TW314468B - - Google Patents

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°U468 A7 B7 五、發明説明（1 ) 本發明係W於8α -3-羥基鹼-1,3, 5(10),9(11)-四烯-17-_(Λ9(11)-去氳-8-異雌醑）（VI)及其製程，係闞於 含該 8α -3-羥基 _-1,3·5(1<Π,9(11>-四烯-17-钃（Δ9 去氫-8-異難麵>(VI)的藥學成份Μ及該8« -3-羥 基雌-1,3,5(10) ,9(11)-四烯-17-嗣（△ 9(11)-去氫-8-異鵡繭）（VI)在修正骨顗製造及骨頭耗損閾平衡與在包 含類的宿主_物内當作抗氧化繭的用途。 發酋兽 骨霣疏鬆症為一種骨骼病症，其特戡為全身骨顗密度 減少，事實上，脅頭磷物霣（《酸钙•稱為"羥基磷灰石 及骨頭母霣（主要蛋白霣稱為”膠原均逐潇流失。此現 象可能在人類30歲時開始發生。一般而言•在停經婦女 此過程較男性更快逋。然而，超逾80歲後，在骨質疏鬆 症的發生上躭沒有性另上的差異。骨質流失之1〇年-2 0 年間，可能有背痛的症狀及脊椎變形之X光片之證明。 更年長時，由於近供股骨（”«部”）容易骨折，骨頭易碎 度因而顯現出來。骨霣疏鬆症為超過45歲者骨折最常見 的原因。 雖然母質疏鬆症的原因未知，人們認為骨頭製造及骨 頭耗撗（骨頭衰退）之間存在著不平衡。骨頭在動物一生 中保持為一動態姐孅。那表示新的骨頭一直持鑛地形成 而舊的骨頭在持鑛地耗損。然而，在罹《骨質疎鬆症的 動物體内，淨骨頭耗損超逾骨頭的形成。 一讕査顯示在美國，可能有一千五百萬至二千萬人民 -3- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2 ) 罹患骨質疏鬆症[V. A. Peck(Chairaan), NIH.Osteoporosis Consensus Confrence, J. A·. Med. Assoc. , 10, 2 5 2 :799-802 (1984)]»根據其被認為是病因之特殊情況來 表示不同形成的骨質疏鬆症：老年（衰老）；停經（女性 喪失製造_激素能力）：醆棄未用（disuse)(慢性癱瘓） (chronic iaaobilization);類固酵（M節炎長期旛予 類固酵治療>»骨霣疏鬆症也可能出現在牙齒的閜題上 •因下頷骨較任何其他《顗更思流失質量。因此，伴》 成人牙齒鬆落的牙周病可能為骨質疏鬆症的早期微兆。 目前對#質流失的機制不甚明瞭。此外，目前的治療 方法通常是不令人滿意地。疽些包括合成代謝繭 (anabolic agents).包括败，維生素D ,转鹽，顛化 物Μ及降血®素（c a丨c i t n i η)。 雌激素置換治.療法（Estrogen replacement therapy)為 治療停經婦女骨質疏鬆症的選擇之一。 物理治療為目前用K治療骨質疏鬆症的另一種方法， 因為在任何年龄，癱痪會造成骨質疏鬆症◊因此，許多 II師認為蓮動及物理治療能防止老年病患疾病的惡化。 經濟部中央標準局負工消費合作社印裝 ----------I 装-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) Λ, 然而，物理治療對费折病患會造成傷害，此外，通度澹 烈的蓮動會造成病患骨折部位嚴重骨質疏鬆。 其他治療方法，包括胞予氟鹽，如氟化納，其薄由剌 激謬質的合成而能在睡床上.明顬地促進骨頭生長。然 而，一嚴重的副作用是不充份石灰化及不規則骨頭的生 長，另一治療之含输入鈣及維生素D K中和某些老年患 -4-本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS > A4規格（210X297公釐） 314468 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 3 ) 1 1 者 鈣 缺 乏 或 鈣 質 吸 收 減 弱 之 戡 候 ο 然 而 f 尚 無 m 高 攝 取 1 1 量 能 預 防 骨 質 疏 鬆 症 或 增 加 成 人 骨 頭 的 質 量 的 證 明 ο 1 1 治 療 骨 霣 疏 鬆 症 最 有 前 途 的 療 法 是 施 予 能 修 正 骨 頭 製 y—ν 請 1 先 1 造 速 度 及 骨 頭 耗 損 速 度 間 之 不 平 衡 的 薄 劑 9 其 使 前 者 與 閱 讀 1 後 者 的 比 例 升 高 而 致 使 沒 有 淨 骨 頭 流 失 ο 在 先前 龕 生 之 背 1 I 之 I 骨 頭 流 失 回 復 後 » 逹 到 —. m 定 狀 態 » 其 時 骨 頭 製 造 速 度 注 意 1 | 與 骨 頭 耗 m 速 度 相 等 〇 如 此 之 修 正 法 可 能 藉 由 剌 激 骨 頭 事 項 1 I 再 t 沈 積 的 生 理 櫬 制 那 表 示 骨 頭 形 成 $ 或 藉 由 延 埋 骨 頭 耗 § 寫 本 袈 損 之 櫬 制 参 或 兩 者 而 達 成 〇 百 前 使 用 或 在 實 驗 階 段 用 以 頁 、·_〆 1 | 達 成 瑄 些 百 的 的 蔡 物 包 括 m > 降 血 钙 素 及 光 m 嫌 素 1 1 ( Ϊ t hr a η y c i η ) « >然而， 瑄些藥物都有鍰重的缺失< ) 1 I 光 輝 嫌 素 為 一 種 抗 生 素 $ 具 抗 腫 瘤 活 性 及 低 血 鈣 活 性 1 訂 9 導 致 血 清 中 鈣 的 減 少 9 其 被 認 為 是 表 示 骨 頭 耗 損 相 對 1 進 度 降 低 -那表示， 骨頭耗損相對於骨頭製造 >然而副 1 I 作 用 包 括 有 腎 及 肝 的 毒 性 及 反 胃 〇 同 樣 地 9 有 機 磷 具 1 1 有 包 括 骨 骼 外 石 灰 化 » 低 血 壓 及 醫 衰 竭 的 副 作 用 〇 降 血 1 1 鈣 素 呈 現 免 疫 的 問 題 因 其 通 常 由 非 人 類 來 源 衍 生 〇 因 I 此 9 沒 有 一 個 前 述 藥 劑 逋 於 巨 前 單 獨 使 用 在 骨 質 疏 鬆 症 1 1 的 治 療 上 〇 1 | 先 前 技 術 1 先 刖 技 術 係 闞 於 馬 烯 雌 固 飼 (e q u i 1 in )本身（ > 1 1 Bu da ν a Γ 1 S(1989 ). The Η e r c k I n d ex 1 1th e d * 1 I Me Γ C k & Co I n c • R a h w ay 9 Ne V Je r s e y $ P · 3582 1 1 及 闞 於 另 一 巳 知 馬 烯 雌 固 酮 之 異 構 物 9 3- 羥 基 m -1 ,3. 1 1 | -5 - 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印装 A7 B7___ 五、發明説明（4 ) 5(10>,9(11)-四烯-17-醑（09(11)-去氫雌爾>(1),其 揭示於

Magerlein BJ, Hogg JA (1958)· Preparation and reactions of H-substituted 1,3,5( l())-csiratricncs. I. 11-Oxygcnatcd cslroncs and estradiols. J Am Chcm Soc 80:2220-2225.

Schcring A-G (by Weiskc R) (1964). Ger Offen 1,177,636. Chem Abstr 61:14748h.

Collins DJ, Sjovall J (1983). The structure and function of oestrogens. IV. Synthesis of 17a-cthynyloestradiol specifically polydeutcrated in ring C. Aust J Chem 36:339-360· 雄明蓉S 發明敘述 本發明偽闞於化學式（VI)的化合物或其藥學容許鹽

本發明之化合物（VT)為Μ化學式（1 >表示之馬烯雌固 醑的雙鐽異構物，且藉由在非質子媒質（aprotic eedia) 中Μ

(△7 -去氣難國） -6 一 本纸張跋適用中國固家榡準（CNS)八4胁（21GX297公酱） I 装— I I I I 訂— I I I I —^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 5 ) 1 i 酸 處 理 馬 烯 雌 固 酮 製 備 本 發 明 之 化 合 物 (VI ) 用 於 1 1 1) 治 療 或 預 防 難 激 素 缺 乏 引 起 之 骨 霣 流 失 1 1 2) 減 低 心 血 管 血 小 板 的 形 成 % 其 導 致 死 亡 率 降 低 y—s 請 1 先 1 3) 停 烴 m 激 素 缺 乏 徵 候 的 舒 媛 % 包 括 但 不 限 於 » 血 管 舒 閱 讀 1 m 神 經 激 烈 收 m (V a s ο η 〇 t 〇 r h 0 t f 1 a s h e s ), 鬱閟及 背 Λ 1 之 1 失 眠 注 意 I 4) 资 防 尿 失 事 項 1 I 再 5) 治 療 牙 周 病 % 禽 本 装 6) 當 作 抗 氧 化 劑 頁 '—^ 1 I 本 發 明 的 另 一 標 的 是 提 供 — 個 方 法 • 罹 患 骨 質 疏 鬆 症 1 1 之 包 括 人 類 的 宿 主 動 物 因 而 被 治 療 Μ 修 正 該 動 物 宿 主 骨 I I 頭 沈 積 及 骨 頭 耗 損 速 度 間 之 不 平 衡 t 後 者 與 前 者 的 比 例 J 訂 因 而 降 低 Ο 1 同 樣 地 本 發 明 的 另 一 檷 的 是 提 供 一 種 宿 主 動 物 的 療 1 I 程 t Μ 預 防 該 宿 主 動 物 既 存 健 康 骨 頭 姐 m 退 化 〇 這 些 销 1 1 m 也 可 能 用 於 治 療 惡 性 疾 病 的 高 血 鈣 症 > 柏 哲 德 氏 病 1 1 (P ag e t • S d is e a se)以及鼷節炎疹c > 卜 I 本 發 明 更 進 — 步 的 檷 的 是 提 供 一 種 牙 周 病 的 療 程 〇 1 1 本 發 明 的 另 一 檷 的 是 使 用 本 發 明 的 化 合 物 (VI >作 為 一 1 | 抗 氧 化 劑 〇 I 發 明 詳 沭 1 1 本 發 明 化 學 式 (VI ) 的 化 合 物 可 單 獨 使 用 或 與 藥 學 上 容 1 1 許 載 體 合 併 使 用 * 其 比 例 由 化 合 物 的 溶 解 度 及 化 學 特 性 J 1 9 選 擇 之 給 m 路 徑 及 標 準 轚 -7 療 慣 例 決 定 〇 例 如 9 他 們 Μ 1 1 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ❶14468 B7 經濟部中央標準局員工消费合作社印装 五、發明説明（ 6 ) 1 1 應 m 9 錠 劑 f 懸 浮 液 或 溶 液 形 式 口 浪 給 藥 或 可 能 Μ 膠 爾 1 1 外 注 射 〇 應 囊 及 绽 劑 為 給 蕖 的 較 佳 形 式 〇 至 於 臈 爾 外 給 1 1 m • 他 們 可 Μ 用 含 其 他 溶 質 • 如 足 狗 之 Μ 水 或 葡 萄 耱 使 請 1 溶 先 1 液 等 滲 壓 • 之 滅 菌 溶 液 的 形 式 使 用 〇 閲 讀 1 應 囊 及 錠 繭 成 份 含 有 與 缠 合 0 囊 及 錠 劑 製 ’造之 藥 學 賦 背 1 | 之 1 形 m 混 合 之 有 效 成 份 » 逋 當 的 m 學 賦 形 嫌 有 如 澱 粉 注 意 I % 糖 > 特 定 種 類 的 石 賫 等 等 〇 錠 m 可 Μ 是 未 包 覆 的 戒 是 事 項 I 再 1 可 Μ 藉 已 知 技 術 包 覆 者 t 以 延 蠼 矚 爾 道 中 的 分 解 及 吸 收 % 袈 1 I 因 此 提 供 一 在 較 長 時 間 内 效 用 的 維 持 0 本 頁 化 學 式 (VI ) 之 化 合 物 的 水 性 懸 浮 液 含 有 與 一 種 或多 種 1 已 知 m 於 水 性 懸 浮 液 製 造 之 無 m 性 藥 學 賦 形 繭 混 合 之 有 1 I 效 成 份 0 逋 當 的 賦 形 劑 有 $ 如 曾 甲 基 嫌 維 素 9 藻 朊 酸 納 1 訂 1 (S 〇 d ! u η a 1 g 1 n a t e ), 阿拉伯膠（ gu 鼴 ac a c i a )· 卵m胞 等 等 Ο 水 性 想 浮 液 也 可 包 含 一 種 或 多 種 保 存 劑 $ —-- 種 成 1 I 多 種 著 色 劑 9 一 種 或 多 種 香 料 及 一 種 或 多 種 甜 味 料 0 1 1 非 水 性 懸 浮 液 可 藉 將 有 效 成 份 懸 浮 於 植 物 油 § 如 花 生 1 L 油 • 橄 m 油 • 芝 臃 油 9 或 椰 子 油 9 成 於 礦 物 油 * 如 液 狀 J· | 石 蠼 調 m 而 成 » 嫌 浮 液 可 能 含 有 蝤 m m * 如 蜜 蠘 硬 吠 1 1 石 蠼 或 十 烷 基 酵 〇 這 些 成 份 也 可 含 有 甜 味 料 香 料 及 1 | 抗 氧 化 朗 〇 1 化 學 式 (VI ) 之 化 合 物 的 m 量 隨 著 給 藥 型 式 及 所 選 擇 之 1 1 特 定 化 合 物 而 有 所 不 同 Ο 再 者 f m 著 特 定 個 體 9 年 龄 9 1 1 體 簠 « 治 療 下 偭 體 之 狀 況 以 及 症 吠 的 特 性 與 程 度 而 不 同 1 1 〇 一 般 而 古 9 治 療 Μ 較 化 合 物 最 佳 m 悬 小 的 劑 量 開 始 Ο 1 1 | -8 - 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 314468 A7 A7 B7 五、發明説明（7 ) 而後，_量以微小增加量遂渐增加直至在該吠況下達到 最佳效果。大體而言，本發明之化合物最佳給藥濃度為 其產生有效的结果而無導致任何有害或有毒的副作用。 舉例而言，口狼給藥之化合物的有效量範_通常Μ單一 繭量或分次_量為200奄克至1200«克/每天·雖然如 前述•會有所變動。然而•為堪有效的目的，口眼給藥 較希望Κ簞一繭悬或分次劑量範圃約500奄克至900奪 克/每天的繭董施藥。8«χ -3-羥基雌-1,3,5(10),9(11} -四烯-17-嗣（D9(ll)_去氫-8-異雌鬭）（VI )可Μ 200奄克 至1200毫克的每日繭量對人類給藥。 下列實施例用Μ銳明製備及測試本發明化合物之方法 。瑄些實施例不Μ任何形式被認為是本發明幅員及範園 的限制，實ΙΚ5例中的溫度Μ攝氏度數表示。 窗餱俐1 —般方法 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 熔點利用湯瑪士-虎佛毛细管熔點裝置（Tho_as-Hoover Capillary Helting Point apparatus)_ 定且未經更正 。特定旋光[a]D可在室溫下以桕金-艾碣型號241(Perkin-Elner «odel 241>之《振計及小型管檐取得。除非特別 檷示，否則該灞度約為IX在二《S烷（dioxane)中。紫外 線（UV)光譜Μ在USP酵中由惠普型號8452二極排列分光 光度計測得。紅外媒（IR)光譜利用KBr丸Μ尼可雷特 (Nicolet)20DX FTIR分光計取得。1 Η核磁共振（HMR>光 譜利用在含氘氣仿中（除非特別言明其他種類）Μ布魯克 -9 - 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消费合作社印裝 °^4468 A7 B7 五、發明説明（8 ) (Bruker)AM 400分光計取得且W自四甲基硅烷下方範画 (d0wn field)每百萬分之部分來表示。霣饍利用«子撞 擊齄子化，Μ芬尼、更（Finn igan)-MAT型虢8230雙聚焦磁 埸儀器 (double focusing ! magnetic sector instrument) r 或惠普型號5994單四極儀器（Single quadripole instrument)澜得。 3-羥*_-1,3,5(10广，.8(9)-四烯-17-鼷的製程（^8(9)-去氣異tt _ > ( I > 在-50t：下，添加5g(18.7uoles>的馬烯難固酮（置） 於一含有125·丨液態氟化氫的授拌聚乙烯反應容器（500 1)。混合物在-50t：下攪拌24小時而後倒人2L的冰水中 ，所得固體經過溏，以水洗滌及在P2〇s之上真空乾嫌 。利用氣體色谱法（使用 The United States Pharijacopeia 22nd ed. suppl 1(1990). Hack, Easton,Pennsylvania, P2127的步嫌），粗製產物（4.8g, 96X產率）為90X3-羥基 雌-1,3,5(10),8(9)-四鋪-17-釅（I >及10X的另一種產 物（VI)。自熱笨-己烷（1:1)再结晶無法去除（VI)。粗製 混合物（5 00毫克）分兩部分在交賺聚葡萄糖（36?»13<^8®) L Η-20管柱（5X 50公分填充至47公分高度）進行曆析，K 環己烷/苯/甲酵（500:150:75)洗脫（使用Krol GJ, M a s s e r ano RP, Carney JF, Kho BT(1970). Quantitative separation of free estrogens by liquid partition chromatography. J Phar· Sci 59:1483-1487的步朦）。 流速為4·1/·ίη且洙脫液在27 0η·下監測。分幾儸部分收 -10- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（210X297公釐) " . *. 裝 、言·一 I II —T^r (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A 7 _ B7 --------- 五、發明説明（9 ) 集•並Μ氣體色譜法分析。含（1)之部分在約2350·丨時 洗脸出來。類似成份及純度的部分合併並蒸發至乾以取 得35〇ng不含其他產物（W)的（I)。此經靥析的物霣再 W溶於热笨中，而後添加己烷至辑黏纯化。溶液冷卻至 室租，而後保存在4X324小時。產物經過嫌，風乾而溶 於热乙酵，添加活性碳於熱溶液中，再通漶•添加热水 至海贴。在冷卻至室溫後，置於4t：60小時，過濾並風 乾可得300毫克熔酤229-230¾铕有分解（熔化前為棕色） 的纯（I)。光繒及其他數據參考表1 。 保留含產物（VI)的都分以進行進一步的作業。 3~羥基雌-1,3,5(10),9(11>-四烯-17-謂的製程（^9(11> -去氣雌酹）（I ) 在〇幻下，添加6g(22.4*noles)的馬烯_固酾（1 )於 一含150·1液態觎化氫的撹拌之聚乙烯反應容器（500· 1) 中。混合物在〇*C下攪拌0.5小時，去除一 50·1部分並倒 入1Α冰水中。所得固體經過濾，以水洗滌並在Ρ2 之上真空乾嫌。粗製產物的氣體色譜（使用The United States Pharaacopeia 22nd ed. SuppI l(1990)Mack, Easton, Pennsylvania, p.2127的步麻）顯現有二種成 份：38X 3-羥基雌-1,3,5(10),9(11)-四烯-17-醑（E) ,55X 3-羥基 _-1,3,5(10),8(9>:-四烯-17-_(1)及 7X相同於自（I )合成的產物（VI)。_餘的反寒混合物在 〇 υ下再攪拌1小時，去除另一 50·1部分。K上述方法操 作，氣體色繒顬現三種相同的成分存在，其比例為55Χ 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） '裝------訂-------^ (請先閲讀背面之注意事項再壤寫本頁) 經濟部中央橾準局員工消費合作社印装 A7 _ B7 五、發明説明（10 ) 3-羥基雌-1,3,5(10),9(11)-四烯-17-酮（1>, 40X 3-羥基_-l.3,5(10),8(9)-四烯-17-醑（I )及5X相同於自 (Ϊ )合成的產物（W )。剰餘的50·1混合物在Ot：下再攪 拌2小時，反應混合物以上述方法搡作，氣體色饍鼷示 粗製產物為100X的3-羥基雌-1,3,5(10),9(11)-四烯-17 ~m (I ),將此物質（1.6g, 80X產率）溶解於60·1沸《甲 酵/丙醣（2:1)中並添加活性碳。溶液趁熱通濾JW去除 活性碳•再添加1〇·1蒸鎇水於沸騰溶液中。溶液冷卻至 室溫而後保存在4”下48小時。將產物逢濾並風乾可得 1.2g,熔點255-2 57 t：帶有分解的纯3-羥基雌-1,3· 5 (10) ,9(11)-四烯-17-_(1)。光鱔及其他數據參考表1。 8α -3-羥基鰭_1·3,5(10),9(11)-四烯-17-酮的製程 (△9(11)-去氫-8-異雄 _)(VI) 由（I)的合成，將含（VI)的部分合併並使用相同管柱 及洗脫溶蘭再層析。收集各部分並Μ氣體色嫌法分析。 合併鈍的（VI)部分，蒸發至乾，並自乙醇/水再结晶可 得120«g,熔點243.5-244.帶有分解的產物，光繒及 其他數據參考表1 。 结果及討論 傑克西（J a c q u e s y )(參考 J a c q u e s y J C · J ο 1 y G，G e s s ο η J P (1972)· Reactions in hyperacidic media. Selective isomerization of e q u i 1 i n in acidic or hyperacidic 麗 e d i a , ι Compt rend Acad 274:969-971)陳述：在 0*0， i)為唯一產物，而在-30 υ, (i >為 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝' 訂 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝

五、發明説明（11 )

唯一產物。由於設備的限制，（1>的合成在-5〇υ下進 行。-5 0t：粗製反應產物的分析顯示9:1(1 )與未知物， (W)的比例，其非起始物，（I),也非（W)。又，若0¾ ，反應在反應完全Μ前终止，可發規（I)、U)、（I) 間各不同的比例。化合物（VI)在一大的交W聚葡萄耱 (Sephadex® UH-20管柱中Μ液體色譜法分離（使用Krol GJ, Hasserano RP, Carney JF, Kho BT(1970). Quantitative separation of free estrogens by liquid partition chromatography. J Phar· Sci 5 9 J 1483-1478) 〇 以質譜、IR、UV及1 Η HHl{分析（VI)可知 其為馬烯雌固醑的異構物。根據異構化反應的傑克西 (』8〇91^37)理論處理，認為（\/1)為3-羥基雌-1,3,5(10) ,8(14)-四烯-17-嗣（Δ8(14)_ 去氫異 _ 鬭）（V)

HO

V 然而，（VI )的核磁共振光譜顯示在6.0 0 p p m δ (C D C 1 3 ) 有一質子多重譜線，其為乙烯基質子的表徵。除此之外 ，（W)的iHNMR光譜類似（I)的光譜，兩者均在近 ------=4^=-!_ 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） m. .n emm— m Is·— (n —--I - I - - I I n^— I an 1^1 (請先«讀皆面之注意事項再填寫本頁) 〇14468 A7 B7

五、發明説明（l2 6ρρ〇 δ (CDC13 )處有一乙烯基質子多簠譜線及類似的芳 香烴分裂型式。（I )的芳香烴分裂型式埋異於（VI)的型 式。既然一8-14雙鐽異構物不具有乙烯基質子，（V)被 排除而支持，（H)在8及/或14位置具相反之質子旋轉的 9-11雙鐽異構物（參考结構（VI), (VI)及（\1)9(11>雙鐽 異構物，其只不同於8及14位置）。

(VI)之UV光镨極類似於（I)的光譜，更進一步證明雙鍵在 9-11位置。 高埸（High field)1 H KMR報告顯示（VI)在氛仿溶液 中自發回復至（I),其顯現14-質子與所有其他動情類 固醇相同為a並且8-質子已經拥轉。依此，認定其结構 為 8α -3-羥基 _-1，3,5(10),9(11)-四烯-17-謂（Λ9(11) -去氫-8-異 _ _ ) (VI )。 (VI)的分析及光譜數據，Μ及馬烯_固酮及馬烯雌固 _異構物（I), (I)及（IV)列於表1 。 14. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） H, ----- II:· —II I— 1^1 f ^^1 ^^1 —^1 ^^1 (請I閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（13 )

馬烯雌固酮on) (A7-去氲雌酮） A7 B7 表1l«JRT 熔點（t：)(度） MS 1R (KBr) ni/e v(cnrh_

237- 239 238- 24QIO +308 +308 10 268 (M+) 1719 (C=0) 1615 (arom)

265-269 261-26311 265-26612 229-230 228-230 -129 -1271 268 (M+) 1714,1725(00) 1615 (arom)' ,13 + 40.7 + 86,3-b 268 (M+) 1717 (C=0) 1607 (arom) I n n 11 · nn I I m —Ml muJ-reJ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

255-257 257-2591 +295 +297.5 +299 b +30116.b 268 (M+) 1721 (C=0) 1606 (arom) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 △ 9(11)-去氫 __ ( Π ) 243.5-244.5 +182

268 (M+) 1719 (C=0) 1607 (arom) △ 9(11>-去氫-8-異_81(\/1) a乙酵 b氛仿 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） -15- 五、發明説明（ΙΑ ) 化合物

馬烯雌固酮（m) (△7-去氳雌銅）

A7 B7 表1(鑛） UV (nin) 1H NMR (CDCI3/TMS) δ (ppm) λ max ε 281 282 304 271 262 221 304 262 220 279 214 275 1977 22911 2522 6096 7477 25731 2754n，a 8913u.a 30903 11.a 15565 17229 15900 3.a 0.79 (s, 311, 18.CJIA 5.52 (m, III, 7-H), 6.60 (d, 1H； 4-H), 6.70 (dd, 1H, 2-H), 7.26 (d, 1H, 1-H) 0.81(s, 3H, I8-CII3), 6.04 (del, 1H, 7-H), 6.46 (dd, 1M, 6-H), 6.52 (d, 1H, 4-H), 6.57 (dd, 1H, 2-H), 7.01 (d, 1H, 1-H) b 0.90 (s, 3H, I8-CII3) 6.64 (s, 3/2H, 2-I I, 3-M), 6.66 (D, 1/2 Η, 2-H), 7.09 (d, 1H, 1-H) II — — — — — — — - - I I I n (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 △ 8(9)-去氫 _酮（I )

289 263 298 263.5

295 260 △ 9(11)-去氫-8-異雔酮（VI) a_^S?_~rb~DMSad6" 3334 17913 3138,6·β 1807316·* 0.94 (s, 3H, I8-CH3), 6.13 (in, III, 11-H), 6.57 (d, 1H, 4-H), 6.65 (dd, 1H, 2-H), 7.49 (d, 1H, 1-H) 2580 0.97 (s, 3H, 18-CH3), 6.00 (m, III, 16943 11-H), 6.58 (d, 1H, 4-H), 6.65 (dd, 1H, 2-H), 7.40 (d, 1H, 1-H) -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（-210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（Μ ) 兹者·》獻 1. Budavari S (1989). The Merck Index 11th ed. Merck & Co Inc, Rahway, New Jersey, p. 3582. 2. Kaufmann St, Pataki J, Rosenkranz G, Romo J, Djerassi C (1950). Steroids VI. The Wohl-Zicglcr bromination of steroidal l,4-dien-3-oncs. Partial synthesis of 6-dchydrocstrone and cquilenin. 7/lw Client Soc 72:4531-4534. 3. Pcarlman WH, Wintersteiner O (1940). Estrogens with oxygen in ring B. II. Δό-IsoequiHn from 7-hydroxyestrone. 7 fiio/ Chem 132:605-612. 4. Banes D, Carol J (1953). The constituents of isoequilin A. J Biol Chem 204:509-515. 5. Magerlein BJ, Hogg JA (1958). Preparation and reactions of 11-substitutcd l,3,5(10)-estrairienes. I. 11-Oxygenated estrones and estradiols.//4m Chem Soc 80:2220-2225. - 6. Scliering A-G (by Weiske R) (1964). Ger Offetx 1,177,636. Chem Absir 61:14748h. 7. Collins DJ, Sjovall J (1983). The structure and function of oestrogens. IV. Synthesis of 17a-etliynylocstradiol specifically polydeuterated in ring C. Aust J Chem 36:339-360. 8. Zdcric JA, Carpio H, Bowers Λ, Djerassi C (1963). Steroids CCXXV11I. The synthesis of cquilin. Steroids 1:233-249. 化學式（VI)化合物有效之骨質疏鬆症的活性以檷準蕖 理試驗證實，例如，龌定之試驗：骨頭耗損分析：老思 肢脅你Ca之釋出（Bone Resorption Assay: Release fro· Rat Li^b Bones ° 此分析的目的為確認在培養物中抑制基髓或受剌激之 骨頭耗損的化合物 8α -3-羥基 _-l,3,5(10),9(11)-四烯-17-麵 -去氫-8-異_嗣）（VI>修正骨頭耗損通程的能力在本霣 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^^1 ·ϋ· mV law— nn HI t m· — am I n ϋ·ϋ ^ ^i (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 314468 . A7 __B7_ 五、發明説明（16 ) 上 M L.G. Raisz，Bone resorption in tissue culture. Factors influencing the response to paralhyroid hormone. (J. Clin. Invest. 44:103-116, 1965) and P.H. Stern ct al, Comparisons of fetal rat limb bones and neonatal mouse calvaria: Effects of parathyroid hormone and 1,25-dihydroxyvitamin D3 (Calcif. Tissue Iiu. 35:172-176, 1983). 所描述的方法評估。

步_R 昉# »S樾 廚懷孕第18天的史桕葛-多利CD«>S (Sprague-Davley CD«> rat)(査理士河）皮下注射溶於100« 1 0.9X鼸水中 的 100// Ci #CaCl2 (HEH 鈣-45HEZ-013) 〇 第二天用 C〇2 使老》窒息。取出胎兒，切下右前肢並置於含有冰冷移 植物物培巷基的培養皿中，該培養基由調至PH7.3並添 加TES之修正過BGJb -費頓傑克遜（BGJb -Fitton Jackson)培養基（慣用配方，Gibco No.78-0088)姐成， 修正通之BGJb培養基取得時不含鹽，葡萄糖或破酸氫 鹽而在使用前，添加O.lmM MgCl2 , 1.25·Μ CaCl2 ,

5.3·Η RC1. 0.7bH NgS〇4 , 130·Η NaCl, l.〇nH 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 1· -HI an aMH ml n :-水 m In in an (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) '

NaH2P〇4, U/L葡萄糖，50ng/L醋酸納及IOOU/bI盤疟 西林G (penicillin G)。在解剖顯微鏡下，清除骨頭黏 著性姐織並去除軟骨末端。 梭奋》淪藥 將中幹（Bidshafts)分別置於3X 3··方形濾紙<Ge丨《an GH-6 letricel濾紙；孔徑0.45«Μ)上，其放置在含0.5 祖1前培育培着基之24-#孔培養板的孔中之不绣綱網上。 -18- 本纸張尺度適用中國鬮家標準（CNS ) Μ规格（210X297公釐) " ' 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（17 ) 在轉移骨頭之前，前培育培養基放置至37t：。前培育培 饕基用修正過BGJb培着基（含如前述之薩類及葡萄耱>, PH7.3,含 29·Μ NaHC〇3 所組成。在 37*C,含 5XC02 環 境下培育18-24小時，f頭在他們的網狀/«紙支掙物上 轉移至新的培着板上，該培着板含以補充15 X熱純化馬 血澝（heat inactivated horse serua〇(Gibco Ho.230-6050)前培脔培着基稀釋的試驗化合物，PH7.3,具成不 具骨頭耗撗剌激繭（例如甲狀旁朦荷爾蒙[PTH]或間白素 -l(inter Uukin-l)[IL-n),其 37T 下總體積為 0·5·1 孔。廚於播非水性溶劑的化合物，由逋當母液以培養 基稀釋在瑄些例子中，包含暴«於一當董濃度之媒介物 (vehicle)之受剌激的基骽及骨頭耗攒對照姐◊另一姐 兼沸1小時（死亡對照組）（kill control)的骨頭被用Μ 建立背景數據，沒有细胞傳缠，#Ca的交換。使用自每 «胎兒取下之右尺骨及橈骨。埴兩種骨頭都接受相同的 處理且每個處理姐由4或更多胎兒的骨頭姐成。處理方 式利用睹床前统計程式（Preclinical statistics progra·) (PS-ALL0C)任意遘定。在 37 t：,含 5XC0 2 環境 下培育48小時，自培養基取出骨頭並在〇.5·1 0.1H HC1 中萃取1成更多天。作成兩份l50tfl的培育培養基，骨 頭萃取物在5 1液態閃爍合劑（1 i q u丨d s c i n t i 1 1 a t i ο η cocktail)中進行欲c a放射性分析。 計苴 骨頭#Ca釋出至培養基的百分比由下式決定： -19- 本紙張X度適用中國囷家標準（CNS ) M規格（21〇><297公釐） n'm· In i m fli· 1·» ^ 、一一eJ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 0乂韌68 -------- 1'發明説明（ιβ )

培養基中之#Ca CPM 經濟部中央樣隼局貝工消費合作社印裝 X 100

培餐基中之&Ca CPM +骨頭中之#Ca CPM 结果通常K實驗姐^Ca釋出百分比對缠當媒介控制组 (veh丨clecontrol)的比例表示。 化學式（VI)之化合物的有效脅霣疏鬆症的活性可進一 指定之轼驗證明：基體骨頭耗損分析：自«股骨 Λ/»· C a 之釋出（B a s a 1 Β ο n e R e s o r p t i ο π A s s a y : w C a Release fro· Rat Liib Bones) ° 此分析的目的為活體外轼驗骨頭耗損的剌激及抑制爾 • 自活«外摞記之S科骨頭移植物釋出至培養基中 被認為是骨頭耗損的指檷。 I植物魁備 標記開始後兩天，母鼠Μ鹵神（halothane)麻醉並Μ 頸部脫白方式處死。小鼠Μ開刀切除並很快斬首。顱頂 (頫骨及頂骨），前肢（含放線（radii) ‘及尺骨）及後肢（脛 骨）被去除並置於培着皿中之對照姐培養基内。藉由不 銳利的切割/在吸收性紙張上溫和的轉動Μ去除骨頭彎 的柔軟姐嫌，注意不可播勡骨臢》软骨末蟠自長#切除 ，顱頂沿著中間鏠合線切成兩半。费頭分為三個種類： 半顔骨，睡费及尺骨/放嬢。八《(毎一個骨頭族群 > 為 —組的各族群任意置於含0.5·1對照姐培養基之2 4-#孔 培着板。培着液置於含95Χ空氣：5Χ C02的潮獼培育 器中並保持在37*C。 -20 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -装------訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 S14468 A7 B7 五、發明説明（19 ) 這些骨頭培育24小時後，培養基自骨頭吸出並置換， 含試驗化合物的新鲜培養基°每一個骨頭族群均有含数 目8的對照姐及含數目8的死亡對照組。喪失活性之培 着Μ在55t!下，加热培養基中骨頭60分鐘而取得。骨頭 在37t!下再培育72小時。在培育终止時，10 0 «Γ培養基 被取出並置於閃爍（scintillation)玻璃瓶中，添加10·1 艾檜索（Aquasol), #CaM閃嫌分光計定量。骨頭W醱 水洗滌，置於閃爍玻璃瓶（Scitillation vial)中，在 室溫下0.75·1 6H HC1中水解遇夜。水解的骨頭水溶液 Κ添加2.25·1 2Ν NaOH.中和，_後添加10·丨艾儈素 (Aquasol), #Ca含量Μ閃爍分光計決定。 分析 24至96小時各時段#Ca釋出至培着基個別與對照培養 基中4jrCa釋出比較並與藉唐納特（Dunnett’s test)試驗 失去活性之骨頭比較。 化學式（VI)之化合物的有效骨質疏鬆症的活性可進一 步由抱定之試驗證明：老鼠神經切除法誘發之骨質流失 Denervation Induced Osteopenia in Rats) ® 此分析的目的為評估老鼠内藥劑對藉由外科切除（神 經切除）坐骨神經致使癱痪所引發之骨質流失的效用。 自査理士河取得225至250g重，切除卵巢成完整之史 桕葛-多利CD® (Sprague Dawley CD®)母鼠被使用。 動物收容於具備食物（rat Purina 500 chow)及水的 塑應籠（4或5隻老鼠/簏）中，其飲食不受限制；14/ 本紙張尺度適用中國國家揉丰（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------装I I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 5ΐ44β8 Α7 Β7 五、發明説明（20 ) 10白天/夜晩循瑁。 在一缠的遘應瑁境後，動物任意被分為6至10隻老親 /每组的族群。每隻老鼠被稱里* Μ腹膜注射100 氨胺酮 (B r i s t ο 1 L a b 〇 r a t 〇 r i e s , S y r a c u s e · Η Y}及 〇 . 7 5 g/kg乙酿普馬嗪（Aveco, Ft. Dodge IA>麻醉。左後肢 藉由對平行股骨進行側面切除及外科去除尾向旨方向股 骨及內收短肌節近坐骨神經〇.5c·。切除部位夾缠 合。手術後，老里飼着在含吸收性墊草的鼈内Μ減低癱 痪，肢體再受創傷至最小程度。在藥物治療開始前，有 24小時的手術後恢復期。 第物母液的漘度被計算為以〇.1·1/1〇〇8«金的髓積輸 送蕖液或均勻懸浮液在IX吐溫80(Tveen 80), —般鼸水 中配製，每天（一週5次）Μ 口版或應Μ外路徑給藥，持 鑛4理。 礦化姐嫌之連鑛性三倍標記被用以決定骨霣變化（特 別是骨頭形成）及礦化速度。每隻動物分別在研究前約 21天，10天及2天皮下注射90«g/kg二甲酚橙（Xylenol 0 r* a n g e ) (F i s h e r S c i e n t i f i c C 〇 祖 p a n y ) , 1 5 g / k g 转黄 錄素（Calcein)(Sig^a Chemical Co^pay)及腹 注射 15 g/kg去甲金霉素（De^eclocycline)。 四纒末，毎隻老思被稱重，M腹膜注射胺 _ (ketamine)及 0.75^g/kg乙釀普馬嗪（Acepronazine) 麻醉，藉由心臓穿剌收集約4· 1的血液，麻醉的老鼠因 暴露於C02中致死。股骨及脛骨自雙股切除並去除软姐 -22- 本紙張尺度逋用中國國家橾準（CNS > Α4規格（210X2+97公釐） --In--ί — - 1 .哀-- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部4-央標準局員工消費合作社印製 A7 _B7___ 五、發明説明（21 ) 嫌。 U)使用消音火《將股骨在〜下焚嫌16小時至 成灰。 (Π)基部脛骨在甲基丙烯酸甲酯-乙二酵丙烯酸甲_ 混合物中被固定·脫水及不脫鈣，縱行組鐵（Longitudinal tissue) 部分 （10«) 置於 Polycut S 超薄 切片拥 上（Reichert)在非浮動部分上使用修正«高得»! (Goldner's)染色進行染色，而後被裝載在台上並W玻 片覆蓋。 近側脛骨中網眼狀骨質（cancellous bone)含ftM影 像分析處理裝置（軟β由Drexel University開發）定量 Ο 被選擇做為網眼狀#質含悬評估的脛骨部位為主要及 次要骨鬆質。為選擇並檷準化評估的部位，將脅合成長 板-幹费合皤接合處方向平行於數位化螢幕的横座檷。 自成長板的骨頭成分1.7··(次要骨鬆質）及0.2··(主要 骨鬆霣）[及#腹皮質.成分等距來]Μ上述方法定量。評 估的總面稹為2.3〇1^寬及1.45>11深，姐成一3.34||2區 域。 髓重，股骨質量（乾的或成灰的）及小梁（網眼狀骨頭 礦物質面積（B. Ar)被決定。 完整（對照）及處理組切除神經股體在股骨質量及骨頭 礦物質面積的差異性（絕對量與改變量百分比）與利用唐 納特試驗或其他多重比較法進行，變異董簞程分析的媒 - 2 3 _ 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X 297公釐） ^1- - 1 an ^^1 ^^1 I 1. ^^1 In an ϋ— —I8-- 1^1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 314468 A7 ___B7_ 五、發明説明（22 ) 介組（vehicle group)相比較。 在骨顔耗損過程中，费頭分解，而此導致後鑛骨質疏 鬆症的發展，本發明提供修正宿主動物骨頭耗損速度及 骨頭沈稹速度間平衡的宿主動物治療法，骨顔耗損速度 與骨頭沈積速度的比例因而降低，其包含施以該宿主動 物足量的 8ot -3-羥 *«1-1.3,5(10),9(11)-四烯-17-鼷 (△9(11)-去氫-8-異_酮）（VI )以修正該平衡及降低該 比例。 W於本發明8ct-3-羥基雌-1,3,5(10),9(11)-四烯-17 -酮（Δ9(11)_去籯-8-異雌騮>(VI)的給與可在骨霣疏鬆 症或牙周病的治療上補充其他腋法。例如，8α -3-羥基 鰭-1,3,5(10) ,9(11)-四烯-17-釅（Δ9(11)-去氣-8-異 _酮）（VI)的給與可補充每日以磷酸钙或碳酸鈣形式600 g 至 1200«g 鈣的攝取。8α -3-羥基雌-1,3,5(10),9(11) -四烯-17-飼（Δ9(11)-去氫-8-異_嗣>(VI >的施與也可 補充《I激素置換治療法，如每天〇.625«g的共輾馬烯_固酮 Ml瀲素。 經濟部中央樣準局貝工消费合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明化合物（VI >也可用作抗氣化爾，由此用途，化 合物（VI )可用Μ治療、抑制或改善動脈硬化，冠狀動脈 疾病，心血管疾病，再狹窄症（特別是導因於氣球専管 血管成形術步Κ),皮虜老化及黻纹Κ及阿滋海默氏病 。由於其抗氧化_之特性，本發明化合物（VI)也用於癌 的治療，由於其抗氧化劑之特性，本發明化合物（VI)也 用W預防自由基的產生，因而用於由自由基產生之细胞 内傷害的預防及延緩。 -2 4 - 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）

Claims (1)

1. ,» U. Α8 修止 松3痛一本丨_i |補充够年外知 六、申請專利範圍 第84 1 0 1 526號「由馬烯雌固酮酸性異構化製得馬烯雌 固酮雙鍵異構物」專利案 （86年3月修正） 杰申請專利範圍 1.化合物 8α -3-羥基雌-1,3,5(10) ,9(11)-四烯-17-_ (△ 9(11)-去氫-8-異雌酮）（VI )及其藥學容許鹽

   △ 9 (11)-去氫-8 -異雌酮）（VI ) 2.—種用以修正宿主動物中骨頭耗損速度與骨頭形成速 度間平衡而使骨頭耗損速度與骨頭形成速度的比例降 低之藥學組成物，其包含如申請專利範圍第1項之化 學式（VI)的化合物及藥學容許載體。 裝 訂.if (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印装 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）