EA003777B1 - Конъюгаты эритропоэтина, их применение, фармацевтические композиции и способы лечения - Google Patents
Конъюгаты эритропоэтина, их применение, фармацевтические композиции и способы лечения Download PDFInfo
- Publication number
- EA003777B1 EA003777B1 EA200000607A EA200000607A EA003777B1 EA 003777 B1 EA003777 B1 EA 003777B1 EA 200000607 A EA200000607 A EA 200000607A EA 200000607 A EA200000607 A EA 200000607A EA 003777 B1 EA003777 B1 EA 003777B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- conjugate
- sequence
- glycoprotein
- thr
- asn
- Prior art date
Links
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 title claims abstract description 94
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 title claims abstract description 94
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 89
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 title description 72
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 101000920686 Homo sapiens Erythropoietin Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims abstract description 42
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 41
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 41
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 38
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 21
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 10
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 claims abstract description 10
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims abstract description 9
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 2
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 claims description 2
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 claims 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 claims 1
- 210000001136 chorion Anatomy 0.000 claims 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 claims 1
- 102200158977 rs116107386 Human genes 0.000 claims 1
- -1 poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 abstract description 10
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 abstract description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 5
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 abstract description 4
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 abstract description 3
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 abstract description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 abstract description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 abstract 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 abstract 1
- GRVDJDISBSALJP-UHFFFAOYSA-N methyloxidanyl Chemical compound [O]C GRVDJDISBSALJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 201000006747 infectious mononucleosis Diseases 0.000 description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 11
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 7
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 6
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 5
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- 108091006629 SLC13A2 Proteins 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 4
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 4
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 3
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 101100460719 Mus musculus Noto gene Proteins 0.000 description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 3
- 101100187345 Xenopus laevis noto gene Proteins 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 3
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N oxamic acid Chemical compound NC(=O)C(O)=O SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DYMYLBQTHCJHOQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) butanoate Chemical class CCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O DYMYLBQTHCJHOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101150002621 EPO gene Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- GHWVXCQZPNWFRO-UHFFFAOYSA-N butane-2,3-diamine Chemical compound CC(N)C(C)N GHWVXCQZPNWFRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000007792 gaseous phase Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
В заявке описаны конъюгаты эритропоэтина с поли(этиленгликолем), включающие гликопротеин эритропоэтина, имеющий, по меньшей мере, одну свободную аминогруппу и обладающий биологической активностью in vivo, обусловливающей увеличение продуцирования ретикулоцитов и эритроцитов клетками костного мозга, и выбранный из группы, включающей человеческий эритропоэтин и его аналоги, которые имеют последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования или перегруппировкой, по меньшей мере, одного сайта гликозилирования, при этом гликопротеин ковалентно связан с n поли(этиленгликольными) группами формулы -CO(CH)(OCHCH)-OR, где -СО-группа каждой поли(этиленгликольной)группы образует амидную связь с одной из этих аминогрупп и R обозначает (низш.)алкил, х равно 2 или 3, m равно от примерно 450 до примерно 900, n равно 1-3 и n и m выбирают таким образом, чтобы молекулярная масса конъюгата за вычетом гликопротеина эритропоэтина составляла от 20 до 100 кДа.
Description
Настоящее изобретение относится к конъюгату эритропоэтина, причем этот конъюгат включает гликопротеин эритропоэтина, имеющий по меньшей мере одну свободную аминогруппу и обладающий биологической активностью ίπ νίνο, обусловливающей увеличение продуцирования ретикулоцитов и эритроцитов клетками костного мозга, и выбранный из группы, включающей человеческий эритропоэтин и его аналоги, которые имеют последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования или перегруппировкой по меньшей мере одного сайта гликозилирования, при этом гликопротеин ковалентно связан с п поли(этиленгликольными) группами формулы -СО(СН2)Х(ОСН2СН2)т-ОВ, где -СО-группа (т.е. с карбонил) каждой поли(этиленгликольной) группы образует амидную связь с одной из этих аминогрупп и В обозначает (низш.)алкил, х равно 2 или 3, т равно от примерно 450 до примерно 900, п равно 1-3 и п и т выбирают таким образом, чтобы молекулярная масса конъюгата за вычетом гликопротеина эритропоэтина составляла от 20 до 100 кДа. Изобретение также относится к содержащим предлагаемые конъюгаты композициям, в которых процентное содержание конъюгатов в композиции, когда п равно 1, составляет, по меньшей мере, 90%.
По сравнению с немодицированным ЕРО (т.е. ЕРО без присоединенного ПЭГ) и обычными конъюгатами ПЭГ-ЕРО конъюгаты по изобретению отличаются более продолжительным временем полужизни в кровотоке и временем сохранения в плазме, пониженным клиренсом и более высокой активностью, выявленной ш νίνο в клинических условиях. Конъюгаты по изобретению применяются таким же образом, как и ЕРО. В частности, конъюгаты по изобретению могут применяться для лечения пациентов, стимулируя деление и дифференцировку коммитированных эритроидных клеток-предшественников в костном мозге таким же образом, как это происходит при использовании ЕРО для лечения пациентов.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к конъюгату эритропоэтина, причем этот конъюгат включает гликопротеин эритропоэтина, имеющий, по меньшей мере, одну свободную аминогруппу и обладающий биологической активностью ш νίνο, обусловливающей увеличение продуцирования клетками костного мозга ретикулоцитов и эритроцитов, и выбранный из группы, включающей человеческий эритропоэтин и его аналоги, которые имеют последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования или перегруппировкой, по меньшей мере, одного сайта гликозилирования, при этом гликопротеин ковалентно связан с п поли(этиленгликольными) группами формулы -СО(СН2)х-(ОСН2СН2)т-ОК, где -СО-группа (т.е. с карбонил) каждой поли(этиленгликольной) группы образует амидную связь с одной из этих аминогрупп и К. обозначает (низш.)алкил, х равно 2 или 3, т равно от примерно 450 до примерно 900, п равно 1-3 и п и т выбирают таким образом, чтобы молекулярная масса конъюгата за вычетом гликопротеина эритропоэтина составляла от 20 до 100 кДа.
Было установлено, что конъюгаты по изобретению могут применяться таким же образом, что и немофицированный ЕРО. Однако конъюгаты по изобретению отличаются более продолжительным временем полужизни в кровотоке и временем сохранения в плазме, пониженным клиренсом и более высокой активностью, выявленной ίη νίνο в клинических условиях. Благодаря этим улучшенным свойствам протеинов конъюгаты по изобретению могут вводиться один раз в неделю вместо 3 раз в неделю, как это требуется для немодифицированного ЕРО. Снижение частоты введения вероятно должно привести к облегчению соблюдения пациентом режима и схемы лечения, что улучшает результат лечения, а также улучшает состояние пациента. По сравнению с обычными, связанными с поли(этиленгликолем) конъюгатами ЕРО конъюгаты, имеющие молекулярную массу и строение линкера, соответствующие конъюгатам по изобретению, обладают повышенной эффективностью, стабильностью, ЛИС (площадь над кривой), временем полужизни в кровотоке, а также предпочтительной ценой продукта.
Конъюгаты по изобретению можно вводить в терапевтически эффективном количестве пациенту таким же способом, которым вводят ЕРО. Терапевтически эффективное количество представляет собой такое количество конъюгата, которое необходимо для проявления биологической активности ίη νίνο, обусловливающей увеличение продуцирования клетками костного мозга ретикулоцитов и эритроцитов. Точное количество конъюгата предпочтительно определяется такими факторами, как конкретный тип состояния, подлежащего лечению, состояние пациента, подвергаемого лечению, а также другими ингредиентами композиции. Так, в частности, вводимая, например, один раз в неделю доза может составлять от 0,01 до 10 мкг/кг веса тела, предпочтительно от 0,1 до 1 мкг/кг веса тела.
Фармацевтические композиции, содержащие конъюгат, могут быть приготовлены в виде композиций, которые могут вводиться различными путями больному человеку, страдающему нарушениями крови, для которых характерно продуцирование недостаточных количеств эритроцитов или продуцирование аномальных эритроцитов. Средние терапевтически эффективные количества конъюгатов могут варьироваться и, в частности, должны выбираться согласно рекомендациям и предписаниям квалифицированного лечащего врача.
Продукты, представляющие собой гликопротеин эритропоэтин, полученные согласно изобретению, могут быть приготовлены в виде пригодных для инъекции фармацевтических композиций в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем по методам, известным в данной области. Так, например, приемлемые композиции описаны в \УО 97/09996, \УО 97/40850, \УО 98/58660 и \УО 99/07401. Среди предпочтительных фармацевтически приемлемых носителей, пригодных для приготовления продуктов по изобретению, можно назвать человеческий сывороточный альбумин, человеческие протеины плазмы и т. д. Соединения по изобретению могут быть приготовлены в 10мМ натрий/калийфосфатном буфере с рН 7, который содержит способствующий поддержанию тоничности агент, например 132 мМ хлорид натрия. Необязательно фармацевтическая композиция может содержать консервант. Фармацевтическая композиция может содержать различные количества эритропоэтина, например 10-1000 мкг/мл, в частности 50 мкг или 400 мкг.
Понятие эритропоэтин или ЕРО относится к гликопротеину, имеющему аминокислотную последовательность, которая представлена в 8ЕО ГО ЫО:1 или в 8ЕО ГО ЫО:2 либо практически гомологична ей и биологические свойства которой связаны со стимуляцией продуцирования эритроцитов и стимуляцией деления и дифференцировки коммитированных эритроидных клеток-предшественников в костном мозге. В контексте настоящего описания эти понятия включают такие протеины, которые преднамеренно модифицированы, например, с помощью сайтнаправленного мутагенеза, или модифицированы в результате случайных мутаций. Эти понятия также включают аналоги, имеющие от 1 до 6 дополнительных сайтов гликозилирования, аналоги, имеющие, по меньшей мере, одну дополнительную аминокислоту на карбоксильном конце гликопротеина, причем дополнительная аминокислота включает, по меньшей мере, один сайт гликозилирования, и аналоги, имеющие аминокислотную последовательность, которая включает перегруппировку, по меньшей мере, одного сайта гликозилирования. Эти понятие включают как имеющий естественное происхождение, так и полученный рекомбинантным путем человеческий эритропоэтин.
Конъюгаты эритропоэтина по изобретению могут быть представлены формулой I:
Р-[ННСО-(СН2)х-(ОСН2СН2)т-ОК]п (I), где х, т, η и К имеют указанные выше значения. В формуле I символ Р обозначает остаток гликопротеина эритропоэтина, представленный в настоящем описании (т.е. остаток без аминогруппы или аминогрупп, которая(ые) образует(ют) амидную связь с карбонилом, приведенным в формуле (I)), который обладает биологической активностью ίη νίνο, обусловливающей увеличение продуцирования клетками костного мозга ретикулоцитов и эритроцитов.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения К. обозначает метил. Предпочтительно т равно от примерно 650 до примерно 750, а η предпочтительно равно 1.
В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения К обозначает метил, т равно от примерно 650 до примерно 750, а η предпочтительно равно 1, т.е. конъюгат, как он определен выше, имеет формулу [СНзО(СН2СН2О)тСН2СН2СН2СО-ЫН]п-Р, где т равно 650-750, η равно 1, а Р имеет указанные выше значения. Предпочтительно среднее значение т составляет примерно 680.
Предпочтительно гликопротеин в конъюгатах, как они определены выше, представляет собой человеческий эритропоэтин. Человеческий эритропоэтин и аналогичные протеины, как они определены выше, могут экспрессироваться путем эндогенной активации гена. Предпочтительными гликопротеинами человеческого эритропоэтина являются гликопротеины, имеющие последовательность, представленную в 8ЕО ΙΌ N0:1 и в 8ЕО ΙΌ N0:2, наиболее предпочтительно в 8Е0 ΙΌ N0:1.
Кроме того, Р может быть выбран из группы, включающей остатки человеческого эритропоэтина или его аналогов, имеющих от 1 до 6 дополнительных сайта гликозилирования. Как более подробно описано ниже, процессы получения и очистки ЕРО хорошо известны в данной области. Под понятием ЕРО подразумевают встречающийся в естественных условиях или рекомбинантный протеин, предпочтительно человеческий, полученный из любого обычного источника, такого как ткани, в результате синтеза протеинов, из культуры клеток с использованием встречающихся в естественных условиях или рекомбинантных клеток. Под это понятие подпадают любые протеины, обладающие активностью ЕРО, такие как мутеины или протеины, модифицированные иным путем. Рекомбинантный ЕРО может быть получен путем экспрессии в клетках линии СНО, ВНК или НеЬа с использованием метода рекомбинантной ДНК или путем эндогенной активации гена. Экспрессия протеинов, включая ЕРО, в результате эндогенной активации гена хорошо известна в данной области и описана, например, в патентах И8 5733761, И8 5641670 и И8 5733746 и заявках АО 93/09222, АО 94/12650, АО 95/31560, АО 90/11354, АО 91/06667 и АО 91/09955, при этом содержание каждого документа включено в настоящее описание в качестве ссылки. Предпочтительными видами ЕРО для получения продуктов гликопротеинов эритропоэтина являются различные виды человеческого ЕРО. Более предпочтительные виды ЕРО представляют собой человеческий ЕРО, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ΙΌ NО:1 или в 8Е0 ΙΌ NО:2, наиболее предпочтительно аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ΙΌ NО:1
В одном из вариантов осуществления Р может обозначать остаток аналога гликопротеина, имеющий от 1 до 6 дополнительных сайтов гликозилирования. Гликозилирование протеина с помощью одной или нескольких олигосахаридных групп происходит в определенных местах на каркасе полипептида и в значительной степени влияет на такие физиологические свойства протеина, как стабильность протеина, секреция, субклеточная локализация и биологическая активность. Как правило, гликозилирование может быть двух типов. О-связанные олигосахариды присоединяются к остаткам серина или треонина, а Ν-связанные олигосахариды присоединяются к остаткам аспарагина. Обнаружен один тип олигасахаридов, относящихся как к Ν-связанным, так и к О-связанным олигосахаридам, который представляет собой Νацетилнейраминовую кислоту (сиаловая кислота), относящуюся к семейству аминосахаров, содержащих 9 или более атомов углерода. Сиаловая кислота, как правило, является концевым остатком как на Ν-связанных, так и на Освязанных олигосахаридах и, поскольку она несет отрицательный заряд, обусловливает кислотные свойства гликопротеина. Человеческий эритропоэтин, имеющий 165 аминокислот, содержит три Ν-связанных и одну О-связанную олигосахаридные цепи, на долю которых приходится примерно 40% общей молекулярной массы гликопротеина. Ν-связанное гликозилирование происходит на остатках аспарагина, локализованных в положениях 24, 38 и 83, а Освязанное гликозилирование происходит на остатке серина, локализованном в положении 126. Олигосахаридные цепи модифицируют концевыми остатками сиаловой кислоты. Ферментативное удаление всех остатков сиаловой кислоты из гликозилированного эритропоэтина приводит к потере активности ίη νίνο, но при этом сохраняется активность ίη νίίτο, поскольку сиалилирование эритропоэтина препятствует его связыванию связывающим протеином печени и последующему клиренсу.
Гликопротеины по изобретению включают аналоги человеческого эритропоэтина с одним или с несколькими изменениями в аминокислотной последовательности человеческого эритропоэтина, что приводит к увеличению количества сайтов, к которым присоединяется сиаловая кислота. Эти аналоги гликопротеина могут быть получены сайтнаправленным мутагенезом, и они имеют вставки, делеции или замены аминокислотных остатков, что увеличивает количество или изменяет сайты, доступные для гликозилирования. Аналоги гликопротеина, в которых содержание сиаловой кислоты выше, чем содержание, обнаруженное в человеческом эритропоэтине, получают путем добавления сайтов гликозилирования, которые не нарушают вторичную или третичную конформацию, необходимую для проявления биологической активности. Гликопротеины по изобретению также включают аналоги, имеющие повышенные уровни углевода, присоединенного в сайте гликозилирования, что, как правило, включает замену одной или нескольких аминокислот, близко расположенных к Ν-связанному или Освязанному сайту. Гликопротеины по изобретению также включают аналоги, имеющие одну или несколько аминокислот, расположенных за карбоксильным концом эритропоэтина и дающих, по меньший мере, один дополнительный сайт для присоединения углевода. Гликопротеины по изобретению также включают аналоги, имеющие аминокислотную последовательность, включающую перегруппировку по меньшей мере одного сайта гликозилирования. Такая перегруппировка сайта гликозилирования включает делецию одного или нескольких сай тов гликозилирования в человеческом эритропоэтине и добавление одного или нескольких не встречающихся в естественных условиях сайтов гликозилирования. Увеличение количества углеводных цепей на эритропоэтине и вследствие этого количества остатков сиаловой кислоты на молекулу эритропоэтина может обусловливать ценные свойства, такие как повышенная растворимость, большая устойчивость к протеолизу, пониженная иммуногенность, повышенное время полужизни в сыворотке и увеличенная биологическая активность. Аналоги эритропоэтина с дополнительными сайтами гликозилирования описаны более подробно в заявке ЕР 0640619, поданной на имя ЕШо! и опубликованной 1 марта 1995 г.
В предпочтительном варианте осуществления гликопротеины по изобретению имеют аминокислотную последовательность, которая включает, по меньшей мере, один дополнительный сайт для гликозилирования, такие как эритропоэтины, имеющие последовательность человеческого эритропоэтина, измененную путем модификации, выбранной из группы, включающей:
А8п30Тйг32,
А8П51Тйг53,
А8п57Тйг59,
Αδη69,
А8П69ТЙГ71,
8ег68А5п69Тйг71,
Уа187А5п88Тйг90, §ег87А5п88Тйг90, §ег87А5п88С1у89Тйг90, §ег87А5п88Тйг90Тйг92, 8ег87А5п88Тйг90А1а162, А5п69Тйг71§ег87А5п88Тйг90,
А5п30Тйг32Уа187А5п88Тйг90,
А5п8911е90Тйг91, 8ег87А5п8911е90Тйг91,
Ач1'3Т11г38.
А5П138Тйг140,
Тйг125 и
Рго124Тйг125, но не ограничены этими гликопротеинами.
Условные обозначения, примененные в настоящем описании для описания аминокислотной последовательности, означают, что положение(я) в аминокислотной последовательности соответствующего немодифицированного протеина (например НЕРО, имеющего последовательность 8ЕЦ ΙΌ N0:1 или 8ЕЦ ГО N0:2), указанные с помощью верхнего(их) индекса(ов), заменены на аминокислоту(ы), которая(ые) стоит(ят) непосредственно перед соответствующим(и) верхним(и) индексом(ами).
Гликопротеин также может являться аналогом, имеющим, по меньшей мере, одну дополнительную аминокислоту на карбоксильном конце гликопротеина, причем дополнительная аминокислота включает, по меньшей мере, один сайт гликозилирования, т.е. понятие конъюгат, как оно определено выше, также относится к соединению, в котором гликопротеин имеет последовательность, включающую последовательность человеческого эритропоэтина и вторую последовательность на карбоксильном конце последовательности человеческого эритропоэтина, причем вторая последовательность содержит, по меньшей мере, один сайт гликозилирования. Дополнительная аминокислотная последовательность может включать пептидный фрагмент из карбоксильного конца человеческого гонадотропина хориона. Предпочтительно гликопротеин представляет собой аналог, выбранный из группы, включающей (а) человеческий эритропоэтин, имеющий следующую аминокислотную последовательность 8ег 8ег 8ег 8ег Ьуз А1а Ргр Рго Рго 8ег Ьеи Рго 8ег Рго 8ег Агд Ьеи Рго С1у Рго 8ег Αδρ ТНг Рго 11е Ьеи Рго С1п (8ЕЦ ГО N0:3), располагающуюся за карбоксильным концом, (б) аналог, указанный в разделе (а), дополнительно включающий 8ег87Азп88 ТНг90 ЕРО, и (в) аналог, указанный в разделе (а), дополнительно включающий А8п30Тйг32Уа187 А5П88Тйг90 ЕРО.
Гликопротеин также может представлять собой аналог, имеющий аминокислотную последовательность, которая включает перегруппировку, по меньшей мере, одного сайта гликозилирования. Перегруппировка может представлять собой делецию любого из Ν-связанных сайтов, предназначенных для присоединения углевода в человеческом эритропоэтине, и добавление Ν-связанного сайта, предназначенного для присоединения углевода в положение 88 аминокислотной последовательности человеческого эритропоэтина. Предпочтительно гликопротеин представляет собой аналог, выбранный из группы, включающей С1п248ет87Акп88Т1г90 ЕРО; С1п388ет87Акп88Т1г90ЕРО и 61п83§ег87 Акп88Т1г90 ЕРО.
В контексте настоящего описания понятие (низш.)алкил означает линейную или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 6 атомов углерода. Примеры (низш.)алкильных групп включают метил, этил и изопропил. Согласно настоящему изобретению В обозначает (низш.)алкил. Предпочтительными являются конъюгаты, в которых В обозначает метил.
Символ т обозначает количество этиленоксидных звеньев (ОСН2СН2) в поли(этиленоксидной) группе. Одно ПЭГ-звено этиленоксида имеет молекулярную массу примерно 44 Да. Таким образом, молекулярная масса конъюгата (включая молекулярную массу ЕРО) зависит от значения т. В конъюгатах по изобретению т равно от 450 до 900 (что соответствует молекулярной массе от примерно 20 кДа до примерно 40 кДа), предпочтительно от примерно 650 до примерно 750 (что соответствует молекулярной массе примерно 30 кДа). Значение т выбирают таким образом, чтобы образовавшийся конъюгат по изобретению имел физиологическую активность, сопоставимую с активностью немодицированного ЕРО, и указанная активность может быть такой же, более высокой или составлять только часть от активности немодифицированного ЕРО. Понятие примерно по отношению к молекулярной массе обозначает определенные усредненные значения, которые находятся в приемлемом диапазоне значений этой величины при определении с использованием общепринятых аналитических методов. Значение т выбирают таким образом, чтобы молекулярная масса каждой поли(этиленгликольной) группы, ковалентно связанной с гликопротеином эритропоэтина, составляла от примерно 20 кДа до примерно 40 кДа, предпочтительно примерно 30 кДа.
В конъюгатах по изобретению символ п обозначает количество полиэтиленгликольных групп, ковалентно связанных со свободными аминогруппами (включая ε-аминогруппы аминокислоты лизина и/или Ν-концевую аминогруппу) протеина эритропоэтина через амидную(ые) связь(и). Конъюгат по изобретению может иметь одну, две или три ПЭГ-группы на молекулу ЕРО. Символ п обозначает целое число в пределах от 1 до 3, предпочтительно п обозначает 1 или 2 и более предпочтительно п обозначает 1.
Соединение формулы I может быть получено из известного полимерного продукта
где В и т имеют указанные выше значения, путем конденсации соединения формулы II с гликопротеином эритропоэтина. Соединения формулы II, в которых х равно 3, представляют со бой сукцинимидиловые эфиры масляной кислоты и альфа-(низш.)алкокси-поли(этиленгликоля) [(низш.)алкокси-ПЭГ-СМК]. Соединения формулы II, в которых х равно 2, представляют собой сукцинимидиловые эфиры пропионовой кислоты и альфа-(низш.)алкокси-поли(этиленгликоля) [(низш.)алкокси-ПЭГ-СПК]. Для получения амида может применяться любой обычный метод взаимодействия активированного сложного эфира с амином. В описанном выше взаимодействии приведенный в качестве примера сукцинимидиловый сложный эфир представляет собой уходящую группу, приводящую к образованию амида. Применение сукцинимидиловых сложных эфиров в качестве соединений формулы II с целью получения конъюгатов с протеинами описано в патенте И8 5672662, выданном 30 сентября 1997 г. (Натпк и др.).
Человеческий ЕРО содержит девять свободных аминогрупп, Ν-концевую аминогруппу плюс ε-аминогруппу восьми остатков лизина. Когда пэгилирующий реагент объединяли с СМК-соединением формулы II, было установлено, что при рН 7,5 соотношении протеин:ПЭГ 1:3 и температуре реакции 20-25°С получали смесь моно-, ди- и следовых количеств трипэгилированных видов. Когда пэгилирующий реагент представлял собой СПК-соединение формулы II при аналогичных условиях, за исключением того, что соотношение протеин: ПЭГ составляло 1:2, получали первичные монопэгилированные виды. Пэгилированный ЕРО может применяться в виде смеси или в виде различных пэгилированных видов, разделенных с помощью катионообменной хроматографии. Изменяя реакционные условия (например соотношение реагентов, рН, температуру, концентрацию протеина, время реакции и т.д.), можно изменять относительные количества различных пэгилированных видов.
Человеческий эритропоэтин (ЕРО) представляет собой человеческий гликопротеин, который стимулирует образование эритроцитов. Его получение и терапевтическое применение подробно описано, например, в И8 5547933, И8 5621080, ЕР-В 0148605, у Ниапд 8.Ь., Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А, 2708-2712 (1984), ЕР-В 0205564, ЕР-В 0209539 и ЕР-В 0411678, а также у Ьа1 Р.Н. и др. 1. Бю1. Сйет. 261, 3116-3121 (1986), 8акак1 Н. и др. 1. Βίο1. Сйет. 262, 12059-12076 (1987). Эритропоэтин для терапевтических целей может быть получен рекомбинантными методами (ЕР-В 0148605, ЕР-В 0209539 и Едпе ЕС., 81пск1апб Т.^., Ьапе 1. и др. [ттипоЫо1. 72: 213-224 (1986)).
Методы экспрессии и получения эритропоэтина в бессывороточной среде описаны, например, в заявке XVО 96/35718 (на имя Вигд), опубликованной 14 ноября 1996 г., и в ЕР 0513738 (на имя Кос!). дата публикации 12 июня 1992 г. Помимо методов, представленных в указанных выше публикациях, также известно, что в бессывороточной среде может быть проведена ферментация рекомбинантных СНОклеток, которые содержат ген ЕРО. Такие методы описаны, например, в ЕР-А-0513738, ЕР-А0267678 и в общем виде у Ка^ато1о Т. и др. Аиа1уйса1 БюсЬет 130, 445-453 (1983), ЕР-А0248656, у 1<о\саг 1. и Егапек Е., Ме1Ьоб§ ίη Епхуто1оду 421, 277-292 (1986), Вау181ег В., Ехрсо1оду 271, 45-51 (1981), ЕР-А-0481791, ЕРА-0307247, ЕР-А-0343635, АО 88/00967.
В ЕР-А-0267678 описано применение ионообменной хроматографии на 8-сефарозе, препаративной ЖХВР с обращенной фазой на С8колонке и гель-фильтрации для очистки ЕРО, полученного в бессывороточной культуре после диализа. В этом отношении стадия гельфильтрации может быть заменена ионообменной хроматографией с высокой скоростью потока на 8-сефарозе. Перед ионообменной хроматографией также предлагается осуществлять хроматографию с красителем на колонке типа В1ие Тпзасгук
Метод очистки рекомбинантного ЕРО описан у ИоЬио I. и др. 1. ВюсЬет. 107, 352-359 (1990). Согласно этому методу перед стадиями очистки ЕРО обрабатывают раствором Ттееп® 20, фенилметилсульфонилфторидом, этилмалеимидом, пепстатином А, сульфатом меди и оксаминовой кислотой. В публикациях, включая заявку АО 96/35718 (на имя Вигд), опубликованную 14 ноября 1996 г., описан метод получения эритропоэтина путем ферментации в бессывороточной среде (ЕРОМ).
Удельная активность ЕРО или ЕРОконъюгатов согласно настоящему изобретению может быть определена различными известными в данной области методами. Биологическая активность очищенных ЕРО-протеинов по изобретению проявляется в том, что при введении ЕРО-протеина путем инъекции больным людям в клетках костного мозга увеличивается продуцирование ретикулоцитов и эритроцитов по сравнению с контрольной группой людей, не подвергавшихся инъекции. Биологическая активность ЕРО-протеинов или их фрагментов, полученных и очищенных согласно настоящему изобретению, может быть оценена с помощью методов, описанных у АппаЬ1е и др. в Ви11. А1б. НИЬ. Огд., 47: 99-112 (1972) и в РЬагт. Еигора 8рес. 188ие Егу1Ьгоро1ейп ВНР Вю, 1997(2). Другой биологический метод определения активности ЕРО-протеина, заключающийся в использовании нормоцитарных мышей (мышей с нормоцитами (зрелыми эритроцитами)), описан в примере 4.
В изобретении предлагается также композиция, включающая конъюгаты, как они описаны выше. Композиция, включающая, по меньшей мере, 90% моно-ПЭГ -конъюгатов, т.е. в которой п равно 1, может быть получена по методу, описанному в примере 5. Как правило, требуются моноПЭГ-конъюгаты гликопротеинов эритропоэтина, поскольку они обладают тенденцией проявлять более высокую активность по сравнению с диПЭГ-конъюгатами. Процентное содержание моноПЭГ-конъюгатов, а также соотношение моно- и ди-ПЭГ-конъюгатов может контролироваться путем объединения более широкого спектра фракций с целью увеличения процентного содержания моно-ПЭГ-конъюгатов в композиции. Примерно 90%-ное содержание моно-ПЭГ-конъюгатов является хорошим балансом между выходом и активностью. Иногда могут требоваться композиции, в которых, например, содержание моно-ПЭГконъюгатов (п равно 1) составляет, по меньшей мере, 92% или, по меньшей мере, 96%. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения процентное содержание конъюгатов, в которых п равно 1, составляет от 90 до 96%.
Изобретение также относится к соответствующим фармацевтическим композициям, включающим конъюгат или композицию, как они описаны выше, и фармацевтически приемлемый эксципиент.
Конъюгаты и композиции по изобретению наиболее пригодны для приготовления лекарственных средств, предназначенных для лечения или профилактики болезней, связанных с анемией у пациентов с хронической почечной недостаточностью (ХПН), больных СПИДом и для лечения раковых больных, подвергающихся химиотерапии.
Еще одним объектом изобретения является способ профилактического и/или терапевтического лечения нарушений, включающих анемию у пациентов с хронической почечной недостаточностью (ХПН), больных СПИДом и раковых больных, подвергающихся химиотерапии, предусматривающий введение пациенту композиции, как она описана выше.
Кроме того, изобретение относится к способу получения описанных выше соединений, причем этот способ включает конденсацию соединения формулы II о
К0(СН2СН2О)т(СН2)хСООМ-Ц (II) с гликопротеином эритропоэтина, где Н, т и х имеют указанные выше значения.
Изобретение также относится к описанным выше соединениям, предназначенным для лечения болезней, связанных с анемией у пациентов с хронической почечной недостаточностью (ХПН), больных СПИДом и раковых больных, подвергающихся химиотерапии.
Ниже изобретение проиллюстрировано на примерах, которые не ограничивают его объем.
Примеры
Пример 1. Ферментация и очистка человеческого ЕРО.
а) Получение инокулята и ферментация.
Из рабочего банка клеток, созданного из ЕРО-продуцирующей линии клеток СНО (может быть использован штамм АТСС СНБ8695.
описанный в ЕР 41167 (СснсОе ΙηκΙίΙυΙο)), берут один флакон из замороженного в газообразной фазе жидкого азота, хранящегося в соответствующем тэнке. Клетки переносят в стеклянные вращающиеся колбы и культивируют в забуференной бикарбонатом среде во влажном СО2инкубаторе. Типичная бессывороточная среда, применяемая для получения инокулята и ферментации, описана в Европейской заявке на патент № 513738 на имя Коей, опубликованной 12 июня 1992 г., или в заявке \¥О 96/35718 на имя Вигд, опубликованной 14 ноября 1996 г., и, например, представляет собой среду ΌΜΕΜ/Ρ12 (например, фирм ЖН Вюкаепсек/НахШоп В1о1ощс5. Дэнвер, США, порядковый номер 57736) и дополнительно бикарбонат натрия, Ь+глутамин, Ό+глюкозу, рекомбинантный инсулин, селенит натрия, диаминобутан, гидрокортизон, сульфат железа (II), аспарагин, аспарагиновую кислоту, серин и стабилизатор для клеток млекопитающих, такой как, например, поливиниловый спирт, метилцеллюлоза, полидекстран, полиэтиленгликоль, Р1игошс Е68, увеличивающий объем плазмы полигелин (НЕМАССЕЬ®) или поливинилпирролидон (\УО 96/35718).
Культуры оценивают с помощью микроскопа на отсутствие загрязняющих микроорганизмов и определяют плотность клеток. Эти тесты проводят на каждой стадии расщепления.
После начального периода роста культуру клеток разбавляют свежей средой до получения исходной плотности клеток и подвергают второму циклу роста. Эту процедуру повторяют до тех пор, пока во вращающейся колбе не будет получен объем культуры, равный примерно 2 л. После получения примерно 12 удвоенных объемов по 1-5 л этой культуры их используют в качестве инокулята в 10-литровом ферментере, предназначенном для получения большего объема инокулята.
Через 3-5 дней культура из 10-литрового ферментера может использоваться в качестве инокулята для 100-литрового ферментера, предназначенного для получения большего объема инокулята.
После культивирования в течение еще 3-5 дней культура из 100-литрового ферментере может использоваться в качестве инокулята для 1000-литрового ферментера, предназначенного для получения продукта.
б) Сбор и разделение клеток.
Применяют процесс с периодической подпиткой, т.е. когда достигается требуемая плотность клеток, при этом собирают примерно 80% культуры. Оставшуюся культуру пополняют свежей культуральной средой и культивируют до следующего сбора. Один цикл получения состоит максимум из 10 последовательных сборов клеток: 9 частичных сборов и 1 полного сбора в конце ферментации. Сборы производят каждые 3-4 дня.
Определенный объем сбора переносят в охлажденный сосуд. Клетки удаляют центрифугированием или фильтрацией и отбрасывают. Содержащий ЕРО супернатант на стадии центрифугирования сразу подвергают фильтрации и собирают во второй охлажденный сосуд. Каждый сбор обрабатывают по-отдельности.
Типичный метод очистки ЕРО-протеина описан в заявке XVО 96/35718 на имя Вигд, опубликованной 14 ноября 1996 г. Этот метод очистки описан ниже.
а) Хроматография с использованием голубой сефарозы (В1ие 8ерйагоке).
В1ие Зерйагоке (фирма Рйагтас1а) состоит из гранул сефарозы, с поверхностью которых ковалентно связан краситель голубой СлЬасгоп. Поскольку ЕРО более сильно связывается с В1ие 8ер11аго5е, чем большинство небелковых загрязнителей, некоторые белковые загрязнители и ПВА, содержание ЕРО может быть повышено на этой стадии. Элюирование заполненной В1ие 8ер11агоке колонки осуществляют, повышая концентрацию соли, а также значение рН.
Колонку заполняют 80-100 л В1ие 8ерйагоке, регенерируют с помощью ЫаОН и уравновешивают уравновешивающим буфером (хлорид натрия/кальция и ацетат натрия). Загружают полученный из ферментера подкисленный и профильтрованный супернатант. По окончании загрузки колонку промывают сначала буфером, который аналогичен уравновешивающему буферу и который содержит более высокую концентрацию хлорида натрия, а затем трисбуфером. Продукт элюируют трис-буфером и собирают в виде одной фракции в соответствии с основным профилем элюирования.
б) Хроматография с использованием Ви!у1 Тоуореаг1.
Ви!у1 Тоуореаг1 650 С (фирма Токо Наак) представляет собой матрицу, основой которой является полистирол, с которым ковалентно связаны алифатические бутильные фрагменты. Поскольку ЕРО более сильно связывается с этим гелем, чем большинство загрязнителей и ПВА, он может элюироваться с помощью содержащего изопропанол буфера.
Колонку заполняют 30-40 л Ви!у1 Тоуореаг1 650 С, регенерируют с помощью ЫаОН, промывают трис-буфером и уравновешивают с помощью содержащего изопропанол трисбуфера.
Концентрацию изопропанола в элюате, полученном с помощью хроматографии на В1ие 8ерйагоке, доводят до концентрации изопропанола в уравновешивающем буфере и загружают в колонку. Затем колонку промывают уравновешивающим буфером с повышенной концентрацией изопропанола. Продукт элюируют буфером для элюирования (трис-буфер с высокой концентрацией изопропанола) и собирают в виде одной фракции в соответствии с основным профилем элюирования.
в) Хроматография с использованием гидроксиапатитного ультрагеля.
Гидроксиапатитный ультрагель (НубгохуараШе иПгадс1 фирмы Вюкерга) состоит из гидроксиапатита, включенного в агарозную матрицу с целью улучшения механических свойств. ЕРО обладает низкой аффинностью по отношению к гидроксиапатиту и вследствие этого может элюироваться более низкими концентрациями фосфата, чем белковые загрязнители.
Колонку заполняют 30-40 л гидроксиапатитного ультрагеля и регенерируют буфером, содержащим фосфат калия/хлорид кальция и ΝαΟΗ, а затем трис-буфером. Затем ее уравновешивают трис-буфером с низким содержанием изопропанола и хлорида натрия.
В колонку загружают элюат, полученный с помощью хроматографии на ВгДу 1 Тоуореаг1. Колонку последовательно промывают уравновешивающим буфером и трис-буфером без изопропанола и хлорида натрия. Продукт элюируют трис-буфером с низким содержанием фосфата калия и собирают в виде одной фракции в соответствии с основным профилем элюирования.
г) ЖХВР с обращенной фазой на материале Уубас С4.
Материал Уубас С4 (фирма Уубас) для ЖХВР с обращенной фазой состоит из частиц силикагеля, на поверхности которых находятся С4алкильные цепи. Отделение ЕРО от белковых загрязнителей основано на различиях в силе их гидрофобных взаимодействий. Элюирование осуществляют в градиенте ацетонитрила в разбавленной трифторуксусной кислоте.
Препаративную ЖХВР проводят с использованием колонки из нержавеющей стали (заполненной 2,8-3,2 л силикагеля Уубас С4). Элюат, полученный с помощью хроматографии на гидроксиапатитном ультрагеле, подкисляют, добавляя трифторуксусную кислоту, и загружают в колонку, заполненную Уубас С4. Для промывки и элюирования используют градиент ацетонитрила в разбавленной трифторуксусной кислоте. Фракции собирают и немедленно нейтрализуют фосфатным буфером. Объединяют содержащие ЕРО фракции, которые соответствуют требованиям 1РС.
д) Хроматография на ДЭАЭ-сефарозе.
Материал ДЭАЭ-сефароза (фирма РйагшаС1а) состоит из диэтиламиноэтильных (ДЭАЭ) групп, ковалентно связанных с поверхностью гранул сефарозы. Связывание ЕРО с ДЭАЭгруппами опосредуется ионными взаимодействиями. Ацетонитрил и трифторуксусную кислоту пропускают через колонку без задержки. После того, как эти вещества смывают, следовые количества загрязнителей удаляют, промывая колонку ацетатным буфером с низким значением рН. Затем колонку промывают нейтральным фосфатным буфером и ЕРО элюируют буфером с повышенной ионной силой.
Колонку заполняют ДЭАЭ-сефарозой, предназначенной для хроматографии с высокой скоростью потока. Объем колонки регулируют таким образом, чтобы обеспечить загрузку ЕРО из расчета 3-10 мг ЕРО/мл геля. Колонку промывают водой и уравновешивающим буфером (фосфат натрия/калия). Объединенные фракции, полученные после элюирования с использованием ЖХВР, загружают и колонку промывают уравновешивающим буфером. Затем колонку промывают промывочным буфером (натрийацетатный буфер), а затем промывают уравновешивающим буфером. После этого ЕРО элюируют из колонки с помощью элюирующего буфера (хлорид натрия, фосфат натрия/калия) и собирают в виде одной фракции в соответствии с основным профилем элюирования.
Элюат, полученный с колонки, заполненной ДЭАЭ-сефарозой, доводят до определенной проводимости. Полученную субстанцию для приготовления лекарственного средства фильтруют в стерильных условиях в сосуды из тефлона (ТеГ1оп) и хранят при -70° С.
Пример 2. Пэгилирование ЕРО с помощью мПЭГ-СМК.
ЕРО, очищенный по описанному в примере 1 методу в бессывороточной среде (ΈΡΟχΓ). является гомогенным по данным аналитических методов и имеет типичную схему изоформ, состоящую из 8 изоформ. Его удельная биологическая активность составляет 190000 МЕ/мг, как установлено в опыте с использованием нормоцитарных мышей. Примененный пэгилирующий реагент представляет собой метокси-ПЭГ-СМК, т.е. соединение формулы II, в котором В обозначает метил, х равно 3 и т равно 650-750 (в среднем примерно 680, что соответствует средней молекулярной массе примерно в 30 кДа).
Реакция пэгилирования.
К 100 мг ЕРОГ (9,71 мл маточного раствора ЕРО с концентрацией 10,3 мг/мл, 548 мкмоля) добавляют 10 мл 0,1М калий-фосфатного буфера, рН 7,5, содержащего 506 мг метоксиПЭГ-СМК с молекулярной массой 30 кДа (16,5 мкмоля) (полученного от фирмы 8йеагуа1ег Ро1утег8 1пс., Хантсвилл, шт. Алабама) и перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре (20-23°С). Конечная концентрация протеина составляет 5 мг/мл, а соотношение протеин/ПЭГ-реагент составляет 1:3. Через 2 ч реакцию прекращают, доводя значение рН до 4,5 с помощью ледяной уксусной кислоты, и хранят при -20°С до начала очистки.
Очистка.
1. Смесь конъюгатов
Примерно 28 мл 8Р-8ЕРНАВО8Е ЕЕ (сульфопропильная катионобменная смола) загружают в стеклянную колонку типа ΑΜΙί'ΌΝ (2,2х7,5 см) и уравновешивают 20мМ ацетатным буфером, рН 4,5, при скорости потока 150 мл/ч. Шесть мл реакционной смеси, содержащей 30 мг протеина, пятикратно разбавляют уравновешивающим буфером и вносят в колонку. Неадсорбированные продукты отмывают буфером, а адсорбированную смесь ПЭГконъюгата элюируют с колонки с помощью 0,175М ЫаС1 в уравновешивающем буфере. Еще сохранившийся на колонке немодифицированный ΕΡϋδΓ элюируют 750мМ ЫаС1. Колонку повторно уравновешивают исходным буфером. Образцы анализируют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ПААГ-ДСН) и определяют степень их пэгилирования. Установлено, что элюат, полученный с помощью 0,175М №С1. содержит моно-, а также ди- и следовые количества трипэгилированных видов, в то время как элюат, полученный с помощью 750М ЫаС1, содержит немодифицированный ЕРОГ
2. Ди-ПЭГ- и моно-ПЭГ-ЕРОГ
Очищенную смесь конъюгатов, элюированную из колонки на предыдущей стадии, четырехкратно разбавляют буфером и повторно вносят в колонку и промывают, как описано выше. ДиПЭГ-ЕРОГ и моно-ПЭГ-ЕРОГ элюируют по отдельности с колонки с помощью 0,1М ЫаС1 и 0,175М ЫаС1 соответственно. Проводят элюирование с помощью 750М ЫаС1 для того, чтобы элюировать немодифицированный ЕРОГ
В альтернативном варианте реакционную смесь пятикратно разбавляют ацетатным буфером и вносят в колонку, заполненную 8Р8ср11аго5с (~0,5 мг протеина/мл геля). Колонку промывают и адсорбированные моно-ПЭГЕРОГ, ди-ПЭГ-ЕРОГ и немодифицированный ЕРОГ элюируют по методу, описанному в предыдущем разделе.
Результаты.
ПЭГ-ЕРОГ синтезируют с помощью химической конъюгации линейной молекулы ПЭГ со средней молекулярной массой 30 кДа. ПЭГ-ЕРОГ получают в результате реакции между первичными аминогруппами ЕРОГ и производным сукцинимидилового эфира ПЭГ-масляной кислоты, где молекулярная масса ПЭГ составляет 30 кДа, приводящей к образованию амидной связи.
Полученные результаты обобщены в табл. 1. Очищенная смесь конъюгатов содержит моно- и ди-ПЭГ-ЕРОГ и не содержит немодифицированный ЕРОГ, что установлено анализом с использованием ПААГ-ДСН. Смесь конъюгатов включает 23,4 мг или 78% исходного материала. Разделение с помощью катионообменной хроматографии моно- и ди-ПЭГ-ЕРОГ позволило установить, что соотношение моно- и ди-ПЭГ в смеси конъюгатов составляет примерно 1:1. По завершении реакции соотношение индивидуальных компонентов моно- : ди- : немодифицированный ЕРОГ составило 40:38:20 (%). Общий выход оказался практически количественным.
Таблица 1. Обобщенные результаты по пэгилированию ЕРОГ
| Образец | Протеин, мг | Выход, % |
| Смесь Нхп. | 30 | 100 |
| Моно- | 12,0 | 40 |
| Ди- | 11,4 | 38 |
| Немодифицированный | 6,0 | 20 |
| Смесь конъюгатов | 23,4 | 78 |
Пример 3. Пэгилирование ЕРО с помощью мПЭГ-СПК.
Различные аликвотные количества ЕРОГ, указанные в примере 2, подвергают взаимодействию с метокси-ПЭГ-СПК с молекулярной массой 30 кДа (фирма 811саг\\а1сг Ро1утега 1пс., Хантсвилл, шт. Алабама). Реакцию проводят при соотношении протеин/реагент 1:2 и используют методы очистки, описанные в примере 2. Получают первичные монопэгилированные виды.
Пример 4. Активность ίη νίνο пэгилированного ЕРО, определенная с помощью опыта с использованием нормоцитарных мышей.
Опыт с использованием нормоцитарных мышей известен в данной области (Рйатт. Еигора 8рес. Еще Ету1йторо1е11п ВНР Βίο, 1997(2)) и является методом, описанным в монографии по эритропоэтину Р11. Еиг. ВНР. Образцы разбавляют смесью бычьего сывороточного альбумина с забуференным фосфатом физиологическим раствором (БСА-3ФР). Нормальным здоровым мышам возрастом 7-15 недель вводят подкожно 0,2 мл ЕРО-фракции, содержащей непэгилированный ЕРО или три-, ди- или монопэгилированный ЕРО, полученный в примере 2 или 3. Через 6 дней берут кровь путем пункции хвостовой вены и разбавляют таким образом, чтобы в 1 мл раствора окрашенного 0,15 мкМ акридином оранжевым находился 1 мкл крови. Время окрашивания составляет 30-10 мин. Количество ретикулоцитов определяют микрофлуорометрически с использованием проточного цитометра, анализируя гистограмму флуоресценции красного цвета. Количество ретикулоцитов указано в виде абсолютных величин (на 30000 проанализированных эритроцитов). Для получения представленных данных обобщают результаты, получаемые каждый день для группы, состоящей из 5 мышей, и у мышей берут кровь только один раз.
В отдельных экспериментах мышам вводят одну дозу немодицированного ЕРО (25 нг ЕРО), смесь ПЭГ(СМК)-ЕРО, полученную в примере 2 (10 нг конъюгата), моно- и дипэгилированные ЕРО, полученные в примере 2 (10 нг конъюгата), ПЭГ(СПК)-ЕРО, полученный в примере 3 (10 нг конъюгата) и буферный раствор. Полученные результаты приведены в табл. 2. Эти результаты свидетельствуют о более высокой активности и пролонгированном времени полужизни пэгилированных видов ЕРО, о чем гово рит существенное увеличение количества ретикулоцитов и сдвиг максимального количества ретикулоцитов при использовании одной и той же дозы/мышь (10 нг) по сравнению с дозой 25 нг немодифицированного ЕРО.
Таблица 2
| Вре мя, ч | ЕРО (немодифицированный) | СПКПЭГ с мол. массой 30 кДА | МоноСМК с мол. массой 30 кДа | ДиСМК с мол. массой 30 кДа | Смесь конъюгатов ПЭГЕРО СМК | Контроль ный буфер |
| 72 | 1000 | 1393 | 1411 | 994 | 1328 | 857 |
| 96ч | 500 | 1406 | 1501 | 926 | 1338 | 697 |
| 120 | -200 | 1100 | 1182 | 791 | 944 | 701 |
| 144 | -0 | 535 | 607 | 665 | 660 | 708 |
Пример 5. Получение в основном моноПЭГ-ЕРО
Реакция пэгилирования.
В качестве исходного продукта используют 100 мг (5,48 мкмоля) ΕΡΘκί в 100мМ калийфосфатном буфере, рН 7,5, полученный согласно примеру 1, и к нему добавляют 329 мг (10,96 мкмоля) реагента ПЭГ-СМК с мол. массой 30 кДа, растворенного в 3 мл 1мМ НС1. Добавляют еще 100мМ калий-фосфатный буфер, рН 7,5, для доведения объема до 20 мл. Конечная концентрация протеина составляет 5 мг/мл, а соотношение протеин/ПЭГ составляет 1:2. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при температуре окружающей среды (20-22°С). Через 2 ч реакцию прекращают, доводя значение рН до 4,5 с помощью ледяной уксусной кислоты, и хранят при -20° С до начала очистки.
Очистка.
Полученную на предыдущей стадии реакционную смесь разбавляют в соотношении 1:5 10мМ ацетатом натрия, рН 4,5, и вносят в 300 мл 8ΡЗерйагоке ЕЕ (сульфопропильная катионобменная смола), загруженной в колонку размером 4,2х19 см. Колонку предварительно уравновешивают таким же буфером. Выходящие с колонки продукты исследуют при длине волны 280 нм с помощью УФ-монитора типа Сйкои и оценивают с помощью записывающего устройства Κίρρ и 2оиеи. Колонку промывают уравновешивающим буфером, используя 300 мл или объем, равный объему 1 слоя, с целью удаления избытка реагентов, побочных продуктов реакции и олигомерного ПЭГЕРО. Затем осуществляют промывку 100мМ №1С1. используя объем, равный объему 2 слоев, с целью удаления ди-ПЭГ-ЕРО. Затем элюируют моноПЭГ-ЕРО с помощью 200мМ ЫаС1. В процессе элюирования моно-ПЭГ-ЕРО первые 50 мл пика протеина отбрасывают и моно-ПЭГ-ЕРО собирают в виде фракции объемом 150 мл. Немодифицированный ΕΡΘκί, оставшийся на колонке, элюируют 750мМ ЫаС1. Все элюирующие буферы готовят в уравновешивающем буфере. Все элюированные образцы анализируют с помощью ПААГ
ДСН и с помощью хроматографии высокого разрешения с вытеснением по размерам (ХВП). Пул моно-ПЭГ-ЕРО, который получен из фракции объемом 150 мл и который не имеет обнаруживаемых количеств немодифицированного ΕΡΘκί, затем концентрируют до концентрации ~4,5-7,5 мг/мл и подвергают диафильтрации (фильтрации посредством диализа) в противотоке буфера для хранения, представляющего собой 10 мМ фосфат калия, 100 мМ ΝαΟ1, рН 7,5. Концентрирование/диафильтрацию проводят при температуре окружающей среды, используя систему МПйроге ЬаЬкса1е8М ТЕЕ' 8ук1ет, снабженную мембраной типа МзШроге БеШсоп ХЬ Вютах 50, пропускающей продукты с максимальной молекулярной массой 5 кДа. Концентрированный моно-ПЭГ-ЕРО стерилизуют фильтрацией и хранят в замороженном состоянии при -20°С.
Примерно 75% ΕΡΘκί было пэгилировано. После очистки общий выход моно-ПЭГ-ЕРО без обнаруживаемых количеств немодифицированного ΕΡΘκί составил -30%, выход ди-ПЭГ-ЕРО составил примерно 25%. Оставшийся протеин представлен олигомерами и непэгилированным ΕΡϋκΓ. Пул моно-ПЭГ-ЕРО, полученный из фракции объемом 150 мл, содержал примерно 90% моно-ПЭГ-ЕРО и примерно 10% ди-ПЭГ-ЕРО.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ (1) ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ:
(ΐ) ЗАЯВИТЕЛЬ:
(A) НАИМЕНОВАНИЕ: Ф.Хоффманн-Ля Рош АГ (B) УЛИЦА: 124 ОгепгасЬегзЪгазве <С) город: Базель (Е) СТРАНА: Швейцария (Г) ПОЧТОВЫЙ ИНДЕКС (ΖΙΡ): СН-4070 (C) ТЕЛЕФОН: (61) 688 11 11 (H) ТЕЛЕФАКС: (61) 688 13 95 (I) ТЕЛЕКС: 962 292 Ь1г сЬ (ϋ) НАЗВАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ: Конъюгаты эритропоэтина (ίϋ) КОЛИЧЕСТВО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ: 3 (ίν) ФОРМА ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ДЛЯ КОМПЬЮТЕРА:
(A) ТИП НОСИТЕЛЯ: флоппи-диск (B) компьютер: совместимый с ιβμ рс (C) ОПЕРАЦИОННАЯ СИСТЕМА: МОНЮ (Ю) ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ: РаСепЫп Йе1еаае 2.0 <170> РаЪепМп νβΓ. 2.0 <210> 1 <211> 165 <212> РТН <213> Ното вархепз <400> 1
| А1а | Рго | Рго | Агд | Ьеи | 11е | Суэ | Азр | Бег | Агд | νβΐ | Ьеи | 61и | Агд | Туг | ьеи |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Ьеи | б1и | А1а | Ьуз | С1и | А1а | <з1и | Азп | 11е | ТЬг | ТЬг | б1у | Суз | А1а | б1и | ΗΪ8 |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Суз | 5ег | Ьеи | Азп | С1и | Азп | 11е | ТЬг | Уа1 | Рго | Азр | ТЬг | Ьуз | νβΐ | Азп | РЬе |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Туг | А1а | Тгр | ьуз | Агд | МеЪ | <31и | Уа1 | 61у | 61п | 61п | А1а | Уа1 | 61и | Уа1 | Тгр |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| 61η | 61у | Ьеи | А1а | ьеи | Ьеи | Бег | б1и | А1а | Уа1 | Ьеи | Агд | 61у | 61 п | А1а | Ьеи |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Ьеи | Уа1 | Азп | Бег | 8ег | 61п | Рго | Тгр | С1и | Рго | Ьеи | 61 п | Ьеи | Нхз | νβΐ | Азр |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Ьуз | А1а | Уа1 | Бег | С1у | Ьеи | Агд | Бег | Ьеи | ТЬг | ТЬг | Ьеи | Ьеи | Агд | А1а | Ьеи |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| 61у | А1а | С1п | Ьуз | С1и | А1а | 11е | Бег | Рго | рго | Азр | А1а | А1а | Бег | А1а | А1а |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Рго | Ьеи | Агд | ТЬг | Не | ТЬг | А1а | Азр | ТЬг | РЬе | Агд | Ьуз | Ьеи | РЬе | Агд | Уа1 |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Туг | Зег | Азп | РЬе | Ьеи | Агд | С1у | Ьуз | Ьеи | Ьуз | Ьеи | Туг | ТЬг | 61у | б1и | А1а |
| 145 | 150 | 155 | 160 |
Суз Агд ТЬг б1у Азр
165 <210> 2 <211> 166 <212> РТЕ <213> Ното заргепз <400> 2
| А1а | Рго | Рго | Агд | ьеи | 11е | Суз | Азр | Зег | Агд | Уа1 | Ьеи | С1и | Агд | Туг | Ьеи |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Ьеи | С1и | А1а | Ьуз | С1и | А1а | О1и | Азп | Не | ТЬг | ТЬг | С1у | Суз | А1а | С1и | ΗΪ3 |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| суз | Зег | Ьеи | АЗП | О1и | АЗП | Не | ТЬг | Уа1 | Рго | Азр | ТЬг | ьуз | Уа1 | Азп | РЬе |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Туг | А1а | Тгр | Ьуз | Агд | МеЪ | <31и | Уа1 | <51у | С1п | С1п | А1а | иа1 | <31и | Уа1 | Тгр |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| С1п | С1у | Ьеи | А1а | Ьеи | Ьеи | Зег | <31и | А1а | Уа1 | Ьеи | Агд | С1у | С1п | А1а | Ьеи |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Ьеи | Уа1 | АЗП | Зег | 5ег | С1п | Рго | Тгр | С1и | РГО | Ьеи | <31п | Ьеи | ΗΪ8 | Уа1 | Азр |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Ьуз | А1а | Уа1 | Зег | 61у | Ьеи | Агд | 8ег | Ьеи | ТЬг | ТЬг | Ьеи | Ьеи | Агд | А1а | Ьеи |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| <31у | А1а | С1п | ьуз | С1и | А1а | Не | Зег | Рго | Рго | Азр | А1а | А1а | Зег | А1а | А1а |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| РГО | Ьеи | Агд | ТЬг | Не | ТЬг | А1а | Азр | ТЬг | РЬе | Агд | Ьуз | Ьеи | РЬе | Агд | 7а1 |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| туг | зег | АЗП | РЬе | ьеи | Агд | (31у | ьуз | ьеи | ьуэ | Ьеи | туг | ТЬг | С1у | <3111 | А1а |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Суз | Агд | ТЬг | <з1у | Авр | Агд |
165 <210> 3 <211> 28 <212> РТЕ
| <213> Ното зархепз <400> 3 | ||||||
| Зег | Зег Зег Зег | ьуз А1а | Рго Рго | рго | Зег | Ьеи Рго Зег Рго Зег Агд |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||
| Ьеи | Рго <31у Рго | Зег Азр | тЬг Рго | Не | Ьеи | Рго <з1п |
| 20 | 25 |
Claims (29)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Конъюгат, который включает гликопротеин эритропоэтина, имеющий, по меньшей мере, одну свободную аминогруппу и обладающий биологической активностью ίη νίνο, обусловливающей увеличение продуцирования ретикулоцитов и эритроцитов клетками костного мозга, и выбранный из группы, включающей человеческий эритропоэтин и его аналоги, которые имеют последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования или перегруппировкой, по меньшей мере, одного сайта гликозилирования, при этом гликопротеин ковалентно связан с η поли(этиленгликольными) группами формулы-СО(СН2)х-(ОСН2СН2)т-ОЯ, где -СО-группа каждой поли(этиленгликольной) группы образует амидную связь с одной из этих аминогрупп и Я обозначает (низш.)алкил, х равно 2 или 3, т равно от примерно 450 до примерно 900, η равно 1-3 и η и т выбирают таким образом, чтобы молекулярная масса конъюгата за вычетом гликопротеина эритропоэтина составляла от 20 до 100 кДа.
- 2. Конъюгат по п.1 формулыР-ЕННСОДОДЯО^ВДт-ОЯГ (I) где х, т, η и Я имеют значения, указанные в п.1, а Р обозначает остаток гликопротеина без аминогруппы или аминогрупп, которая(ые) образует(ют) амидную связь с поли(этиленгликольной(ыми)) группой(ами).
- 3. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где Я обозначает метил.
- 4. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где т равно от примерно 650 до примерно 750.
- 5. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где η равно 1.
- 6. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где Я обозначает метил, т равно от примерно 650 до примерно 750, а η равно 1.
- 7. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, имеющий формулу [СНзО(СН2СН2О)1ПСН2СН2СН2СО-МН]п-Р, где т равно от 650 до 750, η равно 1, а Р имеет значения, указанные в п.2.
- 8. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где гликопротеин представляет собой человеческий эритропоэтин.
- 9. Конъюгат по любому из пп.1-7, при этом гликопротеин, представляющий собой человеческий эритропоэтин, экспрессируется в результате эндогенной активации гена.
- 10. Конъюгат по любому из пп.1-9, при этом гликопротеин имеет последовательность, представленную в 8ЕЦ ГО ИО:1.
- 11. Конъюгат по любому из пп.1-8, при этом гликопротеин имеет последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную путем добавления от 1 до 6 сайтов гликозилирования.
- 12. Конъюгат по любому из пп.1-11, при этом гликопротеин имеет последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную путем модификации, выбранной из группы, включающейΑδη30ΤΗτ32,А8п51ТЬг53,А8п57Тйг59,А5п69,ΑμΓΤΙιΓ.8сг68А5п69Т1п'. να187Αδη88ΤΗτ90, ^сСАыСТЬг90.А'Г АчГС>Б8 Т11Г.§0Γ87Αδη88ΤΗΓ90ΤΗΓ92, §0Γ87Αδη88ΤΗτ90Α1α162,ΑμιΤΙιγ' А'Г'А5п88Тйг90,Α5η30ΤΗτ32να187Α8η88ΤΗΓ90, А5п8911с90Т11г91.8сг8 Ач18'11с 'Т11г .Αδη136ΤΗτ138,А5П138ТЪг140,ТЬг125 иРго124ТЬг125.
- 13. Конъюгат по любому из пп.1-12, при этом гликопротеин имеет последовательность человеческого эритропоэтина и вторую последовательность на карбоксильном конце после довательности человеческого эритропоэтина, причем вторая последовательность содержит, по меньшей мере, один сайт гликозилирования.
- 14. Конъюгат по п.13, при этом вторая по следовательность включает последовательность из последовательности карбоксильного конца человеческого гонадотропина хориона.
- 15. Конъюгат по п.13, при этом гликопротеин имеет последовательность, выбранную из группы, включающей (а) последовательность человеческого эритропоэтина и последовательность, представленную в 8Е^ II) NО:3, на карбоксильном конце последовательности человеческого эритропоэтина, (б) последовательность, указанную в разделе (а), модифицированную 8ег87Л8п88ТЕг90, и (в) последовательность, указанную в разделе (а), модифицированную Л8п30ТЕг32Уа187 Л8п88ТЕг90.
- 16. Конъюгат по любому из пп.1-7, при этом гликопротеин имеет последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную путем перегруппировки, по меньшей мере, одного сайта гликозилирования.
- 17. Конъюгат по п.16, при этом перегруппировка включает делецию любого из Νсвязанных сайтов гликозилирования в человеческом эритропоэтине и добавление Ν-связанного сайта гликозилирования в положение 88 после довательности человеческого эритропоэтина.
- 18. Конъюгат по п.17, при этом гликопро теин имеет последовательность человеческого эритропоэтина, содержащую модификацию, выбранную из группы, включающейО1п248ег87Л§п88ТЬг90,О1п388ег87Л8п88ТЕг90 иО1п838ег87Л8п88ТЕг90.
- 19. Композиция, включающая конъюгаты, каждый из которых содержит гликопротеин эритропоэтин, имеющий, по меньшей мере, одну свободную аминогруппу и обладающий биологической активностью ΐη νίνο, обусловливающей увеличение продуцирования ретикуло цитов и эритроцитов клетками костного мозга, и выбранный из группы, включающей человеческий эритропоэтин и его аналоги, которые име ют последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования или перегруппировкой, по меньшей мере, одного сайта гликозилирования, при этом гликопротеин в каждом таком конъюгате ковалентно связан с п поли(этиленгликольными) группами формулы-СО(СН2)х-(ОСН2СН2)т-ОК, где -СО-группа каждой поли(этиленгликольной) группы образует амидную связь с одной из этих аминогрупп и в каждом таком конъюгате К обозначает (низш.)алкил, х равно 2 или 3, т равно от примерно 450 до примерно 900, п равно 1-3 и η и т выбирают таким образом, чтобы молеку лярная масса конъюгата за вычетом гликопротеина эритропоэтина составляла от 20 до 100 кДа, причем процентное содержание конъюгатов, в которых η равно 1, составляет, по меньшей мере, 90%.
- 20. Композиция, которая включает конъюгат по любому из пп.1-18 и в которой процентное содержание конъюгатов, в которых η равно 1, составляет, по меньшей мере, 90%.
- 21. Композиция по п.19 или 20, в которой процентное содержание конъюгатов, в которых η равно 1, составляет, по меньшей мере, 92%.
- 22. Композиция по п.21, в которой процентное содержание конъюгатов, в которых η равно 1, составляет, по меньшей мере, 96%.
- 23. Композиция по п.19 или 20, в которой процентное содержание конъюгатов, в которых η равно 1, составляет от 90 до 96%.
- 24. Фармацевтическая композиция, включающая конъюгат или композицию по любому из пп.1-23 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
- 25. Применение конъюгата или композиции по любому из пп.1-23 для приготовления лекарственных средств, предназначенных для лечения или профилактики болезней, связанных с анемией у пациентов с хронической почечной недостаточностью (ХПН), больных СПИДом и для лечения раковых больных, подвергающихся химиотерапии.
- 26. Способ профилактического и/или терапевтического лечения нарушений, включающих анемию у пациентов с хронической почечной недостаточностью (ХПН), больных СПИДом и раковых больных, подвергающихся химиотерапии, предусматривающий введение пациенту композиции по любому из пп.1-23.
- 27. Способ получения соединений по любому из пп.1-23, включающий конденсацию соединения формулы IIКО(СН2СН2О)т(СН2)хСООМ-Д (И) с гликопротеином эритропоэтина, в котором К, т и х имеют значения, указанные в пп.1-6.
- 28. Соединения по любому из пп.1-3, полученные способом по п.27.
- 29. Соединения по любому из пп.1-23, предназначенные для лечения болезней, связанных с анемией у пациентов с хронической почечной недостаточностью (ХПН), больных СПИДом и раковых больных, подвергающихся химиотерапии.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14225499P | 1999-07-02 | 1999-07-02 | |
| US15022599P | 1999-08-23 | 1999-08-23 | |
| US15154899P | 1999-08-31 | 1999-08-31 | |
| US16615199P | 1999-11-17 | 1999-11-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200000607A1 EA200000607A1 (ru) | 2001-02-26 |
| EA003777B1 true EA003777B1 (ru) | 2003-08-28 |
Family
ID=27495518
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200000607A EA003777B1 (ru) | 1999-07-02 | 2000-07-03 | Конъюгаты эритропоэтина, их применение, фармацевтические композиции и способы лечения |
Country Status (52)
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2476439C2 (ru) * | 2007-07-17 | 2013-02-27 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Очистка пегилированных полипептидов |
Families Citing this family (226)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK1037927T3 (da) * | 1997-12-08 | 2004-09-06 | Emd Lexigen Res Ct Corp | Heterodimere fusionsproteiner, der er nyttige til målrettet immunterapi og generel immunstimulering |
| US20030105294A1 (en) * | 1998-02-25 | 2003-06-05 | Stephen Gillies | Enhancing the circulating half life of antibody-based fusion proteins |
| EP1071468B1 (en) * | 1998-04-15 | 2006-06-14 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by co-administration with angiogenesis inhibitor |
| US7304150B1 (en) * | 1998-10-23 | 2007-12-04 | Amgen Inc. | Methods and compositions for the prevention and treatment of anemia |
| US7345019B1 (en) * | 1999-04-13 | 2008-03-18 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Modulation of excitable tissue function by peripherally administered erythropoietin |
| CZ299516B6 (cs) * | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
| SK782002A3 (en) | 1999-07-21 | 2003-08-05 | Lexigen Pharm Corp | FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| US7067110B1 (en) | 1999-07-21 | 2006-06-27 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| EP1200479B1 (en) * | 1999-08-09 | 2006-02-01 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Multiple cytokine-antibody complexes |
| US20050202538A1 (en) * | 1999-11-12 | 2005-09-15 | Merck Patent Gmbh | Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics |
| DK1252192T3 (da) | 2000-02-11 | 2006-11-20 | Merck Patent Gmbh | Forbedring af antistofbaserede fusionsproteiners serumhalveringstid |
| US6586398B1 (en) * | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
| CA2408685C (en) * | 2000-05-15 | 2011-02-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate |
| US7517526B2 (en) * | 2000-06-29 | 2009-04-14 | Merck Patent Gmbh | Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by combined treatment with immunocytokine uptake enhancing agents |
| ES2320101T3 (es) * | 2000-10-16 | 2009-05-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Eritropoyetina conjugada con mono-peg. |
| KR100645843B1 (ko) * | 2000-12-20 | 2006-11-14 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 에리트로포이에틴 접합체 |
| ATE505204T1 (de) * | 2000-12-20 | 2011-04-15 | Hoffmann La Roche | Konjugate von erythropoietin (epo) mit polyethylenglykol (peg) |
| US20030072737A1 (en) * | 2000-12-29 | 2003-04-17 | Michael Brines | Tissue protective cytokines for the protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues and organs |
| US7767643B2 (en) | 2000-12-29 | 2010-08-03 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Protection, restoration, and enhancement of erythropoietin-responsive cells, tissues and organs |
| EP1234583A1 (en) * | 2001-02-23 | 2002-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | PEG-conjugates of HGF-NK4 |
| MXPA03008031A (es) * | 2001-03-07 | 2003-12-04 | Merck Patent Gmbh | Tecnologia de expresion para proteinas que contienen porcion de anticuerpo isotipo hibrida. |
| DE10112825A1 (de) | 2001-03-16 | 2002-10-02 | Fresenius Kabi De Gmbh | HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung |
| WO2002079415A2 (en) | 2001-03-30 | 2002-10-10 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Reducing the immunogenicity of fusion proteins |
| PT1383785E (pt) * | 2001-05-03 | 2011-06-28 | Merck Patent Gmbh | Anticorpo recombinante específico de tumores e utilização deste |
| US6818613B2 (en) | 2001-11-07 | 2004-11-16 | Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. | Aqueous sustained-release formulations of proteins |
| KR100467751B1 (ko) | 2001-12-03 | 2005-01-24 | 씨제이 주식회사 | 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질 |
| MXPA04005266A (es) * | 2001-12-04 | 2004-10-11 | Merck Patent Gmbh | Inmunocitocinas con selectividad modulada. |
| CN100522946C (zh) * | 2001-12-06 | 2009-08-05 | 法布罗根股份有限公司 | 低氧诱导因子(HIF)α的稳定化 |
| DE10209822A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid |
| DE10209821A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid |
| US7129267B2 (en) | 2002-03-11 | 2006-10-31 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Methods for SHP1 mediated neuroprotection |
| US20040122216A1 (en) * | 2002-07-01 | 2004-06-24 | Jacob Nielsen | Recombinant tissue protective cytokines and encoding nucleic acids thereof for protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues, and organs |
| WO2004012773A1 (en) | 2002-07-24 | 2004-02-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Polyalkylene glycol acid additives |
| US7459435B2 (en) * | 2002-08-29 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| US20050176627A1 (en) * | 2002-09-09 | 2005-08-11 | Anthony Cerami | Long acting erythropoietins that maintain tissue protective activity of endogenous erythropoietin |
| AU2003263552A1 (en) * | 2002-09-09 | 2004-03-29 | Nautilus Biotech | Rational evolution of cytokines for higher stability, the cytokines and encoding nucleic acid molecules |
| BR0314227A (pt) * | 2002-09-11 | 2005-10-25 | Fresenius Kabi De Gmbh | Derivados de amido de hidroxialquila |
| US7459436B2 (en) * | 2002-11-22 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| US7388079B2 (en) * | 2002-11-27 | 2008-06-17 | The Regents Of The University Of California | Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor |
| PL211180B1 (pl) * | 2002-12-17 | 2012-04-30 | Merck Patent Gmbh | Białko fuzyjne typu przeciwciało-IL2, wektor zawierający sekwencję kwasów nukleinowych kodujących takie białko, kompozycja farmaceutyczna zawierająca takie białko fuzyjne oraz jego zastosowania do wytwarzania leków |
| US7553930B2 (en) | 2003-01-06 | 2009-06-30 | Xencor, Inc. | BAFF variants and methods thereof |
| US20060104968A1 (en) * | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
| US7642340B2 (en) | 2003-03-31 | 2010-01-05 | Xencor, Inc. | PEGylated TNF-α variant proteins |
| AU2004227937B2 (en) | 2003-03-31 | 2007-09-20 | Xencor, Inc | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7610156B2 (en) | 2003-03-31 | 2009-10-27 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7279174B2 (en) * | 2003-05-08 | 2007-10-09 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent coatings comprising hydrophilic additives |
| ATE478093T1 (de) * | 2003-05-12 | 2010-09-15 | Affymax Inc | Neue poly(ethylenglycol) modifizierte erythropoietinagonisten und deren verwendungen |
| PT1629007E (pt) | 2003-05-12 | 2009-05-06 | Affymax Inc | Péptidos novos que se ligam ao receptor da eritropoietina |
| US7528104B2 (en) * | 2003-05-12 | 2009-05-05 | Affymax, Inc. | Peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| US7919118B2 (en) | 2003-05-12 | 2011-04-05 | Affymax, Inc. | Spacer moiety for poly (ethylene glycol) modified peptide based compounds |
| JP2007537986A (ja) * | 2003-05-30 | 2007-12-27 | セントカー・インコーポレーテツド | トランスグルタミナーゼを用いる新規なエリトロポエチン複合体の形成 |
| US7662607B2 (en) * | 2003-07-30 | 2010-02-16 | New Century Pharmaceuticals, Inc. | Chalaropsis lysozyme protein and its method of use in anti-bacterial applications |
| WO2005014655A2 (en) | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein |
| ZA200603396B (en) * | 2003-09-29 | 2007-11-28 | Warren Pharmaceuticals Inc | Tissue protective cytokines for the treatment and prevention of sepsis and the formation of adhesions |
| WO2005035564A2 (en) | 2003-10-10 | 2005-04-21 | Xencor, Inc. | Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders |
| CN1901934B (zh) * | 2003-12-19 | 2013-09-11 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 促红细胞生成素在治疗慢性炎症性肠病中铁分布紊乱中的用途 |
| EP1548031A1 (en) * | 2003-12-22 | 2005-06-29 | Dubai Genetics FZ-LLC | Nature-identical erythropoietin |
| KR20060124656A (ko) * | 2003-12-31 | 2006-12-05 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 개선된 약물동태를 가지는 Ｆｃ-에리스로포이에틴 융합단백질 |
| JP5015608B2 (ja) * | 2004-01-21 | 2012-08-29 | ネクター セラピューティクス | プロピオン酸末端ポリマーの調製方法 |
| CN1914223B (zh) * | 2004-02-02 | 2012-02-29 | Ambrx公司 | 经修饰的人类四螺旋束多肽及其用途 |
| SG151261A1 (en) | 2004-03-11 | 2009-04-30 | Fresenius Kabi De Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination |
| US7588745B2 (en) * | 2004-04-13 | 2009-09-15 | Si Options, Llc | Silicon-containing products |
| US7253650B2 (en) | 2004-05-25 | 2007-08-07 | International Business Machines Corporation | Increase productivity at wafer test using probe retest data analysis |
| KR20070108140A (ko) * | 2004-11-11 | 2007-11-08 | 아피맥스, 인크. | 에리트로포이에틴 수용체에 결합하는 신규한 펩타이드 |
| WO2006062685A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-15 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| CA2595695A1 (en) | 2005-01-25 | 2006-08-03 | Cell Therapeutics, Inc. | Biologically active protein conjugates comprising (nn[s/t]) peptide repeats and having increased plasma half-life |
| US7714114B2 (en) * | 2005-02-16 | 2010-05-11 | Nektar Therapeutics | Conjugates of an EPO moiety and a polymer |
| US7550433B2 (en) * | 2005-06-03 | 2009-06-23 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US7919461B2 (en) | 2005-06-03 | 2011-04-05 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US8324159B2 (en) * | 2005-06-03 | 2012-12-04 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US20070072795A1 (en) * | 2005-09-28 | 2007-03-29 | Anton Haselbeck | Treatment of neurodegenerative disorders |
| PL1931704T3 (pl) * | 2005-10-04 | 2011-06-30 | Zymogenetics L L C | Wytwarzanie i oczyszczanie IL-29 |
| US8124095B2 (en) * | 2005-10-07 | 2012-02-28 | Armagen Technologies, Inc. | Fusion proteins for delivery of erythropoietin to the CNS |
| US8053569B2 (en) * | 2005-10-07 | 2011-11-08 | Armagen Technologies, Inc. | Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins |
| US8741260B2 (en) * | 2005-10-07 | 2014-06-03 | Armagen Technologies, Inc. | Fusion proteins for delivery of GDNF to the CNS |
| US20080171696A1 (en) * | 2005-10-21 | 2008-07-17 | Avigenics, Inc. | Pharmacodynamically enhanced therapeutic proteins |
| WO2007048047A1 (en) * | 2005-10-21 | 2007-04-26 | Avigenics, Inc. | Glycolated and glycosylated poultry derived therapeutic proteins |
| US8841255B2 (en) | 2005-12-20 | 2014-09-23 | Duke University | Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides |
| US20130172274A1 (en) * | 2005-12-20 | 2013-07-04 | Duke University | Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties |
| EP1988910B1 (en) | 2006-02-28 | 2017-12-06 | Kodiak Sciences Inc. | Acryloyloxyethylphosphorylcholine containing polymer conjugates and their preparation |
| WO2007108505A1 (ja) | 2006-03-22 | 2007-09-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | エリスロポエチン溶液製剤 |
| DK2054074T3 (da) * | 2006-08-04 | 2014-11-03 | Prolong Pharmaceuticals Llc | Modificeret erythropoietin |
| WO2008022349A2 (en) | 2006-08-18 | 2008-02-21 | Armagen Technologies, Inc. | Agents for blood-brain barrier delivery |
| JP2010510794A (ja) | 2006-11-28 | 2010-04-08 | ハナル ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 修飾型エリスロポエチンポリペプチド及びこの治療用用途 |
| CA2676036A1 (en) * | 2007-02-02 | 2008-08-14 | Amgen Inc. | Hepcidin, hepcidin antagonists and methods of use |
| WO2008137066A1 (en) * | 2007-05-02 | 2008-11-13 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Use of compacted nucleic acid nanoparticles in non-viral treatments of ocular diseases |
| CL2008002054A1 (es) * | 2007-07-17 | 2009-05-29 | Hoffmann La Roche | Metodo para la regeneracion de una columna de cromatografia de intercambio cationico despues de la elusion de eritropoyetina monopeguilada y metodo para obtener una eritropoyetina monopeguilada, incorporando el metodo de regeneracion de la columna de intercambio cationico. |
| JP5901877B2 (ja) * | 2007-07-27 | 2016-04-13 | アーメイゲン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドＡｒｍａｇｅｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ． | 中枢神経系のα−Ｌ−イデュロニダーゼ活性を増加させるための方法および組成物 |
| WO2009043049A2 (en) * | 2007-09-27 | 2009-04-02 | Amgen Inc. | Pharmaceutical formulations |
| ES2962777T3 (es) | 2007-11-15 | 2024-03-21 | Amgen Inc | Formulación acuosa de anticuerpos estabilizada por antioxidantes para la administración parenteral |
| US8101706B2 (en) | 2008-01-11 | 2012-01-24 | Serina Therapeutics, Inc. | Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same |
| CN101959934B (zh) | 2008-01-11 | 2012-12-12 | 塞瑞纳治疗公司 | 聚噁唑啉共聚物的多官能形式和包含它的药物组合物 |
| WO2009094551A1 (en) | 2008-01-25 | 2009-07-30 | Amgen Inc. | Ferroportin antibodies and methods of use |
| NZ586947A (en) | 2008-02-08 | 2012-11-30 | Ambrx Inc | Modified leptin polypeptides and their uses |
| TWI395593B (zh) | 2008-03-06 | 2013-05-11 | Halozyme Inc | 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制 |
| NZ601248A (en) | 2008-04-14 | 2014-06-27 | Halozyme Inc | Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions |
| EP2294087B1 (en) | 2008-05-01 | 2014-05-14 | Amgen, Inc. | Anti-hepcidin antibodies and methods of use |
| JP2011526303A (ja) | 2008-06-27 | 2011-10-06 | デューク ユニバーシティ | エラスチン様ペプチドを含む治療剤 |
| CN102232085A (zh) | 2008-09-26 | 2011-11-02 | Ambrx公司 | 修饰的动物促红细胞生成素多肽和其用途 |
| EP2349332B1 (en) | 2008-11-13 | 2019-10-23 | The General Hospital Corporation | Methods and compositions for regulating iron homeostasis by modulation bmp-6 |
| WO2010077297A1 (en) | 2008-12-09 | 2010-07-08 | Halozyme, Inc. | Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof |
| CA2748889A1 (en) | 2009-03-18 | 2010-09-23 | Armagen Technologies, Inc. | Compositions and methods for blood-brain barrier delivery of igg-decoy receptor fusion proteins |
| US9289699B2 (en) | 2009-07-30 | 2016-03-22 | Hoffmann-La Roche Inc. | Moveable chromatography column separator |
| WO2011024025A1 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | Avesthagen Limited | An erythropoietin analogue and a method thereof |
| IN2012DN03219A (ru) | 2009-09-17 | 2015-10-23 | Baxter Healthcare Sa | |
| CN102712688B (zh) * | 2009-09-23 | 2015-06-24 | 通益制药有限公司 | 重组人红细胞生成素(epo)的纯化方法、由此纯化的epo以及包含纯化的epo的药物组合物 |
| DK2485761T3 (da) | 2009-10-09 | 2019-05-06 | Armagen Inc | Fremgangsmåder og sammensætninger til øgning af iduronat-2-sulfatase-aktivitet i CNS |
| MX344382B (es) | 2009-10-23 | 2016-12-14 | Amgen Inc * | Adaptador de vial y sistema. |
| US8765432B2 (en) | 2009-12-18 | 2014-07-01 | Oligasis, Llc | Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates |
| BR112012027361A2 (pt) | 2010-04-27 | 2021-04-27 | Scil Technology Gmbh | formulação mia/cd-rap estável. |
| PT2575935E (pt) | 2010-06-07 | 2015-10-20 | Amgen Inc | Dispositivo de administração de medicamento |
| EP2595624B1 (en) | 2010-07-20 | 2018-01-31 | Halozyme, Inc. | Methods of treatment or prevention of the adverse side-effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent |
| PL2616101T3 (pl) | 2010-09-14 | 2015-01-30 | Hoffmann La Roche | Sposób oczyszczania pegylowanej erytropoetyny |
| RU2584176C2 (ru) | 2011-02-02 | 2016-05-20 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Держатель для хроматографической колонки |
| JP2014510045A (ja) | 2011-02-08 | 2014-04-24 | ハロザイム インコーポレイテッド | ヒアルロナン分解酵素の組成物および脂質製剤ならびに良性前立腺肥大症の治療のためのその使用 |
| CA2831100C (en) | 2011-03-31 | 2020-02-18 | Mark Dominis Holt | Vial adapter and system |
| CA3021845C (en) | 2011-04-20 | 2022-03-29 | Amgen Inc. | Autoinjector apparatus |
| US20130011378A1 (en) | 2011-06-17 | 2013-01-10 | Tzung-Horng Yang | Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme |
| MX357209B (es) | 2011-10-14 | 2018-06-29 | Amgen Inc | Inyector y metodo de ensamble. |
| AU2012328880B2 (en) | 2011-10-24 | 2017-02-23 | Halozyme, Inc. | Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof |
| EP4338797A3 (en) | 2011-12-02 | 2024-06-12 | Armagen, Inc. | Methods and compositions for increasing arylsulfatase a activity in the cns |
| ES2609582T3 (es) | 2011-12-30 | 2017-04-21 | Halozyme, Inc. | Variantes de polipéptidos de PH20, formulaciones y usos de los mismos |
| RS57449B1 (sr) | 2012-04-04 | 2018-09-28 | Halozyme Inc | Kombinovana terapija sa hijaluronidazom i taksanom koji ciljno deluje na tumor |
| CN102816227A (zh) * | 2012-08-30 | 2012-12-12 | 深圳赛保尔生物药业有限公司 | 回收促红细胞生成素的方法 |
| US9278124B2 (en) | 2012-10-16 | 2016-03-08 | Halozyme, Inc. | Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods |
| EP3656426B1 (en) | 2012-11-21 | 2023-05-17 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
| JP6336564B2 (ja) | 2013-03-15 | 2018-06-06 | アムゲン・インコーポレーテッド | 薬物カセット、自動注入器、および自動注入器システム |
| ES2695166T3 (es) | 2013-03-15 | 2019-01-02 | Intrinsic Lifesciences Llc | Anticuerpos antihepcidina y usos de los mismos |
| WO2014143815A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Amgen Inc. | Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system |
| AU2014228177B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-04-26 | Amgen Inc. | Body contour adaptable autoinjector device |
| ES2853748T3 (es) | 2013-03-22 | 2021-09-17 | Amgen Inc | Inyector y método de montaje |
| TW201534726A (zh) | 2013-07-03 | 2015-09-16 | Halozyme Inc | 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途 |
| JP6463361B2 (ja) | 2013-09-08 | 2019-01-30 | コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． | 第ｖｉｉｉ因子両性イオンポリマーコンジュゲート |
| MX2016005315A (es) | 2013-10-24 | 2016-08-11 | Amgen Inc | Sistema de administracion de farmacos con control sensible a la temperatura. |
| WO2015061386A1 (en) | 2013-10-24 | 2015-04-30 | Amgen Inc. | Injector and method of assembly |
| WO2015119906A1 (en) | 2014-02-05 | 2015-08-13 | Amgen Inc. | Drug delivery system with electromagnetic field generator |
| CA2945026C (en) | 2014-05-07 | 2023-10-10 | Amgen Inc. | Autoinjector with shock reducing elements |
| MX2016015854A (es) | 2014-06-03 | 2017-07-19 | Amgen Inc | Sistema de suministro de farmacos controlable y metodo de uso. |
| US9840553B2 (en) | 2014-06-28 | 2017-12-12 | Kodiak Sciences Inc. | Dual PDGF/VEGF antagonists |
| EP3186281B1 (en) | 2014-08-28 | 2019-04-10 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor |
| WO2016049036A1 (en) | 2014-09-22 | 2016-03-31 | Intrinsic Lifesciences Llc | Humanized anti-hepcidin antibodies and uses thereof |
| US10695506B2 (en) | 2014-10-14 | 2020-06-30 | Amgen Inc. | Drug injection device with visual and audio indicators |
| EA201700181A1 (ru) | 2014-10-14 | 2017-09-29 | Галозим, Инк. | Композиции аденозиндеаминазы-2 (ада-2), их варианты и способы использования |
| JP6849590B2 (ja) | 2014-10-17 | 2021-03-24 | コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． | ブチリルコリンエステラーゼ両性イオン性ポリマーコンジュゲート |
| ES2898469T3 (es) | 2014-12-19 | 2022-03-07 | Amgen Inc | Dispositivo de administración de medicamentos con sensor de proximidad |
| WO2016100055A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Amgen Inc. | Drug delivery device with live button or user interface field |
| US10538589B2 (en) | 2015-01-14 | 2020-01-21 | Armagen Inc. | Methods and compositions for increasing N-acetylglucosaminidase (NAGLU) activity in the CNS using a fusion antibody comprising an anti-human insulin receptor antibody and NAGLU |
| US10583245B2 (en) | 2015-02-17 | 2020-03-10 | Amgen Inc. | Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback |
| JP2018512184A (ja) | 2015-02-27 | 2018-05-17 | アムジエン・インコーポレーテツド | 針ガードの移動に対する抵抗力の閾値が調整可能な針ガード機構を備えた薬物送達装置 |
| WO2017039786A1 (en) | 2015-09-02 | 2017-03-09 | Amgen Inc. | Syringe assembly adapter for a syringe |
| EP3386573B1 (en) | 2015-12-09 | 2019-10-02 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling cap |
| IL290457B1 (en) | 2015-12-30 | 2024-10-01 | Kodiak Sciences Inc | Antibodies and their conjugates |
| WO2017120178A1 (en) | 2016-01-06 | 2017-07-13 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling electronics |
| DK3429663T3 (da) | 2016-03-15 | 2020-09-28 | Amgen Inc | Reduktion af sandsynligheden for glasbrud i anordninger til indgivelse af lægemidler |
| CN105820232B (zh) * | 2016-04-08 | 2019-05-17 | 昂德生物药业有限公司 | 单修饰聚乙二醇重组人促红素的制备方法及其制品和应用 |
| WO2017189089A1 (en) | 2016-04-29 | 2017-11-02 | Amgen Inc. | Drug delivery device with messaging label |
| US11389588B2 (en) | 2016-05-02 | 2022-07-19 | Amgen Inc. | Syringe adapter and guide for filling an on-body injector |
| US10988284B2 (en) | 2016-05-13 | 2021-04-27 | Amgen Inc. | Vial sleeve assembly |
| EP3458988B1 (en) | 2016-05-16 | 2023-10-18 | Amgen Inc. | Data encryption in medical devices with limited computational capability |
| EP3465124A1 (en) | 2016-06-03 | 2019-04-10 | Amgen Inc. | Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices |
| EP3478342A1 (en) | 2016-07-01 | 2019-05-08 | Amgen Inc. | Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events |
| CN109415427A (zh) | 2016-07-15 | 2019-03-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于纯化聚乙二醇化的促红细胞生成素的方法 |
| WO2018034784A1 (en) | 2016-08-17 | 2018-02-22 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement detection |
| US20200261643A1 (en) | 2016-10-25 | 2020-08-20 | Amgen Inc. | On-body injector |
| WO2018136398A1 (en) | 2017-01-17 | 2018-07-26 | Amgen Inc. | Injection devices and related methods of use and assembly |
| AU2018220538B2 (en) | 2017-02-17 | 2023-12-14 | Amgen Inc. | Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly |
| WO2018152073A1 (en) | 2017-02-17 | 2018-08-23 | Amgen Inc. | Insertion mechanism for drug delivery device |
| MX2019010544A (es) | 2017-03-06 | 2019-10-21 | Amgen Inc | Dispositivo de administracion de farmacos con caracteristica de prevencion de la activacion. |
| WO2018164829A1 (en) | 2017-03-07 | 2018-09-13 | Amgen Inc. | Needle insertion by overpressure |
| CA3052310A1 (en) | 2017-03-09 | 2018-09-13 | Amgen Inc. | Insertion mechanism for drug delivery device |
| WO2018172219A1 (en) | 2017-03-20 | 2018-09-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for in vitro glycoengineering of an erythropoiesis stimulating protein |
| KR102651078B1 (ko) | 2017-03-28 | 2024-03-22 | 암겐 인코포레이티드 | 플런저 로드 및 주사기 조립 시스템 및 방법 |
| US11590294B2 (en) | 2017-06-08 | 2023-02-28 | Amgen Inc. | Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly |
| EP3634546A1 (en) | 2017-06-08 | 2020-04-15 | Amgen Inc. | Torque driven drug delivery device |
| WO2018236619A1 (en) | 2017-06-22 | 2018-12-27 | Amgen Inc. | REDUCING THE IMPACTS / IMPACTS OF ACTIVATION OF A DEVICE |
| US10781435B2 (en) | 2017-06-22 | 2020-09-22 | Catalyst Biosciences, Inc. | Modified membrane type serine protease 1 (MTSP-1) polypeptides and methods of use |
| US11395880B2 (en) | 2017-06-23 | 2022-07-26 | Amgen Inc. | Electronic drug delivery device |
| MA49562A (fr) | 2017-07-14 | 2020-05-20 | Amgen Inc | Système d'insertion-rétractation d'aiguille présentant un système à ressort en double torsion |
| JP2020527376A (ja) | 2017-07-21 | 2020-09-10 | アムジエン・インコーポレーテツド | 薬物容器のためのガス透過性シーリング部材及び組立方法 |
| WO2019022950A1 (en) | 2017-07-25 | 2019-01-31 | Amgen Inc. | DRUG DELIVERY DEVICE WITH CONTAINER ACCESS SYSTEM AND ASSEMBLY METHOD THEREOF |
| EP4085942A1 (en) | 2017-07-25 | 2022-11-09 | Amgen Inc. | Drug delivery device with gear module and related method of assembly |
| MA49838A (fr) | 2017-08-09 | 2020-06-17 | Amgen Inc | Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre |
| US11077246B2 (en) | 2017-08-18 | 2021-08-03 | Amgen Inc. | Wearable injector with sterile adhesive patch |
| US11103636B2 (en) | 2017-08-22 | 2021-08-31 | Amgen Inc. | Needle insertion mechanism for drug delivery device |
| EP3691717B1 (en) | 2017-10-04 | 2023-02-08 | Amgen Inc. | Flow adapter for drug delivery device |
| US11813426B2 (en) | 2017-10-06 | 2023-11-14 | Amgen Inc. | Drug delivery device including seal member for needle of syringe |
| IL273323B2 (en) | 2017-10-09 | 2024-10-01 | Amgen Inc | Drug delivery device with drive assembly and related assembly method |
| EP3703778A1 (en) | 2017-11-03 | 2020-09-09 | Amgen Inc. | System and approaches for sterilizing a drug delivery device |
| AU2018358749B2 (en) | 2017-11-06 | 2024-02-29 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement and flow sensing |
| MA50569A (fr) | 2017-11-06 | 2020-09-16 | Amgen Inc | Ensembles de remplissage-finition et procédés associés |
| MA50557A (fr) | 2017-11-10 | 2020-09-16 | Amgen Inc | Pistons pour dispositifs d'administration de médicament |
| EP3710090A1 (en) | 2017-11-16 | 2020-09-23 | Amgen Inc. | Door latch mechanism for drug delivery device |
| EP3710089A1 (en) | 2017-11-16 | 2020-09-23 | Amgen Inc. | Autoinjector with stall and end point detection |
| SG11202005990RA (en) | 2017-12-29 | 2020-07-29 | Hoffmann La Roche | Process for providing pegylated protein composition |
| JP7410860B2 (ja) | 2017-12-29 | 2024-01-10 | エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー | Ｐｅｇ化タンパク質組成物を提供するための方法 |
| US20200362002A1 (en) | 2017-12-29 | 2020-11-19 | Hoffmann-La Roche Inc. | Process for providing pegylated protein composition |
| JP2021514656A (ja) | 2018-03-02 | 2021-06-17 | コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． | Ｉｌ−６抗体ならびにその融合構築物およびコンジュゲート |
| WO2019222435A1 (en) | 2018-05-16 | 2019-11-21 | Halozyme, Inc. | Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20 |
| US10835685B2 (en) | 2018-05-30 | 2020-11-17 | Amgen Inc. | Thermal spring release mechanism for a drug delivery device |
| US11083840B2 (en) | 2018-06-01 | 2021-08-10 | Amgen Inc. | Modular fluid path assemblies for drug delivery devices |
| EP3826701A1 (en) | 2018-07-24 | 2021-06-02 | Amgen Inc. | Delivery devices for administering drugs |
| MX2021000749A (es) | 2018-07-24 | 2021-03-29 | Amgen Inc | Dispositivos de suministro para administrar farmacos. |
| WO2020023220A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation |
| US12115360B2 (en) | 2018-07-24 | 2024-10-15 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with grip portion |
| US12109389B2 (en) | 2018-07-31 | 2024-10-08 | Amgen Inc. | Fluid path assembly for a drug delivery device |
| DK3613486T3 (da) * | 2018-08-24 | 2021-01-04 | Uga Biopharma Gmbh | Metode og anlæg til rengøring af epo og/eller et epo-derivat |
| EP3856284A1 (en) | 2018-09-24 | 2021-08-04 | Amgen Inc. | Interventional dosing systems and methods |
| AU2019350660B2 (en) | 2018-09-28 | 2024-09-26 | Amgen Inc. | Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device |
| AR116679A1 (es) | 2018-10-02 | 2021-06-02 | Amgen Inc | Sistemas de inyección para la administración de fármacos con transmisión de fuerza interna |
| MA53818A (fr) | 2018-10-05 | 2022-01-12 | Amgen Inc | Dispositif d'administration de médicament ayant un indicateur de dose |
| KR20210076935A (ko) | 2018-10-15 | 2021-06-24 | 암젠 인크 | 댐핑 메커니즘을 갖는 약물 전달 장치 |
| MX2021002791A (es) | 2018-10-15 | 2021-05-12 | Amgen Inc | Proceso de ensamblaje de plataforma para un dispositivo de administracion de farmacos. |
| CA3113076A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
| TWI831847B (zh) | 2018-11-01 | 2024-02-11 | 美商安進公司 | 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法 |
| WO2020091956A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
| US11613744B2 (en) | 2018-12-28 | 2023-03-28 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use |
| CA3137360A1 (en) | 2019-04-24 | 2020-10-29 | Amgen Inc. | Syringe sterilization verification assemblies and methods |
| CA3148261A1 (en) | 2019-08-23 | 2021-03-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods |
| EP4041312A4 (en) | 2019-10-10 | 2023-12-20 | Kodiak Sciences Inc. | METHOD FOR TREATING AN EYE DISORDER |
| EP4219537A1 (en) | 2020-09-22 | 2023-08-02 | Jecho Laboratories, Inc. | Glycosylation-modified erythopoietin and use thereof |
| WO2022159414A1 (en) | 2021-01-22 | 2022-07-28 | University Of Rochester | Erythropoietin for gastroinfestinal dysfunction |
| KR20240005771A (ko) | 2021-05-10 | 2024-01-12 | 치오메 바이오사이언스 가부시키가이샤 | 항체 조성물의 정제 방법 |
| EP4341161A1 (en) | 2021-05-21 | 2024-03-27 | Amgen Inc. | Method of optimizing a filling recipe for a drug container |
| WO2023209074A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods of restoring erythropoiesis in patients suffering from a sf3b1 mutant myelodysplastic syndrome by correcting coasy mis-splicing |
| WO2024094457A1 (en) | 2022-11-02 | 2024-05-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for producing glycoprotein compositions |
| CN116492448A (zh) * | 2023-04-12 | 2023-07-28 | 深圳赛保尔生物药业有限公司 | 负载peg-epo及间充质干细胞的组合物、药物及其制备方法 |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| KR850004274A (ko) * | 1983-12-13 | 1985-07-11 | 원본미기재 | 에리트로포이에틴의 제조방법 |
| DE3572982D1 (en) | 1984-03-06 | 1989-10-19 | Takeda Chemical Industries Ltd | Chemically modified lymphokine and production thereof |
| JPS6197229A (ja) | 1984-10-18 | 1986-05-15 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 安定なエリトロポエチン製剤 |
| US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US5641663A (en) * | 1985-11-06 | 1997-06-24 | Cangene Corporation | Expression system for the secretion of bioactive human granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and other heterologous proteins from steptomyces |
| US4902502A (en) | 1989-01-23 | 1990-02-20 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
| US5166322A (en) | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
| US5674534A (en) * | 1992-06-11 | 1997-10-07 | Alkermes, Inc. | Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin |
| NZ250375A (en) | 1992-12-09 | 1995-07-26 | Ortho Pharma Corp | Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives |
| US5359030A (en) * | 1993-05-10 | 1994-10-25 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| US5681811A (en) | 1993-05-10 | 1997-10-28 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| IL110669A (en) * | 1993-08-17 | 2008-11-26 | Kirin Amgen Inc | Erythropoietin analogs |
| US5643575A (en) * | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5919455A (en) * | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5932462A (en) * | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| DE741187T1 (de) * | 1995-05-05 | 1997-04-30 | Hoffmann La Roche | Rekombinante Obesitäts-(OB)-Proteine |
| US5672662A (en) | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| US6025324A (en) * | 1996-05-15 | 2000-02-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Pegylated obese (ob) protein compositions |
| TW517067B (en) * | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
| ATE255634T1 (de) * | 1997-09-01 | 2003-12-15 | Aventis Pharma Gmbh | Rekombinantes humanes erythropoietin mit vorteilhaftem glykosylierungsmuster |
| EP1135493A2 (en) | 1998-11-30 | 2001-09-26 | Eli Lilly And Company | Erythropoietic compounds |
| CZ299516B6 (cs) * | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
| PE20010288A1 (es) * | 1999-07-02 | 2001-03-07 | Hoffmann La Roche | Derivados de eritropoyetina |
| WO2001068141A2 (en) | 2000-03-17 | 2001-09-20 | Maxygen Aps | Dispersions of polypeptide conjugates |
| US6586398B1 (en) | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
| CA2408685C (en) * | 2000-05-15 | 2011-02-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate |
-
2000
- 2000-06-23 CZ CZ20002386A patent/CZ299516B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-06-27 US US09/604,938 patent/US6583272B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-27 SK SK987-2000A patent/SK286301B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 PT PT00113115T patent/PT1064951E/pt unknown
- 2000-06-28 TR TR2000/01956A patent/TR200001956A2/xx unknown
- 2000-06-28 NO NO20003372A patent/NO327043B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 DO DO2000000030A patent/DOP2000000030A/es unknown
- 2000-06-28 IL IL13705600A patent/IL137056A0/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 2000-06-28 DE DE60036053T patent/DE60036053T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 DE DE122007000064C patent/DE122007000064I2/de active Active
- 2000-06-28 AU AU42744/00A patent/AU736067B2/en not_active Expired
- 2000-06-28 CA CA002310536A patent/CA2310536C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 SI SI200030963T patent/SI1064951T1/sl unknown
- 2000-06-28 NZ NZ505454A patent/NZ505454A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 ID IDP20000533D patent/ID26447A/id unknown
- 2000-06-28 EP EP00113115A patent/EP1064951B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 EP EP07010693A patent/EP1839676A3/en not_active Withdrawn
- 2000-06-28 HR HR20000436A patent/HRP20000436B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 ES ES00113115T patent/ES2289985T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 RS YUP-407/00A patent/RS49928B/sr unknown
- 2000-06-28 PE PE2000000654A patent/PE20010297A1/es not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 DK DK00113115T patent/DK1064951T3/da active
- 2000-06-28 AT AT00113115T patent/ATE370748T1/de active
- 2000-06-29 CN CNB001078895A patent/CN1184233C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-29 CN CNB2004100036029A patent/CN1283664C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-29 AR ARP000103318A patent/AR024625A1/es active IP Right Grant
- 2000-06-29 GT GT200000109A patent/GT200000109A/es unknown
- 2000-06-29 CO CO00048963A patent/CO5190661A1/es active IP Right Grant
- 2000-06-29 GE GEAP20005430A patent/GEP20022804B/en unknown
- 2000-06-29 MY MYPI20002954A patent/MY128500A/en unknown
- 2000-06-29 PA PA20008497801A patent/PA8497801A1/es unknown
- 2000-06-29 SG SG200003658A patent/SG92717A1/en unknown
- 2000-06-30 MX MXPA00006547A patent/MXPA00006547A/es active IP Right Grant
- 2000-06-30 GB GB0400086A patent/GB2393960C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-30 BG BG104570A patent/BG65449B1/bg unknown
- 2000-06-30 HU HU0002553A patent/HU226233B1/hu active Protection Beyond IP Right Term
- 2000-06-30 SV SV2000000120A patent/SV2002000120A/es active IP Right Grant
- 2000-06-30 OA OA1200000197A patent/OA11442A/fr unknown
- 2000-06-30 GB GB0016205A patent/GB2353281B/en not_active Withdrawn - After Issue
- 2000-06-30 MA MA26014A patent/MA26746A1/fr unknown
- 2000-06-30 IS IS5554A patent/IS2492B/is unknown
- 2000-06-30 ES ES200001625A patent/ES2191511B1/es not_active Expired - Fee Related
- 2000-06-30 TW TW089112948A patent/TWI235667B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-06-30 KR KR1020000036976A patent/KR100593143B1/ko active IP Right Grant
- 2000-06-30 TN TNTNSN00147A patent/TNSN00147A1/fr unknown
- 2000-06-30 UY UY26228A patent/UY26228A1/es not_active IP Right Cessation
- 2000-06-30 DE DE10031839A patent/DE10031839A1/de not_active Ceased
- 2000-06-30 IT IT2000MI001479A patent/IT1318606B1/it active
- 2000-07-02 GC GCP2000749 patent/GC0000197A/en active
- 2000-07-03 BR BR0002276-4A patent/BR0002276A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-07-03 PL PL341187A patent/PL202758B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-07-03 FR FR0008609A patent/FR2795734B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-03 JP JP2000201525A patent/JP3727009B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-03 BR BRPI0002276A patent/BRPI0002276B8/pt unknown
- 2000-07-03 EA EA200000607A patent/EA003777B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-06-12 HK HK05100477A patent/HK1068354A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-06-12 HK HK01104020A patent/HK1033328A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-11-14 US US10/293,551 patent/US20030120045A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-12-17 JP JP2003419520A patent/JP2004155787A/ja active Pending
-
2006
- 2006-09-25 AR ARP060104175A patent/AR055650A2/es unknown
-
2007
- 2007-08-23 CY CY20071101097T patent/CY1107719T1/el unknown
- 2007-09-05 NL NL300289C patent/NL300289I9/nl unknown
- 2007-09-06 CY CY200700021C patent/CY2007021I1/el unknown
- 2007-09-12 LU LU91363C patent/LU91363I2/fr unknown
- 2007-10-19 FR FR07C0051C patent/FR07C0051I2/fr active Active
-
2009
- 2009-05-05 NO NO2009010C patent/NO2009010I2/no unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2476439C2 (ru) * | 2007-07-17 | 2013-02-27 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Очистка пегилированных полипептидов |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA003777B1 (ru) | Конъюгаты эритропоэтина, их применение, фармацевтические композиции и способы лечения | |
| KR100510624B1 (ko) | 폴리에틸렌글리콜과의 에리트로포이에틴 결합체 | |
| CA2460489C (en) | Pegylated and diglycosylated erythropoietin | |
| RU2232163C2 (ru) | Конъюгаты эритропоэтина и полиэтиленгликоля, фармацевтические композиции (варианты), способ профилактического и/или терапевтического лечения нарушений и способ получения коньюгата или композиции | |
| UA73468C2 (en) | Conjugate of erythropoietin, compositions containing it, and methods for prevention and/or treatment of diseases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ND4A | Extension of term of a eurasian patent | ||
| TK4A | Corrections in published eurasian patents | ||
| ND4A | Extension of term of a eurasian patent |
Designated state(s): BY KZ RU |
|
| ND4A | Extension of term of a eurasian patent | ||
| MK4A | Patent expired |
Designated state(s): AM AZ KG TJ TM |