CN114181864B - 一种鼠李糖乳杆菌hf01及其应用 - Google Patents

一种鼠李糖乳杆菌hf01及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种鼠李糖乳杆菌HF01及其应用。该鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HF01，已于2021年10月25日保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏号：CCTCC NO.M20211319。根据体外实验筛选出具有减肥功能的益生菌菌株，通过对菌株的模拟胃液和模拟肠液耐受性实验，获得具有良好耐受性菌株，通过动物实验，表明本发明菌株具有预防肥胖功能，菌株及其发酵产物的摄入可以显著增加血清中PYY水平，减少食物摄入量，有效改善肥胖小鼠肝脏中脂肪积累与肥胖引起的血糖和胰岛素水平异常情况，减轻高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重。经16s rDNA鉴定，本发明菌株为鼠李糖乳杆菌。

Description

一种鼠李糖乳杆菌HF01及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种鼠李糖乳杆菌HF01及其应用。
背景技术
肥胖是能量摄入和消耗之间长期不平衡的结果，已经成为一种世界性的流行病。世界卫生组织(WHO)对肥胖定义为可损害健康的异常或过量脂肪累积，身体质量指数(BMI)等于或大于25时为超重，BMI大于或等于30定义为肥胖。在全球范围内，肥胖症的患病率正在上升，1975年以来，世界肥胖人数已增长近三倍，截至2016年，18岁及以上的成年人中逾19亿人超重，其中超过6.5亿人肥胖。肥胖症是由遗传与环境因素共同作用所导致，表现为物质代谢与内分泌功能的改变，以及脂肪细胞的增多与肥大。
益生菌有多种益生机制，包括通过竞争性抑制病原体和毒素粘附到肠上皮，维持肠上皮稳态，改善宿主体内菌群结构促进代谢平衡等。益生菌的益生机制主要包括：恢复宿主体内微生物的平衡，从而减少病原体的入侵和定植；产生具有益生功能的代谢产物；调节宿主免疫系统，T细胞途径和刺激白细胞介素IL-10，进而起到抗炎/促炎作用；通过细胞壁结合污染物/重金属，降低摄入重金属和危险化学品的风险。益生菌功能性包括，调节肠道微生态，抗氧化、调节脂质代谢等。食用益生菌或含有益生菌的产品能够缓解肠道疾病、炎症性肠病、肠易激综合征、2型糖尿病患者的临床症状，代谢综合征和过敏性疾病。并且益生菌通常被认为对人类健康是安全、无副作用。
PYY是胰腺多肽家族的一种，是由36个氨基酸组成的多肽，PYY从肠道下部的L细胞释放出，PYY穿过血脑屏障(BBB)作用于弓形核中神经肽NPY的Y 2受体，从而抑制食物摄入。将乳酸菌与肠道L细胞模型STC-1细胞共培养，根据菌株分泌PYY的能力，筛选出具有促进STC-1细胞分泌PYY肽的乳酸菌，获得具有预防肥胖功能的菌株。
发明内容
本发明提供一种鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HF01，已于2021年10月25日保藏于中国典型培养物保藏中心；简称CCTCC；保藏号：CCTCC NO.M20211319。地址：中国武汉武汉大学，中国湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。
所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HF01的16S rDNA序列如SEQID:1所示。
上述鼠李糖乳杆菌HF01在预防肥胖方面的用途。
上述鼠李糖乳杆菌HF01在制备预防肥胖功能的组合物的用途。
上述鼠李糖乳杆菌HF01在制备具有预防肥胖功能的食品的用途。
所述食品为发酵乳制品。
上述鼠李糖乳杆菌HF01在制备具有预防肥胖功能的活菌制剂的用途。
一种组合物，包含如上所述的鼠李糖乳杆菌HF01。
一种食品，包含如上所述的鼠李糖乳杆菌HF01。
一种乳制品，包含如上所述的鼠李糖乳杆菌HF01。
一种活菌制剂，包含如上所述的鼠李糖乳杆菌HF01。
本发明提供一种制备上述鼠李糖乳杆菌HF01的方法，包括如下步骤；
(1)采用稀释涂布、平板划线法分离纯化出单一乳酸菌；
(2)通过体外实验比较不同分离菌株促PYY分泌能力，筛选出具有预防肥胖功能的的乳酸菌；
(3)通过对分离株的模拟胃液和模拟肠液耐受性实验，获得具有良好耐受性菌株；
(4)通过动物实验，表明本发明菌株具有预防肥胖功能，可以显著增加血清中PYY水平，减少食物摄入量，减轻肥胖小鼠体重，具有显著的预防肥胖的功效。
一种鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus HF01，已于2021年10月25日保藏于中国典型培养物保藏中心；地址：中国湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，武汉大学；简称CCTCC；保藏号：CCTCC NO.M20211319。
经实验证明，该菌株具有耐模拟胃液和模拟肠液能力，且经体外和体内实验表明，该菌株具有促进PYY分泌的作用；通过动物实验，证明该菌株能增加血清中PYY水平，减少食物摄入量，减轻肥胖小鼠体重；通过16S rDNA序列测定并进行对比分析，最终确定该菌株为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。
附图说明
图1为(a)口服葡萄糖耐量试验(OGTT)结果；(b)曲线下的面积(AUC)。注：ab为同一指标不同处理组分别为与对照组、高脂组相比，p<0.05。
图2为(a)小鼠血清中血糖含量；(b)小鼠血清中胰岛素。注：ab为同一指标不同处理组分别为与对照组、高脂组相比，p<0.05。
图3为(a)小鼠HOMA-IR指数；(b)小鼠HOMA-IS指数变化。注：ab为同一指标不同处理组分别为与对照组、高脂组相比，p<0.05。
图4为本发明鼠李糖乳杆菌HF01的16S rDNA的电泳鉴定图。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明作详细的说明。
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
本研究采用传统涂布平板分离法从采集的样品中分离乳酸菌，进行体外具有预防肥胖功能特性菌株的筛选，通过模拟人体胃肠道的环境来筛选具有耐酸耐胆盐的菌株，并根据高脂模型小鼠的预防肥胖功效进行研究，探讨菌株及其发酵产物在体内预防肥胖的作用。
相关培养基配方如下：
(1)MRS液体培养基：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，乙酸钠5.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.04g，，吐温801.0g，最终pH 5.7±0.2。
(2)MRS固体培养基：蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，乙酸钠5.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.04g，，吐温801.0g，琼脂15.0g，最终pH 6.2±0.2。
(3)模拟胃液的配置：使用1mol/L盐酸调节磷酸盐缓冲液pH为3.5、3.0、2.5，加入胃蛋白酶8mg/mL，充分溶解后，使用0.22μm微孔滤膜在无菌操作台中过滤除菌，转入灭菌瓶中，现配现用。
(4)模拟肠液的配置：使用1mol/L氢氧化钠调节磷酸盐缓冲液pH分别为8，分别添加0.1％、0.3％、0.5％的牛胆盐，并加入胰酶1mg/mL，充分溶解后，使用0.22μm微孔滤膜在无菌操作台中过滤除菌，转入灭菌瓶中，现配现用。
具体步骤如下：
1、乳酸菌的分离，
从青海、甘肃、四川等地收集牦牛乳、曲拉、发酵乳、发酵奶油等样品，采用稀释涂布、平板划线法，分离出单一乳酸菌。
2、体外具有预防肥胖功能特性菌株的筛选；
将STC-1细胞以每孔2×105个细胞的密度接种到12孔板中，并培养至80％。乳酸菌用磷酸盐缓冲液洗涤三次，离心收集沉淀(10000×g，2min)，悬浮于无葡萄糖，无L-谷氨酰胺DMEM的溶液中，调节至1×107CFU。将细胞用磷酸盐缓冲液洗涤两次，并且在无葡萄糖，无L-谷氨酰胺的情况下饥饿30min，将乳酸菌加入孔中；共同培养2h后，收集上清液，并离心(6000×g，4℃，15min)除去细胞和乳酸菌；使用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测量上清液中PYY的含量，未经乳酸菌处理的STC-1细胞上清液作为对照组。
通过体外实验筛选获得有4株具有促进PYY分泌的菌株，促进PYY分泌含量35.24～104.24ng/L，未经乳酸菌处理的STC-1细胞上清液为32.21ng/L，其中本发明的菌株促进PYY分泌能力最高，达到104.24ng/L，命名为Lactobacillus rhamnosus HF01。
3、筛选体外具有耐酸耐胆盐能力的乳酸菌菌株
(1)模拟胃液耐受性实验
将活化两代的4株菌种按3％接种量接种于模拟胃液，37℃培养，于3h取样，用灭菌生理盐水按1:10进行系列稀释，采用MRS固体培养基培养并活菌计数，结果表明，在pH3.5中经3h的存活率超过90％的菌株有2株，其中本发明菌株在pH3.5经3h存活率最高，达到96.21％，在pH2.5经3h存活率达到68.25％。
(2)模拟肠液耐受性实验
将活化两代的4株菌种按3％接种量接种于模拟肠液，37℃培养，于4h取样，用灭菌生理盐水按1:10进行系列稀释，采用MRS固体培养基培养并活菌计数，结果表明，在胆盐含量0.1％中经4h的存活率超过50％的菌株有4株，其中本发明菌株在0.1％经4h存活率达到72.31％，在0.5％中经4h的存活率达到50.24％。
4、体内预防肥胖功能动物实验
(1)动物分组以及饲养
实验动物为4周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠48只，体重为17±2g。实验动物被安置在一个12h光照/黑暗交替的动物房内饲养，温度保持在22±1℃，相对湿度为50～60％，在食用生长繁殖饲料的条件下，自由进水饮食，适应环境1周后，随机分为6组，每组小鼠8只，并按表1中分组以及灌胃方案，每天固定时间对小鼠灌胃。
表1实验动物分组及饲养方式
实验分组 日常饲喂 灌胃
1对照组 普通饲料+水 生理盐水
2高脂组 高脂饲料+水 生理盐水
3菌体组 高脂饲料+水 悬浮108CFU/mL菌株的生理盐水
4菌株培养液组 高脂饲料+水 悬浮108CFU/mL菌株的培养液
5菌株上清液组 高脂饲料+水 菌株上清液
6菌株发酵乳组 高脂饲料+水 菌株发酵乳
12周后安乐死，称量肾周脂肪、附睾脂肪和肝脏重量，测定以下指标：口服葡萄糖耐受量实验(OGTT)，血清中总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酸酯(TG)、胆囊收缩素(CCK)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、肽YY(PYY)、瘦素(Leptin)、葡萄糖、胰岛素含量；肝脏组织中TG和TC含量。
(2)小鼠体重、食物摄入量和热量摄入量的测定
饲养期间每周测定小鼠体重、食物摄入量2次，其中小鼠喂养饲料均来自北京科澳协力饲料有限公司，根据普通饲料D12450B能量3.85Kcal/g，高脂饲料D12451能量4.73Kcal/g计算热量摄入量。结果如表2所示。
表2小鼠体重、摄食量和热量摄入量
注：ab为同一指标不同处理组间比较，不同字母表示具有差异性(p<0.05)
从表2中可以看出，在初始体重无显著差的情况下，饲养12周，在实验结束时高脂组体重显著升高(p<0.05)超出对照组38.84％。在12周灌胃实验后，灌胃样品组的小鼠的体重增长均得到了不同程度的抑制，菌体组、菌株上清液组、菌株发酵液组和菌株发酵乳组体重增长量分别比对照组增加了15.38％、5.02％、14.78％和22.37％。
与对照组相比，灌胃样品组小鼠每周的食物摄入量均显著小于对照组和高脂组(p<0.05)。高脂组小鼠比对照组小鼠每周多摄入10.33kcal，这是小鼠由高脂饮食诱导进而导致肥胖的主要原因。菌体组、菌株上清液组、菌株发酵液组和菌株发酵乳组热量摄入量分别比高脂组减少了17.98％、16.97％、20.16％和10.34％，这是食物摄入量减少导致的结果。4组灌胃样品通过影响能量的摄入可以减轻高脂饮食引起的小鼠体重增加。
(3)脏器系数的测定
12周饲喂结束后，将小鼠安乐死，称量小鼠体重以及肾周脂肪、附睾脂肪和肝脏重量，按照公式计算脏器指数。
脏器系数(％)＝m1/m2×100
式中m1为脏器质量(g)；m2为小鼠体重(g)。
表3小鼠脏器系数
肝脏系数(％) 附睾脂肪系数(％) 肾周脂肪系数(％)
1对照组 3.08±0.53bc 1.16±0.53c 0.33±0.2c
2高脂组 3.52±0.8a 3.38±0.8a 1.35±0.6a
3菌体组 3.12±0.29bc 2.07±0.29b 0.87±0.29b
4菌株上清液组 3.23±0.51bc 1.84±0.51b 0.95±0.28b
5菌株发酵液组 3.27±0.85bc 1.85±0.85b 0.89±0.15b
6菌株发酵乳组 3.22±0.69ab 2.23±0.69b 1.05±0.19ab
注：ab为同一指标不同处理组比较，不同字母表示具有差异性(p<0.05)
长期摄入高脂膳食，会破坏肝脏中脂质代谢与合成的动态平衡，使肝脏体积增大，同时破坏机体脂质合成与代谢平衡，造成脂肪的积累。因此选择计算小鼠的肝脏组织、肾周脂肪组织和附睾脂肪组织的脏器系数，反映小鼠的脂肪积累程度。与对照组相比，高脂组肝脏指数、附睾脂肪指数和肾周脂肪指数分别增加1.14倍、2.19倍、4.09倍(表3)。与高脂组相比，肥胖小鼠在经过12周灌胃实验后，附睾脂肪系数和肾周脂肪系数显著降低(p<0.05)。表明4组灌胃样品可以减轻高脂饮食引起的小鼠体内脂肪的积累情况。
(5)血糖和胰岛素相关指标的测定
口服葡萄糖耐受量实验(OGTT)：11周后，小鼠禁食12h，进行口服葡萄糖耐受量实验(葡萄糖剂量2g/kg)。分别在0、30、60、90和120min从尾静脉采集血液，用血糖仪测定血糖。计算曲线下面积(AUC)值，其公式为：
AUC0-120＝[(血糖值0+血糖值30)+(血糖值30+血糖值60)+(血糖值60+血糖值90)+(血糖值90+血糖值120)]×30/2。
OGTT实验主要用来判断胰岛细胞功能和机体对血糖的调节能力，AUC可以用来表示糖耐量受损程度，受损程度越严重则AUC数值越大。如图1a所示，在摄入葡萄糖30min后，高脂组的血糖水平高于对照组，并在120min后保持在较高水平。与高脂组相比，灌胃样品组均显著抑制了升高的血糖水平，并且菌体组、菌株上清液组、菌株发酵液组和菌株发酵乳组使高脂组肥胖小鼠的AUC值分别降低了10.21％、24.08％、16.08％和9.28％(p<0.05，图1b)。
12周饲喂结束后，禁食12h，将小鼠眼球取血后，室温静置4h，待血液凝固后，3000rpm、10min离心分离血清，采用生化试剂盒测定小鼠血清中葡萄糖、胰岛素的含量。并计算胰岛素抵抗(HOMA-IR)指数和胰岛素敏感(HOMA-IS)指数，其公式为：
HOMA-IR＝血清葡萄糖(mmol/L)×血清胰岛素(mIU/L)/22.5；
HOMA-IS＝1/[血清葡萄糖(mmol/L)×血清胰岛素(mIU/L)]。
如图2a所示，与对照组相比，高脂组的血糖和胰岛素水平分别增加1.62倍和1.67倍。与高脂组相比，灌胃样品组显著抑制了升高的血糖和胰岛素水平(p<0.05)，并且菌体组、菌株上清液组、菌株发酵液组和菌株发酵乳组使高脂组肥胖小鼠的血糖水平分别降低了13.78％、19.46％、13.60％和17.48％(p<0.05，图2a)，胰岛素水平分别降低了20.43％、22.19％、20.30％和11.22％(p<0.05，图2b)。
HOMA-IR用于评价个体的胰岛素抵抗水平的指标，HOMA-IS是用于评价个体的胰岛素敏感性的指标，均用于反映体内葡萄糖水平和胰岛素分泌之间的关系。与对照组相比，高脂组的HOMA-IR指数显著更高(图3a)，HOMA-IS指数显著更低(图3b)(p<0.05)。而4组灌胃样品显著的降低了同样高脂饮食喂养的肥胖小鼠的HOMA-IR指数，增高了同样高脂饮食喂养的肥胖小鼠的HOMA-IS指数(p<0.05)。特别是菌株发酵液组的HOMA-IR指数比高脂组下降了60.91％，菌株发酵乳组HOMA-IS指数比高脂组增加了2.16倍(图3)。
这些结果表明，4组灌胃样品组可以有效改善高脂饮食引起的肥胖小鼠血糖和胰岛素水平异常情况。
(6)血清相关指标的测定
12周饲喂结束后，禁食12h，将小鼠眼球取血后，室温静置4h，待血液凝固后，3000rpm、10min离心分离血清，采用生化试剂盒测定小鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肽YY(PYY)、瘦素(leptin)、胆囊收缩素(CCK))以及胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的含量。
表4对小鼠血脂的影响
注：ab为同一指标不同处理组比较，不同字母表示具有差异性(p<0.05)
长期摄入高脂饮食，会导致血脂异常，常表现为TC、TG和LDL-C水平升高和HDL-C水平下降。如表4所示，与对照组相比，高脂组小鼠血清中TC、TG和LDL-C水平分别增加了2.21倍、1.09倍和2.27倍，而HDL-C水平下降了27.39％。与高脂组相比，灌胃样品组均显著降低了小鼠血清中TG、TC和LDL-C水平，增高了HDL-C水平(p<0.05)。与对照组相比，菌体组和菌株上清液组的TG水平，菌株发酵液组和菌株发酵乳组的LDL-C水平恢复到正常水平。结果表明，4组灌胃样品组均可不同程度的改善高脂饮食引起的的肥胖小鼠血脂异常情况。
表5对小鼠激素水平的影响
注：ab为同一指标不同处理组比较，不同字母表示具有差异性(p<0.05)
表2表明，4组灌胃样品组均可不同程度的减少肥胖小鼠的食物摄入量，从而显著改善肥胖小鼠的体重增长。因此，对小鼠血清中影响食欲的激素PYY、CCK、GLP-1和瘦素水平进行测定。如表5所示，高脂组小鼠血清中PYY水平与对照组差异不显著(p>0.05)，但4组灌胃样品组小鼠血清中PYY水平显著高于对照组和高脂组(p<0.05)。说明菌体组、菌株上清液组、菌株发酵液组和菌株发酵乳组均可促进PYY分泌，进而抑制食欲，减少食物摄入，改善高脂饮食小鼠的肥胖状况。
高脂组小鼠血清中CCK水平显著低于对照组(p<0.05)，但与4组灌胃样品组差异不显著(p>0.05)。说明4组灌胃样品组不具有促进CCK分泌能力。
高脂组小鼠血清中GLP-1水平显著低于对照组，并且4组灌胃样品组小鼠血清中GLP-1水平显著高于高脂组(p<0.05)，其中菌体组肥胖小鼠血清中GLP-1水平与对照组无显著差异(p>0.05)。研究表明，胰岛素的缺乏会导致GLP-1分泌减少，因此菌体组、菌株上清液组、菌株发酵液组和菌株发酵乳组GLP-1水平增高，可能是由于胰岛素的缺乏。但增高的GLP-1可能与PYY共同作用抑制食欲，减少食物摄入，减轻肥胖小鼠的体重。
高脂组小鼠血清中瘦素水平显著高于对照组，并且4组灌胃样品组小鼠血清中瘦素水平显著低于高脂组，高于对照组(p<0.05)。虽然瘦素也具有抑制食欲的功能，但瘦素水平与机体能量的摄入成正比，高脂饮食诱导的肥胖可导致瘦素水平的升高。血清中瘦素水平与肝脂肪变性相关，因此，菌体组、菌株上清液组、菌株发酵液组和菌株发酵乳组可能一定程度上降低肥胖导致的肝脏脂肪积累。
(7)肝脏TC和TG含量的测定
12周饲喂结束后取小鼠肝脏，研磨后3000rpm、10min离心取上清液，采用生化试剂盒测定小鼠肝脏中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量。
表6对小鼠肝脏组织的影响
组别 TC(mg/g) TG(mg/g)
1对照组 4.1±0.82e 45.48±5.51e
2高脂组 10.25±0.93a 85.41±6.70a
3菌体组 7.35±0.73d 65.92±5.90c
4菌株上清液组 8.99±1.02bc 62.30±4.95cd
5菌株发酵液组 8.42±0.71cd 55.81±3.74d
6菌株发酵乳组 9.85±0.78ab 75.08±6.48b
注：ab为同一指标不同处理组比较，不同字母表示具有差异性(p<0.05)
高脂饮食诱导的肥胖会导致脂肪在肝脏堆积。如表6所示，与对照组相比，高脂组小鼠肝脏TC和TG的水平分别增加了2.1和1.88倍。4组灌胃样品显著降低了肥胖小鼠肝脏TC和TG的水平(p<0.05)，与前期实验结果相符。与高脂组相比菌体组、菌株上清液组、菌株发酵液组和菌株发酵乳组使高脂组肥胖小鼠肝脏TC水平分别降低了28.29％、12.29％、17.85％和3.90％，TG水平分别降低了22.82％、27.06％、34.66％和12.09％。说明4组灌胃样品组均可有效改善小鼠肝脏的脂肪积累情况。
5、乳酸菌的鉴定
(4)菌株16S rDNA序列鉴定
提取细菌基因组DNA，以基因组DNA为模板，进行PCR扩增，PCR反应体系为：10×ExTaq buffer 2.0μl、5u Ex Taq 0.2μl、2.5mMdNTP Mix 1.6μl、5p Primer 1 1μl、5pPrimer 1 1μl、DNA0.5μl、ddH2O 13.7μl，PCR反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，循环25次；72℃延伸10min。对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，扩增片段长度为1.6bp左右，见图。
测序工作由上海美吉生物医药科技有限公司完成，将测序结果提交到NCBI进行BLAST在线比对，得出结果，本发明菌株100％为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)。该菌株已于2021年10月25日保藏于中国典型培养物保藏中心；地址：中国湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，武汉大学；简称CCTCC；保藏号：CCTCC NO.M20211319。该培养物的存活性本保藏中心与2021年11月09日监测完毕，检测结果为存活。
实施例2
一种含本发明菌株发酵乳的制作方法；
将原料乳预热至40℃，加入7％蔗糖搅拌至溶解，在压力20MPa，温度55℃条件下均质；在温度95℃，进行5min热处理杀菌，冷却至发酵温度37℃，接种鼠李糖乳杆菌HF01，接种数量为2％～3％。37℃发酵至酸度值为70°T，破乳，后熟4℃，16h，即获得发酵乳产品。
实施例3
一种菌株粉末状产品的制作方法；
将活化后鼠李糖乳杆菌HF01以3％接种量接入MRS肉汤培养基中，37℃培养24h后10000r/min，10min离心，倒掉上层清液，即得鼠李糖乳杆菌HF01菌泥。以1:10重量的比例将菌泥与脱脂乳混合，进行真空冷冻干燥，得到菌粉。可将菌粉与奶粉、低聚糖和不同风味剂制成产品，用于日常使用。
以上本发明提供的菌株及其发酵产物具有不同程度的预防肥胖功效。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 新希望乳业股份有限公司
<120> 一种鼠李糖乳杆菌HF01及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1427
<212> RNA
<213> 鼠李糖乳杆菌 Lactobacillus rhamnosus
<400> 1
atgcagtcga cgagttctga ttattgaaag gtgcttgcat cttgatttaa ttttgaacga 60
gtggcggacg ggtgagtaac acgtgggtaa cctgccctta agtgggggat aacatttgga 120
aacagatgct aataccgcat aaatccaaga accgcatggt tcttggctga aagatggcgt 180
aagctatcgc ttttggatgg acccgcggcg tattagctag ttggtgaggt aacggctcac 240
caaggcaatg atacgtagcc gaactgagag gttgatcggc cacattggga ctgagacacg 300
gcccaaactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttcca caatggacgc aagtctgatg 360
gagcaacgcc gcgtgagtga agaaggcttt cgggtcgtaa aactctgttg ttggagaaga 420
atggtcggca gagtaactgt tgtcggcgtg acggtatcca accagaaagc cacggctaac 480
tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tatccggatt tattgggcgt 540
aaagcgagcg caggcggttt tttaagtctg atgtgaaagc cctcggctta accgaggaag 600
tgcatcggaa actgggaaac ttgagtgcag aagaggacag tggaactcca tgtgtagcgg 660
tgaaatgcgt agatatatgg aagaacacca gtggcgaagg cggctgtctg gtctgtaact 720
gacgctgagg ctcgaaagca tgggtagcga acaggattag ataccctggt agtccatgcc 780
gtaaacgatg aatgctaggt gttggagggt ttccgccctt cagtgccgca gctaacgcat 840
taagcattcc gcctggggag tacgaccgca aggttgaaac tcaaaggaat tgacgggggc 900
ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac gcgaagaacc ttaccaggtc 960
ttgacatctt ttgatcacct gagagatcag gtttcccctt cgggggcaaa atgacaggtg 1020
gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca 1080
acccttatga ctagttgcca gcatttagtt gggcactcta gtaagactgc cggtgacaaa 1140
ccggaggaag gtggggatga cgtcaaatca tcatgcccct tatgacctgg gctacacacg 1200
tgctacaatg gatggtacaa cgagttgcga gaccgcgagg tcaagctaat ctcttaaagc 1260
cattctcagt tcggactgta ggctgcaact cgcctacacg aagtcggaat cgctagtaat 1320
cgcggatcag cacgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac 1380
catgagagtt tgtaacaccc gaagccggtg gcgtaaccct ttaggag 1427

Claims (8)

1. 一种鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HF01，已于2021年10月25日保藏于中国典型培养物保藏中心；地址，中国武汉武汉大学；保藏号：CCTCC NO .M20211319。
2.如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌HF01在制备预防肥胖功能的组合物中的用途。
3.如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌HF01在制备具有预防肥胖功能的食品中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述食品为发酵乳制品。
5. 如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌HF01在制备具有预防肥胖功能的活菌制剂中的用 途。
6.一种组合物，其特征在于，包含如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌HF01。
7.一种食品，其特征在于，包含如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌HF01。
8.一种活菌制剂，其特征在于，包含如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌HF01。
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CN115216422B (zh) * 2022-05-20 2023-11-14 宁夏塞尚金河科技有限公司 鼠李糖乳杆菌及其应用
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CN114874951B (zh) * 2022-06-14 2024-01-26 内蒙古一康健康发展有限责任公司 一种新型鼠李糖乳杆菌菌株及其应用
CN116814505B (zh) * 2023-08-11 2024-04-19 顾建文 一种鼠李糖乳杆菌及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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