CA2162703A1 - Novel lupane derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing same - Google Patents

Novel lupane derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing same

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CA2162703A1
CA2162703A1 CA002162703A CA2162703A CA2162703A1 CA 2162703 A1 CA2162703 A1 CA 2162703A1 CA 002162703 A CA002162703 A CA 002162703A CA 2162703 A CA2162703 A CA 2162703A CA 2162703 A1 CA2162703 A1 CA 2162703A1
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acetoxylup
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Michel Evers
Christele Poujade
Francoise Soler
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Abstract

Lupane derivatives of general formula (I) in which R is: (II), wherein X is a bond or an optionally substituted carbamoyl or aminocarbonyl, Y is a bond or phenylene, R DEG and R DEG DEG , which are the same or different, are H or methyl and n is 6 to 12, m is 0 to 3 and p is 0 to 2, with 6 </= m+n+p </= 14, and R1 is methyl, hydroxymethyl, -CH2OR' or -CH2SR' (R' is alkyl or hydroxyalkyl), the alkyl radicals (1 to 4C) are straight or branched. The invention also concerns the salts of said derivatives and their preparation. The products according to the invention are especially useful in the treatment of AIDS and in infections induced by the herpes family of viruses.

Description

2~2~3 WO 94/26725 PCT/I;R94/00533 NOUV~UX D~RIV~ DU T~upAN~ T~T`uR PRT'PARATION F~'T T.T`~ COMPOSITIONS
PHARMA~T~`UTIOUT'~ OUI T.T~'~ CONTIT~`NNT'NT

La présente invention concerne des dérivés du lupane, de formule générale :

CH3 ~ CONH-R
(I) . Hl, H CH3 HO

leurs sels, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.

Dans la ~Pm~n~ de brevet japonais J 01 143 832 ont été décrits des dérivés de la bétuline de formule générale :

H 2 C =l"

`H2--R2 dans laquelle R1 et R2 sont hydroxy ou acyloxy et R3 est notamment méthyle. Ces dérivés sont utiles dans le ~o~-ne des anticancéreux.

Il a été maintenant trouvé que les dérivés du lupane de formule géné-rale ~I) dans laquelle :

R représente un radical de formule générale :

W O 94/26725 PCT~R94/00533 2~627~3 2 N
(CH2)n - X - (CH2)m - Y (C)p ~ / ll (II) R R N

X est une liaison ou représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, aminocarbonyle ou N-méthylaminocarbonyle, Y est une liaison ou représente un radical méta ou para phénylène, R et R identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux méthyle (étant entendu que tous les motifs -CRR ne sont pas nécessairement identiques entre eux) et, n est un nombre entier de 6 à 12, m est un nombre entier de 0 à 3 et p est un nombre entier de 0 a 2 étant entendu que m + n + p est com-pris entre 6 et 14, et R1 est un radical méthyle, hydroxyméthyle ou un radical -CH2OR' ou -CH2SR' pour lequel R' est alcoyle ou hydroxyalcoyle, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables, manifestent un effet cytoprotecteur de cellules infectées par un virus HIV (Human Immunodeficiency Virus) ainsi qu'une activité inhibitrice de la production de transcriptase inverse d'un virus HIV.

Dans la formule générale ci-dessus, il est entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de car-bone.

Dans les cas où R et R sont différents, les produits de formule générale (I) présentent des formes stéréoisomères, il est également entendu que les formes stéréoisomeres ainsi que leurs mélanges en-trent aussi dans le cadre de la présente invention.

Selon l'invention, les dérivés du lupane de formule générale (I) peu-vent également être préparés par action d'un azoture sur un nitrile de formule générale :

j~) 94/26725 ~16 2 ~ ~ 3 PCT/FR94/00533 ~ ~ ~ CoNH-(cH2\n-X-(CH2)m-Y- (C)p-CN

¦ H~, H CH3 R R

HO ~
H3C CH3 (III) dans laquelle R1 R, R, X, Y, n, m, et p sont définis comme précé~^m~^nt.

L'azoture est avantageusement choisi parmi l'azoture de tri n.butylétain, l'azoture de triméthylsilyle ou un azoture alcalin.
Lorsque l'on utilise l'azoture de tri n.butylétain la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que le diméthoxy-1,2 éthane, l'éthoxy-2 éthanol ou un mélange de tels solvants, a la température de reflux du mélange réactionnel. Lorsque l'on fait agir l'azoture de triméthylsilyle, on opère en présence de trichlorure d'aluminium, dans un solvant chloré comme par exemple le dichlorométhane, à une température comprise entre 10 et 40C.

Selon l'invention le dérivé du lupane de formule générale (I) pour lequel X (dans le radical R) représente un radical carbamoyle ou aminocarbonyle éventuellement N-méthylé et les autres radicaux sont définis comme précé~^mm~nt, peut être également obtenu à partir d'un dérivé du lupane de formule générale :

CH3 ~ CONH-R (IV) ¦ Hl, H CH3 HO

W O 94/26725 PCT~R94/00533 ~1627~3 dans laquelle R1 est défini comme pr~cé~ -rt et R" représente un radical de formule générale :
(CH2)n - COOH (IVa) ou (CH2)n-NH-R"' (IVb) dans lesquelles n est défini comme précé~f ~rt et R"' est un atome d'hydroqène ou un radical méthyle, par action respectivement d'une amine ou d'un acide de formules générales :
N ~ N
R"'-HN - (CH2)m - Y /C)P ~ N ~N (V a) R R H
ou N - N
HO-CO - (CH2)m - Y (C)p ~ ~ N (V b) R R H

dans lesquelles R, R, m et p sont définis comme précé~Pmm~nt et R"' est défini comme ci-dessus.

Il est entendu que les radicaux hydroxy du dérivé du lupane de for-mule générale (IV) sont de préférence protégés par des radicaux compatibles qui peuvent être mis en place et fli mi n~S sans toucher au reste de la molécule. A titre d'exemple les groupements protecteurs peuvent être choisis parmi les radicaux décrits par T.W. GREENE, Protective Groups in Organic Synthesis, J. WILEY-Interscience Publication (1991) ou par Mc OMIE, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (1973). On choisira des radicaux pouvant être ~limin~5 en milieu neutre, basique ou acide.

Notamment, les radicaux hydroxy peuvent être protégés ~ l'état d'es-ter (formyloxy, acétoxy, i.butoxy, trichloracétyloxy, phénoxyacétyl-oxy, benzyloxy)i dans ce cas, l'~liminAtion s'effectue par hydrolyse en milieu basique, notamment en présence de soude à une température comprise entre 10 et 50C. La protection peut également être effec-tuée ~ l'état de cétone, sous forme de carbonate par un radical wo 94,26725 2 I 6 ~ 7 0 ~ PCT~R94/00533 -COORa dans lequel Ra est un radical alcoyle ou benzyle éventuelle-ment substitués ou encore par un radical trialcoylsilyle.

La réaction s'effectue selon les méthodes habituelles de condensation d'une amine sur un acide. Notamment, on opère en présence d'un accep-teur d'acide tel qu'une base organique azotée (trialcoylamine, pyri-dine, N-méthyl-morpholine, diaza-1,8 bicyclo[5.4.0]11n~cène-7, diaza-1,5 bicyclo[4.3.0] nonène-5 par exemple) dans un solvant organique comme un solvant chloré (dichlorométhane, dichloréthane, chloroforme par exemple) ou un amide (diméthylformamide par exemple). Il est éga-lement possible d'opérer en présence d'un agent de condensation telqu'un carbodiimide (dicyclohexylcarbodiimide, chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide par exemple) et éventuelle-ment en présence d' Ul catalyseur tel que le N-hydroxybenzotriazole ou le N-hydroxysuccinimide, à une température comprise entre -20 et 40C.

La condensation de l'amine de formule générale (Va) s'effectue de préférence à partir du chlorhydrate de l'amine.

Le nitrile de formule générale (III) peut être préparé par deshydratation de l'amide correspondant, par toute méthode connue qui n'altère pas le reste de la molécule.

On opère notamment au moyen d'anhydride trifluoracétique dans un éther (tétrahydrofuranne par exemple), à une température comprise entre 10 et 66C

L'amide correspondant au nitrile de formule générale (III) peut être lui-même obtenu à partir de l'acide selon les méthodes connues et/ou citées ci-après dans les exemples.

L'acide correspondant peut être préparé par action d'un ~tno~cide de formule générale :
H2N - (cH2)n-x-(cH2)m-y-~c~p-cooH (VI) - R R

W O 94/26725 PCT~R94/00533 ~lS2703 6 dans laquelle R, R, X, Y, n, m, et p sont définis comme précédem-ment et dont la fonction acide est pr~AlAhl~ -nt protégée, sur le chlorure de l'acide de formule générale :

CH3 ~ COOH (VII) ~ Hl, H CH3 HO

dans laquelle Rl est défini comme précé~ t et dont les radicaux hydroxy sont préalablement protégés, suivie de l'~1imin~tion du/des radicaux protecteurs.

La réaction de l'amine sur le chlorure de l'acide lupèn-20(29)oïque-28 de formule générale (VII) s'effectue selon les méthodes habi-tuelles qui n'altèrent pas le reste de la molécule. On opère notam-ment en présence d'une base organique azotée telle qu'une trialcoyla-mine (triéthylamine par exemple) dans un solvant organique tel qu'un solvant chloré (chloroforme, dichloro-1,2 éthane, dichlorométhane) ou dans le tétrahydrofurane ou dans un mélange de ces solvants, à une température comprise entre 15 et 30C.

Il est entendu que le/les radicaux hydroxy sont de préférence préalablement protégés. La protection et la libération des radicaux protecteurs s'effectuent comme décrit préc~ rt.

A titre d'exemple, les radicaux protecteurs d'acide peuvent être choisis parmi les radicaux alcoyle (méthyle, éthyle, t.butyle), al-coyle substitué (trichloréthyle, haloéthyle, p.toluènesulfonyl-éthyle, benzyle, benzyle substitué par un radical nitro, benzhydryle, triphénylméthyle, benzyloxyméthyle...), alcoyloxyalcoyle (méthoxymé-thyle), tétrahydropyranyle ou triméthylsilyle. La mise en place et l'él~minAtion de ces radicaux s'effectue selon les méthodes habituelles citées précedemment.

~o 94,26725 ~ ~ 6 ~ PCT~R94/00533 Lorsque le radical X (dans R) est un radical carbamoyle ou inoc~rbonyle éventuellement N-méthylé, le nitrile de formule géné-rale (III) peut aussi être préparé par condensation d'une amine ou d'un acide de formule générale :
R"'-NH - (CH2)m~Y- (C~p - CN tVIIa) R R
ou HO-CO - (CH2)m-Y- (C)p - CN (VIIb) R R

dans lesquelles R"', R, R, Y, m, et p sont définis comme précédem-ment, sur un dérivé du lupane de formule générale (IVa) ou (IVb).

La réaction s'effectue dans des conditions identiques à celles de la préparation d'un dérivé du lupane de formule générale (I) ~ partir d'une amine ou d'un acide de formule générale (Va) ou (Vb) et d'un dérivé du lupane de formule générale (IV).

L'acide dérivé du lupane, de formule générale (IVa) peut être préparé
par analogie avec la réaction de l'Amino~cide de formule générale (VI) sur le chlorure de l'acide dérivé du lupane de formule générale (VII), par action d'un aminoacide de form,ule générale :

H2N~(CH2)n~CH (VIII) dans laquelle n est défini comme précé~ ~nt et dont la fonction acide est préalablement protégée.

L'amine dérivée du lupane, de formule générale (IVb), pour laquelle R''' est un atome d'hydrogène, peut être préparée a partir d'un dérivé du lupane de formule générale (VII), par action d'une ~i~ine de formule générale :

H2N-(cH2)n-NH2 (IX) dans laquelle n est défini comme préc~e cnt~

Les dérivés (IVb) pour lesquels R''' est un radical méthyle peuvent être obtenus par N-méthylation selon la méthode décrite par W O 94/26725 21~ 2 7 ~ 3 PCT~Rg4/00533 A. KATRITSKY, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 2539 (1987), à partir du produit de formule générale (IVb) pour lequel R''' est un atome d'hydrogène.

Les produits de formule générale (Va) ou (Vb) peuvent être préparés selon ou par analogie avec les méthodes citées ou décrites ci-après dans les exemples.

Les dérivés du lupane de formule générale (IV) ou (VII) pour lesquels Rl est un radical hydroxyméthyle peuvent être préparés par action de l'acétate d'argent sur le dérivé bromé correspondant pour lequel R1 est bromométhyle et pour lequel, le radical hydroxy est préalablement protégé. La réaction s'effectue avantageusement dans un solvant orga-nique comme par exemple le toluène, à une température comprise entre 20C et la température de reflux du mélange réactionnel. Le dérivé
bromé de départ peut être obtenu par action d'un agent de bromation comme par exemple le tribromure de tétrabutyl~mm~r--um ou le N-bromosuccinimide sur le dérivé correspondant de l'acide lup-20(29)-èn-28-oïque. La réaction s'effectue dans un solvant chloré comme le chlorure de méthylène, le chloroforme, ou le tétrachlorure de carbone à une température voisine de 25C.

Les dérivés du lupane de formule générale (VII) pour lesquels R1 est un radical -CH2OR' ou -CH2SR' peuvent être préparés à partir du dé-rivé du lupane pour lequel R1 est bromométhyle, par action de l'alcoolate ou du thiolate correspondant.

Le chlorure d'acide du dérivé du lupane de formule générale (VII) peut être préparé selon les méthodes connu~s A titre d'exemple, on opère par action du chlorure d'oxalyle ou du chlorure de thionyle, dans un solvant chloré comme le chloroforme, le dichloroéthane ou le dichlorométhane Les nouveaux dérivés du lupane de formule générale (I) peuvent être purifiés le cas échéant par des méthodes physiques telles que la cristallisation ou la chromatographie.

Lorsque le dérivé du lupane de formule générale (I) présente des formes stéréoisomères, la préparation s'effectue au moyen de d~rivés O 94/26725 2 1 ~ 2 ~ ~ ~ PCT~R94/00533 chiraux de formule générale (Va), (Vb), (VI), (VIIa) ou (VIIb). Il est entendu que lorsque l'on veut obtenir un intermédiaire chiral, la séparation s'effectue selon les méthodes habituelles qui n'affectent pas le reste de la molécule, telles que par exemple la chromatogra-phie sur phase chirale, ou par conversion du l~]~nge racémique endiastéréoisomères et séparation par cristallisation ou chromatogra-phie.

Les produits selon l'invention peuvent être transformés en sels mé-talliques avec les bases fortes selon les méthodes connues en soi.
Ces sels peuvent être obtenus par action d'une base métallique dans un solvant approprié. Le sel formé précipite après concentration éventuelle de la solution ; il est séparé par filtration.

Comme exemples de sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être cités les sels avec les métaux alcalins (sodium, potassium, lithium).

Les nouveaux dérivés du lupane selon la présente invention sont particulièrement utiles pour la prophylaxie et le traitement du SIDA
(syndrome d'immunodéficience acquise) et de syndromes associés [ARC
(AIDS related complex)]. Par prophylaxie nous sous-entendons le traitement des sujets qui ont été exposés aux virus HIVs, en particu-lier les séropositifs asymptomatiques ,qui présentent le risque dedévelopper la maladie dans les mois ou les années à venir après la primoinfection.

Les produits selon l'invention, qui sont inhibiteurs de l'effet cytopathogène du HIV et inhibiteurs de la production de transcriptase inverse en culture cellulaire à des concentrations dépourvues d'effet cytotoxique ou cytostatique, sont particulièrement intéressants.

Il a été également démontré que les produits selon l'invention sont actifs pour le traitement des affections dans lesquelles interviennent des virus de la famille des herpès.

La famille des herpès est en effet à l'origine de nombreuses affections dont certaines peuvent être très graves. Elle comprend l'Herpès simplex, le varicella-zoster, le cytomegalovirus et le virus d'Epstein-Barr. L'Herpès simplex peut varier de formes bénignes comme W O 94/26725 PCT~R94/00533 ~
2~9~7~3 ~o l'herpès labial aux formes plus sérieuses comme l'herpès génital et peut même être responsable d'encéphalites mettant la vie du patient en danger. Le varicella zoster est le virus responsable de la varicelle et du zona, il peut également être à l'origine d'affections plus graves parmi lesquelles des encéphalites. Les infections à
cytomégalovirus sont en général asymptomatiques chez les sujets sains, mais peuvent devenir la cause d'infections ophtalmiques graves (retinites) pouvant conduire à la cécité, de morbidité et de mortalité chez des sujets immunodéprimés (m~ es atteints du SIDA ou de toute autre immunodéficience, par exemple après transplantation d'organes ou après chimiothérapie anticancéreuse). Le cytomégalovirus est également responsable de manifestations cliniques sévères pour le foetus ou le nouveau-né dans le cas d'une primo-infection pendant la grossesse ou lors de la transfusion de sang séropositif à un nouveau-né séronégatif.

Les activités ont été mises en évidence dans les tests suivants :

Activité vis-à-vis de l'effet cytopatho~ène du vin ~ HIV

Les produits en poudre ont été mis en solution à raison de 2 mg de produit par 2 ml (environ 4 x 10 M) dans du diméthylformamide (DMF) pour obtenir une solution stock de produit à 100 % de DMF. Le test est réalisé sur la lignée lymphoh1~toïde CEM 4. Dans une microplaque de 96 puits on dépose 25 ~l/puits d'une solution de produit à tester dans du tampon phosphate isotonique (TPI) ou de TPI seul dans le cas des contrôles. Les produits sont étudiés à 8 concentrations, à raison de 6 puits par concentration. On ajoute alors 125 ~l d'une suspension de cellules C~M (8 x 10 cellules par ml) dans le milieu RPMI
contenant 10 % de sérum de veau foetal, 100 UI/ml de pénicilline, 100 ~g/ml de streptomycine et 2 ~moles/ml de glutamine et les microplaques sont incubées une heure à 37C, sous une atmosphère contenant 5 % de gaz carbonique. Pour chaque concentration, l'essai est partagé en deux parties : une partie (3 puits) sur cellules infectées, pour la détermination de l'activité antivirale et l'autre partie (3 puits) sur cellules non infectées, pour déterminer la cytotoxicité des produits. On infecte alors la première série avec HIV-1 (100 ~l par puits d'une suspension de virus LAV-1-BRU contenant ~ 0 94/2672~ 21 6 ~ ~ ~ 3 PCT~R94/00533 200-300 TCID50) tandis que l'autre s~rie reçoit 100 ~l de milieu RPMI
tel que défini préc~m~nt. Au bout de 5 jours d'incubation, 100 ~l de cellules sont prélevés pour mesurer la viabilité cellulaire [déterminée selon une modification de la technique décrite par R.
Pauwels et coll., J. Virol. Meth., ~Q, 309-321 (1988)]. On ajoute à
ce prélèvement 10 ~l d'une solution contenant 7 mg de M~T [bromure de
2 ~ 2 ~ 3 WO 94/26725 PCT / I; R94 / 00533 NOUV ~ UX D ~ RIV ~ DU T ~ upAN ~ T ~ T`uR PRT'PARATION F ~ 'T TT` ~ COMPOSITIONS
PHARMA ~ T ~ `UTIOUT '~ YES TT ~' ~ CONTIT ~` NNT'NT

The present invention relates to lupane derivatives, of formula general:

CH3 ~ CONH-R
(I) . Hl, H CH3 HO

their salts, their preparation and the pharmaceutical compositions which contain them.

In the ~ Pm ~ n ~ Japanese patent J 01 143 832 have been described betulin derivatives of general formula:

H 2 C = l "

`H2 - R2 in which R1 and R2 are hydroxy or acyloxy and R3 is in particular methyl. These derivatives are useful in the ~ o ~ -ne anticancer.

It has now been found that the lupane derivatives of the general formula rale ~ I) in which:

R represents a radical of general formula:

WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 2 ~ 627 ~ 3 2 NOT
(CH2) n - X - (CH2) m - Y (C) p ~ / ll (II) RRN

X is a bond or represents a carbamoyl radical, N-methyl carbamoyl, aminocarbonyl or N-methylaminocarbonyl, Y is a bond or represents a meta or para phenylene radical, R and R identical or different are hydrogen atoms or methyl radicals (it being understood that all the -CRR units are not not necessarily identical) and, n is an integer from 6 to 12, m is an integer from 0 to 3 and p is an integer from 0 to 2 with the understanding that m + n + p is com-taken between 6 and 14, and R1 is a methyl, hydroxymethyl radical or a -CH2OR 'radical or -CH2SR 'for which R' is alkyl or hydroxyalkyl, as well as their pharmaceutically acceptable salts, exhibit a cytoprotective effect of cells infected with an HIV virus (Human Immunodeficiency Virus) and inhibitory activity production of reverse transcriptase of an HIV virus.

In the general formula above, it is understood that the radicals alkyl are straight or branched and contain 1 to 4 carbon atoms bone.

In cases where R and R are different, the products of formula general (I) have stereoisomeric forms, it is also understood that the stereoisomeric forms as well as their mixtures Also within the scope of the present invention.

According to the invention, the lupane derivatives of general formula (I) can can also be prepared by the action of an azide on a nitrile of general formula:

j ~) 94/26725 ~ 16 2 ~ ~ 3 PCT / FR94 / 00533 ~ ~ ~ CoNH- (cH2 \ nX- (CH2) mY- (C) p-CN

¦ H ~, H CH3 RR

HO ~
H3C CH3 (III) where R1 R, R, X, Y, n, m, and p are defined as previous ~ ^ m ~ ^ nt.

The azide is advantageously chosen from the sorting azide n.butyltin, trimethylsilyl azide or an alkali azide.
When using tributyltin azide the reaction is carried out in an organic solvent such as 1,2-dimethoxyethane, 2-ethoxyethanol or a mixture of such solvents, at the temperature reflux of the reaction mixture. When the azide of trimethylsilyl, the operation is carried out in the presence of aluminum trichloride, in a chlorinated solvent such as, for example, dichloromethane, at a temperature between 10 and 40C.

According to the invention the lupane derivative of general formula (I) for which X (in the radical R) represents a carbamoyl radical or optionally N-methylated aminocarbonyl and the other radicals are defined as above ~ ^ mm ~ nt, can also be obtained from a lupane derivative of general formula:

CH3 ~ CONH-R (IV) ¦ Hl, H CH3 HO

WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 ~ 1627 ~ 3 in which R1 is defined as pr ~ ce ~ -rt and R "represents a radical of general formula:
(CH2) n - COOH (IVa) or (CH2) n-NH-R "'(IVb) in which n is defined as above ~ f ~ rt and R "'is an atom of hydroqene or a methyl radical, by the action respectively of a amine or acid of general formulas:
N ~ N
R "'- HN - (CH2) m - Y / C) P ~ N ~ N (V a) RRH
or N - N
HO-CO - (CH2) m - Y (C) p ~ ~ N (V b) RRH

in which R, R, m and p are defined as above ~ Pmm ~ nt and R "'is defined as above.

It is understood that the hydroxy radicals of the lupane derivative of general mule (IV) are preferably protected by radicals compatible which can be set up and fli mi n ~ S without touching the rest of the molecule. For example, protective groups can be chosen from the radicals described by TW GREENE, Protective Groups in Organic Synthesis, J. WILEY-Interscience Publication (1991) or by Mc OMIE, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (1973). We will choose radicals that can be ~ limin ~ 5 in neutral, basic or acidic medium.

In particular, hydroxy radicals can be protected ~ the state of ter (formyloxy, acetoxy, i.butoxy, trichloracetyloxy, phenoxyacetyl-oxy, benzyloxy) i in this case, ~ liminAtion is carried out by hydrolysis in basic medium, in particular in the presence of soda at a temperature between 10 and 50C. Protection can also be performed killed ~ ketone state, in the form of carbonate by a radical wo 94.26725 2 I 6 ~ 7 0 ~ PCT ~ R94 / 00533 -COORa in which Ra is an optional alkyl or benzyl radical-ment substituted or also by a trialcoylsilyl radical.

The reaction is carried out according to the usual condensation methods of an amine on an acid. In particular, we operate in the presence of an accept-acid such as an organic nitrogen base (trialcoylamine, pyri-dine, N-methyl-morpholine, diaza-1,8 bicyclo [5.4.0] 11n ~ supper-7, diaza-1.5 bicyclo [4.3.0] nonene-5 for example) in an organic solvent as a chlorinated solvent (dichloromethane, dichlorethane, chloroform for example) or an amide (dimethylformamide for example). It is also It is also possible to operate in the presence of a condensing agent such as a carbodiimide (dicyclohexylcarbodiimide, 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide for example) and optionally-ment in the presence of a catalyst such as N-hydroxybenzotriazole or N-hydroxysuccinimide, at a temperature between -20 and 40C.

The amine of the general formula (Va) is condensed by preferably from the amine hydrochloride.

The nitrile of general formula (III) can be prepared by dehydration of the corresponding amide, by any known method which does not alter the rest of the molecule.

One operates in particular by means of trifluoroacetic anhydride in a ether (tetrahydrofuran for example), at a temperature between 10 and 66C

The amide corresponding to the nitrile of general formula (III) can be itself obtained from the acid according to known methods and / or cited below in the examples.

The corresponding acid can be prepared by the action of a ~ tno ~ cide of general formula:
H2N - (cH2) nx- (cH2) my- ~ c ~ p-cooH (VI) - RR

WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 ~ lS2703 6 where R, R, X, Y, n, m, and p are defined as above ment and whose acid function is pr ~ AlAhl ~ -nt protected, on the acid chloride of general formula:

CH3 ~ COOH (VII) ~ Hl, H CH3 HO

in which Rl is defined as above ~ t and whose radicals hydroxy are protected beforehand, followed by the elimination of the protective radicals.

The reaction of the amine on the chloride of lupen-20 (29) oic acid-28 of general formula (VII) is carried out according to the usual methods which do not affect the rest of the molecule. We operate in particular-ment in the presence of an organic nitrogenous base such as a trialkyla-mine (triethylamine for example) in an organic solvent such as chlorinated solvent (chloroform, 1,2-dichloroethane, dichloromethane) or in tetrahydrofuran or in a mixture of these solvents, at a temperature between 15 and 30C.

It is understood that the hydroxy radical (s) are preferably previously protected. Protection and liberation of radicals protectors are made as described above ~ rt.

For example, the acid protecting radicals can be chosen from alkyl radicals (methyl, ethyl, t.butyl), al-substituted coyl (trichlorethyl, haloethyl, p.toluenesulfonyl-ethyl, benzyl, benzyl substituted by a nitro radical, benzhydryl, triphenylmethyl, benzyloxymethyl ...), alkyloxyalkyl (methoxymethyl-thyle), tetrahydropyranyl or trimethylsilyl. The establishment and the ~ minAtion of these radicals is carried out according to the methods usual cited above.

~ o 94,26725 ~ ~ 6 ~ PCT ~ R94 / 00533 When the radical X (in R) is a carbamoyl radical or inoc ~ rbonyl optionally N-methylated, the nitrile of the general formula rale (III) can also be prepared by condensation of an amine or an acid of general formula:
R "'- NH - (CH2) m ~ Y- (C ~ p - CN tVIIa) RR
or HO-CO - (CH2) mY- (C) p - CN (VIIb) RR

where R "', R, R, Y, m, and p are defined as above ment, on a lupane derivative of general formula (IVa) or (IVb).

The reaction is carried out under conditions identical to those of preparation of a lupane derivative of general formula (I) ~ from an amine or an acid of general formula (Va) or (Vb) and a lupane derivative of general formula (IV).

Acid derived from lupane, of general formula (IVa) can be prepared by analogy with the reaction of Amino ~ cide of general formula (VI) on the acid chloride derived from lupane of general formula (VII), by the action of an amino acid of general form:

H2N ~ (CH2) n ~ CH (VIII) in which n is defined as above ~ ~ nt and whose function acid is previously protected.

The amine derived from lupane, of general formula (IVb), for which R '''is a hydrogen atom, can be prepared from a lupane derivative of general formula (VII), by the action of a ~ i ~ ine of general formula:

H2N- (cH2) n-NH2 (IX) in which n is defined as prec ~ e cnt ~

The derivatives (IVb) for which R '''is a methyl radical may be obtained by N-methylation according to the method described by WO 94/26725 21 ~ 2 7 ~ 3 PCT ~ Rg4 / 00533 A. KATRITSKY, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 2539 (1987), from product of general formula (IVb) for which R '''is an atom hydrogen.

The products of general formula (Va) or (Vb) can be prepared according to or by analogy with the methods cited or described below in the examples.

The lupane derivatives of general formula (IV) or (VII) for which Rl is a hydroxymethyl radical can be prepared by the action of silver acetate on the corresponding brominated derivative for which R1 is bromomethyl and for which the hydroxy radical is previously protected. The reaction is advantageously carried out in an organic solvent.
for example toluene, at a temperature between 20C and the reflux temperature of the reaction mixture. The derivative starting bromine can be obtained by action of a bromination agent such as tetrabutyl tribromide ~ mm ~ r - um or N-bromosuccinimide on the corresponding derivative of lup-20 acid (29) -en-28-oic. The reaction is carried out in a chlorinated solvent such as methylene chloride, chloroform, or carbon tetrachloride at a temperature close to 25C.

The lupane derivatives of general formula (VII) for which R1 is a radical -CH2OR 'or -CH2SR' can be prepared from the de-riveted lupane for which R1 is bromomethyl, by action of the corresponding alcoholate or thiolate.

The acid chloride of the lupane derivative of general formula (VII) can be prepared according to known methods ~ s For example, operates by the action of oxalyl chloride or thionyl chloride, in a chlorinated solvent such as chloroform, dichloroethane or dichloromethane The new lupane derivatives of general formula (I) can be purified if necessary by physical methods such as crystallization or chromatography.

When the lupane derivative of general formula (I) exhibits stereoisomeric forms, the preparation is carried out by means of rivets O 94/26725 2 1 ~ 2 ~ ~ ~ PCT ~ R94 / 00533 chirals of general formula (Va), (Vb), (VI), (VIIa) or (VIIb). he it is understood that when one wants to obtain a chiral intermediary, the separation is carried out according to the usual methods which do not affect not the rest of the molecule, such as for example the chromatographic phie on chiral phase, or by conversion of l ~] ~ racemic endiastereoisomers and separation by crystallization or chromatography phie.

The products according to the invention can be transformed into metallic salts.
metallic with strong bases according to methods known per se.
These salts can be obtained by the action of a metal base in a suitable solvent. The salt formed precipitates after concentration possible solution; it is separated by filtration.

As examples of pharmaceutically acceptable salts can be cited the salts with alkali metals (sodium, potassium, lithium).

The new lupane derivatives according to the present invention are particularly useful for prophylaxis and treatment of AIDS
(acquired immunodeficiency syndrome) and associated syndromes [ARC
(AIDS related complex)]. By prophylaxis we mean the treatment of subjects who have been exposed to HIVs, in particular link asymptomatic HIV-positive people who are at risk of developing the disease in the coming months or years after primary infection.

The products according to the invention, which are inhibitors of the effect HIV cytopathogen and inhibitors of transcriptase production reverse in cell culture at ineffective concentrations cytotoxic or cytostatic, are particularly interesting.

It has also been demonstrated that the products according to the invention are active for the treatment of conditions in which viruses of the herpes family are involved.

The herpes family is indeed the source of many conditions some of which can be very serious. She understands Herpes simplex, varicella-zoster, cytomegalovirus and virus of Epstein-Barr. Herpes simplex can vary from mild forms like WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 ~
2 ~ 9 ~ 7 ~ 3 ~ o cold sores with more serious forms such as genital herpes and may even be responsible for life-threatening encephalitis in danger. Varicella zoster is the virus responsible for chickenpox and shingles, it can also cause illnesses more serious including encephalitis. Infections cytomegaloviruses are generally asymptomatic in subjects healthy, but can cause serious eye infections (retinitis) which can lead to blindness, morbidity and mortality in immunocompromised subjects (people with AIDS or any other immunodeficiency, for example after transplantation organs or after cancer chemotherapy). Cytomegalovirus is also responsible for severe clinical manifestations for the fetus or newborn in the case of a primary infection during pregnancy or when transferring seropositive blood to a new-born HIV negative.

The activities were highlighted in the following tests:

Activity vis-à-vis the cytopathic effect ~ wine ene ~ HIV

The powdered products were dissolved in a proportion of 2 mg of produced by 2 ml (approximately 4 x 10 M) in dimethylformamide (DMF) to obtain a 100% DMF product stock solution. The test is carried out on the lymphoh1 ~ tode CEM 4 line. In a microplate of 96 wells 25 ~ l / well of a solution of product to be tested are deposited in isotonic phosphate buffer (TPI) or TPI alone in the case controls. The products are studied at 8 concentrations, of 6 wells per concentration. 125 ~ l of a suspension are then added C ~ M cells (8 x 10 cells per ml) in RPMI medium containing 10% fetal calf serum, 100 IU / ml penicillin, 100 ~ g / ml streptomycin and 2 ~ moles / ml glutamine and microplates are incubated for one hour at 37C, under an atmosphere containing 5% carbon dioxide. For each concentration, the test is divided into two parts: one part (3 wells) on cells infected, for determining antiviral activity and the other part (3 wells) on uninfected cells, to determine the product cytotoxicity. We then infect the first series with HIV-1 (100 ~ l per well of a suspension of LAV-1-BRU virus containing ~ 0 94/2672 ~ 21 6 ~ ~ ~ 3 PCT ~ R94 / 00533 200-300 TCID50) while the other series receives 100 ~ l of RPMI medium as defined above ~ m ~ nt. After 5 days of incubation, 100 ~ l cells are taken to measure cell viability [determined according to a modification of the technique described by R.
Pauwels et al., J. Virol. Meth., ~ Q, 309-321 (1988)]. We add to this sample 10 ~ l of a solution containing 7 mg of M ~ T [bromide

3-(4,5-diméthyl 2-thiazolyl)-2,5-diphényltétrazolium] par ml de tampon phosphate isotonique. Après 3 heures d'incubation à 37C le surnageant est enlevé. Le MTT est converti en un sel de formazan (bleu) uniquement à l'intérieur des cellules vivantes. On ajoute alors 100 ~l d'isopropanol (contenant 0,04 mole/l d'acide chlorhydrique) et les microplaques sont agitées jusqu'à la solubilisation du bleu de formazan. L'absorbance à 540 nm est lue avec un lecteur automatique de réactions ELISA en microplaques. Cette absorbance est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes.

Le taux de protection (en ~) d'un produit donné est déterminé à par-tir des densités optiques (DO) par la formule :

DO~cell. traitées et inf.)-DO(cell. non traitées et inf.) DO(cell. traitées et non inf.)-DO(cell. non traitées et inf.) Le cas échéant la concentration inhibitrice 50 % est déterminée.

Les résultats démontrent que pour des concentrations de produit testé
comprises entre 0,01 et 10 ~g/ml, on obtient une ~ nution signifi-cative de l'effet cytopathogène.

Le taux de protection procuré par les produits selon l'invention est 25 compris entre 20 et 100 %

La concentration inhibitrice 50 ~ des produits selon l'invention est comprise entre 0,05 et 50 ~g/ml lorsqu'elle peut etre déterminée.

D~ter~in~tion ~ la multiplication virale par ~os~e ~e la tran~criD-tase inverse du virns HIV

L'activité de la transcriptase inverse est mesurée dans 10 ~l de surnageant de culture A l'aide du kit de dosage poly r(A) reverse transcriptase [3H]-SPA enzyme assay (RPQN 0100, Amersham, GB) selon W O 94/26725 2 ~ 6 ~ q 0 3 12 PCT~R94/00533 la procédure préconisée par le fabricant. Le temps de réaction est de 6 heures et la radioactivité comptée à l'aide d'un compteur microbeta tTOPCOUNT ~ PACKARD].

On observe des inhibitions de la production de transcriptase inverse associée au virus, comprises entre 20 et 100 % aux concentrations testées (0,01 à 10 ~g/ml).

Action sur les virus de la fAmille des her~ès :

L'action des dérivés de formule qénérale (I) sur les virus de la famille des herpès a été mise en évidence dans la technique décrite par NEYTS et coll., Virology, 179, 41-50 (1990).

La technique employée consiste dans la mesure de l'effet cytopathogène du virus et de sa protection par utilisation des produits de formule générale (I). L'activité antivirale est appréciée par la mesure de la CE50 (concentration nécessaire pour inhiber 50 de l'effet cytopathogène induit par le virus).

Les résultats obtenus dans cette technique sont donnés ci-après :

L'activité sur cytomégalovirus a été étudiée sur les souches Davis et DER 648 (souche résistante au Ganciclovir) :

, Souche Davis DER 648 N de l exemple CE50 (~g/ml) CE50 (~g/ml) 1 0,86 0,57 0,8 0,76 13 sup. 2 sup.0,5 14 sup. 2 2 Tableau I

L'activité sur varicella zoster a été étudiée sur la souche résistante thymidine-kinase négative (TK-) YS/R :

O 94/26725 ~ 1 6 2 7 0 ~ PCT~R94/00533 N de l'exemple Souche YS/R

CE50 (~g~ml) 1 sup. 2 13 sup. 2 Tableau II

Les exemples suivants donnés à titre non limitatif illustrent la pré-sente invention.

~mD le 1 A une solution de 0,5 g d'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque dans 90 cm de dichlorométhane, on a~oute 125 mg de chlorhydrate de 5-~min~thyl-tétrazole, 141 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 380 mq de chlorhydrate de 1-(3-diméthylamino-propyl)-3-éthylcarbodiimide et 0,48 cm de triethy1~in~. La solution est agitée pendant 24 heures à 20C puis le mélange réactionnel est lavé 5 fois avec 100 cm d'eau distillée. La phase organique est en-suite séchée sur du sulfate de magnesium et evaporee à sec sous pres-sion réduite (2,7 kPa) à une temperature voisine de 40C. Le residu obtenu (600 mg) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-15 0,045 mm) éluée d'abord avec 2 litres d'un ~ nge de cycloh~Y~ne et d'acétate d'éthyle (30-70 en volumes), puis avec 2 litres d'un mé-lange de méthanol et d'acétate d'éthyle (30-70 en volumes) ; les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu est repris avec 10 cm d'éther éthylique, filtré, lavé 2 fois avec 5 cm d'éther éthylique et séché sous pression réduite (13,5 Pa) a 20C. On obtient ainsi 290 mg de 5-{N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-~n-W O 94/26725 ~ 7 ~3 PCT~Rg4/00533 28-oyl)-8-aminooctanoyl]-Am;n~m~thyl}-tétrazole sous la forme d'une poudre hlAnch~ (Rf = 0,26 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-A~m~n-Aque à 20 % (12-3-0,5 en volumes)).

Une solution de 1,07 g de 5-{N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-~minométhyl}-tétrazole obtenu comme décrit ci-des-sus, 5,7 cm de soude 5N, 18,4 cm de tétrahydrofurane et 36,9 cm3 de méthanol est agitée 20 heures à une température voisine de 20C. Le mélange est refroidi à 5C, puis acidifié avec de l'acide chlorhy-drique 5N, et dilué avec 100 cm d'eau distillée. Après 1 heure sous agitation à 5C, le solide obtenu est séparé par filtration, lavé 5 fois avec 25 cm d'eau distillée et séché sous pression réduite (15,5 Pa) à une température voisine de 20C. On obtient ainsi 880 mg de 5-{N'-[N-(3~-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-amino-méthyl}-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers L'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque peut être préparé de la manière suivante :

Après avoir chauffé au reflux pendant 3 heures un mélange de 330 mg d'acide 8-aminooctanoïque et 410 mg de chlorotriméthylsilane dans 50 cm de dichlorométhane, la solution est refroidie vers 20C et on ajoute 1 g de chlorure de 3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle (préparé à
partir d'acide 3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque) puis 0,81 cm3 de triéthylamine. L'agitation est maintenue pendant 15 heures a une tem-pérature voisine de 20C et le solvant est évaporé à sec sous pres-sion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C. Le résidu est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle (60-40 en vo-lumes). Les fractions contenant le produit sont rass~ hl~ et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C. On obtient ainsi 1,1 g d'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque sous la forme d'un meringue hlAnche (Rf - 0,4 ; chromatographie sur couche mince de silice ;
éluant : cyclohexane, acétate d'éthyle (60-40 en volumes)).

O 94/26725 ~ 1 S 2 ~ ~ 3 PCT~R94/00~33 Le chlorhydrate de 5-~min~m~thyl-tétrazole peut être préparé selon la méthode décrite dans la ~m~n~ de brevet DE 3 626 130.
F~ mnle 2 A une solution de 640 mg d'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque dans 50 cm de chloroforme, on ajoute 134 mg de 5-amino-lH-tétrazole, 168 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 50 cm3 de diméthylformamide, 692 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthy-laminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, et 0,70 cm de triéthylamine en solution dans 5 cm de chloroforme. La solution est agitée pendant 2 10 jours à 20C puis le mélange réactionnel est lavé 3 fois avec 50 cm3 d'acide chlorhydrique lN, puis 5 fois avec 100 cm d'eau distillée.
La phase organlque est séchée sur du sulfate de magnésium et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (730 mg) est chromatographié sur une colonne 15 de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec 800 cm d'acétate d'éthyle puis avec 800 cm d'un mélange de dichlorométhane et de méthanol (95-5 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concen-trées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu est repris dans 15 cm d'oxyde d'isopropyle, filtré, 20 séché sous pression réduite (13,5 Pa) à 20C. On obtient ainsi 265 mg de 5-{N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-amino}-tétrazole sous la forme d'une poudre beige (Rf 0,40 ; chromatogra-phie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-ammo-niaque à 20 % (12-3-0,5 en volumes)).

25 Une solution de 260 mg de 5-{N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-amino}-tétrazole, 0,92 cm3 d'hydroxyde de li-thium 1N, 2,5 cm3 de tétrahydrofurane et 5 cm de méthanol est agitée 20 heures à une température voisine de 20C. Le mélange est acidifié
avec de l'acide chlorhydrique lN, et dilué avec 80 cm d'eau distil-lée. On extrait ensuite le mélange par 100 cm d'acétate d'éthyle puis 2 fois par 25 cm d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, lavées 4 fois par 40 cm d'eau distillée, séchées sur du sulfate de magnésium et évaporées ~ sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45C. Le résidu obtenu 35 (170 mg) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-W O 94/26725 PCT~R94/00533 ~27~3 16 0,045 mm) eluée avec un melange de chloroforme, methanol et A -ni~que à 20 % t12-3-0,5 en volumes). Les fractions contenant le produit sont reunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à
une temperature voisine de 40C. Le residu est repris par 5 cm d'oxyde d'isopropyle, filtre, lave 2 fois par 1 cm d'oxyde d'isopropyle et séche sous pression réduite (15,5 Pa) à 20C. On obtient ainsi 80 mg de 5-{N'-[N-(3~-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-amino}-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 165-170C.

~mnle 3 A une solutlon de 100 mg d'acide N-(3~,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque dans 50 cm de dichlorométhane, on ajoute 22 mg de chlorhydrate de 5-~min~ thyl-tétrazole, 25 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 70 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylamino-propyl)-3-éthylcarbodiimide et 0,09 cm de triéthylamine. La solution est agitee pendant 24 heures à 20C puis le mélange réactionnel est lavé successivement 3 fois avec 50 cm d'eau distillee, 2 fois avec 25 cm d'acide chlorhydrique 1N, puis 3 fois avec 50 cm d'eau distillee . La phase organique est ensuite sechee sur du sulfate de magnesium et evaporee à sec sous pression reduite (2,7 kPa) à une temperature voisine de 40C. Le residu obtenu (110 mg) est chromato-graphie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) eluée avec un mé-lange de chloroforme, methanol et Ammnni~que a 20 % (12-3-0,5 en vo-lumes). Les fractions contenant le produit sont reunies et concen-trees sous pression reduite (2,7 kPa) à une temperature voisine de40C. On obtient ainsi 65 mg de 5-{N'-[N-(3~,30-diacetoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-Amin~thyl}-tetrazole sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,40 ; chromatographie sur couche mince de silice ; eluant : chloroforme-méthanol-~ ;~que à 20 % (12-3-0,5 en volumes)).

Une solution de 160 mg de 5-{N'-[N-(3~,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl~-~min~m~thyl}-tetrazole, 1,3 cm de soude 5N, 6 cm de tetrahydrofurane et 3 cm de methanol est agitee 20 heures à
une temperature voisine de 20C. Le melange est refroidi à 5C, puis acidifie avec de l'acide chlorhydrique 5N, et dilué avec 30 cm3 d'eau ~ 0 94/2672~ 21 6 2 7 0 3 PCT~R94/00533 distillée Après 1 heure sous agitation à 5C, on ajoute 150 cm d'eau distillée et le mélange est extrait 5 fois par 50 cm d'un mé-lange de dichlorométhane et de méthanol (9-1 en volumes~. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur du sulfate de maqnésium et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C Le résidu obtenu (140 mg) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045mm) éluée avec un ~el~nqe de chloro-forme, méthanol et ~m~Q~i~que à 20 % (12-3-0,5 en volumes). Les frac-tions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu est repris par 2 cm d'acétonitrile, filtré et séché sous pression ré-duite (15,5 Pa) à 20C. On obtient ainsi 48 mg de 5-{N'-[N-(3~,30-di-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-aminométhyl}-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 145-150C

15 L'acide N-(3~,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoique est synthétisé par analogie avec l'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque à partir de chlorure de 3~,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oyle et de 8-aminooctanoate de méthyle (R = 95 %; Rf =
0,34 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclo-hexane-acétate d'éthyle (50-50 en volumes)).

Le chlorure de 3~,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oyle est préparé de la manière suivante :

A une solution de 560 mg d'acide 3~,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oïque dans 25 cm de dichlorométhane, on ajoute 0,22 cm de chlorure d'oxalyle. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de 20C, le solvant est évaporé sous pression réduite (22 kPa) et à une température voisine de 40C On obtient 600 mg d'une meringue hlAn~he qui est utilisée sans autre purification.

L'acide 3~,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oïque est obtenu de la ma-30 nière suivante :

Une suspension de 1,8 g d'acide 3~-acétoxy-30-bromolup-20(29)-èn-28-oïque et 800 mg d'acétate d'argent dans 50 cm de toluène est agitée 48 heures à une température voisine de 20C puis filtrée. La solution obtenue est ensuite concentrée à sec sous pression réduite (2 kPa).
--W O 94l26725 PCT~R94/00~33 ~
~2~ ~3 ` 18 Le résidu est mis en solution dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est décantée et lavée par 60 cm au total d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre, puis concen-trée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température vosine de 40C. Le solide blanc obtenu (1,7 g) est chromatographié sur une co-lonne de 1,7 cm de diamètre et contenant 35 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cycloh~n~ et d'acétate d'éthyle 80-20 ten volumes), en rec~ nt des fractions de 15 cm . Les 4 premières fractions obtenues sont ~l imin~, les 10 suivantes sont concentrées à sec sous pression réduite (13,5 Pa) a une température voisine de 40C. On obtient ainsi 1,1 g d'acide 3~,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oique sous forme d'une meringue blanche suffi~Amment - pure pour les transformations ultérieures.

L'acide 3~-acétoxy-30-bromolup-20(29)-en-28-oïque est obtenu de la manière suivante :

Une solution de 2,5 g d'acide 3~-acétoxy-lup-20(29)-èn-28-oïque et 2,41 g de tribromure de tétrabutyl~mm~nium dans 50 cm3 de chloroforme est agitée 5 jours à une température voisine de 25C. Le mélange ré-actionnel est lavé successivement 2 fois par 25 cm d'eau distillée, 2 fois par 25 cm d'une solution de thiosulfate de sodium 0,lN et par 2 fois 25 cm d'eau distillée puis séché sur du sulfate de magnésium anhydre. La phase organique est concentrée a sec sous pression réduite (2,7 kPa) et a une température voisine de 40C. On obtient un solide pâteux jaune (4 g) qui est chromatographié sur une colonne de 3,2 cm de diametre contenant 100 g de silice (0,02-0,045 mm) et éluée avec un mélange de cyclol-~x~n~ et d'acétate d'éthyle 85-15 (en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm . Les 5 premières fractions obtenues sont ~l; mi n~, les 10 suivantes sont évaporées sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 2,7 g d'acide 3~-acétoxy-30-bromolup-20(29)-~n-28-oïque sous forme d'un solide blanc fondant a une température voisine de l 90C

L'acide 3~-acétoxylup-20(29)-en-28-oïque peut être préparé selon BRUCXNER, KOVACS et KOCZKA, J. Chem. Soc., 948 (1948).

_~YO 94/26725 PCT~R94/00533 `~ 2~6~0~
,9 ~m~ le 4 A une solution de 400 mg d'acide N-[3~-acétoxylup-30-(2'-aCétoxyé-thylthio)-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoique, 90 mg de chlorhydrate de 5-aminométhyltétrazole, 100 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotria-zole, 250 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthyl-carbodiimide dans 100 cm de dichlorométhane, est ajouté en environ 10 minutes, 0,32 cm de triéthylamine. La solution est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20C, additionnée de 50 cm d'eau distillée puis acidifiée a pH voisin de 1 par 15 cm d'une so-lution aqueuse d'acide chlorhydrique N. La phase organique est décan-tée, la phase aqueuse est extraite par 3 fois 50 cm de dichlorom~-thane. Les phases organiques réunies sont ensuite s~chées sur du sul-fate de magnésium et évaporées a sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (400 mg) est 15 chromatographié sur colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de dichlorométhane et de méthanol (90-10 en volumes). Les fractions contenarlt le produit sont réunies et concentrés sous pres-sion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 300 mg de 5-{N'-[N-(3~-acétoxylup-30-(2'-acétoxyéthylthio)-20 20(29)-en-28-oyl)-8-aminooctanoyl]aminométhyl}-tétrazole sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,40 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-~mmoniAque à 20 %
(12-3-0,5 en volumes)).

Une solution de 300 mg de 5-{N'-[N-(3~-acétoxylup-30-(2'-acétoxyé-25 thylthio)-20(29)-en-28-oyl)-8-aminooctanoyl]aminométhyl}-tétrazole, 2,2 cm de soude N, 10 cm de t~trahydrofurane et 20 cm de méthanol est agitée 48 heures à une température voisine de 20C. Le r' 1 An~e est acidifié à pH 1 par addition de 4 cm d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 4N puis diluée par 70 cm d'eau distillée.
Apres 2 heures sous agitation à une température voisine de 20C, le solide est filtré et lavé 5 fois par 10 cm d'eau distillée. Le so-lide est dissout dans 20 cm d'éthanol. La solution est filtrée et le - filtrat est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (300 mg) est chromatographié sur 35 colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chlo-roforme, méthanol et ~mmQni~que à 20 % (24-6-1 en volumes). Les frac-W O 94/26725 PCT~R94/00533 ~
~6~7 ~ 20 tions contenant le produit sont reunies et concentrees sous pression réduite (2,7 kPa) a une temperature voisine de 40C. Le solide obtenu (150 mg) est traité par 5 cm d'oxyde d'isopropyle, le solide est filtré, lavé 2 fois avec 1 cm d'oxyde d'isopropyle puis séché sur hydroxyde de potassium. On obtient ainsi 100 mg de 5-{N'-[N-(3~-hydroxylup-30-(2'-hydroxyéthylthio)-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminoocta-noyl]-A~tnom~thyl}-tetrazole sous la forme d'un solide blanc fondant vers 140C.

L'acide N-[3~-acetoxylup-30-(2'-acetoxyethylthio)-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque peut être obtenu de la manière suivante :

A une solution de 500 mg d'acide N-[3~-acetoxylup-30-(2'-hydroxyé-thylthio)-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et 600 mg d'acétate de sodium dans 35 cm d'anhydride acétique est porté à une température proche du reflux durant environ 3 heures. Le mélange réactionnel est réfroidi à 20C puis concentré sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu est traité par un mélange de 15 cm de pyridine et 15 cm d'eau et agite durant 12 heures à une temperature voisine de 20C. Le melange réactionnel est concentré à
sec sous pression réduite (2,7 kPa) a une temperature voisine de 50C. Le residu est traite par 50 cm d'eau distillee et 10 cm d'une solution aqueuse d'acide chlorhydriqu,e N. La phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 3 fois 40 cm3 de dichloromethane. Les phases organiques réunies sont lavées 3 fois avec 20 cm d'eau distillée, séchees sur sulfate de magnésium puis évaporée à sec sous pression reduite (2,7 kPa) a une température voi-sine de 40C. Le résidu obtenu (500 mg) est recristallisé dans 5 cm3 d'un mélange éthanol-eau (75-25 en volumes). Le solide obtenu est filtré, puis lavé 2 fois par 1 cm d'un mélange éthanol-eau (75-25 en volumes) et séché sous pression réduite (13,5 Pa) sur pentoxyde de phosphore On obtient ainsi 400 mg d'acide N-[3~-acétoxylup-30-(2'-acétoxyéthylthio)-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,25 ; chromato~raphie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-Amm~n;~que à 20 % (24-6-1 en volumes)).

~ O 94/26725 ~ ~ ~ 2 7 ~ 3 PCT~Rg4/00533 L'acide N-[3~-acétoxylup-30-(2'-hydroxyéthylthio)-20~29)-èn-28-oyl~ -8-aminooctanoïque peut être obtenu de la manière suivante :

A une solution de 1,3 q d'acide N-[3~-acétoxylup-30-bromo-20(29)-èn-28-oyl~-8-aminooctanoïque dans 10 cm d'éthanol, on ajoute une solu-tion de 0,60 q de 2-hydroxyéthanethiolate de sodium dans 35 cm3 d'éthanol. On laisse agiter le mélanqe réactionnel 48 heures à une température voisine de 20C. On ajoute qoutte à goutte en 10 minutes environ, 5 cm d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique N puis dilue par 350 cm d'eau. Le mélange réactionnel est extrait 3 fois par 50 cm de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont lavée 3 fois par 30 cm d'eau distillée puis séchées sur du sulfate de maqnésium et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température volslne de 40C L'huile obtenue (1,1 q) est chromatoqra-phié sur colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de dichlorométhane et de méthanol (98-2 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrés sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 500 mg d'acide N-[3~-acétoxylup-30-(2'-hydroxyéthylthio)-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf 0,40 ;
chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-m~thanol-ammoniaque à 20 % (12-3-0,5 en volumes)~.

L'acide N-[3~-acétoxylup-30-bromo-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque peut être obtenu de la manière suivante :

A un mélange de 640 mg d'acide N-[3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de 30 cm de tétrachlorure de carbone, ajouter en une seule fois 350 mg de N-bromosuccinimide. La suspension est agitée 12 heures à une température voisine de 20C. Le solide est filtré, lavé par 3 fols 10 cm de tétrachlorure de carbone. Le filtrat est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30 40C. On obtient 800 mg d'acide N-[3~-acétoxylup-30-bromo-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque sous la forme d'une meringue hl~n~he (Rf -0,25 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlo-roforme-méthanol-ammoniaque à 20 ~ (24-6-1 en volumes)).

L'acide N-[3~-acétoxylup-30-bromo-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque est préparé comme décrit dans l'exemple 1.

W O 94/26725 PCT~R94/00533 L'hydroxyéthanethiolate de sodium est préparé par action de l'éthy-late de sodium sur le 2-hydroxyéthanthiol en solution dans l'éthanol.

Le chlorure de 3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle est préparé d'après J.
PROVITA et A. VYSTRCIL, Collect. Czech. Chem. Commun. 41, 1200 (1976).

~mn le 5 A une solution de 1,9 g d'acide N-[[3~-acétoxylup-20(29)-an-28-oyl]-8-aminooctanoïque dans 55 cm de dichlorométhane, on ajoute 2,2 cm3 de chlorure de thionyle. La solution est agitée pendant 24 heures a 20C puis le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C. Le résidu obtenu est mis en solution dans 25 cm de dichlorométhane et la solution est à nouveau évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) a une tempé-rature voisine de 35C. Le solide obtenu (1,97 g) et 485 mg de 5-(4-aminophényltétrazole) sont mis en solution dans 60 cm de dichloromé-thane et 1,41 cm de triéthylamine sont ajoutés goutte à goutte. La solution obtenue est agitée 24 heures a une température voisine de 20C. La solution obtenue est concentrée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C. Au solide obtenu est ajouté 50 cm de dichlorométhane et 25 cm d'une solution d'acide chlorhydrique N La phase organique est décantée, lavée 2 fois avec 10 cm d'une solution d'acide chlorhydrique N puis 2 fois avec 10 cm d'eau distillée La phase organique est sechée sur sulfate de sodium puis concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C. On obtient ainsi 2,0 g d'un solide qui est chromatographié sur colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée, avec un mélange de méthanol et d'acétate d'éthyle (10-90 en volumes), les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le 30 résidu (280 mg) est chromatographié sur colonne de silise (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'Ammon;Aque (24-6-1 en volumes), les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) a une température voisine de 35C. On obtient ainsi 310 mg de 5-~4-{N-[N'-35 (3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-amino}-phényl]-té-~ 0 94/26725 21 ~ 2 7 ~ 3 PCT~R94/00533 trazole sous la forme d'une poudre blanche (Rf 0,32 ; chromatogra-phie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-am-moniaque ~ 20 ~ (24-6-1 en volumes)).

Une solution de 0,31 q de 5-[4-{N-[N'(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminoctyll-amino}-phényl]-tétrazole, 1 cm de soude 4N, 3 cm3 de tétrahydrofurane et 1,5 cm de méthanol est agitée 26 heures à une température voisine de 20C. Le mélange est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C, puis dilué avec cm d'eau distillée et acidifié avec 1,2 cm d'une solution d'acide chlorhydrique 4N. Après 1 heure d'agitation, à une tempéra-ture voisine de 20C, le solide est séparé par filtration, lavé 6 fois avec 5 cm d'eau distillée et séché sous pression réduite (15,5 Pa) à une température voisine de 30C. On obtient ainsi 250 mg de 5-[4-{N-[N'-(3~-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-amino}-phényl]-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 200C.

Le 5-(4-aminophényle)tétrazole peut être préparé d'après J.M. McMANUS
et R. HERBST, J Org. Clem , 24, 1044 (1959).

Ex~mole 6 A une solution de 1,9 g d'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque dans 55 cm de dichlorométhane, on ajoute 2,2 cm3 de chlorure de thionyle. La solution est agitée pendant 24 heures à 20C
puis le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C. Le résidu obtenu est mis en solution dans 25 cm de dichlorométhane et la solution est à
nouveau concentrée a sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une tempé-rature voisine de 35C. Le solide obtenu (1,97 g) et 485 mg de 5-(3-aminophényltétrazole) sont mis en solution dans 60 cm de dichloromé-thane et 1,41 cm de triéthylamine sont ajoutés goutte à goutte. La solution obtenue est agitée 24 heures à une température voisine de 20C. La solution obtenue est concentrée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C. Au solide obtenu est ajouté 50 cm de dichlorométhane et 25 cm d'une solution d'acide chlorhydrique N. La phase organique est décantée, lavée 2 fois avec 10 cm d'une solution d'acide chlorhydrique N puis 2 fois avec 10 cm W O 94/26725 ~ PCT~R94/00533 ~
7~ ~ 24 d'eau distillée. La phase organique est sechée sur sulfate de sodium puis concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) ~ une température voisine de 35C. On obtient ainsi 2,2 g d'un solide qui est chromatographié sur colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée, avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque (24-6-1 en volumes), les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C. On obtient ainsi 840 mg d'un solide qui est à nouveau chromatographié sur colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée, en premier lieu avec de l'acétate d'éthyle puis avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'Ammoni~que (24-6-1 en volumes), les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C. On obtient ainsi 390 mg de 5-[3-{N-[N'-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-amino}-phényl]-tétrazole sous la forme d'une poudre blanche (Rf = 0,36 ; chromatographie sur couche mince de silice ;
éluant : chloroforme-méthanol-A~ ;aque à 20 ~ (24-6-1 en volumes)).

Une solution de 380 mg de 5-[3-{N-[N'-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctalloyll-amino}-phényl]-tétrazole, 1,2 cm de soude 4N,
3- (4,5-dimethyl 2-thiazolyl) -2,5-diphenyltetrazolium] per ml of isotonic phosphate buffer. After 3 hours of incubation at 37C the supernatant is removed. MTT is converted to a formazan salt (blue) only inside living cells. We add then 100 ~ l of isopropanol (containing 0.04 mole / l of acid hydrochloric) and the microplates are agitated until the solubilization of formazan blue. Absorbance at 540 nm is read with an automatic microplate ELISA reaction reader. This absorbance is proportional to the amount of living cells.

The protection rate (in ~) of a given product is determined by-drawing of the optical densities (OD) by the formula:

DO ~ cell. treated and inf.) - DO (cell not treated and inf.) DO (cell treated and not inf.) - DO (cell not treated and inf.) If necessary, the inhibitory concentration 50% is determined.

The results demonstrate that for concentrations of product tested between 0.01 and 10 ~ g / ml, we obtain a ~ nution signifi-cative of the cytopathogenic effect.

The protection rate provided by the products according to the invention is 25 between 20 and 100%

The inhibitory concentration 50 ~ of the products according to the invention is between 0.05 and 50 ~ g / ml when it can be determined.

D ~ ter ~ in ~ tion ~ viral multiplication by ~ bone ~ e ~ e the tran ~ criD-HIV virs reverse tase The reverse transcriptase activity is measured in 10 ~ l of culture supernatant Using the poly r (A) reverse assay kit transcriptase [3H] -SPA enzyme assay (RPQN 0100, Amersham, GB) according to WO 94/26725 2 ~ 6 ~ q 0 3 12 PCT ~ R94 / 00533 the procedure recommended by the manufacturer. The reaction time is 6 hours and radioactivity counted using a microbeta counter tTOPCOUNT ~ PACKARD].

Inhibitions of reverse transcriptase production are observed associated with the virus, between 20 and 100% at concentrations tested (0.01 to 10 ~ g / ml).

Action on herbal family viruses:

The action of derivatives of general formula (I) on the viruses of family of herpes was highlighted in the described technique by NEYTS et al., Virology, 179, 41-50 (1990).

The technique used consists of measuring the effect cytopathogen of the virus and its protection by the use of products of general formula (I). Antiviral activity is appreciated by measuring the EC50 (concentration necessary to inhibit 50 virus-induced cytopathic effect).

The results obtained in this technique are given below:

Activity on cytomegalovirus was studied on Davis and DER 648 (strain resistant to Ganciclovir):

, Strain Davis DER 648 Example n EC50 (~ g / ml) EC50 (~ g / ml) 1 0.86 0.57 0.8 0.76 13 sup. 2 extra 0.5 14 sup. 2 2 Table I

The activity on varicella zoster was studied on the strain resistant thymidine kinase negative (TK-) YS / R:

O 94/26725 ~ 1 6 2 7 0 ~ PCT ~ R94 / 00533 N of the example YS / R strain EC50 (~ g ~ ml) 1 sup. 2 13 sup. 2 Table II

The following examples, given without limitation, illustrate the pre-invention.

~ mD on 1 To a solution of 0.5 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8- acid aminooctanoic in 90 cm of dichloromethane, we have ~ 125 mg of 5- ~ min ~ hydrochloride thyl-tetrazole, 141 mg hydrate 1-hydroxybenzotriazole, 380 mq of 1- (3-dimethylamino-) hydrochloride propyl) -3-ethylcarbodiimide and 0.48 cm of triethy1 ~ in ~. The solution is stirred for 24 hours at 20C then the reaction mixture is washed 5 times with 100 cm of distilled water. The organic phase is then dried over magnesium sulfate and evaporated to dryness under pressure reduced sion (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (600 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-15 0.045 mm) eluted first with 2 liters of a ~ nge of cycloh ~ Y ~ ne and ethyl acetate (30-70 by volume), then with 2 liters of one mixture of methanol and ethyl acetate (30-70 by volume); the product-containing fractions are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue is taken up with 10 cm of ethyl ether, filtered, washed twice with 5 cm of ethyl ether and dried under reduced pressure (13.5 Pa) at 20C. 290 mg of 5- {N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) - ~ n- are thus obtained.

WO 94/26725 ~ 7 ~ 3 PCT ~ Rg4 / 00533 28-oyl) -8-aminooctanoyl] -Am; n ~ m ~ thyl} -tetrazole in the form of a hlAnch ~ powder (Rf = 0.26; thin layer chromatography of silica; eluent: chloroform-methanol-A ~ m ~ n-Aque at 20% (12-3-0.5 in volumes)).

A solution of 1.07 g of 5- {N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] - ~ minomethyl} -tetrazole obtained as described below-above, 5.7 cm of 5N sodium hydroxide, 18.4 cm of tetrahydrofuran and 36.9 cm3 of methanol is stirred for 20 hours at a temperature in the region of 20C. The mixture is cooled to 5C, then acidified with chlorhy-drique 5N, and diluted with 100 cm of distilled water. After 1 hour under stirring at 5C, the solid obtained is separated by filtration, washed 5 times with 25 cm of distilled water and dried under reduced pressure (15.5 Pa) at a temperature in the region of 20C. 880 mg is thus obtained of 5- {N '- [N- (3 ~ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -amino-methyl} -tetrazole, in the form of a white solid melting towards N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoic acid can be prepared as follows:

After heating at reflux for 3 hours, a mixture of 330 mg of 8-aminooctanoic acid and 410 mg of chlorotrimethylsilane in 50 cm of dichloromethane, the solution is cooled to around 20C and add 1 g of 3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride (prepared at from 3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid) then 0.81 cm3 of triethylamine. Stirring is continued for 15 hours at a time temperature close to 20C and the solvent is evaporated to dryness under pressure reduced sion (2.7 kPa) at a temperature close to 35C. The residue is chromatographed on an eluted silica column (0.02-0.045 mm) with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate (60-40 in vo-lumes). The fractions containing the product are collected ~ hl ~ and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 35C. 1.1 g of N- (3 ~ -acetoxylup-) acid are thus obtained.
20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoic in the form of a meringue hlAnche (Rf - 0.4; thin layer silica chromatography;
eluent: cyclohexane, ethyl acetate (60-40 by volume)).

O 94/26725 ~ 1 S 2 ~ ~ 3 PCT ~ R94 / 00 ~ 33 5- ~ min ~ m ~ thyl-tetrazole hydrochloride can be prepared according to the method described in the ~ m ~ n ~ of patent DE 3,626,130.
F ~ mnle 2 To a solution of 640 mg of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) acid -8-aminooctanoic in 50 cm of chloroform, 134 mg of 5-amino-1H-tetrazole, 168 mg of 1-hydroxybenzotriazole hydrate, 50 cm3 of dimethylformamide, 692 mg of 1- (3-dimethyl-) hydrochloride laminopropyl) -3-ethylcarbodiimide, and 0.70 cm of triethylamine as solution in 5 cm of chloroform. The solution is stirred for 2 10 days at 20C then the reaction mixture is washed 3 times with 50 cm3 1N hydrochloric acid, then 5 times with 100 cm of distilled water.
The organic phase is dried over magnesium sulfate and evaporated dry under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (730 mg) is chromatographed on a column 15 of silica (0.02-0.045 mm) eluted with 800 cm of ethyl acetate then with 800 cm of a mixture of dichloromethane and methanol (95-5 in volumes). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue is taken up in 15 cm of isopropyl ether, filtered, 20 dried under reduced pressure (13.5 Pa) at 20C. 265 mg are thus obtained of 5- {N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -amino} -tetrazole in the form of a beige powder (Rf 0.40; chromatography phie on a thin layer of silica; eluent: chloroform-methanol-ammo-niac at 20% (12-3-0.5 by volume)).

25 260 mg solution of 5- {N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -amino} -tetrazole, 0.92 cm3 of hydroxide 1N thium, 2.5 cm3 of tetrahydrofuran and 5 cm of methanol is stirred 20 hours at a temperature close to 20C. The mixture is acidified with lN hydrochloric acid, and diluted with 80 cm of distilled water lée. The mixture is then extracted with 100 cm of ethyl acetate then 2 times with 25 cm of ethyl acetate. The organic phases are combined, washed 4 times with 40 cm of distilled water, dried on magnesium sulfate and evaporated ~ dry under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 45C. The residue obtained 35 (170 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 ~ 27 ~ 3 16 0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and A -ni ~ only at 20% t12-3-0.5 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) to a temperature close to 40C. The residue is taken up by 5 cm isopropyl ether, filter, wash 2 times with 1 cm of oxide of isopropyl and dries under reduced pressure (15.5 Pa) at 20C. We thus obtains 80 mg of 5- {N '- [N- (3 ~ -hydroxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -amino} -tetrazole, as a white solid melting around 165-170C.

~ mnle 3 Has a solutlon of 100 mg of N- (3 ~, 30-diacetoxylup-20 (29) -en-28- acid) oyl) -8-aminooctanoic in 50 cm of dichloromethane, we add 22 mg of hydrochloride of 5- ~ min ~ thyl-tetrazole, 25 mg of hydrate of 1-hydroxybenzotriazole, 70 mg of 1- (3-dimethylamino-) hydrochloride propyl) -3-ethylcarbodiimide and 0.09 cm of triethylamine. The solution is stirred for 24 hours at 20C then the reaction mixture is washed successively 3 times with 50 cm of distilled water, 2 times with 25 cm of 1N hydrochloric acid, then 3 times with 50 cm of water distilled. The organic phase is then dried over sulphate of magnesium and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (110 mg) is chromato-written on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a metal lange of chloroform, methanol and Ammnni ~ that at 20% (12-3-0.5 in vo-lumes). The fractions containing the product are combined and concentrated trees under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. This gives 65 mg of 5- {N '- [N- (3 ~, 30-diacetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -Amin ~ thyl} -tetrazole in the form a white meringue (Rf = 0.40; thin layer chromatography silica; eluent: chloroform-methanol- ~; ~ only 20% (12-3-0.5 in volumes)).

A 160 mg solution of 5- {N '- [N- (3 ~, 30-diacetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl ~ - ~ min ~ m ~ thyl} -tetrazole, 1.3 cm 5N sodium hydroxide, 6 cm of tetrahydrofuran and 3 cm of methanol is stirred for 20 hours at a temperature close to 20C. The mixture is cooled to 5C, then acidifies with 5N hydrochloric acid, and diluted with 30 cm3 of water ~ 0 94/2672 ~ 21 6 2 7 0 3 PCT ~ R94 / 00533 distilled After 1 hour with stirring at 5C, 150 cm are added distilled water and the mixture is extracted 5 times with 50 cm of a mixture mixture of dichloromethane and methanol (9-1 by volume ~. The phases organics are combined, dried over maqnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C The residue obtained (140 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045mm) eluted with a ~ el ~ nqe of chloro-form, methanol and ~ m ~ Q ~ i ~ only 20% (12-3-0.5 by volume). The frac-tions containing the product are combined and concentrated under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue is taken up in 2 cm of acetonitrile, filtered and dried under pressure pick (15.5 Pa) at 20C. 48 mg of 5- {N '- [N- (3 ~, 30-di-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -aminomethyl} -tetrazole, in the form of a white solid melting around 145-150C

15 The N- (3 ~, 30-diacetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoic acid is synthesized by analogy with N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28- acid oyl) -8-aminooctanoic from 3 ~, 30-diacetoxylup- chloride 20 (29) -en-28-oyl and methyl 8-aminooctanoate (R = 95%; Rf =
0.34; thin layer chromatography on silica; eluent: cyclo-hexane-ethyl acetate (50-50 by volume)).

The chloride of 3 ~, 30-diacetoxylup-20 (29) -èn-28-oyle is prepared from as follows:

To a solution of 560 mg of acid 3 ~, 30-diacetoxylup-20 (29) -èn-28-oic in 25 cm of dichloromethane, 0.22 cm of chloride is added of oxalyl. After 15 hours of stirring at a temperature close to 20C, the solvent is evaporated under reduced pressure (22 kPa) and at a temperature close to 40C We obtain 600 mg of a meringue hlAn ~ he which is used without further purification.

Acid 3 ~, 30-diacetoxylup-20 (29) -èn-28-oïque is obtained from ma-Next 30:

A suspension of 1.8 g of 3 ~ -acetoxy-30-bromolup-20 (29) -èn-28- acid oic and 800 mg of silver acetate in 50 cm of toluene is agitated 48 hours at a temperature close to 20C then filtered. The solution obtained is then concentrated to dryness under reduced pressure (2 kPa).
--WO 94l26725 PCT ~ R94 / 00 ~ 33 ~
~ 2 ~ ~ 3 to 18 The residue is dissolved in 50 cm3 of ethyl acetate. The organic phase is decanted and washed with a total of 60 cm of water distilled, dried over anhydrous magnesium sulfate, then concentrated reduced pressure (2.7 kPa) at an Vosine temperature of 40C. The white solid obtained (1.7 g) is chromatographed on a co-lonne 1.7 cm in diameter and containing 35 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cycloh ~ n ~ and ethyl acetate 80-20 ten volumes), with fractions of 15 cm. The 4 first fractions obtained are ~ l imin ~, the next 10 are concentrated to dryness under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature close to 40C. 1.1 g of 3 ~, 30-diacetoxylup- acid are thus obtained.
20 (29) -èn-28-oique in the form of a white meringue sufficient ~ Amment - pure for subsequent transformations.

3 ~ -acetoxy-30-bromolup-20 (29) -en-28-oic acid is obtained from as follows:

A solution of 2.5 g of 3 ~ -acetoxy-lup-20 (29) -en-28-oic acid and 2.41 g of tetrabutyl tribromide ~ mm ~ nium in 50 cm3 of chloroform is stirred for 5 days at a temperature in the region of 25C. The mixture re-active is washed successively twice with 25 cm of distilled water, 2 times with 25 cm of a 0.1N sodium thiosulfate solution and with 2 times 25 cm of distilled water then dried over magnesium sulfate anhydrous. The organic phase is concentrated to dryness under pressure reduced (2.7 kPa) and at a temperature close to 40C. We get a yellow pasty solid (4 g) which is chromatographed on a column of 3.2 cm in diameter containing 100 g of silica (0.02-0.045 mm) and eluted with a mixture of cyclol- ~ x ~ n ~ and ethyl acetate 85-15 (in volumes) by collecting 20 cm fractions. The first 5 fractions obtained are ~ l; mi n ~, the next 10 are evaporated under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature close to 40C. We thus obtains 2.7 g of 3 ~ -acetoxy-30-bromolup-20 (29) - ~ n-28-oic acid in the form of a white solid melting at a temperature close to l 90C

3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid can be prepared according to BRUCXNER, KOVACS and KOCZKA, J. Chem. Soc., 948 (1948).

_ ~ YO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 `~ 2 ~ 6 ~ 0 ~
, 9 ~ m ~ the 4 To a solution of 400 mg of N- [3 ~ -acetoxylup-30- (2'-aCetoxy-thylthio) -20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoique, 90 mg hydrochloride of 5-aminomethyltetrazole, 100 mg of 1-hydroxybenzotria- hydrate zole, 250 mg of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethyl- hydrochloride carbodiimide in 100 cm of dichloromethane, is added in approximately 10 minutes, 0.32 cm of triethylamine. The solution is stirred for 15 hours at a temperature close to 20C, plus 50 cm distilled water then acidified to a pH close to 1 per 15 cm of a so-aqueous hydrochloric acid N. The organic phase is decanted tée, the aqueous phase is extracted with 3 times 50 cm of dichlorom ~ -thane. The combined organic phases are then dried on sul-magnesium fate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (400 mg) is 15 chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of dichloromethane and methanol (90-10 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under pressure reduced sion (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We obtain thus 300 mg of 5- {N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-30- (2'-acetoxyethylthio) -20 20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl] aminomethyl} -tetrazole under the form of a white meringue (Rf = 0.40; layer chromatography thin silica; eluent: chloroform-methanol- ~ mmoniAque at 20%
(12-3-0.5 by volume)).

A 300 mg solution of 5- {N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-30- (2'-acetoxy-25 thylthio) -20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl] aminomethyl} -tetrazole, 2.2 cm of sodium hydroxide, 10 cm of t ~ trahydrofuran and 20 cm of methanol is stirred for 48 hours at a temperature in the region of 20C. The 1 year is acidified to pH 1 by addition of 4 cm of an aqueous solution of 4N hydrochloric acid then diluted with 70 cm of distilled water.
After 2 hours with stirring at a temperature close to 20C, the solid is filtered and washed 5 times with 10 cm of distilled water. The O-the solution is dissolved in 20 cm of ethanol. The solution is filtered and the - filtrate is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (300 mg) is chromatographed on 35 silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of chloro roform, methanol and ~ mmQni ~ only 20% (24-6-1 by volume). The frac-WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 ~
~ 6 ~ 7 ~ 20 the product containing product are combined and concentrated under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The solid obtained (150 mg) is treated with 5 cm of isopropyl ether, the solid is filtered, washed twice with 1 cm of isopropyl ether and then dried over potassium hydroxide. 100 mg of 5- {N '- [N- (3 ~ -hydroxylup-30- (2'-hydroxyethylthio) -20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminoocta-noyl] -A ~ tnom ~ thyl} -tetrazole in the form of a melting white solid around 140C.

N- [3 ~ -acetoxylup-30- (2'-acetoxyethylthio) -20 (29) -èn-28-oyl] acid -8-aminooctanoic can be obtained in the following way:

To a solution of 500 mg of N- [3 ~ -acetoxylup-30- (2'-hydroxy-thylthio) -20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoic acid and 600 mg of acetate sodium in 35 cm of acetic anhydride is brought to a temperature close to reflux for about 3 hours. The reaction mixture is cooled to 20C then concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) to a temperature close to 40C. The residue is treated with a mixture of 15 cm of pyridine and 15 cm of water and stirred for 12 hours at a temperature close to 20C. The reaction mixture is concentrated to dry under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 50C. The residue is treated with 50 cm of distilled water and 10 cm of a aqueous solution of hydrochloric acid, e N. The organic phase is decanted, the aqueous phase is extracted with 3 times 40 cm3 of dichloromethane. The combined organic phases are washed 3 times with 20 cm of distilled water, dried over magnesium sulfate and then evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature sine of 40C. The residue obtained (500 mg) is recrystallized from 5 cm3 an ethanol-water mixture (75-25 by volume). The solid obtained is filtered, then washed twice with 1 cm of an ethanol-water mixture (75-25 volumes) and dried under reduced pressure (13.5 Pa) on pentoxide phosphorus 400 mg of N- [3 ~ -acetoxylup-30- (2'-acetoxyethylthio) -20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoic in the form a white meringue (Rf = 0.25; chromato ~ raffia on a thin layer silica; eluent: chloroform-methanol-Amm ~ n; ~ only 20% (24-6-1 in volumes)).

~ O 94/26725 ~ ~ ~ 2 7 ~ 3 PCT ~ Rg4 / 00533 N- [3 ~ -acetoxylup-30- (2'-hydroxyethylthio) -20 ~ 29) -èn-28-oyl acid - -8-aminooctanoic can be obtained in the following way:

To a solution of 1.3 q of N- [3 ~ -acetoxylup-30-bromo-20 (29) -en- acid 28-oyl ~ -8-aminooctanoic in 10 cm of ethanol, a solution is added.
tion of 0.60 q of sodium 2-hydroxyethanethiolate in 35 cm3 ethanol. The reaction mixture is allowed to stir for 48 hours at a temperature close to 20C. We add drop by drop in 10 minutes approximately, 5 cm of an aqueous solution of hydrochloric acid N then diluted with 350 cm of water. The reaction mixture is extracted 3 times with 50 cm of dichloromethane. The combined organic phases are washed 3 times with 30 cm of distilled water and then dried over sulfate of maqnesium and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a vol temperature 40C The oil obtained (1.1 q) is chromatoqra-phied on a silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of dichloromethane and methanol (98-2 by volume). Fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. This gives 500 mg N- [3 ~ -acetoxylup-30- (2'-hydroxyethylthio) -20 (29) -èn-28-oyl] acid -8-aminooctanoic in the form of a white meringue (Rf 0.40;
thin layer chromatography on silica; eluent: chloroform-m ~ thanol-ammonia 20% (12-3-0.5 by volume) ~.

N- [3 ~ -acetoxylup-30-bromo-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoic acid can be obtained as follows:

To a mixture of 640 mg of N- [3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8- acid aminooctanoic and 30 cm of carbon tetrachloride, add in 350 mg N-bromosuccinimide only once. The suspension is agitated 12 hours at a temperature close to 20C. The solid is filtered, washed with 3 x 10 cm carbon tetrachloride. The filtrate is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 30 40C. 800 mg of N- [3 ~ -acetoxylup-30-bromo-20 (29) -en- acid are obtained.
28-oyl] -8-aminooctanoic in the form of a meringue hl ~ n ~ he (Rf -0.25; thin layer chromatography on silica; eluent: chlo-roform-methanol-ammonia at 20 ~ (24-6-1 by volume)).

N- [3 ~ -acetoxylup-30-bromo-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoic acid is prepared as described in Example 1.

WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 Sodium hydroxyethanethiolate is prepared by the action of ethyl-sodium late on 2-hydroxyethanthiol in solution in ethanol.

3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride is prepared according to J.
PROVITA and A. VYSTRCIL, Collect. Czech. Chem. Common. 41, 1200 (1976).

~ mn on 5 To a solution of 1.9 g of N - [[3 ~ -acetoxylup-20 (29) -an-28-oyl] acid -8-aminooctanoic in 55 cm of dichloromethane, 2.2 cm3 are added thionyl chloride. The solution is stirred for 24 hours a 20C then the reaction mixture is concentrated to dryness under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature close to 35C. The residue obtained is dissolved in 25 cm of dichloromethane and the solution is again evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature erasure close to 35C. The solid obtained (1.97 g) and 485 mg of 5- (4-aminophenyltetrazole) are dissolved in 60 cm of dichlorome-thane and 1.41 cm of triethylamine are added dropwise. The solution obtained is stirred for 24 hours at a temperature close to 20C. The solution obtained is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 35C. To the solid obtained is added 50 cm of dichloromethane and 25 cm of an acid solution hydrochloric N The organic phase is decanted, washed twice with 10 cm of a hydrochloric acid solution N then 2 times with 10 cm distilled water The organic phase is dried over sodium sulfate then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) to a temperature close to 35C. 2.0 g of a solid are thus obtained, which is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted, with a mixture of methanol and ethyl acetate (10-90 by volume), the product-containing fractions are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The 30 residue (280 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and Ammon; Aque (24-6-1 by volume), the fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 35C. 310 mg of 5- ~ 4- {N- [N'-35 (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -amino} -phenyl] -té-~ 0 94/26725 21 ~ 2 7 ~ 3 PCT ~ R94 / 00533 trazole in the form of a white powder (Rf 0.32; chromatography phie on a thin layer of silica; eluent: chloroform-methanol-am-moniac ~ 20 ~ (24-6-1 by volume)).

A solution of 0.31 q of 5- [4- {N- [N '(3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminoctyll-amino} -phenyl] -tetrazole, 1 cm 4N sodium hydroxide, 3 cm3 of tetrahydrofuran and 1.5 cm of methanol is stirred for 26 hours at temperature close to 20C. The mixture is evaporated under pressure reduced (2.7 kPa) to a temperature close to 35C, then diluted with cm of distilled and acidified water with 1.2 cm of a solution 4N hydrochloric acid. After 1 hour of stirring, at a temperature ture close to 20C, the solid is separated by filtration, washed 6 times with 5 cm of distilled water and dried under reduced pressure (15.5 Pa) at a temperature close to 30C. 250 mg are thus obtained of 5- [4- {N- [N '- (3 ~ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -amino} -phenyl] -tetrazole, as a white, melting solid around 200C.

5- (4-aminophenyl) tetrazole can be prepared according to JM McMANUS
and R. HERBST, J Org. Clem, 24, 1044 (1959).

Ex ~ mole 6 To a solution of 1.9 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8- acid aminooctanoic in 55 cm of dichloromethane, 2.2 cm 3 of thionyl chloride. The solution is stirred for 24 hours at 20C
then the reaction mixture is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 35C. The residue obtained is put dissolved in 25 cm of dichloromethane and the solution is new dry concentrate under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature erasure close to 35C. The solid obtained (1.97 g) and 485 mg of 5- (3-aminophenyltetrazole) are dissolved in 60 cm of dichlorome-thane and 1.41 cm of triethylamine are added dropwise. The solution obtained is stirred for 24 hours at a temperature close to 20C. The solution obtained is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 35C. To the solid obtained is added 50 cm of dichloromethane and 25 cm of an acid solution hydrochloric N. The organic phase is decanted, washed twice with 10 cm of a hydrochloric acid solution N then 2 times with 10 cm WO 94/26725 ~ PCT ~ R94 / 00533 ~
7 ~ ~ 24 distilled water. The organic phase is dried over sodium sulfate then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) ~ one temperature close to 35C. 2.2 g of a solid are thus obtained, which is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted, with a mixture of chloroform, methanol and ammonia (24-6-1 in volumes), the fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a similar temperature 35C. 840 mg of a solid are thus obtained, which is again chromatographed on an eluted silica column (0.02-0.045 mm), first with ethyl acetate then with a mixture of chloroform, methanol and Ammoni ~ that (24-6-1 by volume), the product-containing fractions are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 35C. We thus obtains 390 mg of 5- [3- {N- [N '- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -amino} -phenyl] -tetrazole in the form of a powder white (Rf = 0.36; thin layer chromatography on silica;
eluent: chloroform-methanol-A ~; aque to 20 ~ (24-6-1 by volume)).

A solution of 380 mg of 5- [3- {N- [N '- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctalloyll-amino} -phenyl] -tetrazole, 1.2 cm 4N sodium hydroxide,

4 cm de tétrahydrofurane et 2 cm de méthanol est agitée 22 heures à
une température voislne de 20C. Le mélange est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35C, puis dilué avec 25 cm d'eau distillée et acidifié avec 1,4 cm d'une solution d'acide chlorhydrique 4N. Après 1 heure d'agitation, à une tempéra-ture voisine de 20C, le solide est séparé par filtration, lavé 6 fois avec 5 cm d'eau distillée et séché sous pression réduite (15,5 Pa) à une température voisine de 30C. On obtient ainsi 270 mg de 5-[3-{N-[N'-(3~-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-amino}-phényl]-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 170C.

Le 5-(3-aminophényle)tétrazole peut être préparé d'après J.M. McMANUS
et R. HERBST, J. Org. Chem., 24, 1044 (1959).

~n le 7 670 mg de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-11-aminonn~c~n~nitrile et 1 g d'a~oture de tributylétain sont mis en solution dans 5 cm3 de ~ 0 94/2672~ 2 1~ 2~ o~ PCT~R94/00533 1~2-diméthoxyéthane~ Le mélange est chauffé au reflux pendant 48 heures. On rajoute 0,5 g d'azoture de tributylétain et le mélange est à nouveau chauffé au reflux pendant 48 heures. Le mélanqe réac-tionnel est dilué par 50 cm d'eau distillée puis extrait avec 100 cm d'acétate d'éthyle. La phase organique est ensuite lavée avec 75 cm d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium et évapo-rée à sec sous pression réduite ~2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu ~2,2 g~ est chromatographié sur une colonne de silice ~0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, mé-thanol et ammoniaque à 20 % ~12-3-0,5 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression ré-duite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 700 mg de 5-~N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-10-aminodécyl]-té-trazole sous la forme d'une meringue blanche (Rf - 0,32 ; chromato-graphie sur couche mirlce de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-Amm~niAque à 20 % (12-3-0,5 en volumes)).

Une solution de 290 mg de 5-[N-(3~-acétoxylup-20~29)-èn-28-oyl)-10-aminodécyl]-tétrazole, 0,82 cm de soude 5N, 3 cm de tétrahydrofu-rane et 6 cm3 de méthanol est agitée 20 heures à une température voi-sine de 20C. Le mélange est acidifié avec de l'acide chlorhydrique5N, et dilué avec 40 cm d'eau distillée. Le 51 An~e est extrait par 50 cm , puis 2 fois 25 cm , d'acétate d'~thyle. Les phases organiques sont rassemblées, lavées par 100 cm d'eau distillée, séchées sur du sulfate de magnésium et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (280 mg) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et A --lAqUe à 20 % (12-3-0,5 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à
une température voisine de 40C. Le résidu est repris par 30 cm3 d'oxyde d'isopropyle, filtré, lavé avec 10 cm d'oxyde d'isopropyle et séché sous pression réduite (15,5 Pa) à 20C. On obtient ainsi 185 mg ,de 5-[N-(3~-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-10-aminodécyl]-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 200C.

L'azoture de tributylétain peut être préparé d'après H.R. KRICHELDORF
et E. LEPPERT, Synthesis, 329 (1976).

WO 94/2672
4 cm of tetrahydrofuran and 2 cm of methanol is stirred for 22 hours at a temperature close to 20C. The mixture is evaporated under pressure reduced (2.7 kPa) to a temperature close to 35C, then diluted with 25 cm of distilled and acidified water with 1.4 cm of a solution 4N hydrochloric acid. After 1 hour of stirring, at a temperature ture close to 20C, the solid is separated by filtration, washed 6 times with 5 cm of distilled water and dried under reduced pressure (15.5 Pa) at a temperature close to 30C. 270 mg are thus obtained of 5- [3- {N- [N '- (3 ~ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -amino} -phenyl] -tetrazole, as a white, melting solid around 170C.

5- (3-aminophenyl) tetrazole can be prepared according to JM McMANUS
and R. HERBST, J. Org. Chem., 24, 1044 (1959).

~ n on 7 670 mg N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -11-aminonn ~ c ~ n ~ nitrile and 1 g of tributyltin oture are dissolved in 5 cm3 of ~ 0 94/2672 ~ 2 1 ~ 2 ~ o ~ PCT ~ R94 / 00533 1 ~ 2-dimethoxyethane ~ The mixture is heated at reflux for 48 hours. 0.5 g of tributyltin azide is added and the mixture is again heated at reflux for 48 hours. The reaction melanqe is diluted with 50 cm of distilled water and then extracted with 100 cm of ethyl acetate. The organic phase is then washed with 75 cm of distilled water, dried over magnesium sulfate and evaporated dry under reduced pressure ~ 2.7 kPa) at a similar temperature 40C. The residue obtained ~ 2.2 g ~ is chromatographed on a column silica ~ 0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, thanol and ammonia at 20% ~ 12-3-0.5 by volume). Fractions containing the product are combined and concentrated under pressure pick (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We thus obtain 700 mg of 5- ~ N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -10-aminodecyl] -té-trazole in the form of a white meringue (Rf - 0.32; chromato-written on a thin silica layer; eluent: chloroform-methanol-Amm ~ niAque at 20% (12-3-0.5 by volume)).

A 290 mg solution of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 ~ 29) -èn-28-oyl) -10-aminodecyl] -tetrazole, 0.82 cm 5N sodium hydroxide, 3 cm tetrahydrofu-rane and 6 cm 3 of methanol is stirred for 20 hours at a temperature sine of 20C. The mixture is acidified with 5N hydrochloric acid, and diluted with 40 cm of distilled water. The 51 Year ~ e is extracted by 50 cm, then twice 25 cm, of ethyl acetate. Organic phases are collected, washed with 100 cm of distilled water, dried on magnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (280 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and A --lAqUe at 20% (12-3-0.5 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue is taken up by 30 cm3 of isopropyl ether, filtered, washed with 10 cm of isopropyl ether and dried under reduced pressure (15.5 Pa) at 20C. We thus obtain 185 mg of 5- [N- (3 ~ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -10-aminodécyl] -tetrazole, as a white solid melting around 200C.

Tributyltin azide can be prepared according to HR KRICHELDORF
and E. LEPPERT, Synthesis, 329 (1976).

WO 94/2672

5 ~ PCT/FR94/00533 ~
7 ~ 3 26 Le N-(313--acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-11-amino~ln~l~CcAnF~nitrile peut être obtenu de la façon suivante:
A une solution de 2,5 g de N-(3¦3-acétoxylup-20 (29)-èn-28-oyl)-11-ami-noundécanamide dans 300 cm de tétrahydrofurane sec, on ajoute goutte 5 à goutte 1,92 cm d'anhydride trifluoroacétique. La solution est agi-tée 15 heures à température ambiante puis 1,9 cm supplémentaires d'anhydride trifluoroacétique sont ajoutés et la solution est agitée 48 heures à température ambiante. La solution est neutralisée par addition d'une solution saturée de bicarbonate de sodium puis 10 concentrée sous pression réduite (2,7 kPa). Le résidu est repris par 100 cm d'eau distillée et le mélange est extrait 2 fois avec 150 cm d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, lavées 3 fois avec 100 cm d'eau distillée, séchées sur du sulfate de magné-sium et évaporées A sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une tempé-15 rature voisine de 40C. Le résidu obtenu (2,5 g) est chromatographiésur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec du dichloromé-thane. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 1,6 g de N-(313-acétoxylup-20(29) -en-28-oyl)-11-20 amino--n~lécAn~nitrile sous la forme d'une meringue blAn~ he ~Rf -- 0,6;
chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cycl~h~cAne acétate d'éthyle (60-40 en volumes)) .

Le N-(3~3--acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-11-aminonn~l~c~n~Tnide peut être obtenu de la manière suivante:

25 A une solution de 2,6 g d'acide N-[313-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminonndécAnoïque dans 240 cm de dichlorométhane, on ajoute 3,5 cm d'Amm~njAque à 20 %, 580 mg d'hydrate de 1 -hy-droxybenzotriazole, et 1,45 g de chlorhydrate de 1- (3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide. La solution est agitée pen-30 dant 2 jours à 20C puis la phase organique est décantée, lavée suc-cessivement avec 50 cm d'eau distillée, 3 fois 25 cm d'acide chlor-hydrique lN, 2 fois 40 cm d'eau distillée, puis séchée sur du sul-fate de magnésium, filtrée et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 2,7 g 35 de N-(3~3-acétoxylup-20 (29)-èn-28-oyl)-11-aminol~nll~cAnA~;de sous la ~o 94/26725 ~ 3 PCT~R94/00533 forme d'une meringue couleur crème (Rf ! 0,15 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohPxAne-acétate d'éthyle (30-70 en volumes)).

L'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-11-aminonn~écAnoïque est synthétisé par analogie avec l'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque a partir de chlorure de 3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle et de 11-aminoundécanoate de méthyle (R = 38 % ; Rf 0,57 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichlorométhane-méthanol (90-10 en volumes)).

~m~le 8 1 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanenitrile et 1,6 g d'azoture de tributylétain sont mis en solution dans 25 cm de 1,2-diméthoxyéthane. Le mélange est chauffé au reflux pendant 24 heures. On ajoute 35 cm de 2-éthoxyéthanol, distille le 1,2-dimé-thoxyéthane et le mélanqe est à nouveau chauffé au reflux pendant48 heures. Le mélange réactionnel est refroidi à température ambiante, versé dans une solution de 100 cm d'acide chlorhydrique lN. Après 15 mlnutes d'agitation, le mélange est extrait avec 3 fois 50 cm d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, lavées avec 7 fois 30 cm d'eau distillée, séchées sur du sulfate de magnésium et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (2,7 g) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et A~oniAque à 20 % (12-3-0,5 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température vo;ci n~
de 40C. Le résidu obtenu est lavé avec 5 fois 75 cm de pentane, filtré, séché sous pression réduite (2,7 kPa) à 40C. On obtient ainsi 920 mg de 5-[N-(3~-acétoxylup-20~29)-èn-28-oyl)-7-~ inoheptyl]
r 30 tétrazole sous la forme d'une poudre blanc crème (Rf = 0,28 chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-ammoniaque à 20 ~ (12-3-0,5 en volumes)).

Une solution de 900 mg de 5-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-Aminoheptyl]-tétrazole, 2,7 cm de soude 5N, 10 cm de tétrahydrofu-35 rane et 20 cm de méthanol est agitée 15 heures a une température W O 94/26725 PCT~R94/00533 2~27~3 voisine de 20C. Le mélange est acidifié avec de l'acide chlorhy-drique 1N, et dilué avec 175 cm d'eau distillée. Le mélange est ex-trait par 3 fois 100 cm d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rAcse~hlées, lavées par 250 cm d'eau distillée, séchées sur du sulfate de magnésium et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu ~865 mg) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et ~ que à 20 % (12-3-0,5 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à
une température voisine de 40C. Le résidu est repris par 10 cm3 d'oxyde d'isopropyle, filtré, lavé avec 6 cm d'oxyde d'isopropyle et - séché sous pression réduite (15,5 Pa) à 20C. La poudre obtenue (510 mg) est à nouveau chromatographiée sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de dichlorométhane et de méthanol (95-5 en volumes) Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu est repris par 5 cm d'oxyde d'isopropyle, filtré, lavé avec 2 cm3 d'oxyde d'isopropyle et séché sous pression réduite 20 (15,5 Pa) à 20C. On obtient ainsi 224 mg de 5-[N-(3~-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-~minoheptyl]-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 150-155C.

Le N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanenitrile peut être obtenu de la facon suivante :

25 A une solution de 2,4 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanamide dans 200 cm de tétrahydrofurane sec, on ajoute goutte à goutte 1,97 cm d'anhydride trifluoroacétique. La solution est agitée 15 heures à température ambiante puis 5,0 cm supplémentaires d'anhydride trifluoroacétique sont ajoutés et la solution est agitée 48 heures à température ambiante. La solution est neutralisée par addition d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, puis diluée par 100 cm d'eau distillée. Le tétrahydrofurane est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à 40C. Le melange est ensuite repris par 200 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est extraite par 50 cm d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, lavées 2 fois avec 100 cm d'eau distillée, séchées sur ~ O 94/2672~ 216 2 7 0 ~ PCT~R94/00533 du sulfate de magnésium, filtrées et évaporées à sec sous pression réduite ~2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 2,2 g de N-(3~-acétoxylup-20t29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanenitrile sous la forme d'une meringue blanc crème (Rf - 0,23 ; chromatoqraphie sur couche mince de silice ; éluant : cycloh~An~-acétate d'éthyle (80-20 en volumes)).

Le N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanamide peut être obtenu de la manière suivante :

A une solution de 2,4 g d'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-10 aminooctanoïque dans 240 cm de dichlorométhane, on ajoute 3,8 cm3 d'Armo~iAque à 20 %, 580 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, et 1,45 g de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodii-mide. La solution est agitée 24 heures à température A~hi~nte puis la phase organique est décantée, lavée avec 5 ~ois 250 cm d'eau distil-lée, séchée sur du sulfate de magnésium, filtrée et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 2,4 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooc-tanamide sous la forme d'une meringue hlAnche (Rf 0,1 ; chromato-graphie sur couche mince de silice ; éluant : cycloh~An~-acétate d'~thyle (50-50 en volumes)).

ExemPle 9 1,3 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-12-aminodo~cAn~nitrile et 1,27 g d'azoture de tributylétain sont mis en solution dans 50 cm de 2-éthoxyéthanol. Le mélange est chauffé au reflux pendant 25 48 heures. Le mélange réactionnel est versé dans 300 cm3 d'eau dis-tillée glacée. Après 5 minutes d'agitation, le r~lAnqe est acidifié
avec une solution d'acide chlorhydrique 2N puis extrait avec 3 fois 80 cm de dichlorométhane. Les phases organiques sont réunies, lavées jusqu'à neutralité par de l'eau distillée, séchées sur du sulfate de magnésium et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (1,4 q) est chromato-graphié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mé-lange de chloroforme, méthanol et A ~ Aque à 20 % (12-3-0,5 en vo-lumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concen-trées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de W O 94/26725 PCT~R94/00533 _ 2 ~ 3 40C. On obtient ainsi 1,2 g de 5-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-11-aminoundécyl]-tétrazole sous la forme d'une meringue blanche (Rf - 0,45 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant :
chloroforme-méthanol-~ ~ni~que a 20 % (12-3-0,5 en volumes)).

5 Une solution de 1,2 q de 5-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-11-aminoundécyl~-tétrazole, 3,3 cm de soude 5N, 12 cm de tétrahydrofu-rane et 24 cm de méthanol est agitée 20 heures à une température voisine de 20C. Le mélange est acidifié avec de l'acide chlorhy-drique 5N, et dilué par 150 cm d'eau distillée. Le mélange est ex-trait par 3 fois 60 cm de dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, lavées jusqu'à neutralité par de l'eau distillée, séchées sur du sulfate de magnésium et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (1,1 g) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de dichlorométhane, méthanol et ~rmoniAque a 20 % (12-3-0,5 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une tempéra-ture voisine de 40C. Le résidu est repris par 15 cm d'éther éthy-lique, filtré, lavé avec 12 cm d'éther éthylique et séché sous pres-20 sion réduite (15,5 Pa) à 20C. On obtient ainsi 340 mg de 5-[N-(3~-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-11-aminoundécyl]-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 200-205C.

Le N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-12-aminodo~P~AnPnitrile peut être obtenu de la façon suivante :

25 A une solution de 1,5 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-12-ami-nodod~cAn~mlde dans 150 cm de tétrahydrofurane sec, on a~oute goutte à goutte 1,9 cm d'anhydride trifluoroacétique. La solution est agi-t~e 60 heures à température ambiante, puis diluée par 30 cm3 d'eau distillée. Le tétrahydrofurane est évaporé ~ sec sous pression ré-30 duite (2,7 kPa) à 40C. Le mélange est repris par 100 cm3 d'eau dis-tillée, neutralisé par addition d'une solution saturée de bicarbonate de sodium puis extrait par 3 fois 50 cm3 de dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, lavées par 3 fois 40 cm3 d'eau distillée, séchées sur du sulfate de magnésium et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On O 94/26725 ~ ~ ~ 2 7 ~ 3 PCT~R94/00533 obtient ainsi 1,36 g de N- (3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-12-ami-nodo~5c~ne~itrile sous la forme d'une meringue hl~nche (Rf ~ 0,35 ;
chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cycloh~YAne-acétate d'éthyle (80-20 en volumes)).

Le N-(3~-acétoxylup-2o(29)-èn-28-oyl~-12-aminodo~c~n~mlde peut être obtenu de la façon suivante :

A une solution de 1,5 g d'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-12-aminododécanoïque dans 250 cm de dichlorométhane, on ajoute 2,15 cm3 d'ammoniaque ~ 20 %, 330 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzo-triazole, et 826 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide. La solution est agitée 15 heures à température ambiante puis la phase organique est décantée, lavée suçcessivement avec 5 fois 80 cm d'eau distillée, 3 fois 80 cm d'acide chlorhy-drique lN, 5 fois 80 cm d'eau distillée, puis séchée sur du sulfate 15 de magnésium, filtrée et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 1,5 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-12-aminododécanamide sous la forme d'une meringue couleur crème (Rf = 0,47 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : dichlorométhane-méthanol (90-10 en 20 volumes)) ~'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-12-aminodod~écanoïque est synthétisé par analogie avec l'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque à partir de chlorure de 3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle et de 12-aminododécanoate de méthyle (R = 75 %; Rf =
25 0,45 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichlorométhane-méthanol (90-10 en volumes)).

~X~mDle 1 0 490 mg de N'- [N- (3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-r aminopropanenitrile et 700 mg d'azoture de tributylétain sont mis en 30 solution dans 10 cm de 1,2-diméthoxyéthane. Le mélange est chauffé
- au reflux pendant 6 jours. Le mélange réactionnel est refroidi à tem-pérature ambiante, dilué avec 100 cm de dichlorométhane et acidifié
avec 25 cm d'acide chlorhydrique 2N. Après 5 minutes d'agitation, la phase organique est décantée, lavée par 5 fois 40 cm3 d'eau W O 94/26725 PCT~R94/00533 ~
2~ ~7~3 32 distillée, sechée sur du sulfate de magnésium, filtrée et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu est lavé par 5 fois 10 cm de pentane, chroma-tographié sur une colonne de silice ~0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange d'acétate d'éthyle et de méthanol (80-20 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pres-sion réduite (2,7 kPa) a une température voisine de 40C. On obtient ainsi 435 mg de 5-{N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-en-28-oyl)-8-aminooc-tanoyl]aminoéthyl}-tétrazole sous la forme d'une meringue hlAnrh~, (Rf 0,39 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant :
chloroforme-méthanol-Ammo~i~que à 20 % (12-3-0,5 en volumes)).

Une solution de 600 mg de 5-{N'-~N-(3~-acétoxylup-20(29)-en-28-oyl)-8-aminooctanoyl]aminoéthyl}-tétrazole, 1,6 cm de soude 5N, 10 cm de tétrahydrofurane et 20 cm de méthanol est agitée 15 heures a une température voisine de 20C. Le mélange est acidifié avec de l'acide chlorhydrique lN, et dilué avec 120 cm d'eau distillée. Le mélange est agité 1 heure a 20C, filtré, lavé jusqu'à neutralité par de l'eau distillé, puis par 5 fois 5 cm de pentane, et séché sous pres-sion réduite (15,5 Pa) a 20C La poudre obtenue (553 mg) est chroma-tographiée sur une colonne de silice (0,02-0,045mm) éluée avec un mélange de chloro~orme, méthanol et ammoniaque a 20 ~ (12-3-0,5 en volumes) Les fractions contenant le produit sont réunies et concen-trées sous pression réduite (2,7 kPa) a une température voisine de 40C. Le résidu est repris par 15 cm d'oxyde d'isopropyle, filtré, et séché sous pression réduite (15,5 Pa) à 20C. On obtient ainsi 430 mg de 5-{N'-[N-(3~-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl)-8-aminoocta-noyl]aminoéthyl}-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 155-160C.

Le N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-ami-nopropanenitrile peut être obtenu de la façon suivante :

A une solution de 960 mg de N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aminopropanamide dans 70 cm de tétrahydrofurane sec, on ajoute goutte à goutte 0,94 cm d'anhydride trifluoroacé-tique. La solution est agitée 15 heures à température ambiante, puis le tétrahydrofurane est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à

~ 0 94/2672~ 216 2 7 0 3 PCT~R94/00~33 40C. Le mélange est ensuite repris par 70 cm de dichlorométhane. La phase organique est décantée, lavée par 3 fois 50 cm d'eau distil-lée, séchée sur du sulfate de magnésium et évaporée à sec sous pres-sion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (887 mg) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange d'acétate d'éthyle et de cyclohexane (70-30 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voi-sine de 40C. On obtient ainsi 692 mg de N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino propanenitrile sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,27 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cycloh~x~ne-acétate d'éthyle (30-70 en ~ volumes)).

Le N'-[N-(3~-acétoxylup-20~29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-ami-nopropanamide peut être obtenu de la manière suivante :

A une solution de 967 mg d'acide N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyll-3-aminopropanoïque dans 150 cm de dichloro-méthane, on ajoute 1 cm3 d'~m~oni~que à 20 ~, 208 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, et 521 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide. La solution est agitée 50 heures à température ambiante puis la phase organique est décantée, lavée avec 60 cm d'acide chlorhydrique 1N, 5 fois 50 cm3 d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium, filtrée et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) a une température 25 voisine de 40C. On obtient ainsi 960 mg de N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aminopropanamide sous la forme d'une meringue blanc crème (Rf = 0,68 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-A i~que à 20 %
(12-3-0,5 en volumes)).

30 L'acide N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aminopropanoïque peut être obtenu de la manière suivante :

A une solution anhydre de 2,3 g de iodure de lithium et de 100 cm3 de collidine, on ajoute 1,3 g de N-[(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aminopropionate de méthyle. La solution est chauffée au reflux pendant 3 heures, puis concentrée sous pression réduite W O 94/26725 PCTn~R94/00533 ~

(2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu est repris par 150 cm d'eau distillée et 150 cm d'acétate d'éthyle, puis refroidi à 0C. La phase organique est extraite, lavée par 3 fois 50 cm d'acide chlorhydrique lN, puis par de l'eau distillée jusqu'à neutra-lité, séchée sur du sulfate de magnésium et évaporée à sec sous pres-sion réduite ~2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu est repris par 20 cm d'acétate d'éthyle et le mélange est concentré
sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 1,07 g d'acide N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-en-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aminopropanoïque sous la forme d'une meringue beige (Rf = 0,22 ; chromatographie sur couche mince de silice éluant : chloroforme-méthanol-ammoniaque à 20 ~ (12-3-0,5)).

Le N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino propionate de méthyle peut être préparé de la manière suivante :

A une solution de 2 g d'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque dans 260 cm de dichlorométhane, on ajoute 524 mg de chlorhydrate d'amino-3 propionate de méthyle, 480 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, l,2 g de chlorhydrate de 1-(3-diméthylamino-propyl)-3-éthylcarbodiimide, et 1,1 g de triéthylamine en solution dans 15 cm de dichlorométhane. La solution est agitée 50 heures a température ambiante puis la phase organique est décantée, lavée avec
5 ~ PCT / FR94 / 00533 ~
7 ~ 3 26 N- (313 - acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -11-amino ~ ln ~ l ~ CcAnF ~ nitrile can be obtained as follows:
To a solution of 2.5 g of N- (3¦3-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -11-ami-noundecanamide in 300 cm of dry tetrahydrofuran, drop added 5 to drop 1.92 cm of trifluoroacetic anhydride. The solution is agi-ted 15 hours at room temperature then an additional 1.9 cm of trifluoroacetic anhydride are added and the solution is stirred 48 hours at room temperature. The solution is neutralized by addition of saturated sodium bicarbonate solution then 10 concentrated under reduced pressure (2.7 kPa). The residue is taken up by 100 cm of distilled water and the mixture is extracted twice with 150 cm ethyl acetate. The organic phases are combined, washed 3 times with 100 cm of distilled water, dried over magnesium sulfate sium and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature 15 rature close to 40C. The residue obtained (2.5 g) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with dichlorome-thane. The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We 1.6 g of N- (313-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -11- are thus obtained 20 amino - n ~ lécAn ~ nitrile in the form of a blAn meringue ~ he ~ Rf - 0.6;
thin layer chromatography on silica; eluent: cycl ~ h ~ cAne ethyl acetate (60-40 by volume)).

N- (3 ~ 3 - acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -11-aminonn ~ l ~ c ~ n ~ Tnide can be obtained as follows:

25 To a solution of 2.6 g of N- [313-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] acid -11-aminonndécAnoïque in 240 cm of dichloromethane, we add 3.5 cm of Amm ~ njAque at 20%, 580 mg of hydrate of 1 -hy-droxybenzotriazole, and 1.45 g of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide. The solution is stirred for 30 days 2 days at 20C then the organic phase is decanted, washed successively afterwards with 50 cm of distilled water, 3 times 25 cm of chlorine acid lN water, twice 40 cm of distilled water, then dried over sul-magnesium fate, filtered and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. 2.7 g are thus obtained.
35 of N- (3 ~ 3-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -11-aminol ~ nll ~ cAnA ~; from under ~ o 94/26725 ~ 3 pct ~ R94 / 00533 form of a cream-colored meringue (Rf! 0.15; chromatography on thin layer of silica; eluent: cyclohPxAne-ethyl acetate (30-70 in volumes)).

The N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -11-amino acid ~ ecAnoic acid is synthesized by analogy with N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28- acid oyl) -8-aminooctanoic from 3 ~ -acetoxylup-20 chloride (29) -en-28-oyl and methyl 11-aminoundecanoate (R = 38%; Rf 0.57; thin layer chromatography on silica; eluting dichloromethane-methanol (90-10 by volume)).

~ m ~ the 8 1 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanenitrile and 1.6 g of tributyltin azide are dissolved in 25 cm of 1,2-dimethoxyethane. The mixture is heated at reflux for 24 hours. 35 cm of 2-ethoxyethanol are added, the 1,2-dimethyl is distilled thoxyethane and the mixture is again heated to reflux for 48 hours. The reaction mixture is cooled to temperature room, poured into a 100 cm solution of hydrochloric acid lN. After 15 minutes of stirring, the mixture is extracted with 3 times 50 cm of ethyl acetate. The organic phases are gathered, washed with 7 times 30 cm of distilled water, dried over sulphate magnesium and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (2.7 g) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and A ~ oniAque at 20% (12-3-0.5 in volumes). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature vo; ci n ~
40C. The residue obtained is washed with 5 times 75 cm of pentane, filtered, dried under reduced pressure (2.7 kPa) at 40C. We obtain thus 920 mg of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 ~ 29) -èn-28-oyl) -7- ~ inoheptyl]
r 30 tetrazole in the form of a creamy white powder (Rf = 0.28 thin layer chromatography on silica; eluent: chloroform-methanol-ammonia at 20 ~ (12-3-0.5 by volume)).

A 900 mg solution of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-Aminoheptyl] -tetrazole, 2.7 cm 5N sodium hydroxide, 10 cm tetrahydrofu-35 rane and 20 cm of methanol is stirred for 15 hours at a temperature WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 2 ~ 27 ~ 3 close to 20C. The mixture is acidified with chlorhy-drique 1N, and diluted with 175 cm of distilled water. The mixture is ex-treated with 3 times 100 cm of ethyl acetate. Organic phases are rAcse ~ hlées, washed with 250 cm of distilled water, dried on magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained ~ 865 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and ~ only 20% (12-3-0.5 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue is taken up by 10 cm3 of isopropyl ether, filtered, washed with 6 cm of isopropyl ether and - dried under reduced pressure (15.5 Pa) at 20C. The powder obtained (510 mg) is again chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and methanol (95-5 by volume) The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a similar temperature 40C. The residue is taken up in 5 cm of isopropyl ether, filtered, washed with 2 cm3 of isopropyl ether and dried under reduced pressure 20 (15.5 Pa) at 20C. This gives 224 mg of 5- [N- (3 ~ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7- ~ minoheptyl] -tetrazole, in the form of a solid white melting around 150-155C.

The N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanenitrile can be obtained in the following way:

25 To a solution of 2.4 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanamide in 200 cm of dry tetrahydrofuran, we add drop by drop 1.97 cm of trifluoroacetic anhydride. The solution is stirred for 15 hours at room temperature then 5.0 cm additional trifluoroacetic anhydride are added and the solution is stirred for 48 hours at room temperature. The solution is neutralized by adding a saturated solution of bicarbonate sodium, then diluted with 100 cm of distilled water. Tetrahydrofuran is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at 40C. The mixture is then taken up in 200 cm3 of ethyl acetate. The aqueous phase is extracted with 50 cm of ethyl acetate. The organic phases are combined, washed twice with 100 cm of distilled water, dried over ~ O 94/2672 ~ 216 2 7 0 ~ PCT ~ R94 / 00533 magnesium sulfate, filtered and evaporated to dryness under pressure reduced ~ 2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We thus obtain 2.2 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20t29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanenitrile under the shape of a creamy white meringue (Rf - 0.23; chromatography on thin layer of silica; eluent: cycloh ~ An ~ -ethyl acetate (80-20 in volumes)).

The N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanamide can be obtained as follows:

To a solution of 2.4 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8- acid 10 aminooctanoic acid in 240 cm of dichloromethane, 3.8 cm3 are added of Armo ~ iAque at 20%, 580 mg of 1-hydroxybenzotriazole hydrate, and 1.45 g of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodii- hydrochloride mide. The solution is stirred for 24 hours at temperature A ~ hi ~ nte then the organic phase is decanted, washed with 5 ~ 250 cm distilled water drained, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We 2.4 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooc- are thus obtained tanamide in the form of a hlAnche meringue (Rf 0.1; chromato-written on a thin layer of silica; eluent: cycloh ~ An ~ -acetate of ~ thyle (50-50 by volume)).

1.3 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -12-aminodo ~ cAn ~ nitrile and 1.27 g of tributyltin azide are dissolved in 50 cm of 2-ethoxyethanol. The mixture is heated at reflux for 25 48 hours. The reaction mixture is poured into 300 cm3 of distilled water.
frozen tillée. After 5 minutes of stirring, the r ~ lAnqe is acidified with a 2N hydrochloric acid solution then extracted with 3 times 80 cm of dichloromethane. The organic phases are combined, washed until neutral with distilled water, dried over sulphate magnesium and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (1.4 q) is chromato-graphiated on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a metal lange of chloroform, methanol and A ~ Aque at 20% (12-3-0.5 in vo-lumes). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 _ 2 ~ 3 40C. 1.2 g of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -11-aminoundecyl] -tetrazole in the form of a white meringue (Rf - 0.45; thin layer chromatography on silica; eluent:
chloroform-methanol- ~ ~ ni ~ only 20% (12-3-0.5 by volume)).

5 A solution of 1.2 q of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -11-aminoundecyl ~ -tetrazole, 3.3 cm 5N sodium hydroxide, 12 cm tetrahydrofu-rane and 24 cm of methanol is stirred for 20 hours at a temperature close to 20C. The mixture is acidified with chlorhy-drique 5N, and diluted with 150 cm of distilled water. The mixture is ex-milked with 3 times 60 cm of dichloromethane. Organic phases are collected, washed until neutral with distilled water, dried over magnesium sulfate and evaporated to dryness under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (1.1 g) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane, methanol and ~ rmoniAque a 20% (12-3-0.5 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature ture close to 40C. The residue is taken up in 15 cm of ethyl ether.
lique, filtered, washed with 12 cm of ethyl ether and dried under pressure 20 reduced ion (15.5 Pa) to 20C. 340 mg of 5- [N- (3 ~ -hydroxylup-20 (29) -en-28-oyl) -11-aminoundecyl] -tetrazole, under the form of a white solid melting around 200-205C.

N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -12-aminodo ~ P ~ AnPnitrile can be obtained as follows:

25 To a solution of 1.5 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -12-ami-nodod ~ cAn ~ mlde in 150 cm of dry tetrahydrofuran, we have ~ drop all drop 1.9 cm of trifluoroacetic anhydride. The solution is agi-t ~ e 60 hours at room temperature, then diluted with 30 cm3 of water distilled. The tetrahydrofuran is evaporated ~ dry under pressure re 30 pick (2.7 kPa) at 40C. The mixture is taken up in 100 cm3 of water tilled, neutralized by adding a saturated bicarbonate solution sodium then extracted with 3 times 50 cm3 of dichloromethane. The organic phases are combined, washed with 3 times 40 cm3 of water distilled, dried over magnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We O 94/26725 ~ ~ ~ 2 7 ~ 3 PCT ~ R94 / 00533 thus obtains 1.36 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -12-ami-nodo ~ 5c ~ ne ~ itrile in the form of a meringue hl ~ nche (Rf ~ 0.35;
thin layer chromatography on silica; eluent: cycloh ~ YAne-ethyl acetate (80-20 by volume)).

The N- (3 ~ -acetoxylup-2o (29) -èn-28-oyl ~ -12-aminodo ~ c ~ n ~ mlde can be obtained as follows:

To a solution of 1.5 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) acid -12-aminododecanoic acid in 250 cm of dichloromethane, we add 2.15 cm3 of ammonia ~ 20%, 330 mg of 1-hydroxybenzo hydrate triazole, and 826 mg of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3- hydrochloride ethylcarbodiimide. The solution is stirred for 15 hours at temperature ambient then the organic phase is decanted, washed successively with 5 times 80 cm of distilled water, 3 times 80 cm of chlorhy-drique lN, 5 times 80 cm of distilled water, then dried over sulfate 15 mg of magnesium, filtered and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. 1.5 g are thus obtained.
of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -12-aminododecanamide under the form of a cream-colored meringue (Rf = 0.47; chromatography on thin layer of silica; eluent: dichloromethane-methanol (90-10 in 20 volumes)) ~ N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -12-aminodod ~ ecanoic acid is synthesized by analogy with N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28- acid oyl) -8-aminooctanoic from 3 ~ -acetoxylup-20 chloride (29) -en-28-oyl and methyl 12-aminododecanoate (R = 75%; Rf =
0.45; thin layer chromatography on silica; eluting dichloromethane-methanol (90-10 by volume)).

~ X ~ mDle 1 0 490 mg N'- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-r aminopropanenitrile and 700 mg of tributyltin azide are used 30 solution in 10 cm of 1,2-dimethoxyethane. The mixture is heated - at reflux for 6 days. The reaction mixture is cooled to tem-ambient temperature, diluted with 100 cm of dichloromethane and acidified with 25 cm of 2N hydrochloric acid. After 5 minutes of agitation, the organic phase is decanted, washed with 5 times 40 cm3 of water WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 ~
2 ~ ~ 7 ~ 3 32 distilled, dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated dry under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained is washed with 5 times 10 cm of pentane, chroma-tographed on a silica column ~ 0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of ethyl acetate and methanol (80-20 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced sion (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We obtain thus 435 mg of 5- {N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooc-tanoyl] aminoethyl} -tetrazole in the form of a meringue hlAnrh ~, (Rf 0.39; chromatography on a thin layer of silica; eluent:
chloroform-methanol-Ammo ~ i ~ only 20% (12-3-0.5 by volume)).

A 600 mg solution of 5- {N'- ~ N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl] aminoethyl} -tetrazole, 1.6 cm 5N sodium hydroxide, 10 cm tetrahydrofuran and 20 cm of methanol is stirred for 15 hours at a temperature close to 20C. The mixture is acidified with acid hydrochloric lN, and diluted with 120 cm of distilled water. The mixture is stirred for 1 hour at 20C, filtered, washed until neutral with distilled water, then with 5 times 5 cm of pentane, and dried under pressure reduced sion (15.5 Pa) at 20C The powder obtained (553 mg) is chroma-tographed on a silica column (0.02-0.045mm) eluted with a mixture of chloro ~ elm, methanol and ammonia at 20 ~ (12-3-0.5 in volumes) The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue is taken up in 15 cm of isopropyl ether, filtered, and dried under reduced pressure (15.5 Pa) at 20C. We thus obtain 430 mg of 5- {N '- [N- (3 ~ -hydroxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminoocta-noyl] aminoethyl} -tetrazole, in the form of a melting white solid around 155-160C.

N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-ami-nopropanenitrile can be obtained as follows:

To a solution of 960 mg of N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-aminopropanamide in 70 cm of tetrahydrofuran dry, 0.94 cm of trifluoroacid anhydride is added dropwise tick. The solution is stirred for 15 hours at room temperature, then the tetrahydrofuran is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at ~ 0 94/2672 ~ 216 2 7 0 3 PCT ~ R94 / 00 ~ 33 40C. The mixture is then taken up in 70 cm of dichloromethane. The organic phase is decanted, washed with 3 times 50 cm of distilled water lated, dried over magnesium sulphate and evaporated to dryness under pressure reduced sion (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (887 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of ethyl acetate and cyclohexane (70-30 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature sine of 40C. This gives 692 mg of N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino propanenitrile in the form a white meringue (Rf = 0.27; thin layer chromatography silica; eluent: cycloh ~ x ~ ne-ethyl acetate (30-70 in ~ volumes)).

N '- [N- (3 ~ -acétoxylup-20 ~ 29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-ami-nopropanamide can be obtained as follows:

To a solution of 967 mg of acid N '- [N- (3 ~ -acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyll-3-aminopropanoic acid in 150 cm of dichloro-methane, 1 cm3 of ~ m ~ oni ~ is added to 20 ~, 208 mg of hydrate 1-hydroxybenzotriazole, and 521 mg of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide. The solution is agitated 50 hours at room temperature then the organic phase is decanted, washed with 60 cm of 1N hydrochloric acid, 5 times 50 cm3 distilled water, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature 25 close to 40C. This gives 960 mg of N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-aminopropanamide in the form a creamy white meringue (Rf = 0.68; layer chromatography thin silica; eluent: chloroform-methanol-A i ~ only at 20%
(12-3-0.5 by volume)).

N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3- acid aminopropanoic can be obtained in the following way:

To an anhydrous solution of 2.3 g of lithium iodide and 100 cm3 of collidine, 1.3 g of N - [(3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8- are added methyl aminooctanoyl] -3-aminopropionate. The solution is heated at reflux for 3 hours, then concentrated under reduced pressure WO 94/26725 PCTn ~ R94 / 00533 ~

(2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue is taken up by 150 cm of distilled water and 150 cm of ethyl acetate, then cooled at 0C. The organic phase is extracted, washed with 3 times 50 cm hydrochloric acid 1N, then with distilled water to neutral lity, dried over magnesium sulfate and evaporated to dryness under pressure reduced pressure ~ 2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue is taken up in 20 cm of ethyl acetate and the mixture is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We 1.07 g of N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) - acid is thus obtained 8-aminooctanoyl] -3-aminopropanoic in the form of a meringue beige (Rf = 0.22; thin layer chromatography on silica eluent: chloroform-methanol-ammonia at 20 ~ (12-3-0.5)).

N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino methyl propionate can be prepared as follows:

To a solution of 2 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8- acid aminooctanoic acid in 260 cm of dichloromethane, 524 mg of 3-amino methyl propionate hydrochloride, 480 mg hydrate 1-hydroxybenzotriazole, 1.2 g of 1- (3-dimethylamino-) hydrochloride propyl) -3-ethylcarbodiimide, and 1.1 g of triethylamine in solution in 15 cm of dichloromethane. The solution is stirred for 50 hours a room temperature then the organic phase is decanted, washed with

6 fois 150 cm d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium, filtrée et évaporée a sec sous pression réduite (2,7 kPa) a une tem-pérature voisine de 40C. Le résidu obtenu (2,4 g) est chromatogra-phié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange d'acétate d'éthyle et de cyclohexane (50-50 en volumes). Les frac-tions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) a une température voisine de 40C. On obtient ainsi 2 g de N'-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-en-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino propionate de méthyle sous la forme d'une meringue hlAnche (Rf = 0,62 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : acé-tate d'éthyle) ~ emn l e 11 720 mg de [N-(3~-acétoxylup-20(29)-en-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-amino]-acétonitrile et 1,1 g d'azoture de tributylétain sont mis en 0 94/26725 ~ 1 ~ 2 7 Q 3 PCT~R94/00533 , ,.

solution dans 15 cm de 1,2-diméthoxy~thane. Le mélange est chauffé
au reflux pendant 3 jours. Le mélange réactionnel est dilué avec 40 cm d'eau distillée et 15 cm d'acide chlorhydrique 2N, puis extrait avec 3 fois 80 cm de dichlorométhane. La phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium, filtrée et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) a une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (1,8 g) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et ~oni~que à 20 %
(12-3-0,5 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu est lavé 5 fois avec 20 cm de pentane, puis séché sous pression réduite (15,5 Pa) à 20C. On obtient ainsi 820 mg de 5-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-~etllyl-alnillométhyl]-tétrazole sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,33 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-~m~oni~que à 20 % (12-3-0,5 en volumes)).

A une solution de 800 mg de 5-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-A~inom~thyl]-tétrazole, 2,7 cm de soude 5N, 10 cm3 de tétrahydrofurane et 20 cm de méthanol est agitée 48 heures à
une température voisine de 20c. Le mélange est acidi~ié avec de l'acide chlorhydrique lN, et dilué avec~100 cm d'eau distillée. Le mélange est agité 1 heure à 20C, filtré, lavé jusqu'à neutralité par de l'eau distillé, puis par 5 fois 5 cm de pentane, et s~ché sous pression réduite ( 15,5 Pa) à 20C. Le produit obtenu (740 mg) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un melange de chloroforme, méthanol et ammoniaque à 20% (12-3-0,5 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu est repris par 15 cm d'oxyde d'isopropyle, filtré, et séché sous pression réduite (15,5 Pa) à 20C. On obtient ainsi 360 mg de 5-[N-(3~-hydroxylup-Z0(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-aminométhyl]-tétrazole, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 151C.

Le [N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-amino]-acétonitrile peut etre obtenu de la façon suivante :

W O 94/26725 PCT~R94/00533 ~ 36 A une solution de 1,2 g de [N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-amino~-acétamide dans 70 cm de tétrahydrofurane sec, on ajoute goutte à goutte 1 cm d'anhydride trifluoroacétique.
La solution est agitée 15 heures à température ambiante, puis neutralisée par une solution saturée de bicarbonate de sodium. Le tétrahydrofurane est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à 40C.
Le mélange est ensuite repris par 200 cm d'eau distillée et extrait par 3 fois 80 cm de dichlorométhane. Les phases organiques sont ré-unies, lavées par 3 fois 50 cm d'eau distillée, séchée sur du sul-fate de magnésium et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) àune température voisine de 40C. Le résidu obtenu (1,0 g) est chroma-tographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange d'acétate d'éthyle et de cycloh~x~ne (30-70 en volumes). Les fractions contenant le produit sont reunies et concentrées sous pres-sion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtientainsi 720 mg de [N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-amino]-acétonitrile sous la forme d'une meringue blAn~h~ (Rf -0,32 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant cyclohexane-acétate d'éthyle (50-50 en volumes)).

Le [N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-amino]-acétamide peut être obtenu de la manière suivante :

A une solution de ,00 mg d'acide [N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-métllyl-amino]-acétique dans 100 cm de di-chlorométhane, on ajoute 0,72 cm d'A~oniAque à 20 %, 150 mg d'hy-drate de 1-hydroxybenzotriazole, et 380 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide. La solution est agitée 15 heures à température ambiante puis la phase organique est décantée, lavée avec 30 cm d'acide chlorhydrique 1N puis avec 5 fois 40 cm d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium, filtrée et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (630 mg) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélanqe de di-chlorométhane et de méthanol (97-3 en volumes). Les fractions conte-nant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 500 mg de [N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-amino]-O 94/26725 ~ ~ ~ 2 7 ~ 3 PCT~R94/00533 acétamide sous la forme d'une meringue blanc crème (Rf - 0,32 chromatographie sur couche mince de silice i éluant : dichloromé-thane-méthanol (95-5 en volumes)).

L'acide [N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-- 5 amino]-acétique peut être obtenu de la manière suivante :

Une solution de 167 mg de sarcosine, 406 mg de chlorotriméthylsilane et 75 cm de dichlorométhane est chauffée au reflux pendant 15 heures. Cette solution est ensuite ajoutée à une solution conte-nant 1 g d'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminoocta-10 noïque, 239 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 600 mg de chlor-hydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, et 75 cm3 de dichlorométhane. On ajoute ensuite 1,5 cm de triéthylamine en solution dans 10 cm de dichlorométhane. La solution est agitée 50 heures à température ambiante puis le mélange réactionnel est lavé
15 par 70 cm d'acide chlorhydrique 2N, puis par 3 fois 80 cm d'eau distillée, séché sur du sulfate de magnésium, filtré et concentré à
sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (2,4 q) est chromatographié sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de dichlorométhane, 20 méthanol et ammoniaque à 20 ~ (12-3-0,5 en volumes) Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression ré-duite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 712 mg d'acide [N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl-méthyl-amino]-acétique sous la forme d'une meringue hlAn~he (Rf 0,32 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant chloroforme-méthanol-AmmoniAque à 20 ~ (12-3-0,5 en volumes)).

E8~mnl e 12 A une solution de 1,4 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctylcarbamoylacétonitrile dans 20 cm de dichlorométhane, on 30 ajoute 0,8 cm d'azoture de triméthylsilyle et 270 mg de trichlorure d'aluminum. Le mélange réactionnel est agité pendant 72 heures à 20C
puis versé goutte à goutte en 30 minutes sur 50 cm d'une solution aqueuse à 10 % d'hydrogénocarbonate de sodium. La phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 2 fois 50 cm3 de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont lavées 3 fois -W O 94l26725 PCT~R94/00533 ~
~2~ ~3 38 avec 50 cm d'eau distillée, séchées sur sulfate de magnésium puis évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) a une température voi-sine de 30C. Le résidu obtenu (1,9 g) est chromatographié sur co-lonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chloro-forme, méthanol et ammoniaque à 20 % (24-6-1 en volumes). Les frac-tions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 1 g de 5-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctylcarba-moylméthyl]-tétrazole sous la forme d'une meringue hl~nrh~ (Rf =
0,25 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloro-forme-méthanol-ammoniaque à 20 % (24-6-1 en volumes)).

Une solutlon de 1 g de 5-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-ami-nooctylcarbamoylméthyl~-tétrazole, 5,4 cm de soude N, 20 cm de tétrahydrofurane et 40 cm de méthanol est agitée 72 heures à une température voisine de 20C. Le mélange est versé dans 10 cm d'une solution d'acide chlorhydrique N puis dilué avec 250 cm d'eau dis-tillée. Après 1 heure sous agitation à une température voisine de 20C, le solide est filtré et lavé 4 fois par 10 cm d'eau distillée puis dissout dans 30 cm d'éthanol. La solution est filtrée, le fil-trat est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50C Le résidu obtenu (140 mg) est repris par 15 cm d'oxyde d'isopropyle Le solide obtenu est fitré, lavé par 2 fois 5 cm d'oxyde d'isopropyle puis séché sous vide (13,5 Pa) à une tem-pérature voisine de 40C. On obtient ainsi 700 mg de 5-[N-(3~-hy-25 droxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctylcarbamoylméthyl]-tétrazole sous la forme d'un solide blanc fondant vers 175C

Le N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctylcarbamoylacétoni-trile peut être obtenu de la manière suivante :

A une solution de 3,6 g de N-[3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-1,8-30 ~i~minooctane~ 500 mg d'acide cyanoacétique, 1,06 g d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 2,76 g de chlorhydrate de 1-(3-dimethylamino-propyl)-3-éthylcarbodiimide dans 75 cm de dichlorométhane, est ajouté en environ 10 minutes, 3,6 cm de triéthylamine. La solution est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20C puis le mélange réactionnel est lavé 3 fois avec 40 cm d'eau distillée.

~ O 94/26725 21~62~ ~ ~ PCT~R94/00533 La phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de magnésium et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voi-sine de 40C. Le résidu obtenu (4,8 g) est chromatographié sur co-lonne de silice (0,02-0,045 mm), éluee avec un mélange de dichloromé-thane et de métharlol (99-1 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrés sous pression réduite (2,7 kPa) à
une température voisine de 40C. On obtient ainsi 3,7 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctylcarbamoylacétonitrile sous la forme d'une meringue jaune (Rf = 0,40 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-~mm~niaque à 20 %
(12-3-0,5 en volumes)) Le N-(3~-acéto:~ylup-20(29)-erl-28-oyl)-1,8-diaminooctane peut être obtenu de la ma~ re suivante :

50 cm d'une solution dans le dichlorométhane de chlorure de 3~-acé-15 toxylup-20(29)-èn-28-oyle (préparée à partir de 5 g d'acide 3~-acé-toxylup-20(29)-èn-28-oïque) sont ajoutés goutte à goutte en environ 3 heures à une solution de 8,6 g de 1,8~ ;n~octane dans 20 cm de dichlorométhane. Le mélange réactionnel est agité durant 2 heures à
une température voisine de 20C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu est chromatographié sur colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et A -ni~que à 20 % (24-6-1 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concen-trées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 25 40C. On obtient ainsi 5,9 g de N-[3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-1,8-diaminooctane sous la forme d'une meringue jaune (Rf G 0~ 25 ;
chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-ammonlaque à 20 ~ (24-6-1 en volumes)).
~n le 13 30 A une solution de 2,1 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-ami-noheptycarbamoylacétonitrile dans 25 cm de dichlorométhane, on ajoute 1,07 cm d'azoture de triméthylsilyle et 410 mg de trichlorure d'aluminum. Le mélange réactionnel est agité pendant 72 heures à 20C
puis versé goutte à goutte en 30 minutes sur 50 cm d'une solution aqueuse à 10 % d'hydrogénocarbonate de sodium. La phase organique est W O 94/26725 I PCT~R94/00533 ~
211~2703 40 décantée, la phase aqueuse est extraite par 2 fois 60 cm de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont lavées 3 fois avec 50 cm d'eau distillée, séchées sur sulfate de magnésium pUi5 concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) ~ une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (2,5 g) est chromatographié sur co-lonne de silice ~0,02-0,045 mm), éluée avec un mélanqe de chloro-forme, méthanol et ~nmoni~que à 20 % (24-6-1 en volumes). Les frac-tions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 1,4 g de 5-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-Am1nohPptylcarba-moylméthyl]-tétrazole sous la forme d'une meringue hl~n~h~ (Rf 0,25 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant: chloro-forme-méthanol-ammoniaque à 20 % (24-6-1 en volumes)).

Une solution de l g de 5-rN-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-aminoheptylcarbamoyllnétllyl]-tétrazole, 8 cm de soude N, 25 cm de tétrahydrofurane et 50 cm de méthanol est agitée 48 heures à une température voisine de 20C. Le mélange réactionnel est évaporé par-tiellement sous pression réduite (2,7 kPa) a une température voisine de 40C jusqu'à l'apparition d'un trouble. Le mélange est alors aci-difié a un p~ compris entre 1 et 2 par addition d'une solutionaqueuse d'acide chlorhydrique N. Après 2 heures sous agitation à une température voisine de 20C, le solide est filtré et lavé 5 fois par 5 cm d'eau distillée puis dissout dans 50 cm3 d'éthanol. La solution est filtrée, le filtrat est evaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à
une température voisine de 40C. Le résidu obtenu est repris par 20 cm d'oxyde d'isopropyle. Le solide obtenu est fitré, lavé par 2 fois 5 cm d'oxyde d'isopropyle puis séché sous pression réduite (13,5 Pa) a une température voisine de 40C. Le résidu obtenu est chromatograpllié sur colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chloroforme, métllanol et ~ ni~que à 20 % (24-6-1 en volumes) Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le solide obtenu est mis en solution dans 20 cm3 de chloroforme, la solution est filtrée, le filtrat est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) a une température voisine de 40C. Le résidu obtenu est repris par 20 cm d'oxyde d'isopropyle. Le solide obtenu est fitré, lavé par 2 fois 5 cm d'oxyde d'isopropyle puis O 94/26725 ~ 16 2 ~ ~ 3 PCT~R94/00533 séché sous vide (13,5 Pa) a une température voisine de 40C. On obtient ainsi 900 mg de 5-[N-(3~3-hydroxylup-20(29)-~n-28-oyl)-7-Aminoheptylcarbamoylméthyl]-tétrazole sous la forme d'un solide blanc fondant vers 160C.

5 Le N-(3~3-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-~minohPptylcarbamoyl-acét nitrile peut être obtenu de la manière suivante :

A une solution de 2,45 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-~i~minoh~ptane~ 340 mg d'acide cyanoacétique, 730 g d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 1,9 g de chlorhydrate de 1-(3-diméthylamino-propyl)-3-éthylcarbodiimide dans 120 cm de dichlorométhane, est ajouté en environ 10 minutes, 2,5 cm de triéthylamine. La solution est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20C puis le mélange réactionnel est lavé 3 fois avec 50 cm d'eau distillée.
La phase organlque est ensuite séchée sur du sulfate de magnésium et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voi-sine de 40C. Le résidu obtenu (2, 7 g) est chromatographié sur co-lonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mPlAnge de dichloromé-thane et de méthanol (99-1 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrés sous pression réduite (2,7 kPa) à
20 une température voisine de 40C. On obtient ainsi 3,7 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl) -7-~mi n~hpptylcarbamoylacétonitrile sous la forme d'une meringue blanche (Rf r 0,40 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-~m~on1~que à
20 ~ (12-3-0,5 en volumes)~.

25 Le N-[3~3-acétoxylup-2o(29)-èn-28-oyl]-l~7-~iAminoheptane peut être obtenu de la manière suivante :

1000 cm d'une solution dans le dichlorométhane de chlorure de 3~3-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle ~préparée à partir de 30 g d'acide 3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque) sont ajoutés goutte à goutte, en envi-30 ron 10 heures, à une solution de 46,8 g de 1,7-~i~minohPptane dans 120 cm de dichlorométhane Le mélanqe réactionnel est agité durant 15 heures à une température voisine de 20C puis concentré à sec sous pression réduite (2, 7 kPa) à une température voisine de 40C. Le ré-sidu est repris par 2000 cm d'eau distillée. Le solide est filtré, lavé par 3 fois 200 cm d'eau distillée, puis mis en solution dans W O 94/26725 ~16 % 7 0 3 42 PCT~R94/00533 ~

500 cm d'éthanol. La solution est filtrée, le solide est lavé 2 fois avec 50 cm d'éthanol et les filtrats sont évaporés à sec sous pres-sion réduite (2,7 kPa) a une température voisine de 50C. Le résidu obtenu est chromatographié sur colonne de silice ~0,02-0,045 mm), éluée avec Ull mélange de chloroforme, méthanol et ~m~on;~que à 20 %
(24-6-1 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voi-sine de 40C. On obtient ainsi 28 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-~ in~heptane sous la forme d'une meringue jaune (Rf =
0,25 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloro-forme-méthanol-ammoniaque à 20 ~ (24-6-1 en volumes)).

~em~le 14 A une solutlon de 2,3 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-ami-noheptylcarbamoylpropionitrile dans 25 cm3 de dichlorométhane, on ajoute 1,30 cm d'azoture de triméthylsilyle et 450 mg de trichlorure d'aluminium. Le mélange réactionnel est agité pendant 48 heures à
20C puis 32 heures à une température proche du reflux. On ajoute à
nouveau 1,30 cm d'azoture de triméthylsilyle et 450 mg de trichlo-rure d'aluminium et on chauffe 24 heures à une température voisine du reflux. Le mélange réactionnel est refroidi à 20C puis versé goutte à goutte en 30 mlnutes sur 40 cm d'une solution aqueuse à 10 % d'hy-drogénocarbonate de sodium. La phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 3 fois 50 cm de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont lavées 3 fois avec 50 cm d'eau distillée, séchées sur sulfate de magnésium puis évaporées à sec sous pression réduite ~2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (2,5 g) est traité par 25 cm d'oxyde d'isopropyle, puis lavé 3 fois par 5 cm d'oxyde d'isopropyle. Le solide obtenu (1,8 g) est mis en solution dans 25 cm de dichlorométhane. La solution est filtrée sur celite. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le solide est traité par 20 cm d'oxyde d'isopropyle puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. On obtient ainsi 1,5 g de 5-[N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-A~i noheptylcarbamoylé-thyl]-tétraæole sous la forme d'une meringue hl~n~he (Rf 0,25 ;

WO 94/26725 ~ 1 ~ 2 7 0 3 PCT/FR94/00533 . . .

chromatographie sur couche mince de silice; éluant: chloroforme-méthanol-~ ni~que à 20 % ~24-6-1 en volumes)) .

Une solution de 1 g de 5-[N-(313-acétoxylup-20(29) -èn-28-oyl) -7-aminoheptylcarbamoyléthyl]-tétrazole, 20 cm de soude N, 25 cm de tétrahydrofurane et 50 cm de méthanol est agitée 72 heures à une température voisine de 20C. Le mélange dilué par 250 cm d'eau dis-tillée et acidifié à pl~ l par addition d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique N Après 1 heure sous agitation à une température voi-sine de 20C, le solide est filtré et lavé 5 fois par 10 cm d'eau distillée puis traité par 5 fois 40 cm dlacétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont évaporées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le résidu obtenu (700 mg) est chromatographié sur colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et ~mmor~i aque à 20 %
(24-6-l en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le solide obtenu (600 mg) est traité par 15 cm d'oxyde d'isopropyle, le solide est filtré, lavé 2 fois avec 5 cm d'oxyde d'isopropyle puis séché sur hydroxyde de potassium. On obtient ainsi 140 mg de 5-tN- (313-hydroxylup-20(29) -èn-28-oyl) -7-aminoheptylcarbamoyléthyle]-tétrazole sous la forme d'un solide blanc fondant vers 110C.

Le N-(3f~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-aminoheptylcarbamoylpropio-nitrile peut être obtenu de la manière suivante:

A une solution de 2,45 g de N-(3~3-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane, 400 mg d'acide 2-cyanopropionique, 730 g d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 1,9 g de chlorhydrate de 1-(3-diméthylamino-propyl)-3-éthylcarbodiimide dans 120 cm de dichlorométhane, est ajouté en environ 10 minutes, 2,5 cm de triéthylamine. La solution est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20C. Le mélange réactionnel est lavé 3 fois avec 50 cm d'eau distillée. La phase orqanique est ensuite séchée sur du sulfate de magnésium et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voi-sine de 40C. Le résidu obtenu (3,5 g) est chromatographié sur co-lonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de dichloromé-W O 94/26725 , PCT~R94/00533 ~1 &~7~3 44 thane et de méthanol (99-l en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrés sous pression réduite (2,7 kPa) à
une température voisine de 40C. On obtient ainsi 2,3 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-Aminoheptylcarbamoylpropionitrile sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,40 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-A~niAque à
20 ~ (12-3-0,5 en volumes)).

Le N-(3~-acétoxylup-2o(29)-èn-28-oyl)-1~7-~iAmin~h~ptane peut être obtenu de la manière suivante :

1000 cm3 d'une solution dans le dichlorométhane de chlorure de 3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle (préparée à partir de 30 g d'acide 3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque) sont ajoutés goutte à goutte en envi-ron 10 heures à une solution de 46,8 g de 1,7-~;~minoh~ptane dans 120 cm de dichlorométhane. Le mélange réactionnel est agité durant 15 heures à une température voisine de 20C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40C. Le ré-sidu est repris par 2000 cm3 d'eau distillée. Le solide est filtré, lavé par 3 fois 200 cm d'eau distillée, puis mis en solution dans 500 cm d'éthanol. La solution est filtrée, le solide est lavé 2 fois avec 50 cm3 d'éthanol et les filtrats sont évaporés à sec sous pres-sion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50C. Le résidu obtenu est chromatoqraphié sur colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et ammoniaque à 20 ~
(24-6-1 en volumes) Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) a une température voi-sine de 40C. On obtient ainsi 28 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-~iArinoheptane sous la forme d'une meringue jaune (Rf 2 0,25 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloro-forme-méthanol-~ -niAque à 20 ~ (24-6-1 en volumes)).

Exemele 15 En opérant par analogie avec l'exemple 10, le 5-{N-{[3~-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl}-2-aminopropyl (R,S)} tétrazole a été préparé a partir de l'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl}-2-aminobutanoïque (R,S)}. Le produit se présente sous la forme d'une poudre blanche; pF=130C.

W O 94/26725 2 ~ 6 2 7 o 3 E~r~Rg4/00533 L'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl}-3-aminobutanoïque (R,S)} peut être préparé par analogie avec l'acide [N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-~inooctanoyl}-méthyl-amino~acétique (exemple 11). L'acide N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl}-3-aminobutanoïque (R,S)} se présente sous la forme d'une meringue blanche (Rf=0,44 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : dichloromethane, acétate d'éthyle et méthanol 40-40-20 (en volumes)).
~ pmnle 16 En opérant par analogie avec l'exemple 13, le 5-{N-[3~-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptyl-(N-méthylcarbamoyl)}méthyltétrazole a été préparé à partir de N-méthyl N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-~ inoheptane, pFs183C

Le N-méthyl-N'-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-di~minoheptane peut être obtenu de la manière suivante :

A une solution de 15,2 g d'iodure de N-méthyl 2-méthylthiobenzothia-zolium dans 300 cm3 de dichlorométhane, on ajoute une solution de 28,7 g de N-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-~;~m;noheptane dans 50 cm3 de dichlorométhane puis en approximativement 15 minutes, 6,6 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée à une température voisine de 20C durant 2 heures puis le mélange réactionnel est concentré sous pression atmosphérique à une température voisine de 60C. A l'huile obtenue (35,6 g), on ajoute 150 cm3 d'iodure de méthyle et le mélanqe réactionnel est porté durant 30 heures à une température voisine du reflux. Le mélange réactionnel est concentré
sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50C. Le résidu huileux est repris par 300 cm3 d'oxyde de diéthyle et tritur~.
On obtient ainsi 39,8 g d'un solide orangé qui est mis en solution dans 100 cm3 de dichlorométhane. A la solution obtenue, on ajoute 4,3 cm3 de n-butylamine. Le miélange réactionnel est agité 4 heures à une température voisine de 25C, puis dilué par 300 cm3 de dichlorométhane et lavé par 450 cm3 d'eau distillée. La phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température W O 94/26725 PCT~R94/00533 ~627~3 46 voisine de 40C. Le résidu obtenu est chromatographié sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de dichlorométhane et de méthanol 19-1 (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) ~ une température voisine de 40C. On obtient ainsi 7,1 g (26%) de N-méthyl-N'-(3~-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-~i~minoheptane sous la forme d'une meringue blAnch~, pF~158C.

~m~le 17 En opérant par analogie avec l'exemple 14, on prépare le 5-{3-[N-(3~-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-AminohPptylcarbamoyl]-2,2-diméthylpro-pyl}tétrazole sous forme d'un solide blanc ; pF = 155C.

La présente invention concerne également les compositions pharmaceu-tiques contenant au moins un produit de formule générale (I) éven-tuellement sous forme de sel, ~ l'état pur ou sous forme d'une asso-ciation avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables, ou avec un autre agent destiné au traitement du SIDA, un agent antiviral, immunomndulateur ou antimi-crobien.

La composition selon l'invention est capable de maintenir en vie les cellules infectées par un virus HIV et donc de réduire la progression vers le SIDA ou de diminuer sa gravité chez les sujets déja infectés en réduisant la mortalité des cellules infectées. Les compositions peuvent être utilisées par voie orale, parentérale ou rectale.

Les compositions peuvent être utilisées à titre curatif ou à titre préventif chez des sujets présentant une immunodéficience et/ou in-fectés par un virus HIV. Bien entendu, la constitution de ces compo-sitions sera adaptée au cas particulier du tractus digestif des immu-nodéprimés.

Comme compositions solides pour administration orale peuvent etre utilisés des comprimés, des pilules, des gélules, des poudres ou des granul~s. Dans ces compositions, le produit actif selon l'invention est mélangé à un ou plusieurs diluants ou adjuvants inertes, tels que s~h~Arose, lactose ou amidon.

W O 94/26725 2 ~ ~ 2 7 ~ 3 PCT~R94/00s33 Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium ou un enrobage destiné à une libération contrôlée.

Comme compositlons liquides pour administration orale, on peut utiliser des solutions pharmaceutiquement acceptables, des suspen-sions, des émulsions, des sirops et des élixirs contenant des diluants inertes tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants.

Les compositions pour administration parentérale, peuvent être des solutions stériles ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylèneqlycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive, des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle.

Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, isotonisants, émulsifiants, dispersants et stabilisants.

La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à
l'aide d'un filtre bactériologique, par irradiation ou par chauffage.
Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable.

Les compositions par administration rectale sont les suppositoires ou les capsules rectales, qui contiennent outre le principe actif, des excipients tels que le beurre de cacao, des glycérides semi-synthétiques ou des polyéthylèneglycols.

En thérapeutique humaine, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction d'un traitement préventif ou curatif, en fonction de l'âge, du poids, du degré de l'infection et des autre facteurs propres au sujet à traiter. Généralement, les doses sont comprises entre 10 et 100 mg/kg par voie orale pour un adulte.

W O 94/26725 PCT~R94/00533 La présente invention concerne également les associations constituées d'un ou plusieurs dérivés du lupane de formule générale (I), et/ou le cas échéant leurs sels, et d'un autre principe actif connu pour son activité anti-rétrovirus, éventuellement en présence d'excipients pharmaceutiquement acceptables.

Les agents anti-rétrovirus pouvant être associés sont choisis parmi des agents compatibles et inertes vis-à-vis du dérivé du lupane de formule générale (I). A titre non limitatif ces agents sont choisis parmi des inhibiteurs de la reverse transcriptase [zidovudine (AZT), didanosine (DDI), didéoxycytidine (DDC), TIBO, névirapine, PMEA, D4T, pyridones, ~-APA, HEPT... ], parmi des inhibiteurs de la protéase [comme par exemple le RO 31-8959 ou le A 77003], ou parmi des inhibi-teurs de la protélne tat rcomme par exemple le RO 24-7429].

L'exemple suivant illustre une composition selon l'invention.

Exempl~

On prépare selon la technique habituelle des comprimés de produit actif ayant la composition suivante :

- 5-[N'-[N-[3~-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-Aminom~thyl]-tétrazole , 100 mg - amidon 332 mg - silice 120 mg - stéarate de magnésium 12 mg
6 times 150 cm of distilled water, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a tem-temperature close to 40C. The residue obtained (2.4 g) is chromatographed phied on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture ethyl acetate and cyclohexane (50-50 by volume). The frac-tions containing the product are combined and concentrated under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We thus obtain 2 g of N '- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-methyl amino propionate in the form of a hlAnche meringue (Rf = 0.62; thin layer chromatography on silica; eluent: aces-ethyl tate) ~ emn the 11 720 mg of [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl-methyl-amino] -acetonitrile and 1.1 g of tributyltin azide are 0 94/26725 ~ 1 ~ 2 7 Q 3 PCT ~ R94 / 00533 ,,.

solution in 15 cm of 1,2-dimethoxy ~ thane. The mixture is heated at reflux for 3 days. The reaction mixture is diluted with 40 cm of distilled water and 15 cm of 2N hydrochloric acid, then extracted with 3 times 80 cm of dichloromethane. The organic phase is dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated to dryness under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (1.8 g) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and ~ oni ~ only at 20%
(12-3-0.5 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at one temperature close to 40C. The residue is washed 5 times with 20 cm of pentane, then dried under reduced pressure (15.5 Pa) at 20C. We thus obtains 820 mg of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl- ~ etllyl-alnillomethyl] -tetrazole in the form of a white meringue (Rf = 0.33; thin layer chromatography of silica; eluent: chloroform-methanol- ~ m ~ oni ~ only at 20% (12-3-0.5 in volumes)).

To an 800 mg solution of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl-methyl-A ~ inom ~ thyl] -tetrazole, 2.7 cm 5N sodium hydroxide, 10 cm3 of tetrahydrofuran and 20 cm of methanol is stirred for 48 hours at a temperature close to 20c. The mixture is acidified with lN hydrochloric acid, and diluted with ~ 100 cm of distilled water. The mixture is stirred for 1 hour at 20C, filtered, washed until neutral with distilled water, then with 5 times 5 cm of pentane, and dried under reduced pressure (15.5 Pa) at 20C. The product obtained (740 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and 20% ammonia (12-3-0.5 in volumes). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a similar temperature 40C. The residue is taken up in 15 cm of isopropyl ether, filtered, and dried under reduced pressure (15.5 Pa) at 20C. We obtain thus 360 mg of 5- [N- (3 ~ -hydroxylup-Z0 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl-methyl-aminomethyl] -tetrazole, in the form of a white solid melting around 151C.

[N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl-methyl-amino] -acetonitrile can be obtained as follows:

WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 ~ 36 To a solution of 1.2 g of [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl-methyl-amino ~ -acetamide in 70 cm of tetrahydrofuran dry, 1 cm of trifluoroacetic anhydride is added dropwise.
The solution is stirred for 15 hours at room temperature, then neutralized with a saturated sodium bicarbonate solution. The tetrahydrofuran is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at 40C.
The mixture is then taken up in 200 cm of distilled water and extracted with 3 times 80 cm of dichloromethane. The organic phases are re-united, washed with 3 times 50 cm of distilled water, dried on sul-magnesium fate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40C. The residue obtained (1.0 g) is chroma-tographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of ethyl acetate and cycloh ~ x ~ ne (30-70 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced sion (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. 720 mg of [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl- are thus obtained.
methyl-amino] -acetonitrile in the form of a meringue blAn ~ h ~ (Rf -0.32; thin layer chromatography on silica; eluting cyclohexane-ethyl acetate (50-50 by volume)).

[N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl-methyl-amino] -acetamide can be obtained as follows:

To a solution of .00 mg of acid [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl-metllyl-amino] -acetic in 100 cm di-chloromethane, 0.72 cm of 20% A ~ oniAque, 150 mg of hy-1-hydroxybenzotriazole drate, and 380 mg of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide. The solution is agitated 15 hours at room temperature then the organic phase is decanted, washed with 30 cm of 1N hydrochloric acid and then with 5 times 40 cm of distilled water, dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (630 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloromethane and methanol (97-3 by volume). The fractions the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. This gives 500 mg of [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl-methyl-amino] -O 94/26725 ~ ~ ~ 2 7 ~ 3 PCT ~ R94 / 00533 acetamide in the form of a creamy white meringue (Rf - 0.32 thin layer chromatography of silica i eluent: dichlorome-thane-methanol (95-5 by volume)).

[N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl-methyl- acid - 5 amino] -acetic can be obtained as follows:

A solution of 167 mg of sarcosine, 406 mg of chlorotrimethylsilane and 75 cm of dichloromethane is heated at reflux for 15 hours. This solution is then added to a solution containing 1 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminoocta- acid 10 noic, 239 mg of 1-hydroxybenzotriazole hydrate, 600 mg of chlor-1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrate, and 75 cm3 dichloromethane. 1.5 cm of triethylamine are then added in solution in 10 cm of dichloromethane. The solution is agitated 50 hours at room temperature then the reaction mixture is washed 15 per 70 cm of 2N hydrochloric acid, then 3 times 80 cm of water distilled, dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated to dry under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (2.4 q) is chromatographed on a column of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane, 20 methanol and ammonia at 20 ~ (12-3-0.5 by volume) The fractions containing the product are combined and concentrated under pressure pick (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We thus obtain 712 mg of acid [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl-methyl-amino] -acetic in the form of a meringue hlAn ~ he (Rf 0.32; thin layer chromatography on silica; eluting chloroform-methanol-Ammonia at 20 ~ (12-3-0.5 by volume)).

E8 ~ mnl e 12 To a solution of 1.4 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctylcarbamoylacetonitrile in 20 cm of dichloromethane, we 30 adds 0.8 cm of trimethylsilyl azide and 270 mg of trichloride aluminum. The reaction mixture is stirred for 72 hours at 20C
then poured dropwise over 30 minutes onto 50 cm of a solution aqueous at 10% sodium hydrogencarbonate. The organic phase is decanted, the aqueous phase is extracted with 2 times 50 cm3 of dichloromethane. The combined organic phases are washed 3 times -WO 94l26725 PCT ~ R94 / 00533 ~
~ 2 ~ ~ 3 38 with 50 cm of distilled water, dried over magnesium sulfate and then evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature sine of 30C. The residue obtained (1.9 g) is chromatographed on co-ton of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of chloro-form, methanol and 20% ammonia (24-6-1 by volume). The frac-tions containing the product are combined and concentrated under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We thus obtain 1 g of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctylcarba-moylméthyl] -tétrazole in the form of a meringue hl ~ nrh ~ (Rf =
0.25; thin layer chromatography on silica; eluent: chloro-form-methanol-ammonia at 20% (24-6-1 by volume)).

A 1 g solutlon of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-ami-nooctylcarbamoylmethyl ~ -tetrazole, 5.4 cm of sodium hydroxide N, 20 cm of tetrahydrofuran and 40 cm of methanol is stirred for 72 hours at a temperature close to 20C. The mixture is poured into 10 cm of a hydrochloric acid solution N then diluted with 250 cm of water tilled. After 1 hour with stirring at a temperature close to 20C, the solid is filtered and washed 4 times with 10 cm of distilled water then dissolved in 30 cm of ethanol. The solution is filtered, the wire-trat is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 50C The residue obtained (140 mg) is taken up by 15 cm isopropyl oxide The solid obtained is lumpy, washed twice 5 cm of isopropyl ether then dried under vacuum (13.5 Pa) at a tem-temperature close to 40C. 700 mg of 5- [N- (3 ~ -hy-25 droxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctylcarbamoylmethyl] -tetrazole as a white solid melting around 175C

N- (3 ~ -acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctylcarbamoylacétoni-trile can be obtained as follows:

To a solution of 3.6 g of N- [3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -1,8-30 ~ i ~ minooctane ~ 500 mg of cyanoacetic acid, 1.06 g of hydrate 1-hydroxybenzotriazole, 2.76 g of 1- (3-dimethylamino-) hydrochloride propyl) -3-ethylcarbodiimide in 75 cm of dichloromethane, is added in about 10 minutes, 3.6 cm of triethylamine. The solution is stirred for 15 hours at a temperature close to 20C then the reaction mixture is washed 3 times with 40 cm of distilled water.

~ O 94/26725 21 ~ 62 ~ ~ ~ PCT ~ R94 / 00533 The organic phase is then dried over magnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature sine of 40C. The residue obtained (4.8 g) is chromatographed on co-ton of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of dichlorome-thane and metharlol (99-1 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. This gives 3.7 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctylcarbamoylacetonitrile under the shape of a yellow meringue (Rf = 0.40; layer chromatography thin silica; eluent: chloroform-methanol- ~ mm ~ niac at 20%
(12-3-0.5 by volume)) N- (3 ~ -aceto: ~ ylup-20 (29) -erl-28-oyl) -1,8-diaminooctane can be obtained from the following ma ~ re:

50 cm of a solution in dichloromethane chloride 3 ~ -acaceous-15 toxylup-20 (29) -en-28-oyl (prepared from 5 g of 3 ~ -acid- acid toxylup-20 (29) -en-28-oic) are added dropwise in approximately 3 hours to a solution of 8.6 g of 1.8 ~; n ~ octane in 20 cm of dichloromethane. The reaction mixture is stirred for 2 hours at a temperature close to 20C then concentrated to dryness under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of chloroform, methanol and A -ni ~ only 20% (24-6-1 in volumes). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 25 40C. 5.9 g of N- [3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] are thus obtained -1,8-diaminooctane in the form of a yellow meringue (Rf G 0 ~ 25;
thin layer chromatography on silica; eluent: chloroform-methanol-ammonia at 20 ~ (24-6-1 by volume)).
~ n the 13 30 To a solution of 2.1 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-ami-noheptycarbamoylacetonitrile in 25 cm of dichloromethane, we add 1.07 cm of trimethylsilyl azide and 410 mg of trichloride aluminum. The reaction mixture is stirred for 72 hours at 20C
then poured dropwise over 30 minutes onto 50 cm of a solution aqueous at 10% sodium hydrogencarbonate. The organic phase is WO 94/26725 I PCT ~ R94 / 00533 ~
211 ~ 2703 40 decanted, the aqueous phase is extracted with 2 times 60 cm of dichloromethane. The combined organic phases are washed 3 times with 50 cm of distilled water, dried over magnesium sulphate pUi5 concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) ~ one temperature close to 40C. The residue obtained (2.5 g) is chromatographed on co-lonne of silica ~ 0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of chloro-form, methanol and ~ nmoni ~ only 20% (24-6-1 by volume). The frac-tions containing the product are combined and concentrated under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. We thus obtain 1.4 g of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-Am1nohPptylcarba-moylméthyl] -tétrazole in the form of a meringue hl ~ n ~ h ~ (Rf 0.25; thin layer chromatography on silica; eluent: chloro-form-methanol-ammonia at 20% (24-6-1 by volume)).

A solution of lg of 5-rN- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-aminoheptylcarbamoyllnétllyl] -tetrazole, 8 cm of sodium hydroxide, 25 cm of tetrahydrofuran and 50 cm of methanol is stirred for 48 hours at a temperature close to 20C. The reaction mixture is evaporated by-partially under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to from 40C until the appearance of a disorder. The mixture is then aci-dified has a p ~ between 1 and 2 by addition of an aqueous solution of hydrochloric acid N. After 2 hours with stirring at temperature close to 20C, the solid is filtered and washed 5 times with 5 cm of distilled water and then dissolved in 50 cm3 of ethanol. The solution is filtered, the filtrate is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained is taken up by 20 cm of isopropyl ether. The solid obtained is lumpy, washed in pairs times 5 cm of isopropyl ether and then dried under reduced pressure (13.5 Pa) has a temperature close to 40C. The residue obtained is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of chloroform, metllanol and ~ ni ~ only 20% (24-6-1 in volumes) The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a similar temperature 40C. The solid obtained is dissolved in 20 cm3 of chloroform, the solution is filtered, the filtrate is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained is taken up in 20 cm of isopropyl ether. The solid obtained is matured, washed with 2 times 5 cm of isopropyl ether then O 94/26725 ~ 16 2 ~ ~ 3 PCT ~ R94 / 00533 dried under vacuum (13.5 Pa) at a temperature close to 40C. We thus obtains 900 mg of 5- [N- (3 ~ 3-hydroxylup-20 (29) - ~ n-28-oyl) -7-Aminoheptylcarbamoylmethyl] -tetrazole as a white solid melting around 160C.

5 N- (3 ~ 3-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7- ~ minohPptylcarbamoyl-acet nitrile can be obtained as follows:

To a solution of 2.45 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-~ i ~ minoh ~ ptane ~ 340 mg of cyanoacetic acid, 730 g of hydrate 1-hydroxybenzotriazole, 1.9 g of 1- (3-dimethylamino-) hydrochloride propyl) -3-ethylcarbodiimide in 120 cm of dichloromethane, is added in about 10 minutes, 2.5 cm of triethylamine. The solution is stirred for 15 hours at a temperature close to 20C then the reaction mixture is washed 3 times with 50 cm of distilled water.
The organic phase is then dried over magnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature sine of 40C. The residue obtained (2.7 g) is chromatographed on co-ton of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a dichlorome mPlAnge thane and methanol (99-1 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at 20 a temperature close to 40C. This gives 3.7 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -7- ~ mi n ~ hpptylcarbamoylacetonitrile under the shape of a white meringue (Rf r 0.40; chromatography on thin layer of silica; eluent: chloroform-methanol- ~ m ~ on1 ~ than at 20 ~ (12-3-0.5 by volume) ~.

25 The N- [3 ~ 3-acetoxylup-2o (29) -èn-28-oyl] -l ~ 7- ~ iAminoheptane can be obtained as follows:

1000 cm of a solution in dichloromethane chloride 3 ~ 3-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyle ~ prepared from 30 g of acid 3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oic) are added dropwise, approximately 30 ron 10 hours, to a solution of 46.8 g of 1.7- ~ i ~ minohPptane in 120 cm of dichloromethane The reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature close to 20C then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The re-sidu is taken up in 2000 cm of distilled water. The solid is filtered, washed with 3 times 200 cm of distilled water, then dissolved in WO 94/26725 ~ 16% 7 0 3 42 PCT ~ R94 / 00533 ~

500 cm of ethanol. The solution is filtered, the solid is washed 2 times with 50 cm of ethanol and the filtrates are evaporated to dryness under pressure.
reduced sion (2.7 kPa) at a temperature close to 50C. The residue obtained is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of chloroform, methanol and ~ m ~ on; ~ only 20%
(24-6-1 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature sine of 40C. This gives 28 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1.7- ~ in ~ heptane in the form of a yellow meringue (Rf =
0.25; thin layer chromatography on silica; eluent: chloro-form-methanol-ammonia at 20 ~ (24-6-1 by volume)).

~ em ~ the 14 To a solutlon of 2.3 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-ami-noheptylcarbamoylpropionitrile in 25 cm3 of dichloromethane, we add 1.30 cm of trimethylsilyl azide and 450 mg of trichloride aluminum. The reaction mixture is stirred for 48 hours at 20C then 32 hours at a temperature close to reflux. We add to new 1.30 cm of trimethylsilyl azide and 450 mg of trichlo-aluminum coating and heating for 24 hours to a temperature close to reflux. The reaction mixture is cooled to 20C and then poured dropwise dropwise in 30 mlnutes over 40 cm of a 10% aqueous solution of hy-sodium drocarbonate. The organic phase is decanted, the phase aqueous solution is extracted with 3 times 50 cm of dichloromethane. The phases combined organics are washed 3 times with 50 cm of distilled water, dried over magnesium sulfate and then evaporated to dryness under pressure reduced ~ 2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (2.5 g) is treated with 25 cm of isopropyl ether, then washed 3 times with 5 cm of isopropyl ether. The solid obtained (1.8 g) is put in solution in 25 cm of dichloromethane. The solution is filtered on celite. The filtrate is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The solid is processed by 20 cm of isopropyl ether then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. 1.5 g are thus obtained.
of 5- [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-A ~ i noheptylcarbamoyla-thyl] -tétraæole in the form of a meringue hl ~ n ~ he (Rf 0.25;

WO 94/26725 ~ 1 ~ 2 7 0 3 PCT / FR94 / 00533 . . .

thin layer chromatography on silica; eluent: chloroform-methanol- ~ ni ~ only 20% ~ 24-6-1 by volume)).

A solution of 1 g of 5- [N- (313-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-aminoheptylcarbamoylethyl] -tetrazole, 20 cm of sodium hydroxide, 25 cm of tetrahydrofuran and 50 cm of methanol is stirred for 72 hours at a temperature close to 20C. The mixture diluted with 250 cm of water tilled and acidified to pl ~ l by addition of an aqueous acid solution hydrochloric N After 1 hour with stirring at a room temperature sine of 20C, the solid is filtered and washed 5 times with 10 cm of water distilled and then treated with 5 times 40 cm of ethyl acetate. The combined organic phases are evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The residue obtained (700 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of chloroform, methanol and ~ mmor ~ i aque at 20%
(24-6-l by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The solid obtained (600 mg) is treated with 15 cm isopropyl ether, the solid is filtered, washed twice with 5 cm isopropyl ether then dried over potassium hydroxide. We thus obtains 140 mg of 5-tN- (313-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-aminoheptylcarbamoylethyl] -tetrazole as a white solid melting around 110C.

N- (3f ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-aminoheptylcarbamoylpropio-nitrile can be obtained as follows:

To a solution of 2.45 g of N- (3 ~ 3-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane, 400 mg of 2-cyanopropionic acid, 730 g of hydrate 1-hydroxybenzotriazole, 1.9 g of 1- (3-dimethylamino-) hydrochloride propyl) -3-ethylcarbodiimide in 120 cm of dichloromethane, is added in about 10 minutes, 2.5 cm of triethylamine. The solution is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20C. The reaction mixture is washed 3 times with 50 cm of distilled water. The the organic phase is then dried over magnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature sine of 40C. The residue obtained (3.5 g) is chromatographed on co-ton of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of dichlorome-WO 94/26725, PCT ~ R94 / 00533 ~ 1 & ~ 7 ~ 3 44 thane and methanol (99-1 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. 2.3 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -7-Aminoheptylcarbamoylpropionitrile under the shape of a white meringue (Rf = 0.40; chromatography on thin layer of silica; eluent: chloroform-methanol-A ~ niAque to 20 ~ (12-3-0.5 by volume)).

N- (3 ~ -acetoxylup-2o (29) -èn-28-oyl) -1 ~ 7- ~ iAmin ~ h ~ ptane can be obtained as follows:

1000 cm3 of a solution in dichloromethane chloride 3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl (prepared from 30 g of acid 3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oic) are added dropwise approximately ron 10 hours in a solution of 46.8 g of 1.7- ~; ~ minoh ~ ptane in 120 cm of dichloromethane. The reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature close to 20C then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40C. The re-sidu is taken up in 2000 cm3 of distilled water. The solid is filtered, washed with 3 times 200 cm of distilled water, then dissolved in 500 cm of ethanol. The solution is filtered, the solid is washed 2 times with 50 cm3 of ethanol and the filtrates are evaporated to dryness under pressure.
reduced sion (2.7 kPa) at a temperature close to 50C. The residue obtained is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of chloroform, methanol and ammonia at 20 ~
(24-6-1 by volume) The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature sine of 40C. This gives 28 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1.7- ~ iArinoheptane in the form of a yellow meringue (Rf 2 0.25; thin layer chromatography on silica; eluent: chloro-form-methanol- ~ -niAque at 20 ~ (24-6-1 by volume)).

Example 15 By operating by analogy with Example 10, 5- {N - {[3 ~ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoyl} -2-aminopropyl (R, S)} tetrazole a was prepared from N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8- acid aminooctanoyl} -2-aminobutanoic (R, S)}. The product comes in the shape of a white powder; pF = 130C.

WO 94/26725 2 ~ 6 2 7 o 3 E ~ r ~ Rg4 / 00533 N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoyl} -3- acid aminobutanoic (R, S)} can be prepared by analogy with [N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8- ~ inooctanoyl} -methyl- acid amino ~ acetic (example 11). N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -en-28- acid oyl) -8-aminooctanoyl} -3-aminobutanoic (R, S)} occurs under the form of a white meringue (Rf = 0.44; layer chromatography thin silica; eluent: dichloromethane, ethyl acetate and methanol 40-40-20 (by volume)).
~ pmnle 16 By operating by analogy with Example 13, 5- {N- [3 ~ -hydroxylup-20 (29) -en-28-oyl] -7-aminoheptyl- (N-methylcarbamoyl)} methyltetrazole a was prepared from N-methyl N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7- ~ inoheptane, pFs183C

N-methyl-N '- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-di ~ minoheptane can be obtained as follows:

To a solution of 15.2 g of N-methyl 2-methylthiobenzothia iodide-zolium in 300 cm3 of dichloromethane, a solution of 28.7 g of N- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1.7- ~; ~ m; noheptane in 50 cm3 of dichloromethane then in approximately 15 minutes, 6.6 cm3 of triethylamine. The solution is stirred at a temperature close to 20C for 2 hours then the reaction mixture is concentrated under atmospheric pressure at a temperature close to 60C. To the oil obtained (35.6 g), 150 cm 3 of iodide of methyl and the reaction mixture is brought for 30 hours to a temperature close to reflux. The reaction mixture is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 50C. The oily residue is taken up in 300 cm3 of diethyl ether and tritur ~.
39.8 g of an orange solid are thus obtained which is dissolved in 100 cm3 of dichloromethane. To the solution obtained, 4.3 is added.
cm3 of n-butylamine. The reaction mixture is stirred for 4 hours at a temperature close to 25C, then diluted with 300 cm3 of dichloromethane and washed with 450 cm3 of distilled water. The sentence organic is then dried over magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 ~ 627 ~ 3 46 close to 40C. The residue obtained is chromatographed on a column silica (0.02 - 0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and methanol 19-1 (by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) ~ one temperature close to 40C. 7.1 g (26%) of N- are thus obtained.
methyl-N '- (3 ~ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7- ~ i ~ minoheptane under the shape of a white meringue ~, pF ~ 158C.

~ m ~ on the 17th By operating by analogy with Example 14, the 5- {3- [N- (3 ~ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -7-AminohPptylcarbamoyl] -2,2-dimethylpro-pyl} tetrazole as a white solid; pF = 155C.

The present invention also relates to pharmaceutical compositions.
ticks containing at least one product of general formula (I) even in the form of salt, ~ pure or in the form of an asso-ciation with one or more compatible diluents or adjuvants and pharmaceutically acceptable, or with another agent intended for treatment of AIDS, an antiviral, immunosuppressive or anti-Crobian.

The composition according to the invention is capable of keeping alive the cells infected with an HIV virus and therefore reduce progression towards AIDS or to decrease its severity in subjects already infected reducing the mortality of infected cells. The essays can be used orally, parenterally or rectally.

The compositions can be used for curative purposes or as preventive in subjects with immunodeficiency and / or infected with an HIV virus. Of course, the constitution of these components will be adapted to the specific case of the digestive tract of the immu-depressed.

As solid compositions for oral administration may be used tablets, pills, capsules, powders or granul ~ s. In these compositions, the active product according to the invention is mixed with one or more inert diluents or adjuvants, such as s ~ h ~ Arose, lactose or starch.

WO 94/26725 2 ~ ~ 2 7 ~ 3 PCT ~ R94 / 00s33 These compositions can include substances other than thinners, for example a lubricant such as magnesium stearate or a coating for controlled release.

As liquid composites for oral administration, use pharmaceutically acceptable solutions, suspensions sions, emulsions, syrups and elixirs containing inert diluents such as water or paraffin oil. These compositions may also include substances other than thinners, for example wetting, sweetening or flavorings.

The compositions for parenteral administration can be sterile solutions or emulsions. As solvent or vehicle, can use propylene glycol, polyethylene glycol, oils vegetable, in particular olive oil, organic esters injectables, for example ethyl oleate.

These compositions can also contain adjuvants, in particular particularly wetting, isotonizing, emulsifying agents, dispersants and stabilizers.

Sterilization can be done in several ways, for example using a bacteriological filter, by irradiation or by heating.
They can also be prepared in the form of compositions sterile solids which can be dissolved at the time of use in sterile water or any other sterile injectable medium.

The compositions for rectal administration are suppositories or rectal capsules, which contain, in addition to the active ingredient, excipients such as cocoa butter, semi-glycerides synthetic or polyethylene glycols.

In human therapy, the doctor will determine the dosage he considers the most appropriate based on preventive treatment or curative, depending on age, weight, degree of infection and other factors specific to the subject to be addressed. Generally, doses are between 10 and 100 mg / kg orally for a adult.

WO 94/26725 PCT ~ R94 / 00533 The present invention also relates to associations formed one or more lupane derivatives of general formula (I), and / or the where appropriate their salts, and of another active principle known for its anti-retrovirus activity, possibly in the presence of excipients pharmaceutically acceptable.

The anti-retrovirus agents which can be combined are chosen from compatible and inert agents vis-à-vis the lupane derivative of general formula (I). Without limitation, these agents are chosen among reverse transcriptase inhibitors [zidovudine (AZT), didanosine (DDI), dideoxycytidine (DDC), TIBO, nevirapine, PMEA, D4T, pyridones, ~ -APA, HEPT ...], among protease inhibitors [such as RO 31-8959 or A 77003], or among inhibitors tat proteners as for example RO 24-7429].

The following example illustrates a composition according to the invention.

Example ~

Product tablets are prepared according to the usual technique.
active ingredient with the following composition:

- 5- [N '- [N- [3 ~ -hydroxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoyl] -Aminom ~ thyl] -tetrazole, 100 mg - starch 332 mg - silica 120 mg - magnesium stearate 12 mg

Claims

REVENDICATIONS

1 - Un dérivé du lupane de formule générale :

dans laquelle :

R représente un radical de formule générale :

X est une liaison ou représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, aminocarbonyle ou N-méthylaminocarbonyle, Y est une liaison ou représente un radical méta ou para phénylène, R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux méthyle (étant entendu que tous les motifs -CR°R°° ne sont pas nécessairement identiques entre eux) et, n est un nombre entier de 6 à 12, m est un nombre entier de 0 à 3 et p est un nombre entier de 0 à 2 étant entendu que m + n + p est com-pris entre 6 et 14, et R1 est un radical méthyle, hydroxyméthyle ou un radical -CH2OR' ou -CH2SR' pour lequel R' est alcoyle ou hydroxyalcoyle, étant entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de carbone, ainsi que leurs sels et le cas échéant leurs formes stéréoisomères et leurs mélanges.

2 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du 5- {N ' - [N- (3.beta.-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amino-octanoyl]-aminométhyl}-tétrazole.

3 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'aqit du 5- [4- {N- [N ' - (3.beta.-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amino-octanoyl]-amino}-phényl]-tétrazole.

4 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du 5-[N-(3.beta.-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl) -7-aminoheptyl-carbamoylméthyl]-tetrazole.

- Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du 5-[N-(3.beta.-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-7-aminoheptyl-carbamoylméthyl]-tétrazole 6 - Procédé de préparation d'un dérivé du lupane selon la revendica-tion 1, caractérisé en ce que l'on fait agir un azoture sur un nitrile de formule qénerale :

dans laquelle R1 R°, R°°, X, Y, n, m, et p sont définis comme dans la revendication 1, puis élimine le cas échéant des radicaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel.

7 - Procédé de préparation d'un dérivé du lupane selon la revendica-tion 1, pour lequel X (dans le radical R) représente un radical car-bamoyle ou aminocarbonyle éventuellement N-méthylé et les autres radicaux sont définis comme dans la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait agir une amine ou un acide de formules générales :

ou dans lesquelles R°, R°°, m et p sont définis comme dans la revendi-cation 1 et R"' est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, sur un dérivé du lupane de formule générale :

dans laquelle R1 est défini comme dans la revendication 1 et R"
représente un radical de formule générale :
(CH2)n - COOH
ou (CH2)n-NH-R"' dans lesquelles n est défini comme dans la revendication 1 et R"' est défini comme ci-dessus, puis élimine le cas échéant des radicaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel.

8 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient au moins un produit selon la revendication 1, à l'état pur ou en as-sociation avec tout diluant ou adjuvant compatible et pharmaceuti-quement acceptable et/ou en association avec un autre principe actif antiviral, immunomodulateur ou antimicrobien.
1 - A lupane derivative of general formula:

in which :

R represents a radical of general formula:

X is a bond or represents a carbamoyl radical, N-methyl carbamoyl, aminocarbonyl or N-methylaminocarbonyl, Y is a bond or represents a meta or para phenylene radical, R° and R°°, identical or different, are hydrogen atoms or methyl radicals (it being understood that not all -CR°R°° units are not necessarily identical to each other) and, n is an integer from 6 to 12, m is an integer from 0 to 3 and p is an integer from 0 to 2, it being understood that m + n + p is composed of taken between 6 and 14, and R1 is a methyl or hydroxymethyl radical or a -CH2OR' radical or -CH2SR' for which R' is alkyl or hydroxyalkyl, it being understood that the alkyl radicals are straight or branched and contain 1 to 4 carbon atoms, as well as their salts and the case optionally their stereoisomeric forms and their mixtures.

2 - A derivative of lupane according to claim 1, characterized in that that it is 5-{N'-[N-(3.beta.-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl)-8-amino-octanoyl]-aminomethyl}-tetrazole.

3 - A derivative of lupane according to claim 1, characterized in that that it is 5-[4-{N-[N'-(3.beta.-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl)-8-amino-octanoyl]-amino}-phenyl ]-tetrazole.

4 - A derivative of lupane according to claim 1, characterized in that that it is 5-[N-(3.beta.-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl)-7-aminoheptyl-carbamoylmethyl]-tetrazole.

- A lupane derivative according to claim 1, characterized in that that it is 5-[N-(3.beta.-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl)-7-aminoheptyl-carbamoylmethyl]-tetrazole 6 - Process for preparing a lupane derivative according to claim tion 1, characterized in that an azide is made to act on a nitrile with general formula:

where R1 R°, R°°, X, Y, n, m, and p are defined as in of claim 1, then removes, where appropriate, radicals protectors and eventually transforms the product obtained into a salt.

7 - Process for preparing a lupane derivative according to claim tion 1, for which X (in the radical R) represents a radical car-optionally N-methylated bamoyl or aminocarbonyl and the others radicals are defined as in claim 1, characterized in what an amine or an acid of the general formulas is made to act:

Where wherein R°, R°°, m and p are defined as in claim cation 1 and R"' is a hydrogen atom or a methyl radical, on a lupane derivative of general formula:

wherein R1 is defined as in claim 1 and R"
represents a radical of general formula:
(CH2)n-COOH
Where (CH2)n-NH-R"' wherein n is defined as in claim 1 and R"' is defined as above, then removes any radicals protectors and eventually transforms the product obtained into a salt.

8 - Pharmaceutical composition characterized in that it contains at least one product according to claim 1, in the pure state or in as-association with any compatible diluent or adjuvant and pharmaceutical only acceptable and/or in combination with another active ingredient antiviral, immunomodulator or antimicrobial.
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