CZ20002974A3 - 2-(purin-9-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diolové deriváty - Google Patents

Abstract

Sloučeniny obecného vzorce I, způsob jejich přípravy, « lékových přípravků ajejich užití v terapii zánětlivých onemocnění. Sloučeniny obecného vzorce I inhibují aktivitu leukocytů a lze je proto uplatnit jako imunosupresní látky při autoimunitních onemocněních, k inhibici metastáz nebo jako podpůrný prostředek při hojení ran.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nových chemických sloučenin, postupů jejich přípravy, farmaceutických přípravků obsahujících tyto sloučeniny ajejich užití v terapii.

Dosavadní stav techniky

Zánět je primární odpovědí organismu na jeho tkáňové poranění nebo na vniknutí mikrobů do organismu, která je charakterizována adhezi leukocytů k endotelu, jejich proniknutím per diapedesim do tkáně a následnou aktivací uvnitř tkáně. Aktivací leukocytů dojde ke tvorbě toxických kyslíkatých radikálů (hyperoxidový anion) a k uvolnění produktů granulace (peroxidáz a proteáz). Oběhovými leukocyty jsou neutrofilní, eosinofilní a bazofilní leukocyty, dále monocyty a lymfocyty. Jednotlivé formy zánětlivé reakce se liší zastoupením infiltrujících leukocytů, které je ovlivněno mírou přilnavosti tkáňových buněk a expresí cytokinárních a chemotaktických faktorů tkáně.

Primární funkcí leukocytů je obrana hostitele proti napadajícímu organismu, resp. proti bakteriím a parazitům. Pokud je tkáň poraněná nebo infikována, dojde ke komplexu řetězových reakcí, které vedou k lokální imigraci leukocytů z oběhu do infikovaných tkání, k plně kontrolované a dokonalé destrukci a fagocytóze cizích a mrtvých buněk, k následné reparaci tkáně a odbourání zánětlivého infiltrátu. U chronických zánětlivých stavů často proběhne imigrace nedokonalým způsobem, odbourání zánětlivého infiltrátu není adekvátně kontrolováno, takže zánětlivá reakce způsobí destrukci tkáně.

Z doložených in vitro a in vivo studií vyplývá, že sloučeniny působící na adenosin A2a-receptory mají protizánětlivý účinek (Cronstein, 1994). Studie izolovaných neutrofilních leukocytů prokázaly inhibici tvorby hyperoxidových aniontů, degranulace, agregace a adherence zprostředkovanou receptory A2 (Cronstein a spol.- 1983 a 1985, Burkey a Webster

- 1993, Richter 1992, Skubitz a spol.-1988).

Při použití látky selektivní pro A2a receptory přes A2b receptory (například CGS 21680) je rozsah inhibice shodný s aktivací A2a receptoru (Diazani a spol. - 1994).

Agonisté adenosinu pravděpodobně kontrolují i ostatní druhy leukocytů (Elliot a Leonard 1989, Peachell a spol. 1989). Studie na zvířatech prokázaly protizánětlivý účinek metotrexatu, který je zprostředkován adenosinem a aktivací A2 receptorů (Asako a spol. - 1993, Crostein a spol. - 1993 a 1994).

Samotný adenosin a sloučeniny, které zvyšují hladinu adenosinu, prokazují protizánětlivý účinek in vivo (Green a spol.

- 1991, Rosengren a spol. - 1995).

U lidí vede zvýšená plasmatická hodnota adenosinu (způsobená deficiencí deamináz) k imunosupresi (Hirshom 1993).

Objevili jsme novou skupinu sloučenin s Širokým protizánětlivým účinkem, které inhibují imigraci leukocytů z oběhu do tkáně a aktivaci leukocytů uvnitř tkáně a mají agonistický účinek na adenosinový 2a receptor. Potenciálním terapeutickým účinkem je ochranný účinek těchto sloučenin při onemocněních, během nichž dochází k leukocyty indukované destrukci tkáně. Sloučeniny podle současného vynálezu jsou také bezpečnější v léčbě zánětlivých onemocnění

než léčba kortikosteroidy, jejichž použití je limitováno jejich závažnými vedlejšími účinky.

Sloučeniny podle současného vynálezu vykazují lepší účinky než známé A2a selektivní agonisté pro jejich úplné omezení působení na lidské A3 receptory. Mají dokonce antagonistický účinek na lidské A3 receptory. Receptory A3 byly pozorovány na eosinofilních leukocytech a jiných buňkách zánětlivé reakce (na žírných buňkách) a aktivace těchto receptorů podporuje zánětlivou reakci (Kohno a spol. - 1996, Van Schaick a spol. - 1996).

Uvažuje se i o možném zprostředkování bronchokonstrikčních účinků adenosinu u astmatu cestou A3 receptorů (Kohno - 1996).

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří sloučenina obecného vzorce I:

(i) kde R¹ a R² nezávisle znamenají tyto skupiny:

1) C₃-8 cykloalkyl-;

2) vodík;

3) aryl2CHCH₂-;

4) C₃-8cykloalkyl-Ci-₆alkyl;

5) Cvgaikyl-;

6) aryl-Ci.₆alkyl-;

7) R4RsN-Ci-6alkyl-;

8) Ci.₆alkyl-CH(CH₂OH)-;

9) aryl-Ci-₅alkyl-CH(CH₂OH)-;

10) aryl-Ci-5alkyl-C(CH₂OH)₂-;

11) C₃-scykloalkyl- nezávisle substituovaný jednou, dvěma nebo třemi -(CH₂)_PR⁶ skupinami;

12) H₂NC(=NH)NHC₁.₆alkyl-;

13) skupina vzorce

nebo skupina, ve které jeden atom uhlíku metyienu, který sousedí s X (nebo oba, pokud existují) je nahrazen metylem;

14) -Ci-ealkyl-OH;

15) -Ci.₈haloalkyl;

16) skupina vzorce (CH₂)_cCO(CH₂)_d

NR

17) aryl

18) -(CH₂)fSO₂NHg(Ci-4alkyl-)2-g nebo

-(CH₂)fSO₂NHg(arylCi-4alkyl)₂-_g;

R³ označuje metyl, etyl, -CH=CH₂, n-propyl, -CH₂CH=CH₂, CH=CHCH₃, izopropenyl, cyklopropyl, cyklopropenyl, -CH(OH)CH₃, -(CH₂)_qhalogen, -(CH₂)_hY(CH₂)iH, -COO(CH₂),H, -CON(CH₂)_mH((CH₂)_nH), -CO(CH₂)_oH nebo

C((CH₂)_uH)=NO(CH₂)_vH

Y označuje O, S nebo N(CH₂)jH;

a a b nezávisle znamená celé číslo od 0 do 4, kde a+b je v intervalu od 3 do 5;

c, d a e nezávisle označují celé číslo od 0 do 3, kde c+d+e je v intervalu od 2 do 3;

f označuje 2 nebo 3 a g označuje celé číslo od 0 do 2; p označuje 0 nebo 1; q označuje 1 nebo 2; h označuje 1 nebo 2;

i označuje celé číslo O nebo 1, takže h+i je v intervalu od 1 do 2;

j označuje celé číslo od 0 do 2, kde h+i+j je v rozmezí od 1 do 2;

I označuje 1 nebo 2;

man nezávisle znamenají celé číslo od 0 do 2, kde m+n je v intervalu od 0 do 2; o označuje celé číslo od 0 do 2;

u a v nezávisle označují 0 nebo 1, kde u+v je celé číslo v rozmezí od 0 do 1;

R⁴ a R⁵ nezávisle znamenají vodík, Ci-₆alkyl, aryl, arylCi-esUkylnebo NR⁴R⁵ společně označují pyridinyl, pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl nebo N-C-i-ealkyl- -piperazinyl;

R⁶ označuje OH, NH2, NHCOCH3 nebo halogen;

R⁷ označuje vodík, Ci-₆alkyl, -Ci-ealkylaryl nebo -COCi-₆alkyl;

X označuje NR⁷, O, S, SO nebo SO₂; a jejich soli nebo solváty.

Jako C_x-_y alkyl označujeme nasycený nebo nenasycený alifatický uhlíkový řetězec obsahující od x do y uhlíkových atomů, které mohou tvořit přímý nebo větvený řetězec. Označení alkoxy lze vysvětlit obdobně, jde především o řetězce nasycené.

Jako aryl označujeme mono- a bi-cyklické karboxylové aromatické uhlovodíky (fenyl, naftyl) a heterocyklické aromatické uhlovodíky, které například mohou obsahovat 1-3 heteroatomy S, O a N (pyridinyl, pyrimidinyl, thiofenyl, imidazolyl, chinolinyl, furanyl, pyrolyl, oxalyl). Všechny lze případně substituovat (například Ci-₆alkylem, halogenem, hydroxyskupinou, nitroskupinou, Ci-ealkoxyskupinou, kyanoskupinou, aminoskupinou, SO2NH2 nebo -CH₂OH.

Jako C3-ecykloalkyl (použití jako zbytky R¹ a R²) označujeme monocyklické alkylové skupiny (cyklopentyl, cyklohexyl) a bicyklické alkylové skupiny (norbornyl, například exonorborn-2-yl).

Příkladem zbytku (aryl)₂CHCH2- pro R¹ a R² je Ph₂CHCH₂nebo skupina, ve které jeden nebo dva fenylové zbytky jsou substituovány halogenem nebo Ci_4alkylem.

Příkladem C3-8cykloalkyl-Ci-₆alkyiu pro R¹ a R² je etylcyklohexyl.

Příkladem C^salkylu pro R¹ a R² jsou -(CH₂)₂C(Me)3, -CH(Et)₂ a CH₂=C(Me)CH₂CH₂-.

Příkladem arylCi-ealkylu pro R¹ a R² jsou -(CH₂)2Ph, -CH₂Ph nebo lze tento Ph nahradit (jednou nebo víckrát) halogenem (jodem), aminoskupinou, metoxyskupinou, hydroxyskupinou, CH₂OH nebo SO₂NH₂, -(CH₂)₂-pyridinylem (tj. -(CH₂)₂-pyridin-2yl, eventuálně substituovaným aminoskupinou), (CH₂)₂imidazolylem (tj. 1H-imidazol-4-ylem) nebo takovou skupinou, ve které imidazolu N-substituovaný C^alkylem (především metylem).

Příkladem R⁴R⁵N-Ci-6alkylu pro R¹ a R² jsou etyl-piperidin-1-yl, etyl-pyrolidin-1 -yl, etyl-morfolin-1-yl, -(CH₂)2NH(pyridin-2-yi) a -(CH₂)₂NH₂.

Příkladem zbytku Ci_₆alkyl-CH(CH₂OH)- pro R¹ a R² je Me₂CHCH(CH₂OH)-.

Příkladem zbytku arylC-i-₅alkyl-CH(CH₂OH)- pro R¹ a R² je především PhCH₂CH(CH₂OH)-.

Příkladem arylCi-5alkyl-C(CH₂OH)₂- pro R¹ a R² je PhCH₂C(CH₂OH)₂-.

Příkladem C3-8cykloalkyl- zbytku nezávisle substituovaného jednou nebo více skupinami ~(CH₂)_PR⁶ (tj. 1, 2 nebo 3 takovými skupinami) pro R¹ a R² je 2-hydroxy-cyklopentyl (především trans-2-hydroxy-cyklopentyl) a 4-amino-cyklohexyl (především trans-4-amino-cyklohexyl).

Příkladem H₂NC(=NH)NHCi-₆alkylu pro R¹ a R² je H₂NC(=NH)NH(CH₂)₂-.

Příkladem skupin obecného vzorce

X (CH/

pro R¹ a R² je pyrolidin-3-yl, piperidin-3-yl, piperidin-4-yl, tetrahydro-1,1-dioxid, thiofen-3-yl, tetrahydropyran-4-yl, tetrahydro-thiopyran-4-yl a 1,1-dioxo-hexahydro-1.lamda.6thiopyran-4-yl, nebo derivát N-substituovaný Ci-6alkylem (například metylem), Ci-₆alkylacylem (například acetylem), arylCi-ealkylem (například benzylem).

Příkladem Ci_₆alkyl-OH pro R¹ a R² jsou -CH₂CH₂OH a -CH(CH₂OH)CH(CH₃)₂.

Příkladem Cf-shaloalkyl pro R¹ a R² jsou -CH₂CH₂CI a (CH₃)₂CIC(CH₂)₃-.

Příkladem skupin obecného vzorce ,(CH₂)_cCO<CH₂), .NR⁷ '(ch₂v pro R¹ a R² jsou 2-oxopyrolidin-4-yl, 2-oxopyrolidin-3-yl nebo derivát N-substituovaný Ci.ealkylem (například metylem) nebo benzylem.

Příkladem arylu pro R¹ a R² je fenyl popřípadě substituovaný halogenem (například fluór, především 4-fluor).

Příkladem -(CH₂)fSO₂NH₉(Ci-4afkyl)₂-g skupiny pro R¹ a R² je -(CH₂)₂SO₂NHMe, a příkladem -(CH₂)_fS0₂NH9(arylCi-4alkyl)₂.g skupin pro R1 a R2 je -(CH₂)2SO₂NHCH₂Ph.

Příkladem Cí-ealkylového zbytku pro R⁷ je metyl, příkladem Ci-6alkyl-arylového zbytku pro R⁷ je benzyl a příkladem -COC1₆alkylu pro R⁷ je acetyl.

Preferujeme, když R¹ a R² nejsou oba vodík.

Preferujeme, když zbytkem R¹ je aryl₂CHCH₂-.

Dále preferujeme, když R¹ označuje C^galkyl, C₃. ₈cykloalkylCi-₆alkyl, arylCi-₆alkyl nebo vodík.

Preferujeme, když R² označuje -CH(CH₂OH)Ci-₃alkyl, 4amino-cyklohexyl, pyrolidinyl (především pyrolidin-3-yl) nebo arylCH₂CH₂-, především kde aryl označuje (1 -Ci-3alkyl-1 Himidazol-4-yl).

Dále preferujeme, když R² označuje: pyrolidin-3-yI, ve kterém je N-substituovaný Ci^alkylem nebo benzylem, dále R⁴R⁵NCi-₆alkyl,

Ci.₆alkyl-OH, ·· • · aryl (především kde aryl označuje fenyl substituovaný halogenem), aryl-C₁.₅alkyl-CH(CH₂OH)-,

C₃.₈cykloalkyl, aryl(CH₂)2 (především kde aryl označuje pyridinyl (především pyridin-2-yl), 1 H-imidazol-4-yl, fenyl nebo fenyl disubstituovaný metoxyskupinou) nebo

C₃.₈cykloalkyl nezávisle substituovaný jednou nebo více (tj. 1, 2 nebo 3) (CH₂)_PR® skupinami.

Preferujeme, když R³ označuje metyl, etyl, n-propyl, cyklopropyl, -CH₂OH -COOCH₃ nebo -CH=NOH, především metyl, etyl, n-propyl, cyklopropyl nebo -CH₂OH.

Především preferujeme, když R³ označuje metyl, etyl, npropyl nebo cyklopropyl, zvláště metyl, etyl nebo cyklopropyl, především pak metyl nebo etyl, nejlépe etyl.

Preferujeme, když R⁴ a R⁵ nezávisle označují vodík, Ci_ 6alkyl, aryl, arylCi-6alkyl- nebo NR⁴R⁵ společně označují pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl nebo N-Ci-8alkyl-piperazinyl.

Především preferujeme, když R⁴ a R⁵ nezávisle označují vodík nebo aryl nebo NR⁴R⁵ společně označuje pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl nebo Nmetyl-piperazinyl.

Preferujeme, když p označuje 0.

Preferujeme, když R⁶ označuje OH nebo NH₂.

Preferujeme, když q označuje 1.

Preferujeme, když h označuje 1.

Preferujeme, když i označuje 0.

Preferujeme, když j označuje 1.

• · · · · · ς ;

............ .· «ί·

Preferujeme, když I označuje 1.

Preferujeme, když man označuje 0.

Preferujeme, když o označuje 1.

Preferujeme, když u označuje 0.

Preferujeme, když v označuje 0.

Preferujeme, když Y označuje O.

Preferujeme, když a označuje 2, a když b označuje 1 nebo 2.

Preferujeme, když X označuje NR⁷ (například NH), O, S nebo S0₂, především O, S nebo NH.

Preferujeme, když c označuje 0, a když buď d označuje 1 a e označuje 1 nebo d označuje 0 a e označuje 2. ,

Preferujeme, když R⁷ označuje vodík.

Zvláště preferujeme, když R¹ označuje Ph2CHCH2-Zvláště preferujeme, když R¹ označuje CH(CH2CH3)2, fenyletyl, cyklohexyletyl, -(CH₂)2C(CH₃)3 nebo vodík.

Zvláště preferujeme, když R² označuje CH(CH₂OH)CH(CH₃)₂ (především 1S-hydroxymetyl-2-metylpropyl), trans-4-amino-cyklohexyl, 2-(1-metyl-1 H-imidazol-4yl)CH₂CH₂- nebo pyrolidin-3-yl.

Zvláště preferujeme, když R² označuje 2-(1H-imidazol-4-yl)etyl, morfolin-1-yl-etyl, pyrolidin-1 -yl-etyl, pyridin-2-yl-amino-etyl, (+)-exonorborn-2-yl, 3,4-dimetoxy-fenyletyl, 2-hydroxy-etyl, 4fluor-fenyl, N-benzyl-pyrolidin-3-yl, pyridin-2-yi-etyl, 1S-hydroxymetyl-2-fenyl-etyl, cyklopentyl, fenyletyl, piperidin-1-yl-etyl nebo 2-hydroxy-pentyl (především trans-2-hydroxy-pentyl).

* ·· *« · * · · • 9999 99

Je nejvhodnější, když R¹ označuje Ph₂CHCH₂-, CH(CH₂CH₃)₂, vodík nebo fenyletyl-.

Je nejvhodnější, když R² označuje 2-(1-metyl-1 H-imidazol-4yl)-CH₂CH₂-, 1S-hydroxymetyl-2-fenyletyl, fenyletyl nebo 1Shydroxymetyl-2-metyl-propyl.

Nejvíce preferovanými sloučeninami obecného vzorce I jsou:

(2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1 Himidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

(2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-{6-(1-etylpropyl-amino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin9-yl}-tetra-hydro-furan-3,4-diol;

(2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(1-etyl-propylamino)-2-[2-(1-metyl-1Himidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-metyl-[1,2,4]oxadiazol5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-dioI;

(2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1Himidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-metyl-[1,2,4joxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

(2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-amino-2-[2-(1-metyl-1 H-imidazol-4-yl)etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-metyl-[1,2,4loxadiazol-5-yl)tetrahydro-furan-3,4-diol;

(2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-amino-2-(1S-hydroxy-metyl-2-fenyletylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl~[1,2,4j-oxadiazol-5-yl)tetrahydro-furan-3,4-diol;

(2R, 3R, 4S, 5S)-2-(6-amino-2-fenetyl-amino-purin-9-yl)-5-(3metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

(2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-cyklopropyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1etyl-propyl-amino)-2-(2-(1-metyi-1H-imidazol-4-yl)-etyiamino)purin-9-yi]-tetra-hydrofuran-3,4-diol;

A AA • A A	A A • A	• A A	A A A A	A A
• A A A A A A A AAAA	A A A A A A A A A	A A A AAA	A A •A A A A A A	A A

(2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-fenetylamino-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4y!)-etyl-amino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol~5-yl)tetrahydro-furan-3,4-diol;

(2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(1Shydroxymetyl-2-metyl-propyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

(2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(l-etyl-propyl-amino)-2-(1S-hydroxymetyl2-fenyl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)tetrahydro-furan-3,4-diol;

a jejích soli a solváty.

Do uvedeného obecného vzorce I se zahrnují stereochemické vlastnosti sloučenin. Pokud vedlejší řetězce obsahují chirální centra, a pak se vynález týká i směsi enántiomerů (včetně racemických směsí), diastereoizomerů a jednotlivých enántiomerů. Obecně je preferováno použití sloučeniny obecného vzorce I ve formě čištěného jednoduchého enántiomerů.

Vynález se týká první části přípravy sloučenin obecného vzorce I, včetně uvedení do reakce sloučeniny obecného vzorce II:

* ·· · , kde L označuje odštěpitelnou skupinu - halogen (především chlór), nebo její derivát s navázanou ochrannou skupinou, se sloučeninou vzorce R²NH2 nebo s jejím derivátem s vázanou ochrannou skupinou.

Při této reakci se reakční činidla zahřejí na teplotu 50-150°C za přítomnosti inertního rozpouštědla (DMSO). Sloučeninu obecného vzorce II lze použít ve formě derivátu s vazbou ochranných skupin (acetonidu nebo acetylových skupin) na dvou hydroxylových skupinách. Sloučeniny obecného vzorce R²NH2 jsou známé neboje lze připravit obecně známými postupy.

Sloučeniny obecného vzorce II lze připravit ze sloučeniny obecného vzorce IV. Nejprve se aktivuje karboxylová skupina sloučeniny obecného vzorce IV, a následně reakcí amidoximu vzorce OH-N=C(R³)NH2 v rozpouštědle (tetrahydrofuranu), a pak cyklizaci v rozpouštědle (toluen) při teplotě 20-150°C.

Karboxylovou aktivací rozumíme reakci kyselého chloridu (pivalolyl-chlorid) nebo kyselého anhydridů za přítomnosti zásady (terciárního aminu - diizopropyl-etylaminu). Lze použít aktivační činidla používaná v chemii peptidů (EEDQ). Hydroxylové skupiny lze odstranit obecně platnými postupy, například acetonid lze odstranit působením vodného roztoku kyseliny (kyseliny trifluorctové nebo octové při teplotě 0-150°C.

• 4

Schéma vhodného postupu první části přípravy: Schéma 1

TFA / voda

0°C až teplota místnosti

Vhodnou odštěpitelnou skupinou L je halogen (především chlór).

Použití izopropylidinové ochranné skupiny dvou hydroxyskupin ribózy ve sloučeninách obecného vzorce III a IV není limitující, lze použít i ostatní ochranné skupiny.

Sloučeniny obecného vzorce IV lze připravit podle postupu přípravy 4 (R¹ = Ph₂CHCH₂-) uvedeného v mezinárodní patentové přihlášce WO č. 94/17090 nebo obdobným postupem.

4 * 9999

4

Syntéza amidoximů je popsána autory Flora a spol. - 1978 a Bedford a spol. - 1986.

Sloučeniny obecného vzorce II lze také připravit podle postupu, ve kterém vstupuje do reakce sloučenina obecného vzorce (V):

kde L¹ a L² nezávisle označují odštěpitelnou skupinu (halogen tj. chlór) nebo jejich deriváty s vazbou ochranné skupiny, se sloučeninou obecného vzorce R¹NH2Reakce je vhodné provést za přítomnosti zásady (aminu diizopropyl-etylaminu) v rozpouštědle (alkoholu - izopropanolu) při zvýšené teplotě (50°C).

Vynález se týká druhé části postupu přípravy sloučenin obecného vzorce I, kde sloučenina obecného vzorce VI:

OH

HO OH (VI) nebo její derivát s vazbou ochranných skupin vstupuje do reakce s karboxylovým čidlem (EEDQ) a amidoximem obecného vzorce OH-N=C(R³)NH2. Je vhodné, když reakce probíhá při teplotě 50°-150°C a za přítomnosti inertního rozpouštědla (dioxanu).

Sloučeninu obecného vzorce VI lze připravit oxidací hydroxymetylové skupiny sloučeniny obecného vzorce VII. Vhodnou metodou oxidace je reakce sloučeniny obecného vzorce VII s manganistanem (manganistanem draselným) za přítomnosti zásady (vodného roztoku hydroxidu draselného) a ve vodě mísitelném rozpouštědle (dioxanu) při teplotě 0°C 50°C. Jiným vhodným způsobem oxidace je použití TEMPO za přítomnosti chlornanu (chlornanu sodného) a bromidu kovu (bromidu draselného), za přítomnosti zásady (hydrogenuhličitanu sodného) v bifázickém vodném rozpouštědle (etylacetátu) a vodě při teplotě 0°-50°C.

Schéma vhodného postupu druhé části přípravy:

DMSO, 90* C

FvNH,

HO

CH

NHR^:

NHR (Vlil) (VII)

• 9

(1)

1. EEDQ DICXAř, 2

103*C. fyOH z

N

NH,

2. TFA/voda O*C

kde L označuje odštěpitelnou skupinu jako halogen, především chlór.

Sloučeniny obecného vzorce (VII) lze připravit reakcí sloučenin obecného vzorce Vlil s aminem obecného vzorce R²NH2 v inertním rozpouštědle (DMSO) při teplotě 50-150°C. Lze použít na trhu dostupné aminy obecného vzorce R²NH2 nebo je lze připravit obecně známými postupy.

Sloučeniny obecného vzorce Vlil se připraví postupem popsaným v přípravě 3 (R¹ = Ph₂CHCH₂-) v mezinárodní patentové přihlášce WO č. 94/17090.

Vynález se týká třetí části přípravy sloučeniny obecného vzorce I, kde vstupuje do reakce sloučenina obecného vzorce IX:

• » a sloučenina obecného vzorce X:

(X) kde L je odštěpitelná skupina nebo jejich deriváty s vazbou ochranných skupin.

Sloučeninu obecného vzorce X je vhodné použít ve formě derivátu, kde hydroxylové skupiny v pozici 2- a 3- ribózy mají vázanou ochrannou skupinu (např. acetyl). Jako odštěpitelnou skupinou L lze zvolit hydroxylovou skupinu OH,ale především Crealkoxy (metoxy nebo etoxyskupiny), zbytek esteru (acetyloxy - nebo benzyloxy-) nebo halogen. Preferovanou skupinou L- je acetyloxy-. Reakční směs se vytvoří sloučením reakčních činidel v inertním rozpouštědle (metylkyanidu) za přítomnosti Lewisovy kyseliny (TMSOTf) a DBU.

Tento postup je vhodný pro přípravu sloučenin obecného vzorce II , kde se použije derivát sloučeniny obecného vzorce IX s vazbou skupiny L namísto R²NH. Stejný postup je vhodný pro přípravu sloučeniny obecného vzorce V.

Sloučeniny obecného vzorce IX (a shora uvedené deriváty) lze připravit obecně známými postupy.

»·· ···· ** ·»· ·· ·

Sloučeniny obecného vzorce Vlil lze připravit podle schématu 3:

Schéma 3

POCI3, N,N-dimetylanilin, MeCN, reflux

(IX) (^xl)

Sloučeniny obecného vzorce X lze připravit podle postupu přípravy sloučenin obecného vzorce III.

Vynález se týká čtvrté části přípravy sloučenin obecného vzorce I, kde se uvede do reakce sloučenina obecného vzorce lla

HO kde L označuje odštěpitelnou skupinu (chlór), nebo její derivát s vazbou ochranných skupin se sloučeninou vzorce R¹NH₂ podle postupu shora uvedeného.

Sloučeniny obecného vzorce lla lze připravit reakcí sloučeniny vzorce (XI)¹

N

N

H (XI)¹ (L označuje především halogen, tj. chlór) se sloučeninou obecného vzorce X podle postupu třetí části syntézy.

Sloučeniny obecného vzorce (XI)¹ lze připravit podle postupu schématu 3 nebo obdobným způsobem.

Vynález se týká páté části přípravy sloučenin obecného vzorce I, ve které R¹ označuje vodík. V této části se přemění sloučenina obecného vzorce lib

například působením PPh₃, a následně vodou.

Sloučeniny obecného vzorce lib lze připravit uvedením do reakce sloučeninu obecného vzorce Va

se sloučeninou obecného vzorce R²NH₂ podle postupu první části syntézy.

Sloučeniny obecného vzorce Va lze připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce V, kde L¹ a L² nezávisle označuje odštěpitelnou skupinu (halogen, tj. chlór), nebo jejího chráněného derivátu se sloučeninou obecného vzorce NaN₃.

Vynález se týká šesté části přípravy sloučenin obecného vzorce I, ve které se oddělí ochranné skupiny sloučeniny obecného vzorce I a tato sloučenina nebo její súl se podle potřeby přemění na jinou sůl.

Sloučeniny obecného vzorce R¹NH2, R²NH2 a OHN=C(R³)NH₂ jsou na trhu dostupné nebo je lze připravit obecně známými postupy.

Ochranné skupiny uvedené v této patentové přihlášce a prostředky jejich odštěpení jsou popsány v publikaci T.W.Green „Protective Group in Organic Synthesis“ (J.Wiley and Sons, 1991).

Vhodnou hydroxylovou ochrannou skupinou je alkyl (metyl), acetat (acetonid) a acyl (acetyl nebo benzoyl), které lze odstranit hydrolýzou nebo arylalkyl (benzyl), který lze odštěpit katalytickou hydrogenolýzou. Vhodnou ochrannou aminoskupinou je sulfonyl (tosyl), acyl (benzyloxy-karbonyl nebo t-butoxy-karbonyl) a arylalkyl (benzyl), které se odstraní hydrolýzou nebo hydrogenolýzou.

Vhodnými solemi sloučenin obecného vzorce I jsou fyziologicky nezávadné soli, jako například kyselé adiční soli odvozené od anorganických nebo organických kyselin (hydrochloridy, hydrobromidy, sulfáty, fosfáty, acetáty, benzoáty, citráty, sukcináty, laktáty, tartaráty, fumaráty, maleáty, 1hydroxy-2-naftoáty, metansulfonáty a popřípadě jejich anorganické zásadité soli (soli alkalických zemin - sodné soli). Ostatní soli sloučenin obecného vzorce I, včetně solí • · • · • · · fyziologicky nevhodných, lze použít k přípravě sloučenin obecného vzorce I a jejich fyziologicky vhodných solí. Mezi takové soli patří trifluoracetáty a mravenčany.

Mezi vhodné solváty sloučenin obecného vzorce I patří hydráty.

Kyselé adiční soli sloučenin obecného vzorce I se získají z volných bází obecného vzorce I, na které se působí odpovídající kyselinou.

Sloučeniny obecného vzorce I inhibují aktivitu leukocytů, což lze demonstrovat na schopnosti inhibice tvorby hyperoxidů (O₂') u neutrofilů stimulovaných chemicky (N-formyl-methionylleucyl-fenylalaninem - fMLP). Z toho vyplývá, že sloučeniny obecného vzorce I mají potenciální terapeutický účinek tím, že chrání před leukocyty indukovaným poškozením tkáně.

Mezi onemocnění, při kterých lze uplatnit potenciální protizánětlivý účinek, patří;

onemocnění dýchacího ústrojí -syndrom dechové tísně dospělých (ARDS), bronchitidy (včetně chronických bronchitid), cystická fibróza, astma (včetně alergenem vyvolaných astmatických reakcí), emfyzém, rhinitis a septický šok;

onemocnění gastrointestinální - zánětlivá střevní onemocnění (Crohnova choroba nebo ulcerativní kolitis), gastritidy vyvolané Helicobacterem pylori, radiací nebo alergenem vyvolaná sekundární zánětlivá onemocnění nebo gastropatie vyvolaná nesteroidními protizánětlivými léky;

kožní onemocnění - psoriáza, alergická dermatitis a hypersensitivní reakce a onemocnění CNS - Alzheimerova choroba a roztroušená skleróza.

• · • ·

Mezi onemocnění, při kterých lze uplatnit potenciální terapeutický účinek sloučenin podle současného vynálezu patří:

onemocnění srdce - onemocnění periferní cév, postischemické reperfuzní poranění a idiopatický eosinofilní syndrom.

Sloučeniny podle současného vynálezu inhibují funkci lymfocytů a mohou se uplatnit jako imunosupresní látky při autoimunitních onemocněních (revmatická arthritis a diabetes).

Sloučeniny podle současného vynálezu lze uplatnit k inhibici metastáz nebo jako podpůrný prostředek při hojení ran.

Vynález se týká nejen léčby rozvinutých onemocnění, ale i jejich profylaxe.

Sloučeniny obecného vzorce I lze použít při léčbě lidí i zvířat, především jako látky s protizánětlivým účinkem.

Vynález se týká sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli nebo solvátu použitelné při léčbě lidí nebo zvířat, především při léčbě zánětlivých onemocnění, která vedou k poškození tkáně.

Vynález se také týká použití sloučeniny obecného vzorce I nebo její fyziologicky vhodné soli nebo solvátu při přípravě léku k terapii zánětlivých onemocnění pacientů vnímavých k leukocyty vyvolanému poškození tkáně.

Vynález se týká postupu léčby lidí a zvířat se zánětlivým onemocněním, vnímavých k leukocyty vyvolanému poškození tkáně, který zahrnuje podání účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo její soli nebo solvátu člověku nebo zvířeti.

Sloučeniny podle současného vynálezu lze podat v jakékoli vhodné formě. Vynález se týká jakéhokoli farmaceutického přípravku při terapii zánětu, který obsahuje sloučeninu obecného vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou sůl nebo solvát, eventuelně společně s jedním nebo s více farmaceuticky vhodnými nosiči a pomocnými látkami.

Vynález se týká přípravy farmaceutických přípravků, které obsahují více složek.

Sloučeniny podle současného vynálezu lze připravit ve formě pro orální, bukální, parenterální, místní nebo rektální podání, především ve formě pro parenterální nebo místní (aerosol) podání.

Tablety a kapsle pro orální podání mohou obsahovat: odpovídající pomocné látky - sirup, akaciovou pryž, želatinu, sorbitol, tragakanth, škrob, celulózu nebo polyvinyl-pyrolidon; plnidla - laktózu, mikrokrystalickou celulózu, cukr, kukuřičný škrob, fosforečnan vápenatý nebo sorbitol;

kluzné látky - stearát hořečnatý, kyselinu stearovou, talek, polyetylen-glykol nebo oxid křemičitý;

disintegrační činidla - bramborový škrob, sodná sůl sesítěné karmelózy nebo sodná sůl glykolátu škrobu; smáčedla - lauryl-sulfát sodný.

Tablety lze opatřit povlakem podle obecně známých postupů.

Tekuté orální přípravky lze připravit ve formě vodné nebo olejové suspenze, roztoku, emulze, sirupu nebo elixíru nebo ve formě suchého produktu, který se před podáním smísí s vodou nebo s jiným vhodným nosičem. Vhodnými aditivy těchto přípravků jsou:

suspenzní činidla - sorbitolový sirup, metylcelulóza, glukózový/cukrový sirup, želatina, hydroxymetyicelulóza, karboxymetyl-celulóza, gel stearátu hlinitého nebo • · • · · ·· · • · · · · ♦ » · · hydrogenované jedlé tuky;

emulzní činidla - lecitin, mono-oleát sorbitanu nebo akaciová pryž;

bezvodé nosiče (j^e<úé oleje) - mandlový olej frakciovaný kokosový olej, olejovité estery, propylenglykol nebo etylalkohol; konzervační látky - metyl nebo propyl -p-hydroxybenzoáty nebo kyselina sorbová.

Přípravky mohou popřípadě obsahovat soli pufrů, látky pro úpravu chuti a barvy a/nebo sladidla (manitol).

Pro podání cestou bukální lze použít tablety ve formě tablet nebo pastilek připravených obvyklými postupy.

Sloučeniny lze podat ve formě čípků, které lze připravit za použití vhodných čípkových základů - kakaového másla nebo jiných glyceridů.

Sloučeniny podle současného vynálezu lze podat parenterálně injekční nebo kontinuální infuzní cestou. Přípravky lze upravit na formy obsahujících jednotlivé dávky jako ampulky, vialky, infuzní nádoby malého objemu nebo předem plněné stříkačky nebo na zásobní nádoby obsahující větší množství jednotlivých dávek spolu s přidanými konzervačními činidly. Přípravky lze použít ve formě roztoku, suspenze nebo emulze ve vodném nebo bezvodém nosiči, které mohou obsahovat pomocné látky jako antioxidantia, pufry, antimikrobiální látky a/nebo činidla upravující tonicitu. Účinnou látku lze připravit ve formě prášku, který se před použitím smíchá s vhodným nosičem, tj. se sterilní, apyrogenní vodou. Přípravek v pevné suché formě se připraví plněním do jednotlivých sterilních zásobních nádob nebo aseptickým plněním sterilního roztoku do jednotlivých zásobních nádob a jejich následnou lyofilizaci.

Místní cestou podání je inhalace a insuflace. Mezi přípravky pro místní podání patří masti, krémy, pleťové vody,

pudry, pesary, spreje, aerosoly, kapsle nebo náplně inhalátorů nebo insuflátorů, roztoky k nebulazici nebo kapky (oční kapky nebo nosní kapky).

Masti a krémy mohou obsahovat vodný nebo olejový základ společně s vhodnými zahušťovacími činidly a/nebo želatinizovanými činidly a/nebo rozpouštědly. Mezi tato základy patří voda a/nebo olej (kapalný parafín) nebo rostlinný olej (arašídový olej nebo ricinový olej) nebo rozpouštědlo (polyetylenglykol). Jako zahušťovací činidlo lze použít měkký parafín, stearát hlinitý, cetostearyl-alkohol, polyetylenglykoly, mikrokrystalický vosk a včelí vosk.

Pleťové vody lze připravit z vodných nebo olejových základů a obecně také obsahují jedno nebo více emulzních činidel, stabilizační činidla, disperzní činidla, suspenzní činidla nebo zahušťovací látky.

Prášky pro externí použití lze připravit za pomoci jiných vhodných práškových základů (talek, laktóza nebo škrob). Kapky lze připravit z vodných nebo bezvodých základů spolu s jedním nebo více disperzními činidly, solubilizačními činidly nebo suspenzními činidly.

Přípravky jako spreje lze připravit za pomoci vodných roztoků nebo suspenzí nebo jako aerosoly, které se aplikují z tlakových nádob za pomocí vhodných hnacích prostředků (dichlor-difluor-metanu, trichlor-fluormetanu, dichlortetrafluoretanu, 1,1,1,2,3,3,3-haptafluor-propanu, 1,1,1,2tetrafluor-etanu, oxidu uhličitého nebo jiných vhodných plynů.

Intranazální spreje lze připravit z vodných nebo bezvodých nosičů s přídavkem zahušťovacích činidel, pufrových solí nebo kyselin nebo alkálií k úpravě pH, činidel zajišťujících izotonicitu přípravku a antioxidantia.

Kapsle a náplně (například želatinové) nebo blistry (například laminované hliníkové fólie) pro užití v inhalátorech nebo insuflátorech mohou obsahovat prášek obsahující sloučeninu podle současného vynálezu a vhodný práškový základ (laktózu nebo škrob).

Roztoky pro inhalaci rozprašováním lze připravit na vodném nosiči s přídavkem činidel - kyseliny nebo zásady, pufrových solí, činidel zajišťujících izotonicitu a antimikrobiálních látek. Přípravky lze sterilizovat filtrací nebo zahříváním v autoklávu nebo je lze připravit jako nesterilní produkt

Farmaceutické přípravky podle současného vynálezu lze použít v kombinaci s jinými léčivy, například s:

protizánětlivými léčivy - kortikosteroidy (fluticasoni propionas, beclometasoni dipropionas, mometasoni furoas, triamcinolini acetonidum nebo budesonidum) nebo NSAID (kromoglykát sodný);

beta-adrenergními léčivy - salmeterolum, salbutamolum, formoterolum nebo terbutalinum a jejich soli;

antibakteriálními nebo protivirovými léčivy.

Vynález se týká lékového přípravku, který obsahuje sloučeninu obecného vzorce I nebo její fyziologicky vhodnou sůl nebo solvát společně s jiným léčivem, například s protizánětlivými léčivy (kortikosteroidy nebo NSAID).

Vynález se týká shora uvedené kombinace léčiv ve formě farmaceutického přípravku obsahujícího shora uvedenou kombinaci léčiv s farmaceuticky vhodnými nosiči.

Jednotlivé složky takových kombinací lze podávat postupně nebo současně ve formě oddělených nebo kombinovaných farmaceutických přípravků. Odpovídající dávky známých léčiv jsou se určí podle obecně platných pravidel.

Sloučeniny podle současného vynálezu lze podat v dávce od 0,01 do 500 mg/kg tělesné hmotnosti, zvláště od 0,01 do 100 mg/kg tělesné hmotnosti jedenkrát až čtyřikrát denně. Přesné určení velikosti jednotlivé dávky závisí na věku, na stupni rozvoji onemocnění pacienta a vybrané cestě podání.

Některé popsané meziprodukty sloučenin jsou nové a jsou součástí tohoto vynálezu.

Výhodou sloučenin podle současného vynálezu je jejich vyšší účinnost, vyšší selektivita, méně vedlejších účinků, delší doba působení, při výběru preferované cesty podání mají vyšší biologickou dostupnost a při inhalačním podání jsou méně systémově dostupné nebo mají více známých požadovaných vlastností než podobné známé sloučeniny.

Sloučeniny podle současného vynálezu jsou výhodné především pro jejich selektivitu k adenosinovému 2a receptorů vyšší než k ostatním adenosinovým receptorům (především k receptorům A1 a A3) oproti dosud známým sloučeninám.

• · 9

Biologickou účinnost sloučenin podle současného vynálezu lze prokázat zkouškami in vitro a in vivo podle následujících metod:

1/ Agonistické působení na adenosinové receptory typu 2a, a 3

Agonistické selektivní působení sloučeniny podle současného vynálezu na adenosinové receptory lze sledovat na ovariálních buňkách čínského křečka (CHO - Chinese hamster ovary) s přeneseným genem pro odpovídající lidský adenosinový receptor, a následně zpracovaných následnou metodou podle Castanona a Spevaka, 1994. Do CHO buněk se také přenese gen secernované placentám! alkalické fosfatázy (SPAP), jehož aktivita je ovlivěna přítomností složek cAMP odpovědi (Wood, 1995). Účinnost zkoumaných sloučenin je dána jejich účinkem na základní hladiny cAMP (A2a) nebo na forskolinem zvýšenou hladinu cAMP (A1 a A3), která se projeví změnou hladiny SPAP. Hodnota EC50 se určí vzhledem k neselektivnímu agonistu N-etyl-karboxamid-adenosinu (NECA).

2/ Antigenem vyvolaná akumulace plicních eosinofilů u senzitizovaných morčat

Ovalbuminem senzitizovaným morčatům je aplikován 1 mg/kg intraperitoneálně mepyraminu jako protektivní dávka zabraňující vývoji anafylaktického bronchospasmu. Sloučenina podle současného vynálezu se podá inhalační cestou (30 minut dýchání aerosolu sloučeniny podle současného vynálezu), a pak se ihned inhalačně podá ovalbumin (30 dýchání aerosolu připraveného z 50 pg/ml roztoku albuminu). Po 24 hodinách po podání ovalbuminu se morčata usmrtí a plíce se vymyjí. Z bronchoalveolární vymývací tekutiny se určí celkový a

diferenciální leukocytový počet, a následně se určí dávka zkoumané sloučeniny způsobující 50% redukci akumulace eosinofilních leukocytů (ED₅₀) (Sanjar a spol. 1992).

• 4 · • · · · ♦ 4 4 4 4 ♦ 44 4444 44 444

4 4 «44

Literatura:

Asako H., Wolf RE, Granger DN (1993), Gastroenterology 104, str. 31-37;

Bedford CD, Howd RA, Dailey OD, Miller A, Nolen HW III, Kenley RA, Kern J.R., Winterle JS, (1986), J. Med. Chem: 29, str. 2174-2183;

Burkey TH Webster RO, (1993), Biochem. Biofys. Acta 1175, str. 312-318;

Castanon MJ, Spevak W, (1994), Biochem. Biofys Res. Commun, 198, str. 626-631;

Cronstein BN Kramer SB, Weissmann G, Hirschhorn R, (1983), Trans. Assoc. Am. Physicians 96, str. 384-91;

Cronstein BN Kramer SB, Rosenstein ED, Weissmann G, Hirschhorn R, (1985), Ann N.Y. Acad. Sci. 4S1, str. 291-301;

Cronstein BN Naime D, Ostad E (1993), J. Clin. Invest. 92, str. 2675-82;

Cronstein BN Naime D, Ostad E, (1994), Adv. Exp. Med. Biol, 370, str. 411-6;

Cronstein BN (1994), J. Appl. Physiol. 76, str. 5-13;

Dianzani C Brunelleschi S, Viano I, Fantozzi R, (1994), Eur. J. Pharmacol 263, str. 223-226;

Eillot KRF, Leonard EJ, (1989), FEBS Letters 254, str. 94-98;

Flora KP, van't Riet B, Wampler GL, (1978), Cancer Research, 38, str. 1291-1295;

Green PG, Basbaum Al, Helms C Levine JD, (1991), Proč. Nati. Acad Sci. 88, str. 4162-4165;

Hirschorn R, (1993), Pediatr. Res 33, str. S35-41;

Kohno Y; Xiao-duo J; Mawhorter SD; Koshiba M; Jacobson KA.

*A · A A • · AA AAA • A A A A

A AAAA

A A · AAA ·· AAA AA AAA (1996). Blood 88 str. 3569-3574.

Peachell PT, Lichtenstein LM, Schieimer RP, (1989), Biochem Pharmacol 38, str. 1717-1725;

Richter J, (1992), J. Leukocyte Biol. 51, str. 270-275;

Rosengren S, Bong GW, Firestein GS, (1995), J. Immunol. 154, str. 5444-54S1;

Sanjar S, McCabe PJ, Fattah D, Humbies AA, Pol SM, (1992), Am. Rev.

Respir. Dis, 14S, A40;

Skubitz KM, Wickman NW, Hammerschmidt DE, (1988), Blood 72, str. 29-33

Van Schaick EA; Jacobson KA; Kim HO; Ijzerman AP; Danhof

M. (1996) Eur J Pharmacol 308, str. 311-314.

Wood KV. (1995) Curr Opinion Biotechnology 6 str. 50-58.

♦ »♦ ♦· · ·· · · · · ·· • ♦ * φ · • · · · · φ • · · * · ··· ···* ·· >·«

Příklady provedení vynálezu

Upřesnění použitých termínů:

Pokud je uvedeno čištění rychlou chromatografii na koloně, jde o kolonu silikagelu s velikostí otvorů od 0,040 do 0,063 mm mesh (tj. Merck Art 9385), přičemž se eluce kolonky urychlí umístěním do tlaku dusíku 34,474 kPa.

'Biotage' Označuje použití systému Biotage Flash 40 za použití předem připravené normální fáze kolony oxidu křemičitého, přičemž se eluce rozpouštědlem urychlí aplikací mobilní fáze pod tlakem dusíku do 137,896 kPa.

Při chromatografii na tenké vrstvě (TLC) se použijí 60 F₂54 desky silikagelu o velikosti 5x10 cm (například Merck Art 5719) při vizualizaci detektory pracujícími v UV oblasti elektromagnetického záření, pokud není uvedeno jinak.

Pokud jsou produkty čištěny preparatívní HPLC jde o HPLC v reverzní fázi na C₁₈koloně (1“ Dynamax™) při eluci gradientem roztoku acetnitrilu (obsahujícího 0,1% roztok kyseliny trifluoroctové) ve vodě (obsahující 0,1% roztok kyseliny trifluoroctové) a výsledné produkty se získají jako trifluoracetáty produktů.

Standardní automatizované preparatívní HPLC kolony, podmínky a eluční činidla:

Automatizovaná preparatívní kapalinová chromatografie s vysokou rozlišovací schopností (autopreparativní HPLC) se provede na koloně Supelco™ ABZ+ (velikost částic 5pm, výška kolony 100 mm, vnitřní průměr kolony 22 mm) při eluci směsí rozpouštědel stávající se z:

1/ 0,1% roztoku kyseliny mravenčí ve vodě a ·* · ·« • ·· · ♦ · • » » ♦ • * · · ♦ • · · · · · · ··· ···· ·· ··« ·· ·

2/ 0,05% roztoku kyseliny mravenčí v acetnitrilu.

Eluční činidlo se vyjadřuje v procentech roztoku 2/ ve směsi rozpouštědel. Rychlost průtoku je 4 mi za minutu. Pokud není jinak uvedeno, provede se eluce gradientem od 5 do 95% během 20 minut

LC/MS systémy:

Systémy pro spojení hmotnostní spektrometrie s vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií

LC/MS Systém A - A

Kolona Supelco™ ABZ+ (výška kolony 3,3 cm, vnitřní průměr 4,6 mm) se eluuje systémem rozpouštědel:

A - 0,1 %objemových roztoku kyseliny mravenčí + 0,077 % hmotnostně/objemových octanu amonného ve vodě a B - směs acetnitrilu a vody v poměru 95:5 obsahující 0,05% objemových kyseliny mravenčí.

Gradientová eluce: 100% A - 0,7 minut; gradient směsi A+B od 0 % B do 100% B během 3,5 minut; 100% B - 3,5 minut; návrat k 0% B během 0,3 minut. Použije se pozitivní a negativní ionizace elektrosprejem.

LC/MS Systém B - A

Kolona Supelco™ ABZ+ (výška kolony 5 cm, vnitřní průměr 2,1 mm) se eluuje systémem rozpouštědel:

A - 0,1 % objemových kyseliny mravenčí + 0,077% hmotnostně/objemových octanu amonného ve vodě a

B - směs acetnitrilu ve vodě v poměru 95:5 + 0,05%

• ♦ · · · · ·· ··· ·· ··· objemových kyseliny mravenčí.

Gradientova eluce: 0 - 100% B během 3,5 minut; 100% B 1,50 minut , návrat k 0% B během 0,50 minut. Použije se pozitivní a negativní ionizace elektrosprejem.

LC/MS Systém C - A

Kolona Supelco™ ABZ+ (výška kolony 3,3 cm, vnitřní průměr 4,6 mm) se eluuje systémem rozpouštědel:

A - 0,1 % objemových kyseliny mravenčí + 10 mmol octanu amonného ve vodě a

B - směs acetnitrilu ve vodě v poměru 95:5 obsahující 0,05% objemových roztoku kyseliny mravenčí.

Gradientová eluce: 100% A - 0,7 minut; gradient směsi rozpouštědel A+B od 0% B do 100% B během 3,7 minut ; 100% B - 0,9 minut; návrat k 0% B během 0,2 minut. Použije se pozitivní a negativní ionizace elektrosprejem.

Meziprodukty

Meziprodukt 1 (6R-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1 H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR,6aR)-furo[3,4d]-[ 1,3]dioxol-4R-yl)-metanol

Do 0,24 g (1,92 mmol) 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etyl-aminu (připraveného z odpovídajícího bis-hydrochloridu neutralizací přidáním malého množství pevného hydroxidu sodného v metanolu) se přidá 0,20 g (0,384 mmol) 2-chlor-N-(2,2difenyletyl)-2,3,0-(1-metyl-etyliden)-adenosinu (příprava č. 3 WO 94/17090). Rozpouštědlo se odstraní odpařováním. Do vytvořeného zbytku se přidá 0,7 ml DMSO za vzniku suspenze, která se 25 hodin zahřívá k teplotě 90 °C. Zchlazená reakční • · · · · · · ··* ···· ·· «»♦ _o směs se čistí rychlou chromatografii na koloně silikagelu při eluci směsí DCM, metanolu a amoniaku v poměru 200:5:1 200:10:1 za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako 0,226 g bílé pevné látky.

LC/MS systém A: Rt= 3,97 minut, m/z = 611 MH+.

Meziprodukt 2 (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-2,2-dimetyl-tetrahydro-furo[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4-karboxylová kyselina

Do míchaného fialového roztoku 0,292 g (1,85 mmol) manganistanu draselného a 0,166 g (2,96 mmol) hydroxidu draselného v 1 ml vody se při teplotě 0°C po kapkách přidá roztok 0,226 g (0,370 mmol) meziproduktu 1 v 3 ml 1,4-dioxanu. Vytvořený roztok se 3 hodiny míchá při teplotě 0°C, a pak se na něj působí pevným metabisulfitem sodným do vymizení fialového zbarvení. Vytvořená šedá suspenze se okyselí na pH 3 přidáním 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové a produkt se třikrát extrahuje 20 ml etylacetátu. Organické podíly se promyjí 20 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a suší se nad síranem hořečnatým, a pak se zahustí ve vakuu za vzniku 0,100 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém A: Rt= 3,96 minut, m/z = 625 MH+.

Meziprodukt 3 {2-chlor-9-[6S-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR,6aS)-furo[3,4-d]-[1,3]dioxol-4R-yl]-9H-purin-6-yl}-(2,2-difenyl-etyl)-amin

Do míchané směsi 0,50 g (0,935 mmol) (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-[2chlor-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl]-2,2-dimetyl-tetrahydro39 • »··· furo[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4-karboxylové kyseliny [příprava 4 mezinárodní patentové přihlášky WO 94/17090] v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě 0°C přidá 0,218 ml (1,214 mmol) diizopropyl-etylaminu. Do zchlazené míchané směsi se přidá 0,150 ml (1,214 mmol) pivaloyl-chloridu a směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0°C. Směs se zchladí na teplotu -10°C, po kapkách se přidá 0,160 g (1,87 mmol) N-hydroxypropionamidinu v 3 ml bezvodého tetrahydrofuranu a vytvořený roztok se 1 hodinu míchá. Směs se nechá zahřát k teplotě místnosti a míchá dalších 20 hodin. Roztok se zahustí ve vakuu, a pak se azeotropicky destiluje dvakrát 10 ml toluenu. Žlutý zbytek se znovu rozpustí v 15 ml toluenu a 1 hodinu se zahřívá k teplotě 80°C za stálého míchání. Po zchlazení se reakční směs zahustí ve vakuu za vzniku žlutého oleje, který se čistí rychlou chromatografií na koloně silikagelu při eluci 35-50% roztokem etylacetátu v cyklohexanu za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako 0,430 g bílé pevné látky.

TLC (35% roztok etylacetátu v cyklohexanu): Rf = 0,58

Meziprodukt 4 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-chlor-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol

Roztok 0,375 mg (0,638 mmol) meziproduktu 3 ve směsi 5,6 ml kyseliny trifluoroctové a 1,4 ml vody se 8,5 hodiny míchá v atmosféře dusíku při teplotě 5-10°C, a pak se zahustí ve vakuu. Vytvořený zbytek se dvakrát azeotropicky destiluje toluenem za vzniku výsledné sloučeniny jako 0,340 mg smetanově bílé pevné látky.

LC/MS systém B: Rt = 3,36 minut, m/z = 548 MH+

Meziprodukt 5

2-chlor-N-( 1 -etylpropyl)-adenosin

Směs 10,1 g (22,6 mM) 2,6-dichlor-9-(2,3,5-tri-O-acetyl-S-Dribo-furanosyl)-9H-purinu*\ 300 ml izopropanolu, 5 g uhličitanu draselného a 2,17 g (24,84 mM) 1-etyl-propylaminu se 24 hodin míchá při teplotě 20°C. Reakční směs se 73 hodin zahřívá k teplotě 54°C. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu, přidá se 50 ml vody, směs se třikrát extrahuje 80 ml etylacetátu a sloučené extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Získá se 9,44 g výsledné sloučeniny jako béžové pěny.

LC/MS systém A: Rt = 2,66 minut, m/z = 372 MH+.

** M.J. Robina a B. Uznanski, Canad. J. Chem, 1981, 59 (17), 2608.

Meziprodukt 6 {6R-[2-chlor-6-(1-etyl-propylamino)-purin-9-yl]-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR,6aR)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4R-yl}-metanol

Směs 9,3 g (22,6 mmol) meziproduktu 5, 35 ml 2,2-dimetoxypropanu, 250 ml acetonu a 8,1 g para-toluen-sulfonové kyseliny se 22 hodin míchá při teplotě 20°C. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se zpracuje 200 ml etylacetátu, třikrát se promyje 70 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodný promývací podíl se zpětně extrahuje 50 ml etylacetátu. Sloučené organické podíly se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně silikagelu při eluci 50%, 60%, a pak 70% roztokem etylacetátu v cyklohexanu za vzniku 5,67 g výsledné sloučeniny jako bílé pěny.

TLC S1O2 (50% roztok etylacetátu v cyklohexanu): Rf = 0,17.

* *· ·< · • · · · « 9 · · • 9 9 9 9 * * · · · 9

9 9 9 9

999 9999 99 999 ·« • · ·

9

9 9

999

Meziprodukt 7 (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-[2-chlor-6-(1-etyl-propylamino)-purin-9-yl]-2,2-dimetyl-tetrahydro-furo[3,4-d]-[1,3]dioxol-4-karboxylová kyselina

Směs 5,431 g (13,2 mmol) meziproduktu 6, 0,157 g (1,32 mmol) bromidu draselného, 0,010 g (0,07 mmol) TEMPO v 205 ml etylacetátu a 138 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného se 20 minut energicky míchá při teplotě 0°C. Po kapkách se během 5 minut přidá směs 7,3 ml chlornanu sodného (13% aktivní chlorid), 0,420 g pevného hydrogenuhličitanu sodného a 2 ml vody. Po 30 minutách se přidají další reakční činidla (bromid draselný, TEMPO, chlornan sodný, pevný hydrogenuhličitan sodný a voda ve stejných, shora uvedených množstvích). Tato adice se opakuje po uplynutí dalších 30 minut O hodinu později se reakční směs vlije do roztoku 28 g vodného roztoku siřičitanu sodného ve 400 ml vody a zředí se 100 ml etylacetátu. Směs se energicky protřepává a organický podíl se promyje 100 ml vody. Sloučené vodné podíly se zchladí na teplotu 0°C, okyselí na pH 3 přidáním 2M roztoku kyseliny chlorovodíkové, extrahují se třikrát 200 ml etylacetátu, suší se nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu. Získá se 5,03 g výsledné sloučeniny jako bílé pěny.

LC/MS systém B: R_t = 3,25 minut, m/z = 426 MH+.

Meziprodukt 8 {2-chlor-9-[6S-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazof-5-yl)-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR, 6aS)-furo[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4R-yl]-9H-purin-6-yl}-( 1 -etyl-propyl)-amin *9 t

• ·

9 9 • · ve 12 ml

Na roztok 0,7 g (1,647 mmol) meziproduktu bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě 0°C působí 0,372 ml (2,14 mmol) di-izopropyl-etyl-aminu a 0,263 ml (2,14 mmol) pivaloyl-chloridu. Vytvořený roztok se 1,5 hodiny míchá při teplotě 0°C, a pak se dále zchladí na teplotu -10 °C. Během 15 minut se přidá 0,289 g (3,29 mmol) N-hydroxy-propionamidinu v 5 ml tetra-hydrofuranu. Roztok se 1 hodinu míchá při teplotě 05°C, a pak 20 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se reakční směs azeotropicky destiluje dvakrát 20 ml toluenu. Vytvořený zbytek se rozpustí v 15 ml toluenu a roztok se 1 hodinu zahřívá k teplotě 80°C. Zchlazený roztok se zahustí ve vakuu, čistí se rychlou chromatografií na koloně silikagelu při eluci 35% roztokem etylacetátu v cyklohexanu za poskytnutí 0,780 g v názvu uvedené sloučeniny jako čirého oleje.

TLC SiO₂ (30% etylacetát v cyklohexanu): Rf = 0,26.

LC/MS systém B: R_t = 3,53 minut, m/z = 478 MH+.

Meziprodukt 9 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-chlor-6-(1-etyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol

Roztok 0,78 g (1,63 mmol) meziproduktu 8 v 5 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 10:1 se 4,5 hodiny míchá při teplotě 0°C. Směs se zahustí ve vakuu a azeotropicky se destiluje třikrát 10 ml toluenu za vzniku 0,705 g výsledné sloučeniny jako růžové pevné látky.

LC/MS systém B: R_t= 3,05 minut, m/z = 438 MH+.

Meziprodukt 10 {2-chlor-9-[2,2-dimetyl-6S-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-(3aR,6aS)-furo[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4R-y!]-9H-purin-6-yl}-(1-etyl-propyl)-amin

Na roztok 0,7 g (1,647 mmol) meziproduktu 7 v 12 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě 0°C působí 0,372 ml (2,14 mmol) di-izopropyl-etylaminu a 0,263 ml (2,14 mmol) pivaloyl-chloridu. Vytvořený roztok se míchá při teplotě 1,5 hodiny při teplotě 0°C, dále se zchladí na teplotu -10°C a během 15 minut se přidá 0,244 g (3,29 mmol) N-hydroxy-acetamidinu v 5 ml tetrahydrofuranu. Roztok se 1 hodinu míchá při teplotě 0-5 °C, a pak 20 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se azeotropicky destiluje dvakrát 20 ml toluenu. Vytvořený zbytek se rozpustí v 15 ml toluenu a roztok se 1 hodinu zahřívá k teplotě 80°C. Zchlazený roztok se zahustí ve vakuu, a pak se čistí rychlou chromatografií na koloně silikagelu při elucí 35% etylacetátu v cyklohexanu za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako 0,762 g čirého oleje.

TLC SÍO2 (30% roztok etylacetátu v cyklohexanu): Rf = 0,24. LC/MS systém B: R_t = 3,41 minut, m/z = 464 MH+.

Meziprodukt 11 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-chlor-6-(1-etyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol

Roztok 0,76 g (1,64 mmol) meziproduktu 10 v 5 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 10 : 1 se 4,5 hodiny míchá při teplotě 0°C. Směs se zahustí ve vakuu a vytvořený zbytek se třikrát azeotropicky destiluje 10 ml toluenu za vzniku 0,692 g výsledné sloučeniny jako světle růžové pevné látky. LC/MS systém B: Rt = 2,92 minut, m/z = 424 MH+.

Meziprodukt 12 2-chloradenosin

Při teplotě 0°C se proudem čpavku 30 minut probublává 25 ml bezvodého metanolu. Roztok se následně přidá do směsi 2,000 g (4,5mmol) 2,6-dichlor-9-(2,3,5-tri-O-acetyl-B-D-ribo-furanosyl)9H-purinu** v 5 ml bezvodého metanolu a 24 hodin se zahřívá na teplotu 20°C. Po dalších 6 hodinách se roztokem opět nechá probublávat amoniak, a následně po dalších 20 hodinách. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a vytvořený zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně silikagelu při eluci čistým etylacetátem za vzniku 1,152 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

TLC Si0₂ (čistý etylacetát): Rf = 0,15 ** M.J. Robins a B. Uznanski, Canad. J. Chem, 1981, 59 (17), 2608.

Meziprodukt 13 [6R-(6-amino-2-chlor-purin-9-yl)-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR,

6aR)-furo-[3,4-d]-[l,3]-dioxol-4R-yl]-metanol

Do míchaného roztoku 0,700 g (2,3 mmol) meziproduktu 12 v 70 ml acetonu se přidá 1,70 m (13,8 mmol) 2,2-dimetoxy-propanu a 0,438 g (2,3 mmol) para-toluen-sulfonové kyseliny a reakční směs se přes noc míchá při teplotě 20°C. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a reakční směs se zpracuje 150 ml etylacetátu. Suspenze se třikrát protřepává s 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a s vodou. Vodný promývací podíl se zpětně extrahuje 50 ml etylacetátu. Sloučené organické podíly se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu za vzniku 0,651 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

• ·

TLC SiO₂ (čistý etylacetát): Rf = 0,33

Meziprodukt 14 (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-(6-amino-2-chlor-purin-9-yl)-2,2-dimetyl-tetrahydro-furo[3,4-d]-[1,3]dioxol-4-karboxylová kyselina

Roztok 0,400 g (1,2 mmol) meziproduktu 13 v 12 ml 1,4-dioxanu a 4 ml vody se při teplotě 0°C během 20 minut po kapkách přidá do míchaného roztoku 0,924 g (5,8 mmol) manganistanu draselného a 0,524 g (9,4 mmol) hydroxidu draselného ve 4 ml vody. Směs se další 3 hodiny míchá při teplotě 0°C, přidává se pevný metabisulfit sodný do vymizení fialového zabarvení, a pak se směs okyselí na pH 3 přidáním 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Směs se třikrát extrahuje 50 ml etylacetátu, sloučené organické roztoky se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu. Vznikne 0,316 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

TLC SiO₂ (čistý etylacetát): Rf= 0,10.

Meziprodukt 15

2-chlor-9-[2,2-dimetyl-6S-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-(3aR,6aS)-furo[3,4-d]-[1,3]dioxol-4R-yl]-9H-purin-6-yl-amin

Směs 0,400 g meziproduktu 14 a 0,154 ml di-izopropyletylaminu v 10 ml tetrahydrofuranu se 15 minut míchá v atmosféře dusíku a při teplotě místnosti, a pak se zchladí na teplotu 0°C. Po přidání 0,18 ml pivaloyl-chloridu se směs 1 hodinu míchá při teplotě 0°C. Na směs se působí 0,196 g Nhydroxy-acetamidinu, 1 hodinu se míchá při teplotě 0°C, a pak se přes noc nechá zahřát k teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu, přidá se 20 ml toluenu a směs se 3 hodiny zahřívá k teplotě 80°C. Zchlazená směs se odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí rychlou chromatografii na koloně silikagelu při eluci směsí dichlormetanu, etanolu a 880 amoniaku v poměru 100:8:1 za vzniku 0,328 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

TLC S1O2 (dichlormetanu : etanol : 880 amoniak = 100:8:1):

R_f = 0,47

Meziprodukt 16

2-chlor-9-[6S-(3-etyl-[1,2,4joxadiazol-5-yl)-2,2-dimetyl· tetrahydro-(3aR,6aS)-furo[3,4-d]-[1,3]dioxol-4R-yl]-9H-purin-6-yl-amin

Směs 0,500 g meziproduktu 14 a 0,318 ml di-izopropyletylaminu v 10 ml tetrahydrofuranu se zchladí na teplotu 0°C a 15 minut se míchá v atmosféře dusíku. Po přidání 0,225 ml pivaloyl-chloridu se směs 1 hodinu míchá při teplotě 0°C. Na směs se působí 0,246 g N-hydroxy-propionamidinu ve 2 ml tetrahydrofuranu, 1 hodinu se míchá při teplotě 0°C, a pak se přes noc nechá zahřát k teplotě místnosti. Zchlazená reakční směs se odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí rychlou chromatografii na koloně silikagelu při eluci směsí dichlormetanu, etanolu a 880 amoniaku v poměru 100:8:1 za vzniku 0,389 g výsledné sloučeniny jako světle žluté pěny.

TLC SÍO2 (dichlormetan : etanol : 880 amoniak = 100:8:1):

Rf - 0,5 • · · · ·

Meziprodukt 17 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-(6-amino-2-chlorpurin-9-yl)-5-(3-metyl[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-acetát

Na teplotu 100 °C se 16 hodin zahřívá roztok 0,488 g meziproduktu 15 ve 20 ml kyseliny octové a 5 ml vody. Zchlazená reakční směs se odpařuje ve vakuu za vzniku výsledné sloučeniny jako 0,537 g hnědého oleje.

TLC S1O2 (dichlormetan : etanol: 880 amoniak = 100:8:1):

Rf - 0,14.

Meziprodukt 18 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-(6-amino-2-chlor-purin-9-yl)-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxa-diazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-acetát

Na teplotu 100 °C se 4,5 hodin zahřívá roztok 0,381 g meziproduktu 16 v 15 ml kyseliny octové a 3 ml vody, a pak se 3 hodiny udržuje při teplotě 119°C. Po přidání 5 ml kyseliny octové a 1 ml vody se reakční směs 8 hodin zahřívá na teplotu 119°C. Zchlazená reakční směs se odpařuje ve vakuu za vzniku 0,410 g výsledné sloučeniny jako světle hnědé pevné látky.

TLC S1O2 (dichlormetan : etanol: 880 amoniak = 100:8:1): Rf = 0,15.

Meziprodukt 19 [6R-(6-amino-2-fenyl-etylamino-purin-9-yl)-2,2-dimetyltetrahydro-(3aR, 6aR)-furo[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4R-yl]-metanol

Roztok 10,0 g (19,5 mmol) meziproduktu 13 a 12,2 ml (97,3 mmol) fenyl-etylaminu se 7 hodin zahřívá na teplotu 110 °C. Reakční směs se zředí 400 ml etylacetátu a promyje se 1M roztokem kyseliny chlorovodíkové. Vodný podíl se třikrát extrahuje 200 ml etylacetátu a sloučené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a vytvořený produkt se čistí chromatografií na koloně oxidu křemičitého při eluci 5% roztokem metanolu v dichlormetanu za vzniku 7,61 g výsledné sloučeniny jako hnědého oleje.

TLC SiO₂ (dichlormetan : metanol = 10:1) Rf = 0,28

Meziprodukt 20 (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-(6-amino-2-fenyletyl-amino-purin-9-yl)-2,2-dimetyl-tetrahydro-furo[3,4-d]-[1,3]dioxol-4-karboxylová kyselina

Během 30 minut se při teplotě 0°C po kapkách přidá roztok 4,0 g (9,38 mmol) meziproduktu 19 v 54 ml 1,4-dioxanu a 13,3 ml vody do míchaného roztoku 7,5 g (46,9 mmol) manganistanu draselného a 4,24 g (75 mmol) hydroxidu draselného v 84 ml vody. Směs se míchá při teplotě 0°C další 1 hodinu. Přebytek manganistanu draselného se odstraní přidáváním po částech pevného metabisulfitu sodného. Roztok se filtruje přes vrstvu Celitu a promyje se 1,4-dioxinem. Filtrát se zahustí ve vakuu na objem 20 ml, okyselí se přidáním koncentrovaného roztoku kyseliny chlorovodíkové. Pevný produkt se filtruje a suší se přes noc přes oxid fosforečný za vzniku 2,25 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

TLC SiO₂ (dichlormetan : metanol = 5:1) Rf = 0,44

Meziprodukt 21

2-fenyletyl-amino-9-[6S-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR,6aS)-furo[3,4-d]-[1,3]dioxol-4R-yl]-9H-purin-6-yl-amin

Do roztoku 0,500 g (1,14 mmol) meziproduktu 20 v 10 ml DME se přidá 0,168 g (2,28 mmol) N-hydroxy-acetamidinu a 0,654 g (2,28 mmol) EEDQ a reakční směs se 2 hodiny zahřívá k refluxu. Po přidání 0,168 g (2,28 mmol) N-hydroxy-acetamidinu a 0,654 g (2,28 mmol) EEDQ se reakční směs 4 dny zahřívá na teplotu refluxu, rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně silikagelu při eluci 5% roztokem metanolu v etylacetátu za vzniku 0,256 g výsledné sloučeniny jako žluté pěny.

TLC SÍO2 (etylacetát: metanolu 19:1): Rf = 0,33

Meziprodukt 22 {2-chlor-9-[2,2-dimetyl-6R-(3-propyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-(3aS, 6aR)-furo-[3,4-d]-[1,3J-dioxol-4S-yl]-9H-purin-yl}-(2,2-difenyletyl)-amin

Do míchané směsi 0,428 g (0,8 mmol) (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-[2chlor-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl)-2,2-dimetyl-tetrafuro[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4-karboxylové kyseliny (příprava 4, mezinárodní patentová přihláška WO 94/17090) v 8 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě 0°C přidá 0,181 ml (1,04 mmol) diizopropyl-etylaminu. Do zchlazené míchané směsi se přidá 0,128 ml (1,04 mmol) pivaloyl-chloridu a směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0°C. Po kapkách se během 10 minut přidá 0,163 g (1,6 mmol) N-hydroxy-butyramidinu v 7 ml bezvodého tetrahydrofuranu a vytvořený roztok se 1 hodinu míchá při teplotě 0°C. Směs se nechá zahřát k teplotě místnosti a míchá dalších 20 hodin. Roztok se zahustí ve vakuu, a pak se azeotropicky destiluje dvakrát 10 ml toluenu. Žlutý zbytek se znovu rozpustí v 15 ml toluenu a 1 hodinu se za stálého míchání zahřívá k teplotě 80°C. Po zchlazení se reakční směs zahustí ve vakuu za vzniku žlutého oleje, který se čistí rychlou

chromatografií na koloně silikagelu při eluci 40% roztokem etylacetátu v cyklohexanu za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako 0,392 g čirého oleje.

LC/MS systém A: Rt - 5,27 minut, m/z = 602 MH+.

Meziprodukt 23 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-chlor-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl]~ -5-(3-propyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol

Roztok 0,392 mg (0,652 mmol) meziproduktu 22 ve směsi 10 ml kyseliny octové a 2,5 ml vody se 26 hodin míchá v atmosféře dusíku při teplotě 5-10°C, a pak se zahustí ve vakuu. Vytvořený zbytek se dvakrát azeotropicky destiluje toluenem za vzniku výsledné sloučeniny jako 0,355 mg smetanově bílé pěny.

LC/MS systém B: Rt = 3,41 minut, m/z = 562 MH+.

Meziprodukt 24 {2-chlor~9-[2,2-dimetyl-6S-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-(3aR, 6aS)-furo-[3,4-dJ-[1,3]-dioxol-4R-yl]-9H-purin-yl}-(2,2-difenyletyl)-amin

Do míchané směsi 0,15 g (0,28 mmol) (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-[2chlor-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl)-2,2-dimetyl-tetrafuro[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4-karboxylové kyseliny (příprava 4, mezinárodní patentová přihláška WO 94/17090) ve 4 ml bezvodého tetrahydrofuranu při teplotě 0°C přidá 0,63 ml (0,364 mmol) diizopropyl-etylaminu. Do zchlazené míchané směsi se přidá 0,045 ml (0,364 mmol) pivaloyl-chloridu, a směs se 1,5 hodiny míchá při teplotě 0°C. Po částech se během 10 minut přidá 0,042 g (0,56 mmol) N-hydroxy-acetamidinu, a vytvořený roztok se míchá 1 hodinu při teplotě 0°C. Směs se nechá zahřát k teplotě místnosti a dalších 20 hodin se míchá. Roztok se • · · · · zahustí ve vakuu, a pak se dvakrát azeotropicky destiluje 10 ml toluenu. Vytvořený žlutý zbytek se znovu rozpustí v 7 ml toluenu a roztok se za stálého míchání 1 hodinu zahřívá k teplotě 80°C. Zchlazená reakční směs se zahustí ve vakuu za vzniku 0,146 g výsledné sloučeniny jako žlutého oleje.

LC/MS systém B: Rt= 3,58 minut, m/z = 574 MH+.

Meziprodukt 25 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-chlor-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol

Roztok 0,146 g (0,255 mmol) meziproduktu 24 ve směsi 10 ml octové kyseliny a 2,5 ml vody se v atmosféře dusíku míchá 37 hodin při teplotě 100°C, a pak se zahustí ve vakuu. Vytvořený zbytek se dvakrát azeotropicky destiluje s 10 ml toluenu, za vzniku 0,132 g výsledné sloučeniny jako žluté pevné látky. LC/MS systém B: Rt = 3,23 minut, m/z = 534 MH+.

Meziprodukt 26 {2-chlor-9-[6S-(3-cyklopropyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-2,2-dimetyl-tetra-hydro-(3aR,6aS)-furo[3,4-d]-(1,3]-dioxol-4R-yl]-9H-purin-6-yl}-(1-etyl-propyl)-amin

Ve 33 ml tětrahýdrofuranu se v atmosféře dusíku rozpustí 2,13 g (5 mmol) meziproduktu 7, roztok se zchladí na teplotu 5°C a přidá se 1,9 ml (11 mmol) N,N-di-izopropyl-etylaminu a 0,67 ml (5,5 mmol) trimetylacetyl-chloridu. Směs se během 1 hodin zahřeje k teplotě místnosti. Po zchlazení na teplotu 5°C se přidá 0,61 g (6 mmol) N-hydroxy-cyklopropan-karboxamidinu** a reakční směs se 16 hodin míchá a zahřívá k teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se rozpustí ve 100 ml toluenu a 24 hodin zahřívá na teplotu refluxu (120 °C) v atmosféře dusíku. Toluen se ve vakuu odpařování a produkt se čistí extrakcí tuhou fází za použití 10 g (SÍO2) předem připravené kolony Varian Mega Bonded Elut při eluci směsí etylacetátu a cyklohexanu v poměru 1:2 za vzniku 2,170 g výsledné sloučeniny žluté pryže.

LC/MS systém A: Rt = 4,80 minut, m/z=490 MH+ ** W.J. Fanshawe, V.J. Bauer, S.R. Safír, D.A. Blickens a S.J.Riggi, J. Med. Chem, 1969, 12, 381.

Meziprodukt 27 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-chlor-6-(1-etyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-cyklo-propyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro- furan-3,4-diol

Při teplotě 0°C se v 25 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 9:1 během 6 hodin v atmosféře dusíku za stálého míchání rozpustí 2,1 g (4,5 mmol) meziproduktu 26 a nechá se 16 hodin v lednici (4°C). Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se pomalu vlije do 150 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, extrahuje se třikrát 50 ml dichlormetanu, promyje se nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad sulfátem sodným, filtruje se a zahustí se za vzniku 2 g výsledné sloučeniny jako žluto-bílé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t= 3,22 minut, m/z = 450 MH+.

Meziprodukt 28 {6R-(2-chlor-6-fenetyl-amino-purin-9-yl)-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR, 6aR)-furo[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4R-yl}-metanol

Směs umístěná v uzavřené zkumavce (tj. Reactivial™) 0,1 g (0,224 mmol) 4R-acetoxy-5R-acetoxy-metyl-2R-(2,6-dichlorpurin-9-yl)-tetra-hydro-furan-3R-yl-esteru kyseliny octové **, 0,034 ml (0,27 mmol) 2-fenyletyl-aminu a 0,047 ml (0,27 mmol)

A* A ·· A

A AAA AAA

AAA A A AAA di-izopropyl-etylaminu ve 2 ml izopropanolu se 17,5 hodiny zahřívá k teplotě 52°C. Reakční směs se pak zředí 1ml metanolu. Po přidání 0,077 ml (0,336 mmol) 25% hmotnostních roztoku metoxidu sodného v metanolu se směs míchá 3,5 hodiny při teplotě místnosti. Do reakční směsi se přidá 0,2 ml kyseliny octové. Po odstranění těkavého podílu se získá zbytek, který se rozpustí v 2,5 ml acetonu a na směs se působí 0,35 ml 2,2dimetoxy-propanu a 0,081 g paratoluen-sulfonové kyseliny. Po 66 hodinách se přidají 3 ml acetonu a 0,35 ml 2,2-dimetoxypropanu a po 90 hodinách se přidá 81 mg para-toluensulfonové kyseliny. Po dalších 21 hodinách se reakční směs odpařuje proudem vzduchu. Vytvořená směs se 10 minut míchá společně s 4 ml nasyceného vodného uhličitanu sodného, extrahuje se třikrát 3 ml etylacetátu, suší se nad síranem hořečnatým a odpařuje se ve vakuu za vzniku 0,118 g výsledné sloučeniny jako světle hnědé pryže.

LC/MS systém A: Rt= 4,50 minut, m/z = 446 MH+ pro C₂iH₂₄ ³⁵CIN₅0₄.

** M.J. Robins a B. Uznanski, Canad. J. Chem, 1981, 59 (17), 2608.

Meziprodukt 29 {6R-[2-chlor-6-(2-cyklohexyl-etylamino)-purin-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydro-(3aR, 6aR)-furo[3,4-d]-[1,3]dioxol-4R-yl}-metanol

Meziprodukt 29 se připraví obdobným způsobem jako meziprodukt 28 za použití 0,034 g (0,27 mmol) 2-cyklohexyletylaminu. Získá se 0,116 g výsledné sloučeniny jako světle hnědé pěny.

LC/MS systém A: R_t= 4,93 minut, m/z = 452 MH+ pro C₂₁H₃₀ ³⁵CIN₅O₄.

·· ·

Meziprodukt 30 {6R-[2-chlor-6-(3,3-dimetyl-butylamino)-purin-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydro-(3aR, 6aR)-furo[3,4-d]-[1,3]dioxol-4R-yl}-metanol

Meziprodukt 30 se připraví obdobným způsobem jako meziprodukt 28 za použití 0,036 mí (0,27 mmol) 3,3-dimetylbutylaminu. Získá se výsledná sloučenina jako 0,111 g bílé pevné látky o 88% čistotě.

LC/MS systém A: R_t= 4,93 minut, m/z = 452 MH+ pro C₂iH3o³⁵CIN₅0₄.

Meziprodukt 31 {6R-(6-fenetyl-amino)-2-[2-(1 -metyl-1 H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR, 6aR)-furo[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4R-yl)-metanol

Směs 0,118 g (0,265 mmol) meziproduktu 28 a 0,168 g (1,344 mmol) 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylaminu (připraveného z odpovídajícího bis-hydro-chloridu neutralizací přidáním s mírnou deficiencí pevného hydroxidu sodného v metanolu) ve směsi 0,3 ml di-izopropyl-etylaminu a 0,3 ml DMSO se v uzavřené zkumavce (například Reacti-vial™) 20 hodin zahřívá na teplotu 104 °C. Zchlazená reakční směs se zředí 5 ml 0,5 M vodného roztoku hydroxidu sodného a čtyřikrát se extrahuje 5 ml dichlormetanu. Sloučené extrakty se filtrují přes kolonu Varian Mega Bond Elut (5g Si, velikost 20 ml), při eluci dichlormetanem, 50% roztokem etylacetátu a cyklohexanu, etylacetátem, a pak se 10% roztokem metanolu v etylacetátu. Podíly obsahující požadovaný produkt se sloučí a odpařují ve vakuu za vzniku 0,107g výsledného produktu jako čiré pryže.

TLC (10% roztok metanolu v etylacetátu, vizualizace UV světlem): R_f - 0,13.

Meziprodukt 32 {6R-{6-(2-cyklohexyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR,6aR)furo[3,4-dH1,3]-dioxol-4R-yl)-metanol

Meziprodukt 32 se připraví obdobným způsobem jako meziprodukt 31 za použití 0,116 g (0,257 mmol) meziproduktu 29. Získá se výsledná sloučenina jako 0,09 g čiré pryže.

TLC (10% roztok metanolu v etylacetátu, vizualizace UV světlem): Rf =0,13.

Meziprodukt 33 {6R-{6-(3,3-dimetyl-butylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etyl-amino]-purin-9-yl}-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR,6aR)-furo-[3,4d]-[1,3]-dioxol-4R-yl)-metanol

Meziprodukt 33 se připraví obdobným způsobem jako meziprodukt 31 za použití 0,111 g (0,261 mmol) meziproduktu

30. Získá se výsledná sloučenina jako 0,097 g čiré pryže.

TLC (10% roztok metanolu v etylacetátu, vizualizace UV světlem): Rf = 0,13

Meziprodukt 34 (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-{6-fenetyl-amino-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-2,2-dimetyl-tetrahydro-furof3,4-d]-11,3]dioxol-4-karboxylová kyselina

Do míchané směsi 0,1 g hydroxidu draselného a 0,158 g (1 mmol) manganistanu draselného v 1 ml vody při teplotě 0°C se • 1 4

4

4· 4 • · «4

4444444 44 během 5 minut po kapkách přidá roztok 0,107 g (0,2 mmol) meziproduktu 31 v 1,6 ml dioxanu. Směs se 4 hodiny míchá v lázni ledu a vody. Pevný metabisulfit sodný se přidává do vymizení fialového zabarvení a směs se filtruje přes krátkou a lisovanou vrstvu Harbourlite. Vytvořený vodný roztok se opatrně okyselí na hodnotu pH 3 - 4 přidáním 2M vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a třikrát se promyje 5 ml etylacetátu. Vytvořený vodný roztok se lyofilizuje za vzniku bílé pevné látky, která se jedenkrát extrahuje 3 ml metanolu, a pak dvakrát 1 ml metanolu za vzniku výsledného produktu jako 0,084 g smetanově bílé pevné látky.

LC/MS systém C: R_t= 2,43 minut, m/z = 549 MH+.

Meziprodukt 35 (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-{6-(2-cyklohexyl-etylamino)-2-[2-(1 metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-2,2-dimetyl-tetrahydrofuro-[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4-karboxylová kyselina

Meziprodukt 35 se připraví obdobným způsobem jako meziprodukt 34 za použití 0,09 g (0,17 mmol) meziproduktu 32. Získá se výsledná sloučenina jako 0,081g smetanově bílé pevné látky.

LC/MS systém C: R_t= 2,61 minut, m/z = 555 MH+

Meziprodukt 36 (3aS, 4S, 6R, 6aR)-6-{6-(3,3-dimetyl-butylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-2,2-dimetyl-tetrahydrofuro[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4-karboxylová kyselina

Za stálého míchání se v 0,5 ml vody rozpustí 0,09 g (1,52 mmol) drceného hydroxidu draselného. Během míchání se přidá 0,158 g (0,95 mmol) manganistanu draselného a směs se zchladí na ♦ 4444 44 • 4 · teplotu 0°C. Do zchlazené směsi se přidá předem zchlazený roztok na teplotu 0°C 0,097 g (0,19 mmol) meziproduktu 33 rozpuštěného v 1,6 ml 1,4-dioxanu a 0,5 ml vody a znovu se zchladí na teplotu 0°C. Reakční směs se 3 hodiny míchá při teplotě 0°C a na směs se působí 0,15 g pevného metabisulfitu sodného do vymizení fialového zbarvení. Nerozpustný materiál se odstraní filtrací přes vrstvu Harborlite a promytím 10 ml vody. Vodná směs se extrahuje dvakrát 20 ml dichlormetanu. Sloučené organické podíly se zahustí ve vakuu za vzniku výsledné sloučeniny jako 0,064 g žlutého oleje.

LC/MS systém C: R_t = 2,44 minut, m/z=529 MH+.

Meziprodukt 37

2-(pyrídin-2-yl-amino)-etylamin

V atmosféře dusíku se za stálého míchání při teplotě 20°C po kapkách přidá 10,00 g (63,3 mmol) 2-brompyridinu do 76,00 g (126,6 mmol) 1,2-diamino-etanu. Reakční směs se 4 hodiny míchá při teplotě 20°C, a pak se 24 hodin zahřívá pod refluxem. Reakční směs se zahustí ve vakuu a čistí rychlou chromatografií na koloně silikagelu při eluci směsí dichlormetanu, etanolu a amoniaku v poměru 30:8:1 za vzniku 1,23 g výsledné sloučeniny jako červeného oleje.

TLC S1O2 (dichlormetan, etanol, amoniak = 30:8:1): Rf = 0,14. Hmotové spektrum: m/z 138 (MH+ pro C7H11N3).

Meziprodukt 38

N-Hydroxy-propionamidin

Směs 20 ml (280 mmol) propionitrilu, 78 g (560 mmol) uhličitanu draselného a 19,000 g (280 mmol) hydroxylamin-hydrochloridu ve 400 ml etanolu se 15 minut míchá při teplotě místnosti a *· ♦ 9 • 9 9 pomalu se během 1 hodiny zahřívá na teplotu refluxu, a pak se 7 hodin refluxuje. Po zchlazení se směs filtruje přes vrstvu Harborlite a promyje se 100 ml etanolu. Rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu a zbytek se třikrát azeotropicky destiluje 100 ml toluenu za vzniku 17 g výsledné sloučeniny jako lehce zabarveného oleje.

TLC SiO₂ (5% metanol / chloroform /1% amoniak): Rf = 0,21.

Meziprodukt 39

3-etyl-5-(6R-metoxy-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR,6aR)-furo-[3,4d]-[1,3]-dioxol-4S-yl)-[1,2,4]-oxadiazol

Směs 14,800 g (68 mmol) (3aS,4S,6R,6aR)-metoxy-2,2-dimetyltetrahydro-furo-[3,4-d]-[1,3]-dioxol-4-karboxylové kyseliny (připravené podle postupu přípravy meziproduktu 1 v mezinárodní patentové přihlášce W0 98/28319), 9,200 g (68 mmol) 1-hydroxy-benz-triazolu a 13,000 g (68 mmol) 1-(3dimetyl-amino-propyl)-3-etyl-karbodiimid-hydrochloridu v 200 ml dimetylformamidu se přes noc míchá při teplotě místnosti. Po přidání roztoku 6,000 g (68 mmol) meziproduktu 38 v 10 ml dimetylformamidu se směs přes noc zahřívá na teplotu 70°C. Po zchlazení se rozpouštědlo odstraní odpařováním ve vakuu. Vytvořený zbytek se zpracuje 100 ml etylacetátu, dvakrát se promyje 100 ml 10% citrónové kyseliny a jedenkrát 100 ml vody. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým a odpařuje ve vakuu za vzniku výsledné sloučeniny jako 17,00 g bezbarvé pryže.

LC/MS systém C: R_t =1,77 minut, m/z = 271 MH+.

« ♦··· • ·

Meziprodukt 40

4S-acetoxy-2R-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5S-metoxy-tetrahydro-furan-3R-yl-ester kyseliny octové

Směs 17 g (62 mmol) meziproduktu 39 a 3 ml koncentrovaného roztoku kyseliny chlorovodíkové ve 200 ml metanolu se přes noc zahřívá pod refluxem. Po zchlazení se směs odpařuje ve vakuu na 50% objemu a přidá se 50 ml pyridinu. Směs se pak odpařuje ve vakuu na přibližně 25% původního objemu. Po přidání dalších 100 ml pyridinu a se směs odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se zpracuje 150 ml bezvodého pyridinu a na směs se působí 50 ml (přebytkem) anhydridů kyseliny octové, a následně 0,38 g (3 mmol) DMAP. Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Směs se odpařuje, zbytek se zpracuje 200 ml etylacetátu a dvakrát se promyje 100 ml 10% roztoku citrónové kyseliny a 100 ml vody, suší se nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí za použití rychlou chromatografií na koloně Biotage (třikrát 90g, S1O2) při eluci 30% roztokem cyklohexanu v etylacetátu. Získá se 17,500 g výsledné sloučeniny jako bezbarvé pevné látky.

TLC S1O2 (50% roztoku cyklohexanu v etylacetátu): Rf - 0,52

Meziprodukt 41

4S-acetoxy-2R-(2,6-dichlor-purin-9-yl)-5S-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3R-yl-ester kyseliny octové

Směs 0,829 g (4,3 mmol) 2,6-dichlor-purinu v 5 ml 1,1,1,3,3,3hexametyl-disilazanu se přes noc zahřívá pod refluxem, a pak se rozpouštědlo odstraní odpařováním ve vakuu. Vytvořený zbytek se třikrát azeotropicky destiluje 5 ml bezvodého toluenu. Do vytvořeného zbytku v 2 ml bezvodého acetonitrilu se přidá 0,500 g (1,6 mmol) meziproduktu 40 a 0,65 ml (4,3 mmol) DBU.

Směs se pak zchladí na teplotu 0°C a přidá se 0,9 ml (4,8 mmol) TMSOTf. Směs se nechá zahřát k teplotě místnosti, a přes noc zahřívá pod refluxem za vzniku tmavě červeného roztoku. Po zchlazení se směs vlije do 5 ml roztoku nasyceného bikarbonátu a třikrát se extrahuje 10 ml etylacetátu. Sloučené organické podíly se promyjí 20 ml vody, suší se nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu. Vytvořený zbytek rychlou chromatografií na koloně Biotage (8g, SÍO2) při elucí 60% roztokem cyklohexanu v etylacetátu za vzniku 0,599 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém C: Rt = 3,32 minut, m/z = 472 MH+.

Meziprodukt 42

4S-acetoxy-2R-[6-azido-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5S-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetra-hydrofuran-3R-yl-ester kyseliny octové

Do zchlazené směsi 0,600 g (1,27 mmol) meziproduktu 41 v bezvodém dimetylformamidu se při teplotě -10 do -15°C přidá 0,088 g (1,35 mmol) azidu sodného. Směs se 2 hodiny míchá při teplotě -10 °C, a pak se přidá 0,388 g (2,8 mmol) 3-(S)-(-)-2amino-3-fenyl-propanolu v 1 ml bezvodého dimetyl-formamidu. Směs se nechá zahřát k teplotě místnosti a míchá přes noc. Po přidání 15 ml vody se směs třikrát extrahuje 15 ml etylacetátu. Sloučené organické podíly se suší nad síranem hořečnatým a odpařují ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně Biotage (8g, SiO₂) při elucí 30% roztokem cyklohexanu v etylacetátu. Získá se 0,450 g výsledné sloučeniny jako bezbarvé pryže.

LC/MS systém C: Rt = 3,25 minut, m/z = 593 MH+.

4«

Meziprodukt 43

4S-acetoxy-2R-[6-amino-2-( 1 S-hydroxymetyl-2-fenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5S-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3R-yl-ester kyseliny octové

Směs 0,440 g (0,74 mmol) meziproduktu 42 a 0,220 g (0,84 mmol) trifenyl-fosfinu v 5 ml tetrahydrofuranu se přes noc míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí autopreparativní HPLC za vzniku 0,410 g výsledné sloučeniny jako špinavě bílé pevné látky. LC/MS systém C: R_t = 2,77 minut, m/z = 567 MH+.

• ··*·

Příklad 1 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-bis(trifluoracetát)

Roztok 0,050 g (0,08 mmol) meziproduktu 2 v 2 ml 1,4-dioxanu se působí 0,024 g (0,096 mmol) EEDQ a 0,012 g (0,16 mmol) Nhydroxy-acetamidinu. Vytvořená směs se za stálého míchání 6 dní zahřívá k teplotě 103°C. Roztok se zahustí ve vakuu za vzniku žlutého oleje, do kterého se přidá zchlazený roztok 0,9 ml kyseliny trifluoroctové a 0,1 ml vody. Vytvořený roztok se 6 hodin míchá při teplotě 0°C, a pak se zahustí ve vakuu a třikrát se azeotropicky destiluje s toluenem. Vytvořený produkt se čistí preparatívní HPLC při eluci 30-70% roztokem acetonitrilu ve vodě. Získá se 0,006 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém A: R_t= 3,98 minut, m/z = 623 MH+.

Příklad 2 (2R, 3R, 4S,5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-{3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-bis(difluoracetát)

Výsledná sloučenina příkladu 2 se připraví podle postupu příkladu 1 za použití 0,014 g (0,16 mmol) N-hydroxypropionamidinu. Na roztok 0,050 g (0,08 mmol) meziproduktu 2 v 2 ml 1,4-dioxanu se působí 0,024 g (0,096 mmol) EEDQ a 0,014 g (0,16 mmol) N-hydroxy-propionamidinu. Vytvořená směs se 6 dní za stálého míchání zahřívá k teplotě 103°C. Roztok se zahustí ve vakuu za vzniku žlutého oleje. Do tohoto zbytku se přidá chlazený roztok 0,9 ml kyseliny trifluoroctové a 0,1 ml vody. Vytvořený roztok se 6 hodin míchá při teplotě 0°C, zahustí se ve vakuu a třikrát se azeotropicky destiluje s toluenem.

• · · e • · · ·· ·

Vytvořený zbytek se čistí preparativní HPLC při eluci 30-70% roztokem acetonitrilu ve vodě za vzniku 0,012 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém A: Rt= 4,02 minut , m/z = 637 MH+.

Příklad 3 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etyiamino)-2-(pyrolidin-3R-yl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-mravenčan.

K teplotě 80°C se v uzavřené zkumavce (například Reacti-vial™) 28 hodin zahřívá směs 0,034 g (0,062 mmol) meziproduktu 4, 0,030 ml (0,311 mmol) (3R)-(+ -3-aminopyrolidinu) a 0,03 ml DMSO. Vytvořený surový produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,017 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém A: R_t= 3,65 minut, m/z = 598 MH+.

Příklad 4 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-(trans-4-amino-cyklohexyl-amino)-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diol-diformiát

Výsledná sloučenina příkladu 4 se připraví obdobným způsobem podle příkladu 3 za použití 0,035 g (0,311 mmol) trans-1,4diamino-cyklohexanu. Po lyofilizaci se získá 0,013 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t= 2,58 minut, m/z = 626 MH+.

• · • · • ·

Příklad 5 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(1S-hydroxy-metyl-2-metyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4}-oxadiazol-5-yl)-tetra-hydrofuran-3,4-diol-formiát

Výsledná sloučenina příkladu 5 se připraví obdobným způsobem podle postupu příkladu 3 za použití 0,032 g (0,311 mmol) (S)-2amino-3-metyl-1 -butanolu. Reakční směs se 3 dny zahřívá na teplotu 80-95°C. Po lyofilizaci se získá 0,005 g bílé pevné látky výsledné sloučeniny. LC/MS systém B: Rt= 3,16 minut, m/z = 615 MH+.

Příklad 6 (2R, 3R,4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(2-morfolin-4-yl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V 0,03 ml DMSO se rozpustí 0,069 g (0,163 mmol) meziproduktu 11 a 0,107 ml (0,815 mmol) 4-(2-aminoetyl)morfolinu a směs se v uzavřené zkumavce (například Reactivial™) 26 hodin zahřívá k teplotě 80°C, a následně se po prvních 20 hodinách přidá 0,053 ml (0,407 mmol) 4-(2aminoetyl)-morfolinu. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,059 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,19 minut, m/z = 517MH+.

Příklad 7 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-amino-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-metyl-í 1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-bis(trifluoracetát) • ·

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 20 hodin zahřívá na teplotu 90°C směs 0,048 g meziproduktu 17 a 0,06 g 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylaminu v 0,05 ml DMSO. Surový materiál se čistí dvakrát autopreparativní HPLC, a následně preparativní HPLC při eluci 10-60% roztoku acetonitrilu během 22 minut. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se lyofilizuje za vzniku 0,007 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém A: Rt =1,8 minut, m/z 443 (MH+).

Příklad 8 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-amino-2-(2-pyridin-2-yl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-diformiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 16 hodin zahřívá na teplotu 90 °C 0,041 g meziproduktu 18, 0,06 ml 2-(2-amino-etyl)-pyridinu a 0,05 ml DMSO. Produkt se čistí autopreparativní HPLC. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se lyofilizuje za poskytnutí 0,011 g v názvu uvedené sloučeniny jako světle hnědé pevné látky. LC/MS systém B: Rt =1,92minut, m/z 4S4 (MH+).

Příklad 9 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-amino-2-(1S-hydroxy-metyJ-2-fenyl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 32 hodin zahřívá na teplotu 90°C směs 0,041 g meziproduktu 18, 0,06 g (S)-(-)-2-amino-3-fenyl-1-propanolu a 0,05 ml DMSO, a pak se teplota reakční směsi 16 hodin udržuje na teplotě 110°C.

Produkt se dvakrát čistí autopreparativní HPLC. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se lyofilizuje za poskytnutí 0,003 g v názvu uvedené sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,36 minut, m/z = 483 (MH+).

Příklad 9 (alternativní způsob přípravy)

2R-[6-amino-2-(1S-hydroxy-metyl-2-fenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5S-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3R,4S-diol-formiát

Směs 0,160g (0,28mmol) meziproduktu 43 a 0,009 g (0,14 mmol) kyanidu draselného v 3 ml metanolu se 30 minut míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu a zbytek se čistí za použití autopreparativní HPLC za vzniku výsledné sloučeniny 0,050 g jako bílé pevné látky.

LC/MS systém C: Rt = 2,35 minut, m/z = 483 MH+.

Příklad 10 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-amino-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)tetrahydro-furan-3,4-diol-diformiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 32 hodin zahřívá na teplotu 90°C směs 0,041 g meziproduktu 18, 0,06 g 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylaminu a 0,05 ml DMSO, a pak se 16 hodin teplota reakční směsi udržuje na teplotě 110°C. Produkt se čistí autopreparativní HPLC, rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se lyofilizuje za poskytnutí 0,014 g v názvu uvedené sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t =1,88 minut, m/z = 457 (MH+).

• · *· * · · · • · · · • 9 9 9 4 • 4 9 4

Příklad 11 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-(6-amino-2-cyklopentyl-amino-purin-9-yl)-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 20 hodin zahřívá na teplotu 90°C směs 0,048 g meziproduktu 17 a 0,06 ml cyklopentyl-aminu v 0,05 ml DMSO se zahřívá v uzavřené zkumavce (například Reactivial™). Surový materiál se čistí autopreparativní HPLC, rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se lyofilizuje za poskytnutí 0,006 g v názvu uvedené sloučeniny jako žluté pevné látky.

LC/MS systém A: R_t =2,2 minut, m/z = 403 (MH+)

Příklad 12 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-amino-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 20 hodin zahřívá na teplotu 90°C směs 0,048 g meziproduktu 17 a 0,06 g (S)-(-)-2-amino-3-fenyl-1-propanolu v 0,05 ml DMSO. Surový materiál se čistí dvakrát autopreparativní HPLC, rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se lyofilizuje za vzniku 0,002 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém A: R_t = 2,24 minut, m/z = 469 (MH+).

Příklad 13 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5-{6-(1-etyl-propyl-amino)-2-[2-( 1 -metyl-1 H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-tetra-hydrofuran-3,4-diol-formiát

K teplotě 85-100°C se v atmosféře dusíku 8 dní zahřívá roztok

0,070 g (0,161 mmol) meziproduktu 9 a 0,101 g (0,807 mmol) 2(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etyl-aminu v 0,03 ml DMSO, a následně se po 5 dnech přidá 0,101 g (0,807 mmol) 2-(1-metyl1H-imidazol-4-yl)-etylaminu. Produkt se čistí autopreparativní HPLC. Po lyofilizaci vznikne 0,010 g výsledné sloučeniny jako smetanově bílé pevné látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,36 minut, m/z = 526 MH+.

Příklad 14 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(1-etyl-propylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

K teplotě 85-100°C se v atmosféře dusíku 7 dní zahřívá směs 0,069 g (0,163 mmol) meziproduktu 11 a 0,102 g (0,815 mmol) 2-(1-metyl-1H-imidazol-4yl)-etylaminu v 0,03 ml DMSO, a následně se po prvních 5 dnech přidá 0,102 g (0,815 mmol) 2(1-metyl-1 H-imidazol-4-yl)-etylaminu. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,013 g výsledné sloučeniny jako béžové pevné látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,32 minut, m/z = 512 MH+.

Příklad 15 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-(6-amino-2-fenetyl-amino-purin-9-yl)-5-(3metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-dioltrifluoracetát

Při teplotě 20°C se 3 hodiny míchá roztok 0,210 g (0,44 mmol) meziproduktu 21 ve 2 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 9:1 a rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí preparativní HPLC při elucí 10-90% roztokem acetonitrilu ve vodě a po lyofilizaci vznikne 0,088 g

výsledné sloučeniny jako žluté pevné látky.

Hmotové spektrum m/z 439 (MH+ pro C20H23N804).

Nalezeno: C 46,70; H 4,05; N 19,51;

pro C20H22N8O4 . C₂HF₃02 . 0,5 H₂0 vypočteno: C 46,54; H 4,24; N 19,56.

Příklad 16 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-(trans-4-amino-cyklohexyl-amino)-6-(1-etyl-propyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazoi-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 66 hodin zahřívá na teplotu 80-90°C směs 0,069 g (0,163mmol) meziproduktu 11 a 0,093 g (0,815 mmol) trans-1,4-diaminocyklohexanu v 0,03 ml DMSO, a následně se po prvních 20 hodinách přidá 0,093 g (0,815 mmol) trans-1,4-diaminocyklohexanu. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,063 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: Rt = 2,12 minut, m/z = 502 MH+.

Příklad 17 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 5,5 hodiny zahřívá na teplotu 80-95’C směs 0,069 g (0,163 mmol) meziproduktu 11a 0,123 g (0,815 mmol) 3-(S)-(-)2-amino-3-fenylpropanolu v 0,03 ml DMSO. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,014 g výsledné sloučeniny jako žluté pevné látky.

• 4 4

4 4 44

LC/MS systém B: R_t = 2,80 minut, m/z = 539 MH+.

Příklad 18 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-1-etyl-propylamino)-2-(2-piperidin-1-yl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 40 hodin zahřívá na teplotu 80°C směs 0,069 g (0,163 mmol) meziproduktu 11 a 0,116 ml (0,815 mmol) 2-piperidin-etylaminu v 0,03 ml DMSO, a následně se po prvních 20 hodinách přidá 0,058 ml (0,407 mmol) 2-piperidin-etylaminu. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofiliizaci vznikne 0,031 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,25 minut, m/z = 516 MH+.

Příklad 19 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-morfolin-4-yl-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 26 hodin zahřívá na teplotu 80°C směs 0,070 g (0,161 mmol) meziproduktu 9 a 0,106 ml (0,807 mmol) 4-(2-aminoetyl)morfolinu v 0,03 ml DMSO, a následně se po prvních 6 hodinách přidá 0,053 ml (0,403 mmol) 4-(2-amino-etyl)-morfolinu. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,049 g výsledné sloučeniny jako béžové pevné látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,27 minut, m/z = 532 MH+.

• 9

Příklad 20 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-piperidin-1-yl-etyl-amino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 40 hodin zahřívá na teplotu 80°C směs 0,070 g (0,161 mmol) meziproduktu 9 a 0,115 ml (0,807 mmol) 2-piperidin-etylaminu v 0,03ml DMSO, a následně se po prvních 20 hodinách přidá 0,057 ml (0,403mmol) 2-piperidin-etylaminu. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,035 g výsledné sloučeniny jako hnědé pryže.

LC/MS systém B: Rt = 2,33 minut, m/z = 530 MH+.

Příklad 21 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-pyridin-2-yl-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 46 hodin zahřívá na teplotu 80°C směs 0,070 g (0,161 mmol) meziproduktu 9 a 0,096 ml (0,807 mmol) 2-(2-amino-etyl)pyridinu v 0,03 ml DMSO, a následně se po prvních 20 hodinách přidá 0,096 ml (0,807 mmol) 2-(2-aminoetyl)-pyridinu. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,035 g výsledné sloučeniny jako béžové pevné látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,38 minut, m/z = 524 MH+.

Příklad 22 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-cyklopentyl-amino-6-(1-etyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 20 hodin zahřívá na teplotu 80°Csměs 0,069 g (0,163 mmol) meziprodukt 11a 0,08 ml (0,815 mmol) cyklopentyl-aminu v 0,03 ml DMSO. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,007 g výsledné sloučeniny jako béžové pevné látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,87 minut, m/z = 472 MH+.

Příklad 23 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-cyklopentyI-amino-6-(1-etyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 20 hodin zahřívá na teplotu 80°C směs 0,070 g (0,161 mmol) meziproduktu 9 a 0,03 ml (0,807 mmol) cyklopentyl-aminu v 0,03 ml DMSO. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,008 g výsledné sloučeniny jako smetanově bílé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t = 3,01 minut, m/z = 486 MH+.

Příklad 24 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2S-hydroxy-cyklopentyl-(S)-yl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4}-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 68 hodin zahřívá na teplotu 80-95°C směs 0,069 g (0,163 mmol) meziproduktu 11 a 0,082 g (0,815 mmol) (R,R)-aminocyklopentan-2-olu* v 0,03 ml DMSO. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,005 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: R, = 2,57 minut, m/z = 489 MH+.

* · · 9 9 · · · 9 9 99 999

9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9

99999 99 9 99 * · ·

L.E. Overman a S. Sugai, J. Org. Chem, 1985, 50, 4154

Příklad 25 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2S-hydroxy-cyklopent-(S)-yl-amino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 68 hodin zahřívá na teplotu 80-95°C směs 0,070 g (0,161 mmol) meziproduktu 9 a 0,082 g (0,807 mmol) (R,R)-aminocyklopentan-2-olu* v 0,03 ml DMSO. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,005 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: Rt = 2,68 minut, m/z = 503 MH+.

* L.E. Overman a S. Sugai, J. Org. Chem, 1985, 50, 4154.

Příklad 26 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(pyrolidin-3R-yl-amino)-purin-9-yI]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 6 hodin zahřívá na teplotu 80°C směs 0,069 g (0,163 mmol) meziprodukt 11 a 0,070 g (0,815 mmol) (3R)-(+)-3-amino-pyrolidinu v 0,03 ml DMSO. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,041 g výsledné sloučeniny jako smetanově bílé pevné látky.

LC/MS systém B: Rt = 2,24 minut, m/z = 474 MH+.

Příklad 27 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4J-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl74

-propyl-amino)-2-(pyrolidin-3R-yl-amino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 6 hodin zahřívá na teplotu 80°C směs 0,070 g (0,161 mmol) meziproduktu 9 a 0,07 g (0,807 mmol) (3R)-(+)-3-aminopyrolidinu v 0,03 ml DMSO. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,041 g výsledné sloučeniny jako smetanově bílé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,31 minut, m/z = 488 MH+.

Příklad 28 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(1S-hydroxymetyl-2-metyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 5,5 dne zahřívá na teplotu 80-95°C směs 0,069 g (0,163 mmol) meziprodukt 11 a 0,084 g (0,815 mmol) L-2-amino-3-metylbutanolu v 0,03 ml DMSO. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,030 g výsledné sloučeniny jako žluté pryže.

LC/MS systém B: R_t = 2,59 minut, m/z = 491 MH+.

Příklad 29 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-(trans-4-amino-cyklohexyl-amino)-6-(1-etyl-propyl~amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 66 hodin zahřívá na teplotu 80-90°C směs 0,070 g (0,161 mmol)

• »·

Β ·· Β meziproduktu 9 a 0,092 g (0,807 mmol) trans-1,4-diaminocyklohexanu v 0,03 ml DMSO, a následně se po prvních 20 hodinách přidá 0,092 mg (0,807 mmol) trans-1,4-diamino-cyklohexanu. Produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,082 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky. LC/MS systém B: R_t = 2,21 minut, m/z = 516 MH+.

Příklad 30 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-amino-2-(2-pyridin-2-yl-etyíamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-diformiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 20 hodin zahřívá na teplotu 90°C směs 0,048 g meziproduktu 17 a 0,06 ml 2-(2-amino-etyl)-pyridinu v 0,05 ml DMSO. Přidá se 0,05 ml 2-(2-amino-etyl)-pyridinu a směs se 16 hodin zahřívá k teplotě Í1O°C. Vytvořený zbytek se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,0015 g výsledné sloučeniny jako světle hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t =1,88 minut, m/z = 440 MH+.

Příklad 31 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(2-morfolin-4-yl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyI~[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 28 hodin zahřívá na teplotu 80°C směs 0,034 g (0,062 mmol) meziproduktu 4, 0,041 ml (0,31 mmol) 4-(2-amino-etyl)-morfolinu a 0,03 ml DMSO. Vytvořený zbytek se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,015 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém A: R_t= 3,67 minut, m/z = 642MH+.

Příklad 32 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(2-píperidin-1-yl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4J-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 28 hodin zahřívá na teplotu 80°C směs 0,034 g (0,062 mmol) meziproduktu 4, 0,044 ml (0,311 mmol) 2-piperidin-etylaminu v 0,03 ml DMSO. Vytvořený zbytek se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,010 g výsledné sloučeniny jako bílé pevné látky.

LC/MS systém A: R_t= 3,72 minut, m/z = 640 MH⁺.

Příklad 33 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-propyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 40 hodin zahřívá na teplotu 85°C směs 0,075 g (0,135 mmol) meziproduktu 23 a 0,085 g (0,67 mmol) 2-(1-metyl-1 H-imidazol4-yl)-etylaminu v 0,04 ml di-izopropyl-etyl-aminu a 0,04 ml DMSO, a následně se po prvních 20 hodinách přidá 0,085g (0,677 mmol) 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etyl-aminu. Produkt se čistí auto-preparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,037 g výsledné sloučeniny jako smetanově bílé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t= 2,71 minut, m/z = 651 MH+.

** • ♦ • ·

Příklad 34 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 40 hodin zahřívá na teplotu 85-90°C směs 0,132 g (0,248 mmol) meziproduktu 25 a 0,138 g (1,24 mmol) histaminu v 0,04 ml diizopropyl-etylaminu a 0,04 ml DMSO. Vytvořený surový produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,032 g výsledné sloučeniny jako smetanově bílé pevné látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,59 minut, m/z = 609 MH+.

Příklad 35 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-cyklopropyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(2-piperidin-1-yl-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol-diformiát

V uzavřené zkumavce (například Reactivial™) se 4 hodiny zahřívá na teplotu 90°C směs 70 mg (0,15 mmol) meziproduktu 27 a 0,117 ml (0,83 mmol) 2-piperidin-etylaminu v 0,3 ml dimetylsulfoxidu. Vytvořený surový produkt se čistí autopreparativní HPLC a po lyofilizaci vznikne 0,015 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém C: R_t=2,32 minut, m/z=542 MH+.

Příklad 36 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-cyklopropyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(2-morfolin-4-yl-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol-diformiát

Výsledná sloučenina příkladu 36 se připraví podle postupu

• · · · ♦ ··· ··· ···· ·· ··· ·· ·«· příkladu 35 za použití 0,108 ml (0,825 mmol) 4-(2-amino-etyl)morfolinu, která se 4 hodiny zahřívá při teplotě 90°C. Po lyofilizaci vznikne 0,009 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém C: R_t=2,32 minut, m/z=544 MH+.

Příklad 37 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-cyklopropyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-(2-pyridinyl)-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol-diformiát

Výsledná sloučenina příkladu 37 se připraví podle postupu příkladu 35 za použití 0,104 g (0,825 mmol) 2-(2-aminoetyl)pyridinu, která se 4 hodiny zahřívá pří teplotě 90°C. Po lyofilizaci vznikne 0,012 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém C: R_t=2,18 minut, m/z=535 MH+.

Příklad 38 (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-cyklopropyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-{6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol-diformiát

Výsledná sloučenina příkladu 38 se připraví podle postupu příkladu 35 za použití 0,14 g (0,825 mmol) 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylaminu, připraveného z odpovídajícího bishydrochloridu neutralizací přidáním malého množství pevného hydroxidu sodného v metanolu a odpařováním těkavého podílu proudem dusíku pod dobu 4 hodin při teplotě 90°C. Po lyofilizaci vznikne 0,015 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

9 9 9 9 9

9 9 9 9

9 99 99 ·

LC/MS systém C: Rt = 2,32 minut, m/z-542 MH+

Příklad 39 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(2-pyrolidin-1-yl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-diformiát

Za stálého míchání se v uzavřené zkumavce (například Reactivial™) 4 hodiny zahřívá k teplotě 90°C směs 70 mg (0,15 mmol) meziproduktu 3 a 0,114 g (1 mmol) 1-(2-amino-etyl)pyrolídinu v 0,2 ml dimetyl-sulfoxidu. Vytvořený surový produkt se čistí autopreparativní HPLC. Po lyofilizaci vznikne 0,008 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: Rt = 2,67 minut, m/z=626 MH+.

Příklad 40 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-pyridin-2-yl-amino)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diol-diformiát

Výsledná sloučenina příkladu 40 se připraví obdobným způsobem jako výsledná sloučenina příkladu 39 za použití 0,137 g (1 mmol) meziproduktu 37 a 4 hodiny při teplotě 90 °C. Po lyofilizaci vznikne 0,003 g výsledné sloučeniny jako hnědá pevná látka.

LC/MS systém A: RT 2,74 minut, m/z=649 MH+.

Příklad 41 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{2-(bicyklo-[2,2,1]-hept-2-yl-amino)-6-(2,2difenyl-etyl-amino)-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

44 · 44 ♦ · ♦ · ♦ · 4 4 4

4 4 4 · ·

4 · 4 4*4

444 44 444 44 4*4

Výsledná sloučenina příkladu 41 se připraví obdobným způsobem jako výsledná sloučenina příkladu 39 za použití 0,110 g (1 mmol) (±)-exo-2-amino-norbomanu a 4 hodiny při teplotě 90°C. Po lyofilizaci vznikne 0,008 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: Rt=3,77 minut, m/z=623 MH+.

Příklad 42 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{2-(2-[3,4-dimetoxy-fenyl]-etylamino)-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4joxadiazol-5-yl)-tetra hy d rof u ran-3,4-d i ol-form i át

Výsledná sloučenina příklad 42 se připraví obdobným způsobem jako výsledná sloučenina příkladu 39 za použití 0,181 (1 mmol) 2-(3,4-dimetoxy-fenyl)-etylaminu a 4 hodiny při teplotě 90°C. Po lyofilizaci vznikne 0,002 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém B: RT 3,42 minut, m/z=693 MH+.

Příklad 43 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(2-hydroxy-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-[3,4-d]-diol-formiát

Výsledná sloučenina příklad 43 se připraví obdobným způsobem jako výsledná sloučenina příkladu 39 za použití 0,061g (1mmol) 2-hydroxy-etyiaminu a 4 hodiny při teplotě 90°C. Po lyofilizaci vznikne 0,013 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky. LC/MS systém B: Rt 3,02 minut, m/z=573 MH+.

• ·· • · ·	•» 0 • 0 · ·	99 9 4	9 9
* ·	0 · 4	4 ·
• 9 · · · ·	00 449	94	4 9

Příklad 44 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(4-fluor-fenyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyí-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-formiát

V uzavřené zkumavce (například Reacti-vial™) umístěná směs 50 mg (0,09 mmol) meziproduktu 3 a 0,11g (1 mmol) 4fluoranilinu v 0,2 ml DMSO se za stálého míchání 20 hodin zahřívá na teplotu 90°C, a následně 20 hodin na teplotu 110°C. Vytvořený surový produkt se čistí autopreparativní HPLC a lyofilizuje se za vzniku 0,005 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém C: Rt=3,60 minut, m/z=623 MH+.

Příklad 45 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-(1-benzyl-pyrolidin-3S-yl-amino)-6-(2,2-difenyl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diol-diformiát

Výsledná sloučenina příklad 45 se připraví obdobným způsobem jako výsledná sloučenina příkladu 39 za použití 0,18 g (1mmol) 1-benzyl-3S-amino-pyrolidinu a 4 hodiny pří teplotě 90°C. Po lyofilizaci vznikne 0,003 g výsledné sloučeniny jako hnědé pevné látky.

LC/MS systém C: Rt=2,75 minut, m/z=688 MH+.

Příklad 46 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-fenetyl-amino-2-[2-1-metyl-1 H-imidazol-4-yl)-etyl-amino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol-diformiát

V 3 ml roztoku DCM a tetrahydrofuranu v poměru 9:1 se rozpustí ·· A AA

AAAA A A

AAA A A

AAA A«AA AAA A A

AA AAA AA použitím sonikace ultrazvukem 0,083 mg (0,15 mmol) meziproduktu 34. Za stálého míchání se v atmosféře dusíku do reakční směsi přidá 0,057 ml (3,32 mmol) N,Ndiizopropyletylaminu a 0,021 ml (0,16 mmol) trímetylacetylchloridu při teplotě 0°C. Reakční směs se během 2 hodin nechá zahřát na teplotu místnosti, znovu se zchladí na teplotu 0°C a za stálého míchání se přidá roztok 0,015 g (0,18 mmol) N-hydroxypropionamidinu v 0,5 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se zahřívá na teplotu místnosti a 16 hodin se míchá. Rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu a reakční směs se rozpustí v 10 ml toluenu. Reakční směs se 8 hodin zahřívá k teplotě refluxu (120 °C). Produkt se čistí na koloně Varian Mega Bond Elut (5 g Si, velikost 20 ml) při eluci směsí etylacetátu v metanolu v poměru od 50:1 do 1:1 za vzniku 0,01 g surového produktu jako žlutého oleje. Produkt se za stálého míchání rozpustí během 4 hodin ve 4 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 9:1 při teplotě 0°C a v atmosféře dusíku. Rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu, dvakrát se azeotropicky destiluje 50 ml toluenu a vytvořený zbytek se čistí autopreparativní HPLC. Vznikne 0,004 g výsledné sloučeniny jako žluté pryže.

LC/MS systém C: Rt=2,39 min m/z=561 MH+

Příklad 47 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2-cyklohexyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1 H-imid-azol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetra-hydrofuran-3,4-diol-diformiát

Výsledná sloučenina příkladu 47 se připraví obdobným způsobem jako výsledná sloučenina příkladu 46 za použití 0,081g (0,146 mmol) meziproduktu 35, 0,02 ml (0,16 mmol) trimetylacetyl-chloridu, 0,056 ml (0,32 mmol) N,Ndiizopropyletylaminu ve 2 ml směsi DCM a tetrahydro-furanu

4

4 44 • 4

4

4 4 4 44

4 4

4« 444 v poměru 9:1 a 0,014 g (0,175 mmol) N-hydroxy-propion-amidinu. Čištěním autopreparativní HPLC za vznikne 0,003 g výsledné sloučeniny jako žluté pryže.

LC/MS systém C: Rt=2,54 minut, m/z=567 MH+.

Příklad 48 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(3,3-dimetyl-butylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4-dioí-diformiát

Výsledná sloučenina příkladu 48 se připraví obdobným způsobem jako výsledná sloučenina příkladu 46 za použití 0,05 g (0,09 mmol) meziproduktu 36, 0,012 ml (0,1 mmol) trimetylacetyl-chloridu, 0,035 ml (0,2 mmol) N,N-diizopropyletylaminu ve 2 ml směsi DCM a tetrahydro-furanu v poměru 9:1 a 0,0087 g (0,11 mmol) N-hydroxy-propíon-amidinu. Čištěním autopreparativní HPLC za vznikne 0,002 g výsledné sloučeniny jako žluté pryže.

LC/MS systém C: Rt=2,42 minut, m/z=541 MH+.

Biologické sledování

Výsledky sledování agonistíckého účinku na receptorech typů A2a, A3 a A1 (podle popsaného postupu 1) jsou shrnuty v následující tabulce:

Příklad č:	A2a	A3	A1
1	1,19	>197	1306
2	0,64	> 197	1823
3	4,63	>304	6719

4	5,37	>383	>=3996
5	6,12	>309	1391,2
6*	41,35	>642	>4833
7*	11,02	>117	1013,4
8*	14,05	>215	>=3865
9*	0,81	>231	1692,4
9**	0,086	>287	3006
10*	7,66	>269	3449.6
11*	6,66	>266	145,5
12*	4,54	>302	1863,5
13	0,61	>289	>=4370
14	0,66	>239	>4587
15	2,29	>130	>5511
16*	11,87	>362	>6244
17*	3,97	>362	>6244
18*	8,16	>314	>6244
19*	34,52	>694	>5860
20*	17,08	>694	>=1853
21*	9,39	>303	>5090
22	22,25	>193	78,28
23	12,72	>163	17,02
24	18,13	>284	>5264
25	19,35	>163	515,35
26*	5,18	>284	>5264

44 4 ·« 4 4 44

4 4 4

4 4 4 4 < 4 4 4

444 44 444

27*	10,5	>284	263,14
28*	5,49	>284	>5263
29*	8,92	>117	989,5
30*	19,54	>215	1460,7
31	30,6	>262	6452
32	31,4	>258	7521
33*	8,35	>259	>815,9
34*	8,31	231,1	3270,8
35	7,89	>194	912,1
36	20,13	>194	>9364
37	49,45	>87	>10402
38	2,02	>87	670,04
39	30,21	>130	4505,4
40	4,89	>130	>=3311,7
41	23,93	>130	2033,2
42	32,77	>130	>6064
43	6,85	>130	1367,6
44	94,39	>165	>6131
45	29,82	>165	>3738,84
46	0,90	>165	3560,13
47	6,93	>165	4993,28
48	4,40	>165	16,84

* Data minimální hodnoty, neboť se po zkouškách zjistila přítomnost inaktivních nečistot.

** Výsledky opakovaně testovaných čištěných sloučenin.

Uvedené hodnoty v tabulce jsou hodnoty EC50 jako poměr NECA.

Použité zkratky

TMS	trimetylsilyl
TFA	kyselina trif luoroctové
DMF	N,N-dimetyl-formamid
NECA	N-etylkarboxamid-adenosin
DMAP	4-dimetylaminopyridin
TEMPO	2,2,6,6-tetrametyl-1-piperidínyloxy (volný radikál)
TMSOTf	trimetylsilyl-trifluormetyl-sulfonát
DBU	1,8-diazabicyklo[5,4,0Jundec-7-en
BSA	bistrimetyl-silylacetamid
DCM	dichlormetan
DAST	dietylamino-sulfur-trifluorid
Ph	fenyl
CDI	karbonyl-diimidazol
EEDQ	2-etoxy-1 -etoxy-karbonyl-1,2 dihydrochinon
NSAID	nesteroidní protizánětlivé léčiva
DMSO	dimetylsulfoxid
Me	metyl
Et	etyl
THF	tetrahydrofuran

ρ &&

Claims (29)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   i. 2-(Purin-9-y!)-tetrahydrofuran-3,4,-diolové deriváty obecného vzorce (1):

   kde R¹ a R² nezávisle znamenají skupinu vybranou z následujících:

   1/ C₃-8cykloalkyl-;
2. 2/ vodík;
3. 3/ aryl₂CHCH₂-;
4. 4/ C3-8cykloalkylCi-6alkyl-;
5. 5/ Ci.₈alkyl-;
6. 6/ arylCi-₆alkyl-;
7. 7/ R⁴R⁵N-Ci.₆alkyl-;
8. 8/ Ci.₆alkyl-CH(CH₂OH)-;
9. 9/ arylCi-5alkyl-CH(CH₂OH)-;
10. 10/ arylCi-₅alkyl-C(CH2OH)2-;
11. 11/ C3-scykloalkyl nezávisle substituovaný jednou nebo více (CH2)pR⁶ skupin;
12. 12/ H₂NC(=NH)NHC₁.«alkvl-:
13. 13/skupina vzorce ,<^CH2\ \ 7 (CH₂)_b

    9 9 •

    • 9999 • 9 • 9 • · ·

    9 9

    9 9 9

    9 9 • 9 9

    9 9

    9 99 9 nebo skupina ve které jeden atom uhlíku metylenu, který sousedí s X, nebo oba, pokud existují, je nahrazen metylem;
14. 14/ -Cf-salkyl-OH;
15. 15/ -Cvahaloalkyl;
16. 16/ skupina vzorce (CH₂)_cCO(CH₂)

    -?NR⁷
17. 17/ aryl a
18. 18/ -(CH₂)fSO2NHg(Ci-4alkyl-)₂-g nebo -(CH₂)fSO₂NHg(arylC₁.₄alkyl)₂._g;

    R³ označuje metyl, etyl, -CH=CH₂, n-propyl, -CH₂CH=CH₂, >CH=CHCH3, izopropenyl, cyklopropyl, cyklopropenyl, -CH(OH)CH₃, -(CH₂)halogen, -(CH₂)hY(CH₂)iH, ~COO(CH₂),H, -CON(CH₂)_mH((CH₂)_nH), -CO(CH₂)_oH nebo -((CH₂)_uH)=NO(CH₂)_vH

    Y označuje O, S nebo N(CH₂)jH;

    a a b nezávisle znamená celé číslo od 0 do 4, kde a+b je v intervalu od 3 do 5;

    c, d a e nezávisle označují celé číslo od 0 do 3, kde c+d+e je v intervalu od 2 do 3;

    f označuje 2 nebo 3 a g označuje celé číslo od 0 do 2; p označuje 0 nebo 1;

    q označuje 1 nebo 2;

    h označuje 1 nebo 2;

    i označuje celé číslo od 0 do 1, kde h+i je v rozmezí od 1 do 2;

    j označuje celé číslo od 0 do 1, kde h+i+j je v rozmezí od 1 do 2;

    I označuje 1 nebo 2;

    man nezávisle znamená celé číslo od 0 do 2, kde m+n je v intervalu od 0 do 2;

    o označuje celé číslo od 0 do 2;

    u a v nezávisle označuje 0 nebo 1, kde u+v je celé číslo v rozmezí od 0 do 1;

    R⁴ a R⁵ nezávisle znamená vodík, Ci-₆alkyl, aryl, arylCi-6alkylnebo NR⁴R⁵ společně označují pyridinyl, pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl nebo N-Ci-6-alkyl-piperazinyl;

    R⁶ označuje OH, NH₂, NHCOCH3 nebo halogen;

    R⁷ označuje vodík, O-alkyl, C-j_₆alkyIaryl nebo COC-i-6alkyl;

    X označuje NR⁷, O, S, SO nebo SO₂; a jejich soli nebo solváty.

    2. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde R³ označuje metyl, etyl, n-propyl, cyklopropyl nebo -CH₂OH.

    3. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 2, kde R³ označuje metyl, etyl nebo n-propyl.

    4. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 2, kde R³ označuje etyl.

    5. Sloučenina obecného vzorce I podle jednoho z nároků 1 až 4, kde R¹ a R² společně neznamenají vodík.

    6. Sloučenina obecného vzorce I podle jednoho z nároků 1 až 5, kde R¹ označuje Ci.₈alkyl, Cs.scykloalkylCvealkyl-, arylCi-6alkylnebo vodík.

    7. Sloučenina obecného vzorce I podle jednoho z nároků 1 až 5, kde R¹ označuje aryl₂CHCH₂-.

    8. Sloučenina obecného vzorce 1 podle nároku 6 kde R¹ označuje -CH(CH₂CH₃)₂, fenyletyl, cyklohexyletyl,

    -(CH₂)₂C(CH₃)₃ nebo vodík.

    9. Sloučenina obecného vzorce I podle jednoho z nároků 1 až 5, kde R¹ označuje Ph₂CHCH₂-, -CH(CH₂CH₃)₂, vodík nebo fenyletyl-.

    10. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 7, kde R¹ označuje Ph₂CHCH2-.

    11. Sloučenina obecného vzorce I podle jednoho z nároků 1 až

    10. kde R² označují -CH(CH₂OH)Ci_₆alkyl, 4-aminocyklohexyl, pyrolidinyl nebo arylCH₂CH₂.

    12. Sloučenina obecného vzorce I podle jednoho z nároků 1 až 10, kde R² označuje pyrolidin-3-yl N-substituovaný Ci-galkylem nebo benzylem, R⁴R⁵NC₁.₆alkyl, Ci-6alkyl-OH, aryl, arylCi. ₅alkyl-CH(CH₂OH)-, C₃-8cykloalkyl, aryl(CH₂)2- nebo C₃-8cykloalkyl nezávisle substituovaný jednu nebo více skupinu -(CH₂)_pR⁶.

    13. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 12, kde R označuje 2-(1 H-imidazol-4-yl)-etyl, morfolin-1-yl-etyl, pyrolidin-1-yl-etyl, pyridin-2-yl-amino-etyl, (+)-exonorborn-2-yl, 3,4-dimetoxy-fenyletyl, 2-hydroxy-etyl, 4-fluor-fenyl, N-benzyl-py rolidi n-3-y I, pyridi n-2-y l-etyl, 1 S-hydroxy-metyl-2-fenyl-etyl,

    -cyklopentyl, fenyletyl, piperidin-1-yl-etyl nebo 2-hydroxy-pentyl.

    14. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 11, kde R² označuje -CH(CH₂OH)CH(CH₃)₂, trans-4-amino-cyklohexyl, 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)CH₂CH₂- nebo pyrolidin-3-yl.

    15. Sloučenina obecného vzorce I podle jednoho z nároků 1 až 10, kde R² označuje 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)CH₂CH₂-, 1S-hydroxy-metyl-2-fenyletyl, fenyletyl nebo 1S-hydroxymetyl-2-metyl-propyl.

    16. Sloučenina obecného vzorce I podle jednoho z nároků 1 až 15, kde R⁴ a R⁵ nezávisle znamenají vodík, C-t-6alkyl, aryl, arylCi-e alkyl- nebo NR⁴R⁵ společně znamenají pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl nebo NCi-6alkyl-piperazinyl.

    17. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 16, kde R⁴ a R⁵ nezávisle znamenají vodík, aryl nebo NR⁴R⁵ společně znamenají pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl nebo N-metylpiperazinyl.

    18. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kterou je (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etyl-amino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol nebo její soli a solváty.
19. 19. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kterou je (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-amino-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol nebo její soli a solváty.
20. 20. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, kterými jsou:

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylamino]-purín-9-yl}-5-(3-metyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2~[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(pyrolidin-3R-yl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro92

    -furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-(trans-4-amino-cyklohexyl-amino)-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(1S-hydroxy-metyl-2-metyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(2-morfolin-4-yl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-amino-2-[2-(1-metyl-1 H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-metyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R,4S, 5S)-2-[6-amino-2-(2-pyridin-2-yl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyi-[ 1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-amino-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-(6-amino-2-cyklopentyl-amino-purin-9-yl)-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-teírahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-amino-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol~5-yl)-5-{6-(1-etyl-propyl-amino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(1-etyl-propylamino)-2-[2-{1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-{3-metyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-(6-amino-2-fenetyl-amino-piirin-9-yl)-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazoi-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-(trans-4-amino-cykiohexyl-amino)-6-(1-etylpropyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyi-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(1S-hydroxymetyf-2-fenyl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-piperidin-1-yl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-morfolin-4-yl-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-piperidin-1-yl-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-pyridin-2-yl-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-cyklopentyl-amino-6-(1-etyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-cyklopentyl-amino-6-(1-etyl-propylamino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4j-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(2S-hydroxy-cyklopent-(S)-yl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2S-hydroxy-cyklopent-(S)-yl-amino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(pyrolidin-3R-yl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(pyrolidin-3R-yl-amino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(1S-hydroxymetyl-2-metyl-propyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-(trans-4-amino-cyklohexyl-amino)-6-(1-etylpropyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-amino-2-(2-pyridin-2-yl-etylamino)-purin-9-yl]-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(2-morfolin-4-yl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-{2,2-difenyl-etylamino)-2-(2-piperidin-1-yl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 53)-2-(6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-( 1-metyl-1 H-imidazol-4-yl)etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-propyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-{2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(1H-imidazol-4-yl)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-metyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-{3-cyklopropyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-piperidin-1-yl-etylamino)-purin-9-ylj-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-cyklopropyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1^J -etyl-propyl-amino)-2-(2-morfolin-4-yl-etylamino)-purin-9-yl]~

    -tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-cyklopropyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1* -etyl-propyl-amino)-2-(2-(2-pyridinyl)-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2S, 3S, 4R, 5R)-2-(3-cyklopropyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-5-[6-(1-etyl-propyl-amino)-2-(2-(1-metyl-1 H-imidazol-4-yl)-etylamino)-purin-9-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(2~pyrolidin-1-yl-etylamino)purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-[2-(pyridin-2-yl-amino)-etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-(2-(bicyklo[2,2,1]hept-2-yl-amino)-6-(2,2-difenyl-etyl-amino)purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{2-(2-[3,4-dimetoxy-fenyl]-etylamino)-6-(2,2-difenyl-etylamino)-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2~[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(2-hydroxy-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[6-(2,2-difenyl-etylamino)-2-(4-fluor-fenyl-amino)-purin-9-yl]-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diol;

    • · • · · · · (2R, 3R, 4S, 5S)-2-[2-(1-benzyl-pyrolidin-3S-yl-amino)-6-(2,2-difenyl-etyl-amino)-purin-9-yl]-5-{3-etyl-[1,2,4]-oxadiazol-5-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-fenetylamino-2-[2-(1-metyl-1 H-imidazol-4-yl)-etyl-amino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(2-cyklohexyl-etylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imid-azol-4-yl)etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    (2R, 3R, 4S, 5S)-2-{6-(3,3-dimetyl-butylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imid-azol-4-yl)etylamino]-purin-9-yl}-5-(3-etyl-[1,2,4joxadiazol-5-yl)-tetrahydro-furan-3,4-diol;

    nebo jejich soli a solváty.
21. 21. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce podle nároků 1 až 20 nebo její farmaceuticky vhodnou sůl nebo solvát ve směsi s jedním nebo více farmaceuticky vhodnými ředidly nebo nosiči.
22. 22. Sloučenina obecného vzorce I podle nároků 1 až 20 nebo její sůl nebo solvát pro použití ve farmacii.
23. 23. Použití sloučeniny obecného vzorce l podle nároků 1 až 20 nebo její farmaceuticky vhodné soli nebo solvátu pro výrobu léčivého přípravku k terapii zánětlivých onemocnění jako astmatu nebo chronické bronchiální obstrukce (COPD).
24. 24. Postup léčby nebo profylaxe zánětlivého onemocnění (astmatu nebo chronické bronchiální obstrukce) vyznačující se tím, že se pacientovi aplikuje účinné množství sloučeniny obecného vzorce I podle nároků 1 až 20 nebo její farmaceuticky vodné soli a solváty.

    • ·
25. 25. Postup přípravy sloučeniny obecného vzorce I podle nároků

    1 až 20 vyznačující se tím, že se:

    a) uvede do reakce sloučenina obecného vzorce II kde: R¹ je určeno nároky 1, 5 až 10 a 18 až 20;

    R³ je určeno nároky 1 až 4 a 18 až 20 a L označuje odštěpitelnou skupinu - halogen (chlór) nebo její derivát chráněný sloučeninou se sloučeninou vzorce R²NH₂ nebo s jejím chráněným derivátem, kde R² je určeno nároky 1, 5, 11 až 15 a 18 až 20.

    b) uvede do reakce sloučenina obecného vzorce VI kde: R¹ je určeno nároky 1, 5 až 10 a 18 až 20;

    R² je určeno nároky 1, 5, 11 až 15 a 18 až 20 nebo její derivát chráněný sloučeninou • 4

    44 4 4 ·

    4 4 4 44 4

    4 4 4 4 · s karboxylovým aktivačním činidlem nebo amidoximovou sloučeninou vzorce OH-N=C(R³)NH₂, kde R³ je určeno nároky 1 až 4 a 18 až 20;

    c) uvede do reakce sloučenina vzorce IX (ix) kde: R¹ je určeno nároky 1, 5 až 10 a 18 až 20;

    R² je určeno nároky 1, 5, 11 až 15 a 18 až 20 se sloučeninou obecného vzorce X (X) kde: R³ je určeno nároky 1 až 4 a 18 až 20 a L označuje odštěpitelnou skupinu nebo jejím chráněným derivátem.

    d) odštěpení ochranné skupiny vázané na sloučeninu obecného vzorce I a popřípadě se sloučenina obecného vzorce I nebo její sůl přemění na její jinou sul.

    • ·
26. 26. Postup přípravy sloučeniny obecného vzorce I podle nároků 1 až 20 vyznačující se tím, že se: a) uvede do reakce sloučenina obecného vzorce lla kde: R² je určeno nároky 1, 5, 11 až 15 a 18 až 20;

    R³ je určeno nároky 1 až 4 a 18 až 20 a L označuje odštěpitelnou skupinu (chlór) nebo její chráněný derivát se sloučeninou vzorce R¹NH2, kde R¹ je určeno nároky 1, 5 až 10 a 18 až 20;

    nebo se

    b) připraví sloučenina obecného vzorce I, kde R¹ označuje vodík, přeměnou sloučeniny obecného vzorce lib

    O

    HO (lib)

    OH

    100 kde: R² je určeno nároky 1,5, 11 až 15 a 18 až 20 R³ je určeno nároky 1 až 4 a 18 až 20.
27. 27. Sloučenina obecného vzorce II kde: R¹ je určeno nároky 1, 5 až 10 a 18 až 20; R³ je určeno nároky 1 až 4 a 18 až 20 a L označuje odštěpitelnou skupinu nebo její derivát s vázanou ochrannou skupinou.
28. 28. Sloučenina obecného vzorce V kde: R³ je určeno nároky 1 až 4 a 18 až 20 a L¹ a L² označuje odštěpitelnou skupinu nebo její chráněný derivát.

    101
29. 29. Sloučenina obecného vzorce X (X) kde R³ je určeno nároky 1 až 4 a 18 až 20 a L označuje odštěpitelnou skupinu nebo její chráněný derivát.