JP2017530119A - リンパ球における阻害経路の中和 - Google Patents

Abstract

本発明は、ヒトＮＫＧ２Ａに特異的に結合して阻害する化合物を、ヒトＰＤ−１に結合して阻害する化合物と組み合わせて使用する、疾患の処置、予防および診断の方法に関する。本発明はまた、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋腫瘍浸潤ＮＫ細胞および／またはＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋腫瘍浸潤ＣＤ８Ｔ細胞を同定するためのアッセイにも関する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年９月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／０５０，９４８号明細書、２０１４年１１月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／０８３，９２９号明細書および２０１４年１２月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／０９３，１４１号明細書の利益を主張し、これらは全て、あらゆる図面を含むその全体が参照により本明細書に援用される。

配列表への言及
本出願は、電子フォーマットの配列表と一緒に出願されている。この配列表は、サイズが３８ＫＢである「ＮＫＧ２Ａ−ＰＤ１＿ＳＴ２５」という標題のファイル（２０１５年９月１５日に作成した）で提供されている。この配列表の電子フォーマット中の情報は、その全体が参照により本明細書に援用される。

本発明は、がんの処置のためのＮＫＧ２Ａ中和剤とＰＤ−１中和剤との併用に関する。

ＮＫ細胞の活性は、活性化シグナルおよび阻害シグナルの両方を含む複雑な機序により制御されている。ＮＫ細胞により媒介されるＨＬＡクラスＩ欠損標的細胞（ＨＬＡ Ｃｌａｓｓ Ｉ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｔａｒｇｅｔ ｃｅｌｌ）の認識および死滅において重要な役割を果たすいくつかの異なるＮＫ特異的レセプターが同定されている。天然細胞傷害性レセプター（Ｎａｔｕｒａｌ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（ＮＣＲ）は、ＮＫ細胞中で特異的に発現される活性型レセプタータンパク質のクラスおよびこのタンパク質を発現する遺伝子を意味する。ＮＣＲの例として、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４０およびＮＫｐ４６が挙げられる（例えば、（非特許文献１）、（非特許文献２）、（非特許文献３）、（非特許文献４）、（非特許文献５）、（非特許文献６）を参照されたい。これらの開示全体が参照により本明細書に援用される）。このレセプターはＩｇスーパーファミリのメンバーであり、このレセプターの架橋（特異的なｍＡｂにより誘発される）により、ＮＫ細胞が強力に活性化されて細胞内Ｃａ^＋＋レベルが増加し、細胞傷害性およびリンホカイン放出が誘発され、多くの種類の標的細胞に対するＮＫ細胞傷害性が活性化される。

ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、リンパ球のサブセット上で見出される阻害レセプターである。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、サイトカイン放出と、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡのリガンドであるＨＬＡ−Ｅを発現する細胞に対するある種のリンパ球の細胞傷害応答とを制限する（例えば（特許文献１）を参照されたい）。ＨＬＡ−Ｅはまた、ある種の腫瘍細胞により（（非特許文献７））および活性化された内皮細胞により（（非特許文献８））、可溶型で分泌されることも分かっている。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達を阻害する抗体は、サイトカイン放出とＨＬＡ−Ｅ陽性標的細胞に対するリンパ球の細胞溶解活性とを増加させることができ、例えばＨＬＡ−Ｅ発現腫瘍細胞またはウイルス感染細胞に対するＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性ＮＫ細胞の応答を増加させることができる。従って、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを阻害するがＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現細胞の死滅を誘発しない治療用抗体（即ち、非枯渇性抗体（ｎｏｎ−ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ）は、がん患者の腫瘍増殖の制御を誘導することができる。

ＰＤ−１はＣＤ２８ファミリのレセプターの阻害メンバーであり、このＣＤ２８ファミリには、ＣＤ２８、ＣＴＬ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含まれる。ＰＤ−１は、活性化されたＢ細胞上で、Ｔ細胞上でおよび骨髄細胞上で発現される（非特許文献９）、（非特許文献１０））。ＰＤ−１に対する２種のリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２が同定されており、これらのリガンドはＰＤ−１への結合時にＴ細胞活性化を下方制御することが明らかになっている（（非特許文献１１）、（非特許文献１２）、（非特許文献１３））。ＰＤ−Ｌ１は様々なヒトがんで豊富に存在している（（非特許文献１４））。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用により、腫瘍浸潤リンパ球が減少し、Ｔ細胞レセプターにより媒介される増殖が低下し、がん性細胞による免疫回避が起こる。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との局所的な相互作用を阻害することにより免疫抑制を元に戻すことができ、この効果は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用が同様に遮断される際にも付加される。

国際公開第９９／２８７４８号パンフレット

Ｌａｎｉｅｒ（２００１）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２３−２７ Ｐｅｎｄｅ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９０：１５０５−１５１６ Ｃａｎｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１８９：７８７−７９６ Ｓｉｖｏｒｉ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：１１２９−１１３６ Ｐｅｓｓｉｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１８８（５）：９５３−６０ Ｍａｎｄｅｌｂｏｉｍ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４０９：１０５５−１０６０ Ｄｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００６；１７７：３１００−７ Ｃｏｕｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００７；１０９：２８０６−１４ Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：３９１７７９−８２ Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０：７１１−８ Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：１０２７−３４ Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２６１−８ Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：６３４−４３ Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７８７−９

ＰＤ−１遮断により、多数の臨床試験において印象的な抗腫瘍応答が起きている。しかしながら、全ての患者が抗腫瘍応答で処置に応答するわけではなく、更に一部の患者では処置後にがんが再発する。従って、当分野では、ＰＤ−１軸（ＰＤ−１ ａｘｉｓ）の阻害剤により処置される患者への利点の改善が必要とされている。

本発明は、例えば抗体の使用による阻害レセプターＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の複合中和によって抗腫瘍免疫応答を高める、改善された方法を提供する。（末梢中の）ＣＤ８Ｔ細胞およびＮＫ細胞はＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の両方を発現しないが、腫瘍細胞の除去を媒介する腫瘍浸潤リンパ球が阻害レセプターＰＤ−１および阻害レセプターＮＫＧ２Ａの両方を発現し得ることを発見した。加えて、抗ＰＤ−１による処置によって、腫瘍浸潤リンパ球上のＮＫＧ２Ａレセプターの上方制御が起こる可能性があり、その結果、ＮＫＧ２Ａは、ＰＤ１軸を遮断する薬剤の有効性を制限している場合がある。これらのレセプターは両方とも、腫瘍浸潤リンパ球の細胞傷害活性を制限する可能性があることから、抗体によるこれら２種のレセプターの両方の阻害活性の中和により、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋リンパ球はがん細胞を効率的に除去することができる。一実施形態では、このＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋リンパ球は細胞傷害性リンパ球であり、任意選択でＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。

ＰＤ−１の阻害活性の阻害または中和は、例えば、ＰＤ−１の天然リガンドＰＤ−Ｌ１との相互作用を遮断する（および任意選択でＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用を更に遮断する）ことによりＰＤ−Ｌ１誘発性ＰＤ−１シグナル伝達を防止するポリペプチド（例えば、抗体、Ｆｃドメインに融合したポリペプチド、イムノアドヘシン等）の使用を有利に含むことができる。一態様では、このポリペプチドはＰＤ−１に結合する抗体（抗ＰＤ−１抗体）であり、そのような抗体は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用および／またはＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用を遮断することができる。別の態様では、このポリペプチドはＰＤ−Ｌ１に結合する抗体（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）であり、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用を遮断する。

従って、一実施形態では、提供されるのは、個体のがんを処置するまたは予防する方法であって、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物の治療上有効な量と、（ｂ）ヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する化合物の治療上有効な量とを個体に投与することを含む方法である。一実施形態では、このがんは固形腫瘍である。一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体である。一実施形態では、ヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する化合物は、ＰＤ−１の阻害活性を中和する抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体である。この個体をヒトに指定することができる。

一実施形態では、提供されるのは、個体中におけるＣＤ８＋腫瘍浸潤Ｔ細胞の活性を活性化させるまたは増強する方法であって、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物の治療上有効な量と、（ｂ）ヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する化合物の治療上有効な量とを個体に投与することを含む方法である。一実施形態では、提供されるのは、個体中における腫瘍浸潤ＮＫ細胞の活性を活性化させるまたは増強する方法であって、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物の治療上有効な量と、（ｂ）ヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する化合物の治療上有効な量とを個体に投与することを含む方法である。

一態様では、提供されるのは、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体とＰＤ−１の阻害活性を中和する抗体との組合せを投与することを含む処置である。

一態様では、提供されるのは、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する抗体とヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する抗体とを含む組成物である。一態様では、この組成物は、がんの処置または予防で使用されるためのものであり、任意選択で固形腫瘍の処置または予防で使用されるためのものであり、任意選択で血液悪性腫瘍の処置または予防で使用されるためのものである。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、（ｉｎ ｖｉｖｏで）ヒト患者中においてヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和が起こる量で投与し、例えば、ヒト患者中においてＣＤ８Ｔ細胞上のおよびＮＫ細胞上のヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和が起こる量で投与する。一実施形態では、ヒト患者中においてヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和が起こる量は、（例えば、ＰＢＭＣに対して抗体が漸増される結合アッセイで）ＮＫＧ２Ａ＋細胞の表面上のＮＫＧ２Ａレセプターを実質的に飽和させるのに必要な最低濃度の少なくとも１０倍（例えば、１０〜２０倍、１０〜５０倍、１０〜１００倍、２０〜５０倍、２０〜１００倍、３０〜１００倍、５０〜１００倍）であり、任意選択で少なくとも５０倍、６０倍、８０倍または１００倍である。一実施形態では、この抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ヒトＮＫＧ２Ａへの結合に関してＨＬＡ−Ｅと競合する。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を少なくとも１回の投与サイクルで投与し、この投与サイクルは、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも１回目のおよび２回目の（ならびに任意選択で３回目の、４回目の、５回目の、６回目の、７回目のおよび／もしくは８回目の、または更なる）投与を含み、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、１回目の投与と２回目の（および任意選択で更なる）投与との間で少なくとも１０μｇ／ｍｌ（または任意選択で２０、３０、４０もしくは５０μｇ／ｍＬ）の抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続（最低）血中濃度を達成するのに有効な量で投与する。指定された連続血中濃度の達成または維持は、指定された期間の持続時間（例えば、抗体の２回の投与の間、数週間）にわたり血中濃度が指定された血中濃度を実質的に下回らないことを意味しており、即ち、血中濃度は指定された期間にわたり可変であり、指定された血中濃度は最低濃度または「トラフ」濃度を表す。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、投与時に（例えば投与の１日以内にまたは２日以内に）約または少なくとも約５０、６０、７０または８０μｇ／ｍｌの、任意選択で少なくとも約１００μｇ／ｍｌの、ピーク血中濃度を達成するのに有効な量で投与する。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、この抗体の投与後に少なくとも１週間または少なくとも２週間にわたり、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０または８０μｇ／ｍｌの、任意選択で約１００μｇ／ｍｌの、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続（最低）血中濃度を達成するのに有効な量で投与する。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、２回の連続する投与の間で約または少なくとも約５０、６０、７０または８０μｇ／ｍｌの、任意選択で少なくとも約１００μｇ／ｍｌの、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続（最低）血中濃度を達成するのに有効な量で投与する。一実施形態では、１回目の投与および２回目の投与は約２週間の期間で隔てられており、任意選択で約１週間の期間で隔てられている。

任意選択で、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、有効な量でおよび投与サイクルの持続時間全体にわたり指定されている連続（最低）血中濃度を達成する頻度に従って投与することができる。

一実施形態では、個体の固形腫瘍を処置するために、ヒトＰＤ−１ペプチドを中和する抗体と組み合わせて抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与し、この投与サイクルは抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の投与を含み、２回の連続する投与の間で少なくとも４μｇ／ｍＬの、任意選択で１０μｇ／ｍＬの、（例えば腫瘍環境下での）血管外組織中での連続（最低）濃度を達成するのに有効な量で抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与する。任意選択で、この投与サイクルの持続時間全体にわたり、少なくとも４μｇ／ｍＬの、任意選択で少なくとも１０μｇ／ｍＬの、（例えば腫瘍環境下での）血管外組織中での連続（最低）濃度を達成するのに有効な量で抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与する。一実施形態では、２回の連続する投与の間で、またはこの投与サイクルの持続時間にわたり、少なくとも４０μｇ／ｍＬの、任意選択で少なくとも１００μｇ／ｍＬの、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続（最低）血中濃度を達成するのに有効な量で抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与する。

一実施形態では、ヒトＰＤ−１ペプチドを中和する抗体を、（ｉｎ ｖｉｖｏで）ヒト患者中においてヒトＰＤ−１の阻害活性の中和が起こる量で投与し、例えば、ヒト患者中においてＣＤ８Ｔ細胞上のおよびＮＫ細胞上のヒトＰＤ−１の阻害活性の中和が起こる量で投与する。一態様では、この組合せを、特定の臨床投与レジメン（特に特定の用量）および具体的な投薬スケジュールに従って投与する、または、この組合せは、特定の臨床投与レジメン（特に特定の用量）および具体的な投薬スケジュールに従った投与用である。

一態様では、ＮＫＧ２Ａを中和する抗体は非枯渇性抗体であり、例えば、死滅させず、除去せず、溶解させず、またはそのような死滅、除去もしくは溶解を誘発せず、その結果、サンプル中にまたは対象中に存在するＮＫＧ２Ａ発現細胞の数に悪影響を及ぼさない抗体である。一態様では、ＰＤ−１を中和する抗体は非枯渇性抗体である。非枯渇性抗体は例えば、Ｆｃドメインを欠失することができる、または１種もしくは複数種のＦｃγレセプター（例えばＣＤ１６）への結合が最小であるＦｃドメインもしくはこのＦｃγレセプターに結合しないＦｃドメインを有することができる。例として、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ抗体からの定常領域を有する抗体、１種または複数種のＦｃγレセプター（例えばＣＤ１６）への結合を低減するようにまたは消失させるように定常領域が改変されているあらゆるアイソタイプ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３）の抗体が挙げられる。

一実施形態では、がんは、進行性のおよび／または難治性の固形腫瘍である。非限定的な一実施形態では、がん（例えば進行性で難治性の固形腫瘍）は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、腎がん、膵臓または食道の腺癌、乳がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、黒色腫、結腸直腸がんおよび卵巣がんからなる群から選択される。

ＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物（抗ＮＫＧ２Ａ剤）は、ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞および／またはＴ細胞のＨＬＡ−Ｅ発現細胞の死滅を引き起こす能力を増大させる化合物である。任意選択で、ＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物は、ＮＫＧ２Ａポリペプチドに結合するポリペプチド（任意選択で抗体（例えばモノクローナル抗体））である。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、ＮＫＧ２ＡのリガンドＨＬＡ−Ｅの結合を遮断することによりＮＫＧ２Ａの阻害活性を低下させる。即ち、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、ＨＬＡ−ＥによるＮＫＧ２Ａの結合を妨げる。配列番号４〜８のいずれかの重鎖と配列番号９の軽鎖とを有する抗体は、そのような抗体の一例である。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、ＮＫＧ２ＡのリガンドＨＬＡ−Ｅの結合を遮断することなくＮＫＧ２Ａの阻害活性を低下させる。即ち、抗ＮＫＧ２Ａ剤は非競合アンタゴニストであり、ＨＬＡ−ＥによるＮＫＧ２Ａの結合を妨げない。それぞれ配列番号１０および配列番号１１の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有する抗体は、そのような抗体の一例である。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、１種または複数種の活性化ＮＫＧ２レセプターへの結合と比べて有意に高い親和性でＮＫＧ２Ａに結合する抗体である。例えば、一実施形態では、この薬剤は、ＮＫＧ２Ｃへの結合と比べて有意に高い親和性でＮＫＧ２Ａに結合する抗体である。追加のまたは代替の実施形態では、この薬剤は、ＮＫＧ２Ｅへの結合と比べて有意に高い親和性でＮＫＧ２Ａに結合する抗体である。追加のまたは代替の実施形態では、この薬剤は、ＮＫＧ２Ｈへの結合と比べて有意に高い親和性でＮＫＧ２Ａに結合する抗体である。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合において、それぞれ配列番号４〜８および配列番号９の重鎖および軽鎖を有する抗体またはそれぞれ配列番号１０および配列番号１１の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有する抗体と競合する。この薬剤は、例えばヒト抗ＮＫＧ２Ａ抗体またはヒト化抗ＮＫＧ２Ａ抗体であることができる。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、それぞれ配列番号４〜８のいずれかの重鎖のいずれかの重鎖ＣＤＲと配列番号９の軽鎖の軽鎖ＣＤＲとを有するヒト化抗体である。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、それぞれ配列番号４〜８のいずれかの重鎖のいずれかの重鎖可変領域と配列番号９の軽鎖の軽鎖可変領域とを有するヒト化抗体である。改善された特性（例えば、より低い免疫原性、改善された抗原結合特性もしくはその他の機能特性等）および／または改善された物理化学的特性（例えばより良好な安定性等）を有するそのようなヒト化抗体の例示的な相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基もしくは配列および／またはフレームワーク領域（ＦＲ）中でのアミノ酸置換用の部位が提供される。

ある特定の任意選択の態様では、ＮＫＧ２Ａ用のリガンドの、任意選択で更にＰＤ−１のリガンドの、腫瘍サンプル（例えば腫瘍組織および／または腫瘍隣接組織）中での存在を評価することにより、抗ＮＫＧ２Ａ剤およびＰＤ１中和剤による処置用に患者を同定することができる。本明細書における治療的使用またはがんの処置方法もしくは予防方法のいずれかの一実施形態では、個体のがんの処置または予防は、
ａ）がんを有する個体内での悪性細胞のＨＬＡ−Ｅポリペプチド状態を判定すること、および
ｂ）悪性細胞（例えば腫瘍細胞）により（例えば悪性細胞の表面上で）ＨＬＡ−Ｅポリペプチドが顕著に発現されているとの判定時に、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物とヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤とを個体に投与すること
を含む。

本明細書における治療的使用またはがんの処置方法もしくは予防方法のいずれかの一実施形態では、個体のがんの処置または予防は、
ａ）がんを有する個体内での悪性細胞（例えば腫瘍細胞）のＨＬＡ−Ｅポリペプチド状態およびＰＤ−Ｌ１ポリペプチド状態を判定すること、ならびに
ｂ）悪性細胞の表面上でＨＬＡ−ＥポリペプチドおよびＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが顕著に発現されているとの判定時に、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物とヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤とを個体に投与すること
を含む。

一実施形態では、生物学的サンプル（例えば、腫瘍細胞、腫瘍組織および／または腫瘍隣接組織を含むサンプル）がＨＬＡ−Ｅの核酸またはポリペプチドを顕著に発現するという判定は、ヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤との組合せで、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤により処置することができるがんを個体が有することを示す。

これらの方法のいずれかの一実施形態では、工程（ａ）におけるＨＬＡ−Ｅポリペプチド状態の判定または発現レベルの判定は、生物学的サンプル中における悪性細胞のＨＬＡ−Ｅの核酸またはポリペプチドの発現レベルを測定すること、およびこのレベルを参照レベル（例えば、値、弱いまたは強い細胞表面染色等）と比較することを含む。この参照レベルは、例えば、健康な個体、（任意選択でヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤との組合せで）抗ＮＫＧ２Ａによる処置から導かれる臨床的利益がない／もしくは低い個体、または（任意選択でヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤との組合せで）抗ＮＫＧ２Ａ抗体による処置から実質的な臨床的利益が導かれる個体に対応することができる。生物学的サンプルが、増加したレベル（例えば、高い値、強い表面染色、抗ＮＫＧ２Ａ抗体による処置から臨床的利益が実質的に導かれる個体のレベルに対応するレベル、抗ＮＫＧ２Ａ抗体による処置から導かれる臨床的利益がない／または低い個体に対応するレベルと比べて高いレベル等）でＨＬＡ−Ｅの核酸またはポリペプチドを発現するという判定は、例えば本明細書で説明する処置方法に従って、ヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤との組合せで抗ＮＫＧ２Ａ抗体により処置することができるがんを個体が有することを示す。

一実施形態では、提供されるのは、ＮＫＧ２Ａ阻害ＰＤ−１発現リンパ球（ＮＫＧ２Ａ−ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ＰＤ−１−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）を同定する方法であって、
ａ）生物学的サンプル中におけるＮＫリンパ球および／またはＣＤ８Ｔリンパ球のＮＫＧ２Ａポリペプチド状態およびＰＤ−１ポリペプチド状態を判定することを含み、
ｂ）相当な割合のリンパ球の表面上でＮＫＧ２ＡポリペプチドおよびＰＤ−１ポリペプチドが発現されているとの判定は、リンパ球がＮＫＧ２Ａ阻害ＰＤ−１発現リンパ球であることを示す、
方法である。任意選択で、このリンパ球は腫瘍浸潤リンパ球である。任意選択で、この生物学的サンプルは、腫瘍組織および／または腫瘍隣接組織を含むサンプルである。

一実施形態では、提供されるのは、抗ＮＫＧ２Ａ剤による処置が適しているがんを有する個体を同定する方法であって、
ａ）個体からの腫瘍浸潤リンパ球のＮＫＧ２Ａポリペプチド状態およびＰＤ−１ポリペプチド状態を判定することを含み、
ｂ）個体からの相当な割合の腫瘍浸潤リンパ球の表面上で、任意選択で予め定義されたサブセットのＴＩＬ（例えば、ＣＤ８Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の表面上で、ＮＫＧ２ＡポリペプチドおよびＰＤ−１ポリペプチドが発現されているとの判定は、この個体には、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物とヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤とによる処置が適していることを示す、
方法である。

一実施形態では、提供されるのは、個体のがんの処置方法または予防方法であって、
ａ）個体からの腫瘍浸潤リンパ球のＮＫＧ２Ａポリペプチド状態およびＰＤ−１ポリペプチド状態を判定すること、ならびに
ｂ）個体からの相当な割合の腫瘍浸潤リンパ球の表面上で、任意選択で予め定義されたサブセットのＴＩＬ（例えば、ＣＤ８Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の表面上で、ＮＫＧ２ＡポリペプチドおよびＰＤ−１ポリペプチドが発現されているとの判定時に、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物とヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤とを含む治療レジメンを個体に施すこと
を含む方法である。

一実施形態では、腫瘍浸潤リンパ球はＣＤ８Ｔ細胞である。一実施形態では、腫瘍浸潤リンパ球はＮＫ細胞である。一実施形態では、ＣＤ８Ｔ細胞の少なくとも１０、１５、２０、２５％がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ^＋である。一実施形態では、ＣＤ８Ｔ細胞の少なくとも１０％、１５％、２０％または２５％がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋である。一実施形態では、ＮＫ細胞の少なくとも２０％、２５％、３０％または３５％がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋である。

その他の実施形態では、医薬組成物およびキットが提供され、これらを使用する方法も提供される。一実施形態では、提供されるのは、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物とヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤とを含む医薬組成物である。一実施形態では、提供されるのは、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物とヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤とを含むキットである。

これらの態様を、本明細書で提供する本発明の説明においてより完全に説明し、追加の態様、特徴および利点は、本明細書で提供する本発明の説明から明らかであるだろう。

ＰＤ−Ｌ１＋ Ｑａ−１＋ ＲＭＡ−Ｓ Ｑａ−１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ腫瘍細胞およびＡ２０腫瘍細胞は、ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞ならびにＮＫＧ２Ａおよび／またはＰＤ−１を発現するＣＤ８Ｔに浸潤されることを示すグラフである。ＲＭＡ−Ｓ Ｑａ−１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ腫瘍担持マウス（上側の列）およびＡ２０腫瘍担持マウス（下側の列）を、腫瘍体積が約５００ｍｍ^３である場合に屠殺した。腫瘍細胞（図１Ａ）および腫瘍浸潤リンパ球−ＴＩＬ−（図１Ｂ）を、腫瘍細胞の場合にはＱａ−１およびＰＤＬ−１の発現に関してならびにＴＩＬの場合にはＮＫＧ２Ａ／Ｃ／ＥおよびＰＤ−１の発現に関して、それぞれフローサイトメトリーにより分析した。ＭＦＩ：蛍光強度の中央値。 マウス中におけるＮＫ細胞およびＴ細胞のサブセット上でのＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の分布を示すグラフである。脾臓から、腫瘍所属リンパ節（ｔｕｍｏｒ ｄｒａｉｎｉｎｇ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ）から、および固形腫瘤内からリンパ球を採取した。ＰＤ−１発現は、脾臓およびリンパ節からの全ての細胞サブセットで低頻度であったが、またはなかったが、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）では、全ての細胞サブセットは、ＰＤ−１を発現する細胞を比較的高い割合で有した。その一方で、脾臓およびリンパ節では、ＮＫＧ２ＡがＮＫ細胞上で見出されたがＴ細胞サブセット上では見出されず、更に腫瘍では有意な割合のＴＩＬ上で見出され、平均してＮＫ細胞の３０％超およびＣＤ８Ｔ細胞の１９％超がＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１に関して二重陽性であった。 腫瘍担持マウス中におけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の発現を示すグラフである。ＲＭＡ Ｒａｅ１腫瘍担持マウス（上側の列）、ＭＣ３８腫瘍保持マウス（中央の列）およびＲＭＡ腫瘍保持マウス（下側の列）を、これらの腫瘍がそれぞれ５００、２０００および８００ｍｍ^３の体積に達した場合に屠殺した。ＮＫ細胞（図３Ａ）およびＣＤ８Ｔ細胞（図３Ｂ）を、ＮＫＧ２Ａ／Ｃ／ＥおよびＰＤ−１の発現に関して、脾臓中での、腫瘍所属リンパ節（ＬＮ）中でのおよび腫瘍中でのフローサイトメトリーにより分析した。 抗ＰＤ−１ｍＡｂによるマウスの処置により、ＭＣ３８腫瘍中においてＮＫＧ２Ａ発現ＴＣＤ８Ｔ細胞の頻度が増加することを示すグラフである。ＭＣ３８腫瘍担持マウスを、細胞生着から１１日後、１４日後および１７日後に、２００μｇのラットＩｇＧ２ａアイソタイプコントロール（ＩＣ）または抗マウスＰＤ−１抗体のいずれかで処置した。３１日目にマウスを屠殺し、脾臓中での、腫瘍所属リンパ節（ＬＮ）中でのおよび腫瘍中でのフローサイトメトリーによりＣＤ８Ｔ細胞をキャラクタライズした。 １１日目、１４日目および１８日目に、アイソタイプコントロール、抗マウスＮＫＧ２ＡｍＡｂ（２００μｇ、ｉｖ）、抗マウスＰＤ−Ｌ１ｍＡｂ（２００μｇ、ｉｐ）または抗ｍＮＫＧ２Ａ／ｍＰＤＬ−１組合せで処置したマウスにおける、腫瘍体積の中央値を経時的に示すグラフである。このモデルにおいて、抗ＮＫＧ２Ａではアイソタイプコントロールと比較して控えめな抗腫瘍効果のみが得られ、抗ＰＤ−Ｌ１では相当な抗腫瘍効果が得られたが、腫瘍体積は２８日頃に増加し、抗ＮＫＧ２Ａおよび抗ＰＤ−Ｌ１の組合せ処置では腫瘍増殖が完全に消失し、２８日目に観測した腫瘍体積において有意な増加はなかった。

定義
本明細書で使用する場合、「ａ」または「ａｎ」は１または複数を意味することができる。特許請求の範囲で使用する場合、単語「含む」と共に使用する際には単語「ａ」または「ａｎ」は１以上を意味することができる。本明細書で使用する場合、「別の」は少なくとも２番目またはより以降を意味することができる。

「含む」を使用する場合、この「含む」を「から本質的になる」または「からなる」で任意選択的に置き換えることができる。

ＮＫＧ２Ａ（ＯＭＩＭ１６１５５５、この開示全体が参照により本明細書に援用される）は、ＮＫＧ２群の転写産物のメンバーである（Ｈｏｕｃｈｉｎｓ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１０１７−１０２０）。ＮＫＧ２Ａは、２５ｋｂに及ぶ７個のエクソンによりコードされており、いくつかの異なるスプライシングを示す。ＣＤ９４と一緒に、ＮＫＧ２Ａはヘテロ二量体阻害レセプターＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを形成し、このＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、ＮＫ細胞、α／βＴ細胞、γ／δＴ細胞およびＮＫＴ細胞のサブセットの表面上で見出される。阻害ＫＩＲレセプターと同様に、ＮＫＧ２Ａは、この細胞質ドメインにおいてＩＴＩＭを持つ。本明細書で使用する場合、「ＮＫＧ２Ａ」は、ＮＫＧ２Ａ遺伝子またはコードされたタンパク質のあらゆる多様体、誘導体またはアイソフォームを意味する。ヒトＮＫＧ２Ａは、下記の３個のドメイン中に２３３個のアミノ酸を含む：下記の配列の残基１〜７０を含む細胞質ドメイン、下記の配列の残基７１〜９３を含む膜貫通領域、下記の配列の残基９４〜２３３を含む細胞外領域：

ＮＫＧ２Ｃ（ＯＭＩＭ６０２８９１、この開示全体が参照により本明細書に援用される）およびＮＫＧ２Ｅ（ＯＭＩＭ６０２８９２、この開示全体が参照により本明細書に援用される）は、ＮＫＧ２群の転写産物のその他の２種のメンバーである（Ｇｉｌｅｎｋｅ，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４８：１６３−１７３）。ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＣレセプターおよびＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅレセプターは、ＮＫ細胞およびＴ細胞等のリンパ球のサブセットの表面上で見出される活性型レセプターである。

ＨＬＡ−Ｅ（ＯＭＩＭ１４３０１０、この開示全体が参照により本明細書に援用される）は、細胞表面上で発現されるおよびペプチド（例えばその他のＭＨＣクラスＩ分子のシグナル配列に由来する断片等）の結合により制御される非古典的なＭＨＣ分子である。ＨＬＡ−Ｅの可溶性バージョンも同定されている。ＨＬＡ−ＥのＴ細胞レセプター結合特性に加えて、ＨＬＡ−Ｅは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＢおよびＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃへの特異的な結合により、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）ならびにＴ細胞（α／βおよびγ／δ）のサブセットに結合する（例えばＢｒａｕｄ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９１：７９５−７９９を参照されたい。この開示全体が参照により本明細書に援用される）。ＨＬＥ−Ａの表面発現により、標的細胞は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ＋のＮＫ細胞クローン、Ｔ細胞クローンまたはＮＫＴ細胞クローンによる溶解から保護される。本明細書で使用する場合、「ＨＬＡ−Ｅ」は、ＨＬＡ−Ｅ遺伝子またはコードされたタンパク質のあらゆる多様体、誘導体またはアイソフォームを意味する。

本発明の文脈では、「ＮＫＧ２Ａ」または「ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球」は、細胞表面上でＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現するリンパ系の細胞（例えばＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞およびＴ細胞）を意味しており、この細胞を、例えば、ＣＤ９４上およびＮＫＧ２Ａ上の複合エピトープまたはＮＫＧ２Ａ上のエピトープのみを特異的に認識する抗体を使用するフローサイトメトリーにより検出することができる。「ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球」はまたは、リンパ起源の不死化細胞株（例えばＮＫＬ、ＮＫ−９２）も含む。

本発明の文脈において、「ＮＫＧ２Ａの阻害活性を低下させる」、「ＮＫＧ２Ａを中和する」または「ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する」は、サイトカイン放出および細胞傷害応答等のリンパ球応答が引き起こされる細胞内プロセスに悪影響を及ぼすＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの能力が阻害されるプロセスを意味する。このことを、例えばＮＫ細胞またはＴ細胞をベースとする細胞傷害アッセイで測定することができ、この細胞傷害アッセイでは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球によるＨＬＡ−Ｅ陽性細胞の死滅を刺激する治療用化合物の能力が測定される。一実施形態では、抗体調製物により、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ制限リンパ球（ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）の細胞傷害性が少なくとも１０％増大し、任意選択でリンパ球の細胞傷害性が少なくとも４０％または５０％増大し、任意選択でＮＫ細胞傷害性が少なくとも７０％増大し、説明する細胞傷害アッセイを参照する。抗ＮＫＧ２Ａ抗体がＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡのＨＬＡ−Ｅとの相互作用を低下させるまたは遮断する場合、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ制限リンパ球の細胞障害性を増加させることができる。このことを、例えばＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞とＨＬＡ−Ｅを発現する標的細胞とを使用する標準的な４時間ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害アッセイで評価することができる。そのようなＮＫ細胞によるＨＬＡ−Ｅ発現標的の死滅は効率的ではない。なぜならば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡがＨＬＡ−Ｅを認識し、リンパ球により媒介される細胞溶解を防止する阻害シグナル伝達が開始されて伝播されるからである。そのようなｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害アッセイを、例えばＣｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）に記載されているように当分野で公知である標準的な方法により実行することができる。また、リンパ球を刺激してＰ８１５細胞、Ｋ５６２細胞等の標的細胞または適切な腫瘍細胞を死滅させる抗体の能力を評価するためのクロム放出および／またはその他のパラメータが、Ｓｉｖｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９−１１３６、Ｖｉｔａｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８７：２０６５−２０７２、Ｐｅｓｓｉｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８８：９５３−９６０、Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎ．２００１；８：１１３１−１１３５、Ｐｅｎｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９９；１９０：１５０５−１５１６で開示されており、これらの開示全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される。ＮＫ細胞の添加前に標的細胞を^５１Ｃｒで標識し、次いで、死滅の結果としてのこの細胞から培地への^５１Ｃｒの放出に比例して死滅を推定する。ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡがＨＬＡ−Ｅに結合するのを防止する抗体の添加により、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａによる阻害シグナル伝達の開始および伝播が防止される。従って、そのような薬剤の添加により、リンパ球により媒介される標的細胞の死滅が増加する。その結果、この工程により、例えばリガンド結合を遮断することでＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ誘発性の負のシグナル伝達を防止する薬剤が同定される。特定の^５１Ｃｒ放出細胞傷害アッセイでは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現ＮＫエフェクター細胞はＨＬＡ−Ｅ陰性ＬＣＬ７２１．２２１標的細胞を死滅させることができるが、ＨＬＡ−Ｅ発現ＬＣＬ７２１．２２１−Ｃｗ３コントロール細胞をあまり死滅させることができない。対照的に、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを欠失しているＹＴＳエフェクター細胞は両方の細胞株を効率的に死滅させる。そのため、ＮＫエフェクター細胞によるＨＬＡ−Ｅ^＋ＬＣＬ７２１．２２１−Ｃｗ３細胞の死滅は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡによるＨＬＡ−Ｅ誘発性阻害シグナル伝達に起因してあまり効率的ではない。そのような^５１Ｃｒ放出細胞傷害アッセイにおいて、ＮＫ細胞を、本発明に係る抗ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ抗体を遮断しつつプレインキュベートする場合、ＨＬＡ−Ｅ発現ＬＣＬ７２１．２２１−Ｃｗ３細胞は、抗体濃度依存的様式でより効率的に死滅される。抗ＮＫＧ２Ａ抗体の阻害活性（即ち細胞傷害性を高める能力）を、多くのその他の方法のいずれかで評価することもでき、例えば、例えばＳｉｖｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９−１１３６（この開示は参照により本明細書に援用される）で説明されているような細胞内遊離カルシウムへの効果により評価することもできる。ＮＫ細胞の細胞傷害性の活性化を、例えばサイトカイン産生（例えばＩＦＮ−γ産生）または細胞傷害性マーカー（例えばＣＤ１０７またはＣＤ１３７の動員）の増加を測定することにより評価することができる。例示的なプロトコルでは、ＰＢＭＣからのＩＦＮ−ｙ産生を、培養下での４日後に細胞表面および細胞質内の染色により評価してフローサイトメトリーにより分析する。簡潔に言うと、培養の最後の４時間にわたり５μｇ／ｍｌの最終濃度でＢｒｅｆｅｌｄｉｎ Ａ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加する。次いで、透過処理（ＩｎｔｒａＰｒｅｐ（商標）、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）およびＰＥ抗ＩＦＮ−ｙまたはＰＥ−ＩｇＧ１（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）による染色の前に、細胞を抗ＣＤ３および抗ＣＤ５６ｍＡｂと共にインキュベートする。ＥＬＩＳＡ（ＧＭ−ＣＳＦ：ＤｕｏＳｅｔ Ｅｌｉｓａ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＩＦＮ−ｙ：ＯｐｔＥＩＡセット、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用して、上清中におけるポリクローナル活性化ＮＫ細胞からのＧＭ−ＣＳＦおよびＩＦＮ−ｙの産生を測定する。

本明細書で使用する場合、用語「ＰＤ−１」は、ＣＤ２８ファミリのレセプターの阻害メンバーであるタンパク質プログラム死１（ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｄｅａｔｈ １）（ＰＤ−１）（「プログラム細胞死１」とも称される）を意味しており、このＣＤ２８ファミリには、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含まれる。完全ヒトＰＤ−１配列をＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ６４８６３で見出すことができ、下記に示す：

「ＰＤ−１」はまた、ＰＤ−１遺伝子またはコードされたタンパク質のあらゆる多様体、誘導体またはアイソフォームも含む。ＰＤ−１は、活性化されたＢ細胞上で、Ｔ細胞上でおよび骨髄細胞上で発現されるＯｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：３９１７７９−８２、Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０：７１１−８）。このファミリの最初のメンバーであるＣＤ２８およびＩＣＯＳは、モノクローナル抗体の添加後のＴ細胞増殖の増大への機能的効果により発見された（Ｈｕｔｌｏｆｆ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ ３９７：２６３−２６６、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｓ １０：２４７−２６０）。ＰＤ−１に対する２種のリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２が同定されており、これらのリガンドはＰＤ−１への結合時にＴ細胞活性化を下方制御することが分かっている（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：１０２７−３４、Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２６１−８、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：６３４−４３）。ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２は両方とも、ＰＤ−１に結合するがその他のＣＤ２８ファミリメンバーには結合しないＢ７相同体である。

完全ヒトＰＤ−Ｌ１配列をＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ識別子Ｑ９ＮＺＱ７−１で見出すことができ、下記に示す：

ＰＤ−Ｌ１は様々なヒトがんで豊富に存在している（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７８７−９）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用により、腫瘍浸潤リンパ球が減少し、Ｔ細胞レセプターにより媒介される増殖が低下し、がん性細胞による免疫回避が起こる（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１−７、Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７−３１４、Ｋｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：５０９４−１００）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との局所的な相互作用を阻害することにより免疫抑制を元に戻すことができ、この効果は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用が同様に遮断される際にも付加される。

本発明の文脈において、「ヒトＰＤ−１の阻害活性を低下させる」、「ＰＤ−１を中和する」または「ヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する」は、ＰＤ−１と、このＰＤ−１の結合パートナー（例えばＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２）の内の１種または複数種との相互作用により生じるＰＤ−１のシグナル伝達能力が阻害されるプロセスを意味する。ＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤は、ＰＤ−１と、このＰＤ−１の結合パートナー（例えばＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２）の内の１種または複数種との相互作用により生じるシグナル伝達を低減する、遮断する、阻害する、抑止する、または妨げる。その結果、そのような薬剤は、Ｔリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質により媒介される負の共刺激シグナルまたはこの細胞表面タンパク質を介した負の共刺激シグナルを低減することができ、その結果、増殖、サイトカイン産生および／または細胞傷害性等のＴ細胞エフェクター機能が増強される。

本明細書全体において、「がんの処置」等が抗ＮＫＧ２Ａと抗ＰＤ−１結合剤または抗ＰＤ−Ｌ１結合剤（例えば抗体）とに関して述べられている場合は常に、（ａ）がんの処置方法であって、がんの処置を可能とする用量（治療上有効な量）で、任意選択で本明細書において指定する用量（量）で、そのような処置を必要とする個体、哺乳動物、特にヒトに、（例えば薬学的に許容される担体材料と一緒にまたは別々に）ＮＫＧ２Ａと抗ＰＤ−１結合剤もしくは抗ＰＤ−Ｌ１結合剤とを（少なくとも１回の処置のために）投与する工程を含む方法；（ｂ）がんの処置のための抗ＮＫＧ２Ａと抗ＰＤ−１結合剤もしくは抗ＰＤ−Ｌ１結合剤との使用、または（特にヒトにおいて）前記処置で使用するための抗ＮＫＧ２Ａ結合剤、（ｃ）がんの処置用の医薬調製物を製造するための抗ＮＫＧ２Ａと抗ＰＤ−１結合剤もしくは抗ＰＤ−Ｌ１結合剤との使用、がんの処置用の医薬調製物を製造するために抗ＮＫＧ２Ａと抗ＰＤ−１結合剤もしくは抗ＰＤ−Ｌ１結合剤とを使用する方法であって、抗ＮＫＧ２Ａおよび抗ＰＤ−１結合剤もしくは抗ＰＤ−Ｌ１結合剤と薬学的に許容される担体とを混合することを含む方法、またはがんの処置に適切な抗ＮＫＧ２Ａと抗ＰＤ−１結合剤もしくは抗ＰＤ−Ｌ１結合剤との有効用量を含む医薬調製物；または（ｄ）本出願が出願される国での特許が許容される主題に従うａ）、ｂ）およびｃ）の任意の組合せが含まれる。

用語「生検」は、本明細書で使用する場合、診断を確立するため等の検査を目的とする組織の摘出として定義される。生検の種類の例として、シリンジに取り付けられた針による等の吸引の適用によるもの、機器による組織断片の摘出によるもの、内視鏡を介した適切な機器による摘出によるもの、例えば病変全体外科的切除によるもの等が挙げられる。

用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を意味する。重鎖中の定常ドメインの種類に応じて、抗体は下記の５種の主なクラスの内の１種に割り当てられる：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ。これらの内のいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４等のサブクラスまたはアイソタイプに更に分類される。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は四量体を含む。各四量体は２つの同一対のポリペプチド鎖で構成され、各対は、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０個またはより多くのアミノ酸の可変領域を画定する。用語可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）および可変重鎖（Ｖ_Ｈ）はそれぞれ、これらの軽鎖および重鎖を意味する。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」および「ミュー」と称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元立体配置が公知である。ＩｇＧは、本明細書で用いる抗体の例示的なクラスである。なぜならば、ＩｇＧは、生理学的状況下で最も一般的な抗体であり、研究室の環境下で最も容易に作製されるからである。任意選択で、抗体はモノクローナル抗体である。抗体の特定の例は、ヒト化されている、キメラである、ヒトである、またはヒトに適した抗体である。「抗体」はまたは、本明細書で説明する抗体のいずれかのあらゆる断片または誘導体を含む。

用語「特異的に結合する」は、タンパク質の組み換え形態、このタンパク質中のエピトープ、または単離標的細胞の表面上に存在する天然タンパク質のいずれかを使用して評価する場合、抗体が好ましくは競合結合アッセイにおいて結合パートナー（例えばＮＫＧ２Ａ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１）に結合することができることを意味する。競合結合アッセイおよび特異的な結合を判定するためのその他の方法は当分野で公知である。例えば、放射能標識により、質量分析等の物理的方法により、または例えば細胞蛍光測定分析（例えばＦＡＣＳｃａｎ）を使用して検出される直接蛍光標識もしくは間接蛍光標識により、結合を検出することができる。非特異的薬剤であるコントロールで見られる量を超える結合は、薬剤が標的に結合することを示す。ＮＫＧ２Ａに特異的に結合する薬剤は、ＮＫＧ２ＡのみにまたはＣＤ９４との二量体としてのＮＫＧ２Ａに結合することができる。

抗体が特定のモノクローナル抗体と「競合する」と言う場合、このことは、組み換え分子（例えばＮＫＧ２Ａ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１）または表面で発現される分子（例えばＮＫＧ２Ａ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１）のいずれかを使用する結合アッセイにおいて、抗体がモノクローナル抗体と競合することを意味する。例えば、試験抗体が、結合アッセイにおいて配列番号４〜８のいずれかの重鎖と配列番号９の軽鎖とを有する抗体のＮＫＧ２ＡポリペプチドまたはＮＫＧ２Ａ発現細胞への結合を低下させる場合、この抗体は、そのような抗体とそれぞれ「競合する」と言う。

用語「親和性」は、本明細書で使用する場合、エピトープへの抗体の結合の強さを意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ−Ａｇ］として定義される解離定数Ｋｄにより得られ、［Ａｂ−Ａｇ］は抗体−抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は非結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は非結合抗原のモル濃度である。親和性定数Ｋ_ａは１／Ｋｄで定義される。ｍＡｂの親和性を判定する方法を、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）中に見出すことができ、これらの参考文献はその全体が参照により本明細書に援用される。ｍＡｂの親和性を判定するための当分野で公知の標準的な一方法は、（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析デバイスでの分析による）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニングの使用である。

本明細書の文脈中において、「決定基」はポリペプチド上の相互作用部位または結合部位を示す。

用語「エピトープ」は抗原決定基を意味しており、抗体が結合する抗原上のエリアまたは領域のことである。タンパク質エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、特異的な抗原結合抗体または抗原結合ペプチドにより効率的に遮断されるアミノ酸残基（即ち、抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基）とを含むことができる。タンパク質エピトープは、例えば抗体またはレセプターと結合することができる複雑な抗原分子上の最も単純な形のまたは最小の構造エリアである。エピトープは、直線状または立体構造的／構造的であることができる。用語「直線状エピトープ」は、アミノ酸の直線状配列（一次構造）上で連続するアミノ酸残基で構成されているエピトープと定義される。用語「立体構造的エピトープまたは構造的エピトープ」は、全てが連続しているわけではなく、そのため分子のフォールディング（二次構造、三次構造および／または四次構造）により互いに近接するようになるアミノ酸の直線状配列の分離した部分を表すアミノ酸残基で構成されているエピトープと定義される。立体構造的エピトープは３次元構造に依存する。従って、用語「立体構造的」は「構造的」と互換的に使用されることが多い。

本明細書では、用語「薬剤」を、化学化合物、化学化合物の混合物、生体高分子、または生体物質から作られた抽出物を示すために使用する。用語「治療剤」は、生物学的活性を有する薬剤を意味する。

本明細書での目的のために、「ヒト化」抗体または「ヒト」抗体は、１種または複数種のヒト免疫グロブリンの定常フレームワークおよび可変フレームワークが動物免疫グロブリンの結合領域（例えばＣＤＲ）と融合している抗体を意味する。そのような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を維持するが非ヒト抗体に対する免疫応答を回避するように設計されている。そのような抗体を、抗原負荷に反応して特異的なヒト抗体を産生するように「設計されている」トランスジェニックマウスまたはその他の動物から得ることができる（例えばＧｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ ７：１３、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎ ６：５７９を参照されたい。これらの教示全体が参照により本明細書に援用される）。完全ヒト抗体を、遺伝子または染色体のトランスフェクション法およびファージディスプレイ技術により構築することもでき、これらは全て当分野で既知である（例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５３を参照されたい）。ヒト抗体を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化されたＢ細胞により生成することもできる（例えば米国特許第５，５６７，６１０号明細書および米国特許第５，２２９，２７５号明細書を参照されたい。これらの全体が参照により援用される）。

「キメラ抗体」は、（ａ）定常領域もしくはその一部が改変され、置換され、もしくは交換され、その結果、抗原結合部位（可変領域）が、異なるもしくは改変されたクラスの定常領域、エフェクター機能および／もしくは種に連結されている、またはキメラ抗体に新たな特性を付与する完全に異なる分子、例えば酵素、毒素、ホルモン、増殖因子、薬等に連結されている、または（ｂ）可変領域もしくはその一部が、異なるもしくは改変された抗原特異性を有する可変領域により改変されている、置換されている、もしくは交換されている、抗体分子である。

用語「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」および「Ｆｃ領域」は抗体重鎖のＣ末端断片を意味しており、例えば、ヒトγ（ガンマ）重鎖の約アミノ酸（ａａ）２３０〜約ａａ４５０もしくはその他の種類の抗体重鎖（例えば、ヒト抗体の場合α、δ、εおよびμ）中における前記約アミノ酸（ａａ）２３０〜約ａａ４５０に対応する配列またはこれらの天然に存在するアロタイプからのＣ末端断片を意味する。別途指定しない限り、本開示全体を通して、免疫グロブリンに関して一般に認められるＫａｂａｔアミノ酸ナンバリングを使用する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照されたい）。

用語「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」は、その天然な状態で見られるように通常付随する構成成分を実質的にまたは本質的に含まない物質を意味する。純度および均一性は概して、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィー等の分析化学技術を使用して測定される。調製物中に存在する主な種であるタンパク質は、実質的に精製されている。

本明細書において、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」を、アミノ酸残基のポリマーを意味するように互換的に使用する。これらの用語を、１個または複数個のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび天然には存在しないアミノ酸ポリマーに適用する。

用語「組み換え」は、例えば細胞、核酸、タンパク質またはベクターに関して使用する場合、細胞、核酸、タンパク質またはベクターが異種の核酸もしくはタンパク質の導入または天然の核酸もしくはタンパク質の変更により改変されていること、または細胞がそのように改変されている細胞に由来することを示す。そのため、例えば、組み換え細胞は、天然（非組み換え）形態の細胞内では見られない遺伝子を発現する、または異常に発現される、不十分に発現されるもしくは全く発現されない天然遺伝子を発現する。

本明細書の文脈中において、用語ポリペプチドまたはエピトープに「結合する」抗体は、特異性および／または親和性で前記決定基に結合する抗体を示す。

用語「同一性」または「同一の」は、２種以上のポリペプチドの配列間の関係で使用する場合、２種以上のアミノ酸残基の列の間のマッチの数により決定されるように、ポリペプチド間の配列関連性の程度を意味する。「同一性」は、特定の数理モデルまたはコンピュータプログラム（即ち「アルゴリズム」）により処理されるギャップアラインメント（ある場合）を有する２種以上の配列のより小さい方の間の同一マッチの割合を示す。関連するポリペプチドの同一性を、既知の方法により容易に算出することができる。そのような方法として、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８、Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１およびＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載されているものが挙げられるがこれらに限定されない。

同一性を測定する方法は、試験する配列の間に最大のマッチをもたらすように設計されている。同一性を測定する方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムに記載されている。２種の配列間の同一性を測定するためのコンピュータプログラム法として、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）等のＧＣＧプログラムパッケージ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３−４１０（１９９０））が挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）およびその他の供給源（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，上記参照）から公的に入手可能である。公知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを、同一性を測定するために使用することもできる。

ＮＫＧ２Ａ中和治療剤
抗ＮＫＧ２Ａ薬剤はヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａレセプターの細胞外部分に結合し、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球の表面上で発現されたヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａレセプターの阻害活性を低下させる。一実施形態では、この薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合においてＨＬＡ−Ｅと競合する。即ち、この薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡとこのＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡのリガンドＨＬＡ−Ｅとの相互作用を遮断する。別の実施形態では、この薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合においてＨＬＡ−Ｅと競合しない。即ち、この薬剤は、ＨＬＡ−Ｅと同時にＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに結合することができる。この抗体は、ＣＤ９４上およびＮＫＧ２Ａ上の複合エピトープまたはならびにＮＫＧ２Ａ上のエピトープのみに結合することができる。

一態様では、この抗ＮＫＧ２Ａ薬剤は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体およびキメラ抗体から選択される抗体である。一態様では、この薬剤は、ヒトＩｇＧ１抗体、ヒトＩｇＧ２抗体、ヒトＩｇＧ３抗体またはヒトＩｇＧ４抗体に由来する定常ドメインを含む。一態様では、この薬剤は、ＩｇＡ抗体、ＩｇＤ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＥ抗体およびＩｇＭ抗体から選択される抗体の断片である。一態様では、この薬剤は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、重鎖Ｉｇ（ラマまたはラクダのＩｇ）、Ｖ_ＨＨ断片、単一ドメインＦＶおよび単鎖抗体断片から選択される抗体断片である。一態様では、この薬剤は、ｓｃＦＶ、ｄｓＦＶ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、カッパボディ、ＩｇＮＡＲおよび多重特異性抗体から選択される合成のまたは半合成の抗体由来分子である。

任意選択で、この抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、Ｆｃγレセプター（例えばＣＤ１６）への実質的な特異的結合を示さない。そのような抗体は、Ｆｃレセプターに結合しないことが分かっている様々な重鎖の定常領域を含むことができる。そのような一例は、ヒトＩｇＧ４定常領域である。一実施形態では、ＩｇＧ４抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏでの半抗体の形成（ｆａｂアーム交換）を防止するような改変を含み、例えば、この抗体は、ＥＵインデックスに従う２２８位に対応する残基２４１でのセリンからプロリンへの変異を含むＩｇＧ４重鎖を含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５^ｔｈ ｅｄ．，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＬ，１９９１）。そのような改変ＩｇＧ４抗体は、結合親和性を変更させる可能性がある一価様式でＮＫＧ２Ａに結合するようなｉｎ ｖｉｖｏでのｆａｂアーム交換を受けるであろう天然ＩｇＧ４とは対照的に、ｉｎ ｖｉｖｏで原形を維持してＮＫＧ２Ａへの二価（高親和性）結合を維持することができる。あるいは、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）２断片等の定常領域を含まない抗体断片を使用して、Ｆｃレセプター結合を回避することができる。Ｆｃレセプター結合を当分野で既知の方法に従って評価することができ、この方法として、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいてＦｃレセプタータンパク質への抗体の結合を試験することが挙げられる。また、Ｆｃレセプターへの結合が最小化されるようにまたは除去されるようにＦｃ部分が改変されている、あらゆるヒト抗体タイプ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）を使用することができる（例えば国際公開第０３１０１４８５号パンフレットを参照されたい。この開示は参照により本明細書に援用される）。Ｆｃレセプター結合を評価するためのアッセイ（例えば細胞ベースのアッセイ）は当分野で公知であり、例えば国際公開第０３１０１４８５号パンフレットで説明されている。

そのため、本発明は、ＮＫＧ２Ａに結合する抗体またはその他の薬剤に関する。一態様では、この抗体は、ヒトＮＫＧ２Ｃおよび／またはＮＫＧ２Ｅへの結合と比べて少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａに結合する。

本発明の一態様では、この薬剤は、例えば、ＮＫＧ２ＡによるＨＬＡ−Ｅの結合を妨げることにより、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａレセプターでの立体構造変化を防止するもしくは誘発することにより、ならびに／またはＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａレセプターの二量体化および／もしくはクラスター化に影響を及ぼすことにより、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達を妨げることで、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現リンパ球のＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ媒介性阻害を低下させる。

本発明の一態様では、この薬剤は、ＮＫＧ２Ｃへの結合と比べて少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。更に好ましい態様では、この薬剤は、ＮＫＧ２Ｃへの結合と比べて少なくとも１５０、２００、３００、４００または１０，０００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。本発明の別の態様では、この薬剤は、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅおよび／またはＮＫＧ２Ｈ分子への結合と比べて少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。更に好ましい態様では、この薬剤は、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｃおよび／またはＮＫＧ２Ｈ分子への結合と比べて少なくとも１５０、２００、３００、４００または１０，０００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。このことを例えばＢｉａＣｏｒｅ実験で測定することができ、このＢｉａＣｏｒｅ実験では、固定されたＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ（例えば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２発現細胞から精製されている、または生体系で産生されている）の細胞外部分に結合する薬剤の能力を測定し、同じアッセイにおける、同様に産生されたＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃおよび／またはその他のＣＤ９４／ＮＫＧ２多様体への薬剤の結合と比較する。あるいは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを普通に発現するまたは（例えば一過性のもしくは安定した遺伝子導入の後に）過剰に発現する細胞への薬剤の結合を測定し、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃおよび／またはその他のＣＤ９４／ＮＫＧ２多様体を発現する細胞への結合と比較することができる。抗ＮＫＧ２Ａ抗体は任意選択でＮＫＧ２Ｂに結合することができ、このＮＫＧ２Ｂは、ＣＤ９４と一緒に阻害レセプターを形成するＮＫＧ２Ａスプライス多様体である。一実施形態では、米国特許第８，２０６，７０９号明細書で開示されている方法を使用して親和性を測定することができ、例えば米国特許第８，２０６，７０９号明細書の実施例８に示されているＢｉａｃｏｒｅにより、共有結合により固定されたＮＫＧ２Ａ−ＣＤ９４−Ｆｃ融合部分への結合を評価することで親和性を測定することができ、この明細書の開示は参照により本明細書に援用される。

この抗ＮＫＧ２Ａ抗体はヒト化抗体であることができ、例えば、例えばＶＨ１＿１８、ＶＨ５＿ａ、ＶＨ５＿５１、ＶＨ１＿ｆおよびＶＨ１＿４６およびＪＨ６ Ｊセグメントから選択されるヒトアクセプター配列からのＶＨヒトアクセプターフレームワークまたは当分野で既知のその他のヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列を含むヒト化抗体であることができる。ＶＬ領域ヒトアクセプター配列は例えばＶＫＩ＿Ｏ２／ＪＫ４であることができる。

一実施形態では、この抗体は、抗体Ｚ２７０をベースとするヒト化抗体である。様々なヒト化Ｚ２７０ＶＨ鎖を配列番号４〜８（可変領域ドメインアミノ酸に下線を引いてある）に示す。ＨｕｍＺ２７０ＶＨ６（配列番号４）はＶＨ５＿５１をベースとしており、ＨｕｍＺ２７０ＶＨ１（配列番号５）はＶＨ１＿１８をベースとしており、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ５（配列番号６）はＶＨ５＿ａをベースとしており、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ７（配列番号７）はＶＨ１＿ｆをベースとしており、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ８（配列番号８）はＶＨ１＿４６をベースとしており、全てがＪＨ６ Ｊセグメントを有する。これらの抗体はそれぞれ、この抗体に対する宿主免疫応答の可能性が低いＮＫＧ２Ａへの高親和性の結合を保持する。なぜならば、ヒト化構築物それぞれのＫａｂａｔ ＣＤＲ−Ｈ２の６個のＣ末端アミノ酸残基はヒトアクセプターフレームワークと同一だからである。アラインメントプログラムＶｅｃｔｏｒＮＴＩを使用して、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ１とｈｕｍＺ２７０ＶＨ５、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ６、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ７およびｈｕｍＺ２７０ＶＨ８との間の下記の配列同一性を得た：７８，２％（ＶＨ１対ＶＨ５）、７９，０％（ＶＨ１対ＶＨ６）、８８，７％（ＶＨ１対ＶＨ７）および９６，０％（ＶＨ１対ＶＨ８）。

一態様では、この薬剤は、（ｉ）配列番号４〜８のいずれかまたはこの配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号９またはこの配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域とを含む。一態様では、この薬剤は、（ｉ）配列番号４〜８のいずれかのアミノ酸配列またはこのアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列またはこのアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。配列番号４〜８のいずれかの重鎖と配列番号９の軽鎖とを有する抗体は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和するが、活性型レセプターＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧＥまたはＮＫＧ２Ｈには実質的に結合しない。この抗体は更に、細胞の表面上のＮＫＧ２Ａへの結合に関してＨＬＡ−Ｅと競合する。一態様では、この薬剤は、配列番号４〜８のいずれかのアミノ酸配列を有する重鎖に由来するＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列および／またはＨＣＤＲ３配列を含む。本発明の一態様では、この薬剤は、配列番号９のアミノ酸配列を有する軽鎖に由来するＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列および／またはＬＣＤＲ３配列を含む。

重鎖
ＶＨ６：

ＶＨ１：

ＶＨ５：

ＶＨ７：

ＶＨ８：

軽鎖

一態様では、この抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号４〜８の残基３１〜３５に対応するＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号４〜８の残基５０〜６０（任意選択でヒト起源のアミノ酸を含む場合には５０〜６６）に対応するＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号４〜８の残基９９〜１１４（Ｋａｂａｔによれば９５〜１０２）に対応するＣＤＲ−Ｈ３とを含む抗体である。一実施形態では、配列番号４〜８の残基５０〜６６に対応するＣＤＲ−Ｈ２。任意選択で、ＣＤＲは、１個、２個、３個、４個またはより多くのアミノ酸置換を含むことができる。

一態様では、この抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号９の残基２４〜３４に対応するＣＤＲ−Ｌ１と、配列番号９の残基５０〜５６に対応するＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号９の残基８９〜９７に対応するＣＤＲ−Ｌ３とを含む抗体である。任意選択で、ＣＤＲは、１個、２個、３個、４個またはより多くのアミノ酸置換を含むことができる。

一態様では、この抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号４〜８の残基３１〜３５に対応するＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号４〜８の残基５０〜６０（任意選択で５０〜６６）に対応するＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号４〜８の残基９９〜１１４（Ｋａｂａｔによれば９５〜１０２）に対応するＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号９の残基２４〜３４に対応するＣＤＲ−Ｌ１と、配列番号９の残基５０〜５６に対応するＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号９の残基８９〜９７に対応するＣＤＲ−Ｌ３とを含む抗体である。

一態様では、この薬剤は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨに由来するＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列および／またはＨＣＤＲ３配列を含む。本発明の一態様では、この薬剤は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬに由来するＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列および／またはＬＣＤＲ３配列を含む。一態様では、この薬剤は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨに由来するＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列および／またはＨＣＤＲ３配列と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬに由来するＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列および／またはＬＣＤＲ３配列とを含む。配列番号１０の重鎖と配列番号１１の軽鎖とを有する抗体は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和し、更に活性型レセプターＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２ＥまたはＮＫＧ２Ｈに結合する。この抗体は、細胞の表面上のＮＫＧ２Ａへの結合に関してＨＬＡ−Ｅと競合しない（即ち、この抗体はＮＫＧ２Ａの非競合的アンタゴニストである）。

一態様では、この薬剤は、可変重（Ｖ_Ｈ）ドメイン（配列番号１０）のアミノ酸残基３１〜３５、５０〜６０、６２、６４、６６および９９〜１０８と、可変軽（Ｖ_Ｌ）ドメイン（配列番号１１）のアミノ酸残基２４〜３３、４９〜５５および８８〜９６とを含み、任意選択で、１個、２個、３個、４個またはより多くのアミノ酸が置換されている。

一態様では、この薬剤は、上述した抗体のいずれかが結合するＣＤ９４／ＮＫＧ２エピトープに対して産生されている完全ヒト抗体である。

上述した抗体を使用することができるが、その他の抗体がＮＫＧ２Ａポリペプチドの任意の部分を認識し得るおよびこの任意の部分に対して産生され得、但しこの抗体はＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和を引き起こすことが認識されるだろう。例えば、ＮＫＧ２Ａ（好ましくはヒトＮＫＧ２Ａであるがこれに限定されない）の任意の断片を、またはＮＫＧ２Ａ断片の任意の組合せを、抗体を産生するための免疫源として使用することができ、この抗体はＮＫＧ２Ａポリペプチド内の任意の位置でエピトープを認識することができ、但し、この抗体は、本明細書で説明したＮＫＧ２Ａ発現ＮＫ細胞上でそのように行なうことができる。任意選択で、このエピトープは、配列番号４〜８の重鎖と配列番号９の軽鎖とを有する抗体により特異的に認識されるエピトープである。

一態様では、この薬剤は、ヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａレセプターの細胞外部分への結合において、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（この開示は参照により本明細書に援用される）で開示されているｈｕｍＺ２７０抗体と競合する。例えば、ｈｕｍＺ２７０で飽和された、固定されたＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａレセプター（例えば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２発現細胞から精製されている、または生体系で産生されている）の細胞外部分への結合に関して薬剤の能力を測定するＢｉａＣｏｒｅ実験において、競合的結合を測定することができる。あるいは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａレセプターを普通に発現するまたは（例えば一過性のもしくは安定した遺伝子導入の後に）過剰に発現する細胞への薬剤の結合が測定され、この細胞は、飽和用量のＺ２７０と共にプレインキュベートされている。一実施形態では、米国特許第８，２０６，７０９号明細書で開示されている方法を使用して競合的結合を測定することができ、例えば米国特許第８，２０６，７０９号明細書の実施例１５に示されているフローサイトメトリーによりＢａ／Ｆ３−ＣＤ９４−ＮＫＧ２Ａ細胞への結合を評価することで競合的結合を測定することができる。

ＰＤ−１中和治療剤
現在、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を遮断する少なくとも６種の薬剤が存在しており、これらの薬剤は市販されている、または臨床評価中である。一例の薬剤は、ＢＭＳ−９３６５５８（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ／ＯＮＯ−４５３８、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；以前はＭＤＸ−１１０６）である。Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ（商品名Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））は、ＰＤ−１およびＣＤ８０の両方へのＰＤ−Ｌ１リガンドの結合を阻害し、国際公開第２００６／１２１１６８号パンレフット（この開示は参照により本明細書に援用される）において抗体５Ｃ４として説明されている、ＦＤＡにより承認された完全ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ−Ｌ１ｍＡｂである。黒色腫患者の場合では３ｍｇ／ｋｇの用量で最も有意なＯＲが観測されたが、その他のがんの種類の場合では１０ｍｇ／ｋｇで最も有意なＯＲが観測された。Ｎｉｖｏｌｕｍａは一般に、がんの進行まで３週毎に１０ｍｇ／ｋｇで投与される。

ＭＫ−３４７５（ＭｅｒｃｋのヒトＩｇＧ４抗ＰＤ−１ｍＡｂ）（ランブロリズマブまたはペンブロリズマブ（商品名Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））とも称される）は黒色腫の処置用にＦＤＡにより承認されており、その他のがんでは試験中である。ペンブロリズマブは、疾患の進行まで２週毎にまたは３週毎に２ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇで試験された。ヒト化抗体ｈ４０９ＡＩＩの重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡ構築物が、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）により寄託されている。ｈ４０９Ａ−Ｉ１の重鎖をコードするＤＮＡを含むプラスミドが２００８年６月９日に寄託されて０８１４６９＿ＳＰＤ−Ｈと識別され、ｈ４０９ＡＩ１の軽鎖をコードするＤＮＡを含むプラスミドが２００８年６月９日に寄託されて０８０１４７０＿ＳＰＤ−Ｌ−Ｉ１と識別された。また、国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットにはＭＫ−３４７５（Ｍｅｒｃｋ ３７４５またはＳＣＨ−９００４７５としても知られている）も説明されている。

ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈの抗ＰＤ−Ｌ１）は、ＦｃγＲ結合を最小化し、結果として抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を最小化することにより有効性および安全性を最適化するように設計されている操作Ｆｃドメインを含むヒト抗ＰＤ−Ｌ１ｍＡｂである。≦１、１０、１５および２５ｍｇ／ｋｇの用量のＭＰＤＬ３２８０Ａは最大で１年にわたり３週毎に投与された。第３相試験において、ＭＰＤＬ３２８０Ａは、ＮＳＣＬＣにおいて３週毎に静脈内注入により１２００ｍｇで投与される。

ＡＭＰ−２２４（ＡｍｐｌｉｍｍｕｎｅおよびＧＳＫ）は、Ｆｃドメインに融合したＰＤ−Ｌ２細胞外ドメインを含むイムノアドヘシンである。ＰＤ−１を中和する薬剤のその他の例として、ＰＤ−Ｌ２に結合してＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用を遮断する抗体（抗ＰＤ−Ｌ２抗体）を挙げることができる。

Ｐｉｄｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ−０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）（ＣｕｒｅＴｅｃｈ／Ｔｅｖａのヒト化ＩｇＧ１抗ＰＤ１ｍＡｂ）、Ｐｉｄｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ−０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）（例えば国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレットを参照されたい）、リツキシマブに敏感な再発ＦＬを有する３０例の患者が、ＣＴ０１１の最初の注入から２週後に開始して、４週間にわたり毎週３７５ｍｇ／ｍ２で投与されるリツキシマブと組み合わされて、４回の注入で４週毎に３ｍｇ／ｋｇの静脈内ＣＴ−０１１で処置された。

更に既知のＰＤ−１抗体およびその他のＰＤ−１阻害剤として、ＡＭＰ−２２４（ＧＳＫに認可されたＢ７−ＤＣ／ＩｇＧ１融合タンパク質）、国際公開第２０１２／１４５４９３号パンフレットで説明されているＡＭＰ−５１４、国際公開第２０１１／０６６３８９号パンフレットおよび米国特許出願公開第２０１３／０３４５５９号明細書で説明されている抗体ＭＥＤＩ−４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅにより開発された抗ＰＤ−Ｌ１）、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットで説明されている抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（抗ＰＤ−Ｌ１）、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットで説明されている、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂにより開発された抗ＰＤ−Ｌ１抗体であるＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３６５５９としても知られている）、国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレット、国際公開第２００９／０１４７０８号パンフレット、国際公開第２００９／１１４３３５号パッフレットおよび国際公開第２０１３／０１９９０６号パンフレットで説明されている抗体および阻害剤が挙げられ、これらの開示は参照により本明細書に援用される。抗ＰＤ−１抗体の更なる例が国際公開第２０１５／０８５８４７号パンフレット（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）に開示されており、例えば、それぞれ配列番号６、配列番号７および／または配列番号８の軽鎖可変ドメインＣＤＲ１、２および３と、それぞれ配列番号３、配列番号４または配列番号５の抗体重鎖可変ドメインＣＤＲ１、２および３とを有する抗体であり、これらの配列番号の言及は、国際公開第２０１５／０８５８４７号パンフレットに従うナンバリングであり、この開示は参照により本明細書に援用される。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１への結合に関してこれらの抗体のいずれかと競合する抗体を使用することもできる。

例示的な抗ＰＤ−１抗体はペンブロリズマブである（例えば国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットを参照されたい。この開示は参照により本明細書に援用される）。抗ＰＤ−１抗体は、国際公開第２００８／１５６７１２号パンフレットにおける抗ｈ４０９ＡＩであることができ、この抗ｈ４０９ＡＩは、０８１４６９＿ＳＰＤ−ＨでＡＴＣＣに寄託されたＤＮＡによりコードされる重鎖可変領域と、０８０１４７０＿ＳＰＤ−Ｌ−Ｉ１でＡＴＣＣに寄託されたＤＮＡによりコードされる軽鎖可変領域とを含む。その他の実施形態では、この抗体は、ペンブロリズマブの重鎖および軽鎖のＣＤＲまたは可変領域を含む。従って、一実施形態では、この抗体は、０８１４６９＿ＳＰＤ−ＨでＡＴＣＣに寄託されたＤＮＡによりコードされるペンブロリズマブのＶＨのＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインと、０８０１４７０＿ＳＰＤ−Ｌ−Ｉ１でＡＴＣＣに寄託されたＤＮＡによりコードされるペンブロリズマブのＶＬのＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインとを含む。

一部の実施形態では、このＰＤ−１中和剤は、ＰＤ１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する抗ＰＤ−Ｌ１ｍＡｂである。一部の実施形態では、このＰＤ−１中和剤は、ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１の結合を阻害する抗ＰＤ１ｍＡｂである。一部の実施形態では、このＰＤ−１中和剤はイムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の細胞外部分またはＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。

別の例示的な抗ＰＤ−１抗体は、配列番号１２および配列番号１３に示す各配列またはこれらと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一の各アミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を含むニボルマブ、またはこのニボルマブの抗原結合断片および多様体である。その他の実施形態では、この抗体は、ニボルマブの重鎖および軽鎖のＣＤＲまたは可変領域を含む。従って、一実施形態では、この抗体は、配列番号１２に記載の配列を有するニボルマブの重鎖のＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインと、配列番号１３に記載の配列を有するニボルマブの軽鎖のＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインとを含む。

例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、配列番号１４および配列番号１５に示す各配列またはこれらとそれぞれ少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖の可変領域、またはこれらの抗原結合断片および多様体を含む。その他の実施形態では、この抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａの重鎖および軽鎖のＣＤＲまたは可変領域を含む。従って、一実施形態では、この抗体は、配列番号１４に記載の配列を有する重鎖のＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインと、配列番号１５に記載の配列を有する軽鎖のＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインとを含む。

この抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を、完全ヒト抗体、ヒト化抗体およびキメラ抗体から選択することができる。本発明の一態様では、この薬剤は、ヒトＩｇＧ１抗体、ヒトＩｇＧ２抗体、ヒトＩｇＧ３抗体またはヒトＩｇＧ４抗体に由来する定常ドメインを含む。本発明の一態様では、この薬剤は、ＩｇＡ抗体、ＩｇＤ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＥ抗体およびＩｇＭ抗体から選択される抗体の断片である。本発明の一態様では、この薬剤は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、重鎖Ｉｇ（ラマまたはラクダのＩｇ）、Ｖ_ＨＨ断片、単一ドメインＦＶおよび単鎖抗体断片から選択される抗体断片である。本発明の一態様では、この薬剤は、ｓｃＦｖ、ｄｓＦＶ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、カッパボディ、ＩｇＮＡＲおよび多重特異性抗体から選択される合成のまたは半合成の抗体由来分子である。

この抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−１抗体は、Ｆｃγレセプター（例えばＣＤ１６）への実質的な特異的結合を欠失することができる。そのような抗体は、Ｆｃレセプターに結合しないことが分かっている様々な重鎖の定常領域を含むことができる。そのような一例はＩｇＧ４定常領域である。ＩｇＧ４、あるいは、定常領域を含まない抗体断片（例えばＦａｂ断片またはＦ（ａｂ’）２断片）を使用して、Ｆｃレセプター結合を回避することができる。Ｆｃレセプター結合を当分野で既知の方法に従って評価することができ、この方法として、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいてＦｃレセプタータンパク質への抗体の結合を試験することが挙げられる。また、Ｆｃγレセプターへの結合が最小化されるようにまたは除去されるようにＦｃ部分が改変されている、あらゆるヒト抗体タイプ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）を使用することができる。従って、この抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体は概してエフェクター機能が低減され得る、または最小化され得る。一態様では、最小のエフェクター機能は原核細胞中での産生に起因する。一態様では、最小のエフェクター機能は、「エフェクターレスＦｃ変異」または非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）に起因する。更なる実施形態では、このエフェクターレスＦｃ変異は、定常領域におけるＮ２９７Ａ置換またはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。

製剤
抗ＮＫＧ２Ａ薬剤または抗ＰＤ−１薬剤または抗ＰＤ−Ｌ１薬剤、例えば抗体は、１ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌの濃度で含む医薬製剤に組み込まれ得、前記製剤のｐＨは２．０〜１０．０である。この製剤は、緩衝系、防腐剤、等張化剤、キレート剤、安定剤および界面活性剤を更に含むことができる。一実施形態では、この医薬製剤は水性製剤であり、即ち水を含む製剤である。そのような製剤は概して、溶液または懸濁液である。更なる実施形態では、この医薬製剤は水溶液である。用語「水性製剤」は、少なくとも５０重量／重量％の水を含む製剤と定義される。同様に、用語「水溶液」は、少なくとも５０重量／重量％の水を含む溶液と定義され、用語「水性懸濁液」は、少なくとも５０重量／重量％の水を含む懸濁液と定義される。

別の実施形態では、この医薬製剤は、医師または患者が使用前に溶媒および／または希釈剤を添加する凍結乾燥製剤である。

別の実施形態では、この医薬製剤は、あらゆる事前の溶解を必要とすることなく使用可能な（例えば凍結乾燥されているまたは噴霧乾燥されている）乾燥製剤である。

更なる態様では、この医薬製剤は、そのような抗体および緩衝剤の水溶液を含み、この抗体は１ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で存在し、前記製剤のｐＨは約２．０〜約１０．０である。

別の実施形態では、この製剤のｐＨは、約２．０〜約１０．０、約３．０〜約９．０、約４．０〜約８．５、約５．０〜約８．０および約５．５〜約７．５からなるリストから選択される範囲である。

更なる実施形態では、緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リシン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウムおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、ビシン、トリシン、マレイン酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸またはこれらの混合物からなる群から選択される。これらの特定の緩衝剤はそれぞれ、本発明の代替実施形態を構成する。

更なる実施形態では、この製剤は、薬学的に許容される防腐剤を更に含む。更なる実施形態では、この製剤は等張剤を更に含む。更なる実施形態では、この製剤はキレート剤も含む。本発明の更なる実施形態では、この製剤は安定剤を更に含む。更なる実施形態では、この製剤は界面活性剤を更に含む。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９^ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５を参照する。

本発明のペプチド医薬製剤中にはその他の成分が存在し得ることも可能である。そのような追加の成分として、湿潤剤、乳化剤、抗酸化剤、充填剤、張度調整剤、キレート剤、金属イオン、油性賦形剤、タンパク質（例えばヒト血清アルブミン、ゼラチンまたはタンパク質）ならびに双性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リシンおよびヒスチジン等のアミノ酸）を挙げることができる。そのような追加の成分は、当然のことながら本発明の医薬製剤全体の安定性に悪影響を及ぼすべきではない。

いくつかの投与経路（例えば静脈内）を経て、本発明に係る医薬製剤を投与することができる。適切な抗体製剤を、その他の既に開発された治療用モノクローナル抗体による実験を調べることにより決定することもできる。Ｒｉｔｕｘａｎ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）Ｘｏｌａｉｒ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）、Ｂｅｘｘａｒ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、Ｃａｍｐａｔｈ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、Ｚｅｖａｌｉｎ、Ｏｎｃｏｌｙｍおよび同様の製剤等の、臨床的状況下で有効であることが分かっているいくつかのモノクローナル抗体を、本発明の抗体と共に使用することができる。例えば、モノクローナル抗体は、１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）の使い捨てバイアル中に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給され得、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０および注射用無菌水でＩＶ投与用に製剤化される。ｐＨは６．５に調整される。別の実施形態では、この抗体は、約２０ｍＭのクエン酸Ｎａ、約１５０ｍＭのＮａＣｌを含む製剤（約６．０のｐＨ）で供給される。

また、提供されるのは、上述の方法での使用に適した治療上有効な量で、抗ＮＫＧ２Ａ抗体および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を含むキットである。このキットは任意選択で、このキットに含まれる組成物をがん（例えば固形腫瘍）を有する患者に投与するために、専門家（例えば、医師、看護師および患者）がこの組成物を投与することを可能にする使用説明書（例えば投与スケジュールを含む）も含むことができる。このキットはシリンジを含むこともできる。

任意選択で、このキットは、上記に記載の方法に従う単回投与用に有効量の抗ＮＫＡＧ２Ａ抗体、抗ＰＤ−１抗体またはＰＤ−Ｌ１抗体をそれぞれ含む単回用量の医薬組成物の複数のパッケージを含む。このキットには、この医薬組成物の投与に必要な機器またはデバイスも含まれ得る。例えば、キットは、ある量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む１本または複数本のプレフィルドシリンジを提供することができる。

一実施形態では、本発明は、ヒト患者のがんを処置するためのキットであって、
（ａ）配列番号４〜８のいずれかに記載の配列を有する重鎖のＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインと、配列番号９に記載の配列を有する軽鎖のＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインとを含む、ある用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体、
（ｂ）ある用量の抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ならびに
（ｃ）任意選択で、本明細書で説明する方法のいずれかで抗ＮＫＧ２Ａ抗体と抗ＰＤ−１抗体とを使用するための使用説明書
を含むキットを提供する。

悪性腫瘍の診断、予後予測および処置
説明されているのは、個体のがんの診断、予後予測、モニタリング、処置および予防で有用な方法である。本明細書で説明する処置のレジメンおよび方法は固形腫瘍の処置に特に有用であるが、本明細書で説明する処置のレジメンおよび方法を、様々な血液がんならびに感染性疾患および炎症および自己免疫障害に使用することもできる。本発明の方法および組成物は例えば様々ながんおよびその他の増殖性疾患の処置に用いられ、その他の増殖性疾患として下記が挙げられるがこれらに限定されない：癌腫、例えば、膀胱、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、前立腺、膵臓、胃、頸部、甲状腺および皮膚の癌腫；リンパ系の造血器腫瘍、例えば、白血病、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫および多発性骨髄腫；骨髄系の造血器腫瘍、例えば、急性および慢性の骨髄性白血病、前骨髄球性白血病および骨髄異形成症候群；間葉系起源の腫瘍、例えば線維肉腫および横紋筋肉腫（ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓｃａｒｃｏｍａ）；その他の腫瘍、例えば、黒色腫、精上皮腫、奇形癌腫、神経芽細胞腫および神経膠腫；中枢神経系および末梢神経系の腫瘍、例えば、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン腫；間葉系起源の腫瘍、例えば、線維肉腫、横紋筋肉腫（ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓｃａｒｃｏｍａ）および骨肉腫；ならびにその他の腫瘍、例えば黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫および甲状腺濾胞がん。

本明細書に記載したがんの処置用の併用療法は、中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体とＰＤ−１中和薬剤（例えば、中和抗ＰＤ−１抗体または中和抗ＰＤ−Ｌ１抗体）とを投与して、がん（例えば進行性で難治性の固形腫瘍）に苦しむ対象を処置することを含む。一実施形態では、本発明は、固形腫瘍（例えば、固形腫瘍、進行性で難治性の固形腫瘍）を有する対象または血液腫瘍を有する対象を処置するための、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と抗ＰＤ−１抗体との組合せを提供する。特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号４〜８のいずれかの重鎖と配列番号９の軽鎖とを含む。一実施形態では、ＰＤ−１の阻害活性を中和する抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、ＭＥＤＩ−４７３６、ＣＴ−０１１およびＭＰＤＬ３２８０Ａからなる群から選択される。

本明細書で使用する場合、付属的なまたは複合の投与（同時投与）として、同じもしくは異なる剤形での化合物の同時投与または化合物の別々の投与（例えば順次の投与）が挙げられる。そのため、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体とを単一製剤で同時に投与することができる。あるいは、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と抗ＰＡ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体とを別々の投与用に製剤化することができ、これらの抗体を同時にまたは順次に投与する。

一実施形態では、本明細書で開示する方法で処置するがんはＨＬＡ−Ｅ発現がんである。一実施形態では、このがんは、肺がん（例えば非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、腎細胞癌（ＲＣＣ）、黒色腫、結腸直腸がんおよび卵巣がんからなる群から選択される。

がんを有する患者を、腫瘍細胞の表面上でのＨＬＡ−Ｅの発現を評価するための事前検出工程の有無にかかわらず抗ＮＫＧ２Ａ剤で処置することができる。有利には、この処置方法は、個体からの（例えば腫瘍細胞に関する）腫瘍の生物学的サンプル中におけるＨＬＡ−Ｅの核酸またはポリペプチドを検出する工程を含むことができる。生物学的サンプルの例として、あらゆる適切な体液（例えば、血清、リンパ液、血液）、細胞サンプルまたは組織サンプルを挙げることができる。例えば、組織サンプルは、腫瘍組織または腫瘍隣接組織のサンプルであることができる。任意選択で、ＨＬＡ−Ｅポリペプチドを悪性細胞の表面上で検出する。生物学的サンプルがＨＬＡ−Ｅを発現する（例えば、顕著に発現する；参照と比較して抗ＨＬＡ−Ｅ抗体による染色の高レベル、高強度でＨＬＡ−Ｅを発現する）ことの検出は、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤による処置の利益が強力であり得るがんを個体が有することを示す。一実施形態では、この方法は、生物学的サンプル中におけるＨＬＡ−Ｅの核酸またはポリペプチドの発現のレベルを検出すること、ならびに、このレベルを、健康な個体に対応する参照レベル（例えば、値、弱い細胞表面染色等）と比較することを含む。生物学的サンプルが参照レベルと比較して高いレベルでＨＬＡ−Ｅの核酸またはポリペプチドを発現することの検出は、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤により処置され得るがんを個体が有することを示す。

一実施形態では、生物学的サンプル（例えば、腫瘍細胞、腫瘍組織および／または腫瘍隣接組織を含むサンプル）がＨＬＡ−Ｅの核酸またはポリペプチドを顕著に発現することの検出は、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤で処置され得るがんを個体が有することを示す。「顕著に発現されている」は、ＨＬＡ−Ｅポリペプチドに関する場合、所与の個体から採取された腫瘍細胞の相当な数でＨＬＡ−Ｅポリペプチドが発現されていることを意味する。用語「顕著に発現されている」の定義は正確な割合の値に拘束されないが、一部の例では、「顕著に発現されている」といわれるレセプターは、（サンプル中における）患者から採取された腫瘍細胞の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％またはより多くで存在し得る。

ＨＬＡ−Ｅポリペプチドを発現するがん細胞を個体が有するかどうかを検出することは、例えば、個体から（例えば生検を実施することにより）がん細胞を含む生物学的サンプルを得ること、前記細胞を、ＨＬＡ−Ｅポリペプチドに結合する抗体と接触させること、および細胞がこの細胞の表面上でＨＬＡ−Ｅを発現するかどうかを検出することを含むことができる。任意選択で、ＨＬＡ−Ｅを発現するがん細胞を個体が有するかどうかを検出することは、免疫組織化学アッセイを行なうことを含む。任意選択で、ＨＬＡ−Ｅを発現するがん細胞を個体が有するかどうかを検出することは、フローサイトメトリーアッセイを行なうことを含む。

この処置方法では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体とを、別々に、一緒にもしくは順次にまたはカクテルで投与することができる。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与前に抗原結合化合物を投与する。例えば、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の約０〜３０日前に抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与することができる。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の約３０分〜約２週間前に、約３０分〜約１週間前に、約１時間〜約２時間前に、約２時間〜約４時間前に、約４時間〜約６時間前に、約６時間〜約８時間前に、約８時間〜１日前にまたは約１〜５日前に、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与と同時に抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与する。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与後に抗ＮＫＡＧ２Ａ抗体を投与する。例えば、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の約０〜３０日後に抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与することができる。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の約３０分〜約２週間後に、約３０分〜約１週間後に、約１時間〜約２時間後に、約２時間〜約４時間後に、約４時間〜約６時間後に、約６時間〜約８時間後に、約８時間〜１日後にまたは約１〜５日後に、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与する。

がんを有するヒトを処置するのに適した処置プロトコルは、例えば、ＮＫＧ２Ａを阻害する抗体およびヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する抗体それぞれの有効量を患者に投与することを含み、この方法は、少なくとも１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を１〜１０ｍｇ／体重ｋｇの用量で投与し、少なくとも１回の用量の抗ＰＤ−１抗体または抗Ｐｄ−Ｌ１抗体を１〜２０ｍｇ／体重ｋｇの用量で投与する少なくとも１回の投与サイクルを含む。一実施形態では、この投与サイクルは２週〜８週である。

一実施形態では、この方法は少なくとも１回の投与サイクルを含み、このサイクルは８週未満の期間であり、少なくとも１回のサイクルのそれぞれに関して、２回、３回または４回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を１〜１０ｍｇ／体重ｋｇの用量を投与し、２回、３回または４回の用量の抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を１〜２０ｍｇ／体重ｋｇの用量で投与する。

この抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、（例えば、ＰＢＭＣにおいてＮＫＧ２Ａ発現細胞に対して抗ＮＫＧ２Ａ抗体を漸増させることで評価する場合に）実質的に完全な（例えば９０％、９５％）レセプター飽和に必要な濃度と比べて少なくとも１０倍、２０倍もしくは３０倍高い循環濃度を達成する量で、または任意選択で（例えば、ＰＢＭＣにおいてＮＫＧ２Ａ発現細胞に対して抗ＮＫＧ２Ａ抗体を漸増させることで評価する場合に）実質的に完全なレセプター飽和に必要な濃度と比べて少なくとも１０倍、２０倍もしくは３０倍高い細胞外組織（例えば腫瘍組織または環境）中での濃度を達成する量で、有利に投与することができる。

ＨＬＡ−Ｅ発現標的細胞に対するＮＫＧ２Ａ発現ＮＫ細胞の細胞傷害活性に関する適切なアッセイを使用して、ＮＫＧ２Ａ＋ＨＫ細胞応答を評価することができる。例として、ＮＫ細胞活性化のマーカー（例えばＣＤ１０７またはＣＤ１３７の発現）をベースとするアッセイが挙げられる。本明細書の実施例で使用する抗ＮＫＧ２Ａ抗体ｈｕｍＺ２７０（例えば配列番号４〜８のいずれかの重鎖と配列番号９の軽鎖を有する）の遮断の（例えば、ＣＤ１０７動員アッセイで評価する場合の）ＮＫＧ２Ａ＋ＮＨ細胞応答に関するＥＣ_５０は約４μｇ／ｍｌであり、ＥＣ_１００は約１０μｇ／ｍｌである。そのため、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、少なくとも４μｇ／ｍｌの連続（最低）血中濃度を維持する量で投与する。有利には、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、少なくとも１０μｇ／ｍｌの連続（最低）血中濃度を達成するおよび／または維持する量で投与することができる。例えば、達成されるおよび／または維持される血中濃度は、１０〜１２μｇ／ｍｌ、１０〜１５μｇ／ｍｌ、１０〜２０μｇ／ｍｌ、１０〜３０μｇ／ｍｌ、１０〜４０μｇ／ｍｌ、１０〜５０μｇ／ｍｌ、１０〜７０μｇ／ｍｌ、１０〜１００μｇ／ｍｌ、１０〜１５０μｇ／ｍｌまたは１０〜２００μｇ／ｍｌであることができる。（例えば固形腫瘍の処置において）血管系外の組織を標的とする場合、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、少なくとも１０μｇ／ｍｌの組織濃度を達成するおよび／または維持する量で投与し、例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を少なくとも１００μｇ／ｍｌの血中濃度を達成する量で投与することにより、少なくとも１０μｇ／ｍｌの組織濃度が達成されると予想される。例えば、組織中において１０μｇ／ｍｌを達成する／維持するために達成すべきおよび／または維持すべき血中濃度は、１００〜１１０μｇ／ｍｌ、１００〜１２０μｇ／ｍｌ、１００〜１３０μｇ／ｍｌ、１００〜１４０μｇ／ｍｌ、１００〜１５０μｇ／ｍｌ、１００〜２００μｇ／ｍｌ、１００〜２５０μｇ／ｍｌまたは１００〜３００μｇ／ｍｌであることができる。

一部の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を、ＮＫＧ２Ａ＋リンパ球細胞応答（例えばＮＫＧ２Ａ＋ＮＫ細胞応答）に関する少なくともＥＣ_５０に対応し、任意選択で約ＥＣ_１００または少なくとも約ＥＣ_１００に対応する血液（例えば血清）中の濃度を得る量で投与する。ＮＫＧ２Ａ＋細胞応答（例えばＮＫ細胞応答）に関する「ＥＣ_５０」（または「ＥＣ_１００」）は、この細胞の最大応答またはそのようなＮＫＧ２Ａ＋細胞応答（例えばＮＫ細胞応答）に関する効果の５０％（またはＥＣ_１００を指す場合には１００％）を生じる抗ＮＫＧ２Ａ抗体の効率的な濃度を意味する。一部の実施形態では、特に固形腫瘍の処置の場合、達成される濃度は、（血管系外の、例えば腫瘍環境中の）組織中の濃度がＮＫＧ２Ａ＋ＮＫ細胞応答に関する少なくともＥＣ_５０に対応し、任意選択でＮＫＧ２Ａ＋ＮＫ細胞応答に関する約ＥＣ_１００または少なくとも約ＥＣ_１００に対応するように設計される。

ＮＫＧ２Ａ＋ＮＫ細胞応答に関するＥＣ_１００が約１０μｇ／ｍｌである本明細書の実施例で使用するｈｕｍＺ２７０等の抗ＮＫＧ２Ａ抗体に適した処置プロトコルは、少なくとも１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を２〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、任意選択で４〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、任意選択で６〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、任意選択で２〜６ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、任意選択で２〜８ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、または任意選択で２〜４ｍｇ／体重ｋｇの用量で投与する少なくとも１回の投与サイクルを含む。任意選択で、少なくとも２回、３回、４回、５回、６回、７回または８回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与する。一実施形態では、この投与サイクルは２週〜８週である。一実施形態では、この投与サイクルは８週である。一実施形態では、この投与サイクルは８週であり、２週毎に抗ＮＫＧ２Ａ抗体の１回の用量（即ち合計で４回の用量）を投与することを含む。

本明細書の実施形態のいずれかの一態様では、この抗ＮＫＧ２Ａ抗体を約２週毎に１回投与する。

特に造血器腫瘍の処置のための、抗ＮＫＧ２Ａ抗体による使用に適した処置プロトコルは、例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続する投与の間で少なくとも１０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量で１ヶ月当たり２回、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に投与することを含み、この量は２〜１０ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で２〜６ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で２〜８ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で２〜４ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で２〜６ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で２〜４ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で約４ｍｇ／体重ｋｇである。任意選択で、これらの用量を、処置サイクル全体を通して少なくとも１０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を実現するように投与することができる。１０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度の達成は、ヒト化Ｚ２７０等の抗体に関するＥＣ_１００に対応する。

特に血管外組織中で（例えば、腫瘍中でまたは腫瘍環境下で）抗ＮＫＧ２Ａ抗体のＥＣ_５０濃度が求められる固形腫瘍の処置のための、抗ＮＫＧ２Ａ抗体による使用に適した処置プロトコルは、例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続する投与の間で少なくとも４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量で１ヶ月当たり２回、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に投与することを含み、この量は２〜１０ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で２〜６ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で２〜４ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で約４ｍｇ／体重ｋｇである。任意選択で、これらの用量を、処置サイクル全体を通して少なくとも４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を実現するように投与することができる。４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度の達成により約４μｇ／ｍｌの組織（例えば血管外組織、腫瘍環境）濃度が実現されると予想され、ひいてはヒト化Ｚ２７０等の抗体に関するＥＣ_５０に対応する。

特に血管外組織中で（例えば腫瘍中でまたは腫瘍環境下で）抗ＮＫＧ２Ａ抗体のＥＣ_５０濃度が求められる固形腫瘍の処置のための、抗ＮＫＧ２Ａ抗体による使用に適した処置プロトコルは、例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の有効量を患者に投与することを含み、この抗体を１ヶ月当たり２回投与し、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続する投与の間で少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量は４〜１０ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で４〜６ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で４〜８ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で約４ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で約６ｍｇ／ｋｇであり、任意選択で約８ｍｇ／ｋｇであり、または任意選択で約１０ｍｇ／ｋｇである。任意選択で、これらの用量を、処置サイクル全体を通して少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を実現するように投与することができる。１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度の達成により約１０μｇ／ｍｌの組織（例えば血管外、腫瘍環境）濃度が実現されると予想され、ひいてはヒト化Ｚ２７０等の抗体のＥＣ_１００に対応する。

抗ＮＫＧ２Ａ抗体による使用に適した更なる処置プロトコルは、より高い用量の負荷期間を用い、続いて維持期間を用いるレジメンを含む。例えば、負荷期間は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の有効量を患者に投与することを含み、この抗体を、維持レジメン中の抗ＮＫＧ２Ａ抗体の最初の投与まで少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量で１回または複数回投与する。例えば、１回投与する場合、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の１０ｍｇ／ｋｇの負荷用量を投与することができ、負荷用量の約２週（またはより短い期間）後に、維持レジメン中での抗ＮＫＧ２Ａ抗体の最初の投与を行なう。次いで、維持レジメンは、より低い用量および／または投与のより低い頻度を用いて、維持レジメン中での連続する投与の間で少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持することができる。例えば、維持レジメンは、２〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択で４〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択で２〜４ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択で４〜６ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択で４〜８ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択で約４ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択で約６ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択で約８ｍｇ／ｋｇの用量で、２週毎に抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与することを含む。

ある特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の用量（例えば各用量）を４、６、８または１０ｍｇ／ｋｇで投与する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体の用量（例えば各用量）を１〜２０ｍｇ／ｋｇで投与し、任意選択で１０ｍｇ／ｋｇで投与する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の用量（例えば各用量）を１０、１５、２０または２５ｍｇ／ｋｇで投与し、任意選択で１２００ｍｇの総用量で投与する。ある特定の実施形態では、併用療法により、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をより低い用量で投与することが可能となり、一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体の各用量を２または３ｍｇ／ｋｇで投与する。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体とを下記の用量で投与する：
（ａ）１〜１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体、および（ｉ）１〜１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体もしくは（ｉｉ）１〜２０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体、
（ｂ）４、６、８もしくは１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体、および１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体、
（ｃ）４、６、８もしくは１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体、および３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体、または
（ｄ）４、６、８もしくは１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体、および２ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体。

本明細書の実施形態のいずれかの一態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を約２週毎に１回投与する。本明細書の実施形態のいずれかの一態様では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を約３週毎に１回投与する。本明細書の実施形態のいずれかの一態様では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を約２週毎に１回投与する。本明細書の実施形態のいずれかの一態様では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を約４週毎に１回投与する。

一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と抗ＮＫＧ２Ａ抗体とを静脈内投与する。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と抗ＮＫＧ２Ａ抗体とを同日に投与し、任意選択で更に約２週毎に１回投与し、任意選択で更に静脈内投与する。

その他の態様では、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋のＮＫ細胞およびＴ細胞を同定する方法が提供される。ＮＫ細胞上でのおよび／またはＴ細胞上でのＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の同時発現を評価することを、診断方法または予後予測方法で使用することができる。例えば、生物学的サンプルを個体から（例えばがん患者から得たがん組織またはがん隣接組織から）得て、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋のＮＫ細胞および／またはＴ細胞の存在に関して分析することができる。例えば、そのような細胞上でのＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の両方の発現を使用して、ＮＫＧ２ＡポリペプチドおよびＰＤ１ポリペプチドの両方により阻害される腫瘍浸潤ＮＫ細胞および／または腫瘍浸潤Ｔ細胞を有する個体を同定することができる。この方法は、例えば、ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤による処置への応答に関する予後予測として、ＰＤ１を中和する薬剤による処置への応答に関する予後予想として、またはＮＫＧ２Ａを中和する薬剤とＰＤ１を中和する薬剤との組合せ処置に関する応答に関する予後予測として有用であることができる。

一実施形態では、提供されるのは、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤とヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤とによる処置に個体が適しているかどうかを評価する方法であって、個体からの生物学的サンプル中においてＮＫＧ２Ａの核酸またはポリペプチドとＰＧ−１の核酸またはポリペプチドとの両方を発現するリンパ球集団（例えばＣＤ８＋Ｔ細胞）を検出することを含む方法である。ＮＫＧ２Ａの核酸またはポリペプチドとＰＤ−１の核酸またはポリペプチドとの両方を発現するリンパ球集団を個体が有するという検出は、この患者が、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤とヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤との組合せで処置され得るがんを有することを示す。

その他の態様では、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋のＮＫ細胞および／またはＴ細胞を同定する方法が提供される。腫瘍浸潤エフェクターリンパ球が阻害レセプターＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の両方を発現し得るという発見により、処置方法ならびに診断および予測で有用であり得るそのような二重制限／阻害エフェクター細胞を検出する方法が改善される。

例えば、生物学的サンプルを個体から（例えば、がん患者から得たがん組織またはがん隣接組織から）得て、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋のＮＫ細胞および／またはＴ細胞の存在に関して分析することができる。例えば、そのような細胞上でのＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の両方の発現を使用して、ＮＫＧ２ＡポリペプチドおよびＰＤ１ポリペプチドの両方により阻害される腫瘍浸潤ＮＫ細胞および／または腫瘍浸潤Ｔ細胞を有する個体を同定することができる。この方法は、例えば、ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤による処置への応答に関する予後予測として、ＰＤ１を中和する薬剤による処置への応答に関する予後予測として、またはＮＫＧ２Ａを中和する薬剤とＰＤ１を中和する薬剤との組合せ処置に関する応答に関する予後予測として有用であることができる。

生物学的サンプル内のＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１が制限されたＮＫ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞を検出することはより一般的に、ＮＫ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞のキャラクタリゼーションが興味の対象である病理の研究、評価、診断、予後予測および／または予測での使用に利点を有することができる。例えば、腫瘍または腫瘍隣接組織が、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の両方を発現する浸潤ＮＫ細胞および／または浸潤ＣＤ８Ｔ細胞を特徴とするかどうかを評価することにより、好ましいまたは好ましくないがんの予後予測を行なうことができる。

例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体および抗ＰＤ−１抗体を使用して、患者のがんをキャラクタライズして、または評価して、そのようなＮＫ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞が（がん隣接組織中の）腫瘍周辺で存在するかどうか等の、腫瘍浸潤ＮＫ細胞および／または腫瘍浸潤ＣＤ８Ｔ細胞がＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋であるかどうかを評価することができる。この方法は、患者が、（例えばＮＫＧ２Ａおよび／もしくはＰＤ−１またはこれらそれぞれのリガンドＨＬＡ−ＥもしくはＰＤ−Ｌ１に結合することにより）ＮＫ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞に直接作用するまたは（例えばＮＫ細胞および／もしくはＣＤ８Ｔ細胞の活性を調節することができるサイトカインもしくはその他のシグナル伝達分子を産生することにより）ＮＫ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞に間接的に作用する治療剤による調節に適している可能性があるＮＫ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞を特徴とする病理を有するかどうかを判定するのに有用であることができる。任意選択で、任意の実施形態では、この患者は、ＰＤ−１を中和する薬剤により処置されている。任意選択で、本明細書で説明する方法は、腫瘍浸潤ＮＫ細胞および／または腫瘍浸潤ＣＤ８Ｔ細胞に作用する治療剤による調節に適している可能性がある病理を個体が有すると判定した場合には、そのような治療剤をこの個体に投与することを更に含むことができる。

一態様では、本発明者らは、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ−１＋リンパ球（任意選択でＮＫ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞）を検出するｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法であって、腫瘍浸潤リンパ球を含む生物学的サンプルを準備すること、およびこのリンパ球がＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１を発現するかどうかを判定することを含む方法を提供する。

一態様では、本発明者らは、ヒト個体からのサンプル内におけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１を発現する（即ち二重陽性）ＣＤＴ細胞またはＮＫ細胞を検出するｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法であって、個体からのサンプルを準備すること、サンプル中においてヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体とヒトＰＤ−１ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体とを使用して前記サンプル中の細胞を接触させること、およびこれらの抗体の細胞への結合を検出することを含む方法を提供する。一実施形態では、この細胞はＣＤ８Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞である。

一態様では、本発明者らは、ヒト個体からのサンプル内においてＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の両方により阻害される組織浸潤ヒトＣＤ８Ｔ細胞および／または組織浸潤ヒトＮＫ細胞を検出するｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法であって、個体からのサンプルを準備すること、サンプル中においてヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体とヒトＰＤ−１ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体とを使用して前記サンプル中の組織浸潤ＣＤ８Ｔ細胞および／または組織浸潤ＮＫ細胞を検出することであり、ＮＫＧ２ＡポリペプチドおよびＰＤ−１ポリペプチドの検出は、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１が阻害される組織浸潤ＣＤ８Ｔ細胞および／または組織浸潤ＮＫ細胞の存在を示す、検出することを含む方法を提供する。任意選択で、任意の実施形態では、この患者は、ＰＤ−１を中和する薬剤により処置されている。一実施形態では、このサンプルは、腫瘍細胞、腫瘍組織または腫瘍隣接組織を含む。一実施形態では、このＣＤ８Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を、免疫組織化学法を使用して検出する。一実施形態では、このサンプルはパラフィン包埋サンプルであり、任意選択で、固定し、パラフィン中に包埋し、薄片にし、脱パラフィンし、モノクローナル抗体と接触させる前にスライドに移しているパラフィン包埋サンプルである。一実施形態では、このＣＤ８Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を、フローサイトメトリー法を使用して同定する。

実施例１−ＲＭＡ−Ｓ腫瘍細胞およびＡ２０腫瘍細胞は、ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞とＮＫＧ２Ａおよび／またはＰＤ−１を発現するＣＤ８Ｔ細胞とに浸潤される
リンパ球は概して、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１を同時発現しないことが分かっている。腫瘍浸潤リンパ球上でのこれらのレセプターの発現を調べるために、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の分布を、マウスからの腫瘍中におけるＮＫ細胞およびＴ細胞のサブセットで研究した。脾臓から、腫瘍所属リンパ節から、および固形腫瘍内からリンパ球を採取した。

Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、ＰＤＬ−１＋ Ｑａ−１＋ ＲＭＡ−Ｓ細胞（Ｑａ−１、Ｑｄｍ、Ｂ２ｍ）またはＡ２０腫瘍細胞を生着させた（ｓｃ）。ＲＭＡ−Ｓ Ｑａ−１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ腫瘍担持マウス（上側の列）およびＡ２０腫瘍担持マウス（下側の列）を、腫瘍体積が約５００ｍｍ^３である場合に屠殺した。

結果を図１Ａおよび図１Ｂに示す。腫瘍細胞（図１Ａ）および腫瘍浸潤リンパ球−ＴＩＬ−（図１Ｂ）を、腫瘍細胞の場合にはＱａ−１およびＰＤＬ−１の発現に関してならびにＴＩＬの場合にはＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の発現に関して、それぞれフローサイトメトリーにより分析した。３匹の内の１匹の代表的なマウスを示す。ＭＦＩ：蛍光強度の中央値。

両方の腫瘍タイプからの浸潤ＮＫ細胞の半数超がＮＫＧ２Ａを発現しており、このことは、腫瘍浸潤ＮＫ細胞がＮＫＧ２Ａにより阻害されることを示唆する。ＮＫＧ２Ａ＋ＮＫ細胞は概して、有意な量のＰＤ−１を発現しなかった。しかしながら、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の両方に対して陽性であるＣＤ８Ｔ細胞を発見しており、このことは、ＣＤ８Ｔ細胞が阻害レセプターＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の両方により制限され得ることを示唆する。

実施例２−ｒｍａ−ｒａｅ１腫瘍を担持するマウスからのＮＫ細胞およびＴ細胞のサブセットはＮＫＧ２ＡおよびＰＤ１の同時発現が可能である
レセプターＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の発現を更に調べるために、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の分布を、マウス中におけるＮＫ細胞およびＴ細胞のサブセットで研究した。脾臓から、腫瘍所属リンパ節から、および固形腫瘍内からリンパ球を採取した。

Ｃ５７／ＢＬ６マウスにＲＭＡ−Ｒａｅクローン６（２００万個の細胞）を生着させた（ｓｃ）。この腫瘍細胞は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡリガンドＱａ−１を発現する。１２日目（平均腫瘍体積：７２３ｍｍ^３、ＳＤ：１６１ｍｍ^３、ｎ＝４）にマウスを屠殺した。脾臓、ＬＮおよび腫瘍からの細胞懸濁液の調製後、細胞を下記のように染色した：ＣＤ３ｅ ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５、ＮＫＰ４６ Ａｌｅｘａ ６４７、ＮＫＧ２Ａ／Ｃ／Ｅ ＦＩＴＣ、ＰＤ１ＰＥ、ＣＤ８ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ。

結果を、図２および表１〜３に示す。

ＮＫ細胞のサブセットでは、所属リンパ節および脾臓の両方における細胞は、およそ半数がＮＫＧ２Ａ陽性であり、半数がＮＫＧ２Ａ陰性であったが、いずれの場合にもＰＤ１の有意な発現はなかった。リンパ節からのＮＫ細胞はＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１⁻（４９．２％）およびＮＫＧ２Ａ⁻ＰＤ−１⁻（４９．５％）であり、ＮＫ細胞の１％未満（平均）がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋であった。脾臓からのＮＫ細胞はＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１⁻（４４．１％）およびＮＫＧ２Ａ⁻ＰＤ−１⁻（５５．７％）であり、ＮＫ細胞の平均０．１％（平均）がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋であった。

Ｔ細胞のサブセットでは、ほとんどの細胞がＮＫＧ２Ａ陰性であり（リンパ節におけるわずか１．１％および脾臓における４．７％がＮＫＧ２Ａ^＋である）、ごく一部の細胞がＰＤ−１^＋であり（リンパ節における３．５％および脾臓における１０％がＰＤ−１^＋ＮＫＧ２Ａ⁻であった）、有意な二重陽性ＮＫＧ２ＡＰＤ−１細胞はなかった。リンパ節中におけるＴ細胞のわずか０．１％（平均）がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋であり、脾臓中におけるＴ細胞のわずか０．４％（平均）がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋であった。リンパ節からのＴ細胞の９５．１％が二重陰性であり、脾臓からのＴ細胞の８５．６％が二重陰性であった。

ＣＤ８Ｔ細胞のサブセットでは、ほとんどの細胞が再びＮＫＧ２Ａ陰性であり（リンパ節におけるわずか１．６％および脾臓における３．９％がＮＫＧ２Ａ^＋である）、ごく一部の細胞がＰＤ−１^＋であり（リンパ節における１．１％および脾臓における２．５％がＰＤ−１^＋ＮＫＧ２Ａ⁻であった）、有意な二重陽性ＮＫＧ２ＡＰＤ−１細胞はなかった。リンパ節中におけるＴ細胞のわずか０．２％（平均）がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋であり、脾臓中におけるＴ細胞のわずか０．３％（平均）がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋であった。リンパ節からのＴ細胞の９７．３％が二重陰性であり、脾臓からのＴ細胞の９３．６％が二重陰性であった。

しかしながら、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）では、全ての細胞サブセットがＰＤ−１を発現する細胞を有した。ＮＫ細胞（これまで、ＰＤ−１を発現することが有意な割合で見出されなかった）は、ＮＫＧ２Ａ^＋サブセット内等で、ＰＤ−１陽性であることが腫瘍中で観察され、ＮＫ細胞の３１．８％（平均）がＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋であった。腫瘍の外側のほとんどのＣＤ８Ｔ細胞はＮＫＧ２Ａ発現を有しなかったが、腫瘍ではＰＤ−１を発現するＣＤ８Ｔ細胞の頻度が高かった（腫瘍浸潤ＣＤ８Ｔ細胞サブセットは、平均して２６．３％のＮＫＧ２Ａ＋陽性細胞を有した）。更に、このＮＫＧ２Ａ陽性ＣＤ８Ｔ細胞サブセット内では、細胞のほとんどがＮＫＧ２Ａ^＋ＰＤ−１^＋であった（１９．４％（平均））。更に、ＣＤ８⁻Ｔ細胞サブセットでは、腫瘍中におけるＴ細胞のわずか５．１％がＮＫＧ２Ａを発現し、Ｔ細胞のわずか３．６％が二重陽性ＮＫＧ２ＡＰＤ−１であったことから、ＴＩＬと脾臓またはリンパ節細胞との間で観測したＮＫＧ２Ａ発現にわずかな差異があった。

実施例３−腫瘍担持マウス中におけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の発現
腫瘍担持マウス中におけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の発現を更に調べるために、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに様々な腫瘍細胞、即ちＲＭＡ−Ｒａｅ１、ＭＣ３８またはＲＭＡ株のいずれかを生着させた（ｓｃ）。腫瘍体積の影響を評価するために、マウスの腫瘍が５００、２０００および８００ｍｍ^３の体積にそれぞれ達した場合にマウスを屠殺した。

ＲＭＡ Ｒａｅ１（上側の列）、ＭＣ３８（中央の列）およびＲＭＡ（下側の列）での結果を図３Ａおよび図３Ｂに示す。ＮＫ細胞（図３Ａ）およびＣＤ８Ｔ細胞（図３Ｂ）を、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１の発現に関して、脾臓中における、腫瘍所属リンパ節（ＬＮ）中におけるおよび腫瘍中におけるフローサイトメトリーにより分析した。２〜４匹中の１匹の代表的なマウスを示す。

ＮＫ細胞サブセットでは、腫瘍中における、リンパ節中におけるおよび脾臓中における細胞はおよそ半数がＮＫＧ２Ａ陽性であり、半数がＮＫＧ２Ａ陰性であった。所属リンパ節または脾臓からのＮＫ細胞はいずれも（これらのＮＫ細胞のＮＫＧ２Ａ発現にかかわらず）、ＰＤ１のあらゆる有意な発現を示さなかった。しかしながら、ＲＭＡ−Ｒａｅ１およびＲＭＡからの腫瘍浸潤ＮＫ細胞は、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ１の両方を有意なレベルで発現した。特に大きな体積（２０００ｍｍ^３）で屠殺した腫瘍株ＭＣ３８からの腫瘍浸潤ＮＫ細胞は、ＮＫＧ２Ａを発現した（５０％）がＰＤ１を有意に発現しなかった（３％）。

集団のおよそ半分でＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞とは異なり、脾臓およびリンパ節からのＣＤ８Ｔ細胞は概して、ＮＫＧ２ＡもＰＤ１も発現しなかった。しかしながら、腫瘍中では、ＣＤ８Ｔ細胞の大部分がＮＫＧ２ＡおよびＰＤ１の両方を発現した（ＲＭＡ−Ｒａｅ１では２８％、ＭＣ３８の４３％およびＲＭＡの４０％が二重陽性であった）。これらの結果は、腫瘍浸潤ＣＤ８Ｔ細胞および腫瘍浸潤ＮＫ細胞が阻害レセプターＮＫＧ２ＡおよびＰＤ１の両方により制限され得、更に腫瘍細胞の種類の違いを超えて制限され得ることを再び示唆する。

実施例４−抗ＰＤ−１ｍＡｂによる処置により、腫瘍中におけるＮＫＧ２Ａ発現ＣＤ８Ｔ細胞の頻度が増加する
抗ＰＤ−１抗体による処置のＣＤ８Ｔ細胞への効果を評価するために、細胞の生着から１１日後、１４日後および１７日後に、ＭＣ３８腫瘍担持マウスを、２００μｇのラットＩｇＧ２アイソタイプコントロール（ＩＣ）または中和抗マウスＰＤ−１モノクローナル抗体のいずれかで処置した。マウス（ｎ＝３／群）を３１日目に屠殺し、脾臓中において、腫瘍所属リンパ節（ＬＮ）中においておよび腫瘍中においてフローサイトメトリーによりＣＤ８Ｔ細胞をキャラクタライズした。ＣＤ８Ｔ細胞におけるＣＤ８ＮＫＧ２Ａ＋の割合の平均＋／−ＳＤ（ｎ＝３）を表す。Ｐ＜０．００５（^＊＊＊）、Ｐ＜０．０００５（^＊＊＊＊）、統計的分析を、Ｔｗｏ ｗａｙ ＡＮＯＶＡ後のＴｕｋｅｙの多重比較検定で実施した。

結果を図４に示す。その他の発現で観測されたものと同様に、リンパ節の脾臓からのＣＤ８Ｔ細胞はＮＫＧ２Ａを有意に発現しなかった。抗ＰＤ１抗体を投与しても、脾臓またはリンパ節のＴ細胞中におけるＮＫＧ２Ａ発現のレベルのいかなる変化も生じなかった。しかしながら、腫瘍浸潤ＣＤ８Ｔ細胞集団では、抗ＰＤ１抗体の投与により、ＮＫＧ２Ａ発現ＣＤ８Ｔ細胞の５０％超の増加が生じた。これらの結果は、抗ＰＤ１抗体による処置時に、ＮＫＧ２Ａレセプターはｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍に対するＣＤ８Ｔ細胞応答の阻害への寄与が増加し得ることを示唆する。従って、ＮＫＧ２Ａの中和は、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤＬ１抗体等のＰＤ−１軸を中和する薬剤で処置した個体中におけるＮＫＧ２Ａ制限Ｔ細胞の阻害を元に戻すのに有用であることができる。

実施例５−組合せ抗ＮＫＧ２Ａ／抗ＰＤ−１遮断は腫瘍増殖を阻害する
中和抗ＰＤ１抗体および中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体による組合せ処置の効果を評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＲＭＡ−Ｓ Ｑａ−１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ腫瘍細胞を生着させ（ｓｃ）、中和抗ＰＤ１剤（中和抗ＰＤ−Ｌ１抗体）および中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体で処置した。

簡潔に言うと、ＲＭＡ−Ｓ Ｑａ−１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ腫瘍体積が約８５ｍｍ^３（ｎ＝８のマウス／群）である１１日目にＣ５７ＢＬ／６マウスを無作為化し、１１日目、１４日目および１８日目に、アイソタイプコントロール、抗マウスＮＫＧ２ＡｍＡｂ（２００μｇ、ｉｖ）、抗マウスＰＤ−Ｌ１ｍＡｂ（２００μｇ、ｉｐ）または抗ｍＮＫＧ２Ａ／ｍＰＤＬ−１組合せで処置した。腫瘍体積をカリパスで１週間に２回測定した。腫瘍が大きくなった場合に（体積＞２０００ｍｍ^３）、潰瘍化した場合に、または壊死した場合に、動物を安楽死させた。データは、１回の実験当たりの腫瘍体積の中央値を表す。

経時的な腫瘍体積の中央値の進展を図５に示す。このモデルにおいて、抗ＮＫＧ２Ａではアイソタイプコントロールと比較して控えめな抗腫瘍効果のみが得られ、抗ＰＤ−Ｌ１では相当な抗腫瘍効果が得られたが、腫瘍体積は２８日頃に増加し、抗ＮＫＧ２Ａおよび抗ＰＤ−Ｌ１の組合せ処置では腫瘍増殖が完全に消失し、２８日目に観測した腫瘍体積において有意な増加はなかった。

本明細書で引用した、刊行物、特許出願および特許を含む全ての参考文献は、それらの参考文献の全体が参照により本明細書に援用され、ならびに本明細書の他の箇所で行なわれた、いかなる別途記載された特定の文献の援用にもかかわらず、それらの参考文献が参照により援用されると個々におよび具体的に指示されたかのようにおよび（法的に認められる最大限まで）その全体が本明細書に記載されたのと同程度まで、本明細書に援用される。

本発明を説明する文脈における用語「ａ」および「ａｎ」および「ｔｈｅ」および類似の指示語の使用は、本明細書において別途指示しない限りまたは文脈により明らかに否定されない限り、単数および複数の両方をカバーすると解釈しなければならない。

別途明記しない限り、本明細書で提供される全ての正確な値は、対応する近似値の代表である（例えば、特定の因子または測定値に関して提供される全ての正確な例示的値は、必要に応じて「約」で修飾される、対応する近似の測定値も提供するとみなすことができる）。「約」が数字との組合せで使用される場合、このことは、指定した数字の＋／−１０％に対応する値を含むにように指定され得る。

要素に関して「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」等の用語を使用する本発明の任意の態様または実施形態の本明細書における説明は、別途明記しない限りまたは文脈により明らかに否定されない限り、この特定の要素「からなる」、「から本質的になる」または「を実質的に含む」本発明の類似の態様または実施形態への支持を提供することが意図されている（例えば、特定の要素を含むと本明細書で説明されている組成物は、別途明記しない限りまたは文脈により明らかに否定されない限り、その要素からなる組成物も説明すると理解すべきである）。

本明細書において提供される任意のおよび全ての実施例または例示的な言葉（例えば「等」）の使用は、本発明をより明らかにすることのみが意図されており、別途主張しない限り本発明の範囲の限定を提示しない。本明細書における言葉は、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に必須であるとして示すと解釈すべきではない。

Claims (29)

1. ヒト患者のがんの処置で使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤であって、前記処置は、（ａ）前記ヒトＮＫＧ２の阻害活性を中和する薬剤、任意選択で抗体および（ｂ）ヒトＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤、任意選択で抗体それぞれの有効量を前記患者に投与することを含む、薬剤。
2. 個体のＮＫＧ２Ａ＋／ＰＤ１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化させる方法であって、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１抗体および／または抗ＰＤＬ２抗体とを前記個体に同時投与することを含む方法。
3. 前記ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体の少なくとも２回の用量を、この抗体の投与後に少なくとも１週間にわたり少なくとも１０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を達成するのに有効な量で投与する、請求項１に記載の使用するための化合物または請求項２に記載の方法。
4. 前記処置が少なくとも１回の投与サイクルを含み、任意選択で前記サイクルは８週の期間であり、各サイクルに関して、前記ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体の２回、３回または４回の用量を投与し、前記ＰＤ−１抗体の阻害活性を中和する前記抗体の２回、３回または４回の用量を投与する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
5. 前記ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体と前記ＰＤ−１の阻害活性を中和する前記抗体とが別々の投与用に製剤化されており、これらの抗体を同時にまたは順次に投与する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
6. 前記ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体と前記ＰＤ−１の阻害活性を中和する前記抗体とが単一製剤での同時投与用に製剤化されている、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
7. 前記ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体と前記ＰＤ−１の阻害活性を中和する前記抗体とが同日での同時投与用に製剤化されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
8. 前記がんが固形腫瘍である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
9. 前記がんが血液腫瘍である、請求項８に記載の使用するための化合物または方法。
10. 前記がんが、肺がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、黒色腫、結腸直腸がんおよび卵巣がんからなる群から選択される、請求項８に記載の使用するための化合物または方法。
11. 前記がんがＨＬＡ−Ｅ発現がんである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
12. 前記ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体が、配列番号４〜８のいずれか１つに記載の配列を有する重鎖のＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインと、配列番号９に記載の配列を有する軽鎖のＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメインおよびＣＤＲ３ドメインとを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
13. 前記ＰＤ−１の阻害活性を中和する抗体がＰＤ−１ポリペプチドに結合する抗体である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
14. 前記ＰＤ−１の阻害活性を中和する抗体がＰＤ−Ｌ１ポリペプチドに結合する抗体である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
15. 前記抗体がキメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
16. 前記ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体が非枯渇性抗体である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
17. 前記ＰＤ−１の阻害活性を中和する前記抗体が非枯渇性抗体である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
18. 前記抗体がＩｇＧ４抗体である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
19. 前記抗体がＦｃドメインを欠失している、またはＦｃドメインとＦｃγレセプターとの間の結合を低減するように改変されているＦｃドメインを含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
20. 前記抗体が抗体断片である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の使用するための化合物または方法。
21. 前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、単鎖抗体断片または複数種の異なる抗体断片を含む多重特異性抗体から選択される、請求項２０に記載の使用するための化合物または方法。
22. ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択で抗体と、ＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤、任意選択で抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
23. （ａ）ある用量の、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択で抗体と、（ｂ）ある用量の、ＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤、任意選択で抗体とを含むキット。
24. （ａ）ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体の有効量を含む単回用量の医薬組成物の複数のパッケージと、（ｂ）ＰＤ−１の阻害活性を中和する抗体の有効量を含む単回用量の医薬組成物の複数のパッケージとを含むキット。
25. 個体のＮＫＧＡ＋ＰＤ−１＋リンパ球の、任意選択でＣＤ８＋Ｔ細胞の調節で使用するための、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体であって、方法は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択で抗体の有効量と、ＰＤ−１の阻害活性を中和する薬剤、任意選択で抗体の有効量とを前記個体に投与することを含む、抗体。
26. ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ−１＋リンパ球を、任意選択でＮＫ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞を検出するｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法であって、腫瘍浸潤リンパ球を含む生物学的サンプルを準備すること、ならびに前記リンパ球がＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１を発現するかどうかを判定することを含む方法。
27. ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ−１＋リンパ球の、任意選択でＣＤ８＋Ｔ細胞の活性を調節するｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法であって、表面でＮＫＧ２ＡおよびＰＤ−１を発現するリンパ球を、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体およびＰＤ−１の阻害活性を中和する抗体と接触させることを含む方法。
28. 個体のがんの処置または予防で使用するための、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体であって、前記処置は、
    ａ）がんを有する個体内での悪性細胞のＨＬＡ−Ｅポリペプチド状態を判定すること、および
    ｂ）悪性細胞（例えば腫瘍細胞）により（例えば悪性細胞の表面上で）ＨＬＡ−Ｅポリペプチドが顕著に発現されているとの判定時に、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物とヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤とを前記個体に投与すること
    を含む、抗体。
29. 個体のがんの処置または予防で使用するための、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体であって、前記処置は、
    ａ）個体からの腫瘍浸潤リンパ球のＮＫＧ２Ａポリペプチド状態およびＰＤ−１ポリペプチド状態を判定すること、ならびに
    ｂ）個体からの相当な割合の腫瘍浸潤リンパ球の表面上でＮＫＧ２ＡポリペプチドおよびＰＤ−１ポリペプチドが発現されているとの判定時に、（ｉ）ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物と（ｉｉ）ヒトＰＤ−１ポリペプチドを阻害する薬剤とを含む治療レジメンを前記個体に施すことを含む、抗体。

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