CN105154345A - 一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂的制备方法，属于动物饲料加工技术领域。本发明以克鲁斯假丝酵母菌、产阮假丝酵母菌和嗜热链球菌为菌种进行活化培养，以葡萄糖等为原料，加入亚硒酸钠，通过菌种发酵将其转化为有机硒，在发酵的过程中附带产生甘油等物质，最后加入玉米粉作为吸附载体，浓缩后即得一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂。实例证明，本发明所制得的益生菌不仅与反刍饲料结合率高，无毒无害，而且富含大量的甘油和有机硒，使得反刍动物吸收能力增强。
Description
技术领域
本发明公开了一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂的制备方法，属于动物饲料加工技术领域。
背景技术
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的复合活性益生菌，其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。
益生菌在工业、农业、医药、食品、饲料等与人类生活密切相关的重要领域中应用价值很高，在改善动物体内微生态环境、增加免疫力、预防疾病、促进生长以及改善养殖环境等方面产生巨大的经济效应和社会效应。
反刍动物直接吸收利用葡萄糖的能力非常有限，且母畜在围产期经历妊娠、分娩、开始泌乳等一系列剧烈的生理变化，极易导致能量代谢障碍。甘油可以作为生糖物质添加到反刍动物的日粮中，能调节血液代谢，提高泌乳性能，增高血糖，降低血液中的BHBA和NEFA的含量，降低尿中的酮体含量，进而调节能量平衡。硒是一种动物所必须的微量元素，其最主要的功能是抗氧化作用。围产期反刍动物体内活性氧的产生大大超过了正常水平，硒能参与机体的抗氧化防御系统。当年广泛使用的补硒方法是在日粮中添加亚硒酸钠，但是却存在结合率比较低，毒性大，污染大，因此以及被限量使用。
发明内容
本发明主要解决的技术问题：针对目前反刍动物自身直接吸收利用葡萄糖的能力非常有限，而硒是动物所必须的微量元素，但是目前补硒方法是在日粮中添加亚硒酸钠，导致结合率低，毒性大，污染严重的问题，提供了一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂的制备方法，该方法以克鲁斯假丝酵母菌、产阮假丝酵母菌和嗜热链球菌为菌种进行活化培养，以葡萄糖等为原料，加入亚硒酸钠，通过菌种发酵将其转化为有机硒，在发酵的过程中附带产生甘油等物质，最后加入玉米粉作为吸附载体，浓缩后即得一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂。本发明所制得的益生菌不仅与反刍饲料结合率高，无毒无害，而且富含大量的甘油和有机硒，使得反刍动物吸收能力增强。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）将保存在4～6℃下的克鲁斯假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在30～40℃下培养24～30h，之后重复转接3～5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将克鲁斯假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，放入恒温摇床培养箱，在30～35℃下以100～150r/min的转速恒温培养24～30h得到种子液1；
（2）将产阮假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在28～30℃下培养30～36h，之后重复转接3～5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在28～38℃下恒温培养18～24h得到种子液2；
（3）将嗜热链球菌菌株，接种于固体活化培养基中，在38～42℃下培养36～48h，之后重复转接3～5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在35～40℃下恒温培养24～30h得到种子液3；
（4）向发酵罐中加入400～500g葡萄糖、300～400g酵母浸膏、60～70g蛋白胨、30～40g硫酸铵和30～40g硫酸氢二钾，再加入20～30L蒸馏水，用磁力搅拌机在100～200r/min的转速搅拌10～15min，之后在100～115℃下高压蒸汽灭菌5～10min，冷却至室温；
（5）向上述冷却后的发酵罐中加入400～500mL含硒量为0.5～0.6mg/mL的亚硒酸钠溶液、100～150mL种子液1、200～300mL种子液2和700～800mL种子液3，再用磁力搅拌机以100～200r/min的转速搅拌15～20min后密封罐口，罐内减压至40～50kPa，在30～40℃下恒温发酵30～36h后得到发酵液；
（6）取300～400mL上述发酵液放入1000mL烧杯中，加入200～300g玉米粉，放置在超声振荡器上振荡均匀，再放入浓缩罐，罐内减压至900～1000Pa，进行浓缩处理，得到的浓缩液即一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂。
所述的固体活化培养基由20～30g葡萄糖、2～4g尿素、4～5g酵母浸膏、20～30g琼脂和900～1000mL蒸馏水组成。
所述的种子培养基由200～250g葡萄糖、2～5g尿素、4～6g酵母浸膏、20～30g琼脂和1000～1200mL蒸馏水组成。
所述的克鲁斯假丝酵母株代号是CICC1722，嗜热链球菌代号为AS1.2471，产阮假丝酵母菌株代号为AS2.1180。
本发明的应用方法是：将本发明所制得的反刍动物饲料复合益生菌浓缩液加入水稀释100倍，然后在每100～300g反刍动物饲料中添加5～15mL稀释后的益生菌液，搅拌均匀，放入动物食物盆中，10～20天，可以明显感觉反刍动物免疫力提高，体重生长迅速，活泼健康。
本发明的有益效果是：
（1）将本发明所制得益生菌添加到反刍动物食用的饲料中，富含甘油和有机硒，使得反刍动物吸收能力增强；
（2）益生菌与反刍动物饲料结合，导致结合率提高，且无任何毒性，对于环境没有任何污染问题。
具体实施方式
首先将保存在4～6℃下的克鲁斯假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在30～40℃下培养24～30h，之后重复转接3～5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将克鲁斯假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，放入恒温摇床培养箱，在30～35℃下以100～150r/min的转速恒温培养24～30h得到种子液1；然后将产阮假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在28～30℃下培养30～36h，之后重复转接3～5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在28～38℃下恒温培养18～24h得到种子液2；随后将嗜热链球菌菌株，接种于固体活化培养基中，在38～42℃下培养36～48h，之后重复转接3～5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在35～40℃下恒温培养24～30h得到种子液3；之后向发酵罐中加入400～500g葡萄糖、300～400g酵母浸膏、60～70g蛋白胨、30～40g硫酸铵和30～40g硫酸氢二钾，再加入20～30L蒸馏水，用磁力搅拌机在100～200r/min的转速搅拌10～15min，之后在100～115℃下高压蒸汽灭菌5～10min，冷却至室温；接下来向上述冷却后的发酵罐中加入400～500mL含硒量为0.5～0.6mg/mL的亚硒酸钠溶液、100～150mL种子液1、200～300mL种子液2和700～800mL种子液3，再用磁力搅拌机以100～200r/min的转速搅拌15～20min后密封罐口，罐内减压至40～50kPa，在30～40℃下恒温发酵30～36h后得到发酵液；
最后取300～400mL上述发酵液放入1000mL烧杯中，加入200～300g玉米粉，放置在超声振荡器上振荡均匀，再放入浓缩罐，罐内减压至900～1000Pa，进行浓缩处理，得到的浓缩液即一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂。
所述的固体活化培养基由20～30g葡萄糖、2～4g尿素、4～5g酵母浸膏、20～30g琼脂和900～1000mL蒸馏水组成。
所述的种子培养基由200～250g葡萄糖、2～5g尿素、4～6g酵母浸膏、20～30g琼脂和1000～1200mL蒸馏水组成。
所述的克鲁斯假丝酵母株代号是CICC1722，嗜热链球菌代号为AS1.2471，产阮假丝酵母菌株代号为AS2.1180。
实例1
首先将保存在4℃下的克鲁斯假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在30℃下培养24h，之后重复转接3次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将克鲁斯假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，放入恒温摇床培养箱，在30℃下以100r/min的转速恒温培养24h得到种子液1；然后将产阮假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在28℃下培养30h，之后重复转接3次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在28℃下恒温培养18h得到种子液2；随后将嗜热链球菌菌株，接种于固体活化培养基中，在38℃下培养36h，之后重复转接3次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在35℃下恒温培养24h得到种子液3；之后向发酵罐中加入400g葡萄糖、300g酵母浸膏、60g蛋白胨、30g硫酸铵和30g硫酸氢二钾，再加入20L蒸馏水，用磁力搅拌机在100r/min的转速搅拌10min，之后在100℃下高压蒸汽灭菌5min，冷却至室温；接下来向上述冷却后的发酵罐中加入400mL含硒量为0.5mg/mL的亚硒酸钠溶液、100mL种子液1、200mL种子液2和700mL种子液3，再用磁力搅拌机以100r/min的转速搅拌15min后密封罐口，罐内减压至40kPa，在30℃下恒温发酵30h后得到发酵液；最后取300mL上述发酵液放入1000mL烧杯中，加入200g玉米粉，放置在超声振荡器上振荡均匀，再放入浓缩罐，罐内减压至900Pa，进行浓缩处理，得到的浓缩液即一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂。
本实例方法独特新颖，使用时将本发明所制得的反刍动物饲料复合益生菌浓缩液加入水稀释100倍，然后在每100g反刍动物饲料中添加5mL稀释后的益生菌液，搅拌均匀，放入动物食物盆中，10天后可以明显感觉反刍动物免疫力提高，体重生长迅速，活泼健康。
实例2
首先将保存在5℃下的克鲁斯假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在35℃下培养26h，之后重复转接4次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将克鲁斯假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，放入恒温摇床培养箱，在33℃下以130r/min的转速恒温培养26h得到种子液1；然后将产阮假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在29℃下培养33h，之后重复转接4次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在35℃下恒温培养22h得到种子液2；随后将嗜热链球菌菌株，接种于固体活化培养基中，在40℃下培养42h，之后重复转接4次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在38℃下恒温培养26h得到种子液3；之后向发酵罐中加入450g葡萄糖、350g酵母浸膏、65g蛋白胨、35g硫酸铵和35g硫酸氢二钾，再加入25L蒸馏水，用磁力搅拌机在150r/min的转速搅拌13min，之后在105℃下高压蒸汽灭菌7min，冷却至室温；接下来向上述冷却后的发酵罐中加入450mL含硒量为0.55mg/mL的亚硒酸钠溶液、130mL种子液1、250mL种子液2和750mL种子液3，再用磁力搅拌机以150r/min的转速搅拌18min后密封罐口，罐内减压至45kPa，在35℃下恒温发酵33h后得到发酵液；最后取350mL上述发酵液放入1000mL烧杯中，加入250g玉米粉，放置在超声振荡器上振荡均匀，再放入浓缩罐，罐内减压至950Pa，进行浓缩处理，得到的浓缩液即一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂。
本实例方法独特新颖，使用时将本发明所制得的反刍动物饲料复合益生菌浓缩液加入水稀释80倍，然后在每200g反刍动物饲料中添加10mL稀释后的益生菌液，搅拌均匀，放入动物食物盆中，15天后可以明显感觉反刍动物免疫力提高，体重生长迅速，活泼健康。
实例3
首先将保存在6℃下的克鲁斯假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在40℃下培养30h，之后重复转接5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将克鲁斯假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，放入恒温摇床培养箱，在35℃下以150r/min的转速恒温培养30h得到种子液1；然后将产阮假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在30℃下培养36h，之后重复转接5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在38℃下恒温培养24h得到种子液2；随后将嗜热链球菌菌株，接种于固体活化培养基中，在42℃下培养48h，之后重复转接5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在40℃下恒温培养30h得到种子液3；之后向发酵罐中加入500g葡萄糖、400g酵母浸膏、70g蛋白胨、40g硫酸铵和40g硫酸氢二钾，再加入30L蒸馏水，用磁力搅拌机在200r/min的转速搅拌15min，之后在115℃下高压蒸汽灭菌10min，冷却至室温；接下来向上述冷却后的发酵罐中加入500mL含硒量为0.6mg/mL的亚硒酸钠溶液、150mL种子液1、300mL种子液2和800mL种子液3，再用磁力搅拌机以200r/min的转速搅拌20min后密封罐口，罐内减压至50kPa，在40℃下恒温发酵36h后得到发酵液；最后取400mL上述发酵液放入1000mL烧杯中，加入300g玉米粉，放置在超声振荡器上振荡均匀，再放入浓缩罐，罐内减压至1000Pa，进行浓缩处理，得到的浓缩液即一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂。
本实例方法独特新颖，使用时将本发明所制得的反刍动物饲料复合益生菌浓缩液加入水稀释60倍，然后在每300g反刍动物饲料中添加15mL稀释后的益生菌液，搅拌均匀，放入动物食物盆中，20天后可以明显感觉反刍动物免疫力提高，体重生长迅速，活泼健康。
Claims (4)
1.一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）将保存在4～6℃下的克鲁斯假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在30～40℃下培养24～30h，之后重复转接3～5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将克鲁斯假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，放入恒温摇床培养箱，在30～35℃下以100～150r/min的转速恒温培养24～30h得到种子液1；
（2）将产阮假丝酵母株，接种于固体活化培养基中，在28～30℃下培养30～36h，之后重复转接3～5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在28～38℃下恒温培养18～24h得到种子液2；
（3）将嗜热链球菌菌株，接种于固体活化培养基中，在38～42℃下培养36～48h，之后重复转接3～5次，以便菌株活力得到恢复，活化完成后，将产阮假丝酵母菌斜面接种于种子培养基中，在35～40℃下恒温培养24～30h得到种子液3；
（4）向发酵罐中加入400～500g葡萄糖、300～400g酵母浸膏、60～70g蛋白胨、30～40g硫酸铵和30～40g硫酸氢二钾，再加入20～30L蒸馏水，用磁力搅拌机在100～200r/min的转速搅拌10～15min，之后在100～115℃下高压蒸汽灭菌5～10min，冷却至室温；
（5）向上述冷却后的发酵罐中加入400～500mL含硒量为0.5～0.6mg/mL的亚硒酸钠溶液、100～150mL种子液1、200～300mL种子液2和700～800mL种子液3，再用磁力搅拌机以100～200r/min的转速搅拌15～20min后密封罐口，罐内减压至40～50kPa，在30～40℃下恒温发酵30～36h后得到发酵液；
（6）取300～400mL上述发酵液放入1000mL烧杯中，加入200～300g玉米粉，放置在超声振荡器上振荡均匀，再放入浓缩罐，罐内减压至900～1000Pa，进行浓缩处理，得到的浓缩液即一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂。
2.根据权利要求1所述的一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂的制备方法，其特征在于：所述的固体活化培养基由20～30g葡萄糖、2～4g尿素、4～5g酵母浸膏、20～30g琼脂和900～1000mL蒸馏水组成。
3.根据权利要求1所述的一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂的制备方法，其特征在于：所述的种子培养基由200～250g葡萄糖、2～5g尿素、4～6g酵母浸膏、20～30g琼脂和1000～1200mL蒸馏水组成。
4.根据权利要求1所述的一种添加到反刍动物饲料中复合益生菌制剂的制备方法，其特征在于：所述的克鲁斯假丝酵母株代号是CICC1722，嗜热链球菌代号为AS1.2471，产阮假丝酵母菌株代号为AS2.1180。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20151216 |