CN101970490A - 针对异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列以及包括所述氨基酸序列的多肽 - Google Patents

针对异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列以及包括所述氨基酸序列的多肽 Download PDF

Info

Publication number
CN101970490A
CN101970490A CN2008801255706A CN200880125570A CN101970490A CN 101970490 A CN101970490 A CN 101970490A CN 2008801255706 A CN2008801255706 A CN 2008801255706A CN 200880125570 A CN200880125570 A CN 200880125570A CN 101970490 A CN101970490 A CN 101970490A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sequence
polypeptide
subunit
aminoacid sequence
albumen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2008801255706A
Other languages
English (en)
Inventor
迈克尔·约翰·斯科特·桑德斯
克里斯托夫·布朗什托
海蒂·罗梅拉尔
约·韦尔凯门
约翰内斯·约瑟夫·威廉姆斯·德哈德
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ablynx NV
Original Assignee
Ablynx NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ablynx NV filed Critical Ablynx NV
Publication of CN101970490A publication Critical patent/CN101970490A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及针对(如本文所定义)异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列，以及包括一个或多个所述氨基酸序列或基本上由其组成的化合物或构建体，并且特别是蛋白和多肽(在本文中还分别地称为“本发明的氨基酸序列”、“本发明的化合物”和“本发明的多肽”)。本发明还涉及编码所述所述氨基酸序列和多肽的核酸(在本文中还称为“本发明的核酸”或“本发明的核苷酸序列”)；制备所述氨基酸序列和多肽的方法；表达或能够表达所述氨基酸序列或多肽的宿主细胞；包括所述氨基酸序列、多肽、核酸和/或宿主细胞的组合物、且特别是药物组合物；以及所述氨基酸序列或多肽、核酸、宿主细胞和/或组合物的应用，特别是用于预防、治疗或诊断目的，诸如本文所提到的预防、治疗或诊断目的的应用。

Description

针对异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列以及包括所述氨基酸序列的多肽
本发明涉及针对(如本文所定义)异二聚体细胞因子和或其受体的氨基酸序列，以及包括一个或多个所述氨基酸序列或基本上由其组成的化合物或构建体，并且特别是蛋白和多肽(在本文中还分别地称为“本发明的氨基酸序列”、“本发明的化合物”和“本发明的多肽”)。
本发明还涉及编码所述所述氨基酸序列和多肽的核酸(在本文中还称为“本发明的核酸”或“本发明的核苷酸序列”)；制备所述氨基酸序列和多肽的方法；表达或能够表达所述氨基酸序列或多肽的宿主细胞；包括所述氨基酸序列、多肽、核酸和/或宿主细胞的组合物、且特别是药物组合物；以及所述氨基酸序列或多肽、核酸、宿主细胞和/或组合物的应用，特别是用于预防、治疗或诊断目的，诸如本文所提到的预防、治疗或诊断目的的应用。
本发明的其它方面、实施方案、优点和应用将从本发明的进一步描述中变得显而易见。
异二聚体细胞因子、它们的受体以及它们和它们的受体所参与的通路、信号传导、生物学机制和生理效应在现有技术中是已知的。
异二聚体细胞因子及其受体的一些最有名的实例分别是IL-12、IL-23和IL-27，以及它们的受体IL-12R，IL-23R和IL-27。如它们的名称所意指的那样，这些细胞因子是由两个不同的亚单位组成的异二聚体，即，所述亚单位在IL-12时为IL12p40和IL12p35，在IL-23时为IL12p40和IL23p19(也称为IL-30B)和在IL-27时为EBI3和IL27p28。这些异二聚体细胞因子的受体也由多个亚单位组成，即，在IL-12R时为IL12Rβ1和IL12Rβ2，在IL-23R时为IL12Rβ1和IL23R，以及在IL-27R时为WSX1和gp130。
IL12仍然是典型的异二聚体细胞因子(由IL12p40和IL12p35组成)，直到最近才有其他相关的异二聚体存在。
在2000年，基于对IL-6家族成员的同源性检索而鉴定了IL-23及其亚单位p19(IL23p19)。它们的研究揭示了p19与IL12p40二聚化，并且称为IL23的该细胞因子使用IL12Rβ1而非IL12Rβ2作为其高亲和力受体的组分。功能克隆鉴定了IL23受体的另一个亚单位，该亚单位称为IL23R(对CA Hunter 2003的文字做了适应性改动)。还发现IL-23在Th17细胞的增殖中具有重要的作用。
IL27是与IL12相关的另一种异二聚体细胞因子，其由EBI3和IL27p28组成。埃巴病毒(EBV)诱导分子3(Epstein-Barr virus(EBV)-induced molecule 3)(EBI3)已经被鉴定为IL-12p40同源物。在2002年，发现IL-27的p28亚单位(IL-27p28)是与IL-12p35和IL-6具有同源性的蛋白。
近年来，已经记述了另一种属于IL-12家族的异二聚体细胞因子，称为IL-35(Collison等，Nature(自然)，2007年11月22日，566)。该异二聚体细胞因子被描述为促进T细胞功能的调节，并由IL12p35和EBI-3亚单位组成。
已经记述了34种已知的I型细胞因子，并且尽管配体更难以鉴定，有至少27种可被归为5个不同的家族(见Boulay等，2003)。这些分组中的一组由使用gp130(糖蛋白130)或几种gp130相关蛋白之一的一系列细胞因子受体的配体组成。这些包括IL6的受体以及异二聚体细胞因子IL-12、IL-23和IL-27的受体(Hunter，见前)。
IL12受体是IL12Rβ1和IL12Rβ2的异二聚体。
IL23受体是IL12Rβ1和IL23R的异二聚体。IL12Rβ1被IL12和IL-23两者用于信号传导。靶向该受体将导致IL-12和IL-23两种信号传导的阻断。
IL27受体是由WSX1(基于gp130样蛋白的同源性检索而被鉴定)和gp130组成的异二聚体，gp130是IL-6受体(包括IL-6Rα和gp130)和IL-27受体(包括WSX1和gp130)的共用元件，这与这些细胞因子密切的家族关系是相一致的。
关于异二聚体细胞因子和它们的受体，以及它们参与的通路、信号传导、生物学机制和生物学效应，还有它们相关的疾病的更多信息，参考下列的现有技术：Oppmann，2000，Immunity(免疫)，13：751-725；Gubler等，1991，PNAS(美国国家科学院院报)，88：4143-4147；Hunter，Nature Rev.(自然综述)，卷5，2003年7月，521；Watford等，Cytokine and Growth Factor Reviews(细胞因子和生长因子综述)14(2003)，361-368；Boulay，Immunity(免疫)，卷19，159-163(2003)；Goriely和Goldmann，American Journal of Transplantation(美国移植杂志)2007；7：208-284；Langrish等，Immunological Reviews(免疫学综述)2004，202，96-105；Kaufmann等，J.Invest.Dermatol.(皮肤病学研究杂志)，123：1037-1044，2004；Neurath，Nature Medecine(自然-医学)，卷13，2007年1月，26；Collison等，Nature(自然)，2007年11月22日，566；Parham等，The Journal of Immunology(免疫学杂志)，2002，5699；EP 433 827；EP 1 210 434；EP 790 308；EP 790309；EP 1 175 446；EP 0 969 867；EP 1 309 692；EP 1 002 084；EP 1 587 178；EP 1 589 998；WO 04/071517；EP 1 601 695；WO 05/079837；WO 06/068987；WO 07/027761；WO/2007/024846；WO 02/09748和WO 06/069036；以及这些参考文献和本说明书中引用的另外的现有技术。上述参考文献中的一些还描述了异二聚体细胞因子(诸如常规的单克隆抗体)的拮抗剂，并且提到可通过使用此类拮抗剂预防和/或治疗的疾病和病症。
对于异二聚体细胞因子和它们的受体的各种亚单位的序列，参考下列的Genbank登录号，其还提到了关于它们参与的通路、信号传导、生物学机制和生物学效应，以及它们相关的疾病的其他信息：
P19：NM_016584
P40：NM_002187
IL12Rβ1：NM_005535
IL23R NM_144701
IL12Rβ2 NM_001559
WSX1：IL27RA：NM_004843
Gp130：NM_002184和NM_175767
P35(IL12A)：NM_000882
P28：NM_145659
EBI3：NM_005755
从上述，还要清楚的是上面提到的异二聚体细胞因子和它们的受体具有一些共用的亚单位，例如，存在于IL-12和IL-23上的IL12p40，以及例如，存在于IL-12的(同源)受体以及IL-23的(同源)受体上的IL-12Rβ1。此外，存在于异二聚体细胞因子或其受体中的一些其他的亚单位，尽管不相同，但在结构上和/或功能上相似，并且基于这些相似性可如下分组：-p19，p35和p28亚单位(和它们的目前和将来的同源物)，它们在本文中还总称为“p19样亚单位”，其被理解为，IL-12的p19样亚单位是p35，IL-23的p19样亚单位是p19，IL-27的p19样亚单位是p28，以及IL-35的p19样亚单位是p35。p19样亚单位(诸如p35)还与I型细胞因子，诸如IL6和制瘤素M(oncostatin M)同源，例如，共用对于I型细胞因子常见的“四螺旋束(four helix bundle)”；
-p40和EBI3亚单位(和它们的目前和将来的同源物)，它们在本文中还总称为“p40样亚单位”，其被理解为，IL-12的p40样亚单位是p40，IL-23的p40样亚单位是p40，IL-27的p40样亚单位是EBI3，以及IL-35的p40样亚单位是EBI3。P40样亚单位(诸如IL12p40)与可溶性IL-6受体(IL-6Rα)在结构上是相关的；
-gp130和IL-12β-1亚单位(和它们的目前和将来的同源物)，它们在本文中还总称为“gp130样亚单位”，其被理解为，IL-12受体的gp130样亚单位是IL-12Rβ-1，IL-23受体的gp130样亚单位是IL-12Rβ-1以及IL-27受体的gp130样亚单位是gp130；
-IL-12Rβ-2，IL-23R和WSX-1亚单位(和它们的目前和将来的同源物)，它们在本文中还总称为“IL-23亚单位”，其被理解为，IL-12受体的IL-23亚单位是IL-12Rβ-2，IL-23受体的IL-23样亚单位是IL-23R，以及IL-27受体的IL-23样亚单位是WSX-1。
通常已知细胞因子和它们的受体在调节免疫反应的所有方面(的通路)中具有关键性的作用。这在属于白介素-12(IL12)相关家族的异二聚体细胞因子及其受体的情况下也是这样。例如，IL12，其为IL-12家族的典型异二聚体成员，诱导NK、T细胞、树突细胞(DC)和巨噬细胞产生干扰素-□(IFN-□)。IL-12还促进初始型CD4+T细胞分化为T辅助1(TH1)细胞，TH1细胞产生IFN-□并辅助细胞介导的免疫。因此，IL12在TH1细胞的生成(细胞介导的免疫应答)中的重要作用长时间来已经为人所理解。例如，小鼠模型确定，对于针对细胞内病原体发展的保护性固有的和适应性免疫应答，IL12是必需的。
IL23和IL27----来自IL-12家族的其他异二聚体细胞因子中的两种，也调节TH1-细胞应答，尽管具有不同的功能。IL-23刺激CD4+T细胞产生IL-17的能力在自身免疫性炎症的发生和维持中具有主导地位。相对比地，IL-27在体内的主要功能是限制固有性和适应性免疫应答的强度和持续时间。
另外，发现IL12p40可以作为具有拮抗活性的单体或同型二聚体。
近年来，显示IL23是在炎性肠病中观察到的慢性炎症的原因。这通过下列的事实来证实，即，IL23R基因被鉴定参与到炎性肠病中。还已发现p19敲除小鼠对胶原诱发性关节炎和结肠炎有抵抗力，而发现同等的p35敲除小鼠对胶原诱发性关节炎更敏感。此外，当p19敲除小鼠与IL-10敲除小鼠交配时，获得的后代对结肠炎有抵抗力，而p19敲除小鼠与IL-10敲除小鼠的类似交配获得的后代对结肠炎敏感。进一步发现针对p19的单克隆抗体抑制EAE(多发性硬化的临床前动物模型)的发展，并且减少IL-17(其不受IL-12调节)的血清水平。而且，IL-23而非IL-12似乎是CNS自身免疫性炎症中的重要细胞因子。所有这些结果表明IL-23/p19可能是比IL-12/p35或p40更具吸引力的用于治疗结肠炎、局限性肠炎(Crohn’sdiseases)、IBD、多发性硬化、类风湿性关节炎和本文提到的一些其他疾病和病症的靶标(因为针对p40的化合物有可能调节IL-12和IL-23两者)。还应该注意到，目前正在进行临床开发中的单克隆抗体CNTO 1275和ABT-874(见下)两者均针对p40。因此，本发明的一个特殊的目的是提供针对p19的氨基酸序列和多肽，并且特别地是与p35和p40两者相比对p19特异的(如本文所定义的)和/或与IL-12相比对IL-23特异的(如本文所定义的)氨基酸序列和多肽。从本文的描述中这些氨基酸序列和多肽的实例将变得显而易见。
如本文进一步所述，本发明的氨基酸序列、多肽和组合物通常可用来调节(如本文所定义)由异二聚体细胞因子和/或它们的受体所介导的信号传导，调节(如本文所定义)异二聚体细胞因子和/或它们的受体参与其中的生物学通路，和/或调节(如本文所定义)与异二聚体细胞因子、它们的受体、所述信号传导和/或这些通路相关的生物学机制、反应和效应(所有前面所述在本文中也总称为“异二聚体细胞因子介导的信号传导”)。
就此而言，本发明的氨基酸序列、多肽和组合物通常可用来调节施用了(即，以治疗相关量)本发明的一个或多个氨基酸序列、多肽和组合物的受试者中的免疫系统和/或一个或多个特异性免疫应答。
如本文使用的术语“异二聚体细胞因子”在其最广泛意义上通常包括任何异二聚体细胞因子，即，包括至少两个，且更优选地仅两个亚单位的细胞因子。
特别地，如本文使用的术语“异二聚体细胞因子”包涵与细胞介导的(TH1)免疫相关的异二聚体细胞因子，尽管本发明在其最广泛意义上不限于此，并且还包涵与体液(TH2)免疫相关的异二聚体细胞因子。
根据一个具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对选自下列的异二聚体细胞因子：包括p40亚单位或p40样亚单位，诸如p40亚单位(例如存在于IL-12和IL-23中)或埃巴病毒(EBV)诱导分子3(EBI3，例如存在于IL-27和IL-35中)的异二聚体细胞因子。
根据另一个具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对选自下列的异二聚体细胞因子：包括p19亚单位或p19样亚单位，诸如p19亚单位(例如存在于IL-23中)，p35亚单位(例如存在于IL-12和IL-35中)，或p28亚单位(例如存在于IL-27中)或它们的同源物的异二聚体细胞因子。
例如，本发明的氨基酸序列和多肽可针对这样的异二聚体细胞因子，其将包括至少一个p19亚单位或p19样亚单位和至少一个p40亚单位或p40样亚单位。
根据一个甚至更具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对选自IL-12、IL-23、IL-27和/或IL-35的异二聚体细胞因子。
在一个具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对IL-23(即，针对p40，p19或两者)。本发明的这些氨基酸序列和多肽(以及包括它们的组合物)可用于预防和治疗与IL-23相关的病症。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对IL-12(即，针对p40，p35或两者)。本发明的这些氨基酸序列和多肽(以及包括它们的组合物)可如本文进一步所述的那样，并且可用于预防和治疗与IL-12相关的病症。
所述氨基酸序列、多肽和组合物可用来调节(如本文所定义，并且例如作为激动剂或拮抗剂)异二聚体细胞因子和它们的受体，和/或这些所参与的信号传导、通路、生物学机制和效应。
为异二聚体细胞因子和它们的受体(和/或这些所参与的信号传导、通路、生物学机制和效应)的拮抗剂的氨基酸序列和多肽可用来减少或抑制异二聚体细胞因子的激动效应。
更一般地，本发明的氨基酸序列(诸如本文所述的p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)，多肽(诸如-例如本文所述的多价的、多特异性的和/或双互补位型(biparatopic)构建体，所述构建体包括至少一个p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和/或IL-23序列)和组合物可用于预防和治疗(如本文所定义)与异二聚体细胞因子和它们的受体(和/或与这些所参与的信号传导、通路、生物学机制和效应)相关的疾病和病症。通常，“与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的疾病和病症”可定义为可通过适当地向需要其的受试者(即，患有所述疾病或病症或其至少一种症状和/或处于诱发或发生该疾病或病症的风险中)施用本发明的多肽或组合物(以及特别地，施用其药学活性量)和/或针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体或异二聚体细胞因子和/或它们的受体参与其中的生物学通路或机制的已知有效成分(以及特别地，施用其药学活性量)而分别地预防和/或治疗的疾病和病症。基于本文的公开内容，与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的这些疾病和病症的实例对于专业技术人员将是显而易见的，并且例如包括下列的疾病和病症：炎症和炎性疾病诸如肠疾病(结肠炎、局限性肠炎、IBD)，传染病，银屑病，癌症，自身免疫病(诸如MS)，carcoidis，移植排斥，囊性纤维化，哮喘，慢性阻塞性肺病，类风湿性关节炎，病毒感染，普通变异型免疫缺陷，和本文引用的现有技术中提到的各种疾病和病症。基于此，对于专业技术人员来说还是显而易见的是，异二聚体细胞因子(和/或其受体)参与到哪一种具体的疾病和病症中。
特别地，本发明的多肽和组合物可用于预防和治疗与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的疾病和病症，这些疾病和病症的特征在于由异二聚体细胞因子和/或它们的受体或由异二聚体细胞因子和/或它们的受体参与到其中的(多个)通路介导的过度的和/或不需要的信号传导。基于本文的公开内容，异二聚体细胞因子和它们的受体相关的这些疾病和病症的实例对于专业技术人员来说将同样是显而易见的。为此目的，通常将使用异二聚体细胞因子和它们的受体(和/或它们所参与的信号传导、通路、生物学机制和效应)的拮抗剂。
异二聚体细胞因子和它们的受体(和/或它们所参与的信号传导、通路、生物学机制和效应)的激动剂可用来刺激或增强人或动物中的一种或多种免疫应答，例如用于预防和/或治疗如下的疾病，即，以削弱的免疫系统为特征的疾病或可由于具有削弱的免疫系统而引起的疾病。例如参考Hunter(见前)，表1，该表列举了几种基因敲除小鼠，以及与其相关的炎性表型，在这些基因敲除小鼠中各种异二聚体细胞因子及其受体(并且特别是其亚单位)已经被敲除。
已经显示IL12p40在自身免疫性炎症中具有重要的作用，如在疾病模型系统如EAE(实验性过敏性脑脊髓炎)或CIA(胶原诱发性关节炎)中所显示的那样。
因此，不限于此，例如，本发明的氨基酸序列和多肽可以用来预防和/或治疗目前采用可调节异二聚体细胞因子和/或它们的受体介导的信号传导的有效成分预防或治疗的所有疾病和病症，所述的有效成分诸如上面引用的现有技术中所提到的那些(例如，WO 02/09748和WO 06/069036中记载的单克隆抗体CNTO 1275；ABT-874，一种由雅培(Abbott)正在开发的针对p40的单克隆抗体；以及小分子Apilimod
Figure BPA00001186248900081
Syntha Pharmaceuticals)。还设想本发明的多肽可用来预防和/或治疗采用目前正在开发的、已经提出的、或未来将提出或开发的这些有效成分所治疗的所有疾病和病症。另外，设想，如本文进一步所公开的，因为它们的有利特性，本发明的多肽可用于预防和治疗与这些已知有效成分正在用于或将要提出或开发用于的疾病和病症不同的其他疾病和病症；和/或本发明的多肽可提供用于治疗本文所述的疾病和病症的新方法和方案。
如从本文的进一步描述中将显而易见的是，本发明的氨基酸序列可以是所谓“单价”形式(即，包括单个抗原结合结构域或结合单位或基本上由其组成)或“多价”形式(即，包括两个或多个结合结构域或结合单位或基本上由其组成----所述两个或多个结合结构域或结合单位可以是相同的或不同的----它们任选地经一个或多个适当的接头彼此连接)。还进一步如本文所述，本发明的这些多价氨基酸序列和多肽可以为，例如，而非限制，多特异性(诸如双特异性或三特异性)或多互补位型(multiparatopic)(诸如双互补位型)构建体(或是多互补位型和多特异性两者，诸如含有用于结合血清蛋白的另一个结合结构域的针对p19亚单位的双互补位型构建体，如本文中所例举的)；并且例如可以是包括至少两个结合结构域或结合单位的构建体，所述结合结构域或结合单位各自针对异二聚体细胞因子的相同亚单位上的不同表位；包括至少两个结合结构域或结合单位的构建体，所述结合结构域或结合单位各自具有不同的生物学功能(例如一个结合结构域可阻断或抑制受体-配体相互作用，并且一个结合结构域不能阻断或抑制受体-配体相互作用)；或包括至少两个结合结构域或结合单位的构建体，所述结合结构域或结合单位各自针对异二聚体细胞引起的不同亚单位。
从本文的进一步公开内容中这些构建体的实例将变得显而易见。
从本文的进一步描述中还变得显而易见的是，通常可通过将本发明的两个或多个“单价”氨基酸序列适当地连接(任选地经适当的接头)或合并(或通过适当地将编码这些单价氨基酸序列的核苷酸序列适当地连接或合并以提供编码所需多价构建体的核酸，然后适当地表达所述多价构建体)来提供(和特别地，为特定的生物学作用有目的地设计)这些构建体。因此，应当清楚，本发明不仅能够获得本文所述的单价和多价氨基酸序列和多肽，而且通过获得本文所述的单价氨基酸序列和多肽为专业技术人员提供一定范围的不同的结合结构域和结合单位，它们可用作“构件”以提供一定范围的不同的多价、多特异性和/或多互补位型(以及特别地，双互补位型)构建体(其可具有不同的结合亲和力、抗体亲抗原性(avidities)、特异性、效力和/或效能)，通过使用适当的如本文所述的“构件”这些构建体可有目的地被设计用于本发明的不同方面中(如本文进一步所述)。
因此，使用本发明的各种单价氨基酸序列用作“构件”用于提供本发明的蛋白和多肽(或编码它们的核苷酸序列/核酸，然后可将其表达以提供这些蛋白和多肽)形成本发明的一个重要的方面。
为此目的和为本文所述的其他目的，在一个特殊的方面，本发明提供了许多不同的氨基酸序列，这些序列可各自用作单个结合结构域或结合单位，或原样使用(即，如本文进一步所述，作为单价氨基酸序列)或作为多价、多特异性和/或多特异性构建体的一部分(和/或用作“构件”)，如本文进一步所述。
以其单价形式，例如，这些氨基酸序列可分类如下：
-“p19序列”，即，针对(如本文所定义)p19亚单位(如存在于例如IL-23中)的本发明的氨基酸序列。本文所述的p19序列可进一步细分为“p19+序列”(即，针对p19亚单位且能够调节、中和、阻断和/或抑制包括p19亚单位的异二聚体细胞因子与其(同源)受体的结合，并且特别是能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与其(同源)受体的结合的p19序列，例如，在实施例19或22的α-筛选测定中)和“p19-序列”(即，针对p19亚单位但(本身/原样)(基本上)不能够调节、中和、阻断和/或抑制包括p19亚单位的异二聚体细胞因子与其(同源)受体的结合的p19序列)；
-“p40序列”，即，针对(如本文所定义)p40亚单位(如存在于例如IL-12和IL-23中)的本发明的氨基酸序列。本文所述的p40序列可进一步细分为“p40+序列”(即，针对p40亚单位且能够调节、中和、阻断和/或抑制包括p40亚单位的异二聚体细胞因子与其(同源)受体的结合，并且特别是能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与其(同源)受体的结合的p40序列，例如，在实施例19或22的α-筛选测定中)和“p40-序列”(即，针对p40亚单位但(本身/原样)(基本上)不能够调节、中和、阻断和/或抑制包括p40亚单位的异二聚体细胞因子与其(同源)受体的结合的p40序列)；
-“p35序列”，即，针对(如本文所定义)p35亚单位(如存在于例如IL-12中)的本发明的氨基酸序列；
-“IL-27序列”，即，针对(如本文所定义)IL-27的本发明的氨基酸序列。本文所述的IL-27序列可针对EBI-3亚单位或针对IL-27p28亚单位；
-“IL-12Rb1序列”，即，针对IL-12R和/或IL-23R的Rβ1亚单位的本发明的氨基酸序列；
-“IL-12Rb2序列”，即，针对IL-12R的Rβ2亚单位的本发明的氨基酸序列；
-“IL-23R序列”，即，针对IL-23受体的IL-23R亚单位的本发明的氨基酸序列。
p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23R序列的每一个可如本文进一步所述，并且本发明的氨基酸序列的各个类型形成本发明进一步的方面。
本发明还涉及这些p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23R序列(和/或编码它们的核苷酸序列和/或核酸)作为“构件”(即，作为单个抗原结合结构域或单位)在多价、多特异性和/或多互补位型构建体中或用于多价、多特异性和/或多互补位型构建体的应用，如本文进一步所述。
在此方面，应当注意，例如，不能够调节、中和、阻断和/或抑制所述异二聚体细胞因子与其同源受体(诸如p19-序列或p40-序列)的结合的本发明的氨基酸序列可以仍然用作本发明的多价、多特异性和/或多互补位型多肽中的结合结构域和/或结合单位，例如以便提供/提高特异性和/或提供/提高亲和力和/或抗体亲抗原性。从本文的公开内容中对于专业技术人员来说其实例将变得显而易见。
此外，本发明的其它方面涉及：-包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括本发明的所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位；
-编码包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括本发明的所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位；
-包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列在提供、构建双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括本发明的所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位；
-编码包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码双互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括本发明的所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位；
-包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列在提供、构建针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体(或其他异二聚体“靶标”)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括本发明的所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位，并且其中本发明的所述一个或多个氨基酸序列针对所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第一亚单位，并且至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与所述第一亚单位不同的所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第二亚单位；
-编码包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体(或其他异二聚体“靶标”)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括本发明的所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位，并且其中本发明的所述一个或多个氨基酸序列针对所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第一亚单位，并且至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与所述第一亚单位不同的所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第二亚单位；
-包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽针对异二聚体细胞因子或异二聚体细胞因子的(同源受体)并且包括本发明的所述氨基酸序列和至少一个另外的结合结构域或结合单位；
-编码包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽针对异二聚体细胞因子或异二聚体细胞因子的(同源受体)并且包括本发明的所述氨基酸序列和至少一个另外的结合结构域或结合单位；
-包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列在提供、构建双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽针对异二聚体细胞因子(的亚单位)或异二聚体细胞因子的(同源)受体(的亚单位)并且包括本发明的所述氨基酸序列和至少一个另外的结合结构域或结合单位；
-编码包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码双互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽针对异二聚体细胞因子(的亚单位)或异二聚体细胞因子的(同源)受体(的亚单位)并且包括本发明的所述氨基酸序列和至少一个另外的结合结构域或结合单位；
-包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列在提供、构建针对异二聚体细胞因子的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括本发明的所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位，并且其中本发明的所述一个或多个氨基酸序列针对所述异二聚体细胞因子的第一亚单位，并且至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对所述同一异二聚体细胞因子的第二亚单位(即，不同于所述第一亚单位)；
-编码包括单个结合结构域或结合单位(如本文所定义)或基本上由其组成的本发明的氨基酸序列的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建针对异二聚体细胞因子的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括本发明的所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位，并且其中本发明的所述一个或多个氨基酸序列针对所述异二聚体细胞因子的第一亚单位，并且至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对所述同一异二聚体细胞因子的第二亚单位(即，不同于所述第一亚单位)；
-p19+序列(如本文所定义)在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p19+序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p19+序列(如本文所定义)在提供、构建针对p19和/或针对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19+序列(一个或多个)和至少一个也针对p19(但针对p19的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p19+序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建针对p19和/或针对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19+序列(一个或多个)和至少一个也针对p19(但针对p19的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p19+序列(如本文所定义)在提供、构建针对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p19不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-23中的p40)；
-编码p19+序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p19不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-23中的p40)；
-p19-序列(如本文所定义)在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p19-序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p19-序列(如本文所定义)在提供、构建针对p19和/或针对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19-序列(一个或多个)和至少一个也针对p19(但针对p19的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p19-序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建针对p19和/或针对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19-序列(一个或多个)和至少一个也针对p19(但针对p19的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p19-序列(如本文所定义)在提供、构建针对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p19不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-23中的p40)；
-编码p19-序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p19-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p19不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-23中的p40)；
-p40+序列(如本文所定义)在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p40+序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p40+序列(如本文所定义)在提供、构建针对p40和/或针对包括p40亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23或IL-12)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40+序列(一个或多个)和至少一个也针对p40(但针对p40的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p40+序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对p40和/或针对包括p40亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23或IL-12)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40+序列(一个或多个)和至少一个也针对p40(但针对p40的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p40+序列(如本文所定义)在提供、构建针对包括p40亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p40不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-23中的p19或IL-12中的p35)；
-编码p40+序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对包括p40亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23或IL-12)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p40不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-23中的p40或IL-12中的p35)；
-p40-序列(如本文所定义)在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p40-序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p40-序列(如本文所定义)在提供、构建针对p40和/或针对包括p40亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23或IL-12)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40-序列(一个或多个)和至少一个也针对p40(但针对p40的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p40-序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对p40和/或针对包括p40亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23或IL-12)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40-序列(一个或多个)和至少一个也针对p40(但针对p40的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p40-序列(如本文所定义)在提供、构建针对包括p40亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23或IL-12)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p40不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-23中的p19或IL-12中的p35)；
-编码p40-序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对包括p40亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-23或IL-12)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p40-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p40不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-23中的p40或IL-12中的p35)；
-p35序列(如本文所定义)在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p35序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p35序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p35序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p35序列(如本文所定义)在提供、构建针对p35和/或针对包括p35亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-12)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p35序列(一个或多个)和至少一个也针对p35(但针对p35的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码p35序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对p35和/或针对包括p35亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-12)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述p35序列(一个或多个)和至少一个也针对p35(但针对p35的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-p35序列(如本文所定义)在提供、构建针对包括p35亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-12)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p35序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p35不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-12中的p40)；
-编码p35序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对包括p35亚单位的异二聚体细胞因子(诸如IL-12)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述p35序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与p35不同的所述异二聚体细胞因子的第二亚单位(诸如IL-12中的p40)；
-IL-27序列(如本文所定义)在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-27序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码IL-27序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-27序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-IL-27序列(如本文所定义)在提供、构建双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽针对IL-27并且包括所述IL-27序列(一个或多个)和至少一个也针对IL-27(但针对IL-27的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码IL-27序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码双互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽针对IL-27并且包括所述IL-27序列(一个或多个)和至少一个也针对IL-27(但针对IL-27的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-IL-27序列(如本文所定义)在提供、构建针对IL-27的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-27序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与所述IL-27序列所被针对的亚单位不同的IL-27的另一亚单位；
-编码IL-27序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对IL-27的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-27序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与所述IL-27序列所被针对的亚单位不同的IL-27的另一亚单位；
-IL-12RB1序列(如本文所定义)在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB1序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码IL-12RB1序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB1序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-IL-12RB1序列(如本文所定义)在提供、构建针对IL-12RB1和/或针对包括IL-12Rb1亚单位的受体(诸如IL-12和IL-23的同源受体)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB1序列(一个或多个)和至少一个也针对IL-12RB1(但针对IL-12RB1的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码IL-12RB1序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对IL-12RB1和/或针对包括IL-12Rb1亚单位的受体(诸如IL-12和IL-23的同源受体)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB1序列(一个或多个)和至少一个也针对IL-12RB1(但针对IL-12RB1的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-IL-12RB1序列(如本文所定义)在提供、构建针对包括IL-12RB1亚单位的异二聚体受体(诸如IL-12和IL-23的同源受体)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB1序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与IL-12RB1不同的所述异二聚体受体的另一亚单位；
-编码IL-12RB1序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或序列在提供、构建编码针对包括IL-12RB1亚单位的异二聚体受体(诸如IL-12和IL-23的同源受体)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB1序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与IL-12RB1不同的所述异二聚体受体的另一亚单位；
-IL-12RB2序列(如本文所定义)在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB2序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码IL-12RB2序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB2序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-IL-12RB2序列(如本文所定义)在提供、构建针对IL-12RB2和/或针对包括IL-12Rb2亚单位的受体(诸如IL-12的同源受体)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB2序列(一个或多个)和至少一个也针对IL-12RB2(但针对IL-12RB2的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码IL-12RB2序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对IL-12RB2和/或针对包括IL-12Rb2亚单位的受体(诸如IL-12和IL-23的同源受体)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB2序列(一个或多个)和至少一个也针对IL-12RB2(但针对IL-12RB2的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-IL-12RB2序列(如本文所定义)在提供、构建针对包括IL-12RB2亚单位的异二聚体受体(诸如IL-12的同源受体)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB2序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与IL-12RB2不同的所述异二聚体受体的另一亚单位；
-编码IL-12RB2序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或序列在提供、构建编码针对包括IL-12RB2亚单位的异二聚体受体(诸如IL-12的同源受体)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-12RB2序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与IL-12RB2不同的所述异二聚体受体的另一亚单位；
-IL-23R序列(如本文所定义)在提供、构建多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-23R序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码IL-23R序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-23R序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-IL-23R序列(如本文所定义)在提供、构建针对IL-23R和/或针对包括IL-23R亚单位的受体(诸如IL-23的同源受体)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-23R序列(一个或多个)和至少一个也针对IL-23R(但针对IL-23R的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-编码IL-23R序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对IL-23R和/或针对包括IL-23R亚单位的受体(诸如IL-23的同源受体)的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，所述双互补位型构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-23R序列(一个或多个)和至少一个也针对IL-23R(但针对IL-23R的不同表位或抗原决定簇)的另外的结合结构域或结合单位，和任选地一个或多个另外的结合结构域或结合单位；
-IL-23R序列(如本文所定义)在提供、构建针对包括IL-23R亚单位的异二聚体受体(诸如IL-23的同源受体)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-23R序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与IL-23R不同的所述异二聚体受体的另一亚单位；
-编码IL-23R序列(如本文所定义)的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码针对包括IL-23R亚单位的异二聚体受体(诸如IL-23的同源受体)的多特异性(和特别地，双特异性)构建体、蛋白和/或多肽的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述IL-23R序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位，并且其中至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与IL-23R不同的所述异二聚体受体的另一亚单位。
在上述各方面/应用的任意一项包括编码单价氨基酸序列的核苷酸序列和/或核酸在提供、构建编码多价、多特异性和/或多互补位型构建体(诸如双互补位型构建体)的核苷酸序列和/或核酸中和/或作为其一部分的应用时，所述方面/应用任选地进一步包括由此获得的核苷酸序列和/或核酸在制备(例如，通过适当的表达，如本文进一步所述)由所述核苷酸序列和/或核酸编码的多价、多特异性和/或多互补位型构建体中的应用。
更概括地，在本发明的一个方面，提供了针对(如本文所定义)异二聚体蛋白、多肽、配体或受体(或其他“靶标”)的(“多特异性”，如本文所定义)多肽构建体，所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-至少第一亚单位；
和
-至少第二亚单位；
其中所述多肽构建体至少包括针对所述第一亚单位的第一结合结构域或结合单位和针对所述第二亚单位的第二结合结构域或结合单位。
特别地，在本发明的此方面，提供了针对(如本文所定义)第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的(“多特异性”，如本文所定义)多肽构建体，所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-至少在所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体和至少第二不同的异二聚体蛋白、多肽、配体或受体之间共有的第一亚单位；
和
-至少在所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体和所述第二不同的异二聚体蛋白、多肽、配体或受体之间不共有的第二亚单位；
其中所述多肽构建体至少包括针对所述第一(即，共有的)亚单位的第一结合结构域或结合单位和针对所述第二(即，不共有的)亚单位的第二结合结构域或结合单位。
在本发明的另一个方面，提供了针对(如本文所定义)异二聚体蛋白、多肽、配体或受体(或其他“靶标”)的多肽构建体，所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-至少第一亚单位；
和
-至少第二亚单位；
其中所述多肽构建体是至少包括针对所述第一亚单位的第一结合结构域或结合单位和也针对所述第一亚单位但针对所述第一亚单位上的不同表位、抗原决定簇或结合位点的不同于所述第一结合结构域或结合单位的第二结合结构域或结合单位的(双互补位型-如本文所定义)构建体。
在本发明的另一个方面，提供了针对(如本文所定义)异二聚体蛋白的多肽构建体，所述异二聚体蛋白是受体的配体并且包括：
-至少第一亚单位；
和
-至少第二亚单位；
其中所述多肽构建体是至少包括针对所述第一亚单位的第一结合结构域或结合单位和不同于所述第一结合结构域或结合单位的第二结合结构域或结合单位的(双互补位型-如本文所定义)构建体，其中所述第二结合结构域或结合单位也针对所述第一亚单位但针对所述第一亚单位上的不同表位、抗原决定簇或结合位点。特别地，但非限制，在这样的(双互补位型)构建体中，所述第一结合结构域或结合单位可以这样的，即其能够调节(如本文所定义)、阻断、抑制和/或中和所述异二聚体蛋白与其(同源)受体的结合，并且第二结合结构域或结合单位可以是这样的，即其基本上不调节(如本文所定义)、阻断、抑制和/或中和所述异二聚体蛋白与其(同源)受体的结合(或反之亦然)。
在本发明的另一个方面中，提供了针对(如本文所定义)异二聚体蛋白的多肽构建体，所述异二聚体蛋白是受体的配体并且包括：
-至少在所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体和至少第二不同的异二聚体蛋白、多肽、配体或受体之间共有的第一亚单位；
和
-至少在所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体和所述第二不同的异二聚体蛋白、多肽、配体或受体之间不共有的第二亚单位；
其中所述多肽构建体是至少包括针对所述第二(即，不共有的)亚单位的第一结合结构域或结合单位和不同于所述第一结合结构域或结合单位的第二结合结构域或结合单位的(双互补位型-如本文所定义)构建体，其中所述第二结合结构域或结合单位也针对所述第二(即，不共有的)亚单位但针对所述第二亚单位上的不同表位、抗原决定簇或结合位点。特别地，但非限制，在这样的(双互补位型)构建体中，所述第一结合结构域或结合单位可以这样的，即其能够调节(如本文所定义)、阻断、抑制和/或中和所述异二聚体蛋白与其(同源)受体的结合，并且第二结合结构域或结合单位可以是这样的，即其基本上不调节(如本文所定义)、阻断、抑制和/或中和所述异二聚体蛋白与其(同源)受体的结合(或反之亦然)。
在本发明的另一个方面，提供了针对(如本文所定义)异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的多肽构建体，所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-至少第一亚单位；
和
-至少第二亚单位；
其中所述多肽构建体是至少包括针对所述第一亚单位的第一结合结构域或结合单位和不同于所述第一结合结构域或结合单位的第二结合结构域或结合单位的(双互补位型-如本文所定义)构建体，其中所述第二结合结构域或结合单位也针对所述第一亚单位但针对所述第一亚单位上的不同表位、抗原决定簇或结合位点。
在上述的多特异性(和特别地，双特异性)和多互补位型(和特别地，双互补位型)构建体中，所述第一和第二结合结构域通常可以如本文大体上对本发明的氨基酸序列所述的那样(例如，就它们所针对的亚单位的亲和力、特异性等而言)。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述的那样，在所述构建体中存在的第一、第二和任选地另一些结合结构域或结合单位优选地是这样的，即它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以是例如包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，包括四个构架区和三个CDR的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体、单结构域抗体(single domain antiboies)、VHH、“dAb”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们适当的片段。
基于本文的公开内容，对于上述多特异性(和特别地，双特异性)和多互补位型(和特别地双互补位型)构建体的适当的异二聚体“靶标”将是显而易见的；应用针对这些靶标的上述构建体的优点也将是显而易见的。
例如，但非限制，异二聚体蛋白、多肽、配体或受体可以是为异二聚体受体的配体的异二聚体蛋白，并且可特别地是异二聚体细胞因子(例如，IL-12，IL-23，IL-27或IL-35)。此外，例如，异二聚体蛋白，多肽，配体或受体可以是为异二聚体配体的受体的异二聚体配体，并且可以特别地是异二聚体细胞因子的受体(例如，IL-12，IL-23，IL-27或IL-35的受体)。
特别地，根据本发明，所述异二聚体蛋白，配体或多肽可以是异二聚体细胞因子或细胞因子(和特别是异二聚体细胞因子)的(异二聚体)受体。
基于本文的公开内容，上述构建体的其他应用和优点对于专业技术人员来说将变得显而易见。
本发明的一些优选的但非限制性的构建体为：
a)包括至少一个p19+序列(如本文所定义)和至少一个p19-序列(如本文所定义)的构建体；
b)包括至少一个p19+序列(如本文所定义)和至少一个p40+序列(如本文所定义)的构建体；
c)包括至少一个p19+序列(如本文所定义)和至少一个p40-序列(如本文所定义)的构建体；
d)包括至少一个p19-序列(如本文所定义)和至少一个p40+序列(如本文所定义)的构建体；
e)包括至少一个p35序列(如本文所定义)和至少一个p40+序列(如本文所定义)的构建体；
f)包括至少一个p35序列(如本文所定义)和至少一个p40-序列(如本文所定义)的构建体；
g)包括至少一个p40+序列(如本文所定义)和至少一个p40-序列(如本文所定义)的构建体；
h)包括至少两个(相同或不同的)p19-序列(如本文所定义)的构建体，使得其能够(例如，但非限制，通过空间相互作用和/或经由其中存在的(一个或多个)接头)调节、中和、阻断和/或抑制包括p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合，并且特别地能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与IL-23R的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)
i)包括至少两个(相同或不同的)p40-序列的构建体，使得其能够(例如，但非限制，通过空间相互作用和/或经由其中存在的(一个或多个)接头)调节、中和、阻断和/或抑制包括p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合，并且特别地能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与IL-23R的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)和/或调节、中和、阻断和/或抑制IL-12与其受体的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)；
j)包括至少一个IL-12Rb1序列(如本文所定义)和至少一个IL-12Rb2序列(如本文所定义)的构建体；
k)包括至少一个IL-12Rb1序列(如本文所定义)和至少一个IL-23R序列(如本文所定义)的构建体；
并且这些构建体、编码它们的核苷酸序列、包含它们的剂型和制剂以及它们的制备和各种用途(所有如本文进一步所述)形成本发明的其他方面。
基于本文的公开内容，对于专业技术人员来说这些构建体(和/或可用作结合结构域和/或结合单位以提供这些构建体的本发明的氨基酸序列)的实例，以及上述构建体的可能用途和优点将变得显而易见。例如，并且不限于：
-在上面a)中所提到的构建体：(i)将能够调节、中和、阻断和/或抑制包括p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合，并且特别地能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与IL-23R的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)；和/或(ii)与不包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如，IL-12，IL-27或IL-35)相比，通常将对IL-23特异(如本文所定义)；和/或(iii)本身与p19结合的抗体亲抗原性和特异性高于相应的p19+序列(或另一p19+序列)；和/或
-在上面b)、c)和d)中所提到的构建体：(i)将能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与IL-23的(同源)受体的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)；和/或(ii)与IL-12相比，通常将对IL-23特异(如本文所定义)(并且与可能包括p19或p40亚单位的其他异二聚体细胞因子相比，也期望对IL-23特异)；和/或(iii)本身与IL-23结合的抗体亲抗原性和特异性高于相应的p19+序列(或另一p19+序列)；和/或(iv)通常优于仅包含p19-序列和p40-序列的类似构建体；
-在上面e)和f)中所提到的构建体：(i)将能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-12与IL-12的(同源)受体的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)；和/或(ii)与IL-23相比，通常将对IL-12特异(如本文所定义)(并且与可能包括p35或p40亚单位的其他异二聚体细胞因子相比，也期望对IL-12特异)；和/或(iii)本身与IL-12结合的抗体亲抗原性和特异性高于相应的p35序列(或另一p35序列)；
-在上面g)中所提到的构建体：(i)将能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与IL-23的(同源)受体的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)以及IL-12与IL-12的(同源)受体的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)；(ii)本身与p40结合的抗体亲抗原性和特异性高于相应的p40+序列(或另一p40+序列)；
-在上面h)中所提到的构建体：(i)将能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与IL-23的(同源)受体的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)；和/或与不包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(诸如，IL-12，IL-27或IL-35)相比，通常将对(如本文所定义)IL-23特异；和/或(iii)本身与p23结合的抗体亲抗原性和特异性高于各个相应的p19-序列(或另一单体p19-序列或p19+序列)；
-在上面i)中所提到的构建体：(i)将能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与IL-23的(同源)受体的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)以及IL-12与IL-12的(同源)受体的结合(例如，实施例19或22中的α-筛选测定)；和(ii)本身与p40结合的抗体亲抗原性和特异性高于各个相应的p40-序列(或另一单体p40-序列或p40+序列)；
-在上面j)中所提到的构建体：(i)与IL-23的同源受体相比，将对IL-12的同源受体特异；和(ii)与IL-12的同源受体结合的抗体亲抗原性和特异性高于单体IL-12Rb2序列；
-在上面k)中所提到的构建体：(i)与IL-12的同源受体相比，将对IL-23的同源受体特异；和(ii)与IL-23的同源受体结合的抗体亲抗原性和特异性高于单体IL-23R序列；
此外，如本文进一步所述，在上面j)中所提到的构建体：(i)可充当由IL-12的同源受体介导的信号传导的激动剂(在此情况下，与由IL-23的同源受体介导的信号传导所介导的信号传导相比，期望该构建体对由IL-12的同源受体介导的信号传导特异，或可基本上不能够充当由IL-23的同源受体介导的信号传导的激动剂)；和/或(ii)可以能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-12与其同源受体的结合和/或可以另外地能够防止、调节、中和、阻断和/或抑制所述受体介导的信号传导，没有所述构建体的存在，所述受体介导的信号传导将通过IL-12与其同源受体的结合触发(即，充当IL-12和/或由IL-12的同源受体介导的信号传导的拮抗剂)，并且如此与IL-23的同源受体相比，对IL-12的同源受体特异(和/或与IL-12的同源受体结合的抗体亲抗原性和/或特异性高于IL-23的同源受体)。
类似地，如本文进一步所述，在上面k)中所提到的构建体：(i)可充当由IL-23的同源受体介导的信号传导的激动剂(在此情况下，与由IL-12的同源受体介导的信号传导所介导的信号传导相比，期望该构建体对由IL-23的同源受体介导的信号传导特异，或可基本上不能够充当由IL-12的同源受体介导的信号传导的激动剂)；和/或(ii)可以能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与其同源受体的结合和/或可以另外地能够防止、调节、中和、阻断和/或抑制所述受体介导的信号传导，没有所述构建体的存在，所述受体介导的信号传导将通过IL-23与其同源受体的结合触发(即，充当IL-23和/或由IL-23的同源受体介导的信号传导的拮抗剂)，并且如此与IL-12的同源受体相比，对IL-23的同源受体特异(和/或与IL-12的同源受体结合的抗体亲抗原性和/或特异性高于IL-23的同源受体)。
从本文的进一步公开内容，对于专业技术人员来说本发明的氨基酸序列和多肽的其他应用和用途将变得显而易见。
一般地，本发明的一个目的是提供药理学活性剂，包括其的组合物，它们可用于与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的疾病和病症以及本文提到的其他疾病和病症的诊断、预防和/或治疗中；以及提供用于这些疾病和病症的诊断、预防和/或治疗的方法，这些方法涉及这些药剂和组合物的施用和/或应用。
特别地，本发明的一个目的是提供与本领域中目前所用的和/或所知的药剂、组合物和/或方法相比具有某些优点的此类药理学活性剂、组合物和/或方法。这些优点将从下文的进一步描述而变得显而易见。
更特别地，本发明的一个目的是提供可以用作药理学活性剂的治疗性蛋白，以及包括其的组合物，其用于诊断、预防和/或治疗与异二聚体细胞因子和它们的受体相关以及本文提及的其他的疾病和病症；和提供用于诊断、预防和/或治疗所述疾病和病症的方法，所述方法涉及所述治疗性蛋白和组合物的施用和/或应用。
因此，本发明的具体目的是提供针对(如本文所定义)异二聚体细胞因子和/或它们的受体、特别是针对来自温血动物的异二聚体细胞因子和/或它们的受体、更特别是针对来自哺乳动物的异二聚体细胞因子和/或它们的受体、并且尤其是针对人异二聚体细胞因子和/或它们的受体的氨基酸序列；并且提供包括至少一种所述氨基酸序列或基本上由其组成的蛋白和多肽。
特别地，本发明的具体目的是提供适合在温血动物、并且特别是在哺乳动物、且更特别是在人中用于预防、治疗和/或诊断应用的所述氨基酸序列和所述蛋白和/或多肽。
更特别地，本发明的具体目的是提供可以在温血动物、特别是在哺乳动物、且更特别是在人中用于预防、治疗、减轻和/或诊断一种或多种与异二聚体细胞因子和/或它们的受体相关和/或由异二聚体细胞因子和/或它们的受体介导的疾病、病症或病况(如本文所提及的疾病、病症和病况)的所述氨基酸序列和所述蛋白和/或多肽。
本发明还有一个具体目的是提供可以用于制备用于预防和/或治疗温血动物、特别是哺乳动物、且更特别是人中的一种或多种与异二聚体细胞因子和/或它们的受体相关的和/或由异二聚体细胞因子和/或它们的受体介导的疾病、病症或病况(如本文所提及的疾病、病症和病况)的药物或兽医用组合物的所述氨基酸序列和所述蛋白和/或多肽。
在本发明中，通常，这些目的通过利用本文所述的氨基酸序列、蛋白、多肽和组合物实现。
一般地，本发明提供针对(如本文所定义)和/或可以特异性结合(如本文所定义)异二聚体细胞因子和/或它们的受体的氨基酸序列；以及包括至少一个所述氨基酸序列的化合物和构建体、且特别是蛋白和多肽。所述氨基酸序列优选地形成单个(抗原)结合结构域或结合单位和/或基本上由其组成，和/或能够形成单个(抗原)结合结构域或结合单位(任选地在适当的折叠后)和/或起到单个(抗原)结合结构域或结合单位的作用(任选地在适当的折叠后)，或是原样的和/或作为如本文进一步所述的本发明的蛋白或多肽的一部分。
更特别地，本发明提供可以以如本文所定义的亲和力(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合的氨基酸序列(诸如本文所述的p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)；以及包括至少一个所述氨基酸序列的化合物和构建体、且特别是蛋白和多肽。
特别地，本发明的氨基酸序列和多肽优选是这样的，即，它们：
-以10-5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升或更小、并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合；
和/或是这样的，即，它们：
-以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的kon-速率与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合；
和/或是这样的，即，它们：
-以1s-1(t1/2＝0.69s)-10-6s-1(假定具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的koff速率与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。
优选地，本发明的单价氨基酸序列(或基本上包含仅一个本发明的氨基酸序列的多肽)优选是这样的，即，它将以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和力与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。
对于本发明的氨基酸序列或多肽与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合的一些优选的IC50值将从本发明的进一步描述和实施例中变得显而易见。
对于与异二聚体细胞因子和/或它们的受体合，本发明的氨基酸序列通常将在其氨基酸序列内包含一个或多个氨基酸残基、或氨基酸残基的一个或多个序列(即，每个“序列(stretch)”包括彼此相邻或彼此紧邻的两个(或多个)氨基酸残基，即，在该氨基酸序列的一级或三级结构上)，通过其本发明的氨基酸序列可以与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合，因此所述氨基酸残基或氨基酸残基的序列形成结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体的“位点”(本文还称为“抗原结合位点”)。
本发明提供的氨基酸序列优选地基本上采用分离形式(如本文所定义)、或形成本发明的蛋白或多肽的一部分(如本文所定义)，其可以包括一个或多个本发明的氨基酸序列或基本上由其组成，并且其可以任选地还包括一个或多个其它的氨基酸序列(全部任选地通过一个或多个适当的接头连接)。例如，并且不限于，本发明的一个或多个氨基酸序列可以用作在这样的蛋白或多肽内的结合单位，所述蛋白或多肽可以任选地包含可以充当结合单位的一个或多个其它的氨基酸序列(即，针对除异二聚体细胞因子和/或它们的受体外的一个或多个其它靶标)，以便分别提供单价、多价或多特异性的本发明的多肽，全如本发明所述。这样的蛋白或多肽还可以采用基本上分离的形式(如本文所定义)。
因此，本发明的氨基酸序列(诸如如本文所述的p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)和多肽(诸如----例如本文所述的多价的、多特异性的和/或双互补位型构建物，其包括至少一个p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和/或IL-23序列)优选地基本上由不通过二硫键与任一另一氨基酸序列或链连接(但是其可以或可以不包含一个或多个分子内二硫键。例如，已知纳米抗体----如本文所述----有时可以含有在CDR3和CDR1或FR2之间的二硫键)的单个氨基酸链组成。然而，应该注意，一个或多个本发明的氨基酸序列可以彼此连接和/或与其他氨基酸序列连接(例如，通过二硫键)，以提供也可以用于本发明的肽构建体(例如，Fab’片段，F(ab’)2片段，ScFv构建体，“双抗体”和其他多特异性构建体。例如，参考Holliger和Hudson，Nat Biotechnol.(自然生物技术)2005年9月；23(9)：1126-36的综述)。
一般地，当本发明的氨基酸序列(或包括其的化合物、构建体或多肽)意欲施用给受试者时(例如，为了如本文所述的治疗和/或诊断目的)，优选其是在所述受试者内天然不存在的氨基酸序列；或当它在所述受试者内天然存在时，采用基本上分离的形式(如本文所定义)。
专业技术人员还应该清楚，对于药物应用，本发明的氨基酸序列(以及包括其的化合物、构建体和多肽)优选地针对人异二聚体细胞因子和/或它们的受体；而对于兽医用目的，本发明的氨基酸序列和多肽优选地针对来自待治疗的物种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体，或至少与来自待治疗的物种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体交叉反应。
此外，本发明的氨基酸序列可以任选地，并且除了所述至少一个针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合的结合位点之外，包含针对其它抗原、蛋白或靶标结合的一个或多个其它的结合位点。
本发明的氨基酸序列和多肽的功效、以及包括其的组合物的功效可以使用任何适合的体外测定、基于细胞的测定、体内测定和/或本身已知的动物模型、或它们的任何组合进行检测，这取决于所涉及的具体的疾病或病症。适当的体外测定对于专业技术人员来说将是清楚的，并且例如，包括体外测定诸如Biacore(见，例如实施例12，20或23)；α-筛选(见，例如实施例14，实施例20或实施例22)，FLIPR，ELISA(见例如实施例10)和竞争性ELISA(见例如实施例11)，基于细胞的测定诸如激活PBMC的增殖(用于测量IL-12介导的信号传导的调节)，激活的脾细胞的IL17产生(用于测量IL-23介导的信号传导的调节，见例如Aggarwal，Journal of Biological Chemistry(生物化学杂志)，278，3，2003，1910-1914)；以及用于测量TH1的分化和/或TH17细胞的抑制的测定(用于测量IL-23介导的信号传导的调节)，以及用于炎性疾病和病症的各种动物模型，诸如用于自身免疫性炎症的模型诸如EAE(实验性过敏性脑脊髓炎)，CIA(胶原诱发性关节炎)，IL12诱发的新蝶呤释放，和小鼠脾IL17产生；小鼠和大鼠中的IBD模型诸如葡聚糖硫酸盐诱发的溃疡性结肠炎和二硝基氟苯诱发的局限性肠炎，以及在下面试验部分和本文引用的现有技术中所使用的测定和动物模型。基于本文的公开内容，并且取决于所涉及的(一种或多种)异二聚体细胞因子和/或受体，专业技术人员通常能够为异二聚体细胞因子或它们的受体选择适当的体外测定、细胞测定或动物模型以检测本发明的氨基酸序列和多肽，用于检测它们调节异二聚体细胞因子和它们的受体和/或它们所参与的信号传导、通路、生物学机制和效应的能力；以及它们对与异二聚体细胞因子和/或它们的受体相关的一种或多种疾病和病症的治疗和/或预防作用。
并且，根据本发明，针对来自第一温血动物物种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的氨基酸序列和多肽可以或可以不表现出与来自一种或多种其它温血动物物种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的交叉反应性。例如，针对人异二聚体细胞因子和/或它们的受体的氨基酸序列和多肽可以或可以不表现出与来自一种或多种其它灵长类物种(诸如，不限于，来自猕猴属(Macaca)的猴子(诸如，并且特别地，食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))和/或恒河猴(恒河猴(Macaca mulatta)))和狒狒(豚尾狒狒(Papio ursinus)))的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的交叉反应性，和/或与来自通常用于疾病的动物模型中(例如小鼠、大鼠、兔、猪或狗)、且特别是用于与异二聚体细胞因子和/或它们的受体相关的疾病和病症的动物模型中的一种或多种动物物种(诸如本文提及的物种和动物模型)的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的交叉反应性。在这一方面，对于专业技术人员应该清楚，从药物开发观点来看，所述交叉反应性，当存在时，可能具有优点，因为它允许所述针对人异二聚体细胞因子和/或它们的受体的氨基酸序列和多肽在所述疾病模型中被检测到。
更一般地，与来自多个哺乳动物物种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体交叉反应的本发明的氨基酸序列和多肽将通常有利于用于兽医应用，原因在于它将允许在多种物种之间使用相同的氨基酸序列或多肽。因此，在本发明的范围内还包括，针对来自一个动物物种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的氨基酸序列和多肽(诸如针对人异二聚体细胞因子和/或它们的受体的氨基酸序列和多肽)可以用于治疗另一个动物物种，只要所述氨基酸序列和/或多肽的应用在待治疗的物种中提供所需要的作用。
本发明在其最广泛意义上也不特别限于或限定于本发明的氨基酸序列和多肽所针对的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的特异性抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚单位或构象(confirmation)(在适用时)。在本发明的一个特别的方面，氨基酸序列和多肽(至少)针对异二聚体细胞因子或受体上的相互作用位点(如本文所定义)。
如本文进一步所述，本发明的多肽可含有两个或多个针对其期望的(同源的)同源靶标(诸如异二聚体细胞因子、其受体或任一者的亚单位)的本发明的氨基酸序列。通常，所述多肽与所述靶标的抗体亲抗原性将高于本发明的单个氨基酸序列。此类多肽可以例如包括两个针对所述靶标的相同的抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚单位或构象(在适用时)(可以是或不是相互作用位点)的本发明的氨基酸序列；或包括至少一个本发明的“第一”氨基酸序列，其针对所述靶标的第一相同的抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚单位或构象(在适用时)(可以是或不是相互作用位点)；以及至少一个本发明的“第二”氨基酸序列，其针对与所述第一不同的第二抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚单位或构象(在适用时)(并且同样可以是或不是相互作用位点)。优选地，在本发明的所述“双互补位型”多肽中，至少一个本发明的氨基酸序列针对相互作用位点(如本文所定义)，尽管本发明在其最广泛的意义上不限于此。
此外，当所述靶标为结合对(例如，受体-配体结合对)的一部分时，所述氨基酸序列和多肽可以是这样的，即，它们与同源的结合配偶体(例如，配体，受体或其他结合配偶体，在适用时)竞争与所述靶标的结合，和/或是这样的，即，它们(完全地或部分地)中和所述结合配偶体与所述靶标的结合。
在适用时，本发明的氨基酸序列或多肽可以结合于异二聚体细胞因子和/或它们的受体的两个以上的抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚单位或构象，这也在本发明范围内。在此情况下，与本发明的氨基酸序列和/或多肽结合的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的抗原决定簇、表位、部分、结构域或亚单位可以基本上是相同的(例如，如果异二聚体细胞因子和/或它们的受体包含重复的结构基序或以多聚体形式存在)，或可以是不同的(并且在后一种情况下，本发明的氨基酸序列和多肽可以以可能相同或不同的亲和力和/或特异性结合于异二聚体细胞因子和/或它们的受体的所述不同的抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚单位)。此外，例如，当异二聚体细胞因子和/或它们的受体以活化构象存在和以无活性构象存在时，本发明的氨基酸序列和多肽可以结合于这些构象中的任一种，或者可以结合于这两种构象(即，以可能是相同的或不同的亲和力和/或特异性)。此外，例如，本发明的氨基酸序列和多肽可以这样地结合于异二聚体细胞因子和/或它们的受体的构象，即，在所述构象中其与相关配体结合，可以这样地结合于异二聚体细胞因子和/或它们的受体的构象，即，在所述构象中其不与相关配体结合，或者可以结合于所述两种构象(同样以可能是相同的或不同的亲和力和/或特异性)。
还期望本发明的氨基酸序列和多肽通常将结合于异二聚体细胞因子和/或它们的受体的所有天然存在的或合成的类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段；或至少结合于异二聚体细胞因子和/或它们的受体的那些类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段，它们包含与在异二聚体细胞因子和/或它们的受体中(例如在野生型异二聚体细胞因子和/或它们的受体中)与本发明的氨基酸序列和多肽结合的(一个或多个)抗原决定簇或(一个或多个)表位基本上相同的一个或多个抗原决定簇或表位。同样地，在此情况下，本发明的氨基酸序列和多肽可以以本发明的氨基酸序列与(野生型)异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合的亲和力和特异性相同或不同(即，高于或低于其)的亲和力和/或特异性结合于所述类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段。本发明的氨基酸序列和多肽结合于异二聚体细胞因子和/或它们的受体的一些类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段而不与结合于另一些，这也包括在本发明的范围内。
本发明的氨基酸序列、多肽和组合物通常可用来调节(如本文所定义)由异二聚体细胞因子和/或它们的受体所介导的信号传导，调节(如本文所定义)异二聚体细胞因子和/或它们的受体参与其中的生物学通路，和/或调节(如本文所定义)与异二聚体细胞因子、它们的受体、这些信号传导和/或这些通路相关的生物学机制、反应和效应(所有前面所述在本文中也总称为“异二聚体细胞因子介导的信号传导”)。
就此而言，本发明的氨基酸序列、多肽和组合物通常可用来调节施用了(即，以治疗相关量)本发明的一个或多个氨基酸序列、多肽和组合物的受试者中的免疫系统和/或一个或多个特异性免疫应答。
如本文使用的术语“异二聚体细胞因子”在其最广泛意义上通常包括任何异二聚体细胞因子，即，包括至少两个，且更优选地仅两个亚单位的细胞因子。
特别地，如本文使用的术语“异二聚体细胞因子”包涵与细胞介导的(TH1)免疫相关的异二聚体细胞因子，尽管本发明在其最广泛意义上不限于此，并且还包涵与体液(TH2)免疫相关的异二聚体细胞因子。
根据一个具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对选自下列的异二聚体细胞因子：包括p40亚单位或p40样亚单位，诸如p40亚单位(存在于例如IL-12和IL-23中)或埃巴病毒(EBV)诱导分子3(EBI3，存在于例如IL-27和IL-35中)的异二聚体细胞因子。
根据另一个具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对选自下列的异二聚体细胞因子：包括p19亚单位或p19样亚单位，诸如p19亚单位(存在于例如IL-23中)，p35亚单位(存在于例如IL-12和IL-35中)，或p28亚单位(存在于例如IL-27中)或它们的同源物的异二聚体细胞因子。
例如，本发明的氨基酸序列和多肽可针对这样的异二聚体细胞因子，其将包括至少一个p19亚单位或p19样亚单位和至少一个p40亚单位或p40样亚单位。
根据一个甚至更具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对选自IL-12、IL-23、IL-27和/或IL-35的异二聚体细胞因子。
在一个具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对IL-23(即，针对p40，p19或两者)。本发明的这些氨基酸序列和多肽(以及包括它们的组合物)可如本文进一步所述，并且可用于预防和治疗与IL-23，IL-23受体和/或IL-23介导的信号传导相关的病症。同样参考上面引用的现有技术。此外，如本文所提及的，针对IL-23，并且特别是与IL-12相比对IL-23特异(如本文所定义)的那些本发明的氨基酸序列和多肽，比针对IL-12的本发明的氨基酸序列和多肽具有治疗应用上的优势。此外，如本文所提及的，针对p19，并且特别是与p35和p40相比对p19特异(如本文所定义)的那些本发明的氨基酸序列和多肽，比针对p35和p40的本发明的氨基酸序列和多肽具有治疗应用上的优势。
根据另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽(如本文所定义)。这些氨基酸序列和/或多肽可如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的两个亚单位的“双特异性”(如本文所定义)多肽。这些多肽可如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的一个亚单位的“双互补位型”(如本文所定义)多肽。这些多肽可如本文进一步所述。
特别地，但非限制，本发明提供针对异二聚体细胞因子的至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽，其中所述异二聚体细胞因子与细胞介导的(TH1)免疫相关。
例如，在一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽，其中所述异二聚体细胞因子选自包括p40亚单位或p40样亚单位，诸如p40亚单位(存在于例如IL-12和IL-23中)或埃巴病毒(EBV)诱导分子3(EBI3，存在于例如IL-27和IL-35中)的异二聚体细胞因子。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供这样的氨基酸序列和多肽，其针对p40亚单位或p40样亚单位，诸如针对下列亚单位之一：p40和/或EBI3，或前述各种亚单位的突变体、变体、等位基因或同源物。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽，其中所述异二聚体细胞因子选自包括p19亚单位或p19样亚单位，诸如p19亚单位(存在于例如IL-23中)，p35亚单位(存在于例如IL-12和IL-35中)，p28亚单位(存在于例如IL-27中)或前述各种亚单位的突变体、变体、等位基因或同源物的异二聚体细胞因子。这些氨基酸序列和/多肽可如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供这样的氨基酸序列和多肽，其针对p19亚单位或p19样亚单位，诸如针对下列亚单位之一：p19，p35和/或p28，或前述各种亚单位的突变体、变体、等位基因或同源物。这些氨基酸序列和/多肽可如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供这样的氨基酸序列和多肽，其针对下列异二聚体细胞因子之一的至少一个亚单位：IL-12，IL-23，IL-27和/或IL-35。这些氨基酸序列和/多肽可如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-12或IL-12的至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽，所述氨基酸序列和/多肽可如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-23或IL-23的至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽，所述氨基酸序列和/多肽可如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-27或IL-27的至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽，所述氨基酸序列和/多肽可如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-35或IL-35的至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽，所述氨基酸序列和/多肽可如本文进一步所述。
例如，针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35的所述多肽可包括本发明的单个氨基酸序列或基本上由其组成(诸如纳米抗体)，所述氨基酸序列分别针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35，并且特别地针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35上的相互作用位点(如本文所定义)。当该多肽包括两个或多个分别针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35的本发明的氨基酸序列(任选地经一个或多个适当的接头彼此连接，如本文所述)时，这些氨基酸序列可分别针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35上的相同的表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基的序列，或分别针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35上的不同的表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基的序列。例如，该多肽可包括一个或多个分别针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35上的相互作用位点(如本文所定义，并且特别是受体结合位点)的本发明的氨基酸序列，和一个或多个分别针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35上的非相互作用位点的位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基的序列的本发明的氨基酸序列。该多肽还可包括一个或多个分别针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35上的相互作用位点(如本文所定义，并且特别是受体结合位点)的本发明的氨基酸序列，和一个或多个分别针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35上的不同的相互作用位点(如本文所定义)的本发明的氨基酸序列。还有可能，该多肽包括两个或多个分别针对IL-12，IL-23，IL-27或IL-35上的相同相互作用位点(如本文所定义，并且特别是受体结合位点)的本发明的氨基酸序列。
例如，该多肽可包括一个或多个可分别调节IL-12，IL-23，IL-27或IL-35与其受体的结合的本发明的氨基酸序列(诸如一个或多个纳米抗体)；和/或一个或多个分别不调节(并且特别是抑制)IL-12，IL-23，IL-27或IL-35与其受体的结合的本发明的氨基酸序列(诸如一个或多个纳米抗体)。例如，该多肽可包括一个可分别调节IL-12，IL-23，IL-27或IL-35与其受体的结合的本发明的氨基酸序列(诸如一个纳米抗体)和一个分别不调节IL-12，IL-23，IL-27或IL-35与其受体的结合的本发明的氨基酸序列(诸如一个纳米抗体)。
本发明的所述多肽的实例将从本文进一步的描述中变得显而易见。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对p19的氨基酸序列和多肽(本文也称为“p19序列”)。所述氨基酸序列和/或多肽可如本文进一步所述(例如，所述氨基酸序列可以是“p19+序列”或“p19-序列”)。例如，该多肽可以是含有一个或多个针对p19的氨基酸序列，诸如一个或多个针对p19的纳米抗体的多肽。期望本发明的所述多肽与IL-12，IL-27和/或IL-35相比对IL-23和含有p19的其他异二聚体细胞因子有选择性。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对p35的氨基酸序列和多肽。所述氨基酸序列和/或多肽可如本文进一步所述。例如，该多肽可以是含有一个或多个针对p35的氨基酸序列，诸如一个或多个针对p35的纳米抗体的多肽。期望本发明的所述多肽与IL-12和/或IL-27相比对IL-12和/或IL-35和含有p40的其他异二聚体细胞因子有选择性。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对p28的氨基酸序列和多肽。所述氨基酸序列和/或多肽可如本文进一步所述。例如，该多肽可以是含有一个或多个针对p28的氨基酸序列，诸如一个或多个针对p28的纳米抗体的多肽。期望本发明的所述多肽与IL-12，IL-23和/或IL-35相比对IL-27和含有p28的其他异二聚体细胞因子有选择性。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对p40的氨基酸序列和多肽。所述氨基酸序列和/或多肽可如本文进一步所述(例如，所述氨基酸序列可以是“p40+序列”或“p40-序列”)。例如，该多肽可以是含有一个或多个针对p40的氨基酸序列，诸如一个或多个针对p40的纳米抗体的多肽。期望本发明的所述多肽与IL-27和/或IL-35相比对IL-12和/或IL-23和含有p40的其他异二聚体细胞因子有选择性。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对EBI3的氨基酸序列和多肽。所述氨基酸序列和/或多肽可如本文进一步所述。例如，该多肽可以是含有一个或多个针对EBI3的氨基酸序列，诸如一个或多个针对EBI3的纳米抗体的多肽。期望本发明的所述多肽与IL-12和/或IL-23相比对IL-27和/或IL-23和含有EBI3的其他异二聚体细胞因子有选择性。
例如，针对p19，p35，p28，p40或EBI3的所述多肽可包括本发明的单个氨基酸序列或基本上由其组成(诸如纳米抗体)，所述氨基酸序列分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3，并且特别地针对p19，p35，p28，p40或EBI3上的相互作用位点(如本文所定义)。当该多肽包括两个或多个分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3的本发明的氨基酸序列(任选地经一个或多个适当的接头彼此连接，如本文所述)时，这些氨基酸序列可分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3上的相同的表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基的序列，或分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3上的不同的表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基的序列。例如，该多肽可包括一个或多个分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3上的相互作用位点(如本文所定义，并且特别是参与到其中存在所述亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合中的位点)的本发明的氨基酸序列，和一个或多个分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3上的非相互作用位点的位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基的序列的本发明的氨基酸序列。该多肽还可包括一个或多个分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3上的相互作用位点(如本文所定义，并且特别是受体结合位点)的本发明的氨基酸序列，和一个或多个分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3上的不同的相互作用位点(如本文所定义)的本发明的氨基酸序列。还有可能，该多肽包括两个或多个分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3上的相同相互作用位点(如本文所定义，并且特别是参与到其中存在所述亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合中的位点)的本发明的氨基酸序列。
例如，该多肽可包括一个或多个分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3，并且可调节(并且特别是抑制)其中存在所述亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的本发明的氨基酸序列(诸如一个或多个纳米抗体)；和/或一个或多个分别针对p19，p35，p28，p40或EBI3，但不能够调节其中存在所述亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的本发明的氨基酸序列(诸如一个或多个纳米抗体)。
同样，本发明的所述多肽的实例将从本文进一步的描述中变得显而易见。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子中存在的两个不同的亚单位的氨基酸序列和(特别是)多肽。特别地，本发明提供针对异二聚体细胞因子(和特别是在来自IL-12家族的异二聚体细胞因子，诸如IL-12，IL-23，IL-27和IL-35)中存在的两个不同的亚单位的氨基酸序列和(特别是)多肽。例如，所述氨基酸序列或多肽可针对(a)p19或p19样亚单位，诸如针对p19，p35或p28；以及针对异二聚体细胞因子(诸如IL-12，IL-23，IL-27和IL-35)中存在的至少一个其他的亚单位；或(b)针对p40或p40样亚单位，诸如针对p40或EBI-3以及针对异二聚体细胞因子(诸如IL-12，IL-23，IL-27和IL-35)中存在的至少一个其他的亚单位。
更特别地，本发明提供针对下列的氨基酸序列和(特别是)多肽：(i)至少一个p19或p19样亚单位，诸如针对p19，p35或p28；以及(ii)至少一个p40或p40样亚单位，诸如针对p40或EBI-3。
本发明的所述氨基酸序列或多肽还可以例如是针对异二聚体细胞因子中存在的两个亚单位的界面，诸如针对IL-23中的p19/p40界面，针对IL-12中的p35/p40界面，针对IL-27中的p28/EBI3界面，或针对IL-35中的p35/EBI3界面的本发明的氨基酸或多肽。
在具体优选的方面，本发明的所述多肽可以是本发明的“双特异性”和特别是“双互补位型”多肽(如本文进一步所述)，其包括至少一个针对至少一个p19或p19样亚单位(诸如针对p19，p35或p28)的本发明的氨基酸序列(诸如一个纳米抗体)，和至少一个针对至少一个p40或p40样亚单位(诸如针对p40或EBI-3)的本发明的氨基酸序列(诸如一个纳米抗体)。
例如，本发明提供：
-针对p19和p40的氨基酸序列和(特别是)多肽，其期望与IL-12，IL-27和IL-35相比对IL-23有选择性。例如，所述双互补位型多肽可包括至少一个针对p19的本发明的氨基酸序列和至少一个针对p40的本发明的氨基酸序列；
-针对p35和p40的氨基酸序列和(特别是)多肽，其期望与IL-23，IL-27和IL-35相比对IL-12有选择性。例如，所述双互补位型多肽可包括至少一个针对p35的本发明的氨基酸序列和至少一个针对p40的本发明的氨基酸序列；
-针对p35和EBI3的氨基酸序列和(特别是)多肽，其期望与IL-12，IL-23和IL-27相比对IL-35有选择性。例如，所述双互补位型多肽可包括至少一个针对p35的本发明的氨基酸序列和至少一个针对EBI3的本发明的氨基酸序列；
-针对p28和EBI3的氨基酸序列和(特别是)多肽，其期望与IL-12，IL-23和IL-35相比对IL-27有选择性。例如，所述双互补位型多肽可包括至少一个针对p28的本发明的氨基酸序列和至少一个针对EBI3的本发明的氨基酸序列。
同样，所有所述氨基酸序列和/或多肽可如本文进一步所述，并且本发明的所述多肽的一些实例从本文的进一步描述中将变得显而易见。
例如，所述多肽可包括：
-一个或多个针对p19或p19样亚单位上的相互作用位点(如本文所定义，并且特别是参与到其中存在所述亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合中的位点)的本发明的氨基酸序列；和一个或多个针对p40或p40样亚单位上的非相互作用位点的位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基的序列的本发明的氨基酸序列；
-一个或多个针对p40或p40样亚单位上的相互作用位点(如本文所定义，并且特别是参与到其中存在所述亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合中的位点)的本发明的氨基酸序列；和一个或多个针对p19或p19样亚单位上的非相互作用位点的位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基的序列的本发明的氨基酸序列；或
-一个或多个针对p40或p40样亚单位上的相互作用位点(如本文所定义)的本发明的氨基酸序列；和一个或多个针对p19或p19样亚单位上的相互作用位点的本发明的氨基酸序列；
-一个或多个针对p19或p19样亚单位并且可调节(并且特别是抑制)其中存在所述p19或p19样亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的本发明的氨基酸序列；和/或一个或多个针对p40或p40样亚单位但不能够调节其中存在所述p40或p40样亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的本发明的氨基酸序列；
-一个或多个针对p40或p40样亚单位并且可调节(并且特别是抑制)其中存在所述p40或p40样亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的本发明的氨基酸序列；和/或一个或多个针对p19或p19样亚单位但不能够调节其中存在所述p19或p19样亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的本发明的氨基酸序列；
-一个或多个针对p19或p19样亚单位并且可调节(并且特别是抑制)其中存在所述p19或p19样亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的本发明的氨基酸序列；和一个或多个针对p40或p40样亚单位但可以调节其中存在所述p40或p40样亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的本发明的氨基酸序列。
同样，所有所述氨基酸序列和/或多肽可如本文进一步所述，并且本发明的所述多肽的一些实例从本文的进一步描述中将变得显而易见。
因此，在一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子中的两个或多个亚单位的本发明的氨基酸或多肽。例如，本发明包括包括多特异性蛋白和多肽(如本文所定义)，其包含至少一个针对异二聚体细胞因子的第一亚单位的结合单位和至少一个针对不同于所述第一亚单位的异二聚体细胞因子的第二亚单位的结合单位。例如，本发明包括所述多特异性蛋白和多肽，其包含至少一个针对异二聚体细胞因子的第一亚单位的结合单位和至少一个针对不同于所述第一亚单位的异二聚体细胞因子的第二亚单位的结合单位，其中所述第一和第二亚单位形成同一异二聚体细胞因子的一部分(换句话说，就所述异二聚体细胞因子而言，所述多特异性蛋白或多肽是“双互补位型”的，因为它们能够结合于所述异二聚体细胞因子上的两个不同的表位。备选地，而非限制，就本文所提及的亚单位之一而言，如本文所述的蛋白或多肽可以例如是双互补位型的，即，包括至少一个针对所述亚单位上第一表位的结合单位和至少一个针对所述亚单位上第二表位的结合单位)。所述多特异性蛋白和多肽的一些非限制性实例是针对p35和p40(两者均存在于IL-12中，从而预测所述多价蛋白或多肽对IL-12特异)，针对p19和p40(均存在于IL-23中)，或针对p28和EBI3(均存在于IL-27中)的多特异性蛋白和多肽。
更一般地，本发明包括这样的多特异性蛋白和多肽，其包含至少一个针对异二聚体细胞因子的第一亚单位的结合单位和至少一个针对不同于所述第一亚单位的异二聚体细胞因子的第二亚单位的结合单位，其中所述第一和第二亚单位选自p19，p35，p28，p40和/或EBI3；和/或前述的每一个的突变体、变体、等位基因或同源物。例如，所述多特异性蛋白和多肽可包括至少一个针对p19样亚单位诸如p19，p35或p 28的结合单位和至少一个针对p40样亚单位诸如p40或EBI3的结合单位(还应该注意，本发明甚至更一般地涉及如下的任何多特异性蛋白和多肽，即，其包括至少一个针对异二聚体细胞因子或其亚单位(诸如p19，p35，p28，p40和/或EBI3)的结合单位和至少一个另外的针对任何其他的(例如，非异二聚体细胞因子)所需靶标、抗原决定簇或表位的结合单位)。
对专业技术人员还将显而易见的是，如本文所述的氨基酸序列或多肽可针对形成异二聚体细胞因子的两个亚单位之间的界面(通常是p19样亚单位和p40样亚单位之间的界面)。因此，所述氨基酸序列和多肽将经常能够(同时地)结合于形成异二聚体细胞因子的两个亚单位，从而横跨所述两个亚单位之间界面。例如，本文所述的氨基酸序列和多肽可针对IL-12的p35/p40界面，针对IL-23的p19/p40界面，或针对IL-28的p28/EBI-3。
由此，从上面，对专业技术人员将显而易见的是本文所述的氨基酸序列和多肽可针对单个异二聚体细胞因子(或针对异二聚体细胞因子的单个亚单位)，但也可针对多个异二聚体细胞因子(或针对其多个亚单位，所述亚单位形成同一异二聚体细胞因子或甚至不同异二聚体细胞因子的一部分)。
在一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽与IL-12，IL-27和IL-35相比对IL-23特异(如本文所定义)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽与IL-23，IL-27和IL-35相比对IL-12特异(如本文所定义)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽与IL-12，IL-23和IL-35相比对IL-27特异(如本文所定义)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽与IL-12，IL-23和IL-27相比对IL-35特异(如本文所定义)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽与p35或p28亚单位相比对p19亚单位特异(如本文所定义)。预测所述氨基酸序列和多肽对IL-23特异(即，与IL-12，IL-27和IL-35相比)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽与p35或p19亚单位相比对p28亚单位特异(如本文所定义)。预测所述氨基酸序列和多肽对IL-27特异(即，与IL-12，IL-23和IL-35相比)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽与p28或p19亚单位相比对p35亚单位特异(如本文所定义)。预测所述氨基酸序列和多肽对IL-12和IL-35特异(即，与IL-23和IL-27相比)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽与EBI-3相比对p40亚单位特异(如本文所定义)。预测所述氨基酸序列和多肽对IL-12和IL-23特异(即，与IL-27和IL-35相比)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽与p40亚单位相比对EBI-3亚单位特异(如本文所定义)。预测所述氨基酸序列和多肽对IL-27和IL-35特异(即，与IL-12和IL-23相比)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽对p19和p40亚单位两者特异(与其他亚单位相比)，并且特别地针对(如本文所定义，即，能够特异性地结合)p19和p40亚单位，但不针对(即，不能够特异性地结合)亚单位p35，p28和/或EBI3的任一个(或，根据甚至更具体的方面，不针对除p19以外的任何p19样亚单位和不针对除p40以外的任何p40样亚单位)。预测所述氨基酸序列(可以例如横跨如本文所述的IL-23中的p19/p40界面)或多肽(可以例如是具有至少一个针对p19的结合单位和至少一个针对p40的结合单位的双特异性多肽)与IL-27相比对IL-23特异，并且预测其与IL-23的抗体亲抗原性(和优选地还有选择性)高于IL-12。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽对p35和p40亚单位两者(与其他亚单位相比)特异，并且特别地针对(如本文所定义，即，能够特异性地结合)p35和p40亚单位，但不针对(即，不能够特异性地结合)亚单位p19，p28和/或EBI3中的任一个(或，根据甚至更具体的方面，不针对除p35以外的任何p19样亚单位和不针对除p40以外的任何p40样亚单位)。预测所述氨基酸序列(例如，其可以如本文所述横跨IL-12中的p35/p40界面)或多肽(例如，其可以是具有至少一个针对p35的结合单位和至少一个针对p40的结合单位的双特异性多肽)与IL-27相比对IL-12特异，并且预测与IL-23相比，以更高的亲和力(和优选地还有选择性)结合IL-12。
在另一个具体的但非限制性的方面，本文所述的氨基酸序列和多肽对p28和EBI-3亚单位两者(与其他亚单位相比)特异，并且特别地针对(如本文所定义，即，能够特异性地结合)p28和EBI-3，但不针对(即，不能够特异性地结合)亚单位p19，p35和/或p40中的任一个(或，根据甚至更具体的方面，不针对p28以外的任何p19样亚单位和不针对EBI-3以外的任何p40样亚单位)。预测所述氨基酸序列(例如，其可以如本文所述横跨IL-27中的p28/EBI-3界面)或多肽(例如，其可以是具有至少一个针对p28的结合单位和至少一个针对EBI-3的结合单位的双特异性多肽)与IL-12和IL-23相比对IL-27特异。
本发明还提供针对异二聚体细胞因子的受体，特别是本文所述的异二聚体细胞因子受体的氨基酸序列和多肽。
更特别地，本发明提供针对异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列和多肽，其中所述受体是与细胞介导的(TH1)免疫相关的异二聚体细胞因子的受体。
在一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列和多肽，其中所述受体是下列异二聚体细胞因子的受体：所述异二聚体细胞因子含有一个或多个p19样亚单位，和/或含有一个或多个p40样亚单位，并且特别地含有下列亚单位的一个或多个：p19，p35，p28，p40和/或EBI3；或前述每一个的突变体、变体、等位基因或同源物。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列和多肽，其中所述受体是至少含有p19亚单位的异二聚体细胞因子的受体。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列和多肽，其中所述受体是至少含有p35亚单位的异二聚体细胞因子的受体。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列和多肽，其中所述受体是至少含有p28亚单位的异二聚体细胞因子的受体。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列和多肽，其中所述受体是至少含有p40亚单位的异二聚体细胞因子的受体。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列和多肽，其中所述受体是至少含有EBI3亚单位的异二聚体细胞因子的受体。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供分别针对IL-12，IL-23，IL-27和/或IL-35的受体的氨基酸序列和多肽，且优选地分别针对IL-12，IL-23，IL-27和/或IL-35的高亲和力受体的氨基酸序列和多肽。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-12的受体、和优选地针对IL-12的高亲和力受体、或针对其至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽。更优选地，所述氨基酸序列和多肽与IL-23R的(同源)受体和/或IL-27的(同源)受体相比对IL-12的(同源)受体特异(如本文所定义)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-23的受体、和优选地针对IL-23的高亲和力受体、或针对其至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽。更优选地，所述氨基酸序列和多肽与IL-12的(同源)受体和/或IL-27的(同源)受体相比对IL-23的(同源)受体特异(如本文所定义)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-27的受体、和优选地针对IL-27的高亲和力受体、或针对其至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽。更优选地，所述氨基酸序列和多肽与IL-12的(同源)受体和/或IL-23的(同源)受体相比对IL-27的(同源)受体特异(如本文所定义)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-35的受体、和优选地针对IL-35的高亲和力受体、或针对其至少一个亚单位的氨基酸序列和多肽。
上述氨基酸序列和多肽可以全部如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-12，IL-23，IL-27和/或IL-35的受体的至少一个亚单位，且优选地针对IL-12，IL-23，IL-27和/或IL-35的高亲和力受体的亚单位的氨基酸序列和多肽。所述本发明的氨基酸序列和多肽可以例如针对所述受体的IL-23样亚单位，针对所述受体的gp130样亚单位，或两者(例如，在本发明的双特异性/双互补位型多肽的情况下)。
优选地，所述氨基酸和多肽针对所述受体的IL-23样亚单位诸如IL-12Rβ-2，IL-23R和WSX-1(针对gp-130样亚单位诸如IL-12Rβ-1亚单位或针对gp130的氨基酸序列和多肽不太优选，尽管其不排除在本发明的范围内)。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-12受体的至少一个亚单位，优选地针对IL-12的高亲和力受体的氨基酸序列和多肽。优选地，所述氨基酸序列和多肽针对IL-12Rβ-2亚单位。更优选地，所述氨基酸序列和多肽与IL-23R亚单位和WSX-1亚单位相比对IL-12Rβ-2亚单位特异(如本文所定义)。期望所述氨基酸序列和多肽将与IL-23的(同源)受体和/或IL-27的(同源)受体相比对IL-12的(同源)受体特异。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-23受体的至少一个亚单位，优选地针对IL-23的高亲和力受体的氨基酸序列和多肽。优选地，所述氨基酸序列和多肽针对IL-23R亚单位。更优选地，所述氨基酸序列和多肽与IL-12Rβ-2亚单位和WSX-1亚单位相比对IL-23R亚单位特异(如本文所定义)。期望所述氨基酸序列和多肽将与IL-12的(同源)受体和/或IL-27的(同源)受体相比对IL-23的(同源)受体特异。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对IL-27受体的至少一个亚单位，优选地针对IL-27的高亲和力受体的氨基酸序列和多肽。优选地，所述氨基酸序列和多肽针对WSX-1亚单位。更优选地，所述氨基酸序列和多肽与IL-12Rβ-2亚单位和IL-23R亚单位相比对WSX-1亚单位IL-23R亚单位特异(如本文所定义)。期望所述氨基酸序列和多肽将与IL-12的(同源)受体和/或IL-23的(同源)受体相比对IL-27的(同源)受体特异。
上述氨基酸序列和多肽可以全部如本文进一步所述。
本发明还提供针对IL-12Rβ-1的氨基酸序列和多肽。优选地，所述氨基酸序列和多肽与gp130相比对IL-12Rβ-1特异(如本文所定义)。
本发明还提供针对gp130的氨基酸序列和多肽。优选地，所述氨基酸序列和多肽与IL-12Rβ-1相比对gp130特异(如本文所定义)。
这些氨基酸序列和多肽可以全部如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明提供针对异二聚体细胞因子的受体的第一亚单位，和针对不同于所述第一亚单位的异二聚体细胞因子的受体的第二亚单位的双特异性多肽。
例如，本发明的所述双特异性多肽可包括至少一个针对gp130样亚单位(诸如gp130或IL-12β-1亚单位，或其变体、突变体、等位基因或同源物)的本发明的氨基酸序列(诸如纳米抗体)，和至少一个针对IL-23样亚单位(诸如IL-12Rβ-2，IL-23，或WSX-1)的本发明的氨基酸序列(诸如纳米抗体)。优选地，所述双特异性多肽是这样的，即，其针对形成同一受体的一部分的gp130样亚单位和IL-23样亚单位。所述双特异性多肽可以例如触发、促进和/或增强所述受体的激活和/或缔合(或更一般地受体介导的信号传导)，例如通过模拟配体结合的作用；并且由此用作所述受体、其配体和/或相关的异二聚体细胞因子介导的信号传导的激动剂(在此方面，还应该注意，在另一方面，本发明包括这样的本发明的多肽，其包含一个或多个，诸如两个、三个或四个针对单个细胞因子受体链的本发明的氨基酸序列，以便诱导二聚化或寡聚化并且导致所述受体的激活)。
备选地，所述双特异性多肽可以例如阻断、抑制或减少所述配体与所述受体的结合，或者阻断、抑制或减少所述受体与所述配体结合后的激活和/或缔合，和/或通常用作所述受体、其配体和/或相关的异二聚体细胞因子介导的信号传导的激动剂。
例如，本发明提供：
-针对IL12Rβ1和IL12Rβ2的氨基酸序列和(特别是)多肽，其期望与IL-23受体和IL-27受体相比对IL-12受体具有(且优选地具有)选择性。例如，所述双互补位型多肽可包括至少一个针对IL12Rβ1的本发明的氨基酸序列和至少一个针对IL12Rβ2的本发明的氨基酸序列；
-针对IL12Rβ1和IL23R的氨基酸序列和(特别是)多肽，其期望与IL-12受体和IL-27受体相比对IL-23受体具有(且优选地具有)选择性。例如，所述双互补位型多肽可包括至少一个针对IL12Rβ1的本发明的氨基酸序列和至少一个针对IL23R的本发明的氨基酸序列；
-针对WSX-1和gp130的氨基酸序列和(特别是)多肽，其期望与IL-12受体和IL-23受体相比对IL-27受体具有(且优选地具有)选择性。例如，所述双互补位型多肽可包括至少一个针对WSX-1的本发明的氨基酸序列和至少一个针对gp130的本发明的氨基酸序列。
同样，所述氨基酸序列和多肽可以全部如本文进一步所述。
在另一个具体的但非限制性的方面，本发明的多肽可以是这样的双特异性多肽，其包括至少一个针对异二聚体细胞因子(或针对其至少一个亚单位)的本发明的氨基酸序列，和至少一个针对异二聚体细胞因子的受体(或针对其至少一个亚单位)的本发明的氨基酸序列。特别地，在本发明的这一方面，本发明的多肽可包括至少针对异二聚体细胞因子(或其至少一个亚单位)的本发明的氨基酸序列，和至少一个针对所述异二聚体细胞因子的受体(或其至少一个亚单位)，即，针对所述异二聚体细胞因子的同源受体的本发明的氨基酸序列。
期望所述双特异性多肽可用作异二聚体细胞因子、其受体和异二聚体细胞因子介导的信号传导的激动剂，即，通过加速或促进异二聚体细胞因子与其受体的结合，和/或通过在异二聚体细胞因子与其受体的结合时稳定配体/受体复合体。为此，所述双特异性多肽优选地包括不中和所述异二聚体细胞因子与所述受体的结合的氨基酸序列。
取决于被选择用来形成构建体的氨基酸序列，进一步期望所述双特异性多肽还可被设计用作拮抗剂，即，连接细胞因子和受体而不使其激活，由于然后受体被占用并且失活而用作显性负调节物。
如本文所述的双特异性多肽也可与Fc部分连接，如题目为“Immunoglobulin constructs(免疫球蛋白构建体)”的申请人的同时待审的申请，该申请与本申请具有相同的申请日，2007年12月4日。
此外，针对异二聚体细胞因子和针对不是所述异二聚体细胞因子的同源受体的受体的双特异性多肽，也可用来调节由其所针对的细胞因子介导的并且(特别是)由其所针对的受体介导的信号传导。例如，本发明的双特异性抗IL12p35和抗IL23R多肽可连接IL12和IL23受体，并且触发IL23信号。
例如，上述双特异性多肽可包括：
-至少一个针对IL-12(或至少一个其亚单位，并且优选p35亚单位)的本发明的氨基酸序列，和至少一个针对IL-12的受体(或至少一个其亚单位，并且优选IL-12Rβ-2亚单位)的本发明的氨基酸序列。
-至少一个针对IL-23(或至少一个其亚单位，并且优选p19亚单位)的本发明的氨基酸序列，和至少一个针对IL-23的受体(或至少一个其亚单位，并且优选IL-23亚单位)的本发明的氨基酸序列；或
-至少一个针对IL-27(或至少一个其亚单位，并且优选p28亚单位)的本发明的氨基酸序列，和至少一个针对IL-27的受体(或至少一个其亚单位，并且优选WSX-1亚单位)的本发明的氨基酸序列。
同样，所述氨基酸序列和多肽可以全部如本文进一步所述。
当本发明的氨基酸序列或多肽针对异二聚体细胞因子时，其可以几种不同的方式调节(如本文所定义)异二聚体细胞因子介导的信号传导(如本文所定义)。例如，并且尽管本发明在其最广泛的意义上不限于任何特定的解释、假设或机制，其可以为，在结合异二聚体细胞因子(或与其至少一个亚单位)时，所述氨基酸序列或多肽：
-阻止、减少或抑制(部分地或全部地)所述异二聚体细胞因子与其受体(或与其至少一个亚单位)的结合；
-阻止、减少、抑制异二聚体细胞因子(例如，其亚单位)的缔合(即，异二聚化)；
-使异二聚体细胞因子不稳定或另外地影响异二聚体细胞因子的构象或阻止或减少异二聚体细胞因子改变其构象的能力，特别地以便完全地或部分地减少其结合其受体(或结合其至少一个亚单位)的能力，或在与其受体结合时，触发受体介导的信号传导；
-仍然允许异二聚体细胞因子与其受体(或与其至少一个亚单位)结合，但在所述结合时，阻止、减少、抑制(部分地或全部地)所述受体的激活和/或二聚化(即，在配体结合时受体缔合的情形中，如例如关于IL-23受体的情形，见，Parham等，见前)；
或另外地阻止、减少或抑制由异二聚体细胞因子与其受体的结合所引起的信号传导。
因此，根据一个非限制性的方面，本发明的针对异二聚体细胞因子(并且可进一步如本文所述)的氨基酸序列或多肽是这样的，即，在结合异二聚体细胞因子时，其阻止、减少或抑制所述异二聚体细胞因子与其受体或与其至少一个亚单位的结合(即，与在不存在所述氨基酸序列或多肽时所述异二聚体细胞因子与同一受体的结合相比，如通过适当的测定法诸如本文所提及和/或试验部分中所使用的测定法之一测定，其程度达至少1％，诸如达至少5％，例如达至少10％，至少30％，至少50％，至少70％和直至90％或更大)。
根据另一个非限制性的方面，本发明的针对异二聚体细胞因子(并且可进一步如本文所述)的氨基酸序列或多肽是这样的，即，在结合异二聚体细胞因子时和所述异二聚体细胞因子与其受体的结合(或与所述受体的至少一个亚单位结合)后，其阻止、减少或抑制其受体的激活和/或缔合(即，与在不存在所述氨基酸序列或多肽时所述异二聚体细胞因子介导的所述受体的缔合相比，如通过适当的测定法诸如本文所提及和/或试验部分中所使用的测定法之一测定，其程度达至少1％，诸如达至少5％，例如达至少10％，至少30％，至少50％，至少70％和直至90％或更大)。
根据另一个非限制性的方面，本发明的针对异二聚体细胞因子(并且可进一步如本文所述)的氨基酸序列或多肽是这样的，即，在结合异二聚体细胞因子时，其阻止、减少或抑制由所述异二聚体细胞因子介导的受体缔合所触发的所述受体的信号传导(即，与在不存在所述氨基酸序列或多肽时所述异二聚体细胞因子介导的所述受体的缔合后的信号传导相比，如通过适当的测定法诸如本文所提及和/或试验部分中所使用的测定法之一测定，其程度达至少1％，诸如达至少5％，例如达至少10％，至少30％，至少50％，至少70％和直至90％或更大)。
一般地，根据一个优选的方面，本发明的针对异二聚体细胞因子(并且可进一步如本文所述)的氨基酸序列或多肽是这样的，即，在结合异二聚体细胞因子时，其阻止、减少或抑制与所述异二聚体细胞因子和/或与其受体相关的所述异二聚体细胞因子介导的信号传导(如本文所定义)(即，与在不存在所述氨基酸序列或多肽时由所述异二聚体细胞因子介导的所述异二聚体细胞因子介导的信号传导相比，如通过适当的测定法诸如本文所提及和/或试验部分中所使用的测定法之一测定，其程度达至少1％，诸如达至少5％，例如达至少10％，至少30％，至少50％，至少70％和直至90％或更大)。
同样，所述氨基酸序列和多肽可以全部如本文进一步所述。
当本发明的氨基酸序列(诸如本文所述p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)或多肽(诸如，本文所述的例如多价、多特异性和/或双互补位型构建体，其包括至少一个p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和/或IL-23序列)针对异二聚体细胞因子的受体时，其可以几种不同的方式调节(如本文所定义)异二聚体细胞因子介导的信号传导(如本文所定义)。例如，并且尽管本发明在其最广泛的意义上不限于任何特定的解释、假设或机制，其可以为，在结合异二聚体细胞因子(或与其至少一个亚单位)时，所述氨基酸序列或多肽：
-阻止、减少或抑制(部分地或全部地)配体(即，为所述受体的配体的异二聚体细胞因子)与所述受体(或与其至少一个亚单位)的结合；
-仍然允许所述配体与所述受体结合，但阻止、减少、抑制正常情况下将由所述配体与所述受体的结合所触发的信号传导(例如，且非限制，影响所述受体的构象或通过减小所述受体改变其构象的能力)；
-阻止、减少或抑制受体(例如，其亚单位)的激活和/或缔合(例如，二聚化)，和特别地由配体(即，为所述受体的配体的异二聚体细胞因子)与所述受体(或与其至少一个亚单位)的结合所触发的所述受体的缔合，如例如关于IL-23受体的情形，见，Parham等，见前；
-仍然允许所述受体的配体介导的缔合(例如，二聚化)，但阻止、减少、抑制正常情况下将由所述缔合所触发的信号传导(例如，且非限制，影响所述受体的构象或通过减小所缔合的受体改变其构象的能力)
或另外地阻止、减少或抑制由所述异二聚体细胞因子与其受体的结合所引起的或由所述受体的配体介导的缔合所引起的信号传导。
因此，根据一个非限制性的方面，本发明的针对异二聚体细胞因子的受体(并且可进一步如本文所述)的氨基酸序列或多肽是这样的，即，在结合受体(例如，结合其至少一个亚单位)时，其阻止、减少或抑制其配体与所述受体或与其至少一个亚单位的结合(即，与在不存在所述氨基酸序列或多肽时所述配体与所述受体的结合相比，如通过适当的测定法诸如本文所提及和/或试验部分中所使用的测定法之一测定，其程度达至少1％，诸如达至少5％，例如达至少10％，至少30％，至少50％，至少70％和直至90％或更大)。
根据一个非限制性的方面，本发明的针对异二聚体细胞因子的受体(并且可进一步如本文所述)的氨基酸序列或多肽是这样的，即，在结合受体(例如，结合其至少一个亚单位)时，允许配体与受体结合，但阻止、减少或抑制由(或在正常情况下将由)所述配体与所述受体或与其至少一个亚单位的结合所触发的信号传导(即，与不存在所述氨基酸序列或多肽时在所述配体与所述受体的结合时的信号传导相比，如通过适当的测定法诸如本文所提及和/或试验部分中所使用的测定法之一测定，其程度达至少1％，诸如达至少5％，例如达至少10％，至少30％，至少50％，至少70％和直至90％或更大)。
根据另一个非限制性的方面，本发明的针对异二聚体细胞因子的受体(并且可进一步如本文所述)的氨基酸序列或多肽是这样的，即，在结合受体例如，结合其至少一个亚单位)时，其阻止、减少或抑制所述受体的激活和/或缔合，和特别地所述受体的配体介导的缔合(即，与在不存在所述氨基酸序列或多肽时所述受体的配体介导的缔合相比，如通过适当的测定法诸如本文所提及和/或试验部分中所使用的测定法之一测定，其程度达至少1％，诸如达至少5％，例如达至少10％，至少30％，至少50％，至少70％和直至90％或更大)。
根据另一个非限制性的方面，本发明的针对异二聚体细胞因子的受体(并且可进一步如本文所述)的氨基酸序列或多肽是这样的，即，在结合受体时，其阻止、减少或抑制由所述受体的配体介导的缔合所触发的信号传导(即，与在不存在所述氨基酸序列或多肽时所述配体与所述受体结合后的信号传导相比，如通过适当的测定法诸如本文所提及和/或试验部分中所使用的测定法之一测定，其程度达至少1％，诸如达至少5％，例如达至少10％，至少30％，至少50％，至少70％和直至90％或更大)。
一般地，根据一个优选的方面，本发明的针对异二聚体细胞因子的受体(并且可进一步如本文所述)的氨基酸序列或多肽是这样的，即，在结合受体时，其阻止、减少或抑制与所述受体和/或其配体相关的异二聚体细胞因子介导的信号传导(如本文所定义)(即，与在不存在所述氨基酸序列或多肽时异二聚体细胞因子介导的信号传导相比，如通过适当的测定法诸如本文所提及和/或试验部分中所使用的测定法之一测定，其程度达至少1％，诸如达至少5％，例如达至少10％，至少30％，至少50％，至少70％和直至90％或更大)。
同样，所述氨基酸序列和多肽可以全部如本文进一步所述。
对于专业技术人员将显而易见的是上述本发明的氨基酸序列和多肽通常将用作异二聚体细胞因子介导的信号传导(其在本文中通常指与异二聚体细胞因子和/或与异二聚体细胞因子的受体相关的信号传导，和特别地由异二聚体细胞因子与其受体的结合所引起的信号传导，以及由该信号传导触发的生物学机制和效应)的拮抗剂。
然而，本发明还涉及用作异二聚体细胞因子介导的信号传导的激动剂的本发明的氨基酸序列和多肽。例如，所述激动剂可以是本发明的氨基酸序列或多肽，其可结合异二聚体细胞因子的受体(诸如IL-12，IL-23，IL-27或IL-35的受体)或结合其至少一个亚单位以便触发受体介导的信号传导。还期望包括至少一个针对异二聚体细胞因子(或针对其至少一个亚单位)的本发明的氨基酸序列和至少一个针对所述异二聚体细胞因子的受体(或针对其至少一个亚单位)的本发明的氨基酸序列的上述双特异性多肽的一些可用作异二聚体细胞因子介导的信号传导的激动剂，如本文进一步所述。为此，所述双特异性多肽优选地包括不中和异二聚体细胞因子与受体结合的氨基酸序列。
还包括在本发明的范围内的是使用本发明的氨基酸序列和多肽的部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物，和/或使用包括所述部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物的一种或多种或基本上由其一种或多种组成的蛋白或多肽，只要它们适合用于本文所设想的应用。所述部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物通常将含有(至少一部分)用于结合异二聚体细胞因子和/或其受体的功能性抗原结合位点；和更优选地将能够特异性地结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体，和甚至更优选地以如本文所定义的亲和力(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体。从本文进一步的描述中所述部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因、衍生物、蛋白和/或多肽的一些非限制性实例将变得显而易见。本发明的其他片段或多肽还可通过适当地将如本文所述的一个或多个(较小的)部分或片段合并(即，通过连接或基因融合)而提供。
在本发明的一个具体的但非限制性的方面，将在本文中进一步描述，所述类似物、突变体、变体、等位基因、衍生物与它们所来源的氨基酸序列相比具有延长的血清半衰期(如本文进一步所述)。例如，本发明的氨基酸序列可连接到(化学地或另外地)一个或多个延长的半衰期的基因或结构部分(诸如PEG)，以便提供具有延长的半衰期的本发明氨基酸序列的衍生物。在一个具体的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列(诸如本文所述的p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)可以是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列或可以是在适当的条件(诸如生理条件)下能够形成免疫球蛋白折叠(即，通过折叠)的氨基酸序列。特别地参考Halaby等，J.(1999)Protein Eng.(蛋白质工程)12，563-71的综述。优选地，当被正确地折叠以形成免疫球蛋白折叠时，此氨基酸序列能够特异性地结合(如本文所定义)异二聚体细胞因子和/或它们的受体；和更优选地能够以如本文所定义的亲和力(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体。此外，所述氨基酸序列的部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物优选是这样的，即，它们包括免疫球蛋白折叠或者能够在适当的条件下形成免疫球蛋白折叠。
特别地，但不限于，本发明的氨基酸序列(诸如本文所述的p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)可以是基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列；或所述氨基酸序列的任何适当的片段(那么其通常将包含至少一些形成至少一个CDR的氨基酸残基，如本文进一步所述)。
本发明的氨基酸序列(诸如本文所述的p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)可以特别是免疫球蛋白序列或其适当的片段，并且更特别地是免疫球蛋白可变结构域序列或其适当的片段，诸如轻链可变结构域序列(例如，VL-序列)或其适当的片段；或重链可变结构域序列(例如，VH-序列)或其适当的片段。当本发明的氨基酸序列是重链可变结构域序列时，它可以是来源于常规四链抗体的重链可变结构域序列(诸如，不限于，来源于人抗体的VH序列)，或是来源于所谓的“重链抗体”(如本文所定义)的所谓的VHH-序列(如本文所定义)。
然而，应该注意到，本发明不限制本发明的氨基酸序列的来源(或用于表达其的本发明的核苷酸序列的来源)，也不限制产生或获得(或已经产生或获得)本发明的氨基酸序列或核苷酸序列的方法。因此，本发明的氨基酸序列可以是天然存在的氨基酸序列(来自任何适当的物种)或合成的或半合成的氨基酸序列。在本发明的具体而非限制性方面，所述氨基酸序列是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何适当的物种)或合成的或半合成的免疫球蛋白序列，包括但不限于“人源化的”(如本文所定义)免疫球蛋白序列(诸如部分或完全人源化的小鼠或兔免疫球蛋白序列，并且特别是部分或完全人源化的VHH序列或纳米抗体)，“骆驼源化的(camelized)”(如本文所定义)免疫球蛋白序列，以及已经通过下列技术获得的免疫球蛋白序列：诸如亲和力成熟(例如，起始于合成的、随机的或天然存在的免疫球蛋白序列)，CDR移植，镶合术(veneering)，组合来源于不同的免疫球蛋白序列的片段，利用重叠的引物进行的PCR装配，以及专业技术人员公知的加工免疫球蛋白序列的相似技术；或前述任一项的任何适当的组合。例如，参考标准手册，以及本文进一步描述和提及的现有技术。
类似地，本发明的核苷酸序列可以是天然存在的核苷酸序列或合成的或半合成的序列，并且例如，可以是通过PCR从适当的天然存在的模板(例如，从细胞分离的DNA或RNA)分离的序列，已经从文库(并且特别是表达文库)分离的核苷酸序列，已经通过向天然存在的核苷酸序列中引入突变(利用任何适当的本身已知的技术，诸如错配PCR)而制备的核苷酸序列，已经使用重叠的引物通过PCR制备的核苷酸序列，或已经利用本身已知的DNA合成技术制备的核苷酸序列。
本发明的氨基酸序列(诸如本文所述的p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)可以特别是结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)，单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)，″dAb″(或适合用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体TM(NanobodyTM)(如本文所定义，并且包括但不限于VHH序列)；其它单可变结构域，或它们中任一种的任何适当的片段。对于(单)结构域抗体的概括描述，参考上文引用的现有技术，以及参考EP 0 368 684。对于术语“dAb’s”，例如，参考Ward等(自然(Nature)1989年10月12日；341(6242)：544-6)，参考Holt等，生物技术趋势(Trends Biotechnol.)，2003，21(11)：484-490；以及例如参考WO 06/030220，WO 06/003388与Domantis有限公司(Domantis Ltd.)的其它公布的专利申请。还应该注意到，尽管由于它们不是哺乳动物来源的，在本发明的情形中较不优选，但是单结构域抗体或单可变结构域可以来源于某些鲨鱼(shark)物种(例如，所谓的“IgNAR结构域”，参见例如WO 05/18629)。
特别地，本发明的氨基酸序列可以是纳米抗体TM(如本文所定义)或其适当的片段。[注意：纳米抗体TM(Nanobody TM)，纳米抗体TM(NanobodiesTM)和纳米克隆TM(Nanoclone TM)为埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的注册商标]。所述针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体在本文也称为“本发明的纳米抗体”。
对于纳米抗体的概括描述，参考下文的进一步描述，以及参考本文所引用的现有技术。在这一方面，然而，应该注意到，本文描述和现有技术主要描述所谓“VH3种类”的纳米抗体(即，与VH3种类的人种系序列如DP-47、DP-51或DP-29具有高度序列同源性的纳米抗体)，所述纳米抗体形成本发明的优选方面。然而，应该注意到，本发明在其最广泛意义上通常涵盖任何类型的针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体，并且例如，还涵盖属于所谓的“VH4种类”的纳米抗体(即，与VH4种类的人种系序列如DP-78具有高度序列同源性的纳米抗体)，例如，如在由埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)于2006年4月14日提交的的题目为“DP-78-like Nanobodies(DP-78样纳米抗体)”的美国临时申请60/792,279(还参见PCT/EP2007/003259和WO 07/118670)中所述。
一般地，纳米抗体(特别是VHH序列和部分人源化的纳米抗体)可以特别地特征在于，在一个或多个构架序列(同样如本文进一步所述)中存在一个或多个“标志残基(hallmark residues)”(如本文所述)。
因此，通常，纳米抗体可以定义为具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FRl-CDRl-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FRl-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDRl-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中一个或多个标志残基如本文进一步所定义。
特别地，纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FRl-CDRl-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FRl-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDRl-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中所述构架序列如本文进一步所定义。
更特别地，纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FRl-CDRl-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDRl-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基的一个或多个选自下表A-4中提及的标志残基；
并且其中：
ii)所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：1-22中的至少一种氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基(在序列SEQ ID NO’s：1-22中表示为X)。
在这些纳米抗体中，所述CDR序列通常如本文进一步所定义。
因此，本发明还涉及这样的纳米抗体，其可以结合(如本文定义)和/或针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体，涉及其适当的片段，以及涉及包括一种或多种所述纳米抗体和/或适当的片段或基本上由其组成的多肽。
-适当的构架序列的一些(其他)实例为：
-对于构架1：FR1序列组1；FR1序列组8；FR1序列组15；FR1序列组22；FR1序列组29；FR1序列组36；FR1序列组43；FR1序列组50和/或FR1序列组57的构架I序列(见下面的表A-1)，或与所述构架I序列的一个或多个具有不超过5个，诸如4，3，2或仅1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列(在此情况下，可采用可选条件I、可选条件II和/或可选条件IV(如本文所定义))；
-对于构架2：FR2序列组3；FR2序列组10；FR2序列组17；FR2序列组24；FR2序列组31；FR2序列组38；FR2序列组45；FR2序列组52和/或FR2序列组59的构架2序列(见下面的表A-1)，或与所述构架I序列的一个或多个具有不超过5个，诸如4，3，2或仅1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列(在此情况下，可采用可选条件I、可选条件II和/或可选条件IV(如本文所定义))；
-对于构架3：FR3序列组5；FR3序列组12；FR3序列组19；FR3序列组26；FR3序列组33；FR3序列组40；FR3序列组47；FR3序列组54和/或FR3序列组61的构架3序列(见下面的表A-1)，或与所述构架I序列的一个或多个具有不超过5个，诸如4，3，2或仅1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列(在此情况下，可采用可选条件I、可选条件II和/或可选条件IV(如本文所定义))；
-对于构架4：FR4序列组7；FR4序列组14；FR4序列组21；FR4序列组28；FR4序列组35；FR4序列组42；FR4序列组49；FR4序列组56和/或FR4序列组63的构架4序列(见下面的表A-1)，或与所述构架I序列的一个或多个具有不超过5个，诸如4，3，2或仅1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列(在此情况下，可采用可选条件I、可选条件II和/或可选条件IV(如本文所定义))；
在本文进一步的描述中，将参考某些组氨基酸序列(即，构架序列和CDR序列)。这些组氨基酸序列(总计63组)在下面的表A-1中定义：
表A-1：本说明书中提到的构架序列和CDR序列。SEQ ID NO’s分别指序列表和图11-19中给出的SEQ ID NO’s。
Figure BPA00001186248900651
表A-1(续)：
Figure BPA00001186248900661
表A-1(续)：
Figure BPA00001186248900671
表A-1(续)：
Figure BPA00001186248900681
表A-1(续)：
Figure BPA00001186248900691
此外，在本说明书中，将参考形成完整的单个抗原结合结构域的特定的氨基酸序列(在此特殊的情况下，纳米抗体序列)组。这些序列组在下面的表A-2中定义：
表A-2：本发明的P19+序列，p19-序列，P40-序列，P40+序列，P35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23R序列的非限制性实例。SEQ ID NO’s分别指序列表和图20-27中给出的SEQ ID NO’s。
Figure BPA00001186248900701
表A-2：(续)：
Figure BPA00001186248900711
表A-2：(续)：
Figure BPA00001186248900721
特别地，在某些具体的方面，本发明提供：
-针对(如本文所定义)p19并且与上面表A-2中列举的至少一个p19+序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列。这些氨基酸序列优选地是这样的，即，它们中和IL-23与其受体的结合；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个p19+序列与p19的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个p19+序列与p19结合的氨基酸序列。
-针对(如本文所定义)p19并且与上面表A-2中列举的至少一个p19-序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列。这些氨基酸序列优选地是这样的，即，它们基本上不阻断或中和IL-23与其受体的结合；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个p19-序列与p19的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个p19-序列与p19结合的氨基酸序列。
-针对(如本文所定义)p40并且与上面表A-2中列举的至少一个p40+序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列。这些氨基酸序列优选地是这样的，即，它们中和IL-23和/或IL-12与其受体的结合；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个p40+序列与p40的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个p40+序列与p40结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)p40并且与上面表A-2中列举的至少一个p40-序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列。这些氨基酸序列优选地是这样的，即，它们基本上不阻断或中和IL-23或IL-12与其受体的结合；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个p40-序列与p40的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个p40-序列与p40结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)p35并且与上面表A-2中列举的至少一个p35序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个p35序列与p35的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个p35序列与p35结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)IL-12并且与上面表A-2中列举的p35序列，p40+序列和/或p40-序列的至少一个具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的p35序列，p40+序列和/或p40-序列的至少一个与IL-12的结合和/或竞争上面表A-2中列举的p35序列，p40+序列和/或p40-序列的至少一个与IL-12结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)IL-23并且与上面表A-2中列举的p19+序列，p19-序列，p40+序列和/或p40-序列的至少一个具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的p19+序列，p19-序列，p40+序列和/或p40-序列的至少一个与IL-23的结合和/或竞争上面表A-2中列举的p19+序列，p19-序列，p40+序列和/或p40-序列的至少一个与IL-23结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)IL-27并且与上面表A-2中列举的至少一个IL-27序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个IL-27序列与IL-27的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个IL-27序列与IL-27结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)IL-12Rb1并且与上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb1序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb1序列与IL-12Rb1的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb1序列与IL-12Rb1结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)IL-12的(同源)受体和/或IL-23的(同源)受体并且与上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb1序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb1序列与IL-12的(同源)受体和/或IL-23的(同源)受体的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb1序列与IL-12的(同源)受体和/或IL-23的(同源)受体结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)IL-12Rb2并且与上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb2序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb2序列的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb2序列与IL-12Rb2结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)IL-12的(同源)受体并且与上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb2序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb2序列与IL-12的(同源)受体的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个IL-12Rb2序列与IL-12的(同源)受体结合的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)IL-23R并且与上面表A-2中列举的至少一个IL-23R序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个IL-23R序列与IL-23R的结合和/或与上面表A-2中列举的至少一个IL-23R序列竞争的氨基酸序列；
-针对(如本文所定义)IL-23的(同源)受体并且与上面表A-2中列举的至少一个IL-23R序列具有至少80％，优选至少85％，诸如90％或95％或更大的序列同一性的氨基酸序列；
-交叉阻断(如本文所定义)上面表A-2中列举的至少一个IL-23R序列与IL-23的(同源)受体的结合和/或竞争上面表A-2中列举的至少一个IL-23R序列与IL-23的(同源)受体结合的氨基酸序列；
这些氨基酸序列可如本文进一步所述(和可以例如是纳米抗体)；以及提供本发明的多肽，其包括一个或多个所述氨基酸序列(其可以如本文进一步所述，并且可以例如是如本文所述的双特异性和/或双互补位型多肽)，和编码所述氨基酸序列和多肽的核酸序列。
因此，本发明的一些特别优选的纳米抗体是这样的纳米抗体，所述纳米抗体可结合(如本文进一步所定义)和/或针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体，并且其：
i)与SEQ ID NO’s：1890-2141，2485-2529和/或2559-2614的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，形成CDR序列的氨基酸残基被忽略。就此而言，还参考表A-1(还见图11-19)中提及的构架1序列，构架2序列，构架3序列和构架4序列的各组(就构架1序列的位置1-4和27-30处的氨基酸残基而言，还参考下面的评论。因此，为了确定氨基酸同一性程度，这些残基优选地被忽略)；
和其中：
ii)优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108处的氨基酸残基的一个或多个选自下表A-4中提及的标志残基。
在这些纳米抗体中，CDR序列通常如本文进一步所述。
同样地，所述纳米抗体可以以任何适当的方式获得，并且来源于任何适当的来源，并且例如，可以是天然存在的VHH序列(即，来自于适当的骆驼(Camelid)物种)或合成的或半合成的氨基酸序列，包括但不限于“人源化的”(如本文所定义)纳米抗体，“骆驼源化的”(如本文所定义)免疫球蛋白序列(并且特别是骆驼源化的重链可变结构域序列)，以及已经通过下列技术获得的纳米抗体：诸如亲和力成熟(例如，起始于合成的、随机的或天然存在的免疫球蛋白序列)，CDR移植，镶合术，组合来源于不同的免疫球蛋白序列的片段，利用重叠的引物进行的PCR装配，以及专业技术人员公知的加工免疫球蛋白序列的相似技术；或前述任一项的任何适当的组合，这如本文进一步描述。此外，当纳米抗体包括VHH序列时，所述纳米抗体可以适当地被人源化，如本文进一步所述，以便提供一个或多个本发明的进一步(部分或完全)人源化的纳米抗体。类似地，当纳米抗体包括合成的或半合成的序列(诸如部分人源化的序列)时，所述纳米抗体可以任选地进一步适当地被人源化，同样如本文所述，同样以便提供一个或多个本发明进一步(部分或完全)人源化的纳米抗体。
特别地，人源化的纳米抗体可以是如前述段落中关于纳米抗体概括定义的氨基酸序列，但是其中存在至少一个这样的氨基酸残基(并且特别地，在至少一个构架残基中)，所述氨基酸残基是和/或对应人源化的取代(如本文所定义)。基于本文公开的内容，对于专业技术人员，一些优选的、而非限制性的人源化取代(及其适当的组合)将变得清楚。另外，或者备选地，通过比较天然存在的VHH序列的构架区序列与一个或多个紧密相关的人VH序列的相对应的构架序列，可以确定其它潜在有用的人源化取代，此后，可以将由此确定的一个或多个潜在有用的人源化取代(或其组合)引入到所述VHH序列中(以本身已知的任何方式，如本文进一步所述)，并且可以检测所得到的人源化的VHH序列对靶标的亲和力、稳定性、表达的容易性和水平、和/或其它需要的特性。以这种方式，通过利用有限的试验和误差程度，专业技术人员基于本文公开的内容可以确定其它适当的人源化取代(或其适当的组合)。此外，基于前述内容，纳米抗体(的构架区)可以是部分人源化的或完全人源化的。
本发明的一些特别优选的人源化纳米抗体是SEQ ID NO’s：1890至2141，2485至2490和/或2502至2529的人源化变体，它们可以是例如，针对p19的纳米抗体的人源化变体(例如，为p19+序列或p19-序列的纳米抗体的人源化变体，例如，图20和21中分别显示的纳米抗体之一的人源化变体)，针对p40的纳米抗体的人源化变体(例如，为p40-序列或p40+序列的纳米抗体的人源化变体，例如，图22和23中分别显示的纳米抗体之一的人源化变体)，针对p35的纳米抗体的人源化变体(例如，图24中显示的纳米抗体之一的人源化变体)，针对IL-27的纳米抗体的人源化变体(例如，图26中显示的纳米抗体之一的人源化变体)，针对IL-12Rb1的纳米抗体的人源化变体(例如，图27中显示的纳米抗体之一的人源化变体)，针对IL-12Rb2的纳米抗体的人源化变体(例如，图28中显示的纳米抗体之一的人源化变体)，或针对IL-23R的纳米抗体的人源化变体(例如，图29中显示的纳米抗体之一的人源化变体)。这些人源化纳米抗体的实例在SEQ IDNO’s：2559至2614(还见图31)中给出，并且专业技术人员将能够基于本文的公开内容，任选地在一些有限的反复试验(trial-and-error)后，找到其他合适的人源化变体。
因此，本发明的一些其他优选的纳米抗体，其可以结合(如本文进一步所定义)异二聚体细胞因子和/或它们的受体，并且其：
i)是SEQ ID NO’s：1890至2141，2485至2490和/或2502至2529的氨基酸序列之一的人源化变体；和/或
ii)与SEQ ID NO’s：1890至2141，2485至2490和/或2502至2529的氨基酸序列的至少之一具有至少80％氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；
并且其中：
i)优选地，在依据Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108处的一个或多个氨基酸残基选自下表A-4中提及的标志残基。
本发明的另一个方面涉及针对来自小鼠的p19的纳米抗体。所述纳米抗体的一些非限制性实例在SEQ ID NO’s：2491-2501中给出。
按照本发明的另一个具体方面，本发明提供许多特别适合结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体(即，分别结合p19，p40，p35，IL-12，IL-23，IL-27，IL-12Rb1，IL-12Rb2，IL-23R，IL-12的同源受体或IL-23的同源受体，如本文进一步所述)的氨基酸残基的序列(streches)(即，小肽)。这些氨基酸残基的序列可以存在于，和/或可以结合在本发明的氨基酸序列中，特别以它们形成本发明的氨基酸序列的(部分)抗原结合位点这样的方式存在和/或结合。由于这些氨基酸残基序列最初作为针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体产生的重链抗体或VHH序列的CDR序列产生(或可以基于和/或来源于所述CDR序列，如本文进一步所述)，在本发明中它们还将通常被称为“CDR序列”(即，分别称为CDR1序列，CDR2序列和CDR3序列)。然而，应该注意到，本发明在其最广泛意义上不限于这些氨基酸残基序列可能在本发明的氨基酸序列中具有的特有的结构作用或功能，只要这些氨基酸残基序列允许本发明的氨基酸序列与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。因此，一般地，本发明在其最广泛意义上包括任何这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合，并且包括一个或多个本文所述的CDR序列，并且特别地两个或更多个所述CDR序列的适当组合，其通过一个或多个其它氨基酸序列彼此适当连接，以致整个氨基酸序列形成能够结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体的结合结构域和/或结合单位。然而，还应该注意到，在本发明的氨基酸序列中仅存在一个所述CDR序列可以本身已经足以提供能够结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体的本发明的氨基酸序列；例如，同样参考WO03/050531中描述的所谓的“派遣片段(Expedite fragments)”。
因此，在另一个具体而非限制性的方面，本发明的氨基酸序列可以是这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列包括选自由本文所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列或它们的任何适当的组合组成的组的至少一个氨基酸序列。基于本文的公开内容，特别合适的组合将对专业技术人员是清楚的。特别地，本发明的氨基酸序列可以是包括至少一个抗原结合位点的氨基酸序列，其中所述抗原结合位点包括选自由本文所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列或它们的任何适当的组合，诸如本文所述的各种组合组成的组的至少一个氨基酸序列。
一般地，在本发明的这一方面中，本发明的氨基酸序列可以是包括至少一个氨基酸残基序列的任何氨基酸序列，其中所述氨基酸残基序列具有与本文所述的至少一个CDR序列的序列相对应的氨基酸序列。这样的氨基酸序列可以或可以不包括免疫球蛋白折叠。例如，并且不限于，这样的氨基酸序列可以是适当的免疫球蛋白序列片段，所述片段包括至少一个所述CDR序列，但是其不够大，不足以形成(完整)的免疫球蛋白折叠(例如，同样参考WO 03/050531中所述的“派遣片段”)。备选地，这样的氨基酸序列可以是适当的“蛋白支架”，所述蛋白支架包括与这样的CDR序列相对应(即，作为其抗原结合位点的一部分)的至少一个氨基酸残基序列。用于呈递氨基酸序列的适当的支架对于专业技术人员将是清楚的，并且例如，包括，但不限于，基于或来源于免疫球蛋白的结合支架(即，除了本文已经描述的免疫球蛋白序列之外)，来源于蛋白质A结构域的蛋白支架(诸如AffibodiesTM)，淀粉酶抑肽(tendamistat)，纤连蛋白，脂笼蛋白，CTLA-4，T-细胞受体，设计的锚蛋白重复序列，avimers和PDZ结构域(Binz等，Nat.Biotech(自然生物技术)2005，卷23：1257)，和基于DNA或RNA的结合部分，包括但不限于DNA或RNA适体(Ulrich等，组合化学高通量筛选(Comb Chem High Throughput Screen)20069(8)：619-32)。
同样地，包括一个或多个这些CDR序列的任何本发明的氨基酸序列优选是这样的，以致其可以特异性结合(如本文所定义)异二聚体细胞因子和/或它们的受体，并且更特别地是这样的，以致其可以以如本文所限定的亲和力(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本文进一步所述)与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。
特别地，本发明的氨基酸序列可以是针对p19的氨基酸序列(其可以是“p19+序列”或“p19-序列”，两者均如本文所定义)；针对p40的氨基酸序列(其可以是“p40+序列”或“p40-序列”，两者均如本文所定义)；针对p35的氨基酸序列；针对IL-23的氨基酸序列(其可以是针对p19或针对p40的氨基酸序列)；针对IL-12的氨基酸序列(其可以是针对p35或针对p40的氨基酸序列)；针对IL-23的氨基酸序列(其可以是针对p19或针对p40的氨基酸序列)；针对IL-27的氨基酸序列；针对IL-12Rb1的氨基酸序列；针对IL-12Rb2的氨基酸序列；针对IL-23R的氨基酸序列；针对IL-12的同源受体的氨基酸序列(其可以是针对IL-12Rb1或IL-12Rb2的氨基酸序列)；和/或针对IL-23的同源受体的氨基酸序列(其可以是针对IL-12Rb1或IL-23R的氨基酸序列)。这些氨基酸序列可如本文进一步所述，并且形成本发明的另外的方面(如编码其的核苷酸序列/核酸，包括其的多肽以及这些氨基酸序列在所述构建体中的应用，其制备方法和其应用，所有均如本文进一步所述)。
A)“p19+序列”。
一个具体的但非限制性的方面涉及“p19+序列”，本文中其通常被定义为针对(如本文所定义)p19亚单位(如存在于例如IL-23中)，并且能够调节、中和、阻断和/或抑制包括p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合，和特别地能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与IL-23R的结合(例如在实施例19或22中的α-筛选测定中)的本发明的氨基酸序列。
P19+序列通常可以如本文大体上对本发明的氨基酸序列的进一步所述(例如，就对p19的亲和力、特异性等而言)。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述，p19+序列优选地是这样的，即，它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以例如是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，由4个构架区和三个CDR’s构成的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体，单结构域抗体，VHH’s，“dAb’s”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们的适当的片段。
在一个特殊的方面，p19+序列可包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图11)；
b)与来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图11)；
e)与来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图11)；
h)与来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据a)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据d)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据g)所述的原始氨基酸序列相比)。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合p19的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，p19+序列可包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组2”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组2”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组4”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组4”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组6”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组6”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组4”或来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组2”或来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组2”或来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合p19的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，p19+序列可包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组2”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组2”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组4”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组4”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组6”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组6”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合p19的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与表A-2和图20中列举的至少一个p19+序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：1890；1891；1892；1893；1894；1895；1896；1897；1898；1899；1900；2485；2486；2487；2488；2489和/或2490(见表A-2和图20)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)p19亚单位；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合p19亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值(所有如本文(进一步)所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组2”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组2”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组4”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组4”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组6”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组6”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组2”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组2”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组4”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组4”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组6”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组6”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组2”的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由来自“CDR2序列组4”的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由来自“CDR3序列组6”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本发明所定义)p19亚单位；并且更特别地以如本发明所定义的亲和力结合p19亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本发明进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：1890；1891；1892；1893；1894；1895；1896；1897；1898；1899；1900；2485；2486；2487；2488；2489和/或2490(见表A-2和图20)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸残基和SEQ ID NO’s：1890；1891；1892；1893；1894；1895；1896；1897；1898；1899；1900；2485；2486；2487；2488；2489和/或2490(见表A-2和图20)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
“p19+序列”的一些优选的但非限制性的实例是SEQ ID NO’s：1890；1891；1892；1893；1894；1895；1896；1897；1898；1899；1900；2485；2486；2487；2488；2489和/或2490(见表A-2和图20)的氨基酸序列。因此，根据本发明的另一个优选地但非限制性的方面，p19+序列是这样的氨基酸序列，其针对(如本文所定义)p19亚单位(如存在于例如IL-23中)，并且能够调节、中和、阻断和/或抑制包括p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合，和特别地能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与IL-23R的结合(例如在实施例19或22中的α-筛选测定中)，并且是下列的任一项
a)其具有与SEQ ID NO’s：1890；1891；1892；1893；1894；1895；1896；1897；1898；1899；1900；2485；2486；2487；2488；2489和/或2490(见表A-2和图20)的至少一个氨基酸序列具有至少70％氨基酸同一性，优选至少80％氨基酸同一性，更优选至少90％氨基酸同一性，诸如95％氨基酸同一性或更大或甚至基本上100％氨基酸同一性；
和/或其
b)其与SEQ ID NO’s：1890；1891；1892；1893；1894；1895；1896；1897；1898；1899；1900；2485；2486；2487；2488；2489和/或2490(见表A-2和图20)的至少一个氨基酸序列具有不超过20个，优选不超过10个，诸如9，8，7，6，5，4，3，2或仅一个氨基酸差异。优选地，此氨基酸序列在CDR’s中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异和/或在构架序列中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异；
和/或
c)其是(i)能够交叉阻断(如本文所定义)SEQ ID NO’s：1890；1891；1892；1893；1894；1895；1896；1897；1898；1899；1900；2485；2486；2487；2488；2489和/或2490的至少一个氨基酸序列与p19亚单位之间的相互作用和/或(ii)能够竞争SEQ ID NO’s：1890；1891；1892；1893；1894；1895；1896；1897；1898；1899；1900；2485；2486；2487；2488；2489和/或2490(见表A-2和图20)的至少一个氨基酸序列与p19亚单位的结合(即是其竞争剂)。
在另一个优选的但非限制性的方面，p19+序列选自SEQ ID NO’s：1890；1891；1892；1893；1894；1895；1896；1897；1898；1899；1900；2485；2486；2487；2488；2489和/或2490(见表A-2和图20)的氨基酸序列之一。
B)“p19-序列”。
一个具体的但非限制性的方面涉及“p19-序列”，在本文中其通常被定义为针对(如本文所定义)p19亚单位(如存在于例如IL-23中)，但(基本上)不能够中和、或抑制包括p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合(例如，在实施例19和22中对于IL-23及其同源受体和对于IL-12及其同源受体的适当α-筛选测定中)的氨基酸序列。
P19-序列通常可以如本文大体上对本发明的氨基酸序列的进一步所述(例如，就对p19的亲和力、特异性等而言)。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述，p19-序列优选地是这样的，即，它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以例如是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，由4个构架区和三个CDR’s构成的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体，单结构域抗体，VHH’s，“dAb’s”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们的适当的片段。
在一个特殊的方面，p19-序列可包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图12)；
b)与来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图12)；
e)与来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图12)；
h)与来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据a)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据d)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据g)所述的原始氨基酸序列相比)。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合p19的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，p19-序列可包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组9”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组9”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组11”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组11”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组13的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组13”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组13”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组11”或来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组9”或来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组9”或来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合p19的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，p19-序列可包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组9”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组9”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR2序列组11”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR2序列组11”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR3序列组13”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR3序列组13”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合p19的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与表A-2和图21中列举的至少一个p19-序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：1901；1902；1903；1904；1905；1906；1907；1908；1909；1910；1911；1912；1913；1914；1915；1916；1917；1918；1919；1920；1921；1922；1923；1924；1925；1926；1927；1928；1929；1930；1931；1932；1933；1934；1935；1936；1937；1938；1939；2502和/或2503(见表A-2和图21)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)p19亚单位；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合p19亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值(所有如本文(进一步)所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组9”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组9”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组11”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组11”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组13”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组13”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组9”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组9”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组11”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组11”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组13”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组13”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组9”的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由来自“CDR2序列组11”的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由来自“CDR3序列组13”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本发明所定义)p19亚单位；并且更特别地以如本发明所定义的亲和力结合p19亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本发明进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：1901；1902；1903；1904；1905；1906；1907；1908；1909；1910；1911；1912；1913；1914；1915；1916；1917；1918；1919；1920；1921；1922；1923；1924；1925；1926；1927；1928；1929；1930；1931；1932；1933；1934；1935；1936；1937；1938；1939；2502和/或2503(见表A-2和图21)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸残基和SEQ ID NO’s：1901；1902；1903；1904；1905；1906；1907；1908；1909；1910；1911；1912；1913；1914；1915；1916；1917；1918；1919；1920；1921；1922；1923；1924；1925；1926；1927；1928；1929；1930；1931；1932；1933；1934；1935；1936；1937；1938；1939；2502和/或2503(见表A-2和图21)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
“p19-序列”的一些优选的但非限制性的实例是SEQ ID NO’s：1901；1902；1903；1904；1905；1906；1907；1908；1909；1910；1911；1912；1913；1914；1915；1916；1917；1918；1919；1920；1921；1922；1923；1924；1925；1926；1927；1928；1929；1930；1931；1932；1933；1934；1935；1936；1937；1938；1939；2502和/或2503(见表A-2和图21)的氨基酸序列。因此，根据本发明的另一个优选地但非限制性的方面，p19-序列是这样的氨基酸序列，其针对(如本文所定义)p19亚单位(如存在于例如IL-23中)，但(基本上)不能够中和或抑制包括p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合(例如，在实施例19和22中对于IL-23及其同源受体和对于IL-12及其同源受体的适当α-筛选测定中)的氨基酸序列，并且是下列的任一项
a)其具有与SEQ ID NO’s：1901；1902；1903；1904；1905；1906；1907；1908；1909；1910；1911；1912；1913；1914；1915；1916；1917；1918；1919；1920；1921；1922；1923；1924；1925；1926；1927；1928；1929；1930；1931；1932；1933；1934；1935；1936；1937；1938；1939；2502和/或2503(见表A-2和图21)的至少一个氨基酸序列具有至少70％氨基酸同一性，优选至少80％氨基酸同一性，更优选至少90％氨基酸同一性，诸如95％氨基酸同一性或更大或甚至基本上100％氨基酸同一性；
和/或
b)其与SEQ ID NO’s：1901；1902；1903；1904；1905；1906；1907；1908；1909；1910；1911；1912；1913；1914；1915；1916；1917；1918；1919；1920；1921；1922；1923；1924；1925；1926；1927；1928；1929；1930；1931；1932；1933；1934；1935；1936；1937；1938；1939；2502和/或2503(见表A-2和图21)的至少一个氨基酸序列具有不超过20个，优选不超过10个，诸如9，8，7，6，5，4，3，2或仅一个氨基酸差异。优选地，此氨基酸序列在CDR’s中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异和/或在构架序列中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异；
和/或
c)其是(i)能够交叉阻断(如本文所定义)SEQ ID NO’s：1901；1902；1903；1904；1905；1906；1907；1908；1909；1910；1911；1912；1913；1914；1915；1916；1917；1918；1919；1920；1921；1922；1923；1924；1925；1926；1927；1928；1929；1930；1931；1932；1933；1934；1935；1936；1937；1938；1939；2502和/或2503(见表A-2和图20)的至少一个氨基酸序列与p19亚单位之间的相互作用和/或(ii)能够竞争SEQ ID NO’s：1901；1902；1903；1904；1905；1906；1907；1908；1909；1910；1911；1912；1913；1914；1915；1916；1917；1918；1919；1920；1921；1922；1923；1924；1925；1926；1927；1928；1929；1930；1931；1932；1933；1934；1935；1936；1937；1938；1939；2502和/或2503(见表A-2和图21)的至少一个氨基酸序列与p19亚单位的结合(即是其竞争剂)。
在另一个优选的但非限制性的方面，p19-序列选自SEQ ID NO’s：1901；1902；1903；1904；1905；1906；1907；1908；1909；1910；1911；1912；1913；1914；1915；1916；1917；1918；1919；1920；1921；1922；1923；1924；1925；1926；1927；1928；1929；1930；1931；1932；1933；1934；1935；1936；1937；1938；1939；2502和/或2503(见表A-2和图21)的氨基酸序列之一。
C)P40-序列。
一个具体的但非限制性的方面涉及“p40-序列”，本文中其通常被定义为针对(如本文所定义)p40亚单位(如存在于例如IL-23和IL-12中)，但(基本上)不能够中和、或抑制包括p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合(例如，在实施例19和22中对于IL-23及其同源受体和对于IL-12及其同源受体的适当α-筛选测定中)的本发明的氨基酸序列。
P40-序列通常可以如本文大体上对本发明的氨基酸序列的进一步所述(例如，就对p40的亲和力、特异性等而言)。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述，p40-序列优选地是这样的，即，它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以例如是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，由4个构架区和三个CDR’s构成的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体，单结构域抗体，VHH’s，“dAb’s”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们的适当的片段。
在一个特殊的方面，p40-序列可包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图13)；
b)与来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图13)；
e)与来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图13)；
h)与来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据a)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据d)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据g)所述的原始氨基酸序列相比)。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合p40的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，p40-序列可包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组16”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组16”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组18”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组18”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组20的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组20”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组20”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组18”或来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组16”或来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组16”或来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合p40的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，p40-序列可包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组16”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组16”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR2序列组18”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR2序列组18”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR3序列组20”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR3序列组20”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合p40的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与表A-2和图22中列举的至少一个p40-序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：1940；1941；1942；1943；1944；1945；1955；1958；1968；1971；1972；1974；1975；1976；1977；1978；1979；1980；1983；1986；1989；1991；1992；1996；2002；2004；2006；2007；2023；2024；2028；2033；2504；2505；2506；2507；2508和/或2509(见表A-2和图22)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)p40亚单位；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合p40亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值(所有如本文(进一步)所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组16”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组16”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组18”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组18”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组20”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组20”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组16”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组16”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组18”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组18”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组20”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组20”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组16”的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由来自“CDR2序列组18”的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由来自“CDR3序列组20”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本发明所定义)p40亚单位；并且更特别地以如本发明所定义的亲和力结合p40亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本发明进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：1940；1941；1942；1943；1944；1945；1955；1958；1968；1971；1972；1974；1975；1976；1977；1978；1979；1980；1983；1986；1989；1991；1992；1996；2002；2004；2006；2007；2023；2024；2028；2033；2504；2505；2506；2507；2508和/或2509(见表A-2和图22)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸残基和SEQ IDNO’s：1940；1941；1942；1943；1944；1945；1955；1958；1968；1971；1972；1974；1975；1976；1977；1978；1979；1980；1983；1986；1989；1991；1992；1996；2002；2004；2006；2007；2023；2024；2028；2033；2504；2505；2506；2507；2508和/或2509(见表A-2和图22)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
“p40-序列”的一些优选的但非限制性的实例是SEQ ID NO’s：1940；1941；1942；1943；1944；1945；1955；1958；1968；1971；1972；1974；1975；1976；1977；1978；1979；1980；1983；1986；1989；1991；1992；1996；2002；2004；2006；2007；2023；2024；2028；2033；2504；2505；2506；2507；2508和/或2509(见表A-2和图22)的氨基酸序列。因此，根据本发明的另一个优选地但非限制性的方面，p40-序列是这样的氨基酸序列，其针对(如本文所定义)p40亚单位(如存在于例如IL-23和IL-12中)，但(基本上)不能够中和或抑制包括p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合(例如，在实施例19和22中对于IL-23及其同源受体和对于IL-12及其同源受体的适当α-筛选测定中)的氨基酸序列，并且是下列的任一项
a)其具有与SEQ ID NO’s：1940；1941；1942；1943；1944；1945；1955；1958；1968；1971；1972；1974；1975；1976；1977；1978；1979；1980；1983；1986；1989；1991；1992；1996；2002；2004；2006；2007；2023；2024；2028；2033；2504；2505；2506；2507；2508和/或2509(见表A-2和图22)的至少一个氨基酸序列具有至少70％氨基酸同一性，优选至少80％氨基酸同一性，更优选至少90％氨基酸同一性，诸如95％氨基酸同一性或更大或甚至基本上100％氨基酸同一性；
和/或
b)其与SEQ ID NO’s：1940；1941；1942；1943；1944；1945；1955；1958；1968；1971；1972；1974；1975；1976；1977；1978；1979；1980；1983；1986；1989；1991；1992；1996；2002；2004；2006；2007；2023；2024；2028；2033；2504；2505；2506；2507；2508和/或2509(见表A-2和图22)的至少一个氨基酸序列具有不超过20个，优选不超过10个，诸如9，8，7，6，5，4，3，2或仅一个氨基酸差异。优选地，此氨基酸序列在CDR’s中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异和/或在构架序列中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异；
和/或
c)其是(i)能够交叉阻断(如本文所定义)SEQ ID NO’s：1940；1941；1942；1943；1944；1945；1955；1958；1968；1971；1972；1974；1975；1976；1977；1978；1979；1980；1983；1986；1989；1991；1992；1996；2002；2004；2006；2007；2023；2024；2028；2033；2504；2505；2506；2507；2508和/或2509(见表A-2和图20)的至少一个氨基酸序列与p40亚单位之间的相互作用和/或(ii)能够竞争SEQ ID NO’s：1940；1941；1942；1943；1944；1945；1955；1958；1968；1971；1972；1974；1975；1976；1977；1978；1979；1980；1983；1986；1989；1991；1992；1996；2002；2004；2006；2007；2023；2024；2028；2033；2504；2505；2506；2507；2508和/或2509(见表A-2和图22)与p40亚单位的结合(即是其竞争剂)。
在另一个优选的但非限制性的方面，p40-序列选自SEQ ID NO’s：1940；1941；1942；1943；1944；1945；1955；1958；1968；1971；1972；1974；1975；1976；1977；1978；1979；1980；1983；1986；1989；1991；1992；1996；2002；2004；2006；2007；2023；2024；2028；2033；2504；2505；2506；2507；2508和/或2509(见表A-2和图22)的氨基酸序列之一。
D)P40+序列。
一个具体的但非限制性的方面涉及“p40+序列”，本文中其通常被定义为针对(如本文所定义)p40亚单位(如存在于例如IL-23和IL-12中)，并且能够调节、中和、阻断和/或抑制包括p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合，和特别地能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与其(同源)受体的结合(特别地，在实施例19或22中所述的α-筛选测定中)；和/或IL-12与其(同源)受体的结合(特别地，在实施例19中所述的α-筛选测定中)的本发明的氨基酸序列。
P40+序列通常可以如本文大体上对本发明的氨基酸序列的进一步所述(例如，就对p40的亲和力、特异性等而言)。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述，p40+序列优选地是这样的，即，它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以例如是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，由4个构架区和三个CDR’s构成的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体，单结构域抗体，VHH’s，“dAb’s”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们的适当的片段。
在一个特殊的方面，p40+序列可包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图14)；
b)与来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图14)；
e)与来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图14)；
h)与来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据a)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据d)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据g)所述的原始氨基酸序列相比)。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合p40的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，p40+序列可包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组23”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组23”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组25”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组25”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组27”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组27”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1 序列组23”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2 序列组25”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3 序列组27”的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组25”或来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组23”或来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组23”或来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合p40的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，p40+序列可包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组23”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组23”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组25”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组25”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组27”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组27”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合p40的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与表A-2和图23中列举的至少一个p40+序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：1942；1946；1948；1950；1952；1953；1954；1956；1957；1959；1962；1963；1964；1965；1967；1969；1970；1973；1981；1982；1984；1985；1987；1988；1990；1993；1994；1995；1997；1998；1999；2000；2001；2003；2005；2030；2510；2511；2512；2513；2514；2515；2516；2517；2518；2519；2520；2521；2522；2523；2524；2525；2526；2527和/或2528(见表A-2和图23)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)p40亚单位；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合p40亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值(所有如本文(进一步)所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组23”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组23”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组25”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组25”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组27”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组27”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组23”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组23”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组25”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组25”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组27”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组27”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组23”的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由来自“CDR2序列组25”的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由来自“CDR3序列组27”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本发明所定义)p40亚单位；并且更特别地以如本发明所定义的亲和力结合p40亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本发明进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：1942；1946；1948；1950；1952；1953；1954；1956；1957；1959；1962；1963；1964；1965；1967；1969；1970；1973；1981；1982；1984；1985；1987；1988；1990；1993；1994；1995；1997；1998；1999；2000；2001；2003；2005；2030；2510；2511；2512；2513；2514；2515；2516；2517；2518；2519；2520；2521；2522；2523；2524；2525；2526；2527和/或2528(见表A-2和图23)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸残基和SEQ ID NO’s：1942；1946；1948；1950；1952；1953；1954；1956；1957；1959；1962；1963；1964；1965；1967；1969；1970；1973；1981；1982；1984；1985；1987；1988；1990；1993；1994；1995；1997；1998；1999；2000；2001；2003；2005；2030；2510；2511；2512；2513；2514；2515；2516；2517；2518；2519；2520；2521；2522；2523；2524；2525；2526；2527和/或2528(见表A-2和图23)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
“p40+序列”的一些优选的但非限制性的实例是SEQ ID NO’s：1942；1946；1948；1950；1952；1953；1954；1956；1957；1959；1962；1963；1964；1965；1967；1969；1970；1973；1981；1982；1984；1985；1987；1988；1990；1993；1994；1995；1997；1998；1999；2000；2001；2003；2005；2030；2510；2511；2512；2513；2514；2515；2516；2517；2518；2519；2520；2521；2522；2523；2524；2525；2526；2527和/或2528(见表A-2和图23)的氨基酸序列。因此，根据本发明的另一个优选地但非限制性的方面，p40+序列是这样的氨基酸序列，其针对(如本文所定义)p40亚单位(如存在于例如IL-23和IL-12中)，并且能够调节、中和、阻断和/或抑制包括p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合，和特别地能够调节、中和、阻断和/或抑制IL-23与其(同源)受体的结合(特别地，在实施例19或22中所述的α-筛选测定中)；和/或IL-12与其(同源)受体的结合(特别地，在实施例19中所述的α-筛选测定中)的本发明的氨基酸序列，并且是下列的任一项
a)其具有与SEQ ID NO’s：1942；1946；1948；1950；1952；1953；1954；1956；1957；1959；1962；1963；1964；1965；1967；1969；1970；1973；1981；1982；1984；1985；1987；1988；1990；1993；1994；1995；1997；1998；1999；2000；2001；2003；2005；2030；2510；2511；2512；2513；2514；2515；2516；2517；2518；2519；2520；2521；2522；2523；2524；2525；2526；2527和/或2528(见表A-2和图23)的至少一个氨基酸序列具有至少70％氨基酸同一性，优选至少80％氨基酸同一性，更优选至少90％氨基酸同一性，诸如95％氨基酸同一性或更大或甚至基本上100％氨基酸同一性；
和/或
b)其与SEQ ID NO’s：1942；1946；1948；1950；1952；1953；1954；1956；1957；1959；1962；1963；1964；1965；1967；1969；1970；1973；1981；1982；1984；1985；1987；1988；1990；1993；1994；1995；1997；1998；1999；2000；2001；2003；2005；2030；2510；2511；2512；2513；2514；2515；2516；2517；2518；2519；2520；2521；2522；2523；2524；2525；2526；2527和/或2528(见表A-2和图23)的至少一个氨基酸序列具有不超过20个，优选不超过10个，诸如9，8，7，6，5，4，3，2或仅一个氨基酸差异。优选地，此氨基酸序列在CDR’s中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异和/或在构架序列中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异；
和/或
c)其是(i)能够交叉阻断(如本文所定义)SEQ ID NO’s：1942；1946；1948；1950；1952；1953；1954；1956；1957；1959；1962；1963；1964；1965；1967；1969；1970；1973；1981；1982；1984；1985；1987；1988；1990；1993；1994；1995；1997；1998；1999；2000；2001；2003；2005；2030；2510；2511；2512；2513；2514；2515；2516；2517；2518；2519；2520；2521；2522；2523；2524；2525；2526；2527和/或2528的至少一个氨基酸序列与p40亚单位之间的相互作用和/或(ii)能够竞争SEQ ID NO’s：1942；1946；1948；1950；1952；1953；1954；1956；1957；1959；1962；1963；1964；1965；1967；1969；1970；1973；1981；1982；1984；1985；1987；1988；1990；1993；1994；1995；1997；1998；1999；2000；2001；2003；2005；2030；2510；2511；2512；2513；2514；2515；2516；2517；2518；2519；2520；2521；2522；2523；2524；2525；2526；2527和/或2528(见表A-2和图23)的至少一个氨基酸序列与p40亚单位的结合(即是其竞争剂)。
在另一个优选的但非限制性的方面，p40+序列选自SEQ ID NO’s：1942；1946；1948；1950；1952；1953；1954；1956；1957；1959；1962；1963；1964；1965；1967；1969；1970；1973；1981；1982；1984；1985；1987；1988；1990；1993；1994；1995；1997；1998；1999；2000；2001；2003；2005；2030；2510；2511；2512；2513；2514；2515；2516；2517；2518；2519；2520；2521；2522；2523；2524；2525；2526；2527和/或2528(见表A-2和图23)的氨基酸序列之一。
E)P35序列。
一个具体的但非限制性的方面涉及“p35序列”，本文中其通常被定义为针对(如本文所定义)p35亚单位(如存在于例如IL-12中)的本发明的氨基酸序列。
P35序列通常可以如本文对本发明的氨基酸序列的进一步所述，即，就对p35的亲和力、特异性等而言。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述，p35序列优选地是这样的，即，它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以例如是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，由4个构架区和三个CDR’s构成的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体，单结构域抗体，VHH’s，“dAb’s”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们的适当的片段。
在一个特殊的方面，p35序列可包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图15)；
b)与来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图15)；
e)与来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图15)；
h)与来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据a)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据d)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据g)所述的原始氨基酸序列相比)。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合p35的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，p35序列可包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
j)来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列；
k)与来自“CDR1序列组30”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
l)与来自“CDR1序列组30”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
m)来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列；
n)与来自“CDR2序列组32”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
o)与来自“CDR2序列组32”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
p)来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列；
q)与来自“CDR3序列组34”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
r)与来自“CDR3序列组34”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组32”或来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组30”或来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组30”或来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合p35的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，p35序列可包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
j)来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列；
k)与来自“CDR1序列组30”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
l)与来自“CDR1序列组30”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR2序列组32”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR2序列组32”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR3序列组34”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR3序列组34”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合p35的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与表A-2和图24中列举的至少一个p35序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：1947；1949；1951；1960；1961；1966；2008；2009；2010；2011；2012；2013；2014；2015；2016；2017；2018；2019；2020；2021；2022；2025；2026；2027；2029；2031；2032；2034；2035；2036；2037和/或2529(见表A-2和图24)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)p35亚单位；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合p35亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值(所有如本文(进一步)所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
j)来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列；
k)与来自“CDR1序列组30”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
l)与来自“CDR1序列组30”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
m)来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列；
n)与来自“CDR2序列组32”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
o)与来自“CDR2序列组32”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
p)来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列；
q)与来自“CDR3序列组34”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
r)与来自“CDR3序列组34”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
j)来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列；
k)与来自“CDR1序列组30”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
l)与来自“CDR1序列组30”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
m)来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列；
n)与来自“CDR2序列组32”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
o)与来自“CDR2序列组32”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
p)来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列；
q)与来自“CDR3序列组34”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
r)与来自“CDR3序列组34”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组30”的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由来自“CDR2序列组32”的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)p35亚单位；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合p35亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本发明进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：1947；1949；1951；1960；1961；1966；2008；2009；2010；2011；2012；2013；2014；2015；2016；2017；2018；2019；2020；2021；2022；2025；2026；2027；2029；2031；2032；2034；2035；2036；2037和/或2529(见表A-2和图24)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸残基和SEQ ID NO’s：1947；1949；1951；1960；1961；1966；2008；2009；2010；2011；2012；2013；2014；2015；2016；2017；2018；2019；2020；2021；2022；2025；2026；2027；2029；2031；2032；2034；2035；2036；2037和/或2529(见表A-2和图24)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
p35序列的一些优选的但非限制性的实例是SEQ ID NO’s：1947；1949；1951；1960；1961；1966；2008；2009；2010；2011；2012；2013；2014；2015；2016；2017；2018；2019；2020；2021；2022；2025；2026；2027；2029；2031；2032；2034；2035；2036；2037和/或2529(见表A-2和图24)的氨基酸序列。因此，根据本发明的另一个优选地但非限制性的方面，p35序列是这样的氨基酸序列，其针对(如本文所定义)p35亚单位(如存在于例如IL-12中)，并且是下列的任一项
a)其具有与SEQ ID NO’s：1947；1949；1951；1960；1961；1966；2008；2009；2010；2011；2012；2013；2014；2015；2016；2017；2018；2019；2020；2021；2022；2025；2026；2027；2029；2031；2032；2034；2035；2036；2037和/或2529(见表A-2和图24)的至少一个氨基酸序列具有至少70％氨基酸同一性，优选至少80％氨基酸同一性，更优选至少90％氨基酸同一性，诸如95％氨基酸同一性或更大或甚至基本上100％氨基酸同一性；
和/或
b)其与SEQ ID NO’s：1947；1949；1951；1960；1961；1966；2008；2009；2010；2011；2012；2013；2014；2015；2016；2017；2018；2019；2020；2021；2022；2025；2026；2027；2029；2031；2032；2034；2035；2036；2037和/或2529(见表A-2和图24)的至少一个氨基酸序列具有不超过20个，优选不超过10个，诸如9，8，7，6，5，4，3，2或仅一个氨基酸差异。优选地，此氨基酸序列在CDR’s中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异和/或在构架序列中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异；
和/或
c)其是(i)能够交叉阻断(如本文所定义)SEQ ID NO’s：1947；1949；1951；1960；1961；1966；2008；2009；2010；2011；2012；2013；2014；2015；2016；2017；2018；2019；2020；2021；2022；2025；2026；2027；2029；2031；2032；2034；2035；2036；2037和/或2529的至少一个氨基酸序列与p35亚单位之间的相互作用和/或(ii)能够竞争SEQ ID NO’s：1947；1949；1951；1960；1961；1966；2008；2009；2010；2011；2012；2013；2014；2015；2016；2017；2018；2019；2020；2021；2022；2025；2026；2027；2029；2031；2032；2034；2035；2036；2037和/或2529(见表A-2和图24)的至少一个氨基酸序列与p35亚单位的结合(即是其竞争剂)。
在另一个优选的但非限制性的方面，p35序列选自SEQ ID NO’s：1947；1949；1951；1960；1961；1966；2008；2009；2010；2011；2012；2013；2014；2015；2016；2017；2018；2019；2020；2021；2022；2025；2026；2027；2029；2031；2032；2034；2035；2036；2037和/或2529(见表A-2和图24)的氨基酸序列之一。
F)IL-27序列。
一个具体的但非限制性的方面涉及“IL-27序列”，本文中其通常被定义为针对(如本文所定义)IL-27(针对EBI3亚单位或p28亚单位)的本发明的氨基酸序列。
IL-27序列通常可以如本文大体上对本发明的氨基酸序列的进一步所述(即，就对IL-27或其亚单位之一的亲和力、特异性等而言)。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述，IL-27序列优选地是这样的，即，它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以例如是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，由4个构架区和3个CDR’s构成的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体，单结构域抗体，VHH’s，“dAb’s”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们的适当的片段。
在一个特殊的方面，IL-27序列可包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图16)；
b)与来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图16)；
e)与来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图16)；
h)与来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据a)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据d)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据g)所述的原始氨基酸序列相比)。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合IL-27的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，IL-27序列可包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组37”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组37”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组39”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组39”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组41”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组41”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组39”或来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组37”或来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组37”或来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合IL-27的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，IL-27序列可包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组37”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组37”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR2序列组39”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR2序列组39”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR3序列组41”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR3序列组41”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合IL-27的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与表A-2和图26中列举的至少一个IL-27序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：2038；2039；2040；2041；2042；2043；2044；2045；2046；2047；2048；2049；2050；2051；2052；2053；2054；2055；2056；2057；2058；2059；2060；2061；2062；2063；2064；2065；2066；2067；2068；2069；2070；2071；2072；2073；2074；2075和/或2076(见表A-2和图26)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)IL-27(即，结合EBI3亚单位或p28亚单位)；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合IL-27(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值(所有如本文(进一步)所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组37”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组37”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组39”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组39”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组41”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组41”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组37”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组37”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组39”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组39”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组41”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组41”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组37”的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由来自“CDR2序列组39”的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由来自“CDR3序列组41”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)IL-27；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合IL-27(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本发明进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：2038；2039；2040；2041；2042；2043；2044；2045；2046；2047；2048；2049；2050；2051；2052；2053；2054；2055；2056；2057；2058；2059；2060；2061；2062；2063；2064；2065；2066；2067；2068；2069；2070；2071；2072；2073；2074；2075和/或2076(见表A-2和图26)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸残基和SEQ ID NO’s：2038；2039；2040；2041；2042；2043；2044；2045；2046；2047；2048；2049；2050；2051；2052；2053；2054；2055；2056；2057；2058；2059；2060；2061；2062；2063；2064；2065；2066；2067；2068；2069；2070；2071；2072；2073；2074；2075和/或2076(见表A-2和图26)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
IL-27序列的一些优选的但非限制性的实例是SEQ ID NO’s：2038；2039；2040；2041；2042；2043；2044；2045；2046；2047；2048；2049；2050；2051；2052；2053；2054；2055；2056；2057；2058；2059；2060；2061；2062；2063；2064；2065；2066；2067；2068；2069；2070；2071；2072；2073；2074；2075和/或2076(见表A-2和图26)的氨基酸序列。因此，根据本发明的另一个优选地但非限制性的方面，IL-27序列是这样的氨基酸序列，其针对(如本文所定义)IL-27，并且是下列的任一项：
a)其具有与SEQ ID NO’s：2038；2039；2040；2041；2042；2043；2044；2045；2046；2047；2048；2049；2050；2051；2052；2053；2054；2055；2056；2057；2058；2059；2060；2061；2062；2063；2064；2065；2066；2067；2068；2069；2070；2071；2072；2073；2074；2075和/或2076(见表A-2和图26)的至少一个氨基酸序列具有至少70％氨基酸同一性，优选至少80％氨基酸同一性，更优选至少90％氨基酸同一性，诸如95％氨基酸同一性或更大或甚至基本上100％氨基酸同一性；
和/或
b)其与SEQ ID NO’s：2038；2039；2040；2041；2042；2043；2044；2045；2046；2047；2048；2049；2050；2051；2052；2053；2054；2055；2056；2057；2058；2059；2060；2061；2062；2063；2064；2065；2066；2067；2068；2069；2070；2071；2072；2073；2074；2075和/或2076(见表A-2和图26)的至少一个氨基酸序列具有不超过20个，优选不超过10个，诸如9，8，7，6，5，4，3，2或仅一个氨基酸差异。优选地，此氨基酸序列在CDR’s中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异和/或在构架序列中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异；
和/或
c)其是(i)能够交叉阻断(如本文所定义)SEQ ID NO’s：2038；2039；2040；2041；2042；2043；2044；2045；2046；2047；2048；2049；2050；2051；2052；2053；2054；2055；2056；2057；2058；2059；2060；2061；2062；2063；2064；2065；2066；2067；2068；2069；2070；2071；2072；2073；2074；2075和/或2076的至少一个氨基酸序列与IL-27之间的相互作用和/或(ii)能够竞争SEQ ID NO’s：2038；2039；2040；2041；2042；2043；2044；2045；2046；2047；2048；2049；2050；2051；2052；2053；2054；2055；2056；2057；2058；2059；2060；2061；2062；2063；2064；2065；2066；2067；2068；2069；2070；2071；2072；2073；2074；2075和/或2076(见表A-2和图26)的至少一个氨基酸序列与IL-27的结合(即是其竞争剂)。
在另一个优选的但非限制性的方面，IL-27序列选自SEQ ID NO’s：2038；2039；2040；2041；2042；2043；2044；2045；2046；2047；2048；2049；2050；2051；2052；2053；2054；2055；2056；2057；2058；2059；2060；2061；2062；2063；2064；2065；2066；2067；2068；2069；2070；2071；2072；2073；2074；2075和/或2076(见表A-2和图26)的氨基酸序列之一。
G)IL-12Rb1序列。
一个具体的但非限制性的方面涉及“IL-12Rb1序列”，本文中其通常被定义为针对(如本文所定义)IL-12Rb1亚单位，如存在于IL-12的受体以及IL-23的受体两者中(并且由此，针对IL-12以及IL-23的受体)的本发明的氨基酸序列。
IL-12Rb1序列通常可以如本文大体上对本发明的氨基酸序列的进一步所述(即，就对IL-12Rb1的亲和力、特异性等而言)。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述，IL-12Rb1序列优选地是这样的，即，它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以例如是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，由4个构架区和3个CDR’s构成的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体，单结构域抗体，VHH’s，“dAb’s”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们的适当的片段。
在一个特殊的方面，IL-12Rb1序列可包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图17)；
b)与来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图17)；
e)与来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图17)；
h)与来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据a)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据d)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据g)的原始氨基酸序列相比)。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组34”的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合IL-12Rb1的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，IL-12Rb1序列可包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组44”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组44”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组46”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组46”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组48”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组48”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
a)来自CDR1序列组44”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组46”或来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组44”或来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组44”或来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合IL-12Rb1的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，IL-12Rb1序列可包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组44”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组44”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组46”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组46”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR3序列组48”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR3序列组48”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合IL-12Rb1的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与表A-2和图27中列举的至少一个IL-12Rb1序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：2077；2078；2079；2080；2081；2082；2083；2084；2085；2086；2087；2088；2089；2090；2091；2092；2093；2094；2095；2096；2097；2098；2099；2100；2101；2102和/或2103(见表A-2和图27)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)IL-12Rb1亚单位(即，存在于IL-12的受体和/或IL-23的受体中)；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合IL-12Rb1亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值(所有如本文(进一步)所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组44”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组44”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组46”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组46”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组48”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组48”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组44”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组44”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组46”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组46”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组48”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组48”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组44”的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由来自“CDR2序列组46”的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由来自“CDR3序列组48”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)IL-12Rb1；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合IL-12Rb1(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本发明进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：2077；2078；2079；2080；2081；2082；2083；2084；2085；2086；2087；2088；2089；2090；2091；2092；2093；2094；2095；2096；2097；2098；2099；2100；2101；2102和/或2103(见表A-2和图27)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸残基和SEQ ID NO’s：2077；2078；2079；2080；2081；2082；2083；2084；2085；2086；2087；2088；2089；2090；2091；2092；2093；2094；2095；2096；2097；2098；2099；2100；2101；2102和/或2103(见表A-2和图27)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
IL-12Rb1序列的一些优选的但非限制性的实例是SEQ ID NO’s：2077；2078；2079；2080；2081；2082；2083；2084；2085；2086；2087；2088；2089；2090；2091；2092；2093；2094；2095；2096；2097；2098；2099；2100；2101；2102和/或2103(见表A-2和图27)的氨基酸序列。因此，根据本发明的另一个优选地但非限制性的方面，IL-12Rb1序列是这样的氨基酸序列，其针对(如本文所定义)IL-12Rb1，并且是下列的任一项：
a)其具有与SEQ ID NO’s：2077；2078；2079；2080；2081；2082；2083；2084；2085；2086；2087；2088；2089；2090；2091；2092；2093；2094；2095；2096；2097；2098；2099；2100；2101；2102和/或2103(见表A-2和图27)的至少一个氨基酸序列具有至少70％氨基酸同一性，优选至少80％氨基酸同一性，更优选至少90％氨基酸同一性，诸如95％氨基酸同一性或更大或甚至基本上100％氨基酸同一性；
和/或
b)其与SEQ ID NO’s：2077；2078；2079；2080；2081；2082；2083；2084；2085；2086；2087；2088；2089；2090；2091；2092；2093；2094；2095；2096；2097；2098；2099；2100；2101；2102和/或2103(见表A-2和图27)的至少一个氨基酸序列具有不超过20个，优选不超过10个，诸如9，8，7，6，5，4，3，2或仅一个氨基酸差异。优选地，此氨基酸序列在CDR’s中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异和/或在构架序列中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异；
和/或
c)其是(i)能够交叉阻断(如本文所定义)SEQ ID NO’s：2077；2078；2079；2080；2081；2082；2083；2084；2085；2086；2087；2088；2089；2090；2091；2092；2093；2094；2095；2096；2097；2098；2099；2100；2101；2102和/或2103的至少一个氨基酸序列与IL-12Rb1之间的相互作用和/或(ii)能够竞争SEQ ID NO’s：2077；2078；2079；2080；2081；2082；2083；2084；2085；2086；2087；2088；2089；2090；2091；2092；2093；2094；2095；2096；2097；2098；2099；2100；2101；2102和/或2103(见表A-2和图27)的至少一个氨基酸序列与IL-12Rb1的结合(即是其竞争剂)。
在另一个优选的但非限制性的方面，IL-12Rb1序列选自SEQ ID NO’s：2077；2078；2079；2080；2081；2082；2083；2084；2085；2086；2087；2088；2089；2090；2091；2092；2093；2094；2095；2096；2097；2098；2099；2100；2101；2102和/或2103(见表A-2和图27)的氨基酸序列之一。
H)IL-12Rb2序列。
一个具体的但非限制性的方面涉及“IL-12Rb2序列”，本文中其通常被定义为针对(如本文所定义)IL-12Rb2亚单位，例如如存在于IL-12的受体中(并且由此，针对IL-12的受体)的本发明的氨基酸序列。
IL-12Rb2序列通常可以如本文大体上对本发明的氨基酸序列的进一步所述(即，就对IL-12Rb2的亲和力、特异性等而言)。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述，IL-12Rb2序列优选地是这样的，即，它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以例如是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，由4个构架区和三个CDR’s构成的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体，单结构域抗体，VHH’s，“dAb’s”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们的适当的片段。
在一个特殊的方面，IL-12Rb2序列可包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图18)；
b)与来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图18)；
e)与来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图18)；
h)与来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据a)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据d)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据g)所述的原始氨基酸序列相比)。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合IL-12Rb2的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，IL-12Rb2序列可包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组51”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组51”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组53”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组53”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组55”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组55”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组53”或来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组51”或来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组51”或来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合IL-12Rb2的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，IL-12Rb2序列可包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组51”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组51”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨
基酸差异的氨基酸序列；第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR2序列组53的氨基酸序列；
b)与来自“CDR2序列组53”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR2序列组53”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR3序列组55”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR3序列组55”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合IL-12Rb2的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与表A-2和图28中列举的至少一个IL-12Rb2序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：2104；2105；2106；2107；2108；2109；2110；2111；2112；2113；2114；2115；2116；2117；2118；2119；2120；2121；2122；2123和/或2124(见表A-2和图28)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)IL-12Rb2亚单位(即，如存在于IL-12的受体中)；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合IL-12Rb2亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值(所有如本文(进一步)所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组51”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组51”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组53”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组53”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组55”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组55”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组51”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组51”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组53”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组53”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组55”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组55”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组51”的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由来自“CDR2序列组53”的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由来自“CDR3序列组55”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)IL-12Rb2；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合IL-12Rb2(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，所有如本发明(进一步)所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：2104；2105；2106；2107；2108；2109；2110；2111；2112；2113；2114；2115；2116；2117；2118；2119；2120；2121；2122；2123和/或2124(见表A-2和图28)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸残基和SEQ ID NO’s：2104；2105；2106；2107；2108；2109；2110；2111；2112；2113；2114；2115；2116；2117；2118；2119；2120；2121；2122；2123和/或2124(见表A-2和图28)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
IL-12Rb2序列的一些优选的但非限制性的实例是SEQ ID NO’s：2104；2105；2106；2107；2108；2109；2110；2111；2112；2113；2114；2115；2116；2117；2118；2119；2120；2121；2122；2123和/或2124(见表A-2和图28)的氨基酸序列。因此，根据本发明的另一个优选地但非限制性的方面，IL-12Rb2序列是这样的氨基酸序列，其针对(如本文所定义)IL-12Rb2，并且是下列的任一项：
a)其具有与SEQ ID NO’s：2104；2105；2106；2107；2108；2109；2110；2111；2112；2113；2114；2115；2116；2117；2118；2119；2120；2121；2122；2123和/或2124(见表A-2和图28)的至少一个氨基酸序列具有至少70％氨基酸同一性，优选至少80％氨基酸同一性，更优选至少90％氨基酸同一性，诸如95％氨基酸同一性或更大或甚至基本上100％氨基酸同一性；
和/或
b)其与SEQ ID NO’s：2104；2105；2106；2107；2108；2109；2110；2111；2112；2113；2114；2115；2116；2117；2118；2119；2120；2121；2122；2123和/或2124(见表A-2和图28)的至少一个氨基酸序列具有不超过20个，优选不超过10个，诸如9，8，7，6，5，4，3，2或仅一个氨基酸差异。优选地，此氨基酸序列在CDR’s中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异和/或在构架序列中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异；
和/或
c)其是(i)能够交叉阻断(如本文所定义)SEQ ID NO’s：2104；2105；2106；2107；2108；2109；2110；2111；2112；2113；2114；2115；2116；2117；2118；2119；2120；2121；2122；2123和/或2124的至少一个氨基酸序列与IL-12Rb2之间的相互作用和/或(ii)能够竞争SEQ ID NO’s：2104；2105；2106；2107；2108；2109；2110；2111；2112；2113；2114；2115；2116；2117；2118；2119；2120；2121；2122；2123和/或2124(见表A-2和图28)的至少一个氨基酸序列与IL-12Rb2的结合(即是其竞争剂)。
在另一个优选的但非限制性的方面，IL-12Rb2序列选自SEQ ID NO’s：2104；2105；2106；2107；2108；2109；2110；2111；2112；2113；2114；2115；2116；2117；2118；2119；2120；2121；2122；2123和/或2124(见表A-2和图28)的氨基酸序列之一。
I)IL-23R序列。
一个具体的但非限制性的方面涉及“IL-23R序列”，本文中其通常被定义为针对(如本文所定义)IL-23R亚单位，例如如存在于IL-12的受体中(并且由此，针对IL-23的受体)的本发明的氨基酸序列。
IL-23R序列通常可以如本文大体上对本发明的氨基酸序列的进一步所述(即，就对IL-23R的亲和力、特异性等而言)。此外，如本文对本发明的氨基酸序列所述，IL-23R序列优选地是这样的，即，它们形成或能够形成(任选地在适当的折叠后)单个抗原结合结构域或抗原结合单位，并且可以例如是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，由4个构架区和3个CDR’s构成的氨基酸序列，并且可以特别地是结构域抗体，单结构域抗体，VHH’s，“dAb’s”或纳米抗体(所有均如本文进一步所述)，或它们的适当的片段。
在一个特殊的方面，IL-23R序列可包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图19)；
b)与来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图19)；
e)与来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列(如表A-1中定义和列举；还见图19)；
h)与来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列的至少一个具有至少80％氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列的至少一个具有3，2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据a)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据d)所述的原始氨基酸序列相比)。此外，任选地，当本发明的氨基酸序列含有根据h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时，可选条件I，可选条件II和/或可选条件III(所有均如本文所定义)可应用于所述氨基酸序列(即，与根据g)所述的原始氨基酸序列相比)。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合IL-23R的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，IL-23R序列可包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组58”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组58”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组60”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组60”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组62”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组62”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
a)来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列；
b)来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列；和
c)来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组60”或来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组58”或来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于来自“CDR1序列组58”或来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合IL-23R的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，IL-23R序列可包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组58”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组58”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组60的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组60”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组60”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组62”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组62”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合IL-23R的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与表A-2和图29中列举的至少一个IL-23R序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：2125；2126；2127；2128；2129；2130；2131；2132；2133；2134；2135；2136；2137；2138；2139；2140和/或2141(见表A-2和图29)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)IL-23R亚单位(即，如存在于IL-12的受体中)；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合IL-23R亚单位(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值(所有如本文(进一步)所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组58”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组58”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组60”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组60”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组62”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组62”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列；
b)与来自“CDR1序列组58”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与来自“CDR1序列组58”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列；
e)与来自“CDR2序列组60”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与来自“CDR2序列组60”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列；
h)与来自“CDR3序列组62”的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与来自“CDR3序列组62”的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由来自“CDR1序列组58”的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由来自“CDR2序列组60”的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由来自“CDR3序列组62”的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)IL-23R；并且更特别地以如本文所定义的亲和力结合IL-23R(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，所有如本发明(进一步)所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：2125；2126；2127；2128；2129；2130；2131；2132；2133；2134；2135；2136；2137；2138；2139；2140和/或2141(见表A-2和图29)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸残基和SEQ ID NO’s：2125；2126；2127；2128；2129；2130；2131；2132；2133；2134；2135；2136；2137；2138；2139；2140和/或2141(见表A-2和图29)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
IL-23R序列的一些优选的但非限制性的实例是SEQ ID NO’s：2125；2126；2127；2128；2129；2130；2131；2132；2133；2134；2135；2136；2137；2138；2139；2140和/或2141(见表A-2和图29)的氨基酸序列。因此，根据本发明的另一个优选地但非限制性的方面，IL-23R序列是这样的氨基酸序列，其针对(如本文所定义)IL-23R，并且是下列的任一项：
a)其具有与SEQ ID NO’s：2125；2126；2127；2128；2129；2130；2131；2132；2133；2134；2135；2136；2137；2138；2139；2140和/或2141(见表A-2和图29)的至少一个氨基酸序列具有至少70％氨基酸同一性，优选至少80％氨基酸同一性，更优选至少90％氨基酸同一性，诸如95％氨基酸同一性或更大或甚至基本上100％氨基酸同一性；
和/或
b)其与SEQ ID NO’s：2125；2126；2127；2128；2129；2130；2131；2132；2133；2134；2135；2136；2137；2138；2139；2140和/或2141(见表A-2和图29)的至少一个氨基酸序列具有不超过20个，优选不超过10个，诸如9，8，7，6，5，4，3，2或仅一个氨基酸差异。优选地，此氨基酸序列在CDR’s中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异和/或在构架序列中具有不超过总计5个(诸如4，3，2或仅一个)所述氨基酸差异；
和/或
c)其(i)能够交叉阻断(如本文所定义)SEQ ID NO’s：2125；2126；2127；2128；2129；2130；2131；2132；2133；2134；2135；2136；2137；2138；2139；2140和/或2141的至少一个氨基酸序列与IL-23R之间的相互作用和/或(ii)能够竞争SEQ ID NO’s：2125；2126；2127；2128；2129；2130；2131；2132；2133；2134；2135；2136；2137；2138；2139；2140和/或2141(见表A-2和图29)的至少一个氨基酸序列与IL-23R的结合(即是其竞争剂)。
在另一个优选的但非限制性的方面，IL-23R序列选自SEQ ID NO’s：2125；2126；2127；2128；2129；2130；2131；2132；2133；2134；2135；2136；2137；2138；2139；2140和/或2141(见表A-2和图29)的氨基酸序列之一。
在一些其他的非限制性方面，本发明涉及：
-针对包括至少一个p19亚单位的异二聚体细胞因子的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p19+序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对包括至少一个p19亚单位的异二聚体细胞因子的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p19-序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对包括至少一个p40亚单位的异二聚体细胞因子的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p40-序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对包括至少一个p40亚单位的异二聚体细胞因子的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p40+序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对包括至少一个p35亚单位的异二聚体细胞因子的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p35序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-23的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p19+序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-23的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p19-序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-23的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p40-序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-23的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p40+序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-12的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p35序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-12的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p40-序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-12的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p40+序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-12和IL-23并且优选地与IL-27和/或IL-35相比对IL-12和/或IL-23特异(如本文所定义)的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p40-序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-12和IL-23并且优选地与IL-27和/或IL-35相比对IL-12和/或IL-23特异(如本文所定义)的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个p40+序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-27并且优选地与IL-12和/或IL-23相比对IL-27特异(如本文所定义)的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个IL-27序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对包括至少一个IL-12Rb1亚单位的异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个IL-12Rb1序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对包括至少一个IL-12Rb2亚单位的异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个IL-12Rb2序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对包括至少一个IL-23R亚单位的异二聚体细胞因子的受体的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个IL-23R序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-23的(同源)受体的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个IL-12Rb1序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-23的(同源)受体并且优选地与IL-12的(同源)受体相比对IL-23的(同源)受体特异(如本文所定义)的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个IL-23R序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-12R的(同源)受体的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个IL-12Rb1序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-12的(同源)受体并且优选地与IL-23的(同源)受体相比对IL-12的(同源)受体特异(如本文所定义)的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个IL-12Rb2序列(如本文所定义)或基本上由其组成；
-针对IL-12的(同源)受体以及IL-23的(同源)受体并且优选地对IL-12的(同源)受体和/或IL-27的(同源)受体和/或IL-35的(同源)受体特异(如本文所定义)的氨基酸序列、蛋白或多肽，所述氨基酸序列、蛋白或多肽包括至少一个IL-12Rb1序列(如本文所定义)或基本上由其组成。
同样，所述氨基酸序列、蛋白或多肽可如本文进一步所述。本发明还涉及编码其的核苷酸序列/核酸，包括其的制剂和剂型，产生其的方法和其的应用，所有均如本文进一步所述。
在本发明的氨基酸序列(诸如如本文所述的p19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)中，构架序列可以是任何合适的构架序列，并且例如，基于标准手册和进一步公开的内容以及本文所提及的现有技术，适当的构架序列的实例对于专业技术人员将是清楚的。
所述构架序列优选是免疫球蛋白构架序列或已经来源于免疫球蛋白构架序列(例如，通过人源化或骆驼源化)的构架序列(的适当组合)。例如，所述构架序列可以是来源于轻链可变结构域(例如，VL-序列)和/或来源于重链可变结构域(例如，VH-序列)的构架序列。在一个特别优选的方面中，所述构架序列是已经来源于VHH-序列的构架序列(其中所述构架序列可以任选地已经被部分或完全人源化)或是已经骆驼源化(如本文所定义)的常规VH序列。
所述构架序列优选地是这样的，以致本发明的氨基酸序列是结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)；是单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)；是″dAb″(或适合用作dAb的氨基酸序列)；或是纳米抗体TM(包括但不限于VHH序列)。同样地，例如，基于标准手册和进一步的公开内容以及本文所提及的现有技术，适当的构架序列对于专业技术人员将是清楚的。
特别地，在本发明的氨基酸序列中存在的所述构架序列可以包含一个或多个标志残基(如本文所定义)，以致本发明的氨基酸序列是一种纳米抗体TM。所述构架序列(的适当的组合)的一些优选的、而非限制性的实例将通过本发明进一步的公开内容变得清楚。
同样地，如本发明关于本发明的氨基酸序列概括所述，还可以使用前述任一种的适当的片段(或片段组合)，诸如包含适当与一个或多个构架序列侧连和/或通过一个或多个构架序列连接的一个或多个CDR序列的片段(例如，以如这些CDR相同的顺序，并且构架序列可以以所述片段所来源的完整大小的免疫球蛋白序列存在)。所述片段还可以也是这样的，以致它们包括或可以形成免疫球蛋白折叠，或者备选地是这样的，以致它们不包括或不能形成免疫球蛋白折叠。
在一个具体的方面中，这样的片段包括如本发明所述的单CDR序列(并且特别是CDR3序列)，其在每一端侧连构架序列(的一部分)(并且特别地，在所述片段所来源的免疫球蛋白序列中与所述CDR序列相邻的构架序列的一部分。例如，CDR3序列可以在FR3序列(的一部分)之后并且在FR4序列(的一部分)之前)。这样的片段还可以包含二硫键，并且特别是连接分别在所述CDR序列之前和之后的两个构架区的二硫键(为了形成这样的二硫键的目的，可以使用在所述构架区中天然存在的半胱氨酸残基，或备选地，半胱氨酸残基可以合成添加或引入到所述构架区)。对于这些“派遣片段”的进一步描述，同样参考WO 03/050531，以及埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)于2006年12月5日提交的题目为“能够结合血清蛋白的肽(Peptides capable of binding to serum proteins)”的美国临时申请(发明人：Revets，Hilde Adi Pierrette；Kolkman，Joost Alexander；和Hoogenboom，Hendricus Renerus Jacobus Mattheus)，(还见PCT/EP2007/063348)。
在另一个方面中，本发明涉及一种化合物或构建体，并且特别是一种蛋白或多肽(在本发明中还分别称为“本发明的化合物”或“本发明的多肽”)，其包括一个或多个本发明的氨基酸序列(或其适当的片段)或基本上由其组成，并且任选地还包括一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位。如通过本文进一步的公开内容，对于专业技术人员将变得清楚的，所述其它基团、残基、结构部分、结合单位或氨基酸序列可以或可以不为本发明的氨基酸序列(和/或为其存在于其中的化合物或构建体)提供其它的官能性，并且可以或可以不改变本发明的氨基酸序列的特性。
例如，所述其它基团、残基、结构部分或结合单位可以是一个或多个额外的氨基酸序列，以致所述化合物或构建体是一种(融合)蛋白或(融合)多肽。在一个优选而非限制性的方面中，所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位是免疫球蛋白序列。甚至更优选地，所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位选自由下列各项组成的组：结构域抗体、适合于用作结构域抗体的氨基酸序列、单结构域抗体、适合于用作单结构域抗体，“dAb”的氨基酸序列、适合于用作dAb的氨基酸序列、或纳米抗体。
备选地，例如，所述基团、残基、结构部分或结合单位可以是化学基团、残基、结构部分，其自身可以是或可以不是生物学和/或药理学活性的。例如，并且不限于，所述基团可以连接到一个或多个本发明的氨基酸序列上，以提供本发明的氨基酸序列或多肽的“衍生物”，如本发明进一步所述。
也在本发明范围内的是这样的化合物或构建体，其包括一个或多个本文所述的衍生物或基本上由其组成，并且任选地还包括任选地通过一个或多个接头连接的一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位。优选地，所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位是氨基酸序列。
在上述化合物或构建体中，所述一个或多个本发明的氨基酸序列以及所述一个或多个基团、残基、结构部分或结合单位可以彼此直接连接和/或通过一个或多个适当的接头或间隔体连接。例如，当所述一个或多个基团、残基、结构部分或结合单位是氨基酸序列时，所述接头可以也是氨基酸序列，以致所得到的化合物或构建体是融合(蛋白)或融合(多肽)。
本发明的化合物或多肽通常可以通过这样的方法制备，所述方法包括将所述一个或多个本发明的氨基酸序列任选地通过一个或多个适当的接头适当地连接到所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位上的至少一个步骤，以提供本发明的化合物或多肽。本发明的多肽还可以通过这样的方法制备，所述方法通常至少包括下述步骤：提供编码本发明的多肽的核酸，以适当方式表达所述核酸，和回收所表达的本发明的多肽。这样的方法可以以本身已知的方式进行，例如，基于本发明进一步所述的方法和技术，其对于专业技术人员将是清楚的。
由本发明的氨基酸序列起始，设计/选择和/或制备本发明的化合物或多肽的方法在本文中还称为“格式化”所述的本发明的氨基酸序列；并且组成本发明的化合物或多肽的一部分的本发明的氨基酸被认为是“格式化的”或采用所述的本发明的化合物或多肽的“格式”。基于本文的公开内容，专业技术人员将清楚本发明的氨基酸序列可以被格式化的方法实例以及所述格式的实例；并且所述格式化的氨基酸序列形成本发明的另一个方面。
在本发明的一个具体方面中，与相对应的本发明的氨基酸序列相比，本发明的化合物或本发明的多肽可以具有增加的半衰期。基于本文进一步的公开内容，所述化合物和多肽的一些优选而非限制性实例对于专业技术人员将变得清楚，并且例如包括下列各项：已经被化学修饰以增加其半衰期(例如，通过聚乙二醇化方式)的本发明的氨基酸序列或多肽；包括至少一个用于结合血清蛋白(诸如血清白蛋白，见例如EP 0 368 684B1，第4页)的另外的结合位点的本发明的氨基酸序列；或包括至少一个与增加本发明的氨基酸序列的半衰期的至少一个结构部分(并且特别是至少一个氨基酸序列)连接的本发明的氨基酸序列的本发明的多肽。基于本发明进一步的公开内容，包括所述延长半衰期的结构部分或氨基酸序列的本发明的多肽的实例对于专业技术人员将变得清楚；并且例如，包括，但不限于，这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的氨基酸序列适当地连接一个或多个血清蛋白或其片段(诸如(人)血清白蛋白或其适当的片段)或连接一个或多个可以结合血清蛋白的结合单位(诸如，例如，结构域抗体，适合于用作结构域抗体、单结构域抗体的氨基酸序列，适合于用作单结构域抗体，“dAb”的氨基酸序列，适合于用作dAb的氨基酸序列，或可以结合血清蛋白如血清白蛋白(诸如人血清白蛋白)、血清免疫球蛋白如IgG、或运铁蛋白的纳米抗体；参考进一步的描述和本发明提及的参考文献)；这样的多肽，其中本发明的氨基酸序列连接Fc部分(诸如人Fc)或其适当的部分或片段；或这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的氨基酸序列适当连接一个或多个可以结合血清蛋白的小蛋白或肽(诸如，但不限于，记载在WO 91/01743，WO 01/45746，WO 02/076489和埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)于2006年12月5日提交的题目为“能够结合血清蛋白的肽”的美国临时申请(还见PCT/EP2007/063348和WO 08/068280)以及埃博灵克斯股份有限公司的题目均为“能够结合血清蛋白的改进的肽”的美国临时申请61/050,385和61/045,690。
通常，具有增加的半衰期的本发明的化合物或多肽优选地具有比相对应的本发明的氨基酸序列本身的半衰期高至少1.5倍、优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的半衰期。例如，与相对应的本发明的氨基酸序列本身相比，具有增加的半衰期的本发明的化合物或多肽可以具有增加超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的半衰期。
在本发明的一个优选而非限制性方面中，与相对应的本发明的氨基酸序列本身相比，所述本发明的化合物或多肽具有增加超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的血清半衰期。
在本发明的另一个优选而非限制性方面中，所述本发明的化合物或多肽在人中表现出至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期。例如，本发明的化合物或多肽可以具有至少5天(诸如约5-10天)、优选至少9天(诸如约9-14天)、更优选至少约10天(诸如约10-15天)、或至少约11天(诸如约11-16天)、更优选至少约12天(诸如约12-18天或更多)、或超过14天(诸如约14-19天)的血清半衰期。
本发明的一些优选的但非限制性的实例为：
-SEQ ID NO：2142；SEQ ID NO：2143；SEQ ID NO：2144；SEQ ID NO：2145；SEQ ID NO：2146；SEQ ID NO：2147；SEQ ID NO：2148；SEQ ID NO：2149；SEQ ID NO：2150；SEQ ID NO：2151；SEQ ID NO：2152；SEQ ID NO：2153；SEQ ID NO：2154；SEQ ID NO：2155；SEQ ID NO：2156；SEQ ID NO：2157；SEQ ID NO：2158；SEQ ID NO：2159；SEQ ID NO：2160；SEQ ID NO：2161；SEQ ID NO：2162；SEQ ID NO：2163；SEQ ID NO：2164；SEQ ID NO：2165；SEQ ID NO：2166；SEQ ID NO：2167；SEQ ID NO：2168；SEQ ID NO：2169；SEQ ID NO：2530；SEQ ID NO：2531；SEQ ID NO：2532；SEQ ID NO：2533；SEQ ID NO：2534；SEQ ID NO：2535；SEQ ID NO：2536；SEQ ID NO：2537；SEQ ID NO：2538；SEQ ID NO：2539；SEQ ID NO：2540；SEQ ID NO：2541；SEQ ID NO：2542；SEQ ID NO：2543；SEQ ID NO：2544；SEQ ID NO：2545；SEQ ID NO：2546；SEQ ID NO：2547；SEQ ID NO：2548；SEQ ID NO：2549；SEQ ID NO：2550；SEQ ID NO：2551；SEQ ID NO：2552；SEQ ID NO：2553；SEQ ID NO：2554；SEQ ID NO：2555；SEQ ID NO：2556；SEQ ID NO：2557和/或SEQ ID NO：2558的多肽(还见图30)；它们是针对p19(即，包括至少一个p19+序列和/或至少一个p19-序列)的本发明的多价、多特异性和/或双互补位型多肽的一些非限制性实例。这些多肽针对(如本文所定义)并(期望)对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(与不包括p19亚单位的其他异二聚体细胞因子相比)特异(如本文所定义)。例如，这些多肽期望与IL-12(和还与IL-27和/或IL-35)相比对IL-23特异(如本文所定义)；
-SEQ ID NO：2615；SEQ ID NO：2616；SEQ ID NO：2617；SEQ ID NO：2618；SEQ ID NO：2619；SEQ ID NO：2620；SEQ ID NO：2621和/或SEQ ID
NO：2622的多肽(还见图32)；它们是针对包括至少一个人源化p19+序列和/或至少一个人源化p19-序列的p19的多价、多特异性和/或双互补位型多肽的一些非限制性实例。这些多肽针对(如本文所定义)并(期望)对包括p19亚单位的异二聚体细胞因子(与不包括p19亚单位的其他异二聚体细胞因子相比)特异(如本文所定义)。例如，这些多肽期望与IL-12(并且还与IL-27和/或IL-35)相比对IL-23特异(如本文所定义)；
-SEQ ID NO：2623；SEQ ID NO：2624；SEQ ID NO：2625；SEQ ID NO：2626；SEQ ID NO：2627；SEQ ID NO：2628；SEQ ID NO：2629；SEQ ID NO：2643和/或SEQ ID NO：2644的多肽(还见图33)；它们是包括至少一个针对p19的本发明的氨基酸序列(即，至少一个p19+序列和/或至少一个p19-序列)和至少一个针对p40的本发明的氨基酸序列(即，至少一个p40+序列和/或至少一个p40-序列)的本发明的多特异性“p19-p40”多肽的一些非限制性实例。这些多肽期望与IL-12(并且还与IL-27和/或IL-35)相比对IL-23特异(如本文所定义)；
-SEQ ID NO：2630；SEQ ID NO：2631；SEQ ID NO：2632；SEQ ID NO：2633；SEQ ID NO：2634；SEQ ID NO：2635；SEQ ID NO：2636；SEQ ID NO：2637；SEQ ID NO：2638；SEQ ID NO：2639；SEQ ID NO：2640和/或SEQ ID
NO：2641的多肽(还见图34)；它们是针对p40的本发明的多价、多特异性和/或双互补位型多肽(即，包括至少一个p40+序列和/或至少一个p40-序列)的一些非限制性实例。这些多肽针对(如本文所定义)并(期望)对包括p40亚单位的异二聚体细胞因子(与不包括p40亚单位的其他异二聚体细胞因子相比)特异(如本文所定义)。例如，这些多肽期望与IL-27和/或IL-35相比对IL-23和/或IL-12特异(如本文所定义)；
-SEQ ID NO：2645和/或SEQ ID NO：2646的多肽(还见图35)，它们是针对p35的本发明的多价、多特异性和/或双互补位型多肽的一些非限制性实例。这些多肽针对(如本文所定义)并(期望)对包括p35亚单位的异二聚体细胞因子(与不包括p35亚单位的其他异二聚体细胞因子相比)特异(如本文所定义)。例如，这些多肽期望与IL-23(并且还与IL-27和/或IL-35)相比对IL-12特异(如本文所定义)；
-SEQ ID NO：2647和/或SEQ ID NO：2648的多肽(也见图36)，它们是包括至少一个针对p35的本发明的氨基酸序列和至少一个针对p40的本发明的氨基酸序列(即，至少一个p40+序列和/或至少一个p40-序列)的本发明的多特异性“p35-p40”多肽的一些非限制性实例。这些多肽期望与IL-23(并且还与IL-27和/或IL-35)相比对IL-12特异(如本文所定义)。
基于本文的公开内容，适于用于本发明中的多肽，可用于所述多肽中的本发明的氨基酸序列(诸如本文所述19+序列，p19-序列，p40+序列，p40-序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列和IL-23序列)(或包括其的核苷酸序列/核酸)的其它实例，以及如何可以使用所述本发明的氨基酸序列构建和产生本发明的多肽对于专业技术人员来说将是清楚的。
因此，本发明的一些其它方面涉及：
-SEQ ID NO：2142的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2142的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2143的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2143的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2144的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2144的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2145的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2145的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2146的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2146的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2147的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2147的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2148的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2148的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2149的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2149的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2150的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2150的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2151的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2151的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2152的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2152的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2153的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2153的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2154的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2154的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2155的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2155的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2156的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2156的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2157的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2157的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2158的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2158的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2159的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2159的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2160的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2160的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2161的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2161的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2162的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2162的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2163的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2163的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2164的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2164的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2165的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2165的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2166的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2166的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2167的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2167的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2168的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2168的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2169的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2169的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2530的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2530的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2531的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2531的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2532的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2532的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2533的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2533的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2534的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2534的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2535的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2535的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2536的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2536的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2537的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2537的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2538的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2538的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2539的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2539的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2540的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2540的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2541的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2541的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2542的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2542的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2543的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2543的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2544的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2544的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2545的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2545的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2546的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2546的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2547的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2547的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2548的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2548的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2549的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2549的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2550的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2550的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2551的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2551的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2552的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2552的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2553的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2553的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2554的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2554的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2555的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2555的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2556的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2556的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2557的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2557的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2558的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2558的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2615的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2615的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2616的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2616的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2617的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2617的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2618的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2618的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2619的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2619的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2620的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2620的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2621的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2621的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2622的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2622的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
以及涉及核苷酸序列或编码其的核苷酸序列。这些多肽构建体优选地进一步是这样的，即，它们针对p19和/或IL-23(并且更优选地还对p19和/或IL-23特异)，和甚至更优选地能够调节、阻断、中和或抑制IL-23与其同源受体的结合(例如，在实施例19或22中所述的α-筛选测定中)。
本发明的其他方面还涉及：
-SEQ ID NO：2623的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2623的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2624的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2624的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2625的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2625的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2626的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2626的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2627的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2627的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2628的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2628的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2629的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2629的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2643的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2643的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2644的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2644的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
以及涉及核苷酸序列或编码其的核苷酸序列。这些多肽构建体优选地进一步是这样的，即，它们针对p19和/或IL-23(并且更优选地还对p19和/或IL-23特异)，和甚至更优选地能够调节、阻断、中和或抑制IL-23与其同源受体的结合(例如，在实施例19或22中所述的α-筛选测定中)。
本发明的其他方面还涉及：
-SEQ ID NO：2630的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2630的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2631的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2631的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2632的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2632的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2633的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2633的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2634的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2634的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2635的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2635的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2636的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2636的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2637的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2637的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2638的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2638的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2639的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2639的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2640的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2640的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2641的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2641的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
以及涉及核苷酸序列或编码其的核苷酸序列。这些多肽构建体优选地进一步是这样的，即，它们针对p40，IL-12和/或IL-23(并且更优选地与IL-27和/或IL-35相比还对p40，IL-12和/或IL-23特异)，和甚至更优选地能够调节、阻断、中和或抑制IL-23与其同源受体的结合和/或调节、阻断、中和或抑制IL-12与其同源受体的结合(例如，在实施例19或22中所述的α-筛选测定中)。
本发明的其他方面还涉及：
-SEQ ID NO：2645的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2645的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2646的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2646的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
以及涉及核苷酸序列或编码其的核苷酸序列。这些多肽构建体优选地进一步是这样的，即，它们针对p35和/或IL-12(并且更优选地还对p35和/或IL-12特异)，和甚至更优选地能够调节、阻断、中和或抑制IL-12与其同源受体的结合。
本发明的其他方面还涉及：
-SEQ ID NO：2647的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2647的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
-SEQ ID NO：2648的多肽(构建体)；或与SEQ ID NO：2648的多肽具有至少70％，优选至少80％，更优选至少85％，诸如至少90％，例如超过95％的氨基酸同一性(如本文所定义)的多肽(构建体)；
以及涉及核苷酸序列或编码其的核苷酸序列。这些多肽构建体优选地进一步是这样的，即，它们针对p35和/或IL-12(并且更优选地还对p35和/或IL-12特异)，和甚至更优选地能够调节、阻断、中和或抑制IL-12与其同源受体的结合(例如，在实施例19或22中所述的α-筛选测定中)。
在另一个方面中，本发明涉及编码本发明的氨基酸序列(诸如本发明的(单)结构域抗体和/或纳米抗体)或本发明的多肽(或其适当的片段)的核酸。这样的核酸在本文中还称为“本发明的核酸”，并且例如，可以采用遗传构建体的形式，如本文进一步所述。
在另一个方面中，本发明涉及表达(或在适当的环境下能够表达)本发明的氨基酸序列(诸如本发明的(单)结构域抗体和/或纳米抗体)和/或本发明的多肽的宿主或宿主细胞，和/或包含本发明的核酸的宿主或宿主细胞。通过本文进一步的描述，所述宿主或宿主细胞的一些优选而非限制性的实例将变得清楚。
本发明还涉及一种产品或组合物，所述产品或组合物包含或包括至少一种本发明的氨基酸序列、至少一种本发明的多肽(或其适当的片段)和/或至少一种本发明的核酸、以及任选地一种或多种所述组合物本身已知的其它成分，即，取决于所述组合物的目的用途。例如，这样的产品或组合物可以是药物组合物(如本文所述)、兽医用组合物或用于诊断用途的产品或组合物(同样如本文所述)。通过本文进一步的描述，所述产品或组合物的一些优选而非限制性的实例将变得清楚。
本发明还涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽、或包括其的组合物在体外(例如，在体外或细胞测定法中)或体内(例如，在单个细胞中或在多细胞生物体中，且特别是在哺乳动物中，且更特别是在人类中，诸如在处于与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的疾病或病症的危险中或患有其的人中)调节(如本文所定义)异二聚体细胞因子、异二聚体细胞因子的受体和/或异二聚体细胞因子介导的信号传导(如本文所定义)(的方法或组合物)中的应用。
本发明还涉及在体外(例如，在体外或细胞测定法中)或体内(例如，在单个细胞中或在多细胞生物体中，且特别是在哺乳动物中，且更特别是在人类中，诸如在处于与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的疾病或病症的危险中或患有其的人中)调节(如本文所定义)异二聚体细胞因子、异二聚体细胞因子的受体和/或异二聚体细胞因子介导的信号传导(如本文所定义)的方法，所述方法至少包括使异二聚体细胞因子和/或异二聚体细胞因子的受体与至少一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽、或包括其的组合物以适于调节所述异二聚体细胞因子、所述受体和/或异二聚体细胞因子介导的信号传导的方式和量相接触的步骤。
本发明还涉及一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在制备用于在体外(例如，在体外或细胞测定法中)或在体内(例如，在单个细胞中或在多细胞生物体中，且特别是在哺乳动物中，且更特别是在人类中，诸如在处于与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的疾病或病症的危险中或患有其的人中)调节(如本文所定义)异二聚体细胞因子、异二聚体细胞因子的受体和/或异二聚体细胞因子介导的信号传导(如本文所定义)的组合物(诸如，但不限于如本文进一步所述的药物组合物或制剂)中的应用。
本发明还涉及用于制备或产生本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的方法。通过本文进一步的描述，所述方法的一些优选的但非限制性的实例将变得清楚。
一般地，这些方法可以包括下列步骤：
a)提供氨基酸序列的组、集合或文库；和
b)从氨基酸序列的所述组、集合或文库中筛选可以结合和/或具有针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和力的氨基酸序列；
和
c)分离所述可以结合和/或具有针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和力的氨基酸序列。
在这样的方法中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是任何适当的氨基酸序列的组、集合或文库。例如，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是免疫球蛋白序列的组、集合或文库(如本发明所述)，诸如免疫球蛋白序列的首次用于实验的组、集合或文库；免疫球蛋白序列的合成的或半合成的组、集合或文库；和/或已经进行了亲和力成熟的免疫球蛋白序列的组、集合或文库。
此外，在这样的方法中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是重链可变结构域(诸如VH结构域或VHH结构域)或轻链可变结构域的组、集合或文库。例如，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是结构域抗体或单结构域抗体的组、集合或文库，或可以是能够作为结构域抗体或单结构域抗体行使功能的氨基酸序列的组、集合或文库。
在本方法的优选方面中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是免疫球蛋白序列的免疫组、集合或文库，例如，来自已经用异二聚体细胞因子和/或它们的受体适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的哺乳动物的免疫球蛋白序列的组、集合或文库。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
在上述方法中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体、或适当的微生物(诸如酵母)上，以诸如促进筛选。用于展示和筛选氨基酸序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域专业技术人员将是清楚的，例如，基于本文进一步的公开内容。同样参考Hoogenboom在Nature Biotechnology(自然生物技术)，23，9，1105-1116(2005)中的综述。
在另一个方面中，用于产生氨基酸序列的方法包括至少下列步骤：
a)提供表达氨基酸序列的细胞的集合或样品；
b)从所述细胞的集合或样品中筛选表达可以结合和/或具有针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和力的氨基酸序列的细胞；
和
c)(i)分离所述氨基酸序列；或(ii)从所述细胞分离编码所述氨基酸序列的核酸序列，然后表达所述氨基酸序列。
例如，当所需要的氨基酸序列是免疫球蛋白序列时，所述细胞的集合或样品可以是，例如，B细胞的集合或样品。此外，在该方法中，细胞样品可以来源于已经用异二聚体细胞因子和/或它们的受体适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的哺乳动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
上述方法可以以任何适当的方式进行，这对于专业技术人员将是清楚的。例如，参考EP 0 542 810，WO 05/19824，WO 04/051268和WO04/106377。步骤b)的筛选优选地使用流式细胞术技术诸如FACS进行。对于此，例如，参考Lieby等，Blood(血液)，卷97，No.12，3820(2001)。
在另一个方面中，用于产生针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的氨基酸序列的方法可以包括至少下列步骤：
a)提供编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库；
b)从核酸序列的所述组、集合或文库中筛选编码可以结合和/或具有针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和力的氨基酸序列的核酸序列；
和
c)分离所述核酸序列，然后表达所述氨基酸序列。
在这样的方法中，所述编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库可以是，例如，编码免疫球蛋白序列的首次用于实验的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；编码免疫球蛋白序列的合成的或半合成的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；和/或编码已经进行了亲和力成熟的免疫球蛋白序列的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库。
此外，在这样的方法中，所述核酸序列的组、集合或文库可以编码重链可变结构域(诸如VH结构域或VHH结构域)或轻链可变结构域的组、集合或文库。例如，所述核酸序列的组、集合或文库可以编码结构域抗体或单结构域抗体的组、集合或文库，或能够作为结构域抗体或单结构域抗体行使功能的氨基酸序列的组、集合或文库。
在该方法的优选方面中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是核酸序列的免疫的组、集合或文库，例如，所述核酸序列来源于已经用异二聚体细胞因子和/或它们的受体适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的哺乳动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
例如，所述核酸序列的组、集合或文库可以编码重链可变结构域或轻链可变结构域的免疫的组、集合或文库。在一个具体的方面中，所述核苷酸序列的组、集合或文库可以编码VHH序列的组、集合或文库。
在上述方法中，所述核苷酸序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体或适当的微生物(诸如酵母)上，以诸如促进筛选。用于展示和筛选编码氨基酸序列的核苷酸序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域专业技术人员将是清楚的，例如，基于本文进一步的公开内容。同样参考Hoogenboom在NatureBiotechnology(自然生物技术)，23，9，1105-1116(2005)中的综述。
本发明还涉及通过上述方法或备选地通过包括上述方法之一以及至少下列步骤的方法而获得的氨基酸序列，所述步骤为：确定所述免疫球蛋白序列的核苷酸序列或氨基酸序列；并且以本身已知的方式表达或合成所述氨基酸序列，诸如通过在适当的宿主细胞或宿主生物体内表达，或通过化学合成。
此外，在上述步骤后，一个或多个本发明的氨基酸序列可以适当地被人源化(或备选地，被骆驼源化)；和/或可以将这样获得的氨基酸序列彼此连接，或连接一个或多个其它适当的氨基酸序列(任选地，通过一个或多个适当的接头)，以提供本发明的多肽。此外，编码本发明的氨基酸序列的核酸序列可以被适当地人源化(或备选地，被骆驼源化)并且适当地表达；和/或编码本发明的氨基酸序列的一个或多个核酸序列可以彼此连接，或连接编码其它适当的氨基酸序列的一个或多个核酸序列(任选地通过编码一个或多个适当的接头的核苷酸序列)，然后，这样获得的核苷酸序列可以进行适当地表达，以提供本发明的多肽。
本发明还涉及本发明所述的氨基酸序列、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的应用和用途，以及涉及用于预防和/或治疗与异二聚体细胞因子和/或它们的受体相关的疾病和病症的方法。通过本文进一步的描述，一些优选的但非限制性的应用和用途将变得清楚。
本发明的一些具体的但非限制性的方面涉及：
1.蛋白或多肽，其包括任选地经合适的接头连接的、至少一个针对p19亚单位的氨基酸序列和至少一个针对p40亚单位的氨基酸序列，并且任选地包括一个或多个另外的氨基酸序列、结合结构域和/或结合单位。
2.如方面1所述的蛋白或多肽，其中所述针对P19亚单位的氨基酸序列是p19+序列(即，能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中所述针对p40亚单位的氨基酸序列是p40+序列(即，能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
3.如方面1所述的蛋白或多肽，其中所述针对p19亚单位的氨基酸序列是p19+序列(即，能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中所述针对p40亚单位的氨基酸序列是p40-序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
4.如方面1所述的蛋白或多肽，其中所述针对p19亚单位的氨基酸序列是p19+序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中所述针对p40亚单位的氨基酸序列是p40+序列(即，能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
5.蛋白或多肽，其包括任选地经合适的接头连接的、至少一个针对p35亚单位的氨基酸序列和至少一个针对p40亚单位的氨基酸序列，并且任选地包括一个或多个另外的氨基酸序列、结合结构域和/或结合单位。
6.蛋白或多肽，其包括任选地经合适的接头连接的、至少一个针对p19亚单位上的第一表位或抗原决定簇的氨基酸序列和至少一个针对p19亚单位上不同于所述第一表位或抗原决定簇的第二表位或抗原决定簇的另外的氨基酸序列，并且任选地包括一个或多个另外的氨基酸序列、结合结构域和/或结合单位。
7.如方面6所述的蛋白或多肽，其中第一氨基酸序列是p19+序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中第二氨基酸序列是p19-序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
8.蛋白或多肽，其包括任选地经合适的接头连接的、至少一个针对p40亚单位上的第一表位或抗原决定簇的氨基酸序列和至少一个针对p40亚单位上不同于所述第一表位或抗原决定簇的第二表位或抗原决定簇的另外的氨基酸序列，并且任选地包括一个或多个另外的氨基酸序列、结合结构域和/或结合单位。
9.蛋白或多肽，其中第一氨基酸序列是p40+序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中第二氨基酸序列是p40-序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
10.根据方面1-9中任意一项所述的蛋白或多肽，其中包含在所述蛋白或多肽内并且针对亚单位的各氨基酸序列形成单个(抗原)结合结构域或结合单位和/或基本上由单个(抗原)结合结构域或结合单位组成，和/或能够形成单个(抗原)结合结构域或结合单位(任选地在适当地折叠后)和/或作为单个(抗原)结合结构域或结合单位(任选地在适当地折叠后)起作用。
11.根据方面1-10中任意一项所述的蛋白或多肽，其中包含在所述蛋白或多肽内并且针对亚单位的各氨基酸序列包括免疫球蛋白折叠或在适当的条件下能够形成免疫球蛋白折叠。
12.根据方面1-11中任意一项所述的蛋白或多肽，其中包含在所述蛋白或多肽内并且针对亚单位的各氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1至FR4)和3个互补决定区组成。
13.根据方面1-12中任意一项所述的蛋白或多肽，其中包含在所述蛋白或多肽内并且针对亚单位的各氨基酸序列是结构域抗体(或适于用作结构域抗体的氨基酸序列)、单结构域抗体(或适于用作单结构域抗体的氨基酸序列)、″dAb″(或适于用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体TM(包括但不限于VHH序列)或另一种单可变结构域，或其任意一种的任何适当的片段。
14.针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的蛋白或多肽，所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-至少第一亚单位；
和
-至少第二亚单位；
其中所述蛋白或多肽至少包括针对所述第一亚单位的第一结合结构域或结合单位和针对所述第二亚单位的第二结合结构域或结合单位。
15.针对第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的蛋白或多肽，所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-至少在所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体和至少第二、不同的异二聚体蛋白、多肽、配体或受体之间共有的第一亚单位；
和
-至少在所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体和所述第二、不同的异二聚体蛋白、多肽、配体或受体之间不共有的第二亚单位；
其中所述蛋白或多肽至少包括针对所述第一(即，共有的)亚单位的第一结合结构域或结合单位和针对所述第二(即，不共有的)亚单位的第二结合结构域或结合单位。
16.针对第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的蛋白或多肽，所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-至少第一亚单位；
和
-至少第二亚单位；
其中所述蛋白或多肽至少包括针对所述第一亚单位的第一结合结构域或结合单位，和不同于所述第一结合结构域或结合单位的第二结合结构域或结合单位，所述第二结合结构域或结合单位也针对所述第一亚单位但针对所述第一亚单位上的不同表位、抗原决定簇或结合位点。
17.根据方面15或16所述的蛋白或多肽，其针对受体的配体，并且包括能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合的至少一个结合结构域或结合单位，和基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合的至少一个结合结构域或结合单位。
18.根据方面15所述的蛋白或多肽，其针对受体的配体，其中所述第一结合结构域或结合单位以及所述第二结合结构域或结合单位两者都能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合。
19.根据方面14-18中任意一项所述的蛋白或多肽，其中各结合结构域或结合单位包括免疫球蛋白折叠或在适当的条件下能够形成免疫球蛋白折叠。
20.根据方面14-19中任意一项所述的蛋白或多肽，其中各结合结构域或结合单位基本上由4个构架区(分别为FR1至FR4)和3个互补决定区组成。
21.根据方面14-20中任意一项所述的蛋白或多肽，其中各结合结构域或结合单位是结构域抗体(或适于用作结构域抗体的氨基酸序列)、单结构域抗体(或适于用作单结构域抗体的氨基酸序列)、″dAb″(或适于用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体TM(包括但不限于VHH序列)或另一种单可变结构域，或其任意一种的任何适当的片段。
22.编码根据方面1-21中任意一项所述的蛋白或多肽的核苷酸序列或核酸。
23.包括至少一种根据方面1-21中任意一项所述的蛋白或多肽或根据方面22所述的核苷酸序列或核酸的组合物。
24.包括至少一种根据方面1-21中任意一项所述的蛋白或多肽和至少一种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂和/或辅料的药物组合物。
25.p19+序列(编码p19+序列的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p19+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p19+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
26.p19-序列(编码p19-序列的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p19-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p19-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
27.p40-序列(编码p40-序列的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p40-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p40-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
28.p40+序列(编码p40+序列的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p40+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p40+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
29.p35序列(编码p35序列的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p35序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p35序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
30.根据方面25-29中任意一项所述的应用，其中所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽针对异二聚体细胞因子。
31.根据方面25-30中任意一项所述的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽是针对异二聚体细胞因子的一个亚单位的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽。
32.根据方面30和31中任意一项所述的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽是包括针对所述异二聚体细胞因子的第一亚单位的至少一个结合结构域或结合单位和针对所述异二聚体细胞因子的第二亚单位的至少一个结合结构域或结合单位的多特异性构建体、蛋白和/或多肽。
33.根据方面30-32中任意一项所述的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括能够调节、中和、阻断和/或抑制所述异二聚体细胞因子与其(同源)受体的结合的至少一个结合结构域或结合单位。
34.包括单个结合结构域或结合单位或基本上由单个结合结构域或结合单位组成的氨基酸序列(编码其的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的多特异性构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的多特异性构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位，并且其中所述一个或多个氨基酸序列针对所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第一亚单位，并且至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与所述第一亚单位不同的所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第二亚单位。
35.根据方面34所述的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽针对异二聚体细胞因子或针对异二聚体细胞因子的异二聚体受体。
36.包括单个结合结构域或结合单位或基本上由单个结合结构域或结合单位组成的氨基酸序列(编码其的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位，并且其中所述一个或多个氨基酸序列针对所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第一亚单位，并且至少一个所述另外的结合结构域或结合单位也针对所述第一亚单位，但针对所述亚单位上不同的表位或抗原决定簇。
37.根据方面36的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽针对受体的配体，并且包括至少一个能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合的结合结构域或结合单位，和至少一个基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合的结合结构域或结合单位。
此外，本文所述的本发明的所有氨基酸序列(诸如(单)结构域抗体和/或纳米抗体)、构建体、多肽和蛋白(在它们的所有各个和/或优选的方面中)，优选地具有如下的IC50值：
-当本发明的氨基酸序列、蛋白或多肽是针对p19的单价氨基酸序列(如本文所述)并且是p19+序列时，在实施例25(使用19pM人IL-23)中所述的测定中的IC50值小于100nM，更优选地小于50nM，甚至更优选地小于10nM，诸如小于1nM(例如，在皮摩尔范围内)；
-当本发明的氨基酸序列、蛋白或多肽是针对p40的单价氨基酸序列(如本文所述)并且是p40+序列时，在实施例25(使用19pM人IL-23)中所述的测定和实施例27(使用1pM人IL-12)中所述的测定中的IC50值小于100nM，更优选地小于50nM，甚至更优选地小于10nM，诸如小于1nM(例如，在皮摩尔范围内)；
-当本发明的氨基酸序列、蛋白或多肽是针对IL-23的多价、多特异性和/或双互补位型构建体时，在实施例25(使用19pM人IL-23)中所述的测定中的IC50值小于10nM，更优选地小于1nM，甚至更优选地小于500pM，诸如小于100pM(例如，在1-50皮摩尔范围内)；
-当本发明的氨基酸序列、蛋白或多肽是针对IL-12的多价、多特异性和/或双互补位型构建体时，在实施例27(使用1pM人IL-12)中所述的测定中的IC50值小于10nM，更优选地小于1nM，甚至更优选地小于500pM，诸如小于100pM(例如，在1-50皮摩尔范围内)。
通过本文进一步的描述，本发明的其它方面、实施方案、优点和应用也将变得清楚，其中本发明将更详细地描述和讨论本发明的纳米抗体以及包括其的本发明的多肽，其形成本发明的一些优选方面。
如通过本文进一步的描述将变得清楚，与“dAb”或相似的(单)结构域抗体或免疫球蛋白序列相比，纳米抗体通常提供某些优点(本文所概述的)，本发明的纳米抗体也提供所述优点。然而，专业技术人员应该清楚，下述教导的更通用的方面也可以适用于(直接或类似地)本发明的其它氨基酸序列。
本发明的详述
在本说明书、实施例和权利要求中：
a)除非另外指明或限定，所用的所有术语具有它们在本领域内的通用意思，其对于专业技术人员应该是清楚的。例如，参考标准手册，如Sambrook等，″分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)″(第2版)，卷1-3，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)(1989)；F.Ausubel等，编，″现代分子生物学方法(Current protocols in molecular biology)″，Green Publishing和Wiley Interscience，纽约(1987)；Lewin，“基因II”(“Genes II”)，John Wiley & Sons，New York，纽约，(1985)；Old等，“基因操作原理：基因工程导言(Principles of Gene Manipulation：An Introduction to Genetic Engineering)”，第2版，加利福尼亚大学出版社(University of California Press)，伯克利，CA(1981)；Roitt等，“免疫学(Immunology)”(第6版)，Mosby/Elsevier，Edinburgh(2001)；Roitt等，Roitt基础免疫学(Roitt’s Essential Immunology)，第10版.Blackwell Publishing，英国(2001)；和Janeway等，“免疫生物学(Immunobiology)”(第6版)，Garland Science Publishing/Churchill Livingstone，纽约(2005)，以及本文所引用的公知背景技术；
b)除非另外指明，术语“免疫球蛋白序列”——不管其在本文中用来指重链抗体或常规的4-链抗体——用作一般术语，包括完整大小的抗体、其单独的链、以及其所有部分、结构域或片段(包括但不限于抗原-结合结构域或片段，分别诸如VHH结构域或VH/VL结构域)。另外，术语“序列”用于本文时(例如在类似“免疫球蛋白序列”、“抗体序列”、“可变结构域序列”、“VHH序列”或“蛋白序列”的术语中)通常应该理解为包括相关的氨基酸序列、以及编码所述氨基酸序列的核酸序列或核苷酸序列，除非上下文需要更狭义的解释；
c)除非另外指明，所有没有具体详细描述的方法、步骤、技术和操作可以以本身已知的方式进行并且已经进行，这对于专业技术人员是清楚的。例如，仍旧参考标准手册，参考本文所提及的公知背景技术，和参考其中所引用的其它参考文献；以及例如下列的综述：Presta，先进药物递送评论(Adv.Drug Deliv.Rev.)2006，58(5-6)：640-56；Levin和Weiss，分子生物系统(Mol.Biosyst.)2006，2(1)：49-57；Irving等，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)，2001，248(1-2)，31-45；Schmitz等，胎盘(Placenta)，2000，21增刊A，S106-12，Gonzales等，肿瘤生物学(Tumour Biol.)，2005，26(1)，31-43，它们描述了蛋白工程的技术，诸如亲和力成熟和其他用于改善蛋白的特异性和其他所需特性诸如免疫球蛋白的技术。
d)氨基酸残基按照标准的三字母或一字母的氨基酸密码显示，如在表A-3提及的；
表A-3：一字母和三字母氨基酸密码
Figure BPA00001186248901871
e)出于比较两种或更多种核苷酸序列的目的，第一核苷酸序列和第二核苷酸序列之间的“序列同一性”百分数可以通过用[第一核苷酸序列中与第二核苷酸序列中相应位置的核苷酸相同的核苷酸数目]除以[第一核苷酸序列中的核苷酸总数]并且乘以[100％]而计算，其中在第二核苷酸序列中核苷酸的每一删除、插入、取代或添加——与第一核苷酸序列相比——都视作在单一核苷酸(位置)的差异。
备选地，两种或更多种核苷酸序列之间的序列同一性程度可以使用已知的用于序列比对的使用标准设置的计算机算法进行计算，诸如NCBI Blast v2.0。
例如，在WO 04/037999，EP 0 967 284，EP 1 085 089，WO 00/55318，WO00/78972，WO 98/49185和GB 2 357 768-A中描述了用于确定序列同一性程度的一些其它的技术、计算机算法和设置。
通常，出于按照上文列出的计算方法来确定两种核苷酸序列之间的“序列同一性”的百分数的目的，将具有最大核苷酸数目的核苷酸序列视作“第一”核苷酸序列，并且将另一种核苷酸序列视作“第二”核苷酸序列；
f)出于比较两种或更多种氨基酸序列的目的，第一氨基酸序列和第二氨基酸序列之间的“序列同一性”百分数(在本文也称为“氨基酸同一性”)可以通过用[第一氨基酸序列中与第二氨基酸序列中相应位置的氨基酸残基相同的氨基酸残基数目]除以[第一氨基酸序列中的氨基酸残基总数]并且乘以[100％]而计算，其中第二氨基酸序列中氨基酸残基的每一删除、插入、取代或添加——与第一氨基酸序列相比——都视作在单一氨基酸残基(位置)上的差异，即，视作本发明所定义的“氨基酸差异”。
备选地，两种氨基酸序列之间的序列同一性程度可以使用已知的计算机算法进行计算，诸如上文提及的用于确定核苷酸序列的序列同一性程度的那些，其仍旧使用标准设置。
通常，出于按照上文列出的计算方法来确定两种氨基酸序列之间的“序列同一性”的百分数的目的，将具有最大氨基酸残基数目的氨基酸序列视作“第一”氨基酸序列，并且将另一种氨基酸序列视作“第二”氨基酸序列。
此外，在确定两种氨基酸序列之间的序列同一性程度时，专业技术人员可以考虑所谓的“保守”氨基酸取代，其通常可以描述为这样的氨基酸取代，即，其中氨基酸残基被具有相似化学结构的另一种氨基酸残基取代，并且其对所述多肽的功能、活性或其它生物学特性几乎没有或者基本上没有影响。这种保守氨基酸取代是本领域内公知的，例如，从WO 04/037999，GB-A-4 357 768，WO 98/49185，WO 00/46383和WO 01/09300中可知；并且可以基于WO 04/037999以及WO 98/49185和其中所引用的其它参考文献的相关教导而选择这种取代的(优选)类型和/或结合。
所述保守取代优选地是这样的取代，即，其中下列组(a)-(e)内的一个氨基酸被同组内的另一氨基酸残基取代：(a)小的脂肪族、非极性或弱极性的残基：Ala，Ser，Thr，Pro和Gly；(b)极性、带负电荷的残基及其(不带电荷的)酰胺：Asp，Asn，Glu和Gln；(c)极性、带正电荷的残基：His，Arg和Lys；(d)大的脂肪族、非极性残基：Met，Leu，Ile，Val和Cys；以及(e)芳族残基：Phe，Tyr和Trp。
特别优选的保守取代如下：Ala取代成Gly或取代成Ser；Arg取代成Lys；Asn取代成Gln或取代成His；Asp取代成Glu；Cys取代成Ser；Gln取代成Asn；Glu取代成Asp；Gly取代成Ala或取代成Pro；His取代成Asn或取代成Gln；Ile取代成Leu或取代成Val；Leu取代成Ile或取代成Val；Lys取代成Arg，取代成Gln或取代成Glu；Met取代成Leu，取代成Tyr或取代成Ile；Phe取代成Met，取代成Leu或取代成Tyr；Ser取代成Thr；Thr取代成Ser；Trp取代成Tyr；Tyr取代成Trp；和/或Phe取代成Val，取代成Ile或取代成Leu。
用于本文所述的多肽的任何氨基酸取代还可以基于Schulz等，蛋白质结构原理(Principles of Protein Structure)，Springer-Verlag，1978研究的不同物种的同源蛋白之间的氨基酸变异频率的分析，基于Chou和Fasman，生物化学(Biochemistry)13：211，1974和高级酶学(Adv.Enzymol.)，47：45-149，1978研究的结构形成潜力的分析，和基于Eisenberg等，美国国家科学院学报(Proc.Nad.Acad Sci.USA)81：140-144，1984；Kyte和Doolittle；分子生物学杂志(J Molec.Biol.).157：105-132，1981，以及Goldman等，物理化学综述年刊(Ann.Rev.Biophys.Chem.).15：321-353，1986研究的蛋白中疏水模式的分析，所有这些通过引用完全结合于此。在本文描述和上文引用的公知背景技术中给出关于纳米抗体的一级、二级和三级结构的信息。此外，出于这一目的，例如，Desmyter等，自然结构生物学(Nature Structural Biology)，卷3，9，803(1996)；Spinelli等，自然结构生物学(Natural Structural Biology)(1996)；3，752-757；和Decanniere等，结构(Structure)，卷7，4，361(1999)给出来自美洲驼(llama)的VHH结构域的晶体结构。关于在常规VH结构域中形成VH/VL界面的一些氨基酸残基和在这些位置的潜在的骆驼源化(camelizing)取代的其它信息可以在上文引用的现有技术中找到。
g)如果在它们的全长有100％的序列同一性(如本发明所定义)，那么认为氨基酸序列和核酸序列“完全相同”。
h)当比较两种氨基酸序列时，术语“氨基酸差异”是指与第二序列相比，在第一序列位置上的单个氨基酸残基的插入、删除或取代；应该理解两种氨基酸序列可以包含1个、2个或多个这样的氨基酸差异。
i)当认为核苷酸序列或氨基酸序列分别“包括”另一个核苷酸序列或氨基酸序列，或“基本由”另一个核苷酸序列或氨基酸序列“组成”时，这可以意指后一个核苷酸序列或氨基酸序列已经分别结合在最先提及的核苷酸序列或氨基酸序列中，但是更通常地，这一般意指最先提及的核苷酸序列或氨基酸序列在其序列内分别包括核苷酸或氨基酸残基的序列，其分别与后一个序列具有相同的核苷酸序列或氨基酸序列，而不管实际上已经怎样产生或获得最先提及的序列(例如，其可以通过本发明所述的任何适当的方法进行)。通过非限制性实例的方式，当认为本发明的纳米抗体包括CDR序列时，这可以意指所述CDR序列已经结合在本发明的纳米抗体内，但是更通常地，这一般意指本发明的纳米抗体在其序列内包含具有与所述CDR序列相同的氨基酸序列的氨基酸残基序列，而不管已经怎样产生或获得所述本发明的纳米抗体。还应该注意到，当后一个氨基酸序列具有特异性生物学或结构功能时，它优选地具有在最先提及的氨基酸序列中基本相同、相似或等价的生物学或结构功能(换言之，最先提及的氨基酸序列优选是这样的，以致后一个序列能够实施基本上相同的、相似的或等价的生物学或结构功能)。例如，当认为本发明的纳米抗体分别包括CDR序列或构架序列时，在所述纳米抗体中的所述CDR序列和构架优选地分别能够作为CDR序列或构架序列行使作用。此外，当认为核苷酸序列包括另一个核苷酸序列时，最先提及的核苷酸序列优选是这样的，以致当它被表达成表达产物(例如，多肽)时，由后一个核苷酸序列编码的氨基酸序列形成所述表达产物的一部分(换言之，后一个核苷酸序列处在与所述最先提及的、较大的核苷酸序列相同的阅读框内)。
j)核酸序列或氨基酸序列视作“(以)基本上分离的(形式)”——例如，与其天然生物来源和/或其从中获得的反应介质或培养介质相比——此时其已经与其通常在所述来源或介质中与之相关的至少一种其它成分(诸如另一种核酸，另一种蛋白/多肽，另一种生物成分或高分子或至少一种污染物、杂质或微量组分)分离。特别地，当它已被纯化至少2倍，特别是至少10倍，更特别地至少100倍，并且达到1000倍或更多时，认为核酸序列或氨基酸序列“基本上分离”。当使用适当技术确定时，诸如适当的层析技术，诸如聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，“以基本上分离形式”的核酸序列或氨基酸序列优选地基本上是均相的；
k)当用于本文时，术语“结构域”通常是指抗体链的球状区域(诸如抗体链，并且特别是指重链抗体的球状区域)，或者指基本上由所述球状区域组成的多肽。通常，例如，这样的结构域包括作为片层或通过二硫键而稳定的肽环(例如3或4个肽环)。术语“结合结构域”是指针对抗原决定簇(如本文所定义)的结构域。
l)术语‘抗原决定簇’是指抗原上由抗原-结合分子(诸如本发明的纳米抗体或多肽)并且更特别是所述分子的抗原-结合位点而识别的表位。术语“抗原决定簇”和“表位”在本文中还可以互换地使用；
m)对于特定的抗原决定簇、表位、抗原或蛋白(或对于至少其的一部分、片段或表位)可以(特异性)结合、具有亲和力和/或具有特异性的氨基酸序列(诸如本发明的纳米抗体、抗体、多肽，或通常为抗原结合蛋白或多肽或其片段)认为是“针对(against)”，“针对(directed against)”或“针对(directed to)”所述抗原决定簇、表位、抗原或蛋白。
n)术语“特异性”是指特定的抗原-结合分子或抗原-结合蛋白(诸如本发明的纳米抗体或多肽)分子可以结合的不同类型的抗原或抗原决定簇的数目。一种抗原-结合蛋白的特异性可以依据亲和力和/或抗体亲抗原性(avidity)而确定。亲和力，表示为抗原与抗原-结合蛋白的解离平衡常数(KD)，是抗原决定簇和所述抗原-结合蛋白上抗原-结合位点之间的结合强度的测量：KD值越小，抗原决定簇和抗原-结合分子之间的结合强度越强(备选地，亲和力还可以表示为亲和常数(KA)，其为1/KD)。专业技术人员应该清楚(例如，基于本发明进一步的公开内容)，亲和力可以以本身已知的方式确定，其取决于目的特异性抗原。抗体亲抗源性是抗原-结合分子(诸如本发明的纳米抗体或多肽)和相关抗原之间的结合强度的测量。抗体亲抗源性与抗原决定簇及其在抗原-结合分子上的抗原结合位点之间的亲和力以及在所述抗原-结合分子上存在的相关结合位点的数目相关。典型地，抗原-结合蛋白(诸如本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽)将以10-5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升或更小并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))而结合它们的抗原。任何大于10-4摩尔/升的KD值(或任何小于104M-1的KA值)升/摩尔通常认为指示非特异性结合。优选地，本发明的单价免疫球蛋白序列将以小于500nM、优选地小于200nM、更优选地小于10nM诸如小于500pM的亲和力与理想的抗原结合。抗原-结合蛋白与抗原或抗原决定簇的特异性结合可以以本身已知的任何适当的方法确定，其包括，例如，斯卡查德分析和/或竞争结合检测，诸如放射性免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和夹心式(sandwich)竞争测定，和本领域本身已知的其不同的变化；以及本发明提及的其它技术。
解离常数可以是实际的或表观解离常数，专业技术人员应该清楚。确定解离常数的方法对于专业技术人员应该是清楚的，并且例如，包括本发明提及的技术。在这一点上，还应该清楚，不可能测量大于10-4摩尔/升或10-3摩尔/升(例如，10-2摩尔/升)的解离常数。任选地，专业技术人员应该清楚，可以根据(实际或表观)缔合常数(KA)利用[KD＝1/KA]的关系计算所述(实际或表观)解离常数。
亲和力表示分子相互作用的强度或稳定性。亲和力通常作为KD或解离常数给出，其具有摩尔/升(或M)的单位。亲和力还可以表示为缔合常数KA，其等于1/KD，并且具有(摩尔/升)-1(或M-1)的单位。在本说明书中，两个分子(诸如本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽及其目的靶点)之间的相互作用的稳定性将主要以它们相互作用的KD值表示；专业技术人员应该清楚，考虑到KA＝1/KD的关系，通过其KD值表示分子相互作用的强度也可以用于计算相对应的KA值。由于KD-值通过公知的关系式DG＝RT.ln(KD)(等价于DG＝-RT.ln(KA))与结合的自由能(DG)相关，KD-值还在热力学意义上表征分子相互作用的强度，在所述关系式中，R等于气体常数，T等于绝对温度，并且ln表示自然对数。
关于认为是有意义的(例如，特异性的)生物学相互作用的KD典型地在10-10M(0.1nM)-10-5M(10000nM)范围内。相互作用越强，其KD越低。
KD也可以表示为复合体的解离速率常数(表示为koff)与其缔合速率(表示为kon)的比例(以致KD＝koff/kon和KA＝kon/koff)。解离速率koff具有单位s-1(其中s是秒的SI单位符号)。缔合速率kon具有单位M-1s-1。缔合速率可以在102M-1s-1-约107M-1s-1之间变化，对于两分子相互作用达到扩散-极限缔合速率常数。解离速率以关系式t1/2＝ln(2)/koff与给定的分子相互作用的半衰期相关。解离速率可以在10-6s-1(接近具有数天的t1/2的不可逆复合体)到1s-1(t1/2＝0.69s)之间变化。
两个分子之间的分子相互作用的亲和力可以通过本身已知的不同技术测量，诸如公知的表面等离子体共振(SPR)生物传感器技术(例如，参见Ober等，国际免疫学(Intern.Immunology)，13，1551-1559，2001)，其中将一个分子固定在生物传感器芯片上，另一个分子在流动条件下经过所固定的分子，产生kon，koff测量以及因此产生KD(或KA)值。例如，这可以使用公知的Biacore仪器进行(见例如实施例12或20)。
专业技术人员还应该理解，如果测量过程以某种方式影响暗指的分子的内在结合亲和力，例如通过与一个分子的生物传感器上的涂层相关的人为产物影响，则测量的KD可以与表观KD相对应。此外，如果一个分子含有针对另一个分子的多于一个的识别位点，则可以测量表观KD。在这样的情形中，所测量的亲和力可以受到两个分子之间相互作用的抗体亲抗原性的影响。
可以用来评估亲和力的另一个方法是Friguet等(免疫方法杂志(J.Immunol.Methods)，77，305-19，1985)的2步ELISA(酶联免疫吸附测定)方法。该方法建立溶液相结合平衡测量，并且避免与在支持物如塑料上的一个分子的吸附相关的可能的人为产物。
然而，KD的准确测量可能是非常费力的，并且作为结果，通常确定表观KD值来评估两个分子的结合强度。应该注意到，只要所有的测量以一致的方式(例如，保持测定条件不变)进行，表观KD测量可以用作真实KD的近似值，并且因此在现有文献中，应该以同等的重要性或相关性对待KD和表观KD。
最后，应该注意到，在许多情形中，有经验的科学家可以判断相对于一些参照分子确定结合亲和力是便利的。例如，为了评估分子A和B之间的结合强度，例如，人们可以使用已知与B结合且适合用荧光团或生色团或其它化学部分标记的参照分子C，诸如在ELISA或FACS(荧光活化的细胞分选)中容易检测的生物素、或其它形式(用于荧光检测的荧光团，用于光吸收检测的生色团，用于链霉抗生物素蛋白-介导的ELISA检测的生物素)。典型地，参照分子C保持在固定的浓度，并且A的浓度关于B的给定的浓度或量变化。结果，对应于A的浓度获得IC50值，在其中将在不存在A的条件下关于C所测量的信号二等分。假定已知参照分子的KD，即KD ref，以及参照分子的总浓度cref，则可以通过下式获得关于A-B相互作用的表观KD：KD＝IC50/(1+cref/KD ref)。注意，如果cref＜＜KD ref，则KD≈IC50。假定以一致的方式(例如，保持cref不变)针对比较的结合剂进行IC50测量，则分子相互作用的强度或稳定性可以通过IC50进行评估，并且在本发明的整个内容中，认为该测量等价于KD或等价于表观KD。
o)本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的半衰期通常可以定义为所述氨基酸序列、化合物或多肽的血清浓度在体内减少50％所花费的时间，例如，由于所述序列或化合物的降解和/或通过天然机制对所述序列或化合物的清除或螯合(sequestration)。本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的体内半衰期可以以本身已知的任何方式确定，诸如通过药物动力学分析。适当的技术对于本领域专业技术人员应该是清楚的，并且例如，通常可以包括下列步骤：将适当剂量的本发明的氨基酸序列、化合物或多肽适当施用给温血动物(即，施用给人或另一种适当的哺乳动物，诸如小鼠、兔、大鼠、猪、狗或灵长类动物，例如来自猕猴属的猴子(诸如，并且特别是食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))和/或恒河猴(恒河猴(Macaca mulatta)))和狒狒(豚尾狒狒(Papio ursinus)))；从所述动物收集血液样品或其它样品；确定在所述血液样品中的本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的水平或浓度；并且从这样获得的数据(的图表)计算与在给药时的初始水平相比较直到本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的水平或浓度已经减少50％的时间。例如，参考下述实验部分，以及Dennis等，生物化学杂志(J.Biol.Chem)277：35035-42(2002)，和标准手册，诸如Kenneth，A等：药物的化学稳定性：药剂师手册(Chemical Stability of Pharmaceuticals：A Handbook for Pharmacists)和Peters等，药物动力学分子：实践方法(Pharmacokinete analysis：A Practical Approach)(1996)。还参考″药物动力学(Pharmacokinetics)″，M Gibaldi和D Perron，Marcel Dekker出版，第2综述版(2nd Rev.edition)(1982)。
专业技术人员还应该清楚(例如，参见WO 04/003019的第6和7页以及其中引用的其它参考文献)，半衰期可以用参数如t1/2-α，t1/2-β和曲线下面积(AUC)表示。在本说明书中，“半衰期增加”是指在这些参数的任何一种的增加，诸如这些参数的任何两种，或基本上所有这三种参数。当用于本发明时，“半衰期增加”或“增加的半衰期”特别是指t1/2-β的增加，具有或不具有t1/2-α和/或AUC或二者的增加。
例如，本发明的氨基酸序列和多肽的半衰期通过在啮齿类动物或非-人灵长类动物模型中进行的药物代谢动力学研究确定，如下。向动物组(n＝2-10)给药静脉内推注(bolus injection)1mg/kg或10mg/kg 2D3-17D12融合蛋白。血浆样品在给药后的不同时间点(例如，给药后1，2，4，6，8，12，24，48，144，192，240，288和336小时)，通过静脉获得，并通过ELISA分析2D3-17D12融合蛋白的存在。将血浆浓度随时间变化拟合为二-区室消除模型。清除、V1、稳定状态体积(Vss)、T1/2、AUC、和对实际给药剂量校正的AUC(AUC/剂量)的药物代谢动力学参数针对各个治疗组进行平均。组之间的区别通过方差分析确定。
p)在本发明的上下文中，“调节(modulating)”或“调节(to modulate)”通常意指减少或抑制靶或抗原的活性，或备选地增加靶标或抗原的活性，如使用适当的体外、细胞或体内测定法测量的。特别地，“调节(modulating)”或“调节(to modulate)”可以意指减少或抑制靶标或抗原的活性，或备选地增加靶标或抗原的(相关或目的)生物学活性，如使用适当的体外、细胞或体内测定法(其通常将取决于涉及的靶标或抗原)测量的，与在相同条件但不存在本发明的构建体的条件下，在相同测定中的所述靶标或抗原的活性相比较，至少1％，优选至少5％，诸如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％或更多。
专业技术人员应该清楚，“调节”还可以包括与相同条件但不存在本发明的构建体相比较，对靶标或抗原对其配体、结合伴侣、缔合成同源多聚体或异源多聚体形式的伴侣、或底物中的一种或多种的亲和力、抗体亲抗原性、特异性和/或选择性形成改变(其可以是增加或减少)；和/或对所述靶标或抗原对于在所述靶标或抗原存在于其中的介质或环境的一种或多种条件(诸如pH、离子强度、辅因子的存在、等等)的敏感性形成改变(其可以是增加或减少)。专业技术人员应该清楚，这同样可以以适当的方式和/或使用本身已知的任何适当的测定法来确定，这取决于所涉及的靶标或抗原。
“调节”还可以意指对所述靶标或抗原参与其中(或包括其(多个)底物、(多个)配体、或(多个)途径参与其中，如其信号传导途径或代谢途径以及它们相关的生物学或生理学作用)的一种或多种生物学或生理学机制、作用、反应、功能、途径或活性形成改变(即，分别作为激动剂、作为拮抗剂或作为反激动剂的活性，这取决于所述靶标或抗原和需要的生物学或生理学作用)。同样，专业技术人员应该清楚，这样的作为激动剂或拮抗剂的作用可以以任何适当方式和/或使用本身已知的任何适当的(体外且通常是细胞或体内测定法)测定法确定，这取决于所涉及的靶标或抗原。特别地，作为激动剂或拮抗剂的作用可以是这样的，以致与在相同条件下但不存在本发明的构建体的相同测定法中的生物学或生理学活性相比，分别将目的生物学或生理学活性增加或减少至少1％，优选至少5％，诸如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％或更多。
例如，调节还可以包括所述靶标或抗原的别构调节；和/或减少或抑制所述靶标或抗原与其底物或配体之一的结合和/或与天然配体、底物竞争与所述靶标或抗原的结合。调节还可以包括激活所述靶标或抗原或所述靶标或抗原参与其中的机制或途径。例如，调节还可以包括对所述靶标或抗原的折叠或构象、或对所述靶标或抗原折叠的能力形成改变，以改变其构象(例如，在与配体结合时)，以与其他(亚)单位缔合，或以解聚。例如，调节还可以包括对所述靶标或抗原转运其他化合物或作为其他化合物(诸如离子)的通道的能力形成改变。
调节可以是可逆的或不可逆的，但是对于药学和药理学目的，通常应该是以可逆的方式。
q)关于靶标或抗原，术语在所述靶标或抗原上的“相互作用位点”意指在所述靶标或抗原上的位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基序列，其是所述靶标或抗原的用于结合配体、受体或其他结合配偶体的位点、催化位点、分解位点、别构相互作用的位点、参与多聚体化(如同源多聚体化或异源多聚体化)的位点；或是在所述靶标或抗原上的参与所述靶标或抗原的生物学作用或机制的任何其他位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基序列。更一般地，“相互作用位点”可以是在所述靶标或抗原上的本发明的氨基酸序列或多肽可以与之结合的任何位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基序列，以致调节(如本文定义)所述靶标或抗原(和/或其中包括所述靶标或抗原的任何途径、相互作用、信号传导、生物学机制或生物学作用)。
r)认为这样的氨基酸序列或多肽是对第一靶标或抗原“特异性的”，即，与第二靶标或抗原相比较，当与第一抗原以是所述氨基酸序列或多肽与第二靶标或多肽结合的亲和力的至少10倍、如至少100倍、且优选至少1000倍、且多至10000倍或更多的亲和力(如上述，且适当表示为KD值、KA值、koff-速率和/或kon-速率)结合时。例如，所述第一抗原可以以比所述氨基酸序列或多肽与所述第二靶标或多肽结合的KD小至少10倍、如小至少100倍、且优选小至少1000倍、如小10000倍或者甚至更小的KD值结合所述靶标或抗原。优选地，当氨基酸序列或多肽与第二靶标或抗原相比较对第一靶标或抗原是“特异性的”时，它针对(如本文定义)所述第一靶标或抗原，但是不针对所述第二靶标或抗原。
s)术语“交叉阻断(cross-block)”，“交叉阻断的(cross-blocked)”和“交叉阻断(cross-blocking)”在本文可以互换使用，用来意指氨基酸序列或其他结合试剂(如本发明的多肽)干扰本发明的其他氨基酸序列或结合试剂与给定靶标的结合的能力。本发明的氨基酸序列或其他结合试剂能够干扰另一种对[靶标]的结合的程度，且因此其能够被认为是本发明所述的交叉阻断的，可以使用竞争结合测定法确定。一种特别适当的定量测定法使用Biacore机器，其可以使用表面等离子体共振技术测量相互作用的程度。另一种适当的定量交叉阻断测定法使用基于ELISA的方法来测量氨基酸序列或其他结合试剂之间对于它们与所述靶标的结合的竞争。
以下概括描述用于确定氨基酸序列或其他结合试剂是否交叉阻断或按照本发明能够交叉阻断的适当的Biacore测定法。应该理解，所述测定法可以与本文所述的任何氨基酸序列或其他结合试剂一起使用。按照供应商的建议使用Biacore机器(例如，Biacore 3000)。因此，在一种交叉阻断测定法中，使用标准胺偶联化学将目标蛋白偶联到CM5 Biacore芯片上，以产生由所述靶标包被的表面。典型地，200-800个共振单位的靶标将被偶联到芯片上(易于给出可测量水平的结合但是易于被所用的测试试剂的浓度饱和的量)。将两种待检测它们彼此交叉阻断的能力的测试氨基酸序列(称为A*和B*)以结合位点1∶1摩尔比例混合在适当的缓冲液中，以产生测试混合物。当基于结合位点计算浓度时，假设氨基酸序列的分子量是氨基酸序列的总分子量除以所述氨基酸序列上的靶标结合位点的数目。测试混合物中每种氨基酸序列的浓度应该足够高，足以易于饱和所述氨基酸序列关于捕获在Biacore芯片上的靶标分子的结合位点。在所述混合物中的氨基酸序列处于相同的摩尔浓度(基于结合)，且所述浓度典型地为1.00-1.5微摩尔(基于结合)。还制备仅包含A*和仅包含B*的分开的溶液。在这些溶液中的A*和B*应该处在与在所述测试混合物中相同的缓冲液中和相同的浓度。将测试混合物通过靶标-包被的Biacore芯片，且记录结合的总量。然后，以这样的方式处理芯片，以在不损坏芯片-结合的靶标的条件下去除结合的氨基酸序列。典型地，这通过用30mM HCl处理芯片60秒进行。然后，将仅有A*的溶液通过靶标-包被的表面，并记录结合的量。同样处理芯片，以在不损坏芯片-结合的靶标的条件下去除所有结合的氨基酸序列。然后，将仅有B*的溶液通过靶标-包被的表面，并记录结合的量。接着计算A*和B*混合物的最大理论结合，且为每种氨基酸序列在单独通过靶标表面时的结合的总和。如果实际记录的混合物的结合小于该理论最大值，则该两种氨基酸序列彼此是交叉阻断的。因此，通常，按照本发明的交叉阻断的氨基酸序列或其他结合试剂是一种将在上述Biacore交叉阻断测定法中与靶标结合的，以致在该测定法中且在存在本发明的第二氨基酸序列或其他结合试剂时，所记录的结合是组合的两种氨基酸序列或结合试剂的最大理论结合(如上文定义)的80％-0.1％(例如，80％-4％)，特别地是最大理论结合的75％-0.1％(例如，75％-4％)，且更特别地是最大理论结合的70％-0.1％(例如，70％-4％)。上述Biacore测定法是用来确定氨基酸序列或其他结合试剂彼此是否是按照本发明交叉阻断的主要测定法。在很少的情形中，特定的氨基酸序列或其他结合试剂可能不与通过胺化学偶联到CM5Biacore芯片上的靶标结合(这通常在靶标上的相关结合位点通过与芯片的偶联而被遮蔽或破坏时发生)。在这样的情形中，交叉阻断可以使用标记形式的靶标，例如N端His-标记的形式确定。以这种特定的形式，抗-His氨基酸序列将被偶联到Biacore芯片上，然后将His-标记的靶标通过芯片表面，并被所述抗-His氨基酸序列捕获。交叉阻断分析将基本上按照上述进行，除了在每次芯片再生循环之后，新的His-标记的靶标将被重新负载到抗-His氨基酸序列包被的表面上。除了使用N端His-标记的[靶标]给出的实例之外，可以备选地使用C端His-标记的靶标。此外，本领域已知的各种其他标记和标记结合蛋白组合可以用于这样的交叉阻断分析(例如，具有抗-HA抗体的HA标记；具有抗-FLAG抗体的FLAG标记；具有链霉抗生物素蛋白的生物素标记)。
下述概括描述用于确定针对靶标的氨基酸序列或其他结合试剂是否交叉阻断或如本文所定义那样能够交叉阻断的ELISA测定法。应该理解，所述测定法可以与本文所述的任何氨基酸序列(或其他结合试剂，如本发明的多肽)一起使用。本测定法的一般原理是使得针对所述靶标的氨基酸序列或结合试剂包被到ELISA平板的孔上。将过量的量的第二、潜在的交叉阻断、抗-靶标氨基酸序列添加到溶液中(即，不与ELISA平板结合)。然后将有限量的靶标添加到孔中。所述包被的氨基酸序列和溶液中的氨基酸序列竞争与有限量的靶标分子的结合。洗涤平板，以去除未与包被的氨基酸序列结合的过量的靶标，且还去除第二、溶液相氨基酸序列以及在所述第二、溶液相氨基酸序列和靶标之间形成的任何复合物。然后，使用适于检测所述靶标的试剂测量结合的靶标的量。相对于在不存在第二、溶液相的氨基酸序列的条件下所述包被的氨基酸序列可以结合的靶标分子的数量，溶液中能够交叉阻断所包被的氨基酸序列的氨基酸序列将能够引起所述包被的氨基酸序列可以结合的靶标分子的数量的减少。在其中选择第一氨基酸序列如Ab-X作为固定的氨基酸序列的情形中，它被包被到ELISA平板的孔上，之后使用适当的封闭溶液来封闭该平板，以最小化随后添加的试剂的非特异性结合。然后，将过量的量的第二氨基酸序列如Ab-Y添加到该ELISA平板中，以致在包被所述ELISA平板的过程中，每孔Ab-Y[靶标]结合位点的摩尔比每孔所用的Ab-X[靶标]结合位点的摩尔高至少10倍。然后，加入[靶标]，以致每孔加入的[靶标]的摩尔比用于包被每孔的Ab-X[靶标]结合位点的摩尔低至少25倍。在适当的温育时间之后，洗涤ELISA平板，且加入用于检测所述靶标的试剂，以测量由所述包被的抗-[靶标]氨基酸序列(在该情形中为Ab-X)特异结合的靶标的量。关于该测定法的背景信号定义为在使用所述包被的氨基酸序列(在该情形中为Ab-X)、第二溶液相氨基酸序列(在该情形中为Ab-Y)、仅有[靶标]缓冲剂(即，无靶标)和靶标检测试剂的孔中获得的信号。关于该测定法的阳性对照信号定义为在使用所述包被的氨基酸序列(在该情形中为Ab-X)、仅有第二溶液相氨基酸序列缓冲剂(即，无第二溶液相氨基酸序列)、靶标和靶标检测试剂的孔中获得的信号。该ELISA测定法可以以这样的方式运行，以使得阳性对照信号是背景信号的至少6倍。为了避免由选择哪种氨基酸序列用作包被氨基酸序列和哪种用作第二(竞争剂)氨基酸序列导致的任何假象(例如，Ab-X和Ab-Y之间对于[靶标]的显著不同的亲和力)，该交叉阻断测定法可以以两种形式运行：1)形式1是其中Ab-X是包被到ELISA平板上的氨基酸序列，Ab-Y是在溶液中的竞争氨基酸序列，和2)形式2是其中Ab-Y是包被到ELISA平板上的氨基酸序列，Ab-X是在溶液中的竞争氨基酸序列。如果在形式1或在形式2中，与在不存在溶液相抗-靶标氨基酸序列的条件下(即，阳性对照孔)获得的靶标检测信号相比较，所述溶液相抗-靶标氨基酸序列能够引起靶标检测信号(即，由所述包被的氨基酸序列结合的靶标的量)减少60％-100％，特别地70％-100％，且更特别地80％-100％，则Ab-X和Ab-Y被定义为是交叉阻断的。
t)如果它对于这两种不同的抗原或抗原决定簇是特异性的(如本文定义)，则认为氨基酸序列对于两种不同的抗原或抗原决定簇(诸如来自两种不同哺乳动物种属的血清白蛋白，诸如人血清白蛋白和犬血清白蛋白)是“交叉反应的”。
u)“基本上不依赖pH”的结合在本文通常意指在动物或人体细胞内存在的pH值(如本文进一步所述)氨基酸序列对血清蛋白(如血清白蛋白)的缔合常数(KA)是在所述细胞外存在的pH值所述氨基酸序列对相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5％，如至少10％，优选至少25％，更优选至少50％，甚至更优选至少60％，如甚至更优选至少70％，如至少80％或90％或更多(或甚至大于100％，如大于110％，大于120％或甚至130％或更多，或甚至大于150％，或甚至大于200％)。备选地，“基本上不依赖pH”的结合在本文通常意指在动物或人体细胞内存在的pH值(如本文进一步所述，例如5.5左右的pH，例如5.3-5.7)氨基酸序列对血清蛋白(如血清白蛋白)的koff速率(通过Biacore测量)是在所述细胞外存在的pH值如pH 7.2-7.4所述氨基酸序列对相同血清蛋白的koff速率的至少5％，如至少10％，优选至少25％，更优选至少50％，甚至更优选至少60％，如甚至更优选至少70％，如至少80％或90％或更多(或甚至大于100％，如大于110％，大于120％或甚至130％或更多，或甚至大于150％，或甚至大于200％)。所谓“在动物或人体细胞内存在的pH值”意指可能在细胞内，且特别是在参与血清蛋白再循环的细胞内存在的pH值。特别地，“在动物或人体细胞内存在的pH值”意指可能存在于参与血清蛋白的再循环(例如，作为胞饮作用、内吞作用、胞转作用、胞外分泌和吞噬作用或类似的摄入或在所述细胞内内在化的机制)的(亚)细胞区室或小泡内如内涵体、溶酶体或胞饮泡内的pH值。
v)如本文进一步所述，纳米抗体中氨基酸残基总数可以在110-120区间，优选112-115，并且最优选113。然而，应该注意纳米抗体的部分、片段、类似物或衍生物(如本文进一步所述)不特别局限于它们的长度和/或大小，只要这样的部分、片段、类似物或衍生物满足本发明列出的深层要求，并且还优选地适于本文所述的目的；
w)纳米抗体的氨基酸残基按照Kabat等(“免疫学目的蛋白的序列(Sequence of proteins of immunological interest)”，美国公众健康服务中心(US Public Health Services)，NIH Bethesda，MD，Publication No.91)给出的关于VH结构域的通用编号方式进行编号，这种编号方式在Riechmann和Muyldermans，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)2000年6月23日；240(1-2)：185-195的文章中用于来自骆驼科动物的VHH结构域(例如，参见该公布的图2)，或参考本文。按照这种编号方式，纳米抗体的FR1包括位置1-30的氨基酸残基，纳米抗体的CDR1包括位置31-35的氨基酸残基，纳米抗体的FR2包括位置36-49的氨基酸，纳米抗体的CDR2包括位置50-65的氨基酸残基，纳米抗体的FR3包括位置66-94的氨基酸残基，纳米抗体的CDR3包括位置95-102的氨基酸残基，以及，纳米抗体的FR4包括位置103-113的氨基酸残基。[在这一方面，应该注意——如在本领域内关于VH结构域和关于VHH结构域公知的——在每一CDR中的氨基酸残基的总数可以不同，并且可以不与由Kabat编号方式指示的氨基酸残基的总数相对应(即，按照Kabat编号方式的一个或多个位置可能不占据在实际序列中，或者实际序列可能包含比由Kabat编号方式允许的数目更多的氨基酸残基)。这意味着，通常，按照Kabat的编号方式可能或可能不与实际序列中的氨基酸残基的实际编号方式相对应。然而，通常可以认为，按照Kabat的编号方式并且不考虑CDR中的氨基酸残基的数目，按照Kabat编号方式的位置1对应FR1的起点，并且反之亦然，按照Kabat编号方式的位置36对应FR2的起点，并且反之亦然，按照Kabat编号方式的位置66对应FR3的起点，并且反之亦然，以及按照Kabat编号方式的位置103对应FR4的起点，并且反之亦然。
用于编号VH结构域的氨基酸残基的备选方法是由Chothia等(自然(Nature)342，877-883(1989))所述的方法，即所谓的“AbM定义”和所谓的“联系定义”，所述方法还可以以类似的方式用于来自骆驼科动物的VHH结构域以及用于纳米抗体。然而，在本说明书、权利要求和附图中，遵循由Riechmann和Muyldermans用于VHH结构域的按照Kabat的编号方式，除非另外指明；并且
x)就本文所述的为CDR序列(诸如来自CDR1序列组2，9，16，23，30，37，44，51和/或58(见表A-1)的任意一个CDR序列；来自CDR2序列组4，11，18，25，32，39，46，53，和/或60(见表A-1)的任意一个CDR序列；和/或来自CDR3序列组6，13，20，27，34，41，48，54和/或62(见表A-1)的任意一个CDR序列)的任意氨基酸序列而言，“可选条件I”是指当所述氨基酸序列含有氨基酸置换时，这些氨基酸置换优选地是，并且与没有所述置换的原始氨基酸序列相比，保守氨基酸置换(如本文所定义)；“可选条件II”是指所述优选地仅含有氨基酸置换，并且与没有所述置换的原始氨基酸序列相比，没有氨基酸缺失或插入；“可选条件III”是指所述氨基酸序列可以是使用本身已知的亲和力成熟的一种或多种技术通过亲和力成熟从相应的氨基酸序列获得的氨基酸序列。
y)就本文所述的为构架序列的任意一个氨基酸序列而言，“可选条件I”是指当所述氨基酸序列含有氨基酸置换时，这些氨基酸置换优选地是，并且与没有所述置换的原始氨基酸序列相比，保守氨基酸置换(如本文所定义)；“可选条件II”是指所述优选地仅含有氨基酸置换，并且与没有所述置换的原始氨基酸序列相比，没有氨基酸缺失或插入；以及“可选条件IV”是指在这些氨基酸序列含有任何氨基酸差异时，这些氨基酸差异优选地不存在于标志残基之一处(尽管不排除在标志残基的位置处存在氨基酸差异，条件是如本文所述的VHH或纳米抗体的有利特性基本上被保留或不被影响到使生成的氨基酸序列不再适合用作单抗原结合结构域或单位(例如，作为纳米抗体)的程度)；
z)给出附图、序列表和实验部分/实施例只是进一步举例说明本发明，并且不应该被以任何方式解释为或者认为限制本发明和/或附上的权利要求的范围，除非本文中另外明确指明。此外，通常，实验部分中明确提到的本发明的氨基酸序列和多肽是本发明的氨基酸序列和多肽的优选实施例。从实验部分中给出的数据，来自这些氨基酸序列和多肽内的更多的优选实例将变得清楚。
关于重链抗体及其可变结构域的概括描述，其中特别参考本文引用的现有技术，参考Muyldermans在分子生物技术综述(Reviews in Molecular Biotechnology)74(2001)，277-302中的综述论文；以及参考下述专利申请，其作为公知背景技术提及：Vrije Universiteit Brussel的WO 94/04678，WO 95/04079和WO 96/34103；Unilever的WO 94/25591，WO 99/37681，WO 00/40968，WO 00/43507，WO 00/65057，WO 01/40310，WO 01/44301，EP 1134231和WO 02/48193；Vlaams Instituut voor Biotechnologie(VIB)的WO 97/49805，WO 01/21817，WO 03/035694，WO 03/054016和WO 03/055527；Algonomics N.V.和埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的WO 03/050531；加拿大国家研究委员会的(the National Research Council of Canada)WO 01/90190；抗体研究所(the Institute of Antibodies)的WO 03/025020(＝EP 1 433 793)；以及埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的WO 04/041867，WO 04/041862，WO 04/041865，WO 04/041863，WO 04/062551，WO 05/044858，WO 06/40153，WO 06/079372，WO 06/122786，WO 06/122787和WO 06/122825，和埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的其它公布的专利申请。还参考在这些申请中提及的其它现有技术，并且特别参考在国际申请WO 06/040153第41-43页提及的参考文献列表，该列表和参考文献通过引用结合于此。
按照本领域中所用的术语学(参见上述参考文献)，在天然存在的重链抗体中存在的可变结构域还叫作“VHH结构域”，以将它们与在常规的4-链抗体中存在的重链可变结构域(其在下文中叫作“VH结构域”)区分，以及与在常规4-链抗体中存在的轻链可变结构域(其在下文中叫作“VL结构域”)区分。
如在上文提到的现有技术中提及，VHH结构域具有许多独特的结构特征和功能特性，这使得分离的VHH结构域(以及基于此的纳米抗体，其与天然存在的VHH结构域一起具有这些结构特征和功能特性)以及包含其的蛋白高度有利地用作功能性抗原-结合结构域或蛋白。特别地，并且不限于此，VHH结构域(其天然地被“设计”为功能性结合抗原，而无需存在轻链可变结构域，并且无需与轻链可变结构域的任何相互作用)和纳米抗体可以作用为单一的、相对小的、功能性抗原-结合结构单位、结构域或蛋白。这将VHH结构域与常规4-链抗体的VH和VL结构域区分开，其本身通常不适合作为单一抗原-结合蛋白或结构域用于实际应用，但是需要以某种形式或另一种形式组合以提供功能性抗原-结合单位(例如，在常规抗体片段诸如Fab片段中；在ScFv’s片段中，其由共价连接到VL结构域上的VH结构域组成)。
由于这些独特的特性，VHH结构域和纳米抗体用作单一抗原-结合蛋白或用作抗原-结合结构域(即，作为更大的蛋白或多肽的部分)提供许多优于常规VH和VL结构域、scFv’s或常规抗体片段(诸如Fab-或F(ab’)2-片段)应用的显著优点：
-只需要单结构域来以高亲和力和高选择性结合抗原，以致不需要存在两个分开的结构域，也不需要保证这两个结构域以正确的空间构象和构型(即，通过使用专门设计的接头，如同scFv’s)存在；
-VHH结构域和纳米抗体可以从单一基因表达，并且不需要翻译后折叠或修饰；
-VHH结构域和纳米抗体可以容易地加工成多价和多特异性形式(如本文进一步所讨论)；
-VHH结构域和纳米抗体高度可溶，并且没有聚集倾向(如同Ward等，自然(Nature)，341卷，1989，第544页所述的来源于小鼠的“dAb’s”)；
-VHH结构域和纳米抗体对热、pH、蛋白酶和其它变性剂或条件高度稳定(参见，例如，Ewert等，同前所述)；
-VHH结构域和纳米抗体制备容易并且相对廉价，即使以生产需要的规模制备。例如，VHH结构域、纳米抗体和包含其的蛋白/多肽可以使用微生物发酵生产(例如，下文进一步所述)，并且不需要使用哺乳动物表达系统，如同例如常规抗体片段；
-与常规4-链抗体及其抗原-结合片段相比，VHH结构域和纳米抗体相对较小(大约15kDa，或比常规IgG小10倍)，并且因此表现出比所述常规4-链抗体及其抗原-结合片段更高的组织(包括但不限于实体瘤和其它致密组织)穿透性；
-VHH结构域和纳米抗体可以表现出所谓的腔-结合(cavity-binding)特性(与常规VH结构域相比，尤其由于它们延长的CDR3环)，并且因此还可以接近常规4-链抗体及其抗原-结合片段不能接近的靶标和表位。例如，已经表明VHH结构域和纳米抗体可以抑制酶(参见，例如，WO 97/49805；Transue等，Proteins(蛋白质)1998年9月1日；32(4)：515-22；Lauwereys等，EMBO J.1998年7月1日；17(13)：3512-20)。
在一个具体且优选的方面中，本发明提供针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体，且特别是针对来自温血动物的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体，且更特别地是针对来自哺乳动物的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体，且尤其是针对人异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体；以及包括至少一种所述纳米抗体的蛋白和/或多肽。
特别地，本发明提供针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体，和包括其的蛋白和/或多肽，与常规针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的抗体或其片段相比，与可基于所述常规抗体或抗体片段的构建体(如Fab’片段，F(ab’)2片段，ScFv构建体，“二抗体”和其他多特异性构建体(参见例如Holliger和Hudson，Nat Biotechnol.(自然生物技术)2005年9月；23(9)：1126-36)的综述)相比，且还与所谓的“dAb’s”或可能来源于常规抗体的可变结构域相似的(单)结构域抗体相比，其具有提高的治疗和/或药学特性和/或其他有利特性(诸如，例如，改进的制备容易性和/或减少的商品成本)。这些提高的和有利的特性将通过本文的进一步描述变得清楚，且例如包括但不限于，下述各项的一种或多种：
-提高的针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和力和/或抗体亲抗原性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)；
-对于以多价形式(例如，以二价形式)格式化的更好的适合性；
-对于以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)格式化的更好的适合性；
-提高的对“人源化”取代(如本文定义)的适合性或易感性；
-更小的免疫原性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)；
-增加的稳定性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)；
-增加的针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的特异性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)；
-减少或在需要时提高与来自不同物种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体的交叉反应性；
和/或
-一种或多种对药学应用(包括预防应用和/或治疗应用)和/或诊断应用(包括但不限于成像目的)理想的其他改善的特性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)。
如本文关于本发明的氨基酸序列概括所述，本发明的纳米抗体优选以基本上分离的形式(如本文定义)存在，或形成本发明的蛋白或多肽(如本文定义)的一部分，其可以包括一个或多个本发明的纳米抗体或基本上由其组成，且其可以任选地还包括一个或多个其他氨基酸序列(所有任选地通过一个或多个适当的接头连接)。例如，且不限于，所述本发明的一个或多个氨基酸序列可以在所述蛋白或多肽中用作结合单位，其可以任选地包含一个或多个可以作为结合单位的其他氨基酸序列(即，针对除异二聚体细胞因子和/或它们的受体外的一个或多个其他的靶标)，以分别提供单价的、多价的或多特异性的本发明的多肽，所有均如本文所述。特别地，这样的蛋白或多肽可以包括一个或多个本发明的纳米抗体和任选地一个或多个(其他)纳米抗体或基本上由其组成(即，针对除异二聚体细胞因子和/或它们的受体外的其他的靶标)，所有均任选地通过一个或多个适当的接头连接，以分别提供单价的、多价的或多特异性的纳米抗体构建体，如本文进一步所述。这样的蛋白或多肽也可以以基本上分离的形式(如本文定义)存在。
在本发明的纳米抗体中，用于针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合的结合位点优选地由CDR序列形成。任选地，本发明的纳米抗体还可以，且除了用于针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合的至少一个结合位点之外，包含一个或多个用于针对其他抗原、蛋白或靶标结合的其他结合位点。对于引入所述第二结合位点的方法和位置，例如，参考Keck和Huston，Biophysical Journal，(生物物理学杂志)71，1996年10月，2002-2011；EP 0 640 130；WO 06/07260。
如本文关于本发明的氨基酸序列概括所述，当意欲将本发明的纳米抗体(或包括其的本发明的多肽)施用给受试者时(例如，用于治疗和/或诊断目的，如本文所述)，它优选地针对人异二聚体细胞因子和/或它们的受体；而对于兽医用目的，它优选地针对来自被治疗的物种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体。此外，如使用本发明的氨基酸序列，本发明的纳米抗体可以或可以不是交叉反应的(即，针对来自两种或多种哺乳动物物种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体，如针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体和来自本文提及的哺乳动物物种中的至少一种的异二聚体细胞因子和/或它们的受体)。
此外，同样如本文关于本发明的氨基酸序列概括所述，本发明的纳米抗体可以通常针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的任何抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚单位或构象(在适用的情形中)，诸如相互作用位点(如本文所定义)或非相互作用位点的位点、抗原决定簇、表位、部分、结构域。
如本文已经所述，可以认为纳米抗体的氨基酸序列和结构----然而，不限于此----包括4个构架区或“FR’s”(或有时还称为“FW’s”)，其在本领域和本文中分别称为“构架区1”或“FR1”；“构架区2”或“FR2”；“构架区3”或“FR3”；和“构架区4”或“FR4”；所述构架区由3个互补性决定区或“CDR’s”中断，其在本领域分别称为“互补性决定区1”或“CDR1”；“互补性决定区2”或“CDR2”；和“互补性决定区3”或“CDR3”。在本发明的纳米抗体中存在的一些优选的构架序列和CDR’s(及其组合)如本文所述。其他适当的CDR序列可以通过本文所述的方法获得。
按照本发明的非限制性但是优选的方面，本发明的纳米抗体(中存在的CDR序列)是这样的，以致：
-所述纳米抗体可以以10-5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升或更小、并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合；
和/或这样，以致：
-所述纳米抗体可以以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的kon-速率与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合；
和/或这样，以致：
-所述纳米抗体可以以1s-1(t1/2＝0.69s)-10-6s-1(假定具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的koff速率与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。
优选地，本发明的纳米抗体(中存在的CDR序列)是这样的，以致：本发明的单价纳米抗体(或包含仅一个本发明的纳米抗体的多肽)优选是这样，以致它将以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和力与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。
本发明的纳米抗体针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和力可以以本身已知的方式确定，例如，使用本文提及的用于测量KD.KA，koff或kon的通用技术，以及本文所述的一些具体的测定法确定。
对于本发明的纳米抗体(和包括其的多肽)与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合的一些优选的IC50值将从本发明的进一步描述和实施例中变得清楚。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及为p19+序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组2的氨基酸序列(见表A-1和图11)；
b)与CDR1序列组2的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组2的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组4的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组4的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组4的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组6的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组6的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组6的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，按照该优选而非限制性的方面，本发明涉及为p19+序列的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组2的氨基酸序列；
b)与CDR1序列组2的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组2的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组4的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组4的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组4的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组6的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组6的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组6的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明涉及为p19-序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组9的氨基酸序列(见表A-1和图12)；
b)与CDR1序列组9的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组9的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组11的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组11的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组11的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组13的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组13的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组13的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，按照该优选而非限制性的方面，本发明涉及为p19-序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组9的氨基酸序列；
b)与CDR1序列组9的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组9的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组11的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组11的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组11的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组13的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组13的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组13的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明涉及为p40-序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组16的氨基酸序列(见表A-1和图13)；
b)与CDR1序列组16的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组16的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组18的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组18的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组18的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组20的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组20的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组20的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，按照该优选而非限制性的方面，本发明涉及为p40-序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组16的氨基酸序列；
b)与CDR1序列组16的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组16的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组18的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组18的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组18的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组20的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组20的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组20的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明涉及为p40+序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组23的氨基酸序列(见表A-1和图14)；
b)与CDR1序列组23的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组23的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组25的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组25的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组25的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组27的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组27的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组27的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，按照该优选而非限制性的方面，本发明涉及为p40+序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组23的氨基酸序列；
b)与CDR1序列组23的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组23的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组25的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组25的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组25的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组27的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组27的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组27的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明涉及为p35序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组30的氨基酸序列(见表A-1和图15)；
b)与CDR1序列组30的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组30的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组32的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组32的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组32的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组34的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组34的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组34的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，按照该优选而非限制性的方面，本发明涉及为p35序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组30的氨基酸序列；
b)与CDR1序列组30的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组30的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组32的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组32的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组32的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组34的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组34的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组34的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明涉及为IL-27序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组37的氨基酸序列(见表A-1和图16)；
b)与CDR1序列组37的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组37的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组39的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组39的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组39的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组41的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组41的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组41的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，按照该优选而非限制性的方面，本发明涉及为IL-27序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组37的氨基酸序列；
b)与CDR1序列组37的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组37的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组39的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组39的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组39的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组41的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组41的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组41的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明涉及为IL-12Rb1序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组44的氨基酸序列(见表A-1和图17)；
b)与CDR1序列组44的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组44的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组46的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组46的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组46的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组48的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组48的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组48的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，按照该优选而非限制性的方面，本发明涉及为IL-12Rb1序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组44的氨基酸序列；
b)与CDR1序列组44的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组44的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组46的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组46的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组46的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组48的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组48的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组48的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明涉及为IL-12Rb2序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组51的氨基酸序列(见表A-1和图18)；
b)与CDR1序列组51的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组51的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组53的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组53的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组53的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组55的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组55的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组55的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，按照该优选而非限制性的方面，本发明涉及为IL-12Rb2序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组51的氨基酸序列；
b)与CDR1序列组51的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组51的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组53的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组53的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组53的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组55的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组55的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组55的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明涉及为IL-23R序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组58的氨基酸序列(见表A-1和图18)；
b)与CDR1序列组58的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组58的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组60的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组60的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组60的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组62的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组62的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组62的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，按照该优选而非限制性的方面，本发明涉及为IL-23R序列(如本文所定义)的(单)结构域抗体和/或纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)CDR1序列组58的氨基酸序列；
b)与CDR1序列组58的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与CDR1序列组58的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)CDR2序列组60的氨基酸序列；
e)与CDR2序列组60的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与CDR2序列组60的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)CDR3序列组62的氨基酸序列；
h)与CDR3序列组62的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与CDR3序列组62的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
一般地，具有上述CDR序列的纳米抗体可以如本文进一步所述，且优选地具有也如本文进一步所述的构架序列。因此，例如，且如本文所提及，这样的纳米抗体可以是(来自任何适当的物种的)天然存在的纳米抗体，天然存在的VHH序列(即，来自适当的骆驼科物种)或合成的或半合成的氨基酸序列或纳米抗体，包括但不限于部分人源化的纳米抗体或VHH序列、完全人源化的纳米抗体或VHH序列、骆驼源化的重链可变结构域序列、以及已经通过本文提及的技术获得的纳米抗体。
此外，就与表A-2中分别提及的p19+序列，p19-序列，p40-序列，p40+序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列或IL-23R序列具有的序列同一性程度，与其的氨基酸差异数目，和/或交叉阻断和/或与其竞争的能力而言，上述p19+，p19-，p40+，p40-，抗p35，抗IL-27，抗IL-12Rb1，抗IL-12Rb2和抗IL-23R纳米抗体分别优选地如本文所述。优选地，所述p19+，p19-，p40+，p40-，抗p35，抗-IL-27，抗IL-12Rb1，抗IL-12Rb2和抗IL-23R纳米抗体选自表A-2中提及的相应序列。
因此，在一个具体而非限制性的方面中，本发明涉及人源化的纳米抗体，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中CDR1-CDR3如本文所定义，且其中所述人源化的纳米抗体包括至少一个人源化取代(如本文定义)，且特别地是在其至少一个构架序列(如本文定义)中的至少一个人源化取代。
本发明另一个优选的而非限制性的方面涉及上面p19+，p19-，p40+，p40-，抗p35，抗IL-27，抗IL-12Rb1，抗IL-12Rb2和抗IL-23R纳米抗体的人源化变体，它们与相应的天然VHH序列(即，如表A-2中所提及)相比较，包括至少一个人源化取代(如本文定义)，且特别是在至少其构架序列(如本文定义)之一中的至少一个人源化取代。这样的人源化纳米抗体的实例在SEQ ID NO’s：2559-2614(还见图31)中给出，并且专业技术人员将能够基于本文公开的内容，任选地在一些有限的反复试验后找到其他合适的人源化变体。
本发明的多肽包括至少一个本发明的纳米抗体或基本上由其组成。本发明的多肽的一些优选的，但非限制性的实例在SEQ ID NO’s：2142-2169和2530-2558(还见图30)，以及SEQ ID NO：2615-2622(见图32)，2623-2629，2643和2644(见图33)，SEQ ID NO：2630-2641(见图34)，SEQ ID NO：2645和2646(见图35)以及SEQ ID NO：2647和2648(见图36)中给出。本发明还涉及与这些多肽的至少一个具有至少70％，诸如至少80％，例如至少90％的序列同一性的多肽。
例如，如在实验部分中进一步所述，在由Aggarwal所述的脾细胞测定中(见实施例15)，单价Nb 121A2得到的IC50为约1.5nM，而下列的双互补位型构建体得到下列的IC 50值：121A2-35GS-81A2：IC50＝～60pM；121A2-35GS-81G2：IC50＝～90pM；121A2-35GS-119G7)：IC50＝30-60pM；121A2-35GS-124H2：IC50＝～90pM；以及121A2-35GS-124H IC50＝～180pM。
专业技术人员应该清楚，本文提及为“优选的”(或“更优选的”、“甚至更优选的”、等等)纳米抗体也是优选的(或更优选的，或甚至更优选的，等等)用于本文所述的多肽中。因此，包括一个或多个“优选的”本发明的纳米抗体或基本上由其组成的多肽通常将是优选的，且包括一个或多个“更优选的”本发明的纳米抗体或基本上由其组成的多肽通常将是更优选的，等等。
一般地，包括单一纳米抗体(如本发明的单一纳米抗体)或基本上由其组成的蛋白或多肽在本文称为“单价的”蛋白或多肽或称为“单价的构建体”。包括两个或多个纳米抗体(如至少两个本发明的纳米抗体或至少一个本发明的纳米抗体和至少一个其他纳米抗体)或基本上由其组成的蛋白和多肽在本文称为“多价的”蛋白或多肽或称为“多价的构建体”，且与相对应的本发明的单价纳米抗体相比较，这些可以提供某些优点。通过本文的进一步描述，所述多价构建体的一些非限制性的实例将变得清楚。
按照一个具体而非限制性的方面，本发明的多肽包括至少两个本发明的纳米抗体、如两个或三个本发明的纳米抗体或基本上由其组成。如本文进一步所述，与包括本发明的单一纳米抗体或基本上由其组成的蛋白或多肽相比较，所述多价构建体可以提供某些优点，如提高很多的对于异二聚体细胞因子和/或它们的受体的抗体亲抗原性。基于本文的公开内容，对于专业技术人员来说所述多价构建体将是清楚的。
按照另一个具体而非限制性的方面，本发明的多肽包括至少一个本发明的纳米抗体和至少一个其他结合单位(即，针对另一个表位、抗原、靶标、蛋白或多肽)或基本上由其组成，所述其他结合单位优选地也是纳米抗体。所述蛋白或多肽在本文还称为“多特异性”蛋白或多肽，或称为“多特异性构建体”，且与相对应的本发明的单价纳米抗体相比较，这些可以提供某些优点(如从本文对一些优选的、但非限制性的多特异性构建体的进一步讨论中将变得清楚)。基于本文的公开内容，对于专业技术人员来说所述多特异性的构建体将是清楚的，并且可以特别地是双互补位型构建体(如本文所提及)。基于本文的公开内容，所述多特异性纳米抗体构建体的一些优选的、但非限制性的实例对于专业技术人员将是清楚的。
按照另一个具体的但非限制性的方面，本发明的多肽包括至少一个本发明的纳米抗体、任选地一个或多个其他纳米抗体、和至少一个赋予本发明的纳米抗体和/或赋予所得到的融合蛋白至少一种需要的特性的其他氨基酸序列(如蛋白或多肽)，或基本上由其组成。同样地，与相对应的本发明的单价纳米抗体相比较，所述融合蛋白可以提供某些的优点。所述氨基酸序列和所述融合构建体的一些非限制性的实例将通过本文的进一步描述变得清楚。
还可以组合两个或多个上述方面，例如，以提供三价双特异性构建体，其包括两个本发明的纳米抗体，和一个其他的纳米抗体，和任选地一个或多个其他的氨基酸序列。所述构建体的其他非限制性的实例，以及在本发明的情形中特别优选的一些构建体，将通过本文的进一步描述变得清楚。
在上述构建体中，所述一个或多个纳米抗体和/或其他氨基酸序列可以直接彼此连接和/或适当地通过一个或多个接头序列彼此连接。所述接头的一些适合的但非限制性的实例将通过本文的进一步所述变得清楚。
在本发明的一个具体的方面中，与本发明相对应的氨基酸序列相比较，本发明的纳米抗体或包括至少一个本发明的纳米抗体的本发明的化合物、构建体或多肽可以具有增加的半衰期。基于本文进一步公开的内容，专业技术人员应该清楚所述纳米抗体、化合物和多肽的一些优选的但非限制性的实例，且例如，包括已经进行化学修饰(例如，通过聚乙二醇化)提高其半衰期的本发明的纳米抗体序列或多肽；包括至少一个用于结合血清蛋白(如血清白蛋白)的额外的结合位点的本发明的氨基酸序列；或包括至少一个与至少一个增加本发明的纳米抗体的半衰期的部分(且特别是至少一个氨基酸序列)连接的本发明的纳米抗体的本发明的多肽。基于本文进一步的公开内容，专业技术人员应该清楚包括所述半衰期延长部分或氨基酸序列的本发明的多肽的实例；且例如包括，不限于，这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的纳米抗体适当地与下列各项连接：一个或多个血清蛋白或其片段(如血清白蛋白或其适当的片段)，或一个或多个可以结合血清蛋白的结合单位(如例如，可以结合血清蛋白如血清白蛋白、血清免疫球蛋白如IgG、或运铁蛋白的纳米抗体或(单)结构域抗体)；这样的多肽，其中本发明的纳米抗体与Fc部分(如人Fc)或其适当的部分或片段连接；或这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的纳米抗体适当地与可以结合血清蛋白的一个或多个小蛋白或肽连接(诸如，不限于，记载在WO91/01743，WO 01/45746，WO 02/076489和埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)于2006年12月5日提交的题目为“能够结合血清蛋白的肽(Peptides capable of binding to serum proteins)”的埃博灵克斯股份有限公司的美国临时申请(也参见WO 068280)以及埃博灵克斯股份有限公司的题目均为“能够结合血清蛋白的改进的肽(Improved peptides capable of binding to serum proteins)”的美国临时申请61/050,385和61/045,690)中的蛋白和肽)。
同样地，如专业技术人员应该清楚的，所述纳米抗体、化合物、构建体或多肽可以包含一个或多个另外的基团、残基、部分或结合单位，如一个或多个其他氨基酸序列，且特别是一个或多个另外的纳米抗体(即，不针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体)，以提供多特异性纳米抗体构建体中的三特异性纳米抗体构建体。
一般地，具有增加的半衰期的本发明的纳米抗体(或包括其的化合物、构建体或多肽)优选地具有是相对应的本发明的氨基酸序列本身的半衰期的至少1.5倍、优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的半衰期。例如，与相对应的本发明的氨基酸序列本身相比，具有增加的半衰期的本发明的纳米抗体、化合物、构建体或多肽可以具有增加超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的半衰期。
在本发明的一个优选而非限制性方面中，所述本发明的纳米抗体、化合物、构建体或多肽在人中表现出至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期。例如，本发明的化合物或多肽可以具有至少5天(诸如约5-10天)、优选至少9天(诸如约9-14天)、更优选至少约10天(诸如约10-15天)、或至少约11天(诸如约11-16天)、更优选至少约12天(诸如约12-18天或更多)、或超过14天(诸如约14-19天)的半衰期。
在本发明的另一个方面中，本发明的多肽包括与允许所得到的本发明的多肽穿过血脑屏障的一个或多个(诸如两个并且优选一个)氨基酸序列连接(任选地通过一个或多个适当的接头序列连接)的一个或多个(诸如两个或优选一个)本发明的纳米抗体。特别地，允许所得到的本发明的多肽穿过血脑屏障的所述一个或多个氨基酸序列可以是一个或多个(诸如两个并且优选一个)纳米抗体，诸如在WO 02/057445中所述的纳米抗体，其中FC44(WO 06/040153的SEQ ID NO：189)和FC5(WO 06/040154的SEQ ID NO：190)是优选的实施例。
特别地，包括一个或多个本发明的纳米抗体的多肽优选是这样的，以致它们：
-以10-5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升或更小、并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合；
和/或这样，以致它们：
-以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的kon-速率与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合；
和/或这样，以致它们：
-以1s-1(t1/2＝0.69s)-10-6s-1(假定具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的koff速率与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。
优选地，包含仅一个本发明的氨基酸序列的多肽优选是这样，以致它将以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和力与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。在这一方面中，专业技术人员应该清楚，与包含仅一个本发明的氨基酸序列的多肽相比较，包含两个或多个本发明的纳米抗体的多肽可以以增加的抗体亲抗原性结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体。
对于本发明的氨基酸序列或多肽与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合的一些优选的IC50值将从本发明的进一步描述和实施例中变得清楚。
本发明的另一个方面涉及编码本发明的纳米抗体或包括其的本发明的多肽的核酸。同样地，如本文关于本发明的核酸概括所述，这样的核酸可以以遗传构建体的形式存在，如本文定义。
在另一个方面中，本发明涉及表达或能够表达本发明的氨基酸序列(诸如(单)结构域抗体和/或纳米抗体)和/或包括其的本发明的多肽的宿主或宿主细胞；和/或包含本发明的核酸的宿主或宿主细胞。通过本文进一步的描述，所述宿主或宿主细胞的一些优选的但非限制性的实例将变得清楚。
本发明的另一个方面涉及包含或包括至少一个本发明的氨基酸序列(诸如(单)结构域抗体和/或纳米抗体)、至少一个本发明的多肽和/或至少一个本发明的核酸的产品或组合物，和任选地本身已知的所述组合物的一种或多种其他成分，即，取决于所述组合物的目的用途。例如，所述产品或组合物可以是药物组合物(如本文所述)，兽医用组合物或用于诊断应用(也如本文所述)的产品或组合物。通过本文进一步的描述，所述产品或组合物的一些优选的但非限制性的实例将变得清楚。
本发明还涉及用于制备或产生本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的方法。通过本文进一步的描述，所述方法的一些优选的但非限制性的实例将变得清楚。
本发明还涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的应用和用途，以及用于预防和/或治疗与异二聚体细胞因子和/或它们的受体相关的疾病和病症的方法。通过本文进一步的描述，一些优选的但非限制性的应用和用途的实例将变得清楚。
通过下文的进一步描述，本发明的其他方面、实施方案、优点和应用也变得清楚。
一般地，应该注意，术语纳米抗体在用于本文时在其最广泛意义上不限于具体的生物来源或具体的制备方法。例如，如在下文更详细讨论的，本发明的纳米抗体通常可以这样获得：(1)通过分离天然存在的重链抗体的VHH结构域；(2)通过表达编码天然存在的VHH结构域的核苷酸序列；(3)通过将天然存在的VHH结构域“人源化”(如本文所述)或者通过表达编码这样的人源化VHH结构域的核酸；(4)通过将来自于任何动物物种且特别是哺乳动物物种诸如来自于人类的天然存在的VH结构域“骆驼源化(camelization)”(如本文所述)，或者通过表达编码这样的骆驼源化的VH结构域的核酸；(5)通过如Ward等(同前所述)所述将“结构域抗体”或“Dab”“骆驼源化”，或者通过表达编码这样的骆驼源化VH结构域的核酸；(6)应用合成或半合成技术制备本身已知的蛋白、多肽或其它氨基酸序列；(7)通过应用本身已知的核酸合成技术制备编码纳米抗体的核酸，然后表达这样获得的核酸；和/或(8)通过前述一种或多种的任何结合。基于本文的公开内容，专业技术人员应该清楚实行前述的适当的方法和技术，并且例如包括本发明更详细描述的方法和技术。
一个优选的纳米抗体种类对应于针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的天然存在的重链抗体的VHH结构域。如本文进一步所述，这样的VHH序列通常可以这样产生或获得：通过用异二聚体细胞因子和/或它们的受体适当免疫骆驼科动物物种(即，以产生针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的免疫反应和/或重链抗体)，通过获得来自所述骆驼科动物的适当的生物样品(诸如血液样品、血清样品或B-细胞样品)，并且通过利用本身已知的任何适当技术从所述样品开始产生针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的VHH序列。所述技术对于专业技术人员应该是清楚的，和/或在本文中进一步所述。
备选地，所述针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体天然存在的VHH结构域可以从首次用于实验的骆驼科动物VHH序列文库获得，例如，通过使用本身已知的一种或多种筛选技术用异二聚体细胞因子和/或它们的受体、或其至少一部分、片段、抗原决定簇或表位筛选这样的文库。例如，这样的文库和技术记述在WO 99/37681，WO 01/90190，WO 03/025020和WO 03/035694中。备选地，可以使用来源自首次用于实验的VHH文库的改进的合成的或半合成的文库，诸如通过诸如随机诱变和/或CDR重排的技术从首次用于实验的VHH文库获得的VHH文库，如例如记述在WO 00/43507中获得。
因此，在另一个方面中，本发明涉及用于产生针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体的方法。在一个方面中，所述方法至少包括下列步骤：
a)提供纳米抗体序列的组、集合或文库；和
b)从所述纳米抗体序列的组、集合或文库中筛选可以结合和/或具有针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和力的纳米抗体序列；
和
c)分离所述可以结合和/或具有针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和性的氨基酸序列。
在这样的方法中，所述纳米抗体序列的组、集合或文库可以是纳米抗体序列的首次用于实验的组、集合或文库；纳米抗体序列的合成的或半合成的组、集合或文库；和/或已经进行了亲和力成熟的纳米抗体序列的组、集合或文库。
在本方法的优选方面中，所述纳米抗体序列的组、集合或文库可以是纳米抗体序列的免疫组、集合或文库，特别是，来自已经用异二聚体细胞因子和/或它们的受体适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的骆驼科物种的VHH序列的免疫组、集合或文库。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
在上述方法中，所述纳米抗体或VHH序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体、或适当的微生物(诸如酵母)上，如以促进筛选。用于展示和筛选纳米抗体序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域专业技术人员将是清楚的，例如，基于本发明进一步的公开内容。还参考WO 03/054016和Hoogenboom在Nature Biotechnology(自然生物技术)，23，9，1105-1116(2005)中的综述。
在另一个方面中，所述用于产生纳米抗体序列的方法包括至少下列步骤：
a)提供来源于骆驼科物种的表达免疫球蛋白序列的细胞的集合或样品；和
b)从所述细胞集合或样品中筛选：(i)表达可以结合和/或具有针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和力的免疫球蛋白序列的细胞；和(ii)表达重链抗体的细胞，其中子步骤(i)和(ii)可以基本上按照一个筛选步骤或作为两个独立的筛选步骤以任何适当的顺序进行，以提供至少一种表达可以结合和/或具有针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和力的重链抗体的细胞；
和
c)(i)从所述细胞分离存在于所述重链抗体中的VHH序列；或(ii)从所述细胞分离编码存在于所述重链抗体中的VHH序列的核酸序列，然后表达所述VHH结构域
在该方面所述的方法中，所述细胞的集合或样品可以是，例如，B细胞的集合或样品。此外，在该方法中，细胞样品可以来源于已经用异二聚体细胞因子和/或它们的受体适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的骆驼科动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位
上述方法可以以任何适当的方式进行，这对于专业技术人员将是清楚的。例如，参考EP 0 542 810，WO 05/19824，WO 04/051268和WO 04/106377。步骤b)的筛选优选地使用流式细胞术技术诸如FACS进行。对于此，例如，参考Lieby等，血液(Blood)，卷97，No.12，3820。特别参考在埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的国际申请WO 06/079372中记述的所谓的“纳米抗体TM”技术。
在另一个方面中，所述用于产生针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的氨基酸序列的方法可以包括至少下列步骤：
a)提供编码重链抗体或纳米抗体序列的核酸序列的组、集合或文库；
b)从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选编码可以结合和/或具有针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的亲和性的重链抗体或纳米抗体序列的核酸序列；
和
c)分离所述核酸序列，然后分别表达存在于所述重链抗体中的VHH序列、或表达所述纳米抗体序列。
在这样的方法中，所述编码重链抗体或纳米抗体序列的核酸序列的组、集合或文库可以是，例如，编码重链抗体或VHH序列的首次用于实验的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；编码纳米抗体序列的合成的或半合成的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；和/或编码已经进行了亲和力成熟的纳米抗体序列的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库。
在该方法的优选方面中，所述核酸序列的组、集合或文库可以是编码重链抗体或VHH序列的核酸序列的免疫的组、集合或文库，所述核酸序列来源于已经用异二聚体细胞因子和/或它们的受体适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的骆驼科动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
在上述方法中，所述核苷酸序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体或适当的微生物(诸如酵母)上，如以促进筛选。用于展示和筛选编码氨基酸序列的核苷酸序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域专业技术人员将是清楚的，例如，基于本文进一步的公开内容。还参考WO 03/054016和Hoogenboom在自然生物技术(Nature Biotechnology)，23，9，1105-1116(2005)中的综述。
专业技术人员应该清楚，本文所述的方法的筛选步骤也可以作为选择步骤进行。因此，术语“筛选”在用于本说明书时，可以包括选择、筛选或选择和/或筛选技术的任何适当的组合。此外，当使用序列的组、集合或文库时，它可以包含任何适当数量的序列，如1，2，3或约5，10，50，100，500，1000，5000，104，105，106，107，108或更多序列。
此外，上述氨基酸序列的组、集合或文库中的一个或多个或全部序列可以通过理性的、或半经验的方法如计算机建模技术或生物统计学或数据采掘(datamining)技术获得或定义。
此外，这样的组、集合或文库可以包括作为来自另一种的变体(例如，具有设计的点突变或具有随机的位置)的一个、两个或多个序列，包括(compromise)来源于不同的天然多样性序列的组(例如，免疫文库)的多个序列，或不同序列的任何其他来源(例如，如在Hoogenboom等，Nat Biotechnol(自然生物技术)23：1105，2005和Binz等，Nat Biotechnol(自然生物技术)2005，23：1247中所述)。所述序列的组、集合或文库可以展示在噬菌体颗粒、核糖体、细菌、酵母细胞、哺乳动物细胞的表面上，且在这些载体内与编码所述氨基酸序列的核苷酸序列连接。这使得所述组、集合或文库易于进行选择步骤，从而分离需要的本发明的氨基酸序列。更一般地，当将序列展示在适当的宿主或宿主细胞上时，还可以(且习惯上)首先从所述宿主或宿主细胞分离编码所需要的序列的核苷酸序列，然后通过在适当的宿主生物体内适当表达所述核苷酸序列而获得所需要的序列。同样地，这可以以本身已知的任何适当的方式进行，其是专业技术人员应该清楚的。
用于获得针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的VHH序列或纳米抗体序列的另一种技术包括适当地免疫能够表达重链抗体的转基因哺乳动物
(即，以产生针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的免疫应答和/或重链抗体)，从所述转基因哺乳动物获得包含所述VHH序列或纳米抗体序列(的编码核酸序列)的适当的生物样品(如血液样品、血清样品或B-细胞样品)，然后使用本身已知的任何适当的技术(如例如本文所述的任何方法或杂交瘤技术)由所述样品起始产生针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的VHH序列。例如，为了该目的，可以使用记述在WO 02/085945，WO 04/049794和WO 06/008548和Janssens等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(美国国家科学院学报)2006 10月10日；103(41)：15130-5中的表达重链抗体的小鼠和其他方法和技术。例如，所述表达重链抗体的小鼠可以表达具有任何适当的(单)可变结构域、如来源于天然来源的(单)可变结构域(例如，人(单)可变结构域、骆驼科(单)可变结构域或鲨鱼(单)可变结构域)、以及例如合成的或半合成的(单)可变结构域的重链抗体。
本发明还涉及通过上述方法、或备选地通过包括上述方法之一和另外至少下列步骤的方法获得的VHH序列或纳米抗体序列，所述步骤为：确定所述VHH序列或纳米抗体序列的核苷酸序列或氨基酸序列；和以本身已知的方式，如通过在适当的宿主细胞或宿主生物体内表达或通过化学合成，表达或合成所述VHH序列或纳米抗体序列。
如本文提及，本发明纳米抗体的一种特别优选的种类包括具有与天然存在的VHH结构域的氨基酸序列相对应的但是已被“人源化”的氨基酸序列的纳米抗体，“人源化”即，用在来自于人类的常规4-链抗体的VH结构域中对应位置存在的一个或多个氨基酸残基替换所述天然存在的VHH序列的氨基酸序列中(并且特别是在构架序列中的)的一个或多个氨基酸残基(例如上文所示)。这可以以本身已知的方式进行，这对于专业技术人员是清楚的，例如，基于本文的进一步描述以及本文引用的关于人源化的现有技术。此外，应该注意，本发明这样的人源化纳米抗体可以以本身已知的任何适当方法获得(即，在上文(1)-(8)点下所示)，并且因此没有严格地限于使用包括天然存在的VHH结构域的多肽作为起始原料而获得的多肽。
本发明纳米抗体的另一种特别优选的种类包括具有与天然存在的VH结构域的氨基酸序列相对应但已被“骆驼源化”的氨基酸序列的纳米抗体，“骆驼源化”即，用在重链抗体的VHH结构域中对应位置存在的一个或多个氨基酸残基替换常规4-链抗体的天然存在的VH结构域的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基。这可以以本身已知的方式进行，这对于专业技术人员是清楚的，例如，基于本文的进一步描述。这样的“骆驼源化”取代优选插入在形成和/或存在于VH-VL界面的氨基酸位置，和/或在所谓的骆驼科动物(Camelidae)标志残基，如本文所定义(参见例如WO 94/04678和Davies与Riechmann(1994和1996)，同前所述)。优选地，用作产生或设计所述骆驼源化纳米抗体的起始原料或起点的VH序列优选地是来自哺乳动物的VH序列，更优选地是人类的VH序列，诸如VH3序列。然而，应该注意，这种骆驼源化的本发明纳米抗体可以以本身已知的任何适当方式获得(即，在上文(1)-(8)点下所示)，并且因此没有严格地限于使用包括天然存在的VH结构域的多肽作为起始原料而获得的多肽。
例如，又如本文进一步所述，“人源化”和“骆驼源化”可以这样进行：通过提供分别编码天然存在的VHH结构域或VH结构域的核苷酸序列，并且然后以本身已知的方式改变所述核苷酸序列中的一个或多个密码子，以致新核苷酸序列分别编码“人源化的”或“骆驼源化的”本发明的纳米抗体。然后以本身已知的方式表达这种核酸，以提供理想的本发明的纳米抗体。备选地，分别基于天然存在的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列，可以分别设计理想的人源化或骆驼源化的本发明的纳米抗体的氨基酸序列，然后应用本身已知的肽合成技术从头开始合成。此外，分别基于天然存在的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列或核苷酸序列，可以分别设计编码所述理想的人源化或骆驼源化的本发明的纳米抗体的核苷酸序列，然后应用本身已知的核酸合成技术从头开始合成，之后可以以本身上已知的方式表达这样获得的核酸，以提供合乎需要的本发明的纳米抗体。
专业技术人员应该清楚从天然存在的VH序列或优选的VHH序列起始而获得本发明的纳米抗体和/或编码其的核酸的其它适宜方法和技术，并且例如，可以包括以适当方式组合一个或多个天然存在的VH序列的一个或多个部分(诸如一个或多个FR序列和/或CDR序列)，一个或多个天然存在的VHH序列的一个或多个部分(诸如一个或多个FR序列和/或CDR序列)，和/或一个或多个合成的或半合成的序列，以提供本发明的纳米抗体或编码其的核苷酸序列或核酸(然后其可以被适当地表达)。基于本文的公开内容和/或本文引用的其他现有技术(和/或备选地可以通过由使用本文所述的方法获得的核苷酸序列起始的PCR获得)，编码VHH序列或纳米抗体的构架序列的核苷酸序列为专业技术人员所清楚，且可以适当地与编码需要的CDR’s的核苷酸序列(例如，通过利用重叠引物的PCR装配)组合，以提供编码本发明的纳米抗体的核酸。
如本文提及，纳米抗体可以特别特征在于在一个或多个构架序列中存在一个或多个“标志残基(Hallmark residues)”(如本文所述)。
因此，根据本发明方面的一个优选的但非限制性的方面，纳米抗体在其最广泛意义上通常可以定义为这样的多肽，所述多肽包括：
a)包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，
其中在按照Kabat编号方式的位置108的氨基酸残基是Q；
和/或：
b)包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸(如本发明所定义)或半胱氨酸残基，并且在位置44的氨基酸残基优选是E；
和/或：
c)包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组。
因此，在第一优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中
a)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
和/或其中：
b)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸或半胱氨酸，并且按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基优选是E；
和/或其中：
c)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
特别地，纳米抗体在其最广泛意义上可以通常定义为这样的多肽，所述多肽包括：
a)包括被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
和/或：
b)包括被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基是E，并且其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；
和/或：
c)包括被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P，R和S组成的组，并且特别是选自由R和S组成的组。
因此，在一个优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中
a)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
和/或其中：
b)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基是E，并且其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；
和/或其中：
c)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
特别地，根据本发明针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体可以具有下述结构：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中
a)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
和/或其中：
b)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基是E，并且其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；
和/或其中：
c)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
特别地，根据本发明方面的一个优选的但非限制性的方面，纳米抗体通常可以定义为包括包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列的多肽，其中：
a-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A，G，E，D，G，Q，R，S，L组成的组；并且优选地选自由G，E或Q组成的组；和
a-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L，R或C组成的组；并且优选地选自由L或R组成的组；和
a-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R或S组成的组；并且优选地是W或R，并且最优选地为W；
a-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
或者其中：
b-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由E和Q组成的组；和
b-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；和
b-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R和S组成的组；并且优选地为W；
b-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组；并且优选地为Q；
或者其中：
c-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A，G，E，D，Q，R，S，和L组成的组；并且优选地选自由G，E和Q组成的组；和
c-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L，R和C组成的组；并且优选地选自由L和R组成的组；和
c-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P，R和S组成的组；并且特别选自由R和S组成的组；和
c-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组；优选地为Q；
并且其中
d)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
因此，在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
a-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A，G，E，D，G，Q，R，S，L组成的组；并且优选地选自由G，E或Q组成的组；
并且其中：
a-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L，R或C组成的组；并且优选地选自由L或R组成的组；
并且其中：
a-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R或S组成的组；并且优选地选自由W或R组成的组，并且最优选地为W；
并且其中：
a-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
b-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由E和Q组成的组；
并且其中：
b-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；
并且其中：
b-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R和S组成的组；并且优选地为W；
并且其中：
b-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组；
并且优选地为Q；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
在另一个优选的但非限制性方面中，本发明的纳米抗体可以具有下述结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
c-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A，G，E，D，Q，R，S，和L组成的组；并且优选地选自由G，E和Q组成的组；
并且其中：
c-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L，R和C组成的组；并且优选地选自由L和R组成的组；
并且其中：
c-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P，R和S组成的组；并且特别选自由R和S组成的组；
并且其中：
c-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组；优选地为Q；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
本发明纳米抗体的两个特别优选的但非限制性的组是按照上述a)；按照上述(a-1)到(A-5)；按照上述b)；按照上述(b-1)到(b-4)；按照上述(c)；和/或按照上述(c-1)到(c-4)的那些，其中：
i)按照Kabat编号方式在位置44-47的氨基酸残基形成序列GLEW(或如本文所述的GLEW-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q；
或其中：
ii)按照Kabat编号方式在位置43-46的氨基酸残基形成序列KERE或KQRE(或如本文所述的KERE-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q或L，并且优选地为Q。
因此，在另一个优选的但非限制性方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)按照Kabat编号方式在位置44-47的氨基酸残基形成序列GLEW(或如本发明定义的GLEW-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q；
并且其中：
ii)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)按照Kabat编号方式在位置43-46的氨基酸残基形成序列KERE或KQRE(或KERE-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q或L，并且优选是Q；
并且其中：
ii)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
在所述其中按照Kabat编号方式在位置43-46的氨基酸残基形成序列KERE或KQRE的本发明的纳米抗体中，在位置37的氨基酸残基最优选是F。在所述其中按照Kabat编号方式在位置44-47的氨基酸残基形成序列GLEW的本发明的纳米抗体中，在位置37的氨基酸残基选自由Y，H，I，L，V或F组成的组，并且最优选是V。
因此，但不以任何方式局限于此，基于在上述位置存在的氨基酸残基，本发明的纳米抗体可以通常基于下述三组分类：
i)“GLEW-组”：按照Kabat编号方式在位置44-47具有氨基酸序列GLEW并且按照Kabat编号方式在位置108具有Q的纳米抗体。如本文进一步所述，在这一组内的纳米抗体通常在位置37具有V，并且可以在位置103具有W，P，R或S，并且优选地在位置103具有W。所述GLEW组还包括一些GLEW-样的序列，诸如下表A-4中提及的那些。更一般地，且不限于，属于GLEW-组的纳米抗体可以定义为在位置44具有G和/或在位置47具有W的纳米抗体，其中位置46通常为E，且其中优选地位置45不是带电荷的氨基酸残基且不是半胱氨酸；
ii)“KERE-组”：按照Kabat编号方式在位置43-46具有氨基酸序列KERE或KQRE(或另一个KERE-样序列)并且按照Kabat编号方式在位置108具有Q或L的纳米抗体。如本文进一步所述，在这一组内的纳米抗体通常在位置37具有F，在位置47具有L或F；并且可以在位置103具有W，P，R或S，并且优选地在位置103具有W。更一般地，且不限于，属于KERE-组的纳米抗体可以定义为在位置44具有K，Q或R(通常为K)的纳米抗体，其中位置45是带电荷的氨基酸残基或半胱氨酸，且位置47如本文进一步所定义；
iii)“103 P，R，S-组”：在位置103具有P，R或S的纳米抗体。这些纳米抗体可以在按照Kabat编号方式的位置44-47具有氨基酸序列GLEW或者在按照Kabat编号方式的位置43-46具有氨基酸序列KERE或KQRE，后者最优选地与位置37的F和位置47的L或F结合(如关于KERE-组所定义)；并且可以在按照Kabat编号方式的位置108具有Q或L，并且优选地具有Q。
此外，在适当的情形中，纳米抗体可以属于这些种类的两种或更多种(即，具有其特征)。例如，一个特别优选的纳米抗体组在位置44-47具有GLEW或GLEW-样序列；在位置103具有P，R或S(并且特别是R)；并且在位置108具有Q(其可以人源化为L)。
更一般地，应该注意，上述定义描述和应用于以天然(即，非人源化的)VHH序列的形式存在的纳米抗体，且这些纳米抗体的人源化的变体可以包含除了上述显示的那些(即，如本文定义的一个或多个人源化的取代)之外的其他氨基酸残基。例如，且不限于，在GLEW-组或103 P，R，S-组的一些人源化的纳米抗体中，在位置108的Q可以被人源化为108L。如本文已经提及的，基于本文的公开内容，其他人源化的取代(及其适当的组合)将为专业技术人员所清楚。另外，或备选地，其他潜在有用的人源化取代可以通过将天然存在的VHH序列的构架区序列与一个或多个紧密相关的人VH序列的相对应的构架序列进行比较而确定，之后，可以将由此确定的一个或多个潜在有用的人源化取代(或其组合)引入到所述VHH序列中(以本身已知的任何方式，如本文进一步所述)，且由此人源化的VHH序列可以检测针对靶标的亲和力、稳定性、表达的容易性和水平、和/或其他需要的特性。以这种方式，通过有效程度的试验和误差，其他适当的人源化取代(或其适当的组合)可以由专业技术人员基于本文的公开内容确定。此外，基于前述，纳米抗体(的构架区)可以被部分人源化或完全人源化。
因此，在另一个优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以是属于GLEW-组(如本文所定义)的纳米抗体，并且其中CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以是属于KERE-组(如本文所定义)的纳米抗体，并且其中CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
因此，在另一个优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以是属于103 P，R，S-组(如本发明所定义)的纳米抗体，并且其中CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
此外，更一般地，并且除了上文提及的108Q，43E/44R和103P，R，S残基之外，本发明的纳米抗体可以在常规VH结构域中形成(部分)VH/VL界面的一个或多个位置包含一个或多个氨基酸残基，所述氨基酸残基比在相对应的天然存在的VH序列同一位置天然存在的氨基酸残基更加高度带电荷，并且特别是一个或多个带电荷的氨基酸残基(如表A-3中提及)。这样的取代包括，但不限于下表A-4中提及的GLEW-样序列；以及国际申请WO 00/29004中所述关于所谓的“微体(microbodies)”的取代，例如以获得在位置108具有Q和在位置44-47具有KLEW组合的纳米抗体。基于本发明的公开内容，在这些位置的其它可能的取代对于专业技术人员应该是清楚的。
在本发明的纳米抗体的一个方面中，在位置83的氨基酸残基选自由L，M，S，V和W组成的组；并且优选地为L。
此外，在本发明的纳米抗体的一个方面中，位置83的氨基酸残基选自由R，K，N，E，G，I，T和Q组成的组；并且最优选地为K或E(对于与天然存在的VHH结构域相对应的纳米抗体)或R(对于“人源化”纳米抗体，如本发明所述)。在一个方面中，位置84的氨基酸残基选自由P，A，R，S，D T，和V组成的组，并且最优选地是P(对于与天然存在的VHH结构域相对应的纳米抗体)或R(对于“人源化”纳米抗体，如本发明所述)。
此外，在本发明的纳米抗体的一个方面中，位置104的氨基酸残基选自由G和D组成的组；并且最优选地是G。
总而言之，在所述纳米抗体中如上文提及的在位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基在本文中还叫作“标志残基”。所述标志残基以及在最接近的相关的人VH结构域，即VH3的相对应的位置的氨基酸残基总结在表A-4中。
在天然存在的VHH结构域中存在的这些标志残基的一些特别优选但非限制性的组合在表A-5中提及。为了比较，将叫作DP-47的人VH3的相对应氨基酸残基以斜体显示。
表A-4：纳米抗体中的标志残基
在所述纳米抗体中，在除所述标志残基外的任何其它位置的每一氨基酸残基可以是在天然存在的VHH结构域的相应位置(按照Kabat编号方式)天然存在的任何氨基酸残基。
专业技术人员对于这样的氨基酸残基应该是清楚的。表A-6至A-9提及一些非限制性的残基，其可以存在于天然存在的VHH结构域的FR1、FR2、FR3和FR4的任一位置(按照Kabat编号方式)。对于任一位置，在天然存在的VHH结构域的任一位置最经常存在的氨基酸残基(并且其在纳米抗体中对于所述位置是最优选的氨基酸残基)以粗体显示；并且对于每一位置的其它优选的氨基酸残基已加下划线(注意：在天然存在的VHH结构域的位置26-30发现的氨基酸残基的数目支持Chothia(同前所述)的构成编号方式的基础的假说，即，在这些位置的残基已经形成CDR1的部分。)
在表A-6-A-9中，还已经提及可以在人VH3结构域的任一位置存在的一些非限制性的残基。此外，对于每一位置，在天然存在的人VH3结构域的每一位置最经常存在的氨基酸残基以粗体显示；并且其它优选的氨基酸残基加下划线。
仅是为了参考，表A-6-A-9还包含对于代表性样品1118VHH序列关于在每个氨基酸位置的VHH熵(“VHH Ent.”)和VHH可变性(“VHH Var.”)的数据(数据由乌得勒支大学(Utrecht University)的David Lutje Hulsing和Theo Verrips教授馈赠)。关于VHH熵和VHH可变性的数值提供对于被分析的1118个VHH序列之间的氨基酸残基的可变性和保守度的测量：低数值(即＜1，诸如＜0.5)表示在所述VHH序列之间氨基酸残基是高度保守的(即，几乎没有可变性)。例如，在位置8的G和在位置9的G分别具有0.1和0的VHH熵数值，这表示这些残基是高度保守的，并且具有很小的可变性(并且假设在所分析的所有1118个序列中位置9是G)，而对于形成CDR部分的残基通常发现1.5或更大的数值(数据未显示)。注意：(1)在表A-6-A-9第二栏列出的氨基酸残基是基于比最后两栏引用的为确定VHH熵和VHH可变性而分析的1118个VHH序列大的样品；并且(2)下述数据支持这样的假说：在位置27-30的氨基酸残基以及还可能甚至在位置93和94的氨基酸残基已经形成CDR的一部分(尽管本发明不限于任何具体的假说或解释，并且如上文所提及，本发明使用按照Kabat的编号方式)。对于序列熵的一般解释，序列可变性以及用于确定其的方法，参见Oliveira等，蛋白质：结构，功能和遗传(PROTEINS：Structure，Function and Genetics)，52：544-552(2003)。
表A-6：FR1中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表A-4的脚注)
Figure BPA00001186248902511
表A-6：FR1中的氨基酸残基的非限制性实例(续表)
Figure BPA00001186248902521
表A-7：FR2中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表A-4的脚注)
Figure BPA00001186248902522
表A-8：FR3中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表A-4的脚注)
Figure BPA00001186248902531
表A-8：FR3中的氨基酸残基的非限制性实例(续表)
Figure BPA00001186248902541
表A-9：FR4中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表A-4的脚注)
Figure BPA00001186248902542
因此，在另一个优选的但非限制性的方面中，本发明的纳米抗体可以定义为具有下述(通用)结构的氨基酸序列
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的一个或多个氨基酸残基优选选自表A-4中提及的标志残基；
并且其中：
ii)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如本发明的一个更优选的方面而定义。
例如，上述纳米抗体可以是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
特别地，本发明的纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)(优选地)在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基的一个或多个选自下表A-4中提及的标志残基(应该理解，VHH序列应该包含一个或多个标志残基；并且部分人源化的纳米抗体应该通常，且优选地，[仍然]包含一个或多个标志残基[尽管依据本发明在适当的情形中提供部分人源化的纳米抗体也在本发明的范围内，在所述部分人源化的纳米抗体中，所有的标志残基，而不是一个或多个其余氨基酸残基，已经被人源化]；并且在完全人源化的纳米抗体中，依据本发明在适当的情形中，所有在标志残基位置上的氨基酸残基应该是在人VH3序列中存在的氨基酸残基。基于本发明公开的内容，专业技术人员应该清楚，所述VHH序列、所述具有至少一个标志残基的部分人源化的纳米抗体、所述不具有标志残基的部分人源化的纳米抗体、和所述完全人源化的纳米抗体均形成本发明的方面)；
并且其中：
ii)所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：1-22中的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度，忽略形成CDR序列的氨基酸残基(在序列SEQ ID NO’s：1-22中用X表示)；
iii)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本文的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。
例如，上述纳米抗体可以是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
Figure BPA00001186248902571
Figure BPA00001186248902581
特别地，本发明KERE-组的纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中：
i)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸(如本文定义)或半胱氨酸残基，且位置44优选地是E；
且其中：
ii)FR1是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-11：KERE-组纳米抗体的代表性FW1序列。
  KERE FW1 序列号1   SEQ ID NO：23   QVQRVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTSS
  KERE FW1 序列号2   SEQ ID NO：24   QVQLVESGGGLVQTGDSLSLSCSASGRTFS
  KERE FW1 序列号3   SEQ ID NO：2S   QVKLEESGGGLVQAGDSLRLSCAATGRAFG
  KERE FW1 序列号4   SEQ ID NO：26   AVQLVESGGGLVQPGESLGLSCVASGRDFV
  KERE FW1 序列号5   SEQ ID NO：27   EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCEVLGRTAG
  KERE FW1 序列号6   SEQ ID NO：28   QVQLVESGGGWVQPGGSLRLSCAASETILS
  KERE FW1 序列号7   SEQ ID NO：29   QVQLVESGGGTVQPGGSLNLSCVASGNTFN
  KERE FW1 序列号8   SEQ ID NO：30   EVQLVESGGGLAQPGGSLQLSCSAPGFTLD
  KERE FW1 序列号9   SEQ ID NO：31   AQELEESGGGLVQAGGSLRLSCAA5GRTFN
且其中：
iii)FR2是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-12：KERE-组纳米抗体的代表性FW2序列。
  KERE FW2 序列号1  SEQ ID NO：41   WFRQAPGKEREFVA
  KERE FW2 序列号2  SEQ ID NO：42   WFRQTPGREREFVA
  KERE FW2 序列号3  SEQ ID NO：43   WYRQAPGKQREMVA
  KERE FW2 序列号4  SEQ ID NO：44   WYRQGPGKQRELVA
  KERE FW2 序列号5  SEQ ID NO：45   WIRQAPGKEREGVS
  KERE FW2 序列号6  SEQ ID NO：46   WFREAPGKEREGIS
  KERE FW2 序列号7  SEQ ID NO：47   WYRQAPGKERDLVA
  KERE FW2 序列号8  SEQ ID NO：48   WFRQAPGKQREEV5
  KERE FW2 序列号9  SEQ ID NO：49   WFRQPPGKVREFVG
且其中：
iv)FR3是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-13：KERE-组纳米抗体的代表性FW3序列。
  KERE FW3 序列号1   SEQ ID NO：50   RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYRCYF
  KERE FW3 序列号2   SEQ ID NO：51   RFAISRDNNKNTGYLQMNSLEPEDTAVYYCAA
  KERE FW3 序列号3   SEQ ID NO：52   RFTVARNNAKNTVNLEMNSLKPEDTAVYYCAA
  KERE FW3 序列号4   SEQ ID NO：53   RFTISRDIAKNTVDLLMNNLEPEDTAVYYCAA
  KERE FW3 序列号5   SEQ ID NO：54   RLTISRDNAVDTMYLQMNSLKPEDTAVYYCAA
  KERE FW3 序列号6   SEQ ID NO：55   RFTISRDNAKNTVYLQMDNVKPEDTAIYYCAA
KERE FW3 序列号7 SEQ ID NO：S6 RFTISKDSGKNTVYLQMTSLKPEDTAVYYCAT
KERE FW3 序列号8 SEQ ID NO：57 RFTISRDSAKNMMYLQMNNLKPQDTAVYYCAA
KERE FW3 序列号9 SEQ ID NO：S8 RFTISRENDKSTVYLQLNSLKPEDTAVYYCAA
  KERE FW3 序列号10   SEQ ID NO：59   RFTISRDYAGNTAYLQMNSLKPEDTGVYYCAT
且其中：
v)FR4是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-14：KERE-组纳米抗体的代表性FW4序列。
  KERE FW4 序列号1   SEQ ID NO：60   WGQGTQVTVSS
  KERE FW4 序列号2   SEQ ID NO：61   WGKGTLVTVSS
  KERE FW4 序列号3   SEQ ID NO：62   RGQGTRVTVSS
  KERE FW4 序列号4   SEQ ID NO：63   WGLGTQVTISS
且其中：
vi)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
在上述纳米抗体中，一个或多个其他标志残基优选地如本文所述(例如，当它们为VHH序列或部分人源化的纳米抗体时。)
此外，上述纳米抗体可以，例如，是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
关于构架1，专业技术人员应该清楚，当上述氨基酸序列通过表达核苷酸序列而产生时，前4个氨基酸序列(即，按照Kabat编号方式的氨基酸残基1-4)可以通常通过已经用来生成所述核酸的引物来确定。因此，为了确定氨基酸同一性的程度，优选忽略前4个氨基酸残基。
此外，关于构架1，且尽管按照Kabat编号方式的氨基酸位置27-30被认为是构架区的一部分(且不是CDR’s)，通过分析多于1000个VHH序列的数据库已经发现，位置27-30具有比在位置1-26的可变性高得多的可变性(以VHH熵和VHH可变性表示----参见表A-6至A-9)。因为此，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地也忽略在位置27-30的氨基酸残基。
考虑到此，KERE种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列，其中：
i)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸(如本文定义)或半胱氨酸残基，且位置44优选地是E；
且其中：
ii)FR1是这样的氨基酸序列，其在按照Kabat编号方式的位置5-26与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性：
表A-15：KERE-组纳米抗体的代表性FW1序列(氨基酸残基5-26)。
  KERE FW1 序列号10   SEQ ID NO：32   VESGGGLVQPGGSLRLSCAASG
  KERE FW1 序列号11   SEQ ID No：33   VDSGGGLVQAGDSLKLSCALTG
  KERE FW1 序列号12   SEQ ID NO：34   VDSGGGLVQAGDSLRLSCAASG
  KERE FW1 序列号13   SEQ ID NO：35   VDSGGGLVEAGGSLRLSCQVSE
  KERE FW1 序列号14   SEQ ID NO：36   QDSGGGSVQAGGSLKLSCAASG
  KERE FW1 序列号15   SEQ ID NO：37   VQSGGRLVQAGDSLRLSCAASE
  KERE FW1 序列号16   SEQ ID NO：38   VESGGTLVQSGDSLKLSCASST
  KERE FW1 序列号17   SEQ ID NO：39   MESGGDSVQSGGSLTLSCVASG
  KERE FW1 序列号18   SEQ ID NO：40   QASGGGLVQAGGSLRLSCSASV
且其中：
iii)FR2，FR3和FR4如本文关于KERE-种类的纳米抗体的FR2，FR3和FR4所提及的；
且其中：
iv)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义
上述纳米抗体可以，例如，是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
GLEW种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中
i)优选地，当所述GLEW-种类的纳米抗体是非人源化的纳米抗体时，在位置108的氨基酸残基是Q；
ii)FR1是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-16：GLEW-组的纳米抗体的代表性FW1序列
GLEW FW1 序列号1  SEQ ID NO：64   QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS
GLEW FW1 序列号2  SEQ ID NO：65   EVHLVESGGGLVRPGGSLRLSCAAFGFIFK
GLEW FW1 序列号3  SEQ ID NO：66   QVKLEESGGGLAQPGGSLRLSCVASGFTFS
GLEW FW1 序列号4  SEQ ID NO：67   EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVCVSSGCT
GLEW FW1 序列号5  SEQ ID NO：68   EVQLVESGGGLALPGGSLTLSCVFSGSTFS
且其中：
iii)FR2是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-17：GLEW-组的纳米抗体的代表性FW2序列。
 GLEW FW2 序列号1  SEQ ID NO：72   WVRQAPGKVLEWVS
 GLEW FW2 序列号2  SEQ ID NO：73   WVRRPPGKGLEWVS
 GLEW FW2 序列号3  SEQ ID NO：74   WVRQAPGMGLEWVS
 GLEW FW2 序列号4  SEQ ID NO：75   WVRQAPGKEPEWVS
 GLEW FW2 序列号5  SEQ ID NO：76   WVRQAPGKDQEWVS
 GLEW FW2 序列号6  SEQ ID NO：77   WVRQAPGKAEEWVS
 GLEW FW2 序列号7  SEQ ID NO：78   WVRQAPGKGLEWVA
 GLEW FW2 序列号8  SEQ ID NO：79   WVRQAPGRATEWVS
且其中：
iv)FR3是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-18：GLEW-组的纳米抗体的代表性FW3序列。
  GLEW FW3 序列号1   SEQ ID NO：80   RFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCVK
  GLEW FW3 序列号2   SEQ ID NO：81   RFTISRDNARNTLYLQMDSLIPEDTALYYCAR
  GLEW FW3 序列号3   SEQ ID NO：82   RFTSSRDNAKSTLYLQMNDLKPEDTALYYCAR
  GLEW FW3 序列号4   SEQ ID NO：83   RFIISRDNAKNTLYLQMNSLGPEDTAMYYCQR
  GLEW FW3 序列号5   SEQ ID NO：84   RFTASRDNAKNTLYLQMNSLKSEDTARYYCAR
  GLEW FW3 序列号6   SEQ ID NO：85   RFTISRDNAKNTLYLQMDDLQSEDTAMYYCGR
且其中：
v)FR4是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-19：GLEW-组的纳米抗体的代表性FW4序列。
GLEW FW4 序列号1   SEQ ID NO：86   GSQGTQVTVSS
GLEW FW4 序列号2   SEQ ID NO：87   LRGGTQVTVSS
GLEW FW4 序列号3   SEQ ID NO：88   RGQGTLVTVSS
GLEW FW4 序列号4   SEQ ID NO：89   RSRGIQVTVSS
GLEW FW4 序列号5   SEQ ID NO：90   WGKGTQVTVSS
GLEW FW4 序列号6   SEQ ID NO：91   WGQGTQVTVSS
且其中：
vi)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本文的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
在上述纳米抗体中，其他标志残基中的一个或多个优选地如本文所述(例如，当它们为VHH序列或部分人源化的纳米抗体时。)
关于构架1，同样专业技术人员应该清楚，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地忽略在位置1-4和27-30的氨基酸残基。
考虑到此，GLEW种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中：
i)优选地，当GLEW-种类的纳米抗体是非人源化的纳米抗体时，在位置108的氨基酸残基为Q；
且其中：
ii)FR1是这样的氨基酸序列，其在按照Kabat编号方式的位置5-26与下述氨基酸序列至少之一具有至少80％的氨基酸同一性：
表A-20：KERE-组的纳米抗体的代表性FW1序列(氨基酸残基5-26)。
  GLEW FW1 序列号6   SEQ ID NO：69   VESGGGLVQPGGSLRLSCAASG
  GLEW FW1 序列号7   5EQ ID NO：70   EESGGGLAQPGGSLRLSCVASG
  GLEW FW1 序列号8   SEQ ID NO：71   VESGGGLALPGGSLTLSCVFSG
且其中：
iii)FR2，FR3和FR4如本文关于GLEW-种类的纳米抗体的FR2，FR3和FR4所提及的；
且其中：
iv)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
例如，上述纳米抗体可以是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。在上述纳米抗体中，其他标志残基中的一个或多个优选地如本文所述(例如，当它们是VHH序列或部分人源化的纳米抗体时)。
P，R，S103种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中：
i)在按照Kabat编号方式的位置103的氨基酸残基不同于W；
且其中：
ii)优选地，在按照Kabat编号方式的位置103的氨基酸残基是P.R或S，且更优选是R；
且其中：
iii)FR1是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-21：P，R，S 103-组的纳米抗体的代表性FW1序列。
 P，R，S 103 FW1 序列号1  SEQ ID NO：92   AVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFS
 P，R，S 103 FW1 序列号2  SEQ ID NO：93   QVQLQESGGGMVQPGGSLRLSCAASGFDFG
 P，R，S 103 FW1 序列号3  SEQ ID NO：94   EVHLVESGGGLVRPGGSLRLSCAAFGFIFK
 P，R，S 103 FW1 序列号4  SEQ ID NO：95   QVQLAESGGGLVQPGGSLKLSCAASRTIVS
 P，R，S 103 FW1 序列号5  SEQ ID NO：96   QEHLVESGGGLVDIGGSLRLSCAASERIFS
 P，R，S 103 FW1 序列号6  SEQ ID NO：97   QVKLEESGGGLAQPGGSLRLSCVASGFTFS
 P，R，S 103 FW1 序列号7  SEQ ID NO：98   EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVCVSSGCT
 P，R，S 103 FW1 序列号8  SEQ ID NO：99   EVQLVESGGGLALPGGSLTLSCVFSGSTFS
且其中：
iv)FR2是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-22：P，R，S 103-组的纳米抗体的代表性FW2序列。
  P，R，S 103 FW2 序列号1   SEQ ID NO：102   WFRQAPGKEREFVA
  P，R，S 103 FW2 序列号2   SEQ ID NO：103   WVRQAPGKVLEWVS
  P，R，S 103 FW2 序列号3   SEQ ID NO：104   WVRRPPGKGLEWVS
  P，R，S 103 FW2 序列号4   SEQ ID NO：105   WIRQAPGKEREGVS
  P，R，S 103 FW2 序列号5   SEQ ID NO：106   WVRQYPGKEPEWVS
  P，R，S 103 FW2 序列号6   SEQ ID NO：107   WFRQPPGKEHEFVA
  P，R，S 103 FW2 序列号7   SEQ ID NO：108   WYRQAPGKRTELVA
  P，R，S 103 FW2 序列号8   SEQ ID NO：109   WLRQAPGQGLEWVS
  P，R，S 103 FW2 序列号9   SEQ ID NO：110   WLRQTPGKGLEWVG
  P，R，S 103 FW2 序列号10   SEQ ID NO：111   WVRQAPGKAEEFVS
且其中：
v)FR3是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-23：P，R，S 103-组的纳米抗体的代表性FW3序列。
 P，R，S 103 FW3 序列号1   SEQ ID NO：112   RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA
 P，R，S 103 FW3 序列号2   SEQ ID NO：113   RFTISRDNARNTLYLQMDSLIPEDTALYYCAR
 P，R，S 103 FW3 序列号3   SEQ ID NO：114   RFTISRDNAKNEMYLQMNNLKTEDTGVYWCGA
 P，R，S 103 FW3 序列号4   SEQ ID NO：115   RFTISSDSNRNMIYLQMNNLKPEDTAVYYCAA
 P，R，S 103 FW3 序列号5   SEQ ID NO：116   RFTISRDNAKNMLYLHLNNLKSEDTAVYYCRR
 P，R，S 103 FW3 序列号6   SEQ ID NO：117   RFTISRDNAKKTVYLRLNSLNPEDTAVYSCNL
 P，R，S 103 FW3 序列号7   SEQ ID NO：118   RFKISRDNAKKTLYLQMNSLGPEDTAMYYCQR
 P，R，S 103 FW3 序列号8   SEQ ID NO：119   RFTVSRDNGKNTAYLRMNSLKPEDTADYYCAV
且其中：
vi)FR4是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表A-24：P，R，S 103-组的纳米抗体的代表性FW4序列。
 P，R，S 103 FW4 序列号1   SEQ ID NO：120   RGQGTQVTVSS
 P，R，S 103 FW4 序列号2   SEQ ID NO：121   LRGGTQVTVSS
 P，R，S 103 FW4 序列号3   SEQ ID NO：122   GNKGTLVTVSS
 P，R，S 103 FW4 序列号4   SEQ ID NO：123   SSPGTQVTVSS
 P，R，S 103 FW4 序列号5   SEQ ID NO：124   SSQGTLVTVSS
 P，R，S 103 FW4 序列号6   SEQ ID NO：125   RSRGIQVTVSS
且其中：
vii)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
在上述纳米抗体中，其他标志残基中的一个或多个优选地如本文所述(例如，当它们为VHH序列或部分人源化的纳米抗体时。)
关于构架1，同样专业技术人员应该清楚，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地忽略在位置1-4和27-30的氨基酸残基。
考虑到此，P，R，S 103种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中：
i)在按照Kabat编号方式的位置103的氨基酸残基不同于W；
且其中：
ii)优选地，在按照Kabat编号方式的位置103的氨基酸残基是P，R或S，且更优选是R；
且其中：
iii)FR1是这样的氨基酸序列，其在按照Kabat编号方式的位置5-26与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性：
表A-25：P，R，S 103-组纳米抗体的代表性FW1序列(氨基酸残基5-26)。
P，R，S 103 FW1 序列号9   SEQ ID NO：100   VESGGGLVQAGGSLRLSCAASG
P，R，S 103 FW1 序列号10   SEQ ID NO：101   AESGGGLVQPGGSLKLSCAASR
且其中：
iv)FR2，FR3和FR4如本文关于P，R，S 103-种类的纳米抗体的FR2，FR3和FR4所提及的；
且其中：
v)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如根据本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如根据本发明的一个更优选的方面而定义。
例如，上述纳米抗体可以是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
在上述纳米抗体中，其他标志残基中的一个或多个优选地如本文所述(例如，当它们是VHH序列或部分人源化的纳米抗体时)。
优选地，本发明的(单)结构域抗体和/或纳米抗体中的CDR序列和FR序列是这样的，即，本发明的纳米抗体(和包括其的本发明的多肽)：
-以10-5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升或更小、并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合；
和/或这样，以致它们：
-以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的kon-速率与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合；
和/或这样，以致它们：
-以1s-1(t1/2＝0.69s)-10-6s-1(假定具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的koff速率与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。
优选地，在本发明的纳米抗体中存在的CDR序列和FR序列是这样的，以致本发明的纳米抗体将以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和力与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。
根据本发明的一个非限制性方面，纳米抗体可以是如本文所定义的，但是具有这样的限制条件：与天然存在的人VH结构域的相对应的构架区相比，并且特别是与DP-47的相对应的构架区相比，其在至少一个构架区具有至少“一个氨基酸差异”(如本文所定义)。更特别地，根据本发明的一个非限制性方面，纳米抗体可以是如本文所定义的，但是具有这样的限制条件：与天然存在的人VH结构域的相对应的构架区相比，并且特别是与DP-47的相对应的构架区相比，其在至少一个标志残基(包括在位置108，103和/或45的那些)具有至少“一个氨基酸差异”(如本文所定义)。通常，纳米抗体应该在FR2和/或FR4中的至少一种中，并且特别是在FR2和/或FR4中的至少一个标志残基(同样，(包括在位置108，103和/或45的那些))与天然存在的VH结构域具有至少一个这样的氨基酸差异。
此外，人源化的本发明的纳米抗体可以如本发明所定义，但是具有这样的限制条件：与天然存在的VHH结构域的相对应的构架区相比，其在至少一个构架区具有“至少一个氨基酸差异”(如本文所定义)。更特别地，根据本发明的一个非限制性方面，人源化的纳米抗体可以如本文所定义，但是具有下述限制条件：与天然存在的VHH结构域的相对应的构架区相比，其在至少一个标志残基(包括在位置108，103和/或45的那些)具有至少“一个氨基酸差异”(如本文所定义)。通常，人源化的纳米抗体应该在FR2和/或FR4中的至少一个、并且特别是在FR2和/或FR4中的至少一个标志残基(同样，包括在位置108，103和/或45的那些)关于天然存在的VHH结构域具有至少一个所述氨基酸差异。
从本发明的公开内容应该清楚，使用如本发明所定义的本发明的纳米抗体的天然或合成的类似物、突变体、变体、等位基因、同系物和直向同源物(本发明笼统称为“类似物”)也在本发明的范围之内。因此，根据本发明的一个方面，术语“本发明的纳米抗体”在其最广泛意义上还涵盖所述类似物。
通常，在所述类似物中，与如本发明所定义的本发明纳米抗体相比，一个或多个氨基酸残基可以被取代、删除和/或添加。这样的取代、插入或删除可以在一个或多个构架区和/或在一个或多个CDR内进行。当所述取代、插入或删除在一个或多个构架区内进行时，它们可以在一个或多个标志残基处和/或在构架残基中的一个或多个其它位置进行，尽管通常较不优选在标志残基处的取代、插入或删除(除非这些是如本文所述的适当的人源化取代)。
通过非限制性实例的方式，例如，取代可以是保守取代(如本文所述)和/或氨基酸残基可以被天然存在于另一个VHH结构域中相同位置处的另一个氨基酸残基取代(关于这样的取代的一些非限制性实例参见表A-5-A-8)，尽管本发明通常不限于此。因此，在本发明的范围内包括任何一个或多个取代、删除或插入，或它们的任何组合，所述取代、删除或插入或其组合改善本发明的纳米抗体的特性，或至少没有将本发明的纳米抗体的理想特性或理想特性的平衡或组合减损太多(即，到所述纳米抗体不再适合其目的应用的程度)。基于本发明的公开内容，以及任选地在有限程度的常规实验之后，例如，常规实验可以包括引入有限数目的可能的取代并且确定它们对这样获得的纳米抗体特性的影响，专业技术人员通常应该能够确定并且选择适当的取代、删除或插入、或它们的适当的组合。
例如，并且取决于用于表达本发明的纳米抗体或多肽的宿主生物体，所述删除和/或取代可以以这样的方式设计，所述方式去除一个或多个翻译后修饰的位点(诸如一个或多个糖基化位点)，这应该在本领域技术人员的能力范围内。备选地，可以设计取代或插入，以引入一个或多个附着官能团(如本文所述)的位点，例如，以允许位点-特异性的聚乙二醇化(pegylation)(同样如本文所述)。
从在上述表A-5-A-8中提供的关于VHH熵和VHH可变性的数据可以看出，在构架区中的一些氨基酸残基比其它的更保守。通常，尽管本发明在其最广泛意义上不限于此，优选在较不保守的位置进行任何取代、删除或插入。此外，通常，氨基酸取代优于氨基酸删除或插入。
所述类似物优选是这样的，以致它们可以以如本文关于本发明的纳米抗体所定义的亲和力(适当测量的和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地表示为IC50值，如本发明进一步所述)结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体。
所述类似物优选还是这样的，以致它们保留所述纳米抗体的有利特性，如本文所述。
此外，根据一个优选的方面，所述类似物与在表A-2中提及的p19+序列，p19-序列，p40-序列，p40+序列，p35序列，IL-27序列，IL-12Rb1序列，IL-12Rb2序列或IL-23R序列之一分别具有至少70％、优选至少80％、更优选至少90％、如至少95％或99％或更多的序列同一性程度；和/或优选地具有至多20个、优选地至多10个、甚至更优选地至多5个、如4，3，2或仅有1个氨基酸差异(如本文定义)。
此外，所述类似物的构架序列和CDR’s优选是这样的，以致它们与本文定义的优选方面一致。更一般地，如本文所述，所述类似物具有：(a)在位置108的Q；和/或(b)在位置45的带电荷氨基酸或半胱氨酸残基，和优选地在位置44为E，更优选地在位置44为E和在位置45为R；和/或(c)在位置103的P，R或S。
本发明纳米抗体的类似物的一个优选的种类包括已经被人源化的纳米抗体(即，与天然存在的本发明的纳米抗体的序列相比较)。如在本发明引用的背景技术中提及的，这样的人源化通常包括用在人VH结构域如人VH3结构域中相同位置存在的氨基酸残基取代在天然存在的VHH序列中的一个或多个氨基酸残基。专业技术人员应该清楚可能的人源化取代的实例或人源化取代的组合，例如，从本发明的表格，从在本发明引用的背景技术中提及的可能的人源化取代，和/或从纳米抗体序列和天然存在的人VH结构域序列之间的比较获知。
所述人源化取代应该这样选择，以致所得到的人源化的纳米抗体仍然保留如本发明所定义的纳米抗体的有利特性，并且更优选这样选择，以致它们如在前段中关于类似物的描述。基于本文的公开内容，并且任选地在有限程度的常规实验之后，所述常规实验包括，例如，引入有限数量的可能的人源化取代，并且确定它们对这样获得的纳米抗体的特性的影响，专业技术人员通常能够确定并选择适当的人源化取代或适当的人源化取代的组合。
一般地，作为人源化的结果，本发明的纳米抗体可以变得更加“人-样”，同时仍然保留如本发明所述的本发明的纳米抗体的有利特性。结果，与相对应的天然存在的VHH结构域相比，这样人源化的纳米抗体可以具有一些优点，诸如减小的免疫原性。同样，基于本发明的公开内容，并且任选在有限程度的常规实验之后，专业技术人员应该能够选择人源化取代或适当的人源化取代组合，其最优化或获得一方面在通过人源化取代提供的有利特性和另一方面在天然存在的VHH结构域的有利特性之间的理想的或适当的平衡。
本发明的纳米抗体可以在任何构架残基处被适当人源化，诸如在一个或多个标志残基处(如本文所定义)或在一个或多个其它构架残基处(即，非标志残基)或它们的任何适当的组合。关于“P，R，S-103组”或“KERE组”的纳米抗体的一个优选的人源化取代是将Q108取代成L108。“GLEW种类”的纳米抗体也可以通过将Q108取代成L108被人源化，条件是其它标志残基中的至少一个含有骆驼科动物(骆驼源化)取代(如本文所定义)。例如，如上文所提及，人源化的纳米抗体的一个特别优选的种类在位置44-47具有GLEW或GLEW-样序列；在位置103具有P，R或S(并且特别是R)，并且在位置108具有L。
人源化的和其它类似物，以及编码其的核酸序列，可以以本身已知的任何方式提供。例如，所述类似物可以这样获得：通过提供编码天然存在的VHH结构域的核酸，将要被取代的一个或多个氨基酸残基的密码子改变成相对应的合乎需要的氨基酸残基的密码子(例如，通过位点定向诱变或通过使用适当错配的引物进行的PCR)，在适当的宿主或表达系统中表达这样获得的核酸/核苷酸序列；并且任选地分离和/或纯化这样获得的类似物，以提供基本上分离形式(如本文进一步所述)的所述类似物。这通常可以应用本身已知的方法和技术而进行，所述方法和技术应该是专业技术人员所清楚的，例如从手册和本文所引用的参考文献、本文引用的背景技术和/或从本文的进一步描述中可知。备选地，编码所述需要的类似物的核酸可以以本身已知的方法合成(例如使用用于合成具有预先确定氨基酸序列的核酸序列的自动装置)，并且然后可以如本文所述进行表达。另一种技术可以包括组合一个或多个分别编码所述理想的类似物的一部分的天然存在的和/或合成的核酸序列，并且然后如本发明所述表达所组合的核酸序列。此外，所述类似物可以使用相关氨基酸序列的化学合成而提供，其应用本身已知的肽合成技术，诸如本发明所提及的那些技术。
在这一方面，专业技术人员还应该清楚，本发明的纳米抗体(包括它们的类似物)还可以从人VH序列(即，氨基酸序列或相对应的核苷酸序列)起始设计和/或制备，所述人VH序列诸如例如人VH3序列，诸如DP-47、DP-51、或DP-29，即，通过引入一个或多个骆驼源化的取代(即，将在所述人VH结构域的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基改变成在VHH结构域相对应位置存在的氨基酸残基)，以提供本发明的纳米抗体序列，和/或将纳米抗体的有利特性赋予这样获得的序列。同样地，这通常可以应用前段中提到的各种方法和技术进行，其应用人VH结构域的氨基酸序列和/或核苷酸序列作为起点。
一些优选的而非限制性的骆驼源化取代可以来自表A-5-A-8。同样应该清楚，在一个或多个标志残基的骆驼源化取代通常将比在一个或多个其它氨基酸位置的取代对所需要的特性有更大的影响，尽管这两种取代以及它们的任何适当的组合均包括在本发明范围之内。例如，可以引入一个或多个已经赋予至少一些所需要的特性的骆驼源化取代，并且然后引入进一步的骆驼源化取代，其进一步改善所述特性和/或赋予额外的有利特性。同样地，基于本发明的公开内容，并且任选地在有限程度的常规实验之后，所述常规实验可以包括，例如，引入有限数量的可能的骆驼源化取代，并且确定是否获得或改善纳米抗体的有利特性(即，与原始VH结构域相比)，专业技术人员将通常能够确定并选择适当的骆驼源化取代或适当的骆驼源化取代的组合。
然而，一般地，所述骆驼源化取代优选是这样的以致得到的氨基酸序列至少包含(a)在位置108的Q；和/或(b)在位置45的带电荷的氨基酸或半胱氨酸残基以及优选地也在位置44的E，以及更优选地在位置44的E和在位置45的R；和/或(c)在位置103的P，R或S；和任选地一种或多种其它的骆驼源化取代。更优选地，所述骆驼源化取代是这样的以致它们导致本发明的纳米抗体和/或其类似物(如本文定义)，如得到人源化的类似物和/或优选地如在前述段落中定义的类似物。
如从本文的公开内容中还要清楚的是，使用如本文所定义的本发明的纳米抗体的部分或片段，或两个或多个部分或片段的组合，并且特别是分别如本文进一步所述的和/或如表A-2中所列举的p19+，p19-，p40+，p40-，抗p35，抗IL-27，抗IL-12Rb1，抗IL-12Rb2和抗IL-23R纳米抗体；或其人源化变体的部分或片段，也包括在本发明的范围内。因此，根据本发明的一个方面，术语“本发明的纳米抗体”在其最广泛的意义上也涵盖所述部分或片段。
一般地，本发明的纳米抗体(包括其类似物)的所述部分或片段具有这样的氨基酸序列，其中，与相对应的本发明的全长纳米抗体(或其类似物)的氨基酸序列相比较，已经删除和/或去除在N末端的一个或多个氨基酸残基，在C末端的一个或多个氨基酸残基，一个或多个连续的内部氨基酸残基，或它们的任何组合。
所述部分或片段优选是这样的，以致它们可以以如本文关于本发明的纳米抗体所定义的亲和力(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本发明进一步所述))结合异二聚体细胞因子和/或它们的受体。
任何部分或片段优选地是这样，以致其包括相对应的本发明的全长纳米抗体的氨基酸序列的至少10个连续的氨基酸残基，优选地至少20个连续的氨基酸残基，更优选地至少30个连续的氨基酸残基，诸如至少40个连续的氨基酸残基。
此外，任何部分或片段优选是这样的，以致其包括CDR1、CDR2和/或CDR3中的至少一个或至少其部分(并且特别是至少CDR3或至少其部分)。更优选地，任何部分或片段是这样的，以致其包括至少一个CDR(并且优选至少CDR3或其部分)，和至少一个其它CDR(即，CDR1或CDR2)或至少其部分，优选通过适当的构架序列或至少其部分连接。更优选地，任何部分或片段是这样的，以致其包括至少一个CDR(且优选至少CDR3或其部分)，和至少两个剩余CDR的部分，同样优选通过适当的构架序列或至少其部分连接。
按照另一个特别优选的但非限制性的方面，这样的部分或片段包括至少CDR3，诸如相对应的本发明全长纳米抗体的FR3、CDR3和FR4，即，例如，如在国际申请WO 03/050531(Lasters等)中所述。
如上文已经提及，还可以组合两个或更多个这样的部分或片段(即，来自相同的或不同的本发明的纳米抗体)，即，以提供本发明纳米抗体的类似物(如本文所定义)和/或以提供其它部分或片段(如本文所定义)。例如，还可以将本发明纳米抗体的一个或多个部分或片段与人VH结构域的一个或多个部分或片段组合。
根据一个优选方面，所述部分或片段与分别如本文进一步所述的和/或如表A-2中所列举的p19+，p19-，p40+，p40-，抗p35，抗IL-27，抗IL-12Rb1，抗IL-12Rb2和抗IL-23R纳米抗体之一；和/或与它们的人源化变体之一具有至少50％、优选地至少60％、更优选地至少70％、甚至更优选地至少80％、诸如至少90％、95％或99％或更多的序列同一性程度。
所述部分和片段，以及编码其的核酸序列可以以本身已知的任何方式提供并且任选地组合。例如，所述部分或片段可以通过在编码本发明的全长纳米抗体的核酸中插入终止密码子，并且然后以本身已知的方式(例如，如本文所述)表达这样获得的核酸而获得。备选地，编码所述部分或片段的核酸可以这样获得，即，通过适当限制性酶切(restrict)编码本发明的全长纳米抗体的核酸或通过以本身已知的方式合成这样的核酸。部分或片段还可以使用本身已知的肽合成技术提供。
本发明在其最广泛意义上还包括本发明的纳米抗体的衍生物。这样的衍生物通常可以通过本发明的纳米抗体和/或形成本发明的纳米抗体的一个或多个氨基酸残基的修饰而获得，并且特别是通过化学和/或生物(例如，酶促)修饰获得。
专业技术人员应该清楚这样的修饰的实例，以及纳米抗体序列中可以以这样的方式修饰的氨基酸残基的实例(即，在蛋白骨架上但是优选地在侧链上)，可以用来引入所述修饰的方法和技术以及所述修饰的潜在用途和优点。
例如，这样的修饰可以包括向本发明的纳米抗体内或向本发明的纳米抗体上引入(例如，通过共价连接或以其它适当的方式)一个或多个官能团、残基或部分，并且特别是赋予本发明的纳米抗体一种或多种理想的特性或官能性的一个或多个官能团、残基或部分。专业技术人员应该清楚所述官能团的实例。
例如，所述修饰可以包括引入(例如，通过共价结合或以任何其它适当的方式)一个或多个这样的官能团，即，所述官能团增加本发明的纳米抗体的半衰期、溶解性和/或吸收，减少本发明的纳米抗体的免疫原性和/或毒性，消除或减弱本发明的纳米抗体的任何不理想的副作用，和/或赋予本发明的纳米抗体和/或多肽其它的有利特性和/或减少本发明的纳米抗体和/或多肽的不理想特性；或者两种或多种上述的任何组合。所述官能团的实例以及引入所述官能团的技术的实例应该为专业技术人员清楚，并且通常可以包括上文引用的综合背景技术中提及的所有官能团和技术，以及本身已知的用于修饰药物蛋白并且特别用于修饰抗体或抗体片段(包括ScFv’s和单结构域抗体)的官能团和技术，关于其的参考文献例如参考雷明顿药物科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)，第16版，Mack出版公司，Easton，PA(1980)。例如，所述官能团可以直接连接(例如共价地)到本发明的纳米抗体上，或者任选地通过适当的接头或间隔臂连接，这也为专业技术人员所清楚。
关于增加半衰期和/或减少药物蛋白的免疫原性最广泛应用的一种技术包括适当的药用聚合物诸如聚(乙二醇)(PEG)或其衍生物(诸如甲氧基聚(乙二醇)或mPEG)的附着。一般地，可以应用聚乙二醇化作用的任何适当的形式，诸如本领域中用于抗体和抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv’s)的聚乙二醇化作用；例如，参考Chapman，自然生物技术(Nat.Biotechnol.)，54，531-545(2002)；Veronese和Harris，高级药物递送综述(Adv.Drug Deliv.Rev.)54，453-456(2003)，Harris和Chess，自然药物发现综述(Nat.Rev.Drug.Discov.)，2，(2003)以及在WO 04/060965中。用于蛋白聚乙二醇化的各种试剂还可以商购，例如从美国Nektar治疗公司(Nektar Therapeutics)购得。
优选地，应用定向聚乙二醇化，特别是通过半胱氨酸-残基(参见例如Yang等，蛋白质工程(Protein Engineering)，16，10，761-770(2003))。例如，为了这一目的，PEG可以附着到在本发明的纳米抗体中天然存在的半胱氨酸残基上，本发明的纳米抗体可以这样进行修饰，以适当地引入一个或多个用于PEG附着的半胱氨酸残基，或者可以将包括一个或多个用于PEG附着的半胱氨酸残基的氨基酸序列融合到本发明的纳米抗体的N-和/或C-端，本身为专业技术人员所了解的所有应用的蛋白质加工技术。
优选地，对于本发明的纳米抗体和蛋白，使用具有分子量大于5000，诸如大于10,000并且小于200,000，诸如小于100,000；例如在20,000-80,000范围内的PEG。
另一种通常较不优选的修饰包括N-连接的或O-连接的糖基化，通常作为共翻译和/或翻译后修饰的一部分，其取决于为了表达本发明的纳米抗体或多肽所用的宿主细胞。
另一种修饰可以包括引入一种或多种可检测的标记或其它信号-产生基团或结构部分，其取决于所标记纳米抗体的目的用途。适宜的标记以及附着、使用和检测它们的技术是专业技术人员所清楚的，并且例如包括但不限于，荧光标记(诸如荧光素、异硫氰酸酯、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二醛(o-phthaldehyde)、以及荧光胺和荧光素金属诸如152Eu或其它来自镧系的金属)，磷光性标记、化学发光标记或生物发光标记(诸如鲁米那、异鲁米诺、theromatic acridinium ester、咪唑、acridinium盐、草酸酯、二氧杂环丁烷或GFP及其类似物)，放射性-同位素(诸如3H，125I，32P，35S，14C，51Cr，36Cl，57Co，58Co，59Fe和75Se)，金属、金属螯合物或金属阳离子(例如金属阳离子诸如99mTc，123I，111In，131I，97Ru，67Cu，67Ga和68Ga，或其它特别适合用于体内、体外或原位诊断和成像的金属或金属阳离子，诸如(157Gd，55Mn，162Dy，52Cr和56Fe))，以及发色团和酶(诸如苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、Δ-V-类固醇异构酶、酵母醇脱氢酶、α-磷酸甘油脱氢酶、丙糖磷酸异构酶、生物素-抗生物素蛋白过氧化酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、过氧化氢酶、葡萄糖-VI-磷酸脱氢酶、葡糖淀粉酶和乙酰胆碱酯酶)。其它适宜的标记为专业技术人员所清楚，并且例如包括可以应用NMR或ESR光谱检测的部分。
例如，这样标记的本发明的纳米抗体和多肽可以用于体外、体内或原位检测(包括本身已知的免疫检测，诸如ELISA，RIA，EIA和其它“夹心式检测”等)，以及体内诊断和成像目的，这取决于特定的标记的选择。
专业技术人员应该清楚，另一种修饰可以包括引入螯合基团，例如以螯合上文提到的金属或金属阳离子中的一种。例如，适当的螯合基团包括但不限于二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)。
另一种修饰可以包括引入作为特异性结合对诸如生物素-(链霉)抗生物素蛋白结合对的一部分的官能团。这样的官能团可以用来将本发明的纳米抗体与另一种蛋白、多肽或化学化合物结合，所述另一种蛋白、多肽或化学化合物与所述结合对的另一半结合，即，通过形成所述结合对。例如，本发明的纳米抗体可以缀合到生物素上，并且连接到与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白缀合的另一种蛋白、多肽、化合物或载体上。例如，这样缀合的纳米抗体可以用作报道子，例如在产生可检测的信号的试剂与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白缀合的诊断系统中用作报道子。例如，这种结合对还可以用来将本发明的纳米抗体与载体结合，所述载体包括适用于药物目的的载体。一个非限制性的实例是Cao和Suresh，药物靶向杂志(Journal of Drug Targetting)，8，4，257(2000)所述的脂质体制剂。这种结合对还可以用来将治疗活性剂与本发明的纳米抗体结合。
对于一些应用，特别是对于意欲杀死表达本发明的纳米抗体所针对的靶标的细胞(例如，在治疗癌症时)，或者意欲减少或减缓所述细胞的生长和/或增殖的那些应用中，本发明的纳米抗体还可以与毒素或者毒性残基或部分连接。例如，可以与本发明的纳米抗体连接以提供细胞毒性化合物的毒性部分、化合物或残基的实例对于专业技术人员是清楚的，并且例如，可以在上文引用的现有技术和/或本文的进一步描述中找到。一个实例是记述在WO 03/055527中的所谓的ADEPTTM技术。
专业技术人员应该清楚其它潜在的化学和酶促修饰。这种修饰还可以为研究目的引入(例如，为了研究功能-活性关系)。例如，参考Lundblad和Bradshaw，生物技术和应用生物化学(Biotechnol.Appl.Biochem.)，26，143-151(1997)。
优选地，所述衍生物是这样的，以致它们以如本文关于本发明的纳米抗体所定义的亲和力(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本发明进一步所述)与异二聚体细胞因子和/或它们的受体结合。
如上文提及，本发明还涉及基本上由至少一个本发明的纳米抗体组成或包括至少一个本发明的纳米抗体的蛋白或多肽。“基本上由……组成”意指本发明的多肽的氨基酸序列与本发明纳米抗体的氨基酸序列完全相同，或者与本发明纳米抗体的氨基酸序列相对应，其将有限数目的氨基酸残基，诸如1-20个氨基酸残基，例如1-10个氨基酸残基并且优选地1-6个氨基酸残基，诸如1，2，3，4，5或6个氨基酸残基添加到所述纳米抗体的氨基酸序列的氨基末端、羧基末端或者氨基末端和羧基末端两端。
所述氨基酸残基可以或者可以不变化、改变或者另外影响所述纳米抗体的(生物学)特性，并且可以或者可以不为所述纳米抗体添加其它的官能性。例如，所述氨基酸残基：
-可以包括N-端Met残基，例如，作为在异源宿主细胞或宿主生物体内表达的结果；
-可以形成信号序列或前导序列，当合成时其引导所述纳米抗体从宿主细胞中分泌。适宜的分泌性前导肽应该是专业技术人员所清楚的，并且可以是本文进一步所述的。通常，这样的前导序列与所述纳米抗体的N端连接，尽管本发明在其最广泛意义上不限于此；
-可以形成这样的序列或信号，即，所述序列或信号允许所述纳米抗体导向和/或透过或进入特异性的器官、组织、细胞、或者细胞的部分或区室，和/或所述序列或信号允许所述纳米抗体透过或穿过生物屏障诸如细胞膜、细胞层诸如上皮细胞层、肿瘤包括实体瘤、或血脑屏障。所述氨基酸序列的实例对于专业技术人员是清楚的。一些非限制性的实例是在WO 03/026700和Temsamani等，生物学治疗的专家观点(Expert Opin.Biol.Ther.)，1，773(2001)；Temsamani和Vidal，今日药物发现(Drug Discov.Today)，9，1012(004)以及Rousselle，药理学和实验治疗学杂志(J.Pharmacol.Exp.Ther.)，296，124-131(2001)中所述的小肽载体(“Pep-trans载体”)，和由Zhao等，凋亡(Apoptosis)，8，631-637(2003)所述的膜易位体序列。例如，用于抗体片段细胞内靶向的C端和N端氨基酸序列由Cardinale等，方法(Methods)，34，171(2004)所述。关于细胞内靶向的其它适宜的技术包括所谓的“细胞内抗体(intrabody)”的表达和/或应用，所述“细胞内抗体”包括本发明的纳米抗体，如下文所提及；
-可以形成“标记”，例如允许或促进所述纳米抗体的纯化的氨基酸序列或残基，例如使用针对所述序列或残基的亲和技术进行纯化。然后，所述序列或残基可以被去除(例如，通过化学或酶促裂解)，以提供纳米抗体序列(为了这一目的，所述标记可以任选地通过可裂解的接头序列与所述纳米抗体序列连接或包含可裂解的基序)。这种残基的一些优选的但非限制性的实例是多组氨酸残基、谷胱甘肽(glutatione)残基以及myc-标记(例如参见WO 06/12282的SEQ ID NO：31)；
-可以是已经被官能化和/或可以作为用于官能团附着的位点的一个或多个氨基酸残基。适宜的氨基酸残基和官能团应该是专业技术人员所清楚的，并且包括但不限于，本文为本发明的纳米抗体的衍生物提及的氨基酸残基和官能团。
按照另一个方面，本发明的多肽包括本发明的纳米抗体，所述多肽在其氨基末端、在其羧基末端、或者在其氨基末端和其羧基末端两端融合至少一个其它氨基酸序列，即，以提供包括所述本发明的纳米抗体和一个或多个其它氨基酸序列的融合蛋白。这种融合体在本文还叫作“纳米抗体融合体”。
所述一个或多个其它氨基酸序列可以是任何适宜的和/或理想的氨基酸序列。所述其它氨基酸序列可以或可以不变化、改变或另外影响所述纳米抗体的(生物学)特性，并且可以或可以不为本发明的纳米抗体或多肽加入其它的官能性。优选地，所述其它氨基酸序列是这样的，以致它赋予本发明的纳米抗体或多肽一种或多种理想的特性或官能性。
例如，所述其他氨基酸序列也可以提供第二结合位点，所述结合位点可以针对任何需要的蛋白、多肽、抗原、抗原决定簇或表位(包括但不限于与本发明的纳米抗体所针对的相同的蛋白、多肽、抗原、抗原决定簇或表位，或不同的蛋白、多肽、抗原、抗原决定簇或表位)。
这样的氨基酸序列的实例是专业技术人员所清楚的，并且通常可以包括基于常规抗体及其片段(包括但不限于ScFv’s和单结构域抗体)的用于肽融合的所有氨基酸序列。例如，参考Holliger和Hudson，自然生物技术(Nature Biotechnology)，23，9，1126-1136(2005)的综述。
例如，与本发明的纳米抗体本身相比，这样的氨基酸序列可以是这样的氨基酸序列，即，其增加本发明的多肽的半衰期、溶解性、或吸收，减少本发明的多肽的免疫原性或毒性，消除或减弱本发明的多肽的不理想的副作用，和/或赋予本发明的多肽其它有利的特性和/或减少本发明的多肽的不理想特性。所述氨基酸序列的一些非限制性实例为血清蛋白，诸如人血清白蛋白(参见，例如WO 00/27435)或半抗原分子(例如被循环抗体识别的半抗原，参见例如WO 98/22141)。
特别地，在本领域中已经描述，免疫球蛋白(如VH结构域)与血清白蛋白或与其片段的连接片段可以用来增加半衰期。参考WO 00/27435和WO 01/077137。根据本发明，本发明的纳米抗体优选地与血清白蛋白(或与其适当的片段)直接连接，或通过适当的接头连接，且特别地通过适当的肽连接，以致本发明的多肽可以作为遗传融合体(蛋白)表达。按照一个具体的方面，本发明的纳米抗体可以与血清白蛋白片段连接，所述血清白蛋白片段至少包括血清白蛋白的结构域III或其部分。例如，参考埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的于2006年3月31日申请的题目为“白蛋白来源的氨基酸序列，其用于增加治疗性蛋白和其他治疗性蛋白和实体的半衰期的用途，以及包括其的构建体(Albumin derivedamino acid sequence，use thereof for increasing the half-life of therapeutic proteins and of other therapeutic proteins and entities，and constructs comprising the same)”美国临时申请60/788,256(还参见PCT/EP2007/002817)。
备选地，所述其它的氨基酸序列还可以提供第二结合位点或结合单位，所述结合位点或结合单位针对血清蛋白(诸如例如，人血清白蛋白或另一种血清蛋白，诸如IgG)，以在血清中提供增加的半衰期。例如，所述氨基酸序列包括下述纳米抗体，以及在WO 91/01743，WO 01/45746和WO 02/076489中所述的小肽和结合蛋白，和在WO 03/002609和WO 04/003019所述的dAb’s。还参考Harmsen等，疫苗(Vaccine)，23(41)；4926-42，2005，以及EP 0 368 684，以及下述本文提及的埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx.N.V.)的美国临时申请60/843,349(也参见PCT/EP2007/059475)，60/850,774(也参见PCT/EP2007/060849)，60/850,775(也参见PCT/EP2007/060850)和埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx.N.V.)于2006年12月5日申请的题目为“Peptides capable of binding to serum proteins(能够结合血清蛋白的肽)”的美国临时申请(也参见WO 068280)以及埃博灵克斯股份有限公司的题目均为“能够结合血清蛋白的改进的肽(Improved peptides capable of binding toserum proteins)”的美国临时申请61/050,385和61/045,690。所述氨基酸序列可以特别针对血清白蛋白(并且更特别是人血清白蛋白)和/或针对IgG(并且更特别是人IgG)。例如，所述氨基酸序列可以是下列氨基酸序列：针对(人)血清白蛋白的氨基酸序列，和可以结合在(人)血清白蛋白上不参与血清白蛋白与FcRn结合的氨基酸残基的氨基酸序列(例如，参见WO 06/0122787)，和/或能够结合在血清白蛋白上不形成血清白蛋白结构域III的一部分的氨基酸残基的氨基酸序列(例如，同样参见WO 06/0122787)；具有或可以提供增加的半衰期的氨基酸序列(例如，参见埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的于2006年9月8日申请的题目为“具有长半衰期的血清白蛋白结合蛋白(Serum albumin binding proteins with long half-lives)”的美国临时申请60/843,349；还参见PCT/EP2007/059475)；与来自至少一个哺乳动物物种的、并且特别是与至少一个灵长类物种(诸如但不限于，来自猕猴属(Macaca)的猴子(诸如，并且特别地，食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))和/或恒河猴(恒河猴(Macaca mulatta)))和狒狒(豚尾狒狒(Papio ursinus))，同样参考美国临时申请60/843,349和PCT/EP2007/059475)的血清白蛋白交叉反应的针对人血清白蛋白的氨基酸序列；可以以不依赖pH方式结合血清白蛋白的氨基酸序列(参见，例如，埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)于2006年10月11日申请的题目为“以基本上不依赖pH的方式结合血清白蛋白的氨基酸序列，包含其的化合物及其应用(Amino acid sequences that bind to serum proteins in a manner that is essentially independent of the pH，compounds comprising the same，and uses thereof)”的美国临时申请60/850,774，还参见WO 08/043821)，和/或是条件粘合剂的氨基酸序列(例如，参见埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)于2006年10月11日申请的题目为“以条件方式结合需要的分子的氨基酸序列(Amino acid sequences that bind to a desired molecule in a conditional manner)”的美国临时申请60/850,775)；还参见PCT/EP2007/060850)。
按照另一个方面，所述一个或多个其他氨基酸序列可以包括常规4-链抗体(且特别是人抗体)和/或重链抗体的一个或多个部分、片段或结构域。例如，尽管通常较不优选，本发明的纳米抗体可以与常规(优选人)VH或VL结构域连接或与VH或VL结构域的天然或合成的类似物连接，同样任选地通过接头序列(包括但不限于其他(单)结构域抗体，如Ward等所述的dAb’s)。
所述至少一个纳米抗体还可以与一个或多个(优选人的)CH1、CH2和/或CH3结构域连接，这任选地通过接头序列连接。例如，与适宜的CH1结构域连接的纳米抗体，可以例如——与适当的轻链一起——用来产生类似于常规Fab片段或F(ab’)2片段的抗体片段/结构，但是其中一个或者(F(ab’)2片段的情形中)一个或两个常规VH结构域已被本发明的纳米抗体取代。此外，两个纳米抗体可以与CH3结构域(任选通过接头)连接，以提供具有增加的体内半衰期的构建体。
根据本发明的多肽的一个具体方面，一个或多个本发明的纳米抗体可以与一个或多个恒定结构域(例如，2或3个可以用作Fc部分的一部分/形成Fc部分的恒定结构域)、Fc部分和/或一个或多个抗体部分、片段或结构域连接(任选地通过适当的接头或铰链区连接)，其赋予本发明的多肽一种或多种效应子功能，和/或可以赋予与一个或多个Fc受体结合的能力。例如，为了这一目的，并且不限于此，所述一个或多个其它氨基酸序列可以包括抗体、诸如来自重链抗体(如本文所述)并且更优选来自常规人4-链抗体的一个或多个CH2和/或CH3结构域；和/或可以形成Fc区域的(部分)和Fc区域，例如来自IgG(例如，来自IgG1，IgG2，IgG3或IgG4)，来自IgE或来自另一种人Ig如IgA，IgD或IgM。例如，WO 94/04678描述了包括骆驼科动物VHH结构域或其人源化的衍生物的重链抗体(即，纳米抗体)，其中所述骆驼科动物CH2和/或CH3结构域已被人CH2和CH3结构域取代，以提供由2条重链组成的免疫球蛋白，其中每条重链包括纳米抗体和人CH2与CH3结构域(但是无CH1结构域)，所述免疫球蛋白具有由所述CH2和CH3结构域提供的效应子功能，并且所述免疫球蛋白可以在无需任何轻链的存在下行使功能。专业技术人员应该清楚可以适当与本发明的纳米抗体连接以提供效应子功能的其它氨基酸序列，并且可以基于所需要的效应子功能进行选择。例如，参考WO 04/058820，WO 99/42077；WO 02/056910和WO05/017148，以及Holliger和Hudson，同前所述的综述；和参考埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)于2007年12月4日申请的题目为“Constructs comprising single variable domains and an Fc portion derived from IgE(包括但可变结构域和来源于IgE的Fc部分的构建体)”的未预先公布的美国临时申请以及基于其的相应PCT申请(也要求作为本申请的优先权文件)，该申请与本申请具有相同的申请日。与相对应的本发明的纳米抗体相比，本发明的纳米抗体与Fc部分偶联也可以导致增加的半衰期。对于一些应用，使用赋予增加的半衰期而无任何生物学显著效应子功能的Fc部分和/或恒定结构域(即，CH2和/或CH3结构域)也可以是适当的或者甚至是优选的。专业技术人员应该清楚包括具有增加的体内半衰期的一个或多个纳米抗体和一个或多个恒定结构域的其它适当的构建体，并且例如，其可以包括与CH3结构域连接的两个纳米抗体，任选地通过接头序列连接。通常，具有增加的半衰期的任何融合蛋白或衍生物将优选具有大于50kD的分子量，50kD是肾吸收的截留值。
在另一个优选的但非限制性的方面中，为了形成本发明的多肽，一个或多个本发明的氨基酸序列可以与具有减少的(或基本上没有)自我缔合成二聚体的倾向(即，与在常规4-链抗体中天然存在的恒定结构域相比较)的天然存在、合成的或半合成的恒定结构域(或其类似物、变体、突变体、部分或片段)连接(任选地通过适当的接头或铰链区)。所述单体(即，无自我缔合的)Fc链变体，或其片段，是专业技术人员所清楚的。例如，Helm等，J Biol Chem(生物化学杂志)1996 271 7494，描述了可以用于本发明的多肽链中的单体Fcε链变体。
此外，所述单体Fc链变体优选是这样的，以致它们仍然能够结合补体或相关的Fc受体(取决于它们所来源的Fc部分)，和/或是这样的，以致它们仍然具有它们所来源的Fc部分的一些或全部的效应子功能(或处于仍然适用于目的用途的减少的水平)。备选地，在这样的本发明的多肽链中，单体Fc链可以用来赋予所述多肽链增加的半衰期，在这种情形中，所述单体Fc链还可以不具有或基本上不具有效应子功能。
本发明的二价/多价、双特异性/多特异性或双互补位型/多互补位型多肽也可以与Fc部分连接，以提供于2007年12月4日申请的题目为“immunoglobulin constructs(免疫球蛋白构建体)”的未预先公布的美国临时申请(也被要求作为本申请的优先权文件)以及基于其的相应PCT申请(该申请与本申请具有相同的申请日)中记述的那种类型的多肽构建体。
所述其它氨基酸序列还可以形成信号序列或前导序列，当合成时其引导本发明的纳米抗体或多肽从宿主细胞中分泌(例如，以提供本发明的多肽的前体-(pre-)、原-(pro-)或前原-(prepro-)形式，这取决于用来表达本发明的多肽的宿主细胞)。
所述其它氨基酸序列还可以形成这样的序列或信号，即，所述序列或信号允许本发明的纳米抗体或多肽导向和/或透过或进入特异性的器官、组织、细胞、或者细胞的部分或区室，和/或所述序列或信号允许本发明的纳米抗体或多肽透过或穿过生物屏障诸如细胞膜、细胞层诸如上皮细胞层、肿瘤包括实体瘤、或血脑屏障。所述氨基酸序列的适当的实例对于专业技术人员是清楚的，并且例如包括但不限于，上文提及的“Peptrans”载体，Cardinale等描述的序列，以及本身已知的可以用来将本发明的纳米抗体和多肽表达或生产为“细胞内抗体”的氨基酸序列和抗体片段，例如，如在WO 94/02610，WO 95/22618，US-A-7004940，WO 03/014960，WO 99/07414；WO 05/01690；EP 1 512 696；和Cattaneo，A.与Biocca，S.(1997)细胞内抗体：开发和应用(Intracellular Antibodies：Development and Applications)Landes和Springer-Verlag；以及在Kontermann，方法(Methods)34，(2004)，163-170，以及本发明所述的其它参考文献中所述。
对于一些应用，特别是对于意欲杀死表达本发明的纳米抗体所针对的靶标的细胞(例如，在治疗癌症时)，或者意欲减少或减缓所述细胞的生长和/或增殖的那些应用中，本发明的纳米抗体还可以与(细胞)毒性蛋白或多肽连接。例如，可以与本发明的纳米抗体连接以提供本发明的细胞毒性多肽的所述毒性蛋白和多肽的实例对于专业技术人员是清楚的，并且例如，可以在上文引用的现有技术和/或本文的进一步描述中找到。一个实例是在WO 03/055527中所述的所谓的ADEPTTM技术。
根据一个优选但非限制性的方面，所述一个或多个其它氨基酸序列包括至少一个其它的纳米抗体，以提供包括至少两个、诸如三个、四个、五个或更多个纳米抗体的本发明的多肽，其中所述纳米抗体可以任选地通过一个或多个接头序列(如本发明所定义)连接。包括两个或更多个纳米抗体的本发明的多肽，其中至少一个是本发明的纳米抗体，在本发明中还将称为本发明的“多价”多肽，并且在所述多肽中存在的纳米抗体还将在本发明中称为处于“多价形式”。例如，本发明的“二价”多肽包括2个纳米抗体，任选地通过一个接头序列连接，而本发明的“三价”多肽包括3个纳米抗体，任选地通过两个接头序列连接；等等；其中在所述多肽中存在的至少一个纳米抗体，并且多达在所述多肽中存在的所有纳米抗体，是本发明的纳米抗体。
在本发明的多价多肽中，所述两个或更多个纳米抗体可以是相同的或不同的，并且可以针对同一抗原或抗原决定簇(例如，针对相同部分或表位或者针对不同部分或表位)，或可以备选地针对不同的抗原或抗原决定簇；或它们的任何适当的组合。例如，本发明的二价多肽可以包括：(a)两个相同的纳米抗体；(b)针对蛋白或抗原的第一抗原决定簇的第一纳米抗体，和针对所述蛋白或抗原的同一抗原决定簇的第二纳米抗体，所述第二纳米抗体不同于所述第一纳米抗体；(c)针对所述蛋白或抗原的第一抗原决定簇的第一纳米抗体，和针对所述蛋白或抗原的另一个抗原决定簇的第二纳米抗体；或(d)针对第一蛋白或抗原的第一纳米抗体，和针对第二蛋白或抗原(即，与所述第一抗原不同)的第二纳米抗体。类似地，本发明的三价多肽可以，例如但不限于此，包括(a)3个相同的纳米抗体；(b)针对抗原的第一抗原决定簇的两个相同的纳米抗体，和针对同一抗原的不同抗原决定簇的第三纳米抗体；(c)针对抗原的第一抗原决定簇的两个相同的纳米抗体，和针对不同于所述第一抗原的第二抗原的第三纳米抗体；(d)针对第一抗原的第一抗原决定簇的第一纳米抗体，针对所述第一抗原的第二抗原决定簇的第二纳米抗体，和针对不同于所述第一抗原的第二抗原的第三纳米抗体；或(e)针对第一抗原的第一纳米抗体，针对不同于所述第一抗原的第二抗原的第二纳米抗体，和针对不同于所述第一和第二抗原的第三抗原的第三纳米抗体。
包含至少两个纳米抗体的本发明的多肽，其中至少一个纳米抗体针对第一抗原(即，针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体)，并且至少一个纳米抗体针对第二抗原(即，不同于异二聚体细胞因子和/或它们的受体)，还叫作本发明的“多特异性”多肽，并且存在于所述多肽中的纳米抗体还叫作处于“多特异性形式”。因此，例如，本发明的“双特异性”多肽是包括至少一个针对第一抗原(即异二聚体细胞因子和/或它们的受体)的纳米抗体和至少一个针对第二抗原(即，不同于异二聚体细胞因子和/或它们的受体)的其它纳米抗体的多肽，而本发明的“三特异性”多肽是这样的多肽，即，其包括至少一个针对第一抗原(即异二聚体细胞因子和/或它们的受体)的纳米抗体，至少一个针对第二抗原(即，不同于异二聚体细胞因子和/或它们的受体)的其它纳米抗体，和至少一个针对第三抗原(即，不同于异二聚体细胞因子和/或它们的受体和所述第二抗原二者)的其它纳米抗体；等等。
因此，以其最简单的形式，本发明的双特异性多肽是本发明的二价多肽(如本文所定义)，其包括针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的第一纳米抗体，和针对第二抗原的第二纳米抗体，其中所述第一和第二纳米抗体可以任选地通过接头序列(如本文所定义)而连接；而以其最简单形式存在的本发明的三特异性多肽是本发明的三价多肽(如本文所定义)，其包括针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的第一纳米抗体，针对第二抗原的第二纳米抗体，和针对第三抗原的第三纳米抗体，其中所述第一、第二和第三纳米抗体可以任选地通过一个或多个，并且特别是一个或多个特别是两个接头序列连接。
然而，从上文所述应该清楚，本发明并不限于此，在这种意义上，本发明的多特异性多肽可以包括至少一个针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的纳米抗体，和任何数目的针对一个或多个不同于异二聚体细胞因子和/或它们的受体的抗原的纳米抗体。
此外，尽管所述多个纳米抗体在本发明的多肽中的特定顺序或排列可能对本发明最终的多肽的特性具有一些影响(包括，但不限于针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的或针对所述一个或多个其它抗原的亲和力、特异性或抗体亲抗源性)也包括在本发明的范围内，但是所述顺序或排列通常不是关键的，并且可以由专业技术人员适当选择，任选地基于本发明的公开内容在一些有限的常规实验之后选择。因此，当提及本发明的特异性多价或多特异性多肽时，应该注意到，这包括相关纳米抗体的任何顺序或排列，除非另外明确指明。
最后，本发明的多肽包含两个或更多个纳米抗体以及一个或多个其它氨基酸序列(如本文所提及)也在本发明的范围之内。
对于包含一个或多个VHH结构域的多价和多特异性多肽及其制备，还参考Conrath等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，卷276，10.7346-7350，2001；Muyldermans，分子生物技术综述(Reviews in Molecular Biotechnology)74(2001)，277-302；以及例如，WO 96/34103和WO 99/23221。本发明的一些具体的多特异性和/或多价多肽的一些其它实例可以在本发明所引用的埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的申请中找到。
本发明的多特异性多肽的一个优选而非限制性的实例包括至少一个本发明的纳米抗体和至少一个提供增加的半衰期的纳米抗体。例如，所述纳米抗体可以是针对血清蛋白、且特别是人血清蛋白的纳米抗体，所述血清蛋白诸如人血清白蛋白、甲状腺素结合蛋白、(人)转铁蛋白、凝血因子I、免疫球蛋白如IgG、IgE或IgM、或WO 04/003019中列出的一种血清蛋白。在这些中，可以结合血清白蛋白(且特别是人血清白蛋白)或结合IgG(且特别是人IgG，例如，参见在Muyldermans，同前所述的综述中记述的纳米抗体VH-1)的纳米抗体是特别优选的(尽管，例如，对于在小鼠或灵长类动物中的实验，可以使用分别针对小鼠血清白蛋白(MSA)或来自所述灵长类动物的血清白蛋白的纳米抗体或与之交叉反应的纳米抗体。然而，对于药物应用，通常优选针对人血清白蛋白或人IgG的纳米抗体。)提供增加的半衰期且可以用在本发明的多肽中的纳米抗体包括针对血清白蛋白的纳米抗体，其记述在埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的WO 04/041865，WO 06/122787和其他专利申请中，如上文所述的那些。
例如，提供增加的半衰期以用于本发明的所述一些优选的纳米抗体包括可以与(人)血清白蛋白上不参与血清白蛋白与FcRn结合的氨基酸残基结合的纳米抗体(例如，参见WO 06/0122787)；能够与血清白蛋白上不形成血清白蛋白结构域III的一部分的氨基酸残基结合的纳米抗体(例如，参见WO 06/0122787)；具有或可以提供增加的半衰期的纳米抗体(例如，参见本文提及的埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的美国临时申请60/843,349；还参见PCT/EP2007/059475)；针对与来自至少一个哺乳动物物种、且特别是至少一个灵长类物种(诸如但不限于，来自猕猴属(Macaca)的猴子(诸如，并且特别地，食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))和/或恒河猴(恒河猴(Macaca mulatta)))和狒狒(豚尾狒狒(Papio ursinus))，例如，参见埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的美国临时申请60/843,349；还参见PCT/EP2007/059475)的血清白蛋白交叉反应的针对人血清白蛋白的纳米抗体；可以以不依赖pH的方式结合血清白蛋白的纳米抗体(例如，参见本文提及的埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的美国临时申请60/850,774；还参见WO 08/043821)和/或是条件粘合剂的纳米抗体(例如，参见 埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的美国临时申请60/850,775；还参见PCT/EP2007/060850)。
一些特别优选的提供增加的半衰期且可以用于本发明的多肽中的纳米抗体包括WO 06/122787中公开的纳米抗体ALB-1至ALB-10(参见表II和III)，其中ALB-8(WO 06/122787中的SEQ ID NO：62)是特别优选的。
根据本发明的一个具体的但非限制性的方面，除了一个或多个本发明的纳米抗体之外，本发明的多肽还包含至少一个针对人血清白蛋白的纳米抗体。
一般地，包含一个或多个本发明的纳米抗体的具有增加的半衰期的任何本发明的多肽，和具有增加的半衰期的本发明的纳米抗体的任何衍生物或所述多肽的任何衍生物，优选地具有是相对应的本发明的纳米抗体本身半衰期的至少1.5倍、优选至少2倍、如至少5倍、例如至少10倍或多于20倍的半衰期。例如，与相对应的本发明的纳米抗体本身相比较，所述具有增加的半衰期的衍生物或多肽可以具有增加超过1小时、优选超过2小时、更优选超过6小时、如超过12小时、或甚至超过24、48或72小时的半衰期。
在本发明的一个优选的但非限制性的方面中，所述衍生物或多肽可以在人中表现出至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期。例如，所述衍生物或多肽可以具有至少5天(如约5-10天)、优选至少9天(如约9-14天)、更优选至少约10天(如约10-15天)、或至少约11天(如约11-16天)、更优选至少约12天(如约12-18天或更多)、或大于14天(如约14-19天)的半衰期。
根据本发明的一个方面，所述多肽能够与可以增加所述多肽的体内半衰期的一个或多个分子结合。
本发明的多肽在体内是稳定的，并且它们的半衰期通过与抗降解和/或清除或螯合的分子结合来增加。典型地，所述分子是本身具有长久的体内半衰期的天然存在的蛋白。
本发明的多特异性多肽的另一个优选而非限制性的实例包括至少一个本发明的纳米抗体和至少一个这样的纳米抗体，即，所述纳米抗体是本发明的多肽所针对的，和/或允许本发明的多肽透过或进入特异性的器官、组织、细胞、或者细胞的部分或区室，和/或允许所述纳米抗体透过或穿过生物屏障诸如细胞膜、细胞层诸如上皮细胞层、肿瘤包括实体瘤、或血脑屏障。所述的纳米抗体的实例包括针对所需要的器官、组织或细胞的特异性的细胞表面蛋白、标记或表位(例如，与肿瘤细胞相关的细胞表面标记)的纳米抗体，和在WO 02/057445和WO 06/040153中描述的单结构域靶向脑的抗体片段，其中FC44(WO 06/040153中的SEQ ID NO：189)和FC5(WO 06/040154中的SEQ ID NO：190)是优选的实例。
在本发明的多肽中，所述一个或多个纳米抗体和所述一个或多个多肽可以直接彼此连接(例如在WO 99/23221中所述)和/或可以通过一个或多个适宜的间隔体或接头或其任意组合而彼此连接。
用于多价和多特异性多肽的适宜的间隔体或接头应该是专业技术人员所清楚的，并且通常可以是本领域用来连接氨基酸序列的任何接头或间隔体。优选地，所述接头或间隔体适合用于构建意欲药用的蛋白或多肽。
一些特别优选的间隔体包括本领域中用于连接抗体片段或抗体结构域的间隔体和接头。这些包括上文所引用的公知背景技术中提及的接头，以及例如在本领域中用于构建双抗体或ScFv片段的接头(在这一方面，然而，应该注意，尽管在双抗体和在ScFv片段中，所用的接头序列应该具有某种长度、某种程度的柔性以及允许相关的VH和VL结构域靠近在一起形成完整的抗原-结合位点的其它特性，但是，由于每一纳米抗体本身形成完整的抗原-结合位点，所以对于用于本发明的多肽的接头的长度或柔性没有特别的限制)。
例如，接头可以是适当的氨基酸序列，并且特别是1-50、优选1-30、诸如1-10个氨基酸残基的氨基酸序列。所述氨基酸序列的一些优选实例包括gly-ser接头，例如，(glyxsery)z型的，诸如(例如(gly4ser)3或(gly3ser2)3，如在WO 99/42077中所述，和在本文提及的Ablynx的申请中描述的GS30，GS15、GS9和GS7接头(例如，参见WO 06/040153和WO 06/122825)，以及铰链样区域如天然存在的重链抗体的铰链区或类似的序列(如在WO94/04678中所述)。
一些其他特别优选的接头是聚丙氨酸(如AAA)，以及接头GS30(在WO 06/122825中的SEQ ID NO：85)和GS9(在WO 06/122825中的SEQ ID NO：84)。
其它适宜的接头通常包括有机化合物或聚合物，特别是适用于药用蛋白的那些。例如，聚(乙二醇)部分已经用来连接抗体结构域，参见例如WO 04/081026。
下列情形也在本发明范围内，所用的接头的长度、柔性程度和/或其他特性(尽管不是关键的，由于它通常是用在ScFv片段中的接头)可以对本发明最终的多肽的特性具有一些影响，包括但不限于针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体、或针对一种或多种其他抗原的亲和力、特异性或抗体亲抗源性。基于本文的公开内容，专业技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头，任选地在一些有限的常规实验之后。
例如，在包括针对多聚体抗原(诸如多聚体受体或其他蛋白)的纳米抗体的本发明的多价多肽中，所述接头的长度和柔性优选是这样的，以致其允许在所述多肽中存在的每一个本发明的纳米抗体结合在所述多聚体每个亚基上的抗原决定簇。类似地，在包括针对在同一个抗原上的两个或更多个不同抗原决定簇(例如，针对抗原的不同表位和/或针对多聚体受体、通道或蛋白的不同亚基)的纳米抗体的本发明的多特异性多肽中，所述接头的长度和柔性优选是这样的，以致其允许每个纳米抗体与其目的抗原决定簇结合。同样地，基于本文的公开内容，专业技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头，任选地在一些有限的常规实验之后。
下列情形也在本发明范围内：所用接头赋予本发明的多肽一种或多种其它有利特性或官能性，和/或提供用于形成衍生物和/或用于官能团附着的一个或多个位点(例如，如本文关于本发明的纳米抗体的衍生物的描述)。例如，包含一个或多个带电荷氨基酸残基(参见上表A-3)的接头可以提供提高的亲水特性，而形成或包含小的表位或标记的接头可以用于检测、鉴定和/或纯化目的。并且，基于本文的公开内容，专业技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头，任选地在一些有限的常规实验之后。
最后，当两个或更多个接头用于本发明的多肽时，这些接头可以相同或不同。并且，基于本文的公开内容，专业技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头，任选地在一些有限的常规实验之后。
通常，为了使表达和生产容易，本发明的多肽将是线性多肽。然而，本发明在其最广泛意义上不限于此。例如，当本发明的多肽包括三个或多个纳米抗体时，可以利用具有三个或更多个“臂”的接头连接它们，所述每个“臂”与纳米抗体连接，以提供“星形”的构建体。尽管通常较不优选，但是还可以使用环形的构建体。
本发明还包括本发明多肽的衍生物，其可以基本上类似于本发明纳米抗体的衍生物，即，如本文所述。
本发明还包括“基本上由”本发明的多肽“组成的蛋白或多肽”(其中措辞“基本上由……组成”具有基本如上文所示相同的意思)。
根据本发明的一个方面，本发明的多肽基本上以分离的形式存在，如本文所定义。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和核酸可以以本身已知的方式制备，专业技术人员应该从本文的进一步描述中而清楚。例如，本发明的纳米抗体和多肽可以以本身已知用于制备抗体且特别是用于制备抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)的任何方式制备。制备所述氨基酸序列、纳米抗体、多肽和核酸的一些优选但非限制性的方法包括本文所述的方法和技术。
专业技术人员应该清楚，用于制备本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽的一种特别有用的方法通常包括下列步骤：
i)在适宜的宿主细胞或宿主生物体(本文还叫作“本发明的宿主”)中或在另一种适宜的表达系统中，表达编码所述本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的核酸(本文还叫作“本发明的核酸”)，任选地接着进行：
ii)分离和/或纯化这样获得的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。特别地，这样的方法可以包括下列步骤：
i)在某种条件下培养和/或维持本发明的宿主，所述条件是这样的，以致所述本发明的宿主表达和/或生产至少一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽；任选地接着进行：
ii)分离和/或纯化这样获得的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。
本发明的核酸可以是单链或双链DNA或RNA的形式，并且优选地是双链DNA形式。例如，本发明的核苷酸序列可以是基因组DNA、cDNA或合成的DNA(诸如具有特别适用于在要用的宿主细胞或宿主生物体中表达的密码子应用的DNA)。
根据本发明的一个方面，本发明的核酸是基本上分离的形式，如本文所定义。
本发明的核酸还可以是这样的形式，存在于和/或是载体的一部分，诸如例如质粒、黏端质粒或YAC，其也可以是基本上分离的形式。
本发明的核酸可以以本身已知的方法制备或获得，其基于关于本文给出的本发明的多肽的氨基酸序列的信息，和/或可以从适当的天然来源分离。为了提供类似物，例如，编码天然存在的VHH结构域的核苷酸序列可以进行位点定向诱变，以提供编码所述类似物的本发明的核酸。并且，专业技术人员应该清楚，为了制备本发明的核酸，一些核苷酸序列，诸如至少一种编码纳米抗体的核苷酸序列，以及例如编码一种或多种接头的核酸，还可以以适当的方法连接在一起。
用于产生本发明的核酸的技术应该是专业技术人员所清楚的，并且例如可以包括但不限于，自动DNA合成；位点定向诱变；将两个或多个天然存在的和/或合成的序列(或者其两个或更多个部分)组合，引入引起剪截表达产物表达的突变；引入一个或多个限制性位点(例如，以产生可以使用适宜的限制性酶容易地消化和/或连接的盒和/或区)，和/或通过使用一个或多个“错配”引物，使用例如异二聚体细胞因子和/或它们的受体的天然存在形式的序列作为模板的PCR反应的方法引入突变。这些以及其它技术应该是专业技术人员所清楚的，并且参考也参见上文提及的标准手册，诸如Sambrook等和Ausubel等，以及下文的实施例。
本发明的核酸还可以是这样的形式，存在于和/或是遗传构建体的一部分，这对于本领域的技术人员应该是清楚的。这样的遗传构建体通常包括至少一种本发明的核酸，其任选地与本身已知的一个或多个遗传构建体元件连接，诸如例如一个或多个适宜的调节元件(诸如适当的启动子、增强子、终止子、等等)和本文提到的其它遗传构建体元件。包括至少一种本发明的核酸的所述遗传构建体在本文也叫作“本发明的遗传构建体”。
本发明的遗传构建体可以是DNA或RNA，并且优选地是双链DNA。本发明的遗传构建体还可以是适于意欲的宿主细胞或宿主生物体的转化的形式，适于结合到要用的宿主细胞的基因组DNA中的形式，或者适于在要用的宿主生物体中独立复制、维持和/或遗传的形式。例如，本发明的遗传构建体可以是载体形式，诸如例如质粒、黏端质粒、YAC、病毒载体或转座子。特别地，所述载体可以是表达载体，即，可以提供体外和/或体内表达的载体(例如，在适宜的宿主细胞、宿主生物体和/或表达系统中)。
在一个优选的但非限制性的方面中，本发明的遗传构建体包括
i)至少一种本发明的核酸；其可操作性地连接
ii)一个或多个调节元件，诸如启动子和任选地适宜的终止子；
并且任选地还有
iii)本身已知的一个或多个其它遗传构建体元件；
其中术语“调节元件”、“启动子”、“终止子”和“可操作性地连接”具有它们在本领域中的通用意思(如本文进一步所述)；并且其中存在于遗传构建体中的所述“其它元件”，例如，可以是3’-或5’-UTR序列、前导序列、选择标记、表达标记/报道基因、和/或可以促进或增加转化或整合(效率)的元件。用于所述遗传构建体的这些和其它适宜的元件对于专业技术人员应该是清楚的，并且例如可能取决于所用的构建体、要用的宿主细胞或宿主生物体的类型；本发明的目的核苷酸序列在其中表达的方式(例如，通过组成型的、瞬时的或可诱导的表达)；和/或要用的转化技术。例如，本身已知用于抗体和抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)表达和生产的调节序列、启动子和终止子可以以基本上相似的方式使用。
优选地，在本发明的遗传构建体中，所述至少一种本发明的核酸和所述调节元件，以及任选地所述一个或多个其它元件，彼此“可操作性地连接”，这通常意指它们彼此是功能性关系。例如，如果所述启动子能够起始或者另外控制/调节编码序列的转录和/或表达，那么启动子被视为与编码序列“可操作性地连接”(其中所述编码序列应该理解为“受控于”所述启动子)。一般地，当两个核苷酸序列可操作性地连接时，它们应该在相同的方向，并且通常还在同一阅读框中。它们通常还应该基本上邻接，尽管这也可以不是必需的。
优选地，本发明的遗传构建体的调节以及其它元件是这样的，即，它们能够在要用的宿主细胞或宿主生物体内提供它们需要的生物学功能。
例如，在要用的宿主细胞或宿主生物体中，启动子、增强子或终止子应该是“可操作的”，这意味着(例如)所述启动子应该能够起始或者另外控制/调节与其可操作性地连接(如本文所定义)的核苷酸序列——例如，编码序列——的转录和/或表达。
一些特别优选的启动子包括但不限于，本身已知用于在本文提及的宿主细胞中表达的启动子；并且特别是用于在细菌细胞中表达的启动子，诸如本文提及的那些和/或在实施例中所用的那些。
选择标记应该是这样的，即，其允许——即，在适当的选择条件下——已经(成功地)转化了本发明的核苷酸序列的宿主细胞和/或宿主生物体与没有(成功地)转化的宿主细胞/生物体区分开来。所述标记的一些优选的但非限制性的实例是提供针对抗生素(诸如卡那霉素或氨苄青霉素)的抗性的基因，提供温度抗性的基因，或者在培养基中不存在某些因子、化合物和/或(食物)成分时允许所述宿主细胞或宿主生物体维持的基因，所述因子、化合物和/或(食物)成分是未转化的细胞或生物体生存所必需的。
前导序列应该是这样的，以致——在要用的宿主细胞或宿主生物体中——其允许理想的翻译后修饰和/或以致其将转录的mRNA导向细胞的理想部分或细胞器。前导序列还可以允许从所述细胞分泌表达产物。同样地，前导序列可以是在所述宿主细胞或宿主生物体中可操作的任何原-(pro-)、前-(pre-)或前原-(prepro-)序列。对于在细菌细胞中表达，前导序列可以不是必需的。例如，本身已知用于抗体和抗体片段(包括但不限于单结构域抗体和ScFv片段)表达和生产的前导序列可以以基本上相似的方式使用。
表达标记或报道基因应该是这样的，即，——在宿主细胞或宿主生物体中——其允许检测所述遗传构建体(其上存在的基因或核苷酸序列)的表达。表达标记任选地还可以允许表达产物的定位，例如，定位在细胞的特定部分或细胞器中和/或在多细胞生物体的特定细胞、组织、器官或部分中。所述报道基因还可以表达为与本发明的氨基酸序列融合的蛋白融合体。一些优选的但非限制性的实例包括荧光蛋白如GFP。
适宜的启动子、终止子和其它元件的一些优选的但非限制性的实例包括可以用于在本文提及的宿主细胞中表达的那些；并且特别是适用于在细菌细胞中表达的那些，诸如本文提及的那些和/或在下述实施例中所用的那些。关于可以存在于/用于本发明的遗传构建体的启动子、选择标记、前导序列、表达标记和其它元件的一些(其它)非限制性的实例——诸如终止子、转录和/或翻译增强子和/或整合因子——参考上文提及的通用手册，诸如Sambrook等和Ausubel等，以及WO 95/07463，WO 96/23810，WO 95/07463，WO 95/21191，WO 97/11094，WO 97/42320，WO 98/06737，WO 98/21355，US-A-7,207,410，US-A-5,693,492和EP 1 085 089中给出的实例。其它实例对于专业技术人员应该是清楚的。参考也参见上文引用的公知背景技术和本文引用的其它参考文献。
本发明的遗传构建体通常可以通过将本发明的核苷酸序列与上文所述的一个或多个其它元件适当地连接而提供，例如应用上文提及的通用手册诸如Sambrook等和Ausubel等中所述的技术。
通常，本发明的遗传构建体通过将本发明的核苷酸序列插入到本身已知的适当的(表达)载体中而获得。适当的表达载体的一些优选的但非限制性的实例是下述实施例中所用的那些，以及本文提及的那些。
本发明的核酸和/或本发明的遗传构建体可以用于转化宿主细胞或宿主生物体，即，用于表达和/或生产本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。适当的宿主或宿主细胞是专业技术人员所清楚的，并且例如可以是任何适当的真菌的、原核的或真核的细胞或细胞系，或者任何适当的真菌的、原核的或真核的生物体，例如：
-细菌菌株，其包括但不限于革兰氏-阴性菌株，诸如大肠杆菌(Escherichia coli)菌株；变形菌属(Proteus)菌株，例如奇异变形菌(Proteus mirabilis)菌株；假单胞菌属(Pseudomonas)菌株，例如荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株；以及革兰氏-阳性菌株，诸如芽孢杆菌属(Bacillus)菌株，例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株或短芽孢杆菌(Bacillus brevis)菌株；链霉菌属(Streptomyces)菌株，例如浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)菌株；葡萄球菌属(Staphylococcus)菌株，例如肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)菌株；以及乳球菌属(Lactococcus)菌株，例如乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)菌株；
-真菌细胞，其包括但不限于来自下列各项物种的细胞：木霉属(Trichoderma)，例如Trichoderma reesei的物种；脉孢菌属(Neurospora)，例如粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)；粪壳属(Sordaria)，例如大孢粪壳(Sordaria macrospora)；曲霉菌(Aspergillus)，例如黑曲霉(Aspergillus niger)或酱油曲霉(Aspergillus sojae)；或其它丝状真菌；
-酵母细胞，其包括但不限于来自下列各项物种的细胞：酵母属(Saccharomyces)，例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)，例如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)；毕赤酵母属(Pichia)，例如巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)或Pichia methanolica；汉逊酵母属(Hansenula)，例如多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)，例如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)；Arxula，例如Arxula adeninivorans；Yarrowia，例如Yarrowia lipolytica；
-两栖类细胞或细胞系，诸如爪蟾卵母细胞(Xenopus oocytes)；
-来源于昆虫的细胞或细胞系，诸如衍生于鳞翅目(lepidoptera)的细胞/细胞系，包括但不限于贪夜蛾(Spodoptera)SF9和Sf21细胞，或者衍生于果蝇属(Drosophila)的细胞/细胞系，诸如Schneider和Kc细胞；
-植物或植物细胞，例如在烟草(tobacco)植物中；和/或
-哺乳动物细胞或细胞系，例如来源于人的细胞或细胞系、来源于哺乳动物的细胞或细胞系，包括但不限于CHO-细胞、BHK-细胞(例如BHK-21细胞)，以及人细胞或细胞系，诸如HeLa，COS(例如COS-7)和PER.C6细胞；
以及本身已知的用于表达和生产抗体及抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)的所有其它宿主或宿主细胞，这对于专业技术人员应该是清楚的。参考还参见上文引用的公知背景技术，以及例如WO 94/29457；WO 96/34103；WO 99/42077；Frenken等，(1998)，同前所述；Riechmann和Muyldermans，(1999)，同前所述；van der Linden，(2000)，同前所述；Thomassen等，(2002)，同前所述；Joosten等，(2003)，同前所述；Joosten等，(2005)，同前所述；以及本文所引用的其它参考文献。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以被引入多细胞生物体的一个或多个细胞、组织或器官中并且在其中表达，例如用于预防和/或治疗目的(例如，作为基因治疗)。为了这一目的，可以将本发明的核苷酸序列以任何适当的方式引入到细胞或组织中，例如照此(例如使用脂质体)或者在它们插入到适当的基因治疗载体(例如，衍生于反转录病毒诸如腺病毒，或者细小病毒诸如腺伴随病毒)中之后。同样对于专业技术人员应该是清楚的，这样的基因治疗可以在体内进行和/或在患者体内原位进行，其通过给患者或患者的特定细胞或特定组织或器官施用本发明的核酸或者编码其的适当的基因治疗载体而进行；或者适宜的细胞(通常取自要治疗的患者的身体，诸如移植的淋巴细胞、骨髓吸出物或活组织切片)可以用本发明的核苷酸序列在体外进行治疗，然后适当地(重新)引入回到所述患者的身体内。所有这些可以使用专业技术人员公知的基因治疗载体、技术和递送系统进行，例如，在下列各项中所述：Culver，K.W.，″基因治疗(Gene Therapy)″，1994，p.xii，Mary Ann Liebert公司，出版，New York，纽约)；Giordano，自然F医学(Nature F Medicine)2(1996)，534-539；Schaper，循环研究(Circ.Res).79(1996)，911-919；Anderson，科学(Science)256(1992)，808-813；Verma，自然(Nature)389(1994)，239；Isner，柳叶刀(Lancet)348(1996)，370-374；Muhlhauser，循环研究(Circ.Res).77(1995)，1077-1086；Onodera，血液学(Blood)91；(1998)，30-36；Verma，基因治疗(Gene Ther).5(1998)，692-699；Nabel，纽约科学院年刊(Ann.N.Y.Acad.Sci.)：811(1997)，289-292；Verzeletti，人类基因治疗(Hum.Gene Ther.)9(1998)，2243-51；Wang，自然医学(Nature Medicine)2(1996)，714-716；WO 94/29469；WO 97/00957，US 5,580,859；US 5,5895466；或Schaper，现代生物技术观点(Current Opinion in Biotechnology)7(1996)，635-640。例如，在本领域中已描述ScFv片段(Afanasieva等，基因治疗(Gene Ther.)，10，1850-1859(2003))和双抗体(Blanco等，免疫学杂志(J.Immunol)，171，1070-1077(2003))的原位表达。
对于纳米抗体在细胞中的表达，它们还可以作为所谓的“细胞内抗体”表达，例如在WO 94/02610，WO 95/22618和US-A-7004940；WO 03/014960中所述；在Cattaneo，A.和Biocca，S.(1997)细胞内抗体：开发和应用(Intracellular Antibodies：Development and Applications).Landes和Springer-Verlag；以及在Kontermann，方法(Methods)34，(2004)，163-170中所述。
例如，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以在转基因哺乳动物的乳中产生，例如在兔、母牛、山羊或绵羊的乳中(对于将转基因引入哺乳动物的通用技术参见例如US-A-6,741,957，US-A-6,304,489和US-A-6,849,992)，在植物中或植物的部分中产生，所述植物部分包括但不限于它们的叶、花、果实、种子、根或turbers(例如在烟草、玉米、大豆或苜蓿中)中，或者例如在蚕家蚕(Bombix mori)的蛹中。
此外，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以在不含细胞的表达系统中表达和/或生产，并且这样的系统的适当的实例应该是专业技术人员所清楚的。一些优选的但非限制性的实例包括在麦芽胚系统中的表达；在兔网织红细胞裂解物中表达；或者在大肠杆菌(E.coli)Zubay系统中表达。
如上文提及，应用纳米抗体的一个优点在于，基于此的多肽可以通过在适宜的细菌系统中表达而制备，并且适宜的细菌表达系统、载体、宿主细胞、调节元件等对专业技术人员是清楚的，例如参考上文引用的参考文献。然而，应该注意，本发明在其最广泛意义上并不限于在细菌系统中表达。
优选地，在本发明中，应用(体内或体外)表达系统，诸如细菌表达系统，其以适于药用的形式提供本发明的多肽，并且所述表达系统也是专业技术人员所清楚的。专业技术人员还应该清楚，适于药用的本发明的多肽可以使用肽合成技术制备。
对于工业规模的生产，用于纳米抗体或包含纳米抗体的蛋白治疗物的(工业)生产的优选的异源宿主包括大肠杆菌、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、酿酒酵母(S.cerevisiae)的菌株，其适用于大规模表达/生产/发酵，并且特别适用于大规模药物(即，GMP级别)表达/生产/发酵。所述菌株的适当的实例是专业技术人员所清楚的。所述菌株以及生产/表达系统也可从公司诸如Biovitrum(Uppsala，瑞典)获得。
备选地，哺乳动物细胞系，特别是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，可以用于大规模表达/生产/发酵，并且特别用于大规模药物表达/生产/发酵。并且，所述表达/生产系统也可从上文提及的一些公司获得。
具体的表达系统的选择部分取决于特定的翻译后修饰的需要，更具体地是糖基化的需要。生产包含纳米抗体的重组蛋白，对于所述重组蛋白糖基化是理想的或者必需的，将使得应用具有将所表达的蛋白糖基化的能力的哺乳动物表达宿主成为必要。在这一方面，专业技术人员应该清楚，获得的糖基化模式(即，附着的残基的种类、数量和位置)将取决于表达所用的细胞或细胞系。优选地，使用人细胞或细胞系(即，形成基本上具有人糖基化模式的蛋白)，或者使用另一种哺乳动物细胞系，其可以提供基本上和/或功能上与人糖基化作用相同的糖基化模式或者至少模拟人糖基化作用。一般地，原核宿主诸如大肠杆菌不具有将蛋白糖基化的能力，并且应用更低等真核细胞诸如酵母通常导致与人糖基化作用不同的糖基化模式。不过，应该理解，所有前述宿主细胞和表达系统可以用于本发明，这取决于要获得的理想的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。
因此，根据本发明的一个非限制性方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽被糖基化。根据本发明的另一个非限制性方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽未被糖基化。
根据本发明的一个优选的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在细菌细胞中生产，特别是在适于大规模药物生产的细菌细胞，诸如上文提及的菌株的细胞中生产。
根据本发明另一个优选的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在酵母细胞中生产，特别是在适于大规模药物生产的酵母细胞，诸如上文提及的物种的细胞中生产。
根据本发明另一个优选的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在哺乳动物细胞中生产，特别是在人细胞或人细胞系的细胞中，并且更特别是在适于大规模药物生产的人细胞或人细胞系的细胞中，诸如上文提及的细胞系中生产。
当应用在宿主细胞中的表达来生产本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽时，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以在细胞内产生(例如，在细胞溶质中，在周质或在内含体中)，然后从宿主细胞分离，并且任选地进一步纯化；或者可以在细胞外产生(例如，在培养所述宿主细胞的培养基中)，然后从培养基分离，并且任选地进一步纯化。当使用真核宿主细胞时，由于极大地促进进一步的分离以及获得的纳米抗体和蛋白的下游处理，所以通常优选细胞外生产。除了少数种类的蛋白诸如毒素和溶血素之外，细菌细胞诸如上文提及的大肠杆菌的菌株一般不向细胞外分泌蛋白，并且在大肠杆菌内的分泌生产是指蛋白穿过内膜易位到周质空间。周质生产相对于细胞溶质生产提供一些优点。例如，在通过特异的信号肽酶将分泌信号序列裂解之后，所分泌的产物的N-端氨基酸序列可以与天然基因产物相同。此外，在周质中比在细胞质中似乎存在少得多的蛋白酶活性。另外，由于在周质中更少的污染蛋白，所以蛋白纯化更简单。另一个优点是，由于周质提供比细胞质更加氧化性的环境，所以可以形成正确的二硫键。在大肠杆菌中过量表达的蛋白通常在不溶的聚集体，即所谓的内含体中发现。这些内含体可以位于细胞溶质中或在周质中；从这些内含体回收生物活性蛋白需要变性/重折叠步骤。许多重组蛋白，包括治疗性蛋白，是从内含体回收的。备选地，专业技术人员应该清楚，可以使用细菌的重组菌株，其已被遗传修饰，以分泌理想的蛋白，并且特别是本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。
因此，根据本发明的一个非限制性方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽是在细胞内产生并且从宿主细胞分离，并且特别是从细菌细胞或者从细菌细胞中的内含体中分离的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。根据本发明的另一个非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽是在细胞外产生并且从培养宿主细胞的培养基中分离的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。
与这些宿主细胞一起使用的一些优选的但非限制性的启动子包括，
-用于在大肠杆菌中表达：lac启动子(及其衍生物，诸如lacUV5启动子)；阿拉伯糖启动子；噬菌体λ的左向-(PL)和右向(PR)启动子；trp操纵子的启动子；杂合lac/trp启动子(tac和trc)；T7-启动子(更具体地是T7-噬菌体基因10的启动子)以及其它T-噬菌体启动子；Tn10四环素抗性基因的启动子；上述启动子的工程变体，其包括一个或多个拷贝的外来调节操纵基因序列；
-用于在酿酒酵母中表达：组成型：ADH1(醇脱氢酶1)，ENO(烯醇化酶)，CYC1(异-1细胞色素c)，GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)；PGK1(磷酸甘油酸激酶)，PYK1(丙酮酸激酶)；调节型：GAL1，10，7(半乳糖代谢酶)，ADH2(醇脱氢酶2)，PHO5(酸性磷酸酶)，CUP1(铜金属硫蛋白)；异源型：CaMV(花椰菜花叶病毒35S启动子)；
-用于在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达：AOX1启动子(醇氧化酶I)；
-用于在哺乳动物细胞中表达：人巨细胞病毒(异二聚体细胞因子MV)即时早期增强子/启动子；人巨细胞病毒(异二聚体细胞因子MV)即时早期启动子变体，其包含两个四环素操纵基因序列，以致所述启动子可以受Tet抑制剂调节；单纯疱疹病毒胸苷激酶(TK)启动子；劳斯肉瘤病毒长末端重复(RSV LTR)增强子/启动子；来自于人、黑猩猩、小鼠或大鼠的延伸因子1α(hEF-1α)启动子；SV40早期启动子；HIV-1长末端重复启动子；β-肌动蛋白启动子；
与这些宿主细胞一起使用的一些优选的但非限制性的载体包括：
-用于在哺乳动物细胞中表达的载体：pMAMneo(Clontech)，pcDNA3(Invitrogen)，pMClneo(Stratagene)，pSG5(Stratagene)，EBO-pSV2-neo(ATCC 37593)，pBPV-1(8-2)(ATCC 37110)，pdBPV-MMTneo(342-12)(ATCC 37224)，pRSVgpt(ATCC37199)，pRSVneo(ATCC37198)，pSV2-dhfr(ATCC 37146)，pUCTag(ATCC 37460)和1ZD35(ATCC 37565)，以及基于病毒的表达系统，诸如基于腺病毒的那些；
-用于在细菌细胞中表达的载体：pET载体(Novagen)和pQE载体(Qiagen)；
-用于在酵母或其它真菌细胞中表达的载体：pYES2(Invitrogen)和毕赤表达载体(Invitrogen)；
-用于在昆虫细胞中表达的载体：pBlueBacII(Invitrogen)和其它杆状病毒载体；
-用于在植物或植物细胞中表达的载体：例如基于花椰菜花叶病毒或烟草花叶病毒的载体，适宜的农杆菌(Agrobacterium)菌株，或基于Ti-质粒的载体。
与这些宿主细胞一起使用的一些优选的但非限制性的分泌序列包括：
-用于细菌细胞诸如大肠杆菌：PelB，Bla，OmpA，OmpC，OmpF，OmpT，StII，PhoA，PhoE，MalE，Lpp，LamB等；TAT信号肽，溶血素C-端分泌信号；
-用于酵母：α-交配因子前原-序列(α-mating factor prepro-sequence)，磷酸酶(pho1)，转化酶(Suc)，等；
-用于哺乳动物细胞：在靶蛋白是真核起源的情形中固有的信号(indigenous signal)；鼠Igκ-链V-J2-C信号肽；等。
用于转化本发明的宿主或宿主细胞的适宜的技术对专业技术人员是清楚的，并且可以取决于要用的宿主细胞/宿主生物体和要用的遗传构建体。参考也参见上文提及的手册和专利申请。
转化后，可以进行检测并且选择已经成功转化了本发明的核苷酸序列/遗传构建体的那些宿主细胞或宿主生物体的步骤。例如，这可以是基于存在于本发明的遗传构建体中的选择标记的选择步骤，或者是包括检测本发明的氨基酸序列的步骤，例如，使用特异的抗体进行。
转化的宿主细胞(其可以是稳定的细胞系的形式)或宿主生物体(其可以是稳定的突变系或株系的形式)形成本发明的另一方面。
优选地，这些宿主细胞或宿主生物体是这样的，以致它们表达或者(至少)能够表达(例如，在适宜的条件下)本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽(并且在宿主生物体的情形中：在它的至少一种细胞、部分、组织或器官中)。本发明还包括本发明的宿主细胞或宿主生物体的其它世代、后代和/或子代，例如，其可以通过细胞分裂或者通过有性或无性生殖获得。
为了生产/获得本发明的氨基酸序列的表达，所述转化的宿主细胞或转化的宿主生物体通常可以在本发明(理想的)氨基酸序列、纳米抗体或多肽得到表达/生产的条件下保存、维持和/或培养。适宜的条件对专业技术人员是清楚的，并且通常取决于所用的宿主细胞/宿主生物体，以及取决于控制本发明的(相关)核苷酸序列表达的调节元件。此外，参考参见在上文关于本发明的遗传构建体段落中提及的手册和专利申请。
一般地，适宜的条件可以包括使用适宜的培养基，存在适宜的食物来源和/或适宜的营养素，使用适当的温度，并且任选地存在适当的诱导因子或化合物(例如，在本发明的核苷酸序列在可诱导启动子的控制下的情形中)；所有这些可以由专业技术人员选择。此外，在这样的条件下，本发明的氨基酸序列可以以组成型方式、以瞬时方式、或者只在适当地诱导时表达。
专业技术人员还应该清楚，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽可以(首先)以不成熟的形式(如上文提及)产生，其然后可以进行翻译后修饰，这取决于所用的宿主细胞/宿主生物体。并且，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽可以被糖基化，这也取决于所用的宿主细胞/宿主生物体。
然后，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽可以从宿主细胞/宿主生物体和/或从培养所述宿主细胞或宿主生物体的培养基中分离，这使用本身已知的蛋白分离和/或纯化技术，诸如(制备级)层析和/或电泳技术、差别沉淀技术、亲和技术(例如，使用与本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽融合的特异性的、可裂解的氨基酸序列)和/或制备级免疫学技术(即，使用针对要被分离的氨基酸序列的抗体)进行。
通常，对于药物应用，本发明的多肽可以配制成药物制剂或组合物，其包括至少一种本发明的多肽和至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂和/或佐剂，并且任选地一种或多种其它药物活性多肽和/或化合物。通过非限制性实例的方式，这样的制剂可以是适于下列各项的形式：口服给药，肠胃外给药(诸如通过静脉内、肌内或皮下注射或静脉内输注)，局部给药(例如，作为霜剂用于预防和/或治疗浅表炎症，诸如银屑病)，通过吸入、皮肤贴片、植入物、栓剂给药，等等。所述适宜的给药形式——其可以是固体、半固体或液体，取决于给药的方式——以及制备其所用的方法和载体，对专业技术人员是清楚的，并且在本文中进一步描述。
因此，在另一个方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含至少一种本发明的氨基酸，至少一种本发明的纳米抗体或至少一种本发明的多肽，以及至少一种适当的载体、稀释剂或赋形剂(即，适于药用)，以及任选地一种或多种其它活性物质。
通常，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以以本身已知的任何适当的方法配制和施用，例如，关于其的参考文献参见上文引用的公知背景技术(并且特别参见WO 04/041862，WO 04/041863，WO 04/041865和WO 04/041867)，以及参见标准手册，诸如雷明顿药物科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，第18版，Mack出版公司，美国(1990)或雷明顿，制药科学和实践(Remington，the Science and Practice of Pharmacy)，第21版，Lippincott Williams和Wilkins(2005)。
例如，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以本身已知的用于常规抗体及抗体片段(包括ScFv’s和双抗体)和其它药物活性蛋白的任何方法配制和施用。所述制剂以及制备其的方法对于专业技术人员是清楚的，并且例如，包括适于肠胃外给药(例如静脉内、腹膜内、皮下、肌内、腔内、动脉内或鞘内给药)或适于局部(及透皮的或皮内)给药的制剂。
例如，用于肠胃外给药的制剂可以是适于输注或注射的无菌溶液、混悬液、分散液或乳剂。例如，用于所述制剂的适宜的载体或稀释剂包括但不限于，无菌水以及水性缓冲液和溶液，诸如生理磷酸盐缓冲液、林格溶液、葡萄糖溶液、和Hank′s溶液；水油(water oils)；甘油；乙醇；二醇诸如丙二醇，或者以及矿物油，动物油和植物油例如花生油、豆油，及它们的适宜的混合物。通常优选水性溶液或混悬液。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以使用递送的基因治疗方法进行施用。参见，例如，美国专利号5,399,346，其完全结合作为参考。使用递送的基因治疗方法，转染了编码本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的基因的原代细胞另外可以用组织特异性启动子转染，以靶向特异的器官、组织、移植物、肿瘤或细胞，并且另外可以使用用于亚细胞定位表达的信号和稳定序列进行转染。
因此，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以全身施用，例如，口服地，与药用赋形剂诸如惰性稀释剂或可同化的食用载体组合。它们可以包封在硬壳或软壳的明胶胶囊中，可以压缩成片剂，或者可以直接与患者日常饮食的食物组合。对于口服治疗性施用，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以与一种或多种赋形剂组合，并且以可吸收的片剂、颊含片剂、药片、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆、糯米纸囊剂等形式使用。所述组合物和制剂应该包含至少0.1％的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。当然，所述组合物和制剂的百分数可以变化，并且可以便利地在所给单位剂型的约2-约60重量％之间。本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在这样的治疗有效组合物中的量是这样的，以致获得有效的剂量水平。
所述片剂、药片、丸剂、胶囊等还可以包含下列各项：粘合剂，诸如黄蓍胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，诸如磷酸二钙；崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸等；润滑剂，诸如硬脂酸镁；并且可以加入甜味剂，诸如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦，或者调味剂，诸如薄荷、冬青油、或樱桃调味剂。当单位剂型是胶囊时，除上述类型的物质之外，它还可以包含液体载体，诸如植物油或聚乙二醇。各种其它物质可以作为涂层存在，或者另外修饰所述固体单位剂型的物理形式。例如，片剂、丸剂、或胶囊可以用胶、蜡、紫胶或糖等包被。糖浆或酏剂可以包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽，作为甜味剂的蔗糖或果糖，作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯类，染料和调味剂诸如樱桃或橙味调味剂。当然，在制备任何单位剂型中所用的任何物质都应该是药物可接受的，并且在所用的量上基本上无毒。另外，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以结合在持续释放的制剂和装置中。
用于口服给药的制备物和制剂还可以被提供以肠衣，所述肠衣允许本发明的构建体抵抗胃环境，并且进入肠内。更一般地，用于口服给药的制备物和制剂可以适当地配置成用于递送到胃肠道的任何理想的部分。另外，适宜的栓剂可以用于递送到胃肠道内。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以通过输注或注射进行静脉内或腹膜内施用。本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽或者它们的盐的溶液可以在水中制备，任选地与无毒表面活性剂混合。分散体还可以在甘油、液体聚乙二醇、三醋精及其混合物中以及在油中制备。在普通的保存和使用条件下，这些制剂包含防腐剂以防止微生物的生长。
适于注射或输注的药物剂型可以包括包含活性成分的无菌的水溶液或分散液或者无菌粉剂，其适合即时制备无菌注射或输注溶液或分散体，任选地包封在脂质体中。在所有情形中，在制备和保存条件下，最终剂型必须是无菌的、流动的和稳定的。液体载体或赋形剂可以是溶剂或液体分散介质，例如，其包括水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯及其适当的混合物。可以保持适当的流动性，例如，通过形成脂质体，在分散剂的情形中通过保持需要的颗粒大小或者通过使用表面活性剂。防止微生物作用可以通过各种抗细菌和抗真菌试剂获得，例如，对羟基苯甲酸酯类、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞(thimerosal)等。在许多情形中，优选地包括等渗剂，例如，糖、缓冲剂或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在所述组合物中使用延迟吸收剂例如单硬脂酸铝和明胶而获得。
无菌注射溶液通过将需要量的本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽结合在适当的溶剂中，当需要时，与上文列举的各种其它成分一起结合，然后进行过滤除菌而制备。在用无菌粉剂制备无菌注射溶液的情形中，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生活性成分加上在先前的无菌过滤溶液中存在的任何其它理想的成分的粉剂。
对于局部给药，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以以纯的形式应用，即，在它们是液体的情形中。然而，通常理想地将它们作为与皮肤病学可接受的载体结合的组合物或制剂施用到皮肤上，所述载体可以是固体或液体。
有用的固体载体包括细碎分裂的固体，诸如滑石、粘土、微晶纤维素、硅石、矾土等。有用的液体载体包括水、羟烷类或二醇类或水-醇/二醇掺合剂，其中本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以以有效水平溶解或分散，任选地在无毒表面活性剂的帮助下。可以添加佐剂诸如香味剂和其它抗微生物剂，以将给定用途的特性最优化。得到的液体组合物可以通过吸收衬垫应用，用于浸渍的绷带及其它敷料，或者使用泵型或气溶胶喷雾器喷到感染区域。
增稠剂诸如合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐及酯、脂肪醇、改性纤维素或改性的矿物质还可以与液体载体一起使用，以形成易涂开的糊剂、凝胶、药膏、皂剂等，用于直接涂覆到使用者的皮肤。
可以用于将本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽递送到皮肤的有用的皮肤病用组合物的实例是本领域已知的；例如，参见Jacquet等(美国专利号4,608,392)，Geria(美国专利号4,992,478)，Smith等(美国专利号4,559,157)和Wortzman(美国专利号4,820,508)。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽的有用剂量可以通过比较它们的体外活性和在动物模型中的体内活性而确定。将在小鼠和其它动物中的有效剂量外推至人的方法是本领域已知的；例如，参见美国专利号4,938,949。
通常，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽在液体组合物诸如洗液中的浓度约0.1-25重量-％，优选地约0.5-10重量-％。在半固体或固体组合物诸如凝胶或粉剂中的浓度约0.1-5重量-％，优选地约0.5-2.5重量-％。
需要用于治疗的本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽的量不但随着所选的特定的氨基酸序列、纳米抗体或多肽而变化，而且随着施用途径、要治疗的病症的性质以及患者的年龄和病症而变化，并且最终取决于随从医生或临床医生的判断力。此外，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽的剂量变化取决于靶细胞、肿瘤、组织、移植物或器官。
理想的剂量可以便利地以单一剂量或作为在适当的时间间隔施用的分剂量而存在，例如，作为每天2、3、4次或更多的亚剂量。所述亚剂量本身可以进一步分割，例如，分割成许多次不连续的宽松间隔的施用；诸如从吸入器多次吸入，或者通过使用多滴到眼睛中。
施用方案可以包括长期的、日常的治疗。“长期”意指至少2周，并且优选地数周、数月或数年的持续时间。在这一剂量范围的必要的修改可以由本领域的普通技术人员仅仅使用本文的教导所给的常规实验而确定。参见雷明顿药物科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)(Martin，E.W.，第4版)，Mack出版公司，Easton，PA。在任何并发症情形中，剂量还可以由个别医生进行调整。
在另一方面中，本发明涉及预防和/或治疗至少一种与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的疾病和功能障碍的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。
在本发明的内容中，术语“预防和/或治疗”不但包括预防和/或治疗疾病，而且通常包括预防所述疾病的发作，减缓或逆转疾病进程，防止或减缓与所述疾病相关的一种或多种症状的发作，减少和/或减轻与所述疾病相关的一种或多种症状，减少所述疾病和/或与之相关的任何症状的严重性和/或持续时间，和/或防止所述疾病的严重性和/或与之相关的任何症状的进一步增加，防止、减少或逆转由所述疾病引起的任何生理损害以及通常对被治疗的患者有益的任何药理作用。
待治疗的受试者可以是任何温血动物，但是特别是哺乳动物，并且更特别是人类。专业技术人员应该清楚，待治疗的受试者特别是患有或者有危险患有本文提及的疾病和功能障碍的人。
本发明还涉及预防和/或治疗至少一种与异二聚体细胞因子和/或它们的受体、与其生物学或药学活性、和/或与其中涉及异二聚体细胞因子和/或它们的受体的生物学途径或信号传导相关的疾病或病症的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。特别地，本发明涉及一种用于预防和/或治疗可以通过调节异二聚体细胞因子和/或它们的受体、其生物学或药学活性、和/或其中涉及异二聚体细胞因子和/或它们的受体的生物学途径或信号传导的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。特别地，所述药用有效量可以是足以调节异二聚体细胞因子和/或它们的受体、其生物学或药学活性、和/或其中涉及异二聚体细胞因子和/或它们的受体的生物学途径或信号传导的量；和/或在循环中提供足以调节异二聚体细胞因子和/或它们的受体、其生物学或药学活性、和/或其中涉及异二聚体细胞因子和/或它们的受体的生物学途径或信号传导的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽的水平的量。
本发明还涉及预防和/或治疗至少一种可以通过给患者施用本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体或本发明的多肽而预防和/或治疗的疾病或病症的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。
更特别地，本发明涉及预防和/或治疗选自由本文列出的疾病和病症组成的组的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。
在另一个方面中，本发明涉及免疫治疗的方法，并且特别涉及被动免疫治疗的方法，所述方法包括给患有或者有危险患有本文提及的疾病和病症的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。
在上述方法中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽和/或包含其的组合物可以以任何适当的方式施用，这取决于要用的特定的药物制剂或组合物。因此，例如，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/多肽和/或包含其的组合物可以口服、腹膜内(例如，静脉内、皮下、肌内、或者通过避开胃肠道的任何其它施用途径)、鼻内、透皮地、局部施用，通过栓剂、通过吸入方式施用，这也取决于要用的特定药物制剂或组合物。临床医生能够选择适当的施用途径和用于所述施用的适当的药物制剂或组合物，这取决于要预防或治疗的疾病或病症以及临床医生公知的其它因素。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽和/或包含其的组合物按照治疗方案进行施用，所述治疗方案适于预防和/或治疗要被预防或治疗的疾病或病症。临床医生通常能够确定适宜的治疗方案，取决于下列因素，诸如要被预防或治疗的疾病或病症，要被治疗的疾病的严重性和/或其症状的严重性，要用的本发明的特定的氨基酸序列、纳米抗体或多肽，要用的特定的施用途径和药物制剂或组合物，患者的年龄、性别、体重、饮食、综合病况，以及临床医生公知的类似因素。
一般地，所述治疗方案包括以一种或多种药物有效量或剂量施用一种或多种本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽，或者包含其的一种或多种组合物。施用的具体量或剂量由临床医生确定，同样基于上文引用的因素。
通常，对于预防和/或治疗本文提及的疾病和病症，并且取决于要治疗的具体疾病或病症，要用的特定的本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽的功效，具体的施用途径和使用的特定的药物制剂或组合物，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽一般以每天每kg体重1克-0.01微克的量施用，优选地每天每kg体重0.1克-0.1微克，诸如每天每kg体重约1，10，100或1000微克，作为单一的每日剂量连续施用(例如，通过输注)或者在一天内作为多次分剂量施用。临床医生通常能够确定适宜的日常剂量，这取决于本文提及的因素。还应该清楚，在具体的情形中，临床医生可以选择偏离这些量，例如，基于上文引用的因素以及他的专业判断。一般地，关于施用量的一些指导可从通过基本上相同的途径通常施用的相当的针对相同施用靶标的常规抗体或抗体片段的量而获得，但是要考虑亲和性/抗体亲抗源性、功效、生物分布、半衰期以及专业技术人员公知的类似因素的不同。
通常，在上述方法中，将使用单一的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。然而，使用组合的两种或更多种本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽也在本发明范围之内。
本发明的纳米抗体、氨基酸序列和多肽还可以与一种或多种其它药物活性化合物或成分(principles)组合应用，即，作为组合治疗方案，其可以或者可以不引起增效效应。并且，基于上文所引用的因素及其专业判断，临床医生能够选择所述的其它化合物或成分，以及适宜的组合治疗方案。
特别地，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以与其它药物活性化合物或成分组合应用，所述其它药物活性化合物或成分是或者能够用于预防和/或治疗本文所引用的疾病和病症，结果可以或不可以获得增效效应。所述化合物和成分的实例，以及施用其的途径、方法和药物制剂或组合物是临床医生所清楚的。
当两种或更多种物质或成分用作组合治疗方案的一部分时，它们可以通过相同的施用途径或者通过不同的施用途径在基本上相同的时间或在不同时间(例如，基本上同时地、连续地、或者按照交替方案)施用。当所述物质或成分通过相同的施用途径同时施用时，它们可以作为不同的药物制剂或组合物或者作为组合的药物制剂或组合物的一部分进行施用，这是专业技术人员所清楚的。
此外，当两种或更多种活性物质或成分作为组合治疗方案的一部分使用时，每一物质或成分可以以相同的量施用，并且按照与当所述化合物或成分单独使用时相同的方案施用，并且所述组合应用可以或可以不引起增效效应。然而，当所述两种或更多种活性物质或成分的组合应用引起增效效应时，还可以可能地减少要施用的一种、多种或全部物质或成分的量，同时仍旧获得理想的治疗作用。例如，这可以用于避免、限制或减少当以它们的常规用量使用时与一种或多种所述物质或成分的应用相关的任何不需要的副作用，同时仍旧获得理想的药物或治疗效果。
根据本发明所用的治疗方案的效果可以以本身已知的用于所涉及的疾病或病症的任何方式进行确定和/或遵循，这是临床医生所清楚的。在适当的并且基于病例/病例基础的情形中，临床医生还应该能够改变或改进特定的治疗方案，以便获得理想的治疗效果，以避免、限制或减少不需要的副作用，和/或实现一方面获得理想的治疗效果与另一方面避免、限制或减少不理想的副作用之间的适当的平衡。
通常，应该遵循所述治疗方案，直到获得理想的治疗效果和/或只要维持所述理想的治疗效果。并且，这可以由临床医生确定。
在另一方面中，本发明涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在制备用于预防和/或治疗至少一种与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的疾病或病症的药物组合物中的应用；和/或用于一种或多种本文所提及的治疗方法中的应用。
待治疗的受试者可以是任何温血动物，但是特别是哺乳动物，并且更特别是人类。专业技术人员应该清楚，待治疗的受试者特别是患有或者有危险患有本文提及的疾病和病症的人。
本发明还涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在制备用于预防和/或治疗至少一种可以通过给患者施用本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽而得到预防和/或治疗的疾病或病症的药物组合物中的应用。
更特别地，本发明涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在制备用于预防和/或治疗与异二聚体细胞因子和它们的受体相关的疾病和病症、且特别是用于预防和治疗本发明列出的一种或多种疾病和病症的药物组合物的应用。
同样地，在这样的药物组合物中，所述一种或多种本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽还可以适当地与一种或多种其它活性成分如本发明提及的那些组合。
最后，尽管更优选本发明的纳米抗体(如本文所定义)和本发明的多肽的应用，但是基于本发明内容应该清楚，专业技术人员还应该能够以类似的方式设计和/或产生针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的其它氨基酸序列、且特别是(单)结构域抗体，以及包括所述(单)结构域抗体的多肽。
例如，专业技术人员应该清楚，可以可能地将上文提及的用于本发明的纳米抗体的一个或多个CDR’s“移植”到所述(单)结构域抗体或其它蛋白支架上，所述支架包括但不限于人支架或非-免疫球蛋白支架。用于这种CDR移植的适宜的支架和技术是专业技术人员所清楚的，并且是本领域公知的，参见，例如US-A-7,180,370，WO 01/27160，EP 0 605 522，EP 0 460 167，US-A-7,054,297，Nicaise等，蛋白质科学(Protein Science)(2004)，13：1882-1891；Ewert等，方法(Methods)，2004年10月；34(2)：184-199；Kettleborough等，蛋白质工程(Protein Eng.)1991年10月；4(7)：773-783；O’Brien和Jones，分子生物学方法(Methods Mol.Biol.)2003：207：81-100；和Skerra，分子识别杂志(J.Mol.Recognit.)2000：13：167-187,和Saerens等，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)2005年9月23日；352(3)：597-607，以及本文引用的其它参考文献。例如，可以以相似的方式应用本身已知的关于将小鼠或大鼠的CDR’s移植到人构架和支架上的技术，以提供包括一个或多个本发明的纳米抗体的CDR’s和一个或多个人构架区或序列的嵌合蛋白。
还应该注意，当本发明的纳米抗体包含除上文提及的优选的CDR序列之外的一个或多个其它CDR序列时，这些CDR序列可以以本身已知的任何方法获得，例如，从纳米抗体(优选)、来自常规抗体(并且特别来自人抗体)的VH结构域、重链抗体、常规4-链抗体(诸如常规的人4-链抗体)或针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的其它免疫球蛋白序列获得。针对异二聚体细胞因子和/或它们的受体的这种免疫球蛋白序列可以以任何本身已知的方法产生，如专业技术人员所清楚的，即，通过用异二聚体细胞因子和/或它们的受体免疫或通过用异二聚体细胞因子和/或它们的受体筛选免疫球蛋白序列的适宜的文库，或其任何适当的组合进行。任选地，这可以接着进行技术诸如随机或位点定向诱变和/或其它本身已知的用于亲和力成熟的技术。产生这样的免疫球蛋白序列的适宜的技术是专业技术人员所清楚的，并且例如包括Hoogenboom，自然生物技术(Nature Biotechnology)，23，9，1105-1116(2005)综述的筛选技术。产生针对指定的靶标的免疫球蛋白的其它技术包括，例如，Nanoclone技术(例如，在公布的美国专利申请2006-0211088中所述)，所谓的SLAM技术(例如欧洲专利申请0 542 810中所述)，应用表达人免疫球蛋白的转基因小鼠或者公知的杂交瘤技术(参见，例如Larrick等，生物技术(Biotechnology)，卷7，1989，第934页)。所有这些技术可以用来产生针对RANK-L的免疫球蛋白，并且这种免疫球蛋白的CDR’s可以用于本发明的纳米抗体，即，如上文列出的。例如，这样的CDR序列可以被确定、合成和/或分离，并且插入到本发明的纳米抗体的序列中(例如，以便取代相对应的天然CDR)，均使用本身已知的技术，诸如本文所述的那些，或者包含所述CDR’s的本发明的纳米抗体(或编码其的核酸)可以从头合成，也应用本文提及的技术。
基于本文的公开内容，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽、核酸、遗传构建体以及宿主与宿主细胞的其它应用是专业技术人员所清楚的。例如，并且不限于，本发明的氨基酸序列可以连接在适当的载体或固体支持物上，以提供一种可以以本身已知的从包含其的组合物和制备物中纯化异二聚体细胞因子和/或它们的受体的方式使用的介质。包括适当的可检测标记的本发明的氨基酸序列的衍生物也可以用作(定性或定量)确定异二聚体细胞因子和/或它们的受体在组合物或制备物中存在的标记，或作为选择性检测异二聚体细胞因子和/或它们的受体在细胞或组织表面存在的标记(例如，与适当的细胞分选技术结合)。
现在，借助于下列非限制性实施例和附图进一步说明本发明，其中附图显示：
图1：显示如实施例5中所述，(胞质级分中的)纳米抗体对IL12Rβ1链或IL23R链结合的IL23中和活性的竞争结合ELISA的代表性结果。平均结合受体设为1。纳米抗体如实施例3b中所选择。
图2：实施例6中所述的基于细胞的增殖测定的结果。
图3：对p19+ Nbs 121A2，119A3；对p40- Nbs 80D10，80C10，对p40+ Nbs，81E10和121C1的全Biacore分析。
图4：选择的单价Nbs的Biacore解离速率加上交叉反应性和表位“分组”数据。对一组p19+和p19-纳米抗体以及一个p40-Nb测定来自R&D系统或来自eBiosciences的hIL-23的Biacore解离速率，且数据表示在表2中。
图5：测量hIL-23与hIL23R-Fc(方案显示在图5B中)结合以测定双互补位型纳米抗体与单价p19+纳米抗体的效力比较的α-筛选的结果。图5A是结果的图示。还参见图6和图7。
图6：hIL-23-hIL-23R α-筛选中单价和双互补位型纳米抗体的效力。
图7：hIL-23-hIL-23R α-筛选中单价和双互补位型纳米抗体的效力。
图8：用于选择单价和双互补位型纳米抗体(p19+-35GS-p19-；和p19+-35GS-p40-)的脾细胞生物测定(测量mIL-17水平)的结果。
图9：选择的p19-(未中和的)和p19+(中和的)纳米抗体的Biacore数据。
图10：选择的p40-(未中和的)和p40+(中和的)纳米抗体的Biacore数据。
图11：显示一些优选的但非限制性的″p19+序列″(在此情况下，p19+纳米抗体)的构架区和CDR′s的表
图12：显示一些优选的但非限制性的″p19-序列″(在此情况下，p19-纳米抗体)的构架区和CDR′s的表
图13：显示一些优选的但非限制性的″p40-序列″(在此情况下，p40-纳米抗体)的构架区和CDR′s的表(*)
图14：显示一些优选的但非限制性的″p40+序列″(在此情况下，p40+纳米抗体)的构架区和CDR′s的表(*)
图15：显示一些优选的但非限制性的″p35序列″(在此情况下，抗p35纳米抗体)的构架区和CDR′s的表
图16：显示一些优选的但非限制性的″IL-27序列″(在此情况下，抗IL-27纳米抗体)的构架区和CDR′s的表
图17：显示一些优选的但非限制性的″IL-12Rb1序列″(在此情况下，抗IL-12Rb1纳米抗体)的构架区和CDR′s的表
图18：显示一些优选的但非限制性的″IL-12Rb2序列″(在此情况下，抗IL-12Rb2纳米抗体)的构架区和CDR′s的表
图19：显示一些优选的但非限制性的″IL-23R序列″(在此情况下，抗IL-23R纳米抗体)的构架区和CDR′s的表
图20：给出一些优选的但非限制性的″p19+序列″(在此情况下，p19+纳米抗体)的氨基酸序列的表
图21：给出一些优选的但非限制性的″p19-序列″(在此情况下，p19-纳米抗体)的氨基酸序列的表
图22：给出一些优选的但非限制性的″p40-序列″(在此情况下，p40-纳米抗体)的氨基酸序列的表(*)
图23：给出一些优选的但非限制性的″p40+序列″(在此情况下，p40+纳米抗体)的氨基酸序列的表(*)
图24：给出一些优选的但非限制性的″p35序列″(在此情况下，抗p35纳米抗体)的氨基酸序列的表
图25：给出一些″p19+序列″(在此情况下，p19+纳米抗体)的氨基酸序列的表
图26：给出一些优选的但非限制性的″IL-27序列″(在此情况下，抗IL-27纳米抗体)的氨基酸序列的表
图27：给出一些优选的但非限制性的″IL-12Rb1序列″(在此情况下，抗IL-12Rb1纳米抗体)的氨基酸序列的表
图28：给出一些优选的但非限制性的″IL-12Rb2序列″(在此情况下，抗IL-12Rb2纳米抗体)的氨基酸序列的表
图29：给出一些优选的但非限制性的″IL-23R序列″(在此情况下，抗IL-23R纳米抗体)的氨基酸序列的表
图30：给出包括至少一个抗p19序列(即，p19+或p19-序列，或两者)的多价、多特异性和/或双互补位型构建体的一些优选的但非限制性实例的氨基酸序列
图31：给出人源化和/或突变的抗p19序列的一些优选的但非限制性实例的氨基酸序列的表
图32：给出包括至少一个人源化抗p19序列(即，p19+或p19-序列，或两者)的多价、多特异性和/或双互补位型构建体的一些优选的但非限制性实例的氨基酸序列的表
图33：给出多特异性“p19-p40”构建体(即，包括至少一个抗p19序列和至少一个抗p40序列)的一些优选的但非限制性实例的氨基酸序列的表
图34：给出一些优选的但非限制性的多价、多特异性和/或双互补位型p40构建体的氨基酸序列的表
图35：给出一些优选的但非限制性的多价、多特异性和/或双互补位型p35构建体的氨基酸序列的表
图36：给出一些优选的但非限制性的多特异性“p35-p40”构建体(即，包括至少一个抗p35序列和至少一个抗p40序列)的氨基酸序列的表
图37：显示在实施例22中对在使用hIL-23的α-筛选中测量一些抗p19和抗p40序列的效力获得的结果的图
图38：显示在实施例22中对在使用食蟹猴IL-23的α-筛选中测量一些抗p19和抗p40序列的效力而获得的结果的图
图39：显示如实施例24中获得的表位作图的结果的图
图40：显示如实施例24中获得的表位作图的结果的图
图41：显示在实施例25中对在小鼠脾细胞测定中用hIL-23刺激后测量mIL-22合成(其可被单价抗p40纳米抗体阻断)而获得的结果的图
图42：显示实施例25中对在小鼠脾细胞测定中用食蟹猴IL-23刺激后测量mIL-22合成(其可被单价抗p19纳米抗体阻断)而获得的结果的图。
图43：显示如在实施例26中获得的表达Ba/F3亚克隆4D9的h-IL12Rβ1的流式细胞仪分析的结果。通过鼠抗hIL-12Rβ1抗体紧接着PE标记的多克隆抗小鼠Ig抗体进行检测。通过和与FACS缓冲液(PBS+10％FBS)温育紧接着与PE标记的多克隆抗小鼠Ig抗体温育的细胞相比荧光强度的增加来测量细胞上h-IL12Rβ1的存在。荧光强度绘制在X轴上，事件次数绘制在Y轴上。还显示了未染色细胞的FACS谱。
图44：显示在实施例26中获得的关于在与几种浓度的hIL-23温育72小时后在细胞增殖测定中对几种Ba/F3-hIL12Rβ1-hIL23R单细胞克隆的hIL-23应答性的结果(作为使用[甲基-3H]-胸苷掺入[ON脉冲]的读数)的图
图45：显示在实施例34中获得的关于为单价(p19+：119A3，37D5-ALB1；p19-：81A12，81G2)纳米抗体对IL-23与hIL-23R相互作用的抑制作用的结果的图。
图46：显示在实施例34中获得的关于为双互补位型(230049，23IL0041，23IL0038)纳米抗体对IL-23与IL-23R相互作用的抑制作用的结果的图。
图47：显示在实施例35中获得的关于对确定获得最佳mIL-22合成的hIL-23的最佳注射频次的结果的图。在小鼠脾细胞测定中施用1x3微克，2x3微克或x3微克hIL-23(图的第一部分)后测定mIL22。在图的第二部分中，当在首次hIL-23注射前2小时或注射后29小时注射P23IL0036时监测mIL22产生的抑制作用。平均mIL-22合成表示为与组4相比较的％变化率。
图48：显示在实施例35中获得的关于对在小鼠脾细胞测定中经不同给药途径施用23IL0036或IRR007后mIL-22合成的抑制作用的结果的图。平均mIL-22合成表示为与仅接受hIL-23的组比较的％变化率。
图49A-D：显示对实施例36中获得的关于在小鼠脾细胞测定中施用纳米抗体(图49A：23IL0049；图49B：23IL0041；图49C：23IL0038)或阳性对照抗体(图49D：BM01)后对mIL-22合成的抑制作用的结果的图。平均mIL-22合成表示为与仅接受hIL-23的组比较的％变化率。
图50：显示在实施例37中获得的关于在小鼠脾细胞测定中施用23IL0054和23IL0050后对mIL-22合成的抑制作用的结果的图。平均mIL-22合成表示为与仅接受hIL-23的组比较的％变化率。
图51A-E：本发明的人源化氨基酸序列和相应的野生型序列和VH3-23/JH5种系序列的序列比对。野生型纳米抗体和人种系序列之间构架区的氨基酸差异以黑框指示，CDR区以灰色突出显示。人源化序列中的黑框表示与野生型序列相比发生变化的残基。图51A：P23IL119A3和最终的人源化变体与VH3-23/JH5种系序列的比对。图51B：P23IL81A12和最终的人源化变体与VH3-23/JH5种系序列的比对。图51C：P23IL81G2和最终的人源化变体与VH3-23/JH5种系序列的比对。图51D：P23IL37D5和人源化变体与VH3-23/JH5种系序列的比对。图51E：P23IL124C4和人源化变体与VH3-23/JH5种系序列的比对。
图52：显示在实施例40中对格式化的人源化纳米抗体对IL-23与IL-23R相互作用的抑制作用而获得的结果的图。
图53：显示在实施例40中对23IL0064与人血清白蛋白的结合而获得的结果的图。
图54：显示在实施例41中获得关于在施用纳米抗体或阳性对照抗体后对mIL-22合成的抑制作用的结果的图。平均mIL-22合成表示为与仅接受hIL-23的组比较的％变化率。
图55：显示对实施例41中获得的关于在施用纳米抗体或阳性对照抗体后对mIL-22合成的抑制作用的结果的图。平均mIL-22合成表示为与仅接受hIL-23的组比较的％变化率。
图56：显示在实施例47中获得的关于在小鼠脾细胞测定中以两个不同的剂量水平施用BM01，23IL400和23IL403后对mIL-22合成的抑制作用的结果的图。平均mIL-22合成表示为与仅接受hIL-23的组比较的％变化率。
(*)注释：P23ILp40-PMP84G12为p40的部分阻滞剂，因此其在图13和14中，以及图22和23中均被提及。
实验部分：
实施例1：免疫
两只美洲驼根据标准方案采用6次细胞因子混合物(2x40ug+4x20ug，含有等量的人IL12，IL23和IL27)加强免疫进行免疫。在第6次加强免疫后7天后和第6次加强免疫后10天后从这些动物采集血液和淋巴结。所有3种细胞因子均为购自R&D系统的重组蛋白：hIL-12(目录号219-IL/CF)；hIL-23(目录号1290-IL/CF)和hIL-27(目录号2526-IL/CF)。
实施例2：文库构建
根据供应商的使用说明书使用Ficoll-Hypaque从血液样品中制备外周血单核细胞。下一步，从这些细胞中以及淋巴结弓形细胞(bow cell)中提取总RNA，并用作RT-PCR的起始原料以扩增编码纳米抗体的基因片段。这些片段克隆进噬菌粒载体pAX50中。根据标准方法(参见例如本文引用的现有技术和申请人提交的各个申请)制备噬菌体并且保存在4℃以备进一步使用，得到两个噬菌体文库(“A”和“B”)。
实施例3a：选择
为了鉴定识别细胞因子的纳米抗体，来自实施例2的噬菌体文库用于选择免疫的细胞因子和生物素化的细胞因子。(生物素化)蛋白单独地以5ug/ml，0.5ug/ml或0ug/ml(对照)固定在Nunc Maxisorp ELISA测定板上，当生物素化蛋白用于选择时该板预先包被以中性抗生物素蛋白(Neutravidine)(5ug/ml)。如在标准试验方案中，使用胰蛋白酶(1mg/ml)将结合的噬菌体从IL12，IL23或IL27(和生物素化形式)洗脱下来。
对两轮R1选择的结果分析富集因子(相对于对照存在于洗脱液中的噬菌体)。基于这些参数，选择最佳的选择物用于进一步分析。然后将多克隆结果重新克隆进PAX51中，并且挑取单个TG1菌落并生长在96深孔平板(1ml体积)中，并且通过加入IPTG诱导纳米抗体表达。根据标准方法。根据标准方法(参见例如本文引用的现有技术和申请人提交的各个申请)制备胞质提取物(体积：～100μl)。
实施例3b：hIL12或hIL23特异性纳米抗体的选择
为了鉴定特异性识别hIL12或hIL23并且因此分别识别IL12p35或IL23p19的纳米抗体，进行2轮采用相关的反选择的选择。
对于IL23特异性纳米抗体，将2.5ug/ml IL23包被在Nunc Maxisorp ELISA板上。来自文库146和147的噬菌体加入至存在有10ug IL12(100ug/ml)的包被孔上。IL12的存在防止识别非特异性IL23表位(在IL12p40上)的噬菌体结合IL23。为了鉴定IL12特异性纳米抗体，采用2.5ug/ml IL12包被以及10ug IL23(100ug/ml)与噬菌体一起加入来完成相同的步骤。在所有情况下，结合的噬菌体均使用标准的试验方案使用胰蛋白酶(1mg/ml)洗脱(R1)。
在第一轮中洗脱的噬菌体用来使用与第一轮相同的条件进行第二轮，得到R2。
拯救R2选择的结果，并使用标准的多克隆再克隆法克隆进PAX51中。挑取含有PAX51表达的纳米抗体的单个菌落并生长在96深孔平板(1ml体积)中，并加入IPTG诱导以表达纳米抗体。根据标准方法(参见例如本文引用的现有技术和申请人提交的各个申请)制备胞质提取物(体积：～100μl)。
实施例3c：小鼠IL12或小鼠IL23特异性抗体的选择。
为了完成动物研究，需要有识别小鼠细胞因子亚型的纳米抗体。为了鉴定与小鼠IL12或小鼠IL23交叉反应的纳米抗体，一种方式是检测较早鉴定的针对人IL12/IL23的纳米抗体与小鼠IL12或IL23的交叉反应性。以该方式鉴定了几种交叉反应的纳米抗体。
第二种方式是直接从实施例2的文库中选择针对人IL12和IL23的噬菌体。因此，如实施例3a中一样完成选择，不同之处在于包被小鼠IL12(100ul中5ug/ml；目录号419-ML/CF，R&Dsystem)或小鼠IL23(100ul中5ug/ml；目录号1887-MF/CF，R&Dsystem)。另外，在作为反选择的小鼠IL12(当包被IL23时)和人IL23(当包被IL12时)的存在下完成相同的选择。
第三种方式是在如实施例3b中在R1期间洗脱的噬菌体中直接选择噬菌体(则该方式是第1轮针对人IL反选择，第二轮针对小鼠IL)。因此，如实施例3b中一样完成第二轮选择，不同之处在于包被小鼠IL12(100ul中的5ug/ml；目录号419-ML/CF，R&Dsystem)或小鼠IL23(100ul的5ug/ml；目录号1887-MF/CF，R&Dsystem)。并行地，为了鉴定特异性小鼠IL12和小鼠IL23，在用作反选择蛋白的小鼠IL12(当包被IL23时)和人IL23(当包被IL12时)的存在下完成相同的选择。
在所有选择中，使用胰蛋白酶洗脱结合的噬菌体，并在TG1中拯救。挑取单个TG1菌落并生长在96深孔平板(1ml体积)中并通过加入IPTG诱导以表达纳米抗体。根据标准方法(参见例如本文引用的现有技术和申请人提交的各个申请)制备胞质提取物(体积：～100μl)。
实施例4：结合的筛选
为了确定与细胞因子的结合特异性，在ELISA结合测定装置中检测克隆。
简言之，将1μg/ml的细胞因子(IL12，IL23或IL27)直接固定在polysorp微量滴定板上(Nunc)。用PBS中的4％Marvel封闭游离结合位点。下一步，允许在100ul 2％Marvel PBST中的5ul含有不同克隆的纳米抗体的胞质提取物结合固定的抗原。在温育和洗涤后，使用小鼠抗myc二抗来展现纳米抗体结合，其在洗涤步骤后用HRP缀合的山羊抗小鼠抗体检测。基于与不接受纳米抗体的对照(如表B-1中所例举)相比的OD值确定结合特异性。与p40结合的纳米抗体被鉴定为识别IL12和IL23的纳米抗体。
表B-1：ELISA(如实施例3a中所述的选择结果的实例)中阳性的克隆百分比。每个靶位和每个文库总计22或24个克隆。
Figure BPA00001186248903231
实施例5：中和活性的筛选
为了确定纳米抗体的中和效率，在受体结合测定(竞争ELISA)中检测各克隆。细胞因子包被在96孔(Maxisorp，Nunc)中。在如常规洗涤和封闭后，包被的细胞因子与15ul上面制备的胞质级分温育。最后，加入与人Fc融合的特异性受体链(购自R&D系统的重组蛋白)。
洗涤后，使用抗人IgG-HRP抗体检测结合受体的存在。在胞质中存在的纳米抗体中和细胞因子(即，竞争受体结合)的情况下，检测不到结合受体。在所有情况下，检测的蛋白浓度用来得到亚最佳(sub-optimal)应答(表B-2显示了实例，图1显示代表性结果)。对于IL12，使用IL12Rβ1或IL12Rβ2。对于IL23，使用IL12Rβ1或IL23R。
对于IL27，使用IL27R。
表B-2：ELISA中阳性克隆的百分比，和竞争ELISA中竞争IL23R结合的克隆的百分比(来自如实施例3b中所述的选择的结果的实例)。每个文库总计46-47个克隆。
Figure BPA00001186248903232
实施例6：在基于细胞的测定中的中和活性。
基于实施例4的结果和/或基于它们的序列(仅存在于IL12选择而不存在于IL23选择中的纳米抗体家族，例如，表明该家族对IL12特异)，一些纳米抗体被选择检测其在细胞上的中和活性。
那些选择的纳米抗体(在PAX51质粒中编码)使用标准的IPTG诱导在细菌培养物(50ml)中产生，并如供应商所推荐的那样使用TALON珠纯化(使用咪唑从珠上洗脱并在无菌PBS中透析)。
为了检测针对IL12的纳米抗体，使用用PHA 3天+用IL-21天激活的PBMC。然后我们加入IL-12(在一定范围的抗IL-12纳米抗体的存在下)。2天后，用3H-胸苷掺入测量增殖。
使用此方案，使用60pg/孔(＝300pg/ml)rhIL-12获得最大的增殖。因此针对60pg/孔IL-12检测纯化的纳米抗体(浓度从1μg变化至10-6μg//孔)。针对商购抗体(抗p35和抗p40，MAB219和MAB1510分别获自R&D系统；B-T21获自Diaclone)检测抗体LG120C7和120F8。结果显示在图2中。
实施例7：免疫：
两只美洲驼用下列(每种2x40ug+每种4x20ug)的混合物进行免疫：人IL12Rβ1-hFc(目录号839-B1/CF)；人IL12Rβ2-hFc(目录号1959-B2-b1/CF)和人IL23R(目录号1400-IR/CF)。基本上如实施例1中所述进行免疫。
实施例8：文库构建
基本上实施例2中所述进行文库(“C”和“D”)的构建。
实施例9a：针对IL12家族受体的纳米抗体的选择
为了鉴定识别IL12家族细胞因子的受体的纳米抗体，将来自两个文库(“C”和“D”)的噬菌体用于选择免疫的重组蛋白。蛋白单独地以5ug/ml，0.5ug/ml或0ug/ml(对照)固定在Nunc Maxisorp ELISA板上。
为了去除与融合于重组蛋白的Fc融合结构域结合的噬菌体，在选择的时间期间，向所述噬菌体加入总人IgG(获自sigma(西格玛)的250μg/ml)和不相关hFc融合蛋白(获自R&D系统的hRAGE-Fc，以25μg/ml)。
如标准试验方案使用胰蛋白酶(1mg/ml)从包被蛋白洗脱结合的噬菌体。
实施例9b：中和IL12家族受体的纳米抗体的选择
这如实施例9a中所述进行，不同之处在于仅包被0.5ug/ml受体，并且进行竞争洗脱代替胰蛋白酶洗脱。为此，在噬菌体结合和充分洗涤后，各受体链的配体用来洗脱噬菌体。简言之，将5ug IL12(对于IL12Rβ1和IL12Rβ2)或5ug IL23(对于IL12Rβ1或IL23R)加入至仍然与包被的受体结合的噬菌体。振摇2小时后，回收洗脱的噬菌体并在TG1中拯救。
对两轮R1选择的结果分析富集因子(相对于对照存在于洗脱液中的噬菌体)。基于这些参数，选择最佳的选择物用于进一步分析。然后将多克隆结果重新克隆进PAX51中(仅用于胰蛋白酶洗脱)，并且挑取单个TG1菌落并生长在96深孔平板(1ml体积)中，并且通过加入IPTG诱导纳米抗体表达。根据标准方法(参见例如本文引用的现有技术和申请人申请的各个申请)制备胞质提取物(体积：～100μl)。
实施例10：结合的筛选
为了确定与受体链的结合特异性，在ELISA结合测定装置中检测克隆。
将2μg/ml蛋白(IL12Rb1，IL12Rb2和IL23R)或总hIgG(15ug/ml)直接固定在maxisorp微量滴定板上(Nunc)。用PBS中的4％Marvel封闭游离结合位点。下一步，允许在100ul 2％ Marvel PBST中的7.5ul含有不同克隆的纳米抗体的胞质提取物结合固定的抗原。在温育和洗涤后，使用小鼠抗myc二抗来展现纳米抗体结合，其在洗涤步骤后用AP缀合的山羊抗小鼠抗体检测。基于与不接受纳米抗体的对照(如图1中所例举)相比和与hIgG包被孔(与hIgG结合的纳米抗体与Fc结合且不与受体链结合)相比的OD值确定结合特异性。结果显示在表B-3上：
表B-3：在ELISA中阳性和对受体特异的克隆的百分比(如在3d中所述的选择结果的实例)。检测的每个靶位和每个文库总计46个克隆。
Figure BPA00001186248903251
实施例11：中和活性的筛选
为了确定纳米抗体的中和效率，以前面对IL12/IL23和IL27所进行的相同方式在受体结合测定(竞争ELISA)中检测各克隆。简言之，细胞因子包被在96孔(Maxisorp，Nunc)中。在如常规洗涤和封闭后，包被的细胞因子与15ul上面制备的胞质级分温育。最后，加入与人Fc融合的特异性受体链(购自R&D系统的重组蛋白)。洗涤后，使用抗人IgG-HRP抗体检测结合受体的存在。在胞质中存在的纳米抗体中和细胞因子(即，竞争受体结合)的情况下，检测不到结合受体。在所有情况下，检测的蛋白浓度用来得到亚最佳(sub-optimal)应答(见表B-4中作为实例给出的数据)。对于IL12，使用IL12Rβ1或IL12Rβ2。对于IL23，使用IL12Rβ1或IL23R。对于IL27，使用IL27R。
表B-4：竞争ELISA中阻断IL23与IL12Rβ1结合的(胞质中)纳米抗体的数目(来自如3d和3e中所述的选择结果的实例)。每个文库总计46-47个克隆。
Figure BPA00001186248903261
实施例12：L-23单价p19+，p19-，和IL-23/IL-12 p40+，和p40-纳米抗体的Biacore分析。
hIL-23(获自R&D系统)或hIL-12(也获自R&D系统)附着于Biacore芯片，并且测定p19+，p40+和p40-纳米抗体的选择物的结合特性。对p19+纳米抗体121A2，119A3，对p40-纳米抗体80D10，80C10以及对p40+纳米抗体81E10和121C1的Biacore分析的结果显示在图3中，该图给出了结果。
Biacore
单价纳米抗体的交叉反应性模式(profile)(见图4)在Biacore实验(mIL-23)和在使用食蟹猴(cyno)IL-23(来自转染细胞的上清液)的ELISA中进行研究，其中待测纳米抗体附着至板中，加入食蟹猴IL-23并且使用抗p40mAb(mAB 1510 R&D)展现结合作用。
使用Bbiacore进行表位作图实验，在Bbiacore中单价纳米抗体附着至芯片并且用来俘获hIL-23。随后检测其他单价纳米抗体结合的能力。当纳米抗体仍然与已经附着于Biacore芯片上固定的纳米抗体的hIL-23相结合时，该抗体被认为结合独立的表位组。不能结合的纳米抗体被认为属于与固定的纳米抗体相同的表位组(结果也表示在图4中)。
图4显示选择的单价纳米抗体的Biacore解离速率(off-rate)结合交叉反应性和表位“分组”数据。对于一组p19+和p19-纳米抗体以及一个p40-纳米抗体使用来自R&D系统(或来自eBiosciences)的hIL-23测定Biacore解离速率。
实施例13：双特异性/双互补位型IL23纳米抗体构建体的构建、产生和纯化。
双互补位型构建体在pAX55载体中制成，其中在N-端位置处的p19+纳米抗体(121A2或119A3)和C-端位置处的p19-纳米抗体(81G2，81A12，123F1，119G7，124C4或124H5)或p40-纳米抗体(119B2)通过35GS接头序列融合。使用通过35GS接头融合的N-端位置处的p19-纳米抗体(81G2，81A12，123F1，119G7，124C4或124H5)和C-端位置处的p19+纳米抗体121A2制成其他的构建体。类似地，单价纳米抗体也克隆进pAX55中用作对照。
将构建体转化至TG1细胞中，所述TG1细胞用1mM IPTG诱导。使用组氨酸俘获(histidine trap)亲和层析，从胞质提取物中纯化纳米抗体，然后脱盐。当需要额外纯化时，通过在中性pH下的阴离子交换色谱，或通过在50mM辛基葡基吡喃糖苷(octyl-glycosayl pyranoside)的存在下的凝胶过滤进行LPS的去除。
实施例14：阻断IL-23-IL23R结合的α-筛选
进行α-筛选，其中监测hIL-23与hIL23R-Fc结合的阻断(见图5b)以测定与单价p19+纳米抗体相比双互补位型纳米抗体的效力。结果表示在图5A，6和7中。
图5显示测量hIL-23与hIL23R-Fc的结合以测定双互补位型纳米抗体与单价p19+纳米抗体的效力比较的α-筛选的结果(见图5B)。图5A是结果的图示。图6和图7显示hIL-23-hIL-23R α-筛选中单价和双互补位型纳米抗体的效力。
实施例15：IL-23纳米抗体对IL-23生物学功能的中和
新鲜分离的小鼠脾细胞用hIL-23(eBiosciences)处理，hIL-23用滴定的hIL-23纳米抗体或对照纳米抗体或抗体预温育。培养3-7天后，取出细胞上清液，并通过ELISA使用IL-17ELISA套装(duo set)(R&D系统)进行测定。图8显示用于单价和双互补位型纳米抗体(p19+-35GS-p19-；和p19+-35GS-p40-)的选择物的脾细胞生物测定(测量mIL-17水平)的结果。参考Aggarwal，Journal of Biological Chemistry(生物化学杂志)，278，3，2003，1910-1914.
如图8中所示，单价p19+纳米抗体抑制hIL-23介导的IL-17产生，且大多数双互补位型纳米抗体显示相当大的效力增强。
实施例16：免疫
两只美洲驼根据标准方案，以每周一次的时间间隔，用6次肌肉内注射重组人IL-23(R&D系统，明尼阿波利斯，MN，US)(前两次注射为40μg/次剂量，随后4次注射为20μg/次剂量)进行免疫。最后一次注射后两周，给予20μg的加强免疫。抗原配制在Stimune(Cedi-Diagnostics B.V.，Lelystad，荷兰)中。在第3周，收集血清以通过ELISA确定针对人IL-23的抗体效价。96孔Maxisorp滴定板(Nunc，威斯巴登，德国)包被以人IL-23。在封闭和加入稀释的血清样品后，通过使用HRP(辣根过氧化物酶)缀合的山羊抗美洲驼免疫球蛋白(Bethyl Laboratories Inc.，蒙哥马利，得克萨斯州，美国)并且随后在底物TMB(3，3’，5，5’-四甲基联苯胺)(Pierce，罗克福德，伊利诺伊州，美国)的存在下进行酶促反应证明抗IL-23抗体的存在。在两只动物中OD450nm均超过1。从这些动物中采集血液和淋巴结，最后一次注射后4天和8天的血液以及加强免疫后13天的淋巴结。
实施例17：文库构建
根据供应商的使用说明书使用Ficoll-Hypaque从血液样品中制备外周血单核细胞。下一步，从这些细胞中以及淋巴结弓形细胞中提取总RNA，并用作RT-PCR的起始原料以扩增编码纳米抗体的基因片段。这些片段克隆进噬菌粒载体pAX50中。根据标准方法(参见例如本文引用的现有技术和申请人提交的各个申请)制备噬菌体并且保存在4℃以备进一步使用，得到两个噬菌体文库(“E”和“F”)。
实施例18：抗IL-23p19和p40纳米抗体的新一轮选择
为了鉴定特异性识别人IL-23的p19亚单位的纳米抗体，将5或0.5nM人IL-23(R&D系统，明尼阿波利斯，MN，US)包被在Nunc Maxisorp ELISA平板上。来自文库E和F的噬菌体通过与包被5μg/ml的人IL-12的孔结合预先消耗3次(以去除结合p40的噬菌体)，并且在加入至IL-23包被孔之前进一步与1μM hIL-12在溶液中预温育。如标准试验方案中所述，噬菌体用500nM 双互补位型抗p19纳米抗体或500nM重组IL-23R(R&D系统，明尼阿波利斯，MN，US)特异性地洗脱，或用胰蛋白酶洗脱。对这些1轮选择的结果分析富集因子(相对于对照存在于洗脱液中的噬菌体数目)。基于这些参数，选择最佳结果用于使用与第1轮相同的条件进行第2轮选择。这些第2轮选择的富集结果在ELISA中筛选相对于hIL-12与hIL-23的结合。观察到大多数与hIL-23的特异结合。挑取单个TG1菌落并生长在96深孔平板(1ml体积)中，并且通过加入IPTG诱导纳米抗体表达。根据标准方法(参见例如本文引用的现有技术和申请人提交的各个申请)制备胞质提取物(体积：～100μl)。
如上所述获得结合p40的纳米抗体，然而使用胰蛋白酶(1mg/ml)洗脱结合的噬菌体。挑取来自第一轮结果的单个TG1菌落，如上所述生长并诱导。这些克隆在ELISA中筛选相对于hIL-12与hIL-23的结合。选择与hIL-23和hIL-12两者均结合的克隆作为p40结合剂用于进一步表征。
实施例19：筛选结合p19和p40的纳米抗体和鉴定阻断受体相互作用的p19和p40纳米抗体
为了测定与IL-23的p19或p40亚单位的结合特异性，在ELISA结合测定装置中检测胞质提取物。在此筛选中还包括对来自美洲驼的146和147文库选择获得的胞质提取物。
1μg/ml hIL-12或hIL-23直接固定在polysorp微量滴定板(Nunc)上。使用PBS中的1％酪蛋白封闭游离结合位点。下一步，将含有不同克隆的纳米抗体的胞质提取物1/50稀释在100μl PBS+0.1％酪蛋白＝0.05％吐温中，并且使其与固定的抗原结合。在温育和洗涤后，使用生物素化抗His抗体来展现纳米抗体结合，其在洗涤步骤后，用HRP缀合的extravidin和TMB底物来检测。基于与不接受纳米抗体的对照相比的OD值确定结合特异性。与p40结合的纳米抗体被鉴定为识别hIL12和hIL23的纳米抗体，结合p19的纳米抗体被鉴定为仅识别hIL-23的纳米抗体。
与食蟹猴IL-23的交叉反应性在ELISA中进行检测，其中食蟹猴IL-23经固定的抗IL-23抗体(AF1716 R&D系统)结合在板上。提取物中存在的纳米抗体的结合使用HRP-缀合的抗myc抗体和TMB底物来展现。
为了测定表达的纳米抗体的中和效率，胞质提取物在hIL-23或hIL-12α-筛选测定中进行筛选。该测定依赖于可与生物分子缀合的供体珠和接纳体珠(Acceptor bead)的使用。当分子间的生物相互作用使珠子接近时，在经680nm激光激发后由供体珠中的光敏剂产生的激发的单线态氧分子在接纳体珠上扩散，与接纳体珠中的化学发光物反应，后者进一步活化荧光基团，使其随后在520-620nm处发光。如果纳米抗体抑制hIL-23与hIL-23R的结合，或hIL-12与hIL12Rβ1的结合，荧光输出量将减小，且存在的纳米抗体的量将与荧光量负相关。
hIL-12(R&D系统)和hIL-23(eBioscience)使用磺基-NHS-LC-生物素(Pierce)进行生物素化。人IL23R-Fc嵌合体和hIL12Rβ1-Fc嵌合体(R&D系统)根据供应商(Perkin Elmer，沃尔瑟姆，MA，US)的使用说明书偶联至接纳体珠。为了评价抗p19纳米抗体的中和能力，胞质提取物的系列稀释液与生物素化hIL-23预温育。向此混合物中，加入IL-23R-Fc偶联的接纳体珠和链霉亲和素供体珠并在室温下再温育1小时。通过在EnVision多标记平板读数仪(EnVision Multilabel Plate Reader)(Perkin Elmer)上使用680nm的激发波长和520nm的发射波长读板测量荧光。荧光信号的减小表明生物素化hIL-23与IL-23受体的结合被胞质提取物中表达的纳米抗体阻断，当中和时纳米抗体标注为19+，当不中和时标注为p19-。抗p40纳米抗体的中和能力以相同的方式，但使用生物素化hIL-12和hIL12Rβ1-Fc偶联的接纳体珠，评价为p40+中和纳米抗体和p40-非中和纳米抗体。
实施例20：含有单价抗p19和抗p40单价纳米抗体的胞质提取物的Biacore解离速率筛选
人IL-23(eBioscience)经胺偶联共价结合于CM5传感器芯片表面，使用EDC/NHS用于活化，HCl用于灭活。含有p19+，p19-，p40+或p40-纳米抗体的胞质提取物以45μl/分钟的流速注射4分钟，以允许结合芯片结合的抗原。下一步，以相同的流速向所述芯片上喷入不含胞质提取物的结合缓冲液，以使结合的纳米抗体自发解离。从不同的胞质提取物获得的传感图(sensorgrams)，计算koff值(kd)值(图9和10)。当对照hIL-12(R&D系统)固定在Biacore芯片上时，p19纳米抗体不与该芯片结合，而p40纳米抗体结合并显示与对hIL-23类似的解离速率。
基于此Bbiacore分析，选择具有最佳解离速率的p19和p40纳米抗体，并测序。在测序分析后，这提供了属于4个家族的6个独特的p19+纳米抗体，属于2个家族的2个独特的p19-纳米抗体，属于5个家族的6个独特的p40+序列以及属于6个家族的6个独特的p40-序列。与实施例1-6中或的的序列一起，这制备了总共7个家族的p19+纳米抗体，15个家族的p19-纳米抗体，14个家族的p40+纳米抗体和11个家族的p40-纳米抗体。这些纳米抗体的氨基酸序列分别列举在图20-23中。
通过测定在固定的mIL-23上的解离速率，还筛选胞质提取物对鼠IL-23的交叉反应性。两个p19-家族对mIL-23交叉反应，没有找到p19+，p40+或p40-小鼠交叉反应性纳米抗体。
实施例21：抗IL-23纳米抗体表达和纯化
表达、纯化和进一步表征6个来自实施例20的p19+纳米抗体，来自实施例20的1个p19-纳米抗体和12个来自实施例20的p40+纳米抗体和8个来自实施例20的p40-纳米抗体。在250mL的培养体积中在大肠杆菌TG1细胞中表达为c-myc，His6-标记蛋白。通过加入1mM IPTG并在37℃下进一步温育3小时而诱导表达。在离心细胞培养物后，通过冻融沉淀物而制备胞质提取物并重悬在dPBS中。将这些提取物用作使用Histrap FF粗柱(GEHealthcare)的固定金属亲和层析(IMAC)的起始原料。将纳米抗体用250mM咪唑从柱上洗脱下来，并且随后针对dPBS脱盐。对于下述的脾细胞测定，应该从纳米抗体去除内毒素，并且此通过在50mM辛基β-D-吡喃葡萄糖苷(OGP，Sigma)的存在下的凝胶过滤或通过在dPBS中阴离子交换(Mono QHR5/50，GE healthcare)而获得，其中纳米抗体在流动相中回收，而LPS留在柱上。使用LAL测定确定LPS水平。
实施例22：在α-筛选中测定的中和抗p19和抗p40纳米抗体的效力
将hIL-12(R&D系统)，hIL-23(eBioscience)和食蟹猴IL-23R用磺基-NHS-LC-生物素(Pierce)生物素化。将人IL-23R-Fc嵌合体和hIL 12Rβ1-Fc嵌合体(R&D系统，明尼阿波利斯，MN，US)根据供应商(Perkin Elmer，沃尔瑟姆，MA，US)的使用说明书偶联至接纳体珠。
为了评价p19+纳米抗体的效力，将从250nM起始直至1pM的抗p19纳米抗体的系列稀释液与500pM生物素化hIL-23或食蟹猴IL-23在室温(RT)下预温育15分钟。向此混合物中，加入IL-23R接纳体珠和链霉亲和素供体珠并在室温下再温育1小时。所有纳米抗体与生物素化IL-23的预温育减少520nm处的荧光强度，证明纳米抗体可有效地以剂量依赖方式抑制hIL-23与IL-23R的结合。结果显示在图37和图38中，图37是显示在此实施例22中对在使用hIL-23的α-筛选中测量一些抗p19和抗p40纳米抗体的效力而获得的结果的图；图38是显示在此实施例22中对在使用食蟹猴IL-23的α-筛选中测量一些抗p19和抗p40纳米抗体的效力而获得的结果的图。计算的IC50值显示在表B-5中，并且从P23IL36A1的7.3nM变化至P23IL37D5的110pM。然而，食蟹猴IL-23结合仅被P23IL36A4有效地抑制。
为了评价p40+纳米抗体的效力，将从250nM起始直至1pM的抗p40纳米抗体的系列稀释液与3nM生物素化hIL-12在室温(RT)下预温育15分钟。向此混合物中，加入IL12Rβ1接纳体珠和链霉亲和素供体珠并在室温下再温育1小时。大多数被测纳米抗体与生物素化IL-12的预温育减少520nm处的荧光强度，证明纳米抗体可有效地以剂量依赖方式抑制hIL-12与IL12Rβ1的结合。计算的IC50值显示在表B-6中，并且从P23IL81E10的23nM变化至P23IL3B8的350pM。
表B-5：在α-筛选中p19+纳米抗体阻断hIL-23或食蟹猴IL-23(cIL-23)受体相互作用的的IC50值
P19+ 纳米抗体   IC50(nM)hIL-23   IC50(nM)cIL-23
P23IL 36A1   7,3   7,80(部分阻断)
P23IL 36B3   2,2   未阻断
P23IL 36B4   1,8   未阻断
P23IL 36E5   0,96   部分阻断
P23IL 36A4(＝36G2)   1,00   0,47
P23IL 37D5   0,11   0,32(部分阻断)
表B-6：在α-筛选中p40+纳米抗体的IC50值
 P40+ 纳米抗体   IC50(nM)hIL-12
 P23IL 3B8   0,35
 P23IL 3G10   0,90
 P23IL 84A12   0,96
 P23IL 3F11   未检测
 P23IL 21C4   1,63
 P23IL 3C1   1,0
 P23IL 84G12   部分阻断
 P23IL 81E10   23
 P23IL 22D7   1,9
 P23IL 22E11   1,3
 P23IL 23H3   1,2
 P23IL 23E3   1,2
实施例23：IL-23单价p19+，p19-，和IL-23/IL-12 p40+，和p40-纳米抗体的结合动力学。
p19+，p19-，p40+和p40-纳米抗体的选择物的结合动力学通过表面等离振子共振(Biacore T100)进行分析。人IL-23经胺偶联共价结合于CM5传感器芯片表面，使用EDC/NHS用于活化，HCl用于灭活。纳米抗体结合在一个浓度(100nM)下评价。各纳米抗体以45μl/分钟的流速注射4分钟以结合芯片结合的抗原。下一步，以相同的流速向所述芯片上喷入不含纳米抗体的结合缓冲液，以使结合的纳米抗体自发解离。从不同的纳米抗体获得的传感图，计算koff值(kd)值并且表示在表B-7至B-11中。对于P23IL37D5，在不同的浓度下评价结合，测定结合速率常数和解离速率常数(kon或koff)，并且由此测定结合常(KD)并显示在表B-9中。
在Biacore试验中使用固定的食蟹猴IL-23研究单价纳米抗体的交叉反应性模式。结果显示在表B-7至B-11中。
表B-7至B-11：在Biacore上测定的抗p19和p40对人和食蟹猴IL-23的解离速率。
表B-7：
Figure BPA00001186248903341
表B-8：
Figure BPA00001186248903342
表B-9：
 P19+ 纳米抗体  Koff(s-1)   Kon(s-1)   Kd(M)
 P23IL 37D5  1,80E-04   3,20E+05   5,70E-10
表B-10：
  P23IL 84G12   2,90E-04   7E-05
  P23IL 81E10   2,63E-03   1,32E-03/1,2E-03
  P23IL 22D7   1,70E-04   2,30E-04
  P23IL 22E11   2,30E-04   2,30E-04
  P23IL 23H3   1,10E-03   6,7E-04
  P23IL 23E3   1,80E-04   1,2à2,5E-03
表B-11：
Figure BPA00001186248903351
实施例24：抗p19和抗p40纳米抗体的表位分组
为了测定纳米抗体构建成为双互补位型或双特异性构建体的相容性，进行了一些相关表位作图试验。
为了测定p19纳米抗体的相关表位，使用磺基-NHS-LC-生物素(Pierce)生物素化指定的抗p19抗体，并且将抗人IL23抗体(R&D Mab6091)根据供应商(Perkin Elmer，沃尔瑟姆，MA，US)的使用说明书偶联至接纳体珠。从200nM起始直至1pM的第二个抗p19纳米抗体的系列稀释液与500pM hIL-23在室温(RT)下预温育15分钟。向此混合物中，加入抗IL-23抗体偶联的接纳体珠，并加入生物素化的p19纳米抗体，在室温下再温育1小时，最后该混合物与链霉亲和素供体珠在室温下温育1小时。如果指定纳米抗体与hIL-23的预温育减少520nm处的荧光强度，则该纳米抗体识别hIL-23上与生物素化纳米抗体相同或重叠的表位。如此测定的相关表位显示在表B-12中。
因此，本发明的其他方面是：
-结合p19上的与P23IL-121A2(SEQ ID NO：1890)，P23IL119A3(SEQ ID NO：1898)和/或P23IL36A4(SEQ ID NO：2486)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p19的结合，和/或能够竞争其与p19的结合的p19+序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)；
-结合p19上的与P23IL81A12(SEQ ID NO：1936)和/或P23IL81G2(SEQ ID NO：1930)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p19的结合，和/或能够竞争其与p19的结合的p19-序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)；
-结合p19上的与P23IL-124C4(SEQ ID NO：)和/或P23IL20B11(SEQ ID NO：2502)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p19的结合，和/或能够竞争其与p19的结合的p19-序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)；
-结合p19上的与P23IL119G7(SEQ ID NO：1902)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p19的结合，和/或能够竞争其与p19的结合的p19-序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)。
表B-12：p19纳米抗体的相关表位分组，X，A，B，C对应于独立的表位；X/A是独立的表位，其中该纳米抗体阻止识别表位X或表位A的纳米抗体的结合
  纳米抗体类型   ID   表位组
  p19+   P23IL-121A2   X
  P23IL119A3   X
  P23IL37D5   X/A
  P23IL36A4   X
  p19-   P23IL81A12   A
  P23IL81G2   A
  P23IL-124C4   B
  P23IL20B11   B
  P23IL119G7   C
进行类似的实验以确定p40纳米抗体的相关表位。接纳体珠与p19+纳米抗体P23IL-121A2偶联。在第一个实验中，p40+纳米抗体P23IL3B8，3C1，81E10，23E3，23H3和3G10以及p40-纳米抗体P23IL80D10被生物素化。未生物素化的纳米抗体P23IL3B8，3C1，23E3，23H3，3G10，81E10，80D10，20F2，22D10，23A11，80A3，84G1，81A1，21C4，22D7，22E11，84A12，84G12和3F1以100nM的浓度与400pM hIL-23在室温下温育15分钟。向纳米抗体-hIL-23混合物中，加入P23IL-121A2偶联的接纳体珠和指定的生物素化纳米抗体，并在室温下再温育1小时，最后该混合物与链霉亲和素供体珠在室温下温育1小时。如果指定纳米抗体与hIL-23的预温育减少520nm处的荧光强度，则该纳米抗体识别hIL-23上的与生物素化纳米抗体/mAB相同或重叠的表位。
如所期望的那样，所有p40+纳米抗体结合与p40-纳米抗体不同的表位。对于p40+纳米抗体，相关作图更为复杂，但结果显示：
-在图23中显示的纳米抗体中，纳米抗体P23IL23E3(SEQ ID NO：2514)，23H3(SEQ ID NO：2515)，3G10(SEQ ID NO：2516)，21C4(SEQ ID NO：2510)，22D7(SEQ ID NO：2511)，22E11(SEQ ID NO：2512)，84A12(SEQID NO：1970)和3F11(SEQ ID NO：2525)识别与P23IL3B8(SEQ ID NO：2527)相同的表位的至少一部分。因此，结合p40上的与P23IL3B8(SEQ ID NO：2527)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p40的结合，和/或能够竞争其与p40的结合的p40+序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)形成本发明的另一方面；
-纳米抗体P23IL23E3(SEQ ID NO：2514)，23H3(SEQ ID NO：2515)，81E10(SEQ ID NO：1946)，80D10(SEQ ID NO：1940)，20F2(SEQ ID NO：2504)，22D 10(SEQ ID NO：2505)，80A3(SEQ ID NO：1952)，84G1(SEQID NO：1992)，81A1(SEQ ID NO：1962)，22D7(SEQ ID NO：2511)和84G12(SEQ ID NO：1942)识别与P23IL3C1(SEQ ID NO：2033)相同的表位的至少一部分。因此，结合p40上的与P23IL3C1(SEQ ID NO：2033)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p40的结合，和/或能够竞争其与p40的结合的p40+或p40-序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)形成本发明的另一方面；
-纳米抗体P23IL3B8(SEQ ID NO：2527)，3C1(SEQ ID NO：2033)，23H3(SEQ ID NO：2515)，3G10(SEQ ID NO：2516)，81E10(SEQ ID NO：1946)，80D10(SEQ ID NO：1940)，80A3(SEQ ID NO：1952)，21C4(SEQ ID NO：2510)，22D7(SEQ ID NO：2511)，22E11(SEQ ID NO：2512)，84A12(SEQ ID NO：1970)，3F11(SEQ ID NO：2525)识别与P23IL-23E3(SEQ ID NO：2514)相同的表位的至少一部分。因此，结合p40上的与P23IL-23E3(SEQ ID NO：2514)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p40的结合，和/或能够竞争其与p40的结合的p40+或p40-序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)形成本发明的其他方面；
-纳米抗体P23IL 3B8(SEQ ID NO：2527)，3C1(SEQ ID NO：2033)，23E3(SEQ ID NO：2514)，3G10(SEQ ID NO：2516)，81E10(SEQ ID NO：1946)，80A3(SEQ ID NO：1952)，84G1(SEQ ID NO：1992)，81A1(SEQ ID NO：1962)，21C4(SEQ ID NO：2510)，22D7(SEQ ID NO：2511)，22E11(SEQ ID NO：2512)，84A12(SEQ ID NO：1970)，84G12(SEQ ID NO：1942)，3F11(SEQ ID NO：2525)识别与P23IL-23H3(SEQ ID NO：2515)相同的表位的至少一部分。因此，结合p40上的与P23IL-23H3(SEQ ID NO：2515)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p40的结合，和/或能够竞争其与p40的结合的p40+或p40-序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)形成本发明的其他方面；
-纳米抗体P23IL 3B8(SEQ ID NO：2527)，23E3(SEQ ID NO：2514)，23H3(SEQ ID NO：2515)，81A1(SEQ ID NO：1962)，21C4(SEQ ID NO：2510)，22D7(SEQ ID NO：2511)，22E11(SEQ ID NO：2512)，84A12(SEQ ID NO：1970)和3F11(SEQ ID NO：2525)识别与23IL3G10(SEQ ID NO：2516)相同的表位；
-纳米抗体P23IL 3C1(SEQ ID NO：2033)，23E3(SEQ ID NO：2514)，23H3(SEQ ID NO：2515)，80D10(SEQ ID NO：1940)，22D10(SEQ ID NO：2505)，80A3(SEQ ID NO：1952)，84G1(SEQ ID NO：1992)，81A1(SEQ ID NO：1962)和84G12(SEQ ID NO：1942)识别与P23IL81E10(SEQ ID NO：1946)相同的表位的至少一部分。因此，结合p40上的与P23IL81E10(SEQ ID NO：1946)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p40的结合，和/或能够竞争其与p40的结合的p40+或p40-序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)形成本发明的其他方面。
在第二个实验中，p40+纳米抗体P23IL-22D7(SEQ ID NO：2511)和22E11(SEQ ID NO：2512)被生物素化。未生物素化的纳米抗体P23IL84G12，80D10，20F2，22D10，23A11，80A3，84G1，81A1，22D7和22E11以250nM或71nM的浓度与400pM hIL-23在室温下温育15分钟。向纳米抗体-hIL-23混合物中，加入P23IL-121A2偶联的接纳体珠，并加入生物素化的P23IL-22D7或22E11，并在室温下再温育1小时，最后该混合物与链霉亲和素供体珠在室温下温育1小时。如果指定的纳米抗体与hIL-23的预温育减少520nm处的荧光强度，则该纳米抗体识别hIL-23上的与生物素化纳米抗体相同或重叠的表位。结果显示在图39(针对22D7的表位作图)和图40(针对22E11的表位作图)中。因此，结合p40上的与P23IL-22D7(SEQ ID NO：2511)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p40的结合，和/或能够竞争其与p40的结合的p40+或p40-序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)形成本发明的其他方面。类似地，因此，结合p40上的与P23IL-22E11(SEQ ID NO：2512)相同的表位，和/或能够交叉阻断其与p40的结合，和/或能够竞争其与p40的结合的p40+或p40-序列(如本文所定义，并且特别地，(单)结构域抗体和/或纳米抗体)形成本发明的其他方面。
使用biacore进行p19+纳米抗体P23IL119A3相对于三个p40+纳米抗体P23IL3B8，P23IL3C1和P23IL-23E3的相关表位作图，其中P23IL119A3附着于芯片上并用来俘获hIL-23。随后，检测p40+单价纳米抗体的结合能力。如所期望的那样，p40+纳米抗体结合独立的表位组，因为它们仍然与已经附着于固定在Biaocore芯片上的P23IL119A3的hIL-23相结合。
实施例25：在基于细胞的测定中p19+和p40+纳米抗体的中和活性
小鼠脾细胞测定(由实施例15改动)用于基于IL-23刺激小鼠脾细胞分泌IL-22的能力来测定IL-23活性的抑制。基本试验方案如下：取出5C57BL/6小鼠的脾脏并收获脾细胞，并且制备单细胞悬液。将脾细胞在添加了10％ FBS(Invitrogen，Cat 10270-106)，1％Pen/Strep(Invitrogen，Cat 15140-122)，80μM β-巯基乙醇(Invitrogen，Cat 31350-010)和1mM丙酮酸钠(Gibco，Cat 1136)的RPMI(Invitrogen，Cat 72400-021)中洗涤3次。此培养基还被称为完全RPMI。脾细胞悬液用1x红细胞裂解缓冲液(10x储备液：在1升MilliQ中的82.9g NH4Cl，10.9g KHCO3和370mg EDTA)处理以去除所有残余的红细胞。在完全RPMI中3次洗涤步骤后，细胞经100μM细胞过滤网(cell strainer)(BD，Cat 35260)过滤，并且重悬在含有20ng/ml重组mIL-2(R&D系统，Cat 402-ML)的完全RPMI中。细胞以400000细胞/孔接种在96孔平底平板(Falcon，Cat 353072)中。
纳米抗体(50μl)与重组hIL-23在室温下在完全RPMI中预温育30分钟，然后在hIL-23或食蟹猴IL-23的预定终浓度(范围为3.7-19pM)下与脾细胞另外温育5天。收集上清液，使用ELISA (小鼠IL-22ELISA构建试剂盒，Antigenix America，Cat RMF222CK)测量mIL-22水平。
如图41和42中所示，单价p40+(图41)和p19+(图42)纳米抗体抑制hIL-23介导的IL-22产生。使用抗p40mAB(本文称为“BM01”)作为对照，其是根据WO 00/56772所述的人mAB(具有WO 00/56772的SEQ ID NO’s；31和32的可变链序列)，其是根据标准技术制备的。
表B-13显示p19+纳米抗体阻断19pM hIL-23和3.7pM食蟹猴IL-23(cIL-23)的效力。表B-14显示p40+纳米抗体阻断19pM hIL-23和3.7pM食蟹猴IL-23的效力(nc＝不完全阻断)。
表B-13：p19+纳米抗体阻断19pM hIL-23和3.7pM食蟹猴IL-23(cIL-23)的效力。
  纳米抗体   hIL-23IC50(pM)   cIL-23IC50(pM)
  P23IL119A3   25510   37430
  BM01   8   25
  P23IL36A4   3120   10955
  P23IL37D5   17   288
表B-14：p40+纳米抗体阻断19pM hIL-23和3.7pM食蟹猴IL-23的效力(nc＝不完全阻断)。
  纳米抗体   hIL-23IC50(pM)   cIL-23IC50(pM)
  BM01   15   40
  P23IL3B8   408   1787
  P23IL3C1   nc 510   nc 517
  P23IL3G10   2325   9451
  P23IL-23E3   935   5461
  P23IL-23H3   790   32540
  P23IL-22D7   116   705
  P23IL-22E11   186   1269
实施例26：稳定表达hIL23R和hIL12Rβ1的Ba/F3细胞系的生成
Ba/F3，鼠IL-3依赖性祖B细胞系(pro-B cell line)，培养在添加了10％FBS(Invitrogen，Cat 10270-106)，1％Pen/Strep(Invitrogen，Cat 15140-122)和10％WEHI-3B(组成型地产生IL-3的鼠骨髓单核细胞系)的条件培养基的RPMI(Invitrogen，Cat 72400-021)中。首先，BA/F3细胞系用编码hIL-12Rβ1的表达载体稳定地转染。转染使用Amaxa核转染剂II(Amaxa nucleofector II)(目录号AAD-1001)和Amaxa核转染试剂盒V(Amaxa nucleofection kit V)(目录号VCA-1003)进行。转染后，立即向小杯中加入500μl预温的培养基，并将整个内容物转移至含4ml如上所述的培养基的T25中。为选择转染细胞，在转染后48小时加入1.1mg/ml潮霉素B(Invitrogen，Cat 10687-010)。
表达hIL12Rβ1的Ba/F3细胞汇集液是使用FACSaria分选的单细胞。在15ml Falcon管中，将细胞以20E6/ml重悬在稀释的小鼠抗hIL-12Rβ1(0.5mg/ml，R&D系统，Cat MAB839)中。细胞使用锥虫蓝和血细胞计数器进行计数。所有稀释液和洗涤步骤均使用添加了10％FBS的PBS 1x (Invitrogen：141190-094)来进行。在4℃下温育30分钟后，细胞用PBS洗涤三次。用藻红蛋白标记的抗小鼠IgG(Jackson ImmunoResearch Laboratories(杰克逊免疫研究实验室)，Cat 115-115-164)进行第二次染色。细胞在4℃下温育30分钟，并洗涤3次。包括用TOPRO3(分子探针T3605)的最终染色以排除死细胞。表达H-IL12Rβ1的Ba/F3细胞为分选至96孔板中的单细胞，并进一步培养。
在FACS阵列(FACSarray)上几次筛选后，表达h-IL12Rβ1的Ba/F3亚克隆4D9被选择用于转染hIL-23编码质粒。如该实施例26中获得的表达h-IL12Rβ1的Ba/F3亚克隆4D9的流式细胞分析结果显示在图43中。通过小鼠抗hIL-12Rβ1抗体，紧接着通过PE标记的多克隆抗小鼠Ig抗体进行检测。细胞上h-IL12Rβ1的存在通过与下列细胞相比荧光强度的增加来测量，即，所述细胞与FACS缓冲液(PBS+10％FBS)，紧接着与PE标记的多克隆抗小鼠Ig抗体温育。荧光强度绘制在X轴上，事件次数绘制在Y轴上。还显示未染色细胞的FACS模式。
对于用hIL-23R稳定转染表达hIL12Rβ1的Ba/F3亚克隆4D9，使用如上所述的相同试验方案，不同之处仅为使用2μg pcDNA3.1Neo-hIL23R代替2μg pcDNA3.1Hygro-h-IL12Rβ1。为了选择稳定转染的细胞，在转染后48小时加入1mg/ml G418(Invitrogen，Cat 10131-07)。在G418选择下培养几代后，Ba/F3-hIL12Rβ1-hIL23R细胞汇集液耗尽WEHI-3B培养上清液(含有mIL-3生长因子)并补充以100ng/ml重组hIL-23(e-Bioscience，Cat 34-8239-85)。扩充存活的细胞并以3细胞/孔，1细胞/孔或0.3细胞/孔接种在补充以10％FBS，1％P/S和100ng/ml重组hIL-23的RPMI中。
扩充获得的单细胞克隆并筛选它们在细胞增殖测定中的hIL-23应答性。为此，选择的细胞克隆在补充以10％FBS和1％Pen/Strep的RPMI中洗涤3次，并且随后以3E06-5E06细胞/ml的细胞密度在无hIL-23的培养基中温育3小时。饥饿后，在96孔平底平板(Greiner bio-one，Cat 655180)中细胞以7500细胞/孔接种在体积为100μl的无hIL-23培养基中。下一步，100μl hIL-23稀释曲线以下列的方式加入至细胞中，即，获得从500ng/ml起始的1/2系列稀释液。温育72小时后，用1μCi[3H]-胸苷使细胞发生脉冲并继续温育24小时，然后在-80℃下冷冻。细胞随后解冻，然后使用细胞采集器(Perkin Elmer Life Sciences，韦尔斯利，MA，USA)包埋在玻璃纤维膜上。用水洗涤几次后，将滤膜晾干，并使用γ-计数仪(Perkin Elmer Life Sciences)计数。结果显示在图44中，其是显示在实施例26中在与几种浓度的hIL-23温育72小时后在细胞增殖测定中对几种Ba/F3-hIL 12Rβ1-hIL23R单细胞克隆的hIL-23应答性获得的结果(作为使用[甲基-3H]-胸苷掺入[ON脉冲]的读数)的图。选择克隆5H10用于IL-23中和纳米抗体格式的进一步表征。
实施例27：IL-12依赖性PHA胚细胞增殖测定
PHA胚细胞通过将PBMC在PHA(50μg/ml)中培养3天并在IL-2(50U/ml)中培养一天而获得。将这些PHA胚细胞用与从2000nM起始直至1pM的p40+纳米抗体的系列稀释液或对照纳米抗体或抗体预温育的1pMhIL-12刺激。细胞刺激2天，并用1μCi/孔3H-胸苷使细胞发生脉冲持续最后6个小时，因此通过闪烁计数测量3H-胸苷掺入来测定增殖。
如表B-15中所示，大多数被测的单价p40+纳米抗体抑制hIL-12介导的增殖。
表B-15：p40+纳米抗体阻断hIL-12(使用1pM hIL-12)介导的增殖的效力(nc＝未完全阻断)。
  纳米抗体   加入的hIL-12(pM)   IC 50(pM)
  BM01   1   0,67
  3B8(SEQ ID NO：2527)   1   nc 1505
  3C1(SEQ ID NO：2526)   1   几乎不阻断
  3G10(SEQ ID NO：2516)   1   194
  23E3(SEQ ID NO：2514)   1   nc 1734
  23H3(SEQ ID NO：2515)   1   174
  22D7(SEQ ID NO：2511)   1   116
  22E11(SEQ ID NO：2513)   1   159
实施例28：其他双特异性/双互补位型IL-23p19纳米抗体的构建、产生和纯化，以便研究接头长度对效力的作用
除了实施例13中所述的双互补位型构建体以外，制备具有较短接头的一些双互补位型构建体以确定最佳的接头长度。单个构件通过9Gly/Ser(GGGGSGGGS；SEQ ID NO：2649)或20Gly/Ser接头(GGGGSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；SEQ ID NO：2650)融合，并克隆在pAX100载体中。这些双互补位型抗p19纳米抗体的序列显示在图30中。构建体在TG1细胞中转化，所述TG1细胞用1mM IPTG诱导。使用组氨酸俘获亲和层析然后通过脱盐从胞质提取物中纯化纳米抗体。通过在50mM辛基β-D-吡喃葡萄糖苷(Sigma)的存在下的凝胶过滤进行进一步纯化和LPS去除。在脾细胞测定中评价效力(见实施例27)，并且IC50列举在表B-16和B-17中。结果清晰地显示缩短接头长度越短使IC50变差，因此可优选使用具有总计超过20个的氨基酸残基的接头(诸如20个氨基酸残基和45个氨基酸残基之间，例如35Gly/Ser接头(GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS，SEQ ID NO：2651)。
表B-16：在使用19pM hIL-23的脾细胞测定中的效力
  纳米抗体  hIL-23 IC50(pM)
  P23IL119A3-35GS-81G2  14
  P23IL119A3-9GS-81G2  1988
  P23IL-121A2-35GS-81G2  94
  P23IL-121A2-9GS-81G2  740
表B-17：在使用37pM hIL-23的脾细胞测定中的效力
  纳米抗体  hIL-23 IC50(pM)
  P23IL-121A2-35GS-124C4  57
  P23IL-121A2-20GS-124C4  1360
  P23IL-121A2-9GS-124C4  1715
  P23IL-121A2-35GS-119G7  42
  P23IL-121A2-9GS-119G7  4755
实施例29：具有延长的半衰期的HLE p19双互补位型构建体的构建、产生和表征
A)HLE1：抗人血清白蛋白纳米抗体，ALB-1：
构建三价双互补位型抗p19纳米抗体(例如，P23IL-121A2-9GS-ALB1-9GS-124C4)，其由两个与抗p19纳米抗体对应的构件和在其中间与抗人血清白蛋白纳米抗体构件(ALB-1；SEQ ID NO：790)对应的第三构件构成。单个构件通过9Gly/Ser接头(GGGGSGGGS；SEQ ID NO：792)融合。为了检测ALB1纳米抗体的定位是否影响效力，我们还制备了ALB-1在C-末端的构建体(例如，P23IL119A3-35GS-81G2-9GS-ALB1)，其中p19纳米抗体通过35Gly/Ser接头融合，且ALB1与该构建体通过9Gly/Ser接头融合。这些三价双特异性抗p19纳米抗体的序列也显示在图30中。
这些构建体克隆在pAX100中，转化至TG1细胞，表达为c-myc，His6-标记蛋白，随后在OGP的存在下以去除内毒素，通过固定的金属亲和性层析(IMAC)和大小排阻层析(SEC)从胞质提取物中纯化。以较大的规模产生两种这样格式化的纳米抗体，从而在急性体内小鼠脾细胞测定中进行检测(见实施例36)。
P23IL0036＝119A3-9GS-ALB1-9GS-81G2在大肠杆菌中产生，并俘获在MabCapture A(Poros)上，使用100mM甘氨酸pH 2.5洗脱，并立即用150mMTris pH8.8中和。抗体进一步在Poros 50HS(Poros)上精制，与用于去除LPS的50mM OGP(辛基β-D-吡喃葡萄糖苷，Sigma)在4℃下温育过夜，紧接着进行SEC(Superdex75pg，GE Healthcare)。将P23IL0044＝119A3(H37Y-M43K)-9GS-ALB1-9GS-81A12首先重新克隆在pAX98中(其产生P23IL0049)，并转化毕赤酵母。然后其从表达纳米抗体
Figure BPA00001186248903451
的重组毕赤酵母的澄清发酵液中开始纯化。发酵液在D-PBS中分别使用0.22μm和10KMWCO HydroSart盒(HydroSart cassettes)(Sartorius)经正切流动过滤制成为无微粒的和浓缩的。TFF渗余物进一步在MabCaptureA(Poros)上处理，使用100mM甘氨酸pH 2.5洗脱后，各级分用150mM Tris pH7.5中和，并透析至1/10 PBS(SnakeSkin折叠透析管(SnakeSkin Pleated Dialysis Tubing)10,000 MWCO(Pierce，ref 68100))。纳米抗体经阳离子交换层析(Poros 50HS，Poros)，紧接着通过大小排阻层析(Superdex75pg，GE Healthcare)进行精制。
B)HLE2：HSA
通过将HSA直接与双互补位型抗p19纳米抗体P23IL119A3-35GS-81G2的C-末端融合而制备该构建体的HSA融合体。这通过将P23IL119A3-35GS-81G2的编码序列连接进pAX99载体(其是含有全长人血清白蛋白编码序列的pPICZalphaA载体)中而进行，产生P23IL0041＝P23IL119A3-35GS-81G2-HSA。将该质粒转化至毕赤酵母株X33中。然后从表达纳米抗体的重组毕赤酵母的澄清发酵液中开始纯化。澄清的发酵液经TFF(Hydrosart 0.22μm盒，Sartorius)，紧接着通过使用TFF(PESU-AL盒Sartorius)的至PBS的浓缩和透析过滤步骤而制成为无微粒的。经在MabCaptureA(Poros)上的俘获步骤和使用Poros50HQ和Superdex200 XK26/60的进一步精制步骤纯化目的蛋白。
C)HLE3：PEG
为了使双互补位型纳米抗体聚乙二醇化，生成C-末端标记被GGGC-序列替换的构建体。因此，将P23IL119A3-35GS-81G2和P23IL-121A2-35GS-124C4的编码序列克隆进pAX 93载体中。构建体在TG1中表达。如下进行纯化和聚乙二醇化：纳米抗体P23IL0038＝P23IL119A3-35GS-81G2-GGGC在MabSelect XtraTM(GEHealthcare)上俘获，并使用100mM甘氨酸pH 2.5洗脱。收集的样品立即用150mM Tris pH7.5中和，针对1/10PBS(SnakeSkin折叠透析管(SnakeSkin Pleated Dialysis Tubing)10,000MWCO(Pierce，ref 68100))透析，并在5mMDTT的存在下经CEX(Poros 50HS，Poros)进一步精制。含有纳米抗体的级分经Vivaspin(5kDa)浓缩，加入DTT至10mM的终浓度，并温育过夜。通过SEC(Superdex 75pg XK 16/60，GE healthcare)去除过量的游离DTT后，还原的纳米抗体与5摩尔过量的支化-mPEG40(NOF，SunBright GL2-400MA)温育过夜。聚乙二醇化纳米抗体进一步在MacroCap SP(GE Healthcare)上纯化以去除过量的未反应的PEG40。最后，聚乙二醇化纳米抗体使用用于去除LPS的50mM辛基β-D-吡喃葡萄糖苷(Sigma)处理过夜，并使用Superdex75pg(GE Healthcare)分级分离。
为了生成第二批聚乙二醇化的P23IL0038，纳米抗体在MabCapture A(POROS)上俘获，使用100mM甘氨酸pH 2.5洗脱，并立即使用150mM Tris pH7.5中和。在4℃下(SnakeSkin折叠透析管(SnakeSkin Pleated Dialysis Tubing)10,000MWCO(Pierce，ref68100))针对5L 1/10 PBS透析过夜后，样品在Poros 50HS(PoroS)上进一步精制，紧接着用10mM DTT还原。通过SEC(Superdex75pg，GE healthcare)去除过量的DTT，并且将还原的纳米抗体偶联至线性mPEG40(40kDa甲氧基聚(乙二醇)马来酰亚胺基-丙酰胺(methoxy poly(ethylene glycol)maleimido-propionamice)，Dow Pharma)。在MacroCap SP(GE healthcare)上从过量的mPEG40和未反应的纳米抗体中分离聚乙二醇化的纳米抗体。最后，聚乙二醇化纳米抗体使用用于去除LPS的50mM辛基β-D-吡喃葡萄糖苷(Sigma)处理过夜，紧接着最后进行SEC(Superdex75pg，GE Healthcare)。
纳米抗体P23IL0039＝P23IL-121A2-35GS-124C4-GGGC俘获在MabSelect XtraTM(GE Healthcare)上，并使用100mM甘氨酸pH 2.5洗脱。收集的样品立即使用150mM Tris pH7.5中和，并经阴离子交换层析(Poros 50HQ，PoroS)进一步精制。含有纳米抗体的级分在10mM DTT的存在下还原。过夜温育后，通过大小排阻层析(Superdex 200pg XK26/60，GE healthcare)去除过量的DTT。还原的纳米抗体与5摩尔过量的支化-mPEG40(NOF，SunBright GL2-400MA)温育过夜。聚乙二醇化纳米抗体进一步在MacroCapSP(GE Healthcare)上纯化以去除过量的未反应的PEG40。最后，聚乙二醇化纳米抗体使用Superdex 200pg XK26/60(GE Healthcare)分级分离。
实施例30：HLE纳米抗体的脾细胞测定和对食蟹猴IL-23的交叉反应性
在如实施例25中所述的脾细胞测定中检测和比较实施例29的HLE纳米抗体，结果显示在表B-18中。所有三种类型的HLE均是合适的，因为没有一种类型HLE导致效力的丧失，相反，效力稍有增加。此外，ALB 1纳米抗体的位置不影响效力。由于9GS-ALB1-9GS结构部分可有效地替换35Gly/Ser-接头，含有P23IL37D5构件的抗p19双互补位型纳米抗体立即被构建、表达和检测为ALB1在中间的HLE纳米抗体。
另外，检查针对食蟹猴IL-23的交叉反应性。所有含有P23IL119A3和P23IL37D5构件的抗p19双互补位型纳米抗体均是交叉反应的，含有P23IL-121A2构件的均是无交叉反应的。
表B-18：在使用19pM hIL-23或3,8pM食蟹猴IL-23(cIL-23)的脾细胞测定中具有不同HLE的抗p19双互补位型纳米抗体的效力的比较，nb＝未阻断；nt＝未检测
Figure BPA00001186248903481
实施例31：双互补位型/双特异性抗hIL-23纳米抗体对hIL-23诱导的Ba/F3-hIL12Rβ1-hIL23R细胞增殖的作用。
将如实施例26中所述生成的Ba/F3-hIL12Rβ1-hIL23R亚克隆5H10培养在补充了10％FBS，1％Pen/Strep，10％WEHI-3B细胞系的条件培养基，1mg/ml G418和1.1mg/ml潮霉素B的RPMI中。细胞在补充了10％FBS和1％Pen/Strep的RPMI中洗涤3次。细胞在该无mIL-3的培养基中以3E06-5E06细胞/ml的细胞密度温育1小时以去除所有残余的生长因子。
为了评价不同纳米抗体的中和能力，5Qμl纳米抗体稀释液与50μlhIL-23(终浓度为4ng/ml)在96孔平底平板(Greiner bio-one，Cat 655180)中预温育30分钟。下一步，将50μl Ba/F3-hIL12Rβ1-hIL23R细胞加入至这些预温育的样品中以达到50000细胞/孔的最终密度。
在37℃下在5％CO2的存在下24小时后，使用CellTiter-Glo
Figure BPA00001186248903491
发光细胞存活力测定(Luminescent Cell Viability Assay)(Promega G7571)根据供应商的使用说明书测量细胞存活力。如实施例32中所示，被检测的实施例29的HLE纳米抗体能够有效地阻断这些细胞的增殖。
实施例32：HLE纳米抗体的IL-23依赖性BAF3增殖
也在使用76pM hIL-23的如实施例27中所述的hIL-23依赖性BAF3增殖测定中检测和比较实施例29的HLE纳米抗体。如表B-19中所示，所有检测的纳米抗体均能够有效地阻断这些细胞的增殖。
表B-19：在使用76pM hIL-23的BAF3增殖测定中的效力
  纳米抗体/mAB   IC 50(pM)
  P23IL119A3(H37Y-M43K)-9GS-ALB 1-9GS-81A12   46,5
  P23IL119A3-35GS-81G2-HSA   61,4
  P23IL119A3-35GS-81G2-GGGC-线性PEG40   58,5
  P23IL119A3-35GS-81G2-GGGC-支化PEG40   61,2
  BM01   59,7
  纳米抗体/mAB   IC 50(pM)
  P23IL37D5-9GS-ALB1-9GS-20B11   19,5
  P23IL-124C4-9GS-ALB1-9GS-37D5   13,5
  BM01   33,2
  纳米抗体/mAB   IC 50(pM)
  PIL2337D5   13
  BM01   41
实施例33：天然人IL-23的诱导和测定HLE纳米抗体针对该天然人IL-23的效力
人单核细胞系THP-1(ATCC TIB-202)用于产生天然人IL-23。将THP-1细胞培养在补充以10％胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素(均获自Invitrogen，卡尔斯巴德，美国)的RPMI1640培养基中。细胞通过每2-3天传代培养而进行繁殖，使细胞密度保持在104-106细胞/mL之间。通过用固定的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aures)细胞(SAC；Pansorbin，Calbiochem，默克)刺激THP-1细胞诱导IL-23分泌。THP-1细胞(2.5-5x106细胞/mL)用0.05％SAC(37℃，5％CO2)刺激20-24小时。随后，通过离心(200g，5分钟，室温)收获上清液，过滤(0.22μm PVDF，密理博(Millipore)，爱尔兰)以去除剩余细胞和碎片，并保存在-70℃下。人IL-23的浓度使用人IL-23(p 19/p40)Elisa Ready-SET-Go！试剂盒(eBioscience，圣地亚哥，USA)测定。典型地，诱导20-40ng/mL人IL-23。然后使用含有IL-23的上清液作为小鼠脾细胞测定中的IL-23源以确定纳米抗体是否能够中和天然人IL-23。检测有限的一组双互补位型纳米抗体，并且它们所有都能够中和天然hIL-23，如表B-20中所示。
表B-20：在使用19pM天然hIL-23的脾细胞测定中的效力
实施例34：ELISA效力测定-单价和双互补位型纳米抗体对IL-23与IL-23R相互作用的抑制
96孔板用抗Fc纳米抗体(6μg/ml)在4℃下包被过夜，随后用Superblock T20(PBS)封闭缓冲液封闭30分钟。不同浓度的单价和双互补位型纳米抗体与4ng/ml hIL-23预温育30分钟，然后与300ng/ml hIL-23R-Fc温育30分钟，之后将混合物转移至包被的孔中。结合的hIL-23在室温下用在含有10％Superblock T20(PBS)封闭缓冲液的PBS中的生物素化抗人白介素-12(IL-12)p40/70单克隆抗体(eBiosciences，San Diego，USA)的1/750稀释液检测30分钟，紧接着在室温下与在含有10％ Superblock T20(PBS)封闭缓冲液的PBS中的1/5000辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素温育30分钟。使用增强型可溶性3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(esTMB)染色试剂进行显色，之后用1N HCl终止显色反应。测量在450nm处的吸光度。如图45中所示，p19+(119A3；37D5-ALB1)单价纳米抗体抑制与IL-23R的相互作用，而p19-(81A12，81G2)单价纳米抗体则不能。双互补位型(230049，23IL0041和23IL0038)纳米抗体具有比单价纳米抗体显著高的抑制hIL-23-hIL-23R相互作用的效力(图46)。表B-21给出了不同纳米抗体的相应效力(IC50)。
表B-21：单价和双互补位型抗IL23(p19)纳米抗体在抑制ELISA测定中的效力(37D5的氨基酸序列见SEQ ID NO：2490)
Figure BPA00001186248903511
实施例35：急性体内小鼠脾细胞模型的优化
急性体内小鼠脾细胞模型被优化并标准化以分析IL-23p19中和纳米抗体的体内功效。
在此模型中，以mIL-22合成的离体读数结果在体内发生hIL-23的中和作用。在所有实验中，C57BL/6已经经腹膜内(i.p.)注射hIL-23。在仅一次/首次hIL-23注射后刚好31小时，小鼠被放血并随后被处死。取出脾脏，并且通过在毛玻璃载玻片之间匀浆脾脏而分离脾细胞。洗涤脾细胞并以106细胞/ml的浓度重悬在培养基中。使用的培养基为补充了10％FCS，10U/ml青霉素，100μg/ml链霉素，1％非必需氨基酸，1％丙酮酸钠，2.5mM HEPES和0.00035％2-巯基乙醇的RPMI 1640。细胞以200,000细胞/200μl/孔接种在预包被以仓鼠抗小鼠CD3e抗体(PBS中5μg/ml，在4℃下过夜)的96孔培养板中。对于每个脾脏，接种6孔。然后将96孔板在潮湿的CO2温箱中温育24小时。小鼠IL-22的夹心ELISA试剂盒(RMF222CK，Antigenix)用来测量每份上清液中mIL-22的量。
结果显示在图47中和图48中，图47是显示在该实施例35中获得的关于在小鼠脾细胞测定中在单独施用3微克hIL-23或与23IL0036联合施用时对mIL-22合成的抑制的结果的图。平均mIL-22合成表示为与组4相比的％变化率；图48是显示在该实施例35中获得的关于在小鼠脾细胞测定中在经不同给药途径施用23IL0036或IRR007后对mIL-22合成的抑制的结果的图。平均mIL-22合成表示为与仅接受hIL-23的组相比的％变化率。
在第一个实验中，不同组的小鼠(n＝4)经腹膜内在t＝0小时，7小时，和31小时(组1)时注射PBS，在t＝0小时(组2)时注射1x3μg hIL-23，在t＝0小时和7小时(组3)时注射2x3μg hIL-23或在t＝0小时，7小时和23小时(组4，5和6)时注射3x3μg hIL-23。在组5和6中，分别在首次hIL-23注射之前2小时和之后29小时，另外地经腹膜内施用0.2mg抗IL-23p19纳米抗体23IL0036。结果清晰地显示需要2次或3次hIL-23注射得到相当程度的mIL-22合成的诱导(图47)。将结果关于组4的平均mIL-22浓度标准化，组4注射3x3μg hIL-23。基于这些结果，我们决定在随后的实验中使用在t＝0小时，7小时和23小时时注射3次3μg hIL-23来诱导mIL-22合成。另外，利用该实验我们已经证明，在体内阶段而非离体期间需要中和hIL-23，因为当在首次hIL-23注射前2小时施用时，23IL0036可抑制mIL-22合成，并且在分离脾细胞之前2小时施用时不抑制mIL-22合成(图47)。
在第二个实验中，不同组的小鼠(n＝4)注射PBS(组1)或3x3μg hIL-23(组2-6)。另外，组3-5注射0.2mg 23IL0036，而组6注射无关纳米抗体IRR007。纳米抗体的给药途径在不同组间有所不同。在组3和组6中23IL0036和IRR007分别经腹膜内施用，而在组4中23IL0036经静脉内(i.v.)注射，且在组5中经皮下(s.c.)注射。将结果关于组2的平均mIL-22浓度标准化，组2仅注射hIL-23。在不同的给药途径之间在对mIL-22合成的抑制中没有观察到差异(图48)。由于hIL-23经腹膜内施用，并且我们想要全身性而非在腹腔内抑制hIL-23的事实，因此我们决定在下列的实验中皮下注射纳米抗体。无关纳米抗体IRR007对mIL-22合成没有作用。在图48中，该图显示在该实施例35中获得的关于在小鼠脾细胞测定中在经不同给药途径施用23IL0036或IRR007后对mIL-22合成的抑制作用的结果。平均mIL-22合成表示为与仅接受hIL-23的组相比的％变化率。
实施例36：在急性体内小鼠脾细胞模型中野生型纳米抗体23IL0038，23IL0041和23IL0049的剂量范围分析
在实施例35中所述的优化的急性体内小鼠脾细胞模型中证明野生型IL-23p19中和纳米抗体23IL0038，23IL0041和23IL0049的效力。
在四个独立的实验中，C57BL/6小鼠被分配至7个组，各组由4个个体组成。来自组2-7的所有小鼠在3个不同的时间点(t＝0小时，7小时和23小时)经腹膜内注射3x3μg hIL-23。组1的动物在相同的时间点接受PBS代替hIL-23。在4个实验中的各个实验中，在首次hIL-23注射前2小时皮下注射5个不同剂量的特异性纳米抗体或阳性对照抗体。剂量如下进行选择，即，使得在所有实验中对于三种纳米抗体和阳性对照抗体BM01的每一种，对每次3μg hIL-23注射的过量摩尔均是相同的(82倍，16倍，3.2倍，0.64倍和0.128倍过量)。
对于每个实验，将结果关于组2的平均mIL-22浓度标准化，组2仅注射hIL-23，并且标准化的结果表示在图49A至D中，这些图是显示在该实施例36中获得的关于在小鼠脾细胞测定中在施用纳米抗体(图49A：23IL0049；图49B：23IL0041；图49C：23IL0038)或阳性对照抗体(图49D：BM01)后对mIL-22合成的抑制作用的结果的图。平均mIL-22合成表示为与仅接受hIL-23的组相比的％变化率。
所有三种纳米抗体均能够在体内中和hIL-23。纳米抗体23IL0049和23IL0038在第4个最高剂量时显著地阻断mIL-22合成。三个纳米抗体的最低剂量(0.128倍过量)仍然有作用，但是不能完全地阻断mIL-22产生。对于23IL0041，最高的三个剂量显著地阻断mIL-22的合成，而在两个最低剂量组中抑制不完全。纳米抗体的功效与BM01的功效相当。
在仅注射hIL-23的组的最后采血样品中测量hIL-23浓度。在最后一次注射3μg hIL-23后8小时，hIL-23的平均血清浓度为22.5ng/ml。
实施例37：在急性体内小鼠脾细胞模型中纳米抗体23IL0050和23IL0054的活性
单价纳米抗体23IL0050和双互补位型纳米抗体23IL0054已经在实施例35中所述的急性体内小鼠脾细胞模型中进行了检测。C57BL/6小鼠，7组每组4只小鼠，在t＝0小时，7小时和23小时时用3μg hIL-23刺激。组1的小鼠在相同的时间点接受PBS代替hIL-23。两种纳米抗体在首次hIL-23注射前24小时皮下注射。分析三个剂量，并且对于各个剂量水平，关于每次3μg hIL-23注射使用相同的过量摩尔(16倍，3.2倍或0.64倍过量)。
结果显示在图50中，该图是显示在该实施例37中获得的关于在小鼠脾细胞测定中在施用P23IL0054和P23IL0050后对mIL-22合成的抑制作用的结果的图。结果关于组2的平均mIL-22浓度标准化，组2仅注射hIL-23。
两种纳米抗体在最高的两个剂量水平下均完全地阻断mIL-22的合成。在最低剂量下，在单价和双互补位型纳米抗体之间有明显的差异。尽管双互补位型23IL0054在0.64倍摩尔过量下仍然抑制mIL-22合成，而在相同摩尔剂量的23IL0050下，mIL-22浓度返回至基线水平。
实施例38：P23IL119A3，81A12，81G2，37D5，20B11和124C4的人源化
P23IL119A3的氨基酸序列使用内部序列查询/比对工具与人种系VH序列数据库进行比较(见图51A)。人种系VH3-23(还称为DP-47)和JH5显示最密切相关的序列。为人源化的目的，取代10个氨基酸残基(图51A中在119A3v16中的黑框所指示)，并且为稳定性目的取代1个(H37Y)，以制备P23IL119A3v16(SEQ ID NO：2578)。
在P23IL119A3的人源化过程中，构建18个P23IL119A3版本(P23IL119A3-BASIC和P23IL119A3v1至v17)。P23IL119A3-BASIC含有5个取代：A14P，H37Y，V78L，K84R和Q108L。除了这些改变以外，附加的取代已经引入至v1-v17版本中：V5L，M43K，Q44G，A49S，N58Y，A74S，Q75K，K76N，N82bS和Q93A。使用PCR重叠延伸法从寡核苷酸组装这些版本。这些构建体在大肠杆菌中表达并通过IMAC和脱盐纯化。
通过表面等离振子共振评价所有变体的hIL-23结合能力并且在如实施例27和35中所述的α-筛选和脾细胞测定中评价它们的中和活性。还使用Lightcylcer(Roche)在热漂移测定中检测这些变体的热稳定性。在此测定中纳米抗体变体在不同的pH值下在宝石橙(sypro orange)的存在下温育，并且施加温度梯度。当纳米抗体开始变性时，宝石橙结合并且测量到的荧光陡然增加，照此，可对特定的pH测定熔解温度(melting temperature)。分析在两轮中进行，在第一轮中评价基础变体上的单突变，并且基于这些结果，制备具有组合突变的新变体。结果总结在表B-22中。
第二轮变体的结合动力学通过表面等离振子共振(Biacore 3000)进行全面深入的分析。人可溶性IL-23经胺偶联共价结合于CM5传感器芯片表面，使用EDC/NHS用于活化，HCl用于灭活。纳米抗体结合在一个浓度(100nM)下评价。各种纳米抗体以45μl/分钟的流速注射4分钟以结合芯片结合的抗原。下一步，以相同的流速向所述芯片上喷入不含纳米抗体的结合缓冲液，以使结合的纳米抗体自发解离。从不同的纳米抗体获得的传感图，计算koff值(kd)值并且表示在表B-23中。结合速率常数(kon或ka)，并且因此还有KD值，仅是指示性的，原因在于仅使用一个纳米抗体浓度来拟合结合模型。结果总结在表B-23中。
Figure BPA00001186248903561
Figure BPA00001186248903571
P23IL81A12的氨基酸序列使用内部序列查询/比对工具与人种系VH序列数据库进行比较(见图51B)。人种系VH3-23(还称为DP-47)和JH5显示最密切相关的序列。为人源化的目的，取代8个氨基酸残基(图51B中在81A12v4中的黑框所指示)，以制备P23IL81A12v4(SEQ ID NO：2584)。
在P23IL81A12的人源化过程中，构建5个P23IL81A12版本(P23IL81A12-BASIC和P23IL81A12v1至v4)。P23IL81A12-BASIC含有4个取代：A14P，V78L，K84R和Q108L。除了这些改变以外，附加的取代已经引入至v1-v4版本中：V5L，E44G，A49S和A74S。使用PCR重叠延伸法从寡核苷酸组装这些版本。这些构建体在大肠杆菌中表达并通过IMAC和脱盐纯化。
通过表面等离振子共振评价所有变体的hIL-23结合能力并且还检测这些变体的热稳定性。分析在两轮中进行，在第一轮中评价基础变体上的单突变，其结果总结在表B-24中。
表B-24：对P23IL81A12的第一轮人源化的结果
Figure BPA00001186248903581
制备并检测具有所有突变的最终变体：P23IL 81A12v4。此最终变体的分析结果显示在表B-25中。该分子在构架区中为91.95％人源化的(根据Kabat编号)。
表B-25：对P23IL81A12的第二轮人源化的结果
Figure BPA00001186248903582
P23IL81G2的氨基酸序列使用内部序列查询/比对工具与人种系VH序列数据库进行比较(见图51C)。人种系VH3-23(还称为DP-47)和JH5显示最密切相关的序列。为人源化的目的，取代11个氨基酸残基(图51C中在81G2v11中的黑框所指示)，以制备P23IL81G2v11(SEQ ID NO：2597)。
在P23IL81G2的人源化过程中，构建12个P23IL81G2版本(P23IL81G2basic和P23IL81G2v1至v11)。P23IL81A12basic含有2个取代：E44G和Q108L。除了这些改变以外，附加的取代已经引入至v1-v11版本中：V5L，I22A，A49S，G60A，F62S，A68T，A74S，T78L，W79Y K83R和T105Q。使用PCR重叠延伸法从寡核苷酸组装这些版本。这些构建体在大肠杆菌中表达并通过IMAC和脱盐纯化。通过表面等离振子共振评价所有变体的hIL-23结合能力并且还检测这些变体的热稳定性。分析在两轮中进行，在第一轮中评价基础变体上的单突变，其结果总结在表B-26中。
表B-26：对P23IL81G2的第一轮人源化的结果
Figure BPA00001186248903591
制备并检测具有除V3和V4的突变以外的所有突变的最终变体：P23IL81G2v11。此最终变体的分析结果显示在表B-27中。该分子在构架区中为92.10％人源化的(根据Kabat编号)。
表B-27：对P23IL81G2的第二轮人源化的结果
P23IL37D5的氨基酸序列使用内部序列查询/比对工具与人种系VH序列数据库进行比较(见图51D)。人种系VH3-23(还称为DP-47)和JH5显示最密切相关的序列。为人源化的目的，可以取代8个氨基酸残基(图51D中在37D5v16中的黄色和蓝色所指示)，以制备P23IL37D5v16(SEQ ID NO：2601)。在此情况下，制备基础变体，其含有突变V5L，E44G，K84R和Q108L。然后构建在74，75，76和78位处有16(24)种排列的基础突变体的微小文库。该文库在TG1中转化，并且挑取单个菌落并生长在96孔板中。制备胞质提取物并筛选解离速率和在阻断α-筛选中筛选。还测定这些克隆的序列。
产生在效力和亲和力方面没有损失或损失很小的变体，并通过IMAC和脱盐纯化，并且全面深入地分析。结果显示在表B-28中。为人源化目的改变的氨基酸残基在图51D中的变体中用黑框指示。
表B-28：对P23IL37D5的人源化的分析结果
P23IL-124C4的氨基酸序列使用内部序列查询/比对工具与人种系VH序列数据库进行比较(见图51E)。人种系VH3-23(还称为DP-47)和JH5显示最密切相关的序列。为人源化的目的，可以取代6个氨基酸残基。制备基础变体P23IL-124C4-BASIC，并含有突变E44G和V78L。除了这些改变以外，附加的取代已经引入至v1-v3版本中：S71R，A74S和K105Q。使用PCR重叠延伸法从寡核苷酸组装这些变体。这些构建体在大肠杆菌中表达并通过IMAC和脱盐纯化。
实施例39：不同格式的人源化纳米抗体的构建和产生
使用构件P23IL119A3v16或P23IL119A3v10，P23IL81G2v11或P23IL81A12v4，用三种不同类型的HLE构建双互补位型抗p19纳米抗体。不同格式的人源化纳米抗体的一些优选的但非限制性的实例及其相应的纳米抗体ID表示在图32中。
A)HLE1：抗人血清白蛋白纳米抗体
三价人源化双互补位型分子(P23IL0057和P23IL0058/0064)具有两个与人源化抗p19纳米抗体对应的构件和在其中间的与抗人血清白蛋白纳米抗体构件对应的第三个人源化纳米抗体构件。单个构件通过9Gly/Ser(GGGGSGGGS；SEQ ID NO：792)接头融合。P23IL0057由P23IL119A3v10和P23IL84A12组成，而P23IL0058由P23IL119A3v16和P23IL84A12组成。这些构建体转化至TG1中。表达后，通过在Mabselect Extra上俘获并用100mM甘氨酸pH 2.5洗脱，紧接着立即用1M TrisHCl pH7.5中和而从胞质提取物中纯化这些纳米抗体。样品通过使用Mono S HR5/50柱(GE healthcare)进行阳离子交换，并在Superdex75 10/300 GL(GE healthcare)上通过大小排阻进行精制。
为了大批生产这些纳米抗体，这些构建体克隆在pAX89(改良的pPICZalphaA载体，Invitrogen，卡尔斯巴德，CA)中，并转化进毕赤酵母株X33中。纳米抗体P23IL0064从表达纳米抗体的重组毕赤酵母的澄清发酵液中开始纯化。澄清的发酵液经TFF(Hydrosart 0.22μm盒，Sartorius)，紧接着通过使用TFF(Hydrosart 10kDa MWCO-盒Sartorius)的至PBS中的浓缩和透析过滤步骤而制成为无微粒的。纳米抗体在MabCaptureA(Poros)上俘获，紧接着经SEC(Sephadex G25 fine，GE healthcare)将缓冲液转换为1/10 PBS和在Poros 50HS(Poros)上的精制步骤。在用用于去除LPS的50mM辛基β-D-吡喃葡萄糖苷(Sigma)处理后，纳米抗体在Superdex 75pg(GEHealthcare)上分级分离。
B)HLE2：HSA：
HSA融合的人源化双互补位型纳米抗体(P23IL0065)由通过35Gly/Ser接头融合的与人源化抗p19纳米抗体P23IL119A3v16和P23IL81G2v11对应的两个构件组成。HSA直接融合在该构建体的C-末端。这通过将P23IL119A3v16-35GS-81G2v11的编码序列连接进pAX99载体(其是含有全长人血清白蛋白的编码序列的pPICZalphaA载体)中而进行。质粒转化至毕赤酵母株X33中。然后从表达纳米抗体的重组毕赤酵母的澄清发酵液中开始纯化纳米抗体。澄清的发酵液经TFF(Hydrosart 0.22μm盒，Sartorius)，紧接着通过使用TFF(PESU-AL盒Sartorius)的至PBS中的浓缩和透析过滤步骤而制成为无微粒的。目的蛋白经在Blue Sepharose 6FF(GE Healthcare，乌普萨拉，瑞典)上俘获和进一步经使用Poros50HQ和Superdex200 XK26/60的精制步骤而进一步纯化。
C)HLE3：PEG
聚乙二醇化的人源化双互补位型纳米抗体P23IL0062/0063由通过35Gly/Ser接头融合的与人源化抗p19纳米抗体P23IL119A3v16和P23IL81G2v11对应的两个构件组成。GGGC序列在该构建体的C-末端处加入。这通过将P23IL119A3v16-35GS-81G2v11的编码序列连接进pAX 97载体(其是含有此GGGC序列的pPICZalphaA载体)中产生P23IL0063或连接仅pAX101载体中产生P23IL0062而进行。pAX97构建体转化进毕赤酵母株X33中，并且pAX101构建体转化进TG1中。如下进行纯化和聚乙二醇化：纳米抗体P23IL0063在毕赤酵母中产生。纳米抗体通过在MabCaptureA(Poros)上的俘获步骤，并使用100mM甘氨酸pH 2.7洗脱而从澄清的发酵液中开始纯化。之后将缓冲液转换为1/10PBS，目的蛋白在Poros 50HS(Poros)上进一步精制，紧接着用10mM DTT还原。通过SEC(Superdex75pg，GE Healthcare)去除过量的DTT，并且将还原的纳米抗体偶联至线性mPEG40(40kDa甲氧基聚(乙二醇)马来酰亚胺基-丙酰胺，Dow Pharma)。聚乙二醇化纳米抗体在MacroCap SP(GE healthcare)上进一步纯化以去除过量的未反应的PEG40。最后，聚乙二醇化纳米抗体使用用于去除LPS的50mM辛基β-D-吡喃葡萄糖苷(Sigma)处理，紧接着进行大小排阻层析(Superdex75pg，GE Healthcare)。
实施例40：格式化的人源化抗p19纳米抗体的表征
A)小鼠脾细胞测定中的效力
在如实施例27中所述的使用hIL-23和食蟹猴IL-23的脾细胞测定中检测人源化HLE纳米抗体并与WT HLE纳米抗体比较。结果显示在表B-29和B-30中。
B)BAF3增殖测定中的效力
在如实施例27中所述的使用76pM hIL-23的BAF3增殖测定中检测人源化HLE纳米抗体并与WT HLE纳米抗体比较。结果显示在表B-31中。
表B-29：在使用19pM hIL-23和3.8pM食蟹猴IL-23(cIL-23)的脾细胞测定中HLE人源化双互补位型抗p19纳米抗体的效力
Figure BPA00001186248903631
表B-30：在使用19pM hIL-23和3,8pM食蟹猴IL-23(cIL-23)的脾细胞测定中HLE人源化双互补位型抗p19纳米抗体与它们的非人源化等价物相比较的效力。
Figure BPA00001186248903641
表B-31：在使用76pM hIL-23的BA/F3增殖测定中HLE人源化双互补位型抗p19纳米抗体与非人源化等价物相比较的效力
  纳米抗体/mAB   IC 50(pM)
  P23IL119A3V16-9GS-ALB8-9GS-81A12V4   49
  P23IL119A3(H37Y-M43K)-9GS-ALB1-9GS-81A12   43
  P23IL119A3V16-35GS-81G2V11-HSA   125
  P23IL119A3-35GS-81G2-HSA   66
  P23IL119A3V16-35GS-81G2V11-GGGC-线性PEG40   71
  P23IL119A3-35GS-81G2-GGGC-线性PEG40   71
  BM01   58
C)ELISA效力测定：格式化人源化纳米抗体对IL-23与IL-23R的相互 作用的抑制
96孔板用抗Fc纳米抗体(6μg/ml)在4℃下包被过夜，随后用SuperblockT20(PBS)封闭缓冲液封闭30分钟。将不同浓度的格式化人源化纳米抗体与4ng/ml hIL-23预温育30分钟，然后与300ng/ml hIL-23R-Fc温育30分钟，之后将混合物转移至包被的孔中。结合的hIL-23在室温下用在含有10％Superblock T20(PBS)封闭缓冲液的PBS中的生物素化抗人白介素-12(IL-12)p40/70单克隆抗体(eBiosciences，圣地亚哥，USA)的1/750稀释液检测30分钟，紧接着在室温下与在含有10％Superblock T20(PBS)封闭缓冲液的PBS中的1/5000辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素温育30分钟。使用增强型可溶性3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(esTMB)着色试剂进行显色，之后用1N HCl终止显色反应。测量在450nm处的吸光度。图52显示格式化人源化纳米抗体(23IL0064，23IL0065和23IL0063)抑制IL-23与IL-23R的相互作用，并且表B-32给出了相应的IC50值。
在此测定中，还图示说明了格式化人源化纳米抗体与绒猴(marmoset)IL-23的交叉反应性。
表B-32：在抑制ELISA测定中格式化人源化抗IL23(p19)纳米抗体的效力
Figure BPA00001186248903651
D)23IL0064与人血清白蛋白的结合
96孔微量滴定板用重组人血清白蛋白(HSA，在PBS中125μg/ml)在4℃下包被过夜。从孔中吸出液体并用Superblock T20(PBS)封闭缓冲液封闭30分钟后，各孔与23IL0064的系列稀释液温育1小时。用二价的辣根过氧化物酶(HRP)缀合的纳米抗体检测结合的23IL0064。在用1/3稀释的增强型可溶性3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(esTMB)着色试剂显色后，用1N HCl终止显色反应，并在450nm处测量吸光度(图53)。
实施例41：在急性体内小鼠脾细胞模型中人源化纳米抗体23IL0063，23IL0064和23IL0065的活性
在实施例35中所述的急性体内小鼠脾细胞模型中证明了人源化IL-23p19中和纳米抗体23IL0063，23IL0064和23IL0065的功效。
在两个独立的实验中，C57BL/6小鼠分配为8组，每组由4个个体组成。来自组2-8的所有小鼠在3个不同的时间点(t＝0小时，7小时和23小时)经腹膜内注射3μg hIL-233次。组1的动物在相同的时间点接受PBS代替hIL-23。在首次hIL-23注射前24小时皮下注射纳米抗体或阳性对照抗体。在两个实验期间，纳米抗体23IL0063，23IL0064和23IL0065以三种不同的剂量施用。剂量如下进行选择，即，使得对于三种纳米抗体的每一种，对每次3μg hIL-23注射的过量摩尔均是相同的(16倍，3.2倍或0.64倍过量)。使用BM01作为阳性对照。
将结果关于组2的平均mIL-22浓度标准化，组2仅注射hIL-23，并且表示在图54和55中。所有三种纳米抗体均能够中和hIL-23并在两个最高剂量下显著地阻断mIL-22的合成。最低剂量的纳米抗体(0.64倍过量)仍然具有作用但不能够完全地阻断mIL-22产生。纳米抗体的功效与BM01的功效相当。
实施例42：双互补位型野生型纳米抗体在小鼠中的药代动力学
为了测定一些代表性的双互补位型野生型纳米抗体的药代动力学特性，72只雄性Balb/c小鼠分配为6组，各组由12只小鼠组成。小鼠为约12周龄，初始体重为19.8-24.9克。
检测纳米抗体23IL0049，23IL0041和23IL0038。如表B-33中所述，在检测第1天，动物经静脉或皮下单次给药而用药。在表B-32中所述的时间点取血清样品用于测定纳米抗体水平和抗体分析。
Figure BPA00001186248903671
Figure BPA00001186248903681
纳米抗体23IL0049(119A3-Alb1-81A12；P1aWT)，23IL0041(119A3-81G2-HSA；P1bWT)和23IL0038(119A3-81G2-PEG40；P1cWT)的浓度通过三种不同的免疫测定法在血清中测定。
在小鼠血清中纳米抗体23IL0049的浓度如下测定：96孔微量滴定板(Maxisorp，Nunc，威斯巴登，德国)用100μL/孔中性抗生物素蛋白(neutravidin)(PBS中2μg/mL，Pierce，罗克福德，IL)在4℃下包被过夜。将各孔吸出液体，并用SuperBlock
Figure BPA00001186248903691
T20PBS(Pierce，罗克福德，IL)(300μL/孔)在室温下封闭30分钟。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，通过在以600rpm摇动下在室温下温育1小时而俘获100μL/孔生物素化hIL23(在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％Tween20中0.2μg/mL；无载体重组人IL-23(p19/p40)eBioScience，圣地亚哥，USA)。用EZ-Link
Figure BPA00001186248903692
Sulfo-NHS-LC-生物素(Pierce，罗克福德，IL，USA)制备生物素化hIL23，并且使用Zeba脱盐离心柱(Zeba desalt spin columns)(Pierce，罗克福德，IL，USA)去除游离的生物素。在该温育步骤后，各孔用PBS-0.05％吐温20洗涤3次。用于标准品、QC样品和检测样品的所有制备均在非包被(聚丙烯)板中完成。标准品和QC样品的预稀释液在100％小鼠血清中制备。为制备标准品和QC样品，在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中制备预稀释液的1/10稀释液(小鼠血清的终浓度为10％)。检测样品1/10稀释在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中，并且当需要时，进一步在含有10％小鼠血清的PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中稀释(小鼠血清的终浓度为10％)。将标准品、QC样品和检测样品转移至包被板中，并且在以600rpm摇动下在室温下温育2小时。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，各板与100μL/孔的兔抗纳米抗体多克隆抗体(在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中1/5000稀释)在600rpm摇动下在室温下温育1小时。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，各板与100μL/孔的辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔多克隆抗体(在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中1/5000稀释，DakoCytomation，Glostrup，丹麦)在600rpm摇动下在室温下温育1小时。通过与100μL/孔的增强型可溶性3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(esTMB，SDT，布鲁塞尔，比利时)温育进行显色。10分钟后，用100μL/孔1N HCl终止显色反应。10秒摇动后在Tecan ELISA读数仪中测定450nm处的吸光度，并且在620nm处校正本底吸光度。基于S形标准曲线测定各样品中的浓度。
在小鼠血清中纳米抗体23IL0041的浓度如下测定：96孔微量滴定板(Maxisorp，Nunc，威斯巴登，德国)用100μL/孔中性抗生物素蛋白(PBS中2μg/mL，Pierce，罗克福德，IL)在4℃下包被过夜。将各孔吸出液体，并用SuperBlock
Figure BPA00001186248903701
T20 PBS(Pierce，罗克福德，IL)(300μL/孔)在室温下封闭30分钟。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，通过在600rpm摇动下在室温下温育1小时而俘获100μL/孔生物素化hIL23(在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中0.2μg/mL；无载体重组人IL-23(p 19/p40)eBioScience，圣地亚哥，USA)。在该温育步骤后，各孔用PBS-0.05％吐温20洗涤3次。用于标准品、QC样品和检测样品的所有制备均在非包被(聚丙烯)板中完成。标准品和QC样品的预稀释液在100％小鼠血清中制备。为制备标准品和QC样品，在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中制备预稀释液的1/10稀释液(小鼠血清的终浓度为10％)。检测样品1/10稀释在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中，并且当需要时，进一步在含有10％小鼠血清的PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中稀释(小鼠血清的终浓度为10％)。将标准品、QC样品和检测样品转移至包被板中，并且在600rpm摇动下在室温下温育2小时。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，各板与100μL/孔的辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗人白蛋白多克隆抗体(在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中1/5000稀释，Nordic Immunology，提尔堡，荷兰)在600rpm摇动下在室温下温育1小时。通过与100μL/孔的增强型可溶性3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(esTMB，SDT，布鲁塞尔，比利时)温育进行显色。10分钟后，用100μL/孔1N HCl终止显色反应。10秒摇动后在Tecan ELISA读数仪中测定450nm处的吸光度，并且在620nm处校正本底吸光度。基于S形标准曲线测定各样品中的浓度。
在小鼠血清中纳米抗体23IL0038的浓度如下测定：96孔微量滴定板(Maxisorp，Nunc，威斯巴登，德国)用100μL/孔人IL-12/IL-23 p40 MAb(克隆169516)(PBS中2.5μg/mL，R&D系统，明尼阿波利斯，USA)在4℃下包被过夜。将各孔吸出液体，并用SuperBlockT20 PBS(Pierce，罗克福德，IL)(300μL/孔)在室温下封闭30分钟。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，通过在600rpm摇动下在室温下温育1小时而俘获100μL/孔无载体重组人IL-23(p19/p40)(PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中0.25μg/mL，eBioScience，圣地亚哥，USA)。在该温育步骤后，各孔用PBS-0.05％吐温20洗涤3次。用于标准品、QC样品和检测样品的所有制备均在非包被(聚丙烯)板中完成。标准品和QC样品的预稀释液在100％小鼠血清中制备。为制备标准品和QC样品，在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中制备预稀释液的1/10稀释液(小鼠血清的终浓度为10％)。检测样品1/10稀释在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中，并且当需要时，进一步在含有10％小鼠血清的PBS-0.1％酪蛋白-0.05％Tween20中稀释(小鼠血清的终浓度为10％)。将标准品、QC样品和检测样品转移至包被板中，并且在以600rpm摇动下在室温下温育2小时。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，各板与100μL/孔的兔抗纳米抗体多克隆抗体(在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中稀释1/2000)在600rpm摇动下在室温下温育1小时。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，各板与100μL/孔的辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔多克隆抗体(在PBS-0.1％酪蛋白-0.05％吐温20中1/5000稀释，DakoCytomation，Glostrup，丹麦)在以600rpm摇动下在室温下温育1小时。通过与100μL/孔的增强型可溶性3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(esTMB，SDT，布鲁塞尔，比利时)温育进行显色。10分钟后，用100μL/孔1N HCl终止显色反应。10秒摇动后在Tecan ELISA读数仪中测定在450nm处的吸光度，并且在620nm处校正本底吸光度。基于S形标准曲线测定各样品中的浓度。
用23IL0049，23IL0041和23IL0038注射的平均血浆浓度-时间曲线使用WinNonlin软件专业版5.1(WinNonlin Professional Software Version 5.1)(Pharsight Corporation，山景城，加利福尼亚州，美国)使用分别用于IV和SC给药途径的预编程的1-7模型和3-4模型进行分室药代动力学分析。通过拟合的直观查验(visual inspection)，以及最小AIC(Akaike信息量准则(Akaike’s Information Criterion))，SBC(施瓦茨贝叶斯准则(Schwarz Bayesian Criterion))，WRSS(加权残差平方和)和CV％(参数的变化系数)的评价来进行模型和加权鉴别(Model and Weighting discrimination)。计算的药代动力学参数的总结在表B-35和表B-36中给出。
静脉内施用23IL0038或23IL0041-23IL0049后的曲线似乎分别以单相或双相的方式下降。皮下施用23IL0049，23IL0041和23IL0038后的曲线在达到最大浓度后以单相的方式下降。在经静脉内和皮下两种方式施用后获得23IL0049和23IL0038的期望PK参数，23IL0049具有稍高的经静脉内和皮下两种施用方式后的最终半衰期并且具有较高的生物利用度。23IL0041的经静脉内和皮下两种施用方式后的最终半衰期和生物利用度均显著较低。
表35：在雄性Balb/c小鼠中在单次静脉内施用(100μg/ml)后23IL0049，23IL0041和23IL0038的基础药代动力学参数1。
Figure BPA00001186248903721
表36：在雄性Balb/c小鼠中在单次皮下施用(100μg/ml)后23IL0049，23IL0041和23IL0038的基础药代动力学参数1
  参数1   23IL00492   23IL0041   23IL0038
  V/F(mL)   2.07   16.9   3.84
  CL/F(mL/天)   0.929   33.9   2.04
  tlag(hr)   2.09   -   2.41
  t1/2吸收(＝0.693/K01)(hr)   6.26   1.98   2.46
  t1/2消除(＝0.693/K10)(天)   1.55   0.346   1.30
  tmax(天)   0.894   0.218   0.508
  Cmax(μg/ml)   47.1   3.82   21.0
Figure BPA00001186248903731
在动物中没有检测到针对23IL0049和23IL0038纳米抗体的显著抗体效价。在静脉内施用6天和皮下施用10天后看到有少量针对23IL0041的抗体。
实施例43：小鼠中格式化人源化纳米抗体(23IL0064，23IL0065和23IL0063)的PK。
人源化IL23纳米抗体23IL0064，23IL0065和23IL0063经静脉内和皮下施用于雄性Balb/c小鼠。在血清样品中测量纳米抗体的浓度。测量针对纳米抗体的抗体。
实施例44：在食蟹猴中格式化人源化纳米抗体(23IL0064，23IL0065和23IL0063)的PK。
人源化IL23纳米抗体23IL0064，23IL0065和23IL0063经静脉内和皮下施用于雄性食蟹猴。在血清样品中测量纳米抗体的浓度。测量针对纳米抗体的抗体。
实施例45：23IL0064，23IL0065和23IL0064在人源化小鼠银屑病模型中的功效
在人源化小鼠模型中评价了抗IL23p19纳米抗体抑制银屑病的各个方面的能力。该模型基于Wrone-Smith和Nickoloff(1996)所述的研究。其是唯一可用的模型，其中可在体内进行监测药物对人银屑病病变的进展的作用。简言之，来自银屑病患者的非病变皮肤被移植到免疫缺陷小鼠上，并且在接受植入物后，皮内注射自体预激活的PBMC，这触发银屑病进程。小鼠经腹膜内每周治疗两次。治疗3周后，将小鼠处死并且关于表皮增生(HE-染色)以及角质形成细胞的增殖和分化(例如Ki-67染色)，组织学评价人皮肤移植物。
实施例46：抗p40双互补位型纳米抗体和抗p19-抗p40双特异性纳米抗体
A)抗p40双互补位型纳米抗体和抗p19抗p40双特异性纳米抗体的 构建
基于来自p40纳米抗体的表位分组实验的数据(实施例26)，下列的纳米抗体以抗p40双互补位型格式的方式合并：P23IL3C1与P23IL3B8或P23IL3G10，P23IL3B8与P23IL80D10或P23IL84G12，P23IL-23E3与P23IL81A1或P23IL84G1，P23IL-22D7与P23IL80D10或P23IL-22D10以及P23IL-22E11与P23IL80D10或P23IL84G12，或以抗p19和抗p40双特异性格式的形式合并：P23IL119A3与P23IL3C1，P23IL3B8或P23IL-23E3以及P23IL37D5与P23IL-22D7。研究了格式化，纳米抗体的定位和接头长度对效力的影响。使用的所有构建体列举在图33和34中。
编码序列克隆进pAX100中，在TG1中转化并表达为myc-His标记分子。它们在50mM OGP的存在下通过IMAC、脱盐、浓缩和凝胶过滤纯化以去除LPS。
B)抗p40双互补位型纳米抗体和抗p19抗p40双特异性纳米抗体在 小鼠脾细胞测定中的效力
在如实施例27中所述的使用hIL-23和食蟹猴IL-23的脾细胞测定中检测抗p40双互补位型和抗p19抗p40双特异性HLE纳米抗体并与mABBM01比较。结果显示在表B-37中。对于双特异性纳米抗体，所有在hIL-23上表现良好，但P23IL0202和0204在食蟹猴IL-23上表现较差。当使用食蟹猴IL-23时，对于双互补位型纳米抗体P23IL0406和0407具有较差的效力，因此它们的交叉反应性不是最佳的。
表B-37：在使用19pM hIL-23和3.8pM食蟹猴IL-23(cIL-23)的小鼠脾细胞测定中抗p40双互补位型纳米抗体和抗p19抗p40双特异性纳米抗体的效力
Figure BPA00001186248903751
C)在BAF3增殖测定中抗p40双互补位型纳米抗体和抗p19抗p40 双特异性纳米抗体的效力
基于来自小鼠脾细胞测定的结果，在如实施例27中所述的使用76pMhIL-23的BA/F3增殖测定中检测具有最佳效力的选择组的抗p40双互补位型和抗p19抗p40双特异性HLE纳米抗体，并与mAB BM01比较。结果显示在表B-38中。
表B-38：在使用76pM hIL-23的BA/F3增殖测定中抗p40双互补位型纳米抗体和抗p19抗p40双特异性纳米抗体的效力
Figure BPA00001186248903761
D)在脾细胞测定中对天然hIL-23的活性：
基于来自使用重组hIL-23的小鼠脾细胞测定的结果，在使用19pM天然hIL-23的小鼠脾细胞测定中检测如实施例31中所述制备的具有最佳效力的选择组的抗p40双互补位型和抗p19抗p40双特异性HLE纳米抗体，并与mAB BM01比较。结果显示在表B-39中。
表B-39：在使用19pM天然hIL-23的小鼠脾细胞测定中抗p40双互补位型纳米抗体和抗p19抗p40双特异性纳米抗体的效力
Figure BPA00001186248903762
E)在IL-12依赖性PHA胚细胞增殖测定中的效力
在IL-12依赖性PHA胚细胞增殖测定中测定hIL-12的中和作用的效力。简言之，PHA胚细胞通过将PBMC在PHA(50μg/ml)中培养3天并在IL-2(50U/ml)中培养一天而获得。这些PHA胚细胞用与纳米抗体测试项目的系列稀释液(例如从60nM u起始至0.15pM)或从2000nM起始直至1pM的p19-p40双特异性纳米抗体和p40单价纳米抗体或对照纳米抗体或抗体预温育的hIL-12刺激。细胞刺激2天，并用1μCi/孔3H-胸苷使细胞发生脉冲持续最后6个小时，因此通过闪烁计数测量3H-胸苷掺入来测定增殖。
实施例47：纳米抗体23IL400和23IL403在急性体内小鼠脾细胞模型中的活性
二价p40+/p40+纳米抗体23IL400(3B8-ALB 1-3C 1，SEQ ID NO：2630)和23IL403(3G10-ALB1-3C1，SEQ ID NO：2633)已经在实施例35中所述的急性体内小鼠脾细胞模型中进行了分析。7组每组4只C57BL/6小鼠在t＝0小时，7小时和23小时时用3μg hIL-23刺激。组1的小鼠在相同的时间点接受PBS代替hIL-23。在首次hIL-23注射前24小时皮下注射阳性对照抗体(BM01；组3和4)，23IL400(组5和6)以及23IL403(组7和8)。分析两个剂量，并且对于两个剂量，对于所有三个测试项目对每次3μg hIL-23注射的过量摩尔均是相同的(3.2倍过量和0.64倍过量)。
结果显示在图51中，该图是显示在实施例38中获得的关于在小鼠脾细胞测定中在以两个不同的剂量水平施用BM01，P23IL0400和P23IL0403后对mIL-22合成的抑制作用的结果的图。
将结果关于组2的平均mIL-22浓度标准化，组2仅注射hIL-23。两种纳米抗体均在最高剂量下完全阻断mIL-22的合成。在最低的剂量下，在23IL400和23IL403之间有明显的差异。尽管23IL400在0.64倍过量摩尔下仍显著地抑制mIL-22合成，但在相同摩尔剂量的23IL403下mIL-22浓度几乎回到基线水平。23IL400的功效与BM01相当。

Claims (37)

1.蛋白或多肽，其包括任选地经合适的接头连接的、至少一个针对p19亚单位的氨基酸序列和至少一个针对p40亚单位的氨基酸序列，并且任选地包括一个或多个另外的氨基酸序列、结合结构域和/或结合单位。
2.根据权利要求1所述的蛋白或多肽，其中所述针对p19亚单位的氨基酸序列是p19+序列(即，能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中所述针对p40亚单位的氨基酸序列是p40+序列(即，能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
3.根据权利要求1所述的蛋白或多肽，其中所述针对p19亚单位的氨基酸序列是p19+序列(即，能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中所述针对p40亚单位的氨基酸序列是p40-序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
4.根据权利要求1所述的蛋白或多肽，其中所述针对p19亚单位的氨基酸序列是p19+序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中所述针对p40亚单位的氨基酸序列是p40+序列(即，能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
5.蛋白或多肽，其包括任选地经合适的接头连接的、至少一个针对p35亚单位的氨基酸序列和至少一个针对p40亚单位的氨基酸序列，并且任选地包括一个或多个另外的氨基酸序列、结合结构域和/或结合单位。
6.蛋白或多肽，其包括任选地经合适的接头连接的、至少一个针对p19亚单位上的第一表位或抗原决定簇的氨基酸序列和至少一个针对p19亚单位上不同于所述第一表位或抗原决定簇的第二表位或抗原决定簇的另外的氨基酸序列，并且任选地包括一个或多个另外的氨基酸序列、结合结构域和/或结合单位。
7.根据权利要求6所述的蛋白或多肽，其中第一氨基酸序列是p19+序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中第二氨基酸序列是p19-序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p19亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
8.蛋白或多肽，其包括任选地经合适的接头连接的、至少一个针对p40亚单位上的第一表位或抗原决定簇的氨基酸序列和至少一个针对p40亚单位上不同于所述第一表位或抗原决定簇的第二表位或抗原决定簇的另外的氨基酸序列，并且任选地包括一个或多个另外的氨基酸序列、结合结构域和/或结合单位。
9.蛋白或多肽，其中第一氨基酸序列是p40+序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)，并且其中第二氨基酸序列是p40-序列(即，基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制包含p40亚单位的异二聚体细胞因子与其受体的结合的氨基酸序列)。
10.根据权利要求1-9中任意一项所述的蛋白或多肽，其中包含在所述蛋白或多肽内并且针对亚单位的各氨基酸序列形成单个(抗原)结合结构域或结合单位和/或基本上由单个(抗原)结合结构域或结合单位组成，和/或能够形成单个(抗原)结合结构域或结合单位(任选地在适当地折叠后)和/或作为单个(抗原)结合结构域或结合单位(任选地在适当地折叠后)起作用。
11.根据权利要求1-10中任意一项所述的蛋白或多肽，其中包含在所述蛋白或多肽内并且针对亚单位的各氨基酸序列包括免疫球蛋白折叠或在适当的条件下能够形成免疫球蛋白折叠。
12.根据权利要求1-11中任意一项所述的蛋白或多肽，其中包含在所述蛋白或多肽内并且针对亚单位的各氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1至FR4)和3个互补决定区组成。
13.根据权利要求1-12中任意一项所述的蛋白或多肽，其中包含在所述蛋白或多肽内并且针对亚单位的各氨基酸序列是结构域抗体(或适于用作结构域抗体的氨基酸序列)、单结构域抗体(或适于用作单结构域抗体的氨基酸序列)、″dAb″(或适于用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体TM(包括但不限于VHH序列)或另一种单可变结构域，或其任意一种的任何适当的片段。
14.针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的蛋白或多肽，所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-至少第一亚单位；
和
-至少第二亚单位；
其中所述蛋白或多肽至少包括针对所述第一亚单位的第一结合结构域或结合单位和针对所述第二亚单位的第二结合结构域或结合单位。
15.针对第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的蛋白或多肽，所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-在所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体和至少第二、不同的异二聚体蛋白、多肽、配体或受体之间共有的至少第一亚单位；
和
-在所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体和所述第二、不同的异二聚体蛋白、多肽、配体或受体之间不共有的至少第二亚单位；
其中所述蛋白或多肽至少包括针对所述第一(即，共有的)亚单位的第一结合结构域或结合单位和针对所述第二(即，不共有的)亚单位的第二结合结构域或结合单位。
16.针对第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的蛋白或多肽，所述第一异二聚体蛋白、多肽、配体或受体包括：
-至少第一亚单位；
和
-至少第二亚单位；
其中所述蛋白或多肽至少包括针对所述第一亚单位的第一结合结构域或结合单位，和也针对所述第一亚单位但针对所述第一亚单位上的不同表位、抗原决定簇或结合位点的不同于所述第一结合结构域或结合单位的第二结合结构域或结合单位。
17.根据权利要求15或16所述的蛋白或多肽，其针对受体的配体，并且其包括至少一个能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合的结合结构域或结合单位，和至少一个基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合的结合结构域或结合单位。
18.根据权利要求15所述的蛋白或多肽，其针对受体的配体，其中所述第一结合结构域或结合单位以及所述第二结合结构域或结合单位两者都能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合。
19.根据权利要求14-18中任意一项所述的蛋白或多肽，其中各结合结构域或结合单位包括免疫球蛋白折叠或在适当的条件下能够形成免疫球蛋白折叠。
20.根据权利要求14-19中任意一项所述的蛋白或多肽，其中各结合结构域或结合单位基本上由4个构架区(分别为FR1至FR4)和3个互补决定区组成。
21.根据权利要求14-20中任意一项所述的蛋白或多肽，其中各结合结构域或结合单位是结构域抗体(或适于用作结构域抗体的氨基酸序列)、单结构域抗体(或适于用作单结构域抗体的氨基酸序列)、″dAb″(或适于用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体TM(包括但不限于VHH序列)或另一种单可变结构域，或其任意一种的任何适当的片段。
22.编码根据权利要求1-21中任意一项所述的蛋白或多肽的核苷酸序列或核酸。
23.组合物，其包括至少一种根据权利要求1-21中任意一项所述的蛋白或多肽或根据权利要求22所述的核苷酸序列或核酸。
24.药物组合物，其包括至少一种根据权利要求1-21中任意一项所述的蛋白或多肽和至少一种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂和/或辅料。
25.p19+序列(编码p19+序列核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p19+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p19+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
26.p19-序列(编码p19-序列的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p19-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p19-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
27.p40-序列(编码p40-序列的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p40-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p40-序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
28.p40+序列(编码p40+序列的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p40+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p40+序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
29.p35序列(编码p35序列的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建包括所述p35序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为包括所述p35序列(一个或多个)和一个或多个另外的结合结构域或结合单位的多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用。
30.根据权利要求25-29中任意一项所述的应用，其中所述多价、多特异性和/或多互补位型构建体、蛋白和/或多肽针对异二聚体细胞因子。
31.根据权利要求25-30中任意一项所述的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽是针对异二聚体细胞因子的一个亚单位的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽。
32.根据权利要求30和31中任意一项所述的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽是包括至少一个针对所述异二聚体细胞因子的第一亚单位的结合结构域或结合单位和至少一个针对所述异二聚体细胞因子的第二亚单位的结合结构域或结合单位的多特异性构建体、蛋白和/或多肽。
33.根据权利要求30-32中任意一项所述的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括至少一个能够调节、中和、阻断和/或抑制所述异二聚体细胞因子与其(同源)受体的结合的结合结构域或结合单位。
34.包括单个结合结构域或结合单位或基本上由单个结合结构域或结合单位组成的氨基酸序列(编码其的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的多特异性构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的多特异性构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位，并且其中所述一个或多个氨基酸序列针对所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第一亚单位，并且至少一个所述另外的结合结构域或结合单位针对与所述第一亚单位不同的所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第二亚单位。
35.根据权利要求34所述的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽针对异二聚体细胞因子或针对异二聚体细胞因子的异二聚体受体。
36.包括单个结合结构域或结合单位或基本上由单个结合结构域或结合单位组成的氨基酸序列(编码其的核苷酸序列和/或核酸)在提供、构建针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)中的应用和/或作为针对异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的双互补位型构建体、蛋白和/或多肽(编码其的核苷酸序列和/或核酸)的一部分的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽包括所述氨基酸序列(一个或多个)和至少一个另外的结合结构域或结合单位，并且其中所述一个或多个氨基酸序列针对所述异二聚体蛋白、多肽、配体或受体的第一亚单位，并且至少一个所述另外的结合结构域或结合单位也针对所述第一亚单位，但针对所述亚单位上不同的表位或抗原决定簇。
37.根据权利要求36的应用，其中所述构建体、蛋白和/或多肽针对受体的配体，并且包括至少一个能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合的结合结构域或结合单位，和至少一个基本上不能够调节、中和、阻断和/或抑制所述配体与其(同源)受体的结合的结合结构域或结合单位。
CN2008801255706A 2007-11-27 2008-11-27 针对异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列以及包括所述氨基酸序列的多肽 Pending CN101970490A (zh)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US433207P 2007-11-27 2007-11-27
US61/004,332 2007-11-27
US533107P 2007-12-04 2007-12-04
US532407P 2007-12-04 2007-12-04
US526507P 2007-12-04 2007-12-04
US61/005,331 2007-12-04
US61/005,265 2007-12-04
US61/005,324 2007-12-04
PCT/EP2008/066365 WO2009068627A2 (en) 2007-11-27 2008-11-27 Amino acid sequences directed against heterodimeric cytokines and/or their receptors and polypeptides comprising the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101970490A true CN101970490A (zh) 2011-02-09

Family

ID=40377235

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008801255706A Pending CN101970490A (zh) 2007-11-27 2008-11-27 针对异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列以及包括所述氨基酸序列的多肽

Country Status (12)

Country Link
US (5) US20110053865A1 (zh)
EP (5) EP2650311A3 (zh)
JP (1) JP2011504740A (zh)
KR (1) KR20100097716A (zh)
CN (1) CN101970490A (zh)
AU (4) AU2008328781A1 (zh)
BR (1) BRPI0819656A2 (zh)
CA (4) CA2706425A1 (zh)
IL (1) IL205734A0 (zh)
MX (1) MX2010005783A (zh)
WO (5) WO2009068625A2 (zh)
ZA (1) ZA201004057B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107001458A (zh) * 2014-09-26 2017-08-01 Biocad股份有限公司 基于可变结构域vl和vhh衍生物的高亲和力和聚集稳定的抗体
CN114920839A (zh) * 2022-06-17 2022-08-19 天津大学 特异性结合il-23的纳米抗体及其用途
CN115915939A (zh) * 2020-03-31 2023-04-04 生物催化公司 抗真菌多肽

Families Citing this family (281)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005289809A (ja) 2001-10-24 2005-10-20 Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) 突然変異重鎖抗体
SG184709A1 (en) 2005-05-18 2012-10-30 Ablynx Nv Improved nanobodies™ against tumor necrosis factor-alpha
DE102005023617A1 (de) 2005-05-21 2006-11-23 Aspre Ag Verfahren zum Mischen von Farben in einem Display
US9023352B2 (en) 2007-02-20 2015-05-05 Tufts University Methods, compositions and kits for treating a subject using a recombinant heteromultimeric neutralizing binding protein
CN101687925B (zh) 2007-02-23 2012-10-31 先灵公司 抗IL-23p19的工程抗体
MX2009009080A (es) 2007-02-23 2009-11-02 Schering Corp Anticuerpos anti-interleucina-23p19 manipulados por ingenieria genetica.
CA2700714C (en) 2007-09-26 2018-09-11 Ucb Pharma S.A. Dual specificity antibody fusions
WO2009068625A2 (en) * 2007-11-27 2009-06-04 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against her2 and polypeptides comprising the same for the treatment of cancers and/or tumors
US8444976B2 (en) 2008-07-02 2013-05-21 Argen-X B.V. Antigen binding polypeptides
DK2334705T3 (en) 2008-09-26 2017-03-27 Ucb Biopharma Sprl BIOLOGICAL PRODUCTS
AU2009333791B2 (en) 2008-10-29 2013-04-04 Ablynx N.V. Formulations of single domain antigen binding molecules
CN105646643A (zh) 2008-10-29 2016-06-08 阿布林克斯公司 单域抗原结合性分子的纯化方法
WO2010066836A2 (en) * 2008-12-10 2010-06-17 Ablynx Nv Amino acid sequences directed against the angiopoietin/tie system and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders related to angiogenesis
DK2370465T3 (da) 2008-12-19 2019-05-06 Ablynx Nv Genetisk immunisering til fremstilling af immunoglobuliner mod celleassocierede antigener, såsom p2x7, cxcr7 eller cxcr4
EP2403873A1 (en) 2009-03-05 2012-01-11 Ablynx N.V. Novel antigen binding dimer-complexes, methods of making/avoiding and uses thereof
US9265834B2 (en) 2009-03-05 2016-02-23 Ablynx N.V. Stable formulations of polypeptides and uses thereof
AU2010233658B2 (en) 2009-04-10 2013-11-28 Ablynx Nv Improved amino acid sequences directed against IL-6R and polypeptides comprising the same for the treatment of IL-6R related diseases and disorders
DK2424889T3 (en) 2009-04-30 2015-11-02 Ablynx Nv Process for the preparation of domain antibodies
WO2010142534A1 (en) * 2009-05-27 2010-12-16 Ablynx Nv Biparatopic protein constructs directed against il-23
MX340541B (es) 2009-06-05 2016-07-13 Alblynx Nv Secuencias de aminoacidos mejoradas dirigidas contra virus sincitial respiratorio humano y polipeptidos que comprenden las mismas para la prevencion y/o tratamiento de infecciones del tracto respiratorio.
WO2011003622A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Ablynx N.V. Method for the production of variable domains
PL2473528T3 (pl) 2009-09-03 2015-05-29 Ablynx Nv Stabilne formulacje polipeptydów i ich zastosowanie
WO2011042398A1 (en) 2009-10-09 2011-04-14 Ablynx Nv Immunoglobulin single variable domain directed against human cxcr4 and other cell associated proteins and methods to generate them
JO3244B1 (ar) 2009-10-26 2018-03-08 Amgen Inc بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية
WO2011064382A1 (en) 2009-11-30 2011-06-03 Ablynx N.V. Improved amino acid sequences directed against human respiratory syncytial virus (hrsv) and polypeptides comprising the same for the prevention and/or treatment of respiratory tract infections
WO2011073180A1 (en) 2009-12-14 2011-06-23 Ablynx N.V. Single variable domain antibodies against ox40l, constructs and therapeutic use
WO2011083141A2 (en) 2010-01-08 2011-07-14 Ablynx Nv Method for generation of immunoglobulin sequences by using lipoprotein particles
GB201000467D0 (en) * 2010-01-12 2010-02-24 Ucb Pharma Sa Antibodies
PL3501499T3 (pl) 2010-02-11 2023-01-09 Ablynx Nv Sposoby i kompozycje do wytwarzania aerozoli
PE20130527A1 (es) * 2010-03-03 2013-05-09 Boehringer Ingelheim Int Polipeptidos de union a a-beta biparatopicos
WO2011135026A1 (en) * 2010-04-30 2011-11-03 Ablynx Nv Amino acid sequences of nanobodies directed against p19 subunit of the heterodimeric cytokine il-23
KR20130080790A (ko) 2010-05-20 2013-07-15 아블린쓰 엔.브이. Ｈｅｒ３와 관련된 생물학적 물질들
CN107253992B (zh) 2010-05-27 2022-03-11 根马布股份公司 针对her2的单克隆抗体
CN103153339B (zh) 2010-05-27 2021-05-04 根马布股份公司 针对her2表位的单克隆抗体
WO2011161263A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Ablynx Nv Pharmaceutical compositions for cutaneous administration
DE102010026061A1 (de) 2010-06-30 2012-01-05 Siemens Aktiengesellschaft 11C-markiertes Peptid zur Detektion eines Tumors, der einen Her2/neu-Rezeptor exprimiert
WO2012007880A2 (en) * 2010-07-16 2012-01-19 Ablynx Nv Modified single domain antigen binding molecules and uses thereof
EP2621953B1 (en) 2010-09-30 2017-04-05 Ablynx N.V. Biological materials related to c-met
US11644471B2 (en) 2010-09-30 2023-05-09 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
EP3279214B1 (en) 2010-10-29 2024-10-09 Ablynx NV Method for the production of immunoglobulin single variable domains
JP5736764B2 (ja) * 2010-12-21 2015-06-17 Jnc株式会社 発光活性を有する融合蛋白質
JP5766296B2 (ja) * 2010-12-23 2015-08-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ポリペプチド−ポリヌクレオチド複合体、およびエフェクター成分の標的化された送達におけるその使用
US9428565B2 (en) 2011-01-31 2016-08-30 The General Hospital Corporation Treatment and bioluminescent visualization using multimodal TRAIL molecules
PT2691415T (pt) 2011-03-28 2018-10-19 Ablynx Nv Método para produção de formulações sólidas compreendendo domínios variáveis únicos de imunoglobulina
JP2014514314A (ja) 2011-04-20 2014-06-19 ゲンマブ エー／エス Ｈｅｒ２およびｃｄ３に対する二重特異性抗体
EP2699260A1 (en) * 2011-04-20 2014-02-26 Genmab A/S Bispecifc antibodies against her2
UA117218C2 (uk) 2011-05-05 2018-07-10 Мерк Патент Гмбх Поліпептид, спрямований проти il-17a, il-17f та/або il17-a/f
EP2707382B1 (en) 2011-05-09 2019-07-17 Ablynx NV Method for the production of immunoglobulin single variable domains
CN107903325B (zh) * 2011-05-16 2021-10-29 埃泰美德(香港)有限公司 多特异性fab融合蛋白及其使用方法
EP2944653A1 (en) 2011-06-23 2015-11-18 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobin single variable domains
EP2723771B1 (en) 2011-06-23 2019-09-11 Ablynx NV Serum albumin binding proteins
EP4350345A3 (en) 2011-06-23 2024-07-24 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobin single variable domains
EP2723769B2 (en) 2011-06-23 2022-06-15 Ablynx NV Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
IN2014CN00437A (zh) 2011-06-23 2015-04-03 Ablynx Nv
EP2987806A3 (en) * 2011-08-17 2016-07-13 Glaxo Group Limited Modified single variable domain antibodies with reduced binding to anti-drug-antibodies
US9346884B2 (en) 2011-09-30 2016-05-24 Ablynx N.V. Biological materials related to c-Met
CN103889451B (zh) 2011-09-30 2016-06-29 埃博灵克斯股份有限公司 与C-Met相关的生物物质
CN102399288B (zh) * 2011-10-19 2013-06-05 山西德丰信成生物科技有限公司 针对免疫球蛋白Fc段的单域重链抗体
KR102080535B1 (ko) * 2011-11-23 2020-02-24 메디뮨 엘엘씨 Her3에 특이적인 결합 분자 및 이의 용도
EP2620772A1 (en) * 2012-01-25 2013-07-31 APP Latvijas Biomedicinas petijumu un studiju centrs Gastric cancer biomarkers and methods of use thereof
WO2014018113A1 (en) 2012-07-24 2014-01-30 The General Hospital Corporation Oncolytic virus therapy for resistant tumors
US9605074B2 (en) * 2012-08-30 2017-03-28 The General Hospital Corporation Multifunctional nanobodies for treating cancer
WO2014060365A1 (en) 2012-10-15 2014-04-24 Universität Zürich Prorektorat Mnw Bispecific her2 ligands for cancer therapy
EP2719706A1 (en) 2012-10-15 2014-04-16 Universität Zürich Bispecific HER2 ligands for cancer therapy
EP2738180A1 (en) * 2012-11-30 2014-06-04 Molecular Partners AG Binding proteins comprising at least two binding domains against HER2.
WO2014087010A1 (en) 2012-12-07 2014-06-12 Ablynx N.V. IMPROVED POLYPEPTIDES DIRECTED AGAINST IgE
WO2014111550A1 (en) * 2013-01-17 2014-07-24 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Modified anti-serum albumin binding proteins
ES2800630T3 (es) 2013-03-12 2021-01-04 Molecular Templates Inc Proteínas citotóxicas que comprenden regiones de unión de reconocimiento celular y regiones de la subunidad A de la toxina Shiga para la eliminación selectiva de tipos de células específicas
CA2910945A1 (en) * 2013-05-08 2014-11-13 Zymeworks Inc. Bispecific her2 and her3 antigen binding constructs
WO2015002985A2 (en) * 2013-07-01 2015-01-08 University Of Maryland Fc coupled compositions and methods of their use
PL3049439T3 (pl) * 2013-09-26 2020-07-13 Ablynx N.V. Bispecyficzne nanociała
AU2014357292B2 (en) 2013-11-27 2020-06-25 Zymeworks Bc Inc. Bispecific antigen-binding constructs targeting HER2
WO2015095412A1 (en) * 2013-12-19 2015-06-25 Zhong Wang Bispecific antibody with two single-domain antigen-binding fragments
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JP6655017B2 (ja) 2014-01-27 2020-02-26 モレキュラー テンプレーツ, インク.Molecular Templates, Inc. Ｍｈｃクラスｉエピトープ送達ポリペプチド
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
EP3502134B1 (en) 2014-03-11 2020-12-16 Molecular Templates, Inc. Proteins comprising binding regions, shiga toxin a subunit effector regions, and carboxy-terminal, endoplasmic reticulum localization signal motifs
AU2015229583B2 (en) 2014-03-11 2020-07-09 Molecular Templates, Inc. Proteins comprising amino-terminal proximal Shiga toxin A Subunit effector regions and cell-targeting immunoglobulin-type binding regions
MY187246A (en) 2014-03-14 2021-09-14 Novartis Ag Antibody molecules to lag-3 and uses thereof
CN106163547A (zh) 2014-03-15 2016-11-23 诺华股份有限公司 使用嵌合抗原受体治疗癌症
CN106164094B (zh) 2014-03-21 2021-05-14 X博迪公司 双特异性抗原结合多肽
WO2015160940A1 (en) * 2014-04-15 2015-10-22 President And Fellows Of Harvard College Bi-specific agents
ES2900852T3 (es) 2014-05-16 2022-03-18 Ablynx Nv Métodos de detección y/o medición de anticuerpos anti-fármaco, en particular anticuerpos anti-fármaco que se presentan durante el tratamiento
SI3248986T1 (sl) 2014-05-16 2022-04-29 Ablynx Nv Variabilne domene imunoglobulina
ES2919749T3 (es) 2014-06-11 2022-07-28 Molecular Templates Inc Moléculas dirigidas a células citotóxicas resistentes a la escisión por proteasa
NL2013661B1 (en) 2014-10-21 2016-10-05 Ablynx Nv KV1.3 Binding immunoglobulins.
GB201411320D0 (en) 2014-06-25 2014-08-06 Ucb Biopharma Sprl Antibody construct
SG11201700476VA (en) 2014-07-21 2017-02-27 Novartis Ag Treatment of cancer using humanized anti-bcma chimeric antigen receptor
US11542488B2 (en) 2014-07-21 2023-01-03 Novartis Ag Sortase synthesized chimeric antigen receptors
KR102594343B1 (ko) 2014-07-21 2023-10-26 노파르티스 아게 Cd33 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료
WO2016014530A1 (en) 2014-07-21 2016-01-28 Novartis Ag Combinations of low, immune enhancing. doses of mtor inhibitors and cars
EP3180037A1 (en) 2014-07-29 2017-06-21 Vrije Universiteit Brussel Radio-labelled antibody fragments for use in the prognosis, diagnosis of cancer as well as for the prediction of cancer therapy response
CN106573983B (zh) * 2014-07-29 2018-05-25 布鲁塞尔自由大学 用于在癌症的预防和/或治疗中使用的放射性标记的抗体片段
EP3660042B1 (en) 2014-07-31 2023-01-11 Novartis AG Subset-optimized chimeric antigen receptor-containing t-cells
US10851149B2 (en) 2014-08-14 2020-12-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Treatment of cancer using GFR α-4 chimeric antigen receptor
CN107108744B (zh) 2014-08-19 2020-09-25 诺华股份有限公司 抗cd123嵌合抗原受体(car)用于癌症治疗
AU2015317608B2 (en) 2014-09-17 2021-03-11 Novartis Ag Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
MA40035A (fr) 2014-10-14 2016-04-21 Dana Farber Cancer Inst Inc Molécules d'anticorps de pd-l1 et leurs utilisations
WO2016082044A1 (en) 2014-11-27 2016-06-02 Zymeworks Inc. Methods of using bispecific antigen-binding constructs targeting her2
US20180334490A1 (en) 2014-12-03 2018-11-22 Qilong H. Wu Methods for b cell preconditioning in car therapy
WO2016094602A1 (en) 2014-12-10 2016-06-16 Tufts University Vhh based binding antibodies for anthrax and botulinum toxins and methods of making and using therefor
PL3233910T3 (pl) * 2014-12-19 2020-06-01 Ablynx N.V. Dimery nanociał połączone cysteiną
CA2981103A1 (en) * 2015-03-31 2016-10-06 Vhsquared Limited Polypeptides
ES2913200T3 (es) 2015-03-31 2022-06-01 Sorriso Pharmaceuticals Inc Polipéptidos
BR112017021500A2 (pt) 2015-04-08 2018-09-25 Novartis Ag terapias com cd20, terapias com cd22 e terapias de combinação com uma célula que expressa (car) receptor de antígeno quimérico de cd19
US12128069B2 (en) 2015-04-23 2024-10-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker
WO2016179707A1 (en) 2015-05-13 2016-11-17 Zymeworks Inc. Antigen-binding constructs targeting her2
SI3294768T1 (sl) 2015-05-13 2019-11-29 Ablynx Nv Polipeptidi, ki rekrutirajo celice T, na osnovi reaktivnosti TCR alfa/beta
JP7163028B2 (ja) 2015-05-13 2022-10-31 アブリンクス エン．ヴェー． Ｃｄ３反応性に基づくｔ細胞リクルートポリペプチド
RS60441B1 (sr) 2015-05-30 2020-07-31 Molecular Templates Inc De-imunizovane, strukture shiga toksin a podjedinice i ciljani ćelijski molekuli koji sadrže isti
US11298433B2 (en) * 2015-07-17 2022-04-12 Vrije Universiteit Brussel Radiolabelled antibody fragments for use in treating cancer
WO2017015623A2 (en) 2015-07-23 2017-01-26 Inhibrx Lp Multivalent and multispecific gitr-binding fusion proteins
KR20180030085A (ko) 2015-07-26 2018-03-21 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 시가 독소 a 서브유닛 작동체 및 cd8+ t-세포 에피토프를 포함하는 세포-표적화 분자
US20180207273A1 (en) 2015-07-29 2018-07-26 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
EP3328418A1 (en) 2015-07-29 2018-06-06 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to pd-1
DK3317301T3 (da) 2015-07-29 2021-06-28 Immutep Sas Kombinationsterapier omfattende antistofmolekyler mod lag-3
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
CN105085656B (zh) * 2015-09-01 2018-04-27 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 P19/Ebi3复合物及其多克隆抗体在系统性红斑狼疮诊治中的应用
MA44334A (fr) 2015-10-29 2018-09-05 Novartis Ag Conjugués d'anticorps comprenant un agoniste du récepteur de type toll
US10968271B2 (en) 2015-10-30 2021-04-06 Ablynx N.V. Polypeptides against IL-23
NO2768984T3 (zh) 2015-11-12 2018-06-09
SI3374392T1 (sl) 2015-11-13 2022-04-29 Ablynx Nv Izboljšane variabilne domene imunoglobulina, ki vežejo serumski albumin
UA121914C2 (uk) 2015-11-18 2020-08-10 Мерк Шарп І Доум Корп. Молекула, що зв'язує pd1 і lag3
JP6768800B2 (ja) 2015-11-18 2020-10-14 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． Ｃｔｌａ４結合性物質
CN109071639B (zh) 2015-11-18 2022-07-08 默沙东公司 Pd1/ctla4结合剂
AU2016357460B2 (en) 2015-11-18 2023-07-27 Ablynx Nv Improved serum albumin binders
WO2017106656A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Novartis Ag Antibody molecules to pd-1 and uses thereof
EP3389713A2 (en) 2015-12-17 2018-10-24 Novartis AG Combination of c-met inhibitor with antibody molecule to pd-1 and uses thereof
WO2017120213A1 (en) * 2016-01-05 2017-07-13 Colorado State University Research Foundation Compositions comprising resurfaced cell-penetrating nanobodies and methods of use thereof
WO2017125897A1 (en) 2016-01-21 2017-07-27 Novartis Ag Multispecific molecules targeting cll-1
KR20180118175A (ko) 2016-03-04 2018-10-30 노파르티스 아게 다중 키메라 항원 수용체 (car) 분자를 발현하는 세포 및 그에 따른 용도
CA3017776A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Generon (Shanghai) Corporation Ltd. Multispecific fab fusion proteins and use thereof
EP3432924A1 (en) 2016-03-23 2019-01-30 Novartis AG Cell secreted minibodies and uses thereof
US12059474B2 (en) 2016-03-29 2024-08-13 Stcube & Co., Inc. Methods for selecting antibodies that specifically bind glycosylated immune checkpoint proteins
AU2017241440B2 (en) 2016-03-29 2024-06-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Dual function antibodies specific to glycosylated PD-L1 and methods of use thereof
JP7497955B6 (ja) 2016-04-15 2024-07-01 ノバルティス アーゲー 選択的タンパク質発現のための組成物および方法
US20210177896A1 (en) 2016-06-02 2021-06-17 Novartis Ag Therapeutic regimens for chimeric antigen receptor (car)- expressing cells
US20190195866A1 (en) 2016-06-23 2019-06-27 Ablynx N.V. Improved pharmacokinetic assays for immunoglobulin single variable domains
WO2018013918A2 (en) 2016-07-15 2018-01-18 Novartis Ag Treatment and prevention of cytokine release syndrome using a chimeric antigen receptor in combination with a kinase inhibitor
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
JP2019528251A (ja) 2016-07-20 2019-10-10 エスティーキューブ，インコーポレイテッド グリコシル化ｐｄ−ｌ１に結合する抗体の組合せを使用するがんの処置および治療の方法
CN110214150A (zh) 2016-07-28 2019-09-06 诺华股份有限公司 嵌合抗原受体和pd-1抑制剂的组合疗法
EP3490590A2 (en) 2016-08-01 2019-06-05 Novartis AG Treatment of cancer using a chimeric antigen receptor in combination with an inhibitor of a pro-m2 macrophage molecule
MX2019003298A (es) 2016-09-22 2019-09-26 Molecular Partners Ag Proteinas de union recombinantes y sus usos.
MX2019003886A (es) 2016-10-07 2019-08-05 Novartis Ag Receptores de antigenos quimericos para el tratamiento del cancer.
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
GB201618432D0 (en) 2016-11-01 2016-12-14 Matn Scient Ltd Detection and treatment of demyelinating diseases
CN117700549A (zh) 2016-11-16 2024-03-15 埃博灵克斯股份有限公司 能够结合CD123和TCRα/β的T细胞募集多肽
JP7417421B2 (ja) 2016-12-07 2024-01-18 アブリンクス エン．ヴェー． 改善された血清アルブミン結合性免疫グロブリン単一可変ドメイン
CN110191896B (zh) 2017-01-17 2023-09-29 埃博灵克斯股份有限公司 改进的血清白蛋白结合物
EP4442708A2 (en) 2017-01-17 2024-10-09 Ablynx NV Improved serum albumin binders
US11535662B2 (en) 2017-01-26 2022-12-27 Novartis Ag CD28 compositions and methods for chimeric antigen receptor therapy
EP3589647A1 (en) 2017-02-28 2020-01-08 Novartis AG Shp inhibitor compositions and uses for chimeric antigen receptor therapy
BR112019017853A2 (pt) * 2017-02-28 2021-04-27 Vib Vzw Meios e métodos para liberação oral de proteína
CN106866823A (zh) * 2017-03-08 2017-06-20 康众（北京）生物科技有限公司 一种抗Her2的纳米抗体
MX2019011702A (es) 2017-03-31 2019-11-01 Ablynx Nv Ensayos de inmunogenicidad mejorados.
EP3609580A4 (en) * 2017-04-09 2021-03-24 Combio Pharmaceutical, Inc. BIPARATOPIC AND MULTIPARATOPIC ANTIBODIES WITH COMMON LIGHT CHAIN AND METHOD OF USE
SG11201909160WA (en) 2017-04-11 2019-10-30 Inhibrx Inc Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and methods of using the same
EP3615068A1 (en) 2017-04-28 2020-03-04 Novartis AG Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
EP3615055A1 (en) 2017-04-28 2020-03-04 Novartis AG Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
WO2018233624A1 (zh) 2017-06-20 2018-12-27 和迈生物科技有限公司 抗Her2纳米抗体及其编码序列和用途
CN109096396B (zh) * 2017-06-20 2022-01-04 华兰生物工程股份有限公司 一种抗pd-l1人源化纳米抗体及其应用
BR112019027104A2 (pt) 2017-06-22 2020-08-18 Novartis Ag moléculas de anticorpo para cd73 e usos das mesmas
JP2020525483A (ja) 2017-06-27 2020-08-27 ノバルティス アーゲー 抗ｔｉｍ−３抗体のための投与レジメンおよびその使用
GB201710973D0 (en) 2017-07-07 2017-08-23 Avacta Life Sciences Ltd Scaffold proteins
SG10201913144TA (en) 2017-07-11 2020-03-30 Compass Therapeutics Llc Agonist antibodies that bind human cd137 and uses thereof
KR20200031659A (ko) 2017-07-20 2020-03-24 노파르티스 아게 항-lag-3 항체의 투여 요법 및 그의 용도
US11718679B2 (en) 2017-10-31 2023-08-08 Compass Therapeutics Llc CD137 antibodies and PD-1 antagonists and uses thereof
WO2019089798A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Novartis Ag Anti-car compositions and methods
MX2020004756A (es) 2017-11-16 2020-08-20 Novartis Ag Terapias de combinacion.
US11851497B2 (en) 2017-11-20 2023-12-26 Compass Therapeutics Llc CD137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof
SG11202005273XA (en) 2017-12-28 2020-07-29 Nanjing Legend Biotech Co Ltd Antibodies and variants thereof against pd-l1
JP7369127B2 (ja) 2017-12-28 2023-10-25 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｔｉｇｉｔに対する単一ドメイン抗体及びその変異体
AU2019205128A1 (en) * 2018-01-04 2020-07-16 Lumosa Therapeutics Co., Ltd. Single-domain antibody-cytosine deaminase fusion proteins
AU2019207276A1 (en) 2018-01-15 2020-09-03 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against PD-1
CA3090249A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
US20200392512A1 (en) 2018-02-26 2020-12-17 Ablynx N.V. Nucleotide sequences encoding peptide linkers
WO2019175250A1 (en) * 2018-03-13 2019-09-19 Smivet B.V. Single domain antibodies binding to tetanus neurotoxin
AU2019241350A1 (en) 2018-03-30 2020-07-30 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against LAG-3 and uses thereof
WO2019198731A1 (ja) * 2018-04-10 2019-10-17 国立大学法人東北大学 抗体断片及び該抗体断片を含む二重特異性抗体
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
KR20200143634A (ko) 2018-04-17 2020-12-24 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 탈면역된 시가 독소 a 서브유닛 스캐폴드를 포함하는 her2-표적화 분자
EP3784351A1 (en) 2018-04-27 2021-03-03 Novartis AG Car t cell therapies with enhanced efficacy
EP3797120A1 (en) 2018-05-21 2021-03-31 Compass Therapeutics LLC Compositions and methods for enhancing the killing of target cells by nk cells
WO2019226658A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Multispecific antigen-binding compositions and methods of use
WO2019227003A1 (en) 2018-05-25 2019-11-28 Novartis Ag Combination therapy with chimeric antigen receptor (car) therapies
WO2019232244A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
SG11202011830SA (en) 2018-06-13 2020-12-30 Novartis Ag Bcma chimeric antigen receptors and uses thereof
SG11202012712YA (en) 2018-06-19 2021-01-28 Atarga Llc Antibody molecules to complement component 5 and uses thereof
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
CN112673022B (zh) 2018-09-10 2024-07-09 南京传奇生物科技有限公司 针对cd33的单结构域抗体及其构建体
EP3864054A1 (en) 2018-10-08 2021-08-18 Universität Zürich Her2-binding tetrameric polypeptides
KR20210107628A (ko) 2018-11-13 2021-09-01 콤파스 테라퓨틱스 엘엘씨 체크포인트 분자에 대한 다중특이적 결합 작제물 및 이의 용도
EP4249513A3 (en) 2018-12-20 2023-12-20 Novartis AG Combinations of a hdm2-p53 interaction inhibitor and a bcl2 inhibitor and their use for treating cancer
CN113271945A (zh) 2018-12-20 2021-08-17 诺华股份有限公司 包含3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物的给药方案和药物组合
US10871640B2 (en) 2019-02-15 2020-12-22 Perkinelmer Cellular Technologies Germany Gmbh Methods and systems for automated imaging of three-dimensional objects
AU2020222346B2 (en) 2019-02-15 2021-12-09 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
WO2020165833A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
US20220088075A1 (en) 2019-02-22 2022-03-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Combination therapies of egfrviii chimeric antigen receptors and pd-1 inhibitors
JP7308477B2 (ja) * 2019-03-11 2023-07-14 パナソニックＩｐマネジメント株式会社 抗体、複合体、それを用いた検出装置及び検出方法
US20220185876A1 (en) 2019-03-29 2022-06-16 Atarga, Llc Anti fgf23 antibody
CN114466864A (zh) 2019-06-21 2022-05-10 索瑞索制药公司 多肽
EP3986931A1 (en) 2019-06-21 2022-04-27 Sorriso Pharmaceuticals, Inc. Polypeptides
CN110499259B (zh) * 2019-07-22 2021-07-27 浙江工业大学 一种解酯耶氏酵母yw100-1及其应用
TW202128775A (zh) 2019-10-16 2021-08-01 英商阿法克塔生命科學有限公司 PD-L1抑制劑-TGFβ抑制劑雙特異性藥物部分
EP4048285A1 (en) 2019-10-21 2022-08-31 Novartis AG Tim-3 inhibitors and uses thereof
BR112022007376A2 (pt) 2019-10-21 2022-07-05 Novartis Ag Terapias de combinação com venetoclax e inibidores de tim-3
AR120566A1 (es) 2019-11-26 2022-02-23 Novartis Ag Receptores de antígeno quiméricos y sus usos
CN114981300A (zh) 2019-12-06 2022-08-30 艾伯霖克斯公司 包含靶向TNFα和IL-23的免疫球蛋白单个可变结构域的多肽
TW202135858A (zh) 2019-12-20 2021-10-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體和檢查點抑制劑用於治療增殖性疾病之用途
WO2021146636A1 (en) 2020-01-17 2021-07-22 Becton, Dickinson And Company Methods and compositions for single cell secretomics
IL293752A (en) 2020-01-17 2022-08-01 Novartis Ag A combination containing a tim-3 inhibitor and a substance that causes hypomethylation for use in the treatment of myeloplastic syndrome or chronic myelomonocytic leukemia
JP7481856B2 (ja) * 2020-02-25 2024-05-13 シスメックス株式会社 改変抗体及びその製造方法、並びに抗体の熱安定性を向上させる方法
CA3173737A1 (en) 2020-02-27 2021-09-02 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
US12080426B2 (en) * 2020-04-06 2024-09-03 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Functional deep neural network for high-dimensional data analysis
GB202101299D0 (en) 2020-06-09 2021-03-17 Avacta Life Sciences Ltd Diagnostic polypetides and methods
JP2023531676A (ja) 2020-06-23 2023-07-25 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピぺリジン－２，６－ジオン誘導体を含む投与レジメン
US20230256111A1 (en) 2020-06-24 2023-08-17 Sapreme Technologies B.V. Combination comprising an adc or an aoc comprising a vhh, and a saponin or a ligand-saponin conjugate
WO2021259507A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Sapreme Technologies B.V. Conjugate of a single domain antibody, a saponin and an effector molecule, pharmaceutical composition comprising the same, therapeutic use of said pharmaceutical composition
MX2023000031A (es) 2020-06-24 2023-04-19 Sapreme Tech Bv Conjugado de un anticuerpo de dominio unico, una saponina y una molecula efectora, composicion farmaceutica que comprende el mismo, uso terapeutico de dicha composicion farmaceutica.
US20230270872A1 (en) 2020-06-24 2023-08-31 Sapreme Technologies B.V. Conjugate of saponin and single-domain antibody, pharmaceutical composition comprising said conjugate, therapeutic use thereof
US12077576B2 (en) 2020-07-02 2024-09-03 Trustees Of Tufts College VHH polypeptides that bind to Clostridium difficile toxin b and methods of use thereof
KR102486958B1 (ko) * 2020-07-08 2023-01-11 한국과학기술원 인간 상피세포 증식인자 수용체 2형의 도메인 4에 특이적으로 결합하는 신규 폴리펩티드 및 이의 용도
EP4182025A1 (en) 2020-07-16 2023-05-24 Novartis AG Anti-betacellulin antibodies, fragments thereof, and multi-specific binding molecules
WO2022026592A2 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Celltas Bio, Inc. Antibody molecules to coronavirus and uses thereof
CN116134027A (zh) 2020-08-03 2023-05-16 诺华股份有限公司 杂芳基取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
US12122839B2 (en) 2020-08-05 2024-10-22 Synthekine, Inc. IFNGR binding synthetic cytokines and methods of use
WO2022031929A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Synthekine, Inc. Il12rb1-binding molecules and methods of use
US12077594B2 (en) 2020-08-05 2024-09-03 Synthekine, Inc. IL2RG binding molecules and methods of use
US20230279126A1 (en) * 2020-08-05 2023-09-07 Synthekine, Inc. Il23 receptor synthetic cytokines and methods of use
EP4192502A4 (en) * 2020-08-05 2024-10-09 Synthekine Inc COMPOSITIONS AND METHODS RELATING TO IL27 RECEPTOR BINDING
US12018085B2 (en) 2020-08-05 2024-06-25 Synthekine, Inc. Interferon-gamma R2 (IFNGR2) binding molecules comprising single-domain antibodies and method of use thereof to treat autoimmune and inflammatory diseases
EP4200339A2 (en) * 2020-08-05 2023-06-28 Synthekine, Inc. Compositions and methods related to receptor pairings
WO2022032023A2 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Synthekine, Inc. Il23r binding molecules and methods of use
US20230295314A1 (en) * 2020-08-05 2023-09-21 Synthekine, Inc. IL27RAlpha Binding Molecules and Methods of Use
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
US20230338587A1 (en) 2020-08-31 2023-10-26 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
WO2022098771A1 (en) * 2020-11-03 2022-05-12 Ab Studio Inc. Multispecific antibodies and uses thereof
JP2023547499A (ja) 2020-11-06 2023-11-10 ノバルティス アーゲー 抗体Ｆｃ変異体
AU2021378316A1 (en) 2020-11-13 2023-06-01 Novartis Ag Combination therapies with chimeric antigen receptor (car)-expressing cells
AU2021402090A1 (en) 2020-12-18 2023-08-03 Ablynx Nv T cell recruiting polypeptides based on tcr alpha/beta reactivity
CN116829587A (zh) * 2020-12-18 2023-09-29 先声再明医药有限公司 Her2抗体及其应用
EP4284510A1 (en) 2021-01-29 2023-12-06 Novartis AG Dosage regimes for anti-cd73 and anti-entpd2 antibodies and uses thereof
KR20220118961A (ko) 2021-02-19 2022-08-26 (주)샤페론 Cd47에 대한 단일 도메인 항체 및 이의 용도
AU2022222423A1 (en) 2021-02-19 2023-09-28 Seoul National University R&Db Foundation Single domain antibody against pd-l1 and use thereof
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
WO2022234003A1 (en) 2021-05-07 2022-11-10 Avacta Life Sciences Limited Cd33 binding polypeptides with stefin a protein
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
MX2023015153A (es) * 2021-07-01 2024-04-16 Ningbo T Maximum Biopharmaceuticals Co Ltd Polipéptido de unión a antígeno que se dirige a b7h3 y aplicación del mismo.
IL309559A (en) 2021-07-09 2024-02-01 Luxembourg Inst Of Health Lih Dimeric protein complexes and their uses
EP4373851A2 (en) 2021-07-19 2024-05-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il12 receptor agonists and methods of use thereof
US11970548B2 (en) * 2021-08-27 2024-04-30 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Nanobody target GCC and uses in chimeric antigen receptor cell therapy
CN113813380B (zh) * 2021-09-15 2023-03-07 深圳大学 一种靶向her2的光热纳米材料及其制备方法与应用
EP4405396A2 (en) 2021-09-20 2024-07-31 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer
EP4413038A1 (en) 2021-10-07 2024-08-14 Avacta Life Sciences Limited Pd-l1 binding affimers
EP4412711A1 (en) 2021-10-07 2024-08-14 Avacta Life Sciences Limited Serum half-life extended pd-l1 binding polypeptides
WO2023070317A1 (zh) * 2021-10-26 2023-05-04 江苏省农业科学院 基于dc细胞的双功能纳米抗体及其构建方法和应用
WO2023092004A1 (en) 2021-11-17 2023-05-25 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of tau-related disorders
WO2023121447A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Sapreme Technologies B.V. Conjugate of a single domain antibody, a saponin and an effector molecule, pharmaceutical composition comprising the same, therapeutic use of said pharmaceutical composition
US20230383010A1 (en) 2022-02-07 2023-11-30 Visterra, Inc. Anti-idiotype antibody molecules and uses thereof
KR20230121575A (ko) 2022-02-10 2023-08-18 주식회사 아피셀테라퓨틱스 Cd40l에 특이적으로 결합하는 스테핀 a 단백질 변이체 및 이의 용도
WO2023183317A2 (en) * 2022-03-21 2023-09-28 Ab Therapeutics, Inc. Multispecific antibodies and uses thereof
US20230406916A1 (en) * 2022-04-15 2023-12-21 Valitor, Inc. Humanized multivalent protein conjugates
CN114805578B (zh) * 2022-05-06 2022-12-06 浙江大学 一种白细胞免疫球蛋白样受体亚家族b成员2的羊驼纳米抗体、制备方法及其应用
WO2023218243A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Avacta Life Sciences Limited Lag-3/pd-l1 binding fusion proteins
WO2023220695A2 (en) 2022-05-13 2023-11-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer
WO2023230488A1 (en) * 2022-05-23 2023-11-30 Cereius, Inc. Her2-binding agents and uses thereof
WO2024023271A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Ablynx Nv Polypeptides binding to a specific epitope of the neonatal fc receptor
WO2024030976A2 (en) 2022-08-03 2024-02-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for crossing the blood brain barrier
WO2024094165A1 (zh) * 2022-11-04 2024-05-10 茂行制药(苏州)有限公司 靶向b7h3的通用型car-t细胞及其制备方法和应用
WO2024129897A2 (en) * 2022-12-13 2024-06-20 Bj Bioscience Inc. Anti-cd3 antibodies and bispecific antibodies
WO2024133935A1 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Ablynx Nv Protein-based conjugation carriers
WO2024151978A1 (en) 2023-01-13 2024-07-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il12 receptor agonists and methods of use thereof
WO2024168061A2 (en) 2023-02-07 2024-08-15 Ayan Therapeutics Inc. Antibody molecules binding to sars-cov-2
US20240368250A1 (en) 2023-02-17 2024-11-07 Ablynx N.V. Polypeptides binding to the neonatal fc receptor
FR3147278A1 (fr) 2023-03-31 2024-10-04 Avacta Life Sciences Limited Polypeptides de liaison au tnfr2 et procedes d'utilisation
WO2024200987A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Avacta Life Sciences Limited Tnfr2 binding polypeptides and methods of use
US20240358847A1 (en) 2023-04-24 2024-10-31 Merck Sharp & Dohme Llc Trop2 binders and conjugates thereof
CN116574186B (zh) * 2023-07-07 2023-11-28 云南大学 特异性结合her2的纳米抗体及其应用

Family Cites Families (104)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU572654B2 (en) 1984-05-11 1988-05-12 Premier Submers-A-Lite Pty. Ltd. Tail light assembly
AU634186B2 (en) 1988-11-11 1993-02-18 Medical Research Council Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors
SE509359C2 (sv) 1989-08-01 1999-01-18 Cemu Bioteknik Ab Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel
US5038508A (en) 1989-08-08 1991-08-13 Brown Frank C Safety device for a firearm
DE69032086T2 (de) 1989-12-22 1998-09-17 Hoffmann La Roche Zytotoxischer Lymphozyten-Reifefaktor
WO1991015581A1 (en) 1990-04-05 1991-10-17 Roberto Crea Walk-through mutagenesis
EP0542810A1 (en) 1990-08-02 1993-05-26 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
EP0940468A1 (en) * 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
WO1993023537A1 (en) 1992-05-08 1993-11-25 Creative Biomolecules Chimeric multivalent protein analogues and methods of use thereof
DE69334258D1 (de) 1992-08-21 2009-02-26 Univ Bruxelles Immunoglobuline ohne Leichtkette
US6838254B1 (en) 1993-04-29 2005-01-04 Conopco, Inc. Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of camelidae
EP0698097B1 (en) 1993-04-29 2001-08-16 Unilever N.V. Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of camelidae
FR2708622B1 (fr) 1993-08-02 1997-04-18 Raymond Hamers Vecteur recombinant contenant une séquence d'un gène de lipoprotéine de structure pour l'expression de séquences de nucléotides.
EP0739981A1 (en) 1995-04-25 1996-10-30 Vrije Universiteit Brussel Variable fragments of immunoglobulins - use for therapeutic or veterinary purposes
JP2000515002A (ja) 1996-06-27 2000-11-14 フラームス・インテルウニフェルジテール・インスティテュート・フォール・ビオテヒノロジー・ヴェーゼットウェー 標的分子の活性部位またはクレフトと特異的に相互作用する認識分子
US6329516B1 (en) 1997-04-28 2001-12-11 Fmc Corporation Lepidopteran GABA-gated chloride channels
PE20000183A1 (es) 1997-07-25 2000-03-11 Schering Corp Citoquinas de mamiferos y reactivos relacionados
ATE274920T1 (de) 1997-10-31 2004-09-15 Wyeth Corp Verwendung von anti-il-12 antikörpern bei transplantationsabstossungen
AU3596599A (en) 1998-01-26 1999-08-09 Unilever Plc Method for producing antibody fragments
KR20010034512A (ko) 1998-02-19 2001-04-25 베렌슨, 론 림프구 활성화 조절을 위한 조성물 및 그 방법
EP0967284A1 (en) 1998-05-28 1999-12-29 Pfizer Limited Phosphodiesterases
US6818749B1 (en) * 1998-10-31 2004-11-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49
IL127127A0 (en) 1998-11-18 1999-09-22 Peptor Ltd Small functional units of antibody heavy chain variable regions
WO2000040968A1 (en) 1999-01-05 2000-07-13 Unilever Plc Binding of antibody fragments to solid supports
AU2291700A (en) 1999-01-19 2000-08-07 Unilever Plc Method for producing antibody fragments
CA2361678A1 (en) 1999-02-05 2000-08-10 Rijksuniversiteit Leiden Method of modulating metabolite biosynthesis in recombinant cells
AU784108B2 (en) 1999-03-15 2006-02-02 University Of British Columbia, The Methods and reagents for modulating cholesterol levels
KR20130105766A (ko) 1999-03-25 2013-09-25 애보트 게엠베하 운트 콤파니 카게 사람 ｉｌ-12에 결합하는 사람 항체 및 이의 제조방법
BR0009866A (pt) 1999-04-22 2002-01-08 Unilever Nv Método de inibição de infecção viral, uso de uma proteìna de ligação de antìgeno monovalente, produto alimentìcio, composição farmacêutica ou cosmética, proteìna de ligação de antìgeno monovalente, sequência de nucleotìdeos, vetor de expressão, célula hospedeira, e, métodos de seleção e de indentificação de uma proteìna de ligação de antìgeno
WO2000078972A2 (en) 1999-06-18 2000-12-28 Cv Therapeutics, Inc. Regulation with binding cassette transporter protein abc1
CN100340575C (zh) * 1999-06-25 2007-10-03 杰南技术公司 人源化抗ErbB2抗体及其在制备药物中的应用
EP1198572A2 (en) 1999-08-02 2002-04-24 Keygene N.V. Method for generating cgmmv resistant plants, genetic constructs, and obtained cgmmv-resistant plants
MXPA02002684A (es) 1999-09-09 2002-07-30 Schering Corp Citocinas de mamifero; reactivos y metodos relacionados.
GB9922124D0 (en) 1999-09-17 1999-11-17 Pfizer Ltd Phosphodiesterase enzymes
US6479280B1 (en) 1999-09-24 2002-11-12 Vlaams Interuniversitair Institutuut Voor Biotechnologie Vzw Recombinant phages capable of entering host cells via specific interaction with an artificial receptor
DE19955408A1 (de) 1999-11-18 2001-05-23 Bayer Ag GABA-B-Rezeptoren
DK1233987T3 (da) 1999-11-29 2009-09-28 Bac Ip B V Immobiliserede enkelt-domæne antigenbindende molekyler
DK1242460T3 (da) 1999-11-29 2006-12-11 Unilever Nv Immobilisering af proteiner ved hjælp af et polypeptidsegment
US7608681B2 (en) 1999-12-24 2009-10-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds
EP1134231B1 (en) 2000-03-14 2009-04-15 Unilever N.V. Antibody heavy chain variable domains against human dietary lipases, and their uses
CA2403425C (en) * 2000-04-11 2013-08-27 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
US20030190598A1 (en) 2000-05-26 2003-10-09 Jasmid Tanha Single-domain antigen-binding antibody fragments derived from llama antibodies
US7943129B2 (en) 2000-05-26 2011-05-17 National Research Council Of Canada Single-domain brain-targeting antibody fragments derived from llama antibodies
CA2418036A1 (en) 2000-07-31 2002-02-07 Yale University Innate immune system-directed vaccines
US6902734B2 (en) 2000-08-07 2005-06-07 Centocor, Inc. Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof
WO2002048193A2 (en) 2000-12-13 2002-06-20 Unilever N.V. Camelidae antibody arrays
PL364623A1 (en) 2001-01-17 2004-12-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7211395B2 (en) 2001-03-09 2007-05-01 Dyax Corp. Serum albumin binding moieties
GB0110029D0 (en) 2001-04-24 2001-06-13 Grosveld Frank Transgenic animal
US20060073141A1 (en) 2001-06-28 2006-04-06 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
JP4213586B2 (ja) 2001-09-13 2009-01-21 株式会社抗体研究所 ラクダ抗体ライブラリーの作製方法
JP2005289809A (ja) 2001-10-24 2005-10-20 Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) 突然変異重鎖抗体
WO2003050531A2 (en) 2001-12-11 2003-06-19 Algonomics N.V. Method for displaying loops from immunoglobulin domains in different contexts
CA2471116A1 (en) 2001-12-21 2003-07-03 Serge Muyldermans Method for cloning of variable domain sequences
EP1461085A2 (en) 2002-01-03 2004-09-29 Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. Immunoconjugates useful for treatment of tumours
EP1500665B1 (en) 2002-04-15 2011-06-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha METHODS FOR CONSTRUCTING scDb LIBRARIES
JP2006512895A (ja) 2002-06-28 2006-04-20 ドマンティス リミテッド リガンド
EP1382615A1 (en) 2002-07-15 2004-01-21 Xerion Pharmaceuticals AG MCAM inhibitors
PT2263691E (pt) 2002-07-15 2012-11-12 Hoffmann La Roche Tratamento de cancro com o anticorpo anti-erbb2 monoclonal humanizado recombinante 2c4 (rhumab 2c4)
WO2004037999A2 (en) 2002-10-23 2004-05-06 Ludwig Institute For Cancer Research A34 and a33-like 3 dna, proteins, antibodies thereto and methods of treatment using same
EP1558646A2 (en) 2002-11-08 2005-08-03 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against interferon- gamma and uses thereof
NZ540195A (en) 2002-11-08 2009-01-31 Ablynx Nv Stabilized single domain antibodies
WO2004051268A1 (en) 2002-12-03 2004-06-17 Celltech R & D Limited Assay for identifying antibody producing cells
GB0228210D0 (en) 2002-12-03 2003-01-08 Babraham Inst Single chain antibodies
GB0230203D0 (en) 2002-12-27 2003-02-05 Domantis Ltd Fc fusion
AU2003301114B2 (en) 2002-12-31 2010-03-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Uses of mammalian cytokine; related reagents
KR101025143B1 (ko) 2002-12-31 2011-04-01 넥타르 테라퓨틱스 가수분해상으로 안정한 말레이미드－종결 중합체
CN101412759A (zh) 2003-01-10 2009-04-22 埃博灵克斯股份有限公司 治疗性多肽,其同源物、其片段及其在调节血小板介导的聚集方面的应用
US7461263B2 (en) 2003-01-23 2008-12-02 Unspam, Llc. Method and apparatus for a non-revealing do-not-contact list system
US20040219150A1 (en) 2003-02-06 2004-11-04 Cua Daniel J. Uses of mammalian cytokine; related reagents
GB0312481D0 (en) 2003-05-30 2003-07-09 Celltech R&D Ltd Antibodies
RU2005140664A (ru) 2003-06-27 2007-08-27 Байорен, Инк. (Us) Просматривающий мутагенез
AU2003264053A1 (en) 2003-08-12 2005-03-10 William M. Yarbrough Treatment for acne vulgaris and method of use
ATE554390T1 (de) 2003-08-20 2012-05-15 Ucb Pharma Sa Verfahren zur gewinnung von antikörpern
DE60334645D1 (de) 2003-11-07 2010-12-02 Ablynx Nv Camelidae schwere ketten antikörper vhhs gegen epidermalen wachstumfaktor rezeptor (egfr) und ihre verwendung
EP1901768B1 (en) 2004-02-17 2011-11-16 Schering Corporation Methods of modulating il-23 activity; related reagents
US7785903B2 (en) * 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
JP4550470B2 (ja) 2004-04-14 2010-09-22 住友電装株式会社 コネクタ
US20050279676A1 (en) 2004-06-21 2005-12-22 Izzy Zuhair A Fluid filter assembly for a dispensing faucet
EP1774019B1 (en) 2004-07-06 2011-10-12 Bioren, Inc. Look-through mutagenesis for developing altered polypeptides with enhanced properties
WO2006020258A2 (en) 2004-07-17 2006-02-23 Imclone Systems Incorporated Novel tetravalent bispecific antibody
DE102004051767B4 (de) 2004-07-20 2018-03-29 Witte-Velbert Gmbh & Co. Kg Getriebeanordnung zum Öffnen/Schließen einer Tür, einer Klappe o. dgl.
KR101443473B1 (ko) 2004-07-22 2014-09-22 에라스무스 유니버시티 메디컬 센터 로테르담 Ｖh 결합 영역의 분리 방법
US7563443B2 (en) 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
CA2583017A1 (en) 2004-10-13 2006-04-20 Ablynx N.V. Single domain camelide anti-amyloid beta antibodies and polypeptides comprising the same for the treatment and diagnosis of degenerative neural diseases such as alzheimer's disease
WO2006040154A2 (en) 2004-10-14 2006-04-20 Dublin City University Prokaryotic two hybrid system
EP2292758A3 (en) 2004-12-20 2013-12-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Uses of mammalian cytokine; related reagents
JP2008523842A (ja) 2004-12-21 2008-07-10 セントカー・インコーポレーテツド 抗ｉｌ−１２抗体、エピトープ、組成物、方法および用途
AU2005325801A1 (en) 2005-01-31 2006-08-03 Ablynx N.V. Method for generating variable domain sequences of heavy chain antibodies
SG184709A1 (en) 2005-05-18 2012-10-30 Ablynx Nv Improved nanobodies™ against tumor necrosis factor-alpha
KR101414438B1 (ko) 2005-05-20 2014-07-10 아블린쓰 엔.브이. 폰 빌레브란트 인자에 대한 단일 도메인 ｖｈｈ 항체
US7700739B2 (en) 2005-06-30 2010-04-20 Abbott Laboratories IL-12/p40 binding proteins
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
KR20140053410A (ko) 2005-08-19 2014-05-07 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EA013506B1 (ru) 2005-08-25 2010-06-30 Эли Лилли Энд Компани Антитело к il-23 и его применение
DE602006009834D1 (de) * 2005-09-01 2009-11-26 Schering Corp Verwendung von il-23 und il-17-antagonisten zur behandlung von autoimmuner entzündlicher augenerkrankung
JP2009511032A (ja) * 2005-10-11 2009-03-19 アブリンクス エン．ヴェー． Ｅｇｆｒおよびｉｇｆ−ｉｒに対するナノボディおよびポリペプチド
RS55963B1 (sr) * 2005-12-29 2017-09-29 Janssen Biotech Inc Humana anti-il-23 antitela, kompozicije, metode i upotrebe
CA2640066A1 (en) 2006-01-24 2007-08-02 Roland Beckmann Fusion proteins that contain natural junctions
US20090286727A1 (en) * 2006-04-14 2009-11-19 Ablynx N.V. DP-78-Like Nanobodies
CN101611056A (zh) * 2006-12-05 2009-12-23 埃博灵克斯股份有限公司 能够结合于血清蛋白的肽
US20100135998A1 (en) 2007-02-28 2010-06-03 Schering Corporation Combination therapy for treatment of immune disorders
WO2009068625A2 (en) 2007-11-27 2009-06-04 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against her2 and polypeptides comprising the same for the treatment of cancers and/or tumors
WO2010066836A2 (en) * 2008-12-10 2010-06-17 Ablynx Nv Amino acid sequences directed against the angiopoietin/tie system and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders related to angiogenesis

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107001458A (zh) * 2014-09-26 2017-08-01 Biocad股份有限公司 基于可变结构域vl和vhh衍生物的高亲和力和聚集稳定的抗体
CN107001458B (zh) * 2014-09-26 2022-02-18 Biocad股份有限公司 基于可变结构域vl和vhh衍生物的高亲和力和聚集稳定的抗体
CN115915939A (zh) * 2020-03-31 2023-04-04 生物催化公司 抗真菌多肽
CN114920839A (zh) * 2022-06-17 2022-08-19 天津大学 特异性结合il-23的纳米抗体及其用途
CN114920839B (zh) * 2022-06-17 2023-03-10 天津大学 特异性结合il-23的纳米抗体及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
EP2220120A2 (en) 2010-08-25
US20110059090A1 (en) 2011-03-10
IL205734A0 (en) 2010-11-30
EP2650311A3 (en) 2014-06-04
US8975382B2 (en) 2015-03-10
CA2706200A1 (en) 2009-06-04
KR20100097716A (ko) 2010-09-03
BRPI0819656A2 (pt) 2015-06-23
EP2215125A1 (en) 2010-08-11
AU2008328779A1 (en) 2009-06-04
EP2650311A2 (en) 2013-10-16
EP2215123A1 (en) 2010-08-11
AU2008328784A1 (en) 2009-06-04
WO2009068631A1 (en) 2009-06-04
CA2706425A1 (en) 2009-06-04
CA2705890A1 (en) 2009-06-04
US20150232562A1 (en) 2015-08-20
WO2009068628A1 (en) 2009-06-04
JP2011504740A (ja) 2011-02-17
WO2009068625A3 (en) 2009-08-06
MX2010005783A (es) 2010-08-10
AU2008328779B2 (en) 2014-06-05
EP2225278A2 (en) 2010-09-08
AU2008328785A1 (en) 2009-06-04
AU2008328781A1 (en) 2009-06-04
WO2009068630A1 (en) 2009-06-04
ZA201004057B (en) 2011-04-28
US20110053865A1 (en) 2011-03-03
WO2009068627A3 (en) 2009-10-01
CA2706675A1 (en) 2009-06-04
US9969805B2 (en) 2018-05-15
US20110028695A1 (en) 2011-02-03
WO2009068627A2 (en) 2009-06-04
WO2009068625A2 (en) 2009-06-04
US20110189203A1 (en) 2011-08-04
AU2008328784B2 (en) 2014-03-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101970490A (zh) 针对异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列以及包括所述氨基酸序列的多肽
CN104231082B (zh) 用于治疗骨疾病和病症的针对rank-l的氨基酸序列以及包括其的多肽
US10618966B2 (en) Methods for the treatment of interleukin-6 receptor-related diseases and disorders
JP6159684B2 (ja) Ｉｌ−６ｒ関連疾患及び障害の治療のためのｉｌ−６ｒに指向性を有する改善されたアミノ酸配列及びこれを含むポリペプチド
CN102056945A (zh) 针对Notch途径的单可变结构域
US20100136018A1 (en) Anti-FC-receptor single domain antibodies (nanobodies-tm) and therapeutic use
US20090297535A1 (en) Amino Acid Sequences Directed Against Il-6 And Polypetides Comprising The Same For The Treatment Of Diseases And Disorders Associated With Il-6 Mediated Signalling
CN101663319A (zh) 针对血管内皮生长因子的氨基酸序列和包括其的多肽用于治疗特征在于过量和/或病理性血管发生或新血管形成的病症和疾病
CN102307902A (zh) 用于治疗与血管发生相关的疾病和病症的针对血管生成素/Tie系统的氨基酸序列和包括其的多肽
WO2009095489A2 (en) Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with il-6-mediated signalling
CN101528778A (zh) 用于治疗与il-6-介导的信号传导相关的疾病和病症的针对il-6r的氨基酸序列以及包括其的多肽
WO2010040736A2 (en) Amino acid sequences directed against il18 and/or the il-18 receptor and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and/or disorders associated with il-18 mediated signaling
WO2010037818A1 (en) Amino acid sequences directed against il-15 and/or the il-15 receptor and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with il-15 mediated signalling

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20110209