JP2003535309A - がんのマーカーとして使用されるアネキシン類及び自己抗体 - Google Patents
がんのマーカーとして使用されるアネキシン類及び自己抗体Info
- Publication number
- JP2003535309A JP2003535309A JP2001515976A JP2001515976A JP2003535309A JP 2003535309 A JP2003535309 A JP 2003535309A JP 2001515976 A JP2001515976 A JP 2001515976A JP 2001515976 A JP2001515976 A JP 2001515976A JP 2003535309 A JP2003535309 A JP 2003535309A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- annexin
- cancer
- protein
- subject
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 title claims abstract description 155
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 title claims abstract description 155
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 111
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 92
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 73
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 44
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 25
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 claims abstract description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 58
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 55
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 26
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 26
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 26
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 26
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 16
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 16
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 14
- 108090000663 Annexin A1 Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 8
- 239000013068 control sample Substances 0.000 claims description 3
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 claims description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 claims description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 2
- 102100040006 Annexin A1 Human genes 0.000 claims 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 48
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 15
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 25
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 13
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 13
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 12
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 12
- 102000004149 Annexin A2 Human genes 0.000 description 11
- 108090000668 Annexin A2 Proteins 0.000 description 11
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 10
- 102000004145 Annexin A1 Human genes 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 9
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 6
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 101000978703 Escherichia virus Qbeta Maturation protein A2 Proteins 0.000 description 5
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 5
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 4
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 4
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000011537 solubilization buffer Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 4
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 3
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 238000000539 two dimensional gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010831 Cytoskeletal Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037414 Cytoskeletal Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 238000012817 gel-diffusion technique Methods 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 2
- CLSVDHLSLGVAPO-UHFFFAOYSA-N piperazine;prop-2-enamide Chemical compound NC(=O)C=C.C1CNCCN1 CLSVDHLSLGVAPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000239 Aequorin Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100310856 Drosophila melanogaster spri gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030708 GTPase KRas Human genes 0.000 description 1
- 101710113436 GTPase KRas Proteins 0.000 description 1
- 230000010558 Gene Alterations Effects 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 206010023774 Large cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010047357 Luminescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000006830 Luminescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000009096 Proto-Oncogene Proteins c-myb Human genes 0.000 description 1
- 108010087776 Proto-Oncogene Proteins c-myb Proteins 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710100968 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N ac1mix0p Chemical compound C1=CC=C2N(C[C@H](C)CN(C)C)C3=CC(OC)=CC=C3SC2=C1.O([C@H]1[C@]2(OC)C=CC34C[C@@H]2[C@](C)(O)CCC)C2=C5[C@]41CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C2O QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000036203 calcium-dependent phospholipid binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091011005 calcium-dependent phospholipid binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000012578 cell culture reagent Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 238000007435 diagnostic evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000005061 intracellular organelle Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 201000009546 lung large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- -1 oil emulsions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 239000002287 radioligand Substances 0.000 description 1
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 238000001419 two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000007794 visualization technique Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4718—Lipocortins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
る血清自己抗体の存在を検出することによって、被検者におけるがんの診断、予
後あるいはがんに対する罹患性についてスクリーニングする方法に関するもので
ある。また、本発明は、被検者から得た生物学的サンプル中のアネキシンタンパ
ク質発現程度の増加を検出することにより、被検者におけるがんの診断及び予後
をスクリーニングする方法を提供する。本発明の方法は、がんになるリスクを持
つ被検者を発見するために使用することもできる。本発明の方法は、アネキシン
タンパク質発現またはアネキシン由来ペプチドまたは抗原の発現の存在とそのレ
ベル、及び/または循環する特異アネキシンタンパク質抗原に対する自己抗体の
存在とそのレベル、を測定するための被検者由来生物学的サンプルの使用を含ん
でいる。さらに、本発明は上記スクリーニング方法を実施するためのキットを提
供する。そのキットはアネキシンタンパク質の上昇したレベルについて被検者を
スクリーニングするために使用することができ、あるいはがんの診断、予測また
は予後の指標としてアネキシンタンパク質に対する自己抗体の検出のために使用
することができる。本発明は、アネキシンタンパク質のレベルの上昇、及びアネ
キシンタンパク質に反応する循環自己抗体レベルの上昇が被検者の血清中に認め
られた実例によって示されている。
が示されている。がん患者においてそのようなタンパク質のレベル上昇は、がん
に対する診断及び予後判定のためのアッセイに使用し得る。例えば、前立腺特異
抗原(PSA)の上昇した血清レベルは、しばしばヒト前立腺がん存在の指標とし
て使用されている。
かな症状を示す以前に、正常または修飾された細胞性タンパク質に対する自己抗
体が患者により生産されていることが知られている。種々のがん患者において多
くの細胞内及び表面抗原に対する抗体の同定に示されるように、ヒトにおけるが
んに対する液性免疫応答の証拠が増えている(Gourevitch et al., 1995, Br.J.
Cancer 72:934-938; Yamamoto et al., 1996, Int.J.Cancer, 69:283-289; Stoc
kert et al., 1998, J.Exp.Med. 187:1349-1354; Gure et al., 1998, Cancer R
es. 58:1034-1041)。例えば、体細胞のp53遺伝子の変化は、影響を受けた患者
の30‐40%に液性応答を引き起こす(Soussi, 1996, Immunol.Today 17:354-356
)。ある例では、抗p53抗体の検出はがんの診断に先行する(Lubin et al., 199
5, Nat.Med. 7:701-702; Cawley et al., 1998, Gastroenterology 115:19-27)
。United States Patent No. 5,405,749は、がんによる網膜疾患自己抗原のスク
リーニング法及び自己抗原に対する自己抗体に関する患者血清の試験方法を公開
している。さらに、腫瘍細胞骨格タンパク質の相対的合成速度の増加が、白血病
細胞の表面及び変異原及びEpstein-Barrウイルスにより形質転換したリンパ球の
表面において観察された(Bachvaroff, R.J. et al., 1980, Proc.Natl Acad. S
ci. 77:4979-4983)。
産物ではない。種々の抗原及び腫瘍に過剰発現している遺伝子産物を含んでいる
(Old and Chen, 1998, J.Exp.Med. 187:1163-1167)。何故あるタイプの腫瘍患
者の一部のみが個別抗原に対して液性応答をするのか明らかではない。免疫応答
に影響を与える因子には主要組織適合複合体分子の個体間のばらつきが含まれる
であろう。タンパク質が、翻訳後の修飾、類似の腫瘍の間でも違いがありうる過
程、を経た後に免疫原になる可能性もある。
以上(28%)を占めている(Travis et al., 1996, Cancer 77:2464-2470)。c-m
yc増幅、Ki-rasまたはp53変異などの多くの分子変化は腫瘍の反応に影響を及ぼ
すことを明らかにした(Mao et al., 1994, Cancer Res 54:1634-1637, Mills e
t al., 1995, J.Natl.Cancer Inst. 87:1056-1060, Gao et al., 1997, Carcino
genesis 18:473-478)。c-myc(Ben-Mahres et al ., 1990, Int.J.Cancer 46:3
5-38), c-myb (Sorokine et al., 1991, Int.J.Cancer 47:665-669), c-erbB-2
(Pupa et al., 1993, Cancer Res 53:5864-5866), ras (Takahashi et al., 19
95, Clin. Cancer 1:107)及びp53 (Peyrat et al., 1995, Lancet 345:621-622;
Iizasa et al., 1998, Cancer Immunol.Immunother. 46:345-349) のような、
がん遺伝子及びがん抑制遺伝子産物に対する血清自己抗体は種々の悪性疾患患者
について報告されている。L-mycがん遺伝子産物に対する自己抗体は肺がん患者
の10%の血清で報告されている(Yamamoto et al., 1996, Int.J.Cancer 69:283-
289)。また、p53に対する血清自己抗体は非小細胞性肺がん患者(NSCLC)の血
清に検出されている(Iizasa et al., 1998, Cancer Immunol. Immunother. 46:
345-349)。抗p53自己抗体の血清力価上昇がNSCLC患者の約20%に存在したし、ま
たこの自己抗体の存在はp53変異及び p53過剰発現を反映している(Yamamoto et
al., 1996, Int.J.Cancer 69:283-289)。
種々の方法を用いて実施されてきた。例えば、増殖性細胞核抗原(PCNA)は、最
初紅斑性ろうそう患者から得られた核抗原に結合する抗体として記述された(Mi
yachi,K., Fritzler,M.J. and Tan,E.M., 1978, J.Immunol 121:2228-2234)。
次いで、核染色で示される分裂促進因子で刺激されたリンパ球とは逆に、休止リ
ンパ球は抗体と反応しないことが観察された。このことが結局、紅斑性ろうそう
においてこの自己抗体によって認識された、PCNAと呼ばれるタンパク質の同定に
つながる(Tan,E.M., Ogata,K, and Takasaki,Y., 1987, J.Rheumatol., 13:89-
96)。その他の例としては、p53の研究で行われたように、候補タンパク質を単
離し、そして患者において抗体を誘導することができるかどうかを検討した(Cr
awford,L.V., Firm,D.C., Bulbrook,R.D., 1984, Int.J.Cancer 30:403-408)。
更にSEREXと呼ばれる技術は腫瘍抗原を同定するための組換えcDNA発現ライブラ
リーの血清学的解析による。(Old,L,ら.1998,J.Exp.Med. 187:1163-1167)。こ
のように、多くの研究に追随し、それに拮抗して自己抗体が産生される可能性の
あるタンパクが探索されている。
型に偏在して発現するカルシウム依存性リン脂質結合タンパクの族である(Benz,
J. and Hofmann,A., 1997, Biol.Chem 378:177-183)。少なくとも12種のアネキ
シンタンパクが同定されている。アネキシン族のタンパクに対して示唆されてい
る多くの役割の中で、制御されたエクソサイトーシスに関与するタンパクに影響
を与えるという可能性が高い(Donnelly,SR and Moss SE,Cell,1997, Mol.Life S
ci. 53:533-538)。典型的なアネキシンタンパクは二つの異なる特徴をもってい
る。(i)リン脂質に対するCa2+依存性結合、及び(ii)その族の既知の物質の
中で4回あるいは8回繰り返される約70種の保存されたアミノ酸の配列単位の存在
。アネキシンの免疫細胞化学的研究によってそれらはカルシウムをキレート化す
る細胞内オルガネラの近傍の、原形質膜のすぐ近くに存在することが示されてい
る(Gerke,V and Moss,SE,1997, Biochimica et Biophysica Acra 1357:129-154)
。アネキシンに関連した物理的性質にはフォスフォリパーゼA2、抗凝固活性、細
胞骨格タンパクに対する結合、細胞膜と小胞の集合およびカルシウム選択性チャ
ンネル活性の阻害がある。多発性硬化症及び実験的神経炎を含む多くの疾患に関
連してアネキシンの濃度の増加が認められてきた。
癌の診断及び予後判定の評価、癌の素因を持つ被験者の識別、及び癌治療を受け
ている患者のモニタリングに対するスクリーニング法を提供することが本発明の
目的である。本発明はまた癌の診断上のもしくは予後判定の指標としてアネキシ
ンタンパクの過剰産生及び/もしくはアネキシンタンパク群の過剰産生を検出す
る方法を提供する。
対する自己抗体を検出することによる癌の診断上の評価及び予後判定に関連する
。アネキシンタンパクに対する自己抗体の血清中濃度の増加を確認することによ
り癌のスクリーニング、診断及び予後のための新しい方法を構築する。
に計画された免疫検定法におけるアネキシンタンパク抗原の利用法を提供する。
このような免疫検定は癌の診断及び予後に利用することが可能である。本発明に
よって、被験者の血清中アネキシン自己抗体濃度の測定は癌の早期診断に用いる
ことができる。さらに、血清自己抗体濃度のモニタリングは疾患の進行を段階づ
けるために予後的に利用することが可能である。
された検定法に関連する。このような検定法にはアネキシンタンパクが抗アネキ
シン特異性抗体との相互作用によって検出される免疫検定法がある。例えば、ア
ネキシン抗体もしくは抗体の断片が被験者の標本中アネキシンタンパクの存在及
び含有量を量的に確認するために利用される可能性がある。
もつ患者を免疫する抗原としてのアネキシンタンパクの利用法に関連している。
このような抗原に対する免疫学的反応を刺激することによって、とりわけ腫瘍細
胞の成長を阻害しもしくは腫瘍細胞の死滅を促進するような、腫瘍細胞に対する
更に効果的な攻撃を誘発することを意図している。個々の癌に関連するアネキシ
ンタンパク抗原に対する自己抗体の同定によって疾患の免疫療法の基礎が得られ
る。
に都合よく利用できるパック入りの診断用キットを提供する。そのキットはまた
癌の治療に用いられる薬剤の有効性をモニターするために利用することが可能で
ある。本発明の具体例として、そのキットには標本中のアネキシン抗原に対する
自己抗体濃度の確認及び/もしくは測定用の成分が含まれる。第二の具体例とし
て本発明のキットには生体標本中のアネキシン抗原を検出及び/もしくは測定す
る成分が含まれる。
本中でアネキシンI及びIIの発現レベルが増加するという発見に基づいている。
更に、肺腺癌及び扁平上皮細胞癌の被験者の血清中においてアネキシンI及びII
に拮抗する自己抗体の増加が認められた。癌の被験者から採取された標本中にお
いてアネキシンタンパク及びアネキシン自己抗体の濃度が増加するという結果に
よって、癌の様々な治療法の有効性をモニタリングする方法と同様に診断及び予
後判定法の開発の基礎が得られる。
評価法を提供すること、また癌発生の素因を示す被験者の識別法を提供すること
、を達成する。本発明の検定法には、被験者の血清もしくは他の生体標本中のア
ネキシンタンパク産生のレベルの上昇、あるいはアネキシン自己抗体の存在を確
認するために計画された方法が含まれる。本発明の目的のために、アネキシンタ
ンパクは一続きの約70のアミノ酸が少なくとも4回繰り返されている標準的なモ
チーフが特徴である(Wallner,B.P..ら1986, Nature 320:77-80; Weber,K.及びJo
hnson,N., 1986, FEBS Lett. 203:95-98; Saris,C.J.M.ら1986 ,Cell 46:201-21
2; Huang K.S.ら1986, Cell 46:191-199)。
れる。 (a)被験者から採取された生体標本中のアネキシンタンパクの定量的測定、
および (b)被験者の標本中に検出されたタンパク濃度を対照標本中に検出されたタ
ンパク濃度と比較すること。 ここでは対照の検体と比較した時、被験者の標本中に検出されたアネキシンタン
パク濃度の上昇が癌のもしくは癌の危険性の増大した被験者の指標である。アネ
キシンタンパクの検出に加えて、アネキシン誘導ペプタイド、抗原もしくは特異
的に修飾されたアネキシンタンパクを癌の診断及び/もしくは予後判定のために
測定してもよい。
調製しタンパク発現のレベルを測定してもよい。好ましい具体例として、癌の疑
いのある被験者もしくは癌の素因のある被験者の標本が、肺組織標本に限るわけ
ではないが、アネキシンタンパク産生のレベルの上昇をスクリーニングするため
に用いられる可能性がある。
。 (a)免疫特異性抗原抗体結合反応がおこる可能性のある条件下で被験者から
採取した抗体を含有する生体標本をアネキシンタンパク抗原を含有する標本に接
触させること、および (b)アネキシンタンパクに対する被験者の生体標本中に存在する自己抗体の
免疫特異性結合の存在を確認すること。 ここでは自己抗体の免疫特異性結合の存在が被験者の癌の存在を示す。
びそれらから誘導されたペプタイドに限ったことではないが、感受性の高いまた
急速な免疫吸着検定法あるいは他の方法によって、このようなタンパク抗原に対
する循環自己抗体の存在について被験者の血清をスクリーニングするために精製
され利用される。
法は抗アネキシン抗体のようなアネキシンタンパクを検出するための少なくとも
一種の試薬を含むパック入りの診断用キットを利用することによって実施できる
。標本を採取した被験者のアネキシン自己抗体の検出のために診断用キットはア
ネキシンタンパクもしくは抗原タンパク断片のどちらかを含有する。
および肺扁平上皮癌で増加するという発見に基づいている。さらに、アネキシン
タンパクに拮抗して反応する循環自己抗体濃度の増加が肺腺癌及び肺扁平上皮細
胞癌の被験者の血清中に認められた。
定を癌のような疾患の早期診断に利用することができる。さらに、アネキシンタ
ンパク濃度のモニタリング及び定量はその疾患の進行を段階づけるために、また
癌患者の治療のために用いられる薬剤の有効性を評価するために予後的に利用で
きる。
れかによって実施することが可能である。被験者の生体標本中のアネキシンタン
パクの検出のための好ましい診断法には、たとえば、アネキシンタンパクがアネ
キシン特異性抗体との相互作用によって検出される免疫検定法がある。本発明に
有用な抗体はアネキシンもしくはそのアネキシン断片の存在を定量的にあるいは
定性的に検出するために用いることができる。さらに、例えばアネキシンタンパ
クに特異的に結合するポリペプタイドのような、抗体以外の試薬がアネキシンタ
ンパク発現のレベルを測定するための検定法に利用することが可能である。いず
れかの方法で、アネキシンタンパクの検出は、例えば、フォスフォリパーゼA、
及び抗凝固活性のようなアネキシンタンパクに関連した生物学的性質のレベルを
検出及び測定することによって行なうことが可能である。
もちいた検定システムに限ったことではなく、少数例をあげればラジオイムノア
ッセイ、ELISA(免疫吸着検定に関連した酵素)、「サンドイッチ」免疫検定法、免
疫沈降検定法、沈降素反応、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散検定法、凝集検定法
、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、タンパクA免疫検定
法がある。
のある生体標本は個々の癌もしくは癌の危険性をもった疑いのある被験者から採
取する。全体の組織あるいは細胞の部分標本は専門家には周知のいろいろ異なっ
た反応混液のいずれか一種類を用いて可溶化する。例えば、組織は脱イオン水で
希釈した(1リットル当たり)8M尿素、20ml Nonidet P-40界面活性剤、20ml
両性電解質(pH 3.5-10)、20ml 2-メルカプトエタノール、及び0.2mMフェニルメ
チルスルフォニルフルオライド(PMSF)を含有する溶解緩衝液の追加により可溶化
することができる。
て、免疫特異性抗原抗体結合反応が起こる可能性のあるような条件下で抗アネキ
シン抗体を用いて被験者から採取された組織標本のような生体標本への接触、お
よび抗体による免疫特異性結合量の検出あるいは測定が含まれる。特定の側面と
しては、例えば、抗体のこのような結合はアネキシンタンパク産生の増加が罹患
の指標である場合に、アネキシンタンパク産生の存在及び増加を確認するために
利用できる。生体標本中のアネキシンタンパク濃度は同年令及び同性の正常な個
体と癌のないもしくは前癌状態の様々な被験者に対して設けられた基準値と比較
する。
パクを固定化する目的で、ニトロセルロースのような固相支持物質に接触させる
。その後支持物質は適当な緩衝液で洗浄し、続いて検出できるようにラベルされ
たアネキシン特異性抗体で処理する。固相支持物質はその後結合していない抗体
を除去するために緩衝液で2回洗浄する。固相の支持物質に結合した抗体量はそ
の後周知の方法に従って測定する。専門家であれば日常の実験法を用いて個々の
測定のための任意の検定条件を設定できるであろう。
、酵素免疫検定法(EIA)に用いられる方法のように、酵素に抗体が結合すること
による(Voller,A.,"The Enzyme Linked Immunosorbent Assay(ELISA)"1978, Dia
gnostic Horizons 2:1-7 Microbiological Associates Quarterly Publication,
Walkersville,MD; Voller,Aら1978, J.Clin.Pathol. 31:507-520; Butler,J.E
.,1981, Meth.Enzymol.73:482-523)。抗体に結合した酵素は、例えば によ
って検出できる化学成分を産出するような方法で、おそらく色素産生性の基質で
ある適当な基質に反応する。例えば分光光度計、蛍光計または視覚的手段により
。抗体を検出できるよう標識するために用いることができる酵素は、西洋ワサビ
ペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼを含むが、それに限定されるも
のではない。検出は、酵素に対する発色基質を採用する比色法によっても行うこ
とができる。
例えば、抗体または抗体のフラグメントを放射性物質で標識することにより、放
射免疫測定法(RIA)を用いてアネキシン蛋白の発現を検出することが可能であ
る(例えば、Weintraub, B. Principles of Radioimmunoassays , Seventh Trai
ning Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, Marc
h 1986参照)。放射性同位体は、γ計数器またはシンチレーション計数器を用い
るような方法もしくはオートラジオグラフィーによって検出することができる。
蛍光性標識化合物は、フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィ
コエリトリンおよびフルオレサミンである。同様に、生物発光化合物も、アネキ
シン抗体の標識に用いられる。生物発光蛋白の有無は、発光の有無を検出するこ
とにより測定できる。標識を目的とした重要な生物発光化合物には、ルシフェリ
ン、ルシフェラーゼおよびエクオリンがある。
、二次元ゲル電気泳動により分析することができる。二次元ゲル電気泳動の方法
は、技術に熟練を要することが知られている。組織試料のような生物学的試料を
、一次元目において、電荷に基き蛋白を分離する等電点電気泳動による分離を行
うために電気泳動ゲルに添加する。多数の一次元目ゲル調製品が利用できるが、
それには両性担体に基く分離のためのチューブゲルまたは固定化勾配に基く分離
のためのゲルストリップなどがある。一次元目の分離の後、蛋白を二次元目のゲ
ルに移し、平衡化処理を行った後、分子量に基き蛋白を分離するSDS PAGEを用い
て分離を行う。異なる被験者由来の生物学的試料を比較するときは、複数のゲル
を個々の生物学的試料(正常コントロールからの試料を含む)から調製する。
ブレン上に移す。ウエスタンブロッティングおよびその後の蛋白視覚化の手法も
、良く知られた技術である(Sambrook et al., “Molecular Cloning, A Labora
ory Mannual” 2nd Edition, Volume 3, 1989, Cold Spring Harbor)。標準的
な手順を用いるか、もしくはその手順が特定のタイプの蛋白、例えば高度に塩基
性または酸性、または脂溶性などのタイプを同定する技術において知られている
ような変更を加えることができる(例えば、Ausubel et al., 1999年、Current
Protocols in Molecular Biology, Wiley & Sons Inc., N.Y. 参照)。アネキシ
ン蛋白に結合する抗体を、インキュベーションの段階で、ウエスタンブロット分
析の手法に従って利用する。一次抗体に特異的な二次抗体をウエスタンブロット
分析の手法で利用して、一次抗体と反応した蛋白を視覚化する。
性の可能性をモニターするために用いることもできる。例えば、アネキシン蛋白
産生レベルは、治療前および治療中に測定することができる。薬剤の有効性は、
治療期間全体にわたりアネキシンの発現量を比較することにより追跡できる。効
果を発現する薬剤は、その薬剤を用いた治療が進行するにつれて、アネキシン蛋
白産生レベルを低下させる薬剤である。
織試料中でアネキシン蛋白濃度の上昇が検出されたところで立証されている。特
に、アネキシンIおよびIIの濃度の上昇は、肺癌患者由来の試料中で検出された
。生物学的試料中のアネキシン蛋白の検出および/または定量法は、アネキシン
蛋白が過剰発現するある種の癌または他の増殖性疾患を発現するリスクがある被
験者のスクリーニングに用いることができる。さらに、蛋白のアネキシンファミ
リーの異なるメンバーの血清または生物学的液体中に生じるパターンの定量的差
を、癌または癌のリスクのスクリーニング、診断または予後の指標として利用す
ることができる。
ような疾患の診断および予測法を提供する。本法は、癌を有する被験者ならびに
年齢と性別をマッチさせた癌のないコントロールから得た生物学的試料を用いる
ことにより確認されている。自己抗体が含まれている可能性がある生物学的試料
、例えば血清などを、特定の癌が疑われる被験者または癌を発現する素因がある
ことが疑われる被験者から採取する。同じ体液を、癌のないコントロールの被験
者から採取する。
のような疾患の早期診断に用いることができる。さらに、自己抗体レベルのモニ
タリングは、疾患進行の段階を予測するのに用いることができる。患者の血清試
料中の自己抗体は、多くの方法により検出することができる。このような方法に
は、ほんの一例として、ウエスタンブロット、放射免疫測定法、ELISA(酵素免
疫測定法)、「サンドイッチ」免疫測定法、免疫沈降測定法、沈降反応、ゲル拡
散沈降反応、免疫拡散測定法、凝集測定法、補体結合測定法、免疫放射定量測定
法、蛍光免疫測定法、蛋白A免疫測定法などのような技術を用いたアッセイシス
テムが挙げられるが、これに限定されるものではない。
よる免疫特異性結合の検出または定量を行うことができるという条件下で、アネ
キシン蛋白抗原含有試料の被験者由来の血清試料と接触させる方法により行う。
特異的な面において、このような組織切片による抗体の結合は、例えば、自己抗
体の検出が疾患の状態を示すような自己抗体の有無の検出に用いることができる
。血清試料中の自己抗体のレベルを、疾患を有しない被験者から得た類似の血清
試料中に存在するレベルと比較する。
の方法には、例えば、アネキシン蛋白を固体の支持体に固定し、そこに特異的に
結合する抗アネキシン抗体を検出する方法などがある。本発明の測定法で利用さ
れるアネキシン蛋白は、よく知られた技術である遺伝子組換えDNA技術により調
製することができる。例えば、アネキシン蛋白またはその抗原フラグメントをコ
ードするDNA分子を、遺伝子工学を用いて適切な発現ベクターに挿入し、アネキ
シン蛋白を大規模に調製することができる。アネキシン蛋白の標識、固定化また
は検出を促進できる融合蛋白をつくることは、有利であると思われる。例えば、
Sambrookらが、1989年に、Molecular Cloning:A laboratory Manual, Cold Spri
ng Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y.で報告した方法を参照のこと。あ
るいは、アネキシン蛋白を天然資源から精製すること、例えば、よく知られた技
術である蛋白分離法を用いて、細胞から精製することも考えられる。このような
精製法には、分子ふるいクロマトグラフィーおよび/またはイオン交換クロマト
グラフィーなどが含まれるが、これに限定されるものではない。実際には、マイ
クロタイタープレートが、アネキシン蛋白の固体の支持体として用いるのに便利
である。表面を予め調製して保管してもよい。
抗原に対して反応性のある循環している自己抗体のレベルが上昇しているところ
で立証されている。血清中の循環している抗−アネキシン自己抗体の検出および
/または定量は、アネキシン蛋白レベルが上昇する癌またはその他の増殖性疾患
のリスクがある被験者のスクリーニングに用いることができる。
する抗原としてのアネキシン蛋白の利用とも関連している。このような抗原に対
して免疫学的反応を刺激することは、腫瘍細胞により効果的な攻撃を惹起するこ
と、とりわけ腫瘍細胞増殖阻害、または腫瘍細胞死滅促進のような攻撃を惹起す
ることを意図している。特定の癌と関連するアネキシン蛋白抗原に対する自己抗
体を同定することは、疾患の免疫療法の根拠となる。
増殖阻害のような免疫反応が惹起される。アネキシン蛋白抗原は、上述の蛋白精
製法を用いて調製することができる。
ネキシン蛋白抗原を構成する免疫原を、免疫反応を惹起するために用いる。投与
については、蛋白抗原に対する免疫反応を増大させるために、アネキシン蛋白抗
原は適切なアジュバントを用いて製剤化しなければならない。適切なアジュバン
トには、水酸化アルミニウムなどのミネラルゲル、リゾレシチン、プルロン酸ポ
リオール、多価陰イオン、ペプチド、油乳剤のような界面活性物質があり、BCG
(bacilli Calmett-Guerin)および(Corynebacterium parvum)のように有用な
ヒトアジュバントとなり得るものが含まれるが、これに限定されるものではない
。上記由来の製剤を投与するために多くの方法を用いることができ、こうした方
法には経口、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下投与などが含まれるが、
これに限定されるものではない。
測定法は、例えば、少なくともアネキシンペプチド(アネキシン自己抗体検出用
)、またはアネキシン抗体試薬(アネキシン蛋白検出用)からなる予めパッケー
ジ化された診断キットを用いることにより実施することができ、これは、例えば
臨床において癌のような疾患を診断するために、便利に使用することができる。
るキットは、アネキシン抗原を指向するヒトIgG抗体を検出および/または測定
するための成分からなる。1例として、抗体が酵素免疫測定法(ELISA)により検
出および/または測定されるところでは、このような成分は標的抗原からなり、
少なくともひとつ、できれば多数の異なるアネキシン抗原またはそのエピトープ
の形をしており、固相と結合しており、標的抗原と結合するヒト抗体を検出する
ための手段である。このような検出手段は、例えば、ヒトIgGの不変の領域を指
向する抗体(例えば、ウサギ抗ヒトIgG抗体)であり、これ自身を検出できるよ
う標識する(例えば放射能、蛍光、色または酵素の標識)か、もしくは標識した
二次抗体により検出することができる(例えば、ヤギ抗ウサギ抗体)。
るキットは、被験者の生物学的試料中のアネキシン抗原を検出および/または測
定する成分からなる。例えば、アネキシン蛋白を酵素結合免疫測定法(ELISA)
により検出および/または測定するところでは、このような成分はアネキシン蛋
白のエピトープを指向する抗体からなり、これは生物学的試料中のアネキシン発
現レベルを検出および/または定量するために用いることができる。抗体自身は
、検出できるよう放射能、蛍光、色または酵素の標識で標識することができる。
あるいは、キットに標識された二次抗体を含めることもできる。
よび癌患者からのサンプルにおけるアネキシン蛋白質発現のレベルの増大 本発明の方法を用い、癌患者から得た血清をアネキシン蛋白質についてスクリ
ーニングした。 癌患者からの血清サンプルはアネキシン蛋白質に対して反応性であることが判
明した。加えて、癌患者からの組織サンプル中にアネキシン蛋白質産生のレベル
が増大していることが判明した。
リウムおよびピリドキシンヒドロクロリドを含む)、ダルベッコのリン酸緩衝塩
類液(PBS)、子牛胎児血清およびペニシリン/ストレプトマイシンを含む全
ての細胞培養試薬はGIBCO−BRL(グランド アイランド、N.Y.)か
ら得た。マウス モノクロナル抗―アネキシンIおよびII抗体はICN(コス
タ メサ、C.A.)から得た。マウス モノクロナル抗―ヒトIgM抗体はシ
グマケミカル社(St.Louis,MO)から購入した。セイヨウワサビ ペ
ルオキシダーゼー結合マウス抗―ヒトIgG1,IgG2,IgG3およびIg
G4抗体はZymed社(サンフランシスコ、CA)から購入した。セイヨウワ
サビ ペルオキシダーゼー結合羊抗―ヒトIgGおよび抗―マウスIgGモノク
ロナル抗体、ECL(Enhanced Chemiluminescence
)キットおよびハイパーフィルム(Hyperfilm) MPはアメルシャム
(アーリントン ハイツ、IL)から得た。イモビロン(Immobilon)
−P PVDF(ポリビニリデン フルオライド)膜はミリポア社(ベッドフォ
ード、Mass)から購入した。第一次元電気泳動に用いるアクリルアミド、尿
素、アンモニウム パーサルフェイトおよびPDA(ピペラジン アクリルアミ
ド)は全てバイオーラッド(Bio−Rad)(ロックビル センター、N.Y
.)から購入した。第二次元電気泳動で用いるアクリルアミドはセルバ(Ser
va)社(クレッセント ケミカル、ホウポウグ、N.Y.)から購入した。キ
ャリアー アンホライト(ampholyte)(pH4−8)およびNP−4
0は両方ともガラード(Gallard)/シュレジンガー(Schlessi
nger)社(カール プレイス、N.Y.)から購入した。その他の全ての試
薬および薬品はフィッシャーまたはシグマ社のいずれかから得、得られうる最高
純度のものであった。
タ中、10%子牛胎児血清、100U/mlペニシリンペニシリンよび100U/
mlストレプトマイシンを加えたDMEM中で37℃で培養した。細胞は70−
80%の集合となった後、毎週継代培養した。
した。実験プロトコールはヒト患者を含む認可研究についてのミシガン大学協会
検討委員会によって認可された。インフォームド コンセントは研究前に患者(
またはその家族)から得た。腫瘍組織は摘出後直ちに−80℃に凍結し、その後
少量の腫瘍組織を可溶化緩衝液中で可溶化し、使用するまで−80℃に保存した
。培養細胞を、8M尿素、2%NP−40,2%キャリアー アンホライト(p
H4−8)、2%β―メカプトエタノールおよび10mM PMSFからなる2
00μlの可溶化緩衝液を添加して溶解し、細胞スクレイパーを用いて採取した
。さらに100μlの可溶化緩衝液を加えた後、細胞抽出液を含む溶液をマイク
ロフュージ チューブに移し、使用するまで−80℃に保存した。
若干修飾して、次元別に分離した(ストラーラー他、1989、蛋白質の二次元
ポリアクリルアミド ゲル 電気泳動、「Protein Structure
:A Practical Approach」 T.E.クレイトン(ed.
)IRL出版、オックスフォード、U.K.,pp65−92)。簡潔に言えば
、可溶化緩衝液中における細胞溶解に次いで、およそ2.5×106細胞から得
た培養細胞または可溶化腫瘍組織の35μlアリコットを等電点電気泳動ゲル上
に置く。pH4−8キャリアー アンホライトを用いて、700Vで16時間、
次いで1000Vでさらに2時間、等電点電気泳動を行った。
ル、2%SDS,1%ジチオスレイトールおよびブロモフェノール ブルーを含
有する、125mM Tris(pH6.8))において平衡後、第二次元ゲル
を含むカセットに加えた。第二次元の分離には、11%−14%のアクリルアミ
ド勾配を用い、色素の前面がゲルの反対側に到達するまでサンプルを電気泳動に
かけた。分離した蛋白質をイモビロンーPPVDF膜に移した。ゲル中の蛋白質
のパターンは銀染色により、イモビロンーP膜に関しては、膜のクーマッシー
ブルー染色により、視覚化した。
.8%の脱脂ドライミルクおよび0.1%トウイーン20を含むTris緩衝塩
類液(TBS)を包含する)で2時間インキュベートし、次いで、洗浄し、そし
て患者から得た血清、または正常な対照血清(300μlの血清、1:100希
釈)のいずれかと室温で1時間インキュベートした。ブロッキング緩衝液で3回
洗浄した後、膜をセイヨウワサビ ペルオキシダーゼー結合羊抗ヒトIgG抗体
(1:1000希釈で)と室温で30分間インキュベートした。膜を0.1%ト
ウイーン20を含有するTBSで5回洗浄し、TBS中で一度、ECL中で暫時
インキュベートし、hyperfilm(登録商標)に10−30分間曝した。
患者血清とハイブリダイゼーション後、視覚化したパターンを、蛋白質との関係
を測定するため、同じサンプルからのクーマッシーブルー染色ブロット、ならび
に自己抗原の特異性を測定するため、対照血清または他の固形腫瘍を有する患者
からの血清について同じサンプルから得たブロットのハイブリダイゼーションか
ら得たパターンの両方と、直接比較した。別途に、膜を、セイヨウワサビ ペル
オキシダーゼー結合羊抗ヒトIgM抗体とインキュベートし、抗ヒトIgG抗体
とのインキュベーションと同様に処理した。
チノーマ細胞系の溶解物および腫瘍の両方における蛋白質スポットをさらに特徴
づけた。A549細胞溶解物を2−D PAGEにかけ、その後、分離した蛋白
質をイモビロンーP膜に移し、次いでクーマッシーブルーで染色した。興味ある
蛋白質スポット膜から削り取り、N−末端アミノ酸配列決定および質量分析にか
けた。得られた配列およびペプチド質量は蛋白質同定のためのデータベース サ
ーチに用いた。
体を用いた。これらの一次抗体は免疫ブロットアッセイにおいて、1:5000
に希釈して使用し、患者の血清をインキュベートしたものを処理した。
(Immobilon−P) PVDF膜の上に移した。ウェスタンブロット分
析のために、各々の膜は1つの血清サンプルで処理した。血清を含むサンプルは
、肺腺癌の患者18人、扁平上皮細胞肺癌の患者11人、小細胞肺癌の患者4人
、大細胞肺癌の患者2人、分類されていない肺癌の患者19人;その他の癌患者
37人(乳癌11人、黒色腫癌7人、肝臓癌11人及び食道癌8人)の診断時に
入手し、また、以前に癌又は自己免疫疾患の病歴のない、健康な被験者15人か
らも入手した。
としての患者の血清と、二次抗体としての羊抗−ヒトIgGとを用いた、膜のハ
イブリダイゼーションは、肺癌患者の血清中で様々な反応パターンを示した。同
一のハイブリダイゼーションを繰り返したところ、同様のパターンが結果として
得られた。総体的に、いくつかの反応性スポットが、ほとんどの血清で観察され
た。反応性スポットのいくつかは、コントロールの血清でも観察され、従って、
これらは非特異的反応性を示すものであると考えられた。その他のスポットは、
肺癌患者の血清に限定された。後者の中で最も注目できるものは、A1で示され
ている、隣接する蛋白質のスポットのグループにおける強烈な反応性であり、p
Iが6.3〜6.8、分子量が37kDaのものであって(図2)、18人の肺
腺癌患者のうちの8人、11人の扁平上皮細胞肺癌患者のうちの4人、4人の小
細胞肺癌患者のうちの1人及び19人の分類されていない肺癌患者のうちの2人
の血清において観察され、これは、健康な人の血清とハイブリダイズしたA54
9膜には存在しないものであった。A2で示されている、隣接する蛋白質のスポ
ットの第2のグループ(図3)は、pIが7.2〜7.8、分子量が約36kD
aのものであって、18人の肺腺癌患者のうちの7人、11人の扁平上皮細胞肺
癌患者のうちの3人、4人の小細胞肺癌患者のうちの2人及び19人の分類され
ていない肺癌患者のうちの6人の血清において観察されたが、これは、健康な人
の血清中には存在しないものであった。全体として、18人の肺腺癌患者のうち
の11人、11人の扁平上皮細胞肺癌患者のうちの6人、及び4人の小細胞肺癌
患者のうちの3人の血清がA1及び/又はA2に反応性を示した。
、IgMに基づく免疫反応をもまた示したかどうかを調べるために、A1及び/
又はA2に対してIgGに基づく免疫反応を示した肺腺癌患者3人の血清と、2
つのネガティブコントロールとをこの分析において用いた。膜含有A549溶解
物を患者及びコントロールの血清とハイブリダイズし、続いてホースラディッシ
ュペルオキシダーゼ−接合羊抗−ヒトIgM抗体とともにインキュベートした。
A1及び/又はA2に対してIgGに基づく反応性を示した患者の血清のみが、
これら2つの隣接してセットされた蛋白質に対して、IgMに基づく反応性を示
した(図3)。
ブタイプの血清を調べるために、A1及び/又はA2蛋白質に対してIgG免疫
反応を示した肺腺癌患者3人の血清と、2つのネガティブコントロールとをこの
分析において用いた。膜含有A549溶解物を患者及びコントロールの血清とハ
イブリダイズし、続いてホースラディッシュペルオキシダーゼ−接合マウス抗−
ヒトIgG1、IgG2、IgG3又はIgG4抗体とともにインキュベートし
た。A1及び/又はA2に対してIgGに基づく反応性を示した患者の血清のみ
が、これら2つの隣接してセットされた蛋白質に対して、IgG1に基づく反応
性を示した(図4)。
ブリザイズした。いずれの血清もA2に対してIgGに基づく免疫反応性を示さず、A
1蛋白質は食道癌患者(5/8)および乳癌患者(1/11)に存在し、メラノーマ患者
(0/7)および肝癌患者(0/11)には存在しなかった。
溶解物から調製し、蛋白質をクーマシーブルー染色により視覚化した。A1および
A2スポットを膜から切り出し、溶出しトリプシン消化に付した。ペプチド断片を
マススペクトルにより分析した。4つの隣接するセクションである、A1a、A1b(
Alaの直ぐ左側、即ちより酸性)、A1c(A1bの直ぐ左側、即ちより酸性)およびA
1d(A1cの直ぐ左側、即ちより酸性)をブロットから切り出した。これら4つの
領域は全部で免疫反応性の全A1領域を含んでいた。これら4つのセクション由来
のペプチドのマススペクトル分析により、アネキシンIおよびアネキシンII変異
体がセクションA1aを除いてより優勢なアネキシンIアイソフォームであることが
分かり、セクションA1aは何らの結果も示さなかった。A2蛋白質については、2
つのセクションである、A2aおよびA2b(A1bの直ぐ左側、即ちより酸性)をブロ
ットから切り出した。これらのセクション由来のペプチドのマススペクトル分析
により、アネキシンII変異体(A2a)およびアネキシンII変異体(A2b)がより優
勢なアネキシンIIアイソフォームであった。追加的に、A1およびA2スポットを膜
から切り出し、直接N末端配列決定に付した。アネキシンはアセチル化によりN末
端がブロックされているため、如何なる結果も得られなかった。
物からなることを確認するため、A549アデノカルシノーマセルラインから調製し
た膜を、アネキシンIと反応する市販されているマウスモノクローナル抗体ある
いはマウスモノクローナルアネキシンII抗体とハイブリザイズさせた。得られた
免疫反応性パターンを、同じタイプの細胞溶解物のクーマシーブルー染色ブロッ
トおよび肺癌患者の血清との免疫反応性のパターンと比べた。抗アネキシンI抗
体および抗アネキシンII抗体は、肺癌患者血清でそれぞれ視覚化したA1および
A2スポット中の蛋白質と免疫反応した(図6)。印象的には、幾つかの付加的な
低分子免疫反応スポットが、用いた両者のモノクローナル抗アネキシンI抗体お
よび抗アネキシンII抗体のハイブリダイゼーションの結果として観察された。こ
れらのスポットは、テストしたいずれの患者血清とも免疫反応性を示さなかった
。
本発明の一つの局面を説明するためのものであり、機能的に等価の如何なる組成
物および方法も本発明の範囲内である。実際、本明細書に記載し示したものに加
えて各種の修正はこれまでの記載から当業者には明らかであろう。そのような修
正はクレーム範囲内のものである。
銀色に染色した。
ブロット法。pI6.3〜6.8及び分子量37kDaのA1を示した一群の連続的なタンパク
のスポットにおいて反応性が観察された。
解物の二次元ゲル分離のウェスタンブロット法。続いて膜はセイヨウワサビ過酸
化酵素結合ヒツジ抗ヒトIgM抗体と共にインキュベートした。
されたA549溶解質の二次元ゲル分離のウェスタンブロット法。続いて膜はセイヨ
ウワサビ過酸化酵素結合マウス抗ヒトIgG1、IgG2、IgG3あるいはIgG4抗体と融合
させた。
膜は黒色腫、乳癌、肝癌もしくは食道癌の患者の血清と融合させた。食道癌の患
者の血清(5/8)、乳癌の患者の血清(1/11)で認められ、黒色腫の患者の血清(0/7)
及び肝癌の患者の血清(0/11)では認められなかったA2、A1タンパクに拮抗するIg
Gによる免疫反応性はどの血清でも見られなかった。
パクに拮抗する免疫反応性をもつ。
Claims (24)
- 【請求項1】 対照サンプルと比較して被検者のサンプル中に検出されるア
ネキシンタンパク質の濃度増加ががん患者の指標となるので、 (a)被検者から得た生物学的サンプル中のアネキシンタンパク質を定量的に検
出し、そして (b)被検者のサンプル中に検出されたタンパク質濃度を対照サンプル中に検出
されたタンパク質濃度と比較すること、からなる 被検者におけるがんの診断及び予後診断の方法。 - 【請求項2】 アネキシンタンパク質を免疫検定法で検出する、請求項1に
記載の方法。 - 【請求項3】 免疫検定法が免疫沈降法である請求項2に記載の方法。
- 【請求項4】 サンプルが肺組織サンプルである請求項1に記載の方法。
- 【請求項5】 がんが肺がんである請求項1に記載の方法。
- 【請求項6】 自己抗体の存在が被検者にがんが存在することを示すので、 (a) 免疫特異的に抗原抗体結合反応が生じるような条件下で被検者から得た生
物学的サンプルを含む抗体とアネキシンタンパク質抗原を含むサンプルを接触さ
せ、そして (b)被検者の生物学的サンプルにおいてアネキシンタンパク質に対する抗体の
免疫特異的な結合を検出すること、からなる、 がん患者の診断方法。 - 【請求項7】 被検者の生物学的サンプル中の自己抗体検出の段階に、被検
者の生物学的サンプル中に存在する抗体の中の特殊な抗体に結合する信号発生基
を使用することからなる、請求項6に記載の方法。 - 【請求項8】 (a)1以上のアネキシンタンパク質を膜あるいは基質の上に固
定し、 (b)その膜あるいは基質を被検者の生物学的サンプルと接触させ、そして (c)被検者の生物学的サンプル中のアネキシンに特異的な自己抗体の存在を検
出すること、からなる免疫検出法によって生物学的サンプル中の自己抗体の存在
を測定する、請求項7に記載の方法。 - 【請求項9】 がんが肺がんである請求項6に記載の方法。
- 【請求項10】 生物学的サンプル中のアネキシンタンパク質の存在を検出
するための構成要素からなる、被検者におけるがんの診断及び予後診断のための
キット。 - 【請求項11】 アネキシンタンパク質を検出するための構成要素が抗アネ
キシン抗体である、請求項10に記載のキット。 - 【請求項12】 抗アネキシン抗体が標識されている、請求項11に記載の
キット。 - 【請求項13】 標識が放射能、蛍光、カロリメーターまたは酵素標識であ
る、請求項12に記載のキット。 - 【請求項14】 免疫特異的に抗アネキシン抗体に結合する標識2次抗体を
含む請求項11に記載のキット。 - 【請求項15】 サンプル中のアネキシン自己抗体の存在を検出するための
構成要素を含む、被検者のがんの診断及び予後診断のためのキット。 - 【請求項16】 構成要素がアネキシン抗原である請求項15に記載のキッ
ト。 - 【請求項17】 アネキシン抗原が標識されている請求項16に記載のキッ
ト。 - 【請求項18】 アネキシン抗原が固相に固定されている請求項16に記載
のキット。 - 【請求項19】 アネキシン自己抗体の検出のための構成要素を含む請求項
15に記載のキット。 - 【請求項20】 上記アネキシン抗原に対する抗体を生産するために、生理
的に許容される担体に入れたアネキシン抗原を宿主に接種することからなる、ア
ネキシンタンパク質、アネキシン由来ペプチドあるいは修飾されたアネキシンタ
ンパク質に対して宿主を免疫する方法。 - 【請求項21】 宿主がアネキシンタンパク質の過剰生産によって特徴づけ
られる疾患に冒されている、請求項20に記載の方法。 - 【請求項22】 疾患ががんである請求項21に記載の方法。
- 【請求項23】 がんが肺がんである請求項22に記載の方法。
- 【請求項24】 アネキシンタンパク質がアネキシン1である請求項20に
記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/370,337 | 1999-08-06 | ||
US09/370,337 US6645465B2 (en) | 1999-08-06 | 1999-08-06 | Annexin proteins and autoantibodies as serum markers for cancer |
PCT/US2000/021514 WO2001011372A1 (en) | 1999-08-06 | 2000-08-04 | Annexins and autoantibodies used as markers for cancer |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2003535309A true JP2003535309A (ja) | 2003-11-25 |
JP4594575B2 JP4594575B2 (ja) | 2010-12-08 |
Family
ID=23459219
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001515976A Expired - Fee Related JP4594575B2 (ja) | 1999-08-06 | 2000-08-04 | がんのマーカーとして使用されるアネキシン類及び自己抗体 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US6645465B2 (ja) |
EP (3) | EP1200832B1 (ja) |
JP (1) | JP4594575B2 (ja) |
AT (3) | ATE529751T1 (ja) |
AU (1) | AU780772B2 (ja) |
CA (1) | CA2380398C (ja) |
DE (2) | DE60028040T2 (ja) |
DK (2) | DK1200832T3 (ja) |
ES (2) | ES2320585T3 (ja) |
WO (1) | WO2001011372A1 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2006098144A1 (ja) * | 2005-03-17 | 2008-08-21 | 国立大学法人 千葉大学 | 特発性肺線維症の検出マーカー、検出キット及び検出方法 |
JP2015007645A (ja) * | 2007-06-29 | 2015-01-15 | アボツト・モレキユラー・インコーポレイテツド | 肺癌に対する素因をスクリーニングするための方法およびマーカーの組み合わせ |
JP2016536568A (ja) * | 2013-09-18 | 2016-11-24 | アデレード リサーチ アンド イノベイション ピーティーワイ エルティーディーAdelaide Research & Innovation Pty Ltd | 卵巣がんの自己抗体バイオマーカー |
Families Citing this family (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9810040D0 (en) * | 1998-05-11 | 1998-07-08 | Univ Nottingham | Blood borne tumour markers |
GB9827228D0 (en) * | 1998-12-10 | 1999-02-03 | Univ Nottingham | Cancer detection method and reagents |
US6645465B2 (en) * | 1999-08-06 | 2003-11-11 | Michigan, University Of The Regents | Annexin proteins and autoantibodies as serum markers for cancer |
US20030232399A1 (en) * | 2000-06-14 | 2003-12-18 | Robertson John Forsyth Russell | Cancer detection methods and reagents |
WO2002008249A1 (fr) * | 2000-07-21 | 2002-01-31 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Procede de purification de la proteine de liaison a l'ion calcium |
US7635680B2 (en) | 2001-02-21 | 2009-12-22 | Alavita Pharmaceuticals, Inc. | Attenuation of reperfusion injury |
EP1839670A3 (en) | 2001-02-21 | 2009-11-11 | Alavita Pharmaceuticals, Inc. | Modified Annexin Proteins and their use against thrombosis |
US7645739B2 (en) | 2001-02-21 | 2010-01-12 | Alavita Pharmaceuticals, Inc. | Modified annexin compositions and methods of using same |
US7635676B2 (en) | 2001-02-21 | 2009-12-22 | Alavita Pharmaccuticals, Inc. | Modified annexin proteins and methods for their use in organ transplantation |
US7214498B2 (en) * | 2001-03-23 | 2007-05-08 | Benaroya Research Institute At Virginia Mason | Tumor associated antigens and methods of using the same |
WO2003025568A2 (de) * | 2001-09-14 | 2003-03-27 | Reinhard Zeidler | Identifizierung von antigenen durch xenogene, allogene oder autologe antikörper-vermittelte präzipitation |
WO2003064593A2 (en) * | 2001-11-09 | 2003-08-07 | Virginia Mason Research Center | Antigen panels and methods of using the same |
GB2395270B (en) * | 2002-11-14 | 2006-08-16 | Univ Nottingham | Tumour marker proteins and uses thereof |
US7700307B2 (en) | 2003-03-08 | 2010-04-20 | Auvation Limited | Mitochondrial stress-70 protein markers for colorectal cancer |
PL1720611T3 (pl) * | 2004-02-16 | 2010-09-30 | Proteosys Ag | Marker diagnostyczny dla raka |
EP1756572B1 (en) * | 2004-05-13 | 2016-02-24 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | A device for binding a target entity to a bait entity and detection methods using the same |
US20060024757A1 (en) * | 2004-07-30 | 2006-02-02 | Robert Hussa | Detection of oncofetal fibronectin for selection of concepti |
RU2277242C2 (ru) * | 2004-08-23 | 2006-05-27 | Александр Владимирович Балюра | Способ диагностики опухолей |
EP1724585A1 (en) * | 2005-05-21 | 2006-11-22 | ProteoSys AG | Annexin for cancer risk assessment |
EP1724586A3 (en) * | 2005-05-21 | 2007-07-04 | ProteoSys AG | Annexin for cancer risk assessment |
GB2426581A (en) * | 2005-05-27 | 2006-11-29 | Univ Nottingham | Immunoassay methods |
SI1889059T1 (sl) | 2005-05-27 | 2009-12-31 | Oncimmune Ltd | Izboljšani imunotestni postopek |
WO2006130525A2 (en) * | 2005-05-31 | 2006-12-07 | Sidney Kimmel Cancer Center | Methods for immunotherapy of cancer |
EP1929311B1 (de) * | 2005-09-26 | 2010-03-31 | Ulrich Loos | Verfahren zum nachweis von autoimmunantikörpern gegen den tsh-rezeptor und neue tsh- rezeptorchimären |
WO2007079284A2 (en) * | 2005-11-10 | 2007-07-12 | University Of Kentucky | Lung cancer diagnostic assay |
CN101490550A (zh) * | 2006-07-08 | 2009-07-22 | 肯塔基大学研究基金会 | 肺癌诊断分析 |
CN101632020B (zh) * | 2006-09-13 | 2013-11-27 | 昂西免疫有限公司 | 改进的免疫测定方法 |
US20080305512A1 (en) * | 2006-10-26 | 2008-12-11 | Mattingly Phillip G | Assay for cardiac troponin autoantibodies |
US7776605B2 (en) | 2006-10-26 | 2010-08-17 | Abbott Laboratories | Assay for cardiac troponin autoantibodies |
WO2008051762A2 (en) * | 2006-10-26 | 2008-05-02 | Abbott Laboratories | Immunoassay of analytes in samples containing endogenous anti-analyte antibodies |
US20090047689A1 (en) * | 2007-06-20 | 2009-02-19 | John Kolman | Autoantigen biomarkers for early diagnosis of lung adenocarcinoma |
GB0725239D0 (en) * | 2007-12-24 | 2008-02-06 | Oncimmune Ltd | Calibrator for autoantibody assay |
EP2277049A4 (en) * | 2008-05-09 | 2012-05-30 | Univ Duke | AUTOANTIBODIES IN THE DETECTION AND TREATMENT OF CANCER |
US9581599B2 (en) | 2010-06-28 | 2017-02-28 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Diagnosis of benign and cancerous growths by measuring circulating tumor stem cells and serum AnnexinA2 |
US9555074B2 (en) | 2010-10-08 | 2017-01-31 | Regents Of The University Of Minnesota | Annexin II compositions |
KR20150010882A (ko) * | 2013-07-19 | 2015-01-29 | 삼성전자주식회사 | 아넥신 A2 결합단백질, p53 단백질 및 p18 단백질을 포함하는 융합 단백질 및 이를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 조성물 |
US10206986B2 (en) | 2013-11-13 | 2019-02-19 | Regents Of The University Of Minnesota | Annexin II variant compositions and methods |
CN104407151B (zh) * | 2014-11-19 | 2016-06-08 | 汕头大学医学院 | Kindlin-2,Myosin-9和Annexin II三蛋白联合预测食管鳞癌患者预后试剂盒 |
CN113721021B (zh) * | 2021-09-16 | 2023-07-07 | 郑州大学 | Prkcz自身抗体在食管鳞癌辅助诊断中的应用 |
CN116539885B (zh) * | 2023-07-06 | 2023-09-29 | 上海秤信生物科技有限公司 | 用于乳腺癌早期检测的肿瘤自身抗原/抗体组合及应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02496A (ja) * | 1987-12-24 | 1990-01-05 | Nippon Shinyaku Co Ltd | モノクローナル抗体、製法、及び利用法 |
JPH04228090A (ja) * | 1990-04-18 | 1992-08-18 | Behringwerke Ag | Pp4に対するモノクローナル抗体およびその製造方法 |
JPH0772147A (ja) * | 1993-07-02 | 1995-03-17 | Noboru Kaneko | 抗アネキシンv抗体並びに該抗体の製法及び利用 |
WO1999018435A1 (fr) * | 1997-10-08 | 1999-04-15 | International Reagents Corporation | Procede d'analyse de l'annexine v dans l'urine et utilisation |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE4040306A1 (de) | 1990-12-17 | 1992-06-25 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung von antikoerpern gegen lipocortine |
US5405749A (en) * | 1991-12-06 | 1995-04-11 | Polans; Arthur S. | Method for identifying and purifying a cancer associated retinopathy autoantigen, and testing patient serum for the autoantibody to the autoantigen |
JPH0772149A (ja) * | 1993-06-30 | 1995-03-17 | Nippon Shinyaku Co Ltd | 肝癌又は肝硬変の診断薬及び診断法 |
EP0651253A1 (en) * | 1993-11-02 | 1995-05-03 | Abbott Laboratories | Immunoassay for the detection of human autoantibodies |
US5658877A (en) * | 1995-05-18 | 1997-08-19 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method to treat endotoxin effects by administration of 33 kilodalton phospholipid binding protein |
ATE266203T1 (de) | 1997-06-26 | 2004-05-15 | Univ Michigan | Methode zur identifizierung von tumorantigenen mit autoantikörpern in serum |
JP2003529318A (ja) * | 1998-12-28 | 2003-10-07 | プロ ダクト ヘルス インコーポレーティッド | 乳管から材料を採取するための装置、方法、およびシステム |
US6645465B2 (en) * | 1999-08-06 | 2003-11-11 | Michigan, University Of The Regents | Annexin proteins and autoantibodies as serum markers for cancer |
-
1999
- 1999-08-06 US US09/370,337 patent/US6645465B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-08-04 EP EP00952594A patent/EP1200832B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-04 AT AT09151524T patent/ATE529751T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-08-04 EP EP09151524A patent/EP2051079B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-04 DE DE60028040T patent/DE60028040T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-04 AU AU65262/00A patent/AU780772B2/en not_active Ceased
- 2000-08-04 DE DE60041839T patent/DE60041839D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-04 CA CA2380398A patent/CA2380398C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-04 DK DK00952594T patent/DK1200832T3/da active
- 2000-08-04 AT AT00952594T patent/ATE326699T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-08-04 AT AT06075982T patent/ATE426167T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-08-04 WO PCT/US2000/021514 patent/WO2001011372A1/en active IP Right Grant
- 2000-08-04 ES ES06075982T patent/ES2320585T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-04 ES ES00952594T patent/ES2259609T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-04 JP JP2001515976A patent/JP4594575B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-04 EP EP06075982A patent/EP1734368B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-04 DK DK06075982T patent/DK1734368T3/da active
-
2003
- 2003-09-05 US US10/656,356 patent/US20040048320A1/en not_active Abandoned
-
2006
- 2006-06-21 US US11/425,528 patent/US7759081B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-21 US US11/425,439 patent/US20060275845A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-06-10 US US12/813,070 patent/US7955602B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02496A (ja) * | 1987-12-24 | 1990-01-05 | Nippon Shinyaku Co Ltd | モノクローナル抗体、製法、及び利用法 |
JPH04228090A (ja) * | 1990-04-18 | 1992-08-18 | Behringwerke Ag | Pp4に対するモノクローナル抗体およびその製造方法 |
JPH0772147A (ja) * | 1993-07-02 | 1995-03-17 | Noboru Kaneko | 抗アネキシンv抗体並びに該抗体の製法及び利用 |
WO1999018435A1 (fr) * | 1997-10-08 | 1999-04-15 | International Reagents Corporation | Procede d'analyse de l'annexine v dans l'urine et utilisation |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6009031260, BASTIAN B. C. et al., "Autoantibodies to annexins: diagnostic marker for cutaneous disorders?", J. Dermatol. Sci., 1994, Vol.8, P.194−202 * |
JPN6009031262, DAVIS R. G. et al., "Detection of secreted and intracellular annexin II by a radioimmunoassay", J. immunol. methods, 1995, Vol.188, P.91−95 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2006098144A1 (ja) * | 2005-03-17 | 2008-08-21 | 国立大学法人 千葉大学 | 特発性肺線維症の検出マーカー、検出キット及び検出方法 |
JP4521575B2 (ja) * | 2005-03-17 | 2010-08-11 | 国立大学法人 千葉大学 | 特発性肺線維症の検出マーカー、検出キット及び検出方法 |
JP2015007645A (ja) * | 2007-06-29 | 2015-01-15 | アボツト・モレキユラー・インコーポレイテツド | 肺癌に対する素因をスクリーニングするための方法およびマーカーの組み合わせ |
JP2016536568A (ja) * | 2013-09-18 | 2016-11-24 | アデレード リサーチ アンド イノベイション ピーティーワイ エルティーディーAdelaide Research & Innovation Pty Ltd | 卵巣がんの自己抗体バイオマーカー |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2051079A2 (en) | 2009-04-22 |
US20100330587A1 (en) | 2010-12-30 |
EP2051079B1 (en) | 2011-10-19 |
US7759081B2 (en) | 2010-07-20 |
DE60028040D1 (de) | 2006-06-22 |
AU6526200A (en) | 2001-03-05 |
CA2380398A1 (en) | 2001-02-15 |
CA2380398C (en) | 2017-01-31 |
US6645465B2 (en) | 2003-11-11 |
WO2001011372A9 (en) | 2002-04-11 |
ES2259609T3 (es) | 2006-10-16 |
ATE529751T1 (de) | 2011-11-15 |
US20040048320A1 (en) | 2004-03-11 |
US20070037227A1 (en) | 2007-02-15 |
ATE326699T1 (de) | 2006-06-15 |
ES2320585T3 (es) | 2009-05-25 |
US7955602B2 (en) | 2011-06-07 |
AU780772B2 (en) | 2005-04-14 |
DE60028040T2 (de) | 2006-11-23 |
DK1200832T3 (da) | 2006-09-18 |
DE60041839D1 (de) | 2009-04-30 |
EP1734368B1 (en) | 2009-03-18 |
EP1734368A2 (en) | 2006-12-20 |
ATE426167T1 (de) | 2009-04-15 |
EP1200832B1 (en) | 2006-05-17 |
EP1200832A1 (en) | 2002-05-02 |
DK1734368T3 (da) | 2009-06-02 |
JP4594575B2 (ja) | 2010-12-08 |
EP2051079A3 (en) | 2009-06-10 |
US20060275845A1 (en) | 2006-12-07 |
WO2001011372A1 (en) | 2001-02-15 |
EP1734368A3 (en) | 2007-03-07 |
US20020168696A1 (en) | 2002-11-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4594575B2 (ja) | がんのマーカーとして使用されるアネキシン類及び自己抗体 | |
JP4820003B2 (ja) | 癌の血清マーカーとしてのs100タンパク質および自己抗体 | |
WO2011010969A1 (en) | Cancer biomarker and the use thereof | |
CA2665707C (en) | Method for identification of cellular protein antigens and presence of antibodies to specific cellular protein antigens in serum | |
US8492100B2 (en) | Autoantibodies for protein antigens as markers for cancer of gingivo-buccal complex | |
CN109517049B (zh) | Linc00266-1多肽作为实体瘤标志物的应用 | |
US20040191841A1 (en) | Method for identification of cellular protein antigens and presence of antibodies to specific cellular protein antigens in serum | |
US6677128B1 (en) | Method for identification of cellular protein antigens and presence of antibodies to specific cellular protein antigens in serum | |
AU2004201392B2 (en) | S100 proteins and autoantibodies as serum markers for cancer |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20061101 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20090618 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090626 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090918 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090930 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20091026 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20091102 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091113 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091211 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100310 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20100317 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100407 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100604 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100812 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100903 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100917 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130924 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |