아피틴

Affitin
야생형 Sac7d(파랑과 오렌지) 꼬임 DNA(라일락), PDB: 1AZP

아피틴[1][2](상표명 나노피틴)은 항원을 선택적으로 결합하는 능력을 가진 인공 단백질이다.그것들은 구조적으로 고대 도메인에 속하는 미생물인 Sulfolobus acidocaldarius에서 발견되는 DNA 결합 단백질 Sac7d에서 유래한다.Sac7d의 결합표면상의 아미노산을 랜덤화하고, 그 결과 얻은 단백질 라이브러리를 여러 차례의 리보솜 표시함으로써 친화성을 펩타이드, 단백질,[3][4] 바이러스 및 세균 등의 다양한 표적에 향하게 할 수 있다.아피틴은 항체 미메틱스이며, 항체의 대체 물질로 바이오 테크놀로지의 도구로서 개발되고 있습니다.그것들은 또한 다양한 [citation needed]효소에 대한 특이적 억제제로 사용되어 왔다.아피틴은 생화학적 정제 기술, 특히 친화성 크로마토그래피에서 사용될 수 있다.항원을 선택적으로 결합하는 아피틴의 능력은 특정 단백질을 목표로 하는 데 사용된다.과학자들은 [5]순도가 높은 아피틴 기둥을 이용해 인간 면역글로불린G(hIgG), 세균성 PulD 단백질, 닭알 용효소 등을 정제할 수 있었다.이들은 폴리펩타이드 태그에 대한 단백질의 융합이 불가능하거나 이점이 없을 때 필요한 단백질의 특정 리간드 역할을 할 수 있는 능력을 가지고 있으며, 따라서 생물 의약품의 생산과 마찬가지로 친화 컬럼을 형성한다.그것들은 아가로스 매트릭스 상에 고정되었고 컬럼들은 높은 선택성을 보였다.또한 어피니티 크로마토그래피를 [6]통해 아피틴을 사용하여 항체 및 비면역글로빈 단백질을 정제할 수 있다.작은 크기와 높은 용해성으로 인해 세균 발현 시스템을 사용하여 쉽게 대량 생산이 가능합니다.

특성.

아피틴은 66개의 아미노산으로 구성되며 분자량은 약 7kDa이다. 이는 약 130~150kDa의 항체에 비해 작다. 열친화성 유기체에서 얻은 특이 내열성 단백질이다.또한 아피틴은 내구성이 뛰어나 여러 번의 [citation needed]정화 사이클에도 견딜 수 있습니다.항체와 달리 아피틴은 체외에서 생성되므로 더 [3]빨리 생성될 수 있다.작은 크기와 높은 용해성으로 인해 세균 발현 시스템을 사용하여 쉽게 대량 생산이 가능합니다.

아피틴은 초고온성 단백질인 Sac7d와 같은 고고학에서 발견되기 때문에 극호성인 강한 변형 시약이다.그것들은 높은 친화력, 작은 크기, 낮은 구조적 복잡성을 가진 인위적인 결합 단백질이다.두 가지 바인딩 모드가 있습니다.첫 번째는 평평한 표면이 필요한 반면, 두 번째 바인딩 모드는 평평한 표면과 두 개의 짧은 루프가 필요합니다.이들은 열 및 화학적으로 안정적인 시약이며 돌연변이 또는 이식 기술을 사용하여 안정성을 더욱 높일 수 있습니다.이들을 안정화시키는 다른 방법으로는 동일한 계열에 속하는 다른 단백질의 배열 원소의 사용, 결합 표면 전환, 따라서 더 긴 결합 용량을 갖는 것이 포함된다.이는 D1Sac7d의 결합면을 보다 안정적인 Sso7d에 접목하고 기존에 WT Sso7d에 안정화 [7]된 것으로 확인된 점 돌연변이를 도입함으로써 이루어졌다.

레퍼런스

  1. ^ Correa, A; Pacheco, S; Mechaly, A. E.; Obal, G; Béhar, G; Mouratou, B; Oppezzo, P; Alzari, P. M.; Pecorari, F (2014). "Potent and specific inhibition of glycosidases by small artificial binding proteins (affitins)". PLOS ONE. 9 (5): e97438. Bibcode:2014PLoSO...997438C. doi:10.1371/journal.pone.0097438. PMC 4019568. PMID 24823716.
  2. ^ Pacheco, S; Béhar, G; Maillasson, M; Mouratou, B; Pecorari, F (2014). "Affinity transfer to the archaeal extremophilic Sac7d protein by insertion of a CDR". Protein Engineering Design and Selection. 27 (10): 431–8. doi:10.1093/protein/gzu042. PMID 25301962.
  3. ^ a b Mouratou, B; Schaeffer, F; Guilvout, I; Tello-Manigne, D; Pugsley, AP; Alzari, PM; Pecorari, F (2007). "Remodeling a DNA-binding protein as a specific in vivo inhibitor of bacterial secretin PulD". Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (46): 17983–8. Bibcode:2007PNAS..10417983M. doi:10.1073/pnas.0702963104. PMC 2084283. PMID 17984049.
  4. ^ Krehenbrink, M; Chami, M; Guilvout, I; Alzari, PM; Pécorari, F; Pugsley, AP (2008). "Artificial binding proteins (Affitins) as probes for conformational changes in secretin PulD". Journal of Molecular Biology. 383 (5): 1058–68. doi:10.1016/j.jmb.2008.09.016. PMID 18822295.
  5. ^ Béhar, Ghislaine; Renodon-Cornière, Axelle; Mouratou, Barbara; Pecorari, Frédéric (2016). "Affitins as robust tailored reagents for affinity chromatography purification of antibodies and non-immunoglobulin proteins". Journal of Chromatography A. 1441: 44–51. doi:10.1016/j.chroma.2016.02.068. PMID 26952369.
  6. ^ 베하르, G., 르노동-코니에르, A., 모우라투, B. 및 페코라리, F. (2016).항체와 비면역 글로불린 단백질의 친화성 크로마토그래피 정화를 위한 강력한 맞춤형 시약으로서의 아피틴.크로마토그래피 저널 A, 1441, 44-51
  7. ^ Béhar, G., Pacheco, S., Maillasson, M., Moratou, B. 및 F. 페코라리. (2014년)항IgG 결합 부위를 고생 극호성 단백질 사이에서 전환하면 pH 안정성이 향상된 아피틴을 얻을 수 있다.생명공학 저널, 192, 123-129.


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