SK287835B6

SK287835B6 - Hemisynthetic method for preparing compounds

Info

Publication number: SK287835B6
Application number: SK1650-2001A
Authority: SK
Inventors: Carmen Cuevas; Marta Perez; Andres Francesch; Carolina Fernandez; Jose Luis Chicharro; Pilar Gallego; Maria Zarzuelo; La Calle Fernando De; Ignacio Manzanares
Original assignee: Pharma Mar, S. A.
Priority date: 1999-05-14
Filing date: 2000-05-15
Publication date: 2011-12-05
Also published as: NO328301B1; ATE283273T1; US7524956B2; RU2237063C9; CY1108095T1; NO322016B1; BRPI0110801B8; KR20020021636A; EP1185536A2; SK15272002A3; TR200103273T2; CN100475822C; PL353002A1; SI1185536T1; DE60016209D1; CN1360588A; CN1211386C; PT1185536E; SK287879B6; PL226890B1

Abstract

Intermediates, derivatives and related structures of ecteinascidin or other tetrahydroisoquinolinephenol compounds are prepared by hemisynthetic processes starting from natural bis(tetrahydroisoquinoline) alkaloids.

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka syntetických metód so zvláštnym dôrazom na polosyntetické metódy.

Doterajší stav techniky

Európsky patent 309 477 sa týka ekteinascidínov 729, 743, 745, 759A, 759B a 770. Bolo zistené, že zlúčeniny ekteinascidínov majú antibakteriálne a iné užitočné vlastnosti. Protinádorové vlastnosti ekteinascidínu

743 sa teraz overujú v klinických štúdiách.

Ekteinascidín 743 má komplexnú tris(tetrahydroizochinolínfenol)ovú štruktúru podľa všeobecného vzorca (I)

V súčasnosti sa táto zlúčenina pripravuje izoláciou z extraktov Ecteinascidin turbinata. Pretože výťažok 15 je malý, hľadajú sa iné spôsoby prípravy ekteinascidínov.

Syntetický proces prípravy zlúčenín ekteinascidínov je opísaný v US Patent 5 721 362. Patentovaná metóda je dlhá a komplikovaná, pozostávajúca z 38 príkladov, opisujúcich každý krok syntézy až po prípravu ekteinascidínu 743.

Patentový nárok číslo 25 z US nárokov 5 721 362 je zameraný na fenolový medziprodukt podľa všeobec20 ného vzorca (I), ktorý sa tak isto nazýva medziproduktom číslo 11. Táto zlúčenina má nasledovnú bis(tetrahydroizochinolínfenol)ovú štruktúru II:

kde MOM je metoxymetylová substitučná skupina a TBSPS je 3,5-t-butyldifenylsilylová substitučná skupina.

Z medziproduktu 11 je možné syntetizovať inú zaujímavú protinádorovú látku, ftalascidin. Pozri Proc.

Natl. Sci. USA, 96, 3496 - 3501, 1999. Ftalascidin je bis(tetrahydroizochinolín)ový derivát podľa všeobecného vzorca (III):

(IV),

V ekteinascidíne 743 má 1,4 mostík štruktúru podľa všeobecného vzorca (IV):

Ďalšie známe ekteinascidíny zahŕňajú zlúčeniny s inými systémami premostenia cyklických kruhov, ako je to napríklad v ekteinascidíne 722 a 736, kde mostík má štruktúru podľa všeobecného vzorca (V):

Ďalším príkladom je ekteinascidín 583 a 597, kde mostík má štruktúru podľa všeobecného vzorca (VI):

H¹

O

'nh₂ (VI),

Iným príkladom je ekteinascidín 594 a 596, kde mostík má štruktúru podľa všeobecného vzorca (VII):

(Vil), o

Kompletná štruktúra týchto a príbuzných zlúčenín je uvedená v J. Am. Chem. Soc., 1996. 118, 9 017 - 9

023. Odkaz na článok sa nachádza v zozname citovanej literatúry.

Ďalšie známe zlúčeniny neobsahujú systém premostených cyklických kruhov. Tieto zahŕňajú bis(tetrahydroizochinolínchinon)y - protinádorové a antímikrobiálne látky safracíny a saframycíny, a prírodné morské produkty renieramycíny a xestomycíny, izolované z kultúr mikróbov alebo húb. Všetky majú spoločnú dimerickú tetrahydroizochinolínovú uhlíkovú kostru. Podľa charakteru oxidácie aromatických kruhov je možné tieto zlúčeniny rozdeliť do štyroch typov I až IV.

Typ I alebo dimerické izochinolinochinóny predstavujú systém podľa všeobecného vzorca (VIII). Najčastejšie sa vyskytujú v tejto skupine zlúčenín - pozri tab. I:

Tab. I

Štruktúra saframycínových antibiotík typu I

(Vili)

Substitučná skupina

Zlúčenina	R^,4a	R^14b	R²¹	_R25a	R^25b	R25C
Saframicín A	H	H	CN	O	O	ch₃
Safŕamicín B	H	H	H	0	O	ch₃
Saframicín C	H	och₃	CN	0	0	ch₃
Saframicín G	H	OH	CN	0	o	ch₃
Saframicín H	H	H	CN	OH	CH₂COCH₃	ch₃
Saframicín S	H	H	OH	0	0	ch₃
Saframicín Y₃	H	H	CN	O	o	ch₃

saframicín Yd[	H	H	CN	nh₂	H	c₂h₅
saframicín Ad]	H	H	CN	0	0	c₂h₅
saframicín Yd₂	H	H	CN	nh₂	H	H
saframicín Y₂b	H	Q^b	CN	nh₂	H	ch₃
saframicín Y_2b._d	H	Q^b	CN	nh₂	H	c₂h₅
saframicín AH₂	H	H	CN	H^a	OH^a	ch₃
saframicín AH₂Ac	H	H	CN	H	OAc	ch₃
saframicín AH,	H	H	CN	OH^a	H^a	ch₃

saframicín AH,Ac H

H CN OAc

CH₃ saframicín AR₃

H H H H

OH CH₃ ^a navzájom zameniteľné ^b kde skupina Q má všeobecný vzorec (IX):

Aromatické kruhy typu I sa nachádzajú v saframycínoch A, B, C, G, H a S, ktoré je možno izolovať zo Straptomyces lavendulae v malom množstve. Kyano derivát safŕamycínu A, ktorý sa nazýva kyanochinonamín, je známy z japonského kokai JP-A2 59/225 189 a 60/084 288. Saframycíny Y₃, Yd_b Ad, a Yd₂ boli pripravené z organizmu S. lavendulae procesom priamej biosyntézy pri vhodnej suplementácii média, v ktorom organizmus rástol. Rovnako boli vytvorené diméry saframycínov Y_2b a Y_2b._d vytvorené naviazaním dusíka na C-25 jednej podjednotky na C-14 druhé podjednotky. Tieto zlúčeniny pochádzajú z kultúr S. lavendulae rastúcich v suplementovaných médiách. Saframycín ARi(= AH₂), mikrobiálny produkt redukcie safŕamycínu A na C-25, vytvorený mikroorganizmom Rhodococcus amidohpilus bol tiež pripravený nonstereoselektívnou chemickou redukciou saframycínu A pomocou borohydrátu sodného ako zmes epimérov 1 : 1, za ktorou na15 sledovala chromatografická separácia (druhý AH] izomér je menej polárny).

Produkt ďalšej redukcie, saframycín AR₃, 21-dekyano-25-dihydro-saframycín A, (t. j. 25-dihydrosaframycín B) bol vytvorený rovnakou mikrobiálnou konverziou. Iným typom mikrobiálnej konverzie saframycínu A pomocou Nocardia spec. bol vytvorený saframycín B a ďalšou redukciou mikroorganizmom Mycobacterium spec. bol vytvorený saframycín AH’Ac. Pre biologické experimenty boli tak isto pripravené 25-020 -acetáty saframycínu AH₂ a AH_b

Zlúčeniny typu I podľa všeobecného vzorca (X) boli izolované z morských sasaniek - pozri tab. 2

Tab. 2

Štruktúry zlúčenín typu I pochádzajúcich z morských sasaniek

Substituent

R^14a R^14b R²¹ R

renieramicín A	OH	H	H	-C(CH₃) = CH-CH;
renieramicín B	OC₂H₅	H	H	-C(CH₃) = CH-CH;
renieramicín C	OH	0	0	-C(CH₃) = CH-CH;
renieramicín D	OC₂H₅	O	0	-C(CH₃) = CH-CH;
renieramicín E	H	H	OH	-C(CH₃) = CH-CH;
renieramicín F	och₃	H	OH	-C(CH₃) = CH-CH;
xestomycín	och₃	H	H	-ch₃

Renieramycíny A až D boli izolované z antimikrobiálneho extraktu huby Reniera spec., pochádzajúcej z 5 Mexika, spoločne s biogeneticky príbuznými monomerickými izochinolínmi, ako sú renieron a príbuzné zlúčeniny.

Štruktúra renieramycínu A bola pôvodne stanovená pomocou invertovanej stereochémie na C-3, C-11 a C-13. Dôkladným rozborom dát získaných pomocou 'H NMR analýzy príbuzných zlúčenín renieramycínu E a F, izolovaných z rovnakej sasanky nájdenej v Palau, bolo zistené, že spojenie kruhov renieramycínov je identické so spojením kruhov nájdených pri saftamycínoch. Toto zistenie viedlo k záveru, že pôvodne stanovená stereochémia renieramycínov A až D musí byť rovnaká ako pri saftamycínoch.

Xestomycín bol nájdený v sasanke Xestospongia spec., žijúca vo vodách Srí Lanky.

Zlúčeniny typu II podľa všeobecného vzorca (XI) nesúci redukovaný hydrochinónový kruh zahŕňajú saframycíny D a F, izolované zo 5. lavendulae a saframycíny Mx-1 a Mx-2 izolované z Myxococcus xanthus.

Pozri tab. 3.

Tab. 3

Zlúčeniny typu II

OCH₃

Substituenty

Zlúčenina	R^14a	R^14b	R²¹	_R25a	R^25b	_r25c
saframicín D	0	0	H	0	O	ch₃
saframicín F	0	0	CN	0	0	ch₃
saframicín Mx-1	H	OCH₃	OH	H	CH₃	nh₂
saframicín Mx-2	H	och₃	H	H	ch₃	nh₂

Kostra typu III bola nájdená v antibiotikách safracín A a B, izolovaných z kultúry Pseudomonas fluórescens.

Tieto antibiotiká podľa všeobecného vzorca (XII) sa skladajú z tetrahydroizochinolínchinonovej a tetrahydroizochinolínfenolovej podjednotky, kde >21

jX/CH, (XII),

R je -H v safracíne A a -OH v safiacíne B.

Saftamycín R, jediná zlúčenina, klasifikovaná ako zlúčenina nesúca kostru typu IV, bol rovnako izolovaný zo S. lavendulae. Táto zlúčenina podľa všeobecného vzorca (XIII), pozostávajúca z hydrochinónového kruhu s postranným glykolesterovým reťazcom na jednom z fenolických kyslíkov je pravdepodobne výhodnejší ako saframycín A, a to vďaka jej miernej toxicite.

Všetky tieto známe zlúčeniny majú systém fuzovaných piatich kruhov A až E, ako je to znázornené na nasledovnej štruktúre všeobecného vzorca (XIV):

(XIV).

V ekteinascidínoch a niektorých ďalších zlúčeninách sú kruhy A a E fenolické, zatiaľ čo v iných zlúčeninách, najmä v saframycínoch, sú kruhy A a E chinónové. V známych zlúčeninách sú kruhy B a D tetrahydro, pričom kruh C je perhydro.

Predmetom vynálezu je potreba výroby aktívnych zlúčenín so systémom fuzovaných piatich kruhov zo zlúčenín dnes známych. Tak isto je predmetom potreba vývoja alternatívnych ciest na syntézu ekteinascidínov a príbuzných zlúčenín. Takéto spôsoby syntézy znamenajú omnoho ekonomickejší prístup k už známym protinádorovým látkam, a tiež dovoľujú prípravu nových aktívnych zlúčenín.

Podstata vynálezu

Vynález je zameraný na použitie známej zlúčeniny safŕacín B, nazývanou tiež chinónamín, v polosyntetickej syntéze.

Všeobecnejšie, vynález je podobný polosyntetickému spôsobu prípravy medziproduktov, derivátov a príbuzných štruktúr ekteínascidínu alebo iných zlúčenín tetrahydroizochinolínfenolu, počínajúc z prírodných bis(tetrahydroizochinolín)-ových alkaloidov. Vhodný východiskový materiál polosyntetického procesu obsahuje triedy saframycínových a safracínových antibiotík, nachádzajúcich sa v kultivačných médiách rôznych mikroorganizmov, ako aj triedy zlúčenín reineramycínu a xestomycínu, nachádzajúcich sa v morských sasankách.

Všeobecný vzorec (XV) východiskových zlúčenín je nasledovný:

kde R¹ je amidometylová skupina ako napríklad -CH2-NH-CO-CR^25aR^25bR^25c, kde R^25b tvorí keto-skupina alebo jedna je -OH, -NH2 alebo -OCOCH₃ a druhá je -CH₂COCH₃, -H, -OH alebo -OCOCH₃, keď R^25a je -OH alebo -NH2, potom R^25b nie je -OH a R^25c je -H, -CH3 alebo -CH₂CH₃, alebo R¹ je acyloxymetylénová skupina ako napríklad -CH₂-O-CO-R, kde R je -C(CH₃) = CH-CH₃ alebo -CH₃, kde R⁵ a R⁸ sú vybrané nezávisle z -H, -OH alebo -OCOCH₂OH, alebo R⁵ a R⁸ sú obidva keto a kruh A je p-benzochinónový,

R^l4a _a j^i4b _S1j -H alebo jeden je -H a druhý je -OH, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^,4b tvoria spoločne keto skupinu,

R¹⁵ a R¹⁸ sú vybrané nezávisle z -H alebo -OH, alebo R⁵ a R⁸ sú obidva keto a kruh A je p-benzochinónový a kde R²¹ je -OH alebo -CN.

Všeobecnejší vzorec tejto triedy zlúčenín je znázornený neskôr:

kde substitučné skupiny definované ako R_b R₂, R₃, R4, R5, Re, R?, R₈, R9, Rio sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -H, -OH, OCH₃, CN, = O, CH₃;

kde X predstavuje rôzne amidové alebo esterové funkčné skupiny obsiahnuté v prírodných produktoch; kde každý bodkovaný kruh predstavuje jednu, dve alebo bi prípadné dvojité väzby.

V predkladanom vynáleze sa definujú polosyntetické postupy na prípravu medziproduktov obsahujúcich medziprodukt 11, a teda na prípravu zlúčenín ekteinascidínu, ako aj ftalascidínu a prídavných zlúčenín. Polosyntetické postupy vynálezu obsahujú veľký počet krokov potrebných na dosiahnutie žiadaného produktu. Každý samostatný krok je proces súvisiaci s predkladaným vynálezom. Vynález nieje obmedzený len na postupy tu uvedené; alternatívne postupy, ako napríklad zmena poradia jednotlivých krokov, sú tak isto možné.

Tento vynález je založený na dostatočnom množstve 21-kyanovej východiskovej zlúčeniny všeobecného vzorca (XVI):

OCHa

(XVI), kde R¹, R⁵, R⁸, R¹⁵ a R¹⁸ sú opísané.

Iné zlúčeniny všeobecného vzorca (XVI) s rôznymi substituentmi v polohe 21 tak isto predstavujú možný východiskový materiál. Všeobecne, akýkoľvek derivát, ktorý je možné vyrobiť nukleofilným nahradením 21-hydroxylovej skupiny zlúčenín všeobecného vzorca (XV), kde R²¹ je hydroxylová skupina, je derivátom kandidátnym. Príklady vhodných 21-substituentov obsahujú nasledovné funkčné skupiny, ale nie sú na ne obmedzené:

merkapto-skupina;

alkyltio skupina (alkylová skupina s 1 až 6 uhlíkovými atómami);

aryltio skupina (arylová skupina so 6 až 10 uhlíkovými atómami, nesubstituovaná alebo substituovaná 1 až 5 substituentmi, vybranými napríklad z: alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka, alkoxy skupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, halogénové atómy, merkapto skupiny a nitro skupiny);

amino-skupina;

mono alebo dialkylamino-skupina (táto alebo každá alkylová skupina má 1 až 6 uhlíkových atómov);

mono alebo diarylamino-skupina (táto alebo každá arylo skupina definovaná rovnako ako spomenuté aryltio skupiny);

α-karbonylalkyl skupina všeobecného vzorca -C(R^a)(R^b)-C(= O)R^C, kde

R^a a R^b sú vybrané z atómov vodíka, alkylových skupín s 1 až 20 atómami uhlíka, arylových skupín (ako je definované v súvislosti s aryltio skupinami) a aralkyl-skupín (v ktorých alkylová skupina s 1 až 4 atómami uhlíka je nahradená arylovovu skupinou, definovanou v súvislosti s aryltio-skupinami), s podmienkou, že jeden z R^a a R^b je atóm vodíka;

R^c je vybraný z atómov vodíka, alkylové skupiny s 1 až 20 atómami uhlíka, arylových skupín (ako je definované v súvislosti s aryltio skupinami), aralkylové skupiny (v ktorých alkylová skupina s 1 až 4 atómami uhlíka je nahradená arylovovu skupinou, definovanou v súvislosti s aryltio skupinami), alkoxy-skupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, amino-skupiny a mono- alebo dialkylamino skupiny, ako je uvedené.

Zo všeobecnejšieho hľadiska súvisí predkladaný vynález s procesmi, v ktorých je prvým krokom príprava 21-derivátu pri použití nukleofilného činidla. Zlúčeniny tohto druhu sa nazývajú 21-Nuc zlúčeniny.

Prítomnosť 21-kyano-skupiny je potrebná pre niektoré konečné produkty, predovšetkým ekteinascidín 770 a ftalascidín, pokiaľ pre iné konečné produkty pôsobí ako ochranná skupina, ktorá môže byť okamžite premenená na iný substituent, ako napríklad 21-hydroxy skupinu ekteinascidínu 743 alebo 21-hydroxyftalascidínu. Zavedenie 21-kyano zlúčeniny ako východiskového materiálu výrazne stabilizuje molekulu počas ďalších syntetických krokov, nezje prípadne odstránená. Iné 21-Nuc zlúčeniny ponúkajú túto a iné výhody.

Z jedného dôležitého hľadiska spočíva predkladaný vynález v použití 21-kyano zlúčeniny so všeobecným vzorcom (XVI) pri príprave bis- alebo tris(tetrahydroizochinolínfenol)ových zlúčenín. Produkty, ktoré sa pripravia, zahŕňajú medziprodukty, ako napríklad medziprodukt 11a ekteinascidíny a ftalascidín, ako aj nové a známe zlúčeniny príbuznej štruktúry.

Výhodným východiskovým materiálom sú zlúčeniny všeobecného vzorca (XV), kde R¹⁴“ a R^14b sú obidva atómy vodíka. Vhodným východiskovým materiálom sú také zlúčeniny všeobecného vzorca (XV) alebo (XVI), kde R¹⁵ je atóm vodíka. Ďalším výhodným východiskovým materiálom sú zlúčeniny všeobecného vzorca (XV) alebo (XVI), kde kruh E je fenolový. Výhodným východiskovým materiálom sú zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (XV) alebo (XVI), kde aspoň jeden, lepšie aspoň dva alebo tri z R⁵, R⁸, R¹⁵ a R¹⁸ nie sú atómy vodíka.

Príklady vhodného východiskového materiálu pre tento vynález zahŕňajú saframycín A, saframycín B, safŕamycín C, safŕamycín G, saframycín H, safŕamycín S, saframycín Y₃, saframycín Y_dl, safŕamycín A_dl, saframycín Y_d2, safŕamycín AH₂, saframycín AH₂Ac, safŕamycín AH,, saframycín Al-f Ac, safŕamycín AR₃, renieramycín A, renieramycín B, renieramycín C, renieramycín D, renieramycín E, renieramycín F, xestomycín, safŕamycín D, safŕamycín F, safŕamycín Mx-1, safŕamycín Mx-2, safracín A, safracín B a saframycín R.

Vhodný východiskový materiál má kyano skupinu v polohe 21 (pre skupinu R²¹).

Zvlášť významnou okolnosťou je, že vynález zahrnuje polosyntetický proces, v ktorom sa transformačné kroky týkajú safracínu B.

Safracín B predstavuje kruhový systém priamo príbuzným s ekteinascidínmi. Táto zlúčenina má rovnakú pentacyklovú štruktúru a rovnaký substitučný vzorec aromatického kruhu E. Tak isto je safracín B veľmi podobný niektorým syntetickým medziproduktom celkovej syntézy ET-743, predovšetkým medziproduktu 11.

Medziprodukt tohto druhu sa mení na ET-743 pomocou dobre uplatnenej metódy. Syntetická konverzia safracínu B v medziprodukte 11 totiž predstavuje polosyntetickú metódu na získanie ET-743.

Týmto spôsobom sa zo safracínu B pripraví medziprodukt 11 a zlúčeniny odvodené od medziproduktu 11, konkrétne zlúčeniny ekteinascidínu. Ďalej sa zo safracínu B pripraví ftalascidín. Predkladaný vynález súvisí s použitím safracínu B v príprave medziproduktu 11, ftalascidínu, zlúčenín ekteinascidínu a iných medziproduktov vynálezu. Vynález tak isto súvisí so zlúčeninami opísanými v predkladanom vynáleze a so zlúčeninami odvodenými od iných uvedených vhodných východiskových materiálov, ako aj s použitím týchto zlúčenín pri príprave týchto zlúčenín.

Výhodnejšie východiskové produkty tohto vynálezu majú 21-kyano skupinu. V súčasnosti najvýhodnejšou zlúčeninou predkladaného vynálezu je zlúčenina podľa všeobecného vzorca (2). Tento produkt sa získa priamo zo safracínu Báje považovaný za kľúčový medziprodukt v polosyntetickom procese.

(2),

Kyanosafracín B sa pripravuje kvasením safracínu B produkujúceho kmeňa Pseudomonas fluorescens a spracovaním kultivačného média pomocou kyanidového iónu. Výhodným kmeňom Pseudomonas fluorescens je kmeň A2-2, FERM BP-14, ktorý sa využíva pri príprave EP 055, 299. Vhodným zdrojom kyanidové5 ho iónu je kyanid draselný. Kultivačné médium sa prefiltruje a pridá sa nadbytok kyanidového iónu. Po jednej hodine trepania sa upraví pH na hodnotu 9,5 a po organickej extrakcii sa získa hrubý bunkový extrakt. Následnou purifíkáciou hrubého extraktu sa získa kyanosafracín B.

Stereochémia uvedená v tomto patente je založená na poznatkoch správnej stereochémie prírodných produktov. V prípade, že by bola odhalená chyba v použitej stereochémii, je potrebné urobiť potrebné opravy vo vzorkách v rozsahu celého patentu.

Z dôvodu, že uvedené syntézy je možné modifikovať, sa tento vynález rozširuje o stereoizoméry. Produkty tohto vynálezu sú typické podľa všeobecného vzorca (XVIIb):

kde:

R¹ is aminometylénová skupina, chránená aminometylénová skupina, derivatizovaná aminometylénová skupina, hydroxymetylénová skupina, chránená hydroxymetylénová skupina alebo derivatizovaná hydroxymetylénová skupina; a

R⁴je-H; alebo

R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII):

R⁵ je-H, -OH;

R⁷ je -OCH3 a R⁸ je -OH alebo R⁷ a R⁸ spoločne tvoria skupinu -O-CH2-O-;

R^14a a R^l4b sú obidve -H alebo jedno je -H a druhé je -OH, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^14b spoloč25 ne tvoria ketoskupinu;

R¹⁵ je-H, -OH;

R²¹ je -H, -OH alebo -CN;

a deriváty;

a vyrábajú sa z 21-kyano zlúčeniny vzorca (XVIb):

kde:

R¹ je amidometylénová skupina alebo acyloxymetylénová skupina;

R⁵ a R⁸ sú nezávisle vybrané z -H, -OH alebo -OCOCH₂OH, alebo R⁵ a R⁸ sú obidve ketoskupiny a kruh A je p-benzochinónový kruh;

R¹² je -H, -CH₃ alebo -CH₂CH₃;

R^,4a a R^l4b sú obidve -H alebo jedna je -H a druhá je -OH, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^14b spoločne tvoria keto skupinu; a

R¹⁵ a R¹⁸ sú nezávisle vybrané z -H alebo -OH, alebo R¹⁵ a R¹⁸ sú obidve ketoskupiny a kruh E je p-benzochinónový kruh;

za predpokladu, že najmenej jeden z kruhov A alebo E je p-benzochinónový kruh, pričom reakcie spôsobu obsahujú podľa potreby:

a) konverziu chinónového systému pre kruh E na fenolový systém;

b) konverziu chinónového systému pre kruh A na fenolový systém;

c) konverziu fenolového systému pre kruh A na metyléndioxyfenolový kruh;

d) tvorbu mostíkového spirokruhového systému vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII) cez polohu 1 a polohu 4 v kruhu Ä;

e) derivatizáciu;

f) konverziu 21 -kyano substituenta na substituent -H alebo -OH;

za poskytnutia požadovanej zlúčeniny vzorca (XVIIb).

Skupina R¹ môže byť acylovaná na skupine NH₂, a napríklad N-acylové deriváty sa pripravia zo skupín -CH₂-NH₂ a -CH₂-NH-aa. Acyl deriváty môžu byť N-acyl deriváty alebo z nich N-tioacyl deriváty, rovnako ako cyklické amidy.

Na ilustráciu, acyl skupiny môžu byť alkanoyl, haloalkanoyl, arylalkanoyl, alkenoyl, heteocyklylacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroaroyl alebo iné acyl skupiny. Acyl skupiny majú všeobecný vzorec -CO-R^a, kde R^a predstavuje rôzne skupiny ako napríklad alkyl, alkoxy, alkylén, arylalkyl, arylalkylén, aminoacyl alebo heterocyklyl, každý prípadne substituovaný halo, kyano, nitro, carboxyalkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, heterocyklyl, heterocyklyloxy, alkyl, amino alebo substituovanú amino skupinu.

Iné alkylujúce látky zahrnujú izotiokyanáty, ako napríklad aryl izotiokyanáty, najmä fenyl izokyanát. Alkyl, alkoxy alebo alkylénová skupina R^a má výhodne 1 až 6 až 12 atómov uhlíka a môže byť lineárna, vetvená alebo cyklická. Arylové skupiny sú typicky fenyl, bifenyl alebo naftyl.

Heterocyklylové skupiny môžu byť aromatické alebo čiastočne alebo úplne nenasýtené a výhodne majú 4 až 8 kruhových atómov, najvýhodnejšie 5 alebo 6 kruhových atómov, s jedným alebo viacerými heteroatómami, ktorými sú buď dusík, síra alebo kyslík.

Aby bol zoznam kompletný, typické R^a skupiny zahrnujú alkyl, haloaikyl, alkoxyalkyl, haloalkoxyalkyl, arylalkylén, haloalkylarylalkylén, acyl, haloacyl, arylalkyl, alkenyl a aminokyselinu.

Napríklad R^a-CO môže byť acetyl, trifluoroacetyl, 2,2,2-trichloroetoxykarbonyl, izovalerylkarbonyl trans-3-(trifluorometyl)cinamoylkarbonyl, heptafluorobutyryl-carbonyl, dekanoylkarbonyl, trans-cinamoylkarbonyl, butyrylkarbonyl, 3-chloro-propyonylkarbonyl, cinamoylkarbonyl, 4-metylcinamoylkarbonyl, hydrocinamoyl-karbonyl alebo trans-hexenoylkarbonyl, alebo alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, izoleucyl, leucyl, lyzyl, metionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, treonyl, tyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl, ako aj iné menej známe amino acyl skupiny, ako aj ftalimido a iné cyklické amidy. Iné príklady je možné nájsť v zozname chrániacich skupín.

Zlúčeniny, kde -CO-R^a je odvodený od aminokyseliny a obsahuje amino skupinu, môžu samé tvoriť acylové deriváty. Vhodné N-acylové zlúčeniny zahrnujú dipeptidy, ktoré sú obratom schopné tvoriť N-acylové deriváty.

V jednej modifikácii, ktorá sa týka medziproduktov, je kruh A zmenený tak, že inkorporuje podštruktúru, uvedenú ako zlúčenina podľa všeobecného vzorca (XX) alebo (XXI), ako bude uvedené.

V inej modifikácii, ktorá sa týka medziproduktov, môže byť skupina R¹ -CH₂O-CO-Cfu-CH₂-S-Prot³ odvodená od zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (XIX), kde Prot³ a Fu majú naznačené významy. V takom prípade R⁷ a R⁸ tvoria oxymetylénoxy skupinu. Skupina R¹⁸ je obvykle chránená. R²¹ je obvykle kyano.

R^14a a R^14b sú výhodne atómy vodíka. R¹⁵ je výhodne atóm vodíka. O-acylové deriváty sú výhodne alifatické O-acyl deriváty, hlavne acylové deriváty veľkostí 1 až 4 uhlíkových atómov, a typicky je to O-acetylová skupina, predovšetkým na pozícii 5.

Vhodné chrániace skupiny pre fenoly a hydroxy skupiny zahrnujú étery a estery, ako sú alkyl, alkoxyalkyl, aryloxyalkyl, alkoxyalkoxylalkyl, alkylsilylalkoxylalkyl, alkyltioalkyl, aryltioalkyl, azidoalkyl, cyanoalkyl, chloroalkyl heterocyklyl, arylacyl, haloarylacyl, cycloalkylalkyl, alkenyl, cykloalkyl, alkylarylalkyl, alkoxyarylalkyl, nitroarylalkyl, haloarylalkyl, alkylaminokarbonylarylalkyl; alkylsulfinylarylalkyl, alkylsilyl a iné étery, rovnako ako arylacyl, arylalkylkarbonát, alifatický karbonát, alkylsulfinylarylalkyl karbonát, alkyl karbonát, arylhaloalkyl karbonát, arylalkenyl karbonát, aryl karbamát, alkyl fosfmyl, alkylfosfmotioyl, aryl fosfinotioyl, arylalkyl sulfonát a iné estery. Tieto skupiny sa prípadne môžu nahradiť uvedenými skupinami v R¹.

Vhodné chrániace skupiny amínov zahrnujú karbamáty, amidy a iné chrániace skupiny, ako napríklad alkyl, arylaldyl, sulfo- alebo halo-arylalkyl, haloalkyl, alkylsilylalkyl, arylalkyl, cykloalklylalkyl, alkylarylalkyl, heterocyklylalkyl, nitroarylalkyl, acylaminoalkyl, nitroarylditioarylalkyl, dicylkoalkylkarboxamidoalkyl, cykloalkyl, alkenyl, arylalkenyl, nitroarylalkenyl, heterocyklylalkenyl, heterocyklyl, hydroxyheterocyklyl, alkylditio, alkoxy- alebo halo-, alebo alkylsulfinyl arylalkyl, heterocyklylacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroalroyl a iné amidy, ako aj alkyl, aldenyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkoxyalkyl, kyanoalkyl, haetrocyklyl, alkoxyarylalkyl, cykloalkyl, nitroaryl, arylalkyl, alkoxy- alebo hydroxy-arylalkyl a mnoho iných skupín. Tieto skupiny sa prípadne môžu nahradiť uvedenými skupinami v R¹.

Príklady chrániacich skupín sú uvedené v nasledujúcich tabuľkách:

Ochrana -OH skupiny

Éter Skratka metyl metoxymetyl MOM benzyloxymetyl BOM metoxyetoxymetyl MEM

2-(trimetylsilyl)etoxymetyl SEM metyltiometyl MTM phenyltiometyl PTM azidometyl cyanometyl

2,2-dichloro-1,1 -difluoroetyl

2-chloroetyl

2-bromoetyl tetrahydropyranyl THP

1-etoxyetyl EE phenacyl

4-bromophenacyl cyklopropylmetyl allyl propargyl izopropyl cyklohexyl í-butyl benzyl

2.6- dimetylbenzyl

4-metoxybenzyl MPM/PMB o-nitrobenzyl

2.6- dichlorobenzyl

3,4-dichlorobenzyl

4-(dimetylamino)carbonylbenzyl

4-metylsuflinylbenzyl Msib

9-antrylmetyl

4-picolyl

heptafluoro-p-tolyl tetrafluoro-4-pyridyl
trimetylsilyl	TMS
Z-butyldimetylsilyl	TBDMS
Z-butyldiphenylsilyl	TBDPS
triizopropylsilyl	TIPS
Estery aryl formiát aryl acetát aryl levulinát aryl pivaloát aryl benzoát aryl 9-fluorocarboxylát	ArOPv
aryl metyl caTbonát 1-adamantyl carbonát Z-butyl carbonát	BOC-OAr
4-metylsulfinylbenzyl carbonát	Msz-Oar
2,4-dimetylpent-3-yl carbonát aryl 2,2,2-trichloroetyl carbonát aryl vinyl carbonát uryl benzyl carbonát uryl carbamát	Doc-Oar
dimetylphosphinyl	Dmp-OAr
dimetylphosphinotioyl	Mpt-OAr
diphenylphosphinotioyl	Dpt-OAr
aryl metanesulfonát aryl toluénesulfonát aryl 2-formylbenzenesulfonát

Karbamáty

Ochrana -NH₂ skupiny Skratka metyl etyl

9-fluorenylmetyl

9-(2-sulfo)fluroenylmetyl

9-(2,7-dibromo)fluorenylmetyl 17-tetrabenzol[a,c,g,i]fluorenylmetyl 2-chloro-3 -indenylmetyl benz[f] inden-3 -ylmetyl

2,7-di-Z-butyl[9-( 10,10-dioxo-10,10,10,10 tetrahydrotioxantyl)]metyl

2,2,2-trichloroetyl

2-trimetylsilyletyl

2-fenyletyl

-(1 -adamantyl)-1 -metyletyl

2-chloroetyl

1,1 -dimetyl-2-chloroetyl

1,1 -dimetyl-2-bromoetyl

1,1 -dimetyl-2,2-dibromoetyl

1,1 -dimetyl-2,2,2_trichloroetyl 1 -metyl-1 -(4-bifenyl)etyl 1 -(3,5-di-Z-butylfenyl)-1 -1 -metyletyl

Fmoc

Tbfmoc

Climoc

Bimoc

DBD-Tmoc

Troc

Teoc hZ

Adpoc

DB-Z-BOC

TCBOC

Bpoc

Z-Burmeoc

2-(2'-and 4'-pyridyl)etyl

2,2-bis(4 '-nitrofenyl)etyl n-(2-pivaloylamino)-1,1 -dimetyletyl

2-[(2-nitrofenyl)ditio]-1 -fenyletyl

2-(n,n-dicyklohexylcarboxamido)etyl ŕ-butyl

1- adamantyl

2- adamantyl vinyl allyl

1-izopropylallyl cinnamyl

4-nitrocinnamyl

3- (3'-pyridyl)prop-2-enyl

8- chinolyl n-hydroxypiperidinyl alkylditio benzyl

77-metoxybenzyl />-nitrobenzyl p-bromobenzyl p-chlorobenzyl

2,4-dichlorobenzyl

4- metylsulfmylbenzyl

9- antrylmetyl difenylmetyl phenotiazinyl-( 10)-carbonyl n-p-toluenesulfonylaminocarbonyl n '-/3-fenylaminotiocarbonyl

Amidy formamid acetamid chloroacetamid trifluoroacetamid fenylacetamid

-fény lpropanamid pent-4-enamid picolinamid pyridylcarboxamid benzamid μ-fenylbenzamid «-phtalimid n -tetrachlorophtalimid

4-nitro-«-phtalimid «-ditiasuccinimid «-2,3-difenylmaleimid «-2,5-dimetylpyrrol n -2,5 -bis(triizopropylsiloxyl)pyrrol n-1,1,4,4-tetrametyldisiliazacyclopentant addukt 1,1,3,3-tetrametyl-1,3-disilaisoindolín

Zvláštne -NH chrániace skupiny n-metylamín «-ŕ-butylamín n-allylamín n-[2 trimetylsilyl)etoxy]metylamín n-3 -acetoxypropylamín n -cy anomety lamín n-(l-izopropyl-4-nitro-2-oxo-3-pyrrolin-3-yl)amín

Pyoc

Bnpeoc

NpSSPeoc

BOC

1- Adoc

2- Adoc Voc

Aloc or Alloc

Ipaoc

Coc

Noc

P aloc

Cbz/Z

Moz

PNZ

Msz

TFA

TCP

Dts

BIPSOP

STABASE

BSB

SEM

«-2,4-dimetoxybenzylamín	Dmb
2-azanorbomenes «-2,4-dinitrofenylamín w-benzylamín	Bn
«-4-metoxybenzylamín	MPM
«-2,4-dimetoxybenzylamín	DMPM
«-2-hydroxybenzylamín	Hbn
«-(difenylmetyl)amino	DPM
«-bis(4-metoxyfenyl)metylamín n-5 -dibenzosuberylamín	DBS
«-trifenylmetylamín	Tr
«-[(4-metoxyfenyl)difenylmetyl]amino	MMTr
«-9-fenylflurenylamín	Pf
«-ferrocenylmetylamín	Fcm
«-2-picolylamine «'-oxid «-1,1 -dimetyltiometylénamín «-benzylideneamín «-p-metoxybenzylideneamín «-difenylmetyleneamín «-(5,5-dimetyl-3-oxo-1 -cyklohexenyljamín «-nitroamín «-nitrosoamín difenylfosfmamid	DPP
dimetyltiofosfinamid	Mpt
difenyltiofosfinamid	Ppt
dibenzyl fosforamidát 2-nitrobenzenesulfenamid	Nps
«-1 -(2,2,2-trifluoro-1,1 -difenyl)etylsufenamid.	TDE
3-nítro-2-pyridinesulfenamid	Npys
p-toluenesulfonamid	Ts
benzenesulfonamid

Safracín B obsahuje alanylový postranný reťazec. Bolo zistené, že chránenie voľnej amino skupiny Boe skupinou je veľmi osožné.

Konkrétne ekteinascidínové produkty tohto vynálezu zahrnujú zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (XVIII):

(XVIII), kde R¹ a R⁴ tvoria skupinu podľa všeobecného vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII):

zriedkavo skupinu podľa všeobecného vzorca (IV) alebo (V);

R²¹ je -H, -OH alebo -CN, zriedkavo -OH alebo -CN;

a ich acylové deriváty, zriedkavo 5-acyl deriváty zahrnujúce 5-acyl derivát.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príprava ekteinascidínu 743 a príbuzných zlúčenín

Všeobecne, premena 21-kyano východiskovej zlúčeniny na ekteinascidín - napríklad podľa všeobecného vzorca (XVIII) - zahrnuje:

a) v prípade potreby premenu E kruhu chinónového systému na systém fenolový,

b) v prípade potreby premenu A kruhu chinónového systému na systém fenolový,

c) premenu A kruhu fenolového systému na metyléndioxyfenolový kruh,

d) tvorbu premosteného spiro kruhového systému podľa všeobecného vzorca (IV), (VI) alebo (VII) cez pozíciu 1 a 4 kruhu B; a

e) derivatizáciu, podľa potreby, ako napríklad acylácia.

Krok (a) - v prípade potreby premena E kruhu chinónového systému na systém fenolový, sa uskutoční obvyklým redukčným procesom. Vhodným reakčným systémom je vodík s paládiovo-uhlíkovým katalyzátorom, aj keď je možné použiť akýkoľvek iný redukčný systém.

Krok (b) - v prípade potreby premena A kruhu chinónového systému na systém fenolový, je analogický kroku (a).

Krok (c) - premena A kruhu fenolového systému na metyléndioxyfenolový kruh, môže byť ovplyvnený rôznymi spôsobmi, pravdepodobne spoločne s krokom (b). Napríklad, chinónový kruh môže byť demetylovaný na metoxy skupine na pozíciu 7 a redukovaný na dihydrochinón a zachytený vhodnou elektrofilnou látkou ako napríklad CH₂Br₂, BrCH₂Cl alebo podobnou dvojmocnou látkou, čím sa priamo získa metyléndioxy kruhový systém, alebo pomocou dvojmocného reagentu ako napríklad tiokarbonyldiimidazol, čím sa získa substituovaný metyléndioxy kruhový systém, ktorý sa môže konvertovať na želaný kruh.

Krok (d) je typicky ovplyvnený vhodnou substitúciou na pozíciu 1 pomocou premosťovacieho reagentu, ktorý napomáha formovaniu želaného mostíka tým, že tvorí exendo chinónmetid na pozícii 4 a dovoľuje metidu reagovať s 1-substituentom pri tvorbe premostenej štruktúry. Výhodne používané premosťovacie reagenty sú podľa všeobecného vzorca (XIX):

Prot

(XIX), kde Fu predstavuje chránenú funkčnú skupinu, ako napríklad -NHProt⁴³ alebo OProt^4b;

Prot³ je chrániaca skupina a bodkovaná čiara naznačuje prípadnú dvojitú väzbu.

Metid sa výhodne pripraví vnesením hydroxy skupiny v polohe 10 v oblasti spoja kruhov A a B, čím vznikne produkt so všeobecným vzorcom (XX):

(XX), alebo výhodnejšie produkt so všeobecným vzorcom (XXI):

(XXI), kde skupina R“ je zvolená tak, aby vznikla zlúčenina podľa všeobecného vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII). Pre prvé dve takéto zlúčeniny má skupina R“ obvykle tvar -CHFu-CH₂ = SProt³.

Chrániace skupiny môžu byť potom odstránené a modifikované podľa potreby tak, aby vznikla želaná zlúčenina.

Typický postup pre krok (d) je uvedený v US Patente 5 721 362, ktorý je tu citovaný. Zvláštne odkazy sú k pasáži stĺpca 8, krok (1) a príklad 33 US Patentu, a k príbuzným oblastiam.

Derivatizácia v kroku (e) zahrnuje acyláciu, napríklad pomocou skupiny R^a-CO, ako aj premenu 12-NCH₃ skupiny na 12-NH alebo 12-NCH₂CH₃. Táto reakcia môže predchádzať alebo nasledovať iné kroky.

Na ilustráciu, teraz je možné premeniť zlúčeninu kyanosafracínu B podľa všeobecného vzorca (2) na ET-743. Tento spôsob prípravy ET-743 je omnoho priamejší a kratší, ako ponúkali skôr známe metódy. Kyanosafracín B sa mení na medziprodukt 25;

a z tohto derivátu je možné pripraviť veľké množstvo cysteinových derivátov, ktoré sa potom premenia na ET-743. Výhodne používané cysteinové deriváty sú znázornené pomocou týchto zlúčenín podľa všeobecného vzorca:

Retrosyntetická analýza na prípravu ET-743 použitím zlúčeniny 29 je znázornená na schéme I.

Schéma I:

NHTree

Podľa schémy I je možné získať ET-743 v 21 lineárnych krokoch. Táto metóda premieňa kyanosfracín B na medziprodukt 25, a to pomocou postupnosti reakcií, ktoré zahrnujú (1) odstránenie metoxy skupiny umiestnenej v kruhu A, (2) redukciu kruhu A a formáciu metyléndioxy skupiny; to všetko v jednej reakčnej nádobe, (3) hydrolýzu amidovej funkčnej skupiny na uhlíku 1, (4) premenu vzniknutej amino skupiny na hydroxylovú skupinu. Reakčný postup nechráni primárnu alkoholovú funkčnú skupinu v polohe 1 v kruhu B zlúčeniny 25; reakcia priamo využíva cysteínový zvyšok 29 na prípravu medziproduktu 27. Derivát cysteínu 29 je chránený na amino skupine s /3-/3-/3-trichloroetoxykarbonylovou chrániacou skupinou, aby sa zachovala kompatibilita s existujúcou allylovou a MOM skupinou. Medziprodukt 27 je okamžite oxidovaný a zacyklovaný. Tieto okolnosti, spolu s rôznou deprotektívnou stratégiou v neskorších štádiách reakcie, znamenajú nové cesty syntézy, prístupnejšie priemyselnému vývoju než proces vedený pod názvom US 5 721 362.

Premena zlúčeniny 2-kyano na medziprodukt 25 obvykle zahrnuje tieto kroky (pozri schéma II):

• prípravu chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (14), vytvorenej reakciou 2 s anhydridom terc-butoxykarbonylu;

• premenu zlúčeniny 14 na chránenú zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (15), vytvorenej reakciou s bromometylmetyl étherom a diizopropyletylamínom v acetonitrile;

• selektívne odstránenie metoxy skupiny chinónového systému v zlúčenine 15, čím sa získa zlúčenina podľa všeobecného vzorca (16), vytvorená reakciou s metanolovým roztokom hydroxidu sodného;

• premenu zlúčeniny 16 na zlúčeninu dioxymetylénovú podľa všeobecného vzorca (18) tak, že sa využije táto potupnosť reakcií:

(1) chinónová skupina zlúčeniny 16 sa redukuje 10 % Pd/C vo vodíkovej atmosfére;

(2) hydrochinónový medziprodukt sa premení na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (17) tak, že reaguje s bromochlorometánom a cézium karbonátom vo vodíkovej atmosfére;

(3) zlúčenina 17 sa premení na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (18) tým, že sa chráni voľná hydoxylová skupina pri vzniku OCH₂R. Táto reakcia prebieha s BrCH₂R a cézium karbonátom, kde R môže byť aryl, CH = CH₂, OR' atď.

• odstránenie terc-butoxykarbonylu a metyloxymetylových chrániacich skupín zlúčeniny 18 dovoľuje prípravu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (19) tým, že reaguje s roztokom HC1 v dioxáne. Táto reakcia sa tiež uskutoční zmiešaním zlúčeniny 18 s roztokom trifluórooctovej kyseliny v dichlorometáne;

• prípravu zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca (20) tým, že reaguje zlúčenina 19 s fenylizotiokyanátom;

• konverziu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (20) na amino zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (21) tým, že reaguje s roztokom HCI v dioxane;

• premenu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (21) na N-Troc derivát 22 tým, že reaguje s trichloretyl chloroformiátom a pyridínom;

• prípravu chránenej hydroxy zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (23) tým, že reaguje 22 s bromometylmetyl éterom a diizopropyletylamínom;

• premenu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (23) na -NH derivát 24 tým, že reaguje s kyselinou octovou a zinkom;

• premenu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (24) na hydroxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (25) tým, že reaguje s nitritom sodným a kyselinou octovou. Inou možnosťou je použitie nitrogén tetroxidu v kombinácii s kyselinou octovou a acetonitrilom, s následnou aplikáciou hydroxidu sodného. Je možné tiež použiť nitrit sodný v kombinácii s acetanhydridom kyseliny octovej, s následnou aplikáciou hydroxidu sodného.

Premena medziproduktu 25 na ET-743 pomocou derivátu cysteínu 29 obvykle zahrnuje tieto kroky (pozri schéma III):

• premenu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (24) na derivát 30 tým, že sa ochráni primárna hydroxylová funkčná skupina (S)-N-2,2,2-trichloroetoxykarbonyl-S-(9H-fluorén-9-ylmetyl)cysteínom 29;

• konverzia chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (30) na derivát fenolu 31 tým, že sa odštiepi allylová skupina tributyltín hydridom a dichloropaládium-bis(trifenylfosfín)om;

• premena fenolovej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (31) na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (32) tým, že sa oxiduje anhydridom benzénselenínu pri nízkej teplote;

• premena hydroxy zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (32) na laktón 33 nasledovným postupom:

(1) Zlúčenina podľa všeobecného vzorca (32) reaguje s dvomi ekvivalentmi triflic anhydridu a piatimi ekvivalentmi DMSO, (2) pridá sa osem ekvivalentov diizopropyletylamínu;

(3) pridajú sa štyri ekvivalenty t-butyl alkoholu;

(4) pridá sa sedem ekvivalentov 2-tert-butyl-l,l,3,3,tetrametylguanidínu;

(5) pridá sa desať ekvivalentov acetanhydridu;

• premenu laktónovej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (33) na hydroxylovú zlúčeninu 34 tým, že sa odstráni MOM chrániaca skupina pomocou TMSI;

• štiepenie N-trichloroetoxykarbonylovej skupiny zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (34) na zlúčeninu 35 tým, že reaguje s Zn/AcOH;

• premenu aminozlúčeniny 35 na zodpovedajúcu α-keto laktónovú zlúčeninu 36 tým, že reaguje s N-metylpyridinium karboxaldehyd chloridom, s následným DBU;

• prípravu ET-770 tým, že zlúčenina podľa všeobecného vzorca (36) reaguje s 3-hydroxy-4-metoxyfenyletylamínom;

• premenu ET-770 na ET-743 tým, že reaguje s dusičnanom strieborným v zmesi s AcN/H₂O

3$

Postup znázornenej syntézy, smerujúci k premene medziproduktu 25 v ET-743, môžu byť výhodne modifikované pomocou iných derivátov cysteínu, napríklad zlúčeniny 37, s názvom 2-metoxymetoxyloxy-3-(9H-fluoren-9-ylmetyl)propenová kyselina. Táto zlúčenina má už keto skupinu vo forme enoléteru, pokým iné analógy obsahujú aminoskupinu, ktorá má byť premenená na keto skupinu procesom transaminá5 cie. Táto reakcia má výťažok 55 - 60 %. Použitím zlúčeniny 37 je možné podstatne zvýšiť výťažok lineárnej syntézy, pretože je možné sa vyhnúť transaminačnému kroku.

Konverzia medziproduktu 25 v ET-743 použitím derivátu cysteínu 37 môže byť uskutočnená podobným spôsobom a s rovnakými reagentmi, na rozdiel od derivátu cysteínu 29, s výnimkou premien (f) a (g). Reakčný postup je znázornený v schéme IV:

Zlúčenina 38 sa pripraví tak isto tým, že reaguje medziprodukt 12 opísaný vUS patente N 5 721 362 s medziproduktom 37. Táto reakcia znamená výrazné zlepšenie reakčnej schémy uvedenej v US patente.

Príprava ftalascidínu a príbuzných zlúčenín

V predkladanom vynáleze zahrnuje kľúčová skupina produktov ftalascidín s nasledovným všeobecným vzorcom (XX)

(XX), kde R¹ je amidometylénová skupina; R⁵ je krátky oxy-postranný reťazec; a R²¹ je kyano skupina alebo hydroxy skupina. V prípade ftalascidínu R¹ je ftalimidometylénová skupina; R⁵ je acetoxy skupina; R²¹ je kyano skupina. Iné skupiny predstavujúce R¹ zahrnujú mono- a di-N-amidometylény ako aj iné cyklické amidometylény, a iné skupiny predstavujúce R⁵ zahrnujú C¹ až C⁴ acylovej skupiny, ako aj C¹ až C⁴ alkylovej skupiny.

Konverzia 21 kyano zlúčeniny vo ftalascidíne alebo príbuznej zlúčenine podľa všeobecného vzorca (XX) obvykle obsahuje nasledovné kroky:

a) v prípade potreby konverziu E kruhu chinónového systému na systém fenolový;

b) tvorbu R⁵ skupiny na pozícii 5 v kruhu A;

c) tvorbu R¹ skupiny na pozícii 1 v kruhu B;

d) v prípade potreby konverziu A kruhu chinónového systému na systém fenolový;

e) v prípade potreby konverziu A kruhu fenolového systému na kruh metyléndioxyfenolový.

Uvedené kroky sú veľmi podobné tým, ktoré boli uvedené pri príprave ekteinascidínov. Krok (c) obvykle zahrnuje tvorbu -CH₂NH₂ skupiny v polohe 1 a jej acyláciu.

Ftalascidín sa pripraví pomocou medziproduktov opísaných v časti pojednávajúcej o premene kyanosafracínu B na medziprodukt 25. Napríklad medziprodukty 21 a 17 sú vhodné východiskové zlúčeniny na prípravu ftalascidínu.

Ako bolo uvedené v schéme V, proces syntetickej prípravy ftalascidínu začínajúci medziproduktom 21 zahrnuje tieto za sebou nasledujúce kroky:

• premenu zlúčeniny 21 na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (27) tým, že reaguje s ftalát anhydridom v dichlórmetáne a karbonylimidazole • konverziu zlúčeniny 27 na ftalascidín tým, že reaguje s tributyltín hydridom a dichloropaládium-bis(trifenylfosfmjom alebo zásaditým médiom, nasledovaná reakciou s acetyl chloridom.

Ako bolo uvedené v schéme VI, proces syntetickej prípravy ftalascidínu začínajúci medziproduktom 17 zahrnuje tieto za sebou nasledujúce kroky:

• Acetyláciu hydroxylovej skupiny zlúčeniny podľa všeobecného vzorce (17) pomocou acetyl chloridu a pyridínu tak, že vznikne acetylovaný medziprodukt podľa všeobecného vzorce (42).

• Odstránenie íerc-butoxykarbonylu a ochrannej metyloxymetylovej skupiny zlúčeniny 42 na prípravu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (43) tým, že reaguje s roztokom HCI v dioxáne. Táto reakcia sa tak isto dosiahne zmiešaním zlúčeniny 42 s roztokom trifluórooctovej kyseliny v dichlórmetáne.

• Prípravu zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca (44) tým, že reaguje 43 s fenylizotiokyanátom.

• Konverziu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (44) na emino zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (45) tým, že reaguje s roztokom HCI v dioxáne.

• Premenu 45 na ftalascidín tým, že reaguje s ftalát anhydridom v dichlórmetáne a karbonylimidazole.

IT 42 «

CMjOj

J^hiteMäMn

Schéma VI

Príprava medziproduktu 11 a príbuzných medziproduktov 5 Retrosyntetická analýza je opísaná v nasledujúcej schéme.

V predkladanom vynáleze obsahuje kľúčová skupina medziproduktov medziprodukt 11 a má všeobecný vzorec (XXI)

kde Prot¹ a Prot² sú hydroxy chrániace skupiny, podľa možnosti rozdielne. Prot¹ je obvykle......Prot² je obvykle .......Čo sa týka samotného medziproduktu 11, je Prot¹ skupina predstavovaná metoxymetylovou skupinou, Prot² je t-butyldifenylsilylová skupina.

Konverzia 21-kyano zlúčeniny na medziprodukt 11 alebo príbuzné medziprodukty podľa všeobecného vzorca (XXI) obvykle zahrnuje tieto za sebou idúce kroky:

b) tvorbu -Oprot¹ skupiny v polohe 18 v kruhu E;

c) tvorbu -CH₂-Oprot² skupiny v polohe 1 v kruhu B;

d) v prípade potreby konverziu kruhu A chinónového systému na fenolový systém;

e) konverziu fenolového systému kruhu A na metyléndioxyfenolový kruh.

Krok (b), tvorba -Oprot¹ skupiny v polohe 18 kruhu E, je typickou chrániacou reakciou fenolovej skupiny. Reakčné podmienky sa vyberú podľa charakteru chrániacej skupiny. Ďalšie kroky sú podobné iným reakciám.

Krok (c), tvorba -CH₂-Oprot² skupiny v polohe 1 kruhu B, sa obvykle uskutočňuje tvorbou -CH2NH2 na pozícii 1 a potom premenou amínovej funkčnej skupiny na hydroxy a chránením. Reaktant s funkčnou skupinou R¹ v tvare -CH2-NH-CO-CR^25aR^25bR^25z stratí N-acylovú skupinu. V prípade, že východiskový produkt má skupinu R¹ v tvare -CH₂-O-CO-R, nie je potrebné ekteinascidín nijako upravovať, pretože jeho R¹ substitučná skupina je rovnaká.

Čo sa týka iných produktov, je potrebné odstrániť O-acylovú skupinu. Na tieto deacylácie sú k dispozícii rôzne metódy. V jednej z nich je deacylácia a konverzia na hydroxylovú funkčnú skupinu uskutočnená v jednom kroku. Potom je hydroxylová skupina acetylovaná alebo akokoľvek inak upravovaná tak, aby vznikla vhodná R¹ funkčná skupina.

US patent 5 721 362 opisuje syntetickú metódu na prípravu ET-743 pozostávajúcu z mnohých krokov. Jeden z medziproduktov syntézy je medziprodukt 11. Použitím kyanosafracínu B ako východiskovej zlúčeniny je možné dosiahnuť medziprodukt 11 oveľa jednoduchším spôsobom a teda vylepšiť metódu na prípravu

ET-743.

Kyanosafracíin B je premenený na medziprodukt 25 pomocou opísanej metódy. Medziprodukt 11 sa z medziproduktu 25 získa pomocou týchto krokov (pozri schéma VII).

• tvorba chránenej hydroxy zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (26) tým, že reaguje 25 s íerc-butyldifenylsilyl chloridom za prítomnosti bázy;

• konečné odštiepenie allyovej skupiny pomocou tributyltín hydridu a dichloropaládium-bis(trifenylfosfuijorn na zlúčeninu 26, ktorá vedie k tvorbe medziproduktu 11.

BujSaH

Schéma VII

Predstava syntetického procesu, uvedená v predkladanom vynáleze a zameraná na premenu safracínu B na medziprodukt 11, je modifikáciou schémy VIII a pozostáva z týchto krokov:

• stereošpecifické premeny zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (1) (saftacín B) na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (2) tým, že sa selektívne nahradí -OH skupina -CN skupinou tým, že reaguje s KCN v kyslom prostredí;

• tvorby zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca (3) tým, že reaguje zlúčenina podľa všeobecného vzorca (2) s fenyl izotiokyanátom;

• premeny zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca (3) na acetamid podľa všeobecného vzorca (5) tým, že sa hydrolyzuje v kyslom prostredí a je nasledovaný pridaním acetanhydridu; medziprodukt amino zlúčenina podľa všeobecného vzorca (4) sa pripraví ukončením hydrolýzy v kyslom prostredí s bikarbonátom sodným. Tento medziprodukt je ale značne nestabilný a je okamžite premenený na päťčlenný cyklický imín 6;

• tvorby chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (7) tým, že reaguje s bromometyl metyléterom a diizopropyletylamínom v dichlórmetáne;

• selektívnu demetyláciu metoxy skupiny chinónového systému zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (7) na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (8) tým, že reaguje s roztokom metanolu a hydroxidu sodného;

• premeny zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (8) na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (9) tým, že dôjde k:

(1) chinónová skupina zlúčeniny 8 sa redukuje 10 % Pd/C vo vodíkovej atmosfére;

(2) hydrochinónový medziprodukt je premenený na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (9) tým, že reaguje s bromochlorometánom a cézium karbonátom vo vodíkovej atmosfére;

(3) zlúčenina podľa všeobecného vzorca (9) je premenená na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (10) tým, že sa chráni voľná hydroxylová skupina ako OCH₂R skupina tým, že reaguje s BrCH₂R a cézium karbonátom, kde R predstavuje aryl, CH = CH₂, OR' atď.;

(4) premene acetamidovej skupiny zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (10) na zodpovedajúcu hydroxylovú skupinu podľa všeobecného vzorca (11) tým, že reaguje s nitrogén tetroxidom v zmesi s kyselinou octovou a octanu sodného, nasledovaná pridaním hydroxidu sodného;

(5) prípadne sa acetamidová skupina zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (10) premení na primárnu amínovú skupinu tým, že reaguje s hydrazínom alebo s Boc₂O, DMAP nasledovaná pridaním hydrazínu; tento primárny amín sa premení na zodpovedajúcu hydroxylovú skupinu (zlúčenina podľa všeobecného vzorca (11)) tým, že sa primárny amín oxidatívne premení na zodpovedajúci aldehyd so 4-formyl-l-metylpyridínium sulfonátom alebo iným pyridíniovým iónom, nasledovaným DBU alebo inou zásadou a ďalšou hydrolýzou a nasledovaný redukciou aldehydu na zodpovedajúcu hydroxylovú skupinu pomocou hydridu lítnohlinitého alebo inej redukujúcej látky;

(6) tvorbe chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (26) tým, že reaguje s t-butyldifenylsilyl chloridom a dimetylaminopyridínom v dichlórmetáne;

(7) premene silylovanej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (26) na medziprodukt 11 tým, že sa odkryje -OCH₂R ochranná skupina tým, že reaguje v kyslom alebo zásaditom prostredí.

Typické reakcie zahrnujú paládiovú čerň vo vodíkovej atmosfére, alebo vodný roztok TFA, alebo tributyltín hydrid a dichloro bis(trifenylfosfín paládium).

V ešte inej úprave reakčného postupu dochádza k premene kyano zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (2) na medziprodukt 11 pomocou rozšírenej schémy II, ktorá zahrnuje tieto kroky:

• tvorbu chránenej hydroxy zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (26) tým, že reaguje 25 s íerc-butyldifenylsilyl chloridom za prítomnosti zásady;

• záverečné odštiepenie allylovej skupiny pomocou tributyltín hydridu a dichloropaládium-bis(trifenylfosfm) na zlúčeninu 26, ktorá vedie ku príprave medziproduktu 11.

Príprava aktívnych zlúčenín

Kyanosafracín B sa premieňa na veľký počet medziproduktov a derivátov s potenciálnou protinádorovou terapeutickou aktivitou. Tieto medziprodukty sa dajú vytvoriť už z opísaných zlúčenín alebo použitím alternatívnych reakčných postupov.

Medziprodukty tu opísané zahrnujú zlúčeninu 47 a mnoho ďalších amidových derivátov, ktoré sa pripravia pomocou zlúčenín 45 alebo 43.

Na schéme VIII je znázornená príprava zlúčeniny 47 použitím týchto krokov:

• príprava zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca (3) tým, že reaguje zlúčenina podľa všeobecného vzorca (2) s fenylizotiokyanátom;

• premena zlúčeniny tiourey podľa všeobecného vzorca (3) na acetamid podľa všeobecného vzorca (5) tým, že dochádza k hydrolýze v kyslom prostredí a následnému pridávaniu acetanhydridu. Medziproduktom je aminová zlúčenina podľa všeobecného vzorca (4), ktorá sa izoluje ukončením hydrolýzy v kyslom prostredí pomocou bikarbonátu sodného. Medziprodukt je veľmi nestabilný a okamžite sen mení na päťčlenný cyklický imín 6;

• príprava chránenej zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (7) tým, že reaguje s bromometylmetyl éterom a diizopropyletylamínom v dichlórmetáne;

• selektívna demetylácia metoxy skupiny chinónového systému zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (7) na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (8) tým, že reaguje s metanolovým roztokom hydroxidu sodného;

• premena zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (8) na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (10) pomocou týchto reakčných krokov:

(1) chinónová skupina zlúčeniny 8 sa redukuje pomocou 10 % Pd/C vo vodíkovej atmosfére;

(2) hydrochinónový medziprodukt sa premení na metyléndioxy zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (9) tým, že reaguje s bromochlorometánom a cézium karbonátom vo vodíkovej atmosfére;

(3) zlúčenina podľa všeobecného vzorca (9) sa premieňa na zlúčeninu podľa všeobecného vzorca (10) tým, že sa chráni voľná hydroxylová skupina, akou je allyloxy skupina tým, že reaguje s allylbromidom a cézium karbonátom;

• premena zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (9) na acetyl derivát 46 tým, že reaguje s acetylchloridom v pyridíne;

• premena zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (46) na nechránenú zlúčeninu 47 tým, že reaguje s kyselinou chlorovodíkovou v dioxáne.

Schéma VIII

Iné užitočné deriváty amidových medziproduktov sa vytvoria už z opísaného medziproduktu 45 pomocou nasledujúcej schémy:

Druhý krok nie je bezprostredne potrebný. Tento proces predstavuje dôležitú časť vynálezu, obzvlášť 15 tam, kde skupina R je skupinou R^a, ako to bolo uvedené skôr. Schému VIII je možné ľahko rozšíriť tak, že umožní prípravu zlúčenín podľa všeobecného vzorca (XXIII) tým, že sa vo východiskovej zlúčenine v polohe 5 umiestni iná funkčná skupina, a to buď skupina priamo potrebná pre produkt, alebo skupina, ktorú je možné odstrániť alebo inak modifikovať tak, že vznikne želaná funkčná skupina.

Schéma IX

Zo zlúčeniny 45 sa pripraví skupina analógov pomocou nasledovných reakčných krokov:

• acylácia amino skupiny zlúčeniny všeobecného vzorca (45) pomocou veľkej skupiny acylových derivátov, ktoré poskytnú zodpovedajúce amidy, kde preferovanými acylovými skupinami sú acetyl, cinnamoylchlorid, p-trifluorocinnamoylchlorid, izovalerylchlorid-fenylizotiokyanát alebo aminokyseliny, alebo iné uvedené skupiny R^aCO-.

• transformácia -CN skupiny na -OH skupinu tým, že reaguje s nitrátom strieborným v zmesi s AcN/H₂O. Iné užitočné deriváty amidového medziproduktu sa pripravia použitím už opísaného medziproduktu 43 podľa nasledujúcej schémy:

RCOCI. py

Schéma X

Použitím nasledujúceho postupu sa zo zlúčeniny 43 získa iná skupina zaujímavých derivátov.

a) acylácia amino skupiny zlúčeniny podľa všeobecného vzorce (43) pomocou veľkej škály acylových derivátov, ktoré poskytnú zodpovedajúce amidy, kde preferovanými acylovými skupinami sú acetyl, cinnamoylchlorid, p-trifluorocinnamoylchlorid, izovalerylchlorid alebo aminokyseliny, alebo iné uvedené zlúčeniny skupiny,

b) transformácia -CN skupiny na -OH skupinu tým, že reaguje s nitrátom striebra v zmesi AcN/H₂O.

Nové medziprodukty

Vzhľadom na uvedené je zrejmé, že v predkladanom vynáleze sa vyskytuje mnoho medziproduktov. Podľa charakteru kruhu A majú tieto medziprodukty všeobecný vzorec (XXIIa)

alebo všeobecný vzorec (XXIIb)

kde R¹ je -CH₂NH₂ alebo -CH₂OH, chránený, alebo derivatizovaný variant takejto skupiny a R⁴ je -H; alebo

R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu podľa všeobecného vzorca (IV), (VI) alebo (VII)

R⁵ je -OH, chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny;

R^14a a R^14b sú obidve -H alebo jedna je -H a druhá je -OH, chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^14b spoločne tvoria keto skupinu;

R¹² je -H, -CH₃ - alebo -CH₂CH₃-;

R¹⁵ je -OH, chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny;

R¹⁸ je -OH, chránený alebo derivatizovaný variant takejto skupiny a R²¹ je -H, -OH alebo -CN.

V jednom usporiadaní, aspoň R¹, R⁵, R^14a, R^14b, R¹⁵ alebo R¹⁸ je chránená alebo derivatizovaná skupina.

V jednej modifikácii tohto vynálezu R¹ nie je skupina 3,5-íerc-butyldifenylsilylová a/alebo skupina R¹⁸ nieje metoxymetylová.

Výhodne je R* -CH₂NH₂ alebo -CH₂OH, alebo chránený, alebo derivatizovaný variant takejto skupiny a R⁴ je-H; alebo

R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu:

Výhodne sú R^l4a a R^14b obidva -H.

Jedna dôležitá kategória medziproduktov obsahuje zlúčeninu, nazvanou ako zlúčenina 25, ktorá má všeobecný vzorec:

Vo všeobecnom vzorci uvedenej kategórie zlúčenín je skupina MOM nahradíte ľná akoukoľvek chrániacou skupinou.

Iné dôležité medziprodukty zahrnujú zlúčeniny nazvané ako zlúčeniny 45 a 47. Zo zlúčeniny 45 sa jednoduchým spôsobom pripravia N-acyl deriváty, ktoré sú dôležitou súčasťou predkladaného vynálezu. Vhodné acylové skupiny už boli uvedené. Zodpovedajúce aktívne 21-hydroxy zlúčeniny sú tiež dôležité a sú súčasťou tohto vynálezu.

Nové aktívne zlúčeniny

Bolo zistené, že zlúčeniny tohto vynálezu, ktoré boli pôvodne pripravené ako medziprodukty, majú výrazné účinky pri liečbe malígnych nádorov, ako napríklad leukémie, nádory pľúc, čreva, ľadvín a melanómu.

Predkladaný vynález teda ponúka možnosť liečby karcinómov cicavcov, predovšetkým človeka, terapeuticky efektívnou dávkou zlúčeniny podľa vynálezu, ako aj ich farmakologických zlúčenín.

Predkladaný vynález sa tiež týka farmaceutických prípravkov, ktoré ako aktívnu zložku obsahujú zlúčeninu alebo zlúčeniny podľa vynálezu, ako aj proces ich prípravy.

Príklady farmaceutických prípravkov zahrnujú akékoľvek pevné (tablety, pilulky, kapsuly, granuly) alebo kvapalné (roztoky, suspenzie alebo emulzie) prípravky s vhodným zložením, alebo prípravky na orálne, miestne alebo parenterálne podávanie. Tieto prípravky obsahujú buď čistú zlúčeninu, alebo v kombinácii s nosičom alebo inou farmakologicky aktívnou látkou. Tieto prípravky musia byť sterilné, v prípade, že sa podávajú parenterálne.

Podávanie zlúčenín alebo prípravkov predkladaného vynálezu je buď vo forme intravenóznych infúzií, orálnych preparátov, alebo sú podávané intraperitoneálne. Výhodne sa použije 24 hodinová infúzia, ešte výhodnejšie infúzia 1 až 12 hodín, najlepšie 2 až 6 hodín. Krátke infúzne časy, ktoré dovoľujú krátku nemocničnú hospitalizáciu, sú obzvlášť výhodné. V prípade potreby je však možné nastaviť čas infúzie na 12 až 24 hodín. Infúzie sa opakujú vo vhodných intervaloch 2 až 4 týždňov. Farmakologické prípravky, ktoré obsahujú zlúčeniny uvedené v predkladanom vynáleze, sa do tela chorého dopravia vo forme lipozómov alebo nanosférových mechúrikov vo forme umožňujúcej uvoľnenie aktívnych látok, alebo použitím iných štandardných prostriedkov dodania účinnej látky na miesto pôsobenia.

Vhodná dávka zlúčenín sa líši podľa konkrétneho prípravku, spôsobu aplikácie, konkrétneho stavu nemocného a nádoru, ktorý je potrebné liečiť. Iné faktory, ako napríklad vek, telesná hmotnosť, pohlavie, diéta, doba podávania, pomer vylučovania aktívnej látky, stav pacienta, kombinácia liekov, citlivosť na podávané látky a závažnosť ochorenia sa musí tiež zohľadniť. Podávanie môže prebiehať kontinuálne alebo periodicky s maximálnou tolerovateľnou dávkou.

Zlúčeniny a prípravky podľa predkladaného vynálezu môžu byť použité v kombinácii s inými liekmi vo forme kombinovanej terapie. Iné lieky môžu byť súčasťou rovnakého prípravku, alebo môžu byť podávané ako samostatný prípravok súčasne alebo s časovým odstupom. Iné lieky nie sú špeciálne obmedzené a vhodnými kandidátmi sú:

a) lieky s antimitotickým účinkom, predovšetkým tie, ktoré sú zacielené proti cytoskeletu bunky, zahrnujúce modulátory mikrotubulov, ako napríklad taxanové látky (taxol, paclitaxel, taxoter, docetaxel), podofylotoxíny alebo vinea alkaloidy (vineristín, vinblastín);

b) antimetabolity, ako napríklad 5-fluorouracil, cytarabín, gemcitabín, purínové analógy (ako napríklad pentostatín, metotrexát);

c) alkylujúce látky ako napríklad cyklofosfamid alebo ifosfamid;

d) látky, ktorých cieľom je DNA, ako napríklad antracyklíny adriamycín, doxorubicín, farmorubicín alebo epirubicín;

e) látky, ktorých cieľom je topoizomeráza ako napríklad etoposid;

f) hormóny alebo antagonisty hormónov ako napríklad estrogény, antiestrogény (tamoxifen a príbuzné zlúčeniny) a androgény, flutamid, leuprorelín, goserelín, cyprotron alebo octreotid;

g) látky, ktorých cieľom je prenos signálov v malígnej bunke, obsahujúce deriváty protilátok ako napríklad herceptín;

h) alkylujúce látky ako napríklad deriváty platiny (cis-platina, karbónplatina, oxaliplatina, paraplatina) alebo nitrosourea;

i) látky potenciálne ovplyvňujúce metastázy tumorov ako napríklad inhibítory matrixových metaloproteáz;

j) génová terapia a antisenze-látky;

k) protilátková terapia;

l) iné bioaktívne zlúčeniny morského pôvodu, hlavne didemníny ako napríklad aplidín;

m) steroidné analógy, konkrétne dexametazon;

n) antiemetické látky, konkrétne dexametazon.

Predkladaný vynález sa tiež týka zlúčenín podľa vynálezu použiteľných v metodike liečby a použitia zlúčenín pri príprave prípravkov na liečbu rakoviny.

Cytotoxická aktivita

Bunkové kultúry

Bunky boli udržované v logaritmickej fáze rastu v EMEM (Earle's Minimum Essential Médium) s EBS (Earle's Balanced Salts), s 2, mM L-glutamínom, neesenciálnymi aminokyselinami, bez bikarbonátu sodného (EMEM/neaa).

Médium bolo doplnené o 10 % fetálneho teľacieho séra /FCS/, 10 - 2 M bikarbonátu sodného a 0,1 g/1 penicilín-G a streptomycín sulfátu.

Pomocou jednoduchej modifikovanej metódy (Bergeron et.al., 1984) bola testovaná a porovnávaná protinádorová aktivita zlúčenín. V experimentoch boli použité tieto línie: P-388 (suspenzná kultúra malígnych lymfoidných buniek pochádzajúcich z DBA/2 myši), A-549 (kultúra ľudského pľúcneho karcinómu rastúceho v jednej vrstve), HT-29 (ľudská kultúra karcinómu čreva rastúceho v jednej vrstve) a MEL-28 (ľudská kultúra malígneho melanómu rastúceho v jednej vrstve).

P-388 boli vysiate do 16 mm komôrok s hustotou lxlO⁴ buniek na jednu komôrku v 1 ml MEM 5 FCS média, ktoré obsahovalo presnú koncentráciu testovanej látky. Na kontrolu exponenciálneho rastu buniek boli oddelene vysiate rovnaké bunky, rastúce však v médiu bez prídavku testovanej látky. Všetky experimenty boli uskutočnené duplicitne. Po troch dňoch inkubácie pri 37 °C, 10 % CO₂ vo vlhkej atmosfére (98 %) boli komôrky zafarbené 0,1 % kryštálovou violetou. Približná IC50 bola stanovená porovnaním rastu buniek v komôrkach s testovanou látkou s bunkami v komôrkach rastúcich bez prítomnosti testovanej látky.

1. Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr., Steven J. Kline: Róbert G. Hughes, Jr., Gary T. Elliot a

Carl W. Porter. Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholamide iron chelators. Biochem.Bioph. Res. Comm. 1984, 121 (3), 848 - 854

2. Alan C. Schroeder, Róbert G. Hughes, Jr. a Alexander Bloch. Effects of Acyclic Pyrimidine Nucleoside

Analoges. 7. Med. Chem. 1981, 24. 1078 - 1083.

Zlúčenina	IC$o (μΜ)
	P-388	A-549	HT-29	MEL-28	CV-1	DU-145
OUt
οι 'Λ 2	0,009	0,018	0,018	0,018	0,023
ow· HO. -«*«
⁰ ° ' 14	0,!5	>0,15	0,15	>0,15

1 ' 15	1,44	1,44	1,44	1,44
1 ?* O^O^-k,*· <£>·+ Y 16	>1,5	>1,5	>1,5	v I-* >w LA
1 * e^o^JL·» γγν^* ^-0 X<fc* o J <A„	1,4	1,4	1,4	b⁴
X, I ?* \_o HŕR •Y 18	0,01	0,01	0,01	0,01
-ÄŽ •Y' 19	0,08	0,16	0,01	0,16
x Γ MO^Xy· * Υ'ι'ι “4-*· ° I 20	0,01	0,01	0,01	0,01
N í* ‘'-o M- 21	0,019	0,019	0,019	0,019
HOyXľ-'» ^Οχ-ο Λ“¹' 22	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014
X, Γ* X AAx-Oyŕy“· Ma A y. V-O A*** 23	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13
-_ gj_ V χΟνβγ/γ“· %4 24	0,18	1,8	1,8	1,8	1,8	1,8
*Ί ' ľ“ \ «-Mv- 25	0,2	0,2	0,2	0,2		0,2
->£;	0,008	0,008	0,008	0,008

Jl «·. °TI i JLJ	0,01	0,01	0,01	0,01
« Tr“ Xr* O 28	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
1 MH «/''Vy“· W?	0,13	0,13	0,13	0,13		0,13
MH Me JJjf vší,/» A“' 43	0,008	0,016	0,008	0,008		0,016
ÔtH M* JJ J úo l^í» 3 44	0/101	0,001	0,001	0,001		0,001
MH °** jT jf 45	0,01	0,01	0,01	0/11		0,01
κΟ-Α^ιη O 1 tu «Μ i 3	0,015	0,015	0,015	0,015	0,018
AŽ,	2,171	2,171	2,171	2,171	2,171
A?' 5	0/105	0,005	0,005	0,005
j aa • Txy* <A 7	0,22	0,22	0,22	0,22	0,22
j g- Ο^χΟχ^Λγ.·*· «Α g	>9	>18,1	>18,1	>18,1	>18,1

’ ľ~ T v-o O+v 9	>1,77	>1,77	>1,77	>1,77	>1,77
X. t V-0 k^í* »A 10	>1,65	>1,65	>1,65	>1,65	>1,65
• 6- Ms/k'* OAC 1 J □A 46	0,016	0,016	0,016	0,016	0,016
6m· mO^L,· o· 'T' J M·. -L· ΊΓ n\| ^w7j^-1** °Z°ÍJ» «Α 47	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
6m· MO,JL„M· ΟΛλ J '^stif^ZNť*GT“· _oaX 48	0,0008	0,001	0,0008	0,0008	0,001
OM· NOv^yM OU jT j v-o cw «Μ o'*'!'·'· 49	0,007	0,007	0,007	0,007	0,007
°** JZ T “’yVv^* '-o < Žw Ao_a	0,0001	0/)001	0,0001	0,0001	0,0001
OM· MD^J^M· OM jľ T Αύ<> O T i s o bt NM X“ 51	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OU· om JZ T Mt ΊΓΤΤ»^*· oS<vy^ VO CM •M eAf“·	0,001	0/)01	0/)01	0,001	0,001

ΟΜ» OAC T J Xxy *· o 53	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
x “*· oVÝV^ >-0 \ ČM </γ~γ~· m· o 54	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
Ota OM JT } *’^sr^^xY^xN^xS^M· •Χχγ’ w o 55	0,01	0,01	0,01	0,01	0,01
oue -yC-y^Oi. \- o X» é* MM •N” 56	0,18	0,9	0,18	0,8	0,9
OM· ⁰ 3 57	0,14	0,14	0,14	0,14	0,14
OM· O< \~O k í ' “ 58	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
ΟΜ» ΜΟ^χ,Μ. ΟΜ Jľ Τ ~ώςχ> °V-0 χ in Λ=Χ° - 60	0,001	0,001	0,0005	0/)01	0,0005
ΟΜ· MO^JvyM· ΟΜ JT 1 7Χ^ 3-Ό X CM o*v, 61	0/)01	o/wi	0,001	0,001	0,001
OM· MOx^Sy.“» o* ΊΓΤ v-o χ Cm £ H _, ⁰ L 1 62	0,001	0,001	0,0005	0/)005	0,001

OAC J j ζζχχχ· 1 c*	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMC OAC j T „W,/ O T Y i v-o * ô* r «_o . í. o 64	0/)01	0/)01	0/)01	0/)01	0,001
O*· OAC CM 65	0,0001	0,0005	0/)001	0,0001	0,0005
OMe OAC X J Ha. JL λ Γίτ ν-O \| ÔK o vu	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMa MO-jL.·· ©« x r Ma. JL óV?	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001

Z týchto údajov je možno vidieť, že aktívne zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu zahrnujú zaujímavú triedu zlúčenín podľa všeobecného vzorca (XXIII)

kde R¹ je, ako bolo definované pre všeobecný vzorec (XVIIb) a je výhodne stredne veľká derivatizovaná aminometylénová skupina;

R⁵ je, ako bolo definované pre všeobecný vzorec (XVIIb) a je výhodne menšia derivatizovaná hydroxy skupina;

R¹² je, ako je uvedené, a je výhodne -CH₃- a

R²¹ je hydroxy alebo kyanoskupina.

R’ je výhodne hydrofóbna skupina, ktorá teda nemá voľnú amino, hydroxy alebo inú hydrofilnú funkčnú skupinu. R¹ je typicky skupina -CH₂-NH-CO-R^a, kde R^a je, ako bolo uvedené, výhodne má však lineárny reťazec kratší ako 20 atómov, ešte výhodnejšie menej než 15 alebo 10 atómov, kde 1,4-fenyl sa ráta ako reťazec s dĺžkou 4 atómov a podobne je to aj s inými cyklickými skupinami (napríklad 1,2-cyklohexyl je reťazec s dĺžkou 2 atómov). Lineárny reťazec kratší než 10, 15 alebo 20 atómov môže byť nahradený. Podľa týchto údajov je potrebné nájsť rovnováhu medzi zlúčeninou, ktorá nemá žiadnu skupinu R^a-CO- a zlúčeninou, ktorá má objemnú skupinu.

V jednej modifikácii sa uprednostňuje R¹ bez cyklických skupín, hlavne bez skupín aromatických. V príbuznom variante nie je predkladaný vynález zameraný na prípravu zlúčenín opísaných v článku Proc. Natl. Acad. Sci USA, 96, 3 496 - 3 501, 1999, ktorý sa nachádza v citovanej literatúre. Naše výhodne používané skupiny R¹ nezahrnujú zodpovedajúce substituenty CH2R2, ktoré sa nachádzajú v tabuľke 1 citovaného článku, obzvlášť skupiny A, B, C a D pre R₂.

R⁵ je výhodne acetylová skupina.

V mimoriadne dôležitých zlúčeninách je skupina R¹ acetylovaná na -NH₂ skupine a napríklad N-acyl deriváty je možné pripraviť zo skupín -CN₂NH₂ a -CH₂-NH-aa. Acylové deriváty sú ich N-acylové alebo N-tioacylové deriváty. Acylová skupina má všeobecný vzorec -CO-R“, kde R^a je vybraný tak, aby spĺňal uvedené kritériá. Vhodné acyl skupiny zahrnujú alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, izoleucyl, leucyl, lysyl, metionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, treonyl, tyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl, ako aj iné aminokyselinové zvyšky. Tieto aminokyselinové zvyšky sú výhodne derivatizované na amino skupine, čím zlúčenine dodávajú hydrofobicitu.

V jednej modifikácii je R¹ derivatizovaná hydroxymetylénová skupina. Podobné je to s derivatizovanou aminometylénovou skupinou.

S ohľadom na spomenuté aktívne zlúčeniny, predkladaný patent zahrnuje tento proces:

kde skupina R⁵ vo výslednom produkte je rovnaká ako pre zlúčeninu XXII a môže sa líšiť vo východiskovej zlúčenine a byť konvertovaná do nej ako súčasť procesu,

R¹⁸ je hydroxyskupina vo výslednom produkte, ale môže byť chránenou hydroxy skupinou vo východiskovej zlúčenine a byť konvertovaná do nej ako súčasť procesu,

R¹² skupina vo východiskovej zlúčenine je rovnaká ako vo výslednom produkte, alebo je v nej premenená ako súčasť procesu,

R²¹ vo výslednom produkte, je ako už bolo uvedené a v prípade, že hydroxy skupina je tvorená z kyano skupiny ako súčasť procesu,

R^a je, ako už bolo uvedené aje acylovaná ako súčasť procesu pri vzniku konečného produktu, ktorý má acylovanú R^a skupinu.

R⁵ je vo východiskovej zlúčenine výhodne acetyl alebo iná malá acylová skupina a počas reakcie sa nemení. R¹⁸ je vo východiskovej zlúčenine výhodne hydroxy skupina a počas reakcie sa nemení. R¹² je vo východiskovej zlúčenine výhodne -CH₃ a počas reakcie sa nemení. R²¹¹ vo výslednom produkte je, ako už bolo uvedené a hydroxy skupina je tvorená z kyano skupiny ako súčasť procesu. R^a sa nachádza vo výslednom produkte a je definovaný vo vzťahu k zlúčenine všeobecného vzorca (XXIII).

Iný dôležitý spôsob predkladaného vynálezu zahŕňa reakciu:

Iný dôležitý spôsob predkladaného vynálezu zahŕňa reakciu, kde R¹ predstavujúcu aminometylén sa mení na hydroxymetylénovú skupinu.

Iná dôležitá metóda predkladaného vynálezu zahrnuje reakciu, kde zlúčenina, ktorá má skupinu R¹, predstavujúcu hydroxymetylén reaguje so zlúčeninou podľa všeobecného vzorca (XIX) on O

Prot (XIX), kde Fu predstavuje chránenú funkčnú skupinu, Prot3 je chrániaca skupina a bodkovaná čiara predstavuje prípadnú dvojitú väzbu.

Iná dôležitá metóda predkladaného vynálezu zahrnuje reakciu na prípravu 21-kyano zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (XVI), ktorá zahrnuje reakciu zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (XV)

kde R¹, R⁵, R^14a, R^l4b, R¹⁵ a R¹⁸ boli už definované a R²’ je hydroxy skupina, so zdrojom kyanidového iónu pri vzniku 21-kyano zlúčeniny.

Možné je využiť aj procesy, ktoré využívajú zlúčeniny obsahujúce nukleofil na prípravu podobných zlúčenín podľa všeobecného vzorca (XVI), v ktorých poloha 21 je chránená inou nukleofilnou skupinou (21-Nuc skupinou). Napríklad 21 -Nuc zlúčenina podľa všeobecného vzorca (XVI) s alkylamino substituentom v polohe 21 sa pripraví reakciou zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (XV), kde R²¹ je hydroxy skupina, s vhodným alkylamínom. 21-Nuc zlúčenina podľa všeobecného vzorca (XVI) so substituentom v polohe 21 sa pripraví reakciou zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (XV), kde R²¹ je hydroxy skupina, s vhodným alkantiolom. Prípadne, 21-Nuc zlúčenina podľa všeobecného vzorca (XVI) s α-karbonylalkylom ako substituentom v polohe 21 sa pripraví reakciou zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (XV), kde R²¹ je hydroxy skupina, s vhodnou karbonylovou zlúčeninou, typicky v prítomnosti zásady. Na prípravu iných 21-Nuc zlúčenín je možné použiť aj alternatívne spôsoby.

Iná dôležitá metóda predkladaného vynálezu zahrnuje reakciu 21-kyano produktu predkladaného vynálezu, v ktorej vzniká 21-hydroxy zlúčenina. Tieto zlúčeniny majú zaujímavé in vivo vlastnosti.

Príklady uskutočnenia vynálezu

oA^NHi

Me (BochO

-.EtOH. 7b. 23’C

OMe

NH o/*’'//

Me O '

K roztoku 2 (21,53 g, 39,17 mmol) v etanole (200 ml) bol pridaný tercbutoxykarbonyl anhydrid (7,7 g, 35,25 mmol) a zmes sa miešala 7 hod. pri teplote 23 °C. Potom bola reakcia koncentrovaná vo vákuu a zvy38 šok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 6 : 4) pri vzniku 14 (20,6 g, 81 %) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,52 (etyl acetát: CHC1₃ 5 : 2).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,49 (s, 1H), 6,32 (bs, 1H), 5,26 (bs, 1H), 4,60 (bs, 1H), 4,14 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,05 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,81 (d, 7= 4,8 Hz, 1H), 3,7 (s, 3H), 3,34 (br d, 7= 7,2 Hz, 1H), 3,18 - 3,00 (m, 5H), 2,44 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,82 (s, 3H), 1,80 - 1,65 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 0,86 (d, 7= 5,7 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,5, 180,8, 172,7, 155,9, 154,5, 147,3, 143,3, 141,5, 135,3, 130,4, 129,2,

127,5, 120,2, 117,4, 116,9, 80,2, 60,7, 60,3, 58,5, 55,9, 55,8, 54,9, 54,4, 50,0, 41,6, 40,3, 28,0, 25,3, 24,0, 18,1,15,6, 8,5.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₄H₄₃N₅O₈: 649,7. Zistené (M+H)⁺: 650,3

Me

MOMBr, DIPEA DMAP (cat.), CH₃CN

24h. 23C

’YW

Me O ¹

Za stáleho miešania roztoku 14 (20,6 g, 31,75 mmol v CH₃CN (159 ml) pri 0 °C sa pridal diizopropyletylamín (82,96 ml, 476,2 mmol), metoxymetylénbromid (25,9 ml, 317,5 mmol) a dimetylaminopyridín (155 mg, 1,27 mmol). Zmes sa miešala pri 23 °C 24 hod. Reakcia bola ukončená pri 0 °C pomocou vodného roztoku 0,1 N HCI (750 ml) (pH = 5), a extrahovaná CH₂C1₂ (2x 400 ml). Organická fáza bola usušená (sulfát sodný) a koncentrovaná vo vákuu. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán : etylacetát 4 : 1 až hexán : etylacetát 3 : 2) pri vzniku 15 (17,6 g, 83 %) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,38 (hexán : etylacetát 3 : 7).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8 6,73 (s, 1H), 5,35 (bs, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,50 (bs, 1H), 4,25 (d, 7= 2,7 Hz 1 H), 4,03 (d, 7= 2,7 Hz, 1 H), 3,97 (s, 3H), 3,84 (bs, 1H), 3,82 - 3,65 (m, 1 H), 3,69 (s, 3H), 3,56 (s, 3H)

3,39 až 3,37 (m, 1 H), 3,20 - 3,00 (m, 5H), 2,46 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,85 (s, 3H) 1,73 až 1,63 (m, 1H), 1,29 (s, 9H), 0,93 (d, 7= 5, 1 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,4, 180,9, 172,4, 155,9, 154,5, 149,0, 148,4, 141,6, 135,1, 131,0, 129,9

127,6, 124,4, 123,7, 117,3, 99,1, 79,3, 60,7, 59,7, 58,4, 57,5, 56,2, 55,9, 55,0, 54,2, 50,0, 41,5, 39,9, 28,0

25,2, 24,0, 18,1, 15,6, 8,5.

ESI-MS m/z: vyrátané pre C₃₆H₄₇N₅O₉: 693,8. Zistené (M+H)⁺: 694,3

Príklad 3

Do nádoby obsahujúcej roztok 15 (8 g, 1,5 mmol) v metanole (1,6 1) bol pri teplote 0 °C pridaný vodný roztok 1 M hydroxidu sodného (3,2 1). Zmes bola 2 hod. miešaná pri teplote 0 °C a potom nastavená 6 M

HCI na pH = 5. Zmes bola extrahovaná etylacetátom (3x1 1) a zmiešané organické vrstvy boli usušené (sulfát sodný) a skoncentrované vo vákuu. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient CHC1₃ k CHCI3: etylacetát 2 : 1) pri vzniku 16 (5,3 mg, 68 %).

Rf: 0,48 (CH₃CN : H₂O 7 : 3, RP-C18) ’H NMR (300 MHz, CDClj): δ 6,73 (s, 1H), 5,43 (bs, 1H), 5,1 b (s, 2H), 4,54 (bs, 1H), 4,26 (d, 7= 1,8 Hz, 1H), 4,04 (d, 7= 2,7 Hz 1H), 3,84 (bs, 1H), 3,80 - 3,64 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,41 - 3,39 (m, 1H), 3,22 až 3,06 (m, 5H), 2,49 (d, 7 = 18,6 Hz 1H), 2,35 (s, 3H), 2,30 - 2,25 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,45 až 1,33 (m, 1 H), 1,19 (s, 9H), 1,00 (br d, 7 = 6,6 Hz 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCb): δ 184,9, 180,9, 172,6, 154,7, 151,3, 149,1, 148,6, 144,7, 132,9, 131,3, 129,8,

124,5, 123,7, 117,3, 116,8, 99,1, 79,4, 59,8, 58,6, 57,7, 56,2, 55,6, 54,9, 54,5, 50,1, 41,6, 40,1, 28,0, 25,3,

24,4, 18,1, 15,7, 8,0.

ESI-MS m/z vyrátané pre C35H45N5O9: 679,7. Zistené (M+H)⁺: 680,3

Príklad 4

Me

1) H/Pd-C 10%/DMF, 23“C

2) CICHjBr/CSjCOj/IWC

Me

K odplynenému roztoku zlúčeniny 16 (1,8 g, 2,64 mmol) v DMF (221 ml) bolo pridané 10 % Pd/C (360 mg) a roztok sa miešal vo vodíkovej atmosfére (atmosférický tlak) 45 min. Zmes bola prefiltrovaná cez celit v argónovej atmosfére do nádoby obsahujúcej bezvodý Cs₂CO₃ (2,58 g, 7,92 mmol). Potom bol pridaný brómchlórmetán (3,40 ml, 52,8 mmol). Nádoba s reakčnou zmesou bola uzatvorená a zmes bola miešaná pri 100 °C 2 hod. Reakčná zmes bola ochladená, filtrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂C1₂. Organická vrstva bola skoncentrovaná a vysušená (sulfát sodný) pri vzniku 17 vo forme hnedej olej ovitej látky, ktorá bola použitá v ďalšom kroku bez akejkoľvek purifikácie.

Rf: 0,36 (hexán: etylacetát 1:5, SiO₂).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,68 (s, 1 H), 6,05 (bs, 1H), 5,90 (s, 1H), 5,79 (s, 1H), 5,40 (bs, 1H), 5,31 až 5,24 (m, 2H), 4,67 (d, 7= 8,1 Hz, 1H), 4,19 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,07 (bs, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,64 - 2,96 (m, 5H), 2,65 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,01 až 1,95 (m, 1H), 1,28 (s, 9H), 0,87 (d, 7= 6,3 Hz, 3H) ^l3C NMR (75 MHz, CDCb): δ 172,1, 162,6, 154,9, 149,1,145,7, 135,9, 130,8, 130,7,125,1, 123,1, 117,8,

100,8, 99,8, 76,6, 59,8, 59,2, 57,7, 57,0, 56,7, 55,8, 55,2, 49,5, 41,6, 40,1, 36,5, 31,9, 31,6, 29,7, 28,2, 26,3, 25,0, 22,6, 18,2, 15,8, 14,1, 8,8.

ESI-MS m/z vyrátané pre C36H47N5O9: 693,34. Zistené (M+H)⁺: 694,3

Príklad 5

AllylBr, Cs₂CO₃DMF.Ih. 23’C

Do nádoby obsahujúcej roztok 17 (1,83 g, 2,65 mmol) v DMF (13 ml) bol pridaný Cs₂CO₃ (2,6 g, 7,97 mmol) a alylbromid (1,15 ml, 13,28 mmol) pri teplote 0 °C. Výsledná zmes bola miešaná pri 23 °C 1 hod. Reakčná zmes bola filtrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂C1₂. Organická vrstva bola vysušená a skoncentrovaná (sulfát sodný). Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, CHC1₃: etylacetát 1 : 4) pri vzniku 18 (1,08 mg, 56 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,36 (CHC1₃: etylacetát: 1 : 3).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,70 (s, 1H), 6,27 - 6,02 (m, 1H), 5,94 (s, 1H), 5,83 (s, 1H), 5,37 (dd, J= 1,01 Hz, J₂ = 16,8 Hz, 1 H), 5,40 (bs, 1H), 5,25 (dd, J, = 1,0 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,91 (bs, 1H), 4,25 - 4,22 (m, 1H), 4,21 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,14 - 4,10 (m, 1H), 4,08 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,56 - 3,35 (m, 2H), 3,26 - 3,20 (m, 2H), 3,05 - 2,96 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,63 (d, 7 = 18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,91 - 1,80 (m, 1H), 1,24 (s, 9H), 0,94 (d, J =6,6 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,0, 154,8, 148,8, 148,6, 148,4, 144,4, 138,8, 133,7, 130,9, 130,3, 125,1, 124,0, 120,9, 117,8, 117,4, 112,8, 112,6, 101,1, 99,2, 73,9, 59,7, 59,3, 57,7, 56,9, 56,8, 56,2, 55,2, 40,1, 34,6,

31,5, 28,1, 26,4, 25,1, 22,6, 18,5,15,7, 14,0, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C39H51N5O9: 733,4. Zistené (M+H)⁺: 734,4

Príklad 6

4.3M HCl/dioxán

1.2h. 23°C

Me

K roztoku 18 (0,1 g, 0,137 mmol) v dioxáne (2 ml) bol pridaný 4,2 M HCl/dioxán (1,46 ml) a zmes bola miešaná pri 23 °C 1,2 hod.. Reakcia bola zastavená pri 0 °C pomocou nasýteného vodného roztoku bikarbonátu sodného (60 ml) a extrahovaná s etylacetátom (2 x 70 ml). Organické vrstvy boli spojené a vysušené (sulfát sodný) a skoncentrovaný in vacuo pri vzniku 19 (267 mg, 95 %) vo forme bielej pevnej látky, ktorá bola v ďalších reakciách použitá bez akejkoľvek purifikácie

Rf: 0,17 (etyl acetát: metanol 10:1, SiO₂) 'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,49 (s, 1H), 6,12 - 6,00 (m,l H), 5,94 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,34 (dd, 7 = 1,0 Hz, 7= 17,4 Hz, 1 H), 5,25 (dd,. 7 = 1,0 Hz, 7 = 10,2 Hz 1H), 4,18 - 3,76 (m, 5H), 3,74 (s, 3H), 3,71 - 3,59 (m, 1H), 3,36 - 3,20 (m, 4H), 3,01 - 2,90 (m, 1H), 2,60 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,97 - 1,86 (m, 1H), 0,93 (d, 7= 8,7 Hz, 3H) ¹³CNMR (75 MHz, CDC1₃): δ 175,5, 148,4, 146,7, 144,4, 142,4, 138,9, 133,7, 131,3, 128,3, 120,8, 117,9,

117,4, 113,8, 112,4, 101,1, 74,2, 60,5, 59,1, 56,5, 56,1, 56,3, 56,0, 55,0, 50,5, 41,6, 39,5, 29,5, 26,4, 24,9, 21,1, 15,5,9,33.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃₉N₅O₆: 589. Zistené (M+H)⁺: 5 90

Príklad 7

Me

K roztoku 19 (250 mg, 0,42 mmol) v CH₂C1₂ (1,5 ml) bol pridaný fenylizotiokyanát (0,3 ml, 2,51 mmol) a zmes sa miešala pri 23 °C 1 hod. Reakčná zmes bola skoncentrovaná vo vákuu a zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán až 5 : 1 hexán : etylacetát) pri vzniku zlúčeniny 20 (270 mg, 87 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,56 (CHC1₃: etylacetát 1 : 4).

'H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 8,00 (bs, 1H), 7,45 - 6,97(m, 4H), 6,10(s, 1H), 6,08 - 6,00 (m, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,82 (s, 1 H), 5,40 (dd, 7= 1,5 Hz, 7= 17,1 Hz, 1 H), 3,38 (bs, 1H), 5,23 (dd, 7= 1,5 Hz, 7= 10,5 Hz, 1H), 4,42 - 4,36 (m, 1H), 4,19 - 4,03 (m, 5H), 3,71 (s, 3H), 3,68 - 3,17 (m, 4H), 2,90 (dd, 7 = = 7,8 Hz, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,57 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H),l,90 (dd, 7 = = 12,3 Hz, 7= 16,5 Hz, 1H), 0,81 (d, 7 =6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCfi): δ 178,4, 171,6, 148,6, 146,8, 144,3, 142,7, 138,7, 136,2, 133,6, 130,7, 129,8,

126,6, 124,2, 124,1, 120,9, 120,5, 117,7, 117,4, 116,7, 112,6, 112,5, 101,0, 74,0, 60,6, 59,0, 57,0, 56,2, 56,1, 55,0, 53,3, 41,4, 39,7, 26,3, 24,8, 18,3, 15,5, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₉H₄₄N₆O₆S: 724,8. Zistené (M+H)⁺: 725,3

Me

21

K roztoku 20 (270 mg, 0,37 mmol) v dioxáne (1 ml) bol pridaný 4,2 N CCI/dioxán (3,5 ml) a reakčná zmes sa miešala pri 23 °C 30 min. Potom sa pridal etylacetát (20 ml) a H₂O (20 ml) a organická vrstva bola centrifugovaná. Vodná fáza bola bazifíkovaná pomocou saturovaného vodného roztoku bikarbonátu sodného (60 ml) (pH = 8) pri 0 °C a potom extrahovaná CH₂C1₂ (2 x 50 ml). Organické extrakty boli spojené a vysušené (suifát sodný) a skoncentrované vo vákuu. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, etylacetát: metanol) pri vzniku zlúčeniny 21 (158 mg, 82 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,3 (etylacetát: metanol 1:1).

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,45 (s,l H), 6,12 - 6,03 (m, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,38 (dd, J, = 1,2 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,24 (dd, J, = 1,2 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 4,23 - 4,09 (m, 4H), 3,98 (d, 7 = 2,1 Hz, 1H), 3,90 (bs, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,36 - 3,02 (m, 5H), 2,72 - 2,71 (m, 2H), 2,48 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, J, = 11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 148,4, 146,7, 144,4, 142,8, 138,8, 133,8, 130,5, 128,8, 121,5, 120,8, 118,0,

117,5, 116,9, 113,6, 112,2, 101,1, 74,3, 60,7, 59,9, 58,8, 56,6, 56,5, 55,3, 44,2, 41,8, 29,7, 26,5, 25,7, 15,7,

9,4.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂9H₃₄N₄O₅: 518,3. Zistené (M+H)⁺: 519,2

Príklad 9

K roztoku 21 (0,64 g, 1,22 mmol) v CH₂C1₂ (6,13 ml) bol pridaný pyridín (0,104 ml, 1,28 mmol) a 2,2,2-trichlóretylchlórformiát (0,177 ml, 1,28 ml) pri teplote -10 °C. Reakčná zmes bola miešaná pri tejto teplote 1 hod., a potom bola reakcia zastavená pridaním 0,1 N HCI (10 ml) a extrahovaná CH₂C1₂ (2x10 ml). Organická vrstva bola vysušená (sulfát sodný) a skoncentrovaná vo vákuu. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 1 : 2) pri vzniku 22 (0,84 g, 98 %) vo forme bielej penovej pevnej látky.

Rf: 0,57 (etyl acetát: metanol 5 : 1).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 6,10 - 6,00 (m, 1H), 6,94 (d, 7 = 1,5 Hz, 1H), 5,87 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,73 (bs, 1H), 5,37 (dq, J, = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,26 (dq, J, = 1,8 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 4,60 (d, 7 = 12 Hz, 1H), 4,22 - 4,10 (m, 4H), 4,19 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,37 - 3,18 (m, 5H), 3,04 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,63 (d, 7 = 18 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, J, = 12,3 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 154,3, 148,5, 146,7, 144,5, 142,8, 139,0, 133,8, 130,7, 128,7, 121,3,

120,8,117,8, 117,7, 116,8, 112,7, 101,2, 77,2, 74,3, 60,7, 59,9, 57,0, 56,4, 55,3, 43,3, 41,7, 31,6, 26,4, 25,3,

22,6,15,9, 14,1,9,4.

ESI-MS m/z vyrátané pre C32H35CI3N4O7: 694,17. Zistené (M+H)⁺: 695,2

BrMOM, CH₃CN, DIPEA DMAP, 30°C, 10h.

K roztoku 22 (0,32 g, 0,46 mmol) v CH₃CN (2,33 ml) bol pridaný diizopropyletylamín (1,62 ml, 9,34 mmol), brómetylmetyléter (0,57 ml, 7,0 mmol) a dimetylaminopyridín (6 mg, 0,046 mmol) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes bola ohrievaná pri 30 °C 10 hod. Potom bola reakčná zmes zriedená dichlorometánom (30 ml) a pridaná do vodného roztoku HCI, pH5 (10 ml). Organická vrstva bola vysušená (sulfát sodný) a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom pri vzniku zvyšku, ktorý bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 2 : 1) pri vzniku 23 (0,304 g, 88 %) vo forme bielej penovej pevnej látky.

Rf: 0,62 (hexán : etylacetát 1:3).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,73 (s, 1H), 6,10 (m, 1H), 5,94 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,88 (d, 7= 1,5 Hz, 1H),

5,39 (dq, J, = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,26 (dq, 7/ = 1,8 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,61 (d, 7= 12 Hz, 1H), 4,55 (t, 7= 6,6 Hz, 1H), 4,25 (d, 7= 12 Hz, 1H), 4,22 - 4,11 (m, 4H), 4,03 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,38 - 3,21 (m, 5H), 3,05 (dd, 7, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,65 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,79 (dd, J, = 12,3 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 154,3, 148,6, 148,4, 144,5, 139,0, 133,6, 130,6, 130,1, 125,07, 124,7, 124,0, 121,1, 117,7, 112,6, 101,2, 99,2, 77,2, 74,4, 74,1, 59,8, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 56,68, 55,3, 43,2, 41,5, 26,4,

25,2, 15,9, 9,3,

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₄H₃9C1₃N₄O₈: 738,2. Zistené (M+H)⁺: 739,0

AcOH aq. Zn 7h. 23*C

K suspenzii 23 (0,304 g, 0,41 mmol) v 90 % vodnom roztoku kyseliny octovej (4 ml) bol pridaný zinkový prášok (0,2 g, 6,17 mmol) a reakčná zmes bola miešaná pri 23 °C 7 hod. Zmes bola filtrovaná cez vrstvu celi43 tu, ktorá bola premytá CH₂C1₂. Organická vrstva bola premytá saturovaným vodným roztokom bikarbonátu sodného (pH 9) (I 5 ml) a vysušená (sulfát sodný). Rozpúšťadlo bolo odparené podtlakom pri vzniku 24 (0,191 g, 83 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,3 (etylacetát: metanol 5:1).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,68 (s,l H), 6,09 (m, 1H), 5,90 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,83 (d, J= 1,5 Hz, 1H),

5,39 (dq, J, = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,25 (dq, J, = 1,5 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,22 - 4,09 (m, 3H), 3,98 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,37 - 3,17 (m, 3H), 3,07 (dd, J, = = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,71 (m, 2H), 2,48 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 21,7 (s, 3H), 1,80 (dd, J, = 12,3 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H) ”CNMR (75 MHz, CDC1₃): δ 148,5, 148,2, 144,3, 138,7,133,7, 130,7, 129,9, 125,0, 123,9, 121,3, 117,9,

117.5, 113,6, 112,0, 101,0, 99,2, 74,0, 59,8, 59,7, 58,8, 57,6, 57,0, 56,2, 55,2, 44,2, 41,5, 31,5, 26,4, 25,6,

22.5, 16,7, 14,0, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃iH₃₈N₄O₆: 562,66. Zistené (M+H)⁺: 563,1

Me

H₂O. THF. AcOH. NaNO₂3h, 0^eC.

Me

K roztoku 24 (20 mg, 0,035 mmol) v H₂O (0,7 ml) a THF (0,7 ml) bol pridaný NaNO₂ (12 mg, 0,17 mmol) a 90 % voľný roztok AcOH (0,06 ml) pri teplote 0 °C a pri tejto teplote sa reakčná zmes miešala 3 hod. Po zriedení CH₂C1₂ (5 ml) bola organická vrstva premytá vodou (1 ml), vysušená cez sulfát sodný a skoncentrovaná vo vákuu. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 2 : 1) pri vzniku 25 (9,8 mg, 50 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,34 (hexán : etylacetát 1 : 1).

’H NMR (300 MHz, CDClj): δ 6,71 (s, 1H), 6,11 (m, 1H), 5,92 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,87 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,42 (dq, J, = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,28 (dq, J_t = 1,5 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,26 - 4,09 (m, 3H), 4,05 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,97 (t, J = 3,0 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,67 - 3,32 (m, 4H), 3,58 (s, 3H), 3,24 (dd, J, = 2,7 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 3,12 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,51 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,83 (dd, 7_; = 12,3 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 148,7, 148,4, 138,9, 133,7, 131,1, 129,4, 125,1, 123,9, 120,7, 117,6, 117,5,

113.2, 112,3, 101,1, 99,2, 74,0, 63,2, 59,8, 59,7, 57,9, 57,7, 57,0, 56,5, 55,2, 41,6, 29,6, 26,1, 25,6, 22,6,15,7,

9.2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₁H₃₇N₃O₇: 563,64. Zistené (M+H)⁺: 564,1

2.2.2-Trichloroethyl chlorofomtíl NaH. THF. reflux

Východisková zlúčenina (2,0 g, 5,90 mmol) sa pridala k suspenzii hydridu sodného (354 mg, 8,86 mmol) v THF (40 ml) pri teplote 23 °C. Potom bol k suspenzii pridaný alylchlórformiát (1,135 ml, 8,25 mmol) pri teplote 23 °C a táto reakcia prebiehala 3 hod. Suspenzia bola ochladená, odfiltrovaná, pevná látka bola premytá etylacetátom (100 ml) a filtrát bol skoncentrovaný. Olejovitý hrubý produkt sa rozotrel s hexánom (100 ml) a cez noc uložený do 4 °C. Potom sa rozpúšťadlo odstredilo a ku svetložltej riedkej hmote sa pridal CH₂C1₂ (20 ml). Reakčná zmes bola precipitovaná hexánom (100 ml). Po 10 minútach sa rozpúšťadlo opäť odstredilo. Táto procedúra bola opakovaná do tej doby, až sa objavila biela pevná látka. Biela pevná látka bola odfiltrovaná a vysušená pri vzniku zlúčeniny 29 (1,80 g, 65 %) vo forme bielej pevnej látky.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,74 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,62 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 7,33 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,30 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 5,71 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 4,73 (d, J= 7,8 Hz, 2H), 4,59 (m, 1H), 4,11 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 3,17 (dd, J= 6,0 Hz, J= 2,7 Hz, 2H), 3,20 (dd, 7 = 5,4 Hz, J= 2,1 Hz, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 173,6, 152,7, 144,0, 139,7, 137,8, 126,0, 125,6, 123,4, 118,3, 73,4, 52,4, 45,5,

35,8,33,7.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂₀Hi₈Ci₃NO₄S: 474,8. Zistené (M+H)⁺: 497,8

Príklad 14

Zmes zlúčeniny 25 (585 mg, 1,03 mmol) a zlúčeniny 29 (1,47 mg, 3,11 mmol) bola azeotropovaná bezvodým toluénom (3x10 ml). K roztoku 25 a 29 v bezvodom CH₂C1₂ (40 ml) sa pridal DMAP (633 mg, 5,18 mmol) a EDC . HCI (994 mg, 5,18 mmol) pri teplote 23 °C. Reakčná zmes bola miešaná 3 hod. pri 23 °C. Zmes bola rozdelená pomocou nasýteného vodného roztoku bikarbonátu sodného (50 ml) a vrstvy boli oddelené. Vodná fáza bola premytá CH₂C1₂ (50 ml). Organické fázy boli spojené a vysušené cez sulfát sodný, filtrované a skoncentrované. Hrubý produkt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán 1 : 3) pri vzniku 30 (1,00 g, 95 %) vo forme svetlosmotanovej žltej pevnej látky.

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,72 (m, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,28 (m, 2H), 6,65 (s, 1H), 6,03 (m, 1H), 5,92 (d, 7 = 1,5 Hz, 1H), 5,79 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,39 (m, 1H), 5,29 (dq, 7= 10,3 Hz, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,73 (d, 7= 11,9 Hz, 1H), 4,66 (d, 7= 11,9 Hz, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,36 - 3,96 (m, 9H), 3,89 (t, 7 = 6,4 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 3,33 (m, 1H), 3,20 (m, 2H), 2,94 (m, 3H), 2,59 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,83 (dd,7= 16,0 Hz, 7= 11,9 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 169,7, 154,0, 148,8, 148,4, 145,7, 144,5, 140,9, 139,0, 133,7, 130,9, 130,6,

127,6, 127,0, 124,8, 124,6, 124,1, 120,8, 119,9, 118,2, 117,7, 117,3, 112,7, 112,1, 101,3, 99,2, 74,7, 73,9,

64,4, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 55,4, 53,3, 46,7, 41,4, 36,5, 34,7, 31,5, 26,4, 24,9, 22,6, 15,7, 14,0, 9,1.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₅iH₅₃Ci₃N₄Oi₀S: 1020,4. Zistené (M+H)⁺: 1021,2

31

K roztoku 30 (854 mg, 0,82 mmol) sa pri teplote 23 °C pridala kyselina octová (500 mg, 8,28 mmol), (PPh₃)₂PdCl₂ (29 mg, 0,04 mmol) v bezvodom CH₂C1₂ (20 ml) a po kvapkách Bu₃SnH (650 mg, 2,23 mmol). Reakčná zmes bola miešaná pri tejto teplote 15 min. Reakcia bola zastavená vodou (50 ml) a extrahovaná CH₂C1₂ (3x50 ml). Spojené organické fázy boli vysušené cez sulfát sodný, filtrované a skoncentrované. Hrubý produkt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán s gradientom od 1 : 5 až po 1 : 3) pri vzniku zlúčeniny 31 (730 mg, 90 %) vo forme svetlosmotanovej žltej pevnej látky.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 77,2 (m, 2H), 7,56 (m, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,30 (m, 2H), 6,65 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,77 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,36 (d, 7= 5,9 Hz, 1H), 5,32 (d, 7= 5,9 Hz, 1 H), 5,20 (d, 7= 9,0,1H), 4,75 (d, 7= 12,0 Hz, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,48 (d, 7 = 11,9 Hz, 1H), 4,08 (m, 4H), 3,89 (m, 1H), 3,86, (t, 7= 6,2 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,38 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,02 - 2,89 (m, 4H), 2,67 (s, 1 H), 2,61 (s, 1H), 2,51 (dd, 7= 14,3 Hz, 7= 4,5 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,83 (m, 1H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,2, 152,5, 148,1, 146,2, 144,4, 144,3, 143,3, 139,6, 134,6, 129,7, 129,6,

126,2, 125,6, 123,4, 123,3, 121,6, 118,5, 116,3, 110,7, 110,2, 105,1, 99,4, 98,5, 75,2, 73,3, 61,7, 58,4, 57,9, 56,3, 56,1, 55,1, 54,7, 53,9, 51,9, 45,2, 40,1, 35,6, 33,3, 24,8, 23,3, 14,5, 7,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₄₈H₄₉Ci₃N₄O₁₀: 980,3. Zistené (M+H)⁺: 981,2

Príklad 16

K roztoku 31 (310 mg, 0,32 mmol) v bezvodom CH₂C1₂ (15 ml) pri teplote -10 °C bol pomocou kanyly pridaný roztok 70 % anhydridu benzénselénu (165 mg, 0,32 mmol) v bezvodom CH₂C1₂ (7 ml). Teplota reakčnej zmesi bola udržiavaná na -10 °C a miešaná 5 min. Pri tejto teplote sa pridal nasýtený roztok bikarbonátu sodného (30 ml). Vodná fáza bola premytá nadbytkom CH₂C1₂ (40 ml). Spojené organické vrstvy boli vysušené pomocou sulfátu sodného, filtrované a skoncentrované. Hrubý extrakt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán s gradientom od 1 : 5 až po 2 : 1) pri vzniku zlúčeniny 32 (287 mg, 91 %) vo forme zmesi dvoch izomérov (65 : 35) svetlosmotanovej žltej pevnej látky, ktoré boli použité v nasledujúcom kroku.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ (zmes izomérov) 7,76 (m, 4H), 7,65 (m, 4H), 7,39 (m, 4H), 7,29 (m, 4H), 6,62 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,79 - 5,63 (m, 6H), 5,09 (s, 1H), 5,02 (d, 7= 6,0 Hz, 1H), 4,99 (d, 7= 6,0 Hz, 1H), 4,80 - 4,63 (m, 6H), 4,60 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,38 (d, 7= 128 Hz, 7= 7,5 Hz, 1H), 4,27 (dd, 7= 12,8 Hz, 7= 7,5 Hz, 1H), 4,16 - 3,90 (m, 10H), 3,84 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,33 - 2,83 (m, 14H), 2,45 - 2,18 (m, 2H), 2,21 (s, 6H), 2,17 (s, 6H),1,77 (s, 6H),1,67 (m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): δ (zmes izomérov) 168,6, 168,4, 158,6, 154,8, 152,8, 152,5, 147,3, 147,2,

146,8, 144,1, 144,0, 140,8, 139,7, 137,1, 129,8, 129,3, 128,4, 128,7,126,5, 125,5, 123,7, 123,6, 123,5, 123,4,

122,2, 121,3, 118,3, 115,8, 115,5, 110,2, 106,9, 103,5, 103,2, 100,1, 99,6, 97,9, 97,7, 93,8, 73,4, 70,9, 69,2,

64,9, 62,5, 59,3, 58,9, 58,4, 56,7, 56,3, 56,2, 55,4, 55,2, 55,1, 54,9, 54,7, 54,3, 54,1, 53,8, 52,8, 45,5, 40,5, 40,0, 39,8, 35,8, 35,5, 33,9, 33,7, 30,1, 28,8, 24,2, 24,1, 21,2, 14,5, 14,4, 12,7, 6,0, 5,7.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₄₈H₄₉Ci₃N₄OnS: 996,3. Zistené (M+H)⁺: 997,2

Príklad 17

1) DMSO, Tf₂O

2) DIPEA

3) 'BuOH

N'Bu o X

Me₂N NMe₂

5) AcjO, CHjCIj

Reakčná nádoba bola dva razy vypálená plameňom, viac ráz na ňu pôsobilo vákuum/argón a uskladnená v argónovej atmosfére. K roztoku DMSO (39,1 ml, 0,55 mmol, 5 ekvivalentov) v bezvodom CH₂C1₂ (4,5 ml) bol po kvapkách pridaný triflic anhydrid (37,3 ml, 0,22 mmol, 2 ekvivalent), pri teplote -78 °C. Reakčná zmes bola miešaná pri -78 °C 20 min., potom sa kanylou pridal roztok 32 (110 mg, 0,11 mmol, HPLC: 91,3 %) v bezvodom CH₂C1₂ (1 ml ako hlavný prídavok, 0,5 ml na premývanie), pri -78 °C. Počas pridávania reaktantov bola teplota reakčnej zmesi udržiavaná na -78 °C v obidvoch nádobách a farba zmesi sa zmenila zo žltej na hnedú. Reakčná zmes sa miešala 35 min. pri teplote -40 °C. Farba roztoku sa zmenila zo žltej na tmavozelenú. Potom sa po kvapkách pridal ’Pr₂NEt (153 ml, 0,88 ml, 8 ekvivalentov) a teplota reakčnej zmesi bola udržiavaná na 0 °C počas 45 min. a farba roztoku sa zmenila na hnedú. Potom sa po kvapkách pridal íerc-butanol (41,6 ml, 0,44 mmol, 4 ekvivalenty) a 2-terc-butyl-l,l,3,3-tetrametylguanidín (132,8 ml, 0,77 mmol, 7 ekvivalentov). Reakčná zmes sa miešala 40 min. pri teplote 23 °C. Potom sa po kvapkách pridal acetanhydrid (104,3 ml, 1,10 mmol, 10 ekvivalentov) a reakčná zmes sa ďalšiu hodinu udržiavala pri teplote 23 °C. Potom sa reakčná zmes zriedila CH₂C1₂ (20 ml) a premyla vodným nasýteným roztokom NH₄C1 (50 ml), bikarbonátu sodného (50 ml) a chloridu sodného (SO ml). Spojené organické fázy boli usušené pomocou sulfátu sodného, filtrované a skoncentrované. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (elučné činidlo: etylacetát/hexánový gradient od 1 : 3 až po 1 : 2) pri vzniku zlúčeniny 33 (54 mg, 58 %) vo forme svetložltej pevnej látky.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,85 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,20 (d, 7= 5,8 Hz, 1H), 5,14 (d, J = = 5,3 Hz, 1H), 5,03 (m, 1H), 4,82 (d, J= 12,2, 1H), 4,63 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,35 - 4,17 (m, 4H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (m, 2H), 2,03 (s, 3H).

^I3C-NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,5, 167,2, 152,7, 148,1, 147,1, 144,5, 139,6, 139,1, 130,5, 129,0, 123,7,

123,5, 123,3, 1188, 116,5, 112,1, 100,6, 97,8, 73,3, 60,5, 59,4, 59,2, 58,3, 57,6, 57,4, 56,1, 53,3, 53,1, 40,6, 40,0,31,0,22,2, 18,9, 14,4, 8,1.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₆H₃₉Ci₃N₄OnS: 842,1. Zistené (M+H)⁺: 843,1

Príklad 18

K roztoku 33 (12 mg, 0,014 mmol) v suchom dichlórmetáne (1,2 ml) a HPLC čistom acetonitrile (1,2 ml) sa pridal pri teplote 23 °C jodid sodný (21 mg, 0,14 mmol) a čerstvo destilovaný (cez kalciumhydrid pod atmosférickým tlakom) trimetylsilylchlorid (15,4 mg, 0,14 mmol). Farba reakčnej zmesi sa zmenila na oranžovú. Po 15 min. bol roztok zriedený dichlórmetánom (10 ml) a premytý čerstvým, vodou nasýteným roztokom Na₂S₂O₄ (3x10 ml). Organická fáza bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a skoncentrovaná. Získaná bola zlúčenina 34 (13 mg, kvantitatívnych) vo forme svetložltej pevnej látky, ktorá sa ďalej použila bez akejkoľvek purifikácie.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,85 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,27 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 5,14 (d, J = = 5,3 Hz, 1H), 5,03 (d, 7= 11,9 Hz, 1H), 4,82 (d, J= 12,2 Hz, 1H), 4,63 (d, J= 13,0 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 4,27 (bs, 1H), 4,18 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,44 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₄H₃₅N₄Oi₀S: 798,1. Zistené (M+H)⁺: 799,1

Príklad 19

K roztoku 34 (13 mg, 0,016 mmol) v zmesi kyseliny octovej vo vode (90 : 1, 1 ml) bol pridaný zinkový prášok (5,3 mg, 0,081 mmol) pri teplote 23 °C. Reakčná zmes bola ohrievaná 6 hod. na teplotu 70 °C. Potom bola reakčná zmes ochladená na 23 °C, zriedená CH₂C1₂ (20 ml) a premytá vodným nasýteným roztokom bikarbonátu sodného (15 ml) a vodným roztokom Et₃N (15 ml). Organická fáza bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a skoncentrovaná. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (elučné činidlo: etylacetát/hexánový gradient od 0 : 100 až po 50 : 50) pri vzniku zlúčeniny 35 (6,8 mg, 77 % - 2 kroky) vo forme svetložltej pevnej látky.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,51 (s, 1H), 6,03 (dd, 7= 1,3 Hz, 7= 26,5 Hz, 2H), 5,75 (bs, 1H), 5,02 (d, 7 = 11,6 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), 4,18 (d, 7 = 2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, 7 = 1,9 Hz, 7 = 11,5 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,40 (m, 2H), 3,26 (t, 7= 6,4 Hz, 1H), 2,88 (m, 2H), 2,30 - 2,10 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,02 (s, 3H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 174,1, 168,4, 147,8, 145,4, 142,9, 140,8, 140,1, 131,7, 130,2, 129,1, 128,3,

120.4, 118,3, 117,9, 113,8, 111,7, 101,7, 61,2, 59,8, 59,2, 589, 544, 53,8, 54,4, 41,3, 41,5, 34,1, 23,6, 20,3,

15.5.9.4.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃iH₃₄N₄O₈S: 622,7 Zistené (M+H)⁺: 623,2

Príklad 20

K roztoku 36 (49 mg, 0,08 mmol) a 2-[3-hydroxy-4-metoxyfenyl]etylamínu (46,2 mg, 0,27 mmol) v etanole (2,5 ml) bol pridaný silikagél (105 mg) pri teplote 23 °C. Reakčná zmes bola miešaná 14 hod. pri teplote 23 °C. Reakčná zmes bola zriedená hexánom a naliata do chromatografickej kolóny (etylacetát/hexán od 1 : 3 až do 1 : 1) pri vzniku Et-770 (55 mg, 90 %) vo forme svetložltej pevnej látky.

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,60 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 5,02 (d, J = = 11,4 Hz, 1H), 4,57 (bs, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,28 (d, 7 = 5,3 Hz, 1H), 4,18 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, 7 = = 2,1 Hz, 7= 11,5 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (d, 7 = 5,0 Hz, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,10 (ddd, 7 = = 4,0 Hz, 7= 10,0 Hz, 7= 11,0 Hz, 1H), 2,94 (m, 2H), 2,79 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,09 (m, 1H), 2,04 (s, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C40H42N4O10S: 770,7. Zistené (M+H)⁺: 771,2

Príklad 22

K roztoku 21 (22 mg, 0,042 mmol) v CH2CI2 (0,8 ml) bol pridaný ftalát anhydrid (6,44 mg, 0,042 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 2 hod. pri 23 °C. Potom bol pridaný karbonyldiimidazol (1 mg, 0,006 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 7 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný karbonyldiimidazol (5,86 mg, 0,035 mmol) a reakčná zmes bola miešaná ďalších 17 hod. pri teplote 23 °C. Roztok bol zriedený CH₂C1₂ (15 ml) a premytý 0,1 N HCI (15 ml). Organická fáza bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : : etylacetát 2 : 1) pri vzniku 27 (26,4 mg, 96 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,58 (etylacetát).

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): 7,73 - 7,64 (m, 4H), 6,40 (s, 1H), 6,12 - 6,01 (m, 1H), 5,63 (s, 1H), 5,58 (d, 7 = 1,5 Hz, 1H), 5,37 (dd, J₁ = 1,8 Hz, J₂ = 17,4 Hz), 5,23 (dd, 7, = 1,8 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1 H), 5,12 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 4,22 - 4,15 (m, 3H), 4,08 (d, 7= 1,8 Hz, 1 H), 3,68 (s, 3H), 3,59 - 3,55 (m, 2H), 3,35 (d, 7= 8,1 Hz, 1H), 3,27 - 3,16 (m, 2H), 3,05 (dd, 7, = 8,1 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1 H), 2,64 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,80 (dd, J, = 11,4 Hz, J₂ = 15 Hz, 1 H);

^I3C-NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 167,7, 148,9, 146,4, 144,2, 142,6, 139,5, 134,0, 133,5, 132,0, 131,0, 128,3, 123,0, 121,3, 120,9, 118,1, 117,5, 116,8, 113,6, 112,4, 100,8, 74,5, 60,6, 60,5, 57,7, 56,6, 55,6, 55,5, 42,3,

41,7,26,6, 25,5, 15,9,9,46.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₇H₃₅N₄O₇: 648,79. Zistené (M+H)⁺: 649,3

Príklad 23

K roztoku 27 (26 mg, 0,041 mmol) v CH₂C1₂ (11 ml) bola pridaná kyselina octová (11 ml), (PPh3)PdCl₂(2,36 mg) a Bu₃SnH (28 ml, 0,10 mmol) pri teplote 23 °C. Po dvojhodinovom miešaní pri tejto teplote sa re49 akčná zmes naliala do separačnej kolóny (SiO₂, gradient hexán : etylacetát 2 : 1) pri vzniku 28 (24,7 mg, 99 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,33 (hexán : etylacetát. 2:1).

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,75 - 7,70 (m, 2H), 7,69 - 7,65 (m, 2H), 6,39 (s, 1H), 5,82 (bs, 1H), 5,50 (á, = 1,5 Hz, 1H), 5,0 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 4,45 (bs, 1H), 4,23 - 4,19 (m, 2H), 4,10 - 4,09 (m, 1H), 3,73 (s, 3H),

3.60 - 3,48 (m, 2H), 3,36 - 3,33 (m, 1H), 3,26 - 3,20 (m, 1H), 3,14 - 3,08 (m, 1H), 3,98 (d, 7= 14,4 Hz, 1H),

2.61 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s, 3H),1,85 (dd, 7, = 12 Hz, J₂ = 15,3 Hz); ’³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 167,8, 146,4, 145,1, 143,9, 142,7, 137,1, 133,5, 131,9, 130,8, 128,4, 122,9,

120,8, 118,0, 116,8, 114,0, 113,4, 106,4, 100,4, 60,6, 60,5, 57,8, 56,6, 55,5, 55,2, 42,6, 41,5, 25,6, 25,5, 15,8,

8,9.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₄H₃₂N₄O₇: 608,6. Zistené (M+H)⁺: 609,2

CHjCOCI. py, CH₂CI₂O’C, 1h

Ftalascidín

K roztoku 28 (375 mg, 0,058 mmol) v CH₂C1₂ (3 ml) bol pridaný acetylchlorid (41,58 ml. 0,58 mmol) a pyridín (47,3 ml, 0,58 mmol) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (15 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (15 ml). Organická fáza bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CH₃CN : H₂O 60 : 40) pri vzniku ftalascidínu (354 mg, 94 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,37 (CH₃CN : H₂O 7 : 3, RP-18).

’H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,72 - 7,68 (m, 2H), 7,67 - 7,63 (m, 2H), 6,38 (s, 1H), 5,69 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,25 - 4,21 (m, 2H), 4,02 (d, 7 = 2,1 Hz, 1H), 3,64 - 3,62 (m, 5H), 3,33 (d, 7= 8,4 Hz, 1H), 3,21-3,16 (m, 1H), 3,02 (dd, J, = 8,1 Hz, 7, = 18 Hz, 1 H), 2,76 (dd, 7/ = 1,8 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1 H), 2,63 (d, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,29 (s, 3 H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,73 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 15,3 Hz, 1 H) ^l3C-NMR (75 MHz, CDClj): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8, 130,7, 128,2,

120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6, 41,5, 26,5, 25,2, 20,2,15,7,

9,4.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₆H₃₄N₄O₈: 650. Zistené (M+H)⁺: 651,2

Príklad 25

<2

K roztoku 17 (300 mg, 0,432 mmol)v CH₂C1₂ (2 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný acetylchlorid (30,7 ml, 0,432 mmol) a pyridín (34,9 ml, 0,432 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 2 hod. pri teplote 0 °C a potom sa roztok zriedil pomocou CH₂C1₂ (15 ml) a prepláchol 0,1 N HCI (15 ml). Organická vrstva bola vysušená cez vrstvu sulfátu sodného, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom pri vzniku zlúčeniny 42 (318 mg, 100 %) v podobe bielej pevnej látky, ktorá bola použitá v nasledujúcich reakciách bez ďalšej purifikácie.

Rf: 0,5 (etylacetát: metanol 5:1).

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,66 (s, IH), 5,93 (d, J = 1,2 Hz, IH), 5,83 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,42 (t, J = = 6,6 Hz, IH), 5,07 (d, J= 5,7 Hz, IH), 4,98 (d, J= 5,7 Hz, IH), 4,16 (d, 7 = 1,8 Hz, IH), 4,11 (d, 7 = 2,7 Hz, IH), 3,98 (bs, IH), 3,73 - 3,61 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,52 - 3,48 (m, IH), 3,50 (s, 3H), 3,33 (d, 7= 9,6 Hz, IH), 3,17 - 3,14 (m, IH), 2,97 - 2,87 (m, IH), 2,75 - 2,70 (d, 7= 16,8 Hz, IH), 2,26 (s, 6H), 2,16 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,70 (dd, J, = 11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz, IH), 1,33 (s, 9H), 0,59 (d, 7= 6,0 Hz, 3H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,0, 168,3, 162,3, 148,2, 144,4, 140,4, 140,2, 130,9, 130,5, 125,3, 123,4, 120,8, 117,6, 112,7, 111,7, 101,4, 99,1, 79,2, 59,5, 58,8, 57,5, 57,4, 56,4, 55,5, 55,0, 41,3, 39,0, 28,2, 26,4,

24,6, 19,9, 18,4, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z vyrátané pre C^^NsCho: 735,82. Zistené (M+H)⁺: 736,3

Príklad 26

K roztoku 42 (318 mg, 0,432 mmol) v CH₂C1₂ (2,16 ml) bola pridaná trifluorooctová kyselina (1,33 ml, 17,30 mmol) a reakčná zmes bola miešaná pri teplote 23 °C 3,5-hod. Reakcia bola zastavená pri teplote 0 °C pomocou nasýteného vodného roztoku bikarbonátu sodného (60 ml) a extrahovaná CH₂C1₂ (2x 70 ml). Spojené organické vrstvy boli vysušené (sulfát sodný) a skoncentrované vo vákuu. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, etylacetát : metanol 20 : 1) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (43) (154 mg, 60 %) v podobe bielej pevnej látky.

Rf: 0,22 (etylacetát: metanol 5:1).

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,47 (s, IH), 6,22 (bs, IH), 5,95 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 5,88 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 4,08 - 4,06 (m, 2H), 4,01 (bs, IH), 3,69 (s, 3H), 3,49 (d,7= 3,6 Hz, IH), 3,33 (d,7= 8,1 Hz, IH), 3,26 - 3,22 (m, IH), 2,95 (dd, 7₇ = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, IH), 2,80 - 2,76 (m, 2H), 2,58 (d, 7= 18 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,77 (dd, J, = 12,3 Hz, J₂ = 15,6 Hz, IH), 0,90 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 174,8, 169,0, 146,8, 144,4, 142,8, 140,5, 140,2. 131,1, 128,8,120,8,120,5, 117,1, 112,9, 111,6, 101,5, 60,3, 59,0, 56,5, 56,3, 55,6, 55,1, 50,2, 41,6, 39,5, 26,8, 26,3, 24,9, 20,2, 15,4, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C3iH₃7N₅O₇: 591,65. Zistené (M+H)⁺: 592,3

Príklad 27

K roztoku 43 (154 mg, 0,26 mmol) v CkfiCfi (1,3 ml) bol pridaný fenylizotiokyanát (186 ml, 1,56 mmol) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná 2 hod. Reakčná zmes bola skoncentrovaná vo vákuu a zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán až po hexán : etylacetát 1 : 1) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (44) (120 mg, 63 %) v tvare bielej pevné látky.

Rf: 0,41 (etylacetát: metanol 5 : 1).

'H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 8,17 (s, 1H), 7,49 - 7,44 (m, 3H), 7,31 - 7,24 (m, 3H), 7,05 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 5,98 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,52 (bs, 1H), 4,54 (t, 7= 6,6 Hz, 1H), 4,15 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,03 (d, 7=2,7 Hz, 2H), 3,80 (bs, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,40 (bs, 1H), 3,32 (d, 7= 7,8 Hz, 1H), 3,16 {d, 7= 11,7 Hz, 1H), 2,82 - 2,61 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,99 (s, 3H),1,8O (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 0,62 (d, 7= 6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCfi) 8 178,5, 171,9, 168,7, 146,7, 144,5, 142,6, 140,6, 140,3, 136,3, 131,0, 129,9,

128,9, 126,7, 124,4, 120,9, 120,6, 117,7, 116,6, 112,7, 111,9, 101,4 60,4, 58,7, 57,5, 56,1, 55,7, 55,1, 53,3,

41,4, 38,8, 26,3, 24,4, 20,2, 18,1, 15,3, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₈H₄₂N₆O₇S: 726,3. Zistené (M+H)⁺: 727,3

Príklad 28

Me

5.3N HCI v Dioxánfc

2.5h. 23 *C y^+x^NHCSNHPh

M e

Me

K roztoku 44 (120 mg, 0,165 mmol) v dioxáne (0,9 ml) sa pridal 5,3 N HCl/dioxán (1,8 ml) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná 2,5-hod. Potom sa k reakčnej zmesi pridal CH₂C1₂ (10 ml) a H₂O (5 ml) a organická fáza bola odstredená. Vodná fáza bola alkalizovaná pomocou roztoku saturovaného bikarbonátu sodného (20 ml) (pH 8) pri teplote 0 °C a potom extrahovaná pomocou CH₂Cfi (2x15 ml). Spojené organické extrakty boli vysušené (suifát sodný) a skoncentrované vo vákuu pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (45) (75 mg, 87 %) vo forme bielej pevnej látky, ktorá bola použitá v nasledujúcich reakciách bez ďalšej purifikácie.

Rf: 0,23 (etylacetát: metanol 5 : 1).

'H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 6,43 (s, 1H), 5,94 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 4,10 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 3,98 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,91 (bs, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,34 - 3,25 (m, 2H), 3,05 (dd, J, = 1,8 Hz, J₂ = 8,1 Hz, 1H), 2,80 - 2,73 (m, 3H), 2,46 (d, 7=18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,20 (s, 3H),1,98 (s, 3H), 1,79 (dd, J, = 12,6 Hz, J₂ = 16,2 Hz, 1H);

¹³CNMR (75 MHz, CDCfi): δ 168,7, 146,7, 144,4, 142,9, 140,4, 130,4, 128,9, 121,1, 120,8, 117,8, 116,8,

113,6, 111,5, 101,4, 67,6, 60,5, 59,8, 58,4, 56,6, 55,8, 55,3, 43,6, 41,8, 31,3, 25,6, 20,2, 15,6, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂₈H₃₂N₄O₆: 520,58. Zistené (M+H)⁺: 521,3

Príklad 29

K roztoku 45 (10 mg, 0,02 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) bol pridaný ftalát anhydrid (2,84 mg, 0,02 mmol) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná 2 hod. Potom sa pridal karbonylimidazol (0,5 mg, 0,003 mmol) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná 7 hod. Potom sa pridal karbonylimidazol (2,61 mg, 0,016 mmol) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná ďalších 7 hod. Roztok bol zriedený pomocou CH₂C1₂(10 ml) a premytý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená pomocou sulfátu sodného, filtrovaná a rozpúšťadlo sa odstránilo podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CHjCN : H₂O 60 : 40) pri vzniku ftalascidínu (11,7 mg, 93 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,37 (CHjCN : H₂O 7 : 3, RP-18).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,72 - 7,68 (m, 2 h), 7,67 - 7,63 (m, 2 h), 6,38 (s, 1H), 5,69 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,25 - 4,21 (m, 2 h), 4,02 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 3,64 - 3,62 (m, 5H), 3,33 (d, 7= 8,4 Hz, 1H), 3,21 - 3,16 (m, 1H), 3,02 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,76 (dd, J, = 1,8 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 2,63 (d, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,73 (dd, 7; = 12,0 Hz, J₂ = 15,3 Hz, 1H);

’³C NMR (75 MHz, CDClj): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8, 130,7, 128,2,

120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 64,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6, 41,5, 26,5, 25,2, 20,2, 15,7,

9,4.

ESI-MS m/z vyrátané pre C_3ôHj4N₄O₈: 650. Zistené (M+H)⁺: 651,2

K roztoku 25 (18 mg, 0,032 mmol) v DMF (0,05 ml) sa pri teplote 0 °C pridal DMAP (0,5 mg, 0,004 mmol), imidazol (5 mg, 0,08 mmol) a terc-butyldifenylsilyl-chlorid (12,5 ml, 0,048 mmol) a reakčná zmes bola pri teplote 23 °C miešaná 6 hod. Pri teplote 0 °C sa pridala voda (10 ml) a vodná fáza sa extrahovala pomocou hexán : etylacetát 1 : 10 (2x10 ml). Organická vrstva bola vysušená (sulfát sodný), filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu. Hrubý extrakt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 3 : 1) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (26) (27 mg, 88 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,29 (hexán : etylacetát 3 : 1).

’H NMR (300 MHz, CDClj) δ 7,61 - 7,58 (m, 2 h), 7,42 - 7,28 (m, 8H), 6,71 (s, 1H), 6,19 - 6,02 (m, 1H), 5,78 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,44 (dd, 7/ = 1,2 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,27 (dd, 7, = 1,2 Hz, 7, = 10,2 Hz, 1H), 5,13 (s, 2h), 4,45 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 4,24 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,17 - 4,06 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,64 (dd, J, = 2,4 Hz, J₂ = 9,9 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,42 - 3,21 (m, 4H), 3,10 (dd, J, = 8,1 Hz, 7, = 17,7 Hz, 1H), 2,70 (d, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,08 - 1,89 (m, 1H), 0,87 (s, 9H);

’³C NMR (75 MHz, CDClj): δ 148,5, 148,3, 148,1, 144,0, 139,0, 135,6, 135,4, 133,8, 133,1, 132,6, 130,5, 130,3, 129,6, 129,4, 127,5, 127,4, 125,1, 124,3, 121,6, 118,5, 117,5, 112,9, 111,7, 100,8, 99,2, 74,0, 67,7,

61,5, 59,6, 59,0, 57,7, 57,1, 55,4, 41,6, 29,6, 26,6, 25,5, 18,8, 15,8, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C47H55NJO7S1: 801,3. Zistené (M+H)⁺: 802,3

K roztoku 26 (7 mg, 0,0087 mmol) v CH₂C1₂ (0,15 ml) bola pri teplote 23 °C pridaná kyselina octová (2,5 ml, 0,044 mmol), (PPh₃)₂PdCl₂ (0,5 mg, 6,96 xlO’⁴ mmol) a Bu₃SnH (3,5 ml, 0,013 mmol). Pri tejto teplote sa reakčná zmes miešala 1 hod. Roztok bol zriedený zmesou hexán : etylacetát 5 : 1 (0,5 ml) a naliaty na stĺpec separačnej kolóny (SiO₂, gradient 5 : 1 až po 1 : 1 hexán : etylacetát) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca ET-11 (5 mg, 75 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,36 (hexán : etylacetát 1 : 5, silica).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,56 (m, 2 h), 7,41 - 7,25 (m, 8H), 6,67 (s, 1H), 5,72 (d, 7= 1,0 Hz, 1H), 5,58 (d, 7= 1,0 Hz, 1H), 5,51 (s, 1H), 5,38 (d, , 7 = 5,75 Hz, 1H), 5,16 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,57 (d, 7= 2,9 Hz, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,09 (m, 11H), 3,72 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,68 (dd, J, = 2,1 Hz, 7, = 10,4 Hz, 1H), 3,38 až 3,26 (m, 3H), 3,11 (dd, J, = 2,5 Hz, 7, = 15,7 Hz, 1H), 3,01 (dd, 7/ = 8,9 Hz, J₂ = Yl,9 Hz, 1H), 2,70 (d, 7= 17,9 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,89 (dd, J, = 12,1 Hz, 7, = 15,7 Hz, 1H), 0,9 (s, 9H);

^l3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 149,0, 147,4, 145,3, 144,3, 136,3, 135,7, 135,4, 133,2, 130,9, 130,5, 129,6,

129,5, 127,5, 125,0, 118,6, 112,5, 112,1, 105,7, 100,5, 99,8, 68,5, 61,5, 59,7, 58,8, 57,7, 56,9, 56,5, 55,4, 41,7, 26,6, 26,2, 25,5, 18,9, 15,8, 14,2, 8,7.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₄₄H₅₁N₃O7Si: 761. Zistené (M+H)⁺: 762

Príklad 32

Roztok, zložený z roztoku 2 (3,0 g, 5,46 mmol) a fenylizotiokyanátu (3,92 ml, 32,76 mmol) v CH₂C1₂(27 ml) sa pri teplote 23 °C miešal 1,5-hod. Reakčná zmes bola rozdelená medzi CH₂C1₂ (10 ml) a H₂O (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a skoncentrovaná. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán až hexán : etylacetát 2 : 3) pri vzniku zlúčeniny podľa všeobecného vzorca (3) (3,29 g, 99 %) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,27 (ACN : H₂O 3 : 2, RP-C18);

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,77 (bs, 1H), 7,42 - 7,11 (m, 5H), 6,65 (d, 1H), 6,29 (s, 1H), 5,6 - 5,5 (m, 1H), 4,19 - 4,14 (m, 2h), 4,08 (d, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,87 - 3,65 (m, 6H), 3,77 (s, 3H), 3,37 - 2,98 (m, 8H), 2,50 (d, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,96 (d, 1H), 1,87 (s, 3H), 1,81 -1,75 (m, 1H), 0,96 (d, 3H);

¹³CNMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,7, 180,9, 178,9, 172,0, 155,7, 147,1, 143,2, 142,4, 136,0, 135,1, 130,5,

129,9, 129,3, 128,5, 126,9, 124 4, 120 2, 117,4, 116,3, 77,1, 60,9, 58,6, 56,2, 55,8, 55,0, 54,6, 53,5, 41,7,

40,3,25,1,24,5, 18,4, 15,8, 8,7

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₆H₄₀N₆O₆S: 684,8. Zistené (M+H)⁺: 685,2

Príklad 33

PhHNSCHN

KjN

Roztok 3 (0,143 g, 0,208 mmol) v 6,5 M roztoku HCl/dioxán (150 ml) sa pri teplote 23 °C miešal 6 hod. Potom sa k reakčnej zmesi pridal toluén (3 ml) a organická vrstva bola odstredená. Zvyšok bol rozdelený medzi nasýtený roztok bikarbonátu sodného (3 ml) a CHCI3 (3x3 ml). Organické vrstvy boli vysušené a skoncentrované pri vzniku zlúčeniny ako zmesi zlúčenín 4 a 6 (4 : 6 90 : 10), ktorá pomaly státím cyklizuje na zlúčeninu 6.

Rf: 0,4 (etylacetát: metanol 5 :1, silica);

'H NMR (300 MHz CDC1₃): δ 6,45 (s, 1H), 4,16 (m, 1H), 4,02 (d, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,79 (m, 2h), 3,75 (s, 3H), 3,35 (m, 1H), 3,20 - 3,00 (m, 3H), 2,87 (d, 1H), 2,75 (d, 1H), 2,43 (d, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,72 - 1,5 (m, 3H);

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂6H₃₀N₄Os: 478,5. Zistené (M+H)⁺: 479,2

Príklad 34

PhHNSCHN

Roztok 3 (0,143 g, 0,208 mmol) v 6,5 M HCI v dioxáne (150 ml) sa pri teplote 23 °C miešal 1 hod. Odparením rozpúšťadla vznikol zvyšok, ktorý bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát: metanol : trietylamín 100 : 25 : 0,1) pri vzniku zlúčeniny 6 (80 mg, 83 %) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,26 (ACN : H₂O 3 : 2, RP-C18);

'H NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 6,46 (s, 1H), 5,9 (bs, 1H) 4,67 (dd, 7 = 18,3 Hz, 7= 7,8 Hz, 1H), 4,24 (d, 1H), 4,16 (s, 3H), 3,93 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 3,8 (m, 2 h), 377 (s, 3H), 3,45 (m, 2h), 3,08 (dd, 7 = 17,9 Hz, J = 3,6 Hz, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,55 (d, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,3 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,90 (s, 3H);

¹³CNMR (75 MHz, CDC1₃): δ 186,2, 162,1, 154,9, 146,9, 145,3, 143,0, 130,1, 129,4, 128,1, 125,0, 121,4,

116,4, 116,2, 66,6, 60,7, 60,7, 60,1, 59,6, 58,8, 55,6, 54,9, 41,9, 25,3, 24,7, 15,7, 8,9 ESI-MS m/z vyrátané pre C₂6H₂8N₄O₄: 460,5. Zistené (M+H)⁺: 461,1

Príklad 35

K roztoku 3 (2,38 g, 3,47 mmol) v dioxáne (5 ml) sa pridal 5,3 M HCI v dioxáne (34 ml) a reakčná zmes sa miešala pri teplote 23 °C 45 min. Potom sa pridal AcO₂ (51 ml, 539,5 mmol) a reakčná zmes sa miešala 4 hod. Reakčná zmes bola ochladená na 0 °C a pri tejto teplote rozdelená medzi vodný nasýtený roztok Na₂CO₃ (300 ml) a etyl acetát (300 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a skoncentrovaná. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient CH₂C1₂ až CH₂C1₂ : etylacetát 1 : 2) pri vzniku zlúčeniny 5 (1,75 g, 97 %) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,53 (ACN : H₂O 3 : 2, RP-C18);

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,51 (s, 1H), 5,98 (bs, 1H), 4,84 (dd, 1H), 4,17 (d, 1H), 4,00 (d, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,85 (bs, 1H), 3,81 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,70 (d, 1H), 3,23 (m, 1H), 3,11 (dd, 1H), 3,09 (m, 1H), 2,93 (m, 2 h), 2,44 (d, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,60 - 1,50 (m, 2h), 1,29 (s, 3H);

¹³CNMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,9, 180,8, 169,9, 160,2, 156,2, 147,0, 143,1, 140,4, 136,1, 130,6, 129,6,

127,9, 120,4, 117,2, 61,0, 60,7, 58,6, 56,1, 55,7, 55,1, 54,3, 41,8, 41,1, 25,7, 23,9, 22,2, 15,7, 8,7.

SK 287835 Β6

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂₈H₃₂N₄O₆: 520,6. Zistené (M+H)⁺: 521,1 Príklad 36

K roztoku 5 (1,75 g, 3,36 mmol) v CH₂C1₂ (17 ml) sa pri teplote 0 °C pridal diizopropyletylamín (11,71 ml, 67,23 mmol), DMAP (20 mg, 0,17 mmol) a bromometylmetyléter (4,11 ml, 50,42 mmol). Po 6 hod. pri teplote 23 °C bola reakčná zmes rozdelená medzi CH₂C1₂ (50 ml) a nasýtený vodný roztok bikarbonátu sodného (25 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný a rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu. Hrubý extrakt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CH₃CN : H₂O 1 : 1) pri vzniku zlúčeniny 7 (1,32 g, 70 %) vo forme žltej pevnej látky.

Rf: 0,34 (ACN : H₂O 2 : 3, RP-C 18);

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,74 (s, 1H), 5,14 (s, 2h), 4,82 (m, 1H), 4,22 (d, 1H), 4,00 (s, 3H), 4,0 (m, 1H), 3,83 (m, 2h), 3,7 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,4 (m, 1H), 3,2 - 2,95 (m, 6H), 2,43 (d, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,5 - 1,4 (m, 2 h), 1,31 (s, 3H);

¹³CNMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,9, 180,7, 169,6, 156,2, 148,9, 148,5, 140,3, 136,2, 131,3, 130,1, 127,7,

124,6, 123,7, 117,3, 99,5, 99,2, 60,9, 59,7, 58,8, 57,7, 56,4, 55,7, 55,0, 54,2, 51,0, 41,6, 41,0, 40,5, 25,5, 23,9,22,3, 19,3,15,6, 14,6, 8,6.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₀H₃₆N₄O₇: 564,6. Zistené (M+H)⁺: 565,3

Príklad 37

A.

K roztoku 7 (0,37 g, 0,65 mmol) v metanole (74 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný IM hydroxid sodný (130 ml). Reakčná zmes bola miešaná 15 min. a potom bola nastavená pri teplote 0 °C pomocou 6M HCI na pH 5. Reakčná zmes bola extrahovaná etylacetátom (3 x 50 ml) a spojené organické vrstvy boli vysušené pomocou sulfátu sodného a skoncentrované vo vákuu. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CH₃CN : H₂O 1 : 11) pri vzniku zlúčeniny 8 (232 mg, 65 %) vo forme žltej olejovitej látky.

Rf: 0,5 (ACN : H₂O 3 : 2, RP-C18);

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,75 (s, 1H), 5,15 (s, 2 h), 4,86 (m, 1H), 4,26 (d, 1H), 4,01 (d, 1H), 3,88 až 3,81 (m, 2h), 3,70 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39 (m, 1H), 3,27 - 3,21 (m, 1H), 3,18 - 3,08 (m, 2h), 3,03 - 2,97 (m, 1H), 2,47 (d, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,57 - 1,46 (m, 2h), 1,33 (s, 3H);

¹³CNMR (75 MHz, CDCI3): δ 185,3, 180,6, 175,9, 170,1, 151,5, 148,9, 148,6, 143,3, 133,7, 131,5, 129,9,

124.7, 123,5, 117,1, 117,0, 99,2, 59,8, 58,7, 57,8, 56,3, 55,3, 54,9, 54,3, 41,5, 40,7, 29,6, 25,5, 24,4, 22,2,

20.7, 15,7, 8,0.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂9H₃₄N₄O₇: 550,6. Zistené (M+H)⁺: 551,2

Príklad 38

K odplynenému roztoku zlúčeniny 8 (240 mg, 0,435 mmol) v DMF (30 ml) bol pridaný 10 % Pd/C (48 mg) a reakčná zmes bola miešaná vo vodíkovej atmosfére (atmosférický tlak) 1 hod. Reakčná zmes bola filtrovaná cez vrstvu celitu pod argónom do Schlenkovej skúmavky ako bezfarebný roztok, obsahujúci bezvodý Cs₂CO₃ (240 mg, 0,739 mmol). Potom bol pridaný bromochlorometán (0,566 ml, 8,71 mmol). Skúmavka bola uzatvorená a reakčná zmes bola miešaná 3 hod. pri teplote 90 °C. Reakčná zmes bola ochladená a filtrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂C1₂. Organická vrstva bola skoncentrovaná a vysušená (sulfát sodný) pri vzniku zlúčeniny 9 vo forme hnedej olejovitej látky, ktorá bola použitá v nasledujúcom kroku bez ďalšej purifikácie.

Rf: 0,36 (SiO₂, hexán : etylacetát 1 : 5) 'H NMR (300 MHz, CDC1₃): ô 6,71 (s, 3H), 5,89 (d, IH), 5,81 (d, IH), 5,63 (bs, IH), 5,33 (d, IH), 5,17 (d, IH), 4,97 (m, IH), 4,20 (d, IH), 4,09 (m, IH), 3,99 (m, IH), 3,68 (m, IH), 3,65 (s, 6H), 3,59 - 3,47 (m, 4H), 3,37 - 3,27 (m, 2 h), 3,14 - 2,97 (m, 2h), 2,62 (d, IH), 2,32 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,72 (m, IH), 1,36 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 169,8, 149,1, 147,4, 145,5, 136,2, 130,9, 130,8, 125,0, 122,9, 117,7, 112,6, 111,8, 106,4, 100,8, 99,8, 59,8, 58,9, 57,7, 56,6, 56,4, 55,5, 55,2, 41,6, 40,1, 29,6, 25,9, 25,0, 22,5,15,6, 8,8. ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₀H₃₆SiN₄O₇: 564,6. Zistené (M+H)⁺: 565,3

Do nádoby obsahujúcej zlúčeninu 9 (245 mg, 0,435 mmol) v DMF (4 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný cézium karbonát (425 ml, 1,30 mmol) a alylbromid (376 ml, 4,35 mmol) a zmes bola miešaná 1 hod. pri 23 °C. Reakčná zmes bola filtrovaná cez vrstvu celitu a rozdelená medzi CH₂C1₂ (25 ml) a H₂O (10 ml). Organická fáza bola usušená (sulfát sodný) a skoncentrovaná podtlakom pri vzniku zvyšku, ktorý bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, CHC1₃: etylacetát 1 : 2) pri vzniku zlúčeniny 10 (113 mg, 43 %) vo forme žltej olejovitej látky.

Rf: 0,36 (hexán : etylacetát 1 : 5) 'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,74 (s, IH), 6,3 - 6,0 (m, IH), 5,94 (d, IH), 5,87 (d, IH), 5,43 - 5,36 (m, 2h), 5,22 (s, 2h), 5,00 (m, IH), 4,22 (m, IH), 4,17 - 4,01 (m,l H), 3,98 (m, 2h), 3,71 - 3,67 (m, IH), 3,69 (s, 3H), 3,62 - 3,51 (m, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39 - 3,37 (m, IH), 3,31 - 3,26 (m, 3H), 3,09 (dd, IH), 2,56 (d, IH), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,24 - 2,10 (m, IH), 1,82 - 1,73 (m, IH), 1,24 (bs, 3H) ¹³CNMR (75 MHz, CDC1₃): δ 169,4, 148,8, 148,3, 139,1, 133,7, 130,9, 130,3, 125,2, 120,2, 117,7, 113,1,

112,6, 101,3, 99,3, 74,1, 59,7, 59,3, 57,8, 57,0, 56,1, 56,1, 55,2, 41,6, 41,0, 40,9, 29,7, 26,3, 22,5,,15,6, 9,3 ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₃H₄₀N₄O₇: 604,7. Zistené (M+H)⁺: 605,3

Príklad 40

0^ » «6

K roztoku 9 (22 mg, 0,039 mmol) v CH2CI2 (0,2 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný acetylchlorid (2,79 ml, 0,039 mmol) a pyridín (3,2 ml, 0,039 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HC1 (5 ml). Organická fáze bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom pri vzniku zlúčeniny 46 (22 mg, 93 %) vo forme bielej pevnej látky. Rf: 0,4 (hexán: etylacetát 1 : 5) 'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,74 (s, 1H), 5,97 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 0,9 Hz, 1H), 5,12 (d, 7= 5,7 Hz, 2 h), 5,04 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,90 (t, 7= 6 Hz, 1H), 4,17 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,05 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,50 - 3,44 (m, 2 h), 3,38 - 3,36 (m, 1H), 3,30 - 3,26 (m, 1H), 3,00 (dd, J, = 7,8 Hz, 7, = 18,0 Hz, 1 H), 2,79 (d, 7= 12,9 Hz, 1H), 2,60 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H),

2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,68 (dd, J, = 11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1 H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃₈N₄O₈: 606,67. Zistené (M+H)⁺: 607,3

Príklad 41

OMe

Me □A

K roztoku 46 (8 mg, 0,013 mmol) v dioxáne (0,1 ml) bol pridaný 5,3 N roztok HC1 v dioxáne (0,5 ml) a zmes bola miešaná 1 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol roztok zriedený pomocou CH₂C1₂ (5 ml) a prepláchnutý 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo od20 stránené podtlakom pri vzniku zlúčeniny 47 (5 mg, 70 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,4 (hexán : etylacetát 1 : 5) 'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,51 (s, 1H), 5,97 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 4,97 (bs, 1H), 4,11 (bs, 1H), 4,04 - 4,02 (m, 2 h), 3,75 (s, 3H), 3,65 (d, 7= 2,1 Hz, 2 h), 3,56 - 3,30 (m, 2h), 3,04 (dd, J, = 7,5 Hz, J₂ = 18 Hz, 1 H), 2,80 (d, 7= 14,4 Hz, 1H), 2,59 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H),

2,00 (s, 3H); í,76 (dd, 7, = 12,0 Hz, 7? = 15,9 Hz, 1 H), 1,33 (s, 3H), 1,25 (s, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃oH₃₄N₄0₇: 562,61. Zistené (M+H)⁺: 563,3

Príklad 42

K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný izovalerylchlorid (2,34 ml, 0,00192 mmol) a pyridín (1,55 ml, 0,0192 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený pomocou CH₂C1₂ (5 ml) a prepláchnutý 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 1 : 2) pri vzniku zlúčeniny 48 (11 mg, 95 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,12 (Hex : etylacetát 1:2).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,02 (t, 7= 5,4 Hz, 1H), 4,10 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 4,06 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,02 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,76 - 3,71 (m, 1H), 3,86 - 3,28 (m, 3H), 3,04 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1 H), 2,78 (d,. 7= 15,9 Hz, 1H), 2,55 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,26 (s, 3H), 1,98 (s, 3H),1,84 - 1,68 (m, 2h), 1,36 (d, 7= 7,12 Hz, 2h), 0,69 (d, 7= 6,6 Hz, 3H), 0,62 (d, 7= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C33H40N4O7: 604,69. Zistené (M+H)⁺: 605,3

cA(Ch₂),

I

K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný izovalerylchlorid (3,98 ml, 0,0192 mmol) a pyridín (1,55 ml, 0,0192 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (5 ml) a prepláchnutý 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 1 : 2) pri vzniku zlúčeniny 49 (12,4 mg, 96 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,7 (etylacetát: metanol 10 : 1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,5 Hz 1H), 5,73 (s, 1H), 5,08 (t, 7= 5,4 Hz, 1H), 4,10 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,65 - 3,61 (m, 1H), 3,40 - 3,27 (m, 3H), 3,03 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18,6 Hz, 1H), 2,78 (d, 7= 13,2 Hz, 1H), 2,57(d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H),1,99 (s, 3H), 1,79 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 16,5 Hz, 1H), 1,73 až 1,42 (m, 4H), 1,33 - 1,18 (m, 10H),l,03 (m, 2h), 087 (t, 7= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₈H₅₀N₄O₇: 674,83. Zistené (M+H)⁺: 675,5

trans-C₁₀H₆CIF₃O. py.

CHjCIj. O“, lh.

K roztoku 45 (14,5 mg, 0,0278 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný tra«.v-3-trifluórmetylcinnamoylchlorid (4,76 ml, 0,0278 mmol) a pyridín (2,25 ml, 0,0278 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom sa roztok zriedil CH₂C1₂ (5 ml) a prepláchol 0,1 N HCI (3 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 1 : 1) pri vzniku zlúčeniny 50 (18,7 mg, 94 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,64 (etylacetát: metanol 15 : 1).

Ή NMR (300 MHz, CH₃OD) δ 7,74 - 7,55 (m, 4H), 7,23 (d, 7 = 16,0 Hz, 1H), 6,34 (s, 1H), 6,12 (d, 7= 16,0 Hz, 1H), 6,07 (d, 7 = 0,9 Hz, 1H), 5,96 (d, 7 = 0,9 Hz, 1H), 4,39 (d, 7 = 2,4 Hz, 1H), 4,07 - 4,05 (m,l H), 3,81 (bs, 1H), 3,46 - 3,51 (m, 3H), 3,42 (s, 3H), 3,09 (br d, 7= 12,0 Hz, 1H), 2,94 - 2,85 (m, 2h), 2,74 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,80 (s, 3H),1,84 - 1,75 (m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃)): δ 168,7, 165,3, 146,5, 144,7, 142,6, 140,6, 138,0, 135,9, 131,0, 130,9, 129,1,

128.6, 125,8, 125,7, 124,5, 124,4, 122,7, 121,2, 117,8, 116,5, 113,0, 112,0, 101,7, 60,4, 59,1, 56,5, 56,4,

55.6, 55,3, 41,8, 40,3, 26,6, 25,1, 20,3, 15,4, 9,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre ¢3^37^^4()7: 718,72. Zistené (M+H)⁺: 719,3

K roztoku 43 (33 mg, 0,0557 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný izovalerylchlorid (6,79 ml, 0,0557 mmol) a pyridín (4,5 ml, 0,0557 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (5 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 1 : 2) pri vzniku zlúčeniny 51 (34 mg, 91 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,09 (Hexán : etylacetát 1 : 2).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,46 (s, 1H), 6,10(bs, 1H), 5,99 (d,7 = 0,9 Hz, 1H), 5,90 (d,7=0,9 Hz, 1H), 5,30(t, 7= 6,0 Hz, 1H), 4,10 - 4,05 (m, 3H), 3,81 (bs, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,54 (bs, 1H), 3,38 - 3,36 (m, 1H), 3,29 - 3,21 (m, 1H), 3,00 (dd, J, = 8,0 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,95 až 1,90 (m, 3H), 0,87 (d, 7= 6,6 Hz, 6H), 0,76 (d, 7= 6,0 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₆H45N₅O₈: 675,77. Zistené (M+H)⁺: 676,3

Príklad 46

NH₂

NH

K roztoku zlúčeniny 43 (33 mg, 0,0557 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný trans-3-lnfluórmetylcinnamoylchlorid (9,52 ml, 0,0557 mmol) a pyridín (4,5 ml, 0,0557 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (5 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 1 : 2) pri vzniku zlúčeniny 52 (40 mg, 92 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,21 (hexán : etylacetát 1 : 2).

‘H NMR (300 MHz, CD₃OD), δ 7,74 - 7,47 (m, 4H), 6,49 (s, 1H), 6,40 (d, 7 = 15,6 Hz, 1H), 6,00 (d, 7 = 1,5 Hz, 1H), 5,90 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,47 (t, J= 6 Hz, 1H), 4,12 - 4,09 (m, 3H), 3,93 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,59 až 3,58 (m, 1H), 3,38 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,29 (d, J= 12,0 Hz, 1 H), 3,00 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,79 - 2,78 (m, 1H), 2,65 (d, 7 = 18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H),1,84 - 1,80 (m, 1H), 0,85 - 0,84 (m, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCl·,) δ 171,9, 168,8, 164,4, 146,9, 144,6, 143,0, 140,5, 140,5, 139,3, 135,7, 131,1, 131,0, 129,4, 129,1, 126,0, 124,1, 124,0, 122,4, 121,1, 120,7, 120,6, 117,7, 116,9 112,8, 112,0, 101,6, 60,6, 59,3, 57,1, 56,3, 55,9, 55,2,49,0,41,7, 49,9, 26,5, 25,1, 20,2, 18,4, 15,7, 9,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre C4iH4₂F₃N₅O_g: 789,8. Zistené (M+H)⁺: 7903

K roztoku zlúčeniny 43 (10 mg, 0,0169 mmol) v CH₂C1₂ (0,2 ml) bol pri teplote 23 °C pridaný anhydrid trifluóroctovej kyseliny (2,38 μΐ, 0,0169 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 5 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (5 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 1 : 2) pri vzniku zlúčeniny 53 (10,7 mg, 92 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,57 (etylacetát: metanol 5:1).

*H NMR (300 MHz, CDCl·,) δ 6,45 (s, 1H), 6,00 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,87 (bs, 1H),

5,32 (bs, 1H), 4,12(d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 3,78 - 3,56i (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,40 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 3,25 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 3,00 (dd, J, = 8,4 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,77(dd, J, = 2,1 Hz, J, = 15,9 Hz, 1H), 2,68 (d, 7= 18,6 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,75 (dd, J, = 11,4 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 0,69 (d, 7= 6,3 Hz, 3H).

C NMR (75 MHz, CDC1₃) Ô 170,1, 168,6, 156,0, 147,0, 144,6, 143,0, 140,6, 140,4, 131,0, 129,4, 120,9, 120,7, 117,6, 116,8, 112,4, 112,1, 101,6, 60,5, 59,0, 57,1, 56,3, 55,6, 55,2, 48,7, 41,6, 39,4, 26,5, 24,9, 20,2,

17,8,15,4, 9,2.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₃H₃₆F₃N₅O₈: 687,63. Zistené (M+H)⁺: 688,66

Príklad 48

K roztoku zlúčeniny 19 (11 mg, 0,0169 mmol) v CH₂C1₂ (0,2 ml) bol pri teplote 23 °C pridaný anhydrid trifluóroctovej kyseliny (2,38 ml, 0,0169 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 5 hod. a potom bol roztok zriedený CH2CI2 (5 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (3 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, hexán : etylacetát 3 : 2) pri vzniku zlúčeniny 54 (107 mg, 93 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,6 (etylacetát: metanol 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,33 (d, J= 6,3 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,04 (m, 1H), 5,95 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,84 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,32 (m, 2h), 5,21 (m, 1H), 4,11 (m, 4H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (m, 2h), 3,51 (m, 1H), 3,37 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 3,22 (m, 2h), 3,03 (dd, 1H, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,60 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,86 (dd, J, = 12 Hz, 7, = 16,2 Hz, 1H), 0,82 (d, 7= 7,2 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 170,0, 156,0, 148,4, 147,1, 144,3, 143,0, 138,7, 133,8, 130,5, 129,4, 120,6,

120,4, 117,6, 117,5, 117,0, 113,5, 112,5, 112,4, 101,1, 74,1, 66,8, 60,4, 59,3, 56,9, 56,6, 56,3, 55,4, 48,7,

41,6, 40,1, 26,2, 25,0, 17,6, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃5H₃9F₃N₅O₇: 685,69. Zistené (M+H)⁺: 686,3

Príklad 49

K roztoku 54 (100 mg, 0,415 mmol) v CH₂C1₂ (4 ml) bola pri teplote 23 °C pridaná kyselina octová (40 ml), (PPh₃)₂PdCl₂ (8,4 mg, 0,012 mmol) a Bu₃SnH (157 ml, 0,56 mmol). Pri tejto teplote bola reakčná zmes miešaná 2 hod. a potom naliata na stĺpec separačnej kolóny (SiO₂, gradient hexán : etylacetát 2 : 1) pri vzniku zlúčeniny 55 (90 mg, 96 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,6 (hexán : etylacetát 1 : 2).

'H NMR (300 MHz, CDClj) δ 7,55 (d, 7 = 7,2 Hz, 1H), 6,45 (s, 1 H), 5,90 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,82 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,37 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 4,15 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,04 (d, 7= 1,8 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,66 až 3,53 (m, 2h), 3,37 - 3,31(m, 2h), 3,19 - 3,15 (d, 7= 11,7 Hz, 1H), 3,08 - 3,00 (m, 2h), 2,56 (d, 7= 18,3 Hz,

1H), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,91 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,84 (d, J= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 170,1, 156,3, 147,3, 144,9, 144,4, 143,3, 136,7, 130,7, 129,3, 120,6, 117,6,

117,4, 114,4, 112,1, 107,7, 101,0, 85,8, 60,5, 59,3, 56,5, 56,4, 56,2, 55,2, 48,9, 41,6, 40,9, 25,7, 25,3, 18,0,

15,6, 8,7.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃₅F₃N₅O₇: 645,63. Zistené (M+H)⁺: 646,2

Príklad 50

TFA. CHjClj 4h, 23 *C

Me

K roztoku 17 (200 mg, 0,288 mmol) v CH2CI2 (1,44 ml) bola pridaná trifluóroctová kyselina (888 ml, 11,53 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 4 hod. pri teplote 23 °C. Reakcia bola zastavená pri teplote 0 °C pomocou nasýteného vodného roztoku bikarbonátu sodného (60 ml) a extrahovaná etylacetátom (2x70 ml). Spojené organické vrstvy boli vysušené (sulfát sodný) a skoncentrované in vacuo pri vzniku zlúčeniny 56 (147 mg, 93 %) vo forme bielej pevnej látky, ktorá bola použitá v nasledujúcich reakciách bez ďalšej purifikácie.

Rf: 0,19 (etylacetát: metanol 15 : 1).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,48 (s, 1H), 5,88, (d, J = 0,9 Hz, 1H), 5,81 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 4,35 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 4,15 (d, 7= 1,8 Hz, 1H), 3,99 - 3,98 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,52 - 2,96 (m, 7H), 2,68 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s, 3H),1,85 (dd, J, = 11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,91 (d, 7= 6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CD₃OD) δ 173,2, 149,1, 145,6, 144,9, 138,0, 132,2, 130,6, 121,4, 119,6, 117,4, 114,3, 109,2, 102,5, 82,3, 60,4, 58,4, 58,3, 57,8, 56,6, 50,1, 42,3, 41,6, 27,8, 26,2, 19,5, 15,5, 9,8.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂9H₃₅N₅O₆: 549,62. Zistené (M+H)⁺: 550,3

Me

K roztoku 56 (10 mg, 0,018 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) bol pridaný fenylizotiokyanát (13 ml, 0,109 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 1,5-hod. pri teplote 23 °C. Reakčná zmes bola skoncentrovaná vo vákuu a zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient hexán až po hexán : etylacetát 1:1) pri vzniku zlúčeniny 57 (8 mg, 65 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,57 (etylacetát: metanol 10 : 1).

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,88 (bs, 1H), 7,41 - 7,36 (m, 2h), 7,27 - 7,22 (m, 1H), 7,02 - 7,00 (d, 7= 7,8 Hz, 2h), 6,71 (d, 7= 7,2 Hz, 1H), 6,31 (s, 1H), 6,17 (bs, 1H), 5,93 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,83 (d, 7= 1,2 Hz, 1H),

5,55 (bs, IH), 5,20 - 5,17 (m, IH), 4,16 (d, 7= 1,8 Hz, IH), 4,05 (bs, IH), 4,02 (d, 7= 2,4 Hz, IH), 3,79 (s, 3H), 3,75 - 3,71 (m, IH), 3,35 (d, 7= 7,8 Hz, IH), 3,28 - 3,19 (m, 2h), 3,12 - 2,97 (m, 2h), 2,50 (d, 7= 18,3 Hz, IH), 2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,15 - 2,09 (dd, J, = 11,4 Hz, J₂ = 15,9 Hz, IH), 1,95 (s, 3H), 0,88 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 178,5, 171,7, 147,2, 145,0, 144,3, 143,3, 137,0, 135,7, 130,6, 130,4, 129,6,

127,5, 124,3, 120,6, 117,7, 117,2, 115,3, 112,1, 108,3, 100,9, 60,9, 59,5, 56,7, 56,5, 56,2, 55,2, 54,1, 41,7, 41,1,26,3,25,4, 18,5, 15,8,9,0.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₆H_4I)N₆O₆S: 684,81. Zistené (M+H)⁺: 685,3

Me

K roztoku 57 (45 mg, 0,065 mmol) v CH₂C1₂ (0,5 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný acetylchlorid (4,67 ml, 0,065 mmol) a pyridín (5,3 ml, 0,065 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 3 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 NHC1 (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (RP-18, CH₃CN ·. H₂O 40 : 60) pri vzniku zlúčeniny 58 (14 mg, 28 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,34 (CH₃CN : H₂O 7:15).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 11,90 (d, 7 = 6,6 Hz, IH), 7,45 - 7,40 (m, 3H), 7,18 - 7,15 (m, 2h), 6,58 (s, IH), 6,0 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 5,89 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 5,70 (s, IH), 5,37 (t, 7= 4,8 Hz, IH), 4,48 (m, IH),

4,23 (bs, IH), 4,07 (bs, 2h), 3,85 - 3,75 (m, IH), 3,70 (s, 3H), 3,46 - 3,41 (m, 2h), 3,24 - 3,20 (m, IH), 3,00 až 2,95 (m, IH), 2,87 - 2,75 (m, IH), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s, 3H),1,85 (dd, J, = 11,4 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, IH), 1,66 (s, 3H), 0,82 (d, 7= 6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 182,6, 174,3, 171,0, 146,6, 144,6, 142,7,142,3, 140,7, 140,2, 131,3, 129,8, 129,3, 128,9, 128,8, 121,5, 120,4, 117,3, 116,6, 112,8, 112,0, 111,3, 101,5, 60,5, 59,0, 57,6, 56,2, 55,9, 55,3, 55,1, 41,6, 39,4, 27,8, 26,5, 24,8, 20,2, 17,1, 15,5, 9,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₄₀H₄₄N₆O₈S: 768,88. Zistené (M+H)⁺: 769,2

Me

59

K roztoku 57 (130 mg, 0,189 mmol) v dioxáne (1 ml) bol pridaný 5,3 N HCl/dioxán (1,87 ml) a reakčná zmes bola miešaná 4 hod. pri teplote 23 °C. Potom sa k reakčnej zmesi pridal CH₂C1₂ (15 ml) a H₂O (10 ml) a organická fáza bola odstredená. Vodná fáza bola alkalizovaná pomocou roztoku saturovaného bikarbonátu sodného (60 ml) (pH 8) pri teplote 0 °C a potom extrahovaná pomocou etylacetátu (2x50 ml). Spojené orga64 nické extrakty boli vysušené (sulfát sodný) a skoncentrované in vacuo pri vzniku zlúčeniny 59 (63 mg, 70 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,15 (etylacetát: metanol 5 : 1).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,67 (s, 1H), 5,99 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,10 (bs, 1H),

4,32 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4r25 (dd, J, = 3,6 Hz, J₂ = 9,3 Hz, 1H), 3,7 (s, 3H), 3,71 - 3,64 (m, 2h), 3,50 (dd, J, = 2,4 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 3,42 - 3,37 (m, 2h), 3,16 (dd, J, = 3,6 Hz, J₂ = 12,9 Hz, 1H), 2,57 (dd, J, = 9,3 Hz, J₂ = 12,9 Hz, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,91 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z vyrátané pre Ο₂₆Η₃₀Ν₄Ο₅: 478,5. Zistené (M+H)⁺: 479,3

Me

Trans-CgHgCIO, Py

CH₂CI_2< 1h. 0 *C

K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný cinnamoylchlorid (5,63 ml, 0,0338 mmol) a pyridín (2,73 ml, 0,0338 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická fáza bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, EtOAc : MeOH 20 : 1) pri vzniku zlúčeniny 60 (22 mg, 90 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,56 (EtOAc : MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,51 (s, 1H), 7,50 - 7,47 (m, 2H), 7,36 - 7,35 (m, 2H), 6,43 (s, 1H), 6,36 (brd, J= 15,9 Hz, 2H), 6,01 (d, 7 = 1,5 Hz, 1H), 5,90 (brd, 7= 1,5 Hz, 2H), 5,42 (t, 7= 6,0 Hz, 1H), 4,12 - 4,07 (m, 3H), 3,96 - 3,95 (m, 1H), 3,73 (bs, 3H), 3,58 (bs, 2H), 3,39 (d, 7= 8,7 Hz, 1H), 3,25 (d, 7= 11,7 Hz, 1H), 3,0 (dd, J, = 7,5 Hz, J₂ = ΪΊ,Ί Hz, 1H), 2,78 (d, 7= 15,9 Hz, 1H), 2,67 (d, 7= 16,5 Hz, 1H), 2,29 (s, 6H),

2,23 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,82 (dd, J, = 11,4 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,83 (d, 7= 6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDClj) δ 172,0, 165,0, 146,9, 144,6, 143,1, 141,0, 140,5, 134,8, 131,0, 129,7, 129,1, 128,8, 127,8, 125,5, 123,8, 123,0, 121,1, 120,5, 117,7, 116,9, 112,8, 112,0, 101,9, 60,6, 59,2, 57,1, 56,4, 55,9, 55,3, 48,8,41,7, 40,0, 26,5,25,1, 20,3, 18,5, 15,7, 9,3.

ESI-MS m/z vyrátané pre C₄₀H₄₃N₅O₈: 721,8. Zistené (M+H)⁺: 722,3

Me cAc₃f₇

K roztoku 45 (19 mg, 0,0364 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný heptafluorobutyrylchlorid (5,44 ml, 0,0364 mmol) a pyridín (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, EtOAc : MeOH 20 : 1) pri vzniku zlúčeniny 61 (11,7 mg, 45 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,76 (EtOAc : MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDCfi) δ 6,46 (s, 1H), 6,12 (bs, 1H), 5,98 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,93 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,72 (bs, 1H), 4,13 - 4,11 (m, 2H), 4,0 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,98 - 3,96 (m, 1 H), 3,73 (s, 3H), 3,39 (d, 7 = 7,5 Hz, 1H), 3,39 - 3,28 (m, 2H), 3,09 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,80 (d, 7= 16,2 Hz, 1H), 2,46 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,21 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,80 (dd, 7_; = 12,0 Hz, J₂ = 16,2 Hz, 1H),

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃iF₇N₄O₇: 716,6. Zistené (M+H)⁺: 717,2

Príklad 56

K roztoku 43 (24 mg, 0,04 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný butyrylchlorid (4,15 ml, 0,04 mmol) a pyridín (3,28 ml, 0,04 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný, filtrovaná a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 20 : 1) pri vzniku zlúčeniny 62 (24 mg, 90 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,35 (EtOAc : MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,47 (s, 1 H), 6,10 (d, 7= 6,5 Hz, 1H), 6,0 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,86 (bs, 1H), 5,31 (d, 7= 6,9 Hz, 1H), 4,11 - 4,06 (m, 3H), 3,85 - 3,81 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,59 až 3,53 (m, 2H), 3,38 (d, 7= 7,5 Hz, 1H), 3,27 - 3,22 (m, 1H), 3,0 (dd, J; = 7,8 Hz, J₂ = 17,4 Hz, 1H), 2,79 (d, 7= 15,3 Hz, 1H), 2,63 (d, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,80 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 1,58 (q, 7= 7,2 Hz, 2H), 0,89 (t, 7= 7,2 Hz, 3H), 0,76 (d, 7= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₃H₄₃N₅O₈: 716,6. Zistené (M+H)⁺: 717,2

K roztoku 45 (19 mg, 0,0364 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný cinnamoylchlorid (6,06 mg, 0,0364 mmol) a pyridín (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 20:1) pri vzniku zlúčeniny 63 (24 mg, 90 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,65 (EtOAc : MeOH 5:1).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,39 - 7,29 (m, 5H), 6,42, (s, 1H), 6,01 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,92 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,73 (bs, 1H), 5,24 (t, 7= 6,8 Hz, 1H), 4,12 - 4,08 (m, 3H), 3,66 - 3,64 (m, 2H), 3,58 (bs, 3H), 3,36 (d, 7= 8,7 Hz, 1H), 3,29 (d, 7= 12,0 Hz, 1H), 2,98 (dd, 7, = 8,1 Hz, 7, = 18 Hz, 1H), 2,33 (s, 6H), 2,29 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,84 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C37H38N4O7: 650,72. Zistené (M+H)⁺: 651,2

K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) v CH2CI2 (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný 3-chloropropionylchlorid (3,22 ml, 0,0338 mmol) a pyridín (2,73 ml, 0,0338 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 20 : 1) pri vzniku zlúčeniny 64 (20,5 mg, 89 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 032 (EtOAc : Hexán 5 : 1).

'H NMR (300 MHz, CDClj) 6,48 (s, 3H), 6,28 (m, 1H), 5,99 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,86 (bs, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,08 - 4,07 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,72 - 3,53 (m, 5H), 3,39 (d, J= 8,1 Hz, 1H),

3,24 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 3,00 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,79 (d, J= 13,5 Hz, 1H), 2,50 (t, J= 6,3 Hz, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,79 (dd, J, = 12,3 Hz, J₂ = 14,8 Hz, 1 H), 0,81 (d, J =6,3 Hz, 3H).

butyryl chloride Py.CHjCIj, Ih.O’C

K roztoku 43 (19 mg, 0,0364 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) bol pri teplote 0 °C pridaný butyrylchlorid (3,78 ml, 0,0364 mmol) a pyridín (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakčná zmes bola miešaná 1 hod. a potom bol roztok zriedený CH₂C1₂ (10 ml) a prepláchnutý 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva bola vysušená cez sulfát sodný a rozpúšťadlo bolo odstránené podtlakom. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 20 : 1) pri vzniku zlúčeniny 65 (19 mg, 87 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,60 (EtOAc : MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) 6,50(s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,01 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,10 - 4,09 (m, 1H), 4,06 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 4,03 - 4,02 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,67 až 3,60 (m, 1H), 3,42 - 3,35 (m, 2H), 3,29 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 3,02 (dd, J, = 7,8 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,79 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 2,56 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,78 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = = 15,9 Hz, 1H), 1,63 (s, 3H), 1,53 - 1,46 (m, 2H), 1,28 - 1,16 (m, 2H), 0,68 (t, 7 = 7,2 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃₈N₄O7: 590,67. Zistené (M+H)⁺: 591,2

K roztoku 50 (31,7 mg, 0,044 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (225 mg, 1,32 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 17 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂C1₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 5 : 1) pri vzniku zlúčeniny 66 (16 mg, 51 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,26 (EtOAc : MeOH 5 : 1).

'H NMR (300 MHz, CDCfi) δ 7,66 - 7,42 (m, 4H), 7,20 (bs, 1H), 6,44 (s, 1H), 5,97 (b, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,76 (bs, 1H), 5,28 (bs, 1H), 4,54 (bs, 1H), 4,43 (bs, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,68 - 3,57 (m, 4H), 3,47 (d, 7= 3,3 Hz, 1H), 3,40 (d, 7= 11,7 Hz, 1H), 3,17 (d, 7= 6,9 Hz, 1H), 2,92 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = = 17,7 Hz, 1H), 2,74 (d, 7= 17,1 Hz, 1H), 2,48 (d, 7= 18,6 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,76 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 16,2 Hz, 1H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃7H₃₈F₃N₃O₈: 709. Zistené (M+H)⁺: 692,3

Me O 53

AgNO₃, CHjCN/HjO 24h, 23 *C

Me O 67

K roztoku 53 (57 mg, 0,0828 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (650 mg, 3,81 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCCfi (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂C1₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 5 : 1) pri vzniku zlúčeniny 67 (28 mg, 50 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,28 (EtOAc : MeOH 10 : 1).

‘H NMR (300 MHz, CDCfi) d

6,47 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 5,35 (bs, 1H), 4,51 (bs, 1H), 4,41 (bs, 1H), 4,12 - 4,05 (m, 1H), 4,00 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,64 (bs, 1H), 3,46 (d, 7= 3,3 Hz, 1H), 3,34 (d, 7= 11,4 Hz, 1H), 3,18 (d, 7 = 7,5 Hz, 1H), 2,95 (dd, 7, = 8,4 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,70 (d, 7 = 15,6 Hz, 1H), 2,48 (d, 7 = 17,7 Hz, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,68 (dd, J, = 12 Hz, 7, = 15,6 Hz, 1H), 0,86 (d, 7= 6,3 Hz, 3H).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₃₂H₃₇F₃N₄O9: 678,66. Zistené (M+H)⁺: 661,2

K roztoku 48 (32 mg, 0,0529 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (270 mg, 1,58 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂C1₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 5 : 1) pri vzniku zlúčeniny 68 (18 mg, 56 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,40 (EtOAc : MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) d 6,50 (s, 1H), 5,95 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,23 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 4,45 (d, 7= 3,3 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,01 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,41 - 3,37 (m, 1H), 3,17 - 3,15 (m, 1H), 2,96 (dd, 7, = 7,8 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,70 (d, 7= 15,3 Hz, 1H), 2,40 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 6H), 2,27 (s, 3H), 1,76 - 1,65 (m, 1H), 1,35 - 1,25 (m, 2H), 0,89 - 0,82 (m, 1H), 0,69 (d, 7= 6,6 Hz, 3H), 0,58 (d, 7= 6,6 Hz, 3H)

K roztoku 51 (27 mg, 0,04 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (204 mg, 1,19 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂C1₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 5 : 1) pri vzniku zlúčeniny 69 (10 mg, 38 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,38 (EtOAc : MeOH 5 : 1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) d 6,48 (s, 1 H), 6,16 (bs, 1H), 5,98 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,89 (d, 7= 1,5 Hz, 1H),

5,33 (t, 7= 6,0 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,11 - 4,09 (m, 1H), 4,00 (d, 7= 2,6 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,41 - 3,32 (m, 3H), 3,18 (d,7= 8,4 Hz, 1H), 2,94 (dd, J, = 8,4 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,70 (d, 7= 14,4 Hz, 1H), 4,45 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,00 - 1,86 (m, 3H), 1,73 (m, 1H), 0,87 (d, 7= 6,3 Hz, 6H).

Príklad 64

OMe

Me

AgNO₃, CHjCN/BjO 24ri, 23’C

OMe

K roztoku 63 (15 mg, 0,023 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (118 mg, 0,691 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂C1₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 5 : 1) pri vzniku zlúčeniny 70 (20,1 mg, 85 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,43 (EtOAc : MeOH 5 : 1).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃) d 7,38 - 7,28 (m, 5H), 6,48 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,75 (bs, 1H), 5,38 (brd, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,02 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 3,78 až 3,65 (m, 5H), 3,46 - 3,40 (m, 2H), 3,17 (d, 7= 7,8 Hz, 1H), 2,94 (dd, 7_Z = 7,8 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,73 (d, 7= 16,8 Hz, 1H), 2,45 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,77 (dd, J, = 12,0 Hz, 7,= 15,3 Hz, 1H).

K roztoku 65 (25 mg, 0,042 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) bol pridaný AgNO₃ (215,56 mg, 1,269 mmol) a reakčná zmes bola miešaná 24 hod. pri teplote 23 °C. Potom bol pridaný soľný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakčná zmes bola miešaná 15 min., prefiltrovaná cez vrstvu celitu a premytá CH₂C1₂ (20 ml). Roztok bol odstredený a organická fáza bola vysušená a skoncentrovaná in vacuo. Zvyšok bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, AtOAc : MeOH 5 : 1) pri vzniku zlúčeniny 71 (16 mg, 65 %) vo forme bielej pevnej látky.

Rf: 0,05 (EtOAc : MeOH 5 : 2).

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃) d 6,50 (s, 1H), 5,95 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,78 (s, 1H), 5,19 (bs, 1H), 4,45 (d, 7= 3,3 Hz, 1H), 4,37 (bs, 1H), 4,11 (brd, 7= 4,8 Hz, 1H), 4,01 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 3,76 (s, 1H), 3,71 - 3,69 (m, 1H), 3,49 - 3,35 (m, 1H), 3,24 (d, 7= 13,5 Hz, 1H), 3,15 (d, 7= 9,3 Hz, 1H), 2,95 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = = 17,7 Hz, 1H), 2,70 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 2,40 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,75 - 1,66 (m, 1H), 1,52 -1,17 (m, 2H), 0,66 (t, 7 = 7,2 Hz, 3H).

Kvasné procesy

Príklad A

Kultivačné médium ZMP3 obsahujúce 1 % glukózu, 0,25 % hovädzí vývar, 0,5 % bakto-pepton, 0,25 % NaCl a 0,8 % CaCO₃ bolo naočkované 0,1 % zmrazenou vegetatívnou kultúrou mikroorganizmu Pseudomonas fluórescens, kmeň A2-2. Bakteriálna kultúra bola inkubovaná na rotačnej trepačke (250 ot./min.) pri teplote 27 °C. Po 30 hod. inkubácii bola kultúra prenesená do fermentora, kde za stáleho trepania prebiehala ďalšia inkubácia v produkčnom médiu obsahujúcom 2 % dextrózu, 4 % manitol, 2 % sušené pivovarnícke kvasnice (vitalevor R Biolux, Belgicko), 1 % (NH₄)₂SO₄, 0,04 % K₂HPO₄, 0,8 % KC1, 0,001 % FeCl₃, 0,1 % L-Tyr, 0,8 % CaCO₃, 0,05 % PPG-200, 0,2 % protipenivého silikónu (ASSAF-100, RHODIA UK). Sterilizácia prebiehala pri teplote 122 °C 30 min. Zaočkovaný objem bol 2 % (v/v). Teplota bola 27 °C (0 až 16 hod.) a 24 °C od 16 hod. až po konečné spracovanie (41 hod.). Kultúra rástla v kyslíkovej atmosfére 25 %. pH bolo udržované na hodnote 6,0 pomocou kyseliny sírovej od 28 hod. inkubácie až po konečné spracovanie. Pretlak bol 0,5 bar. Od 16. hod. kultivácie bol do kultivačného média pridaný 1 % manitol alebo sorbol (na 2 dni) a 2 % manitol alebo sorbol na 3 dni počas fermentačného procesu.

Po 41 alebo 64 hodinách sa extrahuje fermentačné médium na získanie safracínu B, alebo po pridaní KCN do kultivačného média je možné z vyčereného média získať kyanosafracín B.

Príklad B

Získanie kyanosafracínu B z hrubého extraktu

Vyčerenie alebo filtrácia fermentačného média pri pH 6 odstráni pevné časti. Vyčerené kultivačné médium bolo nastavené na pH 9,5 pomocou zriedeného hydroxidu sodného a dvakrát extrahované pomocou 2 : 1 (v/v) etylacetátu, metylénchloridu alebo butylacetátu. Extrakcia prebiehala za stáleho trepania 20 min., teplota zmesi bola udržiavaná v rozsahu 8 až 10 °C. Obidve fázy boli odstreďovaním oddelené a organická fáza bola vysušená pomocou bezvodého sulfátu sodného. Iným spôsobom separácie je zmrazenie a potom filtrácie na odstránenie kryštálov ľadu. Organická fáza (etylacetátová vrstva) bola odparovaná dovtedy, pokým sa získal olej ovitý hrubý extrakt.

Príklad C

Vyčerenie alebo filtrácia fermentačného média pri pH 6 odstráni pevné časti. Vyčerené kultivačné médium bolo nastavené na pH 3,9 pomocou koncentrovanej kyseliny octovej. Do vyčereného extraktu sa pridal KCN v koncentrácii 0,5 g na liter média a reakčná zmes bola za stáleho miešania inkubovaná pri teplote 20 °C 1 hod. Potom bola teplota znížená na 15 °C a pH bolo pomocou zriedeného hydroxidu sodného nastavené na hodnotu 9,5. Reakčná zmes bola extrahovaná pomocou 2 : 1,5 (v/v) etylacetátu. Extrakcia prebiehala za stáleho trepania 20 min., teplota zmesi bola udržiavaná v rozsahu 8 až 10 °C. Odstredením boli oddelené obidve fázy. Organická fáza bola vysušená pomocou bezvodého sulfátu sodného. Organická fáza (etylacetátová vrstva) bola odparovaná dovtedy, pokým sa získal olej ovitý hrubý extrakt. Tento extrakt bol purifikovaný pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, gradient 20 : 1 cez 10 : 1 až po 5 : 1 etylacetát : metanol) pri kvantitatívnom vzniku zlúčeniny 2 vo forme svetložltej pevnej látky.

Rf: 0,55 (etylacetát: metanol 5 : 1); t_R = 19,9 min [HPLC, Delta Park C4, 5 gm, 300 A, 150x3 mm, λ= 215 nm, flow = 0,7 ml/min., temp = 50°C, grád: CH₃CN-aq. NaOAc (100 mM) 85 % - 70 % (20')];

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,54 (dd, J, = 4,4 Hz, J₂ = 8,4 Hz, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,12 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,87 (bs, 1H), 3,65 (ddd, J, = 1,5 Hz, J₂ = 8,7 Hz, J₃ = 9,9 Hz, 1H), 3,35 (br, D, J= 8,4 Hz, 1H), 3,15 - 2,96 (m, 4H), 2,92 (q, J= 7,2 Hz, 1H), 2,47 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,18 (s, 3H) 1,83 (s, 3H), 1,64 (ddd, J, = 2,7 Hz, J₂ = 11,1 Hz, J₃ = 14,1 Hz, 1H), 0,79 (d, J = 7,2 Hz, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 186,0 (q), 175,9 (q), 156,2 (q), 146,8 (q), 142,8 (q), 140,7 (q), 136,6 (q), 130,5 (q), 128,8 (q), 127,0 (q), 120,5 (s), 117,4 (q), 116,5 (q), 60,8 (t), 60,4 (s), 58,7 (t), 56,2 (s), 55,7 (s), 54,8 (s), 54,8 (s), 54,4 (s), 50,0 (s), 41,6 (t), 39,8 (d), 25,2 (d), 24,4 (d), 21,2 (t),15,5 (t), 8,4 (t).

ESI-MS m/z vyrátané pre C₂₉H₃₅N₅O₆: 549,6. Zistené (M+H)⁺: 572,3

Príklad D

Médium (50 I) zložené z 2 % dextrózy, 4 % manitolu, 2 % sušených pivovarníckych kvasníc, 1 % sulfátu amónneho, 0,04 % hydrogénfosforečnanu draselného, 0,8 % chloridu draselného, 0,001 % chloridu železitého, 0,1 % L-tyrozínu, 0,8 % uhličitanu vápenatého, 0,05 % polypropylénglykolu 2000 a 0,2 % protipenivej zlúčeniny ASSAF 1000 sa nalialo do fermentačnej nádoby s objemom 75 1 a po sterilizácii naočkované 2 % kultúrou kmeňa A2-2 (FERM BP-14). Kultivácia prebiehala za prístupu vzduchu pri teplote od 27 do 24 °C počas 64 hod. (prevzdušňovanie 75 1 za minútu a trepanie 350 až 500 obrátok za minútu). pH bolo kontrolované pomocou automatického pridávania riedenej kyseliny sírovej od 27. hodiny kultivácie až po finálne spracovanie. Od 16. hodiny kultivácie bol pridaný 2 % manitol. Po odstredení buniek sa získalo médium (45

1) a pomocou riedeného hydroxidu sodného bolo pH nastavené na 9,5. Potom bolo dvakrát extrahované 25 litrami etylacetát. Extrakcia prebiehala pri stálom trepaní 20 min. pri teplote 8 °C. Odstredením boli oddelené obidve fázy. Organické fázy boli zmrazené na teplotu -20 °C a prefiltrované kvôli odstráneniu kryštálikov ľadu a odparované až do okamihu, pokým sa získalo 40 g olejovito tmavého hrubého extraktu. Po zavedení kyanidovej skupiny a purifikácii sa získalo 3,0 g kyanosafŕacínu B.

Príklad E

Médium (SO I) zložené z 2 % dextrózy, 4 % manitolu, 2 % sušených pivovarníckych kvasníc, 1 % sulfátu amónneho, 0,02 % hydrogénfosforečnanu draselného, 0,2 % chloridu draselného, 0,001 % chloridu železitého, 0,1 % L-tyrozínu, 0,8 % uhličitanu vápenatého, 0,05 % polypropylénglykolu 2000 a 0,2 % protipenivej zlúčeniny ASSAF 1000 sa nalialo do fermentačnej nádoby s objemom 75 I a po sterilizácii naočkované 2 % kultúrou kmeňa A2-2 (FERM BP-14). Kultivácia prebiehala za prístupu vzduchu pri teplote od 27 do 24 °C počas 64 hod. (prevzdušňovanie 75 I za minútu a trepanie 350 až 500 obrátok za minútu). pH bolo kontrolované pomocou automatického pridávania riedenej kyseliny sírovej od 28. hodiny kultivácie až po finálne spracovanie. Od 16. hodiny kultivácie bol pridaný 1 % manitol. Po odstredení buniek sa získalo médium (45 I) a pomocou 200 ml koncentrovanej kyseliny octovej bolo pH nastavené na 3,9. Pridaných bolo 25 g 97 % KCN a po 1 hod. trepania bolo pH média pomocou 1 500 ml 10 % roztoku hydroxidu sodného nastavené na hodnotu 9,5. Potom bolo médium extrahované 35 litrami etylacetátu. Extrakcia prebiehala pri stálom trepaní 20 min. pri teplote 8 °C. Odstredením boli oddelené obidve fázy. Organická fáza bola vysušená pomocou bezvodého sulfátu sodného a odparovaná až do okamihu, pokým sa získalo 60 g olejovito tmavého hrubého extraktu.

Po chromatografickej separácii sa získalo 4,9 g kyanosafŕacínu B.

Citovaná literatúra

European Patent 309,477.

US Patent 5,721,362.

Sakai, R., Jares-Erijman, E. A., Manzanares, I., Elipe, M. V. S., and Rinehart, K. L. J. Am.

Chem. Soc. (1996) 118, 9017 - 9023

Martinez, E. J., Owa, T., Schreiber, S. L. and Corey, E. J. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999, 96, 3496 - 3501. Japanese Kokai JP-A2 59/225189.

Japanese Kokai JP-A2 60/084288.

Arai, T,; Kubo, A. In The Alkaloids, Chemistry and Pharmacology; Brossi, A. Ed.; Academic: New York, 1983, Vol 21; pp 56-110.

Remers, W. A.: In The Chemistry of Antitumor Antibiotics; Vol. 2; Wiley; New York. 1988, pp 93 - 118. Gulavita N. K.; Scheuer, P. J.: Desilva, E. D. Abst. Indo-United States Symp. on Bioactive Compounds from Marine Organisms, Goa, India, Feb. 23 - 27,1989, p 28.

Arai, T; Takahashi, K; Kubo, A. J. Antibiot, 1977, 30,1015 - 1018.

Arai. T.; Takahashi, K.; Nakahara, S.; Kubo, A. Experientia 1980, 36, 1025 - 1028. Mikami, Y.; Takahashi, K; Yazawa, K.; Hour-Young, C.; Arai, T.; Saito, N.; Kubo, A. J. Antibiot.1988,41, 734 - 740.

Arai, T.; Takahashi, K.; Ishiguro, K.; Yazawa, K. J. Antibiot. 1980, 33, 951 - 960.

Yazawa, K.; Takahashi, K.; Mikami, Y.; Arai, T.; Saito, N.; Kubo, A. J. Antibiot. 1986, 39,1639 - 1650.

Arai, T.; Yazawa, K.; Takahashi, K.; Maeda, A.; Mitrami, Y. Antimicrob. Agent Chemother. 1985, 28, 5 - 11. Takahashi, K.; Yazawa, K.; Kishi, K.; Mikami, Y.; Arci, T.; Kubo, A. J. Antibiot. 1982, 35, 196 - 201. Yazawa, K.; Asaoka, T.; Takahashi, K.; Mitrami, Y.; Arai, T. J. Antibiot. 1982, 35, 915 - 917.

Frincke, J. M.; Faulkner, D. J. J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 265 - 269.

He, H. -Y.; Faulkner, D. J. J. Org. Chem. 1989, 54, 5822 - 5824.

Kubo, A.; Saito, N.; Kitahara, Y.; Takahashi, K.; Tazawa, K.; Arci, T. Chem Pharm. Bull. 1987, 35, 440 až 442.

Trowitzsch-Kienast, W.; Irschik, H.; Reichenback, H.; Wray, V.; Hófle, G. Liebigs Ann. Chem. 1988, 475 až 481.

Ikeda, Y.; Idemoto, H.; Hirayama, F.; Yamamoto, K.; Iwao, K.; Asano, T.; Munakata, T. J. Antibiot. 1983, 36,1279 - 1283.

Asaoka, T.; Yazawa, K.; Mitrami, Y. Arai, T.; Takahashi, K. J. Antibiot. 1982, 35, 1708 - 1710.

Lown, J. W.; Hanstock, C. C.; Joshua, A. V.; Arci, T; Takahashi, K. J. Antibiot. I 983, 36, 1184 - 1194. Munakata et al. United States Patent 4, 400, 752,1984.

Y. Ikeda et al. The Journal of Antibiotics. VOL XXXVI, N°10, 1284,1983.

R Cooper, S. Unger. The Journal of Antibiotics. VOL XXXVIII, N°l, 1985.

Corey et al. United States Patent 5, 721, 362. 1998.

Corey et al. J. Am. Chem. Soc. vol 118 pp 9202 - 92034,1996.

Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 96, pp 3496 - 3501,1999.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Spôsob prípravy zlúčeniny vzorca (XVIIb):

5 kde:

R¹ je aminometylénová skupina, chránená aminometylénová skupina, derivatizovaná aminometylénová skupina, hydroxymetylénová skupina, chránená hydroxymetylénová skupina alebo derivatizovaná hydroxymetylénová skupina; a

R⁴ je-H;

10 alebo

R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII):

R⁵ je -H, -OH;

R⁷ je -OCH3 a R⁸ je -OH alebo R⁷ a R⁸ spoločne tvoria skupinu -O-CH2-O-;

15 R^14a a R^l4b sú obidve -H alebo jedno je -H a druhé je -OH, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^14b spoločne tvoria ketoskupinu;

R¹⁵ je-H, -OH;

R²¹ je -H, -OH alebo -CN; a acyl deriváty;

20 z 21 -kyano zlúčeniny vzorca (XVIb):

kde:

R¹ je amidometylénová skupina alebo acyloxymetylénová skupina;

R⁵ a R⁸ sú nezávisle vybrané z -H, -OH alebo -OCOCH₂OH, alebo R⁵ a R⁸ sú obidve ketoskupiny a kruh A je 25 p-benzochinónový kruh;

R¹²je-CH₃;

R^14a a R^l4b sú obidve -H alebo jedna je -H a druhá je -OH, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^14b spoločne tvoria keto skupinu; a

R¹⁵ a R¹⁸ sú nezávisle vybrané z -H alebo -OH, alebo R¹⁵ a R¹⁸ sú obidve ketoskupiny a kruh E je p-benzo30 chinónový kruh;

za predpokladu, že najmenej jeden z kruhov A alebo E je p-benzochinónový kruh, pričom reakcie spôsobu obsahujú podľa potreby:

a) konverziu chinónového systému pre kruh E na fenolový systém;

b) konverziu chinónového systému pre kruh A na fenolový systém;

c) konverziu fenolového systému pre kruh A na metyléndioxyfenolový kruh;

d) tvorbu mostíkového spirokruhového systému vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII) cez polohu 1 a polohu 4 v kruhu B;

e) derivatizáciu;

za poskytnutia požadovanej zlúčeniny vzorca (XVIIb).
2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že krok a) konverzie chinónového systému pre kruh £ na fenolový systém sa uskutočňuje redukciou použitím vodíka s paládiovo-uhlíkovým katalyzátorom.
3. Spôsob podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že krok b) konverzie chinónového systému pre kruh A na fenolový systém sa uskutočňuje redukciou použitím vodíka s paládiovo-uhlíkovým katalyzátorom.
4. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že pozostáva najmenej z krokov b), c) a e).
5. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, vyznačujúci sa tým, že R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII) a krok d) tvorby mostíkového spirokruhového systému cez polohu 1 a polohu 4 v kruhu B sa uskutočňuje substitúciou v polohe 1 s mostíkovým reagentom za vytvorenia exendového chinónového metidu v polohe 4 a reakciou uvedeného metidu s 1-substituentom za vytvorenia mostíkového spirokruhového systému.
6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že mostíkový reagent je vzorca (XIX) kde Fu znamená chránenú funkčnú skupinu, Prot³ je chrániaca skupina, a prerušovaná čiara znázorňuje prípadnú dvojitú väzbu.
7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, žeFuje skupina -NHProť*³ alebo -OProt^4b, kde Prot^4a je amino chrániaca skupina a Prot^4b je hydroxy chrániaca skupina.
8. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že mostíkovým reagentom je Int-29 alebo Int-37:
9. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 5 až 8, vyznačujúci sa tým, že tvorba metidu zahrnuje zavedenie hydroxyskupiny v polohe 10 v spojení kruhov A a B za získania čiastočnej štruktúry vzorca (XX):

O R kde skupina R je vybraná na tvorbu požadovanej skupiny vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII).
10. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že zavedenie hydroxyskupiny v polohe

10 v spojení kruhov A aB dáva parciálnu štruktúru vzorca (XXI):

O R kde skupina R je, ako je definované v nároku 9.
11. Spôsob podľa nároku 9 alebo 10, vyznačujúci sa tým, že skupina R je -CHFu-CH₂-SProt³, kde Fu je chránená fúnkčná skupina a Prot³ je tiolová chrániaca skupina.
12. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11, vyznačujúci sa tým, že krok e) derivatizácie zahrnuje acyláciu.
13. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov lažl2, vyznačujúci sa tým, že 21-kyano zlúčenina vzorca (XVIb) je safŕamycín R alebo sa získa zavedením 21-kyano skupiny do safŕamycínu A, saframycínu B, safŕamycínu C, safŕamycínu G, safŕamycínu H, safŕamycínu S, safŕamycínu Y₃, safŕamycínu Y_db safŕamycínu Ad,, safŕamycínu Yd₂, safŕamycínu AH₂, safŕamycínu AH₂Ac, safŕamycínuAH,, safŕamycín AH,Ac, safŕamycínu AR₃, renieramycínu A, renieramycínu B, renieramycínu C, renieramycínu D, renieramycínu E, renieramycínu F, xestomycínu, safŕamycínu D, safŕamycínu F, safŕamycínu Mx-1, safŕamycínu Mx-2, safracínu A alebo safracínu B.
14. Spôsob podľa nároku 13, vyznačujúci sa tým, že 21-kyano zlúčenina alebo vzorca

Zlúčenina 2
15. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 14, vyznačujúci sa tým, že R⁵ v zlúčenine vzorca (XVIIb) je alkanoyloxy s 1 až 5 atómami uhlíka.
16. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 15, vyznačujúci sa tým, že R⁵ v zlúčenine vzorca (XVIIb) je acetyloxy.
17. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16, vyznačujúci sa tým, že R^14a a R^14b v zlúčenine vzorca (XVIIb) sú vodík.
18. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 17, vyznačujúci sa tým, že R¹⁵ v zlúčenine vzorca (XVIIb) je vodík.
19. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 18, vyznačujúci sa tým, že R¹⁸ v zlúčenine vzorca (XVIIb) je hydroxy.
20. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19, vyznačujúci sa tým, že R²¹ v zlúčenine vzorca (XVIIb) je -OH alebo -CN.
21. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov laž20, vyznačujúci sa tým, že R⁷ a R⁸ v zlúčenine vzorca (XVIIb) spoločne tvoria skupinu -O-CH₂-O-.
22. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 21, v y z n a č u j ú c i sa tým, že R¹ a R⁴ vo vzorci vzorca (XVIIb) spoločne tvoria skupinu vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII):

alebo
23. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, 12 až 21, vyznačujúci sa tým, že R¹ v zlúčenine vzorca (XVIIb) je prípadne chránená alebo derivatizovaná aminometylénová skupina, prípadne chránená alebo derivatizovaná hydroxymetylénová skupina a R⁴ je -H.

5
24. Spôsob podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že R¹ v zlúčenine vzorca (XVIIb) je skupina -CH₂-NH₂ alebo -CH₂-NH-aa, kde aa je acyl aminokyseliny.
25. Spôsob podľa nároku 24, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina vzorca (XVIIb) je N-acyl derivát skupiny R¹, kde -CH₂NH₂ alebo -CH₂-NH-aa.
26. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že R¹ v zlúčenine vzorca (XVIIb) je N10 -acyl derivát, kde acylová skupina je vzorca -CO-R^a, kde R^a je alkyl, alkoxy, alkenyl, aralalkyi, arylalkenyl, acyl aminokyseliny, alebo heterocyklyl; každý prípadne substituovaný s halo, kyano, nitro, karboxyalkylom, alkoxy, arylom, aryloxy, heterocyklylom, heterocyklyloxy, alkylom, amino alebo substituovaným amino; alebo acylová skupina je aa.
27. Spôsob podľa nároku 24, 25 alebo 26, vyznačujúci sa tým, že je prítomná jedna alebo 15 viac aa skupín a je alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, izoleucyl, leucyl, lyzyl, metionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, treonyl, tyronyl, tryptofyl, tyrozyl alebo valyl.
28.Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 27, vyznačujúci sa tým, že v ktorejkoľvek reakcii je chránených jedna alebo viac skupín substituentov chrániacou skupinou.

20
29. Spôsob prípravy zlúčeniny vzorca (XXIIb):

kde

R¹ je -CH₂NH₂ alebo -CH₂OH, alebo chránená, alebo derivatizovaná verzia tejto skupiny a R⁴ je -H; alebo R¹ a R⁴ spoločne tvoria skupinu vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII):

R⁵ je -OH alebo chránená, alebo derivatizovaná verzia tejto skupiny;

R¹² je -H, -CH₃ alebo -CH₂CH₃;

R^14a a R^14b sú obidve -H alebo jedno je -H a druhé je -OH alebo chránená, alebo derivatizovaná verzia tejto skupiny, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^14b spoločne tvoria ketoskupinu;

R¹⁵ je -H, -OH alebo chránená, alebo derivatizovaná tejto skupiny;

R¹⁸ je -OH alebo chránená alebo derivatizovaná verzia tejto zlúčeniny; a

R²¹ je -H, -OH alebo -CN; z 21-kyano zlúčeniny vzorca (XVIb):

kde:

R¹ je amidometylénová skupina alebo acyloxymetylénová skupina;

R⁵ a R⁸ sú nezávisle vybrané z -H, -OH alebo -OCOCH₂OH, alebo R⁵ a R⁸ sú obidve keto skupiny a kruh A je μ-benzochinónový kruh;

R¹² je -H, -CH₃ alebo -CH₂CH₃;

R^l4a a R^14b sú obidve -H alebo jedno je -H a druhé je -OH, -OCH₃ alebo -OCH₂CH₃, alebo R^14a a R^14b spoločne tvoria keto skupinu; a

R¹⁵ a R¹⁸ sú nezávisle vybrané z -H alebo -OH, alebo R¹⁵ a R¹⁸ sú obidve keto skupiny a kruh E je p-benzochinónový kruh;

za predpokladu, že aspoň jeden kruh A alebo E je p-benzochinónový kruh, pričom reakcie spôsobu obsahujú podľa potreby:

a) konverziu chinónového systému pre kruh E na fenolový systém;

b) konverziu chinónového systému pre kruh A do fenolového systému;

c) konverziu fenolového systému pre kruh A na metyléndioxyfenolový kruh;

d) tvorbu mostíkového spirokruhového systému vzorca (IV), (V), (VI) alebo (VII) cez polohu la polohu 4 v kruhu fi; a

e) derivatizáciu;

za poskytnutia požadovanej zlúčeniny vzorca (XXIIb).
30. Spôsob podľa nároku 29, vyznačujúci sa tým, že v zlúčenine vzorca (XXIIb) R⁵ je OH, R^14a a R^l4b sú H, R¹⁵ je H a R¹⁸ je OH.
31. Spôsob podľa nároku 29, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina vzorca (XXIIb) je ekteinascidín 743 alebo ekteinascidín 770:

ET-743
32. Spôsob podľa nároku 29, vyznačujúci sa nascidín 743:

tým, že zlúčenina vzorca (XXIIb) je ektei77
33. Spôsob podľa nároku 29, v y z n a č u j ú c i sa tým, že produkt je vzorca (XXIII):

kde

5 R¹ je derivatizovaná aminometylénová skupina strednej veľkosti;

R⁵ je derivatizovaná hydroxy skupina malej veľkosti;

R¹² je -CH₃ a

R²¹ je hydroxy alebo kyano skupina.
34. Spôsob podľa nároku 33, v y z n a č u j ú c i sa tým, že R¹ je hydrofóbna skupina.

10
35. Spôsob podľa nároku 34, vyznačujúci sa tým, že R¹ je skupina -CH₂NH-CO-R^a, kde

R^a má lineárny reťazec s dĺžkou menšou ako 20 atómov.
36. Spôsob podľa nároku 35, vyznačujúci sa tým, žeR^amá lineárny reťazec s dĺžkou menšou ako 15 atómov.
37. Spôsob podľa nároku 36, vyznačujúci sa tým, že R“ má lineárny reťazec s dĺžkou

15 menšou ako 10 atómov.
38. Spôsob podľa nároku 29 alebo podľa ktoréhokoľvek z nárokov 31 až 37, vyznačujúci sa tým, že R⁵ je acetylová skupina.
39. Spôsob podľa nároku 33, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina vzorca (XXIII) je ftalascidín vzorca (III):
40. Spôsob podľa nároku 24, 25 alebo 26, v y z n a č u j ú c i sa tým, že aa je alanyl.
41. Spôsob podľa nároku 40, vyznačujúci sa tým, že alanylová skupina je chránená s butoxykarbonylovou skupinou.
42. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 41, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje reakciu:

kde R¹ a R¹⁸ sú, ako je definované v nároku 1 alebo 29.
43. Spôsob podľa nároku 42, v y z n a č u j ú c i sa tým, že R¹⁸ je chránená OH skupina.
44. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 43, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje reakciu:

kde R¹ a R¹⁸ sú, ako je definované v nároku 1 alebo 29.
45. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 25, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje reakciu premeny zlúčeniny so skupinou R¹, ktorá je aminometylénová skupina, na zlúčeninu so skupinou R¹, ktorá je hydroxymetylénová skupina.
46. Zlúčenina vzorca (XVIb) ako je definovaná v nároku 1, charakterizovaná vzorcom kde R¹ je prípadne chránená alebo aminometylénová skupina derivatizovaná acylom, kde chrániace skupiny pre aminometylénovú skupinu sú vybrané z alkylu, alkenylu, alkysilylalkoxyalkylu, alkoxyalkylu, kyanoalkylu, heterocyklylu, alkoxyarylalkylu, cykloalkylu, nitroarylu, arylalkylu a hydroxyarylalkylu;

acylové skupiny v aminometylénovej skupine derivatizovanej acylom sú vybrané z alkanoylu, haloalkanoylu, arylalkanoylu, alkenoylu, heterocyklylacylu, aroylu, arylaroylu, haloaroylu a nitroaroylu; alebo acylové skupiny v aminometylénovej skupine derivatizovanej acylom sú vzorca -CO-R^a, kde R^a je vybrané z alkylu, alkoxylu, alkenylu, arylalkylu, arylalkenylu, acylu aminokyseliny a heterocyklylu, každé prípadne substituované s halo, kyano, nitro, karboxyalkylom, alkoxy, arylom, aryloxy, heterocyklylom, heterocyklyloxy, alkylom, amino a substituovanou amino; alebo skupina -CO-R^a je acyl aminokyseliny; a

R¹⁸ je éter chrániaci skupinu OH, kde éter je vybraný z alkylu, alkoxyalkylu, aryloxyalkylu, alkoxyalkoxyalkylu, alkylsilylalkoxyalkylu, alkyltioalkylu, aryltioalkylu, azidoalkylu, kyanoalkylu, chlóroalkylu, heterocyklylu, cykloalkylalkylu, alkenylu, cykloalkylu, alkylarylakylu, alkoxyarylalkylu, nitroarylalkylu, haloarylalkylu, alkylaminokarbonylarylalkylu, alkylsulfinylarylalkylu a alkylsilyl éterov.
47. Zlúčenina podľa nároku 46, ktorá je vzorca

Me
48. Medziprodukt v spôsobe definovanom v nároku 1, charakterizovaný vzorcom kde R¹ je prípadne chránená alebo aminometylénová skupina derivatizovaná acylom, kde chrániace skupiny 5 pre aminometylénovú skupinu sú vybrané z alkylu, alkenylu, alkysilylalkoxyalkylu, alkoxyalkylu, kyanoalkylu, heterocyklylu, alkoxyarylalkylu, cykloalkylu, nitroarylu, arylalkylu a hydroxyarylalkylu;

acylové skupiny v aminometylénovej skupine derivatizovanej acylom sú vybrané z alkanoylu, haloalkanoylu, arylalkanoylu, alkenoylu, heterocyklylacylu, aroylu, arylaroylu, haloaroylu a nitroaroylu; alebo acylové skupiny v aminometylénovej skupine derivatizovanej acylom sú vzorca -CO-R“, kde R^a je vybrané 10 z alkylu, alkoxylu, alkenylu, arylalkylu, arylalkenylu, acylu aminokyseliny a heterocyklylu, každé prípadne substituované s halo, kyano, nitro, karboxyalkylom, alkoxy, arylom, aryloxy, heterocyklylom, heterocyklyloxy, alkylom, amino a substituovanou amino; alebo skupina -CO-R^a je acyl aminokyseliny; a

R¹⁸ je éter alebo ester chrániace skupinu OH, kde éterové chrániace skupiny sú vybrané z alkylu, alkoxyalky15 lu, aryloxyalkylu, alkoxyalkoxyalkylu, alkylsilylalkoxyalkylu, alkyltioalkylu, aryltioalkylu, azidoalkylu, kyanoalkylu, chlóroalkylu, heterocyklylu, cykloalkylalkylu, alkenylu, cykloalkylu, alkylarylakylu, alkoxyarylalkylu, nitroarylalkylu, haloarylalkylu, alkylaminokarbonylarylalkylu, alkylsulfinylarylalkylu a alkylsilyl éterov;

esterové chrániace skupiny sú vybrané z arylacylu, arylalkylkarbonátu, alifatického karbonátu, alkylsulfinyl20 arylalkyl karbonátu, alkyi karbonátu, arylhaloalkyl karbonátu, arylalkenyl karbonátu, aryl karbamátu, alkyi fosfinylu, alkylfosfinotionylu a arylalkyl sulfonátu.
49. Zlúčenina podľa nároku 48, ktorá je vzorca:
50. Zlúčenina vzorca (XXIIb) ako je definovaná v nároku 29, charakterizovaná vzorcom:

kde R¹ je chránená alebo aminometylénová skupina derivatizovaná acylom, kde chrániace skupiny aminometylénovej skupiny sú vybrané z alkylu, alkenylu, alkysilylalkoxyalkylu, alkoxyalkylu, kyanoalkylu, alkoxyarylalkylu, cykloalkylu, nitroarylu, arylalkylu a hydroxyarylalkylu;

acylové skupiny v aminometylénovej skupine derivatizovanej acylom sú vybrané z alkanoylu, haloalkanoylu, alkenoylu, heterocyklylacylu, arylaroylu, haloaroylu a nitroaroylu; alebo acylové skupiny v aminometylénovej skupine derivatizovanej acylom sú vzorca -CO-R“, kde R^a je vybrané z alkylu, alkoxylu, alkenylu, arylalkenylu, acylu aminokyseliny a heterocyklylu, každé prípadne substituované s halo, kyano, nitro, karboxyalkylom, alkoxy, aryloxy, heterocyklylom, heterocyklyloxy, alkylom, amino a substituovanou amino; alebo skupina -CO-R“ je acyl aminokyseliny;

a

R¹⁸ je éter alebo ester chrániace skupinu OH, kde éterové chrániace skupiny sú vybrané z alkylu, alkoxyalkylu, aryloxyalkylu, alkoxyalkoxyalkylu, alkylsilylalkoxyalkylu, alkyltioalkylu, aryltioalkylu, azidoalkylu, kyanoalkylu, chlóroalkylu, heterocyklylu, cykloalkylalkylu, alkenylu, cykloalkylu, alkoxyarylalkylu, nitroarylalkylu, haloarylalkylu, alkylaminokarbonylarylalkylu, alkylsulfinylarylalkylu a alkylsilyl éterov; esterové chrániace skupiny sú vybrané z arylacylu, arylalkylkarbonátu, alifatického karbonátu, alkylsulfmylarylalkyl karbonátu, alkyl karbonátu, arylhaloalkyl karbonátu, arylalkenyl karbonátu, aryl karbamátu, alkyl fosfmylu, alkylfosfmotionylu a arylalkyl sulfonátu.
51. Zlúčenina podľa nároku 50, ktorá je vzorca:

Me