PL213948B1 - Kompozycje zawierajace glikoproteine, czasteczka kwasu nukleinowego kodujaca te glikoproteine, komórka gospodarza, sposób wytwarzania glikoproteiny, kompozycja do zastosowania do leczenia, zastosowanie kompozycji i zestaw zawierajacy kompozycje - Google Patents

Kompozycje zawierajace glikoproteine, czasteczka kwasu nukleinowego kodujaca te glikoproteine, komórka gospodarza, sposób wytwarzania glikoproteiny, kompozycja do zastosowania do leczenia, zastosowanie kompozycji i zestaw zawierajacy kompozycje

Info

Publication number
PL213948B1
PL213948B1 PL372709A PL37270902A PL213948B1 PL 213948 B1 PL213948 B1 PL 213948B1 PL 372709 A PL372709 A PL 372709A PL 37270902 A PL37270902 A PL 37270902A PL 213948 B1 PL213948 B1 PL 213948B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
region
glycoprotein
amino acid
composition
antibody
Prior art date
Application number
PL372709A
Other languages
English (en)
Other versions
PL372709A1 (pl
Inventor
Leonard G. Presta
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26990808&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL213948(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of PL372709A1 publication Critical patent/PL372709A1/pl
Publication of PL213948B1 publication Critical patent/PL213948B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
    • C07K16/4291—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig against IgE
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)

Description

Niniejszy wynalazek dotyczy kompozycji zawierających glikoproteinę, cząsteczki kwasu nukleinowego kodującej tę glikoproteinę, komórki gospodarza, sposobu wytwarzania glikoproteiny, kompozycji do zastosowania do leczenia, zastosowania kompozycji i zestawu zawierającego kompozycję. W niniejszym wynalazku opisano kompozycję, która zawiera glikoproteiny ze zmodyfikowanymi wzorami glikozylacji.
Stan techniki
Przeciwciała
Przeciwciała są białkami, które wykazują swoistość wiązania z konkretnym antygenem. Przeciwciała natywne są zwykle heterotetramerowymi glikoproteinami o wielkości około 150000 daltonów, składające się z dwóch identycznych łańcuchów lekkich (L) i dwóch identycznych łańcuchów ciężkich (H). Każdy łańcuch lekki jest połączony z łańcuchem ciężkim jednym kowalencyjnym wiązaniem dwusiarczkowym, natomiast liczba wiązań dwusiarczkowych pomiędzy łańcuchami ciężkimi jest różna w różnych izotypach immunoglobulin. Każdy łańcuch ciężki i lekki ma również regularnie rozmieszczone wewnątrzłańcuchowe mostki dwusiarczkowe. Każdy łańcuch ciężki ma na jednym końcu domenę zmienną (VH), po której następuje kilka domen stałych. Każdy łańcuch lekki ma na jednym końcu domenę zmienną (VL), a na drugim końcu domenę stałą; domena stała łańcucha lekkiego pasuje do pierwszej domeny stałej łańcucha ciężkiego, a domena zmienna łańcucha lekkiego pasuje do domeny zmiennej łańcucha ciężkiego. Uważa się, że poszczególne reszty aminokwasowe tworzą połączenie pomiędzy domenami zmiennymi łańcucha lekkiego i łańcucha ciężkiego.
Termin „zmienny” dotyczy faktu, że niektóre części domen zmiennych przeciwciał wykazują bardzo duże różnice w sekwencji pomiędzy przeciwciałami i są wykorzystywane w wiązaniu i specyficzności poszczególnych przeciwciał wobec konkretnego antygenu. Jednakże, zmienność nie jest równomiernie rozmieszczona na przestrzeni domen zmiennych przeciwciał. Zazwyczaj koncentruje się ona w trzech odcinakach zwanych regionami determinującymi dopasowanie (CDR, od ang. complementarity determining region) w domenach zmiennych zarówno łańcucha lekkiego, jak i ciężkiego. Najbardziej zakonserwowane części domen zmiennych są nazywane regionem zrębowym (FR). Każda z domen zmiennych natywnych łańcuchów lekkich i ciężkich zawiera cztery FR, przyjmujące w większości konfigurację β-kartki, połączone przez trzy CDR, które tworzą pętle łączące, a w niektórych przypadkach tworzą część struktury β-kartki. CDR w każdym łańcuchu są utrzymywane razem w bliskości przez regiony FR i, wraz z CDR z innego łańcucha, uczestniczą w tworzeniu się miejsca wiążącego antygen przeciwciał (patrz Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, wyd. 5, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)].
Domeny stałe nie uczestniczą bezpośrednio w wiązaniu się przeciwciała z antygenem, ale pełnią one funkcje efektorowe. W zależności od sekwencji aminokwasowej domeny stałej łańcuchów ciężkich, przeciwciała i immunoglobuliny można przypisać do różnych „klas”. Istnieje pięć głównych klas immunoglobulin: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, a kilka z nich można dalej podzielić na „podklasy” (izotypy), np. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA i IgA2. Regiony domen stałych łańcuchów ciężkich, które odpowiadają różnym klasom przeciwciał są nazywane odpowiednio, α, β, ε, γ i μ. Wiadomo, że spośród różnych klas ludzkich immunoglobulin jedynie ludzkie IgG1, IgG2, IgG3 i IgM aktywują dopełniacz; ludzkie IgG1 i IgG3 pośredniczą w ADCC bardziej skutecznie niż IgG2 i IgG4.
Schematyczne przedstawienie struktury natywnej IgG1 jest pokazane na fig. 1A, gdzie wskazane są różne części natywnej cząsteczki przeciwciała. Trawienie przeciwciał papainą prowadzi do wytworzenia dwóch identycznych fragmentów wiążących antygen, nazywanych fragmentami Fab, każdy z pojedynczym miejscem wiązania antygenu i pozostałego fragmentu „Fc”, którego nazwa odzwierciedla zdolność do łatwej krystalizacji. Struktura krystaliczna regionu Fc ludzkiej IgG została ustalona (Deisenhofer, Biochemistry 20: 2361-2370 (1981)). W cząsteczkach ludzkiej IgG region Fc jest wytwarzany poprzez cięcie papainą po stronie N Cys 226. Region Fc zajmuje centralne miejsce biorąc pod uwagę funkcje efektorowe przeciwciał.
Zostały opisane też inne cząsteczki typu przeciwciała. Przykładowo, opisano w piśmiennictwie „immunoadhezyny”, które łączą w sobie domenę wiązania heterologicznego białka, takiego jak receptor, ligand lub enzym, z funkcjami efektorowymi regionu Fc. Taką przykładową cząsteczką jest immunoadhezyna: receptor czynnika martwicy nowotworów-IgG (TNFR-IgG) opisana w patencie USA nr
610 297. Opisano również immunoadhezyny bispecyficzne i chimery przeciwciało-immunoahezyna.
PL 213 948 B1
Stabila, P., Nature Biotech, 16: 1357 (1998) opisuje inną zakotwiczoną w błonie komórkowej fuzję białkową zawierającą region. Fuzja białkowa w tym odnośniku stanowi połączenie domeny transbłonowej typu II, która lokuje się w błonie komórkowej z końcem N regionu Fc.
Przeciwciała i immunoadhezyny stosowane są jako leki w ludzkich chorobach (Glennie i wsp. Immunol. Today 21: 403-410 (2000); King i wsp. Curr. Opin. Drug Discovery Develop 2: 110-117 (1999); Vaswani i wsp. Ann. Allergy Asthma Immunol. 81: 105-119 (1998) oraz Abraham i wsp. Sec. Intern. Autumnal Them. Meeting on Sepsis, Deauville, France (1995)). Niektóre z tych przeciwciał i immunoadhezyn, np. te, wiążą się z receptorem albo ligandem i blokują w ten sposób oddziaływanie liganda z receptorem mogą działać bez wykorzystywania mechanizmów efektorowych przeciwciała. Inne mogą wymagać zaangażowania układu immunologicznego do zabicia komórki docelowej (Clynes i wsp. Nature Med. 6: 443-446 (2000); Clynes i wsp. PNAS (USA) 95: 652-656 (1998) oraz Anderson i wsp. Biochem. Soc. Trans. 25: 705-708 (1997)).
Funkcje efektorowe przeciwciał
Funkcje efektorowe, w których bierze udział region Fc przeciwciała można podzielić na dwie kategorie: (1) funkcje efektorowe, która działają po związaniu się przeciwciała z antygenem (te funkcje obejmują udział kaskady dopełniacza lub komórek niosących receptor Fc (FcR); i (2) funkcje efektorowe, która działają niezależnie od wiązania antygenu (te funkcje nadają utrzymywanie się w układzie krążenia i zdolność do przenikania przez bariery komórkowe poprzez transcytozę), Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology 2: 77-94 (1995).
Podczas gdy wiązanie przeciwciała do odpowiedniego antygenu ma efekt neutralizujący, który mógłby zapobiegać wiązaniu obcego antygenu do jego endogennego celu (np. receptora lub liganda), samo wiązanie może nie usuwać obcego antygenu. Aby być skuteczne w usuwaniu i/lub niszczeniu obcych antygenów, przeciwciało powinno posiadać zarówno wiązanie o wysokim powinowactwie do swego antygenu, jak i wydajne funkcje efektorowe.
Interakcja przeciwciał i kompleksów przeciwciało-antygen z komórkami układu immunologicznego wywołuje różne odpowiedzi, w tym zależną od przeciwciała cytotoksyczność z udziałem komórek (ADCC, od ang. cell-mediated cytotoxicity) i cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC od ang. complement dependent cytotoxicity) (przegląd w Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997); Ward i Ghetie, Therapeutic Immunol. 2: 77-94 (1995) oraz Ravetch i Kinat, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991)).
W kilku funkcjach efektorowych przeciwciała pośredniczą receptory Fc (FcRs), które wiążą region Fc przeciwciała. FcRs są definiowane przez swoją specyficzność względem izotypów immunoglobulin; receptory Fc dla przeciwciał IgG są określane jako FcyR, dla IgE jako FcsR, dla IgA jako FcaR i tak dalej. Zidentyfikowano trzy podklasy FcyR: FcyRI (CD64), FeyRII (CD32) i FcyRIII (CD16). Ponieważ każda podklasa FcyR jest kodowana przez dwa lub trzy geny i alternatywne składanie RNA prowadzi do wielu transkryptów, istnieje szeroka różnorodność izoform FcyR. Trzy geny kodujące podklasę FeyRI (FcyRIA, FcyRIB i FcyRIC) tworzą skupienie w regionie lq21.1 długiego ramienia chromosomu I; geny kodujące izoformy FcyRII (FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIC) i dwa geny kodujące FcyRIII (FcyRIIIA i FcyRIIIB) są wszystkie skupione w regionie lq22. Te różne podtypy FcR są wyrażane na różnych typach komórek (przegląd w Ravetch i Kinat, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991)). Na przykład u ludzi FcyRIIIB znajduje się tylko na neutrofiłach, podczas gdy FcyRIIIA znajduje się na makrofagach, monocytach, komórkach naturalnych zabójcach (NK) i subpopulacji komórek T.
Strukturalnie wszystkie FcyR są członkami nadrodziny immunoglobulin mających łańcuch, a wiążący IgG z zewnętrzną częścią złożoną albo z dwóch (FcyRI i FcyRIII) albo z trzech (FcyRI) domen podobnych do Ig. Dodatkowo, FcyRI i FcyRIII mają dodatkowe łańcuchy białkowe (y, Ζ) związane z łańcuchem α, które działają w transdukcji sygnału. Te receptory także różnią się swym powinowactwem względem IgG. FcyRI wykazuje wysokie powinowactwo względem IgG, Ka = 108-109 M-1 (Ravetch i wsp. Ann. Rev. Immunol. 19: 275-290 (2001)) i może wiązać monomeryczną IgG. Przeciwnie
-1
FcyRII i FcyRIII wykazują stosunkowo słabsze powinowactwo dla monomerycznej IgG Ka < 10 M (Ravetch i wsp. Ann. Rev. Immunol. 19: 275-290 (2001)) i dlatego też oddziałują skutecznie tylko z multimerowymi kompleksami immunologicznymi. Receptory FcyRII obejmują FcyRIIA („receptor aktywujący”) i FcyRIIB („receptor hamujący”), które mają podobne sekwencje aminokwasowe, które przede wszystkim różnią się w swoich domenach cytoplazmatycznych. Receptor aktywujący FcyRIIA zawiera motyw aktywujący immunoreceptora oparty na tyrozynie (ITAM, od ang. immunoreceptor tyrosine-based activation motif) w swojej domenie cytoplazmatycznej. Receptor hamujący FcyRIIB zawiera motyw hamujący immunoreceptora oparty na tyrozynie (tyrosine-based inhibition motif - ITIM)
PL 213 948 B1 w swojej domenie cytoplazmatycznej (patrz przegląd w Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997)). Komórki NK niosą tylko FcyRIIIA i wiązanie przeciwciał do FcyRIIIA prowadzi do aktywności ADCC przez komórki NK.
W populacji ludzkiej znaleziono warianty alleliczne kilku ludzkich FcyR. Wykazano, że te alleliczne formy wariantowe wykazują różnice w wiązaniu ludzkiego i mysiego IgG i szereg badań asocjacyjnych korelowało wyniki kliniczne z obecnością specyficznych form allelicznych (przegląd w Lehrnbecher i wsp. Blood 94 (12): 4220-4232 (1999)). Kilka badań dotyczyło dwóch form FcyRIIA, R131 i H131 i ich asocjacji z wynikami klinicznymi (Hatta i wsp. Genes and Immunity 1: 53-60 (1999); Yap i wsp., Lupus 8: 305-310 (1999); i Lorenz i wsp. European J. Immunogenetics 22: 397-401 (1995)). Dwie formy alleliczne FcyRIIIA, F158 i V158, są badane dopiero teraz (Lehrnbecher i wsp., jak wyżej oraz Wu i wsp., J. Clin. Invest. 100 (5): 1059-1070 (1997)). Allotyp FcyRIIIA (Val158) oddziałuje z ludzką IgG lepiej niż allotyp FcyRIIIA (Phe158) (Shields i wsp. J. Biol. Chem. 276: 6591-6604 (2001); Koene i wsp. Blood 90: 1109-1114 (1997) oraz Wu i wsp. J.Clin. Invest. 100: 1059-1070 (1997)).
Innym typem receptora jest noworodkowy receptor Fc (FcRn). FcRn jest strukturalnie podobny do głównego antygenu zgodności tkankowej (MHC) i składa się z łańcucha α niekowalencyjnie powiązanego z p2-mikroglobuliną.
Zaproponowano, że FcRn reguluje homeostazę IgG w krwi, a także być może kontroluje transcytozę przez tkanki (Ghetie i wsp. Annu. Rev. Immunol. 18: 739-766 (2000)).
Miejsca wiązania FcyR na ludzkich i mysich przeciwciałach uprzednio zmapowano do tak zwanego „dolnego regionu zawiasowego” złożonego z reszt 233-239 (numery indeksu EU jak w Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, wyd. 5 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Woof i wsp. Molec. Immunol. 23: 319-330 (1986); Duncan i wsp. Nature 332: 563 (1988); Canfield i Morrizon, J. Exp. Med. 173: 1483-1491 (1991); Chappel i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci USA 88: 9036-9040 (1991). Spośród reszt 233-239, P238 i S239 wymieniano jako możliwie biorące udział w wiązaniu.
Inne uprzednio cytowane obszary być może biorące udział w wiązaniu FcyR to: G316-K338 (ludzka IgG) dla ludzkiego FcyRI (tylko na podstawie porównania sekwencji; nie oceniano mutantów z podstawieniami); (Woof i wsp. Molec. Immunol. 23: 319-330 (1986)); K274-R301 (ludzka IgG1) dla ludzkich FcyRIII (na podstawie peptydów) (Sarmay i wsp. Molec. Immunol. 21: 43-51 (1984)); Y407-R416 (ludzka IgG) dla ludzkiego FcyRIII (na podstawie peptydów) (Gergely i wsp. Biochem. Soc. Trans. 12: 739-743 (1984)); jak i N297 i E318 (mysia IgG2b) dla mysiego FcyRII (Lund i wsp., Molec. Immunol. 29: 53-59 (1992)). Patrz też Armour i wsp. Eur. J. Immunol. 29: 2613-2624 (1999).
W WO 00/42072 (Presta) ujawniono warianty polipeptydów z ulepszonym lub osłabionym wiązaniem FcRs. Zawartość tej publikacji jest tu wyłączona jako odniesienie. Patrz także Shields i wsp. J. Biol. Chem. 9 (2): 6591-6604 (2001).
Clq i dwie proteazy serynowe Clr i Cis, tworzą kompleks Cl, pierwszy składnik szlaku cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). Clq jest cząsteczką sześciowartościową z masą cząsteczkową około 460000 i budową porównywaną z bukietem tulipanów, w którym wszystkie sześć kolagenowych „łodyg” jest połączonych z sześcioma globularnymi regionami głowy. Burton i Woof, Advances in Immunol. 51: 1-84 (1992). Aby zaktywować kaskadę dopełniacza konieczne jest, by Clq związał przynajmniej dwie cząsteczki IgG1, IgG2 lub IgG3 (uważa się, że IgG4 nie aktywuje dopełniacza), ale tylko jedną cząsteczkę IgM, przyłączoną do docelowego antygenu. Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology 2: 77-94 (1995) na stronie 80.
W oparciu o wyniki modyfikacji chemicznych i badań krystalograficznych, Burton i wsp. Nature, 288: 338-344 (1980) zaproponowali, że miejsce wiązania dla składnika Clq dopełniacza na IgG obejmuje ostatnie dwie (C-końcowe) nici β domeny CH2. Burton później zasugerował (Molec. Immunol., 22(3): 161-206 (1985)), że region obejmujący reszty aminokwasów 318 do 337 może bierze udział we wiązaniu dopełniacza.
Duncan i Winter, Nature 332: 738-40 (1988), stosując mutagenezę ukierunkowaną donieśli, że Glu318, Lys320 i Lys322 tworzą miejsce wiązania do Clq. Dane Duncan i Winter uzyskano poprzez testowanie wiązania izotypu mysiej IgG2b do Clq świnki morskiej. Rolę reszt Glu318, Lys320 i Lys322 we wiązaniu Clq potwierdzono przez zdolność krótkiego peptydu zawierającego te reszty do hamowania Iizy z udziałem dopełniacza. Podobne wyniki ujawniono w patencie USA nr 5 648 260 wydanym 15 lipca, 1997 i patencie USA nr 5 624 821 wydanym 29 kwietnia, 1997.
Reszta Pro331 jest podejrzewana o wiązanie Clq na podstawie analizy zdolności podklas ludzkiej IgG do przeprowadzenia Iizy komórek z udziałem dopełniacza. Mutacja Ser331 do Pro331 w IgG4
PL 213 948 B1 nadała zdolność do aktywacji dopełniacza (Tao i wsp., J. Exp. Med., 178: 661-667 (1993); Brekke i wsp., Eur. J. Immunol., 24: 2542-47 (1994)).
Z porównania danych grupy Wintera i prac Tao i wsp. i Brekke i wsp., Ward i Ghetie wywnioskowali w swojej pracy przeglądowej, że istnieją przynajmniej dwa różne regiony biorące udział we wiązaniu Clq: jeden na nici β domeny CH2 niosącej reszty Glu318, Lys320 i Lys322 i drugi na skręcie zlokalizowanym bardzo blisko tej samej nici β i zawierającym kluczową resztę aminokwasu w pozycji 331.
Inne prace sugerowały, że ludzkie reszty IgG1 Lys235 i W Gly237 zlokalizowane w dolnym regionie zawiasowym, odgrywają kluczową rolę w wiązaniu i aktywacji dopełniacza. Xu i wsp., J. Immunol. 150:152A (Abstrakt) (1993). W0 94/29351 opublikowany 22 grudnia, 1994, donosi, że reszty aminokwasów potrzebne do wiązania przez Clq i FcR ludzkiej IgG1 są zlokalizowane w N-końcowym regionie domeny CH2, tzn. obejmuje reszty 231 do 238.
Zaproponowano dalej, że zdolność IgG do wiązania Clq i aktywacji kaskady dopełniacza także zależy od obecności, braku lub modyfikacji reszty węglowodanowej umieszczonej między dwiema domenami CH2 (jest ona normalnie zakotwiczona na Asn297). Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology 2: 77-94 (1995) na stronie 81.
Warianty polipeptydowe ze zmienionymi sekwencjami aminokwasowymi regionu Fc i zwiększoną lub zmniejszoną zdolnością do wiązania Clq opisano w patencie USA nr 6 194 551 B1 i WO 99/51642. Zawartości tych publikacji patentowych jest tu konkretnie włączona jako odniesienie. Patrz także Idusogie i wsp. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).
Inne sposoby, które poprawiają angażowanie układu immunologicznego obejmują przeciwciała bispecyficzne, w których jedno ramię przeciwciała wiąże i receptor IgG (Segal i wsp. J. Immunol. Meth. 248: 1-6 (2001) oraz fuzje białowe mi cytokina-IgG (Penichet i wsp. J. Immunol. Meth. 248: 91-101 (2001)).
Glikozylacja przeciwciał
Wiele polipeptydów, w tym przeciwciał, podlega szeregu modyfikacjom potranslacyjnym z udziałem reszt węglowodanowych, takim jak glikozylacja oligosacharydami. Takie glikozylowane polipeptydy są określane jako „glikoproteiny”.
Istnieje kilka czynników, które mogą wpływać na glikozylację. Wykazano, że gatunek, typ tkanki i komórki są ważne dla sposobu, w jaki zachodzi glikozylacja. Dodatkowo, otoczenie zewnątrzkomórkowe przez zmienione warunki hodowli, takie jak stężenie surowicy, może mieć bezpośredni wpływ na glikozylację. (Lifely i wsp. Glycobiology 5 (8): 813-822 (1995)). Zaproponowano różne metody, aby zmienić wzór glikozylacji uzyskiwany w danym organizmie gospodarza obejmujące wprowadzenie lub nadekspresję pewnych enzymów biorących udział w wytwarzaniu oligosacharydów. (Patent USA nr 5 047 335; patent USA nr 5 510 261). Te schematy nie są ograniczane do metod wewnątrzkomórkowych (patent USA nr 5 278 299).
Wszystkie przeciwciała zawierają węglowodany w konserwatywnych pozycjach w regionach stałych łańcucha ciężkiego. Każdy izotyp przeciwciała ma odrębną odmianę struktur węglowodanowych związanych z N. Poza węglowodanem przyłączonym do ciężkiego łańcucha, do 30% ludzkich IgG ma glikozylowany region Fab. IgG ma pojedynczy związany z N dwuantenowy węglowodan na Asn297 domeny CH2. W pełni obrobiona struktura węglowodanu przyłączonego do Asn297 jest przedstawiona na fig. 2. W przypadku IgG z surowicy lub produkowanej ex vivo w hybrydomach lub komórkach poddanych inżynierii genetycznej, IgG są heterogenne pod względem węglowodanu połączonego z Asn297. Jefferis i wsp. Immunol. Rev. 163: 59-76 (1998); i Wright i wsp. Trends Biotech 15: 26-32 (1997). W przypadku IgG, oligosacharyd rdzeniowy normalnie składa się z GlcNAc2Man3-GlcNAc, z różnymi liczbami zewnętrznych reszt. Fig. 2 tutaj przedstawia szlak obróbki oligosacharydu do dojrzałego węglowodanu. Wcześnie syntetyzowana forma Glu3Man9GlcNac2 jest przenoszona na Asn297 w domenie CH2 przeciwciała, gdy wyłania się ono z rybosomu. Po odcięciu trzech końcowych glukoz, gdy glikoproteina przechodzi przez retikulum endoplazmatyczne, glikoproteina przemieszcza się do cis aparatu Golgiego, gdzie reszty mannozy usuwane są enzymatycznie przez α-mannozydazy. Obróbka może zatrzymać się w tym stadium, dając hiper-mannozylowane glikoproteiny. W przeciwnym wypadku obróbka może być kontynuowana do uzyskania Man5GlcNac2. Działanie N-acetyloglikozaminylotransferazy i w środkowym aparacie Golgiego jest etapem zaangażowania w syntezie złożonych oligosacharydów. W aparacie Golgiego, środkowym i trans, oligosacharyd jest poddawany dalszym etapom obróbki, w których reszty mannozy są przycinane i kolejno dodawane są reszty cukrów. Nowo syntetyzowana glikoproteina następnie wychodzi z aparatu Golgiego i jest transportowana do błony komórkowej lub jest wydzielana.
PL 213 948 B1
Zmienność wśród poszczególnych IgG wynika z przyłączenia galaktozy i/lub galaktozy-kwasu sialowego do dwóch końcowych GlcNac lub przyłączenia trzeciego ramienia GlcNAc (rozdzielająca GlcNAc). Badano węglowodan przyłączony do Asn297 IgG. Brak węglowodanu wpływa na wiązanie
Clq i FcyR (i w efekcie wpływa na aktywację dopełniacza i ADCC). Leatherbarrow i wsp. Molec. Immunol. 22: 407-415 (1985); Duncan i wsp. Nature 332: 738-740 (1988); Walker i wsp. Biochem. J. 259: 347-353 (1989); Dorai i wsp. Hybridoma 10: 211-217 (1990) oraz Horan Hand i wsp. Cancer Immunol. Immunother. 35: 165-174 (1992). Podczas gdy brak węglowodanu nie wydaje się wpływać na wiązanie FeRn (Hobbs i wsp. Molec. Immunol. 29: 949-956 (1992) oraz Kim i wsp. Eur. J. Immunol. 24: 542-548 (1994)), wpływ na klirans nie jest pewny (Dorai i wsp. Hybridoma 10: 211-217 (1990); Horan Hand i wsp. Cancer Immunol. Immunother. 35: 165-174 (1992); Hobbs i wsp. Molec. Immunol. 29: 949-956 (1992); Kim i wsp. Eur. J. Immunol. 24: 542-548 (1994); Wawrzynczak i wsp. Biochem. Soc. Trans. 17: 1061-1062 (1989) oraz Tao i wsp. J. Immuno. 143: 2595-2601 (1989)). Gdy węglowodan jest obecny charakter reszt cukrowych może także wpływać na funkcje efektorowe IgG. Doniesiono, że obecność lub brak końcowych reszt galaktozy wpływa na funkcje (Wright i wsp. J. Immunol. 160: 3393-3402 (1998)) i wydaje się korelować z reumatoidalnym zapaleniem stawów (Parekh i wsp. Nature 316: 452-457 (1985)). Ludzka IgG izolowana z surowic pacjentów ze szpiczakiem mnogim wykazuje ekstrema w obecności/braku fukozy, galaktozy i rozdzielającej N-acetyloglikozoaminy (Parekh i wsp. Nature 316: 452-457 (1985)). Raju i wsp. opisują zmienność glikozylacji IgG z różnych gatunków (Raju i wsp. Glycobiology 10 (5): 477-486 (2000)).
Boyd i wsp. stwierdzili, że usunięcie końcowego kwasu sialowego z pochodzących z CHO CAMPATH-1H za pomocą trawienia glikopeptydazą F nie wpływało na żadną z testowanych aktywności IgG, podczas gdy stwierdzono, że usunięcie większości reszt galaktozy z desialylowanych CAMPATH-1H zmniejsza (ale nie znosi) aktywność lityczną dopełniacza. Usunięcie galaktozy nie wpływała na inne aktywności. Boyd i wsp. Molec. Immunol. 32 (17/18): 1311-1318 (1995). Kumpel i wsp., Hum. Antibod. Hybridomas, 5 (3-4): 143-151 (1994) donoszą, że galaktozylacja ludzkiego monoklonalnego przeciwciała IgG wpływa na aktywność funkcjonalną z udziałem Fc.
Rothman i wsp. testowali funkcję ADCC monoklonalnej IgG oczyszczanej z hybrydom traktowanych inhibitorami glikozydazy, które działały w różnych stadiach szlaku obróbki węglowodanów. Rothman i wsp. Molecular Immunol. 26 (12): 1113-1123 (1989). Traktowanie kastanosperminą, która hamuje usuwanie reszt glukozy z tworzącego się oligosacharydu (Kaushal i wsp. Meth. Enzymol. 230: 316-329 (1994)), wykazało zwiększoną ADCC komórek NK, które wyrażają (wykazują ekspresję) tylko FcyRIII, ale nie dla innych typów komórek efektorowych, takich jak monocyty. Analiza wiązania pektyny sugerowała, że w traktowanej kastanosperminą IgG brakowało fukozy; jednak możliwe jest, że IgG będąca wynikiem traktowania kastanosperminą miała inną strukturę węglowodanów, taką jak hipermannozylacja, jak również końcowe reszty glukozy (Kaushal i wsp. Meth. Enzymol. 230: 316-329 (1994); Hashim i wsp. Immunology 63: 383-388 (1988); Hashim i wsp. Molec. Immunol. 24: 1087-1096 (1987)), nie spotykane zazwyczaj na IgG wydzielanej z nietraktowanych komórek lub z surowicy ludzkiej.
WO 97/30087 opisuje przygotowanie glikozylowanych przeciwciał gdzie miejsce N-glikozylacji domeny Fc przeciwciała jest podstawione dwuantenowym oligosacharydem.
Umana i wsp. wprowadzili gen β-(1,4)-N-acetyloglukozaminylotransferazy III (GcTIII), który katalizuje dodatek rozdzielającej GlcNAc do węglowodanowego rdzenia przyłączonego do Asn297 przeciwciała komórek jajnika chomika chińskiego (Chinese hamster ovary CHO). Glikoformy produkowane przez komórki CHO poddane inżynierii genetycznej uważano za posiadające zoptymalizowane ADCC. Patrz WO 99/54342 i Umana i wsp., Nature Biotechnology, 17: 176-180 (1999).
WO 98/58964 (Raju i wsp.) opisuje kompozycje przeciwciał, gdzie zasadniczo cały związany z N oligosacharyd jest oligosacharydem G2. G2 dotyczy dwuantenowej struktury z dwiema końcowymi Gal i brakiem NeuAc. WO 99/22764 (Raju i wsp.) dotyczy kompozycji przeciwciał, które są zasadniczo wolne od glikoprotein mających związany z N oligosacharyd G1, G0 lub G-1 w swojej domenie CH2. G1 dotyczy struktury dwuantenowej mającej jeden Ga1 i pozbawionej NeuAc, G0 dotyczy struktury dwuantenowej, gdzie nie są obecne końcowe NeuAc lub Ga1 i G-1 dotyczy jednostki rdzenia minus jedna GlcNAc.
W WO 0/61739 ujawniono, że 47% przeciwciał anty-hIL-5R wyrażanych przez YB2/0 (szpiczak szczura) ma połączone α-1-6 fukozą łańcuchy cukrowców, w porównaniu z 73% tych przeciwciał wyrażanych przez komórki NSO (szpiczak myszy). Stosunek względny fukozy przeciwciał α-hIL-5R wyrażanych przez różne komórki gospodarza wynosił YB2/0 < CHO/d < NSO.
PL 213 948 B1
Routier i wsp. badali wzór glikozylacji humanizowanego przeciwciała IgG1 (Dl.3) wyrażanego w komórkach CHO-DUKX. Struktury N-glikanów wyrażanych na CHO były dwuantenowymi N-glikanami z rdzeniową fukozą, ale były pozbawione rozdzielającej GlcNAc i kwasu sialowego. Struktury były heterogenne względem końcowej galaktozylacji i zostały więc VB nazwane G2, G1 i G0. Routier i wsp. Glycoconjugate J. 14: 201-207 (1997).
Uprzednio doniesiono, że znaleziono fukozę połączoną z O na szeregu polipeptydów i że przyłączona fukoza jest ważna dla właściwej aktywności polipeptydu. Patrz W098/33924, który opisuje metody glikozylacji resztą O-fukozy. Stankova i wsp. J. Immunol. 135 (6): 3719-3728 (1985) stwierdzili, że fukoza znacząco wzmaga zdolność cytolityczną indukowanych przez mieszaną hodowlę leukocytów (mixed leukocyte culture-MCL) lub przez preinkubowane komórki efektorowe. Cameron i wsp. Immunol. Lett. 11: 39-44 (1985) stwierdzili, że α-L-fukoza wydaje się odgrywać ważną rolę w interakcjach makrofagów z komórkami guza.
Istnieje ciągła potrzeba w tej dziedzinie wytwarzania glikoprotein, takich jak przeciwciała, mających ulepszoną aktywność biologiczną.
Streszczenie wynalazku
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest kompozycja, charakteryzująca się tym, że zawiera glikoproteinę posiadającą region Fc ludzkiej IgG, przy czym 51-100% tej glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego rdzenia węglowodanowego, pozbawionego fukozy, przyłączonego do regionu Fc glikoproteiny, przy czym region Fc zawiera sekwencję aminokwasową, która różni się od natywnej sekwencji regionu Fc ludzkiej IgG i gdzie glikoproteina ta:
(a) wiąże się z FcyRIII z większym powinowactwem; lub (b) pośredniczy w zależnej od przeciwciała toksyczności za pośrednictwem komórek (ADCC) bardziej skutecznie niż glikoproteina ze strukturą dojrzałego rdzenia węglowodanowego zawierającego fukozę, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny i fizjologicznie akceptowalny nośnik, zaróbkę lub stabili zator.
Korzystnie, kompozycja według wynalazku charakteryzuje się tym, że wspomniany region Fc zawiera podstawienia aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430, stosując numerację EU dla reszt regionu Fc.
Bardziej korzystnie, region Fc zawiera podstawienia aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji 298, 333 i 334, a jeszcze bardziej korzystnie region Fc zawiera podstawienia aminokwasowe w pozycjach 298, 333 i 334.
Najkorzystniej zastępującymi resztami w pozycjach 298, 333 i 334 są alaniny.
W kompozycji według wynalazku korzystnie region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267 , 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290 , 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312 , 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414 , 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc.
Bardziej korzystnie, region Fc zawiera podstawienia aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 239, 248, 249 , 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382,
388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc.
Również korzystnie, region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcyRI w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
W innej korzystnej realizacji wynalazku region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcyRII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
W następnej korzystnej realizacji wynalazku w kompozycji według wynalazku region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238,
239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327,
329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435 lub 437 regionu Fc, a region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcyRIII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
PL 213 948 B1
Również korzystnie, kompozycja według wynalazku zawiera glikoproteinę, której region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych
255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym region Fc wykazuje zwiększone wiązanie do jednego lub większej liczby FcyR w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
Bardziej korzystnie, wspomniany region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym region Fc wykazuje zwiększone wiązanie do FcyRIII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
Jeszcze bardziej korzystnie, w kompozycji według wynalazku, region Fc wykazuje ponadto zmniejszone wiązanie do FcyRII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
W innym korzystnym wykonaniu wynalazku region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276,
280, 283, 285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym Fc wykazuje zwiększone wiązanie do FcyRII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
Bardziej korzystnie, region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcyRIII.
Jeszcze bardziej korzystnie, region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc.
W kompozycji według wynalazku region Fc glikoproteiny ma korzystnie zmienione powinowactwo wiązania do FcRn w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
Bardziej korzystnie, region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc.
Również korzystnie, region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcRn w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
Region Fc może także korzystnie zawierać podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zwiększone wiązanie do FcRn w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
Kompozycja według wynalazku korzystnie charakteryzuje się tym, że region Fc ma zmienione wiązanie Clq i/lub funkcję cytotoksyczności zależną od dopełniacza (CDC), a bardziej korzystnie region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 270, 322, 326, 327, 329, 331, 333 i 334 łańcucha ciężkiego.
W innym korzystnym wykonaniu wynalazku kompozycja charakteryzuje się tym, że sekwencja arainokwasowa regionu Fc zawiera zmianę sekwencji aminokwasowej, która zmienia natywny wzór glikozylacji glikoproteiny.
Korzystnie, glikoproteina w kompozycji według wynalazku jest zasadniczo wolna od rozdzielającej N-acetyloglukozaminy (GlcNAc) przyłączonej do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego. Glikoproteina w kompozycji według wynalazku ma rozdzielającą N-acetyloglukozaminę (GlcNAc) przyłączoną do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
Również korzystnie, glikoproteina ma jedną lub większą liczbę reszt galaktozy przyłączonych do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
Glikoproteina korzystnie jest zasadniczo wolna od jednej lub większej liczby reszt galaktozy przyłączonych do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
Glikoproteina korzystnie ma jedną lub większą liczbę reszt kwasu sialowego przyłączonych do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
Glikoproteina korzystnie jest zasadniczo wolna od jednej lub większej liczby reszt kwasu sialowego przyłączonych do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
Także korzystnie, 100% glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego rdzenia węglowodanowego, pozbawionego fukozy, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny.
PL 213 948 B1
Kompozycja według wynalazku korzystnie charakteryzuje się tym, że region Fc obejmuje region
Fc ludzkiej IgG, gdzie bardziej korzystnie region Fc ludzkiej IgG obejmuje region Fc ludzkiej IgGx, IgG2, IgG3 lub IgG4.
Bardziej korzystnie, glikoproteina wiąże się z FcyRIII, a jeszcze bardziej korzystnie glikoproteina wiąże się z FcyRIII z lepszym powinowactwem albo pośredniczy w zależnej od przeciwciała toksyczności za pośrednictwem komórek (ADCC) bardziej skutecznie niż glikoproteina ze strukturą dojrzałego rdzenia węglowodanowego zawierającego fukozę, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny.
W następnym korzystnym rozwiązaniu kompozycji według wynalazku glikoproteina obejmuje przeciwciało, przy czym korzystnym przeciwciałem jest przeciwciało chimerowe, humanizowane albo ludzkie. Przeciwciało to wiąże się z antygenem wybranym z grupy składającej się z markera powierzchniowego komórek B, receptora ErbB, antygenu związanego z nowotworem i czynnika angiogennego. Również korzystnie przeciwciało wiąże się z CD20, HER2, czynnikiem wzrostu śródbłonka naczyń (VEGF), CD40 lub antygenem komórek macierzystych prostaty (PSCA). Przeciwciało to także korzystnie obejmuje humanizowane przeciwciało anty-HER2, chimerowe przeciwciało anty-CD20 i humanizowane przeciwciało anty-VEGF.
Kompozycja według wynalazku charakteryzuje się tym ponadto, że 90-99% glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego rdzenia węglowodanowego, pozbawionego fukozy, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny.
Kompozycja według wynalazku charakteryzuje się tym, że glikoproteina została wytworzona przez komórkę jajnika chomika chińskiego (CHO), a korzystniej komórką CHO jest komórka Lec13.
Kompozycja według wynalazku jest preparatem farmaceutycznym, który w korzystnej realizacji może zawierać ponadto dopuszczalny farmaceutycznie nośnik, która to kompozycja korzystnie jest jałowa, i ewentualnie może być korzystnie zliofilizowana.
W kompozycji według wynalazku glikoproteina jest immunoadhezyną.
Kompozycja według wynalazku jest skoniugowana z cząsteczką heterologiczną, którą to cząsteczką heterologiczną korzystnie jest czynnik cytotoksyczny, enzym albo czynnik umożliwiający uzyskanie obrazu.
Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja, która zawiera glikoproteinę, która jest immunoadhezyną i która to kompozycja jest koniugowana z cząsteczką heterologiczną, przy czym cząsteczką heterologiczną jest czynnik cytotoksyczny, enzym lub czynnik umożliwiający uzyskanie obrazu, łącznie z dopuszczalnym farmaceutycznie nośnikiem.
Przedmiotem wynalazku jest także cząsteczka kwasu nukleinowego, która koduje glikoproteinę opisaną w wynalazku zawierającą region Fc jak zdefiniowano.
Przedmiotem wynalazku jest również komórka gospodarza zawierająca kwas nukleinowy jak zdefiniowano w powyżej, przy czym 80-100% glikoproteiny wytwarzanej przez komórkę gospodarza zawiera strukturę dojrzałego rdzenia węglowodanowego, pozbawionego fukozy, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny.
Korzystnie, komórka gospodarza jest komórką jajnika chomika chińskiego (CHO), bardziej korzystnie komórką CHO jest komórka Lec13.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania glikoproteiny, polegający na tym, że obejmuje hodowanie komórki gospodarza zdefiniowanej powyżej, tak, że kwas nukleinowy podlega ekspresji.
Sposób według wynalazku obejmuje ponadto odzyskanie glikoproteiny z hodowli komórki gospodarza.
Sposób według wynalazku obejmuje ponadto łączenie glikoproteiny z cząsteczką heterologiczną. Korzystną cząsteczką heterologiczną jest czynnik cytotoksyczny, enzym albo czynnik umożliwiający uzyskanie obrazu.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja jak zdefiniowano w powyżej do zastosowania do leczenia ssaka mającego chorobę lub zaburzenie wybrane z grupy składającej się z raka, choroby autoimmunologicznej, choroby zapalnej, infekcji lub innego stanu, gdzie pożądane jest usunięcie komórek albo tkanki. W przypadku kompozycji według wynalazku, korzystnie ssakiem jest człowiek, bardziej korzystnie człowiek u którego zachodzi ekspresja FcyRI11 (F158).
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie skutecznej terapeutycznie ilości kompozycji jak zdefiniowano powyżej do wytwarzania leku do leczenia ssaka mającego chorobę lub zaburzenie wybrane z grupy składającej się z raka, choroby autoimmunologicznej, choroby zapalnej, infekcji lub innego stanu, gdzie pożądane jest usunięcie komórek albo tkanki.
PL 213 948 B1
W zastosowaniu według wynalazku, korzystnie ssakiem jest człowiek, a bardziej korzystnie człowiek, u którego zachodzi ekspresja FcyRIII (F158).
Przedmiotem wynalazku jest także zestaw terapeutyczny albo diagnostyczny zawierający kompozycję według wynalazku jak zdefiniowano powyżej oraz instrukcję jej użycia.
Wykazano, że kompozycje według wynalazku wykazują zdumiewające, 100-krotne polepszenie wiązania się z FcyRIIIA (F158), które nie jest aż tak efektywne jak oddziaływanie FeyRIIIA (V158) z ludzką IgG. A zatem przewiduje się, że ta kompozycja będzie lepsza od kompozycji opisywanych uprzednio, szczególnie do leczenia pacjentów-ludzi, którzy posiadają ekspresję FcyRIIIA (F158). FcyRIIIA (F158) jest bardziej powszechny niż FcyRIIIA (V158) u normalnych, zdrowych Afroamerykanów i członków rasy kaukaskiej. Patrz Lehrnbecher i wsp. Blood 94: 4220 (1999).
Niniejsze zgłoszenie wykazuje ponadto synergiczny wzrost wiązania FcyRIII i/lub funkcji ADCC, które są wynikiem połączenia ujawnionych tu wariantów glikozylacji z modyfikacją(ami) sekwencji aminokwasowej regionu Fc glikoproteiny. W celu wytworzenia wariantu sekwencji aminokwasowej o zwiększonej aktywności ADCC zwykle konstruuje się wariant regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania się z FcyRIII, który uważa się za ważny FcR w pośredniczeniu w ADCC. Przykładowo, można wprowadzić modyfikację aminokwasową (np. podstawienie) do rodzicielskiego regionu Fc w dowolnej, jednej lub większej liczbie pozycji aminokwasowych, 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 w celu wytworzenia takiego wariantu. Wariant o zwiększonym powinowactwie wiązania z FcyRIII może mieć ponadto zmniejszone powinowactwo wiązania z FcyRII, a w szczególności zmniejszone powinowactwo hamowania receptora FcyRIIB. W korzystnym wykonaniu, region Fc ma podstawienia aminokwasowe w pozycjach 298, 333 i 334, np. S298A/E333A/K334A. Region Fc o zmienionej sekwencji aminokwasowej obejmuje ponadto wariant glikozylacji, który jeszcze bardziej wzmacnia ADCC. Przykładowo, wariant regionu Fc może mieć przyłączoną strukturę dojrzałego węglowodanu rdzeniowego, w którym brak fukozy.
A zatem, wynalazek dostarcza kompozycji zawierającej glikoproteinę mającą region Fc, gdzie około 51-100% glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego węglowodanu rdzeniowego, w którym brak fukozy, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny i gdzie region Fc zawiera sekwencję aminokwasową, która różni się od natywnej sekwencji regionu Fc.
Korzystniej, jeżeli około 80-100% glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego węglowodanu rdzeniowego, w którym brak fukozy, a najkorzystniej jeżeli około 90-99% glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego węglowodanu rdzeniowego, w którym brak fukozy.
Glikoproteina może obejmować na przykład przeciwciało lub immunoadhezynę. Glikoproteina zawiera generalnie region Fc, korzystnie ludzki region Fc; np. region Fc ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4. Glikoproteina wykazuje zwiększone wiązanie do FcyRIII (takiego jak FcyRIIIA (F158) i/lub Fcy-RIIIA (V158)) i zwiększoną ADCC w stosunku do glikoproteiny z fukozą przyłączoną do struktury dojrzałego węglowodanu rdzeniowego.
Wynalazek dostarcza również kompozycji farmaceutycznej zawierającej glikoproteinę i, ewentualnie, dopuszczalny farmaceutycznie nośnik lub rozcieńczalnik. Ten preparat do potencjalnego użycia terapeutycznego jest jałowy i może być zIiofilizowany.
Rozważa się zastosowania diagnostyczne i terapeutyczne ujawnionej tu glikoproteiny. W zastosowaniu diagnostycznym wynalazek dostarcza sposobu ustalania obecności antygenu będącego przedmiotem zainteresowania, obejmujący wystawienie próbki podejrzewanej o to, że zawiera antygen na działanie glikoproteiny i ustalenie wiązania się glikoproteiny z próbką.
W zastosowaniu terapeutycznym, wynalazek dostarcza sposobu leczenia ssaka cierpiącego albo podatnego na chorobę lub schorzenie, który mógłby odnieść korzyść z takiego leczenia, obejmujący podawanie ssakowi skutecznej terapeutycznie ilości ujawnionej tu kompozycji, szczególnie tam, gdzie kompozycja jest preparatem farmaceutycznym.
Wynalazek dostarcza ponadto komórki gospodarza kodującej glikoproteinę zawierającą region Fc, gdzie około 80-100% glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego węglowodanu rdzeniowego, w którym brak fukozy, przyłączoną do regionu Fc glikoproreiny. Ponadto, wynalazek dostarcza sposobu wytwarzania glikoproteiny obejmujący hodowanie komórki gospodarza w taki sposób, że kwas nukleinowy ulega ekspresji i ewentualnie, odzyskanie glikoproteiny z hodowli komórki gospodarza (np. z pożywki hodowlanej komórki gospodarza).
Wynalazek dostarcza ponadto glikoprotein w artykule przemysłowym albo zestawie, który można zastosować dla celów leczenia choroby albo schorzenia.
PL 213 948 B1
Krótki opis rysunków
Figura 1A to schematyczne przedstawienie natywnej IgG i jej enzymatycznego trawienia z wytworzeniem różnych fragmentów przeciwciała. Mostki dwusiarczkowe są reprezentowane przez podwójne linie pomiędzy domenami CH1 i CL i dwiema domenami CH2. V to domena zmienna; C to domena stała; L oznacza łańcuch lekki, a H oznacza łańcuch ciężki.
Figura 1B przedstawia schematycznie strukturę w pełni obrobionego lub „dojrzałego” węglowodanu rdzeniowego (2100) przyłączonego do Asn297 IgG z surowicy, strukturę dojrzałego węglowodanu rdzeniowego z pojedynczą resztą galaktozy (2110) jak również strukturę węglowodanu rdzeniowego z dwiema resztami galaktozy oraz rozdzielającym GlcNAc (3120). Liczby reszt, odpowiednio, Glc-NAc, fukozy, galaktozy i kwasu sialowego są przedstawione w systemie numeracji czterocyfrowej pokazanym na tej figurze.
Figura 2 ilustruje dodawanie oligosacharydu do Asn297 w domenie CH2 IgG, po którym następuje jej obróbka w aparacie Golgiego, cis, medial i trans, z wytworzeniem złożonej, dwuantenowej, w pełni obrobionej struktury węglowodanu. Kastanospermina hamuje usuwanie reszt z powstającego oligosacharydu.
Figura 3 pokazuje oligosacharydy łańcucha ciężkiego (Fc) znajdujące się na przeciwciałach wyrażanych w komórkach CHO z normalnym metabolizmem fukozy.
W dalszych legendach do figur i przykładach, stosowane są następujące oznaczenia: „Hu4D5” to oznaczenie dla humanizowanego przeciwciała anty-HER2 4D5, jajnik chomika chińskiego jest oznaczony jako „CHO”, komórki CHO-DP12 hodowane w 15 cm płytkach są oznaczone „CHO-P”, komórki CHO-DP12 hodowane w obrotowych butelkach są oznaczone jako „CHO-S”, ludzkie komórki nerki zarodkowej 293 są oznaczone jako „HEK293”, „Lec 13” reprezentuje linię komórkową CHO z defektywnym metabolizmem fukozy otrzymaną od Pamela Stanley z Albert Einstein College of Medicine z Yeshiva University, Bronx, New York, Hu4D5 z podstawieniami S298A/E333A/K334A w jego regionie Fc jest nazywany „Hu4D5-AAA”, „E27” poddane dojrzewaniu pod względem powinowactwa/humanizowane przeciwciało anty-IgE opisane w patencie USA nr 6 172 213, E27 z podstawieniami S298A/E333A/K334A w jego regionie Fc jest nazywany „E27-AAA”, a zależna od przeciwciała cytotoksyczność z udziałem komórek jednojądrzastych komórek z krwi obwodowych jest oznaczona „PBMC ADCC”
Figura 4 pokazuje wiązanie się monomerów Hu4D5 z ludzkim FcyRI. Przeciwciało Hu4D5 wyrażono w komórkach CHO-S, komórkach HEK293, CHO-P lub komórkach Lec13 CHO (dwie różne partie).
Figura 5 pokazuje wiązanie się dimerów Hu4D5 z ludzkim FcyRIIB. Przeciwciało Hu4D5 wyrażono w komórkach CHO-S lub Lec13 (trzy różne partie).
Figura 6 pokazuje wiązanie się dimerów Hu4D5 z ludzkim FcyRIIA (R131). Przeciwciało Hu4D5 wyrażono w komórkach CHO-S lub Lec13 (trzy różne partie).
Figura 7 ilustruje wiązanie się dimerów Hu4D5 z ludzkim FcyRIIA (H131). Przeciwciało Hu4D5 wyrażono w komórkach CHO-S lub Lec13 (trzy różne partie).
Figura 8 pokazuje wiązanie się dimerów Hu4D5 lub Hu4D5-AAA wyrażanych w komórkach CHO-S lub Lec13 komórkach (odpowiednio dwie i trzy różne partie), z ludzkim FcyRIIIA (V158).
Figura 9 pokazuje wiązanie się dimerów Hu4D5 wyrażanych w komórkach CHO-S lub Lec13 (trzy różne partie) albo dimerów Hu4D5-AAA wyrażanych w komórkach Lec13 (dwie różne partie), z ludzkim FcyRIIIA (F158).
Figura 10 przedstawia wiązanie się dimerów anty-IgE (E27) z ludzkim Fc (RIIIA (V158). E27 wyrażane w komórkach HEK293, komórkach CHO-P (dwie partie) lub komórkach Lec13 (dwie partie) testowano w tym badaniu.
Figura 11 przedstawia wiązanie się dimerów anty-IgE (E27) z ludzkim FcyRIIIA (F158). E27 wyrażane w komórkach HEK293, komórkach CHO-P (dwie partie) lub komórkach Lec13 komórkach (dwie partie) testowano w tym badaniu.
Figura 12 ilustruje wiązanie się heksamerów anty-IgE (E27) i E27-AAA do FcyRIIIA (Fl58). Przeciwciała były wyrażane w komórkach CHO-P, Lec13 lub HEK293.
Figura 13 ilustruje wiązanie się heksamerów anty-IgE (E27) i E27-AAA do Fc(RIIIA (V158). Przeciwciała były wyrażane w komórkach CHO-P, Lec13 lub HEK293 komórkach.
Figura 14 przedstawia wiązanie się Hu4D5 wyrażanego w komórkach CHO-P, CHO-S lub Lec13 komórkach z ludzkim FcRn.
PL 213 948 B1
Figura 15 przedstawia wiązanie się Hu4D5 i anty-CD20 (RITUXAN®) z ludzkim Clq. Hu4D5 było ® wyrażane w komórkach CHO-P lub Lec13 komórkach (dwie partie). RITUXAN® było wyrażane w komórkach CHO-P.
®
Figura 16 reprezentuje wiązanie się Hu4D5 lub RITUXAN® z ludzkim Clq. Hu4D5 zastosowane w tym doświadczeniu było wyrażane w komórkach CHO-P, Lec13 (trzy różne partie) lub w komórkach CHO-S. RITUXAN® było wyrażane w komórkach CHO-P.
Figura 17 przedstawia PBMC ADCC wobec komórek raka sutka SKBR3 (E:T 30:1) przy użyciu dawcy FcyRIII VF. Pokazana jest spontaniczna ADCC w porównaniu do tej powodowanej Hu4D5 wyrażanym w komórkach CHO-S lub Lec13.
Figura 18 przedstawia PBMC ADCC wobec komórek raka sutka (E:T 30:1) przy użyciu innego dawcy FcyRIII VF. Pokazana jest spontaniczna ADCC w porównaniu do tej powodowanej Hu4D5 wyrażanym w komórkach CHO-S lub Lec13.
Figura 19 przedstawia PBMC ADCC wobec komórek raka sutka (E:T 30:1) przy użyciu dawcy FcyRIII FF. Pokazana jest spontaniczna ADCC w porównaniu do tej powodowanej Hu4D5 wyrażanym w komórkach CHO-S lub Lec13.
Figura 20 przedstawia PBMC ADCC wobec komórek raka sutka (E:T 30:1) przy użyciu innego dawcy FcyRIII FF. Pokazana jest spontaniczna ADCC w porównaniu do tej powodowanej Hu4D5 wyrażanym w komórkach CHO-S lub Lec13.
Figura 21 przedstawia monocytową ADCC wobec komórek raka sutka (E:T 10:1) przy użyciu dawcy FcyRIIA RR donor. Pokazana jest spontaniczna ADCC w porównaniu do tej powodowanej Hu4D5 wyrażanym w komórkach CHO-S lub Lec13.
Figura 22 przedstawia monocytową ADCC wobec komórek raka sutka (E:T 10:1) przy użyciu dawcy FcyRIIA HH donor. Pokazana jest spontaniczna ADCC w porównaniu do tej powodowanej Hu4D5 wyrażanym w komórkach CHO-S lub Lec13.
Figura 23 przedstawia dopasowanie regionów Fc natywnych sekwencji IgG. Pokazane są sekwencje regionu Fc natywnych sekwencji IgG, humlgGl (nie-A i A allotypy) (odpowiednio, SEK NR ID: 112), humIgG2 (SEK NR ID: 3), humIgG3 (SEK NR ID: 4) i humIgG4 (SEK NR ID: 5). Sekwencja ludzkiej IgG1 jest allotypu nie-A, a różnice pomiędzy tą sekwencją z allotypem A (w pozycjach 356 i 358; system numerowania EU) są pokazane poniżej sekwencji ludzkiej IgG1. Pokazane są również sekwencje regionu Fc natywnych mysich sekwencji IgG, murlgGl (SEK NR ID: 6), murIgG2A (SEK NR ID: 7), murIgG2B (SEK NR ID: 8) i murIgG3 (SEK NR ID: 9).
Figura 24 przedstawia wiązanie się Hu4D5 i Hu4D5-AAA z CD56 dodatnimi komórkami naturalnych zabójców (NK). Testowanymi produktami były: (1) połączona z FITC anty-ludzka IgG, (2) Hu4D5 z CHO-S, (3) Hu4D5 wyrażone w komórkach Lec 13 i (4) Hu4D5-AAA wyrażane komórkach w Lec 13.
Figura 25 pokazuje barwienie fluorescencyjne oczyszczonych komórek NK wyrażających receptory FcyRIII (F/F).
Figura 26 dostarcza porównania aktywności NK ADDC Hu4D5 z CHO-S, Hu4D5 z komórek Lec13, Hu4D5-AAA z komórek Lec 13 i Hu4D5 z komórek HEK293. Dawcą był FcyRIII (F/F).
Figura 27 powtarza doświadczenie z fig. 26 z różnym dawcą FcyRIII (F/F).
Figura 28 przedstawia wiązanie się monomerów Hu4D5anty-HER2 z linią CHO stabilnie stransfekowaną ludzkim łańcuchem α i łańcuchem γ Fc(RIIIA (reprezentatywny wykres dla jednego testu). Hu4D5 CHO-S, otwarte kółka; Hu4D5 Lec13-D, otwarte kwadraty; Hu4D5 Lec13-E, otwarte romby; Hu4D5 Lec13-F, otwarte trójkąty; Hu4D5 HEK293-/y\A, wypełnione otwarte; Hu4D5 Lec13-AAA-B, wypełnione kwadraty; Hu4D5 Lec13-AAA-C, wypełnione romby.
Szczegółowy opis korzystnych wykonań wynalazku
I. Definicje
W niniejszym opisie i zastrzeżeniach, numeracja reszt w łańcuchu ciężkim immunoglobuliny jest tą z indeksu EU, jak w Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, wyd. 5. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), konkretnie włączone jako odniesienie. „Indeks EU jak w Kabat” dotyczy numerowania reszt w ludzkim przeciwciele IgG1 EU.
Grupy węglowodanowe według niniejszego wynalazku będą opisane w odniesieniu do powszechnie stosowanej nomenklatury dla opisu oligosacharydów. Przegląd chemii węglowodanów który stosuje tę nomenklaturę znajduje się w Hubbard i wsp. Ann. Rev. Biochem. 50: 555-583 (1981).
Nomenklatura ta obejmuje na przykład, Man, która reprezentuje mannozę; GlcNAc, która reprezentuje
2-N-acetyloglukozaminę; Gal, która reprezentuje galaktozę; Fuc dla fukozy; i Gic, która reprezentuje
PL 213 948 B1 glukozę. Kwasy sialowe są opisane przez skróty NeuNAc, dla kwasu 5-N- acetyloneuraminowego i NeuNGc dla 5-glikoliloneuraminowego.
Termin „glikozylacja” oznacza przyłączenie oligosacharydów (węglowodanów zawierających dwa lub większą liczbę cukrów prostych połączonych razem, np. złożonych z dwóch do około dwunastu połączonych razem cukrów prostych) do glikoproteiny. Boczne łańcuchy oligosacharydowe są zazwyczaj przyłączone do szkieletu glikoproteiny poprzez N lub poprzez O. Oligosacharydy według niniejszego wynalazku występują za ogół jako oligosacharydy przyłączone poprzez N do domeny CH2 regionu Fc.
„Glikozykacja poprzez N” dotyczy przyłączenia grupy węglowodanowej do reszty asparaginowej w łańcuchu glikoproteinowym. Specjalista w tej dziedzinie będzie wiedział, że na przykład każda domena CH2 mysiej IgG1, IgG2a, IgG2b i IgG3 jak również ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA i IgD ma pojedyncze miejsce dla glikozylacji poprzez N przy reszcie aminokwasowej 297 (Kabat i wsp. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 1991).
„Glikoproteiny” to polipeptydy mające przyłączony jeden lub większą liczbę bocznych łańcuchów oligosacharydowych.
Dla potrzeb niniejszego wynalazku „struktura dojrzałego węglowodanu rdzeniowego” dotyczy poddanej obróbce struktury węglowodanu rdzeniowego przyłączonej do regionu Fc, która generalnie składa się z następujących struktur węglowodanowych GlcNAc(Fukoza)-GlcNAc-Man-(Man-GlcNAc)2, typowo dwuantenowych oligosacharydów przedstawionych schematycznie poniżej:
Termin ten obejmuje w szczególności formy G1 struktury dojrzałego węglowodanu rdzeniowego, w której brak reszty β1,2 GlcNAc. Korzystne jest, jednakże jeżeli struktura węglowodanu m rdzeniowego zawiera obydwie reszty β1,2 GlcNAc. Struktura dojrzałego węglowodanu rdzeniowego tutaj generalnie nie jest hipermannozylowana.
Struktura dojrzałego węglowodanu rdzeniowego jest przyłączona do regionu Fc glikoproteiny, na ogół poprzez m przyłączenie przez N do Asn297 domeny CH2 regionu Fc.
„Rozdzielająca GlcNAc” to reszta GlcNAc przyłączona do β^4 mannozy w strukturze dojrzałego węglowodanu rdzeniowego. Rozdzielająca GlcNAc może być przyłączona enzymatycznie do struktury dojrzałego węglowodanu rdzeniowego przez enzym β-(1,4)-N-acetyloglukozaminylotransferazę III (GnTIII). Komórki CHO normalnie nie wyrażają GnTIII (Stanley i wsp. J. Biol. Chem. 261: 13370-13378 (1984)), ale mogą być poddane manipulacjom aby to robić (Umana i wsp. Nature Biotech. 17: 176-180 (1999)).
Glikoproteina, która jest „zasadniczo wolna” od jednej lub większej liczby wybranych grup cukrowych (np. rozdzielającej GlcNAc albo jednej lub większej liczby reszt galaktozy albo jednej lub większej liczby reszt kwasu sialowego) jest wytwarzana zazwyczaj w komórce gospodarza, który jest defektywny pod względem dodawania w wybranej(ych) grupy cukrowej do struktury dojrzałego węglowodanu rdzeniowego, tak że około 90-100% glikoproteiny w kompozycji nie będzie miała wybranej (ych) grupy cukrowej przyłączonej do struktury dojrzałego węglowodanu rdzeniowego.
A „glikozydaza” to enzym uczestniczący w biosyntezie połączonych przez asparaginę (połączonych przez N) glikoprotein. Enzym „skracający” to taki, który usuwa oligosacharyd(y), podczas gdy „transferaza” dodaje oligosacharyd(y). Przykłady glikozydaz obejmują glukozydazy skracające, takie jak glukozydaza I i glukozydaza II; skracające mannozydazy takie jak mannozydaza szorstkiego endoplazmatyczego retikulum (mannozydaza rER), mannozydaza IA, mannozydaza IB i mannozydaza II; jak również transferazy takie jak glikosylotransferazy, np. β(1,4)-Ν-acetyloglukozaminylotransferaza III (GnT III), Gal-transferazy, transferazy kwasu sialowegi i fuc-transferazy.
PL 213 948 B1 „Inhibitor glikozydazy” dotyczy związku lub kompozycji, który zmiesza albo zapobiega obróbkce oligosacharydu połączonego poprzez N przez jeden albo większą liczbę glikozydaz. Przykłady obejmują nojirymycynę, 1-deoksynojirymycynę (dNM), N-Metylo-1-deoksynojirymycynę (M-dNM), kastanosperminę, bromokonduritol, 1-deoksymannojirymycynę (dMM), australinę, MDL, lentiginozynę i swainzoninę (Sw). Inhibitory glikozydazy są omówione w Fuhrmann i wsp. Biochim. Biophys. Acta 825: 95-110 (1985); Kaushal i Elbein, Methods in Enzym. 230: 316-329 (1994) oraz Elbein, A. FASEB 5: 3055-3063 (1991).
„Lec13” dotyczy opornej na lektynę zmutowanej linii komórkowej jajnika chomika chińskiego (CHO), która wykazuje defektywny metabolizm fukozy i dlatego ma zmniejszoną zdolność do dodawania fukozy do złożonych węglowodanów. Ta linia jest opisana w Ripka i Stanley, Somatic Cell & Molec. Gen. 12 (1): 51-62 (1986) oraz Ripka i wsp. Arch. Biochem. Biophys. 249 (2): 533-545 (1986) I jest dostępna z Albert Einstein College of Medicine z Yeshiva University, Bronx, New York. Uważa się, że w komórkach Lec13 brak jest transktyptu dla GDP-D-mannozo-4,6-dehydratazy, kluczowego enzymu metabolizmu fukozy. Ohyama i wsp. J. Biol. Chem. 273 (23): 14582-14587 (1988). GDP-D-mannozo-4,6-dehydrataza wytwarza GDP-mannozo-4-keto-6-D-deoksymannozę z GDP-mannozy, która jest następnie przekształcana przez białko FX do GDP-L- fukozy. Ekspresja fukozylowanych oligosacharydów jest zależna od donorowych substratów GDP-L-fukozy i fukozylotransferazy(az).
„Fukozylotransferaza” to enzym, który dodaje jedną lub większą liczbę fucoz do glikoproteiny. Przykłady obejmują a1,6-fukozyoltransferazę, FucTI, FucTII, FucTIII, FucTIV, FucTV, FucTVI i FucTVII. Świńskie i ludzkie Porcine and human a1,6-fukozyoltransferazy są opisane, odpowiednio, w Uozumi i wsp. J. Biol. Chem. 271: 27810-27817 (1996) i Yanagidani i wsp. J. Biochem. 121: 626-632 (1997).
„Sialilotransferaza” to enzym, który dodaje jedną lub większą liczbę reszt kwasu sialowego do glikoproteiny. α2,3-sialilotransferaza może dodawać reszty(ę) kwasu sialowego do reszt(y) galaktozy przyłączonych do struktury dojrzałego węglowodanu rdzeniowego.
„Galaktotransferaza” to enzym, który dodaje jedną lub większą liczbę reszt galaktozy do glikoproteiny. β1,4-galaktozylotransferaza może dodawać reszty(ę) galaktozy do struktury dojrzałego węglowodanu rdzeniowego.
Termin „region Fc zawierający glikoproteinę” dotyczy glikoproteiny, takiej jak przeciwciało albo immunoadhezyna, która zawiera region Fc.
Termin „region Fc” jest stosowany do zdefiniowania regionu C-końcowego łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, np. jak pokazano na fig. 1. „Regionem Fc” może być region Fc o sekwencji natywnej albo wariant regionu Fc. Jakkolwiek granice regionu Fc łańcucha ciężkiego immunoglobuliny mogą różnić się, region Fc łańcucha ciężkiego ludzkiej IgG jest zwykle zdefiniowany jako rozciągający się od reszty aminokwasowej w pozycji około Cys226 lub od pozycji około Pro230, do końca karboksylowego regionu Fc. Region Fc immunoglobuliny generalnie zawiera dwie domeny stałe, domenę CH2 i CH3, jak pokazano na przykład na fig. 1A.
„Funkcjonalny region Fc” posiada co najmniej jedną „funkcję efektorową” regionu Fc o sekwencji natywnej. Przykładowe „funkcje efektorowe” obejmują wiązanie Clq, cytotoksyczność zależną od dopełniacza; wiązanie receptora Fc; cytotoksyczność z udziałem komórek zależną od przeciwciała (ADCC); fagocytozę; obniżenie aktywności receptorów powierzchniowych (np. receptora komórek B; BCR), itd. Takie funkcje efektorowe generalnie wymagają, aby region Fc region był połączony z domeną wiążącą (np. domeną zmienną przeciwciała) i mogą być testowane przy zastosowaniu różnych testów, na przykład jak tu ujawnionych.
„Region Fc o sekwencji natywnej” obejmuje sekwencję identyczną z sekwencją aminokwasową regionu Fc znajdywanego w naturze. Ludzkie regiony Fc o sekwencji natywnej są pokazane na fig. 23 i obejmują region Fc ludzkiej IgG1 o sekwencji natywnej (allotypy nie-A i A); region Fc ludzkiej IgG2 o sekwencji natywnej; region Fc ludzkiej IgG3 o sekwencji natywnej i region Fc ludzkiej IgG4 o sekwencji natywnej jak również ich naturalnie występujące warianty. Mysie regiony Fc o sekwencji natywnej są również pokazane na fig. 23. Inne przykłady regionów Fc o sekwencji natywnej obejmują region Fc ludzkiej IgA o sekwencji natywnej i region Fc ludzkiej IgD o sekwencji natywnej.
„Wariant regionu Fc” obejmuje sekwencję aminokwasową, która różni się od sekwencji regionu Fc o sekwencji natywnej co najmniej jedną „modyfikacją aminokwasową”. Korzystne jest, jeżeli wariant regionu Fc ma co najmniej jedno podstawienie aminokwasowe w porównaniu do regionu Fc o sekwencji natywnej albo regionu Fc polipeptydu rodzicielskiego, np. od jednego do około dziesięciu podstawień aminokwasowych, korzystnie od około jednego do około pięciu podstawień aminokwasowych w regionie Fc o sekwencji natywnej albo regionie Fc polipeptydu rodzicielskiego. Korzystnie będzie,
PL 213 948 B1 jeżeli rozważany tu wariant regionu Fc ma co najmniej około 80% identyczności sekwencji z regionem Fc o sekwencji natywnej albo regionem Fc polipeptydu rodzicielskiego, najkorzystniej co najmniej około 90% identyczności, korzystniej co najmniej około 95% identyczności.
„Homologia” jest zdefiniowana jako procent reszt w sekwencji aminokwasowej wariantu, które są identyczne po dopasowaniu sekwencji i wprowadzeniu przerw, jeżeli to konieczne, dla uzyskania maksymalnego procentu homologii. Metody i programy komputerowe do dopasowania są dobrze znane w tej dziedzinie. Jednym z takich programów komputerowych jest „Align 2” autorstwa Genentech, Inc., który został złożony z dokumentacją w biurze United States Copyright Office, Washington, DC 20559, 10 grudnia, 1991.
Terminy „receptor Fc” albo „FcR” są stosowane dla opisania receptora, który wiąże się z regionem Fc przeciwciała. Korzystnym FcR jest ludzki FcR o sekwencji natywnej. Ponadto, korzystnym FcR jest taki, który wiąże się z przeciwciałem IgG (receptorem gamma) i obejmuje receptory podklas FcyRI, FcyRII oraz FcyRIII, włączając w to warianty alleliczne i formy tych receptorów powstałe w wyniku alternatywnego składania. Receptory FcyRII obejmują FcyRIIA („receptor aktywujący”) i FcyRIIB („receptor hamujący”), które mają podobne sekwencje aminokwasowe, różniące się głównie w domenach cytoplazmatycznych. Receptor aktywujący FcyRIIA zawiera w swojej domenie cytoplazmatycznej immunoreceptorowy, oparty o tyrozynę motyw aktywacyjny (ITAM, od ang. immunoreceptor tyrosine-based activation motif). Receptor hamujący FcyRIIB zawiera w swojej domenie cytoplazmatycznej immunoreceptorowy, oparty o tyrozynę motyw hamujący (ITIM, od ang. immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif) (patrz praca przeglądowa Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997)). Omawiane tu receptory Fc obejmują dwa znane, występujące naturalnie allotypy, FcyRII (H131) i FcyRII (R131), ludzki FcyRII który został zidentyfikowany na podstawie aminokwasu w pozycji 131 (Clark i wsp. J. Immunol. 143: 1731-1734 (1989)) oraz występujące naturalnie allotypy ludzkiego FcyRIIIA. Ludzki FcyRIIIA ma naturalnie występujące allotypy w pozycji 48 (Leu, His lub Arg) i w pozycji 158 (Val lub Phe). Allotyp FcyRIIIA (V158) oddziałuje z ludzką IgG lepiej niż allotyp FcyRIIIA (F158) (Shields i wsp. J. Biol. Chem. 276: 6591-6604 (2001); Koene i wsp. Blood 90: 1109-1114 (1997) oraz Wu i wsp. J. Clin. Invest. 100: 1059-1070 (1997)). Przegląd FcR jest w Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92 (1991); Capel i wsp., Immunomethods 4: 25-34 (1994) oraz de Haas i wsp., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995). Inne FcR, włączając w to te, które będą zidentyfikowane w przyszłości, są tu objęte terminem „FcR”. Termin obejmuje również receptor noworodkowy, FcRn, który jest odpowiedzialny za przeniesienie matczynych IgG do płodu (Guyer i wsp., J. Immunol. 117: 587 (1976) oraz Kim i wsp., J. Immunol 24: 249 11994)).
„Cytotoksyczność z udziałem komórek zależna od przeciwciała” i „ADCC” dotyczą reakcji z udziałem komórek, w której niespecyficzne komórki cytotoksyczne, które wyrażają receptory Fc (FcR) (np. komórki naturalnych zabójców, ang. Natural Killer (NK), komórki obojętnochłonne i makrofagi) rozpoznają związane przeciwciało na komórce docelowej, a następnie powodują lizę komórki docelowej. Komórki pierwotne uczestniczące w ADCC, komórki NK, wyrażają jedynie FcyRIII, podczas gdy monocyty wyrażają FcyRI, FcyRII i FcyRIII. Ekspresja FcR na komórkach krwiotwórczych jest zestawiona w tabeli 3 na stronie 464 w Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92 (1991).
„Ludzkie komórki efektorowe” to leukocyty, które wyrażają jedną albo większą liczbę FcR i pełnią funkcje efektorowe. Korzystne jest, jeżeli komórki wyrażają co najmniej FcyRIII i pełnią funkcje efektorowe ADCC. Przykłady ludzkich leukocytów, które pośredniczą w ADCC obejmują jednojądrzaste komórki z krwi obwodowej (PBMC), komórki naturalnych zabójców (NK), monocyty, cytotoksyczne komórki T i komórki obojętnochłonne; przy czym korzystne są komórki PBMC i NK. Komórki efektorowe można izolować z naturalnych źródeł, np. z krwi albo PBMC, jak tu opisano.
„Region zawiasowy” jest generalnie zdefiniowany jako rozciągający się od około Glu216 lub od około Cys226 do około Pro230 ludzkiej IgG1 (Burton, Molec. Immunol. 22: 161-206 (1985)). Regiony zawiasowe innych izotypów IgG można dopasować do sekwencji IgG1 poprzez umieszczenie pierwszej i ostatniej cysteiny tworzącej wiązania S-S wewnątrz łańcucha ciężkiego w tej samej pozycji.
„Niższy region zawiasowy” regionu Fc jest normalnie zdefiniowany jako ciąg reszt położony bezpośrednio po stronie C regionu zawiasowego, tj. reszty 233 do 239 regionu Fc.
Termin „domena CH2” jak używa się w niniejszym opisie jest tu stosowany dla opisania domeny
CH2 mającej pojedyncze miejsce przyłączenia co najmniej jednego oligosacharydu poprzez N, generalnie przy Asn297. Jest charakterystyczne dla glikoproteiny według niniejszego wynalazku, że zawiera albo może być tak zmodyfikowana aby zawierać co najmniej jedną domenę CH2 mającą przyłączony poprzez N oligosacharyd domeny CH2 ludzkiej IgG. Korzystne jest, jeżeli domeną CH2 jest dome16
PL 213 948 B1 na CHy2 ludzkiej IgG. Domena CH2 ludzkiej IgG zwykle rozciąga się od aminokwasu około 231 do aminokwasu około 340 regionu Fc, stosując indeks EU do numerowania reszt łańcucha ciężkiego immunoglobuliny.
„Domena CH3” zawiera ciąg reszt C-końcowych w stosunku do domeny CH2 regionu Fc (tj. od reszty aminokwasowej około 341 do reszty aminokwasowej około 447 IgG).
Terminy „aminokwasy” i „aminokwas” dotyczą wszystkich występujących naturalnie alfaaminokwasów, w obydwu formach stereoizomerycznych oraz ich analogów i pochodnych. Analog jest zdefiniowany jako podstawienie atomu w aminokwasie innym atomem, który ma zwykle podobne właściwości. Pochodna jest zdefiniowana jako aminokwas, który ma przyłączoną inną cząsteczkę albo atom. Pochodne będą obejmować, na przykład acetylację grupy aminowej, aminację grupy karboksylowej lub oksydację reszt siarkowych dwóch cząsteczek cysternowych z wytworzeniem cysteiny.
Stosowany tu termin „polipeptyd” dotyczy generalnie peptydów i białek mających więcej niż około dziesięć aminokwasów. Polipeptydy mogą być homologiczne względem komórki gospodarza, w której są wyrażane lub, korzystnie, mogą być egzogenne, co oznacza, że są one heterologiczne, tj. obce względem zastosowanej komórki gospodarza, tak jak w przypadku chimerowych, humanizowanych lub ludzkich przeciwciał wytwarzanych przez komórkę CHO.
Termin „przeciwciało” jest tu stosowany w najszerszym znaczeniu i obejmuje przeciwciała monoklonalne (włączając w to przeciwciała monoklonalne pełnej długości), przeciwciała poliklonałne, przeciwciała multispecyficzne (np. przeciwciała bispecyficzne) i fragmenty przeciwciał o ile wykazują one pożądaną aktywność biologiczną.
„Fragmenty przeciwciał” zdefiniowane dla potrzeb niniejszego wynalazku obejmują część nienaruszonego przeciwciała, na ogół zawierającą miejsce wiązania antygenu nienaruszonego przeciwciała lub region Fc przeciwciała. Przykłady fragmentów przeciwciał obejmują przeciwciała liniowe; cząsteczki przeciwciał jednołańcuchowych i przeciwciała multispecyficzne utworzone z fragmentów przeciwciał.
Stosowany tu termin „przeciwciało monoklonalne” dotyczy przeciwciała otrzymanego z populacji zasadniczo homogennych przeciwciał, tj. poszczególne przeciwciała zawarte w populacji są identyczne z wyjątkiem możliwych naturalnie występujących mutacji, które mogą być obecne w niewielkiej liczbie. Przeciwciała monoklonalne są wysoce specyficzne, będąc skierowanymi wobec pojedynczego miejsca antygenowego. Ponadto, w przeciwieństwie do preparatów przeciwciał poliklonalnych, które zawierają różne przeciwciała skierowane przeciw różnym determinantom (epitopom), każde przeciwciało monoklonalne jest skierowane przeciw pojedynczej determinancie antygenu. Określenie „monoklonalny” nie ma być traktowane jako wymaganie odnośnie wytwarzania przeciwciała jakąś konkretną metodą. Przykładowo, monoklonalne przeciwciała do zastosowania zgodnie z niniejszym wynalazkiem mogą być wytwarzane metodą hybrydom po raz pierwszy opisaną przez Kohler i wsp., Nature, 256: 495 (1975) albo wytwarzane metodami rekombinowania DNA (patrz np. patent USA nr 4 816 567). „Przeciwciała monoklonalne” można również izolować z fagowych bibliotek przeciwciałowych przy zastosowaniu technik opisanych na przykład w Clackson i wsp., Nature, 352: 624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991).
Stosowane tu przeciwciała monoklonalne obejmują w szczególności przeciwciała (immunoglobuliny) „chimerowe”, w których część łańcucha lekkiego i/lub ciężkiego jest identyczna albo homologiczna z odpowiadającymi im sekwencjami przeciwciał pochodzących z określonych gatunków albo należących do określonej klasy przeciwciał, podczas gdy reszta łańcucha(ów) jest identyczna albo homologiczna z odpowiednimi sekwencjami przeciwciał pochodzących z innego gatunku albo należących do określonej klasy albo podklasy przeciwciał, jak również fragmenty takich przeciwciał tak długo, jak wykazują one pożądaną aktywność biologiczną (patent USA nr 4 816 567 oraz Morrison i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)).
„Humanizowane” postaci przeciwciał nie-ludzkich (np. mysich) to chimerowe przeciwciała, które zawierają minimalną sekwencję pochodzącą z immunoglobuliny nie-ludzkiej. W większości przypadków, humanizowane przeciwciała są ludzkimi immunoglobulinami (przeciwciało-biorca), w którym reszty z regionu hiperzmiennego biorcy są zastąpione resztami hiperzmiennego regionu przeciwciała z gatunku innego niż człowiek (przeciwciało donorowe), takiego jak mysz, szczur, królik albo naczelny nie-człowiek, mającego pożądaną specyficzność, powinowactwo i pojemność. W niektórych przypadkach, reszty regionu zrębowego (FR) ludzkiej immunoglobuliny są zastąpione przez odpowiadające im reszty nie-ludzkie. Ponadto humanizowane przeciwciała mogą zawierać reszty, które nie są znajdywane w przeciwciele biorcy ani w przeciwciele donorowym. Tych modyfikacji dokonuje się w celu dalPL 213 948 B1 szej zmiany właściwości przeciwciała. Generalnie, humanizowane przeciwciała będą zawierały zasadniczo wszystkie spośród co najmniej jednej, a typowo dwóch domen zmiennych, w których wszystkie albo zasadniczo wszystkie pętle hiperzmienne odpowiadają tym z immunoglobulin nie-ludzkich i wszystkie albo zasadniczo wszystkie FR są z sekwencji immunoglobuliny ludzkiej. Humanizowane przeciwciała będą ewentualnie zawierały co najmniej cześć regionu stałego immunoglobuliny (Fc), typowo z immunoglobuliny ludzkiej. Dla dalszych szczegółów patrz Jones i wsp., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann i wsp., Nature 332: 323-329 (1988) oraz Presta, Curr. Op. Struct. Biol 2: 593-596 (1992).
„Przeciwciało ludzkie” to takie, które ma sekwencję aminokwasową, która odpowiada sekwencji przeciwciała wytwarzanego przez człowieka i/lub zostało wytworzone przy zastosowaniu dowolnej z ujawnionych tu technik wytwarzania ludzkich przeciwciał. Definicja ludzkiego przeciwciała specyficznie wyklucza przeciwciało humanizowane zawierające nie-ludzkie reszty wiążące antygen. Ludzkie przeciwciała można wytwarzać przy zastosowaniu różnych technik znanych w tej dziedzinie. W jednym z wykonań, ludzkie przeciwciało wybiera się z biblioteki fagowej, gdzie ta biblioteka fagowa wyraża ludzkie przeciwciała (Vaughan i wsp. Nature Biotechnology 14: 309-314 (1996): Sheets i wsp. PNAS (USA) 95: 6157-6162 (1998)); Hoogenboom i Winter, J. Mol. Biol., 227: 381 (1991); Marks i wsp., J. Mol. Biol., 222: 581 (1991)). Ludzkie przeciwciała można również wytwarzać poprzez wprowadzenie ludzkich Ioci immuboglobulinowych do transgenicznych zwierząt np. myszy, u których endogenne geny immuboglobulinowe zostały częściowo albo całkowicie zinaktywowane. Po prowokacji, obserwowane jest wytwarzanie ludzkich przeciwciał ściśle przypominające to, co obserwuje się u ludzi we wszystkich aspektach, włączając w to rearanżację genu, składanie i repetruar przeciwciał. Podejście to jest opisane na przykład w patentach USA nr 5 545 807; nr 5 545 806; nr 5 569 825; nr 5 625 126; nr 5 633 425; nr 5 661 016 oraz następujących publikacjach naukowych: Marks i wsp., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg i wsp., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-13 (1994); Fishwild i wsp., Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996); Lonberg i Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995). Alternatywnie, ludzkie przeciwciało można otrzymać poprzez unieśmiertelnianie ludzkich limfocytów B wytwarzających przeciwciało skierowane wobec docelowego antygenu (takie limfocyty B można pobrać z osobnika albo mogą być iramunizowane in vitro). Patrz np., Cole i wsp., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner i wsp., J. Immunol., 147 (1): 86-95 (1991) oraz patent USA nr 5 750 373.
Stosowany tu termin „region hiperzmienny” odnosi się do reszt aminokwasowych przeciwciała, które są odpowiedzialne za wiązanie antygenu. Region hiperzmienny generalnie obejmuje reszty aminokwasowe z „regionu determinującego dopasowanie” albo „CDR” (tj. reszty 24-34 (L1), 50-56 (L2) i 89-97 (L3) w domenie zmiennej łańcucha lekkiego i 31-35 (H1), 50-65 (H2) i 95-102 (H3) w domenie zmiennej łańcucha ciężkiego; Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, wyd. 5, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991) i/lub reszty z „pętli hiperzmiennej” (tj. reszty 26-32 (L1), 50-52 (L2) i 91-96 (L3) w domenie zmiennej łańcucha lekkiego oraz 26-32 (H1), 53-55 (H2) i 96-101 (H3) w domenie zmiennej łańcucha ciężkiego; Chothia i Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987)). Resztami „regionu zrębowego” lub „FR” są reszty domeny zmiennej inne niż zdefiniowane tu reszty regionu hiperzmiennego.
Stosowany tu termin „immunoadhezyna” oznacza cząsteczki typu przeciwciała, które stanowią połączenie „domeny wiążącej” heterologicznego białka „adhezyny” (np. receptora, ligandu lub enzymu) z domeną stałą immunoglobulin. Strukturalnie, immunoadhezyny są fuzją sekwencji aminokwasowej adhezyny z pożądaną specyficznością wiązania, która jest inna niż miejsce rozpoznawania i miejsca wiązania antygenu (miejsca przyłączania antygenu) przeciwciała (tj. jest „heterologiczną”) i sekwencji domeny stałej immunoglobuliny.
Stosowany tu termin „domena wiążąca ligand” dotyczy dowolnego natywnego receptora na powierzchni komórki albo jego dowolnego regionu lub pochodnej zachowującej co najmniej jakościową zdolność wiązania ligandu odpowiadającego mu receptora natywnego. W konkretnym wykonaniu, receptor pochodzi z białka powierzchniowego mającego domenę zewnątrzkomórkową, który jest homologiczny do członka nadrodziny genowej immunoglobulin. Innymi receptorami, które nie są członkami nadrodziny genowej immunoglobulin, ale pomimo tego są objęte tą definicją są receptory dla cytokin, a w szczególności receptory z aktywnością kinazy tyrozynowej (receptorowe kinazy tyrozynowe), przedstawiciele nadrodzin hemopoetyny i receptora czynnika wzrostu nerwów oraz cząsteczki związane z adhezją komórkową, np. selektyny (E-, L- i P).
PL 213 948 B1
Termin „domena wiążąca receptor” jest stosowany dla oznaczenia dowolnego natywnego ligandu dla receptora, włączając w to cząsteczki związane z adhezją komórkową, albo dowolnego regionu lub pochodnej takiego natywnego ligandu, zachowującej co najmniej jakościową zdolność wiązania receptora odpowiadającego mu natywnego ligandu. Ta definicja, miedzy innymi, obejmuje konkretnie sekwencje ligandów dla wspominanych powyżej receptorów.
„Chimera przeciwciało-immunoadhezyna” obejmuje cząsteczkę, która stanowi połączenie co najmniej jednej domeny wiążącej przeciwciała (jak tu zdefiniowano) z co najmniej jedną immunoadhezyną (jak zdefiniowano w tym opisie). Przykładowymi chimerami przeciwciało-immunoadhezyna są bispecyficzne chimery CD4-IgG jak opidsano w Berg i wsp., PNAS (USA) 88: 4723-4727 (1991) oraz Chamow i wsp., J. Immunol. 153: 4268 (1994).
Termin „preparat” jest tu zastosowany dla zdefiniowania kompozycji lub glikoproteiny, która została zidentyfikowana i wydzielona i/lub odzyskana ze składników jego otoczenia. Składniki zanieczyszczające z jego otoczenia to materiały, które przeszkadzałyby w zastosowaniach diagnostycznych i «ft, terapeutycznych kompozycji lub glikoproteiny i mogą obejmować enzymy, hormony i inne białkowe albo niebiałkowe substancje rozpuszczone. Preparat według wynalazku jest zasadniczo wolny od tych zanieczyszczeń. W korzystnych wykonaniach, preparat glikoproteiny będzie oczyszczony (1) do ponad 95% przeciwciała, wagowo, przy określaniu metodą Lowry, a korzystniej do ponad 99% wagowo, (2) do stopnia dostatecznego dla otrzymania co najmniej 15 reszt N-końcowej albo wewnętrznej sekwencji aminokwasowej poprzez zastosowanie separatora wirówkowego albo (3) do homogenności określanej poprzez SDS-PAGE w warunkach redukujących albo nie redukujących przy zastosowaniu barwienia błękitem Coomassie albo korzystniej barwienia srebrem.
Dla obecnych potrzeb „preparat farmaceutyczny” to taki, który jest przystosowany i odpowiedni do podawania ssakowi, a w szczególności człowiekowi. A zatem, kompozycję można zastosować do leczenia choroby albo schorzenia ssaka. Ponadto, glikoproteina, która jest aktywnym składnikiem kompozycji, została poddana jednemu lub większej liczbie etapów oczyszczania lub izolacji tak, że zanieczyszczenie(a), które mogłyby przeszkadzać w jej zastosowaniu terapeutycznemu zostały od niej oddzielone. Generalnie, kompozycja farmaceutyczna zawiera glikoproteinę i dopuszczalny farmaceutycznie nośnik lub rozcieńczalnik, przykłady których są opisane poniżej. Ten preparat jest zazwyczaj jałowy i może być zliofiiizowany.
Dla celów niniejszego wynalazku „glikoproteina rodzicielska” to glikoproteina mająca taką samą sekwencję aminokwasową i strukturę dojrzałego węglowodanu rdzeniowego jak wariant glikoproteiny według niniejszego wynalazku, z tą różnicą, że fukoza jest przyłączona do struktury dojrzałego węglowodanu rdzeniowego. Przykładowo, w kompozycji zawierającej glikoproteinę rodzicielska, około 50-100% albo około 70-100% glikoproteiny rodzicielskiej zawiera strukturę dojrzałego węglowodanu rdzeniowego mającą przyłączoną fukozę.
Wariant glikoproteiny, który wiąże się z FcR z „lepszym powinowactwem” niż rodzicielska glikoproteina, jest takim, który wiąże się z dowolnym, jednym albo większą liczbą zidentyfikowanych powyżej FcR z zasadniczo lepszym powinowactwem wiązania niż rodzicielska glikoproteina, kiedy ilości wariantu glikoproteiny i glikoproteiny rodzicielskiej w teście wiązania są zasadniczo takie same. Przykładowo, wariant o zwiększonym powinowactwie wiązania FcR może wykazywać od około 5-krotnego do około 1000-krotnego, np. od około 10-krotnego do około 500-krotnego polepszenia powinowactwa wiązania FcR w porównaniu z glikoproteiną rodzicielską, gdzie powinowactwa wiązania FcR jest określane na przykład jak ujawniono tu w przykładach.
Wariant glikoproteiny, który „pośredniczy w zależnej od przeciwciała cytotoksyczności z udziałem komórek (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych bardziej skutecznie” niż rodzicielski polipeptyd, to taki, który in vitro lub in vivo jest zasadniczo bardziej skuteczny w pośredniczeniu w ADCC, kiedy ilości wariantu glikoproteiny i glikoproteiny rodzicielskiej użyte w teście są zasadniczo takie same. Generalnie, takie warianty glikoproteiny będą zidentyfikowane przy zastosowaniu testu ADCC in vitro jak tu ujawniono, ale bierze się również pod uwagę inne testy i metody określania aktywności ADCC np. w modelach zwierzęcych, itd. Korzystny wariant glikoproteiny jest około 1,5 razy do około 100 razy, np. od około dwóch razy do około pięćdziesięciu razy bardziej skuteczny w pośredniczeniu w ADCC niż glikoproteina rodzicielska, np. w ujawnionym tu teście in vitro.
„Modyfikacja aminokwasowa” dotyczy zmiany w sekwencji aminokwasowej ustalonej uprzednio sekwencji aminokwasowej. Przykładowe modyfikacje obejmują podstawienia, insercje i/lub delecje aminokwasów. Korzystną modyfikacją aminokwasową jest tu podstawienie.
PL 213 948 B1 „Modyfikacja aminokwasowa” w konkretnej pozycji, np. regionu Fc, oznacza podstawienie lub delecję wskazanej reszty albo insercję co najmniej jednej reszty obok wskazanej reszty. Insercja „obok” wskazanej reszty oznacza insercję w odstępie jednej do dwóch reszt. Insercja może być N-końcowe lub C-końcowe w stosunku do wskazanej reszty.
„Podstawienie aminokwasowe” oznacza zastąpienie co najmniej jednej istniejącej reszty aminokwasowej w ustalonej uprzednio sekwencji aminokwasowej inną „zastępującą” resztą aminokwasową. Zastępująca reszta lub reszty mogą być „resztami aminokwasowymi występującymi naturalnie”, (tj. kodowanymi przez kod genetyczny) i wybranymi z grupy składającej się z: alaniny (Ala); argininy (Arg); asparaginy (Asn); kwasu asparaginowego (Asp); cysteiny (Cys); glutaminy (Gln); kwasu glutaminowego (Glu); glicyny (Gly); histydyny (His); izoleucyny (He); leucyny (Leu); lizyny (Lys); metioniny (Met); fenyloalaniny (Phe); proliny (Pro); seryny (Ser); treoniny (Thr); tryptofanu (Trp); tyrozyny (Tyr) i waliny (Val). Korzystne jest, jeżeli zastępującą resztą nie jest cysteina. Podstawienie jedną albo większą liczbą reszt aminokwasowych nie występujących naturalnie jest tu również objęte definicją podstawienia aminokwasowego.
„Reszta aminokwasowa nie występująca naturalnie” dotyczy reszty innej niż występujące naturalnie reszty wymienione powyżej, która ma zdolność do wiązania się kowalencyjnie z sąsiednią resztą(-ami) w łańcuchu polipeptydowym. Przykłady reszt aminokwasowych nie występujących naturalnie obejmują norleucynę, ornitynę, norwalinę, homoserynę i inne analogi reszt aminokwasowych, takie jak te opisane w Ellman i wsp. Meth. Enzym. 202: 301-336 (1991). W celu wytworzenia takich reszt aminokwasowych nie występujących naturalnie można zastosować procedury z Noren i wsp. Science 244: 182 (1989) oraz Ellman i wsp., jak wyżej. Pokrótce, procedury te obejmują, aktywację chemiczną supresorowego tRNA resztą aminokwasową nie występującą naturalnie, a następnie transkrypcję i translację RNA in vitro.
„Insercja aminokwasowa” dotyczy wstawienia co najmniej jednego aminokwasu do ustalonej uprzednio sekwencji aminokwasowej. Jakkolwiek insercja zwykle stanowi wstawienie jednej albo dwóch reszt aminokwasowych, niniejsze zgłoszenie bierze pod uwagę większe „insercje peptydowe”, np. wstawienia od około trzech do około pięciu albo nawet do około dziesięciu reszt aminokwasowych. Wstawiona reszta(y) mogą być występującymi naturalnie albo nie występującymi naturalnie, jak ujawniono powyżej.
„Delecja aminokwasowa” oznacza usunięcie co najmniej jednej reszty aminokwasowej z ustalonej uprzednio sekwencji aminokwasowej.
„Clq” to polipeptyd, który zawiera miejsce wiązania dla regionu Fc immunoglobuliny. Clq razem z dwiema proteazami serynowymi, Clr i Cis, tworzą kompleks Cl, pierwszy składnik szlaku cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC, od ang. complement dependent cytotoxicity). Ludzki Clq można kupić, np. z Quidel, San Diego, CA.
„Leczenie” odnosi się zarówno do traktowania terapeutycznego i profilaktycznego albo środków zapobiegawczych. Potrzebujący leczenia obejmują tych, u których już występuje choroba, jak również tych, u których chce się zapobiec chorobie.
„Schorzenie lub choroba” to jakikolwiek stan, w którym odnosi się korzyści z leczenia glikoproteiną. Obejmuje to przewlekłe i ostre choroby i schorzenia, włączając w to stany patologiczne, które predysponują ssaka do wystąpienia choroby będącej przedmiotem zainteresowania. W jednym z wykonań chorobą jest rak, choroba autoimmunologiczna, choroba zapalna, infekcja i inny stan, taki jak wole, gdzie pożądane jest usunięcie niepożądanej tkanki albo komórek. Korzystną chorobą lub schorzeniem, które ma być tu leczone jest rak albo choroba autoimmunologiczna.
Terminy „rak i rakowaty” dotyczą albo opisują stan fizjologiczny u ssaków, który typowo charakteryzuje się nieregulowanym wzrostem komórkowym. Przykłady raka obejmują między innymi raka, chłoniaka, raka z niedojrzałych komórek, mięśniaka oraz białaczkę. Bardziej konkretnie przykłady takich raków obejmują raka płaskokomórkowego, raka płuc z małych komórek, raka płuc nie z małych komórek, gruczolakoraka płuc, płaskokomórkowego raka płuc, raka otrzewnej, raka wątrobokomórkowego, raka żołądka, włączając w to raka żołądkowo-jelitowego, raka trzustki, glejaka, raka szyjki macicy, raka jajnika, raka wątroby, raka pęcherza, wątrobiaka, raka sutka, raka okrężnicy, raka odbytnicy, raka jelita grubego, raka śluzówki macicy lub macicy, raka gruczołu śliniankowego, raka nerki, raka prostaty, raka sromu, raka tarczycy, raka wątroby i różne typy raka głowy i szyi.
„Rak komórek B” obejmuje tu chłoniaka nieziarniczego (NHL, ang. non-Hodkin's lymphoma), włączając w to NHL grudkowego/o niskiej złośliwości; NHL z małych limfocytów (SL, ang. small lymphocytic), grudkowego chłoniaka nieziarniczego (NHL) o średniej złośliwości, rozlanego NHL o śred20
PL 213 948 B1 niej złośliwości, NHL immunoblastycznego o wysokiej złośliwości, NHL Iimfoblastycznego o wysokiej złośliwości, NHL z małych komórek o szczelinowatym jądrze o wysokiej złośliwości, masywną chorobę NHL, chłoniaka z komórek płaszcza, chłoniaka związanego z AIDS oraz makroglobulinemię Waldenstroma); białaczkę, włączając w to ostrą białaczkę Iimfoblastyczną (ALL, ang. acute lymphoblastic leukemia), przewlekłą białaczkę limfocytową (CLL, ang. chronic lymphocytic leukemia), białaczkę kosmatokomórkową, przewlekłą białaczkę szpikową i inne nowotwory hematologiczne. Takie nowotwory można leczyć przeciwciałami skierowanymi przeciw markerom powierzchniowym komórek B, takim jak CD20.
Rak „niezależny od hormonu” to taki, którego proliferacja nie jest zależna od obecności hormonu, który wiąże się z receptorem wyrażanym przez komórki raka. Takie raki nie podlegają klinicznej regresji po zastosowaniu strategii farmakologicznych albo chirurgicznych, które zmniejszają stężenie hormonu w pobliżu guza. Przykłady raków niezależnych od hormonu obejmują niezależnego od androgenu raka prostaty, niezależnego od estrogenu raka sutka, raka śluzówki macicy i raka jajnika. Takie raki mogą zaczynać się jako guzy zależne od hormonu i rozwijać się od stadium zależnego od hormonu do opornego na hormon po terapii przeciwhormonalnej.
„Choroba autoimmunologiczna” jest tu nienowotworową chorobą lub schorzeniem powstającą z i skierowaną przeciw własnym tkankom osobnika. Przykłady chorób i schorzeń autoimmunologicznych obejmują między innymi odpowiedzi zapalne, takie jak choroby zapalne skóry włączając w to łuszczycę i zapalenie skóry (np. atopowe zapalenie skóry); ogólnoustrojową twardzinę i stwardnienie; odpowiedzi związane z chorobą zapalną jelita grubego (takie jak choroba Crohna i wrzodziejące zapalenie okrężnicy); zespół ostrego wyczerpania oddechowego (włączając w to zespół ostrego wyczerpania oddechowego dorosłych; ARDS); zapalenie skóry; zapalenie opon mózgowych; zapalenie mózgu; zapalenie błony naczyniowej oka; zapalenie okrężnicy; zapalenie kłębuszków nerkowych; stany alergiczne, takie jak egzema i astma oraz inne stany związane z naciekaniem komórek T i przewlekłymi odpowiedziami zapalnymi; miażdżycę tętnic; niedobór adhezji leukocytów; reumatoidalne zapalenie stawów; toczeń ogólnoustrojowy (SLE, ang. systemie lupus erythematosus); cukrzycę (np. cukrzycę typu I lub cukrzycę insulinozależną); stwardnienie rozsiane; zespół Reynauda; autoimmunologiczne zapalenie tarczycy; alergiczne zapalenie mózgu i rdzenia; zespół Sjorgena; cukrzycę młodzieńczą i choroby autoimmunologiczne związane z ostrą albo przewlekłą nadwrażliwością z udziałem cytokin i limfocytów T typowo występującą w gruźlicy, sarkoidozie, zapaleniu wielomięśniowym, ziarniniakowatości i zapaleniu naczyń; anemię złośliwą (choroba Addisona)); choroby związane z diapedezą leukocytów; choroby zapalne centralnego układu nerwowego (CNS, ang. central nervous system); zespół uszkodzenia wielonarządowego; anemię hemolityczną (włączając w to między innymi krioglobinemię lub anemię Coombs dodatnią); poważne osłabienie mięśni; choroby z udziałem kompleksu antygen-przeciwciało; chorobę przeciw kłębuszkowej błonie podstawnej; zespół antyfosfolipidowy; alergiczne zapalenie nerwu; chorobę Gravesa; zespół miasteniczny Lamberta-Eatona; pęcherze pęcherzycopodobne; pęcherzycę; autoimmunizacyjne poliendokrynopatie; chorobę Reitera; zespół sztywnienia; chorobę Behceta; wielkokomórkowe zapalenie tętnic; zapalenie nerek związane z kompleksem immunologicznym; nefropatię IgA; polineuropatie IgM; immunologiczną plamicę małopłytkową (ITP, ang. immune thrombocytopenic purpura) lub immunologiczną małopłytkowość, etc.
„Choroba zapalna” dotyczy stanów patologicznych będących wynikiem zapalenia, typowo powodowanego przez chemotaksję komórek obojętnochłonnych. Przykłady takich chorób obejmują choroby zapalne skóry, włączając w to włączając w to łuszczycę i atopowe zapalenie skóry; uogólnioną twardzinę i stwardnienie; odpowiedzi związane z chorobą zapalną jelita grubego (takie jak choroba Crohna i wrzodziejące zapalenie okrężnicy); choroby związane z reperfuzją niedokrwienną obejmujące operacyjne reperfuzyjne uszkodzenie tkanek, stany niedokrwienne serca, takie jak zawał mięśnia sercowego, zatrzymanie serca, reperfuzja po operacji serca i zwężenie po przezświatłowej wieńcowej angioplastyce bez naruszania skóry, udar i tętniak tętnicy brzusznej; obrzęk mózgowy po udarze; uraz czaszki; szok oligemiczny; zamartwicę; zespół ostrego wyczerpania oddechowego dorosłych; ostre uszkodzenie płuc; chorobę Behceta; zapalenie skórno-mięśniowe; zapalenie opon mózgowych; zapalenie mózgu; zapalenie błony naczyniowej oka; gościec zwyradniający; zapalenie nerek w toczniu rumieniowatym układowym; choroby autoimmunologiczne, takie jak reumatoidalne zapalenie stawów, zespół Sjorgena, zapalenie naczyń; choroby związane z diapedezą leukocytów; choroby zapalne centralnego układu nerwowego (CNS, ang. central nervous system); zespół uszkodzenia wielonarządowego po posoczniczy lub urazie; zapalenie wątroby u alkoholików, bakteryjne zapalenie płuc; choroby z udziałem kompleksu antygen-przeciwciało, włączając w to zapalenie kłębuszków nerkowych; poPL 213 948 B1 socznicę; sarkoidozę; immunopatologiczne odpowiedzi na transplantację tkanki/narządu; zapalenia płuc, włączając w to zapalenie opłucnej, zapalenie pęcherzyków płucnych, zapalenie naczyń, zapalenie płuc, przewlekłe zapalenie oskrzeli, rozstrzenie oskrzelowe, rozlane uogólnione zapalenie oskrzeklików, zapalenie płuc związane z nadwrażliwością, samoistne zwóknienie płuc (IPF od ang. idiopathic pulmonary fibrosis) i mukowiscydozę, itd. Korzystne wskazania obejmują ostre uszkodzenie płuc, zespół ostrego wyczerpania oddechowego dorosłych, reperfuzją niedokrwienną (włączając w to operacyjne reperfuzyjne uszkodzenie tkanek, niedokrwienie mięśnia sercowego i ostry zawał mięśnia sercowego), szok oligemiczny, astmę, bakteryjne zapalenie płuc i chorobą zapalną jelit taką jak wrzodziejące zapalenie okrężnicy. Choroby autoimmunologiczne mogą zachodzić na choroby zapalne a może być tak, że choroby zapalne mogą zachodzić na autoimmunologiczne.
„Blokowanie odpowiedzi immunologicznej” na obcy antygen ma oznaczać zmniejszenie albo zapobieganie co najmniej jednej odpowiedzi z udziałem odporności będącej wynikiem wystawienia na antygen, tj. poprzez zapobieganie albo zmniejszenie wytwarzania przeciwciał skierowanych przeciw antygenowi u ssaka. Alternatywnie albo dodatkowo, można poddawać supresji idiotyp, „pacyfikować” usuwanie komórek opłaszczonych przez przeciwciało i/lub wpływać na prezentację alloantygenu poprzez pozbycie się komórek prezentujących antygen.
„Obcy antygen” ma oznaczać cząsteczkę albo cząsteczki, która jest/są nie-endogenna(e) albo natywna(e) dla ssaka, który jest wystawiony na ich działanie. Obcy antygen może wzbudzić odpowiedź immunologiczną, np. odpowiedź humoralną i z udziałem komórek T u ssaka. Generalnie, obcy antygen będzie prowokować wytwarzanie przeciwciał przeciw niemu. Przykłady branych tu pod uwagę obcych przeciwciał obejmują immunogenne czynniki terapeutyczne, np. białka, takie jak przeciwciała, a w szczególności przeciwciała zawierające nie-ludzkie reszty aminokwasowe (np. przeciwciała gryzoni, chimerowe/humanizowane i prymatyzowane); toksyny (ewentualnie skoniugowane z cząsteczką docelową, taką jak przeciwciało, gdzie cząsteczka docelowa może być również immunogenna), wektory wirusowe do terapii genowej, takie jak retrowirusy i adenowirusy; przeszczepy, czynniki infekcyjne (np. bakterie i wirusy); alloantygeny (tj. antygeny, które występują u niektórych, ale nie innych przedstawicieli tego samego gatunku), takie jak różnice w typach krwi, antygeny ludzkich limfocytów (HLA, ang. human lymphocyte antigens), antygeny płytek krwi, antygeny wyrażane na przeszczepianych narządach, składniki krwi, czynniki ciążowe (Rh) i hemofilityczne (np. czynnik VIII i czynnik IX).
„Antygen związany z nowotworem” dla obecnych celów to antygen charakteryzujący się wysoką ekspresją na komórkach nowotworowych w porównaniu z komórkami prawidłowymi. Konkretne przykłady obejmują receptory ErbB, markery powierzchniowe komórek B, gangliozyd GD2, GD3 i GM2 (Ragupathi G., Cancer Immunol. Immunother. 43: 152 (1996)); CD52 (Ginaldi i wsp., Leukemia Research 22: 185 (1998)); antygen komórek macierzystych prostaty (PSCA, od ang. prostate stem cell antigen) oraz MAGE (Kirkin i wsp., APMIS 106: 665 (1998)).
„Czynnik angiogenny”, tutaj, to cząsteczka, która stymuluje angiogenezę. Przykłady obejmują czynnik wzrostu śródbłonka naczyń (VEGF, od ang. vascular endothelial growth factor), zasadowy lub kwaśny czynnik wzrostu fibroblastów (FGF, od ang. basic or acidic fibroblast growth factor) oraz pochodzący z płytek krwi czynnik wzrostu komórek śródbłonka Hft (PD-ECGF, od ang. platelet-derived endothelial cell growth factor).
„Receptor ErbB” to receptorowa kinaza tyrozynowa, która należy do rodziny receptora ErbB i obejmuje receptory EGFR, ErbB2, ErbB3 i ErbB4 oraz innych członków tej rodziny, którzy będą zidentyfikowani w przyszłości. Receptor ErbB będzie generalnie zawierać domenę zewnątrzkomórkową, która może wiązać się z ligandem ErbB; lipofilową domenę transbłonową; konserwowaną wewnątrzkomórkową domenę kinazy tyrozynowej oraz karboksykońcową domenę przekazującą sygnały niosącą kilka m reszt tyrozynowych, które mogą być fosforylowane.
Terminy „ErbB1”, „receptor nabłonkowego czynnika wzrostowego” i „EGFR” są tu stosowane wymiennie i odnoszą się do natywnej sekwencji EGFR ujawnionej na przykład w Carpenter i wsp., Ann. Rev. Biochem. 56: 881-914 (1987), włączając w to występujące naturalnie ich zmutowane postaci (np. mutanta delecyjnego EGFR, jak w Humphrey i wsp., PNAS (USA) 87: 4207-4211 (1990)). erbBl odnosi się do genu kodującego produkt białkowy EGFR.
Wyrażenia „ErbB2” i „HER2” są tu stosowane wymiennie i odnoszą się do natywnej sekwencji ludzkiego białka HER2 opisanej na przykład w Semba i wsp., PNAS (USA) 82: 6497-6501 (1985) oraz
Yamamoto i wsp., Nature 319: 230-234 (1986) (numer dostępu do Genebank X03363). Przykłady przeciwciał, które wiążą się z HER2 obejmują MAbs 4D5, 7C4, 7F3 i 7C2 jak również ich humanizowane warianty, włączając w to huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4 D5-5,
PL 213 948 B1 huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 i huMAb4D5-8 jak opisano w tabeli 3 patentu USA nr 5 821 337, włączonego tu dokładnie jako odniesienie; oraz humanizowane zmutowane 2C4 nr 560, 561, 562, 568, 569, 570, 571, 574 lub 56869 jak opisano w W001/00245. 7C2 i 7F3 oraz ich humanizowane warianty są opisane w W098/17797. Korzystnymi przeciwciałami są te zawierające ciężkie i lekkie regiony zmienne huMAb4D5-8 albo mutant 574 humanizowanych 2C4.
„Trastuzumab” (HERCEPTIN®) to humanizowane przeciwciało, pochodzące ze zrekombinowanego DNA, które wiąże się z wysokim powinowactwem w teście opartym na komórkach (Kd = 5 nM) z domeną zewnątrzkomórkową HER2. Przeciwciałem jest przeciwciało IgG1, które zawiera regiony zmienne łańcucha ciężkiego i lekkiego wariantu huMAb4D5-8, jak opisano w tabeli 3 patentu USA nr 5 821 337. Przeciwciało jest wytwarzane przez komórki CHO-DP12.
„ErbB3” i „HER3” odnoszą się do polipeptydu receptorowego, jak ujawniono na przykład w patentach USA nr 5 183 884 i 5 480 968, jak również Kraus i wsp., PNAS (USA) 86: 9193-9197 (1989).
Terminy „ErbB4” i „HER4” odnoszą się tu do receptorowego polipeptydu, jak ujawniony na przykład EP zgłoszeniu patentowym nr 599 274; Plowman i wsp., Proc. Natl Acad. Sci USA, 90: 1746-1750 (1993) oraz Plowman i wsp., Nature, 366: 473-475 (1993), włączając w to jego izoformy, np. ujawnione w WO 99/19488, opublikowanym 22 kwietnia, 1999.
„Marker powierzchniowy komórek B” oznacza tu antygen wyrażany na powierzchni komórek B, który może stanowić cel dla przeciwciała, które się do niego wiąże. Przykładowe markery powierzchniowe komórek B obejmują markery powierzchniowe leukocytów CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD40, CD53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw7 8, CD7 9a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 i CD86. Marker powierzchniowy komórek B będący przedmiotem szczególnego zainteresowania jest preferencyjnie wyrażany na komórkach B w porównaniu do innych tkanek - nie komórek B ssaków i może być wyrażany zarówno na prekursorowych komórkach B, jak i dojrzałych komórkach B. W jednym z wykonań, markerem jest taki, jak CD20 lub CD19, który znajduje się na komórkach B w czasie różnicowania linii od stadium komórki macierzystej aż do punktu tuż przed ostatecznym różnicowaniem w komórki plazmatyczne. Korzystnymi markerami powierzchniowymi komórek B są tu CD19, CD20, CD22 i CD40.
Antygen „CD20” to nieglikozylowana fosfoproteina o wielkości około 35 kDa znajdująca się na powierzchni ponad 90% komórek B z krwi obwodowej albo narządów Iimfatycznych. CD20 jest wyrażany w czasie wczesnego rozwoju komórek pre-B i pozostaje aż do różnicowania się komórek plazmatycznych. CD20 jest obecny zarówno na prawidłowych komórkach B, jak i nowotworowych komórkach B. Inne nazwy dla CD20 w literaturze obejmują „antygen ograniczony do limfocytów B” i „Bp35”. Antygen CD20 jest opisany na przykład w Clark i wsp. PNAS (USA) 82: 1766 (1985).
Przykłady przeciwciał, które wiążą się antygenem CD20 obejmują: „C2B8” które jest teraz nazywane „Rituximab” („RITUXAN®)”) (patent USA nr 5 736 137, włączony tu dokładnie jako odniesienie); wyznakowane itrem[90] mysie przeciwciało 2B8 oznaczone „Y2B8” (patent USA nr 5 736 137,
131 włączony tu dokładnie jako odniesienie); mysie IgG2a „B1” ewentualnie wyznakowane 131I z wytwo131 ™ rzeniem przeciwciała „131I-B1” (BEXXART™) (patent USA nr 5 595 721, włączony tu dokładnie jako odniesienie); mysie przeciwciało monoklonalne „1F5” (Press i wsp. Blood 69 (2): 584-591 (1987)); przeciwciało „chimerowe 2H7” (patent USA nr 5 677 180, włączony tu dokładnie jako odniesienie) oraz monoklonalne przeciwciała L27, G28-2, 93-1 B3, B-C1 lub NU-B2 dostępne z International Leukocyte Typing Workshop (Valentine i wsp., W: Leukocyte Typing III (McMichael, wyd., str. 440, Oxford University Press (1987)).
®
Terminy „Rituximab” lub „RITUXAN®” oznaczają tu poddane zabiegom inżynierii genetycznej chimerowe mysie/ludzkie przeciwciało monoklonalne skierowane przeciw antygenowi CD20 i oznaczone „C2B8” w patencie USA nr 5 736 137, włączonym tu dokładnie jako odniesienie. Przeciwciałem jest immunoglobulina IgG1 kappa zawierająca mysie sekwencje regionu zmiennego łańcucha lekkiego i ciężkiego oraz ludzkie sekwencje regionu stałego. Rituximab ma powinowactwo wiązania dla antygenu CD20 wynoszące około 8,0 nM. Rituximab jest wytwarzane przez komórki CHO DG44.
Termin „ssak” obejmuje dowolnego zwierzęta zaklasyfikowane jako ssak, włączając w to ludzi, krowy, konie, psy i koty. W korzystnym wykonaniu wynalazku ssakiem jest człowiek.
Stosowane tu określenie „czynnik hamujący wzrost” dotyczy związku albo kompozycji, która hamuje wzrost komórki (np. komórki nowotworowej) in vitro bądź in vivo. A zatem, czynnikiem hamującym wzrost może być taki, który znacząco zmniejsza udział procentowy komórek w fazie S. Przykłady czynników hamujących wzrost obejmują czynniki, które blokują postęp cyklu komórkowego (w punkcje innym niż faza S), takie jak czynniki, które indukują zatrzymanie fazy G1 i M. Klasyczne
PL 213 948 B1 czynniki blokujące fazę M obejmują czynniki winka (winkrystynę i winblastynę), taksany oraz inhibitoty topo II, takie jak doksorubicyna, epirubicyna, daunorubicyna, etopozyd oraz bleomycyna. Te czynniki, które powodują zatrzymanie w fazie Gl wpływają również na zatrzymanie w fazie S, na przykład, czynniki alkilujące DNA, takie jak tamoksifen, prednizon, dakarbazyna, mechloretamina, cisplatyna, metotreksan, 5-fluorouracyl oraz ara-C. Dalsze informacje można znaleźć w The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn i Israel, wyd., Rozdział I, zatytułowany „Cell cycle regulation, oncogenes and antineoplastic drugs” autorstwa Murakami i wsp. (WB Saunders: Philadelphia, 1995), a w szczególności str. 13.
Przykładami przeciwciał „hamujących wzrost” są takie, które wiążą się z antygenem i hamują wzrost komórek nowotworowych z wyrażających ten antygen. Korzystne hamujące wzrost przeciwciała anty-HER2 hamują wzrost komórek raka sutka SK-BR-3 w hodowli komórkowej więcej niż 20%, a korzystnie więcej niż 50% (np. od około 50% do około 100%) przy stężeniu przeciwciał od około 0,5 do 30 μg/ml, gdzie hamowanie wzrostu określa się sześć dni po wystawieniu komórek SK-BR-3 na przeciwciało (patrz patent USA nr 5 677 171 wydany 14 października 1997). Korzystnym hamującym wzrost przeciwciałem jest huMAb4D5-8.
Przeciwciało, które „indukuje śmierć komórki” jest takim, które powoduje, że żywa komórka staje się nieżywą. Komórką jest generalnie taka, która wyraża antygen, z którym wiąże się przeciwciało. Śmierć komórek można określać in vitro w nieobecności dopełniacza i efektorowej komórki immunologicznej w celu rozróżnienia śmierci komórki indukowanej przez zależną od przeciwciała cytotoksyczność z udziałem komórek (ADCC) i cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC). A zatem, test na śmierć komórek można przeprowadzać przy zastosowaniu surowicy inaktywowanej termicznie (tj. w nieobecności dopełniacza) i w nieobecności immunologicznych komórek efektorowych. W celu określenia, czy przeciwciało ma zdolność do indukowania śmierci komórki, można testować utratę integralności błony, którą ocenia się poprzez pobieranie jodku propidynowego (PI), błękitu trypanowego (patrz Moore i wsp., Cytotechnology 17: 1-11 (1995)) oraz 7AAD w stosunku do komórek nietraktowanych. Korzystnymi przeciwciałami indukującymi śmierć komórki są takie, które indukują pobieranie PI w teście PI w komórkach BT474.
Przeciwciało, które „indukuje apoptozę” to takie, które indukuje programowaną śmierć komórki, co określa się poprzez wiązanie aneksyny V, fragmentację DNA, kurczenie się komórek, rozszerzanie się endoplazmatycznego retikulum, fragmentację komórki i/lub tworzenie się pęcherzyków błonowych (zwanych ciałkami apoptotycznymi). Komórka wyraża antygen, do którego wiąże się przeciwciało. Korzystne jest jeżeli komórką jest komórka nowotworowa. Dostępnych jest wiele metod dla oceniania zdarzeń komórkowych związanych z apoptozą. Przykładowo, można mierzyć przemieszczanie się fosfatydyloseryny (PS) poprzez wiązanie aneksyny; fragmentację DNA można oceniać poprzez obserwację drabinki DNA, jak ujawniono tu w przykładzie; a kondensację jądrowo/chromatynową łącznie z fragmentacją DNA można oceniać poprzez wzrost liczby komórek hipodiploidalnych. Korzystne jest, jeżeli cząsteczką, która indukuje apoptozę jest taka, która prowadzi do około 2- do 50-krotnej, korzystniej 5- do 50-krotnej, a najkorzystniej, około 10- do 50-krotnej indukcji wiązania aneksyny w stosunku do komórek nie traktowanych w teście wiązania aneksyny z zastosowaniem komórek BT474.
Termin „ilość skuteczna terapeutycznie” odnosi się ilości leku skutecznej do leczenia choroby albo schorzenia u ssaka. W przypadku nowotworu, skuteczna terapeutycznie ilość leku może zmniejszyć liczbę komórek nowotworowych; zmniejszyć rozmiar guza; zahamować (tj. zwolnić do pewnego stopnia, a korzystnie zatrzymać) naciekanie komórek nowotworowych do narządów obwodowych; zahamować (tj. zwolnić do pewnego stopnia, a korzystnie zatrzymać) przerzuty raka; zahamować do pewnego stopnia wzrost guza i/lub w pewnym stopniu złagodzić jeden albo więcej objawów związanych z nowotworem. W zakresie, w którym lek może zapobiegać wzrostowi i zabijać istniejące komórki nowotworowe, może być on cytostatyczny i/lub cytotoksyczny. Dla terapii nowotworów skuteczność można mierzyć na przykład poprzez badanie czasu rozwoju choroby (TTP, ang. time to disease progression) i/lub ustalanie szybkości odpowiedzi (RR, ang. response rates).
„Rak wyrażający antygen” jest takim, który zawiera komórki, które mają dostateczne poziomy antygenu na swojej powierzchni komórkowej, aby przeciwciało anty-antygen mogło związać się z nim i mieć efekt terapeutyczny względem nowotworu.
Rak „charakteryzujący się nadmierną aktywacją” receptora jest takim, w którym nadmiar aktywacji receptora w komórkach nowotworowych znacząco przewyższa poziom aktywacji tego receptora w komórkach nienowotworowych z tego samego typu tkanki. Taka nadmierna aktywacja może być spowodowana przez nadekspresję receptora i/lub większe niż normalnie poziomy ligandu dostępnego
PL 213 948 B1 dla aktywacji receptora w komórkach nowotworowych. Taka nadmierna aktywacja może powodować i/lub być spowodowana przez stan rakowy komórki nowotworowej. W niektórych wykonaniach, nowotwór będzie poddany testowi diagnostycznemu lub prognostycznemu, w celu ustalenia, czy następuje amplifikacja i/lub nadekspresja receptora, która prowadzi do takiej nadmiernej aktywacji receptora. Alternatywnie lub dodatkowo, nowotwór może być poddany testowi diagnostycznemu lub prognostycznemu, w celu ustalenia, czy następuje w nowotworze amplifikacja i/lub nadekspresja ligandu, której towarzyszy nadmierna aktywacja receptora. W podzestawie takich nowotworów, nadmierna aktywacja receptora może być wynikiem autokrynnego szlaku stymulacji.
Rak, który „naprodukuje” receptor to taki, który ma znacząco wyższy poziom receptora, takiego jak HER2, na powierzchni swoich komórek w porównaniu w komórkami nierakowymi z tego samego typu tkanki. Taka nadprodukcja może być spowodowana przez amplifikację genu albo poprzez wzrost transkrypcji albo translacji. Nadprodukcja receptora może być oznaczona w teście diagnostycznym albo prognostycznym poprzez określenie wzrostu poziomu białka receptora obecnego na powierzchni komórki np. poprzez zastosowanie testu immunohistochemicznego; IHC). Alternatywnie albo dodatkowo, można zmierzyć poziomy kwasów nukleinowych kodujących receptor w komórce, np. poprzez fluorescencyjną hybrydyzację in situ (FISH; patrz WO 98/45479 opublikowany październik, 1998), analizę Southern albo techniki reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR), takie jak ilościowy PCR w czasie rzeczywistym (RT-PCR). Można również badać nadprodukcję receptora poprzez mierzenie wyrzucanych antygenów (np. domeny zewnątrzkomórkowej) w płynach biologicznych, takich jak surowica (patrz np. patent USA nr 4 933 294 wydany 12 czerwca, 1990; WO 91/05264 opublikowany 18 kwietnia, 1991; patent USA nr 5 401 638 wydany 28 marca, 1995 oraz Sias i wsp., J. Immunol. Methods 132: 73-80 (1990)). Poza powyższymi testami dostępne są dla specjalistów różne testy in vivo. Przykładowo, można eksponować komórki wewnątrz ciała pacjenta na przeciwciało, które jest fakultatywnie wyznakowane wykrywalnym znacznikiem np. radioaktywnym izotopem i wiązanie przeciwciała z komórkami u pacjenta można zmierzyć na przykład poprzez zewnętrzne skanowanie radioaktywności albo analizowanie biopsji pobranej od pacjenta wystawionego uprzednio na działanie przeciwciała.
Rak, który „naprodukuje” ligand to taki, który ma znacząco wyższy poziom ligandu, w porównaniu w komórkami nierakowymi z tego samego typu tkanki. Taka nadprodukcja może być spowodowana przez amplifikację genu albo poprzez wzrost transkrypcji albo translacji. Nadprodukcja receptora może być oznaczona diagnostycznie poprzez określenie poziomów ligandu (albo kodującego go kwasu nukleinowego) u pacjenta, np. w biopsji guza nowotworowego albo poprzez zastosowanie różnych testów diagnostycznych, takich jak IHC, FISH, analiza Southern, PCR albo testy in vivo jak opisano powyżej.
Stosowany tu termin „czynnik cytotoksyczny” dotyczy substancji, która hamuje albo przeciwdziała funkcji komórek i/lub powoduje zniszczenie komórek. Termin ma obejmować izotopy radioaktywne (np. At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 oraz radioaktywne izotopy Lu), czynniki chemioterapeutyczne oraz toksyny, takie jak niskocząsteczkowe toksyny albo enzymatycznie aktywne toksyny pochodzenia bakteryjnego, roślinnego albo zwierzęcego, włączając w to ich fragmenty i/lub warianty.
„Czynnik chemioterapeutyczny” to związek chemiczny przydatny w leczeniu raka. Przykłady czynników chemioterapeutycznych obejmują czynniki alkilujące, takie jak tiotepa i cyklosfosfamid ™ (CYTOXAN™); sulfoniany alkilowe, takie jak busulfan, improsulfan i piposulfan; azyrydyny, takie jak benzodopa, karbokuon, meturedopa i uredopa; etylenoiminy i metylamelaminy, włączając w to altretaminę, trietyIomelaminy, trietylenofosforamid, trietylenotiofosforoamid i trimetylolomelaminę; iperyty azotowe, takie jak chlorambucyl, chloronafazyna, chorofosfamid, estramustyna, ifosfamid, mechloroetamina, chlorowodowek tlenku mechloroetaminy, melfalan, nowembichina, fenesteryna, prednimustyna, trofosfamid, iperyt uraculowy; nitrosury, takie jak karmustyna, chlorozotocyna, fotemustyna, lomustyna, nimustyna, ranimustyna; antybiotyki, takie jak aklacynomyzyny, aktynomycyna, autramycyna, azaseryna, bleomycyny, kaktynomycyna, kalicheamycyna, karabicyna, karminomycyna, karzynofilina, chromomycyny, daktynomycyna, daunorubicyna, detorubicyna, 6-diazo-5-okso-L-norleucyna, doksorubicyna, epirubicyna, ezorubicyna, idarubicyna, marcelomycyna, mitomycyny, kwas mykofenolowy, nogalamycyna, oligomycyny, peplomycyna, potfiromycyna, puromycyna, kelamycyna, rodorubicyna, streptonigryn, streptozocyna, tubercydyna, ubenimeks, zynostatyna, zorubicyna; anty- metabolity, takie jak metotreksan i 5-fluorouracyl (5-FU); analogi kwasu foliowego, takie jak denopteryna, metotreksan, pteropteryna, trimetreksan; analogi puryn, takie jak fludarabina, 6-merkaptopuryna, tiamipryna, tioguanina; analogi pirymidyn, takie jak ancytabina, azacytydyna, 6-azaurydyna, karmofur, cytaraPL 213 948 B1 bina, dideoksyurydyna, doksyflurydyna, enocytabina, floksyurydyna, 5-FU; androgeny takie jak kalusteron, propionian dromostanolonu, epitiostanol, mepitiostan, testolakton; czynniki antyadrenalgiczne, takie jak aminoglutetimid, mitotan, trilostan; dopełniacz dla kwasu foliowego, taki jak kwas frolinowy; aceglaton; glikozyd aldofosfamidu; kwas aminolewulinowy; amsakryna; bestrabucyl; bisantren; edatraksan; defofamina; demekolcyna; diazykuon; elfornityna; octan eliptynowy; etoglucyd; azotan galu; hydrokslomocznik; lentinan; lonidamina; mitoguazon; raitoxantron; mopidamol; nitracrina; pentostatin; fenamet; pirarubicyna; kwas podofilinowy acid; 2-etylohydrazyd; prokarbazyna; PSK; razoksan; sizofiran; spirogermanium; kwas tenuazonowy; triazikon; 2,2',2'-trichlorotrietyloamina; uretan; windesyna;
dakarbazyna; mannomustyna; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacytozyna; arabinozyd („Ara-C”);
® cyklofosfamid; tiotepa; taksany, np. paklitaksel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, ®
NJ) oraz doksetaksel (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); chlorambucyl; gemcytabina; 6-tioguanina; merkaptopuryna; metotreksan; analogi platyny, takie jak cysplatyna i karboplatyna; winblastyna; platyna; etopozyd (VP-16); ifosfamid; mitomycyna C; mitoksantron; winkrystyna; winorelbina; nawelbina; nowantron; tenipozyd; daunomycyna; aminopteryna; kseloda; ibandronan; CPT-11; inhibitor topoizomerazy RFS 2000; difluorometyloornityna (DMFO); kwas retynowy; esperamycyny; kapecytabina oraz farmaceutycznie dopuszczalne sole, kwasy albo pochodne dowolnej z powyższych. Definicja ta obejmuje również czynniki przeciwhormonalne, które działają regulując albo hamując działanie hormonów na nowotwory, takie jak anty-estrogeny włączając w to na przykład tamoksifen, raloksifen, 4(5)-imidazole hamujące aromatazę, trioksifen, keoksifen, LY117018, onapriston i toremifen (Fareston) oraz antyandrogeny, takie jak flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid i goserelin oraz farmaceutycznie dopuszczalne sole, kwasy albo pochodne dowolnej z powyższych.
Stosowany tu termin „lek kierowany przez EGFR” dotyczy czynnika terapeutycznego, który wiąże się z EGFR i, ewentualnie hamuje aktywację EGFR. Przykłady takich czynników obejmują przeciwciała i małe cząsteczki, które wiążą się z EGFR. Przykłady przeciwciał, które wiążą się z EGFR obejmują MAb 579 (ATCC CRL HB 8506), MAb 455 (ATCC CRL HB8507), MAb 225 (ATCC CRL 8508), MAb 528 (ATCC CRL 8509) (patrz patent USA nr 4 943 533, Mendelsohn i wsp.) oraz ich warianty, takie jak chimery 225 (C225) i ludzkie 225 o przywróconym kształcie (H225) (patrz, WO 96/40210, Imclone Systems Inc.); przeciwciał, które wiążą się ze zmutowanym EGFR typu II (US patent nr 5 212 290); humanizowane i chimerowe przeciwciała, które wiążą się z EGFR jak opisano w patencie USA nr 5891996 oraz ludzkie przeciwciała, które wiążą się z EGFR (patrz WO 98/50433, Abgenix). Przeciwciało anty-EGFR może być połączone z czynnikiem cytotoksycznym tworząc immunokoniugat (patrz np. EP659, 439A2, Merck Patent GmbH). Przykłady takich małych cząsteczek, które wiążą się z EGFR obejmują ZD1839 (IRESSA®) (Astra Zeneca), CP-358774 lub OSI-774 (TARCEVA™) (Genentech) i AG1478.
Termin „cytokina” to ogólny termin dla białek uwalnianych przez jedną populację komórek, które działają na inne komórki jako międzykomórkowe przekaźniki. Przykładami takich cytokin są limfokiny, monokiny i tradycyjne hormony peptydowe. Wśród tych cytokin są: hormon wzrostu, taki jak ludzki hormon wzrostu, pochodna N-metionylowa ludzkiego hormonu wzrostu i bydlęcy hormon wzrostu; hormon przytarczycy; tyroksyna; insulina; proinsulina; relaksyna; prorelaksyna; hormony glikoproteinowe takie jak hormon folikulotropowy (FSH), tyrotropina (TSH), hormon luteinizujący (LH); wątrobowy czynnik wzrostowy; fibroblastowy czynnik wzrostowy; prolaktyna; laktogen łożyskowy; czynnik martwicy nowotworów a i β; substancja hamująca mullerian; mysi peptyd związany z gonadotropiną; inhibina; aktywina; naczyniowy śródbłonkowy czynnik wzrostowy; integryna; trombopoetyna (TPO); nerwowe czynniki wzrostowe takie jak NGF-α; czynnik wzrostowy płytek krwi; transformujące czynniki wzrostowe (TGF), takie jak TGF-α i TGF-β; czynnik wzrostowy insulino-podobny I i II; erytropoetyna (EPO); czynniki osteoinduktywne; interferony, takie jak interferon-α, -β i -γ; czynniki stymulujące kolonie (CSF), takie jak CSF makrofagów (M-CSF); CSF granulocytów- makrofagów (GM-CSF); i CSF granulocytów (G-CSF); interleukiny (IL), takie jak IL-1, IL-1a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; czynnik martwicy nowotworów, taki jak TNF-α lub TNF-β oraz inne czynniki polipeptydowe, włączając w to ligand LIF i kit (KL). Stosowany tu termin cytokina obejmuje białka ze źródeł naturalnych albo z hodowli zrekombinowanych komórek albo biologicznie aktywne ekwiwalenty cytokin o sekwencji natywnej.
Termin „prolek” stosowany w tym zgłoszeniu dotyczy formy prekursorowej albo pochodnej aktywnej farmaceutycznie substancji, która jest mniej toksyczna wobec komórek nowotworowych w porównaniu z lekiem rodzicielskim i podlega aktywacji enzymatycznej albo przekształceniu w bardziej aktywną postać rodzicielską. Patrz, np. Wilman, „Prodrugs in Cancer Chemotherapy” Biochemical
PL 213 948 B1
Society Transactions, 14, str. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) oraz Stella i wsp., „Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery” Directed Drug Delivery, Borchardt i wsp., (wyd.), str. 247, 267, Humana Press (1985). Proleki według tego wynalazku obejmują między innymi proleki zawierające tiofosforany, proleki zawierające siarczan, proleki zawierające peptyd, proleki ze zmodyfikowanymi D-aminokwasami, proleki glikozylowane, proleki zawierające laktam, proleki zawierające fenoksyacetamid ewentualnie podstawione albo proleki zawierające fenyloacetamid, ewentualnie podstawione, 5-fluorocytozynę i inne proleki 5-fluorourydynowe, które można przekształcić w bardziej aktywne wolne leki cytotoksyczne. Przykłady leków cytotoksycznych, które można przekształcić w postać proleku do zastosowania w tym wynalazku obejmują miedzy innymi opisane powyżej czynniki chemioterapeutyczne.
„Liposom” to mały pęcherzyk składający się z różnych typów lipidów, fosfolipidów i/lub związków powierzchniowo czynnych, które są przydatne do dostarczania leku (takiego jak ujawniona tu kompozycja glikoproteinowa i, ewentualnie, czynnik chemioterapeutyczny) do ssaka. Składniki liposomu są zwykle zorganizowane w postaci podwójnej warstwy, podobnie do organizacji lipidów w błonach biologicznych.
Termin „dołączona ulotka” jest tu użyty w odniesieniu do instrukcji zwykle dołączanych do handlowych opakowań produktów terapeutycznych, która zawiera informacje o wskazaniach, zastosowaniu, dawkowaniu, podawaniu, przeciwwskazaniach i/lub ostrzeżeniach dotyczących zastosowania takiego produktu terapeutycznego „Wyizolowana” cząsteczka kwasu nukleinowego to cząsteczka kwasu nukleinowego, która jest zidentyfikowana i oddzielona od co najmniej jednej cząsteczki kwasu nukleinowego stanowiącej zanieczyszczenie, z którą występuje normalnie razem w naturalnym źródle kwasu nukleinowego. Wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego jest odmienna od postaci albo układu, w którym występuje w naturze. Wyizolowane cząsteczki kwasu nukleinowego można zatem odróżnić od cząsteczki kwasu nukleinowego występującej w naturalnych komórkach. Jednakże, wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje cząsteczkę kwasu nukleinowego zawartą w komórkach, które wyrażają przeciwciało, gdzie na przykład cząsteczka kwasu nukleinowego jest w pozycji chromozomowej innej niż w komórkach naturalnych.
Kwas nukleinowy jest „połączony funkcjonalnie”, kiedy jest umieszczony w funkcjonalnym związku z inną sekwencją kwasu nukleinowego. Przykładowo, DNA dla presekwencji albo lidera do sekrecji jest połączony funkcjonalnie z DNA dla polipeptydu, jeżeli jest wyrażany jako prebiałko, które uczestniczy w sekrecji polipeptydu; promotor albo wzmacniacz jest połączony funkcjonalnie z sekwencją kodującą, jeżeli wpływa na transkrypcję sekwencji, albo miejsce wiązania rybosomu jest połączone funkcjonalnie z sekwencją kodującą, jeżeli jest umieszczone tak, aby ułatwić translację. Generalnie, „połączone funkcjonalnie” oznacza, że sekwencje, które podlegają łączeniu są ciągłe, a w przypadku lidera do sekrecji, ciągłe i w fazie odczytu. Jednakże wzmacniacze nie muszą być ciągle. Łączenia dokonuje się poprzez ligację w dogodnych miejscach restrykcyjnych. Jeżeli takie miejsca nie istnieją, używa się syntetycznych oligonukleotydowych adaptorów zgodnie z konwencjonalną praktyką.
„Wyizolowana” cząsteczka kwasu nukleinowego to cząsteczka kwasu nukleinowego, która jest zidentyfikowana i oddzielona od co najmniej jednej cząsteczki kwasu nukleinowego stanowiącej zanieczyszczenie, z którą występuje normalnie razem w naturalnym źródle kwasu nukleinowego. Wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego jest odmienna od postaci albo układu, w którym występuje w naturze. Wyizolowane cząsteczki kwasu nukleinowego można zatem odróżnić od cząsteczki kwasu nukleinowego występującej w naturalnych komórkach. Jednakże, wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje cząsteczkę kwasu nukleinowego zawartą w komórkach, które wyrażają przeciwciało, gdzie na przykład cząsteczka kwasu nukleinowego jest w pozycji chromosomowej innej niż w komórkach naturalnych.
„Sekwencje kontrolujące” ekspresję dotyczą sekwencji DNA niezbędnych do ekspresji połączonych z nimi funkcjonalnie sekwencji kodujących w danym organizmie gospodarza. Sekwencje kontrolujące, które są odpowiednie dla organizmów prokariotycznych, obejmują promotor, ewentualnie sekwencję operatorową oraz miejsce wiązania rybosomu. Wiadomo, że komórki eukariotyczne wykorzystują promotory, sygnały poliadenylacji i wzmacniacze.
Kwas nukleinowy jest „połączony funkcjonalnie” kiedy jest umieszczony w związku funkcjonalnym z inną sekwencją kwasu nukleinowego. Przykładowo, DNA dla prosekwencji albo lidera sekrecyjnego jest połączony funkcjonalnie z DNA dla polipeptydu jeżeli jest wyrażany jako prebiałko, które uczestniczy w sekrecji polipeptydu; promotor albo wzmacniacz jest połączony funkcjonalnie z sekwenPL 213 948 B1 cją kodującą jeżeli wpływa na transkrypcję sekwencji; albo miejsce wiązania rybosomu jest połączone funkcjonalnie z sekwencją kodującą jeżeli jest umieszczone tak, aby ułatwiać translację. Generalnie, „połączony funkcjonalnie” oznacza, że połączone sekwencje DNA są ciągłe, a w przypadku sekwencji lidera sekrecyjnego ciągłe i w fazie odczytu. Natomiast wzmacniacze nie muszą być ciągłe. Połączenie uzyskuje się poprzez ligację w odpowiednich miejscach restrykcyjnych. Jeżeli takie miejsca nie istnieją, stosowane są syntetyczne oligonukleotydy- adaptory albo łączniki, zgodnie z konwencjonalną praktyką.
Stosowany tu termin ekspresyjna „komórka”, „linia komórkowa” i „hodowla komórkowa” są stosowane wymiennie i wszystkie te określenia obejmują potomstwo. A zatem, słowa „transformant” i „komórki transformanta” obejmują pierwotną komórkę obiektu i hodowle z niej pochodzące niezależnie od liczby transferów. Jest również zrozumiałe, że całe potomstwo nie musi być całkowicie identyczne pod względem zawartości DNA na skutek przemyślanych albo przypadkowych mutacji. Zmutowane potomstwo, które ma taką samą funkcję albo aktywność biologiczną jak poszukiwana przy wyjściowo stransformowanych komórkach, jest również tu włączone. Tam gdzie zamierzone są inne cele, będzie to jasne z kontekstu.
II. Sposoby wykonania wynalazku
Wynalazek ten dotyczy sposobu przygotowania zasadniczo homogennego preparatu glikoproteiny zawierającej region Fc, gdzie około 80-100% glikoproteiny w kompozycji zawiera dojrzały węglowodan rdzeniowy pozbawiony fukozy, przyłączony do regionu Fc glikoproteiny. W korzystnych wykonaniach białko jest przeciwciałem lub immunoadhezyną. Glikoproteiny mogą być przygotowane na przykład przez (a) zastosowanie komórki gospodarza poddanej inżynierii genetycznej lub zmutowanej, w której brak metabolizmu fukozy, tak że ma zmniejszoną zdolność (lub nie jest zdolna) do fukozylacji wyrażanych w niej białek;
(b) hodowanie komórek w warunkach, które zapobiegają lub zmniejszają fukozylację;
(c) potranslacyjne usunięcie fukozy (np. enzymem fukozydazą);
(d) potranslacyjne dodanie pożądanego węglowodanu, np. po zrekombinowanej ekspresji nieglikozylowanej glikoproteiny;
(e) oczyszczenie glikoproteiny tak, by wybrać produkt, który nie jest fukozylowany.
Obecny wynalazek rozważa połączenie dwóch lub więcej z tych przykładowych sposobów (a)-(e).
Najbardziej korzystnie jeżeli, kwas nukleinowy kodujący pożądaną glikoproteinę jest wyrażany w komórce gospodarza, która ma zmniejszoną zdolność (lub nie jest zdolna) do fukozylacji wyrażanych w niej białek. Korzystnie, jeżeli komórka gospodarza jest komórką jajnika chomika chińskiego (CHO) pozbawioną reduktazy dihydrofolianu (DHFR), np. komórką Lec13 CHO lub np. komórką CHO-K1, DUX-B11, CHO-DP12 lub CHO-DG44 CHO, która była zmodyfikowana tak, że wytwarzana w niej glikoproteina nie jest znacząco fukozylowana. Tak więc komórka może wykazywać zmienioną ekspresję lub aktywność enzymu fukozylotransferazy albo inny enzym biorący udział w dodawaniu fukozy do związanego z N oligosacharydu może mieć zmniejszoną aktywność i/lub obniżone poziomy w komórce gospodarza.
Struktura węglowodanu rdzeniowego jest dojrzała, tak więc na ogół należy unikać stosowania inhibitorów, takich jak kastanospermina, które hamują lub przeszkadzają w obróbce dojrzałego węglowodanu. Według jednego z korzystnych wykonań około 80-100% glikoproteiny w kompozycji odzyskanej ze zrekombinowanej komórki gospodarza wytwarzającej glikoproteinę będzie miała strukturę węglowodanu rdzeniowego, która jest pozbawiona fukozy przyłączonej do regionu Fc glikoproteiny, dalej nazywana „kompozycją glikoproteiny wolną od fukozy”. „Odzyskana” ma tu oznaczać materiał uzyskany bezpośrednio z hodowli komórek gospodarza bez poddawania tego materiału etapowi oczyszczania, który wzbogaca w glikoproteinę wolną od fukozy.
Jednak, niniejszy wynalazek rozważa wzbogacanie ilości glikoproteiny wolnej od fukozy za pomocą różnych technik, takich jak oczyszczanie z zastosowaniem substratu lektynowego aby usunąć glikoproteinę zawierająca fukozę z pożądanej kompozycji.
Będzie oczywiste, że ilość wolnej od fukozy glikoprotein z różnych partii zrekombinowanej produkowanej glikoproteiny może być różna. Na przykład, w przykładach poniżej % całkowitego oligosacharydu bez fukozy przyłączonego do glikoproteiny wyrażanej przez komórki CHO-Lec13 był w zakresie 88%-95%.
Korzystnie, jeżeli około 90-99% glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego węglowodanu rdzeniowego, która jest pozbawiona fukozy przyłączonej do regionu Fc glikoproteiny.
PL 213 948 B1
W kompozycji mogą istnieć różne formy struktury węglowodanów. Na przykład, węglowodan przyłączony do glikoproteiny może być przedstawiony za pomocą następującego wzoru:
Χ4 - Χ3- GN - Μ
Χι\μ - GN - GN
Χ4 - Χ3 - Χ2 - Μ / gdzie:
M to mannoza,
GN to GlcNAc,
X1 to ewentualna rozdzielająca reszta GlcNAc, z dodatkowym monosacharydem(ami), ewentualnie przyłączonym do rozdzielającej GlcNAc,
X2 to korzystna reszta GlcNAc,
X3 to ewentualna reszta Ga1, jedna reszta Ga1 może być przyłączona do każdego ramienia GN,
X4 to ewentualne końcowe reszty kwasu sialowego, mogą być przyłączone jedna lub dwie reszty kwasu sialowego.
Wolne od fukozy ujawnione tu kompozycje glikoproteinowe wykazują zwiększone wiązanie jednego lub więcej receptorów FcyRIII w porównaniu z kompozycją tej samej glikoproteiny, ale gdzie większość (np. około 50-100% lub około 70-100%) glikoproteiny w tej kompozycji ma fukozę przyłączoną do struktury dojrzałego rdzeniowego węglowodanu (dalej tu „kompozycja glikoproteiny zawierająca fukozę”). Na przykład, kompozycje glikoproteiny wolne od fukozy tu ujawnione mogą wykazywać 100-1000-krotnie zwiększone wiązanie do FcyRIII, takiego jak FcyRIII (F158), w porównaniu z kompozycjami glikoproteinowymi zawierającymi fukozę. Jako że allotyp F158 jest mniej skuteczny w interakcji z ludzką IgG niż V158, uważa się, że to zapewnia znaczącą przewagę z terapeutycznego punku widzenia, szczególnie u pacjentów, którzy wyrażają FcyRIII (F158). Co więcej, ujawniona tu wolna od fukozy kompozycja glikoproteinowa wykazuje lepszą aktywność ADCC w porównaniu z odpowiednimi kompozycjami glikoproteinowymi zawierającymi fukozę, np. z około 2-20-krotnie polepszoną aktywnością ADCC.
Poza wolną od fukozy strukturą dojrzałego rdzeniowego węglowodanu, dodatkowe oligosacharydy mogą być przyłączone do struktury węglowodanu rdzeniowego. Na przykład rozdzielająca GlcNAc może być przyłączona lub nie. Jako przykład, komórka gospodarza może być pozbawiona enzymu GnTIII i w efekcie glikoproteina może być zasadniczo wolna od rozdzielającej GlcNAc. Alternatywnie, glikoproteina może być wyrażana w komórce gospodarza (np. gospodarza Y0 lub komórce CHO poddanej inżynierii genetycznej), która dodaje rozdzielającą GlcNAc.
Jedna lub więcej (na ogół jedna lub dwie) reszty galaktozy mogą być też przyłączone do struktury węglowodanu rdzeniowego. W końcu jedna lub więcej końcowych reszt kwasu sialowego (na ogół jedna lub dwie) mogą być przyłączone do struktury węglowodanu rdzeniowego, np. przez połączenie z resztą (resztami) galaktozy.
Kompozycje tu ujawnione są w korzystnym wykonaniu wytwarzane i przeznaczone do zastosowań terapeutycznych. Tak więc korzystna kompozycja jest preparatem farmaceutycznym zawierającym glikoproteinę i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub rozcieńczalnik, tak jak te podane przykładowo poniżej. Takie preparaty są zazwyczaj jałowe i mogą być liofilizowane.
W korzystnym wykonaniu wynalazku glikoproteiną jest przeciwciało i przykładowe sposoby wytwarzania przeciwciał są opisane bardziej szczegółowo w następujących częściach. Glikoproteiną może jednak być dowolna inna glikoproteina zawierająca region Fc, np. immunoadhezyna. Sposoby wytwarzania immunoadhezyn są tu podane bardziej szczegółowo poniżej.
A. Warianty sekwencji regionu Fc
W jednym z wykonań wynalazku, wariant glikozylacji obejmuje ponadto wariant regionu Fc z sekwencją aminokwasową, która różni się od natywnej sekwencji regionu Fc. Tam gdzie region wariantu Fc ma więcej niż jedno podstawienie aminokwasowe, na ogół, ale niekoniecznie, podstawienia aminokwasowe w tej samej klasie są łączone, aby uzyskać pożądany wynik. Różne klasy podstawień aminokwasowych są opisane w następującej tabeli.
PL 213 948 B1
T a b e l a 1
Klasy wariantów regionu Fc
Klasa Zdolność wiązania FcR Pozycja podstawienia (podstawień) w regionie Fc
1A zmniejszone wiązanie do wszystkich FcyR 238, 265, 269, 270, 297*, 327, 329
1B zmniejszone wiązanie do obydwu, FcyRII i FcyRIII 239, 294, 295, 303, 338, 373, 376, 416, 435
2 zwiększone wiązanie do obydwu, FcyRII i FcyRIII 256, 290, 312, 326, 330, 339, 378, 430
3 zwiększone wiązanie do FcyRII i brak wpływu na wiązanie FcyRIII 255, 258, 267, 276, 280, 283, 285, 286, 305, 307, 309, 315, 320, 331, 337, 398
4 zwiększone wiązanie do FcyRII i zmniejszone wiązanie do FcyRIII 268, 272, 301, 322, 340
5 zmniejszone wiązanie do FcyRII i brak wpływu na wiązanie do FcyRIII 292, 324, 335, 414, 419, 438, 439
6 zmniejszone wiązanie do FcyRII i zwiększone wiązanie do FcyRIII 298, 333
7 brak wpływu na wiązanie do FcyRII i zmniejszone wiązanie do FcyRIII 248, 249, 252, 254, 278, 289, 293, 296, 338, 382, 388, 389, 434, 437
8 brak wpływu na wiązanie FcyRII i zwiększone wiązanie do FcyRIII 334, 360
* wersja deglikozylowana
Poza podstawieniami aminokwasowymi, niniejszy obecny wynalazek rozważa inne modyfikacje sekwencji aminokwasowych wyjściowego regionu Fc w celu wytworzenia wariantu regionu Fc ze zmienioną funkcją efektorową.
Można na przykład usunąć jedną lub więcej reszt aminokwasowych z regionu Fc aby zmniejszyć wiązanie się z FcR. Na ogół usuwa się jedną lub więcej reszt regionu Fc tu zidentyfikowanych jako przeprowadzających wiązanie FcR, aby wytworzyć taki wariant regionu Fc. Na ogół nie więcej niż jedna do dziesięciu reszt regionu Fc będzie usunięta według tego wykonania wynalazku. Region Fc zawierający jedną lub więcej delecji aminokwasów będzie korzystnie zachowywał przynajmniej około 80% i korzystnie przynajmniej około 90%, i najbardziej korzystnie przynajmniej około 95% wyjściowego regionu Fc albo natywnej sekwencji ludzkiego regionu Fc.
Można też wytworzyć warianty regionu Fc z insercjami aminokwasów, które to warianty mają zmienioną funkcję efektorową. Na przykład, można wprowadzić przynajmniej jedną resztę aminokwasową (np. jedną do dwóch reszt aminokwasów i na ogół nie więcej niż dziesięć reszt) obok jednej lub więcej pozycji regionu Fc zidentyfikowanych tu jako wpływające na wiązanie FcR. Przez „obok” rozumie się w obrębie jednej do dwóch reszt aminokwasowych w zidentyfikowanych tu resztach regionu Fc. Takie warianty regionu Fc mogą wykazywać zwiększone lub zmniejszone wiązanie FcR i/lub aktywność ADCC. Aby wytworzyć takie warianty insercyjne, można ocenić strukturę ko-kryształu polipeptydu zawierającego region wiązania FcR (np. zewnątrz komórkową domenę FcR będącego przedmiotem zainteresowania) i region Fc, do którego reszta (reszty) aminokwasów mają być wstawione (patrz na przykład, Deisenhofer, Biochemistry 20 (9): 2361-2370 (1981) oraz Burmeister i wsp., Nature 342: 379-383, (1994)) aby racjonalnie zaprojektować wariant regionu Fc z np. poprawioną zdolnością wiązania FcR. Taka insercja (insercje) będą na ogół zrobione w pętli regionu Fc, ale nie w strukturze drugorzędowej (np. w nici β) regionu Fc.
Przez wprowadzenie odpowiedniej sekwencji aminokwasowej w rodzicielskim regionie Fc, można wytworzyć wariant regionu Fc, który (a) pośredniczy w zależnej od przeciwciał cytotoksyczności zależnej od komórek (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych bardziej skutecznie i/lub (b) wiąże receptor Fc gamma (FcyR) z lepszym powinowactwem niż wyjściowy polipeptyd. Takie warianty regionu Fc będą na ogół zawierały przynajmniej jedną modyfikację aminokwasową w regionie Fc. Uważa się, że łączenie modyfikacji aminokwasowych jest szczególnie korzystne. Na przykład, wariant region Fc może zawierać dwie, trzy, cztery, pięć itd. podstawień, np. konkretnych, określonych tu pozycji regionu Fc.
PL 213 948 B1
Korzystne jest, jeżeli rodzicielski polipeptyd-region Fc jest ludzkim regionem Fc, np. natywną sekwencją ludzkiego regionu Fc ludzkiej IgG1 (allotypy A i nie-A), IgG2, IgG3 lub IgG4. Takie sekwencje przedstawiono na fig. 23.
Aby wytworzyć region Fc z polepszoną aktywnością ADCC, korzystne jest, jeżeli rodzicielski polipeptyd ma uprzednio istniejącą aktywność ADCC, np. zawiera region Fc ludzkiej IgG1 lub ludzkiej IgG3. W jednym z wykonań, wariant z zwiększoną ADCC pośredniczy w ADCC znacząco bardziej skutecznie niż przeciwciało z regionem Fc IgG1 lub IgG3 o natywnej sekwencji i regionem wiązania antygenu wariantu. Korzystnie, jeżeli wariant zawiera lub jest zasadniczo złożony z, podstawień dwóch lub trzech reszt w pozycjach 298, 333 i 334 regionu Fc. Najkorzystniej, jeżeli reszty w pozycjach 298, 333 i 334 są podstawione (np. resztami alaniny). Co więcej, aby wytworzyć wariant regionu Fc ze zwiększoną aktywnością ADCC na ogół konstruuje się wariant regionu Fc ze zwiększonym powinowactwem wiązania do FcyRIII, który uważa się za ważny FcR w przeprowadzaniu ADCC. Na przykład, można wprowadzić modyfikację aminokwasową (np. podstawienie) do rodzicielskiego regionu Fc w jednym lub więcej aminokwasów w pozycjach 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430, aby wytworzyć taki wariant. Wariant ze zwiększonym powinowactwem wiązania do FcyRIII może dalej mieć zmniejszone powinowactwo wiązania dla FcyRII, szczególnie zmniejszone powinowactwo do hamującego receptora FcyRIIB.
Modyfikacja(e) aminokwasowe korzystnie wprowadza się do domeny CH2 regionu Fc, ponieważ tu podane eksperymenty m wskazują, że domena CH2 jest ważna dla aktywności wiązania FcR. Co więcej, w odróżnieniu od nauk z tej dziedziny, cytowanych powyżej, obecne zgłoszenie rozważa wprowadzenie modyfikacji do części regionu Fc innego niż w dolnym regionie zawiasowym.
Przydatne pozycje aminokwasowe do modyfikacji w celu wytworzenia wariantu regionu Fc IgG ze zmienionym powinowactwem wiązania lub aktywnością receptora Fc gamma (FcyR) obejmują dowolną jedną lub więcej pozycji aminokwasowych 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc.
Korzystnie, jeżeli rodzicielski region Fc stosowany jako matryca do wytworzenia takich wariantów zawiera region Fc ludzkiej IgG. Gdy podstawiona jest reszta 331, rodzicielski region Fc korzystnie nie jest z ludzkiej IgG3 o sekwencji natywnej lub wariant regionu Fc zawierający podstawienie w pozycji 331 korzystnie wykazuje zwiększone wiązanie do FcR, np. do FcyRII.
Aby wytworzyć wariant regionu Fc ze zmniejszonym wiązaniem do FcyR można wprowadzić modyfikację aminokwasową w dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasowej 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc.
Warianty, który wykazują zmniejszone wiązanie do FcyRI, obejmują te zawierające modyfikację aminokwasową regionu Fc w dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasów 238, 265, 269, 270, 327 lub 329.
Warianty, które wykazują obniżone wiązanie do FcyRII obejmują te zawierające modyfikację aminokwasu regionu Fc w dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439.
Warianty regionu Fc, które wykazują zmniejszone wiązanie do FcyRIII obejmują te zawierające modyfikację aminokwasową regionu Fc w dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasowej 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435 lub 437.
Można także wytworzyć warianty ze zwiększonym wiązaniem jednego lub więcej FcyR. Takie warianty regionu Fc mogą zawierać modyfikację aminokwasową w dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasów 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc.
Na przykład, wariant ze zwiększoną aktywnością wiązania FcyR może wykazywać zwiększone wiązanie do FcyRIII, i ewentualnie może wykazywać ponadto zmniejszone wiązanie do FcyRII; np. wariant może zawierać modyfikację aminokwasową w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc.
Warianty ze zwiększonym wiązaniem do FcyRII obejmują te zawierające modyfikację aminokwasową w dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276,
280, 283, 285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc. Takie warianty mogą dalej wykazywać zmniejszone wiązanie do FcyRIII. Na przyPL 213 948 B1 kład, mogą zawierać modyfikację aminokwasową regionu Fc w dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasych 268, 272, 298, 301, 322 lub 340.
Jakkolwiek korzystne jest zmienianie wiązania do FcyR, warianty regionu Fc ze zmienionym powinowactwem wiązania dla receptora noworodkowego (FcRn) są tu także rozważane. Oczekuje się, że warianty regionu Fc ze zwiększonym powinowactwem do FcRn będą miały dłuższy czas półtrwania w surowicy i takie cząsteczki będą miały użyteczne zastosowania w sposobach leczenia zwierząt, gdy długi okres półtrwania podawanego peptydu jest pożądany, np. aby leczyć przewlekłą chorobę lub schorzenie. Przeciwnie, oczekuje się, że warianty regionu Fc ze zmniejszonym powinowactwem wiązania FcRn będą miały krótsze okresy półtrwania i takie cząsteczki mogą, na przykład, być podawane ssakowi wówczas, gdy krótszy czas w krążeniu może być korzystny, np. dla obrazowania diagnostycznego lub dla polipeptydów, które mają toksyczne efekty uboczne gdy krążą w krwiobiegu przez przedłużone okresy czasu itd. Oczekuje się, że warianty regionu Fc ze zmniejszonym powinowactwem wiązania mają mniejszą szansę przechodzenia przez łożysko i mogą więc być stosowane w leczeniu chorób lub schorzeń u kobiet w ciąży.
Warianty regionu Fc ze zmienionym powinowactwem wiązania do FcRn obejmują te zawierające modyfikację aminokwasową regionu Fc dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasowych 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447. Te, które wykazują zmniejszone wiązanie do FcRn będą na ogół zawierały modyfikację aminokwasową regionu Fc w dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasów 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447; a te ze zwiększonym wiązaniem do FcRn będą zazwyczaj zawierały modyfikację aminokwasową regionu Fc w dowolnej jednej lub więcej pozycji aminokwasowych 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434.
Wariant(y) polipeptydu wytworzone jak opisano powyżej mogą być poddane dalszym modyfikacjom, często w zależności od przeznaczonego zastosowania polipeptydu. Takie modyfikacje mogą obejmować dalsze zmiany sekwencji aminokwasu (podstawienie, insercja i/lub delecja reszt aminokwasowych), fuzję z heterologicznym polipeptydem(ami) i/lub modyfikacje kowalencyjne. Takie „dalsze modyfikacje” mogą być przeprowadzone przed, równocześnie z lub po modyfikacji aminokwasowej(ych) ujawnionych powyżej, które powodują zmianę wiązania receptora Fc i/lub aktywności ADCC. W jednym z wykonań można połączyć tu podane modyfikacje w regionie Fc z podstawieniami w regionie Fc ujawnionymi w cytowanych odnośnikach w części „Dziedziny pokrewne” tego zgłoszenia.
Alternatywnie lub dodatkowo, może być przydatne połączenie powyższych modyfikacji aminokwasowych z jedną lub więcej modyfikacjami aminokwasowymi, które zmieniają wiązanie Clq i/lub funkcję cytotoksyczności zależnej od dopełniacza regionu Fc.
Wyjściowy polipeptyd będący przedmiotem szczególnego zainteresowania jest zazwyczaj tym, który wiąże Clq i wykazuje cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC). Dalsze podstawienia aminokwasowe tu opisane będą na ogół służyły do zmiany wyjściowego polipeptydu do wiązania Clq i/lub modyfikowania jego funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza, np. zmniejszenie i korzystnie zniesienie tych funkcji efektorowych. Jednak rozważane są tu polipeptydy zawierające podstawienia w jednej lub więcej z opisanych pozycji z polepszonym wiązaniem Clq i/lub funkcją cytotoksyczności zależną od dopełniacza (CDC). Na przykład, wyjściowy polipeptyd może nie być zdolny do wiązania Clq i/lub pośredniczeniu w CDC i może być modyfikowany zależnie od nauk tu podanych tak, że nabiera tych dalszych funkcji efektorowych. Co więcej, polipeptydy z uprzednio istniejącą zdolnością wiązania Clq dowolnie dalej mające zdolność do brania udziału w CDC mogą być modyfikowane tak, że jedna lub obie z tych aktywności są zwiększone.
Aby wytworzyć region Fc ze zmienionym wiązaniem Clq i/lub funkcją cytotoksyczności zależną od dopełniacza (CDC) pozycje aminokwasowe do modyfikowania są na ogół wybierane z pozycji łańcucha ciężkiego 270, 322, 326, 327, 329, 331, 333 i 334, gdzie numerowanie reszt łańcucha ciężkiego IgG jest tym podanym w indeksie EU jak w Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, wyd. 5 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). W jednym z wykonań tylko jedna z ośmiu zidentyfikowanych powyżej pozycji jest zmieniona aby wytworzyć wariantowy region polipeptydu ze zmienionym wiązaniem Clq i/lub funkcją cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC).
Korzystnie, tylko reszta 270, 329 lub 322 jest zmieniona w tym przypadku. Alternatywnie, dwie lub więcej z pozycji zidentyfikowanych m powyżej są zmodyfikowane. Jeśli podstawienia mają być łączone, na ogół podstawienia, które zwiększają wiązanie ludzkiego Clq (np. w resztach w pozycjach
PL 213 948 B1
326, 327, 333 i 334) lub te, które zmniejszają wiązanie ludzkiego Clq (np. w resztach w pozycjach 270, 322, 329 i 331) są łączone. W tym ostatnim wykonaniu wszystkie cztery pozycje (tzn. 270, 322, 329 i 331) mogą być podstawione.
Korzystnie, dalsze podstawienia w dwóch, trzech lub wszystkich pozycjach 326, 327, 333 lub 334 są łączone, dowolnie z innymi podstawieniami regionu Fc aby wytworzyć polipeptyd ze zwiększonym wiązaniem ludzkiego Clq i korzystnie zwiększoną aktywnością CDC in vitro lub in vivo.
Prolina jest konserwowana w pozycji 329 w ludzkich IgG. Ta reszta jest korzystnie zastępowana alaniną, jednak podstawienie dowolnym innym aminokwasem jest rozważane, np. seryną, treoniną, asparaginą, glicyną lub waliną.
Prolina jest konserwowana w pozycji 331 w ludzkiej IgG1, IgG2 i IgG3, ale nie TgG4 (która ma resztę seryny w pozycji 331). Reszta 331 jest korzystnie zastępowana przez alaninę lub inny aminokwas, np. serynę (dla regionów IgG innych niż IgG4), glicynę lub walinę.
Lizyna 322 jest konserwowana w ludzkich IgG i ta reszta jest korzystnie zastępowana przez resztę alaniny, ale rozważa się podstawienie dowolną inną resztą aminokwasy np. seryna, treonina, glicyna lub walina.
D270 jest konserwowana w ludzkich IgG i ta reszta może być zastąpiona przez inną resztę aminokwasu np. alanina, seryna, treonina, glicyna, walina lub lizyna.
K326 jest też konserwowana w ludzkich IgG. Ta reszta może być podstawiona przez inną resztę włączając, w to między innymi, walinę, kwas glutaminowy, alaninę, glicynę, kwas asparaginowy, metioninę lub tryptofan, przy czym tryptofan jest korzystny.
Podobnie, E333 jest też konserwowana w ludzkich IgG. E333 jest korzystnie zastępowana przez resztę aminokwasową z mniejszą objętością łańcucha bocznego, taką jak walina, glicyna, alanina lub seryna, przy czym seryna jest korzystna.
K334 jest konserwowana w ludzkich IgG i może być podstawiona przez inną resztę taką jak alanina lub inna reszta.
W ludzkiej IgG1 i IgG3, resztą 327 jest alanina. Aby wytworzyć wariant ze zwiększonym wiązaniem Clq, tę alaninę można podstawić inną resztą taką jak glicyna. W IgG2 i IgG4, resztą 327 jest glicyna i to może być zastąpione przez alaninę (lub inną resztę) aby zmniejszyć wiązanie Clq.
Jak ujawniono powyżej, można zaprojektować region Fc ze zmienioną funkcją efektorową np. przez modyfikację wiązania Clq i/lub wiązania FcR w ten sposób zmieniając aktywność CDC i/lub aktywność ADCC. Na przykład, można wytworzyć wariant regionu Fc ze zwiększonym wiązaniem Clq i zwiększonym wiązaniem FcyRIII np. mającym zarówno zwiększoną aktywność ADCC i zwiększoną aktywność CDC. Alternatywnie, gdy pożądane jest zmniejszenie lub usunięcie funkcji efektorowej można skonstruować wariant region Fc ze zmniejszoną aktywnością CDC i/lub zmniejszoną aktywnością ADCC. W innych wykonaniach można zwiększyć tylko jedną z tych aktywności i dowolnie także zmniejszyć drugą aktywność np. aby wytworzyć wariant regionu Fc ze zwiększoną aktywnością ADCC, ale zmniejszoną aktywnością CDC i vice versa.
Pod względem dalszych zmian sekwencji aminokwasów, dowolna reszta cysteiny nie biorąca udziału w utrzymywaniu właściwej konformacji wariantu polipeptydu może być także podstawiona, na ogół seryną aby poprawić stabilność oksydacyjną cząsteczki i zapobiec błędnemu wiązaniu krzyżowemu.
Inny typ podstawienia aminokwasu służy do zmiany wzoru glikozylacji polipeptydu. Można to uzyskać przez delecję jednej lub więcej reszt węglowodanowych znajdowanych w polipeptydzie i/lub dodanie jednego lub więcej miejsca glikozylacji, które nie są obecne w polipeptydzie. Glikozylacja polipeptydów jest typowo albo jako połączenie przez N albo połączenie przez O. Połączenie przez z N dotyczy przyłączenia reszty węglowodanu do łańcucha bocznego reszty asparaginy. Sekwencja tripeptydu asparagina-X-seryna i asparagina-X-treonina, gdzie X jest dowolnym aminokwasem z wyjątkiem proliny są miejscami rozpoznawania przyłączania enzymatycznego reszty węglowodanu do łańcucha bocznego asparaginy. Tak więc, obecność dowolnej z tych sekwencji tripeptydu w polipeptydzie tworzy potencjalne miejsce glikozylacji. Glikozylacja poprzez O dotyczy przyłączenia jednego z cukrów N-acetylogalaktozaminy, galaktozy lub ksylozy do hydroksyaminokwasu, najczęściej seryny lub treoniny, choć 5-hydroksyprolina lub 5-hydroksylizyna może być też stosowana. Dodanie miejsc glikozylacji do polipeptydu jest dogodnie przeprowadzane przez zmianę sekwencji aminokwasów tak, że zawiera jedną lub więcej z opisanych powyżej sekwencji tripeptydów (dla glikozylacji związanej z N). Ta zmiana może być przeprowadzona przez dodatek lub podstawienie przez jedna lub więcej reszt
PL 213 948 B1 seryny lub treonina do sekwencji oryginalnego polipeptydu (dla miejsc glikozylacji związanych z O). Przykładowy wariant glikozylacji ma podstawienie aminokwasu reszty Asn 297 łańcucha ciężkiego.
Co więcej klasa, podklasa lub allotyp regionu Fc może być zmieniony przez jedno lub więcej kolejnych podstawień aminokwasowych aby wytworzyć region Fc z sekwencją aminokwasową bardziej homologiczną do innej klasy, podklasy lub allotypu w zależności od potrzeby. Mysi region Fc może być zmieniony aby wytworzyć sekwencję aminokwasową bardziej homologiczną do ludzkiego region Fc; ludzki nie będący allotypem A IgG1 region Fc może być zmodyfikowany aby uzyskać allotyp A IgG1 ludzkiego regionu etc. W jednym z wykonań modyfikacje aminowe tu podane, które zmieniają wiązanie FcR i/lub aktywność ADCC są dokonywane w domenie CH2 regionu Fc i domenę CH3 usuwa się lub zastępuje inną domeną dimerizacji. Korzystnie jednak zatrzymuje się domenę CH3 (poza obecnymi w niej modyfikacjami aminokwasowymi, które zmieniają funkcje efektorowe, jak tu ujawniono).
Glikoproteina wytworzona jak opisano powyżej może być poddana dalszym modyfikacjom, często zależnie od planowanego zastosowania glikoproteiny. Takie modyfikacje mogą obejmować dalsze zmiany sekwencji aminokwasów (podstawienie, insercja i/lub deleeja reszt aminokwasowych), fuzję z heterologicznym polipeptydem(ami) i/lub modyfikacje kowalencyjne.
Inny typ podstawienia aminokwasowego służy do zmiany wzoru glikozylacji glikoproteiny. Takie warianty glikozylacji mogą być dodatkowe oprócz wariantów glikozylacji pod względem braku fukozy tu opisanych i mogą być uzyskane przez delecję jednej lub więcej grup węglowodanowych spotykanych w glikoproteinie, i/lub dodanie jednego lub więcej miejsc glikozylacji, które nie są obecne w glikoproteinie. Glikozylacja glikoprotein jest typowo poprzezz N albo poprzez O. Połączenie poprzez N dotyczy przyłączenia reszty węglowodanu do bocznego łańcucha reszty asparaginy. Sekwencje tripeptydu asparagina-X-seryna i asparagina-X-treonina, gdzie X jest dowolnym aminokwasem z wyjątkiem proliny są miejscami rozpoznawania do przyłączania enzymatycznego reszty węglowodanu do bocznego łańcucha asparaginy. Tak więc, obecność dowolnej z tych sekwencji tripeptydów w glikoproteinie tworzy potencjalne miejsce glikozylacji. Glikozylacja poprzez O dotyczy przyłączenia jednego z cukrów, N-acetylogalaktozominy, galaktozy lub ksylozy do hydroksyaminokwasu, najczęściej seryny lub treoniny, choć 5-hydroksyprolina lub 5-hydroksylizyna mogą być także stosowane. Dodanie miejsc glikozylacji do glikoproteiny dogodnie przeprowadza się przez zmianę sekwencji aminokwasów tak, że zawiera ona jedną lub więcej z opisanych powyższej sekwencji tripeptydu (dla miejsca z wiązanego z miejscem N-glikozylacji). Zmiana może być też przeprowadzona przez dodanie lub podstawienie jednej lub więcej reszt seryny lub treoniny do sekwencji oryginalnej glikoproteiny (dla miejsc glikozylacji poprzez O).
B. Badanie aktywności biologicznej
Wariant glikoproteiny może być poddany jednemu lub więcej oznaczeniom aby ocenić ewentualne zmiany aktywności biologicznej w porównaniu z polipeptydem wyjściowym.
Korzystne jest, jeżeli wariant glikoproteiny zasadniczo zachowuje zdolność wiązania antygenu w porównaniu z peptydem nie będącym wariantem tzn. zdolność wiązania jest słabsza mniej niż 20-krotnie, np. jest słabsza nie więcej niż 5-krotnie niż polipeptydu nie będącego wariantem. Zdolność wiązania wariantu polipeptydu można oznaczyć stosując techniki, takie jak na przykład analiza sortowania komórek aktywowanego fluorescencją (FACS) lub radioimmunoprecypitacja (RIA).
Można ocenić zdolność wariantu glikoproteiny do wiązania FcR. Gdy FcR jest receptorem Fc o wysokim powinowactwie, takim jak FcyRI, FcRn, FcyRIIB lub FcyRIIIA, wiązanie można mierzyć przez miareczkowanie wariantu monomerycznej glikoproteiny i pomiar związanego wariantu glikoproteiny stosując przeciwciało, które specyficznie wiąże wariant glikoproteiny w standardowym formacie ELISA (patrz przykłady poniżej). Inne oznaczenie wiązania FcR dla FcR z niskim powinowactwem jest opisane w WO nr 00/42072 (Presta) i patencie USA nr 6 242 195 B1.
Aby ocenić aktywność ADCC wariantu glikoproteiny w oznaczeniu in vitro można przeprowadzić oznaczenie ADCC stosując zmienne stosunki efektor:cel. Przydatne „komórki efektorowe” do takich oznaczeń obejmują jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) i komórki naturalnych zabójców (NK). Alternatywnie lub dodatkowo aktywność ADCC wariantu glikoproteiny można oszacować in vivo, np. w modelu zwierzęcym, takim jak ujawniono w Clynes i wsp. PNAS (USA) 95: 652-656
Można ocenić zdolność wariantu do wiązania Clq i brania udziału w cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC).
Aby oznaczyć wiązanie Clq można przeprowadzić ELISA wiązania Clq. Pokrótce, płytki do oznaczeń można powlec przez noc w 4°C wariantem glikoproteiny lub wyjściowym polipeptydem (kontrola) w buforze do powlekania. Płytki można następnie przepłukać i zablokować. Po płukaniu do każ34
PL 213 948 B1 dej studzienki można dodać próbkę ludzkiego Clq i inkubować przez 2 godz. w temperaturze pokojowej. Po dalszym płukaniu do każdej studzienki można dodać 100 μl przeciwciała Clq skoniugowanego z peroksydazą przeciw dopełniaczowi i inkubować przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Płytki można ponownie płukać buforem do płukania i do każdej studzienki można dodać 100 μl buforu substratu zawierającego OPD (dichlorowodorek O-fenylenodiaminy (Sigma)). Reakcja utleniania, obserwowana przez pojawianie się żółtej barwy, może przebiegać przez 30 minut i można ją zahamować przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4. Wówczas można odczytać absorbancję przy (492--405) nm.
Przykładowym wariantem glikoproteiny jest taki, który wykazuje „znaczące obniżenie wiązania Clq” w tym oznaczeniu. To oznacza, że około 100 μg/ml wariantu glikoproteiny wykazuje zmniejszenie około 50-krotne lub większe wiązania Clq w porównaniu ze 100 μg/ml kontrolnego przeciwciała mającego niezmutowany reqion Fc IgG1. W najbardziej korzystnym wykonaniu wariant glikoproteiny „nie wiąże Clq”, tzn. 100 μg/ml wariantu glikoproteiny wykazuje około 100-krotne lub większe zmniejszenie wiązania Clq w porównaniu z 100 μg/ml przeciwciała kontrolnego.
Inny przykładowy wariant to taki, który ma „lepsze powinowactwo wiązania do ludzkiego Clq niż wyjściowy polipeptyd”. Taka cząsteczka może na przykład, wykazywać poprawę dwukrotną lub większą, a korzystnie pięciokrotną lub większą wiązania ludzkiego Clq w porównaniu z wyjściowym polipeptydem (np. przy wartościach IC50 dla tych dwóch cząsteczek). Na przykład, wiązanie ludzkiego Clq może być około dwukrotnie do około 500-krotne, a korzystnie od około dwukrotnie do około pięciokrotnie do około 1000-krotnie poprawione w porównaniu z wyjściowym polipeptydem.
Aby zbadać aktywację dopełniacza, można przeprowadzić oznaczenie cytotoksyczności zależnej od dopełniacza np. jak opisano w Gazzano-Santoro i wsp., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996). Pokrótce, różne stężenia wariantu glikoproteiny i ludzki dopełniacz mogą być rozcieńczone buforem. Komórki, które wyrażają antygen, z którym wiąże się wariant glikoproteiny mogą być rozcieńczone do ~ 1 x 106 komórek/ml. Mieszaniny wariantu glikoproteiny, rozcieńczonego ludzkiego dopełniacza i komórek wyrażających antygen można dodać do płytki z 96-płaskodennymi studzienkami i inkubować przez 2 godz. w 37°C i 5% CO2 aby ułatwić lizę komórek z udziałem dopełniacza. Następnie do każdej studzienki można dodać 50 ml błękitu alamar (Accumed International) i inkubować przez noc w 37°C. Absorbancję mierzy się stosując 96-studzienkowy fluorymetr ze wzbudzeniem przy 530 nm i emisji przy 590 nm. Wyniki można wyrazić jako jednostki względnej fluorescencji (relative fluorescence units (RFU)). Stężenia próbki można wyliczyć z krzywej standartowej i podaje się procent aktywności dla wariantu glikoproteiny będącego przedmiotem zainteresowania w porównaniu z polipeptydem nie będącym wariantem.
Jeszcze inny przykładowy wariant „nie aktywuje dopełniacza”. Na przykład, 0,6 μg/ml wariantu glikoproteiny wykazuje około 0-10% aktywności CDC w tym oznaczeniu w porównaniu z 0,6 μg/ml kontrolnego przeciwciała mającego niezmutowany region Fc IgG1. Korzystnie, wariant nie wydaje się mieć żadnej aktywności CDC w powyższym oznaczeniu CDC.
Glikoproteina może być taką, która wykazuje zwiększony CDC w porównaniu z wyjściowym polipeptydem, np. wykazując około dwukrotne do około 100-krotnego zwiększenie aktywności CDC in vitro lub in vivo (np. przy porównywaniu wartości IC50 dla każdej cząsteczki).
Warianty regionu Fc ze zmienionym powinowactwem wiązania dla receptora noworodkowego (FcRn) są tu także rozważane. Oczekuje się, że warianty regionu Fc ze zwiększonym powinowactwem do FcRn będą miały dłuższe okresy półtrwania w surowicy i takie cząsteczki będą miały użyteczne zastosowania w metodach leczenia ssaków, gdy pożądany jest długi okres półtrwania podawanej glikoproteiny, np. by leczyć przewlekła chorobę lub schorzenie. Przeciwne, oczekuje się, że warianty regionu Fc ze zmniejszonym powinowactwem wiązania do FcRn będą miały krótsze okresy półtrwania i takie cząsteczki mogą, na przykład, być podawane ssakowi gdy krótszy czas w krążeniu może być korzystny, np. dla obrazowania diagnostycznego lub dla polipeptydów, które mają toksyczne efekty uboczne gdy krążą w krwiobiegu przez przedłużone okresy czasu itd. Oczekuje się, że warianty regionu Fc ze zmniejszonym powinowactwem wiązania do FcRn mają mniejszą szansę przechodzenia przez łożysko i mogą więc być stosowane w leczeniu chorób lub zaburzeń u kobiet w ciąży.
C. Wytwarzanie przeciwciał
W korzystnym wykonaniu wynalazku, glikoproteiną, która jest zmodyfikowana według nauk tego wynalazku jest przeciwciało. Techniki wytwarzania przeciwciał są jak następuje:
(i) Wybór i wytwarzanie antygenu
Tam gdzie glikoproteiną jest przeciwciało, jest ono skierowane przeciw antygenowi będącemu przedmiotem zainteresowania. Korzystne jest, jeżeli jest ważną biologicznie glikoproteiną i podawanie
PL 213 948 B1 przeciwciała ssakowi cierpiącemu z powodu choroby albo schorzenia może prowadzić do korzyści terapeutycznej u ssaka. Jednakże, przeciwciała skierowane przeciw antygenom niepolipeptydowym (takim jak związane z nowotworem antygeny glikolipidowe; patrz patent USA nr 5 091 178) są również brane pod uwagę.
Tam, gdzie antygenem jest polipeptyd, może to być cząsteczka transbłonowa (np. receptor) albo ligand, taki jak czynnik wzrostu. Przykładowe antygeny obejmują cząsteczki takie jak renina; hormon wzrostu, włączając w to ludzki hormon wzrostu i bydlęcy hormon wzrostu; czynnik uwalniający hormon wzrostu; hormon przytarczycy; tyroksyna; lipoproteiny; alfa-1-antytrypsyna; łańcuch A insuliny; łańcuch B insuliny; proinsulina; hormon folikulotropowy; kalcytonina; hormon luteinizujący; glukagon; czynniki krzepnięcia, takie jak czynnik VIIIC, czynnik IX, czynnik tkankowy (TF) i czynnik von Wiłlebranda; czynnik przeciw-krzepnięciu, taki jak Białko C; przedsionkowy czynnik wydalania sodu z moczem; czynnik powierzchniowo czynny płuc; aktywator plazminogenu, taki jak aktywator plazminogenu urokinazowy albo z ludzkiego moczu albo typu tkankowego (t-PA); bombezyna; trombina; krwiotwórczy czynnik wzrostowy; czynnik martwicy nowotworów alfa i beta; enkefalinaza; RANTES (ang. regulated on activation normally T-cell expressed and secreted, regulowany przy aktywacji, normalnie wyrażany i wydzielany przez komórki T); ludzkie makrofagowe białko zapalne (MIP-1-alfa, ang. macrophage inflammatory protein); albumina z surowicy, taka jak ludzka albumin z surowicy; substancja hamująca Mullerian; łańcuch A relaksyny; łańcuch B relaksyny; prorelaksyna; mysi peptyd związany z gonadotropiną; białko bakteryjne, takie jak beta-laktamaza; DNaza; IgE; antygen związany z cytotoksycznymi limfocytami T (CTLA, ang. cytotoxic T-lymphocyte associated antygen), taki jak CTLA-4; inhibina; aktywina; naczyniowy śródbłonkowy czynnik wzrostowy (VEGF, ang. vascular endothelial growth factor); receptory hormonów lub czynników wzrostowych; białko A lub D; czynniki reumatoidalne; czynnik neurotropowy, taki jak czynnik neurotropowy pochodzący z kości (BDNF, ang. bonederived neurotrophic factor), neurotrofina-3, -4, -5 lub -6 (NT-3, NT-4, NT-5 lub NT-6) albo czynnik wzrostu nerwów, taki jak NGF-β; czynnik wzrostowy pochodzący z płytek krwi (PDGF, ang. plateletderived growth factor); fibroblastowy czynnik wzrostowy taki jak aFGF i bFGF; naskórkowy czynnik wzrostowy (EGF); transformujący czynnik wzrostowy (TGF), taki jak TGF-alfa i TGF-beta, włączając w to TGF^1, TGF-2, TGF3, TGF- β4 lub TGF^5; czynnik wzrostowy insulino-podobny I i II (IGF-I i IGF-II); des(1-3)-IGF-I (mózgowy IGF-I), białka wiążące czynnik wzrostowy insulino-podobny; białka CD, takie jak CD3, CD4, CD8, CD19, CD20 i CD25 (podjednostka Tac receptora IL-2); erytropoetyna; czynniki osteoinduktywne; immunotoksyny; białko morfogenetyczne kości (BMP, ang. bone morphogenetic protein); interferony, takie jak interferon -alfa, -beta i -gamma; czynniki stymulujące klonie (CSF), np. M-CSF, GM-CSF i G-CSF; interleukiny (IL), np., IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9 i IL-10; dysmutaza ponadtlenkowa; receptory komórek T; powierzchniowe białka błonowe; czynnik przyśpieszający rozkład; antygen wirusowy, taki jak na przykład, część otoczki AIDS; białka transportowe; receptory zasiedlania; adresyny; białka regulacyjne; integryny, takie jak CD11a, CD11b, CD11c, CD18 oraz ICAM, VLA-4 lub VCAM; antygen związany z nowotworem, taki jak receptor HER2, HER3 lub HER4; oraz fragmenty dowolnego z wymienionych powyżej polipeptydów.
Przykładowe cząsteczki docelowe dla przeciwciał objętych niniejszym wynalazkiem obejmują markery powierzchniowe albo białka CD, takie jak CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD34 i CD40; członków rodziny receptora ErbB, takich jak receptor EGF, receptor HER2, receptor HER3 lub receptor HER4; antygen specyficzny dla komórek macierzystych prostaty (PSCA); cząsteczki adhezji komórkowej, takie jak LFA-1, Mac1, pl50.95, VLA-4, ICAM-1, VCAM, integryna α4/β7 i integryna αν/β3, włączając w to jej podjednostki α lub β (np. przeciwciała anty-CD11a, anty-CD18 lub anty-CD11b); czynniki wzrostowe, takie jak VEGF; czynnik tkankowy (TF, ang. tissue factor); interferon alfa (α-IFN); interleukina, taka jak IL-8; IgE; antygeny grupy krwi; receptor flk2/flt3; receptor otyłości (OB); receptor mpl; CTLA-4; białko C, itd.
Rozpuszczalne antygeny lub ich fragmenty, ewentualnie połączone z innymi cząsteczkami, można zastosować jako immunogeny do wytwarzania przeciwciał. Dla cząsteczek transbłonowych, takich jak receptory, jako immunogen można użyć ich fragmenty (np. zewnątrzkomórkową domenę receptora). Alternatywnie, jako immunogen można użyć komórki wyrażające cząsteczkę transbłonową. Takie komórki mogą pochodzić ze źródła naturalnego (np. nowotworowych linii komórkowych) albo mogą być komórkami, które zostały stransformowane technikami rekombinowania DNA w celu uzyskania ekspresji cząsteczki transbłonowej. Inne antygeny i ich postaci przydatne do wytwarzania przeciwciał będą oczywiste dla specjalistów w tej dziedzinie.
PL 213 948 B1 (ii) Przeciwciała poliklonalne
Przeciwciała poliklonalne korzystnie wzbudza się w zwierzętach poprzez wielokrotne podskórne (sc) albo dootrzewnowe (ip) wstrzyknięcie odpowiedniego antygenu i adiuwanta. Może być przydatne sprzężenie odpowiedniego antygenu z białkiem, które jest immunogenne w gatunkach, które mają być immunizowane, np. hemocyjaniną ze skałoczepa, albuminą z surowicy, wołową tyroglobuliną albo inhibitorem trypsyny z ziaren soi, stosując czynnik bifunkcjonalny albo derywatyzujący, na przykład ester maleimidobenzoylosulfosukcynoimidowy (sprzężenie poprzez reszty cysteinowe), N-hydroksysukcynimid (poprzez reszty lizyowe), glutaraldehyd, bezwodnik bursztynianowy, SOCl2 lub
R1N=C=NR, gdzie R i R1 są różnymi grupami alkilowymi.
Zwierzęta immunizuje się przeciw antygenowi, immunogennym koniugatom albo pochodnym poprzez zmieszanie np. 100 μg lub 5 μg białka albo koniugatu (dla królików i myszy, odpowiednio) z 3 objętościami kompletnego adiuwanta Freunda i wstrzykniecie roztworu doskórne w wielu miejscach. Miesiąc później zwierzętom podaje się dawkę przypominającą wstrzykując doskórnie w wielu miejscach 1/5 do 1/10 wyjściowej ilości peptydu albo koniugatu w kompletnym adiuwancie Freunda. Siedem do 14 dni później zwierzęta skrwawia się i surowice testuje pod kątem miana przeciwciała. Zwierzętom podaje się dawki przypominające aż do osiągnięcia plateau. Korzystne jest, jeżeli zwierzętom podaje się dawkę przypominającą z koniugatem tego samego antygenu, ale sprzężonym z różnymi białkami i/lub poprzez inny czynnik łączący krzyżowo. Koniugaty można również wytwarzać w zrekombinowanych hodowlach komórkowych jako fuzje białkowe. Ponadto, czynniki agregujące, takie jak ałun są odpowiednie do zastosowania do wzmacniania odpowiedzi immunologicznej.
(ii) Przeciwciała monoklonalne
Przeciwciała monoklonalne można wytworzyć stosując metodę hybrydom opisaną po raz pierwszy przez Kohler i wsp., Nature, 256: 495 (1975) albo można wytwarzać metodami rekombinowania DNA (patent USA nr 4 816 567).
W metodzie hybrydomy, mysz albo inne odpowiednie zwierzę będące gospodarzem, takie jak chomik, immunizuje się jak opisano powyżej w celu wzbudzenia limfocytów, które wytwarzają albo są zdolne do wytwarzania przeciwciał wiążących się specyficznie z białkiem zastosowanym do immunizacji. Alternatywnie, limfocyty można immunizować in vitro. Limfocyty można następnie poddać fuzji z komórkami szpiczaka stosując odpowiedni czynnik powodujący fuzję, taki jak glikol polietylenowy, do wytwarzania komórek hybrydomy (Goding, Monoclonal Antybodies: Principles and Practice, str. 59-103 (Academic Press, 1986).
Utworzone w ten sposób komórki hybrydomy wysiewa się i hoduje na odpowiedniej pożywce hodowlanej, która korzystnie zawiera jedną albo większą liczbę substancji, które hamują wzrost i przeżycie nie poddanych fuzji rodzicielskich komórek szpiczaka. Przykładowo, jeśli w rodzicielskim szpiczaku brak jest enzymu fosforybozylotransferazy hipokantyno-guaninowej (HGPRT lub HPRT), pożywka hodowlana dla hybrydom zwykle zawiera hipoksantynę, aminopterynę oraz tymidynę (pożywka HAT), które to substancje zapobiegają wzrostowi komórek z brakiem HGPRT.
Korzystnymi komórkami szpiczaka są takie, które podlegają fuzji wydajnie, utrzymują stabilny poziom wytwarzania przeciwciała przez wybrane komórki wytwarzające przeciwciało i są wrażliwe na pożywkę, taką jak HAT. Wśród nich, korzystnymi liniami komórkowymi szpiczaka są linie mysiego szpiczaka, takie jak te pochodzące z mysich nowotworów MOPC-21 i MPC-11 dostępne z Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA oraz komórki SP-2 lub X63-Ag8-653 dostępne z American Type Culture Collection, Rockville, Maryland USA. Zostały również opisane komórki ludzkiego szpiczaka i linie komórkowe mysio-ludzkiego heretoszpiczaka do wytwarzania ludzkich przeciwciał monoklonalnych (Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984) oraz Brodeur i wsp., Monoclonal Antybody Production Techniques and Applications, str. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
Pożywki hodowlane, w których hoduje się komórki, testuje się pod kątem wytwarzania przeciwciał monoklonalnych skierowanych wobec antygenu. Korzystne jest, jeżeli specyficzność wiązania przeciwciał monoklonalnych wytwarzanych przez komórki hybrydomy określa się poprzez immunoprecypitację albo test wiązania in vitro, taki jak test radioimmunologiczny (RIA) albo enzymatyczny test immunosorpcyjny (ELISA).
Po zidentyfikowaniu komórek hybrydomy, które wytwarzają przeciwciała o pożądanej specyficzności, powinowactwie i/lub aktywności, klon można subklonować poprzez procedurę ograniczonych rozciehczeń i hodować według standardowych metod (Goding, Monoclonal Antybodies: Principles and
Practice, str. 59-103 (Academic Press, 1986). Odpowiednie pożywki hodowlane do tych celów obejPL 213 948 B1 mują na przykład pożywkę, D-MEM lub pożywkę RPMI-1640. Ponadto, komórki hybrydomy można hodować in vivo w nowotworach puchlinowych u zwierząt.
Przeciwciała monoklonalne wydzielane przez subklony dogodnie jest wydzielać z pożywki hodowlanej, płynów puchlinowych albo surowicy poprzez konwencjonalne procedury oczyszczania przeciwciał, takie jak na przykład chromatografia na białku A-sefarozie, hydroksyloapatycie, elektroforeza w żelu, dializa albo chromatografia powinowactwa.
DNA kodujący przeciwciała monoklonalne można łatwo wyizolować i zsekwencjonować stosując konwencjonalne procedury (np. poprzez zastosowanie sond oligonukleotydowych, które mają zdolność wiązania się specyficznie z genami kodującymi lekkie i ciężkie łańcuchy mysich przeciwciał). Komórki hybrydomy służą jako korzystne źródło takiego DNA. Po wyizolowaniu, DNA można umieszczać w wektorach ekspresyjnych, które transfekuje się następnie do komórek gospodarza, takich jak komórki E. coli, małpie komórki COS, komórki jajnika chomika chińskiego (ang. Chinese Hamster Ovary, CHO) lub komórki szpiczaka, które w innym przypadku nie wytwarzają przeciwciała, w celu otrzymania syntezy przeciwciał monoklonalnych w zrekombinowanych komórkach gospodarza. Artykuły przeglądowe na temat rekombinowanej ekspresji w bakteriach DNA kodującego przeciwciała obejmują Skerra i wsp., Curr. Opinion in Immunol, 5: 256-262 (1993) oraz Pluckthun, Immunol. Revs., 130: 151-188 (1992). Rekombinowana ekspresja przeciwciał jest opisana bardziej szczegółowo poniżej.
W dalszym wykonaniu, przeciwciała monoklonalne albo fragmenty przeciwciał można izolować z przeciwciałowych bibliotek fagowych wytworzonych przy zastosowaniu technik opisanych w McCafferty i wsp., Nature, 348: 552-554 (1990). Clackson i wsp., Nature, 352: 624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J. Mol. Biol, 222: 581-597 (1991) opisują izolację przeciwciał mysich i ludzkich, odpowiednio, przy zastosowaniu bibliotek fagowych. Kolejne publikacje opisują wytwarzanie ludzkich przeciwciał o wysokim powinowactwie (rzędu nM) poprzez tasowanie łańcuchów (Marks i wsp., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)), jak również kombinatoryczną infekcję i rekombinację in vivo jako strategię konstruowania bardzo dużych bibliotek fagowych (Waterhouse i wsp., Nuc. Acids. Res., 21: 2265-2266 (1993)). A zatem techniki te stanowią atrakcyjną alternatywę wobec tradycyjnych technik hybrydom monoklonalnych przeciwciał do izolacji przeciwciał monoklonalnych.
DNA można również modyfikować, na przykład poprzez podstawienie sekwencji kodującej domen stałych ludzkiego łańcucha ciężkiego i lekkiego w miejsce homologicznych sekwencji mysich (patent USA nr 4 816 567 oraz Morrison i wsp., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81: 6851 (1984)) albo poprzez połączenie kowalencyjne sekwencji kodujących immunoglobulinę, całych albo części, z sekwencją kodującą polipeptydu innego niż immunoglobulina.
Typowo, takim polipeptydem innym niż immunoglobulina zastępuje się domeny regionu stałego przeciwciała albo zastępuje się zmienne miejsca wiązania antygenu w celu wytworzenia chimerowego dwuwartościowego przeciwciała zawierającego jedno miejsce wiązania antygenu mające specyficzność wobec antygenu i inne miejsce wiążące antygen mające specyficzność wobec odmiennego antygenu.
(iv) Przeciwciała humanizowane i ludzkie
Przeciwciało humanizowane ma wprowadzoną jedną albo większą liczbę reszt aminokwasowych ze źródła innego niż człowiek. Te nie-ludzkie reszty aminokwasowe są często określane jako reszty „zaimportowane”, które są typowo wzięte z „zaimportowanej” domeny zmiennej. Humanizację można zasadniczo przeprowadzić według metody Winter i współpracowników (Jones i wsp., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann i wsp., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen i wsp., Science, 239: 1534-1536 (1988)), poprzez zastąpienie sekwencji jednego lub więcej CDR gryzoni odpowiadającymi im sekwencjami przeciwciała ludzkiego. A zatem, takimi przeciwciałami „humanizowanymi” są przeciwciała chimerowe (patent USA nr 4 816 567), gdzie zasadniczo mniej niż nienaruszona ludzka domena zmienna została zastąpiona odpowiednią sekwencją z gatunku innego niż człowiek. W praktyce, przeciwciałami humanizowanymi są typowo przeciwciała ludzkie, w których niektóre reszty z regionu hiperzmiennego i możliwe że niektóre reszty FR są zastąpione resztami z analogicznych miejsc w przeciwciałach gryzoni.
Wybór ludzkich domen zmiennych, zarówno lekkiej, jak i ciężkiej, która ma być zastosowana do wytwarzania humanizowanych przeciwciał jest bardzo ważna dla zmniejszenia antygenności. Według tak zwanej metody „najlepszego dopasowania” sekwencje domeny zmiennej przeciwciała gryzonia przeszukuje się wobec całej biblioteki znanych ludzkich sekwencji ludzkiej domeny zmiennej. Ludzka sekwencja, która jest najbliższa tej z gryzoni jest następnie zaakceptowana jako ludzki region zrębowy (FA) dla humanizowanego przeciwciała (Sims i wsp., J. Immunol, 151: 2296 (1993); Chothia i wsp.,
PL 213 948 B1
J. Mol Biol, 196: 901 (1987)). Inne metody stosują konkretny region zrębowy pochodzący z sekwencji najwyższej zgodności wszystkich ludzkich przeciwciał z danej podgrupy łańcuchów lekkich i ciężkich. Ten sam region zrębowy może być zastosowany dla kilku różnych przeciwciał humanizowanych (Carter i wsp., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 89: 4285 (1992); Presta i wsp., J. Immunol, 151: 2623 (1993)).
Ważne jest ponadto, żeby przeciwciała były humanizowane z zachowaniem wysokiego powinowactwa do antygenu i innych korzystnych właściwości biologicznych. Aby osiągnąć ten cel według korzystnych metod humanizowane przeciwciała wytwarza się poprzez przeprowadzenie analizy sekwencji rodzicielskich I różnych zaprojektowanych produktów humanizowanych przy użyciu trójwymiarowych modeli sekwencji rodzicielskich i humanizowanych. Trójwymiarowe modele immunoglobulin są powszechnie dostępne i są znane specjalistom w tej dziedzinie. Dostępne są programy komputerowe, które ilustrują i pokazują możliwe trójwymiarowe struktury konformacyjne wybranych kandydatów dla sekwencji immunoglobulin. Badanie tych obrazów umożliwia analizę prawdopodobnej roli reszt w funkcjonowaniu sekwencji immunoglobuliny-kandydata, tj. analizę reszt, które wpływają na zdolność immunoglobuliny- kandydata do wiązania się ze swoim antygen. W ten sposób można wybrać reszty FR i połączyć sekwencje biorcy i zaimportowane, uzyskując pożądane właściwości przeciwciała, takie jak zwiększone powinowactwo do docelowych antygenu(ów). Generalnie, reszty regionu CDR mają bezpośredni i najbardziej znaczący wpływ na wiązanie antygenu.
Alternatywnie, możliwe jest obecnie wytwarzanie transgenicznych zwierząt (np. myszy), które po immunizacji są zdolne do wytwarzania pełnego repertuaru ludzkich przeciwciał w nieobecności wytwarzania endogennych immunoglobulin. Przykładowo, opisano, że homozygotyczna delecja regionu łącznikowego łańcucha ciężkiego (JH) przeciwciała w mutancie chimerowym i w linii płciowej myszy prowadzi do całkowitego zahamowania wytwarzania endogennych przeciwciał.
Przeniesienie ludzkiego układu genów z ludzkiej linii płciowej do takiego mutanta w linii płciowej myszy będzie prowadziła do wytwarzania ludzkich przeciwciał po prowokacji antygenem. Patrz np. Jakobovits i wsp., Proc. Natl Acad. Sci USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits i wsp., Nature, 362: 255-258 (1993); Bruggermann i wsp., Year in Immuno., 7: 33 (1993) oraz Duchosal i wsp. Nature 355: 258 (1992). Ludzkie przeciwciała mogą również pochodzić z bibliotek z prezentacją na fagach (Hoogenboom i wsp., J. Mol. Biol., 227: 381 (1991); Marks i wsp., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991); Vaughan I wsp. Nature Biotech 14: 309 (1996)).
(v) Przeciwciała multispecyficzne
Przeciwciała multispecyficzne mają specyficzności wiązania wobec co najmniej dwóch różnych antygenów. Jakkolwiek takie cząsteczki normalnie będą wiązać jedynie dwa antygeny (tj. przeciwciała bispecyficzne, BsAbs), przeciwciała z dodatkowymi specyficznościami, takie jak przeciwciała trispecyficzne, są objęte przez stosowane tu wyrażenie. Przykłady BsAbs obejmują te, które mają jedno ramię skierowane wobec antygenowi komórki nowotworowej, a drugie ramię skierowane wobec cząsteczce
HER2 będącej cytotoksycznym włącznikiem, takie jak anty-FcYRI/anty-CD15, anty-pl85 /FcyRIII (CD16), anty-CD3/anty-rakowa komórka B (1D10), anty-CD3/anty-pl85HER2, anty-CD3/anty-p97, anty-CD3/-anty-rak komórek nerkowych, anty-CD3/anty-OVCAR-3, anty-CD3/L-D1 (anty-rak okrężnicy), anty-CD3/anty-analog hormonu stymulującego melanocyty, anty-receptor EGF/anty-CD3, anty-CD3-antyCAMA1, anty-CD3/anty-CD19, anty-CD3/MoV18, anty-cząsteczka adhezji komórek nerwowych (NCAM)/anty-CD3, anty-białko wiążące folian (FBP)/anty-CD3, anty-antygen związany z uogólnionym rakiem (AMOC-31)/anty-CD3; BsAbs z jednym ramieniem, które wiąże się specyficznie z antygenem nowotworowym i jednym ramieniem, które wiąże się z toksyną, takie jak anty-saporyna/anty-Id-1, anty-CD22/anty-saporyna, anty-CD7/anty-saporyna, anty-CD38/anty-saporyna, anty-CEA/anty-łańcuch A rycyny, anty-interferon-α (FN^/anty-idiotyp hybrydomy, anty-CEA/anty-alkaloid winka; BsAbs dla enzymów - konwertaz aktywujących proleki, takie jak anty-CD30/anty-alkaliczna fosfataza (która katalizuje przekształcenie proleku - fosforanu mitomycyny do alkoholu mitomycyny); BsAbs, które można użyć jako czynniki do lizowania skrzepów, takie jak anty-fibryna/anty-tkankowy aktywator plazminogenu (tPA), anty-fibryna/anty-aktywator plazminogenu typu urokinazy (uPA); BsAbs dla kierowania kompleksów immunologicznych do komórkowych receptorów powierzchniowych, takie jak anty-likporoteina o niskiej gęstości (LDL)/anty-receptor Fc (np. FcyRI, FcyRII lub FcyRIII); BsAbs do zastosowania w terapii chorób infekcyjnych, takie jak anty-CD3/anty-wirus opryszczki pospolitej (HSV), anty kompleks receptora komórek T:CD3/anty-wirus grypy, anty-FcYR/anty-HIV; BsAbs dla wykrywania nowotworu in vitro lub in vivo, takie jak anty-CEA/anty-EOTUBE, anty-CEA/anty-DPTA, anty-p185HER2/anty-hapten; BsAbs jako adiuwanty szczepionkowe oraz BsAbs jako narzędzia diagnostyczne, takie jak
PL 213 948 B1 anty-królicza IgG/anty-ferrytyna, anty-peroksydaza chrzanowa (HRP)/anty-hormon, anty-somatostatyna/anty-substancja P, anty-HRP/anty-FITC, anty-CEA/anty-e-galaktozydaza.
Przykłady przeciwciał trispecicznych obejmują anty-CD3/anty-CD4/anty-CD37, anty-CD3/anty-CD5/anty-CD37 i anty-CD3/anty-CD8/anty-CD37.
Przeciwciała bispecyficzne można wytwarzać jako przeciwciała pełnej długości albo fragmenty przeciwciał (np. przeciwciała bispecyficzne F(ab')2). Przegląd przeciwciał bispecyficznych jest w Segal i wsp. J. Immunol. Methods 248: 1-6 (2001).
Sposoby wytwarzania przeciwciał bispecyficznych są znane w tej dziedzinie. Tradycyjne wytwarzanie bispecyficznych przeciwciał pełnej długości opiera się na jednoczesnej ekspresji dwóch lekkich i ciężkich łańcuchów immunoglobuliny, gdzie te dwa łańcuchy mają różne specyficzności (Miilstein i wsp., Nature, 305: 537-539 (1983)). Dzięki losowemu doborowi łańcuchów lekkich i ciężkich, hybrydomy te (kwadromy) wytwarzają potencjalnie mieszaninę 10 różnych cząsteczek przeciwciał, z których tylko jedna ma prawidłową strukturę bispecyficzną. Oczyszczanie prawidłowej cząsteczki, które zwykle wykonuje się poprzez etapy oczyszczania przez powinowactwo jest raczej kłopotliwe, a wydajność produktów niska. Podobne procedury są ujawnione w WO 93/08829 i Traunecker i wsp., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991).
W różnych podejściach domeny zmienne przeciwciała z pożądanymi specyficznościami wiązania (miejsca połączenia przeciwciało-antygen) łączy się z sekwencjami domen stałych immunoglobuliny, zawierającymi co najmniej część regionu zawiasowego, CH2 i CH3. Korzystne jest posiadanie pierwszego regionu stałego łańcucha ciężkiego (CH1) zawierającego miejsce niezbędne do wiązania łańcucha lekkiego, obecnego w co najmniej jednej z fuzji. DNA kodujący fuzję łańcucha ciężkiego immunoglobuliny i jeżeli to pożądane, łańcuch lekki immunoglobuliny, wstawia się do odrębnych wektorów ekspresyjnych i przeprowadza kotransfekcję do odpowiedniego organizmu gospodarza. To daje dużą elastyczność w dobieraniu wzajemnych proporcji trzech fragmentów polipeptydowych w wykonaniach, tam gdzie stosowanie nierównych proporcji trzech fragmentów polipeptydowych przy konstrukcji dostarcza optymalnych wydajności. Możliwe jest jednakże wstawienie sekwencji kodujących dla dwóch albo wszystkich trzech łańcuchów polipeptydowych do jednego wektora ekspresyjnego, kiedy ekspresja co najmniej dwóch łańcuchów polipeptydowych w równych proporcjach prowadzi do wysokich wydajności lub kiedy stosunki nie mają szczególnego znaczenia.
W korzystnym wykonaniu tego podejścia przeciwciała składają się z hybrydowego łańcucha ciężkiego immunoglobuliny z pierwszą specyficznością wiązania w jednym ramieniu i hybrydowej pary łańcuchów lekkich immunoglobuliny (dostarczającego drugiej specyficzności wiązania) w drugim ramieniu. Stwierdzono, że ta niesymetryczna struktura ułatwia rozdzielenie pożądanych bispecyficznych składników od niepożądanej kombinacji łańcuchów immunoglobulinowych, ponieważ obecność łańcucha lekkiego immunoglobuliny tylko w jedynej połowie bispecyficznej cząsteczki dostarcza łatwego sposobu rozdziału. Podejście to jest ujawnione w WO 94/04690. Dla dalszych szczegółów wytwarzania bispecyficznych przeciwciał, patrz na przykład Suresh i wsp., Methods In Enzymology, 121: 210 (1986). Według innego podejścia opisanego w patencie W096/27011, miejsce styku pomiędzy parą cząsteczek przeciwciała można poddać manipulacjom tak, aby zmaksymalizować udział procentowy heterodimerów, które odzyskuje się z hodowli zrekombinowanych komórek. Korzystne miejsce styku obejmuje co najmniej część domeny stałej CH3 przeciwciała. W tej metodzie, jeden albo więcej małych bocznych łańcuchów aminokwasowych z miejsca styku w pierwszej cząsteczce przeciwciała zastępuje się dłuższymi łańcuchami bocznymi (np. tyrozyną albo tryptofanem). Kompensujące „zagłębienia” o identycznych albo podobnych rozmiarach co duży łańcuch(y) boczny(e) wytwarza się w miejscu styku w drugiej cząsteczce przeciwciała poprzez zastąpienie dużego aminokwasowego łańcucha bocznego mniejszym (np. alaniną albo treoniną). Dostarcza to mechanizmu dla zwiększenia wydajności heterodimeru w stosunku do niepożądanych produktów końcowych, takich jak homodimery.
Przeciwciała bispecyficzne obejmują przeciwciała połączone krzyżowo lub „heterokoniugaty”. Przykładowo, jedno z przeciwciał w heterokoniugacie może być połączone z awidyną, a inne z biotyną. Zaproponowano, żeby takie przeciwciała wykorzystać do kierowania komórek układu immunologicznego do niechcianych komórek (patent USA nr 4 676 980) i do leczenia zakażenia HIV (WO 91/00360, WO 92/20373 i EP 03 089). Przeciwciała-immunokoniugaty można wytwarzać stosując dowolne dogodne metody łączenia krzyżowego. Odpowiednie czynniki do łączenia krzyżowego są dobrze znane w tej dziedzinie i są ujawnione w patencie USA nr 4 676 980, razem z wieloma innymi technikami łączenia krzyżowego.
PL 213 948 B1
Bierze się również pod uwagę możliwość zastosowania przeciwciał z więcej niż dwiema wartościowościami. Przykładowo, można wytworzyć przeciwciała trój specyficzne. Tutt i wsp., J. Immunol. 147: 60 (1991).
(vi) Przeciwciała wielowartościowe
Przeciwciało wielowartościowe może być internalizowane (albo katabolizowane) szybciej niż przeciwciało dwuwartościowe przez komórkę wyrażającą antygen, do którego wiążą się przeciwciała. Przeciwciałami według wynalazku mogą być przeciwciała wielowartościowe (które są innymi niż klasy IgM) z trzema albo większą liczbą miejsc wiązania (np. przeciwciała czterowartościowe), które można łatwo wytworzyć poprzez ekspresję zrekombinowanych kwasów nukleinowych kodujących łańcuchy polipeptydowe przeciwciała. Przeciwciało wielowartościowe może zawierać domenę dimeryzacji i trzy lub więcej miejsc wiązania antygenu. Korzystna domena dimeryzacji zawiera (albo składa się z) region Fc albo region zawiasowy. W tym wykonaniu przeciwciało będzie zawierało region Fc i trzy lub więcej miejsc wiązania antygenu po stronie amino-końcowej regionu Fc. Korzystne przeciwciało wielowartościowe tu ujawnione zawiera (albo składa się z) trzech do około ośmiu, ale korzystnie czterech miejsc wiązania antygenu. Przeciwciało wielowartościowe zawiera co najmniej jeden łańcuch polipeptydowy (a korzystnie dwa łańcuchy polipeptydowe) gdzie łańcuch(y) polipeptydowy(e) zawiera dwie lub więcej domen zmiennych. Przykładowo, łańcuch(y) polipeptydowy (e) może zawierać VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc, gdzie VD1 jest pierwszą domeną zmienną, VD2 jest drugą domeną zmienną, Fc jest jednym łańcuchem polipeptydowym regionu Fc, X1 i X2 reprezentują aminokwas albo polipeptyd, a n to 0 lub 1. Przykładowo, łańcuch(y) polipeptydowy(e) może zawierać VH-CH1-elastyczny łącznik-VH-CH1-łańcuch regionu Fc albo VH-CH1-VH-CH1-łańcuch regionu Fc. Korzystne jest, jeżeli przeciwciało wielowartościowe tu rozważane zawiera ponadto co najmniej dwa (a korzystnie cztery) polipeptydy domen zmiennych łańcucha lekkiego. Przeciwciało wielowartościowe tu rozważane może zawierać na przykład od około dwóch do około ośmiu polipeptydów domen zmiennych łańcucha lekkiego. Rozważane tu polipeptydy domen zmiennych łańcucha lekkiego zawierają domenę zmiennej łańcucha lekkiego i ewentualnie zawierają ponadto domenę CL. Przeciwciała wielowartościowe są opisane w WO 01/00238 i WO 00/44788.
(vii) Przeciwciała z rozwiniętym powinowactwem
Rozważane tu przeciwciało może być przeciwciałem z rozwiniętym powinowactwem zawierającym podstawienie(a) jednego albo większej liczby reszt regionu hiperzmiennego przeciwciała rodzicielskiego (np. przeciwciała humanizowanego albo ludzkiego). Generalnie, otrzymany w rezultacie wariant(y) wybierane do dalszych badań będą miały polepszone właściwości biologiczne w stosunku do przeciwciał rodzicielskich, z których zostały wytworzone. Dogodny sposób wytwarzania takich wariantów z podstawieniami obejmuje rozwijanie powinowactwa przy zastosowaniu prezentacji na fagach. W skrócie, kilka miejsc w regionach hiperzmiennych (np. 6-7 miejsc) mutuje się w celu wytworzenia wszystkich możliwych podstawień aminokwasowych w każdym miejscu. Wytworzone w ten sposób warianty przeciwciała prezentuje się w sposób monowartościowy na cząstkach fagów nitkowatych jako fuzje z produktem genu III M13 zapakowanym w każdej cząstce. Warianty prezentowane na fagach przeszukuje się następnie pod kątem aktywności biologicznej (np. powinowactwa wiązania) jak tu ujawniono. W celu zidentyfikowania miejsc regionu zmiennego będących kandydatami na modyfikację, przeprowadza się alaninową mutagenezę skaningową w celu zidentyfikowania reszt regionu biorących znaczący udział w wiązaniu antygenu. Alternatywnie albo dodatkowo, może być korzystna analiza struktury krystalicznej kompleksu antygen-przeciwciało w celu zidentyfikowania miejsc styku pomiędzy przeciwciałem i jego antygenem. Takie reszty na styku lub sąsiadujące są kandydatami na podstawienia zgodnie z omówionymi tu technikami. Po wytworzeniu takich wariantów, zestawy wariantów poddaje się przeszukiwaniu jak tu opisano i przeciwciała o lepszych właściwościach w jednym albo większej liczbie odpowiednich testów można wybrać do dalszych badań, (vii) Immunokoniugaty
Wynalazek dotyczy również terapii immunokoniugatami zawierającymi glikoproteinę połączoną z czynnikiem przeciwnowotworowym, takim jak czynnik cytotoksyczny lub czynnik hamujący wzrost.
Czynniki chemioterapeutyczne przydatne do wytwarzania takich immunokoniugatów zostały opisane powyżej.
Koniugaty przeciwciała i jednej albo większej liczby małych cząsteczek toksyn, takich jak kalicheamycyna, maitansynoidy, trichoten i CC1065 oraz pochodne tych toksyn, które mają aktywność toksyny są tu również brane pod uwagę.
PL 213 948 B1
W jednym z korzystnych wykonań wynalazku, glikoproteina według wynalazku jest połączona z jedną albo większą liczbą cząsteczek maitansynoidu.
Koniugaty glikoproteina-maitansynoid można wytwarzać poprzez połączenie chemiczne glikoproteiny (np. przeciwciała) z cząsteczką maitansynoidu bez znaczącego zmniejszenia aktywności biologicznej zarówno glikoproteiny, jak cząsteczki maitansynoidu. Wykazano skuteczność około 3-4 cząsteczek maitansynoidu połączonych z cząsteczką przeciwciała w zwiększaniu cytotoksyczności komórek docelowych bez negatywnego wpływania na funkcję albo rozpuszczalność przeciwciała, jakkolwiek można się spodziewać, że nawet jedna cząsteczka toksyny/przeciwciało będzie zwiększać cytotoksyczność w porównaniu z zastosowaniem nagiego przeciwciała. Maitansynoidy są dobrze znane w tej dziedzinie i mogą być syntetyzowane znanymi technikami albo izolowane z naturalnych źródeł. Przydatne maitansynoidy są ujawnione na przykład w patencie USA nr 5 208 020. Korzystnymi maitansynoidami są maitansynol i analogi maitansynolu zmodyfikowane w pierścieniu aromatycznym albo innych pozycjach cząsteczki maitansynolu, takie jak rozmaite estry maitansynolu. Istnieje wiele grup łączących znanych w dziedzinie wytwarzania koniugatów przeciwciało-maitansynoid, włączając w to między innymi te ujawnione w patencie USA 5208020 lub patencie EP nr 0 425 235 B1 oraz Chari i wsp., Cancer Research 52: 127-131 (1992). Grupy łączące obejmują grupy dwusiarczkowe, grupy tioetereowe, grupy kwasolabilne, grupy fotolabilne, grupy rozkładane przez peptydazy albo grupy rozkładane przez esterazy jak ujawniono w wymienionych powyżej patentach, przy czym korzystne są grupy dwusiarczkowe i tioeterowe. Koniugaty przeciwciała i maitansynoidu można wytwarzać przy użyciu rozmaitych bifunkcjonalnych czynników łączących białka, takich jak N- sukcynimidylo-3-(2-pirydylotio)propionian (SPDP), sukcynimidylo-4-(N-maleimidometylo)cykloheksano-1-karboksylan, iminotiolan (IT), bifunkcjonlne pochodne imidoesterów (takie jak dimetyloadipimidan HCl), aktywne estry (takie jak disukinimidylosuberan), aldehydy (takie jak glutareldehyd), związki bis-azydowe (takie jak bis(p-azydobenzoylo) heksanodiamina), pochodne bis-diazoniowe (takie jak bis-(p-diazoniumbenzoylo)etylenodiamino), diizocyjaniany (takie jak tolieno 2,6-diizocyjanian) oraz bis-aktywne związki fluoru (takie jak 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen).
Szczególnie korzystnymi czynnikami łączącymi dla dostarczania wiązań dwusiarczkowych są N-sukcynimidylo-3-(2-pirydylotio)propionian (SPDP) (Carlsson i wsp., Biochem. J. 173: 723-737 [1978]) i N-sukcynimidylo-4-(2-pirydylotio)pentanian (SPP). Łącznik może być przyłączony do cząsteczki maitansynoidu w różnych pozycjach, w zależności od typu połączenia. Przykładowo, wiązanie estrowe może być utworzone w pozycji C-3 mającej grypę hydroksylową, w pozycji C-14 zmodyfikowanej hyrdoksymetylem, w pozycji C-15 zmodyfikowanej grupą hydroksylową oraz pozycji C-20 mającej grupę hydroksylową przy zastosowaniu konwencjonalnych technik łączenia. W korzystnym wykonaniu, połączenie jest tworzone w pozycji C-3 maitansynolu albo analogu maitansynolu.
Inny immunokoniugat będący przedmiotem zainteresowania stanowi glikoproteina połączona z jedną albo większą liczbą cząsteczek kalicheamycyny. Rodzina antybiotyków kalicheamycynynowych ma zdolność wytwarzania dwuniciowych pęknięć w DNA przy sub-pikomolowych stężeniach. Po wytwarzanie koniugatów z rodziny kalicheamycyny patrz patenty USA nr nr 5 712 374, 5 714 586, 5 739 116, 5 767 285, 5 770 701, 5 770 710, 5 773 001, 5 877 296 (wszystkie dla American Cyanamid Company). Analogi strukturalne kalicheamycyny, które można zastosować obejmują między innymi γ1 1, α21, α31, N-acetylo-γ-ι1, PSAG i θ1 1 (Hinman i wsp. Cancer Research 53: 3336-3342 (1993) oraz Lode i wsp. Cancer Research 58: 2925-2928 (1998)) i wspomniane powyżej patenty USA dla American Cyanamid Company. Innym lekiem przeciwnowotworowym, z którym glikoproteina może być połączona to QFA, który jest antyfolianem. Zarówno kalicheamycyna, jak i QFA mają wewnątrzkomórkowe miejsce działania i nie przechodzą łatwo przez błonę plazmatyczną. A zatem pobieranie przez komórki tych czynników poprzez internalizację za pośrednictwem przeciwciała znacznie zwiększa ich efekty cytotoksyczne.
Inne czynniki przeciwnowotworowe, które można łączyć z glikoproteinami według wynalazku obejmują BCNU, streptozoicynę, winkrystynę i 5-fluorouracyl, rodzinę czynników znanych wspólnie jako kompleks LL-E33288 opisany w patentach USA nr 5 053 394, nr 5 770 710, jak również esperamycyny (patent USA nr 5 877 296).
Aktywne enzymatycznie toksyny i ich fragmenty, które można zastosować obejmują łańcuch A błonicy, niewiążące się aktywne fragmenty toksyny błonicy, łańcuch A egzotoksyny (z Pseudomonas aeruginosa), łańcuch A rycyny, łańcuch A abryny, łańcuch A modecyny, alfa-sarcynę, białka Aleurites fordii, białka dlantyny, białka Phytolaca americana (PAPI, PAPII i PAP-S), inhibitor Momordica charan42
PL 213 948 B1 tya, kurcynę, krotynę, inhibitor Sapaonaria officinalis, żeloninę, mitożelinę, restriktocynę, fenomycynę, enomycynę oraz trikoteceny. Patrz, na przykład, WO 93/21232 opublikowany 28 października, 1993.
Niniejszy wynalazek bierze ponadto pod uwagę immunokoniugaty utworzone pomiędzy glikoproteiną i związkiem o aktywności nukleolitycznej (np. rybonukleazą albo nukleazą DNA, taką jak deoksyrybonukleaza; DNaza).
Do wybiórczego niszczenia nowotworu, przeciwciało może zawierać wysoce radioaktywny atom. Rozmaite izotopy radioaktywne są dostępne do wytwarzania radiokoniugatów przeciwciał. Przykłady obejmują At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 oraz radioaktywne izotopy Lu. Kiedy koniugat jest używany do diagnozy, może on zawierać atom radioaktywny do badań scyntygraficznych, na przykład tc99m lub I123, albo znacznik spinowy do obrazowania przy zastosowaniu jądrowego rezonansu magnetycznego (NMR, od ang. nuclear magnetic resonance) (znanego również jako obrazowanie rezonansem magnetycznym, ang. magnetic resonance imaging, mri) taki jak znowu jod-123, jod-131, ind-111, fluor-19, węgiel-13, azot-15, tlen-17, gadolin, mangan lub żelazo.
Znaczniki radioaktywne i inne znaczniki mogą być włączone do koniugatu w różny sposób. Przykładowo, peptyd może być biosyntetyzowany albo może być syntetyzowany poprzez chemiczną syntezę aminokwasu przy zastosowaniu odpowiednich prekursorów aminokwasów, zawierających na przykład fluor-19 w miejsce tlenu. Znaczniki, takie jak tc99m lub I123, Re180, Re188 oraz In111 mogą być przyłączone poprzez resztę cysteinową w peptydzie. Itr-90 może być przyłączony poprzez resztę lizynową. Metodę IODOGEN (Fraker i wsp. Biochem. Biophys. Res. Commun. 80: 49-57 (1978) można zastosować do włączenia jodu-123. „Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy” (Chatal, CRC Press 1989) opisuje szczegółowo inne metody.
Koniugaty glikoproteiny i czynnika cytotoksycznego można wytwarzać przy użyciu rozmaitych bifunkcjonalnych czynników łączących z białkami, takich jak N-sukcynimidylo-3-(2-pirydylotio)propionian (SPDP), sukcynimidylo-4-(N-maleimidometylo)cykloheksano-1-karboksylan, iminotiolan (IT), bifunkcjonlne pochodne imidoesterów (takie jak dimetyloadipimidan HCl), aktywne estry (takie jak disukcymidylosuberan), aldehydy (takie jak glutareldehyd), związki bis-azydowe (takie jak bis(p-azydobenzoylo) heksanodiamina), pochodne bis-diazoniowe (takie jak bis-(p-diazoniumbenzoylo)etylenodiamina), diizocyjaniany (takie jak tolleno-2,6-diizocyjanian) oraz bis-aktywne związki fluoru (takie jak 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen). Na przykład, immunotoksynę rycynową można wytworzyć jak opisano w Vitetta i wsp. Science 238: 1098 (1987). Wyznakowany węglem-14 kwas 1-izotiocyjanatobenzylo-3-metylodietylenotriaminopentaoctowy (MX-DTPA) jest przykładowym czynnikiem chelatującym do przyłączania radionukleotydu do przeciwciała. Patrz WO 94/11026. Łącznik może być „łącznikiem podatnym na cięcie” ułatwiającym uwolnienie leku cytotoksycznego w komórce. Przykładowo można zastosować łącznik nietrwały w kwasach, łącznik wrażliwy na peptydazę, łącznik dimetylowy lub łącznik zawierający disiarczek (Chari i wsp. Cancer Research 52: 127- 131 (1992), patent USA nr 5 208 020).
Alternatywnie, można wytworzyć fuzję białkową fest zawierającą glikoproteinę i czynnik cytotoksyczny, np. poprzez techniki rekombinowania DNA albo syntezę peptydów. Odcinek DNA może zawierać odpowiednie regiony kodujące dwie części koniugatu bądź sąsiadujące ze sobą bądź oddzielone przez region kodujący peptydowy łącznik, który nie niszczy pożądanych właściwości koniugatu.
W jeszcze innym wykonaniu, przeciwciało można połączyć z „receptorem” (takim jak streptawidyna) do zastosowania we wstępnym docieraniu do nowotworu, gdzie koniugat receptor-przeciwciało podaje się pacjentowi, po czym usuwa się z układu krążenia niezwiązany koniugat przy zastosowaniu czynnika usuwającego, a następnie podaje „ligand” (np. awidynę), który jest połączony z czynnikiem cytotoksycznym (np. radionukleotydem).
(ix) Zależne od przeciwciała leczenie prolekiem za pośrednictwem enzymu (ADEPT, od ang. Antybody Dependent Enzyme Mediated Prodrug Therapy)
Przeciwciała według niniejszego wynalazku można również użyć w ADEPT poprzez połączenie przeciwciała z aktywującym prolek enzymem, który przekształca prolek (np. peptydylowy czynnik chemioterapeutyczny, patrz WO 81/01145) w aktywny lek przeciwnowotworowy. Patrz na przykład WO 88/07378 i patent USA nr 4 975 278.
Składnik enzymatyczny immunokoniugatu przydatny w ADEPT obejmuje dowolny enzym zdolny do działania na prolek w taki sposób, że przekształca go w bardziej aktywną, cytotoksyczną postać.
Enzymy, które są użyteczne w tej metodzie obejmują między innymi alkaliczną fosfatazę przydatną do przekształcania proleków zawierających fosforan w wolne leki; deaminazę cytozynową przydatną do przekształcania nietoksyczną 5-fluorocytozynę w lek przeciwnowotworowy, 5-fluorouracyl;
PL 213 948 B1 proteazy, takie jak proteaza Serratia, termolizyna, subtilizyna, karboksypeptydazy i katepsyny (takie jak katepsyny B i L), które są przydatne do przekształcania proleków zawierających peptyd w wolne leki; D-alanylokarboksypeptydazy, przydatne do przekształcania proleków, które zawierają podstawniki D-aminokwasowe; enzymy trawiące węglowodan, takie jak beta-galaktozydaza i neuraminidaza przydatne do przekształcania proleków glokozylowanych w wolne leki; betalaktamaza przydatna do przekształcania pochodnych beta-laktamowych leków w wolne leki oraz amidazy penicyliny, takie jak amidaza penicyliny V, amidaza penicyliny V, przydatne do przekształcania w wolne leki pochodnych leków ze przyłączonymi do azotu w aminie grupami fenoksyacetylowymi lub fenyloacetylowymi, odpowiednio. Alternatywnie, przeciwciała z aktywnością enzymatyczną, znane również jako „abzymy” można zastosować do przekształcania proleków według wynalazku w wolne aktywne leki (patrz, np., Massey, Nature 328: 457-458 (1987)). Koniugaty przeciwciało-abzym można wytworzyć jak tu popisano dla dostarczania abzymu do populacji komórek nowotworowych.
Enzymy według tego wynalazku mogą być kowalencyjnie łączone z przeciwciałami technikami dobrze znanymi w tej dziedzinie, takimi jak zastosowanie dyskutowanych powyżej heterobifunkcjonalnych odczynników łączących krzyżowo. Alternatywnie, można skonstruować fuzje białkowe zawierające co najmniej jeden region wiążący antygen przeciwciała według wynalazku połączony z co najmniej funkcjonalnie aktywną częścią enzymu według wynalazku przy zastosowaniu technik rekombinowania DNA dobrze znanych w tej dziedzinie (patrz, np. Neuberger i wsp., Nature, 312: 604608 (1984).
(x) Inne modyfikacje przeciwciał
Brane są tu pod uwagę inne modyfikacje glikoproteiny. Przykładowo, glikoproteina może być połączona z rozmaitymi niebiałkowymi polimerami, np. glikolem polietylenowym, glikolem polipropylenowym, polioksyalkilenami lub kopolimerami glikolu polietylenowego lub glikolu polipropylenowego. Przeciwciało może być również zamknięte w mikrokapsułkach wytworzonych na przykład technikami koacerwacji albo poprzez polimeryzację międzyfazową (na przykład mikrokapsułkach hydroksymetylocelulozowych lub żelatynowych i mikrokapsułkach poli(metylometacylanowych), odpowiednio), w koloidalnych systemach dostarczania leków (na przykład, liposomach, mikrokulkach albuminowych, mikroemulsjach, nanocząstkach i nanokapsułkach) albo w makroemulsjach. Takie techniki są ujawnione w Remington's Pharmaceutical Sciences, wyd. 16, Oslo, A., Wyd., (1980).
Ujawnione tu glikoproteiny mogą również być wytwarzane jako immunoliposomy. „Liposom” to mały pęcherzyk złożony z różnego rodzaju lipidów, fosfolipidów i/lub związków powierzchniowoczynnych, które są przydatne do dostarczania leku ssakowi. Składniki liposomu są zazwyczaj zorganizowane w postaci podwójnej warstwy, podobnie jak przy organizacji lipidów w błonach biologicznych. Liposomy zawierające przeciwciało wytwarza się metodami znanymi w tej dziedzinie, takimi jak opisane w Epstein i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang i wsp., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980); pat. USA nr 4 485 045 i 4 544 545 oraz WO 97/38731 opublikowany 23 października, 1997. Liposomy o zwiększonym czasie krążenia są ujawnione w patencie USA nr 5 013 556.
Szczególnie przydatne liposomy można wytworzyć przy zastosowaniu metody odparowania z odwróconą fazą z użyciem kompozycji lipidowej zawierającej fosfatydylcholinę, cholesterol i pochodne PEG fosfatydyloetanolaminy (PEG-PE). Liposomy przetłacza się przez filtry o określonych rozmiarach porów w celu uzyskania liposomów o pożądanej średnicy. Fragmenty Fab' przeciwciała według niniejszego wynalazku można łączyć z liposomami jak opisano w Martin i wsp. J. Biol. Chem. 257: 286-288 (1982) poprzez reakcję wymiany dwusiarczkowej. W liposomie fakultatywnie zawarty jest czynnik chemioterapeutyczny. Patrz Gabizon i wsp. J. National Cancer Inst. 81 (19) 1484 (1989).
(xi) Przykładowe przeciwciała
Korzystne przeciwciała w zakresie niniejszego wynalazku obejmują te zawierające sekwencje aminokwasowe następujących przeciwciał:
przeciwciał anty-HER2, włączając w to przeciwciała zawierające regiony zmienne łańcuchów ciężkich i lekkich huMAb 4D5-8 (Carter i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285-4289 (1992), patent USA nr 5 725 856);
przeciwciał anty-CD20, takich jak chimerowe anty-CD20 „C2B8”, jak w patencie USA nr 5 736 137 (RITUXAN®), chimerowy lub humanizowany wariant przeciwciała 2H7, jak w patencie USA nr 5 721 108 B1 lub Tositumomab (BEXXAR®);
anty-IL-8 (St John i wsp., Chest, 103:932 (1993) i międzynarodowa publikacja nr WO 95/23865);
przeciwciał anty-VEGF, włączając w to przeciwciała anty-VEGF humanizowane i/lub z rozwiniętym powinowactwem, takie jak humanizowane przeciwciało anty-VEGF huA4.6.1 AVASTIN™ (Kim
PL 213 948 B1 i wsp., Growth Factors, 7: 53-64 (1992), międzynarodowa publikacja nr WO 96/30046 oraz WO 98/45331, opublikowane 15 października, 1998); przeciwciał anty-PSCA (W001/40309);
przeciwciał anty-CD40, włączając w to S2C6 i ich humanizowane warianty (WO 00/7 5348); anty-CD11a (patent USA nr 5 622 700, WO 98/23761, Steppe i wsp., Transplant Intl. 4: 3-7 (1991) oraz Hourmant i wsp., Transplantation 58: 377-380 (1994));
anty-IgE (Presta i wsp., J. Immunol. 151: 2623-2632 (1993) i międzynarodowa publikacja nr WO
95/19181; patent USA nr 5 714 338, wydany 3 lutego, 1998 lub patent USA nr 5 091 313, wydany 25 lutego, 1992, WO 93/04173 opublikowane 4 marca, 1993 lub WO 99/01556 opublikowane 14 stycznia, 1999, patent USA nr 5714338);
anty-CD18 (patent USA nr 5 622 700, wydany 22 kwietnia, 1997, albo jak w WO 97/26912, opublikowane 31 lipca, 1997); przeciwciała anty-receptor Apo-2 (WO 98/51793 opublikowane 19 listopada, 1998);
przeciwciał anty-TNF-α, włączając w to cA2 (REMICADE®), CDP571 i MAK-195 (patrz patent USA nr 5 672 347 wydany 30 września, 1997, Lorenz i wsp. J. Immunol., 156 (4): 1646-1653 (1996) oraz Dhainaut i wsp. Crit. Care Med. 23 (9):1461-1469 (1995));
anty-czynnik tkankowy (TF, od ang. Tissue Factor) (patent europejski nr 0 420 937 B1 przyznany 9 listopada, 1994);
anty-ludzka integryna α4-β7 (WO 98/06248 opublikowane 19 lutego, 1998);
anty-EGFR (chimerowe lub humanizowane przeciwciało 225, jak w WO 96/40210 opublikowanym 19 grudnia, 1996);
przeciwciał anty-CD3, takich jak OKT3 (patent USA nr 4 515 893 wydany 7 maja, 1985); przeciwciał anty-CD25 lub anty-tac, takich jak CH1-621 (SIMULECT®) i (ΖΕΝΑΡΑΧ®) (patrz patent USA nr 5 693 762 wydany 2 grudnia, 1997);
przeciwciał anty-CD4, takich jak przeciwciało cM-7412 (Choy i wsp. Arthritis Rheum 39 (1): 52-56 (1996));
przeciwciał anty-CD52, takich jak CAMPATH-1H (Riechmann i wsp. Nature 332: 323-337 (1988);
przeciwciał anty-receptor Fc, takich jak przeciwciało M22 skierowane przeciw FcyRI, jak w Graziano i wsp. J. Immunol. 155 (10): 4996-5002 (1995);
przeciwciał anty-antygen karcynoembrionalny (CEA, od carcinoembryonic antigen), takich jak hMN-14 (Sharkey i wsp. CancerRes. 55 (23 Suppl): 5935s-5945s (1995);
przeciwciał skierowanych przeciw komórkom nabłonkowym sutka, włączając w to huBrE-3, hu-Mc 3 i CHL6 (Ceriani i wsp. Cancer Res. 55 (23): 5852s-5856s (1995) oraz Richman i wsp. Cancer Res. 55 (23 Supp): 5916s-5920s (1995));
przeciwciał, które wiążą się z komórkami raka okrężnicy, takich jak C242 (Litton i wsp. Eur J. Immunol. 26 (1): 1-9 (1996));
przeciwciał anty-CD38, np. AT 13/5 (Ellis i wsp. J. Immunol. 155 (2): 925-937 (1995)); przeciwciał anty-CD33, takich jak Hu M195 (Jurcic i wsp. Cancer Res 55 (23 Suppl): 5908s-5910s (1995) i CMA-676 lub CDP771;
przeciwciał anty-CD22, takich jak LL2 lub LymphoCide (Juweid i wsp. Cancer Res 55 (23 Suppl): 5899s-5907s (1995);
przeciwciał anty-EpCAM, takich jak 17-1A (PAN0REX®);
przeciwciał anty-GpIIb/IIIa, takich jak abciximab lub c7E3 Fab (REOPRO®);
przeciwciał anty-RSV, takich jak MEDI-493 (SYNAGIS®);
przeciwciał anty-CMV, takich jak PROTOVIR®; przeciwciał anty-HIV, takich jak PRO542;
przeciwciał anty-wirus zapalenia wątroby, takich jak przeciwciało przeciw zapaleniu wątroby B,
OSTAVIR®;
przeciwciała OvaRex anty-CA 125; przeciwciała BEC2 anty-idiotypowy epitop GD3; przeciwciała VITAXIN® anty-αvβ3;
przeciwciała anty-ludzkie komórki raka, takiego jak ch-G250; ING-1; przeciwciała anty-ludzki 17-1A (3622W94); przeciwciała anty-ludzki rak okrężnicy i odbytnicy (A33);
przeciwciała anty-ludzki czerniak R24, skierowanego przeciw gangliozydowi GD3; anty-ludzki rak płaskokomórkowy (SF-25); oraz
PL 213 948 B1 przeciwciał anty-ludzki antygen leukocytowy (HLA, human leukocyte antigen), takich jak Smart IDlO i przeciwciało Oncolym (Lym-1) anty-HLA DR.
Jakkolwiek korzystne jest, jeżeli glikoproteina będąca przedmiotem zainteresowania to przeciwciało, bierze się również pod uwagę inne glikoproteiny zawierające region Fc, które można zmodyfikować według opisanych tu metod. Przykładem takiej cząsteczki jest immunoadhezyna.
D. Wytwarzanie immunoadhezyn
Najprostszy i najbardziej oczywisty projekt imunoadhezyny łączy w sobie domenę/y wiążące adhezyny (np. zewnątrzkomórkową domenę (ECD) receptora) z regionem Fc łańcucha ciężkiego immunoglobuliny. Zwykle, podczas wytwarzania immunoadhezyn według niniejszego wynalazku, kwas nukleinowy kodujący domenę wiążącą adhezyny będzie przyłączony w postaci fuzji na końcu C do kwasu nukleinowego kodującego koniec N sekwencji domeny stałej immunoglobuliny, jednak fuzje N-końcowe są także możliwe.
Typowo, w takich fuzjach kodowany chimerowy polipeptyd zachowa przynajmniej funkcjonalnie aktywne domeny zawiasową, CH2 i CH3 regionu stałego łańcucha ciężkiego immunoglobuliny. Robi się także fuzje na końcu C części Fc domeny stałej lub bezpośrednio N-końcowe do CH1 łańcucha ciężkiego lub odpowiedniego regionu łańcucha lekkiego. Dokładne miejsce, w którym zrobiona jest fuzja, nie jest istotne; poszczególne miejsca są dobrze znane i można je wybrać w celu zoptymalizowania aktywności biologicznej, wydzielania lub właściwości wiążących immunoadhezyny.
W korzystnym wykonaniu sekwencja adhezyny jest przyłączona w postaci fuzji do końca N regionu Fc immunoglobuliny Gi (IgG1). Możliwe jest przyłączenie całego regionu stałego łańcucha ciężkiego do sekwencji adhezyny. Jednak, bardziej korzystnie, w fuzji stosuje się sekwencję zaczynającą się w regionie zawiasowym zaraz powyżej miejsca cięcia dla papainy, które określa chemicznie Fc IgG (tj. reszty 216, przyjmując, że pierwszą resztą regionu stałego łańcucha ciężkiego jest 114) lub analogicznego miejsca innych immunoglobulin.
W szczególnie korzystnym wykonaniu sekwencja aminokwasowa immnunoadhezyny jest przyłączona w postaci fuzji do (a) regionu zawiasowego i CH2 oraz CH3 lub (b) domen CH1, zawiasowej, CH2 oraz CH3 łańcucha ciężkiego IgG.
W przypadku immunoadhezyn bispecyficznych immunoadhezyny organizują się w multimery, a w szczególności w heterodimery lub heterotetramery. Ogólnie, te złożone immunoglobuliny będą posiadały znane struktury jednostkowe. Podstawowa czterołańcuchowa jednostka strukturalna jest formą, w której występują IgG, IgD oraz IgE. Czterołańcuchowa jednostka strukturalna jest powtarzana w immunoglobulinach o wyższej masie cząsteczkowej; IgM ogólnie występuje jako pentamer czterech podstawowych jednostek utrzymywany razem przy użyciu wiązań dwusiarczkowych. Globulina IgA, a czasami globulina IgG, także mogą występować w formie multimerycznej w osoczu. W przypadku multimeru każda z czterech jednostek może być taka sama lub inna.
Różne przykładowe złożone immunoadhezyny objęte zakresem niniejszego wynalazku są poniżej schematycznie przedstawione w postaci diagramów:
(a) ACL-ACL;
(b) ACH-(ACh, ACL-ACH,- ACL-VHCH lub VLCL-ACH);
(c) ACL-ACH-(ACL-ACH, ACL-VHCH, VLCL-ACH Lub VLCL-VHCH) (d) ACL-VHCH- (ACH lub ACL-VHCH Lub VLCL-ACH);
(e) VLCL-ACH-(ACL-VHCH Lub VLCL-ACH) oraz (f) (A-Y)n-(VLCL-VHCH)2, gdzie:
każde A oznacza identyczne lub różne sekwencje aminokwasowe adhezyn;
VL to domena zmienna łańcucha lekkiego immunoglobuliny;
VH to domena zmienna łańcucha ciężkiego immunoglobuliny;
CL to domena stała łańcucha lekkiego immunoglobuliny;
CH to domena stała łańcucha ciężkiego immunoglobuliny; n to liczbę całkowita większa niż 1;
Y to reszta czynnika wytwarzającego kowalencyjne wiązania krzyżowe.
Dla zwięzłości opisu powyższe struktury pokazują tylko kluczowe cechy; nie wskazują one domen łączących (J) lub innych domen immunoglobulin, ani nie pokazano wiązań dwusiarczkowych. Jednak, kiedy takie domeny są wymagane do aktywności wiążącej, powinno się całość tak skonstruować, aby były one obecne w swoich zwykłych pozycjach, które zajmują w cząsteczkach immunoglobulin.
PL 213 948 B1
Alternatywnie, sekwencje adhezyn można wstawić pomiędzy sekwencje łańcucha ciężkiego i łańcucha lekkiego immunoglobuliny, tak aby otrzymać immunoglobulinę zawierającą chimerowy łańcuch ciężki. W tym wykonaniu sekwencje adhezyny są przyłączone w postaci fuzji do końca 3' łańcucha ciężkiego immunoglobuliny na każdym ramieniu immunoglobuliny, albo pomiędzy domenę zawiasową i CH2 lub pomiędzy domeny CH2 i CH3. Podobne konstrukty zostały opisane w Hoogenboom i wsp., Mol. Immunol., 28: 1027-1037 (1991).
Jakkolwiek obecność łańcucha lekkiego immunoglobuliny nie jest wymagana w immunoahezynach według niniejszego wynalazku, łańcuch lekki immunoglobuliny może być obecny albo w postaci kowalencyjnie związanej z fuzją polipeptydową adhezyna-łańcuch ciężki immunoglobuliny albo bezpośrednio przyłączony w postaci fuzji do adhezyny. W pierwszym przypadku DNA kodujący łańcuch lekki immunoglobuliny typowo wykazuje koekspresję z DNA kodującym fuzję białkową adhezynałańcuch ciężki immunoglobuliny. W trakcie wydzielania hybrydowy łańcuch ciężki i łańcuch lekki będą kowalencyjnie związane w celu zapewnienia struktury immunoglobulinopodobnej zawierającej dwie połączone przy użyciu wiązania dwusiarczkowego pary łańcuch ciężki immunoglobuliny-łańcuch lekki. Sposoby odpowiednie do wytwarzania takich struktur są ujawnione na przykład w patencie USA nr 4 816 567 wydanym 28 marca 1989.
Immunoadhezyny najdogodniej konstruuje się poprzez połączenie sekwencji cDNA kodującej część adhezyny z sekwencją cDNA immunoglobuliny w ramce odczytu. Jednak można także zastosować fuzję do fragmentów genomowych immunoglobulin (patrz, np., Aruffo i wsp., Cell, 61: 1303-1313 (1990) oraz Stamenkovic i wsp., Cell, 66: 1133-1144 (1991)). Drugi typ fuzji wymaga obecności sekwencji regulatorowych Ig dla ekspresji. cDNA kodujące regiony stałe łańcucha ciężkiego IgG można wyizolować technikami hybrydyzacji lub łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR) w oparciu o opublikowane sekwencje z bibliotek cDNA pochodzących z limfocytów śledziony lub krwi obwodowej. cDNA kodujące części „adhezynową” i immunoglobulinową immunoadhezyny są wstawione tandemowo do wektora plazmidowego, który kieruje wydajną ekspresją w wybranych komórkach gospodarza.
E. Wektory, komórki gospodarzy i metody rekombinowania DNA
Wynalazek dostarcza również wyizolowanego kwasu nukleinowego kodującego ujawnioną tu glikoproteinę, wektorów i komórek gospodarzy zawierających kwas nukleinowy oraz technik rekombinowania DNA do wytwarzania glikoproteiny.
Aby wytworzyć glikoproteinę poprzez rekombinowanie DNA, izoluje się kodujący je kwas nukleinowy i wstawia do zdolnego do replikacji wektora w celu dalszego klonowania (powielania DNA) lub do ekspresji. DNA kodujący glikoproteinę można łatwo wyizolować i zsekwencjonować przy zastosowaniu konwencjonalnych procedur (np. poprzez użycie sond oligonukleoytydowych, które są zdolne do specyficznego wiązania się z genami kodującymi glikoproteinę). Dostępnych jest wiele wektorów. Składniki wektorów generalnie obejmują między innymi jeden albo więcej spośród: sekwencji sygnałowej, początku replikacji, jednego albo większej liczby genów markerowych i elementów wzmacniających, promotora oraz sekwencji terminacyjnej dla transkrypcji.
(i) Sekwencja sygnałowa
Glikoproteinę według tego wynalazku można wytwarzać poprzez rekombinowanie DNA nie tylko bezpośrednio, ale również jako fuzję polipeptydową z peptydem heterologicznym, którym jest korzystnie sekwencja sygnałowa albo inny polipeptyd mający specyficzne miejsce cięcia na końcu N dojrzałego białka albo polipeptydu. Korzystne jest, jeżeli wybrana heterologiczną sekwencja sygnałowa jest taką, która jest rozpoznawana i ulega obróbce (tj. cięciu przez peptydazę sygnałową) w komórce gospodarza. W przypadku prokariotycznych komórek gospodarza, które nie rozpoznają i dokonują obróbki sekwencji sygnałowej natywnego polipeptydu, sekwencję sygnałową zastępuje się sekwencją prokariotczną wybraną na przykład z grupy złożonej z liderów alkalicznej fosfatazy, penicylinazy, lpp, wrażliwej na ciepło enterotoksyny II. Do wydzielenia z drożdży natywną sekwencję sygnałową można zastąpić, np. przez lider inwertazy drożdżowej, lider czynnika α (włączając w to lidery czynnika α Saccharomyces i Kluyveromyces) albo lider alkalicznej fosfatazy, lider glukoamylazy C. albicans lub sekwencję sygnałową opisaną w WO 90/13646. Przy ekspresji w komórkach ssaków, dostępne są ssacze sekwencje sygnałowe, jak również wirusowe lidery sekrecyjne, na przykład sekwencja sygnałowa gD wirusa opryszczki pospolitej. DNA dla takiego regionu prekursorowego poddaje się ligacji w ramce odczytu z DNA kodującym polipeptyd.
PL 213 948 B1 (ii) Początek replikacji
Zarówno wektory do ekspresji, jak i klonowania, zawierają sekwencję kwasu nukleinowego, która umożliwia wektorowi replikację w komórkach jednego albo większej liczby wybranych gospodarzy. Generalnie, w wektorach do klonowania sekwencją tą jest taka, która umożliwia wektorowi replikację niezależnie od DNA chromosomowego gospodarza i obejmuje początki replikacji albo autonomicznie replikujące się sekwencje. Takie sekwencje są dobrze znane dla wielu bakterii, drożdży i wirusów. Początek replikacji z plazmidu pBR322 jest odpowiedni dla większości bakterii Gram-ujemnych, początek replikacji plazmidu 2μ jest odpowiedni dla drożdży, a różne początki wirusowe (SV40, polyoma, adenowirusa, VSV lub BPV) są przydatne dla wektorów do klonowania w komórkach ssaczych. Generalnie początek replikacji nie jest potrzebny w ssaczych wektorach ekspresyjnych (początek replikacji SV40 może być typowo używany jedynie dlatego, że zawiera wczesny promotor).
(iii) Gen selekcyjny
Wektory do ekspresji i klonowania mogą zawierać gen selekcyjny, zwany również markerem selekcyjnym. Typowe geny selekcyjne kodują białka, które:
(a) nadają oporność na antybiotyki lub inne toksyny, np., ampicylinę, neomycynę, metotreksan lub tetracyklinę;
(b) komplementują niedobory auksotroficzne albo (c) dostarczają krytycznych składników odżywczych niedostępnych ze złożonej pożywki, np. gen kodujący racemazę D-alaniny dla Bacilli.
Jeden ze schematów selekcji wykorzystuje lek dla zahamowania wzrostu komórki gospodarza. Te komórki, które zostały z powodzeniem stransformowane heterologicznm genem, wytwarzają białko nadające oporność na lek, a zatem przezywają tryb selekcji. W przykładach takiej selekcji dominującej stosuje się leki: neomycynę, kwas mykofenolowy i higromycynę.
Inny przykład odpowiednich markerów selekcyjnych dla komórek ssaczych stanowią te, które umożliwiają identyfikację komórek zdolnych do pobierania kwasu nukleinowego dla polipeptydu, takie jak DHFR, kinaza tymidynowa, metalotioneina-I i -II, korzystnie geny metalotionein naczelnych, deaminaza adenozynowa, dekarboksylaza ornitynowa, etc.
Przykładowo, komórki stransformowane genem selekcyjnym DHFR identyfikuje się najpierw poprzez hodowanie wszystkich transformantów w pożywce hodowlanej, która zawiera metotreksan (Mtx), współzawodniczącego antagonistę DHFR.
Odpowiednimi komórkami gospodarza, kiedy stosuje się DHFR typu dzikiego, jest linia komórkowa jajnika chomika chińskiego (CHO) bez aktywności DHFR.
Alternatywnie, komórki gospodarza (a w szczególności gospodarza typu dzikiego, który zawiera endogenny DHFR) transformowane lub kotransformowane sekwencjami DNA kodującymi polipeptyd, białko DHFR typu dzikiego i inny marker selekcyjny, taki jak 3'-fosfotransferazę aminoglikozydową (APH) można selekcjonować poprzez hodowlę komórek na pożywce zawierającej czynnik selekcyjny dla podlegającego selekcji markera, takiego jak antybiotyk aminoglikozydowy, np. kanamycyna, neomycyna lub G418. Patrz patent USA nr 4 965 199.
Odpowiednim genem selekcyjnym do zastosowania w drożdżach jest gen trpl obecny w plazmidzie YRp7 (Stinchcomb i wsp., Nature, 282: 39 (1979)). Gen trp1 dostarcza markera selekcyjnego dla zmutowanego szczepu drożdży z brakiem zdolności do wzrostu na tryptofanie, na przykład ATCC nr 44076 lub PEP4-1 (Jones, Genetics, 85: 12 (1977). Brak trp1 w genomie komórek gospodarza drożdżowego stwarza odpowiednie środowisko dla wykrywania transformacji poprzez wzrost w nieobecności tryptofanu. Podobnie szczepy drożdży bez Leu2- (ATCC 20622 lub 38626) są komplementowane przez znane plazmidy niosące gen Leu2.
Dodatkowo, wektory pochodzące z 1,6 μm kolistego plazmidu pKD1 można użyć do transformacji drożdży Kluyveromyces. Alternatywnie, doniesiono o systemie ekspresji do wytwarzania na dużą skalę zrekombinowanej chymozyny cielęcej dla K. laetis. Van den Berg, BiolTechnology, 8: 135 (1990). Ujawniono również stabilne wielokopiowe wektory do ekspresji do wydzielenia dojrzałej zrekombinowanej ludzkiej albuminy surowiczej przez przemysłowe szczepy Kluyveromyces. Fleer i wsp., BiolTechnology, 9: 968-975 (1991).
(iv) Składnik promotorowy
Wektory do ekspresji i klonowania zwykle zawierają promotor, który jest rozpoznawalny przez organizm gospodarza i jest połączony funkcjonalnie z kwasem nukleinowym dla polipeptydu. Promotory przydatne do zastosowania z gospodarzami prokariotycznymi obejmują promotor phoA, β-laktamazy oraz systemy promotorowe laktozy, alkalicznej fosfatazy, system promotorowy tryptofanu (trp)
PL 213 948 B1 i promotory hybrydowe, takie jak promotor tac. Jednakże przydatne są inne znane promotory bakteryjne. Promotory do zastosowania w systemach bakteryjnych będą również zawierały sekwencję Shine-Dalgarno (S. D.) połączoną funkcjonalnie z DNA kodującym przeciwciało wielowartościowe.
Sekwencje promotorowe są znane dla organizmów eukariotycznych. W zasadzie wszystkie geny eukariotyczmne mają region AT-bogaty położony około 25 do 30 zasad od miejsca, gdzie rozpoczyna się transkrypcja. Inna sekwencja znajdująca się 70 to 80 zasad od miejsca startu transkrypcji wielu genów to region CNCAAT, gdzie N może być dowolnym nukleotydem. Na końcu 3' większości genów eukariotycznych jest sekwencja AATAAA, która może być sygnałem dla dodania ogona poli A do końca 3' sekwencji kodującej. Wszystkie te sekwencje są odpowiednio wstawione do eukariotycznych wektorów ekspresyjnych.
Przykłady odpowiednich sekwencji promotorowych do zastosowania z gospodarzami drożdżowymi obejmują promotory kinazy 3-fosfoglycerynianowej lub innych enzymów glikolitycznych, takich jak enolaza, dehydrogenaza glyceraldehydo-3-fosforanowa, heksokinaza, dekarboksylaza pirogronianowa, fosfofruktokinaza, izomeraza glukozo-6- fosforanowa, mutaza 3-fosfoglicerynianowa, kinaza pirogronianowa, izomeraza triozofosforanowa, izomeraza fosfoglukozowa i glukokinaza.
Inne promotory drożdżowe, które są promotorami indukowalnymi, mającymi dodatkową zaletę transkrypcji kontrolowanej przez warunki wzrostu to regiony promotorowe dla dehydrogenazy alkoholowej 2, izocytochromu C, kwaśnej fosfatazy, enzymów rozkładających związanych z metabolizmem azotu, metalotioneiny, dehydrogenazy gliceraldehydo-3-fosforanowej oraz enzymów odpowiedzialnych za wykorzystanie maltozy i galaktozy. Odpowiednie wektory i promotory do zastosowania przy ekspresji w drożdżach są opisane ponadto w EP nr 73 657. Wzmacniacze drożdżowe są również korzystnie stosowane z promotorami drożdżowymi.
Transkrypcja polipeptydu z wektorów w ssaczych komórkach gospodarza jest kontrolowana na przykład przez promotory otrzymane z genomów wirusów, takich jak wirus polyoma, wirus ospy drobiu, adenowirus (taki jak Adenowirus 2), bydlęcy wirus brodawczaka, ptasi wirus mięsaka, cytomegalowirus, retrowirus, wirus zapalenia wątroby B, a najkorzystniej Małpi Wirus 40 (SV40), z heterologicznych promotorów ssaczych, np., promotora aktyny lub promotora immunoglobuliny, promotorów szoku cieplnego, przy założeniu, że promotory są zgodne z systemami komórkowymi gospodarza.
Wczesne i późne promotory wirusa SV40 można dogodnie otrzymać z fragmentu restrykcyjnego SV40, który również zawiera wirusowy początek replikacji SV40. Najwcześniejszy promotor ludzkiego cytomegalowirusa dogodnie jest otrzymać jako fragment restrykcyjny HindIII E. System ekspresji DNA w gospodarzach ssaczych przy zastosowaniu jako wektora bydlęcego wirusa brodawczaka jest ujawniony w patencie USA nr 4 419 446. Modyfikacja tego systemu jest opisana w patencie USA nr 4601978. Patrz także Reyes i wsp., Nature 297: 598-601 (1982) na temat ekspresji cDNA ludzkiego β-interferonu w komórkach mysich pod kontrolą promotora kinazy tymidynowej z wirusa opryszczki pospolitej. Alternatywnie jako promotor można zastosować długie odwrócone powtórzenia wirusa mięsaka Rousa.
(v) Element wzmacniacza
Transkrypcja DNA kodującego polipeptyd według tego wynalazku u wyższych Eucaryota jest często wzmacniana poprzez wstawienie do wektora sekwencji wzmacniacza. Znanych jest wiele sekwencji wzmacniaczy z genów ssaczych (globiny, elastazy, albuminy, α-fetoproteiny oraz insuliny). Jednakże, typowo używa się wzmacniacza z wirusa komórek eukariotycznych. Przykłady obejmują wzmacniacz SV40 po stronie późnej początku replikacji (bp 100-270), wzmacniacz wczesnego promotora cytomegalowirusa, wzmacniacz polyoma po stronie późnej początku replikacji oraz wzmacniacze adenowirusa. Patrz także Yaniv, Nature 297: 17-18 (1982) na temat elementów wzmacniających dla aktywacji promotorów eukariotycznych. Wzmacniacz może być wstawiony do wektora w pozycji 5' lub 3' sekwencji kodującej polipeptyd, ale korzystne jest, jeżeli jest położony po stronie 5' promotora.
(vi) Składnik terminacji transkrypcji
Wektory do ekspresji stosowane w komórkach gospodarza eukariotycznego (drożdże, grzyby, rośliny, zwierzęta, człowiek lub komórki jądrzaste innych organizmów wielokomórkowych) będą również sekwencje niezbędne do terminacji transkrypcji i do stabilizowania mRNA. Takie sekwencje są powszechnie dostępne z końców 5', a czasami 3' nie ulegających translacji regionów eukariotycznych albo wirusowych DNA lub cDNA. Regiony te zawierają odcinki nukleotydowe podlegające transkrypcji jako fragmenty poliadenylowane w nie ulegającej translacji części mRNA kodującego polipeptyd. Jednym z przydatnych składników terminacji transkrypcji jest region poliadenylacji bydlęcego hormonu wzrostu. Patrz WO 94/11026 i ujawniony tam wektor ekspresyjny.
PL 213 948 B1 (vii) Selekcja i transformacja komórek gospodarza
Odpowiednie komórki gospodarza do klonowania i ekspresji DNA w rozważanych tu wektorach są opisanymi powyżej komórkami prokariotycznymi, drożdżowymi albo wyższych Eukaryota. Odpowiednie tego celu organizmy prokariotyczne obejmują Eubacteriae, takie jak organizmy Gram ujemne lub Gram dodatnie, na przykład, Enterobacteriaceae, takie jak Escherichia, np., E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, np., Salmonella typhimurium, Serratia, np. Serratia marcescans oraz Shigella, jak również Bacilli, takie jak B. subtilis i B. Iicheniformis (np. B. Iicheniformis 41 P ujawniony w DD 266710 opublikowanym 12 kwietnia 1989), Pseudomonas, takie jak P. aeruginosa i Streptomyces. Jednym z korzystnych gospodarzy do klonowania w E. coli jest E. coli 294 (ATCC 31446), jakkolwiek inne szczepy, takie jak E. coli B, E. coli X1776 (ATCC 31537) i E. coli W3110 (ATCC 27325) są również odpowiednie. Przykłady te stanowią ilustrację, a nie ograniczenie.
Poza organizmami prokariotycznymi, mikroorganizmy eukariotyczne, takie ja grzyby nitkowate albo drożdże są przydatnymi gospodarzami do klonowania i ekspresji dla wektorów kodujących polipeptyd. Saccharomyces cerevisiae albo zwyczajne drożdże piekarnicze, są najpowszechniej używanymi wśród mikroorganizmów gospodarzami - niższymi Eukaryota. Jednakże powszechnie dostępne są i przydatne tu liczne inne rodzaje, gatunki i szczepy, takie jak Schizosaccharomyces pombe; gospodarze Kluyveromyces, tacy jak, np., K. lactis, K. fragilis (ATCC 12424), K. bulgaricus (ATCC 16045), K. wickeramii (ATCC 24,178), K. waltii (ATCC 56500,), K. drosophilarum (ATCC 36906),
K. Thermotolerans oraz K. marxianus; Yarrowia (EP nr 402 226); Pichia pastors (EP nr 183 070); Candida; Trichoderma reesia (EP nr 244 234); Neurospora crassa; Schwanniomyces, taki jak Schwanniomyces occidentalis oraz grzyby nitkowate, takie jak np. Neurospora, Penicillium, Tolypocladium i gospodarze Aspergillus, tacy jak A. nidulans i A. niger.
Odpowiednie komórki gospodarzy do ekspresji glikozylowanego polipeptydu pochodzą z organizmów wielokomórkowych. Przykłady komórek bezkręgowców obejmują komórki roślinne i komórki owadów. Zidentyfikowano liczne szczepy bakulowirusowe i warianty oraz odpowiadające im permisywne komórki gospodarzy owadzich z gospodarzy takich jak Spodoptera frugiperda (gąsienica), Aedes aegypti (komar), Aedes albopictus (komar), Drosophila melanogaster (muszka owocowa) oraz Bombyx mori. Rozmaite szczepy wirusowe do transfekcji są publicznie dostępne, np. wariant L-1 Autographa cali fornica NPV oraz szczep Bm-5 Bombyx mori NPV i takie wirusy można zastosować tu według niniejszego wynalazku, szczególnie do transfekcji komórek Spodoptera frugiperda.
Hodowle komórek roślinnych: bawełny, kukurydzy, ziemniaka, soi, petunii, pomidora i tytoniu można również użyć jako gospodarzy.
Jednakże, główne zainteresowanie dotyczy komórek kręgowców, a namnażanie komórek kręgowców w hodowli (hodowli tkankowej) stało się rutynową procedurą. Przykładami przydatnych linii komórek ssaków-gospodarzy jest linia komórek małpiej nerki CV1 transformowana SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); linia ludzkiej embrionalnej nerki (293 lub komórki 293 subklonowane do wzrostu w hodowli zawiesinowej, Graham i wsp., J. Gen Virol. 36: 59 (1977)); komórki nerki noworodka chomika (BHK, ATCC CCL 10); komórki jajnika chomika chińskiegi/DHFR (CHO, Urlaub i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216 (1980)); mysie komórki sertoli (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980)); małpie komórki nerki (CV1 ATCC CCL 70); komórki nerki zielonej małpy afrykańskiej (VERO76, ATCC CRL-1587); ludzkie komórki raka szyjki macicy (HELA, ATCC CCL 2); komórki nerki psa (MDCK, ATCC CCL 34); komórki wątroby szczura buffalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442); ludzki komórki płuc (W138, ATCC CCL 75); ludzkie komórki wątroby (Hep G2, HB 8065); mysi rak gruczołu mlecznego (MMT 060562, ATCC CCL51); komórki TRI (Mather i wsp., Annals N. Y. Acad. Sci. 383: 44-68 (1982)); komórki MRC 5; komórki FS4; mysie komórki szpiczaka, takie jak NSO (np. RCB0213, Bebbington i wsp., Bio/Technology 10: 169 (1992)) oraz komórki SP2/0 (np. komórki SP2/0-Ag14, ATCC CRL 1581); szczurze komórki szpiczaka, takie jak komórki YB2/0 np. komórki YB2/3HL.P2.G11.16Ag.20, ATCC CRL 1662); oraz ludzka linia wątrobiaka (Hep G2). Komórki CHO bez reduktazy dihydrofolianowej (DHFR) są korzystną linią komórkową do wykonania wynalazku, z CHO-K1, DUX-B11, CHO-DP12, CHO-DG44 (Urlaub i wsp., Somatic Cell and Molecular Genetics 12: 555 (1986)) oraz Lec 13 będące przykładowymi przykładowymi liniami gospodarzy CHO. Komórki DUX-B11 zostały stransfekowane pSVEHIGNeo niosącym cDNA dla preproinsuliny, z wytworzeniem klonu CHO-DP12. W przypadku komórek gospodarza CHO-K1 (ATCC CRL 61), DUX-B11 (Simonsen i wsp. PNAS (USA) 80: 2495-2499 (1983)), DG44 lub CHO-DP12, mogą być one zmienione w taki sposób, że brak im zdolności do fukozylacji wyrażanych w nich białek.
PL 213 948 B1
Wynalazek można również zastosować do komórek hybrydom. Termin „hybrydoma” dotyczy hybrydowej linii komórkowej wytwarzanej poprzez fuzję nieśmiertelnej linii komórkowej pochodzenia immunologicznego i komórki wytwarzającej przeciwciało. Termin obejmuje potomstwo heterohybrydowych fuzji szpiczaka, które są wynikiem fuzji z komórkami ludzkimi i mysią linia komórkową szpiczaka połączonymi następnie z komórką plazmatyczną, powszechnie znane jako linia komórkowa triomy. Ponadto, termin ma obejmować dowolną unieśmiertelnioną linię komórkową, która wytwarza przeciwciała, taką jak na przykład kwadromy (patrz, np., Milstein i wsp., Nature, 537: 3053 (1983)). Hybrydowe llinie komórkowe mogą być z dowolnego gatunku, włączając w to człowieka i mysz.
W najbardziej korzystnych wykonaniach komórką ssaka jest komórka ssaka inna niż hybrydoma, która została stransformowana egzogennym wyizolowanym kwasem nukleinowym kodującym polipeptyd będący przedmiotem zainteresowania. „Egzogenny kwas nukleinowy” lub „heterologiczny kwas nukleinowy” ma oznaczać sekwencję kwasu nukleinowego, która jest obca dla komórki albo homologiczna dla komórki, ale w pozycji w obrębie kwasu nukleinowego komórki gospodarza, w której kwas nukleinowy normalnie się nie znajduje.
(viii) Hodowanie komórek gospodarzy
Komórki gospodarza transformuje się opisanymi powyżej wektorami do klonowania i ekspresji w celu wytworzenia polipeptydu i hoduje w konwencjonalnej pożywce hodowlanej zmodyfikowanej odpowiednio do indukowania promotorów, selekcjonowania transformantów albo powielania genów kodujących pożądane sekwencje.
Komórki gospodarzy stosowane do wytwarzania polipeptydu według tego wynalazku można hodować w rozmaitych pożywkach. Dostępne handlowo pożywki, takie jak Ham's FlO (Sigma), Minimal Essential Medium ((MEM), (Sigma), RPMI-1640 (Sigma) oraz Dulbecco's Modified Eagle's Medium ((DMEM), Sigma) są przydatne do hodowania komórek gospodarzy. Ponadto, jako pożywkę hodowlaną dla komórek gospodarza można użyć dowolną z pożywek opisanych w Ham i wsp., Meth. Enz. 58: 44 (1979), Barnes i wsp., Anal. Biochem. 102: 255 (1980), pat. USA nr 4 767 704; 4 657 866; 4 927 762; 4 560 655 lub 5 122 469; WO 90/03430; WO 87/00195 lub patent USA nr 30 985. Dowolna z tych pożywek może być uzupełniona, jak potrzeba, hormonami i/lub innymi czynnikami wzrostowymi (takimi jak insulina, transferyna lub nabłonkowy czynni wzrostowy), sole (takie jak chlorek sodu, wapń, magnez i fosforan) bufory (takie jak HEPES), nukleotydy (takie jak adenozyna i tymidyna), antybiotyki (takie jak lek GENTAMYCIN™), elementy śladowe zdefiniowane jako związki nieorganiczne zwykle obecne w stężeniu końcowym w zakresie mikromolarnym) oraz glukoza lub ekwiwalentne źródło energii. Dowolne inne niezbędne uzupełnienia można również dodać w odpowiednich stężeniach, które będą znane specjalistom w tej dziedzinie. Warunki hodowli, takie jak temperatura, pH i temu podobne, są takie, jak stosowane uprzednio dla komórek gospodarza wybranego do ekspresji i będą oczywiste dla przeciętnego specjalisty w tej dziedzinie.
Wszystkie pożywki hodowlane typowo dostarczają co najmniej jednego składnika spośród jednego lub większej liczby następujących kategorii:
1) źródło energii, zwykle w postaci węglowodanu takiego jak glukoza;
2) wszystkie niezbędne aminokwasy i zwykle podstawowy zestaw dwudziestu aminokwasów plus cystyna;
3) witaminy i/lub inne związki organiczne wymagane w niskich stężeniach;
4) wolne kwasy tłuszczowe; oraz
5) elementy śladowe, gdzie elementy śladowe są zdefiniowane jako związki nieorganiczne albo występujące naturalnie elementy, które są typowo wymagane w bardzo niskich stężeniach, zwykle w zakresie mikromolowym.
Korzystne jest, jeżeli pożywka hodowlana jest wolna od surowicy, np. zawiera mniej niż około 5%, korzystnie mniej niż 1%, korzystniej mniej niż 0 do 0,1% surowicy i innych białek pochodzenia zwierzęcego. Jednakże mogą być one stosowane, jeśli potrzeba. W korzystnym wykonaniu wynalazku pożywka do hodowli komórek zawiera nadmiar aminokwasów. Aminokwasy, które są dostarczone w nadmiarze mogą być wybrane spośród Asn, Asp, Gly, He, Leu, Lys, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr i Val. Korzystnie, Asn, Asp, Lys, Met, Ser i Trp są dostarczone w nadmiarze. Przykładowo, można użyć aminokwasów, witamin, elementów śladowych i innych składników pożywki w pojedynczym albo dwukrotnym zakresie wyszczególnionym w patencie europejskim EP nr 307 247 lub patencie USA nr 6 180 401. Te dwa dokumenty są tu włączone jako odniesienie.
Do hodowli komórek ssaczych wyrażających pożądane białko i zdolnych do dodawania pożądanych węglowodanów w określonych pozycjach, można użyć wielu warunków hodowli przywiązując
PL 213 948 B1 szczególną uwagę hodowanym komórkom gospodarza. Odpowiednie warunki hodowli dla komórek ssaków są dobrze znane w tej dziedzinie (Cleveland i wsp., J. Immunol. Methods 56: 221-234 (1983)) albo mogą był łatwo ustalone przez specjalistę w tej dziedzinie (patrz na przykład, Animal Cell Culture: A Practical Approach wyd. 2, Rickwood, D. i Hames, B. D., wyd. Oxford University Press, New York (1992)) i różnią się zależnie od konkretnej wybranej komórki gospodarza.
(ix) Oczyszczanie glikoproteiny
Kiedy stosuje się techniki rekombinowania DNA, glikoproteina może być wytwarzana wewnątrzkomórkowo, w przestrzeni periplazmatycznej albo wydzielana bezpośrednio do pożywki. Jeżeli glikoproteina jest wytwarzana wewnątrzkomórkowo, w pierwszym etapie cząsteczkowe resztki, czy to komórki gospodarza czy fragmenty po lizie, usuwa się na przykład poprzez wirowanie albo ultrawirowanie. Carter i wsp., BiolTechnology 10: 163-167 (1992) opisuje procedurę izolowania przeciwciał, które są wydzielane do przestrzeni periplazmatycznej E. coli. Pokrótce, masę komórek rozmraża się w obecności octanu sodowego (pH 3,5), EDTA i fenylometylsulfonylofluorku (PMSF) przez około 30 min. Resztki komórek usuwa się poprzez wirowanie. Tam gdzie glikoproteina jest wydzielana do pożywki, supernatanty z takich systemów ekspresyjnych generalnie najpierw zatęża się przy użyciu dostępnych handlowo filtrów do zatężania białek, na przykład jednostek do ultrafiltracji Amicon lub Millipore Pellicon. Inhibitor proteaz, taki jak PMSF może być dodany na dowolnym z powyższych etapów w celu hamowania proteolizy, a antybiotyki można dodać w celu zapobiegania wzrostu przypadkowych zanieczyszczeń.
Kompozycję glikoproteiny wytworzoną z komórek można oczyścić stosując na przykład chromatografię na hydroksyloapatycie, elektroforezę w żelu, dializę oraz chromatografię powinowactwa, przy czym korzystną techniką oczyszczania jest chromatografia powinowactwa. Przydatność białka A jako ligandu powinowactwa zależy od rodzaju i izotypu regionu Fc immunoglobuliny, który jest obecny w glikoproteinie. Białko A można zastosować do oczyszczania przeciwciał, które opierają się na ludzkich łańcuchach ciężkich γ1, γ2 lub γ4 (Lindmark i wsp., J. Immunol. Meth. 62: 1-13 (1983)). Białko G jest polecane dla wszystkich izotypów mysich i ludzkiej γ3 (Guss i wsp., EMBO J. 5: 1567- 1575 (1986)). Podłożem, do którego ligand powinowactwa jest przytwierdzony jest najczęściej agaroza, ale dostępne są również inne podłoża. Stabilne mechanicznie podłoża, takie jak szkło o określonych porach lub poli(styrenodiwinylo)benzen umożliwiają szybsze tempo przepływu i krótszy czas obróbki niż można uzyskać z agarozą. Tam gdzie glikoproteina zawiera domenę CH3, do oczyszczania przydatna jest żywica Bakerbond ABX™ (J. T. Baker, Phillipsburg, NJ). Dostępne są również inne techniki oczyszczania białka, takie jak frakcjonowanie na kolumnie jonowymiennej, wytrącanie etanolem, HPLC z odwróconymi fazami, chromatografia na krzemionce, chromatografia na heparynaSEPHAROSE™, chromatografia na żywicy jonowymiennej anionowej albo kationowej (takiej jak kolumna z kwasu poliasparaginowego), chromatoognoskowanie, SDS-PAGE oraz wytrącanie siarczanem amonu, zależnie od glikoproteiny, która ma być odzyskana.
W jednym z wykonań glikoproteinę można oczyścić poprzez zastosowanie adsorpcji na substracie lektynowym (np. kolumnie powinowactwa do lektyny) w celu usunięcia z preparatu glikoproteiny zawierającej fukozę i wzbogacić go w glikoproteinę wolną od fukozy.
F. Analiza glikoprotein
Złożoną część węglowodanową glikoproteiny wytwarzanej sposobem według niniejszego wynalazku można łatwo analizować w celu ustalenia, czy reakcja glikozylacji opisana powyżej jest kompletna. Oligosacharydy analizuje się konwencjonalnymi technikami analizy węglowodanów. A zatem, przykładowo, techniki takie jak analiza na filtrach z lektyną, dobrze znane w tej dziedzinie, pokazują proporcje końcowej mannozy lub innych cukrów, takich jak galaktoza.
Korzystne jest, jeżeli węglowodany analizuje się przy zastosowaniu spektralna analizę mas MALD1-T0F jak w przykładzie 1, poniżej oraz Shields i wsp., J. Biol. Chem. 9 (2): 6591-6604 (2001).
Znanych jest w tej dziedzinie kilka metod analizy glikozylacji i są one przydatne w kontekście niniejszego wynalazku. Takie metody dostarczają informacji dotyczącej tożsamości i składu oligosacharydu przyłączonego do peptydu. Sposoby analizy węglowodanu przydatne w niniejszym wynalazku obejmują między innymi chromatografię na HPAEC-PAD, która wykorzystuje chromatografię anionowymienną z wysokim pH w celu rozdzielenia oligosacharydów w oparciu o ładunek; NMR; spektrometrię mas; HPLC; GPC; analizę składu monosacharydów; kolejne trawienia enzymatyczne.
Dodatkowo, znane są sposoby uwalniania oligosacharydów. Metody te obejmują:
1) enzymatyczną, np. z zastosowaniem fukozydazy, takiej jak α-L-fukozydazy w celu usunięcia fukozy;
PL 213 948 B1
2) eliminację poprzez zastosowanie ostrych warunków alkalicznych w celu uwolnienia głównie struktur połączonych przez O;
3) metody chemiczne z użyciem bezwodnej hydrazyny w celu uwolnienia oligosacharydów połączonych, zarówno przez N, jak i przez O;
Cukry obojętne i aminowe można oznaczyć poprzez wysokosprawną chromatografię anionowymienną w połączeniu z pulsową detekcją amperometryczną (HPAE-PAD Carbohydrate System, Dionex Corp.). Przykładowo, cukry można uwalniać poprzez hydrolizę w 20% (obj./obj.) kwasie trifluorooctowym w IOO0C przez 6 godz. Hydrolizaty suszy się następnie poprzez liofilizację lub przy zastosowaniu Speed-Vac (Savant Instruments). Reszty rozpuszcza się następnie w 1% roztworze trójwodnego octanu sodowego i analizuje na kolumnie HPLC-AS6 jak opisano w Anumula i wsp. Anal. Biochem. 195: 269-280 (1991).
Kwas sialowy można oznaczyć oddzielnie poprzez zastosowanie bezpośredniej metody kolorymetrycznej według Yao i wsp. Anal Biochem. 179: 332-335 (1989)) w trzech powtórzeniach próbek. W korzystnych wykonaniach używany jest kwas tiobarbaturowy (TBA) według Warren, L. J. Biol. Chem., 238: (8) (1959).
Alternatywnie, można przeprowadzić analizę węglowodanów na filtrze. Według tej procedury związane z białkiem węglowodany wykrywa się stosując komercyjny system wykrywania glikanów (Boehringer), który opiera się na procedurze oksydacyjnej analizy immunologicznej na filtrze opisanej przez Haselbeck i Hosel (Haselbeck i wsp. Glycoconjugate J., 7: 63 (1990)).
Metody analizy obejmują te opisane dla analizy oligosacharydów związanych z przeciwciałem i opisane na przykład w Wormald i wsp., Biochem. 36: 1370-1380 (1997); Sheeley i wsp. Anal. Biochem. 247: 102-110 (1997) oraz Cant i wsp., Cytotechnology 15: 223-228 (1994), jak również zacytowanych tam odnośnikach.
G. Kompozycje farmaceutyczne
Kompozycje terapeutyczne glikoproteiny można wytwarzać poprzez mieszanie glikoproteiny mającej pożądany stopień czystości z ewentualnymi farmaceutycznie dopuszczalnymi nośnikami, zaróbkami lub stabilizatorami (Remington's Pharmaceutical Sciences wydanie 16, Osol, A. Ed. (1980)), w postaci preparatów liofilizowanych albo roztworów wodnych. Dopuszczalne nośniki, zaróbki lub stabilizatory są nietoksyczne dla biorców w zastosowanych dawkach i stężeniach i obejmują bufory, takie jak fosforan, cytrynian i inne kwasy organiczne, przeciwutleniacze, włączając w to kwas askorbinowy i metioninę; środki konserwujące (takie jak chlorek oktadecylodimetylobenzyloamonowy; chlorek heksametoniowy; chlorek benzalkoniowy, chlorek benzetoniowy; alkohol fenolowy, butylowy lub benzylowy; parabeny alkilowe, takie jak paraben metylowy lub propylowy; katechol; rezorcynol; cycloheksanol; 3-pentanol; oraz m-krezol); polipeptydy o niskiej masie cząsteczkowej (mniej niż około 10 reszt); białka, takie jak albumina z surowicy, żelatyna albo immunoglobuliny; polimery hydrofilowe, takie jak poliwinylopirolidon; aminokwasy takie jak glicyna, glutamina, asparagina, histidyna, arginina lub lizyna; monosaccharydy, disacharydy i inne węglowodany włączając w to glukozę, mannozę lub dekstryny; czynniki chelatujące, takie jak EDTA; cukry, takie jak sacharoza, mannitol, trehaloza lub sorbitol; tworzące sole jony, takie jak sodowe; kompleksy metali (np. kompleksy Zn-białko) i/lub niejonowe związki powierzchniowo czynne, takie jak TWEEN™, PLURONICS™ lub glikol polietylenowy (PEG).
Rozważane tu kompozycje mogą również zawierać jeden albo większą liczbę związków czynnych niezbędnych podczas leczenia przy poszczególnych wskazaniach, korzystnie o uzupełniających się aktywnościach, które nie mają na siebie wzajemnie szkodliwego wpływu. Przykładowo, kombinacja może zawierać ponadto inne przeciwciało albo czynnik chemioterapeutyczny. Takie cząsteczki powinny być obecne w kompozycji w ilościach, które są skuteczne dla zamierzonych potrzeb.
Składniki czynne można również zamykać w mikrokapsułkach wytwarzanych na przykład techniką koacerwacji albo polimeryzacji międzyfazowej, na przykład mikrokapsułkach hydroksymetylocelulozowych albo żelatynowych, odpowiednio i mikrokapsułkach poli(metylometacylanowych), odpowiednio, w koloidalnym systemie dostarczania leków (na przykład liposomy, mikrokulki albuminowe, mikroemulsje, nanocząstki i nanokapsułki) lub w makroemulsjach. Takie techniki są ujawnione w Remington's Pharmaceutical Sciences wyd. 16, Osol, A. Ed. (1980).
Kompozycje do stosowania in vivo muszą być jałowe. To można łatwo osiągnąć poprzez filtrację przez błony filtracyjne.
Można również wytworzyć preparaty o opóźnionym uwalnianiu. Odpowiednie przykłady preparatów o opóźnionym uwalnianiu obejmują półprzepuszczalne podłoża ze stałych hydrofobowych poliPL 213 948 B1 merów zawierających przeciwciało, gdzie podłoża wytwarza się w postaci uformowanych artykułów, np. błon albo mikrokapsułek. Przykłady podłóż o opóźnionym uwalnianiu obejmują poliestry, hydrożele (na przykład, poli(2-hydroksyetylometakrylan) albo poli(winyloalkohol)), polimleczany (patent USA nr 3 773 919), kopolimery kwasu L-glutaminowego oraz γ-etylo-L-glutaminianu, nie podlegający rozkładowi octan etyleno-winylowy, podlegające rozkładowi kopolimery kwas mlekowy-kwas glikolowy, takie jak LUPRON DEPOT™ (wstrzykiwalne mikrokulki składające się kopolimeru kwas mlekowykwas glikolowy i octanu leuprolidowego) oraz kwas poli-D-(-)-3-hydroksymasłowy. Jakkolwiek polimery, takie jak octan etyleno-winylowy i kwas mlekowy-kwas glikolowy umożliwiają uwalnianie cząsteczek na przestrzeni 100 dni, pewne hydrożele uwalniają białka w krótszych okresach czasu. Po zamknięciu w kapsułki przeciwciała pozostają w organizmie przez długi i mogą denaturować albo agregować jako wynik wystawienia na działanie wilgoci w 37°C, co prowadzi do utraty aktywności biologicznej i możliwych zmian w immunogenności. Można zaprojektować racjonalne strategie dla stabilizacji w zależności od mechanizmu, który w tym uczestniczy. Przykładowo, jeżeli odkryty mechanizm agregacji jest tworzeniem się międzycząsteczkowych wiązań S-S poprzez wymianę tio-disiarczkową, stabilizację można uzyskać poprzez modyfikacje reszt sulfhydrylowych, liofilizację z roztworów kwaśnych, kontrolowanie zawartości wilgoci, z zastosowaniem odpowiednich dodatków i opracowywanie specyficznych złóż polimerowych.
Kompozycje farmaceutyczne mogą być liofilizowane. Kompozycje liofilizowanych przeciwciał są opisane w patencie USA nr 6 267 958. Stabilne wodne kompozycje przeciwciał są opisane w patencie USA nr 6 171 586 B1.
H. Nie-terapeutyczne zastosowania glikoproteiny
Glikoproteinę według wynalazku można zastosować jako czynnik do oczyszczania poprzez powinowactwo. W tym procesie, glikoproteinę unieruchamia się na fazie stałej, takiej jak złoże Sephadex albo bibuła filtracyjna stosując metody znane w tej dziedzinie. Doprowadza się do kontaktu unieruchomionej glikoproteiny z próbką zawierającą antygen, który ma być oczyszczony, a następnie podłoże przemywa się odpowiednim roztworem, który będzie usuwać zasadniczo cały materiał z próbki z wyjątkiem antygenu, który ma być oczyszczony, związanym z unieruchomioną glikoproteiną. Na koniec podłoże przemywa się innym odpowiednim roztworem, takim jak bufor glicynowy pH 5,0, który będzie uwalniał antygen z glikoproteiny.
Glikoproteina może być również przydatna w testach diagnostycznych, np. do wykrywania ekspresji antygenu będącego przedmiotem zainteresowania w konkretnych komórkach, tkankach lub surowicy.
Do zastosowań diagnostycznych, glikoproteina będzie typowo wyznakowana wykrywalną resztą. Dostępnych jest wiele znaczników, które generalnie grupuje się w następujące kategorie:
oc -i λ ή o jod (a) Radioizotopy, takie jak 35S, 14C, 125I, 3H i 131I. Glikoproteina może być wyznakowana radioizotopem przy użyciu technik opisanych na przykład w Current Protocols in Immunology, tomy 1 i 2, Coligen i wsp., Wyd. Wiley-Interscience, New York, New York, Wyd. (1991), a radioaktywność można mierzyć przy zastosowaniu zliczania w scyntylatorze.
(b) Znaczniki fluorescencyjne, takie jak chelaty ziem rzadkich (chelaty europu) lub fluoresceina i jej pochodne, rodamina i jej pochodne, dansyl, Lissamina, fikoerytryna i czerwień teksańska są dostępne. Znaczniki fluorescyjne można połączyć z glikoproteiną przy zastosowaniu technik ujawnionych na przykład w Current Protocols in Immunology, jak wyżej. Fluorescencję można oceniać ilościowo przy użyciu fluorymetru.
(c) Różne znaczniki substrat-enzym są dostępne, a patent USA nr 4 275 149 dostarcza przeglądu niektórych spośród nich. Enzym generalnie katalizuje zmianę chemiczną chromogennego substratu, którą można mierzyć przy zastosowaniu różnych technik. Na przykład, enzym może katalizować zmianę koloru substratu, którą można mierzyć spektrofotometrycznie. Alternatywnie, enzym może zmieniać fluorescencję lub chemiluminescencję substratu. Techniki oceny ilościowej zmiany fluorescencji są opisane powyżej. Substrat chemiluminescencyjny staje się wzbudzony elektronicznie przez reakcję chemiczną i może następnie emitować światło, które można mierzyć (stosując na przykład chemiluminometr) albo przekazywać energię do fluorescencyjnego akceptora. Przykłady znaczników fluorescencyjnych obejmują lucyferazy (np. lucyferazę ze świetlika i lucyferazę bakteryjną; patent USA nr 4 737 456), lucyferynę, 2,3-dihydroftalazynodiony, dehydrogenazę jabłczanową, ureazę, peroksydazę, taką jak peroksydaza z chrzanu (HRPO), alkaliczną fosfatazę, β-galaktozydazę, glukoamylazę, lizozym, oksydazy sacharydowe (np. oksydaza glukozy, oksydaza galaktozy oraz dehydrogenaza glukozo-6-fosforanu), oksydazy heterocykliczne (takie jak urykaza i oksydaza ksantynowa), lakto54
PL 213 948 B1 peroksydaza, mikroperoksydaza i temu podobne. Techniki przyłączania enzymów do przeciwciał są opisane w O'Sullivan i wsp., Methods for the Preparation of Enzyme-Antybody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, w Methods in Enzym. Wyd. J. Langone & H. Van Vunakis), Academic Press, New York, 73: 147-166 (1981).
Przykłady połączenia enzym-substrat obejmują na przykład:
(i) Peroksydazę z chrzanu (HRPO) z nadtlenkiem wodoru jako substratem, gdzie peroksydaza nadtlenkowa utlenia prekursor barwnika (np. ortofenylenodiaminę (OPD) lub 3,3',5,5'-tetrametylobenzydynohydrochlorek (TMB));
(ii) alkaliczną fosfatazę (AP) z para-nitrofenylofosforanem jako substratem chromogennym; oraz (iii) β-D-galaktozydazę (β-D-Gal) z chromogennym substratem (np. p-nitrofenylo-D-galaktozydazą) lub fluorogennym substratem 4-metyloumbeliferylo-(3-β-D-galaktozydazą).
Wiele innych kombinacji enzym-substrat dostępnych jest dla specjalistów w tej dziedzinie. Dla ich ogólnego przeglądu patrz patenty USA nr 4 275 149 i nr 4 318 980.
Czasami znacznik jest połączony bezpośrednio z glikoproteiną. Specjalista w tej dziedzinie będzie wiedział o wielu technikach, którymi można to osiągnąć. Przykładowo, glikoproteinę można połączyć z biotyną i dowolny ze znaczników z tych trzech szerokich kategorii wspomnianych powyżej, można połączyć ze awidyną lub vice versa. Biotyna wiąże się wybiórczo z awidyną, a zatem w ten pośredni sposób można połączyć znacznik z glikoproteiną. Alternatywnie, aby uzyskać pośrednie połączenie znacznika z glikoproteiną, glikoproteinę łączy się z małym haptenem (np. digoksyną), a jeden z różnych typów wspomnianych powyżej znaczników łączy się z polipeptydem anty-hapten (np. przeciwciałem anty-digoksyną). A zatem można uzyskać pośrednie połączenie znacznika z glikoproteiną.
W innym wykonaniu wynalazku, glikoproteina nie musi być znakowana, a jego obecność może być wykrywana przy zastosowaniu wyznakowanego przeciwciała, które wiąże się z glikoproteiną.
Glikoproteinę według niniejszego wynalazku można wykorzystać w dowolnym ze znanych testów, takich jak testy współzawodnictwa o wiązanie, bezpośrednie i pośrednie testy kanapkowe i testy immunoprecypitacji. Zola, Monoclonal Antybodies: A Manual of Techniques, str. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987).
Glikoproteinę można również zastosować w testach diagnostycznych in vivo. Generalnie, glikoproteinę znakuje się radionuklidem (takim jak 111I, 99Tc, 14C, 131I, 125I, 3H, 32P lub 35S), tak, że antygen albo wyrażające go komórki można zlokalizować przy użyciu immunoscyntografii.
I. Zastosowania glikoproteiny in vivo
Bierze się pod uwagę możliwość zastosowania glikoproteiny według niniejszego wynalazku do leczenia ssaka, np. pacjenta cierpiącego z powodu albo predysponowanego do choroby lub schorzenia, który mógłby odnieść korzyść z podawania glikoproteiny. Stanów, które można leczyć glikoproteiną jest wiele i obejmują nowotwór (np. tam, gdzie glikoproteina wiąże się antygenem związanym z nowotworem, antygenem powierzchniowym komórek B, takim jak CD20, receptorem ErbB, takim jak receptor HER2, czynnikiem angiogennym, takim jak czynnik wzrostu śródbłonka naczyń (VEGF, od ang. vascular endothelial growth factor); stany alergiczne, takie jak astma (z przeciwciałem anty-IgE) oraz choroby, w których pośredniczy LFA-1 (np. gdzie glikoproteiną jest przeciwciało anty-LFA-1 lub anty-ICAM-1) etc. W przypadku przeciwciała, które wiąże się z antygenem powierzchniowym komórek B, takim jak CD20, korzystnymi wskazaniami są nowotwory komórek B (np. chłoniak nieziarniczy), choroba autoimmunologiczna albo do blokowania odpowiedzi immunologicznej na obcy antygen (patrz WO nr 01/03734).
Tam gdzie przeciwciało wiąże się z receptorem ErbB, stanem jest korzystnie nowotwór wyrażający ErbB, np. łagodne i złośliwe guzy charakteryzujące się nadekspresją receptora ErbB. Takie nowotwory obejmują miedzy innymi raka sutka, raka płaskokomórkowego, raka płuc z małych komórek, raka płuc nie z małych komórek, raka żołądkowo-jelitowego, raka trzustki, glejaka, raka szyjki macicy, raka jajnika, raka wątroby, raka pęcherza, wątrobiaka, raka okrężnicy, raka okrężnicy i odbytnicy, raka śluzówki macicy, raka gruczołu śliniankowego, raka nerki, raka wątroby, raka prostaty, raka sromu, raka tarczycy, nowotworów wątroby i różne typy raka głowy i szyi.
Według wskazówek tu zawartych, można wytworzyć glikoproteinę z wariantem regionu Fc o polepszonej aktywności ADCC. Takie cząsteczki znajdą zastosowanie w leczeniu różnych chorób.
Przykładowo, glikoproteinę o polepszonej aktywności ADCC można zastosować do leczenia chorób lub schorzeń, gdzie pożądana jest eliminacja tkanki albo obcego mikroorganizmu. Przykładowo, glikoproteinę można zastosować do leczenia raka; chorób autoimmunologicznych, chorób zapalPL 213 948 B1 nych; infekcji (np. bakteryjnych, wirusowych, grzybowych lub drożdżowych) i innych stanów (takich jak wole) gdzie pożądane jest usunięcie tkanki, itd.
Glikoproteinę podaje się dowolnym z odpowiednich sposobów, włączając w to podawanie pozajelitowe, podskórne, dootrzewnowe, dopłucne, donosowe, a jeśli to pożądane przy miejscowym leczeniu immunosupresyjnym, douszkodzeniowe. Wlewy pozajelitowe obejmują podawanie domięśniowe, dożylne, dotętnicze, dootrzewnowe lub podskórne. Ponadto, dogodne jest podawanie glikoproteiny poprzez pulsowy wlew, najkorzystniej ze zmniejszającymi się dawkami glikoproteinę. Korzystne jest, jeżeli dawki podaje się w zastrzykach, najkorzystniej zastrzykach dożylnych albo podskórnych, w zależności po części od tego, czy podawanie jest krótkie czy długotrwałe.
Dla zapobiegania albo leczenia choroby odpowiednia dawka glikoproteiny będzie zależała od typu choroby, która ma być leczona, ostrości i przebiegu choroby, tego czy przeciwciało jest podawane dla celów zapobiegawczych czy leczniczych, wcześniejszej terapii, historii klinicznej pacjenta i odpowiedzi glikoproteinę oraz opinii prowadzącego lekarza. Dogodne jest podawanie pacjentowi glikoproteiny jednorazowo albo w postaci serii dawek.
W zależności od typu i ostrości choroby, wyjściowa proponowana dawka glikoproteiny do podania pacjentowi, podawana na przykład jednokrotnie więcej razy albo jako ciągły wlew, wynosi około 1 μg/kg do 15 mg/kg (np. 0,1-20 mg/kg). Typowa dzienna dawka może mieścić się w zakresie od około 1 μg/kg do 100 mg/kg lub więcej w zależności od wspomnianych powyżej czynników. Przy podawaniu powtarzanym na przestrzeni kilku dni lub dłużej, zależnie od stanu chorobowego, leczenie podtrzymuje się aż do pożądanego zniesienia objawów chorobowych. Jednakże mogą być użyteczne inne tryby podawania. Postęp tej terapii można łatwo śledzić przy zastosowaniu konwencjonalnych technik i testów. Przykłady tutaj pokazują, że można podawać niższe dawki glikoproteiny (np. przeciwciała wolnego od fukozy), w porównaniu z glikoproteiną zawierającą fukozę.
Kompozycja glikoproteiny będzie wytworzona, dawkowana i podawana w sposób zgodny z dobrą praktyka medyczną. Czynniki brane pod uwagę w tym kontekście obejmują konkretne schorzenia poddawane leczeniu, konkretnego ssaka poddanego leczeniu, stan kliniczny konkretnego pacjenta, przyczyny choroby, miejsca dostarczania czynnika, sposobu podawania, trybu podawania i innych czynników znanych praktykującym lekarzom. „Skuteczna leczniczo ilość” glikoproteiny, która ma być podawana będzie zależeć od takich uwarunkowań i jest minimalna ilością konieczną do zapobiegania, łagodzenia i leczenia choroby albo schorzenia. Glikoproteina nie musi być, ale jest fakultatywnie mieszane z jednym albo większą liczbą czynników obecnie stosowanych do zapobiegania albo leczenia danej choroby. Skuteczna ilość takich innych czynników zależy od ilości glikoproteiny obecnej w kompozycji, typu choroby lub leczenia i innych dyskutowanych powyżej parametrów. Są one generalnie stosowane w tych samych dawkach i tymi samymi drogami podawania jak stosowane tu wcześniej lub około 1 do 99% stosowanych tu uprzednio dawek.
Kompozycje terapeutycznego przeciwciała są generalnie umieszczane w pojemniku mającym jałowy dostęp, na przykład torbie lub fiolce z roztworem dożylnym mającym zatyczkę, którą można przebić igłą do zastrzyków podskórnych.
Pacjent z nowotworem, który ma być traktowany przeciwciałem jako antagonistą jak tu ujawniono, może również otrzymać radioterapię. Alternatywnie albo dodatkowo, pacjentowi można podać środek chemioterapeutyczny. Przygotowanie i schemat podawania środków chemioterapeutycznych można przeprowadzić według instrukcji producenta lub po empirycznym ustaleniu przez specjalistę w tej dziedzinie. Przygotowanie i schemat podawania leku w takiej chemioterapii są także opisane w Chemotherapy Service wyd., M. C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, MD (1992). Podanie środka chemioterapeutycznego może poprzedzać lub następować po podaniu antagonisty lub można go podać równocześnie. Przy wskazaniach nowotworowych, może być pożądane podawanie również dodatkowych przeciwciał wobec antygenów związanych z nowotworem albo czynników angiogennych, takich jak przeciwciała, które wiążą się z HER2 lub jak czynnik wzrostu śródbłonka naczyń (VEGF). Alternatywnie albo dodatkowo, pacjentowi można podać jednocześnie jedną albo większa liczbę cytokin.
Wynalazek dostarcza ponadto produkt fabryczny zawierający materiały przydatne do leczenia na przykład nowotworu. Produkt fabryczny zawierają pojemnik oraz etykietkę. Odpowiednie pojemniki obejmują na przykład butelki, fiolki i probówki testowe. Pojemniki mogą być wytworzone z rozmaitych materiałów, takich jak szkło albo plastyk. Pojemniki zawierają kompozycję zawierającą opisany tu preparat glikoproteiny. Składnikiem czynnym w kompozycji jest konkretna glikoproteina. Etykietka na pojemniku wskazuje, że kompozycja ma być stosowana do leczenia albo zapobiegania konkretnej choroby albo schorzenia i może również zawierać wskazówki stosowania in vivo, takie jak opisano
PL 213 948 B1 powyżej. Zestaw według wynalazku zawiera pojemnik opisany powyżej i drugi pojemnik zawierający bufor. Może on ponadto zawierać inne materiały pożądane z punktu widzenia handlowego i użytkownika, włączając w to inne bufory, rozcieńczalniki, filtry, igły i strzykawki i wkładki w opakowaniu z instrukcjami stosowania.
Wynalazek został zilustrowany następującymi przykładami.
Przykłady
Aby ocenić rolę fukozylowanego oligosacharydu w funkcji IgG stosowano linię komórkową Lec13 (Ripka i wsp. Arch. Biochem. Biophys. 249: 533-545 (1986)) do wyrażania ludzkiej IgG1. Ta linia komórkowa CHO ma upośledzoną zdolność do dodawania fukozy, ale poza tym dodawała do IgG oligosacharyd, który był podobny do spotykanego w normalnych liniach CHO i w surowicy ludzkiej. Powstałe produkty IgG stosowano do oceny wpływu fukozylowanego węglowodau na funkcje efektorowe przeciwciała, w tym wiązanie ludzkiego FcyR, ludzkiego Clq, ludzkiego FcRn i ADCC stosując ludzkie komórki efektorowe.
P r z y k ł a d 1
Wiązanie do ludzkiego FcR
Konstrukty cDNA do stabilnych linii komórkowych: Łańcuchy ciężki i lekki humanizowanego przeciwciała anty-HER2 (Carter i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285 (1992)), humanizowane, dojrzałe pod względem powinowactwa przeciwciało anty-IgE E27 (patent USA nr 6 172 213) i chimerowe przeciwciało anty-CD20 C2B8 (patent US nr 5 736 137) subklonowano do uprzednio opisanego wektora ekspresyjnego do komórek ssaczych (Lucas i wsp. Nucl. Acid Res. 24, 1774-1779 (1996)).
Stosowano puromycynę jako marker selekcyjny w komórkach DHFR(+), takich jak komórki Lec13 i zatrzymano miejsce DHFR do amplifikacji metotreksatem stabilnej linii komórkowej.
Transfekcja i hodowanie komórek CHO Lec13 i typu dzikiego: linię komórkową CHO ProLec13.6a (Lec13) otrzymano od Profesor Pameli Stanley z Albert Einstein College of Medicine z Yeshiva University. Linie rodzicielskie są Pro- (auksotrof prolinowy) i Gat- (auksotrof glicynowy, adenozynowy i tymidynowy). Linia komórkowa CHO-DP12 stosowana do przeciwciał typu dzikiego jest pochodną linii komórkowej CHO-K1 (ATCC #CCL-61), która ma niedobór reduktazy dihydrofolianu i ma obniżone wymaganie dla insuliny.
Linie komórkowe transfekowano cDNA stosując metodę Superfect (Qiagen, Valencia, CA). Selekcję komórek Lec13 wyrażających transfekowane przeciwciała przeprowadzono stosując dichlorowodorek puromycyny (Calbiochem, San Diego, CA) przy 10 pg/ml w podłożu hodowlanym zawierającym: podłoże MEM Alpha z L-glutaminą, rybonukleozydami i deoksyrybonukleozydami (GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD), uzupełnione 10% inaktywowanym FBS (GIBCO), 10 mM HEPES i 1 x penicyliną/streptomycyną (GIBCO). Komórki CHO selekcjonowano podobnie w podłożu wzrostowym zawierającym Hama F12 bez GHT: DMEM z małą ilością glukozy bez glicyny z NaHCO3 uzupełnione 5% FBS (GIBCO), 10 mM HEPES, 2 mM L-glutaminą, 1 x GHT (glicyna, hipoksantyna, tymidyna) i 1 x penicylina/streptomycyna.
Kolonie tworzyły się w ciągu dwóch do trzech tygodni i były łączone do ekspansji i ekspresji białek. Pule komórek pierwotnie zaszczepiano przy 3 x 106 komórek/10 cm płytkę do ekspresji białek na małą skalę. Komórki przenoszono na podłoża bez surowicy po osiągnięciu 90-95% konfluencji i po 3-5 dniach zbierano supernatanty komórek i testowano w ELISA Fc IgG- i nienaruszony IgG aby ocenić poziomy ekspresji białek. Komórki Lec13 i CHO zaszczepiano przy około 8 x 106 komórek/15 cm płytka jednego dnia przed przerzuceniem na podłoże produkcyjne PS24 uzupełnione 10 mg/L zrekombinowanej ludzkiej insuliny i 1 mg/L pierwiastków śladowych.
Ekspresja białek: komórki Lec13 i CHO pozostawały w podłożu produkcyjnym wolnym od surowicy przez 3-5 dni. Supernatanty zbierano i klarowano przez wirowanie w stożkowych probówkach 150 ml aby usunąć komórki i pozostałości. Dodano inhibitory proteaz PMSF i aprotyninę (Sigma, St. Louis, MO) i supernatanty zatężono 5-krotnie na mieszanych komórkach stosując filtry MWCO30 (Amicon, Beverly, MA) przed natychmiastowym oczyszczeniem stosując chromatografię z białkiem G (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ)). Dla wszystkich białek wymieniono bufor do soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS) stosując zatężacze Centripriep-30 (Amicon) i analizowano za pomocą elektroforezy w żelu SDS-poliakryloamid.
Oznaczono stężenia białek stosując A280 i sprawdzono stosując analizę składu aminokwasów.
Średnio komórki Lec13 generowały 10 pg mAb na płytkę 15 cm; ekspresja w kontrolnych komórkach
CHO dla wszystkich przeciwciał była 4-5 razy wyższa niż w komórkach Lec13. Przeciwciała wygenePL 213 948 B1 rowane z CHO-DP12 hodowanych na płytkach będą oznaczane jako CHO-P. Komórki CHO-DP12 5 hodowano także w butelkach do mieszania. Komórki zaszczepiano przy 6 x 105 komórek/ml i hodowano w 37°C przez dwa dni. Trzeciego dnia zmieniono temperaturę na 33°C i pozwolono komórkom na wzrost aż żywotność spadła do 70% ze względu na spadek pH do -6,5. Przeciwciała pochodzące z komórek HO-DP12 hodowanych w butelkach do mieszania będzie określane jako CHO-S.
Analiza poprzez spektrometrię mas przy zastosowaniu laserowej desorpcja/jonizacji z czasem przelotu na matrycy (ang. Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight, MALDI-TOF) oligosacharydów związanych z asparaginą: oligosacharydy związane przez N uwolniono ze zrekombinowanych glikoprotein stosując procedurę Papac i wsp., Glycobiology 8, 445-454 (1998). Pokrótce, studzienki 96-studzienkowej płytki do mikromiareczkowania wyścielonej PVDF (Millipore, Bedford, MA) kondycjonowano 100 μl metanolu, który był przeciągany przez membrany PDVF przez przyłożenie próżni do wielopróbkowego aparatu próżniowego Millipore Multiscreen. Kondycjonowane membrany PVDF płukano 3 x 250 μl wody.
Między wszystkimi etapami płukania studzienki w pełni opróżniano przykładając niewielką próżnię do aparatu. Membrany płukano buforem do redukcji i karboksymetylacji (RCM) złożonym z 6M chlorowodorku guanidyny, 360 mM Tris, 2 mM EDTA, pH 8,6. Próbki glikoproteiny (50 μg) nanoszono do poszczególnych studzienek, ponownie przeciągano przez membrany PVDF przez zastosowanie niewielkiej próżni i studzienki płukano 2 x 50 μl buforu RCM.
Immobilizowane próbki redukowano przez dodanie 50 μl 0,1M roztworu ditiotreitolu (DTT) do każdej studzienki i inkubację płytki mikrotytracyjnej w 37°C przez 1 godz. DTT usunięto za pomocą próżni i studzienki płukano 4 x 250 μl wody.
Reszty cysteiny karboksymetylowano przez dodatek 50 μl 0,1M roztworu kwasu jodooctowego (IAA), który był świeżo przygotowywany w 1M NaOH i rozcieńczany do 0,1M buforem RCM. Karboksymetylację uzyskano przez inkubację przez 30 min w ciemności w temperaturze otoczenia. Do płytki przyłożono próżnię w celu usunięcia roztworu IAA i studzienki płukano 4 x 250 μl oczyszczonej wody. Membrany PVDF blokowano przez dodatek 100 μl 1% roztworu PVP360 (poliwinylopirolidyna m. cz. 360000) (Sigma) i inkubację przez 1 godz. w temperaturze otoczenia. Usunięto roztwór PVP-360 za pomocą niewielkiej próżni i studzienki przepłukano 4 x 250 μl wody.
Do każdej studzienki dodano roztwór do trawienia PNGase F (New England Biolabs, Beverly, MA), 25 μl roztworu 25 jednostek/ml w 10 mM Tris octan, pH 8,4 i trawiono przez 3 godz. w 37°C. Po trawieniu próbki przeniesiono do 500 ml probówek Eppendorfa i do każdej próbki dodano 2,5 ml roztworu 1,5 M kwasu octowego.
Zakwaszone próbki inkubowano przez 3 godz. w temperaturze otoczenia aby przekształcić oligosacharydy z glikozyloamin do formy hydroksylowej. Przed analizą widm masowych MALDI-TOF uwolnione oligosacharydy odsolono stosując 0,7ml złoże żywicy kationowymiennej (żywica AG50W-X8 w formie wodorowej) (Bio-Rad, Hercules, CA) upakowanej jako zawiesina do zwartych probówek do reakcji (US Biochemical, Cleveland, OH).
Dla analizy spektralnej mas MALDI-TOF próbek na sposób dodatni, odsolone oligosacharydy (próbki 0,5 ml) naniesiono na nierdzewny cel z 0,5 ml matrycy kwasu 2,5 dihydroksybenzoesowego (sDHB), którą przygotowano przez rozpuszczenie 2 mg kwasu 2,5 dihydroksybenzoesowego z 0,1 mg kwasu 5-metoksysalicylowego w 1 ml etanol/10 mM chlorek sodu 1:1 (obj/obj).
Mieszaninę próbka/matryca suszono pod próżnią. W celu analizy w sposobie negatywnym, odsolone oligosacharydy (próbki 0,5 ml) naniesiono na nierdzewny cel z razem z 0,5 ml matrycy 2',4',6'-trihydroksyacetofeno-nowej (THAP) przygotowanej w 1:3 (obj/obj) acetonitryl/13,3 mM bufor cytrynian amonu.
Mieszaninę próbka/matrycę suszono pod próżnią i następnie pozostawiono do wchłonięcia wilgoci z powietrza przed analizą. Uwolnione oligosacharydy analizowano za pomocą MALDI-TOF na spektrometrze masowym PerSeptive BioSystems Voyager-DE. Spektrometr masowy uruchamiano przy 20 kV albo w sposobie dodatnim albo ujemnym z liniową konfiguracją i stosując opóźnioną ekstrakcję. Dane pozyskiwano stosując moc lasera 1300 i w wariancie sumowania danych (240 skany) aby poprawić stosunek sygnału do szumu.
Przyrząd kalibrowano mieszaniną standardowych oligosacharydów i dane wygładzano stosując punktowy algorytm Savitskyego-Golaya przed przypisaniem mas. Integrację danych widm mas uzyskano stosując pakiet oprogramowania Caesar 7.0 (SciBridge Software).
Wyniki podsumowano w następującej tabeli.
PL 213 948 B1
T a b e l a 2
Wiązanie przeciwciał do ludzkiego FcyR
Średnia (S. D.) N %-Fukc % Ga10 %Ga11 %Ga12
1 2 3 4 5 6 7
FYRIa’b
CHO-S 1,00 5 3 53 42 6
HO-P 0,97 (0,07) 5 2 73 25 3
Lec13(A) 1,04 (0,07) 4 92 50 43 1
Lec13(B) 1,04 (0,10) 5 91 55 40 5
FcyRIIA (R131)c
CHO-S 1,00 3 3 53 42 6
CHO-P 0,87 (0,14) 2 2 73 25 3
Lec13(A) 1,70 (0,04) 3 92 50 43 7
Lec13(B) 1,49 (0,16) 3 91 55 40 5
Lec13(C) 1,77 (0,38) 3 93 51 43 7
Lec13(D) 1,71 (0,40) 3 88 51 43 7
Lec13-Avg 1,62 (0,32) 12 91 (2) 52 (2) 42 (2) 7 (1)
FcyRIIA (H131)d
CHO-S 1,00 3 3 53 42 6
CHO-P 0,87 (0,07) 2 2 73 25 3
Lec13(A) 0,93 (0,08) 3 92 50 43 7
Lec13(B) 0,75 (0,07) 3 91 55 40 5
Lec13(C) 0,94 (0,15) 3 93 51 43 7
Lec13(D) 0,91 (0,07) 3 88 51 43 7
Lec13-Avg 0,88 (0,12) 12 91 (2) 52 (2) 42 (2) 7 (1)
FcyRBc
CHO-S 1,00 3 3 53 42 6
CHO-P 0,81 (0,11) 2 2 73 25 3
Lec13(A) 2,27 (0,35) 3 92 50 43 7
Lec13(B) 1,51 (0,22) 3 91 55 40 5
Lec13(C) 2,07 (0,33) 2 93 51 43 7
Lec13(D) 1,60 (0,45) 3 88 51 43 7
Lec13-Avg 1,81 (0,49) 12 91 (2) 52 (2) 42 (2) 7 (1)
FcyRIIIA (F158)e
CHO-S 1,00 3 3 53 42 6
CHO-P 0,94 (0,01) 2 2 73 25 31
Lec13(A) 27,0 (2,1) 3 92 50 43 7
Lec13(B) 22,8 (2,3) 3 91 55 40 5
Lec13(C) 25,1 (2,4) 3 93 51 43 7
Lec13(D) 22,3 (1,0) 3 88 51 43 7,1
Lec13-Avg 24,3 (2,6) 12 91 (2) 52 (2) 42 (2) 7 (1)
PL 213 948 B1 cd tabeli 2
1 2 3 4 5 6 7
HEK2 93-AAA 20,8 (0,9) 2
Lec13-AAA(A) 32,8 1 195 75 22 2
Lec13-AAA(B) 32,9 (2,9) 3 92 75 22 3
Lec13-AAA(C) 34,8 (3,0) 2
Lec13-AAA-Avg 33,5 (2,1) 6
FcyRIIIA (F158)f
HEK293 1,00 2
DP12 0,35 (0,01) 2
Lec13 7,63 (0,20) 2
FcyRIIIA (F158)g
HEK293 1,00 3
CHO-P 0,65 (0,24) 3
Lec13 1,92 (0,39) 3
HEK293-AAA 1,87 (0,24) 3
FcyRIIIA (F158) - transfekowane komórki CHOh
CHO-S 1,00 4
Lec13-D 15,7 2,4 4
Lec13-E 17,0 3,1 3
Lec13-F 15,8 3,2 3
Lec13-Avg 16,1 2,5 10
HEK2 93-AAA 10,7 1,4 3
Lec13-AAA-B 26,8 6,6 3
Lec13-AAA-C 25,9 5,9 3
Lec13-AAA-Avg 26,4 5,6 6
FcyRIIIA (V158)e
CHO 1,00 3 3 53 42 6
DP12 0,61 (0,01) 2 2 73 25 3
Lec13(A) 14,9 (2,9) 3 92 50 43 7
Lec13(B) 12,5 (1,3) 3 91 55 40 5
Lec13(C) 12,6 (3,3) 3 93 51 43 7
Lec13(D) 14,5 (1,9) 3 88 51 43 7
Lec13-Avg 13,6 (2,4) 12 91 (2) 52 (2) 42 (2) 7 (1)
HEK2 93-AAA 9,3 1
Lec13-AAA(A) 25,4 1 95 75 22 2
Lec13-AAA(B) 23,8 (1,1) 3 92 75 22 3
Lec13-AAA(C) 22,5 (0,2) 2
Lec13-AAA-Avg 23,1 (1,4) 6
PL 213 948 B1 cd tabeli 2
1 2 3 4 5 6 7
FcyRIIIA (V158)f
HEK293 1,00 2
CHO-P 0,32 (0,01) 2
Lec13 6,44 (0,19) 2
FcyRIIIA (V158)g
HEK293 1,00 3
CHO-P 1,00 (0,13) 3
Lec13 1,18 (0,10) 3
HEK293-AAA 1,15 (0,05) 3
Wszystkie wartości są stosunkiem A(wariant)/A(standard) mierzonymi przy A490nm<· CHO-S przedstawia IgG wyrażaną przez komórki CHO w butelkach do mieszania, CHO-P przedstawia IgG wyrażaną przez komórki CHO na płytkach 15 cm, Lec13 przedstawia IgG wyrażaną przez komórki Lec 13 na płytkach, HEK293 przedstawia IgG wyrażaną ludzkie komórki nerki 293, AAA przedstawia wariant IgG1 Ser298Ala/Glu333Ala/Lys334Ala, Lec13-S przedstawia IgG wyrażaną przez komórki Lec13 w butelkach do mieszania (zamiast płytek), litery w nawiasach przedstawiają niezależnie wyrażane partie IgG b dimery Hu4D5 przy [mAb] = 0,12 pg/ml c %-Fuk to procent całkowitego oligosacharydu bez fukozy, %Ga10, %Ga11, %Ga12 to procent całkowitego oligosacharydu bez (agalaktozyl), z jedną (monogalaktozyl), lub dwiema (digalaktozyl) resztami galaktozy kowalencyjnie związanymi z końcowymi resztami mannozy. Wartości w nawiasach są odchyleniami od średniej dla czterech niezależnie wyrażanych partii Lec13-Hu4D5 d dimery Hu4D5 przy [mAb] = 3,33 pg/ml e dimery Hu4D5 przy [mAb] = 1,11 pg/ml f dimery Hu4D5 przy [mAb] = 0,12 pg/ml g dimery E27 przy [mAb] = 0,12 pg/ml h heksamery E27 przy [mAb] = 0,12 pg/ml
Oznaczenia do mierzenia wiązania IgG1 do FcYR i FcRn (oparte na ELISA i w komórkach) opisano uprzednio (Shields i wsp. J. Biol. Chem. 27 6: 6591-6604 (2001) i WO 00/42072 (Presta).
Monomeryczna Lec13-Hu4D5 IgG1 wiązała ludzki FcYRI równoważnie do wiązania Hu4D5-CHO-S i CHO-P (fig. 4; tabela 2). Choć obecność węglowodanu jest potrzebna dla wiązania FcYRI (Walker i wsp. Biochem. J. 259: 347-353 (1989)), równoważne wiązanie IgG1 niezależnie od różnic w zawartości fukozy (Lec13 w porównaniu z CHO) lub zawartości galaktozy (CHO-P w porównaniu z CHO-S) wykazuje, że ludzki FcYRI nie jest wrażliwy na obecność tych reszt na węglowodanie. Wpływ galaktozylacji na wiązanie IgG do ludzkiego FcYRI badano uprzednio (Wright i wsp. J. Immunol. 160: 3393-3402 (1998); Kumpel i wsp. Human Antibod. Hybridomas 5: 143-151 (1994); i Tsuchiya i wsp. J. Rheumatol. 16: 285-290 (1989)) i przegląd tych danych sugeruje, że jeśli galaktozylacja ma wpływ na wiązanie FcYRI, jest on subtelny i może być zależny od izotypu (Wright i wsp. J. Immunol. 160: 3393-3402 (1998)).
W przeciwieństwie do monomerycznego wiązania IgG1 do ludzkiego FcYRI oznaczenie wiązania dla ludzkiego FcYR o niskim powinowactwie (FcYRII, FcYRIII) wymagało tworzenia dimerów (Hu4D5, HuE27) lub heksamerów (HuE27) aby spowodować wykrywanie wiązania. Ludzki FcYRIIA ma dwa znane, występujące naturalnie allotypy, które są określane przez aminokwas w pozycji 131 (Clark i wsp. J. Immunol. 143: 1731-1734 (1989)).
Ludzki FcYRIIIA ma naturalnie występujące allotypy w pozycji 48 (Leu, His lub Arg) i w pozycji 158 (Val lub Phe); allotyp FcYRIIIA (Val158) oddziałuje z ludzką IgG lepiej niż allotyp FcYRIIIA (Phel58) (Shields i wsp. J. Biol. Chem. 276: 6591-6604 (2001); Koene i wsp. Blood 90: 1109-1114 (1997); i Wu i wsp. J. Clin. Invest. 100: 1059-1070 (1997)).
Wiązanie dimerów Lec13-Hu4D5 do ludzkiego FcYRIIB i polimorficznej formy R131 ludzkiego FcYRIIA wykazało 1,8-krotną i 1,6-krotną poprawę wiązania, odpowiednio w porównaniu z CHO-Hu4D5 (fig. 5, 6; tabela 2). Przeciwnie, brak fukozy nie wpływał na wiązanie do polimorficznej formy H131 ludzkiego FcYRIIA (fig. 7; tabela 2).
Podobna poprawa wiązania IgG1 bez fukozy do zarówno ludzkiego FcYRIIA (R131) i FcYRIIB, z których każdy ma argininę w pozycji 131, w porównaniu z brakiem efektu na FcYRIIA (H131) sugeruje, że fukoza może albo bezpośrednio oddziaływać z resztą FcYR pozycji 131 lub zmienia konformację
PL 213 948 B1
IgG1 tak, by wywierać subtelny, negatywny wpływ na wiązanie gdy arginina jest obecna w FcyR w pozycji 131.
Obie polimorficzne formy FcyRIIIA wykazały znacząco ulepszone wiązanie do IgG1 pozbawionej fukozy. Wiązanie dimerycznego Lec13-Hu4D5 do FcyRIIIA (V158) wykazało 14-krotną poprawę w stosunku do CHO-Hu4D5 (fig. 8; tabela 2) i wiązanie do FcyRIIIA (F158) wykazało przynajmniej 100-krotną poprawę (fig. 9). Dimery Lec13-HuE27 też wykazały poprawione wiązanie do obu polimorficznych form FcyRIIIA (fig. 10, 11; tabela 2).
W uprzednich badaniach wpływu wariantów sekwencji białka ludzkiej IgG1 na wiązanie do ludzkiego FcyR, stosowano heksameryczne kompleksy złożone z trzech anty-IgE E27 i trzech IgE (Shields i wsp. J. Biol. Chem. 276: 6591-6604 (2001)); stąd też te kompleksy są trimerami w anty-IgE E27. W tamtych badaniach poprawa wiązania wariantu S298A/E333A/K334A-IgG1 do FcyRIIIA (F158) i FcyRIIIA (V158) była 1,5- do 2-krotna i 1,1-krotna, odpowiednio; choć poprawa może wydawać się minimalna, wpływ na ADCC był znaczący (Shields i wsp. J. Biol. Chem. 276: 6591-6604 (2001)).
W obecnych badaniach, heksameryczny kompleks S298A/E333A/K334A-IgG1 wykazał poprawione wiązanie do obu polimorficznych form FcyRIIIA zgodnie z wartościami z poprzednich badań (fig. 12, 13; tabela 2); podobnie heksameryczny kompleks Lec13-HuE27 (natywna IgG1) wykazał polepszone wiązanie około 2-krotne do FcyRIIIA (F158) (tabela 2). Gdy były oznaczane jako dimery, S298A/E333A/K334A-wariant IgG1 z fukozą wykazał 9-krotną i 20-krotną poprawę w wiązaniu FcyRIIIA (V158) i FcyRIIIA (F158), odpowiednio; ten sam wariant bez fukozy wykazał jeszcze większą poprawę wiązania do polimorficznych form 21-krotny i 33-krotny, odpowiednio (tabela 2).
Tak więc, brak fukozy nie tylko zwiększa wiązanie natywnej IgG1 do FcyRIIIA ale także może zwiększyć wiązanie wariantów IgG1. Tak więc, zmiany białka i węglowodanu są synergistyczne.
Dla wszystkich form HuE27 (natywna, S298A/E333A/K334A-IgG1, pochodząca z Lec13), poprawa wiązania większego kompleksu (trimeryczny w HuE27) była znacznie mniejsza niż obserwowana dla tego samego mAb jako kompleksu dimerycznego. Na przykład, wiązanie Lec13-HuE27 jako dimeru wykazało około 20-krotną poprawę, ale tylko 2-krotną poprawę dla większego kompleksu (tabela 2). Sugeruje to, że jako że wielkość kompleksu awidyczności może zacząć dominować nad wiązaniem.
Poprawione wiązanie się IgG1 z brakiem fukozy z FcyRIIIA potwierdzono z pełnej długości łańcuchem a FcyRIIIA (Phe158) wyrażanym razem z łańcuchem y na komórkach CHO (fig. 28; tabela 2). W przypadku samej fuzji białkowej łańcucha α w teście ELISA, niedobór fukozy był synergistyczny z wariantem S298A/E333A/K334A-IgG1.
Oceniano także wiązanie natywnęj i pozbawionej fukozy IgG1 do mysich FcyRII i FcyRIII. Ludzka IgG1, nawet jako dimery, słabo wiąże się do tych receptorów i nie stwierdzono poprawy wiązania z IgG1 bez fukozy. Inny receptor dla IgG, noworodkowy receptor Fc (FcRn), jest strukturalnie niespokrewniony z FcyR (Burmeister i wsp. Nature 372: 379-383 (1994); i Raghavan i wsp. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 12: 181-220 (1996)) i zaproponowano, że bierze udział w szeregu procesów biologicznych, w tym szybkości kliransu IgG (Ghetie i wsp. Annu. Rev. Immunol. 18: 739-766 (2000)).
Wiązanie fukozylowanych i nie-fukozylowanych IgG1 do FcRn było równoważne (fig. 14). To nie jest dziwne ponieważ aglikozylowana IgG1 wiąże ten receptor podobnie do glikozylowana IgG1 (agliko Ab wiąże FcRn).
Brak fukozy na węglowodanie związanym z Asn297 dał znacząco poprawione wiązanie do ludzkiego FcyRIIIA (obu form polimorficznych F158 i V158) w oznaczeniu w formacie ELISA. Zwiększone wiązanie do FcyRIIIA zostało dalej wzmocnione przez zdolność IgG fukoza-minus do wzmagania cytotoksyczności w oznaczeniach ADCC stosujących oczyszczone ludzkie PBMC. Poprawiona cytotoksyczność była szczególnie widoczna przy niższych stężeniach przeciwciała, sugerując, że terapeutyczne przeciwciała, które stosują ADCC mogłyby być podawane przy niższej dawce aby zapewnić ekwiwalentne zabijanie komórek jak wyższa dawka fukozylowanej IgG.
Stwierdzono mniejszą poprawę w wiązaniu IgG fukoza-minus do ludzkiego FcyRIIA (R131) i FcyRIIB; nie stwierdzono różnicy dla ludzkiego FcyRIIA(H131). Dwa pierwsze receptory mają argininę w pozycji 131, implikując, bez ograniczania się do tej teorii, że w fukozylowanej IgG reszta fukozy może albo oddziaływać bezpośrednio (i ewidentnie, negatywnie) z resztą 131 FcyRII lub może subtelnie wpływać na konformację IgG, co daje w efekcie interakcję negatywną.
Chociaż poprawa wiązania IgG fukoza-minus do FcyRIIA (R131) i FcyRIIB w oznaczeniach w formacie ELISA było małe (~ 2-krotne), oznaczenia ADCC stosujące monocyty także wykazały pewną zwiększoną cytotoksyczność przy niższych stężeniach przeciwciała. Monocyty wyrażają FcyRI,
PL 213 948 B1
FcyRIIA, FcyRIIB i tylko subpopulacja monocytów wyraża FcyRIIIA. Ponieważ wiązanie do ludzkiego FcyRI było równoważne dla zarówno fukozylowanej IgG i IgG fukoza-minus, poprawa w ADCC najprawdopodobniej nie jest wynikiem różnicowej interakcji z FcyRI. Zarówno monocyty dawcy FcyRIIA (R131/R131) i FcyRIIA (H131/H131) wykazały pewną poprawę w ADCC (fig. 21, 22) sugerując bez ograniczania się do dowolnej jednej teorii, że:
(1) FcyRIIA może nie być wyrażany na dostateczne wysokim poziomie na monocytach aby wykazać różnicę między dwiema formami polimorficznymi, (2) FcyRIIB może być dominującym wiązaniem FcyR (wpływając ekwiwalentnie na zarówno monocyty R131/R131 i H131/H131) lub (3) subpopulacja monocytów wyrażających FcyRIIA jest odpowiedzialna za poprawiony ADCC.
Porównanie węglowodanu obecnego na natywnej IgG z IgG1 produkowaną przez Lec13 i przez
CHO nie wykazywało wyraźnych różnic w stopniu galaktozylacji i tak więc wyniki mogą być przypisane wyłącznie obecności/brakowi fukozy.
Jednak dla wariantu IgG1 S298A/E333A/K334A produkowana przez Lec13, HEK293 i DP12 IgG1 wykazała zróżnicowaną galaktozylację. Jednak kombinacja wariantów sekwencji białka i braku fukozy nie wydawały się być addytywne.
Uprzednie badania wariantów sekwencji białka ludzkiej IgG wykazały, że podstawienia alaniny (i inne) w niektórych pozycjach Fc mogły zmniejszać lub poprawić wiązanie do FcyR jak i wykazywać poprawione ADCC (Shields i wsp. J. Biol. Chem. 276 (9): 6591-6604 (2001)). Jest interesujące, że niektóre z nich nie były w pobliżu interfejsu interakcji spotykanego w strukturze kryształu kompleksu Fc ludzkiej IgG-ludzki FcyRIIIA (Sondermann i wsp. Nature 406: 267-273 (2000)).
Na przykład, z trzech podstawień alaniną S298A/E333A/K334A stosowanych w tych badaniach tylko S298 jest na złączu Fc-FcyRIIIA w strukturze kryształu. Podobnie w strukturze ko-kryształu żadna z obu reszt fukozy na dwóch ciężkich łańcuchach Fc oddziałuje z FcyRIIIA. Inspekcja struktur kryształów Fc or IgG ludzkich lub gryzoni wykazuje, że fukoza może przyjmować zmienne konformacje i wykazuje wysokie czynniki B, sugerując wysoki stopień mobilności.
Normalne komórki CHO i HEK293 dodają fukozę do oligosacharydu IgG w wysokim stopniu (97-98%). IgG z surowic są także wysoce fukozylowane.
P r z y k ł a d 2
Wiązanie Clq i FcRn
Wiązanie Clq do przeciwciał jest pierwszym etapem w klasycznym szlaku aktywacji dopełniacza (Makrides, S. C. Pharmacol. Rev. 50: 59-87 (1998)). Charakter węglowodanu na IgG wpływa na oddziaływanie z Clq (Wright i wsp. J. Immunol. 160: 3393-3402 (1998); Boyd i wsp. Molec. Immunol. 32: 1311- 1318 (1995); i Tsuchiya i wsp. J. Rheumatol. 16: 285-290 (1989)). Hu4D5 wiąże ludzki Clg słabiej niż RITUXAN©, chimerowa IgG1 mysz/człowiek anty-CD20 (fig. 15, 16) (Idusogie i wsp. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)) i brak fukozy nie wpływał na zdolność Hu4D5 do interakcji z ludzkim Clq (fig. 15, 16). Podobnie obecność lub brak fukozy nie wydają się wpływać na wiązanie IgG1 do FcRn.
P r z y k ł a d 3
Cytotoksyczność komórkowa zależna od przeciwciała (ADCC)
Wpływ braku fukozy na ADCC oceniano stosując Lec13-Hu4D5 IgG1 na linię ludzką raka piersi SK-BR-3 (Hudziak i wsp. Mol. Cell Biol. 9: 1165-1172 (1989)). PBMC od dwóch dawców Fc(RIIIA (V158/F158) i dwóch dawców FcyRIIIA (F158/F158) stosowano jako komórki efektorowe w stosunku efektor:cel 30:1. U wszystkich dawców IgG1 bez fukozy wykazał znaczącą poprawę w ADCC w porównaniu z IgG1 z fukozą (fig. 17-20). Istotne jest, że dla wszystkich dawców poprawa cytotoksyczności była bardziej widoczna w miarę obniżana stężenia przeciwciała. To może być odbiciem większej poprawy wiązania obserwowanej dla dimerów w porównaniu z heksametrami, tzn. wariant fuktozaminus może wymagać mniej mAb na powierzchni komórki docelowej aby wpłynąć na wiązanie/aktywację komórki efektorowej.
Ludzkie monocyty wyrażają FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB i tylko subpopulacja wyraża FcyRIIIA. Ponieważ brak fukozy nie wpływał na wiązanie do FcyRI ale miał niewielki wpływ na wiązanie do FcyRIIA (R131) i FcyRIIB, przeprowadzono oznaczenia ADCC stosując oczyszczone ludzkie monocyty jako komórki efektorowe przy stosunkach efektor: cel 20:1, 10:1 i 5:1. Oczyszczanie monocytów jest trudniejsze niż oczyszczanie PBMC i z tego powodu oznaczenie ADCC jest trudniejsze. Jak z ADCC PBMC, ADCC monocytów wykazywały poprawioną cytotoksyczność dla IgG1 pozbawionej fukozy choć efekt wydaje się mniej wyraźny i zdolność monocytów do zabijania docelowych komórek jest obniżona w porównaniu z PBMC (fig. 21-22).
PL 213 948 B1
P r z y k ł a d 4
Aktywność ADCC przeciwciał z wariantem Fc
Następujące doświadczenia porównywały:
(1) Hu4D5 wyrażany w komórkach CHO (Hu4D5 CHO-S), (2) wariant Hu4D5 z niedoborem fukozy wyrażany w komórkach Lec13 (hu4D5 Lec13), (3) wariant Hu4D5 z podstawieniem potrójnym alaniny w domenie Fc wyrażany w komórkach 293 HEK (Hu4D5 HEK293-AAA) i (4) wariant Hu4D5 z podstawieniem potrójnym alaniny w domenie Fc wyrażany w komórkach Lec13 (Hu4D5-Lec13-AAA).
Metody ADCC: komórki naturalnych zabójców (NK) oczyszczono z obwodowej krwi 2 dawców stosując negatywną selekcję z paciorkami magnetycznymi (Miltenyi Biotech, Auburn, CA). Dawców wybrano tak, by byli homozygotyczni względem allelu wyrażającego formę F158 FcyR3 (CD16)(F/F158) (Shields i wsp., J. Biol. Chem. 27 6: 6591-6604 (2001)), która wykazuje fenotyp wiązania o niższym powinowactwie dla IgG.
Komórki raka piersi SKBR-3 z nadekspresją HER2 oposonizowano z I ng/ml każdego przeciwciała przez 45 minut w 25°C w podłożach do oznaczeń (50:50 Hams F12: DMEM zawierające 1% inaktywowaną termicznie płodową surowicę bydlęcą i 10 mM bufor Hepes) i następnie traktowano różnymi stężeniami komórek NK ze stosunkiem efektora do celu (E:T) w zakresie od 0:1 do 0,156 przez 5 godzin w 37°C w nawilżanym inkubatorze CO2. Cytotoksyczność mierzono na podstawie uwalniania dehydrogenazy mleczanowej (LDH) stosując handlowy zestaw (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN).
Metoda barwienia komórek NK za pomocą pośredniej immunofluorescencji: oczyszczone komórki NK inkubowano z 2 μg/ml każdego wariantu Hu4D5 przez 30 min. w 4°C w buforze do barwienia (sól fizjologiczna buforowana fosforanem, 0,1% bydlęca albumina surowicza, 0,01% azydek sodu). Komórki płukano 3 razy i inkubowano z połączonym z fikoerytryną mysim mab anty-ludzki CD56 (Pharmingen, San Diego, CA) i FITC - kozi F(ab')2 specyficzny wobec ludzkiej IgG (F(ab')2 (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) przez dodatkowe 30 min. w 4°C.
Komórki analizowano pod kątem 2-barwnego barwienia immunofluorescencyjnego na cytometrze przepływowym 2 barwnym FACS-can™ (B. D. Biosciences, San Jose, CA).
Wniosek: u obu dawców (5365 i 7580), wystąpiła zwiększona aktywność ADCC przy stosunkach E/T większych niż 2 (patrz figury 26 i 27) dla formy Hu4D5-Lec13-AAA Hu4D5 względem formy Hu4D5-Lec13, co sugeruje synergistyczne zwiększenie wiązania FcyRIII/ADCC w potrójnym alaninowym wariancie Fc z brakiem fukozy.
To zwiększone wiązanie potwierdzono poprzez barwienie z pośrednią immunofluorescencją komórek NK u dawcy 5365 (patrz figury 24 i 25) w komórkach NK wyrażających CD56/CD16.
PL 213 948 B1
Lista sekwencji <110> Genenteeh, Inc.
<12 0> Kompozycje glikoprotein <130> P1877R1PCT <140> PCT/US02/33739 <141> 2002-10-22 <150> US 60/337,642 <151> 2001-10-25 <150> US 60/347,694 <151> 2002-01-09 <160> 9 <21Q> 1 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 1
Pro 1 Ala Pro Glu Leu 5 Leu ciy Gly Pro Ser 10 Val Phe Leu Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys ASp 20 Thr Leu Met Ile Ser 25 Arg Thr Pro Glu Val 30
Thr Cys Val Val Val 35 Asp Val Ser His Glu 40 Asp Pro Glu Val Lys 45
Phe Asn Trp Tyr Val 50 Asp Gly Val Glu Val 55 His Asn Ala Lys Thr 60
Lys Pro Arg Glu Glu 65 Gin Tyr Asn Ser Thr 70 Tyr Arg Val Val Ser 75
Val Leu Thr Val Leu 80 His Gin Asp Trp Leu 85 Asn Gly Lys Glu Tyr 90
Lys Cys Lys Val Ser 95 Asn Lys Ala Leu Pro 100 Ala Pro Ile Glu Lys 105
Thr Ile Ser Lys Ala 110 Lys Gly Gin Pro Arg 115 Glu Pro Gin Val Tyr 120
Thr Leu Pro Pro Ser 125 Arg Glu Glu Met Thr 130 Lys Asn Gin Val Ser 135
Leu Thr Cys Leu Val 140 Lys Gly Phe Tyr Pro 14 5 Ser Asp Ile Ala Val 150
Glu Trp Glu Ser Asn 155 Gly Gin Pro Glu Asn 160 Asn Tyr Lys Thr Thr 165
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
PL 213 948 B1
Leu Thr Val ASp Lys 185 Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val 190 Phe Ser 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu. Ser Leu Ser Pro Gly Lys
215
<210> 2
<211> 218
<212> PR?
<213> homo sapiens
<4Q0> 2
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Al a Val
140 145 150
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Val lj O Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser L Ser Pro Gly Lys
215 <210> 3
PL 213 948 B1 <211> 217 <212> PRT <213> homo sapiens
<400> 3 Alei Gly Pro Ser Val 10 Phe Leu Phe Pro Pro 15
Pro 1 Ara Pro Pro Vai 5
Lys Pro Lys Asp Thr Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
20 25 30
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe
35 40 45
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
50 55 60
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val. Ser Val
65 70 75
Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
80 85 90
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
95 100 105
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr
110 115 120
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu
125 130 135
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Al a Val Glu
140 145 150
Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
1S5 160 165
Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
170 175 180
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys
185 190 195
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser
200 205 210
leu Ser leu Ser Pro Gly Lys
215 <210> 4 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 4
Pro 1 Ala Pro Glu Leu 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Leu Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
25 30
PL 213 948 B1
Thr Cys Val Val Val 35 Asp val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin
40 45
Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
65 70 75
Val Łeu Thr Val Leu His Gin ASP Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Met Łeu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Ile Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
215 <210> 5 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 5
Pro 1 Ala Pro Glu Phe 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Leu Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys Asp 20 Thr Leu Met Ile Ser 25 Arg Thr Pro Glu Val 30
Thr Cys Val Val Val 35 Asp Val Ser Gin Glu 40 Asp Pro Glu Val Gin 45
Phe Asn Trp Tyr Val 50 Asp Gly Val Glu Val 55 His Asn Ala Lys Thr 60
Lys Pro Arg Glu Glu CjJl π Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
10 75
PL 213 948 B1
Val Leu Thr Val Leu 80 His Gin Asp Trp Leu 85 Asn Gly Lys Glu Tyr 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glx Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
17 0 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
215 <210> 6 <211> 215 <212> PRT <213> Mus musculus <400> δ
Thr 1 Val Pro Glu Val 5 Ser Ser Val Phe Ile 10 Phe Pro Pro Lys Pro 15
Lys Asp Val Leu Thr 20 Ile Thr Leu Thr Pro 25 Lys Val Thr Cys Val 30
Val Val Asp I le Ser 35 Lys Asp Asp Pro Glu 40 Val Gin Phe Ser Trp 4 5
Phe Val Asp Asp Val 50 Glu Val His Thr Ala 55 Gin Thr Gin Pro Arg 60
Glu Glu Gin Phe Asn 65 Ser Thr Phe Arg Ser 70 Val Ser Glu Leu Pro 75
Ile Met His Gin Asp 80 Cys Leu Asn Gly Lys 85 Glu Phe Lys Cys Arg 90
Val Asn Ser Ala Ala 95 Phe Pro Ala Pro Ile 100 Glu Lys Thr Ile Ser 105
Lys Thr Lys Gly Arg 110 Pro Lys Ala Pro Gin 115 Val Tyr Thr Ile Pro 120
Pro Pro Lys Glu Gin. Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys
PL 213 948 B1
125 130 135
Met Ile Thr Asp Phe 140 Phe Pro Glu Asp Ile 145 Thr Vai Glu Trp Gin 150
Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn. Thr Gin Pro Tle
155 160 165
Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val
170 175 180
Gin Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
185 190 195
Leu His GXxi Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser
200 205 210
His Ser Pro Gly Lys
215 <210> 7 <211> 218 <212.'- PRT <213> Mus musculus <400> 7
Pro 1 Ala Pro Asn Leu 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Ile Phe Pro 15
Pro Lys Ile Lys Asp 20 Val Leu Met Ile Ser 25 Leu Ser Pro Ile Val 30
Thr Cys Val Val Val 35 Asp Val Ser Glu Asp 40 Asp Pro Asp Val Gin 45
Ile Ser Trp Phe Val 50 Asn Asn Val Glu Val 55 His Thr Ala Gin Thr 60
Gin Thr His Arg Glu 65 Asp Tyr Asn Ser Thr 70 Leu Arg Val Val Ser 75
Ala Leu Pro Ile Gin 80 His Gin Asp Trp Met 85 Ser Gly Lys Glu Phe 90
Lys cys Lys Val Asn 95 Asn Lys Asp Leu Pro 100 Ala Pro Ile Glu Arg 105
Thr Ile Ser Lys Pro 110 Lys Gly Ser Val Arg 115 Ala Pro Gin Val Tyr 120
Va.l Leu Pro Pro Pro 125 Glu Glu Gili Met Thr 130 Lys Lys Gin Val Thr 135
Leu Thr Cys Met Val 140 Thr Asp Phe Met Pro 145 Glu Asp Ile Tyr Val 150
Glu Trp Thr Asn Asn 155 Gly Łys Thr Glu Leu 160 Asn Tyr Lys Asn Thr 165
Glu Pro Val Leu Asp 170 Ser Asp Gly Ser Tyr 175 Phe Met Tyr Ser Lys 180
PL 213 948 B1
Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser
185 190 195
Cys Ser val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys
200 205 210
Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
215 <210> 8 <2łl> 218 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8
Pro Ala 1 Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 15
5 10
Pro Asn Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gin
35 40 45
Ile Ser Trp Phe vai Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr
50 55 60
Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser
65 70 75
His Leu Pro Ile Gin His Gin Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe
80 85 90
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Leu Val Arg Ala Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Pro Ala Glu Gin Leu Ser Arg Lys Asp Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Val Gly Phe Asn Pro Gly Asp Ile Ser Val
140 145 150
Glu Trp Thr Ser Asn Gly His Thr Glu Glu Asn Tyr Lys Asp Thr
155 160 165
Ala Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Ile Ser Lys
170 175 180
Leu Asn Met Lys Thr Ser Lys Trp Glu Lys Thr Asp Ser Phe Ser
185 190 195
Cys Asn Val Arg His Glu Gly Leu Lys Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys
200 205 210
Thr Tle Ser Arg Ser Pro Gry Lys
215
PL 213 948 B1 <210> 9 <211> 218 < 212 > PRT <213> Mus musculus <400> 9
Pro 1 Pro Gly Asn Ile 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Ile Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val His
35 40 45
Val Ser Trp Phe Val Asp Asn Lys Glu Val His Thr Ala Trp Thr
50 55 60
Gin Pro Arg Glu Ala Gin Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
65 70 75
Ala Leu Pro Ile Gin His Gin Asp Trp Met Arg dy Lys Glu Phe
80 85 90
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Arg Ala Gin Thr Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Ile Pro Pro Pro Arg Glu Gin Met Ser Lys Lys Lys Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu val Thr Asn Phe Phe Ser Glu Ala Ile Ser Val
140 145 150
Glu Trp Glu Arg Asn Gly Glu Leu Glu Gin Asp Tyr Lys Asn Thr
155 160 165
Pro Pro Ile Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Thr Asp Ser Trp Leu Gin Gly Glu Ile Phe Thr
185 190 195
Cys Ser Val Val His Glu Ala Leu His Asn His His Thr Gin Lys
200 205 210
Asn Leu Ser Arg Ser Pro Gly Lys
215

Claims (65)

1. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera glikoproteinę posiadającą region Fc ludzkiej IgG, przy czym 51-100% tej glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego rdzenia węglowodanowego, pozbawionego fukozy, przyłączonego do regionu Fc glikoproteiny, przy czym region Fc zawiera sekwencję aminokwasową, która różni się od natywnej sekwencji regionu Fc ludzkiej IgG i gdzie glikoproteina ta:
(a) wiąże się z FcyRIII z większym powinowactwem; lub (b) pośredniczy w zależnej od przeciwciała toksyczności za pośrednictwem komórek (ADCC) bardziej skutecznie niż glikoproteina ze strukturą dojrzałego rdzenia węglowodanowego zawierającego fukozę, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny i fizjologicznie akceptowalny nośnik, zaróbkę lub stabilizator.
2. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienia aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430, stosując numerację EU dla reszt regionu Fc.
3. Kompozycja według zastrz. 2, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienia aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji 298, 333 i 334.
4. Kompozycja według zastrz. 3, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienia aminokwasowe w pozycjach 298, 333 i 334.
5. Kompozycja według zastrz. 4, znamienna tym, że zastępującymi resztami w pozycjach 298, 333 i 334 są alaniny.
6. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 239, 248, 249, 252,
254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293,
294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333,
334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437,
438 lub 439 regionu Fc.
7. Kompozycja według zastrz. 6, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329,
333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc.
8. Kompozycja według zastrz. 6, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcyRI w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
9. Kompozycja według zastrz. 6, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcyRII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
10. Kompozycja według zastrz. 6, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435 lub 437 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcyRIII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
11. Kompozycja według zastrz. 6, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 333,
334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zwiększone wiązanie do jednego lub większej liczby FcyR w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
12. Kompozycja według zastrz. 11, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zwiększone wiązanie do FcyRIII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
13. Kompozycja według zastrz. 12, znamienna tym, że region Fc wykazuje ponadto zmniejszone wiązanie do FcyRII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
PL 213 948 B1
14. Kompozycja według zastrz. 11, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zwiększone wiązanie do FcYRII w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
15. Kompozycja według zastrz. 14, znamienna tym, że region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcYRIII.
16. Kompozycja według zastrz. 15, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc.
17. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że region Fc ma zmienione powinowactwo wiązania do FcRn w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
18. Kompozycja według zastrz. 17, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc.
19. Kompozycja według zastrz. 18, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zmniejszone wiązanie do FcRn w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
20. Kompozycja według zastrz. 18, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc i tym, że region Fc wykazuje zwiększone wiązanie do FcRn w stosunku do regionu Fc o sekwencji natywnej.
21. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że region Fc ma zmienione wiązanie Clq i/lub funkcję cytotoksyczności zależną od dopełniacza (CDC).
22. Kompozycja według zastrz. 21, znamienna tym, że region Fc zawiera podstawienie aminokwasowe w dowolnej z jednej albo większej liczby pozycji aminokwasowych 270, 322, 326, 327, 329, 331, 333 i 334 łańcucha ciężkiego.
23. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że sekwencja aminokwasowa regionu Fc zawiera zmianę sekwencji aminokwasowej, która zmienia natywny wzór glikozylacji glikoproteiny.
24. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że glikoproteina jest zasadniczo wolna od rozdzielającej N- acetyloglukozaminy (GlcNAc) przyłączonej do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
25. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że glikoproteina ma rozdzielającą N acetyloglukozaminę (GlcNAc) przyłączoną do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
26. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że glikoproteina ma jedną lub większą liczbę reszt galaktozy przyłączonych do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
27. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że glikoproteina jest zasadniczo wolna od jednej lub większej liczby reszt galaktozy przyłączonych do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
28. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że glikoproteina ma jedną lub większą liczbę reszt kwasu sialowego przyłączonych do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
29. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że glikoproteina jest zasadniczo wolna od jednej lub większej liczby reszt kwasu sialowego przyłączonych do struktury dojrzałego rdzenia węglowodanowego.
30. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że 80-100% glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego rdzenia węglowodanowego, pozbawionego fukozy, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny.
31. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że region Fc obejmuje region Fc ludzkiej IgG.
32. Kompozycja według zastrz. 31, znamienna tym, że region Fc ludzkiej IgG obejmuje region Fc ludzkiej IgGi, IgG2, IgG3 lub IgG4.
33. Kompozycja według zastrz. 32, znamienna tym, że glikoproteina wiąże się z FcYRIII.
34. Kompozycja według zastrz. 33, znamienna tym, że glikoproteina wiąże się z FcYRIII z lepszym powinowactwem albo pośredniczy w zależnej od przeciwciała toksyczności za pośrednictwem
PL 213 948 B1 komórek (ADCC) bardziej skutecznie niż glikoproteina ze strukturą dojrzałego rdzenia węglowodanowego zawierającego fukozę, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny.
35. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że glikoproteina obejmuje przeciwciało.
36. Kompozycja według zastrz. 35, znamienna tym, że przeciwciałem jest przeciwciało chimerowe, humanizowane albo ludzkie.
37. Kompozycja według zastrz. 35, znamienna tym, że przeciwciało wiąże się z antygenem wybranym z grupy składającej się z markera powierzchniowego komórek B, receptora ErbB, antygenu związanego z nowotworem i czynnika angiogennego.
38. Kompozycja według zastrz. 35, znamienna tym, że przeciwciało wiąże się z CD20, HER2, czynnikiem wzrostu śródbłonka naczyń (VEGF), CD40 lub antygenem komórek macierzystych prostaty (PSCA).
39. Kompozycja według zastrz. 38, znamienna tym, że przeciwciało obejmuje humanizowane przeciwciało anty-HER2, chimerowe przeciwciało anty-CD20 i humanizowane przeciwciało anty-VEGF.
40. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że 90-99% glikoproteiny w kompozycji zawiera strukturę dojrzałego rdzenia węglowodanowego, pozbawionego fukozy, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny.
41. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że glikoproteina została wytworzona przez komórkę jajnika chomika chińskiego (CHO).
42. Kompozycja według zastrz. 41, znamienna tym, że komórką CHO jest komórka Lec13.
43. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że jest preparatem farmaceutycznym.
44. Kompozycja według zastrz. 43, znamienna tym, że zawiera ponadto dopuszczalny farmaceutycznie nośnik.
45. Kompozycja według zastrz. 43, znamienna tym, że jest jałowa.
46. Kompozycja według zastrz. 43 lub zastrz. 44, znamienna tym, że jest zliofilizowana.
47. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że glikoproteina jest immunoadhezyną.
48. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że jest skoniugowana z cząsteczką heterologiczną.
49. Kompozycja według zastrz. 48, znamienna tym, że cząsteczką heterologiczną jest czynnik cytotoksyczny, enzym albo czynnik umożliwiający uzyskanie obrazu.
50. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera glikoproteinę jak zdefiniowano w zastrz. od 47 do 49 łącznie z dopuszczalnym farmaceutycznie nośnikiem.
51. Cząsteczka kwasu nukleinowego, znamienna tym, że koduje glikoproteinę zawierającą region Fc jak zdefiniowano w zastrz. 1.
52. Komórka gospodarza, znamienna tym, że zawiera kwas nukleinowy jak zdefiniowano w zastrz. 51, gdzie 80-100% glikoproteiny wytwarzanej przez komórkę gospodarza zawiera strukturę dojrzałego rdzenia węglowodanowego, pozbawionego fukozy, przyłączoną do regionu Fc glikoproteiny.
53. Komórka gospodarza według zastrz. 52, znamienna tym, że jest komórką jajnika chomika chińskiego (CHO).
54. Komórka gospodarza według zastrz. 53, znamienna tym, że komórką CHO jest komórka Lec13.
55. Sposób wytwarzania glikoproteiny, znamienny tym, że obejmuje hodowanie komórki gospodarza zdefiniowanego w zastrz. od 52 do 54, tak, że kwas nukleinowy podlega ekspresji.
56. Sposób według zastrz. 55, znamienny tym, że obejmuje ponadto odzyskanie glikoproteiny z hodowli komórki gospodarza.
57. Sposób według zastrz. 56, znamienny tym, że obejmuje ponadto łączenie glikoproteiny z cząsteczką heterologiczną.
58. Sposób według zastrz. 57, znamienny tym, że cząsteczką heterologiczną jest czynnik cytotoksyczny, enzym albo czynnik umożliwiający uzyskanie obrazu.
59. Kompozycja jak zdefiniowano w zastrz. 1 do zastosowania do leczenia ssaka mającego chorobę lub zaburzenie wybrane z grupy składającej się z raka, choroby autoimmunologicznej, choroby zapalnej, infekcji lub innego stanu, gdzie pożądane jest usunięcie komórek albo tkanki.
60. Kompozycja według zastrz. 59, znamienna tym, że ssakiem jest człowiek.
61. Kompozycja według zastrz. 60, znamienna tym, że człowiek wyraża FcyRI11 (F158).
62. Zastosowanie skutecznej terapeutycznie ilości kompozycji zdefiniowanej w zastrz. 1 do wytwarzania leku do leczenia ssaka mającego chorobę lub zaburzenie wybrane z grupy składającej się
PL 213 948 B1 z raka, choroby autoimmunologicznej, choroby zapalnej, infekcji lub innego stanu, gdzie pożądane jest usunięcie komórek albo tkanki.
63. Zastosowanie według zastrz. 62, znamienne tym, że ssakiem jest człowiek.
64. Zastosowanie według zastrz. 63, znamienne tym, że człowiek wyraża FcYRIII (F158).
65. Zestaw terapeutyczny albo diagnostyczny zawierający kompozycję, jak zdefiniowano w zastrz. 1 oraz instrukcję jej użycia.
PL372709A 2001-10-25 2002-10-22 Kompozycje zawierajace glikoproteine, czasteczka kwasu nukleinowego kodujaca te glikoproteine, komórka gospodarza, sposób wytwarzania glikoproteiny, kompozycja do zastosowania do leczenia, zastosowanie kompozycji i zestaw zawierajacy kompozycje PL213948B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US33764201P 2001-10-25 2001-10-25
US34769402P 2002-01-09 2002-01-09

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL372709A1 PL372709A1 (pl) 2005-07-25
PL213948B1 true PL213948B1 (pl) 2013-05-31

Family

ID=26990808

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL372709A PL213948B1 (pl) 2001-10-25 2002-10-22 Kompozycje zawierajace glikoproteine, czasteczka kwasu nukleinowego kodujaca te glikoproteine, komórka gospodarza, sposób wytwarzania glikoproteiny, kompozycja do zastosowania do leczenia, zastosowanie kompozycji i zestaw zawierajacy kompozycje

Country Status (19)

Country Link
US (5) US20030157108A1 (pl)
EP (1) EP1443961B1 (pl)
JP (3) JP2005532253A (pl)
KR (1) KR100988949B1 (pl)
CN (1) CN100423777C (pl)
AT (1) ATE430580T1 (pl)
AU (1) AU2002337935B2 (pl)
BR (1) BR0213761A (pl)
CA (1) CA2463879C (pl)
DE (1) DE60232265D1 (pl)
DK (1) DK1443961T3 (pl)
ES (1) ES2326964T3 (pl)
HK (1) HK1076388A1 (pl)
HU (1) HUP0600342A3 (pl)
IL (2) IL161412A0 (pl)
MX (1) MXPA04003798A (pl)
NZ (1) NZ532526A (pl)
PL (1) PL213948B1 (pl)
WO (1) WO2003035835A2 (pl)

Families Citing this family (1610)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6136311A (en) 1996-05-06 2000-10-24 Cornell Research Foundation, Inc. Treatment and diagnosis of cancer
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ES2601882T5 (es) * 1999-04-09 2021-06-07 Kyowa Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
ES2254174T3 (es) 1999-05-07 2006-06-16 Genentech, Inc. Tratamiento de enfermedades autoinmunes con antagonistas que se unen a marcadores de superficie de linfocitos b.
ATE329610T1 (de) * 2000-02-16 2006-07-15 Genentech Inc Anti-april antikörper und hybridomazellen
FR2807767B1 (fr) 2000-04-12 2005-01-14 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps monoclonaux anti-d
US7449308B2 (en) 2000-06-28 2008-11-11 Glycofi, Inc. Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes
US8697394B2 (en) * 2000-06-28 2014-04-15 Glycofi, Inc. Production of modified glycoproteins having multiple antennary structures
US7598055B2 (en) * 2000-06-28 2009-10-06 Glycofi, Inc. N-acetylglucosaminyltransferase III expression in lower eukaryotes
US20060029604A1 (en) * 2000-06-28 2006-02-09 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GlcNAc2Man3GlcNAc2 glycoform
US7029872B2 (en) * 2000-06-28 2006-04-18 Glycofi, Inc Methods for producing modified glycoproteins
US20020058029A1 (en) * 2000-09-18 2002-05-16 Nabil Hanna Combination therapy for treatment of autoimmune diseases using B cell depleting/immunoregulatory antibody combination
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
EP1355666B1 (en) 2000-12-22 2012-06-13 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Use of repulsive guidance molecule (RGM) and its modulators
IL160127A0 (en) * 2001-08-03 2004-06-20 Genentech Inc Tacis and br3 polypeptides and uses thereof
HUP0600342A3 (en) * 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) * 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20060024292A1 (en) * 2001-12-27 2006-02-02 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2 glycoform
EP1471938A4 (en) * 2002-01-09 2008-03-05 Medarex Inc HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST CD30
US8093357B2 (en) 2002-03-01 2012-01-10 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US20080260731A1 (en) * 2002-03-01 2008-10-23 Bernett Matthew J Optimized antibodies that target cd19
US20080152649A1 (en) * 2002-03-01 2008-06-26 Xencor, Inc. Optimized igf-1r antibodies and methods of using the same
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20090042291A1 (en) * 2002-03-01 2009-02-12 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20100311954A1 (en) * 2002-03-01 2010-12-09 Xencor, Inc. Optimized Proteins that Target Ep-CAM
US20040132101A1 (en) * 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US20070148171A1 (en) * 2002-09-27 2007-06-28 Xencor, Inc. Optimized anti-CD30 antibodies
US20080254027A1 (en) * 2002-03-01 2008-10-16 Bernett Matthew J Optimized CD5 antibodies and methods of using the same
CA2481925A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Therapeutic agent for patients having human fc.gamma.riiia
WO2003084569A1 (fr) * 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition anticorps
AU2003236020B2 (en) 2002-04-09 2009-03-19 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Cell with depression or deletion of the activity of protein participating in GDP-fucose transport
AU2003256836A1 (en) * 2002-07-25 2004-02-16 Genentech, Inc. Taci antibodies and uses thereof
JP4459810B2 (ja) 2002-08-14 2010-04-28 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ＦｃγＲＩＩＢ特異的抗体とその利用法
US8946387B2 (en) 2002-08-14 2015-02-03 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8968730B2 (en) 2002-08-14 2015-03-03 Macrogenics Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
DK1537419T3 (da) * 2002-09-13 2011-06-27 Lfb Biotechnologies Test for CD16-medieret ADCC effektivitet af monoklonale og polyklonale antistoffer
US20060235208A1 (en) * 2002-09-27 2006-10-19 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
EP2289936B1 (en) * 2002-12-16 2017-05-31 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
ES2897506T3 (es) 2003-01-09 2022-03-01 Macrogenics Inc Identificación y modificación de anticuerpos con regiones Fc variantes y métodos de utilización de los mismos
WO2004062619A2 (en) 2003-01-13 2004-07-29 Macrogenics, Inc. SOLUBLE FcϜR FUSION PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
US7332299B2 (en) 2003-02-20 2008-02-19 Glycofi, Inc. Endomannosidases in the modification of glycoproteins in eukaryotes
US8388955B2 (en) * 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US20090010920A1 (en) * 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US20070275460A1 (en) * 2003-03-03 2007-11-29 Xencor.Inc. Fc Variants With Optimized Fc Receptor Binding Properties
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
CA2897608C (en) * 2003-05-09 2018-07-31 Duke University Cd20-specific antibodies and methods employing same
US20050163775A1 (en) * 2003-06-05 2005-07-28 Genentech, Inc. Combination therapy for B cell disorders
PL1631313T3 (pl) 2003-06-05 2015-08-31 Genentech Inc Terapia skojarzona zaburzeń z komórek B
FR2858235B1 (fr) * 2003-07-31 2006-02-17 Lab Francais Du Fractionnement Utilisation d'anticorps optimises en adcc pour traiter les patients faibles repondeurs
AU2004266159A1 (en) 2003-08-22 2005-03-03 Biogen Idec Ma Inc. Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same
CN1845755A (zh) * 2003-08-29 2006-10-11 健泰科生物技术公司 眼部疾病的抗cd－20治疗
US8883147B2 (en) 2004-10-21 2014-11-11 Xencor, Inc. Immunoglobulins insertions, deletions, and substitutions
US20060134105A1 (en) * 2004-10-21 2006-06-22 Xencor, Inc. IgG immunoglobulin variants with optimized effector function
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US8399618B2 (en) 2004-10-21 2013-03-19 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions, and substitutions
US8101720B2 (en) 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
US20050226867A1 (en) * 2003-10-08 2005-10-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. IL-5R-specific antibody composition
AU2004279742A1 (en) * 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Fused protein composition
US20050287138A1 (en) * 2003-10-08 2005-12-29 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. CCR4-specific antibody composition
JPWO2005035740A1 (ja) * 2003-10-09 2006-12-21 協和醗酵工業株式会社 無血清馴化したゲノム改変細胞
US7691810B2 (en) * 2003-10-09 2010-04-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Method of producing recombinant antithrombin III composition
US20060021071A1 (en) * 2003-10-09 2006-01-26 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cell in which genome is modified
WO2005035753A1 (ja) 2003-10-10 2005-04-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 機能蛋白質を代替する二重特異性抗体
JP5438880B2 (ja) * 2003-10-10 2014-03-12 中外製薬株式会社 機能蛋白質を代替する二種特異性抗体
JP5490734B2 (ja) * 2003-10-10 2014-05-14 中外製薬株式会社 機能蛋白質を代替する二種特異性抗体
FR2861395B1 (fr) 2003-10-23 2006-02-17 Lab Francais Du Fractionnement Facteur viii viralement securise a faible teneur en multimeres superieurs
LT2348051T (lt) 2003-11-05 2019-02-25 Roche Glycart Ag Cd20 antikūnai su padidintu fc receptoriaus prisijungimo giminingumu ir efektorine funkcija
EP1701979A2 (en) * 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
JPWO2005053742A1 (ja) * 2003-12-04 2007-06-28 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物を含有する医薬
US7741449B2 (en) 2003-12-10 2010-06-22 Medarex, Inc. Anti-interferon alpha antibodies
ES2388435T3 (es) 2003-12-10 2012-10-15 Medarex, Inc. Anticuerpos de IP-10 y sus usos
MXPA06006864A (es) * 2003-12-19 2006-08-23 Genentech Inc Deteccion de cd20 en la terapia de enfermedades autoinmunes.
CA2549237A1 (en) * 2003-12-19 2005-07-07 Genentech, Inc. Detection of cd20 in transplant rejection
US20050249723A1 (en) * 2003-12-22 2005-11-10 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel Fc ligand binding sites
EP1737890A2 (en) * 2004-03-24 2007-01-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
CN104611245A (zh) * 2004-04-15 2015-05-13 格利科菲公司 在低等真核生物中产生半乳糖基化糖蛋白
BRPI0510224A (pt) * 2004-05-05 2007-10-23 Genentech Inc métodos de prevenção de doença autoimunológica e artigo industrializado
AU2005244058B2 (en) 2004-05-10 2011-07-28 Macrogenics, Inc. Humanized FcgammaRIIB specific antibodies and methods of use thereof
KR20130099228A (ko) 2004-06-04 2013-09-05 제넨테크, 인크. 다발성 경화증의 치료 방법
TW200608994A (en) * 2004-06-04 2006-03-16 Genentech Inc Method for treating lupus
CN102863532A (zh) 2004-06-21 2013-01-09 米德列斯公司 干扰素α受体1抗体及其用途
KR100863776B1 (ko) * 2004-07-15 2008-10-16 젠코어 인코포레이티드 최적화된 Ｆｃ 변이체
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
WO2006012508A2 (en) * 2004-07-22 2006-02-02 Genentech, Inc. Method of treating sjögren's syndrome
EP2399936A3 (en) 2004-07-26 2012-02-22 Biogen Idec MA Inc. Anti-CD154 antibodies
EP1773884B1 (en) 2004-08-03 2012-03-07 Innate Pharma Therapeutic and diagnostic methods and compositions targeting 4ig-b7-h3 and its counterpart nk cell receptor
EP1784424A4 (en) * 2004-08-16 2009-03-18 Medimmune Inc EPH RECEPTOR BINDING FC VARIANTS HAVING CELLULAR CELLULAR ACTIVITY DEPENDENT ANTIBODIES
US20060074225A1 (en) * 2004-09-14 2006-04-06 Xencor, Inc. Monomeric immunoglobulin Fc domains
AU2005292227A1 (en) * 2004-10-01 2006-04-13 Medarex, Inc. Methods of treating CD30 positive lymphomas
BRPI0516297A (pt) 2004-10-05 2008-09-02 Genentech Inc métodos de tratamento de vasculite e artigos de fabricação
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
KR101027427B1 (ko) 2004-11-12 2011-04-11 젠코어 인코포레이티드 ＦcRn에 대하여 증가된 결합력을 갖는 Ｆc 변이체
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US20100166654A1 (en) * 2004-12-03 2010-07-01 The Uab Research Foundation Single-Drug Multi-Ligand Conjugates for Targeted Drug Delivery
EP1858925A2 (en) * 2005-01-12 2007-11-28 Xencor, Inc. Antibodies and fc fusion proteins with altered immunogenicity
BRPI0606108A2 (pt) * 2005-01-13 2009-06-02 Genentech Inc processo de tratamento
ZA200706017B (en) 2005-01-21 2008-12-31 Genentech Inc Fixed dosing of her antibodies
DOP2006000029A (es) * 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
SI1871805T1 (sl) 2005-02-07 2020-02-28 Roche Glycart Ag Antigen vezavne molekule, ki vežejo EGFR, vektorji, ki te kodirajo in uporabe le-teh
PL1853718T3 (pl) 2005-02-15 2016-01-29 Univ Duke Przeciwciała anty-CD19 i zastosowania w onkologii
US8207303B2 (en) * 2005-02-18 2012-06-26 Medarex, Inc. Monoclonal antibodies against CD30 lacking in fucosyl residues
US7875278B2 (en) 2005-02-18 2011-01-25 Medarex, Inc. Monoclonal antibodies against prostate specific membrane antigen (PSMA) lacking in fucosyl residues
RU2404806C2 (ru) 2005-02-23 2010-11-27 Дженентек, Инк. Продление времени до прогрессирования заболевания или продолжительности жизни у онкологических больных с применением ингибиторов димеризации her
CA2601858A1 (en) * 2005-03-25 2006-09-28 Glycart Biotechnology Ag Antigen binding molecules directed to mcsp and having increased fc receptor binding affinity and effector function
US10011858B2 (en) 2005-03-31 2018-07-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
GB0507123D0 (en) * 2005-04-08 2005-05-11 Isis Innovation Method
AR053579A1 (es) * 2005-04-15 2007-05-09 Genentech Inc Tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (eii)
US9296816B2 (en) 2005-04-15 2016-03-29 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2010080538A1 (en) 2008-12-19 2010-07-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2006116246A2 (en) * 2005-04-25 2006-11-02 Medarex, Inc. Method of treating cd30 positive lymphomas
WO2006116260A2 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Medimmune, Inc. Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
EP2221316A1 (en) 2005-05-05 2010-08-25 Duke University Anti-CD19 antibody therapy for autoimmune disease
US8008449B2 (en) 2005-05-09 2011-08-30 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
MX2007013924A (es) * 2005-05-09 2008-01-28 Glycart Biotechnology Ag Moleculas que unen antigeno que tienen regiones fc modificadas y union alterada a receptores fc.
RU2007147426A (ru) * 2005-05-20 2009-06-27 Дженентек, Инк. (Us) Предварительная обработка биологического образца, взятого у индивидуума с аутоиммунным заболеванием
MX2007015107A (es) * 2005-06-03 2008-02-15 Genentech Inc Metodo para producir anticuerpos con funcion mejorada.
AU2006261920A1 (en) 2005-06-23 2007-01-04 Medimmune, Llc Antibody formulations having optimized aggregation and fragmentation profiles
TW201444869A (zh) 2005-06-30 2014-12-01 Abbvie Inc Ｉｌ-１２／ｐ４０結合蛋白
CA3201163A1 (en) 2005-07-01 2007-01-11 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (pd-l1)
WO2007005612A2 (en) * 2005-07-01 2007-01-11 Medimmune, Inc. An integrated approach for generating multidomain protein therapeutics
WO2007008943A2 (en) 2005-07-08 2007-01-18 Xencor, Inc. Optimized anti-ep-cam antibodies
ES2530265T3 (es) * 2005-07-21 2015-02-27 Genmab A/S Ensayos de potencia de unión de una sustancia medicamentosa de anticuerpo a un receptor FC
US7923538B2 (en) 2005-07-22 2011-04-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Recombinant antibody composition
HUE029465T2 (en) 2005-08-10 2017-02-28 Macrogenics Inc Identification and preparation of antibodies with variant fc regions and methods for their use
EP2500358A3 (en) 2005-08-19 2012-10-17 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
RU2515108C2 (ru) 2005-08-19 2014-05-10 Эббви Инк Иммуноглобулин с двойными вариабельными доменами и его применения
CN102628074B (zh) * 2005-08-19 2015-07-29 詹森生物科技公司 抗蛋白酶解的抗体制剂
AU2006287173A1 (en) * 2005-09-02 2007-03-08 Glycofi, Inc Immunoglobulins comprising predominantly a GICNAcMan3GIcNAc2 glycoform
WO2007039256A2 (de) 2005-09-30 2007-04-12 Abbott Gmbh & Co. Kg Bindungsdomänen von proteinen der repulsive guidance molecule (rgm) proteinfamilie und funktionale fragmente davon sowie deren verwendung
EP1931709B1 (en) * 2005-10-03 2016-12-07 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
EP1951757B1 (en) * 2005-10-06 2014-05-14 Xencor, Inc. Optimized anti-cd30 antibodies
US7790655B2 (en) 2005-10-14 2010-09-07 Medimmune, Llc Cell display of antibody libraries
KR101461263B1 (ko) 2005-10-21 2014-11-17 노파르티스 아게 Ｉｌ-13에 대항한 인간 항체 및 치료적 용도
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
CA2629306A1 (en) * 2005-11-23 2007-05-31 Genentech, Inc. Methods and compositions related to b cell assays
JP5475994B2 (ja) 2005-11-30 2014-04-16 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗Ａβグロブロマー抗体、その抗原結合部分、対応するハイブリドーマ、核酸、ベクター、宿主細胞、前記抗体を作製する方法、前記抗体を含む組成物、前記抗体の使用及び前記抗体を使用する方法。
WO2007064972A2 (en) 2005-11-30 2007-06-07 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against amyloid beta protein and uses thereof
RU2426742C2 (ru) 2005-12-02 2011-08-20 Дженентек, Инк. Составы и способы лечения заболеваний и нарушений, связанных с передачей сигналов цитокинами
KR101446510B1 (ko) 2005-12-08 2014-10-20 메다렉스, 엘.엘.시. 푸코실-지엠1에 대한 인간 모노클론 항체 및 항-푸코실-지엠1 사용법
PT1973950E (pt) 2006-01-05 2014-12-29 Genentech Inc Anticorpos anti-epbh4 e métodos que os utilizam
US20090060921A1 (en) * 2006-01-17 2009-03-05 Biolex Therapeutics, Inc. Glycan-optimized anti-cd20 antibodies
US20070166306A1 (en) * 2006-01-17 2007-07-19 Fey Georg H M Anti-CD19 antibody composition and method
US8716557B2 (en) 2006-01-17 2014-05-06 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compositions and methods for inhibition of fucosyltransferase and xylosyltransferase expression in plants
EP1976883B1 (en) * 2006-01-17 2012-10-03 Medarex, Inc. Monoclonal antibodies against cd30 lacking in fucosyl and xylosyl residues
KR20080098504A (ko) * 2006-02-03 2008-11-10 메디뮨 엘엘씨 단백질 제제
WO2007103469A2 (en) 2006-03-06 2007-09-13 Aeres Biomedical Ltd. Humanized anti-cd22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
US8940871B2 (en) 2006-03-20 2015-01-27 The Regents Of The University Of California Engineered anti-prostate stem cell antigen (PSCA) antibodies for cancer targeting
EP2006381B1 (en) 2006-03-31 2016-02-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
EP3345616A1 (en) 2006-03-31 2018-07-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody modification method for purifying bispecific antibody
EP2011870A4 (en) * 2006-04-14 2010-09-15 Medical & Biol Lab Co Ltd MUTANT POLYPEPTIDE WITH EFFECTOR FUNCTION
PL2032606T3 (pl) 2006-05-30 2014-04-30 Genentech Inc Przeciwciała i immunokoniugaty oraz ich zastosowania
SG172687A1 (en) * 2006-06-06 2011-07-28 Genentech Inc Compositions and methods for modulating vascular development
AR061246A1 (es) * 2006-06-06 2008-08-13 Genentech Inc Anticuerpos anti- dill4 y metodos que los usan
EP2032159B1 (en) 2006-06-26 2015-01-07 MacroGenics, Inc. Combination of fcgammariib antibodies and cd20-specific antibodies and methods of use thereof
PT2029173T (pt) 2006-06-26 2016-11-02 Macrogenics Inc Anticorpos específicos fc rib e seus métodos de uso
EP1878747A1 (en) 2006-07-11 2008-01-16 greenovation Biotech GmbH Glyco-engineered antibodies
US20100166741A1 (en) * 2006-07-13 2010-07-01 Genentech , Inc. Altered br-3 binding polypeptides
EP2046809B1 (en) 2006-07-19 2016-12-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Wsx-1/il-27 as a target for anti-inflammatory responses
GB0615266D0 (en) * 2006-08-01 2006-09-06 Immunobiology Ltd Composition and method for mediating an immune response
AR062223A1 (es) * 2006-08-09 2008-10-22 Glycart Biotechnology Ag Moleculas de adhesion al antigeno que se adhieren a egfr, vectores que los codifican, y sus usos de estas
JP5825756B2 (ja) 2006-08-14 2015-12-02 ゼンコー・インコーポレイテッドＸｅｎｃｏｒ、 Ｉｎｃ． Ｃｄ１９を標的とする最適化抗体
MX2009002418A (es) 2006-09-05 2009-04-23 Medarex Inc Anticuerpos para las proteinas morfogenicas oseas y receptores de estas y metodos para su uso.
RU2495882C2 (ru) 2006-09-08 2013-10-20 Медиммун, Ллк. Гуманизированные антитела к cd19 и их применение для лечения онкологического, связанного с трансплантацией и аутоиммунного заболевания
CA2662701C (en) 2006-09-08 2015-12-08 Abbott Laboratories Interleukin-13 binding proteins
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
MY185887A (en) 2006-09-13 2021-06-14 Abbvie Inc Cell culture improvements
CA2660795C (en) * 2006-09-18 2014-11-18 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target hm1.24
TWI592425B (zh) 2006-10-02 2017-07-21 Ｅ Ｒ 施貴寶＆聖斯有限責任公司 與ｃｘｃｒ４結合之人抗體及彼之用途
KR20090078349A (ko) 2006-10-12 2009-07-17 제넨테크, 인크. 림포톡신-알파에 대한 항체
EP2407548A1 (en) * 2006-10-16 2012-01-18 MedImmune, LLC Molecules with reduced half-lives, compositions and uses thereof
EP2078731A4 (en) 2006-10-20 2012-08-01 Forerunner Pharma Res Co Ltd PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING ANTI-HB-EGF ANTIBODY AS ACTIVE INGREDIENT
US7846434B2 (en) * 2006-10-24 2010-12-07 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Materials and methods for improved immunoglycoproteins
JP2010507394A (ja) * 2006-10-24 2010-03-11 トルービオン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド 改良免疫糖タンパク質のための物質および方法
EP2061814B1 (en) 2006-10-27 2012-06-06 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
US8618248B2 (en) 2006-10-31 2013-12-31 President And Fellows Of Harvard College Phosphopeptide compositions and anti-phosphopeptide antibody compositions and methods of detecting phosphorylated peptides
CA2669921A1 (en) 2006-11-15 2008-06-26 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to btla and methods of use
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
US8481683B2 (en) 2006-12-01 2013-07-09 Medarex, Inc. Human antibodies that bind CD22 and uses thereof
US20080127996A1 (en) * 2006-12-04 2008-06-05 Weinhold Dennis G Method and apparatus to remediate an acid and/or liquid spill
WO2008140603A2 (en) 2006-12-08 2008-11-20 Macrogenics, Inc. METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE USING IMMUNOGLOBULINS HAVING FC REGIONS WITH ALTERED AFFINITIES FOR FCγR ACTIVATING AND FCγR INHIBITING
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
MX2009006277A (es) 2006-12-14 2009-07-24 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se enlazan a cd70 y usos de los mismos.
US20100119526A1 (en) * 2007-01-26 2010-05-13 Bioinvent International Ab DLL4 Signaling Inhibitors and Uses Thereof
RU2009133784A (ru) 2007-02-09 2011-03-20 Дженентек, Инк. (Us) АНТИ-Robo4-АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
WO2008104386A2 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
PE20090681A1 (es) 2007-03-02 2009-06-10 Genentech Inc Prediccion de respuesta a un inhibidor her
KR20090130029A (ko) * 2007-03-07 2009-12-17 글리코파이, 인크. 푸코실화가 변형된 당단백질의 제조
NZ580245A (en) 2007-03-22 2012-01-12 Biogen Idec Inc Binding proteins, including antibodies, antibody derivatives and antibody fragments, that specifically bind cd154 and uses thereof
EP2528002B1 (en) * 2007-04-16 2015-11-04 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Defined glycoprotein products and related methods
EP2703011A3 (en) 2007-05-07 2014-03-26 MedImmune, LLC Anti-icos antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
ES2666165T3 (es) 2007-05-14 2018-05-03 Astrazeneca Ab Métodos para reducir los niveles de eosinófilos
AU2008260498B2 (en) 2007-05-30 2012-11-29 Xencor, Inc. Methods and compositions for inhibiting CD32b expressing cells
PL2171090T3 (pl) 2007-06-08 2013-09-30 Genentech Inc Markery ekspresji genów odporności guza na leczenie hamujące HER2
US7580304B2 (en) * 2007-06-15 2009-08-25 United Memories, Inc. Multiple bus charge sharing
KR101799337B1 (ko) 2007-06-21 2017-12-20 마크로제닉스, 인크. 공유결합형 디아바디 및 이것의 사용
JP5469456B2 (ja) 2007-06-25 2014-04-16 中外製薬株式会社 ＡＤＣＣ活性又はＣＤＣ活性を有する抗Ｐｒｏｍｉｎｉｎ−１抗体
US20110077383A1 (en) * 2007-07-03 2011-03-31 Medimmune, Llc Hinge domain engineering
HUE037162T2 (hu) 2007-07-09 2018-08-28 Genentech Inc Diszulfidkötés redukciójának megelõzése polipeptidek rekombináns elõállítása során
CA2694488A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Medimmune, Llc Multispecific epitope binding proteins and uses thereof
JP6126773B2 (ja) 2007-09-04 2017-05-10 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 癌のターゲッティングおよび検出のための高親和性抗前立腺幹細胞抗原（ｐｓｃａ）抗体
AU2008296361B2 (en) 2007-09-04 2013-04-11 Compugen, Ltd. Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof as a drug target for producing drugs and biologics
EP4339294A3 (en) 2007-09-26 2024-10-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr
MY163473A (en) 2007-09-26 2017-09-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modified antibody constant region
PT2195017E (pt) * 2007-10-01 2014-12-31 Bristol Myers Squibb Co Anticorpos humanos que se ligam à mesotelina e utilizações dos mesmos
EP3714906A1 (en) * 2007-10-03 2020-09-30 Cornell University Treatment of proliferative disorders using radiolabelled antibodies to psma
AR068767A1 (es) 2007-10-12 2009-12-02 Novartis Ag Anticuerpos contra esclerostina, composiciones y metodos de uso de estos anticuerpos para tratar un trastorno patologico mediado por esclerostina
EP2200631A1 (en) 2007-10-16 2010-06-30 Zymogenetics, Inc. Combination of blys inhibition and anti-cd 20 agents for treatment of autoimmune disease
BRPI0820327A2 (pt) 2007-11-02 2020-10-06 Novartis Ag moléculas e métodos para modulação de proteína relacionada ao receptor de lipoproteína de baixa densidade 6 (lrp6)
EP2217263A2 (en) 2007-11-07 2010-08-18 Genentech, Inc. Compositions and methods for treatment of microbial disorders
US8637435B2 (en) * 2007-11-16 2014-01-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Eukaryotic cell display systems
WO2015164330A1 (en) 2014-04-21 2015-10-29 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-psyk antibody molecules and use of same for syk-targeted therapy
TWI580694B (zh) 2007-11-30 2017-05-01 建南德克公司 抗-ｖｅｇｆ抗體
CN101945893B (zh) 2007-12-14 2015-02-25 诺沃-诺迪斯克有限公司 抗人nkg2d抗体及其用途
EP2225273B1 (en) * 2007-12-21 2012-05-23 Roche Glycart AG Stability testing of antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
AU2008339576B2 (en) 2007-12-21 2014-05-22 Medimmune Limited Binding members for interleukin-4 receptor alpha (IL-4Ralpha)
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
HUE024903T2 (en) 2007-12-26 2016-02-29 Xencor Inc FC variants with modified binding to FCRN
US7914785B2 (en) 2008-01-02 2011-03-29 Bergen Teknologieverforing As B-cell depleting agents, like anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
EP2077281A1 (en) 2008-01-02 2009-07-08 Bergen Teknologioverforing AS Anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
MX2010007500A (es) 2008-01-11 2010-10-20 Univ Tokyo Anticuerpo anti-cldn6.
CN101918451A (zh) * 2008-01-15 2010-12-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗CCR5的afucosylated抗体及其用途
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
RU2528736C2 (ru) 2008-02-05 2014-09-20 Бристоль-Мейерз Сквибб Компани Антитела против альфа5-бета 1 и их применение
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
US8877686B2 (en) * 2008-03-03 2014-11-04 Glycofi, Inc. Surface display of recombinant proteins in lower eukaryotes
US9441034B2 (en) * 2008-03-27 2016-09-13 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for inhibiting PDGFRβ and VEGF-A
KR101614494B1 (ko) 2008-04-02 2016-04-22 마크로제닉스, 인크. Ｂｃｒ-복합체-특이적 항체 및 그것의 사용 방법
AU2009231991B2 (en) 2008-04-02 2014-09-25 Macrogenics, Inc. HER2/neu-specific antibodies and methods of using same
MX2010011955A (es) 2008-04-29 2011-01-21 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
CA2723277A1 (en) 2008-05-02 2009-11-05 Novartis Ag Improved fibronectin-based binding molecules and uses thereof
AU2009245354C1 (en) 2008-05-09 2016-05-19 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies to receptor of advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
KR20110016958A (ko) 2008-06-03 2011-02-18 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
SG191625A1 (en) 2008-06-03 2013-07-31 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CA2726845C (en) 2008-06-04 2017-09-26 Macrogenics, Inc. Antibodies with altered binding to fcrn and methods of using same
CA2729567C (en) 2008-06-30 2018-04-24 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anti-cd27 antibody
TW201014602A (en) 2008-07-08 2010-04-16 Abbott Lab Prostaglandin E2 binding proteins and uses thereof
NZ590074A (en) 2008-07-08 2012-12-21 Abbott Lab Prostaglandin e2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US8067339B2 (en) 2008-07-09 2011-11-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Surface display of whole antibodies in eukaryotes
AU2009202778B2 (en) * 2008-07-11 2014-05-08 Commonwealth Of Australia As Represented By And Acting Through The Department Of The Environment, Water, Heritage And The Arts Improved baiting method and composition
ES2541142T3 (es) 2008-08-05 2015-07-16 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos contra la proteína C5 del complemento
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
ES2499031T3 (es) 2008-09-17 2014-09-26 Xencor, Inc. Novedosas composiciones y métodos para el tratamiento de trastornos mediados por la IgE
AU2009303526B2 (en) * 2008-10-14 2015-01-15 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
RU2520838C2 (ru) 2008-10-20 2014-06-27 Эббви Инк Выделение и очистка антител с использованием аффинной хроматографии на основе белка а
CA2738499A1 (en) 2008-10-20 2010-04-29 Abbott Laboratories Viral inactivation during purification of antibodies
ES2719496T3 (es) 2008-11-12 2019-07-10 Medimmune Llc Formulación de anticuerpo
ES2535404T5 (es) 2008-11-22 2018-11-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Uso de anticuerpo anti-VEGF en combinación con quimioterapia para tratar cáncer de mama
US20110311450A1 (en) 2008-12-08 2011-12-22 Zurit Levine Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof as a drug target for producing drugs and biologics
GB2466025A (en) 2008-12-08 2010-06-09 Univ Francois Rabelais De Tour C3/ITGAM polymorphisms and cancer prognosis
MX2011006110A (es) 2008-12-09 2011-06-24 Halozyme Inc Polipeptidos ph20 solubles extendidos y usos de los mismos.
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
CN102264759B (zh) 2008-12-23 2016-05-11 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 与蛋白a的结合改变的免疫球蛋白变体
US20110142836A1 (en) * 2009-01-02 2011-06-16 Olav Mella B-cell depleting agents for the treatment of chronic fatigue syndrome
WO2010081890A1 (en) 2009-01-19 2010-07-22 Innate Pharma Anti-kir3d antibodies
WO2010096394A2 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Redwood Biosciences, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
US10517969B2 (en) * 2009-02-17 2019-12-31 Cornell University Methods and kits for diagnosis of cancer and prediction of therapeutic value
WO2010095031A2 (en) 2009-02-23 2010-08-26 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Humanized antibodies that bind to cd19 and their uses
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
WO2010099186A1 (en) * 2009-02-25 2010-09-02 Merck Sharp & Dohme Corp. Her2 antibody compositions
KR101579771B1 (ko) 2009-03-05 2015-12-28 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ-17 결합 단백질
ME02842B (me) 2009-03-05 2018-01-20 Squibb & Sons Llc Potpuno ljudska antitijela specifična za cadm1
US8283162B2 (en) 2009-03-10 2012-10-09 Abbott Laboratories Antibodies relating to PIVKAII and uses thereof
TW201544123A (zh) 2009-03-20 2015-12-01 Genentech Inc 抗-ｈｅｒ抗體
MY173526A (en) 2009-03-25 2020-01-31 Genentech Inc Novel anti-?5?1 antibodies and uses thereof
CN102378767B (zh) 2009-03-25 2015-01-14 健泰科生物技术公司 抗-fgfr3抗体及其使用方法
AR075982A1 (es) 2009-03-31 2011-05-11 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo afucosilado y una o mas de las citoquinas seleccionadas de gm- csf humano, m -csf humano y/o il-3 humano y composicion
EP2414391B1 (en) 2009-04-02 2018-11-28 Roche Glycart AG Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain fab fragments
PT2417156E (pt) 2009-04-07 2015-04-29 Roche Glycart Ag Anticorpos trivalentes, biespecíficos
WO2010115552A1 (en) 2009-04-07 2010-10-14 Roche Glycart Ag Bispecific anti-erbb-3/anti-c-met antibodies
MX2011010169A (es) 2009-04-07 2011-10-11 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-erbb-1/anti-c-met.
AU2010239351C1 (en) 2009-04-20 2015-02-05 Oxford Biotherapeutics Ltd. Antibodies specific to Cadherin-17
CA2758290C (en) 2009-04-27 2018-04-10 Novartis Ag Antagonistic activin receptor iib (actriib) antibodies for increasing muscle growth
CA2759942A1 (en) 2009-04-27 2010-10-07 Novartis Ag Composition and methods of use for therapeutic antibodies specific for the il-12 receptore betai subunit
BRPI1007602A2 (pt) 2009-05-27 2016-02-16 Hoffmann La Roche "anticorpo tri ou tetraespecífico, método para preparação de um anticorpo triespecífico ou tetraespecífico, célula hospedeira, composição, composição farmacêutica e método para o tratamento de um paciente com necessidade de terapia"
WO2010138184A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Synageva Biopharma Corp. Avian derived antibodies
EP2808393B1 (en) 2009-06-02 2018-01-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fucosylation-deficient cells
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
WO2010146059A2 (en) 2009-06-16 2010-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy
RU2011151287A (ru) 2009-06-18 2013-07-27 Пфайзер Инк. АНТИ Notch-1 АНТИТЕЛА
JP2009292822A (ja) * 2009-07-23 2009-12-17 Chugai Pharmaceut Co Ltd 機能蛋白質を代替する二種特異性抗体
TW201106972A (en) 2009-07-27 2011-03-01 Genentech Inc Combination treatments
CN102498129B (zh) 2009-07-31 2016-03-02 霍夫曼-拉罗奇有限公司 使用bv8拮抗剂或g-csf拮抗剂抑制肿瘤转移
JP5898617B2 (ja) 2009-07-31 2016-04-06 メダレックス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＭｅｄａｒｅｘ， Ｌ．Ｌ．Ｃ． Ｂｔｌａに対する完全ヒト抗体
CN102498206A (zh) 2009-08-11 2012-06-13 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 在无谷氨酰胺的细胞培养基中的蛋白质生产
TWI409079B (zh) 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
JP2013501741A (ja) 2009-08-14 2013-01-17 ロシュ グリクアート アーゲー アフコシル化ｃｄ２０抗体とフルダラビン及び／又はミトキサントロンの併用療法
MX336476B (es) 2009-08-15 2016-01-20 Genentech Inc Terapia anti-angiogenesis para el tratamiento de cancer de mama previamente tratado.
CA2771436A1 (en) 2009-08-17 2011-02-24 Forerunner Pharma Research Co., Ltd. Pharmaceutical composition comprising anti-hb-egf antibody as active ingredient
WO2011021146A1 (en) 2009-08-20 2011-02-24 Pfizer Inc. Osteopontin antibodies
TWI412375B (zh) 2009-08-28 2013-10-21 Roche Glycart Ag 人類化抗ｃｄｃｐ１抗體
TW201113037A (en) 2009-08-28 2011-04-16 Hoffmann La Roche Antibodies against CDCP1 for the treatment of cancer
CA2770174A1 (en) * 2009-08-31 2011-03-03 Roche Glycart Ag Affinity-matured humanized anti cea monoclonal antibodies
JP2013503607A (ja) 2009-09-01 2013-02-04 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
WO2011028950A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
WO2011029823A1 (en) 2009-09-09 2011-03-17 Novartis Ag Monoclonal antibody reactive with cd63 when expressed at the surface of degranulated mast cells
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
NZ701769A (en) 2009-09-16 2016-06-24 Genentech Inc Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof
US9096877B2 (en) 2009-10-07 2015-08-04 Macrogenics, Inc. Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use
BR112012008665A2 (pt) 2009-10-12 2016-11-22 Pfizer tratamento de câncer
EP2470569A1 (en) 2009-10-13 2012-07-04 Oxford Biotherapeutics Ltd. Antibodies against epha10
UY32948A (es) 2009-10-15 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011050188A1 (en) 2009-10-22 2011-04-28 Genentech, Inc. Anti-hepsin antibodies and methods using same
CN104447996A (zh) 2009-10-23 2015-03-25 米伦纽姆医药公司 抗gcc抗体分子及其相关组合物和方法
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011051327A2 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Novartis Ag Small antibody-like single chain proteins
WO2011053707A1 (en) 2009-10-31 2011-05-05 Abbott Laboratories Antibodies to receptor for advanced glycation end products (rage) and uses thereof
WO2011051466A1 (en) 2009-11-02 2011-05-05 Novartis Ag Anti-idiotypic fibronectin-based binding molecules and uses thereof
EP2496600A1 (en) 2009-11-04 2012-09-12 Fabrus LLC Methods for affinity maturation-based antibody optimization
MY162511A (en) 2009-11-04 2017-06-15 Merck Sharp & Dohme Engineered anti-tslp antibody
US8361744B2 (en) 2009-11-05 2013-01-29 Genentech, Inc. Methods and composition for secretion of heterologous polypeptides
US9428586B2 (en) 2009-12-01 2016-08-30 Compugen Ltd Heparanase splice variant
US8772459B2 (en) 2009-12-02 2014-07-08 Imaginab, Inc. J591 minibodies and Cys-diabodies for targeting human prostate specific membrane antigen (PSMA) and methods for their use
EP2510001B1 (en) 2009-12-08 2015-12-02 AbbVie Deutschland GmbH & Co KG Monoclonal antibodies against the rgm a protein for use in the treatment of retinal nerve fiber layer degeneration
AR078377A1 (es) 2009-12-11 2011-11-02 Genentech Inc Anticuerpos anti-vegf-c (factor de crecimiento endotelial anti-vascular aislado c) y sus metodos de uso
MA33892B1 (fr) 2009-12-22 2013-01-02 Roche Glycart Ag Anticorps anti-her3, et leurs utilisations
EP2516458A1 (en) 2009-12-22 2012-10-31 Novartis AG Tetravalent cd47-antibody constant region fusion protein for use in therapy
JP5833565B2 (ja) 2009-12-23 2015-12-16 ４−アンティボディ・アクチェンゲゼルシャフト４−Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｇ ヒトサイトメガロウイルスに対する結合メンバー
MY161868A (en) 2009-12-23 2017-05-15 Genentech Inc Anti-bv8 antibodies and uses thereof
US8362210B2 (en) 2010-01-19 2013-01-29 Xencor, Inc. Antibody variants with enhanced complement activity
WO2011092233A1 (en) 2010-01-29 2011-08-04 Novartis Ag Yeast mating to produce high-affinity combinations of fibronectin-based binders
US20110189178A1 (en) * 2010-02-04 2011-08-04 Xencor, Inc. Immunoprotection of Therapeutic Moieties Using Enhanced Fc Regions
BR112012020102A2 (pt) 2010-02-10 2016-11-29 Immunogen Inc anticorpos cd20 e usos dos mesmos.
KR20120125357A (ko) 2010-02-10 2012-11-14 노파르티스 아게 근육 성장을 위한 방법 및 화합물
CN102892779B (zh) 2010-02-18 2016-12-21 基因泰克公司 神经调节蛋白拮抗剂及其在治疗癌症中的用途
JP6050124B2 (ja) 2010-02-19 2016-12-21 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ オクラホマ Ｗｎｔシグナル伝達経路を阻害するモノクローナル抗体ならびにその製造方法およびその使用方法
AR080244A1 (es) 2010-02-23 2012-03-21 Genentech Inc Terapia anti-angiogenesis para el tratamiento del cancer ovarico
CA2788992A1 (en) 2010-02-24 2011-09-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Method for increasing n-glycosylation site occupancy on therapeutic glycoproteins produced in pichia pastoris
KR101159068B1 (ko) * 2010-03-03 2012-06-22 사회복지법인 삼성생명공익재단 분자영상 프로브 제조용 신규 리간드, 그 리간드를 포함하는 분자영상 프로브, 그 분자영상 프로브를 포함하는 분자영상 입자, 그 제조방법 및 그것을 포함하는 약학 조성물
US8802091B2 (en) 2010-03-04 2014-08-12 Macrogenics, Inc. Antibodies reactive with B7-H3 and uses thereof
HUE045487T2 (hu) 2010-03-04 2019-12-30 Macrogenics Inc B7-H3-ra reaktív antitestek, immunológiailag aktív fragmenseik és alkalmazásaik
RU2587625C2 (ru) 2010-03-24 2016-06-20 Дженентек, Инк. Анти-lrp6 антитела
TW201138821A (en) 2010-03-26 2011-11-16 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies
US20150231215A1 (en) 2012-06-22 2015-08-20 Randolph J. Noelle VISTA Antagonist and Methods of Use
US10745467B2 (en) 2010-03-26 2020-08-18 The Trustees Of Dartmouth College VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
CN103119054B (zh) 2010-03-26 2017-01-18 达特茅斯大学理事会 Vista调节性t细胞介体蛋白、vista结合剂及其用途
WO2011120134A1 (en) 2010-03-29 2011-10-06 Zymeworks, Inc. Antibodies with enhanced or suppressed effector function
US20130123126A1 (en) * 2010-04-07 2013-05-16 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Selection and use of host cells for production of glycoproteins
BR112012025645A2 (pt) 2010-04-07 2017-12-12 Momenta Pharmaceuticals Inc glicanos de alta manose.
WO2011130377A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
EP2563391B1 (en) 2010-04-27 2020-08-26 Roche Glycart AG Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with a mtor inhibitor
EA201291180A1 (ru) 2010-05-06 2013-05-30 Новартис Аг Композиции и способы применения терапевтических антител против белка, родственного рецептору липопротеинов низкой плотности 6 (lrp6)
AU2011249782B2 (en) 2010-05-06 2014-10-02 Novartis Ag Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein - related protein 6 (LRP6) multivalent antibodies
TWI500427B (zh) 2010-05-14 2015-09-21 Abbvie Inc Ｉｌ－１結合蛋白
WO2011146568A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Genentech, Inc. Predicting response to a her inhibitor
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
WO2011153243A2 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Genentech, Inc. Anti-angiogenesis therapy for treating gastric cancer
KR20130098165A (ko) 2010-06-03 2013-09-04 제넨테크, 인크. 항체 및 면역접합체의 이뮤노-ｐｅｔ 영상화 및 그의 용도
MX336001B (es) 2010-06-18 2016-01-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-axl y metodos de uso.
CN103347894B (zh) 2010-06-19 2017-05-10 纪念斯隆-凯特林癌症中心 抗gd2抗体
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011163401A2 (en) 2010-06-22 2011-12-29 Neogenix Oncology, Inc. Colon and pancreas cancer specific antigens and antibodies
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
WO2012006503A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Genentech, Inc. Anti-neuropilin antibodies and methods of use
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
CN103261225A (zh) 2010-07-23 2013-08-21 波士顿大学董事会 作为用于抑制病理性血管生成和肿瘤细胞侵袭力的治疗剂以及用于分子成像和靶向递送的抗DEspR抑制剂
US9120862B2 (en) 2010-07-26 2015-09-01 Abbott Laboratories Antibodies relating to PIVKA-II and uses thereof
EP3029066B1 (en) 2010-07-29 2019-02-20 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
US20140308699A1 (en) 2010-07-30 2014-10-16 Glycode Yeast artificial chromosome carrying the mammalian glycosylation pathway
ES2667100T3 (es) 2010-08-02 2018-05-09 Macrogenics, Inc. Diacuerpos covalentes y sus usos
WO2012018790A2 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
BR112013002535A2 (pt) 2010-08-03 2019-09-24 Hoffmann La Roche biomarcadores de leucemia linfocítica crônica (cll)
WO2012019061A2 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stem Centrx, Inc. Novel effectors and methods of use
CA2805564A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stefan Jenewein Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein
MA34519B1 (fr) 2010-08-13 2013-09-02 Roche Glycart Ag Anticorps anti-fap et procédés d'utilisation
BR112013002444A2 (pt) 2010-08-13 2016-05-24 Roche Glycart Ag anticorpo, polinucleotídeo e polipeotídeo isolados, composição, vetor, cécula hospedeira, conjulgado de anticorpo, formulação farmacêutica, uso do anticorpo, métodos para produzir um anticorpo, tratar um indivíduo, induzir a lise celular de uma célula tumorosa e diagnosticar uma doença em um indivíduo
US9062101B2 (en) 2010-08-14 2015-06-23 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Amyloid-beta binding proteins
WO2012022734A2 (en) 2010-08-16 2012-02-23 Medimmune Limited Anti-icam-1 antibodies and methods of use
TW201208703A (en) 2010-08-17 2012-03-01 Roche Glycart Ag Combination therapy of an afucosylated CD20 antibody with an anti-VEGF antibody
UA114883C2 (uk) 2010-08-20 2017-08-28 Новартіс Аг Антитіло до рецептора епідермального фактора росту-3 (her3)
WO2012025530A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies comprising a disulfide stabilized - fv fragment
ES2553262T3 (es) 2010-08-25 2015-12-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos contra la IL-18R1 y usos de los mismos
WO2012027570A2 (en) 2010-08-26 2012-03-01 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
PE20140190A1 (es) 2010-08-27 2014-02-10 Stem Centrx Inc Moduladores de proteinas notum y metodos de uso
US20120089541A1 (en) 2010-08-31 2012-04-12 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treatment
AU2011295715B9 (en) 2010-09-03 2017-02-23 Abbvie Stemcentrx Llc Novel modulators and methods of use
US8999335B2 (en) 2010-09-17 2015-04-07 Compugen Ltd. Compositions and methods for treatment of drug resistant multiple myeloma
ES2719624T3 (es) 2010-09-23 2019-07-11 Prec Biologics Inc Peptidomiméticos de cáncer de colon y de páncreas
EP2625203A1 (en) 2010-10-05 2013-08-14 Novartis AG Anti-il12rbeta1 antibodies and their use in treating autoimmune and inflammatory disorders
ES2588981T3 (es) 2010-10-05 2016-11-08 Genentech, Inc. Smoothened mutante y métodos de uso de la misma
CN108341868B (zh) 2010-11-05 2022-06-07 酵活有限公司 在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计
BR112013011305A2 (pt) 2010-11-08 2017-07-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd método de tratamento de uma disfunção mediada por il-6, método de tratamento de artrite reumatóide, artigo de fabricação, método de inibição da progressão de dano estrutural articular, composição farmacêutica, método de tratamento de artrite idiopática juvenil (jia) e método de tratamento de arterite de células gigantes (gca)
EA201390669A1 (ru) 2010-11-10 2013-11-29 Дженентек, Инк. Способы и композиции для иммунотерапии заболеваний нервной системы
US9334331B2 (en) 2010-11-17 2016-05-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Bispecific antibodies
WO2012071561A2 (en) 2010-11-23 2012-05-31 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Anti-il-6 antibodies for the treatment of anemia
AU2011336716B2 (en) 2010-11-30 2016-01-21 Genentech, Inc. Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor
KR20220082104A (ko) 2010-11-30 2022-06-16 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 세포상해 유도 치료제
TWI585106B (zh) 2010-12-08 2017-06-01 艾伯維史坦森特瑞斯有限責任公司 新穎調節劑及其使用方法
US9458240B2 (en) 2010-12-10 2016-10-04 Novartis Pharma Ag Anti-BAFFR antibody formulations
SG191039A1 (en) 2010-12-15 2013-08-30 Wyeth Llc Anti-notch1 antibodies
KR101616260B1 (ko) 2010-12-16 2016-04-29 제넨테크, 인크. Th2 억제에 관한 진단 및 치료
RU2013131444A (ru) 2010-12-16 2015-01-27 Рош Гликарт Аг Сочетанная терапия афукозилированным антителом к cd20 и ингибитором mdm2
BR112013014527A2 (pt) 2010-12-20 2017-03-07 Genentech Inc anticorpo isolado, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, uso do imunoconjugado, método para tratamento de um indivíduo que tem um câncer positivo para mesotelina, para inibição de proliferação de uma célula positiva para mesotelina, para detecção de mesotelina humana em uma amostra biológica e para detectar um câncer positivo para mesotelina
MY163368A (en) 2010-12-21 2017-09-15 Abbvie Inc Il-1-alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
CN103261230A (zh) 2010-12-22 2013-08-21 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗pcsk9抗体及使用方法
WO2012085111A1 (en) 2010-12-23 2012-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery
WO2012092539A2 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibodies to dll4 and uses thereof
WO2012097333A2 (en) 2011-01-14 2012-07-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and method of use thereof
EP3763740A1 (en) 2011-01-26 2021-01-13 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
WO2012107416A2 (en) 2011-02-10 2012-08-16 Roche Glycart Ag Improved immunotherapy
SA112330278B1 (ar) 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
CA2824824A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent antigen binding proteins
MX341921B (es) 2011-02-28 2016-09-07 Hoffmann La Roche Proteinas de union a antigeno.
UA115030C2 (uk) 2011-03-02 2017-09-11 Рош Глікарт Аг Антитіло, яке зв'язується зі зв'язаним з мембраною карциноембріональним антигеном (сеа)
WO2012125553A2 (en) 2011-03-12 2012-09-20 Momenta Pharmaceuticals, Inc. N-acetylhexosamine-containing n-glycans in glycoprotein products
EP2895592A1 (en) 2011-03-23 2015-07-22 Société Industrielle Limousine d'Application Biologique (SILAB) A yeast recombinant cell capable of producing gdp-fucose
MX354359B (es) 2011-03-29 2018-02-28 Roche Glycart Ag Variantes de fragmento cristalizable (fc) de los anticuerpos.
CN103596983B (zh) 2011-04-07 2016-10-26 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗fgfr4抗体及使用方法
AU2012241373B2 (en) 2011-04-15 2016-06-09 Compugen Ltd. Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof for treatment of immune related disorders and cancer
ES2724801T3 (es) 2011-04-19 2019-09-16 Pfizer Combinaciones de anticuerpos anti-4-1BB y anticuerpos inductores de ADCC para el tratamiento del cáncer
EP3214096A3 (en) 2011-04-19 2017-10-18 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Monospecific and bispecific anti-igf-1r and anti-erbb3 antibodies
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
RU2638806C2 (ru) 2011-05-12 2017-12-15 Дженентек, Инк. Lc-ms/ms способ мониторинга множественных реакций для выявления терапевтических антител в образцах животных с помощью каркасных сигнатурных пептидов
US9346883B2 (en) 2011-05-13 2016-05-24 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Antibodies against HER3
WO2012158704A1 (en) 2011-05-16 2012-11-22 Genentech, Inc. Fgfr1 agonists and methods of use
AU2012259162C1 (en) 2011-05-21 2020-05-21 Macrogenics, Inc. Deimmunized serum-binding domains and their use for extending serum half-life
US9067997B2 (en) 2011-05-25 2015-06-30 Innate Pharma Sa Anti-KIR antibodies for the treatment of inflammatory and autoimmune disorders
US9244074B2 (en) 2011-06-07 2016-01-26 University Of Hawaii Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma
WO2012170742A2 (en) 2011-06-07 2012-12-13 University Of Hawaii Treatment and prevention of cancer with hmgb1 antagonists
US20130209449A9 (en) 2011-06-13 2013-08-15 Abgenomics Cooperatief U.A. Anti-psgl-1 antibodies and uses thereof
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
BR112013032235A2 (pt) 2011-06-15 2016-11-22 Hoffmann La Roche anticorpos do receptor de epo anti-humano e métodos de uso
KR20140030250A (ko) 2011-06-16 2014-03-11 노파르티스 아게 치료제로서 사용하기 위한 가용성 단백질
US20140120555A1 (en) * 2011-06-20 2014-05-01 Pierre Fabre Medicament Anti-cxcr4 antibody with effector functions and its use for the treatment of cancer
AU2012273955A1 (en) 2011-06-22 2014-01-09 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Anti-Axl antibodies and uses thereof
AU2012273954A1 (en) 2011-06-22 2014-01-09 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Anti-Axl antibodies and uses thereof
KR102038155B1 (ko) 2011-06-22 2019-10-29 에프. 호프만-라 로슈 아게 Mhc 클래스 i 포함 복합체를 사용한 순환 바이러스-특이적 세포독성 t-세포에 의한 표적 세포의 제거
EP2726508B1 (en) 2011-06-28 2017-08-09 Oxford BioTherapeutics Ltd Antibodies to adp-ribosyl cyclase 2
US9428574B2 (en) 2011-06-30 2016-08-30 Compugen Ltd. Polypeptides and uses thereof for treatment of autoimmune disorders and infection
KR20140045440A (ko) 2011-06-30 2014-04-16 제넨테크, 인크. 항-c-met 항체 제제
HUE040276T2 (hu) 2011-07-01 2019-02-28 Novartis Ag Eljárás metabolikus rendellenességek kezelésére
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
TR201807040T4 (tr) 2011-07-11 2018-06-21 Glenmark Pharmaceuticals Sa Ox40 a bağlanan antikorlar ve bunların kullanımları.
CN103857411A (zh) 2011-07-13 2014-06-11 阿布维公司 使用抗il-13抗体治疗哮喘的方法和组合物
US9238689B2 (en) 2011-07-15 2016-01-19 Morpho Sys AG Antibodies that are cross-reactive for macrophage migration inhibitory factor (MIF) and D-dopachrome tautomerase (D-DT)
WO2013013193A1 (en) 2011-07-20 2013-01-24 Zepteon, Incorporated Polypeptide separation methods
WO2013013013A2 (en) * 2011-07-21 2013-01-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for producing modified glycoproteins
US20130022551A1 (en) 2011-07-22 2013-01-24 Trustees Of Boston University DEspR ANTAGONISTS AND AGONISTS AS THERAPEUTICS
MX2014001766A (es) 2011-08-17 2014-05-01 Genentech Inc Anticuerpos de neuregulina y sus usos.
CN103890008A (zh) 2011-08-17 2014-06-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 在顽固性肿瘤中抑制血管发生
CA2844538C (en) 2011-08-23 2020-09-22 Roche Glycart Ag Bispecific antigen binding molecules
US9309306B2 (en) 2011-08-23 2016-04-12 Roche Glycart Ag Anti-MCSP antibodies
JP2015527869A (ja) 2011-08-26 2015-09-24 メリマック ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド タンデムＦｃ二重特異性抗体
MX2014003094A (es) 2011-09-15 2014-04-25 Genentech Inc Metodos para promover diferenciacion.
AR087918A1 (es) 2011-09-19 2014-04-23 Genentech Inc Tratamientos combinados que comprenden antagonistas de c-met y antagonistas de b-raf
BR112014006537A2 (pt) 2011-09-23 2017-11-28 Roche Glycart Ag anticorpos biespecíficos, formulação farmacêutica, usos de um anticorpo biespecífico, método de tratamento, ácido nucleico, vetores de expressão, célula hospedeira e método para a produção de um anticorpo biespecífico
SG11201401104WA (en) 2011-09-30 2014-09-26 Dana Farber Cancer Inst Inc Therapeutic peptides
WO2013052155A1 (en) 2011-10-05 2013-04-11 Genentech, Inc. Methods of treating liver conditions using notch2 antagonists
CN109111523B (zh) 2011-10-14 2022-06-07 诺华股份有限公司 用于Wnt途径相关疾病的抗体和方法
AU2012322618A1 (en) 2011-10-14 2014-05-29 Genentech, Inc. Anti-HtrA1 antibodies and methods of use
CA2850836A1 (en) 2011-10-15 2013-04-18 Genentech, Inc. Methods of using scd1 antagonists
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
JP2014533659A (ja) 2011-10-24 2014-12-15 アッヴィ・インコーポレイテッド スクレロスチンに対するイムノバインダー
CA2850034A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Genentech, Inc. Therapeutic combinations and methods of treating melanoma
KR102398736B1 (ko) 2011-10-31 2022-05-16 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 중쇄와 경쇄의 회합이 제어된 항원 결합 분자
WO2013067057A1 (en) 2011-11-01 2013-05-10 Bionomics, Inc. Anti-gpr49 antibodies
AU2012332588B2 (en) 2011-11-01 2017-09-07 Bionomics, Inc. Methods of blocking cancer stem cell growth
WO2013067060A1 (en) 2011-11-01 2013-05-10 Bionomics, Inc. Anti-gpr49 antibodies
AU2012332587B2 (en) 2011-11-01 2017-02-23 Bionomics, Inc. Antibodies and methods of treating cancer
AU2012336069A1 (en) 2011-11-07 2014-05-22 Medimmune, Llc Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
RU2014124842A (ru) 2011-11-21 2015-12-27 Дженентек, Инк. Очистка анти-с-мет антител
US20130302274A1 (en) 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
AU2012349736A1 (en) 2011-12-05 2014-06-26 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (HER3) directed to domain II of HER3
BR112014013412A8 (pt) 2011-12-05 2021-06-08 Novartis Ag anticorpos para o receptor 3 do fator de crescimento epidérmico (her3), e seus usos
EP2788024A1 (en) 2011-12-06 2014-10-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
WO2013087992A1 (en) * 2011-12-13 2013-06-20 Glykos Finland Oy Glycoprotein
EP2791164B1 (en) 2011-12-13 2017-08-16 Glykos Finland Oy Non-fucosylated glycoprotein comprising the Fc domain of an antibody
PL2794905T3 (pl) 2011-12-20 2020-11-02 Medimmune, Llc Zmodyfikowane polipeptydy dla rusztowań przeciwciał dwuswoistych
EA201491214A1 (ru) 2011-12-21 2015-02-27 Новартис Аг Композиции и способы применения антител, нацеленных на фактор p
SG10201601882PA (en) 2011-12-22 2016-04-28 Hoffmann La Roche Expression Vector Organization, Novel Production Cell Generation Methods And Their Use For The Recombinant Production Of Polypeptides
BR112014013035A2 (pt) 2011-12-22 2018-10-09 Hoffmann La Roche métodos de seleção de células, conjuntos de expressão bicistrônica, células eucarióticas, vetores lentivirais, uso de vetor lentiviral, bibliotecas de ventores lentivirais e de células eucarióticas, métodos de seleção de células, fluxos de trabalho e uso de célula
CN107119073A (zh) 2011-12-22 2017-09-01 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 表达载体元件组合、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途
WO2013096791A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Genentech, Inc. Process for making high concentration protein formulations
CA2859755C (en) 2011-12-23 2021-04-20 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
WO2013101771A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Genentech, Inc. Compositions and method for treating autoimmune diseases
CN104159920A (zh) 2011-12-30 2014-11-19 艾伯维公司 针对il-13和/或il-17的双重可变结构域免疫球蛋白
CN104244968B (zh) 2011-12-30 2017-07-25 哈洛齐梅公司 Ph20多肽变体、配制物及其应用
US10774132B2 (en) 2012-01-09 2020-09-15 The Scripps Research Instittue Ultralong complementarity determining regions and uses thereof
JP2015509091A (ja) 2012-01-09 2015-03-26 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート ヒト化抗体
SG10201601747XA (en) 2012-01-18 2016-04-28 Genentech Inc Anti-LRP5 Antibodies And Methods Of Use
KR20140119114A (ko) 2012-01-18 2014-10-08 제넨테크, 인크. Fgf19 조절제의 사용 방법
GB201201314D0 (en) 2012-01-26 2012-03-07 Isis Innovation Composition
IL297229A (en) 2012-01-27 2022-12-01 Abbvie Inc The composition and method for the diagnosis and treatment of diseases related to the degeneration of nerve cells
AR091305A1 (es) 2012-01-31 2015-01-28 Genentech Inc ANTICUERPOS ANTI-IgE Y SUS METODOS DE USO
RU2014111999A (ru) 2012-02-01 2016-03-27 Компуджен Лтд. Антитела к C10RF32 и их применения для лечения рака
AU2013218017B2 (en) 2012-02-07 2017-12-07 Innate Pharma MICA binding agents
RU2644341C2 (ru) 2012-02-10 2018-02-08 Дженентек, Инк. Одноцепочечные антитела и другие гетеромультимеры
AU2013216753B2 (en) 2012-02-11 2017-09-21 Genentech, Inc. R-spondin translocations and methods using the same
CA2860600C (en) 2012-02-15 2022-07-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor based affinity chromatography
AU2013240261A1 (en) 2012-03-27 2014-09-18 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to HER3 inhibitors
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US10385395B2 (en) 2012-04-11 2019-08-20 The Regents Of The University Of California Diagnostic tools for response to 6-thiopurine therapy
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9505833B2 (en) 2012-04-20 2016-11-29 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
SG11201407106XA (en) 2012-05-01 2014-11-27 Genentech Inc Anti-pmel17 antibodies and immunoconjugates
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
SI2849723T1 (sl) 2012-05-18 2018-09-28 Genentech, Inc. Formulacije z visoko koncentracijo monoklonskih protiteles
CN104520325A (zh) 2012-05-21 2015-04-15 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于提高血脑屏障转运的安全性的方法
CN104335047B (zh) 2012-05-23 2017-08-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 治疗剂的选择方法
US9695454B2 (en) 2012-05-23 2017-07-04 Glykos Finland Oy Production of fucosylated glycoproteins
KR20150013188A (ko) 2012-05-24 2015-02-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 다중특이적 항체
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
EP2856159A4 (en) 2012-06-01 2016-04-13 Momenta Pharmaceuticals Inc METHODS RELATING TO DENOSUMAB
US20150104468A1 (en) 2012-06-04 2015-04-16 Irm Llc Site-specific labeling methods and molecules produced thereby
KR101566539B1 (ko) 2012-06-08 2015-11-05 국립암센터 신규한 Ｔｈ2 세포 전환용 에피토프 및 이의 용도
US9216219B2 (en) 2012-06-12 2015-12-22 Novartis Ag Anti-BAFFR antibody formulation
RU2015101113A (ru) 2012-06-15 2016-08-10 Дженентек, Инк. Антитела против pcsk9, составы, дозы и способы применения
AU2013277051B2 (en) 2012-06-22 2018-06-07 King's College London Novel VISTA-Ig constructs and the use of VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
US9890215B2 (en) 2012-06-22 2018-02-13 King's College London Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
KR20150023889A (ko) 2012-06-27 2015-03-05 에프. 호프만-라 로슈 아게 2 개 이상의 상이한 결합 단위를 함유하는 맞춤-제작된 고도로 선별적이고 다중-특이적인 표적화 단위의 선별 및 제조 방법 및 이의 용도
CA2871882A1 (en) 2012-06-27 2014-01-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof
US20140004121A1 (en) 2012-06-27 2014-01-02 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
RU2017128512A (ru) 2012-07-04 2019-02-15 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела к теофиллину и способы их применения
CN107973856B (zh) 2012-07-04 2021-11-23 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 共价连接的抗原-抗体缀合物
EP2870180B1 (en) 2012-07-04 2024-08-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-biotin antibodies and methods of use
CN110042114B (zh) 2012-07-05 2024-09-10 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 表达和分泌系统
SG11201500142RA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
AU2013288932A1 (en) 2012-07-09 2014-12-11 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti - CD79b antibodies
JP2015527318A (ja) 2012-07-09 2015-09-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２２を含む免疫複合体
BR112015000437A2 (pt) 2012-07-09 2017-06-27 Genentech Inc imunoconjugados, formulação farmacêutica, métodos de tratamento e de inbir a proliferação de uma célula
AR091755A1 (es) 2012-07-12 2015-02-25 Abbvie Inc Proteinas de union a il-1
LT2872534T (lt) 2012-07-13 2018-10-25 Roche Glycart Ag Dvigubai specifiniai anti-vegf/anti-ang-2 antikūnai ir jų panaudojimas akių kraujagyslių ligoms gydyti
US9334332B2 (en) 2012-07-25 2016-05-10 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Anti-kit antibodies
JP6290209B2 (ja) 2012-08-07 2018-03-07 ロシュ グリクアート アーゲー 低下した及び増加したエフェクター機能を有するように操作された２つの抗体を含む組成物。
SG11201500583PA (en) 2012-08-29 2015-04-29 Hoffmann La Roche Blood brain barrier shuttle
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
SG11201504249XA (en) 2012-09-02 2015-07-30 Abbvie Inc Methods to control protein heterogeneity
JOP20200308A1 (ar) 2012-09-07 2017-06-16 Novartis Ag جزيئات إرتباط il-18
CN109793893B (zh) 2012-09-07 2023-05-26 达特茅斯大学理事会 用于诊断和治疗癌症的vista调节剂
AR093311A1 (es) 2012-11-01 2015-05-27 Abbvie Inc Inmunoglobulinas de dominio variable dual contra el factor de crecimiento endotelial vascular (vegf) y el ligando involucrado en la señalizacion celula a celula a traves del receptor notch (dll4)
WO2014071358A2 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
MX2015005757A (es) 2012-11-08 2015-11-18 Hoffmann La Roche Proteinas ligantes de antigeno her3 de union a la horquilla beta de her3.
SG11201503734UA (en) 2012-11-13 2015-06-29 Genentech Inc Anti-hemagglutinin antibodies and methods of use
EP2733153A1 (en) 2012-11-15 2014-05-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the preparation of immunoconjugates and uses thereof
WO2014084859A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities
LT2925350T (lt) 2012-12-03 2019-04-10 Bristol-Myers Squibb Company Imunomoduliuojančių fc sulietų baltymų priešvėžinio aktyvumo stiprinimas
CN109517063B (zh) 2012-12-05 2022-07-01 诺华股份有限公司 靶向epo的抗体的组合物和方法
MA37961A1 (fr) 2012-12-18 2016-06-30 Glycotope Gmbh Nouveaux traitements thérapeutiques par anticorps anti-her2 à basse fucosylation
JP6475167B2 (ja) 2012-12-21 2019-02-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ジスルフィド結合した多価ｍｈｃクラスｉを含む多機能タンパク質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
CN104903352A (zh) 2012-12-28 2015-09-09 艾伯维公司 多价结合蛋白组合物
NZ709828A (en) 2012-12-28 2019-07-26 Prec Biologics Inc Humanized monoclonal antibodies and methods of use for the diagnosis and treatment of colon and pancreas cancer
US9458244B2 (en) 2012-12-28 2016-10-04 Abbvie Inc. Single chain multivalent binding protein compositions and methods
AU2013371957B2 (en) 2013-01-02 2018-10-25 Ichnos Sciences SA Antibodies that bind to TL1A and their uses
KR20200134340A (ko) 2013-01-10 2020-12-01 젠맵 비. 브이 인간 IgG1 Fc 영역 변이체 및 그의 용도
US9180185B2 (en) 2013-01-11 2015-11-10 Hoffman-La Roche Inc. Combination therapy of anti-HER3 antibodies
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
CN110981964B (zh) 2013-01-14 2023-09-15 Xencor股份有限公司 新型异二聚体蛋白
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP2945969A1 (en) 2013-01-15 2015-11-25 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
EP3939614A1 (en) 2013-01-18 2022-01-19 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116596A1 (en) 2013-01-22 2014-07-31 Abbvie, Inc. Methods for optimizing domain stability of binding proteins
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
WO2014124258A2 (en) 2013-02-08 2014-08-14 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
CN115925957A (zh) 2013-02-08 2023-04-07 Irm责任有限公司 用于修饰抗体以制备免疫缀合物的特定位点
EA031537B1 (ru) 2013-02-08 2019-01-31 Новартис Аг Антитела против il-17a и их применение для лечения аутоиммунных и воспалительных нарушений
BR112015019348A2 (pt) 2013-02-13 2017-08-22 Lab Francais Du Fractionnement Métodos para produção de proteína com glicosilação modificada e com sialilação aumentada, para aumentar a atividade de sialil transferase na glândula mamária e para produzir sialil transferase, proteína com glicosilação modificada ou proteína com sialilação aumentada, composição, sialil transferase, mamífero transgênico, e, célula epitelial mamária
AR094780A1 (es) 2013-02-13 2015-08-26 Laboratoire Français Du Fractionnement Et Des Biotechnologies ANTICUERPOS ANTI-TNF-a ALTAMENTE GALACTOSILADOS Y SUS USOS
EP2956482B1 (en) 2013-02-14 2017-06-28 Innate Pharma Treatment of peripheral t cell lymphoma
EP3896088A1 (en) 2013-02-20 2021-10-20 Innate Pharma Treatment of peripheral t cell lymphoma
CN104994879A (zh) 2013-02-22 2015-10-21 霍夫曼-拉罗奇有限公司 治疗癌症和预防药物抗性的方法
JP2016512489A (ja) 2013-02-26 2016-04-28 ロシュ グリクアート アーゲー 抗ｍｃｓｐ抗体
US9487587B2 (en) 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
US9458245B2 (en) 2013-03-06 2016-10-04 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. ANTI-C-MET tandem Fc bispecific antibodies
MX2015011428A (es) 2013-03-06 2016-02-03 Genentech Inc Metodos para tratar y prevenir la resistencia a los farmacos para el cancer.
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
SG10201705245TA (en) 2013-03-14 2017-07-28 Macrogenics Inc Bispecific Molecules That Are Immunoreactive With Immune Effector Cells That Express An Activating Receptor And An Antigen Expressed By A Cell Infected By A Virus And Uses Thereof
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
MX362075B (es) 2013-03-14 2019-01-07 Abbott Lab Ensayo de combinación de antígeno-anticuerpo del virus de la hepatitis c (vhc) y métodos y composiciones para usarlo.
WO2014143342A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbott Laboratories Hcv ns3 recombinant antigens and mutants thereof for improved antibody detection
EP2971046A4 (en) 2013-03-14 2016-11-02 Abbott Lab MONOCLONAL ANTIBODIES WITH LIPID BINDING TO THE HEART OF HCV
EP3611189A1 (en) 2013-03-14 2020-02-19 Novartis AG Antibodies against notch 3
KR20150127199A (ko) 2013-03-14 2015-11-16 제넨테크, 인크. 항-b7-h4 항체 및 면역접합체
KR20150127203A (ko) 2013-03-14 2015-11-16 제넨테크, 인크. Mek 억제제 화합물과 her3/egfr 억제제 화합물의 조합물 및 사용 방법
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
CN105307683A (zh) 2013-03-14 2016-02-03 基因泰克公司 治疗癌症和预防癌症药物抗性的方法
WO2014151680A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Biogen Idec Ma Inc. Treatment and prevention of acute kidney injury using anti-alpha v beta 5 antibodies
WO2014144466A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Biogen Idec Ma Inc. Anti-alpha v beta 6 antibodies and uses thereof
WO2014143739A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Biogen Idec Ma Inc. Anti-alpha v beta 6 antibodies and uses thereof
EP2970486B1 (en) 2013-03-15 2018-05-16 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
RU2661111C2 (ru) 2013-03-15 2018-07-11 Ац Иммуне С.А. Антитела к тау и способы применения
CN105339001A (zh) 2013-03-15 2016-02-17 基因泰克公司 治疗癌症和预防癌症耐药性的方法
CA2904448A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Tariq Ghayur Dual specific binding proteins directed against il-1.beta. and/or il-17
AP2015008656A0 (en) 2013-03-15 2015-08-31 Novartis Ag Antibody drug conjugates
RS57393B1 (sr) 2013-03-15 2018-09-28 Hoffmann La Roche Il-22 polipeptiidi i il-22 fuzioni proteini i metode za njihovu upotrebu
MX2015012326A (es) 2013-03-15 2016-03-08 Genentech Inc Anticuerpos anti-crth2 y su uso.
US10450361B2 (en) 2013-03-15 2019-10-22 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods related to CTLA4-Fc fusion proteins
US9260527B2 (en) 2013-03-15 2016-02-16 Sdix, Llc Anti-human CXCR4 antibodies and methods of making same
CN105143264A (zh) 2013-03-15 2015-12-09 豪夫迈·罗氏有限公司 用于肝癌诊断和治疗的组合物和方法
BR112015021576A2 (pt) 2013-03-15 2017-10-10 Dana Farber Cancer Inst Inc peptídeos terapêuticos
EP2968545B1 (en) 2013-03-15 2019-03-06 Memorial Sloan Kettering Cancer Center High affinity anti-gd2 antibodies
CN105378075B (zh) 2013-03-15 2022-04-05 Atyr 医药公司 组氨酰-trna合成酶-fc缀合物
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
AU2014235453A1 (en) 2013-03-15 2015-10-08 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treating PD-1 and PD-L1 related conditions
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
AU2014257650A1 (en) 2013-04-22 2015-11-12 Glycotope Gmbh Anti-cancer treatments with anti-EGFR antibodies having a low fucosylation
WO2014177460A1 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use
EA034716B1 (ru) 2013-04-29 2020-03-12 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг АНТИТЕЛА К IGF-1R С ЭЛИМИНИРОВАННОЙ СПОСОБНОСТЬЮ СВЯЗЫВАТЬСЯ С FcRn И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СОСУДИСТЫХ ГЛАЗНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
CN105164157B (zh) 2013-04-29 2024-05-28 豪夫迈·罗氏有限公司 Fc-受体结合的修饰的非对称抗体及使用方法
ES2708759T3 (es) 2013-05-13 2019-04-11 Momenta Pharmaceuticals Inc Procedimientos para el tratamiento de la neurodegeneración
MX2015015970A (es) 2013-05-20 2016-09-08 Genentech Inc Anticuerpos receptores de antitransferina y metodos de uso.
AU2014273817B2 (en) 2013-05-31 2019-03-14 Zymeworks Bc Inc. Heteromultimers with reduced or silenced effector function
KR20160015286A (ko) 2013-05-31 2016-02-12 제넨테크, 인크. 항-세포벽 테이코산 항체 및 접합체
BR112015029838A2 (pt) 2013-05-31 2017-09-26 Genentech Inc anticorpos, composições, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira isolada, método de produção de anticorpos, composto, conjugado de anticorpo e antibiótico, processo de elaboração do composto, intermediário entre ligante e antibiótico, método de tratamento de infecções bacterianas e método de matar staphylococcus aureus
AR096601A1 (es) 2013-06-21 2016-01-20 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
UY35620A (es) 2013-06-21 2015-01-30 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
WO2015017146A2 (en) 2013-07-18 2015-02-05 Fabrus, Inc. Antibodies with ultralong complementarity determining regions
EP3022221B1 (en) 2013-07-18 2021-09-15 Taurus Biosciences, LLC Humanized antibodies with ultralong complementarity determining regions
KR20230047508A (ko) 2013-08-01 2023-04-07 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 비푸코실화된 항-ｆｇｆｒ２ｉｉｉｂ 항체
KR20180021234A (ko) 2013-08-12 2018-02-28 제넨테크, 인크. 보체-연관 상태의 치료를 위한 조성물 및 방법
KR20160042987A (ko) 2013-08-14 2016-04-20 노파르티스 아게 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법
US20150093399A1 (en) 2013-08-28 2015-04-02 Bioasis Technologies, Inc. Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof
KR20160055252A (ko) 2013-09-17 2016-05-17 제넨테크, 인크. 항-lgr5 항체의 사용 방법
DK3050896T3 (da) 2013-09-27 2021-07-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af en polypeptid-heteromultimer
WO2015050959A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Yale University Anti-kit antibodies and methods of use thereof
CA2924559A1 (en) 2013-10-02 2015-04-09 Humabs Biomed Sa Neutralizing anti-influenza a antibodies and uses thereof
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
BR112016006929A2 (pt) 2013-10-11 2017-09-19 Hoffmann La Roche Anticorpo, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de preparação de anticorpo, de tratamento de pacientes e de geração de um anticorpo, composição farmacêutica e uso do anticorpo
CN105813654B (zh) 2013-10-11 2019-05-31 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) Tem8抗体及其用途
CA2926084A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Genentech, Inc. Nsp4 inhibitors and methods of use
WO2015057622A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Sialylated glycoproteins
WO2015057939A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Biogen Idec Ma Inc. Anti-s1p4 antibodies and uses thereof
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
MX2016004802A (es) 2013-10-18 2016-07-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-r-espondina (anti-rspo) y metodos de uso.
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
RU2016119425A (ru) 2013-10-23 2017-11-28 Дженентек, Инк. Способы диагностики и лечения эозинофильных заболеваний
CN105849125B (zh) 2013-11-07 2020-05-15 国家医疗保健研究所 神经调节蛋白变构抗her3抗体
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
PL3071597T3 (pl) 2013-11-21 2020-11-30 F.Hoffmann-La Roche Ag Przeciwciała przeciwko alfa-synukleinie i sposoby stosowania
WO2015082446A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of cancer using an anti-cdcp1 antibody and a taxane
ES2755129T3 (es) 2013-12-06 2020-04-21 Dana Farber Cancer Inst Inc Péptidos terapéuticos
KR102311761B1 (ko) 2013-12-09 2021-10-13 알라코스 인크. 항-Siglec-8 항체 및 그의 사용 방법
US20160333063A1 (en) 2013-12-13 2016-11-17 The General Hospital Corporation Soluble high molecular weight (hmw) tau species and applications thereof
JP6502942B2 (ja) 2013-12-13 2019-04-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ３３抗体とイムノコンジュゲート
MX2016007965A (es) 2013-12-17 2016-10-28 Genentech Inc Terapia de combinacion que comprende agonistas de union a ox40 y antagonistas de union al eje pd-1.
NZ760065A (en) 2013-12-17 2022-12-23 Genentech Inc Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
RU2016128726A (ru) 2013-12-17 2018-01-23 Дженентек, Инк. Способы лечения злокачественных опухолей с использованием антагонистов связывания по оси pd-1 и антитела против cd20
CA3131724A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
US11014987B2 (en) 2013-12-24 2021-05-25 Janssen Pharmaceutics Nv Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same
SI3712174T1 (sl) 2013-12-24 2022-06-30 Janssen Pharmaceutica Nv Protitelesa in delci proti VISTA
JP6602304B2 (ja) 2014-01-03 2019-11-06 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 共有結合で連結されたヘリカー−抗ヘリカー抗体コンジュゲートおよびその用途
MX2016008191A (es) 2014-01-03 2017-11-16 Hoffmann La Roche Conjugados de toxina polipeptidica-anticuerpo unidos covalentemente.
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
BR112016013849A2 (pt) 2014-01-03 2017-10-10 Hoffmann La Roche conjugados de anticorpos biespecíficos antihapteno/antirreceptores da barreira hematoencefálica, seus usos, e formulação farmacêutica
BR112016015589A2 (pt) 2014-01-06 2017-10-31 Hoffmann La Roche módulos de trânsito monovalentes para a barreira hematoencefálica
CN105899534B (zh) 2014-01-15 2020-01-07 豪夫迈·罗氏有限公司 具有修饰的FCRN和保持的蛋白A结合性质的Fc区变体
WO2015110923A2 (en) 2014-01-21 2015-07-30 Acerta Pharma B.V. Methods of treating chronic lymphocytic leukemia and small lymphocytic leukemia usng a btk inhibitor
KR20160111469A (ko) 2014-01-24 2016-09-26 제넨테크, 인크. 항-steap1 항체 및 면역접합체를 사용하는 방법
ES2694857T3 (es) 2014-02-04 2018-12-27 Genentech, Inc. Smoothened mutante y métodos de uso de la misma
RU2724190C2 (ru) 2014-02-08 2020-06-23 Дженентек, Инк. Способы лечения болезни альцгеймера
CN106456729A (zh) 2014-02-08 2017-02-22 豪夫迈·罗氏有限公司 治疗阿尔茨海默氏病的方法
US9518121B2 (en) 2014-02-12 2016-12-13 Genentech, Inc. Anti-Jagged1 antibodies and methods of use
EP3104880B1 (en) 2014-02-14 2020-03-25 MacroGenics, Inc. Improved methods for the treatment of vascularizing cancers
MX2016010729A (es) 2014-02-21 2016-10-26 Genentech Inc Anticuerpos biespecificos anti-il-13 / il-17 y sus usos.
TWI558399B (zh) 2014-02-26 2016-11-21 美國禮來大藥廠 癌症之組合療法
AU2015222757B2 (en) 2014-02-28 2020-10-08 Allakos Inc. Methods and compositions for treating Siglec-8 associated diseases
TW201622744A (zh) 2014-03-04 2016-07-01 美國禮來大藥廠 癌症之組合療法
KR20160125515A (ko) 2014-03-12 2016-10-31 노파르티스 아게 면역접합체의 제조를 위한 항체의 변형에 사용되는 특정 부위
CN106132989B (zh) 2014-03-14 2020-06-19 先天制药公司 具有增加的稳定性的人源化抗体
CN106456728A (zh) 2014-03-14 2017-02-22 达纳－法伯癌症研究所公司 恢复对抗癌症的nkg2d通路功能的疫苗组合物和方法
RU2748026C2 (ru) 2014-03-14 2021-05-19 Дженентек, Инк. Способы и композиции для секреции гетерологичных полипептидов
CN110845616A (zh) 2014-03-21 2020-02-28 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
WO2015140591A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
EP3122900A1 (en) 2014-03-24 2017-02-01 F. Hoffmann-La Roche AG Cancer treatment with c-met antagonists and correlation of the latter with hgf expression
SG10202008629XA (en) 2014-03-28 2020-10-29 Xencor Inc Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3
RU2016142476A (ru) 2014-03-31 2018-05-07 Дженентек, Инк. Комбинированная терапия, включающая антиангиогенезные агенты и агонисты, связывающие ох40
EP3126394B1 (en) 2014-03-31 2019-10-30 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-ox40 antibodies and methods of use
UA117289C2 (uk) 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
EP3126397B1 (en) 2014-04-04 2020-01-29 Bionomics, Inc. Humanized antibodies that bind lgr5
CN106459206B (zh) 2014-04-07 2024-06-07 中外制药株式会社 免疫活化抗原结合分子
KR20160143808A (ko) 2014-04-11 2016-12-14 메디뮨 엘엘씨 이중특이적 her2 항체
TW201622746A (zh) 2014-04-24 2016-07-01 諾華公司 改善或加速髖部骨折術後身體復原之方法
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
SG11201609370QA (en) 2014-05-13 2016-12-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd T cell-redirected antigen-binding molecule for cells having immunosuppression function
RU2016150370A (ru) 2014-05-22 2018-06-26 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты против GPC3
BR112016025040A2 (pt) 2014-05-23 2018-02-20 Genentech Inc métodos para determinar a expressão de biomarcador mit, para tratar câncer, para identificar um indivíduo com câncer, para predizer se um indivíduo com câncer tem mais ou menos probabilidade de responder efetivamente ao tratamento, para inibir a proliferação de uma célula e para tratar nccrcc em um indivíduo
KR102355609B1 (ko) 2014-05-29 2022-01-27 마크로제닉스, 인크. 다중 암 항원에 특이적으로 결합하는 삼중-특이적 결합 분자 및 그것의 사용 방법
DK3148581T3 (da) 2014-05-30 2020-01-13 Henlix Biotech Co Ltd Anti-epidermal vækstfaktorreceptor (egfr)-antistoffer
EP3151921B1 (en) 2014-06-06 2019-08-28 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
MX2016016310A (es) 2014-06-11 2017-10-20 A Green Kathy Uso de agonistas y antagonistas vista para suprimir o aumentar la inmunidad humoral.
CN106459202A (zh) 2014-06-11 2017-02-22 豪夫迈·罗氏有限公司 抗LgR5抗体及其用途
US20230190750A1 (en) 2014-06-13 2023-06-22 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
US20170291939A1 (en) 2014-06-25 2017-10-12 Novartis Ag Antibodies specific for il-17a fused to hyaluronan binding peptide tags
BR112016029935A2 (pt) 2014-06-26 2017-10-31 Hoffmann La Roche ?anticorpos anti-brdu, complexo, formulação farmacêutica e uso de anticorpo?
AU2015279316B2 (en) 2014-06-27 2021-03-04 Innate Pharma Multispecific NKp46 binding proteins
CA2952532A1 (en) 2014-06-27 2015-12-30 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
WO2016007235A1 (en) 2014-07-11 2016-01-14 Genentech, Inc. Anti-pd-l1 antibodies and diagnostic uses thereof
MX2017000363A (es) 2014-07-11 2017-04-27 Genentech Inc Inhibicion de la via de notch.
US10513724B2 (en) 2014-07-21 2019-12-24 Glykos Finland Oy Production of glycoproteins with mammalian-like N-glycans in filamentous fungi
WO2018140026A1 (en) 2017-01-27 2018-08-02 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Bispecific her2 and cd3 binding molecules
WO2016020791A1 (en) 2014-08-05 2016-02-11 Novartis Ag Ckit antibody drug conjugates
US9988443B2 (en) 2014-08-07 2018-06-05 Novartis Ag Angiopoetin-like 4 (ANGPTL4) antibodies and methods of use
EA201790336A1 (ru) 2014-08-07 2017-06-30 Новартис Аг Антитела к ангиопоэтинподобному белку 4 и способы применения
HUE059131T2 (hu) 2014-08-11 2022-10-28 Acerta Pharma Bv BTK-inhibitor, PD-1-inhibitor és/vagy PD-L1-inhibitor terápiás kombinációja
TW201609099A (zh) 2014-08-11 2016-03-16 艾森塔製藥公司 使用布魯頓（Ｂｒｕｔｏｎ）氏酪胺酸激酶（ＢＴＫ）抑制劑以治療慢性淋巴球性白血病和小淋巴球性白血病之方法
TN2016000577A1 (en) 2014-08-12 2018-04-04 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates
WO2016030488A1 (en) 2014-08-27 2016-03-03 Innate Pharma Treatment of celiac disease
TWI805109B (zh) 2014-08-28 2023-06-11 美商奇諾治療有限公司 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體
EP4074735A1 (en) 2014-08-28 2022-10-19 BioAtla, Inc. Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
USD791797S1 (en) * 2014-09-11 2017-07-11 Express Scripts, Inc. Display screen with a graphical user interface
USD791796S1 (en) * 2014-09-11 2017-07-11 Express Scripts, Inc. Display screen with a graphical user interface
US10059768B2 (en) 2014-09-12 2018-08-28 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
JP7085837B2 (ja) 2014-09-12 2022-06-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｈｅｒ２抗体及び免疫複合体
MX2017003022A (es) 2014-09-12 2017-05-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados.
EP3197500A1 (en) 2014-09-17 2017-08-02 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-her2 antibodies and pyrrolobenzodiazepines
ES2796903T3 (es) 2014-09-23 2020-11-30 Hoffmann La Roche Procedimiento de uso de inmunoconjugados anti-CD79b
TWI701435B (zh) 2014-09-26 2020-08-11 日商中外製藥股份有限公司 測定ｆｖｉｉｉ的反應性之方法
TWI700300B (zh) 2014-09-26 2020-08-01 日商中外製藥股份有限公司 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
SG11201702544WA (en) 2014-09-29 2017-04-27 Univ Duke Bispecific molecules comprising an hiv-1 envelope targeting arm
SG10201902924RA (en) 2014-10-03 2019-05-30 Massachusetts Inst Technology Antibodies that bind ebola glycoprotein and uses thereof
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
EP3207057A2 (en) 2014-10-16 2017-08-23 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use
MA41480A (fr) 2014-10-17 2017-12-19 Glenmark Pharmaceuticals Sa Anticorps qui se lient au ccr6 et leurs utilisations
JP6889660B2 (ja) 2014-10-23 2021-06-18 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． 抗ｎｋｇ２ａ剤を用いた癌の処置
WO2016070001A1 (en) 2014-10-31 2016-05-06 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind b7-h4
BR112017009159A2 (pt) 2014-11-03 2018-03-06 Genentech, Inc. métodos e biomarcadores para predizer a eficácia e avaliação de um tratamento com agonista de ox40
CN106796235B (zh) 2014-11-03 2021-01-29 豪夫迈·罗氏有限公司 用于检测t细胞免疫子集的测定法及其使用方法
US10208120B2 (en) 2014-11-05 2019-02-19 Genentech, Inc. Anti-FGFR2/3 antibodies and methods using same
JP6576456B2 (ja) 2014-11-06 2019-09-18 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 修飾されたＦｃＲｎ結合特性およびプロテインＡ結合特性を有するＦｃ領域変種
RU2714116C2 (ru) 2014-11-06 2020-02-11 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ С МОДИФИЦИРОВАННЫМ СВЯЗЫВАНИЕМ FcRn И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
RU2017119428A (ru) 2014-11-06 2018-12-06 Дженентек, Инк. Комбинированная терапия, включающая применение агонистов, связывающихся с ох40, и ингибиторов tigit
WO2016077369A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Genentech, Inc. Animal model for nephropathy and agents for treating the same
KR20170080604A (ko) 2014-11-10 2017-07-10 제넨테크, 인크. 항-인터류킨-33 항체 및 그것의 용도
PE20170912A1 (es) 2014-11-14 2017-07-12 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo-farmaco
US10160795B2 (en) 2014-11-14 2018-12-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to Ebola virus glycoprotein and their use
EA037557B1 (ru) 2014-11-14 2021-04-14 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антигенсвязывающие молекулы, содержащие тримерный лиганд семейства tnf
JP7090421B2 (ja) 2014-11-15 2022-06-24 ズムトール バイオロジクス、インコーポレイテッド Ｄｎａ結合ドメイン、非フコシル化及び部分的フコシル化タンパク質、並びにその方法
SG10201807625PA (en) 2014-11-17 2018-10-30 Genentech Inc Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
CN107001473B (zh) 2014-11-19 2021-07-09 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-运铁蛋白受体抗体及使用方法
EP3221364B1 (en) 2014-11-19 2020-12-16 Genentech, Inc. Antibodies against bace1 and use thereof for neural disease immunotherapy
MX2017006663A (es) 2014-11-19 2017-08-21 Axon Neuroscience Se Anticuerpos tau humanizados en enfermedad de alzheimer.
JP6993228B2 (ja) 2014-11-19 2022-03-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体／抗ｂａｃｅ１多重特異性抗体および使用方法
SI3221355T1 (sl) 2014-11-20 2021-01-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Kombinirano zdravljenje z bispecifičnimi molekulami CD3, ki aktivirajo celice T in vežejo antigene in folatni receptor 1 (FoIR1) ter antagonisti za vezavo osi PD-1
CA2968357A1 (en) 2014-11-21 2016-05-26 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against cd73 and uses thereof
PT3221346T (pt) 2014-11-21 2020-10-23 Bristol Myers Squibb Co Anticorpos compreendendo regiões constantes de cadeia pesada modificadas
CN110894240B (zh) 2014-11-26 2022-04-15 森科股份有限公司 结合cd3和肿瘤抗原的异二聚体抗体
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
CN107406512A (zh) 2014-11-26 2017-11-28 Xencor公司 结合cd3和cd38的异二聚体抗体
CA2965540A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Anti-staphylococcus aureus antibody rifamycin conjugates and uses thereof
CA2966211A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Anti-staphylococcus aureus antibody rifamycin conjugates and uses thereof
PL3227332T3 (pl) 2014-12-03 2020-06-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Wielospecyficzne przeciwciała
SI3227336T1 (sl) 2014-12-05 2019-10-30 Hoffmann La Roche Protitelesa proti CD79b in postopki uporabe
AU2015357463B2 (en) 2014-12-05 2021-10-07 Immunext, Inc. Identification of VSIG8 as the putative vista receptor and its use thereof to produce vista/VSIG8 modulators
JP6864953B2 (ja) 2014-12-09 2021-04-28 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル Ａｘｌに対するヒトモノクローナル抗体
EP3230317A2 (en) 2014-12-10 2017-10-18 F. Hoffmann-La Roche AG Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
UY36449A (es) 2014-12-19 2016-07-29 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6
TWI779010B (zh) 2014-12-19 2022-10-01 日商中外製藥股份有限公司 抗肌抑素之抗體、含變異Ｆｃ區域之多胜肽及使用方法
CA2971542A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Regenesance B.V. Antibodies that bind human c6 and uses thereof
ES2899894T3 (es) 2014-12-19 2022-03-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos anti-C5 y métodos de uso
US10428155B2 (en) 2014-12-22 2019-10-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
CN110256558B (zh) 2014-12-23 2023-07-04 百时美施贵宝公司 针对tigit的抗体
AU2015374385B2 (en) 2014-12-31 2020-08-06 Checkmate Pharmaceuticals, Inc. Combination tumor immunotherapy
WO2016111947A2 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
TWI718118B (zh) 2015-01-16 2021-02-11 美商奇諾治療有限公司 針對ｒｏｒ１之特異性抗體及嵌合抗原受體
WO2016117346A1 (en) 2015-01-22 2016-07-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A combination of two or more anti-c5 antibodies and methods of use
KR20170105622A (ko) 2015-01-26 2017-09-19 마크로제닉스, 인크. Dr5-결합 도메인을 포함하는 다가 분자
JP2018506275A (ja) 2015-01-28 2018-03-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多発性硬化症の遺伝子発現マーカー及び治療
CN107636170A (zh) 2015-02-04 2018-01-26 健泰科生物技术公司 突变型Smoothened及其使用方法
KR20240090831A (ko) 2015-02-05 2024-06-21 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 이온 농도 의존적 항원 결합 도메인을 포함하는 항체, Fc 영역 개변체, IL-8에 결합하는 항체, 및 그들의 사용
JP6970017B2 (ja) 2015-02-09 2021-11-24 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター ヒトａ３３抗原とｄｏｔａ金属複合体に親和性を有する多重特異性抗体及びその使用
WO2016128912A1 (en) 2015-02-12 2016-08-18 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of a btk inhibitor, a pi3k inhibitor, a jak-2 inhibitor, a pd-1 inhibitor, and/or a pd-l1 inhibitor
EP3978929A1 (en) 2015-02-19 2022-04-06 Compugen Ltd. Pvrig polypeptides and methods of treatment
PL3653221T3 (pl) 2015-02-19 2022-12-19 Compugen Ltd. Przeciwciała anty-pvrig i sposoby ich zastosowania
WO2016138160A1 (en) 2015-02-24 2016-09-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Middle east respiratory syndrome coronavirus immunogens, antibodies, and their use
WO2016135041A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
JP2018511797A (ja) 2015-03-16 2018-04-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＩＬ−１３の検出方法及び定量方法並びにＴｈ２関連疾患の診断及び治療における使用
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
EP3683233A1 (en) 2015-03-20 2020-07-22 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to gp120 and their use
EA037621B1 (ru) 2015-03-23 2021-04-22 Джаунс Терапьютикс, Инк. Антитела к icos
EP3590961A1 (en) 2015-03-25 2020-01-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific multivalent fusion proteins
WO2016160976A2 (en) 2015-03-30 2016-10-06 Abbvie Inc. Monovalent tnf binding proteins
JP7082484B2 (ja) 2015-04-01 2022-06-08 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
CA2979732A1 (en) 2015-04-03 2016-10-06 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting afp peptide/mhc complexes and uses thereof
CA2981851A1 (en) 2015-04-07 2016-10-13 Alector Llc Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof
CN107810197B (zh) 2015-04-24 2022-10-25 豪夫迈·罗氏有限公司 鉴定包含结合多肽的细菌的方法
JP2018520642A (ja) 2015-05-01 2018-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド マスク抗ｃｄ３抗体及びその使用方法
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
EP3091033A1 (en) 2015-05-06 2016-11-09 Gamamabs Pharma Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
EP3294771A1 (en) 2015-05-11 2018-03-21 H. Hoffnabb-La Roche Ag Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2016183326A1 (en) 2015-05-12 2016-11-17 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
EP3298044B1 (en) 2015-05-22 2021-08-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Human monoclonal antibodies fragments inhibiting both the cath-d catalytic activity and its binding to the lrp1 receptor
EP3303395B1 (en) 2015-05-29 2019-12-11 AbbVie Inc. Anti-cd40 antibodies and uses thereof
ES2810700T3 (es) 2015-05-29 2021-03-09 Hoffmann La Roche Metilación del promotor de PD-L1 en cáncer
EP4335931A3 (en) 2015-05-29 2024-06-19 F. Hoffmann-La Roche AG Therapeutic and diagnostic methods for cancer
US9644032B2 (en) 2015-05-29 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against OX40 and uses thereof
EP3302563A1 (en) 2015-05-29 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Humanized anti-ebola virus glycoprotein antibodies and methods of use
CN107810012A (zh) 2015-06-02 2018-03-16 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗il‑34抗体治疗神经疾病的组合物和方法
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
BR112017025995A2 (pt) 2015-06-04 2018-08-14 Ospedale San Raffaele S.R.L. inibidor de igfbp3, composição farmacêutica para uso no tratamento e/ou prevenção de um distúrbio intestinal, método para o diagnóstico de um distúrbio intestinal em um indivíduo e kit para o diagnóstico de um distúrbio intestinal
CN107921132B (zh) 2015-06-04 2021-05-07 圣拉斐尔医院有限公司 糖尿病和igfbp3/tmem219轴抑制剂
PE20180041A1 (es) 2015-06-05 2018-01-09 Novartis Ag Anticuerpos dirigidos a la proteina morfogenetica osea (bmp9) y metodos a partir de estos
TW202428606A (zh) 2015-06-05 2024-07-16 美商建南德克公司 抗－ｔａｕ抗體及使用方法
EP3303397A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
CN107810011A (zh) 2015-06-08 2018-03-16 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗ox40抗体治疗癌症的方法
WO2016201124A2 (en) 2015-06-09 2016-12-15 Memorial Sloan Kettering Cancer Center T cell receptor-like antibody agents specific for ebv latent membrane protein 2a peptide presented by human hla
TW201709929A (zh) 2015-06-12 2017-03-16 宏觀基因股份有限公司 治療癌症的聯合療法
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
US10017577B2 (en) 2015-06-15 2018-07-10 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates
JP6871874B2 (ja) 2015-06-16 2021-05-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＦｃＲＨ５に対するヒト化親和性成熟抗体及び使用方法
EP3310378B1 (en) 2015-06-16 2024-01-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-cll-1 antibodies and methods of use
EP3916018A1 (en) 2015-06-16 2021-12-01 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
MX2017016353A (es) 2015-06-17 2018-05-02 Genentech Inc Metodos para tratar canceres de mama metastasicos o localmente avanzados con antagonistas de union al eje de pd-1 y taxanos.
WO2016205567A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Allakos Inc. Methods and compositions for treating fibrotic diseases
WO2016205531A2 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and methods of use
US20190194315A1 (en) 2015-06-17 2019-06-27 Novartis Ag Antibody drug conjugates
JP6971153B2 (ja) 2015-06-23 2021-11-24 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムInnate Pharma Pharma S.A. 多重特異的ｎｋエンゲイジャータンパク質
PE20180602A1 (es) 2015-06-24 2018-04-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-receptor de transferrina con afinidad disenada
US11009509B2 (en) 2015-06-24 2021-05-18 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-VISTA antibodies and fragments
EP3108897A1 (en) 2015-06-24 2016-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
JOP20200312A1 (ar) 2015-06-26 2017-06-16 Novartis Ag الأجسام المضادة للعامل xi وطرق الاستخدام
EP3514174B1 (en) 2015-06-29 2021-03-31 Ventana Medical Systems, Inc. Materials and methods for performing histochemical assays for human pro-epiregulin and amphiregulin
CN108473573A (zh) 2015-06-29 2018-08-31 豪夫迈·罗氏有限公司 Ii型抗cd20抗体用于器官移植中
US20180305451A1 (en) 2015-07-13 2018-10-25 Compugen Ltd. Hide1 compositions and methods
PT3456346T (pt) 2015-07-30 2021-09-28 Macrogenics Inc Moléculas de ligação pd-1 e lag-3 e respetivos métodos de utilização
JP6940479B2 (ja) 2015-08-03 2021-09-29 ノバルティス アーゲー Ｆｇｆ２１関連障害を処置する方法
AU2016304764C1 (en) 2015-08-07 2023-06-01 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to target molecules
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
US20190008859A1 (en) 2015-08-21 2019-01-10 Acerta Pharma B.V. Therapeutic Combinations of a MEK Inhibitor and a BTK Inhibitor
JP6914919B2 (ja) 2015-08-28 2021-08-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ヒプシン抗体及びその使用
UY36889A (es) 2015-09-09 2017-04-28 Novartis Ag Moléculas de unión a linfopoyetina estromal timica (tslp) y métodos de uso de las moléculas
BR112018003326A2 (pt) 2015-09-09 2018-09-18 Novartis Ag anticorpos de ligação de linfopoietina estromal tímica (tslp) e métodos de uso dos anticorpos
US20190022092A1 (en) 2015-09-15 2019-01-24 Acerta Pharma B.V. Therapeutic Combinations of a BTK Inhibitor and a GITR Binding Molecule, a 4-1BB Agonist, or an OX40 Agonist
MA44909A (fr) 2015-09-15 2018-07-25 Acerta Pharma Bv Association thérapeutique d'un inhibiteur du cd19 et d'un inhibiteur de la btk
US9862760B2 (en) 2015-09-16 2018-01-09 Novartis Ag Polyomavirus neutralizing antibodies
EP3353206A1 (en) 2015-09-22 2018-08-01 Spring Bioscience Corporation Anti-ox40 antibodies and diagnostic uses thereof
SG10201911226QA (en) 2015-09-23 2020-01-30 Genentech Inc Optimized variants of anti-vegf antibodies
EP3662930A1 (en) 2015-09-24 2020-06-10 AbVitro LLC Hiv antibody compositions and methods of use
NZ739750A (en) 2015-09-25 2019-11-29 Genentech Inc Anti-tigit antibodies and methods of use
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
JP6657392B2 (ja) 2015-10-02 2020-03-04 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ヒトｃｄ２０／ヒトトランスフェリン受容体抗体及び使用方法
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
UA125962C2 (uk) 2015-10-02 2022-07-20 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Біспецифічна антигензв'язуюча молекула до ox40 та фібробласт-активуючого білка (fap)
CN108137699B (zh) 2015-10-02 2022-05-27 豪夫迈·罗氏有限公司 对pd1和tim3特异性的双特异性抗体
IL293708A (en) 2015-10-06 2022-08-01 Genentech Inc A method for treating multiple sclerosis
BR112018002128A2 (pt) 2015-10-07 2018-09-11 Hoffmann La Roche molécula, polinucleotídeo, composição e método para inibir o crescimento de células
AU2016335750B2 (en) 2015-10-07 2023-05-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services IL-7R-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
WO2017066714A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Compugen Ltd. Anti-vsig1 antibodies and drug conjugates
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
CN108350505A (zh) 2015-10-22 2018-07-31 震动疗法股份有限公司 用于测定icos表达的基因标志
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
MA44334A (fr) 2015-10-29 2018-09-05 Novartis Ag Conjugués d'anticorps comprenant un agoniste du récepteur de type toll
BR112018006562A2 (pt) 2015-10-29 2018-12-11 Hoffmann La Roche anticorpos, ácido nucleico, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, conjugado e uso de um anticorpo
CN108289951A (zh) 2015-10-30 2018-07-17 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-因子d抗体和缀合物
SG10202001808VA (en) 2015-10-30 2020-04-29 Genentech Inc Anti-htra1 antibodies and methods of use thereof
CN116731147A (zh) * 2015-11-02 2023-09-12 豪夫迈·罗氏有限公司 制备岩藻糖基化和去岩藻糖基化形式的蛋白质的方法
US11236152B2 (en) 2015-11-03 2022-02-01 The United States of America, as represented by the Sectetary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to HIV-1 GP41 and their use
CN108602884B (zh) 2015-11-08 2024-06-25 豪夫迈·罗氏有限公司 筛选多特异性抗体的方法
JP6931329B2 (ja) 2015-11-18 2021-09-01 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
US11649293B2 (en) 2015-11-18 2023-05-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for enhancing humoral immune response
KR20180082563A (ko) 2015-11-19 2018-07-18 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 글루코코르티코이드-유도된 종양 괴사 인자 수용체 (gitr)에 대한 항체 및 그의 용도
CN116327924A (zh) 2015-11-23 2023-06-27 戊瑞治疗有限公司 用于癌症治疗的单独fgfr2抑制剂或与免疫刺激剂的组合
CN108602885B (zh) 2015-11-30 2022-05-24 百时美施贵宝公司 抗人ip-10抗体及其用途
MA43372A (fr) 2015-12-04 2018-10-10 Novartis Ag Compositions à greffe de cytokine-anticorps et procédés d'utilisation pour l'immunorégulation
AU2016365742A1 (en) 2015-12-07 2018-06-21 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and PSMA
MX2018005229A (es) 2015-12-09 2019-04-29 F Hoffmann­La Roche Ag Anticuerpo anti-cd20 de tipo ii y usos del mismo.
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
CR20180318A (es) 2015-12-14 2018-09-19 Macrogenics Inc Moléculas biespecíficas que tienen inmunorreactividad con pd-1 y ctla-4, y métodos de uso de las mismas
EP3389711A1 (en) 2015-12-18 2018-10-24 Novartis AG Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
LT3390442T (lt) 2015-12-18 2023-12-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-c5 antikūnai ir jų panaudojimo būdai
WO2017115773A1 (ja) 2015-12-28 2017-07-06 中外製薬株式会社 Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法
WO2017117311A1 (en) 2015-12-30 2017-07-06 Genentech, Inc. Formulations with reduced degradation of polysorbate
PL3400246T3 (pl) 2016-01-08 2021-03-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposoby leczenia nowotworów z dodatnim markerem cea z wykorzystaniem antagonistów wiążących oś pd-1 oraz przeciwciał dwuswoistych anty-cea/anty-cd3
EP3402507A4 (en) * 2016-01-11 2019-08-07 Inhibrx, Inc. MULTIVALENT AND MULTISPECIFIC OX40-BINDING FUSION PROTEINS
EP3402503B1 (en) 2016-01-13 2020-10-21 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of an antifolate and a btk inhibitor
US20190016791A1 (en) 2016-01-20 2019-01-17 Genentech, Inc. High dose treatments for alzheimer's disease
CN109071625A (zh) 2016-02-04 2018-12-21 柯瑞斯公司 平滑化突变体和其使用方法
US11421028B2 (en) 2016-02-06 2022-08-23 Epimab Biotherapeutics, Inc. Fabs-in-tandem immunoglobulin and uses thereof
US10899836B2 (en) 2016-02-12 2021-01-26 Janssen Pharmaceutica Nv Method of identifying anti-VISTA antibodies
JP2019511911A (ja) 2016-02-17 2019-05-09 ノバルティス アーゲー Ｔｇｆベータ２抗体
MX2018010361A (es) 2016-02-29 2019-07-08 Genentech Inc Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer.
WO2017148879A1 (en) 2016-03-01 2017-09-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Obinutuzumab and rituximab variants having reduced adcp
US20190284293A1 (en) 2016-03-04 2019-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy with anti-cd73 antibodies
US10611800B2 (en) 2016-03-11 2020-04-07 Pfizer Inc. Human cytomegalovirus gB polypeptide
TW202214700A (zh) 2016-03-14 2022-04-16 日商中外製藥股份有限公司 用於癌之治療的細胞傷害誘導治療劑
TWI759287B (zh) 2016-03-15 2022-04-01 日商中外製藥股份有限公司 使用ｐｄ－１軸結合拮抗劑和抗ｇｐｃ３抗體治療癌症的方法
MX2018011035A (es) 2016-03-15 2019-01-17 Innate Pharma Anticuerpos-anti-mica.
KR102438140B1 (ko) 2016-03-22 2022-08-31 엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔 인간화 항-클라우딘-1 항체 및 이의 용도
AU2017239038B2 (en) 2016-03-22 2024-06-27 Bionomics Inc Administration of an anti-LGR5 monoclonal antibody
EP4273551A3 (en) 2016-03-25 2024-01-17 F. Hoffmann-La Roche AG Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
EP3865511A1 (en) 2016-04-14 2021-08-18 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-rspo3 antibodies and methods of use
WO2017181034A1 (en) 2016-04-14 2017-10-19 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy using an anti-fucosyl-gm1 antibody and an anti-cd137 antibody
KR20190003958A (ko) 2016-04-15 2019-01-10 제넨테크, 인크. 암의 치료 및 모니터링 방법
JP7184751B2 (ja) 2016-04-15 2022-12-06 イミュネクスト インコーポレイテッド 抗ヒトｖｉｓｔａ抗体およびその使用
IL262396B2 (en) 2016-04-15 2023-09-01 Macrogenics Inc New b7-h3 binding molecules, drug-antibody conjugates and their uses
KR20180126079A (ko) 2016-04-15 2018-11-26 바이오아트라, 엘엘씨 항 Axl항체, 항체 단편 및 이의 면역접합체와 이것들의 용도
JP2019515670A (ja) 2016-04-15 2019-06-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんをモニタリングし治療するための方法
WO2017184562A1 (en) 2016-04-20 2017-10-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Cmv neutralizing antigen binding proteins
EP3448885A4 (en) 2016-04-26 2020-01-08 R.P. Scherer Technologies, LLC ANTIBODY CONJUGATES AND METHODS OF MAKING AND USING SAME
EP3448887A1 (en) 2016-04-27 2019-03-06 Novartis AG Antibodies against growth differentiation factor 15 and uses thereof
WO2017192589A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to influenza ha and their use and identification
CR20180509A (es) 2016-05-02 2019-02-15 Hoffmann La Roche Contorsbody - un ligante de diana monocatenario
EP3455254B1 (en) 2016-05-11 2021-07-07 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and a tenascin binding moiety
WO2017194441A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Modified anti-tenascin antibodies and methods of use
EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
IL308504A (en) 2016-05-13 2024-01-01 Bioatla Llc Antibodies, Antibody Fragments and Their Immunomodules Against ROR2 and Their Uses
EP3243832A1 (en) 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
WO2017198731A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Genmab B.V. Antibodies and methods of use thereof in treatment of infectious disease
ES2858151T3 (es) 2016-05-20 2021-09-29 Hoffmann La Roche Conjugados de PROTAC-anticuerpo y procedimientos de uso
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
CN109313200B (zh) 2016-05-27 2022-10-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法
CN110603266A (zh) 2016-06-02 2019-12-20 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗癌症的ii型抗cd20抗体和抗cd20/cd3双特异性抗体
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3468599A2 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
EP4104865A1 (en) 2016-06-08 2022-12-21 AbbVie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
PE20190177A1 (es) 2016-06-08 2019-02-01 Abbvie Inc Anticuerpos anti-b7-h3 y conjugados de anticuerpo y farmaco
JP2019524651A (ja) 2016-06-08 2019-09-05 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｃｄ９８抗体及び抗体薬物コンジュゲート
US11365256B2 (en) 2016-06-08 2022-06-21 Xencor, Inc. Methods and compositions for inhibiting CD32B expressing cells in IGG4-related diseases
EP3468596A2 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
JP2019521975A (ja) 2016-06-08 2019-08-08 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
US20200002421A1 (en) 2016-06-08 2020-01-02 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
MX2018015285A (es) 2016-06-08 2019-09-18 Abbvie Inc Anticuerpos anti-b7-h3 y conjugados de anticuerpo y farmaco.
MX2018015284A (es) 2016-06-08 2019-09-18 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo anti-egfr y fármaco.
AU2017285218B2 (en) 2016-06-14 2024-08-22 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
CN110381988A (zh) 2016-06-15 2019-10-25 诺华股份有限公司 使用骨形态发生蛋白6(bmp6)的抑制剂治疗疾病的方法
EP3257866A1 (en) 2016-06-17 2017-12-20 Academisch Medisch Centrum Modified anti-tnf antibody and use thereof in the treatment of ibd
WO2017223405A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
EP4050032A1 (en) 2016-06-28 2022-08-31 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
EP3481864A1 (en) 2016-07-08 2019-05-15 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
SG11201900026TA (en) 2016-07-14 2019-01-30 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against tim3 and uses thereof
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
WO2018022438A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Eli Lilly And Company Combination therapy with merestinib and anti-pd-l1 or anti-pd-1 inhibitors for use in the treatment of cancer
BR112019001179A2 (pt) 2016-07-29 2019-04-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha anticorpo biespecífico que exibe atividade alternativa aumentada de função de cofator fviii
WO2018020000A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies targeting tumor associated macrophages and uses thereof
KR20230107408A (ko) 2016-07-29 2023-07-14 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 항-cd19 항체에 대한 항-이디오타입 항체
SG11201900616UA (en) 2016-08-02 2019-02-27 Visterra Inc Engineered polypeptides and uses thereof
CA3032146A1 (en) 2016-08-03 2018-02-08 Bio-Techne Corporation Identification of vsig3/vista as a novel immune checkpoint and use thereof for immunotherapy
SG11201801024XA (en) 2016-08-05 2018-05-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Therapeutic or preventive compositions for il-8-related diseases
BR112019002331A2 (pt) 2016-08-05 2019-06-18 Allakos Inc anticorpos anti-siglec-7 para o tratamento do câncer e métodos para obtenção dos mesmos
JP7250674B2 (ja) 2016-08-08 2023-04-03 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんの治療及び診断方法
BR112019002579A2 (pt) 2016-08-16 2019-05-21 Epimab Biotherapeutics, Inc. anticorpos biespecíficos fab monovalentes, assimétricos e tandem
HUE048313T2 (hu) 2016-08-17 2020-07-28 Compugen Ltd Anti-TIGIT antitestek, anti-PVRIG antitestek és kombinációik
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
WO2018044970A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 University Of Rochester Human monoclonal antibodies to human endogenous retrovirus k envelope (herv-k) and uses thereof
CA3035081A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
SG11201901961SA (en) 2016-09-06 2019-04-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Methods of using a bispecific antibody that recognizes coagulation factor ix and/or activated coagulation factor ix and coagulation factor x and/or activated coagulation factor x
US11168148B2 (en) 2016-09-07 2021-11-09 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
CN109689682B (zh) 2016-09-19 2022-11-29 豪夫迈·罗氏有限公司 基于补体因子的亲和层析
RS64550B1 (sr) 2016-09-23 2023-09-29 Hoffmann La Roche Upotreba il-13 antagonista za lečenje atopičnog dermatitisa
JP2019536437A (ja) 2016-10-03 2019-12-19 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｈｐｖ特異的結合分子
CN110139674B (zh) 2016-10-05 2023-05-16 豪夫迈·罗氏有限公司 制备抗体药物缀合物的方法
EP3523451A1 (en) 2016-10-06 2019-08-14 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
US10829545B2 (en) 2016-10-13 2020-11-10 Massachusetts Institute Of Technology Antibodies that bind Zika virus envelope protein and uses thereof
CR20190227A (es) 2016-10-14 2019-08-29 Xencor Inc Proteínas de fusión heterodiméricas biespecíficas que contienen proteínas de fusión fc il-15/il-15ra y fragmentos de anticuerpo pd-1
CA3037851A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Innate Pharma Treatment with anti-kir3dl2 agents
CN110121508A (zh) 2016-10-25 2019-08-13 法国国家健康和医学研究院 与cd160跨膜同种型结合的单克隆抗体
US11555076B2 (en) 2016-10-29 2023-01-17 Genentech, Inc. Anti-MIC antibodies and methods of use
TWI788307B (zh) 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
KR20190070977A (ko) 2016-11-01 2019-06-21 젠맵 비. 브이 폴리펩티드 변이체 및 그의 용도
LT3535298T (lt) 2016-11-02 2021-12-27 Jounce Therapeutics, Inc. Antikūnai prieš pd-1 ir jų panaudojimas
US11117968B2 (en) 2016-11-03 2021-09-14 Bristol-Myers Squibb Company Activatable anti-CTLA-4 antibodies and uses thereof
WO2018087720A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 Novartis Ag Compositions, methods, and therapeutic uses related to fusogenic protein minion
CN109923128A (zh) 2016-11-15 2019-06-21 基因泰克公司 用于用抗cd20/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
EP3541383B1 (en) 2016-11-16 2021-01-06 Eli Lilly and Company Combination therapy for cancer with exon 14 skipping mutation(s) or exon 14 skipping phenotype
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
US11697680B2 (en) 2016-11-21 2023-07-11 Cureab Gmbh Anti-GP73 antibodies and immunoconjugates
WO2018098363A2 (en) 2016-11-23 2018-05-31 Bioverativ Therapeutics Inc. Bispecific antibodies binding to coagulation factor ix and coagulation factor x
CN108367075B (zh) 2016-11-23 2022-08-09 免疫方舟医药技术股份有限公司 4-1bb结合蛋白及其用途
CN110290801B (zh) 2016-12-07 2024-01-26 基因泰克公司 抗tau抗体和使用方法
CA3045294A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
KR20190095921A (ko) 2016-12-12 2019-08-16 제넨테크, 인크. 항-pd-l1 항체 및 안티안드로겐을 사용하여 암을 치료하는 방법
IL267284B2 (en) 2016-12-19 2023-03-01 Hoffmann La Roche Combination therapy with a targeted 4-bb1 agonist (cd137)
EP3559034B1 (en) 2016-12-20 2020-12-02 H. Hoffnabb-La Roche Ag Combination therapy of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and 4-1bb (cd137) agonists
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
WO2018115262A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Innate Pharma Heterodimeric antigen binding proteins
AU2017383232B2 (en) 2016-12-23 2024-09-12 Novartis Ag Factor XI antibodies and methods of use
MX2019007795A (es) 2017-01-03 2019-08-16 Hoffmann La Roche Moleculas de union a antigeno biespecificas que comprenden el clon 20h4.9 anti-4-1bb.
US20180230218A1 (en) 2017-01-04 2018-08-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
JP2020503351A (ja) 2017-01-06 2020-01-30 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド カリウムチャネルアゴニストによる腫瘍浸潤リンパ球の増殖及びその治療的使用
MA47236A (fr) 2017-01-06 2019-11-13 Iovance Biotherapeutics Inc Expansion de lymphocytes infiltrant les tumeurs (til) avec des agonistes de la superfamille des récepteurs du facteur de nécrose tumorale (tnfrsf) et des combinaisons thérapeutiques de til et d'agonistes de tnfrsf
CN112210010B (zh) 2017-01-06 2023-12-05 优特力克斯有限公司 抗-人4-1bb抗体及其应用
EP3565549B1 (en) 2017-01-09 2022-03-09 Shuttle Pharmaceuticals, Inc. Selective histone deacetylase inhibitors for the treatment of human disease
US11584733B2 (en) 2017-01-09 2023-02-21 Shuttle Pharmaceuticals, Inc. Selective histone deacetylase inhibitors for the treatment of human disease
TW201831517A (zh) 2017-01-12 2018-09-01 美商優瑞科生物技術公司 靶向組織蛋白h3肽/mhc複合體之構築體及其用途
US11266745B2 (en) 2017-02-08 2022-03-08 Imaginab, Inc. Extension sequences for diabodies
TWI786087B (zh) 2017-02-08 2022-12-11 瑞士商諾華公司 Fgf21模擬抗體及其用途
WO2018148660A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2018146253A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of cancers associated with activation of the mapk pathway
BR112019016513A2 (pt) 2017-02-10 2020-04-07 Eutilex Co Ltd anticorpo anticâncer conversível de célula t reguladora induzível por ifn-gama (irtca) e usos do mesmo
AR110873A1 (es) 2017-02-10 2019-05-08 Genentech Inc Anticuerpos contra triptasa, composiciones de estos y usos de estos
SG11201906961UA (en) 2017-02-10 2019-08-27 Genmab Bv Polypeptide variants and uses thereof
CN110506057B (zh) 2017-02-17 2023-09-29 百时美施贵宝公司 Alpha突触核蛋白抗体及其应用
KR20190124256A (ko) 2017-02-28 2019-11-04 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 백신에 대한 면역 반응을 증진시키기 위한 증진된 adcc를 갖는 항-ctla-4 항체의 용도
AU2018228873A1 (en) 2017-03-01 2019-08-29 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
CN110392697A (zh) 2017-03-02 2019-10-29 国家医疗保健研究所 对nectin-4具有特异性的抗体及其用途
KR101994456B1 (ko) * 2017-03-15 2019-06-28 이건무 당 수액제 조성물
PE20191758A1 (es) 2017-03-22 2019-12-12 Genentech Inc Composiciones de anticuerpo optimizadas para el tratamiento de trastornos oculares
IL269083B1 (en) 2017-03-24 2024-08-01 Novartis Ag Methods for the prevention and treatment of heart diseases
SG10201911225WA (en) 2017-03-28 2020-01-30 Genentech Inc Methods of treating neurodegenerative diseases
AU2018241781A1 (en) * 2017-03-29 2019-07-18 Glycotope Gmbh Multispecific antibody constructs binding to MUC1 and CD3
CN110382542B (zh) 2017-03-29 2023-06-09 豪夫迈·罗氏有限公司 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子
EP3601349A1 (en) * 2017-03-29 2020-02-05 Glycotope GmbH Pd-l1 and ta-muc1 antibodies
WO2018178123A1 (en) * 2017-03-29 2018-10-04 Glycotope Gmbh BISPECIFIC MUC-1 x PD-L1 ANTIBODIES
CN110573528B (zh) 2017-03-29 2023-06-09 豪夫迈·罗氏有限公司 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
JP7247101B2 (ja) 2017-04-03 2023-03-28 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｓｔｅａｐ－１に結合する抗体
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
US20180340030A1 (en) 2017-04-04 2018-11-29 Hoffmann-La Roche Inc. Novel bispecific antigen binding molecules capable of specific binding to cd40 and to fap
MA49038A (fr) 2017-04-05 2020-02-12 Hoffmann La Roche Anticorps bispécifiques se liant particulièrement à pd1 et lag3
PT3606954T (pt) 2017-04-05 2022-09-16 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-lag3
TWI796329B (zh) 2017-04-07 2023-03-21 美商默沙東有限責任公司 抗－ilt4抗體及抗原結合片段
MX2019012192A (es) 2017-04-14 2020-01-21 Genentech Inc Métodos de diagnóstico y terapéuticos para el cáncer.
WO2018195302A1 (en) 2017-04-19 2018-10-25 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-vtcn1 antibodies and antibody drug conjugates
US11767520B2 (en) 2017-04-20 2023-09-26 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods for treating lung inflammation
EP3612560A1 (en) 2017-04-21 2020-02-26 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
KR20190141686A (ko) 2017-04-21 2019-12-24 제넨테크, 인크. 질환 치료를 위한 klk5 길항제의 용도
JP7295030B2 (ja) 2017-04-26 2023-06-20 ユーリカ セラピューティックス， インコーポレイテッド グリピカン３を特異的に認識するコンストラクト及びその使用
TWI791519B (zh) 2017-04-27 2023-02-11 美商提薩羅有限公司 針對淋巴細胞活化基因-3（lag-3）之抗體藥劑及其用途
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
AU2018261887A1 (en) 2017-05-05 2019-12-05 Allakos Inc. Methods and compositions for treating allergic ocular diseases
US11116835B2 (en) 2017-05-10 2021-09-14 Fred Hutchinson Cancer Research Center Epstein Barr virus antibodies, vaccines, and uses of the same
TW201904578A (zh) 2017-05-10 2019-02-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 源自液體腫瘤之腫瘤浸潤性淋巴細胞的擴增和該經擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之治療用途
EP3625251A1 (en) 2017-05-15 2020-03-25 University Of Rochester Broadly neutralizing anti-influenza monoclonal antibody and uses thereof
US11091555B2 (en) 2017-05-16 2021-08-17 Five Prime Therapeutics, Inc. Method of treating gastric cancer with anti-FGFR2-IIIb antibodies and modified FOLFOX6 chemotherapy
WO2018215937A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Interleukin-7 antibody cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
CA3063983A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
WO2018215938A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use
JOP20190271A1 (ar) 2017-05-24 2019-11-21 Novartis Ag بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة
CN110719915A (zh) 2017-05-25 2020-01-21 百时美施贵宝公司 包含经修饰的重链恒定区的抗体
CA3064331A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Compugen Ltd. Triple combination antibody therapies
UY37758A (es) 2017-06-12 2019-01-31 Novartis Ag Método de fabricación de anticuerpos biespecíficos, anticuerpos biespecíficos y uso terapéutico de dichos anticuerpos
WO2018229706A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Combination therapy for the treatment of cancer
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
WO2019006472A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Xencor, Inc. TARGETED HETETRODIMERIC FUSION PROTEINS CONTAINING IL-15 / IL-15RA AND ANTIGEN-BINDING DOMAINS
KR20200093518A (ko) 2017-07-21 2020-08-05 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
MX2020000957A (es) 2017-07-26 2020-07-22 Forty Seven Inc Anticuerpos anti-sirp-alfa y metodos relacionados.
EP3684413A1 (en) 2017-09-20 2020-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Dosage regimen for combination therapy using pd-1 axis binding antagonists and gpc3 targeting agent
MA50667A (fr) 2017-09-29 2020-08-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molécule multispécifique de liaison à l'antigène ayant une activité de substitution de la fonction de cofacteur du facteur viii de coagulation sanguine (fviii), et formulation pharmaceutique contenant ladite molécule en tant que principe actif
KR20200104284A (ko) 2017-10-03 2020-09-03 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Hpv-특이적 결합 분자
US11230601B2 (en) 2017-10-10 2022-01-25 Tilos Therapeutics, Inc. Methods of using anti-lap antibodies
AU2018347521A1 (en) 2017-10-12 2020-05-07 Immunowake Inc. VEGFR-antibody light chain fusion protein
EP3700933A1 (en) 2017-10-25 2020-09-02 Novartis AG Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
EP3704148A1 (en) 2017-10-31 2020-09-09 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
US10538583B2 (en) 2017-10-31 2020-01-21 Staten Biotechnology B.V. Anti-APOC3 antibodies and compositions thereof
MX2020004571A (es) 2017-11-01 2020-08-24 Hoffmann La Roche Contorsbodies 2+1 biespecificos.
CN111246884A (zh) 2017-11-01 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖的含有tnf家族配体三聚体的抗原结合分子
AU2018358067A1 (en) 2017-11-01 2020-05-07 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for B-cell maturation antigen
JP2021501162A (ja) 2017-11-01 2021-01-14 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 標的ｏｘ４０アゴニストとの併用療法
WO2019090263A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
KR20200085828A (ko) 2017-11-08 2020-07-15 젠코어 인코포레이티드 신규의 항-pd-1 서열을 사용한 이중특이적 및 단일특이적 항체
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
US20200325232A1 (en) 2017-11-21 2020-10-15 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
EP3713965A1 (en) 2017-11-22 2020-09-30 Novartis AG Reversal binding agents for anti-factor xi/xia antibodies and uses thereof
CA3083118A1 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of peripheral blood lymphocytes (pbls) from peripheral blood
TWI830711B (zh) 2017-12-01 2024-02-01 美商輝瑞大藥廠 抗cxcr5抗體及組合物及其用途
JP2021508439A (ja) 2017-12-01 2021-03-11 ノバルティス アーゲー ポリオーマウイルス中和抗体
CA3085765A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Iovance Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for determining the beneficial administration of tumor infiltrating lymphocytes, and methods of use thereof and beneficial administration of tumor infiltrating lymphocytes, and methods of use thereof
MA51184A (fr) 2017-12-15 2020-10-21 Juno Therapeutics Inc Molécules de liaison à l'anti-cct5 et procédés d'utilisation associés
US11319355B2 (en) 2017-12-19 2022-05-03 Xencor, Inc. Engineered IL-2 Fc fusion proteins
WO2019122052A2 (en) 2017-12-21 2019-06-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a2/wt1
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
TWI833724B (zh) 2017-12-22 2024-03-01 美商永斯醫療股份有限公司 抗ｌｉｌｒｂ２抗體
WO2019126472A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Genentech, Inc. Use of pilra binding agents for treatment of a disease
CN115925943A (zh) 2017-12-27 2023-04-07 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pd-l1抗体及其用途
WO2019129136A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pd-l1抗体及其用途
WO2019129137A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
SG11202004158QA (en) 2017-12-28 2020-06-29 Nanjing Legend Biotech Co Ltd Single-domain antibodies and variants thereof against tigit
JP7383617B2 (ja) 2017-12-28 2023-11-20 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｐｄ－ｌ１に対する抗体及びそのバリアント
WO2019129679A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for improving vegf-receptor blocking selectivity of an anti-vegf antibody
JP7490565B2 (ja) 2017-12-29 2024-05-27 アレクトル エルエルシー 抗ｔｍｅｍ１０６ｂ抗体及びその使用方法
US11976109B2 (en) 2018-01-02 2024-05-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
SG11202006400UA (en) 2018-01-04 2020-08-28 Iconic Therapeutics Inc Anti-tissue factor antibodies, antibody-drug conjugates, and related methods
EA202091650A1 (ru) 2018-01-05 2020-12-02 Ас Иммьюн Са Неправильно свернутые tdp-43-связывающие молекулы
WO2019139921A1 (en) 2018-01-09 2019-07-18 Shuttle Pharmaceuticals, Inc. Selective histone deacetylase inhibitors for the treatment of human disease
KR20200108870A (ko) 2018-01-12 2020-09-21 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Tim3에 대한 항체 및 그의 용도
US11713353B2 (en) 2018-01-15 2023-08-01 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against PD-1
EP3740505A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Lakepharma Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
WO2019148026A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Genentech, Inc. Il-22 fc fusion proteins and methods of use
ES2932861T3 (es) 2018-01-26 2023-01-27 Hoffmann La Roche Composiciones de IL-22 Fc y procedimientos de uso
CN111971301A (zh) 2018-01-31 2020-11-20 艾莱克特有限责任公司 抗ms4a4a抗体及其使用方法
AU2019214183B2 (en) 2018-02-01 2022-04-07 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Fully human anti-B cell maturation antigen (BCMA) single chain variable fragment, and application thereof
JP2021512120A (ja) 2018-02-02 2021-05-13 バイオ−テクネ コーポレーション Ｖｉｓｔａとｖｓｉｇ３との相互作用を調節する化合物ならびにその製造および使用方法
AR115360A1 (es) 2018-02-08 2021-01-13 Genentech Inc Moléculas de unión al antígeno y métodos de uso
AU2019218128A1 (en) 2018-02-09 2020-09-17 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
US20210137930A1 (en) 2018-02-13 2021-05-13 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (tils) with adenosine a2a receptor antagonists and therapeutic combinations of tils and adenosine a2a receptor antagonists
CA3091646A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 Abba Therapeutics Ag Anti-human pd-l2 antibodies
MX2020008502A (es) 2018-02-21 2020-09-25 Genentech Inc Dosis para el tratamiento con proteinas de fusion il-22 fc.
WO2019165122A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
AU2019225249A1 (en) 2018-02-26 2020-09-17 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-PD-L1 antagonist antibodies
WO2019177970A1 (en) 2018-03-12 2019-09-19 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Bispecific binding agents and uses thereof
TWI841551B (zh) 2018-03-13 2024-05-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法
WO2019175071A1 (en) 2018-03-13 2019-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic combination of 4-1 bb agonists with anti-cd20 antibodies
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
CA3087423A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. Anti-claudin 18.2 antibodies
CN116327926A (zh) 2018-03-15 2023-06-27 中外制药株式会社 对寨卡病毒具有交叉反应性的抗登革热病毒抗体及使用方法
CA3092589A1 (en) 2018-03-21 2019-09-26 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to vista at acidic ph
TW202003565A (zh) 2018-03-23 2020-01-16 美商必治妥美雅史谷比公司 抗mica及/或micb抗體及其用途
MX2020010028A (es) 2018-03-29 2020-10-14 Genentech Inc Actividad lactogenica modulada en celulas de mamifero.
KR20200138720A (ko) 2018-03-30 2020-12-10 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Lag-3에 대한 단일-도메인 항체 및 이의 용도
US10982006B2 (en) 2018-04-04 2021-04-20 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
SG11202009284TA (en) 2018-04-05 2020-10-29 Juno Therapeutics Inc T cell receptors and engineered cells expressing same
WO2019197965A1 (en) 2018-04-09 2019-10-17 Checkmate Pharmaceuticals Packaging oligonucleotides into virus-like particles
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
PE20210652A1 (es) 2018-04-13 2021-03-26 Hoffmann La Roche Moleculas de union a antigeno dirigidas a her2 que comprenden 4-1bbl
JP2021520829A (ja) 2018-04-18 2021-08-26 ゼンコア インコーポレイテッド ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲＡ Ｆｃ融合タンパク質およびＴＩＭ−３抗原結合ドメインを含む、ＴＩＭ−３標的化ヘテロ二量体融合タンパク質
EP3781599A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
CA3096703A1 (en) 2018-05-03 2019-11-07 University Of Rochester Anti-influenza neuraminidase monoclonal antibodies and uses thereof
CN112839958A (zh) 2018-05-03 2021-05-25 根马布私人有限公司 抗体变体组合及其用途
KR20210005894A (ko) 2018-05-03 2021-01-15 상하이 에피맙 바이오테라퓨틱스 컴퍼니, 리미티드 Pd-1 및 lag-3에 대한 높은 친화성 항체 및 이로부터 제조된 이중특이성 결합 단백질
CA3100005A1 (en) 2018-05-14 2019-11-21 Werewolf Therapeutics, Inc. Activatable cytokine polypeptides and methods of use thereof
BR112020023160A2 (pt) 2018-05-14 2021-02-02 Werewolf Therapeutics, Inc. polipeptídeos de interleucina 2 ativáveis e métodos de uso destes
PL3794041T3 (pl) 2018-05-18 2023-08-28 Glycotope Gmbh Przeciwciało anty-muc1
JP7337099B2 (ja) 2018-05-25 2023-09-01 アレクトル エルエルシー 抗ｓｉｒｐａ抗体およびその使用法
UY38247A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
JP7490574B2 (ja) 2018-05-31 2024-05-27 ノバルティス アーゲー Ｂ型肝炎抗体
CA3102230A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and uses thereof for treating disease or condition
UY38251A (es) 2018-06-01 2019-12-31 Novartis Ag Moléculas de unión contra bcma y usos de las mismas
EP3802605A1 (en) 2018-06-01 2021-04-14 Compugen Ltd. Anti-pvrig/anti-tigit bispecific antibodies and methods of use
CA3102398A1 (en) 2018-06-03 2019-12-12 Lamkap Bio Beta Ltd. Bispecific antibodies against ceacam5 and cd47
WO2019235426A1 (ja) 2018-06-04 2019-12-12 中外製薬株式会社 細胞質内での半減期が変化した抗原結合分子
EP3806904A4 (en) 2018-06-18 2022-04-27 Eureka Therapeutics, Inc. PROSTATE-SPECIFIC MEMBRANE ANTIGEN (PSMA) TARGETED CONSTRUCTS AND USES THEREOF
BR112020026384A2 (pt) 2018-06-23 2021-03-30 Genentech, Inc. Métodos para tratar um indivíduo com câncer de pulmão e para tratar um indivíduo com câncer de pulmão de pequenas células, kits, anticorpo anti-pd-l1 e composição
WO2020006374A2 (en) 2018-06-29 2020-01-02 Alector Llc Anti-sirp-beta1 antibodies and methods of use thereof
EP3817770A2 (en) 2018-07-02 2021-05-12 Amgen Inc. Anti-steap1 antigen-binding protein
CN112424228B (zh) 2018-07-04 2024-08-09 豪夫迈·罗氏有限公司 新型双特异性激动性4-1bb抗原结合分子
CA3104530A1 (en) 2018-07-09 2020-01-16 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to ilt4
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
SG11202100102VA (en) 2018-07-11 2021-02-25 Five Prime Therapeutics Inc Antibodies binding to vista at acidic ph
FI3618928T3 (fi) 2018-07-13 2023-04-21 Alector Llc Anti-sortiliini-vasta-aineita ja menetelmiä niiden käyttämiseksi
US20240254252A1 (en) 2018-07-13 2024-08-01 Genmab A/S Trogocytosis-mediated therapy using cd38 antibodies
PE20211858A1 (es) 2018-07-13 2021-09-21 Genmab As Variantes de anticuerpos anti-cd38 y sus usos
CA3104147A1 (en) 2018-07-18 2020-01-23 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent
WO2020018879A1 (en) 2018-07-20 2020-01-23 Surface Oncology, Inc. Anti-cd112r compositions and methods
SG11202101152QA (en) 2018-08-03 2021-03-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-binding molecule containing two antigen-binding domains that are linked to each other
US20200047085A1 (en) 2018-08-09 2020-02-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal fc receptor
AR114550A1 (es) 2018-08-10 2020-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Moléculas de unión al antígeno anti-cd137 y sus usos
TW202019968A (zh) 2018-08-13 2020-06-01 美商英伊布里克斯公司 Ox40結合多肽及其用途
TW202021618A (zh) 2018-08-17 2020-06-16 美商２３與我有限公司 抗ｉｌ１ｒａｐ抗體及其使用方法
TW202031273A (zh) 2018-08-31 2020-09-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 抗ｐｄ－１抗體難治療性之非小細胞肺癌（ｎｓｃｌｃ）病患的治療
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
WO2020053742A2 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Novartis Ag Anti-hla-hbv peptide antibodies
US12097219B2 (en) 2018-09-10 2024-09-24 Legend Biotech Ireland Limited Single-domain antibodies against CLL1 and constructs thereof
EP4268831A3 (en) 2018-09-12 2024-05-22 Fred Hutchinson Cancer Center Reducing cd33 expression to selectively protect therapeutic cells
WO2020056077A1 (en) 2018-09-13 2020-03-19 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Novel lilrb4 antibodies and uses thereof
JP2022511337A (ja) 2018-09-19 2022-01-31 インサーム （インスティテュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ ルシェルシェ メディカル） 免疫チェックポイント治療に抵抗性のある癌の治療のための方法および医薬組成物
CN112955747A (zh) 2018-09-19 2021-06-11 豪夫迈·罗氏有限公司 膀胱癌的治疗和诊断方法
TW202028457A (zh) 2018-09-20 2020-08-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 來自經冷凍保存之腫瘤樣本之腫瘤浸潤性淋巴細胞（ｔｉｌ）之擴增
ES2955032T3 (es) 2018-09-21 2023-11-28 Hoffmann La Roche Métodos de diagnóstico para el cáncer de mama triple negativo
CA3112989A1 (en) 2018-09-27 2020-04-02 Xilio Development, Inc. Masked cytokine polypeptides
MA53806A (fr) 2018-10-01 2022-01-05 Hoffmann La Roche Molécules bispécifiques de liaison à l'antigène comprenant un clone anti-fap 212
EP3861025A1 (en) 2018-10-01 2021-08-11 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antigen binding molecules with trivalent binding to cd40
EP3632929A1 (en) 2018-10-02 2020-04-08 Ospedale San Raffaele S.r.l. Antibodies and uses thereof
CA3115096A1 (en) 2018-10-03 2020-04-09 Xencor, Inc. Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
CN112804989A (zh) 2018-10-05 2021-05-14 戊瑞治疗有限公司 抗fgfr2抗体制剂
US11130802B2 (en) 2018-10-10 2021-09-28 Tilos Therapeutics, Inc. Anti-lap antibody variants
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
KR20210079311A (ko) 2018-10-18 2021-06-29 제넨테크, 인크. 육종성 신장암에 대한 진단과 치료 방법
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
KR20210091212A (ko) 2018-11-05 2021-07-21 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 항-pd-1 항체에 불응성인 nsclc 환자의 치료
JP2022506508A (ja) 2018-11-05 2022-01-17 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ａｋｔ経路阻害剤を利用したｔｉｌの拡大培養
WO2020094609A1 (en) 2018-11-06 2020-05-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells
BR112021009373A2 (pt) 2018-11-16 2021-08-17 Memorial Sloan Kettering Cancer Center anticorpos para mucina-16 e métodos de uso dos mesmos
JP2022513653A (ja) 2018-11-28 2022-02-09 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 修飾された重鎖定常領域を含む抗体
WO2020117952A2 (en) 2018-12-05 2020-06-11 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for cancer immunotherapy
CA3119798A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Genentech, Inc. Combination therapy of diffuse large b-cell lymphoma comprising an anti-cd79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-cd20 antibody
TW202034951A (zh) 2018-12-07 2020-10-01 日商小野藥品工業股份有限公司 免疫抑制劑
JP2022513198A (ja) 2018-12-10 2022-02-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｆｃ含有タンパク質への部位特異的コンジュゲーションのための光架橋性ペプチド
WO2020120786A1 (en) 2018-12-14 2020-06-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Isolated mhc-derived human peptides and uses thereof for stimulating and activating the suppressive function of cd8+cd45rclow tregs
TW202039554A (zh) 2018-12-19 2020-11-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＮＦ－α抗體
EP3898667A2 (en) 2018-12-20 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Modified antibody fcs and methods of use
AR117327A1 (es) 2018-12-20 2021-07-28 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
US20220089694A1 (en) 2018-12-20 2022-03-24 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
EP3898683A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Tumor-targeted superagonistic cd28 antigen binding molecules
AU2019410073B2 (en) 2018-12-21 2024-08-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Tumor-targeted agonistic CD28 antigen binding molecules
US11629172B2 (en) 2018-12-21 2023-04-18 Pfizer Inc. Human cytomegalovirus gB polypeptide
MX2021007421A (es) 2018-12-21 2021-08-05 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a factor de crecimiento endotelial vascular (vegf) y a interleucina 1 beta (il-1beta) y metodos de uso.
WO2020132220A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 23Andme, Inc. Anti-il-36 antibodies and methods of use thereof
JP7061733B2 (ja) 2018-12-21 2022-04-28 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｄ３に結合する抗体
BR112021012631A2 (pt) 2018-12-26 2021-12-14 Xilio Dev Inc Anticorpos anti-ctla4 e métodos de uso dos mesmos
JP2022515543A (ja) 2018-12-30 2022-02-18 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 抗ウサギｃｄ１９抗体および使用方法
CA3125762A1 (en) 2019-01-10 2020-07-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. System and methods for monitoring adoptive cell therapy clonality and persistence
WO2020148207A1 (en) 2019-01-14 2020-07-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Human monoclonal antibodies binding to hla-a2
CN113710702A (zh) 2019-01-14 2021-11-26 健泰科生物技术公司 用pd-1轴结合拮抗剂和rna疫苗治疗癌症的方法
CN109762067B (zh) 2019-01-17 2020-02-28 北京天广实生物技术股份有限公司 结合人Claudin 18.2的抗体及其用途
SG11202107951YA (en) 2019-01-22 2021-08-30 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against il-7r alpha subunit and uses thereof
CA3127624A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-cd38 antibodies
EP3915581A4 (en) 2019-01-24 2023-03-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha NOVEL CANCER ANTIGENS AND ANTIBODIES OF THESE ANTIGENS
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
EA202192103A1 (ru) 2019-01-29 2021-12-15 Джуно Терапьютикс, Инк. Антитела и химерные антигенные рецепторы, специфичные к орфанному рецептору типа рецеторной тирозинкиназы 1 (ror1)
JP2022521773A (ja) 2019-02-27 2022-04-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体と抗ｃｄ２０抗体又は抗ｃｄ３８抗体とによる処置のための投薬
MX2021010390A (es) 2019-03-01 2021-11-17 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen a enpp3 y cd3.
MX2021010288A (es) 2019-03-01 2021-09-23 Iovance Biotherapeutics Inc Expansion de linfocitos infiltrantes de tumores a partir de tumores liquidos y usos terapeuticos de los mismos.
TW202101000A (zh) 2019-03-08 2021-01-01 美商建南德克公司 用於偵測且量化膜相關蛋白之方法
EP3938400A4 (en) 2019-03-11 2022-11-23 Memorial Sloan Kettering Cancer Center CD22 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
MX2021010996A (es) 2019-03-14 2021-11-04 Genentech Inc Tratamiento de cancer con anticuerpos biespecificos contra her2xcd3 en combinacion con mab anti-her2.
EP3952996A1 (en) 2019-04-12 2022-02-16 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antigen binding molecules comprising lipocalin muteins
WO2020214748A1 (en) 2019-04-18 2020-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Ipilimumab variants with enhanced specificity for binding at low ph
KR20220002967A (ko) 2019-04-19 2022-01-07 제넨테크, 인크. 항 mertk 항체 및 이의 사용 방법
BR112021019571A2 (pt) 2019-04-19 2021-12-07 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Receptor quimérico que reconhece o sítio de modificação do anticorpo
JP2022530674A (ja) 2019-05-03 2022-06-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｐｄ－ｌ１抗体を用いたがんの処置方法
WO2020227228A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
BR112021022815A2 (pt) 2019-05-14 2021-12-28 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular, kits, imunoconjugados e polatuzumabe vedotina
KR20220023988A (ko) 2019-05-14 2022-03-03 웨어울프 세라퓨틱스, 인크. 분리 모이어티 및 이의 사용 방법
US20230091510A1 (en) 2019-05-20 2023-03-23 Novartis Ag Antibody drug conjugates having linkers comprising hydrophilic groups
WO2020234399A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Novel anti-cd25 antibodies
AU2020279224B2 (en) 2019-05-21 2024-12-05 Novartis Ag Trispecific binding molecules against BCMA and uses thereof
WO2020236792A1 (en) 2019-05-21 2020-11-26 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
US12037378B2 (en) 2019-05-21 2024-07-16 Novartis Ag Variant CD58 domains and uses thereof
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
EP3972692A1 (en) 2019-05-23 2022-03-30 AC Immune SA Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
CA3140023A1 (en) 2019-06-11 2020-12-17 Alector Llc Anti-sortilin antibodies for use in therapy
TW202112816A (zh) 2019-06-12 2021-04-01 瑞士商諾華公司 利鈉肽受體1抗體及使用方法
TW202115124A (zh) 2019-06-26 2021-04-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合至cea之新穎抗原結合分子
JP7354306B2 (ja) 2019-06-27 2023-10-02 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規ｉｃｏｓ抗体及びそれらを含む腫瘍標的化抗原結合分子
WO2021003297A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind egfrviii and their use
EP3998083A4 (en) 2019-07-12 2023-08-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-MUTATION TYPE FGFR3 ANTIBODY AND USE THEREOF
AR119382A1 (es) 2019-07-12 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos de pre-direccionamiento y métodos de uso
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
KR20220034807A (ko) 2019-07-16 2022-03-18 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) Cd38에 대해 특이성을 갖는 항체 및 이의 용도
US20220306734A1 (en) 2019-07-24 2022-09-29 H. Lundbeck A/S Anti-mglur5 antibodies and uses thereof
US20220280643A1 (en) 2019-07-29 2022-09-08 Mark White Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
CA3144524A1 (en) 2019-07-31 2021-02-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to gprc5d
BR112022001733A2 (pt) 2019-07-31 2022-06-28 Alector Llc Anticorpos anti-ms4a4a e métodos de uso dos mesmos
EP4004045A1 (en) 2019-07-31 2022-06-01 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to gprc5d
CA3148740A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Aprinoia Therapeutics Limited Antibodies that bind to pathological tau species and uses thereof
CA3146616A1 (en) 2019-09-12 2021-03-18 Matthew Dominic CASCINO Compositions and methods of treating lupus nephritis
CR20220156A (es) 2019-09-18 2022-05-23 Genentech Inc Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecíficos anti-klk5/klk7 y métodos de uso
JP2022548881A (ja) 2019-09-18 2022-11-22 ノバルティス アーゲー Ｅｎｔｐｄ２抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
US20230192860A1 (en) 2019-09-19 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies Binding to Vista at Acidic pH
EP4031580A1 (en) 2019-09-20 2022-07-27 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for anti-tryptase antibodies
CR20220127A (es) 2019-09-27 2022-05-27 Genentech Inc Administración de dosis para tratamiento con anticuerpos antagonistas anti-tigit y anti-pd-l1
US20220363776A1 (en) 2019-10-04 2022-11-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer
WO2021076196A1 (en) 2019-10-18 2021-04-22 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
WO2021091605A1 (en) 2019-11-04 2021-05-14 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
EP4055388A1 (en) 2019-11-06 2022-09-14 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers
KR20220101147A (ko) 2019-11-14 2022-07-19 웨어울프 세라퓨틱스, 인크. 활성화가능한 사이토카인 폴리펩티드 및 이의 사용 방법
KR20220100611A (ko) 2019-11-15 2022-07-15 엔테라 에스.알.엘. Tmem219 항체 및 이의 치료 용도
US20230039165A1 (en) 2019-11-21 2023-02-09 Enthera S.R.L. Igfbp3 antibodies and therapeutic uses thereof
EP3831849A1 (en) 2019-12-02 2021-06-09 LamKap Bio beta AG Bispecific antibodies against ceacam5 and cd47
WO2021113831A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Compugen Ltd. Anti-pvrig and anti-tigit antibodies for enhanced nk-cell based tumor killing
CN115335399A (zh) 2019-12-06 2022-11-11 朱诺治疗学股份有限公司 针对gprc5d靶结合结构域的抗独特型抗体以及相关组合物和方法
CA3163897A1 (en) 2019-12-06 2021-06-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to bcma-targeted binding domains and related compositions and methods
US20230040928A1 (en) 2019-12-09 2023-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to her4 and uses thereof
US11845799B2 (en) 2019-12-13 2023-12-19 Genentech, Inc. Anti-Ly6G6D antibodies and methods of use
BR112022011570A2 (pt) 2019-12-13 2022-12-13 Alector Llc Anticorpos anti-mertk e métodos de uso dos mesmos
KR20220100963A (ko) 2019-12-18 2022-07-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 Hla-a2/mage-a4에 결합하는 항체
WO2021127414A1 (en) 2019-12-20 2021-06-24 Bristol-Myers Squibb Company Use of fucosylation inhibitor for producing afucosylated antibody
EP4082570A4 (en) 2019-12-27 2023-09-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-CTLA-4 ANTIBODY AND ITS USE
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
TW202138388A (zh) 2019-12-30 2021-10-16 美商西根公司 以非海藻糖苷化抗－ｃｄ７０抗體治療癌症之方法
BR112022012969A2 (pt) 2020-01-09 2022-09-06 Hoffmann La Roche Moléculas de ligação, molécula de ácido nucleico isolada, vetor, célula hospedeira, composição farmacêutica, usos da molécula de ligação, métodos para produzir a molécula de ligação, tratar um indivíduo com câncer e suprarregular ou prolongar a atividade de células t citotóxicas em um indivíduo com câncer
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
TW202140553A (zh) 2020-01-13 2021-11-01 美商威特拉公司 C5ar1抗體分子及其用途
KR20220130724A (ko) 2020-01-16 2022-09-27 젠맵 에이/에스 Cd38 항체의 제제 및 그의 용도
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
CA3165319A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Vincent K. Tuohy Anti-mullerian hormone receptor 2 antibodies and methods of use
CN116650628A (zh) 2020-01-31 2023-08-29 基因泰克公司 用pd-1轴结合拮抗剂和rna疫苗诱导新表位特异性t细胞的方法
CN115397848A (zh) 2020-02-05 2022-11-25 拉利玛生物医药公司 Tat肽结合蛋白及其用途
TW202144395A (zh) 2020-02-12 2021-12-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
MX2022009947A (es) 2020-02-14 2022-11-07 Jounce Therapeutics Inc Anticuerpos y proteinas de fusion que se unen a ccr8 y usos de estos.
US20230348568A1 (en) 2020-02-20 2023-11-02 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Epstein-barr virus monoclonal antibodies and uses thereof
EP3868396A1 (en) 2020-02-20 2021-08-25 Enthera S.R.L. Inhibitors and uses thereof
BR112022017174A2 (pt) 2020-02-27 2022-10-18 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd Anticorpo monoclonal isolado, ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo, nucleotídeo, vetor de expressão, célula hospedeira, composição farmacêutica e métodos de tratamento de uma doença alérgica e de um tumor
WO2021170071A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-cd137 constructs, multispecific antibody and uses thereof
CA3169939A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Jie Xue Anti-cd137 construct and use thereof
JP2023517345A (ja) 2020-03-13 2023-04-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗インターロイキン－３３抗体及びその使用
TW202144408A (zh) 2020-03-19 2021-12-01 美商建南德克公司 同功型選擇性抗－ＴＧＦ－β抗體及其使用方法
WO2021194861A1 (en) 2020-03-23 2021-09-30 Genentech, Inc. Biomarkers for predicting response to il-6 antagonist in covid-19 pneumonia
EP4107186A1 (en) 2020-03-23 2022-12-28 Genentech, Inc. Tocilizumab and remdesivir combination therapy for covid-19 pneumonia
EP4107184A1 (en) 2020-03-23 2022-12-28 Genentech, Inc. Method for treating pneumonia, including covid-19 pneumonia, with an il6 antagonist
CN115867649A (zh) 2020-03-24 2023-03-28 基因泰克公司 Tie2结合剂及其使用方法
EP4127153A2 (en) 2020-03-26 2023-02-08 Genentech, Inc. Modified mammalian cells having reduced host cell proteins
US20230128499A1 (en) 2020-03-27 2023-04-27 Novartis Ag Bispecific combination therapy for treating proliferative diseases and autoimmune diseases
WO2021202590A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Alector Llc Anti-mertk antibodies and methods of use thereof
US20230107644A1 (en) 2020-04-01 2023-04-06 University Of Rochester Monoclonal antibodies against the hemagglutinin (ha) and neuraminidase (na) of influenza h3n2 viruses
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
WO2021202959A1 (en) 2020-04-03 2021-10-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2021207449A1 (en) 2020-04-09 2021-10-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Affinity matured anti-lap antibodies and uses thereof
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
BR112022021441A2 (pt) 2020-04-24 2022-12-13 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular e linfoma difuso de grandes células b e kits
KR20230004520A (ko) 2020-04-27 2023-01-06 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 지단백(ａ)에 대한 이소형-비의존성 항체
JP2023523450A (ja) 2020-04-28 2023-06-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 非小細胞肺がん免疫療法のための方法及び組成物
SG11202112792WA (en) 2020-04-28 2021-12-30 Univ Rockefeller Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies and methods of use thereof
TW202200212A (zh) 2020-05-03 2022-01-01 中國大陸商聯寧（蘇州）生物製藥有限公司 包含抗-trop-2抗體之抗體藥物結合物
JP2023525053A (ja) 2020-05-12 2023-06-14 インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル） 皮膚ｔ細胞リンパ腫及びｔｆｈ由来リンパ腫を処置する新しい方法
US20230272086A1 (en) 2020-05-12 2023-08-31 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. St2 antigen binding protein
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
US20230192867A1 (en) 2020-05-15 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to garp
CN113993900B (zh) 2020-05-27 2023-08-04 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别神经生长因子的抗体及其用途
US11787861B2 (en) 2020-05-29 2023-10-17 23Andme, Inc. Anti-CD200R1 antibodies and methods of use thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
CA3185858A1 (en) 2020-06-02 2021-12-09 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
CA3184495A1 (en) 2020-06-08 2021-12-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hbv antibodies and methods of use
JP2023529206A (ja) 2020-06-12 2023-07-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド がん免疫療法のための方法及び組成物
CN115916182A (zh) 2020-06-16 2023-04-04 基因泰克公司 用于治疗三阴性乳腺癌的方法和组合物
AU2021293507A1 (en) 2020-06-18 2023-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment with anti-TIGIT antibodies and PD-1 axis binding antagonists
IL298610A (en) 2020-06-19 2023-01-01 Hoffmann La Roche Antibodies that bind to cd3- and folr1
WO2021255146A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
CN115698084A (zh) 2020-06-19 2023-02-03 豪夫迈·罗氏有限公司 与cd3结合的抗体
CN115916825A (zh) 2020-06-19 2023-04-04 豪夫迈·罗氏有限公司 与cd3和cd19结合的抗体
TW202413391A (zh) 2020-06-21 2024-04-01 美商輝瑞股份有限公司 人巨細胞病毒糖蛋白Ｂ（ｇＢ）多肽
US20230235040A1 (en) 2020-06-22 2023-07-27 Almirall, S.A. Anti-il-36 antibodies and methods of use thereof
US12049515B2 (en) 2020-06-23 2024-07-30 Hoffmann-La Roche Inc. Agonistic CD28 antigen binding molecules targeting Her2
CN115943158A (zh) 2020-06-24 2023-04-07 基因泰克公司 抗细胞凋亡的细胞系
JP2023531067A (ja) 2020-06-25 2023-07-20 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ３／抗ｃｄ２８二重特異性抗原結合分子
CN116723856A (zh) 2020-06-25 2023-09-08 默沙东有限责任公司 靶向丝氨酸413处磷酸化的tau的高亲和力抗体
KR20230030632A (ko) 2020-06-30 2023-03-06 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 항-cd70 항체 및 이의 적용
PE20230434A1 (es) 2020-07-10 2023-03-08 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a celulas cancerosas y dirigen radionucleotidos a dichas celulas
US20240059771A1 (en) 2020-07-13 2024-02-22 Shanghai Junshi Biosciences Co., Ltd. Anti-cldn-18.2 antibody and use thereof
CR20230087A (es) 2020-07-17 2023-03-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch2 y métodos de uso
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
CA3190328A1 (en) 2020-07-29 2022-02-03 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
JP2023536602A (ja) 2020-08-03 2023-08-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド リンパ腫のための診断及び治療方法
WO2022029080A1 (en) 2020-08-03 2022-02-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Population of treg cells functionally committed to exert a regulatory activity and their use for adoptive therapy
US20230324408A1 (en) 2020-08-05 2023-10-12 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
EP4192854A1 (en) 2020-08-07 2023-06-14 Genentech, Inc. Flt3 ligand fusion proteins and methods of use
EP4196502A1 (en) 2020-08-13 2023-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of redirecting of il-2 to target cells of interest
US20230322908A1 (en) 2020-08-14 2023-10-12 Ac Immune Sa Humanized Anti-TDP-43 Binding Molecules and Uses Thereof
EP4204448A2 (en) 2020-08-27 2023-07-05 cureab GmbH Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
CN116648507A (zh) 2020-08-28 2023-08-25 基因泰克公司 宿主细胞蛋白的CRISPR/Cas9多重敲除
PE20230986A1 (es) 2020-09-04 2023-06-21 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a y ang2, y metodos de uso
JP2023541627A (ja) 2020-09-14 2023-10-03 イシュノス サイエンシズ ソシエテ アノニム Ｉｌ１ｒａｐに結合する抗体及びその使用
JP2023541921A (ja) 2020-09-17 2023-10-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃｏｖｉｄ－１９肺炎を有する入院患者におけるトシリズマブの有効性及び安全性を評価するためのランダム化二重盲検プラセボ対照多施設試験（ｅｍｐａｃｔａ）の結果
CA3197662A1 (en) 2020-09-30 2022-04-07 Dren Bio, Inc. Anti-cd94 antibodies and methods of use thereof
US20230365680A1 (en) 2020-09-30 2023-11-16 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
CN116406291A (zh) 2020-10-05 2023-07-07 基因泰克公司 用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
JP2023546359A (ja) 2020-10-06 2023-11-02 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球療法によるｎｓｃｌｃ患者の治療
WO2022076606A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2022077006A1 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Dren Bio, Inc. Anti-dectin-1 antibodies and methods of use thereof
KR20230086765A (ko) 2020-10-13 2023-06-15 얀센 바이오테크 인코포레이티드 분화 클러스터 iv 및/또는 viii을 조절하기 위한 바이오-조작된 t 세포 매개 면역, 물질 및 기타 방법
CA3198456A1 (en) 2020-10-14 2022-04-21 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-c-c chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use thereof
AR123855A1 (es) 2020-10-20 2023-01-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-mertk conjugados con peg y métodos de uso
KR20230091871A (ko) 2020-10-20 2023-06-23 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd-1 축 결합 길항제 및 lrrk2 억제제의 병용 요법
EP4232475A1 (en) 2020-10-20 2023-08-30 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
EP4232822A2 (en) 2020-10-26 2023-08-30 Compugen Ltd. Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
EP4240766A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4240758A1 (en) 2020-11-04 2023-09-13 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies
WO2022098638A2 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4240493A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
EP4240769A1 (en) 2020-11-06 2023-09-13 Bristol-Myers Squibb Company Dosing and administration of non-fucosylated anti-ctla-4 antibody as monotherapy
KR20230104651A (ko) 2020-11-06 2023-07-10 노파르티스 아게 Cd19 결합 분자 및 이의 용도
WO2022097061A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Anti-cd19 agent and b cell targeting agent combination therapy for treating b cell malignancies
JP2023549316A (ja) 2020-11-16 2023-11-24 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｆａｐを標的としたｃｄ４０アゴニストとの併用療法
WO2022106663A1 (en) 2020-11-20 2022-05-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-cd25 antibodies
CA3199006A1 (en) 2020-11-20 2022-05-27 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Anti-cd25 antibodies
CA3202986A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Alector Llc Methods of use of anti-sortilin antibodies
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
CA3201818A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 Maria Fardis Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with braf inhibitors and/or mek inhibitors
WO2022130182A1 (en) 2020-12-14 2022-06-23 Novartis Ag Reversal binding agents for anti-natriuretic peptide receptor 1 (npr1) antibodies and uses thereof
AU2021401302A1 (en) 2020-12-17 2023-07-06 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with ctla-4 and pd-1 inhibitors
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
WO2022133149A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancers with tumor infiltrating lymphocytes
WO2022140797A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Immunowake Inc. Immunocytokines and uses thereof
CN114685669A (zh) 2020-12-30 2022-07-01 和铂医药(苏州)有限公司 结合trop2的抗体及其用途
WO2022147196A2 (en) 2020-12-31 2022-07-07 Iovance Biotherapeutics, Inc. Devices and processes for automated production of tumor infiltrating lymphocytes
CN116829598A (zh) 2021-01-06 2023-09-29 豪夫迈·罗氏有限公司 采用pd1-lag3双特异性抗体和cd20 t细胞双特异性抗体的组合疗法
JP2024503396A (ja) 2021-01-08 2024-01-25 北京韓美薬品有限公司 Ｃｄ４７と特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメント
KR20230129483A (ko) 2021-01-08 2023-09-08 베이징 한미 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 Pd-l1과 특이적으로 결합하는 항체 및 그 항원 결합단편
EP4276111A1 (en) 2021-01-08 2023-11-15 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. Antibody specifically binding to 4-1bb and antigen-binding fragment of antibody
CN116829593A (zh) 2021-01-12 2023-09-29 豪夫迈·罗氏有限公司 与癌细胞结合并将放射性核素靶向所述细胞的分裂抗体
AU2022207985A1 (en) 2021-01-13 2023-07-06 Visterra, Inc. Humanized complement 5a receptor 1 antibodies and methods of use thereof
AU2022207624A1 (en) 2021-01-13 2023-07-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy
MX2023008261A (es) 2021-01-13 2023-09-12 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Conjugado de anticuerpo-derivado de pirrolobenzodiazepina.
WO2022153195A1 (en) 2021-01-13 2022-07-21 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-dll3 antibody-drug conjugate
EP4277926A1 (en) 2021-01-15 2023-11-22 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
AU2022212599A1 (en) 2021-01-28 2023-08-17 Universität Ulm Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
WO2022165275A2 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1-antibodies
EP4284516A1 (en) 2021-01-28 2023-12-06 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
JP2024506557A (ja) 2021-01-29 2024-02-14 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 修飾された腫瘍浸潤リンパ球を作製する方法及び養子細胞療法におけるそれらの使用
EP4288458A1 (en) 2021-02-03 2023-12-13 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
JP2024506315A (ja) 2021-02-09 2024-02-13 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ アズ リプリゼンテッド バイ ザ セクレタリー、デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ コロナウイルスのスパイクタンパク質を標的とする抗体
CN117396502A (zh) 2021-02-09 2024-01-12 佐治亚大学研究基金会有限公司 针对肺炎球菌抗原的人类单克隆抗体
JP2024506200A (ja) 2021-02-15 2024-02-09 武田薬品工業株式会社 細胞治療用組成物及びｔｇｆ－ｂシグナル伝達を調節する方法
WO2022187270A1 (en) 2021-03-01 2022-09-09 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
JP2024508488A (ja) 2021-03-01 2024-02-27 エクシリオ デベロップメント， インコーポレイテッド がんを治療するためのマスクされたｃｔｌａ４及びｐｄ１／ｐｄ－ｌ１抗体の組み合わせ
EP4301418A1 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
EP4301138A2 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor storage and cell culture compositions
WO2022187863A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
US11739144B2 (en) 2021-03-09 2023-08-29 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CLDN6
US11859012B2 (en) 2021-03-10 2024-01-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and GPC3
CA3211581A1 (en) 2021-03-10 2022-09-15 Ellen WU Immunomodulatory molecules and uses thereof
WO2022192647A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Genentech, Inc. Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
TW202300521A (zh) 2021-03-15 2023-01-01 美商建南德克公司 治療狼瘡性腎炎的組成物及方法
WO2022197947A1 (en) 2021-03-18 2022-09-22 Alector Llc Anti-tmem106b antibodies and methods of use thereof
CR20230488A (es) 2021-03-18 2023-12-12 Medimmune Ltd Moléculas de unión terapéuticas
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
US20240191191A1 (en) 2021-03-19 2024-06-13 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for infiltrating lymphocyte (til) expansion related to cd39/cd69 selection and gene knockout in tils
EP4314063A1 (en) 2021-03-23 2024-02-07 Alector LLC Anti-tmem106b antibodies for treating and preventing coronavirus infections
JP2024511414A (ja) 2021-03-23 2024-03-13 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球のｃｉｓｈ遺伝子編集及び免疫療法におけるその使用
US20240175873A1 (en) 2021-03-23 2024-05-30 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t cell-lymphomas
WO2022204564A2 (en) 2021-03-25 2022-09-29 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods and compositions for t-cell coculture potency assays and use with cell therapy products
WO2022204724A1 (en) 2021-03-25 2022-09-29 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-igfbp7 constructs and uses thereof
WO2022200525A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Innate Pharma Multispecific proteins comprising an nkp46-binding site, a cancer antgienge binding site fused to a cytokine for nk cell engaging
EP4320153A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of anaplastic large cell lymphoma
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
CA3215965A1 (en) 2021-04-19 2022-10-27 Amy Shen Modified mammalian cells
AU2022263418A1 (en) 2021-04-19 2023-10-26 Iovance Biotherapeutics, Inc. Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies
JP2024514281A (ja) 2021-04-23 2024-04-01 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｎｋ細胞係合剤関連の有害作用の防止または軽減
CA3213632A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
US20240218057A1 (en) 2021-05-06 2024-07-04 The Rockefeller University Neutralizing anti- sars-cov-2 antibodies and methods of use thereof
CN118593725A (zh) 2021-05-12 2024-09-06 基因泰克公司 使用抗cd79b免疫缀合物治疗弥漫性大b细胞淋巴瘤的方法
TW202306993A (zh) 2021-05-14 2023-02-16 美商建南德克公司 Ｔｒｅｍ２之促效劑
US20230115257A1 (en) 2021-05-17 2023-04-13 Curia Ip Holdings, Llc Sars-cov-2 spike protein antibodies
WO2022245859A1 (en) 2021-05-17 2022-11-24 Curia Ip Holdings, Llc Sars-cov-2 spike protein antibodies
JP2024519029A (ja) 2021-05-17 2024-05-08 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｐｄ－１遺伝子編集された腫瘍浸潤リンパ球及び免疫療法におけるその使用
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
WO2022246259A1 (en) 2021-05-21 2022-11-24 Genentech, Inc. Modified cells for the production of a recombinant product of interest
AR126009A1 (es) 2021-06-02 2023-08-30 Hoffmann La Roche Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
EP4155321A1 (en) 2021-06-04 2023-03-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ddr2 antibodies and uses thereof
IL308015A (en) 2021-06-09 2023-12-01 Hoffmann La Roche A combination of a specific BRAF inhibitor (paradox breaker) and a PD-1 spindle-binding antagonist for use in cancer treatment
EP4352098A1 (en) 2021-06-09 2024-04-17 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp46, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
WO2022258691A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkg2d, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
BR112023025476A2 (pt) 2021-06-09 2024-02-27 Innate Pharma Proteína de ligação multimérica e seu método de produção, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico isolada, vetor de expressão, célula isolada e proteína de ligação para uso
WO2022258678A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp30, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
KR20240019831A (ko) 2021-06-11 2024-02-14 제넨테크, 인크. St2 길항제를 이용하여 만성 폐쇄성 폐질환을 치료하는 방법
CN117642426A (zh) 2021-06-16 2024-03-01 艾莱克特有限责任公司 双特异性抗MerTK和抗PDL1抗体及其使用方法
JP2024527493A (ja) 2021-06-16 2024-07-25 アレクトル エルエルシー 一価の抗ＭｅｒＴＫ抗体及びその使用方法
US20240279334A1 (en) 2021-06-17 2024-08-22 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
TW202306989A (zh) 2021-06-22 2023-02-16 瑞士商諾華公司 用於在治療化膿性汗腺炎中使用的雙特異性抗體
CN117545779A (zh) 2021-06-25 2024-02-09 中外制药株式会社 抗ctla-4抗体的用途
KR102690141B1 (ko) 2021-06-25 2024-07-30 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ctla-4 항체
IL309405A (en) 2021-06-29 2024-02-01 Seagen Inc Methods for treating cancer with a combination of non-fucosylated anti-CD70 antibody and CD47 antagonist
EP4363450A1 (en) 2021-07-01 2024-05-08 Compugen Ltd. Anti-tigit and anti-pvrig in monotherapy and combination treatments
EP4367139A1 (en) 2021-07-08 2024-05-15 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing tnfr2 and uses thereof
US20230048743A1 (en) 2021-07-12 2023-02-16 Genentech Inc. Structures for Reducing Antibody-Lipase Binding
US20230049152A1 (en) 2021-07-14 2023-02-16 Genentech, Inc. Anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use
WO2023284829A1 (zh) 2021-07-14 2023-01-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 特异性结合hgfr和egfr的抗原结合分子及其医药用途
KR20240058075A (ko) 2021-07-14 2024-05-03 스테이드슨 (베이징) 바이오팔마슈티칼스 캄퍼니 리미티드 Cd40을 특이적으로 식별하는 항체 및 이의 응용
WO2023004386A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Genentech, Inc. Brain targeting compositions and methods of use thereof
AU2022315528A1 (en) 2021-07-22 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterodimeric fc domain antibodies
CA3226111A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Iovance Biotherapeutics, Inc. Method for cryopreservation of solid tumor fragments
TW202327631A (zh) 2021-07-28 2023-07-16 美商艾歐凡斯生物治療公司 利用腫瘤浸潤性淋巴球療法與ｋｒａｓ抑制劑組合治療癌症患者
WO2023012147A1 (en) 2021-08-03 2023-02-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies and methods of use
US20240336697A1 (en) 2021-08-07 2024-10-10 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
WO2023019239A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
EP4388014A1 (en) 2021-08-19 2024-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Multivalent anti-variant fc-region antibodies and methods of use
IL310662A (en) 2021-08-23 2024-04-01 Immunitas Therapeutics Inc Anti-CD161 antibodies and their uses
WO2023025303A1 (zh) 2021-08-26 2023-03-02 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗cldn-18.2抗体药物偶联物及其用途
IL310382A (en) 2021-08-27 2024-03-01 Genentech Inc Methods for treating tau pathologies
EP4396223A1 (en) 2021-08-30 2024-07-10 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
MX2024002611A (es) 2021-08-30 2024-05-29 Lassen Therapeutics 1 Inc Anticuerpos anti-il-11ra.
TW202328192A (zh) 2021-09-06 2023-07-16 荷蘭商珍美寶公司 能結合ｃｄ２７之抗體、彼之變異體及彼等之用途
MX2024002861A (es) 2021-09-09 2024-06-28 Iovance Biotherapeutics Inc Procesos de generacion de productos de linfocitos infiltrantes del tumor (til) mediante atenuacion de nucleasa efectora similar al activador de transcripción (talen) de proteína de muerte programada (pd-1).
AU2022345251A1 (en) 2021-09-17 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Synthetic humanized llama nanobody library and use thereof to identify sars-cov-2 neutralizing antibodies
CA3232700A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Rafael CUBAS Expansion processes and agents for tumor infiltrating lymphocytes
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
JP2024534661A (ja) 2021-09-30 2024-09-20 バイオ－テラ ソリュ－ションズ，エルティーディー． 抗ｂ７－ｈ３抗体及びその応用
MX2024004117A (es) 2021-10-08 2024-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Metodo para preparar formulacion de jeringa precargada.
WO2023064958A1 (en) 2021-10-15 2023-04-20 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
WO2023069919A1 (en) 2021-10-19 2023-04-27 Alector Llc Anti-cd300lb antibodies and methods of use thereof
EP4423755A2 (en) 2021-10-27 2024-09-04 Iovance Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for coordinating manufacturing of cells for patient-specific immunotherapy
JP2024540374A (ja) 2021-11-05 2024-10-31 アメリカン ダイアグノスティックス アンド セラピー， エルエルシー （エーディーエックスアールエックス） がん胎児性抗原に対するモノクローナル抗体、及びそれらの使用
WO2023086803A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of expansion treatment utilizing cd8 tumor infiltrating lymphocytes
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
IL312692A (en) 2021-11-16 2024-07-01 Genentech Inc Methods and compositions for the treatment of systemic lupus erythematosus (SLE) with musontuzumab
MX2024005876A (es) 2021-11-16 2024-05-29 Ac Immune Sa Moleculas novedosas para terapias y diagnostico.
WO2023094525A1 (en) 2021-11-25 2023-06-01 Veraxa Biotech Gmbh Improved antibody-payload conjugates (apcs) prepared by site-specific conjugation utilizing genetic code expansion
CN118159286A (zh) 2021-11-25 2024-06-07 正大天晴药业集团股份有限公司 抗Siglec-15抗体及其应用
EP4186529A1 (en) 2021-11-25 2023-05-31 Veraxa Biotech GmbH Improved antibody-payload conjugates (apcs) prepared by site-specific conjugation utilizing genetic code expansion
CN118284625A (zh) 2021-11-26 2024-07-02 豪夫迈·罗氏有限公司 抗tyrp1/抗cd3双特异性抗体与tyrp1特异性抗体的组合疗法
WO2023103788A1 (zh) 2021-12-06 2023-06-15 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司 特异性结合肺炎克雷伯菌o2抗原和o1抗原的双特异性抗体以及组合物
AR127887A1 (es) 2021-12-10 2024-03-06 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y plap
EP4448095A1 (en) 2021-12-14 2024-10-23 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Depletion of nk cells for the treatment of adverse post-ischemic cardiac remodeling
EP4448579A1 (en) 2021-12-17 2024-10-23 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-ox40 antibodies and methods of use
EP4448578A1 (en) 2021-12-17 2024-10-23 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-ox40 antibodies, multispecific antibodies and methods of use
CR20240246A (es) 2021-12-20 2024-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecificos que los comprenden
TW202337904A (zh) 2022-01-07 2023-10-01 美商壯生和壯生企業創新公司 ＩＬ－１β結合蛋白之材料及方法
WO2023141445A1 (en) 2022-01-19 2023-07-27 Genentech, Inc. Anti-notch2 antibodies and conjugates and methods of use
WO2023147399A1 (en) 2022-01-27 2023-08-03 The Rockefeller University Broadly neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies targeting the n-terminal domain of the spike protein and methods of use thereof
WO2023147488A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
WO2023147486A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor infiltrating lymphocytes engineered to express payloads
WO2023144303A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cd38 as a biomarker and biotarget in t-cell lymphomas
IL314799A (en) 2022-02-10 2024-10-01 Us Health Human monoclonal antibodies broadly targeting coronavirus
IL315043A (en) 2022-02-16 2024-10-01 Ac Immune Sa Humanized molecules that bind TDP-43 and uses thereof
AU2023221861A1 (en) 2022-02-18 2024-09-05 Rakuten Medical, Inc. Anti-programmed death-ligand 1 (pd-l1) antibody molecules, encoding polynucleotides, and methods of use
WO2023173026A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
IL314346A (en) 2022-03-15 2024-09-01 Compugen Ltd Antibodies antagonistic to IL-18BP and their use in monotherapy and combination therapy in cancer treatment
KR20240155275A (ko) 2022-03-15 2024-10-28 예다 리서치 앤드 디벨럽먼트 캄파니 리미티드 항 글루코코르티코이드 유도 tnfr 관련(gitr) 단백질 항체 및 이의 용도
US20240103010A1 (en) 2022-03-18 2024-03-28 Compugen Ltd. Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment
IL314211A (en) 2022-03-23 2024-09-01 Genentech Inc Combined treatment of bispecific antibody and chemotherapy against CD20/ANTI-CD3
AU2023240941A1 (en) 2022-03-25 2024-09-19 Shanghai Henlius Biologics Co., Ltd. Anti-msln antibodies and methods of use
AU2023241824A1 (en) 2022-03-26 2024-10-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023186756A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these
WO2023192881A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
TW202405009A (zh) 2022-03-30 2024-02-01 瑞士商諾華公司 使用抗利尿鈉肽受體１（ｎｐｒ１）抗體治療障礙之方法
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023196877A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
AU2023250038A1 (en) 2022-04-08 2024-11-14 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
WO2023198648A1 (en) 2022-04-11 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t-cell malignancies
TW202404637A (zh) 2022-04-13 2024-02-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３雙特異性抗體之醫藥組成物及使用方法
WO2023201299A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
WO2023198874A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t cell-lymphomas
WO2023201369A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment
WO2023203177A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
TW202406934A (zh) 2022-05-03 2024-02-16 美商建南德克公司 抗Ｌｙ６Ｅ抗體、免疫結合物及其用途
WO2023220608A1 (en) 2022-05-10 2023-11-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with an il-15r agonist
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
AU2022458320A1 (en) 2022-05-11 2024-11-28 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023222886A1 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Depth Charge Ltd Antibody-cytokine fusion proteins
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023237706A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
WO2024003310A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of acute lymphoblastic leukemia
WO2024011114A1 (en) 2022-07-06 2024-01-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Devices and processes for automated production of tumor infiltrating lymphocytes
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020432A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
TW202417503A (zh) 2022-07-19 2024-05-01 美商舒泰神（加州）生物科技有限公司 特異性識別ｂ和ｔ淋巴細胞衰減器（ｂｔｌａ）的抗體及其應用
WO2024018046A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Garp as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies
TW202423992A (zh) 2022-07-22 2024-06-16 美商必治妥美雅史谷比公司 結合至人類pad4之抗體及其用途
TW202417504A (zh) 2022-07-22 2024-05-01 美商建南德克公司 抗ｓｔｅａｐ１抗原結合分子及其用途
WO2024026496A1 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
TW202415679A (zh) 2022-07-29 2024-04-16 美商阿列克特有限責任公司 抗ｇｐｎｍｂ抗體及其使用方法
WO2024023283A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Lrrc33 as a biomarker and biotarget in cutaneous t-cell lymphomas
WO2024030829A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024030758A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Iovance Biotherapeutics, Inc. Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies
WO2024031032A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ctla-4 antibodies for treatment of kras mutant cancers
WO2024028732A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Cd98 binding constructs for treating brain tumors
WO2024028731A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Transferrin receptor binding proteins for treating brain tumors
WO2024037633A2 (en) 2022-08-19 2024-02-22 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd Formulations comprising g-csf and uses thereof
WO2024044675A1 (en) 2022-08-25 2024-02-29 Beigene, Ltd. Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies
WO2024044779A2 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024052503A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
WO2024056861A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Avidicure Ip B.V. Multispecific antigen binding proteins for stimulating nk cells and use thereof
WO2024062076A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Domain Therapeutics Anti-ccr8 monoclonal antibodies and their therapeutic use
WO2024062082A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Domain Therapeutics Anti-ccr8 monoclonal antibodies and their therapeutic use
WO2024062072A2 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Domain Therapeutics Anti-ccr8 monoclonal antibodies and their therapeutic use
WO2024064826A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
TW202421664A (zh) 2022-10-07 2024-06-01 美商建南德克公司 用抗ｃ—ｃ模體趨化因子受體８（ｃｃｒ８）抗體治療癌症之方法
WO2024079192A1 (en) 2022-10-12 2024-04-18 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Cd81 as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies
WO2024086796A1 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Alector Llc Anti-ms4a4a antibodies with amyloid-beta therapies
WO2024091991A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
WO2024098024A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
WO2024098027A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for tumor infiltrating lymphocyte (til) expansion related to cd39/cd103 selection
WO2024097741A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Gilead Sciences, Inc. Anticancer therapies using anti-ccr8 antibody, chemo and immunotherapy combinations
WO2024102734A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024100200A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Cis Pharma Ag Anti-l1-cam antibodies and their uses for diagnostic and therapeutic applications
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
US20240226313A1 (en) 2022-11-17 2024-07-11 Sanofi Ceacam5 antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2024112711A2 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for assessing proliferation potency of gene-edited t cells
WO2024112571A2 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Two-dimensional processes for the expansion of tumor infiltrating lymphocytes and therapies therefrom
WO2024110905A1 (en) 2022-11-24 2024-05-30 Beigene, Ltd. Anti-cea antibody drug conjugates and methods of use
WO2024127366A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Pheon Therapeutics Ltd Antibodies to cub domain-containing protein 1 (cdcp1) and uses thereof
WO2024137381A1 (en) 2022-12-19 2024-06-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies for treating sars-cov-2 infection
TW202430560A (zh) 2023-01-06 2024-08-01 美商拉森醫療公司 抗ｉｌ－１８ｂｐ抗體
WO2024148243A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. Anti-il-18bp antibodies
WO2024148240A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. ANTI-IL-11Rα ANTIBODIES FOR TREATING THYROID EYE DISEASE
WO2024148232A2 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Alector Llc Anti-il18 binding protein antibodies and methods of use thereof
WO2024151885A1 (en) 2023-01-13 2024-07-18 Iovance Biotherapeutics, Inc. Use of til as maintenance therapy for nsclc patients who achieved pr/cr after prior therapy
US20240360229A1 (en) 2023-01-18 2024-10-31 Genentech, Inc. Multispecific antibodies and uses thereof
TW202430570A (zh) 2023-01-19 2024-08-01 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 抗cmet抗體及使用方法
WO2024156672A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to csf1r and cd3
WO2024170543A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-cd44 antibodies and uses thereof
WO2024182443A2 (en) 2023-02-27 2024-09-06 Compugen Ltd. Triple combination therapy with anti-pvrig antibodies, anti-tigit antibodies, and pembrolizumab
WO2024183637A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Muc1 antibodies and methods of use
WO2024183636A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Cd16a antibodies and methods of use
WO2024183635A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Beigene, Ltd. Muc1 and cd16a antibodies and methods of use
WO2024184812A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cldn6 antibodies and methods of use
WO2024184810A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cldn6 and anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use
WO2024184811A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use
WO2024184494A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
EP4428158A1 (en) 2023-03-10 2024-09-11 Istituto Romagnolo per lo Studio dei Tumori "Dino Amadori" - IRST S.r.l. Lung cancer targeting human antibodies and therapeutic uses thereof
EP4428159A1 (en) 2023-03-10 2024-09-11 Istituto Romagnolo per lo Studio dei Tumori "Dino Amadori" - IRST S.r.l. Melanoma targeting human antibodies and therapeutic uses thereof
WO2024191785A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Genentech, Inc. Fusions with proteases and uses thereof
WO2024188965A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and an hla-g t cell bispecific antibody
US20240327522A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Genentech, Inc. Anti-alpha v beta 8 integrin antibodies and methods of use
WO2024206738A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Immunai Inc. Humanized anti-trem2 antibodies
WO2024211234A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211236A2 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211235A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024212827A1 (en) 2023-04-12 2024-10-17 Shanghai Kangabio Co., Limited Multifunctional molecules comprising masked interleukin 12 and methods of use
WO2024220546A2 (en) 2023-04-17 2024-10-24 Peak Bio, Inc. Antibodies and antibody-drug conjugates and methods of use and synthetic processes and intermediates

Family Cites Families (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US627375A (en) * 1899-06-20 Giulio serra zanetti
US4752601A (en) * 1983-08-12 1988-06-21 Immunetech Pharmaceuticals Method of blocking immune complex binding to immunoglobulin FC receptors
US5225539A (en) * 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6548640B1 (en) * 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
AU600575B2 (en) * 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US5204244A (en) * 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5047335A (en) * 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
US5419904A (en) * 1990-11-05 1995-05-30 The Regents Of The University Of California Human B-lymphoblastoid cell line secreting anti-ganglioside antibody
US5278299A (en) * 1991-03-18 1994-01-11 Scripps Clinic And Research Foundation Method and composition for synthesizing sialylated glycosyl compounds
US6582959B2 (en) * 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
WO1994004679A1 (en) * 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1993010260A1 (en) * 1991-11-21 1993-05-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Controlling degradation of glycoprotein oligosaccharides by extracellular glycosisases
GB9206422D0 (en) * 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
US5736137A (en) * 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US6180377B1 (en) * 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
US6086875A (en) * 1995-01-17 2000-07-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US6030613A (en) * 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5731168A (en) * 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5747035A (en) * 1995-04-14 1998-05-05 Genentech, Inc. Polypeptides with increased half-life for use in treating disorders involving the LFA-1 receptor
US5869046A (en) * 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5730977A (en) * 1995-08-21 1998-03-24 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Anti-VEGF human monoclonal antibody
US6277375B1 (en) * 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
AU743758B2 (en) * 1997-04-07 2002-02-07 Genentech Inc. Anti-VEGF antibodies
US20040191256A1 (en) * 1997-06-24 2004-09-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
US6172213B1 (en) * 1997-07-02 2001-01-09 Genentech, Inc. Anti-IgE antibodies and method of improving polypeptides
US6242195B1 (en) * 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
US6194551B1 (en) * 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) * 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
WO1999054342A1 (en) * 1998-04-20 1999-10-28 Pablo Umana Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
HU230769B1 (hu) * 1999-01-15 2018-03-28 Genentech Inc. Módosított effektor-funkciójú polipeptid-változatok
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7183387B1 (en) * 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6676927B1 (en) * 1999-01-20 2004-01-13 The Rockefeller University Animal model and methods for its use in the selection of cytotoxic antibodies
ES2601882T5 (es) * 1999-04-09 2021-06-07 Kyowa Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
US6703020B1 (en) * 1999-04-28 2004-03-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF
FR2807767B1 (fr) * 2000-04-12 2005-01-14 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps monoclonaux anti-d
WO2001079299A1 (en) * 2000-04-13 2001-10-25 The Rockefeller University Enhancement of antibody-mediated immune responses
US20060029604A1 (en) * 2000-06-28 2006-02-09 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GlcNAc2Man3GlcNAc2 glycoform
US20060024304A1 (en) * 2000-06-28 2006-02-02 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a Man5GlcNAc2 glycoform
US20060034828A1 (en) * 2000-06-28 2006-02-16 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GlcNAcMAN5GLCNAC2 glycoform
US20060034830A1 (en) * 2000-06-28 2006-02-16 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GalGlcNAcMan5GLcNAc2 glycoform
US7598055B2 (en) * 2000-06-28 2009-10-06 Glycofi, Inc. N-acetylglucosaminyltransferase III expression in lower eukaryotes
US6946292B2 (en) * 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7754208B2 (en) * 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
ATE507839T1 (de) * 2001-04-02 2011-05-15 Genentech Inc Kombinationstherapie
GB0118662D0 (en) * 2001-07-31 2001-09-19 Univ Southampton Binding agents
HUP0600342A3 (en) * 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) * 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20060024292A1 (en) * 2001-12-27 2006-02-02 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2 glycoform
US20060034829A1 (en) * 2001-12-27 2006-02-16 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a MAN3GLCNAC2 glycoform
US20040002587A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US8188231B2 (en) * 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7317091B2 (en) * 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20080152649A1 (en) * 2002-03-01 2008-06-26 Xencor, Inc. Optimized igf-1r antibodies and methods of using the same
US20040132101A1 (en) * 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20070148171A1 (en) * 2002-09-27 2007-06-28 Xencor, Inc. Optimized anti-CD30 antibodies
US8093357B2 (en) * 2002-03-01 2012-01-10 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
CA2481925A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Therapeutic agent for patients having human fc.gamma.riiia
US7217797B2 (en) * 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7361740B2 (en) * 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP2289936B1 (en) * 2002-12-16 2017-05-31 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
ES2897506T3 (es) * 2003-01-09 2022-03-01 Macrogenics Inc Identificación y modificación de anticuerpos con regiones Fc variantes y métodos de utilización de los mismos
US20090010920A1 (en) * 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8084582B2 (en) * 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
CN1802386B (zh) * 2003-06-12 2010-12-15 伊莱利利公司 Glp-1类似物融合蛋白质
US7758859B2 (en) * 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20050106667A1 (en) * 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
AU2004266159A1 (en) * 2003-08-22 2005-03-03 Biogen Idec Ma Inc. Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same
WO2005027966A2 (en) * 2003-09-05 2005-03-31 Genentech, Inc. Antibodies with altered effector functions
GB0324368D0 (en) * 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
EP1701979A2 (en) * 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
AU2004308439A1 (en) * 2003-12-22 2005-07-14 Centocor, Inc. Methods for generating multimeric molecules
US20060018911A1 (en) * 2004-01-12 2006-01-26 Dana Ault-Riche Design of therapeutics and therapeutics
DE602005016773D1 (de) * 2004-01-22 2009-11-05 Merck Patent Gmbh Antikrebs-antikörper mit reduzierter komplementfixierung
US20060009360A1 (en) * 2004-06-25 2006-01-12 Robert Pifer New adjuvant composition
EP1778728A2 (en) * 2004-08-19 2007-05-02 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US20060074225A1 (en) * 2004-09-14 2006-04-06 Xencor, Inc. Monomeric immunoglobulin Fc domains
EA011879B1 (ru) * 2004-09-24 2009-06-30 Эмджин Инк. МОЛЕКУЛЫ С МОДИФИЦИРОВАННЫМ Fc ФРАГМЕНТОМ
AU2005335714B2 (en) * 2004-11-10 2012-07-26 Macrogenics, Inc. Engineering Fc antibody regions to confer effector function
US20070135620A1 (en) * 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8367805B2 (en) * 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8802820B2 (en) * 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
WO2007008943A2 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 Xencor, Inc. Optimized anti-ep-cam antibodies
US7923538B2 (en) * 2005-07-22 2011-04-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Recombinant antibody composition
AU2009303526B2 (en) * 2008-10-14 2015-01-15 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP1443961A2 (en) 2004-08-11
MXPA04003798A (es) 2004-07-30
WO2003035835A3 (en) 2003-10-16
JP2010248228A (ja) 2010-11-04
CN1607960A (zh) 2005-04-20
AU2002337935B2 (en) 2008-05-01
HUP0600342A2 (en) 2006-08-28
CA2463879C (en) 2012-12-04
KR20040066105A (ko) 2004-07-23
HUP0600342A3 (en) 2011-03-28
US20070020260A1 (en) 2007-01-25
ES2326964T3 (es) 2009-10-22
KR100988949B1 (ko) 2010-10-20
EP1443961B1 (en) 2009-05-06
CN100423777C (zh) 2008-10-08
US20080095762A1 (en) 2008-04-24
IL220142A0 (en) 2012-07-31
NZ532526A (en) 2007-01-26
CA2463879A1 (en) 2003-05-01
BR0213761A (pt) 2005-04-12
IL161412A0 (en) 2004-09-27
US20110086050A1 (en) 2011-04-14
PL372709A1 (pl) 2005-07-25
JP2014076997A (ja) 2014-05-01
ATE430580T1 (de) 2009-05-15
DK1443961T3 (da) 2009-08-24
EP1443961A4 (en) 2005-11-23
US20030157108A1 (en) 2003-08-21
DE60232265D1 (de) 2009-06-18
JP2005532253A (ja) 2005-10-27
WO2003035835A2 (en) 2003-05-01
HK1076388A1 (en) 2006-01-20
US20100255013A1 (en) 2010-10-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100988949B1 (ko) 당단백질 조성물
US20220002430A1 (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
AU2002337935A1 (en) Glycoprotein compositions
ZA200701715B (en) Polypeptide variants with altered effector function
KR20080032065A (ko) 푸코실화 수준이 조절된 항체의 생성 방법
JP2002510481A (ja) 抗体変異体及びその断片
CA2740948A1 (en) Antibody variants and fragments thereof
ZA200504221B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
ZA200403000B (en) Glycoprotein compositions.