RU2543716C2

RU2543716C2 - Диамидные соединения, обладающие активностью антагониста мускаринового рецептора и активностью агониста в2 адренергического рецептора

Info

Publication number: RU2543716C2
Application number: RU2011147374/04A
Authority: RU
Inventors: Адам ХЬЮЗ; Дэниел БИУН; Янь Чэнь; Мелисса Флери; Джон Р. ДЖЕКОБСЕН; Эрик Л. СТЭНДЖЛЭНД; Ричард Д. УИЛСОН; Роуз ЕН
Original assignee: Тереванс Рэспирэйтори Кампани Эл Эл Си
Priority date: 2009-04-23
Filing date: 2010-04-16
Publication date: 2015-03-10
Also published as: EP2421849B1; US9682957B2; JP5965440B2; AU2010239522B2; US9394275B2; JP5671006B2; US20130137665A1; DK2421849T3; SG175330A1; US20140323733A1; US10590107B2; EP2421849A1; BRPI1014877A2; US20170096412A1; ES2635358T3; TR201903556T4; US20200165223A1; US20210024493A1; US20130331364A1; HRP20130468T1

Abstract

Изобретение относится к 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-иловому эфиру бифенил-2-илкарбаминовой кислоты или к его фармацевтически приемлемой соли. Также изобретение относится к фармацевтической композиции на основе указанного соединения, способу и промежуточному соединению для получения указанного соединения. Технический результат: получено новое гетероциклическое соединение, полезное при лечении легочного расстройства, в том числе при хроническом обструктивном заболевании легких или астме. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 табл., 170 пр.

Description

Уровень техники

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к новым диамидным соединениям, обладающим активностью антагониста мускаринового рецептора и агониста β₂ адренергического рецептора. Также изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, способам и промежуточным соединениям при получении таких соединений, и способам применения таких соединений в качестве бронходилатирующих средств для лечения легочных расстройств.

Существующий уровень техники

Легочные расстройства, такие как хроническое обструктивное заболевание легких (COPD) и астма, обычно лечат с помощью бронхолитических средств. См., например, Ziedalski et al., Advances in the Management of Chronic Obstructive Pulmonary Disease, Expert Opin. Pharmacother., (2003) 4(7), 1063-1082; Tashkin et al., The Role of Long-Acting Bronchodilators in the Management of Stable COPD, Chest, 2004: 125; 249-259; и Donohue, Therapeutic Responses in Asthma and COPD: Bronchodilators, Chest, 2004:126; 125-137. Такие бронхолитические средства обычно вводят путем ингаляции, используя портативный ингалятор.

Обычно используемые бронходилатирующие средства характеризуются тем, что обладают активностью антагониста мускаринового рецептора (то есть антихолинергические средства) или активностью агониста β₂ адренергического рецептора (адренорецептора). Недавно сообщалось о соединениях, обладающих активностями как антагониста мускаринового рецептора, так и агониста β₂ адренергического рецептора (MABA) в одной и той же молекуле. Например, патент США № 7141671, опубликованный 28 ноября 2006 г., описывает бифенильные соединения, обладающие активностью и антагониста мускаринового рецептора, и агониста β₂ адренергического рецептора.

MABA соединения, обладающие двойным действием, как ожидают, будут особенно полезны при лечении легочных расстройств, поскольку такие соединения могут быть получены и использованы в виде одного терапевтического средства, однако, при едином применении они обеспечивают бронходилатацию двумя различными и, возможно, взаимно усиливающими, способами действия. Кроме того, у MABA соединений есть возможность объединения с противовоспалительным средством, таким как кортикостероид, вводимым путем ингаляции (ICS), то есть обеспечить тройную терапию в одном ингаляторе, используя только два терапевтических средства (MABA + ICS).

Таким образом, существует потребность в новых MABA соединениях. В частности, существует потребность в новых MABA соединениях, которые высоко эффективны в качестве и антагониста мускаринового рецептора, и агониста β₂ адренергического рецептора. Кроме того, MABA соединения, имеющие длительную продолжительность действия, то есть соединения, которые обеспечивают значительную бронходилатацию в течение по крайней мере приблизительно 24 часа после проведения ингаляции, могут быть особенно полезными при лечении некоторых легочных расстройств, при которых желательно ежедневное введение бронходилатирующего средства.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к новым диамидным соединениям, обладающим активностью и антагониста мускаринового рецептора, и агониста β₂ адренергического рецептора. Такие соединения вызывают бронходилатацию при введении млекопитающему путем ингаляции. Было установлено, что, в некоторых случаях соединения по настоящему изобретению обладают длительной продолжительностью действия, то есть вызывают бронходилатацию в течение по крайней мере около 24 часов после введения. Соответственно, соединения по настоящему изобретению, как ожидают, будут полезны и эффективны в качестве бронходилатирующих средств при лечении легочных расстройств.

В одном аспекте, настоящее изобретение относится к соединению формулы I:

где

Y представляет собой группу формулы (a):

и Y присоединен в 3- или 4-положении фениленового кольца относительно группы -CH₂-(CR⁵R⁶)_e-;

X выбран из -C(O)NH- и -NHC(O)-;

Ar¹ выбран из фен-1,3-илена и фен-1,4-илена, где группа фенилена незамещена или замещена 1-3 заместителями, независимо выбранными из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил) и галогена;

каждый R¹ независимо выбран из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил), гидроксила и галогена;

каждый R² независимо выбран из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил) и галогена;

каждый R³ независимо выбран из C_1-3 алкила; или две R³ группы связаны с образованием C_1-3 алкилена, C_2-3 алкенилена или оксиран-2,3-диила;

каждый R⁴ независимо выбран из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил) и галогена;

R⁵ выбран из водорода, метила и этила;

R⁶ выбран из водорода, метила и этила;

R^a выбран из C_1-6 алкила;

a равно 0, 1, 2 или 3;

b равно 0, 1, 2 или 3;

c равно 0, 1, 2, 3 или 4;

d равно 0, 1, 2 или 3;

e равно 0 или 1;

n равно 0 или 1;

p равно 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6; при условии, что когда n равно 0, p равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6;

q равно 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6;

или его фармацевтически приемлемой соли.

Используемая в настоящем документе далее фраза “соединение формулы I” обозначает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, то есть эта фраза обозначает соединение формулы I в виде свободного основания или в виде фармацевтически приемлемой соли, если не указано иное.

В другом аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей (a) соединение формулы I; (b) фармацевтически приемлемый носитель. Этот аспект изобретения включает, например, фармацевтические композиции, подходящие для введения путем ингаляции.

В еще одном аспекте, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей (a) соединение формулы I, и (b) стероидное противовоспалительное средство (например, кортикостероид). Термин “стероидное противовоспалительное средство”, используемый в настоящем документе, включает фармацевтически приемлемые соли и/или сольваты таких средств, если не указано иное. Также настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей (a) соединение формулы I; (b) стероидное противовоспалительное средство; и (c) фармацевтически приемлемый носитель. Эти аспекты изобретения включают, например, композиции, подходящие для введения путем ингаляции. В конкретном варианте осуществления, стероидным противовоспалительным средством является кортикостероид (например, глюкокортикоид), такой как пропионат флутиказона или его сольват; или фуроат флутиказона или его сольват.

В другом варианте осуществления, настоящее изобретение относится к способу лечения легочного расстройства у пациента, включающему введение соединения формулы I пациенту. Этот аспект изобретения включает, например, лечение хронического обструктивного заболевания легких или астмы. Также включены способы, в которых стероидное противовоспалительное средство вводят одновременно или последовательно с соединением формулы I при лечении легочного расстройства.

В другом аспекте, настоящее изобретение относится к способу вызывания бронходилатации у млекопитающего, включающему введение вызывающего бронходилатацию количества соединения формулы I млекопитающему. Этот аспект включает, например, вызывание бронходилатации у человека.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу вызывания антагонизма к мускариновому рецептору и агонизма к β₂ адренергическому рецептору в биологической системе или образце, содержащем мускариновый рецептор и β₂ адренергический рецептор, способу, включающему обработку биологической системы или образца соединением формулы I. Этот аспект включает как in vivo, так и in vitro способы.

Также настоящее изобретение относится к получению и к новым промежуточным соединениям при получении соединения формулы I. В одном из таких вариантов осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы 3a :

или его соли, где R^x и R^y независимо выбраны из C _1-4 алкила, фенила и -C _1-4 алкил(фенил); и R^z выбран из C_1-4 алкила, фенила, -C_1-4 алкил(фенил) и -O-(C_1-4 алкил).

В еще другом из своих аспектов способа, настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы I, способу, включающему удаление защитных групп у соединения формулы 3a с получением соединения формулы I.

Другие аспекты и варианты осуществления настоящего изобретения описаны далее.

Подробное описание изобретения

В одном из своих аспектов, настоящее изобретение относится к соединениям формулы I. Такие соединения содержат один или несколько хиральных центров, и, соответственно, такие соединения (и промежуточные соединения для их получения) могут находиться в виде рацемических смесей; чистых стереоизомеров (то есть энантиомеров или диастереомеров); стереоизомер-обогащенных смесей и тому подобное. Описанные или указанные в настоящем документе хиральные соединения без определенной стереохимии хирального центра включают любой или всевозможные стереоизомерные варианты неопределенного стереоцентра, если не указано иное. Описание или обозначение конкретного стереоизомера подразумевает, что указанный стереоцентр имеет определенную стереохимию, исходя из предположения, что может также присутствовать незначительное количество других стереоизомеров, если не указано иное, при условии, что эффективность описанных или указанных соединений не уменьшается с присутствием другого стереоизомера.

Соединения формулы I также содержат несколько основных групп (например, аминогрупп) и, соответственно, такие соединения могут быть в виде свободного основания или в виде различных форм солей, например, в виде монопротонированной соли или в виде дипротонированной соли или их смесей. Все такие формы включены в объем настоящего изобретения, если не указано иное.

Настоящее изобретение также включает изотопно-меченные соединения формулы I, то есть соединения формулы I, где атом был заменен на атом или обогащен атомом, имеющим такой же атомный номер, но атомная масса которого отличается от атомной массы, преобладающей в природе. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединение формулы I, включают, но ими не ограничиваются, ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸O, ³⁵S, ³⁶Cl и ¹⁸F. Особый интерес представляют соединения формулы I, обогащенные тритием или углеродом-14, соединения, которые могут быть использованы, например, в исследованиях распределения лекарственного препарата в тканях. Также особый интерес представляют соединения формулы I, обогащенные дейтерием, особенно на участке метаболизма, соединения, которые, как ожидают, будут иметь большую метаболическую стабильность. Также особый интерес представляют соединения формулы I, обогащенные позитронно-активными изотопами, такими как ¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O и ¹³N, соединения, которые могут быть использованы, например, в исследованиях с применением позиционно-эмиссионной томографии (PET).

Кроме того, где применимо, все цис-транс или E/Z изомеры (геометрические изомеры), таутомерные формы и топоизомерные формы соединений по изобретению включены в объем настоящего изобретения, если не определено иное.

Описанные в настоящем документе соединения обычно называли, используя функцию AutoNom коммерчески доступного программного обеспечения MDL® ISIS/Draw (Symyx, Santa Clara, Calif.).

Варианты осуществления

Следующие заместители и значения предназначены для представления характерных примеров различных аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения. Эти характерные значения способствуют определению и иллюстрации таких аспектов и вариантов осуществления и не исключают других вариантов осуществления или не ограничивают объем настоящего изобретения. При этом утверждение, что конкретное значение или заместитель является предпочтительным, никоим образом не исключает другие значения или заместители по настоящему изобретению, если не указано иное.

В одном варианте осуществления, n равно 0, и Ar¹ присутствует. В другом варианте осуществления, n равно 1, и Ar¹ присутствует.

В случае, когда он присутствует, в одном варианте осуществления, Ar¹ представляет собой незамещенный фен-1,3-илен. В другом варианте осуществления, Ar¹ представляет собой фен-1,3-илен, замещенный 1-3 заместителями, независимо выбранными из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил) и галогена. В другом варианте осуществления, Ar¹ представляет собой фен-1,3-илен, замещенный 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из метила, этила, метокси, фтора или хлора. Характерные примеры Ar¹ включают, но ими не ограничиваются, фен-1,3-илен, 2-метилфен-1,3-илен, 4-метилфен-1,3-илен, 5-метилфен-1,3-илен, 6-ометилфен-1,3-илен, 2-метоксифен-1,3-илен, 4-метоксифен-1,3-илен, 5-метоксифен-1,3-илен, 6-ометоксифен-1,3-илен, 2-фторфен-1,3-илен, 4-фторфен-1,3-илен, 5-фторфен-1,3-илен, 6-фторфен-1,3-илен, 2-хлорфен-1,3-илен, 4-хлорфен-1,3-илен, 5-хлорфен-1,3-илен, 6-хлорфен-1,3-илен, 2,4-диметилфен-1,3-илен, 2,5-диметилфен-1,3-илен, 2,6-диметилфен-1,3-илен, 4,6-диметилфен-1,3-илен, 2-хлор-5-метоксифен-1,3-илен и 5-хлор-2-метоксифен-1,3-илен. В конкретном варианте осуществления, Ar¹ представляет собой фен-1,3-илен или 6-метилфен-1,3-илен.

В другом варианте осуществления, Ar¹ представляет собой незамещенный фен-1,4-илен. В еще одном варианте осуществления, Ar¹ представляет собой фен-1,4-илен, замещенный 1-3 заместителями, независимо выбранными из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил) и галогена. В другом варианте осуществления, Ar¹ представляет собой фен-1,4-илен, замещенный 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из метила, этила, метокси, фтора или хлора. Характерные примеры Ar¹ включают, но ими не ограничиваются, фен-1,4-илен, 2-метилфен-1,4-илен, 3-метилфен-1,4-илен, 5-метилфен-1,4-илен, 6-метилфен-1,4-илен, 2-метоксифен-1,4-илен, 3-метоксифен-1,4-илен, 5-метоксифен-1,4-илен, 6-метоксифен-1,4-илен, 2-фторфен-1,4-илен, 3-фторфен-1,4-илен, 5-фторфен-1,4-илен, 6-фторфен-1,4-илен, 2-хлорфен-1,4-илен, 3-хлорфен-1,4-илен, 5-хлорфен-1,4-илен, 6-хлорфен-1,4-илен, 2,3-диметилфен-1,4-илен, 2,5-диметилфен-1,4-илен, 2,6-диметилфен-1,4-илен, 3,5-диметилфен-1,4-илен, 2-хлор-5-метоксифен-1,4-илен и 5-хлор-2-метоксифен-1,4-илен.

В конкретном варианте осуществления, Ar¹ представляет собой фен-1,3-илен, фен-1,4-илен или 6-метилфен-1,3-илен.

В отдельных вариантах осуществления, p равно 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6; при условии, что p не может быть равно 0, когда n равно 0. Кроме того, в одном варианте осуществления, когда n равен 0 и X представляет собой -NHC(O)-, тогда p обычно не равен 1. Характерные -(CH₂)_p- группы включают -CH₂-, -(CH₂)₂-, -(CH₂)₃-, -(CH₂)₄-, -(CH₂)₅- и -(CH₂)₆-. В конкретном варианте осуществления, p равен 0, 1, 2, 3 или 4.

В конкретных вариантах осуществления, q равен 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6. Характерные -(CH₂)_q - группы включают -CH₂-, -(CH₂)₂-, -(CH₂)₃-, -(CH₂)₄-, -(CH₂)₅- и -(CH₂)₆ -. В конкретном варианте осуществления, q равен 0, 1 или 2.

В одном варианте осуществления, X представляет собой -C(O)NH-. В другом варианте осуществления, X представляет собой -NHC(O)-.

В конкретном варианте осуществления, Y образует группу формулы: -(CH₂)_p -X-(CH₂)_q-, где X, p и q являются такими, как определено в настоящем документе. Характерные примеры включают:

-(CH₂)_p-C(O)NH-(CH₂)_q-; и

-(CH₂)_p-NHC(O)-(CH₂)_q-.

В другом конкретном варианте осуществления, Y образует группу формулы: -(CH₂)_p-X-, где X и p являются такими, как определено в настоящем документе. Характерные примеры включают:

-(CH₂)_p-C(O)NH-; и

-(CH₂)_p-NHC(O)-.

В другом конкретном варианте осуществления, Y образует группу формулы: -Ar¹-(CH₂)_p-X-(CH₂)_q-, где Ar¹, X, p и q являются такими, как определено в настоящем документе. Характерные примеры включают:

-(фен-1,3-илен)-(CH₂)_p -C(O)NH-(CH₂)_q-;

-(фен-1,3-илен)-(CH₂)_p-NHC(O)-(CH₂)_q-;

-(фен-1,4-илен)-(CH₂)_p-C(O)NH-(CH₂)_q-; и

-(фен-1,4-илен)-(CH₂)_p-NHC(O)-(CH₂)_q-;

где группа фен-1,3-илен или фен-1,4-илен является незамещенной или замещенной, как определено в настоящем документе.

В другом конкретном варианте осуществления, Y образует группу формулы: -Ar¹-(CH₂)_p-X-, где Ar¹, X и p являются такими, как определено в настоящем документе. Характерные примеры включают:

-(фен-1,3-илен)-(CH₂)_p-C(O)NH-;

-(фен-1,3-илен)-(CH₂)_p-NHC(O)-;

-(фен-1,4-илен)-(CH₂)_p-C(O)NH-; и

-(фен-1,4-илен)-(CH₂)_p-NHC(O)-;

В другом конкретном варианте осуществления, Y образует группу формулы: -Ar¹-X-(CH₂)_q-, где Ar¹, X и q являются такими, как определено в настоящем документе. Характерные примеры включают:

-(фен-1,3-илен)-C(O)NH-(CH₂)_q-;

-(фен-1,3-илен)-NHC(O)-(CH₂)_q-;

-(фен-1,4-илен)-C(O)NH-(CH₂)_q-; и

-(фен-1,4-илен)-NHC(O)-(CH₂)_q-;

В другом конкретном варианте осуществления, Y образует группу формулы: -Ar¹-X-, где Ar¹ и X являются такими, как определено в настоящем документе. Характерные примеры включают:

-(фен-1,3-илен)-C(O)NH-;

-(фен-1,3-илен)-NHC(O)-;

-(фен-1,4-илен)-C(O)NH-; и

-(фен-1,4-илен)-NHC(O)-;

В одном варианте осуществления, Y присоединен в 3-м положении фениленового кольца относительно группы -CH₂-(CR⁵R⁶)_e-. В другом варианте осуществления, Y присоединен в 4-м положении фениленового кольца относительно группы -CH₂-(CR⁵R⁶)_e-.

В одном варианте осуществления, a равен 0, и R¹ отсутствует. В других конкретных вариантах осуществления, a равен 1, 2 или 3, то есть одна, две или три группы R¹ присутствуют в любом доступном положении фенильного кольца, к которому присоединен R¹. Например, когда a равен 1, R¹ может быть во 2-, 3-, 4-, 5- или 6-м положении фенильного кольца, к которому присоединен R¹; когда a равен 2, группы R¹ могут быть во 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-м положениях фенильного кольца, к которому присоединен R¹; и когда a равен 3, группы R¹ могут быть во 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,5-, 2,4,6- или 3,4,5-м положениях фенильного кольца, к которому присоединен R¹.

В случае, когда он присутствует, в одном варианте осуществления, каждый R¹ независимо выбран из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил), гидроксила и галогена. В другом варианте осуществления, каждый R¹ независимо выбран из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил) и галогена. В другом варианте осуществления, каждый R¹ независимо выбран из метила, этила, метокси, фтора, хлора и брома.

В одном варианте осуществления, b равен 0, и R² отсутствует. В других конкретных вариантах осуществления, b равен 1, 2 или 3, то есть одна, две или три группы R² присутствуют в любом доступном положении фениленового кольца, к которому присоединен R². Например, когда b равен 1, группа R² может быть в 3-, 4-, 5- или 6-м положении фен-1,2-иленового кольца, к которому присоединен R²; когда b равен 2, группы R² могут быть в 3,4-, 3,5-, 3,6-, 4,5-, 4,6- или 5,6-м положениях фен-1,2-иленового кольца, к которому присоединен R²; и когда b равен 3, группы R² могут быть в 3,4,5-, 3,4,6- или 4,5,6-м положениях фен-1,2-иленового кольца, к которому присоединен R².

В случае, когда он присутствует, в одном варианте осуществления, каждый R² независимо выбран из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил) и галогена. В другом варианте осуществления, каждый R² независимо выбран из галогена. В другом варианте осуществления, каждый R² независимо выбран из метила, этила, метокси, фтора, хлора и брома.

В одном варианте осуществления, c равен 0, и R³ отсутствует. В других конкретных вариантах осуществления, c равен 1, 2, 3 или 4, то есть одна, две, три или четыре группы R³присутствуют в любом доступном положении пиперидин-1,4-ильного кольца, к которому присоединен R³.

В случае, когда он присутствует, в одном варианте осуществления, каждый R³ независимо выбран из C_1-3 алкила. В другом варианте осуществления, каждый R³ представляет собой метил. Характерные группы R³ включают метил, этил, н-пропил и изопропил.

В другом варианте осуществления, две группы R³ связаны с образованием C_1-3 алкилена или C_2-3 алкенилена или оксиран-2,3-диила. Характерные группы включают -CH₂-, -CH₂CH₂-, -CH═CH-, -CH₂CH₂CH₂- и -CH₂CH═CH-. Например, две группы R³ во 2- и 6-м положениях пиперидинового кольца могут быть связаны с образованием этиленового мостика (то есть пиперидиновое кольцо и группы R³ образуют 8-азабицикло[3,2,1]октановое кольцо); или две группы R³ в 1- и 4-м положениях кольца могут быть связаны с образованием этиленового мостика (то есть пиперидиновое кольцо и группы R³ образуют 1-азабицикло[2,2,2]октановое кольцо); или две группы R³ во 2- и 6-м положениях пиперидинового кольца могут быть связаны с образованием этениленового мостика (то есть пиперидиновое кольцо и группы R³ образуют 8-азабицикло[3,2,1]окт-6-еновое кольцо). В этом варианте осуществления, другие группы R³, как определено в настоящем документе, могут также присутствовать.

В еще одном варианте осуществления, две группы R³ связаны с образованием оксиран-2,3-диильной группы. Например, две группы R³ во 2- и 6-м положениях пиперидинового кольца могут быть связаны с образованием 3-оксатрицикло[3.3.1.0^2,4]нонанового кольца. В этом варианте осуществления, другие группы R³, как определено в настоящем документе, могут также присутствовать.

В одном варианте осуществления, d равен 0, и R⁴ отсутствует.

В других конкретных вариантах осуществления, d равен 1, 2, или 3, то есть одна, две или три группы R⁴ могут быть присоединены в любом доступном положении фениленового кольца, к которому присоединен R⁴. Например, когда d равен 1, и Y присоединен в 3 положении фениленового кольца, группа R⁴ может быть во 2-, 4-, 5- или 6-м положении фен-1,3-иленого кольца, к которому присоединен R⁴. Когда d равен 1, и Y присоединен в 4-м положении фениленового кольца, группа R⁴ может быть, например, во 2-, 3-, 5- или 6-м положении фен-1,4-иленового кольца, к которому присоединен R⁴.

Когда d равен 2, и Y присоединен в 3 положении фениленового кольца, группы R⁴ могут быть, например, во 2,4-, 2,5-, 2,6-, 4,5-, 4,6- или 5,6-м положениях фен-1,3-иленового кольца, к которому присоединен R⁴. Когда d равен 2, и Y присоединен в 4-м положении фениленового кольца, группы R⁴ могут быть, например, во 2,3-, 2,5-, 2,6-, 3,5-, 3,6- или 5,6-м положениях фен-1,4-иленого кольца, к которому присоединен R⁴.

Когда d равен 3, и Y присоединен в положении 3 фениленового кольца, группы R⁴ могут быть, например, во 2,4,5-, 2,4,6-, 2,5,6- или 4,5,6-м положениях фениленового кольца, к которому присоединен R⁴. Когда d равен 3, и Y присоединен в 4-м положении фениленового кольца, группы R⁴ могут быть, например, в 2,3,5-, 2,3,6-, 2,5,6- или 3,5,6-м положениях фениленового кольца, к которому присоединен R⁴.

В случае, когда он присутствует, в одном варианте осуществления, каждый R⁴ независимо выбран из C_1-3 алкила, -O-(C_1-3 алкил) и галогена. В другом варианте осуществления, каждый R⁴ независимо выбран из метила, этила, метокси, фтора, хлора и брома. В конкретном варианте осуществления, R⁴ выбран из метила, метокси, хлора и фтора. В другом конкретном варианте осуществления, d равен 2, и каждый R⁴ представляет собой метил. В другом конкретном варианте осуществления, d равен 2, и один R⁴ представляет собой метокси, а другой R⁴ представляет собой хлор.

В одном варианте осуществления, e равен 0, и -CR⁵R⁶- присутствует. В другом варианте осуществления, e равен 1.

В случае, когда он присутствует, в одном варианте осуществления, R⁵ представляет собой водород. В другом варианте осуществления, R⁵ представляет собой метил. В еще одном варианте осуществления, R⁵ представляет собой этил.

В случае, когда он присутствует, в одном варианте осуществления, R⁶ представляет собой водород. В другом варианте осуществления, R⁶ представляет собой метил. В еще одном варианте осуществления, R⁶ представляет собой этил. В конкретном варианте осуществления, R⁶ представляет собой водород, и R⁵ представляет собой водород или метил. В другом конкретном варианте осуществления, R⁵ и R⁶ оба представляют собой метил.

Когда R⁵≠R⁶, атом углерода, к которому присоединены R⁵ и R⁶, является хиральным. В одном варианте осуществления, этот стереоцентр имеет (R)-конфигурацию. В другом варианте осуществления, этот стереоцентр имеет (S)-конфигурацию. В конкретных вариантах осуществления, группа -CH₂-(CR⁵R⁶)_e - выбрана из -CH₂-, -CH₂CH₂-, -CH₂C*H(CH₃)-, где C* имеет (R) конфигурацию, (S) конфигурацию или является рацемическим.

В одном варианте осуществления, R^a выбран из C_1-6 алкила. В другом варианте осуществления, R^a представляет собой C_1-4 алкил. В еще одном варианте осуществления, R^a представляет собой C_1-3 алкил. Характерные группы R^a включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил и н-гексил. В конкретном варианте осуществления, R^a представляет собой метил.

В одном варианте осуществления, соединение формулы I представляет собой свободное основание. В другом варианте осуществления, соединение формулы I представляет собой форму моносоли. В еще одном варианте осуществления, соединение формулы I представляет собой форму дисоли.

Конкретные структуры и группировки

Следующие конкретные структуры и группировки предназначены для обеспечения характерных примеров различных аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения и по существу они не исключают другие варианты осуществления или не ограничивают объем вариантов осуществления или настоящее изобретение, если не указано иное.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению формулы Ia:

то есть к соединению формулы I, где a, b и c равны 0 (то есть R¹, R² и R³ отсутствуют), R⁶ представляет собой водород, и R⁴, R⁵, R^a, Y, d и e являются такими, как определено в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли.

Другой конкретный вариант осуществления относится к соединению формулы Ib:

то есть к соединению формулы I где a, b, c и e равны 0 (то есть R¹, R², R³ и CR⁵R⁶ отсутствуют), и R⁴, R^a, Y и d являются такими, как определено в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли.

Другой конкретный вариант осуществления относится к соединению формулы Ic:

то есть к соединению формулы I, где a, b и c равны 0 (то есть R¹, R² и R³ отсутствуют), R⁶ представляет собой водород, e равен 1, и R⁴, R⁵, R^a, Y и d являются такими, как определено в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли.

Другой конкретный вариант осуществления относится к соединению формулы II:

то есть к соединению формулы I, где a, b, c и e равны 0 (то есть R¹, R², R³ и CR⁵R⁶ отсутствуют), Y образует группу формулы: -(CH₂)_p-C(O)NH-, и R⁴, R^a, d и p являются такими, как определено в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли.

В конкретном варианте осуществления соединений формулы II, R^a представляет собой метил; p равен 3 или 4; и d равен 0, 1 или 2; и каждый R⁴ независимо выбран из метила; метокси, хлора и фтора.

В другом конкретном варианте осуществления соединений формулы II, R^a представляет собой метил; p равен 4; и d равен 0, 1 или 2; и каждый R⁴ независимо выбран из метила; метокси, хлора и фтора. Как показано в таблице III, все соединения в этом варианте осуществления подвергали исследованию методом Эйнтховена на крысах (100 мкг), демонстрирующем бронхозащитный эффект в течение 24 ч.

Другой конкретный вариант осуществления относится к соединению формулы III:

то есть к соединению формулы I, где a, b и c равны 0 (то есть R¹, R² и R³ отсутствуют), R⁶ представляет собой водород, e равен 1, Y образует группу формулы: -(CH₂)_p-NHC(O)-(CH₂)_q- и R⁴, R⁵, R^a, d, p и q являются такими, как определено в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли.

В конкретном варианте осуществления соединений формулы III, R^a представляет собой метил; p равен 3 или 4; q равен 1; R⁵ представляет собой метил; и d равен 0.

В другом варианте осуществления, настоящее изобретение относится к соединению формулы IV:

то есть к соединению формулы I, где a, b и c равны 0 (то есть R¹, R² и R³ отсутствуют), R⁶ представляет собой водород, e равен 1, Y образует группу формулы: -Ar¹-(CH₂)_p-C(O)NH-(CH₂)_q-, Ar¹ представляет собой фенил-1,4-ен, и R⁴, R⁵, R^a, d, p и q являются такими, как определено в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемая соль.

В конкретном варианте осуществления соединений формулы IV, R^a представляет собой метил; p равен 1; q равен 1 или 2; R⁵ представляет собой водород или метил; d равен 0 или 1; и R⁴ выбран из метила; метокси и фтор.

В другом варианте осуществления, настоящее изобретение относится к соединению формулы V:

то есть к соединению формулы I, где a, b и c равны 0 (то есть R¹, R² и R³ отсутствуют), R⁶ представляет собой водород, e равен 1, Y образует группу формулы: -Ar¹-C(O)NH-, Ar¹ представляет собой фенил-1,3-ен, и R⁴, R⁵, R^a и d являются такими, как определено в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли.

В конкретном варианте осуществления соединений формулы V, R^a представляет собой метил; R⁵ представляет собой водород или метил; d равен 0, 1 или 2; и каждый R⁴ независимо выбран из метила; метокси, хлора и фтора.

Конкретными вариантами осуществления соединений формулы I являются соединения, где a, b и c равны 0 (то есть R¹, R² и R³ отсутствуют), R^a представляет собой метил; и (Ar¹)_n, -(CH₂)_p, X, (CH₂)_q, (R⁴)_d (и фениленовое кольцо, к которому он присоединен) и -CH₂(CR⁵R⁶)_e- являются такими, как определено в таблице I:

Соединения, указанные в таблице I, могут быть в виде свободного основания или могут быть в виде фармацевтически приемлемой соли. Особый интерес представляют соединения, указанные в таблице I, которые демонстрируют бронхозащитный эффект в течение 24 часов после введения путем ингаляции, например, как показало исследование Эйнтховена на крысах.

Определения

При описании настоящего изобретения, включая его различные аспекты и варианты осуществления, следующие термины имеют следующие значения, если не указано иное.

Термины в единственном числе включают соответствующие термины во множественном числе, если в контексте ясно не указано иное.

Термин “алкил” обозначает моновалентную насыщенную углеводородную группу, которая может быть линейной или разветвленной. Если не определено иное, такие алкильные группы обычно содержат от 1 до 10 атомов углерода. Характерные алкильные группы включают, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил и тому подобное.

Когда конкретное количество атомов углерода предполагается для конкретного термина, количество атомов углерода указано перед термином. Например, термин “C_1-3 алкил” обозначает алкильную группу, имеющую от 1-3 атомов углерода, где атомы углерода находятся в любой химически приемлемой конфигурации, включая линейные или разветвленные конфигурации.

Термин “алкилен” обозначает дивалентную насыщенную углеводородную группу, которая может быть линейной или разветвленной. Если не определено иное, такие алкиленовые группы обычно содержат от 1 до 10 атомов углерода. Характерные алкиленовые группы включают, например, метилен, этан-1,2-диил (“этилен”), пропан-1,2-диил, пропан-1,3-диил, бутан-1,4-диил, пентан-1,5-диил и тому подобное.

Термин “амино-защитная группа” обозначает защитную группу, подходящую для предотвращения нежелательных взаимодействий по аминогруппе. Характерные амино-защитные группы включают, но ими не ограничиваются, трет-бутоксикарбонил (BOC), тритил (Tr), бензилоксикарбонил (Cbz), 9-флуоренилметоксикарбонил (Fmoc), бензил, формил, триметилсилил (ТМС), трет-бутилдиметилсилил (TBS) и тому подобное.

Термин “карбоксил-защитная группа” обозначает защитную группу, подходящую для предотвращения нежелательных взаимодействий по карбоксильной группе (то есть -COOH). Характерные карбоксил-защитные группы включают, но ими не ограничиваются, сложные эфиры, такие как метил, этил, трет-бутил, бензил (Bn), п-метоксибензил (PMB), 9-флуоренилметил (Fm), триметилсилил (ТМС), трет-бутилдиметилсилил (TBS, TBDMS), дифенилметил (бензгидрил, DPM) и тому подобное.

Термин “галоген” обозначает фтор, хлор, бром и йод.

Термин “гидроксил-защитная группа” обозначает защитную группу, подходящую для предотвращения нежелательных взаимодействий по гидроксильной группе. Характерные гидроксил-защитные группы включают, но ими не ограничиваются, силильные группы, включая три(C_1-6 алкил)силильные группы, такие как триметилсилил (ТМС), триэтилсилил (TES), трет-бутилдиметилсилил (TBS) и тому подобное; сложные эфиры (ацильные группы), включая C_1-6 алканоильные группы, такие как формил, ацетил и тому подобное; арилметильные группы, такие как бензил (Bn), п-метоксибензил (PMB), 9-флуоренилметил (Fm), дифенилметил (бензгидрил, DPM) и тому подобное. Кроме того, две гидроксильные группы могут также быть защищены, поскольку алкилиденовая группа, такая как проп-2-илидин, образуется, например, взаимодействием с кетоном, таким как ацетон.

Термин “уходящая группа” обозначает функциональную группу или атом, который может быть заменен другой функциональной группой или атомом в реакции замещения, такой как реакция нуклеофильного замещения. Например, характерные уходящие группы включают, но ими не ограничиваются, группы хлор, бром и йод; сложноэфирные группы сульфоновой кислоты, такие как мезилат, тозилат, брозилат, нозилат и тому подобное; и ацилокси группы, такие как ацетокси, трифторацетокси и тому подобное.

Термин “микронизированный” или “в микронизированной форме” обозначает фракции, в которых по крайней мере около 90 процентов частиц имеют диаметр меньше, чем около 10 мкм, если не указано иное.

Термин “фармацевтически приемлемая соль” обозначает соль, которая является приемлемой для введения пациенту или млекопитающему, такому как человек (например, соли, имеющие приемлемую безопасность для млекопитающего при определенном режиме дозирования). Характерные фармацевтически приемлемые соли включают соли уксусной, аскорбиновой, бензолсульфоновой, бензойной, камфорсульфоновой, лимонной, этансульфоновой, эдисиловой кислоты (1,2-этандисульфоновая кислота), фумаровой, гентизиновойя, глюконовой, глюкороновой, глутаминовой, гиппуровой, бромистоводородной, хлористоводородной, изэтионовой, молочной, лактобионовой, малеиновой, яблочной, миндальной, метансульфоновой, муциновой, нафталинсульфоновой, нафталин-1,5-дисульфоновой, нафталин-2,6-дисульфоновой, никотиновой, азотной, оротовой, памовой, пантотеновой, фосфорной, янтарной, серной, винной, п-толуолсульфоновой и ксинафоевой кислоты (1-гидрокси-2-нафтойная кислота) и тому подобное.

Термин “их защищенные производные” обозначает производное определенного соединения, в котором одна или несколько функциональные групп соединения защищены или блокированы от нежелательных взаимодействий с помощью защитных или блокирующих групп. Функциональные группы, которые могут быть защищены, включают, например, карбоксигруппы, аминогруппы, гидроксильные группы, тиольные группы, карбонильные группы и тому подобное. Подходящие защитные группы для таких функциональных групп хорошо известны рядовому специалисту в данной области, как следует, например, из статьи T. W. Greene и P. G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1999, и приведенных здесь ссылок.

Термин “его соль” обозначает соединение, образованное в случаях, когда водород в кислоте заменен катионом, таким как катион металла или органический катион и тому подобное. Например, катион может быть протонированной формой соединения формулы I, то есть где одна или несколько аминогрупп были протонированы кислотой. Обычно соль представляет собой фармацевтически приемлемую соль, хотя это не является обязательным условием для солей промежуточных соединений, которые не предназначены для введения пациенту.

Термин “сольват” обозначает комплекс или агрегат, образованный одной или несколькими молекулами растворенного вещества, то есть соединением формулы I или его фармацевтически приемлемой солью, и одной или несколькими молекулами растворителя. Такие сольваты представляют собой обычно кристаллические твердые вещества, имеющие в основном определенное молярное соотношение растворенного вещества и растворителя. Характерные растворители включают, например, воду, метанол, этанол, изопропанол, уксусную кислоту и тому подобное. Когда растворителем является вода, образованный сольват представляет собой гидрат.

Термин “терапевтически эффективное количество” обозначает количество, достаточное для эффективного лечения при его введении пациенту.

Термин “лечить” или “лечение”, используемый в настоящем документе, обозначает лечение заболевания или медицинского состояния (такого как COPD или астма) у пациента, например, млекопитающего (например, человека), которое включает любой из следующих вариантов или их сочетания:

(a) предупреждение заболевания или медицинского состояния, направленное на его предупреждение, то есть профилактическое лечение пациента;

(b) улучшение течения заболевания или медицинского состояния, то есть устранение или вызывание регрессии заболевания или медицинского состояния у пациента;

(c) сдерживание заболевания или медицинского состояния, то есть замедление или остановка развития заболевания или медицинского состояния у пациента; или

(d) ослабление симптомов заболевания или медицинского состояния у пациента.

Все другие используемые в настоящем документе термины имеют свои обычные значения, понятные рядовому специалисту в данной области, к которой они относятся.

Общие способы синтеза

Соединения по настоящему изобретению и их промежуточные соединения могут быть получены в соответствии со следующими общими способами и процедурами, используя коммерчески доступные или получаемые по стандартной методике исходные вещества и реагенты. Заместители и переменные (например, R¹, R², Y, a, b и так далее), используемые в следующих схемах, имеют такие же значения, как значения, описанные где-нибудь в другом месте в настоящем документе, если не указано иное. Кроме того, соединения, имеющие кислотный или основной атом или функциональную группу, могут быть использованы или могут быть получены в виде соли, если не указано иное (в некоторых случаях, использование соли в конкретной реакции потребует преобразование соли в несолевую форму, например, свободного основания, используя обычные способы перед проведением реакции).

На схеме 1 показан обычный способ получения соединения формулы I (где R⁶ представляет собой водород):

Схема 1

где

G¹ представляет собой -CHO или -CH₂C(O)R⁵; и

P¹ представляет собой гидроксил-защитную группу, такую как трет-бутилдиметилсилил.

В этом способе, соединение 1 взаимодействует с от около 0,95 до около 1,5 молярными эквивалентами соединения 2 в присутствии восстанавливающего агента с получением соединения 3 . Любой подходящий восстановитель может быть использован в этом взаимодействии, включая, в качестве иллюстрации, реагент гидрид металла, такой как боргидрид натрия, триацетоксиборгидрид натрия, цианоборгидрат натрия и тому подобное, или водород и катализатор на основе металла, такой как палладий на угле и тому подобное. Это взаимодействие обычно осуществляют при температуре в пределах от около −20°C до около 30°C, (например, от около 0°C до около 5°C) в течение от около 1 часа до около 6 часов, или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. Обычно это взаимодействие осуществляют в разбавителе, таком как дихлорметан (DCM), дихлорэтан и тому подобное. Необязательно, разбавитель может содержать протонный растворитель, такой как метанол и тому подобное. После завершения взаимодействия, продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное. Альтернативно, если желательно, реакционная смесь, содержащая соединение 3 , может быть использована на следующей стадии синтеза без дополнительного выделения или очистки.

Затем удаляют защитные группы у соединения 3 с получением соединения формулы I. Конкретные условия, применяемые для удаления защитных групп у соединения 3 , будут зависеть от используемой защитной группы. Например, когда P¹ представляет собой силильную защитную группу, например, трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил, дифенилметилсилил, ди-трет-бутилметилсилил, трет-бутоксидифенилсилил и тому подобное (то есть соединение формулы 3a , как определено в настоящем документе), эту реакцию удаления защитных групп обычно осуществляют контактированием соединения 3 с источником фторид-иона. В конкретном варианте осуществления, источником фторид-иона является тригидрофторид триэтиламина. Другие подходящие источники фторид-иона включают фторид тетрабутиламмония, фторид калия с 18-краун-6, фторид водорода, гидрофторид пиридина и тому подобное. Это взаимодействие обычно осуществляют при температуре в пределах от около 0°C до около 50°C, (например, от около 10°C до около 25°C) в течение от около 24 до около 72 часов или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. Обычно, это взаимодействие осуществляют в разбавителе, таком как DCM, дихлорэтан и тому подобное. После завершения взаимодействия, продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное.

Соединения формулы 1 обычно получают путем удаления защитных групп у соответствующего промежуточного соединения ацеталя или кеталя. Например, когда G¹ представляет собой -CHO, соединения формулы 1 обычно получают путем удаления защитных групп у промежуточного соединения формулы 4a :

где P^2a и P^2b независимо выбраны из C_1-6 алкила, или P^2a и P^2b связаны с образованием C_2-6 алкилена, обычно, C_2-4 алкилена.

Аналогично, когда G¹ представляет собой -CH₂C(O)R⁵, соединения формулы 1 обычно получают путем удаления защитных групп у промежуточного соединения формулы 4b :

где P^3a и P^3b независимо выбраны из C_1-6 алкила, или P^3a и P^3b связаны с образованием C_2-6 алкилена, обычно, C_2-4 алкилена.

Удаление защитных групп у соединения 4a или 4b обычно осуществляют взаимодействием 4a или 4b с водным раствором кислоты для гидролиза группы ацеталя или кеталя, и получением соответствующего альдегида или кетона соединения 1 . В этом взаимодействии может быть использована любая подходящая кислота, включая, например, хлористоводородную кислоту, серную кислоту, метансульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту и тому подобное. Реакцию гидролиза обычно осуществляют при температуре в пределах от около 0°C до около 30°C, (например, от около 20°C до около 25°C) в течение от около 1 до около 6 часов, или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. Обычно, это взаимодействие осуществляют в разбавителе, таком как метанол, этанол, изопропанол, дихлорметан/этанол, ацетонитрил и тому подобное. После завершения взаимодействия, продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное. Альтернативно, реакционная смесь, содержащая соединение 1 , может быть непосредственно использована на следующей стадии синтеза.

Соединения формулы 4a или 4b обычно получают связыванием соединения формулы 5 :

с соединением формулы 6a или 6b :

где

G² представляет собой -NH₂, и G³ представляет собой -COOH; или G² представляет собой -COOH, и G³ представляет собой -NH₂.

Реакцию конденсации между соединением 5 и соединением 6a или 6b с образованием соединения 4a или 4b обычно осуществляют, используя реагент, связывающий карбоновую кислоту с амином. Любой подходящий реагент, связывающий карбоновую кислоту с амином, может быть использован в этом взаимодействии, включая, в качестве иллюстрации, гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окси-трис-(диметиламино)фосфония (BOP); N,N′-карбонилдиимидазол (CDI); дициклогексилкарбодиимид (DCC); 3-(диэтоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4(3H)-он (DEPBT); гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC HCl); гексафторфосфат 2-(7-аза-1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HATU); гексафторфосфат 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBTU); гексафторфосфат 2-(6-хлор-1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламиний (HCTU); 1-гидрокси-7-азабензотриазол (HOAt); N-гидроксибензотриазол (HOBt); гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окси-трис-пирролидинофосфония (PyBOP); гексафторфосфат бром-трис-пирролидинофосфония (PyBrOP); тетрафторборат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N′,N′-тетраметилурония (TATU); тетрафторборат 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU); тетрафторборат N,N,N′,N′-тетраметил-O-(3,4-дигидро-4-оксо-1,2,3-бензотриазин-3-ил)урана (TDBTU); тетрафторборат O-(N-сукцинимидил)-1,1,3,3-тетраметил уран (TSTU); и их сочетания, такие как EDC и HOBt.

Реакцию конденсации обычно осуществляют взаимодействием от около 0,95 до около 1,5 молярных эквивалентов соединения амина ( 5 , когда G² представляет собой -NH₂; или 6a или 6b, когда G³ представляет собой -NH₂) с карбоновой кислотой ( 5 , когда G² представляет собой -COOH; или 6a или 6b, когда G³ представляет собой -COOH) в присутствии связывающего реагента. Связывающий реагент обычно используют в количестве в диапазоне от около 1,0 до около 1,5 молярных эквивалентов относительно карбоновой кислоты. Обычно это взаимодействие осуществляют в присутствии стерически затрудненного амина, такого как диизопропилэтиламин (DIEA), N-метилморфолин (NMM), коллидин, 2,3,5,6-тетраметилпиридин (TEMP), 2,6-ди-трет-бутил-4-диметиламинопиридин (DBDMAP) и тому подобное, в разбавителе, таком как дихлорметан, тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, ацетонитрил, диметилформамид, диметилацетамид, N-метилпирролидон или их смеси. Взаимодействие обычно осуществляют при температуре в пределах от около −20°C до около 50°C, (например, от около 20°C до около 25°C) в течение от около 1 до около 30 часов, или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. После завершения взаимодействия продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное.

Соединения формулы 5 обычно получают связыванием соединения формулы 7 :

с соединением формулы 8a , 8b или 8c :

где P⁴ представляет собой карбоксил-защитную группу (такую как C_1-6 алкил, включая метил, этил, н-пропил и тому подобное; или бензил); и P⁵ представляет собой амино-защитную группу (такую как BOC, Fmoc, Cbz и тому подобное). Когда используют соединение формулы 8c , нитрогруппу затем восстанавливают до аминогруппы, используя стандартные реагенты и способы, такие как цинк, олово или металлическое железо и кислота (такая как уксусная кислота, соляная кислота и тому подобное), или каталитическое гидрирование. В этом варианте осуществления, p обычно равен 0.

Соединения формулы 8a , 8b и 8c являются коммерчески доступными, известными в данной области, или могут быть получены стандартными способами, известными в данной области.

Характерные соединения формулы 8a включают, например, метил 4-(метиламино)бутират, метил 5-(метиламино)пентаноат, метил 3-(метиламино)бензоат, метил 4-(метиламино)бензоат, метил 3-(метиламино)-4-метилбензоат, метил [3-(метиламино)фенил]ацетат и тому подобное.

Характерные соединения формулы 8b включают, например, трет-бутиловый эфир (3-метиламинопропил)карбаминовой кислоты, 9H-флуорен-9-илметиловый эфир (3-метиламинопропил)карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир (4-метиламинобутил)карбаминовой кислоты, 9H-флуорен-9-илметиловый эфир (4-метиламинобутил)карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир (3-метиламинофенил)карбаминовой кислоты, 9H-флуорен-9-илметиловый эфир (3-метиламинофенил)карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир (4-метиламинофенил)карбаминовой кислоты, 9H-флуорен-9-илметиловый эфир (4-метиламинофенил)карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир (3-метиламинобензил)карбаминовой кислоты, 9H-флуорен-9-илметиловый эфир (3-метиламинобензил)карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир (4-метиламинобензил)карбаминовой кислоты, 9H-флуорен-9-илметиловый эфир (4-метиламинобензил)карбаминовой кислоты и тому подобное.

Характерные соединения формулы 8c включают, например, N-метил-3-нитроанилин, N-метил-4-нитроанилин, N-этил-3-нитроанилин, N-этил-4-нитроанилин и тому подобное.

Реакцию конденсации карбоновая кислота-амин между соединением 7 и соединением 8a или 8b с образованием соединения 5 обычно осуществляют, используя реагенты и реакционные условия, описанные в настоящем документе для связывания карбоновой кислоты и амина (например, соединение 5 и соединение 6a или 6b ). После завершения взаимодействия, продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное.

Соединения формулы 7 обычно получают взаимодействием соединения формулы 9 :

с от около 0,95 до около 1,5 молярных эквивалентами акриловой кислоты. Это взаимодействие обычно осуществляют в разбавителе, таком как дихлорметан, при температуре в пределах от около 20°C до около 70°C. (например, около 50°C) в течение от около 6 до около 30 часов, или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. После завершения взаимодействия продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное.

Соединения формулы 9 хорошо известны в данной области или могут быть получены стандартными способами, известными в данной области. Например, способы получения таких соединений можно найти в публикации патентной заявки США № U.S. 2004/0167167 A1 и R. Naito et al., Chem. Pharm. Bull., 46(8) 1286-1294 (1998). В качестве иллюстрации, соединения формулы 9 обычно получают взаимодействием соединения формулы 10 :

со спиртом формулы 11 :

где P⁶ представляет собой амино-защитную группу, такую как бензил, BOC, Fmoc, Cbz и тому подобное.

Характерные соединения формулы 10 включают, например, 2-(фенил)фенил изоцианат, 2-(фенил)-5-метилфенил изоцианат, 2-(3-хлорфенил)-4,6-дифторфенил изоцианат, 2-(фенил)-6-фторфенил изоцианат, 2-(фенил)-5-бромфенил изоцианат, 2-(4-бромфенил)-5-бромфенил изоцианат, 2-(фенил)-4-метоксифенил изоцианат, 2-(4-метоксифенил)фенил изоцианат, 2-(фенил)-5-метоксифенил изоцианат и тому подобное.

Характерные соединения формулы 11 включают, например, 4-гидрокси-1-бензилпиперидин, трет-бутиловый эфир 4-гидроксипиперидин-1-карбоновой кислоты, 9H-флуорен-9-илметиловый эфир 4-гидроксипиперидин-1-карбоновой кислоты, 4-гидрокси-4-метил-1-бензилпиперидин, 2-бензил-2-азабицикло[2,2,1]гептан-5-ол, 2-бензил-2-азабицикло[2,2,2]октан-5-ол, 8-бензил-8-азабицикло[3,2,1]окт-6-ен-3-ол, 3-бензил-3-азабицикло[3,2,1]октан-8-ол, 8-бензил-8-азабицикло[3,2,1]октан-3-ол, 3-бензил-3-азабицикло[3,3,1]нонан-9-ол, 9-бензил-9-азабицикло[3,3,1]нонан-3-ол, 8-бензилнортропин, 8-бензилнорпсевдотропин и тому подобное.

Эту реакцию обычно осуществляют взаимодействием соединения 10 с от около 0,95 до около 1,2 молярных эквивалентами соединения 11 при температуре в пределах от около 20°C до около 100°C, (например, от около 60°C до около 80°C) в течение от около 6 до около 24 часов или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. Если желательно, это взаимодействие может быть осуществлено в разбавителе, таком как дихлорметан, толуол и тому подобное. Альтернативно, это взаимодействие может быть выполнено в отсутствие разбавителя. После завершения взаимодействия продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное. Альтернативно, реакционную смесь непосредственно используют на следующей стадии синтеза без выделения продукта.

Затем амино-защитную группу P⁶ удаляют, используя обычные способы с получением соединения 9 . Например, когда P⁶ представляет собой бензильную группу, реакцию удаления защитных групп обычно осуществляют, используя водород или формиат аммония, в присутствии катализатора, такого как палладиевый катализатор. Характерные катализаторы включают, в качестве иллюстрации, палладий на угле, гидроксид палладия на угле и тому подобное. Это взаимодействие обычно осуществляют при температуре в пределах от около 20°C до около 50°C, (например, около 40°C) в течение от около 6 до около 24 часов или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. Обычно это взаимодействие осуществляют в разбавителе, таком как метанол, этанол, изопропанол и тому подобное. После завершения взаимодействия, соединение 9 обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное.

Соединения формулы 2 хорошо известны в данной области или могут быть получены из коммерчески доступных исходных веществ и реагентов, используя хорошо известные способы получения. Например, получение соединения формулы 2 , где P¹ представляет собой трет-бутилдиметилсилил, описано в публикации патентной заявки США № 2006/0035931, опубликованной 16 февраля 2006 г. Другие защитные группы, которые могут быть использованы для P¹, включают, например, диметилизопропилсилил, диэтилизопропилсилил, диметилгексилсилил, трет-бутилдифенилсилил, дифенилметилсилил и тому подобное.

Кроме того, если желательно, гидроксильная группа в соединении 2 может также быть защищена, то есть может быть использовано соединение формулы 2a :

где P^1a представляет собой гидроксил-защитную группу, такую как бензильная группа или 4-метоксибензил. Например, получение соединения формулы 2a , где P¹ представляет собой трет-бутилдиметилсилил, и гидроксильная группа защищена 4-метоксибензильной группой, описано в WO 2008/096129. Когда используют 2a, промежуточные соединения, такие как 3 , 12 и тому подобное, будут обычно содержать группу P^1a. Затем P^1a удаляют, используя обычные способы и реагенты. Например, когда P^1a представляет собой бензильную группу, реакцию удаления защитных групп обычно осуществляют, используя водород или формиат аммония в присутствии катализатора, такого как палладиевый катализатор. Когда P^1a представляет собой 4-метоксибензил, эта группа может быть удалена в условиях кислотного гидролиза, например, 30% ТФУ в DCM.

Альтернативно, соединения формулы I получают связыванием соединения формулы 5 с соединением формулы 12 :

где G⁵ представляет собой -COOH (когда G² представляет собой -NH₂); или G⁵ представляет собой -NH₂ (когда G² представляет собой -COOH).

Реакцию конденсации карбоновая кислота-амин между соединением 5 и соединением 12 обычно осуществляют, используя реагенты и реакционные условия, описанные в настоящем документе для конденсации карбоновой кислоты и амина (например, соединения 5 и соединение 6a или 6b ). После завершения взаимодействия продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное. Удаление защитных групп в полученном продукте (например, удаление P¹), используя стандартные реагенты и условия, затем дает соединение формулы I.

Соединения формулы 12 получают взаимодействием соединения формулы 2 с соединением формулы 13a или 13b :

в присутствии восстанавливающего агента; где G^5P выбран из:

-COOP⁷, где P⁷ представляет собой карбоксил-защитную группу (такую как C_1-6 алкил, включая метил, этил, н-пропил и тому подобное; или бензил); и

-NHP⁸, где P⁸ представляет собой амино-защитную группу (такую как BOC, Fmoc, Cbz и тому подобное). Альтернативно, G^5P представляет собой нитрогруппу, или G^5P-(CH₂)_q- представляет собой NC-(CH₂)_q-1-, где нитрогруппу или цианогруппу затем восстанавливают до аминогруппы, используя стандартные реагенты и способы.

Взаимодействие соединения 2 с соединением 13a или 13b обычно осуществляют, используя реагенты и реакционные условия, описанные в настоящем документе для восстановительного алкилирования амина с альдегидом или кетоном (например, соединение 1 и соединение 2 ). После завершения взаимодействия продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное.

Соединения формулы 13a и 13b являются коммерчески доступными, известными в данной области или могут быть получены стандартными способами, известными в данной области.

Характерные соединения формулы 13a включают, например, метил 3-формилбензоат, метил 4-формилбензоат, метил (3-формилфенил)ацетат, метил (4-формилфенил)ацетат, метил 3-(3-формилфенил)пропионат, метил 3-(4-формилфенил)пропионат, трет-бутиловый эфир (3-формилфенил)карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир (4-формилфенил)карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир (3-формилбензил)карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир (4-формилбензил)карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир [2-(3-формилфенил)этил]карбаминовой кислоты, трет-бутиловый эфир [2-(4-формилфенил)этил]карбаминовой кислоты и тому подобное.

Характерные соединения формулы 13b включают, например, метил 3-(2-оксоэтил)бензоат, метил 4-(2-оксоэтил)бензоат, метил [3-(2-оксоэтил)фенил]ацетат, метил [4-(2-оксоэтил)фенил]ацетат, метил 3-[3-(2-оксоэтил)фенил]пропионат, метил 3-[4-(2-оксоэтил)фенил]пропионат, 2-(3-трет-бутоксикарбониламинофенил)ацетальдегид, 2-(4-трет-бутоксикарбониламинофенил)ацетальдегид, 2-[3-(трет-бутоксикарбониламинометил)фенил]ацетальдегид, 2-[4-(трет-бутоксикарбониламинометил)фенил]ацетальдегид, 2-{3-[2-(трет-бутоксикарбониламино)этил]фенил}ацетальдегид, 2-{4-[2-(трет-бутоксикарбониламино)этил]фенил}ацетальдегид и тому подобное.

Промежуточные соединения формулы 12 также могут быть получены взаимодействием соединения формулы 14:

с соединением формулы 15 :

где L¹ представляет собой уходящую группу, такую как хлор, бром, йод, тозил, нозил и тому подобное; и P⁹ представляет собой гидроксил-защитную группу, такую как бензил и тому подобное. Затем в полученном продукте частично удаляют защитные группы (удалением P⁷ или P⁸ и P⁹) с получением соединения формулы 12 .

Реакцию соединения 14 с соединением 15 обычно осуществляют взаимодействием соединения 14 с около 0,95 до около 1,1 молярных эквивалентами соединения 15 в присутствии избыточного количества основания. Характерные основания включают, например, бикарбонат натрия, карбонат натрия, бикарбонат калия, карбонат калия, триалкиламины (такие как триэтиламин, диизопропилэтиламин и так далее) и тому подобное. Это взаимодействие обычно осуществляют при температуре в пределах от около 20°C до около 120°C, (например, около 100°C) в течение от около 2 до около 24 часов или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. Обычно, это взаимодействие осуществляют в разбавителе, таком как N-метилпирролидинон, ацетонитрил и тому подобное. Если желательно, этому взаимодействию может способствовать воздействие микроволнового излучения на реакционную смесь (например, 300 ватт). Взаимодействие может также быть выполнено без разбавления, то есть в отсутствие разбавителя. Кроме того, если желательно, избыточное количество амина 14 может быть использовано вместо другого основания. После завершения взаимодействия продукт обычно выделяют, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное.

Затем в полученном продукте частично удаляют защитные группы (то есть удаляют P⁷ или P⁸; и удаляют P⁹, если желательно) с получением соединения формулы 12 . Конкретные используемые условия для удаления защитных групп будут зависеть от конкретных применяемых групп. Например, когда P⁷ представляет собой C_1-6 алкил, такие группы обычно удаляют гидролизом группы сложного эфира с основанием, таким как гидроксид лития, гидроксид натрия, гидроксид калия и тому подобное, в разбавителе, таком как смесь метанола и воды и тому подобное. Это взаимодействие обычно осуществляют при температуре окружающей среды в течение от около 30 минут до около 24 часов, или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. Когда P⁸ представляет собой трет-бутоксикарбонильную группу, эту группу обычно удаляют в условиях кислотного гидролиза, таких как 20%-ная трифторуксусная кислота в DCM при температуре окружающей среды. Когда P⁹ представляет собой бензильную группу, эту группу легко удаляют гидрированием. Обычно, это взаимодействие осуществляют контактированием соединения с водородом в присутствии катализатора, такого как палладиевый катализатор. Характерные катализаторы включают гидроксид палладия на угле, палладий на угле и тому подобное. Обычно, эту реакцию дебензилирования осуществляют в присутствии кислоты, такой как уксусная кислота, муравьиная кислота и тому подобное. Это взаимодействие обычно осуществляют при температуре в пределах от около 10°C до около 50°C, (например, около 25°C) в течение от около 6 до около 24 часов, или до тех пор, пока взаимодействие в значительной степени не закончится. Обычно это взаимодействие осуществляют в разбавителе, таком как метанол, этанол и тому подобное. После завершения взаимодействия продукт может быть выделен, используя обычные способы, такие как экстракция, перекристаллизация, хроматография и тому подобное, или непосредственно использован в следующей реакции.

Соединения формулы 14 хорошо известны в данной области или могут быть получены из коммерчески доступных исходных веществ и реагентов, используя хорошо известные способы получения. Например, соединения формулы 14 могут быть получены взаимодействием соединения 13a или 13b с бензиламином в условиях восстановительного алкилирования и затем удалением бензильной группы гидрированием с получением соединения формулы 14 . Характерные бензиламины, которые могут быть использованы, включают, бензиламин, (S)-1-фенилэтиламин, (R)-1-фенилэтиламин и тому подобное. В частности, хиральные бензиламины используют для получения промежуточных соединений формулы 14 , где R⁵ присутствует (то есть e=1), и атом углерода, к которому R⁵ присоединен, имеет определенную стереохимию (то есть R или S).

Кроме того, соединения формулы 14 , где R⁵ и R⁶ независимо представляют собой метил или этил (то есть не водород), хорошо известны в данной области или могут быть получены, используя обычные способы получения, которые описаны, например, в публикации патентной заявки США 2005/0171147 A1, опубликованной 4 августа 2005 г.; публикации патентной заявки США 2005/0277632 A1, опубликованной 15 декабря 2005 г.; WO 2005/092861 A1, опубликованной 6 октября 2005 г.; и тому подобное.

Соединения формулы 15 также хорошо известны в данной области или могут быть получены из коммерчески доступных исходных веществ и реагентов, используя хорошо известные способы получения. Например, получение соединения формулы 15 , где L¹ представляет собой бром; P¹ представляет собой трет-бутилдиметилсилил, и P⁹ представляет собой бензил, описано в публикации патентной заявки США № 2006/0035931, опубликованной в 16 февраля 2006 г.

Альтернативно, соединения формулы 12 получают взаимодействием соединения формулы 16 :

с соединением формулы 17 :

где L² представляет собой уходящую группу, такую как хлор, бром, йод, тозил, нозил и тому подобное; и P¹⁰ представляет собой амино-защитную группу, такую как бензил и тому подобное. В этом варианте осуществления, R⁵ и R⁶ в случае, когда он присутствует, обычно представляют собой водород. Это взаимодействие осуществляют в условиях, аналогичных описанным для взаимодействия соединения 14 и 15 . Соединения формулы 16 и 17 хорошо известны в данной области или могут быть получены из коммерчески доступных исходных веществ и реагентов, используя хорошо известные способы получения. Например, получение соединения формулы 17 , где P¹ представляет собой трет-бутилдиметилсилил, P⁹ представляет собой бензил, и P¹⁰ представляет собой бензил, описано в публикации патентной заявки США № 2006/0035931, опубликованной 16 февраля 2006 г.

Если желательно, фармацевтически приемлемую соль соединения формулы I получают контактированием соединения формулы I в виде свободного основания с фармацевтически приемлемой кислотой.

Дополнительные подробности относительно конкретных реакционных условий и другие способы получения характерных соединений по настоящему изобретению или их промежуточных соединений описаны в примерах, представленных в настоящем документе.

Фармацевтические композиции, комбинации и препаративные формы

Соединения формулы I могут быть объединены с носителем или наполнителем с образованием фармацевтической композиции или препаративной формы. Такие фармацевтические композиции будут обычно содержать терапевтически эффективное количество соединения формулы I. В некоторых случаях, тем не менее, фармацевтическая композиция может содержать больше, чем терапевтически эффективное количество, например, в концентрированной композиции; или меньше, чем терапевтически эффективное количество, например, отдельные одноразовые дозы, предназначенные для многократного введения для достижения терапевтически эффективного количества.

Фармацевтическая композиция будет обычно содержать от около 0,01 до около 95 процентов по массе соединения формулы I, включая, например, от около 0,01 до около 30 процентов по массе; или от около 0,01 до около 10 процентов по массе; или от около 0,01 до около 1 процентов по массе.

Такие фармацевтические композиции обычно получают, используя обычные носители или наполнители. Выбор конкретного носителя или наполнителя, или сочетания носителей или наполнителей, будет зависеть от различных факторов, таких как способ введения композиции, или от медицинского состояния или болезненного состояния, которое подвергают лечению. Любые подходящие носители и наполнители для получения фармацевтических композиций являются коммерчески доступными. Например, их можно приобрести у компании Sigma (St. Louis, Mo.). Способы и вещества для получения фармацевтических композиций, подходящих для конкретного способа введения, описаны в методах получения фармацевтических препаратов, включая, например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Md. (2000); и H. C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7^th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Md. (1999).

Характерные примеры веществ, которые могут использоваться в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают, но ими не ограничиваются, следующие: (1) сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; (2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; (3) целлюлоза и ее производные, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; (4) порошкообразный трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) тальк; (8) наполнители, такие как масло какао и воски для свечей; (9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; (13) агар; (14) буферные вещества, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновая кислота; (16) апирогенная вода; (17) изотонический раствор; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) фосфатные буферные растворы; (21) сжатые газы-пропелленты, такие как хлорфторуглероды и гидрофторуглероды; и (22) другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических композициях.

Фармацевтическую композицию обычно получают тщательным и проникающим перемешиванием или смешиванием соединения формулы I с фармацевтически приемлемым носителем и любыми необязательными ингредиентами. В случае необходимости или при желании полученная однородная смесь может затем быть сформована в таблетки или наполнена в капсулы, пилюли, контейнеры, картриджи, диспенсеры и тому подобное, используя обычные способы и оборудование.

В одном варианте осуществления, фармацевтическая композиция является подходящей для введения путем ингаляции. Фармацевтические композиции для введения путем ингаляции будет обычно находиться в виде аэрозоли или порошка. Такие композиции обычно вводят, используя хорошо известные средства доставки, такие как распылительный ингалятор, дозирующий ингалятор (MDI), ингалятор для доставки сухого порошка в легкие (DPI) или алогичные средства доставки.

В конкретном варианте осуществления, фармацевтическую композицию, содержащую терапевтическое средство, вводят путем ингаляции, используя распылительный ингалятор. Такие распылительные устройства обычно обеспечивают высокую скорость воздушного потока, что заставляет фармацевтическую композицию, содержащую терапевтическое средство, тонко распылятся и попадать в дыхательные пути пациента. Соответственно, при получении терапевтического средства для использования в распылительном ингаляторе, его обычно растворяют в подходящем носителе с образованием раствора. Альтернативно, терапевтическое средство может быть тонко измельчено и объединено с подходящим носителем с образованием суспензии тонкоизмельченных частиц. Распылительные устройства, подходящие для введения терапевтических средств путем ингаляции, известны в данной области или такие устройства являются коммерчески доступными. Например, характерные распылительные устройства или продукты включают Respimat Softmist Inhalaler (Boehringer Ingelheim); AERx Pulmonary Delivery System (Aradigm Corp.); PARI LC Plus Reusable Nebulizer (Pari GmbH); и тому подобное.

Характерная фармацевтическая композиция для использования в распылительном ингаляторе содержит изотонический водный раствор, содержащий от около 0,05 мкг/мл до около 10 мг/мл соединения формулы I. В одном варианте осуществления, величина pH раствора равна от около 4 до около 6.

В другом конкретном варианте осуществления, фармацевтическую композицию, содержащую терапевтическое средство, вводят путем ингаляции, используя ингалятор для доставки сухого порошка в легкие пациента. Такие ингаляторы для доставки сухого порошка обычно вводят терапевтическое средство в виде свободнотекущего порошка, который распыляется в воздушной струе в процессе вдыхания его пациентом. Для получения свободнотекущего порошка, терапевтическое средство обычно готовят с подходящим наполнителем, таким как лактоза, крахмал, маннит, декстроза, полимолочная кислота (PLA), полилактид-со-гликолид (PLGA) или их сочетания. Обычно терапевтическое средство тонко измельчают и объединяют с соответствующим носителем с образованием смеси, подходящей для ингаляции. Соответственно, в одном варианте осуществления, соединение формулы I находится в тонкоизмельченной форме.

Характерная фармацевтическая композиция для использования в ингаляторе для доставки сухого порошка в легкие содержит сухую измельченную лактозу и тонкоизмельченные частицы соединения формулы I.

Такие композиции в виде сухого порошка могут быть получены, например, объединением лактозы с терапевтическим средством, и последующим сухим смешиванием компонентов. Альтернативно, если желательно, терапевтическое средство может быть получено без наполнителя. Затем обычно фармацевтическую композицию помещают в диспенсер для сухого порошка или в картриджи для ингаляции или капсулы для использования с помощью устройства для доставки сухого порошка.

Ингаляторные устройства для доставки сухого порошка в легкие пациента, подходящие для введения терапевтических средств путем ингаляции, известны из уровня техники или такие устройства являются коммерчески доступными. Например, характерные ингаляторные устройства для доставки сухого порошка или продуктов включают Aeolizer (Novartis); Airmax (IVAX); ClickHaler (Innovata Biomed); Diskhaler (GlaxoSmithKline); Diskus/Accuhaler (GlaxoSmithKline); Easyhaler (Orion Pharma); Eclipse (Aventis); FlowCaps (Hovione); Handihaler (Boehringer Ingelheim); Pulvinal (Chiesi); Rotahaler (GlaxoSmithKline); SkyeHaler/Certihaler (SkyePharma); Twisthaler (Schering-Plough); Turbuhaler (AstraZeneca); Ultrahaler (Aventis); и тому подобное.

В другом конкретном варианте осуществления, фармацевтическую композицию, содержащую терапевтическое средство, вводят путем ингаляции, используя дозирующий ингалятор. Такие дозирующие ингаляторы обычно выпускают определенное количество терапевтического средства, используя сжатый газ-пропеллент. Соответственно, вводимые фармацевтические композиции, используя дозирующий ингалятор, обычно содержат раствор или суспензию терапевтического средства в сжиженном газе-вытеснителе. Может быть использован любой подходящий сжиженный газ-вытеснитель, включая гидрофторалканы (HFAs), такие как 1,1,1,2-тетрафторэтан (HFA 134a) и 1,1,1,2,3,3,3-гептафтор-н-пропан, (HFA 227); и хлорфторуглероды, такие как CCl₃F. В конкретном варианте осуществления, газ-вытеснителем являются гидрофторалканы. В некоторых вариантах осуществления, композиция гидрофторалкана содержит сорастворитель, такой как этанол или пентан, и/или поверхностно-активное вещество, такое как сорбитан триолеат, масляная кислота, лецитин и глицерин.

Характерная фармацевтическая композиция для использования в дозирующем ингаляторе содержит от около 0,01% до около 5% по массе соединения формулы I; от около 0% до около 20% по массе этанола; и от около 0% до около 5% по массе поверхностно-активного вещества; остальное представляет собой газ-вытеснитель - HFA.

Такие композиции обычно получают добавлением охлажденного или находящегося под давлением гидрофторалкана в подходящий контейнер, содержащий терапевтическое средство, этанол (если присутствует) и поверхностно-активное вещество (если присутствует). Для получения суспензии, терапевтическое средство тонко измельчают и затем объединяют с газом-вытеснителем. Далее композицию помещают в аэрозольный баллон, который обычно является частью дозирующего ингалятора.

Устройства в виде дозирующего ингалятора, подходящие для введения терапевтических средств путем ингаляции, известны из уровня техники, или такие устройства являются коммерчески доступными. Например, характерные устройства в виде дозирующего ингалятора или продукты включают AeroBid Inhaler System (Forest Pharmaceuticals); Atrovent Inhalation Aerosol (Boehringer Ingelheim); Flovent (GlaxoSmithKline); Maxair Inhaler (3M); Proventil Inhaler (Schering); Serevent Inhalation Aerosol (GlaxoSmithKline); и тому подобное.

В другом варианте осуществления, фармацевтическая композиция является подходящей для перорального введения. Фармацевтические композиции для перорального введения могут быть в виде капсул, таблеток, пилюль, пастилок, облаток, драже, порошков, гранул; или в виде раствора или суспензии в водном или неводном жидком веществе; или в виде жидкой эмульсии типа “масло в воде” или “вода в масле”; или в виде эликсира или сиропа; и тому подобное; каждая содержат заранее определенное количество соединения вариантов осуществления в качестве активного ингредиента.

В случае перорального введения препарата в виде твердой лекарственной формы (то есть в виде капсул, таблеток, пилюль и тому подобное), фармацевтическая композиция будет обычно содержать соединение формулы I и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, таких как цитрат натрия или фосфат дикальция. Необязательно или альтернативно, такие твердые лекарственные формы могут также содержать: (1) наполнители или экстендеры, такие как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и/или кремниевая кислота; (2) связующие вещества, такие как карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахарозу и/или гуммиарабик; (3) смачивающие вещества, такие как глицерин; (4) разрыхляющие вещества, такие как агар-агар, карбонат кальция, картофельный крахмал или крахмал из тапиоки, альгиновая кислота, некоторые силикаты и/или карбонат натрия; (5) замедлители растворения, такие как парафин; (6) ускорители впитывания, такие как четвертичные соединения аммония; (7) увлажняющие вещества, такие как цетиловый спирт и/или глицерин моностеарат; (8) абсорбенты, такие как каолин и/или бентонитовая глина; (9) смазывающие вещества, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и/или их смеси; (10) красители; и (11) буферные вещества.

Разрыхляющие вещества, увлажняющие вещества, покровные вещества, подсластители, ароматизаторы и ароматизирующие добавки, консерванты и антиоксиданты может также присутствовать в фармацевтической композиции. Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают: (1) водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, цистеин гидрохлорид, натрий бисульфат, натрий метабисульфат натрий сульфит и тому подобное; (2) маслорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (BHA), бутилированный гидрокситолуол (BHT), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и тому подобное; и (3) металл-хелатообразующие вещества, такие как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и тому подобное. Покровные вещества для таблеток, капсул, пилюль и тому подобного, включают вещества, используемые для интеросолюбильных покрытий, такие как ацетатфталат целлюлозы (CAP), поливинилацетатфталат (PVAP), фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, сополимеры эфира метакриловой кислоты-метакриловой кислоты, ацетат тримеллитат целлюлозы (CAT), карбоксиметилэтилцеллюлоза (CMEC), гидроксипропилметилцеллюлоза ацетат сукцинат (HPMCAS) и тому подобное.

Если желательно, фармацевтическая композиция может также быть получена таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента, используя, например, гидроксипропилметил целлюлозу в различных пропорциях; или другие полимерные матрицы, липосомы и/или микросферы.

Кроме того, фармацевтическая композиция может необязательно содержать опалесцирующее вещество и может быть получено таким образом, чтобы активный ингредиент высвобождался главным образом в определенной части желудочно-кишечного тракта или с задержкой. Примеры включаемых соединений, которые могут быть использованы, включают полимерные вещества и воска. Активный ингредиент или фармацевтическая композиция, содержащая активные ингредиенты, может быть в микроинкапсулированной форме.

Подходящие жидкие лекарственные формы для перорального введения включают, в качестве иллюстрации, фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Такие жидкие лекарственные формы обычно содержат активный ингредиент и инертный разбавитель, такой как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие вещества и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензил бензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, из зародышей пшеницы, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофуриловый спирт, полиэтиленгликоли и эфиры сорбитана и жирных кислот, и их смеси. Суспензии, помимо активного ингредиента, могут содержать суспендирующие вещества, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные эфиры сорбитана, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, и их смеси.

При получении препарата для перорального введения, фармацевтическая композиция может быть упакована в лекарственную форму для однократного введения. Термин “лекарственная форма для однократного введения” обозначает физически дискретную единицу, подходящую для дозированного введения пациенту, то есть каждая единица содержит заранее определенное количество активного вещества, подсчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта или отдельно или в сочетании с одной или несколькими дополнительными единицами. Например, такая лекарственная форма для однократного введения может быть в виде капсулы, таблетки, пилюли и тому подобное.

Соединения формулы I могут также быть введены трансдермально, используя известные системы трансдермальной доставки и наполнители. Например, соединение вариантов осуществления может быть смешано с усилителями проникновения, такими как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль монолаурат, азациклоалкан-2-оны и тому подобное, и включены в пластырь или аналогичные системы доставки лекарственного средства. Дополнительные наполнители, включая желатинирующие вещества, эмульгаторы и буферы, могут быть использованы в таких трансдермальных композициях, если желательно.

Кроме того, соединение формулы I может быть введено парентерально, то есть внутривенно, подкожно или внутримышечно. Для парентерального введения, соединение формулы I обычно растворяют в носителе, приемлемом для перентерального введения, таком как стерильная вода, солевой раствор, растительное масло и тому подобное. В качестве иллюстрации, внутривенная композиция обычно содержит стерильный водный раствор соединения формулы I, где раствор имеет значение pH в пределах от около 4 до около 7.

Если желательно, соединение формулы I может быть введено в сочетании с одним или несколькими другими терапевтическими средствами. В этом аспекте изобретения, соединение формулы I или физически смешивают с другим терапевтическим средством с образованием композиции, содержащей оба вещества; или каждое вещество присутствует в отдельной композиции, которую вводят пациенту одновременно или последовательно.

Например, соединение формулы I может быть объединено со вторым терапевтическим средством, используя обычные способы и оборудование для получения композиции, содержащей соединение формулы I и второе терапевтическое средство. Кроме того, терапевтические средства могут быть объединены с фармацевтически приемлемым носителем для образования фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I, второе терапевтическое средство и фармацевтически приемлемый носитель. В этом варианте осуществления компоненты композиции обычно смешивают с получением физической смеси. Затем физическую смесь вводят в терапевтически эффективном количестве, используя любой из описанных здесь способов введения.

Альтернативно, терапевтические средства могут храниться обособленно и раздельно перед введением пациенту. В этом варианте осуществления, терапевтические средства физически не смешивают вместе перед введением, а вводят одновременно или последовательно в виде разделенной на компоненты композиции. Например, соединение формулы I может быть введено путем ингаляции одновременно или последовательно с другим терапевтическим средством с помощью устройства для введения лекарственного препарата путем ингаляции, использующего обособленные отделения (например, блистерные упаковки) для каждого терапевтическое средства. Альтернативно, комбинация может быть введена, используя различные средства доставки, то есть одно средство доставки для каждого терапевтического средства. Кроме того, терапевтические средства могут быть доставлены различными способами введения, то есть одно путем ингаляции, а другое путем перорального введения.

Любое терапевтическое средство, совместимое с соединениями формулы I, может быть использовано в сочетании с такими соединениями. В конкретном варианте осуществления, вторым терапевтическим веществом является вещество, которое эффективно вводится путем ингаляции. В качестве иллюстрации, характерные типы терапевтических средств, которые могут быть использованы с соединениями вариантов осуществления, включают, но ими не ограничиваются, противовоспалительные средства, такие как стероидные противовоспалительные средства (включая кортикостероиды и глюкокортикоиды), нестероидные противовоспалительные средства (NSAIDs) и PDE₄ ингибиторы; бронхолитические средства, такие как PDE₃ ингибиторы, 2b аденозин модуляторы и агонисты β2 адренергического рецептора; противоинфекционные средства, такие как грамположительные антибиотики, грамотрицательные антибиотики и противовирусные средства; антигистамины; ингибиторы протеазы; афферентные блокаторы, такие как D₂ агонисты и модуляторы нейрокинина; и антагонисты мускаринового рецептора (антихолинергические средства). Многочисленные примеры таких терапевтических средств хорошо известны в данной области. Подходящие дозы для других терапевтических средств, вводимых в сочетании с соединением вариантов осуществления, находятся обычно в диапазоне от около 0,05 мкг/день до около 500 мг/день.

В конкретном варианте осуществления, соединение формулы I вводят в сочетании со стероидным противовоспалительным средством. Характерные примеры стероидных противовоспалительных средств, которые могут быть использованы в сочетании с соединениями вариантов осуществления, включают, но ими не ограничиваются, дипропионат беклометазона; будезонид; пропионат бутиксокорта; 20R-16α,17α-[бутилиденбис(окси)]-6α,9α-дифтор-11β-гидрокси-17β-(метилтио)андроста-4-ен-3-он (RPR-106541); циклезонид; дексаметазон; S-фторметиловый эфир 6α,9α-дифтор-17α-[(2-фуранилкарбонил)окси]-11β-гидрокси-16α-метил-3-оксоандроста-1,4-диен-17β-тиокарбоновой кислоты; S-фторметиловый эфир 6α,9α-дифтор-11β-гидрокси-16α-метил-17α-[(4-метил-1,3-тиазол-5-карбонил)окси]-3-оксоандроста-1,4-диен-17β-тиокарбоновой кислоты; (S)-(2-оксотетрагидрофуран-3S-ил) эфир 6α,9α-дифтор-11β-гидрокси-16α-метил-3-оксо-17α-пропионилоксиандроста-1,4-диен-17β-тиокарбоновой кислоты; флунизолид; фуроат флутиказона; пропионат флутиказона; метилпреднизолон; фуроат мометазона; преднизолон; преднизон; рофлепонид; ST-126; ацетонид триамцинолона; и тому подобное, или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты. Такие стероидные противовоспалительные средства являются коммерчески доступными или могут быть получены, используя обычные способы и реагенты. Например, получение и использование стероидных противовоспалительных средств описано в патенте США № 6537983, опубликованном 25 марта 2003 г.; патенте США № 6750210 B2, опубликованном 15 июня 2004 г.; патенте США № 6759398 B2, опубликованном 6 июля 2004 г.; патенте США № 6858596 B2, опубликованном 22 февраля 2005 г.; патенте США № 7101866 B2, опубликованном 5 сентября 2006 г.; и приведенных здесь ссылках.

При применении стероидного противовоспалительного средства, его обычно вводят в количестве, которое обеспечивает терапевтически положительный эффект при совместном введении с соединением вариантов осуществления. Обычно, стероидное противовоспалительное средство будут вводить в количестве, достаточном, чтобы обеспечить от около 0,05 мкг до около 500 мкг соединения на дозу.

Следующие примеры иллюстрируют типичные фармацевтические композиции:

A. Композиция в виде сухого порошка

Тонкоизмельченное соединение формулы I (100 мг) смешивают с измельченной лактозой (25 г) (например, лактозой, в которой не больше, чем около 85% частиц имеют MMD, равный от около 60 мкм до около 90 мкм, и не меньше, чем 15% частиц имеют MMD меньше, чем 15 мкм). Затем эту перемешанную смесь загружают в отдельные ячейки блистерной упаковки с отслаивающимся покрытием в количестве, достаточном, чтобы обеспечить от около 10 мкг до около 500 мкг соединения формулы I на дозу. Содержимое ячеек вводят, используя ингалятор для доставки сухого порошка в легкие.

B. Композиция в виде сухого порошка

Тонкоизмельченное соединение формулы I (1 г) смешивают с измельченной лактозой (200 г) с образованием суммарной композиции, имеющей весовое отношение соединения к измельченной лактозе, равно 1:200. Смешанную композицию пакуют в устройство для ингаляции сухого порошка, способное доставлять между от около 10 мкг до около 500 мкг соединения формулы I на дозу.

C. Композиция в виде сухого порошка

Тонкоизмельченное соединение формулы I (100 мг) и тонкоизмельченное стероидное противовоспалительное средство (500 мг) смешивают с измельченной лактозой (30 г). Затем эту смесь помещают в отдельные ячейки блистерной упаковки с отслаивающимся покрытием в количестве, достаточном, чтобы обеспечить от около 10 мкг до около 500 мкг соединения формулы I на дозу. Содержимое блистерных упаковок вводят, используя ингалятор для доставки сухого порошка в легкие.

D. Композиция для дозирующего ингалятора

Тонкоизмельченное соединение формулы I (10 г) диспергируют в растворе, полученном растворением лецитина (0,2 г) в деминерализованной воде (200 мл). Полученную суспензию сушат распылением и затем тонко измельчают с образованием тонкоизмельченной композиции, содержащей частицы, имеющие средний диаметр меньше, чем около 1,5 мкм. Затем тонкоизмельченную композицию помещают в картриджи дозирующего ингалятора, содержащие сжатый 1,1,1,2-тетрафторэтан в количестве, достаточном для обеспечения от около 10 мкг до около 500 мкг соединения формулы I на дозу при введении с помощью дозирующего ингалятора.

E. Композиция для распыления

Соединение формулы I (25 мг) растворяют в цитратном буферном (pH 5) изотоническом растворе (125 мл). Смесь перемешивают и диспергируют ультразвуком до тех пор, пока соединение не растворится. Значение pH раствора проверяют и при необходимости доводят до значения pH, равного 5, медленным добавлением 1 н. водного раствора гидроксида натрия. Раствор вводят, используя устройство для распыления, которое обеспечивает от около 10 мкг до около 500 мкг соединения формулы I на дозу.

F. Твердые желатиновые капсулы

Соединение формулы I (50 г), высушенную распылением лактозу (440 г) и стеарат магния (10 г) тщательно смешивают. Полученную композицию помещают в твердую желатиновую капсулу (500 мг композиции на капсулу), которую вводят перорально.

G. Инъецируемая композиция

Соединение формулы I (0,2 г) смешивают с 0,4 M буферным раствором, содержащим ацетат натрия (2,0 мл). Значение pH полученного раствора доводят до значения pH, равного 4, используя 0,5 н. водный раствор соляной кислоты или 0,5 н. водный раствор гидроксида натрия, по мере необходимости, и затем добавляют достаточное количество воды для инъекции для получения общего объема, равного 20 мл. Далее смесь фильтруют через стерильный фильтр (0,22 микрон) с получением стерильного раствора, подходящего для введения путем инъекции.

Эффективность

Соединения формулы I обладают как активностью антагониста мускаринового рецептора, так и агониста β2 адренергического рецептора, и соответственно такие соединения, как ожидают, будут полезны в качестве терапевтических средств для лечения медицинских состояний, опосредованных мускариновыми рецепторами и/или β₂ адренергическими рецепторами, то есть заболеваний, которые улучшаются или ослабевают лечением с помощью антагониста мускаринового рецептора или агониста β2 адренергического рецептора. Такие заболевания хорошо известны рядовому специалисту в данной области, как следует, например, из работ Eglen et al., Muscarinic Receptor Subtypes: Pharmacology and Therapeutic Potential, DN & P 10(8), 462-469 (1997); Emilien et al., Current Therapeutic Uses and Potential of beta-Adrenoceptor Agonists and Antagonists, European J. Clinical Pharm., 53(6), 389-404 (1998); и приведенных здесь ссылок. Такие заболевания включают, например, легочные расстройства или заболевания, связанные с обратимой обструкция дыхательных путей, такие как хроническое обструктивное заболевание легких (например, хронический и астматический бронхит и эмфизема), астма, фиброз легких, синдром расстройства дыхания у взрослых/синдром острой дыхательной недостаточности (ARDS), хроническая обструкция дыхательных путей, бронхиальная гиперактивность, аллергический ринит, пневмокониоз (такой как алюминоз, антракоз, асбезтоз, халикоз, птилоз, сидероз, силикоз, табакоз и биссиноз) и другие легочные расстройства неизвестного происхождения, которые извлекают выгоду из вызываемой терапевтическим средством бронходилатации. Кроме того, другие заболевания, которые, как известно, поддаются лечению, по крайней мере отчасти, с помощью антагониста мускаринового рецептора или агониста β2 адренергического рецептора, включают преждевременные роды, депрессию, застойную сердечную недостаточность, кожные заболевания (например, воспалительные, аллергические, псориазные и пролиферативные кожные заболевания), состояния, при которых желательно понизить кислотность желудка (например, при пептической язве и язве желудка) и мышечная атрофия.

Соответственно, один вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения легочного расстройства, способу, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I. Соединения формулы I, при использовании для лечения легочного расстройства, будут вводится обычно путем ингаляции в многократных дозах в день, в однократной дозе в день или в однократной дозе в неделю. Обычно, доза для лечения легочного расстройства рассчитывается в пределах от около 10 мкг/день до около 1500 мкг/день; например, от около 25 мкг/день до около 1000 мкг/день; включая от около 50 мкг/день до около 500 мкг/день.

В одном из аспектов способа, настоящее изобретение относится к способу лечения хронического обструктивного заболевания легких или астмы, способу, содержащему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I. Обычно, доза для лечения COPD или астмы находится в пределах от около 10 мкг/день до около 1500 мкг/день. В частности, этот способ включает ослабление симптомов COPD или астмы. Термин “COPD”, понятный рядовому специалисту в данной области, включает ряд респираторных состояний, включая хронический обструктивный бронхит и эмфизему, как следует, например, из работ Barnes, Chronic Obstructive Pulmonary Disease, N. Engl. J. Med., 2000: 343:269-78, и приведенных здесь ссылок.

При введении путем ингаляции, соединения формулы I обычно обладают эффектом вызывания бронходилатации. Соответственно, в другом аспекте способа, изобретение относится к способу вызывания бронходилатации у млекопитающего, содержащему введение млекопитающему определенного количества соединения формулы I, вызывающего бронходилатацию. Обычно доза для вызывания бронходилатации будет находиться в пределах от около 10 мкг/день до около 1500 мкг/день.

При использовании в качестве терапевтического средства, соединения формулы I необязательно вводят в комбинации с другим терапевтическим средством или веществами. В частности, при введении соединений формулы I со стероидным противовоспалительным средством, предполагается тройная терапия, то есть активность антагониста мускаринового рецептора, активность агониста β2 адренергического рецептора и противовоспалительная активность, используя только два терапевтических вещества. Поскольку фармацевтические композиции (и сочетания), содержащие два терапевтических средства обычно легче получать и/или вводить по сравнению с композициями, содержащими три терапевтических средства, такие двухкомпонентные композиции имеют значительное преимущество по сравнению с композициями, содержащими три терапевтических средства. Соответственно, в конкретных вариантах осуществления, фармацевтические композиции, комбинации и способы по настоящему изобретению дополнительно содержат стероидное противовоспалительное средство.

Поскольку соединения формулы I имеют как активность антагониста мускаринового рецептора, так и активность агониста β₂ адренергического рецептора, такие соединения также используют в качестве средства исследования для исследования или изучения биологических систем или образцов, имеющих мускариновые рецепторы или β₂ адренергические рецепторы. Кроме того, такие соединения используют в скрининг-тестах для обнаружения, например, новых соединений, обладающих как активностью антагониста мускаринового рецептора, так и активностью агониста β₂ адренергического рецептора. Используемые биологические системы или образцы могут содержать мускариновые рецепторы или β₂ адренергические рецепторы или рецепторы обоих типов. Любая подходящая биологическая система или образец, имеющий мускариновые рецепторы и/или β₂ адренергические рецепторы, может быть использована в таких исследованиях, которые могут быть проведены или in vitro или in vivo. Характерные биологические системы или образцы, подходящие для таких исследований, включают, но ими не ограничиваются, клетки, клеточные экстракты, плазменные мембраны, образцы ткани, млекопитающих (таких как мышь, крысы, морские свинки, кролики, собаки, свиньи и так далее) и тому подобное.

При использовании в качестве инструмента для исследований биологических систем или объектов, содержащих мускариновый рецептор и/или β₂ адренергический рецептор, обычно вступает во взаимодействие с количеством соединения формулы I, подавляющим мускариновые рецепторы, или активностью агониста в отношении β₂ адренергических рецепторов. Эффекты воздействия на биологическую систему или объект, оказываемые соединением, затем определяют и измеряют, используя обычные методы и оборудование, такие как исследование связывания в исследовании радиолигандного связывания или лиганд-опосредованных изменений в функциональном исследовании или определение степени бронхопротекции, обеспечиваемой соединением в исследовании бронхопротекции у млекопитающего. Характерные функциональные исследования включают лиганд-опосредованные изменения во внутриклеточном циклическом аденозинмонофосфате (цАМФ); лиганд-опосредованные изменения активности фермента аденилилциклазы (который синтезирует цАМФ); лиганд-опосредованные изменения включения гуанозин 5′-O-(тио)трифосфата ([³⁵S]GTP S) в изолированные мембраны посредством катализированного рецептором обмена GDP на[³⁵S]GTP S; лиганд-опосредованные изменения в свободных внутриклеточных ионах кальция (измеренных, например, с помощью устройства для считывания флуоресцентных сигналов с планшетов - FLIPR® от Molecular Devices, Inc.); и так далее. Соединения формулы I, как ожидают, будут вызывать антагонизм или снижать активацию мускаринового рецептора или вызывать агонизм или активацию β₂ адренергического рецептора и в функциональных исследованиях, указанных в настоящем документе, или в исследованиях аналогичного характера. Соединения формулы I будут обычно использоваться на этих стадиях при концентрации в пределах от около 0,1 нмоль до около 100 нмоль.

Кроме того, соединения формулы I могут быть использованы в качестве инструмента для оценки других химических соединений. В этом аспекте, соединение формулы I используют в качестве стандарта в исследовании для сравнения результатов, полученных с помощью тестируемого соединения и соединения формулы I. Например, данные связывания мускаринового рецептора и/или β₂ адренергического рецептора (как определено, например, in vitro исследованиями методом радиолигандного замещения) для тестируемого соединения или группы тестируемого соединения сравнивают с данными связывания мускаринового рецептора и/или β₂ адренергического рецептора для соединения формулы I с целью идентификации тех тестовых соединений, которые обладают желаемым связыванием, то есть тестовые соединения, обладающие примерно равным или большим связыванием с соединением формулы I, если таковые есть. Альтернативно, например, бронхозащитные эффекты могут быть определены для тестируемых соединений и соединения формулы I в исследовании бронхопротекции у млекопитающего, и эти данные сравнивают для идентификации тестируемых соединений, обеспечивающих примерно равный или лучшие бронхозащитные эффекты или продолжительность действия. Этот аспект включает, в качестве отдельных вариантов осуществления, как (i) получение данных для сравнения (используя соответствующие исследования), так и (ii) анализ данных теста для идентификации представляющих интерес тестируемых соединений.

Свойства и эффективность соединений формулы I может быть продемонстрирована, используя различные in vitro и in vivo исследования, хорошо известные рядовому специалисту в данной области. Например, характерные исследования более подробно описаны в следующих примерах.

Примеры

Следующие примеры даны для иллюстрации различных характерных вариантов осуществления и аспектов настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема притязаний по настоящему изобретению каким-либо образом, если не указано особо.

Все реагенты, исходные вещества и растворители, используемые в следующих примерах, были закуплены у коммерческих поставщиков (таких как Aldrich Chemical Company, Milwaukee, Wis.) и использовались без дополнительной очистки, если не указано иное.

Спектры ¹H ЯМР были получены на спектрометре 400 MHz Varian AS400, если не указано иное. Химические сдвиги представлены как значения δ в м.д. относительно тетраметилсилана (ТМС) в качестве внутреннего стандарта. Константы связывания (значения J) даны в герцах (Гц), и мультиплетность указана, используя следующие аббревиатуры: с=синглет, д=дублет, т=триплет, кв=квартет, м=мультиплет, ушир=уширенный, но=не определено.

Условия жидкостной хромато-масс спектроскопии (LC-MS)

Данные LC-MS получали, используя жидкостную хроматографическую систему Agilent 1100-G1312A Binary Pump (Agilent Technologies), ZORBAX Rapid Resolution 3,5 мкм Rx, колонка Bonus-RP (размер частиц 3,5 мкм; 2,1 мм×50 мм) (Agilent Technologies) и масс спектрометр API 150EX Single Quadrupole LC/MS (Perkin-Elmer Sciex Instruments). Используемыми системами растворителей были:

Растворитель A:		98% воды и 2% ацетонитрила (об/об) + 1 мл/л ТФУ
Растворитель B:		90% ацетонитрила и 10% воды (об/об) + 1 мл/л ТФУ
Скорость потока:			500 мкл/мин
Градиент:	(способ 10-90):			от 10% B до 90% B в течение 3 мин
	(способ 2-90):			от 2% B до 90% B в течение 3 мин
	(способ 10-70):			от 10% B до 70% B в течение 3 мин.

Условия ВЭЖХ

ВЭЖХ осуществляли, используя систему HP 1100 Series HPLC (Agilent Technologies) и ZORBAX Rapid Resolution 3,5 мкм Rx, колонка Bonus-RP (размер частиц 3,5 мкм; 2,1 мм×50 мм) (Agilent Technologies) или колонка Ascentis Express C18 HPLC (размер частиц 2,7 мкм, 3,0 мм×3 см). Используемыми системами растворителей были:

Растворитель A:			98% воды и 2% ацетонитрила (об/об) + 1 мл/л ТФУ
Растворитель B:		90% ацетонитрила и 10% воды (об/об) + 1 мл/л ТФУ
Скорость потока:				500 мкл/мин
Градиент:	(способ 10-50):				от 10% B до 50% B в течение 6 мин
	(способ 10-70):				от 10% B до 70% B в течение 6 мин
	(способ 2-90):				от 2% B до 90% B в течение 6 мин

Пример 1

Получение 3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионовой кислоты

Перемешиваемый раствор пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (50,0 г, 168,7 ммоль) (см., например, публикацию патента США № 2006/0035931 A1, опубликованной 16 февраля 2006) и акриловой кислоты (15,1 мл, 219,3 ммоль) в DCM (500 мл) нагревали при 50°C в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток растворяли в MeOH (600 мл). Полученный раствор нагревали при 75°C в течение 2 час и затем оставляли стоять при комнатной температуре в течение около 48 ч. Полученное твердое вещество собирали фильтрацией, промывали MeOH и сушили с получением указанного в заголовке соединения (61,5 г, 99%-ный выход).

Пример 2

Получение метилового эфира 4-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)масляной кислоты

В перемешиваемую смесь гидрохлорида метилового эфира 4-метиламиномасляной кислоты (546 мг, 3,26 ммоль) и 3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионовой кислоты (1,20 г, 3,26 ммоль) в DCM (15 мл) добавляли N,N,N′,N′-тетраметил-O-(7-азабензотриазол-1-ил)уроний гексафторфосфат (1,36 г, 3,58 ммоль), затем N,N-диизопропилэтиламин (1,42 мл, 8,15 ммоль). Анализ LC-MS (способ 2-90) показывал наличие продукта (Rt 3,11 мин; m/z 482,4 [M+H]⁺). Добавляли воду и DCM и слои разделяли. Органический слой промывали водой (2×) и насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (2,0 г, 100%-ный выход) в виде масла светло-желтого цвета.

Пример 3

Получение 4-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)масляной кислоты

В перемешиваемый раствор метилового эфира 4-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)масляной кислоты (1,00 г, 2,08 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавляли по каплям водный гидроксид натрия (1,0 M, 10,4 мл, 10,4 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Анализ LC-MS (способ 10-90) показывал наличие продукта (Rt 3,34 мин; m/z 468,2 [M+H]⁺). Устанавливали pH смеси равным pH 5 с помощью водного раствора соляной кислоты (6 M) и смесь концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли водный раствор хлорида аммония и эту смесь промывали EtOAc. Устанавливали pH водного слоя равным pH 4 с помощью фосфатного буферного раствора и водный слой затем экстрагировали смесью 1:3 изопропилацетат/хлороформ (4×). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла, которое использовали без дополнительной очистки.

Пример 4

Получение 1-(2-{[3-(4-(1,3-диоксолан-2-ил)фенилкарбамоил)пропил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В раствор 4-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)масляной кислоты (75 мг, 0,16 ммоль) и 4-(1,3-диоксолан-2-ил)фениламина (26 мг, 0,16 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли N,N,N′,N′-тетраметил-O-(7-азабензотриазол-1-ил)уроний гексафторфосфат (73,2 мг, 0,192 ммоль), затем N,N-диизопропилэтиламин (55,9 мкл, 0,321 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение около 48 ч. Анализ LC-MS (способ 2-90) показывал наличие продукта (Rt 3,87 мин; m/z 615,4 [M+H]⁺). Добавляли воду и DCM и слои разделяли. Органический слой промывали водой (2×) и насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде масла желтого цвета, которое использовали без дополнительной очистки. В последующих экспериментах это соединение выделяли также в виде фильтруемого твердого вещества.

Пример 5

Получение 1-(2-{[3-(4-формилфенилкарбамоил)пропил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 1-(2-{[3-(4-(1,3-диоксолан-2-ил)фенилкарбамоил)пропил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (98 мг, 0,16 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) добавляли водный раствор соляной кислоты (3 M, 1,07 мл). Полученный темно-оранжевый раствор перемешивали при комнатной температуре. Добавляли воду и полученную смесь экстрагировали DCM (2×). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.

Пример 6

Получение 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 1-(2-{[3-(4-формилфенилкарбамоил)пропил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (91 мг, 0,16 ммоль) в DCM (2 мл) добавляли уксуснокислую соль 5-[(R)-2-амино-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-гидрокси-1H-хинолин-2-она (101 мг, 0,256 ммоль) (см., например, публикацию патента США № 2006/0035931 A1, опубликованного 16 февраля, 2006 г.), затем MeOH (1 мл). Полученный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, затем добавляли натрий триацетоксиборгидрид (89 мг, 0,40 ммоль) и эту смесь перемешивали в течение ночи. Анализ LC-MS (способ 2-90) показывал наличие продукта (Rt 3,25 мин; m/z 889,8 [M+H]⁺). Добавляли воду и DCM и слои разделяли. Органический слой промывали водой (2×) и насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.

Пример 7

Получение дисоли трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил)пропил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (соединение I-1)

В раствор 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (~0,16 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли тригидрофторид триэтиламина (260 мкл, 1,60 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Анализ LC-MS (способ 2-90) показывал наличие продукта (Rt 3,00 мин; m/z 775,4 [M+H]⁺). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (27,8 мг, 39%-ный выход, 94%-ная чистота).

Пример 8

Получение [3-(тритиламино)фенил]уксусной кислоты

В перемешиваемый раствор (3-аминофенил)уксусной кислоты (30,20 г, 199,8 ммоль) в пиридине (200 мл) в атмосфере азота при температуре 0°C добавляли по каплям раствор тритил бромида (77,5 г, 240 ммоль) в DCM (120 мл) в течение 5 мин. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 14 час и затем упаривали при пониженном давлении. К остатку добавляли DCM (~800 мл) и воду (~800 мл) и слои разделяли. Органический слой промывали водой (3×~500 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением коричневато-беловатого твердого вещества (100,1 г). Твердый продукт суспендировали в EtOH (500 мл) и эту смесь нагревали при 60°C в течение 1 час и затем охлаждали до комнатной температуры. Твердый продукт собирали фильтрацией, промывали EtOH и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (67,2 г, 85%-ный выход) в виде твердого вещества белого цвета.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 7,25 (м); 7,13 (м); 6,70 (с); 6,63 (т); 6,55 (д); 6,27 (д); 6,09 (м); 3,29 (уш. с); 3,16 (с).

Пример 9

Получение 2-[3-(тритиламино)фенил]этанола

В перемешиваемую суспензию [3-(тритиламино)фенил]уксусной кислоты (30,00 г, 76,24 ммоль) в ТГФ (126 мл) в атмосфере азота при температуре 0°C добавляли по каплям раствор комплекса боран диметилсульфид в ТГФ (2 M, 76,2 мл, 152 ммоль) в течение 45 мин, поддерживая при этом температуру ≤1,8°C. Полученный бледно-желтый гомогенный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Медленно добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (~300 мл) (очень бурное выделение газа в начале добавления) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь экстрагировали EtOAc (2×~330 мл) и объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (25,6 г, 86%-ный выход) в виде твердого вещества белого цвета.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7,25 (м); 6,9 (т); 6,4 (м); 6,3 (м); 6,1 (с); 5,0 (с); 3,5 (м); 2,5 (т).

Пример 10

Получение 2-[3-(тритиламино)фенил]этилового эфира 4-нитробензолсульфоновой кислоты

В перемешиваемый раствор 2-[3-(тритиламино)фенил]этанол (5,00 г, 13,2 ммоль) и триэтилендиамин (2,22 г, 19,8 ммоль) в DCM (52,7 мл) в атмосфере азота при температуре 0°C добавляли по частям п-нитробензолсульфонилхлорид (3,50 г, 15,8 ммоль) в течение 5 мин. Полученную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 40 мин и затем добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (~50 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и затем слои разделяли. Водный слой экстрагировали DCM (2×~50 мл) и объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (7,44 г, 100%-ный выход) оранжево-желтого пенистого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,20 (м); 7,70 (м); 7,30 (м); 6,70 (м); 6,30 (м); 6,10 (м); 5,30 (с); 5,00 (с); 4,00 (т); 3,20 (м); 2,60 (м).

Пример 11

Получение 5-[(R)-2-{[2-(3-аминофенил)этил]бензиламино}-1-(трет-бутил-диметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она

Перемешиваемую смесь 2-[3-(тритиламино)фенил]этилового эфира 4-нитробензолсульфоновой кислоты (7,44 г, 13,2 ммоль); 5-[(R)-2-бензиламино-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она (5,42 г, 10,5 ммоль) (см., например, публикацию патента США № 2006/0035931 A1, опубликованного 16 февраля, 2006) и бикарбоната натрия (3,32 г, 39,5 ммоль) в ацетонитриле (26,4 мл) нагревали при 75°C в атмосфере азота в течение 18 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и устанавливали pH равным pH<2 с помощью водного раствора соляной кислоты (1 н., ~40 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 час и затем устанавливали pH смеси равным pH 7-8 с помощью насыщенного водного раствора бикарбоната натрия (~30 мл). Добавляли воду (~50 мл) и EtOAc (~50 мл) и слои разделяли (для улучшения разделения добавляли небольшое количество разбавленного водного раствора хлорида натрия). Водный слой экстрагировали EtOAc (2×30 мл) и объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (30-60% EtOAc в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (5,7 г, 68%-ный выход) в виде пенистого твердого вещества светло-желтого цвета.

^lH ЯМР (CDCl₃) δ 9,10 (с); 7,90 (уш. с); 7,40 (м); 7,20 (м); 7,10 (м); 7,00 (т); 6,90 (с); 6,50 (м); 6,30 (с); 5,20 (с); 4,80 (м); 3,60 (м); 2,80 (м); 2,60 (м); 0,80 (с); -0,2 (с).

Пример 12

Получение 4-(трет-бутоксикарбонилметиламино)масляной кислоты

В перемешиваемую смесь гидрохлорида 4-(метиламино)масляной кислоты (1,00 г, 6,51 ммоль) и триэтиламина (2,72 мл, 19,5 ммоль) в DCM (60 мл) при комнатной температуре добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (1,56 г, 7,16 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение около 72 ч. Анализ LC-MS показывал присутствие продукта (Rt 4,11 мин; m/z 216,2 [M+H]⁺). Добавляли DCM и воду и устанавливали pH водного слоя равным pH 4,5-6 с помощью водного раствора соляной кислоты (1 M). Слои разделяли, и органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,5 г, 100%-ный выход) в виде густого масла светло-желтого цвета.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 3,28 (уш. с); 2,85 (с); 2,35 (т); 1,84 (т); 1,46 (с).

Пример 13

Получение трет-бутилового эфира {3-[3-(2-{бензил-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]амино}этил)фенилкарбамоил]пропил} метилкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 4-(трет-бутоксикарбонилметиламино)масляной кислоты (72,0 мг, 0,331 ммоль); 5-[(R)-2-{[2-(3-аминофенил)этил]бензиламино}-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она (210 мг, 0,331 ммоль); 2,6-лутидина (46,5 мкл, 0,398 ммоль); и гидрохлорида N-(3-диметиламинопропил)-N′-этилкарбодиимида (69,8 мг, 0,364 ммоль) в ДМФ (3 мл) при комнатной температуре добавляли раствор 1-гидрокси-7-азабензотриазола в ДМФ (0,5 M, 0,729 мл, 0,364 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Анализ LC-MS (способ 2-90) показывал наличие продукта (Rt 4,56 мин; m/z 833,6 [M+H]⁺). Добавляли воду и эту смесь разбавляли с помощью водного 10%-ного раствора хлорида лития и DCM. Слои разделяли, и органический слой промывали водным 10%-ным раствором хлорида лития (2×), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток затем концентрировали в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (содержит незначительное количество ДМФ), которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Пример 14

Получение N-[3-(2-{бензил-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]амино}этил)фенил]-4-метиламинобутирамида

В перемешиваемый раствор трет-бутилового эфира {3-[3-(2-{бензил-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]амино}этил)фенилкарбамоил] пропил}метилкарбаминовой кислоты (276 мг, 0,331 ммоль) в DCM (3 мл) при комнатной температуре добавляли трифторуксусную кислоту (2 мл, 20 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Анализ LC-MS (способ 2-90) показывал наличие продукта (Rt 2,69 мин; m/z 7,33,4 [M+H]⁺). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток растворяли в DCM. Данный раствор промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (249 мг, 100%-ный выход) в виде масла желто-коричневого цвета, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Пример 15

Получение 1-[2-({3-[3-(2-{бензил-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]амино}этил)фенилкарбамоил]пропил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионовой кислоты (127 мг, 0,344 ммоль) и гидрохлорида N-(3-диметиламинопропил)-N̕-этилкарбодиимида (69,0 мг, 0,360 ммоль) в ДМФ (5 мл) при комнатной температуре добавляли раствор 1-гидрокси-7-азабензотриазола в ДМФ (0,5 M, 0,720 мл, 0,360 ммоль). Добавляли N-[3-(2-{бензил-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]амино}этил)фенил]-4-метиламинобутирамид (240 мг, 0,327 ммоль) и 2,6-лутидин (114 мкл, 0,982 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Анализ LC-MS (способ 2-90) показывал наличие продукта (Rt 4,13 мин; m/z 1083,7 [M⁺]). Добавляли воду и эту смесь разбавляли с помощью DCM. Слои разделяли, и органический слой промывали водным 10%-ным раствором хлорида лития (2×), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-20% MeOH в DCM с 1% TEA) с получением указанного в заголовке соединения (258 мг, 72%-ный выход) в виде масла желтого цвета.

Пример 16

Получение 1-(2-{[3-(3-{2-[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 1-[2-({3-[3-(2-{бензил-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]амино}этил)фенилкарбамоил]пропил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (258 мг, 0,238 ммоль) в MeOH (3 мл) при комнатной температуре добавляли раствор уксусной кислоты в воде (17,4 M, 41,4 мкл, 0,720 ммоль). Полученный раствор продували азотом (3 цикла вакуумирования, после сухого азота) и затем добавляли гидроксид палладия (47 мг, 0,34 ммоль). Эту смесь вновь продували азотом и затем водородом (5×) и далее перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода (баллон с погруженной иглой) в течение 6 ч. Анализ LC-MS (способ 2-90) показывал наличие продукта (Rt 3,71 мин; m/z 903,6 [M+H]⁺). Реакционную смесь фильтровали через мембранный фильтр, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Пример 17

Получение дисоли трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил)пропил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (соединение 1-7)

В перемешиваемый раствор 1-(2-{[3-(3-{2-[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (202 мг, 0,224 ммоль в DCM (4 мл) при комнатной температуре добавляли тригидрофторид триэтиламина (364 мкл, 2,24 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Анализ LC-MS (способ 2-90) показывал наличие продукта (Rt 2,77 мин; m/z 789,6 [M+H]⁺). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (101,6 мг, 47%-ный выход, 100%-ная чистота).

Пример 18

Получение метил (3-бромфенил)ацетата

Перемешиваемый раствор (3-бромфенил)уксусной кислоты (10,0 г, 0,0465 моль) и концентрированной серной кислоты (4,5 мл) в MeOH (230 мл) нагревали при 40°C в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток смешивали с водой (50 мл) и DCM (100 мл). Слои разделяли, и органический слой концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% EtOAc/гексан) с получением указанного в заголовке соединения (19,8 г, 91%-ный выход) в виде бесцветного масла.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 3,36 мин; m/z 300,4 [M+H]⁺; 229,6 [M⁺]. ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,48 (с, 1H); 7,44 (д, 1H); 7,26-7,25 (м, 2H); 3,71 (с, 3H); 3,66 (с, 2H).

Пример 19

Получение метил [3-(2-оксопропил)фенил]ацетата

Перемешиваемую смесь метил (3-бромфенил)ацетата (19,7 г, 86,0 ммоль), метоксида трибутилолова (37,1 мл, 129 ммоль), изопропенилацетата (14,2 мл, 129 ммоль), ацетата палладия (961 мг, 4,28 ммоль), и три-о-толилфосфина (2,63 г, 8,64 ммоль) в толуоле (70 мл) нагревали при 100°C в течение 6 ч. Добавляли водный раствор фторида калия (4M, 120 мл) и EtOAc (200 мл) и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Смесь далее фильтровали через целит и слои разделяли. Органический слой промывали водой и затем упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-8% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (11,8 г, 66%-ный выход).

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 4,24 мин; m/z 207,3 [M+H]⁺.

Пример 20

Получение гидрохлоридной соли метил {3-[(S)-2-((S)-1-фенилэтиламино)пропил]фенил}ацетата

Смесь метил [3-(2-оксопропил)фенил]ацетата (2,31 г, 11,2 ммоль), (S)-1-фенилэтиламина (3,4 мл, 27,0 ммоль), натрий триацетоксиборгидрида (14 г, 68,0 ммоль) и сульфата магния (3,2 г, 27,0 ммоль) в DCM (69 мл) перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (150 мл) до прекращения выделения пузырьков газа. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали DCM (70 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% MeOH в DCM). К продукту добавляли водный раствор соляной кислоты (6 н., 2 мл) с образованием гидрохлоридной соли. Добавляли MeOH (50 мл) и полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Данную процедуру повторяли и затем добавляли минимальное количество MeOH (5 мл) до завершения растворения твердого продукта. Добавляли диизопропиловый эфир (9 мл) и полученную смесь оставляли стоять при комнатной температуре в течение 2 ч. Образовавшийся осадок собирали фильтрацией и промывали эфиром с получением указанного в заголовке соединения (2,85 г; 81%-ный выход; 10:1 ди (диастереомерный избыток) S,S) в виде твердого вещества белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 2,28 мин; m/z 312,2 [M+H]⁺. ^lH ЯМР (CD₃OD) δ 7,71-7,69 (м, 4H); 7,45 (т, 1H); 7,35 (т, 1H); 7,20-7,17 (м, 3H); 4,80-4,76 (м, 1H); 3,85 (с, 3H); 3,81 (с, 2H); 3,42-3,40 (м, 1H); 2,80 (т, 2H); 1,86 (д, 3H); 1,37 (д, 3H).

Пример 21

Получение метил [3-((S)-2-аминопропил)фенил]ацетата

Перемешиваемый раствор гидрохлоридной соли метил {3-[(S)-2-((S)-1-фенилэтиламино)пропил]фенил}ацетата (1,12 г, 3,60 ммоль), формиат аммония (1,16 г, 257 ммоль) и гидроксид палладия (0,30 г, 2,1 ммоль) в EtOH (40 мл) нагревали при 75°C в течение 1 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит и лепешку на фильтре промывали EtOAc (2×50 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток растворяли в DCM (50 мл) и 20%-ном водном растворе аммиака (50 мл). Слои разделяли, и водный слой экстрагировали DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (437 мг, 58%-ный выход) в виде бесцветного масла.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 1,18 мин; m/z 208,4 [M+H]⁺. ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,43 (т, 1H); 7,29-7,25 (м, 3H); 3,85 (с, 3Н); 3,81 (с, 2Н); 3,31-3,23 (м, 1H); 2,85-2,75 (м, 2H); 1,26 (д, 3H).

Пример 22

Получение метилового эфира (3-{(S)-2-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этиламино]пропил}фенил)уксусной кислоты

Раствор метилового эфира [3-((S)-2-аминопропил)фенил]уксусной кислоты (632 мг, 3,05 ммоль) и триэтиламина (1,27 мл, 9,15 ммоль) в N-метилпирролидиноне (3,4 мл, 35 ммоль) добавляли к 8-бензилокси-5-[(R)-2-бром-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-1H-хинолин-2-ону (1,5 г, 3,0 ммоль) (см., например, публикацию патента США № 2006/0035931 A1, опубликованного 16 февраля 2006 г.). Полученную смесь подвергали микроволновому облучению (300 ватт) при температуре 100°C в течение 1,5 ч. Смесь далее растворяли EtOAc (20 мл) и этот раствор промывали повторно насыщенным солевым раствором (100 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (400 мг, 20%-ный выход) в виде масла желтого цвета.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 2,79 мин; m/z 615,4 [M+H]⁺.

Пример 23

Получение (3-{(S)-2-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этиламино]пропил}фенил)уксусной кислоты

В раствор метилового эфира (3-{(S)-2-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этиламино]пропил}фенил)уксусной кислоты (810 мг, 1,3 ммоль) в смеси 3:2:1 ТГФ/MeOH/вода (4 мл) добавляли гидроксид лития (158 мг, 6,59 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и затем подкисляли до pH 6 концентрированным водным раствором соляной кислоты. Эту смесь концентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества желтого цвета (307 мг, 39%-ный выход), которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 3,10 мин; m/z 601,4 [M+H]⁺.

Пример 24

Получение (3-{(S)-2-[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)уксусной кислоты

Раствор (3-{(S)-2-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этиламино]пропил}фенил)уксусной кислоты (~1,3 ммоль) в EtOH (8 мл) продували сухим азотом и затем добавляли палладий на угле (10%, ~50% воды, тип Degussa, 300 мг). Эту смесь продували водородом и затем перемешивали в атмосфере водорода (баллон) в течение 1 ч. Смесь затем фильтровали через целит и осадок на фильтре промывали MeOH (20 мл) и EtOAc (20 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-20% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (300 мг, 40%-ный выход) в виде твердого вещества желтого цвета.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 2,67 мин; m/z 511,6 [M+H]⁺.

Пример 25

Получение трет-бутилового эфира [3-(9H-флуорен-9-илметоксикарбониламино)пропил]метилкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор трет-бутилового эфира N-(3-аминопропил)-N-метилкарбаминовой кислоты (2,00 г, 10,6 ммоль) и карбоната натрия (2,81 г, 26,6 ммоль) в воде (7 мл) при температуре 0°C добавляли раствор 9-флуоренилметилхлорформиата (2,75 г, 10,6 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 час и затем выливали в воду (10 мл). Эту смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (2×50 мл) и объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением прозрачного масла. Масло очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-70% EtOAc в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (4,24 г, 77%-ный выход) в виде прозрачного масла (продукт содержит незначительное количество примесей, но использовался без дополнительной очистки).

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 4,05 мин; m/z 411,2 [M+H]⁺. ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,96 (д, 2H); 7,81 (д, 2H), 7,56 (т, 2H); 7,48 (т, 2H); 4,55 (д, 2H); 4,37 (т, 1H); 3,41 (т, 2H); 3,27 (т, 2H); 3,01 (с, 3H); 1,89-1,85 (м, 2H); 1,61 (с, 9H).

Пример 26

Получение гидрохлоридной соли 9H-флуорен-9-илметилового эфира (3-метиламинопропил)карбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор трет-бутилового эфира [3-(9H-флуорен-9-илметоксикарбониламино)пропил]метилкарбаминовой кислоты (4,24 г, 10,3 ммоль) в EtOAc (8 мл) медленно добавляли концентрированную соляную кислоту (2 мл, 60 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (3,21 г, 78%-ный выход) в виде твердого вещества белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 2,32 мин; m/z 311,4 [M+H]⁺. ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,82 (д, 2H); 7,66 (д, 2H), 7,42 (т, 2H); 7,34 (т, 2H); 4,45 (д, 2H); 4,12 (т, 1H); 3,23 (т, 2H); 2,99 (т, 2H); 2,71 (с, 3H); 1,88-1,83 (м, 2H).

Пример 27

Получение 1-(2-{[3-(9H-флуорен-9-илметоксикарбониламино)пропил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемую смесь 3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионовой кислоты (2,8 г, 7,6 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (2,6 мл, 15 ммоль) в ДМФ (31 мл) добавляли 2-хлор-1-метилпиридиний йодид (3,9 г, 15 ммоль). После растворения твердых продуктов добавляли гидрохлоридную соль 9H-флуорен-9-илметилового эфира (3-метиламинопропил)карбаминовой кислоты (2,63 г, 7,58 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре до по существу полного завершения процесса согласно данным ВЭЖХ и LCMS. Смесь затем концентрировали при пониженном давлении до удаления большей части ДМФ и остаток растворяли в DCM (30 мл). Эту смесь промывали водой (3×20 мл) и насыщенным солевым раствором (3×20 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-20% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (5,0 г, 97%-ный выход) в виде твердого вещества белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 3,24 мин; m/z 661,4 [M+H]⁺.

Пример 28

Получение 1-{2-[(3-аминопропил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

К 1-(2-{[3-(9H-флуорен-9-илметоксикарбониламино)пропил]-метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-иловому эфиру бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (2,2 г, 3,3 ммоль) добавляли 10%-ный раствор пиперидина (0,31 г, 3,3 ммоль) в DCM (3,2 мл) и полученную смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток растворяли в DCM (100 мл). Эту смесь промывали водой (2×20 мл) и затем экстрагировали аммоний хлоридом (1 н., 2×20 мл). Слои разделяли и DCM добавляли в водный слой. Водный слой подщелачивали водным раствором гидроксида калия (1 н.) и слои разделяли. Органический слой промывали водным раствором гидроксида калия (1 н., 2×20 мл) и насыщенным солевым раствором (1×20 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,0 г, 66%-ный выход) в виде прозрачного масла.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 1,85 мин; m/z 439,4 [M+H]⁺.

Пример 29

Получение 1-[2-({3-[2-(3-{(S)-2-[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)ацетиламино]пропил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

Смесь (3-{(S)-2-[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)уксусной кислоты (135 мг, 0,264 ммоль); 2-хлорпиридий трифлата на смоле Wang (полимер-на подложке реагента Mukaiyama) (загрузка 1,19 ммоль/г; 635 мг, 0,775 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (132 мкл, 0,755 ммоль) в ДМФ (4,78 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли 1-{2-[(3-аминопропил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-иловый эфир бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (122 мг, 0,278 ммоль) и эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь фильтровали и смолу промывали DCM (4 мл), MeOH (4 мл) и ТГФ (4 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток растворяли в DCM. Этот раствор промывали водой (2×10 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×10 мл) и насыщенным солевым раствором (1×10 мл); и затем сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-20% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (59 мг, 24%-ный выход) в виде твердого вещества белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 4,35 мин; m/z 931,7 [M+H]⁺.

Альтернативно, это взаимодействие может быть осуществлено, используя сочетание EDC и HOBt в виде реагентов связывания.

Пример 30

Получение дисоли трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[2-(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)ацетиламино]пропил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (соединение I-13)

Раствор 1-[2-({3-[2-(3-{(S)-2-[(R)-2-(трет-бутил-диметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)ацетиламино]пропил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (59 мг, 0,063 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (10,3 мкл, 0,0634 ммоль) в DCM (1 мл) подвергали микроволновому облучению (300 ватт) при температуре 80°C в течение 20 мин. Реакционную смесь затем концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью ВЭЖХ (способ 10-50) с получением указанного в заголовке соединения (35,2 мг, 52%-ный выход).

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 2,16 мин; m/z 817,6 [M+H]⁺.

Пример 31

Получение гидрохлорида метил 5-метиламинопентаноата

Перемешиваемый раствор 1-метил-2-пиперидинона (4,40 мл, 40,0 ммоль) в водном растворе гидроксида натрия (4 M, 11,0 мл, 44,0 ммоль) нагревали при 100°C в течение 15 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем подкисляли до pH 2 с помощью концентрированной соляной кислоты. Смесь затем концентрировали при пониженном давлении с получением сырой 5-метиламинопентановой кислоты в виде твердого вещества розовато-белого цвета. К сырой 5-метиламинопентановой кислоте добавляли MeOH (40,0 мл, 987 ммоль) и концентрированную соляную кислоту (0,33 мл, 4,0 ммоль). Полученный мутный раствор нагревали при 60°C в течение 39 час, за это время LC-MS показывала наличие остатка исходного продукта. Добавляли дополнительное количество концентрированной соляной кислоты (0,33 мл, 4,0 ммоль) и полученную смесь нагревали при 60°C в течение 33 час и затем при 65°C в течение еще 24 часов. LC-MS показывала наличие остатка исходного продукта. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и к остатку добавляли раствор хлористого водорода в MeOH (1,25 M). Полученную смесь нагревали при 60°C в течение 72 час, за это время LC-MS показывала наличие остатка исходного продукта. Реакционную смесь частично упаривали при пониженном давлении, и образовавшийся твердый продукт удаляли фильтрацией, промывая MeOH. Фильтрат затем концентрировали при пониженном давлении с получением гидрохлорида метил 5-метиламинопентаноата (7,57 г, 100%-ный выход) в виде твердого вещества светло-желтого цвета.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 1,10 мин; m/z 146,4 [M+H]⁺. ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 4,86 (с), 3,66 (с), 3,30 (т), 3,00 (т), 2,69 (с), 2,41 (т), 1,71 (м).

Пример 32

Получение метилового эфира 5-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)пентановой кислоты

Смесь гидрохлорида метил 5-метиламинопентаноата (7,27 г, 40,0 ммоль), 3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионовой кислоты (13,3 г, 36,0 ммоль) и 1-гидрокси-7-азабензотриазола (5,14 г, 37,8 ммоль) в DCM (160 мл) и 2,6-лутидина (12,5 мл, 108 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли гидрохлорид N-(3-диметиламинопропил)-N′-этилкарбодиимида (10,4 г, 54,0 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (~100 мл) и слои разделяли. Водный слой экстрагировали DCM (50 мл) и органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (30-100% EtOAc в гексане; затем 2-10% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (12,38 г, 69%-ный выход) в виде смеси густое масло светло-желтого цвета/твердое вещество белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 2,43 мин; m/z 496,6 [M+H]⁺. ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8,10 (д, 1H), 7,40 (м, 6H), 7,20 (м, 2Н), 6,58 (с, 1H), 4,74 (м, 1H), 3,66 (д, 3H), 3,37 (т, 1H), 3,29 (м, 1H), 2,97 (с, 2H), 2,91 (с, 1H), 2,70 (м, 4H), 2,49 (м, 2H), 2,34 (м, 4H), 1,92 (м, 2H), 1,60 (м, 5H).

Пример 33

Получение 5-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)пентановой кислоты

К смеси метилового эфира 5-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)пентановой кислоты (10,21 г, 20,60 ммоль), трет-бутилового спирта (20 мл) и воды (20 мл) добавляли смесь LiOH:вода 1:1 (1,97 г, 41,2 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 час и затем pH смеси доводили до значения около pH 2 с помощью водного раствора соляной кислоты (1н). Водный слой экстрагировали DCM (2×~80 мл) и органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (12,23 г, количественный выход) в виде твердого пенистого вещества грязно-белого цвета (содержащего оставшийся трет-бутиловый спирт).

Анализ LC-MS (способ 2-90): Rt 2,32 мин; m/z 482,4 [M+H]⁺.

Пример 34

Получение 2-(4-нитрофенил)-1,3-диоксолана

Перемешиваемый раствор п-нитробензальдегида (101,5 г, 672 ммоль), этиленгликоля (112 мл) и п-толуолсульфоновой кислоты (12,8 г, 67,2 ммоль) в толуоле (800 мл) нагревали в сосуде, оборудованном дистиллятором Дина-Старка при 120°C в течение 4 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (800 мл) и эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Полученное твердое вещество выделяли фильтрованием и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (121,8 г, 92%-ный выход) в виде твердого вещества желтого цвета.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆): δ 8,12 (д, 2H), 7,59 (д, 2H), 5,78 (с, 1H), 3,8-4,0 (м, 4H).

Пример 35

Получение 4-(1,3-диоксолан-2-ил)фениламина

К смеси диоксида платины (227 мг, 1,00 ммоль) и бикарбоната натрия (420 мг, 5,00 ммоль) в атмосфере сухого азота добавляли раствор 2-(4-нитрофенил)-1,3-диоксолана (976 мг, 5,00 ммоль) в EtOH (30,0 мл). В реакционную смесь барботировали водород в течение 15 мин и затем перемешивали в атмосфере водорода (баллон) в течение 2 ч. Реакционную смесь затем фильтровали через слой целита, промывая MeOH. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,80 г, 96%-ный выход).

Пример 36

Получение 1-(2-{[4-(4-(1,3-диоксолан-2-ил)фенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 5-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)пентановой кислоты (2,33 г, 4,84 ммоль), 4-(1,3-диоксолан-2-ил)фениламина (800 мг, 5 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,26 мл, 7,26 ммоль) в DCM (48,4 мл) добавляли 1-гидрокси-7-азабензотриазол (692 мг, 5,08 ммоль) и гидрохлорид N-(3-диметиламинопропил)-N-этилкарбодиимид (1,39 г, 7,26 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь далее промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (3,04 г, 100%-ный выход) в виде твердого вещества желтого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-70): Rt 2,67 мин; m/z 629,6 [M+H]⁺.

Пример 37

Получение 1-(2-{[4-(4-формилфенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

Перемешиваемую смесь 1-(2-{[4-(4-(1,3-диоксолан-2-ил)фенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (3,04 г, 4,84 ммоль) в водном растворе соляной кислоты (1 M, 10 мл) и ацетонитриле (10 мл) нагревали при 50°C в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и к остатку добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и DCM. Слои разделяли и органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (2,83 г, 100%-ный выход).

Анализ LC-MS (способ 10-70): Rt 2,67 мин; m/z 585,4 [M+H]⁺.

Пример 38

Получение 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил)бутил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 1-(2-{[4-(4-формилфенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (2,83 г, 4,84 ммоль) и уксуснокислой соли 5-[(R)-2-амино-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-гидрокси-1H-хинолин-2-она (1,91 г, 4,84 ммоль) в смеси 1:1 MeOH:DCM (40,0 мл, 312 ммоль) добавляли триацетоксиборгидрид натрия (3,08 г, 14,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем слои разделяли. Органический слой промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества желтого цвета. Твердый продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-30% MeOH в DCM+0,5% NH₄OH) с получением указанного в заголовке соединения (3,60 г, 82%-ный выход) в виде твердого вещества желтого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-70): Rt 2,72 мин; m/z 903,8 [M+H]⁺.

Пример 39

Получение дисоли трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (соединение I-14)

В перемешиваемый раствор бифенил-2-илкарбаминовой кислоты 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил) бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира (3,60 г, 3,98 ммоль) в смеси 9:1 DCM:ДМФ (32,9 мл) добавляли тригидрофторид триэтиламина (1,95 мл, 12,0 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью ВЭЖХ (способ 10-70) с получением указанного в заголовке соединения (1,90 г, 46%-ный выход) в виде твердого вещества белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-70): Rt 2,12 мин; m/z 789,6 [M+H]⁺.

Пример 40

Получение дибензил-(4-йод-2,5-диметилфенил)амина

Смесь 2,5-диметил-4-йоданилина (6,44 г, 26,1 ммоль), бензил бромида (11,50 г, 67,24 ммоль) и карбоната калия (8,20 г, 59,3 ммоль) в EtOH (100 мл) перемешивали при температуре 50°C в течение 12 ч. Реакционную смесь затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток (твердый продукт пурпурного цвета) смешивали с DCM и эту смесь фильтровали, используя вакуум. Фильтрат очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (9,35 г, 83%-ный выход) в виде масла.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 3,99 мин; m/z 428,4 [M+H]⁺.

Пример 41

Получение 4-дибензиламино-2,5-диметилбензальдегида

В перемешиваемый раствор дибензил-(4-йод-2,5-диметилфенил)амина (9,35 г, 21,9 ммоль) в толуоле (100 мл) в атмосфере азота при температуре −15°C добавляли по каплям с помощью шприца н-бутиллитий в гексане (1,6 M, 20,5 мл, 32,8 ммоль) в течение 30 мин. Полученную смесь перемешивали при температуре −15°C в течение 15 мин и затем по каплям в течение 10 мин добавляли N,N-диметилформамид (1,86 мл, 24,1 ммоль). Через 2 час добавляли водный раствор соляной кислоты (1 M, 46,6 мл) и насыщенный солевой раствор (30 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 15 мин. Слои разделяли и органический слой экстрагировали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-50% DCM в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (3,60 г, 49%-ный выход) в виде прозрачного масла.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 3,76 мин; m/z 330,4 [M+H]⁺.

Пример 42

Получение дибензил-[4-(1,3-диоксолан-2-ил)-2,5-диметилфенил]амина

В перемешиваемый раствор 4-дибензиламино-2,5-диметилбензальдегида (3,60 г, 10,9 ммоль) в толуоле (35,0 мл) в атмосфере азота добавляли 1,2-этандиол (1,83 мл, 32,8 ммоль) и п-толуолсульфоновую кислоту (451 мг, 2,62 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение ночи. ТСХ (3:1 гексан:EtOAc) показала состав из смеси ~50:50 продукта и исходного продукта. Добавляли сульфат магния (1,32 г, 10,9 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 6 ч. Реакционную смесь далее фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (3,19 г, 78%-ный выход) в виде масла.

Пример 43

Получение (4-амино-2,5-диметилфенил)метанола

Перемешиваемый раствор дибензил-[4-(1,3-диоксолан-2-ил)-2,5-диметилфенил)амина (2,00 г, 5,35 ммоль) в EtOH (14,0 мл) и EtOAc (7,00 мл) продували азотом в течение 3 мин и затем добавляли бикарбонат натрия (0,200 г, 2,38 ммоль) и палладий на активированном угле (10 масс. %, ~50% вода; 0,800 г, 0,360 ммоль). Реакционную смесь продували газообразным водородом в течение 3 мин и затем перемешивали в атмосфере водорода (баллон) в течение 3 ч. Смесь затем фильтровали через слой целита, и слой промывали MeOH (10 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без какой-либо дополнительной очистки.

Пример 44

Получение 1-(2-{[3-(4-гидроксиметил-2,5-диметилфенилкарбамоил)пропил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

Раствор 5-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)пентановой кислоты (1,19 г, 2,46 ммоль); (4-амино-2,5-диметилфенил)метанола (372 мг, 2,46 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (858 мкл, 4,93 ммоль) в DCM (18,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли гидрохлорид N-(3-диметиламинопропил)-N′-этилкарбодиимида (708 мг, 3,69 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (5 мл) и эту смесь экстрагировали DCM (2×2 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (460 мг, 31%-ный выход) в виде масла желтого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,53 мин; m/z 599,4 [M+H]⁺.

Пример 45

Получение 1-(2-{[4-(4-формил-2,5-диметилфенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 1-(2-{[4-(4-гидроксиметил-2,5-диметилфенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (0,460 г, 0,748 ммоль) и диметилсульфоксида (0,531 мл, 7,48 ммоль) в DCM (2,58 мл) при температуре 0°C добавляли N,N-диизопропилэтиламин (0,65 мл, 3,7 ммоль). Добавляли комплекс триоксид серы-пиридин (0,357 г, 2,24 ммоль) и полученную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 ч. Добавляли воду (3 мл) и слои разделяли. Органический слой сушили над сульфатом натрия и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения в растворе DCM, которое сразу использовали в следующей реакции.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,44 мин; m/z 613,4 [M+H]⁺.

Пример 46

Получение 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2,5-диметилфенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

К перемешиваемому раствору 1-(2-{[4-(4-формил-2,5-диметилфенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (~0,748 ммоль) в DCM из предшествующей реакции добавляли уксуснокислую соль 5-[(R)-2-амино-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-гидрокси-1H-хинолин-2-она (0,295 г, 0,748 ммоль) в смеси 1:1 MeOH:DCM (3,0 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем добавляли натрий триацетоксиборгидрид (0,476 г, 2,24 ммоль) и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 4 часов. Добавляли водный раствор NaOH (1M, 3 мл) и DCM (3 мл) и слои разделяли. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-15% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (420 мг, 60%-ный выход) в виде твердого вещества желтого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,39 мин; m/z 931,6 [M⁺].

Пример 47

Получение дисоли трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2,5-диметилфенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (соединение I-18)

Раствор 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2,5-диметилфенилкарбамоил)бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (0,420 г, 0,451 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (0,220 мл, 1,35 ммоль) в DCM (2,00 мл) подвергали микроволновому облучению (300 ватт) при температуре 80°C в течение 10 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток смешивали со смесью 1:1 AcOH:вода и фильтровали. Фильтрат очищали с помощью ВЭЖХ (способ 2-90) с получением указанного в заголовке соединения (124 мг, 26%-ный выход) в виде твердого вещества белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 1,75 мин; m/z 817,8 [M+H]⁺. ¹H ЯМР (CD₃OD) δ 8,30 (м), 7,56 (м), 7,40 (м), 7,06 (м), 6,68 (д), 5,46 (м), 4,35 (с), 3,51 (м), 3,30 (м), 3,16 (м), 2,94 (м), 2,42 (м), 2,27 (м), 1,97 (м), 1,72 (м).

Пример 48

Получение метил 3-метиламинобензоата

Раствор муравьиной кислоты (106 мл) и уксусного ангидрида (53,0 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли метил 3-аминобензоат (8,50 г, 56,2 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь затем концентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества. Твердый продукт растворяли в ТГФ (50,0 мл) и этот раствор охлаждали до 0°C. Медленно добавляли боран диметилсульфид (10,7 мл, 112 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь далее охлаждали до 0°C и медленно добавляли MeOH (10 мл). Эту смесь перемешивали в течение 3 часов и затем упаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без какой-то дополнительной очистки

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 1,25 мин; m/z 166,4 [M+H]⁺.

Пример 49

Получение метилового эфира 3-(акрилоилметиламино)бензойной кислоты

В перемешиваемую смесь метилового эфира 3-метиламинобензойной кислоты (3,11 г, 18,8 ммоль) и бикарбоната натрия (3,16 г, 37,6 ммоль) в DCM (20,0 мл) при температуре 0°C добавляли 2-пропеноилхлорид (2,29 мл, 28,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и слои разделяли. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (4,12 г, 100%-ный выход), которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Пример 50

Получение метилового эфира 3-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)бензойной кислоты

Перемешиваемый раствор метилового эфира 3-(акрилоилметиламино)бензойной кислоты (примерно ~56 ммоль) и пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (16,6 г, 56,0 ммоль) в EtOH (20,0 мл) нагревали при 90°C в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (13,0 г, 45%-ный выход) в виде твердого продукта не совсем белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,30 мин; m/z 516,2 [M+H]⁺.

Пример 51

Получение 3-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)бензойной кислоты

Раствор метилового эфира 3-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)бензойной кислоты (6,80 г, 13,2 ммоль) и гидроксида лития (1,58 г, 65,9 ммоль) в смеси 1:1 ацетонитрил:вода (25,0 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. pH реакционной смеси устанавливали равным pH 5 с помощью водного раствора соляной кислоты (1M) и эту смесь экстрагировали DCM (20 мл). Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (5,80 г, 87%-ный выход) в виде порошка не совсем белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,15 мин; m/z 502,2 [M+H]⁺.

Пример 52

Получение 1-{2-[(3-хлоркарбонилфенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

Смесь 3-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)бензойной кислоты (1,00 г, 2,00 ммоль) и тионилхлорида (1,50 мл, 20,6 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь затем концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое сразу использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Пример 53

Получение 1-(2-{[3-(4-(1,3-диоксолан-2-ил)фенилкарбамоил)фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 4-(1,3-диоксолан-2-ил)фениламина (0,0826 г, 0,500 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (348 мкл, 2,00 ммоль) в DCM (2,0 мл) при комнатной температуре добавляли раствор 1-{2-[(3-хлоркарбонилфенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (0,260 г, 0,500 ммоль) в DCM (1,0 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Анализ LC-MS (способ 10-90) показывал наличие продукта (Rt 3,41 мин; m/z 649,4 [M+H]⁺. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и слои разделяли. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (345 мг, содержащие немного остатка растворителя, прибл. 100%-ный выход) в виде масла коричневого цвета.

Пример 54

Получение 1-(2-{[3-(4-формилфенилкарбамоил)фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 1-(2-{[3-(4-(1,3-диоксолан-2-ил)фенилкарбамоил)фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (345 мг, содержащие немного остатка растворителя, прибл. 0,500 ммоль) в ацетонитриле (2,00 мл) при комнатной температуре добавляли водный раствор соляной кислоты (1 н., 2,00 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Анализ LC-MS (способ 10-90) показывал наличие продукта (Rt 3,45 мин; m/z 605,0 [M+H]⁺. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и слои разделяли. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Пример 55

Получение 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил)фенил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

Раствор 1-(2-{[3-(4-формилфенилкарбамоил)фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (151 мг, 0,250 ммоль) и уксуснокислой соли 5-[(R)-2-амино-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-гидрокси-1H-хинолин-2-она (98,6 мг, 0,250 ммоль) в смеси 1:1 MeOH:DCM (2,0 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли натрий триацетоксиборгидрид (159 мг, 0,750 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Анализ LC-MS (способ 10-90) показывал наличие продукта (Rt 3,32 мин; m/z 923,6 [M+H]⁺. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и слои разделяли. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Пример 56

Получение дисоли трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-3-метоксифенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (соединение I-25)

Раствор 1-{2-[(4-{[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-3-метоксифенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (231 мг, 0,250 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (204 мкл, 1,25 ммоль) в DCM (2,00 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Анализ LC-MS (способ 10-90) показывал наличие продукта (Rt 2,73 мин; m/z 809,6 [M+H]⁺. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью ВЭЖХ (способ 10-50) с получением указанного в заголовке соединения (47,3 мг, 23,4%-ный выход, 99%-ная чистота) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример 57

Получение 2-(4-нитрофенил)этилового эфира 4-нитробензолсульфоновой кислоты

В перемешиваемый раствор 4-нитробензолэтанола (3,34 г, 20,0 ммоль) и триэтилендиамина (3,36 г, 30,0 ммоль) в DCM (62,7 мл) при температуре 0°C добавляли 4-нитробензолсульфонилхлорид (4,97 г, 22,43 ммоль) по частям в течение 5 мин. Реакционную смесь далее перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли воду (50 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 10 мин. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением сырого указанного в заголовке соединения (5,8 г, 82%-ный выход) в виде твердого вещества желтого цвета.

ВЭЖХ (способ 2-90): Rt 4,23 мин (214 нм).

Пример 58

Получение 5-[(R)-2-{бензил-[2-(4-нитрофенил)этил]амино}-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она

Перемешиваемый раствор 2-(4-нитрофенил)этилового эфира 4-нитробензолсульфоновой кислоты (3,78 г, 10,7 ммоль); 5-[(R)-2-бензиламино-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она (4,620 г, 8,975 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (3,59 мл, 20,6 ммоль) в ацетонитриле (39,2 мл) нагревали при температуре 65°C в течение ночи. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры, добавляли EtOAc (20 мл) и эту смесь промывали насыщенным солевым раствором (20 мл). Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-30% EtOAc в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (3,0 г, 50%-ный выход) в виде масла желтого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,94 мин; m/z 664,4 [M+H]⁺.

Пример 59

Получение 5-[(R)-2-{[2-(4-аминофенил)этил]бензиламино}-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она

Смесь 5-[(R)-2-{бензил-[2-(4-нитрофенил)этил]амино}-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она (3,00 г, 4,52 ммоль); железа (2,52 г, 45,2 ммоль) и тетрагидрат хлорида железа(II) (0,18 г, 0,90 ммоль) в EtOH (27,3 мл) и AcOH (9,09 мл) перемешивали при температуре 80°C в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, промывая EtOAc (20 мл). Органический слой промывали насыщенным солевым раствором (10 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,43 мин; m/z 634,4 [M+H]⁺.

Пример 60

Получение 1-[2-({3-[4-(2-{бензил-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси) этил]амино}этил)фенилкарбамоил]фенил}метилкарбамоил)этил] пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

Смесь 5-[(R)-2-{[2-(4-аминофенил)этил]бензиламино}-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она (1,27 г, 2,00 ммоль); 3-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)бензойной кислоты (1,00 г, 2,00 ммоль); 1-гидрокси-7-азабензотриазола (0,286 г, 2,10 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,697 мл, 4,00 ммоль) в DCM (5,00 мл) перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Добавляли гидрохлорид N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида (0,575 г, 3,00 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 3 ч. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (5 мл) и эту смесь экстрагировали DCM (2×5 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (1,74 г, 77%-ный выход) в виде твердого вещества желтого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,73 мин; m/z 1117,8 [M⁺].

Пример 61

Получение 1-(2-{[3-(4-{2-[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил)фенил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

Раствор 1-[2-({3-[4-(2-{бензил-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]амино}этил)фенилкарбамоил]фенил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (1,74 г, 1,56 ммоль) в EtOH (12,2 мл) и AcOH (0,122 мл) продували азотом в течение 3 мин. Добавляли палладий на угле (10%, ~50% вода, 0,18 г) и реакционную смесь продували водородом в течение 4 мин. Смесь перемешивали в атмосфере водорода (баллон) в течение ночи и затем фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-15% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (1,11 г, 76%-ный выход) в виде густой жидкости коричневатого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,46 мин; m/z 937,6 [M+H]⁺.

Пример 62

Получение дисоли трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил)фенил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (соединение I-34)

Раствор 1-(2-{[3-(4-{2-[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (приблизительно ~1,56 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (299 мкл, 1,84 ммоль) в DCM (3,06 мл) подвергали микроволновому облучению (300 ватт) при температуре 80°C в течение 10 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью ВЭЖХ (способ 10-50) с получением указанного в заголовке соединения (280 мг, 17%) в виде твердого вещества белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 1,98 мин; m/z 823,4 [M+H]⁺.

Пример 63

Получение [3-(2-оксопропил)фенил]ацетонитрила

Перемешиваемый раствор 3-бромфенилацетонитрила (10,0 г, 51,0 ммоль), метоксида трибутилолова (17,6 мл, 61,2 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия(0) (500 мг, 0,5 ммоль), изопропенилацетата (6,74 мл, 61,2 ммоль) и 2-дициклогексилфосфино-2′-(N,N-диметиламино)бифенила (800 мг, 2 ммоль) в толуоле (100 мл, дегазированный) нагревали при 100°C в атмосфере азота в течение 6 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли EtOAc (30 мл). Затем добавляли раствор фторида калия (10 г, 200 ммоль) в воде (52 мл) и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли насыщенный солевой раствор и смесь фильтровали через слой целита. Слои разделяли и органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали (ватная пробка) и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-30% EtOAc в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (6,1 г, 69%-ный выход) в виде масла коричневого цвета.

¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,32 (т, 1H); 7,24 (д, 1H); 7,19 (с, 1H); 7,16 (д, 1H); 3,85 (с, 2H); 3,77 (с, 2H); 2,14 (с, 3H).

Пример 64

Получение гидрохлоридной соли {3-[(R)-2-((R)-1-фенилэтиламино)пропил]фенил}ацетонитрила

В перемешиваемый раствор [3-(2-оксопропил)фенил]ацетонитрила (2,00 г, 11,5 ммоль) и (R)-1-фенилэтиламина (1,52 мл, 11,9 ммоль) в DCM (50,0 мл) добавляли натрий триацетоксиборгидрид (7,59 г, 35,8 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли водный раствор гидроксида натрия (1 M, 10 мл) и насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (20 мл) и слои разделяли. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток частично очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-5% MeOH в DCM). Полученный продукт растворяли в MeOH и добавляли ацетилхлорид (0,5 мл). Эту смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток растворяли в MeOH (15 мл). Медленно добавляли диизопропиловый эфир (30 мл) с образованием второго слоя над раствором. После стояния при комнатной температуре, указанное в заголовке соединение (2,0 г, 55%-ный выход) выпадало в виде осадка, и его собирали фильтрацией.

¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7,53-7,5l (м, 5H); 7,32 (т, 1H); 7,24 (т, 1H); 7,10 (с, 1H); 7,05 (д, 1H); 4,64-4,59 (м, 1H); 3,21-3,16 (м, 2H); 1,70 (д, 3H); 1,17 (д, 3H).

Пример 65

Получение {(R)-2-[3-(2-аминоэтил)фенил]-1-метилэтил}-((R)-1-фенилэтил)амина

В перемешиваемый раствор гидрохлоридной соли {3-[(R)-2-((R)-1-фенилэтиламино)пропил]фенил}ацетонитрила (2,00 г, 6,35 ммоль) и гексагидрата хлорида кобальта(II) (4,27 г, 18,0 ммоль) в MeOH (40,0 мл) при температуре 0°C добавляли по частям натрий тетрагидроборат (2,72 г, 71,8 ммоль) (реакция была экзотермической). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре, затем добавляли концентрированный водный раствор соляной кислоты и перемешивание продолжали до образования твердого продукта, который размельчали. Затем смесь подщелачивали добавлением водного раствора гидроксида натрия (1 M). Эту смесь фильтровали, и фильтрат экстрагировали DCM (50 мл). Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 0,938 мин; m/z 283,6 [M+H]⁺.

Альтернативно, данную реакцию осуществляли, используя литий алюминий гидрид и гексагидрат хлорида кобальта(II) в ТГФ.

Пример 66

Получение трет-бутилового эфира (2-{3-[(R)-2-[(R)-1-фенилэтиламино)пропил]фенил}этил)карбаминовой кислоты

Раствор {(R)-2-[3-(2-аминоэтил)фенил]-1-метилэтил}-((R)-1-фенилэтил)амина (прибл. 6,35 ммоль), ди-трет-бутилдикарбоната (1,41 г, 6,46 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (1,50 мл, 8,62 ммоль) в DCM (20,0 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение около 72 ч. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (20 мл) и полученную смесь экстрагировали DCM (2×10 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (1,24 г, 51%-ный выход, 2 стадии) в виде бесцветного масла.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,42 мин; m/z 383,2 [M+H]⁺.

Пример 67

Получение трет-бутилового эфира {2-[3-((R)-2-аминопропил)фенил]этил}карбаминовой кислоты

Перемешиваемый раствор трет-бутилового эфира (2-{3-[(R)-2-((R)-1-фенилэтиламино)пропил]фенил}этил)карбаминовой кислоты (1,54 г, 4,02 ммоль), гидроксида палладия на угле (10 масс. %, ~50% воды, 2,24 г, 0,805 ммоль), и формиат аммония (1,27 г, 20,1 ммоль) в EtOH (50,0 мл) ступенчато нагревали до 50°C и затем перемешивали при температуре 50°C в течение 1,5 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой целита и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 1,91 мин; m/z 279,4 [M+H]⁺.

Пример 68

Получение трет-бутилового эфира [2-(3-{(R)-2-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этиламино]пропил}фенил)этил]карбаминовой кислоты

Перемешиваемый раствор 8-бензилокси-5-[(R)-2-бром-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-1H-хинолин-2-она (3,14 г, 6,43 ммоль); трет-бутилового эфира {2-[3-((R)-2-аминопропил)фенил]этил}карбаминовой кислоты (1,79 г, 6,43 ммоль) и триэтиламин (1,08 мл, 7,72 ммоль) в ДМФ (21,0 мл) подвергали микроволновому облучению (300 ватт) при температуре 80°C в течение 15 ч. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (10 мл) и полученную смесь экстрагировали DCM (2×10 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (2,8 г, 63%-ный выход) в виде твердого продукта не совсем белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,97 мин; m/z 686,4 [M+H]⁺.

Пример 69

Получение 5-[(R)-2-{(R)-2-[3-(2-аминоэтил)фенил]-1-метилэтиламино}-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она

Раствор трет-бутилового эфира [2-(3-{(R)-2-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этиламино]пропил}фенил)этил]карбаминовой кислоты (2,8 г) в 20%-ной трифторуксусной кислоте в DCM перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Для нейтрализации ТФУ добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и слои разделяли. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 1,91 мин; m/z 586,4 [M+H]⁺.

Пример 70

Получение метил(4-формиламинофенил)ацетата

Раствор уксусного ангидрида (14,3 мл, 151 ммоль) и муравьиной кислоты (22,8 мл, 605 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли метил (4-аминофенил)ацетат (5,00 г, 30,3 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (10 мл) и полученную смесь экстрагировали DCM (2×10 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (4,31 г) в виде масла желтого цвета, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 1,57 мин; m/z 194,4 [M+H]⁺.

Пример 71

Получение метил(4-метиламинофенил)ацетата

В перемешиваемый раствор метил(4-формиламинофенил)ацетата (4,31 г) в ТГФ (20,0 мл) при температуре 0°C медленно добавляли боран диметилсульфид (8,61 мл, 90,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем охлаждали до 0°C. Осторожно добавляли MeOH (15 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 3 ч. Смесь затем концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (4,0 г, 73%-ный выход, 2 стадии) в виде прозрачного масла.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 0,67 мин; m/z 180,2 [M+H]⁺.

Пример 72

Получение метилового эфира [4-(акрилоилметиламино)фенил]уксусной кислоты

В раствор метил(4-метиламинофенил)ацетата (4,00 г, 22,3 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (7,78 мл, 44,6 ммоль) в DCM (20,0 мл) при температуре 0°C медленно добавляли 2-пропеноилхлорид (2,18 мл, 26,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 час и затем добавляли насыщенный водный бикарбонат натрия (20,0 мл). Эту смесь экстрагировали DCM (10 мл) и органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,20 мин; m/z 234,0 [M+H]⁺.

Пример 73

Получение метилового эфира [4-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)фенил]уксусной кислоты

Перемешиваемый раствор метилового эфира [4-(акрилоилметиламино)фенил]уксусной кислоты (~22,3 ммоль) и пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (6,61 г, 22,3 ммоль) в EtOH (15,0 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (8,41 г, 71%-ный выход, 2 стадии) твердого вещества коричневого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,36 мин; m/z 530,6 [M+H]⁺.

Пример 74

Получение [4-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)фенил]уксусной кислоты

Перемешиваемый раствор метилового эфира [4-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)фенил]уксусной кислоты (8,00 г, 15,1 ммоль) и гидроксида лития (1,81 г, 75,5 ммоль) в ацетонитриле (20,0 мл) и воде (20,0 мл) нагревали при 60°C в течение 3 ч. pH реакционной смеси устанавливали равным pH 5 с помощью водного раствора соляной кислоты (1M) и смесь экстрагировали DCM. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-20% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (6,7 г, 86%-ный выход) в виде твердого продукта не совсем белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,17 мин; m/z 516,4 [M+H]⁺.

Пример 75

Получение 1-{2-[(4-{[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этиламино]пропил}фенил)этилкарбамоил] метил}фенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

Смесь 5-[(R)-2-{(R)-2-[3-(2-аминоэтил)фенил]-1-метилэтиламино}-1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этил]-8-бензилокси-1H-хинолин-2-она (0,586 г, 1,00 ммоль); [4-({3-[4-(бифенил-2-илкарбамоилокси)пиперидин-1-ил]пропионил}метиламино)фенил]уксусной кислоты (0,516 г, 1,00 ммоль); 2-хлорпиридий трифлата на смоле Wang (полимер-на подложке реагента Mukaiyama) (загрузка 1,19 ммоль/г; 1,68 г, 2,00 ммоль); и N,N-диизопропилэтиламина (522 мкл, 3,00 ммоль) в DCM (5,00 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения (412 мг, 38%-ный выход) в виде масла не совсем белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,65 мин; m/z 1083,8 [M+H]⁺.

Пример 76

Получение 1-{2-[(4-{[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)этилкарбамоил] метил}фенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты

В перемешиваемый раствор 1-{2-[(4-{[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-(8-бензилокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этиламино]пропил}фенил)этилкарбамоил] метил}фенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (0,704 г, 0,650 ммоль) в EtOH (5,00 мл) в течение 3 мин барботировали сухой азот и затем добавляли палладий на угле (10 масс.%, ~50% вода; 0,289 г, 0,130 ммоль). Водород барботировали в реакционную смесь в течение 3 мин и затем смесь перемешивали в атмосфере водорода (баллон) в течение 1 ч. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки в следующей реакции.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 2,49 мин; m/z 994,0[M+H]⁺.

Пример 77

Получение дисоли трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)этилкарбамоил]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (соединение I-86)

Раствор 1-{2-[(4-{[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)этилкарбамоил] метил}фенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты (~0,65 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (184 мкл, 1,13 ммоль) в DCM (3,00 мл) подвергали микроволновому облучению (300 ватт) при температуре 80°C в течение 10 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью ВЭЖХ (способ 10-50) с получением указанного в заголовке соединения (24,7 мг, 4%-ный выход, 2 стадии) в виде твердого вещества белого цвета.

Анализ LC-MS (способ 10-90): Rt 1,78 мин; m/z 879,8 [M+H]⁺.

Меняя исходные вещества, использованные в предшествующих примерах, или используя подобные способы, получали соединения, показанные в таблице II:

Таблица II
№ Примера	ID №	Соединение	Количество/ LC-MS¹
78	I-2	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2-метилфенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
79	I-3	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2-метоксифенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
80	I-4	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-3-метоксифенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
81	I-5	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2,5-диметилфенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
82	I-6	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(2-хлор-4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}-5-метоксифенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
83	I-8	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил) пропил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
84	I-9	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}-4-метоксифенилкарбамоил)пропил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
85	I-10	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенилкарбамоил) пропил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
86	I-11	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[2-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) ацетиламино]пропил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
87	I-12	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) ацетиламино]пропил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
88	I-15	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2-метилфенилкарбамоил)бутил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
89	I-16	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2-метоксифенилкарбамоил) бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
90	I-17	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-3-метоксифенилкарбамоил) бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
91	I-19	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-3-метоксифенилкарбамоил) бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
92	I-20	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил) бутил]метил-карбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-илкарбаминовой кислоты
93	I-21	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил) бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
94	I-22	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[2-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) ацетиламино]бутил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
95	I-23	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)ацетиламино]бутил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
96	I-24	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[2-(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) ацетиламино]бутил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
97	I-26	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[5-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил)-2-метилфенил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
98	I-27	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2-метилфенилкарбамоил)фенил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
99	I-28	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[5-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2-метилфенилкарбамоил)-2-метилфенил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
100	I-29	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2-метоксифенилкарбамоил)фенил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира
101	I-30	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2,5-диметилфенилкарбамоил)фенил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
102	I-31	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(2-хлор-4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-5-метоксифенилкарбамоил)фенил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
103	I-32	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
104	I-33	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[5-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил)-2-метилфенил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
105	I-34	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[5-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил)-2-метилфенил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
106	I-36	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
107	I-37	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[5-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенилкарбамоил)-2-метилфенил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
108	I-38	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
109	I-39	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
110	I-40	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
111	I-41	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[5-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенилкарбамоил)-2-метилфенил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира
112	I-42	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
113	I-43	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
114	I-44	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
115	I-45	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[5-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил)-2-метилфенил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
116	I-46	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
117	I-47	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[5-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил)-2-метилфенил]метилкарбамоил}этил) пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
118	I-48	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
119	I-49	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[3-(4-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
120	I-50	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
121	I-51	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-(2-{[4-(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) фенил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
122	I-52	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[2-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) ацетиламино]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
123	I-53	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[2-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) ацетиламино]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
124	I-54	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[2-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}-4-метоксифенил)ацетиламино]фенил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
125	I-55	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)этилкарбамоил]фенил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
126	I-56	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[2-(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) этилкарбамоил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
127	I-57	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[2-(4-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) этилкарбамоил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
128	I-58	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[2-(4-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) этилкарбамоил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
129	I-59	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
130	I-60	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-2,5-диметилфенилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил)этил] пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
131	I-61	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[(2-хлор-4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}-5-метоксифенилкарбамоил)этил]фенил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира
132	I-62	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
133	I-63	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({3-[(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
134	I-64	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}бензилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
135	I-65	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}бензилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
136	I-66	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
137	I-67	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
138	I-68	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
139	I-69	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}бензилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил) этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
140	I-70	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}-4-метилбензилкарбамоил)метил]фенил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
141	I-71	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}-2-метилбензилкарбамоил)метил]фенил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
142	I-72	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}-4-метоксибензилкарбамоил) метил]фенил}метилкарбамоил)этил] пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
143	I-73	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-[2-({4-[(4-фтор-3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил} бензилкарбамоил)метил]фенил} метилкарбамоил)этил]пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
144	I-74	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенил)ацетиламино]метил}фенил)метилкарбамоил]этил} пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
145	I-75	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенил)ацетиламино]метил}фенил)метилкарбамоил]этил} пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
146	I-76	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]этил}фенил)ацетиламино] метил}фенил)метилкарбамоил]этил} пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
147	I-77	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) ацетиламино]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
148	I-78	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)ацетиламино]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
149	I-79	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)ацетиламино]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
150	I-80	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) ацетиламино]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
151	I-81	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}-4-метоксифенил)ацетиламино]метил}фенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
152	I-82	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}-4-метоксифенил)ацетиламино]метил}фенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
153	I-83	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}-4-метоксифенил)ацетиламино]метил}фенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
154	I-84	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(4-фтор-3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидро-хинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)ацетиламино]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
155	I-85	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил) этилкарбамоил]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
156	I-86	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино] пропил}фенил)этилкарбамоил]метил} фенил)метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
157	I-88	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(4-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)этилкарбамоил]метил}фенил)метилкарбамоил]этил} пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
158	I-89	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(4-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)этилкарбамоил]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
159	I-90	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(4-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)этилкарбамоил]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
160	I-91	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[3-(3-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}фенил)пропиониламино]метил}фенил)метилкарбамоил]этил} пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
161	I-92	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[3-(3-{(R)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)пропиониламино]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
162	I-93	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[3-(3-{(S)-2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)пропиониламино]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
163	I-94	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(5-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]пропил}-2-метоксифенил)ацетиламино]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
164	I-95	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[2-(2-фтор-5-{2-[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидро-хинолин-5-ил)этиламино]пропил} фенил)ацетиламино]метил}фенил) метилкарбамоил]этил}пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты
165	I-96	Дисоль трифторуксусной кислоты 1-{2-[(4-{[3-(3-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенил)пропиониламино]метил}фенил)метилкарбамоил]этил} пиперидин-4-илового эфира бифенил-2-карбаминовой кислоты)
¹Количество выделенного (сырого или чистого) в миллиграммах; Rt=время удерживания в минутах; LC-MS: наблюдаемое m/z, обычно [M+H]⁺; na=невозможно

Биологические анализы и препараты

Пример A

Клеточные культуры и препараты мембран клеток, экспрессирующих мускриновые рецепторы M ₁ , M ₂ , M ₃ и M ₄ человека

Клеточные линии CHO, стабильно экспрессирующие клонированные подтипы мускариновые рецепторы hM₁, hM₂, hM₃ и hM₄ человека, соответственно, выращивали до конфлюэнции, приблизительно, в среде Hams F-12 с добавлением 10% FBS и 250 мкг/мл генетицина. Клетки выращивали в инкубаторе при 5% CO₂ и температуре 37°C и отслаивали при помощи 2 мМ EDTA в dPBS. Клетки собирали 5-и минутным центрифугированием при 650g и клеточные осадки либо хранили замороженными при -80°C, либо сразу готовили мембранные препараты для использования.

Для мембранных препаратов клеточные осадки ресуспендировали в буфере для лизиса и гомогенизировали тканевым дезинтегратором Polytron PT-2100 (Kinematica AG; 20 секунд×2 импульса). Неочищенные мембраны центрифугировали при 40000g в течение 15 минут при 4°C. Затем мембранный осадок ресуспендировали буфером для ресуспендирования и снова гомогенизировали тканевым дезинтегратором Polytron.

Концентрацию белка мембранной суспензии определяли способом, описанным Lowry et al., 1951, Journal of Biochemistry, 193, 265. Все мембраны хранили в замороженном виде как аликвоты при -80°C, или сразу использовали.

Аликвоты полученных мембран hM₅-рецепторов очищали непосредственно из PerkinElmer Inc. (Wellesley, MA) и хранили при -80°С до использования.

Пример B

Анализ связывания радиолигандов мускриновых рецепторов

Анализ связывания клонированных мускариновых рецепторов проводили в 96-луночном микротитровальном планшете с общим анализируемым объемом 100 мкл. Мембраны клеток СНО, стабильно экспрессирующие либо hM₁, hM₂, hM₃, hM₄, либо hM₅ подтипы мускариновых рецепторов разводили в аналитическом буфере до следующих специфических концентраций мишеневого белка (мкг/лунка): 10 мкг для hM₁, 10-15 мкг для hM₂, 10-20 мкг для hM₃, 10-20 мкг для hM₄ и 10-12 мкг для hM₅ для получении одинаковых сигналов (cpm). Перед добавлением в планшет для анализа мембраны быстро гомогенизировали, используя тканевой дезинтегратор Polytron (10 секунд).

Насыщение связывания изучали для определения значений K_D радиолиганда, используя L-[N-метил-³H]скополамин метил хлорид ([³H]-NMS) (TRK666, 84,0 Кю/ммоль, Amersham Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, Англия) при концентрации в диапазоне от 0,001 нМ до 20 нМ.

Анализ смещения для определения значений K_i тестируемых соединений проводили, используя [³H]-NSM при 1 нМ и одиннадцать различных концентраций тестируемого соединения. Тестируемые соединения сначала растворяли до концентрации 400 мкм в буфере для разведения, а затем осуществляли серийные разведения 5× буфером для разведения до конечных концентраций, равных от 10 пМ до 100 мкм. Порядок добавления и добавляемые в аналитические планшеты объемы были следующие: 25 мкл радиолиганда, 25 мкл разведенного тестируемого соединения и 50 мкл мембран. Аналитические планшеты инкубировали в течение 6 часов при 37°C. Реакцию связывания прерывали быстрой фильтрацией через плашки с фильтром из стеклянных волокон GF/B (PerkinElmer, Inc.), которые заранее обрабатывали 1% BSA. Планшеты с фильтром промывали три раза буфером для промывки (10 мМ HEPES) для удаления несвязанной радиоактивности. Затем пластины сушили на воздухе и в каждую лунку добавляли 50 мкл сцинтилляционной жидкости Microscint-20 (PerkinElmer, Inc.). Планшеты затем считывали с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика PerkinElmer Topcount (PerkinElmer, Inc.).

Данные связывания анализировали при помощи нелинейного регрессионного анализа, используя пакет программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) и используя конкурентную модель с одним участком. Значения K_i для тестируемых соединений вычисляли из наблюдаемых значений IC₅₀ и значения K_D радиолиганда, используя уравнение Cheng-Prusoff (Cheng Y, and Prusoff WH., Biochemical Pharmacology, 1973, 22 (23):3099-108). Значения K_i преобразовывали в значения pK_i для определения среднего геометрического и 95% доверительных интервалов. Эти суммарные статистические данные затем преобразовывали обратно в значения K_i для записи данных.

В этом анализе более низкое значение K_i указывает на то, что тестируемое соединение имеет высокую аффинность связывания в отношении рецептора. Данные связывания соединения по настоящему изобретению (K_i) с рецептором hM₃ приведены в таблице III.

Пример C

Клеточная культура и мембранный препарат клеток, экспрессирующих β ₁ , β ₂ или β ₃ -адренергические рецепторы человека

Линии эмбриональных клеток почки человека (HEK-293), стабильно экспрессирующие клонированные β₁и β₂ адренергические рецепторы человека или клеточные линии яичников китайского хомячка (CHO), стабильно экспрессирующие клонированные β₃ адренергические рецепторы человека, выращивали до конфлюэнтности, приблизительно, в DMEM или Hams F-12 среде с 10% FBS в присутствии 500 мкг/мл генетицина. Монослой клеток отслаивали при помощи 2 мМ EDTA в PBS. Клетки осаждали центрифугированием при 1000 об/мин и клеточные осадки либо хранили в замороженном виде при -80°C, либо из них сразу готовили мембранные препараты для использования.

Для получения мембран, экспрессирующих β₁и β₂ рецепторы клеточные осадки ресуспендировали в буфере для лизиса (10 мМ HEPES/HCl, 10 мМ ЭДТА, pH 7,4 при 4°C) и гомогенизировали, используя плотно пригнанный стеклянный гомогенизатор Dounce (30 встряхиваний) на льду.

Для более восприимчивых к протеазам мембран, экспрессирующих β₃ рецепторы, клеточные осадки гомогенизировали в буфере для лизиса (10 мМ трис/HCl, pH 7,4) с добавлением одной таблетки "таблетка полного коктейля ингибиторов протеаз с 2 мМ ЭДТА" на 50 мл буфера (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN). Гомогенаты центрифугировали при 20000g и полученный осадок промывали один раз буфером для лизиса, ресуспендируя и центрифугируя, как описано выше. Затем конечный осадок ресуспендировали в охлажденном льдом буфере для анализа связывания (75 мМ трис/HCl, pH 7,4, 12,5 мМ MgCl₂, 1 мМ EDTA).

Концентрацию белка мембранной суспензии определяли способами, описанными Lowry et al., 1951, Journal of Biological Chemistry, 193, 265; и Bradford, Analytical Biochemistry, 1976, 72, 248-54. Все мембраны хранили в замороженном виде как аликвоты при температуре -80°С, или сразу использовали.

Пример D

Анализ определения активности адренегрического рецептора в качестве агониста

Анализ цАМФ проводили в формиате радиоиммунного анализа, используя Flashplate систему анализа активации аденилатциклазы с [¹²⁵I]-цАМФ (NEN SMP004, PerkinElmer Life Sciences Inc., Boston, MA), согласно инструкции производителя. Для этого анализа клеточные линии HEK-293, стабильно экспрессирующие клонированные β₁ или β₂ рецепторы человека, выращивали до конфлюэнтности, приблизительно, в DMEM с добавлением 10% FBS и генетицина (500 мкг/мл); или СНО-К1 клеточные линии, стабильно экспрессирующие клонированные β₃ адренергические рецепторы человека, выращивали до конфлюэнтности, приблизительно, в среде HAMs F-12 с добавлением 10% FBS и генетицина (250 мкг/мл). Клетки отслаивали при помощи PBS и разъединяли в dPBS (забуференный фосфатом физиологический раствор Дульбекко, без CaCl₂ и MgCl₂), содержащий 2 мМ EDTA или раствор трипсин-EDTA (0,05% трипсин/0,53 мМ EDTA). После подсчета клеток в счетчике клеточных культур в цитомере Coulter клетки осаждали центрифугированием при 1000 об/мин и ресуспендировали в буфере для стимуляции, содержащем IBMX (PerkinElrner Kit), предварительно нагретом до комнатной температуры при концентрации от 1,6×10⁶ до 2,8×10⁶ клеток/мл. В анализе использовали примерно 40000-80000 клеток на лунку. Тестируемые соединения (10 мМ в DMSO) разбавляли PBS, содержащим 0,1% BSA в Beckman Biomek-2000, и тестировали в 11 различных концентрациях, находящихся в пределах от 100 мкМ до 1 пМ. Реакционные смеси инкубировали в течение 10 мин при 37°C и реакцию останавливали добавлением 100 мкл холодного буфера для детектирования, содержащего [¹²⁵I]-цАМФ (NEN SMP004, PerkinElmer Life Sciences, Boston, MA). Количество продуцированного цАМФ (пМ/лунку) вычисляли на основании количества отсчетов, наблюдаемых для образцов, и цАМФ стандартов, как описано в инструкции производителя.

Данные анализировали нелинейным регрессионным анализом, используя пакет программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) и сигмоидальное уравнение. Для вычисления значений EC₅₀ использовали уравнение Cheng-Prusoff (Cheng Y, and Prusoff WH., Biochemical Pharmacology, 1973, 22, 23, 3099-108).

В этом анализе более низкое значение EC₅₀ указывает, что тестируемое соединение имеет более высокую функциональную активность в тестируемом рецепторе. Данные эффективности hβ₂ (EC₅₀) для соединений по настоящему изобретению представлены в таблице III.

Пример E

Исследование Эйнтховена

В этом анализе измеряли способность тестируемого соединения обеспечивать защиту бронхов у крыс от бронхоспазма, вызванного метахолином (MCh).

Во всех анализах использовали самцов крыс Sprague-Dawley (Harlan, Indianapolis, Ind.), весом от 200 г до 350 г.

Дозу тестируемого соединения или носителя (стерильная деионизированная вода) вводили путем ингаляции (IH) в течение 10 минут в камере для ингаляции в форме торта (R+S Molds, San Carlos, CА), используя 5 мл раствор для дозирования. Крыс обрабатывали с помощью аэрозоля, полученного от LC Star Nebulizer Set Model 22F51 (PARI Respiratory Equipment, Inc. Midlothian, Va.), приводимого в движение Bioblend (5% CO₂/95% атмосферное давление) при давлении 22 пси. Крысы получали дозу в 100 мкг исследуемого соединения, если не указано иного.

В заранее определенные моменты времени крыс анастезировали внутрибрюшной инъекцией (IP) 120 мг/кг инактина (тиобутабарбитал). Дополнительную дозу (40 мг/кг, IP) вводили, если животное отвечало на физический стимул (например, сжатие пальца). Место хирургического вмешательства брили и вентрально делали 1-2 см серединный надрез на шее. Яремную вену извлекали и вводили канюлю с полиэтиленовым катетером, наполненным солевым раствором (PE-50), для обеспечения IV инфузии MCh. Трахею свободно рассекали и вводили канюлю с иголкой, размером 14 G (#NE-014, Small Parts, Miami Lakes, FL). После помещения трахеальной канюли, каждую крысу вентилировали, используя набор для искусственного дыхания (Model 683, Harvard Apparatus, InC, MA) ударным объемом 1 мл/100 г массы тела (но не превышая объем 2,5 мл) и со скоростью 90 ударов в минуту. T-соединитель помещали по ходу трубки для выдоха аппарата искусственного дыхания для измерения изменений в вентиляционном давлении (VP), используя приемник Biopac, который присоединяли к предусилителю Biopac (TSD 137C). Температуру тела поддерживали при 37°C, используя грелку.

Изменения в VP записывали, используя Acknowledge Data Collection Software (Santa Barbara, CA). Базовые значения собирали в течение по крайней мере 2,5 мин. Крысам затем делали некумулятивную внутривенную (IV) инфузию 40 и 80 мкг/кг MCh. MCh вводили путем инфузии внутривенно в течение 2,5 минут с помощью шприца с насосом (sp210iw, World Precision Instruments, InC, Sarasota, FL) со скоростью 2 мл/кг/мин, с интервалом 2 минуты между двумя дозами MCh. Изменения вентиляционного давления (см H₂O) у обработанных животных выражали как % ингибирования ответа на MCh по сравнению с контрольными животными.

В этом анализе вместо MCh можно использовать другие бронхоконстрикторы, такие как гистамин и ацетилхолин. Кроме того, вместо крыс можно использовать морских свинок.

В этом исследовании высокий % ингибирования ответа на MCh указывает, что тестируемое соединение давало больший эффект защиты бронхов. Ингибирование более или равное 30 процентам через 24 часа указывает на длительную продолжительность действия. Данные о защите бронхов для соединений по настоящему изобретению показаны в таблице III.



¹связывание мускаринового рецептора hM3 (K_i) (значение составляет около 0,1 нМ). ²активность адренергического рецептора как агониста hβ₂ (EC₅₀) (значение составляет около 1 нМ). ³бронхозащитный эффект через 24 часа, например, ≥30% ингибирование ответа на MCh через 24 часа в исследовании Эйнтховена на крысах (100 мкг).

Данные в таблице III демонстрируют, что все тестированные соединения имели значение связывания рецептора hM₃ (K_i) в пределах от 0,1 нМ до 0,8 нМ. Кроме того, все тестриуемые соединения имели значение эффективности hβ₂ (EC₅₀) в пределах от 1 нМ до 11 нМ. Кроме того, большинство тестированных соединений в исследовании Эйнтховена на крысах (используя 100 мкг исследуемого соединения) давали значительный бронхозащитный эффект (≥30% ингибирование бронхоспазма, вызыванного MCh) через 24 часа после введения.

Claims

1. 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил)бутил] метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-иловый эфир бифенил-2-илкарбаминовой кислоты формулы:

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п.1, где соединение представляет собой 1-(2-{[4-(4-{[(R)-2-гидрокси-2-(8-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-5-ил)этиламино]метил}фенилкарбамоил) бутил]метилкарбамоил}этил)пиперидин-4-иловый эфир бифенил-2-илкарбаминовой кислоты.

3. Фармацевтическая композиция для лечения легочного расстройства, содержащая соединение по п.1 или 2 и фармацевтически приемлемый носитель.

4. Фармацевтическая композиция по п.3, где композиция содержит дополнительное стероидное противовоспалительное средство или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

5. Соединение по п.1 или 2 для применения в лечении легочного расстройства.

6. Соединение по п.5, где легочным расстройством является хроническое обструктивное заболевание легких или астма.

7. Промежуточное соединение для получения соединения по п.1 формулы:

где R^x и R^y независимо выбраны из C_1-4 алкила и фенила;
R^z выбран из C_1-4 алкила и -О- (C_1-4 алкил), или его соль.

8. Соединение по п.7, где R^x и R^y представляют собой метил и R^z представляет собой трет-бутил.

9. Способ получения соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, включающий удаление защитных групп у соединения по п.7 или 8.