WO2004054618A1 - 哺乳動物に移植された組織の移植拒絶を阻害するための薬剤、及びそれらを使用した糖尿病の治療方法 - Google Patents

哺乳動物に移植された組織の移植拒絶を阻害するための薬剤、及びそれらを使用した糖尿病の治療方法 Download PDF

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Yohichi Yasunami
Masaru Taniguchi
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Definitions

  • TECHNICAL FIELD An agent for inhibiting transplant rejection of a tissue transplanted into a mammal, and a method for treating diabetes using the same.
  • the present invention relates to a drug and a therapeutic method capable of suppressing rejection after tissue transplantation to a recipient, and more particularly to a drug and a therapeutic method capable of suppressing a graft disorder occurring after knee island transplantation in the treatment of diabetes. It is. Height
  • the present invention has been made in view of the above circumstances, and has as its object An object of the present invention is to provide a drug and a therapeutic method capable of suppressing rejection after tissue transplantation into a patient.
  • NKT natural killer T
  • an agent for inhibiting transplant rejection of a tissue transplanted into a mammal comprising the action of natural killer T cells in the mammal after the transplantation.
  • a medicament characterized by containing an effective amount of a component for controlling the amount of a component.
  • the preparation is an agent for treating diabetes for preventing graft damage of islets after transplantation into a mammal.
  • the component is an amount of an anti-inhibitor antibody effective for controlling the action of interferon secreted from the T cells after the transplantation.
  • an anti-inhibitor antibody effective for controlling the action of interferon secreted from the T cells after the transplantation.
  • the anti-inner ferron antibody is a human recombinant antibody.
  • a method for developing a drug for inhibiting transplant rejection of a tissue transplanted into a mammal wherein the drug is a natural drug in a mammal after the transplantation.
  • the composition contains a component that controls the action of killer T cells, and is effective for inhibiting transplant rejection of a tissue transplanted to the mammal.
  • the tissue is Teng Island
  • the steps are: (a) a step of transplanting the island into a mammal; and (b) a graph of Teng Island after the transplant.
  • the component comprises an anti-interferon-a antibody in an amount effective to control the action of inferon ferronase secreted from natural killer T cells after the transplantation. It is.
  • the anti-inner ferron antibody is a human recombinant antibody.
  • a method effective for inhibiting the graft damage of Tengdo transplanted into a mammal comprising: (a) transplanting a tissue into a mammal; (B) providing a drug containing an ingredient in an amount effective to control the action of natural killer T cells in the mammal after transplantation; and (c) treating the mammal with a therapeutically effective effect. Administering an effective amount of said agent.
  • the method is a method of treating diabetes, wherein the agent comprises an anti-inflammatory ferron-a antibody in an amount effective to inhibit post-transplant islet graft damage.
  • the agent comprises an anti-inflammatory ferron-a antibody in an amount effective to inhibit post-transplant islet graft damage.
  • the anti-inulin ferroner antibody is a human recombinant antibody.
  • the first administration of the drug is preferably immediately after transplantation.
  • the administration of the drug is desirably oral administration, intraperitoneal administration, or intravenous administration.
  • Fig. 1 shows the change in blood glucose level of streptozotocin-diabetic mice transplanted with isolated islets (without treatment according to the present invention).
  • Fig. La shows 200 Tengjima implanted in the liver.
  • Fig. 1b shows an example where 400 islands were transplanted into the liver.
  • FIG. 2 shows the change in blood glucose levels of STZ diabetic mice transplanted with 200 isolated islets.
  • FIG. 2a shows the graph of FIG. 1a shown as a comparative example.
  • FIG. 2b shows the change in blood glucose level of STZ diabetic MT-deficient mice transplanted with 20 ° isolated islets.
  • Figure 2c shows the change in blood glucose level when the anti-inulin-ferrona antibody was administered to wild-type STZ diabetic mice transplanted with 200 isolated islets, and
  • Figure 2d shows the control antibody ( The change in blood glucose level when rat IgGlk) was administered was shown.
  • Figure 3 shows the changes in blood glucose levels of STZ diabetic NKT cell-deficient mice transplanted with isolated arm islands.
  • Figures 3a and 3b show comparative examples, and Figure 2a shows the results. and the same graph as FIG. 2b, FIG. 3 c
  • Figure 3d If transfected with ⁇ intrahepatic implantation simultaneously with wild-type mice liver mononuclear (5xl 0 6), Figure 3d, STZ diabetic NKT cells deficient mice liver mononuclear when transfected with the sphere (5x 10 6), Figure 3e, an example in which transfected in the evening one Feron Ichia deficient mice liver mononuclear cells (5x 10 6).
  • the present invention controls NKT cells in suppressing the graft damage by verifying the role of NKT cells in graft damage after islet transplantation in a mammalian model anatomically and physiologically similar to humans They found the applicability of the drug.
  • Insulin-dependent diabetes is caused by the selective destruction of insulin-producing cells (islet ⁇ cells), which are hypoglycemic hormones, by immunological mechanisms. It is known that as a result, hyperglycemia occurs after the onset, and various disorders are caused. Until now, conventional treatment has been to administer (inject) insulin deficiencies to correct hyperglycemia. However, strict glycemic control is difficult with insulin therapy, and sometimes results in overdose, which can lead to life-threatening hypoglycemia. In diabetes, vascular complications of diabetes (retinopathy, nephropathy, neuropathy, etc.) progress after the onset, and conventional treatments (including insulin injection) cannot prevent the progression. Has become. Physiologically, blood sugar is controlled mainly by the regulatory mechanism of islet ⁇ cells. However, in insulin-dependent diabetes mellitus, the lack thereof causes blood sugar levels to fluctuate, causing the above-mentioned clinical symptoms.
  • the islet transplantation related to the present invention is a treatment of insulin-dependent diabetes mellitus, in which insulin is not administered but insulin-producing cells having a blood glucose control function are transplanted.If transplantation is successful, hypoglycemic seizures disappear, and insulin injection is not required. It is a treatment that can be expected to improve vascular complications. Clinical application began in 1990, with some success. The most important challenge at present is the need for a few donor knees for a successful transplant. In other words, transplanting alone from the island of Donna, which was isolated from a single donkey, has not been successful. In other words, how few transplants can be successfully completed on Donna Iteng Teng Island. Finding a solution to this problem would be a revolutionary invention, as it would be possible to transplant one island to one recipient, and even more than one, to one recipient.
  • the present inventors focused on post-transplantation Tengshima graft failure as a solution to this problem of Tengjima transplantation, clarified the mechanism thereof, and found the control method of the present invention.
  • the point of the present invention is the finding that natural killer ( ⁇ ⁇ ⁇ ) cells are the main cause of (intrahepatic) transplantation of Routoshima graft dysfunction. Revealed.
  • ⁇ ⁇ ⁇ natural killer cells are the main cause of (intrahepatic) transplantation of Routoshima graft dysfunction. Revealed.
  • the results of this study were obtained in mice, the properties of human ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ cells, including the ability to secrete human insulin, have been found to be similar to those in mice.
  • Anti-infinity It is considered that the effect is the same. It is appropriate to use anti-mouse antibodies for mice and human recombinant antibodies for humans.
  • islet transplantation into diabetic NK T cell-deficient mice results in normal glucose levels after transplantation of the recipient, but transplantation into diabetic wild-type mice does not correct blood glucose.
  • wild-type or NKT cell-deficient mice were transplanted into the liver during islet transplantation into NKT cell-deficient mice, hyperglycemia was corrected only in the latter case after transplantation.
  • the same results as those of NKT cell-deficient mice were obtained by transfection of hepatic mononuclear cells from mice that lacked Inuichi Ferron-a. Wild-type hepatic mononuclear cells are rich in NKT cells.
  • NKT cells secrete inferior fern when activated, but NKT cell-induced Katsushima graft damage is caused by NKT cell secreted by NKT cells. It was found to be an effect via This finding is evident from the data of the following embodiment which showed that the administration of anti-inulin ferrona antibody can control islet graft damage after transplantation.
  • the subject of the present invention is to control NKT cells after transplantation in order to suppress Tengshima graft damage after transplantation.
  • the insulin secreted from NKT cells is inferred from fertilizer.
  • a drug containing an anti-infrared antibody is administered.
  • the present invention is not limited to the inferior ferrona, and it is considered that all those expressing effects through NKT cells are included in the target.
  • mice male C57BL / 6 mice (22-25 g) were intravenously injected with streptozotocin (STZ, 18 Omg / kg) to be diabetic.
  • streptozotocin STZ, 18 Omg / kg
  • an isolated C57BL / 6 mouse 25_30 g was isolated from diabetic mouse Katsushima. Implanted into the transportal liver of the mouse. Teng Island was isolated from the donor knee by the collagenase method. Blood was collected from the orbital venous plexus three times a week before and after transplantation under anesthesia, and non-fasting blood glucose was measured using a glucose analyzer (Beckman). On the 60th day after transplantation, a glucose tolerance test (0.5 g kg intraperitoneal glucose administration) was performed on the recipient.
  • STZ diabetic NKT cell-deficient mice have normal blood glucose levels after transplantation in 200 donor islands.
  • Figures 2a and 2b show the results of this experiment.
  • NKT cell-deficient mice C57BL / 6 Background J 281-/-
  • the role of NKT cells was examined.
  • FIG. 2a shows the experimental results of the streptozotocin diabetic wild-type mouse shown in FIG. 1, and is presented for comparison with the examples of the present invention.
  • anti-interferoner antibody normalizes blood glucose levels of STZ diabetes mellitus wild-type mice after transplantation in 200 Tengjima. It is known that NKT cells secrete a large amount of inferior fern (INF-a) when activated. Therefore, in order to elucidate whether or not INF- ⁇ is involved in the effect of improving the survival rate of Tengshima graft in NKT cell-deficient mice as described above, anti-INF- ⁇ antibody was administered to recipients at the time of transplantation. A similar experiment was performed after administration.
  • the anti-INF-a antibody used was (Catalog Number 16-7312) (clone R4-6A2) manufactured by eBioscience.
  • FIGS. 3A and 3B show the same experimental results as FIGS. 2A and 2B, and are shown for comparison. From this, it is apparent that the survival rate of Tengshima after transplantation is significantly improved in the absence of NKT cells.
  • Figure 3d shows that 200 Tengjima were transplanted into the liver of STZ diabetic NKT cell-deficient mice, and hepatic mononuclear cells (5 x 10 6 ) of STZ diabetic NKT cell-deficient mice were transferred into the liver at the time of transplantation example
  • Figure 3 e is an example transferred in the liver in the evening one Feron Ichia deficient mice liver mononuclear cells (5xl0 6) at the time of implantation.

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Abstract

　この発明は、上記の事情に鑑みて成されたものであり、その目的は、レシピエントへの組織移植後の拒絶反応を抑制できる薬剤及び治療方法を提供することにある。　この目的を達成するため、この薬剤は、哺乳動物に移植された組織の移植拒絶を阻害するための薬剤であって、前記移植後の哺乳動物内でのナチュラルキラーＴ細胞の作用を制御するのに有効な量の成分を含有するものであることを特徴とする。

Description

明細書 哺乳動物に移植された組織の移植拒絶を阻害するための薬剤、 及びそれら を使用した糖尿病の治療方法 技術分野
この発明は、 レシピエントへの組織移植後の拒絶反応を抑制できる薬剤及 び治療方法に関し、 さらに詳しくは、 糖尿病の治療において、 膝島移植後に 発生するグラフト障害を抑制できる薬剤及び治療方法に関するものである。 背
近年、 欧米に於いて糖尿病の治療手段として脬ランゲルハンス氏島 （脬島 ) 移植の臨床応用が開始された。 インスリン投与による治療ではなくインス リン産生細胞を移植しょうとする試みである。 臨床膝島移植の実際の手技は 局所麻酔下、 超音波ガイド下経皮経肝的に門脈を穿刺しカテーテルを留置、 同部よりドナ一滕島を肝内に移植する。 滕島グラフトは門脈末端に生着、 ィ ンスリンを分泌し血糖値を調節する。 脬島移植が成功した場合糖尿病レシピ ェントは正常血糖となりインスリン治療が不要となる。 しかしながら現在ま でに臨床滕島移植の成功例は限定され、 しかも一人のレシピエントに対し 2 一 3人の滕臓より単離された滕島が移植されているのが現状である。 すなわ ち、 移植直後膝島機能障害が発現し、 グラフト生着率が低下、 一人から一人 への移植では十分ではなく 2— 3人のドナ一から一人への移植が行われてい る。 一説には移植グラフトの 2 0— 3 0 %のみしか生着しないといわれてい る。 この機能障害の詳細は未解明で臨床滕島移植の成績向上にとっては極め て重要な課題となっている。 この問題が解決しグラフト生着率を改善する方 法が見出されれば一人のドナーから一人のレシピエントへ、 更には一人から 二人以上への滕島移植が実現する可能性がある。
この発明は、 上記の事情に鑑みて成されたものであり、 その目的は、 レシ ピエントへの組織移植後の拒絶反応を抑制できる薬剤及び治療方法を提供す ることにある。
さらに詳しくは、 糖尿病の治療において、 滕島移植後に発生するグラフト 障害の原因を明らかにし、 それを抑制できる薬剤及び治療方法を提供するこ とにある。 発明の開示
上記課題を解決するべく、 本発明の発明者らは脬島移植後のグラフト障害 にナチュラルキラ一 T (N K T ) 細胞が重要な役割を演じているのではない かとの仮説を立て、 N K T細胞欠損マウスを脬島移植のレシピエントに使用 し実験を進めた。 その結果、 N K T細胞が移植後の滕島グラフト障害に必須 の役割を演じていることを見出した。 さらにその効果はインターフェロン一 ァを介して発現していることが明らかとなった。
本発明の第 1の主要な観点によれば、 哺乳動物に移植された組織の移植拒 絶を阻害するための薬剤であって、 前記移植後の哺乳動物内でのナチュラル キラ一 T細胞の作用を制御するのに有効な量の成分を含有することを特徴と する薬剤が提供される。
この発明の一実施形態によれば、 前記製剤は、 哺乳動物に移植後の脬島の グラフト障害を防止するための糖尿病治療用薬剤である。
この発明の別の一実施形態によれば、 前記成分は、 前記移植後にナチユラ ルキラ一 T細胞から分泌されるインターフェロン一ァの作用を制御するのに 有効な量の抗イン夕一フヱロンーァ抗体である。 前記哺乳動物がヒトの場合 、 前記抗イン夕一フエロン一ァ抗体はヒトリコンビナント抗体であることが 好ましい。
また、 この発明の第 2の側面によれば、 哺乳動物に移植された組織の移植 拒絶を阻害するための薬剤の開発方法であって、 前記薬剤は前記移植後の哺 乳動物内でのナチュラルキラー T細胞の作用を制御する成分を含むものであ り、 前記哺乳動物に移植された組織の移植拒絶を阻害するのに有効な前記成 分の投与量、 形態及び方法を決定する工程を含むことを特徴とする方法が提 供される。
この発明の一の実施形態によれば、 前記組織は滕島であり、 前記工程は、 ( a )前記脬島を哺乳動物内に移植する工程と、 （b ) 移植後の滕島のグラ フト障害を阻害するのに有効な量の抗インターフェロン—ァ抗体を前記有効 成分として含む薬剤を用意する工程と、 （ c ) 前記薬剤を所定の周期で前記 哺乳動物に投与してモニタ一する工程とを含む。
この発明の別の一の実施形態によれば、 前記成分は、 前記移植後にナチュ ラルキラー T細胞から分泌されるイン夕一フエロン一ァの作用を制御するの に有効な量の抗インターフェロン—ァ抗体である。 前記哺乳動物がヒトの場 合、 前記抗イン夕一フエロン一ァ抗体はヒトリコンビナント抗体であること が好ましい。
この発明の第 3の主要な観点によれば、 哺乳動物に移植された滕島のグラ フト障害を阻害するのに有効な方法であって、 （a) 組織を哺乳動物内に移 植する工程と、 （b ) 移植後の哺乳動物内でのナチュラルキラー T細胞の作 用を制御するのに有効な量の成分を含有する薬剤を用意する工程と、 （c ) 前記哺乳動物に治療上有効な量の前記薬剤を投与する工程とを含む方法が提 供される。
この発明の一実施形態によれば、 この方法は糖尿病の治療方法であり、 前 記薬剤は、 移植後の脬島のグラフト障害を阻害するのに有効な量の抗イン夕 一フエロン—ァ抗体を有効成分として含む薬剤である。 また、 前記哺乳動物 がヒトの場合、 前記抗イン夕一フエロン一ァ抗体はヒトリコンビナント抗体 である。前記薬剤の 1回目の投与は、 移植直後であることが好ましい。 前記 薬剤の投与は、 経口投与、 腹腔内投与又は静脈内投与であることが望ましい この発明のその他の側面、 特徴及び効果は、 以下に説明する本発明の実施 形態及び添付図面から当業者に明らかである。 図面の簡単な説明
図 1は、 単離脬島の移植を受けたストレブトゾトシン糖尿病マウスの血糖 値の推移 （本発明による治療なし） を示すものであり、 図 laは 200個の 滕島を肝内に移植した場合、 図 1 bは 400個の脬島を肝内に移植した場合 の例である。
図 2は、 200個の単離脬島の移植を受けた STZ糖尿病マウスの血糖値 の推移を示すものである。 図 2 aは比較例として示した図 1 aのグラフを示 した。 図 2 bは 20◦個の単離脬島の移植を受けた S T Z糖尿病 MT欠損マ ウスの血糖値の推移を示した。 図 2 cは 200個の単離腌島の移植を受けた STZ糖尿病野生型マゥスに抗ィン夕一フエロン一ァ抗体を投与した場合の 血糖値の推移を示すもの、 図 2dは対照抗体 （rat IgGlk) を投与し た場合の血糖値の推移を示した。
図 3は、 単離膊島の移植を受けた S T Z糖尿病 NKT細胞欠損マウスの血 糖値の推移を示すものであり、 図 3 a及び図 3 bは比較例として示したもの で、 それぞれ図 2a及び図 2bと同じグラフ、 図 3 cは滕島肝内移植と同時に 野生型マウスの肝単核球 （5xl 06) を移入した場合、 図 3dは、 STZ 糖尿病 NKT細胞欠損マウスの肝単核球 (5x 106) を移入した場合、 図 3eは、 イン夕一フエロン一ァ欠損マウスの肝単核球 （5x 106) を移入 した場合の例である。 発明を実施するための最良の形態
以下、 この発明の実施の形態につき図面を参照して説明する。
この発明は、 脬島移植後のグラフト障害における NKT細胞の役割の検証 をヒトと解剖学的構造上及び生理学上類似する哺乳類モデルで検証すること により、 前記グラフト障害の抑制における NKT細胞を制御する薬剤の適用 性を見出したものである。
ィンスリン依存糖尿病の成因は血糖降下ホルモンであるィンスリン産生細 胞 （脬島 β細胞） が免疫学的機序により選択的に破壊されることによるもの で、 その結果発症後に高血糖となり、 さまざまな障害を招来することが知ら れている。 従来までの治療法は不足するインスリン製剤を投与 （注射） し、 高血糖を是正しょうとするものであった。 しかし、 インスリンによる治療で は厳密な血糖管理は困難で時に結果的に過剰投与になり、 生命に危険な低血 糖となることがある。 また、 糖尿病では発症後に糖尿病血管合併症 （網膜症 、 腎症、 神経症など） が進展し、 従来の治療法 （インスリン注射を含め） で はその進展を阻止できず、 治療上重要な課題になっている。 生理的には主と して脬島 β細胞による調節機構により血糖は制御されるが、 ィンスリン依存 糖尿病ではその欠落により血糖値の乱高下を招き、 上記臨床症状の原因とな る。
本発明に関係する脬島移植はィンスリン依存糖尿病の治療としてィンスリ ン投与ではなく、 血糖制御機能を有するィンスリン産生細胞を移植するもの で、 移植が成功すると低血糖発作が消失し、 インスリン注射が不要になり、 血管合併症の改善が期待できる治療法である。 1 9 9 0年に臨床応用が開始 され、 一定程度の成果が得られている。 現在の最も重要な課題は一人の移植 を成功させるために 2— 3人分のドナー膝臓を必要とすることである。 すな わち一人のドナ一勝臓より単離した脬島の移植のみでは成功が得られていな い。 言い換えれば如何に少ないドナ一滕島で移植を成功させられかというこ とになる。 この問題の解決法を見出せば、 一人のドナ一より一人、 更には二 人以上へのレシピエントへの脬島移植が実施できるようになり、 画期的な発 明となる。
本発明者らは滕島移植のこの問題の解決策として移植後滕島グラフト障害 に着目、 そのメカニズムを明らかにし、 本発明の制御法を見出した。 本発明 のポイントはナチュラルキラ一 Τ ( Ν Κ Τ ) 細胞が （肝臓内） 移植後臈島グ ラフト障害の主因であるという知見であり、 そのことを Ν Κ Τ細胞欠損マウ スを用いた実験で明らかにした。 今回のデ一夕はマウスで得られているが、 ヒト Ν Κ Τ細胞の性状はィン夕一フエ口ン分泌能を含めマウスと同様である ことが判明しており、 滕島グラフト障害に対する抗ィン夕一フエロン一ァの 効果も同様であると考えられる。 マウスでは抗マウス抗体、 ヒトではヒトリ コンビナント抗体を使用するのが妥当である。
下記の実施例によれば、 糖尿病 NK T細胞欠損マウスへの脬島移植ではレ シピエントの移植後血糖値は正常になるが糖尿病の野生型マウスへの移植で は血糖は是正されない。 NKT細胞欠損マウスへの脬島移植時に野生型また は NK T細胞欠損マウスの肝臓単核球を肝臓内に移入すると後者でのみ移植 後高血糖は是正された。 またイン夕一フエロンーァ欠損マウスの肝単画球の 移入では N K T細胞欠損マウスと同様の結果が得られた。 野生型肝単核球は NKT細胞を豊富に含有する。 これらの知見は NKT細胞がグラフト障害に 必須の役割を担っていることを示している。 更に NKT細胞は活性ィ匕される とイン夕一フヱロン一ァを分泌することが知られているが、 NKT細胞によ る勝島グラフ卜障害は N K T細胞より分泌されるィン夕一フエロン一ァを介 した作用であることが判明した。 この知見は抗ィン夕一フエロンーァ抗体の 投与により移植後脬島グラフト障害が制御できることを示した下記の実施形 態のデータから明らかである。
すなわち、 本発明の主題は、 移植後滕島グラフト障害を抑制するために、 移植後に NKT細胞を制御するものであり、 本実施形態では、 NKT細胞か ら分泌されたィン夕一フエロン一ァの作用を制御するために抗ィン夕一フエ ロン一ァ抗体を含む薬剤を投与している。 しかし、 イン夕一フエロンーァに 限定されるものではなく、 NKT細胞を介して作用を発現するものはすべて 対象になると考えられる。
実施例
既に知られているように、 ストレブトゾトシン糖尿病マウスの高血糖を正 常化するには一定以上の脬島、 例えば 400個の脬島移植が必要である。 図 1はこのことを示したグラフである。
ここでは、 雄性 C 57BL/6マウス （22— 25 g) にストレブトゾト シン （STZ、 18 Omg/kg) を静注し糖尿病状態とした。 その 3— 5 日後、 同系 C57BL/6マウス （25_30g) の単離勝島を糖尿病マウ スの経門脈的肝内に移植した。 滕島はドナー膝臓よりコラゲナーゼ法により 単離した。 移植前後週 3回無麻酔下に眼窩静脈叢より採血しグルコースアナ ライザ一 （ベックマン） にて非空腹時血糖を測定した。 又移植後 60日目に レシピエントに糖負荷試験 （腹腔内グルコース 0. 5g kg投与） を施行 した。
ドナー勝島数が 400個の場合、 図 1に示すように、 移植後にレシピエン トの血糖値は 10日以内に全て （n= 5)正常血糖 (20 Omg/d 1以下 ) となった。
一方、 ドナ一滕島数が 200個の場合、 全てのマウス （n=10) は移植 後 60日以上高血糖 （40 Omg/d 1以上） で推移した。 すなわち、 ドナ —脬島 20◦個の移植で生着する滕島グラフトでは高血糖を是正出来ないこ とが分かる。
これに対して、 STZ糖尿病 NKT細胞欠損マウスでは 200個のドナ一 脬島で移植後に血糖値は正常ィ匕する。 図 2 a〜図 2 bはこの実験結果を示し たものである。
ここでは、 上記と同様の実験を NKT細胞欠損マウス （C57BL/6 Background J 281— /— ) をレシピエントに用いて行い、 NKT細胞の役割を検討した。 200個の脬島を STZ糖尿病 NKT細胞欠 損マウスの肝内に移植した。 これによれば、 図 2bに示すように、 全てのレ シピエント （n==5) は移植後 7曰以内に正常血糖となった。 すなわち、 N K T細胞の非存在下では移植後の脬島生着率が有意に改善することが明らか になった。
なお、 図 2aは、 図 1で示したストレブトゾトシン糖尿病野生型マウスの 実験結果であり、 本発明の実施例との比較のために提示したものである。 以上の知見は N K T細胞が肝内移植腌島グラフト非特異的障害に必須の役 割を果たしていることを示している。
次に、 抗インターフェロンーァ抗体投与により 200個の滕島で STZ糖 尿病野生型マウスの血糖値は移植後正常化することを示す。 NKT細胞は活性化すると大量のイン夕一フエロンーァ （INF—ァ） を 分泌する事が知られている。 従って上記で示された N K T細胞欠損マウスに 於ける滕島グラフトの生着率改善効果に I N F—ァが関与しているかどうか を明らかにするために抗 I NF—ァ抗体を移植時にレシピエントに投与して 同様の実験を行なった。 ここでは、 抗 INF—ァ抗体は、 eBioscience社製 (Catalog Numberl6-7312) (clone R4-6A2) を使用した。
図 2 cに示すように、 200個の滕島を移植し抗 IN F—ァ抗体 (100 〃g) を 1日 1回、 計 3回 （day 0、 2、 4)腹腔内投与した野生型 S TZ糖尿病マウスの血糖値は 4/5が移植後正常ィ匕した。 また図 2 dに示す ように、 対照抗体 (rat IgGlk) を投与したマウス （n=4) ではド ナ一滕島 200個の移植では血糖値は移植後正常ィ匕せず高血糖で推移した。 図 3a〜dは、 別の実験例を示したものである。
まず、 図 3 a及び図 3 bは、 上記図 2 a及び図 2 bと同じ実験結果であり 、 比較のために示したものである。 これより、 すなわち、 NKT細胞の非存 在下では移植後の滕島生着率が有意に改善することが明らかである。
図 3cは、 STZ糖尿病 NKT細胞欠損マウス （C 57BLZ6 Bac kgr ound J 281-/-) に 200個の脬島を肝内に移植し、 野 生型マウスの肝単核球 （5xl06) を移植時に肝内に移入した例である。 細胞移入された糖尿病 NKT細胞欠損マウス （n=3) の血糖は移植後正常 化せず高血糖で推移した。
また、 図 3dは、 STZ糖尿病 NKT細胞欠損マウスに 200個の滕島を 肝内に移植し、 S T Z糖尿病 NKT細胞欠損マウスの肝単核球 （ 5 X 106 ) を移植時に肝内に移入した例、 図 3 eはイン夕一フエロン一ァ欠損マウス の肝単核球 （5xl06) を移植時に肝内に移入した例である。 いずれも、 細胞移入された糖尿病 NKT細胞欠損マウス （n=3) の血糖は移植後正常 化した。
以上の知見は N K T細胞から分泌されるイン夕一フエロン—ァが肝内移植 滕島グラフトに発現する非特異的障害に必須の役割を果たしていることを示 している。

Claims

請求の範囲
1 . 哺乳動物に移植された組織の移植拒絶を阻害するための薬剤であって、 前記移植後の哺乳動物内でのナチュラルキラ一 T細胞の作用を制御するのに 有効な量の成分を含有することを特徴とする薬剤。
2 . 請求項 1記載の薬剤において、
前記製剤は、 哺乳動物に移植後の滕島のグラフト障害を防止するための糖 尿病治療用薬剤であることを特徴とする薬剤。
3 . 請求項 1記載の薬剤において、
前記成分は、 前記移植後にナチュラルキラー T細胞から分泌されるィン夕 —フエロン一ァの作用を制御するのに有効な量の抗ィン夕一フエロン一ァ抗 体であることを特徴とする薬剤。
4 . 請求項 3記載の薬剤において、
前記哺乳動物がヒトの場合、 前記抗ィン夕一フエロンーァ抗体はヒトリコ ンビナント抗体であることを特徴とする薬剤。
5 . 哺乳動物に移植された組織の移植拒絶を阻害するための薬剤の開発方法 であって、
前記薬剤は前記移植後の哺乳動物内でのナチュラルキラ一 T細胞の作用を 制御する成分を含むものであり、
前記哺乳動物に移植された組織の移植拒絶を阻害するのに有効な前記成分 の投与量、 形態及び方法を決定する工程
を含むことを特徴とする方法。
6 . 請求項 5記載の方法において、
前記組織は脬島であり、
前記工程は、
( a ) 前記勝島を哺乳動物内に移植する工程と、
( b )移植後の滕島のグラフト障害を阻害するのに有効な量の抗イン夕一 フエロン一ァ抗体を前記有効成分として含む薬剤を用意する工程と、
( c ) 前記薬剤を所定の周期で前記哺乳動物に投与してモニタ一する工程 と
を含むことを特徴とする方法。
7 . 請求項 5記載の方法において、
前記成分は、 前記移植後にナチュラルキラ一 T細胞から分泌されるィン夕 —フエロン一ァの作用を制御するのに有効な量の抗ィン夕一フエロン一ァ抗 体であることを特徴とする方法。
8 . 請求項 7記載の方法において、
前記哺乳動物がヒトの場合、 前記抗ィンターフェロン—ァ抗体はヒトリコ ンビナント抗体であることを特徴とする方法。
9 . 哺乳動物に移植された滕島のグラフト障害を阻害するのに有効な方法で あって、
( a ) 組織を哺乳動物内に移植する工程と、
( b ) 移植後の哺乳動物内でのナチュラルキラ一 T細胞の作用を制御する のに有効な量の成分を含有する薬剤を用意する工程と、
( c ) 前記哺乳動物に治療上有効な量の前記薬剤を投与する工程とを含む 方法。
1 0 . 請求項 9記載の方法において、
この方法は糖尿病の治療方法であり、
前記薬剤は、 移植後の脬島のグラフト障害を阻害するのに有効な量の抗ィ ンターフェロン一ァ抗体を有効成分として含む薬剤であることを特徴とする 方法。
1 1 . 請求項 1 0記載の方法において、
前記哺乳動物がヒトの場合、 前記抗ィン夕一フヱロン—ァ抗体はヒトリコ ンビナント抗体であることを特徴とする方法。
1 2 . 請求項 9記載の方法において、
前記薬剤の 1回目の投与は、 移植直後であることを特徴とする方法。
1 3 . 請求項 1 0記載の方法において、
前記薬剤の投与は、 経口投与、 腹腔内投与又は静脈内投与であることを特 徴とする方法。
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