FI87803B - Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt vaerdefulla tricykliska foereningar - Google Patents

Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt vaerdefulla tricykliska foereningar Download PDF

Info

Publication number
FI87803B
FI87803B FI854731A FI854731A FI87803B FI 87803 B FI87803 B FI 87803B FI 854731 A FI854731 A FI 854731A FI 854731 A FI854731 A FI 854731A FI 87803 B FI87803 B FI 87803B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
streptomyces
ethyl acetate
strain
liters
ifo
Prior art date
Application number
FI854731A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI87803C (fi
FI854731A (fi
FI854731A0 (fi
Inventor
Masakuni Okuhara
Hirokazu Tanaka
Tohru Kino
Hiroshi Hatanaka
Toshio Goto
Original Assignee
Fujisawa Pharmaceutical Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB848430455A external-priority patent/GB8430455D0/en
Priority claimed from GB858502869A external-priority patent/GB8502869D0/en
Priority claimed from GB858508420A external-priority patent/GB8508420D0/en
Application filed by Fujisawa Pharmaceutical Co filed Critical Fujisawa Pharmaceutical Co
Publication of FI854731A0 publication Critical patent/FI854731A0/fi
Publication of FI854731A publication Critical patent/FI854731A/fi
Priority to FI864527A priority Critical patent/FI85977C/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI87803B publication Critical patent/FI87803B/fi
Publication of FI87803C publication Critical patent/FI87803C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/18—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C12R2001/55—Streptomyces hygroscopicus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y10S435/898—Streptomyces hygroscopicus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

1 87803
Menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokkaita trisyklisiä yhdisteitä - Förfarande för framställning av farmakologiskt värdefulla tricykliska föreningar Tämän keksinnön kohteena on menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokkaita trisyklisiä yhdisteitä, joiden kaava on ! 10 ./''v CH3 1 r r A°° X^ch3 U) oh r 3
ci,3sA) V
I / CH3 0CH3 OCH3 .. . jossa • ' R3 on allyyli, kun n = 1 ja : *-· R3 on metyyli tai allyyli, kun n = 2.
: .·. Keksinnön mukaan saaduilla trisykloyhdistei 1 lä on farmakologi-\'V siä aktiivisuuksia kuten immunosuppressiivinen aktiivisuus, ·' antimikrobiaalinen aktiivisuus ja vastaavia, näiden valmistusmenetelmä, näitä sisältävä farmaseuttinen seos ja näiden käyttö.
Käsillä olevasta keksinnöstä huomattakoon, että tämä keksintö : ·· saa alkunsa ja perustuu eräiden uusien spesifisten yhdistei- 2 Ö78G3 den, so. PR-900506, PR-900523 ja FR-900525 -aineiden ensimmäiseen ja uuteen löytämiseen. Tarkemmin sanoen FR-900506, FR-900523 ja FR-900525 -aineet eristettiin ensimmäisen kerran puhtaassa muodossa kasvatusliuoksista, jotka saatiin fermen-toimalla uusia streptomyces-sukuun kuuluvia lajeja.
FR-900506, FR-900523 ja FR-900525 -aineiden kemiallisia rakenteita koskevien laajojen seivitystutkimusten seurauksena tämän keksinnön keksijät ovat onnistuneet määrittämään näiden yhdisteiden kemialliset rakenteet ja valmistamaan tämän keksinnön mukaisia trisykloyhdisteitä.
Tämän keksinnön mukaiset uudet trisykloyhdisteet voidaan esittää seuraavalla yleiskaavalla (I)
HO
CH3°"^^VvvJl CH3 1 i r3 ·· ·' ^0° Jk (I1
= ·' ° k-OH
: ca)y% V
·:· I I / CH3 !·!*. OCH3 och3 ! I / • · • · · • · 3 07803 jossa r! on hydroksi tai suojattu hydroksi, R2 on vety, hydroksi tai suojattu hydroksi, R3 on metyyli, etyyli, propyyli tai allyyli, n on kokonaisluku 1 tai 2, ja viiva- ja katkoviivasymboli on yksinkertainen sidos tai kak-soissidos, ja niiden suolat.
Kohdeyhdisteistä (I) havaittiin seuraavien yhdisteiden muodostuvan fermentaation avulla.
(1) Yhdiste (I), R3 on allyyli ja n on kokonaisluku 2; tälle yhdisteelle on annettu nimeksi FR-900506; (2) Yhdiste (I), R3 on metyyli ja n on kokonaisluku 2; tälle yhdisteelle on annettu nimeksi FR-900523 (toinen nimi: WS 723B); ja (3) Yhdiste (I), R3 on allyyli ja n on kokonaisluku 1; tälle yhdisteelle on annettu nimeksi FR-900525.
Tämän keksinnön mukaisesta trisykloyhdisteestä (I) huomatta-·;··· koon, että ne voivat esiintyä yhtenä tai useampana konformee-rina tai stereoisomeerisena parina kuten optisina ja geometri-I. ' sinä isomeereinä johtuen asymmetrisesta hiiliatomista (atomeista) ja kaksoissidoksesta (sidoksista). Myös tällaiset isomeerit sisältyvät tämän keksinnön piiriin.
Tämän keksinnön mukaisesti kohteena olevat trisykloyhdisteet (I) voidaan valmistaa siten, että viljellään mikro-organismia Strentomyces tsukubaensis (FERM BP-927) tai Strentomyces hygroscopicus subsp. vakushimaensis (FERM BP-928) ravintoalus-: tässä ja otetaan talteen yhdiste FR-900506, jonka kaava on « · • a • · · 4 87803
hoV^N
ch^
C jL /° 0H
fl^^CH2-CH=CH2 0 CH t l^OH \ 3
CH, Y^O V
J i /rCH3 och3 och3 ja/tai yhdiste FR-900523, jonka kaava on
Xl CI, 3°^Y CH3 c"3 γγ>°
Li 9y° -A·,
Lon
CHjV^O V
I 1 CH3 : : :' ocn3 och3 ' ja/tai yhdiste FR 900525, jonka kaava on 5 >: 7 803
“XX
CH3 C^Y° 0H J-ch2-ch.ch2 O^f CH -, J.OH χ CH3S|^9 /CH3 OCH3 OCH3
Seuraavassa on yksityiskohtaisesti esitetty tämän keksinnön mukaisten trisykloyhdisteiden (I) valmistusmenetelmiä.
(I) Fermentaatioprosessit: Tämän keksinnön mukaiset aineet FR-900506, FR-900523 ja FR-900525 voidaan siis valmistaa f ermentoimal la ravintoalustassa yhdisteitä FR-900506, FR-900523 ja/tai FR-900525 tuotta-: via kantoja, jotka kuuluvat streptomyces-sukuun kuten Strepto- myces tsukubaensis no. 9993 ja Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis no. 7238 - kantaja.
Seuraavassa on esitetty yksityiskohtia mikro-organismeista, joita käytetään aineiden FR-900506, FR-900523 ja FR-900525 tuottamiseen.
[A] Tämän keksinnön mukaiset aineet FR-900506, FR-900523 ja : ·· FR-900525 voidaan valmistaa fermentoimalla ravintoalustassa « · 6 37803 aineita FR-900506 ja/tai FR-900525 tuottavaa kantaa joka kuuluu streptomyces-sukuun kuten Streptomyces tsukubaensis no. 9993 kantaa.
MIKRO-ORGANISMI
Mikro-organismi, jota voidaan käyttää aineiden FR-900506 ja/tai FR-900525 tuottamiseen, on streptomyces-sukuun kuuluva, ainetta (aineita) FR-900506 ja/tai FR-900525 tuottava kanta. Näistä Streptomyces tsukubaensis no. 9993 kanta on äskettäin eristetty Japanissa, Toyosato-cho, Tsukuba-gun, Ibaraki Prefecture, kerätystä maanäytteestä. Tämän eristetyn Streptomyces tsukubaensis no. 9993 kannan lyofilisoitu näyte on talletettu Fermentation Research Institute -laitokseen, Agency of Industrial Science and Technology (No. 1-3, Higashi 1-chome, Yatabemachi Tsukuba-gun, Ibaraki Prefecture, Japan) tailetusnumerolla FERM-P-7886 (talletuspäivä: 5.10.1984) ja sen jälkeen siirretty Budapestin sopimuksen mukaisesti samaan talletuslaitokseen 19.10.1985 uudella tailetusnumerolla FERM BP-927.
Huomattakoon, että uuden yhdisteen (yhdisteiden) FR-900506 ja/tai FR-900525 tuotto ei ole rajoitettu nimenomaan tässä *·**· yhteydessä kuvatun organismin käyttöön, vaan tämän organismin ;·*·*: käyttö on annettu ainoastaan havainnollisuuden vuoksi. Tämä keksintö sisältää myös minkä tahansa mutant in, joka kykenee tuottamaan aineita FR-900506 ja/tai FR-900525 käytön, mukaan lukien luonnon mutantit sekä keinotekoiset mutantit, jotka voidaan valmistaa kuvatusta organismista tavanomaisin keinoin :Y: kuten säteilyttämällä röntgensäteillä, ultraviolettisäteily- tyksellä, käsittelemällä N-metyyli-N'-nitro-N-nitrosoguanidil-. . la, 2-aminopuriinilla ja vastaavilla.
Streptomyces tsukubaensis no. 9993 kannalla on seuraavat morfologiset, biologiset, fysiologiset ominaisuudet ja viljelyominaisuudet.
* · * 7 67803 (X) Morfologiset ominaisuudet: Tässä taksonomisessa tutkimuksessa käytettiin pääasiallisesti Shirlingin ja Gottliebin kuvaamia menetelmiä (Shirling, E.B. ja D. Gottlieb: Methods for characterization of Streptomyces species. International Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313 - 340, 1966).
Morfologiset havainnot tehtiin valo- ja elektronimikroskoopeilla viljelmillä, joita oli kasvatettu 30°C:ssa 14 päivää ohrajauhoagari1 la, hiivamallasuuteagari11 a ja epäorgaaniset suolat - tärkkelysagarilla. Kypsät sporoforit muodostivat Rectiflexibiles-rakenteita, jolloin jokaisessa ketjussa oli 10 - 50 tai yli 50 itiötä. Elektronimikroskoopilla havainnoitaessa itiöt olivat pitkänomaisia tai sylinterimäisiä ja kooltaan 0,5 - 0,7 x 0,7 - 0,8 um. Itiöiden pinnat olivat sileitä.
(2) Viljelyominaisuudet:
Viljelyominaisuudet tutkittiin Shirlingin ja Gottliebin edellä kuvaamalla ja Waksmannin kuvaamalla kymmenellä eri alustalla (Waksman, S.A.: The actinomycetes, voi. 2: Classification, indentification and description of genera and species. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1961).
» *
Inkubointi suoritettiin 14 päivän aikana 30°C:ssa. Tässä tut-···-’ kimuksessa käytetyt värien nimet perustuivat Guide to Color-; standardiin (käsikirjan julkaisija Nippon Shikisai Kenkyusho, Tokio). Pesäkkeet kuuluivat harmaaseen värisarjaan kasvatettaessa ohrajauhoagarilla, hiivamallasuuteagarilla ja epäorgaani-. . set suola - tärkkelysaragilla. Liukoista pigmenttiä muodostui hiivamallasuuteagarilla mutta ei muilla alustoilla. Tulokset V ' on esitetty taulukossa 1.
• * • « · • » 8 87803
Taulukko 1
Kannan no. 9993 ja Streptomyces misakiensis IFO 12891 kannan viljelyominaisuudet.
Viljelyominaisuudet
Musta_no. 9993_IFO 12891_ ohrajauhoagar G kohtalainen kohtalainen A harmaa harmahtavan valkoinen R vaalean punertava väritön S ei ei hiiva-mallas- G kohtalainen kohtalainen uuteagar Ά vaalean harmaa harmaan valkoinen R himmeä punertava vaalean ruskea oranssi S himmeä punertava ei oranssi epäorgaaniset G kohtalainen kohtalainen suolat - tärkke- A vaalea keltaisen harmahtavan valkoinen lysagar oranssi vaalea harmaa R tumma oranssi vaalea kellertävän ruskea S ei ei . Glukoosiaspara- G heikko kohtalainen giiniagar A valkoinen harmahtavan valkoinen R vaalean ruskea vaalea kellertävän ruskea ;···* S ei vaalean ruskea • *
Glyseriiniaspa- G kohtalainen kohtalainen ragiiniagar A vaalean punerta- harmahtavan valkoinen va-valkoinen * R vaalean punertava vaalea kellertävän l./ ruskea * * · S ei vaalean ruskea 4 • 4 1 · “ · · • · · • * * • « » % * *· a » · « · rt 9 8 7 8 ϋ 3
Alusta___no. 9993_IFO 12891_
Czapekagar G heikko runsas A ei harmahtavan valkoinen R vaalean punertava tumma oranssi - tumma ruskea S ei ei
Ravintoagar G heikko heikko A valkoinen, heikko valkoinen R väritön väritön S ei ei perunadekstroo- G heikko kohtalainen siagar A ei kellertävän harmaa R vaalean punainen ruskea S ei ei tyrosiiniagar G kohtalainen kohtalainen A valkoinen harmahtavan valkoinen - vaalean harmaa R himmeä punertava tumma oranssi - musta oranssi S ei ei peptonihiiva- G heikko heikko uuterauta-agar A ei ei R väritön väritön S ei ei ' Lyhennykset: G = kasvu, • A = ilmamassan väri ·;- R = väri kääntöpuolella : \'m S = liukoinen pigmentti
Soluseinämän analyysi suoritettiin Becker et ai. (Becker, B., M.P. Lechevälier, R.E. Gordon ja H.A. Lechevalier: Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatography of whole cell hydrolysates: Appi. Microbiol., 12, 421 - 423, 1964) ja Yamagutsin (Yamaguchi, T.: Comparison '1· of the cell wall composition of morfhological 1 y distinct actinomycetes: J. Bacteriol., 89, 444-453, 1965) menetelmillä.
· • · · · 10 37803
Kannan no. 9993 koko seinämän hydrolysaatin analyysi osoitti, että mukana oli LL-diaminopimeliinihappoa. Tämän kannan solu-seinämän uskotaan siten olevan tyyppiä I.
(3) Biologiset ja fysiologiset ominaisuudet:
Kannan no. 9993 fysiologiset ominaisuudet määritettiin Shir-ling ja Gottliebin kuvaamilla edellä mainituilla menetelmillä. Tulokset on esitetty taulukossa 2. Kasvun lämpötila-alue ja optimaalinen lämpötila määritettiin hiiva-mallasuuteagarilla käyttämällä lämpötilagradientilla varustettua inkubaattoria (valmistaja Toyo Kagaku Sangyo Co., Ltd.). Kasvun lämpötila-alue oli 18 - 35°C ja optimaalinen lämpötila 28°C. Maidon peptonisoituminen ja gelatiinin nesteytyminen olivat positiivisia. Melanoidipigmentin tuotto oli negatiivinen.
Taulukko 2
Kannan no. 9993 ja Streptomyces misakiensis IFO 12891 fysiologiset ominaisuudet.
Fysiologiset ominaisuudet_no. 9993_IFO 12891_
Kasvun lämpötila-alue 18 - 35°C 12 - 35°C
Optimilämpötila 28°C 28°C
Nitraatin pelkistäminen negatiivinen negatiivinen Tärkkelyksen hydrolyysi negatiivinen positiivinen ' Maidon koagulointi negatiivinen negatiivinen : Maidon peptonisointi positiivinen heikosti positiivinen
Melaniinin tuotto negatiivinen negatiivinen
Gelatiinin nesteytyminen positiivinen negatiivinen H2S:n tuotto negatiivinen negatiivinen
NaCl:n sietokyky (%) <3% 3%<,<5% * ; Hiililähteen käyttö tutkittiin Pridhamin ja Gottliebin mene-... telmillä (Pridham, T.G. ja D. Gottlieb: The utilization of carbon compounds by some Actinomycetales as an aid for species : . determination: J. Bacteriol., 56, 107-114, 1947). 14 päivän ”... 30°C:ssa tapahtuneen inkuboinnin jälkeen kasvu havainnoitiin.
n 37803
Yhteenveto tämän kannan hii1i1ähteiden käytöstä on esitetty taulukossa 3. Kanta no. 9993 kykeni käyttämään glyseriiniä, malto-osia ja natriumsukkinaattia. Lisäksi havaittiin epävarma D-glukoosin, sakkaroosin, D-mannoosin ja salisiinin käyttö.
Taulukko 3
Kannan no. 9993 ja Streptomyces misakiensis IFO 12891 hiili-lähteiden käyttö.
Hiililähteet no. 9993 IFO 12891__ D-glukoosi ±
Sakkaroosi ±
Glyseriini + D-ksyloosi D-fruktoosi
Laktoosi
Maltoosi +
Ramnoosi
Raffinoosi D-Galaktoosi L-arabinoosi D-mannoosi ± D-trehaloosi
Inositoli D-mannitoli
Inuliini - +
Seiluloosa : V Salisiini ± :*· Kitiini • · · . Natriumsitraatti ···· Natriumsukkinaatti +
Natriumasetaatti
Symbolit: +': käyttää ± : käyttää mahdollisesti - : ei käytä
Kannan no. 9993 mikroskooppiset tutkimukset ja soluseinämän koostumuksen analyysi osoittavat, että tämä kanta kuuluu sukuun Streptomyces Waksman ja Henrici 1943.
i2 87803 Tätä kantaa verrattiin sen vuoksi eri streptomyces-lajeihin julkaistujen kuvausten valossa. [International Journal of Systematic Bacteriology, 18, 69 - 189, 279 - 392 (1968) ja 19, 391 - 512 (1969), ja Bergy's Manual of Determinative Bacteriology 8th Edition (1974)].
Vertailun tuloksena katsotaan kannan no. 9993 muistuttavan Streptomyces aburaviensis Nishimura et. ai., Streptomyces avellaneus Baldacci ja Grein ja Streptomyces misakiensis Nakamura -kantaja. Sen vuoksi verrattiin kannan no. 9993 viljelyominaisuuksia vastaaviin Streptomyces aburaviensis IFO 12830, Streptomyces avellaneus IFO 13451 ja Streptomyces misakiensis IFO 12891 -kantoihin. Tämän seurauksena kanta no. 9993 muistutti eniten Streptomyces misakiensis IFO 12891 kantaa. Sen vuoksi kantaa noo. 9993 verrattiin edelleen Streptomyces misakiensis IFO 12891 kantaan, kuten on esitetty edellä taulukoissa 1, 2 ja 3. Jatkovertailujen perusteella kanta no. 9993 voitiin erottaa Streptomyces misakiensis IFO 12891 kannasta jäljempänä esitetyissä kohdissa. Sen vuoksi kantaa no. 9993 pidetään uutena streptomyces-lajina ja sille on annettu nimeksi Streptomyces tsukubaensis sp. nov., joka viittaa Tsukuba-gun seudulta kerättyyn maahan, josta organismi eristettiin.
....: Erot Streptomyces misakiensis IRQ 12891 kannasta · Kannan no. 9993 viljelyominaisuudet ovat erilaiset Streptomyces misakiensis IRO 12891 kantaan verrattuna ohrajauhoagaril-la, hiiva-mallasuuteagarilla, glukoosi-asparatiiniagarilla, ctsapek-agarilla ja peruna-dekstroosiagarilla.
' 1 Kannan no. 9993 tärkkelyshydrolyysi on negatiivinen, mutta
Streptomyces misakiensis IFO 12891 kannalla tämä on positiivi-nen.
• · · » « i3 87803
Kannan no. 9993 gelatiinin nesteyttäminen on positiivinen, mutta Streptomyces misakiensis IFO 12891 kannalla tämän on negatiivinen.
Kanta no. 9993 on hiililähteistä käyttää glyseriiniä, maltoo-sia ja natriumsukkinaattia, kun taas Streptomyces misakiensis IFO 12891 ei voi niitä käyttää. Kanta no. 9993 ei voi taas käyttää D-galaktoosia ja inuliinia, kun taas Streptomyces misakiensis IFO 12891 voi niitä käyttää.
AINEIDEN FR-900506, JA FR-900525 TUOTTAMINEN
Uudet tämän keksinnön mukaiset aineet FR-900506 ja FR-900525 voidaan tuottaa viljelemällä ravintoalustassa ainetta (aineita) FR-900506 ja/tai FR-900525 tuottavaa kantaa, joka kuuluu streptomyces-sukuun (esim. Streptomyces tsukubaensis no. 9993, FERM BP-927).
Yleisesti sanoen voidaan ainetta (aineita) FR-900506 ja/tai FR-900525 tuottaa viljelemällä ainetta (aineita) FR-900506 ja/tai FR-900525 tuottavaa kantaa vesipitoisessa ravintoalustassa, joka sisältää assimiloituvia hiili- ja typpilähteitä, parhaiten aerobisissa olosuhteissa (esim. ravisteluvi1jely, pinnanalaisvi1jely jne.).
... Parhaana pidetyt hiililähteet ravintoalustassa ovat hiilihyd- • · raatteja kuten glukoosi, ksyloosi, galaktoosi, glyseriini, : ·· tärkkelys, dekstriini ja vastaavat. Muita lähteitä, joita *:1 voidaan käyttää, ovat maltoosi, ramnoosi, raffinoosi, arabi-» · > · : noosi, mannoosi, salisiini, natriumsukkinaatti ja vastaavat.
· 1 1 Parhaana pidettyjä typpilähteitä ovat hiivauute, peptoni,
A
gluteeni jauho, pellavansiemenjauho, soijapavunjauho, maissin : ·.: liotusvesi, kuivahiiva, vehnänalkio, höyhenjauho, maapähki- näjauho jne., sekä epäorgaaniset ja orgaaniset typpiyhdisteet kuten ammoniumsuolat, (esim. ammoniumnitraatti, ammoniumsul-: '·· faatti, ammoniumfosfaatti jne.), urea aminohappo ja vastaavat.
i4 87803
Hiili- ja typpilähteitä, joita tosin käytetään edullisesti yhdistelmänä, ei tarvitse käyttää puhtaissa muodoissaan, koska käyttöön sopivat myös vähemmän puhtaat materiaalit, jotka sisältävät hivenmäärinä kasvutekijöitä ja huomattavia määriä mineraaliravinteita. Haluttaessa alustaan voidaan lisätä mine-raalisuoloja kuten natrium- tai kalsiumkarbonaattia, natrium-tai kaliumfosfaatti, natrium- tai kaliumkloridia, natrium- tai kaliumjodidia, magnesiumsuoloja, kuparisuolo ja, kobolttisuolaa ja vastaavia. Tarvittaessa, erityisesti kun viljelyalusta vaahtoaa voimakkaasti, voidaan lisätä vaahdonestoainetta kuten nestemäistä parafiinia, rasvaöljyä, kasviöljyä, mineraaliöljyä tai silikonia.
Jos aineita FR-900506 ja FR-900525 tuottaa suuria määriä, pidetään parhaana pinnanalaisia aerobisia viljelyolosuhteita. Pienten määrien tuottamista varten käytetään ravistelu- tai pintavi1jelmää pullossa. Jos kasvu tapahtuu suurissa tankeissa, on suositeltavaa käyttää organismin vegetatiivista muotoa siirrostamiseen tuotantotankeissa, että vältettäisiin kasvun lag-vaihe aineiden FR-900506 ja FR-900525 tuottoprosessia. Siten on toivottavaa tuottaa ensin organismin vegetatiivinen siirroste siirrostamalla suhteellisen pieni määrä viljelyalus-taa organismin itiöille tai rihmastolla ja viljelemällä mainittua siirrostettua alustaa, minkä jälkeen vegetatiivinen siirroste siirretään aseptisesti suuriin tankkeihin. Alusta, ... jossa vegetatiivinen siirroste tuotetaan, on oleellisesti sama tai erilainen kuin alusta, jota käytetään aineiden FR-900506 ja FR-900525 tuottoon.
: Vil jelyseoksen sekoittaminen ja ilmastus voidaan suorittaa monilla eri tavoilla. Sekoitus voidaan saada aikaan potkurilla tai samantapaisella mekaanisella sekoitusiaitteistolla, pyö- * rittämällä tai ravistelemalla fermentoria, erilaisten pumppa-:/·: uslaitteistojen avulla tai johtamalla steriiliä ilmaa alustan läpi. Ilmastus voidaan suorittaa johtamalla steriiliä ilmaa fermentaatioseoksen läpi.
« m * · * * is 87803
Fermentaatio suoritetaan tavallisesti lämpötilassa välillä noin 20°C - 30°C, parhaiten 25 - 35°C:ssa, noin 50 - 150 tunnin aikana, joka voi vaihdella riippuen fermentaatio-olo-suhteista ja mittakaavasta.
Näin tuotetut aineet FR-900506 ja/tai FR-900525 voidaan ottaa talteen viljelyalustasta tavanomaisin keinoin, jota yleisesti käytetään muiden tunnettujen biologisesti aktiivisten aineiden taiteenottamiseen. Tuotetut aineet FR-900506 ja FR-900525 voidaan siten eristää ja puhdistaa rihmastosta ja suodoksesta, jotka saadaan suodattamalla tai sentrifugoimalla vi1jely1iemi, tavanomaisilla menetelmillä kuten väkevöimällä alipaineessa, lyofilisoimalla, uuttamalla tavanomaisilla liuottimilla, pH-säädön avulla, käsittelemällä tavanomaisella hartsilla (esim. anioni- tai kationi-ioninvaihtohartsi, ei-ioni11inen adsorptiohartsi jne.), käsittelemällä tavanomaisilla adsorben-teilla (esim. aktivoitu hiili, piihappo, silikageeli, selluloosa, alumiinioksidi jne.), kiteyttämällä, kiteyttämällä uudelleen jne.
AINEIDEN FR-900506 JA FR-900525 FYSIOLOGISET JA KEMIALLISET
OMINAISUUDET
Edellä mainituilla menetelmillä valmistetuilla aineilla FR-900506 ja FR-900525 on seuraavat fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet.
- " FR-900506 : (1) Muoto ja väri: valkoinen jauhe (2) Alkuaineanalyysi: C: 64,72 %, H: 8,78 %, N: 1,59 % 64,59 8,74 1,52 ie 87803 (3) Värireaktio:
Positiivinen: seriumsulfaattireaktio, rikkihapporeaktio,
Ehrlichin reaktio, Dragendorffin reaktio ja jodihöyry-reaktio
Negatiivinen: ferrikloridireaktio, ninhydriinireaktio ja
Molishin reaktio (4) ti likoin UUS :
Liukenee: metanoli, etanoli, asetoni, etyyliasetaat ti, kloroformi, dietyylieetteri ja bent-seeni
Liukenee niukasti: heksaani, petrolieetteri
Ei liukene: vesi
(5) Sulamispiste: 85 - 90°C
(6) Ominaiskiertokvky: [a]^3 : -73° (c = 0,8 CHI3) (7) UV-absorptiospektri: loppuabsorptio (8) IR-absorptiospektri: vCHCl3: 3680, 3580, 3520, 2930, 2870, 2830, max 1745, 1720, 1700, 1645, 1450, 1380, 1350, 1330, 1310, 1285, 1170, 1135, 1090, 1050, 1030, 1000, 990, 960(sh), : 918 cm”l :* (9) 13C NMR-spektri: ... δ (ppm, CDCl 3) : /*212,59 (s) il96,18 (s) f169,07 (s) ;*·; (212,45 (s), (192,87 (s), (168,90 (s), : /164,90 (s) /138,89 (s) /135,73 (d) :V: (l66,01 (s), (139,67 (s), (135,60 (d), /132,52 (s) /130,27 (d) /122,87 (d) ... . (131,99 (s), (130,21 (d), (123,01 (d), /116,57 (t) / 97,35 (s) 84,42 (d), : ( 116,56 (t) ( 98,76 (s) , ·! /77,79 (d) /75,54 (d) /73,93 (d) ( 78,22 (d), ( 76,97 (d), (73,09 (d), 0 · » · · 8 7 803 17 (73,72 (d) 170,05 (d) 56,75 (d), 1 75,57 (d), ( 69,15 (d), f 53,03 (d) 148,85 (t) ^40,33 (d) [53,13 (d), (48,62 (t), (40,84 (d) 39,40 (t) 31,58 (t), 30,79 (t), /27,72 (t) I 26,34 (t), 26,46 (d), 24,65 (t), /20,45 (q) (19,73 (q), /14,06 (q) (9,69 (q) (14,23 (q), (9,98 (q), spektri on esitetty taulukossa 1.
(10) NMR-spektri: spektri on esitetty taulukossa 2.
(11) Ohutkerroskromatografia:
Stationäärif aasi Kehitysl juotin Rf.r_a.i-V.pt si 1ikageeli1evy kloroformi : metanoli 0,58 (10:1, v/v) etyyliasetaatti 0,52 (12) Aineen ominaisuus: neutraali aine.
Aineen FR-900506 suhteen on huomattava, että 13C- ja 1H-NMR-; ·’ spektrien mittauksissa tällä yhdistellä oli signaalipareja eri • ’·1 kemiallisilla siirtymillä.
• · · « r .·. Näin karakterisoidulla FR-900506 yhdisteellä on edelleen ’· seuraavat ominaisuudet.
(i) 12C NMR-spektrien mittaukset 25°C ja 60°C:ssa osoittivat : että eri signaalien kunkin parin intensiteetit olivat muuttuneet.
ft m ft · · · » I 1 is 87803 (ii) Ohutlevykromatografia- ja suuren suorituskyvyn nestekro-matografia- mittaukset osoittivat, että FR-900506 esiintyy yhtenä ainoana täplänä ohutlevykromatografiässä ja yhtenä ainoana piikkinä suuren suorituskyvyn nestekroma-tografiässä.
Tämä valkoinen FR-900506 aine voitiin muuntaa kiteiseen muotoon kiteyttämällä uudelleen asetonitrii1istä. Sillä on seu-raavat fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet.
(1) Muoto ia väri: värittömiä prismo-ja (2) Alkuaineanalyysi: C: 64,30 %, H: 8,92 %, N: 1,77 % 64,20 %, 8,86 %, 1,72 %,
(3) Sulamispiste: 127 - 129°C
(4) Ominaiskiertokykv: [a]^ : -84,4° (c = 1,02 CHI3) (5) 13C NMR-§P<?kUi: 6(ppm, ODCI3): ί211,98 (s) Γ 196,28 (s) / 168,97 (s) (211,74 (s), (193,56 (s), (168,81 (s), /164,85 (s) ( 138,76 (s) ?135,73 (d) (165,97 (s), (139,51 (s), (135,63 (d), /132,38 (s) (130,39 (d) (122,82 (d) / (131,90 (s), (130,17 (d) , (122,96 (d), 116,43 (t) (97,19 (s) 84,29 (d) , :(98,63 (s), ( 77,84 (d) ( 77,52 (d) ( 69,89 (d) ; (78,21 (d), ( 76,97 (d), ( 69,00 (d), ‘ j 56,63 (d) (52,97 (d) ( 48,76 (t) (54,87 (d), (52,82 (d), (48,31 (t), /40,21 (d) 31,62 (t), 30,72 (t),
Oi ( 40,54 (d), :T: 24,56 (t), (21,12 (t) (20,33 (q) ( 20,86 (t), (19,74 (q), • · « · i9 87803 J 16,17 (q) / 15.88 (,) ( 13,89 (1) lie,10 (q), ( 15,75 (,), ( 14.05 <1>· r 9,64 (q) 1 9'96 (q), spektri on esitetty kuviossa 3.
(6) NMR-spektri: Spektri on esitetty kuviossa 4.
Muut fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet, so. värittömien FR-900506 prismojen värireaktio, liukoisuus, uitraviolettiab-sorptiospektri, infrapuna-absorptiospektri, ohut 1evykromato-grafia ja paino-ominaisuudet olivat samat kuin saman aineen valkoisella jauheella identtisissä olosuhteissa.
Edellä olevista fysikaalisista ja kemiallisista ominaisuuksista ja röntgendifraktioanalyysista voitiin päätellä FR-900506 yhdisteellä olevan seuraava kemiallinen rakenne CH3 CHs—h. JL it o e 8 \ r 16 '· '· f I /°11 0H ^ m^>CH2-CH=CH2 ; 0 li !* o . 2Γ CH_ I^oh 20 \ 3 X;i\ CH3^T028 y-CH3 OCH3 OCH3 * » .
* * • · * » » · « * ·« >·« 2o 37803 17-Ailyyli-1,14-dihydroksi-12-[l-(4-hydroksi-3-metoksisyklo-heksyyli)-l-metyylivinyyli]-23,25-dimetoksi-13,19,21,27-tetra-metyyli-11,28-dioksi-4-atsatrisyklo[22.3.1.O4'9]oktakos-18-eeni-2,3,10,16-tetraoni.
FR-900525 (1) Muoto ia väri: valkoinen jauhe (2) Alkuaineanalyysi: C: 65,17 %, H: 8,53 %, N: 1,76 % (3) Värireaktio:
Positiivinen: seriumsulfaattireaktio, rikkihapporeaktio,
Ehrlichin reaktio, Dragendorffin reaktio ja jodihöyry-reaktio
Negatiivinen: ferrikloridireaktio, ninhydriinireaktio ja
Molishin reaktio ( 4) ULyR&iAJUiS :
Liukenee: metanoli, etanoli, asetoni, etyyliasetaat ti, kloroformi, dietyylieetteri ja bent-seeni
Liukenee niukasti: heksaani, petrolieetteri
Ei liukene: vesi
... (5) Sulamispiste: 85 - 89°C
: *·· (6) Ominaiskiertokyky: [a]^3 : -88° (c = 1,0 CH13) ·'*; (7) UV-absorptiospektri: loppuabsorptio : : : (8) IR-absorptiospektri: vCHCl3: 3680, 3580, 3475, 3340, 2940, 2880, .·. ; max 2830, 1755, 1705, 1635, 1455, 1382, 1370, 1330, 1310, 1273, 1170, 1135, :·· ! 1093, 1050, 1020, 995, 970, 920, 876 cm-1 2i 37803 (9) 13C NMR-spektri: (ppm, CDCl3): [212,61 (s) (188,57 (s) [168,76 (s) \211,87 (s), (191,12 (s), (170,18 (s), [163,11 (s) (140,28 (s) / 135,63 (d) (161,39 (s), (139,37 (s), (135,70 (d), f 132,28 (s) [ 130,09 (d) [122,50 (d) (131,34 (s), ( 130,00 (d), (123,23 (d) , 116,48 (t) (99,16 (s) J 84,42 (d), ( 99,11 (s) ( 84,48 (d), [78,60 (d) f 76,73 (d) ( 59,97 (d) (79,86 (d), (77,33 (d), (60,45 (d), 57,52 (q) (56,56 (q) [56,14 (q), ( 56,48 (q), ( 55,97 (q), (53,45 (d) (49,15 (t) (48,46 (t) (53,26 (d), (49,73 (t), (47,62 (t), (44,47 (t) [41,40 (d) f35,19 (d) (45,23 (t), (40,40 (d), (35,11 (d) , (33,10 (d) [32,81 (t) [31,53 (t) (34,17 (d), (32,29 (t), (31,33 (t), [30,80 (t) 28,60 (t), (26,03 (d) (30,66 (t), (26,98 (d), [25,43 (t) f18,93 (q) [14,09 (q) ( 24,40 (t) ( 20,57 (q) , (13,95 (q), f 9,85 (q) ....: (10,00 (q) .. . spektri on esitetty taulukossa 5.
J "·· (10) NMR-spektri: spektri on esitetty taulukossa 6.
: (11) Ohutkerroskromatografia:
Stationäärifaasi Kehitysljuotin Riraryo silikageelifevy etyyliasetaatti 0,34 .·;·. (12) Aineen ominaisuus: neutraali aine.
» » # 22 07803 FR-900525 yhdisteestä on huomattava, että ^3C ja 1¾ NMR-spekt-rien mittauksissa tällä yhdistellä esiintyi signaalipareja eri kemiallisilla siirtymillä. Kuitenkin ohutlevykromatografia- ja suuren suorituskyvyn nestekromatografia-mittauksissa FR-900525 yhdisteellä oli yksi ainoa täplä ohutlevykromatografiässä ja yksi ainoa piikki suuren suorituskyvyn nestekromatografiässä.
Esillä olevista fysikaalisista ja kemiallisista ominaisuuksista ja FR-900506 yhdisteen kemiallisen rakenteen onnistuneen määrityksen perusteella voitiin FR-900525 yhdisteellä päätellä olevan seuraava kemiallinen rakenne.
HOv>v CHjO-'k/k CH3
Cl_. T r3
Γ jL /°10 OH
17ri^l^CH2-CH=CH2
0 igL
°, LoH < CH3 pu 26 \ 3J1 0 27 29^ch 25 L Jv. / 3 : .· 24| |22 OCH3 OCH3 • » · · « · · » · · • · « · • · « 16-Ai 1yyli-1,13-dihydroksi-ll-[2-(4-hydroksi-3-metoksisyklo-heksyy 1 i ) -1-met yyl ivinyyl i ]-22,24-dimetoksi -12,18,20,26-tetra-met yyl i-10,27-dioksi-4-atsatrisykl o[ 21.3.1.04'®] oktakos-18-eeni-2,3,9,15-tetraoni.
• · * • · • · 23 87803 [B] Tämän keksinnön mukainen FR-900523 voidaan valmistaa fermentoimal1 a yhdistettä FR-900523 tuottavaa, streptomyces-sukuun kuuluvaa kantaa kuten Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis no. 7238 ravintoalustaa.
MIKRO-ORGANISMI
Mikro-organismi, jota voidaan käyttää FR-900523 yhdisteen tuottamiseen on FR-900523 yhdistettä tuottava kanta, joka kuuluu streptomyces-sukuun. Näistä Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis no. 7238 on äskettäin eristetty maa-näytteestä, jonka keräämiskohta oli Yakushima, Kagoshima Prefecture, Japani.
Juuri eristetyn Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis no. 7238 kannan lyofilisoitu näyte on talletettu Fermentation Research Institute laitokseen, Agency of Industrial Science and Technology (No. 1-3, Higashi 1-chome, Yatabemachi, Tsukuba-gun, Ibaraki Prefecture, Japani) numerolla FERM p-8043 (tailetuspäivä: 12.1.1985) ja sen jälkeen muutettu samassa talletuslaitoksessa Budapestin sopimuksen alaiseksi 19.10.1985 uudella tai 1etusnumerol1 a FERM BP-928.
Huomattakoon, että uuden FR-900523 yhdisteen tuottaminen ei rajoitu nimenomaan tässä yhteydessä kuvatun organismin käyttä-... miseen, joka on annettu ainoastaan havainnollisuuden vuoksi.
; Tämä keksintö käsittää siten myös kaikkien mahdollisten mu- • '·· tanttien käytön, jotka kykenevät tuottamaan FR-900523 ainetta, mukaan lukien luonnonmutantit sekä keinotekoiset mutantit, : .·. jotka voidaan valmistaa kuvatusta organismista tavanomaisin keinoin kuten säteilyttämällä röntgensäteillä, ultraviolet-tisäteilyttämällä, käsittelemällä M-metyyli-N'-nitro-N-nitro-soguanidiini1 la, 2-aminopuriinilla ja vastaavilla.
Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis no. 7238 kannalla on seuraavat morfologiset, biologiset ja fysiologiset : ** ominaisuudet sekä viljelyominaisuudet.
24 37803 [1] Morfologiset ominaisuudet: Tässä taksonoomisessa tutkimuksessa käytettiin pääasiallisesti Shirlingin ja Gottliebin kuvaamia menetelmiä (Shirling, E.B. ja D. Gottlieb: Methods for characterization of Streptomyces species. International Journal of Systematic Bacteriology 16, 313 - 340, 1966).
Morfologiset havainnot tehtiin valo- ja elektronimikroskoopeilla viljelmillä, joita oli kasvatettu 30°C:ssa 14 päivää ohrajauhoagarilla, hiiva-mallasuuteagarilla ja epäorgaaniset suolat - tärkkelysagari11 a. Kypsät sporoforit olivat kohtalaisen lyhyitä ja muodostivat Retinaculiaperti ja Spirales-ketju-ja, joissa oli noin 20 itiötä kussakin ketjussa. Ilmarihmas-tossa havaittiin hygroskooppista itiömassaa ohrajauhoagarilla ja epäorgaaniset suolat - tärkkelysaragilla. Itiöiden pinnan epäsäännöllisyydet olivat hyvin lyhyiden, paksujen harjanteiden ja nystyröiden välillä.
[2] Viljelyominaisuudet:
Viljelyominaisuudet tutkittiin Shirlingin ja Gottliebin edellä kuvaamalla ja Waksmannin (Waksman, S.A.: The actinomycetes voi. 2: Classification, indentification and description of —: genera and species. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, ... 1961) kuvaamalla kymmenellä alustalla.
: - Inkubointi tehtiin 30°C:ssa 14 päivän aikana. Tässä tutkimuk-sessa käytetyt värien nimet perustuivat Guide to Color Stan-: dardiin (käsikirjan julkaisija Nippon Shikisai Kenkyusho,
Tokio). Pesäkkeet kuuluivat harmaaseen värisarjaan kasvatettaessa ohrajauhoagarilla, hiiva-mallasuuteagarilla ja epäorgaaniset suolat - tärkkelysagarilla. Tutkituilla alustoilla ei : muodostunut liukoista pigmenttiä. Tulokset on esitetty taulu- ·/·'·. kossa 4.
i! 25 37803
I QJ C
H C 0) d> H GO) 3 X (TJ G Η G -H 3 <υ 4-) oi G g λ; CM Ή CO) CCD 4-) rB O) <L> <L)C CD «Π —< ra 01 CD > 3 X era C X d) m
QJ 00 ra M -H C Ή M
O Γ" DG rao ra C -H
>1 ro O X G G t—l ra H ιβ ιβ »1 G »- x ta ai ai <tj ta ta · g <d ai oi
O M G oi Γ-H D G § D j—I > I C
4-) o -h e-h ta x e G a ra « m
Dj [m d) G G G -H O G 3 -H O G G C H
ai m χ x d > οι x x d ai x > > o ni e 4-) en e ra :ra <a •ro C > ra
I 0) :ra G
en rH C 4-) C
ro dl -H C <a oo λ: <a ra cu x
ΓΜ Q> 4-1 I—I
<— C M Ή Ή CC
4-> ra 01 φ d) Q) :ra O Olen > 3 X x c> fu T) n ra C H :ra
H 3 oo D G e G D
3 (N O X G G 01 ra ra o) rH ra e οι oi T- χ g a) d) ra ta ai oi raran)
3 -H ^ g 01 H 0) g rH X 4-> G rH
o rao -h e-h ta e e g oi x e d •h etu ai ta ta ta -h 3rara3-H oraa) h -M CD -HM .e .e 4-> > d) C X > C d) XXX d)
0 00 G
υ Γ- o e >t ro >, d)
G r- rH CC
•H 0) -H :G
DO -n C O > C tj D Id) λ; :re e
Cm -H (—iC <—ID d) > d) -h ra e ra 01
0101 X G G >dl D-H
01 3 d) D D 01 ra
UOl G Ai >—I G G -H C 3 D
>1 o raoid) di <a ai <1)Gd G Λ > 3 Ai C > Ai Cd) oa) co rae -h ta -h ia;
D iH ro DC G D G ra -H
Dj tn cm o X C ta D X G G .—i ca ta en d) cd Ai ta cu Q) ta ta d) d) ta ta oi oi
e· M £ 01 H D G Ή X D g D G
dDj · -h e-h ta x e g oi x e g g . co en o cd ra ta g -e o g g 3 -e o g g e -h ..... X 2 X X D > 0) X X > C d) X X > O d) - 3 ... CO 01 : : ro • · (M 01 • - r» 3 : ·.. o
’ · -H
.: . O Dj co u < « ui o<c«oi o<coio . . o
•-•CO) D
- ta o e
• cc .H
: : : e d> i o • · ra >i d) 3 2 X D 01 e 3 ra u 3 d en ; ra oi ta <a •. ·: Di ta oi oi ... ^ ra rH -H >1
• ' * O '—l C r—I
·* O X ra to d)
Ai 3 G <a X
x ra ra i di x
• ."3 D m ta CC
rH oi ta > e O :ra
. * *. 3 3 e -H ra :ra D
dj r—IX -H Di Dj
E-1 <C O X ta d) I
26 37803 c
I I 1 CD
H H :tO C
ID H (0 CD 4-) H
X U) dl M dl U <0 3
W β CD CD 4-) D
ccc d o d d h d h CD tO (0 CD dl <0 in Q) I—I (I) 0)0)4-) VO C d > M C ί > 3 d d <D CD C ΛΙ dl 00 H Q) (0 O H (OP H a> μ λ: h n r^dJd-P d) d 4-> dJCtn to d ΓΟ H H X! C rl IÖ £ d Η Ή m 3 H d5 <- «ι ο ιί 0) to ai <0 a) ro o cd p di a)
4) A! £ «I 4-> H β W 4) J< H 4-> H
O XJ H p H Xl dl P H £ H d! C Xl di
tn O Ό (O (0 H o dl dl di -H o m dl :nl -H o -H dl H
m λ: > x; 4J ai ^ > jd +J cd aC>>>id λ; <d > cd d cc a) cdo) tn cc Ή dl -H C Ή
(O dl O :<n O C
-m e λ; > xc oi
rH P H d0 I—1C
(D dl dl 4-1 dl -H
3* x: >1-1 > di <D 4-) dd Cd cdH cch ai dl 0) :rO ui dl H (U ra ai en c > c> d>a> c > λ: ro H dl -H :dl H dl H dl
00dJ4-)-H dl 4-) dl4-) dl 4-) C
IN H (O Xl tn H dl M H JC dl dl i—I Xl dl r- di m ui in djma) di di cd cd ro di a) 4-> β β C 4-) S H 4-) β h 4-)£h O xl >-) l-ι dl xl l-ι h x: p rö en x: p ro
Pm O dl (0 P H OdlQ) H O <0 (O 3 H Odldl H
H^xixioa) χ x: x cd x: > p <d x: > ai d d cd CD CD CD Q) d in cc
•H H dl H C *H
O dl dl O :n3 O d x, +j e x > xv
H H 1>4 H d0 H C
dl CD dl (O 4-) dl H
> -* x: >i-( > di (D 4-) ddd Cd CdH cch
CDdld) CD :(0 (D dl H (D (O CD
d>> Cd> c > cd d > xc CO -H (O dl H (D :dl H (0 Ai -H (0
rO dl -P 4-) H (0d4-> dl-P dl 4-) C
CNHXixicn H H p H X3 dl dl HXldl
Γ' dl dl n) in (0 O CD (O dl CD CD (0 (0 CD
4J β β d D ϋ H 4-) β H Ai 4-> β i—I
• x: }H J-l dJ X! H H Xl P (0 tn XlCdl
O O (O (0 l-ι H O dl CD H O <0 dl 3 H Odldl H
Ϊ3 AC Xl X! O CD Χί > Xl <D XI X! > p 0) 4! 3 > Hl » · » ^ j' OrCa C/l O < CX C/l 0<CÄ ΙΛ O < d ΙΛ
P P
dl (0
Cn tn
• - (0 dl H
: h i h p >-i d h d di ro .' t *. i h d h Cn en ' “ * H H H H dl dl
. en tn h tn i O
.. dJOdl P dl x 4-) : ·.. 4J O M CD 14 CD d en x dl tn dl Dr h ·· 3 3 CU >1 CU dl > : : h h in h tn n to
< U dl O (0 U M
27 87803 cc c
<U φ CU
cco 3 tn H Ή G ·Η ro nj t/1 Hi
G G G G 3 G G
a) 3 i—i a) S ή cd U3 c d c a) ecu c
oo H Q) X -H I Ai -H
r- 3 C C <tJ 3 C
ro i—IfTj-HiTjttf tH 3 3 3 G :0
«- 3 a> O a) CU 3 3 CU CU 3 G
u hj; ri,ii -P ε g aC -P g
O x; ta p m m G G 3 en -G G
IG O 3 3 tO 3 H O 3 <0 3 ·Η O G :3 G
m a;>>>g<u ac G > g <u a: a> > cu
G G
0) CU
G G
•H ·Η 0 o I G Λ! ^ c (0 CU H G a)
G tn 3 cd G
5-| -H > > -H Ή 0 3 3 3 -p
CCCU-P CC G G G -P
CU 3Λ H CU 3 CU 3 Ή G
m G L·» 0) G > G > CU -HQ)
ro -3 3 Λ! -H 3 -H 3 AC G E
C03GG-G 3-P 3 -P :3 CP
cm i—l 3 3 M G G 3 3 G G 3 > G
r- 3 0) G (1) w 3 3 CU CU 33CU Dj G G 3 '—(G G ε AC AC G ε G c
O G 3 > 3 3 G G tn tn G G 3 3C
tn O 3 3 3 G G 033 3 033 3 COCU
m ac > g > o cu ac g g g λ; x > ci) cnc flj Ή ε o
3 AC
ε 3
»—I *H
O '3 Ή
AC G G G
AC CU CU CU ‘1 »
•3 tn en G
QJ *3 ·3 *3 l/) .G 3 3 3 CG CG CG 3
d) * G Q) G d) G G
cccu cccu ecu ' i
00 -3 a) Ai -3 a) AC -3 Ai CU
ro 3 G G 3 G 3 h
CNrH-3 3tn i—I -3 3 3 G 3 O
r~ 3 0 a> 3 3 o cu ai 3 a) 3 G AC G e G AC G AC G g Dj • G G 3 3 G G 3 en G 3 =0
____: O 03 3 G -H 0333 G O G 3 -3 G
·· z a; > >ocu Ai>>ea) accu>cu e :3 :". ‘. :3 : .· - ac .. 3 - - > -3
* en G
. 3 :3 *:* ac > ···· o < (¾ cq o < cz ω o < dc en ! 11 11 *** * o cc
I I
G 3
en G
O 3 O 3 • · G G 3 : g 3 >
• · en cp g G
. ; ·. AC 3 G G CU
* · - a) G G 3 tn
33 e I CP G
H · I G *3 3 ^3
; · . 3 , 3 G G I G
• G G en O 3 G
... en 3 G O G G a)
: : 3 G 3 G D 3 G
• * g a) tp >i a> 3 >i
% ‘, <C Dj 3 E-< CU G G
2β 3 7 803
Soluseinämän analyysi suoritettiin Becker et ai. (Becker, B., M.P. Lechevalier, R.E. Gordon ja H.A. Lechevalier: Rapid differentation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatography of whole cell hydrolysates: Appi. Microbiol., 12, 421 - 423, 1964) ja Yamaguchin (Yamaguchi, T.: Comparison of the cell wall composition of morfhoiogically distinct actinomycetes: J. Bacteriol., 89, 444 - 453, 1965) menetelmillä. Kannan no. 7238 koko seinämän hydrolysaatin analyysi osoitti, että mukana oli LL-diaminopimeliinihappoa. Tämän kannan soluseinämän uskotaan siten olevan tyyppiä I.
[3] Biologiset ja fysiologiset ominaisuudet:
Kannan no. 7238 fysiologiset ominaisuudet määritettiin Shir-lingin ja Gottliebin kuvaamilla edellä mainituilla menetelmillä. Tulokset on esitetty taulukossa 5. Kasvun lämpötila-alue ja optimaalinen lämpötila määritettiin hiiva-mallasuuteagaril-la käyttämällä lämpötilagradientilla varustettua inkubaattoria (valmistaja Toyo Kagaku Sangyo Co., Ltd.). Kasvun lämpötila-alue oli 18 - 36°C ja optimaalinen lämpötila 28°C. Tärkkelyksen hydrolyysi ja gelatiinin nesteytyminen olivat positiivisia. Melanoidipigmentin tuotto oli negatiivinen.
* 4 · · Ψ * * · * · * * · « * » · · 29 37803
G G G C C G C G
CJ QStUtUastUOSCUty o gggggggc:
U) KO ΙΠ -H -rt Ή -H -H -H -H -H
(U 00 <O >>>>>>>><*>
(_) (—. -H -H -H -r| -H -H -H -H
Cm (Ό I Ή -H Ή *r| -rl -H -rl -H I ~~
g r- -p-p+J-p-p-p-P-P
o cju3-h 333-h33 4J O oOtPtnCntPCnmcntPovi
CU Cu ^r^OJOD^CUOOJOJ
d) M r-cNGOjCCCOiGCm
M
-P
en 3 •n (Ti m 04 ccaccccc
r- U <D(D0)0)CUCUCI)CU
o e e e e e e e e O O'* CO *H -rH ·Η Ή -H -H -H -H o'°
Cu ro ro >>>>>>>>
M 00 Ή -H -rl ·Η ·Η ·Η Ή -H O
CM I -r-| - rl Ή -rl Ή Ή Ή -Η ’
US r- .p-p-P-P-P-P-P-P
3 CJCJ3-rl333-H33' U O OO tJil/ltrtJiÖil/l&Ö'# •h & ooooasoasasasoasas -PU3 H r-r\iGOiG£Ga)£Gr' O 00 υ r- >1 ro e <-
•H
-p o C Cu as h en en
<U 3 GGGGGGCC
uen cj astuasaiasasasas
>iO O GCCCCCCC
^ *H -H Ή ·Η Ή Ή -Η ·Η o'»0
Otl) 00 ro >>>>>>>> -p r-H ΓΟ -rl -Η Ή ‘Μ Ή ·Η Ή Ή Ο
Ci) C71 (Ν I -rl -rl -rl -Η -Η -Η Ή -Η ' 05 r- ρ · CJtJ3-H 333-ri33^ +j · OO tJientj'tJ'O'intJ'O'*1 ·...: w in ο οοοοφοωωωοοο ·· Λ 2 T-tNCa. CCCQjGGr- ... '3 r * : 00 tn • · ro • · cn tn : Γ" 3
" O
.:. · -h e ...: o a g -h as . . co as tn e
• · · O OS G >1 -H
C... G tn 3 -H >1 -H E — . . aS O 1—i E »—i -p Cp <^° : ; : cp as >1 o -h G -P tn —
GtT> I +Jp4J-HO>i 3 3 >1 as tn "d G O -P as 3 >.
X s: h as -h >t -h tn +j +J (n M
rl r-l x x; o -H o (Λ H >1 4J h h ι-h e 3 a> > a: -P -P :0-P<UG30-PC0 -rH0 ... astu & ;o ex as tn -p u h u ··· m m ti E Cj tnasOjCC-P+sas
· -H 3 :aS E G AS O 0) -H -H O AS H
. O tn 3 rH:3-H>iA:CXGC33cn
.. ^ O tn r—I -P r—I ·Η Ή -P *H
: a; ^ -h g -h m as g e ·η -h tn e 3 03 3E3ASOOG-PI3··
rH -H G >·ΗΡα:γ0Τ>3 3 3 rH
·.- 3 US -H tn-P-PP-rl-rlrHrHUSaSO
3 >1 E uJ CX -P :3 3 3 0) 0) <N P 3
. . E-I Cu O AiOC4JEEEtT>K3S
30 87803
Hiililähteiden hyväksikäyttöä tutkittiin Pridhamin ja Gott-liebin menetelmillä (Pridham, T.G. ja D. Gottlieb: The utilization of carbon compounds by some Actinomycetales as an aid for species determination: J. Bacteriol., 56, 107-114, 1946). Kasvu määritettiin 14 päivän inkuboinnin jälkeen 30°C:ssa.
Taulukkoon 6 on koottu tämän kannan hiililähteiden käyttö. Kanta no. 7238 voi käyttää D-glukoosia, sakkaroosia, laktoosia, maltoosia, D-trehaloosia, inositolia, inuliinia ja sa-1isiinia.
Taulukko 6
Kannan no. 7238, Streptomyces antimyocoticus IFO 12893 ja Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 hiili-lähteiden käyttö.
Hiililähteet no. 7238 IFO 12839 IFO 13786 D-glukoosi + + +
Sakkaroosi + + +
Glyseriini + + D-ksyloosi ± + D-fruktoosi + +
Laktoosi + + -
Maltoosi + - +
Ramnoosi +
Raffinoosi + + D-Galaktoosi + + i » · ; L-arabinoosi - ± ± D-mannoosi + + ' , D-trehaloosi + ± + . Inositoli + + + - ·'· D-mannitoli _ + + • ’ Inuliini + +
Selluloosa ±
Salisiini - + + .·, : Kitiini ± ” Natriumsitraatti ±
Natriumsukkinaatti _ + +
Natriumasetaatti -
Symbolit: + : käyttää ± : käyttää mahdollisesti - : ei käytä • * 3i 87803
Kannan no 7238 mikroskooppiset tutkimukset ja soluseinämän koostumuksen analyysi osoittavat, että tämä kanta kuuluu Streptomyces Waksman ja Henrici 1943 sukuun.
Sen vuoksi tätä kantaa verrattiin eri streptomyces-lajeihin julkaistujen kuvausten valossa. [International Journal of Systematic Bacteriology, 18, 69 - 189, 279 - 392 (1968) ja 19, 391 - 512 (1969), ja Bergy's Manual of Determinative Bacteriology 8th Edition (1974)].
Vertailun tuloksena kannan no. 7238 katsotaan muistuttavan kantoja Streptomyces antimycoticus Waksman 1957 ja Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus Ohmori, et. ai. 1962. Kannan no. 7238 viljelyominaisuuksia verrattiin sen vuoksi vielä vastaavien Streptomyces antimycoticus IFO 12839 ja Streptomyces hygroscopicus subsp. glegosus IFO 13786 kantojen ominaisuuksiin, kuten on esitetty edellä taulukoissa 4, 5 ja 6. Tämän jatkovertailun perusteella kanta no. 7238 voidaan erottaa kannoista Streptomyces antimycoticus IFO 12839 ja Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 seuraavissa suhteissa.
(i) Ero kantaan Streptomyces antimycoticus IFO 12839 verrattuna ...: Kannan no. 7238 viljelyominaisuudet eroavat Streptomyces .. · antimycoticus IFO 12839 kannasta hiiva-mallasuuteagari1 la, ‘ glukoosi-asparagiiniagarilla, glyseriini-asparagiiniagari11 a, peruna-dekstroosiagari1 la ja tyrosiiniagari11 a.
' Mitä taas tulee hii 1 i 1 ähteiden käyttöön, niin kanta no. 7238 voi käyttää maltoosia, kun taas Streptomyces antimyoticus IFO 12389 ei voi sitä käyttää. Kanta no. 7238 ei myöskään voi * käyttää glyseriiniä, D-fruktoosia, ramnoosia, raffinoosia, » *,’· D-galaktoosia, D-mannoosia, mannitolia ja natriumsukkinaattia, - kun taas Streptomyces antimycoticus IFO 12839 voi näitä käyt tää.
32 37303 (ii) Ero Streptomyces hyqroscopicus subsp. qlebosus IFO 13786 kantaan verrattuna
Kannan no. 7238 viljelyominaisuudet eroavat Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 kannasta hiiva-malla-suuteagarilla, peruna-dekstroosiagari1 la ja tyrosiiniagari1 la.
Kannan no. 7238 maidon peptonisointi on negatiivinen, kun taas Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 kannalla se on positiivinen. Kanta no. 7238 voi kastaa 7 %:sen natrium-kloridin läsnäollessa, kun taas Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 ei voi kasvaa samoissa olosuhteissa.
Mitä taas tulee hiililähteiden käyttöön, niin kanta no. 7238 voi käyttää laktoosia, inuliinia ja salisiinia, kun taas Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 12786 ei voi niitä käyttää. Kanta no. 7238 ei voi käyttää glyseriiniä, D-ksyloosia, D-fruktoosia, raffinoosia, D-galaktoosia, D-man-noosia, mannitolia ja natriumsukkinaattia, kun taas Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 voi niitä käyttää .
Kanta no. 7238 kuitenkin muodostaa hygroskooppista itiömas-> . saa kaurajauhoagarilla ja epäorgaaniset suolat - tärkkelys- agarilla, ja muut kannan no. 7238 morfologiset ja viljelyomi-: naisuudet ovat samanlaiset kuin Streptomyces hygroscopicus : subsp. glebosus IFO 13786 kannalla. Kannan no. 7238 katsotaan .:. sen vuoksi kuuluvan Streptomyces hygroscopicus lajiin, mutta ; kanta no. 7238 on erilainen kuin Streptomyces hygroscopicus ;V subsp. glebosus IFO 13786, vaikka tämä tunnettu kanta on kaikkein samankaltaisin kannan no. 7238 kanssa Streptomyces hygroscopicus alalajeista. Edellä olevan perusteella pidetään :\j kantaan no. 7238 uutena Streptomyces hygroscopicus lajina ja sille on annettu nimeksi Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis subsp. nov,, viitaten Yakashimassa kerättyyn maahan, josta organismi eristettiin.
33 37803
PR-900523 MKFEN TUOTTAMINEN
Uusi FR-900523 aine voidaan tuottaa viljelemällä ravintoalustassa FR-900523 ainetta tuottavaa kantaa, joka kuuluu Strep-tomyces-sukuun (esim. Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis no. 7238, FERM BP-928).
FR-900523 ainetta voidaan yleisesti valmistaa viljelemällä FR-900523 ainetta tuottavaa kantaa vesipitoisessa ravintoalustassa, joka sisältää assimiloituvan hiilen ja typen lähteitä, parhaiten aerobisissa olosuhteissa (esim. ravisteluvi1jely, pinnanalaisvi1jely jne.).
Parhaina hii1i1ähteinä ravintoalustassa pidetään hiilihydraatteja kun glukoosia sakkaroosia, laktoosia, glyseriiniä, tärkkelystä dekstriiniä ja vastaavia. Muita lähteitä, joita voidaan käyttää ovat maltoosi, D-trehaloosi, inositoli, inuliini, salisiini ja vastaavat.
Suositeltuja typpi 1ähteitä ovat hiivauute, peptoni, gluteeni jauho, puuvi11asiemenjauho, soijapapujauho, maissiniiotus-vesi, kuivahiiva, vehnänalkio, höyhenjauho, maapähkinä jauho jne., sekä epäorgaaniset ja orgaaniset typpiyhdisteet, kuten . ammoniumsuolat (esim. ammoniumnitraatti, ammoniumsulfaatti, ammoniumfosfaatti jne.), urea, aminohappo ja vastaavat.
Hiili- ja typpilähteitä, joita tosin käytetään edullisesti yhdistelmänä, ei tarvitse käyttää puhtaissa muodoissaan, koska käyttöön sopivat myös vähemmän puhtaat materiaalit, jotka * sisältävät hivenmäärinä kasvutekijöitä ja huomattavia määriä mineraaliravinteita. Haluttaessa alustaan voidaan lisätä mineraalisuoloja kuten natrium- tai kalsiumkarbonaattia, nat-: rium- tai kaliumfosfaattia, natrium- tai kaiiumkloridia, nat- rium- tai kai iumjodidia, magnesiumsuol o ja, kuparisuol o ja, kobolttisuolaa ja vastaavia. Tarvittaessa, erityisesti kun vil jelyalusta vaahtoaa voimakkaasti, voidaan lisätä vaahdon- 34 07803 estoainetta kuten nestemäistä parafiinia, rasvaöljyä, kasvi-öljyä, mineraaliöljyä tai silikonia.
Jos ainetta FR-900523 tuottaa suuria määriä, pidetään parhaana pinnanalaisia aerobisia viljelyolosuhteita. Pienten määrien tuottamista varten käytetään ravistelu- tai pintavi1jelmää pullossa. Jos kasvu tapahtuu suurissa tankeissa, on suositeltavaa käyttää organismin vegetatiivista muotoa siirrostamiseen tuotantotankeissa, että vältettäisiin kasvun lag-vaihe aineen FR-900523 tuottoprosessissa. Siten on toivottavaa tuottaa ensin organismin vegetatiivinen siirroste siirrostamalla suhteellisen pieni määrä viljelyalustaa organismin itiöille tai rihmastolla ja viljelemällä mainittua sixrrostettua alustaa, minkä jälkeen viljelty vegetatiivinen siirroste siirretään aseptisesti suuriin tankkeihin. Alusta, jossa vegetatiivinen siirroste tuotetaan, on oleellisesti sama tai erilainen kuin alusta, jota käytetään aineen FR-900523 tuottoon.
Viljelyseoksen sekoittaminen ja ilmastus voidaan suorittaa monilla eri tavoilla. Sekoitus voidaan saada aikaan potkurilla tai samantapaisella mekaanisella sekoituslaitteistolla, pyörittämällä tai ravistelemalla fermentoria, erilaisten pump-pauslaitteistojen avulla tai johtamalla steriiliä ilmaa alus- ____. tan läpi. Ilmastus voidaan suorittaa johtamalla steriiliä ilmaan fermentaatioseoksen läpi.
• · · • · : '·. Fermentaatio suoritetaan tavallisesti lämpötilassa välillä · noin 20 - 30°C, parhaiten 25 - 35°C:ssa, noin 50 - 150 tunnin .·. aikana, joka voi vaihdella riippuen fermentaatio-olosuhteista ;V ja mittakaavasta.
Näin tuotettu aine FR-900523 voidaan ottaa talteen viljely-* :1·.· alustasta tavanomaisin keinoin, jota yleisesti käytetään muiden tunnettujen biologisesti aktiivisten aineiden tal-teenottamiseen. Tuotettu aine FR-900523 on viljellyssä rihmas-*. 1·· tossa ja siten aine FR-900523 voidaan eristää ja puhdistaa rihmastosta, joka saadaan suodattamalla tai sentrifugoimal1 a • · * m · 35 37803 vi1jelyliemi, tavanomaisilla menetelmillä kuten väkevöimällä alipaineessa, 1yofi1isoimal1 a, uuttamalla tavanomaisilla liuottimilla, pH-säädön avulla, käsittelemällä tavanomaisella hartsilla (esim. anioni- tai kationi-ioninvaihtohartsi, ei ionillinen adsorptiohartsi jne.), käsittelemällä tavanomaisilla adsorbenteilla (esim. aktivoitu hiili, piihappo, silikagee-li, selluloosa, alumiinioksidi jne.), kiteyttämällä, kiteyttämällä uudelleen jne..
Erityisesti voidaan FR-900523 erottaa liuottamalla kumpaakin tuotetta sisältävä, fermentaatiolla tuotetut aineet sopivaan liuottimeen kuten etyyliasetaattiin, n-heksaaniin ja vastaavaan ja kromatografoimalla sen jälkeen liuos esim. silikagee-lipylväässä sopivalla orgaanisella liuottimella kuten etyyliasetaatilla ja n-heksaanilla tai niiden seoksella. Näin erotettu FR-900523 aine voidaan sen jälkeen puhdistaa tavanomaisilla menetelmillä, esim. kiteyttämällä uudelleen, kromatograf oimal 1 a uudelleen, suuren suorituskyvyn nestekromatogra-fialla ja vastaavalla.
FR-900523 AINEEN FYSIOLOGISET JA KEMIALLISET OMINAISUUDET FR-900523 (1) Muoto ia väri: värittömiä neulasia ·; (2) Alkuaineanalyysi: C: 64,57 %, H: 8,84 %, N: 1,81 % (3) Värireaktio: '· Positiivinen: seriumsulfaattireaktio, rikkihapporeaktio,
Ehrlichin reaktio, Dragendorffin reaktio * ja jodihöyry-reaktio
Negatiivinen: ferrikloridireaktio, ninhydriinireaktio ja
Molishin reaktio • · 1 · • » « 36 87803 (4) Liukoisuus :
Liukenee: metanoli, etanoli, asetoni, etyyliasetaat ti, kloroformi, dietyylieetteri ja bent-seeni
Liukenee niukasti: n-heksaani, petrolieetteri
Ei liukene: vesi
(5) Sulamispiste: 152 - 154°C
(6) Ominaiskiertokvkv: [<1]^3 : -73,0° (c = 0,65 CH13) (7) UV-absorptiospektri: 1oppuabsorptio (8) IR-absorptiospektri: vCHCl3: 3670, 3580, 3510, 2930, 2875, 2825, max 1745, 1722, 1700, 1647, 1450, 1380, 1350, 1330, 1307, 1285, 1170, 1135, 1090, 1050, 1030, 1000, 990, 978, 960, 930, 915, 888, 870, 850 cm-1 (9) 13C NMR-spektri: 5(ppm, CDCl3): f213,82 (s) (196,31 (s) (168,96 (s) (213,32 (s), (193,34 (s), (l68,85 (s), (164,84 (s) (137,80 (s) f 132,89 (s) (165,98 (s), (138,41 (s), (131,96 (s), ‘ ί 129,62 (d) jl24,51 (d) f 97,13 (s) (130,03 (s), (124,84 (d) , ( 98,67 (s), : 84,38 (d) J 76,69 (d) (75,45 (d), ί 78,06 (d) , (76,91 (d) , (73,89 (d) 73,70 (d), (73,09 (d) Λ l 73,40 (d) ( 72,84 (d) , f 70,40 (d) [ 56,75 (d) 56,93 (q) : 169,24 (d), (52,89 (d), (57,43 (q), :·1·.. f 56,61 (q) ( 56,24 (q) ( 48,58 (t) (56,56 (q), (55,94 (q), (48,32 (t), 37 07803 47,14 (d) (40,23 (d) 27,85 (t) ^ 47,38 (d), ( 40,65 (d), ( 26,32 (t), ( 25,48 (d) 24,68 (t), j 21,33 (t) ( 26,64 (d), I 20,83 (t), (20,63 (q) (16,24 (q) fl5,70 (q) (19,77 (q), (16,34 (q), (15,96 (q), Γ15,51 (q) f14,31 (q) ( 9,64 (q) (15,96 (q) (14,18 (q), (10,04 (q), spektri on esitetty taulukossa 9.
(10) NMR-spektri: spektri on esitetty taulukossa 10.
(11) Ohutkerroskromatografia:
Stationäärifaasi Kehitvsliuotin Rf-arvo si 1ikageeli1evy kloroformi : metanoli 0,38 (20:1, v/v) etyyliasetaatti 0,51 (12) Aineen ominaisuus: neutraali aine.
FR-900523 yhdisteestä on huomattava, että ja 3-h- nmr- ____; spektrien mittauksissa tällä yhdisteellä esiintyi signaalipa- reja eri kemiallisilla siirtymillä. Kuitenkin ohutlevykromato-grafia- ja suuren suorituskyvyn nestekromatografia-mittauksis- * ·· sa FR-900523 yhdisteellä oli yksi ainoa täplä ohutlevykromato--:· grafiassa ja yksi ainoa piikki suuren suorituskyvyn nestekro- : .·. matografiässä.
'·'· Edellä olevista fysikaalisista ja kemiallisista ominaisuuksista ja FR-900506 yhdisteen kemiallisen rakenteen onnistuneen määrityksen perusteella voitiin FR-900523 yhdisteellä päätellä olevan seuraava kemiallinen rakenne.
• · • » • · · • » 1 · 38 87803 hO\/^n.
CH30A^\ ch^
Cy° OH C 3
Ch3V^O V
Ί /-ch3 OCH3 OCH3 I, 14-Dihydroksi-12-[2-(4-hydroksi-3-metoksisykloheksyyli)-1-metyylivinyyli]-23,25-dimetoksi-13,19,17,21,27-pentametyyli- II, 28-dioksa-4-atsatrisyklo[22.3.1.04,9]-oktakos-18-eeni-2,3,10,16-tetraoni.
Esimerkkinä tällaisista farmakologisista aktiivisuuksista seuraavassa on havainnollistettu trisykloyhdisteiden eräitä farmakologisia testiarvoja.
• I · » t
Testi 1 I · t
Trisykl oyhdisteiden (I) aiheuttama suppressio in vitro MLR-reaktiossa (Mixed Lymphocyte Reaction).
• m · · • ·
r;· · MLR-testi suoritettiin mikrotiitteri1evyi11ä, joiden jokainen kalvo sisälsi 5 x 10^ C57BL/6 reaktiosolua (H-2^), 5 x 10^ mitomysiini C:llä käsiteltyjä (25 ug/ml mitomysiini C 37°C:ssa : 30 minuuttia, pesu kolme kertaa RPMI 1640 mediumilla (BALB/C
!./ stimulaattorisoluja (H-2^) 0,2 ml RPMI 1640 mediumissa, joka oli täydennetty 10 %:lla vasikansikiöseerumia, 2 mM natriumve-tykarbonaati 11 a , penisilliinillä (50 yksikköä/ml) ja strepto- « * • · * • » 39 37803 mysiinillä (50 μιη/ml). Soluja inkuboitiin 37°C:ssa 68 tuntia kostutetussa kaasukehässä, joka sisälsi 5 % hiilidioksidia ja 95 % ilmaa, ja pulssitettiin 3H-tymidiini11ä (0,5 μΟϊ) 4 tuntia ennen solujen taiteenottamista. Tämän keksinnön mukainen kohdeyhdiste liuotettiin etanoliin, laimennettiin edelleen RPMI 1640 mediumilla ja lisättiin viljelmiin niin, että loppu-konsentraatioksi saatiin 0,1 μιη/ml tai vähemmän.
Tulokset on esitetty taulukossa 7 - 10. Käsillä olevan keksinnön mukaiset trisykloyhdisteet suppressoivat hiiren MLR-reak-tiota.
Taulukko 7 FR-900506:n vaikutus MLR-reaktioon FR-900506:n konsentraatio Radioaktiivisuudet Suppressio IC50 (nq/ml)____(keskim. C.P.M. ± S.E.) (%)______(nq/ml) 2,5 54 i 4 99,5 1,25 168 ± 23 98,3 0,625 614 ± 57 93,8 0,313 3880 ± 222 60,9 0,26 0,156 5490 ± 431 44,7 0,078 7189 ± 365 27,6 0 9935 ± 428
Taulukko 9 r l"; FR-900523:n vaikutus MLR-reaktioon VV FR-900523: n
konsentraatio Radioaktiivisuudet Suppressio IC5Q
(nq/ml) _(keskim. C.P.M. t S.E.)_£_%_)_(nq/ml) V·: 100 25 ± 12 99,9 10 156 ± 37 99,3 1 5600 ± 399 75,8 0,5 :*·.. 0,500 11624 ± 395 49,7 '··. 0,250 17721 ± 1083 23,3 '*;· 0 23106 ± 1052 0 * * · * * 1 »» · · 40 87803
Taulukko 10 FR-900525:n vaikutus MLR-reaktioon FR-900525:n konsentraatio Radioaktiivisuudet Suppressio IC5g (nq/ml)_(keskim. C.P.M. t S.E.)_LV)_(nq/ml) 100 469 ± 56 97,0 10 372 ± 32 97,6 5 878 ± 369 94,87 1,55 2,5 3564 ± 512 77,4 1,2 10103 ± 421 35,8 0 15741 ± 411
Testi 2
Trisykloyhdisteiden (I) antimikrobiaaliset aktiivisuudet.
Trisykloyhdisteiden (I) antimikrobiaaliset aktiivisuudet eri sieniä vastaan määritettiin sarja 1aimennusmenetelmäl1ä Sabouraud-agari1 la. Pienimmät kestokonsentraatiot (MIC) ilmoitettiin um/ml:na sen jälkeen kun oli inkuboitu 24 tuntia 30°C:ssa.
Käsillä olevan keksinnön mukaisilla trisykloyhdisteil lä oli ‘ antimikrobiaaliset aktiivisuudet sieniä, esim. Aspergillus : *' fumigatus IFO 5840 ja Fusarium oxysporum IFO 5942 sieniä vastaan, kuten on kuvattu seuraavissa taulukoissa 11 ja 12.
Taulukko 11
Trisykloyhdisteiden (I) MIC-arvot (pm/ml) Aspergillus fumiga-·. ·: tus IFO 5840 sientä vastaan
Aineet_MIC (um/ml) ^ FR-900506 0,025 FR-900523 0,3 FR-900525 0,5 4i 37803
Taulukko 12
Trisykloyhdisteiden (I) MIC-arvot (pg/ml) Fusarium oxysporum sientä vastaan
Aineet__MIC (um/rol) FR-900560 0,05 FR-900525 1
Testi 3
Trisykloyhdisteiden (I) vaikutus ihon allograftin eloonjääntiin rotilla.
Ventaaliset allografit 1 ahjoittajarotilta (Fischer) siirros-tettiin vastaanottavien rottien (WKA) lateraaliselle rinnan alueella. Siteet poistettiin päivänä 5. Siirrosteet tutkittiin päivittäin hylkimiseen asti, joksi määritettiin siirrosteen epiteriumin yli 90 % nekroosi.
FR-900506 liuotettiin oliiviöljyyn ja annettiin intramusku-laarisesti 14 peräkkäisenä päivänä alkaen siirrostamispäi-*:**: västä.
Kuten taulukossa 13 on esitetty kaikki ihon allograftit tulivat hyljityksi 8 päivän sisällä rotilla, jotka oli käsitelty intramuskulaarisesti oliiviöljyllä 14 peräkkäisenä päivänä, mutta päivittäinen käsittely FR-900506 aineella selvästi pidensi ihon allograftin eloon jääntiä.
* 1 1 · 1 42 37803
Taulukko 13 FR-900506 aineen vaikutus ihon allograftin eloon jääntiin
Annos Eläinten Ihon allograftin _(mq/kq) määrä_elooniääntipäivä _____
Kontrolli - 11 7,7,7,7,7,7,8,8,8,8,8 (oliiviöljy) FR-900506 1 8 19,19,19,20,21,21,22,22 3,2 6 22,23,23,26,27,35 10 5 56,61,82,85,89
Testi 4
Trisykloyhdisteen (I) vaikutus II-tyyppiseen kollageenilla \ indusoituun artriittiin rotilla.
Kollageenia liuotettiin 2 mg/ml kylmään 0,01 M etikkahappoon. Liuos emulgoitiin yhtä suurella tilavuudella epätäydellistä Freundin apuainetta. Kylmää emulsiota injisoitiin yhteensä 0,5 ml intradermaalisesti Lewis-naarasrottien selkään useaan ' kohtaan ja yhteen tai kahteen kohtaan hännässä. FR-900506 liuotettiin oliiviöljyyn ja annettiin suun kautta. Kontrolli-rotat, jotka oli immunisoitu samalla määrällä II-tyypin kolla-; geeniä, saivat suun kautta vain oliiviöljyä. Artriitin esiin- tymistapaukset merkittiin muistiin. Testin tulokset on esitetty taulukossa 14. Tulehduksellinen polyartriitti indusoitui kaikissa rotissa, jotka oli käsitelty oliiviöljyllä 14 päivää alkaen samaha päivänä kuin suoritettiin immunisointi II-tyypin : kollageenilla.
Päivittäinen käsittely FR-900506 aineella 14 päivän ajan tukahdutti täydellisesti artriitin indusoitumisen 3 viikon havaintojakson aikana.
43 07803
Taulukko 14 FR-900506 aineen vaikutus II-tyypin kollageenilla indusoituun artriittiin rotilla ___Annos (mg/kg per päivä) Artriitin esiintyminen
Kontrolli - 5/5 (oliiviöljy) FR-900506 3,2 0/5
Testi 5
Trisykloyhdisteiden (I) vaikutus kokeelliseen ai 1ergeeniseen Enkefalomyelyyttiin (EAE) SLJ/J-hiirellä.
SJL/L-hiiristä valmistettiin selkäydinhomogenaatti. Selkäyti-met poistettiin isufflatoimalla (imemällä), sekoitettiin suurin piirtein yhtä suuren tilavuuden kanssa vettä ja homogenisoitiin 4°C:ssa. Yhtä suuri tilavuus tätä kylmää homo-genaattia (10 mg/ml) emulgoitiin täydellisen Freundin apuaineen (CFA) kanssa, joka sisälsi 0,6 ml/ml Mycobacterium tuberculosis H37RA-bakteeria.
EAE indusoitiin injisoimalla kaksi kertaa 0,2 ml selkäydin-CFA-emulsiota SLJ/J-hiiriin päivänä 0 ja päivänä 13. Kaikki näissä testeissä käytetyt hiiret arvioitiin ja pisteitettiin päivittäin EAE kliinisten merkkien suhteen.
EAE:n voimakkuus arvioitiin seuraavien kriterioiden mukaisesti: aste 1 pienentynyt hännän jäntevyys: aste 2 kömpelö kulku: aste 3 heikkous yhdessä tai useammassa jäsenessä: aste 4 *:·. paraplegia tai hemiplegia.
: ·.. FR-900506 ainetta liuotettiin oliiviöljyyn ja annettiin suun kautta 19 päivää alkaen 0 (ensimmäisen immunisoinnin päivä).
44 87803
Taulukko 15 osoittaa, että FR-900506 selvästi esti EAE:n kliinisten merkkien kehittymisen.
Taulukko 15
Tautisten eläinten _Annos (mg/kg) määrä päivänä 24___
Kontrolli - 10/10 (oliiviöljy) FR-900506 32 0/5
Testi 6
Trisykloyhdisteiden (I) vaikutus GvHR-reaktioon (Local Graft-versus-Host-reaktion) hiirillä.
Eläviä pernasoluja (1 x 10^ solua) C57BL/6 lahjoittajilta injisoitiin ihonalaisesti BOF^-hiirten oikean takakäpälän jalkapohjaan paikallisen GvHR-reaktion indusoimiseksi. Hiiret tapettiin 7 päivää myöhemmin ja punnittiin sekä oikeat (in-jisoitu käpälä) että vasemmat (injisoimaton käpälä) (PLN:t popliteal lymph nodes). GvHR ilmoitettiin painoerona oikean ja . vasemman PLN:n välillä.
f · . I · FR-900506 ainetta liuotettiin oliiviöljyyn ja annettiin suun kautta viisi päivää alkaen samana päivänä kun herkistäminen suoritettiin.
FR-900506 aineen ED5Q_arvo, joka koski GvHR-reaktion estymis-tä, oli 19 mg/kg.
: Testi 7 ' Trisykloyhdisteiden (I) akuutit toksisuudet.
FR-900506, FR-900523 ja FR-900525 aineiden akuutit toksisuudet tutkittiin ddY-hiirillä injisoimalla intraperitoneaalisesti.
45 87 803
Missään tapauksessa ei voitu havaita kuolleita 100 mg/kg annoksel1 a.
Tämän keksinnön mukaista farmaseuttista seosta voidaan käyttää farmaseuttisena valmisteena esim. kiinteässä, puolikiinteässä tai nestemäisessä muodossa, joka sisältää käsillä olevan keksinnön mukaista trisykloyhdistettä (I) aktiivisena ainesosana seoksena ulkoiseen, enteraaliseen tai parenteraaliseen antamiseen sopivan orgaanisen tai epäorgaanisen kantajan tai apuaineen kanssa. Aktiivinen ainesosa voi olla työstetty esim. tavanomaisten tabletteihin, pelletteihin, kapseleihin, lääke-puikkoihin, liuoksiin, emulsioihin, puikkoihin tarkoitettujen toksittomien farmaseuttisesti hyväksyttävien kantajien kanssa tai minkä tahansa muun käyttökelpoisen muodon kanssa. Kantajia, joita voidaan käyttää, ovat vesi, glukoosi, laktoosi, agaasiakumi, kelatiini, mannitoli, tärkkelystahna, magnesium-trisi1ikaatti, talkki, maissitärkkelys, keratiini, kolloidaalinen piidioksidi, perunatärkkelys, urea ja muut kantajat, jotka sopivat käytettäväksi valmistettaessa preparaatteja kiinteässä, puolikiinteässä tai nestemäisessä muodossa. Lisäksi voidaan käyttää apuaineita, stabilointiaineita, sakeutusai-neita ja värjäysaineita ja parfyymejä. Aktiivista yhdistettä laitetaan farmaseuttiseen seokseen niin paljon, että saadaan aikaan haluttu vaikutus tautien etenemiseen tai tilaan.
Kun tätä seosta annetaan ihmiselle on suositeltavaa, että : . antaminen tapahtuu parenteraalisesti tai enteraalisesti.
Vaikkakin trisykloyhdisteiden (I) terapeuttisesti tehokkaan j määrän annostus vaihtelee ja myös riippuu kunkin hoidettavan :*·*: potilasyksilön iästä ja tilasta, tautien hoitamiseen annetaan yleensä aktiivista ainetta päiväannoksena n. 0,01 - 1000 mg, . . parhaiten 0,1 - 500 mg ja kaikkein parhaiten 0,5 - 100 mg.
• · · A
Yleensä annetaan keskimääräisenä yksittäisannoksena noin : 0,5 g, 1 mg, 5 mg, 10 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg ja 500 mg.
..7 Seuraavat esimerkit on annettu käsillä olevan keksinnön ha-vainnol 1 istamiseksi .
46 37803
Esimerkki 1
Streptomyces tsukubaensis no. 9993 kannan eristäminen
Streptomyces trukubaensis no. 9993 eristettiin käyttämällä laimennusmaljatekniikkaa seuraavassa esitetyllä tavalla.
Noin 1 g maata, jonka keräyspaikka oli Toyosato-cho, Tsukuba Gun, Ibaraki Prefecture, Japani, lisättiin steriiliin koeputkeen ja tilavuus säädettiin 5 ml steriilillä vedellä. Sen jälkeen seosta sekoitettiin 10 sekuntia koeputkisekoittimella ja annettiin olla 10 minuuttia. Supernatantti sarjalaimennet-tiin 100 kertaisesti steriilillä vedellä. Laimennettu liuos (0,01 ml) levitettiin petrimaljalla Czapekin agarille, joka oli täydennetty tiamiinihydrokloridi11 a (sakkaroosi 30 g, natriumnitraatti 3 g, dikaliumfosfaatti 1 g, magnesiumsulfaatti 0,5 g, kaiiumkloridi 0,5 g, ferrosulfaatti 0,01 g, tiamii-nihydrokloridi 0,1 g, agar 20 g, vesijohtovesi 1000 ml; pH 7,2). Kasvavat pesäkkeet, joita muodostui maljoille 21 päivän inkuboinnin jälkeen 30°C:ssa, siirrettiin vinopinnoille [hii-va-mallasuuteagar (ISP-alusta 21)] ja viljeltiin 10 päivää 30°C:ssa. Eristettyjen pesäkkeiden joukosta voitiin löytää Streptomyces tsukubaensis no. 9993 kanta.
»
Fermentaatio . Viljelyalustaa (160 ml), joka sisälsi glyseriiniä (1 %), liukoista tärkkelystä (1 %), glukoosia (0,5 %), pellavan- : siemenjauhoa (0,5 %), kuivahiivaa (0,2 %) säädetty pH-arvoon :: 6,5), kaadettiin 20 Er1enmeyer-pulloon (500 ml) ja steriloi tiin 120°C:ssa 30 minuuttia. Kuhunkin alustaan siirrostettiin . . silmukallinen Streptomyces tsukubaensis no. 9993, PERM BP-927 / kannan vinopintaviljelmää ja viljeltiin 4 päivää 30°C:ssa ravistelulaitteessa. Saatu seos siirrostettiin alustaan, joka sisälsi liukoista tärkkelystä (4,5 %), maissinliotusvettä (1 %), kuivahiivaa (1 %), kalsiumkarbonaattia (0,1 %) ja adekanolia (vaahdonestoaine, tavaramerkki, valmistaja: Asahi 47 87803
Denka Co.) (0,1 %) (150 litraa), 200 litran fermentorissa, joka oli steriloitu 20 minuuttia 120°C:ssa, ja viljeltiin 4 päivää 30°C:ssa ilmastolla 150 1itra/minuutti ja sekoittamalla 250 kierrosta minuutissa.
Eristäminen ia puhdistaminen Näin saatu viljelyliuos suodatettiin piimää (5 kg) avulla. Rihmastokakku uutettiin metanolilla (50 litraa) jolloin saatiin 50 litraa uutetta. Metanoliuute rihmastosta ja suodos yhdistettiin ja johdettiin ei-ioni11isen adsorptiohartsin "Diaion HP20" (tavaramerkki, valmistaja Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) (10 litraa) pylvään läpi. Pestiin vedellä (30 ml) ja vesipitoisella metanolilla (30 litraa), minkä jälkeen eluoitiin metanolilla. Eluaatti haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin jäille jäänyttä vettä (2 1). Tämä jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (2 1). Etyyliasetaattiuute väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin öljymäistä jäännöstä. öljymäinen jäännös sekoitettiin kaksinkertaisen painomää-rän kanssa hapanta piihappogeeliä (silikageelin erikoislaatu 12. valmistaja Fuji Devison Co.) ja tämä seos lietettiin etyyliasetaatin kanssa. Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatu kuiva jauhe pyiväskromatografoitiin samalla happamella ’.·: silikageelil lä (800 ml), joka pakattiin n-heksaanin avulla.
.v. Pylväs ajettiin n-heksaanilla (3 1), n-heksaanin ja etyyli- .. ’ asetaatin seoksella (9:1 v/v, 3 litraa ja 4:1 v/v, 3 litraa) '· ja etyyliasetaatilta (3 litraa). Kohdeyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin : saatiin öljymäistä jäännöstä, öljymäinen jäännös liuotettiin n-heksaanin ja etyyliasetaatin seokseen (1:1, v/v 30 ml) ja pylväskromatografoitiin silikageelillä (valmistaja Merck Co., Ltd. 230 - 400 mesh) (500 ml), joka oli pakattu samalla liuo- *.**: tinsysteemillä.
• « ·
Eluointi suoritettiin n-heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella ! ” (1:1 v/v, 2 litraa ja 1:2 v/v, 1,5 litraa). Ensimmäistä koh- deyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin 48 87803 alipaineessa, jolloin saatiin kellertävää öljyä. Ö1jymäinen jäännös sekoitettiin kaksinkertaisen painomäärän kanssa hapanta silikageeliä ja tämä seos lietettiin etyyliasetaattiin. Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatu kuivajauhe kromatogra-foitiin happamella silikageelillä, joka pakattiin ja keitettiin n-heksaanilla. Kohdeyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin puhdista-matonta FR-900506 ainetta (1054 mg) valkoisena jauheena.
100 mg tätä puhdistamatonta tuotetta käsiteltiin suuren suorituskyvyn nestekromatografialla. Eluointi suoritettiin käyttämällä kolumnia (80 x 500 mm), jossa kantajana oli Lichrosorb SI 60 (tavaramerkki, valmistaja Merck & Co.). Tätä kromato-grafiaa seurattiin UV-detektorilla aallonpituudella 230 nm, ja liikkuva faasi oli metyleenikloridin ja dioksaanin seos (85:15 v/v) virtausnopeudella 5 ml/minuutti. Aktiiviset jakeet otettiin talteen ja haihdutettiin. Tämä suuren suorituskyvyn kromatografia toistettiin uudelleen, jolloin saatiin 14 mg puhdistettua FR-900506 ainetta valkoisena jauheena.
Eluointi suoritettiin edelleen jatkuvana etyyliasetaatilla (1,5 1). Toista kohdeyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin puhdista-....: matonta FR-900525 ainetta (30 mg) kellertävänä öljynä.
;, · Esimerkki 2
Fermentaatio • « *
Esiviljelmän alustaa (100 ml) joka sisälsi glyseriiniä (1 %) , *· maissitärkkelystä (1 %), glukoosia (0,5 %), maissinsiemenjauhoa (1 %), maissinliotusvettä (0,5 %), kuivahiivaa (0,5 %), • · * : ·.: ja kaisiumkarbonaattia (0,2 %) pH-arvossa 6,5, kaadettiin 5004 ml:n Erlenmeyer-pulloihin ja steriloitiin 120°C:ssa 30 minuuttia. Alustaan siirrostettiin silmukal1inen Streptomyces tsukubaensis no. 9993 kannan vinopintaviljelmää ja viljeltiin 30°C:ssa 4 päivää. Saatu viljelmä siirrettiin samaan esivilje- 49 87803 lyalustaan (20 1) 30 litran fermentorissa, joka oli steriloitu 30 minuuttia 120°C:ssa. Viljelmää inkuboitiin 30°C:ssa 2 päivää, minkä jälkeen 16 litraa esiviljelmää siirrostettiin fermentaatioalustaan (1600 litraa), joka sisälsi liukoista tärkkelystä (4,5 %), maissinliotusvettä (1 %), kuivahiivaa (1 %), kalsiumkarbonaattia (0,1 %) ja Adekanolia (vaahdonesto-aine, tavaramerkki, valmistaja Asahi Denka Co.) (0,1 %) pH-arvossa 6,8, 2 tunnin säiliössä, joka oli steriloitu 30 minuuttia 120°C:ssa. Tämän jälkeen viljeltiin 4 päivää 30°C:ssa.
Eristäminen ia puhdistaminen Näin saatu viljelyliuos suodatettiin piimään avulla (25 kg). Rihmastokakku uutettiin asetonilla (500 1), jolloin saatiin 500 litraa uutetta. Asetoniuute rihmastosta ja suodos (1350 1) yhdistettiin ja johdettiin pylvään läpi, joka sisälsi ei-ionillista absorptiohartsia "Diaion HP-20" (tavaramerkki, valmistaja Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) (100 litraa). Pestiin vedellä (300 1) ja 50 %:lla vesipitoisella asetonilla (300 1), minkä jälkeen eluoitiin 75 % vesipitoisella asetonilla. Eluaatti haihdutettiin alipaineessa, jolloin jäljelle jäi vettä (300 1). Tämä jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (2 1) kolme kertaa. Etyyliasetaattiuute väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin öljymäistä jäännöstä, öljymäinen jäännös .. . sekoitettiin kaksinkertaisen painomäärän kanssa hapanta sili- : ·* kageeliä (silikageelin erikoislaatu 12, valmistaja Fuji De-: ’** vison Co.) ja tämä seos lietettiin etyyliasetaattiin. Liuotin ·:· haihdutettiin ja saatu kuiva jauhe pyiväskromatografoltiin : .·. samalla happamella silikageelil lä (8 litraa), joka oli pakattu n-heksaanilla. Pylväs kehitettiin n-heksaani 11 a (30 1), n-hek-*" saanin ja etyyliasetaatin seoksella (4:1, v/v, 30 litraa) ja etyyliasetaatilla (30 litraa). Kohdeyhdistettä sisältävät * · * : jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin öljymäinen jäännös. Tämä jäännös sekoitettiin kaksin- » kertaisen painomäärän kanssa hapanta silikageeliä ja tämä seos : ’·* lietettiin etyyliasetaattiin. Liuottimen haihduttamisen jäl- : : keen saatu kuiva jauhe kromatografoitiin uudelleen happamella so 37803 silikageelillä (3,5 1), joka oli pakattu n-heksaani1 la. Pylväs kehitettiin n-heksaanilla (10 1), n-heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (4:1 v/v, 10 1), n-heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (4:1 v/v, 10 1) ja etyyliasetaatilla (10 1). Kohde-yhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin kellertävää öljyä, öljymäinen jäännös liuotettiin n-heksaanin ja etyyliasetaatin seokseen (1:1 v/v, 300 ml) ja pyiväskromatografoitiin silikageelillä (valmistaja Merck Co., Ltd. 230 - 4300 mesh) (2 litraa), joka oli pakattu samalla 1iuotinjärjestelmällä. Eluointi suoritettiin n-heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (1:1 v/v, 10 1 ja 1:2 v/v, 6 litraa) ja etyyliasetaatilla (6 litraa).
Ensimmäistä kohdeyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin FR-900506 ainetta valkoisena jauheena (34 g). Tämä valkoinen jauhe liuotettiin asetonitriiliin ja väkevöitiin alipaineessa. Tätä konsentraat-tia pidettiin 5°C:ssa yön yli, jolloin saatiin prismoja (22,7 g). Kiteyttämällä uudelleen samasta liuottimesta saatiin puhdistettua FR-900506 ainetta (13,6 g) värittöminä prismoina.
Jakeet, jotka sisälsivät toista kohdeyhdistettä, otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin puhdista-matonta FR-900525 ainetta (314 g) kellertävänä jauheena.
• * » • · * '· ·' Esimerkki 3 •|* Fermentaatio
Vi 1 jelyalustaan (160 ml), joka sisälsi glyseriiniä (1 %), *·*·' maissitärkkelystä (1 %), glukoosia (0,5 %), pellavansiemen- jauhoa (1 %), kuivahiivaa (0,5 %), maissiniiotusvettä (0,5 %) ja kalsiumkarbonaattia (0,2 %) (säädetty pH-arvoon 6,5), kaadettiin kymmeneen 500 1 Erlenmeyer-pulloon ja steriloitiin 120°C:ssa 30 minuuttia. Jokaiseen alustaan siirrostettiin ; *·· silmukallinen Streptomyces tsukubaensis nro 9993 kannan vino-pintaviljelmää ja viljeltiin 30°C:ssa 4 päivää ravistelijassa.
« · · * · · si 87803
Saatu viljelmä siirrostettiin alustaan, joka sisälsi liukoista tärkkelystä (5 %), maapähkinäjauhoa (0,5 %), kuivahiivaa (0,5 %), gluteeni jauhoa (0,5 %), kalsiumkarbonaattia (0,1 %) ja Adekanolia (vaahdonestoaine, tavaramerkki, valmistaja Asahi Denka Co.) (0,1 %), 150 litraa) 200 litran fermentoris-sa, joka oli steriloitu 120°C:ssa 20 minuutin ajan, ja viljeltiin 30°C:ssa 4 päivää ilmastamalla 150 1itraa/minuutti ja sekoittamalla 250 kierrosta minuutissa.
Eristäminen ia puhdistaminen Näin saatu viljelyliuos suodatettiin piimään avulla (5 kg). Rihmastokakku uutettiin asetonilla (50 1), jolloin saatiin 50 litraa uutetta. Asetoniuute rihmastosta ja suodos (135 1) yhdistettiin ja johdettiin pylvään läpi, joka sisälsi ei-io-nillista adsorptiohartsia "Diaion HP20" (tavaramerkki, valmistaja Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) (10 1). Pestiin vedellä (30 1) ja 50 %:lla vesipitoisella asetonilla (30 1), minkä jälkeen eluoitiin 75 % vesipitoisella asetonilla. Elu-aatti (30 1) haihdutettiin alipaineessa, jolloin jäljelle jäi vettä (2 1). Tämä jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (2 1) kolme kertaa. Etyyliasetaattiuute väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin Öljymäistä jäännöstä. öljymäinen jäännös se-- koitettiin kaksinkertaisen painomäärän kanssa hapanta silika-geeliä (silikageelin erikoislaatu 12, valmistaja Fuji Devison : .: Co.) ja tämä seos lietettiin etyyliasetaattiin. Liuottimen : haihduttamisen jälkeen saatu kuiva jauhe pyiväskromatografoi- tiin samalla happamella silikageelil lä (800 ml), joka oli : pakattu n-heksaanilla. Pylväs kehitettiin n-heksaani 11 a (3 1), ;γ n-heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (4:1 v/v, 3 litraa) • · · ja etyyliasetaatilla (3 1). Kohdeyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin : öl jymäinen jäännös. Tämä öl jymäinen jäännös liuotettiin n-hek- saanin ja etyyliasetaatin seokseen (1:1 v/v, 30 ml) ja pylväs-kromatografoitiin silikageelillä (valmistaja Merck Co., Ltd. 230 - 400 mesh) (500 ml), joka oli pakattu samalla liuotinjär-.··. jestelmällä. Eluointi suoritettiin n-heksaanin ja etyyliase- 52 87 803 taatin seoksella (1:1 v/v, 2 litraa ja 1:2 v/v, 1,5 litraa) ja etyyliasetaatilla (1,5 litraa).
Ensimmäistä kohdeyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin puhdistamatonta FR-900506 ainetta (3 g) kellertävänä jauheena.
Toista kohdeyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin öljymäinen jäännös. Tämä öljymäinen jäännös kromatografoitiin uudelleen silikagee-Iillä, jolloin saatiin keltainen öljy. Tämä öljymäinen jäännös sekoitettiin kaksinkertaisen painomäärän kanssa hapanta sili-kageeliä ja tämä seos lietettiin etyyliasetaattiin. Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatu kuiva jauhe kromatografoitiin happamella silikageelillä (100 ml), joka pakattiin ja keitettiin n-heksaanilla. Kohdeyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja vaalean kellertävänä jauheena (380 mg). Tämä jauhe liuotettiin n-heksaaniin ja etyyliasetaatin seokseen (1:2 v/v, 5 ml) ja käsiteltiin happamella silikageelillä (silikageelin erikoislaatu 922, valmistaja Fuji Davison Co.) (100 ml), joka pakattiin ja pestiin samalla liuotinjärjestelmällä. Eluaatti suoritettiin etyyliasetaatilla. Aktiiviset tiet otettiin talteen ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin puhdistet-....: tua FR-900525 ainetta (230 mg) valkoisena jauheena.
»Il ·' Esimerkki. 4 •
Streptomvces hvoroscopicus subsp. vakushimaensis no. 7238 : kannan eristäminen
Noin 1 g maata, jonka keräyspaikka oli Yakushima, Kagoshima Prefecture, Japani, lisättiin steriilin koeputkeen ja tilavuus : säädettiin 5 mlrksi steriilillä vedellä. Seosta sekoitettiin sen jälkeen 10 sekuntia koeputkisekoittimella ja pidettiin 10 minuuttia. Supernatantti sarjalaimennettiin 100 kertaisesti *" steriilillä vedellä. Laimennettu liuos (0,1 ml) levitettiin
Czapek-agarille, joka oli täydennetty tiamiinihydrokloridilla, * » ♦ · » 53 87803 (sakkaroosi 30 g, natriumnitraatti 3 g, dikaliumfosfaatti 1 g, magnesiumsulfaatti 0,5 g, kaiiumkloridi 0,5 g, ferrosulfaatti 0,01 g, diamiinihydrokloridi 0,1 g, agar 20 g, vesijohtovesi 1000 ml; pH 7,2) petrimaljalla. Kasvavat pesäkkeet, jotka muodostuivat maljoille 21 päivän inkuboinnin jälkeen 30°C:ssa, siirrettiin vinopinnoi11 e [hiiva-mallasuuteagar (ISP-alusta 2)], ja viljeltiin 10 päivää 30°C:ssa. Strepto-myces hygroscopicus subsp. yakushimaensis no. 7238 voitiin löytää eristettyjen pesäkkeiden joukosta.
Fermentaatio
Jokaiseen 20:neen 50 ml:n Erlenmeyer-pulloon kaadettiin vilje-lyalustaa (160 ml), joka sisälsi glyseriiniä (1 %), liukoista tärkkelystä (1 %), glukoosia (0,5 %), pellavansiemenjauhoa (0,5 %), kuivahiivaa (0,5 %), maissinliotusvettä (0,5 %) ja kalsiumkarbonaattia (0,2 %) (säädetty pH-arvoon 5), ja steriloitiin 120°C:ssa 30 minuuttia. Jokaiseen alustaan siirros-tettiin silmukallinen Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis no. 7238, FERM BP-928 kannan vinopintaviljelmää ja viljeltiin 4 päivää 30°C:ssa ravistelijassa. Saatu seos siirrostettiin alustaan, joka sisälsi glukoosia (4,5 %), maissinliotusvettä (1 %), kuivahiivaa (1 %), gluteeni jauhoa (1 %), vehnänydintä (0,5 %), kalsiumkarbonaattia (0,1 %) ja Adekanolia (vaahdonestoaine, tavaramerkki, valmistaja Asahi Denka Co.) (0,1 %) (150 litraa), 200 litran fermentorissa, joka oli steriloitu 120°C:ssa 20 minuutin aikana, ja viljel-tiin 30°C:ssa 4 päivää ilmastamalla 150 litraa/minuutti ja sekoittamalla 250 kierrosta minuutissa.
V,· Eristäminen ja puhdistaminen * Näin saatu Viljelyliuos suodatettiin piimään avulla (5 kg). Rihmastokakku muutettiin asetonilla (50 litraa), jolloin saatiin 50 litraa uutetta. Asetoniuute rihmastosta ja suodos (135 litraa) yhdistettiin ja johdettiin pylvään läpi, joka sisälsi ei-ionillista absorptiohartsia "Diaion HP-20" (tava- 54 87803 ramerkki, valmistaja Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) (10 litraa). Pestiin vedellä (30 litraa) ja vesipitoisella asetonilla (30 litraa), minkä jälkeen eluoitiin asetonilla. Eluaatti haihdutettiin alipaineessa, jolloin jäjelle jäi vettä (2 litraa). Jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (4 1). Etyy-1iasetaattiuute väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin öljymäinen jäännös. Tämä öljymäinen jäännös sekoitettiin kaksinkertaisen painomäärän kanssa hapanta silikageeliä (sili-kageelin erikoislaatu 12, valmistaja Fuji Devison Co.), ja tämä seos lietettiin etyyliasetaattiin. Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatu kuiva jauhe pylväskromatografoitiin samalla happamella silikageelillä (800 ml) joka oli pakattu n-hek-saanilla. Pylväs keitettiin n-heksaanilla (3 1), n-heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (4:1 v/v, 3 litraa) ja etyyliasetaatilla (3 litraa). FR-900523 pitoiset jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin öljymäinen jäännös. Tämä öljymäinen jäännös liuotettiin n-heksaaniin ja etyyliasetaatin seokseen (1:1 v/v, 50 ml) ja pylväskroma-tografoitiin silikageelillä (valmistaja Merck Co., Ltd.
70-230 mesh) (1000 ml), joka oli pakattu samalla liuotinjär-jestelmällä. Eluointi suoritettiin n-heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (1:1 v/v, 3 litraa ja 1:2 v/v, 3 litraa) ja etyyliasetaatilla (3 litraa). Kohdeyhdistettä sisältävät ____ jakeet otettiin talteen ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin kellertävää jauhetta (4,5 g). Tämä jauhe liuotettiin metanoliin (2 ml) ja sekoitettiin veden kanssa (10 ml).
: ’·· Seos kromatografoitiin käänteisfaasi-silikageelil lä "YMC" (60-·;· 200 mesh) (500 ml) (tavaramerkki, valmistaja Yamamura Chemical : Institute), joka pakattiin ja keitettiin metanolin ja veden “V seoksella (4:1 v/v).
Käänteisfaasi-silikageeli-kromatografia suoritettiin samalla liuotinjärjestelmällä. FR-900523 ainetta sisältävät jakeet otettiin talteen ja sen jälkeen väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin puhdistamatonta FR-900523 tuotetta (0,51 g) vaalean kellertävänä jauheena. Tämä puhdistamaton tuote liuotettiin asetonitrii1 in (3 ml) ja käsiteltiin käänteisfaasi- 55 8 7 803 silikageelillä "YMC" (70 ml), joka pakattiin ja keitettiin asetonitrii1 in, tetrahydrofuraanin ja 50 mM fosfaattipuskuri-liuoksen (pH 2,0) seoksella (3:2:5 v/v). Kohdeyhdistettä sisältävät jakeet otettiin talteen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Tämä uute väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin kellertävän valkoista jauhetta (190 mg). Tämä kellertävän valkoinen jauhe kromatografoitiin jälleen käänteisfaasi-sili-kageelillä "YMC”, jolloin saatiin valkoista jauhetta (80 mg). Tämä valkoinen jauhe liuotettiin pieneen määrään dietyylieet-teriä ja annettiin seistä yön yli huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin 56 mg kiteitä. Kiteyttämällä uudelleen dietyyli-eetteristä saatiin 34 mg FR-900523 ainetta värittöminä neulasina . 1 · · • · • · • · ·

Claims (2)

56 87803
1. Menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokkaita trisyklisiä yhdisteitä, joiden kaava on :x\ CH3 CH '"•lv -Λ· V. Λ, " C,,3>^0 V 1CH3 OCH3 OCH3 ** jossa ‘ ** on allyyli, kun n = 1 ja ,..1·1 R^ on metyyli tai allyyli, kun n = 2, • :1: tunnettu siitä, että * r » » ' 1 viljellään mikro-organismia Streptomvces tsukubaensis (PERM BP-927) tai Streptomvces hvqroscopicus subsp. vakushima-V1: ensis (PERM BP-928) ravintoalustassa ja otetaan talteen yhdis- · te FR-900506, jonka kaava on ♦ · · • · • · 57 87803' Η°>γΧ\ CH3°*^Nn^^NsJj CH3 Π /° OH ^^CH2-CH=CH2 O^V I^OH \ 3 CH,v^S> V. T /-ch3 OCH3 OCH3 ja/tai yhdiste FR-900523, jonka kaava on H0XX C14°^^Nj CH3 ;'ί Ογ° "X, JL^oh C 3 CHjY^O K kJL y^CH3 OCH3 och3 ____: ja/tai yhdiste FR 900525, jonka kaava on 58 87803 ch3°'^v^VvN, CH3 CH 0 C^Y° 0H Λ«2-ΟΗ.€Η2 “Vi' CH /cn2 och3 och3
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että viljellään yhdistettä FR-900506 tuottavaa Strepto-myces tsukubaensis-kantaa [No 9993 (FERM BP-927)] ravintoalustassa ja otetaan talteen yhdiste FR-900506. 59 87803
FI854731A 1984-12-03 1985-11-29 Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt vaerdefulla tricykliska foereningar FI87803C (fi)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI864527A FI85977C (fi) 1984-12-03 1986-11-07 Foerfarande foer framstaellning av farmaceutiskt vaerdefulla tricykliska foereningar.

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB8430455 1984-12-03
GB848430455A GB8430455D0 (en) 1984-12-03 1984-12-03 Fr-900506 substance
GB858502869A GB8502869D0 (en) 1985-02-05 1985-02-05 Ws 7238 substances
GB8502869 1985-02-05
GB858508420A GB8508420D0 (en) 1985-04-01 1985-04-01 Fr-900506 & fr-900525 substances
GB8508420 1985-04-01

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI854731A0 FI854731A0 (fi) 1985-11-29
FI854731A FI854731A (fi) 1986-06-04
FI87803B true FI87803B (fi) 1992-11-13
FI87803C FI87803C (fi) 1993-02-25

Family

ID=27262535

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI854731A FI87803C (fi) 1984-12-03 1985-11-29 Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt vaerdefulla tricykliska foereningar
FI864527A FI85977C (fi) 1984-12-03 1986-11-07 Foerfarande foer framstaellning av farmaceutiskt vaerdefulla tricykliska foereningar.

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI864527A FI85977C (fi) 1984-12-03 1986-11-07 Foerfarande foer framstaellning av farmaceutiskt vaerdefulla tricykliska foereningar.

Country Status (24)

Country Link
US (15) US4894366A (fi)
EP (1) EP0184162B1 (fi)
JP (6) JPH0372483A (fi)
KR (5) KR930010704B1 (fi)
CN (1) CN1013687B (fi)
AT (1) ATE104984T1 (fi)
AU (1) AU592067B2 (fi)
CA (1) CA1338491C (fi)
CY (1) CY1912A (fi)
DE (2) DE3587806T2 (fi)
DK (1) DK169550B1 (fi)
ES (1) ES8705038A1 (fi)
FI (2) FI87803C (fi)
GR (1) GR852904B (fi)
HK (1) HK18596A (fi)
HU (1) HU195250B (fi)
IE (1) IE62865B1 (fi)
IL (2) IL92345A (fi)
LU (1) LU90317I2 (fi)
MX (1) MX9202943A (fi)
NL (1) NL960023I2 (fi)
NO (1) NO168372C (fi)
NZ (1) NZ214407A (fi)
PT (1) PT81589B (fi)

Families Citing this family (312)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4894366A (en) * 1984-12-03 1990-01-16 Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
US5254562A (en) * 1984-12-03 1993-10-19 Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
US5266692A (en) * 1984-12-03 1993-11-30 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
GB8608080D0 (en) * 1986-04-02 1986-05-08 Fujisawa Pharmaceutical Co Solid dispersion composition
ATE98700T1 (de) * 1987-06-05 1994-01-15 Fujisawa Pharmaceutical Co Anti-fr-900506-stoffe-antikoerper und hoechstempfindliches enzym-immunoassay-verfahren.
DE3737523A1 (de) * 1987-11-05 1989-05-18 Bayer Ag Verwendung von substituierten hydroxypiperidinen als antivirale mittel
DE3838035C2 (de) * 1987-11-09 1994-03-24 Sandoz Ag Neue Verwendung von 11,28-dioxa-4-azatricyclo[22.3.1.O·4··,··9·]octacos-18-en-Derivaten
US5366971A (en) * 1987-11-09 1994-11-22 Sandoz Ltd. Use of 11,28-dioxa-4-azatricyclo[22.3.1.04,9 ]octacos-18-ene derivatives and pharmaceutical compositions containing them
AT400808B (de) * 1987-11-09 1996-03-25 Sandoz Ag Verwendung von tricyclischen verbindungen zur herstellung von topischen arzneimitteln
DE3844904C2 (de) * 1987-11-09 1997-01-30 Sandoz Ag Neue Verwendung von 11,28-Dioxa-4-azatricyclo-[22.3.1.0·4·,·9·]octacos-18-en-Derivaten
DK175235B1 (da) * 1987-11-09 2004-07-19 Novartis Ag Ny anvendelse af azatricycloderivater og farmaceutiske præparater med indhold deraf
JP2799208B2 (ja) * 1987-12-09 1998-09-17 フアイソンズ・ピーエルシー マクロ環状化合物
GB8728820D0 (en) * 1987-12-09 1988-01-27 Fisons Plc Compounds
AT407957B (de) * 1987-12-17 2001-07-25 Novartis Erfind Verwalt Gmbh Neue verwendung von 11,28-dioxa-4-azatricyclo- (22.3.1.04,9)octacos-18-en-derivaten und sie enthaltende pharmazeutische zubereitungen
EP0323865A1 (en) * 1988-01-07 1989-07-12 Merck & Co. Inc. Novel immunosuppressant agent
US5290772A (en) * 1988-06-29 1994-03-01 Merck & Co., Inc. Immunosuppressant agent
EP0349061B1 (en) * 1988-06-29 1995-03-29 Merck & Co. Inc. Immunosuppressant agent
US4981792A (en) * 1988-06-29 1991-01-01 Merck & Co., Inc. Immunosuppressant compound
DE68925080T2 (de) * 1988-08-01 1996-05-15 Fujisawa Pharmaceutical Co FR-901154- und FR-901155-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung
US5202258A (en) * 1988-08-05 1993-04-13 Merck & Co., Inc. Immunosuppressant-producing culture
EP0356399A3 (en) * 1988-08-26 1991-03-20 Sandoz Ag Substituted 4-azatricyclo (22.3.1.04.9) octacos-18-ene derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
EP0358508A3 (en) * 1988-09-08 1991-03-20 Merck & Co. Inc. Novel immunosuppressant compound
US4980466A (en) * 1988-10-12 1990-12-25 Merck & Co., Inc. Hydroxide mediated FK-506 rearrangement product
CA1316916C (en) * 1988-10-12 1993-04-27 David Askin Hydroxide mediated fk-506 rearrangement product
DE68904037T2 (de) * 1988-10-12 1993-06-03 Merck & Co Inc Verfahren zur umlagerung von fk-506 unter beteiligung von hydroxid.
GB2225576B (en) * 1988-11-29 1992-07-01 Sandoz Ltd Substituted azatricyclo derivatives and metabolites,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US4975372A (en) * 1989-01-13 1990-12-04 Merck & Co., Inc. Microbial transformation product of L-683,590
US5268370A (en) * 1989-01-13 1993-12-07 Merck & Co., Inc. Microbial transformation product of L-679,934
EP0378317A3 (en) * 1989-01-13 1990-11-28 Merck & Co. Inc. Microbial transformation product of l-679,934
EP0378320A3 (en) * 1989-01-13 1990-11-28 Merck & Co. Inc. Microbial transformation product
EP0388152B1 (en) * 1989-03-15 1994-10-12 Merck & Co. Inc. Process for producing an immunosuppressant agent (demethimmunomycin) using a mutant strain of a microorganism
EP0388153B1 (en) * 1989-03-15 1994-12-28 Merck & Co. Inc. Immunosuppressant agent
US5272068A (en) * 1989-03-15 1993-12-21 Merck & Co., Inc. Process for producing immunosuppressant agent L-683942 by fermentation
US4940797A (en) * 1989-03-23 1990-07-10 Merck & Co., Inc. Process for synthesis of FK-506 C10-C18 intermediates
US5155228A (en) * 1989-03-23 1992-10-13 Merck & Co., Inc. FK-506 C10-C18 process intermediates
CA2014841A1 (en) * 1989-04-21 1990-10-21 Byron H. Arison Macrolides having immunosuppressive activity
US5068323A (en) * 1989-04-21 1991-11-26 Merck & Co., Inc. Thermally re-arranged FK-506 derivatives having immunosuppressant activity
US5057608A (en) * 1989-04-21 1991-10-15 Merck & Co., Inc. Immunoregulants, immunosuppressants, process to make ring expanded macrolide related to FK-506/FK-520
US5270187A (en) * 1989-05-05 1993-12-14 Merck & Co., Inc. Microbial transformation product
EP0396400A1 (en) * 1989-05-05 1990-11-07 Merck & Co. Inc. Microbial transformation product
US4987139A (en) * 1989-05-05 1991-01-22 Merck & Co., Inc. FK-520 microbial transformation product
IE64214B1 (en) * 1989-06-06 1995-07-26 Fujisawa Pharmaceutical Co Macrolides for the treatment of reversible obstructive airways diseases
CA2018710A1 (en) * 1989-06-13 1990-12-13 Shieh-Shung T. Chen L-683,590 microbial transformation product
US5138052A (en) * 1989-06-13 1992-08-11 Merck & Co., Inc. L-683,590 microbial transformation product
EP0402931A1 (en) * 1989-06-14 1990-12-19 Sandoz Ltd. Heteroatoms-containing tricyclic compounds
US5164525A (en) * 1989-06-30 1992-11-17 Merck & Co., Inc. Synthetic process for fk-506 type macrolide intermediates
US5235066A (en) * 1989-06-30 1993-08-10 Merck & Co., Inc. FK-506 type macrolide intermediate
EP0413532A3 (en) * 1989-08-18 1991-05-15 Fisons Plc Macrocyclic compounds
EP0487593A1 (en) * 1989-08-18 1992-06-03 FISONS plc Macrocyclic compounds
US5011943A (en) * 1989-08-28 1991-04-30 Merck Frosst Canada, Inc. FK-506 C10 -C24 process intermediates
GR1001225B (el) * 1989-09-14 1993-06-30 Fisons Plc Νέαι μακροκυκλικαί ενώσεις και νέα μέ?οδος χρήσεως τους.
US5215995A (en) * 1989-10-16 1993-06-01 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Hair revitalizing agent
DE69021833T2 (de) * 1989-11-09 1996-03-21 Sandoz Ag Heteroatome enthaltende tricyclische Verbindungen.
IE904050A1 (en) * 1989-11-13 1991-05-22 Merck & Co Inc Aminomacrolides and derivatives having immunosuppressive¹activity
US5208228A (en) * 1989-11-13 1993-05-04 Merck & Co., Inc. Aminomacrolides and derivatives having immunosuppressive activity
GB8925797D0 (en) * 1989-11-15 1990-01-04 Fisons Plc Compositions
EP0444829A3 (en) * 1990-02-27 1992-06-03 Fisons Plc Immunosuppressive compounds
US5064835A (en) * 1990-03-01 1991-11-12 Merck & Co., Inc. Hydroxymacrolide derivatives having immunosuppressive activity
US5260301A (en) * 1990-03-01 1993-11-09 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Pharmaceutical solution containing FK-506
WO1991013899A1 (en) * 1990-03-12 1991-09-19 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Tricyclo compounds
US5296489A (en) * 1990-03-13 1994-03-22 Fisons Immunosuppressive macrocyclic compounds
IE910847A1 (en) * 1990-03-13 1991-09-25 Fisons Plc Immunosuppressive macrocyclic compounds
CA2040551A1 (en) * 1990-04-30 1991-10-31 Mark T. Goulet Deoxymacrolide derivatives having immunosuppressive activity
WO1991017754A1 (en) * 1990-05-11 1991-11-28 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Methods for treating and preventing inflammation of mucosa and blood vessels using fk 506 and related compounds
US5643901A (en) * 1990-06-11 1997-07-01 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Medicament for treating idiopathic thrombocytopenic purpura
EP0533930A1 (en) * 1990-06-11 1993-03-31 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Use of a macrolide compound such as fk 506 for manufacturing a medicament for treating idiopathic thrombocytopenic purpura and basedow's disease
GB9014136D0 (en) * 1990-06-25 1990-08-15 Fujisawa Pharmaceutical Co Tricyclo compounds,a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
US5342935A (en) * 1990-06-25 1994-08-30 Merck & Co., Inc. Antagonists of immunosuppressive macrolides
US5210030A (en) * 1990-06-25 1993-05-11 Merck & Co., Inc. Process for selectively acylating immunomycin
CA2044846A1 (en) * 1990-06-25 1991-12-26 Thomas R. Beattie Antagonists of immunosuppressive macrolides
US5190950A (en) * 1990-06-25 1993-03-02 Merck & Co., Inc. Antagonists of immunosuppressive macrolides
GB9014681D0 (en) * 1990-07-02 1990-08-22 Fujisawa Pharmaceutical Co Tricyclo compounds,a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
MY110418A (en) * 1990-07-02 1998-05-30 Novartis Ag Heteroatoms-containing tricyclic compounds.
EP0466365A3 (en) * 1990-07-03 1992-04-15 Merck & Co. Inc. Novel immunosuppressant fermentation products of a microorganism
GB2245891A (en) * 1990-07-09 1992-01-15 Fujisawa Pharmaceutical Co Tricyclo compounds
GB2246350A (en) * 1990-07-23 1992-01-29 Fujisawa Pharmaceutical Co Tricyclo compounds
US5089517A (en) * 1990-08-03 1992-02-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Neuroprotection by indolactam v and derivatives thereof
WO1992003441A1 (en) * 1990-08-18 1992-03-05 Fisons Plc Macrocyclic compounds
GB2247620A (en) * 1990-09-07 1992-03-11 Fujisawa Pharmaceutical Co The use of macrolide compounds for cytomegalovirus infection
CA2051872A1 (en) * 1990-09-24 1992-03-25 Kevin M. Byrne Directed biosynthesis process for prolyl-immunomycin
GB2248184A (en) * 1990-09-28 1992-04-01 Fujisawa Pharmaceutical Co New use of macrolide compounds for active oxygen-mediated diseases
US5143918A (en) * 1990-10-11 1992-09-01 Merck & Co., Inc. Halomacrolides and derivatives having immunosuppressive activity
US5233036A (en) * 1990-10-16 1993-08-03 American Home Products Corporation Rapamycin alkoxyesters
US5348966A (en) * 1990-10-24 1994-09-20 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Method for treating pyoderma and Sezary's syndrome using FK 506 and related compounds
CA2054128A1 (en) * 1990-10-29 1992-04-30 Kevin M. Byrne Process for the production of analogues of immunomycin
PH31204A (en) * 1990-11-02 1998-05-05 Fujisawa Pharmaceutical Co Pharmaceutical composition.
CA2054983A1 (en) * 1990-11-08 1992-05-09 Sotoo Asakura Suspendible composition and process for preparing the same
GB2249787A (en) * 1990-11-19 1992-05-20 Fujisawa Pharmaceutical Co Lactone compounds
GB9027471D0 (en) * 1990-12-19 1991-02-06 Fujisawa Pharmaceutical Co Novel compound
US5116756A (en) * 1991-01-28 1992-05-26 Merck & Co., Inc. Process for producing FK-506
US5194378A (en) * 1991-01-28 1993-03-16 Merck & Co., Inc. Process for producing fk-506
WO1992013862A1 (en) * 1991-02-05 1992-08-20 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Lactone compounds
US5147877A (en) * 1991-04-18 1992-09-15 Merck & Co. Inc. Semi-synthetic immunosuppressive macrolides
DE69231644T2 (de) * 1991-04-26 2001-05-23 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Verwendung von makrolid-verbindungen gegen augenerkrankungen
US5565560A (en) * 1991-05-13 1996-10-15 Merck & Co., Inc. O-Aryl,O-alkyl,O-alkenyl and O-alkynylmacrolides having immunosuppressive activity
US5262533A (en) * 1991-05-13 1993-11-16 Merck & Co., Inc. Amino O-aryl macrolides having immunosuppressive activity
US5162334A (en) * 1991-05-13 1992-11-10 Merck & Co., Inc. Amino O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynlmacrolides having immunosuppressive activity
US5250678A (en) * 1991-05-13 1993-10-05 Merck & Co., Inc. O-aryl, O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynylmacrolides having immunosuppressive activity
EP0528452A1 (en) * 1991-06-19 1993-02-24 Merck & Co. Inc. Immunomycin enzymatic and/or microbial methylation products
US5225403A (en) * 1991-06-25 1993-07-06 Merck & Co., Inc. C-21 hydroxylated FK-506 antagonist
US5149701A (en) * 1991-08-01 1992-09-22 Merck & Co., Inc. C-31 methylated FR-900520 cyclic hemiketal immunosuppressant agents
US5198358A (en) * 1991-08-28 1993-03-30 Merck & Co., Inc. Microorganism for producing C-31 desmethyl FR-900520 cyclic hemiketal immunosuppressant agent
US5273979A (en) * 1991-08-01 1993-12-28 Merck & Co., Inc. C-31 desmethyl FR-900520 cyclic hemiketal immunosuppressant agent
US5189042A (en) * 1991-08-22 1993-02-23 Merck & Co. Inc. Fluoromacrolides having immunosuppressive activity
US5708002A (en) * 1991-09-05 1998-01-13 Abbott Laboratories Macrocyclic immunomodulators
CA2103453A1 (en) * 1991-09-05 1993-03-06 Jay R. Luly Macrocyclic immunomodulators
US5252732A (en) * 1991-09-09 1993-10-12 Merck & Co., Inc. D-heteroaryl, O-alkylheteroaryl, O-alkenylheteroaryl and O-alkynylheteroarylmacrolides having immunosuppressive activity
US5247076A (en) * 1991-09-09 1993-09-21 Merck & Co., Inc. Imidazolidyl macrolides having immunosuppressive activity
US5208241A (en) * 1991-09-09 1993-05-04 Merck & Co., Inc. N-heteroaryl, n-alkylheteroaryl, n-alkenylheteroaryl and n-alkynylheteroarylmacrolides having immunosuppressive activity
ZA926812B (en) 1991-09-09 1993-04-28 Merck & Co Inc O-heteroaryl,o-alkylheteroaryl,o-alkenylheteroaryl and o-alkynylheteroaryl macrolides having immunosupressive activity
US5164495A (en) * 1991-09-18 1992-11-17 Abbott Laboratories Method for preparing a dicarboxylic acid half-acid ester of FK506
US5221625A (en) * 1992-01-10 1993-06-22 Merck & Co., Inc. Cyclcic FR-900520 microbial biotransformation agent
WO1993014780A1 (en) * 1992-01-28 1993-08-05 Abraham Karpas The use of a compound for the manufacture of a medicament for the treatment of hiv infection
JP3140228B2 (ja) * 1992-02-17 2001-03-05 ファイザー製薬株式会社 新規な大環状ラクトンおよびその生産菌
JP2564765B2 (ja) * 1992-03-02 1996-12-18 ファイザー・インコーポレーテッド マクロライド系抗生物質のフルオロ糖誘導体
DE69330747T2 (de) * 1992-03-02 2002-05-29 Pfizer Inc., New York Desosamino-derivate von makroliden als immunosuppressive und antifungale mittel
JP2563080B2 (ja) * 1992-03-02 1996-12-11 フアイザー・インコーポレイテツド マクロライドの糖誘導体
ATE159725T1 (de) * 1992-03-02 1997-11-15 Pfizer 2-aminozuckermakrolid-derivate
EP0562853B1 (en) 1992-03-27 1996-06-05 American Home Products Corporation 29-Demethoxyrapamycin for inducing immunosuppression
CA2091194A1 (en) * 1992-04-08 1993-10-09 Richard D. Connell 2-oxo-ethyl derivatives as immunosuppressants
HUT66531A (en) * 1992-05-07 1994-12-28 Sandoz Ag Heteroatoms-containing tricyclic compounds, pharmaceutical prepns contg. them and process for producing them
WO1993025533A1 (en) * 1992-06-05 1993-12-23 Abbott Laboratories Methods and reagents for the determination of immunosuppressive agents
US5284877A (en) * 1992-06-12 1994-02-08 Merck & Co., Inc. Alkyl and alkenyl macrolides having immunosuppressive activity
US5284840A (en) * 1992-06-12 1994-02-08 Merck & Co., Inc. Alkylidene macrolides having immunosuppressive activity
US5264355A (en) * 1992-07-02 1993-11-23 Merck & Co., Inc. Methlating enzyme from streptomyces MA6858
ZA935112B (en) * 1992-07-17 1994-02-08 Smithkline Beecham Corp Rapamycin derivatives
US5324644A (en) * 1992-07-28 1994-06-28 Merck & Co., Inc. Process for producing immunosuppressant agent
CA2142197C (en) * 1992-08-12 2004-06-22 Masakazu Kobayashi Monoclonal antibody recognizing fk506-binding protein method for assaying fk506-binding protein level, and kit therefor
US5365948A (en) * 1992-08-21 1994-11-22 J & W Mcmichael Software Inc. Method for use in treating a patient with FK 506 to prevent an adverse immune response
US5268282A (en) * 1992-09-28 1993-12-07 Merck & Co., Inc. Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent
US5283183A (en) * 1992-09-28 1994-02-01 Merck & Co., Inc. Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent
US5290689A (en) * 1992-09-28 1994-03-01 Merck & Co., Inc. New cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent
US5268281A (en) * 1992-09-28 1993-12-07 Merck & Co., Inc. Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent
US5318895A (en) * 1992-10-05 1994-06-07 Merck & Co., Inc. Aspergillus niger mutants
GB9227055D0 (en) * 1992-12-29 1993-02-24 Fujisawa Pharmaceutical Co New use
DE4300478C2 (de) * 1993-01-11 1998-05-20 Eos Electro Optical Syst Verfahren und Vorrichtung zum Herstellen eines dreidimensionalen Objekts
EP0690713A4 (en) * 1993-03-17 1996-04-03 Abbott Lab SUBSTITUTED MACROCYCLIC IMMUNOMODULATORS CONTAINING ALICYCLIC AMINES
AT408520B (de) * 1993-05-27 2001-12-27 Novartis Erfind Verwalt Gmbh Galenische formulierungen
MY110603A (en) * 1993-05-27 1998-08-29 Novartis Ag Tetrahydropyran derivatives
CH686761A5 (de) * 1993-05-27 1996-06-28 Sandoz Ag Galenische Formulierungen.
GB2279006A (en) * 1993-06-03 1994-12-21 Fujisawa Pharmaceutical Co Treatment of amyotrophic lateral sclerosis
JPH06345646A (ja) * 1993-06-08 1994-12-20 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd ローション剤
US5352783A (en) * 1993-06-09 1994-10-04 Merck & Co., Inc. Microbial transformation product having immunosuppressive activity
US5359060A (en) * 1993-07-06 1994-10-25 Pfizer, Inc. Phosponated derivatives of macrolides
EP0711298A1 (en) * 1993-07-30 1996-05-15 Abbott Laboratories Activated macrolactams having immunomodulatory activities
GB2281294A (en) * 1993-08-23 1995-03-01 Fujisawa Pharmaceutical Co Process for producing half esters of the macrolide FK506
US5616588A (en) 1993-09-30 1997-04-01 American Home Products Corporation Rapamycin formulation for IV injection
UA41884C2 (uk) * 1993-11-05 2001-10-15 Амерікан Хоум Продактс Корпорейшн Спосіб відокремлення рапаміцину від кислотних, основних та неполярних нейтральних домішок, присутніх в концентраті екстрактів ферментаційного бульйону або маточних розчинів
US5898029A (en) * 1994-04-12 1999-04-27 The John Hopkins University Direct influences on nerve growth of agents that interact with immunophilins in combination with neurotrophic factors
US5880280A (en) * 1994-06-15 1999-03-09 Merck & Co., Inc. Aryl, alkyl, alkenyl and alkynylmacrolides having immunosuppressive activity
US5693648A (en) * 1994-09-30 1997-12-02 Merck & Co., Inc. O-aryl, O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynyl-macrolides having immunosuppressive activity
MX9702699A (es) 1994-10-26 1997-06-28 Novartis Ag Composiciones farmaceuticas.
AR004480A1 (es) * 1995-04-06 1998-12-16 Amico Derin C D Compuestos de ascomicina que poseen actividad antiinflamatoria, pro cedimiento para prepararlos, uso de dichos compuestos para preparar agentesfarmaceuticos y composiciones farmaceuticas que los incluyen
US5616595A (en) * 1995-06-07 1997-04-01 Abbott Laboratories Process for recovering water insoluble compounds from a fermentation broth
DK0851753T3 (da) * 1995-09-19 2004-03-15 Fujisawa Pharmaceutical Co Aerosolpræparater
ATE222502T1 (de) 1996-07-30 2002-09-15 Novartis Ag Kombinationspräparat mit hemmender wirkung auf die abstossung von transplantaten, autoimmunerkrankungen und entzündungen, welches cyclosporin a und 40-0-(2-hydroxyethyl)-rapamycin enthält
KR100244164B1 (ko) * 1997-07-15 2000-03-02 김용옥 수용성 고분자-타크로리무스 접합체 화합물 및 그의 제조 방법
US6562620B2 (en) * 1997-09-19 2003-05-13 Mcgill University Medium to promote islet cell survival
US20030129215A1 (en) 1998-09-24 2003-07-10 T-Ram, Inc. Medical devices containing rapamycin analogs
US6015815A (en) 1997-09-26 2000-01-18 Abbott Laboratories Tetrazole-containing rapamycin analogs with shortened half-lives
US6890546B2 (en) 1998-09-24 2005-05-10 Abbott Laboratories Medical devices containing rapamycin analogs
US7399480B2 (en) 1997-09-26 2008-07-15 Abbott Laboratories Methods of administering tetrazole-containing rapamycin analogs with other therapeutic substances using medical devices
US8257725B2 (en) 1997-09-26 2012-09-04 Abbott Laboratories Delivery of highly lipophilic agents via medical devices
US8057816B2 (en) 1997-09-26 2011-11-15 Abbott Laboratories Compositions and methods of administering paclitaxel with other drugs using medical devices
US8257726B2 (en) 1997-09-26 2012-09-04 Abbott Laboratories Compositions, systems, kits, and methods of administering rapamycin analogs with paclitaxel using medical devices
US8394398B2 (en) 1997-09-26 2013-03-12 Abbott Laboratories Methods of administering rapamycin analogs with anti-inflammatories using medical devices
US7357942B2 (en) 1997-09-26 2008-04-15 Abbott Laboratories Compositions, systems, and kits for administering zotarolimus and paclitaxel to blood vessel lumens
ES2192832T3 (es) * 1998-02-23 2003-10-16 Fujisawa Pharmaceutical Co Uso de compuestos macrolidos para tratar glaucoma.
AUPP223198A0 (en) * 1998-03-06 1998-04-02 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. New use
RU2214244C9 (ru) 1998-03-26 2020-07-29 Астеллас Фарма Инк. Препараты с замедленным высвобождением
SK462001A3 (en) 1998-07-17 2002-02-05 Agouron Pharma Compounds, compositions, and methods for stimulating neuronal growth and elongation
US8257724B2 (en) 1998-09-24 2012-09-04 Abbott Laboratories Delivery of highly lipophilic agents via medical devices
US7455853B2 (en) 1998-09-24 2008-11-25 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Medical devices containing rapamycin analogs
US7960405B2 (en) 1998-09-24 2011-06-14 Abbott Laboratories Compounds and methods for treatment and prevention of diseases
EP1117801B1 (en) 1998-10-02 2006-11-29 Kosan Biosciences, Inc. Polyketide synthase enzymes and recombinant dna constructs therefor, for the production of compounds related to fk-506 and fk-520
DE19853487A1 (de) 1998-11-19 2000-05-25 Fumapharm Ag Muri Verwendung von Dialkylfumaraten
GB9826656D0 (en) 1998-12-03 1999-01-27 Novartis Ag Organic compounds
US6121257A (en) * 1999-03-31 2000-09-19 Abbott Laboratories Sulfamate containing macrocyclic immunomodulators
EP1165575A1 (en) * 1999-03-31 2002-01-02 Abbott Laboratories Phosphate containing macrocyclic immunomodulators
US7572788B2 (en) 1999-04-30 2009-08-11 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof
US20060025388A1 (en) 1999-04-30 2006-02-02 Glick Gary D Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof
US20050113460A1 (en) * 1999-04-30 2005-05-26 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof
ATE433752T1 (de) * 1999-04-30 2009-07-15 Univ Michigan Verwendung von benzodiazepinen zur behandlung von autoimmunischen krankheiten, entzündungen, neoplasien, viralen infektionen und atherosklerosis
US20040176358A1 (en) * 1999-04-30 2004-09-09 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof
US20030119029A1 (en) * 1999-04-30 2003-06-26 Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods relating to novel benzodiazepine compounds and targets thereof
US7063857B1 (en) 1999-04-30 2006-06-20 Sucampo Ag Use of macrolide compounds for the treatment of dry eye
GB9917158D0 (en) * 1999-07-21 1999-09-22 Fujisawa Pharmaceutical Co New use
US20030018044A1 (en) * 2000-02-18 2003-01-23 Peyman Gholam A. Treatment of ocular disease
US6471980B2 (en) 2000-12-22 2002-10-29 Avantec Vascular Corporation Intravascular delivery of mycophenolic acid
US7018405B2 (en) 2000-12-22 2006-03-28 Avantec Vascular Corporation Intravascular delivery of methylprednisolone
AR033151A1 (es) * 2001-04-12 2003-12-03 Sucampo Pharmaceuticals Inc Agente para el tratamiento oftalmico topico de las enfermedades inflamatorias oculares
US6656460B2 (en) 2001-11-01 2003-12-02 Yissum Research Development Method and composition for dry eye treatment
US7452692B2 (en) * 2002-02-13 2008-11-18 Teva Gyógyszergyár Zártkörüen Müködö Részvénytársaság Method for extracting a macrolide from biomatter
CA2475383C (en) 2002-02-13 2009-12-22 Biogal Gyogyszergyar Rt. Method for extracting a macrolide from biomatter
WO2003072026A2 (en) * 2002-02-22 2003-09-04 3M Innovative Properties Company Method of reducing and treating uvb-induced immunosuppression
AU2002321821A1 (en) * 2002-06-28 2004-01-19 Biocon Limited Solid state fermentation and fed batch for the production of an immunosuppressant
JP2005537854A (ja) 2002-09-06 2005-12-15 アボット・ラボラトリーズ 水和抑制剤を具備する医療器具
DE60331367D1 (de) 2002-12-30 2010-04-01 Angiotech Int Ag Wirkstofffreisetzung von schnell gelierender polymerzusammensetzung
AU2003209664A1 (en) * 2003-02-10 2004-08-30 Biocon Limited Solid state fermentation and fed batch for the production of an immunosuppressant
DE04758730T1 (de) * 2003-03-31 2005-06-23 Biogal Gyogyszergyar Rt. Kristallisierung und Reinigung von Makroliden
US20060169199A1 (en) * 2003-03-31 2006-08-03 Vilmos Keri Crystallization and purification of macrolides
KR100486016B1 (ko) * 2003-07-09 2005-04-29 주식회사종근당 타크로리무스의 속용성 고체분산체 및 이의 제조방법
EP1558622B1 (en) * 2003-07-24 2007-11-14 TEVA Gyógyszergyár Zártkörüen Müködö Részvénytársaság Method of purifying macrolides
WO2005011796A1 (ja) * 2003-08-05 2005-02-10 Kaneka Corporation 生体留置用ステント
CA2537041C (en) 2003-08-29 2012-04-03 Lifecycle Pharma A/S Modified release compositions comprising tacrolimus
ATE531368T1 (de) 2003-08-29 2011-11-15 Veloxis Pharmaceuticals As Tacrolimus enthaltende zusammensetzungen mit modifizierter freisetzung
TW200517114A (en) 2003-10-15 2005-06-01 Combinatorx Inc Methods and reagents for the treatment of immunoinflammatory disorders
DE602004018547D1 (de) * 2003-10-17 2009-01-29 Ranbaxy Lab Ltd Herstellung von tacrolimus (fk-506) unter verwendung neuer streptomyces-spezies
CA2546347A1 (en) 2003-11-21 2005-06-09 Combinatorx, Incorporated Methods and reagents for the treatment of inflammatory disorders
CA2548297C (en) * 2003-12-05 2011-06-14 Biocon Limited Process for the purification of macrolides
KR100485877B1 (ko) * 2003-12-30 2005-04-28 종근당바이오 주식회사 타크롤리무스를 생산하는 미생물 및 이를 이용한타크롤리무스의 대량 생산방법
US20050176080A1 (en) * 2004-02-10 2005-08-11 Vani Bodepudi Hapten, immunogens and derivatives of ascomycin useful for preparation of antibodies and immunoassays
WO2005089855A1 (en) 2004-03-19 2005-09-29 Abbott Laboratories Multiple drug delivery from a balloon and a prosthesis
US8431145B2 (en) 2004-03-19 2013-04-30 Abbott Laboratories Multiple drug delivery from a balloon and a prosthesis
CA2562805C (en) * 2004-04-12 2014-03-11 Biocon Limited Process for the production of macrolides using a novel strain, streptomyces sp. bicc 7522
US20050272723A1 (en) * 2004-04-27 2005-12-08 The Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for treating diseases and conditions associated with mitochondrial function
US20090275099A1 (en) * 2004-04-27 2009-11-05 Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for treating diseases and conditions associated with mitochondrial function
JP2006014722A (ja) * 2004-06-02 2006-01-19 Keio Gijuku 遺伝子マーカー及びその利用
US20110104186A1 (en) 2004-06-24 2011-05-05 Nicholas Valiante Small molecule immunopotentiators and assays for their detection
EP1768692B8 (en) * 2004-07-01 2015-06-17 Yale University Targeted and high density drug loaded polymeric materials
US20060014677A1 (en) * 2004-07-19 2006-01-19 Isotechnika International Inc. Method for maximizing efficacy and predicting and minimizing toxicity of calcineurin inhibitor compounds
US20060052369A1 (en) * 2004-09-07 2006-03-09 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof
WO2006031664A1 (en) * 2004-09-10 2006-03-23 Ivax Pharmaceuticals S.R.O. Process for isolation of crystalline tacrolimus
JP2008512125A (ja) * 2004-09-10 2008-04-24 アイバックス ファーマシューティカルズ スポレツノスト エス ルチェニム オメゼニム マクロリド化合物を単離する方法
GT200500282A (es) * 2004-10-12 2006-05-04 Heteroatomos conteniendo compuestos triciclicos.
ITMI20042098A1 (it) * 2004-11-03 2005-02-03 Antibioticos Spa Processo per la purificazione di tacrolimus
JP2007519758A (ja) * 2004-12-01 2007-07-19 テバ ジョジセルジャール ザ−トケルエン ムケド レ−スベニュタ−ルシャシャ−グ 結晶マクロライドの生成方法
EP1835889A1 (en) * 2004-12-15 2007-09-26 Elan Pharma International Limited Nanoparticulate tacrolimus formulations
MX2007005867A (es) * 2004-12-22 2007-07-04 Teva Gyogyszergyar Zartkoeruen Mukoedo Reszvenytarsasag Metodo de purificar macrolidos.
CA2593019A1 (en) * 2005-01-03 2006-07-13 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof
TW200635934A (en) * 2005-01-05 2006-10-16 Teva Gyogyszergyar Zartkoruen Mukodo Reszvenytarsasag Amorphous tacrolimus and preparation thereof
US20090162868A1 (en) * 2005-01-13 2009-06-25 Yusuke Tanigawara Gene Markers and Utilization of the Same
EP1868663B1 (en) 2005-03-23 2011-11-16 Abbott Laboratories Delivery of highly lipophilic agents via medical devices
JP5242374B2 (ja) 2005-03-23 2013-07-24 アボット・ラボラトリーズ 組成物ならびに長期効力を得るための医療機器を用いたラパマイシン類縁体の投与方法
AU2006309291B2 (en) 2005-06-01 2010-05-27 The Regents Of The University Of Michigan Unsolvated benzodiazepine compositions and methods
CN1876822B (zh) * 2005-06-06 2010-05-12 上海市农药研究所 他克莫司的产生菌株及生产方法
WO2007013017A1 (en) * 2005-07-29 2007-02-01 Ranbaxy Laboratories Limited A process for purification of macrolides
ITMI20051549A1 (it) * 2005-08-05 2007-02-06 Antibioticos Spa Purificazione del tacrolimus su supporti dimorigine vegetale
WO2007029082A2 (en) * 2005-09-05 2007-03-15 Ranbaxy Laboratories Limited An improved fermentation process for preparing ascomycin
US20080318289A1 (en) * 2005-10-05 2008-12-25 Parveen Kumar Fermentation Processes for the Preparation of Tacrolimus
US20070105844A1 (en) * 2005-10-26 2007-05-10 Regents Of The University Of Michigan Therapeutic compositions and methods
NZ568254A (en) 2005-11-01 2011-06-30 Univ Michigan 1,4-Benzodiazepine-2,5-diones for regulating cell death and treating autoimmune diseases
US8067433B2 (en) 2005-11-09 2011-11-29 Zalicus Inc. Methods, compositions, and kits for the treatment of ophthalmic disorders
US7622477B2 (en) 2006-02-28 2009-11-24 Cordis Corporation Isomers and 42-epimers of rapamycin alkyl ether analogs, methods of making and using the same
US7678901B2 (en) 2006-02-28 2010-03-16 Wyeth Rapamycin analogs containing an antioxidant moiety
US20080000834A1 (en) * 2006-03-15 2008-01-03 Ladislav Cvak Process for purifying Tacrolimus
US8022188B2 (en) * 2006-04-24 2011-09-20 Abbott Laboratories Immunosuppressant binding antibodies and methods of obtaining and using same
US7759338B2 (en) * 2006-04-27 2010-07-20 The Regents Of The University Of Michigan Soluble 1,4 benzodiazepine compounds and stable salts thereof
EP2037741B1 (en) 2006-06-09 2013-11-27 The Regents Of The University Of Michigan Benzodiazepine derivatives for use in the treatment of immune, inflammatory and proliferative disorders
CA2660804A1 (en) 2006-08-31 2008-03-06 Astellas Pharma Inc. Reverse targeting lipid vesicle
US20080161324A1 (en) * 2006-09-14 2008-07-03 Johansen Lisa M Compositions and methods for treatment of viral diseases
TW200837067A (en) * 2006-11-06 2008-09-16 Teva Gyogyszergyar Zartkoruen Mukodo Reszvenytarsasag Ascomycin and pimecrolimus having reduced levels of desmethylascomycin and 32-deoxy-32-epichloro-desmethylascomycin respectively, and methods for preparation thereof
US9044391B2 (en) * 2007-01-10 2015-06-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Enhanced delivery of immunosuppressive drug compositions for pulmonary delivery
US10265407B2 (en) 2007-02-15 2019-04-23 Yale University Modular nanodevices for smart adaptable vaccines
US20100151436A1 (en) * 2007-03-02 2010-06-17 Fong Peter M Methods for Ex Vivo Administration of Drugs to Grafts Using Polymeric Nanoparticles
WO2008112553A1 (en) 2007-03-09 2008-09-18 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof
ES2634153T3 (es) 2007-05-30 2017-09-26 Veloxis Pharmaceuticals A/S Forma de dosificación oral de una vez al día que comprende tacrolimus
US12083103B2 (en) 2007-05-30 2024-09-10 Veloxis Pharmaceuticals, Inc. Tacrolimus for improved treatment of transplant patients
KR100891313B1 (ko) 2007-08-17 2009-03-31 (주) 제노텍 담체로 작용하는 흡착성 수지의 제공에 의한 트리사이클로화합물의 생산 및 추출 방법
WO2009036175A2 (en) 2007-09-14 2009-03-19 The Regents Of The University Of Michigan F1f0-atpase inhibitors and related methods
KR20100083819A (ko) 2007-11-06 2010-07-22 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미시간 피부 병태의 치료에 유용한 벤조디아제피논 화합물
US8921642B2 (en) * 2008-01-11 2014-12-30 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Conditional-stop dimerizable caspase transgenic animals
KR101003042B1 (ko) 2008-03-17 2010-12-21 종근당바이오 주식회사 고순도 타크로리무스의 정제 방법
MX2010011068A (es) * 2008-04-08 2010-11-04 Amyris Biotechnologies Inc Expresion de secuencias heterologas.
US9549918B2 (en) 2008-05-30 2017-01-24 Veloxis Pharmaceuticals A/S Stabilized tacrolimus composition
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
US20100092479A1 (en) * 2008-08-18 2010-04-15 Combinatorx (Singapore) Pte. Ltd. Compositions and methods for treatment of viral diseases
WO2010030891A2 (en) 2008-09-11 2010-03-18 The Regents Of The University Of Michigan Aryl guanidine f1f0-atpase inhibitors and related methods
KR100910165B1 (ko) 2008-09-18 2009-07-30 (주) 제노텍 은 이온 용액 추출을 이용한 불포화 알킬기를 가진 락톤 화합물 정제방법
ES2478845T3 (es) * 2008-10-08 2014-07-23 Takata Seiyaku Co., Ltd. Preparación de tacrolimus para aplicaciones externas
US8716263B2 (en) 2008-12-23 2014-05-06 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of purine nucleosides
AR074897A1 (es) 2008-12-23 2011-02-23 Pharmasset Inc Fosforamidatos de nucleosidos
KR20110098849A (ko) 2008-12-23 2011-09-01 파마셋 인코포레이티드 뉴클레오시드 유사체
US8604023B2 (en) 2009-04-17 2013-12-10 The Regents Of The University Of Michigan 1,4-benzodiazepinone compounds and their use in treating cancer
CN101712686B (zh) * 2009-06-22 2012-08-29 鲁南制药集团股份有限公司 一种发酵液中他克莫司的分离纯化方法
EP2272963A1 (en) * 2009-07-09 2011-01-12 LEK Pharmaceuticals d.d. Process for Preparation of Tacrolimus
US8673897B2 (en) 2009-09-18 2014-03-18 The Regents Of The University Of Michigan Benzodiazepinone compounds and methods of treatment using same
CA2780287C (en) 2009-11-17 2015-03-17 The Regents Of The University Of Michigan 1,4-benzodiazepine-2,5-diones and related compounds with therapeutic properties
JP5856063B2 (ja) 2009-11-17 2016-02-09 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン 治療特性を有する１，４−ベンゾジアゼピン−２，５−ジオンおよび関連化合物
US20110130711A1 (en) * 2009-11-19 2011-06-02 Follica, Inc. Hair growth treatment
US8951595B2 (en) 2009-12-11 2015-02-10 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Coatings with tunable molecular architecture for drug-coated balloon
US8480620B2 (en) 2009-12-11 2013-07-09 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Coatings with tunable solubility profile for drug-coated balloon
TW201139457A (en) 2010-03-31 2011-11-16 Pharmasset Inc Stereoselective synthesis of phosphorus containing actives
US20110318277A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 APT Pharmaceuticals, Inc. University of Maryland, Baltimore Tacrolimus compositions for aerosol administration
KR101261131B1 (ko) 2010-08-24 2013-05-06 이화여자대학교 산학협력단 신규 타크롤리무스 유도체, 상기 유도체를 포함하는 신경 보호용 조성물, 상기 유도체를 포함하는 면역 억제용 조성물, 상기 유도체의 생산 방법 및 상기 유도체의 생산 균주
MA34586B1 (fr) 2010-08-25 2013-10-02 Medis Lab Particules cristallines de tacrolimus micronise a surface modifiee et compositions pharmaceutiques associees
US10117411B2 (en) 2010-10-06 2018-11-06 Dow Agrosciences Llc Maize cytoplasmic male sterility (CMS) C-type restorer RF4 gene, molecular markers and their use
AU2012229236B2 (en) 2011-03-11 2017-05-18 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Anti-CD40 antibodies and uses thereof
US9597385B2 (en) 2012-04-23 2017-03-21 Allertein Therapeutics, Llc Nanoparticles for treatment of allergy
NZ723459A (en) 2013-03-14 2017-12-22 Alkermes Pharma Ireland Ltd Prodrugs of fumarates and their use in treating various diseases
US8669281B1 (en) 2013-03-14 2014-03-11 Alkermes Pharma Ireland Limited Prodrugs of fumarates and their use in treating various diseases
EP3760223A1 (en) 2013-04-03 2021-01-06 N-Fold Llc Nanoparticle composition for desensitizing a subject to peanut allergens
US9814703B2 (en) 2013-11-14 2017-11-14 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for treating cancer by activation of BMP signaling
CN104650112B (zh) * 2013-11-18 2018-07-31 山东新时代药业有限公司 他克莫司8-丙基类似物的制备方法
UY35927A (es) 2013-12-31 2015-07-31 Dow Agrosciences Llc ?gen restaurador rf3 de tipo s de la esterilidad masculina citoplasmática del maíz (cms), marcadores moleculares y sus usos?.
CA2935801A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Amplyx Pharmaceuticals, Inc. Antifungal compounds
CA2935167C (en) 2014-01-16 2022-02-22 Musc Foundation For Research Development Targeted nanocarriers for the administration of immunosuppressive agents
JP6337135B2 (ja) 2014-02-24 2018-06-06 アルカーメス ファーマ アイルランド リミテッド フマル酸エステルのスルホンアミドプロドラッグ及びスルフィンアミドプロドラッグ並びに種々の疾患の治療におけるその使用
KR101694879B1 (ko) 2014-08-01 2017-01-12 주식회사 인트론바이오테크놀로지 면역억제활성 없이 신경재생활성이 유지되는 fk506 유도체 및 그의 용도
EP3246036B1 (en) 2014-10-28 2021-10-13 Koushi Yamaguchi Medicine for improving pregnancy-induced hypertension syndrome
CA2994859A1 (en) 2015-08-19 2017-02-23 Vivus, Inc. Pharmaceutical formulations
CA3002789A1 (en) 2015-09-04 2017-03-09 Primatope Therapeutics Inc. Humanized anti-cd40 antibodies and uses thereof
CN106074367A (zh) * 2016-07-20 2016-11-09 中山大学中山眼科中心 含fk506类化合物/fkbp蛋白二聚体的药物组合物及其制备方法
CN108384819B (zh) * 2017-02-03 2021-06-25 上海医药工业研究院 一种用于发酵他克莫司的培养基以及发酵方法
RU2686779C1 (ru) * 2018-07-26 2019-04-30 Общество с ограниченной ответственностью "Изварино Фарма" Штамм streptomyces tsukubensis - продуцент такролимуса и способ получения такролимуса
JP7465806B2 (ja) 2018-08-10 2024-04-11 晃史 山口 母体と胎児との関係における液性免疫関連疾患の治療薬
WO2020076738A2 (en) * 2018-10-12 2020-04-16 Bellicum Pharmaceuticals, Inc Protein-binding compounds
WO2020117134A1 (en) 2018-12-04 2020-06-11 İlko İlaç Sanayi̇ Ve Ti̇caret A.Ş. Stable tacrolimus ointment formulation for topical treatment of skin conditions
KR102135527B1 (ko) * 2018-12-18 2020-07-20 이문수 발가락 습기 제거 양말
JPWO2020129348A1 (ja) 2018-12-18 2021-11-04 晃史 山口 不妊・不育症または妊娠状態を改善するための薬剤
GR1009790B (el) 2019-03-20 2020-08-03 Φαρματεν Α.Β.Ε.Ε. Σκευασμα παρατεταμενης αποδεσμευσης που περιλαμβανει τακρολιμους
WO2022187379A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Sana Biotechnology, Inc. Immunosuppressive therapies for use with cardiomyocyte cell therapies, and associated methods and compositions

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3244592A (en) * 1962-06-09 1966-04-05 Arai Tadashi Ascomycin and process for its production
JPS54110000A (en) * 1978-02-17 1979-08-29 Kaken Pharmaceut Co Ltd Novel streptovaricin c derivative
US4309504A (en) * 1980-01-28 1982-01-05 Eli Lilly And Company Process for preparing narasin
US4654334A (en) * 1980-10-08 1987-03-31 International Minerals & Chemical Corp. Manganese-containing antibiotic agents
US4415669A (en) * 1981-12-07 1983-11-15 Merck & Co., Inc. Substance and process for its production
US4390546A (en) * 1981-12-07 1983-06-28 Merck & Co., Inc. Antiparasitic macrolide from a strain of Streptomyces hygroscopicus
US4510317A (en) * 1983-07-28 1985-04-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antibiotic X-14934A
US4894366A (en) * 1984-12-03 1990-01-16 Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
GB8430455D0 (en) * 1984-12-03 1985-01-09 Fujisawa Pharmaceutical Co Fr-900506 substance
US5266692A (en) * 1984-12-03 1993-11-30 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
US5254562A (en) * 1984-12-03 1993-10-19 Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
DK175235B1 (da) * 1987-11-09 2004-07-19 Novartis Ag Ny anvendelse af azatricycloderivater og farmaceutiske præparater med indhold deraf
US5956352A (en) * 1992-04-24 1999-09-21 Digital Equipment Corporation Adjustable filter for error detecting and correcting system

Also Published As

Publication number Publication date
FI87803C (fi) 1993-02-25
IL77222A (en) 1991-06-10
KR930010705B1 (ko) 1993-11-08
US4929611A (en) 1990-05-29
ES8705038A1 (es) 1987-04-16
DK169550B1 (da) 1994-11-28
DE3587806T2 (de) 1994-08-25
CY1912A (en) 1985-11-30
US6028097A (en) 2000-02-22
IE852971L (en) 1986-06-03
US5624842A (en) 1997-04-29
JP2828091B2 (ja) 1998-11-25
FI864527A (fi) 1986-11-07
FI854731A (fi) 1986-06-04
PT81589A (en) 1986-01-01
CN1013687B (zh) 1991-08-28
US5830717A (en) 1998-11-03
FI864527A0 (fi) 1986-11-07
KR930010708B1 (ko) 1993-11-08
PT81589B (pt) 1987-10-20
DE19575026I2 (de) 2002-03-28
NO854833L (no) 1986-06-04
US20040029908A1 (en) 2004-02-12
US20050124646A1 (en) 2005-06-09
JPH0720970B2 (ja) 1995-03-08
US6201005B1 (en) 2001-03-13
DE3587806D1 (de) 1994-06-01
KR860004918A (ko) 1986-07-16
US4894366A (en) 1990-01-16
KR930010707B1 (ko) 1993-11-08
CA1338491C (en) 1996-07-30
FI85977B (fi) 1992-03-13
IE62865B1 (en) 1995-03-08
JPH1112281A (ja) 1999-01-19
JPH0346445B2 (fi) 1991-07-16
NL960023I1 (nl) 1996-12-02
NO168372C (no) 1992-02-12
FI854731A0 (fi) 1985-11-29
HK18596A (en) 1996-02-09
US4956352A (en) 1990-09-11
HU195250B (en) 1988-04-28
HUT41842A (en) 1987-05-28
KR930010704B1 (ko) 1993-11-08
AU592067B2 (en) 1990-01-04
JPH11343294A (ja) 1999-12-14
US5565559A (en) 1996-10-15
EP0184162B1 (en) 1994-04-27
DK556285D0 (da) 1985-11-29
ES549478A0 (es) 1987-04-16
JPH1067783A (ja) 1998-03-10
JPH0372484A (ja) 1991-03-27
GR852904B (fi) 1986-04-01
NZ214407A (en) 1989-11-28
AU5059685A (en) 1986-06-12
DK556285A (da) 1986-06-04
NL960023I2 (nl) 1997-06-02
US5496727A (en) 1996-03-05
JPH07224066A (ja) 1995-08-22
US20030170831A1 (en) 2003-09-11
JP3211891B2 (ja) 2001-09-25
EP0184162A3 (en) 1989-02-08
CN85109492A (zh) 1986-06-10
EP0184162A2 (en) 1986-06-11
FI85977C (fi) 1992-06-25
ATE104984T1 (de) 1994-05-15
NO168372B (no) 1991-11-04
JP2976966B2 (ja) 1999-11-10
US20030229115A1 (en) 2003-12-11
US6482845B1 (en) 2002-11-19
JPH0372483A (ja) 1991-03-27
KR930010706B1 (ko) 1993-11-08
IL92345A (en) 1991-06-10
MX9202943A (es) 1992-06-30
LU90317I2 (fr) 1999-01-11
JP2746134B2 (ja) 1998-04-28
US5110811A (en) 1992-05-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI87803B (fi) Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt vaerdefulla tricykliska foereningar
EP0627009B1 (en) Macrocyclic lactones and a productive strain thereof
JPH0338276B2 (fi)
JP3039780B2 (ja) 免疫抑制剤の生産法
KR900004066B1 (ko) 생물학적으로 활성인 ws 6049의 제조방법
US4975372A (en) Microbial transformation product of L-683,590
US5494820A (en) Streptomyces braegensis strain and its cultivation in a process for producing C9 -desoxo-FK-520
EP0191399B1 (en) Benz[a]anthraquinone compounds, a microbial process for their preparation and their use as medicaments
US5283183A (en) Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent
US5268370A (en) Microbial transformation product of L-679,934
US5290689A (en) New cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent
US5268281A (en) Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent
US5268282A (en) Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent
CA2007678A1 (en) Microbial transformation product of l-679,934
NO176523B (no) Fremgangsmåte for fremstilling av tricykloforbindelsen FR-900523
JPH07233193A (ja) 抗腫瘍抗生物質

Legal Events

Date Code Title Description
ND Supplementary protection certificate (spc) granted
SPCG Supplementary protection certificate granted

Spc suppl protection certif: L80

Extension date: 20090607

FG Patent granted

Owner name: FUJISAWA PHARMACEUTICAL CO LTD

MA Patent expired
PC Transfer of assignment of patent

Owner name: ASTELLAS PHARMA INC.

Free format text: ASTELLAS PHARMA INC.