JPS5896089A - 抗生物質ネオスラマイシンの精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ラマイシンＢの精製法に関する。詳しく菖えば。

本発明は、抗生物質ネオスラマイシンＡまたは／および
ネオスラマイシンＢを含肩する水溶液から、強地基訃隘
イオン交換体、特に第４級アンモニウム基を活性基とす
る強塩基性陰イオン父換体に吸着せしめ次いで中性塩水
溶液で溶離するクロマトグラフ・ｆ−によって、水溶液
の形でネオスラマイシノＡ′またはお・よひネオスラマ
イシンＢを収率よく軸“製する方法に関するものである
。

本発明に係わるネオスラマイシンＡ，ネオスラマイシン
Ｂ　１１本発明者らによって発見いれた新抗生物質で、
ストレプトミセスＭＣ　？＋６　−　Ｃ　４株（ＦＥＲ
Ｍ　−　Ｐ　２４５２又はＡＴＣＣＩ尻３１１２３　Ｊ
　　の培養により製造された。ネオスラマイシンＡ，ネ
オスラマイシンＢは弱い抗菌作用しか示さないが，諸種
の動物移植がんの発育を強く抑制し，制がん剤とＲ７て
臨床試験が行なわれている（日本特許第１００９２０６
号および第１０１９５６８号，ジャーナル・オプ・アン
チビオチフス２　９巻９　３Ｊｊ　１９７６　年および
３０巻３４０貞１９７７年，米国特許第４，０４９，４
９７　−１：）。

ネオスラマイシンＡおよびネオスラマイシンＢの構造は
、本発明者らによって次式 ８式％ 〔式中，Ｒ　が水酸基でＲ２　　が水嵩原子の場合ネオ
スラマイシンＡ・　またＲ１　　が水嵩原子でＲ２　　
が水酸基の場合ネオスラマイシンＢを示す〕と決定され
，ネオスラマイシンＡおよびネオスラマイシンＢは、無
水の状独でそれぞれ分離することができるが、含水溶液
中ではそれぞれ互に変換してネオスラマイシンＡおよび
不オスラマイシンＢの平衡混合物となる。本発明におい
ては、水溶液中において取扱われるので、以下ネオスラ
マイシンＡおよびネオスラマイシ７Ｂの平衡混合物を単
にネオスラマイシンと呼ぶこともある。

前記の日本特許第１００９２０６号および第１０１９５
６８号明細書で詳述したごとくネオスラマイシンの採取
は、それら會含有する水浴液例えは、前記ネオスラマイ
ノン生産菌の醗酵液からブタノールを使用する溶剤抽出
法および活性炭を使用する吸着法によって行なわれる。

活性炭による吸永法では。

活性炭に吸着したネオスラマイシン管一般的には。

メタノール水，ｉｏパノール水，アセトン水なとて抽出
できるが、ネオスラマイシンを吸着した活性炭Ｈ５０９
ｂアセトン水（５０容ν優の了セトンケ含も・水）″Ｔ
：抽出し，そのアセトン水抽出液を減圧下ｖＣｔ＋ｏ”
ｃ以下で濃縮し、得Ｌ：）ｔｔた鍛縮液上凍結乾燥して
ネオスラマイシンＡお工びＢｋ含ｈ−次粗粉末葡先づ得
ることから成る採取法を取ることが実用的であった。

ｎｔ製をするためには．上記の一次粗粉末を８０％エタ
ノール水（８０俤のエタノールを含む水）で抽出し，そ
の抽出液を減圧下に４　０’Ｃ以下で濃縮し．Ｓ給液を
凍結乾燥して二次粗粉末を得，ざらにこれをメタノール
にとかしてから分子篩剤例えばセファデックスＬＨ　−
　２０に通してメタノールで展開することにより、共存
する他の抗生物質。

特にシクロヘキシイミドから分離し，ネオスラマイシン
Ａ．　　Ｂを含む分画を減圧下に濃縮乾固して三次粗粉
末を得た。

この三次粗粉宋音メタノールにとかし、中性シリカグル
のカラムに通してクロロホルム−エタノールで展開する
ことにより、ネオスラマイシンＡｉ含む分画とネオスラ
マイシンＢを含む分画とを別々に取得できる。両方の分
画を別々に取得して。

夫々にネオスラマイシンＡ又はネオスラマイシンＢ′ｉ
！−更に精製するには，夫々のネオスラマイシンＡ　−
ｆ　７’ｃはＢの分画について、中性シリカグル・カツ
ムに通シてクロロホルム−エタノールで展開スるクロマ
トダラフイ手法を用い、溶出液を減圧下に４０°Ｃ以下
で濃縮して部分子＃製σれたネオスラマイシンへ１ｋＩ
Ｉ′ｉＢの粉末を得る。このようにする場合、純粋なネ
オスラマイ゛シ／ＡまたＦｉ、Ｂの粉末舎得る昔でには
、更に上８ピ粉末をクロロホルムにとかしてエチルエー
テル沈澱させ、さらにエタノール溶液にして中性シリカ
ゲル・カラムで含水酢酸エチルによる展開、溶出液の減
圧下４０°Ｃ以下での濃縮の操作を要し・た。

上記のようにネオスラマイシンＡを含む分画と。

ネオスラマイシンＢを含む分画とを別々に精製処理にか
けることもできるが、両方の分＆を混合して上記の手順
で精製すると、純粋なネオスラマイシンＡと純粋なネオ
スラマイシンＢとの混合物を得ることが可能である。

ネオスラマイシンＡ、ネオスラマイシンＢｆ：含有する
水浴液から、前述のように、エタノールで溶剤抽出する
方法ｒｃおいても、ブタノール抽出液を減圧下に４０６
Ｃ以下で濃縮してアメ状の粗動質を先づ得ることか必要
であった。それ以後は、この粗動！ｔ１［を前記の活性
炭吸揄法で得た一次相粉禾について施したと同様な多段
階の′４＊製操作で精製することを要した。

活性炭吸着法文ね、ゲタノール抽出法の何れを採るにし
ても、その精製過程中に中性シリカケ゛ル・カラム中で
クロロホルム−メタノール（又はエタノール）の如き有
機溶剤系で展開し、その使用した有機溶剤からネオスラ
マイシンを分離する操作が数回にわたって必要であり、
これに１１Ｍ圧下濃縮の操作が必らす必袈とされた。こ
のＮ製過程における中性シリカゲル・カラムからの溶出
収率が低い上に、減圧濃縮は操作が繁雑であって効率も
悪い。更に、ネオスラマイシンが常温以上の高い温度で
分解し易い不安定性をもつにも拘らず、減圧濃縮ＶＣ，
は、多少とも昇温させざる令：得ないので、分解が多少
とも起る。

しかも、共存するシクロヘキシイミドの如き副生の抗生
物餉を分離するためには、メタノールにネオスラマイシ
ンＡ、　　Ｂをとかしてセファデックス・カラムにかけ
、メタノールで展開することが必要であるが、ネオスラ
マイシンＡ、Ｂはメタノール、エタノールなどのアルカ
ノール類に接触スると、３−０−メチル体、３−０−エ
チル体などの３−〇−アルキル体に変質する性ｌｉｉを
有するので２不オスラマイシンＡ、Ｂをこれら低級アル
カノール類と接触させることは、本来は好ましくない。

このような理由がら、ネオスラマイシンＡ、　　Ｂにつ
いて当初に開発した採取、精製法は、工業的規模で集流
するのには繁雑で効率も余り良くない欠点があった。前
述した従来法では、培養Ｐ液に基つくネオスラマイシン
純品の総（ｏｖｅｒａｌｌ　）収率は３係以下に止って
いた。

そこで本発明者らは特開昭５３−３８６９５　号公報（
特願昭５１−１１０７２３号）に述べたごとく、非イオ
ン交換性の多孔雀樹脂を使用する塔りロマトダラフィー
ｔＣよって収率のみならず純度の高いＩＩＪＩ溶液をう
る方法ケ闘発した。この非イオン交換性の多孔質樹脂の
塔クロマトグラフィー法では、ネオスラマイシンの水溶
液ヲ、ゾビニルベンゼンースナレ／共■合体であるアン
バーライトＸＡＩ）　−２゜ＸＡＩ）　−４，ＸＡＤ　
−７及びダイヤイオンＩ　Ｐ系の吸漸剤樹脂の塔に通し
て吸着させ、樹脂に成層されたネオスラマイシンは、５
〜２０％のアセトンを含む水、３０〜５０チのメタノー
ル１ｒ：含む水、又はＱ、ＯＩＮ〜０．ＩＮアンモニア
水で溶出させる。

その溶出液は、これを凍結乾燥してネオスラマイシンの
粗粉末を得ることができる。この方法は。

当初の活性炭吸着法、ブタノール抽出法に比べれば、−
回の操作における精製効率は良いけれども。

純粋なネオスラマイシンＡ、８７に得るためには。

多孔質樹脂への吸着、溶出及び凍結乾燥よりなる操作を
５回以上反復しても不充分で、かつ共存しているシクロ
ヘキシイミドの痕跡は完全には除去できない。

本発明者らは、Ｆ＃製の過程でネオスラマイシ／を常温
以上の高い温度に逢わせて分解會多少とも起させる減圧
濃縮の工程を行う必要が全くなく。

しかもネオスラマイシンに接触するとこれを変質させる
メタノール、エタノールの如きブルカノール類を・全く
使用する必要もなく、そして共存のシクロヘキシイミド
を除去するための特別な工程を必要としない上に、ネオ
スラマイシンが分解する酸性の水浴液の状態にネオスラ
マイシンを保持する段階も含１ないネオスラマイシンｎ
製法を開発すべく研５じを血ねた。ネオスラマイシンの
発見当時から、ネオスラマイシンＡ、Ｂは粉末状態では
安定であるが、溶液中では不安定であって、特に１）１
１２・５の５０係エタノール水にとかした溶液中で室温
で１６時間経過すると、それらの抗菌力は夫々２５係お
よび２２％にまで減少さ扛、さらにｐＨ６・５お工びｐ
ｌｉ　８・Ｏの５０％エタノール水にとかした溶液で室
温で保存すると、Ａ物質はＡ物置とＢ物質との平衡混合
物に、またＢ物質もＡ物質とＢ物質との平衡混合物に変
化することが認められていた。また、その後の研究によ
って、ネオスラマイシン水溶液は中性以外の条件では一
般に不安定で、ｐＨ３，ｐＨ７およびｐＨｌ　２におけ
る安定性試験の結果、２５°０２日間でそれぞれ５１・
７％、８５．７ｑ６トよひ４６・４％の７ら４率を示し
、擾た５μｍ１２１３５°ｃ、２日間て線、わずかに９
・９％の残存率であることが聴められた０それ故、ｎ製
過程中にネオスラマイシンの溶液は中性に保つことが必
要であると考えられていた。

本発明者″は色々と実験を重ねたが、ネオスラマイシン
Ａ又は本オスラマイシンＢ又はこれら両者を含む水溶液
を、第４級アンモニウム基をイオン交換基として有する
強塩基性陰イオン交換体に接触させ、ネオスラマイシン
をこの強塩基樹脂に成層させ、次いで塩化ナト１７ウム
の如餘中性塩の水溶液で溶離させた時には、ネオスラマ
イシンが実質的に分解されないはかシでなく、溶出液中
に高い純度、高い濃度でネオスラマイシンが溶出される
ことを予想外にも発見した。また、驚くべきことに、共
存したシクロヘキシイミドは、この強塩基１生陰イオン
交換体と接触１−だ時に完全に分解され除去されたので
、溶出液中に検出できなかった。

従って１本発明者が知見したところによれば。

ネオスラマイシンＡ−ｉたは／およびネオスラマイシン
Ｂを含有する水溶液全強塩基性陰イオン交換体で処理し
て、それらネオスラマイシン’ｉ強塩ｉ性陰イオン交換
体に吸着上′しめ、次いでこの隘イオン交換体を中性塩
の水浴液で溶離してネオスラーｒイシンＡまたは／およ
びネオスラマイシンＢの精製されｔ（水溶液を採取する
方法を、前述した非イオン性多孔性樹脂によるクロマト
グラフィー精製法と組上わせると、ネオスラマイシンＡ
まｆＣハ／およびネオスラマイシンＢの精１ｔｉｌｆｒ
効率よく達成できる。

従って、本発明の要旨とするところは、ネオスラマイシ
ンＡまたは／およびネオスラマイシンＢｉ含櫓する水溶
液、特にネオスラマイシンＡおよびネオスラマイシンＢ
會含有する培養ｐ液を非イオンｌｙ４多孔質樹脂で処理
してこれらネオスラマイシンを該樹脂に吸ｙＦＩせしめ
、この該樹脂をアセトン＼ 含有水または希アンモニア水で溶出してネオスラマイシ
ンＡおよび／ｌｆｃはネオスラマイシンＢｉ・き有する
部分＊＊Ｗされた水溶液を溶出液として収得し７．この
水ｍ液をその１＼、あるい龜この水溶液全凍結乾燥しか
つ水に１４溶解した水溶液を強塩基性陰イオン交換体で
処理して前記抗生物貴を該陰イオン交換体に吸着せしめ
１次いでこの陰イオン交換体を中性塩の水溶液で溶離し
て、中性塩と共にネオスラマイシン人および／またはネ
オスラマイシンＢを含有する精製さ７’ｌだ水溶液を収
得し。

この水溶液を再び非イオン性多孔質樹脂で処理してネオ
スラマイシン全該樹脂に吸着せしめ、さらに該樹脂をア
セトン含有水また希アンモニア水で溶出して、脱塩され
かつネオスラマイシンＡおよび／またはネオスラマイシ
ンＢを含有する更に精８！ｉされた水溶液を溶出液とし
て収得し、この水浴液をそのま＼、あるいはこの水溶液
全凍結乾燥しかつ水に再溶解した水溶液を、前記と同様
な強塩基注鴎イオン交換体による吸着処理、中性地水浴
液による溶出、その溶出液の非イオン性多孔質樹脂によ
る吸着処理、アセトン含有水又は希アンモニア水による
該樹脂の溶出よりなる一連の操作に。

ネオスラマイシンが所望の純度に達するのに必要な回数
だけ、かけることを特徴とする。水溶液の中でネオスラ
マイシンＡまたは／およびネオスラマイシンＢｋｆｆＷ
する方法におる。

本発明の方法ＶＣおいて、先づ、ネオスラマイシンＡま
たは／およびネオスラマイシンＢ　ｋ含Ｗ’ｆる水溶液
、特に培養Ｐ液を非イオン性多孔貴樹脂で処理してネオ
スラマイシンを成層させる段階を行うこの段階を行うに
当っては、使用される非イオンｆ４の多孔質樹脂として
はノビニルベンゼンテ架橋したポリスプレン樹脂が使用
される。市販のアンバーライトＸＡＤ−２，ＸＡＤ−４
，ＸＡＤ−７（以上米国ローム・アンド・）・−ス社製
）やダイヤイオンＨＰ’−１０，ＨＰ−２０（以上三菱
化成製）などを用いることができる。

使用される多孔質樹脂の容ｔｉＦ［龜吸着に供されるネ
オスラマイシンＡまたおよびＢの水溶液の１１５〜ｌ／
２０　　ｉｌｉが適当で、ｕＩ４脂塔は一般に直径と高
さの比が５〜２０のものが使用され、好ましくは１０〜
１５である。吸着に供される水浴液はネオスラマイシン
ＡおよびＢが比較的安定ｆｔ　Ｐ８５〜７の範囲である
のが好ましい。

ネオスラマイシンＡ・　Ｂを吸旭［７だ多孔質樹脂は、
樹脂ｔの４〜１０倍谷倉の水で洗浄したのち、５〜２０
憾アセトン水溶液またはＯ・ＯＩＮ〜０・ＩＮ７ンモニ
ア水で溶出される。これらのクロマトグラフィーはネオ
スラマイシンの不安定性から１０°Ｃ以下の低温室で操
作するのが好１しく、その流速は樹脂容量当り０・５〜
１時間が適当である。

上記の溶出操作によって、ネオスラマイシンＡおよび／
ブたはネオスラマイシンＢの部分精製さオ′シた水溶液
が溶出液として収得できる□この溶出液はその１＼次の
強塩基）生陰イオン交換体処理工程にかけることができ
る。しかし、その溶出液を一旦、常法で凍結乾燥してか
ら、得られた凍結乾燥物を再び水に再溶解して得た水浴
液を次の強塩基性陰イオン交換体処理工程にかけること
もてきる０ 本発明の方法においては、前述の工程に続いて。

強塩基性陰イオン交換体による吸着処理と、中性塩水浴
液による溶離とを行う。アルカリ性条件下でネオスラマ
・１シンが非常に不安定性であることから、第４級アン
モニウム基（通常、ｐＫａ　１３以上を示す）紮活性基
とする強塩基性隘イオン交換体との接触はネオスラマイ
シンの精製にきわめて不利であると思われていた。しか
し、本発明において第４級アンモニウム基を活性基とす
る強塩基性陰イオン交換体を使用する塔クロマトグラフ
ィーによるネオスラマイシンの′ｌＩｔ製工程が、収率
よく高純度のネオスラマイシン濃厚水溶液を得るために
すぐれた成績を示したことは意例である。そして１本発
明における強塩基性陰イオン交換体の塔によるネオスラ
マイシンの吸着、溶ｉｉＩ社夾雑物の除去にきわめて効
果的である。例えば、ネオスラマイシンの培養液中に共
存するシクロヘキシイミドは、強塩基性陰イオン交換体
に接触することによりその塩基性によって完全ＶＣ分解
し２てその塔を通過するので、ネオスラマイシンから容
易に除去することができる。また、ネオスラマイシンの
着色の原因となる構造未知の夾雑物も本発明における強
塩基性陰イオン交換体の処理によって除去することがで
きた。このことに基因するらしく。

本発明の精製法を受けたネオスラマイシンｌＬｋ’ｉ＝
の白色度は着るしく高いものであった。

本発明の方法に使用される強塩基性陰イオン交換体とし
ては、　　−Ｎ（ＣＨ３）３＋を活性基とするポリスチ
レン樹脂として市販されているアンバーライトＩＲＡ　
−４００，ＩＲＡ　−４０１、ＩＲＡ　−４０２（以上
米国ローム・アンド・ハース社製）やダウエックス１゜
２１に、ｌｌ（以上米国ダウ・ケミカル社製）やダイヤ
イオンＲＡ−１ＯＡ（三菱化成製）なと。

−Ｎ（ＣＨ３）２（Ｃ２Ｉ（４０旧　を活性基とするポ
リスチレン樹脂として市販されているアンバーライトＩ
ＲＡ〜４１０、ダウエックス２．ダイヤイオンＳＡ　−
２０Ａなど、またＥＣＴＥＯＬＡセルローズとして市販
されているイオン交換セルローズなどを用いることがで
きる。これらのイオン交換体は１通常ＯＨ−型で使用さ
れる。市販品がＣｔ−型である場合には１〜４モルのア
ルカリ水溶液で処理することにより容易Ｖこ０）ｉ−型
に変換される。

樹脂塔は一般に直径と高ざの比が２〜２ｏのものが使用
される。吸着に供されるネオスラマイシン水溶液の濃度
はきわめて広い範囲（例えば＼Ｉｒｎｃｇ／　ｔｎｌ　
　ｌ　Ｗ　／　ｔｎｌ　）　Ｔ：’　有効であるか、−
ｔ　ノｐＨｉＪ　ネ、ｔスラマイシンが比較的安定なｐ
Ｈ５〜７の範囲に保つのが好ましい。

ネオスラマイシンを吸着したイオン交換体は。

その４〜１０倍容量の水で洗浄したのち、塩化ナトリウ
ム、硫酸アンモニウムなどの中性塩の水溶液によってネ
オスラマイシンを溶離することかで睡る。中性塩水溶液
の濃度は１モル以下で充分である。

かくして得られたネオスラマイシンと中性塩と會含む水
浴液（溶出液）は、再び前述の非イオン性の多孔質樹脂
によるクロマトグラフィーによって容易に脱塩され、純
度が高くなったネオスラマインンが採ホされる◎ なお５以上の操作は、ネオスラマイシンの不安定性から
１０°Ｃ以下の低温讐で行なうのが好１しく、クロマト
グラフィーの流速は樹脂容飯当り０．５−１時間が適尚
である〇 拳法では、水溶液中のネオスラマイシン含量は純粋なネ
オスラマイシ／Ａ　（１０００ｒｎｃｇ　／　Ｈｆｌ　
）　ｋ４＃！準として黄色ぶどう球菌を使用する通常の
円筒平板法によって測定できる。

本発明の方法によると、放線菌Ｍ　Ｃ９１６〜Ｃ４株の
培養Ｐ液（力価５００〜１０００　ｍｃｇ　／　ｔｎｌ
ｌ　）　　から出発して、そのＦ液を非イオン性多孔雀
樹脂で吸着処理し且つアセトン含有水で処理し、その溶
出液について、強塩基性陰イオン交換体による吸着。

中性塩水溶液による溶離、それで得られた溶出液の非イ
オン性多孔質樹脂による吸着、アセトン含有水による溶
出の第１回目のサイクルを行った後、この一連の処理を
さらにｌ〜２サイクル反復すると、実質的に純粋なネオ
スラマイシンが得られた。

しかも、その総（ｏｖｅｒａｌｌ　）収率は約２０俤に
達することができる。

本発明の方法においては、方法の殆んど全体を通してネ
オスラマイシンは水溶液中で処理され、使用される溶剤
は安価な水とアセトンにすぎないので、方法の経費が安
価である利点もおる。

実施例１ ネオスラマイシンを含有する放線菌Ｍ　Ｃ９１６−Ｃ４
株（微工研菌寄第２４５２号）の培養Ｐ液（−’１・Ｉ
　３．　７９６ｍｃｇ／ａｊ　）　ｌ　ＯＬｋダイヤイ
オンＨＰ−２０（Ｉｔ）の塔に通し、ネオスラマイシン
を吸着せしめ、水洗Ｃ７ｔ）ｆｌｋ、５ｆｂアセトン水
で溶出し、１２０ｓｊずつ分画した。ネオスラマイシン
を含有する分画１ｇ−１２０を合し、１１．７ｔの溶液
（ｐｔＩ　６−７．４０４　ｍｃｇ／　ｍｌ　）　’ｃ
得た（収率５９チ）。

この溶液５．８５ｔ１ｊｒ：アンバーライトＩＲＡ　−
４０１（ＯＨ−）　Ｉ　ＯＯ−會つめた塔（内径８０）
に通して吸着せしめ、５００＜の水で洗浄したのち、０
・３Ｍ塩化す）　ＩＪウム水溶液で溶離し、２０ｇずつ
分画した。この分画中にシクロヘキシイミドは検出これ
なかった。ネオスラマイシンを含有する分画８−１２０
を合し、２・１６ｔの溶液（ｐＨ９・６Ｉ９ｏ４ｍｃｇ
／＊）ｋ得た（収率８２係）。

この溶液を１０％硫酸でｐＨ６・１としたのち、ダイヤ
イオンＨＰ−２０（１０１００ａの塔に吸着し、水洗（
５００ｓ７）しｂ　　１５％アセトン水で溶出して脱塩
した（分画２０　ｅｌ　）　ｏ分画６−１９を集め、ア
セトンを溜去したのち、凍結乾燥してネオスラマイシン
の粗粉末（６０９ｍｃｇ／＋１９）２−１６ｒｋ得た（
収率ｂｇｃｓ）。

上記のようにして得たネオスラマイシン粗粉末（６０９
ｍｃｇ／Ｔｎ？）　２　ｔ’に水２０ａｇにとかし、ア
ンバーライトＩＲＡ−４０１（ＯＨ−）　Ｉ　ＯＯｄｋ
つめた塔（内径８闘）會通して吸着せしめ、５００ｄの
水で洗浄したのち、０．３Ｍ塩化ナトリウム水溶液で溶
離し、１８ｄずつ分画した０各分画會シリカゲルの薄層
クロマトグラフィー（展開系：酢酸エチル−水（５０：
ｌ容）、検出：ヨウ素ガス。

Ｒｆ　０．２　　付近）でしらべ、ネオスラマイシンヲ
含；’ｗ−する分画＋３−６０を集め、２Ｎ硫酸で−１
７・０としたのち、ダイヤイオンＨＰ−２０（３０ｄｇ
）の塔に吸着し、水洗（１５０ｄ）ｔ、、１０％アセト
ン水で溶出して脱塩した（分画１６ｄ）。分画２−１１
’ｉ集め、アセトンｔ−溜去したのち、凍結乾燥してネ
オスラマイシンの実質的に純品の精製粉末（９１０ｍａ
ｇ／■）０・７３９を得た。収率５５係。培養液からの
総状率１６優。

実施例２ 実施例１の中間段階と同様の方法で得られたネオスラマ
イシン粗粉末（８５０ｍｃｇ／〜）２ｆｔ水２０ｄにと
かし、アンバーライトＩＲＡ−４Ｑｌ（ＯＨ−）　Ｉ　
ＯＯ−をつめた塔（内径８謔）を通して吸着せしめ、５
００ｄの水で洗浄したのち、０・３Ｍ塩化す）　＋７ウ
ム水溶液で溶離し、１８＋Ｊ！ずつ分画した。各分画會
シリカダルの薄層クロマトグラフィー（展開系：酢酸エ
チル−水（５０：ｌ容）。

検出：ヨウ累ガス、　　Ｒｆ　０．２　　付近）でしら
べ、ネオスラマイシンを含有する分画１３〜６０會集め
、２Ｎ硫酸でｐＨ７・０としたのち、ダイヤイオンＨＰ
−２０（３０ｍＡ）の塔に吸着し、水洗（＋５０ｄ）し
、ｌｏ’１アセトン水で溶出して脱塩した（分画１６ｄ
）。分画２−１１を集め、アセトン全溜去したのち、凍
結乾燥してネオスラマイシンの純品粉末（１０００ｍｃ
ｇ／〜）０・７３ｒ會得た・収率４３勢。

実施例３ 実施例１の中間段階と同様の方法で得られたネオスラマ
イシン粗粉末（５８０ｍｃｇ／Ｉｎｇ）　２　ｆｋ水２
０ａｇにとかし、アンバーライトＩＲＡ−４Ｑｌ（ＯＨ
−）　ｌ　ＯＯｄｋつめたｑｒ（内径６醋）を通して吸
着せしめ、５００ｓｊの水で洗浄したのち、０・５Ｍ硫
酸アンモニウム水溶液で溶離し、＋８ｄずつ分画した。

各分画を実施例２で述べた薄層クロマトグラフィーでし
らべ、ネオスラマイシンを含有する分画９−９６を集め
、２Ｎ硫酸でｐＨ４７，Ｑとしたのち、ダイヤイオン）
ｉＰ−２０（３０ｍ）の塔に吸着し、水洗（１５０ｄ）
Ｌ、１０％アセトン水で溶出して脱塩し、ネオスラマイ
シンを含有する分画を集め、アセトンを溜去後、凍結乾
燥して実質的に純品のネオスラマイシンｙａ８１！粉末
（９４５ｍｃｇ／ｌｒｑ　）　Ｏ−３ｓ　ｔ　２得た。

収率２８％。

実施例４ 放ｆｆｌ＄菌Ｍ　Ｃ９１６−Ｃ４株ＣＤ培養ｆＰ液（ｐ
Ｈ７，１゜９５０ｍｃｇ／ａｇ）ｌ・Ｏｔｉ実施例１の
前半と同様に処理して得ら扛たネオスラマイシン粗粉末
（８５０ｍＱｇ／ｍｔ　）　５００　ｍｇ−２水３ｄに
とかし、ダウエックスｌ　−Ｘ　２　（ＯＨ−）　２０
　ｄ’ｉ：っめた塔（内径１３ｍａｎ　）　ｋ　ａして
吸Ｎゼしめ、１００−の水で洗浄したのち、Ｏ，１２５
Ｍ塩化ナトリウム水溶液で溶離し、８　ｄずつ分画した
。各分画全実施例２で述べた薄層クロマトグラフィーで
しらべ、ネオスラマイシンヶ含有する分画９−２３會集
め、１０係硫酸でｐ１１６．０としたのち、ダイヤイオ
ンＨＰ−２０（１５ｍｌ　）の塔に吸着し、水洗（ｌｏ
Ｏｄ）Ｌ、５０係アセトン水で溶出して脱塩した。ネオ
スラマイシン會含有する分画を集め、アセトンに榴去後
、凍結乾燥〔２て実質的に純品のネオスラマイシン精製
粉末（９００ｒｎｃｇ／’９　）　２２０ｒ”ｉｋ得た
。収率４７係。培養液からの総状率２１％。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　２オスラマイシンＡ萱たは／２よひ不万スラマイ
   シンＢ全含有する不溶液、′＃にネオスラマイシンＡお
   よび不オスラマイシンＢ　ｉｌｌ有する培養Ｐ液を非イ
   オン性多孔質樹脂で処理してこれらネ、ｔｘ５マイシン
   を該樹脂に吸着ぞしめ、この該樹脂をアセトン含有水ま
   たは希アンモニア水で溶出してネオスラマイシン人およ
   び／またはネ万スラマイシンＢｉ含有する部分積層され
   た水溶液全溶出液として収得し、この水溶液を、そのま
   ＼、あるいはこの水溶液を凍結乾燥しかつ水に再溶解し
   た水溶液を強塩基性陰イオン交換体で処理して前記抗生
   物質を該陰イオン交換体に吸着せしめ。 次いでこの陰イオン交換体全中性塩の水溶液で溶離して
   、中性塩と共にネオスラマイシンＡおよび／またはネオ
   スラマイシンＢｉ含有するＭ製された水溶液を収得し、
   この水溶液を再ひ非イオン性多孔質樹脂で処理してネオ
   スラマイシン’ｔ　該１（脂に吸着せしめ、さらに該樹
   脂を７七トン含有水また希アンモニア水で溶出して、脱
   塩されかつネオスラマイシンＡおよび／またはネオスラ
   マイシンＢを含有する更に精製された水溶液を溶出液と
   して収得し、この水溶液をそのま＼、あるいはこの水溶
   液を凍結乾燥しかつ水に再溶解した水溶液上。 前記と同様な強塩基性陰イオン交換体による吸看処理、
   中性塩水溶液による溶出、その溶出液の非イオン性多孔
   質樹脂による吸着処理、アセトン含有水又は希アンモニ
   ア水による該樹脂の溶出よりなる一連の操作に、ネオス
   ラマイシンが所望）純度に達するのに必要な回数たけ、
   かけることを特徴とする。水溶液の中でネオスラマイシ
   ンＡ−ｆたは／およびネオスラマイシンＢｔ−精製する
   方法。 ２、強塩基性隘イオン交換体が第４級アンモニウム基金
   活性基とするポリスチレン樹脂である特許請求の範囲第
   １項記載の方法◎ ８、中性塩水溶液が地化す）　ＩＪウム又は硫酸アンモ
   ニウムの水溶液である特許請求の範囲第１項記載の方法
   。 ４．非イオン性多孔質樹脂がジビニルベンゼン−スチレ
   ン共重合体である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５　了七トン含南水が５〜５０％（重量゛）のアセトン
   を含む水である特許請求の範囲第１項記載の方法。