RU2709136C1 - Nutrient medium for pseudomonas aeruginosa release - Google Patents

Nutrient medium for pseudomonas aeruginosa release Download PDF

Info

Publication number
RU2709136C1
RU2709136C1 RU2019123986A RU2019123986A RU2709136C1 RU 2709136 C1 RU2709136 C1 RU 2709136C1 RU 2019123986 A RU2019123986 A RU 2019123986A RU 2019123986 A RU2019123986 A RU 2019123986A RU 2709136 C1 RU2709136 C1 RU 2709136C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
medium
pseudomonas aeruginosa
potassium phosphate
potassium
water
Prior art date
Application number
RU2019123986A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Анатолий Прокопьевич Шепелин
Ирина Ивановна Марчихина
Ольга Вадимовна Полосенко
Любовь Петровна Шолохова
Original Assignee
Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ПМБ)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ПМБ) filed Critical Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ПМБ)
Priority to RU2019123986A priority Critical patent/RU2709136C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2709136C1 publication Critical patent/RU2709136C1/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/38Pseudomonas
    • C12R2001/385Pseudomonas aeruginosa

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: microbiology.
SUBSTANCE: invention refers to sanitary and clinical microbiology. Nutrient medium for bacteria Pseudomonas aeruginosa release contains pancreatic hydrolysate of fish flour, potassium sulphate, magnesium sulphate 7-water, monosubstituted potassium phosphate, disubstituted potassium phosphate, phenosanic acid, butylhydroxytoluene, N-cetylpyridinium chloride 1 water (CHHC), sodium carbonate, bacterial agar and distilled water with given content of components.
EFFECT: invention enables to obtain objective results of bacteriological control, reduced time of cultivation of bacteria of genus Pseudomonas.
1 cl, 3 tbl, 5 ex

Description

Изобретение относится к клинической и санитарной микробиологии и может быть использовано для обнаружения бактерий рода Pseudomonas при исследовании различного биологического материала, а также объектов окружающей среды с целью выделения бактерий рода Pseudomonas - возбудителей инфекционных заболеваний человека.The invention relates to clinical and sanitary microbiology and can be used to detect bacteria of the genus Pseudomonas in the study of various biological material, as well as environmental objects in order to isolate bacteria of the genus Pseudomonas - causative agents of human infectious diseases.

Синегнойная палочка способна вызывать различные заболевания, картина заболевания и симптоматика зависят от локализации инфекции. Характерной особенностью всех заболеваний, вызванных Pseudomonas aeruginosa, является длительное течение при хронической форме и острая форма, которая лечится так же трудно, как и хроническая, поскольку бактерия обладает высокой резистентностью к антимикробным препаратам. Так, она может стать возбудителем энцефалита, цистита, пневмонии или остеомиелита. Она способна размножаться в кишечнике, среднем ухе, абсцессах и ранах.Pseudomonas aeruginosa is capable of causing various diseases, the picture of the disease and symptoms depend on the location of the infection. A characteristic feature of all diseases caused by Pseudomonas aeruginosa is a long course with a chronic form and an acute form that can be treated as hard as chronic, since the bacterium is highly resistant to antimicrobials. So, it can become the causative agent of encephalitis, cystitis, pneumonia or osteomyelitis. It can multiply in the intestines, middle ear, abscesses and wounds.

Лабораторная диагностика синегнойной палочки не представляет трудностей, поскольку синегнойная палочка хорошо растет на различных питательных средах.Laboratory diagnosis of Pseudomonas aeruginosa is not difficult, since Pseudomonas aeruginosa grows well on various nutrient media.

Выделение на питательной среде чистых культур микроорганизмов с характерными для псевдомонад культуральными, морфологическими и тинкториальными свойствами требует постановки целого ряда подтверждающих тестов, а, следовательно, значительного времени и материальных затрат.Isolation of pure cultures of microorganisms on culture medium with cultural, morphological and tinctorial properties characteristic of pseudomonads requires a number of confirmatory tests, and, consequently, considerable time and material costs.

Быстрота получения результатов при микробиологических исследованиях в значительной степени влияет на диагностику, проведение терапевтических и противоэпидемических мероприятий.The speed of obtaining results in microbiological studies significantly affects the diagnosis, therapeutic and anti-epidemic measures.

Алгоритм бактериологического исследования инфекций синегнойной палочки соответствует той же схеме, что и при заболеваниях, вызванных энтеробактериями. При нецеленаправленном исследовании выявления псевдомонад посев производят на любую из общепринятых питательных сред: 1,5% питательный агар, 5% кровяной агар, агар Эндо, и инкубируют посевы при температуре 37°С в течение 18-24 часов.The algorithm for bacteriological research of Pseudomonas aeruginosa infections corresponds to the same scheme as for diseases caused by enterobacteria. In an unfocused study of the detection of pseudomonas, sowing is performed on any of the generally accepted culture media: 1.5% nutrient agar, 5% blood agar, Endo agar, and the crops are incubated at a temperature of 37 ° C for 18-24 hours.

Известны питательные среды для дифференциации псевдомонад, принцип действия которых основан на способности P. aeruginosa синтезировать феназиновый пигменты - пиоцианин, флуоресцеин или пиовердин, а также другие пигменты (пиорубин, пиомеланин, аоксифеназин), но, не обладающие выраженным ингибирующим эффектом в отношении микробов ассоциантов, и, следовательно, не могут быть использованы для одноэтапного выделения псевдомонад.Nutrient media for the differentiation of pseudomonas are known, the principle of which is based on the ability of P. aeruginosa to synthesize phenazine pigments - pyocyanin, fluorescein or pyoverdin, as well as other pigments (pyorubin, pyomelanin, aoxifenazine), but which do not have a pronounced inhibitory effect against microbes of associates, and, therefore, cannot be used for one-stage isolation of pseudomonads.

В частности, среда Кинг А используется для дифференциации синегнойной палочки и усиления способности продуцировать сине-зеленый пигмент пиоцианин и образования некоторыми штаммами синегнойной палочки другого пигмента - пиорубина, дающий красное окрашивание [Методические рекомендации «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», Методические рекомендации «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)»].In particular, King A medium is used to differentiate Pseudomonas aeruginosa and enhance the ability to produce a blue-green pigment Pigocyanin and the formation of some pigment strains of another pigment - pyorubin, which gives red color [Methodical recommendations "Isolation and identification of Pseudomonas aeruginosa strains from clinical material", Methodological recommendations “Detection and identification of Pseudomonas aeruginosa in environmental objects (food, water, sewage)”].

Среда Хью-Лейфсена с глюкозой применяется для определения способности псевдомонад окислять глюкозу до глюконовой кислоты только в аэробных условиях. При положительной реакции происходит порозовение среды в столбике среды в аэробных условиях, при отсутствии роста и изменения цвета среды в анаэробных условиях [Методические рекомендации «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала»,Методические рекомендации «Обнаружение и идентификация Pseudomonasaeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)»].The Hugh-Leifsen medium with glucose is used to determine the ability of pseudomonads to oxidize glucose to gluconic acid only under aerobic conditions. With a positive reaction, the medium becomes pink in the column under aerobic conditions, in the absence of growth and color change of the medium under anaerobic conditions [Methodological recommendations “Isolation and identification of Pseudomonas aeruginosa strains from clinical material”, Methodological recommendations “Detection and identification of Pseudomonasaeruginosa in environmental objects ( food products, water, sewage) ”].

Среда с ацетамидом так же является дифференциальной средой для синегнойной палочки, основанный на ее способности использовать ацетамид в качестве единственного источника азота и углерода [Методические рекомендации «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», Методические рекомендации «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)»].Medium with acetamide is also a differential medium for Pseudomonas aeruginosa, based on its ability to use acetamide as the sole source of nitrogen and carbon [Methodical recommendations “Isolation and identification of Pseudomonas aeruginosa strains from clinical material”, Methodological recommendations “Detection and identification of Pseudomonas aeruginosa in objects environment (food, water, sewage) "].

Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является питательная среда для выделения синегнойной палочки (ЦДХ агар) производства «Микроген» на основе пептона, с сульфатами калия и магния, углекислым натрием, фенозан-кислотой, цетилпиридинием хлористым и агаром, обеспечивающая рост псевдомонад и продуцирование пиоцианина (феназиновый пигмент, окрашивающий питательную среду в сине-зеленый цвет), а также ингибицию ряда сопутствующих грамположительных и грамотри цательных микроорганизмов. [ПРИКАЗ от 22 апреля 1985 года N 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений», ГФ XIV т. 1 (ОФС. 1.2.4.0002.18].Closest to the proposed nutrient medium is a nutrient medium for the isolation of Pseudomonas aeruginosa (CHA agar) manufactured by Microgen based on peptone, with potassium and magnesium sulfates, sodium carbonate, phenosan acid, cetylpyridinium chloride and agar, which ensures the growth of pseudomonads and the production of pyocyanine ( phenazine pigment, which stains the nutrient medium in a blue-green color), as well as the inhibition of a number of concomitant gram-positive and gram-negative microorganisms. [ORDER of April 22, 1985 N 535 “On the Unification of Microbiological (Bacteriological) Research Methods Used in Clinical and Diagnostic Laboratories of Treatment and Prevention Institutions”, GF XIV vol. 1 (OFS. 1.2.4.0002.18].

Figure 00000001
Figure 00000001

Биохимические характеристики коммерческой сухой питательной среды (производства «Микроген») для выделения синегнойной палочки представлены в таблице 2.Biochemical characteristics of commercial dry nutrient medium (manufactured by Microgen) for the isolation of Pseudomonas aeruginosa are presented in table 2.

Figure 00000002
Figure 00000002

Недостатками ЦПХ агара (производства «Микроген»)являются:The disadvantages of the CPC agar (manufactured by Microgen) are:

- отсутствие отечественного производства фенозана и его производных, и высокая стоимость импортного препарата;- lack of domestic production of phenosan and its derivatives, and the high cost of imported drugs;

- слабые селективные свойства в отношении сопутствующей микрофлоры (сальмонелл, протея и клебсиелл)- weak selective properties in relation to concomitant microflora (Salmonella, Proteus and Klebsiella)

- сниженная чувствительность среды в отношении псевдомонад, ввиду высокой концентрации N-цетилпиридиния хлористого.- reduced sensitivity of the medium to pseudomonas, due to the high concentration of N-cetylpyridinium chloride.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание отечественной сухой питательной среды для выделения псевдомонад, обладающей высокой чувствительностью, стабильностью результатов по ростовым, дифференцирующим и ингибирующим свойствам с целью обеспечения доступности и получения объективных результатов бактериологического контроля, сокращающих время и материальные затраты при лабораторных исследованиях.The technical result of the invention is the creation of a domestic dry nutrient medium for the isolation of pseudomonads, which has high sensitivity, stability of results in growth, differentiating and inhibitory properties in order to ensure accessibility and obtain objective results of bacteriological control, reducing time and material costs in laboratory studies.

Технический результат достигается тем, что предложена питательная среда, содержащая в качестве источника азотистого питания панкреатический гидролизат рыбной муки, сульфаты калия и магния, фосфаты калия и натрий углекислый в качестве стабилизатора рН, N-цетилпиридиний хлористый в качестве ингибитора, комплекс антиоксидантов - фенозан кислота и бутилгидрокситолуол, агар бактериологический при следующем содержании компонентов:The technical result is achieved by the fact that a nutrient medium is proposed containing pancreatic hydrolyzate of fish meal, potassium and magnesium sulfates, potassium phosphates and sodium carbonate as a pH stabilizer, N-cetylpyridinium chloride as an inhibitor, a complex of antioxidants - phenosan acid and butylhydroxytoluene, bacteriological agar with the following components:

- Панкреатический гидролизат рыбной муки- Pancreatic hydrolyzate of fish meal 20,0±3,0 г20.0 ± 3.0 g - Калий сернокислый- Potassium sulfate 7,6±0,76 г7.6 ± 0.76 g - Магний сернокислый 7-водный- Magnesium sulfate 7-water 2,4±0,24 г2.4 ± 0.24 g - Калий фосфорнокислый однозамещенный- Potassium phosphate monosubstituted 1,0±0,1 г1.0 ± 0.1 g - Калий фосфорнокислый двузамещенный- Potassium phosphate disubstituted 1,0±0,1 г1.0 ± 0.1 g - Фенозан-кислота- Phenosan acid 0,025±0,0025 г0.025 ± 0.0025 g - Бутилгидрокситолуол- Butylhydroxytoluene 0,075±0,0075 г0.075 ± 0.0075 g - N-цетилпиридиний хлористый 1 водн (ЦПХ)- N-cetylpyridinium chloride 1 aq (CPC) 0,2±0,05 г0.2 ± 0.05 g - Агар бактериологический- Bacteriological agar 9,0±2,0 г9.0 ± 2.0 g - Натрий углекислый- Sodium carbonate 0,2±0,05 г0.2 ± 0.05 g - Дистиллированная вода- Distilled water 1000 мл1000 ml

Питательная среда для выделения синегнойной палочки представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л.The nutrient medium for the isolation of Pseudomonas aeruginosa is a mixture of dry components from the calculation, g / l.

Совокупность компонентов, входящих в состав среды обеспечивает питательные потребности для роста псевдомонад с образованием пигментов. N-цетилпиридиний хлористый в предложенной концентрации 0,2 г/л (в среде прототипе 0,3 г/л) подавляет рост возможных бактерий ассоциантов и при этом не влияет на чувствительность среды и способность псевдомонад к пигментообразованию. Комплекс антиоксидантов (фенозан кислота и бутилгидрокситолуол) предотвращает окисление жирорастворимых витаминов А и Е, помогает вырабатывать больше необходимой клеткам энергии, способствует накоплению биомассы. При изучении селективных свойств среды без добавления N-цетилпиридиния хлористого и мягкой стерилизации кипячением было отмечено, что на среде с комплексом антиоксидантов в отличие от одного фенозана, полностью подавляется возможный поверхностный и глубинный пророст микрофлоры, присутствующей в сырье. Среда стерилизуется кипячением до полного расплавления агара.The combination of components that make up the environment provides nutritional requirements for the growth of pseudomonads with the formation of pigments. N-cetylpyridinium chloride in the proposed concentration of 0.2 g / l (in the prototype medium 0.3 g / l) inhibits the growth of possible bacteria of associates and does not affect the sensitivity of the medium and the ability of pseudomonads to pigmentation. A complex of antioxidants (phenosan acid and butylhydroxytoluene) prevents the oxidation of fat-soluble vitamins A and E, helps to produce more energy needed by cells, and contributes to the accumulation of biomass. When studying the selective properties of the medium without the addition of N-cetylpyridinium chloride and soft boiling sterilization, it was noted that, on a medium with a complex of antioxidants, unlike phenosan alone, the possible surface and deep germination of microflora present in the raw material is completely suppressed. The medium is sterilized by boiling until the agar is completely melted.

Проведены исследования по определению оптимума рН среды, влиянию на выделение псевдомонад фенозан-кислоты и бутилгидрокситолуола, влиянию магния сернокислого, калия сернокислого на пигментообразование, влиянию различных концентраций N-цетилпиридиния хлористого совместно с комплексом антиоксидантов на ростовые и ингибирующие свойства предлагаемой питательной среды.Studies were carried out to determine the optimum pH of the medium, the effect on the release of pseudomonas of phenosan acid and butylhydroxytoluene, the effect of magnesium sulfate, potassium sulfate on pigmentation, the effect of various concentrations of N-cetylpyridinium chloride in combination with the antioxidant complex on the growth and inhibitory properties of the proposed nutrient medium.

По результатам работ составлена пропись питательной среды для выделения синегнойной палочки и установлено количественное содержание компонентов в г. According to the results of the work, a recipe of the nutrient medium for the isolation of Pseudomonas aeruginosa was compiled and the quantitative content of components in

Отличием предлагаемой среды от прототипа является использование комплекса антиоксидантов и фосфатов калия, уменьшенная концентрация N-цетилпиридиния хлористого. Технический результат достигается также сбалансированностью компонентного состава среды в экспериментально установленных концентрациях. Доказана возможность использования панкреатического гидролизата рыбной муки (ПГРМ), в качестве белковой питательной основы. Количественное соотношение компонентов питательной среды, рН, обеспечивают сохранение хороших ростовых и ингибирующих свойств. Готовая среда сохраняет стерильность не менее 10 суток.The difference between the proposed environment from the prototype is the use of a complex of antioxidants and potassium phosphates, a reduced concentration of N-cetylpyridinium chloride. The technical result is also achieved by balancing the component composition of the medium in experimentally established concentrations. The possibility of using pancreatic hydrolyzate of fish meal (PGRM) as a protein nutrient base has been proven. The quantitative ratio of the components of the nutrient medium, pH, ensures the preservation of good growth and inhibitory properties. The finished medium remains sterile for at least 10 days.

Пример 1. Способ получения питательной среды.Example 1. A method of obtaining a nutrient medium.

Для приготовления среды берут навески следующих ингредиентов, г/л:To prepare the medium, weighed samples of the following ingredients, g / l:

- Панкреатический гидролизат рыбной муки- Pancreatic hydrolyzate of fish meal 17,017.0 - Калий сернокислый.........- Potassium sulfate ......... 6,846.84 - Магний сернокислый 7-водный.........- Magnesium sulfate 7-water ......... 2,162.16 - Калий фосфорнокислый однозамещенный......- Potassium phosphate monosubstituted ... 0,90.9 - Калий фосфорнокислый двузамещенный......- Potassium phosphate disubstituted ... 0,90.9 - Фенозан-кислота......- Phenosan acid ...... 0,02250.0225 - Бутилгидрокситолуол...- Butylhydroxytoluene ... 0,06750.0675 - N-цетилпиридиний хлористый 1 водн....- N-cetylpyridinium chloride 1 aq .... 0,150.15 - Агар бактериологический.........- Bacteriological agar ......... 7,07.0 - Натрий углекислый......- Sodium carbonate ...... 0,150.15 - Вода дистиллированная- Distilled water 1000 мл1000 ml

Навески размешивают в 1 л дистиллированной воды, стерилизуют кипячением в течение 2 мин. до полного расплавления агара.Samples are stirred in 1 liter of distilled water, sterilized by boiling for 2 minutes. until the agar is completely melted.

Используемые для контроля среды тест-штаммы микроорганизмов получены из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКГГМ-Оболенск» ФБУН ГНЦ ПМБ.The microorganism test strains used to control the environment were obtained from the State Collection of Pathogenic Microorganisms and Cell Cultures “GKGGM-Obolensk”, Federal State Budget Scientific Center, SSC PMB.

Готовят стандартную взвесь культуры каждого тест-штамма, соответствующую 10 единицам по стандартному образцу мутности ОСО 42-28-85 П, с использованием стерильного 0,9% раствора натрия хлористого. Полученные взвеси культур десятикратными разведениями (4,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида с 0,5 мл микробной взвеси) доводили до необходимых разведений: 10-6, 10-3 и 10-1 и использовали для контроля среды.Prepare a standard suspension of culture of each test strain corresponding to 10 units of a standard sample of turbidity OCO 42-28-85 P using a sterile 0.9% sodium chloride solution. The obtained suspension of cultures by tenfold dilutions (4.5 ml of 0.9% sodium chloride solution with 0.5 ml of microbial suspension) was adjusted to the required dilutions: 10 -6 , 10 -3 and 10 -1 and used to control the environment.

Посевы инкубировали при температуре (37±1)°С в течение 24-48 ч.Crops were incubated at a temperature of (37 ± 1) ° C for 24-48 hours.

Предлагаемая среда, обеспечивает рост следующих тест-штаммов при посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10-6 Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027, Pseudomonas aeruginosa АТСС 10145, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Pseudomonas aeruginosa 453, Pseudomonas aeruginosa 27/99, ингибицию при посеве по 0,1 мл микробной взвеси каждого из тест-штаммов: Escherichia coli 3912/41 (055:К59), Proteus vulgaris ИХ 19 222 из разведения 10-3, Staphylococcus aureus Wood-46 из разведения 10-1 через 48 часов инкубации посевов при температуре (37±1)°СThe proposed environment provides the growth of the following test strains when plating 0.1 ml of microbial suspension from a dilution of 10 -6 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Pseudomonas aeruginosa 453, Pseudomonas aeruginosa 453, Pseudomonas aeruginosa 453, Pseudomonas aeruginosa 453, sowing 0.1 ml of microbial suspension of each of the test strains: Escherichia coli 3912/41 (055: K59), Proteus vulgaris ИХ 19 222 from dilution 10 -3 , Staphylococcus aureus Wood-46 from dilution 10 -1 after 48 hours of incubation crops at a temperature of (37 ± 1) ° С

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3.The results of biological control are presented in table 3.

Пример 2. Среду готовят в соответствии с примером 1.Example 2. The environment is prepared in accordance with example 1.

- Панкреатический гидролизат рыбной муки...- Pancreatic hydrolyzate of fish meal ... 20,020,0 - Калий сернокислый......- Potassium sulfate ...... 7,67.6 - Магний сернокислый 7-водный......- Magnesium sulfate 7-water ...... 2,42,4 - Калий фосфорнокислый однозамещенный......- Potassium phosphate monosubstituted ... 1,01,0 - Калий фосфорнокислый двузамещенный......- Potassium phosphate disubstituted ... 1,01,0 - Фенозан-кислота...- Phenosan acid ... 0,0250,025 - Бутилгидрокситолуол.................................- Butylhydroxytoluene ................................. 0,0750,075 - N-цетилпиридиний хлористый 1 водн....- N-cetylpyridinium chloride 1 aq .... 0,20.2 - Агар бактериологический...- Bacteriological agar ... 9,09.0 - Натрий углекислый.............- Sodium carbonate ............. 0,20.2 - Вода дистиллированная- Distilled water 1000 мл1000 ml

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки по примеру 1.The results of biological control are presented in table 3 and are similar to the results of the verification in example 1.

Пример 3. Среду готовят в соответствии с примером 1.Example 3. The environment is prepared in accordance with example 1.

- Панкреатический гидролизат рыбной муки...- Pancreatic hydrolyzate of fish meal ... 23,023.0 - Калий сернокислый.........- Potassium sulfate ......... 8,368.36 - Магний сернокислый 7-водный......- Magnesium sulfate 7-water ...... 2,642.64 - Калий фосфорнокислый однозамещенный...- Potassium phosphate monosubstituted ... 1,11,1 - Калий фосфорнокислый двузамещенный...- Potassium phosphate disubstituted ... 1,11,1 - Фенозан-кислота......- Phenosan acid ...... 0,02750.0275 - Бутилгидрокситолуол...............- Butylhydroxytoluene ............... 0,08250.0825 - N-цетилпиридиний хлористый 1 водн....- N-cetylpyridinium chloride 1 aq .... 0,250.25 - Агар бактериологический......- Bacteriological agar ...... 11,011.0 - Натрий углекислый............- Sodium carbonate ............ 0,250.25 - Вода дистиллированная- Distilled water 1000 мл1000 ml

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки по примеру 1.The results of biological control are presented in table 3 and are similar to the results of the verification in example 1.

Пример 4. Среду готовят в соответствии с примером 1.Example 4. The environment is prepared in accordance with example 1.

- Панкреатический гидролизат рыбной муки...- Pancreatic hydrolyzate of fish meal ... 14,014.0 - Калий сернокислый...............- Potassium sulfate ............... 6,086.08 - Магний сернокислый 7-водный......- Magnesium sulfate 7-water ...... 1,921.92 - Калий фосфорнокислый однозамещенный...- Potassium phosphate monosubstituted ... 0,80.8 - Калий фосфорнокислый двузамещенный......- Potassium phosphate disubstituted ... 0,80.8 - Фенозан-кислота...............- Phenosan acid ............... 0,020.02 - Бутилгидрокситолуол...............- Butylhydroxytoluene ............... 0,060.06 - N-цетилпиридиний хлористый 1 водн.- N-cetylpyridinium chloride 1 aq. 0,10.1 - Агар бактериологический............- Bacteriological agar ............ 5,05,0 - Натрий углекислый....- Sodium carbonate .... 0,10.1 - Вода дистиллированная- Distilled water 1000 мл1000 ml

Нарушение количественного соотношения ингредиентов среды ведет к ухудшению ростовых свойств в отношении псевдомонад и ингибирующих свойств к микробам ассоциантам.Violation of the quantitative ratio of the ingredients of the medium leads to a deterioration in growth properties in relation to pseudomonas and inhibitory properties to microbes associates.

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3.The results of biological control are presented in table 3.

Пример 5. Среду готовят в соответствии с примером 1.Example 5. The environment is prepared in accordance with example 1.

- Панкреатический гидролизат рыбной муки......- Pancreatic hydrolyzate of fish meal ...... 26,026.0 - Калий сернокислый...............- Potassium sulfate ............... 9,129.12 - Магний сернокислый 7-водный.........- Magnesium sulfate 7-water ......... 2,882.88 - Калий фосфорнокислый однозамещенный...- Potassium phosphate monosubstituted ... 1,21,2 - Калий фосфорнокислый двузамещенный......- Potassium phosphate disubstituted ... 1,21,2 - Фенозан-кислота............- Phenosan acid ............ 0,030,03 - Бутилгидрокситолуол............- Butylhydroxytoluene ............ 0,090.09 - N-цетилпиридиний хлористый 1 водн....- N-cetylpyridinium chloride 1 aq .... 0,30.3 - Агар бактериологический.........- Bacteriological agar ......... 13,013.0 - Натрий углекислый............- Sodium carbonate ............ 0,30.3 - Вода дистиллированная- Distilled water 1000 мл1000 ml

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и показывают ухудшение ростовых свойств среды для выделения псевдомонад.The results of biological control are presented in table 3 and show a deterioration in the growth properties of the medium for the isolation of pseudomonads.

Из таблиц видно, что предлагаемая питательная среда в соответствии с примерами 1, 2, 3 обладает высокой чувствительностью, стабильностью ростовых свойств и пигментообразования в отношении псевдомонад, подавляет рост сопутствующих микроорганизмов. Изменение количественного соотношения компонентов среды ведет к нарушению биологических показателей качества предлагаемой селективной среды для выделения псевдомонад.The tables show that the proposed nutrient medium in accordance with examples 1, 2, 3 has high sensitivity, stability of growth properties and pigmentation against pseudomonas, inhibits the growth of concomitant microorganisms. A change in the quantitative ratio of the components of the medium leads to a violation of biological quality indicators of the proposed selective medium for the isolation of pseudomonads.

Так, в случае приготовления среды в соответствии с примером 4 наблюдается увеличение диаметра колоний контрольных тест-штаммов псевдомонад, колонии приобретают R -форму, а также наблюдается роение протея. В случае приготовления среды в соответствии с примером 5 - снижается чувствительность среды в отношении штамма Pseudomonasa eruginosa АТСС 9027 (NCTC 12924), уменьшается размер колоний.So, in the case of the preparation of the medium in accordance with example 4, an increase in the diameter of the colonies of the control test strains of pseudomonas is observed, the colonies acquire the R-form, and a swarm of the proteus is observed. In the case of preparation of the medium in accordance with example 5, the sensitivity of the medium with respect to the strain Pseudomonasa eruginosa ATCC 9027 (NCTC 12924) decreases, the size of the colonies decreases.

Таким образом, по сравнению со средой прототипом предлагаемая питательная среда является отечественной, конкурентоспособной средой для селективного выделения и дифференциации псевдомонад, обладает высокой чувствительностью и пигментообразованием, обеспечивает ингибицию сопутствующей микрофлорыThus, in comparison with the prototype medium, the proposed nutrient medium is a domestic, competitive medium for the selective isolation and differentiation of pseudomonads, has high sensitivity and pigmentation, and provides inhibition of concomitant microflora

Figure 00000003
Figure 00000003

Figure 00000004
Figure 00000004

Figure 00000005
Figure 00000005

Figure 00000006
Figure 00000006

Claims (7)

Питательная среда для выделения бактерий Pseudomonas aeruginosa, содержащая питательную основу, сернокислые магний и калий, N-цетилпиридиний хлористый, фенозан-кислоту, натрий углекислый и агар бактериологический, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы она содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, дополнительно содержит бутилгидрокситолуол для повышения селективности и усиления чувствительности среды в отношении псевдомонад, в качестве стабилизаторов рН среды - калий фосфорнокислый однозамещенный и калий фосфорнокислый двузамещенный при следующем содержании компонентов:    A nutrient medium for the isolation of bacteria Pseudomonas aeruginosa, containing a nutrient base, magnesium sulfate and potassium, N-cetylpyridinium chloride, phenosan acid, sodium carbonate and agar bacteriological, characterized in that it contains pancreatic hydrolyzate of fish meal as a protein base, additionally contains butyltigol to increase the selectivity and enhance the sensitivity of the medium with respect to pseudomonads, potassium phosphate monosubstituted and potassium phosphate dviza are used as stabilizers of the pH of the medium substituted with the following components: панкреатический гидролизат рыбной мукиpancreatic hydrolyzate of fish meal 20,0±3,0 г                  20.0 ± 3.0 g калий сернокислыйpotassium sulfate 7,6±0,76 г                                                      7.6 ± 0.76 g магний сернокислый 7-водныйmagnesium sulfate 7-water 2,4±0,24 г                                          2.4 ± 0.24 g
калий фосфорнокислый однозамещенный 1,0±0,1 гmonosubstituted potassium phosphate 1.0 ± 0.1 g калий фосфорнокислый двузамещенный 1,0±0,1 гpotassium phosphate disubstituted 1.0 ± 0.1 g фенозан-кислотаphenosan acid 0,025±0,0025 г                                                                   0.025 ± 0.0025 g бутилгидрокситолуолbutylhydroxytoluene 0,075±0,0075 г                                                        0.075 ± 0.0075 g
N-цетилпиридиний хлористый 1 водный 0,2±0,05 гN-cetylpyridinium chloride 1 aqueous 0.2 ± 0.05 g агар бактериологическийbacteriological agar 9,0±2,0 г                                                         9.0 ± 2.0 g Натрий углекислыйSodium carbonate 0,2±0,05 г                                                        0.2 ± 0.05 g вода дистиллированнаяdistilled water 1000 мл.                                                        1000 ml.
RU2019123986A 2019-07-30 2019-07-30 Nutrient medium for pseudomonas aeruginosa release RU2709136C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019123986A RU2709136C1 (en) 2019-07-30 2019-07-30 Nutrient medium for pseudomonas aeruginosa release

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019123986A RU2709136C1 (en) 2019-07-30 2019-07-30 Nutrient medium for pseudomonas aeruginosa release

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2709136C1 true RU2709136C1 (en) 2019-12-16

Family

ID=69006571

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019123986A RU2709136C1 (en) 2019-07-30 2019-07-30 Nutrient medium for pseudomonas aeruginosa release

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2709136C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2827845C1 (en) * 2024-03-26 2024-10-02 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Elective nutrient medium for pseudomonas aeruginosa recovery

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2076529C1 (en) * 1994-02-28 1997-03-27 Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии NUTRIENT ENVIRONMENT FOR ISSUING PSEUDOMONAD
RU2530549C1 (en) * 2013-05-23 2014-10-10 Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) Dry selective nutrient medium for isolation of pseudomonades
RU2658435C1 (en) * 2017-09-12 2018-06-21 Евгений Петрович Сиволодский Method of isolation and identification of pseudomonas aeruginosa bacteria

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2076529C1 (en) * 1994-02-28 1997-03-27 Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии NUTRIENT ENVIRONMENT FOR ISSUING PSEUDOMONAD
RU2530549C1 (en) * 2013-05-23 2014-10-10 Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) Dry selective nutrient medium for isolation of pseudomonades
RU2658435C1 (en) * 2017-09-12 2018-06-21 Евгений Петрович Сиволодский Method of isolation and identification of pseudomonas aeruginosa bacteria

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ШЕПЕЛИН А.П., СЕРГЕЕВА А.Б., ПОЛОСЕНКО О.В. Определение специфической активности питательных сред для Pseudomonas aeruginosa, Бактериология, 2017, т. 2, N 1, с. 54-60. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2827845C1 (en) * 2024-03-26 2024-10-02 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Elective nutrient medium for pseudomonas aeruginosa recovery

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Merlino et al. Evaluation of CHROMagar Orientation for differentiation and presumptive identification of gram-negative bacilli and Enterococcus species
Acar et al. Human infections caused by thiamine-or menadione-requiring Staphylococcus aureus
JP2831474B2 (en) Salmonella identification method and culture medium
Yassin et al. Incidence and resistotyping profiles of Bacillus subtilis isolated from Azadi Teaching Hospital in Duhok City, Iraq
RU2709136C1 (en) Nutrient medium for pseudomonas aeruginosa release
AL-Rubaye et al. Isolation and Diagnosis of Multi Drug Resistance Pseudomonas Aeruginosa from Wound and Burnpatients in Baghdad City
Nader et al. Biofilm formation and detection of pslÁ gene in multidrug resistant Pseudomonas aeruginosa isolated from Thi-Qar, Iraq
CA2556172C (en) Selective growth medium for listeria spp
Zuberi et al. Detection of biofilm forming ability of bacterial isolates from contact lenses and their accessories
RU2710160C1 (en) Nutrient medium for extracting pseudomonas aeruginosa from water bodies
RU2715329C1 (en) Nutrient medium for separation and identification of non-fermenting bacteria
RU2827840C1 (en) Elective-differential nutrient medium for klebsiella species recovery
RU2812423C1 (en) Dry differential selective nutrient medium for isolation of shigella and salmonella (hectoene entero-agar)
RU2827845C1 (en) Elective nutrient medium for pseudomonas aeruginosa recovery
Deneva et al. Analysis of the species composition of microorganisms in dogs with otomycosis
RU2266956C2 (en) Broth for brucelle isolation
RU2792438C1 (en) Selective nutrient medium with mannitol, bile and polymyxin to detect bacteria of the genera proteus, morganella, providencia, dry
RU2823029C1 (en) Method for increasing antimicrobial activity of cell-free supernatant bifidobacterium bifidum 791 with respect to klebsiella pneumoniae and escherichia coli
Khamees et al. The role of Lactic acid bacteria in combination with conventional antibiotics against bacterial species isolated from genital tract of cattle
Okorie et al. Assessment of Antibacterial Activity of Exopolysaccharide Produced from Pseudomonas aeruginosa strain S16 on Environmental and Clinical Bacteria
RU2510416C1 (en) Nutritive medium for extraction of lactobacteria
Frances et al. Antimicrobial efficiency of commonly used disinfectants against Escherichia coli and Staphylococcus aureus
Ali et al. Susceptibility of oral bacteria to antimicrobial agents and virulence factors
Shilpa et al. Characterisation and antimicrobial resistance of sepsis pathogens in neonates.
Hamady et al. The study on ability of Escherichia coli isolated from different clinical cases to biofilm formation and detection of csgD gene responsible for produce Curli (Fimbriae).