TW202434288A - 一種含抗ｒａｎｋｌ－ｎｇｆ雙特異性抗體的醫藥組成物 - Google Patents
一種含抗ｒａｎｋｌ－ｎｇｆ雙特異性抗體的醫藥組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202434288A TW202434288A TW112144352A TW112144352A TW202434288A TW 202434288 A TW202434288 A TW 202434288A TW 112144352 A TW112144352 A TW 112144352A TW 112144352 A TW112144352 A TW 112144352A TW 202434288 A TW202434288 A TW 202434288A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- ngf
- rankl
- pharmaceutical composition
- bispecific antibody
- seq
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 154
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 77
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 claims description 68
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims description 68
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 65
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 63
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical group [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 57
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 55
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 55
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 55
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 55
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 54
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 53
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 claims description 51
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 claims description 50
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 48
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 48
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 48
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 42
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims description 38
- 230000036407 pain Effects 0.000 claims description 38
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 34
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 30
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 30
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims description 29
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 24
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 24
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 23
- CBMPTFJVXNIWHP-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O CBMPTFJVXNIWHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 16
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 12
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 10
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 10
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 10
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 10
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 claims description 9
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 claims description 9
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 claims description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 9
- 206010061363 Skeletal injury Diseases 0.000 claims description 7
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims description 7
- 208000005615 Interstitial Cystitis Diseases 0.000 claims description 6
- 206010023230 Joint stiffness Diseases 0.000 claims description 6
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 claims description 6
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 5
- 208000000450 Pelvic Pain Diseases 0.000 claims description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 5
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 5
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 claims description 5
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 4
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 claims description 4
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008035 Back Pain Diseases 0.000 claims description 3
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058019 Cancer Pain Diseases 0.000 claims description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000013558 Developmental Bone disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005171 Dysmenorrhea Diseases 0.000 claims description 3
- 206010013935 Dysmenorrhoea Diseases 0.000 claims description 3
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010072132 Fracture pain Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- 208000008930 Low Back Pain Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010028391 Musculoskeletal Pain Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 claims description 3
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010031264 Osteonecrosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 206010036376 Postherpetic Neuralgia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000004550 Postoperative Pain Diseases 0.000 claims description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008765 Sciatica Diseases 0.000 claims description 3
- 206010072610 Skeletal dysplasia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 claims description 3
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000010 osteolytic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 claims description 3
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 claims description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 3
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010044652 trigeminal neuralgia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 abstract 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 62
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 57
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 44
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 37
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 32
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 27
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 17
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 13
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 229960001251 denosumab Drugs 0.000 description 11
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 11
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 101000830603 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11 Proteins 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 229950008160 tanezumab Drugs 0.000 description 10
- 101001111439 Homo sapiens Beta-nerve growth factor Proteins 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 9
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 102000046917 human NGF Human genes 0.000 description 9
- 102000053529 human TNFSF11 Human genes 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 7
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 6
- 238000012506 imaged capillary isoelectric focusing Methods 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 101000830602 Mus musculus Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11 Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- -1 linoleyl-sarcosine Chemical compound 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 102220005407 rs28928875 Human genes 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 101150111783 NTRK1 gene Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 3
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 210000003314 quadriceps muscle Anatomy 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- VBGUQBPWJMPQBI-UHFFFAOYSA-M sodium;butanedioic acid;4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [Na+].OC(=O)CCC(O)=O.OC(=O)CCC([O-])=O VBGUQBPWJMPQBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 2
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000648503 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11A Proteins 0.000 description 2
- 101000801254 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 16 Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 101100404651 Mus musculus Ngf gene Proteins 0.000 description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100033725 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 16 Human genes 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 238000000533 capillary isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 208000013507 chronic prostatitis Diseases 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 102000053530 human TNFRSF11A Human genes 0.000 description 2
- 238000007131 hydrochloric acid regeneration reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007514 neuronal growth Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 210000004417 patella Anatomy 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KKMIHKCGXQMFEU-UHFFFAOYSA-N 2-[dimethyl(tetradecyl)azaniumyl]acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O KKMIHKCGXQMFEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYCCWYAFNPAQC-UHFFFAOYSA-N 2-[dodecyl(methyl)azaniumyl]acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCN(C)CC(O)=O BMYCCWYAFNPAQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TYIOVYZMKITKRO-UHFFFAOYSA-N 2-[hexadecyl(dimethyl)azaniumyl]acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O TYIOVYZMKITKRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNQVCAOGQHOSEN-UHFFFAOYSA-N 2-[methyl(octadecyl)amino]acetic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(C)CC(O)=O SNQVCAOGQHOSEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFJVDSDGRBUNKZ-UHFFFAOYSA-N 2-[methyl(tetradecyl)azaniumyl]acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCN(C)CC(O)=O QFJVDSDGRBUNKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIROHOMJLWMERM-UHFFFAOYSA-N 3-[dimethyl(octadecyl)azaniumyl]propane-1-sulfonate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O DIROHOMJLWMERM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVXPPJIGRGXGCY-TZLCEDOOSA-N 6-O-alpha-D-glucopyranosyl-D-fructofuranose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)C(O)(CO)O1 PVXPPJIGRGXGCY-TZLCEDOOSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- HHNJQTAVFGQHBP-UHFFFAOYSA-L C(C)(=O)O.C(C)(=O)[O-].[Mg+2].C(C)(=O)[O-] Chemical compound C(C)(=O)O.C(C)(=O)[O-].[Mg+2].C(C)(=O)[O-] HHNJQTAVFGQHBP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BMCZJPYYEFQOCO-UHFFFAOYSA-H C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Mg+2].C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Mg+2].[Mg+2] Chemical compound C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Mg+2].C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Mg+2].[Mg+2] BMCZJPYYEFQOCO-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 1
- OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L Copper gluconate Chemical class [Cu+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005682 EO-PO block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 101000596894 Homo sapiens High affinity nerve growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001121408 Homo sapiens L-amino-acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- 101000894590 Homo sapiens Uncharacterized protein C20orf85 Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 238000001265 Jonckheere trend test Methods 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102100026388 L-amino-acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N L-methionine (R)-S-oxide Chemical compound C[S@@](=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulphoxide Natural products CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- NBGXQZRRLOGAJF-UHFFFAOYSA-N Maltulose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)(CO)OCC1O NBGXQZRRLOGAJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 108091008604 NGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000007339 Nerve Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- FYIFITNFHGKSOB-UHFFFAOYSA-J P(=O)([O-])([O-])[O-].[K+].[K+].P(=O)([O-])(O)O.[Na+].[Na+] Chemical compound P(=O)([O-])([O-])[O-].[K+].[K+].P(=O)([O-])(O)O.[Na+].[Na+] FYIFITNFHGKSOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229920005372 Plexiglas® Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 101100288143 Rattus norvegicus Klkb1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 101100465937 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) pst3 gene Proteins 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N Stachyose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O2)O1 UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000003566 TRPV1 Human genes 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007591 Tartrate-Resistant Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010032050 Tartrate-Resistant Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101150016206 Trpv1 gene Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021442 Uncharacterized protein C20orf85 Human genes 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHATUINFZWUDIX-UHFFFAOYSA-N Zwittergent 3-14 Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O BHATUINFZWUDIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- LHAOFBCHXGZGOR-NAVBLJQLSA-N alpha-D-Manp-(1->3)-alpha-D-Manp-(1->2)-alpha-D-Manp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LHAOFBCHXGZGOR-NAVBLJQLSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 1
- 239000006067 antibiotic powder Substances 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000014461 bone development Effects 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- QIIZPUIPFGEZFO-UHFFFAOYSA-L calcium;4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [Ca+2].OC(=O)CCC([O-])=O.OC(=O)CCC([O-])=O QIIZPUIPFGEZFO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DGPUYHMCOANORE-UHFFFAOYSA-L calcium;acetic acid;diacetate Chemical compound [Ca+2].CC(O)=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O DGPUYHMCOANORE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000013368 capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N carboxyglutamic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N cocamidopropyl betaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940073507 cocamidopropyl betaine Drugs 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L fumarate(2-) Chemical class [O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000003370 grooming effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000049046 human NTRK1 Human genes 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 150000003893 lactate salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000832 lactitol Substances 0.000 description 1
- 235000010448 lactitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N lactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N 0.000 description 1
- 229960003451 lactitol Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N lactulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N 0.000 description 1
- 229960000511 lactulose Drugs 0.000 description 1
- PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N lactulose keto form Natural products OCC(=O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000001930 leg bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N maltulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002840 non-reducing disaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000010494 opalescence Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000004409 osteocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 210000000426 patellar ligament Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- UUEIAEHLBMETSI-UHFFFAOYSA-M potassium butanedioic acid 4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound C(CCC(=O)O)(=O)[O-].C(CCC(=O)O)(=O)O.[K+] UUEIAEHLBMETSI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- FHUOTRMCFQTSOA-UHFFFAOYSA-M potassium;acetic acid;acetate Chemical compound [K+].CC(O)=O.CC([O-])=O FHUOTRMCFQTSOA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 238000013077 scoring method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FYKDNWHPKQOZOT-UHFFFAOYSA-M sodium;dihydrogen phosphate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O FYKDNWHPKQOZOT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MHQHHBYRYFICDV-UHFFFAOYSA-M sodium;pyrimidin-3-ide-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].O=C1CC(=O)[N-]C(=O)N1 MHQHHBYRYFICDV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N stachyose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)O2)O)O1 UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 150000003890 succinate salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940117986 sulfobetaine Drugs 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003892 tartrate salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940104261 taurate Drugs 0.000 description 1
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- VWBIJLFTDUZNDF-UHFFFAOYSA-J tetrasodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O.OP([O-])([O-])=O VWBIJLFTDUZNDF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 125000000647 trehalose group Chemical group 0.000 description 1
- SYSWJPSVYLUKCH-UHFFFAOYSA-H tricalcium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O SYSWJPSVYLUKCH-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- SPRBJFWIUVWXBT-UHFFFAOYSA-K tripotassium 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [K+].[K+].[K+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O SPRBJFWIUVWXBT-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Abstract
本揭露涉及一種含抗RANKL-NGF雙特異性抗體的醫藥組成物。具體而言，本揭露涉及的醫藥組成物包含抗RANKL-NGF雙特異性抗體和緩衝劑。
Description
本申請要求中國專利申請(申請號202211438239.8，申請日2022年11月16日)的優先權。
本揭露屬於藥物製劑領域，具體涉及一種含抗RANKL-NGF雙特異性抗體的醫藥組成物，以及其作為藥物的用途。
這裡的陳述僅提供與本揭露有關的背景信息，而不必然地構成現有技術。
骨轉移是很多癌症發展到後期常見的一種伴隨症狀。骨轉移的發病機制為：原發性的腫瘤細胞脫落進入血液循環系統形成循環的腫瘤細胞，循環的腫瘤細胞轉移到骨骼部位形成具有傳播性的腫瘤細胞，並在骨骼微環境中休眠；這一過程可能持續數年的時間，直到存活下來的腫瘤細胞逐漸適應了骨骼的微環境，腫瘤細胞被激活，從休眠狀態進入增殖狀態(Mantyh，P.W.，Curr Opin Support Palliat Care，2014.8(2)：p83-90)。
腫瘤細胞的增殖會影響骨骼的微環境，並促進破骨細胞的形成，破骨細胞導致骨吸收加快並釋放出多種細胞因子，進一步促進腫瘤細胞的增殖，由此形成了一個惡性循環(Quayle，L.，Current Cancer Drug Targets，2015.15(6)：p469-480)。腫瘤細胞的不斷增殖導致多個轉移位點的形成，使患者出現骨損傷和疼痛等各種問題(Gartland，A.，Journal of Bone Oncology，2016.5(3)：p100-103)。
據統計，常見的發生骨轉移的癌症包括骨髓瘤、腎癌、黑色素瘤、膀胱癌、甲狀腺癌、肺癌、乳腺癌和前列腺癌(Clezardin，P.，Joint Bone Spine，2017.84(6)：p677-684.Fidler，M.M.Fidler，Scandinavian Journal of Public Health，2018.46(1)：p27-36)。
在正常骨組織中，成骨和破骨細胞處於一個相對平衡的狀態，以維持骨骼正常的生長發育，而癌細胞的存在會破壞這種平衡。在骨微環境中的癌細胞會釋放一系列的細胞因子來刺激成骨細胞和骨細胞分泌大量的核因子κB受體活化因子配體(Receptor Activator of Nuclear Factor-κB Ligand，RANKL)。RANKL與RANK受體作用促進破骨細胞的形成，導致骨吸收加劇。骨吸收造成的骨質溶解又會釋放出其他的生長因子來促進癌細胞的增殖。這樣就形成了一個有利於癌細胞轉移的循環(Body，J.J.，Expert Rev Anticancer Ther，2012.12(3)：p307-322)。
NGF(Nerve growth factor)是一種神經生長因子。NGF信號通路介導了神經系統的生長發育和疼痛信號的傳導。目前已知在細胞表面有兩種NGF受體，其中TrKA是高親和力的受體，p75NTR是低親和力的受體。NGF與TrkA作用可以同時激活Ras和PI3K通路，促進細胞的存
活和神經的生長。而NGF與p75NTR作用可以促進細胞的凋亡。另外PI3K通路還可以激活TRPV1的磷酸化，導致離子通道激活產生動作電位並傳導痛覺神經元信號(Kumar，V.and Mahal B.A.,Journal of Pain Research，2012.5：p279-287)。
已有數據表明，靶向NGF和RANKL的單株抗體對骨轉移引起的骨損傷和疼痛有一定的治療效果(Body JJ.Expert Rev Anticancer Ther.2012.12(3)：p307-322.Sopata M.，et al.2015.156(9)：p1703-1713)。
本揭露提供一種含抗RANKL-NGF雙特異性抗體的醫藥組成物，該組成物具有治療活性。此外，該組成物還具有穩定性好等優勢。
在一些實施方案中，本揭露提供一種醫藥組成物，包含抗RANKL-NGF雙特異性抗體和緩衝劑，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體包含特異性結合RANKL的第一抗原結合結構域和特異性結合NGF的第二抗原結合結構域，該緩衝劑為醋酸鹽緩衝劑、組胺酸緩衝劑或磷酸鹽緩衝劑。
在一些實施方案中，該緩衝劑為醋酸-醋酸鈉緩衝劑、組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝劑。
在一些實施方案中，該緩衝劑為醋酸-醋酸鈉緩衝劑或組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑。
在一些具體的實施方案中，該緩衝劑為醋酸-醋酸鈉緩衝劑。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物的pH為4.2至7.8。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.2至7.0。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.2至5.4。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.6至5.4。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約4.6。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約4.8。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約5.0。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約5.2。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約5.4。當本揭露中提及點值時，應當理解該點值包含了誤差範圍。這種誤差範圍是由於實驗室環境、人員操作、儀器、方法學、測量誤差等因素所致。以pH為例，當測值為約5.0時，應當理解其包含了誤差範圍。作為一個示例，採用工業用pH計測量製劑時，“約5.0”表示5.0±0.2(即pH為4.8至5.2)。
在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.6-6.6。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.6-5.8。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.0-5.8。
在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7或7.8，或者為這些點值之間的任意範圍。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.6。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.8。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.0。在一些
實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.2。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.4。
通常，藉由置換緩衝劑獲得的醫藥組成物的pH與緩衝劑pH幾乎一致。同時，所屬技術領域中具有通常知識者公知，在藥物製劑的過程中，有時可能會存在pH飄移，但藥物製劑的pH的飄移一般很小(例如±0.3範圍內)。在一些實施方案中，藥物製劑的pH的飄移在±0.2範圍內。在一些實施方案中，藥物製劑的pH的飄移在±0.1範圍內。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至150mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至100mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為10mg/mL至80mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為20mg/mL至80mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為20mg/mL至77mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為20mg/mL至70mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為50mg/mL至77mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為56mg/mL至84mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為63mg/mL至77mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為約77mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為約70mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為約50mg/mL。在一些
實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為約20mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、55mg/mL、56mg/mL、60mg/mL、63mg/mL、65mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、77mg/mL、80mg/mL、84mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL或150mg/mL，或者為這些點值之間的任意範圍。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為77mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為70mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為50mg/mL。在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為20mg/mL。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物包含表面活性劑。在一些實施方案中，該表面活性劑是非離子表面活性劑。在一些實施方案中，該表面活性劑選自泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)、聚山梨酯(例如聚山梨酯20、聚山梨酯80)、聚羥亞烴、Triton、十二烷基磺酸鈉、月桂基磺酸鈉、辛基糖甙鈉、月桂基-磺基甜菜鹼、肉豆蔻基-磺基甜菜鹼、亞油基-磺基甜菜鹼、硬脂基-磺基甜菜鹼、月桂基-肌胺酸、肉豆蔻基-肌胺酸、亞油基-肌胺酸、硬脂基-肌胺酸、亞油基-甜菜鹼、肉豆蔻基-甜菜鹼、鯨蠟基-甜菜鹼、月桂醯胺基丙基-甜菜鹼、柯卡醯胺基丙基-甜菜鹼、亞油醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-甜菜鹼、棕櫚醯胺基丙基-甜菜鹼、異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-二甲基胺、棕櫚醯胺基丙基-二甲基胺、異硬脂醯胺基丙基-二甲基胺、甲基可可
醯基鈉、甲基油基牛磺酸鈉、聚乙二醇、聚丙二醇、乙烯與丙烯二醇的共聚物等。在一些實施方案中，該表面活性劑為聚山梨酯或泊洛沙姆。在一些實施方案中，該表面活性劑為聚山梨酯80、聚山梨酯20或泊洛沙姆188。在一些實施方案中，該表面活性劑為聚山梨酯80或聚山梨酯20。在一些實施方案中，該表面活性劑為聚山梨酯80。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該表面活性劑濃度為0.01mg/mL至1.0mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.01mg/mL至0.8mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.01mg/mL至0.6mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.01mg/mL至0.4mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.01mg/mL至0.2mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.1mg/mL至0.4mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.1mg/mL至0.2mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.05mg/mL至0.15mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.08mg/mL至0.12mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.09mg/mL至0.11mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為約0.4mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為約0.2mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為約0.1mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.08mg/mL、0.09mg/mL、0.1mg/mL、0.11mg/mL、0.12mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL或1.0mg/mL，或者為這些點值之間的任意範圍。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度
為0.4mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.2mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.1mg/mL。
在一些實施方案中，該表面活性劑為約0.1mg/mL的聚山梨酯80。在一些實施方案中，該表面活性劑為0.1mg/mL的聚山梨酯80。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包括穩定劑。在一些實施方案中，穩定劑為糖(包括單糖、二糖、三糖、多糖、糖醇、還原性糖、非還原性糖等等)、胺基酸(包括脯胺酸、精胺酸、甘胺酸、半胱胺酸、組胺酸等等)或鹽類(氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣等)。在一些實施方案中，該穩定劑選自由脯胺酸、蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、精胺酸、甘胺酸和氯化鈉組成的組中的一種或更多種。在一些實施方案中，該穩定劑為脯胺酸、蔗糖或氯化鈉。在一些實施方案中，該穩定劑為胺基酸。在一些實施方案中，該穩定劑為脯胺酸。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，穩定劑濃度為1mM至300mM。在一些實施方案中，穩定劑濃度為25mM至290mM。在一些實施方案中，穩定劑濃度為25mM至250mM。在一些實施方案中，穩定劑濃度為210mM至270mM。在一些實施方案中，穩定劑濃度為216mM至264mM。在一些實施方案中，穩定劑濃度為228mM至252mM。在一些實施方案中，該穩定劑濃度為約240mM。在一些實施方案中，該穩定劑濃度為1mM、5mM、10mM、20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM、210mM、216mM、220mM、228mM、230mM、235mM、
240mM、245mM、250mM、252mM、260mM、264mM、270mM、280mM、290mM或300mM，或者為這些點值之間的任意範圍。在一些實施方案中，該穩定劑濃度為240mM。
在一些實施方案中，該穩定劑為約240mM脯胺酸。在一些實施方案中，該穩定劑為240mM脯胺酸。
在一些實施方案中，該穩定劑為糖，該糖選自：葡萄糖，蔗糖，海藻糖，乳糖，果糖，麥芽糖，右旋糖苷，甘油，赤藻糖醇，丙三醇，阿拉伯糖醇，木糖醇，山梨糖醇(也稱山梨醇)，甘露醇，密裡二糖，松三糖，蜜三糖，甘露三糖，水蘇糖，麥芽糖，乳果糖，麥芽酮糖，麥芽糖醇，乳糖醇和異-麥芽酮糖。在一些實施方案中，該穩定劑選自由蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、精胺酸、甘胺酸和氯化鈉組成的組中的一種或多種。在一些實施方案中，該穩定劑為非還原性二糖。在一些實施方案中，該穩定劑為海藻糖或蔗糖。在一些實施方案中，該穩定劑為蔗糖。
在一些實施方案中，穩定劑為10mg/mL至100mg/mL蔗糖。在一些實施方案中，穩定劑為30mg/mL至80mg/mL蔗糖。在一些實施方案中，穩定劑為50mg/mL至80mg/mL蔗糖。在一些實施方案中，穩定劑為70mg/mL至80mg/mL蔗糖。在一些實施方案中，穩定劑為60mg/mL至90mg/mL蔗糖。在一些實施方案中，穩定劑為67.5mg/mL至82.5mg/mL蔗糖。在一些實施方案中，穩定劑為約75mg/mL蔗糖。在一些實施方案中，穩定劑濃度非限制性實施包括10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、90mg/mL、95mg/mL、
100mg/mL，以及這些點值之間的任一範圍。在一些實施方案中，穩定劑為75mg/mL蔗糖。
在一些實施方案中，該穩定劑為鹽類。在一些實施方案中，該穩定劑為氯化鈉。在一些實施方案中，該穩定劑為0.64%(w/v)至0.96%(w/v)氯化鈉。在一些實施方案中，該穩定劑為0.72%(w/v)至0.88%(w/v)氯化鈉。在一些實施方案中，該穩定劑為約0.8%(w/v)氯化鈉。在一些實施方案中，該穩定劑為0.8%(w/v)氯化鈉。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，該緩衝劑的濃度為5mM至100mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為10mM至50mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為10mM至30mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為10mM至20mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為16mM至24mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為18mM至22mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為約20mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為約10mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為5mM、10mM、15mM、16mM、18mM、20mM、22mM、24mM、25mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM或100mM，以及這些點值之間的任一範圍。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為20mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為10mM。
在一些實施方案中，該緩衝劑為約10mM醋酸-醋酸鈉緩衝劑。在一些實施方案中，該緩衝劑為約20mM醋酸-醋酸鈉緩衝劑。在一些實施方案中，該緩衝劑為10mM醋酸-醋酸鈉緩衝劑。在一些實施方案中，該緩衝劑為20mM醋酸-醋酸鈉緩衝劑。在一些實施方案中，該緩衝劑為
10mM組胺酸一鹽酸組胺酸緩衝劑。在一些實施方案中，該緩衝劑為10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝劑。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體包含：至少一個特異性結合RANKL的第一抗原結合域和至少一個特異性結合NGF的第二抗原結合域。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體包含：兩個特異性結合RANKL的第一抗原結合域和兩個特異性結合NGF的第二抗原結合域。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體具有如圖1所示的結構。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合RANKL的第一抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，
該重鏈可變區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；和
該輕鏈可變區包含：LCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合RANKL的第一抗原結合域
包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；和/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合NGF的第二抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，
該重鏈可變區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；和
該輕鏈可變區包含：LCDR1，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合NGF的第二抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，
該重鏈可變區包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；和/或
該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合NGF的第二抗原結合結構域包含重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列，該輕鏈包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，
(i)特異性結合RANKL的第一抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；和
該輕鏈可變區包含：LCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列；
(ii)特異性結合NGF的第二抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；和
該輕鏈可變區包含：LCDR1，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，
(i)特異性結合RANKL的第一抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；和/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列；
(ii)特異性結合NGF的第二抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；和/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，
(i)特異性結合RANKL的第一抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；和
該輕鏈可變區包含：LCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列；
(ii)特異性結合NGF的第二抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；和
該輕鏈可變區包含：LCDR1，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；且該抗RANKL-NGF雙特異性抗體具有如圖1所示的結構。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，
(i)特異性結合RANKL的第一抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；和/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列；
(ii)特異性結合NGF的第二抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；和/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列；且該抗RANKL-NGF雙特異性抗體具有如圖1所示的結構。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體包含第一多肽鏈和第二多肽鏈，其中：該第一多肽鏈包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列。
在一些實施方案中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體包含兩條序列相同的第一鏈和兩條序列相同的第二鏈，其中：該第一多肽鏈包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至150mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
(c)1mM至300mM的穩定劑，和
(d)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.2至7.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至150mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
(c)1mM至300mM的脯胺酸，和(d)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.2至7.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)10mg/mL至80mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至0.6mg/mL的聚山梨酯20或聚山梨酯80，
(c)25mM至290mM的脯胺酸，和
(d)10mM至50mM的醋酸鹽緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.6至5.4。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)10mg/mL至80mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)25mM至250mM的脯胺酸，和
(d)10mM至50mM的醋酸鹽緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.6至5.4。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)20mg/mL至80mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80，
(c)210mM至270mM的脯胺酸，和
(d)10mM至30mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.6至5.4。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯80，
(c)210mM至270mM的脯胺酸，和
(d)10mM至30mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯80，
(c)25mM至250mM的脯胺酸，和
(d)10mM至20mM的醋酸-醋酸鈉鹽緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯80，
(c)240mM的脯胺酸，和
(d)10mM至20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.05mg/mL至0.15mg/mL的聚山梨酯80，
(c)210mM至270mM的脯胺酸，和
(d)16mM至24mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.08mg/mL至0.12mg/mL的聚山梨酯80，
(c)210mM至270mM的脯胺酸，和
(d)16mM至24mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)約70mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)約0.1mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約240mM的脯胺酸，和
(d)約20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)70mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80，
(c)240mM的脯胺酸，和
(d)20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上所述的醫藥組成物，該醫藥組成物是液體製劑。在一些實施方案中，該液體製劑的溶劑是水。
本揭露還提供一種的凍乾製劑，其特徵在於該凍乾製劑複溶後可形成如上任一項所述的醫藥組成物。
本揭露還提供一種凍乾製劑，其為如上任一項所述的醫藥組成物的凍乾形式製劑。
本揭露還提供一種製備凍乾製劑的方法，其中包括將如上任一項所述的醫藥組成物進行冷凍乾燥的步驟。在一些實施方案中，如上任一項所述冷凍乾燥依次包括預凍、一次乾燥和二次乾燥的步驟。
本揭露還提供一種凍乾製劑，該製劑藉由將如上任一項所述的醫藥組成物經冷凍乾燥獲得。
本揭露還提供一種複溶溶液，其特徵在於該複溶溶液是藉由將如上任一項所述的凍乾製劑經複溶製備獲得。
本揭露還提供一種複溶溶液，其為如上任一項所述的凍乾製劑的複溶形式製劑。
在一些實施方案中，如上任一項的所述的複溶溶液，其組分和含量與前述的醫藥組成物的組分和含量相同。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至150mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，(c)1mM至300mM的穩定劑，和(d)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.2至7.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至150mg/mL的如上任一項所述的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，(c)1mM至300mM的脯胺酸，和(d)5mM至100mM的緩衝劑，醫藥組成物的pH為4.2至7.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)10mg/mL至80mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至0.6mg/mL的聚山梨酯20或聚山梨酯80，(c)25mM至290mM的脯胺酸，和(d)10mM至50mM的醋酸鹽緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.6至5.4。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)10mg/mL至80mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至0.6mg/mL的聚山梨酯80，(c)25mM至250mM的脯胺酸，和(d)10mM至50mM的醋酸鹽緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.6至5.4。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)20mg/mL至80mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80，(c)210mM至270mM的脯胺酸，和(d)10mM至30mM的醋酸鹽緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.6至5.4。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)210mM至270mM的脯胺酸，和(d)10mM至30mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)25mM至250mM的脯胺
酸，和(d)10mM至20mM的醋酸-醋酸鈉鹽緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)240mM的脯胺酸，和(d)10mM至20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.05mg/mL至0.15mg/mL的聚山梨酯80，(c)210mM至270mM的脯胺酸，和(d)16mM至24mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.08mg/mL至0.12mg/mL的聚山梨酯80，(c)210mM至270mM的脯胺酸，和(d)16mM至24mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)約70mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)約0.1mg/mL的聚山梨酯80，(c)約240mM的脯胺酸，和(d)約20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)70mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.1mg/mL的聚山梨酯80，(c)240mM的脯胺酸，和(d)20mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液，其為皮下注射製劑、靜脈注射製劑、腹腔注射製劑或肌肉注射製劑。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液，其為皮下注射製劑。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液，其適用於皮下注射、靜脈注射、腹腔注射或肌肉注射；較佳地，其適用於皮下注射。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液或凍乾製劑，其用於製備皮下注射、靜脈注射、腹腔注射或肌肉注射的藥物；較佳地，其用於製備皮下注射的藥物。
本揭露還提供一種藥盒，其包括至少一個容器，各容器獨立地包含如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑或如上任一項所述的複溶溶液。
在一些實施方案中，本揭露還提供診斷、治療、緩解受試者病症的方法，包含向該受試者施用有效量的如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒。
在一些實施方案中，本揭露還提供如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒在製備治療或預防疾病的藥物中的用途。
在一些實施方案中，本揭露還提供一種治療或預防疾病的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒。
在一些實施方案中，本揭露還提供如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒，其用於治療或預防疾病。
在一個方面，本揭露還提供如前任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒在製備用於預防或治療疾病或病症的藥物中的用途。
在一些具體實施方案中，如上任一項所述的疾病為疼痛、關節僵硬或骨損失。
在一些實施方案中，該疼痛選自：骨關節疼痛、類風濕性關節炎疼痛、痛風、骨癌痛、骨折疼痛、手術後疼痛、癌症疼痛、痛性膀胱綜合症、肌肉骨骼痛、前列腺炎(例如慢性前列腺炎)、盆腔疼痛(例如慢性
盆腔疼痛)、間質性膀胱炎、下背痛、痛經、骨骼疾病相關的疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹後遺神經痛、帶狀皰疹感染、坐骨神經痛、偏頭痛、糖尿病神經病變和外周神經相關的疼痛。
在一些實施方案中，該骨損失與選自下組的至少一種狀況相關：骨質疏鬆症、佩吉特氏病、骨髓炎、高鈣血症、骨質稀少、骨質疏鬆、骨壞死、骨損傷、骨吸收、骨發育不全、炎症、自身免疫疾病、腸炎、類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、克羅恩病、牙周骨吸收、溶骨性轉移和癌症。
在一些實施方案中，其中該癌症選自乳腺癌、前列腺癌、甲狀腺癌、腎癌、肺癌、食道癌、直腸癌、膀胱癌、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、胃腸道癌、黑色素瘤、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、淋巴瘤、非小細胞肺癌、骨腫瘤和何傑金氏病。
在一些實施方案中，前述的疾病為與NGF或RANKL相關的疾病。
在一些實施方案中，前述的疾病為表達NGF或RANKL的疾病。
在一個方面，本揭露提供一種治療或預防與NGF或RANKL相關的疾病的方法，該方法包括給予受試者預防有效量或治療有效量的如前任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒。
在一些實施方案中，該與NGF或RANKL相關的疾病為疼痛、關節僵硬或骨損失。
在一個方面，本揭露的如前任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒可用作藥物。在一些實施方案中，用作用於治療疼痛、關節僵硬或骨損失的藥物。在一些實施方案中，用作用於治療骨關節疼痛、類風濕性關節炎疼痛、痛風、骨癌痛、骨折疼痛、手術後疼痛、癌症疼痛、痛性膀胱綜合症、肌肉骨骼痛、前列腺炎(例如慢性前列腺炎)、盆腔疼痛(例如慢性盆腔疼痛)、間質性膀胱炎、下背痛、痛經、骨骼疾病相關的疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹後遺神經痛、帶狀皰疹感染、坐骨神經痛、偏頭痛、糖尿病神經病變和外周神經相關的疼痛的藥物。在一些實施方案中，用作用於治療骨質疏鬆症、佩吉特氏病、骨髓炎、高鈣血症、骨質稀少、骨質疏鬆、骨壞死、骨損傷、骨吸收、骨發育不全、炎症、自身免疫疾病、腸炎、類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、克羅恩病、牙周骨吸收、溶骨性轉移和癌症引起的骨損失的藥物。
在一個方面，本揭露提供如前任一項所述的藥物醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒在製備用於或預防或治療與NGF或RANKL相關的疾病的藥物中的用途。在一些實施方案中，該與NGF或RANKL相關的疾病為疼痛、關節僵硬或骨損失。
在一個方面，本揭露提供的如前任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒可用作預防或治療與NGF或RANKL相關的疾病的藥物。在一
些實施方案中，該與NGF或RANKL相關的疾病為疼痛、關節僵硬或骨損失。
圖1：DVD-IgG結構示意圖。
圖2A至圖2D：圖2A顯示聯合用藥第14天，小鼠疼痛行為統計結果；圖2B顯示聯合用藥第21天，小鼠疼痛行為統計結果；圖2C顯示聯合用藥第14天，小鼠骨損傷評分結果；圖2D顯示聯合用藥第21天，小鼠骨損傷評分結果；其中vs vehicle ****表示vs vehicle，P<0.0001；***表示vs vehicle，P<0.001；**表示vs vehicle，P<0.01；*表示vs vehicle，P<0.05。空白對照(Blank)；假手術組(Sham)；載劑對照(vehicle)。
圖3A至圖3B：圖3A顯示使用雙特異性抗體1第14天，小鼠疼痛行為統計結果；圖3B顯示使用雙特異性抗體1第21天，小鼠疼痛行為統計結果；其中vs vehicle ****表示vs vehicle，P<0.0001；***表示vs vehicle，P<0.001；**表示vs vehicle，P<0.01；*表示vs vehicle，P<0.05。載劑對照(vehicle)。
圖4A至圖4D：圖4A顯示使用雙特異性抗體1第15天，小鼠疼痛行為統計結果；圖4B顯示使用雙特異性抗體1第21天，小鼠疼痛行為統計結果；圖4C顯示使用雙特異性抗體1第15天，小鼠骨損傷評分結果；圖4D顯示使用雙特異性抗體1第21天，小鼠骨損傷評分結果；其中vs vehicle ****表示vs vehicle，P<0.0001；***表示vs vehicle，
P<0.001；**表示vs vehicle，P<0.01；*表示vs vehicle，P<0.05。假手術組(Sham)；載劑對照(vehicle)。
術語
為了更容易理解本揭露，以下具體定義了某些技術和科學術語。除非在本文中另有明確定義，否則本文使用的所有其它技術和科學術語都具有本揭露所屬技術領域具有通常知識者通常理解的含義。
本揭露所用的單數形式“一個”、“一種”和“該”包括複數指代，除非上下文清楚表明並非如此。
除非上下文另外清楚要求，否則在專利說明書和申請專利範圍中，應將詞語“包含”、“具有”、“包括”等理解為“包括但不僅限於”的意義，而不是排他性或窮舉性意義。
“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。
所屬技術領域中具有通常知識者應當理解，當參考數值範圍、截止值或特定值使用時，“約”可以表示在1個或多於1個標準偏差之內。或者，“約”可以表示相差最高達20%的範圍(即±20%)。由於本文所用的許多數值是藉由實驗確定的，因此所屬技術領域中具有通常知識者應當理解，此類確定可以在不同實驗之間有差異並且通常在不同實驗之間有差異。由於這種內在差異，認為本文所用的值不應受到過度限制。因此，術語“約”用於涵蓋與指定值相差±20%或更小的變化、±10%或更小的變化、±5%或
更小的變化、±1%或更小的變化、±0.5%或更小的變化、或者±0.1%或更小的變化。
儘管本揭露提供了含量範圍或含量值，但所屬技術領域中具有通常知識者理解，該含量範圍或含量值涵蓋了所測定具體值的可接受誤差範圍。
本揭露所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。
“抗-RANKL抗體”意指能夠與RANKL或其表位結合，並抑制RANKL的生物活性及/或抑制RANKL的下游通路的抗體。
術語“NGF”，神經生長因子意指神經生長因子及其保留至少一部分NGF的生物活性的變體。當在本文中使用時，NGF包括所有哺乳動物物種的野生型序列NGF或其天然存在的變體，包括人類、鼠、猴、狗、貓、馬或牛。
術語“胺基酸”是指天然存在的和合成的胺基酸，以及以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的胺基酸類似物和胺基酸模擬物。天然存在的胺基酸是由遺傳密碼編碼的那些胺基酸，以及後來修飾的那些胺基酸，例如羥脯胺酸、γ-羧基谷胺酸和O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物是指與天然存在的胺基酸具有相同基本化學結構(即與氫、羧基、胺基和R基團結合的α碳)的化合物，例如高絲胺酸、正亮胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此類類似物具有修飾的R基團(例如，正亮胺酸)或修飾的肽骨架，但保留與天然存在的胺基酸相同的基本化學結構。胺基酸模擬物是指具有
與胺基酸的一般化學結構不同的結構，但是以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的化學化合物。
“抗體”以最廣義使用，涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體，多株抗體；單特異性抗體，多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，全長抗體和抗體片段(或抗原結合片段，或抗原結合部分)，只要它們展現出期望的抗原結合活性。“天然抗體”指天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體是約150,000道爾頓的異四聚糖蛋白，由二硫鍵結合的兩條相同輕鏈和兩條相同重鏈構成。從N至C端，每條重鏈具有一個可變區(VH)，又稱作可變重域、重鏈可變區，接著是三個恆定域(CH1、CH2和CH3)。類似地，從N至C端，每條輕鏈具有一個可變區(VL)，又稱作可變輕域，或輕鏈可變域，接著是一個恆定輕域(輕鏈恆定區、CL)。術語“雙特異性抗體”指能夠對兩個不同抗原或同一抗原的至少兩個不同抗原表位特異性結合的抗體(包括抗體或其抗原結合片段，如單鏈抗體)。
術語“可變區”或“可變域”指抗體重鏈或輕鏈中涉及抗體結合抗原的域。本文中，抗體重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)各包含四個保守的框架區(FR)和三個互補決定區(CDR)。其中，術語“互補決定區”或“CDR”指可變區內主要促成與抗原結合的區域；“框架”或“FR”是指除CDR殘基之外的可變結構域殘基。VH包含3個CDR區：HCDR1、HCDR2和HCDR3；VL包含3個CDR區：LCDR1、LCDR2和LCDR3。每個VH和VL由從胺基末端排到羧基末端按以下順序排列的三個CDR和四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。單個VH或VL可能足以賦予抗原結合特異性。
可以藉由各種公知方案來確定CDR的胺基酸序列邊界，例如：“Kabat”編號規則(參見Kabat等(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)、“Chothia”編號規則、“ABM”編號規則、“contact”編號規則(參見Martin,ACR.Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J].2001)和ImMunoGenTics(IMGT)編號規則(Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003)；Front Immunol.2018 Oct 16；9：2278)等；各種編號系統之間的對應關係是所屬技術領域中具有通常知識者熟知的。本揭露的編號規則如下表1中所示。
除非另有說明，本揭露實施例中的可變區和CDR序列均適用“Kabat”編號規則。儘管在具體的實施方案中，採用了Kabat編號規則來限定胺基酸殘基，但是其他編號系統所的對應技術方案將視為等同技術方案。
“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述雙特異性抗體，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。本揭露中，“醫藥組成物”和“製劑”並不互相排斥。
“有效量”包含足以改善或預防醫學病症的症狀或病症的量。有效量還意指足以允許或促進診斷的量。用於特定受試者或獸醫學受試者的有效量可依據以下因素而變化：如待治療的病症、受試者的總體健康情況、給藥的方法途徑和劑量以及副作用嚴重性。有效量可以是避免顯著副作用或毒性作用的最大劑量或給藥方案。
“藥學可接受的載體”或“藥學可接受的賦形劑”包括當與活性成分組合時，允許該成分保留生物學活性並且不與受試者的免疫系統反應的任何材料。例子包括但不限於任何標準藥物載體，例如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳劑如油/水乳劑、和各種類型的潤濕劑。在一些實施例中，用於氣霧劑或腸胃外施用的稀釋劑是磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或生理(0.9%)鹽水。包含此類載體的組成物藉由眾所周知的常規方法配製。
“緩衝劑”指藉由其酸-鹼共軛組分的作用而耐受pH變化的緩衝劑。將pH控制在適當範圍中的緩衝劑的例子包括醋酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、組胺酸、草酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、枸櫞酸鹽、酒石酸鹽、延胡索酸鹽、甘胺醯甘胺酸和其它有機酸緩衝劑。
“組胺酸緩衝劑”是包含組胺酸的緩衝劑。組胺酸緩衝劑的實例包括組胺酸-鹽酸組胺酸，組胺酸-醋酸組胺酸，組胺酸-磷酸組胺酸，組胺酸-硫酸組胺酸等緩衝劑，較佳組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑。組胺酸-鹽酸
組胺酸緩衝劑可由組胺酸與鹽酸配製而成，或者由組胺酸與鹽酸組胺酸配製而成。
“枸櫞酸鹽緩衝劑”是包括枸櫞酸根離子的緩衝劑。枸櫞酸鹽緩衝劑的實例包括枸櫞酸-枸櫞酸鈉、枸櫞酸-枸櫞酸鉀、枸櫞酸-枸櫞酸鈣、枸櫞酸-枸櫞酸鎂等。較佳的枸櫞酸鹽緩衝劑是枸櫞酸-枸櫞酸鈉。
“琥珀酸鹽緩衝劑”是包括琥珀酸根離子的緩衝劑。琥珀酸鹽緩衝劑的實例包括琥珀酸-琥珀酸鈉鹽、琥珀酸-琥珀酸鉀、琥珀酸-琥珀酸鈣鹽等。較佳的琥珀酸鹽緩衝劑是琥珀酸-琥珀酸鈉鹽。示例性的，該琥珀酸-琥珀酸鈉可由琥鉑酸與氫氧化鈉配製而成，或由琥鉑酸與琥珀酸鈉鹽配製而成。
“磷酸鹽緩衝劑”是包括磷酸根離子的緩衝劑。磷酸鹽緩衝劑的實例包括檸檬酸-磷酸氫二鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉-枸櫞酸等。較佳的磷酸鹽緩衝劑是檸檬酸-磷酸氫二鈉。
“醋酸鹽緩衝劑”是包括醋酸根離子的緩衝劑。醋酸鹽緩衝劑的實例包括醋酸-醋酸鈉、組胺酸-醋酸組胺酸、醋酸-醋酸鉀、醋酸-醋酸鈣、醋酸-醋酸鎂等。較佳的醋酸鹽緩衝劑是醋酸-醋酸鈉。
“泊洛沙姆(poloxamer)”是環氧乙烷和環氧丙烷的嵌段共聚物，其是水溶性的並在藥物製劑中用作表面活性劑。泊洛沙姆的實例包括泊洛沙姆188。
“凍乾製劑”表示液體或溶液形式的醫藥組成物或液體或溶液製劑經真空冷凍乾燥步驟之後獲得的製劑或醫藥組成物。
本揭露所述的醫藥組成物能夠達到一種穩定的效果：其中的抗體在貯藏後基本上保留其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物學活性的醫藥組成物，較佳地，醫藥組成物在貯藏後基本上保留其物理和化學穩定性以及其生物學活性。貯藏期一般基於醫藥組成物的預定保存期來選擇。目前有多種測量蛋白質穩定性的分析技術，可測量在選定溫度貯藏選定時間段後的穩定性。
穩定的製劑是在下述情況下沒有觀察到顯著變化的製劑：在冷藏溫度(2-8℃)保存至少3個月、較佳6個月、更佳1年，且甚至更佳地多達2年。另外，穩定的液體製劑包括這樣的液體製劑：其在包括25℃的溫度保存包括2週、4週、1個月、3個月或6個月在內的時段後表現出期望的特徵。此外，穩定的液體製劑還包括40℃的溫度保存包括2週、4週、1個月、3個月或6個月在內的時段後表現出期望的特徵。穩定性的典型的例子：藉由SEC-HPLC測得，通常不超過約10%、較佳不超過約5%的抗體發生聚集或降解。藉由視覺分析，製劑是淡黃色近無色澄明液體或者無色澄明液體，或澄清至稍微乳白色。該製劑的濃度、pH和重量克分子滲透壓濃度具有不超過±10%變化，較佳不超過±5%的變化。該製劑通常形成不超過約10%、較佳不超過約5%的聚集。
如果在目檢顏色和/或澄清度後，或者藉由UV光散射、尺寸排阻色譜法(SEC)和動態光散射(DLS)測得，抗體沒有顯示出顯著的聚集增加、沉澱和/或變性，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的物理穩定性”。蛋白構象的變化可以藉由熒光光譜法(其確定蛋白三級結構)和藉由FTIR光譜法(其確定蛋白二級結構)來評價。
如果抗體沒有顯示出顯著的化學改變，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的化學穩定性”。藉由檢測和定量化學上改變的形式的蛋白，可以評估化學穩定性。經常改變蛋白化學結構的降解過程包括水解或截短(藉由諸如尺寸排阻色譜法和CE-SDS等方法來評價)、氧化(藉由諸如與質譜法或MALDI/TOF/MS結合的肽譜法等方法來評價)、脫醯胺作用(藉由諸如離子交換色譜法、毛細管等電聚焦、肽譜法、異天冬胺酸測量等方法來評價)和異構化(藉由測量異天冬胺酸含量、肽譜法等來評價)。
如果抗體在給定時間的生物活性是在製備藥物製劑時表現出的生物活性的預定範圍內，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的生物活性”。
“施用”、“給予”和“處理”，當其應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。“施用”、“給予”和“處理”可以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸，以及試劑與流體的接觸，其中該流體與細胞接觸。“施用”、“給予”和“處理”還意指藉由試劑、診斷、結合組成物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。“處理”當其應用於人、獸醫學或研究受試者時，是指治療處理、預防或預防性措施，研究和診斷應用。
“治療”意指給予患者內用或外用治療劑，例如包含本揭露的任一種的醫藥組成物，該患者具有一種或多種疾病症狀，而已知該治療劑對這些症狀具有治療作用。通常，在受治療患者或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑，以誘導這類症狀退化或抑制這類症狀發
展到任何臨床有測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量(也稱作“治療有效量”)可根據多種因素變化，例如患者的疾病狀態、年齡和體重，以及藥物在患者產生需要療效的能力。藉由醫生或其它專業衛生保健人士通常用於評價該症狀的嚴重性或進展狀況的任何臨床檢測方法，可評價疾病症狀是否已被減輕。儘管本揭露的實施方案(例如治療方法或製品)在緩解每個目標疾病症狀方面可能無效，但是根據本領域已知的任何統計學檢驗方法如Student t檢驗、卡方檢驗、依據Mann和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)、Jonckheere-Terpstra檢驗和Wilcoxon檢驗確定，其在統計學顯著數目的患者中應當減輕目標疾病症狀。
本揭露的醫藥組成物可藉由任何合適的手段施用，包括腸胃外、肺內和鼻內，並且如果需要局部治療，則病灶內施用。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。給藥可以藉由任何適當的途徑，例如，藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射。本文考慮多種給藥時間方案，包括但不限於，單次或在多個時間點多次施用，推注施用和脈衝輸注。在一些實施方案中，本揭露的醫藥組成物藉由皮下注射施用。
本揭露的醫藥組成物將以符合良好醫療實踐的方式配製、給藥和施用。在此背景下考慮的因素包括所治療的具體病症、所治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床狀況、病症的起因、試劑的遞送部位、施用方法、施用時間安排以及醫學從業者已知的其他因素。視需要地，醫藥組成物還可以與用於預防或治療該病症的一種或更多種其它試劑一起配製。此類其它試劑的有效量取決於醫藥組成物中存在的抗原結合分子的量、病症或治療的類型以及其它因素。可以與本文所述相同的劑量和施用路徑使用，
或以本文該劑量的約1至99%使用，或以任何劑量使用，並藉由經驗/臨床確定為合適的任何途徑使用。
本揭露中與NGF或RANKL相關的疾病沒有限制，只要它是與NGF或RANKL相關的疾病即可，例如利用本揭露的抗體誘導的治療反應可藉由結合人類NGF或RANKL，然後阻遏NGF或RANKL與其受體結合，或殺傷過表達NGF或RANKL的細胞；或抑制過表達NGF或RANKL的細胞的生長。
在以上說明書中提出了本揭露一種或多種實施方式的細節。雖然可使用與本文所述類似或相同的任何方法和材料來實施或測試本揭露，但是以下描述較佳的方法和材料。藉由說明書和申請專利範圍，本揭露的其他特點、目的和優點將是顯而易見的。在說明書和申請專利範圍中，除非上下文中有清楚的另外指明，單數形式包括複數指代物的情況。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語都具有本揭露所屬領域具有通常知識者所理解的一般含義。說明書中引用的所有專利和出版物都藉由引用納入。提出以下實施例是為了更全面地說明本揭露的較佳實施方式。這些實施例不應以任何方式理解為限制本揭露的範圍，本揭露的範圍由申請專利範圍限定。
實施例-抗RANKL-NGF雙特異性抗體製備與檢測
PCT/CN2022/092333(申請日：2022.05.12；優先權專利申請號：CN202110515444.9)藉由援引完整收入本揭露。
實施例1：抗RANKL抗體的製備
藉由設計引子，構建酵母菌文庫。利用RANKL蛋白(Sino biological，11682-HNCH)對文庫進行富集和篩選，獲得候選株，藉由測序確定株中抗體的輕重鏈可變區的胺基酸序列。得到的示例性的抗RANKL抗體的序列如下：
將上述可變區與人輕鏈恆定區和重鏈恆定區融合，形成完整的抗體輕、重鏈。示例性的抗體的恆定區序列如下：
人IgG4重鏈恆定區：
SEQ ID NO：9；
人κ輕鏈恆定區：
SEQ ID NO：10。
示例性的抗RANKL抗體的序列如下：
D75H重鏈：
SEQ ID NO：11；
D75H輕鏈：
SEQ ID NO：12。
對照抗RANKL抗體的序列如下：
Denosumab重鏈序列：
SEQ ID NO：13；
Denosumab輕鏈序列：
SEQ ID NO：14。
實施例2：抗RANKL/NGF雙特異性抗體的製備
本揭露中雙特異性抗體的結合NGF的第二抗原結合結構域可以來源於任意適宜的抗體的抗原結合部分。特別適宜的抗體描述於例如國際申請WO2004058184A2(藉由援引完整收入本文)。
示例性雙特異性抗體的結合NGF結合域的CDR和可變區序列如下所示：
NGF結合域重鏈可變區：
SEQ ID NO：21；
NGF結合域輕鏈可變區：
SEQ ID NO：22。
將NGF結合域的可變區分別與SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：23的重鏈恆定區和SEQ ID NO：10的輕鏈恆定區融合，獲得抗NGF抗體。其序列如下：
SEQ ID NO：23；
抗NGF抗體(N-mAb)重鏈：
SEQ ID NO：24；
抗NGF抗體(N-mAb)輕鏈：
SEQ ID NO：25；
對照抗NGF抗體的序列：
Tanezumab重鏈：
SEQ ID NO：26；
Tanezumab輕鏈：
SEQ ID NO：27。
針對骨轉移適應症，目前靶向NGF和RANKL單株抗體的臨床給藥劑量相差懸殊。因此，在製備針對NGF和RANKL的雙特異性抗體時，需要平衡雙特異性抗體的NGF臂和RANKL臂的活性，以便確定合適的雙特異性抗體的給藥劑量，避免因給藥劑量過高引起的副作用，或因給藥劑量太低，不能發揮雙特異性抗體的功能。
本揭露製備的雙特異性抗體具有DVD-IgG結構(如圖1所示)。將抗RANKL抗體和抗NGF抗體的輕鏈可變結構域(VL)直接地，或藉由重組DNA技術經由短連接子串聯連接，隨後為輕鏈恆定結構域。類似地，重鏈包含串聯連接的2個重鏈可變結構域(VH)，隨後為恆定結構域
CH1和Fc區。其中連接子包括但不限於如下肽連接子：ASTKGP(SEQ ID NO：28)、TVAAP(SEQ ID NO：29)。
示例性的雙特異性抗體的序列如下：
雙特異性抗體1的第一鏈
SEQ ID NO：30；
雙特異性抗體1的第二鏈
SEQ ID NO：31。
註釋：序列中單下劃線為RANKL抗體可變區，雙下劃線為NGF抗體可變區，粗體為連接子，其餘序列為恆定區。
測試例
測試例1. 抗RANKL抗體親和力測試
用生物傳感芯片Protein A(GE，29127556)親和捕獲一定量的待測抗體，然後於芯片表面流經一系列濃度梯度的抗原：人RANKL蛋白(Sino Biological，11682-HNCH)，人NGF蛋白(Sino biological，11050-HNAC)，利用Biacore實時檢測反應信號從而獲得結合和解離曲線。在每個循環解離完成後，用pH 1.5的甘胺酸-鹽酸再生溶液(GE，BR-1003-54)將生物芯片洗淨再生。實驗數據用BIAevaluation version 4.1軟體以1：1模型進行擬合，從而得出親和力數值。結果如下表5所示。
結果顯示，改造後的抗體D75H的親和力比Denosumab抗體提高了6倍以上。
測試例2：抗RANKL抗體阻斷RANKL與RANK結合的能力檢測
藉由ELISA的方法檢測抗體阻斷配體和受體結合的活性。用pH7.4的PBS(源培生物，B320)緩衝液將人RANK蛋白稀釋至2μg/mL，以100μL/孔的體積加入96孔酶標板(Corning，3590)中，4℃過夜孵育。棄去液體後，每孔加入200μL 1% Casein封閉液(Thermo，37528)進行封閉，37℃孵育2小時。封閉結束後，棄去封閉液，並用PBST緩衝液(pH7.4 PBS含0.1% tween-20)洗板3次後備用。將固定濃度的生物素(Biotin)標記的人RANKL蛋白(Sino Biological，11682-HNCH)與梯度稀釋的抗體混合後37℃預孵育30分鐘後加入封閉好的酶標板中，37℃孵育1.5小時。孵育結束後用PBST洗板3次，每孔加入100μL鏈黴親和素-HRP(Invitrogen，434323，1：4000稀釋)，37℃孵育1小時。去上清，用PBST洗板3次後每孔加入100μL TMB顯色受質(KPL，5120-0077)，室溫孵育10至15分鐘。每孔加入50μL 1M H2SO4終止反應，用酶標儀讀取在450nm處的吸收值，用軟體擬合出抑制配體和受體結合的曲線，計算出IC50值。結果見下表6。
結果顯示，抗RANKL抗體D75H可阻斷RANKL與RANK結合，其阻斷活性優於Denosumab抗體。
測試例3：ELISA檢測雙特異性抗體與不同種屬抗原的結合活性
用ELISA方法檢測本揭露的雙特異性抗體與人RANKL(Sino biological，11682-HNCH)、猴RANKL(Sino Biological，90301-C01H)、鼠RANKL(R&D Systems，462-TR/CF)和人NGF(猴NGF序列與人NGF完全相同)(Sino biological，11050-HNAC)、鼠NGF(Sino Biological，50385-MNAC)的結合活性，方法如下：
用pH 7.4的PBS緩衝液(源培生物，B320)將抗原稀釋至1μg/mL，以100μL/孔的體積加入96孔酶標板(Corning，9018)中，於4℃過夜。棄去液體後，加入用PBS稀釋的5%脫脂牛奶(BD，232100)封閉液300μL/孔，37℃孵育2小時進行封閉。封閉結束後，棄去封閉液，並用PBST緩衝液(pH 7.4 PBS含0.1% tween-20)洗板3次後，每孔加入100μL用樣品稀釋液(pH 7.4 PBS含1% BSA)稀釋的不同濃度的雙特異性抗體，放於37℃恆溫箱孵育1小時。孵育結束後用PBST洗板3次，每孔加入100μL用樣品稀釋液稀釋的HRP標記的抗人Fc二抗(Abcam，ab97225)，37℃孵育1小時。用PBST洗板3次後，每孔加入100μL TMB顯色受質(KPL，5120-0077)，於室溫孵育10至15min，每孔加入50μL 1M H2SO4終止反應，用酶標儀在450nm處讀取吸收值，計算雙特異性抗體結合抗原的EC50值，結果如下表7所示。
結果顯示，雙特異性抗體1對人RANKL和猴RANKL的結合活性都優於對照Denosumab抗體。但雙特異性抗體1和Denosumab都不與鼠RANKL交叉結合。雙特異性抗體1對人NGF和鼠NGF的結合活性均明顯的弱於Tanezumab，表明本揭露的雙特異性抗體1成功的降低了Tanezumab端(特異性結合NGF的第二抗原結合域)的結合活性。
測試例4：雙特異性抗體親和力測試
用生物傳感芯片Protein A(GE，29127556)親和捕獲一定量的待測抗體，然後於芯片表面流經一系列濃度梯度的抗原：人RANKL蛋白(Sino Biological，11682-HNCH)，人NGF蛋白(Sino biological，11050-HNAC)，利用Biacore實時檢測反應信號從而獲得結合和解離曲線。在每個循環解離完成後，用pH 1.5的甘胺酸-鹽酸再生溶液(GE，BR-1003-54)將生物芯片洗淨再生。實驗數據用BIAevaluation version 4.1軟體以1：1模型進行擬合，從而得出親和力數值。結果如下表8所示。
結果顯示，雙特異性抗體1對人RANKL的親和力是Denosumab的3.8倍，雙特異性抗體1對人NGF的親和力顯著低於Tanezumab。
測試例5：配體和受體的阻斷實驗
藉由ELISA的方法檢測抗體對配體和受體的阻斷活性。用pH7.4的PBS(源培生物，B320)緩衝液將受體蛋白(RANK或TrkA)稀釋至2μg/mL，以100μL/孔的體積加入96孔酶標板(Corning，3590)中，4℃過夜孵育。棄去液體後，每孔加入200μL 1% Casein封閉液(Thermo，37528)進行封閉，37℃孵育2小時。封閉結束後，棄去封閉液，並用PBST緩衝液(pH7.4 PBS含0.1% tween-20)洗板3次後備用。將固定濃度的生物素(Biotin)標記的配體蛋白(RANKL或NGF)與梯度稀釋的抗體或融合蛋白混合後37℃預孵育30分鐘後加入封閉好的酶標板中，37℃孵育1.5小時。孵育結束後用PBST洗板3次，每孔加入100μL streptavidin-HRP(Invitrogen，434323，1：4000稀釋)，37℃孵育1小時。去上清，用PBST洗板3次後每孔加入100μL TMB顯色受質(KPL，5120-0077)，室溫孵育10至15分鐘，每孔加入50μL 1M H2SO4終止反應，用酶標儀讀取在450
nm處的吸收值，用軟體擬合出抑制配體和受體結合的曲線，計算出IC50值。
實驗中所用配體和受體蛋白信息如下：人RANKL蛋白(Sino Biological，11682-HNCH)，人RANK蛋白(Sino Biological，16078-H02H)，人TrkA蛋白(Sino Biological，11073-H03H)，人NGF蛋白(Sino biological，11050-HNAC)。
實驗結果如下表9所示。
結果顯示，雙特異性抗體1對RANKL的阻斷活性優於Denosumab，對NGF的阻斷活性顯著地弱於Tanezumab。這表明藉由降低雙特異性抗體1 NGF端的結合活性，也顯著降低了其對NGF的阻斷活性。
測試例6：破骨細胞分化實驗
RANKL的主要功能是促進破骨細胞的分化和成熟，因此藉由破骨細胞分化實驗可以測試抗體對RANKL的抑制活性。實驗方法如下：
將Raw264.7細胞(ECACC，91062702)鋪在96孔細胞培養板(Corning，3599)中，37℃培養箱中過夜培養。第二天，在96孔細胞板
中加入固定濃度的人RANKL蛋白(Sino Biological，11682-HNCH)和梯度稀釋的待測雙特異性抗體，37℃培養4天。將96孔板取出，除去上清液，每孔加入100μL細胞裂解液(碧雲天，P0013J)，吹打混勻後將細胞裂解液轉移至離心管中，冰上放置10分鐘，離心取上清液。參考抗酒石酸酸性磷酸酶檢測試劑盒(碧雲天，P0332)中的方法，取40μL待測樣本加40μL顯色受質和5μL酒石酸，混合均勻，置於37℃培養箱中孵育10min，加入160μL終止液，用酶標儀檢測OD 405nm的數值，用軟體對數據進行擬合獲得IC50值。實驗結果如下表10所示。
結果顯示，雙特異性抗體1抑制破骨細胞分化的活性是Denosumab的3.3倍以上。
測試例7：TF-1細胞增殖實驗
NGF在體外可以促進TF-1細胞的增殖，因此藉由TF-1細胞增殖實驗評價抗體對NGF的抑制活性。實驗方法如下：
用無GM-CSF的1640培養基(Gibco，22400-105)重新懸浮TF-1細胞(ATCC，CRL-2003)並鋪在96孔細胞培養板(Corning，3903)中，37℃培養箱中過夜培養。第二天在96孔細胞板中加入固定濃度的人NGF蛋白(Sino biological，11050-HNAC)和梯度稀釋的待測抗體，37℃培養箱
中培養72小時。取出細胞培養板，每孔加入50μL Cell-titer Glo(Promega，G755B)溶液，輕輕晃動混勻10分鐘，室溫靜置10分鐘，用PE Victor 3檢測生物發光信號。用軟體對數據進行擬合獲得IC50值。實驗結果如下表11所示。
結果顯示，雙特異性抗體1依然可以抑制TF-1細胞增殖，其中Tanezumab抑制活性是雙特異性抗體1的約4.2倍，說明雙特異性抗體1顯著降低了NGF端的活性。
因此，在體外活性與給藥劑量具有相關性的前提下，我們預期雙特異性抗體1的RANKL端的給藥劑量可以降低到40mg左右，依然可以保持RANKL端的體內藥效；而NGF端的給藥劑量可以提升到80mg左右，依然可以保持較好的安全性。此外，目前臨床中針對NGF的抗體Tanezumab的給藥週期是抗RANKL抗體Denosumab的2倍，因此本揭露中示例性的雙特異性抗體1可以使兩個靶點的給藥劑量達到平衡。
測試例8：骨轉移動物模型體內藥效
用骨轉移動物模型來評價抗體的止痛和骨保護效果。
模型的構建方法為：雄性C57 BL/6小鼠，SPF級，購自常州卡文斯實驗動物有限責任公司。於實驗室環境適應性飼養，給予12/12小
時光/暗週期調節，溫度23±1℃，濕度40至50%，動物均給予標準滅菌鼠飼料，自由進食飲水。小鼠體重達到25g左右開始造模。
用1%巴比妥鈉腹腔注射麻醉小鼠後備皮，把小鼠放在加熱墊上，用眼科剪在左後肢膝蓋外側皮膚上平行於股骨方向切開1釐米，暴露出肌肉，鈍性分離皮膚和肌層。用眼科剪刀以結締組織線為導向，在股直肌和股內側肌之間切開，用彎鑷將股直肌和髕骨移至膝關節內側，暴露股骨髁且不要切斷髕骨韌帶。用直徑0.45mm的針頭在踝間窩處股骨頂部至中部開孔，進入髓內間隙1至1.5cm打開注射通道。用Hamilton微量注射器(50μL，型號Model 1705 RN SYR，26號針頭，型號ga26/51mm/pst3，貨號7768-02)從開孔處插入骨髓腔並緩慢注射10μL(5×104)LLC1細胞(ATCC，CRL-1642)。推注完成後拔出注射器針頭，將腿拉直並用彎鑷將髕骨與韌帶複位，將肌肉恢復原狀，灑上抗生素粉末，再用自動傷口夾(Roboz，Reflex 7 Clip 7mm)縫合外皮。術後動物儘量不多於三隻一籠飼養，七天後取下傷口夾。假手術組(Sham)操作同上，於骨髓腔注射相同體積的PBS；空白組正常飼養不進行任何處理。造模7天後開始給藥，每5天給藥一次，總共給藥3次，分別在第14天(或第15天)和第21天對小鼠的疼痛行為進行統計和腿骨損傷進行評分。
疼痛行為統計方法：動物被放置在四週為有機玻璃，下面是鐵絲網格的地板上，先適應30分鐘(直到動物在盒子裡的探索和主要梳理活動停止)，然後觀察它們的運動情況，並評估5分鐘內出現的躲避患肢疼痛的行為，用秒表測定時長。
躲避疼痛的行為被定義為：
(1)完整的保護(行走時抬起患肢，不落地負重)；
(2)患肢五指蜷縮，會戳穿網格(正常鼠的四肢應為五指伸展，平攤在網格上，用前腳掌發力支撐。腫瘤骨轉移小鼠的患肢會五指蜷縮，如此時能用後腳跟著地支撐，則認為疼痛較輕，不計入測定時間，如全腳掌均不與網格接觸或戳穿網格，則計入測定時間)；
(3)舔舐患側肢體；
(4)零星的單腳跳躍；
(5)單側後肢的站立(兩前肢抬起的情況下)。
骨損傷評分方法：
小心剝取俯臥位左側股骨，採用MX-20 digital cabinet X-ray system(Faxitron/Bioptics)檢測骨破壞情況，由一位固定的專業人士對骨損傷進行評分。
評分標準如下：
0-相對正常，1-輕微-局部損傷，2-中度-局部損傷，3-中度-多處損傷，4-重度-迷漫性損傷。對股骨遠端和股骨近端分別評分後相加，骨破壞最嚴重時計為4+4=8分。
1. RANLK拮抗劑和NGF拮抗劑對止痛和骨保護的效果測試
由於Denosumab對鼠RANKL沒有交叉結合活性，因此我們利用鼠RANKL抗體AMR2與Tanezumab聯用，評估兩種抗體聯用的體內藥效是否優於一種抗體。
AMR2抗體的可變區序列來源於WO2013176469A1，將可變區重輕鏈序列分別與人IgG4和人λ恆定區融合構建成全長抗體AMR2。AMR2的相關序列如下：
AMR2重鏈可變區：
SEQ ID NO：38；
AMR2輕鏈可變區：
SEQ ID NO：39；
AMR2重鏈
SEQ ID NO：40；
AMR2輕鏈
SEQ ID NO：41。
分組及給藥量如下表13所示：
實驗結果如下圖2A至圖2D所示。
小鼠的疼痛行為統計結果表明，在第14天，與陰性組相比，三個給藥組都顯示出了顯著的止痛效果，其中聯合給藥組的止痛效果要強於單抗組。在第21天，只有聯合給藥組顯示出了顯著的止痛效果，兩個單抗組雖然也表現出了一定的止痛效果，但跟陰性組相比沒有顯示出統計學差異(vs vehicle：*P<0.05，** P<0.01，*** P<0.0001)。
骨損傷的評分結果表明，在第14天，聯合給藥組表現出了一定的骨保護效果。在第21天，聯合給藥組顯示出了顯著的骨保護效果。綜合以上實驗結果表明，聯合給藥組在止痛和骨保護兩個方面都顯示出了藥效。因此，發明人之後進一步驗證了本揭露的雙特異性抗體分子在體內的藥效。
2. 雙特異性抗體NGF端體內藥效的評價
由於雙特異性抗體1的NGF端的體外活性與NGF單抗Tanezumab相比，降低了4倍左右，因此，藉由該藥效實驗確定雙特異性抗體1的NGF端在小鼠體內是否依然具有藥效。實驗分組如下表所示：
實驗結果見圖3A至圖3B所示。
結果顯示，給藥後第14天和21天，與陰性組相比，雙特異性抗體1都顯示出了顯著的止痛效果，說明雙特異性抗體1的NGF端依然具有顯著的藥效。
3. 雙特異性抗體的體內藥效評價
用人RANKL轉基因鼠(購自百奧賽圖)構建骨轉移動物模型，以評價雙特異性抗體的體內藥效。實驗分組如下表15所示：
實驗結果見圖4A至圖4D所示。
結果顯示，雙特異性抗體1顯示出了明顯的止痛和骨保護效果。第15天和第21天，雙特異性抗體1的高劑量組都顯示出了顯著的止痛效果，並且高低劑量組都顯示出對骨損傷具有明顯的保護效果。
測試例9：大鼠PK測試
用SD大鼠進行體內藥物代謝動力學測試。雄性SD大鼠(浙江維通利華實驗動物技術有限公司)分組，每組4隻，靜脈注射給藥，雙特異性抗體1的劑量為4mg/kg，給藥組於給藥前及給藥後5分鐘、8小時、24小時、48小時、84小時、9天、10天、14天、21天、28天採集全血0.2mL，不加抗凝。取血後在4℃放置30分鐘，1000g離心15分鐘，取上層血清置於EP管中，於-80℃保存。
用ELISA法檢測血清中的血藥濃度，用Winnolin軟體計算待測抗體的藥物代謝動力學參數，檢測結果如下所示：
結果顯示，雙特異性抗體1在大鼠中的PK表現很好，RANKL和NGF兩端的半衰期比較接近，分別為15.09天和14.3天。
製備實施例-抗RANKL-NGF雙特異性抗體製劑
示例性抗體醫藥組成物(製劑)製備工藝
第一步：RANKL-NGF雙特異性抗體與穩定劑配製成含該抗體的製劑原液，經0.22μm濾芯除菌過濾，收集濾液。
第二步：調節裝量(目標裝量為1.0mL/瓶)，選用西林瓶進行灌裝，分別於灌裝開始、灌裝中間、灌裝結束時取樣檢測裝量差異。
第三步：開啟軋蓋機，加鋁蓋，進行軋蓋。
第四步：目檢，確認產品無裝量不準、外觀不良等缺陷。打印紙盒標簽，折疊紙盒，裝盒，貼紙盒標簽。
外觀：
採用目視法，將樣品瓶擦拭乾淨，在1000~1500lx的光照強度下，分別於澄明度檢測儀白背景和黑背景下觀察樣品顏色、澄清度和可見異物。
外觀檢測儀器：精拓儀器YB-2A澄明度檢測儀。
熔解溫度(Tm)和聚集溫度(Tagg)：
Tm為蛋白質在升溫過程中，50%組分變性時所對應的溫度；Tagg為蛋白在升溫過程中發生聚集時對應的溫度。將樣品加載到Uni管中，以25-95℃的熱升溫運行測定。
Tm和Taag測定儀器：Uncle，儀器廠家為Unchained。
SEC分子排阻色譜法：
根據凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關係而對溶質進行分離的分析方法。
SEC%(SEC單體含量百分比)=A單體/A總×100%(A單體為樣品中主峰單體的峰面積，A總為所有峰面積之和)。△SEC%=穩定性實驗後製劑的SEC%-穩定性實驗前製劑的SEC%。
SEC測定用儀器：安捷倫HPLC 1260。
柱子：Tosoh，TSKgel G3000SWXL(7.8mm×30cm,5μm)。
NR-CE毛細管凝膠電泳：
將凝膠移到毛細管中作為支持介質進行的一種電泳，並在一定的電壓下根據樣品分子量的大小進行分離的方法。
NR-CE%(非還原CE純度百分比)=A主峰/A總×100%(A主峰為樣品中主峰的峰面積，A總為所有峰面積之和。)△NR-CE%=穩定性實驗後製劑的NR-CE%-穩定性實驗前製劑的NR-CE%。
CE測定用儀器：Beckman毛細管電泳儀，型號PA800 plus。
icIEF成像毛細管等電聚焦電泳：
以毛細管為分離通道，在毛細管兩端加上直流電壓，毛細管內兩性電解質溶液形成一定範圍的pH梯度，各組分依據所帶電荷差異遷移至各自等電點，聚焦成很窄的區段，以此實現組分的分離。
icIEF%(主峰含量百分比)=A主峰峰面積/A總面積×100%(A總面積為酸性峰、主峰和鹼性峰面積之和)。△icIEF%=穩定性實驗後製劑的icIEF%-穩定性實驗前製劑的icIEF%。
icIEF測定用儀器：Protein Simple，型號Maurice。
以下製劑的製備實施例中所採用的RANKL-NGF雙特異性抗體為如上所述的雙特異性抗體1，有時簡稱“抗體”。
製備實施例1. RANKL-NGF雙特異性抗體製劑pH篩選
選擇10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝體系，設計4.2、4.6、5.0、5.4、5.8、6.2、6.6、7.0、7.4、7.8共10個不同pH，製備RANKL-NGF雙特異性抗體濃度為20mg/mL的共10組處方抗體製劑，測定樣品的熔解溫度(Tm)，考察抗體在不同pH條件的構象穩定性，測定樣品的聚集溫度(Tagg)，考察抗體在不同pH條件的膠體穩定性。同時藉由測定樣品在40℃條件下外觀、SEC、NRCE等，考察抗體在不同pH條件下的熱穩定性。
1)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH4.2；
2)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH4.6；
3)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH5.0；
4)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH5.4；
5)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH5.8；
6)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH6.2；
7)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH6.6；
8)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH7.0；
9)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH7.4；
10)10mM檸檬酸-磷酸氫二鈉，pH7.8。
結果顯示：RANKL-NGF雙特異性抗體在pH4.6~5.4條件下Tm值和Tagg值較高，表明該抗體在該pH範圍體系中構象穩定性和膠體穩定性較好；在高溫(40℃)條件考察1週後，pH4.2~5.4範圍處方的外觀出現少量可見蛋白顆粒，而在其它pH條件下則出現大量蛋白顆粒。純度方面：除pH 4.2、7.4和7.8體系中的蛋白經40℃孵育7天後出現明顯聚集，pH7.0出現少量聚集外，其餘pH體系中的蛋白均無明顯聚集且組間無顯著差異。NRCE結果顯示，pH 4.6-5.8體系中的蛋白在T0時碎片含量相對較低，其中pH5.0~5.8在經40℃孵育7天後碎片比例低於4%，綜合上述樣品的分子特性、外觀和SEC結果可得，抗體在pH 4.6-5.4體系中表現最好，故選擇中間值pH 5.0作為較佳pH條件以進行後續研究。
製備實施例2. RANKL-NGF雙特異性抗體製劑緩衝體系篩選
選擇pH4.8和pH5.2的10mM醋酸-醋酸鈉、pH5.2的10mM組胺酸-鹽酸組胺酸三組緩衝體系，以75mg/mL蔗糖作為穩定劑，RANKL-NGF雙特異性抗體濃度為20mg/mL，製備共3組處方樣品。藉由檢測樣品外觀、SEC-HPLC、NRCE和iCIEF純度等，考察3組處方在高溫(40℃)放置2週、25℃放置2週和4週、2~8℃放置2週和4週、重複凍融(-35℃和室溫)循環3次和5次等條件下的穩定性，以篩選最適緩衝體系。
1)10mM醋酸-醋酸鈉，pH4.8，75mg/mL蔗糖，20mg/mL抗體；
2)10mM醋酸-醋酸鈉，pH5.2，75mg/mL蔗糖，20mg/mL抗體；
3)10mM組胺酸-鹽酸組胺酸，pH5.2，75mg/mL蔗糖，20mg/mL抗體。
結果顯示：25℃和40℃孵育2週，10mM醋酸-醋酸鈉pH5.2體系中的蛋白呈乳光，10mM醋酸-醋酸鈉pH4.8體系中的蛋白呈微乳光，兩個處方均出現少量蛋白顆粒；10mM組胺酸-鹽酸組胺酸pH5.2體系中的蛋白經40℃孵育2週後出現大量蛋白顆粒，從外觀結果來看，蛋白在10mM醋酸-醋酸鈉緩衝體系中的穩定性更好。純度方面：各組處方在不同穩定性條件下的聚體、單體、碎片比例與T0相比無顯著變化且組間無差異，表明SEC-HPLC純度穩定性均較好；在高溫條件下，與醋酸鹽緩衝體系相比，10mM組胺酸-鹽酸組胺酸體系NRCE碎片增加更明顯；iCIEF檢測結果顯
示各處方無明顯差異。綜上，選擇10mM醋酸-醋酸鈉緩衝體系進行後續處方開發。
製備實施例3. RANKL-NGF雙特異性抗體製劑濃度和穩定劑篩選
為保證緩衝體系更好的pH緩衝效果，將緩衝體系濃度提高至20mM。選擇選擇20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0作為緩衝體系，選擇0.2mg/mL聚山梨酯80作為表面活性劑，選擇75mg/mL蔗糖或240mM脯胺酸或0.8%(w/v)氯化鈉作為穩定劑，抗體濃度分別為20mg/mL、50mg/mL、70mg/mL，共製備5組處方樣品，考察樣品在振盪(300rpm/25℃)、重複凍融(-35℃/室溫)、高溫(40℃)、25℃和光照條件下的穩定性。
1)20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0，75mg/mL蔗糖，0.2mg/mL聚山梨酯80，50mg/mL抗體；
2)20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0，240mM脯胺酸，0.2mg/mL聚山梨酯80，50mg/mL抗體；
3)20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0，0.8%(w/v)氯化鈉，0.2mg/mL聚山梨酯80，50mg/mL抗體；
4)20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0，75mg/mL蔗糖，0.2mg/mL聚山梨酯80，20mg/mL抗體；
5)20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0，75mg/mL蔗糖，0.2mg/mL聚山梨酯80，70mg/mL抗體。
結果顯示：與其他處方相比，處方3乳光略重，外觀略差；純度方面：各組處方在振盪、光照、重複凍融和25℃考察條件下，SEC-HPLC聚體、NRCE碎片含量均無明顯變化。在高溫40℃條件下，處方3 SEC-HPLC聚體含量有明顯增加，表明該處方穩定性較差，處方2 NRCE碎片含量增長較少，表明脯胺酸可作為穩定劑，明顯改善抗體穩定性，且抗體濃度越高，NRCE純度越高(50mg/mL和70mg/mL處方差異相對較
小)。各組處方在振盪、重複凍融和25℃考察條件下，iCIEF酸性峰、中性峰和鹼性峰均無顯著變化，但在高溫40℃ 4週條件下，酸性峰均有所增加，處方2主峰含量相對最高，且50mg/mL和70mg/mL處方差異相對較小。綜合以上結果，選擇脯胺酸作為穩定劑，抗體濃度為70mg/mL，pH 5.0。
製備實施例4. RANKL-NGF雙特異性抗體製劑表面活性劑濃度篩選
選擇20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0緩衝體系，以240mM脯胺酸為穩定劑，RANKL-NGF雙特異性抗體濃度為70mg/mL，製備聚山梨酯80濃度分別為0.1mg/mL、0.2mg/mL和0.4mg/mL的3組處方樣品，考察樣品在振盪(300rpm/25℃)、重複凍融(-35℃/室溫)、高溫(40℃)條件下的穩定性。
1)20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，70mg/mL抗體；
2)20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0，240mM脯胺酸，0.2mg/mL聚山梨酯80，70mg/mL抗體；
3)20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0，240mM脯胺酸，0.4mg/mL聚山梨酯80，70mg/mL抗體。
結果顯示：隨著聚山梨酯80濃度升高，聚體、碎片和酸鹼峰含量均呈增加趨勢，聚山梨酯80濃度為0.4mg/mL時，抗體穩定性相對較差。因此，聚山梨酯80濃度較佳為0.1mg/mL。
製備實施例5. RANKL-NGF雙特異性抗體較佳處方穩定性研究
選擇20mM醋酸-醋酸鈉，pH5.0的緩衝體系，以240mM脯胺酸為穩定劑，RANKL-NGF雙特異性抗體濃度為70mg/mL，製備聚山
梨酯80濃度為0.1mg/mL的製劑，考察製劑在加速條件(25±2℃/60% RH±5RH)和長期條件下(2~8℃)的穩定性。
結果顯示，在加速條件(25±2℃/60%RH±5RH)儲存6個月，iCIEF主峰下降約12.7%，其它檢測項目無明顯變化；而長期條件下(2~8℃)儲存12個月，所有檢測項目與0時相比均無明顯變化，表明RANKL-NGF雙特異性抗體製劑長期穩定性良好。
製備實施例6. 可選擇製劑配方
本揭露提供“50~77mg/mL RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉，pH4.6~5.4”製劑配方的RANKL-NGF雙特異性抗體藥物製劑，包含但不限於：
(1)70mg/mL RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉pH4.6；
(2)70mg/mL RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉pH5.0；
(3)70mg/mL RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉pH5.4；
(4)50mg/ml RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉pH4.6；
(5)50mg/ml RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉pH5.0；
(6)50mg/ml RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉pH5.4；
(7)77mg/ml RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉pH4.6；
(8)77mg/ml RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉pH5.0；
(9)77mg/ml RANKL-NGF雙特異性抗體，240mM脯胺酸，0.1mg/mL聚山梨酯80，20mM醋酸-醋酸鈉pH5.4。
實驗結果表明，上述製劑配方的RANKL-NGF雙特異性抗體製劑均具有良好的穩定性，可應用於RANKL-NGF雙特異性抗體藥物的配製。
TW202434288A_112144352_SEQL.xml
Claims (18)
- 一種醫藥組成物，包含抗RANKL-NGF雙特異性抗體和緩衝劑，其中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體包含特異性結合RANKL的第一抗原結合結構域和特異性結合NGF的第二抗原結合結構域；該緩衝劑為醋酸鹽緩衝劑、組胺酸緩衝劑或磷酸鹽緩衝劑；較佳地，該緩衝劑為醋酸-醋酸鈉緩衝劑、組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝劑；更佳地，該緩衝劑為醋酸-醋酸鈉緩衝劑或組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；最佳地，該緩衝劑為醋酸-醋酸鈉緩衝劑。
- 如請求項1所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物的pH為4.2至7.0；較佳地，該醫藥組成物的pH為4.6至5.4；更佳地，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
- 如請求項1或2所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至150mg/mL；較佳地，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為10mg/mL至80mg/mL；更佳地，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體的濃度為63mg/mL至77mg/mL。
- 如請求項1至3中任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物包含表面活性劑；較佳地，該表面活性劑為聚山梨酯或泊洛沙姆；更佳地，該表面活性劑為聚山梨酯20或聚山梨酯80；最佳地，該表面活性劑為聚山梨酯80。
- 如請求項4所述的醫藥組成物，其中該表面活性劑的濃度為0.01mg/mL至1.0mg/mL；較佳地，該表面活性劑的濃度為0.01mg/mL至0.6mg/mL；更佳地，該表面活性劑的濃度為0.01mg/mL至0.2mg/mL；最佳地，該表面活性劑的濃度為0.05mg/mL至0.15mg/mL。
- 如請求項1至5中任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物包含穩定劑；較佳地，該穩定劑選自由脯胺酸、蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、精胺酸、甘胺酸和氯化鈉組成的組中的一種或更多種；更佳地，該穩定劑為脯胺酸、蔗糖或氯化鈉；最佳地，該穩定劑為脯胺酸。
- 如請求項6所述的醫藥組成物，其中該穩定劑的濃度為1mM至300mM；較佳地，該穩定劑的濃度為25mM至290mM；更佳地，該穩定劑的濃度為210mM至270mM。
- 如請求項1至7中任一項所述的醫藥組成物，其中該緩衝劑的濃度為5mM至100mM；較佳地，該緩衝劑的濃度為10mM至50mM；更佳地，該緩衝劑的濃度為10mM至30mM；最佳地，該緩衝劑的濃度為16mM至24mM。
- 如請求項1至8任一項所述的醫藥組成物，其中，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體包含：至少一個特異性結合RANKL的第一抗原結合域，和至少一個特異性結合NGF的第二抗原結合域；較佳地，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體包含：兩個特異性結合RANKL的第一抗原結合域，和兩個特異性結合NGF的第二抗原結合域；更佳地，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體具有如圖1所示的結構。
- 如請求項9所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合RANKL的第一抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，該重鏈可變區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；和該輕鏈可變區包含：LCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列；較佳地，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合RANKL的第一抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；和/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列。
- 如請求項9或10所述的醫藥組成物，其中該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合NGF的第二抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，該重鏈可變區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；和該輕鏈可變區包含：LCDR1，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；較佳地，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合NGF的第二抗原結合域包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；和/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列；更佳地，該抗RANKL-NGF雙特異性抗體中，特異性結合NGF的第二抗原結合結構域包含重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列，該輕鏈包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列。
- 如請求項1至11中任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：(a)1mg/mL至150mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，(c)1mM至300mM的穩定劑，和(d)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.2至7.0；較佳地，該醫藥組成物包含如下組分：(a)10mg/mL至80mg/mL的該抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至0.6mg/mL的聚山梨酯20或聚山梨酯80，(c)25mM至290mM的脯胺酸，和(d)10mM至50mM的醋酸鹽緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.6至5.4；更佳地，該醫藥組成物包含如下組分：(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.01mg/mL至0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)210mM至270mM的脯胺酸，和(d)10mM至30mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2；最佳地，該醫藥組成物包含如下組分：(a)63mg/mL至77mg/mL的抗RANKL-NGF雙特異性抗體，(b)0.05mg/mL至0.15mg/mL的聚山梨酯80，(c)210mM至270mM的脯胺酸，和(d)16mM至24mM的醋酸-醋酸鈉緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
- 一種凍乾製劑，該凍乾製劑複溶後可形成如請求項1至12中任一項所述的醫藥組成物。
- 一種製備凍乾製劑的方法，其中包括將如請求項1至12中任一項所述的醫藥組成物進行冷凍乾燥的步驟。
- 一種凍乾製劑，該製劑藉由如請求項14所述的方法獲得的。
- 如請求項1至12中任一項所述的醫藥組成物，其為皮下注射製劑、靜脈注射製劑、腹腔注射製劑或肌肉注射製劑；較佳為皮下注射製劑。
- 一種治療或預防疾病的方法，該方法包括給予受試者治療有效量的如請求項1至12中任一項所述的醫藥組成物，或如請求項13或15所述的凍乾製劑；較佳地，該疾病為疼痛、關節僵硬或骨損失；更佳地，該疼痛選自：骨關節疼痛、類風濕性關節炎疼痛、痛風、骨癌痛、骨折疼痛、手術後疼痛、癌症疼痛、痛性膀胱綜合症、肌肉骨骼痛、前列腺炎、盆腔疼痛、間質性膀胱炎、下背痛、痛經、骨骼疾病相關的疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹後遺神經痛、帶狀皰疹感染、坐骨神經痛、偏頭痛、糖尿病神經病變和外周神經相關的疼痛；其中，該骨損失與選自下組的至少一種狀況相關：骨質疏鬆症、佩吉特氏病、骨髓炎、高鈣血症、骨質稀少、骨質疏鬆、骨壞死、骨損傷、骨吸收、骨發育不全、炎症、自身免疫疾病、腸炎、類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、克羅恩病、牙周骨吸收、溶骨性轉移和癌症。
- 如請求項17所述的方法，其中該癌症選自乳腺癌、前列腺癌、甲狀腺癌、腎癌、肺癌、食道癌、直腸癌、膀胱癌、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、胃腸道癌、黑色素瘤、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、淋巴瘤、非小細胞肺癌、骨腫瘤和何傑金氏病。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2022114382398 | 2022-11-16 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202434288A true TW202434288A (zh) | 2024-09-01 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6265978B2 (ja) | 抗体製剤 | |
| CN114616249B (zh) | 含有抗pd-l1抗体的稳定制剂 | |
| CN111433223B (zh) | 抗甲状腺素运载蛋白单克隆抗体的冻干制剂 | |
| CN114929278A (zh) | 抗ccr8抗体及其用途 | |
| CN111867631A (zh) | 治疗眼部疾病的方法 | |
| EA031069B1 (ru) | АНТИТЕЛА ПРОТИВ ИНТЕГРИНОВ αVβ6 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ | |
| KR20090087908A (ko) | 신생물의 치료를 위한 조성물 및 방법 | |
| BR112021010789A2 (pt) | Anticorpos anti-il-36r para o tratamento de pustulose palmoplantar | |
| CN113797333A (zh) | 一种新型冠状病毒抗体的药物组合物及其用途 | |
| TW202220702A (zh) | 一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途 | |
| CN113271962A (zh) | 利用靶向TGF-β抑制的三阴性乳腺癌的治疗 | |
| JP2024037881A (ja) | Ｃ末端抗体改変体 | |
| KR20200034748A (ko) | Sost 항체 약학적 조성물 및 그의 용도 | |
| US20240309104A1 (en) | Compositions comprising humanized antibodies to tnf-like ligand 1a (tl1a) and uses thereof | |
| WO2024104409A1 (zh) | 一种含抗rankl-ngf双特异性抗体的药物组合物 | |
| TW202434288A (zh) | 一種含抗ｒａｎｋｌ－ｎｇｆ雙特異性抗體的醫藥組成物 | |
| TW202021620A (zh) | 一種cd40抗體藥物組合物及其用途 | |
| BR112021008057A2 (pt) | método para tratar câncer cervical, e, kit | |
| RU2745814C1 (ru) | Водная фармацевтическая композиция левилимаба и ее применение | |
| KR20230154300A (ko) | 수의학용 tnf 알파 및 ngf 항체 | |
| JP2023531416A (ja) | 安定な抗ｃｌｅｖｅｒ－１抗体製剤 | |
| CN116688115B (zh) | 一种PD-L1/TGF-β双功能融合蛋白制剂及其用途 | |
| CN113842456B (zh) | 一种抗人4-1bb的单克隆抗体制剂及其用途 | |
| WO2021209017A1 (zh) | 一种特异性结合cd137的制剂及其用途 | |
| WO2024109914A1 (zh) | 一种包含特异性结合hgfr和egfr的双特异性抗体的药物组合物 |