KR20160040290A - 조합 면역원성 조성물 - Google Patents

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안-뮈리엘 스테프
스테판 티. 템메르만
진-프란코이스 투생
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글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.
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Abstract

본 발명은 RSV 및 B. 퍼투시스 둘 모두의 감염 및 질병에 대해 보호를 유도할 수 있는 조합 면역원성 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 B. 퍼투시스 무세포 (Pa) 또는 전세포 (Pw) 항원과 함께, RSV의 재조합 F 단백질 유사체를 포함하는 조성물 및, 특히 신생아 및 모체 면역화에 관한, 이의 용도에 관한 것이다. 모체 면역화에 의해 RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기된 질병에 대해 유아를 보호하는 면역원성 조성물의 백신 요법, 방법, 뿐만 아니라 용도, 및 키트가 또한 기재된다.

Description

조합 면역원성 조성물{COMBINATION IMMUNOGENIC COMPOSITIONS}
본 발명은 면역학의 분야에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 및 보르데텔라 퍼투시스(Bordetella pertussis)에 특이적인 면역 반응을 유도하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.
인간 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)는 6개월 미만의 유아 및 임신 35주 이하의 미숙아에서 하기도 감염 (LRTI)의 전세계적으로 가장 일반적인 원인이다. RSV 질병 스펙트럼은 비염 및 이염으로부터 폐렴 및 세기관지염까지의 다양한 호흡기 증상을 포함하고, 후자의 두 질병은 상당한 이환율 및 사망률과 관련되어 있다. 인간만이 RSV에 대한 공지된 저장소이다. 오염된 코 분비물로부터의 바이러스의 확산은 큰 호흡 비말을 통해 발생하므로, 감염된 개체 또는 오염된 표면과의 밀착이 전파에 요구된다. RSV는 장난감 또는 다른 물체에 몇 시간 동안 지속될 수 있으며, 이는 특히 소아 병동에서, 높은 병원내 RSV 감염율을 설명한다.
RSV에 대한 전세계적인 연간 감염 및 사망률 수치는 각각 64백만명 및 160,000명으로 추정된다. 미국에서만 RSV는 연간 18,000 내지 75,000명 입원 및 90 내지 1900명 사망의 원인으로 추정된다. 온대 기후에서, RSV는 세기관지염 및 폐렴을 포함하는 급성 LRTI의 연간 겨울 전염병의 원인으로서 잘 문서화되어 있다. 미국에서, 거의 모든 소아는 2세까지 RSV에 감염되었다. 다른 건강한 소아에서 RSV-관련 LRTI의 발생률은 일생의 첫 두 해에 1000명의 아이 당 37명 (6개월 미만의 유아에서 1000명의 아이 당 45명) 그리고 입원 위험은 1000명의 아이 당 6명으로 계산되었다. 미국에서 RSV-관련 입원 허가의 거의 절반을 구성하는, 심폐 질환을 가진 소아 및 조산아에서 발생률은 더 높다. 이후 RSV에 의해 야기되는 더 심한 LRTI를 경험한 소아는 증가된 소아 천식 발생률을 지닌다. 이러한 연구는 심각한 LRTI 및 이의 후유증을 갖는 환자에 대한 관리 비용이 상당한 선진국에서, RSV 백신에 대한 광범한 요구, 뿐만 아니라 이의 이용을 입증한다. RSV는 또한 노인에서 인플루엔자-유사 질병으로부터의 이환율의 점점 더 중요한 원인으로 인식되고 있다.
박테리아 보르데텔라 퍼투시스는 유아 및 어린 소아에서 심각할 수 있는 호흡기 질병인 백일해에 대한 병인이다. WHO는, 2008년에, 약 16백만 병증의 백일해가 전세계적으로 발생하였고, 195,000명의 소아가 이 질병으로부터 사망했다고 추정한다. 백신은 수십년 동안 이용가능하였고, 전세계적인 백신화는 2008년에 약 687,000건의 사망을 회피하였다고 추정된다 (WHO).
질병의 임상 경과는 종종 특징적인 '그르렁(whooping)' 소리와 관련된, 빠른 기침의 발작 후에 흡기 노력을 특징으로 한다. 심각한 병증에서, 산소 부족은 뇌 손상으로 이어질 수 있다; 그러나 가장 일반적인 합병증은 이차 폐렴이다. 비록 항생제를 이용한 치료가 이용가능하지만, 질병이 진단되는 시간까지, 박테리아 독소는 종종 심각한 손상을 야기시켰다. 따라서 질병의 예방이 매우 중요하므로, 백신화의 개발이 상당한 관심사이다. B. 퍼투시스(B. pertussis)에 대한 제 1 세대 백신은 열 처리, 포르말린 또는 다른 수단에 의해 사멸된 전체 박테리아로 구성된, 전세포 백신이었다. 이들은 1950년대 및 1960년대에 많은 나라에 도입되었고 백일해의 발생을 감소시키는데 성공적이었다.
전세포 B. 퍼투시스 백신의 문제는 이들과 관련된 높은 수준의 반응원성이다. 이러한 문제는, 종종 69kD 단백질 퍼탁틴 (PRN)과 함께, 그리고 일부 경우에 핌브라 2 및 3 (FIM 2 및 3)을 추가로 포함하는, 고도로 정제된 B. 퍼투시스 단백질 - 일반적으로 적어도 백일해 톡소이드 (PT; 독성을 제거하기 위해 화학적으로 처리되거나 유전적으로 변형된 백일해 독소) 및 실모양 헤마글루티닌 (FHA)을 함유하는 무세포 백일해 백신의 개발에 의해 해결되었다. 이러한 무세포 백신은 전세포 백신보다 일반적으로 훨씬 덜 반응원성이고, 많은 국가에서 백신화 프로그램을 위해 채택되었다. 그러나, 1980년대 초부터 미국에서 보고된 백일해 병증의 전반적인 증가 추세 (1955년 이후 어떠한 해보다 2012년에 더 많은 병증이 보고됨), 및 최근 몇 년 동안 많은 국가에서 매우 대중화된 발생은 무세포 백신에 의해 유도된 보호가 전세포 백신에 의해 부여된 것보다 낮은 지속성을 갖는다는 추측을 이끌어 내었다. 어린 시절 면역화 후 면역성의 이러한 쇠퇴는 청소년 및 성인이 이러한 높은 전염성 질환의 저장소 역할을 할 수 있음을 의미한다. 이는 2-3개월에 이루어지는 소아 백신화의 개시 전에, 수명의 처음 몇 개월 동안 신생아를 특정 위험에 두게 된다.
취약한 신생아를 보호하기 위한 전략은 '코쿠닝(cocooning)', 즉, 신생아와 접촉할 가능성이 있는 청소년 및 성인 (산후 여성 포함)을 백신화하는 것을 포함하고, 한편 임신 여성을 백신화(모체 면역화)하는 것이 현재 여러 나라에서 권고되는데, 이에 의해 항-백일해 항체가 태반을 통해 전달되어 유아가 직접 백신화될 수 있을 때까지 보호를 제공한다. 신생아의 출생시 백신화가 또한 임상 시험에서 평가되었다.
비록 B. 퍼투시스 백신화가 잘 확립되어 있으나, 건강한 집단 및 위험 집단에서 지속적이고 보호성인 면역 반응을 유도하는 안전하고 효과적인 RSV 백신을 생산하기 위한 다양한 시도에도 불구하고, 현재까지 평가된 어떤 후보도 RSV 감염을 예방하고/거나 RSV 질병을 감소 또는 예방할 목적의 백신으로서 안전하고 효과적인 것으로 입증되지 못했다. 따라서, 신생아 및 영아에 특히 위험을 주는 RSV 및 B. 퍼투시스 감염 둘 모두 및 관련 질병에 대한 보호를 제공하는 조합 백신에 대한 충족되지 않은 요구가 존재한다.
간단 개요
본 발명은 RSV 및 B. 퍼투시스 (때로 본원에서 "백일해"로서 언급됨) 둘 모두의 감염 및/또는 질병에 대해 보호를 유도할 수 있는 조합 면역원성 조성물, 예컨대 백신에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 B. 퍼투시스 무세포 (Pa) 또는 전세포 (Pw) 항원과 함께, RSV의 재조합 F 단백질 유사체를 포함하는 그러한 조성물 및, 특히 신생아 및 모체 면역화의 상황에서, 이의 이용에 관한 것이다. 또한, 재조합 RSV F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원을, 적어도 하나의 면역원성 조성물로 임신 여성에 투여함에 의해, 출생으로부터 신생아의 보호가 RSV 및 백일해에 대해 보호성인 모체 항체의 태반을-통한 전달에 의해 영향을 받는, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기된 질병에 대해 유아를 보호하기 위한 백신 요법, 방법 및 면역원성 조성물의 용도가 기재된다. 적어도 하나의 면역원성 조성물은 본원에 기재된 RSV-B. 퍼투시스 조합 조성물일 수 있다. 그러한 모체 면역화에 유용한 키트가 또한 기재된다.
도면의 간단한 설명
도 1A는 RSV F 단백질의 구조적 특징을 강조한 개략도이다. 도 1B는 예시적인 RSV 융합전(Prefusion) F (PreF) 항원의 개략도이다.
도 2는 실시예 1에서 수행된 기니 피그 실험을 위한 연구 설계를 도시힌다.
도 3은 RSV로 기니 피그 자손을 챌린지(challenge)한 후 실시예 1로부터의 결과를 도시한다.
도 4는 실시예 1의 기니 피그 모델에서 중화 항체 반응의 시간-경과를 도시한다.
도 5A 및 5B는 RSV + 백일해 조합 백신으로 면역화 후 RSV 챌린지 감염에 대한 중화 역가 및 보호를 예시하는 그래프이다 (실시예 2).
도 6A 및 6B는 RSV + 백일해 조합 백신으로 면역화 후 보르데텔라 퍼투시스를 이용한 챌린지에 대한 혈청 항체 역가 및 보호를 예시하는 그래프이다 (실시예 3).
도 7A 및 7B는 RSV + 백일해 조합 백신으로 RSV-프라이밍된(primed) 어미의 모체 면역화 후 기니 피그 어미 및 새끼에서 중화 역가를 예시하는 그래프이다 (실시예 4).
도 8은 RSV + 백일해 조합 백신으로 RSV-프라이밍된 어미의 모체 면역화 후 기니 피그 새끼의 RSV 챌린지 감염에 대한 보호를 도시한다 (실시예 4).
상세한 설명
도입
RSV 감염을 예방하기 위한 백신의 개발은 숙주 면역 반응이 질병의 발병기전에 역할을 담당하는 것으로 보인다는 사실 때문에 복잡해졌다. 1960년대의 초기 연구는 포르말린-불활성화된 RSV 백신으로 백신화된 소아가 바이러스로의 후속 노출시 백신화되지 않은 대조 피검체에 비해 더 심각한 질병으로 고통받았다고 보고하였다. 이러한 초기 임상은 백신접종자의 80%의 입원 및 두 명의 사망을 발생시켰다. 질병의 증가된 중증도는 동물 모델에서 재현되었고, 이는 혈청-중화 항체의 부적절한 수준, 국소 면역성의 결핍, 및 폐호산구증가증 및 IL-4 및 IL-5 사이토킨의 증가된 생성과 함께 타입 2 헬퍼 T-세포-유사 (Th2) 면역 반응의 과도한 유도가 원인인 것으로 여겨진다. 대조적으로, RSV 감염에 대해 보호하는 성공적인 백신은 IL-2 및 γ-인터페론 (IFN)의 생성을 특징으로 하는, Th1 바이어스(biased) 면역 반응을 유도한다.
백일해에 대한 면역화가 잘 확립되어 있으나, RSV에 대해 허용되는 백신의 이전의 부재하에, RSV 및 B. 퍼투시스 감염 및/또는 질병에 대해 보호를 부여할 수 있는 조합 백신을 조사할 기회가 없었다. 이러한 감염성 작용제들은 신생아 및 영아 (B. 퍼투시스의 경우 소아 백신화 스케쥴에 의해 자극된 전체 보호기능을 여전히 구축하고 있는)에 가장 심각한 위험을 주고, 또한 둘 모두는 노인에게 위험을 주기 때문에, 단일한 주입으로 두 백신 모두의 전달을 가능케 하는 조합된 면역원성 조성물은 수용체의 편안함, 백신 스케쥴의 준수, 비용-유효성, 뿐만 아니라 다른 백신에 대한 면역화 스케쥴과의 간격(freeing-uo space)을 제공하는 관점에서 유리할 것이다.
본 발명은 RSV 및 B. 퍼투시스 둘 모두와 관련된 감염, 또는 질병에 대해 보호하는 조합 면역원성 조성물 (예컨대, 백신), 및 특히 이러한 병원체와 관련된 이환율 및 사망률과 관련하여, 가장 높은 발생률 및 중증도가 발견되는 집단인 신생아 및 영아의 보호에 이를 이용하는 방법을 기재한다. 그러한 인구(demographic)의 보호는 과제를 제시한다. 영아, 및 특히 조산으로 태어난 영아는 미성숙한 면역 시스템을 지닐 수 있다. 또한 아주 영아에서의 백신화는 모체 항체와의 간섭 가능성이 있다. 과거에 RSV에 대한 영아의 백신화에 의해 RSV 질병이 증가하는 문제 뿐만 아니라, 자연 감염 및 면역화에 의해 유도된 면역성의 쇠퇴로부터 발생하는 문제가 있었다. B. 퍼투시스 항원-함유 백신을 이용한 모체 면역화는 신생아에서 항-B. 퍼투시스 항체 역가를 증가시키는 것으로 나타났고 (비-모체-면역화된 어머니로부터의 신생아에 비해)(예를 들어, Gall et al (2011), Am J Obstet Gynecol, 204:334.e1-5, 본원에 참조로서 포함됨), 그러한 모체 면역화는 현재 일부 국가에서 권고된다. 기재된 조합 조성물을 이용한 면역화 방법을 기재하는 것에 추가하여, 본 발명은 기재된 RSV-B. 퍼투시스 조합 면역원성 조성물을 이용하는 것을 포함하여, RSV 및 B. 퍼투시스 항원의 조합물로 임신 여성을 면역화시킴에 의해 신생아 및 영아를 보호하기 위한 백신 요법, 방법 및 면역원성 조성물의 용도를 추가로 기재한다. 항원은 유리하게는 태반을 통해 임신 영아에 전달되어 출생 후 유아의 수동 면역학적 보호를 발생시키고 RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 및 중증 질병에 대한 중요한 기간 내내 지속되는 항체를 유도한다.
본 발명의 한 양태는 적어도 하나의 RSV 항원 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원을 포함하는 조합 면역원성 조성물에 관한 것이고, 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원은 적어도 하나의 무세포 백일해 (Pa) 항원을 포함하거나 전세포 (Pw) 항원을 포함한다.
특히, 본 발명은 적어도 하나의 RSV 항원이 재조합 가용성 F 단백질 유사체인 그러한 조합 면역원성 조성물을 제공한다. 융합후 입체형태로 안정화된 F 유사체 ("PostF"), 또는 입체형태에 관해 불안정한 F 유사체가 이용될 수 있다. 유리하게는, F 단백질 유사체는 F 단백질의 융합전 입체형태를 안정화시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 융합전 F 또는 "PreF" 항원이다.
특정 구체예에서, 조합 면역원성 조성물의 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원은 백일해 톡소이드 (PT), 실모양 헤마글루티닌 (FHA), 퍼탁틴 (PRN), 핌브라(fimbrae) 타입 2 (FIM2), 핌브라 타입 3 (FIM3)으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 Pa 항원을 포함한다. 그러한 Pa 백신은 당 분야에 잘 알려져 있다.
대안적인 구체예에서, 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원은 Pw 항원을 포함하고, Pw 백신은 당 분야에 잘 알려져 있다. 본원에서 사용되는 용어 "전세포 (Pw) 항원"은 불활성화된 B. 퍼투시스 세포를 의미하므로 (물론 엄격하게 다수의 상이한 항원을 함유한다), Pw 백신과 동일하다.
특정 구체예에서, 기재된 조합 면역원성 조성물은 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제, 예컨대 완충제를 포함한다. 추가로 또는 대안적으로, 면역원성 조성물은 애쥬번트, 예를 들어, 3D-MPL, QS21 (예컨대, 탈독화된 형태에서), 수중유 에멀젼 (예컨대, 면역자극 분자, 예컨대 α-토코페롤이 있거나 없음), 알루미늄 염 (알룸, 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 하이드록사이드 포함) 및 칼슘 포스페이트와 같은 미네랄 염, 또는 이들의 조합물을 포함하는 애쥬번트를 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, 기재된 조합 면역원성 조성물은 RSV 및 B. 퍼투시스 이외의 적어도 하나의 병원성 유기체로부터의 적어도 하나의 항원을 추가로 포함한다. 특히, 상기 적어도 하나의 병원성 유기체는 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheriae); 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani); B형 간염 바이러스; 폴리오 바이러스; 헤마필루스 인플루엔자 (Haemophilus influenzae) 타입 b; N. 메닌지티디스(N. meningitidis) 타입 C; N. 메닌지티디스 타입 Y; N. 메닌지티디스 타입 A, N. 메닌지티디스 타입 W; 및 N. 메닌지티디스 타입 B로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 RSV 및 B. 퍼투시스 감염/질병의 예방 및/또는 치료를 위해 기재된 조합 면역원성 조성물을 이용하는 것에 관한 것이다. 따라서, 면역학적 유효량의 상기 조합 면역원성 조성물을 피검체에 투여하는 것을 포함하는, RSV 및 B. 퍼투시스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법이 본원에 기재된다.
추가의 양태에서, 본 발명은, 특히 RSV 및 B. 퍼투시스에 의한 감염 또는 이들과 관련된 질병의 피검체에서의 예방 또는 치료를 위한, 의약에 사용하기 위한 기재된 조합 면역원성 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하기 위한 백신화 요법에 관한 것이고, 상기 백신화 요법은 재태 영아를 가진 임신 여성에 RSV 및 B. 퍼투시스 둘 모두에 특이적인 체액성 면역 반응을 부스팅할 수 있는 적어도 하나의 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 적어도 하나의 면역원성 조성물은 F 단백질 유사체 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원을 포함하는 재조합 RSV 항원을 포함하며,
적어도 하나의 면역원성 조성물에 의해 임신 여성에서 유도되거나 증가된 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및 적어도 하나의 서브세트의 B. 퍼투시스-특이적 항체는 태반을 통해 재태 영아에 전달됨으로써, 영아가 RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 보호된다.
또한, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하는 방법이 한 양태에 기재되고, 상기 방법은 재태 영아를 가진 임신 여성에 RSV 및 B. 퍼투시스 둘 모두에 특이적인 체액성 면역 반응을 부스팅할 수 있는 적어도 하나의 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 적어도 하나의 면역원성 조성물은 F 단백질 유사체 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원을 포함하는 재조합 RSV 항원을 포함하며,
적어도 하나의 면역원성 조성물에 의해 임신 여성에서 유도되거나 증가된 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및 적어도 하나의 서브세트의 B. 퍼투시스-특이적 항체는 태반을 통해 재태 영아에 전달됨으로써, 영아가 RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 보호된다.
본 발명의 또 다른 양태는 RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하는데 사용하기 위한 F 단백질 유사체를 포함하는 재조합 RSV 항원 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원을 포함하는 면역원성 조성물 또는 복수의 면역원성 조성물에 관한 것이고, 면역원성 조성물(들)은 임신 여성으로의 투여를 위해 제형화되며, 면역원성 조성물(들)은 RSV 및 B. 퍼투시스 둘 모두에 특이적인 체액성 면역 반응을 부스팅할 수 있고, 면역원성 조성물(들)에 의해 임신 여성에서 부스팅된 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및 적어도 하나의 서브세트의 B. 퍼투시스-특이적 항체는 태반을 통해 재태 영아에 전달됨으로써, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호한다.
또 다른 양태에서, 임신 여성에 투여하도록 제형화된 복수의 면역원성 조성물을 포함하는 키트가 기재되고, 상기 키트는,
(a) RSV에 특이적인 체액성 면역 반응을 유도, 유발 또는 부스팅할 수 있는 F 단백질 유사체를 포함하는 제 1 면역원성 조성물; 및
(b) B. 퍼투시스에 특이적인 체액 반응을 유도, 유발 또는 부스팅할 수 있는 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원을 포함하는 제 2 면역원성 조성물을 포함하며,
임신 여성으로의 투여시, 제 1 및 제 2 면역원성 조성물은 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및 적어도 하나의 서브세트의 B. 퍼투시스-특이적 항체를 유도, 유발 또는 부스팅하고, 항체는 태반을 통해 임신 여성의 재태 영아에 전달됨으로써, 영아가 RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 보호된다.
용어
본 발명의 다양한 구체예의 검토를 용이하게 하기 위해, 다음 용어 설명이 제공된다. 추가의 용어 및 설명은 본 발명의 문맥에서 제공될 수 있다.
달리 설명되지 않는 한, 본원에서 이용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 분자 생물학에서 일반적인 용어의 정의는 문헌[Benjamin Lewin, Genes V, published by Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); and Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8)]에서 찾아볼 수 있다.
단수 용어는 문맥에서 명백하게 달리 지시되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 유사하게, "또는"이라는 단어는 문맥에서 명백하게 달리 지시되지 않는 한 "및"을 포함하도록 의도된다. 용어 "복수"는 2개 이상을 말한다. 핵산 또는 폴리펩티드에 대해 제공된 모든 염기 크기 또는 아미노산 크기, 및 모든 분자량 또는 분자 질량 값은 대략적인 것이고, 설명을 위해 제공됨이 추가로 이해되어야 한다. 추가로, 물질, 예컨대 항원의 농도 또는 수준과 관련하여 제공된 수치 한정은 근사치인 것으로 의도된다. 따라서, 농도가 적어도 (예를 들어) 200 pg인 것으로 표시된 경우, 농도는 적어도 대략 (또는 "약" 또는 "~") 200 pg인 것으로 이해되도록 의도된다.
본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 이용될 수 있으나, 적합한 방법 및 물질이 하기에 기재된다. 용어 "포함하다(comprises)"는 "포함함(includes)"을 의미한다. 따라서, 문맥에서 달리 요구하지 않는 한, "을 포함하다"라는 단어, 및 "들을 포함하다" 및 "포함하는"과 같은 변형은 임의의 다른 화합물, 조성물, 단계, 또는 이의 그룹을 배제하지 않으며, 언급된 화합물 또는 조성물 (예컨대, 핵산, 폴리펩티드, 항원) 또는 단계, 또는 화합물 또는 단계의 그룹의 포함을 의미하는 것임이 이해될 것이다. 약어 "예컨대(e.g.)"는 라틴어 exempli gratia에서 온 것이며, 비제한적인 예를 나타내기 위해 본원에서 이용된다. 따라서, 약어 "예컨대"는 용어 "예를 들어"와 동의어이다.
용어 "F 단백질" 또는 "융합 단백질" 또는 "F 단백질 폴리펩티드" 또는 "융합 단백질 폴리펩티드"는 RSV 융합 단백질 폴리펩티드의 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 갖는 폴리펩티드 또는 단백질을 의미한다. 다수의 RSV 융합 단백질이 기재되었고 당업자에게 공지되어 있다. WO2008/114149호는 예시적인 F 단백질 변이체를 제시한다 (예를 들어, 자연 발생 변이체).
"F 단백질 유사체"는 F 단백질의 구조 또는 기능을 변경시키는 변형을 포함하지만 F 단백질의 면역학적 성질을 유지하여, F 단백질 유사체에 대해 발생한 면역 반응이 천연 F 단백질을 인지하도록 하는 F 단백질을 의미한다. 전문이 본원에 참조로서 포함된 WO2010/149745호는 예시적인 F 단백질 유사체를 기재한다. 전문이 본원에 참조로서 포함된 WO2011/008974호는 또한 예시적인 F 단백질 유사체를 기재한다. F 단백질 유사체는 예를 들어 F 단백질의 융합전 입체형태를 안정화시키는 적어도 하나의 변형을 포함하고 일반적으로 가용성인, 즉 막에 결합되지 않은 PreF 항원을 포함한다. F 단백질 유사체는 또한 유리하게 융합후 입체형태로 안정화된, RSV F 단백질의 그러한 입체형태로 존재하는 융합후 F (postF) 항원을 포함한다. 그러한 대안은 또한 일반적으로 가용성이다.
핵산 또는 폴리펩티드 (예컨대, RSV F 또는 G 단백질 핵산 또는 폴리펩티드, 또는 F 유사체 핵산 또는 폴리펩티드)를 언급할 때 "변이체"는 참조 핵산 또는 폴리펩티드와 상이한 핵산 또는 폴리펩티드이다. 일반적으로, 변이체와 참조 핵산 또는 폴리펩티드 간의 차이(들)는 대상물에 비해 비례적으로 소수의 차이를 구성한다.
폴리펩티드 또는 단백질의 "도메인"은 폴리펩티드 또는 단백질 내의 구조적으로 정의된 엘리먼트이다. 예를 들어, "삼합체화 도메인"은 삼합체로의 폴리펩티드의 어셈블리를 촉진시키는 폴리펩티드 내의 아미노산 서열이다. 예를 들어, 삼합체화 도메인은 (동일하거나 상이한 아미노산 서열을 지닌 추가의 폴리펩티드의) 다른 삼합체화 도메인과의 결합을 통해 삼합체로의 어셈블리를 촉진할 수 있다. 상기 용어는 또한 그러한 펩티드 또는 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 나타내기 위해 사용된다.
용어 "천연" 및 "자연 발생"은 자연에 있는 것과 동일한 상태로 존재하는 엘리먼트, 예컨대 단백질, 폴리펩티드 또는 핵산을 의미한다. 다시 말해, 엘리먼트가 인위적으로 변형되지 않았다. 본 발명의 문맥에서, 예컨대 RSV의 상이한 자연 발생 균주 또는 단리물로부터 수득되는, RSV 단백질 또는 폴리펩티드의 다수의 천연/자연 발생 변이체가 존재함이 이해될 것이다. 전문이 본원에 참조로서 포함된 WO2008114149호는 예시적인 RSV 균주, 단백질 및 폴리펩티드를 함유하며, 예를 들어 도 4를 참조하라.
용어 "폴리펩티드"는 단량체가 아미드 결합을 통해 함께 연결된 아미노산 잔기인 중합체를 의미한다. 본원에서 사용되는 용어 "폴리펩티드" 또는 "단백질"은 임의의 아미노산 서열을 포함함을 의도하며 당단백질과 같은 변형된 서열을 포함한다. 용어 "폴리펩티드"는 구체적으로 자연 발생 단백질, 뿐만 아니라 재조합에 의해 또는 합성에 의해 생성된 것들을 포함하도록 의도된다. 폴리펩티드에 관해, 용어 "단편"은 폴리펩티드의 부분 (다시 말해, 부분서열)을 의미한다. 용어 "면역원성 단편"은 참조 전장 단백질 또는 폴리펩티드의 적어도 하나의 우세한 면역원성 에피토프를 보유한 폴리펩티드의 모든 단편을 의미한다. 폴리펩티드 내의 배향은 일반적으로 개별적인 아미노산의 아미노 및 카르복시 모이어티(moiety)의 배향에 의해 정의되는, N-말단에서 C-말단 방향으로 열거된다. 폴리펩티드는 N 또는 아미노-말단으로부터 C 또는 카르복시-말단을 향해 번역된다.
"신호 펩티드"는, 예컨대 세포질 세망의 막으로 및 막을 통해 새롭게 합성된 분비 또는 막 단백질을 유도하는 짧은 아미노산 서열 (예컨대, 대략 18-25개 아미노산 길이)이다. 신호 펩티드는 빈번하게 폴리펩티드의 N-말단에 위치하나 보편적으로 그러한 것은 아니며, 단백질이 막을 가로지른 후 종종 신호 펩티다제에 의해 절단된다. 신호 서열은 전형적으로 3개의 일반적인 구조적 특징: N-말단 극성 염기성 영역 (n-영역), 소수성 코어, 및 친수성 c-영역)을 함유한다.
용어 "폴리뉴클레오티드" 및 "핵산 서열"은 적어도 10개 염기 길이의 뉴클레오티드의 중합성 형태를 의미한다. 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오티드, 또는 어느 뉴클레오티드의 변형된 형태일 수 있다. 상기 용어는 DNA의 단일 및 이중-가닥 형태를 포함한다. "단리된 폴리뉴클레오티드"는 이것이 유래된 유기체의 자연 발생 유전체에서 바로 연속성인 (5' 말단에 하나 그리고 3' 말단에 하나) 코딩 서열 둘 모두와 바로 연속적이지 않은 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 한 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 폴리펩티드를 인코딩한다. 핵산의 5' 및 3' 방향은 개별적인 뉴클레오티드 단위의 연결에 대한 참조에 의해 정의되고, 데옥시리보스 (또는 리보스) 당 고리의 탄소 위치에 따라 지정된다. 폴리뉴클레오티드 서열의 정보 (코딩) 내용은 5'에서 3' 방향으로 판독된다.
"재조합" 핵산은 자연 발생이 아닌 서열을 갖거나 서열의 다르게 분리된 2개 세그먼트의 인위적인 조합에 의해 만들어진 서열을 갖는 것이다. 이러한 인위적인 조합은 화학 합성 또는, 더욱 일반적으로, 예컨대 유전자 공학 기법에 의한, 핵산의 단리된 세그먼트의 인위적 조작에 의해 달성될 수 있다. "재조합" 단백질은 박테리아 또는 진핵생물 세포와 같은 숙주 세포에 도입된 이종성 (예컨대, 재조합) 핵산에 의해 인코딩되는 것이다. 핵산은 도입된 핵산에 의해 인코딩된 단백질을 발현할 수 있는 신호를 갖는 발현 벡터 상에서 도입될 수 있거나, 핵산은 숙주 세포 염색체에 통합될 수 있다.
핵산, 폴리펩티드 또는 다른 세포 성분에 관해 용어 "이종성"은 성분이 보통 자연에서 발견되지 않는 경우 발생하고/거나 이것이 상이한 공급원 또는 종에서 비롯되는 것을 나타낸다.
용어 "정제" (예컨대, 병원체 또는 병원체를 함유하는 조성물에 관해)는 조성물로부터 성분, 즉 요망되지 않는 것의 존재를 제거하는 공정을 의미한다. 정제는 상대적인 용어이며, 요망되지 않는 모든 미량의 성분을 조성물로부터 제거할 것을 요구하는 것은 아니다. 백신 생성에 관해, 정제는 원심분리, 분해(dialization), 이온-교환 크로마토그래피, 및 크기-배제 크로마토그래피, 친화성-정제 또는 침전과 같은 공정을 포함한다. 따라서, "정제된"이라는 용어는 절대적인 순도를 요구하지 않고; 오히려, 상대적인 용어로서 의도된다. 따라서, 예를 들어, 정제된 핵산 또는 단백질 제조물은 핵산 또는 단백질이 그 발생 환경에, 예를 들어 세포 또는 생화학적 반응 챔버 내에 존재하는 것보다 명시된 핵산 또는 단백질이 더 풍부한 제조물이다. 실질적으로 순수한 핵산 또는 단백질의 제조물은 요망되는 핵산이 제조물의 총 핵산 함량의 적어도 50%를 나타내도록 정제될 수 있다. 특정 구체예에서, 실질적으로 순수한 핵산 또는 단백질은 제조물의 총 핵산 또는 단백질 함량의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 또는 초과를 나타낼 것이다.
"단리된" 생물학적 성분 (예컨대, 핵산 분자, 단백질 또는 세포소기관)은 다른 염색체 및 염색체외 DNA 및 RNA, 단백질 및 세포소기관과 같은 성분이 자연적으로 발생하는 유기체의 세포에서 다른 생물학적 성분으로부터 실질적으로 분리되거나 정제되었다. "단리된" 핵산 및 단백질은 표준 정제 방법에 의해 정제된 핵산 및 단백질을 포함한다. 상기 용어는 또한 숙주 세포에서 재조합 발현에 의해 제조된 핵산 및 단백질 뿐만 아니라 화학적으로 합성된 핵산 및 단백질을 포함한다.
"항원"은 주입, 흡수 또는 피검체에 달리 도입되는 조성물을 포함하여, 피검체에서 항체 및/또는 T 세포 반응의 생성을 자극할 수 있는 화합물, 조성물, 또는 물질이다. 용어 "항원"은 모든 관련된 항원성 에피토프를 포함한다. 용어 "에피토프" 또는 "항원성 결정인자"는 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 의미한다. "우세한 항원성 에피토프" 또는 "우세한 에피토프"는 항체 반응 또는 T-세포 반응과 같은 기능적으로 유의한 숙주 면역 반응이 이루어지는 에피토프이다. 따라서, 병원체에 대한 보호성 면역 반응에 관해, 우세한 항원성 에피토프는 숙주 면역 시스템에 의해 인지될 때 병원체에 의해 야기되는 질병으로부터의 보호를 발생시키는 항원성 모이어티이다. 용어 "T-세포 에피토프"는 적절한 MHC 분자에 결합할 때 T 세포 (T 세포 수용체를 통해)에 의해 특이적으로 결합되는 에피토프를 의미한다. "B-세포 에피토프"는 항체 (B 세포 수용체 분자를 통해)에 의해 특이적으로 결합되는 에피토프이다.
"애쥬번트"는 비-항원 특이적 방식으로 면역 반응의 생성을 증가시키는 작용제이다. 일반적인 애쥬번트는 항원이 흡착된 미네랄 (알룸, 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포스페이트)의 현탁액; 유중수, 및 수중유을 포함하는 에멀젼 (및 이중 에멀젼 및 가역적 에멀젼을 포함하는 이의 변이체), 리포사카라이드, 리포폴리사카라이드, 면역자극성 핵산 (예컨대 CpG 올리고뉴클레오티드), 리포솜, Toll-유사 수용체 효능제 (특히 TLR2, TLR4, TLR7/8 및 TLR9 효능제), 및 이러한 성분의 다양한 조합물을 포함한다.
"항체" 또는 "면역글로불린"은 항원에 특이적으로 결합하는 4개의 폴리펩티드로 구성된 혈장 단백질이다. 항체 분자는 디설파이드 결합에 의해 함께 유지된 2개의 중쇄 폴리펩티드 및 2개의 경쇄 폴리펩티드 (또는 이의 배수)로 구성된다. 인간에서, 항체는 5개의 아이소형 또는 부류: IgG, IgM, IgA, IgD, 및 IgE로 정의된다. IgG 항체는 4개의 서브부류 (IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)로 추가로 분류될 수 있다. "중화" 항체는 바이러스의 감염성을 억제할 수 있는 항체이다. 예를 들어, RSV에 특이적인 중화 항체는 RSV의 감염성을 억제하거나 감소시킬 수 있다.
"면역원성 조성물"은 예컨대 RSV 또는 B. 퍼투시스와 같은 병원체에 대해 특이적 면역 반응을 유도할 수 있는 인간 또는 동물 피검체 (예컨대, 실험 또는 임상 환경에서)에 투여하기에 적합한 물질의 조성물이다. 이와 같이, 면역원성 조성물은 하나 이상의 항원 (예를 들어, 폴리펩티드 항원) 또는 항원성 에피토프를 포함한다. 면역원성 조성물은 또한 부형제, 담체, 및/또는 애쥬번트와 같이, 면역 반응을 유도하거나 증가시킬 수 있는 하나 이상의 추가적인 성분을 포함할 수 있다. 특정 예에서, 면역원성 조성물은 병원체에 의해 유도된 증상 또는 상태에 대해 피검체를 보호하는 면역 반응을 유도하기 위해 투여된다. 일부 예에서, 병원체에 의해 야기되는 증상 또는 질병은 피검체가 병원체에 노출된 후 병원체 (예컨대, RSV 또는 B. 퍼투시스)의 복제를 억제함에 의해 예방된다 (또는 감소되거나 개선됨). 본 발명에 관해, 용어 면역원성 조성물은 RSV 및/또는 B. 퍼투시스에 대해 보호성 또는 완화성 면역 반응을 유도할 목적으로 피검체 또는 피검체의 집단에 투여하기 위한 조성물을 포함함이 이해될 것이다 (즉, 백신 조성물 또는 백신). "조합 면역원성 조성물"이 본원에서 이용되는 경우, 이는 구체적으로 RSV 및 B. 퍼투시스 항원 둘 모두를 포함하는 본원에 기재된 면역원성 조성물을 언급하기 위한 것이다 (RSV는 포함하지만 B. 퍼투시스 항원을 포함하지 않거나, 그 반대의 경우인 면역원성 조성물에 반해).
"면역 반응"은 병원체 또는 항원 (예컨대, 면역원성 조성물 또는 백신으로 제형화됨)과 같은 자극에 대한 B 세포, T 세포, 또는 단핵구와 같은 면역 시스템의 세포의 반응이다. 면역 반응은 항원 특이적인 중화 항체와 같은, 특이적 항체의 생성을 발생시키는 B 세포 반응일 수 있다. 면역 반응은 또한 T 세포 반응, 예컨대 CD4+ 반응 또는 CD8+ 반응일 수 있다. B 세포 및 T 세포 반응은 "세포" 면역 반응의 측면이다. 면역 반응은 또한 항체에 의해 매개되는 "체액" 면역 반응일 수 있다. 일부 경우에, 반응은 특정 항원에 특이적이다 (즉, "항원-특이적 반응"). 항원이 병원체로부터 유래되는 경우, 항원-특이적 반응은 "병원체-특이적 반응이다. "보호성 면역 반응"은 병원체의 유해한 기능 또는 활성을 억제하거나, 병원체에 의한 감염을 감소시키거나, 병원체에 의한 감염으로부터 야기된 증상 (사망 포함)을 감소시키는 면역 반응이다. 보호성 면역 반응은, 예를 들어, 플라크 감소 검정 또는 ELISA-중화 검정에서 바이러스 복제 또는 플라크 형성의 억제에 의해, 또는 생체내 병원체 챌린지에 대한 내성을 측정함에 의해 측정될 수 있다. 병원체 또는 항원 (예컨대, 면역원성 조성물 또는 백신으로서 제형화됨)과 같은 면역원성 자극에 대한 피검체의 노출은 자극에 특이적인 일차 면역 반응을 유도하고, 즉, 상기 노출은 면역 반응을 "프라이밍"시킨다. 예컨대, 면역화에 의한, 자극에 대한 후속 노출은 특이적 면역 반응의 크기 (또는 지속기간, 또는 둘 모두)를 증가시키거나 "부스팅"할 수 있다. 따라서, 면역원성 조성물을 투여함에 의해 기존의 면역 반응을 "부스팅"하는 것은 항원 (또는 병원체) 특이적 반응의 크기를 증가시킨다 (예컨대, 항체 역가 및/또는 친화성을 증가시킴에 의해, 항원 특이적 B 또는 T 세포의 빈도를 증가시킴에 의해, 성숙화 효과기 기능을 유도함에 의해, 또는 이들의 임의의 조합).
"Th1" 바이어스 면역 반응은 IL-2 및 IFN-γ를 생성하는 CD4+ T 헬퍼 세포의 존재, 및 따라서 IL-2 및 IFN-γ의 분비 또는 존재를 특징으로 한다. 대조적으로, "Th2" 바이어스 면역 반응은 IL-4, IL-5, 및 IL-13을 생성하는 CD4+ 헬퍼 세포의 우위를 특징으로 한다.
"면역학적 유효량"은 피검체에서 조성물 또는 조성물 중의 항원에 대해 면역 반응을 유도하는데 이용되는 조성물 (전형적으로, 면역원성 조성물)의 양이다. 일반적으로, 요망되는 결과는 병원체에 대해 피검체를 보호할 수 있거나 보호하는데 기여하는 항원 (예컨대, 병원체)-특이적 면역 반응의 생성이다. 그러나, 병원체에 대한 보호성 면역 반응을 획득하기 위해, 면역원성 조성물의 다중 투여가 요구될 수 있다. 따라서, 본 발명에 관해, 용어 면역학적 유효량은 보호성 면역 반응을 달성하기 위해 이전 또는 후속 투여와 조합하여 기여하는 분할 용량을 포함한다.
형용사적인 "약학적으로 허용되는"은 대상물이 피검체 (예컨대, 인간 또는 동물 피검체)에 투여하기에 적합함을 나타낸다. 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 15th Edition (1975)]은 면역원성 조성물을 포함하는 치료적 및/또는 예방적 조성물의 약학적 전달에 적합한 조성물 및 제형 (희석제 포함)을 기재하고 있다.
면역 반응과 같은 반응과 관련하여 용어 "조절하다"는 반응의 개시, 크기, 지속기간 또는 특징을 변경시키거나 다르게 하는 것을 의미한다. 면역 반응을 조절하는 작용제는 이의 투여 이후 면역 반응의 개시, 크기, 지속기간 또는 특징 중 적어도 하나를 변경시키거나, 개시, 크기, 지속기간 또는 특징 중 적어도 하나를 기준 작용제에 비해 변경시킨다.
용어 "감소시키다"는 상대적인 용어이며, 상기 작용제는, 반응 또는 상태가 작용제의 투여 후 정량적으로 감소된 경우, 또는 작용제의 투여 후 기준 작용제에 비해 감소된 경우, 그 반응 또는 상태를 감소시킨 것이다. 유사하게, 용어 "보호하다"는, 반응 또는 상태의 적어도 하나의 특징이 실질적으로 또는 유의하게 감소되거나 제거되는 한, 작용제가 반드시 감염에 의해 야기된 감염 또는 질병의 위험을 완전히 제거시킴을 의미하는 것은 아니다. 따라서, 감염 또는 질병, 또는 이의 증상에 대해 보호하거나 감소시키는 면역원성 조성물은, 감염의 발생 또는 중증도 또는 질병의 발생 또는 중증도가 측정가능하게 감소되는 한, 예를 들어, 작용제의 부재하에, 또는 기준 작용제에 비해, 감염 또는 반응의 적어도 약 50% 만큼, 또는 적어도 약 60% 만큼, 또는 적어도 약 70% 만큼, 또는 적어도 약 80% 만큼, 또는 적어도 약 90% 만큼 감소되는 한, 모든 피검체에서의 감염 또는 질병을 반드시 예방하거나 제거하는 것은 아니다.
"피검체"는 포유동물과 같은 살아 있는 다세포 척추동물 유기체이다. 본 발명에 관해, 피검체는 실험 피검체, 예컨대 비-인간 동물, 예컨대, 마우스, 코튼 래트, 기니 피그, 암소, 또는 비-인간 영장류일 수 있다. 대안적으로, 피검체는 인간 피검체일 수 있다.
RSV F 단백질 유사체
특정 구체예에서, F 단백질 유사체는 F 단백질의 융합전 입체형태를 안정화시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 융합전 F 또는 "PreF" 항원이다. 대안적으로, 융합후 입체형태("PostF")로 안정화되거나, 입체형태에 관해 불안정한 F 유사체가 이용될 수 있다. 일반적으로, F 단백질 유사체, (예컨대, PreF, PostF 등) 항원은 막관통 도메인이 결여되며, 가용성이고, 즉, 막에 결합되지 않는다 (예를 들어, F 단백질 유사체의 발현 및 정제를 촉진하기 위해).
RSV F 단백질의 구조의 자세한 설명은 당 분야에서 널리 허용되는 용어 및 명칭을 참조하여 본원에서 제공되며, 이는 도 1A에 도식적으로 예시되어 있다. 예시적인 PreF 항원의 개략도는 도 1B에 제공된다.
예시적인 구체예에서, F 단백질 유사체는 N-말단에서 C-말단 방향으로, 임의로 이종성 삼합체화 도메인과 함께, RSV F 단백질 폴리펩티드의 F2 도메인 및 F1 도메인의 적어도 일부 또는 실질적으로 전부를 포함한다. 한 구체예에서, F2 도메인과 F1 도메인 사이에 퓨린 절단 부위는 존재하지 않는다. 특정한 예시적인 구체예에서, F2 도메인은 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 폴리펩티드 (F0)의 아미노산 26-105에 상응하는 RSV F 단백질 폴리펩티드의 적어도 일부를 포함하고/거나 F1 도메인은 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 폴리펩티드 (F0)의 아미노산 137-516에 상응하는 RSV F 단백질 폴리펩티드의 적어도 일부를 포함한다.
예를 들어, 특수한 구체예에서, F 단백질 유사체는,
(a) SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:22의 군으로부터 선택되는 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드;
(b) SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:21의 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드, 또는 SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:21의 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드와 실질적으로 이의 전체 길이에 걸쳐 엄격한 조건하에 하이브리드화되는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된 폴리펩티드로서, 폴리펩티드가 자연 발생 RSV 균주에 적어도 일부 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드;
(c) SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:22의 군으로부터 선택되는 폴리펩티드와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, 폴리펩티드가 자연 발생 RSV 균주에 상응하지 않는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드의 군으로부터 선택된다.
임의로, F 단백질 유사체는 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 임의로, F 단백질 유사체는 "태그" 또는 정제를 촉진하기 위한 서열, 예컨대, 다중-히스티딘 서열을 추가로 포함할 수 있다.
이종성 삼합체화 도메인을 포함하는 구체예에서, 그러한 도메인은 코일드-코일 (coiled-coil) 도메인, 예컨대 이소류신 지퍼를 포함할 수 있거나, 예컨대, 박테리오파지 T4 피브리틴(fibritin) ("폴돈(foldon)"), 또는 인플루엔자 HA로부터의 대안적인 삼합체화 도메인을 포함할 수 있다.
특정한 예시적인 구체예에서, F 단백질 유사체는,
(i) 글리코실화를 변경시키는 변형.
(ii) 적어도 하나의 비-퓨린 절단 부위를 제거하는 변형;
(iii) pep27 도메인의 하나 이상의 아미노산을 결실시키는 변형; 및
(iv) F 단백질 세포외 도메인의 소수성 도메인에서 친수성 아미노산을 치환시키거나 부가시키는 변형으로부터 선택되는 적어도 하나의 변형을 포함한다.
특정 구체예에서, F 단백질 유사체는 폴리펩티드의 다합체, 예를 들어, 폴리펩티드의 삼합체를 포함한다.
상기 언급된 대로, 특정 구체예에서, 기재된 조합 면역원성 조성물의 재조합 RSV 항원은 F 단백질의 융합전 입체형태, 다시 말해 숙주 세포 막과의 융합 전에 성숙 어셈블링된 F 단백질의 입체형태를 안정화하도록 변형된 가용성 F 단백질 폴리펩티드를 포함하는 융합 (F) 단백질 유사체를 포함한다. 이러한 F 단백질 유사체는 명확성과 단순성의 목적으로, "PreF" 또는 "PreF 항원"으로 명명된다. WO2010/149745호에 기재되고 예시된 그러한 항원은 개선된 면역원성 특징을 나타내고, 피검체에 생체내 투여시 안전하고 고도로 보호성이다. 임의의 RSV F 단백질이 본원에 기재된 교시에 따라 융합전 입체형태를 안정화하도록 변형될 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다. 따라서, PreF 항원의 생산을 유도하는 원리에 대한 이해를 용이하게 하기 위해, 개별적인 구조적 성분이 예시적인 F 단백질에 관해 표시될 것이고, 이의 폴리뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO:1 및 2에 제공된다. 유사하게, 이용가능한 경우, G 단백질 항원이 예시적인 G 단백질에 관해 기재되며, 이의 폴리뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO:3 및 4에 제공된다.
F 단백질 폴리펩티드의 일차 아미노산 서열에 관해 (도 1A), PreF 항원의 구조적 특징을 기재하기 위해 다음 용어가 이용된다.
용어 F0은 전장 번역된 F 단백질 전구체를 의미한다. F0 폴리펩티드는 pep27로 명명되는 매개 펩티드에 의해 분리된 F2 도메인 및 F1 도메인으로 세분될 수 있다. 성숙화 동안, F0 폴리펩티드는 F2 및 F1과 측면에 있는 pep27 사이에 위치하는 2개의 퓨린 부위에서의 단백질분해 절단을 겪는다. 계속된 논의를 위해, F2 도메인은 아미노산 1-109의 적어도 일부, 및 전부를 포함하고, F1 도메인의 가용성 부분은 F 단백질의 아미노산 137-526의 적어도 일부, 및 최대 전부를 포함한다. 상기 지시된 대로, 이러한 아미노산 위치 (및 본원에 지정된 모든 후속 아미노산 위치)는 SEQ ID NO:2의 예시적인 F 단백질 전구체 폴리펩티드 (F0)에 관해 제공된다.
융합전 F (또는 "PreF") 항원은, RSV 항원이 F 단백질의 융합전 입체형태의 적어도 하나의 면역우성의 에피토프를 보유하도록, F 단백질의 융합전 입체형태를 안정화시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 가용성 (즉, 막에 결합되지 않음) F 단백질 유사체이다. 가용성 F 단백질 유사체는 RSV F 단백질의 F2 도메인 및 F1 도메인을 포함한다 (그러나 RSV F 단백질의 막관통 도메인은 포함하지 않는다). 예시적인 구체예에서, F2 도메인은 F 단백질의 아미노산 26-105를 포함하고 F1 도메인은 아미노산 137-516을 포함한다. 그러나, 안정화된 PreF 항원의 3차원 입체형태가 유지되는 한, 더 작은 부분이 또한 이용될 수 있다. 유사하게, 추가적인 성분이 3차원 입체형태를 붕괴시키지 않거나, 안정성, 생성 또는 처리에 부정적인 영향을 미치거나 항원의 면역원성을 감소시키지 않는 한, 추가의 구조적 성분 (예컨대, 융합 폴리펩티드)을 포함하는 폴리펩티드가 또한 예시적인 F2 및 F1 도메인 대신 이용될 수 있다. F2 및 F1 도메인은 성숙한 융합전 입체형태로의 F 단백질 유사체의 폴딩 및 어셈블리를 복제하도록 설계된 N-말단에서 C-말단 배향으로 정위된다. 생성을 향상시키기 위해, F2 도메인은 재조합 PreF 항원이 발현되는 숙주 세포에서 생성 및 분비를 향상시키도록 선택된 천연 F 단백질 신호 펩티드 또는 이종성 신호 펩티드와 같은 분비성 신호 펩티드에 의해 선행될 수 있다.
PreF 항원은 하나 이상의 아미노산의 첨가, 결실 또는 치환과 같은 하나 이상의 변형을 도입시킴에 의해 안정화된다 (삼합체의 융합전 입체형태에서). 한 그러한 안정화 변형은 이종성 안정화 도메인을 포함하는 아미노산 서열의 첨가이다. 예시적인 구체예에서, 이종성 안정화 도메인은 단백질 다합체화 도메인이다. 그러한 단백질 다합체와 도메인의 한 특히 유리한 예는 코일드-코일 도메인, 예컨대 상기 도메인을 지닌 다수의 폴리펩티드의 삼합체화를 촉진시키는 이소류신 지퍼 도메인이다. 예시적인 이소류신 지퍼 도메인은 SEQ ID NO:11에 도시된다. 전형적으로, 이종성 안정화 도메인은 F1 도메인에 대한 C-말단에 정위된다.
임의로, 다합체화 도메인은 서열 GG와 같은 짧은 아미노산 링커 서열을 통해 F1 도메인에 연결된다. 링커는 또한 더 긴 링커일 수 있다 (예를 들어, 서열 GG, 예컨대 아미노산 서열: GGSGGSGGS; SEQ ID NO:14 포함). PreF 항원의 입체형태를 붕괴시키기 않으며 이러한 상황에 이용될 수 있는 다수의 입체형태적으로 중성인 링커가 당 분야에 공지되어 있다.
또 다른 안정화 변형은 천연 F0 단백질에서 F2 및 F1 도메인 사이에 위치한 퓨린 인지 및 절단 부위의 제거이다. 위치 105-109 및 위치 133-136에 위치한 하나 또는 둘 모두의 퓨린 인지 부위는 프로테아제가 PreF 폴리펩티드를 이의 구성적 도메인으로 절단할 수 없도록 퓨린 인지 부위의 하나 이상의 아미노산을 결실 또는 치환시킴에 의해 제거될 수 있다. 임의로, 매개성 pep27 펩티드가 또한, 예컨대, 링커 펩티드에 의해, 제거되거나 치환될 수 있다. 추가로 또는 임의로, 융합 펩티드에 근접한 비-퓨린 절단 부위 (예컨대, 위치 112-113에 있는 금속단백분해효소 부위)는 제거되거나 치환될 수 있다.
안정화 성숙의 또 다른 예는 F 단백질의 소수성 도메인으로의 친수성 아미노산의 첨가 또는 치환이다. 전형적으로, 하전된 아미노산, 예컨대 리신이 첨가되거나 소수성 영역에서 중성 잔기, 예컨대 류신을 대신할 것이다. 예를 들어, 친수성 아미노산이 첨가되거나, F 단백질 세포외 도메인의 HRB 코일드-코일 도메인 내에서 소수성 또는 중성 아미노산을 대신할 수 있다. 예로서, 하전된 아미노산 잔기, 예컨대 리신은 F 단백질의 위치 512에 존재하는 류신을 대신할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 친수성 아미노산이 첨가되거나, F 단백질의 HRA 도메인 내에서 소수성 또는 중성 아미노산을 대신할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 하전된 아미노산, 예컨대 리신은 PreF 항원의 위치 105-106에 또는 위치 105-106 근방에 삽입될 수 있다 (예컨대, 참조 SEQ ID NO:2의 잔기 105에 상응하는 아미노산 다음에, 예컨대 아미노산 105 및 106 사이에). 임의로, 친수성 아미노산은 HRA 및 HRB 도메인 둘 모두에 첨가되거나 치환될 수 있다. 대안적으로, 하나 이상의 소수성 잔기는, PreF 항원의 전체적인 입체형태에 불리한 영향을 주지 않는 한, 결실될 수 있다.
추가로 또는 대안적으로, PreF 항원의 글리코실화 상태를 변경시키는 하나 이상의 변형이 이루어질 수 있다. 예를 들어, 천연 RSV F 단백질에 존재하는 글리코실화 부위, 예컨대, (SEQ ID NO:2에 대해) 아미노산 잔기 500에 또는 그 주위에 있는 하나 이상의 아미노산은 PreF 항원의 글리코실화 상태를 증가 또는 감소시키기 위해 결실 또는 치환될 수 있다 (또는 글리코실화 부위가 붕괴되도록 아미노산이 첨가될 수 있다). 예를 들어, SEQ ID NO:2의 위치 500-502에 상응하는 아미노산은 NGS; NKS; NGT; and NKT로부터 선택될 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, PreF 항원은 RSV F 단백질 폴리펩티드의 F2 도메인 (예컨대, SEQ ID NO:2의 아미노산 26-105에 상응함) 및 F1 도메인 (예컨대, SEQ ID NO:2의 아미노산 137-516에 상응함)을 포함하는 가용성 F 단백질 유사체를 포함하고, 여기에 글리코실화를 변경시키는 적어도 하나의 변형이 도입되었다. RSV PreF 항원은, 전형적으로 F2 도메인과 F1 도메인 사이에 무손상 융합 펩티드를 포함한다. 임의로, PreF 항원은 신호 펩티드를 포함한다.
상기 기재된 대로, 그러한 F 단백질 유사체는,
(i) 이종성 삼합체화 도메인 (예컨대 이소류신 지퍼 도메인)을 포함하는 아미노산 서열의 첨가;
(ii) 적어도 하나의 퓨린 절단 부위의 결실;
(iii) 적어도 하나의 비-퓨린 절단 부위의 결실;
(iv) pep27 도메인의 하나 이상의 아미노산의 결실; 및
(v) F 단백질 세포외 도메인의 소수성 도메인에서 친수성 아미노산의 적어도 하나의 치환 또는 첨가로부터 선택되는 적어도 하나의 변형을 포함할 수 있다
상기 기재된 대로, 그러한 글리코실화-변형된 RSV PreF 항원은 다합체, 예컨대, 삼합체를 어셈블링한다.
예시적인 구체예에서, 글리코실화-변형된 PreF 항원은,
a) SEQ ID NO:22를 포함하거나 이로 구성된 폴리펩티드;
b) SEQ ID NO:21 또는 SEQ ID NO:21에 실질적으로 이의 전체 길이에 걸쳐 엄격한 조건하에 하이브리화되는 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩된 폴리펩티드;
c) SEQ ID NO:22와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드의 군으로부터 선택된다.
임의의 및/또는 모든 안정화 변형은 개별적으로 및/또는 PreF 항원을 생성하기 위해 본원에 기재된 임의의 다른 안정화 변형과 함께 이용될 수 있다. 예시적인 구체예에서, PreF 단백질은 F2 도메인과 F1 도메인 사이에 매개성 퓨린 절단 부위가 없고, F1 도메인에 대한 C-말단에 정위된 이종성 안정화 도메인 (예컨대, 삼합체화 도메인)을 갖는 F2 도메인 및 F1 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 구체예에서, PreF 항원은 또한 소수성 HRA 및/또는 HRB 도메인으로의 친수성 잔기의 하나 이상의 첨가 및/또는 치환을 포함한다. 임의로, PreF 항원은 적어도 하나의 비-퓨린 절단 부위, 예컨대 금속단백분해효소 부위의 변형을 갖는다.
PreF 항원은 RSV G 단백질의 적어도 면역원성 부분을 포함하는 추가적인 폴리펩티드 성분을 임의로 포함할 수 있다. 즉, 특정 구체예에서, PreF 항원은 F 단백질 및 G 단백질 성분 둘 모두를 포함하는 키메라 단백질이다. F 단백질 성분은 상기 기재된 임의의 PreF 항원일 수 있고, G 단백질 성분은 RSV G 단백질의 면역학적 활성 부분이 되도록 선택된다 (최대 전장 G 단백질 및/또는 전장 G 단백질 포함). 예시적인 구체예에서, G 단백질 폴리펩티드는 G 단백질의 아미노산 149-229를 포함한다 (아미노산 위치가 SEQ ID NO:4에 표시된 G 단백질 서열에 관해 명시되는 경우). 당업자는 선택된 부분이 더 큰 G 단백질 단편의 우세한 면역학적 특징을 보유하는 한, G 단백질의 더 작은 부분 또는 단편이 이용될 수 있음을 이해할 것이다. 특히, 선택된 단편은 대략 아미노산 위치 184-198 (예컨대, 아미노산 180-200) 사이에 면역학적으로 우세한 에피토프를 보유하고, 면역우성의 에피토프를 나타내는 안정한 입체형태로 폴딩 및 어셈블링하기에 충분히 길다. 더 긴 단편, 예컨대, 대략 아미노산 128 내지 대략 아미노산 229, 최대 전장 G 단백질이 또한 이용될 수 있다. 선택된 단편이 키메라 단백질에 관해 안정한 입체형태로 폴딩되기만 하면, 숙주 세포에서 재조합에 의해 생성될 때 생성, 처리 또는 안정성을 방해하지 않는다. 임의로, G 단백질 성분은 짧은 아미노산 링커 서열, 예컨대 서열 GG를 통해 F 단백질 성분에 연결된다. 링커는 또한 더 긴 링커일 수 있다 (예컨대 아미노산 서열: GGSGGSGGS: SEQ ID NO:14). PreF 항원의 입체형태를 붕괴시키지 않으며 이와 관련하여 이용될 수 있는 다수의 입체형태적으로 중성인 링커가 당 분야에 공지되어 있다.
임의로, G 단백질 성분은 RSV 질병의 동물 모델에서 증가된 바이러스 질병을 감소시키거나 예방하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 다시 말해, G 단백질은 PreF-G 키메라 항원을 포함하는 면역원성 조성물이 허용된 동물 모델 (예컨대, RSV의 마우스 모델)로부터 선택된 피검체에 투여될 때, 피검체가 변형되지 않은 G 단백질을 함유하는 백신을 수용한 대조 동물에 비해, 백신 증가된 바이러스 질병 (예컨대, 호산구증가증, 호중구증가증)의 감소된 증상을 나타내거나 증상을 나타내지 않도록 하는 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 백신 증가된 바이러스 질병의 감소 및/또는 예방은 면역원성 조성물이 애쥬번트의 부재하에 투여될 때 뚜렷할 수 있다 (그러나, 예를 들어, 항원이 강력한 Th1 유도성 애쥬번트의 존재하에 투여하는 경우는 아님). 추가로, 아미노산 치환은 인간 피검체에 투여될 때 백신 증가된 바이러스 질병을 감소시키거나 예방할 수 있다. 적합한 아미노산 치환의 예는 위치 191의 아스파라긴을 알라닌으로 교체하는 것이다 (아미노산 191에서 Asn → Ala: N191A).
임의로, 상기 기재된 임의의 PreF 항원은 정제를 위해 도움이 될 수 있는 추가적인 서열을 포함할 수 있다. 일 예는 폴리히스티딘 태그이다. 그러한 태그는 요망시 최종 생성물로부터 제거될 수 있다.
발현시, PreF 항원은 분자내 폴딩 및 폴리펩티드의 다합체를 포함하는 성숙 단백질로의 어셈블링을 겪는다. 유리하게는, preF 항원 폴리펩티드는 성숙한, 처리된, RSV F 단백질의 융합전 입체형태와 닮은 삼합체로 어셈블링된다.
일부 구체예에서, 면역원성 조성물은 PreF 항원 (예컨대 SEQ ID NO:6에 의해 예시된 예시적인 구체예) 및 G 단백질 성분을 포함하는 제 2 폴리펩티드를 포함한다. G 단백질 성분은 전형적으로 G 단백질의 적어도 아미노산 149-229를 포함한다. 비록 G 단백질의 더 작은 부분이 이용될 수 있으나, 그러한 단편은 최소한, 아미노산 184-198의 면역학적 우세한 에피토프를 포함해야 한다. 대안적으로, G 단백질은 G 단백질의 더 큰 부분, 예컨대 아미노산 128-229 또는 130-230을, 임의로 더 큰 단백질, 예컨대 전장 G 단백질, 또는 키메라 폴리펩티드의 엘리먼트로서 포함할 수 있다.
다른 구체예에서, 면역원성 조성물은 G 단백질 성분을 또한 포함하는 키메라 단백질인 PreF 항원을 포함한다 (예컨대 SEQ ID NO:8 및 10에 의해 예시된 예시적인 구체예). 그러한 키메라 PreF (또는 PreF-G) 항원의 G 단백질 성분은 전형적으로 G 단백질의 적어도 아미노산 149-229를 포함한다. 상기 표시된 대로, 면역우성의 에피토프가 유지되고, PreF-G 항원의 입체 형태가 불리한 영향을 받지 않는 한, G 단백질의 더 작거나 더 큰 단편 (예컨대 아미노산 129-229 또는 130-230)도 이용될 수 있다.
PreF 항원에 관한 추가적인 자세한 설명, 및 이를 이용하는 방법은 하기, 및 실시예에 제시된다.
본원에 기재된 재조합 RSV 항원은 RSV F 단백질로부터 유래되고, 전체 또는 부분적으로 이에 면역학적으로 상응하는 F 단백질 유사체이다. 이들은 F 단백질 유사체에 대해 발생한 면역 반응이 천연 F 단백질을 인지하여, RSV를 인지하도록, F 단백질의 구조 또는 기능을 변경시키지만 F 단백질의 면역학적 특성을 유지하는 하나 이상의 변형을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 F 단백질 유사체는 면역원으로서 유용하다.
자연에서, RSV F 단백질은, F0으로 명명되는, 574개 아미노산 길이의 단일 폴리펩티드 전구체로서 발현된다. 생체내에서, F0은 세포질 세망에서 올리고머화되고, 2개의 보존된 퓨린 컨센서스 서열 (퓨린 절단 부위), RARR109 (SEQ ID NO:15) 및 RKRR136 (SEQ ID NO:16)에서 퓨린 프로테아제에 의해 단백질분해에 의해 처리되어 2개의 디설파이드-연결된 단편으로 구성된 올리고머를 발생시킨다. 더 작은 이러한 단편은 F2로 명명되고 F0 전구체의 N-말단 부분에서 유래된다. 더 큰 C-말단 F1 단편은 24개 아미노산 세포질 꼬리에 인접한 소수성 아미노산의 서열을 통해 막에 F 단백질을 부착시킨다. 3개의 F2-F1 이합체가 결합하여 성숙한 F 단백질을 형성하는데, 이는 표적 세포 막과 접촉시에 입체형태적 변화를 받도록 촉발되는 준안정한 융합생성전 ("융합전") 입체형태를 채용한다. 이러한 입체형태적 변화는 숙주 세포 막과 결합하여 표적 세포 막과, 바이러스, 또는 감염된 세포의 막의 융합을 촉진하는 융합 펩티드로서 공지된 소수성 서열을 노출시킨다.
F1 단편은 HRA 및 HRB로 명명되고, 각각 융합 펩티드 및 막관통 부착 도메인과 근접하게 위치하는 적어도 2개의 7가(heptad) 반복 도메인을 함유한다. 융합전 입체형태에서, F2-F1 이합체는 구형 헤드 및 줄기 구조를 형성하는데, 여기서 HRA 도메인은 분할된 (확장된) 입체형태로 구형 헤드에 존재한다. 대조적으로, HRB 도메인은 헤드 영역으로부터 연장된 3가닥 코일드 코일 줄기를 형성한다. 융합전에서 융합후 입체형태로의 전환 동안, HRA 도메인이 붕괴하여 HRB 도메인에 근접하게 되어 반평행 6개 헬릭스 번들을 형성한다. 융합후 상태에서, 융합 펩티드 및 막관통 도메인은 병치되어 막 융합을 촉진시킨다.
비록 상기 제공된 입체형태적 설명이 결정학적 데이터의 분자 모델링에 기반한 것이나, 융합전 및 융합후 입체형태 간의 구조적 차이는 결정학에 의존하지 않고 모니터될 수 있다. 예를 들어, 기술적 교시의 목적으로 본원에 참조로서 포함된 문헌[Calder et al., Virology, 271:122-131 (2000) and Morton et al., Virology, 311:275-288]에 의해 입증된 대로, 전자 현미경을 이용하여 융합전 및 융합후 (대안적으로 융합생성전 및 융합생성으로 명명됨) 입체형태를 구별할 수 있다. 또한 융합전 입체형태는, 또한 기술적 교시의 목적으로 본원에 참조로서 포함된 문헌[Connolly et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:17903-17908 (2006)]에 기재된 대로 리포솜 결합 검정에 의해 융합생성 (융합후) 입체형태로부터 구별될 수 있다. 추가로, 융합전 및 융합생성 입체형태는 RSV F 단백질의 융합전 또는융합생성 형태 중 하나 또는 다른 하나에 존재하지만, 다른 형태에는 존재하지 않는 입체형태 에피토프를 특이적으로 인지하는 항체를 이용하여 구별될 수 있다. 그러한 입체형태 에피토프는 분자의 표면상의 항원성 결정인자의 우선적인 노출 때문일 수 있다. 대안적으로, 입체형태적 에피토프는 선형 폴리펩티드에서 비연속적인 아미노산의 병치에서 발생할 수 있다.
전형적으로, F 단백질 유사체 (PreF, PostF 등)는 막관통 도메인 및 세포질 꼬리가 결여되어 있고, F 단백질 엑토도메인 또는 가용성 F 단백질 엑토도메인으로도 언급될 수 있다.
F 단백질 유사체는 F 단백질의 융합전 입체형태, 다시 말해, 숙주 세포 막과의 융합 전에 어셈블링된 성숙한 F 단백질의 입체형태를 안정화하도록 변형된 F 단백질 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 F 단백질 유사체는 명확성 및 단순성의 목적을 위해 "PreF 유사체", "PreF" 또는 "PreF 항원"으로 명명되고, 일반적으로 가용성이다. 본원에 기재된 PreF 유사체는 이종성 삼합체화 도메인의 혼입에 의해 변형된 가용성 F 단백질 유사체가 개선된 면역원성 특징을 나타내고, 생체내에서 피검체에 투여될 때 안전하고 고도로 보호성이라는 발견에 전제한다. 예시적인 PreF 항원은 PreF 항원의 예를 제공할 목적으로 그 전문이 본원에 참조로서 포함되는 WO2010/149745호에 기재되어 있다.
F 단백질 유사체는 또한 융합후 F 단백질의 입체형태를 갖고 PostF 항원 또는 융합후 항원으로 언급될 수 있는 F 단백질 폴리펩티드를 포함한다. PostF 유사체는 본원에 참조로서 포함되는 WO2011/008974호에 기재되어 있다. PostF 항원은 천연 융합후 F 단백질의 구조 또는 기능을 변경시키는 적어도 하나의 변형을 함유한다.
본원에 기재된 PreF 유사체는 발현된 단백질의 집단에서, 발현된 단백질의 집단의 실질적인 부분이 융합생성전 (융합전) 입체형태 (예컨대, 구조적 및/또는 열역학적 모델링에 의해 예측되는 대로 또는 상기 기재된 방법들 중 하나 이상에 의해 평가된 대로)에 있도록, RSV F 단백질의 융합전 입체형태를 안정화하고 유지하도록 설계된다. 안정화 변형이 천연 (또는 합성) F 단백질, 예컨대 SEQ ID NO:2의 예시적인 F 단백질에 도입되어, F 단백질의 융합전 입체형태의 주요 면역원성 에피토프가 PreF 유사체의 세포 또는 세포외 환경으로의 도입 후에 유지되도록 한다 (예를 들어, 생체내에서, 예컨대, 피검체로의 투여 후에).
첫째, 이종성 안정화 도메인은 F0 폴리펩티드의 막 부착 도메인을 대신하기 위해 작제물의 C-말단 단부에 배치될 수 있다. 이러한 안정화 도메인은 HRB 불안정성을 보상하여, -융합전 이형태체를 안정화시키는 것을 돕는 것으로 예측된다. 예시적인 구체예에서, 이종성 안정화 도메인은 단백질 다합체화 도메인이다. 한 특히 유리한 그러한 단백질 다합체화 도메인의 예는 삼합체화 도메인이다. 예시적인 삼합체화 도메인은 코일드-코일로 폴딩되어 그러한 코일드-코일 도메인을 갖는 다수의 폴리펩티드의 삼합체로의 어셈블리를 촉진시킨다. 삼합체화 도메인의 예는 인플루엔자 헤마글루티닌, SARS 스파이크, HIV gp41, 변형된 GCN4, 박테리오파지 T4 피브리틴 및 ATCase로부터의 삼합체화 도메인을 포함한다. 삼합체화 도메인의 한 유리한 예는 이소류신 지퍼이다. 예시적인 이소류신 지퍼 도메인은 문헌[Harbury et al. Science 262:1401-1407 (1993)]에 기재된 공학처리된 효모 GCN4 이소류신 변이체이다. 한 적합한 이소류신 지퍼 도메인의 서열은 SEQ ID NO:11로 표시되지만, 코일드-코일 안정화 도메인을 형성하는 능력을 보유한 이러한 서열의 변이체가 동등하게 적합하다. 대안적인 안정화 코일드 코일 삼합체화 도메인은 TRAF2 (GENBANK® 수탁 번호 Q12933 [gi:23503103]; 아미노산 299-348); 트롬보스폰딘(Thrombospondin) 1 (수탁 번호 PO7996 [gi:135717]; 아미노산 291-314); 마트릴린(Matrilin)-4 (수탁 번호 O95460 [gi:14548117]; 아미노산 594-618; CMP (matrilin-1) (수탁 번호 NP_002370 [gi:4505111]; 아미노산 463-496; HSF1 (수탁 번호 AAX42211 [gi:61362386]; 아미노산 165-191; 및 큐빌린(Cubilin) (수탁 번호 NP_001072 [gi:4557503]; 아미노산 104-138을 포함한다. 적합한 삼합체화 도메인은 삼합체로의 발현된 단백질의 실질적인 부분의 어셈블리를 발생시킬 것으로 예상된다. 예를 들어, 삼합체화 도메인을 갖는 재조합 PreF 폴리펩티드 중 적어도 50%는 삼합체로 어셈블링될 것이다 (예컨대, AFF-MALS에 의해 평가되는 바와 같이). 전형적으로, 발현된 폴리펩티드의 적어도 60%, 보다 유리하게는 적어도 70%, 및 가장 바람직하게는 적어도 약 75% 이상은 삼합체로 존재한다.
안정화 돌연변이의 또 다른 예는 F 단백질의 소수성 도메인으로의 친수성 아미노산의 첨가 또는 치환이다. 전형적으로, 하전된 아미노산, 예컨대 리신이 첨가되거나 소수성 영역에서 중성 잔기, 예컨대 류신을 대신할 것이다. 예를 들어, 친수성 아미노산이 첨가되거나, F 단백질 세포외 도메인의 HRB 코일드-코일 도메인 내에서 소수성 또는 중성 아미노산을 대신할 수 있다. 예로서, 하전된 아미노산 잔기, 예컨대 리신은 위치 512 F 단백질에 존재하는 류신을 대신할 수 있다 (천연 F0 폴리펩티드에 비해; SEQ ID NO:6의 예시적인 PreF 유사체 폴리펩티드의 L482K). 대안적으로, 또는 추가로, 친수성 아미노산이 첨가되거나, F 단백질의 HRA 도메인 내에서 소수성 또는 중성 아미노산을 대신할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 하전된 아미노산, 예컨대 리신은 PreF 유사체의 위치 105-106에 또는 위치 105-106 근방에 삽입될 수 있다 (예컨대, 참조 SEQ ID NO:2의 잔기 105에 상응하는 아미노산 다음에, 예컨대 아미노산 105 및 106 사이에). 임의로, 친수성 아미노산은 HRA 및 HRB 도메인 둘 모두에 첨가되거나 치환될 수 있다. 대안적으로, 하나 이상의 소수성 잔기는, PreF 유사체의 전체적인 입체형태에 불리한 영향을 주지 않는 한, 결실될 수 있다.
둘째, pep27은 제거될 수 있다. 융합전 상태에서 RSV F 단백질의 구조적 모델의 분석은 pep27이 F1와 F2 사이에 큰 비구속 루프를 생성함을 제안한다. 이러한 루프는 융합전 상태의 안정화에 기여하지 않으며, 퓨린에 의한 천연 단백질의 절단 이후에 제거된다. 따라서, pep27은 또한 융합후 (또는 다른) 입체형태적 유사체를 포함하는 구체예로부터 제거될 수 있다.
셋째, 하나 또는 둘 모두의 퓨린 절단 모티프는 결실될 수 있다 (천연 F0 단백질의 F2와 F1 도메인 사이에서). 위치 105-109 또는 106-109 및 위치 133-136에 위치하는 하나 또는 둘 모두의 퓨린 인지 부위는 퓨린 인지 부위의 하나 이상의 아미노산을 결실 또는 치환시킴에 의해, 예를 들어 하나 이상의 아미노산의 결실 또는 하나 이상의 아미노산의 치환 또는 하나 이상의 치환 또는 결실의 조합에 의해, 또는 프로테아제가 PreF (또는 다른 F 단백질 유사체) 폴리펩티드를 이의 구성적 도메인으로 절단할 수 없도록 하는 변형에 의해 제거될 수 있다. 임의로, 매개성 pep27 펩티드는 또한, 예컨대, 링커 펩티드에 의해 제거되거나 치환될 수 있다. 추가로, 또는 임의로, 융합 펩티드에 근접한 비-퓨린 절단 부위 (예컨대, 위치 112-113에 있는 금속단백분해효소 부위)는 제거되거나 치환될 수 있다.
따라서, 하나 이상의 변경된 퓨린 절단 부위를 갖는 절단되지 않은 엑토도메인인 본 발명에 따른 방법 및 용도에 이용하기 위한 F 단백질 유사체가 얻어질 수 있다. 그러한 F 단백질 유사체 폴리펩티드는 아미노산 101 내지 161로부터의 위치에서 절단되지 않은, 예컨대 위치 105-109 및 131-136에 있는 퓨린 절단 부위에서 절단되지 않은 이들을 분비하는 숙주 세포에서 재조합에 의해 생성된다. 특정 구체예에서, 치환 K131Q, 위치 131-134에서 아미노산의 결실, 또는 치환 K131Q 또는 R133Q 또는 R135Q 또는 R136Q가 136/137에서의 절단을 억제하기 위해 이용된다.
예시적인 설계에서, 융합 펩티드는 F2로부터 절단되지 않아서, 융합전 이형태체의 구형 헤드로부터의 방출 및 근처 막에 대한 접근성을 막는다. 융합 펩티드 및 막 계면 간의 상호작용은 융합전 상태 불안정성의 주요 문제가 될 것으로 예상된다. 융합 공정 동안, 융합 펩티드 및 표적 막 사이의 상호작용은 구형 헤드 구조 내로부터의 융합 펩티드의 노출을 발생시켜, 융합전 상태의 불안정성 및 융합후 이형태체로의 폴딩을 향상시킨다. 이러한 입체형태 변화는 막 융합의 공정을 가능하게 한다. 퓨린 절단 부위 중 하나 또는 둘 모두의 제거는 융합 펩티드의 N-말단 부분으로의 막 접근성을 막아서, 융합전 상태를 안정화시킬 것으로 예측된다. 따라서, 본원에 기재된 예시적인 구체예에서, 퓨린 절단 모티프의 제거는 공정 및 어셈블리 동안 또는 그 후에 퓨린에 의해 절단되지 않은 무손상 융합 펩티드를 포함하는 PreF 유사체를 발생시킨다.
임의로, 적어도 하나의 비-퓨린 절단 부위는 또한, 예를 들어 하나 이상의 아미노산의 치환에 의해 제거될 수 있다. 예를 들어, 실험적 증거는, 특정 금속단백분해효소에 의한 절단에 도움이 되는 조건하에, F 단백질 유사체가 아미노산 110-118 근방에서 절단될 수 있음을 시사한다 (예를 들어, F 단백질 유사체의 아미노산 112와 113 사이; SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 폴리펩티드의 위치 142의 류신 및 위치 143의 글리신 사이에서 발생하는 절단 이용). 따라서, 이러한 영역 내에서 하나 이상의 아미노산의 변형은 F 단백질 유사체의 절단을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 위치 112의 류신은 상이한 아미노산, 예컨대 이소류신, 글루타민 또는 트립토판으로 치환될 수 있다 (SEQ ID NO:20의 예시적인 구체예에 도시된 대로). 대안적으로 또는 추가로, 위치 113의 글리신은 세린 또는 알라닌으로 치환될 수 있다. 추가의 구체예에서, F 단백질 유사체는 변경된 트립신 절단 부위를 추가로 함유하고, F 단백질 유사체는 아미노산 101과 161 사이의 부위에서 트립신에 의해 절단되지 않는다.
임의로, F 단백질 유사체는 글리코실화 패턴 또는 상태를 변경시키는 하나 이상의 변형을 포함할 수 있다 (예컨대, 천연 F 단백질 폴리펩티드에 존재하는 하나 이상의 글리코실화 부위에서 글리코실화된 분자의 비율을 증가시키거나 감소시킴에 의해). 예를 들어, SEQ ID NO:2의 천연 F 단백질 폴리펩티드는 아미노산 위치 27, 70 및 500 (SEQ ID NO:6의 예시적인 PreF 유사체의 위치 27, 70 및 470에 상응함)에서 글리코실화될 것으로 예측된다. 한 구체예에서, 변형은 아미노산 위치 500에 있는 글리코실화 부위 근방에 도입된다 (N470으로 명명됨). 예를 들어, 글리코실화 부위는 (예시적인 PreF 유사체의 위치 470에 대한 정렬에 의해 상응하는, 참조 서열의) 위치 500에 있는 아스파라긴 대신 아미노산, 예컨대 글루타민 (Q)을 치환시킴에 의해 제거될 수 있다. 유리하게는, 이러한 글리코실화 부위에서의 글리코실화 효율을 증가시키는 변형이 도입된다. 적합한 변형의 예는 위치 500-502에, 다음 아미노산 서열: NGS; NKS; NGT; NKT를 포함한다. 흥미롭게는, 증가된 글리코실화를 발생시키는 이러한 글리코실화 부위에서의 변형이 또한 실질적으로 증가된 PreF 생성을 발생시킴이 발견되었다. 따라서, 특정 구체예에서, PreF 유사체는 참조 PreF 서열 (SEQ ID NO:2)의 아미노산 500에 상응하는 위치에, 예컨대, SEQ ID NO:6에 의해 예시된 PreF 유사체의 위치 470에 변형된 글리코실화 부위를 갖는다. 적합한 변형은 참조 F 단백질 폴리펩티드 서열의 위치 500-502에 상응하는 아미노산에 서열: NGS; NKS; NGT; NKT를 포함한다. "NGT" 변형을 포함하는 예시적인 구체예의 아미노산이 SEQ ID NO:18에 제공된다. 당업자는 상응하는 NGS, NKS, 및 NKT 변형과 유사한 변형을 용이하게 결정할 수 있다. 그러한 변형은 본원에 기재된 임의의 안정화 돌연변이와 유리하게 조합된다 (예컨대, 이종성 코일드-코일, 예컨대 이소류신 지퍼, 도메인 및/또는 소수성 영역에서의 변형, 및/또는 pep27의 제거, 및/또는 퓨린 절단 부위의 제거, 및/또는 비-퓨린 절단 부위의 제거, 및/또는 비-퓨린 절단 부위의 제거). 예를 들어, 한 특이적 구체예에서, F 단백질 유사체는 비-퓨린 절단 부위를 제거하는 치환 및 글리코실화를 증가시키는 변형을 포함한다. 예시적인 PreF 유사체 서열이 SEQ ID NO:22에 제공된다 (예시적인 구체예는 "NGT" 변형 및 위치 112에서 류신 대신 글루타민의 치환을 포함한다). 예를 들어, 특정한 예시적인 구체예에서, 글리코실화 변형된 PreF 유사체는,
a) SEQ ID NO:22를 포함하거나 이로 구성된 폴리펩티드;
b) SEQ ID NO:21 또는 SEQ ID NO:21에 실질적으로 이의 전체 길이에 걸쳐 엄격한 조건하에 하이브리화되는 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩된 폴리펩티드;
c) SEQ ID NO:22와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드의 군으로부터 선택된다.
보다 일반적으로, 본원에 기재된 안정화 변형들 중 임의의 하나, 예컨대, 바람직하게는 가용성 F 단백질 유사체의 C-말단 단부에 위치한 이종성 안정화 도메인, 예컨대 코일드-코일 (예를 들어, 이소류신 지퍼 도메인)의 첨가; 소수성 HRB 도메인에서, 예컨대 류신에서 리신으로의 잔기의 변형; pep27의 제거; 하나 또는 둘 모두의 퓨린 절단 모티프의 제거; 비-퓨린 절단 부위, 예컨대 트립신 절단 부위의 제거; 및/또는 글리코실화 부위의 변형은 임의의 하나 이상의 (또는 최대 모든 임의의 요망되는 조합) 다른 안정화 변형과 함께 이용될 수 있다. 예를 들어, 이종성 코일드-코일 (또는 다른 이종성 안정화 도메인)은 단독으로 이용되거나 소수성 영역의 변형, 및/또는 pep27의 제거, 및/또는 퓨린 절단 부위의 제거, 및/또는 비-퓨린 절단 부위의 제거, 및/또는 비-퓨린 절단 부위의 제거 중 임의의 것과 함께 이용될 수 있다. 특정한 특수한 구체예에서, F 단백질 유사체, 예컨대 PreF 유사체는 C-말단 코일드-코일 (이소류신 지퍼) 도메인, HRB 소수성 도메인에서의 안정화 치환, 및 하나 또는 둘 모두의 퓨린 절단 부위의 제거를 포함한다. 그러한 구체예는 퓨린 절단에 의해 제거되지 않은 무손상 융합 펩티드를 포함한다. 한 특이적 구체예에서, F 단백질 유사체는 또한 아미노산 위치 500에 변형된 글리코실화 부위를 포함한다.
본원에 기재된 조성물 및 방법을 위한 F 단백질 유사체는 F 단백질 유사체 (예컨대, PreF 유사체, PostF 유사체 또는 절단되지 않은 F 단백질 엑토도메인 등)를 함유하는 생물학적 물질을 제공하고, 유사체 폴리펩티드 단량체 또는 다합체 (예컨대, 삼합체) 또는 이의 혼합물을 생물학적 물질로부터 정제하는 것을 포함하는 방법에 의해 생성될 수 있다.
F 단백질 유사체는 폴리펩티드 단량체 또는 삼합체, 또는 평형 상태로 존재할 수 있는 단량체 및 삼합체의 혼합물의 형태일 수 있다. 단일 형태의 존재는 더욱 예측가능한 면역 반응 및 양호한 안정성과 같은 이점을 제공할 수 있다.
따라서, 한 구체예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 F 단백질 유사체는 실질적으로 지질 및 지단백질이 없는, 단량체 또는 삼합체 또는 단량체와 삼합체의 혼합물의 형태일 수 있는 정제된 F 단백질 유사체이다.
F 단백질 폴리펩티드는 RSV A 또는 RSV B 균주의 임의의 F 단백질, 또는 이의 변이체로부터 선택될 수 있다 (상기 정의됨). 특정한 예시적인 구체예에서, F 단백질 폴리펩티드는 SEQ ID NO:2에 의해 표시되는 F 단백질이다. 본 발명의 이해를 용이하게 하기 위해, 균주와 무관하게, 모든 아미노산 잔기 위치는 예시적인 F 단백질의 아미노산 위치 (즉, 이와 상응하는 아미노산 잔기 위치)에 관해 제공된다. 임의의 다른 RSV A 또는 B 균주의 필적할 만한 아미노산 위치는 선택된 RSV 균주의 아미노산 서열을 용이하게 이용가능하고 널리 공지된 정렬 알고리즘 (예컨대 BLAST, 예컨대, 디폴트 파라메터 이용)을 이용하여 예시적인 서열과 정렬시킴에 의해 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 상이한 RSV 균주로부터의 F 단백질 폴리펩티드의 다수의 추가적인 예가 WO2008/114149호에 기재된다 (RSV F 및 G 단백질 서열의 추가적인 예를 제공할 목적으로 참조로서 본원에 포함됨). 추가적인 변이체는 유전적 부동을 통해 발생할 수 있거나, 부위 지정 또는 랜덤 돌연변이발생을 이용하거나, 둘 이상의 기존 변이체의 재조합에 의해 인위적으로 생성될 수 있다. 그러한 추가적인 변이체는 또한 본원에 기재된 면역원성 조성물에 관해 이용된 F 단백질 유사체와 관련하여 적합하다.
본원에 기재된 조성물 및 방법에 유용한 대안적인 구체예에서, 재조합 RSV 단백질은 추가적인 F 단백질 유사체를 기재할 목적으로 본원에 참조로서 포함되는 WO2011/008974호에 기재된 F 단백질 유사체이고, 예를 들어 WO2011/008974호의 도 1 및 또한 WO2011/008974호의 실시예 1에 기재된 F 단백질 유사체를 참조하라.
F 단백질의 F2 및 F1 도메인을 선택함에 있어서, 당업자는 전체 F2 및/또는 F1 도메인을 포함할 것을 엄격하게 필요로 하지 않음을 인지할 것이다. 전형적으로, F2 도메인의 부분서열 (또는 단편)을 선택할 때 입체형태적 고려가 중요하다. 따라서, F2 도메인은 전형적으로 폴리펩티드의 어셈블리 및 안정성을 촉진시키는 F2 도메인의 부분을 포함한다. 특정한 예시적인 변이체에서, F2 도메인은 아미노산 26-105를 포함한다. 그러나, 길이에 약간의 변형을 갖는 변이체 (하나 이상의 아미노산의 첨가 또는 결실에 의해)도 가능하다.
전형적으로, F1 도메인의 적어도 부분서열 (또는 단편)은 F 단백질의 면역우성의 에피토프를 포함하는 안정한 입체형태를 유지하도록 선택되고 설계된다. 예를 들어, 일반적으로 아미노산 262-275 (팔리비주맙(palivizumab) 중화) 및 423-436 (Centocor의 ch101F MAb)의 영역에서 항체를 중화시킴에 의해 인지되는 에피토프를 포함하는 F1 폴리펩티드 도메인의 부분서열을 선택하는 것이 바람직하다. 추가로, 가장 일반적으로, F1 서브유닛의 단일한 연속적인 부분으로서 (예컨대, 아미노산 262-436에 걸쳐), 예컨대, 아미노산 328-355의 영역에 T 세포 에피토프를 포함하는 것이 바람직할 수 있지만, 에피토프는 안정한 입체형태로 어셈블링된 불연속적인 엘리먼트로서 이러한 면역우성의 에피토프를 포함하는 합성 서열에 유지될 수 있었다. 따라서, F1 도메인 폴리펩티드는 RSV F 단백질 폴리펩티드의 적어도 대략 아미노산 262-436을 포함한다. 본원에 제공된 한 비제한적인 실시예에서, F1 도메인은 천연 F 단백질 폴리펩티드의 아미노산 137 내지 516을 포함한다. 당업자는 추가적인 더 짧은 부분서열이 의료인의 판단으로 사용될 수 있음을 인지할 것이다.
입체형태적 고려 외에, F2 또는 F1 도메인의 부분서열을 선택할 때 (예컨대, 특정한 PreF-G 유사체의 G 단백질 성분에 관해 하기 논의된 대로), 추가적인 면역원성 에피토프의 포함에 기반하여 서열 (예컨대, 변이체, 부분서열 등)을 선택하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 추가적인 T 세포 에피토프는 부착 모티프 또는 다른 방법, 예컨대 당 분야에 공지된 신경망 또는 다항식 결정을 이용하여 확인될 수 있고, 예컨대, RANKPEP (월드 와이드 웹: mif.dfci.harvard.edu/Tools/rankpep.html에서 이용가능함); ProPredI (월드 와이드 웹: imtech.res.in/raghava/propredI/index.html에서 이용가능함); Bimas (월드 와이드 웹: www-bimas.dcrt.nih.gov/molbi/hla_bind/index.html에서 이용가능함); 및 SYFPEITH (월드 와이드 웹: syfpeithi.bmi heidelberg.com/scripts/MHCServer.dll/home.htm에서 이용가능함)을 참조하라. 예를 들어, 알고리즘을 이용하여 펩티드의 "결합 임계"를 결정하고, 이들에게 특정 친화성의 MHC 또는 항체 결합의 높은 가능성을 제공하는 점수를 가진 것들을 선택한다. 알고리즘은 특정 위치에서 특정 아미노산의 MHC 결합에 대한 효과, 특정 위치에서 특정 아미노산의 항체 결합에 대한 효과, 또는 모티프-함유 펩티드에서 특정 치환의 결합에 대한 효과에 기반한다. 면역원성 펩티드의 문맥 내에서, "보존된 잔기"는 펩티드의 특정 위치에서 임의의 분포에 의해 예상되는 것보다 현저히 높은 빈도를 나타내는 것이다. 부착 잔기는 접촉 지점에 MHC 분자를 제공하는 보존된 잔기이다. 그러한 예측 방법에 의해 확인된 T 세포 에피토프는 특이적 MHC 단백질에 대한 이들의 결합 및 MHC 단백질에 관해 제시될 때 T 세포를 자극하는 이들의 능력을 측정함에 의해 확인될 수 있다.
유리하게는, F 단백질 유사체, 예를 들어 PreF 유사체 (하기 논의되는 PreF-G 유사체 포함), Post F 유사체, 또는 다른 입체형태적 유사체는 발현 시스템에 상응하는 신호 펩티드, 예를 들어, 포유동물 또는 바이러스 신호 펩티드, 예컨대 RSV F0 천연 신호 서열 (예컨대, SEQ ID NO:2의 아미노산 1-25 또는 SEQ ID NO:6의 아미노산 1-25)을 포함한다. 전형적으로, 신호 펩티드는 재조합 발현을 위해 선택된 세포에 상용가능하게 선택된다. 예를 들어, 신호 펩티드 (예컨대, 바큘로바이러스 신호 펩티드, 또는 멜리틴(melittin) 신호 펩티드)가 곤충 세포에서 발현을 위해 치환될 수 있다. 식물 발현 시스템이 바람직한 경우, 적합한 식물 신호 펩티드가 당 분야에 공지되어 있다. 다수의 예시적인 신호 펩티드가 당 분야에 공지되어 있고 (예컨대, 다수의 인간 신호 펩티드를 기재하고 있는 문헌[Zhang & Henzel, Protein Sci., 13:2819-2824 (2004)]을 참조하라), 예컨대, 고세균, 원핵생물 및 진핵생물의 신호 서열을 포함하는 SPdb 신호 펩티드 데이터베이스로 목록화되어 있다 (https://proline.bic.nus.edu.sg/spdb/). 임의로, 임의의 선행 항원은 정제를 용이하게 하기 위해 추가적인 서열 또는 태그, 예컨대 His-tag를 포함할 수 있다.
임의로, F 단백질 유사체 (예를 들어, PreF 또는 Post F 또는 다른 유사체)는 추가적인 면역원성 성분을 포함할 수 있다. 특정한 특히 유리한 구체예에서, F 단백질 유사체는 RSV G 단백질 항원성 성분을 포함한다. PreF 및 G 성분을 갖는 예시적인 키메라 단백질은 하기 PreF_V1 (SEQ ID NO:7 및 8로 표시됨) 및 PreF_V2 (SEQ ID NO:9 및 10으로 표시됨)를 포함한다.
PreF-G 유사체에서, G 단백질의 항원성 부분 (예컨대, 트렁케이션된(truncated) G 단백질, 예컨대 아미노산 잔기 149-229)이 작제물의 C-말단 단부에 첨가된다. 전형적으로, G 단백질 성분은 가요성 링커 서열을 통해 F 단백질 성분에 연결된다. 예를 들어, 예시적인 PreF_V1 설계에서, G 단백질은 -GGSGGSGGS- 링커 (SEQ ID NO:14)에 의해 PreF 성분에 연결된다. PreF_V2 설계에서, 링커는 더 짧다. PreF_V2는 -GGSGGSGGS- 링커 (SEQ ID NO:14)를 갖는 대신, 링커용 2개의 글리신 (-GG-)을 갖는다.
존재하는 경우, G 단백질 폴리펩티드 도메인은 임의의 RSV A 또는 RSV B 균주로부터 선택된 G 단백질의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 특정한 예시적인 구체예에서, G 단백질은 SEQ ID NO:4에 의해 표시되는 G 단백질 (또는 95% 동일한)이다. 적합한 G 단백질 서열의 추가적인 예는 WO2008/114149호 (본원에서 참조로서 포함됨)에서 찾아볼 수 있다.
G 단백질 폴리펩티드 성분은, 예컨대, 아미노산 183-197의 영역에 면역우성의 T 세포 에피토프(들)를 보유하는 G 단백질의 적어도 부분서열 (또는 단편), 예컨대 천연 G 단백질의 아미노산 151-229, 149-229, 또는 128-229를 포함하는 G 단백질의 단편을 포함하도록 선택된다. 한 예시적인 구체예에서, G 단백질 폴리펩티드는 천연 G 단백질 폴리펩티드의 아미노산 잔기 149 내지 229의 전부 또는 일부를 포함하는 천연 G 단백질 폴리펩티드의 서열 (또는 단편)이다. 당업자는 선택된 부분이 F 단백질 유사체의 발현, 폴딩 또는 처리를 입체형태적으로 탈안정화시키거나 붕괴시키지 않는 한, G 단백질의 더 길거나 짧은 부분이 또한 이용될 수 있음을 용이하게 이해할 것이다. 임의로, G 단백질 도메인은 포르말린 불활성화된 RSV 백신과 관련된 호산구증가증을 특징으로 하는 증가된 질병의 감소 및/또는 예방에 관여하는 것으로 이전에 밝혀진, 위치 191에 아미노산 치환을 포함한다. 자연 발생 및 치환된 (N191A) G 단백질의 속성의 충분한 설명은 예컨대 본원에 참조로서 포함되는 미국특허공개 2005/0042230호에서 찾아볼 수 있다.
대안적으로, F 단백질 유사체는 G 단백질 성분을 포함하는 제 2 폴리펩티드를 또한 함유하는 면역원성 조성물로 제형화될 수 있다. G 단백질 성분은 전형적으로 적어도 G 단백질의 아미노산 149-229를 포함한다. 비록 더 작은 G 단백질 부분이 이용될 수 있지만, 그러한 단편은 최소한, 아미노산 184-198의 면역학적 우성 에피토프를 포함하여야 한다. 대안적으로, G 단백질은 더 큰 G 단백질 부분, 예컨대 아미노산 128-229 또는 130-230을, 임의로 더 큰 단백질, 예컨대 전장 G 단백질, 또는 키메라 폴리펩티드의 엘리먼트로서 포함할 수 있다.
예를 들어, 자연 발생 균주에 상응하는 서열의 선택과 관련하여, 도메인 중하나 이상은 서열에 있어서 RSV A 또는 B 균주, 예컨대 A2 또는 Long으로 명명된 일반적인 실험실 단리물, 또는 임의의 다른 자연 발생 균주 또는 단리물과 상응할 수 있다. RSV의 다수의 균주가 현재까지 단리되었다. GenBank 및/또는 EMBL 수탁 번호로 표시되는 예시적인 균주는 본원에 기재된 F 단백질 유사체에 사용하기 적합한 FSV F의 핵산 및 폴리펩티드 서열을 기재할 목적으로 참조로서 본원에 포함된 WO2008114149호에서 찾아볼 수 있다. RSV의 추가적인 균주가 단리될 가능성이 있고, RSV의 속에 포함된다. 유사하게, RSV의 속은 유전적 부동, 및/또는 재조합에 의해 자연 발생 (예컨대, 이전에 또는 후속하여 동정된 균주)으로부터 발생한 변이체를 포함한다.
그러한 자연 발생 및 단리된 변이체 외에, 상기 언급된 서열과 서열 유사성을 공유하는 공학처리된 변이체가 또한 PreF, PostF 또는 다른 유사체 (F-G 포함) 유사체를 포함하는 F 단백질 유사체에 관해 이용될 수 있다. 폴리펩티드 (및 일반적으로 뉴클레오티드 서열)에 관해, F 단백질 유사체 폴리펩티드 (및 하기 기재된 폴리뉴클레오티드 서열) 간의 유사성은 서열 동일성으로서 달리 언급되는 서열 간의 유사성의 관점에서 표현될 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다. 서열 동일성은 종종 동일성 백분율(또는 유사성)에 관해 측정되며; 백분율이 높을수록, 두 서열의 일차 구조는 더 유사한 것이다. 일반적으로, 두 아미노산 (또는 폴리뉴클레오티드) 서열의 일차 구조가 더욱 유사할수록, 폴딩 및 어셈블리로부터 발생하는 고차 구조가 더욱 유사하다. F 단백질, 폴리펩티드 (및 폴리뉴클레오티드) 서열의 변이체는 전형적으로 하나 또는 소수의 아미노산 결실, 첨가 또는 치환을 지니지만 그럼에도 불구하고 매우 높은 백분율의 이들의 아미노산, 및 일반적으로 폴리뉴클레오티드 서열을 공유할 것이다. 더욱 중요하게는, 변이체는 구조적 및, 이에 따라 본원에 기재된 참조 서열의 입체형태적 특성을 유지한다.
서열 동일성을 결정하는 방법은 당 분야에 널리 공지되어 있고, F 단백질 유사체 폴리펩티드, 뿐만 아니라 이들을 인코딩하는 핵산에 이용가능하다 (예컨대, 하기 기재됨). 다양한 프로그램 및 정렬 알고리즘이 문헌[Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482, 1981; Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970; Higgins and Sharp, Gene 73:237, 1988; Higgins and Sharp, CABIOS 5:151, 1989; Corpet et al., Nucleic Acids Research 16:10881, 1988; and Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444, 1988]에 기재되어 있다. 문헌[Altschul et al., Nature Genet. 6:119, 1994]은 서열 정렬 방법 및 상동성 계산의 세부 고려사항을 제시한다. NCBI Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403, 1990)]은 서열 분석 프로그램 blastp, blastn, blastx, tblastn 및 tblastx에 관해 사용하기 위해, National Center for Biotechnology Information (NCBI, Bethesda, MD)을 포함하는 여러 공급원으로부터 및 인터넷 상에서 이용가능하다. 이러한 프로그램을 이용하여 서열 동일성을 결정하는 방법의 설명은 인터넷 상에서 NCBI 웹사이트에서 이용가능하다.
일부 예에서, F 단백질 유사체는 이것이 유래된 자연 발생 균주의 아미노산 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는다 (예컨대, 상기 언급된 안정화 변형 외에). 그러한 차이는 하나 이상의 아미노산의 첨가, 결실 또는 치환일 수 있다. 변이체는 전형적으로 아미노산 잔기의 약 1%, 또는 2%, 또는 5%, 또는 10%, 또는 15%, 또는 20% 이하만큼 상이하다. 예를 들어, 변이체 F 단백질 유사체, 예컨대, PreF 또는 PostF 또는 다른 유사체 폴리펩티드 서열은 참조 F 단백질 서열의 적절한 부분 (예를 들어, SEQ ID NO:6, 8, 10, 18, 20 및/또는 22의 PreF 유사체 폴리펩티드 서열)에 비해 1, 또는 2, 또는 최대 5, 또는 최대 약 10, 또는 최대 약 15, 또는 최대 약 50, 또는 최대 약 100개 아미노산 차이를 포함할 수 있다. 따라서, RSV F 또는 G 단백질, 또는 F 단백질 유사체에 관한 변이체는, 전형적으로 참조 단백질, 예컨대, PreF 유사체의 경우: SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 18, 20 및/또는 22에 예시된 참조 서열, 또는 본원에 기재된 임의의 예시적인 PreF 유사체와 적어도 80%, 또는 85%, 보다 일반적으로, 적어도 약 90% 또는 그 초과, 예컨대 95%, 또는 심지어 98% 또는 99% 서열 동일성을 공유한다. 본 발명의 특징으로서 포함되는 추가적인 변이체는 WO2008/114149호에 기재된 자연 발생 변이체로부터 선택되는 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 포함하는 F 단백질 유사체이다. 추가적인 변이체는 유전적 부동(genetic drift)을 통해 발생할 수 있거나, 부위 지정 또는 랜덤 돌연변이발생을 이용하거나 2개 이상의 기존의 변이체의 재조합에 의해 인위적으로 생성될 수 있다. 그러한 추가적인 변이체는 또한 본원에 기재된 F 단백질 유사체 항원에 관해 적합하다. 예를 들어, 변형은 생성된 F 단백질 유사체의 입체형태 또는 면역원성 에피토프를 변경시키지 않는 하나 이상의 아미노산 (예컨대 2개아미노산, 3개 아미노산, 4개 아미노산, 5개 아미노산, 최대 약 10개 아미노산, 또는 그 초과)의 치환일 수 있다.
대안적으로 또는 추가로, 변형은 하나 이상의 아미노산의 결실 및/또는 하나 이상의 아미노산의 첨가를 포함할 수 있다. 실제로, 요망되는 경우, 폴리펩티드 도메인 중 하나 이상은 임의의 단일 균주에 상응하지 않지만, 다수 균주, 또는 심지어 RSV 바이러스 폴리펩티드의 다수 균주를 정렬시킴에 의해 추론된 컨센서스 서열로부터의 성분 부분서열을 포함하는 합성 폴리펩티드일 수 있다. 특정 구체예에서, 폴리펩티드 도메인 중 하나 이상은 후속 처리 또는 정제를 촉진시키는 태그를 구성하는 아미노산 서열의 첨가에 의해 변형된다. 그러한 태그는 항원성 또는 에피토프 태그, 효소적 태그 또는 폴리히스티딘 태그일 수 있다. 전형적으로, 태그는 단백질의 한 말단 또는 다른 말단, 예컨대 항원 또는 융합 단백질의 C-말단 또는 N 말단에 위치한다.
본원에 기재된 F 단백질 유사체 (및 또한 이용가능한 경우, G 항원)는 재조합 단백질의 발현 및 정제를 위해 널리 확립된 절차를 이용하여 생성될 수 있다.
간단히 말해, F 단백질 유사체를 인코딩하는 재조합 핵산은 벡터 및 숙주 세포의 선택에 따라, 임의의 다양한 널리 공지된 절차, 예컨대 일렉트로포레이션, 리포솜 매개된 트랜스펙션, 칼슘 포스페이트 침전, 감염, 트랜스펙션 등에 의해 숙주 세포에 도입된다. 유리한 숙주 세포는 원핵생물 (즉, 박테리아) 숙주 세포, 예컨대 E. 콜라이(E. coli), 뿐만 아니라 진균 (예컨대, 효모, 예컨대 사카로마이세스 세리비지애(Saccharomyces cerevisiae) 및 피치아 파스토리스(Picchia pastoris)) 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 및 포유동물 세포 (예컨대 3T3, COS, CHO, BHK, HEK 293)를 포함하는 다수의 진핵생물 숙주 세포 또는 Bowes 흑색종 세포를 포함한다. 선택된 숙주 세포에서의 발현 후, 재조합 F 단백질 유사체는 당 분야에 널리 알려진 절차에 따라 단리되고/거나 정제될 수 있다. 예시적인 발현 방법, 뿐만 아니라 PreF 유사체 (PreF-G 유사체 포함)를 인코딩하는 핵산은 F 단백질 유사체의 발현 및 정제를 위한 적합한 방법을 제공할 목적으로 본원에 포함된 WO2010/149745호에 제공된다.
B. 퍼투시스 항원
기재된 조합 면역원성 조성물의 특정 구체예에서, 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원은 백일해 톡소이드 (PT), 실모양 헤마글루티닌 (FHA), 퍼탁틴 (PRN), 핌브라 타입 2 (FIM2), 및 핌브라 타입 3 (FIM3)으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 Pa 항원을 포함한다. 항원은 부분적으로 또는 고도로 정제된다.
PT는 다양한 방식으로, 예를 들어 B. 퍼투시스의 배양액으로부터 독소의 정제 후 화학적 탈독화 (예를 들어, 본원에 참조로서 포함되는 WO91/12020호에 기재됨)에 의해, 또는 대안적으로 PT의 유전적으로-탈독화된 유사체의 정제에 의해 (예를 들어, 하기에 기재된 대로, PT의 고려된 유전적 변형을 기재할 목적으로 본원에 참조로서 포함됨: EP306318호, EP322533호, EP396964호, EP322115호, EP275689호) 생성될 수 있다. 특정 구체예에서, PT는 유전적으로 탈독화된다. 더욱 특히, 유전적으로-탈독화된 PT는 하기 치환 중 하나 또는 둘 모두를 지닌다: R9K 및 E129G.
기재된 조합 면역원성 조성물은 무세포 백일해 항원 PT, FHA, PRN, FIM2 및 FIM3 중 임의의 1, 2, 3, 4 또는 5개를 포함할 수 있다. 보다 특히, 상기 조성물은 조합물을 포함할 수 있다: PT 및 FHA; PT, FHA 및 PRN; PT, FHA, PRN 및 FIM2; PT, FHA, PRN 및 FIM3; 및 PT, FHA, PRN, FIM2 및 FIM3.
특정 구체예에서, PT는 2-50μg (예를 들어 용량 당 정확히 또는 대략 2.5 또는 3.2μg), 5-40μg (예를 들어 용량 당 정확히 또는 대략 5 또는 8μg) 또는 10-30μg (예를 들어 용량 당 정확히 또는 대략 20 또는 25μg)의 양으로 이용된다.
특정 구체예에서, FHA는 2-50μg (예를 들어 용량 당 정확히 또는 대략 2.5 또는 34.4μg), 5-40μg (예를 들어 용량 당 정확히 또는 대략 5 또는 8μg) 또는 10-30μg (예를 들어 용량 당 정확히 또는 대략 20 또는 25μg)의 양으로 이용된다.
특정 구체예에서, PRN은 0.5-20μg, 0.8-15μg (예를 들어 용량 당 정확히 또는 대략 0.8 또는 1.6μg) 또는 2-10μg (예를 들어 용량 당 정확히 또는 대략 2.5 또는 3 또는 8μg)의 양으로 이용된다.
특정 구체예에서, FIM2 및/또는 FIM3은 0.5-10μg (예를 들어 용량 당 정확히 또는 대략 0.8 또는 5μg)의 총 양으로 이용된다.
특정 구체예에서, 조합 면역원성 조성물은 용량 당 같은 양의 PT 및 FHA를 포함하고, 이는 정확히 또는 대략 8 또는 20 또는 25μg이다. 대안적으로, 조합 면역원성 조성물은 정확히 또는 대략 각각 5 및 2.5μg, 또는 정확히 또는 대략 3.2 및 34.4μg의 PT 및 FHA를 포함한다. 추가의 구체예에서, 면역원성 조성물은 용량 당 각각 하기 정확한 또는 대략적인 양의 PT, FHA 및 PRN을 포함한다: 25:5:8μg; 8:8:2.5μg; 20:20:3μg; 2.5:5:3μg; 5:2.5:2.5μg; 또는 3.2:34.4:1.6μg.
대안적으로, 또는 상기 논의된 Pa 항원과 함께, 기재된 조합 면역원성 조성물은 B. 퍼투시스 'BrkA' 단백질로부터 유래된 항원을 포함할 수 있다 (본원에 참조로서 포함되는 WO2005/032584호, 및 문헌[Marr et al (2008), Vaccine, 26(34):4306-4311]에 기재됨).
추가의 구체예에서, 적어도 하나의 Pa 항원은 본원에 참조로서 포함되는 문헌[Roberts et al (2008), Vaccine, 26:4639-4646]에 기재된 대로, B. 퍼투시스로부터 수득된 외막 소포(OMV)를 포함한다. 특히, 그러한 OMV는 지질 A-변형 효소, 예컨대 3-O-데아실라제, 예를 들어 PagL을 발현시키는 재조합 B. 퍼투시스 균주로부터 유래될 수 있다 (Asensio et al (2011), Vaccine, 29:1649-1656, 본원에 참조로서 포함됨).
대안적인 구체예에서, 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원은 Pw 항원을 포함한다. Pw는 무수은 방법을 포함하는 여러 공지된 방법에 의해 불활성화될 수 있다. 그러한 방법은 가열 (예컨대 55-65℃ 또는 56-60℃, 5-60분 동안 또는 10-30분 동안, 예컨대 30분 동안 60℃), 포름알데히드 (예컨대 37℃에서 0.1%, 24시간), 글루타르알데히드 (예컨대 실온에서 0.05%, 10분), 아세톤-I (예컨대 실온에서 3회 처리) 또는 아세톤-II (예컨대 실온에서 3회 처리 및 37℃에서 4회 처리) 불활성화 (예를 들어 문헌[Gupta et al., 1987, J. Biol. Stand. 15:87; Gupta et al., 1986, Vaccine, 4:185]를 참조하라)를 포함할 수 있다. 조합 면역원성 조성물에 사용하기 적합한 사멸된 Pw 항원을 제조하는 방법은 WO93/24148호에 기재되어 있다.
보다 구체적으로, 조합 면역원성 조성물은 용량 당 5-50, 7-40, 9-35, 11-30, 13-25, 15-21, 또는 대략 또는 정확히 20 (국제 불투명도 단위, "IOU")의 Pw를 포함한다.
본 발명에 따른 Pw-포함 조합 면역원성 조성물의 특정 구체예에서, 조성물의 Pw 성분은 감소된 반응원성을 유도한다. Pw 백신의 반응원성 (동통, 발열, 부기 등)은 박테리아 외막으로부터의 내독소인 리포-올리고사카라이드 (B. 퍼투시스에 관해 리포-폴리사카라이드 ('LPS')와 동의어인 'LOS'; 'LOS'가 본원에서 이용될 것이다)에 의해 주로 야기된다. LOS의 지질 A 부분이 주로 그 원인이다. 덜 반응원성인 Pw-함유 백신을 생성하기 위해 (예컨대 상기 논의된 불활성화 절차에 의해 생성된 '전통의' Pw 백신에 비해), 내독소는 유전적으로 또는 화학적으로 탈독화되고/거나 외막으로부터 추출될 수 있다. 그러나, 이는 LOS가 면역 시스템의 강력한 애쥬번트이므로, Pw 항원의 면역원성을 실질적으로 손상시키지 않는 방식으로 수행되어야 한다.
한 구체예에서, 기재된 조합 면역원성 조성물의 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원은 LOS가 유전적으로 또는 화학적으로 탈독화되고/거나 추출된 '저 반응원성' Pw 항원을 포함한다. 예를 들어, Pw 항원은 LOS의 화학적 추출을 기재할 목적으로 본원에 참조로서 포함되는 WO2006/002502호 및 문헌[Dias et al (2012), Human Vaccines & Immunotherapeutics, 9(2):339-348]에 기재된 대로, 유기 용매, 예컨대 부탄올, 및 물의 혼합물로 처리될 수 있다.
대안적인 구체예에서, '저 반응원성'은 덜 독성인 LOS를 생성하도록 유전적으로 공학처리된 B. 퍼투시스 균주로부터의 Pw 항원을 유도함에 의해 달성된다. WO2006/065139호 (본원에 참조로서 포함됨)는 적어도 부분적으로 3-O-데아실화된 LOS를 포함하는 균주를 발생시키는, 유전적 3-O-데아실화 및 B. 퍼투시스 LOS의 탈독화를 기재한다. 따라서 조합 면역원성 조성물의 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원은 지질 A-변형 효소, 예컨대 데-O-아실라제를 발현하도록 공학처리된 B. 퍼투시스의 균주로부터 유래된 Pw 항원일 수 있다. 특히, 그러한 균주는 WO2006/065139호, 뿐만 아니라 문헌[Geurtsen et al (2006), Infection and Immunity, 74(10):5574-5585 and Geurtsen et al (2007), Microbes and Infection, 9:1096-1103, 모두는 본원에 참조로서 포함됨]에 기재된 대로 PagL을 발현시킬 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, Pw 항원이 유래되는 균주는 자연적으로, 또는 공학처리의 결과로서, 글루코사민을 지닌 이의 지질 A 포스페이트기를 변형시키는 능력이 없고/거나; C-3' 위치에서 C10-OH 또는 C12-OH로 치환된 지질 A 디글루코사민 백본을 갖고/거나; 말단 헵토스가 결여된 분자 LOS 종을 발현시킬 수 있다. 그러나 균주인 18-323은 문헌[Marr et al (2010), The Journal of Infectious Diseases, 202(12):1897-1906 (본원에 참조로서 포함됨)]에 기재되어 있다.
면역원성 조성물
본원에 기재된 조합 면역원성 조성물은 전형적으로 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 함유하고, 임의로 추가적인 항원을 함유한다.
약학적으로 허용되는 담체 및 부형제는 잘 알려져 있고 당업자에 의해 선택될 수 있다. 예를 들어, 담체 또는 부형제는 유리하게는 완충제를 포함할 수 있다. 임의로, 담체 또는 부형제는 또한 용해성 및/또는 안정성을 안정화시키는 적어도 하나의 성분을 함유한다. 용해/안정화 작용제의 예는 세척제, 예를 들어, 라우렐 사르코신 및/또는 트윈(tween)을 포함한다. 대안적인 용해/안정화 작용제는 아르기닌, 및 유리 형성 폴리올 (예컨대 수크로스, 트레할로스 등)을 포함한다. 다수의 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 약학적으로 허용되는 부형제는 당 분야에 공지되어 있고, 예컨대, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 5th Edition (975)]에 기재되어 있다.
따라서, 적합한 부형제 및 담체는 선택된 투여 경로에 의해 피검체에 전달하기에 적합한 제형을 생성하기 위해 당업자에 의해 선택될 수 있다.
적합한 부형제는 비제한적으로 글리세롤, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 소르비톨, 트레할로스, N-라우로일사르코신 소듐 염, L-프롤린, 비 세척 설포베타인, 구아니딘 하이드로클로라이드, 우레아, 트리메틸아민 옥사이드, KCl, Ca2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+ 및 다른 이가 양이온 관련 염, 디티오트레이톨, 디티오에리트롤, 및 β-메르캅토에탄올을 포함한다. 다른 부형제는 세척제 (트윈80, 트윈20, 트리톤 X-00, NP-40, 엠피겐(Empigen) BB, 옥틸글루코시드, 라우로일 말토시드, 쯔비터전트(Zwittergent 3-08), 쯔비터전트 3-0, 쯔비터전트 3-2, 쯔비터전트 3-4, 쯔비터전트 3-6, CHAPS, 소듐 데옥시콜레이트, 소듐 도데실 설페이트, 세틸트리메틸암모늄 브로마이드 포함)일 수 있다.
임의로, 기재된 조합 면역원성 조성물은 또한 애쥬번트를 포함하고, 애쥬번트는 또한 기재된 백신 요법, 방법, 용도 및 키트에 이용될 수 있다. 조합 면역원성 조성물이 RSV 및/또는 B. 퍼투시스 감염에 걸리기 쉬운 (또는 증가된 위험의) 특정 연령군의 피검체에 투여될 때, 애쥬번트는 피검체 또는 피검체의 집단에서 안전하고 효과적이도록 선택된다. 따라서, 조합 면역원성 조성물이 노인 피검체 (예컨대, 65세 초과의 피검체)에서의 투여를 위해 제형화될 때, 애쥬번트는 노인 피검체에서 안전하고 효과적이도록 선택된다. 유사하게, 조합 면역원성 조성물이 신생아 또는 유아 피검체 (예컨대, 출생 내지 2세까지의 피검체)에서의 투여를 위해 의도될 때, 애쥬번트는 신생아 및 유아에서 안전하고 효과적이도록 선택된다. 신생아 및 유아에서 안전성 및 효능을 위해 선택된 애쥬번트의 경우, 애쥬번트 용량은 성인 피검체에 전형적으로 투여되는 용량의 희석액 (예컨대, 분할 용량)으로 선택될 수 있다.
추가로, 애쥬번트는 전형적으로 조합 면역원성 조성물이 투여되는 투여 경로를 통해 투여될 때 면역 반응의 요망되는 측면을 향상시키도록 선택된다. 예를 들어, 비내 투여용 조합 면역원성 조성물을 제형화할 때, 프로테오솜 및 프로톨린(protollin)이 유리한 애쥬번트이다. 대조적으로, 조합 면역원성 조성물이 근내 투여를 위해 제형화될 때, 3D-MPL, 스쿠알렌 (예컨대, QS21), 리포솜, 및/또는 오일 및 물 에멀젼 중 하나 이상을 포함하는 애쥬번트가 유리하게 선택된다.
RSV F 단백질 유사체 항원과 함께 사용하기 위한 하나의 적합한 애쥬번트는 비-독성 박테리아 리포폴리사카라이드 유도체이다. 지질 A의 적합한 비-독성 유도체의 예는 모노포스포릴 지질 A 또는 보다 특히 3-데아실화된 모노포스포릴 지질 A (3D-MPL)이다. 3D-MPL은 GlaxoSmithKline Biologicals N.A.에 의해 상표명 MPL하에 판매되고, 문서를 통틀어 MPL 또는 3D-MPL로서 언급된다. 예를 들어, 미국특허 4,436,727호; 4,877,611호; 4,866,034호 및 4,912,094호를 참조하라. 3D-MPL은 주로 IFN-γ (Th1) 표현형을 지닌 CD4+ T 세포 반응을 촉진시킨다. 3D-MPL은 GB2220211 A호에 기재된 방법에 따라 생성될 수 있다. 화학적으로 이것은 3-데아실화된 모노포스포릴 지질 A와 3, 4, 5 또는 6 아실화된 사슬의 혼합물이다. 본 발명의 조성물에서 소입자 3D-MPL이 이용될 수 있다. 소입자 3D-MPL은 0.22μm 필터를 통해 살균-여과될 수 있는 입자 크기를 지닌다. 그러한 제조물은 WO94/21292호에 기재되어 있다.
리포폴리사카라이드, 예컨대 3D-MPL이 면역원성 조성물의 인간 용량 당 1 내지 50μg의 양으로 이용될 수 있다. 그러한 3D-MPL은 약 25μg, 예를 들어 20-30μg, 적합하게는 21-29μg 또는 22 내지 28μg 또는 23 내지 27μg 또는 24 내지 26μg, 또는 25μg의 수준으로 이용될 수 있다. 다른 구체예에서, 면역원성 조성물의 인간 용량은 약 10μg, 예를 들어 5 내지 15μg, 적합하게는 6 내지 14μg, 예를 들어 7 내지 13μg 또는 8 내지 12μg 또는 9 내지 11μg, 또는 10μg의 수준의 3D-MPL을 포함한다. 추가의 구체예에서, 면역원성 조성물의 인간 용량은 약 5μg, 예를 들어 1 내지 9μg, 또는 2 내지 8μg 또는 적합하게는 3 내지 7μg 또는 4 내지 μg, 또는 5μg의 수준의 3D-MPL을 포함한다.
다른 구체예에서, 리포폴리사카라이드는 미국특허 6,005,099호 및 유럽특허 0 729 473 B1호에 기재된 대로, β(1-6) 글루코사민 디사카라이드일 수 있다. 당업자는 이러한 참고문헌의 교시에 기반하여, 다양한 리포폴리사카라이드, 예컨대 3D-MPL을 용이하게 생성할 수 있을 것이다. 그럼에도 불구하고, 이러한 참고문헌은 각각 본원에 참조로서 포함된다. 상기 언급된 면역자극제 (LPS 또는 MPL 또는 3D-MPL와 구조에 있어서 유사한)에 추가하여, MPL의 상기 구조에 대한 하위-부분인 아실화된 모노사카라이드 및 디사카라이드 유도체가 또한 적합한 애쥬번트이다. 다른 구체예에서, 애쥬번트는 일부가 TLR-4 효능제로서 기재된 지질 A의 합성 유도체이고, 이는 비제한적으로 OM174 (2-데옥시-6-o-[2-데옥시-2-[(R)-3-도데카노일옥시테트라-데카노일아미노]-4-o-포스포노-β-D-글루코피라노실]-2-[(R)-3-하이드록시테트라데카노일아미노]-α-D-글루코피라노실디하이드로겐포스페이트), (WO 95/14026); OM 294 DP (3S, 9R)-3--[(R)-도데카노일옥시테트라데카노일아미노]-4-옥소-5-아자-9(R)-[(R)-3-하이드록시테트라데카노일아미노]데칸-1,10-디올,1,10-비스(디하이드로겐포스페이트) (WO 99/64301 및 WO 00/0462); 및 OM 197 MP-Ac DP (3S-, 9R)-3-[(R)-도데카노일옥시테트라데카노일아미노]-4-옥소-5-아자-9-[(R)-3-하이드록시테트라데카노일아미노]데칸-1,10-디올,1-디하이드로게노포스페이트 10-(6-아미노헥사노에이트) (WO 01/46127)를 포함한다.
이용될 수 있는 다른 TLR4 리간드는 알킬 글루코사미니드 포스페이트 (AGP), 예컨대 WO 98/50399호 또는 미국특허 6,303,347호 (AGP를 제조하는 방법이 또한 기재되어 있다)에 기재된 것들, 적합하게는 미국특허 6,764,840호에 기재된 RC527 또는 RC529 또는 AGP의 약학적으로 허용되는 염이다. 일부 AGP는 TLR4 효능제이고, 일부는 TLR4 길항제이다. 둘 모두는 애쥬번트로서 유용한 것으로 고려된다.
TLR-4를 통해 신호전달 반응을 초래할 수 있는 (Sabroe et al, JI 2003 p1630-5) 다른 적합한 TLR-4 리간드는, 예를 들어, 그램-음성 박테리아로부터의 리포폴리사카라이드 및 이의 유도체, 또는 이의 단편, 특히 LPS의 비-독성 유도체(예컨대 3D-MPL)이다. 다른 적합한 TLR 효능제는 열 쇼크 단백질 (HSP) 10, 60, 65, 70, 75 또는 90; 계면활성제 단백질 A, 히알루로난 올리고사카라이드, 헤파란 설페이트 단편, 피브로넥틴 단편, 피브리노겐 펩티드 및 b-디펜신-2, 및 뮤라밀 디펩티드 (MDP)이다. 한 구체예에서 TLR 효능제는 HSP 60, 70 또는 90이다. 다른 적합한 TLR-4 리간드는 WO 2003/011223호 및 WO 2003/099195호에 기재된 바와 같고, 예컨대 WO2003/011223호의 4-5면 또는 WO2003/099195호의 3-4면에 기재된 화합물 I, 화합물 II 및 화합물 III 및 특히 WO2003/011223호에 ER803022, ER803058, ER803732, ER804053, ER804057, ER804058, ER804059, ER804442, ER804680, 및 ER804764로서 기재된 화합물들이다. 예를 들어, 한 적합한 TLR-4 리간드는 ER804057이다.
추가적인 TLR 효능제는 또한 애쥬번트로서 유용하다. 용어 "TLR 효능제"는 직접적인 리간드로서 또는 간접적으로 내인성 또는 외인성 리간드의 생성을 통해, TLR 신호전달 경로를 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 작용제를 의미한다. 그러한 자연 또는 합성 TLR 효능제를 대안적이거나 추가적인 애쥬번트로서 이용할 수 있다. 애쥬번트 수용체로서 TLR의 역할의 간단한 검토는 문헌[Kaisho & Akira, Biochimica et Biophysica Acta 1589:1-13, 2002]에서 제공된다. 이러한 잠재적인 애쥬번트는 비제한적으로 TLR2, TLR3, TLR7, TLR8 및 TLR9에 대한 효능제를 포함한다. 따라서, 한 구체예에서, 애쥬번트 및 조합 면역원성 조성물은 TLR-1 효능제, TLR-2 효능제, TLR-3 효능제, TLR-4 효능제, TLR-5 효능제, TLR-6 효능제, TLR-7 효능제, TLR-8 효능제, TLR-9 효능제, 또는 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택되는 애쥬번트를 추가로 포함한다.
본 발명의 한 구체예에서, TLR-1을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제가 이용된다. 적합하게는, TLR-1을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제는 트리-아실화된 지질펩티드 (LP); 페놀-가용성 모듈린; 마이코박테리움 튜베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis) LP; S-(2,3-비스(팔미토일옥시)-(2-RS)-프로필)-N-팔미토일-(R)-Cys-(S)-Ser-(들)-Lys(4)-OH, 박테리아 지단백질의 아세틸화된 아미노 말단을 모방하는 트리하이드로클로라이드 (Pam3Cys) LP 및 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi)로부터의 OspA LP로부터 선택된다.
대안적인 구체예에서, TLR-2를 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제가 이용된다. 적합하게는, TLR-2를 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제는 지단백질, 펩티도글리칸, M. 튜베르쿨로시스(M tuberculosis), B. 부르그도르페리(B burgdorferi) 또는 T. 팔리둠(T pallidum)으로부터의 박테리아 지질펩티드; 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)를 포함하는 종으로부터의 펩티도글리칸; 리포테이코산, 만누론산, 네이세리아(Neisseria) 포린(porins), 박테리아 섬모, 예르시나(Yersina) 발병력 인자, CMV 비리온, 홍역 헤마글루티닌, 및 효모로부터의 지모산 중 하나 이상이다.
대안적인 구체예에서, TLR-3을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제가 이용된다. 적합하게는, TLR-3을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제는 이중 가닥 RNA (dsRNA), 또는 폴리이노신-폴리시티딜산 (Poly IC), 바이러스 감염과 관련된 분자의 핵산 패턴이다.
대안적인 구체예에서, TLR-5를 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제가 이용된다. 적합하게는, TLR-5를 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제는 박테리아 플라젤린이다.
대안적인 구체예에서, TLR-6을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제가 이용된다. 적합하게는, TLR-6을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제는 마이코박테리아 지단백질, 디-아실화된 LP, 및 페놀-가용성 모듈린이다. 추가적인 TLR6 효능제는 WO 2003/043572호에 기재되어 있다.
대안적인 구체예에서, TLR-7을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제가 이용된다. 적합하게는, TLR-7을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제는 단일 가닥 RNA (ssRNA), 록소리빈(loxoribine), 위치 N7 및 C8에서의 구아노신 유사체, 또는 이미다조퀴놀린 화합물, 또는 이들의 유도체이다. 한 구체예에서, TLR 효능제는 이미퀴모드이다. 추가의 TLR7 효능제는 WO 2002/085905호에 기재되어 있다.
대안적인 구체예에서, TLR-8을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제가 이용된다. 적합하게는, TLR-8을 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제는 단일 가닥 RNA (ssRNA), 항-바이러스 활성을 갖는 이미다조퀴놀린 분자, 예를 들어 레시퀴모드 (R848)이고; 레시퀴모드는 또한 TLR-7에 의해 인지될 수 있다. 이용될 수 있는 다른 TLR-8 효능제는 WO 2004/071459호에 기재된 것들을 포함한다.
대안적인 구체예에서, TLR-9를 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제가 이용된다. 한 구체예에서, TLR-9를 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제는 HSP90이다. 대안적으로, TLR-9를 통해 신호전달 반응을 발생시킬 수 있는 TLR 효능제는 박테리아 또는 바이러스 DNA, 메틸화되지 않은 CpG 뉴클레오티드, 특히 CpG 모티프로 알려진 서열 환경을 함유하는 DNA이다. CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 Th1 반응을 우세하게 유도한다. 그러한 올리고뉴클레오티드는 잘 알려져 있고, 예를 들어, WO 96/02555호, WO 99/33488호 및 미국특허 6,008,200호 및 5,856,462호에 기재되어 있다. 적합하게는 CpG 뉴클레오티드는 CpG 올리고뉴클레오티드이다. 조합 면역원성 조성물에 사용하기 적합한 올리고뉴클레오티드는 CpG 함유 올리고뉴클레오티드, 임의로 적어도 3개, 적합하게는 적어도 6개 이상의 뉴클레오티드에 의해 분리된 2개 이상의 디뉴클레오티드 CpG 모티프를 함유하는 올리고뉴클레오티드이다. CpG 모티프는 시토신 뉴클레오티드에 구아닌 뉴클레오티드가 이어진다. CpG 올리고뉴클레오티드는 전형적으로 데옥시뉴클레오티드이다. 특이적 구체예에서, 올리고뉴클레오티드의 사이 뉴클레오티드는, 비록 포스포다이에스테르 및 다른 뉴클레오티드간 결합이 가능하지만, 포스포로디티오에이트, 또는 적합하게는 포스포로티오에이트 결합이다. 또한 혼합된 뉴클레오티드간 연결을 갖는 올리고뉴클레오티드가 가능하다. 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드 또는 포스포로디티오에이트를 생성하는 방법은 미국특허 5,666,153호, 5,278,302호 및 WO 95/26204호에 기재되어 있다.
예컨대, 단독으로 또는 3D-MPL, 또는 본원에 기재된 또 다른 애쥬번트와 함께, F 단백질 유사체, 예컨대 PreF 유사체를 포함하는 기재된 조합 면역원성 조성물, 및 기재된 백신화 요법, 방법, 용도 및 키트에 이용될 수 있는 다른 애쥬번트는 사포닌, 예컨대 QS21이다. 그러한 애쥬번트는 전형적으로 B. 퍼투시스 항원에 이용되지 않는다 (그러나, 요망되는 경우 이용될 수 있었다).
사포닌은 문헌[Lacaille-Dubois, M and Wagner H. (1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 pp 363-386)]에 교시되어 있다. 사포닌은 식물 및 해양 동물계에 광범하게 분포하는 스테로이드 또는 트리테르펜 글리코시드이다. 사포닌은 진탕시 거품을 일으키며 물 중 콜로이드 용액을 형성하고, 콜레스테롤을 침전시키는 것으로 알려져 있다. 사포닌이 세포막에 가까운 경우, 이들은 막에 구멍-같은 구조를 생성하여 막이 터져 버리게 한다. 적혈구의 용혈은 이러한 현상의 예이며, 이는 전부는 아니지만 특정 사포닌의 속성이다.
사포닌은 전신 투여용 백신에서 애쥬번트로서 알려져 있다. 개별적인 사포닌의 애쥬번트 및 용혈 활성은 당 분야에서 광범하게 연구되었다 (Lacaille-Dubois and Wagner, supra). 예를 들어, Quil A (남아메리카 나무 퀼라자 사포나리아 몰리나(Quillaja Saponaria Molina)의 껍질에서 유래됨), 및 이의 분획은 미국 5,057,540호 및 문헌["Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55]; 및 EP 0 362 279 B1호에 기재되어 있다. Quil A의 분획을 포함하는, 면역 자극 복합체(ISCOMS)로서 명명된 미립자 구조는 용혈성이고 백신의 제조에 이용되어 왔다 (Morein, B., EP 0 109 942 B1호; WO 96/11711호; WO 96/33739호). 용혈성 사포닌 QS21 및 QS17 (Quil A의 HPLC 정제된 분획)은 강력한 전신 애쥬번트로서 기재되었고, 이들의 생성 방법은 본원에 참조로서 포함되는 미국특허 5,057,540호 및 EP 0 362 279 B1호에 기재되어 있다. 전신 백신화 연구에 사용되어 온 다른 사포닌은 다른 식물 종, 예컨대 집소필라(Gypsophila) 및 사포나리아(Saponaria)로부터 유래된 것들을 포함한다 (Bomford et al., Vaccine, 10(9):572-577, 1992).
QS21은 퀼라자 사포나리아 몰리나의 껍질에서 유래된 Hplc 정제된 비-독성 분획이다. QS21을 생성하는 방법은 미국특허 5,057,540호에 기재되어 있다. QS21을 함유하는 비-반응원성 애쥬번트 제형은 WO 96/33739호에 기재되어 있다. 상기 언급된 참고문헌들은 본원에 참조로서 포함된다. 상기 면역학적으로 활성인 사포닌, 예컨대 QS21은 조합 면역원성 조성물의 인간 용량 당 1 내지 50μg의 양으로 이용될 수 있다. 유리하게는, QS21은 약 25μg, 예를 들어 20-30μg, 적합하게는 21-29μg 또는 22-28μg 또는 23-27μg 또는 24-26μg, 또는 25μg의 수준으로 이용된다. 다른 구체예에서, 조합 면역원성 조성물의 인간 용량은 약 10μg, 예를 들어 5 내지 15μg, 적합하게는 6-14μg, 예를 들어 7-13μg 또는 8-12μg 또는 9-11μg, 또는 10μg의 수준의 QS21을 포함한다. 추가의 구체예에서, 조합 면역원성 조성물의 인간 용량은 약 5μg, 예를 들어 1-9μg, 또는 2-8μg 또는 적합하게는 3-7μg 또는 4-6μg, 또는 5μg의 수준의 QS21을 포함한다. QS21 및 콜레스테롤을 포함하는 그러한 제형은 항원과 함께 제형화될 때 성공적인 애쥬번트인 것으로 밝혀졌다. 따라서, 예를 들어, RSV F 단백질 유사체 폴리펩티드는 QS21 및 콜레스테롤의 조합물을 포함하는 애쥬번트와 함께 조합 면역원성 조성물에 유리하게 이용될 수 있다.
임의로, 애쥬번트는 또한 미네랄 염, 예컨대 알루미늄 염, 특히 알루미늄 하이드록사이드 또는 알루미늄 포스페이트, 또는 칼슘 포스페이트를 포함할 수 있다. 예를 들어, 알루미늄 염 (예컨대, 알루미늄 하이드록사이드 또는 "알룸")과 함께 3D-MPL을 함유하는 애쥬번트가 인간 피검체에 투여하기 위한 RSV F 단백질 유사체 항원을 함유하는 조합 면역원성 조성물에서의 제형화에 적합하다. 대안적으로, 그러한 미네랄 염 애쥬번트는 비-미네랄-염 애쥬번트와 조합되는 것 외에 이용될 수 있고, 즉, 조합 면역원성 조성물은 하나, 또는 하나 초과의 미네랄 염 애쥬번트, 예컨대 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포스페이트 및 칼슘 포스페이트로만 애쥬번트화될 수 있다.
RSV F 단백질 유사체 항원 (및 임의로, 요망되는 경우, 백일해 항원, 예컨대 정제된 무세포 B. 퍼투시스 단백질을 지님)을 지니는 제형에 사용하기에 적합한 또 다른 부류의 애쥬번트는 OMP-기반 면역자극성 조성물을 포함한다. OMP-기반 면역자극성 조성물은, 예컨대 비내 투여를 위한 점막 애쥬번트로서 특히 적합하다. OMP-기반 면역자극성 조성물은 면역원, 예컨대 박테리아 또는 바이러스 항원용 담체 또는 조성물에 유용한, 그램-음성 박테리아, 예컨대, 비제한적으로 네이세리아 종 (예컨대, 문헌[Lowell et al., J. Exp. Med. 167:658, 1988; Lowell et al., Science 240:800, 1988; Lynch et al., Biophys. J. 45:104, 1984; Lowell, in "New Generation Vaccines" 2nd ed., Marcel Dekker, Inc., New York, Basil, Hong Kong, page 193, 1997; 미국특허 5,726,292호; 미국특허 4,707,543호)으로부터의 외막 단백질 (OMP, 일부 포린 포함)의 제조물의 종류이다. 일부 OMP-기반 면역자극성 조성물은 "프로테오솜"으로 언급될 수 있고, 이는 소수성이며 인간 사용에 안전하다. 프로테오솜은 약 20 nm 내지 약 800 nm의 소포 또는 소포-유사 OMP 클러스터로 자가-어셈블링하거나, 단백질 항원 (Ag), 특히 소수성 모이어티를 갖는 항원에 비공유적으로 혼입, 통합, 결합 (예컨대, 정전기 또는 소수성에 의해) 또는 달리 협력하는 능력을 갖는다. 하나 이상의 OMP의 다중-분자 막 구조 또는 용융된 구형-유사 OMP 조성물을 포함하는, 소포 또는 소포-유사 형태의 외막 단백질 성분을 발생시키는 임의의 제조 방법은 프로테오솜의 정의 내에 포함된다. 프로테오솜은, 예를 들어, 당 분야에 기재된 대로 제조될 수 있다 (예컨대, 미국특허 5,726,292호 또는 미국특허 5,985,284호를 참조하라). 프로테오솜은 또한 OMP 포린 (예컨대, 네이세리아 종)을 생성하는 이용된 박테리아에서 비롯된 내인성 리포폴리사카라이드 또는 리포올리고사카라이드 (각각 LPS 또는 LOS)를 함유할 수 있고, 이는 일반적으로 총 OMP 제조물의 2% 미만일 것이다.
프로테오솜은 세척제에 의해 용액에 유지된, 네이세리아 메닌지티디스(Neisseria menigitidis)로부터의 화학적으로 추출된 외막 단백질 (OMP)(대부분 포린 A 및 B 뿐만 아니라 클래스 4 OMP)로 주로 구성된다 (Lowell GH. Proteosomes for Improved Nasal, Oral, or Injectable Vaccines. In: Levine MM, Woodrow GC, Kaper JB, Cobon GS, eds, New Generation Vaccines. New York: Marcel Dekker, Inc. 1997; 193-206). 프로테오솜은 본원에 기재된 RSV F 단백질 폴리펩티드를 포함하는, 예컨대 디아필트레이션(diafiltration) 또는 전통적인 투석 공정에 의해 바이러스 공급원으로부터 유래된 다양한 항원, 예컨대 정제되거나 재조합 단백질 또는 정제된 B. 퍼투시스 항원성 단백질과 함께 제형화될 수 있다. 세척제의 점진적인 제거는 직경이 약 100-200nm인 미립자 소수성 복합체의 형성을 가능하게 한다 (Lowell GH. Proteosomes for Improved Nasal, Oral, or Injectable Vaccines. In: Levine MM, Woodrow GC, Kaper JB, Cobon GS, eds, New Generation Vaccines. New York: Marcel Dekker, Inc. 1997; 193-206).
본원에서 사용되는 "프로테오솜: LPS 또는 프로톨린"은, 예컨대 외인성 첨가에 의해, 적어도 한 종류의 리포-폴리사카라이드와 혼합되어 OMP-LPS 조성물 (면역자극성 조성물로서 기능할 수 있다)을 제공하는 프로테오솜의 제조물을 의미한다. 따라서, OMP-LPS 조성물은 (1) 그램-음성 박테리아, 예컨대 네이세리아 메닌지티디스로부터 제조된 프로테오솜의 외막 단백질 제조물 (예컨대, 프로쥬번트(Projuvant)), 및 (2) 하나 이상의 리포사카라이드의 제조물을 포함하는, 프로톨린의 두 기본 성분으로 구성될 수 있다. 리포-올리고사카라이드는 내인성 (예컨대, 자연적으로 OMP 프로테오솜 제조물에 함유됨)일 수 있거나, 외인성으로 제조된 리포-올리고사카라이드로부터의 OMP 제조물과 혼합되거나 조합될 수 있거나 (예컨대, OMP 제조물과 상이한 배양액 또는 미생물로부터 제조됨), 이들의 조합일 수 있다. 그러한 외인성으로 첨가된 LPS는 OMP 제조물이 제조된 것과 동일한 그램-음성 박테리아 또는 상이한 그램-음성 박테리아로부터 비롯될 수 있다. 프로톨린은 또한 지질, 당지질, 당단백질, 소분자 등 및, 이들의 조합을 임의로 포함하는 것이 이해되어야 한다. 프로톨린은, 예를 들어, 미국 특허출원 공개 2003/0044425호에 기재된 대로 제조될 수 있다.
상이한 애쥬번트, 예컨대 상기 언급된 것들의 조합물이 또한 F 단백질 유사체, 예컨대 PreF 유사체 (및 임의로 또한, 요망되는 경우, B. 퍼투시스 항원)와 함께 조성물에 이용될 수 있다. 예를 들어, 이미 언급된 대로, QS21은 3D-MPL과 함께 제형화될 수 있다. QS21:3D-MPL의 비는 전형적으로 대략 1:10 내지 10:1; 예컨대 1:5 내지 5:1, 및 종종 실질적으로 1:1일 것이다. 전형적으로, 상기 비는 2.5:1 내지 1:1 범위의 3D-MPL:QS21이다. 또 다른 조합 애쥬번트 제형은 3D-MPL 및 알루미늄 염, 예컨대 알루미늄 하이드록사이드를 포함한다.
일부 예에서, 애쥬번트 제형은, 미네랄 염, 예컨대 알루미늄 (알룸) 염, 예를 들어 알루미늄 포스페이트 또는 알루미늄 하이드록사이드, 또는 칼슘 포스페이트를 포함한다. 알룸이, 예컨대 3D-MPL과 함께 존재하는 경우, 그 양은 전형적으로 용량 당 약 100μg 내지 1mg, 예컨대 약 100μg, 또는 약 200μg 내지 약 750μg, 예컨대 약 500μg이다.
일부 구체예에서, 애쥬번트는 오일과 물 에멀젼, 예컨대, 수중유 에멀젼을 포함한다. 수중유 에멀젼의 한 예는 수성 담체 중 대사작용성 오일, 예컨대 스쿠알렌, 토콜, 예컨대 토코페롤, 예컨대, 알파-토코페롤, 및 계면활성제, 예컨대 소르비탄 트리올레에이트 (스판(Span) 85™) 또는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트 (트윈 80™)를 포함한다. 특정 구체예에서, 수중유 에멀젼은 임의의 추가적인 면역자극제(들)를 함유하지 않는다, (특히, 비-독성 지질 A 유도체, 예컨대 3D-MPL, 또는 사포닌, 예컨대 QS21을 함유하지 않는다). 수성 담체는, 예를 들어, 포스페이트 완충된 염수일 수 있다. 추가로 수중유 에멀젼은 스판 85 및/또는 레시틴 및/또는 트리카프릴린을 함유할 수 있다.
다른 구체예에서, 조합 면역원성 조성물은 수중유 에멀젼 및 임의로 하나 이상의 추가의 면역자극제를 포함하고, 상기 수중유 에멀젼은 0.5-10 mg의 대사작용성 오일 (적합하게는 스쿠알렌), 0.5-11 mg의 토콜 (적합하게는 토코페롤, 예컨대 알파-토코페롤) 및 0.4-4 mg의 에멀젼화제를 포함한다.
한 특이적 구체예에서, 애쥬번트 제형은 에멀젼, 예컨대 수중유 에멀젼의 형태로 제조된 3D-MPL을 포함한다. 일부 경우에, 에멀젼은 WO 94/21292호에 기재된 대로, 직경이 0.2μm 미만인 소입자 크기를 지닌다. 예를 들어, 3D-MPL의 입자는 0.22마이크론 막을 통해 살균 여과될 만큼 충분히 작을 수 있다 (유럽 특허 번호 0 689 454호에 기재됨). 대안적으로, 3D-MPL은 리포솜 제형으로 제조될 수 있다. 임의로, 3D-MPL (또는 이의 유도체)을 함유하는 애쥬번트는 또한 추가적인 면역자극성 성분을 포함한다.
애쥬번트는 면역원성 조성물이 투여되는 집단에 안전하고 효과적이도록 선택된다. 성인 및 노인 집단의 경우, 제형은 전형적으로 유아 제형에서 전형적으로 발견되는 것보다 많은 애쥬번트 성분을 포함한다. 수중유 에멀젼을 이용한 특정 제형에서, 그러한 에멀젼은 추가적인 성분, 예를 들어, 예컨대 콜레스테롤, 스쿠알렌, 알파 토코페롤, 및/또는 세척제, 예컨대 트윈 80 또는 스판85를 포함할 수 있다. 예시적인 제형에서, 그러한 성분은 다음 양으로 존재할 수 있다: 약 1-50mg의 콜레스테롤, 2 내지 10%의 스쿠알렌, 2 내지 10%의 알파 토코페롤 및 0.3 내지 3%의 트윈 80. 전형적으로, 스쿠알렌:알파 토코페롤의 비는 1이거나 1 미만인데, 이러한 비가 보다 안정한 에멀젼을 제공하기 때문이다. 일부 경우에, 제형은 또한 안정화제를 함유할 수 있다.
RSV F 단백질 폴리펩티드 항원을 지닌 조합 면역원성 조성물이 유아로의 투여를 위해 제형화될 때, 애쥬번트의 투여량은 유아 피검체에 효과적이고 비교적 비-반응원성이도록 결정된다. 일반적으로, 유아 제형 중 애쥬번트의 투여량은 성인 (예컨대, 65세 이상의 성인)으로의 투여를 위해 설계된 제형에 사용된 것보다 낮다 (예를 들어, 용량은 성인에 투여되는 제형에 제공되는 용량의 일부분일 수 있다). 예를 들어, 3D-MPL의 양은 전형적으로 용량 당 1μg-200μg, 예컨대 10-100μg, 또는 10μg-50μg의 범위이다. 유아 용량은 전형적으로 이러한 범위의 하단에 있고, 예컨대, 약 1μg 내지 약 50μg, 예컨대 약 2μg, 또는 약 5μg, 또는 약 10μg으로부터 약 25μg, 또는 약 50μg까지이다. 전형적으로, QS21이 제형에 이용되는 경우, 그 범위는 유사하다 (및 상기 표시된 비에 따라). 오일 및 물 에멀젼 (예컨대, 수중유 에멀젼)의 경우, 소아 또는 유아에 제공되는 애쥬번트의 용량은 성인 피검체에 투여되는 용량의 일부분일 수 있다. 예시적인 수중유 애쥬번트의 다양한 용량과 함께 PreF 항원을 함유하는 면역원성 조성물의 효능의 입증은 WO2010/149745호에 제공된다.
모체 면역화를 위해 RSV F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원을 함유하는 조성물 (기재된 조합 면역원성 조성물 포함)에서, 조성물은 강한 중화 항체 반응을 유도하도록 설계된다. 모체는 이미 RSV 및 B. 퍼투시스에 노출되었으므로, 기존의 프라이밍된 반응을 지닐 것이고, 따라서 유아에 보호를 제공하는 목적은 이러한 프라이밍된 반응을 가능한 한 효과적으로 그리고 높은 효율로 태반을 가로지를 수 있는 항체 서브부류, 예컨대 IgG1에 관해 부스팅하여 유아에 보호를 제공하는 것이다. 이는 애쥬번트를 포함시키지 않거나, 단지 미네랄 염, 특히 알루미늄 하이드록사이드 (알룸), 알루미늄 포스페이트 또는 칼슘 포스페이트만을 포함하는 애쥬번트를 포함시킴에 의해 달성될 수 있다. 대안적으로, 이는 오일 및 물 에멀젼 애쥬번트, 또는 IgG1 서브부류의 항체의 생성을 향상시키는 또 다른 애쥬번트와의 제형화에 의해 달성될 수 있다. 따라서, 모체 면역화에 사용하기 위한 F 단백질 유사체는 유리하게는 미네랄 염, 유리하게는 알룸, 또는 오일 및 물 에멀젼 애쥬번트와 제형화된다.
이와 관련하여, 애쥬번트는 임신 여성에서 안전하고 잘 용인되도록 선택된다. 임의로, 면역원성 조성물은 또한 알룸 이외의 애쥬번트를 포함한다. 예를 들어, 최종 제형이 프라이밍된 여성에서 요망되는 특징 (예컨대, 서브부류 및 중화 기능의)을 갖는 RSV- 및/또는 B. 퍼투시스-특이적 항체의 생성을 향상시키는 경우, 3D-MPL, 스쿠알렌 (예컨대, QS21), 리포솜, 및/또는 오일 및 물 에멀젼 중 하나 이상을 포함하는 애쥬번트가 유리하게 선택된다.
선택된 애쥬번트와 무관하게, 최종 제형에서의 농도는 표적 집단에 안전하고 효과적이도록 산출됨이 주목되어야 한다. 예를 들어, 모체 면역화와 관련하여, 선택된 애쥬번트와 무관하게 최종 제형에서의 농도는 임신 여성의 표적 집단에 안전하고 효과적이도록 산출된다.
본원에 기재되거나, 기재된 백신화 요법, 방법, 용도 및 키트에 사용하기 위한 면역원성 조성물 (즉, 조합물)은 전형적으로 항원의 면역보호성 양 (또는 이의 분할 용량)을 함유하고, 이는 통상적인 기법에 의해 제조될 수 있다. 모체 면역화의 경우, 요구되는 양은 면역된 임신 여성의 유아가 면역보호성이 되도록 하는 항체의 수동 전달을 제공하는 양이다. 인간 피검체에 투여하기 위한 것들을 포함하는, 면역원성 조성물의 제조는 일반적으로 문헌[Pharmaceutical Biotechnology, Vol.61 Vaccine Design-the subunit and adjuvant approach, edited by Powell and Newman, Plenurn Press, 1995. New Trends and Developments in Vaccines, edited by Voller et al., University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978]에 기재되어 있다. 리포솜 내의 캡슐화가, 예를 들어, 문헌[Fullerton, 미국특허 4,235,877호]에 기재되어 있다. 대분자로의 단백질의 컨쥬게이션이, 예를 들어, 문헌[Likhite에 의한 미국특허 4,372,945호 및 Armor 등에 의한 미국특허 4,474,757호]에 기재되어 있다.
전형적으로, 면역원성 조성물의 각각의 용량에서 항원 (예컨대, 단백질)의 양은 전형적인 피검체에서 현저한 부작용 없이 면역보호성 반응을 유도하는 양으로서 선택된다. 이에 관해 면역보호성은 반드시 감염에 대한 완전한 보호를 의미하는 것은 아니다; 이는 증상 또는 질병, 특히 병원체와 관련된 심각한 질병에 대한 보호를 의미한다. 항원의 양은 사용된 특이적 면역원에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 각각의 인간 용량은 1-1000μg의 각각의 단백질 또는 항원, 예컨대 약 1μg 내지 약 100μg, 예를 들어, 약 1μg 내지 약 50μg, 예컨대 약 1μg, 약 2μg, 약 5μg, 약 10μg, 약 15μg, 약 20μg, 약 25μg, 약 30μg, 약 40μg, 또는 약 50μg, 또는 약 60μg을 포함할 것으로 예상된다. 일반적으로, 인간 용량은 0.5ml의 부피일 것이다. 따라서 사용되는 조성물 및 본원에 기재된 방법은 예를 들어 0.5 ml 중 10μg 또는 30μg 또는 60μg의 인간 용량일 수 있다. 면역원성 조성물에 사용되는 양은 피검체 집단에 기반하여 선택된다 (예컨대, 유아 또는 노인 또는 임신 여성). 특정 조성물에 대한 최적의 양은 피검체에서의 항체 역가 및 다른 반응의 관찰을 포함하는 표준 연구에 의해 판단될 수 있다. 초기 백신화 이후에, 피검체는 약 4-12주 후에 추가접종(boost)을 받을 수 있다 (또는, 모체 면역화의 경우, 아기의 분만 전에 언제든지, 유리하게는 예상 분만일보다 적어도 2주 전 또는 적어도 4주 전). 예를 들어, 면역원성 조성물을 유아 피검체에 투여할 때, 초기 및 후속 접종은 이러한 기간 동안 투여되는 다른 백신과 동시에 투여될 수 있다.
추가적인 제형 설명은 RSV F 단백질 유사체, 예컨대 PreF 유사체를 포함하는 면역원성 조성물의 제형에 관한 추가적인 설명을 제공할 목적으로 본원에 참조로서 포함되는 WO2010/149745호에서 찾아볼 수 있다.
특정 구체예에서, 기재된 조합 면역원성 조성물은 RSV 및 B. 퍼투시스 이외의 적어도 하나의 병원성 유기체로부터의 적어도 하나의 항원을 추가로 포함한다. 보다 특히, 상기 적어도 하나의 항원은 디프테리아 톡소이드 (D); 파상풍 톡소이드 (T); B형 간염 표면 항원 (HBsAg); 불활성화된 폴리오 바이러스 (IPV); 담체 단백질에 컨쥬게이션된 H. 인플루엔자(H. influenzae) 타입 b (Hib)의 캡슐 당류; 담체 단백질에 컨쥬게이션된 N. 메닌지티디스 타입 C의 캡슐 당류 (MenC); 담체 단백질에 컨쥬게이션된 N. 메닌지티디스 타입 Y의 캡슐 당류 (MenY); 담체 단백질에 컨쥬게이션된 N. 메닌지티디스 타입 A의 캡슐 당류 (MenA); 담체 단백질에 컨쥬게이션된 N. 메닌지티디스 타입 W의 캡슐 당류 (MenW); 및 N. 메닌지티디스 타입 B (MenB)로부터의 항원으로로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
D 및 T 및 및 예컨대 IPV, HBsAg, Hib 및 컨쥬게이션된 N. 메닌지티디스 캡슐 당류로부터 선택되는 다른 항원의 다양한 조합과 함께 B. 퍼투시스 항원 (Pa 또는 Pw)을 함유하는 조합 백신이, 예를 들어 Infanrix™ (예컨대 DTPa-IPV-HBsAg-Hib) 및 Boostrix™ (예컨대 dTpa) 제품으로서 당 분야에 널리 공지되어 있다. 이와 관련하여, DTPw-HepB-MenAC-Hib 조성물을 기재하고 있는 WO02/00249처럼, WO93/024148호, WO97/000697호 및 WO98/019702호가 참조로서 포함된다. 캡슐 당류 항원에 대한 적합한 담체 단백질은 당 분야에 공지되어 있고, 이는 T, D 및 D 유도체 CRM197을 포함한다.
특정 조합 면역원성 조성물은 적어도 하나의 RSV 항원 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원 외에: D 및 T; D, T 및 IPV; D, T 및 HBsAg; D, T 및 Hib; D, T, IPV 및 HBsAg; D, T, IPV 및 Hib; D, T, HBsAg 및 Hib; 또는 D, T, IPV, HBsAg 및 Hib를 포함한다.
특정 구체예에서, D는 용량 당 1-10 국제 단위 (IU) (예를 들어 정확히 또는 대략 2IU) 또는 10-40IU (예를 들어 정확히 또는 대략 20 또는 30IU) 또는 1-10 응집 한계 (Lf) 단위 (예를 들어 정확히 또는 대략 2 또는 2.5 또는 9Lf) 또는 10-30Lf (예를 들어 정확히 또는 대략 15 또는 25Lf)의 양으로 사용된다.
특정 구체예에서, T는 용량 당 10-30 IU (예를 들어 정확히 또는 대략 20IU) 또는 30-50IU (예를 들어 정확히 또는 대략 40IU) 또는 1-15Lf (예를 들어 정확히 또는 대략 5 또는 10Lf)의 양으로 사용된다.
예시적인 구체예에서, 조합 면역원성 조성물은 적어도 하나의 RSV 항원 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원 외에, 용량 당 개별적인 정확하거나 대략의 양으로서 30:40IU; 25:10Lf; 20:40IU; 15:5Lf; 2:20IU; 2.5:5Lf; 2:5Lf; 25:10Lf; 9:5Lf의 D ? T를 포함한다. 예를 들어, 그러한 조성물은 (적어도 하나의 RSV 항원 외에):
(i) 20-30ug, 예를 들어 정확히 또는 대략 25ug의 PT;
(ii) 20-30ug, 예를 들어 정확히 또는 대략 25ug의 FHA;
(iii) 1-10ug, 예를 들어 정확히 또는 대략 3 또는 8ug의 PRN;
(iv) 10-30Lf, 예를 들어 정확히 또는 대략 15 또는 25Lf의 D; 및
(v) 1-15Lf, 예를 들어 정확히 또는 대략 5 또는 10Lf의 T를 포함할 수 있다.
또 다른 예로서, 그러한 조성물은 (적어도 하나의 RSV 항원 외에):
(i) 2-10ug, 예를 들어 정확히 또는 대략 2.5 또는 8ug의 PT;
(ii) 2-10ug, 예를 들어 정확히 또는 대략 5 또는 8ug의 FHA;
(iii) 0.5-4ug, 예를 들어 2-3ug 예컨대 정확히 또는 대략 2.5 또는 3ug의 PRN;
(iv) 1-10Lf, 예를 들어 정확히 또는 대략 2 또는 2.5 또는 9Lf의 D; 및
(v) 1-15Lf, 예를 들어 정확히 또는 대략 5 또는 10Lf의 T를 포함할 수 있다.
면역원성 조성물은 추가적인 항원, 예컨대 또 다른 RSV 항원 (예컨대, WO2010/149745호에 기재된 G 단백질 항원) 또는 인간 메타뉴모바이러스 (hMPV) 항원, 또는 인플루엔자 항원, 또는 스트렙토코쿠스 또는 뉴모코쿠스로부터의 항원을 추가로 포함할 수 있다. WO2010/149743호는 RSV 항원과 조합될 수 있는 hMPV 항원의 예를 기재하며, 이는 hMPV 항원의 예를 제공할 목적으로 본원에 참조로서 포함된다.
본원에 기재된 모체 면역화 구체예는 근내, 비내, 또는 피부 투여를 포함하는, RSV 및 B. 퍼투시스 백신의 투여에 적합한 경로를 통해 수행된다. 유리하게는, 본원에 기재된 모체 면역화는 피부에서 수행되는데, 이는 항원이 피부의 진피 및/또는 표피로 도입되는 것을 의미한다 (예컨대, 피내). 특정 구체예에서, PreF 항원 또는 PostF 항원과 같은 F 단백질 유사체를 포함하는 재조합 RSV 항원 및/또는 무세포 B. 퍼투시스 단백질 또는 전세포 B. 퍼투시스를 포함하는 B. 퍼투시스 항원은 피부 또는 피내로 임신 여성에 전달된다. 특정 구체예에서, 면역원성 조성물은 피부 또는 피내 전달을 위해, 3D-MPL의 유무와 함께, 본원에 기재된 애쥬번트, 예를 들어 사포닌, 예컨대 QS21과 함께 제형화된다. 다른 구체예에서, 면역원성 조성물은 피부 또는 피내 전달을 위해, QS21 또는 3D-MPL과 같은 면역자극제의 유무와 함께, 미네랄 염, 예컨대 알루미늄 하이드록사이드 또는 알루미늄 포스페이트 또는 칼슘 포스페이트와 함께 제형화된다. B. 퍼투시스 항원은 전형적으로 알루미늄 염과 함께 제형화되고, 임의로 피부 또는 피내 경로에 의해 투여될 수 있다. 임의로, F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원은 피부 또는 피내 전달을 위해, QS21 또는 3D-MPL과 같은 면역자극제의 유무와 함께, 예컨대 미네랄 염, 예컨대 알루미늄 하이드록사이드 또는 알루미늄 포스페이트 또는 칼슘 포스페이트의 존재하에, 본원에 기재된 조합 면역원성 조성물로 공동 제형화된다.
피내 경로를 포함하는 피부 경로를 통한 전달은 근내 전달과 같은 다른 경로보다 낮은 용량의 항원을 요구하거나 허용할 수 있다. 따라서, 낮은 용량, 예컨대 정상 근내 용량 미만, 예컨대 정상 근내 용량의 50% 이하, 예를 들어 F 단백질 유사체의 인간 용량 당 50 μg 이하, 또는 20 μg 이하, 또는 10 μg 이하 또는 5 μg 이하의 적어도 하나의 RSV 항원 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원 및, 예를 들어, 1-10 μg의 PT, 1-10 μg의 FHA, 및 0.5-4 μg의 PRN (추가적인 항원성 성분이 있거나 없음)을 포함하는 피부 또는 피내 전달용 조합 면역원성 조성물이 또한 제공된다. 임의로 피부 또는 피내 전달을 위한 면역원성 조성물은 또한 애쥬번트, 예컨대 알루미늄 염 또는 QS21 또는 3D-MPL 또는 이의 조합물을 포함한다.
피부 투여를 위한 장치는 짧은 바늘 장치 (길이가 약 1 내지 약 2 mm인 바늘을 지님), 예컨대 US 4,886,499, US5,190,521, US5,328,483, US 5,527,288, US 4,270,537, US 5,015,235, US 5,141,496, US 5,417,662 및 EP1092444호에 기재된 것들을 포함한다. 피부 백신은 또한 피부에 바늘의 유효한 침투 길이를 제한하는 장치, 예컨대, 본원에 참조로서 포함되는 WO99/34850호에 기재된 것들, 및 이의 기능적 등가물에 의해 투여될 수 있다. 각질층을 관통하여 진피에 도달하는 제트(jet)를 생성하는 액체 분사기(jet injector) 또는 바늘을 통해 진피에 액체 백신을 전달하는 분사식 장치가 또한 적합하다. 분사식 장치는, 예를 들어 US 5,480,381, US 5,599,302, US 5,334,144, US 5,993,412, US 5,649,912, US 5,569,189,US 5,704,911, US 5,383,851, US 5,893,397, US 5,466,220, US 5,339,163, US5,312,335, US 5,503,627, US 5,064,413, US 5,520, 639, US 4,596,556US 5 4,790,824,US 4,941,880, US 4,940,460, WO 97/37705 및 WO 97/13537호에 기재되어 있다.
피부 투여용 장치는 또한 분말 형태의 백신을 피부의 외층을 통해 진피로 가속시키는 압축 가스를 이용하는 탄도 분말/입자 전달 장치를 포함한다. 추가로, 통상적인 주사기가 피부 투여의 고전적인 망투(mantoux) 방법으로 이용될 수 있다. 그러나, 통상적인 주사기의 사용은 고도로 숙련된 오퍼레이터를 필요로 하므로, 고도로 숙련된 사용자 없이 정확하게 전달할 수 있는 장치가 바람직하다. 피부 투여를 위한 추가적인 장치는 본원에 기재된 면역원성 조성물을 포함하는 패치를 포함한다. 피부 전달 패치는 일반적으로 고체 물질 (예컨대 밀봉 또는 밀봉되지 않은 외과 드레싱)을 포함하는 뒷받침(backing plate)을 포함할 것이다. 그러한 패치는 각질층을 관통하는 마이크로프로젝션(microprojection)을 통해 면역원성 조성물을 진피 또는 표피에 전달한다. 마이크로프로젝션은 일반적으로 10Dm 내지 2mm, 예를 들어 20Dm 내지 500Dm, 30Dm 내지 1mm, 100 내지 200, 200 내지 300, 300 내지 400, 400 내지 500, 500 내지 600, 600 내지 700, 700, 800, 800 내지 900, 100Dm 내지 400Dm, 특히 약 200Dm 내지 300Dm 또는 약 150Dm 내지 250Dm이다. 피부 전달 패치는 일반적으로 복수의 마이크로프로젝션, 예를 들어 2 내지 5000개의 미세침, 예를 들어 1000 내지 2000개의 미세침을 포함한다. 마이크로프로젝션은 각질층, 표피 및/또는 진피를 관통하기에 적합한 임의의 형상을 지닐 수 있다. 마이크로프로젝션은 예를 들어 WO2000/074765호 및 WO2000/074766호에 기재된 형상을 가질 수 있다. 마이크로프로젝션은 적어도 3:1, 적어도 약 2:1, 또는 적어도 약 1:1의 측면 비 (높이 대 기부에서의 직경)를 지닐 수 있다. 마이크로프로젝션에 적합한 한 형상은 다각형 바닥, 예를 들어 육각형 또는 마름모 모양을 갖는 원뿔이다. 다른 가능한 마이크로프로젝션 형상은, 예를 들어, 미국 공개특허 출원 2004/0087992호에 도시된다. 특정 구체예에서, 마이크로프로젝션은 기부를 향해 더 두꺼워지는 형상을 갖는다. 어레이의 마이크로돌기(microprotrusion)의 수는 전형적으로 적어도 약 100개, 적어도 약 500개, 적어도 약 1000개, 적어도 약 1400개, 적어도 약 1600개, 또는 적어도 약 2000개이다. 작은 크기가 제공된 경우, 마이크로돌기의 면적 밀도는 특별히 높지 않을 수 있으나, 예를 들어 cm2 당 마이크로돌기의 수는 적어도 약 50개, 적어도 약 250개, 적어도 약 500개, 적어도 약 750개, 적어도 약 1000개, 또는 적어도 약 1500개일 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 조합 면역원성 조성물은 숙주의 피부에 패치를 배치한 지 5시간 내에, 예를 들어, 4시간, 3시간, 2시간, 1시간 또는 30분 내에 피검체에 전달된다. 특정 구체예에서, 조합 면역원성 조성물은 피부에 패치를 배치한 지 20분 내에, 예를 들어 30초, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 또는 19분 내에 전달된다.
마이크로프로젝션은 당업자에게 공지된 임의의 적합한 물질로 제조될 수 있다. 특정 구체예에서, 마이크로프로젝션의 적어도 일부, 특히 마이크로프로젝션의 끝 또는 마이크로프로젝션의 최외층은 생분해성이다. 특정 구체예에서, 실질적으로 모든 마이크로프로젝션은 생분해성이다. 본원에서 사용되는 용어 "생분해성"은 생분해의 메카니즘과 무관하게, 생체내 사용의 예상된 조건하에 분해될 수 있음을 의미한다 (예컨대, 피부로의 삽입). 예시적인 생분해 메카니즘은 붕해, 분산, 용해, 부식, 가수분해, 및 효소 분해를 포함한다.
항원을 포함하는 마이크로프로젝션의 예는 WO2008/130587호 및 WO2009/048607호에 기재되어 있다. 대사작용성 미세침의 제조 방법은 WO2008/130587호 및 WO2010/124255호에 기재되어 있다. 마이크로프로젝션을 항원으로 코팅하는 것은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 WO06/055844호, WO06/055799호에 기재된 방법에 의해 수행될 수 있다.
본원에 기재된 방법 및 용도에서, 피내 전달을 포함하는 피부 전달을 위한 적합한 전달 장치는 피내 투여용 미세침 장치인 BD Soluvia™ 장치, Corium MicroCor™ 패치 전달 시스템, Georgia Tech 미세침 백신 패치, 나노패스 미세침 전달 장치 및 Debiotech Nanoject™ 미세침 장치를 포함한다. 임의로 애쥬번트, 예컨대 미네랄 염, 예컨대 알룸, 또는 QS21, 또는 3D-MPL 또는 이의 조합물과 제형화된, 본원에 기재된 조합 면역원성 조성물을 함유하는 피부 또는 피내 전달 장치가 또한 제공된다.
면역학적 유효량의 조합 면역원성 조성물을 피검체에 투여하는 것을 포함하는, RSV 및 B. 퍼투시스에 대한 면역 반응을 유도하는 기재된 방법과 관련하여, RSV 및 B. 퍼투시스에 대해 유도된 면역 반응은 바람직하게는 RSV 및 B. 퍼투시스에 의한 감염의 발생을 감소시키거나 막거나, 그 중증도를 감소시키고/거나 RSV 및 B. 퍼투시스로의 감염 이후 병리학적 반응의 발생을 감소시키거나 막거나, 그 중증도를 감소시키는 보호성 면역 반응을 포함한다. 상기 유도된 면역 반응은 부스터(booster) 반응일 수 있다. 더욱이, 기재된 조합 면역원성 조성물은 RSV와의 접촉 후 바이러스 질병을 증가시키지 않으며 이를 달성한다.
조합 면역원성 조성물은 항원을 상기도의 점막과 접촉하도록 직접 배치시키는 경로, 예컨대 비내를 포함하는 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 대안적으로, 근내 투여 경로와 같은 더욱 전통적인 투여 경로가 이용될 수 있다.
따라서, 조합 면역원성 조성물은 본원에서 의약으로 사용하기 위해, 그리고 RSV 및 B. 퍼투시스에 의한 감염, 또는 이와 관련된 질병을 인간 피검체에서 예방 또는 치료하기 위해 고려된다. 다른 병원체로부터의 항원을 함유하는 특정 구체예에서, 그러한 예방 및 치료는 상기 다른 병원체까지 확장될 것이다.
상기 방법 및 용도의 특정 구체예에서, 피검체는 인간 피검체이다. 상기 인간 피검체는 신생아; 유아; 소아; 청소년; 성인; 및 노인의 군으로부터 선택될 수 있다. 피검체는 재태 영아를 가진 임신 여성일 수 있다. 대안적으로, 피검체는 임신 여성이 아닐 수 있다. 피검체가 신생아인 경우, 조합 면역원성 조성물의 투여는 출생 1일 내, 또는 1주일 내, 또는 1개월 내에 이루어질 수 있다.
바람직한 구체예에서, 피검체 (바람직하게는 인간)에게 조합 면역원성 조성물은 단일-투여 요법으로서, 즉, 소정의 일련의 용량들의 일부가 아닌 단독(stand-alone) 용량으로서 투여된다. 상기 용량은, 예를 들어 면역화 스케쥴, 예컨대 소아 면역화 스케쥴의 일부로서, 다른 백신과 동시에 제공될 수 있다. 비록 그러한 단일-용량 구체예에서, 피검체는 피검체의 수명 전반에 걸쳐 하나를 초과하는 용량의 조성물을 수용할 수 있지만, 각각의 이러한 용량은 요망되는 수준의 보호를 달성하기 위해 필요한 것으로 여겨지는 어떤 계획된 추가 용량의 부재하에 투여된다는 의미에서 단독이며 "단일"한 것이다. 한 구체예에서, 조합 면역원성 조성물은 10년, 유리하게는 5년의 기간 내에 단 1회 단일-투여 요법으로서 피검체에 투여된다. 한 구체예에서, 피검체는 10세 내지 18세의 청년기 인간이고, 조합 면역원성 조성물은 단 1회, 즉 단일-투여 요법으로서 투여된다. 다른 구체예에서, 피검체는 임신한 인간 여성이고, 조합 면역원성 조성물은 임신 중 단 1회 투여되며, 즉, 임신 여성은 한 번의 임신 동안 단지 단일 용량의 조성물을 수용한다.
모체 면역화
RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 질병에 대해 영아를 보호하는 안전하고 효과적인 백신의 개발에서의 특정 과제는 매우 영아에서의 가장 높은 발생율 및 가장 큰 이환율 및 사망률에 있다. 영아, 특히 조산아는 미성숙한 면역 시스템을 가질 수 있다. 따라서, RSV 및 B. 퍼투시스 (백일해) 질병으로부터 영아를 보호하는 것은 중요하다. 또한 초기 유아기에서의 백신화가 충분히 효과적일 수 없게 하고, 예컨대 충분히 보호성인 중화성 항체 반응을 유도할 수 없게 하는, 영아의 백신화와 태반을 통해 영아에게 전달된 항체 ("모체 항체")와의 간섭에 대한 가능성이 있다.
한 양태에서, 본 발명은 RSV F 단백질의 유사체 및 무세포 또는 전세포 B. 퍼투시스 항원(들)을 포함하는 안전하고 효과적인 면역원성 조성물(들)로 임신 여성을 능동 면역시킴에 의해, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 질병으로부터 영아를 보호하기에 적합한 면역원성 조성물의 백신화 요법, 방법 및 용도 및 키트에 관한 것이다. F 단백질 유사체는 유리하게는 RSV로의 자연 노출 (또는 이에 대한 이전 백신화)에 의해 이전에 프라이밍된 체액성 반응의 크기를 부스팅하거나 증가시킴에 의해 항체 (예컨대, 중화성 항체)를 유도한다. 유사하게, B. 퍼투시스 항원은 B. 퍼투시스로의 자연 노출, 또는 이에 대한 이전 백신화에 의해 미리 프라이밍된 체액성 반응의 크기를 부스팅하거나 증가시킴에 의해 항체를 유도한다. F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원에 반응하여 생성된 항체는 태반을 통해 재태 영아에 전달되어, 출생 후 영아의 수동 면역학적 보호를 발생시키고 RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기된 감염 및 심각한 질병에 대해 중요한 기간 동안 지속된다 (예컨대, 영아 백신화가 완전히 보호성이 되기 전). 전형적으로, 이러한 방법에 의해 부여된 수동 면역학적 보호는 출생부터 적어도 2개월까지, 예를 들어 최대 약 6개월, 또는 심지어 더 길게도 지속된다.
그러한 모든 조성물은 강력한 항체 반응 (예컨대, 중화성 항체)을 유도하도록 설계된다. 임신한 모체는 전형적으로 일생 동안 RSV에 1회 이상 노출된 후, 이들은 RSV에 대한 기존의 프라이밍된 반응을 갖는다. 성인까지 RSV 감염에 노출되는 집단의 비율은 실질적으로 100%이다. 백일해에 대해 보호하고 예방하도록 설계된 소아 면역화 프로그램은 광범하다. 그러나, 광범한 면역화에도 불구하고, B. 퍼투시스에 의한 자연 감염도 흔하다. 따라서, B. 퍼투시스에 대한 프라이밍은 또한 광범하다. 따라서, 출생 직후 및 이어지는 중요한 처음 몇 개월 동안 RSV 및 B. 퍼투시스로부터의 보호를 유아에 제공하는 것은 모체에서 RSV 및 B. 퍼투시스에 대해, 그리고 유리하게는 태반을 가로질러 유아에 보호를 제공할 수 있는 특정 항체 서브부류 (서브타입), 예컨대 IgG1에 관해, 혈청 항체 반응 (수준)을 가능한 한 효과적으로 증가시키기 위해 이러한 프라이밍된 반응을 부스팅함에 의해 달성될 수 있다. 한 구체예에서, 본원에 사용하기 위한 면역원성 조성물은 애쥬번트를 포함하지 않거나, 강력한 IgG1 반응에 유리한 애쥬번트, 예컨대 미네랄 염, 예컨대 알루미늄 염, 특히 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포스페이트, 또는 칼슘 포스페이트를 포함한다. 따라서, 특정 구체예에서, 모체 면역화에 사용되는 면역원성 조성물은 유리하게는 미네랄 염, 유리하게는 알룸과 제형화된다. 대안적인 구체예에서, 강력한 IgG1 반응에 유리한 애쥬번트는 수중유 에멀젼, 또는 사포닌, 예컨대 QS21 (또는 탈독화된 이의 형태)이다.
임신 여성은 인간 여성일 수 있고, 이에 따라, 유아 또는 재태 영아는 인간 유아일 수 있다. 임신한 인간 여성의 경우, 태아의 임신 주수는 마지막 생리 기간의 시작으로부터 측정된다. 수정후 주수는 마지막 생리 기간의 시작 후 14일로부터 측정된다. 따라서, 임신한 인간 여성이 수정후 24주라고 한다면, 이는 마지막 생리 기간의 시작 후 26주, 또는 임신 26주와 같을 것이다. 임신이 보조 생식 기술에 의해 달성되었다면, 태아의 임신 단계는 수정일 2주 전으로부터 계산된다.
본원에서 사용되는 용어 "재태 영아"는 태아 또는 임신 여성의 발생 태아를 의미한다. 용어 "재태 기간"은 임신 주수, 즉 마지막 생리 기간의 시작 이후 주수를 의미하기 위해 사용된다. 인간 임신은 전형적으로 마지막 생리 기간의 시작으로부터 약 40주이고, 편의상 3개월로 나눌 수 있는데, 첫 번째 3개월은 마지막 생리 기간의 첫째 날로부터 임신 13주까지 연장되고; 두 번째 3개월은 임신 14주부터 27주에 이르며, 세 번째 3개월은 28주에서 시작하여 출생까지 연장된다. 따라서, 세 번째 3개월은 수정후 26주에서 시작하여 아기의 탄생에 이르기까지 계속된다.
인간을 언급할 때 용어 "영아"는 0 내지 2세이다. 본원에 기재된 방법 및 용도에 의해 제공된 보호는 잠재적으로 영아에서 2세 내지 11세의 어린시절, 또는 유아기, 예를 들어 2세 내지 5세, 또는 심지어 12세 내지 18세의 청소년기까지 보호를 제공할 수 있다. 그러나, 개체가 심각한 RSV 및 백일해의 합병증에 가장 취약한 기간은 유아기 동안이며, 특히 출생부터 약 6개월까지이다.
인간 유아는, 특히 임신 35주 전과 같이 미숙하게 태어난 경우, 발생한 면역 시스템이 동일한 병원체에 반응하여 수행될 수 있는 방식으로 면역 시스템이 병원체에 의해 야기된 감염 또는 질병을 예방할 수 있는 면역 반응을 탑재하도록 충분히 잘 발달될 수 없을 때, 일생의 처음 몇 달 동안 면역학적으로 미성숙할 수 있다. 면역학적으로 미성숙한 유아는 잘 발달되거나 성숙한 면역 시스템을 지닌 유아에 비해 병원체에 의해 야기되는 감염 및 질병에 더 굴복하기 쉽다. 인간 유아는 또한 생리학적 및 발달상의 이유로, 예를 들어 기도가 작고 소아 및 성인에 비해 덜 발달되거나 덜 성숙할 수 있으므로, 일생의 처음 몇 개월 동안 LRTI (폐렴 포함)에 증가된 취약성을 지닐 수 있다. 이러한 이유로, 본원에서 유아기의 처음 6개월을 언급할 때, 이는 40주 미만 또는 38주 미만 또는 35주 미만의 재태 기간에서의 손실된 시간의 양에 따라 미성숙 또는 미숙아에 대해 연장될 수 있다.
대안적인 구체예에서, 임신 여성 및 이의 유아는 임의의 종, 예컨대 "피검체"라고 상기 기재된 종에서 비롯될 수 있다. 임신한 동물, 예컨대 임신한 기니 피그 또는 암소의 경우, 수정후 시간은 교배 이후의 시간으로 측정된다. 인간 및 일부 동물, 예를 들어 기니 피그에서, 항체는 태반을 통해 모체에서 태아로 전달된다. 일부 항체 아이소형은 태반을 통해 우선적으로 운반될 수 있고, 예를 들어 인간에서 IgG1 항체는 태반을 통해 가장 효율적으로 전달되는 아이소형이다. 비록 서브부류가 실험 동물, 예컨대 기니 피그 및 마우스에 존재하지만, 다양한 서브부류가 반드시 동일한 기능을 제공하는 것은 아니며, 인간 및 동물의 서브부류들 간의 직접적인 상관관계는 쉽게 만들어질 수 없다.
유리하게는, 감염을 억제하고 RSV 및 B. 퍼투시스 질병의 발생 또는 중증도를 감소시킴에 의해 유아를 보호하는 것은, 예컨대, 유아가 임신 약 40주 또는 그 후에 분만된 열 달을 채운 유아인 경우, 적어도 신생아 기간 및 매우 영아기, 예를 들어 출생 후 수명의 적어도 처음 몇 주, 예컨대 출생으로부터 처음 1개월, 또는 처음 2개월, 또는 처음 3개월, 또는 처음 4개월, 또는 처음 5개월, 또는 출생으로부터 처음 6개월, 또는 그보다 긴 기간을 포함한다. 처음 몇 개월 후, 유아가 심각한 RSV 및 백일해의 효과에 덜 취약해졌을 때, RSV 및 B. 퍼투시스 감염에 대한 보호는 약해질 수 있다. 따라서, 필요한 보호는 이것이 가장 필요한 기간 동안 제공된다. 미숙아의 경우, 유리하게는 보호는 출생으로부터 더 긴 기간 동안, 예를 들어 영아의 출생과 임신 35주였을 때 출생 (즉, 약 추가 5주만큼), 또는 임신 38주였을 때 (약 추가 2주만큼) 출생의 시간 간격과 적어도 동등한 추가적인 시간 간격 동안, 또는 출생시 유아의 재태 기간에 따라 더 길게 제공된다.
유아를 보호하는 것이 반드시 RSV 또는 B. 퍼투시스에 의한 감염에 대한 100% 보호를 의미하는 것은 아님이 명백할 것이다. 감염 또는 질병의 발생 또는 중증도의 감소가 존재하는 경우, 보호가 제공된 것으로 인지될 것이다. 유아를 보호하는 것은 유리하게는 유아를 RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 심각한 질병 및 입원으로부터 보호하는 것을 포함한다. 이와 같이, 본원에 기재된 조성물 및 방법은 RSV에 의해 야기된 질병, 예컨대 하기도 감염 (LRTI), 폐렴 또는 다른 증상 또는 질병, 및 B. 퍼투시스의 발생 또는 중증도를 감소시킨다. 예를 들어, RSV에 관해, 본원에 기재된 면역원성 조성물의 투여는 LRTI의 발생 (백신화된 모체의 유아의 코호트에서)을 백신화되지 않은 모체의 유아에 비해 적어도 약 50% 만큼, 또는 적어도 약 60% 만큼, 또는 60 내지 70% 만큼, 또는 적어도 약 70% 만큼, 또는 적어도 약 80% 만큼, 또는 적어도 약 90% 만큼 감소시킬 수 있다. 유리하게는, 그러한 투여는 LRTI의 중증도를 백신화되지 않은 모체의 감염된 유아에 비해 적어도 약 50% 만큼, 또는 적어도 약 60% 만큼, 또는 60 내지 70% 만큼, 또는 적어도 약 70% 만큼, 또는 적어도 약 80% 만큼, 또는 적어도 약 90% 만큼 감소시킨다. 유리하게는, 그러한 투여는 상기 코호트에서 심각한 RSV 질병으로 인한 입원 요구를 백신화되지 않은 모체의 감염된 유아에 비해 적어도 약 50% 만큼, 또는 적어도 약 60% 만큼, 또는 60 내지 70% 만큼, 또는 적어도 약 70% 만큼, 또는 적어도 약 80% 만큼, 또는 적어도 약 90% 만큼 감소시킨다. 심각한 LRTI로 인해 입원이 필요하다고 고려될 지 여부, 또는 LRTI의 특정 병증의 입원 여부는 나라마다 다를 수 있으므로, 당 분야에 널리 공지된 규정된 임상적 증상에 따라 판단되는 심각한 LRTI는 입원 필요성보다 더 양호한 척도일 수 있다. B. 퍼투시스에 관해, 본원에 기재된 무세포 또는 전세포 백일해 항원을 함유하는 면역원성 조성물의 투여는 심각한 질병 (예컨대, 폐렴 및/또는 호흡 곤란 및 부전)의 발생 (백신화된 모체의 유아의 코호트에서)을 백신화되지 않은 모체의 유아에 비해 적어도 약 50% 만큼, 또는 적어도 약 60% 만큼, 또는 60 내지 70% 만큼, 또는 적어도 약 70% 만큼, 또는 적어도 약 80% 만큼, 또는 적어도 약 90% 만큼 감소시킬 수 있다. 유리하게는, 상기 투여는 폐렴의 중증도를 백신화되지 않은 모체의 감염된 유아에 비해 적어도 약 50% 만큼, 또는 적어도 약 60% 만큼, 또는 60 내지 70% 만큼, 또는 적어도 약 70% 만큼, 또는 적어도 약 80% 만큼, 또는 적어도 약 90% 만큼 감소시킨다. 유리하게는, 상기 투여는 백일해의 심각한 합병증으로 인한 입원 필요성을 그러한 코호트에서 백신화되지 않은 모체의 감염된 유아에 비해 적어도 약 50% 만큼, 또는 적어도 약 60% 만큼, 또는 60 내지 70% 만큼, 또는 적어도 약 70% 만큼, 또는 적어도 약 80% 만큼, 또는 적어도 약 90% 만큼 감소시킨다.
전형적으로, 백신화 요법, 방법, 용도 및 키트에 따르면, 유리한 효과 (특히 조산 위험이 증가된 임신)는 세 번째 3개월의 시작 이전에 얻어질 수 있으나, F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원은 임신 (재태)의 세 번째 3개월 동안 임신 여성에 투여된다. 모체 면역화의 시점은 모체 항체의 생성 및 태아로의 모체 항체의 전달을 허용하도록 설계된다. 따라서, 유리하게는, 면역화와 출생 사이에 태반을 통한 모체 항체의 최적 전달을 허용하기에 충분한 시간이 경과한다. 항체 전달은 일반적으로 약 임신 25주에 인간에서 시작하여, 28주까지 증가하며 약 임신 30주에 최적이 되어 유지된다. 태아로의 RSV F 단백질 및 B. 퍼투시스 항원 (예컨대, 백일해 톡소이드 (PT), 실모양 헤마글루티닌 (FHA), 퍼탁틴 (PRN), 핌브라 타입 2 (FIM2), 핌브라 타입 3 (FIM3) 및 BrkA, 또는 전세포 백일해 항원 중 하나 이상 포함)에 대한 모체 항체의 효과적인 전달을 허용하기 위해, 본원에 기재된 모체 면역화와 출생 사이에 최소 약 2 내지 4주가 필요한 것으로 여겨진다. 따라서, 모체 면역화는 임신 25주 후 임의의 시간 (마지막 생리 기간의 시작으로부터 측정됨), 예를 들어 임신 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34주 또는 그 후 (수정후 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36주), 또는 임신 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31 또는 30주 또는 그 전 (수정후 36, 35, 34, 33, 32, 31, 29 또는 28주)에 이루어질 수 있다. 유리하게는, 모체 면역화는 임신 26주 내지 38주, 예컨대 28주 내지 34주에 수행된다.
유리하게는, 모체 면역화는 아기의 예상 분만일의 적어도 2주 또는 적어도 3주 또는 적어도 4주 또는 적어도 5주 또는 적어도 6주 전에 수행된다. 투여 시점은 항체의 생성 및 태아로의 전달에 충분한 시간을 제공하기 위해, 조산의 위험이 있는 임신 여성의 경우 조정되어야 할 수 있다.
유리하게는, 단일 용량 (또는 각각의 단일 용량들)의 RSV F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원(들) 또는 이의 제형은 개시된 기간 동안 임신 여성에 투여된다. 본원에 기재된 RSV 및 B. 퍼투시스에 대한 모체 면역화는, 예컨대, 자연 노출 또는 백신화에 의해, 이전에 프라이밍된 RSV 및 B. 퍼투시스에 대한 면역 반응을 증가시키는 RSV 및 B. 퍼투시스에 대한 기존의 모체 면역성에 대한 "부스터"로서 고려될 수 있다. 따라서, 단 1회 용량만이 요구될 것으로 예상된다. 따라서, 특히 RSV 항원성 성분 (예컨대, 재조합 단백질, 예컨대 F 단백질 유사체) 및 B. 퍼투시스 항원성 성분이 단일 (즉, 조합) 면역원성 조성물로 공동-제형화될 때, 본원에 기재된 요법, 방법 및 용도의 바람직한 구체예에서, RSV F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원은 단일-용량 (또는 개별적으로 단일 용량들) 요법으로서 투여된다. 다시 말해, 한 번의 임신 동안 (임신의 에피소드) 임신 여성은 각각의 RSV F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원을 단 1회 투여받으며, 이는 조합 면역원성 조성물로 공동-제형화될 때, 상기 조성물은 임신 동안 단 1회 제공됨을 의미한다. 제 2 용량이 투여되는 경우, 이는 또한 유리하게는 제 1 용량에 대한 투여용 기간 내이며, 유리하게는 제 1 및 제 2 용량 사이에 시간 간격, 예를 들어 1 내지 8주 또는 2 내지 6주, 예를 들어 2주 또는 4주 또는 6주의 시간 간격을 가진다.
임신 여성으로의 RSV F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원의 투여는 모체 항체 역가의 부스팅, 예를 들어, 바람직하게는 IgG1 서브부류의 혈청 (예컨대, 중화성) 항체 역가의 증가를 발생시킨다. 모체에서의 증가된 항체 역가는 중화성 효과기 기능을 갖는 RSV-특이적 및 B. 퍼투시스-특이적 항체를 Fc 수용체에 의해 매개되는 능동 전송 메카니즘을 통해, 예컨대, 융모막 융모의 융합영양막에서, 태반을 가로질러 재태 영아에 수동 전달시킨다. 본원에 기재된 면역화 방법에서 비롯된 태반을 가로지르는 RSV-특이적 및 B. 퍼투시스-특이적 IgG1 항체의 전달은 효율적이며, 제 기간 또는 제 기간에 가깝게 태어난 영아에서, 모체 순환에서의 역가에 가깝거나, 이와 동등하거나 이를 초과하는 역가를 발생시킬 것으로 예상된다. 예를 들어, RSV-특이적 항체의 역가는 유리하게는 출생시 적어도 30 μg/mL의 수준이다. 전형적으로, 역가는 이러한 수준이거나 그 초과, 예컨대 40 μg/mL, 50 μg/mL, 60 μg/mL, 또는 심지어 더 높거나, 예컨대 75 μg/mL, 80 μg/mL, 90 μg/mL, 100 μg/mL, 또는 만삭 임신으로 건강하게 태어난 영아에서 심지어 최대 120 μg/mL 또는 그 초과일 수 있다. 이러한 수치는 개체 기준 또는 집단 평균 기준일 수 있다. 유리하게는, 출생시 관찰된 항체의 수준은 언급된 임계 이상이며 출생 후 수 개월 동안 지속된다.
백일해- (예컨대, PT-) 특이적 항체의 역가는 전형적으로, 예컨대, 참조로서 포함되는 문헌[Meade et al., "Description and evaluation of serologic assays used in a multicenter trial of acellular pertussis vaccines", Pediatrics (1995) 96:570-5]에 기재된 대로, ELISA 단위/ml (EU)에 관해 ELISA에 의해 측정된다. 간단히 말해, 예를 들어, 미세역가 플레이트 (예컨대, Immulon 2, VWR International, West Chester, PA, USA)를 표준 양의 PT, FHA, FIM 또는 PRN으로 코팅한다. 혈청의 연속 희석액을 약 2시간 동안 28℃에서 인큐베이션하고 알칼리 포스파타제-컨쥬게이션된 염소 항-인간 IgG의 적절한 희석액을 첨가한다. 반응액을 현상하고 405nm에서 판독한다. 각각의 특이적 항체의 검출 하한은 각각의 항원에 대한 연속 희석된 참조 물질의 다수의 측정에 의해 결정되고 PT, FHA 및 PRN의 경우 1 ELISA 단위 (EU), 및 FIM의 경우 2 EU로 설정된다. 유리하게는, 본원에 기재된 백신화 요법, 방법, 용도에 따르거나 키트에 함유된 백일해 항원을 포함하는 면역원성 조성물의 투여 후, 백일해-특이적 항체 역가는 출생시 적어도 10 EU의 수준이다. 전형적으로, 상기 역가는 이러한 수준이거나 그 초과, 예컨대 20 EU, 30 EU, 40 EU, 50 EU, 60 EU, 70 EU, 80 EU, 90 EU 또는 100 EU 또는 그 초과일 수 있다. 이러한 수치는 개체 기준 또는 집단 평균 기준일 수 있다. 유리하게는, 출생시 관찰된 항체의 수준은 언급된 임계 이상이며 출생 후 수 개월 동안 지속된다.
전달된 항-RSV 항체의 효과기 기능, 예컨대, 중화 능력 (중화 역가)이 또한 평가될 수 있고, 보호와 관련된 항체의 기능적 특성의 척도를 제공한다. 예를 들어, RSV의 경우, RSV 바이러스를 복제할 수 있는 특수한 양 및 혈청의 규정된 희석액을 혼합하고 배양시킨다. 그 후 바이러스-혈청 반응 혼합물이 바이러스 복제를 허용하는 숙주 세포 (예컨대, HEp-2 세포)로 운반되고 세포 성장 및 바이러스 복제에 적합한 기간과 조건하에 인큐베이션된다. 비-중화된 바이러스는 숙주 세포를 감염시키고 숙주 세포에서 복제될 수 있다. 이는 형광색소-태깅된 항-RSV 항체를 이용하여 검출될 수 있는 세포 단층 상에서 주어진 수의 플라크 형성 단위 (PFU)의 형성으로 이어진다. 중화 역가는 혈청 없이, 바이러스 단독에 감염된 세포 단층에 비해 PFU에 있어서 명시된 수준의 억제 (예컨대, 50% 억제 또는 60% 억제)를 유도하는 혈청 희석율을 계산함에 의해 결정된다. 예를 들어, 팔리비주맙 항체는 RSV 항원의 검출을 미처리된 바이러스-감염된 세포에 비해 50% 만큼 감소시키는데 요구되는 항체 농도로서 표시되는 중화 역가 (50% 유효 농도 [EC50])가 각각 임상 RSV A 및 RSV B 단리물에 대해 mL 당 0.65 μg (mL 당 평균 0.75 ± 0.53 μg; n=69, mL 당 0.07-2.89 μg 범위) 및 mL 당 0.28 μg (mL 당 평균 0.35 ± 0.23 μg; n=35, mL 당 0.03-0.88 μg 범위)인 것으로 밝혀졌다. 따라서, 특정 구체예에서, 태반을 통해 재태 영아에 전달된 항체의 중화 역가는 출생 후 유아에서 측정될 수 있고 RSV A 균주에 대해 적어도 약 0.50 μg/mL (예를 들어, 적어도 약 0.65 μg/mL), 또는 그 초과의 EC50 및 RSV B 균주에 대해 적어도 약 0.3 μg/mL (예를 들어, 적어도 약 0.35 μg/mL), 또는 그 초과의 EC50 (집단 평균 기준으로)을 갖는다. 유리하게는, 중화 항체 역가는 출생 후 수 주 내지 수 개월 동안 언급된 임계 이상으로 유지된다.
백일해 독소에 특이적인 항체의 독소-중화 효과기 기능은 또한 요망시, 예를 들어 참조로서 포함되는 문헌[Gillenius et al., "The standardization of an assay for pertussis toxin and antitoxin in microplate culture of Chinese hamster ovary cells". J. Biol. Stand. (1985) 13:61-66]에 기재된 대로, 예컨대, 차이니스 햄스터 난소 (CHO) 세포 중화 검정에서 측정될 수 있다. 그러나, 이러한 검정에서의 중화 활성은 보호와 잘 관련되지 않는다.
임의로, 본원에 기재된 백신화 요법, 방법, 용도 및 키트에 따르면, 수동적으로 전달된 모체 항체가 보호를 제공하는 수명의 초기 몇 개월을 넘어 RSV 및 B. 퍼투시스에 대한 보호를 연장하기 위해, 유아는 RSV 및/또는 B. 퍼투시스에 특이적인 적응성 면역 반응을 유도하도록 능동적으로 면역될 수 있다. 그러한 유아의 능동 면역화는 RSV 항원 및/또는 B. 퍼투시스 항원을 함유하는 하나를 초과하는 조성물을 투여함에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, (하나 이상의) 조성물(들)은 항원에 의해 유도되는 면역 반응을 향상시키기 위해 임의로 애쥬번트와 제형화된 RSV F 단백질 유사체를 포함할 수 있다. 이전에 RSV에 노출되지 않았던 유아로의 투여를 위해, F 단백질 유사체는 Th1 사이토킨 프로파일을 나타내는 T 세포의 생성을 특징으로 하는 (또는 Th1 및 Th2 사이토킨 프로파일을 나타내는 T 세포의 균형을 특징으로 하는) 면역 반응을 유도하는 애쥬번트와 제형화될 수 있다. 유사하게는, 유아는, 임의로 다른 병원체에 대한 보호를 또한 제공하는 조합 백신으로서 투여될 수 있는 B. 퍼투시스 백신에 의해 능동적으로 면역될 수 있다.
대안적으로, RSV F 단백질 유사체 또는 다른 단백질 서브유닛 백신을 유아에게 투여하기보다, RSV에 대해 보호하는 적응성 면역 반응을 유도하는 조성물은 살아 있는 약독화 바이러스 백신, 또는 하나 이상의 RSV 항원 (예컨대 F 항원, G 항원, N 항원, 또는 M2 항원, 또는 이의 일부)을 인코딩하는 핵산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 핵산은 벡터, 예컨대 재조합 바이러스 벡터, 예를 들어, 아데노바이러스 벡터, 아데노-관련 바이러스 벡터, MVA 벡터, 홍역 벡터 등에 존재할 수 있다. 예시적인 바이러스 벡터는 하나 이상의 RSV 항원을 인코딩하는 바이러스 벡터를 함유하는 면역원성 조성물을 예시할 목적으로 본원에 포함되는 WO2012/089231호에 기재되어 있다. 대안적으로, 핵산은, 예컨대, 바이러스 레플리콘, 예컨대 알파바이러스 레플리콘 (예컨대, 바이러스 구조 단백질과 패키징된 바이러스 레플리콘 입자의 형태) 형태의 자기 복제성 핵산, 예컨대 자기-복제성 RNA일 수 있다. 그러한 자기-복제성 RNA 레플리콘의 예는 RSV 단백질을 인코딩하는 RNA 레플리콘 및 면역원성 조성물로서 이의 제형을 기재할 목적으로 본원에 참조로서 포함되는 WO2012/103361호에 기재되어 있다.
추가로 또는 대안적으로, B. 퍼투시스 항원을 함유하는 하나 이상의 조성물(들)은 유아에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 백일해 톡소이드 (PT), 실모양 헤마글루티닌 (FHA), 퍼탁틴 (PRN), 핌브라 타입 2 (FIM2), 핌브라 타입 3 (FIM3) 및 BrkA, 또는 이들의 조합 (예컨대, PT 및 FHA; PT, FHA 및 PRN; 또는 PT, FHA, PRN 및 FIM2와 FIM3 중 어느 하나 또는 둘 모두)로 구성된 군으로부터 선택되는 무세포 백일해 항원을 포함할 수 있고, 예를 들어 여기서 PT는 본원에 기재된 대로 화학적으로 또는 유전적으로 톡소이드화된다. 대안적으로, 조성물은 본원에 기재된 전세포 백일해 항원을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 백신화 요법, 방법 및 용도에 관해, RSV 항원성 성분 (예컨대, 재조합 단백질, 예컨대 F 단백질 유사체) 및 B. 퍼투시스 항원성 성분은 본원에 기재된 대로 단일 (즉, 조합) 면역원성 조성물로 공동-제형화될 수 있다. 대안적으로, RSV 항원성 성분 및 B. 퍼투시스 항원성 성분은 2개 (또는 초과)의 상이한 면역원성 조성물로 제형화되며, 이는, 예컨대, 각종 허가 및 권장 소아 면역화 스케쥴에 따라, 동일하거나 상이한 시간에 투여될 수 있고, 키트로 제공될 수 있다 (본원에 논의됨).
적응성 RSV 면역 반응 및/또는 적응성 B. 퍼투시스 면역 반응을 유도하는 조성물(들)이 임신 동안 본원에 기재된 RSV 및 B. 퍼투시스 면역화를 받은 모체에서 태어난 유아에 투여될 때, 조성물은 1회 이상 투여될 수 있다. 제 1 투여는 출생시 또는 출생시와 가깝게 (예컨대, 출생 당일 또는 출생 다음 날), 또는 출생 1주 내 또는 축생 약 2주 내에 이루어질 수 있다. 대안적으로, 제 1 투여는 출생 약 4주 후, 출생 약 6주 후, 출생 약 2개월 후, 출생 약 3개월 후, 출생 약 4개월 후, 또는 그 이후, 예컨대 출생 약 6개월 후, 출생 약 9개월 후, 또는 출생 약 12개월 후에 이루어질 수 있다. 예를 들어, B. 퍼투시스 항원 (예컨대, Pa 또는 Pw)을 함유하는 조성물의 경우, 출생 약 2, 4 및 6개월 후에 백신을 투여하는 것이 일반적이다 (추가 투여가 12-18개월 및 임의로, 4-7세에 후속된다). 따라서, 한 구체예에서, 본 발명은 RSV 및/또는 B. 퍼투시스에 특이적인 면역 반응을 유도하는 하나 이상의 조성물을, 그녀가 아이를 임신했던 시간 동안 F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원을 포함하는 면역원성 조성물(들)을 투여받았던 여성에서 태어난 유아에 투여함에 의해, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 질병으로부터 유아를 보호하는 방법을 제공한다. 유리하게는, 모체-전달된 RSV- 및 B. 퍼투시스-특이적 항체는 상기 유아에-투여된 조성물 중의 개개 항원에 대한 유아의 면역 반응의 억제 또는 이의 "둔감화(blunting)"를 매개하지 않는다.
상기 언급된 대로, 기재된 백신화 요법, 방법 및 용도에 사용하기 위한 면역원성 조성물은 본원에 기재된 RSV-B. 퍼투시스 조합 (공동 제형화된) 조성물일 수 있거나, F 단백질 유사체 및 B. 퍼투시스 항원을 별도로 제공하는 상이한 조성물일 수 있다. 그러한 '분리된' 조성물은 키트로서 제공될 수 있다. 이들은 같은 날 (공동-투여됨) 또는 다른 날에 투여될 수 있다.
기재된 백신화 요법, 방법 및 용도에서, 유아는 면역학적을 미성숙할 수 있다. 유아는 6개월 미만, 예컨대 2개월 미만, 예를 들어 1개월 미만, 예를 들어 신생아일 수 있다.
기재된 백신화 요법, 방법 및 용도에 관해 임신 여성에 투여되는 적어도 하나의 면역원성 조성물은, 한 구체예에서, 임신 26주 또는 이후에, 예컨대 임신 26주 내지 38주, 예를 들어 임신 28주 내지 34주에 투여될 수 있다.
그러한 백신화 요법, 방법 및 용도의 한 구체예에서, 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체는 출생시 유아의 혈청에서 30μg/mL 또는 그 초과의 수준으로 검출될 수 있고/거나 적어도 하나의 서브세트의 백일해-특이적 항체는 출생시 유아의 혈청에서 10 ELISA 단위/ml (EU) 또는 그 초과의 수준으로 검출될 수 있다.
특정 구체예에서, 그러한 백신화 요법, 방법 및 용도는 유아에서 RSV 및/또는 B. 퍼투시스에 대한 능동 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물을 유아에 투여하는 것을 추가로 포함한다. 능동 면역 반응이 RSV 및 B. 퍼투시스 둘 모두에 대해 프라이밍되거나 유도되는 경우, RSV에 대한 능동 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물 및 B. 퍼투시스에 대한 능동 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물은 동일한 조성물일 수 있거나 대안적으로 상이한 조성물일 수 있다. 후자의 경우에, 상이한 조성물은 같거나 다른 날에 투여될 수 있다. 유리하게는, 상기 적어도 하나의 면역원성 조성물에 의해 유아에서 프라이밍되거나 유도된 능동 면역 반응은 기재된 백신 요법, 방법 및 용도에 따라 임신 동안에 면역되지 않은 모체의 유아에서의 동일한 조성물(들)에 반응하여 생성된 능동 면역 반응으로부터, 임상적으로 유의한 정도까지 정량적으로 상이하지 않다.
유아에서 RSV 및/또는 B. 퍼투시스에 대한 능동 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물이 유아에 투여되는 기재된 백신화 요법, 방법 및 용도의 그러한 구체예에서, 유아에 투여된 적어도 하나의 조성물은 핵산, 재조합 바이러스 벡터 또는 바이러스 레플리콘 입자를 포함할 수 있고, 핵산, 재조합 바이러스 벡터 또는 바이러스 레플리콘 입자는 적어도 하나의 RSV 단백질 항원 또는 항원 유사체를 인코딩한다. 상기 적어도 하나의 조성물은 F 단백질 유사체를 포함하는 RSV 항원을 포함할 수 있다.
임신 여성에 투여하기 위해 제형화된 복수의 면역원성 조성물을 포함하는 키트로서, 키트가,
(a) RSV에 특이적인 체액성 면역 반응을 유도, 유발 또는 부스팅할 수 있는 F 단백질 유사체를 포함하는 제 1 면역원성 조성물; 및
(b) B. 퍼투시스에 특이적인 체액성 반응을 유도, 유발 또는 부스팅할 수 있는 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원을 포함하는 제 2 면역원성 조성물을 포함하고,
임신 여성에 투여시, 제 1 및 제 2 면역원성 조성물이 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및 적어도 하나의 서브세트의 B. 퍼투시스-특이적 항체를 유도, 유발 또는 부스팅하고, 항체는 태반을 통해 임신 여성의 재태 영아에 전달됨으로써, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하는, 키트가 본원에 기재된다. 바람직하게는, 키트의 개개 조성물이 임신 중 단 1회 임신 여성에 투여된다. 바꾸어 말해, 임신의 한 에피소드 동안, 임신 여성은 바람직하게는 단 1회 용량의 각각의 키트 조성물을 투여받는다.
그러한 키트에서, 제 1 면역원성 조성물의 F 단백질 유사체 및/또는 제 2 면역원성 조성물의 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원은 기재된 조합 면역원성 조성물의 개시와 관련하여 제공된 설명을 포함하는 본원에 기재된 바와 같을 수 있다. 한 구체예에서, 제 1 면역원성 조성물 및/또는 제 2 면역원성 조성물은 적어도 하나의 미리-충전된 주사기에 존재한다. 그러한 주사기는 이중-챔버 주사기일 수 있다.
하기 실시예는 어떤 특정한 기능 및/또는 구체예를 예시하기 위해 제공된다. 이러한 실시예는 개시된 특정한 기능 또는 구체예로 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어선 안 된다.
실시예
실시예 전반에 걸쳐 사용된 RSV 백신 (Pre-F)은 SEQ ID NO: 22에 상응하는 타입의 글리코실화-변경된 PreF 항원 즉, L112Q의 변경 및 NGS; NKS; NGT; 및 NKT로부터 선택된 SEQ ID NO:2의 위치 500-502에 상응하는 아미노산의 변경을 함유하는 PreF 항원을 포함하였다.
실시예 1 - 개념의 증명: 기니 피그 모델에서 RSV 모체 면역화
태반 구조로서 기니 피그 모델을 선택하였으며, IgG 전달은 전형적인 설치류 모델에 대한 경우에서 보다 인간의 경우에 더욱 근접하다 (문헌 [Pentsuk and van der Laan (2009) Birth Defects Research (part B) 86:328-344] 검토). 기니 피그의 비교적 긴 수태 기간 (68일)으로 인해 수태 동안 면역화 및 면역 반응 발생이 가능하다. 이들의 일생에 걸쳐 RSV에 노출되었으며 RSV에 대한 이미 존재하는 면역 반응을 지닌 임신한 여성의 RSV 면역 상태를 모방하기 위해, 기니 피그 암컷을 백신화 6주 또는 10주 전에 생 RSV로 프라이밍하였다 (도 2).
기니 피그 암컷 (N=5/군)을 백신화 6 또는 10주 전에 (대략 교배 시점 또는 교배 4주 전) 생 RSV 바이러스 (2.5 x 105 pfu)로 비강내 프라이밍시켰다. 2 군은 프라이밍하지 않은 채 두었다. 수태 암컷을 알루미늄 하이드록사이드와 조합된 10 μg의 PreF 항원으로 수태 시작 후 대략 6주에 면역화시켰다. 프라이밍되지 않은 한 군의 암컷에 PBS를 주입하였다. 항-RSV 결합 및 중화성 항체의 수준을 모니터링하기 위해 프라이밍 및 수태 기간에 걸쳐 혈청 샘플을 수집하였다.
새끼 (7- 내지 16-일령)는 1 x 107 pfu의 생 RSV로 비강내 자극하였다. 자극 4일 후, 폐를 수집하고 7개 엽으로 분리하였다. 7개 엽중 6개에서 바이러스를 적정하고 폐 그램 당 총 바이러스 입자를 계산하였다.
결과는 도 3 및 4의 그래프에 도시하였다.
기니 피그가 6주 전에 또는 10주 전에 프라이밍 되든지 간에 백신화 당일 (D70-75 - 백신화전)에는 유사한 수준의 항체가 관찰되었다. 프라이밍 후 14일 기준으로 플래토 역가에 도달하였다. 중화성 항체 역가는 플래토 도달 후 적어도 60일 동안 감소되지 않았다 따라서, 본 모델에서 두 시점 모두에서의 프라이밍은 동등하였으며, 인간에서 모체 감염을 모방하는데 적합하다.
기니 피그 새끼에 로딩된 폐 바이러스로부터의 결과 (도 3)는 비프라이밍/비백신화된 어미에서 태어난 새끼 대비, 프라이밍되고 백신화된 어미에서 태어난 새끼가 RSV 자극으로부터 보호되었음을 나타낸다. 이에 반해, 비프라이밍/비백신화된 어미에서 태어난 새끼는 RSV 자극으로부터 보호되지 않았다. 스테프 (Steff) 등 (Proof of concept of the efficacy of a maternal RSV, recombinant F protein, vaccine for protection of offspring in the guinea pig model - poster 114, RSV Vaccines for the World conference, Porto, Portugal, 14-16 October 2013)은 모체 면역화 후 기니 피그 새끼에서 보호성 항체 수준을 유도하는데 있어서 PreF 항원의 효능에 대한 추가적인 증거를 제공하였다.
실시예 2 - 조합 백신은 RSV에 의한 자극에 대해 보호한다.
본 실시예는 RSV (Pre-F) 및 B. 퍼투시스 항원 (PT, FHA 및 PRN)을 함유하는 조합 백신에 의해 유발되는 RSV에 대한 보호를 입증하였다. 조합된 Pa-RSV 백신의 2회 투여의 면역원성 (중화성 항체 역가)을 Balb/c 마우스 모델에서 평가하고, 이어서 비강내 RSV 자극하여 조합 백신의 효능을 측정하였다.
BALB/c 마우스 (n=14/군)의 군을 표 1에 제시된 제형으로 3-주 간격으로 2회 근육내 면역화시켰다.
표 1: RSV 자극 전에 투여된 백신 제형
Figure pct00001
모든 마우스로부터의 혈청을 0일 (1차 면역화 전), 21일 (2차 면역화 전) 및 35일 (2차 면역화 2주 후)에서 개별적으로 수집하고, 플라크 감소 검정법을 이용하여 RSV 중화성 항체의 존재에 대해 평가하였다. 간단하게는, 각 혈청의 연속 희석액을 20분 동안 33℃에서 RSV A Long (100 pfu/웰 표적화)과 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 바이러스-혈청 혼합물을 성장 배지 없이 Vero 세포로 미리 시딩된 플레이트에 옮겼다. 각각의 플레이트 상에, 한 컬럼의 세포를 단지 바이러스와만 인큐베이션시키고 (100% 감염성), 2개 웰은 바이러스 또는 혈청으로 처리하지 않았다 (세포 대조군). 플레이트를 2시간 동안 33℃에서 인큐베이션하고, 배지를 제거하고, 0.5% CMC (저점도 카르복시메틸셀룰로스)를 함유하는 RSV 배지를 모든 웰에 첨가하였다. 플레이트를 3일 동안 33℃에서 인큐베이션한 후 면역형광으로 염색하였다.
염색을 위해, 세포 단일층을 PBS로 세척하고, 1% 파라포름알데하이드로 고정시켰다. RSV-양성 세포를 시중의 염소 항-RSV 항혈청 이어서, FITC에 컨쥬게이션된 토끼 항-염소 IgG를 사용하여 검출하였다. 웰당 염색된 플라크의 수를 자동 이미징 시스템을 사용하여 계수하였다. 각 혈청의 중화성 항체 역가를 무혈청의 대조군과 비교하여 플라크 수의 60% 감소를 초래하는 혈청 희석의 역으로서 측정하였다 (ED60). 결과는 도 5A에 도시되어 있다.
Al(OH)3로 애쥬번트 처리된 PreF-기반 백신은 비강내 RSV 자극에 대해 마우스를 보호하며, 따라서 이러한 동물 모델은 폐에서 바이러스 제거를 매개하는 RSV 백신의 능력을 연구하는데 유용하다. 이어서, 단일 백신중의 B. 퍼투시스 (PT, FHA 및 PRN)와 RSV (PreF) 항원의 조합물을 비강내 RSV 자극 마우스 모델에서의 보호성 효능에 대해 평가하였다. 2차 백신 투여 2주 후에, 마우스를 50 μl (콧구멍 당 25 μL)의 생 RSV A Long 균주 (약 1.45x106 pfu/50 μl)의 점적 주입에 의해 자극하였다. 폐 바이러스 로딩의 평가를 위해 자극 후 4일째에 폐를 수집하였다. 자극 후 4일째에 마우스를 안락사시키고, 폐를 무균하에 획득하고, 개별적으로 무게 측정하고 균질화시켰다. 각 폐 균질물의 연속 희석액 (각 8개 복제)을 Vero 세포와 인큐베이션시키고, 시딩 후 6일째에 플라크를 함유하는 웰을 면역형광법에 의해 식별하였다. 바이러스 역가를 TCID50 계산을 위한 Spearman-Kaerber 방법을 이용하여 측정하고, 폐의 그램당으로 나타내었다. 이용된 통계 방법은 log10 값에 대한 분산분석법 (Analysis of Variance) (ANOVA 1)이다.
결과는 도 5B에 도시되어 있다. 예상되는 바와 같이, Al(OH)3와 조합된 2 μg의 PreF는 단독 Pa로 백신화된 마우스 (RSV 자극으로부터의 보호가 예상되지 않은 대조군)와 비교하여 폐에서 바이러스 제거를 효과적으로 증진시켰다. PreF 군의 14 마리중 단지 2마리의 동물만이 폐에서 검출가능한 수준의 RSV를 지녔으며, 나머지 12마리 동물에서는 RSV가 검출되지 않았다. Pa-RSV 조합 백신은 동등하게, 14마리 동물 중 단지 한 마리만 폐에서 검출가능한 수준의 RSV를 지니며, 나머지 13마리 동물에서는 RSV가 검출가능하지 않다는 점에 의해 입증되는 바와 같이 RSV 자극에 대해 마우스를 보호할 수 있다. 전반적으로, PreF + Al(OH)3 백신 또는 Pa 항원 + PreF + Al(OH)3으로 백신화된 동물은 단독 Pa로 백신화된 대조군 동물보다 현저하게 더 낮은 폐 바이러스 역가를 나타냈다 (P<0.001). 애쥬번트의 부재하에 Pa 항원 + PreF로 백신화된 군에서, 폐 바이러스 역가의 유의한 감소가 있었으나 (P<0.001), 바이러스가 모든 동물의 폐에서 정량화되었기 때문에 이 군의 동물은 RSV 자극으로부터 완전히 보호되지 않은 것으로 보인다.
자극 동물 모델을 사용하여, 본 발명자들은 Pa-RSV 조합 백신이 RSV 백신의 것에 필적하는 RSV에 대한 보호성 면역 반응을 유발시켰음을 관찰하였다. 이러한 면역 반응은 RSV 중화성 항체의 발생과 관련이 있었다.
실시예 3 - 조합 백신은 B. 퍼투시스에 의한 자극에 대해 보호한다.
본 실시예는 RSV (Pre-F) 및 B. 퍼투시스 항원 (PT, FHA 및 PRN)을 함유하는 조합 백신에 의해 유발된 보르다텔라 백일해에 대한 보호를 입증하였다. 조합된 Pa-RSV 백신의 2회 투여의 면역원성 (중화성 항체 역가)을 Balb/c 마우스 모델에서 평가하고, 이어서 감염성 B. 퍼투시스로 비강내 자극하여 조합 백신의 효능을 측정하였다.
BALB/c 마우스 (n=20/군)의 군을 표 2에 제시된 제형으로 3-주 간격으로 2회 피하로 면역화시켰다.
표 2: B. 퍼투시스 자극 전에 투여된 백신 제형
Figure pct00002
모든 마우스로부터의 혈청을 2차 면역화 후 7일째 (d28 - 자극 전의 날수)에 개별적으로 수집하고 항-PT, -FHA 및 -PRN IgG 항체의 존재에 대해 평가하였다. 간단하게는, 96-웰 플레이트를 탄산염-중탄산염 완충제 (50mM)중의 FHA (2 μg/ml), PT (2 μg/ml) 또는 PRN (6 μg/ml)으로 피복시키고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. PBS-BSA 1% 완충제로의 포화 단계 후, 마우스 혈청을 PBS-BSA 0.2% 트윈 0.05%에서 1/100으로 희석하고, 플레이트로부터의 웰에서 연속 희석하였다 (12회 희석, 단계 ½). 퍼옥시다제에 커플링된 항-마우스 IgG를 첨가하였다 (1/5000 희석). 퍼옥시다제 기질 (OPDA)의 첨가 후 비색 반응을 관찰하고, HCL 1M로 중단한 후 분광광도계 (파장: 490-620 nm)로 판독하였다. 각 플레이트에 첨가된 표준 물질 및 평가된 각 혈청에 있어서, 4-변수 산정 곡선을 OD와 희석 간의 관계에 맞추었다 (Softmaxpro). 이는 STD 역가로 나타내는 각 샘플 역가의 유도를 가능하게 한다. 백신에 의해 유발된 Pa 항원 (PT, FHA 및 PRN)에 특이적인 혈청학적 항체 반응은 Pa 백신에서 발견된 개별적인 항원에 대한 항체 반응을 유발할 수 있는 백신의 능력의 지표 (그러나, 결정적인 것은 아님)로 간주된다. 도 6A는 2번의 면역화 후 DTPa, 단독 Pa 및 Pa-RSV 조합물이 PT, FHA 및 PRN-특이적 IgG 반응을 증진시켰음을 보여준다. 비백신화된 또는 RSV-백신화된 마우스로부터의 혈청에서는 항원-특이적 항체가 검출되지 않았다 (데이타 미제시됨). 통계 분석은 DTPa (InfanrixTM) 및 Pa-RSV 조합물에 의해 유발된 항-PT 및 항-FHA 항체 반응들 간의 동등성을 입증하였다. 단독 Pa 및 Pa-RSV 조합 백신에 의해 유도된 항-PRN 특이적 항체의 양은 또한 통계적으로 동등하였으며, 이는 RSV 항원의 존재가 항-백일해 항체 반응의 유도를 간섭하지 않았음을 입증한다.
보호를 입증하기 위해, 부스터 후 1주째에, 마우스를 왼쪽 콧구멍에 50 μl의 박테리아 현탁액 (약 5x106 CFU/50 μl)을 점적 주입함으로써 자극하였다. 각 군의 5마리 마우스를 박테리아 자극 후 2시간째, 2일째, 5일째 및 8일째에 안락사시켰다. 폐를 무균하에 획득하고 개별적으로 균질화시켰다. 폐 박테리아 제거는 Bordet-Gengou 아가 플레이트에서 성장한 콜로니를 계수함으로써 측정하였다. 데이터는 각 수집 시간에 대한 각 처리군에서 폐당 콜로니-형성 단위체 (CFU - log10) 수의 평균에 따라 플롯팅하였다. 이용된 통계 방법은 이종의 분산 모델을 사용한 2 인자 (처리 및 일)를 갖는 log10 값에 대한 분산분석법 (ANOVA)이다.
이러한 모델에서, 무세포 B. 퍼투시스 백신 (Pa)은 박테리아로의 비강내 자극에 대해 마우스를 보호한다. 따라서, 이러한 동물 모델은 폐에서 박테리아 제거를 매개하는 B. 퍼투시스-기반 백신의 능력을 연구하는데 유용하다. 이어서, 단일 백신중의 B. 퍼투시스 (PT, FHA 및 PRN)와 RSV (Pre-F) 항원의 조합물을 비강내 자극 마우스 모델에서의 보호성 효능에 대해 평가하였다. 대표적인 결과는 도 6B에 도시되어 있다. 예상되는 바와 같이, 조절된 인간 투여 (1/4 용량의 시중의 DTPa 백신 InfanrixTM)는 비백신화되 마우스와 비교하여 박테리아 제거를 효과적으로 증진시켰다. Pa 단독 및 Pa-RSV 조합 백신 둘 모두는 또한, 보호성 면역 반응을 유발시킬 수 있었으며 이는 박테리아 제거로 이어진다. 예상되는 바와 같이, 단독 Pre-F RSV 백신은 B. 퍼투시스에 대해 이러한 동물 모델을 보호할 수 없었다.
이들 결과는 동물 모델에서, Pa-RSV 조합 백신이 상기 실시예 2에서 입증된 바와 같이 RSV에 대한 보호성 면역 반응 뿐만 아니라 B. 퍼투시스에 대한 보호성 면역 반응을 유발하였음을 입증한다. 이러한 면역 반응은 무세포 Pa 백신에서 발견된 3개의 서브유닛 항원 (PT, FHA 및 PRN)에 대한 특이적 항체의 생성과 관련이 있다.
실시예 4 - 수태한 어미로의 조합된 Pa-RSV 백신의 투여는 기니 피그 모델에서 RSV 자극으로부터의 새끼 보호를 간섭하지 않는다.
기니 피그 암컷 (N=5/군)을 생 RSV 바이러스 (800 pfu)로 비강내 프라이밍시켰다. 일 군은 프라이밍하지 않은 채 두었다. 프라이밍 다음날 교배를 시작하였다. 수태 암컷을 프라이밍 후 4주 및 7주째 (2회-투여 요법) 또는 프라이밍 후 7주째 (단일 투여 요법)에 하기 백신 중 하나로 면역화시켰다: 알루미늄 하이드록사이드 (100 μg)와 조합된 10 μg의 PreF 항원, 알루미늄 하이드록사이드 (130 μg)와 조합된 10 μg의 PreF 항원 + DTaP 항원 (5 Lf 디프테리아 톡소이드, 2 Lf 파상풍 톡소이드, 5 μg FHA, 5 μg 불활성화된 백일해 독소, 1.6 μg PRN), 또는 알루미늄 하이드록사이드 (100 μg)와 조합된 단지 DTaP 항원 (상기와 동일한 양). 혈청 샘플을 각각 1회 또는 2회 면역화된 암컷에 있어서 1차 또는 2차 면역화 후 14일 (프라이밍 후 63일째)에 수집하였다. 항-RSV 중화성 항체의 수준을 이러한 시점 (새끼 출산 전 1주 내지 6주)에서 측정하였다.
출생 후 24 내지 72시간에 새끼로부터 혈청 샘플을 수집하였다. 5일 내지 18일령의 새끼를 2 x 106 pfu의 생 RSV로 비강내 자극하였다. 자극 후 4일째에, 폐를 수집하고 균질화시켰다. 폐 균질화물에서 바이러스를 적정하고 폐의 그램 당 총 바이러스 입자를 계산하였다.
결과는 도 7 및 8의 그래프에 도시되어 있다.
DTaP 항원으로만 1회 또는 2회 백신화된 모체에서의 RSV 중화성 항체 역가 (도 7A에서 군 3 및 6)는 각각 316 및 272였다. 이는 DTaP 항원으로 백신화된 프라이밍되지 않은 모체에서 RSV 중화 반응이 실질적으로 존재하지 않기 때문에 (도 7A의 군 7) RSV 프라이밍에 의해 유도된 역가를 나타낸다. RSV로 프라이밍되고 단지 DTaP 항원으로만 1회 또는 2회 백신화된 모체로부터의 새끼의 RSV 중화 역가는 각각 425 및 563이며 (도 7B의 군 3 및 6), 이는 생 RSV 프라이밍으로 인해 새끼로 전달된 중화성 항체의 수준을 나타낸다. 이러한 중화성 항체 역가는 새끼에서 RSV 자극으로부터의 완전한 보호를 유도하기에 충분하였다 (도 8).
생 RSV 프라이밍 및 PreF 백신 단독의 단일 투여 (도 7A의 군 1) 또는 PreF 및 DTaP 항원의 조합된 투여 (도 7B의 군 2)후 모체에서 유발된 중화성 항체의 수준을 비교할 경우, 중화성 항체 역가에서의 유의한 차이는 관찰되지 않았으며, 이는 DTaP 백신이 RSV 중화성 항체 반응을 간섭하지 않음을 나타낸다. 새끼의 중화성 항체 역가에 있어서도 유사한 관찰이 확인될 수 있었다 (도 7B에서 군 1 및 2 비교). 그러나, 프라이밍된 모체에 조합된 PreF 및 DTaP 항원의 2회 투여가 수행되는 경우, 모체에서의 RSV 중화 역가는 단지 PreF만으로의 백신화 후에 수득된 것보다 낮았으며, 그러나 그 차이는 통계학적 유의성에 이르지 않았다 (각각 조합된 PreF-DTaP 대 PreF-단독 백신 후의 역가 832 vs 1590; 도 7A의 군 4 및 5). 모체가 조합된 PreF-DTaP 백신의 2회 투여로 백신화되는 경우 새끼에 전달된 중화성 항체의 수준은 모체가 PreF-단독 백신으로 2회 백신화되는 경우 관찰된 수준보다 유의하게 낮았다 (조합된 PreF-DTaP 대 PreF-단독 백신 후의 각각의 역가 519 vs 2439; 도 7B의 군 4 및 5). 이들 결과는 조합된 DTaP-RSV 백신의 단일 투여로의 모체 백신화는 새끼에 전달되는 RSV 중화성 항체 수준에서의 간섭을 초래하지 않는 반면, 조합된 DTaP-RSV로의 2회-투여 모체 백신화 후에 출생후 24 내지 72시간의 새끼에서 관찰된 RSV 중화성 항체 수준에 대한 어느 정도의 간섭이 명백하게 존재함을 나타낸다.
기니 피그 새끼에서 폐 바이러스 로딩으로부터의 결과 (도 8)는 어미에 어떠한 백신 요법이 이용되더라도 프라이밍되고 백신화된 어미에서 태어난 새끼는 RSV 자극으로부터 완전히 보호됨을 나타낸다. 프라이밍되고 단지 DTaP 항원(RSV 항원 비함유)으로만 백신화된 동물은 RSV 자극으로부터 완전히 보호되는 반면, 비프라이밍되고 단지 DTaP 항원으로만 백신화된 동물은 보호되지 않는다는 점은, 프라이밍 후 이용된 백신 요법에 상관없이 생 RSV로의 프라이밍이 새끼로 전달되는 항체의 보호성 수준을 유도하는데 충분하였음을 시사한다. 조합된 PreF 및 DTaP 항원의 2회 투여 후 유발된 중화성 항체의 관찰된 수준에서의 명백한 간섭 (도 7)은 RSV 자극으로부터의 새끼 보호에 어떠한 검출가능한 영향도 미치지 않았다.
서열 목록
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Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
SEQUENCE LISTING <110> GlaxoSmithKline Biologicals S.A. <120> COMBINATION IMMUNOGENIC COMPOSITIONS <130> DAW/VB65526P1 <160> 22 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1697 <212> DNA <213> respiratory syncytial virus <400> 1 atggagttgc taatcctcaa agcaaatgca attaccacaa tcctcactgc agtcacattt 60 gttttgcttc tggtcaaaac atcactgaag aattttatca atcaacatgc agtgcagtag 120 caaaggctat cttagtgctc tgagaactgg ttggtatacc agtgttataa ctatagatta 180 agtaatatca aggaaaataa gtgtaatgga acagatgcta aggtaaaatt gataaacaag 240 aattagataa atataaaaat gctgtaacag aattgcagtt gctcatgcaa agcacccagc 300 aacaaacaat cgagccagaa gagaactacc aaggtttatg aattatacac tcaaaatgcc 360 aaaaaaacca atgtaacatt aagcaagaaa aggaaaagaa gatttcttgg tttttgttag 420 gtgttggatc tgcaatcgcc agtggcgttg ctgtatctaa ggtcctgcac ctgaagggga 480 agtgaacaag atcaaaagtg ctctactatc cacaaacaag gctgtagtca gttatcaaat 540 ggagttagtg tcttaaccag caaagtgtta gacctcaaaa actatataga aaacaattgt 600 tacctattgt gaacaagcaa agctgcagca tatcaaatat agcaactgta tagagttcca 660 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ctacgaccct ctggtgttcc cttccgacga gttcgacgcc 1380 tccatcagcc aggtgaacga gaagatcaac gggaccctgg ccttcatccg gaagtccgac 1440 gagaagctgc ataacgtgga ggacaagatc gaggagatcc tgtccaaaat ctaccacatc 1500 gagaacgaga tcgcccggat caagaagctg atcggcgagg cc 1542 <210> 22 <211> 514 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic PreF Polypeptide <400> 22 Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Thr Asn Ala Ile Thr Ala Ile Leu Ala 1 5 10 15 Ala Val Thr Leu Cys Phe Ala Ser Ser Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe 20 25 30 Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45 Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile 50 55 60 Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu Ile Lys 65 70 75 80 Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Ser Ala Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu 85 90 95 Met Gln Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Lys Phe Leu Gly Phe Leu Gln 100 105 110 Gly Val Gly Ser Ala Ile Ala Ser Gly Ile Ala Val Ser Lys Val Leu 115 120 125 His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys Ile Lys Ser Ala Leu Leu Ser 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Cys 340 345 350 Asn Ile Asp Ile Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys Ile Met Thr Ser 355 360 365 Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser Val Ile Thr Ser Leu Gly Ala Ile Val 370 375 380 Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly 385 390 395 400 Ile Ile Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly 405 410 415 Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gln 420 425 430 Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro Ile Ile Asn Phe Tyr 435 440 445 Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser Ile Ser Gln 450 455 460 Val Asn Glu Lys Ile Asn Gly Thr Leu Ala Phe Ile Arg Lys Ser Asp 465 470 475 480 Glu Lys Leu His Asn Val Glu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Leu Ser Lys 485 490 495 Ile Tyr His Ile Glu Asn Glu Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu Ile Gly 500 505 510 Glu Ala

Claims (113)

  1. 적어도 하나의 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 항원 및 적어도 하나의 보르데텔라 퍼투시스 항원을 포함하는 조합 면역원성 조성물로서, 상기 적어도 하나의 RSV 항원이 재조합 가용성 F 단백질 유사체이고, 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원이 적어도 하나의 무세포 백일해 (Pa) 항원을 포함하거나 전세포 (Pw) 항원을 포함하는, 조합 면역원성 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 F 단백질 유사체가 F 단백질의 융합전 입체형태를 안정화시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 PreF 항원인 조합 면역원성 조성물.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, F 단백질 유사체가 N-말단에서 C-말단 방향으로 RSV F 단백질 폴리펩티드의 F2 도메인 및 F1 도메인, 및 이종성 삼합체화 도메인을 포함하고, F2 도메인과 F1 도메인 사이에 퓨린 절단 부위가 존재하지 않는 조합 면역원성 조성물.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, F 단백질 유사체가,
    (i) 글리코실화를 변경시키는 변형;
    (ii) 적어도 하나의 비-퓨린 절단 부위를 제거하는 변형;
    (iii) pep27 도메인의 하나 이상의 아미노산을 결실시키는 변형; 및
    (iv) F 단백질 세포외 도메인의 소수성 도메인에서 친수성 아미노산을 치환시키거나 부가시키는 변형으로부터 선택되는 적어도 하나의 변형을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  5. 제 3항 또는 제 4항에 있어서, F2 도메인이 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 폴리펩티드 (F0)의 아미노산 26-105에 상응하는 RSV F 단백질 폴리펩티드를 포함하고/거나 F1 도메인이 아미노산 137-516에 상응하는 RSV F 단백질 폴리펩티드를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, F 단백질 유사체가,
    i. SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:22의 군으로부터 선택되는 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드;
    ii. SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:21의 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드, 또는 SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:21의 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드와 실질적으로 이의 전체 길이에 걸쳐 엄격한 조건하에 하이브리드화되는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 폴리펩티드로서, 폴리펩티드가 자연 발생 RSV 균주에 적어도 부분적으로 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드;
    iii. SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:22의 군으로부터 선택되는 폴리펩티드와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, 폴리펩티드가 자연 발생 RSV 균주에 상응하지 않는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드의 군으로부터 선택되는 조합 면역원성 조성물.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 F 단백질 유사체가 RSV F 단백질 폴리펩티드의 F2 도메인 및 F1 도메인을 포함하고, F 단백질 폴리펩티드가 글리코실화를 변경시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 F 단백질 유사체가,
    (i) 이종성 삼합체화 도메인을 포함하는 아미노산 서열의 첨가;
    (ii) 적어도 하나의 퓨린 절단 부위의 결실;
    (iii) 적어도 하나의 비-퓨린 절단 부위의 결실;
    (iv) pep27 도메인의 하나 이상의 아미노산의 결실; 및
    (v) F 단백질 세포외 도메인의 소수성 도메인에서 친수성 아미노산의 적어도 하나의 치환 또는 첨가로부터 선택되는 적어도 하나의 변형을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  9. 제 7항 또는 제 8항에 있어서, 글리코실화를 변경시키는 적어도 하나의 변형이 SEQ ID NO:2의 위치 500에 상응하는 아미노산을 포함하고/거나 이에 인접한 하나 이상의 아미노산의 치환을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  10. 제 7항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO:2의 위치 500-502에 상응하는 아미노산이 NGS; NKS; NGT; NKT로부터 선택되는 조합 면역원성 조성물.
  11. 제 7항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 글리코실화를 변경시키는 변형이 SEQ ID NO:2의 위치 500에 상응하는 아미노산에서의 글루타민의 치환을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  12. 제 7항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서, F 단백질 유사체가 F2 도메인과 F1 도메인 사이에 무손상 융합 펩티드를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  13. 제 7항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 변형이 이종성 삼합체화 도메인을 포함하는 아미노산 서열의 첨가를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  14. 제 13항에 있어서, 이종성 삼합체화 도메인이 F1 도메인에 대한 C-말단에 위치하는 조합 면역원성 조성물.
  15. 제 7항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 매개성 퓨린 절단 부위가 없는 F2 도메인 및 F1 도메인을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  16. 제 7항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서, F 단백질 유사체가 다합체, 예컨대 삼합체로 어셈블링되는 조합 면역원성 조성물.
  17. 제 7항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 있어서, F2 도메인이 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 폴리펩티드 (F0)의 아미노산 26-105에 상응하는 RSV F 단백질 폴리펩티드의 적어도 일부를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  18. 제 7항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 있어서, F1 도메인이 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 폴리펩티드 (F0)의 아미노산 137-516에 상응하는 RSV F 단백질 폴리펩티드의 적어도 일부를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  19. 제 7항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 있어서, F2 도메인이 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 폴리펩티드 (F0)의 아미노산 26-105에 상응하는 RSV F 단백질 폴리펩티드를 포함하고/거나 F1 도메인이 아미노산 137-516에 상응하는 RSV F 단백질 폴리펩티드를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  20. 제 7항 내지 제 19항 중 어느 한 항에 있어서, F 단백질 유사체가,
    i. SEQ ID NO:22를 포함하는 폴리펩티드;
    ii. SEQ ID NO:21 또는 SEQ ID NO:21과 실질적으로 이의 전체 길이에 걸쳐 엄격한 조건하에 하이브리드화되는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 폴리펩티드;
    iii. SEQ ID NO:22와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드의 군으로부터 선택되는 조합 면역원성 조성물.
  21. 제 7항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, F2 도메인이 RSV F 단백질 폴리펩티드의 아미노산 1-105를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  22. 제 7항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 있어서, 무손상 융합 펩티드를 갖고 매개성 pep27 도메인이 없는 F2 도메인 및 F1 도메인이 정위되는 조합 면역원성 조성물.
  23. 제 8항 내지 제 22항 중 어느 한 항에 있어서, 이종성 삼합체화 도메인이 코일드-코일 도메인을 포함하거나 이소류신 지퍼를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  24. 제 23항에 있어서, 이소류신 지퍼 도메인이 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  25. 제 7항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 있어서, F 단백질 유사체가 F 단백질 세포외 도메인의 소수성 도메인에 친수성 아미노산의 적어도 하나의 치환 또는 첨가를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  26. 제 25항에 있어서, 소수성 도메인이 F 단백질 세포외 도메인의 HRB 코일드-코일 도메인인 조합 면역원성 조성물.
  27. 제 26항에 있어서, HRB 코일드-코일 도메인이 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 (F0)의 아미노산 512에 상응하는 위치에 중성 잔기 대신 하전된 잔기의 치환을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  28. 제 27항에 있어서, HRB 코일드-코일 도메인이 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 (F0)의 아미노산 512에 상응하는 위치에 류신 대신 리신 또는 글루타민의 치환을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  29. 제 25항에 있어서, 소수성 도메인이 F 단백질 세포외 도메인의 HRA 도메인인 조합 면역원성 조성물.
  30. 제 29항에 있어서, HRA 도메인이 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 (F0)의 아미노산 105에 상응하는 위치 다음에 하전된 잔기의 첨가를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  31. 제 30항에 있어서, HRA 도메인이 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 (F0)의 아미노산 105에 상응하는 위치 다음에 리신의 첨가를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  32. 제 25항 내지 제 31항 중 어느 한 항에 있어서, F 단백질 유사체가 F 단백질 세포외 도메인의 HRA 도메인에 친수성 아미노산의 적어도 제 1 치환 또는 첨가 및 HRB 도메인에 친수성 아미노산의 적어도 제 2 치환 또는 첨가를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  33. 제 7항 내지 제 32항 중 어느 한 항에 있어서, F 단백질 유사체가 자연 발생 F 단백질 전구체 (F0)에 존재하는 퓨린 절단 부위를 제거하는 적어도 하나의 아미노산 첨가, 결실 또는 치환을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  34. 제 33항에 있어서, F 단백질 유사체가 SEQ ID NO:2의 참조 F 단백질 전구체 (F0)의 아미노산 105-109에 상응하는 위치, 아미노산 133-136에 상응하는 위치, 또는 아미노산 105-109 및 133-136에 상응하는 둘 모두의 위치에서 퓨린 절단 부위를 제거하는 아미노산 첨가, 결실 또는 치환을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  35. 제 7항 내지 제 34항 중 어느 한 항에 있어서, F1 및 F2 폴리펩티드 도메인이 서열에 있어서 RSV A Long 균주에 상응하는 조합 면역원성 조성물.
  36. 제 7항 내지 제 35항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 RSV 항원이 폴리펩티드의 다합체, 예컨대 삼합체를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  37. 제 1항 내지 제 36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 Pa 항원이 백일해 톡소이드 (PT), 실모양 헤마글루티닌 (FHA), 퍼탁틴 (PRN), 핌브라 타입 2 (FIM2), 핌브라 타입 3 (FIM3) 및 BrkA로 구성된 군으로부터 선택되는 조합 면역원성 조성물.
  38. 제 37항에 있어서, PT가 화학적으로 톡소이드화되거나, 예를 들어 하나 또는 둘 모두의 돌연변이: R9K 및 E129G에 의해 유전적으로 톡소이드화된 조합 면역원성 조성물.
  39. 제 37항 또는 제 38항에 있어서, 상기 적어도 하나의 Pa 항원이 PT 및 FHA; PT, FHA 및 PRN; 또는 PT, FHA, PRN 및 FIM2와 FIM3 중 어느 하나 또는 둘 모두를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  40. 제 37항 내지 제 39항 중 어느 한 항에 있어서,
    i. 10-30μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 25ug의 PT;
    ii. 10-30μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 25μg의 FHA를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  41. 제 40항에 있어서, 2-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 8μg의 PRN을 추가로 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  42. 제 37항 내지 제 39항 중 어느 한 항에 있어서,
    i. 10-30μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 20μg의 PT;
    ii. 10-30μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 20μg의 FHA;
    iii. 2-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 3μg의 PRN; 및
    iv. 1-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 총 5μg의 FIM2 및 FIM3을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  43. 제 37항 내지 제 39항 중 어느 한 항에 있어서,
    i. 2-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 8μg의 PT;
    ii. 2-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 8μg의 FHA; 및
    iii. 0.5-4μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 2.5μg의 PRN을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  44. 제 37항 내지 제 39항 중 어느 한 항에 있어서,
    i. 2-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 2.5μg의 PT;
    ii. 2-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 5μg의 FHA;
    iii. 0.5-4μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 3μg의 PRN; 및
    iv. 1-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 총 5μg의 FIM2 및 FIM3을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  45. 제 37항 내지 제 39항 중 어느 한 항에 있어서,
    i. 2-5 μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 3.2μg의 PT;
    ii. 25-40μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 34.4μg의 FHA;
    iii. 0.5-3μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 1.6μg의 PRN; 및
    iv. 0.5-1μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 0.8μg의 FIM2를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  46. 제 37항 내지 제 39항 중 어느 한 항에 있어서,
    i. 2-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 8μg의 PT;
    ii. 1-4μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 2.5μg의 FHA; 및
    iii. 1-4μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 2.5μg의 PRN을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  47. 제 1항 내지 제 36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원이 Pw 항원을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  48. 제 47항에 있어서, 상기 Pw 항원이 감소된 내독소 함량을 갖는 조합 면역원성 조성물.
  49. 제 48항에 있어서, 상기 감소된 내독소 함량이 리포-올리고사카라이드 (LOS)의 화학적 추출에 의해, 또는 예를 들어 3-O-데아실라제의 과발현 또는 이종성 발현을 유도하기 위한, 내독소 생성의 유전적 조작에 의해 달성되는 조합 면역원성 조성물.
  50. 제 47항 내지 제 49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Pw 항원이 적어도 부분적으로 3-O-데아실화된 LOS를 포함하는 B. 퍼투시스 세포를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  51. 제 1항 내지 제 50항 중 어느 한 항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  52. 제 51항에 있어서, 담체 또는 부형제가 완충제를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  53. 제 1항 내지 제 52항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 애쥬번트를 추가로 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  54. 제 53항에 있어서, 적어도 하나의 애쥬번트가 알루미늄 염, 예컨대 알루미늄 하이드록사이드 또는 알루미늄 포스페이트; 칼슘 포스페이트; 3D-MPL; QS21; CpG-함유 올리고데옥시뉴클레오티드 애쥬번트; 및 수중유 에멀젼으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 애쥬번트를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  55. 제 53항 또는 제 54항에 있어서, 적어도 하나의 애쥬번트가 알루미늄 하이드록사이드를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  56. 제 53항 또는 제 54항에 있어서, 적어도 하나의 애쥬번트가 수중유 에멀젼을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  57. 제 56항에 있어서, 수중유 에멀젼이 인간 용량 당 5mg 미만의 스쿠알렌을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  58. 제 56항 또는 제 57항에 있어서, 수중유 에멀젼이 토콜(tocol)을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  59. 제 53항에 있어서, 상기 애쥬번트가 신생아 또는 임신한 인간에 투여하기에 적합한 것인 조합 면역원성 조성물.
  60. 제 1항 내지 제 52항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 애쥬번트를 포함하지 않는 조합 면역원성 조성물.
  61. 제 1항 내지 제 60항 중 어느 한 항에 있어서, RSV 및 B. 퍼투시스 이외의 병원성 유기체로부터의 적어도 하나의 항원을 추가로 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  62. 제 61항에 있어서, 디프테리아 톡소이드 (D); 파상풍 톡소이드 (T); B형 간염 표면 항원 (HBsAg); 불활성화된 폴리오 바이러스 (IPV); 담체 단백질에 컨쥬게이션된 H. 인플루엔자(H. influenzae) 타입 b (Hib)의 캡슐 당류; 담체 단백질에 컨쥬게이션된 N. 메닌지티디스 타입 C의 캡슐 당류; 담체 단백질에 컨쥬게이션된 N. 메닌지티디스 타입 Y의 캡슐 당류; 담체 단백질에 컨쥬게이션된 N. 메닌지티디스 타입 A의 캡슐 당류; 담체 단백질에 컨쥬게이션된 N. 메닌지티디스 타입 W의 캡슐 당류; 및 N. 메닌지티디스 타입 B로부터의 항원으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 항원을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  63. 제 62항에 있어서, D 및 T; D, T 및 IPV; D, T 및 HBsAg; D, T 및 Hib; D, T, IPV 및 HBsAg; D, T, IPV 및 Hib; D, T, HBsAg 및 Hib; 또는 D, T, IPV, HBsAg 및 Hib를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  64. 제 62항 또는 제 63항에 있어서, 적어도 하나의 RSV 항원에 추가하여,
    i. 20-30μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 25μg의 PT;
    ii. 20-30μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 25μg의 FHA;
    iii. 1-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 3 또는 8μg의 PRN;
    iv. 10-30Lf, 예를 들어 정확히 또는 대략 15 또는 25Lf의 D; 및
    v. 1-15Lf, 예를 들어 정확히 또는 대략 5 또는 10Lf의 T를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  65. 제 62항 또는 제 63항에 있어서, 적어도 하나의 RSV 항원에 추가하여,
    i. 2-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 2.5 또는 8μg의 PT;
    ii. 2-10μg, 예를 들어 정확히 또는 대략 5 또는 8μg의 FHA;
    iii. 0.5-4μg, 또는 예를 들어 2-3μg 예컨대 정확히 또는 대략 2.5 또는 3μg의 PRN;
    iv. 1-10Lf, 예를 들어 정확히 또는 대략 2 또는 2.5 또는 9Lf의 D; 및
    v. 1-15Lf, 예를 들어 정확히 또는 대략 5 또는 10Lf의 T를 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  66. 제 40항 내지 제 46항, 제 64항 또는 제 65항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 RSV 항원이 F 단백질의 융합전 입체형태를 안정화시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 PreF 항원을 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  67. 제 66항에 있어서, 애쥬번트를 포함하지 않거나, 미네랄 염 애쥬번트를 추가로 포함하는 조합 면역원성 조성물.
  68. 피검체에 제 1항 내지 제 67항 중 어느 한 항의 조합 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는, RSV 및 B. 퍼투시스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  69. 제 68항에 있어서, 상기 조성물의 투여가 RSV와의 접촉 후 바이러스 질병을 증가시키지 않고 RSV에 특이적인 면역 반응을 유도하는 방법.
  70. 제 68항 또는 제 69항에 있어서, 상기 유도된 면역 반응이 부스터 (booster) 반응인 방법.
  71. 제 69항 또는 제 70항에 있어서, RSV 및 B. 퍼투시스에 대한 면역 반응이 RSV 및 B. 퍼투시스에 의한 감염의 발생을 감소 또는 억제하거나, 감염의 중증도를 감소시키고/거나 RSV 및 B. 퍼투시스로의 감염 후 병리적 반응의 발생을 감소 또는 억제하거나, 중증도를 감소시키는 보호성 면역 반응을 포함하는 방법.
  72. 제 1항 내지 제 67항 중 어느 한 항에 있어서, 의약에 사용하기 위한 조합 면역원성 조성물.
  73. 제 1항 내지 제 67항 중 어느 한 항에 있어서, RSV 및 B. 퍼투시스에 의한 감염, 또는 이와 관련된 질병을 피검체에서 예방 또는 치료하기 위한 조합 면역원성 조성물.
  74. 조합 면역원성 조성물이 단일-투여 요법으로서 피검체에 투여되거나, 투여를 위한 것인 제 68항 내지 제 71항 중 어느 한 항의 방법 또는 제 72항 또는 제 73항의 조합 면역원성 조성물.
  75. 피검체가 포유동물, 예컨대 신생아; 유아; 소아; 청소년; 성인; 및 노인의 군으로부터 선택되는 인간인 제 68항 내지 제 71항 중 어느 한 항의 방법 또는 제 73항 또는 제 74항의 조합 면역원성 조성물.
  76. 제 75항에 있어서, 피검체가 청년기 인간이고, 상기 피검체가 10 내지 18세이며, 상기 조합 면역원성 조성물이 단 1회 투여되거나, 투여를 위한 것인 방법 또는 조합 면역원성 조성물.
  77. 피검체가 임신 여성(pregnant female)이 아닌 제 68항 내지 제 71항 중 어느 한 항의 방법 또는 제 72항 또는 제 73항의 조합 면역원성 조성물.
  78. 피검체가 임의로 인간, 재태 영아를 가진 임신 여성인 제 68항 내지 제 71항 중 어느 한 항의 방법 또는 제 72항 또는 제 73항의 조합 면역원성 조성물.
  79. 제 78항에 있어서, 상기 조합 면역원성 조성물이 상기 임신 여성에 임신 중 단 1회 투여되거나, 투여를 위한 것인 방법 또는 조합 면역원성 조성물.
  80. RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하기 위한 백신화 요법으로서, 백신화 요법이 재태 영아를 가진 임신 여성에 RSV 및 B. 퍼투시스 둘 모두에 특이적인 체액성 면역 반응을 부스팅할 수 있는 적어도 하나의 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 적어도 하나의 면역원성 조성물이 F 단백질 유사체를 포함하는 재조합 RSV 항원 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원을 포함하고,
    적어도 하나의 면역원성 조성물에 의해 임신 여성에서 유도되거나 증가된 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및 적어도 하나의 서브세트의 B. 퍼투시스-특이적 항체가 태반을 통해 재태 영아에 전달되어, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하는, 백신화 요법.
  81. RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하는 방법으로서, 상기 방법이 재태 영아를 가진 임신 여성에 RSV 및 B. 퍼투시스 둘 모두에 특이적인 체액성 면역 반응을 부스팅할 수 있는 적어도 하나의 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 적어도 하나의 면역원성 조성물이 F 단백질 유사체를 포함하는 재조합 RSV 항원 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원을 포함하고,
    적어도 하나의 면역원성 조성물에 의해 임신 여성에서 유도되거나 증가된 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및 적어도 하나의 서브세트의 B. 퍼투시스-특이적 항체가 태반을 통해 재태 영아에 전달되어, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하는, 방법.
  82. RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하는데 사용하기 위한 F 단백질 유사체를 포함하는 재조합 RSV 항원 및 적어도 하나의 백일해 항원을 포함하는 면역원성 조성물 또는 복수의 면역원성 조성물로서, 면역원성 조성물(들)이 임신 여성에 투여하기 위해 제형화되고, 면역원성 조성물(들)이 RSV 및 B. 퍼투시스 둘 모두에 특이적인 체액성 면역 반응을 부스팅할 수 있으며, 면역원성 조성물에 의해 임신 여성에서 부스팅된 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및 적어도 하나의 서브세트의 B. 퍼투시스-특이적 항체가 태반을 통해 재태 영아에 전달되어, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하는, 면역원성 조성물 또는 복수의 면역원성 조성물.
  83. F 단백질 유사체를 포함하는 재조합 RSV 항원 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원이 동일한 면역원성 조성물로 공동 제형화되고, 이는 제 1항 내지 제 67항 중 어느 한 항에 정의된 조합 면역원성 조성물인 제 80항 내지 제 82항 중 어느 한 항의 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  84. 제 80항 내지 제 83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 상기 임신 여성에 임신 중 단 1회 투여되거나, 투여를 위한 것인 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  85. 제 80항 내지 제 82항 중 어느 한 항에 있어서, F 단백질 유사체를 포함하는 재조합 RSV 항원 및 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원이 2개의 상이한 면역원성 조성물로 제형화되는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  86. 제 85항에 있어서, 2개의 상이한 면역원성 조성물이 같은 날에 투여 (공동-투여)되는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  87. 제 85항에 있어서, 2개의 상이한 면역원성 조성물이 다른 날에 투여되는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  88. 제 85항 내지 제 87항 중 어느 한 항에 있어서, F 단백질 유사체가 제 1항 내지 제 36항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고, 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원이 제 37항 내지 제 50항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  89. 제 80항 내지 제 88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 임신 여성이 인간인 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  90. 제 80항 내지 제 89항 중 어느 한 항에 있어서, 영아가 면역학적으로 미성숙한 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  91. 제 80항 내지 제 90항 중 어느 한 항에 있어서, 영아가 6개월 미만인 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  92. 제 80항 내지 제 91항 중 어느 한 항에 있어서, 영아가 2개월 미만, 예를 들어 1개월 미만, 예를 들어 신생아인 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  93. 제 80항 내지 제 92항 중 어느 한 항에 있어서, 태반을 통해 전달된 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및/또는 백일해-특이적 항체가 IgG 항체, 바람직하게는 IgG1 항체를 포함하는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  94. 제 80항 내지 제 93항 중 어느 한 항에 있어서, 태반을 통해 전달된 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체가 중화성 항체인 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  95. 제 80항 내지 제 94항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체가 출생시 영아의 혈청에서 30μg/mL 또는 30μg/mL 초과 수준으로 검출가능한 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  96. 제 80항 내지 제 95항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 서브세트의 백일해-특이적 항체가 출생시 영아의 혈청에서 10 ELISA 단위/ml (EU) 또는 10 ELISA 단위/ml (EU) 초과 수준으로 검출가능한 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  97. 제 80항 내지 제 96항 중 어느 한 항에 있어서, 영아에서 RSV에 대한 활성 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물을 영아에 투여하는 것을 추가로 포함하는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  98. 제 80항 내지 제 97항 중 어느 한 항에 있어서, 영아에서 B. 퍼투시스에 대한 활성 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물을 영아에 투여하는 것을 추가로 포함하는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  99. 제 97항 또는 제 98항에 있어서, RSV에 대한 활성 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물 및 B. 퍼투시스에 대한 활성 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물을 영아에 투여하는 것을 포함하는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  100. 제 99항에 있어서, RSV에 대한 활성 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물 및 B. 퍼투시스에 대한 활성 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물이 동일한 조성물인 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  101. 제 99항에 있어서, RSV에 대한 활성 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물 및 B. 퍼투시스에 대한 활성 면역 반응을 프라이밍하거나 유도하는 적어도 하나의 조성물이 상이한 조성물인 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  102. 제 101항에 있어서, 상이한 조성물이 같거나 다른 날에 투여되는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  103. 제 97항 내지 제 101항 중 어느 한 항에 있어서, 영아에 투여된 적어도 하나의 조성물이 F 단백질 유사체를 포함하는 RSV 항원을 포함하는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  104. 제 97항 내지 제 102항 중 어느 한 항에 있어서, 영아에 투여된 적어도 하나의 조성물이 핵산, 재조합 바이러스 벡터 또는 바이러스 레플리콘 입자를 포함하고, 핵산, 재조합 바이러스 벡터 또는 바이러스 레플리콘 입자가 적어도 하나의 RSV 단백질 항원 또는 항원 유사체를 인코딩하는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  105. 제 80항 내지 제 104항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 면역원성 조성물이 임신 26주 또는 그 이후에 임신 여성에 투여되는 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  106. 제 80항 내지 제 105항 중 어느 한 항에 있어서, 임신 여성이 임신 26주 내지 38주, 예를 들어 임신 28주 내지 34주인 백신화 요법, 방법 또는 용도.
  107. 임신 여성에 투여하기 위해 제형화된 복수의 면역원성 조성물을 포함하는 키트로서, 키트가,
    (a) RSV에 특이적인 체액성 면역 반응을 유도, 유발 또는 부스팅할 수 있는 F 단백질 유사체를 포함하는 제 1 면역원성 조성물; 및
    (b) B. 퍼투시스에 특이적인 체액성 반응을 유도, 유발 또는 부스팅할 수 있는 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원을 포함하는 제 2 면역원성 조성물을 포함하고,
    임신 여성에 투여시, 제 1 및 제 2 면역원성 조성물이 적어도 하나의 서브세트의 RSV-특이적 항체 및 적어도 하나의 서브세트의 B. 퍼투시스-특이적 항체를 유도, 유발 또는 부스팅하고, 항체는 태반을 통해 임신 여성의 재태 영아에 전달됨으로써, RSV 및 B. 퍼투시스에 의해 야기되는 감염 또는 질병에 대해 영아를 보호하는, 키트.
  108. 제 107항에 있어서, 제 1 면역원성 조성물의 F 단백질 유사체가 제 1항 내지 제 36항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 키트.
  109. 제 107항 또는 제 108항에 있어서, 제 2 면역원성 조성물의 적어도 하나의 B. 퍼투시스 항원이 제 37항 내지 제 50항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 키트.
  110. 제 107항 내지 제 109항 중 어느 한 항에 있어서, 키트의 적절한 특징이 제 83항 내지 제 101항 중 어느 한 항의 백신 요법, 방법 또는 용도에 대해 정의된 바와 같은 키트.
  111. 제 107항 내지 제 110항 중 어느 한 항에 있어서, 제 1 면역원성 조성물 및/또는 제 2 면역원성 조성물이 적어도 하나의 미리-충전된 주사기에 존재하는 키트.
  112. 제 111항에 있어서, 미리-충전된 주사기가 이중-챔버 주사기인 키트.
  113. 제 107항 내지 제 112항 중 어느 한 항에 있어서, 키트의 개개 조성물이 상기 임신 여성에 임신 중 단 1회 투여하기 위한 것인 키트.
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