WO2024120424A1 - 一种靶向泛kras蛋白降解剂的化合物及其应用 - Google Patents

一种靶向泛kras蛋白降解剂的化合物及其应用 Download PDF

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WO2024120424A1 PCT/CN2023/136686 CN2023136686W WO2024120424A1 WO 2024120424 A1 WO2024120424 A1 WO 2024120424A1 CN 2023136686 W CN2023136686 W CN 2023136686W WO 2024120424 A1 WO2024120424 A1 WO 2024120424A1
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吴颢
徐人奇
杨晓峰
路渊
邹正耀
王冬
张洪波
王泽�
郑航
谭耀明
何将旗
夏洪峰
时召涛
林远望
李腾飞
方龙城
袁丁
许艳杰
卢路
李树森
赵志昌
湛波
王维
周全
兰宏
王家炳
丁列明
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贝达药业股份有限公司
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    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
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    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/08—Bridged systems
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    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems

Definitions

  • the present invention belongs to the field of medical technology, and specifically relates to a compound targeting KRAS protein degradation agent and application thereof.
  • PROTAC is a heterobifunctional molecule, one end of the molecule is a ligand that binds to the target protein, and the other end is a ligand for the E3 ligase, connected in the middle by a suitable chain.
  • PROTAC degradation of target proteins is achieved through the ubiquitin proteasome system (UPS), and the general process is as follows: PROTAC molecules bind to target proteins (POI) and E3 ligases to form a ternary complex, marking the target protein with ubiquitin molecules, and the ubiquitinated proteins are recognized and degraded by the proteasome 26S in the cell.
  • UPS ubiquitin proteasome system
  • PROTAC is "event-driven” and does not affect the function of the protein, but mediates the degradation of pathogenic target proteins. As long as PROTAC mediates the formation of a ternary complex and labels the target protein with ubiquitination, it can theoretically be recycled and reused, so the catalytic amount can play a role. It has a wider range of action, higher activity, can target "undruggable” targets; improves selectivity, activity and safety; can overcome drug resistance, etc.
  • KRAS The activity of KRAS switches due to the binding conversion with GDP or GTP. It is inactive when bound to GDP and activated when bound to GTP. In mutated KRAS proteins, GAP entry into GTP is restricted, thereby preventing hydrolysis, forming a continuously activated GTP-bound state. Because mutant KRAS has a high affinity for guanosine triphosphate (GTP), and there are difficult-to-target factors such as a small catalytic site and a smooth protein surface, the development of small molecule inhibitors has always been challenging, making KRAS "undruggable".
  • GTP guanosine triphosphate
  • KRAS binds to GDP and GTP with an affinity of picomolar concentrations, which seriously hinders the development of nucleotide competitive inhibitors; on the other hand, the KRAS protein lacks an ideal small molecule binding pocket, making it difficult to design high-affinity allosteric inhibitors.
  • KRAS inhibitors face the dilemma of limited efficacy and high drug resistance in clinical practice. If we can combine the anti-drug resistance and high efficacy of PROTAC to develop a new pan-KRAS PROTAC degrader drug for the treatment of diseases caused by KRAS mutation or amplification, it will have great social significance and commercial value.
  • the present invention provides a novel pan-KRAS PROTAC degrader that can be used to treat diseases caused by KRAS mutation or amplification.
  • the present invention provides a compound having a F-L-M structure, or a tautomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
  • the F is a KRAS protein binding fragment represented by general formula (A);
  • the X is selected from -O- or
  • Said represents independently selected from a single bond or a double bond
  • the X 4 is CR 8 , C(R 8 ) 2 , O, N or NR 8 ;
  • R 8 are each independently selected from H, hydroxyl, oxo, halogen, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, -SC 1-6 alkyl, -C 0-3 alkylene-C 2-4 alkenyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy or C 3-14 cycloalkyl; the C 3-14 cycloalkyl and C 1-6 alkyl are optionally further substituted by one or more Ra ;
  • Said X5 is selected from C, CH or N;
  • the X 6 is selected from CR 14 , C(R 14 ) 2 , O, N or NR 14 ;
  • R 14 are each independently selected from H, hydroxyl, oxo, halogen, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, -SC 1-6 alkyl, -C 0-3 alkylene-C 2-4 alkenyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy or C 3-14 cycloalkyl; the C 3-14 cycloalkyl and C 1-6 alkyl are optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the R 6 is selected from absent, C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl; the C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the R 9 is selected from H, amino, substituted amino, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, halogen, C 2-6 alkenyl, C 3-6 cycloalkyl; the C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 3-6 cycloalkyl is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the R 10 is selected from absent, -O- or -NR 11 -;
  • R 11 is selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 hydroxyalkyl or C 1-6 aminoalkyl;
  • the R 7 is selected from C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl, and the C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the K is selected from C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclic group, the C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclic group is a monocyclic, condensed, spirocyclic or bridged ring, optionally further substituted by one or more Ra , and the 3-14 membered heterocyclic group is not
  • m and n are each independently selected from 0, 1, 2, 3, 4 or 5;
  • the L is a connecting unit connecting F and M;
  • the L is selected from
  • the G ring or the D ring is each independently selected from a C 6-14 aryl group, a 5-14 membered heteroaryl group, a C 3-14 cycloalkyl group or a 3-14 membered heterocyclyl group, and the C 6-14 aryl group, the 5-14 membered heteroaryl group or the 3-14 membered heterocyclyl group is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the E's are each independently selected from -O-, -NH- or -NCH 3 -;
  • the Y 1 and Y 2 are each independently selected from absent, -O-, -NH-, a 3-6 membered N-containing heterocyclic group, a C 1-6 alkylene group, a carbonyl group, an ethynyl group or a C 3-6 cycloalkyl group;
  • n1, n2, and n3 are each independently selected from an integer of 0-10, preferably 0, 1, 2, 3 or 4;
  • the M is selected from the VHL binding fragment represented by general formula (III) or (IV);
  • Said X 1 is selected from C, CH or N;
  • Said X2 is selected from C, CH or N;
  • the X3 is selected from N, NH, O or S;
  • the R 1 is selected from H, C 1-6 alkyl, halogen or cyano, preferably methyl, ethyl, F or cyano;
  • the R 2 is selected from H or C 1-6 alkyl, preferably H or methyl;
  • the R 3 is selected from H, C 1-6 alkyl or C 1-6 hydroxyalkyl or -(CH 2 )n-CO-NH-(CH 2 )n-CH 3 , wherein n is selected from 0, 1, 2 or 3, and the R 3 is preferably H, methyl, hydroxymethyl, or -CH 2 -CO-NH-CH 3 ;
  • the R4 is selected from or -NH-;
  • the R 5 is selected from H, C 1-6 alkyl or C 1-6 haloalkyl
  • the R 12 is selected from
  • Each R b is independently H, halogen, hydroxyl, cyano, C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 1-6 haloalkyl, C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl, wherein the C 1-6 alkyl , C 3-6 cycloalkyl, C 1-6 haloalkyl, C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl is optionally further substituted with one or more halogen, C 1-6 alkyl or C 1-6 haloalkyl; or two R b on one atom and the atom to which they are connected together form a C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl, wherein the C 3-14 cycloalkyl, 3-14 member
  • the L is selected from
  • the G ring or the D ring is each independently selected from a C 6-14 aryl group, a 5-14 membered heteroaryl group, a C 3-14 cycloalkyl group or a 3-14 membered heterocyclyl group, and the C 6-14 aryl group, the 5-14 membered heteroaryl group or the 3-14 membered heterocyclyl group is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the E's are each independently selected from -O-, -NH- or -NCH 3 -;
  • n1, n2, and n3 are each independently selected from an integer of 0-10, preferably 0, 1, 2, 3 or 4;
  • the M is selected from the VHL binding fragment represented by general formula (V) or (IV);
  • Said X 1 is selected from C, CH or N;
  • Said X2 is selected from C, CH or N;
  • the X3 is selected from N, NH, O or S;
  • the R 1 is selected from H, C 1-6 alkyl, halogen or cyano, preferably methyl, ethyl, F or cyano;
  • the R 2 is selected from H or C 1-6 alkyl, preferably H or methyl;
  • the R 3 is selected from H, C 1-6 alkyl or C 1-6 hydroxyalkyl, preferably H, methyl or hydroxymethyl;
  • the R4 is selected from or -NH-;
  • the R 12 is selected from
  • the L is selected from
  • the G ring or the D ring is each independently selected from a C 6-14 aryl group, a 5-14 membered heteroaryl group or a 3-14 membered heterocyclyl group, and the C 6-14 aryl group, the 5-14 membered heteroaryl group or the 3-14 membered heterocyclyl group is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the E's are each independently selected from -O-, -NH- or -NCH 3 -;
  • n1, n2, and n3 are each independently selected from an integer of 0-10, preferably 0, 1, 2, 3 or 4;
  • the M is selected from the VHL binding fragment represented by general formula (V) or (IV);
  • Said X 1 is selected from C, CH or N;
  • Said X2 is selected from C, CH or N;
  • the X3 is selected from N, NH, O or S;
  • the R 1 is selected from H, C 1-6 alkyl, halogen or cyano, preferably methyl, ethyl, F or cyano;
  • the R 2 is selected from H or C 1-6 alkyl, preferably H or methyl;
  • the R 3 is selected from H, C 1-6 alkyl or C 1-6 hydroxyalkyl, preferably H, methyl or hydroxymethyl;
  • the R4 is selected from or -NH-;
  • the R 12 is selected from
  • Each R b is independently H, halogen, hydroxy, cyano, C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 1-6 haloalkyl, C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl, and the C 1-6 alkyl , C 3-6 cycloalkyl, C 1-6 haloalkyl, C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl is optionally further substituted with one or more halogen, C 1-6 alkyl or C 1-6 haloalkyl; or two R b on one atom and the atom to which they are commonly attached form a C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl, and the C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered hetero
  • F is a KRAS protein binding fragment represented by general formula (I) or (II);
  • Said represents independently selected from a single bond or a double bond
  • the X 4 is CR 8 , C(R 8 ) 2 , O, N or NR 8 ;
  • R 8 are each independently selected from H, hydroxyl, oxo, halogen, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, -SC 1-6 alkyl, -C 0-3 alkylene-C 2-4 alkenyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy or C 3-14 cycloalkyl; the C 3-14 cycloalkyl and C 1-6 alkyl are optionally further substituted by one or more Ra ;
  • Said X5 is selected from C, CH or N;
  • the X 6 is selected from CR 14 , C(R 14 ) 2 , O, N or NR 14 ;
  • R 14 are each independently selected from H, hydroxyl, oxo, halogen, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, -SC 1-6 alkyl, -C 0-3 alkylene-C 2-4 alkenyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy or C 3-14 cycloalkyl; the C 3-14 cycloalkyl and C 1-6 alkyl are optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the R 6 is selected from absent, C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl; the C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the R 9 is selected from H, amino, substituted amino, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, halogen, C 2-6 alkenyl, C 3-6 cycloalkyl; the C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 3-6 cycloalkyl is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the R 10 is selected from absent, -O- or -NR 11 -;
  • R 11 is selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 hydroxyalkyl or C 1-6 aminoalkyl;
  • the R 7 is selected from C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl, and the C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclyl, C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the K is selected from a C 3-14 cycloalkyl group or a 3-14 membered heterocyclic group, wherein the C 3-14 cycloalkyl group or the 3-14 membered heterocyclic group is a monocyclic, A fused ring, a spiro ring or a bridged ring, optionally further substituted by one or more Ra , and the 3-14 membered heterocyclic group is not
  • the m and n are each independently selected from 0, 1, 2, 3, 4 or 5.
  • the R4 is selected from or -NH-.
  • the R4 is selected from
  • K is selected from C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl, wherein the C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl is a monocyclic ring and is optionally further substituted by one or more Ra .
  • the K is selected from
  • K is a C 3-14 cycloalkyl or a 3-14 membered heterocyclyl, wherein the C 3-14 cycloalkyl or the 3-14 membered heterocyclyl is a spirocyclic ring and is optionally further substituted by one or more Ra .
  • the K is selected from
  • K is a C 3-14 cycloalkyl group or a 3-14 membered heterocyclyl group
  • the C 3-14 cycloalkyl group or the 3-14 membered heterocyclyl group is a condensed ring and is optionally further substituted by one or more Ra .
  • the K is selected from
  • K is a C 3-14 cycloalkyl or a 3-14 membered heterocyclyl
  • the C 3-14 cycloalkyl or the 3-14 membered heterocyclyl is a bridged ring and is optionally further substituted by one or more Ra .
  • the K is selected from
  • the K is selected from
  • the R 7 is selected from C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl, and the C 6-18 aryl or 5-18 membered heteroaryl is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the Ra is independently selected from H, halogen, hydroxyl, amino, cyano, C 2-6 alkynyl, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl or C 2-6 alkene.
  • the R 7 is selected from Said Optionally further substituted by one or more Ra ; said Ra are each independently selected from H, halogen, hydroxy, amino, cyano, C2-6 alkynyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl or C2-6 alkene.
  • the R 7 is selected from
  • the F is selected from
  • R 7 , R 9 , R 8 , R 11 , and R 14 are as defined in the above general formula (I) or (II); Selected from
  • the K is selected from
  • the F is selected from
  • the F is selected from
  • the G ring or the D ring in L is independently selected from C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl, C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl, and the C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl, C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl is optionally further substituted by halogen or C 1-3 alkyl;
  • the C 6-14 aryl group is preferably
  • the 5-14 membered heteroaryl group is preferably selected from
  • the 3-14 membered heterocyclic group is preferably selected from
  • the C 3-14 cycloalkyl group is preferably selected from
  • the G ring or the D ring in L is independently selected from C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl, C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl, and the C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl, C 3-14 cycloalkyl or 3-14 membered heterocyclyl is optionally further substituted by halogen or C 1-3 alkyl;
  • the C 6-14 aryl group is preferably
  • the 5-14 membered heteroaryl group is preferably selected from
  • the 3-14 membered heterocyclic group is preferably selected from
  • the C 3-14 cycloalkyl group is preferably selected from
  • the G ring or the D ring in L is independently selected from C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl or 3-14 membered heterocyclyl, and the C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl or 3-14 membered heterocyclyl is optionally further substituted by halogen or C 1-3 alkyl;
  • the C 6-14 aryl group is preferably
  • the 5-14 membered heteroaryl group is preferably selected from
  • the 3-14 membered heterocyclic group is preferably selected from
  • the L is selected from
  • the G ring or the D ring is each independently selected from a C 6-14 aryl group, a 5-14 membered heteroaryl group, a C 3-14 cycloalkyl group or a 3-14 membered heterocyclyl group, and the C 6-14 aryl group, the 5-14 membered heteroaryl group or the 3-14 membered heterocyclyl group is optionally further substituted by one or more Ra ; the Ra is independently selected from H, hydroxyl, amino, oxo, cyano, halogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl or C 1-6 alkoxy.
  • the Y 1 and Y 2 are each independently selected from absent, -O-, -NH-, a 3-6 membered N-containing heterocyclic group, a C 1-6 alkylene group, a carbonyl group, an ethynyl group or a C 3-6 cycloalkyl group;
  • the E's are each independently selected from -O-, -NH- or -NCH 3 -;
  • n1, n2, and n3 are each independently selected from an integer of 0-10, preferably 0, 1, 2, 3 or 4.
  • L is selected from the following structures:
  • n1 and n2 are each independently selected from an integer of 0-10, preferably 0, 1, 2 or 3.
  • L is selected from the following structures:
  • the M is selected from
  • the M is selected from
  • the L is selected from
  • the G ring is selected from a C 6-14 aryl, a 5-14 membered heteroaryl, a C 3-14 cycloalkyl or a 3-14 membered heterocyclyl, and the C 6-14 aryl, the 5-14 membered heteroaryl or the 3-14 membered heterocyclyl is optionally further substituted by one or more Ra ; each Ra is is independently selected from H, hydroxy, amino, oxo, cyano, halogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl or C 1-6 alkoxy;
  • the D ring is a 5-6 membered N-containing heteroaryl group, preferably
  • the Y 1 and Y 2 are each independently selected from absent, -O-, -NH-, a 3-6 membered N-containing heterocyclic group, a C 1-6 alkylene group, a carbonyl group, an ethynyl group or a C 3-6 cycloalkyl group;
  • n1 and n2 are each independently 0, 1, 2, 3 or 4.
  • the L is selected from
  • the F is selected from
  • the L is selected from the following structures:
  • the G ring or the D ring is each independently selected from a C 6-14 aryl group, a 5-14 membered heteroaryl group, a C 3-14 cycloalkyl group or a 3-14 membered heterocyclyl group, and the C 6-14 aryl group, the 5-14 membered heteroaryl group, the C 3-14 cycloalkyl group or the 3-14 membered heterocyclyl group is optionally further substituted by one or more Ra ;
  • the Y 1 and Y 2 are each independently selected from absent, -O-, -NH-, a 3-6 membered N-containing heterocyclic group, a C 1-6 alkylene group, a carbonyl group, an ethynyl group or a C 3-6 cycloalkyl group;
  • the E's are each independently selected from -O-, -NH- or -NCH 3 -;
  • n1, n2, and n3 are each independently selected from an integer of 0-10, preferably 0, 1, 2, 3 or 4;
  • the M is selected from the VHL binding fragment represented by the general formula (III);
  • the X 1 is selected from C, CH or N;
  • Said X2 is selected from C, CH or N;
  • the X3 is selected from N, NH, O or S;
  • the R 1 is selected from H, C 1-6 alkyl, halogen or cyano, preferably methyl, ethyl, F or cyano;
  • the R 2 is selected from H or C 1-6 alkyl, preferably H or methyl;
  • the R 3 is selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 hydroxyalkyl or -(CH 2 )n-CO-NH-(CH 2 )n-CH 3 , wherein n is selected from 0, 1, 2 or 3, and the R 3 is preferably H, methyl, hydroxymethyl, or -CH 2 -CO-NH-CH 3 ;
  • the R4 is selected from or -NH-;
  • the R 5 is selected from H, C 1-6 alkyl or C 1-6 haloalkyl
  • the Ra is independently selected from H, hydroxy, amino, oxo, cyano, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl or C1-6 alkoxy.
  • the compound of FLM structure is selected from the following compounds:
  • the connecting chain of the compound of the present invention has a great influence on the KRAS degradation ability and cell proliferation inhibition activity of the compound.
  • a 5-6-membered N-containing heteroaryl group especially a pyrazine ring and a pyridine ring
  • the degradation ability of the compound for KRAS will be greatly improved, and the cell proliferation inhibition activity of the compound will be increased.
  • the special spatial position of the N-containing heteroaromatic ring will interact with the VHL protein through hydrogen bonds, etc., which increases the binding force between the compound and VHL, thereby increasing the compound's ability to degrade the KRAS protein.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition, which contains any compound represented by the general formula with F-L-M structure of the present invention, its tautomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof or pharmaceutically acceptable salts thereof, and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.
  • the present invention further provides the use of any of the above-mentioned compounds represented by the general formula having a F-L-M structure, its tautomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or pharmaceutical compositions containing the same in the preparation of drugs for regulating the ubiquitination and degradation of KRAS proteins in a subject.
  • the present invention further provides use of any of the above-mentioned compounds having the general structural formula F-L-M or its tautomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof or pharmaceutically acceptable salts thereof, or a pharmaceutical composition comprising the same, in the preparation of a medicament for treating and/or preventing KRAS-mediated or dependent disorders, wherein the disease mediated by KRAS is preferably selected from tumors.
  • the disease is selected from breast cancer, multiple myeloma, bladder cancer, endometrial cancer, gastric cancer, cervical cancer, rhabdomyosarcoma, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, pleomorphic lung cancer, ovarian cancer, esophageal cancer, melanoma, colorectal cancer, hepatoma, head and neck tumors, hepatobiliary carcinoma, myelodysplastic syndrome, malignant glioma, prostate cancer, thyroid cancer, Schwann cell tumor, squamous cell carcinoma of the lung, lichenoid keratosis, synovial sarcoma, skin cancer, pancreatic cancer, testicular cancer, or liposarcoma.
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine, or iodine, unless otherwise indicated.
  • connection sequence of the groups in the present invention is not particularly limited, and the groups may be connected from left to right or from right to left.
  • alkyl includes a linear or branched monovalent saturated hydrocarbon group.
  • alkyl includes methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, 3-(2-methyl)butyl, 2-pentyl, 2-methylbutyl, neopentyl, n-hexyl, 2-hexyl, 2-methylpentyl, etc.
  • “1-6” in “C 1-6 alkyl” refers to a group containing 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms in a linear or branched form.
  • alkoxy refers to the oxygen ether form of the aforementioned straight-chain or branched alkyl groups, ie, -O-alkyl.
  • alkylene refers to a divalent alkyl linking group. Alkylene formally refers to an alkane with two CH bonds replaced as the point of attachment of the alkylene to the rest of the compound. Similarly, the "C 1-3 " in C 1-3 alkylene refers to an alkylene containing 1, 2, or 3 carbon atoms, including but not limited to methylene, 1,2-ethylene, 1,3-propylene, or 1,2-isopropylene.
  • haloalkyl refers to an alkyl group in which one or more H has been replaced by a halogen atom.
  • oxo or "oxo group” refers to an oxygen atom in the form of a divalent substituent, which forms a carbonyl group when attached to C, and forms a sulfoxide or sulfone group or an N-oxide group when attached to a heteroatom.
  • aromatic ring refers to a polyunsaturated carbon ring or heterocycle with aromatic characteristics (having (4n+2) delocalized ⁇ electrons, where n is an integer).
  • aryl in the present invention, unless otherwise specified, refers to an unsubstituted or substituted monocyclic or condensed aromatic group including carbon ring atoms.
  • C 6-18 aryl more preferably, aryl is a C 6-10 monocyclic or bicyclic aromatic ring group.
  • it is phenyl, naphthyl; most preferably, naphthyl.
  • the aryl ring can be fused to a heteroaryl, heterocyclic or cycloalkyl group, wherein the ring connected to the parent structure is an aryl ring, non-limiting examples include but are not limited to benzocyclopentyl.
  • heterocyclyl refers to a ring system having at least one cyclized alkyl or cyclized alkenyl group containing a heteroatom, wherein the heteroatom is selected from N, O and/or S.
  • the heterocyclyl may include a monocyclic or polycyclic ring (e.g., having 2, 3 or 4 fused rings, spirocyclic rings, bridged rings, etc.).
  • the heterocyclyl may be connected to the rest of the compound via a ring-forming carbon atom or a ring-forming heteroatom.
  • a 3-14-membered heterocyclyl is preferred, and the "3-14 members" in the 3-14-membered heterocyclyl refers to a heterocyclyl composed of 3-14 C, N, O or S ring atoms; wherein the nitrogen or sulfur heteroatom may be selectively oxidized, and the nitrogen heteroatom may be selectively quaternized.
  • heterocyclyls include, but are not limited to Azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, oxopiperazinyl, oxopiperidinyl, tetrahydrofuranyl, dioxolanyl, tetrahydroimidazolyl, tetrahydrothiazolyl, tetrahydrooxazolyl, tetrahydropyranyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, thiomorpholinyl sulfoxide, thiomorpholinyl sulfone and tetrahydrooxadiazolyl.
  • the heterocyclic group can be fused on an aryl, heteroaryl or cycloalkyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is a heterocyclic group.
  • heteroaryl in the present invention, unless otherwise specified, refers to a monocyclic or polycyclic (e.g., having 2, 3 or 4 fused rings, spiro rings, bridged rings, etc.) aromatic heterocycle having at least one heteroatom, wherein the heteroatom is selected from N, O and/or S, and wherein the nitrogen or sulfur heteroatom can be selectively oxidized, and the nitrogen heteroatom can be selectively quaternized.
  • it is a 5-18-membered heteroaryl, wherein the "5-18 members" in the 5-18-membered heteroaryl refers to a heteroaryl composed of 5-18 C, N, O or S ring atoms.
  • heteroaryl More preferred is a 5-10-membered heteroaryl; more preferred is a 5-6-membered heteroaryl.
  • heteroaryl include, but are not limited to, thienyl, furanyl, imidazolyl, isoxazolyl, oxazolyl, pyrazolyl, pyrrolyl, thiazolyl, thiadiazolyl, triazolyl, pyridyl, pyridazinyl, indolyl, azaindolyl, indazolyl, benzimidazolyl, benzofuranyl, benzothienyl, benzisoxazolyl, benzothiazolyl, benzothiazolyl, benzothiadiazolyl, benzotriazolyl adenine, quinolyl or isoquinolyl.
  • the heteroaryl may be fused to an aryl, heterocyclyl or cycloalkyl ring, wherein the ring attached to the
  • cycloalkyl refers to a ring system having at least one cyclized alkyl group.
  • C 3-14 cycloalkyl wherein “C 3-14 " It means that the cycloalkyl group may have 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 ring atoms.
  • the cycloalkyl group may include monocyclic and polycyclic rings (e.g., having 2, 3 or 4 fused rings, spirocyclic rings, bridged rings, etc.).
  • the cycloalkyl group includes, but is not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, etc.; the cycloalkyl group may also be fused to an aryl, heterocyclic or heteroaryl ring, wherein the ring connected to the parent structure is a cycloalkyl group.
  • substituted means that one or more hydrogen atoms in the group are replaced by the same or different substituents.
  • substituents are independently selected from groups comprising -F, -Cl, -Br, -I, -OH, trifluoromethoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, tert- butoxy , -SCH3 , -SC2H5 , carbaldehyde, -C( OCH3 ), cyano, nitro, -CF3 , -OCF3 , amino, dimethylamino, methylthio, sulfonyl, and acetyl.
  • linking group When the number of a linking group is 0, such as -(CH 2 ) 0 -, it means that the linking group is a bond.
  • pharmaceutically acceptable salts refers to salts prepared from pharmaceutically acceptable non-toxic bases or acids.
  • salts derived from inorganic bases include salts of aluminum, ammonium, calcium, copper (high and low valence), ferric iron, ferrous iron, lithium, magnesium, manganese (high and low valence), potassium, sodium, zinc and the like. Particularly preferred are salts of ammonium, calcium, magnesium, potassium and sodium.
  • Nontoxic organic bases that can be derived into pharmaceutically acceptable salts include primary amines, secondary amines and tertiary amines, also include cyclic amines and amines containing substituents, such as naturally occurring and synthetic amines containing substituents.
  • non-toxic organic bases capable of forming salts include ion exchange resins and arginine, betaine, caffeine, choline, N', N'-dibenzylethylenediamine, diethylamine, 2-diethylaminoethanol, 2-dimethylaminoethanol, ethanolamine, ethylenediamine, N-ethylmorpholine, N-ethylpiperidine, reduced glucosamine, glucosamine, histidine, isopropylamine, lysine, methylglucosamine, morpholine, piperazine, piperidine, polyamine resins, procaine, chloroprocaine, purine, theobromine, triethylamine, trimethylamine, tripropylamine, tromethamine, and the like.
  • compound provided by the invention can be from pharmaceutically acceptable nontoxic acid, including inorganic acid and organic acid, conveniently make its corresponding salt.
  • Sud acid includes, as, acetic acid, benzenesulfonic acid, benzoic acid, camphorsulfonic acid, citric acid, ethanesulfonic acid, formic acid, fumaric acid, gluconic acid, glutamic acid, hydrobromic acid, hydrochloric acid, isethionic acid, lactic acid, maleic acid, malic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, mucic acid, nitric acid, embroic acid, pantothenic acid, phosphoric acid, succinic acid, sulfuric acid, oxalic acid, propionic acid, glycolic acid, hydroiodic acid, perchloric acid, cyclamic acid, salicylic acid, 2-naphthalenesulfonic acid, saccharinic acid, trifluoroacetic acid, tartaric acid and
  • Prodrugs of the compounds of the present invention are included within the scope of the present invention.
  • the prodrug refers to a functional derivative that is easily converted into the desired compound in vivo.
  • any pharmaceutically acceptable salt, ester, salt of an ester or other derivative of the compounds of the present application which can directly or indirectly provide the compounds of the present application or their pharmaceutically active metabolites or residues after administration to a receptor.
  • the compounds of the present invention may contain one or more asymmetric centers and may give rise to diastereomers and optical isomers.
  • the present invention includes all possible diastereomers and racemic mixtures thereof, their substantially pure resolved enantiomers, all possible geometric isomers and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • the present invention includes any possible tautomerism and pharmaceutically acceptable salts thereof, and mixtures thereof.
  • pharmaceutical composition refers to a mixture of one or more compounds of the present application or pharmaceutically acceptable salts thereof and pharmaceutically acceptable excipients.
  • the purpose of a pharmaceutical composition is to facilitate administration of the compounds of the present application to an organism.
  • pharmaceutically acceptable excipients refers to those excipients that have no significant irritation to the organism and do not impair the biological activity and performance of the active compound. Suitable excipients are well known to those skilled in the art, such as carbohydrates, waxes, water-soluble and/or water-swellable polymers, hydrophilic or hydrophobic materials, gelatin, oils, solvents, water, etc.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared by combining the compound of the present application with suitable pharmaceutically acceptable excipients, for example, it can be formulated into solid, semi-solid, liquid or gaseous preparations, such as tablets, pills, capsules, powders, granules, ointments, emulsions, suspensions, suppositories, injections, inhalants, gels, microspheres and aerosols.
  • suitable pharmaceutically acceptable excipients for example, it can be formulated into solid, semi-solid, liquid or gaseous preparations, such as tablets, pills, capsules, powders, granules, ointments, emulsions, suspensions, suppositories, injections, inhalants, gels, microspheres and aerosols.
  • Typical routes of administration of the compounds of the invention or their pharmaceutically acceptable salts or their pharmaceutical compositions include, but are not limited to, oral, rectal, topical, inhalation, parenteral, sublingual, intravaginal, intranasal, intraocular, intraperitoneal, intramuscular, subcutaneous, and intravenous administration.
  • treat generally refers to obtaining a desired pharmacological and/or physiological effect.
  • the effect may be therapeutic in terms of partial or complete stabilization or cure of a disease and/or side effects resulting from a disease.
  • "treat” encompasses any treatment of a patient's disease that: (a) inhibits the symptoms of a disease, i.e., arrests its development; or (b) alleviates the symptoms of a disease, i.e., causes regression of the disease or symptoms.
  • the term "effective amount” means an amount of the present invention compound that (i) treats or prevents a specific disease, condition, or disorder, (ii) alleviates, ameliorates, or eliminates one or more symptoms of a specific disease, condition, or disorder, or (iii) prevents or delays the onset of one or more symptoms of a specific disease, condition, or disorder described herein.
  • the amount of the present invention compound that constitutes a “therapeutically effective amount” varies depending on the compound, the disease state and its severity, the mode of administration, and the age of the mammal to be treated, but can be routinely determined by those skilled in the art based on their own knowledge and the present disclosure.
  • FIG1 is a diagram showing the degradation effect of compound 2 on different KRAS in biological experiments.
  • Figure 2 shows the Western Blotting results of compound 135 on KRAS protein degradation in different cell lines in biological experiments.
  • FIG3 is a graph showing the efficacy of compound 135 on a mouse xenograft tumor model in a biological experiment.
  • FIG4 is a graph showing the efficacy of compound 144 on a mouse xenograft tumor model in a biological experiment.
  • Figure 5 shows the Western Blotting results of compound 144 on KRAS protein degradation in different cell lines in biological experiments.
  • DMF N,N-dimethylformamide
  • NIS N-iodosuccinimide
  • THF tetrahydrofuran
  • EA ethyl acetate
  • PE petroleum ether
  • DCM dichloromethane
  • MeOH methanol
  • TBDPSCl tert-butyldiphenylchlorosilane
  • DPPA diphenylphosphoryl azide
  • CDI N,N'-carbonyldiimidazole
  • DIPEA N,N-diisopropylethylamine
  • CataCXium A Pd G3 [n-butyldi(1-adamantyl)phosphine](2-amino-1,1'-biphenyl-2-yl)palladium(II) methanesulfonate
  • LAH/LiAlH 4 lithium aluminum tetrahydride
  • POCl 3 lithium aluminum tetrahydride
  • compound M2-1 (65.00 g) was dissolved in CH 3 CN (82.00 mL), cooled in a water bath, and 4 M hydrogen chloride (dioxane solution (264 mL) was slowly added. The reaction was stirred at room temperature for about 16 hours, and a white solid was precipitated in a suspended state. The reaction mixture was filtered, and the filter cake was rinsed with a small amount of acetonitrile, dried, and the filtrate was discarded.
  • the filter cake was collected and added to a mixture of 700 mL of saturated sodium bicarbonate aqueous solution and 700 mL of ethyl acetate, alkalized, extracted, and separated; the aqueous phase was extracted with 350 mL of ethyl acetate and separated; the ethyl acetate phases were combined, washed with 300 mL of saturated sodium chloride aqueous solution, and separated; the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, the desiccant was removed, and concentrated to obtain the product M2-2 (36.3 g, yield 94.0%).
  • compound M2-2 (36.00 g) was dissolved in acetonitrile (180.00 mL), NIS (66.32 g) and p-toluenesulfonic acid (2.12 g) were added thereto, and the mixture was heated to 70°C under nitrogen protection for reaction.
  • the reaction solution was cooled to 50°C, 900 mL of water was added, and a white solid powder was precipitated.
  • the mixture was slurried for half an hour; filtered, and the filter cake was rinsed with water and dried.
  • compound M2-3 (57.50 g) was dissolved in DMF (22.00 mL), zinc cyanide (32.22 g), tetrakistriphenylphosphine palladium (12.19 g) and powdered Molecular sieves (20.00 mL) were added, and the mixture was heated and kept at 100 °C in a nitrogen atmosphere for about 7 hours. The oil bath was removed, and the mixture was naturally cooled to room temperature and waited for post-treatment. The reaction mixture was filtered with diatomaceous earth as the filter aid, and then dried; the filtrate was collected and concentrated at 60-70 °C to obtain a pale yellow solid crude product.
  • the filter residue was rinsed and dried with 500 mL of ethyl acetate; the rinse liquid was collected, combined with the crude product, and concentrated again until no liquid was distilled out; 700 mL of ethyl acetate was added to dissolve and concentrate the obtained solid crude product, and then 250 mL of saturated sodium chloride was used each time, washed 3 times, and separated.
  • the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated to obtain a pale yellow solid.
  • the filter cake was collected, concentrated in a 45 °C water bath, and then pulled to constant weight with a high vacuum oil pump; the product M2-4 (36.1 g, yield 99.7%) was finally obtained.
  • reaction solution was cooled to below 10°C with an ice-water bath, and then 500 mL of saturated ammonium chloride aqueous solution was added, and a light yellow solid precipitated, and 1000 mL of water was added; then the mixture was transferred to a 5L beaker, and 3000 mL of water was added; stirred for 1 hour, filtered, and drained; the filter cake was collected, placed in a vacuum oven, and dried at 50-55°C to constant weight to obtain the product M2-6 (18.3 g, yield 84.93%).
  • M3-1 (420 mg) was dissolved in 10 mL DCM, and then 3 mL TFA was added and reacted at room temperature for 30 min. 1 M NaOH aqueous solution was added to the reaction solution to free acid. DCM was then used for extraction 3 times, 10 mL each time, the organic phases were combined and dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was distilled under reduced pressure to obtain compound M3 (365 mg).
  • N-tert-Butyloxycarbonyl-3-methyl-3-hydroxypiperidine (1.0 g) was added to a 25 mL single-mouth bottle, 3 mL of acetonitrile was added, and 3 mL of hydrochloric acid (4M/Dioxane) was added at 0°C, and the reaction was carried out at 0°C for 0.5 h. After the reaction was completed, the reaction solution was directly concentrated to obtain intermediate M4 (0.7 g, 99% yield), which was directly used in the next step.
  • potassium carbonate (.78 g) was added to a suspension of compound 1H-1,2,4-triazole-5-carboxylic acid methyl ester (4.00 g) and N-tert-butyloxycarbonyl-3-aminopropyl bromide (7.49 g) in acetonitrile (40 mL), and then the system was placed in an 80°C oil bath and stirred. After reacting for 1 hour, ethyl acetate and water were added to the reaction system for extraction and separation, and the aqueous phase was extracted once with ethyl acetate.
  • M9-1 (152 mg) and M1 (330 mg) were dissolved in 6 mL THF, 6 mL H 2 O, and 6 mL tert-butanol, and then sodium ascorbate (360 mg) and anhydrous copper sulfate (100 mg) were added in sequence, and the mixture was reacted at room temperature for 3 hours. 20.0 mL of water was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with EA 3 times, 20 mL each time. The organic phases were combined, dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated. The organic phases were separated and purified by column chromatography to obtain compound M9-2 (450 mg). ESI-MS m/z: 688 [M+H] + .
  • steps 1 to 3 refers to the synthesis of intermediate M8.
  • the intermediate M2 (500 mg) was added to a 25 mL single-mouth bottle, and the intermediate M4 (275 mg) and N,N-diisopropylethylamine (1.0 g) were added at -40°C, and the reaction was continued for 0.5 h at -40°C.
  • dichloromethane and water were added to the reaction solution for extraction, and the organic phase was collected.
  • the aqueous phase was further extracted with dichloromethane twice, and the organic phases were collected and combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated.
  • tert-butyl 4-(hydroxymethyl)piperidine-1-carboxylate (5.0 g) was dissolved in DCM (50 mL), and then triethylamine (9.68 mL) and p-toluenesulfonyl chloride (5.31 g) were added in sequence. The mixture was reacted at room temperature for 15 h. An appropriate amount of water was added to the reaction solution for quenching. An appropriate amount of ethyl acetate was then added for extraction. The organic phase was collected, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the solvent was evaporated under reduced pressure to obtain 8.02 g of the product, namely compound M14-1, which was directly used in the next step.
  • compound M16-2 (180 mg) was dissolved in 3.0 mL of anhydrous methanol, anhydrous potassium carbonate (167 mg) and dimethyl (1-diazo-2-oxopropyl)phosphonate (174 mg) were added, and the mixture was reacted at room temperature for 3 h. Appropriate amounts of water and ethyl acetate were added to the reaction solution for extraction, and the organic phase was collected, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain compound M16-3 (110 mg), ESI-MS m/z: 194 [M+H-56] + .
  • compound M16-3 (110 mg), 2S,4R-1-(S)-2-azido-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-(S)-1-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide (229 mg), anhydrous copper sulfate (63.3 mg) and sodium ascorbate (227 mg) were dissolved in 4.0 mL of tert-butyl alcohol, 4.0 mL of water and 4.0 mL of THF.
  • Zinc powder (880 mg) and 80 mL of anhydrous tetrahydrofuran were added into a 250 mL three-necked flask under nitrogen protection.
  • Dibromomethane 200 mg was added at room temperature. The temperature was raised to 65 °C for reaction for 1 h. The temperature was lowered to room temperature and TMSCl (115 mg) was added. The temperature was reacted at room temperature for 1 h.
  • 3-iodoazetidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (3.0 g) was added. The temperature was reacted at 40 °C for 1 h to obtain M24-1 which was sealed for later use.
  • tert-butyl 4-(hydroxymethyl)piperidine-1-carboxylate (5.0 g) was dissolved in DCM (50 mL), and then triethylamine (9.68 mL) and p-toluenesulfonyl chloride (5.31 g) were added in sequence. The mixture was reacted at room temperature for 15 h. An appropriate amount of water was added to the reaction solution for quenching. An appropriate amount of ethyl acetate was then added for extraction. The organic phase was collected, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain 8.02 g of the product, namely compound M26-1, which was directly used in the next step.
  • M35-2 (200.0 mg), M29-2 (2S, 4R) -4-hydroxy-N- ((S) -1- (4- (4-methylthiazol-5-yl) phenyl) ethyl) pyrrolidine-2-carboxamide (218.4 mg) and HATU (250.5 mg) were dissolved in DMF (5 mL), and DIPEA (0.45 mL) was added. The mixture was reacted at room temperature for 10 minutes. The reaction was monitored by LCMS.
  • M37-2 (198 mg) and 4 M hydrogen chloride-dioxane solution (5 mL) were added to a 50 mL flask, reacted at room temperature for 1 hour, and desolventized under reduced pressure to obtain about 200 mg of crude M37.
  • compound M38-2 (180 mg) was dissolved in 3.0 mL of anhydrous methanol, and anhydrous potassium carbonate (167 mg) and dimethyl (1-diazo-2-oxopropyl)phosphonate (174 mg) were added, and the mixture was reacted at room temperature for 3 h. Appropriate amounts of water and ethyl acetate were added to the reaction solution for extraction, and the organic phase was collected, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain compound M38-3 (110 mg), ESI-MS m/z: 194 [M+H-56] + .
  • the organic phases were combined, washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated.
  • the product was separated by column chromatography (7% ammonia MeOH/DCM) to obtain a light yellow solid M44 (0.92 g) ESI-MS m/z: 473.20 [M+H] + .
  • 73-3 (300 mg) was added to a 50 mL single-mouth bottle, 3 mL of tetrahydrofuran, 3 mL of tert-butyl alcohol and 3 mL of water, M29 (269 mg), copper sulfate (95 mg), sodium ascorbate (338 mg) were added, and the mixture was reacted at room temperature for 30 min.
  • the reaction solution was diluted with water, extracted twice with EA, the organic phases were collected and combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and the concentrate was separated and purified by column chromatography to obtain compound 73-4 (280 mg).
  • 1,1-cyclopropane dimethanol 150 mg
  • Cs 2 CO 3 (639 mg)
  • DABCO 22 mg
  • a DMF 5 mL
  • EA and water were added to the reaction system, and the aqueous phase was extracted twice with EA, and the organic phases were combined, washed three times with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated.
  • the concentrate was purified by column chromatography (0-6% MeOH/DCM) to obtain compound 89-2 (220 mg).
  • 92-8 (100 mg) was added to a 10 mL single-mouth bottle, 2 mL of DCM and 1 mL of trifluoroacetic acid were added, and the mixture was reacted at room temperature for 1 h. After being spin-dried, 92 (18.3 mg) was obtained by pre-HPLC purification. ESI-MS m/z: 585.3 1/2 [M+2H] + .
  • Example 93 Synthesis of Compound (2S,4R)-1-((S)-2-(4-((1-((1-((7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoro-4-((R)-3-hydroxy-3-methylpiperidin-1-yl)pyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl)piperidin-4-yl)oxy)methyl)phenyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-3-methylbutanoyl)-4-hydroxy-N-(((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 100 Synthesis of Compound (2S,4R)-1-((R)-2-(3-((1-(1-((((7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoro-4-(((R-)-3-hydroxy-3-methylpiperidin-1-yl)pyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl)-4-fluoropiperidin-4-yl)methoxy)isoxazol-5-yl)-3-methylbutanoyl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 1 Synthesis of Compound 104-1
  • Example 105 Synthesis of Compound (2S,4R)-1-(R)-2-(3-(7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoro-4-((R)-3-hydroxy-3-methylpiperidin-1-yl)pyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)isoxazol-5-yl)-3-methylbutanoyl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 119 Synthesis of Compound (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(1-((7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoro-4-((R)-3-hydroxy-3-methylpiperidin-1-yl)pyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl)piperidin-4-yl)phenyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-3,3-dimethylbutanoyl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 120 Synthesis of Compound (2S,4R)-1-((S)-2-(5-(((3S,7aS)-7a-(((7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoro-4-((R)-3-hydroxy-3-methylpiperidin-1-yl)pyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)-6-methylenehexahydro-1H-pyrrolidin-3-yl)methoxy)methyl ester)-1H-1-1,2,3-triazol-1-yl)-3-methylbutanoyl)-4-hydroxy-N-(((S,-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxylic acid hydroxyoxime

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Abstract

一种靶向KRAS蛋白降解剂的化合物及其应用，属于医药技术领域。提供了一种具有F-L-M结构的化合物，或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，所述F为KRAS蛋白结合片段；所述L为连接F和M的连接单元；所述M为VHL结合片段；所述化合物可用于治疗KRAS突变或扩增引起的疾病。

Description

一种靶向泛KRAS蛋白降解剂的化合物及其应用 技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种靶向KRAS蛋白降解剂的化合物及其应用。
背景技术
PROTAC是一种异双功能分子，分子的一端是结合靶蛋白的配体，另一端是E3连接酶的配体，中间通过合适的链相连。PROTAC降解靶蛋白是通过泛素蛋白酶体系统(UPS)实现的，其大致过程如下，PROTAC分子结合靶蛋白(POI)和E3连接酶，形成三元复合物，给靶蛋白标记上泛素分子，泛素化的蛋白被细胞内的蛋白酶体26S识别并降解。
相比传统的小分子和抗体等都是通过“占据驱动”的作用模式抑制靶蛋白的功能，发挥治疗疾病的作用，这种作用模式需要抑制剂或单抗具备较高的浓度才能够占据靶点的活性位点，阻断下游信号通路的转导。而PROTAC是“事件驱动”，不是影响蛋白的功能，而是介导致病靶蛋白被降解。只要PROTAC介导三元复合物的形成并给靶蛋白打上泛素化的标签，理论上是可以循环反复使用的，因此催化剂量即可发挥作用。其具有作用范围更广、活性更高、可靶向“不可成药”靶点；提高选择性、活性和安全性；可以克服药物的耐药性等特点。
KRAS的活性因与GDP或GTP的结合转换而切换，与GDP结合时处于失活的状态，与GTP结合时则激活。发生突变的KRAS蛋白，GAP进入GTP受限从而阻止水解，形成持续激活的GTP结合状态。由于突变型KRAS对三磷酸鸟苷(GTP)具有较高的亲和力，又存在催化位点小、蛋白表面光滑等难以靶向的因素，使小分子抑制剂的开发一直备受挑战，造就了KRAS的“不可成药”性。一方面，KRAS以皮摩尔浓度的亲和力与GDP和GTP结合，严重阻碍了开发核苷酸竞争性抑制剂；另一方面KRAS蛋白缺少理想的小分子结合口袋，难以设计高亲和力变构抑制剂。
RAS突变引起的癌症占所有人类癌症的25％-30％。而其中KRAS突变占3种RAS突变中的86％。在所有KRAS突变中，又存在着G12D(35％)、G12V(29％)、G12C(21％)、G13D(6.7％)、G12R(4.3％)、G12A(4.1％)等多种突变。如果能同时靶向这些不同的KRAS突变，在极大的满足临床需求的同时将具有巨大的商业价值。
然而当下的KRAS抑制剂在临床上面临着药效有限，极易耐药的困境，如能结合PROTAC的抗耐药，高药效等特性，开发出新型的泛KRAS PROTAC降解剂药物，用于治疗KRAS突变或扩增引起的疾病，将具有极大的社会意义和商业价值。
发明内容
本发明提供了一种新型的泛KRAS PROTAC降解剂，可用于治疗KRAS突变或扩增引起的疾病。
一方面，本发明提供了一种具有F-L-M结构的化合物，或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其中：
所述F为通式(A)所示的KRAS蛋白结合片段；
所述X选自-O-或
所述代表独立地选自单键或双键；
所述X4为CR8、C(R8)2、O、N或NR8；R8各自独立选自H、羟基、氧代基、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-S-C1-6烷基、-C0-3亚烷基-C2-4烯基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基或C3-14环烷基；所述C3-14环烷基、C1-6烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
所述X5选自C、CH或N；
所述X6选自CR14、C(R14)2、O、N或NR14；R14各自独立选自H、羟基、氧代基、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-S-C1-6烷基、-C0-3亚烷基-C2-4烯基、C1-6烷氧基、C1- 6卤代烷氧基或C3-14环烷基；所述C3-14环烷基、C1-6烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
所述R6选自不存在、C3-14环烷基或3-14元杂环基；所述C3-14环烷基或3-14元杂环基任选进一步被一个或多个Ra取代；
所述R9选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、C2-6烯基、C3-6环烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6环烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
所述R10选自不存在、-O-或-NR11-；R11选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基或C1-6氨基烷基；
所述R7选自C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
所述K选自C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为单环、稠环、螺环或桥环，任选地进一步被一个或多个Ra取代，且所述3-14元杂环基不为
所述m，n各自独立选自0，1，2，3，4或5；
所述L为连接F和M的连接单元；
所述L选自
其中，
所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
所述Y1、Y2各自独立选自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N杂环基、C1-6亚烷基、羰基、乙炔基或C3-6环烷基；
所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4；
所述M选自通式(III)或(IV)所示的VHL结合片段；
所述X1选自C、CH或N；
所述X2选自C、CH或N；
所述X3选自N、NH、O或S；
所述R1选自H、C1-6烷基、卤素或氰基，优选为甲基、乙基、F或氰基；
所述R2选自H或C1-6烷基，优选为H或甲基；
所述R3选自H、C1-6烷基或C1-6羟基烷基或-(CH2)n-CO-NH-(CH2)n-CH3，所述n选自0，1，2或3，所述R3优选为H、甲基、羟基甲基、或-CH2-CO-NH-CH3；
所述R4选自或-NH-；
所述R5选自H、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
所述R12选自
所述Ra各自独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、-C0-3亚烷基-ORb、-OC(＝O)C1-6烷基、-C0-3亚烷基-SRb、-C0-3亚烷基-N(Rb)2、-C0-3亚烷基-S(＝O)Rb、-C0-3亚烷基-S(＝O)2Rb、-C0-3亚烷基-SRb、-C0-3亚烷基-S(Rb)5、-C0-3亚烷基-C(＝O)Rb、-C0-3亚烷基-C(＝O)ORb、-C0-3亚烷基-C(＝O)N(Rb)2、C2-6烯基、C2- 6炔基、-C0-3亚烷基-C3-14环烷基、-C0-3亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-3亚烷基-C6-18芳基或-C0- 3亚烷基-(5-18元杂芳基)，所述C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0-3亚烷基-C3-14环烷基、-C0-3亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-3亚烷基-C6-18芳基或-C0-3亚烷基-(5-18元杂芳基)任选地进一步被一个或多个Rb取代；
每个Rb各自独立地为H、卤素、羟基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个卤素、C1-6烷基或C1-6卤代烷基所取代；或者一个原子上的两个Rb与其共同连接的原子形成C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个卤素、氨基、羟基、氰基、C1- 6烷基、C3-6环烷基或C1-6卤代烷基取代。
在本发明的一些实施方式中，所述L选自
其中，
所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4；
所述M选自通式(V)或(IV)所示的VHL结合片段；
所述X1选自C、CH或N；
所述X2选自C、CH或N；
所述X3选自N、NH、O或S；
所述R1选自H、C1-6烷基、卤素或氰基，优选为甲基、乙基、F或氰基；
所述R2选自H或C1-6烷基，优选为H或甲基；
所述R3选自H、C1-6烷基或C1-6羟基烷基，优选为H、甲基或羟基甲基；
所述R4选自或-NH-；
所述R12选自
在本发明的一些实施方式中，所述L选自
所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4；
所述M选自通式(V)或(IV)所示的VHL结合片段；
所述X1选自C、CH或N；
所述X2选自C、CH或N；
所述X3选自N、NH、O或S；
所述R1选自H、C1-6烷基、卤素或氰基，优选为甲基、乙基、F或氰基；
所述R2选自H或C1-6烷基，优选为H或甲基；
所述R3选自H、C1-6烷基或C1-6羟基烷基，优选为H、甲基或羟基甲基；
所述R4选自或-NH-；
所述R12选自
所述Ra独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、-C0-3亚烷基-ORb、-OC(＝O)C1-6烷基、-C0-3亚烷基-SRb、-C0-3亚烷基-N(Rb)2、-C0-3亚烷基-S(＝O)Rb、-C0-3亚烷基-S(＝O)2Rb、-C0-3亚烷基-SRb、-C0-3亚烷基-S(Rb)5、-C0-3亚烷基-C(＝O)Rb、-C0-3亚烷基-C(＝O)ORb、-C0-3亚烷基-C(＝O)N(Rb)2、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0- 3亚烷基-C3-14环烷基、-C0-3亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-3亚烷基-C6-18芳基或-C0-3亚烷基-(5- 18元杂芳基)，所述C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0-3亚烷基-C3-14环烷基、-C0-3亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-3亚烷基-C6-18芳基或-C0-3亚烷基-(5-18元杂芳基)任选地进一步被一个或多个Rb取代；
每个Rb独立地为H、卤素、羟基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个卤素、C1-6烷基或C1-6卤代烷基所取代；或者一个原子上的两个Rb与其共同连接的原子形成C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个卤素、氨基、羟基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基或C1-6卤代烷基取代。
在本发明的一些实施方式中，所述F为通式(I)或(II)所示的KRAS蛋白结合片段；
所述代表独立地选自单键或双键；
所述X4为CR8、C(R8)2、O、N或NR8；R8各自独立选自H、羟基、氧代基、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-S-C1-6烷基、-C0-3亚烷基-C2-4烯基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基或C3-14环烷基；所述C3-14环烷基、C1-6烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
所述X5选自C、CH或N；
所述X6选自CR14、C(R14)2、O、N或NR14；R14各自独立选自H、羟基、氧代基、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-S-C1-6烷基、-C0-3亚烷基-C2-4烯基、C1-6烷氧基、C1- 6卤代烷氧基或C3-14环烷基；所述C3-14环烷基、C1-6烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
所述R6选自不存在、C3-14环烷基或3-14元杂环基；所述C3-14环烷基或3-14元杂环基任选进一步被一个或多个Ra取代；
所述R9选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、C2-6烯基、C3-6环烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6环烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
所述R10选自不存在、-O-或-NR11-；R11选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基或C1-6氨基烷基；
所述R7选自C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
所述K选自C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为单环、 稠环、螺环或桥环，任选地进一步被一个或多个Ra取代，且所述3-14元杂环基不为
所述m，n各自独立选自0，1，2，3，4或5。
在本发明的一些实施方式中，所述R4选自或-NH-。
在本发明的一些实施方式中，所述R4选自
在本发明的一些实施方式中，所述K选自C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为单环，且任选地进一步被一个或多个Ra取代。
进一步地，所述K选自
在本发明的一些实施方式中，K为C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为螺环，且任选地进一步被一个或多个Ra取代。
进一步地，所述K选自
在本发明的一些实施方式中，所述K为C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为稠环，且任选地进一步被一个或多个Ra取代。
进一步地，所述K选自
在本发明的一些实施方式中，所述K为C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为桥环，且任选地进一步被一个或多个Ra取代。
进一步地，所述K选自
在本发明的一些实施方式中，所述K选自
在本发明的一些实施方式中，所述R7选自C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个Ra取代；所述Ra各自独立地选自H、卤素、羟基、氨基、氰基、C2-6炔基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C2-6烯烃。
在本发明的一些实施方式中，所述R7选自 所述 任选地进一步被一个或多个所Ra取代；所述Ra各自独立地选自H、卤素、羟基、氨基、氰基、C2-6炔基、C1- 6烷基、C1-6卤代烷基或C2-6烯烃。
在本发明的一些实施方式中，所述R7选自
在本发明的一些实施方式中，所述F选自
其中，所述R7，R9，R8，R11，R14的定义如上述通式(I)或(II)中所定义；所述K 选自
在本发明的一些实施方式中，所述K选自
在本发明的一些实施方式中，所述F选自

在本发明的一些实施方式中，所述F选自
在本发明的一些实施方式中，所述L中的G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基任选地进一步被卤素或C1-3烷基取代；
所述C6-14芳基优选为
所述5-14元杂芳基优选自
所述3-14元杂环基优选自
所述C3-14环烷基优选自
在本发明的一些实施方式中，所述L中的G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基任选地进一步被卤素或C1-3烷基取代；
所述C6-14芳基优选为
所述5-14元杂芳基优选自
所述3-14元杂环基优选自
所述C3-14环烷基优选自
在本发明的一些实施方式中，所述L中的G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被卤素或C1-3烷基取代；
所述C6-14芳基优选为
所述5-14元杂芳基优选自
所述3-14元杂环基优选自
在本发明的一些实施方式中，所述L选自
其中，
所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；所述Ra独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C1-6烷氧基。
所述Y1、Y2各自独立选自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N杂环基、C1-6亚烷基、羰基、乙炔基或C3-6环烷基；
所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4。
在本发明的一些实施方式中，所述L选自如下所示结构：
其中，n1、n2各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2或3。
在本发明的一些实施方式中，所述L选自如下所示结构：

在本发明的一些实施方式中，所述M选自
在本发明的一些实施方式中，所述M选自
在本发明的一些实施方式中，所述L选自
其中，所述G环选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；所述Ra各 自独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C1-6烷氧基；
所述D环为5-6元含N杂芳基，优选为
所述Y1、Y2各自独立选自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N杂环基、C1-6亚烷基、羰基、乙炔基或C3-6环烷基；
所述n1、n2各自独立为0，1，2，3或4。
在本发明的一些实施方式中，所述L选自
在本发明的一些实施方式中，所述F选自
所述L选自如下所示结构：
其中，
所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
所述Y1、Y2各自独立选自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N杂环基、C1-6亚烷基、羰基、乙炔基或C3-6环烷基；
所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4；
所述M选自通式(III)所示的VHL结合片段；
其中，所述X1选自C、CH或N；
所述X2选自C、CH或N；
所述X3选自N、NH、O或S；
所述R1选自H、C1-6烷基、卤素或氰基，优选为甲基、乙基、F或氰基；
所述R2选自H或C1-6烷基，优选为H或甲基；
所述R3选自H、C1-6烷基、C1-6羟基烷基或-(CH2)n-CO-NH-(CH2)n-CH3，所述n选自0，1，2或3，所述R3优选为H、甲基、羟基甲基、或-CH2-CO-NH-CH3；
所述R4选自或-NH-；
所述R5选自H、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
所述Ra独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C1-6烷氧基。
在本发明的一些实施方式中，所述F-L-M结构的化合物选自以下化合物：













本发明通过大量的研究发现，本发明化合物的连接链对于化合物的KRAS的降解能力以及细胞增殖抑制活性都有很大的影响。当在连接链中，靠近VHL配体一侧，加入5-6元含N杂芳基，特别是吡嗪环和吡啶环，将会大幅提升化合物对于KRAS的降解能力，同时增加了化合物细胞增殖抑制活性。我们推测，含N杂芳环所处空间位置特殊，会与VHL蛋白存在氢键等相互作用，增加了化合物与VHL的结合力，从而增加了化合物对于KRAS蛋白的降解能力。研究表明，将该含N杂芳环直接链接在VHL配体上，是增加化合物降解能力的关键因素。另外，该类带有含N杂芳环化合物体内药代性质优秀，成药性高。
另一方面本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有本发明上述任一具有F-L-M结构的通式所示的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明进一步提供上述任一具有F-L-M结构的通式所示的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备用于调节受试者体内的KRAS蛋白泛素化和降解的药物中的用途。
本发明进一步提供上述任一具有F-L-M结构通式所示的化合物或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备用于治疗和/或预防由KRAS介导的或依赖性的病症的药物中的用途，其中由KRAS介导的疾病优选选自肿瘤。
在某些实施方式中，所述疾病选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、肝细胞瘤、头颈部肿瘤、肝胆管细胞癌、骨髓增生异常综合征、恶性胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、徐旺氏细胞瘤、肺鳞状细胞癌、苔藓样角化病、滑膜肉瘤、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
除非另有说明，所述结构通式中使用的一般化学术语具有通常的含义。
例如，除非另有说明，本发明所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
本发明中基团的连接顺序没有特别的限制下，可以自左到右的连接，也可以自右到左的连接。
在本发明中，除非另有说明，“烷基”包括直链或支链的一价饱和烃基。例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基、2-甲基戊基等。类似的，“C1-6烷基”中的“1-6”是指包含有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链形式排列的基团。
术语“烷氧基”是指前述的直链或支链烷基的氧醚形式，即-O-烷基。
术语“亚烷基”是指二价烷基连接基团。亚烷基在形式上是指两个C-H键替换为亚烷基与化合物其余部分的连接点的烷烃。类似的，C1-3亚烷基中的“C1-3”是指含有1、2或3个碳原子的亚烷基，包括但不限于亚甲基、1,2-亚乙基、1,3-亚丙基或1,2-亚异丙基。
术语“卤代烷基”是指一个或多个H已经被卤素原子置换的烷基。
术语“氧代”或“氧代基”是指呈二价取代基形式的氧原子，其与C连接时形成羰基，其与杂原子连接时形成亚砜基或砜基或N-氧化物基团。
本发明中，除另有说明，术语“芳香环”、“芳香族环”或“芳香族杂环”即为具有芳香族特征(具有(4n+2)个非定域π电子，其中n为整数)的多不饱和环的碳环或杂环。
术语“芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的包括碳环的原子的单环或稠环芳香基团。优选C6-18芳基，更优选芳基为C6-10的单环或双环的芳香环基团。优选为苯基、萘基；最优选为萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实例包括但不限于苯并环戊基。
术语“杂环基”是指具有至少一个含有杂原子的环化烷基或环化烯基的环系统，所述杂原子选自N、O和/或S。所述杂环基可以包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠合环、螺环、桥环等)。杂环基可以经由成环碳原子或成环杂原子与化合物其他部分相连接。优选3-14元杂环基，3-14元杂环基中的“3-14元”是指含有3-14个C、N、O或S的成环原子组成的杂环基；其中氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，并且氮杂原子可以选择性地被季铵化。这些杂环基的实例包括但不限于 氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧代哌嗪基、氧代哌啶基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢恶唑基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜基和四氢恶二唑基。所述杂环基可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。
术语“杂芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指具有至少一个杂原子的单环或多环(例如具有2、3或4个稠合环、螺环、桥环等)芳香族杂环，所述杂原子选自N、O和/或S，并且其中所述氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，所述氮杂原子可以选择性地被季铵化。优选5-18元杂芳基，其中5-18元杂芳基中的“5-18元”是指含有5-18个C、N、O或S的成环原子组成的杂芳基。更优选的是5-10元杂芳基；更更优选的是5-6元杂芳基。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并异恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基腺嘌呤、喹啉基或异喹啉基。所述杂芳基可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。
术语“环烷基”是指具有至少一个环化烷基的环系统。优选C3-14环烷基，其中的“C3-14” 是指环烷基可以具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个成环原子。环烷基可以包括单环和多环(例如具有2、3或4个稠合环、螺环、桥环等)。一些实施例中环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基等；所述环烷基还可以稠合于芳基、杂环基或杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基。
术语“取代的”是指基团中的一个或多个氢原子分别被相同的或者不同的取代基所取代。典型的取代基包括但不限于卤素(F、Cl、Br或I)、C1-8烷基、C3-12环烷基、-OR1、-SR1、＝O、＝S、-C(O)R1、-C(S)R1、＝NR1、-C(O)OR1、-C(S)OR1、-NR1R2、-C(O)NR1R2、氰基、硝基、-S(O)2R1、-O-S(O2)OR1、-O-S(O)2R1、-OP(O)(OR1)(OR2)；其中R1和R2独立地选自-H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-6环烷基。在一些实施例中，取代基独立地选自包含-F、-Cl、-Br、-I、-OH、三氟甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、-SCH3、-SC2H5、甲醛基、-C(OCH3)、氰基、硝基、-CF3、-OCF3、氨基、二甲基氨基、甲硫基、磺酰基和乙酰基的基团。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH2)0-表示该连接基团为键。
术语“药用盐”是指从药学上可接受的无毒的碱或酸制备的盐。
当本发明提供的化合物是酸时，可以从药学上可接受的无毒的碱，包括无机碱和有机碱，方便地制得其相应的盐。从无机碱衍生的盐包括铝、铵、钙、铜(高价和低价)、三价铁、亚铁、锂、镁、锰(高价和低价)、钾、钠、锌之类的盐。特别优选铵、钙、镁、钾和钠的盐。能够衍生成药学上可接受的盐的无毒有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺，也包括环胺及含有取代基的胺，如天然存在的和合成的含取代基的胺。能够成盐的其他药学上可接受的无毒有机碱，包括离子交换树脂以及精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N',N'-二苄乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、异丙胺、赖氨酸，甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、氯普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。
当本发明提供的化合物是碱时，可以从药学上可接受的无毒的酸，包括无机酸和有机酸，方便制得其相应的盐。这样的酸包括，如，醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、草酸、丙酸、乙醇酸、氢碘酸、高氯酸、环己氨磺酸、水杨酸、2-萘磺酸、糖精酸、三氟乙酸、酒石酸和对甲苯磺酸等。较优地，柠檬酸、氢溴酸、甲酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。更优地，甲酸和盐酸。
本发明化合物的药物前体包含在本发明的保护范围内。通常，所述药物前体是指很容易在体内转化成所需化合物的功能性衍生物。例如，本申请化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其它衍生物，其在向受体施用后能够直接或间接地提供本申请的化合物或其具有药学活性的代谢物或残基。
本发明所述化合物可能含有一个或多个不对称中心，并可能由此产生非对映异构体和光学异构体。本发明包括所有可能的非对映异构体及其外消旋混合物、其基本上纯的拆分对映异构体、所有可能的几何异构体及其药用盐。
当式(I)所示化合物存在互变异构体时，除非特别声明，本发明包括任何可能的互变异构体和其药用盐，及它们的混合物。
术语“药物组合物”是指一种或多种本申请的化合物或其药用盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本申请的化合物。
在本发明中，“一”、“一个”、“该”、“至少一个”和“一个或多个”可互换使用。因此，例如，包含“一种”药学上可接受的辅料组成的混合物可以被解释为表示该药物组合物包括“一种或多种”药学上可接受的辅料。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
本发明的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本发明化合物或其药用盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
术语“治疗”一般是指获得需要的药理和/或生理效应。该效应根据部分或完全稳定或治愈疾病和/或由于疾病产生的副作用，可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖了对患者疾病的任何治疗，包括：(a)抑制疾病的症状，即阻止其发展；或(b)缓解疾病的症状，即，导致疾病或症状退化。
术语“有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本申请化合物的用量。构成“治疗有效量”的本申请化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
附图说明
图1为生物学实验中化合物2对不同KRAS降解作用图。
图2为生物学实验中化合物135在不同细胞系上对KRAS蛋白降解Western Blotting实验结果。
图3为生物学实验中化合物135对小鼠异体移植瘤模型的药效考察图。
图4为生物学实验中化合物144对小鼠异体移植瘤模型的药效考察图。
图5为生物学实验中化合物144在不同细胞系上对KRAS蛋白降解Western Blotting实验结果。
具体实施方式
为使上述内容更清楚、明确，本发明将用以下实施例来进一步阐述本发明的技术方案。以下实施例仅用于说明本发明的具体实施方式，以使本领域的技术人员能够理解本发明，但不用于限制本发明的保护范围。本发明的具体实施方式中，未作特别说明的技术手段或方法等为本领域的常规技术手段或方法等。
除非另有说明，本发明所有的温度均指摄氏度。
实施例中使用了下列缩略语：
DMF：N,N-二甲基甲酰胺；
NIS：N-碘代丁二酰亚胺；
THF：四氢呋喃；
EA：乙酸乙酯；
PE：石油醚；
DCM：二氯甲烷；
MeOH：甲醇；
TBDPSCl：叔丁基二苯基氯硅烷；
DPPA：叠氮磷酸二苯酯；
CDI：N,N'-羰基二咪唑；
DIPEA：N,N-二异丙基乙胺；
CataCXium A Pd G3：甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)；
LAH/LiAlH4：四氢铝锂；
POCl3：三氯氧磷；
DMSO：二甲亚砜；
DMF-DMA：N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛；
TosMIC：对甲基苯磺酰甲基异腈；
DCE：1,2-二氯乙烷；
DMAP：4-二甲氨基吡啶；
PhN(Tf)2：苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺；
PBS：磷酸缓冲液；
Selectfluor:1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)
TsOH:对甲基苯磺酸
(Boc)2O：二碳酸二叔丁酯
TMSCl:三甲基氯硅烷
Pd2(dba)3:三二亚苄基丙酮二钯
HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
TFA：三氟乙酸
DABCO：三乙烯二胺
DIBAL-H：二异丁基氢化铝
TMSCN：三甲基氰硅烷
TMSOTf：三氟甲磺酸三甲基硅酯
LiHMDS：双三甲基硅基胺基锂
NaBH3CN:氰基硼氢化钠
TBAF:四丁基氟化铵
NADPH：还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
UDPGA：尿苷二磷酸葡萄糖醛酸
UGT：尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶
TEA:三乙胺
中间体M1的合成：
将(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(1g)溶于THF(10mL)和乙腈(10mL)中，加入TEA(1.88mL)，冰浴下滴加2-叠氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐(0.64g)的乙腈(2mL)溶液，冰浴搅拌2h。向反应液中加入20.0mL水，用EA萃取3次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得中间体M1(0.8g)。
ESI-MS m/z:471[M+H]+。
中间体M2的合成：
步骤1：化合物M2-1的合成
在室温下，依次加入2-氯-3-氟-吡啶-4-羧酸(54.00g)，甲苯(390.00mL)，叔丁醇(390.00mL)，三乙胺(128.27mL)，粉末状4A分子筛(90.00mL)(预活化)，氮气保护下，保温回流半小时(内温87℃)。再自然冷却至室温，然后加入DPPA(99.44mL)，升温至回流，保温反应5小时。将反应混合物冷却至40℃以下，然后加入EA500mL稀释；继续冷却至室温，硅藻土助滤，将加入的分子筛过滤除去；并用EA 1500mL多次漂洗滤渣、抽干；收集滤液，依次用水700mL，饱和食盐水700mL洗涤、分液；无水硫酸钠干燥有机相；过滤，除干燥剂，浓缩，浓缩物经柱层析分离纯化(PE/EA＝30:1～20:1)，浓缩洗脱液，最终得到产物M2-1(68.2g，产率89.88％)。
ESI-MS m/z:247.1[M+H]+。
步骤2：化合物M2-2的合成
在室温下，将化合物M2-1(65.00g)溶于CH3CN(82.00mL)中，水浴冷却，慢慢加入4M氯化氢(二氧六环溶液(264mL)，室温搅拌反应约16小时，白色固体析出，呈悬浮态。将反应混合物过滤，并用乙腈少量漂洗滤饼，抽干，丢弃滤液。收集滤饼，加入到700mL饱和碳酸氢钠水溶液和700mL乙酸乙酯的混合物中，碱化，萃取、分液；水相再用乙酸乙酯350mL萃取，分液；合并乙酸乙酯相，加入饱和氯化钠水溶液300mL洗涤、分液；无水硫酸钠干燥有机相，过滤，除干燥剂，浓缩得到产物M2-2(36.3g，产率94.0％)。
ESI-MS m/z:147.1[M+H]+。
步骤3：化合物M2-3的合成
在室温下，将化合物M2-2(36.00g)溶于乙腈(180.00mL)中，NIS(66.32g)和对甲苯磺酸(2.12g)加入其中，氮气保护下，加热保温70℃反应。反应液冷却至50℃，加入水900mL，有粉白色固体粉末析出，打浆半小时；过滤，并用水漂洗滤饼，抽干。收集滤饼，加入乙酸乙酯1200mL溶解完全，然后依次用饱和亚硫酸钠水溶液350mL，洗涤两次，再用饱和食盐水350mL洗涤、分液，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，浓缩，得到产物M2-3(63.2g，产率94.43％)。
ESI-MS m/z:272.9[M+H]+。
步骤4：化合物M2-4的合成
在室温下，将化合物M2-3(57.50g)溶于DMF(22.00mL)中，氰化锌(32.22g)、四三苯基膦钯(12.19g)和粉末状分子筛(20.00mL)加入其中，在氮气氛围中，加热保温100℃反应约7小时。撤去油浴，自然冷却至室温，等待后处理。硅藻土助滤，将反应混合物过滤，抽干；收集滤液，60～70℃浓缩，得到淡黄色固体粗品。滤渣用乙酸乙酯500mL漂洗抽干；收集漂洗液，合并到粗品中，再次浓缩至无液体被蒸馏出；加入乙酸乙酯700mL溶解浓缩所得到固体粗品，然后用每次用饱和氯化钠250mL，洗涤3次，分液。无水硫酸钠干燥有机相，过滤，浓缩得到淡黄色固体，加入PE/EA＝3/1混合物160mL，打浆半小时，过滤、抽干。收集滤饼，45℃水浴，浓缩，再高真空油泵抽拉至恒重；最终得到产物M2-4(36.1g，产率99.7％)。
ESI-MS m/z:172.0[M+H]+。
步骤5：化合物M2-5的合成
在室温下，500mL的单口烧瓶中，加入浓硫酸(61.37mL)，冰水浴冷却至10℃以下，分批加入化合物M2-4(39.30g)，加毕，搅拌10分钟，在氮气氛围中，用油浴保温60℃，反应约1小时。反应液冷却至室温，然后小心地加入到1100mL的冰水混合物中，稀释淬灭，有少量黄色固体析出。搅拌10分钟后，过滤；收集滤饼，用50mL饱和碳酸氢钠水溶液，打浆20分钟，再次过滤，收集两次滤液，合并；然后慢慢加入碳酸钠固体，调pH约等于7，有类白色固体析出。搅拌半小时，过滤、抽干；每次用水100mL漂洗滤饼、抽干，共漂洗2次。收集滤饼，放入真空烘箱中，55℃烘干至恒重得到产物M2-5(33.6g，产率77.37％)。ESI-MS m/z:190.0[M+H]+。
步骤6：化合物M2-6的合成
在室温下，加入四氢呋喃(470.00mL)，氮气置换后，微氮气流保护下，加入氢化钠(10.00g)，用油浴加热，保温40～45℃，搅拌15分钟；然后分批加入化合物M2-5(18.95g)，加毕，保温机械搅拌20分钟后，然后小心地分批加入CDI(24.31g)，加毕，搅拌15分钟后，油浴加热升温，保温回流反应。反应液用冰水浴，冷却至10℃以下，然后加入饱和氯化铵水溶液500mL，有浅黄色固体析出，加入水1000mL；然后转移至5L烧杯中，补加水3000mL；搅拌1小时，过滤，抽干；收集滤饼，放入真空烘箱中，50～55℃干燥至恒重得到产物M2-6(18.3g，产率84.93％)。
ESI-MS m/z:216.0[M+H]+。
步骤7：化合物M2的合成
在室温下，将化合物M2-6(18.00g)和DIPEA(36.00mL)溶于POCl3(180.00mL)中，氮气氛围下，加热保温100℃反应约2.5小时。减压浓缩除去三氯氧磷，并用DCM 100mL带2次；用400mL二氯甲烷溶解浓缩残留物，然后滴加入到500mL的饱和碳酸氢钠水溶液中，用冰水冷却；搅拌15分钟后，分液；水相，再用二氯甲烷300mL萃取、分液；合并二氯甲烷相，用饱和氯化钠水溶液300mL洗涤、分液；无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，浓缩物经硅胶柱纯化(PE/EA＝90/10～75/25)得到产物M2(10.95g，产率51.94％)。
ESI-MS m/z:251.9[M+H]+。
中间体M3的合成：
步骤1：化合物M3-1的合成
将4-乙炔基哌啶-1-羧酸叔丁酯(147mg)，4-(1-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(330mg)溶于6mL THF，6mL H2O，6mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(360mg)和无水硫酸铜(100mg)，室温反应3小时。向反应液中加入20.0mL水，用EA萃取3次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得化合物M3-1(420mg)。
ESI-MS m/z:680[M+H]+。
步骤2：化合物M3的合成
将M3-1(420mg)溶于10mL DCM中，然后加入3mL TFA，室温反应30min。向反应液中加入1M NaOH水溶液游离酸。再用DCM萃取3次，每次10mL，合并有机相并无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏得到化合物M3(365mg)。
ESI-MS m/z:580[M+H]+。
中间体M4的合成：
N-叔丁氧羰基-3-甲基-3-羟基哌啶(1.0g)加入到25mL单口瓶中，加入3mL乙腈，0℃条件下加入3mL盐酸(4M/Dioxane)，0℃下反应0.5h。反应结束后，将反应液直接浓缩即可得到中间体M4(0.7g,99％产率)，直接用于下一步。
中间体M5的合成：
步骤1：化合物M5-1的合成
((2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅烷(1.0g)加入到50mL单口瓶中，加入6mL DMF，然后加入氟化铯(5.9g)，室温搅拌反应1h。TLC监测原料反应完全，将反应液缓慢滴加到水(20mL)中，有白色固体析出，过滤，收集滤饼，烘干得到0.65g白色固体，即化合物M5-1。
步骤2：化合物M5的合成
化合物M5-1(0.65g)加入到50mL单口瓶中，加入6mL MeOH，Pd/C(600mg，10％纯度)，氢气氛围下室温反应20min。反应完全后，过滤，收集滤液，浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到化合物M5(496mg,75.5％产率)。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ7.56(dd,J＝8.9,5.8Hz,1H),7.39(d,J＝2.7Hz,1H),7.36(d,J＝2.7Hz,1H),7.20(t,J＝9.2Hz,1H),5.27(s,2H),3.50(s,3H),3.12(qd,J＝7.5,2.5Hz,2H),1.44(s,12H),1.26(t,J＝7.5Hz,3H)。
中间体M6的合成：
将中间体M5(1.0g)加入到50mL单口瓶中，加入10mL4M氯化氢二氧六环溶液。室温下反应半小时后，加入饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，EA萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(DCM:氨甲醇＝10:1)得中间体M6(0.82g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.46(dd,J＝8.9,5.8Hz,1H),7.27(d,J＝2.7Hz,1H),7.17(dd,J＝12.5,5.9Hz,1H),7.12(d,J＝2.7Hz,1H),3.17–3.07(m,2H),1.45(s,12H),1.29–1.25(m,3H)。
中间体M7的合成：
步骤1：化合物M7-1的合成
4-氨基-2,6-二氯吡啶(63g)加入到1L三口瓶中，加入440mL ACN和180mL水。升温至45℃下加入selectfluor(164g)，反应放热，使其在空气中自然冷却。反应10min后，冰 浴下加入饱和亚硫酸钠溶液淬灭反应，EA萃取3次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝10:1)得化合物M7-1(42.6g)。
ESI-MS m/z:163.9[M+H]+。
步骤2：化合物M7-2的合成
将化合物M7-1(54g)加入到1L三口瓶中，加入500mL ACN，加入NIS(80g)和TsOH(5.1g)。升温至70℃反应1h后，滴加2.5L水，过滤，滤饼用EA溶解。分液后，浓缩有机相得化合物M7-2(94g)。ESI-MS m/z:307.2[M+H]+。
步骤3：化合物M7-3的合成
将化合物M7-2(88g)加入到1L三口瓶中，加入500mL DMF，加入CuCN(31g)。升温至125℃反应16h后，滴加2L水后，加入到2L水中，过滤，滤饼用水洗，EA溶解。水相用EA萃取2次，收集并合并有机相，浓缩得到化合物M7-3(55.4g)。
ESI-MS m/z:207.0[M]-。
步骤4：化合物M7-4的合成
将化合物M7-3(88g)加入到250mL三口瓶中，加入83mL浓硫酸和9mL水。60℃反应16h后，补充70mL浓硫酸和5mL水，继续反应24h。降温至0℃，将反应液缓慢倾倒至2L冰水中，过滤，滤饼水洗后，EA溶解。滤液用EA萃取两次，收集并合并有机相，浓缩后，PE：EA＝1：1打浆。过滤，得到化合物M7-4(59g)。
ESI-MS m/z:224.1[M+H]+。
步骤5：化合物M7-5的合成
将化合物M7-4(58g)加入到1L三口瓶中，加入650mL THF，升温至40℃后，缓慢分批次加入NaH(16g)。搅拌10min后，升温至60℃，缓慢加入N,N'-硫羰基二咪唑(69g)。反应1h后，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，滴加稀盐酸调整pH＝4-5，旋去THF。过滤，滤饼用水洗，甲醇溶解后，浓缩有机相，得到粗品M7-5(85g)。
ESI-MS m/z:267.0[M+H]+。
步骤6：化合物M7的合成
将化合物M7-5(74g)加入到1L三口瓶中，加入750mL ACN，加入碘甲烷(22mL)，加入甲醇钠(23g)的水溶液(100mL)。室温下反应15min后，将反应液加入到3.5L的水中，加入稀盐酸调整pH＝4-5，过滤，滤饼用PE：EA＝2：1的混合溶剂打浆。过滤，滤饼即为化合物M7(42.2g)。
ESI-MS m/z:281.2[M+H]+。
中间体M8的合成：
步骤1：化合物M8-1的合成
室温下，将碳酸钾(4.78g)加入化合物1H-1,2,4-三唑-5-羧酸甲酯(4.00g)和N-叔丁氧羰基-3-氨基丙基溴(7.49g)的乙腈(40mL)悬浮液中,然后将体系置于80℃油浴中搅拌。反应1小时后，在反应体系中加入乙酸乙酯和水进行萃取分液，水相再用乙酸乙酯萃取一次。有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤一次，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到粗产物M8-1(8.90g,99％产率)。ESI-MS m/z＝285.2[M+H]+。
步骤2：化合物M8-2的合成
在室温下，将化合物M8-1(8.90g)溶于4N HCl的二氧六环溶液(40mL)，室温下搅拌1小时。反应结束后将反应液旋干得到M8-2(5.60g,97％产率)直接用于下一步。ESI-MS m/z＝185.1[M+H]+。
步骤3：化合物M8-3的合成
室温下，将化合物M8-2(5.60g)碳酸钠(9.96g)加入100mL水中，然后让反应体系在室温下搅拌5小时。反应结束后用稀盐酸将反应液调节为中性，然后浓缩除去水，得到固体残渣经短硅胶柱用有机溶剂洗涤(DCM：MeOH＝20:1)，滤液浓缩后得到化合物M8-3(1.32g，产率28％)。ESI-MS m/z＝153.2[M+H]+。
步骤4：化合物M8的合成
在室温下，将化合物M8-3(1.20g)加入LiAlH4(0.75g)的THF(24mL)悬浮液中，然后室温搅拌4小时。反应结束后，将反应冷却到0摄氏度，依次加入水(0.75mL)，15％氢氧化钠溶液(0.75mL)和水(2.25mL)，然后将反应恢复室温，搅拌10分钟后加入适量无水硫酸镁，再搅拌10分钟后过滤，滤渣用适量有机溶剂冲洗(DCM：MeOH＝10:1)，所得滤液浓缩得到粗品。粗品用柱色谱纯化(MeOH:DCM＝0-10％)得到产物M8(0.62g，57％产率)。ESI-MS m/z＝139.2[M+H]+。
中间体M9的合成：
步骤1：化合物M9-1的合成
将4-乙炔苯胺(1g)溶于10mL THF中，然后加入(Boc)2O(2.24g)，55℃反应24小时。向反应液中加入20.0mL水，用EA萃取3次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得到化合物M9-1(1.78g)。ESI-MS m/z:218[M+H]+。
步骤2：化合物M9-2的合成
将M9-1(152mg)，M1(330mg)溶于6mL THF，6mL H2O，6mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(360mg)和无水硫酸铜(100mg)，室温反应3小时。向反应液中加入20.0mL水，用EA萃取3次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得到化合物M9-2(450mg)。ESI-MS m/z:688[M+H]+。
步骤3：化合物M9的合成
将M9-2(450mg)溶于10mL DCM中，然后加入3mL TFA，室温反应30min。向反应液中加入1M NaOH水溶液调节pH＝7，再用DCM萃取3次，每次10mL，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得化合物M9(320mg)。ESI-MS m/z:588[M+H]+。
中间体M10的合成：
将化合物M10-1((2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅烷(10g)加入到100mL单口瓶中，加入30mL 4M氯化氢二氧六环溶液。室温下反应半小时后，冰浴下加入饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，过滤，滤饼用水洗两次，EA溶解后，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝82:18)得中间体M10(9.1g)。
中间体M11的合成：
步骤1～步骤3的合成参考中间体M8的合成。
步骤4：化合物M11-4的合成
化合物M11-3(3.4g)加入到250mL三口瓶中，加入100mL THF，分批加入NaBH4(3.1g)，然后N2氛围0℃下缓慢滴加三氟化硼乙醚(14mL)，滴加完毕后，反应液自然升温至室温继续反应过夜。反应结束后，冰浴下向反应液中缓慢加入乙醇(50mL)淬灭反应，减压浓缩除去THF和乙醇，然后向残余物中加入乙醇(70mL)，水(20mL)，10％盐酸溶液(10mL)，继续室温搅拌4h，减压浓缩，使用饱和NaHCO3溶液将残余的母液调节至pH＝8，然后使用DCM/MeOH(10：1)萃取3次，每次40mL，合并有机相，无水硫酸钠，干燥，过滤,旋干得粗产物(2.8g)M11-4直接用于下一步。ESI-MS m/z:196.1[M+H]+。
步骤5：化合物M11-5的合成
化合物M11-4(2.8g)加入到100mL单口瓶中，加入25mL DCM，DIPEA(5.9mL)，冰浴下加入(Boc)2O(5.0g)，然后升温至室温反应3h。反应完毕后，将反应液加入到饱和氯化铵溶液中，加入DCM，萃取，收集有机相，水相继续使用DCM萃取2次，合并有机相， 无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝3:1)得到3.0g化合物M11-5。ESI-MS m/z:296.2[M+H]+。
步骤6：化合物M11-6的合成
化合物M11-5(2.5g)加入到100mL单口瓶中，加入12mL MeOH，12mL THF，然后加入一水合氢氧化锂(1.8g，溶于12mL H2O)，室温搅拌反应0.5h。反应完全后，加水(12mL)将反应液稀释，减压浓缩，水相使用醋酸调节至pH＝5-6，然后使用DCM/MeOH(10：1)萃取3次，每次40mL，合并有机相，无水硫酸钠，过滤，浓缩得粗产物(3.1g)直接用于下一步。ESI-MS m/z:282.2[M+H]+。
步骤7：化合物M11-7的合成
化合物M11-6(1.4g)加入到100mL单口瓶中，加入10mL DMF，然后依次加入四氢吡咯(0.71g)，DIPEA(3.29mL)，HATU(2.84g)，室温搅拌反应1h。反应结束后，向反应液中加入EA和水，萃取，收集有机相，水相继续使用EA萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，浓缩物经柱层析纯化(DCM:EA＝3:1)得到1.5g化合物M11-7。ESI-MS m/z:335.2[M+H]+。
步骤8：化合物M11的合成
化合物M11-7(1.5g)加入到50mL单口瓶中，加入5mL CH3CN，加入5mL盐酸(4M/Dioxane)，室温搅拌反应0.5h。反应结束后，将反应液直接浓缩即可得到中间体M11(0.98g)。ESI-MS m/z:235.3[M+H]+。
中间体M12的合成：
将中间体M2(500mg)加入到25mL单口瓶中，-40℃下加入中间体M4(275mg)，N,N-二异丙基乙胺(1.0g)，保持-40℃继续反应0.5h。反应结束后，向反应液中加入二氯甲烷和水，萃取，收集有机相，水相继续使用二氯甲烷萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝3:2)得到化合物M12(385mg,64.6％产率)。ESI-MS m/z:331.3[M+H]+。
中间体M13的合成：
步骤1：化合物M13-1的合成
将(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(304mg)，2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷 -6-羧酸(150mg)，HATU(284mg)溶于5mL DMF中，然后加入DIPEA(0.31mL)，室温反应30分钟。向反应液中加入20.0mL水，用EA萃取3次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得到化合物M13-1(400mg)。ESI-MS m/z:668[M+H]+。
步骤2：化合物M13的合成
将M13-1(135mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min。向反应液中加入1M NaOH水溶液调节pH＝7。再用氯仿：异丙醇＝3：1萃取3次，每次5mL，合并有机相并无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到M13(110mg)。ESI-MS m/z:568[M+H]+。中间体M14的合成：
步骤1：化合物M14-1的合成
室温下，将4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.0g)溶于DCM(50mL)中，然后依次加入三乙胺(9.68mL)，对甲苯磺酰氯(5.31g)，室温反应15h，向反应液中适量水淬灭，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸出溶剂得到8.02g产物，即化合物M14-1，直接用于下一步。
步骤2：化合物M14-2的合成
将化合物M14-1(7.0g)与4-羟基苯甲酸甲酯(2.6g)溶于DMF(30.0mL)中，加入碳酸钾(4.72g)，60℃反应10h。向反应液中适量水淬灭，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸出溶剂，柱层析纯化得到4.02g产物，即化合物M14-2，ESI-MS m/z:350[M+H]+。
步骤3：化合物M14的合成
将M14-2(3.5g)溶于DCM(30.0mL)中，加入三氟乙酸(10.0mL)，室温反应0.5h，LC-MS监控反应完毕，将反应液直接浓缩，30.0mLDCM复溶后再次浓缩，得到2.5g产物三氟乙酸盐，即化合物M14，直接用于下一步，ESI-MS m/z:250[M+H]+
中间体M15的合成：
步骤1：化合物M15-1的合成
将7-叔丁氧羰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(200.0mg)，2S，4R-1-(S)-2-氨基-3，3-二 甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(300.0mg)溶于5.00mL DMF中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.35mL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(310.0mg)，室温反应30分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入100.0mL水，过滤得到体系中析出的固体，经柱层析分离纯化，得淡黄色固体400.0mg，即化合物M15-1。ESI-MS m/z:696[M+H]+。
步骤2：化合物M15的合成
将M15-1(400.0mg)溶于5.00mL DCM中，然后加入2.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液滴加至饱和碳酸氢钠溶液中，加入适量DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物M15。ESI-MS m/z:596[M+H]+。
中间体M16的合成：
步骤1：化合物M16-1的合成
将7-叔丁氧羰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(500.0mg)溶于5.0mL THF中，加入硼烷四氢呋喃溶液(4.64mL，1mol/L)，室温反应1h。向反应液中缓慢加入5mL HCl/MeOH溶液，搅拌至无气泡产生后，加入1mol/LNaOH溶液调节pH至碱性，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物M16-1(450.0mg)。ESI-MS m/z:200[M+H-56]+。
步骤2：化合物M16-2的合成
将M16-1(250.0mg)溶于5.0mL DCM中，加入戴斯马丁试剂(387.0mg)，室温反应1h。向反应液中加入适量乙酸乙酯，析出固体过滤除去，滤液加入1mol/L NaOH溶液调节pH至碱性，萃取分离收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物M16-2(180.0mg)。ESI-MS m/z:198[M+H-56]+。
步骤3：化合物M16-3的合成
N2保护下，化合物M16-2(180mg)溶于3.0mL无水甲醇中，加入无水碳酸钾(167mg)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(174mg)，室温反应3h。反应液加入适量水和乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物M16-3(110mg)，ESI-MS m/z:194[M+H-56]+。
步骤4：化合物M16-4的合成
N2保护下，化合物M16-3(110mg)，2S，4R-1-(S)-2-叠氮基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(229mg)，无水硫酸铜(63.3mg)以及抗坏血酸钠(227mg)溶于4.0mL叔丁醇，4.0mL水和4.0mLTHF混合溶 剂中，室温反应2h。反应液加入适量水和DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到化合物M16-4(250mg)，ESI-MS m/z:664[M+H-56]+。
步骤5：化合物M16的合成
N2保护下，化合物M16-4(250mg)溶于5.00mL DCM中，然后加入2.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液滴加至饱和碳酸氢钠溶液中，加入适量DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物M16(150.0mg)。ESI-MS m/z:620[M+H]+。
中间体M17的合成：
步骤1：化合物M17-1的合成
冰浴下，将M16-4(100.0mg)溶于DCM(2.0mL)中，依次加入三乙胺(0.046mL)，4-二甲氨基吡啶(1.7mg)，乙酰氯(0.019mL)，冰浴下反应1h。向反应液中加入适量水和DCM萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析纯化得到产物80mg，即化合物M17-1，ESI-MS m/z:762[M+H]+。
步骤2：化合物M17的合成
冰浴下，将M17-1(80.0mg)溶于DCM(2.0mL)中，加入1.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩得到产物三氟乙酸盐80mg，即化合物M17，直接用于下一步，ESI-MS m/z:662[M+H]+。
中间体M18的合成：
步骤1：化合物M18-1的合成
25mL单口瓶中加入4-氟苯甲酸甲酯(0.15g)，溶于DMSO中(3mL)，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯，DIPEA(0.48mL)，加热至100℃，反应过夜。冷却至室温，向反应液中加入10mL水，有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干得0.2g化合物M18-1。
步骤2：化合物M18-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物M18-1(0.2g)，溶于THF(1mL)，加入4M NaOH溶液(1 mL)，MeOH(1mL)，加热至40℃，反应3h。冷却至室温，反应液直接浓缩，向反应液中加入5mL水，并用1M HCI溶液调节溶液pH至3-4，有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得0.17g化合物M18-2。
步骤3：化合物M18-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物M18-2(140.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(180.0mg)，DIPEA(0.13mL)和HATU(231.0mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝12:1),得276.0mg化合物M18-3。
步骤4：化合物M18的合成
25mL单口瓶中加入化合物M18-3(276.0mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL DCM,并用1M NaOH溶液调节溶液pH至8-9,DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干得214.0mg化合物M18。
中间体M19的合成：
M19的合成步骤参考M18制备得到。
中间体M20的合成：
M20的合成步骤参考M18制备得到。
中间体M21的合成：
步骤1：化合物M21-1的合成
化合物(2S，4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-N-((R)-1--(4-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)苯基)-2-羟乙基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(0.08g)，2-乙炔基-7-氮螺[3.5]壬-7-羧酸叔丁酯(0.044g)的叔丁醇(1mL)和THF(1mL)中，加入硫酸铜(28mg)，抗坏血酸钠(105mg)的水溶液(1mL)，20℃反应1h。反应液加入15mL水中，加入15mLEA，分出有机相，干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩物经prep-TLC纯化(MeOH：DCM＝1：20)， 得到78mg化合物M21-1。ESI-MS m/z:719.40[M+H]+。
步骤2：化合物M21的合成
化合物M21-1(78mg)的DCM(2.0mL)中，加入三氟乙酸(0.4mL)，20℃反应0.5h。反应液加入20mL饱和碳酸氢钠中，氯仿/异丙醇＝3：1萃取，分出有机相，有机相干燥，过滤，浓缩，得到65mg化合物M21。直接投下步。ESI-MS m/z:619.40[M+H]+。
中间体M22的合成：
步骤1：化合物M22-1的合成
化合物2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸(0.1g)，(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(0.178g)的DMF(5mL)中，加入HATU(169mg)，DIPEA(145mg)，20℃反应1h。反应液加入20mL水中，加入15mL EA+1mL甲醇，分出有机相，干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到0.22g化合物M22-1。直接投下步。ESI-MS m/z:696.40[M+H]+。
步骤2：化合物M22的合成
化合物M22-1(240mg)的DCM(6.0mL)中，加入三氟乙酸(1.2mL)，20℃反应0.5h。反应液加入20mL饱和碳酸氢钠中，氯仿/异丙醇＝3：1萃取，分出有机相，有机相干燥，过滤，浓缩，得到200mg化合物M22。直接投下步。ESI-MS m/z:596.40[M+H]+。
中间体M23的合成：
步骤1：化合物M23-1的合成
2-氯-5-碘吡啶(1g)加入50mL三口瓶，N2保护下加入10mL TEA，加入三甲基硅基乙炔(1.03g)，碘化亚铜(80mg)，PdCl2(PPh3)2(146mg)，升温至50℃反应3h。反应液过滤后收集滤液直接浓缩。浓缩物经柱层析分离纯化(PE:EA＝10:1)得到0.85g化合物M23-1。ESI-MS m/z:210[M+H]+。
步骤2：化合物M23的合成
化合物M23-1(500mg)加入50mL单口瓶，加入5mL MeOH溶解，加入无水碳酸钾(658mg)，室温搅拌2h。反应液过滤后收集滤液直接浓缩。浓缩物经柱层析分离纯化(PE:EA＝20:1)，得到240mg化合物M23。ESI-MS m/z:138[M+H]+。
中间体M24的合成：
步骤1：化合物M24-1的合成
将锌粉(880mg)，80mL无水四氢呋喃加入到250mL三口瓶中，氮气保护，室温下加入二溴甲烷(200mg)，升温至65℃反应1h，降至室温加入TMSCl(115mg)，室温反应1h，加入3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.0g)，40℃反应1h，得到M24-1密封备用。
步骤2：化合物M24-2的合成
向上述M24-1溶液中加入，依次加入4-溴苯甲酸甲酯(1.1g)，Pd2(dba)3(235mg),Johnphos(153mg)，氮气保护，40℃反应2h。反应结束后，氯化铵淬灭反应，EA萃取，食盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝10:1)得到化合物M24-2(660mg)。
步骤3：化合物M24-3的合成
化合物M24-2(660mg)加入到50mL单口瓶中，加入10mL MeOH和2mL水，室温下加入氢氧化钠(410mg)，升温至60℃反应2h。反应结束后，向反应液中加入水，调节pH＝6,EA萃取二次，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物M24-3(550mg)。
步骤4：化合物M24-4的合成
化合物M24-3(150mg)加入到50mL单口瓶中，加入3mL DMF和HATU(250mg)，氮气保护，0℃加入DIPEA(350mg)，反应0.5h，加入(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(290mg)，升至室温反应1h。反应结束后，氯化铵淬灭反应，EA萃取二次，食盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(DCM:甲醇＝10:1)得化合物M24-4(340mg)。ESI-MS m/z:704.3[M+H]+。
步骤5：化合物M24的合成
化合物M24-4(340mg)加入到50mL单口瓶中，加入5mL DCM，1mL TFA,室温反应1h。反应结束后，浓缩，DCM稀释，倒入碳酸氢钠溶液中，DCM：MeOH(10:1)萃取三次，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物M24(250mg)。ESI-MS m/z:604.3[M+H]+。
中间体M25的合成：
步骤1：化合物M25-1的合成
将4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)苯甲酸(100.0mg)，4-(1-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(174.0mg)和HATU(149.4mg)溶解于DMF(2mL)中，添加DIPEA(0.27mL)，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱层析分离纯化，得到231.0mg化合物M25-1。ESI-MS m/z:732[M+H]+。
步骤2：化合物M25的合成
将M25-1(231.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH(2mL)，室温搅拌5分钟，抽滤，得淡黄色固体181.0mg，即化合物M25。ESI-MS m/z:632[M+H]+。
中间体M26的合成：
步骤1：中间体M26-1的合成
室温下，将4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.0g)溶于DCM(50mL)中，然后依次加入三乙胺(9.68mL)，对甲苯磺酰氯(5.31g)，室温反应15h，向反应液中适量水淬灭，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩得到8.02g产物，即化合物M26-1，直接用于下一步。
步骤2：中间体M26-2的合成
将中间体M26-1(7.0g)与4-羟基苯甲酸甲酯(2.6g)溶于DMF(30.0mL)中，加入碳酸钾(4.72g)，60℃反应10h。向反应液中适量水淬灭，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到4.02g产物，即化合物M26-2。
ESI-MS m/z:350[M+H]+。
步骤3：中间体M26-3的合成
将化合物M26-2(4.0g)溶于THF(40.00mL)，MeOH(40.00mL)混合溶液中，加入氢氧化钠(2.29g)的水(20.0mL)溶液，40℃反应1h，反应液冷却至室温后，加入1M硫酸调节至酸性，加入适量DCM/MeOH萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩得到3.50g产物，即中间体M26-3。
ESI-MS m/z:336[M+H]+。
步骤4：中间体M26-4的合成
将中间体M26-3(1.00g)，2S，4R-1-(S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(1.59g)溶于15.00mL DMF中，然后依次加入N,N-二异丙基乙胺(1.56mL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(1.36g)，室温反应30分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入100.0mL水，过滤得到体系中析出的固体，经柱层析分离纯化得到1.95g，即中间体M26-4。
ESI-MS m/z:762[M+H]+。
步骤5：中间体M26的合成
将中间体M26-4(1.50g)溶于20.00mL DCM中，然后加入5.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液滴加至饱和碳酸氢钠溶液中，加入适量DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压蒸出溶剂得到1.20g中间体M26。
ESI-MS m/z:662[M+H]+。
中间体M27的合成：
步骤1：化合物M27-1的合成
向化合物M11-6(600mg)的DMF(15mL)溶液中依次加入二甲胺(191mg)，DIPEA(1.76mL)，HATU(973mg)，室温搅拌反应1h。反应结束后，向反应液中加入EA和水，萃取，收集有机相，水相继续使用EA萃取两次，合并有机相，有机相再用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(DCM:EA＝3:1)得到580mg化合物M27-1。
ESI-MS m/z:309.3[M+H]+。
步骤2：化合物M27的合成
将M27-1(580mg)溶于HCl/dioxane(4N,5mL)中，室温搅拌反应0.5h。反应结束后，将反应液直接浓缩即可得到中间体M27(390mg)。ESI-MS m/z:209.3[M+H]+。
中间体M28的合成：(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙烷-1-甲醛的合成
步骤1：化合物M28-1的合成
将中间体M2(5.0g)，溶于DCM(20mL),降温至零下40℃左右,加入DIPEA(7.7g)，低温搅拌30min，缓慢加入(3R)-3-甲基哌啶-3-醇盐酸盐(4.2g)，继续搅拌反应1.0h。反应完全后，DCM和H2O萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析(EA:DCM10％)，得到化合物M28-1(5.3g)。
ESI-MS m/z:331.3[M+H]+。
步骤2：化合物M28-2的合成
将化合物M28-1(5.3g)，碳酸铯(10.4g)，DABCO(0.4g),1,1-环丙烷二甲醇(3.3g)溶于DMF(20mL)。室温搅拌反应过夜。反应完全,EA和H2O萃取,饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析(EA:DCM 18％)，得到化合物M28-2(5.0g)。
ESI-MS m/z:397.1[M+H]+。
步骤3：化合物M28-3的合成
将化合物M28-2(5.0g)，M5(9.0g),碳酸钾3.5g，CataCxium APd G3(1.3g)溶于1,4-二氧六环(24mL)和H2O(4mL)，在氮气保护的氛围下，90℃氮气保护下反应1h。反应完全，用EA和H2O稀释反应液，再用EA萃取一遍，饱和食盐水洗一遍,无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析(二氯甲烷:氨甲醇)，得到M28-3(6.0g，85％纯度)，直接进行下一步。ESI-MS m/z:595.2[M+H]+。
步骤4：化合物M28的合成
向化合物M28-3(6.0g)的DCM(50mL)溶液中分批加入DMP(6.4g)，室温搅拌3.0h。反应完全后，饱和亚硫酸钠淬灭，DCM和H2O萃取，水相再用DCM萃取两遍，有机相合并后经无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析(PE:EA50％)，得化合物M28(3.4g)。
ESI-MS m/z:593.4[M+H]+。
中间体M29的合成：化合物(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物M29-1的合成
将(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙胺(12.7g)，Boc-L-羟脯氨酸(13.5g)和HATU(23.2g)溶解于DMF(100mL)中，添加DIPEA(38.5mL)，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入EA(100mL)和饱和食盐水(100mL)，收集有机相，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体22.0g，即化合物M29-1。
ESI-MS m/z:432[M+H]+。
步骤2：化合物M29-2的合成
将M29-1(22.0g)加入DCM(100mL)中，冰水浴下加入盐酸二氧六环溶液(100mL)，室温反应60分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(100mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体16.8g，即化合物M29-2。
ESI-MS m/z:332[M+H]+。
步骤3：化合物M29-3的合成
将M29-2(19.0g)，Boc-L-缬氨酸(12.5g)和HATU(22.9g)溶解于DMF(100mL)中，添加DIPEA(28.4mL)，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入EA(100mL)和饱和食盐水(100mL)，收集有机相，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体25.0g，即化合物M29-3。
ESI-MS m/z:531[M+H]+。
步骤4：化合物M29-4的合成
将M29-3(25.0g)加入DCM(100mL)中，冰水浴下加入盐酸二氧六环溶液(100mL)，室温反应60分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(100mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体17.0g，即化合物M29-4。
ESI-MS m/z:431[M+H]+。
步骤5：化合物M29的合成
将M29-4(17.0g)和TEA(32.9mL)溶解于ACN(100mL)和THF(130mL)中，冰水浴下，2-叠氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐(22.5g)溶解于ACN(30mL)中并缓慢加入体系，保温反应3小时，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入DCM(100mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得淡黄色粉末15.3g，即化合物M29。
ESI-MS m/z:457[M+H]+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.87(s,1H),7.46-7.40(m,4H),7.94(q,J＝7.0Hz,1H),4.64-4.60(m,1H),4.45-4.44(m,1H),3.75(d,J＝8.0Hz,1H),3.71-3.64(m,2H),2.48(s,3H),2.26-2.15(m,2H),1.96-1.91(m,1H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.09-0.98(m,6H)。
中间体M30的合成
步骤1：化合物M30-1的合成
在氮气环境-78℃温度下，向1-(叔丁基)2-甲基(S)-5-氧代吡咯烷-1，2-二甲酸酯(20g)在DCM(300mL)中的搅拌溶液中，滴加1.0M DIBAL-H在正己烷中的溶液(329mL)，-78℃下搅拌30min。然后转移至室温搅拌2小时，TLC确认原料消失后,冷却至0℃，加入MeOH(300mL)和1M HCl(200mL)，混合物在室温下搅拌2小时，TLC确认反应终点。 反应结束后用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩。经柱层析纯化得淡黄色液体(13.9g)，即化合物M30-1。
步骤2：化合物M30-2的合成
将M30-1(13.9g)溶于140mLDMF中，0℃下加入咪唑(4.5g)，随后滴加TBDPSCl(17.2mL)，滴毕，转移至室温搅拌3h，TLC监测反应终点。反应结束后向反应液中加入100.0mL水，用EA萃取3次，每次200mL，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱层析纯化得淡黄色液体(21.09g)，即化合物M30-2。
步骤3：化合物M30-3的合成
将M30-2(21.09g)溶于140mLDCM中，将反应液降至-35℃，加入TMSCN(7.48mL)，-35℃下搅拌15min，滴加TMSOTf(0.14mL)，-35℃搅拌10min，TLC监测反应完成后，加入饱和碳酸氢钠：水＝15mL：90mL，搅拌15min，用EA萃取3次，每次200mL，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得黄色液体16.2g，即化合物M30-3。
步骤4：化合物M30-4的合成
将M30-3(16.2g)和K2CO3(7.55g)在MeOH(120mL)中的混合物在室温下搅拌3h。用1M HCl水溶液将混合物酸化至pH＝2，所得混合物在室温下搅拌3h，TLC确认反应完全。用EtOAc萃取混合物，合并的有机层用盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩，经柱层析纯化得黄色液体(8.5g)，即化合物M30-4。
步骤5：化合物M30-5的合成
将M30-4(8.5g)溶于THF(85mL)中，在氮气环境下，于-78℃下滴加LiHMDS的四氢呋喃溶液(34.16mL)。将得到的混合物在-78℃下搅拌10min，然后在氮气环境下滴加3-氯-2-(氯甲基)丙烯(3.95mL)，所得混合物在室温氮气环境下搅拌16小时，LC-MS确认反应完全。在0℃下用水淬灭混合物，然后用EA萃取，合并有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥并浓缩，经柱层析纯化得黄色液体(5g)即化合物M30-5。
步骤6：化合物M30-6的合成
向M30-5(5g)的DCM(40mL)溶液中滴加TFA(20mL)，将所得混合物搅拌1h。反应混合物减压浓缩，DCM带蒸。残留物溶于MeOH(40mL)并加入K2CO3(10g)。混合物在室温下搅拌40分钟，LC-MS确认反应终点，然后在室温下用水淬灭。混合物用EA萃取，合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，浓缩，经柱层析纯化得黄色液体(3.04g)即化合物M30-6。
步骤7：化合物M30的合成
在-20℃氮气氛围下向M30-6(3.04g)的THF(30mL)溶液中滴加LiAlH4的THF溶液(1M,6.8mL)，将所得混合物在0℃下搅拌20min,LC-MS确认反应结束。然后在0℃下加入十水硫酸钠，搅拌30min。过滤，EA洗涤，浓缩，经中性氧化铝柱色谱纯化得黄色液体(2g)，即化合物M30。
中间体M31：化合物(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-((5S，7aS)-5-羟甲基-2-亚甲基四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)-甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇的合成
步骤1：化合物M31-1的合成
取100mL单口瓶，将M28-2(2.90g)溶于四氢呋喃(30.0mL),加入氢化钠(1.40g)，搅拌10min后加入M30(4.43g)，室温反应0.5h。向反应液中加入适量饱和氯化铵水溶液淬灭，二氯甲烷萃取三次，收集有机相，无水硫酸钠干燥后蒸出溶剂，柱层析分离产物，得5.30g黄色固体，即化合物M31-1。
步骤2：化合物M31-2的合成
100mL单口瓶中依次加入化合物M31-1(5.0g)、M5(2.62g)、CataCXium APd G3(0.40g)、磷酸钾(3.56g)溶于1,4-二氧六环(50.0mL)和水(5.0mL)中，氮气置换2-3次，100℃反应3h。向反应液中加入适量水,乙酸乙酯萃取三次，收集有机相，无水硫酸钠干燥后蒸出溶剂，柱层析分离产物，得4.5g黄色固体，即化合物M31-2。
步骤3：中间体M31的合成
冰浴下，100mL单口瓶中加入化合物M31-2(4.50g)，溶于二氯甲烷(50.0mL)，加入三乙胺氢氟酸盐(10.0mL)，冰浴下反应0.5h。向反应液中加入5.0mL甲醇，50.0mL水萃取三次，饱和食盐水洗后收集有机相，蒸干柱层析分离产物，得2.3g黄色固体，即中间体M31。
中间体M32：化合物((3S，7aS)-7a-((7-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-4-(R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯里嗪-3-基)甲基(4-硝基苯基)碳酸酯的合成
步骤1：化合物M32的合成
化合物M31(100.0mg)，三乙胺(30.0mg),DMAP(5.0mg)和对硝基苯基氯甲酸酯加入到10mL单口瓶中，加入四氢呋喃(4.00mL)。20℃搅拌18小时。LCMS监测原料消失，反应完成，反应液M32直接用于下一步反应。
中间体M33：化合物(R)-2-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙醛的合成
步骤1：化合物M33-1的合成
在反应瓶中加入化合物M28-2(2.50g)，乙腈(40.00mL)，2,2-二甲氧基乙醇(1.20g)，碳酸铯(3.20g)，三乙烯二胺(0.08g)，室温反应2h。先将溶剂浓缩，加水稀释，EA萃取，干燥，浓缩。柱层析分离产物(DCM:EA＝3:1)，得到黄色油状物M33-1(2.3g)ESI-MS m/z:401.28[M+H]+。
步骤2：化合物M33-2的合成
在反应瓶中加入2-[8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基萘-1-基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(3.24g)，化合物M33-2(2.25g)，甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(0.61g)，磷酸钾(2.98g)，1,4-二氧六环(36.00mL)，氮气置换后氮气保护下100℃反应3h，加水稀释，EA萃取，干燥，浓缩。柱层析分离产物(DCM:EA＝3:1)，得到黄色油状物M33-2(3.3g)ESI-MS m/z:599.45[M+H]+。
步骤3：化合物M33的合成
在反应瓶中加入化合物M33-2(2.50g)，1,4-二氧六环(15.00mL)，浓盐酸(9.00mL)，室温反应1h，冰浴下加碳酸氢钠水溶液调pH＝8，用EA和THF萃取，干燥，浓缩，得到黄色固体M33(2.15g)，ESI-MS m/z:509.19[M+H]+。
中间体M34的合成
步骤1：化合物M34-1的合成
将3-丁炔-1-醇(140g)和碳酸氢钾(150g)边搅拌边加入到注有乙酸乙酯/水(1000/100mL)的3L单口瓶中，后将原料1,1-二溴甲醛肟(100g)溶于乙酸乙酯(250mL)，并逐滴加入到3L单口瓶中，室温搅拌16h。反应结束后，向反应液中加入水进行稀释，分离并收集有机相，水相继续使用乙酸乙酯萃取一次，收集并合并有机相，盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝5:1)得到化合物M34-1(93g,97％产率)。ESI-MS m/z:191.9[M+H]+。
步骤2：化合物M34-2的合成
将化合物M34-1(93g)加入到3L单口瓶中，并加入丙酮(1100mL),后将琼斯试剂(450mL)在零摄氏度下逐滴加入到反应液中，升至室温搅拌12h。反应结束后，向反应液中加入水进行稀释，加入乙酸乙酯萃取，收集有机相，水相继续使用乙酸乙酯萃取一次，收集并合并有机相，盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩即得化合物M34-2(60g，60％产率)，黄色油状物。ESI-MS m/z:205.9[M+H]+。
步骤3：化合物M34-3的合成
化合物M34-2(60g)加入到1L单口瓶中，加入甲醇(500mL)，冰浴下逐滴缓慢加入5mL浓硫酸，升温至70度反应2h。反应结束后，减压浓缩，加水稀释，后加入乙酸乙酯萃取，水相继续使用乙酸乙酯萃取两次，收集并合并有机相，盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝10:1)得到化合物M34-3(49g,76％产率)。ESI- MS m/z:219.9[M+H]+。
步骤4：化合物M34-4的合成
化合物M34-3(49g)加入到1L单口瓶中，加入四氢呋喃(500mL)，后加入叔丁醇钾(45g)，冰浴下逐滴加入2-碘代丙烷(49g)，升至室温反应16h。反应结束后，加冰水混合物进行淬灭，后加入乙酸乙酯萃取，水相继续使用乙酸乙酯萃取两次，收集并合并有机相，盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝100:1)得到化合物M34-4(32g,55％产率)。ESI-MS m/z:262.0[M+H]+。
步骤5：化合物M34-5的合成
化合物M34-4(32g)加入到1L单口瓶中，加入甲醇(250mL)及氢氧化钾(73g)，后加入叔丁醇钾(45g)，回流搅拌反应4h。反应结束后，冷却至室温，用1N HCl溶液调节pH＝5，浓缩反应液，浓缩物经反向柱层析(5％-40％ACN/水(0.1％三氟乙酸))得到化合物M34-5(21g,86％产率)。ESI-MS m/z:200.1[M+H]+。
步骤6：化合物M34-6的合成
化合物M34-5(21g)加入到500mL单口瓶中，加入乙酸(150mL)及33％溴化氢水溶液(150mL，)，升至60摄氏度搅拌10h。反应结束后，冷却至室温，减压浓缩反应液，浓缩物经DCM溶解后，经无水硫酸钠干燥，浓缩即得化合物M34-6(15g，77％产率)。ESI-MS m/z:186.0[M+H]+。
步骤7：化合物M34-7的合成
化合物M34-6(15g)加入到500mL单口瓶中，加入甲醇(150mL)，冰浴下逐滴加入二氯亚砜(75mL)，室温搅拌反应1.5h。反应结束后，减压浓缩反应液，后加水进行稀释，加乙酸乙酯进行萃取，收集有机相，水相继续使用乙酸乙酯萃取一次，收集并合并有机相，盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(DCM:MeOH＝100:1)得到化合物M34-7(11g,69％产率)。ESI-MS m/z:200.1[M+H]+。
步骤8：化合物M34的合成
化合物M34-7(7g)加入到500mL单口瓶中，加入乙腈(75mL)，分批加入碳酸钾(10g)，后缓慢滴加全氟丁基磺酰氟(14g)，室温搅拌反应2h。反应结束后，加水进行稀释，后加乙酸乙酯进行萃取，收集有机相，水相继续使用乙酸乙酯萃取一次，收集并合并有机相，盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:THF＝100:1)得到化合物M34(14.5g,80％产率)。
ESI-MS m/z:482.0[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.02(s,1H),4.01(d,J＝7.9Hz,1H),3.69(s,3H),2.37(dq,J＝13.6,6.8Hz,1H),0.93(d,J＝6.7Hz,3H),0.85(d,J＝6.7Hz,3H).
中间体M35的合成
步骤1：化合物M35-1的合成
将2-(3-羟基异恶唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(450.0mg)，4-(溴甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.57g)和碳酸钾(936.7mg)溶解于DMF(10mL)中，50℃反应5小时。LCMS监测反应完成，向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体237.1mg，即化合物M35-1。ESI-MS m/z:341.5[M+H]+。
步骤2：化合物M35-2的合成
将M35-1(237.1mg)加入甲醇(4mL)和水(1mL)中，添加一水合氢氧化锂(125.4mg)，室温反应1小时，LCMS监测反应完成。将反应液pH值调节至酸性，加入EA(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体200.0mg，即化合物M35-2。ESI-MS m/z:283.5[M+H]+。
步骤3：化合物M35-3的合成
将M35-2(200.0mg)，M29-2(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(218.4mg)和HATU(250.5mg)溶解于DMF(5mL)中，添加DIPEA(0.45mL)，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入EA(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机相，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体300.0mg，即化合物M35-3。ESI-MS m/z:696.9[M+H]+。
步骤4：化合物M35-4的合成
将M35-3(300.0mg)SFC拆分，浓缩，得白色固体135.0mg，即化合物M35-4。ESI-MS m/z:696.9[M+H]+。
步骤5：化合物M35的合成
将M35-4(135.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体109.0mg，即化合物M35。ESI-MS m/z:596.9[M+H]+。
中间体M36的合成
步骤1：化合物M36-1的合成
化合物哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.55g)加入N,N-二甲基乙酰胺(150mL)，再加入三乙胺(5.2mL)。反应升至145℃搅拌0.5小时。最后加入M34(6.0g)。145℃搅拌5小时。LCMS监测反应完成。加入H2O稀释，EA萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤三次，再用无水硫酸钠干燥。经柱层析纯化得淡黄色固体(4.2g)。即化合物M36-1。ESI-MS m/z:368.1[M+H]+。
步骤2：化合物M36-2的合成
化合物M36-1(4.2g)加入四氢呋喃(5mL)，甲醇(5mL)和水(5mL)，一水合氢氧化锂(1.0g)。20℃搅拌1小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，稀盐酸调至pH＝5，再用二氯甲烷/异丙醇＝5/1萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥。粗品直接用于下一步。得淡黄色固体(3.6g)。即化合物M36-2。ESI-MS m/z:354.3[M+H]+。
步骤3：化合物M36-4的合成
化合物M36-2(3.5g)和M29-2(3.3g)加入到25mL单口瓶中，加入N,N-二甲基乙酰胺(30.00mL)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(7.6g),N,N-二异丙基乙胺(4.9mL)。20℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。加入H2O稀释，EA萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤三次，再用无水硫酸钠干燥。粗品M36-3经SFC拆分得淡黄色固体(3.4g)。即化合物M36-4。ESI-MS m/z:667.2[M+H]+。
步骤4：化合物M36的合成
化合物M36-4(80.0mg)加入到10mL单口瓶中，加入二氯甲烷(2.00mL)和盐酸(4M in dioxane)(1.00mL)。20℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，再用饱和NaHCO3溶液调至pH＝8，二氯甲烷/异丙醇＝5/1萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥。粗品直接用于下一步。得淡黄色固体(73.0mg)。即化合物M36。ESI-MS m/z:567.3[M+H]+。
中间体M37的合成
步骤1：化合物M37-1的合成
50mL烧瓶中加入5-乙炔基-2-氟吡啶(500mg)，1-叔丁氧羰基-哌嗪(922mg)，丙酮5mL，DIPEA(1.6g)，加热至60℃反应5h，脱溶，加EA溶解，水洗，盐水洗，硫酸钠 干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，柱层析纯化得化合物M37-1(1.02g)。
步骤2：化合物M37-2的合成
50mL烧瓶中加入M37-1(200mg)，M29(250mg)，抗坏血酸钠(226mg)，硫酸铜(108mg)，叔丁醇3mL，THF 3mL，水3mL，室温反应1小时，检测反应完全，加EA萃取，有机相水洗，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，柱层析纯化得化合物M37-2(198mg)。
步骤3：化合物M37的合成
50mL烧瓶中加入M37-2(198mg)，4M氯化氢二氧六环溶液(5mL)，室温反应1小时，减压脱溶，得粗品M37约200mg。
中间体M38的合成
步骤1：化合物M38-1的合成
将7-叔丁氧羰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(500.0mg)溶于5.0mL THF中，加入硼烷四氢呋喃溶液(4.64mL，1mol/L)，室温反应1h。向反应液中缓慢加入5mL HCl/MeOH溶液，搅拌至无气泡产生后，加入1mol/LNaOH溶液调节pH至碱性，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物M38-1(450.0mg)。ESI-MS m/z:200[M+H-56]+。
步骤2：化合物M38-2的合成
将M38-1(250.0mg)溶于5.0mL DCM中，加入戴斯马丁试剂(387.0mg)，室温反应1h。向反应液中加入适量乙酸乙酯，析出固体过滤除去，滤液加入1mol/L NaOH溶液调节pH至碱性，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物M38-2(180.0mg)。ESI-MS m/z:198[M+H-56]+。
步骤3：化合物M38-3的合成
N2保护下，化合物M38-2(180mg)溶于3.0mL无水甲醇中，加入无水碳酸钾(167mg)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(174mg)，室温反应3h。反应液加入适量水和乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物M38-3(110mg)，ESI-MS m/z:194[M+H-56]+。
步骤4：化合物M38-4的合成
将化合物M29(200mg)和化合物M38-3(131mg)溶于叔丁醇(2mL)、四氢呋喃(2mL)和水(2mL)，加入无水硫酸铜(63mg)，抗坏血酸钠(226mg)，室温反应2h。将反应液旋干，加入DCM和水，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，浓缩后柱层析纯化(DCM/MeOH＝15:1)得到化合物M38-4(295mg)，ESI-MS m/z:706[M+H]+。
步骤5：化合物M38的合成
将化合物M38-4(295mg)溶于6mL DCM和3mL氯化氢二氧六环(4mol/L)溶液中，室温反应0.5h。将反应液旋干，加入DCM/异丙醇(3：1)和饱和碳酸氢钠溶液，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩得到化合物M38(240mg)，ESI-MS m/z:606[M+H]+。
中间体M39的制备参考WO2023138524A1实施例176中的176-4制备得到。
中间体M40的合成
步骤1：化合物M40-1的合成
50mL单口瓶中加入化合物(S)-3-(4-溴苯基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸(1.5g)，溶于DMF(15mL),加入碘甲烷(0.74g)，碳酸钾(1.2g)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥,得1.4g黄色固体，即化合物M40-1。
步骤2：化合物M40-2的合成
50mL单口瓶中加入化合物M40-1(1.4g)，溶于DMF(20mL)，加入4-甲基噻唑(1.2g)，醋酸钾(1.2g)，醋酸钯(0.1g)，氮气保护后，加热至80℃反应5h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝4:1),得0.82g黄色固体，即化合物M40-2。
步骤3：化合物M40的合成
25mL单口瓶中加入化合物M40-2(0.82g)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(20mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液减压浓缩，得0.55g黄色固体，即化合物M40。
中间体M42的合成
步骤1：化合物M42-1的合成
把化合物4-(羟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.00g,23.22mmol)、TEA(6.46mL,46.45mmol)、TsCl(6.64g,34.84mmol)依次加到DCM(50.00mL)中，在室温下反应16h。向反应液中加入冰水80mL，用DCM(100.00mL)萃取两遍，饱和食盐水洗涤两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(PE:EA＝85％:15％)得到化合物M 42-1(8.00g,93.23％)。
ESI-MS m/z:270.16[M+H]+。
步骤2：化合物M42-2的合成
把化合物M42-1(8000.00mg,21.65mmol)、对羟基苯甲醛(2908.62mg,23.82mmol)、碳酸铯(21164.30mg,64.96mmol)加到DMF(80.00mL)中，在80℃反应2h。向反应液中加入水，产物析出，过滤，滤饼用水洗涤，烘干得到化合物M42-2(6100.00mg，88.21％)。ESI-MS m/z:220.15[M+H]+。
步骤3：化合物M42-3的合成
把化合物M42-2(3.00g,9.39mmol)、碳酸钾(2.60g,18.79mmol)加到甲醇(30.00mL)中，在搅拌下，加入(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(1.83mL,12.21mmol)，室温反应6h。浓缩反应液，加50mL水，用EA(100.00mL)萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(PE:EA＝90％:10％)得化合物M42-3(2.30g,77.64％)
ESI-MS m/z:216.19[M+H]+。
步骤4：化合物M42-4的合成
把化合物M42-3(276.36mg,0.88mmol)、M29(200.00mg,0.44mmol)、硫酸铜(62.93mg,0.39mmol)、抗坏血酸钠(225.66mg,1.14mmol)、水(2.00mL)、叔丁醇(2.00mL)依次加到四氢呋喃(2.00mL)中，在室温下反应2h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM(80.00mL)萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝95％:5％)得化合物M 42-4(300.00mg,88.71％)
ESI-MS m/z:772.52[M+H]+。
步骤5：化合物M42的合成
把化合物M 42-4(300.00mg,0.39mmol)、三氟乙酸(1.00mL)依次加到二氯甲烷(2.00mL)中，在室温下反应1h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液调碱，用DCM(80.00mL)萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝93％:7％)得化合物M 42(130.00mg,49.79％)
ESI-MS m/z:672.72[M+H]+。
中间体M43的合成
步骤1：化合物M43-1的合成
将化合物M28-3(16.5g)溶于DCM(200mL)中，0℃分批次缓慢加入DMP(18.4g),自然升温至室温反应2小时，反应完毕后，加入水稀释，DCM萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经柱层析纯化得到化合物M43-1(9.5g)。ESI-MS m/z:395.2[M+H]+。
步骤2：化合物M43的合成
将化合物M43-1(9.5g),M6(15.21g),甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(3.50g),磷酸钾(15.3g)加入到1,4-二氧六环(100.00mL)和水(25mL)中，氮气保护下90℃反应1.5小时，反应完毕后，加水稀释，加入乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经柱层析纯化得到化合物M43(8.5g)。ESI-MS m/z:549.1[M+H]+。中间体M44的合成
步骤1：化合物M44-1的合成
在反应瓶中加入商业可得的N-((1R)-1-(4-溴苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.50g)，4-甲基噻唑(1.57g)，醋酸钯(0.18g)，醋酸钾(1.55g,15.81mmol)，N,N-二甲基乙酰胺(40.00mL)，氮气置换后氮气保护下100℃反应10h。加H2O(100mL)稀释，EA(80mL)萃取2次，有机层用饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(DCM:氨甲醇＝20:1)，得黄色固体化合物M44-1(2.01g)，ESI-MS m/z:335.29[M+H]+。
步骤2：化合物M44-2的合成
在反应瓶中加入化合物M44-1(2.01g)，二氯甲烷(20.00mL)，甲醇(10.00mL)，0℃搅拌下加入4M氯化氢二氧六环溶液(10.00mL)，室温反应1h，将溶剂浓缩，得到黄色固体粗品M44-2(1.85g)ESI-MS m/z:218.21[M-OH]+。
步骤3：化合物M44-3的合成
在反应瓶中加入化合物M44-2(1.50g)，商业可得的(2S，4R)-4-羟基-1-[(2-甲基丙-2-基)氧羰基]吡咯烷-2-羧酸(1.48g)，N,N-二甲基甲酰胺(25.00mL)，N,N-二异丙基乙胺(3.17mL)，搅拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(3.16g)，室温反应0.5h，加饱和食盐水稀释，EA萃取，水相用EA:异丙醇＝9:1萃取，合并有机相，再用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离产物(DCM:氨甲醇＝15:1)，得到黄色固体M44-3(2.02g)ESI-MS m/z:448.20[M+H]+。
步骤4：化合物M44-4的合成
在反应瓶中加入化合物M44-3(2.02g)，二氯甲烷(20.00mL)，甲醇(10.00mL)，0℃搅拌下加入4M氯化氢二氧六环溶液(10.00mL)，室温反应1h，将溶剂浓缩，得到黄色固体粗品M44-4(1.86g)。ESI-MS m/z:348.18[M+H]+。
步骤5：化合物M44-5的合成
在反应瓶中加入化合物M44-4(1.55g)，商业可得的(2S)-3-甲基-2-((2-甲基丙-2-基)氧羰基氨基)丁酸(1.07g)，N,N-二甲基甲酰胺(20.00mL)，N,N-二异丙基乙胺(2.21mL)，搅拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(2.21g)，室温反应0.5h，加饱和食盐水稀释，EA萃取，水相用EA:异丙醇＝9:1萃取，合并有机相，再用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离产物(DCM:氨甲醇＝15:1)，得到黄色固体M44-5(2.01g)ESI-MS m/z:547.30[M+H]+。
步骤6：化合物M44-6的合成
在反应瓶中加入化合物M44-5(2.01g)，二氯甲烷(20.00mL)，甲醇(10.00mL)，0℃搅拌下加入4M氯化氢二氧六环溶液(10.00mL)，室温反应1h，将溶剂浓缩，冰浴下加碳酸氢钠水溶液调pH＝8，用反相柱纯化(MeOH/H2O＝95％:5％)，得到淡黄色固体M44-6(1.5g)ESI-MS m/z:447.30[M+H]+。
步骤7：化合物M44的合成
在反应瓶中加入化合物M44-6(1.50g)，四氢呋喃(15.00mL)，乙腈(7.50mL)，三乙胺(1.87mL)，降温至0℃，取2-叠氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐(1.91g,6.72mmol)溶于乙腈(7.50mL)中，然后缓慢加到反应液中，加毕在该温度下反应1h，向反应液中加入适量饱和食盐水，EA萃取，水相再用EA：异丙醇＝9:1萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离产物(7％氨MeOH/DCM)，得到淡黄色固体M44(0.92g)ESI-MS m/z:473.20[M+H]+。
中间体M45的合成
步骤1：化合物M45-1的合成
在反应瓶中加入商业可得的1-乙基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼硼烷-2-基)吡唑(1.83g)，N-((1R)-1-(4-溴苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.00g)，碳酸钾(1.75g)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(0.52g)，1,4-二氧六环(35.00mL)，水(7.00mL)，氮气置换后氮气保护下100℃反应2h，取样检测显示原料反应完全，加水稀释，EA萃取，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩。柱层析分离产物(DCM:EA＝3:1)，得黄色固体化合物M45-1(1.7g)，ESI-MS m/z:332.29[M+H]+。
步骤2：化合物M45-2的合成
在反应瓶中加入化合物M45-1(1.7g)，二氯甲烷(20.00mL)，甲醇(10.00mL)，0℃搅拌下加入4M氯化氢二氧六环溶液(10.00mL)，室温反应1h，将溶剂浓缩，得到黄色固体粗品M45-2(1.35g)ESI-MS m/z:215.21[M-OH]+。
步骤3：化合物M45-3的合成
在反应瓶中加入化合物M45-2(1.30g)，商业可得的(2S)-3-甲基-2-((2-甲基丙-2-基)氧羰基氨基)丁酸(0.82g)，N,N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，N,N-二异丙基乙胺(1.25mL)，搅拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(1.87g)，室温反应0.5h，加饱和盐水稀释，EA萃取，水相用EA:异丙醇＝9:1萃取，合并有机相，饱和盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离产物(DCM:氨甲醇＝20:1)，得到黄色固体M45-3(1.75g)ESI-MS m/z:445.20[M+H]+。
步骤4：化合物M45-4的合成
在反应瓶中加入化合物M45-3(1.75g)，二氯甲烷(20.00mL)，甲醇(10.00mL)，0℃搅拌下加入4M氯化氢二氧六环溶液(10.00mL)，室温反应1h，将溶剂浓缩，得到黄色固体粗品M45-4(1.66g)。ESI-MS m/z:345.18[M+H]+。
步骤5：化合物M45-5的合成
在反应瓶中加入化合物M45-4(1.30g)，商业可得的(2S)-3-甲基-2-((2-甲基丙-2-基)氧羰基氨基)丁酸(0.82g)，N,N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，N,N-二异丙基乙胺(1.25mL)，搅拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(1.87g)，室温反应0.5h，加饱和盐水稀释，EA萃取，水相用EA:异丙醇＝9:1萃取，合并有机相，再用饱和盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离产物(DCM:氨甲醇＝20:1)，得到黄色固体M45-5(1.8g)ESI-MS m/z:544.30[M+H]+。
步骤6：化合物M45-6的合成
在反应瓶中加入化合物M45-5(1.8g)，二氯甲烷(20.00mL)，甲醇(10.00mL)，0℃搅拌下加入4M氯化氢二氧六环溶液(10.00mL)，室温反应1h，将溶剂浓缩，冰浴下加碳酸氢钠水溶液调节pH＝8，用反相柱纯化，得到淡黄色固体M45-6(1.12g)ESI-MS m/z:444.30[M+H]+。
步骤7：化合物M45的合成
在反应瓶中加入化合物M45-6(1.10g)，四氢呋喃(10.00mL)，乙腈(5.00mL)，三乙胺(1.38mL)，降温至0℃，取2-叠氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐(1.41g,4.96mmol)溶于乙腈(5.00mL)，然后加到反应液中，加毕，该温度下继续反应1h，向反应液中加入适量饱和盐水稀释，加入EA萃取，水相再用EA：异丙醇＝9:1萃取，合并有机相，用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离产物，得到淡黄色固体M45(0.8g)ESI-MS m/z:470.20[M+H]+。
中间体M46的合成
步骤1：化合物M46-1的合成
将2-氯-5-碘吡嗪(1g)，三甲基硅基乙炔(0.88mL),双三苯基磷二氯化钯(0.36g)，碘 化亚铜(0.1g)溶于10mL四氢呋喃中，加入三乙胺(2.16mL)，置换氮气三次，80℃反应2h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入10mL水，用DCM:MeOH萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得白色固体0.5g，即M46-1。ESI-MS m/z:211[M+H]+。
步骤2：化合物M46的合成
将M46-1(0.5g)溶于2mL ACN中，冰浴下滴加5M氢氧化钾水溶液(1.25mL)，保温搅拌15min。LCMS监测反应完成。用EA萃取3次，每次10mL，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得白色固体0.17g，即M46。ESI-MS m/z:139[M+H]+。
中间体M47的合成
步骤1：化合物M47-1的合成
将((2-氟-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅烷(1g)溶于10mLDMF中，然后加入氟化铯(3.36g)，25℃反应5h，TLC监测反应完成。加水稀释，EA萃取3次，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得白色固体0.65g，即M47-1。所得粗品不经纯化直接投下一步。ESI-MS m/z:297[M+H]+。
步骤2：化合物M47的合成
将M47-1(0.65g)溶于10mLTHF中，然后加入10％Pd/C(0.4g)，置换氢气三次，25℃下搅拌12h。TLC监测反应完成。用硅藻土过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得白色固体0.48g，即M47。ESI-MS m/z:301[M+H]+。
中间体M48的合成
步骤1：化合物M48-1的合成
将化合物M46(0.83g)，2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(1.63g)溶于15.0mL 1,4-二氧六环，加入三乙胺(2.5mL)，N2氛围升温至80℃反应2h。反应液减压浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE/EA＝65:35)得到化合物M48-1(1.6g)，ESI-MS m/z:329.1[M+H]+。
步骤2：化合物M48-2的合成
将化合物M48-1(300mg)和化合物M29(459mg)溶于叔丁醇(5mL)、四氢呋喃(5mL)和水(5mL)，加入无水硫酸铜(131mg)，抗坏血酸钠(470mg)，室温反应2h。将 反应液旋干，加入DCM/MeOH(10:1)和水，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，滤液减压浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10:1)得到化合物M48-2(646mg)，ESI-MS m/z:785.3[M+H]+。
步骤3：中间体M48的合成
将化合物M48-2(600mg)溶于8mLDCM和8mL氯化氢二氧六环溶液(4M)，室温反应0.5h。反应完毕后，旋干反应液，加入水稀释，EA萃取，收集水相，加入无水碳酸钠调节水相pH至碱性，加入DCM/异丙醇(3:1)萃取，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩得到化合物M48(498mg)，ESI-MS m/z:685.3[M+H]+。
实施例1化合物(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-)(1-((1-)((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基)哌嗪基)-4-甲基-4-苯甲酰氨基-3,3-二甲基丁丁烯基-4-氢(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物1-1的合成
50mL单口瓶中加入化合物M1(0.25g)，溶于DMF(5mL)和THF(5mL)，加入1,1-环丙烷二甲醇(0.31g)，碳酸铯(0.738g)，DABCO(8.47mg)，N2保护40℃反应5h。冷却至室温，向反应液中加入适量水,分液，水相DCM萃取，合并有机相，有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得0.278g淡黄色固体，即化合物1-1。
步骤2：化合物1-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-1(200.0mg)，溶于THF(10mL)和水(2mL)，加入M5(379.3mg)，K3PO4(321.0mg)，CataCXium APd G3(36.7mg)，N2保护75℃反应2h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得210.5mg黄色固体，即化合物1-2。
步骤3：化合物1-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-2(210.0mg)，溶于DCM(10mL)，加入DMP(299.5mg)，室温反应4h。向反应液中加硫代硫酸钠溶液淬灭，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物((DCM:MeOH＝10:1))，得192gm淡黄色固体，即化合物1-3。
步骤4：化合物1-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-3(100mg)，溶于MeOH(3mL)，加入M26(167.5mg)和1M ZnCl2/THF溶液(0.1mL)，加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(53.1mg)， 反应过夜。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝8:1)，得84.0mg淡黄色固体，即化合物1-4。
步骤5：化合物1的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-4(84.0mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(1mL)，室温反应1h。蒸干反应液，反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％)，得白色固体30.6mg，即化合物1。(纯度99.14％)。
LCMS：1/2[M+2H]+＝598.31
1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.31(s,1H),8.98(s,1H),7.78(d,J＝8.6Hz,2H),7.71–7.62(m,2H),7.49–7.37(m,4H),7.33(s,1H),7.25(t,J＝9.3Hz,1H),7.07(s,1H),6.96(d,J＝7.6Hz,2H),5.03(dd,J＝12.9,6.2Hz,2H),4.70–4.59(m,2H),4.57–4.45(m,3H),4.37(t,J＝14.8Hz,2H),4.05-3.94(m,5H),3.86–3.76(m,1H),3.66–3.51(m,2H),3.47–3.35(m,2H),3.04(t,J＝12.4Hz,2H),2.51–2.39(m,4H),2.28–2.09(m,7H),1.92–1.80(m,3H),1.77–1.68(m,2H),1.52(d,J＝6.8Hz,3H),1.27(d,J＝8.3Hz,3H),1.17–1.06(m,9H),1.06-0.98(m,2H),0.92-0.86(m,2H),0.82(q,J＝7.6Hz,3H).
实施例2化合物((3R，7aR)-7a-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-羧酸酯的合成
步骤1：化合物2-1的合成
25mL单口瓶中加入((3R，7aR)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇(100.0mg)，溶于THF(5mL)，加入NaH(38.7mg)，室温反应0.5h后，加入化合物M12(82.0mg)，室温反应2h。向反应液中加饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，减压浓缩后柱层析分离产物((DCM:MeOH＝10:1))，得104.0mg淡黄色固体，即化合物2-1。
步骤2：化合物2-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物2-1(104.0mg)，溶于THF(10mL)和水(2mL)，加入M5(124.0mg)，K3PO4(109.8mg)，CataCXium APd G3(12.5mg)，N2保护75℃反应2h。反应液减压浓缩后柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得106.0mg黄色固体，即化合物2-2。
步骤3：化合物2-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物2-2(106.0mg)，溶于THF(3mL)，加入1M四丁基氟化 铵的四氢呋喃溶液(2mL)，室温反应4h。反应液减压浓缩后柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得67.0mg黄色固体，即化合物2-3。
步骤4：化合物2-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物2-3(67.0mg)，溶于THF(4mL)，加入CDI(24.6mg)，加热至40℃反应2h后，加入化合物M15(300.6mg)，加热至80℃，反应过夜。反应液减压浓缩后柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得62.0mg淡黄色固体，即化合物2-4。
步骤5：化合物2的合成
25mL单口瓶中加入化合物2-4(62.0mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(1mL)，室温反应1h。反应液减压浓缩后经反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％)，得白色固体18.5mg，即化合物2。(纯度96.48％)。
LCMS：1/2[M+2H]+＝621.93
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.30(s,1H),8.92(s,1H),7.69(dd,J＝8.9,5.9Hz,1H),7.43(q,J＝8.3Hz,4H),7.32(d,J＝2.5Hz,1H),7.26(t,J＝9.3Hz,1H),7.07(t,J＝2.8Hz,1H),5.00(dd,J＝13.8,6.9Hz,2H),4.73(dd,J＝12.3,4.5Hz,1H),4.68-4.60(m,3H),4.57–4.23(m,7H),3.87(d,J＝10.9Hz,1H),3.75(dd,J＝10.9,3.7Hz,1H),3.70–3.53(m,3H),3.50–3.36(m,6H),3.24–3.13(m,1H),2.49(s,3H),2.45–2.30(m,3H),2.27–1.92(m,14H),1.90–1.75(m,3H),1.66-1.56(m,3H),1.54-1.47(m,4H),1.31(d,J＝10.8Hz,3H),1.07–0.99(s,9H),0.84–0.78(m,3H).
实施例67化合物(2S，4R)-1-(S)-2-(4-(1-(2-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物67的合成
把化合物M42(80.00mg)、化合物M33(78.96mg)、乙酸(0.05mL)依次加到二氯甲烷(2.00mL)和异丙醇(0.50mL)中，在室温反应0.5h后，加入2-甲基吡啶硼烷(38.22mg)，再在室温下反应2h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液30mL，用DCM萃取三遍，合并浓缩有机相，经Pre-HPLC分离纯化得化合物67(42.4mg，29.43％)
ESI-MS m/z:583.27 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝4.1Hz,1H),8.87(s,1H),8.35(s,1H),7.73(d,J＝8.6Hz,2H),7.67(dd,J＝8.8,5.9Hz,1H),7.47–7.36(m,4H),7.30(d,J＝2.4Hz,1H),7.24(t,J＝9.3Hz,1H),7.06(s,1H),6.97(d,J＝8.6Hz,2H),5.32(d,J＝10.3Hz,1H),5.04(q,J＝6.9Hz,1H),4.68(t,J＝5.4Hz,2H),4.53(t,J＝8.3Hz,2H),4.47(s,1H),4.28(t,J＝13.0Hz,1H),3.93–3.84(m,4H),3.64(d,J＝13.3Hz,1H),3.58(d,J＝13.5Hz,1H),3.45(dd,J＝20.6,9.8Hz,1H),3.18(d,J＝10.9Hz,2H),2.93(d,J＝4.8Hz,2H),2.68–2.57(m,1H),2.48(s,3H), 2.45(s,1H),2.29(t,J＝11.2Hz,2H),2.24–2.13(m,3H),2.03(s,1H),2.01–1.94(m,1H),1.87(t,J＝14.3Hz,4H),1.77(t,J＝9.4Hz,2H),1.51(dd,J＝18.2,9.6Hz,5H),1.29(d,J＝3.5Hz,3H),1.27(s,1H),1.15(t,J＝7.7Hz,3H),0.84–0.78(m,6H).
实施例69(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(4-(1-(1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲氧基)苯基)-1H-1-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：化合物69-1的合成
把化合物M42(62.35mg,0.09mmol)、中间体化合物M28(50.00mg,0.08mmol)、氯化锌的四氢呋喃溶液(0.08mL,1.00mol/L,0.08mmol)加到甲醇(2.00mL)和1,2-二氯乙烷(2.00mL)中，在40℃反应1h，再加入氰基硼氢化钠(53.04mg,0.84mmol)，40℃反应3h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM(80.00mL)萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物69-1(80.00mg,75.92％)
ESI-MS m/z:625.35,1/2[M+2H]+。
步骤2：化合物69的合成
把化合物69-1(80.00mg,0.06mmol)、TFA/三氟乙酸(1.00mL)加入二氯甲烷(2.00mL)中，在室温下反应1h。将反应液浓缩Pre-HPLC分离纯化得化合物69(19.00mg，23.75％)
ESI-MS m/z:603.18,1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.19(d,J＝1.8Hz,1H),8.86(d,J＝7.8Hz,1H),8.34(d,J＝4.2Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,1.4Hz,2H),7.66(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),7.46–7.37(m,4H),7.29(d,J＝2.5Hz,1H),7.23(t,J＝8.9Hz,1H),7.06(t,J＝2.6Hz,1H),6.96(d,J＝7.9Hz,2H),5.32(d,J＝10.3Hz,1H),5.05(q,J＝7.0Hz,1H),4.55–4.42(m,5H),4.24(t,J＝14.2Hz,1H),3.88(ddd,J＝23.4,11.5,4.7Hz,4H),3.62(dd,J＝34.4,13.3Hz,1H),3.50–3.41(m,1H),3.14(dd,J＝20.3,7.1Hz,2H),2.67–2.58(m,1H),2.54–2.37(m,7H),2.24–2.13(m,3H),2.04–1.94(m,4H),1.89–1.72(m,7H),1.53(d,J＝7.0Hz,3H),1.45–1.37(m,2H),1.34(s,2H),1.15(dd,J＝10.8,4.8Hz,4H),0.84–0.78(m,7H),0.72(s,2H),0.51(s,2H).
实施例71化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基 噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物71-1的合成
化合物M29(200.00mg)和M16-3(142.00mg)加入四氢呋喃(4.00mL)，叔丁醇(2.00mL)和水(2.00mL)。再加入硫酸铜(62.93mg)和抗坏血酸钠(225.67mg)。20℃搅拌6小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得淡黄色固体(291.00mg,收率94.10％)。即化合物71-1。
步骤2：化合物71-2的合成
化合物71-2(291.00mg)加入到25mL单口瓶中，加入二氯甲烷(5.00mL)和氯化氢的二氧六环溶液(2.00mL)。20℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，再用饱和NaHCO3溶液调至pH＝8，二氯甲烷/异丙醇＝5/1萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥。粗品直接用于下一步。得淡黄色固体(290.00mg)。即化合物71-2。
步骤3：化合物71-3的合成
化合物M28(80.00mg)和71-2(98.14mg)加入到25mL单口瓶中，加入甲醇(2.00mL)，再加入氯化锌(0.20mL,1.00mol/L)，反应升至40℃搅拌2小时。最后加入氰基硼氢化钠(29.69mg)，40℃搅12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得淡黄色固体(130.00mg,收率81.44％)。即化合物71-3。
步骤4：化合物71的合成
化合物71-3(130.00mg)加入到25mL单口瓶中，加入二氯甲烷(4.00mL)，再加入三氟乙酸(2.00mL)。20℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，粗品经HPLC制备得纯品，得淡黄色固体(50.00mg,收率37.47％)。即化合物71。
ESI-MS m/z:570.23 1/2[M+2H]+
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.11(s,1H),8.77(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.57(t,J＝7.5Hz,1H),7.33(q,J＝8.1Hz,4H),7.23–7.10(m,2H),6.96(s,1H),5.15(d,J＝10.3Hz,1H),4.94(d,J＝6.9Hz,1H),4.52–4.29(m,6H),4.16(t,J＝13.9Hz,1H),3.83–3.68(m,2H),3.59–3.43(m,2H),3.35(q,J＝11.7,11.3Hz,1H),2.55(s,3H),2.45(s,1H),2.38(s,4H),2.18(d,J＝10.9Hz,2H),2.09(s,2H),1.88(d,J＝12.2Hz,3H),1.77–1.73(m,2H),1.71–1.66(m,2H),1.61(s,2H),1.42(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(d,J＝23.5Hz,2H),1.02(d,J＝6.8Hz,3H),0.82–0.75(m,5H),0.70(t,J＝9.4Hz,5H),0.65(d,J＝6.7Hz,3H),0.49(s,2H).
实施例73化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(7-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲 基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物73-1的合成
7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]-2-壬醇(500mg)，加入6mL DCM溶解后，加入三乙胺(0.58mL)，冰浴下加入甲磺酰氯(0.19mL)。恢复至室温搅拌2h后，冰浴下，加水淬灭反应。EA萃取一次，DCM萃取一次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗产物73-1(660mg)。ESI-MS m/z:320.1[M+H]+。
步骤2：化合物73-2的合成
将73-1(660mg)加入到50mL单口瓶中，加入10mL DMF，加入(4-羟苯炔基)三甲基硅烷(511mg)，加入碳酸铯(2.01g)，60℃反应3h。向反应液中滴加50mL水，过滤后，滤饼用水洗。滤饼用DCM溶解，饱和食盐水洗，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到化合物73-2(330mg)。ESI-MS m/z:413.3[M+H]+。
步骤3：化合物73-3的合成
将73-2(330mg)加入到10mL单口瓶中，加入3mL DMF，加入氟化铯(500mg)，室温下搅拌3h。向反应液中滴加20mL水，过滤，滤饼水洗，烘干得到化合物73-3(300mg)。ESI-MS m/z:342.2[M+H]+。
步骤4：化合物73-4的合成
将73-3(300mg)加入到50mL单口瓶中，加入3mL四氢呋喃，3mL叔丁醇以及3mL水，加入M29(269mg)，硫酸铜(95mg)，抗坏血酸钠(338mg)，室温下反应30min。用水稀释反应液，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩物经柱层析分离纯化得到化合物73-4(280mg)。ESI-MS m/z:798.4[M+H]+。
步骤5：化合物73-5的合成
将化合物73-4(280mg)加入到10mL单口瓶中，加入4M氯化氢的二氧六环溶液(3 Ml)，室温下反应30min。用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品73-5(220mg)。ESI-MS m/z:698.4[M+H]+。
步骤6：化合物73-6的合成
将M28(80mg)加入到10mL单口瓶中，加入1mL甲醇，加入73-5(94mg)，加入1M氯化锌的四氢呋喃溶液(0.2mL)，室温下搅拌3h。加入氰基硼氢化钠(25mg)，室温下搅拌16h。用饱和氯化铵溶液淬灭反应液，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品73-6(100mg)。ESI-MS m/z:638.7 1/2[M+2H]+。
步骤7：化合物73的合成
将73-6(100mg)加入到10mL单口瓶中，加入2mL DCM，加入2mL三氟乙酸，室温下反应1h。旋干后，经pre-HPLC纯化得到化合物73(51.4mg)。
ESI-MS m/z:616.4 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.21(s,1H),8.99(s,1H),8.57(s,1H),8.53–8.48(m,1H),7.80–7.72(m,3H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(d,J＝8.2Hz,2H),7.32(d,J＝2.8Hz,1H),7.03(d,J＝2.5Hz,1H),6.88(d,J＝8.8Hz,2H),5.31(t,J＝8.3Hz,1H),5.22–5.10(m,1H),4.93(t,J＝7.2Hz,1H),4.74(t,J＝6.7Hz,2H),4.40(t,J＝8.1Hz,1H),4.36–4.23(m,4H),4.04(dd,J＝27.4,13.5Hz,1H),3.81–3.69(m,1H),3.70–3.49(m,1H),2.45(d,J＝3.9Hz,3H),2.40-2.21(m,9H),2.19–1.93(m,5H),1.81–1.64(m,6H),1.59–1.47(m,5H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.17(d,J＝12.1Hz,4H),1.08(d,J＝6.5Hz,3H),0.85(t,J＝6.9Hz,1H),0.76–0.70(m,6H),0.64(s,2H),0.40(s,2H).
实施例75化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(4-(7-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物75-1的合成
把2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3.00g)、((4-溴苯基)乙炔基)三甲基硅烷 (5.03g)、三(二亚苄基丙酮)二钯(2.43g)、1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(3.30g)、碳酸铯(12.96g)加到甲苯(30.00mL)中，置换氮气，在90℃反应7h。把反应液过滤，滤饼用DCM洗涤，浓缩滤液，柱层析(PE:EA＝93％:7％)分离得到化合物75-1(1.40g,26.50％)。
ESI-MS m/z:398.28[M+H]+。
步骤2：化合物75-2的合成
把化合物75-1(1400.00mg)、碳酸钾(1456.26mg)加到甲醇(20.00mL)中，在室温下反应16h。将反应液浓缩，用DCM稀释，过滤，滤饼用DCM洗涤，将滤液浓缩，柱层析分离(PE:EA＝90％:10％)得到化合物75-2(650.00mg，56.69％)。
ESI-MS m/z:327.25[M+H]+。
步骤3：化合物75-3的合成
把化合物M29(200.00mg)、化合物75-2(286.02mg)、抗坏血酸钠(216.98mg)、硫酸铜(69.93mg)加到四氢呋喃(2.00mL)、水(2.00mL)和叔丁醇(2.00mL)中，在室温下反应3h。向反应液加50mL水，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝95％:5％)得化合物75-3(230mg,67.05％)
ESI-MS m/z:783.59[M+H]+。
步骤4：化合物75-4的合成
把化合物75-3(230.00mg)、三氟乙酸(1.00mL)依次加到二氯甲烷(2.00mL)中，在室温下反应1h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液40mL调碱，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物75-4(129.00mg,64.32％)
ESI-MS m/z:683.49[M+H]+。
步骤5：化合物75-5的合成
把化合物75-4(120.00mg)、化合物M28(104.13mg)、1.0M氯化锌的四氢呋喃溶液(0.35mL)加到甲醇(3.00mL)和1,2-二氯乙烷(3.00mL)中，在40℃反应2h，再加入氰基硼氢化钠(55.20mg)，40℃反应3h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物75-5(110.00mg,49.71％)。
ESI-MS m/z:630.71 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物75-6的合成
把化合物75-5(110.00mg)、三氟乙酸(1.50mL)加入二氯甲烷(3.00mL)中，在室温下反应1h。将反应液浓缩后经Pre-HPLC分离纯化得化合物75(26.10mg，23.43％)
ESI-MS m/z:608.68 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝5.5Hz,1H),8.87(d,J＝6.9Hz,1H),8.25(s,1H),7.67(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),7.62(d,J＝8.5Hz,2H),7.49–7.35(m,4H),7.30(d,J＝2.6Hz,1H),7.24(t,J＝9.3Hz,1H),7.06(t,J＝2.4Hz,1H),6.51(d,J＝8.7Hz,2H),5.30(d,J＝10.4Hz,1H),5.05(q,J＝7.0Hz,1H),4.56–4.40(m,5H),4.25(t,J＝14.4Hz,1H),3.92(dd,J＝11.0,3.9Hz,1H),3.85(d,J＝11.1Hz,1H),3.69–3.52(m,5H),3.51–3.41(m,1H),2.67–2.36(m,11H),2.25–2.13(m,3H),2.10–1.94(m,2H),1.89–1.74(m,7H),1.53(d,J＝7.0Hz,2H),1.35–1.24(m,8H),1.14(dd,J＝15.1,6.5Hz,3H),0.83–0.79(m,5H),0.73(s,2H),0.52(s,2H).
实施例79化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(2-(1-(2-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R-)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基) 乙氧基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物79-1的合成
将2-(3-羟基异恶唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(500mg)、4-(2-溴乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.03g)、碳酸钾(1.04g)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，50℃反应2小时。反应完毕后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤三次，经柱层析(石油醚/乙酸乙酯)进行纯化，得到化合物79-1(920mg)。ESI-MS m/z:433.22[M+Na]+。
步骤2：化合物79-2的合成
将化合物79-1(920mg)溶于甲醇(10mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(268mg)，25℃反应1小时。反应完毕后，加柠檬酸调至pH＝4，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物79-2(883mg)。ESI-MS m/z:297.31[M+H-100]+。
步骤3：化合物79-3的合成
将化合物79-2(883mg)、M29-2(775mg)、HATU(1.27g)、N,N-二异丙基乙胺(1.1mL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，25℃反应1小时。反应完毕后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，手性柱拆分得到化合物79-3(263mg)。ESI-MS m/z:710.53[M+H]+。
步骤4：化合物79-4的合成
将化合物79-3(263mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入4M氯化氢的二氧六环溶液(1mL)，25℃反应20分钟。反应完毕后，加水溶解，用碳酸氢钠溶液中和，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，干燥，浓缩，得到化合物79-4(203mg)。ESI-MS m/z:610.41[M+H]+。
步骤5：化合物79-的合成
将化合物79-4(100mg)、M33(83mg)、冰醋酸(49mg)溶于二氯甲烷(5mL)和异丙醇(0.5mL)中，25℃反应20分钟。再加入2-甲基吡啶-N-甲硼烷(87mg)，25℃反应1小时。反应完毕后，加入碳酸氢钠溶液淬灭，用二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，浓缩，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)及Pre-TLC纯化，得到化合物79(32.5mg)。
ESI-MS m/z:552.18 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),9.26(s,1H),8.99(d,J＝2.7Hz,1H),8.43(d,J＝7.4Hz,1H),7.77(dd,J＝9.1,6.0Hz,1H),7.48–7.41(m,2H),7.39–7.32(m,4H),7.29(s,1H), 7.05(s,1H),6.68(s,1H),6.07(s,1H),5.15–5.13(m,1H),4.91(p,J＝7.2Hz,1H),4.82–4.65(m,3H),4.43–4.31(m,2H),4.30–4.25(m,1H),4.21–4.17(m,2H),4.10(dd,J＝25.0,13.4Hz,1H),3.70(dd,J＝10.6,4.4Hz,1H),3.64(d,J＝10.0Hz,2H),3.58–3.50(m,2H),3.49–3.39(m,2H),3.10–2.95(m,2H),2.46(s,3H),2.39–2.29(m,1H),2.28–2.08(m,3H),2.05–1.97(m,3H),1.92–1.85(m,2H),1.81–1.77(m,1H),1.76(s,3H),1.72–1.63(m,6H),1.45(d,J＝7.0Hz,1H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.17(d,J＝11.6Hz,3H),0.95(d,J＝6.5Hz,3H),0.86–0.80(m,1H),0.79(d,J＝6.7Hz,2H),0.74(q,J＝7.7Hz,3H).
实施例80化合物(2S，4R)-1-(R)-2-(3-(1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
在反应瓶中加入中间体M33(30mg)，中间体M35(35.15mg)，二氯甲烷(1.00mL)，异丙醇(0.10mL)，醋酸(0.02mL)，室温反应10min后加入二甲基吡啶硼烷(31.27mg)，室温反应1h。加碳酸氢钠水溶液调pH＝8，DCM萃取，干燥，浓缩。Pre-HPLC分离，得到化合物80(12mg)。ESI-MS m/z:545.19 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.99(t,J＝75.2Hz,1H),8.66(s,1H),7.92(d,J＝6.7Hz,1H),7.61–7.46(m,1H),7.35(s,4H),7.28(s,1H),7.18(m,2H),5.73(d,J＝8.0Hz,1H),5.05(td,J＝7.1,2.3Hz,1H),4.76–4.37(m,5H),4.35–4.18(m,2H),3.99(m,3H),3.65(d,J＝8.8Hz,1H),3.45–3.34(m,2H),3.28–3.05(m,5H),2.85(s,2H),2.49(s,3H),2.38–2.07(m,8H),2.01(d,J＝4.5Hz,5H),1.70(d,J＝12.7Hz,4H),1.52–1.46(m,4H),0.99(d,J＝6.3Hz,3H),0.87–0.74(m,6H).
实施例88化合物((3R，7aR)-7a-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酰)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-羧酸酯的合成
步骤1：化合物88-1的合成
将(R)-1-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(300mg)溶于2mL THF中，氮气保护，加入NaH(72mg)，然后加入((3R，7aR)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇(259mg)的THF(1mL)溶液，25℃下搅拌2h。LC-MS监测反应完成。向反应液缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后经柱层析分离纯化得淡黄色固体315mg，即化合物88-1。
ESI-MS m/z:580[M+H]+；
步骤2：化合物88-2的合成
将化合物88-1(315mg)，2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(187mg)，磷酸钾(340mg)，CataCXium APd G3(39mg)溶于5mL二氧六环和1mL水中，抽换氮气保护，90℃反应3h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用EA萃取3次，每次30mL，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体146mg，即化合物88-2。ESI-MS m/z:778[M+H]+。
步骤3：化合物88-3的合成
将化合物88-2(146mg)溶于3mLDCM中，然后加入1.5mL三乙胺三氢氟酸盐，室温反应2h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入10.0mL水，用DCM:MeOH＝10:1的萃取液萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体80mg，即化合物88-3。
步骤4：化合物88-4的合成
将化合物88-3(43mg)溶于3mL THF中，然后加入14mg CDI，40℃反应1h，LC-MS监测中间体，然后加入M15(58mg)，80℃搅拌12h，LC-MS监测反应完成。加入5.00mL甲醇淬灭，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体29mg，即化合物88-4。
ESI-MS m/z:643 1/2[M+2H]+。
步骤5：化合物88的合成
将化合物88-4(29mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得淡黄色粉末13.6mg，即化合物88。
ESI-MS m/z:621 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.29(s,1H),8.92(s,1H),7.70-7.67(m,1H),7.43(q,J＝8.2Hz,4H),7.32–7.24(m,2H),7.06-7.05(m,1H),5.03–4.98(m,1H),4.73(d,J＝12.2Hz,1H),4.67-4.60(m,3H),4.57–4.48(m,2H),4.43(s,1H),4.39–4.28(m,3H),3.87(d,J＝10.9Hz,1H),3.76-3.73(m,1H),3.67–3.53(m,2H),3.45–3.40(m,3H),3.17-3.16(m,1H),2.48-2.35(m,6H),2.24-2.17(m,5H),2.14–2.01(m,7H),1.99–1.86(m,4H),1.82-1.80(m,3H),1.61(s,3H),1.51-1.49(m,5H),1.33-1.29(m,7H),1.02(s,9H),0.84-0.78(m,3H).
实施例89化合物5-(7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-2-(1-(4-(4-((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酰基)苯氧基)甲基)哌啶-1-基)甲基环丙基)甲氧基) 吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-N，N-二甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑[1,5-a][1,4]二氮杂-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物89-1的合成
-40℃下向中间体化合物M27(270mg)的DCM(5mL)溶液中加入DIPEA(0.83mL)和2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(255mg)，让反应在该温度下搅拌1h。反应结束后浓缩反应体系，浓缩物经柱层析纯化(0-4％MeOH/DCM)得到化合物89-1(416mg)。
ESI-MS m/z:424.3[M+H]+。
步骤2：化合物89-2的合成
室温下向化合物89-1(416mg)的DMF(5mL)溶液中加入1,1-环丙烷二甲醇(150mg)Cs2CO3(639mg)以及DABCO(22mg)，让反应在该温度下搅拌12h。反应结束后向反应体系加入EA和水，水相再用EA萃取两次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤三次后经无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(0-6％MeOH/DCM)得到化合物89-2(220mg)。
ESI-MS m/z:490.3[M+H]+。
步骤3：化合物89-3的合成
室温下将化合物89-2(220mg)，M10((2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧基硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅烷(335mg)，cataCXium APd G3(33mg)以及K3PO4(286mg)加入50mL单口瓶中，然后加入THF(5mL)和H2O(1mL)，体系置换氮气后,在70℃下搅拌1h。反应结束后向反应体系加入EA和饱和食盐水，水相再用EA萃取一次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后浓缩，浓缩物经制备型薄层色谱纯化(8％MeOH/DCM)得到化合物89-3(196mg)。
ESI-MS m/z:840.7[M+H]+。
步骤4：化合物89-4的合成
室温下向化合物89-3(196mg)的DCM(5mL)溶液中加入DMP(148mg)，让反应 在该温度下搅拌3h。反应结束后向反应体系加入饱和亚硫酸钠溶液淬灭反应，然后加入适量DCM萃取分液，水相再用DCM萃取两次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤一次后经无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(0-5％MeOH/DCM)得到化合物89-4(180mg)。
ESI-MS m/z:838.7[M+H]+。
步骤5：化合物89-5的合成
室温下向化合物89-4(180mg)和M26(156mg)的MeOH(5mL)溶液中加入ZnCl2(0.2mL)，让体系在室温下搅拌1h。然后向体系中加入NaBH3CN(67mg)，让反应在40℃下搅拌过夜。反应结束后向反应体系加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，然后加入混合溶剂(DCM/MeOH＝9:1)萃取分液，水相再用混合溶剂萃取两次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后浓缩，浓缩物经制备型薄层色谱纯化(10％MeOH/DCM)得到化合物89-5(23mg)。
ESI-MS m/z:742.5 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物89-6的合成
室温下向化合物89-5(23mg)的DCM(1mL)溶液中加入CsF(47mg)，在该温度下搅拌3h。反应结束后向反应体系加入EA和饱和食盐水进行萃取分液，有机相再饱和食盐水洗涤三次，有机相经无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经制备型薄层色谱纯化(11％MeOH/DCM)得到化合物89-6(17mg)。
ESI-MS m/z:664.3 1/2[M+2H]+。
步骤7：化合物89的合成
室温下向化合物89-6(17mg)的DCM(2mL)溶液中加入三氟化硼乙醚(0.4mL)，在该温度下搅拌1h。反应结束后将反应体系倒入冷却的饱和碳酸钠溶液中，然后用混合溶剂(DCM/MeOH＝9:1)萃取三次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后浓缩，浓缩物经制备型薄层色谱纯化(12％MeOH/DCM)得到化合物89(7mg)。
ESI-MS m/z:642.8 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.12(s,1H),8.93–8.83(m,1H),7.85(dd,J＝9.1,5.7Hz,1H),7.79–7.75(m,2H),7.46–7.36(m,4H),7.36–7.33(m,1H),7.31(t,J＝8.9Hz,1H),7.22–7.19(m,1H),6.97–6.92(m,2H),6.74(s,1H),5.36–5.28(m,1H),5.20(d,J＝16.1Hz,1H),5.02(q,J＝6.8Hz,1H),4.63–4.53(m,3H),4.51–4.32(m,5H),3.95(d,J＝10.9Hz,1H),3.88–3.77(m,3H),3.32(s,3H),3.06(s,3H),2.48(s,3H),2.44–2.38(m,2H),2.20(dd,J＝19.4,12.0Hz,2H),2.06–1.94(m,2H),1.91–1.81(m,3H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.31–1.27(m,9H),1.11(s,9H),0.77(s,2H),0.57(s,2H).
实施例90化合物(3R，7aR)-7a-((7-(8-乙炔基-7-氟)-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(1,4-氧杂环戊烷-4-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-羧酸酯的合成
步骤1：化合物90-1的合成
将2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(1g)溶于10mL DCM中，加入DIPEA(1.96mL)，置于冰浴中，然后滴加入高吗啉盐酸盐(1g)的DCM(3mL)溶液，插入氮气球，0℃下搅拌0.5h。LC-MS监测反应完成。向反应液加入10mL水，DCM萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后经柱层析分离纯化得淡黄色固体1.26g，即化合物90-1。
ESI-MS m/z:317[M+H]+；
步骤2：化合物90-2的合成
将((3R，7aR)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇(1.08g)溶于4mL THF中，氮气保护，加入NaH(230mg)，室温搅拌0.5h，然后加入化合物90-1(600mg)的THF(2mL)溶液，室温下搅拌0.5h。LC-MS监测反应完成。向反应液缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后经柱层析分离纯化得淡黄色固体790mg，即化合物90-2。
ESI-MS m/z:566[M+H]+；
步骤3：化合物90-3的合成
将化合物90-2(790mg)，((2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧基硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅烷(537mg)，磷酸钾(887mg)，CataCXium A Pd G3(51mg)溶于8mL二氧六环和1.6mL水中，抽换氮气保护，90℃反应3h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用EA萃取3次，每次30mL，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体620mg，即化合物90-3。
ESI-MS m/z:916[M+H]+。
步骤4：化合物90-4的合成
将化合物90-3(620mg)溶于6mLDCM中，然后加入3mL三乙胺三氢氟酸盐，室温反应2h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用DCM:MeOH＝10:1的萃取液萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体500mg，即化合物90-4。
步骤5：化合物90-5的合成
将化合物90-4(89mg)溶于3mL THF中，然后加入23mg CDI，40℃反应1h，LC-MS监测中间体，然后加入中间体化合物M15(99mg)，80℃搅拌12h，LC-MS监测反应完成。加入5.00mL甲醇淬灭，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体101mg，即化合物90-5。
ESI-MS m/z:712 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物90-6的合成
化合物90-5(101mg)溶于3mL DMF中，然后加入CsF(108mg)，室温反应1h，LCMS监测反应完成。水和乙酸乙酯萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过柱层析分离纯化得到70mg淡黄色固体，即化合物90-6。
ESI-MS m/z:634 1/2[M+2H]+；
步骤7：化合物90的合成
将化合物90-6(70mg)溶于3mL DCM中，然后加入1.5mL三氟化硼乙醚溶液，室温反应30min，LCMS监测反应完成。将反应液滴加入碳酸钠水溶液，DCM:异丙醇＝10：1萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，通过制备液相分离得黄色粉末33.2mg，即化合物90。
ESI-MS m/z:612 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.18(d,J＝5.3Hz,1H),8.93(s,1H),7.90–7.87(m,1H),7.45–7.33(m,6H),7.25(d,J＝2.6Hz,1H),4.99(q,J＝6.9Hz,1H),4.76–4.71(m,2H),4.64–4.54(m,3H),4.48-4.43(m,2H),4.36–4.26(m,6H),4.07(t,J＝4.9Hz,2H),3.89–3.86(m,3H),3.77-3.74(m,1H),3.56(d,J＝11.9Hz,1H),3.46-3.41(m,4H),3.16(s,1H),2.48(s,3H),2.42-2.34(m,2H),2.22–2.11(m,5H),2.09-1.93(m,10H),1.60(s,3H),1.50(d,J＝7.4Hz,5H),1.33–1.28(m,2H),1.01(s,9H).
实施例92化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-((4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物92-1的合成
3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(2g)，加入20mL DCM溶解后，冰浴下分批加入戴斯-马丁氧化剂(4.6g)。恢复至室温搅拌3h后，对反应液进行过滤，取滤液，用适量饱和碳酸氢钠溶液洗涤，DCM萃取一次，收集并合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物92-1粗品(2.3g)。ESI-MS m/z:220.1[M+H]+。
步骤2：化合物92-2的合成
将化合物92-1(2.3g)加入到100mL单口瓶中，加入30mL甲苯，加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.86g)，加入钛酸四异丙酯(2.98g)，60℃反应1h，后向反应液中加入氰基硼氢化钠(1.32g)，继续反应5小时。反应结束后，向反应液中加入硅胶浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到化合物92-2(1.6g)。ESI-MS m/z:390.2[M+H]+。
步骤3：化合物92-3的合成
将化合物92-2(1.6g)加入到100mL单口瓶中，加入15mL甲醇，加入氢氧化钯(1g)，创造氢气环境，室温下搅拌17h。过滤，取滤液，浓缩即得化合物92-3(850mg)。ESI-MS m/z:256.2[M+H]+。
步骤4：化合物92-4的合成
将化合物92-3(850mg)加入到50mL单口瓶中，加入中间体M34(1.4g)，加入DMA(15mL)，滴加DIPEA(1.55mL),140℃反应2h。用水稀释反应液，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩物经柱层析分离纯化得到化合物92-4(205mg)。ESI-MS m/z:437.3[M+H]+。
步骤5：化合物92-5的合成
将化合物92-4(205mg)加入到25mL单口瓶中，加入1mL甲醇，1mL四氢呋喃，1mL水，后加入氢氧化锂(24mg)，室温下反应30min。浓缩反应液，后加水稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至5，用二氯甲烷：异丙醇(5：1)溶液萃取两次，收集并合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物92-5(150mg)。ESI-MS m/z:423.3 [M+H]+。
步骤6：化合物92-6的合成
将化合物92-5(150mg)、M29-2(140mg)、HATU(200mg)、N,N-二异丙基乙胺(0.37mL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)中，25℃反应1小时。反应完毕后，加入乙酸乙酯与水萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，手性柱拆分得到化合物92-6(47mg)。ESI-MS m/z:736.4[M+H]+。
步骤7：化合物92-7的合成
将化合物92-6(43mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，25℃反应20分钟。反应完毕后，浓缩，加水稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8～9，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物92-7(35mg)。ESI-MS m/z:636.3[M+H]+。
步骤8：化合物92-8的合成
将化合物92-7(35mg)加入到25mL单口瓶中，加入1mL甲醇，加入M28(50mg)，加入0.1mL氯化锌(1mol/L in THF)，室温下搅拌1h。加入氰基硼氢化钠(25mg)，50℃下搅拌3h。用饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物92-8(100mg)。ESI-MS m/z:607.8 1/2[M+2H]+。
步骤9：化合物92的合成
将92-8(100mg)加入到10mL单口瓶中，加入2mL DCM，加入1mL三氟乙酸，室温下反应1h。旋干后，经pre-HPLC纯化得到92(18.3mg)。ESI-MS m/z:585.3 1/2[M+2H]+。
实施例93：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-((1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物93-1的合成
化合物N-叔丁氧羰基-4-羟基哌啶(300.00mg)和1-(溴甲基)-4-乙炔基苯(377.98mg)加入四氢呋喃(5.00mL)，0℃下分批加入氢化钠(149.06mg,60％)。反应升至50℃搅拌3小时。 LCMS监测反应完成。加入H2O稀释，EA萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。经柱层析纯化得淡黄色固体(249.00mg,收率52.96％)。即化合物93-1。
步骤2：化合物93-2的合成
化合物M29(280.00mg)和93-1(251.47mg)加入四氢呋喃(6.00mL)，叔丁醇(3.00mL)和水(3.00mL)。再加入硫酸铜(88.10mg)和抗坏血酸钠(315.91mg)。20℃搅拌4小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得淡黄色固体(306.00mg,收率64.63％)。即化合物93-2。
步骤3：化合物93-3的合成
化合物93-2(306.00mg)加入到25mL单口瓶中，加入二氯甲烷(5.00mL)和氯化氢的二氧六环溶液(2.00mL)。20℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，再用饱和NaHCO3溶液调至pH＝8，二氯甲烷/异丙醇＝5/1萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥。粗品直接用于下一步。得淡黄色固体(278.00mg)。即化合物93-3。
步骤4：化合物93-4的合成
化合物M28(80.00mg)和93-3(108.84mg)加入到25mL单口瓶中，加入甲醇(2.00mL)，再加入氯化锌(0.20mL,1.00mol/L)，反应升至40℃搅拌2小时。最后加入氰基硼氢化钠(29.69mg)，40℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得淡黄色固体(77.00mg,收率45.68％)。即化合物93-4。
步骤5：化合物93的合成
化合物93-4(77.00mg)加入到25mL单口瓶中，加入二氯甲烷(3.00mL)，再加入三氟乙酸(1.50mL)。20℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，粗品经Pre-HPLC制备得纯品，得白色固体(33.00mg,收率42.19％)。即化合物93。
ESI-MS m/z:603.18 1/2[M+2H]+
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.12(d,J＝4.0Hz,1H),8.79(d,J＝8.0Hz,1H),8.39(s,1H),7.73(d,J＝7.8Hz,2H),7.59(dd,J＝9.1,5.8Hz,1H),7.34(h,J＝8.2Hz,6H),7.22(d,J＝2.7Hz,1H),7.16(t,J＝9.3Hz,1H),6.99(t,J＝2.8Hz,1H),5.28(d,J＝10.3Hz,1H),4.97(d,J＝7.0Hz,2H),4.48(d,J＝9.5Hz,3H),4.40(s,2H),4.36(s,2H),4.16(t,J＝14.8Hz,1H),3.87–3.78(m,2H),3.60–3.48(m,1H),3.39(t,J＝11.4Hz,2H),2.85(d,J＝11.4Hz,2H),2.56(dq,J＝10.2,6.7Hz,1H),2.39(d,J＝11.6Hz,4H),2.34(dd,J＝12.9,5.7Hz,1H),2.16–2.08(m,4H),1.93–1.89(m,1H),1.89–1.83(m,2H),1.77(d,J＝12.6Hz,1H),1.69(q,J＝10.9,7.5Hz,2H),1.61–1.49(m,3H),1.45(d,J＝7.0Hz,2H),1.28–1.24(m,1H),1.20(d,J＝14.1Hz,4H),1.09(d,J＝6.8Hz,3H),0.74(t,J＝8.0Hz,5H),0.64(s,2H),0.42(s,2H).
实施例100：化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-((1-(1-((((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(((R-)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-4-氟哌啶-4-基)甲氧基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物100-1的合成
将2-(3-羟基异恶唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(500mg)、4-氟-4-(羟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(585mg)、三苯基膦(1.32g)、DIAD(1.02g)溶于四氢呋喃(10mL)中，60℃反应1小时。反应完毕后，浓缩，经柱层析(石油醚/乙酸乙酯)进行纯化，得到化合物100-1(786mg)。ESI-MS m/z:315.21[M+H-100]+。
步骤2：化合物100-2的合成
将化合物100-1(786mg)溶于甲醇(10mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(227mg)，25℃反应1小时。反应完毕后，加柠檬酸调至pH＝4，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到将化合物100-2(683mg)。ESI-MS m/z:301.22[M+H-100]+。
步骤3：化合物100-3的合成
将化合物100-2(300mg)、M29-2(248mg)、HATU(427mg)、N,N-二异丙基乙胺(0.37mL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)中，25℃反应1小时。反应完毕后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，手性柱拆分得到化合物100-3(170mg)。ESI-MS m/z:714.54[M+H]+。
步骤4：化合物100-4的合成
将化合物100-3(170mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入4M氯化氢的二氧六环溶液(1mL)，25℃反应20分钟。反应完毕后，用碳酸氢钠溶液中和，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，干燥，浓缩，得到化合物100-4(118mg)。ESI-MS m/z:614.50[M+H]+。
步骤5：化合物100-5的合成
将化合物100-4(118mg)、M28(114mg)、氯化锌(0.18mL,1.00mol/L)溶于甲醇(10mL)中，40℃反应2小时。再加入氰基硼氢化钠(18mg)，40℃反应8小时。反应完毕后，加入氯化铵溶液淬灭，浓缩，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，得到化合物100-5(177mg)。 ESI-MS m/z:596.27 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物100的合成
将化合物100-5(177mg)溶于二氯甲烷(4mL)中，加三氟乙酸(1mL)，25℃反应1小时。反应完毕后，浓缩，经Pre-HPLC(C18色谱柱，A：0.05％三氟乙酸水溶液，B：乙腈，浓度梯度：20％B至75％B，11min，流速：15mL/min，254nm)分离纯化，浓缩，碳酸氢钠溶液中和，产物析出，过滤，得到化合物100(29.9mg)。
ESI-MS m/z:574.10 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21–9.19(m,1H),8.87–9.86(m,1H),7.68–7.65(m,1H),7.46–7.35(m,4H),7.30–7.27(m,1H),7.26–7.22(m,1H),7.07–7.04(m,1H),6.03(d,J＝3.7Hz,1H),5.04–4.98(m,1H),4.52–4.40(m,5H),4.27–4.16(m,3H),3.82(dd,J＝10.9,4.2Hz,1H),3.69–3.64(m,1H),3.63–3.57(m,1H),3.50–3.41(m,1H),2.93–2.83(m,2H),2.54–2.43(m,6H),2.39–2.28(m,3H),2.25–2.09(m,3H),1.97–1.82(m,5H),1.81–1.72(m,4H),1.57(d,J＝7.0Hz,1H),1.51(d,J＝7.0Hz,2H),1.29–1.25(m,3H),1.04(d,J＝6.5Hz,3H),0.91–0.87(m,3H),0.83–0.78(m,3H),0.74–0.70(m,2H),0.54–0.46(m,2H).
实施例104化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物104-1的合成
将M36(80.0mg)和1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲醛(30.0mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，滴加一滴醋酸，室温反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(17.8mg)，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体73.0mg，即化合物104-1。ESI-MS m/z:764.3[M+H]+。
步骤2：化合物104-2的合成
将104-1(73.0mg)溶于DCM(1mL)和TFA(1mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM (20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体55.0mg，即化合物104-2。ESI-MS m/z:664.1[M+H]+。
步骤3：化合物104-3的合成
将104-2(55.0mg)和M28(61.6mg)溶于甲醇(8mL)中，加入1M氯化锌的乙醚溶液(0.25mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(29.2mg)，60℃反应8小时，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体78.0mg，即化合物104-3。ESI-MS m/z:621.4 1/2[M+2H]+。
步骤4：化合物104的合成
将104-3(78.0mg)溶于DCM(2mL)和TFA(1mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末15.3mg，即化合物104。
ESI-MS m/z:599.2 1/2[M+2H]+。
实施例105：化合物(2S，4R)-1-(R)-2-(3-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物105-1的合成
在反应瓶中加入商业可得的2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(310.00mg)，中间体M34(791.14mg)，N,N-二甲基乙酰胺(6.00mL)，N,N-二异丙基乙胺(0.68mL)，微波150℃反应1h，加EA和水萃取，干燥，浓缩。柱层析分离产物，得黄色固体化合物105-1(300mg)，ESI-MS m/z:408.24[M+H]+。
步骤2：化合物105-2的合成
在反应瓶中加入化合物105-1(300mg)，甲醇(4.00mL)，水(1.00mL)，一水合氢氧化锂(185.35mg)，室温反应2h。先将溶剂浓缩，然后用稀盐酸调pH＝3，用DCM和甲醇萃取，干燥，浓缩，得到黄色油状物105-2(270mg)，ESI-MS m/z:394.23[M+H]+。
步骤3：化合物105-3的合成
在反应瓶中加入化合物105-2(260mg)，M29-2 4-羟基-N-1-4-(4-甲基1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(241mg)，N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，N,N-二异丙基乙胺(0.33mL)，搅拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(301mg)，室温反应0.5h，加水稀释，EA萃取，干燥，浓缩，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝20:1)，得到黄色固体310mg，然后再用SFC拆分，得到单一化合物105-3(105mg)，ESI-MS m/z:707.35[M+H]+。
步骤4：化合物105-4的合成
在反应瓶中加入化合物105-3(105mg)，二氯甲烷(3mL)，搅拌下加入4M氯化氢的二氧六环溶液(0.5mL)，室温反应0.2h，析出大量固体，倾去上清液，固体加甲醇溶解，加DCM稀释，再加碳酸氢钠水溶液调pH＝8，萃取，干燥，浓缩，得到黄色固体化合物105-4(70mg)，ESI-MS m/z:707.35[M+H]+。
步骤5：化合物105-5的合成
在反应瓶中加入中间体M28(50mg)，化合物105-4(56mg)，甲醇(1.50mL)，1,2-二氯乙烷(1.50mL)，1M氯化锌的乙醚溶液(0.08mL)，40℃反应1h然后加入氰基硼氢化钠(53.04mg)，40℃反应8h，加入碳酸氢钠水溶液稀释，DCM萃取，干燥，浓缩，用Pre-TLC分离，展开剂用DCM:氨甲醇＝15:1，得到白色固体105-5(50mg)，ESI-MS m/z:592.68 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物105的合成
在反应瓶中加入化合物105-5(50.00mg)，二氯甲烷(1.50mL)，三氟乙酸(1.50mL)，室温反应0.5h，浓缩，然后Pre-HPLC分离，得到化合物105(21mg)。
ESI-MS m/z:570.62 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.32–9.01(m,1H),8.75–8.50(m,1H),7.58–7.47(m,1H),7.33(dt,J＝9.1,4.7Hz,2H),7.27(d,J＝7.7Hz,4H),7.21–7.10(m,2H),6.85(d,J＝126.4Hz,1H),5.67(d,J＝9.9Hz,1H),4.99–4.90(m,1H),4.76–4.68(m,1H),4.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.36–4.12(m,3H),3.99–3.77(m,1H),3.66–3.42(m,7H),3.29–3.01(m,2H),2.53–2.34(m,8H),2.24–1.96(m,5H),1.87–1.48(m,12H),1.39–1.21(m,9H),1.04–0.84(m,6H),0.83–0.74(m,3H).
实施例110化合物(3S，7aS)-7a-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯里嗪-3-基)甲基4-(5-((R)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异恶唑-3-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
步骤1：化合物110-1的合成
往中间体M32反应液中加入化合物M36(73.0mg)，20℃搅拌1小时。LCMS监测反应完成。加入H2O稀释，EA萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤三次，再用无水硫酸钠干燥。经柱层析纯化得淡黄色固体(55.1mg)。即化合物110-1。ESI-MS m/z:635.2 1/2[M+2H]+
步骤2：化合物110的合成
将110-6(55.1mg)加入DCM(2mL)和TFA(1mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末22.2mg，即化合物110。
ESI-MS m/z:613.2 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.22(d,J＝9.5Hz,1H),8.87(s,1H),7.88(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.44-7.38(m,4H),7.29(d,J＝3.0Hz,1H),7.24(t,J＝4.0Hz,1H),7.08-7.06(m,1H),6.11(d,J＝10.5Hz,1H),5.03-5.01(m,1H),4.97-4.93(m,1H),4.85-4.80(m,1H),4.50-4.49(m,2H),4.19-4.08(m,2H),4.00-3.79(m,2H),3.79-3.38(m,12H),3.33-3.19(m,4H),3.10-3.00(m,1H),2.65-2.71(m,1H),2.50-2.41(m,4H),2.40-2.30(m,2H),2.29-1.90(m,6H),1.89-1.72(m,5H),1.55-1.45(m,3H),1.40-1.20(m,2H),1.10-0.79(m,9H)。
实施例111化合物(2S，4R)-1-(R)-2-(3-(4-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物111-1的合成
把4-[(哌啶-4-基)甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400.00mg)、化合物M34(815.16mg)、DIPEA(0.70mL,4.23mmol)加到DMA(3.00mL)中，在150℃下反应2h。加水50mL稀释，用EA萃取两遍，饱和食盐水洗涤，柱层析分离(PE:EA＝1：1)得化合物111-1(380.00mg，57.95％)。
ESI-MS m/z:465.33[M+H]+。
步骤2：化合物111-2的合成
把化合物111-1(370.00mg)、无水氢氧化锂(47.68mg)加到水(2.00mL)、甲醇(2.00mL)和四氢呋喃(2.00mL)中，在室温下反应1h。加水稀释，用1N的盐酸水溶液调节pH＝3,用DCM萃取三遍，无水硫酸钠干燥，浓缩干得化合物111-2(350mg,97.54％)。
ESI-MS m/z:451.35[M+H]+。
步骤3：化合物111-3的合成
把化合物111-2(340.00mg)、DIPEA(0.62mL)、HATU(373.01mg)、化合物M29-2(250.10mg)依次加到二氯甲烷(8.00mL)中，在室温下反应2h。加水，用DCM萃取，饱和食盐水洗涤，干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝91％:9％)后经手性柱拆分得化合物111-3(100mg,17.35％)。
ESI-MS m/z:764.55[M+H]+。
步骤4：化合物111-4的合成
把化合物111-3(100.00mg)、三氟乙酸(1.00mL)加到二氯甲烷(2.00mL)中，在室温下反应1h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液40mL调碱，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，浓缩干得化合物111-4(80.00mg,92.06％)
ESI-MS m/z:664.49[M+H]+。
步骤5：化合物111-5的合成
把化合物111-4(80.00mg)、化合物M28(71.41mg)、1.0M氯化锌四氢呋喃溶液 (0.24mL)加到甲醇(3.00mL)和1,2-二氯乙烷(3.00mL)中，在40℃反应2h，再加入氰基硼氢化钠(75.72mg)，在40℃反应3h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物111-5(70.00mg,46.83％)。
ESI-MS m/z:621.24 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物111的合成
把化合物111-5(70.00mg)、三氟乙酸(1.00mL)加入二氯甲烷(2.00mL)中，在室温下反应1h。将反应液浓缩Pre-HPLC分离纯化得化合物111(25.40mg，36.67％)
ESI-MS m/z:599.17 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝8.0Hz,1H),8.87(s,1H),7.67(dd,J＝8.8,5.9Hz,1H),7.46–7.36(m,4H),7.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.24(t,J＝9.3Hz,1H),7.05(s,1H),6.08(s,1H),5.06–4.99(m,1H),4.49(dt,J＝10.1,5.9Hz,3H),4.45–4.38(m,2H),4.28–4.20(m,1H),3.84(dd,J＝10.8,4.1Hz,1H),3.68–3.42(m,8H),2.81(t,J＝12.2Hz,2H),2.66–2.29(m,15H),2.18(t,J＝11.9Hz,6H),1.95(ddd,J＝8.6,6.6,3.4Hz,1H),1.89–1.68(m,7H),1.58(d,J＝7.0Hz,1H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.26–1.16(m,3H),1.04(d,J＝6.5Hz,3H),0.92–0.86(m,4H),0.82(dd,J＝16.2,7.6Hz,3H),0.72(s,2H),0.51(s,2H).
实施例112化合物(2S，4R)-1-(R)-2-(3-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物112-1的合成
把化合物M36(50.00mg)、化合物M28(52.27mg)、1.0M氯化锌,四氢呋喃溶液(0.18mL)加到甲醇(2.00mL)和1,2-二氯乙烷(2.00mL)中，在40℃反应2h，再加入氰基硼氢化钠(27.71mg)，在40℃反应3h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物112-1(15.00mg,14.87％)。
ESI-MS m/z:572.74 1/2[M+2H]+。
步骤2：化合物112的合成
把化合物112-1(15.00mg)、三氟乙酸(0.50mL)加入二氯甲烷(1.00mL)中，在室温下反应1h。将反应液浓缩Pre-HPLC分离纯化得化合物112(8.50mg，56.67％)
ESI-MS m/z:550.57 1/2[M+2H]+。
实施例113化合物(2S，4R)-1-(R)-2-(3-(3aR，6aS)-5-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物113-1的合成
化合物(3aR，6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(242.60mg)加入N,N-二甲基乙酰胺(2.50mL)，再加入三乙胺(0.72mL)。反应升至120℃搅拌0.5小时。最后加入M34(500.00mg)。120℃搅拌5小时。LCMS监测反应完成。加入H2O稀释，EA萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤三次，再用无水硫酸钠干燥。经柱层析纯化得淡黄色固体(212.00mg,收率51.86％)。即化合物113-1。
步骤2：化合物113-2的合成
化合物113-1(212.00mg)加入四氢呋喃(2.00mL)，甲醇(2.00mL)和水(2.00mL)，一水合氢氧化锂(113.04mg,2.69mmol)。20℃搅拌1小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，稀盐酸调至pH＝5，再用二氯甲烷/异丙醇＝5/1萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥。粗品直接用于下一步。得淡黄色固体(209.00mg)。即化合物113-2。
步骤3：化合物113-3的合成
化合物113-2(201.53mg)和M29-2(160.00mg)加入到25mL单口瓶中，加入N,N-二甲基乙酰胺(3.00mL)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(238.63mg,0.63mmol),N,N-二异丙基乙胺(0.40mL,2.41mmol)。20℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。加入H2O稀释，EA萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤三次，再用无水硫酸钠干燥。粗品经SFC拆分得淡黄色固体(96.00mg)。即化合物113-3。
步骤4：化合物113-4的合成
化合物113-3(96.00mg)加入到25mL单口瓶中，加入二氯甲烷(2.00mL)和4M氯化氢二氧六环溶液(1.00mL)。20℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，再用饱和NaHCO3溶液调至pH＝8，二氯甲烷/异丙醇＝5/1萃取两次，有机层用饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥。粗品直接用于下一步。得淡黄色固体(84.00mg)。即化合物113-4。
步骤5：化合物113-5的合成
化合物M28(70.00mg)和113-4(83.99mg)加入到25mL单口瓶中，加入甲醇(2.00mL)，再加入氯化锌(0.18mL,1.00mol/L)，反应升至40℃搅拌2小时。最后加入氰基硼氢化钠(25.98mg,0.41mmol)，50℃搅12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得淡黄色固体(88.00mg,收率63.72％)。即化合物113-5。
步骤6：化合物113的合成
化合物113-5(88.00mg)加入到25mL单口瓶中，加入二氯甲烷(4.00mL)，再加入三氟乙酸(1.50mL)。20℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，粗品经HPLC制备得纯品，得白色固体(42.20mg,收率48.01％)。即化合物113。
ESI-MS m/z:563.70 1/2[M+2H]+
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.08(dd,J＝7.3,2.6Hz,1H),8.77(d,J＝6.3Hz,1H),7.57(dd,J＝9.1,5.7Hz,1H),7.39–7.23(m,5H),7.20(dt,J＝4.3,2.6Hz,1H),7.14(td,J＝9.3,4.7Hz,1H),7.01–6.95(m,1H),5.89–5.85(m,1H),4.92(d,J＝7.0Hz,1H),4.50(s,2H),4.39(dt,J＝11.7,4.1Hz,2H),4.35–4.30(m,2H),4.19–4.09(m,1H),3.71(dt,J＝10.7,3.8Hz,1H),3.58–3.48(m,2H),3.38–3.31(m,1H),3.25(d,J＝6.3Hz,2H),3.04(q,J＝9.7,8.3Hz,2H),2.83(s,3H),2.49(d,J＝31.0Hz,3H),2.37(d,J＝2.0Hz,3H),2.26(dt,J＝9.7,6.6Hz,1H),2.12–2.02(m,3H),1.87–1.80(m,1H),1.77–1.72(m,1H),1.67(dt,J＝11.7,7.0Hz,2H),1.46(dd,J＝7.0,3.7Hz,2H),1.40(d,J＝7.0Hz,3H),0.93(dt,J＝6.6,3.1Hz,3H),0.80–0.77(m,4H),0.76(d,J＝6.3Hz,3H),0.71(d,J＝7.2Hz,2H),0.63(s,2H),0.45(s,2H).
实施例114化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物114-1的合成
将2-(3-羟基异恶唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(567.0mg)，4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(573.0mg)，三苯基磷(1.12g)溶解于THF(10mL)中，氮气保护，缓慢加入偶氮二甲酸二异丙酯(863mg)，60℃反应4小时。LCMS监测反应完成，向反应液中加入EA(20mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体850.0mg，即化合物114-1。ESI-MS m/z:383.2[M+H]+。
步骤2：化合物114-2的合成
将化合物114-1(850.0mg)加入甲醇(10mL)和水(2mL)中，添加一水合氢氧化锂 (467.0mg)，室温反应1小时，LCMS监测反应完成。将反应液pH值调节至3，加入EA(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体825.0mg，即化合物114-2。ESI-MS m/z:369.2[M+H]+。
步骤3：化合物114-3的合成
将化合物114-2(825.0mg)，(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(821mg)和HATU(1028mg)溶解于DMF(10mL)中，添加DIPEA(1.18mL)，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入EA(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机相，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体1291.0mg，即化合物114-3。ESI-MS m/z:682.3[M+H]+。
步骤4：化合物114-4的合成
将化合物114-3(1291mg)SFC拆分，浓缩，得白色固体502mg，即化合物114-4。ESI-MS m/z:682.3[M+H]+。
步骤5：化合物114-5的合成
将114-4(502.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体426mg，即化合物114-5。ESI-MS m/z:582.3[M+H]+。
步骤6：化合物114-6的合成
将化合物114-5(200.0mg)和M28(207mg)溶于甲醇(10mL)中，加入1.0M氯化锌乙醚溶液(0.52mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(64.8mg)，60℃反应12小时，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体310mg，即化合物114-6。ESI-MS m/z:579.8 1/2[M+2H]+。
步骤7：化合物114的合成
将114-6(310mg)加入DCM(10mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末48.0mg，即化合物114。
ESI-MS m/z:558.1 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.19(d,J＝8.4Hz,1H),8.86(s,1H),7.66(dd,J＝9.0,5.9Hz,1H),7.47–7.35(m,4H),7.29(t,J＝2.5Hz,1H),7.24(dd,J＝12.5,6.2Hz,1H),7.07(t,J＝2.4Hz,1H),5.98(d,J＝1.8Hz,1H),5.08–4.96(m,1H),4.63–4.35(m,7H),4.24(t,J＝13.8Hz,1H),3.86–3.78(m,1H),3.67–3.39(m,4H),2.87(s,2H),2.57–2.29(m,9H),2.25–2.10(m,3H),2.02(d,J＝5.6Hz,3H),1.95(ddd,J＝13.2,8.7,4.7Hz,1H),1.82(dd,J＝35.3,10.7Hz,7H),1.51(d,J＝7.0Hz,4H),1.27(s,2H),1.03(t,J＝15.0Hz,4H),0.81(dd,J＝16.3,7.5Hz,4H),0.72(s,3H),0.50(s,2H).
实施例115化合物(2S，4R)-1-(R)-2-(3-(4-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物115-1的合成
把化合物M36(90.00mg)、4-[(哌啶-4-基)甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(63.28mg)、氯化锌,1.0M四氢呋喃溶液(0.32mL,1.00mol/L)加到甲醇(2.00mL)和1,2-二氯乙烷(2.00mL)中，在40℃反应2h，再加入氰基硼氢化钠(49.90mg)，在40℃反应3h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物115-1(87.00mg,73.35％)。
ESI-MS m/z:750.59[M+H]+。
步骤2：化合物115-2的合成
把化合物115-1(87.00mg)、三氟乙酸(1.00mL)加入二氯甲烷(2.00mL)中，在室温下反应1h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液40mL调碱，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，经柱层析(DCM:MeOH＝90％:10％)分离得化合物115-2(60.00mg,79.59％)
ESI-MS m/z:650.48[M+H]+。
步骤3：化合物115-3的合成
把化合物115-2(50.00mg)、化合物M28(42.19mg)、1.0M氯化锌四氢呋喃溶液(0.15mL)加到甲醇(2.00mL)和1,2-二氯乙烷(2.00mL)中，在40℃反应2h，再加入氰基硼氢化钠(24.16mg)，在40℃反应3h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物115-3(35.00mg,38.49％)。
ESI-MS m/z:614.18 1/2[M+2H]+。
步骤4：化合物115的合成
把化合物115-3(35.00mg)、三氟乙酸(0.50mL)加入二氯甲烷(1.00mL)中，在室温下反应1h。将反应液浓缩Pre-HPLC分离纯化得化合物115(11.40mg，33.59％)
ESI-MS m/z:592.27 1/2[M+2H]+。
实施例116化合物(2S，4R)-1-(R)-2-(3-(4-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物116-1的合成
把化合物M36(80.00mg)、3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(72.52mg)、氯化锌,1.0M四氢呋喃溶液(0.28mL,1.00mol/L)加到甲醇(2.00mL)和1,2-二氯乙烷(2.00mL)中，在40℃反应2h，再加入氰基硼氢化钠(44.37mg)，在40℃反应3h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物116-1(60.00mg,58.56％)。
ESI-MS m/z:722.57[M+H]+。
步骤2：化合物116-2的合成
把化合物116-1(60.00mg)、三氟乙酸(1.00mL)加入二氯甲烷(2.00mL)中，在室温下反应1h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液40mL调碱，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，经柱层析(DCM:MeOH＝90％:10％)分离得化合物116-2(40.00mg,77.41％)。
ESI-MS m/z:622.46[M+H]+。
步骤3：化合物116-3的合成
把化合物116-2(40.00mg)、化合物M28(45.75mg)、1.0M氯化锌四氢呋喃溶液(0.13mL)加到甲醇(2.00mL)和1,2-二氯乙烷(2.00mL)中，在40℃反应2h，再加入氰基硼氢化钠(22.20mg)，在40℃反应3h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物116-3(30.00mg,38.93％)。
ESI-MS m/z:600.30 1/2[M+2H]+。
步骤4：化合物116的合成
把化合物116-3(30.00mg)、三氟乙酸(0.50mL)加入二氯甲烷(1.00mL)中，在室温下反应1h。将反应液浓缩Pre-HPLC分离纯化得化合物116(15.00mg，49.67％)
ESI-MS m/z:578.14 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.24(d,J＝3.7Hz,1H),8.87(d,J＝3.2Hz,1H),7.67(dt,J＝9.1,5.5Hz,1H),7.46–7.38(m,4H),7.31–7.28(m,1H),7.27–7.22(m,1H),7.06(t,J＝2.6Hz,1H),6.10–6.00(m,1H),5.07–4.99(m,1H),4.59–4.48(m,2H),4.45–4.35(m,3H),4.30(t,J＝13.4Hz,1H),4.16(s,2H),3.84(dd,J＝10.8,4.2Hz,1H),3.62(dt,J＝29.2,9.1Hz,3H),3.47(dd,J＝17.9,8.2Hz,1H),2.50–2.29(m,10H),2.24–2.10(m,3H),2.03(s,1H),2.00–1.92(m,2H),1.85(s,1H),1.82–1.74(m,2H),1.58(dd,J＝7.0,2.9Hz,1H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.31–1.26(m,10H),1.05(d,J＝6.5Hz,3H),0.85(ddd,J＝24.4,15.5,7.1Hz,12H).
实施例117化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲 基)哌啶-4-基)氧基)吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物117-1的合成
在反应瓶中加入4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.47g)，6-溴吡啶-3-醇(2.00g)，四氢呋喃(50.00mL)，三苯基膦(3.92g)，降温至0℃，然后缓慢加入偶氮二甲酸二异丙酯(3.02g)，加完恢复室温反应6h。加水稀释，EA萃取，干燥，浓缩。柱层析分离产物(PE:EA＝4:1)，得到无色液体化合物117-1(3.3g)，ESI-MS m/z:301.1[M+H-t-Bu]+。
步骤2：化合物117-2的合成
在反应瓶中加入化合物117-1(1.00g)，双三苯基磷二氯化钯(0.10g)，三乙胺(4.67mL)，四氢呋喃(5.00mL)，氮气置换后室温反应10min，再加入碘化亚铜(0.03g)和乙炔基三甲基硅烷(0.41g)，氮气置换后室温反应2.5h，反应液直接柱层析纯化(PE:EA＝4:1)，得到黄色固体117-2(930mg)，ESI-MS m/z:375.2[M+H]+。
步骤3：化合物117-3的合成
在反应瓶中加入化合物117-2(930.00mg)，甲醇(3.00mL)，碳酸钾(686.35mg)，室温反应1h，过滤，滤饼用EA洗三次，母液浓缩后柱层析纯化(PE:EA＝2:1)，得到黄色固体117-3(702mg)，ESI-MS m/z:303.4[M+H]+。
步骤4：化合物117-4的合成
在反应瓶中加入化合物117-3(99.33mg)，M29(100.00mg)，硫酸铜(31.46mg)，抗坏血酸钠(112.80mg)，四氢呋喃(1.50mL)，叔丁醇(1.50mL)，水(1.50mL)，60℃反应2h，浓缩，然后加DCM萃取，干燥，浓缩。柱层析纯化(DCM:氨甲醇＝25:1)，得到淡黄色固体117-4(91mg)，ESI-MS m/z:759.4[M+H]+。
步骤5：化合物117-5的合成
在反应瓶中加入117-4(91.00mg)，二氯甲烷(3.00mL)，4M氯化氢二氧六环溶液 (0.18mL)，室温反应0.2h，析出大量固体，倾去反应液，固体加甲醇溶解，加DCM稀释，再加碳酸氢钠水溶液调pH＝8，萃取，干燥，浓缩。得到化合物117-5(72mg)，ESI-MS m/z:659.4[M+H]+。
步骤6：化合物117-6的合成
在反应瓶中加入化合物117-5(61.14mg)，中间体M28(50.00mg)，甲醇(1.00mL)，1,2-二氯乙烷(1.00mL)，氯化锌(11.50mg)，40℃反应1h，然后加氰基硼氢化钠(53.04mg)，继续反应4h，将溶剂浓缩，加水稀释，然后用DCM，MeOH萃取，干燥，浓缩。Pre-TLC分离纯化，得到黄色固体117-6(52mg)，ESI-MS m/z:618.8 1/2[M+2H]+。
步骤7：化合物117的合成
在反应瓶中加入化合物117-6(51.00mg)，二氯甲烷(1.00mL)，三氟乙酸(1.00mL)，室温反应0.6h，浓缩，然后加DCM溶解，将反应液加到冰的碳酸氢钠水溶液中调pH＝8，DCM和甲醇萃取，干燥，浓缩。用Pre-TLC制备，展开剂DCM:MeOH＝11:1，得到化合物117(24mg)。
ESI-MS m/z:596.66 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.12(d,J＝12.6Hz,1H),8.65(s,1H),8.52–8.35(m,1H),8.11(d,J＝27.8Hz,1H),7.92–7.70(m,2H),7.53–7.39(m,1H),7.28(m,1H),7.23–7.03(m,6H),5.18–5.00(m,2H),4.38(m,8H),3.70(m,2H),3.24(d,J＝73.9Hz,3H),2.77(s,2H),2.49(m,8H),2.33(d,J＝8.2Hz,4H),2.13–1.84(m,7H),1.79–1.53(m,5H),1.45(t,J＝9.8Hz,3H),1.34–1.17(m,5H),1.06(s,3H),0.75(s,6H).
实施例118化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-(7-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物118-1的合成
把2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(280.00mg)、5-乙炔基-2-氟吡啶(224.76mg)、碳酸铯(1209.31mg)加到DMSO(3.00mL)中，在50℃反应3h。向反应液中加入水40mL，用EA萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(PE:EA＝75％:25％)得化合物118-1(290.00mg,71.59％)
ESI-MS m/z:328.33[M+H]+。
步骤2：化合物118-2的合成
将化合物118-1(121.90mg)、化合物M29(170.00mg)、抗坏血酸钠(184.40mg)、硫酸铜(59.42mg)加到THF/四氢呋喃(2.00mL)、水(2.00mL)和叔丁醇(2.00mL)中，在室温下反应3h。向反应液加50mL水，用EA萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝93％:7％)得化合物118-2(230mg,78.80％)
ESI-MS m/z:784.61[M+H]+。
步骤3：化合物118-3的合成
把化合物118-2(230.00mg)、三氟乙酸(1.00mL)依次加到二氯甲烷(2.00mL)中，在室温下反应1h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液40mL调碱，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，浓缩干得化合物118-3(200.00mg,99.68％)
ESI-MS m/z:684.50[M+H]+。
步骤4：化合物118-4的合成
把化合物118-3(190.00mg)、化合物M28(164.63mg)、氯化锌,1.0M四氢呋喃溶液(0.56mL,1.00mol/L)加到甲醇(3.00mL)和1,2-二氯乙烷(3.00mL)中，在60℃反应2h，再加入氰基硼氢化钠(87.28mg)，在60℃反应3h。将反应液浓缩，加30mL水，用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥，柱层析分离(DCM:MeOH＝90％:10％)得化合物118-4(100.00mg,28.56％)。
ESI-MS m/z:631.21 1/2[M+2H]+。
步骤5：化合物118的合成
把化合物118-4(100.00mg)、TFA/三氟乙酸(1.00mL)加入二氯甲烷(2.00mL)中，在室温下反应1h。将反应液浓缩Pre-HPLC分离纯化得化合物118(42.40mg，43.40％)
ESI-MS m/z:609.32 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.11(d,J＝5.8Hz,1H),8.76(d,J＝6.8Hz,1H),8.38(d,J＝1.7Hz,1H),8.28(d,J＝2.7Hz,1H),7.83(dt,J＝6.9,3.1Hz,1H),7.57(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),7.37–7.26(m,4H),7.20(d,J＝2.6Hz,1H),7.14(t,J＝9.3Hz,1H),6.97(t,J＝2.7Hz,1H),6.36(dd,J＝8.8,3.3Hz,1H),5.23(d,J＝10.3Hz,1H),4.95(q,J＝7.0Hz,1H),4.46–4.29(m,5H),4.15(t,J＝13.4Hz,1H),3.80(dt,J＝25.0,7.5Hz,2H),3.65(s,4H),3.55(dd,J＝12.3,4.8Hz,1H),3.36(q,J＝10.5Hz,1H),2.60–2.30(m,11H),2.17–2.01(m,3H),1.93(s,1H),1.87(ddd,J＝19.5,9.9,5.3Hz,1H),1.79–1.65(m,7H),1.42(d,J＝7.0Hz,3H),1.22–1.15(m,6H),1.05(t,J＝8.2Hz,3H),0.75–0.68(m,6H),0.64(s,2H),0.43(s,2H).
实施例119：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物119-1的合成
将M39(0.155g)，M28(0.100g)溶于4.00mL无水甲醇中，加入1M氯化锌乙醚溶液(0.337mL)，40℃反应1h后加入氰基硼氢化钠(106mg)，40℃反应4h。向反应液加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，DCM/MeOH＝10/1混合溶剂萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得0.150g黄色固体产物，即化合物119-1。ESI-MS m/z:617.3 1/2[M+2H]+；
步骤2：化合物119的合成
室温下，将119-1(150mg)溶于5.00mL二氯甲烷中，然后加入2.00mL三氟乙酸，室温反应1h。减压蒸出溶剂后，二氯甲烷复溶，再次蒸出溶剂，5.00mL四氢呋喃复溶后加入1.00mL水，加入碳酸钠固体搅拌20min，然后加入无水硫酸钠干燥后过滤，减压浓缩后经Pre-HPLC纯化得66.5mg白色固体产物，即化合物119。
ESI-MS m/z:595.3 1/2[M+2H]+；1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.22(s,1H),8.91–8.83(m,1H),8.57–8.46(m,1H),7.79–7.62(m,3H),7.43(td,J＝13.1,12.4,8.2Hz,3H),7.34–7.18(m,4H),7.05(dt,J＝6.5,3.2Hz,1H),5.57(s,1H),5.05(p,J＝6.5,6.0Hz,1H),4.60–4.37(m,5H),4.25(t,J＝15.0Hz,1H),3.93–3.77(m,2H),3.63(dd,J＝34.6,13.4Hz,2H),3.48(t,J＝11.2Hz,1H),3.22(dd,J＝21.4,11.5Hz,3H),2.54(s,2H),2.47–2.39(m,2H),2.27–2.01(m,5H),1.76(dd,J＝23.1,11.4Hz,5H),1.55(dd,J＝7.0,1.9Hz,2H),1.33–1.21(m,4H),1.12(s,3H),0.85–0.67(m,5H),0.53(s,2H).
实施例120：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(5-(((3S，7aS)-7a-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲氧基)甲酯)-1H-1-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S，-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酸羟肟的合成-
步骤1：化合物120-1的合成
将M31(100mg)溶于3mLTHF中，加入NaH(12mg)，室温搅拌30分钟，然后加入3-溴丙炔(15ul)，插入氮气球，25℃下搅拌2h。LC-MS监测反应完成。向反应液缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得淡黄色固体65mg即化合物120-1。ESI-MS m/z:714[M+H]+；
步骤2：化合物120-2的合成
将化合物120-1(65mg)和M29(50mg)溶于2mL THF，2mL H2O，2mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(47mg)和无水硫酸铜(13mg)，室温反应0.5h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用DCM:MeOH＝4:1萃取3次，每次20mL，合并有 机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体54mg，即化合物120-2。ESI-MS m/z:586 1/2[M+2H]+。
步骤3：化合物120的合成
将120-2(54mg)溶于2mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末18.4mg，即化合物120。
ESI-MS m/z:564 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21–9.20(m,1H),8.87(s,1H),8.14(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.44–7.39(m,4H),7.30–7.29(m,1H),7.26–7.21(m,1H),7.07–7.06(m,1H),5.31(d,J＝10.2Hz,1H),4.62–4.60(m,10H),4.54–4.45(m,4H),4.39–4.17(m,3H),3.90-3.80(m,2H),3.73–3.57(m,2H),3.51–3.39(m,3H),3.02-3.01(m,1H),2.57–2.51(m,1H),2.48–2.39(m,4H),2.29–2.04(m,6H),1.97–1.91(m,1H),1.89-1.85(m,1H),1.78-1.71(m,2H),1.69-1.62(m,2H),1.53–1.49(m,2H),1.30–1.27(m,5H),1.14–1.08(m,3H),0.83–0.73(m,6H).
实施例121化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(2-((3S,7aS)-7a-(((7-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲氧基)吡啶-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物121-1的合成
将氢化钠(26.6mg)和M31(150.0mg)溶解于THF(5mL)中，室温搅拌0.5小时。向反应液中加入4-乙炔基-2-氟吡啶(35.0mg)，室温反应3小时。LCMS监测反应完成，向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得黄色固体23.0mg，即化合物121-1。ESI-MS m/z:777.9[M+H]+。
步骤2：化合物121-2的合成
将121-1(23.0mg)，(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(13.5mg)，无水硫酸铜(4.3mg)和抗坏血酸钠(15.3mg)溶解于THF/叔丁醇/水(1/1/1mL)的混合溶剂中，室温反应1小时。LCMS监测反应完成，向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得黄色固体15.0mg，即化合物121-2。ESI-MS m/z:618.3 1/2[M+2H]+。
步骤3：化合物121的合成
将121-2(15.0mg)加入DCM(2mL)和TFA(1mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末5.7mg，即化合物121。
ESI-MS m/z:595.8 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(s,1H),8.87(s,1H),8.57(s,1H),8.47(s,1H),8.08-8.07(m,1H),7.68-7.66(m,1H),7.45-7.39(m,4H),7.29(s, 1H),7.26-7.22(m,1H),7.07(s,1H),6.81(d,J＝10.0Hz,1H),5.37-5.35(d,J＝10.0Hz,1H),5.06-5.02(m,3H),4.55-4.52(m,1H),4.46(s,2H),4.27-4.21(m,1H),3.93-3.86(m,2H),3.58(s,1H),3.49-3.46(m,1H),2.91-2.88(m,3H),2.66-2.62(m,1H),2.52-2.44(m,6H),2.35(s,2H),2.23-2.16(m,3H),2.03-1.98(m,4H),1.81-1.76(m,5H),1.53-1.52(d,J＝5.0Hz,3H),1.31-1.27(d,J＝15.0Hz,3H),1.17-1.16(d,J＝5.0Hz,3H),0.83-0.79(m,6H)。
实施例122化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(4-(((3S，7aS)-7a-((((7-(8-乙基-7-乙基-7-氟氟氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯嘧啶-2-基)氧基)甲基-4，3-d]嘧啶-2-基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物122-1的合成
50mL烧瓶中加入(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((5S,7aS)-5-(羟甲基)-2-甲基四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(M31)140mg，THF 10mL，降温0℃，加入NaH 41mg，升至室温反应0.5小时，加入1-(溴甲基)-4-乙炔基苯(80mg)，加热至45℃反应1小时，冷却至0℃，饱和氯化铵淬灭，EA萃取，有机相水洗，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，柱层析纯化得化合物122-1(49mg)。
步骤2：化合物122-2的合成
50mL烧瓶中加入122-1(49mg)，(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(M29)(32mg)，抗坏血酸钠(33mg)，硫酸铜(10mg)，叔丁醇1mL，THF 1mL，水1mL，室温反应1小时，检测反应完全，加EA萃取，有机相水洗，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，柱层析纯化得化合物122-2(32mg)。
步骤3：化合物122的合成
50mL烧瓶中加入122-2(32mg)，DCM 3mL，TFA1mL，室温反应0.5小时，检测后，减压脱溶，加DCM溶解，用饱和小苏打水溶液调pH＝7-8,搅拌，分层，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，Pre-HPLC纯化得化合物122(13.3mg)。
ESI-MS m/z:602.14 1/2[M+2H]+
实施例123化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(1-(((3S，7aS)-7a-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基哌啶-4-基)-1H-1-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S，-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物123-1的合成
10mL烧瓶中加入M31(100mg)，DCM 2mL，TEA75mg，甲磺酰氯23uL，室温反应2小时，加DCM稀释，饱和小苏打水溶液洗，分层，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，柱层析纯化得化合物123-1(45mg)。
步骤2：化合物123-2的合成
10mL烧瓶中加入123-1(45mg)，DMF 2mL，碳酸铯(145mg)，4-乙炔哌啶(43mg)，加热至60℃反应3小时，加EA稀释，水洗，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，柱层析纯化得化合物123-2(39mg)。
步骤3：化合物123-3的合成
10mL烧瓶中加入123-2(39mg)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(32mg)，抗坏血酸钠(33mg)，硫酸铜(10mg)，叔丁醇1mL，THF 1mL，水1mL，室温反应1小时，检测反应完全，加EA萃取，有机相水洗，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，柱层析纯化得化合物123-3(25mg)。
步骤4：化合物123的合成
10mL烧瓶中加入123-3(25mg)，DCM 3mL，TFA1mL，室温反应0.5小时，检测后，减压脱溶，加DCM溶解，用饱和小苏打水溶液调pH＝7-8,搅拌，分层，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品123，Pre-HPLC纯化得化合物123(1.7mg)。
ESI-MS m/z:590.80 1/2[M+2H]+
实施例124化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-(((3S，7aS))-7a-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲氧基)吡啶-3-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物124-1的合成
向M31(150.00mg,0.22mmol)的四氢呋喃(6.00mL)中，冰水浴冷却，氮气保护,加入氢化钠(26.64mg,60％,0.67mmol)，0℃下反应0.5h，加入5-乙炔-2-氟吡啶(53.77mg,0.44mmol)，然后20℃下反应4h。反应液加入20mL饱和氯化铵中，加入15mL EA，分出有机相，水相5mLEA再萃取1次，合并有机相，有机相干燥，过滤，减压浓缩，柱层析分离纯化，得到85mg黄色泡沫固体。即化合物124-1。ESI-MS m/z:777.30[M+H]+。
步骤2：化合物124-2的合成
向124-1(60.00mg)，M29(35.25mg)的叔丁醇(1.50mL)和四氢呋喃(1.50mL)中，加入硫酸铜(12.32mg)，含有抗坏血酸钠(45.88mg)的水(0.75mL),20℃下反应1h，LCMS转化完全。反应液加入20mL水中，EA萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物柱层析纯化(MEOH：DCM＝1％to 7％)，得到75.00mg黄色泡沫固体。即化合物124-2。ESI-MS m/z:617.7 1/2[M+2H]+。
步骤3：化合物124的合成
向124-2(80.00mg)的二氯甲烷(4.00mL)中，加入三氟乙酸(0.96mL)，20℃下反应0.5h。LCMS转化完全。反应液不加热直接浓缩，Pre-HPLC纯化，得到31.80mg白色粉末。即化合物124。
ESI-MS m/z:595.4 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.21(s,1H),8.99(s,1H),8.72(s,1H),8.67(s,1H),8.54-8.52(m,1H),8.19-8.17(m,1H),7.78-7.75(m,1H),7.46-7.44(m,2H),7.38-7.36(m,2H),7.03(s,1H),6.91-6.88(m,1H),5.34(s,1H),5.19-5.18(m,1H),4.94-4.91(m,1H),4.77-4.75(s,1H),4.42-4.38(m,3H),4.23-4.20(m,1H),4.16-4.11(m,2H),4.03-3.96(m,2H),3.79-3.69(m,2H),2.39-2.34(m,3H),2.12-1.99(m,8H),1.67-1.62(m,3H),1.39-1.34(m,5H),1.17(s,3H),1.15(s,3H),1.08(s,3H),0.72(s,6H).
实施例125化合物(3S,7aS)-7a-((7-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯并[4,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基-4-(((5-(R)-1-(2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-异恶唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸酯的合成
步骤1：化合物125-1的合成
将M35(30.0mg)溶于THF(2mL)中，加入CDI(10.8mg)，40℃反应1小时，然后加入M31(39.7mg)，60℃反应12小时，LCMS监测反应完成。加入甲醇(5.0mL)淬灭反应，将反应液直接浓缩，柱层析分离纯化，得淡黄色固体35.0mg，即化合物125-1。ESI-MS m/z:650.3 1/2[M+2H]+。
步骤2：化合物125的合成
将125-1(35.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，Pre-HPLC纯化，得白色粉末15.3mg，即化合物125。
ESI-MS m/z:627.8 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝7.0Hz,1H),8.87(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.44-7.36(m,4H),7.29(d,J＝2.5Hz,1H),7.24(t,J＝4.5Hz,1H),7.09-7.06(m,1H),5.98-5.92(m,1H),5.26(d,J＝10.0Hz,1H),5.03(d,J＝7.0Hz,1H),4.52-4.49(m,2H),4.43-4.40(m,1H),4.34-4.24(m,2H),4.17-4.13(m,2H),4.07-4.01(m,2H),3.96-3.92(m,1H),3.84-3.81(m,1H),3.70-3.57(m,4H),3.48-3.42(m,2H),3.07-3.04(m,1H),2.93-2.83(m,3H),2.71-2.68(m,1H),2.47(s,3H),2.43-2.35(m,2H),2.23-2.15(m,5H),2.06-1.92(m,4H),1.85-1.77(m,6H),1.51(d,J＝7.0Hz,2H),1.33-1.23(m,6H),1.05(d,J＝6.5Hz,3H),0.91-0.87(m,3H),0.83-0.79(m,3H)。
实施例126化合物(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲基((3-(1-((S)-1-(2S，4R)-4-羟基-2-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)双环[1.1.1]戊-1-基)甲基)氨基甲酸酯的合成
步骤1：化合物126-1的合成
0℃下，将3-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸(1.00g)与二甲羟胺盐酸盐(0.510g)溶于10.0mLDCM中，然后依次加入N,N-二异丙基乙胺(2.17mL)，N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(2.99g)，室温反应3h，向反应液缓慢加入50mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭，EA萃取3次，合并有机相，饱和氯化钠洗3遍，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得1.40g无色油状产物，即化合物126-1。ESI-MS m/z:285[M+H]+；1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ4.51(s,1H),3.66(s,3H),3.18(s,3H),2.80(s,2H),2.02(s,6H),1.44(s,9H).
步骤2：化合物126-2的合成
将化合物126-1(1.40g)溶于20.0mL THF中，冷却至-40℃，加入四氢铝锂(0.330g)，自然升高至室温反应2h，反应液降低温度至0℃，然后向反应液中依次逐渐滴加0.33mL水，0.33mL15％NaOH溶液和0.33mL水，搅拌30min后硅藻土过滤除去不溶性杂质，滤饼用20.0mLEA洗脱3次，收集滤液并无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩后得到0.910g淡黄色油状产物，即化合物126-2。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ9.50(s,1H),4.50(s,1H),3.15(s,2H),1.88(s,6H),1.38(s,9H).
步骤3：化合物126-3的合成
N2保护下，化合物126-2(0.910g)溶于10.0mL无水甲醇中，然后依次加入无水碳酸钾(0.920g)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(0.960g)，室温反应2h。反应液减压浓缩后柱层析分离纯化(PE/EA＝5/1)，得0.480g白色固体，即化合物126-3。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ4.47(s,1H),3.16(s,2H),2.09(s,1H),1.97(s,6H),1.44(s,9H).
步骤4：化合物126-4的合成
室温下，将化合物126-3(0.400g)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(0.818g)，抗坏血酸钠(0.838g)，无水硫酸铜(0.234g)溶于4.00mL叔丁醇，4.00mL四氢呋喃和4.00mL水的混合溶剂中，室温反应1h。向反应液加入50mL水溶液淬灭，DCM/MeOH＝10/1混合溶剂萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得1.050g黄色固体产物，即化合物126-4。ESI-MS m/z:678[M+H]+；
步骤5：化合物126-5的合成
室温下，将化合物126-4(0.800g)溶于10.0mL二氯甲烷中，然后加入3.00mL三氟乙酸，室温反应1h。减压蒸出溶剂后，二氯甲烷复溶，再次蒸出溶剂，5.00mL四氢呋喃复溶后加入1.00mL水，加入碳酸钠固体搅拌20min，然后加入无水硫酸钠干燥后过滤，减压浓缩后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得0.600g黄色固体产物，即化合物126-5。ESI-MS m/z:578[M+H]+；
步骤6：化合物126-6的合成
室温下，将M31(100mg)溶于四氢呋喃(2.00mL)中，依次加入三乙胺(0.165mL)，对硝基氯甲酸苯酯(60.0mg)，4-二甲氨基吡啶(5.50mg)，室温反应过夜后加入化合物126-5(103mg)，室温反应0.5h。向反应液中加入适量水，DCM萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得150mg黄色固体产物，即化合物126-6。ESI-MS m/z:640.7 1/2[M+2H]+；
步骤7：化合物126的合成
室温下，将化合物126-6(150mg)溶于5.00mL二氯甲烷中，然后加入2.00mL三氟乙酸，室温反应1h。减压浓缩后，二氯甲烷复溶，再次蒸出溶剂，5.00mL四氢呋喃复溶后加入1.00mL水，加入碳酸钠固体搅拌20min，然后加入无水硫酸钠干燥后过滤，减压浓缩后经Pre-HPLC纯化得25.1mg白色固体产物，即化合物126。
ESI-MS m/z:618.8 1/2[M+2H]+；1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(s,1H),8.87(d,J＝3.1Hz,1H),7.90(d,J＝11.8Hz,1H),7.66(dd,J＝9.1,5.8Hz,1H),7.42(qd,J＝8.4,7.6,2.8Hz,4H),7.29(d,J＝2.7Hz,1H),7.23(t,J＝9.3Hz,1H),7.06(dd,J＝5.7,2.6Hz,1H),5.25(d,J＝10.3Hz,1H),5.03(q,J＝6.5,6.1Hz,1H),4.94(s,2H),4.55–4.40(m,3H),4.36–4.22(m,2H),4.17(d,J＝10.6Hz,1H),4.03(d,J＝11.3Hz,1H),3.93(dd,J＝10.8,6.0Hz,1H),3.90–3.79(m,2H),3.68(dd,J＝29.6,13.7Hz,2H),3.51–3.38(m,2H),3.23(s,2H),3.04(s,1H),2.84(s,1H),2.70(d,J＝15.5Hz,1H),2.51(d,J＝7.1Hz,2H),2.41(d,J＝15.6Hz,2H),2.28–2.11(m,4H),2.08–1.92(m,8H),1.89–1.73(m,5H),1.51(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(d,J＝13.8Hz,3H),1.10(t,J＝6.9Hz,3H),0.81(q,J＝7.2Hz,3H),0.73(d,J＝6.7Hz,3H).
实施例127化合物((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲基2-(1-(S)-1-(2S，4R)-4-羟基-2-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
步骤1：化合物127-1的合成
将7-叔丁氧羰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(500.0mg)溶于5.0mL THF中，加入硼烷四氢呋喃溶液(4.64mL，1mol/L)，室温反应1h。向反应液中缓慢加入5mLHCl/MeOH溶液，搅拌至无气泡产生后，加入1mol/LNaOH溶液调节pH至碱性，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压蒸除溶剂得无色油状产物450.0mg，即化合物127-1。ESI-MS m/z:200[M+H-56]+
步骤2：化合物127-2的合成
将127-1(250.0mg)溶于5.0mLDCM中，加入戴斯-马丁试剂(387.0mg)，室温反应1h。向反应液中加入适量乙酸乙酯，析出固体过滤除去，滤液加入1mol/L NaOH溶液调节Ph至碱性，萃取分离收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压蒸除溶剂得无色油状产物180.0mg，即化合物127-2。ESI-MS m/z:198[M+H-56]+
步骤3：化合物127-3的合成
N2保护下，化合物127-2(180mg)溶于3.0mL无水甲醇中，加入无水碳酸钾(167mg)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(174mg)，室温反应3h。反应液加入适量水,乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压蒸除溶剂并柱层析纯化得无色油状产物110mg，即化合物127-3，ESI-MS m/z:194[M+H-56]+
步骤4：化合物127-4的合成
室温下，将127-3(120mg)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(218mg)，抗坏血酸钠(223mg)，无水硫酸铜(62.0mg)溶于2.00mL叔丁醇，2.00mL四氢呋喃和2.00mL水的混合溶剂中，室温反应1h。向反应液加入50mL水溶液淬灭，DCM/MeOH＝10/1混合溶剂萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得300mg黄色固体产物，即化合物127-4。ESI-MS m/z:706[M+H]+；
步骤5：化合物127-5的合成
室温下，将127-4(300mg)溶于5.00mL二氯甲烷中，然后加入2.00mL三氟乙酸，室温反应1h。减压蒸出溶剂后，二氯甲烷复溶，再次蒸出溶剂，5.00mL四氢呋喃复溶后加入1.00mL水，加入碳酸钠固体搅拌20min，然后加入无水硫酸钠干燥后过滤，减压蒸除溶剂后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得225mg黄色固体产物，即化合物127-5。ESI-MS m/z:606[M+H]+；
步骤6：化合物127-6的合成
室温下，将M31(100mg)溶于四氢呋喃(2.00mL)中，依次加入三乙胺(0.165mL)，对硝基氯甲酸苯酯(60.0mg)，4-二甲氨基吡啶(5.50mg)，室温反应过夜后加入127-5(99.2mg)，室温反应0.5h。向反应液中加入适量水，DCM萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得155mg黄色固体产物，即化合物127-6。ESI-MS m/z:654.8 1/2[M+2H]+；
步骤7：化合物127的合成
室温下，将127-6(155mg)溶于5.00mL二氯甲烷中，然后加入2.00mL三氟乙酸，室温反应1h。减压蒸出溶剂后，二氯甲烷复溶，再次蒸出溶剂，5.00mL四氢呋喃复溶后加入1.00mL水，加入碳酸钠固体搅拌20min，然后加入无水硫酸钠干燥后过滤，减压蒸除溶剂后经Pre-HPLC纯化得26.8mg白色固体产物，即化合物127。
ESI-MS m/z:632.9 1/2[M+2H]+；1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.22(d,J＝4.4Hz,1H),8.87(d,J＝3.5Hz,1H),7.90(s,1H),7.66(dd,J＝9.1,5.8Hz,1H),7.42(q,J＝8.6,7.8Hz,3H),7.34–7.22(m,2H),7.07(dd,J＝10.1,2.6Hz,1H),5.25(d,J＝10.3Hz,1H),5.12–5.01(m,3H),4.94(s,5H),4.59(s,3H),4.52(t,J＝8.5Hz,2H),4.43(d,J＝25.9Hz,1H),4.30(ddd,J＝29.2,17.1,12.1Hz,2H),4.16(d,J＝10.9Hz,1H),4.06(dd,J＝10.5,4.9Hz,1H),3.97–3.86(m,2H),3.83(s,1H),3.66(dd,J＝24.0,13.8Hz,2H),3.61–3.55(m,1H),3.46(d,J＝12.2Hz,2H),3.40–3.36(m,1H),3.05(s,1H),2.70(d,J＝15.4Hz,1H),2.55(dt,J＝10.9,6.5Hz,1H),2.41(d,J＝15.8Hz,1H),2.31–2.14(m,5H),2.10–1.94(m,4H),1.85(s,1H),1.84–1.74(m,3H),1.69(d,J＝5.6Hz,2H),1.54(dd,J＝25.8,6.3Hz,4H),1.30(dd,J＝15.5,11.4Hz,5H),1.12(d,J＝6.7Hz,3H),0.86–0.72(m,5H).
实施例128化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3- 羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物128-1的合成
将M29(1000.0mg)，3-乙炔基-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯(396.9mg)，无水硫酸铜(314.6mg)和抗坏血酸钠(1128.2mg)溶解于THF/叔丁醇/水(10/10/10mL)的混合溶剂中，室温反应3小时。LCMS监测反应完成，向反应液中加入DCM(30mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得黄色固体628.0mg，即化合物128-1。ESI-MS m/z:638.3[M+H]+。
步骤2：化合物128-2的合成
将128-1(295.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体165.0mg，即化合物128-2。ESI-MS m/z:538.3[M+H]+。
步骤3：化合物128-3的合成
将128-2(165.0mg)和N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(61.2mg)溶于甲醇(5mL)中，加入1M氯化锌乙醚溶液(0.46mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(57.9mg)，40℃反应10分钟，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体120.0mg，即化合物128-3。ESI-MS m/z:721.3[M+H]+。
步骤4：化合物128-4的合成
将128-3(120.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体80.0mg，即化合物128-4。ESI-MS m/z:621.3[M+H]+。
步骤5：化合物128-5的合成
将128-4(80.0mg)和M28(76.4mg)溶于甲醇(5mL)中，加入1M氯化锌乙醚溶液(0.19mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(24.3mg)，60℃反应12小时，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体84.0mg，即化合物128-5。ESI-MS m/z:600.3 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物128的合成
将128-5(84.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测 反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末28.9mg，即化合物128。
ESI-MS m/z:578.2 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝2.5Hz,1H),8.87(s,1H),8.04(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.45-7.39(m,4H),7.29(d,J＝2.5Hz,1H),7.24(t,J＝4.5Hz,1H),7.06(t,J＝2.5Hz,1H),5.27(d,J＝10.0Hz,1H),5.03(q,J＝7.0Hz,1H),4.50(t,J＝8.5Hz,2H),4.47-4.44(m,1H),4.42-4.39(m,2H),4.25(t,J＝14.5Hz,1H),3.90-3.87(m,1H),3.82-3.78(m,2H),3.75-3.71(m,2H),3.67-3.58(m,1H),3.49-3.43(m,1H),3.26(q,J＝7.5Hz,2H),3.10-3.04(m,2H),2.59-2.56(m,1H),2.47(s,1H),2.43-2.39(m,1H),2.23-2.17(m,2H),2.01-1.93(m,2H),1.87-1.85(m,1H),1.81-1.73(m,4H),1.51(d,J＝7.0Hz,2H),1.30-1.27(m,6H),1.12(d,J＝7.0Hz,3H),0.90-0.86(m,2H),0.84-0.79(m,3H),0.75(d,J＝6.5Hz,3H),0.71(s,2H),0.49(s,1H)。
实施例129化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(1-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物129-1的合成
将128-2(300.0mg)和1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲醛(119.0mg)溶于甲醇(8mL)中，加入1M氯化锌乙醚溶液(0.61mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(105.2mg)，40℃反应10分钟，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体267.0mg，即化合物129-1。ESI-MS m/z:735.4[M+H]+。
步骤2：化合物129-2的合成
将129-1(267.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体230.0mg，即化合物129-2。ESI-MS m/z:635.4[M+H]+。
步骤3：化合物129-3的合成
将M28(100mg)和化合物129-2(128.5mg)溶于甲醇(8mL)中，加入1M氯化锌乙醚溶液(0.25mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(31.8mg)，60℃反应12小时，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体82.0mg，即化合物129-3。ESI-MS m/z:607.3 1/2[M+2H]+。
步骤4：化合物129的合成
将129-3(82.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末37.6mg，即化合物129。
ESI-MS m/z:585.2 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝8.0Hz,1H),8.87(s,1H),8.03(d,J＝4.0Hz,1H),7.67-7.64(m,1H),7.44-7.39(m,4H),7.29(d,J＝2.5Hz,1H),7.23(t,J＝9.0Hz,1H),7.06(t,J＝2.5Hz,1H),5.27(d,J＝10.5Hz,1H),5.03(q,J＝7.0Hz,1H),4.52-4.39(m,5H),4.24(t,J＝13.5Hz,1H),3.90-3.87(m,1H),3.82-3.78(m,2H),3.74-3.71(m,2H),3.66-3.56(m,1H),3.49-3.41(m,1H),3.26(q,J＝7.5Hz,2H),3.10-3.03(m,2H),2.57-2.53(m,1H),2.47(s,1H),2.41-2.37(m,3H),2.21-2.16(m,2H),1.98-1.91(m,2H),1.86-1.84(m,1H),1.80-1.74(m,2H),1.69-1.66(m,2H),1.51(d,J＝7.0Hz,2H),1.29-1.27(m,6H),1.12(d,J＝6.5Hz,3H),0.91-0.86(m,2H),0.83-0.79(m,3H),0.75-0.74(m,3H),0.70(s,2H),0.49(s,1H)。
实施例130化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(1-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲基哌啶-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物130-1的合成
将M29(800.0mg)，1-叔丁氧羰基-4-乙炔基哌啶(476.7mg)，无水硫酸铜(251.7mg)和抗坏血酸钠(902.5mg)溶解于THF/叔丁醇/水(10/10/10mL)的混合溶剂中，室温反应3小时。LCMS监测反应完成，向反应液中加入DCM(30mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得黄色固体800.0mg，即化合物130-1。ESI-MS m/z:666.3[M+H]+。
步骤2：化合物130-2的合成
将130-1(800.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体577.0mg，即化合物130-2。ESI-MS m/z:566.3[M+H]+。
步骤3：化合物130-3的合成
将130-2(577.0mg)和1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲醛(217.5mg)溶于甲醇(10mL)中，加入1M氯化锌乙醚溶液(1.53mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(192.3mg)，40℃反应10分钟，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体356.0mg，即化合物130-3。ESI-MS m/z:764.1[M+H]+。
步骤4：化合物130-4的合成
将130-3(356.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM (20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体198.0mg，即化合物130-4。ESI-MS m/z:664.1[M+H]+。
步骤5：化合物130-5的合成
将130-4(100.0mg)和M28(134.2mg)溶于甲醇(10mL)中，加入1M氯化锌乙醚溶液(0.25mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(31.8mg)，60℃反应12小时，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体90.0mg，即化合物130-5。ESI-MS m/z:621.3 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物130的合成
将130-5(90.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末41.2mg，即化合物130。
ESI-MS m/z:599.2 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝8.0Hz,1H),8.87(s,1H),7.89(s,1H),7.67-7.64(m,1H),7.44-7.39(m,4H),7.29(d,J＝3.0Hz,1H),7.23(t,J＝9.5Hz,1H),7.06(d,J＝3.0Hz,1H),5.25(d,J＝10.0Hz,1H),5.04(q,J＝6.5Hz,1H),4.53-4.39(m,5H),4.23(t,J＝13.0Hz,1H),3.90-3.87(m,1H),3.81(d,J＝11.0Hz,1H),3.66-3.56(m,1H),3.49-3.41(m,1H),3.08(q,J＝11.5Hz,2H),2.93(d,J＝11.5Hz,2H),2.75-2.69(m,1H),2.58-2.54(m,1H),2.47(s,1H),2.41-2.38(m,1H),2.22-2.14(m,4H),2.09-2.04(m,2H),1.99-1.93(m,4H),1.86-1.84(m,1H),1.79-1.70(m,6H),1.57-1.51(m,4H),1.29-1.26(m,6H),1.12(d,J＝6.5Hz,3H),0.89-0.86(m,2H),0.84-0.79(m,3H),0.74-0.73(m,3H),0.71(s,2H),0.50(s,1H)。
实施例131化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(1-((((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物131-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(100.0mg)，溶于THF(2mL),加入1-Boc-4-乙炔基哌啶(55.0mg)，硫酸铜(35.2mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(160.0mg)，室温反应0.5h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得104.2mg淡黄色固体，即化合物131-1。ESI-MS m/z:666[M+H]+
步骤2：化合物131-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物131-1(104.2mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷异丙醇混合溶液萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得79.0mg黄色固体，即化合物131-2。ESI-MS m/z:566[M+H]+
步骤3：化合物131-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物13-2(79.0mg)，溶于MeOH(3mL)，加入M28(100.0mg)和1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(35.2mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得108.2mg淡黄色固体，即化合物131-3。ESI-MS m/z:572 1/2[M+2H]+
步骤4：化合物131的合成
25mL单口瓶中加入化合物131-3(108.2mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷和异丙醇的混合溶液萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，经Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得白色固体67.6mg，即化合物131。
ESI-MS m/z:550.1 1/2[M+2H]+
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.27–9.19(m,1H),8.87(s,1H),7.87(t,J＝9.3Hz,1H),7.66(dd,J＝8.9,5.9Hz,1H),7.46–7.35(m,4H),7.29(d,J＝2.5Hz,1H),7.23(t,J＝9.2Hz,1H),7.09–7.04(m,1H),5.25(d,J＝10.2Hz,1H),5.08–4.99(m,1H),4.59–4.41(m,5H),4.25(dd,J＝28.6,13.2Hz,1H),3.88(dd,J＝10.9,3.8Hz,1H),3.79(dd,J＝19.9,9.0Hz,1H),3.70–3.58(m,1H),3.45(d,J＝6.9Hz,1H),3.22–3.06(m,2H),2.94(dd,J＝14.3,7.1Hz,1H),2.68(d,J＝29.7Hz,2H),2.59–2.35(m,8H),2.14(dd,J＝22.5,11.5Hz,6H),1.99–1.83(m,4H),1.81–1.58(m,5H),1.54–1.46(m,3H),1.26(dd,J＝17.7,10.1Hz,4H),1.11(t,J＝8.2Hz,3H),0.85–0.68(m,9H),0.51(s,2H).
实施例132化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-((4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)甲基-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物132-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物M1(1.0g)，溶于DCM(10.0mL),加入DIPEA(1.4mL)，3-溴丙炔(0.7g)，室温反应5h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝1:1)，得1.05 g淡黄色固体，即化合物132-1。
步骤2：化合物132-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(100.0mg)，溶于THF(2mL),加入化合物132-1(55.0mg)，硫酸铜(35.2mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(160.0mg)，室温反应0.5h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得105.7mg淡黄色固体，即化合物132-2。
步骤3：化合物132-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物132-2(105.7mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷以及异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得83.2mg黄色固体，即化合物132-3。
步骤4：化合物132-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物132-3(83.2mg)，溶于MeOH(3mL)，加入M28(100.0mg)和1M的氯化锌四氢呋喃溶液溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(35.2mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得94.3mg淡黄色固体，即化合物132-4。
步骤5：化合物132的合成
25mL单口瓶中加入化合物132-4(94.3mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷和异丙醇的混合溶液萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，经Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％)，得白色固体36.1mg，即化合物132。
LCMS：1/2[M+2H]+＝557.57
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.22(s,1H),8.98(s,1H),8.50(d,J＝7.2Hz,1H),7.97(d,J＝13.6Hz,1H),7.81–7.72(m,1H),7.44(d,J＝7.9Hz,2H),7.40–7.29(m,4H),7.03(s,1H),5.24(d,J＝10.1Hz,1H),5.11(d,J＝44.3Hz,1H),4.97–4.84(m,1H),4.75(d,J＝5.7Hz,1H),4.44–4.23(m,5H),4.04(dd,J＝26.8,13.5Hz,1H),3.74(d,J＝6.9Hz,1H),3.65(s,1H),3.52(d,J＝15.4Hz,3H),2.41–2.27(m,9H),2.09(d,J＝48.3Hz,4H),1.83–1.59(m,5H),1.37(d,J＝6.8Hz,3H),1.17(d,J＝11.3Hz,3H),1.02(d,J＝6.8Hz,6H),0.74(d,J＝7.3Hz,3H),0.63(s,5H),0.40(s,2H).
实施例133化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物133-1的合成
将M29(380mg)和4-(4-乙炔基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(310mg)溶于叔丁醇(4mL)、四氢呋喃(4mL)和水(4mL)，加入无水硫酸铜(120mg)，抗坏血酸钠(429mg)，室温反应2h。将反应液旋干，加入DCM和水，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝15:1)得到化合物133-1(560mg)，ESI-MS m/z:742.3[M+H]+。
步骤2：化合物133-2的合成
将化合物133-1(300mg)溶于6mL DCM和4M的氯化氢二氧六环(3mL)溶液中，室温反应0.5h。将反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液，DCM/异丙醇(3：1)萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩得到化合物133-2(254mg)，ESI-MS m/z:642.3[M+H]+。
步骤3：化合物133-3的合成
将化合物133-2(60.0mg)和M28(66.0mg)溶于甲醇(5mL)中，加入氯化锌溶液(0.14mL，1M in THF)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(18mg)，保持40℃继续反应12小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，萃取，收集有机相，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10:1)得到化合物133-3(59mg)。ESI-MS m/z:609.7 1/2[M+2H]+。
步骤4：化合物133的合成
将化合物133-3(59mg)溶于3mL DCM中，加入3mL三氟乙酸，室温反应1h。将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩，经制备液相分离，得到白色粉末20.9mg，即化合物133。
ESI-MS m/z:588.2 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:9.93(d,J＝2.5Hz,1H),9.23(s,1H),8.98(s,1H),8.63(s,1H),8.52(d,J＝7.5Hz,1H),7.82-7.73(m,3H),7.44(d,J＝8.0Hz,2H),7.39-7.32(m,4H),7.30-7.25(m,2H),7.03(d,J＝2.5Hz,1H),5.32(d,J＝10.0Hz,1H),5.17(d,J＝3.5Hz,1H),4.95-4.89(m,1H),4.75(d,J＝10.0Hz,1H),4.44-4.27(m,5H),4.09-4.01(m,1H),3.78(dd,J＝10.5,4.0Hz,1H),3.70(d,J＝10.5Hz,1H),3.64-3.51(m,1H),3.41-3.36(m,1H),3.08(s,2H),2.39 -2.36(m,3H),2.18-2.12(m,1H),2.10–1.93(m,5H),1.85-1.53(m,9H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.23(s,3H),1.17(d,J＝11.5Hz,3H),1.08(d,J＝6.5Hz,3H),0.77–0.64(m,8H),0.44(s,2H).
实施例134化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-((1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物134-1的合成
将2-溴-5-氯吡嗪(3.0g)，三甲基硅炔(1.83g)溶于THF(20mL)，加入碘化亚铜(0.3g)，双三苯基磷二氯化钯(1.09g)，三乙胺(6.47mL)，N2氛围升温至80℃反应2h。旋干反应液，加入水稀释，EA萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(PE/EA＝10:1)得产物134-1(2.9g)。ESI-MS m/z:211.0[M+H]+。
步骤2：化合物134-2的合成
将化合物134-1(2.9g)溶于THF(20mL)，加入1-Boc-哌嗪(6.41g)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.63g)，2-二环己膦基-2'-(N,N-二甲胺)-联苯(0.27g)，双三甲基硅基胺基锂(27.5mL/1M in THF)，N2氛围升温至80℃反应2h。旋干反应液，加入水稀释，EA萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(PE/EA＝85:15)得产物134-2(728mg)。ESI-MS m/z:631.2[M+H]+。
步骤3：化合物134-3的合成
将化合物134-2(728mg)溶于MeOH(15mL)，加入碳酸钾(140mg)，室温反应1h。旋干反应液，加入水稀释，EA萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(PE/EA＝4:1)得产物134-3(525mg)。ESI-MS m/z:289.1[M+H]+。
步骤4：化合物134-4的合成
将化合物134-3(200mg)和M29(317mg)溶于叔丁醇(4mL)、四氢呋喃(4mL)和水(4mL)，加入无水硫酸铜(100mg)，抗坏血酸钠(357mg)，室温反应3h。将反应液旋干，加水稀释，DCM萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后 经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10:1)得到化合物134-4(440mg)，ESI-MS m/z:745.3[M+H]+。
步骤5：化合物134-5的合成
将化合物134-4(440mg)溶于6mL DCM和3mL氯化氢二氧六环(4mol/L)溶液中，室温反应0.5h。将反应液旋干，加入饱和碳酸氢钠溶液稀释，DCM/异丙醇(3：1)和萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩得到化合物134-5(290mg)，ESI-MS m/z:645.3[M+H]+。
步骤6：化合物134-6的合成
将化合物134-5(90.0mg)和M28(100.0mg)溶于甲醇(5mL)中，加入1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.21mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(27mg)，保持40℃继续反应12小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，萃取，收集有机相，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10:1)得到化合物134-6(115mg)。ESI-MS m/z:611.21/2[M+2H]+。
步骤7：化合物134的合成
将化合物134-6(115mg)溶于3mLDCM中，加入3mL三氟乙酸，室温反应1h。将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩，经制备液相分离，得到白色粉末68.1mg，即化合物134。
ESI-MS m/z:589.6 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:9.95(s,1H),9.21(d,J＝2.0Hz,1H),8.98(s,1H),8.67(d,J＝1.5Hz,1H),8.52(d,J＝7.5Hz,1H),8.43(s,1H),8.33(s,1H),7.75(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),7.46-7.42(m,2H),7.37-7.35(m,2H),7.34-7.30(m,2H),7.03(d,J＝2.5Hz,1H),5.36(d,J＝10.5Hz,1H),5.18(d,J＝4.0Hz,1H),4.95–4.89(m,2H),4.74(d,J＝8.5Hz,1H),4.42-4.29(m,5H),4.08-4.00(m,1H),3.81-3.74(m,1H),3.68(d,J＝11.0Hz,1H),3.62-3.50(m,5H),2.54(s,2H),2.39-2.29(m,4H),2.16-1.97(m,4H),1.1.81–1.61(m,5H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.24(s,3H),1.16(d,J＝13.0Hz,3H),1.07(d,J＝6.5Hz,3H),0.73-0.69(m,8H),0.45(s,2H).
实施例135化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-(1-(1-(((7-(8-乙基-7-氟代-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基-氧基)甲基环丙基甲基环丙基-甲基)哌啶-4-基-4-基)氧氧基)吡啶-3-基吡啶-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基吡啶并-1-氢羟基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物135-1的合成
向N-叔丁氧羰基-4-羟基哌啶(50mg)的四氢呋喃(1.00mL)中，冰水浴冷却，氮气保护，加入氢化钠(29.81mg,60％,0.75mmol)，0℃下反应0.5h，加入5-乙炔-2-氟吡啶(36.10mg,0.30mmol)，20℃下反应2h。反应液加入20mL饱和氯化铵中，加入20mL EA，分出有机相，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(EA：PE＝1：5)，得到60.00mg无色固体。即化合物135-1。ESI-MS m/z:303.20[M+H]+。
步骤2：化合物135-2的合成
向135-1(60.00mg,0.20mmol)，M29(1.50mL)和四氢呋喃(1.50mL)中，加入硫酸铜(31.67mg,0.20mmol),含有抗坏血酸钠(117.92mg,0.60mmol)的水(0.75mL)溶液，20℃下反应1h。LCMS转化完全。反应液加入15mL水中，EA萃取4次，有机相合并，干燥，过滤，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(MeOH：DCM＝1：10),得到105.00mg棕黄色固体。即化合物135-2。ESI-MS m/z:759.40[M+H]+。
步骤3：化合物135-3的合成
向135-2(120.00mg,0.16mmol)的二氯甲烷(3.00mL)中，三氟乙酸(0.59mL,7.91mmol)，20℃下反应0.5h。LCMS转化完全。反应液缓慢加入20mL饱和碳酸氢钠溶液中，DCM萃取4次，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩。得到95.00mg棕色固体。即化合物135-3。ESI-MS m/z:659.30[M+H]+。粗品直接投下一步。
步骤4：化合物135-4的合成
向135-3(106.73mg,0.16mmol)，M28(80.00mg,0.14mmol)的甲醇(4.00mL)中，再加入1M的氯化锌乙醚溶液(0.27mL)，升至40℃搅拌2小时。再加入氰基硼氢化钠(33.93mg,0.54mmol),40℃搅拌4小时。加入20mL水中，DCM萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，经柱层析纯化(MeOH：DCM＝1：10)，得到90.00mg无色固体。即化合物135-4。ESI-MS m/z:618.7 1/2[M+2H]+。
步骤5：化合物135的合成
向135-4(100.00mg,0.08mmol)的二氯甲烷(5.00mL)中，加入三氟乙酸(1.20mL,16.18mmol)，20℃下反应0.5h。LCMS转化完全。反应液减压浓缩，Pre-HPLC纯化得到44.90mg白色粉末。即化合物135。
ESI-MS m/z:596.6 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(s,1H),8.87(s,1H),8.57(s,1H),8.47(s,1H),8.08-8.08(m,1H),7.68-7.65(m,1H),7.45-7.39(m,4H),7.29(s,1H),7.25-7.22(m,1H),7.07(s,1H),6.81(d,J＝10.0Hz,1H),5.37-5.35(d,J＝10.0Hz,1H),5.05-5.02(m,3H),4.55-4.52(m,1H),4.46(s,2H),4.27-4.22(m,1H),3.93-3.86(m,2H),3.58(s,1H),3.48-3.46(m,1H),2.91-2.88(m,3H),2.65-2.63(m,1H),2.51-2.43(m,6H),2.35(s,2H),2.22-2.16(m,3H),2.03-1.98(m,4H),1.80-1.76(m,5H),1.53-1.52(d,J＝5.0Hz,3H),1.30-1.27(d,J＝15.0Hz,3H),1.17-1.16(d,J＝5.0Hz,3H),0.83-0.79(m,6H).
实施例136化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(2-(1-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)吡啶-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物136-1的合成
向N-叔丁氧羰基-4-羟基哌啶(55.00mg,0.27mmol)的四氢呋喃(3.00mL)中，冰水浴冷却，氮气保护，加入氢化钠(32.80mg,60％,0.82mmol)，0℃下反应0.5h，加入4-乙炔-2-氟吡啶(33.10mg,0.27mmol)，20℃下反应2h。反应液加入20mL饱和氯化铵中，加入20mL EA，分出有机相，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(EA：PE＝1％to16％)，得到38.00mg无色固体。即化合物136-1。ESI-MS m/z:303.20[M+H]+。
步骤2：化合物136-2的合成
向136-1(28.00mg,0.09mmol)，M29(46.52mg,0.10mmol)，抗坏血酸钠(55.03mg,0.28mmol)，硫酸铜(14.78mg,0.09mmol)的叔丁醇(1.50mL)，四氢呋喃(1.50mL)，水(0.75mL)中，20℃下反应1h。LCMS转化完全。反应液加入15mL水中，EA萃取4次，有机相合并，干燥，过滤，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(MEOH：DCM＝1％to 10％)。得到50.00mg无色固体。即化合物136-2。ESI-MS m/z:759.40[M+H]+。
步骤3：化合物136-3的合成
向136-2(45.00mg,0.06mmol)的二氯甲烷(2.00mL)中，加入三氟乙酸(0.44mL,5.93mmol)，20℃下反应0.5h。LCMS转化完全。反应液缓慢加入20mL饱和碳酸氢钠溶液中，DCM萃取4次，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩。得到35.00mg棕色固体，即化合物136-3。直接投下步。ESI-MS m/z:659.30[M+H]+。
步骤4：化合物136-4的合成
向136-3(36.70mg,0.06mmol)，M28(30.00mg,0.05mmol)的甲醇(2.00mL)中，加入1M的氯化锌乙醚溶液(0.10mL)，升至40℃搅拌2小时。再加入氰基硼氢化钠(12.72mg,0.20mmol)。40℃搅拌16小时。LCMS转化完全。反应液加入20mL水中，DCM萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，经柱层析纯化(MeOH：DCM＝1：10)得到30.00mg白色固体。即化合物136-4。ESI-MS m/z:618.7 1/2[M+2H]+。
步骤5：化合物136的合成
向136-4(25.00mg,0.02mmol)的二氯甲烷(2.00mL)中，加入三氟乙酸(0.30mL,4.04mmol)，20℃下反应0.5h。LCMS转化完全。反应液不加热减压浓缩，残留物经Pre-HPLC纯化，得到10.10mg,白色固体。即化合物136。
ESI-MS m/z:596.3 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20-9.19(s,J＝5.0Hz,1H),8.87(s,1H),8.66(s,1H),8.13(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.45-7.37(m,5H),7.30(s,1H),7.28-7.22(m,2H),7.07(s,1H),5.41-5.39(d,J＝10.0Hz,1H),5.05-5.02(m,3H),4.55-4.52(m,1H),4.46(s,2H),4.27-4.22(m,1H),3.93-3.86(m,2H),3.58(s,1H),3.48-3.46(m,1H),2.91-2.88(m,3H),2.65-2.63(m,1H),2.51-2.43(m,6H),2.35(s,2H),2.22-2.16(m,3H),2.03-1.98(m,4H),1.80-1.76(m,5H),1.53-1.51(d,J＝10.0Hz,3H),1.30-1.27(d,J＝15.0Hz,3H),1.17-1.16(d,J＝5.0Hz,3H),0.83-0.79(m,6H).
实施例137化合物(2S，4R)-1-((1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基-[1,4'-联哌啶]-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物137-1的合成
向4-乙炔哌啶盐酸盐(200.00mg,1.38mmol)，4-溴哌啶-1-甲酸叔丁酯(437.00mg,1.65mmol)，碳酸钾(476.34mg,3.45mmol)，碘化钾(45.77mg,0.28mmol)的乙腈(4.00mL)中，氮气保护，100℃下反应16h。反应液过滤，滤液减压浓缩后经柱层析纯化(MeOH：DCM＝1：20)得到90.00mg无色液体。即化合物137-1。ESI-MS m/z:293.30[M+H]+。
步骤2：化合物137-2的合成
向137-1(70.00mg,0.24mmol)，M29(120.21mg,0.26mmol)，抗坏血酸钠(142.28mg,0.72mmol)，硫酸铜(38.21mg,0.24mmol)的叔丁醇(2.00mL)，四氢呋喃(2.00mL)和水(1.00mL)中，20℃下反应1h。LCMS转化完全。反应液加入30mL清水中，DCM萃取，有少许不溶固体析出，加适量甲醇溶解。合并有机相，有机相干燥，过滤，浓缩，残留物经柱层析纯化(MeOH：DCM＝15％:85％),得到134.00mg棕色固体。即化合物137-2。ESI-MS m/z:749.30[M+H]+。
步骤3：化合物137-3的合成
向137-2(140.00mg,0.19mmol)的二氯甲烷(5.20mL)中，加入三氟乙酸(1.39mL,18.69mmol)，20℃下反应0.5h。反应液加入20mL饱和碳酸氢钠中，氯仿/异丙醇萃取5次，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩。得到110.00mg棕色固体。即化合物137-3。直接投下步。ESI-MS m/z:649.30[M+H]+。
步骤4：化合物137-4的合成
向137-3(120.43mg,0.19mmol)，M28(100.00mg,0.17mmo)的甲醇(5.00mL)中，加入氯化锌(0.34mL,1.00mol/L,0.34mmol)，升至40℃搅拌2小时。再加入氰基硼氢化钠(42.40mg,0.67mmol)。40℃搅拌16小时。反应液加入25mL水中，补加15mL DCM，分出有机相，有机相干燥，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(MeOH:DCM＝15％：85％)得到110.00mg白色固体。即化合物137-4。ESI-MS m/z:613.7 1/2[M+2H]+。
步骤5：化合物137的合成
向137-4(80.00mg,0.07mmol)的二氯甲烷(4.00mL)中，加入三氟乙酸(0.48mL,6.53mmol)，20℃下反应0.5h。反应液不加热减压浓缩，残留物经Pre-HPLC纯化得到40.00mg白色粉末。即化合物137。
ESI-MS m/z:591.8 1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(s,1H),8.87(s,1H),7.90(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.45-7.40(m,4H),7.30(s,1H),7.28-7.22(m,1H),7.06(s,1H),5.27-5.25(d,J＝10.0Hz,1H),5.05-5.02(m,2H),4.51-4.39(m,6H),4.27-4.22(m,1H),3.90-3.80(m,2H),3.67-3.58(s,1H),3.47-3.45(m,1H),3.34-3.30(m,3H),3.21-3.15(m,2H),3.00-2.93(m,2H),2.75(s,1H),2.54-2.48(m,6H),2.37(s,4H),2.22-2.18(m,1H),2.03-1.94(m,4H),1.85-1.70(m,6H),1.53-1.51(d,J＝10.0Hz,3H),1.30-1.27(d,J＝15.0Hz,3H),1.13-1.12(d,J＝5.0Hz,3H),0.84-0.81(m,2H),0.74-0.73(m,6H),0.50(s,2H).
实施例138化合物(2S，4R)-1-((1-(1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物138-1的合成
向4-(4-溴吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1000.00mg,3.03mmol)的四氢呋喃(10.00mL)中，氮气保护，冷却至-78℃，加入正丁基锂(1.6M in hexane)(1.45mL,2.50mol/L,3.63mmol)，-78℃下反应15分钟，滴加N,N-二甲基甲酰胺(0.28mL,3.63mmol)，-78℃下反应0.5h。LCMS转化完全。反应液加入20mL饱和氯化铵中，EA萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(EA：PE＝35％：65％)，得到680.00mg无色液体。即化合物138-1。ESI- MS m/z:280.30[M+H]+。
步骤2：化合物138-2的合成
向138-1(630.00mg,2.26mmol)，碳酸钾(935.16mg,6.77mmol)的甲醇(15.00mL)中，滴加(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(649.93mg,3.38mmol)，20℃下反应16h。反应液加入50mL水中，EA萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(EA:PE＝30％：70％)得到500.00mg白色固体。即化合物138-2。ESI-MS m/z:276.30[M+H]+。
步骤3：化合物138-3的合成
向138-2(200.00mg,0.73mmol)，M29(364.79mg,0.80mmol)，抗坏血酸钠(431.72mg,2.18mmol)，硫酸铜(115.94mg,0.73mmol)的叔丁醇(5.00mL)，四氢呋喃(5.00mL)和水(2.50mL)中，20℃下反应1h。LCMS转化完全。反应液加入30mL水中，DCM萃取3次，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(MeOH：DCM＝10％：90％)得到430.00mg棕色固体。即化合物138-3。ESI-MS m/z:732.10[M+H]+。
步骤4：化合物138-4的合成
向138-3(430.00mg,0.59mmol)的二氯甲烷(17.00mL)中，加入三氟乙酸(4.36mL,58.75mmol)，20℃下反应0.5h。反应液加入20mL饱和碳酸氢钠中，室温搅拌15分钟，氯仿/异丙醇萃取，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩。得到360.00mg棕色固体，即化合物138-4。直接投下步。ESI-MS m/z:632.30[M+H]+。
步骤5：化合物138-5的合成
向M28(120.00mg,0.17mmol)，138-4(120.92mg,0.19mmol)的甲醇(6.00mL)中，再加入1M的氯化锌乙醚溶液(0.35mL)，升至40℃搅拌2小时。再加入氰基硼氢化钠(43.74mg,0.70mmol)。40℃搅拌16小时。LCMS转化完全。反应液加入25mL清水中，补加20mLDCM，分出有机相，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物经柱层析纯化(MeOH：DCM＝10％:90％)，得到80.00mg无色固体。即化合物138-5。ESI-MS m/z:605 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物138的合成
向138-5(60.00mg,0.05mmol)的二氯甲烷(3.00mL)中，加入三氟乙酸(0.74mL,9.94mmol)，20℃下反应0.5h。LCMS转化完全。反应液减压浓缩，残留物经Pre-HPLC，得到38.90mg白色粉末。即化合物138。
ESI-MS m/z:583.1 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(s,1H),8.87(s,1H),8.25(s,1H),8.05(s,1H),7.84(s,1H),7.67-7.64(m,1H),7.45-7.40(m,4H),7.29(s,1H),7.25-7.21(m,1H),7.05(s,1H),5.32-5.30(d,J＝10.0Hz,1H),5.05-5.02(m,3H),4.54-4.44(m,6H),4.27-4.22(m,2H),3.90-3.85(m,2H),3.67-3.64(s,1H),3.47-3.45(m,1H),3.21-3.15(m,2H),2.47(s,3H),2.19-2.13(m,6H),2.08-1.97(m,5H),1.79-1.77(m,2H),1.52-1.51(d,J＝5.0Hz,3H),1.29-1.27(d,J＝10.0Hz,3H),1.15-1.14(d,J＝5.0Hz,3H),0.81-0.78(m,6H),0.73(s,2H),0.52(s,2H).
实施例139化合物(3S，7aS)-7a-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基2-(((S)-3-((2S，4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异恶唑-5-基)-2l3-丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酰胺基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-羧酸酯
步骤1：化合物139-1的合成
50mL单口瓶中加入化合物M1(2.0g)，溶于甲醇中(30mL)，加入浓硫酸(1.0mL)，加热至80℃，反应过夜。反应液直接蒸干，得淡黄色油状物2.1g，即化合物139-1。
步骤2：化合物139-2的合成
50mL单口瓶中加入化合物139-1(2.1g)，溶于THF(20mL)，加入2-碘代丙烷(3.45g)，叔丁醇钾(3.34g)，室温反应5h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝5:1)，得2.1g淡黄色固体，即化合物139-2。
步骤3：化合物139-3的合成
50mL单口瓶中加入化合物139-2(2.1g)，溶于甲醇(20mL)，加入氢氧化锂(0.89g)，水(4mL)，室温反应2h。用稀硫酸调节溶液pH至2-3，向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得1.78g黄色固体，即化合物139-3。
步骤4：化合物139-4的合成
50mL单口瓶中加入化合物139-3(1.78g)，溶于DMF(20mL)，加入(2S，4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯(1.69g)，DIPEA(4.82mL)和HATU(5.54g)，室温反应1h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝1:1)，得2.21g黄色固体，即化合物139-4。
步骤5：化合物139-5的合成
50mL单口瓶中加入化合物139-4(2.2g)，溶于甲醇(20mL)，加入氢氧化锂(1.5g)，水(4mL)，室温反应2h。用稀硫酸调节溶液pH至2-3，向反应液中加入饱和食盐水(5 mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得1.98g黄色固体，即化合物139-5。
步骤56：化合物139-6A的合成
50mL单口瓶中加入化合物139-5(0.98g)，溶于DMF(10mL)，加入M40(1.1g)，DIPEA(1.4mL)和HATU(1.9g)，室温反应1h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝1:1),手性柱拆分，得139-6A0.34g，为白色固体。
步骤7：化合物139-7A的合成
25mL单口瓶中加入化合物139-6A(0.3g)，溶于甲醇(5mL)，加入氢氧化锂(0.1g)，水(1mL)，室温反应2h。用稀硫酸调节溶液pH至2-3，向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得0.27g黄色固体，即化合物139-7A。
步骤8：化合物139-8A的合成
25mL单口瓶中加入化合物139-7A(0.27g)，溶于DMF(20mL)，加入2-氨基甲基-7-叔丁氧羰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷(0.14g)，DIPEA(0.2mL)和HATU(0.28g)，室温反应1h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1)，得0.27g淡黄色固体，即化合物139-8A。
步骤9：化合物139-9A的合成
25mL单口瓶中加入化合物139-8A(0.27g)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(10mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，得0.16g黄色固体，即化合物139-9。
步骤10：化合物139-10A的合成
25mL单口瓶中加入化合物139-9A(0.16g)，溶于THF(10mL)，加入M32(0.23g),室温反应1h。反应液直接蒸干，得0.11g淡黄色固体，即化合物139-10A。
步骤11：化合物139的合成
25mL单口瓶中加入化合物139-10A(45.0mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷和异丙醇的混合溶液萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，反相色谱柱分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得白色固体1.2mg，即化合物139。
ESI-MS m/z:668.28 1/2[M+2H]+
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝4.2Hz,1H),8.87(d,J＝5.7Hz,1H),7.69–7.63(m,1H),7.39–7.34(m,5H),7.30(d,J＝2.5Hz,1H),7.24(t,J＝8.9Hz,1H),7.06(dd,J＝10.0,2.7Hz,1H),4.61–4.57(m,8H),4.51–4.42(m,5H),4.35–4.21(m,4H),4.17–4.08(m,2H),4.06–3.99(m,5H),3.87-3.81(m,3H),3.75–3.57(m,5H),3.01–2.88(m,3H),2.79–2.63(m,6H),2.50–2.36(m,3H),2.27–2.15(m,4H),2.03–1.82(m,5H),1.63–1.37(m,5H),1.38–1.25(m,2H)，1.05-0.90(m,3H),0.83–0.76(m,3H).
实施例140化合物((3S,7aS)-7a-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲基2-(((S)-1-((2S、4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸酯的合成
步骤1：化合物140-1的合成
将M31(28mg)溶于3mL THF中，然后加入9mg CDI，40℃反应1h，LC-MS监测中间体，然后加入M15N-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(37mg)，80℃搅拌12h，LC-MS监测反应完成。加入5.00mL甲醇淬灭，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体24mg，即化合物140-1。ESI-MS m/z:650，1/2[M+2H]+。
步骤2：化合物140的合成
将140-1(24mg)溶于1.5mL DCM中，然后加入0.5mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末6mg，即化合物140。ESI-MS m/z:628，1/2[M+2H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),9.22(d,J＝3.6Hz,1H),8.98(s,1H),8.38(d,J＝7.7Hz,1H),7.76(s,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H),7.44–7.20(m,6H),7.04–7.02(m,1H),5.11(d,J＝2.8Hz,1H),4.95–4.91(m,3H),4.75(d,J＝11.4Hz,1H),4.50(d,J＝9.2Hz,1H),4.41(t,J＝8.0Hz,1H),4.32–4.21(m,2H),4.11–4.00(m,2H),3.96–3.90(m,2H),3.82-3.78(m,1H),3.63-3.51(m,4H),3.28-3.17(m,5H),2.94(s,1H),2.64–2.53(m,1H),2.45(s,4H),2.34(d,J＝16.4Hz,2H),2.12–1.87(m,8H),1.80–1.65(m,8H),1.49(s,2H),1.41-1.30(m,5H),1.16(d,J＝11.6Hz,3H),0.92(s,9H),0.73(q,J＝7.3Hz,3H).
实施例141化合物(3S,7aS)-7a-((7-(7-(8-乙基-7-氟代-3-羟基萘-1-基)-8-氟代-4-(((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基甲基吡咯并嘧啶-2-基嘧啶-2-基)氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯的合成
步骤1：化合物141-1的合成
将M29(100.0mg)，4-(丙-2-炔-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(97.8mg)，无水硫酸铜(31.5mg) 和抗坏血酸钠(112.8mg)溶解于THF/叔丁醇/水(2/2/2mL)的混合溶剂中，室温反应3小时。LCMS监测反应完成，向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得黄色固体95.0mg，即化合物141-1。ESI-MS m/z:680[M+H]+。
步骤2：化合物141-2的合成
将141-1(95.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体80.0mg，即化合物141-2。ESI-MS m/z:580[M+H]+。
步骤3：化合物141-3的合成
将M31(30.0mg)溶于THF(2mL)中，加入CDI(10.8mg)，40℃反应1小时，然后加入141-2(38.6mg)，80℃反应4小时，LCMS监测反应完成。加入甲醇(5.0mL)淬灭反应，将反应液直接浓缩，柱层析分离纯化，得淡黄色固体29.0mg，即化合物141-3。ESI-MS m/z:1282[M+H]+。
步骤4：化合物141的合成
将141-3(29.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末11.3mg，即化合物141。
ESI-MS m/z:620 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.22(d,J＝9.5Hz,1H),8.87(s,1H),7.88(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.44-7.38(m,4H),7.30(d,J＝3.0Hz,1H),7.24(t,J＝4.0Hz,1H),7.08-7.06(m,1H),5.26(d,J＝10.5Hz,1H),5.03(d,J＝7.0Hz,1H),4.30-4.24(m,3H),4.17-4.07(m,5H),3.94-3.79(m,3H),3.69-3.56(m,3H),3.47-3.42(m,2H),3.07-2.98(m,3H),2.81-2.63(m,6H),2.47(s,1H),2.23-2.18(m,5H),2.05-2.03(m,2H),1.98-1.93(m,1H),1.85-1.78(m,5H),1.67-1.61(m,3H),1.51(d,J＝7.0Hz,2H),1.30-1.28(m,6H),1.12(d,J＝6.5Hz,3H),0.83-0.79(m,3H),0.74(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例142化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(6-(4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基))-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-)5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物142-1的合成
50mL烧瓶中加入M28(100mg)，M37(100mg)，MeOH 5mL，1M的氯化锌乙醚溶液0.3uL，加热至45℃反应1小时，加入氰基硼氢化钠(100mg)，继续45℃反应12小时，加DCM稀释，水洗，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，柱层析纯化得化合物142-1(85mg)。
步骤2：化合物142的合成
50mL烧瓶中加入142-1(70mg)，DCM 3mL，TFA1mL，室温反应0.5小时，检测后，减压脱溶，加DCM溶解，用饱和小苏打水溶液调pH＝7-8,搅拌，分层，盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，滤液减压脱溶，得粗品，Pre-HPLC纯化得化合物142(33.5mg)。
ESI-MS m/z:589.28 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)ppm 9.94(s,1H),9.22(s,1H),8.99(s,1H),8.68-8.46(m,1H),8.00(dd,J＝8.77,2.07Hz,1H),7.76(dd,J＝9.07,6.03Hz,1H),7.52-7.27(m,1H),7.04(d,J＝2.51Hz,1H),6.88(d,J＝8.89Hz,1H),5.80-5.72(m,1H),5.32(d,J＝10.26Hz,1H),5.25-4.69(m,1H),4.48-4.23(m,1H),4.14-3.95(m,1H),3.86-3.17(m,1H),2.63-2.25(m,1H),2.23-1.91(m,1H),1.87-1.51(m,1H),1.48-0.60(m,1H),0.46(s,1H)。
实施例143化合物((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亚甲基六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲基2-(1-((S)-1-(2S，4R)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
步骤1：化合物143-1的合成
将化合物M38(70mg)溶于5mL THF中，加入三乙胺(0.12mL)，4-二甲氨基吡啶(4mg)，对硝基苯基氯甲酸酯(32mg)，室温搅拌反应12h，然后加入化合物(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((5R，7aS)-5-(羟甲基)-2-甲基四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基]吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(88mg)，继续反应0.5h。向反应液中加入甲醇淬灭反应，减压浓缩后柱层析纯化(DCM/氨甲醇＝20：1)得到化合物143-1(96mg)，ESI-MS m/z:654 1/2[M+2H]+。
步骤2：化合物143的合成
将化合物143-1(96mg)溶于4mL DCM中，加入4mL三氟乙酸，室温反应1h。将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩，经制备液相分离，得到白色粉末24.6mg，即化合物143。
ESI-MS m/z:632 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:9.93(d,J＝2.5Hz,1H),9.22(d,J＝4.0Hz,1H),8.99(s,1H),8.50(d,J＝7.5Hz,1H),7.98(s,1H),7.76(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,2H),7.39-7.30(m,4H),7.03(d,J＝2.5Hz,1H),5.21(d,J＝10.4Hz,1H),5.16(d,J＝3.5Hz,1H),4.96-4.84(m,3H),4.75(d,J＝11.0Hz,1H),4.40-4.26(m,3H),4.20-4.00(m,5H),3.75(d,J＝10.5 Hz,4.0Hz,1H),3.64(d,J＝11.2Hz,1H),3.62-3.48(m,3H),3.40-3.34(m,4H),3.27-3.22(s,2H),2.65-2.62(m,1H),2.46(s,3H),2.43-2.31(m,4H),2.21-2.10(m,3H),2.08-1.97(m,2H),1.96-1.83(m,4H),1.82-1.55(m,8H),1.51-1.45(m,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.17(d,J＝10.5Hz,3H),1.04(d,J＝6.5Hz,3H),0.75-0.70(m,3H),0.64(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例144化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(1-((((7-(8-乙基-7-氟代-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯并吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基环丙基甲基环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧)吡嗪-2-基吡嗪-2-甲基-1,2,3-三唑-1-基吡唑嗪2-1-2-3-3-三唑1-基吡唑-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物144-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物N-叔丁氧羰基-4-羟基哌啶(1.0g)，溶于THF(10mL),加入NaH(300.0mg)，2,5-二溴吡嗪(1.18g)，加热至50℃反应5h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝6:1)，得1.38g淡黄色固体，即化合物144-1。
步骤2：化合物144-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物144-1(690.0mg)，溶于DMF(10mL)，加入三甲基乙炔基硅(283.7mg)，CuI(73.3mg)，PdCl2(PPh3)2(135.2mg)，DIPEA(0.95mL)，氮气保护后，加热至50℃反应3h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝6:1)，得522.2mg淡黄色固体，即化合物144-2。
步骤3：化合物144-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物144-2(522.2mg)，溶于THF(10mL),加入1M TBAF的四氢呋喃溶液(2.2mL),室温反应2h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得378.2mg淡黄色固体，即化合物144-3。
步骤4：化合物144-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(100.0mg)，溶于THF(2mL),加入化合物144-3(80.2mg)，硫酸铜(35.2mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(160.0mg)，室温反应0.5h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得132.3mg淡黄色固体，即化合物144-4。
步骤5：化合物144-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物144-4(132.3mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷和异丙醇的混合溶剂萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩得92.2mg黄色固体，即化合物144-5。
步骤6：化合物144-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物144-5(92.2mg)，溶于MeOH(5mL),加入M28(100.0mg)和1M ZnCl2/THF溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(35.2mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得84.6mg淡黄色固体，即化合物144-6。
步骤7：化合物144的合成
25mL单口瓶中加入化合物144-6(84.6mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷和异丙醇的混合溶液萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，经Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％-45％),得白色固体29.3mg，即化合物1。(纯度99.38％)。
LCMS：1/2[M+2H]+＝597.17
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝5.0Hz,1H),8.86(d,J＝7.2Hz,1H),8.72(s,1H),8.54(d,J＝12.7Hz,1H),8.17(s,1H),7.71–7.62(m,1H),7.48–7.35(m,4H),7.29(s,1H),7.23(t,J＝9.2Hz,1H),7.07(s,1H),5.39(d,J＝10.0Hz,1H),5.12–5.00(m,3H),4.58–4.41(m,5H),4.24(t,J＝13.5Hz,1H),3.88(dd,J＝27.5,9.3Hz,2H),3.61–3.54(m,2H),2.90(s,2H),2.61(d,J＝6.5Hz,1H),2.53–2.42(m,6H),2.35(s,2H),2.24–2.11(m,3H),2.08–1.94(m,3H),1.89–1.71(m,5H),1.52(d,J＝6.9Hz,3H),1.36–1.24(m,4H),1.16(d,J＝6.5Hz,3H),0.88–0.77(m,5H),0.72(s,2H),0.51(s,2H).
实施例147化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物147-1的合成
将4-(哌啶-4-基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(270mg)加入到25mL单口瓶中，加入中间体M3(550mg)，加入DMA(6mL)，滴加DIPEA(0.5mL),140℃反应2h。用水稀释反应液，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩物经柱层析分离纯化得到化合物147-1(234mg)。ESI-MS m/z:434.3[M+H]+。
步骤2：化合物147-2的合成
将化合物147-1(234mg)加入到25mL单口瓶中，加入2mL甲醇，2mL四氢呋喃，2mL水，后加入氢氧化锂(105mg)，室温下反应30min。浓缩反应液，后加水稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至5，用二氯甲烷：异丙醇(5：1)溶液萃取两次，收集并合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物147-2(210mg)。ESI-MS m/z:450.3[M+H]+。
步骤3：化合物147-3的合成
将化合物147-2(210mg)、M29-2(180mg)、HATU(250mg)、N,N-二异丙基乙胺(0.3mL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)中，25℃反应1h。反应完毕后，加水稀释，加入乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，手性柱拆分得到化合物147-3(160mg)。ESI-MS m/z:763.4[M+H]+。
步骤4：化合物147-4的合成
将化合物147-3(160mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，25℃反应20分钟。反应完毕后，浓缩，加水稀释，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8～9，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物147-4(110mg)。ESI-MS m/z:663.4[M+H]+。
步骤5：化合物147-5的合成
将化合物147-4(110mg)加入到50mL单口瓶中，加入3mL甲醇，加入M28(120mg)，加入1M的氯化锌的四氢呋喃溶液(0.1mL)，室温下搅拌1h。加入氰基硼氢化钠(40mg)，50℃下搅拌3h。用饱和氯化铵溶液淬灭反应液，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物147-5(190mg)。ESI-MS m/z:598.3 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物147的合成
将化合物147-5(190mg)加入到25mL单口瓶中，加入2mL DCM，加入1mL三氟乙酸，室温下反应1h。减压浓缩后，经pre-HPLC纯化得到147(95.5mg)。ESI-MS m/z:585.31/2[M+2H]+。
实施例148化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(3-((4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物148-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物(3-乙基双环[1.1.1]戊烷-1-基)甲醇(840.0mg)，溶于DCM(10mL)，加入DMP(3.52g)，室温反应3h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠(10mL)，DCM萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝6:1)，得到634.2mg淡黄色固体，即化合物148-1。
步骤2：化合物148-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物148-1(634.2mg)，溶于MeOH(5mL)，加入N-叔丁氧羰基-哌嗪(1.2g)和1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.1mL)，加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(908.7mg)，反应过夜。反应液直接蒸干，析分离纯化(PE:EA＝1:1)，得845.8mg淡黄色固体，即化合物148-2。
步骤3：化合物148-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(100.0mg)，溶于THF(2mL)，加入化合物148-2(70.0mg)，硫酸铜(35.2mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(160.0mg)，室温反应0.5h。反应液直接蒸干，柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得101.2mg淡黄色固体，即化合物148-3。
步骤5：化合物148-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物148-3(101.2mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷和异丙醇的混合溶液萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得76.7mg黄色固体，即化合物148-4。
步骤6：化合物148的合成
25mL单口瓶中加入化合物148-4(76.7mg)，溶于MeOH(5mL)，加入M43(71.4mg)和1M ZnCl2/THF溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(29.8mg)，反应过夜。反应液直接蒸干，经Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％-45％),得白色固体18.9mg，即化合物148。(纯度98.43％)。
LCMS：1/2[M+2H]+＝590.72
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝7.0Hz,1H),8.87(d,J＝2.7Hz,1H),7.91(d,J＝11.5Hz,1H),7.66(dd,J＝8.4,5.9Hz,1H),7.48–7.35(m,4H),7.33–7.17(m,2H),7.06(t,J＝2.7Hz,1H),5.26(d,J＝10.4Hz,1H),5.12–4.94(m,1H),4.59(s,1H),4.55–4.38(m,5H),4.32 –4.18(m,1H),3.88(dd,J＝11.0,3.9Hz,1H),3.81(d,J＝11.1Hz,1H),3.63(dd,J＝32.6,13.3Hz,1H),3.53–3.41(m,1H),2.96(s,1H),2.61–2.51(m,5H),2.47(d,J＝3.5Hz,5H),2.40(d,J＝12.7Hz,2H),2.25–2.12(m,3H),2.09(d,J＝1.3Hz,6H),1.95(ddd,J＝9.1,6.8,3.6Hz,1H),1.90–1.82(m,1H),1.79(d,J＝10.6Hz,2H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.29(d,J＝13.6Hz,5H),1.15–1.05(m,3H),0.82(dd,J＝16.3,7.5Hz,3H),0.76–0.68(m,5H),0.50(d,J＝7.1Hz,2H).化合物149化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(3-(4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)双环[1.1.1]戊-1-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物149-1的合成
将N,N-双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g)和3-氨基双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(0.7g)溶于15mL DMF中，加入K2CO3(2.0g)，KI(1.65g)，N2氛围升温至70℃反应12h。将反应液加入到水中，加入EA，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(PE/EA＝3:2)得到化合物149-1(167mg)，ESI-MS m/z:311.1[M+H]+。
步骤2：化合物149-2的合成
将化合物149-1(167mg)溶于5mL THF中，冰浴下加入LiAlH4(31mg)，保持冰浴条件下反应0.5h。反应完毕后，向反应液中加入适量EA稀释，加入十水合硫酸钠(173mg)，搅拌10min淬灭反应，加入无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，旋干得到化合物149-2(151mg)，ESI-MS m/z:283.1[M+H]+。
步骤3：化合物149-3的合成
将化合物149-2(151mg)溶于6mL DCM中，冰浴下加入DMP(261mg)，然后转移至室温反应1h。过滤，除去不溶性固体，向滤液中加入DCM和水，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(PE/EA＝3:2)得到化合物149-3(131mg)，ESI-MS m/z:281.1[M+H]+。
步骤4：化合物149-4的合成
将化合物149-3(131mg)溶于6mLMeOH，加入(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(0.10mL)，碳酸钾(128mg)，室温反应3h。将反应液加入水中，加入EA，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(PE/EA＝3:2)得到化合物149-4(90mg)，ESI-MS m/z:277.1[M+H]+。
步骤5：化合物149-5的合成
将化合物149-4(90mg)和化合物M29(164mg)溶于叔丁醇(3mL)、四氢呋喃(3mL)和水(3mL)，加入无水硫酸铜(47mg)，抗坏血酸钠(168mg)，室温反应3h。将反应液旋干，加入DCM和水，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，减压浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10:1)得到化合物149-5(231mg)，ESI-MS m/z:732.3[M+H]+。
步骤6：化合物149-6的合成
将化合物149-5溶于5mL DCM和5mL氯化氢二氧六环溶液(4M)，室温反应0.5h。反应完毕后，旋干反应液，加入EA和水，萃取，收集水相，加入无水碳酸钠调节水相pH至碱性，加入DCM/异丙醇(3：1)萃取，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，旋干得到化合物149-6(177mg)，ESI-MS m/z:633.3[M+H]+。
步骤7：化合物149的合成
将化合物149-6(80mg)和化合物M43(85mg)溶于甲醇(5mL)中，加入氯化锌溶液(0.2mL/1M in THF)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(24mg)，升温至60℃继续反应6小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，向反应液中加入DCM，萃取，收集有机相，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，旋干得粗产物，进一步经制备液相分离，得到白色粉末27.8mg，即149。ESI-MS m/z:583.2 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:9.93(d,J＝2.5Hz,1H),9.22(d,J＝2.0Hz,1H),8.99(s,1H),8.51(d,J＝7.5Hz,1H),7.96(s,1H),7.76(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,2H),7.40-7.31(m,4H),7.03(d,J＝2.5Hz,1H),5.23(d,J＝10.5Hz,1H),5.17(d,J＝3.5Hz,1H),4.91(t,J＝7.5Hz,1H),4.75(d,J＝9.5Hz,1H),4.40-4.24(m,5H),4.08-4.00(m,1H),4.76-3.73(m,1H),3.68-3.50(m,2H),3.43-3.37(m,1H),2.46-2.26(m,14H),2.19-1.96(m,10H),1.80-1.62(m,4H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.17(d,J＝12.0Hz,3H),1.03(d,J＝6.5Hz,3H),0.76-0.71(m,3H),0.65-0.63(m,5H),0.41(s,2H).
实施例150化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-((7-((1-((7-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物150-1的合成
将化合物2-羟基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(500mg)、(R)-2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(412mg)、三苯基膦(1.08g)、DIAD(0.84g)溶于四氢呋喃(10mL)中，60℃反应1小时。反应完毕后，浓缩，经柱层析(PE:EA＝10:1)进行纯化，得到化合物150-1(710mg)。ESI-MS m/z:423.21[M+H]+。
步骤2：化合物150-2的合成
将化合物150-1(710mg)溶于甲醇(10mL)和水(10mL)中，加入氢氧化锂(140mg)，室温反应1小时。反应完毕后，加稀盐酸调至pH＝2，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到将化合物150-2(550mg)。ESI-MS m/z:409.22[M+H]+。
步骤3：化合物150-3的合成
将化合物150-2(550mg)、M29-2(491mg)、HATU(1.1g)、N,N-二异丙基乙胺(900mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，室温反应1小时。反应完毕后，加水稀释，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，旋干，浓缩物经柱层析(纯乙酸乙酯)纯化，后经手性拆分(色谱柱：CHIRAL ART IB(20.0mm×250mm，5μm)；柱温：35℃；波长：254nm；流速：25mL/min；流动相：0.1％二乙胺的正己烷：0.1％二乙胺的乙醇(75：25))得到化合物150-3(280mg)。ESI-MS m/z:722.14[M+H]+。
步骤4：化合物150-4的合成
将化合物150-3(150mg)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入4M的氯化氢二氧六环溶液(2mL)，室温搅拌反应30分钟。反应完毕后，旋干溶剂，加水稀释，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物150-4(105mg)。ESI-MS m/z:622.40[M+H]+。
步骤5：化合物150-5的合成
将化合物150-4(105mg)、M28(98mg)、1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.5mL)溶于甲醇(10mL)中，40℃反应1小时。再加入氰基硼氢化钠(25mg)，60℃搅拌反应过夜。反应完毕后，加入氯化铵溶液淬灭，二氯甲烷/甲醇(10:1)萃取3次，无水硫酸钠干燥，过滤， 浓缩，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，得到化合物150-5(100mg)。ESI-MS m/z:600.271/2[M+2H]+。
步骤6：化合物150的合成
将化合物150-5(100mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加三氟乙酸(2mL)，室温搅拌反应1小时。反应完毕后，浓缩，经Pre-HPLC(SunFire C18色谱柱(19.0mm×250mm，5μm)；A：0.05％三氟乙酸水溶液，B：乙腈，浓度梯度：20％B至60％B；8.03-8.45min；流速：20mL/min，254nm)制备得到化合物150(37.8mg)。
ESI-MS m/z:578.20 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.21(d,J＝3.4Hz,1H),8.99(d,J＝9.0Hz,1H),8.32(d,J＝7.0Hz,1H),7.78–7.71(m,1H),7.46(q,J＝8.4Hz,1H),7.40(d,J＝8.2Hz,2H),7.35(d,J＝9.6Hz,2H),7.31(d,J＝8.2Hz,2H),7.07(d,J＝2.4Hz,1H),6.06(s,1H),5.19(d,J＝3.6Hz,1H),4.92–4.83(m,1H),4.83–4.71(m,2H),4.41(t,J＝7.7Hz,1H),4.30(dd,J＝22.0,10.0Hz,5H),4.09–3.95(m,1H),3.74(d,J＝8.5Hz,1H),3.62(d,J＝13.3Hz,1H),3.60–3.48(m,2H),2.45(d,J＝3.9Hz,3H),2.40-2.21(m,9H),2.19–1.93(m,5H),1.81–1.64(m,6H),1.59–1.47(m,5H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.17(d,J＝12.1Hz,4H),1.08(d,J＝6.5Hz,3H),0.85(t,J＝6.9Hz,1H),0.76–0.70(m,6H),0.64(s,2H),0.40(s,2H).
实施例152化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-(1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氨基)吡啶-3-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰)-4-羟基-N-((S)-1-(4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)(苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物152-1的合成
1-叔丁氧羰基-4-氨基哌啶(1550mg)，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺溶解后，加入5-乙炔基-2-氟吡啶(625mg)，再加入N,N-二异丙基乙胺(3.41mL)。100℃搅拌8小时。LCMS监测反应完成。用水稀释反应液，乙酸乙酯萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤三次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物152-1(411mg)。ESI-MS m/z:302.2[M+H]+。
步骤2：化合物152-2的合成
将化合物152-1(103mg)加入到50mL单口瓶中，加入4mL四氢呋喃，2mL叔丁醇以及2mL水，加入M1(120mg)，硫酸铜(38mg)，抗坏血酸钠(135mg)，20℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物152-2(102mg)。ESI-MS  m/z:758.4[M+H]+。
步骤3：化合物152-3的合成
将化合物152-2(102mg)加入到10mL单口瓶中，加入3mL二氯甲烷，1mL 4M的氯化氢二氧六环溶液，20℃搅拌0.5小时。用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物152-3(88mg)。ESI-MS m/z:658.3[M+H]+。
步骤4：化合物152-4的合成
将M28(70mg)加入到50mL单口瓶中，加入3mL甲醇，加入152-3(88mg)，加入1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.18mL)，40℃搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(30mg)，50℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成，减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物152-4(62mg)。ESI-MS m/z:617.8 1/2[M+2H]+。
步骤5：化合物152的合成
将化合物152-4(62mg)加入到10mL单口瓶中，加入2mL DCM，加入1mL三氟乙酸，室温下反应0.5小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经pre-HPLC纯化得到化合物152(11.1mg)。
ESI-MS m/z:596.32 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.10(d,J＝1.1Hz,1H),8.77(d,J＝7.5Hz,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),8.23(d,J＝2.2Hz,1H),7.72(dt,J＝8.7,2.6Hz,1H),7.57(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.36–7.29(m,4H),7.20(d,J＝2.6Hz,1H),7.14(t,J＝9.4Hz,1H),6.96(t,J＝2.6Hz,1H),6.48(d,J＝8.7Hz,1H),5.26–5.19(m,1H),4.95(t,J＝6.9Hz,1H),4.43(t,J＝8.3Hz,1H),4.38–4.33(m,2H),4.17(t,J＝14.4Hz,1H),3.85–3.72(m,2H),3.68–3.53(m,2H),3.48(dd,J＝17.5,11.3Hz,1H),3.36(d,J＝10.6Hz,1H),2.98(s,2H),2.56–2.49(m,1H),2.43(d,J＝13.5Hz,1H),2.38(s,3H),2.36(d,J＝4.8Hz,1H),2.14–2.05(m,5H),1.93–1.86(m,3H),1.76(d,J＝8.1Hz,1H),1.68(t,J＝11.2Hz,3H),1.48(d,J＝14.4Hz,3H),1.43(d,J＝7.0Hz,3H),1.06(d,J＝6.7Hz,2H),0.82–0.78(m,6H),0.72(d,J＝2.2Hz,2H),0.71(d,J＝3.2Hz,2H),0.63(s,2H),0.43(s,2H).
实施例154化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-(1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)吡啶-3-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物154-1的合成
1-叔丁氧羰基-4-氨基哌啶(1550mg)，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺溶解后，加入5-乙炔基-2-氟吡啶(625mg)，再加入N,N-二异丙基乙胺(3.41mL)。100℃搅拌8小时。LCMS监测反应完成。用水稀释反应液，乙酸乙酯萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤三次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物154-1(411mg)。ESI-MS m/z:302.2[M+H]+。
步骤2：化合物154-2的合成
将化合物154-1(140mg)加入3mL四氢呋喃溶解后，加入氢化钠(56mg)，再加入碘甲烷(132mg)。50℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。用水稀释反应液，乙酸乙酯萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物154-2(122mg)。ESI-MS m/z:316.2[M+H]+。
步骤3：化合物154-3的合成
将化合物154-2(122mg)加入到50mL单口瓶中，加入4mL四氢呋喃，2mL叔丁醇以及2mL水，加入M29(130mg)，硫酸铜(41mg)，抗坏血酸钠(147mg)，20℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物154-3(118mg)。ESI-MS m/z:772.4[M+H]+。
步骤4：化合物154-4的合成
将化合物154-3(118mg)加入到10mL单口瓶中，加入3mL二氯甲烷，1mL 4M的氯化氢二氧六环溶液，20℃搅拌0.5小时。用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品化合物154-4(103mg)。ESI-MS m/z:672.3[M+H]+。
步骤5：化合物154-5的合成
将M28(80mg)加入到50mL单口瓶中，加入3mL甲醇，加入154-4(103mg)，加入1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.20mL)，40℃搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(34mg)，50℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物154-5(112mg)。ESI-MS m/z:624.8 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物154的合成
将化合物154-5(112mg)加入到10mL单口瓶中，加入2mL二氯甲烷，0℃下加入1mL三氟化硼乙醚。20℃搅拌1小时。LCMS监测反应完成。用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，二氯甲烷/异丙醇(5:1)萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后经pre-HPLC纯化得到化合物154(41.7mg)。
ESI-MS m/z:603.39 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.22(d,J＝2.1Hz,1H),8.86(d,J＝8.3Hz,1H),8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.92(dt,J＝9.0,3.2Hz,1H),7.67(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.48–7.38(m,4H),7.30(d,J＝2.7Hz,1H),7.24(t,J＝9.3Hz,1H),7.06(t,J＝2.6Hz,1H),6.72(dd,J＝9.1,3.2Hz,1H),5.33(d,J＝10.3Hz,1H),5.05(q,J＝7.2Hz,1H),4.63–4.39(m,7H),4.27(t,J＝13.6Hz,1H),3.95–3.83(m,2H),3.69–3.57(m,1H),3.48(t,J＝11.3Hz,1H),2.89(d,J＝1.4Hz,3H),2.71–2.52(m,3H),2.47(d,J＝11.7Hz,4H),2.34–2.11(m,5H),2.01–1.83(m,6H),1.79(d,J＝10.4Hz,2H),1.73–1.64(m,2H),1.53(d,J＝7.1Hz,3H),1.33–1.25(m, 4H),1.16(d,J＝6.8Hz,2H),0.85–0.80(m,5H),0.78(d,J＝9.8Hz,2H),0.58(s,2H).
实施例155化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(9-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-3，9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物155-1的合成
将化合物3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(1.15g)、化合物M34(0.61g)、三乙胺(1mL)溶于N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，145℃反应3小时。反应完毕后，加入水稀释，乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品经柱层析纯化得到化合物155-1(240mg)。ESI-MS m/z:436.2[M+H]+。
步骤2：化合物155-2的合成
将化合物155-1(240mg)溶于甲醇(10mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(227mg)，25℃反应1小时。反应完毕后，加柠檬酸调至pH＝4，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到将化合物155-2(210mg)。ESI-MS m/z:422.1[M+H]+。
步骤3：化合物155-3的合成
将化合物155-2(210mg)、M29-2(170mg)、HATU(230mg)、N,N-二异丙基乙胺(0.25mL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)中，25℃反应1小时。反应完毕后，加入乙酸乙酯与水萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，手性柱拆分得到化合物155-3(80mg)。ESI-MS m/z:735.3[M+H]+。
步骤4：化合物155-4的合成
将化合物155-3(80mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入4M的氯化氢二氧六环溶液(1mL)，25℃反应20分钟。反应完毕后，用饱和碳酸氢钠溶液中和，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，干燥，浓缩，得到155-4(65mg)。ESI-MS m/z:635.40[M+H]+。
步骤5：化合物155-5的合成
将化合物155-4(65mg)、M28(90mg)、1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.32mL)溶于甲醇(5mL)中，40℃反应2小时。再加入氰基硼氢化钠(50mg)，40℃反应8小时。反应完 毕后，加入氯化铵溶液淬灭，浓缩，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，得到化合物155-5(86mg)。ESI-MS m/z:606.27 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物155的合成
将化合物155-5(86mg)溶于二氯甲烷(4mL)中，加三氟乙酸(1mL)，25℃反应1小时。反应完毕后，浓缩，经Pre-HPLC(C18色谱柱，A：0.05％三氟乙酸水溶液，B：乙腈，浓度梯度：20％B至75％B，11min，流速：15mL/min，254nm)分离纯化，浓缩，碳酸氢钠溶液中和，产物析出，过滤，得到化合物155(30.7mg)。
ESI-MS m/z:584.10 1/2[M+2H]+。
实施例156化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(3-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物156-1的合成
将3-甲基-2-(3-(全氟丁氧基)异恶唑-5-基)丁酸甲酯M34(2.75g)、4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯92-3(1.00g)溶于DMA(15mL)中，缓慢加入TEA(1.73mL)，140℃条件下反应2h。LC-MS监测反应完成，向反应液中加入饱和氯化铵(5mL)淬灭反应，加入EA萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体450.0mg，即化合物156-1。ESI-MS m/z:423.3[M+H]+。
步骤2：化合物156-2的合成
将化合物156-1(450mg)溶于MeOH(10mL)和水(3mL)中，缓慢加入氢氧化锂一水合物(230mg)，室温条件下反应2h。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入DCM萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体435mg，即化合物156-2。ESI-MS m/z:409.2[M+H]+。
步骤3：化合物156-3的合成
称取化合物156-2(435mg)、化合物M29-2(468mg)，HATU(614mg)，加入DMF (10mL)溶解，冰浴条件下缓慢加入DIPEA(0.70mL)，缓慢升至室温反应1h。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入DCM萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体690mg，即化合物156-3。ESI-MS m/z:722.4[M+H]+。
步骤4：化合物156-4的合成
将化合物156-3(690mg)SFC拆分，浓缩，得白色固体275mg，即化合物156-4。ESI-MS m/z:722.3[M+H]+。
步骤5：化合物156-5的合成
将156-4(275mg)加入DCM(5mL)和1M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入饱和碳酸钠溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体237mg，即化合物156-5。ESI-MS m/z:622.3[M+H]+。
步骤6：化合物156-6的合成
将化合物156-5(237mg)和化合物M28(237mg)溶于甲醇(10mL)中，加入1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.69mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(87mg)，60℃反应12小时，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，浓缩，柱层析分离纯化，得白色粉末345mg，即化合物156-6。ESI-MS m/z:600.5 1/2[M+2H]+。
步骤7：化合物156的合成
将化合物156-6(310mg)加入DCM(10mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末88.4mg，即化合物156。ESI-MS m/z:578.1 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),9.22(s,1H),8.99(s,1H),8.42(d,J＝7.6Hz,1H),7.77(dd,J＝9.0,6.1Hz,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,2H),7.36(dd,J＝12.5,8.9Hz,4H),7.04(d,J＝2.3Hz,1H),5.84(s,1H),5.12(d,J＝3.6Hz,1H),4.95–4.86(m,1H),4.76(d,J＝7.1Hz,1H),4.42–4.24(m,5H),4.05(dd,J＝26.0,13.1Hz,1H),3.87(t,J＝6.0Hz,2H),3.69(dt,J＝14.7,7.4Hz,1H),3.62(d,J＝12.8Hz,3H),3.58(d,J＝9.7Hz,1H),3.56–3.44(m,1H),3.43–3.38(m,2H),3.34–3.30(m,1H),3.21(d,J＝5.8Hz,1H),2.46(s,3H),2.38–2.10(m,10H),2.05–1.97(m,2H),1.82–1.62(m,4H),1.41(dd,J＝32.6,7.0Hz,3H),1.17(d,J＝11.7Hz,4H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H),0.87–0.70(m,7H),0.65(s,2H),0.41(s,2H).
实施例157化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-((3R，7aR)-7a-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲氧基)吡啶-3-基)-1H-1-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的合成
步骤1：化合物157-1的合成
将化合物88-3(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基-甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((3R，7aR)-3-(羟甲基)四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(130mg)溶于3mLTHF中，氮气保护下加入NaH(21mg)，室温搅拌30分钟，然后加入5-乙炔基-2-氟吡啶(31mg)，25℃下搅拌2h。LC-MS监测反应完成。向反应液缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得淡黄色固体80mg即化合物157-1。ESI-MS m/z:765[M+H]+；
步骤2：化合物157-2的合成
将化合物157-1(60mg)和M29(2S，4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(57mg)溶于2mL THF，2mL H2O，2mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(54mg)和无水硫酸铜(15mg)，室温反应0.5小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用DCM:异丙醇＝4:1萃取3次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体85mg，即化合物157-2。ESI-MS m/z:611 1/2[M+2H]+。
步骤3：化合物157的合成
将化合物157-2(85mg)溶于2mLDCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末22.3mg，即化合物157。
ESI-MS m/z:589 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(s,1H),8.87(d,J＝6.1Hz,1H),8.62(d,J＝2.3Hz,1H),8.49(s,1H),8.12(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(d,J＝5.7Hz,1H),7.48–7.37(m,4H),7.28-7.22(m,2H),7.05(s,1H),6.93(d,J＝8.7Hz,1H),5.36(d,J＝10.2Hz,1H),4.62-4.48(m,7H),4.41(d,J＝10.5Hz,1H),4.30(d,J＝10.5Hz,2H),3.93-.3.86(m,2H),3.71–3.64(m,2H),3.60-3.57(m,1H),3.44(s,3H),3.16(s,1H),2.97-2.90(m,3H),2.63-2.60(m,1H),2.20-2.19(m,5H),2.07-2.00(m,1H),2.01–1.89(m,6H),1.79–1.75(m,4H),1.53(d,J＝7.0Hz,3H),1.35–1.24(m,6H),1.17-1.14(m,3H),0.86–0.76(m,4H).
实施例158化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(2-(((3R，7aR)-7a-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲氧基)嘧啶-5-基)-1H-1-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基 -N-(((S，-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷2-羧酰胺的合成
步骤1：化合物158-1的合成
将化合物88-3(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基-甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((3R，7aR)-3-(羟甲基)四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(100mg)溶于3mLTHF中，氮气保护下加入NaH(16mg)，室温搅拌30分钟，然后加入2-氯-5-乙炔基嘧啶(28mg)，25℃下搅拌2h。LC-MS监测反应完成。向反应液缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得淡黄色固体60mg即化合物158-1。ESI-MS m/z:766[M+H]+；步骤2：化合物158-2的合成
将化合物158-1(60mg)和M29(2S，4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(43mg)溶于2mL THF，2mL H2O，2mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(40mg)和无水硫酸铜(12mg)，室温反应0.5小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用DCM:异丙醇＝4:1萃取3次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体74mg，即化合物158-2。ESI-MS m/z:612 1/2[M+2H]+。
步骤3：化合物158的合成
将化合物158-2(74mg)溶于2mLDCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末39.6mg，即化合物158。ESI-MS m/z:590 1/2[M+2H]+。
实施例159化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(((3R，7aR)-7a-((7-(8-乙基-7-乙基7-氟氟氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-甲基)吡咯并吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)甲基六氢-1H-吡咯并嗪-3-基)甲氧基)吡嗪-1-1,2,3-三唑唑-4-羟基-N-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物159-1的合成
将化合物88-3(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基-甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((3R，7aR)-3-(羟甲基)四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(90mg)溶于3mLTHF中，氮气保护下加入NaH(15mg)，室温搅拌30分钟，然后加入M46 2-氯-5-乙炔吡嗪(25mg)，25℃下搅拌2h。LC-MS监测反应完成。向反应液缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得淡黄色固体58mg即化合物159-1。ESI-MS m/z:766[M+H]+；步骤2：化合物159-2的合成
将化合物159-1(58mg)和M29(2S，4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(42mg)溶于1.5mL THF，1.5mL H2O，1.5mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(39mg)和无水硫酸铜(11mg)，室温反应0.5小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用DCM:异丙醇＝4:1萃取3次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体25mg，即化合物159-2。ESI-MS m/z:612 1/2[M+2H]+。
步骤3：化合物159的合成
将化合物159-2(25mg)溶于2mLDCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末18.4mg，即化合物159。ESI-MS m/z:590 1/2[M+2H]+。
实施例160化合物(2S，4R)-N-((R)-1-(4-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)苯基)-2-羟乙基)-1-((S)-2-(4-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基环丙基)甲基哌啶-4-基氧基)吡啶-3-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物160-1的合成
在反应瓶中加入中间体M45(100.00mg)，化合物135-1(96.61mg)，硫酸铜(30.60mg)，抗坏血酸钠(109.71mg)，四氢呋喃(1.50mL)，叔丁醇(1.50mL)，水(1.50mL)，氮气置换后室温反应2h，浓缩，加水稀释，然后用DCM和甲醇萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。柱层析分离产物(DCM:氨甲醇＝20:1)，得到白色固体160-1(114mg)，ESI-MS m/z:772.4[M+H]+。
步骤2：化合物160-2的合成
在反应瓶中加入化合物160-1(114mg)，二氯甲烷(2.00mL)，4M的盐酸二氧六环溶液(0.40mL)，室温反应0.5h，反应结束后倾去上清液，不溶物加甲醇溶解，然后用碳酸氢钠水溶液调pH＝8，DCM和甲醇萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物160-2(85mg)，ESI-MS m/z:672.4[M+H]+。
步骤3：化合物160-3的合成
在反应瓶中加入化合物160-2(62.34mg)，M28(50.00mg)，甲醇(2.00mL)，1,2-二氯乙烷(2.00mL)，氯化锌(11.50mg)，40℃反应1h，再加氰基硼氢化钠(53.04mg,0.84mmol)，60℃反应3h，加水稀释，DCM萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。用Pre-TLC制备(DCM:氨甲醇＝18:1)，得到黄色固体160-3(56mg)，ESI-MS m/z:625.3 1/2[M+2H]+。
步骤4：化合物160的合成
在反应瓶中加入化合物160-3(56.00mg)，二氯甲烷(1.00mL)，三氟乙酸(1.00mL)，室温反应0.6h，浓缩，然后加DCM溶解，将反应液加到冰的碳酸氢钠水溶液中调pH＝8，DCM和甲醇萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。用Pre-TLC制备(DCM:氨甲醇＝10:1)，得到化合物160(35.5mg)。
ESI-MS m/z:603.25 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝8.1Hz,1H),8.57(d,J＝2.2Hz,1H),8.50(d,J＝12.8Hz,1H),8.06(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.65(dd,J＝8.9,5.9Hz,1H),7.53–7.37(m,5H),7.30(d,J＝2.6Hz,1H),7.23(t,J＝9.0Hz,1H),7.08(dd,J＝4.9,2.6Hz,1H),6.81(d,J＝8.7Hz, 1H),6.28(dd,J＝8.6,1.9Hz,1H),5.38(d,J＝10.2Hz,1H),5.07(t,J＝6.0Hz,2H),4.73(s,1H),4.61(t,J＝8.3Hz,1H),4.46(t,J＝8.9Hz,4H),4.19(m,3H),3.95–3.82(m,3H),3.67–3.53(m,1H),3.43(dd,J＝25.9,11.7Hz,1H),3.31(m,1H),3.00(s,2H),2.69–2.52(m,6H),2.18–2.04(m,6H),1.77(m,5H),1.36–1.24(m,6H),1.16(d,J＝6.6Hz,3H),0.81(t,J＝7.2Hz,6H),0.75(s,2H),0.56(s,2H).
实施例164化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((R)-1-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物164-1的合成
将4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.30g)、化合物M34(0.54g)、三乙胺(0.47mL)溶于N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，145℃反应3小时。反应完毕后，加入水稀释，EA萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经柱层析纯化得到化合物164-1(190mg)。ESI-MS m/z:451.2[M+H-100]+。
步骤2：化合物164-2的合成
将化合物164-1(190mg)溶于甲醇(10mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(40mg)，25℃反应1小时。反应完毕后，加柠檬酸调至pH＝4，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到将化合物164-2(180mg)。ESI-MS m/z:437.1[M+H-100]+。
步骤3：化合物164-3的合成
将化合物164-2(180mg)、M29-2(150mg)、HATU(190mg)、N,N-二异丙基乙胺(0.20mL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)中，25℃反应1小时。反应完毕后，加入水稀释，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，手性柱拆分得到化合物164-3(81mg)。ESI-MS m/z:750.3[M+H]+。
步骤4：化合物164-4的合成
将化合物164-3(81mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入4M的氯化氢二氧六环溶液(1mL)，25℃反应20分钟。反应完毕后，用碳酸氢钠溶液中和，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，干燥，浓缩，得到化合物164-4(55mg)。ESI-MS m/z:650.4[M+H]+。
步骤5：化合物164-5的合成
将化合物164-4(55mg)、M28(62mg)、1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.19mL)溶于甲醇(5mL)中，40℃反应2小时。再加入氰基硼氢化钠(34mg)，40℃反应8小时。反应完毕后，加入氯化铵溶液淬灭，浓缩，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，得到化合物164-5(43mg)。ESI-MS m/z:613.7 1/2[M+2H]+。
步骤6：化合物164的合成
将化合物164-5(43mg)溶于二氯甲烷(4mL)中，加三氟乙酸(1mL)，25℃反应1小时。反应完毕后，浓缩，经Pre-HPLC(C18色谱柱，A：0.05％三氟乙酸水溶液，B：乙腈，浓度梯度：20％B至75％B，11min，流速：15mL/min，254nm)分离纯化，浓缩，碳酸氢钠溶液中和，产物析出，过滤，得到化合物164(7.1mg)。ESI-MS m/z:591.70 1/2[M+2H]+。实施例165化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(3-(4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)环丁基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物165-1的合成
3-氧代环丁烷-1-羧酸甲酯(10.0g),哌嗪-1-羧酸苄酯(20.63g)加入100mL二氯乙烷溶解后，加入冰乙酸(8mL)，室温搅拌30min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠，室温搅拌过夜。反应完全后，加水稀释，DCM萃取3次，收集并合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化(PE:EA＝10:7)得到化合物165-1(13.0g)。ESI-MS m/z:333.2[M+H]+。
步骤2：化合物165-2的合成
将化合物165-1(13.0g)加入到250mL单口瓶中，加入100mL四氢呋喃，降温0℃以下，分批缓慢加入氢化铝锂(2.9g)，缓慢移至室温搅拌反应3小时。反应完全，降温0℃以 下，反应液中缓慢滴加2.9mL水，缓慢滴加2.9mL氢氧化钠水溶液(质量分数15％)，搅拌10min，再向反应液中缓慢滴加9mL水，加入无水硫酸钠搅拌1h。过滤，滤液浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到化合物165-2(10.0g)。ESI-MS m/z:305.3[M+H]+。
步骤3：化合物165-3的合成
将化合物165-2(10.0g)加入到250mL单口瓶中，加入100mL DCM，分批加入DMP(20.0g mg)，室温下搅拌3小时。饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭，过滤，DCM萃取2次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到化合物165-3(12.0g)。ESI-MS m/z:303.4[M+H]+。
步骤4：化合物165-4的合成
将化合物165-3(12.0g)和(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(9.93mL)依次加入到100mL单口瓶中，加入30mL甲醇溶解，缓慢加入碳酸钾(22.3g)，室温搅拌过夜。用水稀释反应液，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩物经柱层析分离纯化得到化合物165-4(1.4g)。ESI-MS m/z:299.4[M+H]+。
步骤5：化合物165-5的合成
将化合物165-4(140mg)，抗坏血酸钠(280mg)，硫酸铜(70mg)和M29(260mg)依次加入到50mL单口瓶中，加入甲醇，四氢呋喃和水各3mL，室温下反应30min。旋干溶剂，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩物经柱层析分离纯化得到化合物165-5(100mg)。ESI-MS m/z:755.4[M+H]+。
步骤6：化合物165-6的合成
将化合物165-5(100mg)加入到50mL单口瓶中，加入10mL乙醇溶解，加入氢氧化钯(20mg)，氢气置换5次，室温下搅拌过夜。反应完全后，硅藻土过滤，滤液旋干，浓缩得到粗品165-6(50mg)，直接进行下一步。ESI-MS m/z:621.3[M+H]+。
步骤7：化合物165的合成
将化合物165-6(50mg)、M43(44mg)、1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.25mL)溶于甲醇(8mL)中，40℃反应1小时。再加入氰基硼氢化钠(16mg)，70℃搅拌反应4小时。反应完毕后，加入氯化铵溶液淬灭，浓缩，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，浓缩物经Pre-HPLC纯化(色谱柱：SunFire C18色谱柱，A：0.05％三氟乙酸水溶液，B：乙腈，浓度梯度：20％B至70％B，6.36-6.71min，流速：20mL/min，254nm)得到化合物165(23.0mg)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6))δ9.94(s,1H),9.22(s,1H),8.98(s,1H),8.49(d,J＝7.1Hz,1H),7.96(s,1H),7.76(s,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(s,1H),7.03(s,1H),5.19(d,J＝24.9Hz,2H),4.91(t,J＝6.8Hz,1H),4.74(d,J＝4.0Hz,1H),4.33(d,J＝34.8Hz,5H),4.05(s,1H),3.74(s,1H),3.64(s,1H),2.64(s,1H),2.36(s,6H),2.12(s,3H),2.01(s,4H),1.91(s,1H),1.74(t,J＝25.2Hz,5H),1.49(d,J＝36.2Hz,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.27–1.14(m,11H),1.03(d,J＝6.2Hz,3H),0.85(s,1H),0.74(d,J＝7.5Hz,3H),0.64(d,J＝6.5Hz,5H),0.42(s,2H).
实施例166化合物(2S，4R)-1-((2R)-2-(3-(3-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物166-1的合成
3-氧代吡咯烷-1-羧酸苄酯(1.5g),哌嗪-1-羧酸苄酯(1.53g)加入30mL二氯乙烷溶解后，加入冰乙酸(0.82g)，室温搅拌30min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.6g)，室温搅拌过夜。反应完全后，加水稀释，DCM萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析(PE:EA＝4:6)得到化合物166-1(3.0g)。ESI-MS m/z:390.2[M+H]+。
步骤2：化合物166-2的合成
将化合物166-1(3.0g)加入到50mL单口瓶中，加入15mL乙醇溶解，加入氢氧化钯(220mg)，氢气置换5次，室温搅拌过夜。反应完全后，硅藻土过滤，滤液旋干，浓缩得到粗品166-2(2.1g)，直接进行下一步。ESI-MS m/z:256.3[M+H]+。
步骤3：化合物166-3的合成
将化合物166-2(2.1g)、M34(3.3g)、DIPEA(4.3g)溶于DMF(8mL)中，140℃搅拌反应1小时。反应完毕后，冷却至室温，加水稀释，乙酸乙酯萃取3次，收集并合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析得到化合物166-3(1.4g)。ESI-MS m/z:437.1[M+H]+。
步骤4：化合物166-4的合成
将化合物166-3(1.4g)溶于甲醇(10mL)和水(10mL)中，加入氢氧化锂(260mg)，室温反应1小时。反应完毕后，加稀盐酸调至pH＝2，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物166-4(800mg)。ESI-MS m/z:423.3[M+H]+。
步骤5：化合物166-5的合成
将化合物166-4(800mg)、M29-2(720mg)、HATU(1.4g)、N,N-二异丙基乙胺(800mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，室温反应1小时。反应完毕后，加水稀释，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，浓缩物经柱层析纯化，经手性拆分(色谱柱：CHIRALPAK IE(20.0mm×250mm，5μm)；柱温：35℃；波长：254nm；流速：25mL/min；流动相：0.1％二乙胺的正己烷：0.1％二乙胺的乙醇(15：85))得到化合物166-5(100mg)。ESI-MS m/z:736.1[M+H]+。
步骤6：化合物166-6的合成
将化合物166-5(100mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入4M的氯化氢二氧六环溶液(2mL)，室温搅拌反应20分钟。反应完毕后，旋干溶剂，用二氯甲烷洗涤旋干2次，加水溶解，用碳酸氢钠溶液中和，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，干燥，浓缩，得到化合物166-6(80mg)。ESI-MS m/z:636.4[M+H]+。
步骤7：化合物166的合成
将化合物166-6(80mg)、M43(69mg)、1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.5mL)溶于甲醇(10mL)中，40℃反应1小时。再加入氰基硼氢化钠(32mg)，70℃搅拌反应5小时。反应完毕后，冷却至室温，加入氯化铵溶液淬灭，二氯甲烷和甲醇(10：1)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱层析(DCM:MeOH＝85:15)纯化，粗品经Pre-HPLC(C18色谱柱，A：0.05％二乙胺水溶液，B：乙腈，浓度梯度：30％B至80％B，6.52-7.40min，流速：20mL/min，254nm)制备得到化合物166(42.4mg)。
ESI-MS m/z:585.2 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.22(s,1H),8.98(s,1H),8.49(d,J＝7.1Hz,1H),7.96(s,1H),7.76(s,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(s,1H),7.03(s,1H),5.93(s,1H),5.10(s,1H),4.96(s,1H),4.86(s,1H),4.74(d,J＝6.0Hz,1H),4.54–4.21(m,5H),4.10–3.98(m,1H),3.65(dd,J＝22.6,10.8Hz,1H),3.54(s,2H),2.92(s,2H),2.74(s,2H),2.64(s,1H),2.34(d,J＝27.3Hz,10H),2.13(s,2H),2.01(s,3H),1.79(s,1H),1.75(s,1H),1.67(s,3H),1.45(d,J＝7.1Hz,1H),1.33(s,3H),1.24(s,3H),1.16(d,J＝11.5Hz,3H),1.12–1.03(m,1H),0.95(d,J＝6.3Hz,2H),0.81(d,J＝6.2Hz,4H),0.73(d,J＝7.4Hz,4H),0.64(s,2H),0.40(s,2H).
实施例167化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-((1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)哒嗪-3-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物167-1的合成
称取4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.50g)溶于THF(20mL)，冰浴条件下缓慢加入NaH(745mg)，升至室温反应0.5h，加入3，6-二氯哒嗪(1.85g)，缓慢加热至50℃反应3h。LCMS监测反应完成。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，向反应液中加入EA(50mL)，收集有机相，浓缩，柱层析分离纯化，得白色粉末3.80g，即化合物167-1。ESI-MS m/z:314.1[M+H]+。
步骤2：化合物167-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物167-1(1.0g)，溶于THF(10mL)，加入乙炔基三甲基硅烷(907mL)，CuI(121mg)，Pd(PPh3)2Cl2(224mg)，DIPEA(1.67mL)，氮气保护后，加热至60℃反应3h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离纯化，得560mg淡黄色固体，即化合物167-2。ESI-MS m/z:376.2[M+H]+。
步骤3：化合物167-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物167-2(560mg)，溶于MeOH(10mL),加入碳酸钾(763mg)，室温反应1h。硅藻土滤除不溶物，滤液直接蒸干。柱层析分离纯化，得200mg淡黄色固体，即化合物167-3。ESI-MS m/z:304.2[M+H]+。
步骤4：化合物167-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(271mg)，溶于THF(5mL),加入化合物167-3(180mg)，硫酸铜(85mg)，水(5mL)，叔丁醇(5mL)，抗坏血酸钠(306mg)，室温反应0.5h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化，得199mg淡黄色固体，即化合物167-4。ESI-MS m/z:760.4[M+H]+。
步骤5：化合物167-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物167-4(199mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入DCM(3mL)、MeOH(3mL)，室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得175mg黄色固体，即化合物167-5。ESI-MS m/z:660.3[M+H]+。
步骤6：化合物167-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物167-5(175mg)，溶于MeOH(5mL),加入M28(157mg)和1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.53mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(50.0mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化，得153mg淡黄色固体，即化合物167-6。ESI-MS m/z:618.3 1/2[M+H]+。
步骤7：化合物167的合成
25mL单口瓶中加入化合物167-6(153mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用10％二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，经Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得白色固体40.4mg，即化合物167。
ESI-MS m/z:597.3 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.23(s,1H),8.98(d,J＝12.4Hz,1H),8.72(d,J＝9.6Hz,1H),8.55(d,J＝7.6Hz,1H),8.19–8.12(m,1H),7.77(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),7.48–7.43(m,2H),7.36(dt,J＝8.3,7.3Hz,5H),7.26(d,J＝9.3Hz,1H),7.05(d,J＝2.4Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.18(t,J＝9.4Hz,2H),4.94(dd,J＝14.2,7.1Hz,1H),4.76(d,J＝7.2Hz,1H),4.37(ddd,J＝26.1,16.0,9.6Hz,5H),4.05(dd,J＝26.4,13.3Hz,1H),3.80–3.52(m,3H),2.83(s,2H),2.46(s,3H),2.31(d,J＝52.0Hz,5H),2.09–1.97(m,4H),1.67(dd,J＝22.6,13.1 Hz,5H),1.39(d,J＝7.0Hz,3H),1.19–1.14(m,4H),1.10(d,J＝6.4Hz,3H),0.88–0.82(m,1H),0.78–0.65(m,9H),0.44(s,2H).
实施例168化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(7-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)吡嗪-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物168-1的合成
2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(212mg)，加入3mL二氧六环溶解后，加入2-氯-5-乙炔基吡嗪(100mg)，再加入三乙胺(0.30mL)。60℃搅拌2h。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物168-1(180mg)。ESI-MS m/z:329.2[M+H]+。
步骤2：化合物168-2的合成
将168-1(180mg)加入到50mL单口瓶中，加入6mL四氢呋喃，3mL叔丁醇以及3mL水，加入M29(215mg)，硫酸铜(68mg)，抗坏血酸钠(243mg)，20℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物168-2(173mg)。ESI-MS m/z:785.4[M+H]+。
步骤3：化合物168-3的合成
将化合物168-2(173mg)加入到10mL单口瓶中，加入3mL二氯甲烷，4M的氯化氢二氧六环溶液(1mL)，20℃搅拌0.5小时。用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品168-3(150mg)。ESI-MS m/z:685.3[M+H]+。
步骤4：化合物168-4的合成
将M28(105mg)加入到50mL单口瓶中，加入4mL甲醇，加入化合物168-3(146mg)，加入1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.27mL)，40℃搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(46mg)，50℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物168-4(201mg)。ESI-MS m/z:631.3 1/2[M+2H]+。
步骤5：化合物168的合成
将化合物168-4(201mg)加入到10mL单口瓶中，加入2mL二氯甲烷，0℃下加入1mL三氟化硼乙醚。20℃搅拌1小时。LCMS监测反应完成。用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，二氯甲烷/异丙醇(5:1)萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后 经pre-HPLC纯化得到化合物168(28.2mg)。
ESI-MS m/z:609.86 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝4.6Hz,1H),8.86(d,J＝6.3Hz,1H),8.61(dd,J＝7.4,1.5Hz,1H),8.43(s,1H),7.85(dd,J＝4.5,1.5Hz,1H),7.67(dd,J＝9.1,5.8Hz,1H),7.48–7.40(m,4H),7.30(d,J＝2.6Hz,1H),7.24(t,J＝9.4Hz,1H),7.06(t,J＝2.4Hz,1H),5.36(d,J＝10.2Hz,1H),5.05(t,J＝7.1Hz,1H),4.58(s,1H),4.53(t,J＝8.3Hz,1H),4.46(dt,J＝7.2,4.5Hz,2H),4.26(t,J＝14.1Hz,1H),3.91(td,J＝10.2,9.6,5.6Hz,1H),3.85(s,4H),3.63(dd,J＝32.7,13.4Hz,1H),3.52–3.43(m,1H),2.65–2.53(m,4H),2.48(s,4H),2.24–2.15(m,3H),1.97(ddd,J＝13.3,9.0,4.5Hz,1H),1.87(d,J＝9.0Hz,4H),1.79(t,J＝10.5Hz,2H),1.66(d,J＝7.0Hz,1H),1.53(d,J＝7.0Hz,3H),1.15(dd,J＝6.4,2.1Hz,3H),0.92–0.85(m,9H),0.83–0.80(m,5H),0.75(s,2H),0.54(s,2H).
实施例169化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)嘧啶-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰)-4-羟基-N-((S)-1-(4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5)-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物169-1的合成
2-氯-5-羟基嘧啶(500mg)，加入10mL甲苯溶解后，加入1-叔丁氧羰基-4-羟基哌啶(771mg)，再加入三苯基膦(2009mg)和偶氮二甲酸二叔丁酯(1.66mL)。氮气置换三次，氮气氛围保护。85℃搅拌1小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物169-1(915mg)。ESI-MS m/z:314.1[M+H]+。
步骤2：化合物169-2的合成
将化合物169-1(835mg)加入到100mL单口瓶中，加入10mL四氢呋喃。再加入0.75mL三甲基乙炔基硅，碘化亚铜(51mg)，加入双三苯基磷二氯化钯(187mg)和1.85mL三乙胺。氮气置换三次，氮气氛围保护。90℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物169-2(611mg)。ESI-MS m/z:376.2[M+H]+。
步骤3：化合物169-3的合成
将化合物169-2(561mg)加入到50mL单口瓶中，加入6mL四氢呋喃。0℃下加入1M的四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(2.24mL)，20℃搅拌1小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物169-3(73mg)。ESI-MS m/z:304.2[M+H]+。
步骤4：化合物169-4的合成
将化合物169-3(76mg)加入到50mL单口瓶中，加入3mL四氢呋喃，1.5mL叔丁醇以及1.5mL水，加入M29(95mg)，硫酸铜(30mg)，抗坏血酸钠(107mg)，20℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物169-4(155mg)。ESI-MS m/z:760.4[M+H]+。
步骤5：化合物169-5的合成
将化合物169-4(155mg)加入到10mL单口瓶中，加入3mL二氯甲烷，4M的氯化氢二氧六环溶液(1mL)，20℃搅拌0.5小时。用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品169-5(79mg)。ESI-MS m/z:660.3[M+H]+。
步骤6：化合物169的合成
将M43(65mg)加入到50mL单口瓶中，加入3mL甲醇，加入169-5(78mg)，加入1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.18mL)，40℃搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(30mg)，50℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，再用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，二氯甲烷/异丙醇(5:1)萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后经pre-HPLC纯化得到化合物169(45mg)。
ESI-MS m/z:597.16 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝5.2Hz,1H),8.86(d,J＝8.5Hz,1H),8.65(d,J＝13.0Hz,1H),8.53(d,J＝3.2Hz,2H),7.66(dd,J＝9.1,5.8Hz,1H),7.43(q,J＝8.4Hz,4H),7.30(d,J＝2.7Hz,1H),7.24(t,J＝9.3Hz,1H),7.07(t,J＝2.6Hz,1H),5.42(d,J＝10.0Hz,1H),5.05(q,J＝7.0Hz,1H),4.60(s,2H),4.56–4.44(m,5H),4.26(t,J＝13.5Hz,1H),3.94–3.84(m,2H),3.62(dd,J＝32.1,13.3Hz,1H),3.45(q,J＝11.5Hz,1H),2.99(s,2H),2.61(ddt,J＝16.5,13.3,6.6Hz,3H),2.48(s,3H),2.45(s,1H),2.26–2.03(m,6H),1.97(ddd,J＝13.3,9.1,4.4Hz,1H),1.89–1.74(m,5H),1.53(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(d,J＝13.1Hz,3H),1.16(d,J＝6.8Hz,3H),0.82(dd,J＝9.8,7.0Hz,6H),0.77(d,J＝9.4Hz,2H),0.57(s,2H).
实施例170化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(7-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)吡嗪-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((R)-2-羟基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物170-1的合成
2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(212mg)，加入3mL二氧六环溶解后，加入2-氯 -5-乙炔基吡嗪(100mg)，再加入三乙胺(0.30mL)。60℃搅拌2h。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物170-1(193mg)。ESI-MS m/z:329.2[M+H]+。
步骤2：化合物170-2的合成
将化合物170-1(193mg)加入到50mL单口瓶中，加入6mL四氢呋喃，3mL叔丁醇以及3mL水，加入M44(223mg)，硫酸铜(68mg)，抗坏血酸钠(243mg)，20℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物170-2(219mg)。ESI-MS m/z:801.4[M+H]+。
步骤3：化合物170-3的合成
将化合物170-2(219mg)加入到10mL单口瓶中，加入3mL二氯甲烷，4M的氯化氢二氧六环溶液(1mL)，20℃搅拌0.5小时。用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品170-3(112mg)。ESI-MS m/z:701.3[M+H]+。
步骤4：化合物170的合成
将M43(75mg)加入到50mL单口瓶中，加入3mL甲醇，加入170-3(110mg)，加入1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.21mL)，40℃搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(34mg)，50℃搅拌12小时。LCMS监测反应完成。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，再用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，二氯甲烷/异丙醇(5:1)萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后经pre-HPLC纯化得到化合物170(40.3mg)。
ESI-MS m/z:617.93 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝4.1Hz,1H),8.87(d,J＝5.3Hz,1H),8.60(s,1H),8.44(s,1H),7.85(s,1H),7.67(dd,J＝9.1,5.8Hz,1H),7.46(s,4H),7.30(d,J＝2.7Hz,1H),7.24(t,J＝9.3Hz,1H),7.06(t,J＝2.3Hz,1H),5.38(d,J＝10.2Hz,1H),5.05(t,J＝6.1Hz,1H),4.59(s,1H),4.52–4.47(m,2H),4.45(dd,J＝7.1,5.2Hz,2H),4.25(t,J＝14.1Hz,1H),3.93(dd,J＝11.0,3.8Hz,1H),3.87(d,J＝11.1Hz,1H),3.85–3.82(m,5H),3.63(dd,J＝33.7,13.3Hz,1H),3.52–3.42(m,1H),2.84(q,J＝7.3Hz,1H),2.65–2.59(m,1H),2.47(d,J＝6.9Hz,6H),2.41(d,J＝12.8Hz,1H),2.20(tdd,J＝11.6,9.3,6.0Hz,3H),2.01(ddd,J＝13.3,9.1,4.6Hz,1H),1.85(q,J＝9.2,6.0Hz,5H),1.79(dp,J＝12.0,4.3Hz,2H),1.29(d,J＝13.3Hz,4H),1.21(t,J＝7.2Hz,2H),1.15(d,J＝6.6Hz,3H),0.81(dd,J＝10.4,6.9Hz,6H),0.72(s,2H),0.51(s,2H).
实施例171化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-(1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)吡啶-3-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((R)-2-羟基-1-(4-甲基硫唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物171-1的合成
在反应瓶中加入中间体M44(100.00mg)，化合物135-1(95.97mg)，硫酸铜(30.39mg)，抗坏血酸钠(109.00mg)，四氢呋喃(1.20mL)，叔丁醇(1.20mL)，水(1.20mL)，氮气置换后氮气保护下室温反应1h，浓缩，加水稀释，然后用二氯甲烷和甲醇萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离产物(DCM:氨甲醇＝18:1)，得到白色固体化合物171-1(124mg)，ESI-MS m/z:775.4[M+H]+。
步骤2：化合物171-2的合成
在反应瓶中加入化合物171-1(124.0mg)，二氯甲烷(3.00mL)，4M的氯化氢二氧六环溶液(1.00mL)，室温反应0.5h，反应结束后倾去上层液，不溶物加甲醇溶解，然后用碳酸氢钠水溶液调pH＝8，二氯甲烷和甲醇萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物171-2(84mg)，ESI-MS m/z:675.5[M+H]+。
步骤3：化合物171-3的合成
在反应瓶中加入化合物171-2(71.91mg)，中间体M28(50.00mg)，甲醇(2.00mL)，1,2-二氯乙烷(2.00mL)，1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.08mL)，40℃反应1h，然后加氰基硼氢化钠(53.04mg,0.84mmol)，60℃反应2h，加水稀释，DCM萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。Pre-TLC制备(DCM:氨甲醇＝18:1)，得到淡黄色固体化合物171-3(56mg)，ESI-MS m/z:626.7 1/2[M+2H]+。
步骤4：化合物171的合成
在反应瓶中加入化合物171-3(56.00mg)，二氯甲烷(1.00mL)，三氟乙酸(1.00mL)，室温反应0.6h，浓缩，然后加DCM溶解，将反应液加到冰的碳酸氢钠水溶液中调节pH＝8，二氯甲烷和甲醇萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。Pre-TLC制备(DCM:氨甲醇＝10:1)，得到化合物171(25.5mg)。
ESI-MS m/z:604.8 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.19(d,J＝7.4Hz,1H),8.86(d,J＝6.3Hz,1H),8.56(d,J＝2.1Hz,1H),8.48(d,J＝6.3Hz,1H),8.06(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.65(dd,J＝8.8,5.8Hz,1H),7.43(d,J＝11.2Hz,4H),7.31–7.19(m,2H),7.10–7.05(m,1H),6.81(d,J＝8.6Hz,1H),5.37(d,J＝10.2Hz,1H),5.05(t,J＝6.1Hz,2H),4.60(t,J＝8.3Hz,1H),4.47(m,3H),4.23(t,J＝11.6Hz,1H),3.89(m,3H),3.65–3.42(m,2H),3.31(dt,J＝3.3,1.6Hz,2H),2.91(s,2H),2.68–2.59(m,1H),2.53–2.32(m,8H),2.23–1.98(m,6H),1.81(m,5H),1.31–1.23(m,4H),1.15(d,J＝6.6Hz,3H),0.85–0.78(m,6H),0.72(s,2H),0.51(s,2H).
实施例172化合物(2S，4R)-N-((R)-1-(4-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)苯基)-2-羟乙基)-1-((S)-2-(4-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基环丙基)甲基哌啶-4-基)氧基)吡嗪-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物172-1的合成
在反应瓶中加入中间体M45(105.00mg)，化合物144-3(88.2mg)，硫酸铜(32.60mg)，抗坏血酸钠(115.1mg)，四氢呋喃(1.50mL)，叔丁醇(1.50mL)，水(1.50mL)，氮气置换后室温反应1h，浓缩，加水稀释，然后用DCM和甲醇萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。柱层析分离产物(DCM:氨甲醇＝18:1)，得到淡黄色固体化合物172-1(115mg)，ESI-MS m/z:773.4[M+H]+。
步骤2：化合物172-2的合成
在反应瓶中加入化合物172-1(115.0mg)，二氯甲烷(2.00mL)，4M的氯化氢二氧六环溶液(0.40mL)，室温反应0.5h，反应结束后倾去上清液，不溶物加甲醇溶解，然后用碳酸氢钠水溶液调节pH＝8，DCM和甲醇萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物172-2(84mg)，ESI-MS m/z:673.5[M+H]+。
步骤3：化合物172-3的合成
在反应瓶中加入化合物172-2(82.3mg)，中间体M28(65.00mg)，甲醇(2.00mL)，1,2-二氯乙烷(2.00mL)，1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.1mL)，40℃反应1h，再加氰基硼氢化钠(69.04mg)，60℃反应3h，加水稀释，DCM萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。用Pre-TLC制备(DCM:氨甲醇＝18:1)，得到黄色固体化合物172-3(66mg)，ESI-MS m/z:625.81/2[M+2H]+。
步骤4：化合物172的合成
在反应瓶中加入化合物172-3(66.00mg)，二氯甲烷(1.00mL)，三氟乙酸(1.00mL)，室温反应0.6h，浓缩，然后加DCM溶解，将反应液加到冰的碳酸氢钠水溶液中调pH＝8，DCM和甲醇萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。用制备液相分离，得到化合物172(19.5mg)。ESI-MS m/z:603.7 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝6.1Hz,1H),8.72(d,J＝1.4Hz,1H),8.56(d,J＝22.8Hz,1H),8.17(d,J＝1.3Hz,1H),7.65(dt,J＝14.7,7.4Hz,1H),7.51(dd,J＝5.8,1.9Hz,1H),7.49–7.39(m,4H),7.29(d,J＝2.6Hz,1H),7.23(t,J＝9.2Hz,1H),7.07(t,J＝2.8Hz,1H),6.29(dd,J＝9.9,1.9Hz,1H),5.41(d,J＝10.1Hz,1H),5.07(dd,J＝12.8,6.8Hz,2H),4.60(t,J＝8.3Hz,1H),4.50–4.44(m,3H),4.24(t,J＝12.9Hz,1H),4.16(q,J＝7.2Hz,2H),3.89(m,3H),3.62(dd,J＝33.7,13.3Hz,1H),3.46(dd,J＝22.1,10.7Hz,1H),3.31(dt,J＝3.3,1.6Hz,3H),2.90(s,2H),2.66–2.58(m,1H),2.46(t,J＝9.3Hz,2H),2.35(s,2H),2.22–2.01(m,6H),1.79(m,4H),1.33(m,4H),1.30–1.26(m,4H),1.16(d,J＝6.6Hz,3H),0.81(dd,J＝14.7,7.1Hz,6H),0.72(s,2H),0.51(s,2H).
实施例173化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-羰基)吡嗪-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物173-1的合成
称取5-溴-2-吡嗪羧酸(2.50g)、1-叔丁氧羰基哌嗪(2.75g)、HATU(5.62g)、DIPEA(6.44mL)，溶于DMF(20mL)，室温反应1h。LC-MS监测反应完成。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，EA萃取，水洗，浓缩有机相，柱层析分离纯化，得3.62g白色固体，即化合物173-1。ESI-MS m/z:371.1[M+H]+。
步骤2：化合物173-2的合成
称取化合物173-1(2.0g)，溶于THF(30mL)，加入乙炔基三甲基硅烷(1.52mL)，CuI(204mg)，Pd(PPh3)2Cl2(378mg)，DIPEA(2.82mL)，氮气保护后，加热至60℃反应3h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离纯化，得1.03g淡黄色固体，即化合物173-2。ESI-MS m/z:389.2[M+H]+。
步骤3：化合物173-3的合成
称取化合物173-2(200mg)、化合物M29(235mg)，溶于THF(5mL)，加入硫酸铜(74mg)，水(5mL)，叔丁醇(5mL)，抗坏血酸钠(265mg)，碳酸钾(569mg)，室温反应12h。LC-MS监测反应完成。DCM萃取，浓缩有机相，柱层析分离纯化，得316mg淡黄色固体，即化合物173-3。ESI-MS m/z:773.4[M+H]+。
步骤4：化合物173-4的合成
称取化合物173-3(316mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(8mL)，加入DCM(6mL)、MeOH(2mL)，室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇(10：1)萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得290mg黄色固体，即化合物173-4。ESI-MS m/z:673.3[M+H]+。
步骤5：化合物173的合成
称取化合物173-4(153mg)，溶于MeOH(10mL)，加入M43(100mg)和1.0M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.37mL)，加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(34.3mg)，反应过夜。LC-MS监测反应完成。调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，经Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％:45％)，得白色固体86.2mg，即化合物173。
ESI-MS m/z:603.6 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),9.24(s,2H),8.99(s,1H),8.87(s,2H),8.54(d,J＝7.4Hz,1H),7.79–7.74(m,1H),7.48–7.31(m,6H),7.05(s,1H),5.48(d,J＝9.9Hz,1H),5.20(d,J＝3.2Hz,1H),4.99–4.91(m,1H),4.75(d,J＝8.6Hz,1H),4.44(t,J＝7.9Hz,1H),4.36(d,J＝3.7Hz,5H),4.06(dd,J＝22.9,13.2Hz,1H),3.77(dt,J＝21.1,10.5Hz,3H),3.64(d,J＝21.9Hz,2H),3.54–3.45(m,2H),2.54(d,J＝29.2Hz,4H),2.39(s,3H),2.20–1.96(m,3H),1.82(s,1H),1.76–1.62(m,3H),1.40(d,J＝6.8Hz,2H),1.18(d,J＝11.4Hz,2H),1.11(d,J＝6.1Hz,2H),1.05(d,J＝6.0Hz,8H),0.75(dd,J＝13.7,6.8Hz,5H),0.68(s,2H),0.44(s,2H).
实施例174化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(2-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)吡嗪-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物174-1的合成
称取丙二酸叔丁基乙酯(4.35g)溶于THF(30mL)，冰浴条件下缓慢加入NaH(1261mg)，升至室温反应0.5h，加入2,5-二溴吡嗪(5.00g)，缓慢加热至80℃反应2h。LC-MS监测反应完成。冰浴条件下加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，向反应液中加入EA(50mL)，收集有机相，浓缩，柱层析分离纯化，得白色粉末5.60g，即化合物174-1。ESI-MS m/z:345.0[M+H]+。
步骤2：化合物174-2的合成
称取化合物174-1(5.60g)溶于DCM(20mL)，冰浴条件下加入三氟乙酸(20mL)，升至室温反应2h。LC-MS监测反应完成。浓缩反应体系，EA萃取，水洗，收集有机相，浓缩，柱层析分离纯化，得淡黄色油状物2.41g，即化合物174-2。ESI-MS m/z:245.0[M+H]+。
步骤3：化合物174-3的合成
称取化合物174-2(800mg)，溶于THF(10mL)，加入乙炔基三甲基硅烷(0.92mL)，CuI(124mg)，Pd(PPh3)2Cl2(229mg)，DIPEA(1.71mL)，氮气保护后，加热至60℃反应3h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离纯化，得560mg淡黄色固体，即化合物174-3。ESI-MS m/z:263.1[M+H]+。
步骤4：化合物174-4的合成
称取化合物174-3(415mg)，溶于MeOH(10mL)，加入碳酸钾(820mg)，室温反应1h。硅藻土滤除不溶物，滤液直接蒸干。柱层析分离纯化，得340mg淡黄色固体，即化合物174-4。
步骤5：化合物174-5的合成
称取化合物174-4(340mg)、化合物M29(642mg)，溶于THF(5mL),加入硫酸铜(225mg)，水(5mL)，叔丁醇(5mL)，抗坏血酸钠(805mg)，室温反应1h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化，得646mg淡黄色固体，即化合物174-5。ESI-MS m/z:647.3[M+H]+。
步骤6：化合物174-6的合成
称取化合物174-5(646mg)，氢氧化锂一水合物(208mg)，溶于MeOH(9mL)和H2O(3mL)中，室温条件下反应2h。LC-MS监测反应完成。稀盐酸调节pH至3，DCM萃取，水洗，浓缩，得612mg淡黄色固体，即化合物174-6。ESI-MS m/z:619.3[M+H]+。
步骤7：化合物174-7的合成
称取化合物174-6(511mg)、1-叔丁氧羰基哌嗪(184mg)、HATU(471mg)、DIPEA(0.430mL)，溶于DMF(10mL)，室温反应1h。LC-MS监测反应完成。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，EA萃取，水洗，浓缩有机相，柱层析分离纯化，得333mg淡黄色固体，即化合物174-7。ESI-MS m/z:787.4[M+H]+。
步骤8：化合物174-8的合成
称取化合物174-7(333mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(8mL)，加入DCM(6mL)、MeOH(2mL)，室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇(10：1)萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得258mg黄色固体，即化合物174-8。ESI-MS m/z:687.3[M+H]+。
步骤9：化合物174的合成
称取化合物174-8(125mg)，溶于MeOH(10mL)，加入M43(99mg)和1.0M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.37mL)，加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(34.3mg)，反应过夜。LC-MS监测反应完成。调节溶液pH至7-8后，用10％二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，经Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％:45％)，得白色固体58.6mg，即化合物174。
ESI-MS m/z:610.8 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),9.22(s,1H),9.14(t,J＝3.1Hz,1H),8.99(s,1H),8.75(s,1H),8.59(d,J＝1.4Hz,1H),8.53(d,J＝7.6Hz,1H),7.76(dd,J＝9.1,6.0Hz,1H),7.47 –7.32(m,6H),7.04(d,J＝2.6Hz,1H),5.44(d,J＝10.1Hz,1H),5.19(d,J＝3.8Hz,1H),4.93(t,J＝7.2Hz,1H),4.74(d,J＝8.6Hz,1H),4.42(t,J＝8.1Hz,1H),4.38–4.27(m,4H),4.09–3.96(m,3H),3.82–3.70(m,2H),3.63(dd,J＝23.3,10.2Hz,1H),3.53(d,J＝12.9Hz,2H),3.42(d,J＝24.6Hz,2H),2.56(ddd,J＝10.1,9.3,3.9Hz,1H),2.46(d,J＝4.1Hz,4H),2.36(dd,J＝18.9,10.4Hz,4H),2.20–1.98(m,3H),1.83–1.76(m,1H),1.74–1.62(m,3H),1.46(d,J＝20.7Hz,1H),1.39(d,J＝7.0Hz,3H),1.18(dd,J＝12.0,7.3Hz,4H),1.09(t,J＝6.0Hz,3H),0.85(dd,J＝9.2,4.6Hz,1H),0.78–0.70(m,6H),0.66(d,J＝11.8Hz,2H),0.43(s,2H).
实施例175化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(2-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)乙氧基)异恶唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物175-1的合成
称取叔丁基-4-(2-羟乙基)哌嗪-1-羧酸酯(1.16g)、化合物2-(3-羟基异恶唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(1.00g)、三苯基膦(1.98g)、DIAD(1.48mL)，溶于THF(20mL)，氮气保护，60℃反应4h。LC-MS监测反应完成。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，EA萃取，水洗，浓缩有机相，柱层析分离纯化，得1.50g白色固体，即化合物175-1。ESI-MS m/z:412.3[M+H]+。
步骤2：化合物175-2的合成
将化合物175-1(1.50g)溶于MeOH(20mL)和水(5mL)中，缓慢加入氢氧化锂一水合物(459mg)，室温条件下反应2h。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入DCM萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体200mg，即化合物175-2。ESI-MS m/z:398.2[M+H]+。
步骤3：化合物175-3的合成
称取化合物175-2(200mg)、化合物M29-2(175mg)，HATU(229mg)，加入DMF(10mL)溶解，冰浴条件下缓慢加入DIPEA(0.31mL)，缓慢升至室温反应1h。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入DCM萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体186mg，即化合物175-3。ESI-MS m/z:711.4[M+H]+。
步骤4：化合物175-4的合成
将化合物175-3(186mg)SFC拆分，浓缩，得白色固体55mg，即化合物175-4。ESI-MS m/z:711.4[M+H]+。
步骤5：化合物175-5的合成
将化合物175-4(55mg)加入DCM(2mL)和4M的氯化氢二氧六环溶液(2mL)中，室温反应10分钟，LC-MS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入饱和碳酸钠溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体47mg，即化合物175-5。ESI-MS m/z:611.3[M+H]+。
步骤6：化合物175的合成
称取化合物175-5(47mg)，溶于MeOH(10mL)，加入M43(47mg)和1.0M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.23mL)，加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(14.5mg)，反应过夜。LC-MS监测反应完成。调节溶液pH至7-8后，用10％二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％:45％)，得白色固体21.0mg，即化合物175。
ESI-MS m/z:572.5 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),9.22(s,1H),8.99(s,1H),8.43(d,J＝7.7Hz,1H),7.77(dd,J＝8.9,6.1Hz,1H),7.48–7.42(m,2H),7.35(dd,J＝16.2,5.3Hz,4H),7.03(d,J＝2.5Hz,1H),6.08(s,1H),5.11(d,J＝3.7Hz,1H),4.91(p,J＝7.1Hz,1H),4.76(d,J＝6.8Hz,1H),4.40–4.25(m,5H),4.21(t,J＝5.4Hz,2H),4.04(dd,J＝26.7,13.2Hz,1H),3.82–3.41(m,4H),2.60(d,J＝17.5Hz,2H),2.46(s,4H),2.38–2.10(m,8H),2.06–1.95(m,3H),1.80–1.62(m,4H),1.48–1.42(m,1H),1.37(d,J＝7.0Hz,2H),1.17(d,J＝11.8Hz,4H),1.04(d,J＝6.1Hz,2H),0.95(d,J＝6.6Hz,2H),0.87–0.69(m,8H),0.64(s,2H),0.40(s,2H).
实施例176化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(6-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-4-甲基哌啶-4-基)氧)哌啶-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物176-1的合成
将4-羟基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(500.0mg)，5-溴-2-氟吡啶(610.0mg)和氢化钠(170.0mg)溶解于DMF(10mL)中，氮气保护，70℃反应2h，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体480.0mg，即化合物176-1。ESI-MS m/z:371[M+H]+。
步骤2：化合物176-2的合成
将化合物176-1(480.0mg)，双三苯基膦二氯化钯(90.7mg)和碘化亚铜(49.4mg)溶解于TEA(25mL)中，氮气保护，添加三甲基硅基乙炔(0.55mL)，50℃反应过夜，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得棕色固体478.0mg，即化合物176-2。 ESI-MS m/z:192[M+H]+。
步骤3：化合物176-3的合成
将化合物176-2(478.0mg)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(560.9mg)，碳酸钾(300.0mg),硫酸铜(170.2mg)和抗坏血酸钠(640.2g)溶解于混合溶剂THF(10mL)/MeOH(10mL)/H2O(10mL)中，氮气保护，室温反应3小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得淡黄色固体144.0mg，即化合物176-3。ESI-MS m/z:773[M+H]+。
步骤4：化合物176-4的合成
将化合物176-3(100.2mg)加入DCM(3mL)和TFA(1mL)中，室温反应20分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至pH＝10，加入DCM(10mL)和MeOH(1mL)萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色粉末45.1mg，即化合物176-4。ESI-MS m/z:673[M+H]+。
步骤5：化合物176的合成
将化合物176-4(45.1mg)和M43(R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(39.7mg)溶解于MeOH(5mL)中，添加1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.10mL)，40℃反应1.5小时。向反应液中加入氰基硼氢化钠(13.0mg)，60℃继续反应过夜，LCMS监测反应完成。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(5mL)，有机相浓缩，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制备液相分离，得白色固体20.1mg，即化合物176。
ESI-MS m/z:603.8 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝5.0Hz,1H),8.85(d,J＝7.0Hz,1H),8.71(s,1H),8.53(d,J＝12.5Hz,1H),8.18(s,1H),7.70-7.63(m,1H),7.49-7.36(m,4H),7.28(s,1H),7.24(t,J＝9.0Hz,1H),7.09(s,1H),5.41(d,J＝10.0Hz,1H),5.11-5.01(m,3H),4.54-4.40(m,5H),4.25(t,J＝13.5Hz,1H),3.84(dd,J＝27.5,9.5Hz,2H),3.60-3.55(m,2H),2.91(s,2H),2.63(d,J＝6.5Hz,1H),2.54-2.43(m,6H),2.36(s,2H),2.25-2.12(m,3H),2.09-1.92(m,3H),1.87-1.70(m,5H),1.54(d,J＝7.0Hz,3H),1.45(s,3H),1.38-1.25(m,4H),1.15(d,J＝6.5Hz,3H),0.89-0.79(m,5H),0.73(s,2H),0.52(s,2H)。
实施例177：化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(5-((4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)哌嗪-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物177-1的合成
将2-氯-5-2-氯甲基吡嗪(500.0mg)，N-叔丁氧羰基哌嗪(685.6mg)和DIPEA(1.52mL)溶解于DCM(15mL)中，氮气保护，60℃反应24h，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体841.3mg，即化合物177-1。ESI-MS m/z:313[M+H]+。
步骤2：化合物177-2的合成
将化合物177-1(841.3mg)，双三苯基膦二氯化钯(188.7mg)和碘化亚铜(102.4mg)溶解于TEA(25mL)中，氮气保护，添加三甲基硅基乙炔(1.14mL)，50℃反应过夜，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得棕色固体602mg，即化合物177-2。ESI-MS m/z:375[M+H]+。
步骤3：化合物177-3的合成
将化合物177-2(60.0mg)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(302.9mg)，碳酸钾(400.6mg),硫酸铜(95.2mg)和抗坏血酸钠(340.7mg)溶解于混合溶剂THF(5mL)/MeOH(5mL)/H2O(5mL)中，氮气保护，室温反应3小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得淡黄色固体220.2mg，即化合物177-3。ESI-MS m/z:380[M+H]+。
步骤4：化合物177-4的合成
将化合物177-3(100.2mg)加入DCM(3mL)和TFA(1mL)中，室温反应20分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至pH＝10，加入DCM(10mL)和MeOH(1mL)萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色粉末171.1mg，即化合物177-4。ESI-MS m/z:330[M+H]+。
步骤5：化合物177的合成
将化合物177-4(171.1mg)和M43(R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(154.5mg)溶解于MeOH(5mL)中，添加1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.30mL，40℃反应1.5小时。向反应液中加入氰基硼氢化钠(50.0mg)，60℃继续反应过夜，LCMS监测反应完成。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(5mL)，有机相浓缩，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制备液相分离，得白色固体42.1mg，即化合物177。
ESI-MS m/z:596.8 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(s,1H),9.19(t,J＝1.5Hz,1H),8.87(s,1H),8.71(d,J＝2.0Hz,1H),8.68(d,J＝1.5Hz,1H),7.68-7.65(m,1H),7.59-7.58(m,1H),7.45-7.38(m,4H),7.29(t,J＝2.0Hz,1H),7.26-7.22(m,1H),7.07(t,J＝3.0Hz,1H),5.44(d,J＝10.0Hz,1H),5.07-5.02(m,1H),4.58-4.40(m,5H),4.27-4.19(m,2H),3.93-3.86(m,2H),3.73(s,2H),3.67-3.58(m,2H),3.49-3.44(m,1H),2.66-2.57(m,7H),2.50-2.45(m,5H),2.43-2.39(m,1H),2.22-2.12(m,3H),2.03-1.94(m,2H),1.87-1.85(m,1H),1.80-1.75(m,2H),1.67(d,J＝7.0Hz,1H),1.59(d,J＝7.5Hz,1H),1.53-1.51(m,3H),1.29(s,3H),1.17(d,J＝7.0Hz,1H),0.84-0.80(m,6H),0.70(s,2H),0.49(s,2H)。
实施例178化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-((1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘- 1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((R)-2-羟基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物178-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物M44(100.0mg)，溶于THF(2mL)，加入化合物4-((5-乙炔基吡嗪-2-基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(70.6mg)，硫酸铜(33.6mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(152.0mg)，室温反应1h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得106.4mg淡黄色固体，即化合物178-1。
步骤2：化合物178-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物178-1(103.4mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得79.3mg黄色固体，即化合物178-2。
步骤3：化合物178的合成
25mL单口瓶中加入化合物178-2(79.3mg)，溶于MeOH(5mL)，加入M43(71.8mg)和1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(32.7mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％:45％),得白色固体30.1mg，即化合物178。(纯度98.52％)。
LCMS m/z:605.3 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝4.9Hz,1H),8.87(d,J＝6.0Hz,1H),8.73(s,1H),8.54(s,1H),8.18(s,1H),7.70–7.63(m,1H),7.44(d,J＝12.8Hz,4H),7.30(s,1H),7.24(t,J＝9.3Hz,1H),7.07(s,1H),5.41(d,J＝10.0Hz,1H),5.06(dd,J＝18.5,12.6Hz,3H),4.59(t,J＝8.1Hz,2H),4.54–4.40(m,5H),4.25(t,J＝14.1Hz,1H),3.99–3.81(m,4H),3.57(ddd,J＝47.8,27.2,12.3Hz,3H),2.95(s,2H),2.68–2.35(m,8H),2.27–1.98(m,6H),1.91–1.74(m,5H),1.35–1.23(m,4H),1.16(d,J＝6.4Hz,4H),0.91–0.77(m,6H),0.75(s,2H),0.54(s,2H).
实施例179化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(6-((4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物179-1的合成
将2-氯-5-2-氯甲基吡啶(500.0mg)，N-叔丁氧羰基哌嗪(685.6mg)和DIPEA(1.52mL)溶解于DCM(15mL)中，氮气保护，60℃反应24h，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体840.0mg，即化合物179-1。ESI-MS m/z:312[M+H]+。
步骤2：化合物179-2的合成
将179-1(840.0mg)，双三苯基膦二氯化钯(188.7mg)和碘化亚铜(102.4mg)溶解于TEA(25mL)中，氮气保护，添加三甲基硅基乙炔(1.14mL)，50℃反应过夜，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得棕色固体600.0mg，即化合物179-2。ESI-MS m/z:374[M+H]+。
步骤3：化合物179-3的合成
将179-2(60.0mg)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(302.9mg)，碳酸钾(400.6mg),硫酸铜(95.2mg)和抗坏血酸钠(340.7mg)溶解于混合溶剂THF(5mL)/MeOH(5mL)/H2O(5mL)中，氮气保护，室温反应3小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得淡黄色固体200.0mg，即化合物179-3。ESI-MS m/z:379[M+H]+。
步骤4：化合物179-4的合成
将179-3(70.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体60.0mg，即化合物179-4。ESI-MS m/z:658.3[M+H]+。
步骤5：化合物179的合成
将179-4(60.0mg)和M43(R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(54.0mg)溶于甲醇(10mL)中，加入1M的氯化锌乙醚溶液(0.14mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(17.2mg)，60℃反应12小时，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制备液相分离，得白色粉末20.7mg，即化合物179。
ESI-MS m/z:595.8 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.19(d,J＝1.5Hz,1H),8.98(t,J＝1.5Hz,1H),8.87(s,1H),8.64(d,J＝1.5Hz,1H),8.25-8.23(m,1H),7.68-7.65(m,1H),7.59-7.58(m,1H),7.45-7.37(m,4H),7.30-7.18(m,3H),7.07(t,J＝2.5Hz,1H),5.40(d,J＝10.0Hz,1H),5.06-5.02(m,1H),4.55-4.39(m,5H),4.26-4.20(m,2H),3.93-3.87(m,2H),3.68-3.58(m,4H),3.45-3.44(m,1H),2.68-2.53(m,7H),2.53-2.45(m,5H),2.41-2.38(m,1H),2.22-2.13(m,3H),2.03-1.94(m,2H),1.87-1.84(m,1H),1.79-1.75(m,2H),1.66(d,J＝7.0Hz,1H),1.59(d,J＝7.5Hz,1H),1.53-1.51(m,3H),1.29(s,3H),1.17(d,J＝6.5Hz,1H),0.84-0.80(m,6H),0.70(s,2H),0.49(s,2H)。
实施例180化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(3-((1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)双环[1.1.1]戊-1-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物180-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物3-((叔丁氧羰基)氨基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(1.0g)，溶于THF(10mL),加入LAH(236.0mg)，室温反应3h。向反应液中分批加入水(0.5mL)，15％NaOH溶液(0.5mL)，水(1.5mL)，向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝5:1)，得786.8mg淡黄色固体，即化合物180-1。
步骤2：化合物180-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物180-1(786.8mg)，溶于DCM(10mL)，加入DMP(1.88g)，室温反应3h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠(5mL),DCM萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝6:1)，得538.2mg淡黄色固体，即化合物180-2。
步骤3：化合物180-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物180-2(538.2mg)，溶于MeOH(10mL)，加入K2CO3(705.1mg),(1-重氮-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(734.6mg)，室温反应3h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝47:1)，得394.2mg淡黄色固体，即化合物180-3。
步骤4：化合物180-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(100.0mg)，溶于THF(2mL),加入化合物180-3(54.5mg)，硫酸铜(35.2mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(160.0mg)，室温反应0.5h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得114.6mg淡黄色固体，即化合物180-4。
步骤5：化合物180-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物180-4(114.6mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得84.7mg黄色固体，即化合物180-5。
步骤6：化合物180-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物180-5(84.7mg)，溶于MeOH(5mL),加入N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(33.1mg)和1M的氯化锌的四氢呋喃溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(24.1mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得98.4mg淡黄色固体，即化合物180-6。
步骤7：化合物180-7的合成
25mL单口瓶中加入化合物180-6(98.4mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得69.5mg黄色固体，即化合物180-7。
步骤8：化合物180的合成
25mL单口瓶中加入化合物180-7(69.5mg)，溶于MeOH(5mL),加入M43(64.2mg)和1M的氯化锌的四氢呋喃溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(27.1mg)，反应过夜。向反应液中加入37％甲醛水溶液(0.2mL),冰醋酸(0.1mL)，室温反应0.5h后，加入NaBH3CN(27.1mg)，室温反应1h。反应液直接蒸干。Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％:45％),得白色固体23.7mg，即化合物180。(纯度97.84％)。
LCMS：1/2[M+2H]+＝597.84
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(s,1H),8.87(d,J＝2.4Hz,1H),7.93(s,1H),7.67(dd,J＝8.9,5.8Hz,1H),7.47–7.36(m,4H),7.30(d,J＝2.6Hz,1H),7.26–7.21(m,1H),7.05(t,J＝2.7Hz,1H),5.27(d,J＝10.3Hz,1H),5.08–4.99(m,1H),4.55–4.37(m,5H),4.31–4.18(m,1H),3.90–3.76(m,2H),3.63(dd,J＝33.3,13.3Hz,1H),3.51–3.41(m,1H),3.34(s,4H),3.17(dd,J＝11.1,9.6Hz,3H),2.71(s,1H),2.63–2.36(m,6H),2.24(s,3H),2.17–2.10(m,5H),2.07–1.93(m,3H),1.89–1.75(m,3H),1.71–1.60(m,4H),1.51(d,J＝7.0Hz,3H),1.36–1.24(m,5H),1.15–1.05(m,3H),0.81(dd,J＝16.7,7.5Hz,3H),0.76–0.67(m,5H),0.51(s,2H).
实施例181：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(2-((1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)噻唑-5-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物181-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物2,5-二溴噻唑(1.0g)，溶于THF(10mL),加入NaH(330.0mg)，N-叔丁氧羰基-4-羟基哌啶(0.91g)，加热至50℃反应5h，反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝8:1)，得0.96g淡黄色固体，即化合物181-1。
步骤2：化合物181-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物181-1(848.0mg)，溶于DMF(10mL)，加入三甲基乙炔基硅(457.8mg)，CuI(82.3mg)，PdCl2(PPh3)2(148.2mg)，DIPEA(1.1mL)，氮气保护后，加热至50℃反应3h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝6:1)，得594.7mg淡黄色固体，即化合物181-2。
步骤3：化合物181-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物181-2(594.7mg)，溶于MeOH(10mL)，加入K2CO3(432.2mg),室温反应2h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得390.2mg淡黄色固体，即化合物181-3。
步骤4：化合物181-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(100.0mg)，溶于THF(2mL),加入化合物181-3(74.3mg)，硫酸铜(35.2mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(160.0mg)，室温反应1h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得103.4mg淡黄色固体，即化合物181-4。
步骤5：化合物181-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物181-4(103.4mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得74.6mg黄色固体，即化合物181-5。
步骤6：化合物181的合成
25mL单口瓶中加入化合物181-5(68.2mg)，溶于MeOH(5mL),加入M43(61.9mg)和1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(28.3 mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％:45％),得白色固体17.4mg，即化合物181。(纯度97.81％)。
LCMS：1/2[M+2H]+＝599.8
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝4.8Hz,1H),8.87(s,1H),8.38(s,1H),7.66(d,J＝5.9Hz,1H),7.48–7.36(m,5H),7.29(s,1H),7.24(t,J＝9.2Hz,1H),7.07(s,1H),5.35(d,J＝10.2Hz,1H),5.04(dd,J＝13.6,6.7Hz,2H),4.61(s,1H),4.55–4.37(m,5H),4.25(t,J＝14.8Hz,1H),3.87(dd,J＝25.1,9.4Hz,2H),3.74–3.52(m,2H),3.47(s,1H),3.02(dd,J＝14.5,7.3Hz,1H),2.87(s,2H),2.67–2.38(m,4H),2.25–2.01(m,4H),2.00–1.83(m,3H),1.52(d,J＝6.8Hz,3H),1.43(s,1H),1.37–1.23(m,5H),1.15(d,J＝6.5Hz,3H),0.87–0.76(m,6H),0.73(s,2H),0.52(s,2H).
实施例182化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(1-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲基)1H-吡唑-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物182-1的合成
将4-[((4-溴-1H-吡唑-1-基)甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g)溶于THF(10mL)中，氮气保护，置于-78℃低温反应器中，加入2.5M的正丁基锂正己烷溶液(1.74mL)，-78℃搅拌反应1小时，然后加入DMF(0.34mL)，-78℃搅拌反应1小时，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化得白色固体450.0mg，即化合物182-1。ESI-MS m/z:294.4[M+H]+。
步骤2：化合物182-2的合成
将化合物182-1(450.0mg),(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(884.1mg)和碳酸钾(1.27g)加入MeOH(30mL)中，室温反应1小时，LCMS监测反应完成。将反应液过滤，有机相直接浓缩，柱层析纯化得白色固体373.0mg，即化合物182-2。ESI-MS m/z:290.4[M+H]+。
步骤3：化合物182-3的合成
将M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(131.5mg)，化合物182-2(100.0mg)，无水硫酸铜(49.7mg)和抗坏血酸钠(178.1mg)溶解于THF/叔丁醇/水(3/3/3mL)的混合溶剂中，室温反应3小时。LCMS监测反应完成，向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化得黄色固体250.0mg，即化合物182-3。ESI-MS m/z:746.9[M+H]+。
步骤4：化合物182-4的合成
将化合物182-3(250.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体153.1mg，即化合物182-4。ESI-MS m/z:646.9[M+H]+。
步骤5：化合物182-5的合成
将化合物182-4(153.1mg)和M28(R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(168.5mg)溶于甲醇(8mL)中，加入1M的氯化锌乙醚溶液(0.36mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(44.7mg)，60℃反应12小时，LCMS监测反应完成。加入饱和碳酸氢钠溶液(5.0mL)淬灭反应，向反应液中加入DCM(20mL)，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体171.0mg，即化合物182-5。ESI-MS m/z:612.81/2[M+2H]+。
步骤6：化合物182的合成
将化合物182-5(20.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末7.6mg，即化合物182。ESI-MS m/z:590.2 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝8.0Hz,1H),8.87(s,1H),8.03(d,J＝4.0Hz,1H),7.95(s,1H),7.92(s,1H),7.67-7.64(m,1H),7.44-7.39(m,4H),7.29(d,J＝2.5Hz,1H),7.23(t,J＝9.0Hz,1H),7.06(t,J＝2.5Hz,1H),5.27(d,J＝10.5Hz,1H),5.03(q,J＝7.0Hz,1H),4.52-4.39(m,5H),4.24(t,J＝13.5Hz,1H),3.90-3.87(m,1H),3.66-3.56(m,1H),3.49-3.41(m,1H),3.26(q,J＝7.5Hz,2H),3.10-3.03(m,2H),2.57-2.53(m,1H),2.47(s,1H),2.41-2.37(m,3H),2.21-2.16(m,2H),1.98-1.91(m,2H),1.86-1.84(m,1H),1.80-1.74(m,2H),1.69-1.66(m,2H),1.51(d,J＝7.0Hz,2H),1.29-1.27(m,6H),1.12(d,J＝6.5Hz,3H),0.91-0.86(m,2H),0.83-0.79(m,3H),0.75-0.74(m,3H),0.70(s,2H),0.49(s,1H)。
实施例183化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(3-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物183-1的合成
将4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg)溶于5.00mL 1,4-二氧六环中，依次加入TEA(0.576mL)，2-氯-5-乙炔基吡嗪(0.138mg)，80℃反应3h。反应液冷却至室温，减压蒸除溶剂并柱层析纯化得无色油状产物180mg，即化合物183-1，ESI-MS m/z:344[M+H]+
步骤2：化合物183-2的合成
室温下，将化合物183-1(180mg)，M29(230mg)，抗坏血酸钠(216mg)，无水硫酸铜(60.2mg)溶于2.00mL叔丁醇，2.00mL四氢呋喃和2.00mL水的混合溶剂中，室温反应1h。向反应液加入50mL水溶液淬灭，DCM/MeOH＝10/1混合溶剂萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得300mg黄色固体产物，即化合物183-2。ESI-MS m/z:800[M+H]+；
步骤3：化合物183-3的合成
室温下，将化合物183-2(300mg)溶于5.00mL二氯甲烷中，然后加入4M的氯化氢二氧六环溶液(2.00mL)，室温反应0.5h。减压蒸出溶剂后，二氯甲烷复溶，再次蒸出溶剂，5.00mL四氢呋喃复溶后加入1.00mL水，加入碳酸钠固体搅拌20min，然后加入无水硫酸钠干燥后过滤，减压蒸除溶剂后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得208mg黄色固体产物，即化合物183-3。ESI-MS m/z:700[M+H]+；
步骤4：化合物183的合成
室温下，将M43(72.4mg)，183-3(77.0)溶于无水甲醇(3.00mL)中，加入1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.220mL)，55℃反应1.0h，加入氰基硼氢化钠(34.6mg)，70℃反应3.0h。向反应液中加入适量饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入DCM/MeOH＝10/1萃取三次，每次20mL，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后,Pre-HPLC纯化得52.5mg白色固体产物，即化合物183。
ESI-MS m/z:617 1/2[M+2H]+；
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝6.3Hz,1H),8.87(d,J＝3.4Hz,1H),8.64(d,J＝6.6Hz,1H),8.44(s,1H),7.88(s,1H),7.67(dd,J＝8.8,5.9Hz,1H),7.47–7.37(m,4H),7.30(d,J＝2.6Hz,1H),7.24(t,J＝9.2Hz,1H),7.06(t,J＝2.4Hz,1H),5.36(d,J＝10.2Hz,1H),5.04(q,J＝7.1Hz,1H),4.59(s,3H),4.49(ddd,J＝35.9,16.3,9.3Hz,4H),4.24(dd,J＝25.4,11.2Hz,3H),3.99(s,2H),3.96–3.83(m,2H),3.70–3.59(m,1H),3.48(s,1H),3.37(s,1H),2.62(dt,J＝10.1,6.5Hz,3H),2.51(d,J＝13.1Hz,3H),2.47–2.39(m,3H),2.20(dd,J＝14.8,7.2Hz,4H),1.98(td,J＝8.9,4.5Hz,1H),1.91–1.74(m,3H),1.53(d,J＝7.0Hz,2H),1.38–1.23(m,7H),1.15(d,J＝6.7Hz,3H),0.90(t,J＝6.8Hz,1H),0.86–0.79(m,5H),0.72(s,2H),0.50(s,2H).
实施例184化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(1-((((7-(8-乙基-7-氟代-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯并吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基环丙基甲基环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧)吡嗪-2-基吡嗪-2-甲基-1,2,3-三唑-1-基吡唑嗪2-1-2-3-3-三唑1-基吡唑-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((1R，2R)-2-羟基-3-甲基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丁基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物184-1的合成
向(R)-(1-(4-溴苯基)-2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯(4.00g,12.65mmol)，4-甲基噻唑(2.51g,25.30mmol)，醋酸钯(0.28g,1.27mmol)，醋酸钾(2.48g,25.30mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(60.00mL)中，氮气保护，升温至100℃下反应12h。反应液加入50mL水中，EA萃取2次，每次30mL，合并有机相，饱和食盐水洗，干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化(EA：PE＝1％to 60％)。得到2.10g无色固体。即化合物184-1。ESI-MS m/z:335.1[M+H]+。
步骤2：化合物184-2的合成
向化合物184-1(1.00g,2.99mmol)的四氢呋喃(30.00mL)中，加入DMP(1.40g,3.29mmol)，20℃下反应1h。LCMS转化完全，过滤，得到184-2的THF溶液。直接投下步。ESI-MS m/z:351.1[M+H+18]+。
步骤3：化合物184-3的合成
向化合物184-2(1000.00mg,3.01mmol)的四氢呋喃(33.00mL)中，0℃下冷却，氮气保护，加入异丙基氯化镁(9.02mL,2.00mol/L，18.05mmol)，0℃下反应2h。反应液加入100mL饱和氯化铵中，EA萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物柱层析纯化。得到250.00mg泡沫固体。即化合物184-3。ESI-MS m/z:377.2[M+H]+。
步骤4：化合物184-4的合成
向化合物184-3(474.00mg,1.26mmol)的四氢呋喃(4.80mL)中，加入4M的氯化氢二氧六环溶液(1.57mL)，60℃下反应2h。LCMS原料转化，反应液加入20mL饱和碳酸氢钠溶液中，氯仿/异丙醇萃取3次，有机相干燥，过滤，减压浓缩。得到330.00mg黄色液体。即化合物184-4。ESI-MS m/z:277.2[M+H]+。
步骤5：化合物184-5的合成
向化合物184-4(330.00mg,1.19mmol)，(2S，4R)-4-羟基-1-[(2-甲基丙-2-基)氧羰基]吡咯烷-2-羧酸(303.69mg,1.31mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(4.00mL)中，冰水浴冷却至0℃， 加入HATU(499.36mg,1.31mmol)，DIPEA(0.83mL,4.78mmol)，0℃下反应1h，然后20℃下反应2h。反应液加入30mL清水中，EA萃取3次，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物柱层析纯化(MeOH:DCM＝1％to 17％)得到250.00mg淡黄色泡沫固体。即化合物184-5。ESI-MS m/z:490.2[M+H]+。
步骤6：化合物184-6的合成
向184-5(250.00mg,0.51mmol)的二氯甲烷(1.50mL)和甲醇(1.50mL)中，0℃下冷却，加入4M的氯化氢二氧六环溶液(1.28mL)，0℃下反应1h，20℃下再反应1h。反应液加入20mL饱和碳酸溶液中，氯仿/异丙醇萃取8次，有机相干燥，过滤，减压浓缩。得到175.00mg淡黄色泡沫固体。即化合物184-6。ESI-MS m/z:390.1[M+H]+。
步骤7：化合物184-7的合成
向184-6(180.00mg,0.46mmol)，(2S)-3-甲基-2-[(2-甲基丙-2-基)氧羰基氨基]丁酸(110.43mg,0.51mmol)，HATU(193.27mg,0.51mmol)的DMF(4.00mL)中，加入DIPEA(0.32mL,1.85mmol)，20℃下反应2h。原料转化完全，反应液加入30mL水中，EA萃取2次，每次15mL，合并有机相，饱和食盐水洗，干燥，过滤，减压浓缩，残留物柱层析纯化(MeOH：DCM＝1：13)，得到195.00mg淡黄色泡沫固体。即化合物184-7。ESI-MS m/z:589.2[M+H]+。
步骤8：化合物184-8的合成
向184-7(190.00mg,0.32mmol)的甲醇(2.00mL)，二氯甲烷(2.00mL)中，0℃下加入4M的氯化氢二氧六环溶液(0.81mL)，然后20℃下反应1h。反应液不加热，直接减压浓缩。得到130.00mg,白色固体。即化合物184-8，直接投下步。ESI-MS m/z:489.2[M+H]+。
步骤9：化合物184-9的合成
向化合物184-8(150.00mg,0.31mmol)，三乙胺(0.17mL,1.23mmol)的四氢呋喃(1.50mL)和乙腈(1.50mL)中，冰水浴冷却，氮气保护，滴加含有2-叠氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐(175.07mg,0.61mmol)的乙腈(0.75mL)溶液，然后0℃下反应2h。反应液加入20mL水中，DCM萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物柱层析纯化(MeOH:DCM＝1：16)得到120.00mg棕色泡沫固体，即化合物184-9。ESI-MS m/z:515.20[M+H]+。
步骤10：化合物184-10的合成
向化合物184-9(80.00mg,0.16mmol)，化合物144-3(51.84mg,0.17mmol)的叔丁醇(2.50mL)和四氢呋喃(2.50mL)中，加入硫酸铜(24.80mg,0.16mmol)，含有抗坏血酸钠(92.36mg,0.47mmol)的水(1.25mL)，20℃下反应1h。反应液加入20mL清水中，DCM萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物柱层析纯化(MeOH:DCM＝1：16)，得到80.00mg棕色固体。即化合物184-10。ESI-MS m/z:818.10[M+H]+。
步骤11：化合物184-11的合成
向184-10(70.00mg,0.09mmol)的二氯甲烷(2.50mL)中，0℃下加入三氟乙酸(0.48mL,6.42mmol)，0℃反应1h。反应液加入20mL饱和碳酸氢钠溶液中，氯仿/异丙醇萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，得到55.00mg无色油状物。即化合物184-11，直接投下步。ESI-MS m/z:718.30[M+H]+。
步骤12：化合物184的合成
向184-11(70.00mg,0.10mmol)，M43(58.86mg,0.11mmol)的甲醇(2.50mL)中，加入1M 的氯化锌四氢呋喃溶液(0.20mL)，40℃下反应1h，加入氰基硼氢化钠(24.51mg,0.39mmol)，40℃下反应16h。反应液加入20mL水中，氯仿/异丙醇萃取，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩，残留物pre-HPLC纯化得到20.00mg白色粉末。即化合物184。
ESI-MS m/z:625.8 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(s,1H),8.87(s,1H),8.74(s,1H),8.58(s,1H),8.19(s,1H),7.68-7.65(m,1H),7.47-7.41(m,4H),7.30(s,1H),7.26-7.22(m,1H),7.07(s,1H),5.41-5.39(d,J＝10.0Hz,1H),5.10-5.14(m,2H),4.63-4.58(m,5H),4.47(s,4H),4.29-4.22(m,1H),3.95-3.85(m,2H),3.69-3.52(m,4H),2.66-2.63(m,1H),2.48(s,6H),2.22-2.19(m,3H),2.06-1.99(m,3H),1.81-1.77(m,6H),1.30(m,3H),1.28(m,3H),1.18-1.15(m,3H),1.04-1.02(m,6H),0.84-0.79(m,6H),
实施例185化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-((1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(2-甲基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物185-1的合成
将4-溴-2-甲基苯乙酮(3.0g)，叔丁基亚磺酰胺(6.9g)溶于30.00mL无水四氢呋喃，加入钛酸乙酯(31.0mL)，80℃反应3.0h。反应液冷却至室温后滴加冰水中淬灭，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化(PE/EA＝5/1)得3.0产物，即化合物185-1。ESI-MS m/z:316[M+H]+；
步骤2：化合物185-2的合成
将化合物185-1(3.0g)，溶于30.00mL无水四氢呋喃中，加入三仲丁基硼氢化锂(28.46mL)，室温反应2.0h。反应液滴加至冰水中淬灭，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得3.0g粗品，直接用于下一步，即化合物185-2。ESI-MS m/z:318[M+H]+；
步骤3：化合物185-3的合成
将化合物185-2(3.0g)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(35.00Ml)中，室温反应2.0h。反应液减压蒸除溶剂，EA打浆后过滤得2.0g白色产物，即化合物185-3。ESI-MS m/z:214[M+H]+；
步骤4：化合物185-4的合成
将化合物185-3(2.0g)，溶于20.0mL无水二氯甲烷中，依次加入三乙胺(5.57mL)，二碳酸二叔丁酯(2.76mL)，室温反应1.0h。反应液减压蒸除溶剂，柱层析纯化后得2.0g类白色产物，即化合物185-4。ESI-MS m/z:314[M+H]+；
步骤5：化合物185-5的合成
将化合物185-4(2.0g)，4-甲基噻唑(0.95g)，醋酸钯(0.29g)，碳酸钾(2.64g)溶于20.0mL DMA中，120℃反应2.0h。反应液冷却至室温后滴加水淬灭，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化得2.0产物，即化合物185-5。ESI-MS m/z:333[M+H]+；
步骤6：化合物185-6的合成
将化合物185-5(2.0g)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液中(10.00mL)，室温反应1.0h。反应液减压蒸除溶剂，甲醇复溶后再次减压蒸除溶剂得1.1g黄色产物，直接用于下一步，即化合物185-6。ESI-MS m/z:233[M+H]+；
步骤7：化合物185-7的合成
将化合物185-6(1.1g)，(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-2-氨基甲酰基-4-羟基吡咯烷(1.31g)，DIPEA(2.47mL)溶于10.00mLDMF中，加入HATU(1.98g)，室温反应1.0h。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化得2.0产物，即化合物185-7。ESI-MS m/z:446[M+H]+；
步骤8：化合物185-8的合成
将化合物185-7(2.0g)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(15.00mL)与3.0mL甲醇中，室温反应1.0h。反应液中加入50mL EA，体系中有黄色固体析出，过滤得1.1g黄色产物，直接用于下一步，即化合物185-8。ESI-MS m/z:346[M+H]+；
步骤9：化合物185-9的合成
将化合物185-8(1.1g)，叔丁氧羰基-L-缬氨酸(0.76g)，DIPEA(2.77mL)溶于15.00mL DMF中，加入HATU(1.98g)，室温反应1.0h。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化得1.4g产物，即化合物185-9。ESI-MS m/z:545[M+H]+；
步骤10：化合物185-10的合成
将化合物185-9(1.4g)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(15.00mL)中，室温反应1.0h。反应液冰浴下滴加4M NaOH溶液调节pH至12，加入DCM/MeOH＝10/1混合溶剂萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸出溶剂得到1.1g产物，即化合物185-10。ESI-MS m/z:445[M+H]+；
步骤11：化合物185-11的合成
将化合物185-10(1.1g)溶于无水乙腈(15.00mL)和四氢呋喃(8.0mL)混合溶剂中，加入三乙胺(2.06mL)，冰浴下加入2-叠氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐(1.41g)，室温反 应1.5h。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化得1.1g产物，即化合物185-11。ESI-MS m/z:471[M+H]+；
步骤12：化合物185-12的合成
室温下，将185-11(500mg)，化合物144-3(482mg)，抗坏血酸钠(546mg)，无水硫酸铜(152mg)溶于2.00mL叔丁醇，2.00mL四氢呋喃和2.00mL水的混合溶剂中，室温反应1h。向反应液加入50mL水溶液淬灭，DCM/MeOH＝10/1混合溶剂萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得800mg黄色固体产物，即化合物185-12。ESI-MS m/z:774[M+H]+；
步骤13：化合物185-13的合成
将185-12(800mg)送样制备拆分，拆分条件为色谱柱：CHIRAL ART Cellulose-SB(20×250mm，5μm)；流动相：0.1％DEAin HEX：0.1％DEAin EtOH＝85：15；流速20mL/min；样品保留时间：目标化合物A：16.33min，目标化合物B：21.85min。收集化合物B得到320mg产物，即化合物185-13。ESI-MS m/z:774[M+H]+；
步骤14：化合物185-14的合成
将化合物185-13(320mg)，溶于3.0mL甲醇中，加入4M的氯化氢二氧六环溶液(4.00mL)，室温反应1.0h。反应液冰浴下滴加4M NaOH溶液调节pH至12，加入DCM/MeOH＝10/1混合溶剂萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸出溶剂得到180mg产物，即化合物185-14。ESI-MS m/z:674[M+H]+；
步骤15：化合物185的合成
室温下，将M43(48.8mg)，化合物185-14(50.0mg)溶于无水甲醇(2.00mL)中，加入1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.15mL)，55℃反应1.0h，加入氰基硼氢化钠(23.3mg)，70℃反应3.0h。向反应液中加入适量饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入DCM/MeOH＝10/1萃取3次，每次20mL，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经Pre-HPLC纯化得23.2mg白色固体产物，即化合物185。
ESI-MS m/z:604.2 1/2[M+2H]+；
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝4.3Hz,1H),8.85(d,J＝7.3Hz,1H),8.74(dd,J＝4.3,1.4Hz,1H),8.54(d,J＝4.7Hz,1H),8.19(d,J＝1.5Hz,1H),7.67(dd,J＝9.1,5.7Hz,1H),7.39(d,J＝8.1Hz,1H),7.32–7.21(m,4H),7.06(t,J＝2.6Hz,1H),5.39(d,J＝10.1Hz,1H),5.24(q,J＝7.1Hz,1H),5.16(d,J＝10.0Hz,1H),4.58(s,1H),4.55–4.49(m,2H),4.49–4.46(m,2H),4.27(t,J＝14.5Hz,1H),3.95–3.82(m,2H),3.63(dd,J＝33.1,13.3Hz,2H),3.47(d,J＝11.3Hz,2H),3.02(s,2H),2.62(dt,J＝10.1,6.5Hz,3H),2.45(d,J＝16.8Hz,6H),2.26–2.07(m,6H),2.00–1.92(m,2H),1.80(dd,J＝27.5,17.6Hz,5H),1.61(d,J＝6.9Hz,1H),1.49(d,J＝7.0Hz,3H),1.32–1.26(m,5H),1.15(d,J＝6.5Hz,3H),0.85–0.74(m,7H),0.58(s,2H).
实施例186化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(7-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)喹唑啉-2-基))氧)甲基)环丙基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基吡嗪-2-基-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物186-1的合成
将7-溴-8-氟喹唑啉-2,4-二醇(7.2g)溶于60mL三氯氧磷，加入N,N-二异丙基乙胺(13.8mL)，N2氛围升温至100℃反应1h。减压旋蒸除去三氯氧磷，粗品直接柱层析纯化(PE/EA＝3:2)得到化合物186-1(7.5g)，ESI-MS m/z:294.8[M+H]+。
步骤2：化合物186-2的合成
将化合物186-1(0.5g)溶于15.0mL二氯甲烷，-40℃下加入N,N-二异丙基乙胺(0.84mL)和(3R)-3-甲基哌啶-3-醇盐酸盐(0.27g)，保持-40℃反应1h。将反应液加入到饱和氯化铵溶液中，加入EA，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干柱层析纯化(PE/EA＝1：1)得到化合物186-2(0.55g)，ESI-MS m/z:374.0[M+H]+。
步骤3：化合物186-3的合成
将化合物186-2(300mg)，1,1-环丙烷二甲醇(164mg)溶于8.0mL DMF，加入碳酸铯(522mg)，三乙烯二胺(18mg)，升温至40℃反应3h。将反应液加入水中，加入EA，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后柱层析纯化(DCM/EA＝3:2)得到化合物186-3(340mg)，ESI-MS m/z:440.1[M+H]+。
步骤4：化合物186-4的合成
化合物186-3(200mg)加入到50mL单口瓶中，加入8mL 1,4-二氧六环和2mL水，中间体M5(327mg)，CataCXium APd G3(66mg)，磷酸钾(289mg)，N2置换3次，升温至90℃反应1h。反应结束后，向反应液中加入EA和水，萃取，水相继续使用EA萃取2次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(DCM:EA＝3:2)得到化合物186-4(205mg)，ESI-MS m/z:594.2[M+H]+。
步骤5：化合物186-5的合成
将化合物186-4(200mg)溶于8.0mL二氯甲烷中，加入戴斯-马丁氧化剂(214mg)，室温反应0.5h。过滤除去不溶性杂质，向滤液中加入DCM和饱和碳酸氢钠溶液，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后柱层析纯化(DCM/EA＝3:2)得到化合物186-5(142mg)，ESI-MS m/z:592.2[M+H]+。
步骤6：化合物186-6的合成
将化合物186-5(142mg)和化合物M48(145mg)溶于甲醇(5mL)中，加入1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.29mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(45mg)，升温至60℃继续反应6小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，向反应液中加入DCM，萃取，收集有机相，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，浓缩后柱层析纯化(DCM/MeOH＝8:1)得到化合物186-6(138mg)，ESI-MS m/z:630.7 1/2[M+2H]+。
步骤7：化合物186的合成
将化合物186-6溶于5mL二氯甲烷和5mL乙腈，冰浴下加入2.0mL三氟化硼乙醚溶液(1M)，保持冰浴反应15min。将反应液加入到冰的饱和碳酸氢钠溶液中，加入DCM/MeOH(10:1)萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，进一步HPLC制备得到化合物186(8.8mg)，ESI-MS m/z:608.7 1/2[M+2H]+。
实施例187：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-((4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)噻唑-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物187-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物2-溴噻唑-5-甲醛(1.0g)，溶于MeOH(10mL),加入N-叔丁氧羰基-4-羟基哌啶(1.1g)和1M的氯化锌四氢呋喃溶液(1.0mL)，加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(0.62g)，反应过夜。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得1.2g淡黄色固体，即化合物187-1。
步骤2：化合物187-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物187-1(1.2g)，溶于DMF(10mL)，加入三甲基乙炔基硅(487.8mg)，CuI(96.7mg)，PdCl2(PPh3)2(178.2mg)，DIPEA(2.1mL)，氮气保护后，加热至50℃反应3h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝4:1)，得475.2mg淡黄色固体，即化合物187-2。
步骤3：化合物187-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物187-2(475.2mg)，溶于MeOH(10mL),加入K2CO3(412.5mg),室温反应2h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得239.65mg淡黄色固体，即化合物187-3。
步骤4：化合物187-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(100.0mg)，溶于THF(2mL),加入化合物187-3(74.0mg)，硫酸铜(35.2mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(188.0mg)，室温反应1h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得94.3mg淡黄色固体，即化合物187-4。
步骤5：化合物187-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物187-4(94.3mg)，溶于HCl in dioxane(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得63.1mg黄色固体，即化合物187-5。
步骤6：化合物187的合成
25mL单口瓶中加入化合物187-5(63.1mg)，溶于MeOH(5mL),加入M43(52.2mg)和1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(24.8mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％:45％),得白色固体12.4mg，即化合物187。(纯度96.63％)。
LCMS：1/2[M+2H]+＝599.2
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.18(d,J＝10.7Hz,1H),8.87(d,J＝7.1Hz,1H),8.61(dd,J＝17.1,2.9Hz,1H),7.67(dd,J＝9.7,6.5Hz,2H),7.41(dq,J＝16.2,8.2Hz,4H),7.29(d,J＝1.6Hz,1H),7.26–7.19(m,1H),7.06(dd,J＝5.1,2.7Hz,1H),5.43(dd,J＝10.0,2.6Hz,1H),5.08–4.99(m,1H),4.60(s,1H),4.55–4.36(m,6H),4.22(dd,J＝23.3,13.2Hz,1H),3.94–3.78(m,4H),3.69-3.51(m,1H),3.44(s,1H),2.63–2.52(m,4H),2.46-2.40(m,7H),2.21-2.16(m,3H),1.96(dd,J＝17.5,8.6Hz,1H),1.83(s,1H),1.77(d,J＝11.0Hz,2H),1.64(d,J＝7.2Hz,1H),1.51(dd,J＝7.0,2.0Hz,3H),1.28–1.21(m,4H),1.15(d,J＝6.5Hz,3H),0.86–0.76(m,6H),0.70(s,2H),0.49(s,2H).
实施例188：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-((((3R，7aR)-7a-(((7-(8-乙基-7-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-甲基哌啶-2-基)吡咯并嘧啶-2-基)氧基)甲基)甲基六氢-1H-吡咯嗪-3-吡咯并嗪-3-甲氧基)甲酯吡嗪-2-基1-1,2,3,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物188-1的合成
将(5-氯吡嗪-2-基)甲醇(1g)，三甲基硅基乙炔(1.16mL),双三苯基磷二氯化钯(0.48g)， 碘化亚铜(0.13g)溶于10mLDMF中，加入三乙胺(2.88mL)，置换氮气三次，50℃反应2h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入30mL水，用EA萃取三次，每次50mL，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得白色固体1g，即188-1。ESI-MS m/z:207[M+H]+。
步骤2：化合物188-2的合成
将化合物188-1(1g)溶于10mLDCM中，0℃下滴加PBr3(0.68mL)，保温反应1小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用DCM:MeOH＝10:1萃取三次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得白色固体0.61g，即化合物188-2。ESI-MS m/z:269[M+H]+。
步骤3：化合物188-3的合成
将化合物88-3(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基-甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((3R，7aR)-3-(羟甲基)四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(200mg)溶于4mLTHF中，加入NaH(32mg)，室温搅拌30分钟，然后加入188-2(106mg)，插入氮气球，50℃下搅拌1h。LC-MS监测反应完成。向反应液缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得淡黄色固体70mg即化合物188-3。ESI-MS m/z:780[M+H]+；
步骤4：化合物188-4的合成
将化合物188-3(70mg)和M29(2S，4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(41mg)溶于1.5mL THF，1.5mL H2O，1.5mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(39mg)和无水硫酸铜(11mg)，室温反应0.5小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用DCM:异丙醇＝4:1萃取3次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体40mg，即化合物188-4。ESI-MS m/z:619 1/2[M+2H]+。
步骤5：化合物188的合成
将化合物188-4(40mg)溶于2mLDCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得白色粉末11mg，即化合物188。
ESI-MS m/z:597 1/2[M+2H]+。
实施例189化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-)(7-(1-(7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲基]吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物189-1的合成
将5-氯吡嗪-2-甲醛(1.0g)，2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(1.59g)，溶于甲醇(10mL)中，室温反应1小时后分批次加入氰基硼氢化钠，反应完毕后，加入乙酸乙酯和水，萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，经柱层析纯化得到化合物189-1(480mg)。ESI-MS m/z:353.2[M+H]+。
步骤2：化合物189-2的合成
将化合物189-1(480mg)，双三苯基膦二氯化钯(85mg)和碘化亚铜(46mg)溶解于TEA(0.84mL)中，氮气保护，添加三甲基硅基乙炔(0.33mL)，60℃反应过夜，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得化合物189-2(210mg)。ESI-MS m/z:415.1[M+H]+。
步骤3：化合物189-3的合成
将化合物189-2(200.0mg)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(220mg)，碳酸钾(333mg)，硫酸铜(70mg)和抗坏血酸钠(249mg)溶解于混合溶剂THF(2mL)/tBuOH(1mL)/MeOH(1mL)/H2O(2mL)中，氮气保护，室温反应3小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得化合物189-3(274mg)。ESI-MS m/z:799.1[M+H]+。
步骤4：化合物189-4的合成
将化合物189-3(274mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，25℃反应20分钟。反应完毕后，用碳酸氢钠溶液中和，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，干燥，浓缩，得到化合物189-4(164mg)。ESI-MS m/z:699.2[M+H]+。
步骤5：化合物189的合成
将化合物189-4(164mg)，M43(208mg)，1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.60mL)溶于甲醇(5mL)中，40℃反应2小时。再加入氰基硼氢化钠(95mg)，40℃反应8小时。反应完毕后，加入氯化铵溶液淬灭，浓缩，经柱层析(二氯甲烷/甲醇)纯化，得到化合物189(82 mg)。
ESI-MS m/z:616.6 1/2[M+2H]+。
实施例190化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(1-((((7-(8-乙基-7-氟代-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡咯并吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧)-2-基吡嗪-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-3-(甲氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物190-1的合成
将(3S)-3-(4-溴苯基)-3-(叔丁氧基羰基)氨(2.5g)，甲胺盐酸盐(0.58g)溶于15.0mL DMF，加入DIPEA(6.0mL)，HATU(3.3g)，室温反应0.5h。将反应液加入水中，加入EA，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干过柱(DCM/MeOH＝10:1)得到化合物190-1(2.4g)，ESI-MS m/z:357.0[M+H]+。
步骤2：化合物190-2的合成
将化合物190-1(2.4g)，4-甲基噻唑(1.0g)溶于15.0mL DMA，加入Pd(OAc)2(0.3g)，K2CO3(2.8g)，N2氛围升温至120℃反应1.5h。将反应液加入水中，加入EA，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10:1)得到化合物190-2(1.75g)，ESI-MS m/z:376.1[M+H]+。
步骤3：化合物190-3的合成
将化合物190-2(1.75g)加入10mL DCM中，冰水浴下加入4M的氯化氢二氧六环溶液(10mL)，室温反应1h。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM，萃取，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物190-3(1.33g)，ESI-MS m/z:276.1[M+H]+。
步骤4：化合物190-4的合成
将化合物190-3(1.33g)，叔丁氧羰基-L-羟脯氨酸(1.12g)溶于12.0mL DMF，加入DIPEA(4.0mL)，HATU(2.2g)，室温反应0.5h。将反应液加入水中，加入DCM/异丙醇 (3：1)萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10：1)得到化合物190-4(2.28g)，ESI-MS m/z:489.2[M+H]+。
步骤5：化合物190-5的合成
将化合物190-4(2.28g)加入10mL DCM中，冰水浴下加入4M的氯化氢二氧六环溶液(10mL)，室温反应1h。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM/异丙醇(3：1)，萃取，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物190-5(2.0g)，ESI-MS m/z:389.1[M+H]+。
步骤6：化合物190-6的合成
将化合物190-5(2.0g)，叔丁氧羰基-L-缬氨酸(1.12g)溶于15.0mL DMF，加入DIPEA(8.5mL)，HATU(2.35g)，室温反应0.5h。将反应液加入水中，加入DCM/MeOH(10：1)，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10：1)得到化合物190-6(2.05g)，ESI-MS m/z:588.2[M+H]+。
步骤7：化合物190-7的合成
将化合物190-6(2.05g)加入10mL DCM中，冰水浴下加入4M的氯化氢二氧六环溶液(10mL)，室温反应1h。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM/异丙醇(3：1)，萃取，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物190-7(1.6g)，ESI-MS m/z:488.2[M+H]+。
步骤8：化合物190-8的合成
将化合物190-7(200mg)和TEA(0.35mL)溶于ACN(5mL)和THF(5mL)中，冰水浴下加入2-叠氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐(234mg)，自然升温至室温反应3h。将反应液加入水中，加入DCM/MeOH(10：1)萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集有机相，浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10：1)得到化合物190-8(150mg)，ESI-MS m/z:514.2[M+H]+。
步骤9：化合物190-9的合成
将化合物190-8(100mg)和化合物144-3(66mg)溶于叔丁醇(4mL)、四氢呋喃(4mL)和水(4mL)，加入无水硫酸铜(28mg)，抗坏血酸钠(100mg)，室温反应2h。将反应液旋干，加入DCM/MeOH(10:1)和水，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，浓缩后经柱层析纯化(DCM/MeOH＝8:1)得到化合物190-9(132mg)，ESI-MS m/z:817.3[M+H]+。
步骤10：化合物190-10的合成
将化合物190-9(132mg)加入4mL DCM中，冰水浴下加入4M的氯化氢二氧六环溶液(4mL)，室温反应1h。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至反应液pH＝8。向反应液中加入DCM/异丙醇(3：1)，萃取，收集有机相，有机相饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物190-10(105mg)，ESI-MS m/z:717.3[M+H]+。
步骤11：化合物190的合成
将化合物190-10(105mg)和化合物M43(96mg)溶于甲醇(8mL)中，加入1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.22mL)，40℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(28mg)，升温至60℃继续反应6小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，向反应液中加入DCM/MeOH(10:1)，萃取，收集有机相，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液， 旋干得粗产物，进一步Pre-HPLC制备得到化合物190(33.4mg)。
ESI-MS m/z:625.2 1/2[M+2H]+。
实施例191化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(2-(4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)乙基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物191-1的合成
在0℃下，N2保护下，将NaH(1.0g)分批加入到丙二酸叔丁基乙酯(3.5g)的干燥DMF溶液(30mL)。混合物继续在0℃下搅拌30min后，加入2,5-二溴吡嗪(3.0g)，然后升温80℃搅拌3.0h后。反应完全后，反应液加水淬灭，EA萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物191-1(3.0g)。ESI-MS m/z:345.2[M+H]+。
步骤2：化合物191-2的合成
将化合物191-1(3.0g)加入到50mL单口瓶中，加入二氯甲烷(10mL)溶解，冰浴降温0℃左右，加入TFA(10mL)，室温搅拌2.5h。反应完全后，反应液浓缩，加水稀释，乙酸乙酯萃取3次，收集并合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析(PE:EA＝5:1)得到化合物191-2(1.3g)。ESI-MS m/z:245.1[M+H]+。
步骤3：化合物191-3的合成
将化合物191-2(500mg)溶于MeOH(20mL)中，分批加入硼氢化钠(1.0g)室温搅拌反应5.0h。反应完毕后，饱和氯化铵溶液淬灭，加入二氯甲烷/甲醇(10:1)萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析(DCM:MeOH＝50:1)得到化合物191-3(130mg)。ESI-MS m/z:203.4[M+H]+。
步骤4：化合物191-4的合成
将化合物191-3(130mg)、三甲基硅基乙炔(188mg)、Pd(PPh3)2Cl2(45mg)、CuI(25mg)、TEA(648mg)溶于THF(10mL)中，升温80℃搅拌反应2.0h。反应完毕后，硅藻土过滤，旋干，柱层析(DCM:MeOH＝50:1)得到化合物191-4(75mg)。ESI-MS m/z:221.4[M+H]+。
步骤5：化合物191-5的合成
将化合物191-4(75mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入TEA(102mg)降温0℃以下，
加入甲基磺酰氯(78mg)，室温搅拌反应20分钟。反应完毕后，加水淬灭，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品化合物191-5(130mg)。ESI-MS m/z:299.2[M+H]+。
步骤6：化合物191-6的合成
将化合物191-5(130mg)溶于乙腈(10mL)中，加入N-叔丁氧羰基哌嗪(200mg)和K2CO3(500mg)，升温80℃搅拌反应4.0h。反应完毕后，加水稀释，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析(PE:EA＝1:1)得到化合物191-6(55mg)。ESI-MS m/z:389.2[M+H]+。
步骤7：化合物191-7的合成
将化合物191-6(55mg)溶于乙腈(10mL)中，加入K2CO3(500mg)，升温80℃搅拌反应3.0h。反应完毕后，加水稀释，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析(PE:EA＝1:1)得到化合物191-7(30mg)。ESI-MS m/z:317.2[M+H]+。
步骤8：化合物191-8的合成
将化合物191-7(30mg)，抗坏血酸钠(40mg)，硫酸铜(15mg)和M29(45mg)依次加入到25mL单口瓶中，加入甲醇，四氢呋喃和水各3mL，室温下反应30min。旋干溶剂，柱层析(DCM:MeOH＝10:1)分离纯化得到化合物191-8(40mg)。ESI-MS m/z:773.4[M+H]+。
步骤9：化合物191-9的合成
将化合物191-8(40mg)加入到25mL单口瓶中，加入10mL二氯甲烷溶解，加入TFA(5mL)，室温下搅拌1.0h。反应完全后，反应液旋干，饱和碳酸氢钠溶液调pH＝10.0，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品化合物191-9(30mg)。ESI-MS m/z:673.4[M+H]+。
步骤10：化合物191的合成
将化合物191-9(30mg)、M43(25mg)、1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.5mL)溶于甲醇(10mL)中，40℃反应1小时。再加入氰基硼氢化钠(10mg)，70℃搅拌反应5小时。反应完毕后，冷却至室温，加入氯化铵溶液淬灭，二氯甲烷和甲醇(10：1)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱层析(DCM:MeOH＝85:15)纯化，粗品经Pre-HPLC(C18色谱柱，A：0.05％TFA水溶液，B：乙腈，浓度梯度：20％B至55％B，6.45-6.90min，流速：20mL/min，254nm)制备得到化合物191(10.6mg)。
ESI-MS m/z:603.7 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.21(s,1H),9.12(s,1H),8.98(s,1H),8.71(s,1H),8.60(s,1H),8.53(d,J＝7.3Hz,1H),7.75(s,1H),7.44(d,J＝7.1Hz,2H),7.34(dd,J＝20.2,8.8Hz,4H),7.03(s,1H),5.43(d,J＝10.4Hz,1H),4.93(d,J＝6.8Hz,1H),4.74(s,1H),4.41(t,J＝7.8Hz,1H),4.31(d,J＝12.1Hz,4H),4.04(dd,J＝27.4,13.5Hz,1H),3.84–3.65(m,2H),3.58(dd,J＝51.2,14.2Hz,1H),3.17(s,1H),2.95(s,3H),2.65(s,3H),2.46(s,5H),2.29(s,2H),2.04(d,J＝31.8Hz,4H),1.68(s,3H),1.38(d,J＝6.8Hz,3H),1.23(s,4H),1.17(d,J＝12.8Hz,3H),1.09(d,J＝6.1Hz,4H),0.86(s,2H),0.73(d,J＝6.7Hz,7H),0.64(s,2H),0.40(s,2H).
实施例192化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(3-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((R)-2-羟基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物192-1的合成
室温下，将化合物183-1(190mg)，M44(230mg)，抗坏血酸钠(228mg)，无水硫酸铜(64.0mg)溶于2.00mL叔丁醇，2.00mL四氢呋喃和2.00mL水的混合溶剂中，室温反应1h。向反应液加入50mL水溶液猝灭，DCM/MeOH＝10/1混合溶剂萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)得298mg黄色固体产物，即化合物192-1。ESI-MS m/z:816[M+H]+；
步骤2：化合物192-2的合成
室温下，将192-1(298mg)溶于5.00mL无水甲醇中，然后加入4M的氯化氢二氧六环溶液(2.00mL)，室温反应0.5h。减压浓缩后，经柱层析纯化得224mg黄色固体产物，即化合物192-2。ESI-MS m/z:716[M+H]+；
步骤3：化合物192的合成
室温下，将M43(64.4mg)，192-2(70.0mg)溶于无水甲醇(3.00mL)中，加入1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.196mL)，55℃反应1.0h，加入氰基硼氢化钠(30.7mg)，70℃反应3.0h。向反应液中加入适量饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入DCM/MeOH＝10/1萃取三次，每次20mL，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经Pre-HPLC纯化得20.0mg白色固体产物，即化合物192。
ESI-MS m/z:625.35 1/2[M+2H]+；
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝6.1Hz,1H),8.87(d,J＝2.4Hz,1H),8.63(d,J＝1.5Hz,1H),8.45(s,1H),7.88(d,J＝1.5Hz,1H),7.67(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),7.49–7.41(m,3H),7.29(d,J＝2.6Hz,1H),7.24(t,J＝9.3Hz,1H),7.06(t,J＝2.5Hz,1H),5.38(d,J＝10.1Hz,1H),5.05(t,J＝6.1Hz,1H),4.59(t,J＝8.3Hz,2H),4.55–4.41(m,5H),4.31–4.18(m,4H),4.05–3.97(m,2H),3.93(dd,J＝11.0,3.9Hz,2H),3.87–3.81(m,2H),3.63(dd,J＝33.1,13.3Hz, 2H),3.47(s,2H),3.37(s,1H),2.61(dq,J＝12.5,6.4Hz,4H),2.52(s,2H),2.41(dd,J＝12.7,4.2Hz,2H),2.20(dd,J＝15.0,7.8Hz,4H),2.08–2.00(m,2H),1.85(s,1H),1.79(d,J＝11.1Hz,2H),1.36–1.25(m,8H),1.15(d,J＝6.6Hz,3H),0.90(d,J＝6.5Hz,1H),0.81(dd,J＝9.4,6.9Hz,5H),0.72(s,2H),0.50(s,2H).
实施例193化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(5-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物193-1的合成
将5-溴吡嗪-2-羧酸甲酯(4.0g)，4-[(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)亚甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.2g)，四三苯基膦钯(2.1g)和碳酸钠(3.9g)溶解于DME(40mL)和水(10mL)的混合溶剂中，氮气保护，80℃反应6h，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入DCM(30mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得黄色固体1.9g，即化合物193-1。ESI-MS m/z:234[M+H]+。
步骤2：化合物193-2的合成
将化合物193-1(1.9g)和氢氧化钯/碳(240.0mg)溶解于MeOH(30mL)中，氢气氛围下室温反应12h，LCMS监测反应完成。将反应液直接抽滤，浓缩，柱层析分离纯化，得黄色固体760.0mg，即化合物193-2。ESI-MS m/z:236[M+H]+。
步骤3：化合物193-3的合成
将化合物193-2(760.0mg)溶解于THF(40mL)中，氮气保护，冰水浴下加入四氢铝锂(430.0mg)，保温反应10min，LCMS监测反应完成。向反应液中加入水/氢氧化钠溶液/水(1/1/3mL)，抽滤，加入DCM(30mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得黄色固体126.0mg，即化合物193-3。ESI-MS m/z:208[M+H]+。
步骤4：化合物193-4的合成
将化合物193-3(126.0mg)和DMP(173.8mg)溶解于DCM(10mL)中，室温反应1h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，抽滤，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得黄色固体75.0mg，即化合物193-4。ESI-MS m/z:206[M+H]+。
步骤5：化合物193-5的合成
将化合物193-4(70.0mg)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(0.11mL)和碳酸钾(203.7mg)溶解于MeOH(5mL)中，室温反应1h，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得白色固体50.0mg，即化合物193-5。ESI-MS m/z:202[M+H]+。
步骤6：化合物193-6的合成
将化合物193-5(50.0mg)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(75.7mg)，硫酸铜(23.8mg)和抗坏血酸钠(85.5mg)溶解于混合溶剂THF(2mL)/tBuOH(2mL)/H2O(2mL)中，氮气保护，室温反应1h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得淡黄色固体66.0mg，即化合物193-6。ESI-MS m/z:758[M+H]+。
步骤7：化合物193-7的合成
将化合物193-6(66.0mg)加入DCM(3mL)和TFA(1mL)中，室温反应20分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至pH＝10，加入DCM(10mL)和MeOH(1mL)萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色粉末55.0mg，即化合物193-7。ESI-MS m/z:658[M+H]+。
步骤8：化合物193的合成
将193-7(55.0mg)和M43(R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(55.1mg)溶解于MeOH(5mL)中，添加1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.13mL)，40℃反应1.5小时。向反应液中加入氰基硼氢化钠(15.8mg)，60℃继续反应过夜，LCMS监测反应完成。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(5mL)，有机相浓缩，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制备液相分离，得白色固体16.5mg，即化合物193。
ESI-MS m/z:596 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(d,J＝2.5Hz,1H),9.14(d,J＝1.5Hz,1H),8.87(s,1H),8.68(d,J＝1.5Hz,1H),8.49(d,J＝1.5Hz,1H),7.68-7.65(m,1H),7.45-7.37(m,5H),7.32-7.29(m,2H),7.27-7.22(m,2H),7.06(t,J＝2.5Hz,1H),5.43(d,J＝10.0Hz,1H),5.07-5.02(m,1H),4.58-4.40(m,5H),4.28-4.21(m,2H),3.94-3.85(m,2H),3.68-3.59(m,2H),3.50-3.44(m,2H),3.09(s,2H),2.77(d,J＝7.0Hz,2H),2.67-2.61(m,2H),2.48-2.41(m,4H),2.21-2.13(m,3H),2.03-1.93(m,4H),1.89-1.76(m,4H),1.66(d,J＝7.0Hz,1H),1.60(d,J＝7.5Hz,1H),1.53-1.50(m,3H),1.29(s,3H),1.18(d,J＝7.0Hz,1H),0.85-0.81(m,6H),0.71(s,2H),0.48(s,2H)。
实施例194化合物(2S,4R)-1-((2S)-2-(4-(5-(1-(4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物194-1的合成
将1-(5-氯-2-吡嗪)乙酮(5.0g)，双三苯基膦二氯化钯(2.2g)和碘化亚铜(1.2g)溶解于TEA(44mL)和THF(150mL)中，氮气保护，添加三甲基硅基乙炔(13.5mL)，80℃反应过夜，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得棕色固体6.4g，即化合物194-1。ESI-MS m/z:219[M+H]+。
步骤2：化合物194-2的合成
将194-1(2.0g)，N-叔丁氧羰基哌嗪(1.9g)和钛酸四异丙酯(4.1mL)溶解于MeOH(50mL)和THF(50mL)中，氮气保护，80℃反应2h，添加氰基硼氢化钠(1.7g)，80℃反应1h，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入DCM(100mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得棕色固体2.1g，即化合物194-2。ESI-MS m/z:333[M+H]+。
步骤3：化合物194-3的合成
将化合物194-2(300.0mg)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(235.0mg)，碳酸钾(426.8mg),硫酸铜(73.9mg)和抗坏血酸钠(265.1mg)溶解于混合溶剂THF(5mL)/iPrOH(5mL)/MeOH(10mL)/H2O(10mL)中，氮气保护，室温反应3小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得淡黄色固体201.0mg，即化合物194-3。ESI-MS m/z:773[M+H]+。
步骤4：化合物194-4的合成
将化合物194-3(100.0mg)加入DCM(10mL)和TFA(3mL)中，室温反应20分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至pH＝10，加入DCM(10mL)和MeOH(1mL)萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色粉末70.1mg，即化合物194-4。ESI-MS m/z:673[M+H]+。
步骤5：化合物194的合成
将化合物194-4(70.1mg)和M43(R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(68.5mg)溶解于MeOH(5mL)中，添加1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.16mL)，40℃反应1.5小时。向反应液中加入氰基硼氢化钠(19.6mg)，60℃继续反应过夜，LCMS监测反应完成。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(5mL)，有机相浓缩，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制备液相分离，得白色固体22.7mg，即化合物194。
ESI-MS m/z:603.8 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20-9.17(m,2H),8.87(s,1H),8.72-8.70(m,1H),8.65(t,J＝1.5Hz,1H),7.68-7.65(m,1H),7.45-7.32(m,4H),7.30-7.29(m,1H),7.26-7.21(m,1H),7.08-7.06(m,1H),5.45-5.42(m,1H),5.06-5.01(m,1H),4.58-4.52(m,2H),4.47-4.34(m,4H),4.23-4.14(m,2H),3.93-3.86(m,2H),3.78-3.75(m,1H),3.62-3.55(m,1H),3.45-3.40(m,1H),2.66-2.56(m,4H),2.42-2.33(m,2H),2.20-2.15(m,3H),2.07-1.93(m,2H),1.89-1.59(m,8H),1.52-1.50(m,3H),1.46(d,J＝7.0Hz,3H),1.33-1.32(m,5H),1.23(d,J＝1.5Hz,2H),1.17-1.16(m,3H),0.91-0.77(m,13H),0.69(s,2H),0.48(s,2H)。
实施例195化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(1'-)(1-(7-(8-乙基-7-氟)-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧)甲基)环丙基)甲基)-[1,4'-二哌啶]-4-基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物195-1的合成
将5-溴吡嗪-2-羧酸甲酯(5.0g)，N-叔丁氧羰基-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(8.6g)，三苯基膦(1.2g),醋酸钯(1.0g)和碳酸钠(4.9g)溶解于DME(100mL)和水(20mL)的混合溶剂中，氮气保护，80℃反应3h，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入DCM(30mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得化合物195-1(3.4g)。ESI-MS m/z:320.3[M+H]+。
步骤2：化合物195-2的合成
将化合物195-1(3.4g)和钯/碳(680.0mg)溶解于MeOH(30mL)中，氢气氛围下室温反应12h，LCMS监测反应完成。将反应液直接抽滤，浓缩，柱层析分离纯化得化合物195-2(1.6g)。ESI-MS m/z:322.2[M+H]+。
步骤3：化合物195-3的合成
将化合物195-2(1.6g)溶于二氯甲烷(10mL)中，加三氟乙酸(10mL)，25℃反应1小时。反应完毕后反应完毕后，倒出溶剂，用二氯甲烷洗涤2次倒出，加水溶解，用碳酸氢钠溶液中和，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取，干燥，浓缩，得到化合物195-3(0.9g)。ESI-MS m/z:222.2[M+H]+。
步骤4：化合物195-4的合成
将化合物195-3(0.9g)，N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(0.7g)，钛酸四异丙酯(1.9mL)，溶于甲醇(10mL)中，60℃反应1小时后分批次加入氰基硼氢化钠(1g)，反应完毕后，加入乙酸乙酯和水，萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品经柱层析纯化得到将化合物195-4(670mg)。ESI-MS m/z:433.2[M+H]+
步骤5：化合物195-5的合成
将化合物195-4(630.0mg)溶解于THF(10mL)中，氮气保护，冰水浴下加入四氢铝锂(120.0mg)，保温反应10min，LCMS监测反应完成。向反应液中加入水/氢氧化钠溶液/水(0.12/0.12/0.36mL)，抽滤，加入DCM(30mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到将化合物195-5(380.0mg)。ESI-MS m/z:377.3[M+H]+。
步骤6：化合物195-6的合成
将化合物195-5(355mg)和DMP(355mg)溶解于DCM(10mL)中，室温反应1h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，抽滤，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化化合物195-6(121mg)。ESI-MS m/z:375.1[M+H]+。
步骤7：化合物195-7的合成
将化合物195-6(121.0mg)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(93mg)和碳酸钾(134mg)溶解于MeOH(5mL)中，室温反应1h，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化化合物195-7(63mg)。ESI-MS m/z:371.1[M+H]+。
步骤8：化合物195-8的合成
将化合物195-7(46mg)，M29(2S,4R)-1-((S)-2-叠氮基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(57mg)，硫酸铜(18mg)和抗坏血酸钠(64mg)溶解于混合溶剂THF(1mL)/tBuOH(1mL)/H2O(1mL)中，氮气保护，室温反应1h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，化合物195-8(53mg)。ESI-MS m/z:827.2[M+H]+。
步骤9：化合物195-9的合成
将化合物195-8(53mg)加入DCM(3mL)和TFA(1mL)中，室温反应20分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至pH＝10，加入DCM(10mL)和MeOH(1mL)萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，化合物195-9(35mg)。ESI-MS m/z:727.1[M+H]+。
步骤10：化合物195的合成
将化合物195-9(35.0mg)和M43(R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(26mg)溶解于MeOH (5mL)中，添加1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.13mL)，40℃反应1.5小时。向反应液中加入氰基硼氢化钠(15.8mg)，60℃继续反应8小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(5mL)，有机相浓缩，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制备液相分离，得白色固体4.1mg，即化合物195。
ESI-MS m/z:630.6 1/2[M+2H]+。
实施例196化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(4-(1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S，-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的合成
步骤1：化合物196-1的合成
向化合物134-5(75.00mg,0.12mmol)，4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(34.77mg,0.17mmol)的甲醇(2.50mL)中，加入1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.23mL)，40℃下反应0.5h。然后加入氰基硼氢化钠(29.23mg,0.47mmol)，40℃下反应6h。反应液加入20mL水中，氯仿/异丙醇萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物柱层析纯化(MeOH：DCM＝1：11)得到70.00mg棕色固体。即化合物196-1。ESI-MS m/z:828.30[M+H]+。
步骤2：化合物196-2的合成
向化合物196-1(75.00mg,0.09mmol)的二氯甲烷(1.50mL)中，加入三氟乙酸(0.34mL,4.53mmol)，20℃下反应0.5h。反应液加入20mL饱和碳酸氢钠中，氯仿/异丙醇萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩。得到63.00mg,无色油状物。即化合物196-2。ESI-MS m/z:728.20[M+H]+。
步骤3：化合物196的合成
向化合物196-2(65.00mg,0.09mmol)，M43(53.87mg,0.10mmol)的甲醇(2.50mL)中，加入1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.18mL)，40℃下反应1h,加入氰基硼氢化钠(22.45mg,0.36mmol),40℃下反应16h。反应液加入20mL水中，氯仿/异丙醇萃取，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩，Pre-HPLC纯化得到34.00mg白色固体。即化合物196。
ESI-MS m/z:630.7 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.09(s,1H),8.77(s,1H),8.58(s,1H),8.35(s,1H),8.11(s,1H),7.51-7.49(m,1H),7.33-7.28(m,4H),7.12(s,1H),7.10-7.08(m,1H),6.94(s,1H),5.28-5.26(d,J＝10.0Hz,1H),4.95-4.94(m,1H),4.44-4.30(m,5H),4.16-4.11(m,1H),3.82-3.74(m,2H),3.56(s,2H),3.47-3.35(m,2H),3.06-3.02(m,2H),2.57(s,6H),2.17-2.08(m,6H),1.83-1.67(m, 8H),1.42(s,6H),1.23-1.17(m,5H),1.05(s,3H),0.73-0.72(m,3H).
实施例197化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(4-(4-(1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)吡嗪-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-((4-)甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物197-1的合成
向2-氯-5-乙基吡嗪(200.00mg,1.44mmol)，4-(4-哌啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(466.63mg,1.73mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5.00mL)中，加入三乙胺(1.00mL,7.22mmol)，100℃下反应2h。反应液冷却至室温，加入30mL水中，EA萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得到100.00mg棕色固体。即化合物197-1。ESI-MS m/z:372.3[M+H]+。
步骤2：化合物197-2的合成
向化合物197-1(100.00mg,0.27mmol),M29(135.19mg,0.30mmol)的叔丁醇(3.00mL)和四氢呋喃(3.00mL)中，加入硫酸铜(42.97mg,0.27mmol)，含有抗坏血酸钠(159.99mg,0.81mmol)的水(1.50mL)，20℃下反应1h。反应液加入30mL水中，DCM萃取，合并有机相干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得到110.00mg棕色固体。即化合物197-2。ESI-MS m/z:828.3[M+H]+。
步骤3：化合物197-3的合成
向化合物197-2(105.00mg,0.13mmol)的二氯甲烷(2.50mL)中，加入三氟乙酸(0.47mL,6.34mmol)，20℃下反应0.5h。反应液加入30mL饱和碳酸氢钠中，DCM萃取，合并有机相干燥，过滤，减压浓缩。得到80.00mg棕色固体。即化合物197-3。直接投下步。ESI-MS m/z:728.1[M+H]+。
步骤4：化合物197的合成
向化合物197-3(90.00mg,0.12mmol)，M43(74.61mg,0.14mmol)的甲醇(3.00mL)中，加入1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.25mL)，40℃下反应1h，加入氰基硼氢化钠(31.07mg,0.49mmol)，40℃下反应16h。反应液加入20mL水中，氯仿/异丙醇萃取，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩，Pre-HPLC纯化得到60.00mg,白色固体。即化合物197。
ESI-MS m/z:630.7 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.21(s,1H),8.87(s,1H),8.66(s,1H),8.44(s,1H),8.22(s,1H),7.67-7.64(m,1H),7.45-7.38(m,4H),7.29(s,1H),7.25-7.21(m,1H),7.06(s,1H),5.38-5.36 (d,J＝10.0Hz,1H),4.95-4.94(m,1H),4.44-4.30(m,5H),4.16-4.11(m,1H),3.82-3.74(m,2H),3.56(s,2H),3.47-3.35(m,2H),3.06-3.02(m,2H),2.57(s,6H),2.17-2.08(m,6H),1.83-1.67(m,8H),1.42(s,6H),1.23-1.17(m,5H),1.05(s,3H),0.73-0.72(m,3H).
实施例198化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(((1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)甲基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物198-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物(5-氯吡嗪-2-基)甲醇(2.0g)，溶于DMF(10mL)，加入三甲基乙炔基硅(2.1g)，CuI(383.8mg)，PdCl2(PPh3)2(708.1mg)，DIPEA(4.5mL)，氮气保护后，加热至50℃反应3h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝3:1)，得1.49g淡黄色固体，即化合物198-1。
步骤2：化合物198-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物198-1(1.0g)，溶于DCM(10mL),加入PBr3(0.68mL)，室温反应2h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得565.4mg淡黄色固体，即化合物198-2。
步骤3：化合物198-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物198-2(565.4mg)，溶于THF(10mL),加入NaH(252.2mg)，N-叔丁氧羰基-4-羟基哌啶(464.7mg)，加热至50℃反应5h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝5:1)，得351.8mg淡黄色固体，即化合物198-3。
步骤4：化合物198-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(100.0mg)，溶于THF(2mL),加入化合物198-3(76.7mg)，硫酸铜(35.2mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(188.0mg)，室温反应 1h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得105.6mg淡黄色固体，即化合物198-4。
步骤5：化合物198-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物198-4(105.6mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得60.1mg黄色固体，即化合物198-5。
步骤6：化合物198的合成
25mL单口瓶中加入化合物198-5(60.1mg)，溶于MeOH(5mL),加入M43(54.6mg)和1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(25.2mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％:45％),得白色固体11.4mg，即化合物198。(纯度96.63％)。
LCMS：1/2[M+2H]+＝604.09
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝5.0Hz,1H),8.86(d,J＝7.2Hz,1H),8.72(s,1H),8.54(d,J＝12.7Hz,1H),8.17(s,1H),7.71–7.62(m,1H),7.48–7.35(m,4H),7.29(s,1H),7.23(t,J＝9.2Hz,1H),7.07(s,1H),5.39(d,J＝10.0Hz,1H),5.12–5.00(m,3H),4.58–4.41(m,5H),4.24(t,J＝13.5Hz,1H),4.11–3.96(m,2H),3.88(dd,J＝27.5,9.3Hz,2H),3.61–3.54(m,2H),2.90(s,2H),2.61(d,J＝6.5Hz,1H),2.53–2.42(m,6H),2.35(s,2H),2.24–2.11(m,3H),2.08–1.94(m,3H),1.89–1.71(m,5H),1.52(d,J＝6.9Hz,3H),1.36–1.24(m,4H),1.16(d,J＝6.5Hz,3H),0.88–0.77(m,5H),0.72(s,2H),0.51(s,2H).
实施例199化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(((1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物199-1的合成
50mL单口瓶中加入化合物2,5-二溴吡嗪(1.0g)，溶于DMF(20mL)，加入
1-叔丁氧羰基-4-氨甲基哌啶(0.99g)和Cs2CO3(3.4g)，加热至90℃，反应5h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝4:1)，得1.2g淡黄色固体，即化合物199-1。
步骤2：化合物199-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物199-1(1.2g)，溶于DMF(10mL)，加入三甲基乙炔基硅(633.4mg)，CuI(108.3mg)，PdCl2(PPh3)2(197.6mg)，DIPEA(2.4mL)，氮气保护后，加热至50℃反应3h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(PE:EA＝4:1)，得891.6mg淡黄色固体，即化合物199-2。
步骤3：化合物199-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物199-2(891.6mg)，溶于MeOH(10mL)，加入K2CO3(517.2mg),室温反应2h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得563.4mg淡黄色固体，即化合物199-3。
步骤4：化合物199-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物M29(100.0mg)，溶于THF(2mL)，加入化合物199-3(76.3mg)，硫酸铜(35.2mg)，水(2mL)，叔丁醇(2mL)，抗坏血酸钠(188.0mg)，室温反应1h。反应液直接蒸干,柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得103.7mg淡黄色固体，即化合物199-4。
步骤5：化合物199-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物199-4(103.7mg)，溶于4M的氯化氢二氧六环溶液(5mL)，加入甲醇(1mL)，室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL饱和碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至7-8后，用二氯甲烷/异丙醇萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得64.3mg黄色固体，即化合物199-5。
步骤6：化合物199的合成
25mL单口瓶中加入化合物199-5(64.3mg)，溶于MeOH(5mL)，加入M43(50.7mg)和1M氯化锌四氢呋喃溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(25.1mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。Pre-HPLC分离产物(CH3CN/H2O＝55％:45％),得白色固体22.9mg，即化合物199。(纯度96.63％)。
LCMS：1/2[M+2H]+＝603.70
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.20(d,J＝5.0Hz,1H),8.86(d,J＝7.2Hz,1H),8.72(s,1H),8.54(d,J＝12.7Hz,1H),8.17(s,1H),7.71–7.62(m,1H),7.48–7.35(m,4H),7.29(s,1H),7.23(t,J＝9.2Hz,1H),7.07(s,1H),5.39(d,J＝10.0Hz,1H),5.12–5.00(m,3H),4.58–4.41(m,5H),4.24(t,J＝13.5Hz,1H),3.88(dd,J＝27.5,9.3Hz,2H),3.61–3.54(m,2H),2.90(s,2H),2.84–2.73(m,2H),2.61(d,J＝6.5Hz,1H),2.53–2.42(m,6H),2.35(s,2H),2.24–2.11(m,3H),2.08–1.94(m,3H),1.89–1.71(m,5H),1.52(d,J＝6.9Hz,3H),1.36–1.24(m,4H),1.16(d,J＝6.5Hz,3H),0.88–0.77(m,5H),0.72(s,2H),0.51(s,2H).
实施例200化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(3-)(1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物200-1的合成
将4-羟基吡啶(1g)溶于10mLTHF中，依次加入3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.26g),三苯基膦(3.5g)，最后滴加入偶氮二甲酸二异丙酯(2.6g)，55℃搅拌15h。LC-MS监测反应完成。反应液浓缩后经柱层析分离纯化得淡黄色液体2g，即化合物200-1。ESI-MS m/z:251[M+H]+；
步骤2：化合物200-2的合成
将化合物200-1(1g)溶于乙醇(10mL)中，然后依次加入对甲苯磺酸(0.61g)，二氧化铂(0.27g)，抽换H2三次，40℃下搅拌16h。LCMS监测反应完成。加入冰的氢氧化钠水溶液(3M)，硅藻土过滤，旋干乙醇，剩余水相用DCM:NH3-MeOH＝4：1萃取，合并有机相用硫酸钠干燥，浓缩后经柱层析分离纯化得淡黄色固体0.35g，即化合物200-2。ESI-MS m/z:257[M+H]+。
步骤3：化合物200-3的合成
将化合物200-2(84mg)，M43 1-[[9-(8-乙基-7-氟-3-羟基-萘-1-基)-10-氟-5-(3-羟基-3-甲基-1-哌啶基)-2,4,8-三氮杂双环[4.4.0]十碳-2,4,6,8,10-戊烯-3-基]氧甲基]环丙烷-1-甲酰胺(180.00mg)溶于甲醇(2mL)中，加入1M氯化锌正己烷溶液ZnCl2(0.49mL)，加热至40℃反应1h，然后加入氰基硼氢化钠(62mg)，40℃反应12h，LCMS监测反应完成。向反应液缓慢加入5mL水淬灭，DCM：异丙醇＝3：1萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得180mg白色固体，即化合物200-3。ESI-MS m/z:789[M+H]+。
步骤4：化合物200-4的合成
将化合物200-3(180mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min。LCMS监测反应完成。浓缩反应液，加水溶解，用碳酸钠水溶液调碱性，DCM:异丙醇萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩后经柱层析分离纯化得淡黄色固体170mg，即化合物 200-4。ESI-MS m/z:689[M+H]+。
步骤5：化合物200-5的合成
将化合物200-4(150mg)，2-氯-5-乙炔基吡嗪(30mg)溶于3mL二氧六环中，然后加入TEA(0.09mL)，80℃反应3h。LCMS监测反应完成。向反应液中加入10.0mL水，用EA萃取三次，每次10mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体84mg，即化合物200-5。ESI-MS m/z:791[M+H]+。
步骤6：化合物200的合成
将化合物200-5(54mg)和M29(2S，4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(37mg)溶于1.5mL THF，1.5mL H2O，1.5mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(35mg)和无水硫酸铜(9.8mg)，室温反应0.5小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用DCM:异丙醇＝4:1萃取三次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得白色固体14mg，即化合物200。ESI-MS m/z:624 1/2[M+2H]+。
实施例201化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(5-(1-(1-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-4-((R)-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物201-1的合成
将(R)-1-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-3-醇(0.5g),1,1-环丙烷二甲醇(0.31g)，碳酸铯(0.98g)，DABCO(0.03g)溶于5mL DMF中，抽换N2三次，25℃下反应12h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用EA萃取三次，每次20mL，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄色固体0.39g，即化合物201-1。ESI-MS m/z:397[M+H]+。
步骤2：化合物201-2的合成
将化合物201-1(0.39g)，M47 2-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(0.32g),磷酸钾(0.62g)，CataCXium APd G3(71mg)溶于4mL二氧六环和0.4mL水中，90℃反应3h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用EA萃取三次，每次30mL，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得淡黄 色固体0.39g，即化合物201-2。ESI-MS m/z:535[M+H]+。
步骤3：化合物201-3的合成
将化合物201-2(0.39g)溶于5mL DCM中，然后加入戴斯-马丁氧化剂(037g)，室温反应1h，LC-MS监测反应完成。硅藻土过滤反应液，滤饼用10mL DCM洗脱3次，收集滤液，减压蒸出溶剂后经柱层析分离纯化得到0.27g白色固体，即化合物201-3。
ESI-MS m/z:533[M+H]+；
步骤4：化合物201的合成
将化合物201-3(57mg)，化合物144-5(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(4-(5-(哌啶-4-基氧基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(70mg)溶于甲醇(2mL)中，加入1M氯化锌正己烷溶液(0.16mL)，加热至40℃反应1h，然后加入氰基硼氢化钠(20mg)，40℃反应12h,LCMS监测反应完成。向反应液缓慢加入5mL水淬灭，DCM：异丙醇＝3：1萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得41.3mg白色固体，即化合物201。
ESI-MS m/z:589 1/2[M+2H]+。
实施例202化合物(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-(3-((4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物202-1的合成
将化合物1-甲基-1H-吡唑-3,5-二羧酸二甲酯(5.0g)溶于MeOH(100mL)中，冰浴降温至0℃以下，分批加入硼氢化钠(1.9g)，0℃以下搅拌反应2.0h。反应完毕后，饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析得到化合物202-1(300mg)。ESI-MS m/z:171.4[M+H]+。
步骤2：化合物202-2的合成
将化合物202-1(300mg)加入到50mL三口瓶中，加入二氯甲烷(10mL)溶解，冰浴降温0℃左右，缓慢滴加氯化亚砜(0.5mL)，室温搅拌2.0h。反应完全后，反应液浓缩， 加水稀释，乙酸乙酯萃取3次，收集并合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析(PE:EA＝5:1)得到化合物202-2(260mg)。ESI-MS m/z:189.1[M+H]+。
步骤3：化合物202-3的合成
将化合物202-2(260mg)、N-叔丁氧羰基哌嗪(290mg)和DIPEA(535mg)依次加入到50mL三口瓶中，加入乙腈(10mL)溶解，60℃升温搅拌4.0h。反应完全后，反应液浓缩，加水稀释，乙酸乙酯萃取3次，收集并合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析(PE:EA＝2:1)得到化合物202-3(400mg)。ESI-MS m/z:339.1[M+H]+。
步骤4：化合物202-4的合成
将202-3(400mg)加入到100mL单口瓶中，加入四氢呋喃(20mL)，降温0℃以下，分批缓慢加入氢化铝锂(134mg)，缓慢移至室温搅拌反应1.0h。反应完全，降温0℃以下，反应液中缓慢滴加0.2mL水，缓慢滴加0.2mL氢氧化钠水溶液(质量分数15％)，搅拌10min，再反应液中缓慢滴加0.6mL水，加入无水硫酸钠搅拌1.0h。过滤，滤液旋干，浓缩物经柱层析(DCM:MeOH＝10:1)纯化得到化合物202-4(300mg)。ESI-MS m/z:311.3[M+H]+。
步骤5：化合物202-5的合成
将化合物202-4(300mg)加入到100mL单口瓶中，加入二氯甲烷(10mL)，分批加入DMP(615mg)，室温下搅拌1.0h。饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭，过滤，DCM萃取2次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，浓缩得到粗品化合物202-5(300mg)。ESI-MS m/z:309.4[M+H]+。
步骤6：化合物202-6的合成
将化合物202-5(300mg)和(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(374mg)依次加入到100mL单口瓶中，加入甲醇(20mL)溶解，缓慢加入碳酸钾(673mg)，室温搅拌过夜。用水稀释反应液，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩物经柱层析(PE:EA＝3:1)分离纯化得到化合物202-6(200mg)。ESI-MS m/z:205.4[M+H]+。
步骤7：化合物202-7的合成
将化合物202-6(200mg)，抗坏血酸钠(260mg)，硫酸铜(105mg)和M1(300mg)依次加入到50mL单口瓶中，加入甲醇，四氢呋喃和水各3mL，室温下反应30min。旋干溶剂，EA萃取两次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩物经柱层析(DCM:MeOH＝10:1)分离纯化得到化合物202-7(230mg)。ESI-MS m/z:761.3[M+H]+。
步骤8：化合物202-8的合成
将化合物202-7(230mg)加入到25mL单口瓶中，加入10mL二氯甲烷溶解，加入TFA(5mL)，室温下搅拌1.0h。反应完全后，反应液旋干，饱和碳酸氢钠溶液调pH＝10.0，加入二氯甲烷/异丙醇(10:1)萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品化合物202-8(180mg)。ESI-MS m/z:661.4[M+H]+。
步骤9：化合物202的合成
将化合物202-8(90mg)、M43(74mg)、1M的氯化锌四氢呋喃溶液(0.6mL)溶于甲醇(10mL)中，40℃反应1小时。再加入氰基硼氢化钠(26mg)，70℃搅拌反应5小时。反应完毕后，冷却至室温，加入氯化铵溶液淬灭，二氯甲烷和甲醇(10：1)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱层析(DCM:MeOH＝85:15)纯化，粗品经Pre-HPLC(C18色谱柱，A：0.05％二乙胺水溶液，B：乙腈，浓度梯度：30％B至50％B，6.3-7.5min，流速：20 mL/min，254nm)制备得到化合物202(36mg)。
ESI-MS m/z:597.72 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.21(s,1H),8.99(s,1H),8.65(s,1H),8.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.76(dd,J＝8.9,6.1Hz,1H),7.48–7.42(m,2H),7.40–7.29(m,4H),7.04(d,J＝2.5Hz,1H),6.52(d,J＝3.9Hz,1H),5.41–5.30(m,1H),5.34–5.12(m,1H),4.91(t,J＝7.1Hz,1H),4.77(d,J＝6.8Hz,1H),4.40(t,J＝8.1Hz,1H),4.36–4.23(m,4H),4.09–3.97(m,4H),3.79–3.74(m,1H),3.72(d,J＝11.0Hz,1H),3.64–3.58(m,1H),3.52(d,J＝13.2Hz,1H),2.46(d,J＝3.2Hz,4H),2.38–2.25(m,6H),2.19–2.04(m,3H),1.99(dd,J＝12.6,6.9Hz,2H),1.82–1.75(m,1H),1.74–1.61(m,3H),1.57–1.42(m,1H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.24(s,3H),1.17(d,J＝12.4Hz,3H),1.08(d,J＝6.6Hz,3H),0.99(t,J＝7.1Hz,1H),0.85(t,J＝6.8Hz,1H),0.74(dd,J＝14.8,7.1Hz,6H),0.63(s,2H),0.40(s,2H).
化合物203(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-(1-(1-(7-(8-乙基-7-氟))-3-羟基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)吡啶-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物203-1的合成
250mL的单口烧瓶中，依次加入4-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.22g,9.44mmol)，TEA(60.00mL)，乙炔基三甲基硅烷(1.02g,10.38mmol)，PdCl2(PPh3)2(0.33g,0.47mmol)，PPh3(0.12g,0.47mmol)，CuI(0.13g,0.66mmol)，氮气置换，保氮气 氛围，室温搅拌反应过夜。LCMS监测反应完成。浓缩反应液，50mL的乙酸乙酯溶解浓缩残留物，然后依次50mL饱和氯化铵水溶液，50mL饱和食盐水，洗涤、分液，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，经柱层析分离纯化(PE～PE/EA＝97/3)，得到微黄色粘稠物，为化合物203-1(3.3g)。ESI-MS m/z:359.3[M+H]+。
步骤2：化合物203-2的合成
250mL的三口烧瓶中，依次加入K2CO3(1.27g,9.20mmol)，MeOH(70.00mL)，水浴冷却，加入203-1(3.30g,9.20mmol)的MeOH(30.00mL)，室温搅拌反应。LCMS监测反应完成。反应液加入到280g的冰水混合物中，搅拌10分钟；然后用乙酸乙酯萃取100Ml×3，合并有机相，饱和食盐水洗涤、分液；无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，经柱层析分离纯化(PE～PE/EA＝95/5)，得到微黄色固体，为化合物203-2(860mg)。ESI-MS m/z:287.2[M+H]+。
步骤3：化合物203-3的合成
化合物203-2(410mg,1.43mmol)和98-Core(653.66mg,0.15mmol)，CuSO4(228.51mg,1.43mmol)，抗坏血酸钠(737.45mg,3.72mmol)，THF/四氢呋喃(10.00mL)，t-BuOH/叔丁醇(10.00mL)，H2O(10.00mL)，加入到100mL单口瓶中，室温搅拌反应1.0小时。LCMS监测反应完成。100mL水稀释反应液，然后用DCM/MeOH＝4/1混合物萃取、分液，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，经柱层析分离纯化(PE～PE/EA＝1/1)，得到淡黄色泡沫状固体粉末，为化合物203-3(840mg)。ESI-MS m/z:743.6[M+H]+。
步骤4：化合物203-4的合成
50mL的单口烧瓶中，依次加化合物203-3(840.00mg,1.13mmol)，DCM(3.50mL)，水浴冷却，再加入TFA(1.50mL)，室温搅拌反应半小时。LCMS监测反应完成。浓缩反应液至干，加入DCM/MeOH＝4/1混合物溶解浓缩残留物，用饱和碳酸氢钠水溶液中和至碱性，萃取、分液，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，得到化合物203-4(660mg)，淡黄色泡沫状固体。ESI-MS m/z:643.48，[M+H]+。
步骤5：化合物203-5的合成
氮气保护下，25mL的单口烧瓶中，依次加入M28(109.99mg,0.19mmol)，203-4(108.44mg,0.17mmol)，MeOH(5.00mL)，ZnCl2(0.25mL,1.00mol/L,0.25mmol)，油浴加热保温45℃反应1小时，加入NaBH3CN(106.01mg,1.69mmol)，继续保温反应。LCMS监测反应完成。二氯甲烷稀释反应液，加入碳酸氢钠水溶液，淬灭、萃取、分液；水相再用DCM/MeOH＝4/1混合物萃取3遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤、浓缩，柱层析分离纯化(DCM～DCM:MeOH＝87：13)得化合物203-5(118mg)，ESI-MS m/z:610.801/2[M+2H]+。
步骤6：化合物203的合成
10mL的单口烧瓶中，依次加入化合物203-5(118.00mg,0.10mmol)，DCM(3.00mL)，水浴冷却，滴加入TFA(1.50mL)，室温搅拌反应。LCMS监测反应完成。与另一批次反应液(投料：98-5：40mg)合并一起处理，减压浓缩，用DCM/MeOH＝4/1混合物、饱和碳酸氢钠水溶液溶解浓缩残留物，萃取、分液，再经水洗，硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，经柱层析分离纯化(DCM～DCM/MeOH＝80/20)，得化合物203(64.6mg)。
ESI-MS m/z:588.73 1/2[M+2H]+。
1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.22(d,J＝4.9Hz,1H),8.94(s,1H),8.86(d,J＝8.7Hz,1H),8.60(d,J＝6.4Hz,1H),8.14(s,1H),7.66(t,J＝7.5Hz,1H),7.41(dq,J＝24.2,9.5,8.8Hz,6H),7.30(d,J＝7.0Hz,1H),7.22(td,J＝9.5,3.3Hz,1H),7.06(d,J＝5.8Hz,1H),5.49(s,1H),5.41(d,J＝10.2Hz,1H),5.05(q,J＝7.2Hz,1H),4.50(td,J＝22.6,21.0,10.0Hz,6H),4.28(t,J＝12.2Hz,1H),4.00–3.84(m,2H),3.69–3.50(m,3H),3.42(q,J＝11.7Hz,2H),2.93(s,1H),2.70–2.60(m,2H),2.46(d,J＝14.3Hz,4H),2.24–2.17(m,2H),2.11–2.04(m,3H),1.98(ddd,J＝12.9,8.7,4.4Hz,2H),1.84(d,J＝13.1Hz,1H),1.76(d,J＝13.6Hz,1H),1.73(s,2H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.27(dd,J＝16.1,8.2Hz,6H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),0.83(dp,J＝22.8,8.1,7.4Hz,9H),0.72(s,1H).
生物学实验
实施例1细胞增殖实验
表1
将不同突变的细胞按照表1铺板密度铺于低吸附透明96孔板中，置于细胞培养箱过夜培养。待细胞贴壁后，将待测化合物按照终浓度20000、5000、1250、312.5、78.13、19.53、4.88、1.22、0.31、0nM(DMSO终浓度均为0.25％)加入96孔板中，37℃培养96h后向各孔加入50μL Cell-titer Glo工作液，震荡混匀后室温孵育10min，转移混合液到96孔白底不透明板中，在多功能酶标仪读取Luminescence发光值，将发光值数据计算转换为抑制百分数。并根据以下公式，计算细胞增殖抑制百分数：
抑制百分数＝(1-(所测值-Blank)/(最大值-Blank))*100％
(“最大值”来自0.25％DMSO对照孔，“Blank”来自空白培养基对照孔，“所测值”来自化合物处理孔)。
利用GraphPad Prism软件进行曲线拟合并获取IC50(nM)值，结果见表2。
表2




“空白”表示未测定。
实施例2 In Cell Western Blotting实验
试剂与仪器
表3

细胞培养铺板
表4
1)显微镜下观察，细胞状态良好，处于对数生长期，细胞密度80-90％。
2)胰酶消化细胞1-2min，5mL新鲜培养液终止消化，轻轻吹打使细胞成为单个细胞悬液，1000rpm/3min离心。
3)加入新鲜的培养液重悬细胞，吸取10μL细胞液，用台盼蓝染色后通过细胞计数仪统计细胞液密度。
4)取新鲜培养基配制细胞液，调整细胞密度为2.78×105个/mL(5×104个/180μL)。将细胞液加入96孔透底黑板，180μL/孔，37℃，5％CO2培养箱孵育过夜。
加药化合物配制：取10mM的化合物母液20μL，加30μL DMSO，稀释成4mM，并以此为最高浓度，四倍梯度稀释，得到9个浓度化合物；然后转移5μL到195μL培养液中，混匀，得到化合物工作液；并转移20μL工作液到细胞内；
实验准备：将分装冻存的4％多聚甲醛置于室温消融。
细胞固定：弃培养液，将准备好的4％多聚甲醛沿着孔壁轻轻加到板中(150μL/well)，室温固定20min。
期间用PBS配置0.5％的Triton X-100打孔液，0.5％吐温20的清洗液，弃固定液，用含0.5％吐温20的PBS，在摇床上洗5min/4次；
打孔：用上述0.5％Triton X-100 150μL/well固定20min；
弃打孔液，用含0.5％吐温20的PBS，在摇床上洗5min/4次；
封闭：150μL/well封闭液室温封闭1.5h；
一抗：50μL/well，4℃孵育过夜或室温孵育2hr(最后一列加封闭液作为背景；KRASG12D-1:200，GAPDH-1:400)；
弃一抗，用含0.5％吐温20的PBS，在摇床上洗5min/4次；
二抗：50μL/well室温孵育1.5h(anti-Rb 800:1/500；anti-Ms 680:1/500)；
弃二抗，用含0.5％吐温20的PBS，在摇床上洗5min/4次，倒置离心1000rpm/1min，并在室温晾干3小时后,上机；
将测定得到的Relative ICW800信号值导入Prism软件，进行拟合，并计算DC50，结果见表5。
表5化合物在AGS细胞系In Cell Western Blotting降解活性

实施例3化合物2对不同KRAS降解作用
将生长状况良好，处于对数生长期的AGS细胞以3×105铺到12孔板内，37℃，5％CO2培养过夜。第二日，将化合物2稀释到相应的浓度，给药，使化合物2的最终浓度分别为0.2，1，5μM。37℃，5％CO2孵育24h后，弃培养液，加入PBS清洗一次，50μl/孔裂解液冰上裂解10min，离心，收集总蛋白。BCA蛋白定量后，统一将样品按20μg/孔上样到SDS-PAGE胶，电泳程序设置为80V,0.5h，然后120V,1h。电泳结束后，将PAGE胶转印到0.22μm PVDF膜上，5％BSA封闭1h，在35kD marker处将PVDF膜剪开，分别孵育KRAS(Sigma#SAB1404011-100UG)、β-肌动蛋白(CST#5057S)一抗，4℃孵育过夜。第二日，将PVDF膜从一抗液中取出，TBST洗4次，每次5min，之后室温孵育对应二抗1.5hr， TBST清洗4次之后，在iBright FL1000上进行曝光，其结果见图1。
实施例4 Western Blotting实验
细胞铺板
取处于对数生长期，且生长状况良好的AGS细胞，弃掉培养液，PBS清洗一次后，加入0.25％Trypsin消化细胞；
加入培养液终止消化，收集细胞于15mL离心管中，1000rpm离心3min，弃掉培养液，加入2mL培养液重悬，计数，并使用培养液稀释至3.33x105cells/mL(3x105cells/0.9mL/well)；将细胞按照每孔0.9mL铺在12孔板中，37℃，5％CO2过夜培养。
加药处理
化合物工作液配制：吸取一定体积的储存液，使用DMSO稀释成1000x的中间液，之后使用DMSO梯度稀释，得到各个浓度的中间液；然后吸取3uL的各个浓度的中间液到300uL培养液中，吹打混匀，制成10x的工作液；
加药：分别吸取对应的工作液100uL到每个孔中，混匀后将12孔板置于37℃，5％CO2培养24hr。
蛋白质收集和定量
配制细胞裂解液：将配制好的10x RIPA裂解液，10x磷酸酶抑制剂，25x蛋白酶抑制剂提前从-20℃取出，室温溶解后，按照每毫升760uL ddH2O，100uL 10x RIPA裂解液，100uL 10x磷酸酶抑制剂，40uL25蛋白酶抑制剂配制细胞裂解液，混匀，备用；
裂解细胞：药物处理时间结束后，小心吸掉孔内的培养液，每孔加入500uL PBS轻轻润洗，吸去PBS，从孔的中央缓慢加入50uL细胞裂解液，于冰上裂解10～15min后，将裂解液收集到1.5mL离心管内，4℃，15000rpm离心15min，吸取上清液到另一干净离心管内；定蛋白：取一干净的透明96孔板，在每孔内加入20uL PBS，之后分别加入收集好的蛋白上清液5uL，单孔测试，之后将BCA溶液的A液和B液按照50：1进行预混，每孔加入200uL混合好的BCA显色液，用锡纸包裹96孔板，置于37℃孵育30min后，使用Evisin仪器测定OD值(562nM)，带入标准曲线，计算蛋白质浓度。
进行WB实验
1)调整蛋白质浓度：按照计算公式，使用PBS调整每孔蛋白质上样量为30ug，最终体积为10uL，每份样品加入2uL 6x SDS loading buffer，于100℃煮5min，之后离心，冷却至室温；
2)组装电泳槽，加入电泳液，每孔上样12uL，并于样品左右两次分别加marker 2.5uL和1.5uL，marker孔和其余孔均用1x loading buffer补齐至12uL，90V电泳大约30min，待样品在胶内压缩成一条带之后，增加到120V电泳，直到蓝色loading buffer条带到达胶的最底端；
3)提前按照7：2：1(ddH2O：甲醇：10x转膜液)配制2～3L转膜液并置于4℃冷却；
4)跑胶结束后，小心拆开胶板，将胶取出，裁去无用的部分，置于垫好滤纸的转膜夹上，轻轻沿着一次盖上裁剪好的PVDF膜(PVDF膜需要提前用甲醇浸泡活化，并浸泡在转膜液中)，用滚轮小心来回滚压，去掉胶与膜之间的气泡，然后覆盖一次滤纸，小心将转膜夹加紧，插入转膜槽内，加入转膜液，并将转膜槽放置到一个稍大的容器内，周围填满碎冰，400mA转膜120～150min(需要根据蛋白质分子量决定)；
5)配制5％BSA封闭液：称取2.5g BSA，加入TBS-T溶解，定容到50mL；
6)转膜结束后，小心取出PVDF膜，浸泡在5％BSA溶液内，于摇床上，室温封闭1hr；7)配制一抗：将5％BSA稀释到2％，用来稀释抗体；按照抗体说明书建议比例，稀释一抗；
8)将封闭好的PVDF膜转移到一抗溶液中，4℃孵育过夜；
孵育二抗
1)将PVDF膜从一抗溶液中取出，使用TBS-T在摇床上清洗三次，每次10min，使用过的一抗可以保存在-20℃，重复使用；
2)按照一抗说明书，使用2％BSA稀释对应的兔抗或者鼠抗，稀释比例为4000：1，将PVDF膜置于二抗溶液内，室温孵育1～2hr；
3)二抗孵育结束后，TBS-T清洗三次，每次10min；
发光步骤
1)打开发光仪，选择BioSense模式；
2)将发光液A液和B液等比例在容器内混合，将PVDF膜用无尘纸擦干后，置于容器内，使用移液枪吸取发光液，反复浇在PVDF膜上，待PVDF膜被发光液充分浸润后，将膜置于仪器内，进行曝光；其余两个细胞系H358及SW620参考上述测试方法得到，结果见图2。
实施例5化合物在人、大鼠、小鼠、犬肝微粒体中的代谢稳定性研究
实验方法：配制含有K-buffer、MgCl2的0.5mg/mL肝微粒体稀释液：
表6
取上表6中配制的肝微粒体稀释液352μL加入到孵育板预设的孔内，标记为孵育板。取88μL上述孵育液加入含有400μL内标的沉淀剂，振荡后冰箱内放置至少10min后加入2μL待测化合物的工作液(50μM)(DMSO终浓度≤0.5％)和10μL NADPH，振荡器室温下600rpm振荡5min，作为0min样品。将孵育板放入37℃恒温振荡器中预孵5-10min。再向孵育板中加入6μL待测化合物的工作液(50μM)和预热的30μL NADPH启动反应，开始计时。分别在预定的各时间点，从孵育板中取出50μL样品加入到含有200μL内标的沉淀板内，后续步骤与0min样品处理一样。样品混匀，于4℃5000rpm下离心10分钟，取离心后上清加入到预先加有合适比例的超纯水中，室温下振荡器上混匀，进行LC-MS/MS分析。
数据处理：分别测得不同时间点样品中的分析物的峰面积及内标的峰面积，采用非零时间点分析物和内标的峰面积比值与0min样品中分析物和内标的峰面积比值来计算原药的剩余百分比，再以剩余百分比的自然对数值为纵坐标，孵育时间为横坐标作图，线性拟合。计算公式：消除速率常数k＝-slope；半衰期T1/2＝0.693/k；体外肝微粒体内在清除率CLint，in vitro＝k/Cprotein；备注：Cprotein表示孵育终体系中肝微粒体蛋白的浓度。各化合物所 得体外肝微粒体的结果如下表7所示。
表7
备注：人肝微粒体中CLint,in vitro＜8.6时，属于慢代谢；当人肝微粒体中CLint,in vitro＞47时，属于快代谢。
结果表明，化合物71、化合物75、化合物119、化合物133在人肝微粒体中均属于慢代谢。对于成药性来说，有利于降低药物给药剂量。
实施例6化合物在人、大鼠、小鼠、犬肝微粒体中的二相代谢稳定性研究
实验方法：配制含有K-buffer、MgCl2的0.5mg/mL肝微粒体稀释液：
表8
取上表8中配制的肝微粒体稀释液358μL加入到孵育板预设的孔内，标记为孵育板。加入2μL化合物工作液(400μM)(DMSO终浓度≤0.5％)，将孵育板放入37℃恒温振荡器中预孵5-10min。再向孵育板中加入40μL UDPGA(20mM)启动反应，开始计时。分别在预定的各时间点(0，5，15，60分钟)，从孵育板中取出50μL样品加入到含有200μL内标的沉淀板内，样品混匀，于4℃5000rpm下离心10分钟，取离心后上清加入到预先加有合适比例的超纯水中，室温下振荡器上混匀，进行LC-MS/MS分析。
数据处理：分别测得不同时间点样品中的分析物的峰面积及内标的峰面积，采用非零时间点分析物和内标的峰面积比值与0min样品中分析物和内标的峰面积比值来计算原药的剩余百分比。各化合物所得孵育60分钟后原药剩余百分比结果如下表9所示。
表9
备注：当60分钟剩余百分比％＞80％时，认为化合物代谢很慢，利于后期开发。
结果表明：化合物69和化合物71在人肝微粒体中不经由或者很少由UGT代谢。
实施例7化合物2在Balbc小鼠中的PK考察
实验方法和结果：
将化合物与溶媒10％DMSO/5％Solutol/85％生理盐水混合，涡旋并超声，制备得到0.2mg/mL澄清溶液。选取6至7周龄的Balbc雌性小鼠，不禁食，静脉给化合物2，收集一定时间的全血，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNolin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数，结果如表10所示。
表10静脉化合物2单药小鼠PK数据

实施例8化合物在ICR小鼠中的PK考察(全血)
实验方法和结果：
将化合物与溶媒10％DMSO/5％Solutol/85％生理盐水混合，涡旋并超声，制备得到0.2mg/mL澄清溶液。选取6至7周龄的ICR雌性小鼠，不禁食，静脉给化合物，收集一定时间的全血，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNolin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数，结果如表11所示。
表11静脉化合物单药小鼠PK数据
实施例9化合物在ICR小鼠中的PK考察(血浆)
实验方法和结果：
将化合物与溶媒10％DMSO/5％Solutol/85％生理盐水混合，涡旋并超声，制备得到0.2mg/mL澄清溶液。选取6至7周龄的ICR雌性小鼠，不禁食，静脉给化合物，收集一定时间的血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNolin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数，结果如表12所示。
表12静脉化合物单药小鼠PK数据

实施例10化合物135比格犬中的PK考察
实验方法和结果：
将化合物与溶媒10％DMSO/5％Solutol/85％生理盐水混合，涡旋并超声，制备得到0.5mg/mL澄清溶液。选取约10kg比格犬(雌雄各半)，不禁食，静脉给化合物，收集一定时间的血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNolin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数，结果如表13所示。
表13静脉化合物单药比格犬PK数据
实施例11化合物在携带KRASG12D突变的人胰腺癌模型上的抗肿瘤作用评价
PK-59细胞(南京科佰生物科技有限公司，CBP61184)复苏后培养于RPMI1640+10％FBS+1％双抗的培养基中，3天传代一次。待细胞生长到足够数量后，将细胞使用PBS重悬，并与基质胶1:1混合，按照2x106cells/100μL每只小鼠，接种于4-6周龄的BALB/c Nude Crlj雄性免疫缺陷小鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)背部的皮下组织。待小鼠背部肿瘤生长达到200-300mm3后，将小鼠分为11组，每组6只，分别按照表14所示，给于对应的化合物和剂量。测试化合物使用80％生理盐水/10％(50％SBECD)/10％RH40溶解后，通过尾静脉进行给药，并在首次给药后的第3、7、10、14、17、21、24和28天进行肿瘤体积的测量，计算肿瘤抑制率(TGI)；
肿瘤体积(mm3)＝0.5*肿瘤长径D*肿瘤短径d2；
TGI(％)＝(1-RVT实验组/RVT对照组)*100，其中RVT为相对肿瘤体积，RVT＝Vt-V0；
表14


注：QW为每周给药一次；Q2W为每两周给药一次
表15
在给药4周后，结果见表14-15，图3-图4，结果表明：测试化合物1mg/kg，每周给药一次的TGI在70％-87％之间，均实现了肿瘤抑制的效果；给药剂量增加到10mg/kg，每周一次给药后，所有测试化合物均可以实现肿瘤消退，TGI在106％-118％之间。其中，化合物135每次给药的剂量增加到20mg/kg，并延长给药时间到两周一次后，可以实现与10mg/kg，每周给药一次相近的TGI。各给药组均没有看到小鼠体重的降低，显示各化合物均具有良好的安全性。
实施例12化合物144在不同突变细胞内对KRAS降解作用研究
将生长状况良好，处于对数生长期的AGS,SW620,HCT116细胞以3×105铺到12孔板内，37℃，5％CO2培养过夜。第二日，取10mM的待测化合物储存液，使用DMSO按照0.5mM起始，五倍梯度稀释，最后一个浓度为DMSO，得到工作液；工作液按照1/1000的比例，加入到细胞培养液内(每孔1mL培养液，对应加入1μL工作液)，37℃，5％CO2孵育3h。处理结束后，弃培养液，加入PBS清洗一次，50μl/孔裂解液冰上裂解10min，离心，收集总蛋白。BCA蛋白定量后，统一将样品按20μg/孔上样到SDS-PAGE胶，电泳程序设置为80V,0.5h，然后120V,1h。电泳结束后，将PAGE胶转印到0.22μm PVDF膜上，5％脱脂奶粉封闭1h，在35kD marker处将PVDF膜剪开，分别孵育KRAS(Sigma#SAB1404011-100UG)、β-肌动蛋白(CST#5057S)一抗，4℃孵育过夜。第二日，将PVDF膜从一抗液中取出，TBST洗4次，每次5min，之后室温孵育对应二抗1.5hr，TBST清洗4次之后，在iBright FL1000上进行曝光。
实验结果见图5，化合物144在3小时即可有效的降解KRAS G12D/G12V和G13D蛋白。
虽然本发明已通过其实施方式进行了全面的描述，但是值得注意的是，各种变化和修改对于本领域技术人员都是显而易见的。这样的变化和修改都应该包括在本发明所附权利要求的范围内。

Claims (37)

  1. 一种具有F-L-M结构的化合物，或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于：
    所述F为通式(A)所示的KRAS蛋白结合片段；
    所述X选自-O-或
    所述代表独立地选自单键或双键；
    所述X4为CR8、C(R8)2、O、N或NR8；R8各自独立选自H、羟基、氧代基、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-S-C1-6烷基、-C0-3亚烷基-C2-4烯基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基或C3-14环烷基；所述C3-14环烷基、C1-6烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
    所述X5选自C、CH或N；
    所述X6选自CR14、C(R14)2、O、N或NR14；R14各自独立选自H、羟基、氧代基、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-S-C1-6烷基、-C0-3亚烷基-C2-4烯基、C1-6烷氧基、C1- 6卤代烷氧基或C3-14环烷基；所述C3-14环烷基、C1-6烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
    所述R6选自不存在、C3-14环烷基或3-14元杂环基；所述C3-14环烷基或3-14元杂环基任选进一步被一个或多个Ra取代；
    所述R9选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、C2-6烯基、C3-6环烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6环烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
    所述R10选自不存在、-O-或-NR11-；R11选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基或C1-6氨基烷基；
    所述R7选自C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
    所述K选自C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为单环、稠环、螺环或桥环，任选地进一步被一个或多个Ra取代，且所述3-14元杂环基不为
    所述m，n各自独立选自0，1，2，3，4或5；
    所述L为连接F和M的连接单元；
    所述L选自
    其中，
    所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
    所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
    所述Y1、Y2各自独立选自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N杂环基、C1-6亚烷基、羰基、乙炔基或C3-6环烷基；
    所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4；
    所述M选自通式(III)或(IV)所示的VHL结合片段；
    所述X1选自C、CH或N；
    所述X2选自C、CH或N；
    所述X3选自N、NH、O或S；
    所述R1选自H、C1-6烷基、卤素或氰基，优选为甲基、乙基、F或氰基；
    所述R2选自H或C1-6烷基，优选为H或甲基；
    所述R3选自H、C1-6烷基或C1-6羟基烷基或-(CH2)n-CO-NH-(CH2)n-CH3，所述n选自0，1，2或3，所述R3优选为H、甲基、羟基甲基、或-CH2-CO-NH-CH3；
    所述R4选自或-NH-；
    所述R5选自H、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
    所述R12选自
    所述Ra各自独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、-C0-3亚烷基-ORb、-OC(＝O)C1-6烷基、-C0-3亚烷基-SRb、-C0-3亚烷基-N(Rb)2、-C0-3亚烷基-S(＝O)Rb、-C0-3亚烷基-S(＝O)2Rb、-C0-3亚烷基-SRb、-C0-3亚烷基-S(Rb)5、-C0-3亚烷基-C(＝O)Rb、-C0-3亚烷基-C(＝O)ORb、-C0-3亚烷基-C(＝O)N(Rb)2、C2-6烯基、C2- 6炔基、-C0-3亚烷基-C3-14环烷基、-C0-3亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-3亚烷基-C6-18芳基或-C0- 3亚烷基-(5-18元杂芳基)，所述C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0-3亚烷基-C3-14环烷基、-C0-3亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-3亚烷基-C6-18芳基或-C0-3亚烷基-(5-18元杂芳基)任选地进一步被一个或多个Rb取代；
    每个Rb各自独立地为H、卤素、羟基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或 多个卤素、C1-6烷基或C1-6卤代烷基所取代；或者一个原子上的两个Rb与其共同连接的原子形成C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个卤素、氨基、羟基、氰基、C1- 6烷基、C3-6环烷基或C1-6卤代烷基取代。
  2. 根据权利要求1所述的化合物，或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于所述L选自
    其中，
    所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
    所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
    所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4；
    所述M选自通式(V)或(IV)所示的VHL结合片段；
    所述X1选自C、CH或N；
    所述X2选自C、CH或N；
    所述X3选自N、NH、O或S；
    所述R1选自H、C1-6烷基、卤素或氰基，优选为甲基、乙基、F或氰基；
    所述R2选自H或C1-6烷基，优选为H或甲基；
    所述R3选自H、C1-6烷基或C1-6羟基烷基，优选为H、甲基或羟基甲基；
    所述R4选自或-NH-；
    所述R12选自
  3. 根据权利要求2所述的化合物，或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于：
    所述L选自
    所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
    所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
    所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4；
    所述M选自通式(V)或(IV)所示的VHL结合片段；
    所述X1选自C、CH或N；
    所述X2选自C、CH或N；
    所述X3选自N、NH、O或S；
    所述R1选自H、C1-6烷基、卤素或氰基，优选为甲基、乙基、F或氰基；
    所述R2选自H或C1-6烷基，优选为H或甲基；
    所述R3选自H、C1-6烷基或C1-6羟基烷基，优选为H、甲基或羟基甲基；
    所述R4选自或-NH-；
    所述R12选自
    所述Ra独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、-C0-3亚烷基-ORb、-OC(＝O)C1-6烷基、-C0-3亚烷基-SRb、-C0-3亚烷基-N(Rb)2、-C0-3亚烷基-S(＝O)Rb、-C0-3亚烷基-S(＝O)2Rb、-C0-3亚烷基-SRb、-C0-3亚烷基-S(Rb)5、-C0-3亚烷基-C(＝O)Rb、-C0-3亚烷基-C(＝O)ORb、-C0-3亚烷基-C(＝O)N(Rb)2、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0- 3亚烷基-C3-14环烷基、-C0-3亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-3亚烷基-C6-18芳基或-C0-3亚烷基-(5-18元杂芳基)，所述C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0-3亚烷 基-C3-14环烷基、-C0-3亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-3亚烷基-C6-18芳基或-C0-3亚烷基-(5-18元杂芳基)任选地进一步被一个或多个Rb取代；
    每个Rb独立地为H、卤素、羟基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个卤素、C1-6烷基或C1-6卤代烷基所取代；或者一个原子上的两个Rb与其共同连接的原子形成C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个卤素、氨基、羟基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基或C1-6卤代烷基取代。
  4. 如权利要求1-3中任意一项所述的化合物，或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于：
    所述F为通式(I)或(II)所示的KRAS蛋白结合片段；
    所述代表独立地选自单键或双键；
    所述X4为CR8、C(R8)2、O、N或NR8；R8各自独立选自H、羟基、氧代基、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-S-C1-6烷基、-C0-3亚烷基-C2-4烯基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基或C3-14环烷基；所述C3-14环烷基、C1-6烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
    所述X5选自C、CH或N；
    所述X6选自CR14、C(R14)2、O、N或NR14；R14各自独立选自H、羟基、氧代基、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-S-C1-6烷基、-C0-3亚烷基-C2-4烯基、C1-6烷氧基、C1- 6卤代烷氧基或C3-14环烷基；所述C3-14环烷基、C1-6烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
    所述R6选自不存在、C3-14环烷基或3-14元杂环基；所述C3-14环烷基或3-14元杂环基任选进一步被一个或多个Ra取代；
    所述R9选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、C2-6烯基、C3-6环烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6环烷基任选进一步被一个或多个Ra取代；
    所述R10选自不存在、-O-或-NR11-；R11选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基或C1-6氨基烷基；
    所述R7选自C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
    所述K选自C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为单环、 稠环、螺环或桥环，任选地进一步被一个或多个Ra取代，且所述3-14元杂环基不为
    所述m，n各自独立选自0，1，2，3，4或5。
  5. 根据权利要求1-4中任意一项所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述R4选自或-NH-。
  6. 根据权利要求1-4中任意一项所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述R4选自
  7. 根据权利要求1-6中任意一项所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K选自C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为单环，且任选地进一步被一个或多个Ra取代。
  8. 根据权利要求7所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K选自
  9. 根据权利要求1-6中任意一项所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K为C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为螺环，且任选地进一步被一个或多个Ra取代。
  10. 根据权利要求9所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K选自
  11. 根据权利要求1-6中任意一项所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K为C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为稠环，且任选地进一步被一个或多个Ra取代。
  12. 根据权利要求11所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K选自
  13. 根据权利要求1-6中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K为C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C3-14环烷基或3-14元杂环基为桥环，且任选地进一步被一个或多个Ra取代。
  14. 根据权利要求13所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K选自
  15. 根据权利要求1-14中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K选自
  16. 根据权利要求1-15中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述R7选自C6-18芳基或5-18元杂芳基，所述C6-18芳基或5-18元杂芳基任选地进一步被一个或多个Ra取代；所述Ra各自独立地选自H、卤素、羟基、氨基、氰基、C2-6炔基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C2-6烯烃。
  17. 根据权利要求1-16中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述R7选自 所述 任选地进一步被一个或多个所Ra取代；所述Ra各自独立地选自H、卤素、羟基、氨基、氰基、C2-6炔基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C2-6烯烃。
  18. 根据权利要求1-17中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述R7选自
  19. 根据权利要求1-18中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述F选自
    其中，所述R7，R9，R8，R11，R14的定义如权利要求1所定义；
    所述K选自
  20. 根据权利要求1-19中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述K选自
  21. 根据权利要求1-20中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述F选自

  22. 根据权利要求1-21中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述F选自
  23. 根据权利要求1-22任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述L中的G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基任选地进一步被卤素或C1-3烷基取代；
    所述C6-14芳基优选为
    所述5-14元杂芳基优选自
    所述3-14元杂环基优选自
    所述C3-14环烷基优选自
  24. 根据权利要求1-23中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述L中的G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基任选地进一步被卤素或C1-3烷基取代；
    所述C6-14芳基优选为
    所述5-14元杂芳基优选自
    所述3-14元杂环基优选自
    所述C3-14环烷基优选自
  25. 根据权利要求1-24中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述L中的G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被卤素或C1-3烷基取代；
    所述C6-14芳基优选为
    所述5-14元杂芳基优选自
    所述3-14元杂环基优选自
  26. 根据权利要求1-25中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述L选自
    其中，
    所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；所述Ra独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C1-6烷氧基；
    所述Y1、Y2各自独立选自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N杂环基、C1-6亚烷基、羰基、乙炔基或C3-6环烷基；
    所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
    所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4。
  27. 根据权利要求1-26中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述L选自如下所示结构：
    其中，n1、n2各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2或3。
  28. 根据权利要求1-29中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述L选自如下所示结构：

  29. 根据权利要求1-28任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于：所述M选自
  30. 根据权利要求1-29中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于：所述L选自
    其中，所述G环选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；所述Ra各自独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C1-6烷氧基；
    所述D环为5-6元含N杂芳基，优选为
    所述Y1、Y2各自独立选自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N杂环基、C1-6亚烷基、羰基、乙炔基或C3-6环烷基；
    所述n1、n2各自独立为0，1，2，3或4。
  31. 根据权利要求30所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、 或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于：所述L选自
  32. 根据权利要求1-31任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于：
    所述F选自
    所述L选自如下所示结构：
    其中，
    所述G环或D环各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基、C3-14环烷基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个Ra取代；
    所述Y1、Y2各自独立选自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N杂环基、C1-6亚烷基、羰基、乙炔基或C3-6环烷基；
    所述E各自独立选自-O-、-NH-或-NCH3-；
    所述n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数，优选为0，1，2，3或4；
    所述M选自通式(III)所示的VHL结合片段；
    其中，所述X1选自C、CH或N；
    所述X2选自C、CH或N；
    所述X3选自N、NH、O或S；
    所述R1选自H、C1-6烷基、卤素或氰基，优选为甲基、乙基、F或氰基；
    所述R2选自H或C1-6烷基，优选为H或甲基；
    所述R3选自H、C1-6烷基、C1-6羟基烷基或-(CH2)n-CO-NH-(CH2)n-CH3，所述n选自0，1，2或3，所述R3优选为H、甲基、羟基甲基、或-CH2-CO-NH-CH3；
    所述R4选自或-NH-；
    所述R5选自H、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
    所述Ra独立地选自H、羟基、氨基、氧代基、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C1-6烷氧基。
  33. 根据权利要求1-32中任意一项所述的化合物，其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其特征在于，所述F-L-M结构的化合物选自以下化合物：













  34. 一种药物组合物，所述药物组合物含有根据权利要求1-33中任意一项所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐。
  35. 根据权利要求1-33中任意一项所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或根据权利要求33所述的药物组合物在制备用于调节受试者体内的KRAS蛋白泛素化和降解的药物中的用途。
  36. 根据权利要求1-33中任意一项所述的化合物、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或根据权利要求33所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防由KRAS蛋白介导的或依赖性的病症的药物中的用途，其中由KRAS蛋白介导的疾病优选为肿瘤。
  37. 根据权利要求36所述的用途，其特征在于，所述疾病选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、肝细胞瘤、头颈部肿瘤、肝胆管细胞癌、骨髓增生异常综合征、恶性胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、徐旺氏细胞瘤、肺鳞状细胞癌、苔藓样角化病、滑膜肉瘤、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
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