나노CLamp

nanoCLAMP

면역학의 의학 분야에서는 나노CLAMP(CLostridal Antomic Mimetic Progences) 친화성 시약을 타겟 분자에 대한 단단하고 선택적이며 부드럽게 되돌릴 수 있는 결합을 위해 선택된 15 kD 항체 모사 단백질로 재조합한다.[1]나노CLAMP 비계는 Clostridium perfringens hyaluronidase(Mu독소)에서 IgG처럼 온도 조절이 가능한 탄수화물 결합 모듈 제품군 32(CBM32)을 기반으로 한다.나노CLamp의 모양은 길이가 약 4nm, 직경이 2.5nm인 실린더에 근사하며, 이는 나노바디(PDB: 2W1Q)와 거의 같은 크기. 특정 표적에 대한 나노CLAMP는 아미노산 시퀀스 및 베타 가닥을 구성하는 세 개의 노출된 용매 길이, 인접한 루프에 의해 생성되기도 한다.샌드위치를 접어서 결합 친화력과 표적에 대한 특수성을 부여한다.[1]

특성.

나노CLAMP는 폴리올 반응으로 기술된 최초의 항체 모형으로,[2] 즉, 프로필렌 글리콜과 같은 비탄성 소금과 폴리올에 노출되었을 때 표적을 방출한다는 것을 의미한다.[1][3]이 성질은 친화력 정화에 의해 기능성 단백질과 단백질 복합체를 정화하는 데 유용한 것으로 나타났다.나노CLAMP는 대장균의 세포질에서 쉽게 생성되며, 50~300mg/L 배양 범위에서 전형적인 수율이 나타난다.나노CLAMP에는 시스틴이 없기 때문에, 공학적 C-단자 시스틴은 티올 화학물질을 사용하는 불소포체나 레진과 같은 실체의 현장 주도적 결합에 사용될 수 있다.

개발 및 애플리케이션

나노CLamps는 Neutagen의 실험실에서 개발되었다.나노CLAMP 페이징 디스플레이 라이브러리는 기능 다양성이 약 10가지인9 3개의 루프에 16개의 표면 아미노산에 대한 변형이 포함된 라이브러리를 구성했다.이러한 도서관은 단백질과 펩타이드의 표적을 위한 바인더를 선별했으며, 일반적으로 표적에 1에서 30개의 고유 바인더를 산출한다.[1]

단일 C-단자 시스틴을 함유한 정제 나노CLAMP는 고유 또는 변성 조건에서 후광 아세틸 활성 아가로스 수지로 쉽게 결합할 수 있으며, 그 결과 티오에더 결합은 레진 침출 방지 수지를 렌더링한다.표적은 단번에 명백한 동질성으로 정화할 수 있다.레진의 폴리올[2] 반응성으로 인해 표적을 pH 7.9에서 0.75 M 암모늄 황산염과 40% 프로필렌 글리콜로 용출할 수 있으며, 이러한 조건은 고유 구조와 단백질 복합체를 보존하는 것으로 입증되었다.[1][3][4][5][6]

나노CLAMP는 녹색 형광 단백질(GFP), mCherry, SMO(SMT3) NusA, avidin, NeutrAvidin, 말토오스 바인딩 단백질(MBP), 티오레독신 1, 베타갈락토시다아제, SlieD 등을 대상으로 생산됐다.레진의 일반적인 결합 용량은 1~4mg/ml이다.나노CLAMP는 쉽게 리폴딩되기 때문에 염화구니듐을 이용해 수지를 세척하는 나노CLAMP 레진을 여러 번 재생할 수 있다.[1]

참조

  1. ^ a b c d e f Suderman RJ, Rice DA, Gibson SD, Strick EJ, Chao DM (Apr 17, 2017). "Development of polyol-responsive antibody mimetics for single-step protein purification". Protein Expression and Purification. 134: 114–124. doi:10.1016/j.pep.2017.04.008. PMID 28428153.
  2. ^ a b Burgess RR, Watson JD (June 2017). "Gentle antibody-mimetic affinity chromatography with polyol-responsive nanoCLAMPs". Protein Expression and Purification. 134: 154–155. doi:10.1016/j.pep.2017.06.002.
  3. ^ a b Thompson NE, Aronson DB, Burgess RR (1990). "Purification of eukaryotic RNA polymerase II by immunoaffinity chromatography. Elution of active enzyme with protein stabilizing agents from a polyol-responsive monoclonal antibody". J Biol Chem. 265: 7069–7077. PMID 2324114.
  4. ^ Thompson NE, Foley KM, Stalder ES, Burgess, RR (2009). "Identification, production, and use of polyol-responsive monoclonal antibodies for immunoaffinity chromatography". Methods Enzymol. 463: 475–494. doi:10.1016/S0076-6879(09)63028-7. PMID 19892188.
  5. ^ Thompson NE, Hager DA, Burgess RR (Aug 4, 1992). "Isolation and characterization of a polyol-responsive monoclonal antibody useful for gentle purification of Escherichia coli RNA polymerase". Biochemistry. 31: 7003–7008. doi:10.1021/bi00145a019. PMID 1637835.
  6. ^ Thompson NE, Jensen DB, Lamberski JA, Burgess RR (2006). "Purification of protein complexes by immunoaffinity chromatography: application to transcription machinery". Genet Eng (N Y). 27: 81–100. PMID 16382873.

외부 링크