NO327043B1 - Konjugat, preparat samt anvendelse derav og fremgangsmate for fremstilling. - Google Patents
Konjugat, preparat samt anvendelse derav og fremgangsmate for fremstilling. Download PDFInfo
- Publication number
- NO327043B1 NO327043B1 NO20003372A NO20003372A NO327043B1 NO 327043 B1 NO327043 B1 NO 327043B1 NO 20003372 A NO20003372 A NO 20003372A NO 20003372 A NO20003372 A NO 20003372A NO 327043 B1 NO327043 B1 NO 327043B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- glycoprotein
- conjugate
- sequence
- conjugates
- erythropoietin
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims description 88
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims description 88
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical group [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 80
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 claims description 48
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 claims description 48
- 101000920686 Homo sapiens Erythropoietin Proteins 0.000 claims description 44
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 40
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 34
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 34
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 32
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 32
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 29
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 21
- -1 poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 claims description 18
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 16
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 15
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 15
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 11
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 claims description 11
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 claims description 10
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 claims description 10
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 8
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 7
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 claims description 6
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 claims description 6
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 4
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 claims description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 3
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 claims description 3
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 claims description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 claims description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N formamide Substances NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims description 2
- 102220547809 Serine/threonine-protein kinase B-raf_N88T_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 67
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 17
- 238000007745 plasma electrolytic oxidation reaction Methods 0.000 description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 17
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 10
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 8
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 7
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 5
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 5
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 3
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 241001415846 Procellariidae Species 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 2
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N oxamic acid Chemical compound NC(=O)C(O)=O SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- DYMYLBQTHCJHOQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) butanoate Chemical class CCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O DYMYLBQTHCJHOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) propanoate Chemical class CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 101150002621 EPO gene Proteins 0.000 description 1
- 108010092408 Eosinophil Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100031939 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010065426 Hemaccel Proteins 0.000 description 1
- 238000011993 High Performance Size Exclusion Chromatography Methods 0.000 description 1
- 101100333654 Homo sapiens EPO gene Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- CHJKEDSZNSONPS-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CHJKEDSZNSONPS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N Lys-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 1
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GOMUXSCOIWIJFP-GUBZILKMSA-N Pro-Ser-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GOMUXSCOIWIJFP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N Ser-Ser-Ser-Ser Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(O)=O JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- VTMGKRABARCZAX-OSUNSFLBSA-N Thr-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O VTMGKRABARCZAX-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010640 amide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- GHWVXCQZPNWFRO-UHFFFAOYSA-N butane-2,3-diamine Chemical compound CC(N)C(C)N GHWVXCQZPNWFRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- YKCWQPZFAFZLBI-UHFFFAOYSA-N cibacron blue Chemical group C1=2C(=O)C3=CC=CC=C3C(=O)C=2C(N)=C(S(O)(=O)=O)C=C1NC(C=C1S(O)(=O)=O)=CC=C1NC(N=1)=NC(Cl)=NC=1NC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O YKCWQPZFAFZLBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 108010057760 hepatic sialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001048 orange dye Substances 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008288 physiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000003058 plasma substitute Substances 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000000287 tissue oxygenation Effects 0.000 description 1
- 239000012929 tonicity agent Substances 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører konjugat, preparat samt anvendelse derav og fremgangsmåte for fremstilling.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Erytropoiese er dannelse av røde blodceller som forekommer for å kompensere celledestruksjon. Erytropoiese er en kontrollert fysiologisk mekanisme som gjør det mulig at tilstrekkelige røde blodceller blir tilgjengelig for riktig vevsoksygenering. Naturlig forekommende human erytropoietin (hEPO) blir produsert i nyrene og er den humorale plasma-faktor som stimulerer rød-blodcelleproduksjon (Carnot, P and Deflandre, C (1906) CR. Acad. Sei. 143: 432; Erslev, AJ (1953 Blood 8: 349; Reissmann, KR (1950) Blood 5: 372; Jacobson, LO, Goldwasser, E, Freid, W og Plzak, LF (1957) Nature 179: 6331-4). Naturlig forekommende EPO stimulerer delingen division og differensieringen av utøvende erytroide progenitorer i benmargen og utøver sin biologiske aktivitet ved binding til reseptorer på erytroidforløpere (Krantz, BS (1991) Blood 77: 419).
Erytropoietin blir fremstilt biosyntetisk ved anvendelse av rekombinant DNA teknologi (Egrie, JC, Strickland, TW, Lane, J et al. (1986) Immunobiol. 72: 213-224) og er produktet av et klonet human EPO gen innsatt i og uttrykt i eggstokkvevcellene til den kinesiske hamster (CHO celler). Primærstrukturen til den dominerende, fullstendig prosesserte form av hEPO er illustrert i SEKV ID NR:1. Det er to disulfidbroer mellom Cys<7->Cys161 og Cys<29>-Cys<33. >Molekylvekten til polypeptidkjeden til EPO uten sukker- gruppene er 18,236 Da. I det intakte EPO-molekyl utgjøres omtrent 40% av molekyl-vekten av karbohydratgruppene som glykosylerer proteinet i glykosyleringssetene på proteinet (Sasaki, H, Bothner, B, Dell, A og Fukuda, M (1987) J. Biol. Chem. 262: 12059).
Fordi human-erytropoietin er essensiell i rød blodcelledannelse er hormonet nyttig ved behandling av blodsykdommer karakterisert ved lav eller defekt rød blodcelleproduksjon. Klinisk blir EPO anvendt ved behandling av anemi hos kronisk nyresvikt- pasienter (CRF)
(Eschbach, JW, Egri, JC, Downing, MR et al. (1987) NEJM 316: 73-78; Eschbach, JW, Abdulhadi, MH, Browne, JK et al. (1989) Ann. Intern, Med. 111: 992; Egrie, JC, Eschbach, JW, McGuire, T, Adamson, JW (1988) Kidney Intl. 33: 262; Lim, VS, Degowin, RL, Zavala, D et al. (1989) Ann. Intern. Med. 110: 108-114) og i AIDS og kreftpasienter som gjennomgår kjemoterapi (Danna, RP, Rudnick, SA, Abels, RI In: MB, Garnick, ed. Erythropoietin in Clinical Applications-An International Perspective. New York, NY: Marcel Dekker; 1990: s.
301-324). Imidlertid er biotilgjengeligheten av kommersielt tilgjengelige terapeutiske proteinmidler så som EPO begrenset av deres korte plasmahalveringstid og tilbøyelighet til proteasenedbrytning. Disse mangler forhindrer dem fra å nå maksimal klinisk potensiale.
WO 9911781 beskriver rekombinant humant erytropoietin der glykosyleringsprofilen modifiseres slik at disse polypeptidene får en forlenget in vivo halveringstid og økt biologisk aktivitet.
WO 9927897 beskriver glykoprotein-konjugater der hGRF er bundet til PEG og dette øker konjugatets sirkulerende halveringstid.
OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer et konjugat, hvilket konjugat omfatter et erytropoietin-glykoprotein som har minst én fri aminogruppe og som har den in vivo biologiske aktivitet hvilken forårsaker at benmargceller øker produksjon av reticulocytter og røde blodceller og er valgt fra gruppen bestående av humant erytropoietin og humant erytropoietin modifisert ved addisjon av fra 1 til 6 glykosyleringsseter eller en omleiring av minst ett glykosyleringssete; idet nevnte glykoprotein er kovalent bundet til "n" poly(etylenglykol) grupper med formelen
-CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR
slik at -CO i hver poly(etylenglykol) gruppe danner en amidbinding med én av nevnte aminogrupper; hvor
RerCi-C6-alkyl;
x er 2 eller 3;
m er fra 450 til 900;
n er fra 1 til 3; og
n og m er valgt slik at molekylvekten til konjugatet minus erytropoietin-glykoproteinet er fra 20 kilodalton til 100 kilodalton.
Sammenlignet med umodifisert EPO (dvs. EPO uten et PEG tilknyttet) og konvensjonelle PEG-EPO konjugater, har foreliggende konjugater en øket sirkulerende halveringstid og plasmaoppholdstid, redusert utskillelse og øket klinisk aktivitet in vivo. Konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse har samme anvendelser som EPO. Spesielt er konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse nyttige for å behandle pasienter ved å stimulere delingen og differensieringen av "committed erytroid progenitors" i benmargen på samme måte som EPO blir anvendt for å behandle pasienter.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer ovennevnte konjugater. Konjugater er kjennetegnet ved formelen
P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n (I)
hvor x, m, n og R er som definert i krav 1 og P er resten av glykoproteinet uten n aminogruppen(e) som danner amidbinding(er) med poly(etylen-glykol)gruppen(e).
Det er funnet at konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes på samme måte som umodifisert EPO. Imidlertid har konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse en øket sirkulasjonshalveringstid og plasmaoppholdstid, redusert utskillelse og øket klinisk aktivitet in vivo. På grunn av disse forbedrede egenskaper kan konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse administreres én gang ukentlig istedenfor tre ganger ukentlig for umodifisert EPO. Redusert administreringsfrekvens er forventet, hvilket resulterer i forbedret pasientfordragelighet, hvilket fører til forbedrete behandlingsresultater, så vel som forbedret livskvalitet for pasienten. Sammenlignet med konvensjonelle konjugater av EPO bundet til poly(etylenglykol) er det funnet at konjugater som har molekylvekten og linkerstrakturen til konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse, har en forbedret styrke, stabilitet, AUC, sirkulasjonshalveringstid og kostnadsprofil.
Konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse kan administreres i en terapeutisk effektiv mengde til pasienter på samme måte som EPO blir administrert. Den terapeutisk effektive mengde er den mengde av konjugat som er nødvendig for den in vivo biologiske aktivitet som forårsaker at benmarg øker produksjon av reticulocytter og røde blodceller. Den nøyaktige mengde av konjugat er et spørsmål som er avhengig av slike faktorer som den nøyaktige type tilstand som behandles, tilstanden til pasienten som behandles, så vel som de andre bestan-deler i preparatet. For eksempel 0,01 til 10 ji.g pr. kg kroppsvekt, fortrinnsvis 0,1 til 1 \ Lg pr. kg kroppsvekt, kan administreres f.eks. én gang ukentlig.
Foreliggende oppfinnelse vedrører videre preparat, kjennetegnet ved at det omfatter konjugater, idet hvert av nevnte konjugater omfatter et erytropoietin-glykoprotein som har minst én fri aminogruppe og som har den in vivo biologiske aktivitet som forårsaker at benmargceller øker produksjonen av reticulocytter og røde blodceller og er valgt fra gruppen bestående av humant erytropoietin og humant erytropoietin modifisert ved addisjon av fra 1 til 6 glykosyleringsseter eller en omleiring av minst ett glykosyleringssete; idet glykoproteinet i hvert nevnte konjugat er kovalent bundet til "n" poly(etylenglykol) grupper med formelen -CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR idet -CO i hver poly(etylenglykol)gruppe danner en amidbinding med én av nevnte aminogrupper; hvor i hvert av nevnte konjugater R er Ci-C4-alkyl; x er 2 eller 3; m er fra 450 til 900; n er fra 1 til 3; n og m er valgt slik at molekylvekten til hvert konjugat minus erytropoietin-glykoproteinet er fra 20 kilodalton til 100 kilodalton; prosentdelen av konjugater hvor n er 1 er minst nitti prosent.
Oppfinnelsen vedrører også farmasøytisk preparat, kjennetegnet ved at det omfatter et konjugat eller et preparat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 23 og et farmasøytisk akseptabelt tilsetningsmiddel.
De farmasøytiske preparater inneholdende konjugatet kan formuleres til en styrke som er effektiv for administrering med forskjellige midler til et menneske som har blodsykdommer karakterisert ved lav eller defekt produksjon av røde blodceller. Gjennomsnittlige terapeutisk effektive mengder av konjugatet kan variere og bør spesielt baseres på anbefalingene for resepten til en kvalifisert lege.
Foreliggende oppfinnelse vedrører også anvendelse av et konjugat eller et preparat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 23, for fremstilling av medikamenter for behandling eller forebygging av sykdommer korrelert med anemi hos kronisk nyresvikt-pasienter (CRF), AIDS og for behandling av kreftpasienter som gjennomgår kjemoterapi.
Erytropoietinglykoproteinproduktene fremstilt i henhold til foreliggende oppfinnelse kan følgelig dannes til farmasøytiske preparater egnet for injeksjon med en farmasøytisk akseptabel bærer eller konstituent ved metoder kjent på området. For eksempel er egnete preparater beskrevet i WO97/09996, WO97/40850, WO98/58660 og WO99/07401. Blant de foretrukne farmasøytisk akseptable bærere for formulering av produktene ifølge foreliggende oppfinnelse er humant serum albumin, humane plasmaproteiner, etc. Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan formuleres i 10 mM natrium/kaliumfosfatbuffer ved pH 7 inneholdende et tonisitetsmiddel, f.eks. 132 mM natriumklorid. Eventuelt kan det farmasøytiske preparatet inneholde et konserveringsmiddel. Det farmasøytiske preparatet kan inneholde forskjellig mengder av erytropoietin, f.eks. 10 -1000 u,g/ml, f.eks. 50 |ig eller 400
Hg-
Betegnelsen "erytropoietin" eller "EPO" angir et glykoprotein som har aminosyresekvensen angitt i (SEKV ID NR: 1) eller (SEKV ID NR: 2) eller en aminosyresekvens hovedsakelig homolog til denne, hvis biologiske egenskaper relaterer til stimuleringen av produksjonen av røde blodceller og stimuleringen av delingen og differensieringen av
"committed erythroid progenitors" i benmargen. Som anvendt her omfatter disse betegnelser slike proteiner modifisert bevisst, som for eksempel ved setedirigert mutagenese eller tilfeldig gjennom mutasjoner. Disse betegnelser omfatter også analoger som har fra 1 til 6 ytterligere seter for glykosylering, analoger som har minst én ytterligere aminosyre på karboksyenden av glykoproteinet, hvor den ytterligere aminosyre omfatter minst ett glykosyleringssete, og analoger som har en aminosyresekvens som omfatter en omleiring av minst ett sete for glykosylering. Disse betegnelser omfatter både naturlig og rekombinant produsert human erytropoietin.
I en foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen er R metyl. Fortrinnsvis er m fra ca. 650 til ca. 750 og n er fortrinnsvis 1.
Ved den mest foretrukne utførelsesform av oppfinnelsen er R metyl, m er fra ca. 650 til ca. 750 og n er 1, dvs. konjugatet som definert ovenfor som har formelen
hvor m er fra 650 til 750, n er 1 og P er som definert ovenfor. Fortrinnsvis har m et gjennomsnitt på ca. 680.
Fortrinnsvis er glykoproteinet i konjugatene som definert ovenfor et humnat erytropoietin. Humant erytropoietin og analoge proteiner som definert ovenfor kan uttrykkes ved endogen genaktivering. Foretrukne humane erytropoietinglykoproteiner er de med SEKV ID NR: 1 og SEKV ID NR:2, mest foretrukket de med SEKV ID NR:1.
Videre kan P velges fra gruppen bestående av rester av humant erytropoietin og analoger derav som har fra 1 til 6 ytterligere seter for glykosylering. Som angitt i detalj nedenfor er fremstillingen og rensningen av EPO velkjent på området. Med EPO menes det naturlige eller rekombinante protein, fortrinnsvis humant, som oppnås fra hvilken som helst konvensjonell kilde så som vev, proteinsyntese, cellekultur med naturlige eller rekombinante celler. Hvilket som helst protein som har aktiviteten til EPO, så som muteiner eller på annen måte modifiserte proteiner er omfattet. Rekombinant EPO kan fremstilles gjennom ekspresjon i CHO-, BHK- eller HeLa cellelinjer ved rekombinant DNA-teknologi eller ved endogen genaktivering. Ekspresjon av proteiner, omfattende EPO ved endogen genaktivering er velkjent på området og er beskrevet for eksempel i US patenter nr. 5,733,761,5,641,670 og 5,733,746 og international patentpublikasjon nr. WO93/09222, WO94/12650, WO95/31560, WO90/11354, WO91/06667 og WO91/09955. De foretrukne EPO-arter for fremstilling av erytropoietinglykoproteinprodukter er humane EPO arter. Mer foretrukket er EPO-artene det humane EPO som har aminosyresekvensen angitt i SEKV DD NR:1 eller SEKV ID NR:2, mer foretrukket aminosyresekvensen SEKV ID NR:1.
I en utførelsesform kan P være resten av en glykoproteinanalog som har fra 1 til 6 ytterligere seter for glykosylering. Glykosylering av et protein med én eller flere oligosakkarid-grupper forekommer på spesifikke stillinger langs en polypeptidkjede og påvirker sterkt de fysikalske egenskapene til proteinet så som proteinstabilitet, sekresjon, subcellulær lokalise-ring og biologisk aktivitet. Glykosylering er vanligvis av to typer. O-bundete oligosakkarider er bundet til serin- eller treoninrester og N-bundete oligosakkarider er bundet til asparagin-rester. Én type oligosakkarid funnet på både N-bundete og O-bundete oligosakkarider er N-acetylneuraminsyre (sialinsyre), som er en familie av aminosukkere inneholdende 9 eller flere karbonatomer. Sialinsyre er vanligvis den terminale residue på både N-bundete og
O-bundete oligosakkarider, og fordi den har en negativ ladning, bringer den sure egenskaper til glykoproteinet. Humant erytropoietin, som har 165 aminosyrer, inneholder tre N-bundete og én O-bundet oligosakkaridkjeder som omfatter ca. 40% av den totale molekylvekt av glykoproteinet. N-bundet glykosylering forekommer på asparagin-rester lokalisert i stillinger 24,38 og 83, og O-bundet glykosylering forekommer på en serinrest lokalisert i stilling 126. Oligosakkaridkjedene blir modifisert med terminale sialinsyrerester. Enzymatisk fjerning av alle sialinsyrerester fra det glykosylerte erytropoietin resulterer i tap av in vivo aktivitet, men ikke in vitro aktivitet, fordi sialylering av erytropoietin forhindrer dets binding og påfølgende utskillelse ved hepatisk bindingsprotein.
Konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter analoger av humant erytropoietin med én eller flere endringer i aminosyresekvensen av humant erytropoietin som resulterer i en økning av antallet seter for sialinsyretilknytning. Disse glykoprotein- analoger kan dannes ved setedirigert mutagenese som har addisjoner, delesjoner eller substitusjoner av aminosyrerester som øker eller endrer seter som er tilgjengelige for glykosylering. Glyko-proteinanaloger som har nivåer av sialinsyre høyere enn de som er funnet i human erytropoietin er dannet ved addisjon av glykosyleringsseter som ikke forstyrrer den sekundære eller tertiære konformasjon som er nødvendig for biologisk aktivitet. Glykoproteinene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter også analoger som har økede nivåer av karbohydrattilknytning på et glykosyleringssete som vanligvis involverer substitusjon av én eller flere aminosyrer i helt inntil et N-bundet eller O-bundet sete. Glykoproteinene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter også analoger som har én eller flere aminosyrer som strekker seg fra den karboksyterminale ende av erytropoietin og gir minst ett ytterligere karbohydratsete. Glykoproteinene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter også analoger som har en aminosyresekvens som omfatter en omleiring av et sete for glykosylering. En slik omleiring av glykosyleringssete involverer delesjon av ett eller flere glykosyleringsseter i humant erytropoietin og addisjon av ett eller flere ikke-naturlig forekommende glykosyleirngsseter. Økende antallet karbohydratkjeder på erytropoietin og derfor antallet sialinsyrer pr. erytropoietin molekyler kan gi fordelaktige egenskaper så som øket løselighet, større resistens mot proteolysis, redusert immunogenesitet, øket serumhalveringstid og øket biologisk aktivitet. Erytropoietinanaloger med ytterligere glykosyleringsseter er beskrevet i nærmere detalj i europeisk patentsøknad 640 619, til Elliot publisert 1 mars 1995.
I en foretrukket utførelsesform omfatter konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse en aminosyresekvens som omfatter minst ett ytterligere sete for glykosylering så som, men ikke begrenset til, erytropoietiner omfattende sekvensen til humant erytropoietin modifisert ved en modifikasjon valgt fra de følgende:
Anmerkningen anvendt her for modifikasjon av aminosyresekvens betyr at stillingen(e) til det tilsvarende umodifiserte protein (f.eks. hEPO i SEKV ID NR:1 eller SEKV ID NR:2) angitt ved de hevete tall er forandret til aminosyren(e) som står umiddelbart forut for de respektive hevete tall.
Glykoproteinet kan også være en analog som har minst én ytterligere aminosyre på den karboksyterminale ende av glykoproteinet, hvor den ytterligere aminosyre omfatter minst ett glykosyleringssete, dvs. konjugatet som definert ovenfor angir også en forbindelse hvor glykoproteinet har en sekvens omfattende sekvensen til humant erytropoietin og en andre sekvens på karboksyenden av den humane erytropoietin sekvens, hvor den andre sekvens inneholder minst ett glykosyleringssete. Den ytterligere aminosyre kan omfatte et peptid-fragment avledet fra den karboksyterminale ende av humant chorionisk gonadotropin. Fortrinnsvis er glykoproteinet en analog valgt fra gruppen bestående av (a) humant erytropoietin som har aminosyresekvensen, Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gin (SEKV ID NR:3), og strekker seg fra karboksyenden; (b) analogen i (a) omfattende videre Ser<87> Asn88 Thr<90> EPO; og (c) analogen i (a) omfatter videre Asn<30> Thr<32> Val<87> Asn88 Thr<90> EPO.
Glykoproteinet kan også være en analog som har en aminosyresekvens som omfatter en omleiring av minst ett sete for glykosylering. Omleiringen kan omfatte en delesjon av hvilket som helst av de N-bundete karbohydratseter i humant erytropoietin og en addisjon av et N-bundet karbohydratsete i stilling 88 av aminosyresekvensen til humant erytropoietin. Fortrinnsvis er glykoproteinet en analog valgt fra gruppen bestående av Gin OA Ser fl*7 Asnfifi Thr<90> EPO; Gin<38> Ser<87> Asn88 Thr<90> EPO; og Gin<83> Ser<87> Asn88 Thr<90> EPO.
Som anvendt her betyr "lavere alkyl" en lineær eller forgrenet alkylgruppe som har fra ett til seks karbonatomer. Eksempler på lavere alkylgrupper omfatter metyl, etyl og isopropyl. I henhold til foreliggende oppfinnelse er R hvilken som helst lavere alkyl. Konjugater hvor R er metyl, er foretrukket.
Symbolet "m" representerer antallet etylenoksydrester (OCH2CH2) i poly(etylenoksyd)gruppen. En enkel PEG-subenhet av etylenoksyd har en molekylvekt på ca. 44 daltons. Således avhenger molekylvekten til konjugatet (unntatt molekylvekten av EPO) av tallet "m". I konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse er "m" fra ca. 450 til ca. 900 (tilsvarende en molekylvekt på ca. 20 kDa til ca. 40 kDa), fortrinnsvis fra ca. 650 til ca. 750 (tilsvarende til en molekylvekt på ca. 30 kDa). Tallet m er valgt slik at det resulterende konjugat ifølge foreliggende oppfinnelse har en fysiologisk aktivitet sammenlignbar med umodifisert EPO, hvilken aktivitet kan representere samme som, mer enn, eller en fraksjon av den tilsvarende aktivitet av umodifisert EPO. En molekylvekt på "ca." et bestemt tall betyr at det er innenfor et rimelig område fra dette tallet som bestemmes ved konvensjonelle analytiske teknikker. Tallet "m" er valgt slik at molekylvekten av hver poly(etylenglykol)gruppe kovalent bundet til erytropoietin- glykoproteinet er fra ca. 20kDa til ca. 40kDa, og er fortrinnsvis ca. 30kDa.
I konjugatene ifølge foreliggende oppfinnelse er tallet "n" antallet polyetylenglykol-grupper kovalent bundet til frie aminogrupper (omfattende e-aminogrupper av en lysin-aminosyre og/eller den amino-terminale aminogruppe) av et erytropoietinprotein via amidbinding(er). Et konjugat ifølge foreliggende oppfinnelse kan ha én, to eller tre PEG-grupper pr. molekyl av EPO. "n" er et helt tall i området fra 1 til 3, fortrinnsvis er "n" 1 eller 2, og mer foretrukket er "n" 1.
Foreliggende oppfinnelse vedrører videre fremgangsmåte for fremstilling av konjugater eller preparater ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 23, kjennetegnet ved at den omfatter kondensering av forbindelsen med formel II
med et erytropoietin-glykoprotein og hvor R, m og x er som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 6.
Forbindelsen med formel I kan følgelig fremstilles fra det kjente
polymere materiale:
hvor R og m er som beskrevet ovenfor, ved kondensering av forbindelsen med formel II med erytropoietinglykoproteinet. Forbindelser med formel II hvor x er 3 er alfa-lavere alkoksy, smørsyre-suksinimidylestere av poly(etylenglykol) (lavere alkoksy-PEG-SBA). Forbindelser med formel II hvor x er 2 er alfa-lavere alkoksy, propionsyre suksinimidylestere av poly(etylenglykol) (lavere alkoksy-PEG-SPA). Hvilken som helst konvensjonell metode for omsetning av en aktivert ester med et amin for å danne et amid kan anvendes. I reaksjonen beskrevet ovenfor er den eksemplifiserte suksinimidylester en utgående gruppe som forårsaker amiddannelsen. Anvendelse av suksinimidylestere så som forbindelsene med formel II for å fremstille konjugater med proteiner er beskrevet i US patent nr. 5,672,662, utstedt september 30,1997 (Harris, et al.).
Humant EPO inneholder ni frie aminogrupper, den amino-terminale aminogruppe pluss E-aminogruppene av 8 lysin-rester. Når pegyleringsreagense ble kombinert med en SBA-forbindelse med formel II, er det funnet at ved pH 7,5 ble et protein:PEG-forhold på 1:3 og en reaksjonstemperatur på fra 20-25°C, en blanding av mono-, di- og spormengder av de tri-pegylerte typer produsert. Når pegyleringsreagenset var en SPA-forbindelse med formel II, blir ved lignende betingelser bortsett fra at protein:PEG-forholdet var 1:2, primært de mono-pegylerte typer produsert. Det pegylerte EPO kan administreres som en blanding eller som de kationbytterkromatografi-separerte forskjellige pegylerte typer. Ved å manipulere reaksjons-betingelsene (f.eks. forhold av reagenser, pH, temperatur, protein- konsentrasjon, reaksjonstid etc.), kan de relative mengder av de forskjellige pegylerte arter varieres.
Humant erytropoietin (EPO) er et menneske-glykoprotein som stimulerer dannelsen av erytrocytter. Dets fresmtilling og terapeutiske applikasjon er beskrevet i detalj for eksempel i US patent nr. 5.547.933 og 5.621.080, EP-B 0 148 605, Huang, S.L., Proe. Nati. Acad. Sei. USA (1984) 2708-2712, EP-B 0 205 564, EP-B 0 209 539 og EP-B 0 411 678 så vel som Lai, P.H. et al., J. Biol. Chem. 261 (1986) 3116-3121, en Sasaki, H. et al., J. Biol. Chem. 262
(1987) 12059-12076. Erytropoietin for terapeutiske anvendelser kan produseres ved rekombinante midler (EP-B 0 148 605, EP-B 0 209 539 og Egrie, J.C., Strickland, T.W., Lane, J. et al. (1986) Immunobiol. 72: 213-224).
Metoder for ekspresjon og fremstilling av erytropoietin i serumfritt medium er beskrevet for eksempel i WO 96/35718, til Burg publisert 14. november 1996 og i europeisk patentpublikasjon nr. 513 738, til Koch publisert 12. juni 1992. I tillegg til de publikasjoner som er nevnt ovenfor, er det kjent at en serum-fri fermentering av rekombinante CHO-celler som inneholder et EPO-gen kan utføres. Slike metoder er beskrevet for eksempel i EP-A 0 513 738, EP-A 0 267 678 og i en generell form av Kawamoto, T. et al., Analytical Biochem. 130 (1983) 445-453, EP-A 0 248 656, Kowar, J. og Franek, F., Methods in Enzymology 421
(1986) 277-292, Bavister, B., Expcology 271 (1981) 45-51, EP-A 0 481 791, EP-A 0 307 247, EP-A 0 343 635, WO 88/00967.
I EP-A 0 267 678 er en ionebytterkromatografi på S-Sepharose, et preparativ reversfase-HPLC på en Cg kolonne og en gelfiltreringskromatografi beskrevet for rensingen av EPO produsert i serum-fri kultur etter dialyse. I denne forbindelse kan gelfiltrerings-kromatografitrinnet være erstattet av ionebytterkromatografi på S-Sepharose "fast flow". Det er også foreslått at en fargestoffkromatografi på en "Blue Trisacryl kolonne" utføres før ionebytterkromatografien.
En fremgangsmåte for rensing av rekombinant EPO er beskrevet av Nobuo, I. et al.,
J. Biochem. 107 (1990) 352-359.1 denne prosessen blir EPO imidlertid behandlet med en løsning av Tween<®> 20, fenylmetylsulfonylfluorid, etylmaleimid, pepstatin A, kobber- sulfat og oksamsyre før rensetrinnet. Publikasjoner, omfattende WO 96/35718, til Burg publisert 14. november 1996, beskriver en fremgangsmåte for fremstilling av erytropoietin i en serumfri fermenteringsprosess (EPOsf).
Den spesifikke aktivitet av EPO eller EPO-konjugater i henhold til foreliggende oppfinnelse kan bestemmes ved forskjellige forsøk kjent på området. Den biologiske aktiviteten til de rensete EPO-proteiner ifølge foreliggende oppfinnelse er slik at administrering av EPO-proteinet ved injeksjon til humane pasienter resulterer i benmargs- celleøkningsproduksjon av reticulocytter og røde blodceller sammenlignet med ikke-injiserte eller kontrollgrupper av individer. Den biologiske aktiviteten til EPO proteinene eller fragmenter derav, oppnådd og renset i henhold til foreliggende oppfinnelse, kan testes ved metoder i henhold til Annable, et al., Bull. Wld. Hlth. Org. (1972) 47: 99-112 og Pharm. Europa Spee. Issue Erytropoietin BRP Bio 1997(2). Et annet biologisk forsøk for å bestemme aktiviteten til EPO-protein, det normocytaemiske museforsøk, er beskrevet i Eksempel 4.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer følgelig et preparat omfattende konjugater som beskrevet ovenfor. Et preparat inneholdende minst nitti prosent mono-PEG konjugater, dvs. hvor n er 1, kan fremstilles som vist i Eksempel 5. Vanligvis er mono-PEG konjugater av erytropoietinglykoproteiner ønskelig fordi de tenderer til å ha høyere aktivitet enn di-PEG konjugater.. Prosentdelen av mono-PEG konjugater så vel som forholdet av mono- og di-PEG typer kan kontrolleres ved sammenslåing av bredere fraksjoner rundt elueringstoppen for reduksjon av prosentdelen av mono-PEG eller snevrere fraksjoner for å øke prosentdelen av mono-PEG i preparatet. Omtrent nitti prosent mono-PEG konjugater er en god balanse av utbytte og aktivitet. Noen ganger kan preparater hvor for eksempel minst nittito prosent eller minst nittiseks prosent av konjugatene er mono-PEG typer (n equals 1) være ønsket. I en utførelsesform av oppfinnelsen er prosentdelen av konjugater hvor n er 1 fra nitti prosent til nittiseks prosent.
Oppfinnelsen vedrører også som angitt ovenfor de tilsvarende farmasøytiske preparater omfattende et konjugat eller et preparat som beskrevet ovenfor og et farmasøytisk akseptabelt tilsetnings-middel.
Konjugatene og preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse er spesielt nyttige for fremstilling av medikamenter for behandling eller forebygging av sykdommer i sammenheng med anemi hos kronisk nyresvikt-pasienter (CRF), AIDS og for behandling av kreftpasienter som gjennomgår kjemoterapi.
Oppfinnelsen vil bedre forstås ved referanse til de følgende eksempler som illustrerer oppfinnelsen beskrevet heri.
EKSEMPLER
EKSEMPEL 1: Fermentering og rensning av humant EPO
a) Inoculumfresmtilling og fermentering
Et medisinglass fra Working Cell Bank, som stammer fra en EPO-produserende CHO
cellelinje (ATCC CRL8695, beskrevet i EP 411 678 (Genetics Institute) kan anvendes) blir tatt fra gassfasen av den flytende nitrogenlagringstanken. Cellene blir overført i glass-spinner-kolber og dyrket i et hydrogenkarbonat-bufret medium i en fuktet C02-inkubator. Typiske serumfri medier anvendt for inocolumfremstillingen og fermenteringen er beskrevet i europeisk patentsøknad 513 738, til Koch publisert 12. juni 1992 eller WO 96/35718, til Burg publisert 14. november 1996, inneholder for eksempel som medium DMEM/F12 (f.eks. JRH Biosciences/Hazleton Biologics, Denver, US, order No. 57-736) og i tillegg natrium-hydrogenkarbonat, L+glutamin, D+glukose, rekombinant insulin, natriumselenitt, diamino-butan, hydrokortison, jern(II)sulfat, asparagin, asparaginsyre, serin og en stabilisator for pattedyrceller så som f.eks. polyvinylalkohol, metylcellulose, polydekstran, polyetylenglykol, Pluronic F68, plasma ekspander-polygelin (HEMACCEL<®>) eller polyvinylpyrrolidon (WO 96/35718).
Kulturene blir mikroskopisk kontrollert for fravær av forurensende mikroorganismer og celledensitetene blir bestemt. Disse tester blir utført ved hvert spaltningstrinn.
Etter den innledende vekstperiode blir cellekulturen fortynnet med friskt medium til startcelledensiteten og gjennomgår en ny vekstcyklus. Denne prosedyren blir gjentatt inntil et kulturvolum på omtrent 21 pr. glass "spinner kolbe" er oppnådd. Etter ca. 12 dobling 1 til 5 liter er denne kultur tilgjengelig, som deretter blir anvendt som inoculum for 101 inoculum-fermenteren.
Etter 3-5 dager kan kulturen i 101 fermentoren anvendes som inoculum for 1001 inoculum-fermentoren.
Etter ytterligere 3-5 dager dyrking kan kulturen i 1001 fermenteren anvendes som inoculum for 10001 produksjonsfermenteren.
b) Høsting og celleseparering
En satsvis gjenforingsprosess blir anvendt, dvs. når den ønskede celledensitet blir
oppnådd, blir ca. 80 % av kulturen høstet. Den gjenværende kultur er oppfylt med frisk dyrkningsmedium og dyrket inntil neste høsting. Én produksjonskjøring består av maksimum 10 påfølgende høstinger: 9 partielle høstinger og 1 total høsting ved slutten av fermenteringen. Høsting finner sted hver 3-4 dager.
Det bestemte høstevolum blir overført i et avkjølt kar. Cellene fjernes ved sentrifuge-ring eller filtrering og kastes. Den EPO inneholdende supernatant fra sentrifugeringstrinnet blir in-line-fUtrert og oppsamlet i et andre avkjølt kar. Hver høsting behandles separat under rensningen.
En typisk prosess for rensingen av EPO-protein er beskrevet i WO 96/35718, til Burg publisert 14. november 1996. Renseprosessen er forklart i det følgende.
a) Blå Sepharose-kromatografi
Blue Sepharose (Pharmacia) består av Sepharose-kuler til hvis overflate Cibacron blått
fargestoff er kovalent bundet. Siden EPO binder sterkere til Blue Sepharose enn de fleste ikke-proteinaktige forurensninger, kan noen proteinaktige urenheter og PV A, EPO bli anriket i dette trinnet. Elueringen av Blue Sepharose kolonnen blir utført ved økende saltkonsen-trasjon så vel som pH.
Kolonnen blir fylt med 80 - 1001 av Blå Sepharose, regenerert med NaOH og ekvilibrert med ekvilibreringsbuffer (natrium/kalsiumklorid og natriumacetat). Den sur gjorte og filtrerte fermentorsupernatant påsettes. Etter at påsettingen er ferdig blir kolonnen vasket først med en lignende buffer til ekvilibreringsbufferen inneholdende en høyere natriumklorid-konsentrasjon og deretter med en Tris-base-buffer. Produktet blir eluert med en Tris-base-buffer og oppsamlet i en enkel fraksjon i henhold til master-elueringsprofilen.
b) Butyl-Toyopearl-kromatografi
Butyl Toyopearl 650 C (Toso Haas) er en polystyrenbasert matriks til hvilken alifatiske
butylrester er koblet kovalent. Siden EPO binder sterkere til denne gel enn mesteparten av urenhetene og PV A, må den elueres med en buffer inneholdende isopropanol.
Kolonnen blir pakket med 30 - 40 1 Butyl Toyopearl 650 C, regenerert med NaOH, vasket med en Tris-base buffer og ekvilibrert med en Tris-base buffer inneholdende isopropanol.
Blue Sepharose-eluat blir regulert til konsentrasjonen av isopropanol i kolonne-ekvilibreringsbufferen og satt på kolonnen. Deretter blir kolonnen vasket med ekvilibreringsbuffer med øket isopropanol konsentrasjon. Produktet blir eluert med elueringsbuffer (Tris-base-buffer med høyt isopropanolinnhold) og oppsamlet i en enkel fraksjon i henhold til master-elueringsprofilen.
c) Hydroksyapatit Ultrogelkromatografi
Hydroksyapatit-Ultrogel (Biosepra) består av hydroksyapatit som er innbygget i en
agarose-matriks for å forbedre de mekaniske egenskaper. EPO har en lav affinitet til hydroksyapatit og kan derfor elueres ved at lavere fosfatkonsentrasjoner enn protein-urenheter.
Kolonnen blir fylt med 30 - 401 Hydroksyapatite Ultrogel og regenerert med en kaliumfosfat/kalsiumklorid-buffer og NaOH fulgt av en Tris-base-buffer. Deretter blir den ekvilibrert med en Tris-base buffer inneholdende en liten mengde av isopropanol og natriumklorid.
Det EPO-holdige eluat fra Butyl Toyopearl-kromatografien settes på kolonnen. Deretter blir kolonnen vasket med ekvilibreringsbuffer og en Tris-base-buffer uten isopropanol og natriumklorid. Produktet blir eluert med en Tris-base-buffer inneholdende en lav konsentrasjon av kaliumfosfat og oppsamlet i en enkel fraksjon i henhold til master- elueringsprofilen.
d) Reversfase HPLC på Vydac C4
RP-HPLC-materialet Vydac C4 (Vydac) består av silikagelpartikler, hvis overflater bærer C4-alkylkjeder. Separering av EPO fra proteinaktige urenheter er basert på forskjeller i styrken av hydrofobe interaksjoner. Eluering blir utført med en acetonitril- gradient i fortynnet trifluoreddiksyre.
Preparativ HPLC blir utført ved anvendelse av en rustfritt stålkolonne (fylt med 2,8 til 3,2 liter Vydac C4 silikagel). Hydroksyapatit Ultrogel-eluatet blir surgjort ved tilsetning av trifluor-eddiksyre og satt på Vydac C4 kolonnen. For vasking og eluering blir en acetonitril-gradient i fortynnet trifluoreddiksyre anvendt. Fraksjoner blir oppsamlet og umiddelbart nøytralisert med fosfatbuffer. EPO fraksjonene som ligger innenfor IPC grensene blir samlet.
e) DEAE Sepharose-kromatografi
DEAE Sepharose (Pharmacia) materialet består av dietylaminoetyl (DEAE) - grupper
som er kovalent bundet til overflaten av Sepharose-kuler. Bindingen av EPO til DEAE gruppene blir mediert av ioniske interaksjoner. Acetonitril og trifluoreddiksyre går gjennom kolonnen uten å bli holdt tilbake. Etter at disse substanser er vasket ut, fjernes spor av urenheter ved vasking av kolonnen med acetat-buffer ved en lav pH. Deretter blir kolonnen vasket med nøytral fosfatbuffer og EPO blir eluert med en buffer med øket ionestyrke.
Kolonnen blir pakket med DEAE Sepharose fast flow. Kolonnevolumet blir regulert for å sikre en EPO belastning i området 3 -10 mg EPO/ml gel. Kolonnen blir vasket med vann og ekvilibreringsbuffer (natrium/ kaliumfosfat). De samlete fraksjoner av HPLC eluatet påsettes og kolonnen blir vasket med ekvilibreringsbuffer. Deretter blir kolonnen vasket med vaskebuffer (natriumacetat-buffer) fulgt av vasking med ekvilibreringsbuffer. Deretter blir EPO eluert fra kolonnen med elueringsbuffer (natriumklorid, natrium/kaliumfosfat) og oppsamlet i en enkel fraksjon i henhold til master-elueringsprofilen.
Eluatet fra DEAE Sepharose-kolonnen blir regulert til den spesifiserte ledningsevne. Den resulterende medikamentsubstans blir sterilfiltrert i teflon-flasker og lagret ved -70 °C.
EKSEMPEL 2: Pegylering av EPO med mPEG-SBA
EPO renset i henhold til den serumfrie prosedyre i Eksempel 1 (EPOsf) var homogen bestemt ved analytiske metoder og viste det typiske isoform-mønster bestående av 8 isoformer. Det hadde en spesifikk biologisk aktivitet på 190,000 IU/mg bestemt ved det normocytaemiske museforsøk. Pegyleringsreagenset som ble anvendt var en metoksy-PEG-SBA, hvilken er en forbindelse med formel II hvor R er metyl; x er 3; og m er fra 650 til 750 (gjennomsnitt ca. 680, tilsvarende til en gjennomsnittsmolekylvekt på ca. 30 kDa).
Pegyleringsreaksjon
Til ett hundre milligram EPOsf (9,71 ml av en 10,3 mg/ml EPOsf stamløsning, 5,48 umol) ble 10 ml 0,1 M kaliumfosfatbuffer, pH, 7,5 inneholdende 506 mg 30kDa metoksy-PEG-SBA (16,5 mol) (fra Shearwater Polymerer, Inc., Huntsville, Alabama) satt og blandet i 2 timer ved romtemperatur (20-23 °C). Den endelige proteinkonsentrasjon var 5 mg/ml og protein:PEG reagens-forholdet var 1:3. Etter to timer ble reaksjonen stanset ved å regulere pH til 4,5 med iseddik og lagret ved -20°C inntil klar for rensning.
Rensning
1. Konjugatblanding: Omtrent 28 ml SP-SEPHAROSE FF (sulfo-propyl kationbytterharpiks) ble pakket i en AMICON glasskolonne (2,2 x 7,5 cm) og ekvilibrert med 20 mM acetatbuffer pH, 4,5 ved en strømningshastighet på 150 ml/h. Seks milliliter av reaksjonsblandingen inneholdende 30 mg protein ble fortynnet 5 ganger med ekvilibreringsbufferen og satt på kolonnen. Dcke-adsorberte materialer ble vasket vekk med bufferen og den adsorberte PEG-konjugatblanding ble eluert fra kolonnen med 0,175 M NaCl i ekyilibreringsbufferen. Umodifisert EPOsf forsatt gjenværende på kolonnen ble eluert med 750 mM NaCl. Kolonnen ble reekvilibrert i startbufferen. Prøver ble analysert ved SDS-PAGE og deres pegyleringsgrad ble bestemt. Det ble funnet at 0.175M NaCl-eluatet inneholdt mono- så vel som di- og spor av mengder av de tri-pegylerte forbindelser, mens 750 mM NaCl-eluatet inneholdt umodifisert EPOsf. 2. Di-PEG og Mono-PEG-EPOsf: Den rensete konjugatblanding eluert fra kolonnen i foregående trinn ble fortynnet 4 ganger med bufferen og satt på kolonnen på nytt og vasket som beskrevet. Di-PEG-EPOsf og mono-PEG-EPOsf ble separat eluert fra kolonnen med henholdsvis 0,1M NaCl og 0,175 M NaCl. Eluering ble også utført med 750mM NaCl for å eluere eventuelt gjenværende umodifisert EPOsf.
Alternativt ble reaksjonsblandingen fortynnet 5 ganger med acetatbufferen og satt på SP-Sepharose-kolonnen (-0,5 mg protein/ml gel). Kolonnen ble vasket og adsorbert mono-PEG-EPOsf,di-PEG-EPOsf og umodifisert EPOsf ble eluert som beskrevet i det forutgående avsnitt.
Resultater
PEG-EPOsf ble syntetisert ved kjemisk konjugering av et lineært PEG molekyl med en tallgjennomsnittsmolekylvekt på 30 kDa. PEG-EPOsf ble derivatisert fra reaksjonen mellom de primære aminogrupper av EPOsf og suksinimidylesterderivåtet av en 30 kDa PEG-smørsyre, hvilket resulterer i en amidbinding.
Resultatene er oppsummert i Tabell 1. Renset konjugatblanding omfattet mono- og di-PEG-EPOsf og var fri for umodifisert EPOsf bestemt ved SDS-PAGE-analyse. Konjugatblanding utgjorde 23,4 mg eller 78% av utgangsmaterialet. Kationbytter- kromatografisk separering av mono- og di-PEG-EPOsf viste at mono- til di-PEG forhold i konjugat-blandingen var nesten 1:1. Etter avslutning av reaksjonen var forholdet av de individuelle komponenter av Mono: Di: Umodifisert 40: 38: 20 (%). Totalutbytte var nesten kvantitativt.
EKSEMPEL 3: Pegylering av EPO med mPEG-SPA
En forskjellig alikvot av EPOsf anvendt i Eksempel 2 ble omsatt med 30 kDa metoksy-PEG-SPA (Shearwater Polymerer, Inc., Huntsville, Alabama). Reaksjon ble utført ved et proteimreagens-forhold på 1:2 og renseteknikker var i henhold til Eksempel 2. Primært ble de mono-pegylerte forbindelser produsert.
EKSEMPEL 4: In-vivo aktivitet av pegylert EPO bestemt ved det normocytaemiske museforsøk
Den normocytaemiske musebioanalyse er kjent på området (Pharm. Europa Spee. Issue Erytropoietin BRP Bio 1997(2)) og en metode i monografien om erytropoietin fra Ph. Eur. BRP. Prøvene ble fortynnet med BSA-PBS. Normale friske mus, 7-15 uker gamle, ble administrert s.c. 0,2 ml av det EPO-fraksjonsholdige ikke-pegylerte EPO eller tri-, di- eller mono-pegylerte EPO fra Eksempel 2 eller 3. Over en periode på 6 dager, ble blod tappet ved punktur av nålevenen og fortynnet slik at 1 ul blod var tilstede i 1 ml av 0,15 umol acridin-oransje fargeløsning. Fargetiden var 3 til 10 minutter. Reticulocytt- tellinger ble utført mikrofluormetrisk i et strømningscytometer ved analyse av det røde fluorescenshistogram. Reticulocytt-tellingene ble gitt uttrykt som absolutte tall (pr. 30 000 blodceller analysert). For de presenterte data besto hver gruppe av 5 mus pr. dag og musene ble blodtappet bare én gang.
I separate eksperimenter ble en enkel dose av umodifisert EPO (25 ng EPO), PEG(SBA)-EPO blandingen fra Eksempel 2 (10 ng av konjugat), mono- og di- pegylerte EPOs fra Eksempel 2 (10 ng av konjugat), PEG(SPA)-EPO fra Eksempel 3 (10 ng av konjugat) og bufferløsning administrert til mus. Resultatene er vist i Tabell 2. Resultatene viser den overlegne aktivitet og den forlengete halveringstid for de pegylerte EPO forbindelser angitt ved de betydelig økete mengder av reticulocytter og forskyvningen av reticulocytt-tellingsmaksimum ved anvendelse av samme dose pr. mus (10 ng), sammenlignet med en dose av 25 ng for umodifisert EPO.
EKSEMPEL 5: Fremstilling av dominerende mono-PEG-EPO
Pegyleringsreaksjon
Ved å starte med 100 mg (5,48 umol) EPOsf i 100 mM kaliumfosfatbuffer pH 7,5 fremstilt i henhold til Eksempel 1, ble det tilsatt 329 mg (10,96 |imol) 30 kDa PEG-SBE reagens oppløst i 3 ml 1 mM HC1. Nok 100 mM kaliumfosfatbuffer pH 7,5 ble tilsatt til å justere reaksjonsblandingsvolumet til 20 ml. Den endelige proteinkonsentrasjon var 5 mg/ml og protein : PEG-reagensforholdet var 1:2. Reaksjonsblandingen ble blandet i 2 timer ved omgivelsestemperatur (20 - 22°C). Etter 2 timer ble reaksjonen stanset ved å regulere pH til 4,5 med iseddik og lagret frosset ved -20°C inntil den var klar for rensning.
Rensning
Reaksjonsblandingen fra foregående trinn ble fortynnet 1:5 med 10 mM natriumacetat, pH 4,5 og satt på 300 ml SP-Sepharose FF (sulfopropyl-kationbytterharpiks) pakket i en 4,2 x 19 cm kolonne. Kolonnen var forut ekvilibrert med samme buffer. Kolonne-effluenter ble overvåket ved 280 nm med en Gilson UV monitor og registrert med en "Kipp and Zonen recorder". Kolonnen ble vasket med 300 ml eller 1 sjiktvolum ekvilibreringsbuffer for å fjerne overskudd av reagenser, reaksjonsbiprodukter og oligomere PEG-EPO. Det ble fulgt av vasking med 2 sjiktvolumer av 100 mM NaCl for å fjerne di-PEG-EPO. Mono-PEG-EPO ble deretter eluert med 200 mM NaCl. I løpet av elueringen av mono-PEG-EPO ble den første 50 ml proteintoppen kastet, og mono-PEG-EPO ble oppsamlet som en 150 ml fraksjon. Umodifisert EPOsf gjenværende på kolonnen ble eluert med 750 mM NaCl. Alle eluerings-buffere ble laget i ekvilibreringsbufferen. Alle eluerte prøver ble analysert ved SDS-PAGE og ved høy-ytelse størrelsesekskluderings-kromatografi (SEC). Mono-PEG-EPO samlingen oppnådd fra 150 ml-fraksjonen, som ikke hadde noe detekterbart umodifisert EPOsf, ble deretter inndampet til ~ 4,5 - 7,5 mg/ml og diafiltrert i lagringsbufferen, 10 mM kaliumfosfat, 100 mM NaCl, pH 7,5. Konsentrasjon/diafiltrering ble utført med Millipore Labscale™ TFF System utstyrt med 50 kDa "cut off' Millipore Pellicon XL Biomaks 50 membran ved omgivelsestemperatur. Konsentrert mono-PEG-EPO ble sterilfiltrert og lagret frosset ved -20°C.
Omtrent 75% av EPOsf var pegylert. Etter rensning var totalutbyttet -30% mono-PEG-EPO uten detekterbart umodifisert EPOsf og rundt 25% di-PEG-EPO. Oligomerer og upegylert EPOsf utgjorde det gjenværende protein. Mono-PEG-EPO-samlingen oppnådd fra 150 ml-fraksjonen inneholdt omtrent 90% mono-PEG-EPO og omtrent 10% di-PEG-EPO.
Claims (28)
1. Konjugat, karakterisert ved at konjugatet omfatter et erytropoietin-glykoprotein som har minst én fri aminogruppe og som har den in vivo biologiske aktivitet hvilken forårsaker at benmargceller øker produksjon av reticulocytter og røde blodceller og er valgt fra gruppen bestående av humant erytropoietin og humant erytropoietin modifisert ved addisjon av fra 1 til 6 glykosyleringsseter eller en omleiring av minst ett glykosyleringssete; idet nevnte glykoprotein er kovalent bundet til "n" poly(etylenglykol) grupper med formelen
slik at -CO i hver poly(etylenglykol) gruppe danner en amidbinding med én av nevnte aminogrupper; hvor
R er Ci-C6-alkyl;
x er 2 eller 3;
m er fra 450 til 900;
n er fra 1 til 3; og
n og m er valgt slik at molekylvekten til konjugatet minus erytropoietin-glykoproteinet er fra 20 kilodalton til 100 kilodalton.
2. Konjugat ifølge krav 1,karakterisert ved formelen:
hvor x, m, n og R er som definert i krav 1 og P er resten av glykoproteinet uten n aminogruppen(e) som danner amidbinding(er) med poly(etylen-glykol)gruppen(e).
3. Konjugat ifølge hvilket som helst av forutgående krav, karakterisert ved at R er metyl.
4. Konjugat ifølge hvilket som helst av forutgående krav, karakterisert ved at m er fra ca. 650 til ca. 750.
5. Konjugat ifølge hvilket som helst av forutgående krav, karakterisert ved at ner 1.
6. Konjugat ifølge hvilket som helst av forutgående krav, karakterisert ved at R er metyl; m er fra ca. 650 til ca. 750; og n er 1.
7. Konjugat ifølge hvilket som helst av forutgående krav, karakterisert ved at det har formelen
[CH30(CH2CH20)mCH2CH2CH2CO-NH]„-P hvor m er fra 650 til 750, n er 1 og P er som definert i krav 2.
8. Konjugat ifølge hvilket som helst av forutgående krav, karakterisert ved at glykoproteinet er et humant erytropoietin.
9. Konjugat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 7, karakterisert ved at det humane erytropoietin-glykoprotein uttrykkes ved endogen gen-aktivering.
10. Konjugat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 9, karakterisert ved at glykoproteinet har sekvensen SEKV ID NR:1.
11. Konjugat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til8,karakterisert ved at glykoproteinet har sekvensen av humant erytropoietin modifisert ved addisjon av fra 1 til 6 glykosyleringsseter.
12. Konjugat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 11,karakterisert ved at glykoproteinet har sekvensen av humant erytropoietin modifisert ved en modifikasjon valgt fra gruppen bestående av:
13. Konjugat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 12, karakterisert ved at glykoproteinet har en sekvens omfattende sekvensen til humant erytropoietin og en andre sekvens ved karboksyenden av den humane erytropoietin-sekvens, hvor den andre sekvens inneholder minst ett glykosyleringssete.
14. Konjugat ifølge krav 13, karakterisert ved at de andre sekvenser omfatter en sekvens avledet fra den karboksyterminale sekvens av humant chorionisk gonadotropin.
15. Konjugat ifølge krav 13, karakterisert ved at glykoproteinet har en sekvens valgt fra gruppen bestående av: (a) sekvensen til humant erytropoietin og sekvensen SEKV ID NR:3 på karboksyenden av den humane erytropoietin-sekvens; (b) sekvensen i (a) modifisert med Ser sti Asn sr Thr on ; og (c) sekvensen i (a) modifisert med Asn30Thr32 Val<87> Asn88Thr<90>.
16. Konjugat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 7, karakterisert ved at glykoproteinet har sekvensen til humant erytropoietin modifisert ved en omleiring av minst ett glykosyleringssete.
17. Konjugat ifølge krav 16, karakterisert ved at omleiringen omfatter delesjon av hvilke som helst av de N-bundete glykosyleringsseter i humant erytropoietin og addisjon av et N-bundet glykosyleringssete i stilling 88 av sekvensen til humant erytropoietin.
18. Konjugat ifølge krav 17, karakterisert ved at glykoproteinet har sekvensen til humant erytropoietin modifisert ved en modifikasjon valgt fra gruppen bestående av:
19. Preparat, karakterisert ved at det omfatter konjugater, idet hvert av nevnte konjugater omfatter et erytropoietin-glykoprotein som har minst én fri aminogruppe og som har den in vivo biologiske aktivitet som forårsaker at benmargceller øker produksjonen av reticulocytter og røde blodceller og er valgt fra gruppen bestående av humant erytropoietin og humant erytropoietin modifisert ved addisjon av fra 1 til 6 glykosyleringsseter eller en omleiring av minst ett glykosyleringssete; idet glykoproteinet i hvert nevnte konjugat er kovalent bundet til "n" poly(etylenglykol) grupper med formelen -CO-<CH2)x-(OCH2CH2)I„-OR idet -CO i hver poly(etylenglykol)gruppe danner en amidbinding med én av nevnte aminogrupper; hvor i hvert av nevnte konjugater R er Ci-C4-alkyl; x er 2 eller 3; m er fra 450 til 900; n er fra 1 til 3; n og m er valgt slik at molekylvekten til hvert konjugat minus erytropoietin-glykoproteinet er fra 20 kilodalton til 100 kilodalton; prosentdelen av konjugater hvor n er 1 er minst nitti prosent.
20. Preparat omfattende konjugater som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 18, karakterisert ved at prosentdelen av konjugater hvor n er 1 er minst nitti prosent.
21. Preparat ifølge kravene 19 eller 20, karakterisert ved at prosentdelen av konjugater hvor n er 1 er minst nittito prosent.
22. Preparat ifølge krav 21,karakterisert ved at prosentdelen av konjugater hvor n er 1 er minst nittiseks prosent.
23. Preparat ifølge krav 19 eller 20, karakterisert ved at prosentdelen av konjugater hvor n er 1 er fra nitti prosent til nittiseks prosent.
24. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter et konjugat eller et preparat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 23 og et farmasøytisk akseptabelt tilsetningsmiddel.
25. Anvendelse av et konjugat eller et preparat ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 23, for fremstilling av medikamenter for behandling eller forebygging av sykdommer korrelert med anemi hos kronisk nyresvikt-pasienter (CRF), AIDS og for behandling av kreftpasienter som gjennomgår kjemoterapi.
26. Fremgangsmåte for fremstilling av konjugater eller preparater ifølge hvilket som helst av kravene 1 til
23, karakterisert ved at den omfatter kondensering av forbindelsen med formel II
med et erytropoietin-glykoprotein og hvor R, m og x er som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 6.
27. Konjugater ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 18, karakterisert ved at de er for behandling av sykdommer som er forbundet med anemi hos kronisk nyresvikt-pasienter (CRF), AIDS og kreftpasienter som gjennomgår kjemoterapi.
28. Konjugat ifølge krav 1, karakterisert ved at konjugatet omfatter et humant erytropoietin-glykoprotein som har misnt én fri aminogruppe og som har den in vivo biologiske aktivitet hvilken forårsaker at benmargsceller øker produksjon av reticulocytter og røde blodceller, idet nevnte glykoprotein er kovalent bundet til "n" poly(etylenglykol)grupper med formelen
slik at -CO i hver poly(etylenglykol)gruppe danner en amidbinding med én av nevnte aminogrupper; hvor
R er metyl;
X er 3;
m er fra 650 til 750
ner 1; og
n og m er valgt slik at molekylvekten til konjugatet minus erytropoietin-glykoproteinet er omtrent 30 kilodalton.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14225499P | 1999-07-02 | 1999-07-02 | |
| US15022599P | 1999-08-23 | 1999-08-23 | |
| US15154899P | 1999-08-31 | 1999-08-31 | |
| US16615199P | 1999-11-17 | 1999-11-17 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20003372D0 NO20003372D0 (no) | 2000-06-28 |
| NO20003372L NO20003372L (no) | 2001-01-03 |
| NO327043B1 true NO327043B1 (no) | 2009-04-06 |
Family
ID=27495518
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20003372A NO327043B1 (no) | 1999-07-02 | 2000-06-28 | Konjugat, preparat samt anvendelse derav og fremgangsmate for fremstilling. |
| NO2009010C NO2009010I2 (no) | 1999-07-02 | 2009-05-05 | Metoksypolyenglykol-epoetin beta beta |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO2009010C NO2009010I2 (no) | 1999-07-02 | 2009-05-05 | Metoksypolyenglykol-epoetin beta beta |
Country Status (52)
Families Citing this family (227)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK1037927T3 (da) * | 1997-12-08 | 2004-09-06 | Emd Lexigen Res Ct Corp | Heterodimere fusionsproteiner, der er nyttige til målrettet immunterapi og generel immunstimulering |
| US20030105294A1 (en) * | 1998-02-25 | 2003-06-05 | Stephen Gillies | Enhancing the circulating half life of antibody-based fusion proteins |
| EP1071468B1 (en) * | 1998-04-15 | 2006-06-14 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by co-administration with angiogenesis inhibitor |
| US7304150B1 (en) * | 1998-10-23 | 2007-12-04 | Amgen Inc. | Methods and compositions for the prevention and treatment of anemia |
| US7345019B1 (en) * | 1999-04-13 | 2008-03-18 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Modulation of excitable tissue function by peripherally administered erythropoietin |
| CZ299516B6 (cs) * | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
| SK782002A3 (en) | 1999-07-21 | 2003-08-05 | Lexigen Pharm Corp | FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| US7067110B1 (en) | 1999-07-21 | 2006-06-27 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| EP1200479B1 (en) * | 1999-08-09 | 2006-02-01 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Multiple cytokine-antibody complexes |
| US20050202538A1 (en) * | 1999-11-12 | 2005-09-15 | Merck Patent Gmbh | Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics |
| DK1252192T3 (da) | 2000-02-11 | 2006-11-20 | Merck Patent Gmbh | Forbedring af antistofbaserede fusionsproteiners serumhalveringstid |
| US6586398B1 (en) * | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
| CA2408685C (en) * | 2000-05-15 | 2011-02-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate |
| US7517526B2 (en) * | 2000-06-29 | 2009-04-14 | Merck Patent Gmbh | Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by combined treatment with immunocytokine uptake enhancing agents |
| ES2320101T3 (es) * | 2000-10-16 | 2009-05-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Eritropoyetina conjugada con mono-peg. |
| KR100645843B1 (ko) * | 2000-12-20 | 2006-11-14 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 에리트로포이에틴 접합체 |
| ATE505204T1 (de) * | 2000-12-20 | 2011-04-15 | Hoffmann La Roche | Konjugate von erythropoietin (epo) mit polyethylenglykol (peg) |
| US20030072737A1 (en) * | 2000-12-29 | 2003-04-17 | Michael Brines | Tissue protective cytokines for the protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues and organs |
| US7767643B2 (en) | 2000-12-29 | 2010-08-03 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Protection, restoration, and enhancement of erythropoietin-responsive cells, tissues and organs |
| EP1234583A1 (en) * | 2001-02-23 | 2002-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | PEG-conjugates of HGF-NK4 |
| MXPA03008031A (es) * | 2001-03-07 | 2003-12-04 | Merck Patent Gmbh | Tecnologia de expresion para proteinas que contienen porcion de anticuerpo isotipo hibrida. |
| DE10112825A1 (de) | 2001-03-16 | 2002-10-02 | Fresenius Kabi De Gmbh | HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung |
| WO2002079415A2 (en) | 2001-03-30 | 2002-10-10 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Reducing the immunogenicity of fusion proteins |
| PT1383785E (pt) * | 2001-05-03 | 2011-06-28 | Merck Patent Gmbh | Anticorpo recombinante específico de tumores e utilização deste |
| US6818613B2 (en) | 2001-11-07 | 2004-11-16 | Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. | Aqueous sustained-release formulations of proteins |
| KR100467751B1 (ko) | 2001-12-03 | 2005-01-24 | 씨제이 주식회사 | 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질 |
| MXPA04005266A (es) * | 2001-12-04 | 2004-10-11 | Merck Patent Gmbh | Inmunocitocinas con selectividad modulada. |
| CN100522946C (zh) * | 2001-12-06 | 2009-08-05 | 法布罗根股份有限公司 | 低氧诱导因子(HIF)α的稳定化 |
| DE10209822A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid |
| DE10209821A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid |
| US7129267B2 (en) | 2002-03-11 | 2006-10-31 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Methods for SHP1 mediated neuroprotection |
| US20040122216A1 (en) * | 2002-07-01 | 2004-06-24 | Jacob Nielsen | Recombinant tissue protective cytokines and encoding nucleic acids thereof for protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues, and organs |
| WO2004012773A1 (en) | 2002-07-24 | 2004-02-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Polyalkylene glycol acid additives |
| US7459435B2 (en) * | 2002-08-29 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| US20050176627A1 (en) * | 2002-09-09 | 2005-08-11 | Anthony Cerami | Long acting erythropoietins that maintain tissue protective activity of endogenous erythropoietin |
| AU2003263552A1 (en) * | 2002-09-09 | 2004-03-29 | Nautilus Biotech | Rational evolution of cytokines for higher stability, the cytokines and encoding nucleic acid molecules |
| BR0314227A (pt) * | 2002-09-11 | 2005-10-25 | Fresenius Kabi De Gmbh | Derivados de amido de hidroxialquila |
| US7459436B2 (en) * | 2002-11-22 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| US7388079B2 (en) * | 2002-11-27 | 2008-06-17 | The Regents Of The University Of California | Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor |
| PL211180B1 (pl) * | 2002-12-17 | 2012-04-30 | Merck Patent Gmbh | Białko fuzyjne typu przeciwciało-IL2, wektor zawierający sekwencję kwasów nukleinowych kodujących takie białko, kompozycja farmaceutyczna zawierająca takie białko fuzyjne oraz jego zastosowania do wytwarzania leków |
| US7553930B2 (en) | 2003-01-06 | 2009-06-30 | Xencor, Inc. | BAFF variants and methods thereof |
| US20060104968A1 (en) * | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
| US7642340B2 (en) | 2003-03-31 | 2010-01-05 | Xencor, Inc. | PEGylated TNF-α variant proteins |
| AU2004227937B2 (en) | 2003-03-31 | 2007-09-20 | Xencor, Inc | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7610156B2 (en) | 2003-03-31 | 2009-10-27 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7279174B2 (en) * | 2003-05-08 | 2007-10-09 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent coatings comprising hydrophilic additives |
| ATE478093T1 (de) * | 2003-05-12 | 2010-09-15 | Affymax Inc | Neue poly(ethylenglycol) modifizierte erythropoietinagonisten und deren verwendungen |
| PT1629007E (pt) | 2003-05-12 | 2009-05-06 | Affymax Inc | Péptidos novos que se ligam ao receptor da eritropoietina |
| US7528104B2 (en) * | 2003-05-12 | 2009-05-05 | Affymax, Inc. | Peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| US7919118B2 (en) | 2003-05-12 | 2011-04-05 | Affymax, Inc. | Spacer moiety for poly (ethylene glycol) modified peptide based compounds |
| JP2007537986A (ja) * | 2003-05-30 | 2007-12-27 | セントカー・インコーポレーテツド | トランスグルタミナーゼを用いる新規なエリトロポエチン複合体の形成 |
| US7662607B2 (en) * | 2003-07-30 | 2010-02-16 | New Century Pharmaceuticals, Inc. | Chalaropsis lysozyme protein and its method of use in anti-bacterial applications |
| WO2005014655A2 (en) | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein |
| ZA200603396B (en) * | 2003-09-29 | 2007-11-28 | Warren Pharmaceuticals Inc | Tissue protective cytokines for the treatment and prevention of sepsis and the formation of adhesions |
| WO2005035564A2 (en) | 2003-10-10 | 2005-04-21 | Xencor, Inc. | Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders |
| CN1901934B (zh) * | 2003-12-19 | 2013-09-11 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 促红细胞生成素在治疗慢性炎症性肠病中铁分布紊乱中的用途 |
| EP1548031A1 (en) * | 2003-12-22 | 2005-06-29 | Dubai Genetics FZ-LLC | Nature-identical erythropoietin |
| KR20060124656A (ko) * | 2003-12-31 | 2006-12-05 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 개선된 약물동태를 가지는 Ｆｃ-에리스로포이에틴 융합단백질 |
| JP5015608B2 (ja) * | 2004-01-21 | 2012-08-29 | ネクター セラピューティクス | プロピオン酸末端ポリマーの調製方法 |
| CN1914223B (zh) * | 2004-02-02 | 2012-02-29 | Ambrx公司 | 经修饰的人类四螺旋束多肽及其用途 |
| SG151261A1 (en) | 2004-03-11 | 2009-04-30 | Fresenius Kabi De Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination |
| US7588745B2 (en) * | 2004-04-13 | 2009-09-15 | Si Options, Llc | Silicon-containing products |
| US7253650B2 (en) | 2004-05-25 | 2007-08-07 | International Business Machines Corporation | Increase productivity at wafer test using probe retest data analysis |
| KR20070108140A (ko) * | 2004-11-11 | 2007-11-08 | 아피맥스, 인크. | 에리트로포이에틴 수용체에 결합하는 신규한 펩타이드 |
| WO2006062685A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-15 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| CA2595695A1 (en) | 2005-01-25 | 2006-08-03 | Cell Therapeutics, Inc. | Biologically active protein conjugates comprising (nn[s/t]) peptide repeats and having increased plasma half-life |
| US7714114B2 (en) * | 2005-02-16 | 2010-05-11 | Nektar Therapeutics | Conjugates of an EPO moiety and a polymer |
| US7550433B2 (en) * | 2005-06-03 | 2009-06-23 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US7919461B2 (en) | 2005-06-03 | 2011-04-05 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US8324159B2 (en) * | 2005-06-03 | 2012-12-04 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US20070072795A1 (en) * | 2005-09-28 | 2007-03-29 | Anton Haselbeck | Treatment of neurodegenerative disorders |
| PL1931704T3 (pl) * | 2005-10-04 | 2011-06-30 | Zymogenetics L L C | Wytwarzanie i oczyszczanie IL-29 |
| US8124095B2 (en) * | 2005-10-07 | 2012-02-28 | Armagen Technologies, Inc. | Fusion proteins for delivery of erythropoietin to the CNS |
| US8053569B2 (en) * | 2005-10-07 | 2011-11-08 | Armagen Technologies, Inc. | Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins |
| US8741260B2 (en) * | 2005-10-07 | 2014-06-03 | Armagen Technologies, Inc. | Fusion proteins for delivery of GDNF to the CNS |
| US20080171696A1 (en) * | 2005-10-21 | 2008-07-17 | Avigenics, Inc. | Pharmacodynamically enhanced therapeutic proteins |
| WO2007048047A1 (en) * | 2005-10-21 | 2007-04-26 | Avigenics, Inc. | Glycolated and glycosylated poultry derived therapeutic proteins |
| US8841255B2 (en) | 2005-12-20 | 2014-09-23 | Duke University | Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides |
| US20130172274A1 (en) * | 2005-12-20 | 2013-07-04 | Duke University | Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties |
| EP1988910B1 (en) | 2006-02-28 | 2017-12-06 | Kodiak Sciences Inc. | Acryloyloxyethylphosphorylcholine containing polymer conjugates and their preparation |
| WO2007108505A1 (ja) | 2006-03-22 | 2007-09-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | エリスロポエチン溶液製剤 |
| DK2054074T3 (da) * | 2006-08-04 | 2014-11-03 | Prolong Pharmaceuticals Llc | Modificeret erythropoietin |
| WO2008022349A2 (en) | 2006-08-18 | 2008-02-21 | Armagen Technologies, Inc. | Agents for blood-brain barrier delivery |
| JP2010510794A (ja) | 2006-11-28 | 2010-04-08 | ハナル ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 修飾型エリスロポエチンポリペプチド及びこの治療用用途 |
| CA2676036A1 (en) * | 2007-02-02 | 2008-08-14 | Amgen Inc. | Hepcidin, hepcidin antagonists and methods of use |
| WO2008137066A1 (en) * | 2007-05-02 | 2008-11-13 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Use of compacted nucleic acid nanoparticles in non-viral treatments of ocular diseases |
| CL2008002054A1 (es) * | 2007-07-17 | 2009-05-29 | Hoffmann La Roche | Metodo para la regeneracion de una columna de cromatografia de intercambio cationico despues de la elusion de eritropoyetina monopeguilada y metodo para obtener una eritropoyetina monopeguilada, incorporando el metodo de regeneracion de la columna de intercambio cationico. |
| CL2008002053A1 (es) * | 2007-07-17 | 2009-05-22 | Hoffmann La Roche | Metodo para la purificacion de una eritropoyetina monopeguilada (epompeg) que consiste en proporcionar una solucion que contiene eritropoyetina mono, poli y no peguilada y hacerla pasar por dos pasos de cromatografia de intercambio cationico y metodo para producir epo mpeg que incluye metodo de purificacion. |
| JP5901877B2 (ja) * | 2007-07-27 | 2016-04-13 | アーメイゲン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドＡｒｍａｇｅｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ． | 中枢神経系のα−Ｌ−イデュロニダーゼ活性を増加させるための方法および組成物 |
| WO2009043049A2 (en) * | 2007-09-27 | 2009-04-02 | Amgen Inc. | Pharmaceutical formulations |
| ES2962777T3 (es) | 2007-11-15 | 2024-03-21 | Amgen Inc | Formulación acuosa de anticuerpos estabilizada por antioxidantes para la administración parenteral |
| US8101706B2 (en) | 2008-01-11 | 2012-01-24 | Serina Therapeutics, Inc. | Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same |
| CN101959934B (zh) | 2008-01-11 | 2012-12-12 | 塞瑞纳治疗公司 | 聚噁唑啉共聚物的多官能形式和包含它的药物组合物 |
| WO2009094551A1 (en) | 2008-01-25 | 2009-07-30 | Amgen Inc. | Ferroportin antibodies and methods of use |
| NZ586947A (en) | 2008-02-08 | 2012-11-30 | Ambrx Inc | Modified leptin polypeptides and their uses |
| TWI395593B (zh) | 2008-03-06 | 2013-05-11 | Halozyme Inc | 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制 |
| NZ601248A (en) | 2008-04-14 | 2014-06-27 | Halozyme Inc | Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions |
| EP2294087B1 (en) | 2008-05-01 | 2014-05-14 | Amgen, Inc. | Anti-hepcidin antibodies and methods of use |
| JP2011526303A (ja) | 2008-06-27 | 2011-10-06 | デューク ユニバーシティ | エラスチン様ペプチドを含む治療剤 |
| CN102232085A (zh) | 2008-09-26 | 2011-11-02 | Ambrx公司 | 修饰的动物促红细胞生成素多肽和其用途 |
| EP2349332B1 (en) | 2008-11-13 | 2019-10-23 | The General Hospital Corporation | Methods and compositions for regulating iron homeostasis by modulation bmp-6 |
| WO2010077297A1 (en) | 2008-12-09 | 2010-07-08 | Halozyme, Inc. | Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof |
| CA2748889A1 (en) | 2009-03-18 | 2010-09-23 | Armagen Technologies, Inc. | Compositions and methods for blood-brain barrier delivery of igg-decoy receptor fusion proteins |
| US9289699B2 (en) | 2009-07-30 | 2016-03-22 | Hoffmann-La Roche Inc. | Moveable chromatography column separator |
| WO2011024025A1 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | Avesthagen Limited | An erythropoietin analogue and a method thereof |
| IN2012DN03219A (no) | 2009-09-17 | 2015-10-23 | Baxter Healthcare Sa | |
| CN102712688B (zh) * | 2009-09-23 | 2015-06-24 | 通益制药有限公司 | 重组人红细胞生成素(epo)的纯化方法、由此纯化的epo以及包含纯化的epo的药物组合物 |
| DK2485761T3 (da) | 2009-10-09 | 2019-05-06 | Armagen Inc | Fremgangsmåder og sammensætninger til øgning af iduronat-2-sulfatase-aktivitet i CNS |
| MX344382B (es) | 2009-10-23 | 2016-12-14 | Amgen Inc * | Adaptador de vial y sistema. |
| US8765432B2 (en) | 2009-12-18 | 2014-07-01 | Oligasis, Llc | Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates |
| BR112012027361A2 (pt) | 2010-04-27 | 2021-04-27 | Scil Technology Gmbh | formulação mia/cd-rap estável. |
| PT2575935E (pt) | 2010-06-07 | 2015-10-20 | Amgen Inc | Dispositivo de administração de medicamento |
| EP2595624B1 (en) | 2010-07-20 | 2018-01-31 | Halozyme, Inc. | Methods of treatment or prevention of the adverse side-effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent |
| PL2616101T3 (pl) | 2010-09-14 | 2015-01-30 | Hoffmann La Roche | Sposób oczyszczania pegylowanej erytropoetyny |
| RU2584176C2 (ru) | 2011-02-02 | 2016-05-20 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Держатель для хроматографической колонки |
| JP2014510045A (ja) | 2011-02-08 | 2014-04-24 | ハロザイム インコーポレイテッド | ヒアルロナン分解酵素の組成物および脂質製剤ならびに良性前立腺肥大症の治療のためのその使用 |
| CA2831100C (en) | 2011-03-31 | 2020-02-18 | Mark Dominis Holt | Vial adapter and system |
| CA3021845C (en) | 2011-04-20 | 2022-03-29 | Amgen Inc. | Autoinjector apparatus |
| US20130011378A1 (en) | 2011-06-17 | 2013-01-10 | Tzung-Horng Yang | Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme |
| MX357209B (es) | 2011-10-14 | 2018-06-29 | Amgen Inc | Inyector y metodo de ensamble. |
| AU2012328880B2 (en) | 2011-10-24 | 2017-02-23 | Halozyme, Inc. | Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof |
| EP4338797A3 (en) | 2011-12-02 | 2024-06-12 | Armagen, Inc. | Methods and compositions for increasing arylsulfatase a activity in the cns |
| ES2609582T3 (es) | 2011-12-30 | 2017-04-21 | Halozyme, Inc. | Variantes de polipéptidos de PH20, formulaciones y usos de los mismos |
| RS57449B1 (sr) | 2012-04-04 | 2018-09-28 | Halozyme Inc | Kombinovana terapija sa hijaluronidazom i taksanom koji ciljno deluje na tumor |
| CN102816227A (zh) * | 2012-08-30 | 2012-12-12 | 深圳赛保尔生物药业有限公司 | 回收促红细胞生成素的方法 |
| US9278124B2 (en) | 2012-10-16 | 2016-03-08 | Halozyme, Inc. | Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods |
| EP3656426B1 (en) | 2012-11-21 | 2023-05-17 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
| JP6336564B2 (ja) | 2013-03-15 | 2018-06-06 | アムゲン・インコーポレーテッド | 薬物カセット、自動注入器、および自動注入器システム |
| ES2695166T3 (es) | 2013-03-15 | 2019-01-02 | Intrinsic Lifesciences Llc | Anticuerpos antihepcidina y usos de los mismos |
| WO2014143815A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Amgen Inc. | Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system |
| AU2014228177B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-04-26 | Amgen Inc. | Body contour adaptable autoinjector device |
| ES2853748T3 (es) | 2013-03-22 | 2021-09-17 | Amgen Inc | Inyector y método de montaje |
| TW201534726A (zh) | 2013-07-03 | 2015-09-16 | Halozyme Inc | 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途 |
| JP6463361B2 (ja) | 2013-09-08 | 2019-01-30 | コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． | 第ｖｉｉｉ因子両性イオンポリマーコンジュゲート |
| MX2016005315A (es) | 2013-10-24 | 2016-08-11 | Amgen Inc | Sistema de administracion de farmacos con control sensible a la temperatura. |
| WO2015061386A1 (en) | 2013-10-24 | 2015-04-30 | Amgen Inc. | Injector and method of assembly |
| WO2015119906A1 (en) | 2014-02-05 | 2015-08-13 | Amgen Inc. | Drug delivery system with electromagnetic field generator |
| CA2945026C (en) | 2014-05-07 | 2023-10-10 | Amgen Inc. | Autoinjector with shock reducing elements |
| MX2016015854A (es) | 2014-06-03 | 2017-07-19 | Amgen Inc | Sistema de suministro de farmacos controlable y metodo de uso. |
| US9840553B2 (en) | 2014-06-28 | 2017-12-12 | Kodiak Sciences Inc. | Dual PDGF/VEGF antagonists |
| EP3186281B1 (en) | 2014-08-28 | 2019-04-10 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor |
| WO2016049036A1 (en) | 2014-09-22 | 2016-03-31 | Intrinsic Lifesciences Llc | Humanized anti-hepcidin antibodies and uses thereof |
| US10695506B2 (en) | 2014-10-14 | 2020-06-30 | Amgen Inc. | Drug injection device with visual and audio indicators |
| EA201700181A1 (ru) | 2014-10-14 | 2017-09-29 | Галозим, Инк. | Композиции аденозиндеаминазы-2 (ада-2), их варианты и способы использования |
| JP6849590B2 (ja) | 2014-10-17 | 2021-03-24 | コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． | ブチリルコリンエステラーゼ両性イオン性ポリマーコンジュゲート |
| ES2898469T3 (es) | 2014-12-19 | 2022-03-07 | Amgen Inc | Dispositivo de administración de medicamentos con sensor de proximidad |
| WO2016100055A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Amgen Inc. | Drug delivery device with live button or user interface field |
| US10538589B2 (en) | 2015-01-14 | 2020-01-21 | Armagen Inc. | Methods and compositions for increasing N-acetylglucosaminidase (NAGLU) activity in the CNS using a fusion antibody comprising an anti-human insulin receptor antibody and NAGLU |
| US10583245B2 (en) | 2015-02-17 | 2020-03-10 | Amgen Inc. | Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback |
| JP2018512184A (ja) | 2015-02-27 | 2018-05-17 | アムジエン・インコーポレーテツド | 針ガードの移動に対する抵抗力の閾値が調整可能な針ガード機構を備えた薬物送達装置 |
| WO2017039786A1 (en) | 2015-09-02 | 2017-03-09 | Amgen Inc. | Syringe assembly adapter for a syringe |
| EP3386573B1 (en) | 2015-12-09 | 2019-10-02 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling cap |
| IL290457B1 (en) | 2015-12-30 | 2024-10-01 | Kodiak Sciences Inc | Antibodies and their conjugates |
| WO2017120178A1 (en) | 2016-01-06 | 2017-07-13 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling electronics |
| DK3429663T3 (da) | 2016-03-15 | 2020-09-28 | Amgen Inc | Reduktion af sandsynligheden for glasbrud i anordninger til indgivelse af lægemidler |
| CN105820232B (zh) * | 2016-04-08 | 2019-05-17 | 昂德生物药业有限公司 | 单修饰聚乙二醇重组人促红素的制备方法及其制品和应用 |
| WO2017189089A1 (en) | 2016-04-29 | 2017-11-02 | Amgen Inc. | Drug delivery device with messaging label |
| US11389588B2 (en) | 2016-05-02 | 2022-07-19 | Amgen Inc. | Syringe adapter and guide for filling an on-body injector |
| US10988284B2 (en) | 2016-05-13 | 2021-04-27 | Amgen Inc. | Vial sleeve assembly |
| EP3458988B1 (en) | 2016-05-16 | 2023-10-18 | Amgen Inc. | Data encryption in medical devices with limited computational capability |
| EP3465124A1 (en) | 2016-06-03 | 2019-04-10 | Amgen Inc. | Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices |
| EP3478342A1 (en) | 2016-07-01 | 2019-05-08 | Amgen Inc. | Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events |
| CN109415427A (zh) | 2016-07-15 | 2019-03-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于纯化聚乙二醇化的促红细胞生成素的方法 |
| WO2018034784A1 (en) | 2016-08-17 | 2018-02-22 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement detection |
| US20200261643A1 (en) | 2016-10-25 | 2020-08-20 | Amgen Inc. | On-body injector |
| WO2018136398A1 (en) | 2017-01-17 | 2018-07-26 | Amgen Inc. | Injection devices and related methods of use and assembly |
| AU2018220538B2 (en) | 2017-02-17 | 2023-12-14 | Amgen Inc. | Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly |
| WO2018152073A1 (en) | 2017-02-17 | 2018-08-23 | Amgen Inc. | Insertion mechanism for drug delivery device |
| MX2019010544A (es) | 2017-03-06 | 2019-10-21 | Amgen Inc | Dispositivo de administracion de farmacos con caracteristica de prevencion de la activacion. |
| WO2018164829A1 (en) | 2017-03-07 | 2018-09-13 | Amgen Inc. | Needle insertion by overpressure |
| CA3052310A1 (en) | 2017-03-09 | 2018-09-13 | Amgen Inc. | Insertion mechanism for drug delivery device |
| WO2018172219A1 (en) | 2017-03-20 | 2018-09-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for in vitro glycoengineering of an erythropoiesis stimulating protein |
| KR102651078B1 (ko) | 2017-03-28 | 2024-03-22 | 암겐 인코포레이티드 | 플런저 로드 및 주사기 조립 시스템 및 방법 |
| US11590294B2 (en) | 2017-06-08 | 2023-02-28 | Amgen Inc. | Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly |
| EP3634546A1 (en) | 2017-06-08 | 2020-04-15 | Amgen Inc. | Torque driven drug delivery device |
| WO2018236619A1 (en) | 2017-06-22 | 2018-12-27 | Amgen Inc. | REDUCING THE IMPACTS / IMPACTS OF ACTIVATION OF A DEVICE |
| US10781435B2 (en) | 2017-06-22 | 2020-09-22 | Catalyst Biosciences, Inc. | Modified membrane type serine protease 1 (MTSP-1) polypeptides and methods of use |
| US11395880B2 (en) | 2017-06-23 | 2022-07-26 | Amgen Inc. | Electronic drug delivery device |
| MA49562A (fr) | 2017-07-14 | 2020-05-20 | Amgen Inc | Système d'insertion-rétractation d'aiguille présentant un système à ressort en double torsion |
| JP2020527376A (ja) | 2017-07-21 | 2020-09-10 | アムジエン・インコーポレーテツド | 薬物容器のためのガス透過性シーリング部材及び組立方法 |
| WO2019022950A1 (en) | 2017-07-25 | 2019-01-31 | Amgen Inc. | DRUG DELIVERY DEVICE WITH CONTAINER ACCESS SYSTEM AND ASSEMBLY METHOD THEREOF |
| EP4085942A1 (en) | 2017-07-25 | 2022-11-09 | Amgen Inc. | Drug delivery device with gear module and related method of assembly |
| MA49838A (fr) | 2017-08-09 | 2020-06-17 | Amgen Inc | Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre |
| US11077246B2 (en) | 2017-08-18 | 2021-08-03 | Amgen Inc. | Wearable injector with sterile adhesive patch |
| US11103636B2 (en) | 2017-08-22 | 2021-08-31 | Amgen Inc. | Needle insertion mechanism for drug delivery device |
| EP3691717B1 (en) | 2017-10-04 | 2023-02-08 | Amgen Inc. | Flow adapter for drug delivery device |
| US11813426B2 (en) | 2017-10-06 | 2023-11-14 | Amgen Inc. | Drug delivery device including seal member for needle of syringe |
| IL273323B2 (en) | 2017-10-09 | 2024-10-01 | Amgen Inc | Drug delivery device with drive assembly and related assembly method |
| EP3703778A1 (en) | 2017-11-03 | 2020-09-09 | Amgen Inc. | System and approaches for sterilizing a drug delivery device |
| AU2018358749B2 (en) | 2017-11-06 | 2024-02-29 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement and flow sensing |
| MA50569A (fr) | 2017-11-06 | 2020-09-16 | Amgen Inc | Ensembles de remplissage-finition et procédés associés |
| MA50557A (fr) | 2017-11-10 | 2020-09-16 | Amgen Inc | Pistons pour dispositifs d'administration de médicament |
| EP3710090A1 (en) | 2017-11-16 | 2020-09-23 | Amgen Inc. | Door latch mechanism for drug delivery device |
| EP3710089A1 (en) | 2017-11-16 | 2020-09-23 | Amgen Inc. | Autoinjector with stall and end point detection |
| SG11202005990RA (en) | 2017-12-29 | 2020-07-29 | Hoffmann La Roche | Process for providing pegylated protein composition |
| JP7410860B2 (ja) | 2017-12-29 | 2024-01-10 | エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー | Ｐｅｇ化タンパク質組成物を提供するための方法 |
| US20200362002A1 (en) | 2017-12-29 | 2020-11-19 | Hoffmann-La Roche Inc. | Process for providing pegylated protein composition |
| JP2021514656A (ja) | 2018-03-02 | 2021-06-17 | コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． | Ｉｌ−６抗体ならびにその融合構築物およびコンジュゲート |
| WO2019222435A1 (en) | 2018-05-16 | 2019-11-21 | Halozyme, Inc. | Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20 |
| US10835685B2 (en) | 2018-05-30 | 2020-11-17 | Amgen Inc. | Thermal spring release mechanism for a drug delivery device |
| US11083840B2 (en) | 2018-06-01 | 2021-08-10 | Amgen Inc. | Modular fluid path assemblies for drug delivery devices |
| EP3826701A1 (en) | 2018-07-24 | 2021-06-02 | Amgen Inc. | Delivery devices for administering drugs |
| MX2021000749A (es) | 2018-07-24 | 2021-03-29 | Amgen Inc | Dispositivos de suministro para administrar farmacos. |
| WO2020023220A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation |
| US12115360B2 (en) | 2018-07-24 | 2024-10-15 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with grip portion |
| US12109389B2 (en) | 2018-07-31 | 2024-10-08 | Amgen Inc. | Fluid path assembly for a drug delivery device |
| DK3613486T3 (da) * | 2018-08-24 | 2021-01-04 | Uga Biopharma Gmbh | Metode og anlæg til rengøring af epo og/eller et epo-derivat |
| EP3856284A1 (en) | 2018-09-24 | 2021-08-04 | Amgen Inc. | Interventional dosing systems and methods |
| AU2019350660B2 (en) | 2018-09-28 | 2024-09-26 | Amgen Inc. | Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device |
| AR116679A1 (es) | 2018-10-02 | 2021-06-02 | Amgen Inc | Sistemas de inyección para la administración de fármacos con transmisión de fuerza interna |
| MA53818A (fr) | 2018-10-05 | 2022-01-12 | Amgen Inc | Dispositif d'administration de médicament ayant un indicateur de dose |
| KR20210076935A (ko) | 2018-10-15 | 2021-06-24 | 암젠 인크 | 댐핑 메커니즘을 갖는 약물 전달 장치 |
| MX2021002791A (es) | 2018-10-15 | 2021-05-12 | Amgen Inc | Proceso de ensamblaje de plataforma para un dispositivo de administracion de farmacos. |
| CA3113076A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
| TWI831847B (zh) | 2018-11-01 | 2024-02-11 | 美商安進公司 | 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法 |
| WO2020091956A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
| US11613744B2 (en) | 2018-12-28 | 2023-03-28 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use |
| CA3137360A1 (en) | 2019-04-24 | 2020-10-29 | Amgen Inc. | Syringe sterilization verification assemblies and methods |
| CA3148261A1 (en) | 2019-08-23 | 2021-03-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods |
| EP4041312A4 (en) | 2019-10-10 | 2023-12-20 | Kodiak Sciences Inc. | METHOD FOR TREATING AN EYE DISORDER |
| EP4219537A1 (en) | 2020-09-22 | 2023-08-02 | Jecho Laboratories, Inc. | Glycosylation-modified erythopoietin and use thereof |
| WO2022159414A1 (en) | 2021-01-22 | 2022-07-28 | University Of Rochester | Erythropoietin for gastroinfestinal dysfunction |
| KR20240005771A (ko) | 2021-05-10 | 2024-01-12 | 치오메 바이오사이언스 가부시키가이샤 | 항체 조성물의 정제 방법 |
| EP4341161A1 (en) | 2021-05-21 | 2024-03-27 | Amgen Inc. | Method of optimizing a filling recipe for a drug container |
| WO2023209074A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods of restoring erythropoiesis in patients suffering from a sf3b1 mutant myelodysplastic syndrome by correcting coasy mis-splicing |
| WO2024094457A1 (en) | 2022-11-02 | 2024-05-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for producing glycoprotein compositions |
| CN116492448A (zh) * | 2023-04-12 | 2023-07-28 | 深圳赛保尔生物药业有限公司 | 负载peg-epo及间充质干细胞的组合物、药物及其制备方法 |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| KR850004274A (ko) * | 1983-12-13 | 1985-07-11 | 원본미기재 | 에리트로포이에틴의 제조방법 |
| DE3572982D1 (en) | 1984-03-06 | 1989-10-19 | Takeda Chemical Industries Ltd | Chemically modified lymphokine and production thereof |
| JPS6197229A (ja) | 1984-10-18 | 1986-05-15 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 安定なエリトロポエチン製剤 |
| US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US5641663A (en) * | 1985-11-06 | 1997-06-24 | Cangene Corporation | Expression system for the secretion of bioactive human granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and other heterologous proteins from steptomyces |
| US4902502A (en) | 1989-01-23 | 1990-02-20 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
| US5166322A (en) | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
| US5674534A (en) * | 1992-06-11 | 1997-10-07 | Alkermes, Inc. | Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin |
| NZ250375A (en) | 1992-12-09 | 1995-07-26 | Ortho Pharma Corp | Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives |
| US5359030A (en) * | 1993-05-10 | 1994-10-25 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| US5681811A (en) | 1993-05-10 | 1997-10-28 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| IL110669A (en) * | 1993-08-17 | 2008-11-26 | Kirin Amgen Inc | Erythropoietin analogs |
| US5643575A (en) * | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5919455A (en) * | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5932462A (en) * | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| DE741187T1 (de) * | 1995-05-05 | 1997-04-30 | Hoffmann La Roche | Rekombinante Obesitäts-(OB)-Proteine |
| US5672662A (en) | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| US6025324A (en) * | 1996-05-15 | 2000-02-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Pegylated obese (ob) protein compositions |
| TW517067B (en) * | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
| ATE255634T1 (de) * | 1997-09-01 | 2003-12-15 | Aventis Pharma Gmbh | Rekombinantes humanes erythropoietin mit vorteilhaftem glykosylierungsmuster |
| EP1135493A2 (en) | 1998-11-30 | 2001-09-26 | Eli Lilly And Company | Erythropoietic compounds |
| CZ299516B6 (cs) * | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
| PE20010288A1 (es) * | 1999-07-02 | 2001-03-07 | Hoffmann La Roche | Derivados de eritropoyetina |
| WO2001068141A2 (en) | 2000-03-17 | 2001-09-20 | Maxygen Aps | Dispersions of polypeptide conjugates |
| US6586398B1 (en) | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
| CA2408685C (en) * | 2000-05-15 | 2011-02-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate |
-
2000
- 2000-06-23 CZ CZ20002386A patent/CZ299516B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-06-27 US US09/604,938 patent/US6583272B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-27 SK SK987-2000A patent/SK286301B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 PT PT00113115T patent/PT1064951E/pt unknown
- 2000-06-28 TR TR2000/01956A patent/TR200001956A2/xx unknown
- 2000-06-28 NO NO20003372A patent/NO327043B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 DO DO2000000030A patent/DOP2000000030A/es unknown
- 2000-06-28 IL IL13705600A patent/IL137056A0/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 2000-06-28 DE DE60036053T patent/DE60036053T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 DE DE122007000064C patent/DE122007000064I2/de active Active
- 2000-06-28 AU AU42744/00A patent/AU736067B2/en not_active Expired
- 2000-06-28 CA CA002310536A patent/CA2310536C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 SI SI200030963T patent/SI1064951T1/sl unknown
- 2000-06-28 NZ NZ505454A patent/NZ505454A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 ID IDP20000533D patent/ID26447A/id unknown
- 2000-06-28 EP EP00113115A patent/EP1064951B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 EP EP07010693A patent/EP1839676A3/en not_active Withdrawn
- 2000-06-28 HR HR20000436A patent/HRP20000436B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 ES ES00113115T patent/ES2289985T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 RS YUP-407/00A patent/RS49928B/sr unknown
- 2000-06-28 PE PE2000000654A patent/PE20010297A1/es not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 DK DK00113115T patent/DK1064951T3/da active
- 2000-06-28 AT AT00113115T patent/ATE370748T1/de active
- 2000-06-29 CN CNB001078895A patent/CN1184233C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-29 CN CNB2004100036029A patent/CN1283664C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-29 AR ARP000103318A patent/AR024625A1/es active IP Right Grant
- 2000-06-29 GT GT200000109A patent/GT200000109A/es unknown
- 2000-06-29 CO CO00048963A patent/CO5190661A1/es active IP Right Grant
- 2000-06-29 GE GEAP20005430A patent/GEP20022804B/en unknown
- 2000-06-29 MY MYPI20002954A patent/MY128500A/en unknown
- 2000-06-29 PA PA20008497801A patent/PA8497801A1/es unknown
- 2000-06-29 SG SG200003658A patent/SG92717A1/en unknown
- 2000-06-30 MX MXPA00006547A patent/MXPA00006547A/es active IP Right Grant
- 2000-06-30 GB GB0400086A patent/GB2393960C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-30 BG BG104570A patent/BG65449B1/bg unknown
- 2000-06-30 HU HU0002553A patent/HU226233B1/hu active Protection Beyond IP Right Term
- 2000-06-30 SV SV2000000120A patent/SV2002000120A/es active IP Right Grant
- 2000-06-30 OA OA1200000197A patent/OA11442A/fr unknown
- 2000-06-30 GB GB0016205A patent/GB2353281B/en not_active Withdrawn - After Issue
- 2000-06-30 MA MA26014A patent/MA26746A1/fr unknown
- 2000-06-30 IS IS5554A patent/IS2492B/is unknown
- 2000-06-30 ES ES200001625A patent/ES2191511B1/es not_active Expired - Fee Related
- 2000-06-30 TW TW089112948A patent/TWI235667B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-06-30 KR KR1020000036976A patent/KR100593143B1/ko active IP Right Grant
- 2000-06-30 TN TNTNSN00147A patent/TNSN00147A1/fr unknown
- 2000-06-30 UY UY26228A patent/UY26228A1/es not_active IP Right Cessation
- 2000-06-30 DE DE10031839A patent/DE10031839A1/de not_active Ceased
- 2000-06-30 IT IT2000MI001479A patent/IT1318606B1/it active
- 2000-07-02 GC GCP2000749 patent/GC0000197A/en active
- 2000-07-03 BR BR0002276-4A patent/BR0002276A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-07-03 PL PL341187A patent/PL202758B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-07-03 FR FR0008609A patent/FR2795734B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-03 JP JP2000201525A patent/JP3727009B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-03 BR BRPI0002276A patent/BRPI0002276B8/pt unknown
- 2000-07-03 EA EA200000607A patent/EA003777B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-06-12 HK HK05100477A patent/HK1068354A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-06-12 HK HK01104020A patent/HK1033328A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-11-14 US US10/293,551 patent/US20030120045A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-12-17 JP JP2003419520A patent/JP2004155787A/ja active Pending
-
2006
- 2006-09-25 AR ARP060104175A patent/AR055650A2/es unknown
-
2007
- 2007-08-23 CY CY20071101097T patent/CY1107719T1/el unknown
- 2007-09-05 NL NL300289C patent/NL300289I9/nl unknown
- 2007-09-06 CY CY200700021C patent/CY2007021I1/el unknown
- 2007-09-12 LU LU91363C patent/LU91363I2/fr unknown
- 2007-10-19 FR FR07C0051C patent/FR07C0051I2/fr active Active
-
2009
- 2009-05-05 NO NO2009010C patent/NO2009010I2/no unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO327043B1 (no) | Konjugat, preparat samt anvendelse derav og fremgangsmate for fremstilling. | |
| US6340742B1 (en) | Erythropoietin conjugates | |
| CA2460489C (en) | Pegylated and diglycosylated erythropoietin | |
| AU2002233230B2 (en) | Erythropoietin conjugates | |
| EP1345628B1 (en) | Conjugates of erythropoietin (epo) with polyethylene glycol (peg) | |
| RU2232163C2 (ru) | Конъюгаты эритропоэтина и полиэтиленгликоля, фармацевтические композиции (варианты), способ профилактического и/или терапевтического лечения нарушений и способ получения коньюгата или композиции |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| SPCG | Granted supplementary protection certificate |
Free format text: PRODUCT NAME: METOKSYPOLYENGLYKOL-EPOETIN BETA BETA (MIRCERA); NAT. REGISTRATION NO/DATE: EU107400001-16 20070903; FIRST REGISTRATION: GB EU107400001-16 20070720 Spc suppl protection certif: 2009010 Filing date: 20090505 Extension date: 20220720 |
|
| SPCG | Granted supplementary protection certificate |
Free format text: PRODUCT NAME: METOKSYPOLYENGLYKOL-EPOETIN BETA BETA; REG. NO/DATE: EU107400001-16 20070903 Spc suppl protection certif: 2009010 Filing date: 20090505 Extension date: 20220724 |
|
| MK1K | Patent expired | ||
| SPCX | Expiry of an spc |
Spc suppl protection certif: 2009010 |