UA123053C2 - Антитіло до рецептора трансферину зі спеціально підібраною афінністю - Google Patents

Антитіло до рецептора трансферину зі спеціально підібраною афінністю Download PDF

Info

Publication number
UA123053C2
UA123053C2 UAA201800597A UAA201800597A UA123053C2 UA 123053 C2 UA123053 C2 UA 123053C2 UA A201800597 A UAA201800597 A UA A201800597A UA A201800597 A UAA201800597 A UA A201800597A UA 123053 C2 UA123053 C2 UA 123053C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
variable domain
heavy chain
amino acid
human
Prior art date
Application number
UAA201800597A
Other languages
English (en)
Inventor
Штефан ДЕНГЛЬ
Гі Жорж
Ги ЖОРЖ
Ульріх Гьопферт
Ульрих ГЁПФЕРТ
Єнс Нівьонер
Енс НИВЁНЕР
Тільман Шлотауер
Тильман Шлотауер
Original Assignee
Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=56292683&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA123053(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Publication of UA123053C2 publication Critical patent/UA123053C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/79—Transferrins, e.g. lactoferrins, ovotransferrins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2881—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/626—Diabody or triabody
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Virology (AREA)

Abstract

Винахід стосується антитіла до рецептора трансферину, яке специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини та рецептором трансферину яванських макак та включає І) гуманізований варіабельний домен важкого ланцюга, що походить від варіабельного домену важкого ланцюга за SEQ ID NO:01, та II) гуманізований варіабельний домен легкого ланцюга, що походить від варіабельного домену легкого ланцюга за SEQ ID NO:26, причому антитіло має швидкість дисоціації для рецептора трансферину людини, яка менша або дорівнює (тобто щонайбільше є рівною) швидкості дисоціації антитіла до рецептора трансферину для рецептора трансферину яванських макак, де швидкості дисоціації визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, і де антитіло до рецептора трансферину має варіабельний домен важкого ланцюга за SEQ ID NO:23, 24 або 25 та варіабельний домен легкого ланцюга за SEQ ID NO:37.

Description

поверхневого плазмонного резонансу, і де антитіло до рецептора трансферину має варіабельний домен важкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО:23, 24 або 25 та варіабельний домен легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО:37.
ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
Даний винахід стосується антитіл до рецептора трансферину з підібраною швидкістю дисоціації для людського рецептора трансферину, а також їх застосування в якості транспортного модуля через гематоенцефалічний бар'єр.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Проникнення у мозок ліків від неврологічних порушень, таких як, напр., високомолекулярні біотерапевтичні лікарські засоби або низькомолекулярні лікарські засоби зі слабким проникненням у мозок, строго обмежене розлогим і непроникним гематоенцефалічним бар'єром (ГЕБ) разом із іншим клітинним компонентом нейроваскулярної одиниці (НВО). Було перевірено багато стратегій подолання цієї перепони, і однією з них є використання шляхів трансцитозу, опосередкованих ендогенними рецепторами, що експресуються на ендотелії мозкових капілярів (рецепторами гематоенцефалічного бар'єру). З метою уможливити рецептор-опосередковану доставку біотерапевтичних препаратів до мозку було розроблено рекомбінантні білки до цих рецепторів, такі як моноклональні антитіла або пептиди. Тим не менше, недослідженими лишаються стратегії максимізації рівня споживання мозком при одночасній мінімізації неправильного сортування в клітинах ендотелію мозку (КЕМ) та ступеню накопичення у деяких органелах КЕМ (особливо в органелах, де це призводить до деградації біотерапевтичного засобу).
Моноклональні антитіла та інші біотерапевтичні засоби мають величезний потенціал для лікування патології центральної нервової системи (ЦНС). Однак їх шляху в головний мозок перешкоджає ГЕБ. Попередні дослідження показали, що із введених у кровообіг ЇДО лише дуже мала відсоткова частка (приблизно 0,1 95) може проникнути у простір ЦНС (РеІдеппацег, Кіїп.
МуУвенг. 52 (1974) 1158-1164). Це, безумовно, обмежує будь-який фармакологічний ефект через низьку концентрацію антитіла у ЦНС.
Раніше було виявлено, що частку антитіл, які поширюються в ЦНС, можна збільшити, використовуючи рецептори ГЕБ (тобто рецептор трансферину, рецептор інсуліну і т.п.) (див., напр., УУО 95/02421).
Таким чином, існує потреба в системах доставки лікарських засобів від неврологічних порушень через ГЕБ, з метою ефективного транспортування лікарських речовин у мозок.
Зо У УМО 2014/033074 повідомлено про транспортер через гематоенцефалічний бар'єр.
У МО 2014/189973 описано антитіла до рецептора трансферину і способи їх застосування.
Крім цього, повідомлено, що таргетування рецептора ГЕБ за допомогою традиційного специфічного високоафінного антитіла, як правило, призводило до обмеженого зростання транспорту через ГЕБ. Пізніше було виявлено, що серед досліджуваних антитіл до ГЕБ рівні проходження і розподілу антитіла у ЦНС обернено залежні від афінності його зв'язування з рецептором ГЕБ. Наприклад, низькоафінне антитіло до рецептора трансферину (ТІК) у терапевтичних дозах сильно поліпшувало транспорт антитіла до ТІК через ГЕБ і утримання в
ЦНС порівняно з більш афінним антитілом до ТІЯЖ, а також уможливлювало більш легке досягнення терапевтичних концентрацій у ЦНС (Аїмаї та ін., сі. Тгапві. Мей. З (2011) в4га43).
Доказ такого транспорту через ГЕБ було одержано при використанні біспецифічного антитіла, яке зв'язується з ТІК та ферментом, що розщеплює білок-попередник амілоїду (АРР), ВД- секретазою (ВАСЕЇ1). Одна системна доза біспецифічного антитіла до ТР/ВАСЕЇ1, сконструйованого з використанням низькоафінного антитіла, не тільки призводила до значного споживання антитіла головним мозком, але також різко знижувала рівні АВ1-40 в мозку порівняно з самим лише моноспецифічним антитілом до ВАСЕ1, змушуючи припустити, що проникність через ГЕБ впливає на специфічну активність антитіла до ВАСЕЇ1 (Амаї та ін., зсі.
Тгапві. Мед. З (2011) в4га43; Ми та ін., 5сі. Тгапві. Мей. З (2011) в4га44).
Крім того, через постійне ускладнення аспектів конструювання антитіл та варіабельність, викликану різноманітністю клітинних систем рекомбінантного продукування для вироблення антитіл, дуже важливим є ретельне неклінічне оцінювання безпечності моноклональних антитіл (птАБ), призначених для терапевтичного застосування. Більше того, складна структура, унікальні біологічні функції та більш тривалий період напівжиття тАб порівняно з традиційними низькомолекулярними лікарськими сполуками посилюють міркування безпеки, як і занепокоєння з приводу тривалішого клінічного застосування тАб у лікуванні хронічних захворювань (І упси,
С.М., та ін., тАбз 1 (2009) 2-11; Кіт, 5.., та ін., Мої. СеїІз 20 (2005) 17-29).
Загальною метою неклінічних досліджень тАб є визначення токсикологічних властивостей досліджуваного тАБб і надання інформації для розробки продукту. Основними завданнями неклінічного оцінювання є (1) ідентифікація органів-мішеней токсичності та визначення того, чи оборотна ця токсичність після лікування, (2) ідентифікація безпечної початкової дози для 60 клінічного дослідження І фази на людях та схем подальшого підвищення дози, (3) здобуття інформації для відстеження безпекових показників у клінічних дослідженнях та (4) здобуття даних про безпеку для обгрунтування тверджень інструкції до продукту. Для досягнення цих цілей проводять доклінічні дослідження як іп міїго, так і іп мімо, спрямовані на визначення та розуміння фармакологічних властивостей антитіла (Гупсп, С.М., та ін., тАр5 1 (2009) 2-11;
Самадпаго, 9.А., в: Самадпаго, 9У.А. (Ед.) "Ргесіїпіса! заїтесу емаїІцайоп ої Біорпагтасеціїса!5";
НорокКеп, МУ: УМІеу 2008; 45-65).
З метою успішного доклінічного оцінювання безпечності тАб для перевірки токсичності слід вибирати найбільш придатний вид тварин (І упсі, С.М., та ін., тАбз5 1 (2009) 2-11; Спартап, К., та ін., Маї. Кем. Огид Оібсом. 6 (2007) 120-126). Придатний вид - це вид, у якого антитіло фармакологічно активне, наявний або експресується цільовий антиген, а профіль перехресної реактивності у тканинах подібний до людського (Гупсп, С.М., та ін., тАБр5 1 (2009) 2-11;
Спартангп, К., та ін., Маї. Кем. Огид Оізсом. 6 (2007) 120-126; Зибгатапуат, М. та Мегі5спіпо, Е., у: Самадпаго 9.А. (Е4д.); Ргесіїпіса! затеїу емаїчайоп ої рБіорпаппасешіса!є. НоброКеп, МУ: УМіеу 2008; 181-205; НаїІ, МУУ.С., та ін., у; Самадпаго, 9У.А. (Еа.); Ргесіїпіса! заїегу емаїчайоп ої ріорпаптасешіісаіє. НороКеп, МУ: УМіеу 2008; 207-240). Придатний вид тварин, який експресує бажаний епітоп та демонструє подібний до людських тканин профіль перехресної реактивності у тканинах, можна ідентифікувати з застосуванням імунохімічного або функціонального аналізів (Супси, С.М., та ін., тАбБз» 1 (2009) 2-11; НаїІ, МУ/.С., та ін., у: Самадпаго, 9.А. (Еа.); Ргесіїпіса! загеїу емаІцайоп ої рБіорпаптасешіісаІє. НобоКеп, Му: ММіеу 2008; 207-240). Корисні у цьому процесі дослідження перехресної реактивності між видами включають імуногістохімічне обстеження тканин різних видів з використанням доступних у продажу мультивидових тканинних мікрочіпів (Супси, С.М., та ін., тАбБз» 1 (2009) 2-11; НаїІ, МУ/.С., та ін., у: Самадпаго, 9.А. (Еа.); Ргесіїпіса! загеїу емаІнайоп ої Бріорпаптасешісаіє. НороКеп, Му: МУпеу 2008; 207-240). Альтернативна оцінка зв'язування антитіла з клітинами цих тварин за допомогою проточного сортування клітин (ЕАС5) зазвичай є більш чутливою, ніж імуногістохімічний аналіз зрізів тканин (Гупсі, С.М., та ін., тАб5 1 (2009) 2-11; Зйибгатапуат, М. та Мегізспіпд, Е., у: Самадпаго .А. (Еа.); Ргесіїпіса! затеїу емаІцайоп ої ріорпаптасешііса!є. НобоКеп, Му: ММПІеу 2008; 181-205). У видів слід порівнювати
ДНК- та амінокислотні послідовності цільового антигена; також слід визначати міжвидову гомологічність (Гупсп, С.М., та ін., тАб5 1 (2009) 2-11; 5ибгатапуат, М. та Мегівспіпод, Е., у:
Зо Самадпаго .А. (Еа.); Ргєсіїпіса! загеїу емаІйайоп ої БіорпнаптасеціісаІ5. НороКеп, М: УМПеу 2008; 181-205).
Крім цього, біорозподіл, функція та структура антигену у придатного виду тварин і людини повинні піддаватися порівнянню, щоб уможливити оцінку токсичності, яка виникає внаслідок зв'язування антитіла з цільовим антигеном і називається токсичністю, обумовленою дією на мішень (Гупсі, С.М., та ін., тАбз 1 (2009) 2-11; 19,20). Більше того, значна подібність розподілу цільового антигена у тканинах виду тварин і людини збільшує імовірність того, що визначені на тваринах органи-мішені токсичності слугуватимуть передбаченням потенційної токсичності у людей. Недостатньо подібний розподіл антигена в тканинах виду тварин і людини не виключає використання цього виду тварин для досліджень токсичності повністю, але цю різницю слід враховувати при оцінюванні ризиків для людини. У відношенні густини або афінності антигенів також не вимагається абсолютної еквівалентності тваринної моделі та людини. Обгрунтування придатності виду, обраного для перевірки токсичності, слід включати у пакет документів для подання в регуляторний орган. Якщо для оцінювання безпеки використовують лише один вид, слід надати стислий підсумок експериментів, які показали відсутність додаткового придатного виду (І упсі, С.М., та ін., тАбз 1 (2009) 2-11).
Якщо моноклональне антитіло, призначене для терапевтичного застосування, не має перехресної реактивності по виду, то для моделі слід використовувати або сурогатне антитіло, або інший вид. Тому сурогатні антитіла є потенційним вирішенням обмежень перевірки безпечності, можливих при роботі з гуманізованими моноклональними антитілами з обмеженою перехресною реактивністю по видам. Однак на даний момент немає чітких критеріїв оцінювання потенційних сурогатних антитіл перед їх використанням у визначенні ознак небезпечності лікарської речовини (Кедшіайогу Тохісоіоду апа Ріагтасоїіоду, том 40, номер 3, грудень 2004 р., с. 219-226).
Таким чином, для визначення тваринної моделі для конкретного тАб слід взяти до уваги вищеперелічені міркування. Тим не менш необхідна наявність перехресної реактивності досліджуваного тАБр з цільовим антигеном тестового виду. Інакше неможливо використати навіть найбільш придатний тестовий вид. Тому існує потреба у тАбБ, що не мають внутрішньовидової перехресної реактивності, але мають міжвидову перехресну реактивність зі своєю мішенню у людини і виду, призначеного для доклінічних випробувань. бо У ЕР 2 708 560 описане антитіло, яке специфічно розпізнає рецептор трансферину. У ЕК 2
953 841 описані антитіла, спрямовані на рецептор трансферину, та їх застосування для імунотерапії залізозалежних пухлин. У 05 2009/162359 описані бівалентні біспецифічні антитіла.
КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Було виявлено, що антитіла до рецептора трансферину згідно наданого тут опису можуть бути застосовані в якості транспортного модуля через гематоенцефалічний бар'єр для доставки об'єкта-ефектора мозку через гематоенцефалічний бар'єр у головний мозок. У певних варіантах виконання транспортний модуль через гематоенцефалічний бар'єр являє собою одновалентний зв'язувальний об'єкт, який специфічно зв'язується з рецептором трансферину. Антитіла до рецептора трансферину згідно даного опису при застосуванні в якості транспортного модуля через гематоенцефалічний бар'єр корисні, напр., для діагностики або лікування неврологічних порушень, таких як хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та хвороба Альцгеймера з супутньою хворобою Паркінсона.
Тут описані антитіла до рецептора трансферину, які специфічно зв'язуються з рецептором трансферину людини (пиТїКк) та рецептором трансферину яванських макак (сук). У певних варіантах виконання антитіло до рецептора трансферину - зв'язується з рецептором трансферину людини (пиТїЖк) та рецептором трансферину яванських макак (сут'К); - має швидкість дисоціації для рецептора трансферину людини, яка менша або дорівнює (тобто щонайбільше є рівною) швидкості дисоціації антитіла 128.1 до рецептора трансферину для рецептора трансферину яванських макак, де швидкості дисоціації визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, і де антитіло 128.1 до рецептора трансферину має варіабельний домен важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 64 та варіабельний домен легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 65; - зв'язується з рецептором трансферину людини зі швидкістю дисоціації від 0,1 1/с до 0,005 1/с, включно з цими значеннями.
Одним з описаних тут аспектів є антитіло до рецептора трансферину, яке специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини та рецептором трансферину яванських макак та включає
Зо І) гуманізований варіабельний домен важкого ланцюга, що походить від варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 01, та
І) гуманізований варіабельний домен легкого ланцюга, що походить від варіабельного домену легкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 26, де антитіло має швидкість дисоціації для рецептора трансферину людини, яка менша або дорівнює (тобто щонайбільше є рівною) швидкості дисоціації антитіла 128.1 до рецептора трансферину для рецептора трансферину яванських макак, де швидкості дисоціації визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, і де антитіло 128.1 до рецептора трансферину має варіабельний домен важкого ланцюга за
ЗЕО ІЮ МО: 64 та варіабельний домен легкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 65.
В одному з варіантів виконання швидкість дисоціації для рецептора трансферину людини становить від 0,1 1/с до 0,005 1/с, включно з цими значеннями.
В одному з варіантів виконання антитіло має у положенні 80 варіабельного домену легкого ланцюга (нумерація за Кабаї) амінокислотний залишок проліну (Р).
В одному з варіантів виконання антитіло має у положенні 91 варіабельного домену легкого ланцюга (нумерація за Кара) амінокислотний залишок аспарагіну (М).
В одному з варіантів виконання антитіло має у положенні 93 варіабельного домену легкого ланцюга (нумерація за Кабаї) амінокислотний залишок аланіну (А).
В одному з варіантів виконання антитіло має у положенні 1009 варіабельного домену важкого ланцюга (нумерація за Кара) амінокислотний залишок серину (5).
В одному з варіантів виконання антитіло має у положенні 1009 варіабельного домену важкого ланцюга (нумерація за Кара!) амінокислотний залишок глутаміну (0).
В одному з варіантів виконання антитіло має у положенні 65 варіабельного домену важкого ланцюга (нумерація за Кара!) амінокислотний залишок серину (5).
В одному з варіантів виконання антитіло має у положенні 105 варіабельного домену важкого ланцюга (нумерація за Караї) амінокислотний залишок глутаміну (0).
В одному з варіантів виконання антитіло має у положенні 80 варіабельного домену легкого ланцюга амінокислотний залишок проліну (Р), у положенні 91 варіабельного домену легкого ланцюга амінокислотний залишок аспарагіну (М), у положенні 93 варіабельного домену легкого ланцюга амінокислотний залишок аланіну (А), у положенні 1009 варіабельного домену важкого бо ланцюга амінокислотний залишок серину (5), у положенні 65 варіабельного домену важкого ланцюга амінокислотний залишок серину (5), та у положенні 105 варіабельного домену важкого ланцюга амінокислотний залишок глутаміну (0) (нумерація за Кабраб.
В одному з варіантів виконання антитіло має у положенні 80 варіабельного домену легкого ланцюга амінокислотний залишок проліну (Р), у положенні 91 варіабельного домену легкого ланцюга амінокислотний залишок аспарагіну (М), у положенні 93 варіабельного домену легкого ланцюга амінокислотний залишок аланіну (А), у положенні 1009 варіабельного домену важкого ланцюга амінокислотний залишок глутаміну (0), у положенні 65 варіабельного домену важкого ланцюга амінокислотний залишок серину (5), та у положенні 105 варіабельного домену важкого ланцюга амінокислотний залишок глутаміну (0) (нумерація за Кабраб.
Одним з описаних тут аспектів є антитіло до рецептора трансферину, яке включає (а) НМА -
НІ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 66; (6) НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО: 68; (в) НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 71, 72 або 73; (г) НМЕ-І11, що включає амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 75; (г) НМЕА-І2, що включає амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО: 76; та (д) НМЕА-
ЇЗ3, що включає амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 78.
В одному варіанті виконання, якому віддають перевагу, антитіло до рецептора трансферину включає (а) НМЕА-НІ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 66; (б) НМАК-Н2, що включає амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО: 68; (в) НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність «ЕО ІЮО МО: 72; (г) НМК-І11, що включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 75; (г) НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 76; та (д) НМК-І 3, що включає амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 78.
Одним з описаних тут аспектів є антитіло до рецептора трансферину, яке специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини (пиТК) та включає
І) послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН), яка принаймні на 90 95 ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО: 24, та
І) послідовність варіабельного домену легкого ланцюга (МІ), яка принаймні на 90 95 ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО: 37, при цьому антитіло має приблизно таку ж саму швидкість дисоціації, як і антитіло, яке включає послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН) за 5ЕБО ІЮО МО: 24 та
Зо послідовність варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) за ЗЕО ІЮ МО: 37.
В одному з варіантів виконання швидкість дисоціації для рецептора трансферину людини становить від 0,1 1/с до 0,005 1/с, включно з цими значеннями.
Одним з описаних тут аспектів, якому віддають перевагу, є антитіло до рецептора трансферину, яке специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини (ПпитТІК) та включає
І) послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН), що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 24, та
І) послідовність варіабельного домену легкого ланцюга (МІ), що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 37.
В одному з варіантів виконання всіх аспектів антитіло являє собою мультиспецифічне антитіло, що має принаймні одну зв'язувальну специфічність до рецептора трансферину і принаймні одну зв'язувальну специфічність до терапевтичної мішені. В одному з варіантів виконання антитіло включає перший антигензв'язувальний сайт, що зв'язується з рецептором трансферину, і другий антигензв'язувальний сайт, що зв'язується з мозковим антигеном. У подальшому варіанті виконання мозковий антиген вибраний із групи, що складається з людського Абреїа, рецептора епідермального фактору росту (ЕСЕК), людського рецептора епідермального фактору росту 2 (НЕК2), людського альфа-синуклеїну, людського тау-білка, фосфорильованого по тирозиновому або сериновому залишку, людського СО20, білка- попередника амілоїду (АРР) та людської глюкоцереброзидази. В одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, мультиспецифічне антитіло зв'язується одночасно з
І) рецептором трансферину та Абеїа, або
І) рецептором трансферину та СО20, або
І) рецептором трансферину та альфа-синуклеїном, або
ІМ) рецептором трансферину та фосфо-тау-білком, або
М) рецептором трансферину та НЕК, або
МІ) рецептором трансферину та глюкоцереброзидазою.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, 60 та принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕБЕО І МО: 81 та варіабельного домену легкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 82, які утворюють сайт зв'язування для людського Абеїа.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЕО ІЮО МО: 79 та варіабельного домену легкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 80, які утворюють сайт зв'язування для людського СО20. В одному з варіантів виконання варіабельна ділянка важкого ланцюга включає заміну амінокислотного залишку у положенні 11 за системою Кабаї на будь-яку амінокислоту, крім лейцину. В одному з варіантів виконання заміщення включає заміну амінокислотного залишку у положенні 11 за системою Кабаї на неполярну амінокислоту. В одному з варіантів виконання заміщення включає заміну амінокислотного залишку у положенні 11 варіабельного домену важкого ланцюга 5ЕО І МО: 79 за системою Кабраї на амінокислотний залишок, вибраний із групи, що складається з валіну, лейцину, ізолейцину, серину та фенілаланіну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЕО ІЮО МО: 83 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 84, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 85, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 86, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину,
Зо та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 87, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 88, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 89, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 90, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 91, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 92, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 93, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 94, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та сайт зв'язування для І) глюкоцереброзидази, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 97, або Ії) функціонального варіанту ЗЕО ІЮ МО: 97, ідентичного за послідовністю не менш ніж на 70 95, або ІП) функціонального варіанту ЗЕО ІЮО МО: 97, що має одну або більше амінокислотних мутацій, делецій або інсерцій, або ІМ) вкороченого функціонального варіанту
ЗЕО ІЮО МО: 97, з якого видалений принаймні один амінокислотний залишок з М-кінця або С- кінця або всередині амінокислотної послідовності, або М) комбінації ІІ) та ІМ). бо В одному з варіантів виконання всіх аспектів антитіло включає
І) гомодимерну Ес-ділянку підкласу ЇДО1 людини, необов'язково з мутаціями РЗ3290, І 234А та І235А, або
І) гомодимерну Ес-ділянку підкласу Ідс4 людини, необов'язково з мутаціями РЗ290, 5228Р та І235Е, або
І) гетеродимерну Ес-ділянку, в якій а) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутацію ТЗ36бМУУ, а інший поліпептид Ес-ділянки включає мутації 73665, І З368А та 407, або б) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т36бУМ та У349С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І З368А, У407М та 5354С, або в) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т36бУМ та 5354С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І 368А, у407М та у349С, або
ІМ) гетеродимерну Ес-ділянку підкласу Їд054 людини, в якій обидва поліпептиди Ес-ділянки включають мутації РЗ3290, І 234А та І 235А а) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутацію ТЗ36бМУУ, а інший поліпептид Ес-ділянки включає мутації 73665, І З368А та 407, або б) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т36бУМ та У349С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І З368А, У407М та 5354С, або в) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т36бУМ та 5354С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І 368А, у407М та у349С, або
М) гетеродимерну Ес-ділянку підкласу ІдДс4 людини, в якій обидва поліпептиди Ес-ділянки включають мутації РЗ3290, 5228Р та І 235Е і а) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутацію ТЗ36бМУУ, а інший поліпептид Ес-ділянки включає мутації 73665, І З368А та 407, або б) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т366УУ та У349С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І З368А, У407М та 5354С, або в) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т36бУМ та 5354С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І 368А, у407М та у349С.
Зо В одному з варіантів виконання всіх аспектів антитіло являє собою Сто55Маб.
Одним з описаних тут аспектів є антитіло до рецептора трансферину, яке включає
І) варіабельний домен важкого ланцюга, вибраний із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 52, 53, 54, 55, 56, 57 та 58, а також варіабельний домен легкого ланцюга, вибраний із групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 60, 61, 62 та 63, або
І) варіабельний домен важкого ланцюга, вибраний із групи, яка складається з БЕО ІЮО МО: 2, 3, 4,5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 та 25, а також варіабельний домен легкого ланцюга, вибраний із групи, яка складається з ЗЕО ІЮО МО: 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 та 47.
Одним з описаних тут аспектів є фармацевтичний склад, що включає антитіло згідно наданого тут опису і фармацевтично прийнятний носій.
Одним з описаних тут аспектів є антитіло згідно наданого тут опису для застосування як лікарського засобу.
Одним з описаних тут аспектів є застосування антитіла згідно наданого тут опису у виробництві лікарського засобу для лікування неврологічного порушення.
В одному із варіантів виконання неврологічне порушення вибране з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, порушення захворювання очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу, запалення ЦНС, хвороби Альцгеймера, хвороби Паркінсона, множинного склерозу, СЮО20-позитивного раку з метастазами в головний мозок та Нег2-позитивного раку з метастазами в головний мозок.
Одним з описаних тут аспектів є застосування антитіла згідно наданого тут опису у виробництві лікарського засобу для транспортування однієї або більше сполук через гематоенцефалічний бар'єр (ГЕБ).
ОПИС ФІГУР
Фігура 1: Схема трансцитозного тесту
Фігура 2: Швидкості дисоціації різних антитіл до рецептора трансферину, визначені при 2570 за допомогою ВіАсоге; 1: 128.1; 2: 128.1, злите з антитілом до рТаи тАра86; З: 567; 4: 932; 5: 567, злите з антитілом до рТаи тАбБа8еб; 6: 1026; 7: 1027; квадрати: зв'язування з рецептором бо трансферину яванських макак; круги: зв'язування з рецептором трансферину людини; вісь у: б швидкість дисоціації (1/сі.
Фігура 3: Швидкості дисоціації різних антитіл до рецептора трансферину, визначені при 37"С за допомогою ВіАсоге; 1: 128.1; 2: 932; 3: 1026; 4: 1027; квадрати: зв'язування з рецептором трансферину яванських макак; круги: зв'язування з рецептором трансферину людини; вісь у: швидкість дисоціації |1/с)
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВАРІАНТІВ ВИКОНАННЯ ВИНАХОДУ
В даному документі описано гуманізований варіант кролячого антитіла 299, яке демонструє сильний трансцитоз у трансцитозному тесті згідно Прикладу 8, є перехресно реактивним щодо рецепторів трансферину людини і яванської макаки, тобто специфічно зв'язується з обома ортологами рецептора трансферину, добре фарбується у клітинах і має період напівжиття (відображений також швидкістю дисоціації), подібний до мишачого антитіла 128.1 для рецептора трансферину яванської макаки і рецептора трансферину людини.
Одним з описаних тут аспектів є гуманізоване антитіло, що специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини, при цьому антитіло включає у варіабельному домені важкого ланцюга - НМЕК за 5ЕО ІО МО: 66, 68 та 72, та у варіабельному домені легкого ланцюга - НМА за 5ЕО ІО МО: 75, 76 та 78.
В одному із варіантів виконання гуманізоване антитіло включає варіабельний домен важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 24 та варіабельний домен легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37.
В одному із варіантів виконання в гуманізованого антитіла вимкнена ефекторна функція.
В одному з варіантів виконання гуманізоване антитіло специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини та рецептором трансферину яванської макаки.
В одному з варіантів виконання гуманізоване антитіло є а) повнорозмірним антитілом підкласу ЇДО1 людини, або б) повнорозмірним антитілом підкласу Ід54 людини, або в) повнорозмірним антитілом підкласу ІД1 людини з мутаціями І 234А, І 235А та РЗ3296, г) повнорозмірним антитілом підкласу Ідс54 людини з мутаціями 5228Р, 1235Е та необов'язково РЗ290О, г) повнорозмірним антитілом підкласу (3901 людини з мутаціями І 234А, І235А та РЗ3290 в
Зо обох важких ланцюгах, а також мутаціями Т366МУУ і 5354С в одному з важких ланцюгів та мутаціями 73665, І З368А, у407М і у349С у відповідному іншому важкому ланцюзі, або д) повнорозмірним антитілом підкласу Ідб4 людини з мутаціями 5228Р, 1235Е і необов'язково РЗ3290 в обох важких ланцюгах, а також мутаціями Т36бУМ і 5354С в одному з важких ланцюгів та мутаціями 73665, І 368А, у407М і у349С у відповідному іншому важкому ланцюзі.
Одним з описаних тут аспектів є біспецифічне антитіло, яке включає
І) перший сайт зв'язування, що включає варіабельний домен важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ
МО: 24 та варіабельний домен легкого ланцюга за 5ЗЕО ІЮО МО: 37, та
І) другий сайт зв'язування, вибраний з а) варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЕО ІЮО МО: 81 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 82, або б) варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 83 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 84, або в) варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 85 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 86, або г) варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЗЕО ІЮ МО: 87 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 88, або г) варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІО МО: 91 та варіабельного домену
БО легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 92, або д) варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 89 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 90, або е) варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЕО І МО: 93 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 94, або є) варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 79 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 80.
Одним з описаних тут аспектів є фармацевтичний склад, що включає антитіло згідно наданого тут опису і, необов'язково, фармацевтично прийнятний носій.
Одним з описаних тут аспектів є антитіло згідно наданого тут опису для застосування як 60 лікарського засобу.
Одним з описаних тут аспектів є антитіло згідно наданого тут опису для застосування у лікуванні неврологічного порушення.
Одним з описаних тут аспектів є застосування антитіла згідно наданого тут опису у виробництві лікарського засобу.
Одним з описаних тут аспектів є спосіб лікування, що включає введення антитіла згідно наданого тут опису для лікування неврологічного порушення.
Ї. ВИЗНАЧЕННЯ "Акцепторна каркасна ділянка людини" для цілей даного опису являє собою каркасну ділянку, що включає амінокислотну послідовність каркасної ділянки варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) або каркасної ділянки варіабельного домену важкого ланцюга (МН), яка походить від каркасної ділянки імуноглобуліну людини або консенсусної каркасної ділянки людини згідно визначення нижче. Акцепторна каркасна ділянка людини, яка "походить від" каркасної ділянки імуноглобуліну людини або консенсусної каркасної ділянки людини, може включати таку саму амінокислотну послідовність, що і в останніх, або може містити зміни в амінокислотній послідовності. У деяких варіантах виконання кількість амінокислотних змін становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше, 3 або менше або 2 або менше. У деяких варіантах послідовність Мі -акцепторної каркасної ділянки людини ідентична послідовності МІ -каркасної ділянки імуноглобуліну людини або послідовності консенсусної каркасної ділянки людини. "Афінність" позначає сумарну силу нековалентних взаємодій між окремим сайтом зв'язування в молекулі (напр., антитілі) та її зв'язувальним партнером (напр., антигеном). Якщо не вказано інше, тут і далі "афінність зв'язування" позначає притаманну афінність зв'язування, яка відображає 1:11 взаємодію між членами пари зв'язування (напр., антитілом і антигеном).
Афінність молекули Х до її партнера У, як правило, може були представлена константою дисоціації (Ка). Афінність може бути виміряна загальноприйнятими відомими в галузі методами, включаючи описані тут. Конкретні ілюстративні варіанти та приклади виконання для вимірювання афінності зв'язування описані наступним.
Антитіло з "дозрілою афінністю" позначає антитіло з однією або більше змінами в одній або більше гіперваріабельних ділянках (НУК) порівняно з батьківським антитілом, яке не містить
Зо таких змін, причому ці зміни призводять до покращення афінності антитіла до антигену.
Термін "антитіло" тут застосований у найширшому сенсі і охоплює різноманітні структури антитіл, включаючи, але не обмежуючись ними, моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, мультиспецифічні антитіла (напр., біспецифічні антитіла), а також фрагменти антитіл, доки вони виявляють бажану антигензв'язувальну активність. "Фрагмент антитіла" позначає молекулу, відмінну від інтактного антитіла, яка включає частину інтактного антитіла, що зв'язується з тим же антигеном, з яким зв'язується інтактне антитіло. Приклади фрагментів антитіла включають, але не обмежуються ними, Ем, Раб, Раб",
Еар-5Н, Каб)»; діатіла; лінійні антитіла; одноланцюгові молекули антитіл (напр., 5сЕм); а також мультиспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл.
Термін "химерне" антитіло" позначає антитіло, в якому частина важкого і/або легкого ланцюгів походить від певного виду-джерела, тоді як залишок важкого і/або легкого ланцюгів походить від іншого виду-джерела. "Клас" антитіла стосується типу константного домену або константної ділянки, до якого належить його важкий ланцюг. Існує п'ять основних класів антитіл: ІА, дО, ЧЕ, дсес та ДМ, а деякі з них можуть далі поділяти на підкласи (ізотипи), напр., дон, аг, ІдСз, Са, ІдА: та ІдА».
Константні домени важких ланцюгів, що відповідають різним класам імуноглобулінів, відповідно позначають а, б, є, у та р. "Ефекторні функції" позначають ті біологічні активності, що обумовлені Ес-ділянкою антитіла та змінюються з класом антитіла. Приклади ефекторних функцій антитіла включають: зв'язування С1д4 та комплемент-залежну цитотоксичність (КЗЦ); зв'язування з рецептором Ес; антитілозалежну клітинно-опосередковану цитотоксичність (АЗКЦ); фагоцитоз; пригнічення рецепторів поверхні клітини (напр., рецепторів В-клітин); а також активацію В-клітин. "Ефективна кількість" засобу, напр., фармацевтичного складу, означає таку кількість, яка у необхідних дозах та впродовж необхідних періодів часу ефективна для досягнення бажаного терапевтичного або профілактичного результату.
Термін "Ес-ділянка" тут і далі вжито у значенні зони С-кінця важкого ланцюга імуноглобуліну, що містить принаймні частину константної зони. Термін охоплює Ес-ділянки з природною послідовністю та варіанти Ес-ділянок. В одному з варіантів виконання Ес-ділянка важкого ланцюга дос людини простягається від Субз226 або Рго230 до карбоксильного кінця важкого бо ланцюга. Однак С-кінцевий лізин (І уз447) Ес-ділянки може бути присутнім або відсутнім. Якщо не вказано інше, нумерація амінокислотних залишків у Ес-ділянці або константній ділянці наведена згідно системи нумерації ЄЮ, яку також називають покажчиком ЕО, як описано у
Кавбаї, Е.А. та ін., Зедиепсез ої Ргоїеїп5 ої Іттипо!одісаї Іптегеві, 5-те вид., Рибіїс Неайцй зЗегмісе,
Маїопаї! Іпзійшез ої Неайй, ВемШезада, МО (1991), публікація МІН 91-3242. "Каркасні" або "ЕК"-ділянки - це варіабельні залишки доменів, які відрізняються від залишків гіперваріабельних ділянок (НУК). ЕК-ділянка варіабельного домену, як правило, складається з чотирьох ЕК-доменів: ЕК1, ЕК2, ЕКЗ та ЕРК4. Відповідно, послідовності НМЕ та ЕК у МН (або МІ) зазвичай виявляються у наступній послідовності: ЕК1-НІ1(11)-ЕН2-НІ(І 2)-ЕНЗ-НЗІІ 3)-ЕНА.
Терміни "повнорозмірне антитіло", "Іінтактне антитіло" та "цільне антитіло" тут і далі застосовуються взаємозамінно на позначення антитіла, структура якого суттєво подібна до природної структури антитіла, або ж яке містить важкі ланцюги з Ес--ділянкою згідно наданого тут визначення.
Терміни "клітина-хазяїн", "лінія клітин-хазяїв" та "культура клітин-хазяїв" застосовуються взаємозамінно та позначають клітини, в які було введено екзогенну нуклеїнову кислоту, включаючи потомство таких клітин. Клітини-хазяї включають "трансформанти" |і "трансформовані клітини", які охоплюють первинну трансформовану клітину і потомство, яке від неї походить, незважаючи на кількість переносів. Потомство може бути не повністю ідентичним батьківській клітині за складом нуклеїнових кислот, натомість воно може містити мутації. Також сюди включено мутантні потомства, що мають ту ж саму функцію або біологічну активність, яка відслідковувалась або відбиралась у початково трансформованих клітинах. "Консенсусна каркасна ділянка людини" - це каркасна ділянка, що представляє амінокислотні залишки, які найбільш часто зустрічаються при відборі МІ - або МН-каркасних послідовностей імуноглобулінів людини. Як правило, відбір МіІ- або МН-каркасних послідовностей імуноглобулінів людини здійснюють з підгрупи послідовностей варіабельних доменів. Зазвичай підгрупа послідовностей - це підгрупа за Кабаї, Е.А. та ін., Зедиепсе5 ої
Ргоїєїп5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, 5-те вид., Вешпезда МО (1991), публікація МІН 91-3242, Т. 1-3.
В одному з варіантів виконання для МІ. підгрупа є підгрупою каппа-! згідно Кабаї та ін., зирга. В одному з варіантів виконання для МН підгрупа є підгрупою ПІ згідно КаБбаї та ін., зирга. "Гуманізоване" антитіло позначає химерне антитіло, що включає амінокислотні залишки з
НУК, одержаних не від людини, та амінокислотні залишки з людських ЕК. У певних варіантах виконання гуманізоване антитіло включатиме по суті всі з принаймні одного, а як правило, двох варіабельних доменів, в яких всі чи по суті всі НМЕ (напр., СОК) відповідають таким у антитіла, одержаного не від людини, а всі чи по суті всі ЕК відповідають таким у людського антитіла.
Гуманізоване антитіло може необов'язково включати принаймні частину константної ділянки антитіла, що походить від людського антитіла. "Гуманізована форма" антитіла, напр., антитіла, одержаного не від людини, позначає антитіло, яке було піддане гуманізації.
Термін "гіперваріабельна ділянка" або "НМЕ" тут і далі вживається на позначення кожної з ділянок варіабельного домену антитіла, послідовність яких є гіперваріабельною ("ділянки, що визначають комплементарність", або "СОМ"), та які утворюють структурно визначені петлі
Стіперваріабельні петлі") і/або містять залишки, що контактують з антигеном ("антигенні контакти"). Як правило, антитіла включають шість НМЕ; три у МН (НІ, Н2, НЗ) ітри ум (І1, 12,
І 3).
НМЕ тут і далі включають (а) гіперваріабельні петлі, що зустрічаються на амінокислотних залишках 26-32 (11), 50-52 (12), 91-96 (І 3), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2) та 96-101 (НЗ) (Споїтіа, С. та І е5К, А.М., 9. Мої. Віої. 196 (1987) 901-917); (6) СОК, що зустрічаються на амінокислотних залишках 24-34 (І 1), 50-56 (І 2), 89-97 (І 3), 31-
З5р (НІ), 50-65 (Н2) та 95-102 (НЗ) (Кабаї, Е.А. та ін., Зедиепсез ої Ргоївїіп5 ої Іттипо!одісаї
Іпієге5і, 5-те вид. Рибіїс Неакй Зегмісе, Маїйопа! Іпбійшщев5 ої Неакй, ВеїШезада, МО (1991), публікація МІН 91-3242); (в) антигенні контакти, що зустрічаються на амінокислотних залишках 27-36 (І 1), 46-55 (І 2), 89-96 (І 3), 30-356 (НІ), 47-58 (Н2) та 93-101 (НЗ) (МасСайПшт та ін. У. Мої. ВіоїІ. 262: 732-745 (1996)); та (г) комбінації (а), (6) і/або (в), включаючи амінокислотні залишки НМУ 46-56 (І 2), 47-56 (І 2), 48-56 (І 2), 49-56 (І 2), 26-35 (НІ), 26-355Б (НІ), 49-65 (Н2г), 93-102 (НЗ) та 94-102 (НЗ).
Якщо не зазначено інше, НМК-залишки та інші залишки варіабельного домену (напр., ЕК- залишки) пронумеровані відповідно до КарБбаї та ін., зирга. "Індивідуум"' або "суб'єкт" є ссавцем. Ссавці включають, але не обмежуються ними, домашніх тварин (напр., корів, овець, котів, собак та коней), приматів (напр., людей та приматів, бо що не відносяться до людей, таких як мавпи), кролів та гризунів (напр., мишей та щурів). У певних варіантах виконання індивідуум або суб'єкт є людиною. "Івзольоване" антитіло - це антитіло, яке відокремили від компонента його природнього середовища. У деяких варіантах виконання антитіло очищене до ступеня чистоти більш ніж 9595 або 9995, визначеного, напр., електрофорезом (напр., 5ЗО5-РАСЕ, ізоелектричним фокусуванням (ІЕФ), капілярним електрофорезом) або хроматографією (напр., іонообмінною або обернено-фазовою ВЕРХ). Для огляду методів оцінки чистоти антитіла див., напр., Ріайтап,
З. та ін., У. Спготаїйодг. В 848 (2007) 79-87. "Ізольована" нуклеїнова кислота - це молекула нуклеїнової кислоти, яку відокремили від компонента її природнього середовища. Ізольована нуклеїнова кислота охоплює молекулу нуклеїнової кислоти, яка міститься у клітинах, що зазвичай містять молекулу нуклеїнової кислоти, але ця молекула нуклеїнової кислоти присутня позахромосомно або у локусі хромосоми, що відрізняється від її природнього локусу.
Термін "моноклональне антиіло" тут і далі позначає антитіло, одержане з популяції по суті гомогенних антитіл, тобто окремі антитіла, з яких складається популяція, ідентичні і/або зв'язуються з одним і тим же епітопом, за виключенням можливих варіантів антитіл, напр., таких, що містять мутації, які виникли природним чином або у процесі виробництва препарату моноклональних антитіл, де подібні варіанти зазвичай присутні в незначних кількостях. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, які зазвичай включають різні антитіла, спрямовані на різні детермінанти (епітопи), кожне моноклональне антитіло з препарату моноклональних антитіл спрямоване на єдину детермінанту антигену. Тому модифікатор "моноклональний" вказує на те, що антитіло було отримане з істотно гомогенної популяції антитіл, і його не слід трактувати як такий, що вимагає виготовлення антитіла будь-яким конкретним методом. Наприклад, моноклональні антитіла для застосування згідно даного винаходу можуть бути виготовлені різноманітними техніками, включаючи, але не обмежуючись ними, метод гібридом, методи рекомбінантної ДНК, метод фаг-дисплею, а також методи, що використовують трансгенних тварин, які включають всі або частину локусів людських імуноглобулінів; такі методи та інші приклади методів виготовлення моноклональних антитіл описані тут і далі. "Природні антитіла" позначають молекули імуноглобулінів, що зустрічаються у природі, з
Зо різними структурами. Наприклад, природні антитіла дб являють собою гетеротетрамерні глікопротетни масою близько 150 000 дальтон, що складаються з двох ідентичних легких ланцюгів та двох ідентичних важких ланцюгів, з'єднаних дисульфідними зв'язками. Від М- до С- кінця кожен важкий ланцюг має варіабельну ділянку (МН), яку також називають важким варіабельним доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, за якою йдуть три константні домени (СНІ, СН2 та СНЗ). Так само від М- до С-кінця кожен легкий ланцюг має варіабельну ділянку (МІ), яку також називають легким варіабельним доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, за якою йде легкий константний домен (СІ). Легкий ланцюг антитіла на підставі амінокислотної послідовності його константного домену можна віднести до одного з двох типів, які називають каппа (к) і лямбда (Х).
Термін "листок-вкладка" застосовують на позначення інструкцій, які зазвичай вкладають у товарну упаковку лікарських продуктів, та які містять інформацію про показання, застосування, дози, введення, комбіноване лікування, протипоказання і/або застереження, що стосуються використання таких лікарських продуктів. "Відсоткову (95) ідентичність амінокислотної послідовності" відносно еталонної поліпептидної послідовності визначають як відсоток амінокислотних залишків у послідовності- кандидаті, ідентичних амінокислотним залишкам еталонної поліпептидної послідовності після вирівнювання послідовностей і за необхідності введення проміжків задля одержання максимальної відсоткової ідентичності послідовностей, при цьому будь-які консервативні заміщення при визначенні ідентичності послідовностей не враховують. Вирівнювання з метою визначення відсоткової ідентичності амінокислотних послідовностей можна здійснити різними відомими в галузі шляхами, наприклад, з використанням загальнодоступного комп'ютерного програмного забезпечення, такого як програмне забезпечення ВІ А5Т, ВІ А5Т-2, АГІОМ або
Медаїїдп (ЮОМАБТАК). Фахівці у галузі можуть визначити придатні параметри вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, потрібні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині послідовностей, які порівнюють. Тим не менш, для цілей даного опису значення 95 ідентичності амінокислотних послідовностей генерують з використанням комп'ютерної програми порівняння послідовностей АГІСМ-2. Комп'ютерна програма порівняння послідовностей АГ Ї5М-2 була створена Сепепіесі, Іпс., і вихідний код разом з користувацькою документацією було подано до Бюро авторського права США, Умазпіпоїоп О.С., 20559, де вони бо зареєстровані під номером ТХО510087. Програма АГІСМ-2 публічно доступна від Сепепіесії,
Іпс., Саус-Сан-Франциско, Каліфорнія, або може бути скомпільована з вихідного коду. Програму
АЦІСИМ-2 слід компілювати для застосування на операційній системі ОМІХ, включно з цифровою
ОМІХ М4.00. Всі параметри порівняння послідовностей встановлені програмою АГІОМ-2 і не змінюються.
У ситуаціях, коли АГІОМ-2 використовують для порівняння амінокислотних послідовностей,
Фо ідентичність амінокислотних послідовностей заданої амінокислотної послідовності А до заданої амінокислотної послідовності В (що можна перефразувати як те, що задана амінокислотна послідовність А має або включає певну 95 ідентичність амінокислотної послідовності до, із або відносно заданої амінокислотної послідовності В) обраховують наступним чином: частка Х/У, помножена на 100 де Х - кількість амінокислотних залишків, позначених як ідентичні співпадіння програмою вирівнювання послідовностей АГ ЇОМ-2 у вирівнюванні А і В, здійсненому цією програмою, та де
У - загальна кількість амінокислотних залишків у В. Слід розуміти, що коли довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності В, то о ідентичність амінокислотної послідовності А до В не дорівнюватиме 95 ідентичності амінокислотної послідовності В до А. Якщо спеціально не вказано інше, всі використані тут значення 95 ідентичності амінокислотних послідовностей одержані згідно опису в попередньому абзаці із застосуванням комп'ютерної програми АГІСМ-2.
Термін "фармацевтичний склад" стосується препарату, що знаходиться у такій формі, яка уможливлює ефективність біологічної активності діючої речовини, що в ньому міститься, та не містить додаткових компонентів, які були б неприйнятно токсичними для суб'єкта, котрому буде вводитися склад. "Фармацевтично прийнятний носій" позначає інгредієнт фармацевтичного складу, який не є діючою речовиною і нетоксичний для суб'єкта. Фармацевтично прийнятні носії включають, але не обмежуються ними, буфери, допоміжні речовини, стабілізатори або консерванти.
Тут і далі "лікування" (а також його граматичні варіанти, такі як "лікувати") позначає клінічне втручання зі спробою змінити природній перебіг подій для індивідуума, якого лікують, і може бути проведене як з профілактичною метою, так і під час перебігу клінічної патології. Бажані
Зо ефекти лікування включають, але не обмежуються ними, попередження виникнення або рецидиву захворювання, полегшення симптомів, зменшення будь-яких прямих або непрямих патологічних наслідків захворювання, попередження метастазування, зниження швидкості прогресування захворювання, покращення або тимчасове полегшення стану захворювання, а також ремісію або покращений прогноз. У деяких варіантах виконання антитіла згідно винаходу застосовують для затримки розвитку захворювання або уповільнення прогресування захворювання.
Термін "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" позначає домен важкого або легкого ланцюга антитіла, який бере участь у зв'язуванні антитіла з антигеном. Варіабельні домени важкого і легкого ланцюгів (МН і МІ, відповідно) природнього антитіла в цілому мають подібні структури, де кожен домен включає чотири консервативних каркасних ділянки (ЕК) та три гіперваріабельних ділянки (НМК). (Див., напр., Кіпаї, Т.9. та ін. Кибу Іттипоіоду, 6б-те вид.,
М.Н. Егеетап апа Со., М.У. (2007), с. 91) Для надання антигензв'язувальної специфічності може бути достатньо одного УН- або Мі -домену. Більше того, антитіла, що зв'язуються з конкретним антигеном, можна ізолювати за допомогою МН- або Мі-домену антитіла, яке зв'язується з антигеном, задля скринінгу бібліотеки комплементарних МН- або Мі -доменів, відповідно. Див., напр., Рогіоїапо, 5. та ін., У. Іттипої. 150 (1993) 880-887; Сіаскзоп, Т. та ін., Майшге 352 (1991) 624-628). Нумерацію амінокислотних залишків варіабельної ділянки (варіабельних ділянок легкого і важкого ланцюгів) виконують за Кабаї (Кабраї, Е.А. та ін., Зедиепсев5 ої Ргоїеїп5 ої
Іттипоіодісаї! Іпієгевзі, 5-те вид., Вешпезаа МО (1991), публікація МІН 91-3242, Т. 1-3).
Термін "вектор" тут і далі позначає молекулу нуклеїнової кислоти, здатну розмножувати іншу нуклеїнову кислоту, з якою вона сполучена. Термін охоплює вектор як самореплікувальну структуру нуклеїнової кислоти, а також вектор, включений у геном клітини-хазяїна, в яку його було введено. Деякі вектори здатні спрямовувати експресію нуклеїнових кислот, з якими вони функціонально зв'язані. Такі вектори тут називають "векторами експресії".
Термін "гематоенцефалічний бар'єр" (ГЕБ) позначає фізіологічний бар'єр між периферичним кровообігом та головним і спинним мозком, утворений щільними контактами між плазматичними мембранами ендотелію мозкових капілярів, що створює іщільний бар'єр, який обмежує транспорт молекул у мозок, навіть дуже малих молекул на зразок сечовини (60 дальтонів). ГЕБ у головному мозку, бар'єр між кровоносною системою та спинним мозком, а також бо гематоретинальний бар'єр у сітківці є суміжними капілярними бар'єрами в ЦНС і тут і далі сукупно позначаються як гематоенцефалічний бар'єр або ГЕБ. ГЕБ також включає гематолікворний бар'єр (хоріоїдне сплетіння), де бар'єр складається з клітин епендими, а не з ендотеліальних клітин капілярів.
Термін "центральна нервова система" (ЦНС) позначає комплекс нервових тканин, які контролюють роботу тіла, і включає головний та спинний мозок.
Термін "рецептор гематоенцефалічного бар'єру" (РГЕБ) позначає зовнішньоклітинний мембраннозв'язаний рецепторний білок, що експресується на ендотеліальних клітинах мозку і здатен транспортувати молекули через ГЕБ або використовуватись для транспорту екзогенних введених молекул. Приклади РГЕБ включають, але не обмежуються ними, рецептор трансферину (ТІК), рецептор інсуліну, рецептор інсуліноподібного фактору росту (ІСЕ-В), рецептори ліпопротеїнів низької густини, включаючи без обмежень пов'язаний із рецептором ліпопротеїнів низької густини білок 1 (І ЕР) та пов'язаний із рецептором ліпопротеїнів низької густини білок 8 (ІКР8), а також гепарин-зв'язувальний фактор росту, подібний до епідермального фактору росту (НВ-ЕСЕ). Прикладом РГЕБ є рецептор трансферину (ТІК).
Термін "об'єкт-ефектор мозку" позначає молекулу, призначену для перенесення в мозок через ГЕБ. Об'єкт-ефектор зазвичай має характерну терапевтичну активність, яку бажано доставити до мозку. Об'єкти-ефектори включають ліки від неврологічних порушень і цитотоксичні агенти, такі як, напр., поліпептиди і антитіла, зокрема моноклональні антитіла або їх фрагменти, спрямовані на мішень у мозку.
Термін "одновалентний зв'язувальний об'єкт" позначає молекулу, яка здатна специфічно і одновалентно зв'язуватися з РГЕБ. Транспортний модуль через гематоенцефалічний бар'єр мМабо кон'югат згідно наданого тут опису характеризуються наявністю єдиної одиниці одновалентного зв'язувального об'єкта, тобто транспортний модуль через гематоенцефалічний бар'єр і/або кон'югат згідно даного винаходу включають тільки одну одиницю одновалентного зв'язувального об'єкта. Одновалентний зв'язувальний об'єкт включає, але не обмежується ними, поліпептиди, повнорозмірні антитіла, фрагменти антитіл, включно з фрагментами Раб,
Бар, м, одноланцюгові молекули антитіл, такі як, напр., одноланцюгові Раб, 5сгЕм.
Одновалентний зв'язувальний об'єкт може бути, наприклад, каркасним білком, сконструйованим за допомогою відомих з рівня техніки технологій, таких як фаг-дисплей або імунізація.
Одновалентний зв'язувальний об'єкт може також бути поліпептидом. У деяких варіантах виконання одновалентний зв'язувальний об'єкт включає СН2-СНЗ Ід-домен та одноланцюговий
Раб (5сБаб), спрямований на рецептор гематоенцефалічного бар'єру. зсбар приєднаний до
С-кінця СН2-СНЗ Ід-домену за допомогою лінкера. У певних варіантах виконання 5сЕар спрямований на рецептор трансферину.
Термін "одновалентне зв'язування" позначає специфічне зв'язування з РГЕБ, де взаємодія між одновалентним зв'язувальним об'єктом та РГЕБ відбувається по одному окремому епітопу.
Одновалентне зв'язування запобігає будь-якій димеризації/мультимеризації РГЕБ завдяки єдиній точці взаємодії з епітопом. Одновалентне зв'язування запобігає змінам у внутрішньоклітинному сортуванні РГЕБ.
Термін "епітоп" позначає будь-яку поліпептидну детермінанту, здатну специфічно зв'язуватися з антитілом. У деяких варіантах виконання епітопні детермінанти включають хімічно активні поверхневі угрупування молекул, таких як амінокислоти, бічні ланцюги цукрів, залишки фосфорилу або сульфонілу, та, у деяких варіантах виконання, можуть мати специфічні тривимірні структурні характеристики і/або специфічні характеристики заряду. Епітоп - це ділянка антигена, що зв'язується з антитілом. "Рецептор трансферину" (ТК) є трансмембранним глікопротеїном (молекулярна маса приблизно 180 000 Да), який складається з двох дисульфідно зв'язаних субодиниць (кожна з позірною молекулярною масою приблизно 90 000 Да) та бере участь в засвоєнні заліза у хребетних. В одному з варіантів виконання ТІК тут і далі є людським ТІїЖ, що включає амінокислотну послідовність, описану в ЗсПппеїдег та ін. (Маїиге 311 (1984) 675-678).
Термін "засіб отримання зображень" позначає сполуку, одна чи більше властивостей якої уможливлюють пряме або опосередковане виявлення її присутності і/або розташування.
Приклади таких засобів отримання зображень включають білки і низькомолекулярні сполуки, що містять мічену групу, яка уможливлює виявлення.
Терміни "ЦНС-антиген" та "мішень у мозку" позначають антиген і/або молекулу, яка експресується в ЦНС, включаючи головний мозок, і яку можна таргетувати за допомогою антитіла або малої молекули. Приклади такого антигена і/або молекули включають, не обмежуючись ними: бета-секретазу 1 (ВАСЕЇ), бета-амілоїд (Абеїа), рецептор епідермального фактору росту (ЕСЕК), рецептор епідермального фактору росту людини 2 (НЕКЗ), тау-білок, бо аполіпопротеїн Е4 (АроЕ4), альфа-синуклеїн, СО20, гантінгтін, пріоновий білок (РгР), багата на лейцинові повтори кіназу 2 (ІККК2), паркін, пресенілін 1, пресенілін 2, гамма-секретазу, рецептор смерті 6 (ОКб), білок-попередник амілоїду (АРР), рецептор нейротрофіну р75 (р75МТЕ), глюкоцереброзидазу і каспазу 6.
Термін "специфічно зв'язується 3" позначає антитіло, яке селективно або переважно зв'язується 3 антигеном. Афінність зв'язування звичайно визначають за допомогою стандартного аналізу, такого як аналіз Скетчарда, або технології поверхневого плазмонного резонансу (напр., з використанням ВІАСОКЕФ)).
Термін "СН2-СНЗ Ід-об'єкт" тут і далі позначає білковий об'єкт, що походить від імуноглобулінових доменів СН2 або СНЗУ. "СН2-СНЗ Ід-об'єкт" включає два "СН2-СНЗ" поліпептиди, які утворюють димер. Імуноглобуліном може бути Ідс, ІдА, дО, ДЕ або ІЗДМ. В одному з варіантів виконання СН2-СНЗ Ід-об'єкт походить від імуноглобуліну до і позначається тут і далі як "СН2-СНЗ Ідс-об'єкт". Термін охоплює природну послідовність доменів СН2-СНЗ та варіанти доменів СН2-СНЗ. В одному з варіантів виконання "СН2-СНЗ Ід-об'єкт" походить від
СнН2г-СНЗ-домену важкого ланцюга дос людини, який простягається від Суб226 або Рго230 до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Однак С-кінцевий лізин (І уз447) Ес-ділянки може бути присутнім або відсутнім. Якщо не вказано інше, нумерація амінокислотних залишків у ділянці
СнН2г-СНЗ-домену або константній ділянці наведена згідно системи нумерації ЄЮ, яку також називають покажчиком ЕМ, як описано у Кабаї та ін., Зедиепсе5 ої Ргоївіп5 ої Іттипоі|одісаї
Іптегеві, 5-те вид., Рибіїс Неанй з5егмісе, Майопаї Іпозійшез ої Неацй, Веїпезаа, МО (1991). "Кон'югат" - це злитий білок згідно даного винаходу, скон'югований з однією або більше гетерологічних молекул, включаючи, але не обмежуючись ними, мітку, лікарський засіб від неврологічного порушення або цитотоксичний засіб.
Термін "лінкер" позначає хімічний лінкер або одноланцюговий пептидний лінкер, який ковалентно сполучає різні об'єкти транспортного модуля через гематоенцефалічний бар'єр і/або злитого поліпептиду і/або кон'югату згідно наданого тут опису. Лінкер сполучає, наприклад, об'єкт-ефектор мозку з одновалентним зв'язувальним об'єктом. Наприклад, якщо одновалентний зв'язувальний об'єкт включає СІН2-СНЗ Ід-об'єкт і 5сБар, спрямований на рецептор гематоенцефалічного бар'єру, то лінкер кон'югує зсЕРаб до С-кінця СН2-СНЗ Ід-об'єкту.
Лінкер, що сполучає об'єкт-ефектор мозку з одновалентним зв'язувальним об'єктом (перший
Зо лінкер), та лінкер, що приєднує 5сЕРаб до С-кінця СН2-СНЗ Ід-домену (другий лінкер), може бути таким самим або відрізнятися.
Можуть використовуватись одноланцюгові пептидні лінксери, що включають від одного до двадцяти амінокислотних залишків, поєднаних пептидними зв'язками. У деяких варіантах виконання амінокислоти вибрані з-поміж двадцяти амінокислот, що зустрічаються в природі. У певних інших варіантах виконання одна або більше амінокислот вибрані з гліцину, аланіну, проліну, аспарагіну, глутаміну та лізину. В інших варіантах виконання лінкер є хімічним лінксером. У певних варіантах виконання лінкер є одноланцюговим пептидним лінкером з амінокислотною послідовністю довжиною принаймні 25 амінокислотних залишків, в одному варіанті виконання, якому віддають перевагу - довжиною від 32 до 50 амінокислотних залишків.
В одному з варіантів виконання пептидний лінкер являє собою лінкер (сх5)п, де С - гліцин, З - серин, (х-3, п-8, 9 або 10) або (х-4 та п-6, 7 або 8), в одному варіанті виконання х-4, п--6б або 7, в одному варіанті виконання. якому віддають перевагу, х-4, п-7. В одному з варіантів виконання лінкер є (545)4 (5ЕО ІО МО: 95). В одному з варіантів виконання лінкер є (545)602 (5ЕО ІЮ МО: 96).
Кон'югацію можна також здійснити за допомогою різноманітних хімічних лінкерів. Наприклад, одновалентний зв'язувальний об'єкт або злитий поліпептид та об'єкт-ефектор мозку можна скон'югувати за допомогою різноманітних біфункціональних агентів зв'язування білків, таких як
М-сукцинімідил-3-(2-піридилдитіо)пропіонат (СПД), сукцинімідил-4-(М-малеїмідометил) циклогексан-І-карбоксилат (СМЦК), імінотіолан (ІТ), біфункціональні похідні імідоестерів (такі як диметиладипімідат НС), активні естери (такі як дисукцинімідил суберат), альдегіди (такі як глутаральдегід), біс-азидні сполуки (такі як біс-(р- азидобензоїл)гександіамін), похідні біс- діазонію (такі як біс-(р-діазонійбензоїл)- етилендіамін), диїзоціанати (такі як толуолу 2,6- диізоціанат), а також біс-активні сполуки фтору (такі як І. 5-дифтор-2,4-динітробензол). Лінкер може бути "розщеплюваним лінкером", який сприяє вивільненню об'єкта-ефектора після доставки у мозок. Наприклад, можуть використовуватись кислотолабільний лінкер, пептидазочутливий лінкер, фотолабільний лінкер, диметиловий лінкер або лінкер, що містить дисульфідні зв'язки (Спагі та ін., Сапсег Ке5. 52 (1992) 127-131; 05 5,208,020).
Ковалентна кон'югація може бути безпосередньою або через лінкер. У певних варіантах виконання безпосередня кон'югація здійснена шляхом конструювання злиття поліпептидів 60 (тобто злиттям двох генів, які кодують одновалентний зв'язувальний об'єкт для РГЕБ і об'єкт-
ефектор та експресуються як один поліпептид (ланцюг). У певних варіантах виконання безпосередня кон'югація здійснена шляхом утворення ковалентного зв'язку між реакційноздатною групою на одній з двох частин одновалентного зв'язувального об'єкта для
РГЕБ їі відповідною групою або акцептором на об'єкті-ефекторі мозку. У певних варіантах виконання безпосередня кон'югація здійснена шляхом модифікації (тобто генетичної модифікації) однієї з двох молекул, що підлягають кон'югації, таким чином, щоб вона включала реакційноздатну групу (в якості необмежуючих прикладів - сульфгідрильну групу або карбоксильну групу), яка в належних умовах утворює ковалентний зв'язок з іншою молекулою, що підлягає кон'югації. В якості необмежуючого прикладу молекулу (тобто амінокислоту) з бажаною реакційноздатною групою (тобто цистеїновим залишком) можна ввести в, напр., одновалентний зв'язувальний об'єкт для РГЕБ і сформувати з неврологічним лікарським засобом дисульфідний зв'язок. В галузі також відомі способи ковалентної кон'югації нуклеїнових кислот до білків (тобто фотозшивання, див., напр., 7аїзеріп та ін. Ки55. Спет. Кем. 74 (2005) 77- 95). Кон'югацію можна також здійснити за допомогою різноманітних лінкерів. Наприклад, одновалентний зв'язувальний об'єкт та об'єкт-ефектор можна скон'югувати за допомогою різноманітних біфункціональних агентів зв'язування білків, таких як М-сукцинімідил-3-(2- піридилдитіо)пропіонат (СПДП), сукцинімідил-4-(М-малеіїмідометил) циклогексан-І-карбоксилат (СМЦК), імінотіолан (ІТ), біфункціональні похідні імідоестерів (такі як диметиладипімідат НС), активні естери (такі як дисукцинімідил суберат), альдегіди (такі як глутаральдегід), біс-азидні сполуки (такі як біс-(р- азидобензоїл)гександіамін), похідні біс-діазонію (такі як біс-(р- діазонійбензоїл)- етилендіамін), диїзоціанати (такі як толуолу 2,6-диізоціанат), а також біс- активні сполуки фтору (такі як І, 5-дифтор-2,4-динітробензол). Можуть також використовуватись пептидні лінкери, що складаються з від одного до двадцяти амінокислотних залишків, поєднаних пептидними зв'язками. У деяких подібних варіантах виконання амінокислотні залишки вибрані з-поміж двадцяти амінокислот, що зустрічаються в природі. У певних інших подібних варіантах виконання один або більше амінокислотних залишків вибрані з гліцину, аланіну, проліну, аспарагіну, глутаміну та лізину. Лінкер може бути "розщеплюваним лінкером", який сприяє вивільненню об'єкта-ефектора після доставки у мозок. Наприклад, можуть використовуватись кислотолабільний лінкер, пептидазочутливий лінкер, фотолабільний лінкер,
Зо диметиловий лінкер або лінкер, що містить дисульфідні зв'язки (Спагі та ін., Сапсег Ке5. 52 (1992) 127-131; 005 5,208,020).
І. КОМПОЗИЦІЇ ТА МЕТОДИ
Для опису молекулярних взаємодій часто використовують рівноважні константи дисоціації (Ко). Їх використовують як міру сили взаємодії (напр., афінності) двох молекул одна з одною.
Тому значення Ко є мірою сили бімолекулярної взаємодії.
Однак значення Ко як таке не описує кінетику молекулярної взаємодії, тобто зі значення Ко не можна вивести, з одного боку, наскільки швидко дві молекули зв'язуються одна з одною (константа швидкості асоціації, або "оп-гаїе"), а з іншого боку, наскільки швидко дві молекули дисоціюють (константа швидкості дисоціації, або "ой-га(е"). Характеристика бімолекулярних взаємодій лише значенням їх Ко упускає той факт, що можна одержати таке саме значення Ко за надзвичайно різних (таких, що відрізняються на порядки) швидкостей асоціації та дисоціації, оскільки значення Ко є їх відношенням.
Однак швидкості асоціації та дисоціації важливі для характеристики поведінки молекул при зв'язуванні. Швидкість дисоціації особливо важлива, оскільки вона описує тривалість зв'язування, напр., антитіла з його антигеном. Тривала швидкість дисоціації корелює з повільною дисоціацією утвореного комплексу, тоді як коротка швидкість дисоціації корелює зі швидкою дисоціацією.
З метою досягти довготривалих (а отже, таких, що потребують менш частого введення) або спеціально підібраних (напр., таких, що залежать від умов середовища) взаємодій швидкості дисоціації потрібно визначати експериментально. Це ще більш важливо з огляду на те, що передбачити швидкість дисоціації майже неможливо. Крім цього, як зазначено вище, кореляція між швидкістю дисоціації та афінністю зв'язування слабка. Наприклад, через те, що значення Ко є відношенням швидкостей асоціації та дисоціації, навіть слабкі зв'язувачі можуть довго залишатися зв'язаними зі своєю мішенню, тоді як сильні зв'язувачі можуть швидко дисоціювати.
Типовим вузьким місцем проектів створення антитіл є ранжування багатьох кандидатів, одержаних після пеннінгу, на основі сили зв'язування антитіла. В ідеалі такий метод повинен працювати без попереднього мічення антигенів і на неочищених бактеріальних лізатах. Міега, РЕ. та ін. (Апаї. Віоспет. 441 (2013) 208-213) повідомляли про метод скринінгу швидкості дисоціації для відбору високоафінних антитіл до лікарських сполук з неочищених лізатів ЕбсПегіспіа соїї, бо що містили одновалентні Раб-фрагменти. Вони вибрали швидкість дисоціації як параметр ранжування тому, що серед іншого швидкість дисоціації не залежить від концентрації. Вони вибрали одновалентний формат для уникнення під час ранжування за швидкістю дисоціації та визначення афінності ефектів авідності, які б спостерігалися з цільним дос. Міега та ін. було виявлено, що клон з найкращою швидкістю дисоціації був ідентифікований саме на етапі ранжування за Коїї, але не був би ідентифікований при застосуванні лише сили сигналу ІФА як критерія відбору.
Митгтгау, 9.В. та ін. "9. Мей. Спет. 57 (2014) 2845-2850) повідомляли про скринінг швидкості дисоціації (СШД) методом поверхневого плазмонного резонансу як про ефективний метод кінетичного відбору проб потенційного списку з хімічного простору неочищених продуктів реакції. Зазначено, що константа швидкості дисоціації Ка (ой-гаїє) є компонентом ліганд- білкового зв'язування, який має найбільш значний потенціал для посилення специфічної активності сполуки. Автори зазначають, що кінетичне вимірювання афінності протягом програми пошуку ліків Є більш інформативним, ніж визначення рівноважної афінності у стаціонарному стані. Наприклад, сполуку зі вдесятеро повільнішими швидкостями асоціації та дисоціації при оцінюванні рівноважними вимірюваннями афінності не відрізнили б. Більше того, автори виявили, що дані, одержані на приладі ВіІАсоге Т200, показали середню відмінність Ка у неочищених і очищених зразків 19 95, а ті ж самі дані, одержані на старішому приладі ВІАсоге
Т100, мали відмінність 15 95. За спостереженням авторів, Ка при порівнянні різних приладів і різних часів відрізняються в середньому лише на 30 95. Звідси видно, що слідове забруднення попередньою пробою, довготривале зберігання та різне обладнання помірно впливають на спостережувані Ка. Справді, ці малі девіації Ка цілком відображають різницю, яку спостерігали у багатолабораторних дослідженнях, де спостережувана варіабельність становила від 14 95 до 40 95 залежно від системи (Миїгтау, .В., та ін., У. Мед. Спет. 57 (2014) 2845-2850; Каїзатрва,
Р.5., та ін., Апаї. Віоспет. 352 (2006) 208-221).
У УМО 2014/189973 описано антитіла до рецептора трансферину і способи їх застосування.
Крім цього, повідомлено, що таргетування рецептора ГЕБ за допомогою традиційного специфічного високоафінного антитіла, як правило, призводило до обмеженого зростання транспорту через ГЕБ. Пізніше було виявлено, що серед досліджуваних антитіл до ГЕБ рівні проходження і розподілу антитіла у ЦНС обернено залежні від афінності його зв'язування з
Зо рецептором ГЕБ. Наприклад, низькоафінне антитіло до рецептора трансферину (ТІК) у терапевтичних дозах сильно поліпшувало транспорт антитіла до ТІК через ГЕБ і утримання в
ЦНС порівняно з більш афінним антитілом до ТІЖ, а також уможливлювало більш легке досягнення терапевтичних концентрацій у ЦНС (Аїмаї та ін., сі. Тгапві. Мей. З (2011) в4га43).
Доказ такого транспорту через ГЕБ було одержано при використанні біспецифічного антитіла, яке зв'язується з ТІК та ферментом, що розщеплює білок-попередник амілоїду (АРР), ВД- секретазою (ВАСЕЇ1). Одна системна доза біспецифічного антитіла до ТР/ВАСЕЇ1, сконструйованого з використанням низькоафінного антитіла, не тільки призводила до значного споживання антитіла головним мозком, але також різко знижувала рівні АВ1І-40 в мозку порівняно з самим лише моноспецифічним антитіллом до ВАСЕ1Т, змушуючи припустити, що проникність через ГЕБ впливає на специфічну активність антитіла до ВАСЕ1 (Аїмаї та ін., збі.
Тгапзві. Мед. З (2011) в4га43; Ми та ін., 5сі. Тгап5і. Мей. З (2011) в4га44).
Наявні дані та експерименти висвітлюють декілька причинних механізмів підвищення поглинання антитіла в ЦНС із використанням підходу "антитіло з нижчою афінністю".
По-перше, високоафінні антитіла до рецептора ГЕБ (Р-ГЕБ) (напр., антитіло до ТІК з Аїмаї та ін. ії Ми та ін., зхиргад обмежують споживання мозком через швидке насичення Р-ГЕБ в судинах мозку, таким чином зменшуючи загальну кількість антитіла, яке проходить у мозок, а також обмежуючи його розподіл по судинній системі. Навдивовижу, зниження афінності до Р-
ГЕБ покращує споживання мозком і розподіл в ньому, при цьому спостерігається стійке зміщення локалізації від судинної системи до нейронів та асоційованого нейропіля, розосередженого по ЦНС. Було виявлено, що афінність повинна бути нижче певного верхнього рівня і вище певного нижнього рівня.
По-друге, нижча афінність антитіла до Р-ГЕБ запропонована з метою погіршення здатності антитіла повертатися на судинний бік ГЕБ через Р-ГЕБ з ЦНО-боку мембрани, оскільки загальна афінність антитіла до Р-ГЕБ низька, а місцева концентрація антитіла на ЦНСОС-боці ГЕБ не є насичуючою через швидке розсіювання антитіла у просторі ЦНС.
По-третє, іп мімо, а також згідно спостережень за системою ТІК, антитіла з меншою афінністю до Р-ГЕБ не видаляються із системи так само ефективно, як антитіла з більшою афінністю до Р-ГЕБ, і тому залишаються у більшій циркулюючій концентрації, ніж їхні більш високоафінні відповідники. Це сприятливо, оскільки рівні циркулюючого антитіла з меншою бо афінністю утримуються на терапевтичному рівні протягом довшого періоду часу, ніж антитіла з вищою афінністю, що в свою чергу покращує поглинання антитіла мозком протягом довшого періоду часу. Більше того, це вдосконалення експозиції як у плазмі крові, так і в головному мозку може знизити частоту введення у клініці, що було б потенційно корисним не тільки для дотримання пацієнтом режиму терапії та його зручності, але також для зменшення будь-яких потенційних ефектів, не обумовлених дією на мішень, або побічних ефектів антитіла і/або приєднаної до нього терапевтичної сполуки.
В зазначених попередніх дослідженнях використовували мишачі антитіла, які специфічно зв'язувалися з мишачим ТІК, але які не розпізнавали специфічно ТІК приматів або людини.
Відповідно, тут надано антитіла та їх функціональні частини, які специфічно розпізнають ТІК як приматів, особливо яванських макак, так і людини, з метою сприяти дослідженням безпечності та ефективності антитіл на приматах перед терапевтичним або діагностичним застосуванням для людей.
Через постійне ускладнення аспектів конструювання антитіл та варіабельність, викликану різноманітністю клітинних систем рекомбінантного продукування для вироблення антитіл, дуже важливим є ретельне неклінічне оцінювання безпечності моноклональних антитіл (тАБ), призначених для терапевтичного застосування. Більше того, складна структура, унікальні біологічні функції та більш тривалий період напівжиття тАбБ порівняно з традиційними низькомолекулярними лікарськими сполуками посилюють міркування безпеки, як і занепокоєння з приводу тривалішого клінічного застосування тАб у лікуванні хронічних захворювань (І упси,
С.М., та ін., тАбз5 1 (2009) 2-11; Кіт, 5.., та ін., Мої. СеїІ5 20 (2005) 17-29).
Загальною метою неклінічних досліджень тАб є визначення токсикологічних властивостей досліджуваного тАБб і надання інформації для розробки продукту. Основними завданнями неклінічного оцінювання є (1) ідентифікація органів-мішеней токсичності та визначення того, чи оборотна ця токсичність після лікування, (2) ідентифікація безпечної початкової дози для клінічного дослідження І фази на людях та схем подальшого підвищення дози, (3) здобуття інформації для відстеження безпекових показників у клінічних дослідженнях та (4) здобуття даних про безпеку для обгрунтування тверджень інструкції до продукту. Для досягнення цих цілей проводять доклінічні дослідження як іп міїго, так і іп мімо, спрямовані на визначення та розуміння фармакологічних властивостей антитіла (Гупсп, С.М., та ін., тАб5 1 (2009) 2-11;
Зо Самадпаго, 9.А., в: Самадпаго, 9У.А. (Ед.) "Ргесіїпіса! заїтесу емаїІцайоп ої Біорпагтасеціїса!5";
НорокКеп, МУ: УМІеу 2008; 45-65).
З метою успішного доклінічного оцінювання безпечності тАб для перевірки токсичності слід вибирати найбільш придатний вид тварин (І упсі, С.М., та ін., тАбз5 1 (2009) 2-11; Спартап, К., та ін., Маї. Кем. Огид Оібсом. 6 (2007) 120-126). Придатний вид - це вид, у якого антитіло фармакологічно активне, наявний або експресується цільовий антиген, а профіль перехресної реактивності у тканинах подібний до людського (Гупсп, С.М., та ін., тАБр5 1 (2009) 2-11;
Спартангп, К., та ін., Маї. Кем. Огид Оізсом. 6 (2007) 120-126; Зибгатапуат, М. та Мегі5спіпо, Е., у: Самадпаго 9.А. (Е4д.); Ргесіїпіса! затеїу емаїчайоп ої рБіорпаптасешіса!є. НоброКеп, МУ: УМіеу 2008; 181-205; НаїІ, МУУ.С., та ін., у; Самадпаго, 9У.А. (Еа.); Ргесіїпіса! заїегу емаїчайоп ої ріорпаптасешіісаіє. НороКеп, МУ: УМіеу 2008; 207-240). Придатний вид тварин, який експресує бажаний епітоп та демонструє подібний до людських тканин профіль перехресної реактивності у тканинах, можна ідентифікувати з застосуванням імунохімічного або функціонального аналізів (Супси, С.М., та ін., тАбБз» 1 (2009) 2-11; НаїІ, МУ/.С., та ін., у: Самадпаго, 9.А. (Еа.); Ргесіїпіса! загеїу емаІцайоп ої ріорпаптасеціїсаіє. НобоКеп, Му: УМіІеу 2008; 207-240). Корисні у цьому процесі дослідження перехресної реактивності між видами включають імуногістохімічне обстеження тканин різних видів з використанням доступних у продажу мультивидових тканинних мікрочіпів (Супси, С.М., та ін., тАбБз» 1 (2009) 2-11; НаїІ, МУ/.С., та ін., у: Самадпаго, 9.А. (Еа.); Ргесіїпіса! загеїу емаІнайоп ої Бріорпаптасешісаіє. НороКеп, Му: МУпеу 2008; 207-240). Альтернативна оцінка зв'язування антитіла з клітинами цих тварин за допомогою проточного сортування клітин (ЕАС5) зазвичай є більш чутливою, ніж імуногістохімічний аналіз зрізів тканин (Гупсі, С.М., та ін., тАб5 1 (2009) 2-11; Зйибгатапуат, М. та Мегізспіпд, Е., у: Самадпаго .А. (Еа.); Ргесіїпіса! затеїу емаІцайоп ої ріорпагптасешіїса!є. НобоКеп, Му: ММПІеу 2008; 181-205). У видів слід порівнювати
ДНК- та амінокислотні послідовності цільового антигена; також слід визначати міжвидову гомологічність (Гупсп, С.М., та ін., тАб5 1 (2009) 2-11; 5иргатапуат, М. та Мегівспіпд, Е., у:
Самадпаго .А. (Еа.); Ргєсіїпіса! загеїу емаІйайоп ої БіорпнаптасеціісаІ5. НороКеп, М: УМПеу 2008; 181-205).
Крім цього, біорозподіл, функція та структура антигену у придатного виду тварин і людини повинні піддаватися порівнянню, щоб уможливити оцінку токсичності, яка виникає внаслідок зв'язування антитіла з цільовим антигеном і називається токсичністю, обумовленою дією на 60 мішень (Гупсі, С.М., та ін., тАбз 1 (2009) 2-11; 19,20). Більше того, значна подібність розподілу цільового антигена у тканинах виду тварин і людини збільшує імовірність того, що визначені на тваринах органи-мішені токсичності слугуватимуть передбаченням потенційної токсичності у людей. Недостатньо подібний розподіл антигена в тканинах виду тварин і людини не виключає використання цього виду тварин для досліджень токсичності повністю, але цю різницю слід враховувати при оцінюванні ризиків для людини. У відношенні густини або афінності антигенів також не вимагається абсолютної еквівалентності тваринної моделі та людини. Обгрунтування придатності виду, обраного для перевірки токсичності, слід включати у пакет документів для подання в регуляторний орган. Якщо для оцінювання безпеки використовують лише один вид, слід надати стислий підсумок експериментів, які показали відсутність додаткового придатного виду (Гупсп, С.М., та ін., тАбз 1 (2009) 2-11).
Якщо моноклональне антитіло, призначене для терапевтичного застосування, не має перехресної реактивності по виду, то для моделі слід використовувати або сурогатне антитіло, або інший вид. Тому сурогатні антитіла є потенційним вирішенням обмежень перевірки безпечності, можливих при роботі з гуманізованими моноклональними антитілами з обмеженою перехресною реактивністю по видам. Однак на даний момент немає чітких критеріїв оцінювання потенційних сурогатних антитіл перед їх використанням у визначенні ознак небезпечності лікарської речовини (Кедшіайогу Тохісоіоду апа Ріагтасоїіоду, том 40, номер 3, грудень 2004 р., с. 219-226).
Таким чином, для визначення тваринної моделі для конкретного тАб слід взяти до уваги вищеперелічені міркування. Тим не менш необхідна наявність перехресної реактивності досліджуваного тАБр з цільовим антигеном тестового виду. Інакше неможливо використати навіть найбільш придатний тестовий вид. Тому існує потреба у тАбБ, що не мають внутрішньовидової перехресної реактивності, але мають міжвидову перехресну реактивність зі своєю мішенню у людини і виду, призначеного для доклінічних випробувань.
А. Приклади антитіл до трансферину
Тут описано антитіла до рецептора трансферину, швидкість дисоціації яких при зв'язуванні з рецептором трансферину людини знаходиться у певному діапазоні для забезпечення належного транспорту через ГЕБ. Було виявлено, що цей діапазон визначається з одного боку швидкістю дисоціації мишачого антитіла 128.1 до рецептора трансферину (амінокислотні
Ко) послідовності варіабельного домену, наведені у ЗЕО ІЮ МО: 64 та 65), визначеною поверхневим плазмонним резонансом для рецептора трансферину яванської макаки, а з іншого боку - 5 95 від цієї швидкості дисоціації (тобто повільнішою у 20 разів дисоціацією). В одному з варіантів виконання швидкість дисоціації для рецептора трансферину людини становить від 0,1 1/с до 0,005 1/с, включно з цими значеннями.
Гуманізовані антитіла клону 299 згідно даного опису не можна було одержати із застосуванням стандартних технік гуманізації. Необхідно було ввести в амінокислотну послідовність нестандартні мутації з метою одержати гуманізоване антитіло зі швидкостями дисоціації при зв'язуванні з рецептором трансферину в бажаному діапазоні від 0,1 1/с до 0,005 1/с, включно з цими значеннями. Це особливо важливо з огляду на те, що описані тут антитіла розробляються для перетину гематоенцефалічного бар'єру людини з метою транспорту терапевтичного корисного навантаження у мозок.
Було виявлено, що для одержання підходящого і придатного для розробки гуманізованого антитіла потрібно було замінити два цистеїнових амінокислотних залишки у легкому ланцюзі батьківського кролячого антитіла на проліновий і аспарагіновий амінокислотні залишки, відповідно. Додатково для утримання в заданому діапазоні швидкості дисоціації сериновий залишок посередині кролячої СОРІ З слід було замінити на аланіновий залишок.
Крім цього, було виявлено, що сприятливою є зміна трьох амінокислотних залишків у важкому ланцюзі у положеннях 65, 1009 та 105 (нумерація за Кабай.
Вся нумерація, застосована тут і далі, базується на схемі нумерування варіабельних доменів за Кабаї.
Клон 299 кролячого антитіла до трансферину показав властивості, порівнянні з властивостями антитіла 128.1 до рецептора трансферину. Це можна побачити з наступної
Таблиці.
трансцитозне увранецитоз загальний загальний сумарно джерело навантаження | 95 базолате- базолате- - М - - апікальний (пг)| | перенесено |(пг (пгі ральний ральний (пгі тА 128.1 2226 1229 1986 2773 346 2344 наванта- загальний загальний сумарно ЕС5О |нг/млі о базолате- й - о о джерело ження У тАр ральний 9 апікальний 95 | перенесено 95| ЕАС5 пТІВ- о . 28.1 тАб 128.1 Н 128.1 тА 128.1 тАбр 128 128 сно тАр128.1,. |... 100 | 100 | 100 | 100 | 96 2 НКе«Ж(І) макс. геом. сер відношення макс. макс. геом. сер. ЕС50О Інг/мл| ' ; І відношення акака ТІ- ЕС5О макака/ джерело РЛТТВ-СНО 0 БАСЗсутв "М макака/ сно людина людина тА 1284 78200 5200 3103331 06 1 55600 52000 | 08 | 10
ВІіАсоге ВІіАсоге відношення швидкість ВІАсоге П/2 швидкість ВІАсоге П1/2 джерело пий сш 1/2 людина/ дисоціації пит (хві дисоціації макака ТІК (хві макака пит 1/сі) суті (1/с тА 128.1 6,06Е-04 5,АТЕ-02 6,16Е-04 2,77Е-04
У наступній Таблиці показано швидкості дисоціації варіантів гуманізації кролячого варіабельного домена легкого ланцюга клону 299 у комбінації з варіантами гуманізації кролячого варіабельного домена важкого ланцюга клону 299. Партнером зв'язування був рецептор трансферину людини (визначення при 25 "С). мот т | 2 15 | 6 | 7 | в 9 | "| » 0 (10) | 4.34Е-04 | 9.08Е-04 | 8.06Е-04 | 7.72Е-04 | 6.63Е-04 | 5.15Е-04 | 4.06Е-04 | 9.01Е-04 | 9.05Е-04 | 9.21Е-04 5.69Е-03 | 1.00Е-03 | 1.00Е-0О3 | 1.00Е-03 | 1.00Е-03 | 7.52Е-03 | 3.19Е-03 | 6.94Е-0О3 | 1.00Е-03 | 1.00Е-03 1.25Е-03 | 2.86Е-03 | 2.75Е-03 | 2.А1Е-03 | 1.87Е-03 | 1.31Е-03 | 1.01Е-0О3 | 3.99Е-03 | 3.85Е-03 | 6.35Е-03 1.32Е-03 | 4.31Е-03 | 3.84Е-0О3 | 3.16Е-03 | 2.82Е-03 | 1.45Е-03 | 1.00Е-03 | 4.17Е-0О3 | 5.65Е-03 | 5.86Е-03 1.36Е-03 | 2.56Е-03 | 2.63Е-03 | 2.38Е-03 | 1.87Е-0О3 | 1.25Е-03 | 7.88Е-04 | 2.70Б-03 | 3.88Е-03 | 3.11Е-0О3 1.94Е-03 | 2.71Е-03 | 2.62Е-03 | 2.53Е-03 | 1.66Е-0О3 | 1.35Е-03 | 1.07Е-03 | 3.50БЕ-03 | 4.56Е-03 | 5.82Е-03
І 6 | 1.90Е-03 | 5.38Е-03 | 5.55Е-03 | 4.64Е-03 | 3.06Е-0О3 | 1.97Е-0О3 | 1.40Е-0О3 | 6.83Е-0О3 | 6.71Е-03 | 7.05Е-03 4.63Е-03 | 7.33Е-03 | 7.50Е-03 | 6.97Е-03 | 5.63Е-0О3 | 3.66Е-0О3 | 2.31Е-03 | 7.61Б-03 | 7.81Е-03 | 7.71Е-О3
І 8 | 1.39Е-03 | 4.85Е-03 | 3.94Е-0О3 | 3.78Е-03 | 3.01Е-0О3 | 1.72Е-03 | 1.16Е-03 | 5.23Е-0О3 | 5.52Е-03 | 5.31Е-0О3 9-ММА | 1.41Е-03 | 2.А6Е-03 | 2.21Е-03 | 2.03Е-03 | 1.41Б-03 | 1.21Е-03 | 1.01Е-03 | 2.52Е-03 | 2.42Е-03 | 2.19Е-03 1.88Е-03 | 6.77Е-03 | 6.49Е-03 | 6.53Е-03 | 4.55Е-03 | 2.64Е-03 | 1.73Е-03 | 7.19Е-03 | 7.16Е-03 | 7.79Е-03 5.41Е-03 | 7.05Е-03 | 8.14Е-0О3 | 1.00Е-03 | 7.78Е-0О3 | 7.75Е-0О3 | 6.72Е-03 | 1.00Е-0О3 | 7.87Е-03 | 1.00Е-03 1.78Е-03 | 2.99Е-03 | 2.44Е-03 | 2.33Е-03 | 2.20Е-03 | 1.53Е-03 | 1.04Е-03 | 3.32Е-0О3 | 3.51Е-03 | 5.А6Е-03 6.63Е-03 | 6.69Е-03 | 6.38Е-03 | 6.37Е-03 | 4.21Е-0О3 | 2.73Е-0О3 | 1.81Е-03 | 7.39Е-03 | 7.09Е-03 | 7.76Е-03 1.49Е-03 | 7.56Е-03 | 7.12Е-03 | 7.45Е-03 | 7.17Е-03 | 1.87Е-03 | 1.12Е-03 | 4.25Е-0О3 | 7.55Е-03 | 7.27Е-0О3 го вом 0 (10) | 4.82Е-04 | 7.63Е-04 | 6.53Е-04 | 4.13Е-04 | 1.09Е-03 | 1.00Е-03 | 1.11Е-03 | 5.65Е-04 | 5.06Е-04 | 3.38Е-04 1.00Е-03 | 7.72Е-03 | 7.71Е-03 | 4.33Е-03 | 1.00Е-0О3 | 1.00Е-03 | 1.00Е-03 | 7.71Е-0О3 | 5.78Е-03 | 2.80Е-03 2.46Е-03 | 2.16Е-03 | 1.97Е-0О3 | 1.05Е-03 | 4.89Е-03 | 7.69Е-03 | 5.25Е-03 | 1.38Е-0О3 | 1.26Е-03 | 7.15Е-04 2.77Е-03 | 2.07Е-0О3 | 1.73Е-0О3 | 8.43Е-04 | 6.65Е-0О3 | 1.00Е-03 | 7.15Е-03 | 1.94Е-03 | 1.43Е-03 | 7.83Е-04 1.30Е-03 | 1.34Е-03 | 1.27Е-03 | 7.23Е-04 | 3.35Е-0О3 | 1.00Е-03 | 4.36Е-03 | 1.46Е-0О3 | 1.18Е-03 | 7.61Е-04 2.18Е-03 | 2.14Е-03 | 2.23Е-03 | 1.23Е-03 | 3.49Е-03 | 1.00Е-03 | 3.52Е-03 | 1.37Е-0О3 | 1.4А1Е-0О3 | 8.80Е-04
І 6 | 3.65Е-03 | 3.50Е-03 | 3.39Е-03 | 1.71Е-03 | 6.74Е-0О3 | 1.00Е-03 | 6.06Е-03 | 2.07Е-0О3 | 2.14Е-03 | 1.16Е-03 6.68Е-03 | 5.43Е-03 | 5.25Е-03 | 2.33Е-03 | 7.66Е-0О3 | 1.00Е-03 | 7.14Е-03 | 2.38Е-0О3 | 3.37Е-03 | 1.55Е-03 (8 | 2.А7Е-03 | 2.09Е-03 | 1.97Е-03 | 1.11Е-03 | 6.77Е-0О3 | 6.71Е-0О3 | 6.58Е-03 | 1.74Е-0О3 | 1.65Е-03 | 9.А1Е-04 9-ММА | 1.39Е-03 | 1.42Е-03 | 1.36Е-03 | 9.34Е-04 | 2.21Е-0О3 | 6.17Е-03 | 1.89Е-03 | 1.13Е-03 | 1.26Е-03 | 7.69Е-04 5.89Е-03 | 3.99Е-03 | 4.24Е-03 | 1.88Е-03 | 7.46Е-03 | 1.00Е-03 | 7.05Е-03 | 2.11Е-03 | 2.09Е-03 | 1.20Е-03 7.85Е-03 | 7.64Е-03 | 7.54Е-03 | 2.84Е-О3 | 1.00Е-03 | 1.00Е-03 | 1.00Е-03 | 7.54Е-03 | 6.44Е-О3 | 1.87Е-03 2.22Е-03 | 1.94Е-03 | 1.75Е-0О3 | 1.05Е-03 | 3.00Е-0О3 | 7.96Е-03 | 2.39Е-03 | 1.03Е-0О3 | 1.12Е-03 | 7.33Е-04 7.11Е-03 | 6.03Е-03 | 4.77Е-03 | 1.56Е-0О3 | 7.58Е-03 | 1.00Е-03 | 7.85Е-03 | 1.92Е-03 | 1.79Е-03 | 9.86Е-04 3.39Е-03 | 1.69Е-03 | 1.66Е-0О3 | 9.88Е-04 | 5.30ОБЕ-0О3 | 1.00Е-03 | 4.57Е-03 | 9.97Е-04 | 9.38Е-04 | 6.94Е-04
Комбінацію МН2З та МІ 9 обрали в якості початкової точки для подальшого конструювання з метою розробки сайту зв'язування, який би більш точно відображав зв'язувальні властивості антитіла 128.1 щодо рецептору трансферину яванських макак у відношенні зв'язування з рецептором трансферину людини.
У наступній Таблиці показане порівняння швидкостей дисоціації різних прикладів варіантів
МНа23 та МІ 9, а також різних інших варіантів гуманізації варіабельного домену для рецептору трансферину людини (визначених згідно Прикладу 14, 25 "С). 777777. | мке- | мке- | Уукео- | мке- |Мн5б-| МУкто- | УкКт7- | УктІБ- | Уко- |УКБ 777.77. | ММА | 8МУА | су5 | СУБ |Р.МУА|Ї ну | ту5 | АУБ | 5У5 | 55 3.95Е-02 3.73Е-03|12-33Е-0З!Ї /Г(О111Ї111171111171сГ111їг1 3.75Е-03151Е03177717111111Ї1111Г111111Г
Уне-рАМеа |182Е-03Ї | 652031 | 7777/7777 4о2Е02 уне-рдОв | аБЕ-03Ї ЇЇ 11111111
З3.О8БЕ- мто| | 111111 еталон: 128.1-7.78Е-02 (визначено для рецептору трансферину яванських макак).
У наступній Таблиці показане порівняння кінетичних даних різних прикладів варіантів МН2З та МІ 9 (визначених згідно Прикладу 13).
УН2гЗ-ОАЗС/М 09-МУА 0000 людина 00) зе» | везе
МнН2г3-ОПАМС/МІ 09-МЖМА люди | 8.83Е-03 1.55Е--05
У наступній Таблиці показано швидкості дисоціації варіантів гуманізації мишачого варіабельного домена легкого ланцюга клону 494 у комбінації з варіантами гуманізації мишачого варіабельного домена важкого ланцюга клону 494. Партнером зв'язування був рецептор трансферину людини.
Ун-- 1.36Е-04 1.37Е-04 1.56Е-04 1.48Е-04 1.77Е-04 3.70Е-04 АЛОЕ-04 4.5АЕ-04 4.76Е-04 4.АВЕ-04 3.64Е-04 3.99Е-04 4.26Е-04 4.15Е-04 4.38Е-04 3.39Е-04 3.86Е-04 4.З0Е-04 4.ЗАЕ-04 4.52Е-04 5.А2Е-04 6.57Е-04 7.03Е-04 6.83Е-04 7.05Е-04 5.А4АЕ-04 6.84Е-04 7.17Е-04 7.17Е-04 7.28Е-04 00600000 381-004 4.86Е-04 5.27Е-04 5.БОЕ-04 5.Б2Е-04 2.32Е-04 2.7АЕ-04 2.99Е-04 3.06Е-04 3.26Е-04
Більш детально, в одному з аспектів винахід частково базується на виявленні того, що антитіло до рецептора трансферину згідно наданого тут опису може бути застосоване в якості транспортного модуля через гематоенцефалічний бар'єр для доставки об'єкта-ефектора мозку через гематоенцефалічний бар'єр у головний мозок. У певних варіантах виконання транспортний модуль через гематоенцефалічний бар'єр являє собою одновалентний зв'язувальний об'єкт, який специфічно зв'язується з рецептором трансферину. Антитіла до рецептора трансферину згідно даного опису при застосуванні в якості транспортного модуля через гематоенцефалічний бар'єр корисні, напр., для діагностики або лікування неврологічних порушень, таких як хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та хвороба Альцгеймера з
Зо супутньою хворобою Паркінсона.
Було виявлено, що антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга за 5ЕО ІЮ
МО: 24 та варіабельний домен легкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 37, у відношенні рецептора трансферину людини відображає властивості зв'язування мишачого антитіла 128.1 у відношенні рецептора трансферину яванських макак, що стосуються швидкості дисоціації зв'язування.
Відповідно, одним з описаних тут аспектів є ізольоване антитіло, що зв'язується з рецептором трансферину людини (пиТ'К) та рецептором трансферину яванських макак (сут'К), причому антитіло має швидкість дисоціації, визначену методом поверхневого плазмонного резонансу для рецептору трансферину людини, в діапазоні від 0,1 1/с до 0,005 1/с.
Іншим описаним тут аспектом є застосування антитіла або фрагмента антитіла, що зв'язується з рецептором трансферину людини (пиТІК) та рецептором трансферину яванських макак (сутТІКк), причому антитіло має швидкість дисоціації, визначену методом поверхневого плазмонного резонансу для рецептору трансферину людини, в діапазоні від 0,1 1/с до 0,005 1/с, для доставки терапевтичного об'єкта через гематоенцефалічний бар'єр.
В одному з варіантів виконання швидкість дисоціації визначена при 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 15,625 таб нм.
В одному з варіантів виконання швидкість дисоціації визначена з використанням чіпа для поверхневого плазмонного резонансу з біотиновою поверхнею та рухомим буфером 1хФСоБ з додаванням 250 мМ хлориду натрію при швидкості потоку 10 мкл/хв.
В одному з варіантів виконання асоціацію відслідковували протягом 180 секунд, а дисоціацію відслідковували протягом 600 секунд.
В одному з варіантів виконання швидкість дисоціації визначали на ВіАсоге Т200.
В одному з варіантів виконання швидкість дисоціації становить від 0,08 1/с до 0,008 1/с.
В одному з варіантів виконання всіх аспектів швидкість дисоціації визначають при 25 "С.
В одному з варіантів виконання всіх аспектів швидкість дисоціації є швидкістю дисоціації, визначеною при 25 "С.
Одним з описаних тут аспектів є антитіло до рецептора трансферину, яке специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини (пит'К) та рецептором трансферину яванських макак (сутк) та включає І) гуманізований варіабельний домен важкого ланцюга, що походить від варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІО МО: 01, та ІІ) гуманізований варіабельний домен легкого ланцюга, що походить від варіабельного домену легкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 26, при цьому варіабельний домен легкого ланцюга у положенні 80 має проліновий
Зо амінокислотний залишок (Р), у положенні 91 аспарагіновий амінокислотний залишок (М) ї у положенні 93 аланіновий амінокислотний залишок (А) (нумерація за системою Кабаїй).
В одному з варіантів виконання антитіло додатково має у положенні 1009 варіабельного домену важкого ланцюга (нумерація за Кава!) амінокислотний залишок серину (5).
В одному з варіантів виконання антитіло додатково має у положенні 65 варіабельного домену важкого ланцюга (нумерація за Кабаї) амінокислотний залишок серину (5).
В одному з варіантів виконання антитіло додатково має у положенні 105 варіабельного домену важкого ланцюга (нумерація за Кабаї) амінокислотний залишок глутаміну (0).
Одним з описаних тут аспектів є антитіло до рецептора трансферину, яке специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини (пиТК) та рецептором трансферину яванських макак (сут) та включає І) гуманізований варіабельний домен важкого ланцюга, що походить від варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІО МО: 01, та ІІ) гуманізований варіабельний домен легкого ланцюга, що походить від варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 26, при цьому антитіло має швидкість дисоціації в одиницях виміру 1/с для рецептора трансферину людини, яка менша або дорівнює (тобто щонайбільше є рівною) швидкості дисоціації в одиницях виміру 1/с антитіла 128.1 до рецептора трансферину для рецептора трансферину яванських макак, де швидкості дисоціації визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, і де антитіло 128.1 до рецептора трансферину має варіабельний домен важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 64 та варіабельний домен легкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 65.
В одному з варіантів виконання антитіло має швидкість дисоціації в одиницях виміру 1/с для рецептора трансферину людини, яка Ї) менша або дорівнює (тобто щонайбільше є рівною) швидкості дисоціації в одиницях виміру 1/с антитіла 128.1 до рецептора трансферину для рецептора трансферину яванських макак та Ії) більша або дорівнює (тобто щонайменше є рівною) 595 швидкості дисоціації в одиницях виміру 1/с антитіла 128.1 до рецептора трансферину для рецептора трансферину яванських макак.
Одним з описаних тут аспектів є антитіло до рецептора трансферину, яке специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини (пиТІК) та рецептором трансферину яванських макак (суткК). У певних варіантах виконання антитіло до рецептора трансферину - зв'язується з рецептором трансферину людини (пиТїЖк) та рецептором трансферину яванських макак (сут'К); бо - має швидкість дисоціації в одиницях виміру 1/с для рецептора трансферину людини, яка менша або дорівнює (тобто щонайбільше є рівною) швидкості дисоціації антитіла 128.1 до рецептора трансферину для рецептора трансферину яванських макак, де швидкості дисоціації визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, і де антитіло 128.1 до рецептора трансферину має варіабельний домен важкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 64 та варіабельний домен легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 65; - зв'язується з рецептором трансферину людини зі швидкістю дисоціації від 0,1 1/с до 0,005 1/с, включно з цими значеннями.
В одному аспекті забезпечене антитіло до рецептора трансферину, що включає принаймні одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 66; (б) НМАК-Н2, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 68; (в) НМА-Н3З, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 71, 72 або 73; (г) НМК-І1, що включає амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 75; (г) НМК-12, що включає амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО: 76; та (д) НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО: 78.
В одному аспекті винаходом забезпечене антитіло, що включає принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МН НМК, вибрані з (а) НМК-НІ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 66; (б) НМАК-Н2, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 68; та (в) НМА-НЗ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 71 або 72 або 73. В одному аспекті винаходом забезпечене антитіло, що включає принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МН НМЕ, вибрані з (а)ж НМЕК-НІ, що включає амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 66; (б) НМАК-Н2, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 68; та (в) НМАК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 72. В одному аспекті винаходом забезпечене антитіло, що включає принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (а) НМА-НІ, що включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 66; (б) НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 68; та (в) НМА-НЗ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 73. В одному із варіантів виконання антитіло включає НМЕК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 71 або 72 або 73. В одному із варіантів виконання антитіло включає НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 71 або 72 або 73, та НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 78. В одному із варіантів виконання антитіло включає НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 71 або 72 або 73, НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 78, та НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 68. У подальшому варіанті виконання антитіло включає (а) НМЕА-НІ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 66; (б) НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО: 68; та (в) НМАК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 72.
В іншому аспекті винаходом забезпечене антитіло, що включає принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МІ НМ, вибрані з (а) НМК-Ї71, що включає амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 75; (б) НМЕ-12, що включає амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 76; та (в) НМЕА-І3, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 78. В одному із варіантів виконання антитіло включає (а) НМК-1І1, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 75; (6) НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 76; та (в) НМЕ-І3, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 78.
В іншому аспекті антитіло згідно винаходу включає (а) домен УН, що включає принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (І) НМЕК-НІ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО І МО: 66, (І) НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 68, та (ІІ) НМЕ-НЗ, що включає амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО: 71 або 72 або 73, та (б) домен МІ, що включає принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані з (І) НМК-І1, що включає амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 75, (Ії) НМК-12, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 76, та (в) НМЕА-
ІЇ3, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 78.
В іншому аспекті винаходом забезпечене антитіло, яке включає (а) НМАК-НІ, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 66; (6) НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 68; (в) НМА-НЗ, що включає амінокислотну послідовність «ЕО ІО МО: 72; (гу НМК-І11, що включає амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 75; (г) НМК-12, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 76; та (д) НМК-ЇЗ3, що включає амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО: 78.
В будь-якому з вищеперелічених варіантів виконання антитіло до рецептора трансферину гуманізоване. В одному із варіантів виконання антитіло до рецептора трансферину включає бо НМЕ згідно будь-якого з вищеперелічених варіантів виконання і додатково включає акцепторну каркасну ділянку людини, напр., каркасну ділянку імуноглобуліну людини або консенсусну каркасну ділянку людини.
В іншому аспекті антитіло до рецептора трансферину включає послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН), яка принаймні на 90 95, 91 Фо, 92 Фо, 93 9о, 94 95, 95 Фо, 96 Фо, 97 Фо, 9895, 99 95, або на 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮО МО: 24, та має приблизно таку саму швидкість дисоціації що й антитіло, яке включає послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН) за ЗЕО ІЮ МО: 24. У певних варіантах виконання
МН-послідовність, ідентична принаймні на 90 95, 91 95, 92 Фо, 93 95, 94 Фо, 95 Ус, 96 9о, 97 Чо, 98 90 або на 99 95, містить заміщення (напр., консервативні заміщення), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, однак антитіло до рецептора трансферину, що включає таку послідовність, зберігає здатність зв'язуватися з рецептором трансферину з такою ж швидкістю дисоціації. У певних варіантах виконання в ЗЕО ІЮО МО: 24 заміщено, вставлено і/або видалено всього від 1 до 10 амінокислот. У певних варіантах виконання заміщення, інсерції або делеції відбуваються у ділянках поза НМК (тобто у ЕК). Антитіло до рецептора трансферину необов'язково включає МН-послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 24, включно з посттрансляційними модифікаціями цієї послідовності. У конкретному варіанті виконання УН включає одну, дві або три НМКЕК, вибрані з: (а) НМАЕ-НІ, що включає амінокислотну послідовність 560 І МО: 66, (б)
НМВ-Н2, що включає амінокислотну послідовність 56 ІЮО МО: 68, та (в) НМАК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 72.
В іншому аспекті надане антитіло до рецептора трансферину, де антитіло включає послідовність варіабельного домену легкого ланцюга (МІ), яка принаймні на 90 95, 91 95, 92 95, 93 9, 94 95, 95 9, 96 95, 97 90, 98 9, 99 95, або на 100 95 ідентична амінокислотній послідовності
ЗЕО ІЮ МО: 37, та має приблизно таку саму швидкість дисоціації, що й антитіло, яке включає послідовність варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) за ЗЕО ІЮ МО: 37. У певних варіантах виконання Мі -послідовність, ідентична принаймні на 90 9, 91 Фо, 92 У, 93 Уо, 94 95, 95 Фо, 96 9о, 97 95, 9895 або на 99 95, містить заміщення (напр., консервативні заміщення), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, однак антитіло до рецептора трансферину, що включає таку послідовність, зберігає здатність зв'язуватися з рецептором трансферину з такою ж швидкістю дисоціації. У певних варіантах виконання в 5ЕО ІЮО МО: 37 заміщено, вставлено іМабо видалено всього від 1 до 10 амінокислот. У певних варіантах виконання заміщення, інсерції або делеції відбуваються у ділянках поза НМК (тобто у ЕК). Антитіло до рецептора трансферину необов'язково включає Мі-послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 37, включно з посттрансляційними модифікаціями цієї послідовності. У конкретному варіанті виконання М. включає одну, дві або три НМК, вибрані з: (а) НМК-11, що включає амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 75; (б) НМК-12, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 76; та (в) НМЕА-
ЇЗ3, що включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 78.
В іншому аспекті надане антитіло до рецептора трансферину, де антитіло включає МН за будь-яким з вищевикладених варіантів виконання та Мі за будь-яким з вищевикладених варіантів виконання. В одному з варіантів виконання антитіло включає МнН- та Мі - послідовності за ЗЕО ІЮ МО: 24 та 5БЕО ІЮО МО: 37, відповідно, включно з посттрансляційними модифікаціями цих послідовностей.
У подальшому аспекті винаходу антитіло до рецептора трансферину за будь-яким з вищевикладених варіантів виконання є моноклональним антитілом, включно з химерним, гуманізованим або людським антитілом. В одному із варіантів виконання антитіло до рецептора трансферину є фрагментом антитіла, напр., Ем, Раб, Рабр", зсЕм, діатілом або фрагментом
К(абв")2. В іншому варіанті виконання антитіло є повнорозмірним антитілом, напр., інтактним антитілом ІДС1 або іншого класу чи ізотипу згідно наданого тут визначення.
В одному з варіантів виконання всіх аспектів антитіло приєднане до лікарської сполуки.
В одному з варіантів виконання всіх аспектів антитіло приєднане до засобу отримання зображень або мітки.
В іншому варіанті виконання антитіло є мультиспецифічним антитілом, і лікарська сполука необов'язково утворює одну з частин мультиспецифічного антитіла. В одному з таких варіантів виконання мультиспецифічне антитіло включає перший антигензв'язувальний сайт, що зв'язується з ТІК, і другий антигензв'язувальний сайт, що зв'язується з мозковим антигеном. В одному з таких аспектів мозковий антиген вибраний з групи, яка складається з: бета-секретази 1 (ВАСЕЇТ), Абега, рецептора епідермального фактору росту (ЕСЕК), рецептора епідермального фактору росту людини 2 (НЕКЗ), тау-білка, аполіпопротеїну Е (АроЕЄ), альфа-синуклеїну, СО20, гантінгтіну, пріонового білка (РгР), багатої на лейцинові повтори кінази 2 (І ККК2), паркіну, пресеніліну 1, пресеніліну 2, гамма-секретази, рецептора смерті 6 (ОКб), білка- попередника бо амілоїду (АРР), рецептора нейротрофіну р75 (р/5МТК), глюкоцереброзидази і каспази 6. В іншому варіанті виконання мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з ВАСЕ1. В іншому варіанті виконання мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з Абеїа. В іншому варіанті виконання мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з альфа- синуклеїном. В іншому варіанті виконання мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з С020. В іншому варіанті виконання мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, такі з глюкоцереброзидазою. В іншому варіанті виконання лікарська сполука є лікарським засобом від неврологічного порушення.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечений фармацевтичний склад, що включає будь-яке із вищезгаданих антитіл та фармацевтично прийнятний носій.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечене будь-яке із вищезгаданих антитіл для застосування як лікарського засобу.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечене застосування будь-якого із вищезгаданих антитіл для виробництва лікарського засобу для лікування неврологічного порушення. В одному із варіантів виконання неврологічне порушення вибране з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, порушення захворювання очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу та запалення ЦНС.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечене будь-яке із вищезгаданих антитіл для застосування у лікуванні неврологічного порушення. В одному із варіантів виконання неврологічне порушення вибране з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, порушення захворювання очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу та запалення ЦНС.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечене будь-яке із вищезгаданих антитіл для застосування у транспортуванні однієї або більше сполук через ГЕБ.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання забезпечене застосування будь- якого із вищезгаданих антитіл у виробництві лікарського засобу для транспортування однієї або
Зо більше сполук через ГЕБ.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання забезпечено спосіб транспортування сполуки через ГЕБ суб'єкта який включає піддавання будь-якого із вищезгаданих антитіл дії ГЕБ таким чином, що антитіло переносить приєднану до нього сполуку через ГЕБ. В одному з варіантів виконання ГЕБ знаходиться у суб'єкта-людини. В одному з варіантів виконання антитіло, приєднане до сполуки, вводять у терапевтичній дозі. В одному з варіантів виконання терапевтична доза є такою, що насичує ТІК. В іншому варіанті виконання антитіло вводять в дозі і/або з частотою введення дози, підібраною так, щоб мінімізувати гострі клінічні симптоми введення антитіла.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання забезпечено спосіб підвищення експозиції ЦНС суб'єкта до сполуки, який включає піддавання будь-якого із вищезгаданих антитіл дії ГЕБ таким чином, що антитіло переносить приєднану до нього сполуку через ГЕБ. В одному з варіантів виконання ГЕБ знаходиться у суб'єкта-людини. В одному з варіантів виконання антитіло, приєднане до сполуки, вводять у терапевтичній дозі. В одному з варіантів виконання терапевтична доза є такою, що насичує ТІК. В іншому варіанті виконання антитіло вводять в дозі і/або з частотою введення дози, підібраною так, щоб мінімізувати гострі клінічні симптоми введення антитіла.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання забезпечено спосіб підвищення утримання введеної суб'єктові сполуки в ЦНС, який включає піддавання будь-якого із вищезгаданих антитіл дії ГЕБ таким чином, що утримання сполуки в ЦНС підвищується. В одному з варіантів виконання антитіло, приєднане до сполуки, вводять у терапевтичній дозі. В одному з варіантів виконання терапевтична доза є такою, що насичує ТІК. В іншому варіанті виконання антитіло вводять в дозі або з частотою введення дози, підібраною так, щоб мінімізувати гострі клінічні симптоми введення антитіла.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання забезпечено спосіб лікування неврологічного порушення у ссавця, який включає лікування ссавця будь-яким із вищезгаданих антитіл. В одному із варіантів виконання неврологічне порушення вибране з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, порушення захворювання очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу бо та запалення ЦНС. В одному з варіантів виконання неврологічне порушення виникає у суб'єкта-
людини. В одному з варіантів виконання антитіло, приєднане до сполуки, вводять у терапевтичній дозі. В одному з варіантів виконання терапевтична доза є такою, що насичує ТІК.
В іншому варіанті виконання антитіло вводять в дозі і/або з частотою введення дози, підібраною так, щоб мінімізувати гострі клінічні симптоми введення антитіла.
В одному з варіантів виконання антитіло модифіковане за однією або більше властивостей, вибраних з ефекторної функції Ес-ділянки антитіла, функції активації комплементу антитілом, а також афінності антитіла до ТІК.
В одному з варіантів виконання властивість є ефекторною функцією Ес-ділянки антитіла.
В одному з варіантів виконання властивість є функцією активації комплементу антитілом.
В одному з варіантів виконання властивість є афінністю антитіла до ТІК.
В одному з варіантів виконання ефекторна функція або функція активації комплементу зменшені або усунені порівняно з антитілом того ж ізотипу дикого типу. В одному з варіантів виконання ефекторна функція зменшена або усунена методом, вибраним зі зниження глікозилювання антитіла, модифікації ізотипу антитіла до ізотипу, який має природно знижену або усунену ефекторну функцію, а також модифікації Ес-ділянки.
В одному з варіантів виконання ефекторна функція зменшена або усунена зниженням глікозилювання антитіла. В одному з варіантів виконання глікозилювання антитіла знижують методом, вибраним з: продукування антитіла у середовищі, яке улеможливлює дикотипне глікозилювання; видалення вже наявних у антитіла вуглеводневих груп; а також модифікації антитіла таким чином, щоб дикотипне глікозилювання не відбувалося.
В одному з варіантів виконання глікозилювання антитіла знижують методом продукування антитіла у середовищі, яке ууоеможливлює дикотипне глікозилювання, таким як продукування у системі клітин-продуцентів, які не є клітинами ссавців, або ж синтетичне продукування антитіл.
В одному з варіантів виконання антитіло продукують у системі клітин-продуцентів, які не є клітинами ссавців. В іншому варіанті виконання антитіло продукують синтетично.
В одному з варіантів виконання глікозилювання антитіла знижують методом модифікації антитіла таким чином, щоб дикотипне глікозилювання не відбувалося, таким як включення у Ес- ділянку антитіла мутації в положенні 297, так що дикотипний аспарагіновий залишок в цьому положенні заміщується іншою амінокислотою, яка перешкоджає глікозилюванню в цьому
Зо положенні.
В одному з варіантів виконання ефекторна функція зменшена або усунена принаймні однією модифікацією Ес-ділянки. В одному з варіантів виконання ефекторна функція або функція активації комплементу зменшені або усунені делецією всієї Ес-ділянки або її частини, або ж конструюванням такого антитіла, яке не містить Ес-ділянки чи ділянки, що відрізняється від Ес- ділянки і компетентна для ефекторної функції або функції активації комплементу. В одному з варіантів виконання принаймні одна модифікація Ес-ділянки вибрана з: точкової мутації Ес- ділянки з метою погіршити зв'язування з одним або більше Ес-рецепторами, вибраної з наступних положень: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 30 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 та 439; точкової мутації Ес-ділянки з метою погіршити зв'язування з Сід, вибраної з наступних положень: 270, 322, 329 та 321; усунення всієї Ес- ділянки або її частини, і точкової мутації в положенні 132 домену СНІ. В одному з варіантів виконання модифікація є точковою мутацією Ес-ділянки з метою погіршити зв'язування з С1а4, вибраною з наступних положень: 270, 322, 329 та 321. В іншому варіанті виконання модифікація є усуненням всієї Ес-ділянки або її частини. В іншому варіанті виконання функція приведення комплементу в дію зменшена або усунена делецією всієї Ес-ділянки або її частини, або ж конструюванням такого антитіла, яке не містить Ес-ділянки, яка бере участь у шляху комплементу. В одному з варіантів виконання антитіло вибране з Бар або одноланцюгового антитіла. В іншому варіанті виконання ділянку антитіла, що відрізняється від Ес-ділянки, модифікують з метою зменшення або усунення активації антитілом шляху комплементу. В одному з варіантів виконання модифікація є точковою мутацією ділянки СНІ з метою погіршити зв'язування з С3. В одному з варіантів виконання точкова мутація знаходиться у положенні 132 (див., напр., Мідагіе та ін., 9. ВіоЇ. Спет. 276 (2001) 38217-38223).
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання знижують афінність антитіла до
ТІК порівняно з дикотипним антитілом того ж ізотипу, афінність якого до ТІК не знижена. В одному такому аспекті антитіло має Ко або ІСво для ТІК від приблизно 1 пМ до приблизно 100
МКМ.
В одному із варіантів виконання в антитіла згідно даного опису вимкнена ефекторна функція. В одному з варіантів виконання антитіло не має ефекторної функції. В одному з бо варіантів виконання антитіло належить до підкласу людських Ідс1 і має в обох важких ланцюгах мутації І 234А, І 235А та РЗ29О (нумерація згідно покажчика ЄО системи Кабаю.
В одному з варіантів виконання антитіло є а) повнорозмірним антитілом підкласу ЇДО1 людини, або б) повнорозмірним антитілом підкласу Ідо4 людини, або в) повнорозмірним антитілом підкласу ЇДС1 людини з мутаціями І 234А, І 235А та РЗ290, г) повнорозмірним антитілом підкласу Ідс54 людини з мутаціями 5228Р, 1235Е та необов'язково РЗ290О, г) повнорозмірним антитілом підкласу (3901 людини з мутаціями І 234А, І235А та РЗ3290 в обох важких ланцюгах, а також мутаціями Т366УУ і 5354С в одному з важких ланцюгів та мутаціями 73665, І З368А, 407 і у349С у відповідному іншому важкому ланцюзі, або д) повнорозмірним антитілом підкласу ІдДС4 людини з мутаціями 5228Р і необов'язково
РЗ290 в обох важких ланцюгах, а також мутаціями Т36бУУ і 5354С в одному з важких ланцюгів та мутаціями 73665, І З368А, У407М і У349С у відповідному іншому важкому ланцюзі.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечений фармацевтичний склад, що включає будь-яке із вищезгаданих антитіл та фармацевтично прийнятний носій.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечене будь-яке із вищезгаданих антитіл для застосування як лікарського засобу.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечене застосування будь-якого із вищезгаданих антитіл для виробництва лікарського засобу для лікування неврологічного порушення. В одному із варіантів виконання неврологічне порушення вибране з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, порушення захворювання очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу та запалення ЦНС.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечене будь-яке із вищезгаданих антитіл для застосування у лікуванні неврологічного порушення. В одному із варіантів виконання неврологічне порушення вибране з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, порушення захворювання
Зо очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу та запалення ЦНС.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання винаходом забезпечене будь-яке із вищезгаданих антитіл для застосування у транспортуванні однієї або більше сполук через ГЕБ.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання забезпечене застосування будь- якого із вищезгаданих антитіл у виробництві лікарського засобу для транспортування однієї або більше сполук через ГЕБ.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання забезпечено спосіб транспортування сполуки через ГЕБ суб'єкта, який включає піддавання будь-якого із вищезгаданих антитіл дії ГЕБ таким чином, що антитіло переносить приєднану до нього сполуку через ГЕБ. В одному з варіантів виконання ГЕБ знаходиться у суб'єкта-людини. В одному з варіантів виконання антитіло, приєднане до сполуки, вводять у терапевтичній дозі. В одному з варіантів виконання терапевтична доза є такою, що насичує ТІК. В іншому варіанті виконання антитіло вводять в дозі і/або з частотою введення дози, підібраною так, щоб мінімізувати гострі клінічні симптоми введення антитіла.
В іншому аспекті вищезазначеного варіанта виконання забезпечено спосіб підвищення експозиції ЦНС суб'єкта до сполуки, який включає піддавання будь-якого із вищезгаданих антитіл дії ГЕБ таким чином, що антитіло переносить приєднану до нього сполуку через ГЕБ. В одному з варіантів виконання ГЕБ знаходиться у суб'єкта-людини. В одному з варіантів виконання антитіло, приєднане до сполуки, вводять у терапевтичній дозі. В одному з варіантів виконання терапевтична доза є такою, що насичує ТІК. В іншому варіанті виконання антитіло вводять в дозі і/або з частотою введення дози, підібраною так, щоб мінімізувати гострі клінічні симптоми введення антитіла.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання забезпечено спосіб підвищення утримання введеної суб'єктові сполуки в ЦНС, який включає піддавання будь-якого із вищезгаданих антитіл дії ГЕБ таким чином, що утримання сполуки в ЦНС підвищується. В одному з варіантів виконання ГЕБ знаходиться у суб'єкта-людини. В одному з варіантів виконання антитіло, приєднане до сполуки, вводять у терапевтичній дозі. В одному з варіантів виконання терапевтична доза є такою, що насичує ТІК. В іншому варіанті виконання антитіло вводять в дозі і/або з частотою введення дози, підібраною так, щоб мінімізувати гострі клінічні 60 симптоми введення антитіла.
В одному з аспектів вищезазначеного варіанта виконання забезпечено спосіб лікування неврологічного порушення у ссавця, який включає лікування ссавця будь-яким із вищезгаданих антитіл. В одному із варіантів виконання неврологічне порушення вибране з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, порушення захворювання очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу та запалення ЦНС. В іншому подібному аспекті неврологічне порушення виникає у суб'єкта- людини. В одному з варіантів виконання антитіло, приєднане до сполуки, вводять у терапевтичній дозі. В одному з варіантів виконання терапевтична доза є такою, що насичує ТІК.
В іншому варіанті виконання антитіло вводять в дозі і/або з частотою введення дози, підібраною так, щоб мінімізувати гострі клінічні симптоми введення антитіла.
В іншому варіанті виконання забезпечено спосіб зниження кліренсу введеної суб'єктові сполуки, в якому сполуку приєднують до антитіла, яке низькоафінно зв'язується з ТІК, таким чином, що кліренс сполуки знижується.
В іншому варіанті виконання забезпечено спосіб оптимізації фармакокінетики і/або фармакодинаміки сполуки задля її ефективності у ЦНС суб'єкта, де сполуку приєднують до антитіла, яке низькоафінно зв'язується з ТІК, а антитіло обирають таким чином, щоб його афінність до ТІК після приєднання до сполуки призводила до транспорту через ГЕБ такої кількості антитіла, скон'югованого зі сполукою, яка була б оптимальною для фармакокінетики іабо фармакодинаміки сполуки у ЦНС.
У подальшому аспекті антитіло до рецептора трансферину за будь-яким із вищеперелічених аспектів та варіантів виконання може включати будь-яку з ознак, окремо або в комбінації, описаних у Розділах 1-5 нижче: 1. Афінність антитіла
В одному з варіантів виконання Ка вимірюють аналізом зв'язування з радіоміченим антигеном (РІА). В одному з варіантів виконання РІА виконують з Рар-версією досліджуваного антитіла та його антигеном. Наприклад, афінність зв'язування Бар з антигеном у розчині вимірюють врівноваженням Бар з мінімальною концентрацією міченого /725| антигену у присутності титрувальних серійних розведень неміченого антигену з наступним захопленням зв'язаного антигену на планшеті, вкритому антитілом до Еаб (див, напр., Спеп, У. та ін., У. Мо).
Віо!. 293 (1999) 865-881). Для створення умов аналізу багатолункові планшети МІСКОТІТЕК? (Тпепто Зсіепійіс) вкривали, залишаючи на ніч, 5 мкг/мл захоплювального антитіла до Бар (Сарреї Габрз) у 50 мМ карбонату натрію (рН 9,6) з наступним блокуванням за допомогою 2 95 (мас./о0б.) бичачого сироваткового альбуміну у ФСБ протягом від двох до п'яти годин при кімнатній температурі (приблизно 2372). На неадсорбуючому планшеті (Мипс К269620) змішували 100 пМ або 26 пМ Г22ІЦ-антигену і серійні розведення досліджуваного Раб (напр., сумісного з оцінкою антитіла до МЕСЕ, Рар-12, у Ргезіа, І... та ін., Сапсег Кев5. 57 (1997) 4593- 4599). Тоді досліджуваний Бар інкубували протягом ночі; однак період інкубації могли продовжити (напр., до приблизно 65 годин), щоб гарантувати встановлення рівноваги. Потім суміші переносили на захоплювальний планшет для інкубації при кімнатній температурі (напр., протягом години). Розчин видаляли і планшет промивали вісім разів 0,1 95-вим полісорбатом 20 (ТМУЕЕМ-20У) у ФСБ. Коли планшети висохли, додали 150 мкл/лунку сцинтилятора (МІСВО5СІМТ-20 "М; РасКага) і обраховували планшети на гамма-лічильнику ТОРСОШМТ ТМ (РасКкага) протягом 10 хвилин. Концентрації кожного бар, що давали менше або дорівнювали 2095 від максимального зв'язування, відбирали для використання у аналізах конкурентного зв'язування.
Згідно іншого варіанта виконання Ка вимірюють за допомогою аналізу поверхневого плазмонного резонансу ВІАСОКЕ?Є. Наприклад, аналіз за допомогою ВІАСОКЕ?9-2000 або
ВІАСОНЕ 9-3000 (ВІіАсоге, Іпс., Піскатавей, МУ) виконують при 25"С з антигеном, іммобілізованим на чіпах СМ5 з «10 одиниць відповіді (ОВ). В одному з варіантів виконання біосенсорні чіпи з карбоксиметильованого декстрану (СМ5, ВІАСОКЕ, Іпс.) активують за допомогою М-етил-М- (З-диметиламінопропіл)у-карбодиіїміду гідрохлориду (ЕДК) та М- гідроксисукциніміду (НГС) згідно інструкцій постачальника. Антиген розводять у 10 мМ ацетату натрію, рН 4,8, до концентрації 5 мкг/мл (70,2 мкМ) перед введенням на швидкості потоку 5 мкл/хв для одержання приблизно 10 одиниць відповіді (ОВ) приєднаного білка. Після введення антигену вводять 1 М етаноламін для блокування груп, що не прореагували. Для кінетичних вимірювань вводять серійні розведення вдвічі Бар (від 0,78 нМ до 500 нМ) у ФСБ з 0,05 95 поверхнево-активної речовини полісорбату 20 (ТУМЕЕМ-207М) (ФСБТ) при 25 С на швидкості потоку приблизно 25 мкл/хв. Швидкості асоціації (Коп) та дисоціації (Кох) обчислюють з бо використанням простої моделі зв'язування Ленгмюра 1:1 (ВІАСОКЕ 2 Емаїцайоп боїмаге версії
3.2) шляхом одночасної обробки сенсограм асоціації та дисоціації. Рівноважну константу дисоціації (КО) обчислюють як відношення Кок/Коп (див, напр., Спеп, У. та ін., У. Мої. Віо!. 293 (1999) 865-881). Якщо швидкість асоціації у вищеописаному аналізі поверхневого плазмонного резонансу перевищує 106 М" с", то швидкість асоціації можна визначити за допомогою техніки гасіння флуоресценції, яка вимірює зростання або зменшення інтенсивності флуоресцентного випромінювання (збудження - 295 нм; емісія - 340 нм, смуга пропускання 16 нм) при 25 70 20
НМ антитіла до антигену (Гар-форма) у ФСБ, рн 7 2, у присутності підвищуваних концентрацій антигену згідно вимірювань на спектрометрі, такому як спектрофотометр з зупинкою потоку (Амім Іпзігитепів) або спектрофотометр 5ІМ-АМІМСО "М серії 8000 (Тпегтозресігопіс) з перемішуваною кюветою. 2. Фрагменти антитіла
У певних варіантах виконання забезпечене тут антитіло є фрагментом антитіла. Фрагменти антитіла включають, але не обмежуються ними, фрагменти Раф, Раб", Раб'-ЗН, К(ар")», Ем та 5сЕм, а також інші фрагменти, описані нижче. Для огляду деяких фрагментів антитіла див.
Ниазоп, Р.9У. та ін., Маї. Меа. 9 (2003) 129-134. Для огляду фрагментів 5сЕм див., напр.,
Рінескіпип, А., у; Тпе Ріаптасоїіоду ої Мопосіопа! Апііроадієв5, Т. 113, Козепригуд апа Мооге (едвз.),
Зргіпде!-Мепіад, Нью-Йорк (1994), с. 289-315; див. також УМО 93/16185; 05 5,571,894 та 05 5,587,458. Для обговорення фрагментів Раб та Е(абБ)», що включають залишки епітопу зв'язування рецептора реутилізації та мають продовжений період напівжиття іп мімо, див. О5 5,869,046.
Діатіла - це фрагменти антитіла з двома антигензв'язувальними сайтами, які можуть бути бівалентними або біспецифічними. Див., наприклад, ЕР 0 404 097; МО 1993/01161; Ниазоп, Р... та ін., Маї. Меа. 9 (2003) 129-134; та Ноїіїїдег, Р. та ін., Ргос. Май). Асад. 5сі. ОБА 90 (1993) 6444- 6448. Тріатіла і тетратіла також описані в Ниазоп, Р... та ін., Маї. Меа. 9 (20039 129-134).
Однодоменні антитіла є фрагментами антитіл, що включають весь варіабельний домен важкого ланцюга антитіла або його частину, або ж весь варіабельний домен легкого ланцюга антитіла або його частину. У певних варіантах виконання однодоменне антитіло є людським однодоменним антитілом (ботапії5, Іпс., Волтгем, МА; див., напр., О5 6,248,516).
Фрагменти антитіл можна одержати різноманітними техніками, включаючи, але не
Зо обмежуючись ними, протеолітичне розщеплення інтактного антитіла, а також продукування в рекомбінантних клітинах-хазяях (напр., Е. соїї або фаг) згідно наданого тут опису. 3. Химерні та гуманізовані антитіла
У певних варіантах виконання забезпечене тут антитіло є химерним антитілом. Певні химерні антитіла описані, напр., у 05 4,816,567; а також Могтізоп, 5.І.. та ін., Ргос. Маї!. Асад.
Зсі. ОБА 81 (1984) 6851-6855). В одному з прикладів химерне антитіло включає варіабельну ділянку, що походить не від людини (напр., варіабельну ділянку, яка походить від миші, щура, хом'яка, кроля або примата, який не є людиною, такого як мавпа), і людську константну ділянку.
У ще одному прикладі химерне антитіло є антитілом з "перемкнутим класом", в якого змінили клас або підклас батьківського антитіла. Химерні антитіла охоплюють свої антигензв'язувальні фрагменти.
У певних варіантах виконання химерне антитіло є гуманізованим антитілом. Зазвичай антитіло, яке походить не від людини, гуманізують з метою зниження імуногенності в людей при одночасному збереженні специфічності та афінності батьківського не-людського антитіла. Як правило, гуманізоване антитіло включає один або більше варіабельних доменів, у яких НУК, напр., СОК, (або їх частини), походять від не-людського антитіла, а ЕЕ (або їх частини походять від послідовностей людського антитіла. Гуманізоване антитіло може також необов'язково включати принаймні частину людської константної ділянки. У деяких варіантах виконання деякі залишки ЕК у гуманізованому антитілі заміщені відповідними залишками не-людського антитіла (напр., антитіла, з якого походять залишки НМК), напр., з метою відновити або покращити специфічність чи афінність антитіла.
Гуманізовані антитіла та способи їх одержання оглянуті, напр., в АІтадго, 9.С. та Егапе55оп,
У., Екопі. Віовсі. 13 (2008) 1619-1633, та додатково описані, напр., у Кіесптапп, І. та ін., Маїиге 332 (1988) 323-329; Оцееп, С. та ін., Ргос. Май). Асад. Зсі. ОБА 86 (1989) 10029-10033; О5 5, 821,337, 05 7,527,791, 05 6,982,321 та 05 7,087,409; КазПтігі, 5.У. та ін., Меїйоаз 36 (2005) 25- 34 (описана пересадка ділянки, яка визначає специфічність (ЗОК)); Радіап, Е.А., Мої. ІттипоЇ. 28 (1991) 489-498 (описана "перекладка"); ЮБаІгАсдча, УМ.Р. та ін., Мешоаз 36 (2005) 43-60 (описане "перетасування ЕК"); а також О5роип, у. та ін., Меїпод»5 36 (2005) 61-68 та Кіїтка, А. та ін., Вт. ). Сапсег 83 (2000) 252-260 (описаний підхід "керованого відбору" до перетасування
ЕВ). 60 Людські каркасні ділянки, які можна використати для гуманізації включають, але не обмежуються ними: каркасні ділянки, вибрані методом максимальної відповідності (див., напр.,
Зіт5, М.9У. та ін., У. ІттипоїЇї. 151 (1993) 2296-2308; каркасні ділянки, що є похідними консенсусної послідовності людських антитіл, що належать до певної підгрупи за варіабельними ділянками легких або важких ланцюгів (див., напр., Сагіег, Р. та ін., Ргос. Маї). Асад. Зсі. ОБА 89 (1992) 4285-4289; і Ргевіа, І... та ін., У. ІттипоїЇ. 151 (1993) 2623-2632); людські дозрілі (соматично мутовані) каркасні ділянки або каркасні ділянки людської зародкової лінії (див., напр., АІтадго, У.С. та Егапззоп, 9., Егопі. Віовсі. 13 (2008) 1619-1633); а також каркасні ділянки, одержані шляхом скринінгу бібліотек ЕК (див., напр., Васа, М. та ін., 9. Віої. Спет. 272 (1997) 10678-10684 і Козок, М... та ін., у. ВіоЇ. Спет. 271 (19969 22611-22618). 4. Мультиспецифічні антитіла
У певних варіантах виконання надане тут антитіло є мультиспецифічним антитілом, напр., біспецифічним антитілом. Мультиспецифічні антитіла - це моноклональні антитіла, що володіють специфічністю зв'язування принаймні до двох різних сайтів. У деяких варіантах виконання одна зі специфічностей зв'язування призначена для рецептора трансферину, а інша - для будь-якого іншого антигена. Біспецифічні антитіла можуть також застосовуватись для локалізації цитотоксичних агентів у клітинах, які експресують рецептор трансферину.
Біспецифічні антитіла можна виготовити як повнорозмірні антитіла або фрагменти антитіл.
Технології виготовлення мультиспецифічних антитіл включають, але не обмежуються ними, рекомбінантну співекспресію двох імуноглобулінових пар важкий ланцюг-легкий ланцюг, які мають різну специфічність (див. Міїєтеіп, С. та СцейПйо, А.С., Маїшге 305 (1983) 537-540, МО 93/08829, а також Тгашипескег, А. та ін., ЕМВО 4. 10 (1991) 3655-3659), та конструкцію "виступ-у- отвір" (див., напр., О5 5,731,168). Мультиспецифічні антитіла також можна створити шляхом проектування електростатичних напрямних ефектів для утворення Ес-гетеродимерних молекул антитіл (МИМО 2009/089004); поперечного зшивання двох або більше антитіл або їх фрагментів (див., напр., 05 4,676,980 і Вгеппап, М. та ін., Зсієпсе 229 (1985) 81-83); використання лейцинових застібок для одержання біспецифічних антитіл (див., напр., КовіеЇІпу, 5.А. та ін., у.
Іттипої. 148 (1992) 1547-1553; використання технології "діатіл" для одержання біспецифічних фрагментів антитіл (див., напр., Ноїдег, Р. та ін., Ргос. Май. Асай. сі. ОБА 90 (1993) 6444- 6448); використання димерів одноланцюгових Ем (5сЕм) (див., напр. сгибег, М та ін., у. Іттипої.
Зо 152 (1994) 5368-5374); а також одержання триспецифічних антитіл, як описано, напр., у Тий, А. та ін., у. Іттипої. 147 (1991) 60-69).
Тут також охоплені антитіла, сконструйовані з трьома або більше функціональними сайтами зв'язування, включно з "антитілами-восьминогами" (див., напр., 05 .2006/0025576).
Антитіло або його фрагмент тут і далі також охоплюють "Раб подвійної дії", або "ОАЕ", яке включає антигензв'язувальний сайт, що зв'язується з рецептором трансферину, а також з іншим, відмінним антигеном (див., наприклад, О5 2008/0069820).
Антитіло або його фрагмент тут і далі також охоплюють мультиспецифічні антитіла, описані в УМО 2009/080251, УМО 2009/080252, УМО 2009/080253, УМО 2009/080254, УМО 2010/112193, УМО 2010/115589, УМО 2010/136172, УМО 2010/145792 та МО 2010/145793.
В одному з варіантів виконання всіх описаних тут аспектів антитіло до рецептора трансферину є біспецифічним антитілом.
Одним з описаних тут аспектів є бівалентне, біспецифічне антитіло, яке включає а) перший легкий ланцюг та перший важкий ланцюг антитіла, яке специфічно зв'язується з першим антигеном; та б) другий легкий ланцюг та другий важкий ланцюг антитіла, яке специфічно зв'язується з другим антигеном, і при цьому варіабельні домени Мі та МН у другому легкому ланцюзі та другому важкому ланцюзі другого антитіла взаємозамінені, де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
Антитіло за пунктом а) не містить модифікації, описаної в пункті б), і важкий та легкий ланцюги за пунктом а) є ізольованими ланцюгами.
В антитілі за пунктом б) у легкому ланцюзі варіабельний домен легкого ланцюга МГ. замінений варіабельним доменом важкого ланцюга
МН зазначеного антитіла, та у важкому ланцюзі варіабельний домен важкого ланцюга МІ. замінений варіабельним доменом легкого ланцюга
МН зазначеного антитіла.
В одному з варіантів виконання бо І) в константному домені СІ. першого легкого ланцюга при а) амінокислота в положенні 124
(нумерація згідно Кара) заміщена позитивно зарядженою амінокислотою, і де в константному домені СНІ першого важкого ланцюга при а) амінокислота в положенні 147 або амінокислота в положенні 213 (нумерація згідно покажчика БО системи Кава!) заміщена негативно зарядженою амінокислотою, або
І) в константному домені СІ. другого легкого ланцюга при б) амінокислота в положенні 124 (нумерація згідно Кара) заміщена позитивно зарядженою амінокислотою, і де в константному домені СНІ другого важкого ланцюга при б) амінокислота в положенні 147 або амінокислота в положенні 213 (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кабаї) заміщена негативно зарядженою амінокислотою.
В одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу
І) в константному домені СІ першого легкого ланцюга при а) амінокислота в положенні 124 незалежно заміщена лізином (К), аргініном (К) або гістидином (Н) (нумерація згідно Кабаб (в одному кращому варіанті виконання незалежно лізином (К) або аргініном (К)), і де в константному домені СНІ першого важкого ланцюга при а) амінокислота в положенні 147 або амінокислота в положенні 213 незалежно заміщена глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи КарБбаї), або
І) в константному домені СІ. другого легкого ланцюга при б) амінокислота в положенні 124 незалежно заміщена лізином (К), аргініном (К) або гістидином (Н) (нумерація згідно Кава) (в одному кращому варіанті виконання незалежно лізином (К) або аргініном (К)), і де в константному домені СНІ другого важкого ланцюга при б) амінокислота в положенні 147 або амінокислота в положенні 213 незалежно заміщена глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кабаї).
В одному з варіантів виконання в константному домені Сі другого важкого ланцюга амінокислоти в положеннях 124 та 123 заміщені К (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи
Кабай).
В одному з варіантів виконання в константному домені СНІ другого легкого ланцюга амінокислоти в положеннях 147 та 213 заміщені Е (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи
Коо) Каба).
В одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, в константному домені Сі. першого легкого ланцюга амінокислоти в положеннях 124 та 123 заміщені К, а в константному домені СНІ першого важкого ланцюга амінокислоти в положеннях 147 та 213 заміщені Е (нумерація згідно покажчика БО системи Каба)д.
В одному з варіантів виконання в константному домені Сі другого важкого ланцюга амінокислоти в положеннях 124 та 123 заміщені К, і при цьому в константному домені СНІ другого легкого ланцюга амінокислоти в положеннях 147 та 213 заміщені Е, а також у варіабельному домені МІ. першого легкого ланцюга амінокислота у положенні 38 заміщена К, у варіабельному домені МН першого важкого ланцюга амінокислота у положенні 39 заміщена Е, у варіабельному домені МІ. другого важкого ланцюга амінокислота у положенні 38 заміщена К, та у варіабельному домені МН другого легкого ланцюга амінокислота у положенні 39 заміщена Е (нумерація згідно покажчика БО системи Каба)д.
Одним з описаних тут аспектів є бівалентне, біспецифічне антитіло, яке включає а) перший легкий ланцюг та перший важкий ланцюг антитіла, яке специфічно зв'язується з першим антигеном; та б) другий легкий ланцюг та другий важкий ланцюг антитіла, яке специфічно зв'язується з другим антигеном, і при цьому варіабельні домени Мі та МН у другому легкому ланцюзі та другому важкому ланцюзі взаємозамінені, і при цьому константні домени СІ. та СНІ у другому легкому ланцюзі та другому важкому ланцюзі взаємозамінені, де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
Антитіло за пунктом а) не містить модифікації, описаної в пункті б), і важкий та легкий ланцюги за пунктом а) є ізольованими ланцюгами.
В антитілі за пунктом б) у легкому ланцюзі варіабельний домен легкого ланцюга МІ. замінений на варіабельний домен важкого ланцюга
МН зазначеного антитіла, а константний домен легкого ланцюга Сі. замінений на константний домен важкого ланцюга СНІ зазначеного антитіла; та у важкому ланцюзі бо варіабельний домен важкого ланцюга УН замінений на варіабельний домен легкого ланцюга
МІ. зазначеного антитіла, а константний домен важкого ланцюга СНІ замінений на константний домен легкого ланцюга Сі. зазначеного антитіла.
Одним з описаних тут аспектів є бівалентне, біспецифічне антитіло, яке включає а) перший легкий ланцюг та перший важкий ланцюг антитіла, яке специфічно зв'язується з першим антигеном; та б) другий легкий ланцюг та другий важкий ланцюг антитіла, яке специфічно зв'язується з другим антигеном, і при цьому константні домени Сі та СНІ у другому легкому ланцюзі та другому важкому ланцюзі другого антитіла взаємозамінені, де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
Антитіло за пунктом а) не містить модифікації, описаної в пункті б), і важкий та легкий ланцюги за пунктом а) є ізольованими ланцюгами.
В антитілі за пунктом б) у легкому ланцюзі константний домен легкого ланцюга Сі. замінений константним доменом важкого ланцюга
СНІ зазначеного антитіла; і у важкому ланцюзі константний домен важкого ланцюга СНІ замінений константним доменом легкого ланцюга
Сі зазначеного антитіла;
Одним з описаних тут аспектів є мультиспецифічне антитіло, яке включає а) повнорозмірне антитіло, яке специфічно зв'язується з першим антигеном та складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, та б) один, два, три або чотири одноланцюгових Габ-фрагменти, що специфічно зв'язуються з додатковими антигенами в кількості від одного до чотирьох (тобто з другим і/або третім і/або четвертим і/або п'ятим антигеном, більш бажано специфічно зв'язуються з одним додатковим антигеном, тобто з другим антигеном), де зазначені одноланцюгові Еар-фрагменти за пунктом б) злиті з зазначеним повнорозмірним антитілом за пунктом а) за допомогою пептидного лінкера на С- або М-кінці важкого або легкого ланцюга зазначеного повнорозмірного антитіла. де перший антиген або один з додаткових антигенів є рецептором трансферину людини.
В одному з варіантів виконання один або два ідентичних одноланцюгових Рар-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з зазначеним повнорозмірним антитілом за допомогою пептидного лінкера на С-кінці важких або легких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному з варіантів виконання один або два ідентичних одноланцюгових Рар-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з зазначеним повнорозмірним антитілом за допомогою пептидного лінкера на С-кінці важких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному з варіантів виконання один або два ідентичних одноланцюгових Рар-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з зазначеним повнорозмірним антитілом за допомогою пептидного лінкера на С-кінці легких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному з варіантів виконання два ідентичних одноланцюгових Еар-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з зазначеним повнорозмірним антитілом за допомогою пептидного лінкера на С-кінці кожного з важких або легких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному з варіантів виконання два ідентичних одноланцюгових ЕРар-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з зазначеним повнорозмірним антитілом за допомогою пептидного лінкера на С-кінці кожного з важких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному з варіантів виконання два ідентичних одноланцюгових ЕРар-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з зазначеним повнорозмірним антитілом за допомогою пептидного лінкера на С-кінці кожного з легких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла.
Одним з описаних тут аспектів є тривалентне, біспецифічне антитіло, яке включає а) повнорозмірне антитіло, яке специфічно зв'язується з першим антигеном та складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, б) перший поліпептид, що складається з ба) варіабельного домену важкого ланцюга антитіла (УН), або бб) варіабельного домену важкого ланцюга антитіла (МН) та константного домену 1 антитіла (СНІ), бо причому М-кінець зазначеного першого поліпептиду за допомогою пептидного лінкера
Зо злитий з С-кінцем одного з двох важких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла, в) другий поліпептид, що складається з ва) варіабельного домену легкого ланцюга антитіла (МІ), або вб) варіабельного домену легкого ланцюга антитіла (МІ) та константного домену легкого ланцюга антитіла (СІ), причому М-кінець МІ -домену зазначеного другого поліпептиду за допомогою пептидного лінкера злитий з С-кінцем іншого з двох важких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла, та причому варіабельний домен важкого ланцюга антитіла (МН) першого поліпептиду та варіабельний домен легкого ланцюга антитіла (МІ) другого поліпептиду разом утворюють антигензв'язувальний сайт, що специфічно зв'язується з другим антигеном, та де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
В одному з варіантів виконання варіабельний домен важкого ланцюга антитіла (МН) поліпептиду за пунктом б) та варіабельний домен легкого ланцюга антитіла (МІ) поліпептиду за пунктом в) з'єднані та стабілізовані міжланцюговим дисульфідним містком, введеним за допомогою дисульфідного зв'язку в наступних положеннях:
ЇЇ між положенням 44 варіабельного домену важкого ланцюга та положенням 100 варіабельного домену легкого ланцюга, або
І) між положенням 105 варіабельного домену важкого ланцюга та положенням 43 варіабельного домену легкого ланцюга, або
І) між положенням 101 варіабельного домену важкого ланцюга та положенням 100 варіабельного домену легкого ланцюга (нумерація всюди за покажчиком Є системи Кабай.
Техніки введення неприродних дисульфідних містків для стабілізації описані, напр., в УМО 94/029350, Каізадораї, М., та ін., Ргої. Епо. (1997) 1453-59; Корауабвпі, Н., та ін., МисіІєаг Меаісіпе 8. Віоіоду, Т. 25, (1998) 387-393; або Зсптіаї, М., та ін., Опсодепе (1999) 18 1711-1721. В одному з варіантів виконання необов'язковий дисульфідний зв'язок між варіабельними доменами поліпептидів за пунктами б) і в) розташований між положенням 44 варіабельного домену
Зо важкого ланцюга та положенням 100 варіабельного домену легкого ланцюга. В одному з варіантів виконання необов'язковий дисульфідний зв'язок між варіабельними доменами поліпептидів за пунктами б) і в) розташований між положенням 105 варіабельного домену важкого ланцюга та положенням 43 варіабельного домену легкого ланцюга (нумерація всюди за покажчиком БІ системи Кара). В одному з варіантів виконання перевагу віддають тривалентному біспецифічному антитілу без зазначеної необов'язкової дисульфідної стабілізації між варіабельними доменами МН та МІ. одноланцюгових фрагментів Раб.
Одним з описаних тут аспектів є триспецифічне або тетраспецифічне антитіло, яке включає а) перший легкий ланцюг та перший важкий ланцюг повнорозмірного антитіла, яке специфічно зв'язується з першим антигеном; та б) другий (модифікований) легкий ланцюг та другий (модифікований) важкий ланцюг повнорозмірного антитіла, яке специфічно зв'язується з другим антигеном, і при цьому варіабельні домени Мі та МН взаємозамінені, і/або при цьому константні домени Сі та СНІ1 взаємозамінені, та в) де від одного до чотирьох антигензв'язувальних пептидів, які специфічно зв'язуються з одним або двома додатковими антигенами (тобто з третім і/або четвертим антигеном), злито за допомогою пептидного лінкера з С- або М-кінцем легких або важких ланцюгів за пунктами а) і/або б), де перший антиген або другий антиген або один з додаткових антигенів є рецептором трансферину людини.
Антитіло за пунктом а) не містить модифікації, описаної в пункті б), і важкий та легкий ланцюги за пунктом а) є ізольованими ланцюгами.
В одному з варіантів виконання триспецифічне або тетраспецифічне антитіло включає за пунктом в) один або два антигензв'язувальні пептиди, які специфічно зв'язуються з одним або двома додатковими антигенами.
В одному з варіантів виконання антигензв'язувальні пептиди вибрані з групи, що включає 5сЕм-фрагмент та зсЕБар-фрагмент.
В одному з варіантів виконання антигензв'язувальні пептиди являють собою 5сЕм- фрагменти.
В одному з варіантів виконання антигензв'язувальні пептиди являють собою 5сЕар- бо фрагменти.
В одному з варіантів виконання антигензв'язувальні пептиди злиті з С-кінцем важких ланцюгів за пунктами а) і/або б).
В одному з варіантів виконання триспецифічне або тетраспецифічне антитіло включає за пунктом в) один або два антигензв'язувальні пептиди, які специфічно зв'язуються 3 одним додатковим антигеном.
В одному з варіантів виконання триспецифічне або тетраспецифічне антитіло включає за пунктом в) два ідентичні антигензв'язувальні пептиди, які специфічно зв'язуються з третім антигеном. В одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, зазначені два ідентичні антигензв'язувальні пептиди обидва злиті з С-кінцем важких ланцюгів за пунктами а) і б) за допомогою одного і того самого пептидного лінкера. В одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, зазначені два ідентичні антигензв'язувальні пептиди являють собою або 5сЕм-фрагмент, або зсЕаб-фрагмент.
В одному з варіантів виконання триспецифічне або тетраспецифічне антитіло включає за пунктом в) два антигензв'язувальні пептиди, які специфічно зв'язуються з третім і четвертим антигенами. В одному з варіантів виконання зазначені два антигензв'язувальні пептиди обидва злиті з С-кінцем важких ланцюгів за пунктами а) і б) за допомогою одного і того самого пептидного лінкера. В одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, зазначені два антигензв'язувальні пептиди являють собою або 5сЕму-фрагмент, або 5сБар-фрагмент.
Одним з описаних тут аспектів є біспецифічне, тетравалентне антитіло, яке включає а) два легкі ланцюги і два важкі ланцюги антитіла, які специфічно зв'язуються з першим антигеном (і включають два Рар-фрагменти), б) два додаткові Гар-фрагменти антитіла, які специфічно зв'язуються з другим антигеном, причому обидва зазначені додаткові Гар-фрагменти злиті за допомогою пептидного лінкера з С- або М-кінцями важких ланцюгів за пунктом а), та в якому в Гар-фрагментах були виконані наступні модифікації
І) в обох ЕРаб-фрагментах за пунктом а) або в обох Рар-фрагментах за пунктом б) варіабельні домени Мі та МН взаємозамінені, і/або константні домени Сі та СНІ взаємозамінені,
Коо) або
І) в обох РГаб-фрагментах за пунктом а) варіабельні домени Мі та МН взаємозамінені, і константні домени Сі. та СНІ взаємозамінені, та в обох Рар-фрагментах за пунктом б) варіабельні домени Мі та МН взаємозамінені, або константні домени Сі та СНІ взаємозамінені, або
І) в обох Рар-фрагментах за пунктом а) варіабельні домени МІ. та УН взаємозамінені, або константні домени Сі. та СНІ взаємозамінені, та в обох Раб-фрагментах за пунктом б) варіабельні домени Мі та МН взаємозамінені, і константні домени Сі. та СНІ взаємозамінені, або
ЇМ) в обох Раб-фрагментах за пунктом а) варіабельні домени МІ. та МН взаємозамінені, і в обох Рар-фрагментах за пунктом б) константні домени Сі. та СНІ взаємозамінені, або
М) в обох РГар-фрагментах за пунктом а) константні домени Сі та СНІ взаємозамінені, і в обох Рар-фрагментах за пунктом б) варіабельні домени М. та УН взаємозамінені, де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
В одному з варіантів виконання зазначені додаткові Баб-фрагменти обидва злиті за допомогою пептидного лінкера або з С-кінцями важких ланцюгів за пунктом а), або з М-кінцями важких ланцюгів за пунктом а).
В одному з варіантів виконання зазначені додаткові Гар-фрагменти обидва злиті з С-кінцями важких ланцюгів за пунктом а) за допомогою пептидного лінкера.
В одному з варіантів виконання зазначені додаткові Гар-фрагменти обидва злиті з М-кінцями важких ланцюгів за пунктом а) за допомогою пептидного лінкера.
В одному з варіантів виконання у Гар-фрагментах виконані наступні модифікації:
І) в обох ЕРаб-фрагментах за пунктом а) або в обох Рар-фрагментах за пунктом б) варіабельні домени МІ. та УН взаємозамінені, імабо 60 константні домени Сі та СНІ взаємозамінені.
В одному з варіантів виконання у Гар-фрагментах виконані наступні модифікації:
І) в обох РГар-фрагментах за пунктом а) варіабельні домени М. та УН взаємозамінені, імабо константні домени Сі. та СНІ взаємозамінені.
В одному з варіантів виконання у РГар-фрагментах виконані наступні модифікації:
І) в обох РГар-фрагментах за пунктом а) константні домени Сі. та СНІ взаємозамінені.
В одному з варіантів виконання у Гар-фрагментах виконані наступні модифікації:
І) в обох РГар-фрагментах за пунктом б) варіабельні домени МГ. та УН взаємозамінені, імабо константні домени Сі та СНІ взаємозамінені.
В одному з варіантів виконання у Гар-фрагментах виконані наступні модифікації:
І) в обох РГар-фрагментах за пунктом б) константні домени Сі. та СНІ взаємозамінені.
Одним з описаних тут аспектів є біспецифічне, тетравалентне антитіло, яке включає: а) (модифікований) важкий ланцюг першого антитіла, який специфічно зв'язується з першим антигеном та включає першу пару доменів МН-СНІ, при цьому до С-кінця зазначеного важкого ланцюга прикріплено за допомогою пептидного лінкера М-кінець другої пари доменів МН-СНІ1 зазначеного першого антитіла, б) два легкі ланцюги зазначеного першого антитіла за пунктом а), в) (модифікований) важкий ланцюг другого антитіла, який специфічно зв'язується з другим антигеном та включає першу пару доменів МН-СІ, при цьому до С-кінця зазначеного важкого ланцюга прикріплено за допомогою пептидного лінкера М-кінець другої пари доменів МН-СІ. зазначеного другого антитіла, і г) два (модифіковані) легкі ланцюги зазначеного другого антитіла за пунктом в), кожен з яких включає пару доменів СІ -СНІ1, де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
Одним з описаних тут аспектів є біспецифічне антитіло, яке включає а) важкий ланцюг та легкий ланцюг першого повнорозмірного антитіла, яке специфічно зв'язується з першим антигеном; та б) важкий ланцюг та легкий ланцюг другого повнорозмірного антитіла, яке специфічно
Зо зв'язується з другим антигеном, причому М-кінець важкого ланцюга приєднаний до С-кінця легкого ланцюга пептидним лінкером, де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
Антитіло за пунктом а) не містить модифікації, описаної в пункті б), і важкий та легкий ланцюги є ізольованими ланцюгами.
Одним з описаних тут аспектів є біспецифічне антитіло, яке включає а) повнорозмірне антитіло, яке специфічно зв'язується з першим антигеном та складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, та б) Ем-фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном та включає домен МН: і домен МІ, причому обидва домени поєднані дисульфідним містком, де або тільки домен УНЕ-, або тільки домен МІ? злитий за допомогою пептидного лінкера з важким або легким ланцюгом повнорозмірного антитіла, що специфічно зв'язується з першим антигеном, де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
У біспецифічному антитілі важкі та легкі ланцюги за пунктом а) є ізольованими ланцюгами.
В одному з варіантів виконання інший з доменів МН? або МІ? не є злитим за допомогою пептидного лінкера з важким або легким ланцюгом повнорозмірного антитіла, що специфічно зв'язується з першим антигеном.
У всіх описаних тут аспектах перший легкий ланцюг включає домен У. і домен СІ, а перший важкий ланцюг включає домен УН, домен СНІ, шарнірну ділянку, домен СНЕІ і домен СНЗ.
Одним з описаних тут аспектів є біспецифічне тривалентне антитіло, яке включає а) два Гар-фрагменти, що специфічно зв'язуються з першим антигеном, б) один Сго55Бар-фрагмент, який специфічно зв'язується з другим антигеном і в якому домени СНІ і СІ. взаємозамінені, в) одну Ес-ділянку, яка включає перший важкий ланцюг Ес-ділянки та другий важкий ланцюг
Ес-ділянки, при цьому С-кінці доменів СНІ двох Раб-фрагментів приєднані до М-кінців поліпептидів важких ланцюгів Ес-ділянки, та при цьому С-кінець домену Сі Стго55Рар-фрагменту приєднаний до М-кінця домену УНН одного з Гар-фрагментів, та бо де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
Одним з описаних тут аспектів є біспецифічне тривалентне антитіло, яке включає а) два Гар-фрагменти, що специфічно зв'язуються з першим антигеном, б) один Сто55БРарб-фрагмент, який специфічно зв'язується з другим антигеном і в якому домени СНІ і СІ. взаємозамінені, в) одну Ео-ділянку, яка включає перший важкий ланцюг Ес-ділянки та другий важкий ланцюг
Ес-ділянки, при цьому С-кінець домену СНІ першого Рар-фрагменту приєднаний до М-кінця одного з поліпептидів важких ланцюгів Ес-ділянки, та С-кінець домену Сі Сго55Рар-фрагменту приєднаний до М-кінця іншого з поліпептидів важких ланцюгів Ес-ділянки, і при цьому С-кінець домену СНІ другого Гар-фрагменту приєднаний до М-кінця домену УН першого РГар-фрагменту або до М-кінця домену МН Стго55Рар-фрагменту, та де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
Одним з описаних тут аспектів є біспецифічне антитіло, яке включає а) повнорозмірне антитіло, яке специфічно зв'язується з першим антигеном та складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, та б) Рар-фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном та включає домен МН: і домен МІ", фрагмент важкого ланцюга і фрагмент легкого ланцюга, де у фрагменті легкого ланцюга варіабельний домен легкого ланцюга МІ? замінений варіабельним доменом важкого ланцюга УН?- зазначеного антитіла, та у фрагменті важкого ланцюга варіабельний домен важкого ланцюга МН. замінений варіабельним доменом легкого ланцюга МІ 2 зазначеного антитіла де Рар-фрагмент важкого ланцюга вставлений між доменом СНІ одного із важких ланцюгів повнорозмірного антитіла та відповідною Ес-ділянкою повнорозмірного антитіла, і М-кінець Рар- фрагменту легкого ланцюга скон'югований із С-кінцем легкого ланцюга повнорозмірного антитіла, що спарений з важким ланцюгом повнорозмірного антитіла, в який вставлений Еар- фрагмент важкого ланцюга, і
Зо де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
Одним з описаних тут аспектів є біспецифічне антитіло, яке включає а) повнорозмірне антитіло, яке специфічно зв'язується з першим антигеном та складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, та б) РГар-фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном та включає домен УН: і домен МІ", фрагмент важкого ланцюга і фрагмент легкого ланцюга, де у фрагменті легкого ланцюга варіабельний домен легкого ланцюга МІ? замінений варіабельним доменом важкого ланцюга УН?- зазначеного антитіла, та у фрагменті важкого ланцюга варіабельний домен важкого ланцюга МН? замінений варіабельним доменом легкого ланцюга МІ? зазначеного антитіла де С-кінець важксоланцюгового фрагменту Гар-фрагменту скон'югований з М-кінцем одного із важких ланцюгів повнорозмірного антитіла, і С-кінець легколанцюгового фрагменту Рар- фрагменту скон'югований з М-кінцем легкого ланцюга повнорозмірного антитіла, що спарений з важким ланцюгом повнорозмірного антитіла, з яким скон'югований важколанцюговий фрагмент
Еаб-фрагменту, і де перший антиген або другий антиген є рецептором трансферину людини.
В одному з варіантів виконання антитіло згідно даного опису є мультиспецифічним антитілом, що потребує гетеродимеризації принаймні двох важколанцюгових поліпептидів, і при цьому антитіло специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини та другим антигеном, який не є рецептором трансферину людини.
Описано кілька підходів до СНЗ-модифікацій з метою забезпечення гетеродимеризації, наприклад, у УМО 96/27011, МО 98/050431, ЕР 1870459, УМО 2007/110205, УМО 2007/147901, МО 2009/089004, МО 2010/129304, МО 2011/90754, МО 2011/143545, МО 2012/058768, МО 2013/157954, МО 2013/096291, які включено сюди шляхом посилання. У типових відомих в галузі підходах домен СНЗ першого важкого ланцюга і домен СНЗ другого важкого ланцюга обидва сконструйовані комплементарним способом так, щоб важкий ланцюг, який містить один сконструйований домен СНЗ, більше не міг димеризуватися з іншим важким ланцюгом такої ж бо структури (напр., перший важкий ланцюг, який містить сконструйований домен СНЗ, більше не міг димеризуватися з іншим першим важким ланцюгом, який містить сконструйований домен
СНЗ; ії другий важкий ланцюг, який містить сконструйований домен СНЗ, більше не міг димеризуватися з іншим другим важким ланцюгом, який містить сконструйований домен СНЗ).
Таким чином важкий ланцюг, який містить один сконструйований домен СНЗ, змушений гетеродимеризуватися з іншим важким ланцюгом, який містить домен СНЗ, сконструйований комплементарним способом. Для цього варіанта виконання винаходу домен СНЗ першого важкого ланцюга і домен СНЗ другого важкого ланцюга конструюють у комплементарний спосіб за допомогою амінокислотних заміщень, так що перший важкий ланцюг і другий важкий ланцюг змушені гетеродимеризуватись, тоді як перший важкий ланцюг і другий важкий ланцюг більше не здатні гомодимеризуватись (напр., зі стеричних причин).
Інші підходи до забезпечення гетеродимеризації важких ланцюгів, відомі у процитованому вище рівні техніки та включені в цей опис, розглядаються як різні альтернативи, що використовуються в мультиспецифічному антитілі згідно винаходу, яке включає "неперехрещену Рар-ділянку", яка походить від першого антитіла, яке специфічно зв'язується з першим антигеном, та "перехрещену Рар-ділянку", яка походить від другого антитіла, яке специфічно зв'язується з другим антигеном, у комбінації з конкретними амінокислотними заміщеннями, описаними вище для винаходу.
Домени СНЗ мультиспецифічного антитіла згідно даного опису можна змінити технологією "виступів-в-отвори", яка детально описана у кількох прикладах, напр., у УМО 96/027011, Кідджмау,
У.В., та ін., Ргоївіп Епод. 9 (1996) 617-621; та Мегспапі, А.М., та ін., Маї. Віотесппої. 16 (1998) 677- 681. У цьому способі поверхні взаємодії двох доменів СНЗ змінені таким чином, щоб підвищити гетеродимеризацію обох важких ланцюгів, що містять ці два домени СНЗ. Кожен із двох доменів
СНЗ (двох важких ланцюгів) може бути "виступом", тоді як інший є "отвором". Введення дисульфідного містка ще більш стабілізує гетеродимери (Мегспапі, А.М., та ін., Маїшиге
Віотесп.16 (1998) 677-681; Аїмееї, 5., та ін., У. Мої. Віої. 270 (1997) 26-35) та підвищує їх вихід.
В одному кращому варіанті виконання мультиспецифічне антитіло згідно даного опису включає мутацію Т366УМ в домені СНЗ "виступаючого ланцюга" і мутації 73665, І З368А, У407М в домені СНЗ "отвірного ланцюга" (нумерація за покажчиком БО системи Кабаї). Також може бути використаний додатковий дисульфідний місток між доменами СНЗ (Мегспапі, А.М., та ін., Маїиге
Зо Віотесн.16 (1998) 677-681), напр., введенням мутації У349С у домен СНЗ "виступного ланцюга"; та мутації ЕЗ356С або 5354С у домен СНЗ "отвірного ланцюга". Тому в іншому варіанті виконання, якому віддають перевагу, мультиспецифічне антитіло згідно даного опису містить мутації У349С та Т366МУ в одному із двох доменів СНЗ і мутації ЕЗ56С, 73665, І З68А та у407М в іншому із двох доменів СНЗ; або мультиспецифічне антитіло згідно даного опису містить мутації У349С та Т366МУ в одному із двох доменів СНЗ і мутації 5354С, 73665, І З368А та 407 в іншому із двох доменів СНЗ (додаткова мутація У349С в одному із доменів СНЗ і додаткова мутація ЕЗ56С або 5354С в іншому домені СНЗ3 утворюють міжланцюговий дисульфідний місток) (нумерація за покажчиком БО системи Кабайю.
Однак альтернативно або додатково можуть застосовуватись і інші технології "виступів-в- отвори", як описано у ЕР 1 870 459 А1. В одному варіанті виконання мультиспецифічне антитіло згідно даного опису включає мутації К409О0 та КЗ7ОЕ у домені СНЗ "виступного ланцюга" і мутації 0О399К та ЕЗ57К у домені СНЗ "отвірного ланцюга" (нумерація за покажчиком ЄЮ системи Кабай.
В одному варіанті виконання мультиспецифічне антитіло згідно даного опису містить мутацію Т36б6УУ у домені СНЗ "виступного ланцюга" і мутації 73665, І 368А і у407М у домені СНЗ "отвірного ланцюга", а також додатково містить мутації К409О0 та КЗ7ОЕ у домені СНЗ "виступного ланцюга" і мутації 0399К та ЕЗ57К у домені СНЗ "отвірного ланцюга" (нумерація за покажчиком ЕЄШО системи Кабай.
В одному із варіантів виконання мультиспецифічне антитіло згідно даного опису містить мутації У349С та Т366МУ в одному із двох доменів СНЗ і мутації 5354С, 73665, І З368А та 407 в іншому із двох доменів СНЗ; або мультиспецифічне антитіло згідно даного опису містить мутації У349С та Т366МУ в одному із двох доменів СНЗ і мутації 5354С, 73665, І 368А та 7407 в іншому із двох доменів СНЗ, а також додатково містить мутації К4090 та КЗ70Е у домені СНЗ "виступного ланцюга" і мутації 0399К та ЕЗ57К у домені СНЗ "отвірного ланцюга" (нумерація за покажчиком ЄШ системи Каба).
Окрім технології "виступів-в-отвори", в галузі відомі й інші техніки модифікації доменів СНЗ важких ланцюгів мультиспецифічного антитіла для спонукання до гетеродимеризації. Ці технології, особливо описані в УМО 96/27011, УМО 98/050431, ЕР 1870459, МО 2007/110205, УМО 2007/147901, МО 2009/089004, М/о 2010/129304, МО 2011/90754, МО 2011/143545, МО 60 2012/058768, УМО 2013/157954 ії УМО 2013/096291, розглядаються тут як альтернативи технології
"виступів-в-отвори" в комбінації з описаним тут мультиспецифічним антитілом.
В одному з варіантів виконання мультиспецифічного антитіла згідно даного опису для забезпечення гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла використовують підхід, описаний в ЕР 1870459. Цей підхід базується на введенні заряджених амінокислот з протилежними зарядами у конкретних положеннях поверхні контакту доменів СНЗ/СНЗ між обома, першим і другим, важкими ланцюгами.
Відповідно, цей варіант виконання стосується мультиспецифічного антитіла згідно даного опису, де у третинній структурі антитіла домен СНЗ першого важкого ланцюга і домен СНЗ другого важкого ланцюга утворюють поверхню контакту, розташовану між відповідними доменами СНЗ антитіла, де кожна з відповідних амінокислотних послідовностей домену СНЗ першого важкого ланцюга і домену СНЗ другої важкої ланцюга включає набір амінокислот, розташований в межах зазначеної поверхні контакту в третинній структурі антитіла, причому з набору амінокислот, розташованого в межах поверхні контакту в домені СНЗ одного важкого ланцюга, перша амінокислота заміщена позитивно зарядженою амінокислотою, і з набору амінокислот, розташованого в межах поверхні контакту в домені СНЗ іншого важкого ланцюга, друга амінокислота заміщена негативно зарядженою амінокислотою. Мультиспецифічне антитіло згідно цього варіанту виконання також називають "сконструйоване з СНЗ(/-) мультиспецифічне антитіло" (де скорочення "ч7-" позначає протилежно заряджені амінокислоти, введені у відповідні домени СНЗ).
В одному з варіантів виконання вказаного сконструйованого з СНЗ(-/-) мультиспецифічного антитіла згідно даного опису позитивно заряджена амінокислота вибрана з К, К і Н, а негативно заряджена амінокислота вибрана з Е або 0.
В одному з варіантів виконання вказаного сконструйованого з СНЗ(ї/-) мультиспецифічного антитіла згідно даного опису позитивно заряджена амінокислота вибрана з К і К, а негативно заряджена амінокислота вибрана з Е або 0.
В одному з варіантів виконання вказаного сконструйованого з СНЗ(ї/-) мультиспецифічного антитіла згідно даного опису позитивно зарядженою амінокислотою є К, а негативно зарядженою амінокислотою є Е.
Зо В одному з варіантів виконання вказаного сконструйованого з СНЗ(ї7-) мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота К у положенні 409 заміщена О і амінокислота К у положенні заміщена Е, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота Ю у положенні 399 заміщена К і амінокислота Е у положенні 357 заміщена К (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кабаю.
В одному з варіантів виконання мультиспецифічного антитіла згідно даного опису для забезпечення гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла використовують підхід, описаний в М/О 2013/157953. В одному з варіантів виконання вказаного мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота Т у положенні 366 заміщена К, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота І. у положенні 351 заміщена О (нумерація згідно покажчика БЮ системи Кара). В іншому варіанті виконання вказаного мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота Т у положенні 366 заміщена К і амінокислота Ї у положенні 351 заміщена К, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота Г. у положенні 351 заміщена 0 (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кабай.
В іншому варіанті виконання вказаного мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота Т у положенні 366 заміщена К і амінокислота
Гу положенні 351 заміщена К, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота Її. у положенні 351 заміщена О (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кара). Додатково домен
СНЗ іншого важкого ланцюга включає принаймні одне з наступних заміщень: амінокислота У у положенні 349 заміщена Е, амінокислота У у положенні 349 заміщена 0, і амінокислота Г. у положенні 368 заміщена Е (нумерація згідно покажчика ЄО системи Кабра)). В одному з варіантів виконання амінокислота І. у положенні 368 заміщена Е (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи
Кабай).
В одному з варіантів виконання мультиспецифічного антитіла згідно даного опису для забезпечення гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла використовують підхід, описаний в МО 2012/058768. В одному з варіантів виконання вказаного мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота Її у положенні 351 заміщена М і амінокислота М у положенні 407 заміщена А, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота Т у положенні бо 366 заміщена А і амінокислота К у положенні 409 заміщена Е (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кара). В іншому варіанті виконання додатково до вищезазначених заміщень в домені
СНЗ іншого важкого ланцюга заміщена принаймні одна з амінокислот у положеннях: 411 (початково Т), 399 (початково 0), 400 (початково 5), 405 (початково Е), 390 (початково М) апа 392 (початково К) (нумерація згідно покажчика ЕЄО системи Кабаї). Заміщеннями, яким віддають перевагу, є: - заміщення амінокислоти Т у положенні 411 амінокислотою, вибраною з М, К, О.К, О, Е і М/ (нумерація згідно покажчика БО системи Каба), - заміщення амінокислоти Ю у положенні 399 амінокислотою, вибраною з Б, М, мі Кк (нумерація згідно покажчика БО системи Каба), - заміщення амінокислоти 5 у положенні 400 амінокислотою, вибраною з Е,Ї Об, Кік (нумерація згідно покажчика БО системи Каба), - заміщення амінокислоти Е у положенні 405 амінокислотою, вибраною з Ї, М, Т, 5, М і М/ (нумерація згідно покажчика БО системи Каба), - заміщення амінокислоти М у положенні 390 амінокислотою, вибраною з КЕ, К і О (нумерація згідно покажчика ЄО системи Каба), - заміщення амінокислоти К у положенні 392 амінокислотою, вибраною з М, М, БК, Ї, Її Е (нумерація згідно покажчика БО системи Каба)ю,
В іншому варіанті виконання вказаного мультиспецифічного антитіла згідно даного опису (сконструйованого відповідно до УМО 2012/058768) в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота ГІ у положенні 351 заміщена У і амінокислота У у положенні 407 заміщена А, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота Т у положенні 366 заміщена М і амінокислота
К у положенні 409 заміщена Е (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кара). В іншому варіанті виконання вказаного мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота ХХ у положенні 407 заміщена А, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота Т у положенні 366 заміщена А і амінокислота К у положенні 409 заміщена Е (нумерація згідно покажчика БО системи Кара). В зазначеному останньому попередньому варіанті виконання в домені СНЗ зазначеного іншого важкого ланцюга амінокислота К у положенні 392 заміщена Е, амінокислота Т у положенні 411 заміщена Е, амінокислота Ю у положенні 399 заміщена К і амінокислота 5 у положенні 400 заміщена Кк
Зо (нумерація згідно покажчика БО системи Каба).
В одному з варіантів виконання мультиспецифічного антитіла згідно даного опису для забезпечення гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла використовують підхід, описаний в УМО 2011/143545. В одному з варіантів виконання зазначеного мультиспецифічного антитіла згідно даного опису амінокислотні модифікації доменів СНЗ обох важких ланцюгів вводять у положення 368 і/або 409 (нумерація згідно покажчика БО системи Кабай.
В одному з варіантів виконання мультиспецифічного антитіла згідно даного опису для забезпечення гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла використовують підхід, описаний в УМО 2011/090762. МО 2011/090762 стосується амінокислотних модифікацій за технологією "виступів-в-отвори". В одному з варіантів виконання вказаного сконструйованого з СНЗ(ВвО) мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота Т у положенні 366 заміщена МУ, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота М у положенні 407 заміщена А (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кара). В іншому варіанті виконання вказаного сконструйованого з СНЗ(ВвоО) мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота Т у положенні 366 заміщена У, а в домені
СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота М у положенні 407 заміщена Т (нумерація згідно покажчика БО системи Кабай.
В одному з варіантів виконання мультиспецифічного антитіла згідно даного опису, яке належить до ізотипу ЇдО2, для забезпечення гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла використовують підхід, описаний в МО 2011/090762.
В одному з варіантів виконання мультиспецифічного антитіла згідно даного опису для забезпечення гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла використовують підхід, описаний в МО 2009/089004. В одному з варіантів виконання вказаного мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота К або М у положенні 392 заміщена негативно зарядженою амінокислотою (в одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, Е або 0, в одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, 0), а в домені СНЗ іншого важкого бо ланцюга амінокислота Ю у положенні 399, амінокислота Е або О у положенні 356 або амінокислота Е у положенні 357 заміщена позитивно зарядженою амінокислотою (в одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, К або К, в одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, К, в одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, амінокислоти у положеннях 399 або 356 заміщені К) (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кара). В одному додатковому варіанті виконання додатково до вищезазначених заміщень в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота К або К у положенні 409 заміщена негативно зарядженою амінокислотою (в одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, Е або 0, в одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, Ю) (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи
Кара). У ще одному додатковому варіанті виконання додатково або альтернативно до вищезазначених заміщень в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота К у положенні 439 і/або амінокислота К у положенні 370 незалежно одна від одної заміщені негативно зарядженою амінокислотою (в одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, Е або 0, в одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, Ю) (нумерація згідно покажчика ЕЕ системи Кабай.
В одному з варіантів виконання мультиспецифічного антитіла згідно даного опису для забезпечення гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла використовують підхід, описаний в УМО 2007/147901. В одному з варіантів виконання вказаного мультиспецифічного антитіла згідно даного опису в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислота К у положенні 253 заміщена Е, амінокислота О у положенні 282 заміщена К і амінокислота К у положенні 322 заміщена 0, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислота О у положенні 239 заміщена К, амінокислота Е у положенні 240 заміщена К і амінокислота К у положенні 292 заміщена О (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кабаї).
В одному з варіантів виконання мультиспецифічного антитіла згідно даного опису для забезпечення гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла використовують підхід, описаний в МО 2007/110205.
В одному з варіантів виконання всіх аспектів та варіантів виконання згідно даного опису мультиспецифічне антитіло є біспецифічним антитілом або триспецифічним антитілом. В одному кращому варіанті виконання винаходу мультиспецифічне антитіло являє собою
Зо біспецифічне антитіло.
В одному з варіантів виконання всіх аспектів згідно даного опису антитіло є бівалентним або тривалентним антитілом. В одному з варіантів виконання антитіло є бівалентним антитілом.
В одному з варіантів виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло має структуру константного домену антитіла типу (30. У ще іншому варіанті виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло характеризується тим, що зазначене мультиспецифічне антитіло належить до підкласу людських Їдс1 або до підкласу людських Їдс1 з мутаціями І 234А та І 235А. У ще іншому варіанті виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло характеризується тим, що зазначене мультиспецифічне антитіло належить до підкласу людських ІдДс52. У ще іншому варіанті виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло характеризується тим, що зазначене мультиспецифічне антитіло належить до підкласу людських Ід023. У ще іншому варіанті виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло характеризується тим, що зазначене мультиспецифічне антитіло належить до підкласу людських Ід04 або до підкласу людських Ід084 з додатковою мутацією 5228Р. У ще іншому варіанті виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло характеризується тим, що зазначене мультиспецифічне антитіло належить до підкласу людських Їдс1 або підкласу людських Ідс4. У ще іншому варіанті виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло характеризується тим, що зазначене мультиспецифічне антитіло належить до підкласу людських ІдДО1 з мутаціями І 234А та І1235А (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кабраб. У ще іншому варіанті виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло характеризується тим, що зазначене мультиспецифічне антитіло належить до підкласу людських ЇДО1 з мутаціями І 234А, І 235А та РЗ3290 (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи
Кара). У ще іншому варіанті виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло характеризується тим, що зазначене мультиспецифічне антитіло належить до підкласу людських ІдС4 з мутаціями 5228Р та І 235Е (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кара). У ще іншому варіанті виконання всіх аспектів згідно даного опису мультиспецифічне антитіло характеризується тим, що зазначене мультиспецифічне антитіло належить до підкласу людських Ідс4 з мутаціями 5228Р, 1235Е та РЗ290 (нумерація згідно покажчика ЄЮ системи
Кабай). 60 В одному варіанті виконання усіх аспектів згідно даного опису антитіло, яке містить важкий ланцюг, що включає домен СНЗ, як визначено тут і далі, містить додатковий С-кінцевий гліцин- лізиновий дипептид (5446 та К447, нумерація згідно покажчика ЄЮ системи Кара). В одному варіанті виконання антитіло, яке містить важкий ланцюг, що включає домен СНЗ, як визначено тут і далі, містить додатковий С-кінцевий гліциновий залишок (5446, нумерація згідно покажчика
БЕ системи Каба)б. 5. Варіанти антитіл
У певних варіантах виконання розглядаються варіанти амінокислотних послідовностей наданих тут антитіл. Наприклад, може знадобитись покращити афінність зв'язуваня і/або інші біологічні властивості антитіла. Варіанти амінокислотних послідовностей антитіл можна підготувати шляхом введення належних модифікацій у нуклеотидну послідовність, яка кодує антитіло, або шляхом синтезу пептидів. Такі модифікації включають, наприклад, делеції з і/або інсерції в і/або заміщення залишків у амінокислотних послідовностях антитіла. Для одержання кінцевої конструкції можна виконувати будь-яку комбінацію делецій, інсерцій та заміщень, за умови, що кінцева конструкція володіє бажаними характеристиками, напр., зв'язуванням з антигеном. а) Варіанти заміщень, інсерцій та делецій
У деяких варіантах виконання забезпечують варіанти антитіла, що мають одне або більше заміщень амінокислот. Місця, що представляють інтерес для заміщувального мутагенезу, включають НМК та ЕК. Консервативні заміщення наведені у Таблиці 1 під заголовком "консервативні заміщення". Більш суттєві зміни наведені у Таблиці 1 під заголовком "приклади заміщень", а також додатково описані нижче по відношенню до класів бокових ланцюгів амінокислот. Амінокислотні заміщення можна вводити в досліджуване антитіло і продукти, які випробовують на бажану активність, напр., продовжене/покращене зв'язування з антигеном, знижену імуногенність чи покращену АЗКЦ чи КЗЦ.
Таблиця 1
Ше() 77711111 | бешМа;МесАа; РпесНорлейцин.ї | їв цец(Ю 77777110 | НорлейциноМПерМа;МерАвіРнеї | - їб
Амінокислоти можуть бути згруповані за спільними властивостями бічних ланцюгів: (1) гідрофобні: Норлейцин, Меї, Аа, маї, Г ем, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Суб, Зег, ТАг, Азп, Сп;
Зо (3) кислотні: Азр, Сім; (4) основні: Ні, Г ув, Ага; (5) залишки, що впливають на орієнтацію ланцюга: су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє.
Неконсервативні заміщення включатимуть заміну члена одного з цих класів на член іншого класу.
Один із типів заміщувального варіанта включає заміщення одного або більше залишків гіперваріабельної ділянки батьківського антитіла (напр., гуманізованого або людського антитіла). Як правило, одержаний(-і) варіант(-и), відібрані для подальших досліджень, матимуть модифікації (напр., вдосконалення) певних біологічних властивостей (напр., підвищену афінність, знижену імуногенність) порівняно з батьківським оантитілом і/або істотно зберігатимуть певні біологічні властивості батьківського антитіла. Прикладом заміщувального варіанта є антитіло з дозрілою афінністю, яке звичайно можна створити, напр., користуючись техніками дозрівання антитіл на основі фаг-дисплею, такими, як описані тут. Коротко, один або більше залишків НМ піддають мутації, і варіанти антитіл піддають фаг-дисплею та випробовують на конкретну біологічну активність (напр., афінність зв'язування).
До НМК можуть вносити зміни (напр., заміщення), напр., для покращення афінності антитіла.
Такі зміни можуть вносити в "гарячі точки" НУК, тобто залишки, кодовані кодонами з високою частотою мутацій під час процесу соматичного дозрівання (див., напр., Споулапигу, Р.5.,
Меїйподе Мої. Віої. 207 (2008) 179-196), і/або в залишки, що контактують з антигеном, перевіряючи одержаний варіантний УН або Мі на афінність зв'язування. Дозрівання антитіл шляхом конструювання і перевідбору з вторинних бібліотек описане, напр, у Ноодепроот, Н.Е. та ін. в Меїйоа5 іп МоїІесшіаг Віоіоду 178 (2002) 1-37. В деяких варіантах виконання дозрівання антитіл різноманітність вводять у варіабельні гени, обрані для дозрівання, будь-яким із різноманітних методів (напр., стійка до помилок ПЛР, перестановка ланцюгів або спрямований на олігонуклеотиди мутагенез). Тоді створюють вторинну бібліотеку. Бібліотеку піддають скринінгу з метою ідентифікувати будь-які варіанти антитіл з бажаною афінністю. Інший метод введення різноманітності включає підходи через НУК, в яких декілька залишків НУК (напр., 4-6 залишків за раз) рандомізують. Можна конкретно ідентифікувати залишки НМЕ, що беруть участь у зв'язуванні з антигеном, напр., використовуючи аланін-сканувальний мутагенез або моделювання. Зокрема, часто мішенню стають СОК-НЗ та СОК-І 3.
У певних варіантах виконання заміщення, інсерції або делеції можуть відбуватися в одній або більше НМЕ. доти, поки такі зміни не знижують істотно здатність антитіла зв'язуватися з антигеном. Наприклад, у НМК можна вносити консервативні зміни (напр., описані тут консервативні заміщення), які не знижують істотно афінність зв'язування. Такі зміни можуть, наприклад, знаходитись поза залишками НУК, що контактують з антигеном. У певних варіантах виконання наданих вище варіантів послідовностей МН та Мі кожна НУК або незмінена, або містить не більш ніж одне, два або три амінокислотних заміщення.
Корисним методом ідентифікації залишків або ділянок антитіла, що можуть слугувати мішенями мутагенезу, є "аланін-сканувальний мутагенез", описаний Сиппіпопат, В.С. та УуеїЇ5,
У.А., Зсієпсе 244 (1989) 1081-1085. В цьому методі залишок або групу залишків-мішеней (напр., заряджених залишків, таких як Аг9, Азр, Ніб5, Гуз та Сім) ідентифікують та замінюють нейтральною або негативно зарядженою амінокислотою (напр., аланіном або поліаланіном) з метою визначити, чи впливає це на взаємодію антитіла з антигеном. В амінокислотні положення, що виявили функціональну чутливість до початкових заміщень, можуть вводитись подальші заміщення. Альтернативно або додатково для ідентифікації точок контакту антитіла з антигеном може слугувати кристалічна структура комплексу антиген-антитіло. Такі контактні залишки та сусідні залишки можна брати як мішені або виключити з кандидатів на заміщення.
Варіанти можна піддавати скринінгу для визначення, чи мають вони бажані властивості.
Інсерції в амінокислотних послідовностях включають аміно- і/або карбоксикінцеві злиття, довжина яких різниться від одного залишку до поліпептидів, що містять сто або більше залишків, а також вставки окремих або множинних амінокислотних залишків всередину послідовності. Приклади кінцевих інсерцій включають антитіло з М-кінцевим метіонільним залишком. Інші інсерційні варіанти молекули антитіла включають злиття з М- або С-кінцем антитіла фермента (напр., для АЮОЕРТ) або поліпептиду, який подовжує період напівжиття антитіла в сироватці. б) Варіанти глікозилювання
У певних варіантах виконання надане тут антитіло змінене з метою підвищити або знизити ступінь його глікозилювання. Додавання або видалення сайтів глікозилювання до/з антитіла можна звичайно здійснити шляхом зміни амінокислотної послідовності таким чином, щоб створити або вилучити один або більше сайтів глікозилювання.
Якщо антитіло включає Ес-ділянку, то можна змінити приєднаний до неї вуглевод. Природні антитіла, які виробляються в клітинах ссавців, зазвичай включають розгалужений біантенний олігосахарид, приєднаний, як правило, М-зв'язком до А5зп297 домену СН2 Ес-ділянки (див., напр., Умгідні, А. ії Могтізоп, 5.ЇГ., ТІВТЕСН 15 (1997) 26-32). Олігосахарид може охоплювати різні вуглеводи, напр., манозу, М-ацетилглюкозамін (ІСМАс), галактозу та сіалову кислоту, а також бо фукозу, приєднану до сІСМАс у "стовбурі" біантенної структури олігосахариду. У деяких варіантах виконання олігосахарид антитіла згідно винаходу може бути модифікований з метою створити варіанти антитіла з певними покращеними властивостями.
В одному з варіантів виконання надано варіанти антитіла, в структурі вуглеводу яких бракує фукози, приєднаної (напряму або непрямо) до Ес-ділянки. Наприклад, кількість фукози в такому антитілі може становити від 1 95 до 80 95, від 1 95 до 65 905, від 5 95 до 65 95 або від 20 95 до 40 95.
Кількість фукози визначають розрахунком середньої кількості фукози в цукровому ланцюзі при
Азп297 відносно суми всіх глікоструктур, приєднаних до Азп297 (напр., комплексних, гібридних та високоманозних структур), виміряної мас-спектрометрією МАГОІ-ТОЕ, як описано, наприклад, у УМО 2008/077546. А5п297 позначає залишок аспарагіну, розташований приблизно в положенні 297 ЕРсо-ділянки (нумерація залишків Ес-ділянки за покажчиком ЕМО); однак через незначні варіації послідовностей А5п297 також може бути розташований приблизно на х 3 амінокислоти вище або нижче від положення 297, тобто між положеннями 294 та 300. Такі варіанти фукозилювання можуть мати покращену функцію АЗКЦ. Див., напр., 05 2003/0157108;
ОБ 2004/0093621. Приклади публікацій, які стосуються "дефукозильованих" або "фукозодефіцитних" варіантів антитіл, включають: 5 2003/0157108; УМО 2000/61739; УМО 2001/29246; ОБ 2003/0115614; ОБ 2002/0164328; ОБ 2004/0093621; 005 2004/0132140; 5 2004/0110704; 05 2004/0110282; 005 2004/0109865; МО 2003/085119; МО 2003/084570; МО 2005/035586; УМО 2005/035778; МО 2005/053742; УМО 2002/031140; ОКа?лакі, А. та ін., У. Мої. Віої. 336 (2004) 1239-1249; Уатапе-ОПпикі, М. та ін., Віоїесп. Віоепд. 87 (2004) 614-622. Приклади клітинних ліній, що здатні виробляти дефукозильовані антитіла, включають клітини Гес13 СНО, дефіцитні за білювим фукозилюванням (Рірка, «. та ін., Агоп. Віоспет. Віорпув. 249 (1986) 533- 545; 05 2003/0157108; а також МО 2004/056312, особливо Приклад 11), та нокаутні клітинні лінії, такі як клітини СНО з нокаутом гену альфа-1,6-фукозилтрансферази, РОТВ8, (див, напр.,
Уатапе-ОпПпикі, М. та ін., Віоїесп. Віоепо. 87 (2004) 614-622; Капаа, У. та ін., Віотесппої. Віоепд. 94 (2006) 680-688; а також УМО 2003/085107).
Додатково надані варіанти антитіл з роздвоєними олігосахаридами, напр., де приєднаний до
Ес-ділянки антитіла біантенний олігосахарид розсічений надвоє СіІсСМАс. Такі варіанти антитіл можуть мати зменшене фукозилювання і/або покращену функцію АЗКЦ. Приклади подібних варіантів антитіл описані, напр., в УМО 2003/011878; 05 6,602,684; та 5 2005/0123546. Також надано варіанти антитіла з принаймні одним галактозним залишком в приєднаному до Ес- ділянки олігосахариді. Такі варіанти антитіл можуть мати покращену функцію КЗЦ. Такі варіанти антитіл описані, напр., в УМО 1997/30087; УМО 1998/58964; та УМО 1999/22764. в) Варіанти Ес-ділянки
У певних варіантах виконання у Ес-ділянку наданого тут антитіла може бути внесена одна або більше модифікацій, утворюючи варіант за Ес-ділянкою. Варіант за Ес-ділянкою може включати послідовність людської Ес-ділянки (напр., людської Ес-ділянки ІдДО1, Ідс2, ІдеЗ або 39054), яка включає амінокислотну модифікацію (напр., заміщення) в одному або більше амінокислотних положеннях.
У певних варіантах виконання винаходом передбачено варіант антитіла, який володіє деякими, але не всіма ефекторними функціями, що робить його бажаним кандидатом для застосування, в якому важливий період напівжиття антитіла іп мімо, а певні ефекторні функції (такі як комплемент і АЗКЦ) не потрібні або шкідливі. Для підтвердження зниження/вичерпання активностей КЗЦ і/або АЗКЦ можна провести аналіз цитотоксичності іп мійго і/або іп мімо.
Наприклад, щоб упевнитися в тому, що антитіло не зв'язує Есук (а отже, імовірно, не має АЗКЦ- активності), але зберігає здатність зв'язувати ЕсКп, можна провести аналіз зв'язування з Ес- рецептором (ЕСК). Основні клітини, що опосередковують АЗКЦ, НК-клітини, експресують лише
Ес(АЧ, тоді як моноцити експресують ЕсукіІ, ЕсукІІ та ЕсукІ. Експресія ГСК на гемопоетичних клітинах підсумована в Таблиці З на сторінці 464 Камеїси, М. та Кіпеї, 9У.Р., Аппи. Кем. Іттипої. 9 (1991) 457-492. Необмежуючі приклади аналізів оцінки активності АЗКЦ досліджуваної молекули іп міїго описані у О5 5,500,362 (див., напр. Неїїбігот, І. та ін., Ргос. Май. Асай. зсі. ОБА 83 (1986) 7059-7063; та Неїїбігот, І. та ін., Ргос. Май). Асад. Зсі. О5А 82 (1985) 1499-1502); 005 5,821,337 (див. Вгиддетапп, М. та ін., У. Ехр. Мей. 166 (1987) 1351-1361). Альтернативно можуть використовуватись методи нерадісоактивного аналізу (див., наприклад, нерадіоактивний аналіз цитотоксичності для проточної цитометрії АСТІ "м (СеПесппоїоду, Іпс. Маунтін-В'ю, СА; і нерадіоактивний аналіз цитотоксичності СуїотТох 962 (Рготеда, Медісон, УМ). Застосовні у таких аналізах ефекторні клітини включають одноядерні клітини периферичної крові (ОКПК) та природні кілери (НК). Альтернативно або додатково АЗКЦ-активність досліджуваної молекули можна оцінити іп мімо, напр., на тваринній моделі, такій, як описано у СіІупев, К. та ін., Ргос. Маї!.
Асад. 5сі. ОБА 95 (1998) 652-656. Для підтвердження нездатності антитіла зв'язувати С14 і, 60 відповідно, відсутності в нього КЗЦ, можна також виконати аналіз зв'язування Ста. Див., напр.,
ІФА зв'язування Сід і СЗс у М/О 2006/029879 та МО 2005/100402. Для оцінки активації комплементу можна виконати КЗЦ-аналіз (див., наприклад, Са77апо-зЗапіого, Н. та ін., 5.
Іттипої. МеїШшоаз 202 (1996) 163-171; Стадод, М.5. та ін., Віоой 101 (2003) 1045-1052; та Стадад,
М.5. ії М.9. СіІеппіє, Віоса 103 (2004) 2738-2743). Можна також провести визначення зв'язування
ЕсКп та кліренсу/напівжиття іп мімо, використовуючи відомі в галузі методи (див., напр., Реїкома,
З.В. та ін., Іпї. Іттипої. 18 (2006) 1759-1769).
Антитіла зі зниженою ефекторною функцією включають антитіла із заміщенням одного або більше залишків Ес-ділянки 238, 265, 269, 270, 297, 327 та 329 (05 6,737,056). Такі Ес-мутанти включають Ес-мутантів із заміщеннями у двох або більше з амінокислотних положень 265, 269, 270, 297 і 327, включно з так званим Ес-мутантом "САМА" із заміщеннями залишків 265 і 297 на аланін (05 7,332,581).
Описані деякі варіанти антитіл із покращеним або зниженим зв'язуванням ЕсК (див., напр., 5 6,737,056; УМО 2004/056312, та ЗпПпіеїд5, К.Г.. та ін., 9. Віої. Спет. 276 (2001) 6591-6604).
У певних варіантах виконання варіант антитіла включає Ес-ділянку з одним або більше амінокислотними заміщеннями, які покращують АЗКЦ, напр., заміщеннями у положеннях 298, 333 і/або 334 Рс-ділянки (нумерація залишків за покажчиком ЕМ).
У деяких варіантах виконання внесені у Ес-ділянку зміни призводять до змінених (тобто покращених або знижених) зв'язування С14 і/або комплемент-залежної цитотоксичності (КЗЦ), напр., як описано у 05 6,194,551, УМО 99/51642, а також Ідизодіє, Е.Е. та ін., У. Іттипої. 164 (2000) 4178-4184.
Антитіла з продовженим періодом напівжиття та покращеним зв'язуванням з неонатальним
Ес-рецептором (ЕсКп), який відповідає за перенесення материнських до до плоду (Сиуєег, К.І... та ін., У. Іттипої. 117 (1976) 587-593, та Кіт, у.К. та ін., У. Іттипої. 24 (1994) 2429-2434), описані в О5 2005/0014934. Ці антитіла включають Ес-ділянку з одним або більше заміщеннями, які покращують зв'язування Ес-ділянки з ЕсоКп. Такі Ес-варіанти включають варіанти із заміщеннями одного або більше залишків Ес-ділянки: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, напр., заміщення залишку 434
Ес-ділянки (05 7,371,826).
Див. також Юипсап, А.К. і УМіпіег, ., Маїшге 322 (1988) 738-740; 05 5,648,260; 05 5,624,821; і
УМО 94/29351, які стосуються інших прикладів варіантів за Ес-ділянкою. г) Цистеїн-сконструйовані варіанти антитіл
У певних варіантах виконання може бути необхідно створити цистеїн-сконструйовані варіанти антитіл, напр, "тіо0МАБ", в яких один або більше залишків антитіла заміщені цистеїновими залишками. В конкретних варіантах виконання заміщені залишки знаходяться на доступних сайтах антитіла. Завдяки заміщенню цих залишків цистеїном реакційноздатні тіольні групи розміщуються на доступних сайтах антитіла і можуть бути використані для приєднання антитіла до інших груп, таких як фрагменти ліків або фрагменти лінкер-ліки, з метою створення імунокон'югатів, як описано далі. У певних варіантах виконання цистеїном може бути заміщений будь-який один або більше з наступних залишків: М205 (нумерація Кабаї) легкого ланцюга; А118 (нумерація Е)) важкого ланцюга; та 5400 (нумерація Е)) важкого ланцюга Ес-ділянки. Цистеїн- сконструйовані антитіла можна утворити згідно опису, напр., в О5 7,521,541. г) Похідні антитіл
У певних варіантах виконання надане тут антитіло може бути додатково модифіковане з включенням додаткових небілкових груп, які відомі з рівня техніки і доступні. Групи, придатні для утворення похідних антитіла, включають, але не обмежуються ними, водорозчинні полімери. Необмежувальні приклади водорозчинних полімерів включають, але не обмежуються ними, поліетиленгліколь (ПЕГ), співполімери етиленгліколю/пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1,3-діоксолан, полі-1,3,6-триоксан, співполімер етилену/малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (гомополімери або статистичні співполімери) та декстран або полі(н- вінілпіролідон)поліетиленгліколь, гомополімери пропропіленгліколю, співполімери проліпропіленоксиду/етиленоксиду, поліоксиетильовані поліоли (напр., гліцерин), полівініловий спирт та їх суміші. Переваги для виробництва завдяки своїй стабільності у воді може мати поліетиленгліколь-пропіональдегід. Полімер може мати будь-яку молекулярну масу і бути розгалуженим або нерозгалуженим. Кількість приєднаних до антитіла полімерів може різнитися, і в разі приєднання більш ніж одного полімеру вони можуть бути однаковими або різними молекулами. В цілому кількість і/або тип полімерів, які використовуються для отримання похідних, можна визначити з міркувань, які включають, але не обмежуються ними, конкретні властивості або функції антитіла, що підлягають покращенню, чи використовуватиметься бо похідне антитіла у лікуванні при певних умовах і т.д.
В іншому варіанті виконання надано кон'югати антитіла і небілкового фрагмента, який може бути вибірково нагрітий при піддаванні опроміненню. В одному з варіантів виконання небілковий фрагмент є вуглецевою нанотрубкою (Кат, М.УМ. та ін., Ргос. Май). Асад. сі. ОБА 102 (2005) 11600-11605). Випромінювання може мати будь-яку довжину хвилі і включає, але не обмежується ними, довжини хвиль, що не ушкоджують звичайні клітини, але нагрівають небілковий фрагмент до температури, при якій клітини близько від антитіла з небілковим фрагментом гинуть.
Б. Транспортні модулі через гематоенцефалічний бар'єр
В одному з варіантів виконання всіх аспектів антитіло являє собою мультиспецифічне антитіло, що має принаймні одну зв'язувальну специфічність до рецептора трансферину і принаймні одну зв'язувальну специфічність до терапевтичної мішені. В одному з варіантів виконання антитіло включає перший антигензв'язувальний сайт, що зв'язується з рецептором трансферину, і другий антигензв'язувальний сайт, що зв'язується з мозковим антигеном. У подальшому варіанті виконання мозковий антиген вибраний із групи, що складається з Абреїа, рецептора епідермального фактору росту (ЕСЕК), людського рецептора епідермального фактору росту 2 (НЕК2), альфа-синуклеїну, СО20, глюкоцереброзидази або білка- попередника амілоїду (АРР). В одному з варіантів виконання, якому віддають перевагу, мультиспецифічне антитіло зв'язується одночасно з
І) рецептором трансферину та Абеїа, або
І) рецептором трансферину та СО20, або
І) рецептором трансферину та альфа-синуклеїном, або
ІМ) рецептором трансферину та фосфо-тау-білком, або
М) рецептором трансферину та НЕК2, або
МІ) рецептором трансферину та глюкоцереброзидазою.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 81 та варіабельного домену легкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 82, які утворюють сайт зв'язування для
Коо) Ареїа.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЕО ІЮО МО: 79 та варіабельного домену легкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 80, які утворюють сайт зв'язування для людського СО20. В одному з варіантів виконання варіабельна ділянка важкого ланцюга включає заміну амінокислотного залишку у положенні 11 за системою Кабаї на будь-яку амінокислоту, крім лейцину. В одному з варіантів виконання заміщення включає заміну амінокислотного залишку у положенні 11 за системою Кабаї на неполярну амінокислоту. В одному з варіантів виконання заміщення включає заміну амінокислотного залишку у положенні 11 варіабельного домену важкого ланцюга ЗЕО І МО: 79 за системою КабБаї на амінокислотний залишок, вибраний із групи, що складається з валіну, лейцину, ізолейцину, серину та фенілаланіну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЕО ІЮО МО: 83 та варіабельного домену легкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 84, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклетїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 85, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 86, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 87, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від бо ЗЕО ІЮ МО: 88, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 89, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 90, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 91, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 92, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 93, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 94, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 24 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 37, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та сайт зв'язування для людської глюкоцереброзидази.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 7 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 34, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за 5ЕО ІЮО МО: 83 та варіабельного домену легкого ланцюга за ЗЕО ІЮО МО: 84, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклетїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні
Зо одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 7 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 34, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 85, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 86, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 7 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 34, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 87, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 88, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 7 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 34, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 89, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 90, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 7 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 34, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 91, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 92, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 7 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 34, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та принаймні одну пару з гуманізованого варіабельного домену важкого ланцюга, що походить від БЕО ІЮ МО: 93, та гуманізованого варіабельного домену легкого ланцюга, що походить від
ЗЕО ІЮ МО: 94, які утворюють сайт зв'язування для людського альфа-синуклеїну.
В одному із варіантів виконання антитіло є біспецифічним антитілом, що включає принаймні 60 одну пару з варіабельного домену важкого ланцюга за ЗЕО ІЮ МО: 7 та варіабельного домену легкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 34, які утворюють сайт зв'язування для рецептора трансферину, та сайт зв'язування для
Одновалентні зв'язувальні об'єкти, що специфічно зв'язуються з рецептором гематоенцефалічного бар'єру, можна охарактеризувати залежно від їхніх властивостей зв'язування і трансцитозу: - ефективне зв'язування з клітинами, що експресують РГЕБ, в якості одновалентного зв'язувального об'єкта, - ефективний трансцитоз іп міїго в якості одновалентного зв'язувального об'єкта, - перехресна реактивність людина-яванська макака (напр., в експериментах ВіАсоге і ЕАС5).
Скринінг трансцитозу можна виконати в аналізі на основі ПСМЕС/О3. Аналіз можна проводити 3 витісненням мітки. Ендотеліальні клітини мозку ПСМЕС/О3 інкубують з одновалентним зв'язувальним об'єктом протягом 1 години, після чого промивають і через 0 годин і 4 години після промивання визначають наступні параметри:
І) кількість одновалентного зв'язувального об'єкта, поглиненого клітинами під час фази навантаження,
І) базолатеральну кількість одновалентного зв'язувального об'єкта через 4 години після навантаження і промивання;
І) апікальну кількість одновалентного зв'язувального об'єкта через 4 години після навантаження і промивання;
ІМ) кількість одновалентного зв'язувального об'єкта у клітинах (шляхом лізису клітин) через 0 годин і 4 години після навантаження і промивання;
М) загальну кількість одновалентного зв'язувального об'єкта через 0 годин і 4 години після навантаження і промивання.
Щоб підходити на роль одновалентного зв'язувального об'єкта у транспортному модулі через гематоенцефалічний бар'єр згідно наданого тут опису, антитіло до рецептора трансферину (напр., як одновалентний зв'язувальний об'єкт) повинне І) поглинатися клітинами
ПСМЕС/ОЗ3 (ендоцитоз), ІЇ) переноситися назовні клітин ИСМЕС/О3 (екзоцитоз) та І) бути стабільним всередині клітин ПСМЕС/О3 (не піддаватися або якнайменше піддаватися транспортуванню в ендосому для розщеплення).
Зо Тому в одному з варіантів виконання одновалентний зв'язувальний об'єкт в аналізі на основі
ИСМЕС/О3 характеризується І) (суттєвим) поглинанням клітинами ЙСМЕС/О3 протягом одногодинного періоду навантаження, ІЇ) вивільненням в апікальну і/або базолатеральну камеру після періоду навантаження та етапу промивання в рамках 4 годин після промивання, та ПП) низькою (внутрішньоклітинною) швидкістю розщеплення.
В одному з варіантів виконання навантаження здійснюють у концентрації приблизно 2,67 мкг/мл одновалентного зв'язувального об'єкта протягом однієї години.
Було виявлено, що щоб підходити на роль одновалентного зв'язувального об'єкта у транспортному модулі через гематоенцефалічний бар'єр згідно наданого тут опису, одновалентний зв'язувальний об'єкт повинен продемонструвати у вищеописаному аналізі на основі ПСМЕС/О3 наступні порогові значення:
І) кількість одновалентного зв'язувального об'єкта, поглиненого клітинами під час фази навантаження - 400 пг або більше,
І) базолатеральна кількість одновалентного зв'язувального об'єкта через 4 години після навантаження і промивання - 100 пг або більше, та
І) апікальна кількість одновалентного зв'язувального об'єкта через 4 години після навантаження і промивання - 150 пг або більше.
Як еталон можна взяти мишаче антитіло 128.1 до людського рецептора трансферину (послідовності варіабельних ділянок див. у ММО 93/10819 та ЗЕО ІО МО: 64 і 65). В цьому випадку, щоб підходити на роль одновалентного зв'язувального об'єкта у транспортному модулі через гематоенцефалічний бар'єр згідно наданого тут опису, одновалентний зв'язувальний об'єкт повинен продемонструвати у вищеописаному аналізі на основі ПСМЕС/О3 наступні порогові значення:
І) кількість одновалентного зв'язувального об'єкта, поглиненого клітинами під час фази навантаження -- 60 95 або більше від навантаження антитіла 128.1,
І) базолатеральна кількість одновалентного зв'язувального об'єкта через 4 години після навантаження і промивання -- 60 95 або більше від навантаження антитіла 128.1, та
І) апікальна кількість одновалентного зв'язувального об'єкта через 4 години після навантаження і промивання -- 60 95 або більше від апікальної кількості антитіла 128.1.
Аналіз на основі НСМЕС/О3 можна виконувати наступним чином (це один варіант виконання бо всіх описаних тут аспектів):
Середовище і доповнення для ЯНСМЕС/ОЗ3 (див. МИЛО 2006/056879 та Умекзіег, В.В., та ін.,
ЕАЗЕВ 4). 19 (2005) 1872-1874) можна одержати від І опга. Клітини НСМЕС/О3 (пересіви 26-29) культивують/можуть культивувати на вкритих колагеном покривних скельцях (мікроскопних) або у колбах на середовищі ЕВМ2, що містить 2,5 95 ЕВ5, четверту частину доданих факторів росту та повністю укомплектоване доданим гідрокортизоном, гентаміцином і аскорбіновою кислотою.
У всіх трансцитозних тестах використовують/можуть використовувати фільтри-вставки (розмір пор 0,4 мкм, діаметр 12 мм) з ПЕТ-мембрани з високою густиною пор (1х108 пор/см") на 12-лункових планшетах для культивування клітин. Розрахунковий об'єм середовища для апікальної та базолатеральної камер, відповідно, становить 400 мкл та 1600 мкл. Апікальні камери фільтрів-вставок вкриті/можуть бути вкриті колагеном | з хвоста щура (7,5 мкг/см3У) і потім фібронектином (5 мкг/мл), за тривалості кожної інкубації одна година при КТ. Клітини
АСМЕС/О3 вирощують/можуть вирощувати до злитих моношарів (х2х105 клітин/см-) протягом 10-12 днів на середовищі ЕВМ2. Порожні фільтри блокують/можуть блокувати у ФСБ з 1 95 БСА протягом 1 години або протягом ночі (п/н) до аналізу і потім калібрувати в ЕВМ2 протягом принаймні години перед аналізом.
Аналіз (схему аналізу див. на Фігурі 1) виконували у безсироватковому середовищі ЕВМ2, яке в іншому відтворювали згідно наданого тут опису. В день аналізу клітини піддавали сироватковому голодуванню протягом 60 хв з метою вичерпати природній ліганд досліджуваного рецептору гематоенцефалічного бар'єру. Фільтри-вставки з або без клітин (але заблоковані протягом ночі у повному середовищі) інкубували апікально з досліджуваними моноклональними антитілами (одновалентним зв'язувальним об'єктом) протягом 1 години при 37 "Сб. Моношари промивали при кімнатній температурі (КТ) безсироватковим середовищем апікально (400 мкл) і базолатерально (1600 мкл) тричі по 3-5 хв. До апікальної камери додавали попередньо підігріте середовище і переносили фільтри на свіжий 12-лунковий планшет (заблокований протягом ночі у ФСБ з 1 95 БСА), який містив 1600 мкл попередньо підігрітого середовища. В цей момент фільтри з або без клітин лізували у 500 мкл буферу КІРА для визначення специфічного поглинання антитіла (одновалентного зв'язувального об'єкта).
Фільтри, що залишились, інкубували при 37 "С або при 4 "С та в різні моменти часу відбирали зразки для визначення апікального і/або базолатерального вивільнення антитіла
Зо (одновалентного зв'язувального об'єкта). Вміст антитіла у зразках можна кількісно визначити за допомогою високочутливого ІдДС-ІФА (див. Приклад 9). Для кожного моменту часу дані слід знімати з двох порожніх фільтрів і трьох фільтрів з клітинними культурами.
В. Рекомбінантні методи і композиції
Антитіла можна продукувати із застосуванням рекомбінантних методів і композицій, напр., як описано у 05 4,816,567. В одному з варіантів виконання забезпечено ізольовану нуклеїнову кислоту, яка кодує описане тут антитіло до рецептора трансферину. Така нуклеїнова кислота може кодувати амінокислотну послідовність, що включає М, і/або амінокислотну послідовність, що включає МН антитіла (напр., легкий і/або важкий ланцюги антитіла). У подальшому варіанті виконання забезпечено один або більше векторів (напр., векторів експресії), що включають таку нуклеїнову кислоту. У подальшому варіанті виконання забезпечено клітину-хазяїн, що включає таку нуклеїнову кислоту. В одному з таких варіантів виконання клітина-хазяїн включає (напр., була трансформована за допомогою): (1) вектор, що включає нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що включає Мі антитіла, і амінокислотну послідовність, що включає МН антитіла, або (2) перший вектор, що включає нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що включає Мі. антитіла, і другий вектор, що включає нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що включає МУН антитіла. В одному з варіантів виконання клітина-хазяїн є еукаріотичною, напр., клітиною яєчників китайського хом'яка (СНО) або лімфоїдною клітиною (напр., клітиною МО, М50, Зр20). В одному з варіантів виконання запропоновано спосіб одержання антитіла до рецептора трансферину, де спосіб включає культивування клітини-хазяїна, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антитіло, як це було описано вище, в умовах, придатних для експресії антитіла, і, необов'язково, виділення антитіла з клітини-хазяїна (або культурального середовища клітини-хазяїна).
Для рекомбінантного продукування антитіла до рецептора трансферину нуклеїнову кислоту, яка кодує антитіло, напр., як описано вище, виділяють та вводять у один або більше векторів для подальшого клонування та/або експресії в клітині-хазяїні. Таку нуклеїнову кислоту можна легко ізолювати та секвенувати за допомогою звичайних процедур (напр., за допомогою олігонуклеотидних зондів, здатних специфічно зв'язуватися з генами, що кодують важкі та легкі ланцюги антитіла).
Придатні клітини-хазяї для клонування або експресії векторів, що кодують антитіло, бо включають описані тут прокаріотичні або еукаріотичні клітини. Наприклад, антитіла можна продукувати в бактеріях, зокрема, коли глікозилювання та ефекторна функція Ес не потрібні.
Для експресії фрагментів антитіл та поліпептидів у бактеріях див., напр., 5 5,648,237, 05 5,789,199 та 05 5,840,523. (Див. також Спагпюоп, К.А., у: Меїпоа5 іп МоїІесшіаг Віоіоду, Т. 248,10,
В.К.С. (еа.), Нитапа Ргев55, Тотова, М) (2003), с. 245-254, де описано експресію фрагментів антитіл у Е. соїї.) Після експресії антитіло можна виділити з бактеріальної клітинної маси в розчинній фракції і додатково очистити.
Крім прокаріотів, придатними хазяями клонування або експресії для векторів, що кодують антитіла, є еукаріотичні мікроорганізми, такі як нитчасті гриби або дріжджі, включаючи штами грибків та дріжджів, шляхи глікозилювання яких були "гуманізовані", в результаті чого вони продукують антитіло з частковим або повним профілем глікозилювання людини. Див. бегпого55,
Т.О., Маї. Віоїтеси. 22 (2004) 1409-1414; та | і, Н. та ін., Маї. Віоїесі. 24 (2006) 210-215.
Придатні для експресії глікозильованих антитіл клітини-хазяї також отримують з багатоклітинних організмів (безхребетних та хребетних). Прикладами клітин безхребетних є клітини рослин та комах. Ідентифіковано численні штами бакуловірусів, які можна використовувати разом із клітинами комах, зокрема для трансфекції клітин ЗБродорієга
Тгидірегаа.
Як хазяї можуть бути використані і культури рослинних клітин. Див., напр., 05 5,959,177, 05 6,040,498, 05 6,420,548, 05 7,125,978 та 05 6,417,429 (де описана технологія РІ АМТІВОСІЕ5 "М для продукування антитіл на трансгенних рослинах).
Як хазяїв можна використати і клітини хребетних. Наприклад, корисними можуть бути лінії клітин ссавців, адаптовані до росту в суспензії. Інші приклади придатних ліній клітин-хазяїв ссавців представлені лінією СМ1 нирок мавпи, трансформованою 540 (СО5-7); лінією нирок ембріона людини (293 або 293 клітини згідно опису, напр., у сгапбат, РЕ... та ін., У. Сеп Мігої. 36 (1977) 59-74); клітинами нирок новонародженого хом'яка (ННХ); мишачими клітинами Сертолі (клітинами ТМА, як описано, напр..., у Маїнег, У.Р., ВіоІ. Кергоа. 23 (1980) 243-252); клітинами нирок мавпи (СМ1); клітинами нирок африканської зеленої мавпи (МЕКО-76); клітинами карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітинами нирки собаки (МОСК); клітинами печінки сірого щура (ВКІ. ЗА); клітинами легень людини (М/138); клітинами печінки людини (Нер 02); пухлиною молочних залоз миші (ММТ 060562); клітинами ТК, як описано, напр., у Маїнег, У.Р. та ін., Аппаї5 М.У. Асад. 5сі. 383 (1982) 44-68; клітинами МКС 5; та клітинами Е54. Інші придатні лінії клітин-хазяїв ссавців включають клітини яєчника китайського хом'яка (СНО), включно з клітинами ОНЕК-СНО (піар, 6. та ін., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 77 (1980) 4216-4220); а також мієломні клітинні лінії, такі як МО, МО та 5рг/0. Для огляду деяких ліній клітин-хазяїв ссавців, що придатні для виробництва антитіл, див., напр., Уаакі, Р. та УМи, А.М., Меїйоаз іп МоїІесшіаг
Віоіоду, Т. 248, І о, В.К.С. (ва.), Нитапа Ргез5, Тотова, МУ (2004), с. 255-268.
Г. Аналізи
Забезпечені тут антитіла до рецептора трансферину можуть бути піддані ідентифікації, скринінгу або характеристиці своїх фізико-хімічних властивостей і/або біологічних властивостей за допомогою різних відомих в даній галузі аналізів. 1. Аналіз зв'язування
В одному аспекті антитіло згідно із винаходом перевіряють на антигензв'язувальну активність, напр., за допомогою відомих методів, таких як ІФА, аїІрнагІЗА, вестерн-блотинг, матриця антитіл або оберненої фази тощо.
У прикладі аналізу ІФА або аїІрнаі! І5ЗА рецептор трансферину в розчині (супернатант клітин, лізати клітин або тканин, фізіологічні рідини тощо) зв'язується захоплювальним антитілом, яке специфічно зв'язується з першим епітопом на рецепторі трансферину або рецептором трансферину в певній конформації, та оантитілом виявлення, приєднаним до групи детектування, яке специфічно зв'язується з другим епітопом або конформацією рецептора трансферину. Зчитування здійснюють залежно від групи детектування (хемілюмінесценція, флуоресценція, люмінесценція, індукована переносом енергії тощо).
У випадку матриці антитіл антитіла точково наносять на скло або нітроцелюлозні чіпи.
Скельця блокують та інкубують з розчином, що містить рецептор трансферину, промивають для видалення незв'язаних антитіл, а зв'язані антитіла виявляють за допомогою відповідного флуоресцентно міченого вторинного антитіла. Сигнал флуоресценції вимірюється слайд- сканером флуоресценції. Аналогічно для обернено-фазових матриць рекомбінантний рецептор трансферину, супернатант клітин, лізати клітин або тканин, фізіологічні рідини тощо точково наносять на скляні або нітроцелюлозні чіпи. Скельця блокують та інкубують окремі матриці з антитілом до конкретного епітопу рецептора трансферину. Незв'язані антитіла відмивають, а зв'язані антитіла виявляють за допомогою відповідного флуоресцентно міченого вторинного бо антитіла. Сигнал флуоресценції вимірюється слайд-сканером флуоресценції (Оегпіск, о., та ін.,
У. Оріа Нез. 52 (2011) 2323-2331).
Г. Способи та композиції для діагностики та виявлення
У певних варіантах виконання будь-яке з наданих тут антитіл до рецептора трансферину придатне для виявлення присутності рецептора трансферину людини в біологічному зразку.
Термін "виявлення" тут і далі охоплює кількісне або якісне виявлення. У деяких варіантах виконання біологічний зразок містить клітину або тканину, таку як тканина мозку.
В одному з варіантів виконання надане антитіло до рецептора трансферину для застосування у способі діагностики або виявлення. В наступному аспекті надано спосіб виявлення присутності рецептора трансферину в біологічному зразку. У деяких варіантах виконання цей спосіб включає контактування біологічного зразка з описаним тут антитілом до рецептора трансферину в умовах, що допускають зв'язування антитіла до рецептора трансферину з рецептором трансферину, і виявлення утворення комплексу між антитілом до рецептора трансферину і рецептором трансферину. Такий спосіб може бути способом іп міго або іп мімо. В одному з варіантів виконання антитіло до рецептора трансферину використовують для вибору суб'єктів, що можуть бути обрані для терапії антитілом до рецептора трансферину, напр., де рецептор трансферину є біомаркером для відбору пацієнтів.
Приклади розладів, які можуть бути діагностовані за допомогою антитіла згідно винаходу, включають нейродегенерацію з накопиченням у мозку заліза типу 1 (МВІА!Т), ідіопатичну ортостатичну гіпотензію, синдром Дауна, комплекс Гуама та кілька порушень з тільцями Леві, такі як хвороба дифузних тілець Леві (0І ВО), варіант хвороби Альцгеймера з тільцями Леві (ВМАБ), деякі форми хвороби Гоше та деменція при хворобі Паркінсона (РОБ).
У певних варіантах виконання надано мічені антитіла до рецептора трансферину. Мітки включають, але не обмежуються ними, мітки або групи, які виявляються безпосередньо (наприклад, флуоресцентні, хромофорні, електронно-щільні, хемілюмінесцентні та радіоактивні мітки), а також групи, такі як ферменти або ліганди, які виявляються опосередковано, напр., через ферментативну реакцію або молекулярну взаємодію. Зразки міток включають, але не обмежуються ними, радіоіїзотопи ЗР, 740, 125І1, ЗН та 73, флуорофори, такі як хелати рідкісноземельних елементів або флуоресцеїн та його похідні, родамін та його похідні, данзил, умбеліферон, люциферази, напр., люциферазу світляка і бактеріальну люциферазу (05
Зо 4737456), люциферин, 2,3-дигідрофталазиндіони, пероксидазу хріну (НКР), лужну фосфатазу,
В--галактозидазу, глюкоамілазу, лізоцим, сахаридоксидази, напр., глюкозооксидазу, галактозоксидазу та глюкозо-6б-фосфатдегідрогеназу, гетероциклічні оксидази, такі як уриказа і ксантиноксидаза, в поєднанні з ферментом, який використовує пероксид водню для окиснення попередника барвника, таким як НЕР, лактопероксидазу або мікропероксидазу, біотин/авідин, спінові мітки, мітки з бактеріофагами, стабільні вільні радикали і т.п.
Д. Фармацевтичні склади
Фармацевтичні склади описаного тут антитіла до рецептора трансферину готують шляхом змішування такого антитіла, що має бажану ступінь чистоти, з одним або декількома необов'язковими фармацевтично прийнятними носіями (Кетіпдіоп'є Рпагтасешіса! Зсіепсев, 16-те видання, О5ої, А. (ейд.) (1980) ) у формі ліофілізованих композицій або водних розчинів.
Фармацевтично прийнятні носії як правило, є нетоксичними для реципієнтів в використовуваних дозах і концентраціях і включають, але не обмежуються ними: буфери, такі як фосфат, цитрат і інші органічні кислоти; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту та метіонін; консерванти (такі як октадецил диметилбензиламонію хлорид; гексаметонію хлорид; бензалконію хлорид; бензетонію хлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілпарабени, такі як метил або пропілпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; З-пентанол і м-крезол); поліпептиди з низькою молекулярною масою (менш ніж приблизно 10 залишків); білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полі(вінілпіролідон); амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводи, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕДТА; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солеутворюючі контр-іони, такі як натрій; металеві комплекси (напр., 7п-білкові комплекси); і/або неіонні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Приклади фармацевтично прийнятних носіїв також включають засоби диспергування ліків у міжклітинному просторі, такі як розчинні нейтрально активні глікопротеїни гіалуронідази (5НАБЕСР), наприклад, людські розчинні глікопротеїни гіалуронідази РН-20, такі як гпиРН2гОо (НУ ЕМЕХ-, Вахієг Іпіегпаїйопаї,
Іпс.). Деякі приклади 5НАБЕОР та способи їх застосування, включаючи гпишРН2О, описані в 05 2005/0260186 та 05 2006/0104968. В одному аспекті ЗХЗНАБЕСОР скомбіновані з однією або більше додатковими глікозаміногліканазами, такими як хондроїтинази. 60 Приклади ліофілізованих композицій антитіл описані в 05 6,267,958. Водні композиції антитіл включають описані в 05 6,171,586 та МО 2006/044908, де останні композиції містять гістидин-ацетатний буфер.
Описаний тут склад також може містити більше ніж одну діючу речовину, якщо це необхідно для конкретного показання, яке лікують, переважно речовини з комплементарним впливом, які не впливають негативно одна на одну. Такі активні інгредієнти, як правило, присутні в комбінації у кількостях, які є ефективними для поставленої мети.
Діючі речовини можуть міститися у мікрокапсулах, приготованих, наприклад, за допомогою методів коацервації або міжфазної полімеризації, наприклад, гідроксиметилцелюлози або желатино-мікрокапсул та полі-(метилметакрилат) мікрокапсул, відповідно, у колоїдних системах доставки лікарських засобів (наприклад, ліпосомах, мікросферах альбуміну, мікроемульсіях, наночастинках та нанокапсулах) або в макроемульсіях. Такі техніки описані у Кептіпдіоп'є
Ріпаптасеціїса! бсіепсез, 16-те видання, О5ої, А. (ейд.) (1980).
Можна приготувати препарати для тривалого вивільнення. Придатні приклади препаратів для тривалого вивільнення включають напівпроникні матриці твердих гідрофобних полімерів, що містять антитіло, де зазначені матриці мають форму профільних виробів, напр., плівок або мікрокапсул.
Склади для введення іп мімо, як правило, стерильні. Стерильності можна досягти, напр., шляхом фільтрації через стерилізуючі фільтраційні мембрани.
Е. Терапевтичні способи та композиції
Будь-яке із наданих тут антитіл до ТЯ можна застосовувати у лікарських способах. В одному з аспектів надане антитіло до ТІК для застосування як лікарського засобу. Наприклад, винаходом забезпечено спосіб транспортування лікарської сполуки через гематоенцефалічний бар'єр, що включає експонування антитіла до ТІК, сполученого з лікарською сполукою (напр., мультиспецифічного антитіла, що зв'язує як ТІК, так і мозковий антиген), у ГЕБ таким чином, щоб антитіло переносило приєднану лікарську сполуку через ГЕБ. В іншому прикладі винаходом забезпечено спосіб транспортування ліків від неврологічного порушення через гематоенцефалічний бар'єр, що включає експонування антитіла до ТІК згідно винаходу, сполученого з ліками від порушення головного мозку (напр., мультиспецифічного антитіла, що зв'язує як ТІК, так і мозковий антиген), у ГЕБ таким чином, щоб антитіло переносило приєднані
Зо ліки від неврологічного порушення через ГЕБ. В одному з варіантів виконання ГЕБ знаходиться у ссавця (напр., людини), напр. у такого, який має неврологічне порушення в тому числі, без обмежень: хворобу Альцгеймера (АБ), інсульт, деменцію, м'язову дистрофію (МО), розсіяний склероз (М5), аміотрофний бічний склероз (АЇ 5), муковісцидоз, синдром Ангельмана, синдром
Лідла, хворобу Паркінсона, хворобу Піка, хворобу Педжета, рак, травму головного мозку тощо.
В одному з варіантів виконання неврологічне порушення вибране з: невропатії, амілоїдозу, раку (напр., із залученням ЦНС або головного мозку), захворювання або розладу очей, вірусної чи мікробної інфекції, запалення (напр., ЦНС або головного мозку), ішемії, нейродегенеративного захворювання, судоми, поведінкового розладу, хвороби лізосомного накопичення та ін. Антитіла згідно винаходу особливо підходять для лікування таких неврологічних порушень завдяки їх здатності переносити один або декілька пов'язаних активних інгредієнтів/лриєднаних терапевтичних сполук через ГЕБ в ЦНеС/мозок, де знаходиться молекулярне, клітинне або вірусне/мікробне підгрунтя таких порушень. Невропатичні розлади - це захворювання або аномалії нервової системи, що характеризуються невідповідним або неконтрольованим сигналом нервів або його відсутністю, і включають, але не обмежуються ними, хронічні болі (в тому числі ноцицептивний біль), біль, спричинений пошкодженням тканин організму, включаючи біль, пов'язаний з раком, невропатичні болі (біль, викликаний аномаліями нервів, спинного мозку чи головного мозку) та психогенні болі (цілком або в основному пов'язані з психологічним розладом), головний біль, мігрень, невропатію та симптоми і синдроми, які часто супроводжують подібні невропатичні розлади, такі як запаморочення або нудота.
Для невропатичного розладу може бути вибраний неврологічний препарат-анальгетик, який охоплює, але не обмежується ними, наркотичний/опіоїдний анальгетик (тобто морфін, фентаніл, гідрокодон, меперидин, метадон, оксиморфон, пентазоцин, пропоксифен, трамадол, кодеїн та оксикодон), нестероїдний протизапальний препарат (НПЗП) (тобто ібупрофен, напроксен, диклофенак, дифлунісал, етодолак, фенопрофен, флурбіпрофен, індометацин, кеторолак, мефенамова кислота, мелоксикам, набуметон, оксапрозін, піроксикам, суліндак та толметин), кортикостероїд (тобто кортизон, преднізон, преднізолон, дексаметазон, метилпреднізолон і тріамцинолон), антимігренозний агент (тобто суматриптин, алмотриптан, фроватріптан, суматриптан, різатриптан, елетриптан, золмітриптан, дигідроерготамін, елетриптан та ерготамін), ацетамінофен, саліцилат (тобто аспірин, холіну саліцилат, магнію саліцилат, 60 дифлунісал і сальсалат), протисудомний засіб (тобто карбамазепін, клоназепам, габапентин,
ламотриджин, прегабалін, тіагабін і топірамат), анестетик (тобто ізофлуран, трихлоретилен, галотан, севофлуран, бензокаїн, хлоропрокаїн, кокаїн, циклометикаїн, диметокаїн, пропоксікаїн, прокаїн, новокаїн, пропаракаїн, тетракаїн, артикаїн, бупівакаїн, картікаїн, цинхокаїн, етидокаїн, левобупівакаїн, лідокаїн, мепівакаїн, піперокаїн, прілокаїн, ропівакаїн, тримекаїн, сакситоксин та
Б тетродотоксин) та сох-2-інгібітор (тобто целекоксиб, рофекоксиб та валдекоксиб). Для невропатичного розладу із запамороченням може бути вибраний неврологічний препарат проти запаморочень, включаючи, але не обмежуючись ними, меклізин, дифенгідрамін, прометазин та діазепам. Для невропатичного розладу із нудотою може бути вибраний неврологічний препарат проти нудоти, включаючи, але не обмежуючись ними, прометазин, хлорпромазин, прохлорперазин, триметобензамід та метоклопрамід.
Амілоїдози - це група захворювань та розладів, пов'язаних з позаклітинними білковими відкладеннями в ЦНС, включаючи, але не обмежуючись ними, вторинний амілоїдоз, віковий амілоїдоз, хворобу Альцгеймера (АБ), легке когнітивне порушення (МС), деменцію з тільцями
Леві, синдром Дауна, спадковий мозковий крововилив з амілоїдозом (голландський тип); комплекс паркінсонічної діменцві Гуама, церебральну амілоїдну ангіопатію, хворобу
Гантінгтона, прогресуючий над'ядерний параліч, розсіяний склероз; хворобу Крейцфельдта-
Якоба, хворобу Паркінсона, трансмісивну губчасту енцефалопатію, ВІЛ-пов'язану деменцію, аміотрофічний бічний склероз (АЇ 5), міозит-зі включеннями (ІВМ) та очні захворювання, пов'язані з відкладенням бета-амілоїду (тобто дегенерація жовтої плями, пов'язана з друзами оптична невропатія та катаракта).
Для амілоїдозу може бути вибраний неврологічний препарат, який охоплює, але не обмежується цим, антитіло чи іншу зв'язувальну молекулу (включаючи, але не обмежуючись ними, малу молекулу, пептид, аптамер або інший білковий зв'язувач), який специфічно зв'язується з мішенню, вибраною з: бета-секретази, тау-білка, пресеніліну, білка-попередника амілоїду або його частин, бета-амілоїдного пептиду або його олігомерів або фібрил, рецептора смерті 6 (ОКб), рецептора кінцевих продуктів посиленого глікозилювання (КАСЕ), паркіну і гантінтину; інгібітор холінестерази (тобто галантамін, донепезил, ривастигмін і такрин); антагоніст рецептора ММОА (тобто, мемантин), деплетор моноаміну (тобто тетрабеназин); ерголоїду мезилат; антихолінергічний агент проти паркінсонізму (тобто проциклідін,
Зо дифенгідрамін, тригексилфенідил, бензтропін, біпериден та тригексифенідил); дофамінергічний агент проти паркінсонізму (тобто ентакапон, селегілін, праміпексол, бромкриптин, ротиготин, селегілін, ропінірол, разагілін, апоморфін, карбідопа, леводопа, перголід, толкапон та амантадин); тетрабеназин; протизапальний засіб (включаючи, але не обмежуючись ним, нестероїдний протизапальний препарат (тобто індометацин та інші сполуки, перелічені вище), гормон (тобто естроген, прогестерон і лейпролід), вітамін (тобто фолат і нікотинамід), димеболін, гомотаурин (тобто З-амінопропансульфонова кислота, ЗАПС), модулятор активності серотонінових рецепторів (тобто ксаліпроден); інтерферон та глюкокортикоїд.
Рак ЦНС характеризується аберантною проліферацією однієї або кількох клітин ЦНС (тобто нервової клітини) і включає, але не обмежується ними, гліому, мультиформну гліобластому, менінгіому, астроцитому, акустичну неврому, хондрому, олігодендрогліому, медулобластоми, гангліогліому, шванному, нейрофіброму, нейробластому та екстрадуральну, інтрамедулярну, інтрадуральну пухлину або метастази в ЦНС периферичних пухлин, таких як СО20- або НЕК2- позитивні пухлини.
Для раку може бути обраний неврологічний препарат, який є хіміотерапевтичним агентом.
Приклади хіміотерапевтичних агентів включають алкілювальні агенти, такі як тіотепа та циклофосфамід СУТОХАМОФ); алкілсульфонати, такі як бусульфан, імпросульфан і піпосульфан; азиридини, такі як бензодопа, карбоквон, метуредопа та уредопа; етиленіміни та метиламеламіни, включаючи альтретамін, триетиленмеламін, триеєтиленфосфорамід, триетилентіофосфорамід та триметилоломеламін; ацетогеніни (особливо булатацин і
БО булатацінон); дельта-9-тетрагідроканабінол (дронабінол, МАКІМОЇ Ф); бета-лапахон; лапахол; колхіцини; бетулінову кислоту; камптотецин (включаючи синтетичний аналог топотекан (НУСАМТІМФО), СРТ-11 (Ііринотекан, САМРТОБЗАКФ), ацетилкамптотецин, скополектин і 9- амінокамптотецин); бріостатин; калістатин; СС-1065 (включаючи його синтетичні аналоги адозелезин, карцелезин та бізелезин); подофілотоксин; подофілінову кислоту; теніпозид; криптофіцини (особливо криптофіцин 1 і криптофіцин 8); доластатин; дуокарміцин (включаючи синтетичні аналоги, КМУ-2189 і СВ1-ТМІ1); елеутеробін; панкратістатин; саркодиктин; спонгістацин; азотисті іприти, такі як хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамід, естрамустин, іфосфамід, мехлоретамін, мехлоретамін оксиду гідрохлорид, мелфалан, новембічін, фенестерин, преднімустин, трофосфамід, урамустин; нітрозосечовини, такі як кармустин, бо хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, німустин та ранімустин; антибіотики, такі як єндіїнові 5О0 антибіотики (наприклад, каліхеаміцин, особливо каліхеаміцин гамма ІІ! та каліхеаміцин омега ІЇ (див., напр., Апдем/.Спет.пі. Ед. Епаоі., 33 (1994) 183-186); динеміцин, включаючи динеміцин А; еспераміцин; а також хромофори неокарциностатину та хромофори споріднених хромопротеїнових єндіїнових антибіотиків), аклациноміцини, актиноміцин, аутраміцин, азасерин, блеоміцини, кактиноміцин, карабіцин, карміноміцин, карцинофілін, хромоміцини, дактиноміцин, даунорубіцин, деторубіцин, б-діазо-5-оксо-І --орлейцин, АОКІАМУСІМФО доксорубіцин (у тому числі морфоліно-доксорубіцин, ціаноморфоліно-доксорубіцин, 2-піроліно-доксорубіцин (та дезоксидоксорубіцин), епірубіцин, езорубіцин, ідарубіцин, марцеломіцин, мітоміцини, такі як мітоміцин С, мікофенольну кислоту, ногаламіцин, олівоміцини, пеппоміцин, потфіроміцин, пуроміцин, квеламіцин, родорубіцин, стрептонігрин, стрептозоцин, туберцидин, убенімекс, зіностатин, зорубіцин; анти-метаболіти, такі як метотрексат і 5-фторурацил (5-ФУ); аналоги фолієвої кислоти, такі як деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурину, такі як флударабін, б-меркаптопурин, тіаміприн, тіогуанін; аналоги піримідину, такі як анцитабін, азацитидин, 6-25 азауридин, кармофур, цитарабін, дидезоксиуридин, доксифлуридин, еноцитабін, флоксуридин; андрогени, такі як калустерон, дромостанолон пропіонат, епітіостанол, мепітіостан, тестолактон; засоби, що пригнічують наднирники, такі як аміноглутетимід, мітотан, трилостан; замінник фолієвої кислоти, такий як фролінова кислота; ацеглатон; альдофосфамід глікозид; амінолевулінову кислоту; енілурацил; амсакрин; бестрабуцил; бісантрен; едатраксат; дефофамін; демеколцин; діазиквон; ельфорнітин; еліптинію ацетат; епотилон; етоглюцид; нітрат галію; гідроксисечовина; лентинан; лонідайнін; майтанзиноїди, такі як майтанзин та анзамітоцини; мітогуазон; мітоксантрон; мопіданмол; нітраерин; пентостатин; фенамет; пірарубіцин; лозоксантрон; 2-етилгідразид; прокарбазин; полісахаридний комплекс РеКФ (УН5 Маїшга!І Ргодисі5, Едепе, ОК); разоксан; ризоксин; шизофіран; спірогерманій; тенуазонову кислоту; триазиквон; 2,2'2"-трихлортриєтиламін, трихотецени (особливо Т-2 токсин, верракурин А, роридин А та ангуідин), уретан, віндезин (ЕГОЇІ5БІМЕФ, РІГОЄ5БІМФ), дакарбазин, маномустин, мітобронітол, мітолактол, 5-піпоброман, гацитозин, арабінозид ("Ага-С"), тіотепа, таксоїди, наприклад, ТАХОЇ Ф паклітаксел (Вгієто1-
Муегв-5аціБЬ ОпсоЇІоду, Прінстон, МО), АВКАХАМЕТМ, наночастинковий склад паклітакселу на основі альбуміну без кремофору (Атегісап РПпагтасецшіса! Рагіпег5, Шаумберг, Іллінойс) і
Зо ТАХОТЕКЕФ доцетаксел (КпПбпе-Рошіепс Когег, Апіопу, Франція), хлоранбуцил, гемцитабін (СЕМ2АКФ)), 6-тіогуанін, меркаптопурин, метотрексат, платинові аналоги, такі як цисплатин і карбоплатин, вінбластин (МЕ ВАМФ), платина, етопозид (МР-16), іфосфамід, мітоксантрон, вінкристин (ОМСОМІМФ)), оксаліплатин, лейкововін, вінорелбін (МАМЕЇВІМЕФ), новантрон, едатрексат, дауноміцин, аміноптерин, ібандронат, інгібітор топоїзомерази КЕБ5 2000, дифторметилорнітин (ДФМО), ретиноїди, такі як ретиноєва кислота; капецитабін (ХЕ ОБАФ)); фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-ч-ого з вищеперерахованих; а також комбінації двох або більше вищезгаданих засобів, такі як СНОР, абревіатура для комбінованої терапії циклофосфамідом, доксорубіцином, вінкристином та преднізолоном, а також РОЇ ОХ, скорочення для протоколу лікування оксаліплатином (ЕГОХАТІМТМ) у поєднанні з 5-ФУ і лейкововіном.
Також під це визначення хіміотерапевтичних агентів підпадають антигормональні агенти, які чинять регулювання, зменшення, блокування або інгібування ефектів гормонів, що можуть сприяти росту раку, і часто вводяться у вигляді системного або цільнотільного лікування. Вони й самі можуть бути гормонами. Приклади включають антиестрогенні та селективні модулятори рецепторів естрогену (ЗЕКМ), включаючи, наприклад, тамоксифен (включаючи МОЇ МА0ЕХФ тамоксифен), ЕМІЗТАФ ралоксифен, дролоксифен, 4-гідрокситамоксифен, тріоксифен, кеоксифен, І У117018, онапрістон та ФАРЕСТОНФ тореміфен; антипрогестерони; пригнічувачі рецепторів естрогенів (ЕКО); агенти, які функціонують для придушення або зупинки яєчників, наприклад, агоністи гормону, що вивільняє лютеїнізуючий гормон (ІНЕН), такі як ГОРКОМО та
ЕПІСАКОФ лейпролід ацетат, госереліну ацетат, бусереліну ацетат і триптерелін; інші антиандрогенні засоби, такі як флутамід, нілутамід та бікалутамід; і інгібітори ароматази, які інгібують фермент ароматазу, що регулює вироблення естрогену в наднирниках, такі як, наприклад, 4(5)-імідазоли, аміноглутетимід, МЕСАБЕФ мегестролу ацетат, АКОМАБІМФ екземестан, форместан, фадрозол, КІМІЗОКО ворозол, РЕЕМАКАФ летрозол та АКІМІОЕХФ анастрозол. Крім того, таке визначення хіміотерапевтичних агентів включає бісфосфонати, такі як клодронат (наприклад, ВОМЕРО5БФ або ОБ5ТАСФ), ДІОВОСАЇФ етидронат, МЕ-58095, 2ОМЕТАФ золедронова кислота/золедронат, РОБАМАХФ алендронат, АКЕВІАФ памідронат, 5
ЗКЕПОФ тілудронат або ризедронат АСТОМЕЇ Ф; а також троксацитабін (1,3-діоксолановий аналог нуклеозиду цитозину); антисенс-олігонуклеотиди, зокрема ті, які інгібують експресію бо генів у сигнальних шляхах, пов'язаних з аберантною проліферацією клітин, таких як, наприклад,
РКо-альфа, Каї, Н-Ках та рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕ-К); вакцини, такі як вакцина ТНЕКАТОРЕЄФ та вакцини генної терапії, наприклад, вакцина АГ'ОМЕСТІМФ), вакцина
ГЕОМЕСТІМО та вакцина МАХІОФ; | ОКТОТЕСАМОФ інгібітор топоізомерази 1; АВАКЕГІХФ гтКН; лапатиніб дітозилат (низькомолекулярний інгібітор подвійної тирозинкинази ЕгоВ-2 та ЕСЕК, також відомий як СУУ572016); і фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-чого з вищеперерахованих.
Інша група сполук, які можуть бути обрані як неврологічні лікарські засоби для лікування або профілактики раку, являє собою протиракові імуноглобуліни (включаючи, але не обмежуючись ними, трастузумаб, пертузумаб, бевацизумаб, алемтузумаб, цетуксимаб, гемтузумаб озогаміцин, ібрітумомаб тіуксетан, панітумумаб та ритуксимаб). У деяких випадках антитіла у поєднанні з токсичною міткою або кон'юЮюгатом можуть бути використані для націлювання та вбивання потрібних клітин (тобто ракових клітин), включаючи, але не обмежуючись ними, тозитумомаб з 131І-радіоактивною міткою або трастузумаб емтанзин.
Очні захворювання або розлади - це захворювання або розлади ока, яке для цілей даної заявки розглядається як орган ЦНС, відокремлений ГЕБ. Очні захворювання або розлади включають, але не обмежуються ними, розлади склери, рогівки, райдужної оболонки та циліарного тіла (тобто склерит, кератит, виразка рогівки, зношування рогівки, снігова сліпота, травма ока електричною дугою, кератит Тайджесона, неоваскуляризацію рогівки, дистрофію
Фукса, кератоконус, сухий кератокон'юнктивіт, ірит і увеїт), порушення кришталика (тобто катаракту), порушення судинної оболонки та сітківки ока (наприклад, відшарування сітківки, ретиносхізис, гіпертонічна ретинопатія, діабетична ретинопатія, ретинопатія, ретинопатія недоношених, пов'язана з віком макулярна дегенерація, макулярна дегенерація (мокра або суха), епіретинальна мембрана, пігментний ретиніт та макулярний набряк), глаукома, мушки перед очима, порушення зорового нерва та візуальних шляхів (тобто спадкова оптична нейропатія Лебера та друзи диска зорового нерва), розлади очних м'язів / акомодації бінокулярного руху / рефракції (тобто косоокість, офтальмопарез, прогресуюча зовнішня офтальмоплегія, езотропія, екзотропія, гіперметропія, міопія, астигматизм, анізометропія, пресбіопія та офтальмоплегія), порушення зору та сліпота (тобто амбліопія, вроджений амавроз
Левера, скатома, колірна сліпота, ахроматопсія, куряча сліпота, сліпота, річкова сліпота та
Зо мікроофтальмія/колобома), ефект червоних очей, зіниця Аргайла-Робертсона, кератомікоз, ксерофтальмія та анданіридія.
Для очної хвороби або розладу може бути вибраний неврологічний препарат, який є антиангіогенним офтальмологічним агентом (наприклад, бевацизумаб, ранібізумаб («|і пегаптаніб), офтальмологічним глаукомічним агентом (тобто карбахол, епінефрин, демекарію бромід, апраклонідин, бримонідин, брінзоламід, левобунолол, тімолол, бетаксолол, дорзоламід, біматопрост, картеолол, метипранолол, дипівефрін, травопрост та латанопрост), інгібітором карбоангідрази (тобто метазоламід та ацетазоламід), офтальмологічним антигістамінним (тобто нафазолін, фенілефрін і тетрагідрозолін), очним лубрикантом, офтальмологічним стероїдом (тобто фторметолон, преднізолон, лотепреднол, дексаметазон, дифлупреднат, римексолон, флуоцинолон, медризон і тріамцинолон), офтальмоанестетичним препаратом (тобто лідокаїн, пропаракаїн і тетракаїн), офтальмологічним антиінфекційним препаратом (тобто левофлоксацин, гатіфлоксацин, ципрофлоксацин, моксифлоксацин, хлорамфенікол, бацитрацин / поліміксин В, сульфацетамід, тобраміцин, азитроміцин, безифлоксацин, норфлоксацин, сульфізоксазол, гентаміцин, ідоксуридин, еритроміцин, натаміцин, граміцидин, неоміцин, офлоксацин, трифлуридин, ганцикловір, відарабін), офтальмологічним протизапальним засобом (тобто непафенак, кеторолак, флурбіпрофен, супрофен, циклоспорин, триамцинолон, диклофенак та бромфенак) і офтальмологічним антигістамінним або протизапальним (наприклад, кетотіфен, оолопатадин, епінастин, нафазолін, кромолін, тетрагідрозолін, пеміроласт, бепотастин, нафазолін, фенілефрин, недокроміл, лодоксамід, фенілефрин, емедастин та азеластин).
Вірусні або мікробні інфекції ЦНС включають, але не обмежуються ними, інфекції вірусами (наприклад, грипом, ВІЛ, поліовірусом, краснухою), бактеріями (наприклад, Меїіб5в5егіа 5р., зігеріососсив в5р., Реєцдотопавз зр., Ргоїєе з5р., Е. соїї, 5. ашеив, Рпейтососсив зр.,
Мепіпдососсиз 5р., Наеторпійи5 5р. та Мусорасіегіт (ирегсицо5і5) та іншими мікроорганізмами, такими як грибки (тобто дріжджі, Стуріососси5 пеоїогтап5), паразити (тобто (охоріазта допаії) або амебами, що призводять до патофізіологій ЦНС, включаючи, але не обмежуючись цим, менінгіт, енцефаліт, мієліт, васкуліт та абсцес, які можуть бути гострими або хронічними.
Для вірусного або мікробного захворювання може бути вибраний неврологічний препарат, який включає, але не обмежується ними, противірусну сполуку (включаючи, але не бо обмежуючись цим, адамантанові противірусні препарати (тобто, римантадин та амантадин),
антивірусний інтерферон (тобто пег-інтерферон альфа-2Б), антагоніст хемокінових рецепторів (тобто маравірок), інгібітор переносу інтегразної нитки (тобто, ралтегравір), інгібітор нейрамінідази (тобто осельтамівір і занамівір), ненуклеозидний інгібітор зворотної транскриптази (тобто ефавіренц, етравірин, делавірдин і невірапін), нуклеозидний інгібітор зворотної транскриптази (тенофовір, абакавір, ламівудин, зидовудин, ставудін, ентекавір, емтрицитабін, адефовір, зальцитабін, тельбівудін і діданозин), інгібітор протеази (тобто дарунавір, атазанавір, фосампренавір, тіпранавір, ритонавір, нельфінавір, ампренавір, індінавір і саквінавір), пуриновий нуклеозид (тобто валацикловір, фамцикловір, ацикловір, рибавірин, ганцикловір, валганцикловір ії цидофовір), та різні противірусні препарати (тобто енфувіртид, форкарнет, палівізумаб та фомівірсен), антибіотик (включаючи, але не обмежуючись цим, амінопеніцилін (тобто амоксицилін, ампіцилін, оксацилін, нафцилін, клоксацилін, диклоксацилін, флюкоксацилін, темоцилін, азлоцилін, карбеніцилін, тикарцилін, мезлоцилін, піперацилін і бакампіцилін), цефалоспорин (тобто цефазолін, цефалексин, цефалотін, цефамондол, цефтриаксон, цефотаксим, цефподоксим, цефтазидим, цефадроксил, цефрадин, лоракарбеф, цефотетан, цефуроксим, цефпрозіл, цефаклор і цефокситин), карбапенем/пенем (тобто іміпенем, меропенем, ертапенем, фаропенем та доріпенем), монобактам (тобто азтреонам, тигемонам, норкардицин А і табтоксинін-бета-лактам), інгібітор бета-лактамази (тобто клавуланова кислота, тазобактам і сульбактам) у поєднанні з іншим бета-лактамним антибіотиком, аміноглікозид (тобто амікацин, гентаміцин, канаміцин, неоміцин, нетилміцин, стрептоміцин, тобраміцин і паромоміцин), анзаміцин (наприклад, гельданаміцин та гербіміцин), карбацефем (тобто лоракарбеф), глікопептиди (тобто тікопланін і ванкоміцин), макролід (тобто азитроміцин, кларитроміцин, диритроміцин, еритроміцин, рокситроміцин, тролеандоміцин, телітроміцин та спектіноміцин), монобактам (тобто, азтреонам), хінолон (тобто, ципрофлоксацин, еноксацин, гатифлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин, моксифлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин, тровафлоксацин, грепафлоксацин, спарфлоксацин і темафлоксацин), сульфонаміди (тобто мафенід, сульфонамідохризоїдин, сульфацетамід, сульфадіазин, сульфаметізол, сульфаніламід, сульфасалазин, сульфізоксазол, триметоприм, триметоприм і сульфаметоксазол), тетрациклін (тобто, тетрациклін, демеклоциклін, доксициклін, міноциклін і окситетрациклін), протипухлинний або цитотоксичний
Зо антибіотик (тобто, доксорубіцин, мітоксантрон, блеоміцин, даунорубіцин, дактіноміцин, епірубіцин, ідарубіцин, плікаміцин, мітоміцин, пентастатин та валрубіцин) та різні антибактеріальні сполуки (тобто бацитрацин, колістин та поліміксин В)), протигрибкові (тобто метронідазол, нітазоксанід, тинідазол, хлороквін, йодхінол та паромоміцин) і антипаразитарні (включаючи, але не обмежуючись ними, хінін, хлороквін, амодіакін, піриметамін, сульфадоксин, прогуаніл, мефлоквін, атоваквон, примаквін, артемезинін, галофантрин, доксициклін, кліндаміцин, мебендазол, пірантелу памоат, тіабендазол, діетилкарбамазин, івермектин, рифампін, амфотерицин В, меларсопрол, ефорнітин і альбендазол).
Запалення ЦНС включає, але не обмежується ними, запалення, спричинене пошкодженням
ЦНС, яке може бути фізичною травмою (наприклад, унаслідок аварії, хірургії, травми головного мозку, пошкодження спинного мозку, струсу мозку) та пошкодженням через або пов'язаним з одним або декількома іншими захворюваннями або порушеннями ЦНС (наприклад, абсцесом, раком, вірусними або мікробними інфекціями).
Для запалення ЦНС може бути вибраний неврологічний препарат, спрямований на саме запалення (тобто нестероїдний протизапальний засіб, такий як ібупрофен або напроксен), або ж такий, що лікує основну причину запалення (тобто агент антивірусної чи протиракової дії).
Ішемія ЦНС тут і далі стосується групи розладів, що стосуються аберантного кровотоку або судинної поведінки в мозку або їх причин, і включає, але не обмежується ними: місцеву ішемію мозку, глобальну ішемію мозку, інсульт (тобто субарахноїдальний крововилив та внутрішньомозковий крововилив), а також аневризму.
Для ішемії може бути вибраний неврологічний препарат, що включає, але не обмежується ними, тромболітики (тобто урокіназа, альтеплаза, ретеплаза та тенектеплаза), інгібітори агрегації тромбоцитів (тобто аспірин, цилостазол, клопідогрел, прасугрел та дипіридамол), статини (наприклад, ловастатин, правастатин, флувастатин, росувастатин, аторвастатин, симвастатин, церивастатин і пітавастатин), а також сполуки для поліпшення кровотоку або еластичності судин, включаючи, наприклад, препарати для лікування артеріального тиску.
Нейродегенеративні захворювання - це група захворювань та розладів, пов'язаних із втратою функції або смертю нервових клітин у ЦНС, яка включає але не обмежується наступними: адренолейкодистрофія, хвороба Александра, хвороба Альпера, аміотрофічний бічний склероз, атаксія телангіектазія, хвороба Баттен, синдром Кокейна, кортикобазальна 60 дегенерація, дегенерація, спричинена або пов'язана з амілоїдозом, атаксія Фрідріха, лобно-
скронева дегенерація долей, хвороба Кеннеді, множинна системна атрофія, розсіяний склероз, первинний бічний склероз, прогресуючий над'ядерний параліч, спінальна м'язова атрофія, поперечний мієліт, хвороба Рефсума та спінально-церебелярна атаксія.
Для нейродегенеративних захворювань може бути вибраний неврологічний препарат, який є гормоном росту або нейротрофним чинником; приклади включають, але не обмежуються, нейротрофний фактор з мозку (ВОМЕ), фактор росту нервів (МОБ), нейротрофін-4/5, фактор росту фібробластів (ЕСБЕ)-2 та інші ЕСЕ, нейротрофін (МТ)-3, еритропоетин (ЕРО), фактор росту гепатоцитів (НСЕ), епідермальний фактор росту (ЕСЕ), трансформувальний фактор росту (ТаБ)-альфа, ТОЕ-бета, фактор росту ендотелію судин (МЕСЕ), антагоніст рецептора інтерлейкіну-! (ПІ -Тга), циліарний нейротрофний фактор (СМТЕ), гліальний нейротрофний фактор (СОМЕ), нейротурин, тромбоцитарний фактор росту (РОСБЕ), герегулін, нейрегулін, артемін, персефін, інтерлейкіни, нейротрофний фактор, одержаний з лінії гліальних клітин (СЕК), гранулоцитарний колонієстимулюючийфактор (С5Е), гранулоцитарний макрофагальний-
С5Е, нетрини, кардіотропін-1, їжаки, фактор-інгібітор лейкемії (ГІР), мідкін, плейотрофін, кісткові морфогенетичні білки (ВМР), нетрини, сапозини, семафорини та фактор стовбурових клітин (ЗСЕ).
Захворювання та розлади ЦНС, пов'язані із судомами, включають неналежну і/або ненормальну електропровідність в ЦНС і включають, але не обмежуються ними, епілепсію (тобто відсутність судом, атонічні судоми, доброякісну роландичну епілепсію, дитячі абсанси, клонічні судоми, складні часткові судоми, епілепсію лобної частки, фебрильні судоми, спазми немовлят, ювенільну міоклонічну епілепсія, ювенільну абсансну епілепсію, синдром Леннокса-
Гасто, синдром Ландау-Клеффнера, синдром Драве, синдром Отахара, Західний синдром, міоклонічні судоми, мітохондріальні розлади, прогресуючі міоклонічні епілепсії, психогенні судоми, рефлекторну епілепсію, синдром Расмуссена, прості часткові судоми, вторинні генералізовані судоми, епілепсію скроневої частки, тоніко-клонічні судоми, тонічні судоми, психомоторні напади, лімбічну епілепсію, парціальні напади, генералізовані напади судом, епілептичний статус, абдомінальну епілепсію, акінетичні судоми, вегетативні судоми, масивний двосторонній міоклонус, катаменіальну епілепсію, крапельні судоми, емоційні судоми, фокальні судоми, геластичні напади, Джексонівський марш, хвороба Лафори, моторні судоми, мультифокальні судоми, нічні судоми, світлочутливі судоми, псевдосудоми, органолептичні судоми, приховані судоми, судомні припадки, судомні напади та зорові рефлекторні судоми).
Для пов'язаного з судомами захворювання може бути обраний неврологічний препарат, який є протисудомним або протиепілептичним, у тому числі, але не обмежуючись ними, барбітуратні антиконвульсанти (тобто примідон, метарбітал, мефобарбітал, аллобарбітал, амобарбітал, апробарбітал, альфенал, барбітал, бралобарбітал та фенобарбітал). бензодіазепінові антиконвульсанти (тобто діазепам, клоназепам і лоразепам), карбаматні антиконвульсанти (тобто фельбамат), антиконвульсанти-інгібітори карбоангідрази (тобто ацетазоламід, топірамат і зонізамід), дибензазепінові антиконвульсанти (тобто, руфінамід, карбамазепін і окскарбазепін), похідні жирної кислоти (тобто дивальпроекс та вальпроєва кислота), аналоги гамма- аміномасляної кислоти (тобто прегабалін, габапентин і вігабатрин), інгібітори зворотного захоплення гамма-аміномасляної кислоти (тобто тіагабін), інгібітори трансаміназ гамма- аміномасляної кислоти (наприклад, вігабатрин), сгідантоїни (тобто фенітоїн, етотоїн, фосфенітоїн та мефенітоїн), різні антиконвульсанти (тобто, лакозамід та сульфат магнію), прогестини (тобто прогестерон), оксазолідиндіонові антиконвульсанти (наприклад, параметадіон та триметадіон), піролідинові антиконвульсанти (тобто леветірацетам), сукцинімідні антиконвульсанти (тобто, етосукцимід і метсукцимід), триазинові антиконвульсанти (тобто ламотриджін) і сечовинні антиконвульсанти (тобто фенацемід і фенетурид).
Поведінкові розлади - це порушення ЦНС, що характеризуються аберантною поведінкою хворого і включають, але не обмежуються ними: розлади сну (тобто безсоння, парасомнії, нічні жахи, порушення циркадних ритмів та нарколепсія), розлади настрою (депресія, суїцидальна депресія, тривога, хронічні афективні розлади, фобії, панічні атаки, обсесивно-компульсивні розлади, дефіцит гіперактивності та уваги (СДУГ), дефіцит уваги (ДУ), синдром хронічної втоми, агорафобія, посттравматичний стресовий розлад, біполярний розлад), розлади харчування (тобто анорексія або булімія), психози, розлади розвитку (наприклад, аутизм, синдром Ретта, синдром Аспергера), розлади особистості та психотичні розлади (тобто шизофренія, марення та інше).
Для поведінкового розладу неврологічний лікарський засіб може бути вибраний зі сполук, які модифікують поведінку, які включають, але не обмежуються ними, атиповий антипсихотик (тобто, рисперідон, оланзапін, априпіпразол, кветиапін, паліперидон, азенапін, клозапін, бо ілоперидон і зіпразидон), фенотіазинові антипсихотики (тобто прохлорперазин, хлорпромазин,
флуфеназин, перфеназин, трифлуоперазин, тіорідазин і мезоридазин), тіоксантен (тобто тіотіксен), різні антипсихотичні засоби (наприклад, пімозид, літій, моліндон, галоперидол і локсапін), селективний інгібітор зворотного захоплення серотоніну (наприклад, циталопрам, есциталопрам, пароксетин, флуоксетин і сертралін), інгібітор зворотного захоплення серотоніну-норадреналіну (тобто, дулоксетин, венлафаксин, десвенлафаксин, трициклічний антидепресант (тобто доксепін, кломіпрамін, амоксапін, нортриптилін, амітриптилін, триміпрамін, іміпрамін, протриптилін і десіпрамін), тетрациклічний антидепресант (тобто міртазапін і мапротилін), фенілпіперазиновий антидепресант (тобто тразодон і нефазодон), інгібітор моноаміноксидази (тобто ізокарбоксазид, фенелзин, селегілін і транілципромін) бензодіазепін (тобто, альпразолам, естазолам, флуразептам, клоназепам, лоразепам та діазепам), інгібітор зворотного захоплення норадреналіну і допаміну (тобто бупропіон), стимулятор ЦНС (тобто фентермін, діетилпропіон, метамфетамін, декстроамфетамін, амфетамін, метилфенідат, дексметилфенідат, лісдексамфетамін, модафініл, пемолін, фендіметразин, бензфетамін, фендіметразин, армодафініл, діетилпропіон, кофеїн, атомоксетин, доксапрам і мазіндол), анксіолітичний / седативний / гіпнотичний засіб (включаючи, але не обмежуючись ними, барбітурат (тобто, секобарбітал, фенобарбітал та мефобарбітал), бензодіазепін (як описано вище) та різні анксіолітичні / седативні / гіпнотичні засоби (тобто дифенгідрамін, оксибат натрію, залеплон, гідроксизин, хлоралгідрат, аолпідем, буспірон, доксепін, есзопіклон, рамелтеон, мепробамат та етроклорвінол)), секретин (див., напр., Кацй-зсепацб та ін., Ашієт 9 (2005) 256-265), опіоїдний пептид (див., напр., Сожмеп та ін.,
У. Мешоспет, 89 (2004) 273-285) та нейропептид (див., напр., Неїпула та ін., Ат. 9. Рпузіо!., 289 (2005) Е301-305).
Розлади лізосомного накопичення - це порушення метаболізму, які в деяких випадках пов'язані з ЦНС або мають симптоми, специфічні для ЦНС; такі захворювання включають, але не обмежуються ними: хворобу Тея-Сакса, хворобу Гоше, хворобу Фабрі, мукополісахаридоз (типи І, ПП, ШІ, ІМ, М, МІ та МІЇІ), хворобу накопичення глікогену, ЗМ1-гангліозидоз, метахроматичну лейкодистрофію, хворобу Фарбера, лейкодистрофію Канавана та нейрональні цероїдні ліпофуцинози типів 1 і 2, хворобу Німанна-Піка, хворобу Помпе та хворобу Краббе.
Для захворювання лізосомного накопичення може бути обраний неврологічний препарат,
Зо який сам по собі є ферментом, який порушено у захворюванні, або імітує його активність іншим чином. Приклади рекомбінантних ферментів для лікування розладів лізосомного накопичення включають, але не обмежуються ними, викладені, наприклад, в публікації патентної заявки США
Мо 2005/0142141 (тобто альфа-і! 20-ідуронідаза, ідуронат-2-сульфатаза, М-сульфатаза, альфа-
М-ацетилглюкозамінідаза, М-ацетилгалактозамін-б6-сульфатаза, бета-галактозидаза, арилсульфатаза В, бета-глюкуронідаза, кислотна альфа-глюкозидаза, глюкоцереброзидаза, альфа-галактозидаза А, гексозамінідаза А, кислотна сфінгомієліназа, бета- галактоцереброзидаза, бета-галактозидаза, арилсульфатаза А, кислотна керамідаза, аспартацилаза, тіоестераза 1 пальмітоїл-білка і трипептидиламінопептидаза 1).
В одному аспекті антитіло згідно винаходу використовують для виявлення неврологічного розладу до початку симптомів та/або для оцінки тяжкості або тривалості захворювання або порушення. В одному аспекті антитіло дозволяє виявити та/або візуалізувати неврологічний розлад, включаючи візуалізацію методом рентгенографії, томографії або магнітно-резонансної томографії (МРТ).
В одному з аспектів надане низькоафінне антитіло до ТІК згідно винаходу для застосування як лікарського засобу. У подальших аспектах надане низькоафінне антитіло до ТІВ для застосування у лікуванні неврологічного захворювання або розладу (напр., хвороби
Альцгеймера) без виснаження червоних кров'яних клітин (тобто ретикулоцитів). У деяких варіантах виконання надане низькоафінне антитіло до ТІК для застосування у способі лікування, описаному в даному описі. У деяких варіантах виконання винахід забезпечує низькоафінне антитіло до ТІЖ, модифіковане з метою підвищення його безпечності для використання в способі лікування індивідуума, який має неврологічне захворювання або розлад, що включає введення ефективної кількості антитіла до ТІК (необов'язково приєднаного до ліків від неврологічного порушення). В одному з таких варіантів виконання спосіб додатково включає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента. У подальших варіантах здійснення винахід забезпечує антитіло проти
ТІК, модифіковане для підвищення безпечності його використання з метою зменшення або інгібування утворення амілоїдної бляшки у пацієнта, який перебуває в групі ризику або страждає на неврологічне захворювання або розлад (напр., на хворобу Альцгеймера). "Індивідуум" згідно з будь-яким з наведених вище варіантів виконання необов'язково є 60 людиною. У певних аспектах антитіло до ТІК згідно винаходу для застосування у способах даного винаходу покращує поглинання препарату від неврологічного порушення, з яким воно сполучене.
У подальшому аспекті винахід передбачає застосування низькоафінного антитіла до ТІК за винаходом у виробництві або приготуванні лікарського засобу. В одному з варіантів виконання лікарський засіб призначений для лікування неврологічних захворювань або розладів. У подальшому варіанті виконання лікарський засіб призначений для застосування в способі лікування неврологічних захворювань або розладів, який включає введення індивідууму, що має неврологічне захворювання або розлад, ефективної кількості лікарського засобу. В одному з таких варіантів виконання спосіб додатково включає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента.
У подальшому аспекті винахід надає спосіб лікування хвороби Альцгеймера. В одному з варіантів виконання спосіб включає введення індивідууму, що має хворобу Альцгеймера, ефективної кількості мультиспецифічного антитіла згідно винаходу, яке зв'язує як ВАСЕЇ, так і
ТІК, або як Абеїа, так і ТІК. В одному з таких варіантів виконання спосіб додатково включає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента. "Індивідуум" згідно з будь-яким з наведених вище варіантів виконання може бути людиною.
Антитіла до ТІК згідно винаходу можуть бути використані в лікуванні як окремо, так і в комбінації з іншими агентами. Наприклад, антитіло до ТІК згідно винаходу можна спільно вводити принаймні з одним додатковим терапевтичним агентом. У деяких варіантах виконання додатковий терапевтичний агент є терапевтичним агентом, ефективним для лікування того ж самого неврологічного порушення, для лікування якого використовується антитіло до ТІК, або іншого порушення. Приклади додаткових терапевтичних агентів включають, але не обмежуються ними: різні неврологічні лікарські засоби, описані вище, інгібітори холінестерази (такі як донепезил, галантамін, ровастигмін і такрін), антагоністи ММОА-рецепторів (такі як мемантин), інгібітори агрегації пептиду бета-амілоїду, антиоксиданти, у-секретазні модулятори, імітатори фактора росту нервів (МОР) або генна терапія МОБ, агоністи РРАКУ, інгібітори НМ5-
СоА-редуктази (статини), ампакіни, блокатори кальцієвих каналів, антагоністи рецепторів ГАМК, інгібітори глікогенсинтазної кінази, внутрішньовенні імуноглобуліни, агоністи мускаринового
Зо рецептора, модулятори нікротінічних рецепторів, активна або пасивна імунізація пептиду бета- амілоїду, інгібітори фосфодіестерази, антагоністи серотонінового рецептора та антитіла до пептиду амілоїду«-бета. У деяких варіантах виконання принаймні один додатковий терапевтичний агент вибраний завдяки його здатності пом'якшити один або більше побічних ефектів неврологічного препарату.
У певних інших таких варіантах виконання принаймні один додатковий терапевтичний агент вибраний завдяки його здатності інгібувати або запобігати активації шляху комплементу при введенні антитіла до ТК. Приклади таких терапевтичних агентів включають, але не обмежуються ними, агенти, які перешкоджають здатності антитіла до ТІК зв'язуватись з або активувати шлях комплементу, та агенти, які інгібують одну або декілька молекулярних взаємодій у шляху комплементу, і в загальному описані у МоїІпез і Кіг5сплпк (Мо!їес. Іттипої. 43 (2006) 107-121), причому вміст цього документа включений в дану заявку шляхом посилання.
Така вищезазначена комбінована терапія охоплює комбіноване введення (де два або більше терапевтичних агентів включені в одні й ті самі або окремі рецептури), а також окреме введення, і в цьому випадку введення антитіла за винаходом може відбуватися до, одночасно з і/або після введення додаткового терапевтичного агента та/або ад'юванта. В одному з варіантів виконання введення антитіла до ТЇїЖК та введення додаткового терапевтичного агента відбувається в межах приблизно одного місяця, або в межах приблизно одного, двох або трьох тижнів, або в межах приблизно одного, двох, трьох, чотирьох, п'яти або шести днів одне від одного. Антитіла даного винаходу також можуть бути використані в комбінації з іншими інтервенційними терапіями, такими як, але не обмежуючись ними, променева терапія, поведінкова терапія або інша терапія, відома в даній галузі і придатна для неврологічного розладу, що підлягає лікуванню або запобіганню.
Антитіло до ТІК згідно винаходу (і будь-який додатковий терапевтичний агент) може вводитись будь-яким підходящим способом, включаючи парентеральний, внутрішньолегеневий та інтраназальний, і, якщо це необхідно для місцевого лікування, введення у місце ураження.
Парентеральні інфузії включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, внутрішньочеревне або підшкірне введення. Дозування може здійснюватися будь-яким підходящим маршрутом, напр., ін'єкціями, такими як внутрішньовенна або підшкірна ін'єкція, залежно від того, чи є введення короткочасним або тривалим. Передбачено різноманітні бо графіки дозування, що включають, крім іншого, однократне або багаторазове введення в різних часових точках, болюсне введення та пульсуючу інфузію.
Антитіла згідно винаходу рецептують, дозують та вводять у спосіб, який відповідає належній медичній практиці. Фактори для розгляду в цьому контексті включають конкретний розлад, який лікують, конкретний ссавець, котрого лікують, клінічний стан конкретного пацієнта, причину розладу, місце доставки агента, спосіб введення, графік введення та інші відомі лікарям фактори.
Антитіло не повинне, але необов'язково рецептується з одним або декількома агентами, які в даний час використовуються для запобігання або лікування цього порушення або для запобігання, пом'якшення або полегшення одного або декількох побічних ефектів введення антитіл. Ефективна кількість таких інших агентів залежить від кількості антитіл у складі препарату, типу розладу або лікування та інших факторів, описаних вище. Вони, як правило, застосовуються в тих самих дозах та тими самими шляхами введення, як описано в даному документі, або від приблизно 1 до 99 95 дозувань, описаних у даному документі, або в будь-яких дозуваннях та будь-яким шляхом, який емпірично/клінічно визначається належним.
Для профілактики або лікування хвороби відповідна доза антитіла за винаходом (при застосуванні окремо або в комбінації з одним або декількома іншими додатковими терапевтичними агентами) буде залежати від типу хвороби, що підлягає лікуванню, типу антитіла, ступеня тяжкості та перебігу захворювання, чи антитіло вводять для профілактичних або терапевтичних цілей, попередньої терапії, клінічної історії пацієнта та відповіді на антитіло, і від розсуду лікуючого лікаря. Антитіло вводять пацієнтові одномоментно або протягом ряду процедур. Залежно від типу та тяжкості захворювання, кандидатом на початкову дозу введення пацієнтові може бути приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,1 мг/кг-10 мг/кг) антитіла, чи то за допомогою одного або декількох окремих прийомів, чи то безперервною інфузією. Одна типова добова доза може варіювати від приблизно 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше залежно від факторів, згаданих вище. Для повторних прийомів протягом декількох днів або довше, залежно від стану, лікування загалом буде продовжуватися, доки не буде бажаного пригнічення ознак захворювання. Один із прикладів дозування антитіла буде в діапазоні від приблизно 0,05 мг/кг до приблизно 40 мг/кг. Таким чином, пацієнтові можуть вводити одну або більше доз приблизно по 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг, 5,0 мг/кг, 7,5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг, 25 мг/кг, 30 мг/кг, 35
Зо мг/кг або 40 мг/кг (або будь-яку їх комбінацію). Такі дози можуть вводити періодично, напр., кожен тиждень або кожні три тижні (напр., так, щоб пацієнт отримав від приблизно двох до приблизно двадцяти, або, напр., приблизно шість доз антитіла). Можна вводити початкову підвищену навантажувальну дозу, а потім одну або декілька нижчих доз. Проте корисними можуть виявитись і інші режими дозування. Слід розуміти, що один зі способів зменшення впливу на популяції ретикулоцитів шляхом введення антитіл до ТІК полягає в тому, щоб змінити кількість або час введення таких доз, щоб у крові були присутні і взаємодіяли з ретикулоцитами в загальному менші кількості циркулюючих антитіл. У одному необмежувальному прикладі менша доза антитіл проти ТІК може бути введена з більшою частотою, ніж більш висока доза.
Використовувана доза може бути збалансованою між кількістю антитіла, необхідного для доставки до ЦНС (яка пов'язана з афінністю антиген-специфічної частини антитіла до ЦНС), афінністю цього антитіла до ТІК, і чи вводять разом або по черзі з антитілом сполуки, що захищають, стимулють ріст і розвиток червоних клітин крові (тобто, ретикулоцитів), або сполуки, що інгібують шлях комплементу. Прогрес цієї терапії легко відслідкувати традиційними способами та аналізами, як описано в даному документі і як відомо в даній галузі.
Зрозуміло, що будь-який з вищенаведених складів або терапевтичних способів замість або додатково до антитіла доїтїї може бути виконаний з використанням імунокон'югата згідно винаходу.
І. Промислові вироби
В іншому аспекті винаходу надано промисловий виріб, який містить матеріали, придатні для лікування, попередження і/або діагностики вищеописаних порушень. Промисловий виріб містить контейнер і етикетку або листок-вкладку на контейнері або пов'язані з ним. Придатні контейнери включають, наприклад, пляшечки, ампули, шприци, пакети з ВВ-розчином тощо. Контейнери можуть бути виготовлені з різних матеріалів, таких як скло або пластик. Контейнер вміщує композицію, саму по собі або поєднану з іншою композицією, ефективною для лікування, запобігання та/або діагностики стану, і може мати стерильний порт доступу (наприклад, контейнер може бути пакетом для внутрішньовенного розчину або флаконом з пробкою, яку можна пробити підшкірною ін'єкційною голкою). Принаймні однією діючою речовиною в композиції є антитіло згідно винаходу. В етикетці або листку-вкладці вказується, що композиція використовується для лікування стану за вибором. Крім того, промисловий виріб може містити бо (а) перший контейнер із композицією, що міститься в ньому, де композиція містить антитіло за винаходом; і (б) другий контейнер з композицією, що міститься в ньому, де композиція містить додатковий цитотоксичний чи інший терапевтичний агент. Промисловий виріб у цьому варіанті виконання винаходу може додатково містити листок-вкладку, в якому зазначено, що композиції можуть бути використані для лікування конкретного стану. Альтернативно або додатково промисловий виріб може також містити другий (або третій) контейнер, що містить фармацевтично прийнятний буфер, такий як бактеріостатична вода для ін'єкцій (БВДІ), фосфатно-сольовий буфер, розчин Рінгера та розчин декстрози. Він може додатково включати інші матеріали, бажані з комерційної та користувальницької точки зору, включаючи інші буфери, розріджувачі, фільтри, голки та шприци.
Зрозуміло, що будь-який з вищенаведених промислових виробів замість або додатково до антитіла до рецептора трансферину може включати імунокон'югат згідно винаходу.
ІМ. ПРИКЛАДИ
Далі викладено приклади способів та композицій згідно винаходу. Зрозуміло, що можуть практикуватися різні інші варіанти здійснення, з огляду на загальний опис, наведений вище.
Матеріали і методи
Технології рекомбінантної ДНК
Для маніпуляцій з ДНК використовували стандартні методи, описані у Ззатюогоок, 4. та ін.,
Моїесшіаг сіопіпд: А Іабогаюгу тапиа!; Со бргіпд Натог І арогаюгу Ргев55, Соїй брііпу Нагбог,
Мем мок, 1989. Молекулярно-біологічні реактиви застосовували відповідно до інструкцій виробника.
Синтез генів та олігонуклеотидів
Бажані сегменти генів виготовляли хімічним синтезом у Сепеагй СтрнН (Регенсбург,
Німеччина). Синтезовані фрагменти генів клонували в плазміді Е. соЇїї для розмноження/ампліфікації. Послідовності ДНК субклонованих Фрагментів генів підтверджували секвенуванням ДНК. Альтернативно короткі синтетичні фрагменти ДНК збирали відпалом хімічно синтезованих олігонуклеотидів або за допомогою ПЛР. Відповідні олігонуклеотиди готували у теїаріоп СтрН (Плане!г-Мартінсрід, Німеччина).
Реактиви
Усі комерційні реактиви, антитіла та набори використовували відповідно до протоколу
Зо виробника, якщо не вказано інше.
Приклад 1
Імунізація кролів та мишей
Імунізація мишей
Мишей ММК імунізували генетично з використанням плазмідного вектору експресії, що кодує повнорозмірний ТІ людини або яванської макаки, шляхом внутрішньошкірного введення 100 мкг ДНК вектору з наступною електропорацією (2 прямокутних імпульси по 1000 В/см, тривалість 0,1 мс, інтервал 0,125 с; потім 4 прямокутних імпульси по 287,5 В/см, тривалість 10 мс, інтервал 0,125 с). Миші отримували 6 або 7 послідовних імунізацій у дні 0, 14, 28, 42, 56, 70 і 84. Четверту і шосту імунізації проводили з вектором, що кодує ТІК яванської макаки; для всіх інших імунізацій застосовували вектор, що кодує ТІК людини. У дні 36, 78 і 92 відбирали кров і готували сироватку, яку використовували для визначення титра за ІФА (див. нижче). Тварини з найвищими титрами були відібрані для посилення на 96-й день шляхом внутрішньовенного введення 105 клітин ТЕ-1 людини або 50 мкг рекомбінантного людського розчинного ТІК, позбавленого спірального домену (позаклітинний домен ТІїЖ людини, починаючи з Іеи122, закінчуючи А5пбО8, експресується в клітинах НЕК29ЗЕ як М-кінцеве злиття з Ес-ділянкою людини) та очищеного афінною хроматографією з білком А і хроматографією з витісненням за розміром, і виділяли моноклональні антитіла за допомогою гібридомної технології, виходячи з їх здатності зв'язувати рецептор трансферину людини та яванської макаки, експресований на поверхні стабільно трансфекованих клітин СНО-КІ (див. Приклад 3).
Імунізація кролів
Новозеландських білих кроликів або трансгенних кроликів, що експресують гуманізований рецертуар антитіл, імунізували генетично з використанням плазмідного вектору експресії, що кодує повнорозмірний ТІК людини або яванської макаки, шляхом внутрішньошкірного введення 400 мкг ДНК вектору з наступною електропорацією (5 прямокутних імпульси по 750 В/см, тривалість 10 мс, інтервал 1 с. Кролі отримували 6 послідовних імунізацій у дні 0, 14, 28, 56, 84 та 112. Четверту і шосту імунізації проводили з вектором, що кодує ТІК яванської макаки; для всіх інших імунізацій застосовували вектор, що кодує ТІК людини. Кров (10 95 від загального оцінюваного об'єму крові) відбирали на 35, 63, 91 і 119 дні. Готували сироватку, яку використовували для визначення титру за ІФА (див. нижче), і виділяли периферичні одноядерні бо клітини, які використовувались як джерело антиген-специфічних В-клітин у процесі клонування
В-клітин (див. Приклад 2).
Визначення титрів у сироватці (ІФА)
Людський рекомбінантний розчинний ТІК (КО Зузіетв5, кат.Мо 2474-ТЕ) іммобілізували на 9б-лунковому планшеті МОМС Махізогру концентрації З мкг/мл, 100 мкл/лунку, у ФСБ, з наступним: блокуванням планшету 2 95 СтоївіпС у ФСБ, 200 мкл/лунку; додавання серійних розведень антисироватки, по два дублікати в 0,595 СгоївїйС у ФСБ, 100 мкл/лунку; детектування з (1) НКР-скон'юЮюгованим козячим антитілом до мишачого (даск5оп
Іттипогезеагсп/Оіапома 115-036-071; 1/16 000) для всіх мишачих сироваток, (2) НЕР- скон'югованим ослячим антитілом до кролячого Іде (Часкбзоп Іттипогезеагосп/Оіапома 711-036- 152; 1/16 000) для всіх кролячих сироваток, (3) крлячим антитілом до людського дО (Ріегсе//пепто Зсіепійс 31423; 1/5000) для сироваток від трансгенних кролів, (4) біотинільованим козячим каппа-антитілом до людського (боційегп Віоїесп/Віо2о! 2063-08, 1/5 000) та стрептавідином-НЕР для сироваток від трансгенних кролів; розводили у 0,5 95 СтоївіпС у
ФСБ, 100 мкл/лунку. Для всіх етапів планшети інкубували протягом 1 год. при 37 "С. Між всіма етапами планшети промивали тричі 0,05 96 Туеєп 20 у ФСБ. Сигнал отримували додаванням
ВМ Вісе РОО розчинного субстрату (Коспе), 100 мкл/лунку; і припиняли додаванням 1М НСІ, 100 мкл/лунку. Поглинання зчитували при 450 нм проти еталонних 690 нм. Титр визначався як розведення антисироватки, в якому відзначали напівмаксимальний сигнал.
Приклад 2
Клонування В-клітин кролів
Ізолювання кролячих одноядерних клітин периферичної крові (ОКПК)
Зразки крові взяли в загальному у 6 тварин (2 кролі дикого типу (дт) і 4 трансгенних (тг) кролі). Ці кролики отримані з двох різних кампаній імунізації: перша кампанія з 2 дті2 тг кроликами та друга кампанія з 2 тг кроликами (див. також приклад "Імунізація кроликів"). ЕДТА, що містила цільну кров, розбавили вдвічі їх ФСБ (РАА, Пашинг, Австрія) перед центрифугуванням за густиною з використанням лімфоліту для ссавців (Седагапе І арогайогієв,
Берлінгтон, Онтаріо, Канада) згідно інструкцій виробника. ОКПК двічі промивали їхФоБ.
Середовище ЕЇ -4 В5
ЕРМІ 1640 (Рап Віоїесії, Айденбах, Німеччина) з додаванням 10 95 ЕС5 (Нусіопе, Логан, ОТ,
Зо США), 2 мМ глутаміну, 1 9о розчину пеніциліну/стрептоміцину (РАА, Пашинг, Австрія), 2 мМ пірувату натрію, 10 мМ НЕРЕБЗ (РАМ Віоїеспй, Айденбах, Німеччина) і 0,05 мМ в- меркаптоетанолу (бібсо, Пейслі, Шотландія)
Виснаження клітин
Перша кампанія імунізації Для виснаження макрофагів/моноцитів через неспецифічну адгезію, а також лімфоцитів з неспецифічним зв'язуванням використовували стерильні 6- лункові планшети (гатунку клітинної культури), вкриті злитим моношаром клітин СНО.
Друга кампанія імунізації: Крок вичерпання з використанням лунок, вкритих клітинами СНО, був пропущений, оскільки ми не могли виключити вичерпання В-клітин, що продукують антитіла, які перехресно реагують з антитілами до рецептора трансферину хом'яка. Тому чисті б-лункові планшети (гатунку клітинної культури) використовували для вичерпання макрофагів та моноцитів через неспецифічну адгезію, що дозволило потенційним В-лімфоцитам, які продукують поверхневі антитіла, які перехресно реагують за хом'яком (і, можливо, за мишами) досягти наступного етапу робочого процесу.
Для кожної кампанії імунізації: кожну лунку наповнювали максимально 4 мл середовища і до б х 105 ОКПК від імунізованого кроля і дозволяли зв'язатися протягом 1 год. при 37 "С в інкубаторі. Клітини з супернатанту (лімфоцити периферичної крові (ЛІК) використовували для етапу пеннінгу антитіл.
Збагачення В-клітин на рецептор трансферину людини б-лункові планшети для культивування тканин, вкриті моношаром позитивних за людським рецептором трансферину клітин СНО, засіяли до 6 х 105 ЛПК на 4 мл середовища та дозволили зв'язатися протягом 1 год. при 37 "С в інкубаторі. Неадгезуючі клітини видалили обережним промиванням лунок 1-2 рази їхФоСБ. Залишок липких клітин відокремили трипсином протягом 10 хв при 37 "С в інкубаторі. Трипсинізацію зупинили середовищем ЕЇ -4 В5. Клітини тримали на льоду до імунофлуоресцентного фарбування.
Імунофлуоресцентне фарбування і проточна цитометрія
Для сортування окремих клітин застосовували анти-Ідос РІТС (АБО Зегоїес, Дюссельдорф,
Німеччина). Для поверхневого фарбування клітини з етапу виснаження і збагачення інкубували з антитілом анти-Ідс РІТС у ФСБ протягом 45 хв у темряві при 4 "С. Після фарбування ОКПК двчі промивали льодяним ФСБ. Зрештою ОКПК ресуспендували у льодяному ФСБ і негайно 60 піддавали аналізу ЕАС5. Перед аналізом ЕАС5 додавали пропідію йодид у концентрації 5 мкг/мл (ВО РВагтіпдеп, Сан-Дієго, СА, США) для розрізнення мертвих і живих клітин.
Для сортування окремих клітин використовували Весіоп Оіскіпбоп РАСЗАГгіа, обладнану комп'ютером і програмним забезпеченням ЕАС5ОЇма (ВО Віозсіепсе5, США).
Культивування В-клітин
Культивування В-клітин кроля готували подібно до методу, описаного 2ибіег та ін. (1985).
Коротко, окремі відсортовані кролячі В-клітини інкубували на 96-лункових планшетах з 200 мкл/лунку середовища ЕЇ -4 В5, що містило клітини пансорбіну (1:100000) (СаІріоспет (МегскК),
Дармштадт, Німеччина), 5 9о супернатанту кролячих тимоцитів (номер Т5М-М13 (10242),
МісгоСоаї, Бернрід, Німеччина) та гамма-опромінених клітин мишачої тимоми ЕЇ-4-85 (2,5 х 101/лунку) протягом 7 днів при 37 "С в атмосфері 595 СО» в інкубаторі. Супернатанти від культивування В-клітин були вилучені для скринінгу, а залишкові клітини негайно збирали і заморожували при -80" С в 100 мкл буфера КІ Т (Оіадеп, Хільден, Німеччина).
Приклад З
Ідентифікація антитіл людини і яванської макаки, що зв'язуються з ТІК, за допомогою клітинного ІФА
Для скринінгу супернатантів кролячих В-клітин або мишачих гібридом на антитіла, що розпізнають ТК людини та яванської макаки, використовували клітинний ІФА зі стабільно трансфекованими клітинами СНО-КІ. Стабільні трансфектанти одержували шляхом трансфекції клітин СНО-К1 експресійними плазмідами, що містять експресійні касети для ТІК людини або яванської макаки, а також для неоміцин-фосфотрансферази. Після трансфекції клітини розбавляли в середовищі вирощування, яке містило 500 мкг/мл 5418 (І Те Тесппоіодієв5).
Після появи зростаючих клонів клітини відокремлювали, фарбували МЕМ-75 (Арбсат) або 13Е4 (Се Тесппоіодієз) та вторинними РЕ-міченими антитілами до ТІК людини або яванської макаки, і високофлуоресцентні клітини відсортовували як окремі клітини в лунки 96-лункового планшета (ЕАСЗ Агіа). Після 7-денного вирощування клони знову перевіряли на експресію ТІК, і клони з найкращою експресією відбирали для дослідів по клітинному ІФА.
Коротко, на лунку 384-лункового планшета засівали 15 000 клітин і інкубували протягом 18 год. при 37"С, 595 СО». Супернатант видаляли, використовуючи автоматичний промивач (ВІОТЕК), ї до кожної лунки додавали 30 мкл супернатанту, що містив антитіла, а потім 24 мкл
Зо середовища вирощування. Через 2 години інкубації лунки спорожняли і додавали 30 мкл 0,05 95 глутаральдегіду в ФСБ протягом 45 хв при КТ. Після 3-х промивань ФСБ/О,025 95 Гиееп2го (ФСБТ) додавали 30 мкл НКР-антитіла до кролячих або НКР-антитіла до мишачих (5ошВегп
Віотесії), розведеного 1:5000 у блокувальному буфері, та інкубували планшети протягом 1 год. при КТ. Лунки 6 разів промивали ФСБТ і генерували сигнал за допомогою 30 мкл ТМБ на лунку та вимірювали поглинання при 450 нм.
Приклад 4
Клонування і експресія антитіл до ТІК
Технології рекомбінантної ДНК
Для маніпуляцій з ДНК використовували стандартні методи, описані у Затрбгоок, 4. та ін.,
Моїесшіаг сіопіпд: А Іабогаюгу тапиа!; Соїй бргіпд Натог І абогаїюгу Ргезв5, Соїд 5ргіпд Нагтбог,
Мем мок, 1989. Молекулярно-біологічні реактиви застосовували відповідно до інструкцій виробника.
Синтез генів та олігонуклеотидів
Бажані сегменти генів виготовляли хімічним синтезом у Сепеагй СтрнН (Регенсбург,
Німеччина). Синтезовані фрагменти генів клонували в плазміді Б. соїї для розмноження/ампліфікації. Послідовності ДНК субклонованих Фрагментів генів підтверджували секвенуванням ДНК. Альтернативно короткі синтетичні фрагменти ДНК збирали відпалом хімічно синтезованих олігонуклеотидів або за допомогою ПЛР. Відповідні олігонуклеотиди готували у теїаріоп СтрН (Плане!г-Мартінсрід, Німеччина).
ПЛР-ампліфікація М-доменів
З лізату В-клітин готували загальну РНК (ресуспендовану в буфері КІ Т-Оіадеп - кат. Мо 19216), користуючись РНК-набором Мисіеозріп 8/96 (МаспегеуаМадеї; 740709.4, 740698) згідно протоколу виробника. РНК елюювали 60 мкл води без рибонуклеаз. 6 мкл РНК використовували для створення кДНК в реакції зворотної транскриптази, користуючись Зирегзогірі ПІ Рігві-5ігапа
Зупіпезіз ЗирегМіх (Іпийтодеп 18080-400) та оліго-4Т-праймером згідно інструкцій виробника. Усі етапи виконували на системі Натійоп МІ. (аг. 4 мкл кКДНК використовували для ампліфікації варіабельних доменів важкого і легкого ланцюгів імуноглобулінів (МН та МІ) з АссиРгіте зЗирегМіх (Іпийгодеп 12344-040) у кінцевому об'ємі 50 мкл, використавши праймери грНС.ир та
ГРНОС.до для важкого ланцюга, грі С.ир та грі С.до для легкого ланцюга дикотипних В-клітин бо кроля, а також ВСРСК ЕНІС Івєадег.йм ії ВСРСК ПпиСКарра.гем для легкого ланцюга В-клітин бо трансгенного кроля (див. Таблицю нижче). Усі прямі праймери були специфічні по сигнальному пептиду (відповідно у МН та МІ), тоді як усі зворотні праймери були специфічні по константним ділянкам (відповідно у МН та М). Умови ПЛР для КОМНАКБЬМІ. були наступними: Гарячий старт при 94 "С протягом 5 хв; 35 циклів по 20 с при 94 "С, 20 с при 70 "С, 45 с при 68 "С, і фінальна добудова при 68 "С протягом 7 хв. Умови ПЛР для Ним. були наступними: Гарячий старт при 94 7С протягом 5 хв; 40 циклів по 20 с при 94 "С, 20 с при 52 "С, 45 с при 68 "С, і фінальна добудова при 68 "С протягом 7 хв.
ЗЕО ІЮ МО: 103
ЗЕО ІЮ МО: 104
ТІ б. ир
ЗЕО І МО: 106
ВесРСЕА ЕНІ С Івєадег.пу
ВсеРСА ПпПиСКарра.гтем 8 мкл з 50 мкл розчину ПЛР навантажували на 48 Е-Се! 2 95 (Іпийтодеп 8008-02). Позитивні реакції ПЛР відчищали із застосуванням набору Мисіеобріп Ехігасі І! (Маспегеу:Мавдеї; 740609250) згідно інструкцій виробника і елюювали у 50 мкл елюювального буферу. Усі етапи очищення виконували на системі Натійоп МІ. етатіевї.
Рекомбінантна експресія кролячих моноклональних бівалентних антитіл
Для рекомбінантної експресії кролячих моноклональних бівалентних антитіл продукти ПЛР, що кодували МН чи МІ, клонували як кКДНК у вектори експресії методом клонування "липких кінців" (КЗ Нашп та ін., ВіоТесппідце5 (1992) 13, 515-518; МА Ії та ін., Маїшге Меїпоадв5» (2007) 4, 251-256). Вектори експресії містили касету експресії, яка складалася з 5 СММ-промотора включно з інтроном А, а також 3" ВОН послідовності поліаденілювання. Крім касети експресії плазміди містили точку початку реплікації, отриману з рОсС18, а також ген бета-лактамази, що надавав резистентності до ампіциліну задля ампліфікації плазмід у Е.соїї. Використовували три варіанти основної плазміди: одна плазміда містила константну ділянку ДО кролика, призначену для приймання МН-ділянок, тоді як дві додаткові плазміди містили константну ділянку каппа/с кролика або людини для приймання МІ -ділянок.
Приведені до лінійного вигляду плазміди, що кодували каппа- або гамма-константну ділянку та вставки МІ. Л/Н, ампліфікували у ПЛР із застосуванням праймерів, що перекриваються.
Очищені продукти ПЛР інкубували з Т4 ДНК-полімеразою, яка утворювала однониткові "липкі кінці". Реакцію зупиняли додаванням дЦтТФ.
На наступному етапі плазміду і вставку комбінували та інкубували з гесА, який індукував
Зо сайт-специфічну рекомбінацію. Рекомбінованими плазмідами трансформували ЕК.соїї. На наступний день вирослі колонії збирали і перевіряли на правильність рекомбінації плазміди приготуванням препарата плазмід, рестрикційним аналізом і секвенуванням ДНК.
Для експресії антитіла ізольовані плазміди НС і С тимчасово співтрансфекували у клітини
НЕК?293 і за тиждень відбирали супернатанти.
Створення векторів для експресії кролячих моноклональних моновалентних антитіл
Для рекомбінантної експресії відібраних кандидатів як моноклональних моновалентних антитіл кролячі константні ділянки всіх МН-ланцюгів були перетворені на константні ділянки людини, що містили "виступну" мутацію в сегменті СНЗ. Для Мі -ланцюгів, одержаних з В-клітин дикотипних кролів, на людські перетворювали С-каппа константні ділянки. 4 мкл кДНК відібраних кандидатів використовували для ампліфікації варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюгів імуноглобулінів з АссиРгіте Зирегміх (Іпийгодеп 12344-040) у кінцевому об'ємі 50 мкл, при цьому прямі праймери були специфічні по сигнальному пептиду, а зворотні праймери були специфічні по ділянці СОКЗ-) з послідовністю, що перекривається (на 3'-кінці) (20 бр), гомологічною до людських константних ділянок (відповідно МН та МІ). Умови ПЛР для ампліфікації ланцюгів МН та Мі були наступними: Гарячий старт при 94 "С протягом 5 хв; 35 циклів по 20 с при 94 "С, 20 с при 68 "С, 45 с при 68 "С, і фінальна добудова при 68 "С протягом 7 хв.
Продукти ПЛР, що кодували МН чи МІ, клонували як кКДНК у вектори експресії методом клонування "липких кінців" (К5 Нашп та ін., ВіоТесппіднез (1992) 13, 515-518; МА І їі та ін., Маїиге
Меїнодвз (2007) 4, 251-256). Вектори експресії містили касету експресії, яка складалася з 5' СМУ- промотора включно з інтроном А, а також 3' ВОН послідовності поліаденілювання. Крім касети експресії плазміди містили точку початку реплікації, отриману з рОС18, а також ген бета- лактамази, що надавав резистентності до ампіциліну задля ампліфікації плазмід у Б.соїї.
Використовували два варіанти основної плазміди: одна плазміда містила константну ділянку
Ід людини, призначену для приймання нового ампліфікованого МН-ланцюга, тоді як друга плазміда містила константну ділянку каппа ІС людини для приймання Мі -ланцюга.
Приведені до лінійного вигляду плазміди, що кодували каппа- або гамма-константну ділянку та вставки МІ. Л/Н, ампліфікували у ПЛР із застосуванням праймерів, що перекриваються.
Очищені продукти ПЛР інкубували з Т4 ДНК-полімеразою, яка утворювала однониткові "липкі кінці". Реакцію зупиняли додаванням дЦтТФ.
На наступному етапі плазміду і вставку комбінували та інкубували з гесА, який індукував сайт-специфічну рекомбінацію. Рекомбінованими плазмідами трансформували БЕК.соїї. На наступний день вирослі колонії збирали і перевіряли на правильність рекомбінації плазміди приготуванням препарата плазмід, рестрикційним аналізом і секвенуванням ДНК.
Приклад 5
Тимчасова експресія одновалентних антитіл до ТІК
Антитіла генерували іп мімо у тимчасово трансфекованих клітинах НЕК293 (похідна лінії людських ембріональних ниркових клітин 293), які культивували у середовищі Е17 (Іпмігодеп
Согр.). Для трансфекції використовували трансфекційний реагент "без 293" (Момадеп). Антитіла та модифіковані молекули на основі антитіл, як описано вище, експресували з індивідуальних експресійних плазмід. Трансфекції виконували, як зазначено у інструкціях виробника.
Супернатанти клітинних культур, що містять рекомбінантні білки, збирали через три-сім днів після трансфекції. Супернатанти зберігали при зниженій температурі (напр., -807С) до очищення.
Загальна інформація, що стосується рекомбінантної експресії людських імуноглобулінів у, напр., клітинах НЕК293, подана у: Меїі5зпег, Р. та ін., Віотесппої. Віоепа. 75 (2001) 197-203.
Приклад 6
Зо Високошвидкісне очищення неповних антитіл до рецептора трансферину 50 мл прояснених супернатантів, що містили неповні антитіла, на 96-глибоколункових планшетах завантажували у колонки МарзеїесізикКе на 200 мкл. Після етапів промивання ФСБ при рН 7,4 білки елюювали 2,5 мМ НСІ на системі Тесап/Аїї, одержуючи 0,5 мл елюату. Елюат нейтралізували 2 М Тріс рН 8. Очищені білки кількісно визначали, використовуючи спектрофотометр Маподгор, і аналізували методом СЕ-505 в умовах денатурації та редукування, а також аналітичною 5ЕС. Для отримання високочистого протеїну (» 95 95) більша частина антитіл повинна бути додатково очищена хроматографією з витісненням за розміром, щоб відокремити половини антитіл, антитіла "виступ-виступ" та вищі агрегати. Тому потім 500 мкл зразків інжектували у Зирегаех200 10/30001. у 20 мМ гістидину, що містить 140 мм масі рн 6,0, користуючись Біопех ОПіМаїє 3000. Цей метод дозволяє фракціонувати 25-30 зразків на день і тому уможливлює обробку великої кількості скринінгових співпадінь у неповному форматі.
Фракції накопичували і знову аналізували вищеописаним методом.
Приклад 7
Культура клітин ПСМЕС/О3З для трансцитозного тесту
Середовище і доповнення для ПНСМЕС/ОЗ (Муекзіег, В.В., та ін., РЕАБЕВ 9. 19 (2005) 1872- 1874) одержували від опа. Клітини АИСМЕС/О3 (пересіви 26-29) культивували на вкритих колагеном покривних скельцях (мікроскопних) або у колбах на середовищі ЕВМ2, що містить 2,590 ЕВ5, четверту частину доданих факторів росту та повністю укомплектоване доданим гідрокортизоном, гентаміцином і аскорбіновою кислотою.
У всіх трансцитозних тестах використовували фільтри-вставки (0,4 мкм, діаметр 12 мм) з
ПЕТтТ-мембрани з високою густиною пор (1х1085 пор/см7) на 12-лункових планшетах для культивування клітин. Оптимальний розрахунковий об'єм середовища для апікальної та базолатеральної камер, відповідно, становив 400 мкл та 1600 мкл. Апікальні камери фільтрів- вставок були вкриті колагеном І з хвоста щура (7,5 мкг/см3") і потім фібронектином (5 мкг/мл), за тривалості кожної інкубації 1 година при КТ. Клітини ПЙСМЕС/О3 вирощували до злитих моношарів (прибл. 2х105 клітин/см-) протягом 10-12 днів на середовищі ЕМВ2.
Приклад 8
Трансцитозний тест одновалентних антитіл
Весь аналіз виконували у безсироватковому середовищі ЕВМ2, яке в іншому відтворювали бо згідно Прикладу 1. Фільтри-вставки з клітинами інкубували апікально з одновалентними антитілами (концентрація: 2,67 мкг/мл) протягом 1 години при 37 "С, після чого збирали все апікальне та базолатеральне середовище. З цих значень обраховували параклітинний потік.
Моношари промивали при КТ безсироватковим середовищем апікально (400 мкл) і базолатерально (1600 мкл) З х 3-5 хв кожен. Усі змиви збирали для моніторингу ефективності видалення незв'язаного антитіла. До апікальної камери додавали попередньо підігріте середовище і переносили фільтри на свіжий 12-лунковий планшет (заблокований протягом ночі у ФСБ з 195 БСА), який містив 1600 мкл попередньо підігрітого середовища. В цей момент клітини на фільтрах лізували у 500 мкл буферу КІРА для визначення специфічного поглинання антитіла. Фільтри, що залишились, інкубували при 37 "С та в різні моменти часу відбирали зразки для визначення апікального і/або базолатерального вивільнення антитіла. Вміст антитіла у зразках кількісно визначали за допомогою високочутливого Ідс-ІФА (див. Приклад 3). Для кожного моменту часу дані знімали з трьох фільтрів з клітинними культурами.
Приклад 9
Чутливий Ідо-ІФА після трансцитозного тесту
Процедуру виконували при КТ, використовуючи автоматичний промивач для етапів промивання. Планшет на 384 лунки покривали З0 мкл/лунку 1 мкг/мл антитіла до людського/мишачого ІдсС, Есу-специфічного, у ФСБ протягом 2 год. з наступною інкубацією у блокувальному буфері ФСБ з 1 95 БСА або 1 95 СтгоївіпС для аналізів людського і мишачого дос, відповідно. Серійно розведені зразки з трансцитозного тесту та стандартні концентрації антитіла, використані в трансцитозному тесті, додавали до планшета та інкубували протягом 2 годин. Після чотирьох промивань додавали 30 мкл/лунку 50 нг/мл анти-людина/миша-К(ар)2- біотину в блокувальному буфері та інкубували протягом подальших 2 год. Після 6 промивань додавали 30 мкл/лунку 50 нг/мл (аналіз пиідс) або 100 нг/мл (аналіз тідс) полі-НАР4О- стрептавідину (Рігдегаїд; у ФСБ з 1 95 БСА та 0,05 95 Тмееп-20) та інкубували протягом 30 хв.
Після 4 промивань детектували імунні комплекси шляхом додавання 30 мкл/лунку ВМ
Спетішптіпезсепсе Зибрбігаїє (Коспе). Сигнал люмінесценції вимірювали, використовуючи планшетний рідер люмінесценції та концентрацію, розраховану з використанням підігнаної калібрувальної кривої. Чутливість аналізу варіювала від 10 пг/мл до 10 нг/мл.
Приклад 10
Зо Картування епітопів клітинним ІФА клітин СНО, трансфекованих мутантними ПТК
Щоб визначити ділянки епітопів на рецепторі трансферину людини (ПТК), в послідовність
НТК вводили мутації у місцях, де кластер амінокислот, що виходять на поверхню, мав відмінні амінокислоти у вирівняній послідовності ТЯ миші (див. Таблицю нижче), дотримуючись того логічного обгрунтування, що, незважаючи на значну гомологію між ТїЖЕ людини і миші (77 95 ідентичності), не відомо антитіл, спрямованих на позаклітинну частину, які демонструють хорошу перехресну реактивність між обома ортологами. Клонування плазмід з відповідними мутаціями описане вище. Для картування зв'язування зв'язувачів людського ТІК 3 цими епітопами клітини СНО-КІ тимчасово трансфекували описними плазмідами і виміряли зв'язування антитіл у клітинному ІФА. Коротко, за день до експерименту на 96-лунковий планшет засівали 107 клітин на лунку в нормальне ростове середовище (КРМІ/10 95 ЕС5). На наступний день середовище міняли на середовище з меншим вмістом сироватки ОРТІ-МЕМ (сібсо), і після 30 хв преінкубації додавали в лунки 10 мкл суміші 1200 мкл ОРТІ-МЕМ, 12 мкг плазмідної ДНК та 12 мкл трансфекційного реагенту ХігетесЕМЕ (Коспе). Клітини інкубували протягом 2 днів при 37 "С/7,5 96 СО», тоді забирали середовище і додавали антитіла до ТІК у концентраціях від 1 нМ та 100 нМ у ростовому середовищі, з наступною інкубацією при 4 с.
Після цього розчини антитіл заміняли на 0,05 95 глутаральдегід у ФСБ і фіксували клітини протягом 15 хв при КТ, тоді двічі промивали ФСБ і інкубували з вторинним антитілом до людського Ес, скон'югованим з НЕР (ВіоКаєй; 1:2000 у блокувальному реагенті для ІФА (Коспе)) протягом 1,5 год. при КТ. Сигнал генерували після З промивань ФСБ за допомогою 50 мкл ТМБ на лунку та вимірювали поглинання при 450 нм.
СЛ п г4Атг9 59Пе ваїп
АІа1961ІІв/СсІп197Сс1у/Авп198С1Іп/5ет19 9ЗА5п/Уа.2900Мешйего1Майег202 ТП 18914 | аї203Пе/Азр2го4Май уз205С1Іп/Азп206 зЗе/Ссіуго7Авзп/Агаговапу/ ей209Ав5п/
Уаі210І ешТуг211А5р/ еш212Рго 4956г
Приклад 11
Аналіз зв'язування на основі поверхневого плазмонного резонансу для взаємодії ТІК людини - антитіло
Експеримент із зв'язування проводили на ВіАсоге В 4000 (СЕ Неайвсаге), оснащеному сенсорним чіпом С1 (СЕ Неакрсаге, кат. Мо ВК1005-35), попередньо обробленим антитілом до людського Бар (СЕ Неаксаге, кат. Ме 28-9583-25), використовуючи стандартну хімічну процедуру амінного сполучення відповідно до керівництва постачальника.
Для кінетичних вимірювань антитіло зразка іммобілізували, застосовуючи час контакту 60 секунд і швидкість потоку 10 мкл/хв у фосфатно-сольовому буфері рН 7,4, 0,05 95 Туееп 20 при 2576. Рекомбінантний Нізб-мічений рецептор трансферину людини (КО 5узіетв, кат. Мо 2474-
ТА8-050) застосовували у зростаючих концентраціях, а сигнал моніторили протягом часу.
Зафіксовано середній час асоціації 150 секунд та дисоціації 600 секунд при швидкості потоку 30 мкл/хв. Дані допасовували, користуючись моделлю зв'язування 1:1 (ізотерма Ленгмюра).
Приклад 12
Гуманізація доменів МН та МІ. мишачих та кролячих антитіл до рецептора трансферину
Антитіла до рецептора трансферину, що походили не від людини, гуманізували наступним чином: Грунтуючись на характеристиці кодуючих послідовностей та амінокислотних послідовностей, які містять УН та МІ. домени антитіл до рецептора трансферину, що походять не від людини, класу ІдО1 з легким ланцюгом каппа, створили відповідне гуманізоване антитіло до рецептора трансферину шляхом пересадки СОК і зворотних/прямих мутацій на основі каркасної ділянки людської зародкової лінії МН4 З та комбінації МК! 10 для клону 299.
Приклад 13
Спосіб визначення афінності до рецептора ТІК людини/яванської макаки
У цьому прикладі наведено спосіб визначення афінності до рецепторів трансферину людини для порівняння поведінки дисоціації.
Для всіх аналізів використовували набір Віоїіп САРішиге Кії від СЕ Неайвсаге (інструкція 28- 9242-34 АВ). Спочатку чіп регідратували шляхом вставлення його у прилад ВіІАсоге Т200. Після цього чіп залишили в режимі очікування під проточним буфером на ніч. Для підготовки поверхні
Зо Віоїіп САРіцге Кеадепі розводили 1:100 у проточному буфері (ІхФСБ з додаванням 0,25 М масі). Цей розчин інжектували на потокові комірки 1-4 протягом 360 с на швидкості потоку 2 мкл/хв. Далі поверхню сенсора кондиціонували трьома однохвилинними інжектуваннями розчину регенерації з набору Віоїіп САРішге Кії. Це слід виконувати для процедури вставлення або вперше або після зберігання. В потокову комірку 2 інжектують 100 нМ розчину монобіотинільованого рецептору трансферину людини або яванської макаки, відповідно, протягом 30 с на швидкості потоку 10 мкл/хв. Для визначення афінності застосовували інжекції в шести концентраціях (500, 250, 125, 62,5, 31,25, 15,625 та 0 нМ). Їх інжектували на "потокову комірку пи-ТІВА" (напр., потокову комірку 2, підготовлену як описано вище) з часом інжекції 180 с (асоціація) та швидкістю потоку 10 мкл/хв. Після 600 секунд фази дисоціації поверхню регенерували згідно з інструкціями виробника розчином регенерації з набору Віоїіп САРІшге Кії і проводили наступний цикл.
Для оцінки кінетичних даних використовували програмне забезпечення ВіАсоге Т200
Емаїцчайоп Боймаге. Особливо константи швидкості дисоціації різних зв'язувачів рецепторів трансферину людини були враховані після застосування моделі зв'язування Ленгмюра 11.
Приклад 14
Відносне ранжування В4000 дисоціації рецептора трансферину людини/яванської макаки
Сенсорний чіп САР (наданий в комплекті Віоїп САРіцйге Кії серія З 528-9202-34 СЕ) встановили в систему ВіАсоге В4000, нормалізували і адресували гідродинамічним способом, відповідно до інструкцій виробника. У першому циклі реагент САР (як передбачено в комплекті)
був адресований на точки 1, 2, 4 і 5 зі швидкістю потоку1!0 мкл/хв протягом 300 с. Захоплення рецепторів трансферину людини відбувалося у точці 1 (рецептор трансферину людини- біотинільований) та точці 5 (рецептор трансферину яванської макаки-біотинільований) зі швидкістю потоку 10 мкл/хв та тривалістю контакту 30 с. Рецептори розбавляли до концентрації 50 НМ проточним буфером (ІхФСБ й28995084,5Е Неаййсаге, доповнений 0,25 М Масі).
Антитіла інжектували у всі потокові комірки як ряд серійних розведень 100 нМ, 50 нМ, 25 нМ та 0
НМ протягом 180 с на швидкості потоку 30 мкл/хв. Час дисоціації встановили на 300 с. Увесь комплекс регенерували з чіпа САР розчином регенерації з набору Віоїїп САРішге Кії (120 с на швидкості потоку 10 мкл/хв). Для контролю активної концентрації білка другий цикл провели у точці 5 з використанням біотинільованого білка А (Мо Р2165-2МС, Зідта) зі швидкістю потоку 10 мкл/хв та тривалістю контакту 30 с. Точка 1 у цьому контрольному циклі залишалася порожньою. Антитіла і регенерацію проводили так само, як і в циклі 1. Для обрахунку релевантних кінетичних даних використовували програмне забезпечення ВіАсоге 84000
Емаїнайоп Зоїймаге. Дисоціацію з рецептора трансферину людини визначали із застосуванням згладжування дисоціації 1:1.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105» Е. Нойтапп-і а Косне АС «120» АНТИТІЛА ДО РЕЦЕПТОРА ТРАНСФЕРИНУ ЗІ СПЕЦІАЛЬНО ПІДІБРАНОЮ
АФІННІСТЮ
-1305 РЗ2937 «1505 ЕР15173508.1 -1515 2015-06-24 «1505 ЕР15176084.0
Коо) -1515 2015-07-09 -160» 97 «170» РаїепіНп версії 3.5 -2105 1 «2115 122 «212» РАТ «213» Огусіоіадив5 сипісшцив5 -4005 1
Сіп Зег Меї Сіи Спи Зег Спу Спу Аго І єи Маї Тнг Рго Спу ТАг Рго 1 5 10 15
Ї еи ТигІ єи Тиг Суз ТАг Маї бег Спу РНе Зег Геи Зег Зег Туг Аа 20 25 зо
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Спіу Гуз СпПу Ї еи СтПи Тур Пе Спу 35 40 45
ТупПе Тер 5Зег Сіу Спіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тр Ага Гуз СПу 50 55 бо
Агу Ре Тит Пе Зег Гуз Тит Зег Тиг ТНг Маї Ар Геи Гуз Пе ТНг (510) 65 70 75 80 зЗег Рго ТАг Тиг Спи Авр Тнг Аа Тиг Туг Ріе Суз Аа Аго Аг9 Туг 85 90 95 сСіу ТНг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Азп Сіу Ре Ар Рго Тр 100 105 110
Су Рго Сіу ТНг Ге Маї Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 -2105 2 «2115 122 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» тАБ до ТІК 567 МН (-гуманізоване 299 МН основний) «4005 2
Сіп Зег Меї Сіи Сім Зег Спу Спу Аго І єи Маї Тнг Рго Спу Тниг Рго 1 5 10 15
Ї еи ТигІ єи Тиг Суз ТАг Маї бег Спу РНе Зег Геи Зег Зег Туг Аа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Спу Гуз СПУ Геи Спи Тер Пе Спу
З5
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тр Аа Гуз СПУ 60 40
Агу Ре Тит Пе Зег Гуз Тит Зег Тиг ТНг Маї Авр Г еи Гуз Пе ТНг 65 70 75 80 45 зЗег Рго ТАг Тиг Спи Авр Тнг Аа Тиг Туг Рне Суз Аїа Аго Аг9 Туг 85 90 95 сСіу ТНг Зег Туг Рго Ар Туг Спу Авр Аа Авп Сіу Ріє Ар Рго Ттр 50 100 105 110
Су Рго Сіу ТНг Ге Маї Тнг Маї Зег Зег 115 120 55 «2105» З «2115 124 «2125 РВАТ 60 -213» Штвтучна послідовність
«223» 299-001 МН варіант гуманізації «4005 З маї Сіп Геи Маї Спи Тк сЧу Спу Спу Геи Пе Стп Рго СПу СПу бег 1 5 10 15
Ї еи Агу І єи Зег Суз Аа Аа бег Сіу Рне 5ег І єи Зег 5ег Туг АІа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Су Гуз Су Геи СПм Тер Ма! СПу 35 40 45
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа Авр 5ег Маї Гуз Спу 50 55 60
Агу Рпе Ти Пе 5ег Агу Авр Авп 5ег Гуз Авп ТНг І єи Туг І еи Сп 65 70 75 80
Меї Авп 5ег" І єи Ага Аа Спи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Агд 85 90 95
Зо
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Сіу Рпе Ар 100 105 110
Рго Тр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 «-210» 4 «2115 125 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-002 МН варіант гуманізації «400» 4
Спи Маї Сіп Г еи Ма! Спи Тк Спту Спчу Спу Гей Пе Сіп Рго Сіу Спу 1 5 10 15 зЗег І ей Ага І єи бег Суз Аа Аа бег Спіу РНе 5ег І єи Зег 5ег Туг 20 25 0)
Аа Меї 5ег Тгр Маї Ага Сп Аїйа Рго Сіу Гуз Спу І и Сім Тр Маї 35 40 45 60
Ссіу Тут Пе Тр Зег Счпу Спу Зег ТАиг Азр Туг Аа Авр 5ег Маї ГГ ув 50 55 60
Сіу Агд Рпе ТАг Пе 5ег Агу Авр Авп 5ег Гуз Азп ТНгГеи Туг Гей 65 70 75 80
Сп Меї Авп 5ег І еи Агу Аа Спи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа 85 90 95
Аго Ага Туг Спу Тиг Зег Туг Рго Азр Туг Сіу Авр Аа Ап Сіу Рпе 100 105 110
Азр Рго Тгр Сіу Сп Спу ТАг І єи Маї ТАг мМаї Зег Зег 115 120 125 «2105» 5 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-005 МН варіант гуманізації «4005» 5
Зо
Сіп Зег Меї Спи Сі ТАг сту Спчу Спу Гей Пе Сп Рго Спу СЧу зег 1 5 10 15
Ї еи Агу І єи Зег Суз Аа Аа бег Сіу Рне 5ег І єи Зег 5ег Туг АІа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Су Гуз Су Геи СПм Тер Ма! СПу 35 40 45
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа Авр 5ег Маї Гуз Спу 50 55 60
Агу Рпе Ти Пе 5ег Агу Авр Авп 5ег Гуз Авп ТНг І єи Туг І еи Сп 65 70 75 80
Меї Авп 5ег" І єи Ага Аа Спи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Агд 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 100 105 110
Рго Тгр Стпу Рго Стпу ТНг І еи Маї ТАг ма! Бег Зег бо 115 120
«2105» 6 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-006 МН варіант гуманізації «4005» 6
Сп Сій Ї єи Маї Спи Тиг сту Спу СПУ Ї еи Пе Стій Рго Спіу Спу Бег 1 5 10 15
Ї еи Агу І єи Зег Суз Аа Аа 5ег Спу Рпе Зег І єи 5ег Зег Туг Аіа 0) 20
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Спу Гуз СПУ Геи Спи Тер Пе Спу 35 40 45 25 Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа Авр 5ег Маї Гуз Спу 50 55 60
Агу Рпе Ти Пе 5ег Агу Авр Авп 5ег Гуз Авп ТНг І єи Туг І еи Сп 65 70 75 80
Меї Авп 5ег" І єи Ага Аа Спи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Агд 85 90 95
З5
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 100 105 110
Рго Тр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 -2105 7 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-007 МН варіант гуманізації ОАМО «4005 7
Сіп Сп Гей Маї Спи Тиг спу сту СІу Геи Пе Сп Рго Спу Спу зег 1 5 10 15
Ї еи Агу І єи Зег Суз Аа Аа 5ег Спу Рпе Зег І єи 5ег Зег Туг Аіа бо 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Спу Гуз СПУ Геи Спи Тер Пе Спу 35 40 45
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз Спу 50 55 60
Агу Рпе Ти Пе 5ег Агу Авр Авп 5ег Гуз Авп ТНг І єи Туг І еи Сп 65 70 75 80
Меї Авп 5ег" І єи Ага Аа Спи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Агд 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 100 105 110
Рго Тр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 «210» 8 «2115 122 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-008 МН варіант гуманізації «-4005» 8
Сп Сп Ї и Маї Спи Тиг сту Спу Спу Ї ви Пе Стій Рго Спіу Спу Бег 1 5 10 15
Ї еи Агу І єи Зег Суз Аа Аа 5ег Спу Рпе Зег І єи 5ег Зег Туг Аіа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Спу Гуз СПУ Геи Спи Тер Пе Спу 35 40 45
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз Спу 50 55 60
Агу Рпе Тит Пе Бег Гуз ТНг Зег ТНиг ТНг І єи Туг ГГ еи Стп Меї Авп 65 70 75 80 зег І ви Аг Аа Сім Авр ТНг Ага Маї Туг Туг Суз Аа Аго Ага Туг 85 90 95 60 сСіу ТНг Зег Туг Рго Ар Туг Спу Авр Аа Авп Сіу Ріє Ар Рго Ттр 100 105 110
Спу Сип Спу ТАг Гей Маї Тнг Ма! бег 5ег 115 120 «210» 9 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-009 МН варіант гуманізації ОАМО «4005» 9
Сіп Сій І си Ї ви Си бег Сіу СЧу СПУ І єи Маї Сип Рго Сіу Спу бег 1 5 10 15
Ї еи Агу І єи Зег Суз Аа Аа 5ег Спу Рпе Тниг РНе 5ег Зег Туг Аіа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Су Гуз Су Геи СПм Тер Ма! СПу
Зо
Тугп Пе Тер Зег Сіу Спіу Зег ТНг Авр Туг Аа Ар 5ег Маї Гуз Спу 60 35 Агу Рпе Ти Пе 5ег Агу Авр Авп 5ег Гуз Авп ТНг І єи Туг І еи Сп 65 70 75 80
Меї Авп 5ег І еи Агу Аа Си Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа І ув 40 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 100 105 110 45
Рго Тгтр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 50 «2105 10 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність 55 «220» «223» 299-009 МН варіант гуманізації ОАБО «4005» 10 (516)
Сіп Сій Ї єи Ї ви Си бег Сіу СЧу СПУ Г еи Маї Сип Рго Спу Спу бег 1 5 10 15
Ї еи Агу І єи Зег Суз Аа Аа 5ег Спу Рпе Тниг РНе 5ег Зег Туг Аіа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Спу Гуз Сіу Геи Сім Тгтр Ма! Спу 35 40 45
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа Авр 5ег Маї Гуз Спу 50 55 60
Агу Рпе Ти Пе 5ег Агу Авр Авп з5ег Гуз Авп ТНг І єи Туг І еи Сп 65 70 75 80
Меї Авп 5ег І єи Аг Аа Си Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа І ув 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Сіу Авр Аа 5ег СПу Рпе Авр 100 105 110
Рго Тгтр Сну Сп Спу ТНАг ГГ еи Маї ТАг ма! Бег Зег 115 120 «2105 11 «2115 124 «2125 РВАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 299-009 МН варіант гуманізації ОбВАЛОС «4005 11
Сіп Сій І си Ї ви Си бег Сіу СЧу СПУ І єи Маї Сип Рго Сіу Спу бег 1 5 10 15
Ї еи Агу І єи Зег Суз Аа Аа 5ег Спу Рпе Тиг РНе 5ег Зег Туг Аіа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Су Гуз Су Геи СПм Тер Ма! СПу 35 40 45
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа Ар 5ег Маї! Гу5 Спу 50 55 60
Агу Рпе Ти Пе 5ег Агу Авр Авп 5ег Гуз Авп ТНг І єи Туг І еи Сп бо 65 70 75 80
Меї Авп 5ег І єи Аг Аа Си Азвр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа І ув 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг 5ег Туг Рго Авр Туг Сіу Авр Аа Сип Спу Рпе Ар 100 105 110
Рго Тр Сіу Сп СИУу ТНг І еи Маї Тнг Маї Зег 5ег 115 120 «2105 12 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-011 МН варіант гуманізації «-4005 12
Сіп Сій Ї єи Ї ви Си бег Сіу СЧу Спу І єи Маї Сип Рго Сіу Спу бег 1 5 10 15
Ї еи Агу І єи Зег Суз Аа Аа 5ег Спу Рпе Зег І єи 5ег Зег Туг Аіа
Ко) 20 25 Зо
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Су Гуз Спу Геи Спи Тгтр Маї Спу 35
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа Авр 5ег Маї Гуз Спу 60 40
Агу Рпе Ти Пе 5ег Агу Авр Авп 5ег Гуз Авзп ТНг ГГ еи Туг І ви Сп 65 70 75 80 45 Меї Авп 5ег" І єи Ага Аа Спи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Агд 85 90 95
Аго Туг ау Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Сіу Авр Аа Авп Сіпу Рпе Азр 50 100 105 110
Рго Тр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 55 «2105 13 «2115 125 «2125 РВАТ 60 -213» Штвтучна послідовність
«223» 299-012 МН варіант гуманізації «4005 13
Сп Маї Сп Ї ви Сіп СП бег Спу Рго СІу І єи Маї Гуз Рго бег Спи 1 5 10 15
ТАгІ єи Зег Гей Тнг Сувз Тнг Ма! Зег Спу Рне 5ег І єи 5ег Зег Туг 20 25 Зо
Аа Меї 5ег Тгр Іе Агу Сп Рго Рго Сіу Гуз Спу І еи СПм Тер Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Тр Зег Спу Спу Зег ТНг Азр Туг Авп Рго зе" І єи Г ув 50 55 60 зег Агу Ма! Тиг Пе 5ег Маї Авр Тнг Зег Гуз Авп Сп РНе 5ег І еи 65 70 75 80
Гуз І єи Зег 5ег Ма! ТНг Аа Аа Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа 85 90 95
Зо
Аго Ага Туг Спу Тиг Зег Туг Рго Азр Туг Сіу Авр Аа Ап Сіу Рпе 100 105 110
Ар Рго Ттр Су СіІп СИУу Тнг І єи Маї Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 125 «2105» 14 «2115 125 «212» РВТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-013 МН варіант гуманізації «4005» 14
Сп Маї Сп Ї ви Сіп СП бег Спу Рго СІу І єи Маї Гуз Рго бег Спи 1 5 10 15
ТАгІ єи Зег Гей Тнг Сувз Тнг Ма! Зег Спу Рне 5ег І єи бег Зег Туг 20 25 Зо
Аа Меї 5ег Ттр Іе Аго Сп Рго Рго Су І уз Спу Ї еи Спи Тгр Пе 35 40 45 (516)
Спу Тут Пе Тгтр бег Спіу Спу бег ТНг Авр Туг Азп Рго 5ег І єи І уз 50 55 60 зЗег Аг Ма! Тнг Пе 5ег Маї Авр Тнг Зег Гуз Азп ап Маї Зег І єи 65 70 75 80
Гуз І єи Зег 5ег Ма! ТНг Аа Аа Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа 85 90 95
Аго Аго Туг Спу Тиг Зег Туг Рго Азвр Туг Сіу Азр Аа Авп Сіу Рпе 100 105 110
Азр Рго Тгр Сіу Сп Спу ТАг І єи Маї ТАг мМаї Зег Зег 115 120 125 «2105 15 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-015 МН варіант гуманізації «4005 15
Зо
Сіп Сіп Гей Стій Сі Зег Спу Рго Сту Геи Маї Гуз Рго Зег Спи ТАг 1 5 10 15
Ї еєи Бег І єи Тнг Суз ТНг Маї Зег Сіу Рне 5егІ еи Зег 5ег Туг Аа 20 25 0)
Меї 5ег Тгр Маї Аг Сіп Рго Рго Су І уз СпІуУ І еи Спи Тгр Пе Спіу 35 40 45
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег Тиг Авр Туг Авп Рго 5ег І єи Гув Зег 50 55 60
Аг Ма! Тпг Пе Зег Ма! А5р ТАг Зег Гуз Авп Сп Маї Зег І єи Гув 65 70 75 80
Ї еи Зег Зег Маї Тнг Аа Авіа Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Агд 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 100 105 110
Рго Ттр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег бо 115 120
«2105» 16 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-016 МН варіант гуманізації «4005» 16
Сіп Сіп Гей Стій Сі Зег Спу Рго Сту Геи Маї Гуз Рго Зег Спи ТАг 1 5 10 15
Ї ви Зег І єи Тиг Суз ТАг Маї Зег Спу Рпе Зег ГГ еи 5ег Зег Туг Аа 0) 20
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Рго Рго Спу Гуз Спу Гей Сім Тгр Пе Спу 35 40 45 25 Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег Тиг Авр Туг Авп Рго зе" І єи Гув Бег 50 55 60
Аг Ма! Тпг Пе Зег Ма! А5р ТАг Зег Гуз Авп Сп Маї Зег І єи Гув 65 70 75 80
Ї еи Зег Зег Маї Тнг Аа Авіа Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аг9 85 90 95
З5
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Сіу Рпе Ар 100 105 110
Рго Тгр Стпу Рго Стпу ТНг І еи Маї ТАг ма! Бег Зег 115 120 -2105 17 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-017 МН варіант гуманізації «4005» 17
Сіп Сіп Гей Стій Сі Зег Спу Рго Сту Геи Маї Гуз Рго Зег Спи ТАг 1 5 10 15
Ї ви Зег І єи Тиг Суз ТАг Маї Зег Спу Рпе Зег ГГ еи 5ег Зег Туг Аа бо 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Рго Рго Спу Гуз Спу Гей Сім Тгр Пе Спу 35 40 45
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег Тиг Авр Туг Авп Рго зе" І єи Гув Бег 50 55 60
Аг Ма! Тпиг Пе Зег Гуз Авр ТНг Зег Гуз Авп ап Маї 5ег І еи Гуз 65 70 75 80
Ї еи Зег Зег Маї Тнг Аа Авіа Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аг9 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 100 105 110
Рго Тгр Стпу Рго Стпу ТНг І еи Маї ТАг ма! Бег Зег 115 120 «2105» 18 «2115 125 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-018 МН варіант гуманізації «4005» 18
Сп Маї Сп Ї ви Сіп СП бег Спу Рго СІу І єи Маї Гуз Рго 5ег Сп 1 5 10 15
ТАгІ єи Зег Гей Тнг Сувз Тнг Ма! Зег Спу Рне 5ег І єи бег Зег Туг 20 25 0)
Аа Меї Зег Тгр Іе Аг Сп Нів Рго Спу Гуз Спу Геи Сім Тгр Пе 35 40 45 сСіу Тут Пе Тр Зег Счпу Спу Зег Тиг Азр Туг Аа Рго 5ег І єи Гув 50 55 60 зег Агу Ма! Тиг Пе 5ег Маї Авр Тнг Зег Гуз Авп Сп РНе 5ег І еи 65 70 75 80
Гуз І єи Зег 5ег Ма! ТНг Аа Аа Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа 85 90 95 60
Аго Ага Туг Спу Тиг Зег Туг Рго Азр Туг Сіу Авр Аа Ап Сіу Рпе 100 105 110
Азр Рго Тгр Сіу Сп Спу ТАг І єи Маї ТАг мМаї Зег Зег 115 120 125 «2105» 19 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-019 МН варіант гуманізації «4005» 19
Сіп Зег Меї Сіп Спи Зег Спу Рго Су І єи Маї Гуз Рго Зег Сп ТНг 1 5 10 15
Ї еєи Бег І єи Тнг Суз ТНг Маї Зег Сіу Рне 5егІ еи Зег 5ег Туг Аа 20 25 0)
Меї Зег Ттр ІПе Аго Сп Нів Рго Спу Гуз Спу Геи Спи Ттр Пе Спу
Зо
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Айїа Рго 5ег І єи Гув 5ег 60 35 Аг Ма! Тнг Пе Зег Ма! Авр Тнг 5ег Гуз Авзп Сп РНе 5ег Геи ГГ ув 65 70 75 80
Ї еи Зег Зег Маї Тнг Аа Авіа Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аг9 40 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 100 105 110 45
Рго Тр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 50 «2105» 20 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність 55 «220» «223» 299-020 МН варіант гуманізації «4005» 20 60
Сіп Зег Меї Сіп Спи Зег Спу Рго Су І єи Маї Гуз Рго Зег Сп ТНг 1 5 10 15
Ї еєи Бег І єи Тнг Суз ТНг Маї Зег Сіу Рне 5егІ еи Зег 5ег Туг Аа 20 25 0)
Меї Зег Ттр ІПе Аго Сп Нів Рго Спу Гуз Спу Геи Спи Ттр Пе Спу 35 40 45
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Айїа Рго 5ег І єи Гув 5ег 50 55 60
Аг Ма! Тпг Пе Зег Ма! А5р ТАг Зег Гуз Авп Сп Маї Зег І єи Гув 65 70 75 80
Ї еи Зег Зег Маї Тнг Аа Авіа Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аг9 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 100 105 110
Рго Тр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 «2105 21 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-021 МН варіант гуманізації «4005» 21
Сіп Зег Меї Сп Спи Зег Спу Рго Сту Геи Маї Гуз Рго Зег Сп ТНг 1 5 10 15
Ї ви Зег І єи Тиг Суз ТАг Маї Зег Спу Рпе Зег ГГ еи 5ег Зег Туг Аа 20 25 0)
Меї Зег Ттр ІПе Аго Сп Нів Рго Спу Гуз Спу Геи Спи Ттр Пе Спу 35 40 45
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз 5ег 50 55 60
Аг Ма! Тпг Пе Зег Ма! А5р ТАг Зег Гуз Авп Сп Маї Зег І єи Гув бо 65 70 75 80
Ї еи Зег Зег Маї Тнг Аа Авіа Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аг9 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 100 105 110
Рго Тр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 «2105 22 «2115 124 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-022 МН варіант гуманізації «4005» 22
Сіп Зег Меї Сіп Спи Зег Спу Рго Су І єи Маї Гуз Рго Зег Сп ТНг 1 5 10 15
Ї еєи Бег І єи Тнг Суз ТНг Маї Зег Сіу Рне 5ег І еи 5ег 5ег Туг Аа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Ні Рго Спу Гуз СпПу Геи Спи Тер Пе Спу
З5
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз 5ег 60 40
Аг Ма! Тпг Пе Зег Ма! А5р ТАг Зег Гуз Авп Сп Маї Зег І єи Гув 65 70 75 80 45 Ї еи Зег Зег Маї Тнг Аа Авіа Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аг9 85 90 95
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 50 100 105 110
Рго Тр Сіу Сп Слу ТНг І еи Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 55 «2105» 23 «2115 122 «2125 РВАТ 60 -213» Штвтучна послідовність
«223» 299-023 МН варіант гуманізації ОАМО «4005» 23
Сіп Зег Меї Сіп Спи Зег Спу Рго Стпу Геи Маї Гуз Рго Зег Сп ТНг 1 5 10 15
Ї еєи Бег І єи Тнг Суз ТНг Маї Зег Сіу Рне 5егІ еи Зег 5ег Туг Аа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Іе Ага ап Нів Рго Спу Гуз Спу Гей Сім Ттр Пе Спу 35 40 45
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз 5ег 50 55 60
Аго Маї Тпиг Пе Зег Гуз Тиг Зег Тиг Тнг Ма! 5ег І еи Гуз Геи Зег 65 70 75 80 зЗег Ма! Тниг Аа Ага Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аг Аг9 Туг 85 90 95
Зо сСіу ТНг Зег Туг Рго Ар Туг Спу Авр Аа Авп Сіу Ріє Ар Рго Ттр 100 105 110
Спу Сип Спу ТАг Гей Маї Тнг Ма! бег 5ег 115 120 «2105» 24 «2115 122 «2125 РВАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 299-023 МН варіант гуманізації ОАБО «4005» 24
Сіп Зег Меї Сіп Спи Зег Спу Рго Су І єи Маї Гуз Рго Зег Сп ТНг 1 5 10 15
Ї ви Зег І єи Тиг Суз ТАг Маї Зег Спу РНе зег Геи Зег Зег Туг Аа 20 25 0)
Меї Зег Ттр ІПе Аго Сп Нів Рго Спу Гуз Спу Геи Спи Ттр Пе Спу 35 40 45 60
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тр Аа Гуз Зег 50 55 60
Аг Ма! Тпиг Пе Зег Гуз Тиг Зег Тиг Тнг Ма! 5ег І еи Гуз І єи Зег 65 70 75 80 зЗег Ма! Тниг Аа Ага Ар ТНАг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Агу Аг9 Туг 85 90 95 сСіу Тнг Зег Туг Рго Ар Туг Спу Авр Аа 5ег Сіу РНе Азвр Ріо Ттр 100 105 110
Спіу Сип Спу ТНг Гей Маї Тнг Маї бег 5ег 115 120 «2105» 25 «2115 122 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-023 МН варіант гуманізації ОбВАЛОС «4005» 25
Зо
Сіп Зег Меї Сіп Спи Зег Спу Рго Су І єи Маї Гуз Рго Зег Сп ТНг 1 5 10 15
Ї еєи Бег І єи Тнг Суз ТНг Маї Зег Сіу Рне 5егІ еи Зег 5ег Туг Аа 20 25 0)
Меї Зег Ттр ІПе Аг Сп Нів Рго Спу Гуз Спу Гей Спи Ттр Пе Спу 35 40 45
Тугп Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз 5ег 50 55 60
Аг Ма! Тпиг Пе Зег Гуз Тиг Зег Тиг Тнг Маї 5ег І еи Гуз Геи Зег 65 70 75 80 зЗег Ма! Тниг Аа Ага Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аг Аг9 Туг 85 90 95 сСіу ТНг Зег Туг Рго Ар Туг Спу Азр Аа Сіп Сіу Ре Азвр Рго Ттр 100 105 110
Спу Сип Спу ТАг Гей Маї Тнг Ма! бег 5ег бо 115 120
«2105» 26 «2115 110 «2125 РВАТ «213» Огусіоіадив5 сипісшцив5 «4005» 26
Аа Туг Азр Меї Тнг Сп Тнг Рго Аа 5Зег Ма! Сі Маї Аа Ма! Спу 1 5 10 15 сСіу Тнг Маї Тиг Пе Гуз Сув Сіп Аа Зег Сіп Зег Пе Зег Зег Туг 0)
Ї еи Зег Ттр Туг ап Сіп Гув Рго Спу Сп Агу Рго Гуз І єи Геи Пе 20
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа бег Спіу Ма! Зег Зег Агу РНе Гуз Спу 60 25 зЗег Сіу Зег Сіу Тиг Сп Ре Тиг Геи ТАг Пе Зег Спіу Ма! Спи Сув 65 70 75 80
Коо) Аа Азр Айа Аа Тиг Туг Туг Суз Сп Сп Суз Туг Зег Бег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тиг Рпе Спу Спу Спу Тиг Спи Маї Маї Маї Гуз 35 100 105 110 «2105» 27 «2115 110 40 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» тАБ до ТІК 567 МІ («гуманізоване 299 МІЙ основний) 45 «4005» 27
Аа Туг Азр Меї Тиг Сп ТАг Рго Аа Зег Ма! Сім Маї Аа Ма! Спу 1 5 10 15 50 сСіу Тнг Маї Тиг Пе Гуз Сув Сіп Аа Зег Сіп Зег Пе Зег Зег Туг 20 25 0) 55
Ї еи Зег Ттр Туг ап Сіп Гув Рго Спу Сп Агу Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45 (510) Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа бег Спіу Ма! Зег Зег Агу РНе Гуз Спу
50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу Тиг Сп Рне ТНг І єи Тиг Пе бег Спу Ма! Сіи бег 65 70 75 80
Аа Азр Айа Аа Тиг Туг Туг Суз Сп Сп Зег Туг Зег Зег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тиг Рпе Спу Спу Спу Тиг Спи Маї Маї Маї Гуз 100 105 110 «2105» 28 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 567 МІ варіант гуманізації РМУА «4005» 28
Аа Туг Азр Меї Тиг Сп ТАг Рго Аа Зег Ма! Сім Маї Аа Ма! Спу 1 5 10 15
Коо) сСіу Тнг Маї Тиг Пе Гуз Сув Сіп Аа Зег Сіп Зег Пе Зег Зег Туг 20 25 0)
Ї еи Зег Ттр Туг ап Сіп Гув Рго Спу Сп Агу Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа бег Спіу Ма! Зег Зег Агу РНе Гуз Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу Тиг Сп Рне ТНг І єи Тнг Пе бег Спу Ма! Сім Рго 65 70 75 80
Аа Азр Айа Аа Тиг Туг Туг Суз Суп Сп Авп Туг Аа 5ег 5ег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тиг Рпе Спу Спу Спу Тиг Спи Маї Маї Маї Гуз 100 105 110 «2105» 29 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» бо «223» 299-001 МІ. варіант гуманізації
«4005» 29
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
І ей Авзп Тгр Туг Сп Сп Гуз Рго Спу Гуз Аїйа Рго Гуз І еи І еи Пе 35 40 45
Туг Агу Ада 5ег 5ег І еи Сп бег СпПу Маї Рго 5ег Агу Рне 5ег Спіу 50 55 60 зЗег Сіу Зег Сіу ТНг Авр РНе ТНг ГГ еи ТНг Пе 5Бег Зег І єи Сп Рго 65 70 75 80
Сім А5р РНе Аїа Тнг Туг Туг Сув Сіп Сіп бег Туг Зег бег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110
Зо «2105» 30 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-002 МІ. варіант гуманізації 55 «4005 30
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
І ей Авзп Тгр Туг Сп Сп Гуз Рго Спу Гуз Аїйа Рго Гуз І еи І еи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 60
Сім А5р РНе Аїа Тнг Туг Туг Сув Сіп Сіп бег Туг Зег бег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 «2105 31 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-003 МІ. варіант гуманізації «4005 31
Аа Туг Сп Меї Тнг Сп 5ег Рго Зег Зег І єи 5ег Аа Зег Ма! Спу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 Зо
І ей Авзп Тгр Туг Сп Сп Гуз Рго Спу Гуз Аїйа Рго Гуз І еи І еи Пе
Зо
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 60 35
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 40 Сім А5р РНе Аїа Тнг Туг Туг Сув Сіп Сіп бег Туг Зег бег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 45 100 105 110 «2105 32 «2115 110 50 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-004 МІ. варіант гуманізації 55 «-4005 32
Аа Туг Сп Меї Тнг Сп 5ег Рго Зег Зег І єи 5ег Аа Зег Ма! Спу 1 5 10 15 (516)
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
Ї еи Зег Ттр Туг ап Сіп Гуз Рго Сту Гуз Аа Рго Гуз Гей І ви Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Зег Туг Зег 5ег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 «2105» ЗЗ3 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність
Зо «220» «223» 299-005 МІ. варіант гуманізації «4005» ЗЗ3
З5
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
Ї еи Зег Ттр Туг ап Сіп Гуз Рго Сту Гуз Аа Рго Гуз Гей І ви Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 60 50
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 55 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Зег Туг Зег 5ег Зег Авп 85 90 95 (510) маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув
100 105 110 «2105» 34 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-006 МІ. варіант гуманізації 55 «4005» 34
Аа Пе Сіп Гей Тиг Сп Зег Рго Зег 5ег І еи 5ег Аа Зег Маї СпПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 0) 20
Ї еи Зег Ттр Туг ап Сіп Гуз Рго Сту Гуз Аа Рго Гуз Гей І ви Пе 35 40 45 25
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Зег Туг Зег 5ег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 «2105» 35 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-007 МІ. варіант гуманізації «4005 35
Аа Пе Сіп Гей Тиг Сп Зег Рго Зег 5ег І еи 5ег Аа Зег Маї СпПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0) (510) Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Слпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе
35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80
Сім А5р РНе Аїа Тнг Туг Туг Сув Сіп Сіп бег Туг Зег бег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 «2105» 36 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-008 МІ варіант гуманізації «4005» 36
Ко) Аа Туг Сп Геи ТНг Сп 5ег Рго Зег Зег І єи 5ег Аа Зег Ма! Спу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 Зо
Ї еи Зег Ттр Туг ап Сіп Гуз Рго Сту Гуз Аа Рго Гуз Гей І ви Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80
Сім А5р РНе Аїа Тнг Туг Туг Сув Сіп Сіп бег Туг Зег бег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 «-2105 37 «2115 110 бо «2125 РВАТ
-213» Штвтучна послідовність «223» 299-009 МІ варіант гуманізації ММА «4005» 37
Аа Іе Сіп І єи Тнг Сп бег Рго 5ег 5ег І ви 5ег Аіа бег Ма! СПУ 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Слпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Авп Туг Аа 5ег Зег Авп 85 90 95
Зо маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110
З5 «2105» З8 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-009 МІ. варіант гуманізації МА «4005» З8
Аа Іе Сіп І єи Тнг Сп бег Рго 5ег 5ег І ви 5ег Аіа бег Ма! СПУ 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Слпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Зег Туг Аіа 5ег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 «2105» 39 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-009 МІ. варіант гуманізації МУЗ «4005» 39
Аа Пе Сіп Гей Тиг Сп Зег Рго Зег 5ег І еи 5ег Аа Зег Маї СпПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
Зо
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Слпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе
З5
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 60 40 Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Авп Туг Зег Зег Зег Авп 45 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 50 «210» 40 «2115 110 «2125 РВАТ 55 -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-009 МІ. варіант гуманізації 5У5 бо «400» 40
Аа Пе Сіп Гей Тиг Сп Зег Рго Зег 5ег І еи 5ег Аа Зег Маї СпПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Слпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Спу Туг Зег Зег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110
Зо «-2105 А1 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-009 МІ. варіант гуманізації СУ5 «4005 А1
Аа Пе Сіп Гей Тиг Сп Зег Рго Зег 5ег І еи 5ег Аа Зег Маї СпПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Слпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 (510) сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сіп СіІп Сув Туг Зег Зег Зег Авп
85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 «2105» 42 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-010 МІ. варіант гуманізації «4005» 42
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 0)
Ї еи Зег Ттр Туг ап Сіп Гуз Рго Сту Гуз Аа Рго Гуз Гей І ви Пе
Коо) Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 60 зЗег Агу бег СПУ ТНг Авр РНе ТнНг І єи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп Рго 35 65 70 75 80
Сім А5р РНе Аїа Тнг Туг Туг Сув Сіп Сіп бег Туг Зег бЗег Зег Авп 85 90 95 40 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 45 «2105» 43 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність 50 «220» «223» 299-012 МІ. варіант гуманізації НУ5 «4005» 43 55
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15 (510) Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг
20 25 Зо
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Слпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу Рпе Зег Спу 50 55 60 зЗег Агу бег СПУ ТНг Авр РНе ТнНг І єи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп Рго 65 70 75 80
Сім А5р РНе Аїа Тнг Туг Туг Сувз Сіп Сп Нів Туг бег бег бЗег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 «2105» 4А «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штгтучна послідовність «220»
Зо «223» 299-014 МІ. варіант гуманізації «4005» 4А
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тпг Пе Авп Суз Гуз 5ег Зег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 Зо
Ї еи Зег Ттр Туг ап Сіп Гув Рго Спу Сп Агу Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа бег Спу Маї Рго Азр Агу РНе 5ег Спу 60 50 Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Аа 65 70 75 80
Сім Ар Маї Аа Маї Туг Туг Суз СіІп Сіп бег Туг Зег Зег Зег Авп 55 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 (516)
«2105» 45 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штгтучна послідовність «220» «223» 299-015 МІ. варіант гуманізації АУ5 «4005» 45
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тпг Пе Авп Суз Гуз 5ег Зег Сп Зег Пе 5ег Зег Туг 0) 20 Ї ем Пе Ттр Туг Сп С1Тп Гув Рго Спу Сп Рго Рго Гуз ГГ еи ГГ еи Пе
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа бег Спу Маї Рго Азр Ага РНе 5ег Спу 25 50 55 бо
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Аа 65 70 75 80
Зо
Сім Авр Маї Аїа Маї Туг Туг Су Сп СіІп Аа Туг Зег Зег Зег Авп 85 90 95
З5 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 40 «2105» 46 «2115 110 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність 45 «220» «223» 299-017 МІ. варіант гуманізації ТУ5 «4005» 46
Аа Пе Сіп Гей Тиг Сп Зег Рго Зег 5ег І еи 5ег Аа Зег Маї СпПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе Зег Зег Туг 20 25 Зо
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Слпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45 60
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу Рпе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Тиг Туг Зег Зег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 110 «2105» 47 «2115 119 «2125 РВАТ «213» Ми5 тивсшШ5 «4005» 47
Сім Маї Сіп Геи Сп Сп бег Спу Аа Ма! І еи Маї Гуз Рго Спу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз І еи 5ег Суз Рго Аа Зег Спу Рпе Авп Іе Гуз Авр ТНг 20 25 0)
Туп Пе Ні Тгр Ма! Пе Сп Агу Рго Сім Сп Спу Гей Спи Тр Пе
З5
Сіу Ага Іе Авр Рго Аїа Авп Сіу Авр Тпг Гуз Сувз Авр Рго ГГ ув Рпе 60 40
Сіп Ма! Гуз Ага Тпг Пе Тиг Аа Ар ТНг 5ег 5ег Азп ТНг Аїа Туг 65 70 75 80 45 Ї еєи Сп Ї єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Рне Суз 85 90 95
Маї Агу Ар Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Ттр Спу Сип Спу 50 100 105 110
Тиг ТигГеи ТАг Маї Зег Зег 115 55 «2105» 48 «2115 119 «2125 РВАТ 60 -213» Штвтучна послідовність
«223» 494 УН варіант О52А «400» 48
Сім Маї Сіп Геи Сп Сп бег Спу Аа Ма! І еи Маї Гуз Рго Спу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз І еи 5ег Суз Рго Аа Зег Сіу Ріє Авп Іе Гуз Авр ТНг 20 25 0)
Туп Пе Ні Тгр Ма! Пе Сп Агу Рго Сім Сп Спу Гей Спи Тр Пе 35 40 45
Сіу Ага Іе Аа Рго Аїа Авп Стпу Ар Тиг Гуз 5ег Ар Рго Гуз Рпе 50 55 60
Сіп Ма! Гуз Ага Тпг Пе Тиг Аа Ар ТНг 5ег 5ег Азп ТНг Аїа Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Ї єи Зег Зег Геи ТНг Зег Сім Авр Тниг Аа Маї Туг Рне Сувз 85 90 95
Зо
Маї Агу Ар Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Ттр Спу Сип Спу 100 105 110
Тиг ТигГеи Тнг Маї Зег Зег 115 «210» 49 «2115» 119 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494 УН варіант 0521. «4005» 49
Сім Маї Сіп Геи Сп Сп бег Спу Аа Ма! І еи Маї Гуз Рго Спу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз І еи 5ег Суз Рго Аа Зег Спу Рпе Авп Іе Гуз Авр ТНг 20 25 0)
Туп Пе Ні Тгр Ма! Пе Сп Агу Рго Сім Сп Спу Гей Спи Тр Пе 35 40 45 60
Су Ага Іе І єи Рго Аа Авп Сту Авр Тпг Гуз Зег Ар Рго Гуз Ріе 50 55 60
Сіп Ма! Гуз Ага Тпг Пе Тиг Аа Ар ТНг 5ег 5ег Азп ТНг Аїа Туг 65 70 75 80
Ї еєи Сп Ї єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Рне Суз 85 90 95
Маї Агу Ар Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Ттр Спу Сип Спу 100 105 110
Тиг ТигГеи ТАг Маї Зег Зег 115 «2105» 50 «2115 119 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494 УН варіант 0310 «4005» 50
Зо
Сім Маї Сіп Геи Сп Сп бег Спу Аа Маї І еи Маї Гуз Рго Стпу Аіа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз І єи 5ег Суз Рго Аа бег Спу Ре Авп Пе Гуз СпПу ТНг 20 25 0)
Ту Іе Ніз Тгтр Ма! Пе Сіп Агу Рго Спи Сіп Спу Геи Спи Тер Пе 35 40 45
Сіу Ага Іе Авр Рго Аїа Авп Сіу Авр Тпг Гуз Зег Ар Рго Гуз Рпе 50 55 60
Сіп Ма! Гуз Аа Тпиг Пе Тиг Аа Авр ТНг 5ег Зег Азп ТНпг Аа Туг 65 70 75 80
Ї еєи Сп Ї єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Рне Суз 85 90 95
Маї Агу Ар Туг ГГ еи Туг Рго Туг Туг Рне Авр РНе Ттр Стпу Сіп Спу 100 105 110
Тиг ТигГеи ТАг Маї Зег Зег бо 115
«2105 51 «2115 119 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494 МН варіант Г101А «4005 51
Сім Маї Сіп Геи Сп Сп бег Спу Аа Ма! І еи Маї Гуз Рго Спу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз І еи 5ег Суз Рго Аа Зег Спу Рпе Авп Іе Гуз Авр ТНг 0) 20
Туп Пе Ні Тгр Ма! Пе Сп Агу Рго Сім Сп Спу Гей Спи Тр Пе 35 40 45 25 Сіу Ага Іе Авр Рго Аїа Авп Сіу Авр Тпг Гуз Зег Ар Рго Гуз Рпе 50 55 60
Сіп Ма! Гуз Ага Тпг Пе Тиг Аа Ар ТНг 5ег 5ег Азп ТНг Аїа Туг 65 70 75 80
Ї еєи Сп Ї єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Рне Суз 85 90 95
З5
Маї Агу Ар Туг Аїа Туг Рго Туг Туг Рпе Ар РНе Ттр Сіу Сип Спу 100 105 110
Тиг ТигГеи ТАг Маї Зег Зег 115 «2105 52 «2115 119 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494-001 МН варіант гуманізації «4005 52
Сіп Маї Сип І еи Маї Сип Зег Слпу Аа Спи Маї Гуз Гуз Рго Спу Аіа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Маї 5ег Суз Гуз Аа Зег Спу Рне Авп Іе Гуз Авр ТНг бо 20 25 0)
Туг Пе Ніз Тгр Ма! Пе Сіп Аїа Рго Сіу Сіп Спіу Геи Спи Тр Меї 35 40 45
Сіу Ага Іе Азр Рго Аїа Авп Сту Авр Тпг Гуз Зег Ар Рго Гуз Рпе 50 55 60
Сіп Маї Аг Маї Тнг Пе Тиг Аа Ар Тнг 5ег ТНг 5ег Тиг Маї Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Маї Агу Ар Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Ттр Спу Сип Спу 100 105 110
Тиг Тиг Маї Тнг Маї 5ег Зег 115 «2105 53 «2115 119 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494-002 МН варіант гуманізації «4005 53
Сп Маї Сп І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Маї 5ег Суз Гуз Аа бег Спіу РНе Авп Іе Гуз Авр ТНг 20 25 0)
Туг Пе Ніз Тгр Ма! Пе Сіп Аїа Рго Сіу Сіп Спіу Геи Спи Тр Меї 35 40 45
Сіу Ага Іе Авр Рго Аа Авп Сіу Авр Тпг Гуз 5ег Аа Рго Г ув Ріе 50 55 60
Сіп Маї Аг Маї Тнг Пе Тиг Аа Ар ТНг 5ег ТНг 5ег Тиг Маї Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95 60
Маї Агу Авр Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Тгр Стпу Сп Спу 100 105 110
Тиг Тиг Маї Тнг Маї 5ег Зег 115 «2105 54 «2115» 119 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494-003 МН варіант гуманізації «4005» 54
Сп Маї Сп І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Маї 5ег Суз Гуз Аа бег Спіу РНе Авп Іе Гуз Авр ТНг 20 25 зо
Туг Пе Ніз Тгр Ма! Пе Сіп Аїа Рго Сіу Сіп Спіу Геи Спи Тр Меї
Зо
Сіу Ага Іе Авр Рго Аїа Авп Сіу Авр Тпг Гуз Зег Ар Рго Гуз Рпе 60 35 Сіп Спу Аг Маї Тк Пе Тнг Аа Авр Тнг Зег Тнг 5ег ТНиг Маї Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 40 85 90 95
Маї Агу Ар Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Ттр Спу Сип Спу 100 105 110 45
Тиг Тиг Маї Тнг Маї 5ег Зег 115 50 «2105» 55 «2115 119 «2125 РВАТ 213» Штучна послідовність 55 «220» «223» 494-004 МН варіант гуманізації «4005 55 (516)
Сп Маї Сп І єи Маї Сип бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Спіу 5ег 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Маї Бег Суз Гуз Аа 5ег Спу Ріє Авзп Іе Гуз Авр ТНг 20 25 0)
Туг Пе Ніз Тгр Ма! Пе Сіп Аїа Рго Сіу Сіп Спіу Геи Спи Тр Меї 35 40 45
Сіу Ага Іе Авр Рго Аа Авп Су Авр Тпг Гуз Зег Ар Рго ГГ ув Ріе 50 55 60
Сіп Спу Аг Маї Тк Пе Тнг Аа Азвр Сім Бег Тнг 5ег Тнг Аа Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Маї Агу Ар Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Ттр Спу Сип Спу 100 105 110
Тиг Тиг Маї Тнг мМаї 5ег Зег 115 «2105 56 «2115 119 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494-005 МН варіант гуманізації «4005 56
Сп Маї Сп І єи Маї Сип бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Спіу 5ег 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Маї 5ег Суз Гуз Аа бег Спіу РНе Авп Іе Гуз Авр ТНг 20 25 0)
Туг Пе Ніз Тгр Ма! Пе Сіп Агу Рго Спу Спп СПУ Гей СП Тур Меї 35 40 45
Сіу Ага Іе Авр Рго Аїа Авп Сіу Авр Тпг Гуз Зег Ар Рго Гуз Рпе 50 55 60
Сіп Спу Аг Маї Тк Пе Тнг Аа Азвр Сім Бег Тнг 5ег Тнг Аа Туг бо 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Маї Агу Ар Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Ттр Спу Сип Спу 100 105 110
Тиг Тиг Маї Тнг Маї 5ег Зег 115 «2105 57 «2115 119 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494-006 МН варіант гуманізації «4005 57
Сп Маї Сп Ї ви Сіп СП бег Спу Рго Су І єи Маї Гуз Рго бег Си 1 5 10 15
ТигГеи зег ГГ еи Тнг Суз Тиг Ма! Зег Спіу Ріє Авп Іе Гуз Авр ТНг
Ко) 20 25 Зо
Ту Ме Ні Тгр Ма! Пе Сіп Агу Рго Сіу Гуз Спу І ви СПм Тер Пе 35
Сіу Ага Іе Авр Рго Аїа Авп Сіу Авр Тпг Гуз Зег Авр Рго зег І єи 60 40
Сіп Зег Ага Маї Тнг Пе Зег Аа Авр ТНг Зег Гуз Авп ап Аа зег 65 70 75 80 45 Ї єи Гуз І єи Зег Зег Ма! ТНг Аа Аа Авр Тнг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Маї Агу Ар Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Ттр Спу Сип Спу 50 100 105 110
Тиг Тиг Маї Тнг Маї 5ег Зег 115 55 «2105 58 «2115 119 «2125 РВАТ 60 -213» Штвтучна послідовність
«223» 494-007 МН варіант гуманізації «-4005 58
Сіи Маї Сіп Г еи Ма! Спи Зег Счу Сіу Спу Геи Маї Сіп Рго Спу Спу 1 5 10 15 зег І ви Аго І єи 5ег Суз Аа Аа 5ег СпПу Ре Авп Пе Гуз Авр ТНг 20 25 0)
Ту Іе Ні Тгр Ма! Пе Сп Аїа Рго Спу Гуз Спу Геи Сім Тгр Маї 35 40 45
Сіу Ага Іе Авр Рго Аа Авп Сіу Авр Тпг Гуз Бег Авр Рго 5ег Маї 50 55 60
Сіп Маї Аг Ага Тнпг Пе Зег Аіа Ар Тнг Зег Гуз Авп Тиг Айїа Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп з5ег ГГ еи Аг Аа Сім Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Зо
Маї Агу Ар Туг І єи Туг Рго Туг Туг Рпе Авр РНе Ттр Спу Сип Спу 100 105 110
Тиг Тиг Маї Тнг Маї 5ег Зег 115 «2105» 59 «2115 107 «2125 РВАТ «213» Ми5 тивсшШ5 «4005» 59
І уз Пе Ма! Меї Тнг Сп 5ег Рго І уз бег Меї 5ег Меї 5ег Ма! Спу 1 5 10 15
Сім Ага Маї Тиг ГГ еи Авп Суз Агу Ага 5ег Сім 5ег Ма! Авр Тнг Туг 20 25 0) маї зег Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Спи Сп бег Рго Сім Гей І єи Пе 35 40 45
Туг апу Аа 5ег Азп Аго Туг ТАг Спіу Маї Рго Авр Ага РНе Тниг Спу 50 55 60 60
Зег Сіу Зег Аіа ТНиг Азр РНе Тнг І єи Тнг Пе 5ег 5ег Ма! Сип Аа 65 70 75 80
Сім Авр І єм Аа Авр Туг Туг Сув Спу Сп Тит Туг Авп Туг Рго Гей 85 90 95
Тиг РНе ау Аа Сіу Тиг Гуз Геи Спи Гей Гув 100 105 «210» 60 «2115 107 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494-001 Мі. варіант гуманізації «400» 60
Гуз Пе Сіп Меї Тиг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа Зег Ма! Спу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Суз Агу Аа 5ег Сім 5ег Ма! Азр ТНг Туг 20 25 0)
Зо маї зег Тр Туг СіІп Сіп Гуз Рго Слпу Гуз Айїа Рго Гуз І єи Геи Іе
З5
Туг ачу Аа бег Азп Аго Туг ТАг Сіу Маї Рго Зег Агу РНе Зег Спу 60 40 Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе бЗег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Ар Туг Туг Суз Спу Сіп Тиг Туг Авп Туг Рго І єи 45 85 90 95
Тиг Ре Сатпу Сип Спу ТАг Гуз Гей Спи Пе Гув 100 105 50 «2105 61 «2115 107 «2125 РВАТ 55 -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494-002 МІ. варіант гуманізації бо «4005 61
І уз Пе Ма! Гей Тиг Сп 5ег Рго Спіу ТНг І еи 5ег І ей 5ег Рго Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тпг ГГ еи Зег Суз Агу Аїа 5ег Спи Зег Ма! А5р ТАг Туг 20 25 0) маї зег Тр Туг СіІп Сіп Гуз Рго Спу Сп Айа Рго Аго І єи Геи Іе 35 40 45
Туг апу Аа 5ег Азп Аго Туг ТАг Сіу Маї Рго Азр Агу РНе 5Бег Спу 50 55 бо
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе 5ег Агу І єи Спи Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Ар Туг Туг Суз Спу Сіп Тиг Туг Авп Туг Рго ГІ єи 85 90 95
Тиг Ре Сатпу Сип Спу ТАг Гуз Гей Спи Пе Гув 100 105
Зо «2105» 62 «2115 107 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494-003 МІ. варіант гуманізації «4005» 62
Сі Пе Маї СГеи Тит Сп Зег Рго Спу Тиг ГГ еи 5ег ГГ еи Зег Рго Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тпг ГГ еи Зег Суз Агу Аїа 5ег Спи Зег Ма! А5р ТАг Туг 20 25 0) маї зег Тр Туг СіІп Сіп Гуз Рго Спу Сп Айа Рго Аго І єи Геи Іе 35 40 45
Туг апу Аа 5ег Азп Аго Туг ТАг Сіу Маї Рго Азр Агу РНе 5Бег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе 5ег Агу І єи Спи Рго 65 70 75 80 (510) сій Авр РНе Аа Ар Туг Туг Суз Спу Сіп Тиг Туг Авп Туг Рго ГІ єи
85 90 95
Тиг Ре Сатпу Сип Спу ТАг Гуз Гей Спи Пе Гув 100 105 «2105» 63 «2115 107 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 494-004 МІ варіант гуманізації «400» 63
І уз Пе Ма! Геи Тиг Сп 5ег Рго Сіу Тнг І єи Зег І еи 5ег Рго Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тпг ГГ еи Зег Суз Агу Аїа 5ег Спи Зег Ма! А5р ТАг Туг 20 25 0) маї зег Тр Туг СіІп Сіп Гуз Рго Спу Сп Айа Рго Аго І єи Геи Іе
Коо) Туг апу Аа 5ег Азп Аго Туг Тиг Су Пе Рго Азр Агу РНе Зег Спу 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе 5ег Агу І єи Спи Рго 35 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Ар Туг Туг Суз Спу Сіп Тиг Туг Авп Туг Рго ГІ єи 85 90 95 40
Тиг Ре Сатпу Сип Спу ТАг Гуз Гей Спи Пе Гув 100 105 45 «210» 64 «2115 118 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 50 «4005» 64
Сп Маї Сп І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 55 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 0) (516)
Тниг Меї Авп Тр Маї Ага Сп Аа Рго Спіу Сіп СПІу Гей СП Тур Меї 35 40 45
Сіу Ага ЇІе Авп Рго Ні Авп Спіу Спу ТНг Авр Туг Аа Сп Гув Ріе 50 55 60
Сіп Спу Агу Маї Тнг Меї Тнг Агу Авр Тпг Зег Пе 5ег Тнг Аа Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег Агу І єи Ага 5ег Азр Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Аа Агу Сіпу Туг Туг Туг Туг зег І еи Авр Туг Ттр Сіу Сип СПУ ТА 100 105 110
Ї еи мМаї Тнг Маї Зег Зег 115 «210» 65 «2115 106 «2125 РВАТ «213» Ми5 тивсшШ5
Коо) «4005» 65
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
З5
Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Суз Агу Аа 5ег Зег 5ег Пе Аг9 Туг Пе 20 25 0) 40 Ні Тгтр Туг ап Сіп Гуз Рго Сту Гуз Аа Рго Гуз Ага ГГ еи Іе Туг
Азр Тпг 5ег Авп ГГ еи Аа 5ег Спу Маї Рго Зег Агу Ре Зег Спу Зег 45 50 55 60
Спіу бБег Спу Тиг Суми РНе Тнг І єи Тнг Пе 5ег 5ег І ви Сп Рго СПИ 65 70 75 80
Азр Ре Аа ТАг Туг Туг Суз Нів Сип Агу Авп 5ег Туг Рго Тр Тиг 85 90 95
Рпе Стпу Сп Спу ТНг Ага Гей Си Пе Гув 100 105 60 «2105» 66
«2115 7 «212» РВТ «213» Огусюіадив сипісшив «-4005» 66
Сіу Рпе Зег І еи Зег Зег Туг 1 5 «2105» 67 «2115 5 «212» РВТ «213» Огусюіадив сипісшив «4005» 67 зЗег Туг АІа Меї 5ег 1 5 «2105» 68 «2115 5 «212» РВТ «213» Огусюіадив сипісшив «4005» 68
Тір Зег Сіу Спу 5ег
Зо 1 5 «210» 69 «2115 16 «212» РВТ «213» Огусюіадив сипісшив «400» 69
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тр Аа Гуз Спу 1 5 10 15 «2105 70 «2115 16 «212» РВТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-000 НУВ-Н2 Кабаї 655 «-4005 70
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз Бег 1 5 10 15 «2105 71 «2115 17 бо «212» РВТ
«213» Огусюіадив сипісшив «4005 71
Аго Туг сапу Тиг Зег Туг Рго Авр Туг Спу Авр Аа Авп Ссіу Ре Авр 1 5 10 15
Рго «2105 72 «2115 17 «212» РВТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-000 НУВ8-НЗ САБО «4005 72
Аго Туг сапу Тиг 5ег Туг Рго Авр Туг Сіу Авр Аа 5ег СПу Рпе Ар 1 5 10 15
Рго
Зо «2105 73 «2115 17 «212» РВТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-000 НМВ8-НЗ ОАДОС «-4005 73
Аго Туг сапу Тиг 5ег Туг Рго Авр Туг Сіу Авр Аа Сип Спу Рпе Ар 1 5 10 15
Рго «2105» 74 «2115 11 «212» РВТ «213» Огусюіадив сипісшив «4005» 74
Сп Аа бег Сп бег Пе бег 5ег ТугіІ єи Зег 1 5 10 бо «2105 75
«2115 11 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-000 НМВ-І1 ВАА «4005 75
Аг Аа 5ег Сп Бег Пе Бег 5ег Туг І єи Аа 1 5 10 «2105 76 «2115 7 «2125 РВАТ «213» Огусіоіадив5 сипісшцив5 «4005 76
Аг Аа 5ег Тпг Геи Аа 5ег 1 5 «-2105 77 «2115 12 «2125 РВАТ «213» Огусіоіадив5 сипісшцив5
Зо «4005 77
Сп Сип Суз Туг Зег Зег 5ег Азп Маї Азр Авп ТНг 1 5 10 «2105 78 «2115 12 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» 299-000 НМВ-І З ММА «4005 78
Сіп Сп Авп Туг Аа 5ег 5ег Авп Маї Азр Авп ТНг 1 5 10 «2105» 79 «2115» 119 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» МН антитіла до СО2о «4005» 79 (510) Сіп Маї Сип І єи Маї Сип Зег Спу Аа Сім Маї Гуз Гуз Рго Сіу Зег
1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Аа Рпе 5ег Туг Зег 20 25 0)
Тер Пе Авп Ттр Маї Аго Сіп Аа Рго Спіу Сп СПу Геи Спи Тур Меї 35 40 45
Сіу Ага Іе РНе Рго Спу Азр Стпу Ар ТНг Авр Туг Ап Су Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Спу Ага Маї Тит Пе Тнг Аа Авр Гуз Зег Тпг Зег Тиг Аа Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Агу Авп Маї РНе Азр Сту Туг Тр Геи Маї Туг Тгтр Спу Сп Спу 100 105 110
Тиг Ге Маї Тниг Ма! бег Зег 115
Зо «210» 80 «2115 112 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» МІ антитіла до СО20 «4005» 80
Азр Іе Маї Меї Тнг Сіп Тнг Рго І еи Зег І еи Рго Ма! ТНг Рго Спу 1 5 10 15
Спи Рго Аа 5ег Пе бег Суз Агу 5ег 5ег І уз 5егіІ єи І еи Ні 5ег 20 25 0)
Азп сту Пе ТАг Туг ГГ еи Туг Тр Туг Геи Сп Гуз Рго Спу Сіп Зег 35 40 45
Рго Сп І єи Геи Пе Туг Сп Меї Зег Азвзп І єи Ма! Зег Спу Маї Рго 50 55 60
Азр Агу Ре 5Бег Спу 5ег Спу 5ег Спу ТНиг Авр РНе ТнНг І єи Гуз Пе 65 70 75 80 60 зЗег Аг Маї Спи Аа Спи Ар Маї Сіпу Маї Туг Туг Суз Аа Сип Авп 85 90 95
Ї ви Спи І ви Рго Туг ТАг Ре Спу Спу Спу Тнг Гуз Маї Си Пе Гуз 100 105 110 «2105 81 «2115 126 «2125 РВАТ «213» Ното зарієп5 «-4005 81
Сіп Ма! Сім Г еи Ма! Спи Зег Счу Сіу Спу Геи Маї Сіп Рго Спу Спу 1 5 10 15 зег І ви Аго І єи 5ег Суз Аа Аа 5ег СПу Рпе ТНг Рне Зег Зег Туг 20 25 0)
Аа Меї 5ег Тгр Маї Ага Сп Аїйа Рго Сіу Гуз Спу І и Сім Тр Маї 35 40 45 зЗег Аа Пе Азп Аа бег Спу ТНг Агу Тнг Туг Туг АІа Ар 5ег Маї 50 55 60
Гуз Спіу Ага Ре Тнг Пе 5ег Ага Авр Авп з5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80
З5
Ї еи Сп Меї Авп з5ег ГГ еи Аг Аїа Спи Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суб 85 90 95
Аа Агу Су Гуз СпПу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
Рпе Авр Маї Ттр Спу СіІп Спу ТНг І еи Маї Тнг Ма! бег Зег 115 120 125 «2105» 82 «2115 108 «2125 РВАТ «213» Ното зарієп5 «4005» 82
Азр Іе Маї І єи Тиг Сп Зег Рго Аа ТНг І єи 5ег Гей Зег Рго Спу 1 5 10 15 60 См Ага Аа ТНг І еи бег Суз Агу Аа бег Сп бег Ма! бег Зег 5ег
20 25 0)
ТугГеи Аа Тгр Туг Сп Сіп Гуз Рго СПу Сп Аа Рго Аго І еи Гей 35 40 45
Пе Туг Спу Аа бег Зег Агу Аа Тиг Спу Маї Рго Аа Агу Рне 5ег 50 55 60 сСіу Зег Сіу Зег Су Тиг А5р Ріє Тпг ГГ єи Тит Пе Зег 5ег ГІ еи Си 65 70 75 80
Рго Си Авр Ріє Аа Тнг Туг Туг Суз І ви Сп Пе Туг Авп Меї Рго 85 90 95
Пе Тиг Рпе Стпу Сп Спу ТАг Гуз Ма! Си Пе Гув 100 105 «2105» 83 «2115» 116 «2125 РВАТ -213» Штгтучна послідовність «220»
Зо «223» гуманізоване антитіло до альфа-синуклеїну 9Е4 УН «4005» 83
Сіи Маї Сіп Г еи Ма! Спи Зег Счу Сіу Спу Геи Маї Сіп Рго Спу Спу 1 5 10 15 зег І ви Аго І єи 5ег Суз Аа Аа 5ег СПУ Рпе Тнг Ріє 5ег Азп Туг 20 25 0)
Сіу Меї 5ег Тгр Маї Агу Сп Аїа Рго Стпу Гуз Спу Геи Си Тер Маї 35 40 45
Аа 5ег Пе бег Зег СПу Спу Спіу Зег ТНг Туг Туг Рго Авр Авп Маї 60 50 Гуз Спіу Ага Ре Тнг Іе 5ег Ага Авр Авр Аїа Гуз Авп 5ег І еи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І ви Агу Аа Сіи Ар Тнг Аа Маї Туг Туг Сувз 55 85 90 95
Аа Агу Сіпу Стпу Аа Спу Пе Авр Туг Тгтр Спу Сп Спу ТНг І ви Маї 100 105 110 60
Тнг Маї Зег Зег «210» 84 «2115 113 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» гуманізоване антитіло до альфа-синуклеїну 9Е4 МІ. «4005» 84
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Сувз Гуз 5ег Пе Сіп ТНгГеиц І еи Туг Зег 20 25 0) зЗег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгтр Рпе Сіп Сп Гув Рго Сіу Гув
Аа Ро Гуз Ге І єи Пе Туг Тгр Аа Зег Пе Аго Гуз Зег Сіу Маї 60
Зо
Рго Зег Агу Ре Зег Спу Бег Сіу ЗБег Сіу ТНг А5р Ре ТНг І єи ТНг 65 70 75 80
З5
Пе Бег Зег І єи Сп Рго Сім Авр ГІ еи Аа ТАг Туг Туг Сув Сп Сп 85 90 95 40 Туг Туг Зег Туг Рго Геи ТАг Рпе Сіу Спу Спу Тиг Гуз Геи Си Пе 100 105 110
Гуз 45 «2105» 85 «2115 115 50 «2125 РВАТ «213» Ми5 тивсшШ5 «4005» 85 55 Сіп Маї Сіп Г еи Сп Сп Бег Спу Аа Сім Г еи Аа Гув Рго Спу ТНг 1 5 10 15 зЗег Ма! СіІп Меї 5ег Суз Гуз Аа Зег Спіу Туг Тиг РНе ТНг Авп Туг бо 20 25 0)
Тр Меї Авп Ттр Іе Гуз Аа Ага Рго Спу Сіп СПу Геи Спи Тгр Пе 35 40 45
Су Аа Тпиг Авп Рго Авп Авзп сту Туг ТАг Авр Туг Авп Сп Ага Рпе 50 55 60
Гуз Авр Гуз Аїа Іе І єи ТНиг Аа Авр Гуз Бег Зег Азп Тиг Аа Туг 65 70 75 80
Меї Ніз І еи 5ег 5ег І еи ТНг Зег Сіи Авр 5ег Аа Ма! Туг Рне Суз 85 90 95
Аа 5ег СПу Спу Нів І єи Аа Туг Ттр Сіу Сп Спу Тк Маї Ма! Тиг 100 105 110 маї Зег Аа 115 «210» 86 «2115 112 «2125 РВАТ
Коо) «213» Ми5 тивсшШ5 «400» 86
Ар Маї Ма! Меї Тнг Сіп Пе Рго І єи Туг І єи бег Ма! Зег Рго Спу 1 5 10 15
Азр ап Аа 5ег Пе бег Сув Агу Зег Зег Сп 5ег Гей РНе Нів 5ег 20 25 0)
Гуз Спіу Азп ТАг Туг Геи Нів Тгр Туг ГГ еи Сп Гу Рго Спу Сип Зег 35 40 45
Рго Гуз І єи Геи Пе Авп Аг Маї 5ег Авп Ага РНе 5ег Сіу Маї Рго 60 50 Азр Агу Ре 5Бег Спу 5ег Спу 5ег Спу ТНиг Авр РНе ТнНг І єи Гуз Пе 65 70 75 80 зЗег Сіу Маї Спи Аа Ст Авр І еи Спу Ма! Туг Рпе Сув 5ег Сп Зег 55 85 90 95
Аа Ні Маї Рго Тр Тиг Рпе Сіу Сіу Счу Ти Гуз Геи Си Пе Ага 100 105 110 60
«-2105» 87 «2115 115 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 «4005» 87 маї Сп Ї єи Сип Сп бег Спу Рго Сім І єи Ма! Гуз Рго Сіу Тнг Зег 1 5 10 15 маї Гуз Пе Зег Суз І уз АІа бег Спіу Туг Зег Ріпе Тнг 5ег Туг Туг 20 25 0)
Пе Ні Тер Маї І уз Сіп Зег Рго Спіу Сп Спіу Ї еи Спи Тур Пе Спіу 35 40 45
Тер Пе Туг Рго Сіу Зег Спу Авп Тпг Гуз Туг Зег Си Гу РНе Гуз 50 55 60
Сіу Гуз Аіа Тниг І еи ТАг Аа Ар Тнг 5ег Зег 5ег Тиг Аа Туг Меї 65 70 75 80
Сіп Гей бег 5ег І ви ТНг Зег Сі Авр 5ег Аа Маї Туг Рне Суз Аїа 85 90 95
Аг Азр Су Суз Туг Сіу Ріє Аа Туг Тгтр Спу Сп Сіу ТНг Гей Маї 100 105 110
Тнг Маї Зег 115 «2105» 88 «2115 111 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 «4005» 88
Азр Іе Маї І єи Тниг Сп Зег Рго Аа 5ег І ви Аа Маї 5ег І ви Спу 1 5 10 15
Сіп Ага Аа Тниг Пе 5ег Суз ГГ уз Аа 5ег Сп бЗег Ма! А5р Туг Азр 20 25 0)
Сіу Авр 5ег Туг Меї Авп Тгтр Туг Сп Сп Гув Рго СПу Сп Рго Рго 35 40 45 60 Гуз Рне Геи Пе Суз Аїа Аа 5ег Авп І єи Сіи бег Спу Пе Рго Аа
50 55 60
Агу РНе 5ег Спу Зег Сіу Зег СПу Тиг А5р Рне Тнг І єи Авп Іе Нів 65 70 75 80
Рго Маї Спи Спи Спи Авр Аїйа Аа ТНиг Туг Туг Суз Сп Сіп Зег Авп 85 90 95 сій Авр Рго Рпе ТНг Рпє Стпу Зег Спіу ТНиг Гуз Геи Си Пе Гув 100 105 110 «210» 89 «2115 115 «2125 РВАТ «213» Огусіоіадив5 сипісшцив5 «4005» 89
Сіп Зег Ма! Спи Сім Зег Сіу Спу Аго І еи Маї Тнг Рго Стпу ТНиг Рго 1 5 10 15
Ї еи ТигІ єи Тиг Суз ТАг Маї 5ег Спу РНе 5ег Пе Авп 5ег Туг Аа 20 25 зо
Зо
Ме! Пе Ттр Маї Ага СіІп Аа Рго Спу Сіи Сіу Семи СПми Тер Пе Спу 35 ма! Ме Туг Рго Зег Сіу Азп Тнг Туг Туг Аіа Авп Тгр Аа Гуз Спу 60
Агу РНе Тниг Маї 5ег Ага Тиг Зег Тиг Тнг Маї Авр І єи Гуз Пе Тнг 40 65 70 75 80 зЗег Рго ТАг Тиг Спи Авр Тнг Аа Тиг Туг Рне Суз Аїа Агу Агу Авзр 85 90 95 45 сСіу Тит Авр Гуз Тиг Ре Авп Пе Ттр Стпу Рго Слпу Тиг Геи Маї ТНг 100 105 110 50 ма! Зег І еи 115 55 «2105» 90 «2115 112 «2125 РВАТ «213» Огусіоіадив5 сипісшцив5 (510) «-4005 90
Сіп Ма! І еи Тнг Сп ТНг Рго 5ег Рго Маї 5ег Аа Аа Ма! Спіу Спу 1 5 10 15
ТАг Маї Ти Пе Азп Суз Сп Аа бег Сп Авзп Маї Туг Спу Авр Авзп 20 25 0)
ТугГеи Аа Тгр Туг Сп Сіп Гуз Рго СПу Сп Рго Рго Гуз Геи І єи 35 40 45
Пе Туг Сім Аа 5ег Гуз І еи Аа Зег Сіпу Маї Рго Рго Агу Рпеє 5ег 50 55 бо
Спу бег Спу бег Спу ТНг Сп РНе ТНг І еи Тнг Пе 5ег Азр Маї Сіп 65 70 75 80
Сувз Авр Азр Аїа Аа Тнг Туг Тут Суз СіІп Сіу СПи РНе І еи Суз ТНг 85 90 95
Тиг Зег Азр Суз Рпе Тиг Рпе Сіу Сіу Спу Тнг Сту Маї Маї Ма! Ага 100 105 110
Зо «2105 91 «2115» 119 «2125 РВАТ «213» Огусіоїадив5 сипісшив «4005 91
Сіп Зег Ма! Спи Сім Зег Сіу Спу Аго І еи Маї Тнг Рго Стпу ТНиг Рго 1 5 10 15
Ї еи Тиг І єи Тиг Суз ТАиг Ма! Зег Спу Пе Азвр І єи 5ег Ага Туг Аіа 20 25 0)
Меї Зег Ттр Маї Ага Сіп Аа Рго Спу Гуз СПУ Геи Спи Тер Пе Спу 35 40 45 ма! Ме Авп 5ег 5бег Сіу АІа Тнг Туг Туг Аіа 5ег Тгр Аа Гуз СІу 50 55 60
Агу Рпе Тит Пе Бег Спи Тит Зег Тиг Тиг Ма! Сім ГГ еи Гуз Пе ТНг 65 70 75 80 зЗег Рго ТАг Тиг Спи Авр Тнг Аа Тиг Туг Рне Суз Аа Ага Ттр ТНг 85 90 95 60
Туг Авр Авр Туг СаПу Азр Ре Сп Сіу РНе Авп Пе Тгр Спу Рго Спу 100 105 110
Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег І ей 115 «2105» 92 «2115 111 «2125 РВАТ «213» Огусіоіадив5 сипісшцив5 «4005» 92
Аа Ма! І єи Тнг Сп Тнг Рго 5ег Рго Маї Зег Аа Аа Ма! Спу СПУ 1 5 10 15
Тниг Маї ТА Пе Зег Су Сіп Зег Зег Сп 5ег Ма! Туг Абп Авп Авп 20 25 0)
Азр Гей Аа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сп Рго Рго Гуз І еи ГГ еи
Пе Туг Ага Айа 5ег Гуз І ви Аа Зег Сіпу Маї Рго Зег Агу Ре Гуз 60
Зо
Спіу бег Спу бег Спу ТНг Сп РНе ТНиг І еи Тнг Пе бег Спу Ма! Стп 65 70 75 80
З5
Су Авр Азр Аа Аїа Тнг Туг Туг Суз Геи Спіу Сіу Туг Азр Авр Ар 85 90 95 40 Аа Азр Меї Сіпу Аа Рпе Сіу Сіу Спу Тиг Спи Маї Маї Ма! Гув 100 105 110 «2105» 93 45 «2115 111 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» 50 «223» варіабельний домен важкого ланцюга «4005» 93
Сіп ЗегІ еи Сіи Спи Зег Спу Спу Аго ГІ еи Маї Тнг Рго Спу ТНиг Рго 55 1 5 10 15
Ї еи ТигІ єи Тиг Суз ТАг Маї бег Спу Пе Авр І єи Зег Агу Авр Тиг 20 25 0) 60
Ме! Пе Ттр Маї Ага СіІп Аа Рго Спу Сіи Сіу Семи СПми Тер Пе Спу 35 40 45 зЗег Пе Туг Тиг Авр 5ег Сіу Авп ТНг Тгр Туг Аа 5ег Тгр Ма! Гуз 50 55 60
Сіу Агд Рпе Тпг Пе Бег Гуз ТНг Зег Зег Тит Тнг Маї Авр І еи Ага 65 70 75 80
Пе Тиг Зег Рго Тиг ТАг Спи Авр ТАг Аа Тнг Туг Ріє Суз Аа Ага 85 90 95
Азп РНе 5ег Маї Ттр Сіу Рго Сіу ТНг Геи Маї Тнг Ма! 5ег І ви 100 105 110 «210» 94 «2115 112 «2125 РВАТ 213» Штгтучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга «400» 94
Сіп Ма! І еи Тнг Сп ТНг Рго 5ег Рго Маї 5ег Аа Аа Ма! Спіу Спу 1 5 10 15
З5
ТНиг Маї Ти Пе Азп Суз Сп Аа бег Сп 5бег Ма! Туг Азп бег Ар 20 25 0) 40 Ага ГГ еи Аа Ттр РНе Сіп Сіп Меї Аго сапу Сип Рго Рго Гуз І еи Гей
Пе Туг Авр Маї зе" Гуз І еи Аа Зег Спу Маї Рго Зег Агу Рпе 5ег 45 50 55 бо
Спу бег Спу бег Спу ТНг Сп РНе ТНг І еи Тнг Пе 5ег Азр Маї Сіп 65 70 75 80
Су Авр Азр Аа Аїа Тнг Туг Туг Суз І еи Сіу Спу Туг Азр Сув Бег 85 90 95 зЗег Аіа Сіи Сув5 Авп Ма! Рне Сіу Сіу Спу Тиг Спи Маї Маї маї Гув 100 105 110 60 «2105» 95
«2115» 20 «212» РВТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» пептидний лінкер «4005» 95
Сту Спу Спу Спу бЗег Спу Спу Спіу Спу Зег Спу Спу Спу Спу Зег Су 1 5 10 15
СпІу Спу Спу бег «2105» 96 «2115 32 20 «212» РВТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» пептидний лінкер «4005» 96
Сту Спу Спу Спу бЗег Спу Спу Спіу Спу Зег Спу Спу Спу Спу Зег Су 1 5 10 15
Зо
Сту Спу Спу Зег Сіу Спу Спу Спу бег Спіу Спу Спу Спу бег Спу Спу 20 25 Зо «2105» 97 «2115 536 «212» РВТ «213» Ното зарієп5 «4005» 97
Меї Сіи РНе 5ег Зег Рго 5ег Ага Сім СПІши Суз Рго Гуз Рго І єи 5ег 1 5 10 15
Аго Маї Бег Пе Меї Аїа Спу 5ег ГГ еи ТАг Спу І еи Гей ГГ еи Гей Сп 20 25 Зо
Аа Ма! Зег Тр Аа бег Сіу Аа Ага Рго Суз Пе Рго Гуз 5ег Рпє 35 40 45
Сіу Туг Зег Зег Ма! Ма! Суз Маї Суз Авп Аа ТНиг Туг Сувз Авр 5ег 50 55 60
Рпє Авр Рго Рго Тнг Ре Рго Аїа І ви Спу Тиг Рне 5ег Ага Туг Спи бо 65 70 75 80 зЗег ТНг Агу Зег Спіу Агу Аго Меї Сім Геи Зег Меї Спу Рго Пе Сіп 85 90 95
Аа Авп Ні5 Тиг Спу Тиг Спу Гей Гей Гей Тит Гей Сп Рго Спи Сп 100 105 110
Гуз Рпе ап Гуз Маї Гуз Спу Рпе Стпу Спу Аа Меї ТАг Авр Аа Аа 115 120 125
Аа І еи Азп Пе І єи Аа І єи 5ег Рго Рго Аа Сіп Авп І єи ГГ еи Ї еи 130 135 140
Гуз 5ег Туг Рне 5ег Си Спи су Пе Спіу Тук Авп Пе Іе Аг Маї 145 150 155 160
Рго Меї Аа 5ег Суз Авр Ріє 5е! ІПе Аго Тиг Туг ТАг Туг Аа Азр 165 170 175
Тиг Рго Авр Авр Ре ап ГГ еи Ні Азп РНе з5ег ГГ еи Рго Сіи Спи Авр 180 185 190
Зо
Тиг Гуз Геи Гуз Пе Рго ГГ еи Пе Ні Аг Аїа ГІ єи Сп І еи Аа Сіп 195 200 205
Аг Рго Маї зег І еи І еи Аа 5ег Рго Тр ТАг Зег Рго ТНг Тгр І єи 210 215 220
Гуз Тнг Авп Су Аа Маї Авп Сіу Гуз Спіу Зег ГГ еи Гув Спу Суп Рго 225 230 235 240
Сіу Азр Іе Туг Ні Сіп Тнг Тр Аа Аго Туг РНеє Маї Гуз Рне Геи 245 250 255
Азр Аа Туг Аа Сім Нів Гуз І єи Сп РНе Тр Аа Ма! Тиг Аа Спи 260 265 270
Авп Сім Рго 5ег АІа Су І єи І єи Зег Спіу Туг Рго Рне Сіп Суз І єи 275 280 285
Сіу Рпе Тиг Рго Спи Нів Сіп Агу Авр Рне Пе Аїа Агу Авр І ви Спу 290 295 00
Рго Тиг Гей Аа Авп 5ег ТнНг Ніз Ніз Азп Маї Аг І єи І єи Меї І єи бо 305 з10 315 320
Ар Азр Сп Ага І єи І єи І єи Рго Ніз Тр Аа Гуз Маї Ма! І еи ТНг 325 330 335
Азр Рго Си Аїа Аїа Гуз Туг Маї Ні Сіу Пе Аа Маї Ніз Ттр Туг 340 345 350
Ї еи Авр РнНе І єи Аїа Рго Аа Гуз Аа ТНг ГГ еи Спу Сім ТНг Ніз Аг 355 360 365
Ї еи Рне Рго Авзп ТНиг Меї І єи Рне Аа 5ег Сім Аа Суз Маї Су бег 370 375 380
Гуз РНе Ттр Сім Сп бег Маї Агу І єи Спу бег Тр Азр Агу Спіу Меї 385 390 395 400
Сп Туг Зег Нів 5ег Пе Пе Тнг Авп І єи І є! Туг Ніз Маї Ма! Су 405 до 415
Тер Тнг Авр Тр Азвп І єи Айа І єи Авп Рго Сім СтТу СПу Рго Авп Ттр 420 425 430
Зо маї Агу Азп Рне Маї Авр 5ег Рго Іе Пе Маї Авр Пе Тнг Гуз Азр 435 440 445
Тиг Ре Туг Гуз СіІп Рго Меї Ре Туг Нів Геи Спу Ні РНе 5ег ГГ ув 450 455 460
Ре Пе Рго Спи Спу бег Сіп Агу Маї Стпу І еи Маї Аа 5ег Сп Гуз 465 470 475 480
Азп Авр Гей Авр Аа Маї Аа ГІ еи Меї Нів Рго Авр Сіу Зег Аа Маї 485 490 495 маї Маї Маї Геи Авп Агу з5ег Зег І уз Азр Маї Рго Геи Тнг Пе Гув 500 505 510
Азр Рго Аа Маї Сіу Ріє Геи Спи Тниг Пе Зег Рго Спу Туг Зег Пе 515 520 525
Ні5 Тниг Туг Геи Ттр Аг Аго іп 530 535 60

Claims (17)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Гуманізоване антитіло, що специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини, при цьому антитіло включає варіабельний домен важкого ланцюга послідовності зХЕО ІЮ МО:23, 24 або 25 та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності зЗЕО ІЮ МО:37.
2. Гуманізоване антитіло за п. 1, де у гуманізованого антитіла вимкнена ефекторна функція.
3. Гуманізоване антитіло за п. 1 або 2, де гуманізоване антитіло специфічно зв'язується з рецептором трансферину людини та рецептором трансферину яванської макаки.
4. Гуманізоване антитіло за будь-яким з пп. 1-3, де гуманізоване антитіло являє собою мультиспецифічне антитіло, що має принаймні одну зв'язувальну специфічність до рецептора трансферину людини і принаймні одну зв'язувальну специфічність до терапевтичної мішені.
5. Гуманізоване антитіло за п. 4, де гуманізоване антитіло включає перший антигензв'язувальний сайт, що зв'язується з рецептором трансферину людини, і другий антигензв'язувальний сайт, що зв'язується з мозковим антигеном.
6. Гуманізоване антитіло за п. 5, де мозковий антиген вибраний із групи, що складається з Ареїа, рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК), людського рецептора епідермального фактора росту 2 (НЕК2), альфа-синуклеїну, СО20, білка-попередника амілоїду (АРР) та глюкоцереброзидази.
7. Гуманізоване антитіло за будь-яким з пп. 4-6, де мультиспецифічне антитіло зв'язується одночасно з: І) рецептором трансферину людини та Абеїа або І) рецептором трансферину людини та СО20, або І) рецептором трансферину людини та альфа-синуклеїном, або ІМ) рецептором трансферину людини та фосфо-тау-білком, або М) рецептором трансферину людини та глюкоцереброзидазою.
8. Гуманізоване антитіло за будь-яким з пп. 1-7, де гуманізоване антитіло є біспецифічним антитілом, яке включає: І) перший сайт зв'язування, що включає варіабельний домен важкого ланцюга послідовності Ко) ЗЕО ІЮО МО:23, 24 або 25, та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО:37, та ІЇ) другий сайт зв'язування, що включає: а) варіабельний домен важкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО:81 та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО:82, або б) варіабельний домен важкого ланцюга послідовності зБЕО ІЮ МО:83 та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО:84, або в) варіабельний домен важкого ланцюга послідовності ФЕО ІЮ МО:85 та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО:86, або г) варіабельний домен важкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО:87 та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО:88, або г) варіабельний домен важкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО:91 та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності 5ЕО ІЮ МО:92, або д) варіабельний домен важкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО:89 та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО:90, або е) варіабельний домен важкого ланцюга послідовності «ЕО ІЮ МО:93 та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності ЗЕО ІЮ МО:94, або є) варіабельний домен важкого ланцюга послідовності зЗЕО ІЮ МО:79 та варіабельний домен легкого ланцюга послідовності зЗЕО ІЮ МО:80.
9. Гуманізоване антитіло за будь-яким з пп. 1-8, де гуманізоване антитіло є: а) повнорозмірним антитілом підкласу І(ДС1 людини або б) повнорозмірним антитілом підкласу ІД04 людини, або в) повнорозмірним антитілом підкласу ЇДС1 людини з мутаціями І 234А, І 235А та РЗ3296, або г) повнорозмірним антитілом підкласу Їд54 людини з мутаціями 5228Р, І 235Е та необов'язково РЗ3290, або г) повнорозмірним антитілом підкласу ЇДО1 людини з мутаціями І 234А, І 235А та Р3290 в обох важких ланцюгах, а також мутаціями Т366УМ і 5354С в одному з важких ланцюгів та мутаціями Т3665, І З368А, 407 і у349С у відповідному іншому важкому ланцюзі, або д) повнорозмірним антитілом підкласу Ідс4 людини з мутаціями 5228Р, І235Е і необов'язково РЗ290 в обох важких ланцюгах, а також мутаціями Т36бУМ і 5354С в одному з важких ланцюгів бо та мутаціями 73665, І З68А, у407М і у349С у відповідному іншому важкому ланцюзі.
10. Гуманізоване антитіло за будь-яким з пп. 1-8, де гуманізоване антитіло включає: І) гомодимерну Ес-ділянку підкласу ЇДс1 людини, необов'язково з мутаціями РЗ329б, І 234А та І 235А, або І) гомодимерну Ес-ділянку підкласу Ідс4 людини, необов'язково з мутаціями РЗ3290, 5228Р та І235Е, або І) гетеродимерну Ес-ділянку, в якій: а) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутацію ТЗ366УУ, а інший поліпептид Ес-ділянки включає мутації 73665, І З368А та 407, або б) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т366УМ та У349С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І З368А, У407М та 5354С, або в) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т366УМ та 5354С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І З368А, У407М та У349С, або ІМ) гетеродимерну Ес-ділянку підкласу ІдсС4 людини, в якій обидва поліпептиди Ес-ділянки включають мутації РЗ3290, І 234А та І 235А, та а) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутацію ТЗ36б6УУ, а інший поліпептид Ес-ділянки включає мутації 73665, І З368А та 407, або б) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т366УМ та У349С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І З368А, У407М та 5354С, або в) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т366УМ та 5354С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І З368А, У407М та У349С, або М) гетеродимерну Ес-ділянку підкласу дС4 людини, в якій обидва поліпептиди Ес-ділянки включають мутації РЗ3290, 5228Р та І235Е, та а) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутацію ТЗ36б6УУ, а інший поліпептид Ес-ділянки включає мутації 73665, І З368А та 407, або б) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т366УМ та У349С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І З368А, У407М та 5354С, або в) один з поліпептидів Ес-ділянки включає мутації Т366УМ та 5354С, а інший поліпептид Ес- ділянки включає мутації 73665, І 368А, у407М та у349С.
11. Фармацевтичний склад, що містить гуманізоване антитіло за будь-яким з пп. 1-10 та Зо фармацевтично прийнятний носій.
12. Застосування гуманізованого антитіла за будь-яким із пп. 1-10 для виробництва лікарського засобу для лікування неврологічного порушення.
13. Застосування за п. 12, де неврологічне порушення вибране з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, захворювання або розладу очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу та запалення
ЦНе.
14. Застосування гуманізованого антитіла за будь-яким із пп. 1-10 для лікування неврологічного порушення.
15. Застосування за п. 14, де неврологічне порушення вибране із групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, захворювання або розладу очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу та запалення
ЦНе.
16. Спосіб лікування неврологічного порушення, який включає введення гуманізованого антитіла за будь-яким з пп. 1-10.
17. Спосіб за п. 16, де неврологічне порушення вибране із групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, захворювання або розладу очей, розладу, що супроводжується судомами, хвороби лізосомного накопичення, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, поведінкового розладу та запалення
ЦНе.
Джальне пггенекяння Е ! и Я етан нач ОТАК ВО пит, о й Н змо ПЕК МОВІ ВН крани І нниннювня : тав МИНА КН ЗО шт ТЕ пнріні дім в ОСС с інкьнсвві «ЖЖ у нковокулляюкя ТЕ ому о ХО ня з соді ск В ня М ВО І ВІ В ЕКОН, шиття і бути ПИШНИМИ НИииИиІ МО м тні, и о о З : ТЕ: ККЗ ва я щ да БО ща: ХЕ ее Я -
вл. ще
Вік. як ХК її ЗУ як ІК я ЗК ! е ще ЗАККК Г ї ї З 4 ї й 7 Фіга с ? ; . ; ! а ва ак : х по В 7 во ! ге П з З з
Фіг. і 7 з !
UAA201800597A 2015-06-24 2016-06-22 Антитіло до рецептора трансферину зі спеціально підібраною афінністю UA123053C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15173508 2015-06-24
EP15176084 2015-07-09
PCT/EP2016/064460 WO2016207240A1 (en) 2015-06-24 2016-06-22 Anti-transferrin receptor antibodies with tailored affinity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA123053C2 true UA123053C2 (uk) 2021-02-10

Family

ID=56292683

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202007290A UA127809C2 (uk) 2015-06-24 2016-06-22 Антитіло до рецептора трансферину зі спеціально підібраною афінністю
UAA201800597A UA123053C2 (uk) 2015-06-24 2016-06-22 Антитіло до рецептора трансферину зі спеціально підібраною афінністю

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202007290A UA127809C2 (uk) 2015-06-24 2016-06-22 Антитіло до рецептора трансферину зі спеціально підібраною афінністю

Country Status (32)

Country Link
US (3) US10323089B2 (uk)
EP (2) EP3313879B1 (uk)
JP (4) JP6691144B2 (uk)
KR (1) KR20180020169A (uk)
CN (2) CN107810199B (uk)
AU (2) AU2016282334B2 (uk)
BR (1) BR112017024610A2 (uk)
CA (1) CA2985718A1 (uk)
CL (3) CL2017003207A1 (uk)
CO (1) CO2017012416A2 (uk)
CR (2) CR20210429A (uk)
DK (1) DK3313879T3 (uk)
ES (1) ES2908009T3 (uk)
HK (1) HK1250734A1 (uk)
HR (1) HRP20220304T1 (uk)
HU (1) HUE057952T2 (uk)
IL (2) IL302486A (uk)
LT (1) LT3313879T (uk)
MX (4) MX2017014892A (uk)
MY (2) MY180297A (uk)
NZ (4) NZ775278A (uk)
PE (3) PE20180602A1 (uk)
PH (1) PH12017502429A1 (uk)
PL (1) PL3313879T3 (uk)
RS (1) RS62986B1 (uk)
RU (2) RU2729416C2 (uk)
SG (1) SG10202107165XA (uk)
SI (1) SI3313879T1 (uk)
TW (3) TW202323303A (uk)
UA (2) UA127809C2 (uk)
WO (1) WO2016207240A1 (uk)
ZA (1) ZA202203653B (uk)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2417156T3 (en) 2009-04-07 2015-03-02 Roche Glycart Ag Trivalent, bispecific antibodies
EP3227332B1 (en) 2014-12-03 2019-11-06 F.Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
IL310251A (en) 2015-05-04 2024-03-01 Cytomx Therapeutics Inc Anti-CD71 antibodies, activatable anti-71CD antibodies, preparations containing them and their uses
HUE057952T2 (hu) 2015-06-24 2022-06-28 Hoffmann La Roche Anti-transzferrin receptor antitestek testreszabott affinitással
RU2753390C1 (ru) 2015-10-02 2021-08-13 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биспецифические антитела к человеческому cd20/человеческому рецептору трансферрина и способы их применения
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
AU2017311040B2 (en) 2016-08-06 2023-08-31 Ossianix, Inc. In vivo methods for selecting peptides that cross the blood brain barrier, related compositions and methods of use
WO2018129384A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Avidity Biosciences Llc Nucleic acid-polypeptide compositions and methods of inducing exon skipping
KR20190129868A (ko) 2017-02-17 2019-11-20 데날리 테라퓨틱스 인크. 조작된 트란스페린 수용체 결합 폴리펩티드
US10457717B2 (en) 2017-02-17 2019-10-29 Denali Therapeutics Inc. Engineered polypeptides
US10143187B2 (en) 2017-02-17 2018-12-04 Denali Therapeutics Inc. Transferrin receptor transgenic models
US11746325B2 (en) 2017-05-16 2023-09-05 Gamida Cell Ltd. Selection and use of umbilical cord cell fractions suitable for transplantation
MX2019013613A (es) 2017-05-16 2020-07-20 Gamida Cell Ltd Seleccion y uso de fracciones de celulas del cordon umbilical adecuadas para trasplante.
GB201711809D0 (en) 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
JP7280241B2 (ja) * 2017-08-10 2023-05-23 デナリ セラピューティクス インコーポレイテッド 操作されたトランスフェリン受容体結合ポリペプチド
PE20210347A1 (es) * 2017-10-02 2021-02-25 Denali Therapeutics Inc Proteinas de fusion que comprenden enzimas de terapia de reemplazo de enzimas
CA3080351A1 (en) 2017-11-02 2019-05-09 Ossianix, Inc. Improved tfr-selective binding peptides capable of crossing the blood brain barrier
JP7339944B2 (ja) * 2017-11-07 2023-09-06 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム がんの処置におけるｃａｒ－ｔ細胞またはｃａｒ－ｎｋ細胞を用いるｌｉｌｒｂ４のターゲティング法
KR102527941B1 (ko) 2017-12-06 2023-05-02 어비디티 바이오사이언시스 인크. 근위축증 및 근긴장성 이영양증을 치료하는 조성물 및 방법
MX2020008274A (es) 2018-02-07 2020-11-11 Regeneron Pharma Metodos y composiciones para la administracion de proteinas terapeuticas.
JP7517997B2 (ja) * 2018-06-18 2024-07-17 デナリ セラピューティクス インコーポレイテッド プログラニュリンを含む融合タンパク質
CA3109763A1 (en) * 2018-08-16 2020-02-20 Denali Therapeutics Inc. Engineered bispecific proteins
AU2019398467A1 (en) * 2018-12-14 2021-06-24 Fred Hutchinson Cancer Center Transferrin receptor targeting peptides
KR102630499B1 (ko) 2018-12-21 2024-01-30 어비디티 바이오사이언시스 인크. 항트랜스페린 수용체 항체 및 이의 용도
US20220017635A1 (en) * 2018-12-28 2022-01-20 Kyowa Kirin Co., Ltd. BISPECIFIC ANTIBODY BINDING TO TfR
US20220411527A1 (en) * 2019-11-06 2022-12-29 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for transferrin receptor 1 targeting
BR112022012230A2 (pt) 2019-12-23 2022-08-30 Denali Therapeutics Inc Variantes de progranulina
US11525137B2 (en) 2020-03-19 2022-12-13 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
MX2022011880A (es) 2020-03-27 2022-10-20 Avidity Biosciences Inc Composiciones y metodos para tratar distrofia muscular.
EP4132589A4 (en) * 2020-04-08 2024-05-08 Aliada Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR DELIVERY OF THE BLOOD-BRAIN BARRIER
IL302029A (en) 2020-10-14 2023-06-01 Denali Therapeutics Inc Fusion proteins containing sulfoglucosamine sulfohydrolase enzymes and methods thereof
US20240317877A1 (en) * 2021-07-15 2024-09-26 (Iucf-Hyu (Industry-University Cooperation Foundation Hanyang University)) Anti-human transferrin receptor antibody having improved blood-brain-barrier permeability, and multi-specific antibody and pharmaceutical composition which use same
EP4380980A1 (en) 2021-08-03 2024-06-12 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antibodies and methods of use
MX2024002753A (es) 2021-09-01 2024-05-20 Biogen Ma Inc Anticuerpos anti receptor de transferrina y usos de los mismos.
US11912779B2 (en) 2021-09-16 2024-02-27 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US12071621B2 (en) 2022-04-05 2024-08-27 Avidity Biosciences, Inc. Anti-transferrin receptor antibody-PMO conjugates for inducing DMD exon 44 skipping
WO2023198661A1 (en) * 2022-04-12 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Fusion proteins targeted to the central nervous system
WO2024026494A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Viral particles retargeted to transferrin receptor 1
WO2024026488A2 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a modified transferrin receptor locus
WO2024155066A1 (ko) * 2023-01-16 2024-07-25 주식회사 시그널바이오 뇌혈관장벽 통과 효율이 향상된 항 인간 트랜스페린 수용체 항체, 및 이를 이용한 다중특이적 항체 및 약학 조성물
WO2024206161A1 (en) 2023-03-24 2024-10-03 Denali Therapeutics Inc. Abeta-targeting proteins and methods of use

Family Cites Families (285)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5811310A (en) 1986-09-30 1998-09-22 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva Univ. The Alz-50 monoclonal antibody and diagnostic assay for alzheimer's disease
US6893625B1 (en) 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5231000A (en) 1987-10-08 1993-07-27 The Mclean Hospital Antibodies to A4 amyloid peptide
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5283187A (en) 1987-11-17 1994-02-01 Brown University Research Foundation Cell culture-containing tubular capsule produced by co-extrusion
US4892538A (en) 1987-11-17 1990-01-09 Brown University Research Foundation In vivo delivery of neurotransmitters by implanted, encapsulated cells
US5506126A (en) 1988-02-25 1996-04-09 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
WO1989008114A1 (en) 1988-02-25 1989-09-08 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
US4861579A (en) 1988-03-17 1989-08-29 American Cyanamid Company Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies
FI891226A (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
ES2062519T5 (es) 1989-03-21 2003-07-16 Immune Response Corp Inc Vacunacion y metodos contra enfermedades originadas a partir de respuestas patogenicas mediante poblaciones especificas de linfocitos t.
DE69031919T3 (de) 1989-07-19 2005-01-27 Connetics Corp., Palo Alto T-zell-rezeptor-peptide als heilmittel für autoimmune und bösartige krankheiten
US5154924A (en) 1989-09-07 1992-10-13 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical agent conjugates
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
NZ236819A (en) 1990-02-03 1993-07-27 Max Planck Gesellschaft Enzymatic cleavage of fusion proteins; fusion proteins; recombinant dna and pharmaceutical compositions
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
JP2780507B2 (ja) 1991-03-29 1998-07-30 松下電器産業株式会社 内燃機関用フィルタ再生装置
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
EP0861893A3 (en) 1991-09-19 1999-11-10 Genentech, Inc. High level expression of immunoglobulin polypeptides
JPH07509444A (ja) * 1991-11-26 1995-10-19 アルカーメス・インコーポレーテツド トランスフェリンセレプター特異的抗体−神経薬又は診断薬複合体の製造法
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
EP0646178A1 (en) 1992-06-04 1995-04-05 The Regents Of The University Of California expression cassette with regularoty regions functional in the mammmlian host
AU677216B2 (en) 1992-07-27 1997-04-17 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Targeting of liposomes to the blood-brain barrier
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
PL174721B1 (pl) 1992-11-13 1998-09-30 Idec Pharma Corp Przeciwciało monoklonalne anty-CD20
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5955317A (en) 1993-01-25 1999-09-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibodies to β-amyloids or their derivatives and use thereof
EP0683234B2 (en) 1993-01-25 2007-06-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibody against beta-amyloid or their derivative and use thereof
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
JPH08511420A (ja) 1993-06-16 1996-12-03 セルテック・セラピューテイクス・リミテッド 抗 体
US5417972A (en) 1993-08-02 1995-05-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of killing B-cells in a complement independent and an ADCC independent manner using antibodies which specifically bind CDIM
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US5443953A (en) 1993-12-08 1995-08-22 Immunomedics, Inc. Preparation and use of immunoconjugates
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5910486A (en) 1994-09-06 1999-06-08 Uab Research Foundation Methods for modulating protein function in cells using, intracellular antibody homologues
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5688651A (en) 1994-12-16 1997-11-18 Ramot University Authority For Applied Research And Development Ltd. Prevention of protein aggregation
US5586553A (en) 1995-02-16 1996-12-24 Minimed Inc. Transcutaneous sensor insertion set
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6015555A (en) 1995-05-19 2000-01-18 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates
AU5976996A (en) 1995-06-06 1996-12-24 Stemcell Therapeutics L.L.C. Glycoprotein gp105 on bl3 hematopoietic stem cells
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
DK1516628T3 (da) 1995-07-27 2013-09-08 Genentech Inc Stabil, isotonisk lyofiliseret proteinformulering
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
DE19528388A1 (de) 1995-08-02 1997-02-06 Hans Peter Prof Dr Med Zenner Verwendung von Adamantan-Derivaten zur Behandlung von Erkrankungen des Innenohrs
EP0859841B1 (en) 1995-08-18 2002-06-19 MorphoSys AG Protein/(poly)peptide libraries
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US20010056066A1 (en) 1996-07-26 2001-12-27 Smithkline Beecham Corporation Method of treating immune cell mediated systemic diseases
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ES2190087T3 (es) 1997-06-13 2003-07-16 Genentech Inc Formulacion estabilizada de un anticuerpo.
PT994903E (pt) 1997-06-24 2005-10-31 Genentech Inc Metodos e composicoes para glicoproteinas galactosiladas
AU8296098A (en) 1997-07-08 1999-02-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
DE69840412D1 (de) 1997-10-31 2009-02-12 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US7964192B1 (en) 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
AU760562B2 (en) 1997-12-05 2003-05-15 Scripps Research Institute, The Humanization of murine antibody
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
ES2434961T5 (es) 1998-04-20 2018-01-18 Roche Glycart Ag Ingeniería de glicosilación de anticuerpos para mejorar la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo
CZ303898B6 (cs) 1998-08-11 2013-06-19 Biogen Idec Inc. Rituximab jako lécivo pro udrzovací terapii
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
CZ300762B6 (cs) 1998-10-16 2009-08-05 Biogen Idec Ma Inc. Fúzní proteiny interferonu-beta-1a a jejich použití
EP1131093A4 (en) 1998-11-09 2002-05-02 Idec Pharma Corp TREATMENT OF HEMATOLOGICAL VILTIES ASSOCIATED WITH CIRCULATING TUMOR CELLS USING CHIMERIC ANTI-CD20 ANTIBODIES
TR200101302T2 (tr) 1998-11-09 2001-10-22 Idec Pharmaceuticals Corporation BMT yada PBSC transplantı alan hastalarda in vitro ya da in vivo temizleyici madde olarak kimerik anti-CD20 antikorunun kullanımı.
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
KR100940380B1 (ko) 1999-01-15 2010-02-02 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
EP1035172A3 (en) 1999-03-12 2002-11-27 Fuji Photo Film Co., Ltd. Azomethine compound and oily magenta ink
EP2270147B2 (en) 1999-04-09 2020-07-22 Kyowa Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
IL129427A0 (en) 1999-04-13 2000-02-17 Yeda Res & Dev Preparation of biologically active molecules
SE9901428D0 (sv) 1999-04-21 1999-04-21 Karolinska Innovations Ab Amphibodies
CN100358577C (zh) 1999-05-07 2008-01-02 杰南技术公司 抗体在制备治疗哺乳动物自身免疫病的试剂中的用途
JP4286483B2 (ja) 1999-06-09 2009-07-01 イムノメディクス， インコーポレイテッド Ｂ細胞をターゲットとする抗体を使用する自己免疫疾患に対する免疫療法
ITMI991299A1 (it) 1999-06-11 2000-12-11 Consiglio Nazionale Ricerche Uso di anticorpi contro antigeni di superficie per il trattamento della malattia trapianto contro ospite
AU780474B2 (en) 1999-06-16 2005-03-24 Boston Biomedical Research Institute Incorporated Immunological control of beta-amyloid levels in vivo
DE19930748C2 (de) 1999-07-02 2001-05-17 Infineon Technologies Ag Verfahren zur Herstellung von EEPROM- und DRAM-Grabenspeicherzellbereichen auf einem Chip
CN101264324A (zh) 1999-07-12 2008-09-17 杰南技术公司 应用结合cd20的拮抗剂阻断对外来抗原的免疫应答
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
CN100389825C (zh) 1999-08-11 2008-05-28 拜奥根Idec公司 用抗cd20抗体治疗累及骨髓的非霍奇金淋巴瘤患者
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
WO2001013945A1 (en) 1999-08-23 2001-03-01 Biocrystal Ltd. Methods and compositions for immunotherapy of b cell involvement in promotion of a disease condition comprising multiple sclerosis
KR100797667B1 (ko) 1999-10-04 2008-01-23 메디카고 인코포레이티드 외래 유전자의 전사를 조절하는 방법
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
US7504256B1 (en) 1999-10-19 2009-03-17 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing polypeptide
RU2305561C2 (ru) 1999-11-08 2007-09-10 Байоджен Айдек Инк. Лечение в-клеточных злокачественных опухолей с использованием антител против cd40l в комбинации с антителами против cd20 и/или химиотерапией и лучевой терапией
US20020006404A1 (en) 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
US20020094335A1 (en) 1999-11-29 2002-07-18 Robert Chalifour Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
CN1433321A (zh) 1999-11-29 2003-07-30 尼奥切姆公司 预防和治疗Alzheimer症和其他与淀粉样蛋白有关的疾病的疫苗
WO2001049698A1 (en) 1999-12-29 2001-07-12 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
US20020127652A1 (en) 2000-02-11 2002-09-12 Schambye Hans Thalsgard Follicle stimulating hormones
EP1125905A1 (en) 2000-02-16 2001-08-22 Pepscan Systems B.V. Segment synthesis
US20030185796A1 (en) 2000-03-24 2003-10-02 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
CA2404390A1 (en) 2000-03-24 2001-10-04 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma using a combination of an antibody to cd20 and interleukin-2
KR20020091170A (ko) 2000-03-31 2002-12-05 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 Ｂ 세포 림프종의 치료를 위한 항-사이토카인 항체 또는길항제 및 항-ｃｄ２０의 조합된 사용
CA2403425C (en) 2000-04-11 2013-08-27 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
CN1437478A (zh) 2000-04-25 2003-08-20 Idec药物公司 瑞图希单抗的鞘内施用,用于中枢神经系统淋巴瘤的治疗
EP2052742A1 (en) 2000-06-20 2009-04-29 Biogen Idec Inc. Treatment of B-cell associated diseases such as malignancies and autoimmune diseases using a cold anti-CD20 antibody/radiolabeled anti-CD22 antibody combination
CA2412882A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Maxygen Aps Peptide extended glycosylated polypeptides
MXPA03000306A (es) 2000-07-12 2004-04-05 Idec Pharma Corp Tratamiento de malignidades de celulas b que usan una combinacion de anticuerpos supresores de celulas b y aplicaciones relacionadas con anticuerpos moduladores inmunes.
US20030148404A1 (en) 2000-07-27 2003-08-07 Ramot University Authority For Applied Research & Industrial Development Ltd. Peptides and substances, methods and devices using same for diagnosing and treating neurodegenerative disorders
CA2313828A1 (en) 2000-08-01 2002-02-01 Institut De Recherches Cliniques De Montreal/Ircm Post-translational processing of .beta.-secretase (bace): the pro-and transmembrane/cytosolic domains affect its cellular activity and amyloid a.beta. production
MXPA03002262A (es) 2000-09-18 2003-10-15 Idec Pharma Corp Terapia de combinacion para tratamiento de enfermedades autoinmunes usando una combinacion de anticuerpos inmunorreguladores/supresores de celulas b.
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
CA2424602C (en) 2000-10-06 2012-09-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-producing cell
AU2002213357A1 (en) 2000-10-20 2002-05-06 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant igg3 rituxan r and therapeutic use thereof
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
WO2002043478A2 (en) 2000-11-30 2002-06-06 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
PE20020574A1 (es) 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
CA2436789A1 (en) 2000-12-19 2002-08-22 Palatin Technologies, Inc. Identification of target-specific folding sites in peptides and proteins
CA2433353C (en) 2000-12-28 2017-03-21 Altus Biologics, Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
US7319139B2 (en) 2001-01-29 2008-01-15 Biogen Idec, Inc. TAG-72 specific CH2 domain deleted antibodies
WO2002060955A2 (en) 2001-01-29 2002-08-08 Idec Pharmaceuticals Corporation Modified antibodies and methods of use
US20030103971A1 (en) 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
EP1383800A4 (en) 2001-04-02 2004-09-22 Idec Pharma Corp RECOMBINANT ANTIBODIES CO-EXPRESSED WITH GNTIII
EP1385545B1 (en) 2001-04-30 2009-01-07 Eli Lilly And Company Humanized antibodies recognizing the beta-amyloid peptide
WO2002088307A2 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Eli Lilly And Company Humanized antibodies
DE10121982B4 (de) 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
AU2002315168A1 (en) 2001-06-14 2003-01-02 Intermune, Inc. Combination therapy of gamma-interferon and b cell specific antibodies
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
EP1409018B1 (en) 2001-07-25 2010-01-06 Facet Biotech Corporation Stable lyophilized pharmaceutical formulation the igg antibody daclizumab
EP2180044A1 (en) 2001-08-03 2010-04-28 GlycArt Biotechnology AG Antibody glycosylation variants having increased anti-body-dependent cellular cytotoxicity
ES2391905T3 (es) 2001-08-17 2012-11-30 Washington University Método de ensayo para la enfermedad de alzheimer
US20040192898A1 (en) 2001-08-17 2004-09-30 Jia Audrey Yunhua Anti-abeta antibodies
WO2003024993A2 (en) 2001-09-20 2003-03-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Measuring circulating therapeutic antibody, antigen and antigen/antibody complexes using elisa assays
PL213948B1 (pl) 2001-10-25 2013-05-31 Genentech Inc Kompozycje zawierajace glikoproteine, czasteczka kwasu nukleinowego kodujaca te glikoproteine, komórka gospodarza, sposób wytwarzania glikoproteiny, kompozycja do zastosowania do leczenia, zastosowanie kompozycji i zestaw zawierajacy kompozycje
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
AU2002362098A1 (en) 2001-12-07 2003-06-23 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
CN101914158A (zh) 2002-02-14 2010-12-15 免疫医疗公司 抗cd 20抗体及其融合蛋白和使用方法
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
US7657380B2 (en) 2003-12-04 2010-02-02 Xencor, Inc. Methods of generating variant antibodies with increased host string content
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US20030180292A1 (en) 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
WO2003084570A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition d'anticorps appropriee au patient souffrant de polymorphisme fc$g(g)riiia
WO2003085119A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede d'amelioration de l'activite d'une composition d'anticorps de liaison avec le recepteur fc$g(g) iiia
WO2003085118A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede de production de composition anticorps
WO2003084569A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition anticorps
JP4628679B2 (ja) 2002-04-09 2011-02-09 協和発酵キリン株式会社 Ｇｄｐ−フコースの輸送に関与する蛋白質の活性が低下または欠失した細胞
KR20050000380A (ko) 2002-04-09 2005-01-03 교와 핫꼬 고교 가부시끼가이샤 게놈이 개변된 세포
US20030219818A1 (en) 2002-05-10 2003-11-27 Bohen Sean P. Methods and compositions for determining neoplastic disease responsiveness to antibody therapy
CA2494104A1 (en) 2002-07-31 2004-04-22 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
AR040778A1 (es) 2002-08-06 2005-04-20 Glaxo Group Ltd Anticuerpos alterados o fragmentos funcionales que se unen a mag (glicoproteina asociada a mielina).
MXPA05003621A (es) 2002-10-09 2005-10-19 Rinat Neuroscience Corp Metodos de tratamiento de la enfermedad de alzheimer usando anticuerpos dirigidos contra el peptido beta amiloide y composiciones de los mismos.
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP2316856B1 (en) 2002-10-17 2017-08-09 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against CD20
KR101186210B1 (ko) 2002-12-03 2012-10-08 블랜체트 록펠러 뉴로사이언시즈 인스티튜트 혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체
EP3263596A1 (en) 2002-12-16 2018-01-03 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
DK2335725T3 (en) 2003-04-04 2017-01-23 Genentech Inc Highly concentrated antibody and protein formulations
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
US20080241884A1 (en) 2003-10-08 2008-10-02 Kenya Shitara Fused Protein Composition
WO2005035578A1 (ja) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. ガングリオシドｇｍ２に特異的に結合する抗体組成物
SI2380911T1 (en) 2003-11-05 2018-07-31 Roche Glycart Ag ANTIGEN-RELATED PATIENTS WITH INCREASED ATTENTION ON THE RECEPTOR FC AND EFFECTORAL FUNCTION
PT1725249E (pt) 2003-11-06 2014-04-10 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina capazes de conjugação a ligandos
EP1701979A2 (en) 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
JPWO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2007-06-28 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物を含有する医薬
AU2005227326B2 (en) 2004-03-24 2009-12-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the Fc region
WO2005097832A2 (en) 2004-03-31 2005-10-20 Genentech, Inc. Humanized anti-tgf-beta antibodies
KR100891620B1 (ko) 2004-04-13 2009-04-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-ｐ-셀렉틴 항체
GB0412186D0 (en) 2004-05-28 2004-06-30 Univ Cambridge Tech Production of recombinant protein
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
AU2005286607B2 (en) 2004-09-23 2011-01-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US7697967B2 (en) 2005-12-28 2010-04-13 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for providing analyte sensor insertion
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
EP1841456A2 (en) 2005-01-28 2007-10-10 Wyeth Stabilized liquid polypeptide formulations
EP2390267B1 (en) 2005-06-07 2013-06-05 ESBATech - a Novartis Company LLC Stable and soluble antibodies inhibiting TNF(alpha)
US8053569B2 (en) 2005-10-07 2011-11-08 Armagen Technologies, Inc. Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins
PE20100684A1 (es) 2005-12-12 2010-10-04 Hoffmann La Roche Anticuerpo anti b-4-amiloide que contiene asparagina glicosilada en la region variable de vh
DE102005059242A1 (de) 2005-12-12 2007-06-14 Johannes Gutenberg-Universität Mainz, Vertreten Durch Den Präsidenten Molekulare Marker für eine Tumordiagnose und -therapie
DE102006013531A1 (de) 2006-03-24 2007-09-27 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Polylactid-Nanopartikel
EP1998806A1 (en) 2006-03-28 2008-12-10 F. Hoffmann-Roche AG Anti-igf-1r human monoclonal antibody formulation
EP2520586A1 (en) 2006-06-30 2012-11-07 The Regents of the University of Michigan Method of producing factor VIII proteins by recombinant methods
AU2007285763B2 (en) 2006-08-18 2011-12-15 Armagen Technologies, Inc. Agents for blood-brain barrier delivery
AU2007291501B2 (en) 2006-08-31 2012-07-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for the production of insulin-like growth factor-I
US9382327B2 (en) 2006-10-10 2016-07-05 Vaccinex, Inc. Anti-CD20 antibodies and methods of use
US20110070225A1 (en) 2006-11-12 2011-03-24 Pierre Goldbach Beta antibody parenteral formulation
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
US9745367B2 (en) 2007-03-23 2017-08-29 Novelmed Theraputics, Inc. Alternative pathway specific antibodies for treating arthritis
EP2144629A1 (en) 2007-05-02 2010-01-20 F. Hoffmann-Roche AG Method for stabilizing a protein
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
US7879984B2 (en) 2007-07-31 2011-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to human CD20 and method of using thereof
US20090162359A1 (en) * 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
CA2716738A1 (en) 2008-04-07 2009-10-15 Zymogenetics, Inc. Thrombin activator compositions and methods of making and using the same
WO2010011695A1 (en) 2008-07-21 2010-01-28 Arstasis, Inc. Devices, methods, and kits for forming tracts in tissue
US20100077498A1 (en) 2008-09-11 2010-03-25 Pardridge William M Compositions and methods for blood-brain barrier delivery in the mouse
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
MX2011003133A (es) 2008-09-26 2011-04-21 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-egfr/anti-igf-1r.
US20130090457A1 (en) 2008-10-31 2013-04-11 Janssen Biotech, Inc. Toll-Like Receptor 3 Antagonists for the Treatment of Metabolic and Cardiovascular Diseases
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
CN102781470B (zh) 2009-03-05 2016-01-20 Abbvie公司 Il-17结合蛋白
KR101431318B1 (ko) 2009-04-02 2014-08-20 로슈 글리카트 아게 전장 항체 및 단일쇄 ｆａｂ 단편을 포함하는 다중특이성 항체
EP2417160A1 (en) 2009-04-07 2012-02-15 Roche Glycart AG Bispecific anti-erbb-1/anti-c-met antibodies
AU2010324739B2 (en) 2009-11-24 2016-05-05 H. Lundbeck A/S. Antibodies to IL-6 and use thereof
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
FR2953841B1 (fr) 2009-12-16 2011-12-30 Centre Nat Rech Scient Anticorps diriges contre le recepteur de la transferrine et leurs utilisations pour l'immunotherapie des tumeurs qui dependent du fer
WO2011116387A1 (en) 2010-03-19 2011-09-22 Tetragenetics, Inc. Production of aglycosylated monoclonal antibodies in ciliates
RU2439160C1 (ru) * 2010-06-25 2012-01-10 Государственное общеобразовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО РГМУ Росздрава) Способ получения моноклональных антител к аблюминальному мембранному антигену церебральных эндотелиоцитов
AU2011285852B2 (en) 2010-08-03 2014-12-11 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
TWI689314B (zh) * 2010-11-30 2020-04-01 建南德克公司 低親和力血腦障壁受體抗體及其用途
EP2646468B1 (en) 2010-12-01 2018-07-25 AlderBio Holdings LLC Anti-ngf compositions and use thereof
WO2012087835A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Boston Biomedical Research Institute Compositions and methods for enhancing protein folding
CN103443126B (zh) * 2011-01-06 2016-11-23 葛兰素集团有限公司 结合TGFβ受体II的配体
US20130315901A1 (en) 2011-01-10 2013-11-28 Glaxo Group Limited Novel uses
CA2828811C (en) 2011-03-03 2021-09-21 Zymeworks Inc. Multivalent heteromultimer scaffold design and constructs
LT2691417T (lt) 2011-03-29 2018-10-25 Roche Glycart Ag Antikūno fc variantai
BR112013026423A2 (pt) 2011-04-20 2016-11-29 Roche Glycart Ag método e construtos para a passagem de pendente do ph da barreira sangue-cérebro
WO2012153707A1 (ja) 2011-05-09 2012-11-15 株式会社ペルセウスプロテオミクス トランスフェリン受容体を特異的に認識できる抗体
WO2013012733A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Biogen Idec Ma Inc. Heterodimeric fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
DE102012107328A1 (de) 2011-08-10 2013-02-14 Johnson Electric S.A. Getriebemotoranordnung
CN103890007A (zh) 2011-08-17 2014-06-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 神经调节蛋白抗体及其用途
AU2012298535A1 (en) 2011-08-23 2014-02-06 Roche Glycart Ag Bispecific antigen binding molecules
ES2659764T3 (es) 2011-08-23 2018-03-19 Roche Glycart Ag Moléculas biespecíficas de unión a antígeno activadoras de linfocitos T
CA2855955A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Janssen Biotech, Inc. Toll-like receptor 3 antagonists
ES2732712T3 (es) 2011-10-31 2019-11-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molécula de unión a antígeno que tiene una conjugación regulada entre la cadena pesada y la cadena ligera
JP6138813B2 (ja) 2011-11-28 2017-05-31 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＭｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ 抗ｐｄ−ｌ１抗体及びその使用
RU2693264C2 (ru) 2012-02-03 2019-07-01 Ф.Хоффман-Ля Рош Аг Молекулы биспецифических антител и т-клетки, трансфецированные антигеном, и их применение в медицине
CN104144939A (zh) 2012-02-29 2014-11-12 霍夫曼-拉罗奇有限公司 柱上酶切割
PL2822587T3 (pl) 2012-03-08 2016-07-29 Hoffmann La Roche Preparat przeciwciała abeta
MX2014011818A (es) 2012-04-05 2014-12-10 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos contra inductor debil de la apoptosis relacionado con el tnf (tweak) humana e il17 humana y usos de los mismos.
EP3594239B1 (en) 2012-05-21 2024-10-30 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for improving safety of blood-brain barrier transport
EP2668901A1 (en) 2012-05-31 2013-12-04 Roche Diagniostics GmbH Sensor insertion assembly, sensor cartridge, and inserter
US9382329B2 (en) 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
PT2890712T (pt) 2012-08-29 2019-06-28 Hoffmann La Roche Transportador para a barreira hematoencefálica
NZ630166A (en) 2012-09-07 2017-01-27 Genentech Inc Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with a selective bcl-2 inhibitor
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
EP4356927A3 (en) 2012-10-12 2024-10-02 Arizona Board of Regents on behalf of Arizona State University Antibody based reagents that specifically recognize toxic oligomeric forms of tau
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
BR112015012385A2 (pt) 2012-11-28 2019-08-27 Zymeworks Inc constructo de polipeptídeo de ligação de antígeno isolado, polinucleotídeo isolado ou conjunto de polinucleotídeos isolados, vetor ou conjunto de vetores, célula isolada, composição farmacêutica, uso do constructo, método para tratar um sujeito tendo uma doença ou distúrbio ou câncer ou doença vascular, método para inibir, reduzir ou bloquear um sinal dentro de uma célula, método para obter o constructo, método para preparar o constructo, meio de armazenamento legível por computador, método implementado por computador e método para produzir um constructo de polipeptídeo de ligação de antígeno bi-específico
WO2014089209A2 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Abbvie, Inc. Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins
CN105143270B (zh) 2013-02-26 2019-11-12 罗切格利卡特公司 双特异性t细胞活化抗原结合分子
CA2896359A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
US9732150B2 (en) 2013-03-14 2017-08-15 Alderbio Holdings Llc Therapeutic use of antibodies to HGF
EP2970985A1 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods to modify cells for therapeutic objectives
BR112015021399A2 (pt) 2013-03-14 2017-07-18 Bayer Healthcare Llc anticórpos monoclonais contra antitrombina beta complexada com heparina
US9481725B2 (en) 2013-03-14 2016-11-01 Alderbio Holdings, Llc Antibodies to HGF and compositions containing
DE102013208865A1 (de) 2013-05-14 2014-11-20 Beiersdorf Ag Stabilisierte Zubereitungen mit einem Gehalt an Ascorbinsäure und Phosphationen
KR102293064B1 (ko) 2013-05-20 2021-08-23 제넨테크, 인크. 항-트랜스페린 수용체 항체 및 사용 방법
PE20160720A1 (es) 2013-08-02 2016-07-28 Hoffmann La Roche Proteina de fusion terapeutica
CN105612182B (zh) 2013-10-11 2019-12-10 豪夫迈·罗氏有限公司 多特异性结构域交换共有可变轻链抗体
EP3066133A1 (en) 2013-11-04 2016-09-14 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Production of t cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins
CN113995843A (zh) 2013-11-07 2022-02-01 豪夫迈·罗氏有限公司 抗cd20抗体与btk抑制剂的组合疗法
JP2017504566A (ja) 2013-11-21 2017-02-09 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗アルファ−シヌクレイン抗体及び使用方法
CR20160314A (es) 2013-12-17 2016-08-29 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd3 y metodos de uso
MX368656B (es) 2013-12-20 2019-10-10 Hoffmann La Roche Métodos mejorados para la producción de polipéptidos recombinantes.
KR20160105799A (ko) 2014-01-06 2016-09-07 에프. 호프만-라 로슈 아게 1가 혈액 뇌 장벽 셔틀 모듈
US9629801B2 (en) 2014-01-10 2017-04-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Blood-brain barrier targeting antibodies
UA117289C2 (uk) 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
KR102411972B1 (ko) 2014-08-04 2022-06-23 에프. 호프만-라 로슈 아게 이중특이적 t 세포 활성화 항원 결합 분자
CU24597B1 (es) 2014-11-26 2022-05-11 Xencor Inc Anticuerpos biespecíficos heterodiméricos que se unen a cd3 y cd20
WO2016160032A1 (en) 2015-04-03 2016-10-06 Entropic Communications, Inc. Low power adc with pulsed bias
US20160297581A1 (en) 2015-04-13 2016-10-13 Aplix Inc Closable container
JP7021955B2 (ja) 2015-06-24 2022-03-03 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｈｅｒ２及び血液脳関門受容体に特異的な三重特異性抗体及び使用方法
HUE057952T2 (hu) 2015-06-24 2022-06-28 Hoffmann La Roche Anti-transzferrin receptor antitestek testreszabott affinitással
CN107849555B (zh) 2015-06-24 2022-01-04 Jcr制药股份有限公司 通过血脑屏障的抗人转铁蛋白受体抗体
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
RU2753390C1 (ru) 2015-10-02 2021-08-13 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биспецифические антитела к человеческому cd20/человеческому рецептору трансферрина и способы их применения
JP2017187722A (ja) 2016-04-08 2017-10-12 株式会社リコー 画像濃度検出装置及び画像形成装置

Also Published As

Publication number Publication date
PE20221007A1 (es) 2022-06-15
JP2020097621A (ja) 2020-06-25
NZ775955A (en) 2024-07-26
RU2018101978A3 (uk) 2020-03-12
RS62986B1 (sr) 2022-03-31
MX2017014892A (es) 2018-04-13
MY180297A (en) 2020-11-27
RU2729416C2 (ru) 2020-08-06
TWI743038B (zh) 2021-10-21
CO2017012416A2 (es) 2018-02-28
EP3313879A1 (en) 2018-05-02
UA127809C2 (uk) 2024-01-10
ES2908009T3 (es) 2022-04-27
IL255461B1 (en) 2023-06-01
TW201713696A (zh) 2017-04-16
US10323089B2 (en) 2019-06-18
AU2022204500A1 (en) 2022-07-14
CN107810199A (zh) 2018-03-16
EP3313879B1 (en) 2022-01-05
JP7579317B2 (ja) 2024-11-07
AU2016282334B2 (en) 2022-07-21
TW202206464A (zh) 2022-02-16
TWI792646B (zh) 2023-02-11
MY193078A (en) 2022-09-26
JP2018520143A (ja) 2018-07-26
IL255461B2 (en) 2023-10-01
CL2022000328A1 (es) 2022-09-23
IL255461A (en) 2018-01-31
KR20180020169A (ko) 2018-02-27
RU2020124105A (ru) 2020-09-18
US20230220071A1 (en) 2023-07-13
NZ775241A (en) 2024-08-30
RU2018101978A (ru) 2019-07-25
JP6975508B2 (ja) 2021-12-01
PL3313879T3 (pl) 2022-04-11
HK1250734A1 (zh) 2019-01-11
US20200055931A1 (en) 2020-02-20
BR112017024610A2 (pt) 2018-07-31
AU2022204500B2 (en) 2024-08-29
HRP20220304T1 (hr) 2022-05-13
CN113999312A (zh) 2022-02-01
CR20210429A (es) 2021-09-24
JP6691144B2 (ja) 2020-04-28
AU2016282334A1 (en) 2017-11-16
CA2985718A1 (en) 2016-12-29
EP4074730A1 (en) 2022-10-19
CR20170562A (es) 2018-02-01
DK3313879T3 (da) 2022-03-14
PE20180602A1 (es) 2018-04-09
TW202323303A (zh) 2023-06-16
MX2021015139A (es) 2022-03-22
MX2021015140A (es) 2022-03-22
JP7194796B2 (ja) 2022-12-22
HUE057952T2 (hu) 2022-06-28
CL2019003231A1 (es) 2020-04-17
JP2023027252A (ja) 2023-03-01
MX2021015141A (es) 2022-03-22
CN107810199B (zh) 2021-11-09
US11584793B2 (en) 2023-02-21
US20180282408A1 (en) 2018-10-04
NZ775278A (en) 2024-08-30
CL2017003207A1 (es) 2018-06-01
SG10202107165XA (en) 2021-08-30
IL302486A (en) 2023-06-01
PE20221008A1 (es) 2022-06-15
ZA202203653B (en) 2024-09-25
WO2016207240A1 (en) 2016-12-29
SI3313879T1 (sl) 2022-04-29
LT3313879T (lt) 2022-03-25
PH12017502429A1 (en) 2018-07-02
JP2022025120A (ja) 2022-02-09
NZ737205A (en) 2024-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA123053C2 (uk) Антитіло до рецептора трансферину зі спеціально підібраною афінністю
ES2970063T3 (es) Anticuerpos antirreceptor de transferrina y procedimientos de uso
US20180000964A1 (en) Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
US20130149237A1 (en) Delivery system for diagnostic and therapeutic agents
BR112015029009B1 (pt) Anticorpos, formulação farmacêutica e usos de um anticorpo