TW201713363A - 卡奇黴素構建體及使用方法 - Google Patents

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Abstract

本文中提供包含卡奇黴素之抗體藥物結合物(ADC)及使用其治療增殖性病症之方法。

Description

卡奇黴素構建體及使用方法 相關申請案之交叉引用
本申請案主張2015年4月21日提交之美國臨時申請案第62/150,693號之權益，該臨時申請案係出於所有目的以全文引用之方式併入在此。
本申請案大體上係關於包括與靶向劑連接之卡奇黴素(在本文中亦稱為卡奇黴素-連接子構建體)的新穎化合物。該靶向劑可為抗體，從而提供抗體藥物結合物(antibody drug conjugates,ADC)。ADC可用於例如癌症及其任何再發或轉移之治療、診斷或預防。
幹細胞及先驅細胞之分化及增殖為協調作用以便在器官發生、細胞修復及細胞替代期間支持組織生長之正常進行過程。該系統經嚴格調節以確保僅基於生物體之需要而產生適當信號。細胞增殖及分化正常僅在對於替代受損或死亡的細胞而言或對於生長而言有必要時發生。然而，許多因素可能觸發對此等過程之破環，包括各種信號傳遞化學物質之不足或過多、存在經改變之微環 境、基因突變或其組合。對正常細胞增殖及/或分化之破環可導致各種病症，包括增殖性疾病，諸如癌症。
癌症之習知治療性處理包括化學療法、放射療法及免疫療法。此等治療往往無效且手術切除未必能提供可行的臨床替代方案。在患者進行第一線治療且隨後復發之彼等情況下，當前照護標準之限制尤其明顯。在此種情況下，往往出現通常具有侵襲性且不可治癒之難治性腫瘤。許多實體腫瘤之總體存活率多年來基本上保持不變，此至少部分係由於用於預防復發、腫瘤再發及轉移之現存療法失效。因此仍非常需要開發對於增殖性疾病更具標靶性且更有效之療法。本發明解決此需要。
在第一態樣中，提供一種化合物，諸如抗體藥物結合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(I)：Ab-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]z3 (I)。
在式I之抗體藥物結合物中，Ab為靶向劑。W為連接基。M為可裂解部分。L3及L4獨立地為連接子(例如間隔基)。P為二硫鍵保護基。D為卡奇黴素或其類似物。符號z1、z2及z3獨立地為0至10之整數。在諸多實施例中，z3為1至10之整數。
在式I之一實施例中，提供一種化合物，諸如抗體藥物結合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(Ia)：
在式(Ia)化合物中，R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C。R1A、R1B、R1C、R1D及R1E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基；且鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基。符 號n1獨立地為整數0或4。符號v1獨立地為1或2。符號表示與式I中之P的連接點。
在式I之一實施例中，提供一種化合物，諸如抗體藥物結合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(II)：
在式(II)化合物中，Ab為靶向部分，諸如抗體。L3為鍵、-O-、-S-、-NR3B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2、-C(O)NR3B-、-NR3BC(O)-、-NR3BC(O)NH-、-NHC(O)NR3B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。L4為鍵、-O-、-S-、-NR4B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR4B-、-NR4BC(O)-、-NR4BC(O)NH-、-NHC(O)NR4B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、 -CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C。P為-O-、-S-、-NR2B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR2B-、-NR2BC(O)-、-NR2BC(O)NH-、-NHC(O)NR2B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。M為-O-、-S-、-NR5B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5B-、-NR5BC(O)-、-NR5BC(O)NH-、-NHC(O)NR5B-、-[NR5BC(R5E)(R5F)C(O)]n2-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或M1A-M1B-M1C。W為-O-、-S-、-NR6B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6B-、-NR6BC(O)-、-NR6BC(O)NH-、-NHC(O)NR6B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或W1A-W1B-W1C。M1A係鍵結於L3。M1C係鍵結於L4。M1A為鍵、-O-、-S-、-NR5AB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5AB-、-NR5ABC(O)-、-NR5ABC(O)NH-、-NHC(O)NR5AB-、-[NR5ABCR5AER5AFC(O)]n3-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經 取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。M1B為鍵、-O-、-S-、-NR5BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5BB-、-NR5BBC(O)-、-NR5BBC(O)NH-、-NHC(O)NR5BB-、-[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。M1C為鍵、-O-、-S-、-NR5CB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5CB-、-NR5CBC(O)-、-NR5CBC(O)NH-、-NHC(O)NR5CB-、-[NR5CBCR5CER5CFC(O)]n5-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。W1A係鍵結於Ab。W1C係鍵結於L3。W1A為鍵、-O-、-S-、-NR6BA-、-C(O)-、C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6BA-、-NR6BAC(O)-、-NR6BAC(O)NH-、-NHC(O)NR6BA-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。W1B為鍵、-O-、-S-、-NR6BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6BB-、-NR6BBC(O)-、-NR6BBC(O)NH-、-NHC(O)NR6BB-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基 或者經取代或未經取代之伸雜芳基。W1C為鍵、-O-、-S-、-NR6BC-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6BC-、-NR6BCC(O)-、-NR6BCC(O)NH-、-NHC(O)NR6BC-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。R1A、R1B、R1C、R1D、R1E、R2B、R3B、R4B、R5B、R5E、R5F、R5AB、R5AE、R5AF、R5BB、R5BE、R5BF、R5CB、R5CE、R5CF、R6B、R6BA、R6BB及R6BC獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基；且鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基。符號n1為0至4之整數。符號v1為1或2。符號n2、n3、n4及n5獨立地為1至10之整數。符號z1及z2獨立地為0至10之整數。符號z3獨立地為1至10之整數。
在另一態樣中，提供一種式(IV)化合物：
在式(IV)化合物中，L3為鍵、-O-、-S-、-NR3B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR3B-、-NR3BC(O)-、-NR3BC(O)NH-、-NHC(O)NR3B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。L4為鍵、-O-、-S-、-NR4B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR4B-、-NR4BC(O)-、-NR4BC(O)NH-、-NHC(O)NR4B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C。P為-O-、-S-、-NR2B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR2B-、-NR2BC(O)-、-NR2BC(O)NH-、-NHC(O)NR2B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。M為 -O-、-S-、-NR5B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5B-、-NR5BC(O)-、-NR5BC(O)NH-、-NHC(O)NR5B-、-[NR5BC(R5E)(R5F)C(O)]n2-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或M1A-M1B-M1C。W1為反應性部分、氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-N3、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R7E、-OR7A、-NR7BR7C、-C(O)OR7A、-C(O)NR7BR7C、-NO2、-SR7D、-SOn7R7B、-SOv7NR7BR7C、-NHNR7BR7C、-ONR7BR7C或-NHC(O)NHNR7BR7C。M1A係鍵結於L3。M1C係鍵結於L4。M1A為鍵、-O-、-S-、-NR5AB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5AB-、-NR5ABC(O)-、-NR5ABC(O)NH-、-NHC(O)NR5AB-、-[NR5ABCR5AER5AFC(O)]n3-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。M1B為鍵、-O-、-S-、-NR5BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5BB-、-NR5BBC(O)-、-NR5BBC(O)NH-、-NHC(O)NR5BB-、[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之 伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。M1C為鍵、-O-、-S-、-NR5CB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5CB-、-NR5CBC(O)-、-NR5CBC(O)NH-、-NHC(O)NR5CB-、-[NR5CBCR5CER5CFC(O)]n5-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。R1A、R1B、R1C、R1D、R1E、R2B、R3B、R4B、R5B、R5E、R5F、R5AB、R5AE、R5AF、R5BB、R5BE、R5BF、R5CB、R5CE、R5CF、R6B、R7A、R7B、R7C、R7D、R7E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基；且鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基。符號n1及n7獨立地為0至4之整數。符號n7及v7獨立地為1或2。符號n2、n3、n4及n5獨立地為1至10之整數。
在另一態樣中，提供一種製備抗體藥物結合物之方法。該方法包括使卡奇黴素構建體與抗體之胺基 酸(諸如半胱胺酸或離胺酸)接觸，該卡奇黴素構建體具有如本文中所定義之式W1-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D。W1為與諸如離胺酸側鏈或半胱胺酸側鏈之胺基酸具有反應性的官能基。M為可裂解部分。L3及L4獨立地為連接子。P為二硫鍵保護基。D為卡奇黴素或其類似物。符號z1及z2獨立地為0至10之整數。符號z3獨立地為1至10之整數。
本文中亦提供醫藥組合物。在一個態樣中為一種包括本文中所描述之化合物及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組合物。在另一態樣中為一種包括本文中所描述之抗體藥物結合物及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組合物。
本文中亦提供一種在有需要的個體中治療癌症之方法。該方法包括向該個體投與治療有效量之本文中所描述之醫藥組合物或化合物(例如抗體藥物結合物)。
第1圖顯示根據本發明製造之例示性卡奇黴素-連接子構建體的化學結構，其註釋顯示該構建體之某些組分。
第2A至2C圖提供說明本發明所揭示之卡奇黴素-連接子構建體有效裂解從而提供活性卡奇黴素之資料。
第3A至3D圖顯示卡奇黴素(第3A圖)及例示性卡奇黴素-連接子構建體(第3B至3D圖)在試管內有效殺死細胞，同時得到IC50值。
第4A及4B圖提供證實使用所揭示之程序使本發明之卡奇黴素-連接子構建體與例示性抗體有效結合的質譜資料。
第5圖顯示使用RP-HPLC測定之兩種例示性位點特異性抗體輕鏈及重鏈與兩種不同的卡奇黴素-連接子構建體結合的結合百分比。hSC17ss1-vc為在式4'中所指示之連接點與hSC17抗體連接的式4'；該抗體為經由半胱胺酸側鏈與結合物/分子之其餘部分連接的hSC17ss1(IgG抗體)。hSC17ss1-va為在式5'中所指示之連接點與hSC17抗體連接的式5'；該抗體為經由半胱胺酸側鏈與結合物/分子之其餘部分連接的hSC17ss1(IgG抗體)。hSC1ss1-vc為在式4'中所指示之連接點與hSC1抗體連接的式4'；該抗體為經由半胱胺酸側鏈與結合物/分子之其餘部分連接的hSC1ss1(IgG抗體)。
第6圖提供顯示使用HIC測定之使用本文中所揭示之程序結合之例示性位點特異性抗體構建體的DAR分佈的圖示。
第7A至7C圖說明包含卡奇黴素-vc連接子(第7A圖)、卡奇黴素-va連接子(第7B圖)或卡奇黴素-肟連接子(第7C圖)之例示性抗體藥物結合物在試管內殺死細胞的能力。
第8A至8C圖提供顯示本發明之例示性抗體藥物結合物可在活體內有效殺死腫瘤細胞的資料。hSC17ss1-ox為在式14'中所指示之連接點與hSC17抗體連 接的式14'；該抗體為經由半胱胺酸側鏈與結合物/分子之其餘部分連接的hSC17ss1(IgG抗體)。
第9圖提供顯示本發明之例示性抗體藥物結合物可在活體內有效殺死腫瘤細胞的資料。
第10圖提供顯示例示性抗體藥物結合物在食蟹獼猴中之藥物動力學資料。hSC27ss1-vc為在式4'中所指示之連接點與hSC27抗體連接的式4'；該抗體為經由半胱胺酸側鏈與結合物/分子之其餘部分連接的hSC27ss1(IgG抗體)。
本發明可以許多不同的形式實施。本文中揭示本發明之非限制性、說明性實施例，該等實施例例示本發明之原理。本文中所使用之任何章節標題僅出於組織之目的，而不應被視為限制所描述之標的物。一般而言，本文中所使用之命名法及以下所描述之細胞培養、分子遺傳學、有機化學及核酸化學以及雜交中之實驗程序為本領域所熟知且常用的。使用標準技術進行核酸及胜肽合成。一般而言，根據製造商之說明書來進行酶促反應及純化步驟。除非另作說明，否則出於本發明之目的，所有鑑別序列登錄號均可見於NCBI參考序列(Reference Sequence,RefSeq)資料庫及/或NCBI GenBank®檔案序列資料庫。本文中所使用之命名法及以下所描述之分析化學及有機合成中之實驗程序為本領域所熟知且常用的。使用標準技術或其修改方案進行化學合成及化學分析。
I. 定義
術語「可裂解部分」意欲意謂在所選標靶位點上進行裂解之部分。「可裂解部分」較佳地允許藉由使其自靶向劑裂解或分離來分離及/或活化卡奇黴素。可操作地定義，連接子(如以下所定義)較佳地藉由生理效應因子在標靶位點上使可裂解部分分枝而得以裂解。裂解可來自於任何過程，而無例如酶促、還原、pH值等限制。較佳地，可裂解部分經選擇且併入連接子中，以使得在所欲作用位點發生活化作用，該位點較佳為位於靶細胞(例如癌瘤細胞)或組織中或附近之位點。在所選實施例中，可裂解部分可包含胜肽鍵、腙部分、肟部分、酯鍵聯及二硫鍵聯。在尤佳實施例中，此種裂解為酶促裂解，其中例示性之酶促可裂解基團包括以天然胺基酸封端之天然胺基酸或胜肽序列，且併入連接子中。較佳地，所併入之可裂解部分為其中至少約10%卡奇黴素在投與24小時內得以活化及釋放，且更佳為25%得以釋放之彼等可裂解部分。
術語「多肽」、「胜肽」及「蛋白質」在本文中可互換，用於指胺基酸殘基之聚合物。該等術語適用於其中一或多個胺基酸殘基為相對應天然存在之胺基酸的人工化學模擬物的胺基酸聚合物，以及天然存在之胺基酸聚合物及非天然存在之胺基酸聚合物。此等術語亦涵蓋術語「抗體」。
術語「胺基酸」係指天然存在及合成之胺基酸，以及以類似於天然存在之胺基酸的方式起作用的胺 基酸類似物及胺基酸模擬物。天然存在之胺基酸為由基因密碼編碼之彼等胺基酸以及稍後經修飾之彼等胺基酸，例如羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸及O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物係指具有與天然存在之胺基酸相同的基本化學結構(亦即，與氫、羧基、胺基及R基團接合之α碳)的化合物，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。該等類似物具有經修飾之R基團(例如，正白胺酸)或經修飾之胜肽骨架，但保留與天然存在之胺基酸相同的基本化學結構。胺基酸模擬物係指具有與胺基酸之一般化學結構不同的結構但以類似於天然存在之胺基酸的方式起作用的化學化合物。術語「非天然胺基酸」意欲表示以上所描述之二十種天然存在之胺基酸的「D」立體化學形式。應進一步理解，術語非天然胺基酸包括天然胺基酸之同系物及天然胺基酸之經合成修飾形式。經合成修飾形式包括，但不限於，具有縮短或延長至多兩個碳原子之伸烷基鏈的胺基酸、包含視需要經取代之芳基的胺基酸，及包含鹵化基團、較佳地包含鹵化烷基及芳基之胺基酸。當連接於本發明之連接子或結合物時，胺基酸呈「胺基酸側鏈」形式，其中胺基酸之羧酸基已經酮(C(O))基置換。因而，舉例而言，丙胺酸側鏈為-C(O)-CH(NH2)-CH3，諸如此類。
「核酸」係指呈單股或雙股形式之去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。該術語涵蓋含有已知核苷酸類似物或經修飾主鏈殘基或鍵聯之核酸，其為合成、天然存在及非天然存在的，其具有與參考核酸類似之 結合性質且其係以類似於參考核苷酸之方式代謝。此種類似物之實例包括，但不限於，硫代磷酸酯、磷醯胺酯、甲基膦酸酯、手性甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、胜肽-核酸(peptide-nucleic acid,PNA)。
除非另外指示，否則特定核酸序列無疑亦涵蓋其經保守修飾之變異體(例如，簡併密碼子取代)及互補序列以及明確指示之序列。特定言之，簡併密碼子取代可藉由產生其中一或多個所選(或所有)密碼子之第三個位置經混合鹼基及/或去氧肌苷殘基取代的序列來達成。
「脂族」意謂具有指定數目之碳原子(例如，如在「C3脂族」、「C1-C5脂族」或「C1至C5脂族」中，後兩個詞組為具有1至5個碳原子之脂族部分的同義語)或在未明確指定碳原子數目之情況下具有1至4個碳原子(在不飽和脂族部分之情況下具有2至4個碳)的直鏈或支鏈、飽和或不飽和非芳族烴部分。
除非另外闡述，否則術語「烷基」本身或在作為另一取代基之一部分時，意指直鏈或支鏈或環狀烴基或其組合，其可為完全飽和、單不飽和或多不飽和的，並且可包括具有指定碳原子數之二價及多價基團(亦即，C1-C10意謂一至十個碳)。除非另外指出，否則術語「烷基」亦意在包括以下更詳細定義之彼等烷基衍生物，諸如「雜烷基」。烷基，僅限於烴基，稱為「均烷基(homoalkyl)」。在諸多實施例中，烷基不包括環狀烴基。在諸多實施例中，如本文中所使用之術語「烷基」係指具有一至二十個碳原 子之飽和直鏈或分支鏈單價烴基。飽和烴基之實例包括，但不限於，諸如以下之基團：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、異丁基、第二丁基、環己基、(環己基)甲基、環丙基甲基、例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基之同系物及異構體等。不飽和烷基為具有一或多個雙鍵或三鍵之烷基。不飽和烷基之實例包括，但不限於，乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-異戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-丙炔基及3-丙炔基、3-丁炔基以及高級同系物及異構體。「單價」意謂烷基與分子之其餘部分具有一個連接點。烷基之實例包括，但不限於，甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、-CH2CH(CH3)2、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、1-庚基、1-辛基等。特定言之，烷基具有一至十個碳原子。更特定言之，烷基具有一至四個碳原子。
術語「伸烷基」本身或在作為另一取代基之一部分時意謂源自於烷烴之二價基團，例如但不限於-CH2CH2CH2CH2-，且進一步包括如以下「伸雜烷基」所描述之彼等基團。典型地，烷基(或伸烷基)將具有1至24個碳原子，其中具有10個或更少碳原子之彼等基團在本發明中較佳。「低級烷基」或「低級伸烷基」為一般具有八個或 更少碳原子之較短鏈烷基或伸烷基。
除非另外闡述，否則術語「雜烷基」本身或在與另一術語組合時意謂穩定直鏈或分支鏈或環狀烴基或其組合，其由所闡述數目之碳原子及至少一個選自由O、N、P、Si及S所組成之群組的雜原子組成，且其中氮、碳及硫原子可視需要經氧化且氮雜原子可視需要經四級銨化。雜原子O、N及S及Si可位於雜烷基之任何內部位置或位於烷基與分子之其餘部分連接的位置上。實例包括，但不限於，-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH=CH-O-CH3、-Si(CH3)3、-CH2-CH=N-OCH3及-CH=CH-N(CH3)-CH3。至多兩個雜原子可為連續的，諸如，例如-CH2-NH-OCH3及-CH2-O-Si(CH3)3。類似地，術語「伸雜烷基」本身或在作為另一取代基之一部分時意謂源自於雜烷基之二價基團，例如但不限於-CH2-CH2-S-CH2-CH2-及-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。對於伸雜烷基，雜原子亦可佔據一個或兩個鏈末端(例如，伸烷基氧基、伸烷基二氧基、伸烷基胺基、伸烷基二胺基等)。術語「雜烷基」及「伸雜烷基」涵蓋聚(乙二醇)及其衍生物。更進一步，對於伸烷基及伸雜烷基連接基團，書寫連接基團之化學式的方向並不暗示連接基團之取向。舉例而言，式-C(O)2R'-表示-C(O)2R'-及-R'C(O)2-。
術語「低級」在與術語「烷基」或「雜烷基」組合時係指具有1至6個碳原子之部分。
術語「烷氧基」、「烷基胺基」及「烷硫基」(或硫代烷氧基)係以其習知意義使用，且分別係指經由氧原子、胺基或硫原子連接於分子之其餘部分的彼等烷基。
一般而言，「醯基取代基」亦選自以上所闡述之基團。如本文中所使用，術語「醯基取代基」係指連接於直接或間接連接於本發明化合物之多環核的羰基碳且滿足其原子價的基團。
除非另外闡述，否則術語「環烷基」及「雜環烷基」本身或在與其他術語組合時分別表示經取代或未經取代之「烷基」及經取代或未經取代之「雜烷基」的環狀形式。另外，對於雜環烷基，雜原子可佔據雜環與分子之其餘部分連接的位置。環烷基之實例包括，但不限於，環戊基、環己基、1-環己烯基、3-環己烯基、環庚基等。雜環烷基之實例包括，但不限於，1-(1,2,5,6-四氫吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-基、四氫呋喃-3-基、四氫噻吩-2-基、四氫噻吩-3-基、1-哌基、2-哌基等。環狀結構之雜原子及碳原子視需要經氧化。
除非另外闡述，否則術語「鹵基」或「鹵素」本身或在作為另一取代基之一部分時意謂氟、氯、溴或碘原子。另外，諸如「鹵烷基」之術語意在包括單鹵烷基及多鹵烷基。舉例來說，術語「鹵基(C1-C4)烷基」意在包括，但不限於，三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
除非另外闡述，否則術語「芳基」(縮寫Ar)意謂經取代或未經取代之多不飽和芳族烴取代基，其可為單一環或者稠合在一起或共價連接之多個環(較佳為1至3個環)。術語「雜芳基」係指含有一至四個選自N、O或S之雜原子的芳基(或環)，其中氮、碳及硫原子視需要經氧化，及氮原子視需要經四級銨化。雜芳基可經由雜原子與分子之其餘部分連接。芳基及雜芳基之非限制性實例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-聯苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡基、2-唑基、4-唑基、2-苯基-4-唑基、5-唑基、3-異唑基、4-異唑基、5-異唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-異喹啉基、5-異喹啉基、2-喹啉基、5-喹啉基、3-喹啉基及6-喹啉基。以上所指出之芳基及雜芳基環系統各自之取代基係選自以下所描述之可接受之取代基群組。「芳基」及「雜芳基」亦涵蓋其中一或多個非芳族環系統與芳基或雜芳基系統稠合或其他方式結合之環系統。
出於簡便之目的，術語「芳基」當與其他術語組合使用(例如芳氧基、芳基硫氧基、芳基烷基)時包括如以上所定義之芳基及雜芳基環。因而，術語「芳基烷基」意在包括芳基連接於烷基之彼等基團(例如，苯甲基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括碳原子(例如亞甲基)已由例 如氧原子置換之彼等烷基(例如苯氧基甲基、2-吡啶氧基甲基、3-(1-萘氧基)丙基等)。
以上術語(例如，「烷基」、「雜烷基」、「芳基」及「雜芳基」)各自包括所指示之基團的經取代及未經取代之形式。以下提供各類型基團之較佳取代基。
烷基及雜烷基基團(包括通常稱為伸烷基、烯基、伸雜烷基、雜烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、環烯基及雜環烯基之彼等基團)之取代基一般分別稱為「烷基取代基」及「雜烷基取代基」，且其可為選自，但不限於，以下之多種基團中的一或多個：-O'、=O、=NR'、=N-OR'、-NR'R"、-S'、-鹵素、-SiR'R"R'''、-OC(O)'、-C(O)'、-CO2'、-CONR'R"、-OC(O)NR'R"、-NR"C(O)'、-NR'-C(O)NR"R'''、-NR"C(O)2'、-NR-C(NR'R"R''')=NR''''、-NR-C(NR'R")=NR'''、-S(O)'、-S(O)2'、-S(O)2NR'R"、-NRSO2'、-CN及-NO2，其數目介於零至(2m'+1)之範圍內，其中m'為此種基團中之碳原子總數。R'、R"、R'''及R''''各自較佳獨立地指氫、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之芳基(例如，經1至3個鹵素取代之芳基)、經取代或未經取代之烷基、烷氧基或硫代烷氧基或芳基烷基。舉例而言，當本發明之化合物包括多於一個R基團時，獨立地選擇各R基團，如同各R'、R"、R'''及R''''基團在存在超過一個此種基團時。當R'及R"連接於同一氮原子時，其可與氮原子組合以形成5員、6員或7員環。舉例來說，-NR'R"意在包括，但不限於，1-吡咯啶基及4-嗎啉基。根據取代基之以上論 述，本領域技術人員應理解，術語「烷基」意在包括有包括與除氫基團以外之基團結合的碳原子的基團，諸如鹵烷基(例如-CF3及-CH2CF3)及醯基(例如-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)CH2OCH3等)。
類似於針對烷基所描述之取代基，芳基取代基及雜芳基取代基一般分別稱為「芳基取代基」及「雜芳基取代基」，並且可變化且選自例如：鹵素、-OR'、=O、=NR'、=N-OR'、-NR'R"、-SR'、-鹵素、-SiR'R"R'''、-OC(O)R'、-C(O)R'、-CO2R'、-CONR'R"、-OC(O)NR'R"、-NR"C(O)R'、-NR'-C(O)NR"R'''、-NR"C(O)2R'、-NR-C(NR'R")=NR'''、-S(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)2NR'R"、-NRSO2R'、-CN及-NO2、-R'、-N3、-CH(Ph)2、氟(C1-C4)烷氧基及氟(C1-C4)烷基，其數目介於零至芳族環系統上之開放原子價之總數之範圍內；且其中R'、R'、R'''及R''''較佳獨立地選自氫、(C1-C8)烷基及雜烷基、未經取代之芳基及雜芳基、(未經取代之芳基)-(C1-C4)烷基及(未經取代之芳基)氧基-(C1-C4)烷基。舉例而言，當本發明之化合物包括多於一個R基團時，獨立地選擇各R基團，如同各R'、R"、R'''及R''''基團在存在超過一個此種基團時。
芳基或雜芳基環之相鄰原子上的芳基取代基中有兩個可視需要經式-T-C(O)-(CRR')q-U-之取代基置換，其中T及U獨立地為-NR-、-O-、-CRR'-或單鍵，且q為0至3之整數。或者，芳基或雜芳基環之相鄰原子上的取代基中有兩個可視需要經式-A-(CH2)r-B-之取代基置 換，其中A及B獨立地為-CRR'-、-O-、-NR-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR'-或單鍵，且r為1至4之整數。如此形成之新環的單鍵之一可視需要經雙鍵置換。或者，芳基或雜芳基環之相鄰原子上的取代基中有兩個可視需要經式-(CRR')n-X-(CR"R''')d-之取代基置換，其中s及d獨立地為0至3之整數，且X為-O-、-NR'-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)2NR'-。取代基R、R'、R"及R'''較佳獨立地選自氫或者經取代或未經取代之(C1-C6)烷基。
如本文中所使用，術語「雜原子」包括氧(O)、氮(N)、硫(S)及矽(Si)。
符號「R」為表示選自經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之雜芳基及經取代或未經取代之雜環基的取代基團的通用縮寫。
如本文中所使用之「伸烷基」係指具有一至二十個碳原子之飽和直鏈或分支鏈二價烴基，其實例包括，但不限於，與以上所例示之烷基具有相同核心結構者。「二價」意謂伸烷基與分子之其餘部分具有兩個連接點。特定言之，伸烷基具有一至十個碳原子。更特定言之，伸烷基具有一至四個碳原子。
術語「碳環」、「碳環基」、「碳環狀」及「碳環狀環」係指具有3至12個碳原子(呈單環狀環形式)或7至12個碳原子(呈雙環狀環形式)之單價非芳族飽和或部分不飽和環。具有7至12個原子之雙環狀碳環可排列為例如 雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統，且具有9或10個環原子之雙環狀碳環可排列為雙環[5,6]或[6,6]系統，或橋接系統，諸如雙環[2.2.1]庚烷、雙環[2.2.2]辛烷及雙環[3.2.2]壬烷。單環狀碳環之實例包括，但不限於，環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-I-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-I-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環已二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一基、環十二基等。
術語「環烷基烷基」係指藉由伸烷基與另一基團連接之環烷基。環烷基烷基之實例包括，但不限於，環己基甲基、環己基乙基、環戊基甲基、環戊基乙基等。
若基團描述為「視需要經取代」，則該基團可能(1)未經取代或(2)經取代。若基團之碳描述為視需要經取代基清單中之一或多個取代，則該碳上之一或多個氫原子(達到存在任一個之程度)可單獨及/或一起經獨立選擇之視需要的取代基置換。
術語「靶向劑」及「細胞結合劑」可互換使用，且意欲意謂符合下述的部分：(1)能夠使其所連接之實體(例如卡奇黴素)導向靶細胞，例如導向特定類型之腫瘤細胞或(2)優先在標靶組織，例如腫瘤處活化。靶向劑可為小分子，其意欲包括非胜肽及胜肽。靶向劑亦可為大分子，其包括醣、凝集素、受體、受體配位體、蛋白質諸如牛血清白蛋白(BSA)、抗體，諸如此類。最佳地，靶向劑應包含抗體或其免疫活性片段。在諸多實施例中，靶向劑為 抗體或其免疫活性片段。
如本文中所使用之術語「鹽」係指本發明化合物之有機或無機鹽。特定言之，鹽為醫藥學上可接受之鹽。其他非醫藥學上可接受之鹽亦包括在本發明中(例如分子或大分子)。鹽包括藉由使包含鹼性基團之本發明化合物與無機酸或有機酸(諸如羧酸)反應而形成之鹽，及藉由使包含酸性基團之本發明化合物與無機鹼或有機鹼(諸如胺)反應而形成之鹽。例示性鹽包括即將在下文所描述之彼等醫藥學上可接受之鹽。
當本發明之化合物含有相對酸性之官能基時，可藉由使此種化合物之中性形式與足量所欲之鹼(純的或處於適合之惰性溶劑中)接觸來獲得鹼加成鹽。醫藥學上可接受之鹼加成鹽的實例包括鈉、鉀、鈣、銨、有機胺基或鎂鹽或類似鹽。當本發明之化合物含有相對鹼性之官能基時，可藉由使此種化合物之中性形式與足量所欲之酸(純的或處於適合之惰性溶劑中)接觸來獲得酸加成鹽。
醫藥學上可接受之酸加成鹽的實例包括源自於無機酸(如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸、單氫碳酸、磷酸、單氫磷酸、二氫磷酸、硫酸、單氫硫酸、氫碘酸或亞磷酸等)之鹽，以及源自於相對無毒之有機酸(如乙酸、丙酸、異丁酸、馬來酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富馬酸、乳酸、杏仁酸、酞酸、苯磺酸、對甲苯基磺酸、檸檬酸、酒石酸、甲磺酸等)之鹽。亦包括諸如精胺酸等之胺基酸的鹽，以及如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等之有機酸的 鹽(參見例如Berge等人，「Pharmaceutical Salts」,Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1-19)。本發明之某些特定化合物含有允許該等化合物轉化成鹼或酸加成鹽之鹼性及酸性官能基。
術語「醫藥學上可接受之鹽」意謂分子或大分子之有機或無機鹽。醫藥學上可接受之鹽包括用相對無毒之酸或鹼製備的活性化合物之鹽，視在本文中所描述之化合物上發現的特定取代基而定。可與胺基形成酸加成鹽。例示性鹽包括，但不限於，硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、蔗糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽(亦即，1,1'亞甲基雙(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。醫藥學上可接受之鹽可涉及包括另一分子，諸如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他相對離子。相對離子可為使母體化合物上之電荷穩定的任何有機或無機部分。此外，醫藥學上可接受之鹽可在其結構中具有超過一個帶電原子。在多個帶電原子為醫藥學上可接受之鹽的一部分時，該鹽可具有多個相對離子。因此，醫藥學上可接受之鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個相對離子。
較佳藉由使該鹽與鹼或酸接觸並且用習知方式分離母體化合物來再生化合物之中性形式。出於本發明之目的，該化合物之母體形式與多種鹽形式的不同之處在於某些物理性質，諸如在極性溶劑中之溶解度，但在其他方面，該等鹽等效於該化合物之母體形式。
「醫藥學上可接受之溶劑合物」或「溶劑合物」係指一或多個溶劑分子與分子或大分子締合。形成醫藥學上可接受之溶劑合物的溶劑的實例包括，但不限於，水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺。
術語「連接子」、「生物結合連接子」及「間隔基」可互換使用，且如本文中所使用，其描述共價接合一個化學部分與另一個的二價化學基團。連接子之特定實例描述於本文中。連接子可為聚乙烯(PEG)連接子或生物結合連接子或其組合。
術語「連接基」或「生物結合部分」係指允許靶向劑與連接子連接之部分。如以下更詳細論述，例示性連接基以說明而非限制之方式包括烷基、胺基烷基、胺基羰基烷基、羧基烷基、羥基烷基、烷基馬來醯亞胺、烷基-N-羥基琥珀醯亞胺、聚(乙二醇)-馬來醯亞胺及聚(乙二醇)-N-羥基琥珀醯亞胺，其全部可進一步經取代。連接子亦可具有實際上附加於靶向基團之連接部分。
如本文中所使用之「反應性官能基」、「反應性部分」、「反應性基團」係指可反應以便在化學部分之 間形成連接子的基團。所描述之反應性基團包括如本文中所描述之通常用於生物結合技術之反應性官能基。在諸多實施例中，反應性部分可為與諸如離胺酸側鏈或半胱胺酸側鏈之胺基酸(例如胺基酸側鏈)具有反應性的官能基。反應性基團包括，但不限於，烯烴、乙炔、醇、酚、醚、氧化物、鹵化物、醛、酮、羧酸、酯、醯胺、氰酸酯、異氰酸酯、硫代氰酸酯、異硫氰酸酯、胺、肼、腙、醯肼、重氮化合物(diazo)、重氮(diazonium)、硝基、腈、硫醇、硫化物、二硫化物、亞碸、碸、磺酸、亞磺酸、縮醛、縮酮、酐、硫酸酯、次磺酸、異腈、脒、醯亞胺、醯亞胺酯、硝酮、羥胺、肟、異羥肟酸、硫代異羥肟酸、丙二烯、原酸酯、亞硫酸酯、烯胺、炔胺、脲、假脲、半卡肼、碳化二亞胺、胺基甲酸酯、亞胺、疊氮化物、偶氮化合物、氧化偶氮化合物及亞硝基化合物。反應性官能基亦包括用於製備生物結合物之彼等官能基，例如N-羥基琥珀醯亞胺酯、馬來醯亞胺等。用於製備此等官能基中之每一者的方法在本技術領域中為熟知的且其用於特定目的之應用或修飾在本領域技術人員之能力範圍內。
如本文中所使用，術語「結合物」係指原子或分子之間的締合。締合可為直接或間接的。舉例而言，核酸(例如核糖核酸)與如本文中所提供之化合物部分之間的結合物可為直接的(例如，藉由共價鍵)或間接的(例如，藉由非共價鍵)。視需要，使用結合化學反應形成結合物，該結合化學反應包括，但不限於，親核取代(例如胺及醇與 醯基鹵化物、活性酯之反應)、親電子取代(例如烯胺反應)以及碳-碳及碳-雜原子多鍵加成(例如麥可反應、狄爾斯-阿德耳加成)。此等及其他適用反應論述於例如以下文獻中：March,ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY，第3版，John Wiley & Sons,New York,1985；Hermanson,BIOCONJUGATE TECHNIQUES,Academic Press,San Diego,1996；及Feeney等人，MODIFICATION OF PROTEINS；Advances in Chemistry Series，第198卷，American Chemical Society,Washington,D.C.,1982。因而，核酸可經由其主鏈連接於化合物部分。視需要，核糖核酸包括可促進核糖核酸與化合物部分之相互作用的一或多個反應性部分，例如胺基酸反應性部分。
用於本文中之結合化學反應之適用反應性部分或反應性官能基包括例如：(a)羧基及其各種衍生物，包括但不限於N-羥基琥珀醯亞胺酯、N-羥基苯并三唑酯、醯鹵、醯基咪唑、硫酯、對硝基苯酯、烷基、烯基、炔基及芳族酯；(b)可轉化成酯、醚、醛等之羥基；(c)鹵烷基，其中鹵素稍後可用諸如，例如胺、羧酸根陰離子、硫醇陰離子、碳陰離子或醇鹽離子之親核基團置換，從而將新基團共價連接在鹵素原子之位點上；(d)能夠參與狄爾斯-阿德耳反應之親二烯基團，諸如，例如馬來醯亞胺基；(e)醛基或酮基，使得可能經由形成諸如，例如亞胺、 腙、半卡腙或肟之羰基衍生物或經由諸如格任亞加成或烷基鋰加成之機制來進行後續衍生化；(f)磺醯鹵化物基團，其用於與胺進行後續反應以例如形成磺醯胺；(g)硫醇基，其可轉化成二硫化物、與醯基鹵化物反應或與諸如金之金屬鍵結；(h)胺或硫氫基，其可例如經醯化、烷基化或氧化；(i)烯烴，其可進行例如環加成、醯化、麥可加成等；(j)環氧化物，其可與例如胺及羥基化合物反應；(k)亞磷醯胺及適用於核酸合成之其他標準官能基；(l)金屬氧化矽鍵結；(m)與反應性含磷基團(例如膦)鍵結以形成例如磷酸二酯鍵之金屬；及(n)碸，例如乙烯碸。
藉由使用結合(「點擊(click)」)化學反應來連接小分子單元進行組合物之化學合成在本領域中為熟知的且描述於例如以下文獻中：H.C.Kolb,M.G.Finn及K.B.Sharpless((2001).「Click Chemistry：Diverse Chemical Function from a Few Good Reactions」.Angewandte Chemie International Edition 40(11)：2004-2021)；R.A.Evans((2007).「The Rise of Azide-Alkyne 1,3-Dipolar『Click』Cycloaddition and its Application to Polymer Science and Surface Modification」.Australian Journal of Chemistry 60(6)：384-395；W.C.Guida等人，Med.Res.Rev.第3頁1996； Spiteri,Christian及Moses,John E.((2010).「Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Cycloaddition：Regioselective Synthesis of 1,4,5-Trisubstituted 1,2,3-Triazoles」.Angewandte Chemie International Edition 49(1)：31-33)；Hoyle,Charles E.及Bowman,Christopher N.((2010).「Thiol-Ene Click Chemistry」.Angewandte Chemie International Edition 49(9)：1540-1573)；Blackman,Melissa L.及Royzen,Maksim及Fox,Joseph M.((2008).「Tetrazine Ligation：Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactivity」.Journal of the American Chemical Society 130(41)：13518-13519)；Devaraj,Neal K.及Weissleder,Ralph及Hilderbrand,Scott A.((2008).「Tetrazine Based Cycloadditions：Application to Pretargeted Live Cell Labeling」.Bioconjugate Chemistry 19(12)：2297-2299)；Stöckmann,Henning；Neves,Andre；Stairs,Shaun；Brindle,Kevin；Leeper,Finian((2011).「Exploring isonitrile-based click chemistry for ligation with biomolecules」.Organic & Biomolecular Chemistry)，所有文獻均以全文引用之方式且出於所有目的而併入在此。
可選擇反應性官能基以使其不參與或干擾本文中所描述之蛋白質的化學穩定性。舉例而言，核酸可包括乙烯碸或其他反應性部分。視需要，核酸可包括具有式S-S-R之反應性部分。R可為例如保護基。視需要，R為己醇。如本文中所使用，術語己醇包括具有式C6H13OH之化合物，且包括1-己醇、2-已醇、3-已醇、2-甲基-1-戊 醇、3-甲基-1-戊醇、4-甲基-1-戊醇、2-甲基-2-戊醇、3-甲基-2-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-甲基-3-戊醇、3-甲基-3-戊醇、2,2-二甲基-1-丁醇、2,3-二甲基-1-丁醇、3,3-二甲基-1-丁醇、2,3-二甲基-2-丁醇、3,3-二甲基-2-丁醇及2-乙基-1-丁醇。視需要，R為1-己醇。
「抗體」係指特異性結合及識別抗原之包含來自於免疫球蛋白基因之架構區的多肽或其片段。辨識之免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε及μ恆定區基因，以及無數免疫球蛋白可變區基因。輕鏈分類為κ或λ。重鏈分類為γ、μ、α、δ或ε，其又分別定義免疫球蛋白類別IgG、IgM、IgA、IgD及IgE。典型地，抗體之抗原結合區在特異性及結合親和力方面將為最重要的。在一些實施例中，抗體或抗體片段可源自於不同的生物體，包括人類、小鼠、大鼠、倉鼠、駱駝等。本發明之抗體可包括已在一或多個胺基酸位置上經修飾或突變以改良或調節抗體之所欲功能(例如糖基化、表現、抗原識別、效應物功能、抗原結合、特異性等)之抗體。
抗體為具有錯綜複雜之內部結構的大且複雜之分子(分子量約為150,000或約1320個胺基酸)。天然抗體分子含有兩對一致之多肽鏈，每一對具有一個輕鏈及一個重鏈。各輕鏈及重鏈又由兩個區域組成：參與結合標靶抗原之可變(「V」)區及與免疫系統之其他組分相互作用之恆定(「C」)區。輕鏈及重鏈可變區在3維空間中一起形成與抗原(例如，細胞表面上之受體)結合的可變區。在各 輕鏈或重鏈可變區內，存在三個短節段(平均10個胺基酸長度)，稱為互補性決定區(complementarity-determining region,CDR)。抗體可變域中之六個CDR(三個來自於輕鏈且三個來自於重鏈)在3維空間中摺疊而一起形成對接至標靶抗原上之實際抗體結合位點。CDR之位置及長度已由Kabat,E.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Health and Human Services,1983,1987精確定義。未包含在CDR中之可變區部分稱為架構區(framework region,FR)，其形成CDR之環境。
例示性免疫球蛋白(抗體)結構單元包含四聚體。各四聚體包含兩對一致之多肽鏈，每一對具有一個「輕」鏈(約25kD)及一個「重」鏈(約50至70kD)。各鏈之N端定義具有約100至110或更多個胺基酸且主要負責抗原識別之可變區。術語可變輕鏈(VL)及可變重鏈(VH)分別係指此等輕鏈及重鏈。Fc(亦即可結晶片段區)為免疫球蛋白之「基本部分」或「尾部」且典型地包含視抗體類別而貢獻兩個或三個恆定域之兩個重鏈。藉由結合特定蛋白質，Fc區確保各抗體對指定抗原產生適當免疫反應。Fc區亦結合各種細胞受體，諸如Fc受體，及其他免疫分子，諸如補體蛋白。
舉例而言，抗體作為完整免疫球蛋白或作為藉由用各種肽酶消化而產生之多個經充分表徵之片段存在。因而，舉例而言，胃蛋白酶在鉸鏈區中之二硫鍵聯下消化抗體以產生F(ab)'2，其本身為由二硫鍵連接於VH-CH1 之輕鏈的Fab二聚體。可在溫和條件下還原F(ab)'2以破壞鉸鏈區中之二硫鍵聯，從而將F(ab)'2二聚體轉化成Fab'單體。Fab'單體基本上為具有鉸鏈區之一部分的抗原結合部分(參見Fundamental Immunology(Paul編，第3版，1993))。儘管依據完整抗體之消化來定義各種抗體片段，但本領域技術人員應瞭解，可藉由化學方式或藉由使用重組DNA方法從頭合成此種片段。因而，如本文中所使用之術語抗體亦包括藉由修飾完整抗體而產生之抗體片段或使用重組DNA方法從頭合成之抗體片段(例如單鏈Fv)或使用噬菌體展示庫之抗體片段(參見例如McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990))。
術語「治療有效量」意謂在個體中引發所欲生物反應的活性卡奇黴素或抗體藥物結合物之量。此種反應包括減輕所治療之疾病或病症之症狀、預防、抑制或延遲疾病症狀或疾病本身之再發、與未治療時相比增加個體之壽命、或預防、抑制或延遲疾病症狀或疾病本身之進展。有效量之確定完全在本領域技術人員之能力範圍內，尤其是根據本文中所提供之詳細揭示內容。所揭示之化合物的毒性及療效可藉由標準醫藥程序在細胞培養物及實驗動物中確定。欲投與個體之本發明化合物或結合物或其他治療劑之有效量將視多發性骨髓瘤之階段、類別及狀態以及個體之特徵(諸如一般健康狀況、年齡、性別、體重及藥物耐受性)而定。欲投與之本發明化合物或結合物或其他治療劑之有效量將亦視投與途徑及劑型而定。可個別地調整 劑量用量及間隔以提供足以維持所欲治療效果之活性化合物血漿水平。
本文中特別提供新穎方法、化合物、組合物及製品，其提供展現良好藥物動力學及藥效學特徵之卡奇黴素-連接子構建體。本文中所提供之益處可廣泛應用於抗體藥物結合物之領域且可聯合與多種標靶反應之抗體一起使用。在諸多實施例中，所揭示之化合物(例如抗體藥物結合物)包括具有允許在具有降低之非特異性毒性之標靶位點上有效呈現細胞毒性卡奇黴素物質的可裂解部分的新穎卡奇黴素-連接子構建體。此外，在諸多實施例中，所揭示之卡奇黴素-連接子構建體用於提供當與習知結合製劑相比時相對穩定且就平均DAR分佈及有效負載(payload)位置而言實質上均質之位點特異性結合物製劑。如所附實例中所示，此種位點特異性卡奇黴素結合物之穩定性及均質性(就平均DAR分佈及卡奇黴素定位而言)提供有助於改良之治療指數的良好毒性特徵。
在一個實施例中，本發明係關於包含一或多個可裂解部分之卡奇黴素-連接子構建體。本領域技術人員應瞭解，可裂解卡奇黴素有效負載允許將經活化之彈頭選擇性且受控遞送至標靶位點(例如腫瘤細胞)。
在諸多實施例中，所揭示之化合物將與腫瘤生成細胞上所存在之抗原決定子發生免疫特異性反應。因此，在尤佳實施例中，本發明係關於一種包含可裂解卡奇黴素有效負載之抗體藥物結合物，其中該抗體與已知與 多種腫瘤相關之SEZ6決定子發生免疫特異性反應。
II. 組合物
本文中提供式2之化合物(例如抗體藥物結合物)或其醫藥學上可接受之鹽：Ab-[W-(X1)a-CM-(X2)b-P-D]n (式2)。
Ab為靶向劑。W為連接基或連接子。CM為可裂解部分。P為二硫鍵保護基。X1及X2包含視需要的間隔基或連接子部分。D為卡奇黴素。符號a及b獨立地為0或1。符號n為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在一個態樣中，提供一種式(I)之化合物(例如抗體藥物結合物)或其醫藥學上可接受之鹽：Ab-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]z3 (I)。
Ab為靶向劑。W為連接基或連接子基團。M為可裂解部分。L3及L4獨立地為連接子或間隔基。P為二硫鍵保護基。D為卡奇黴素或其類似物。符號z1、z2及z3獨立地為0至10之整數。在諸多實施例中，符號z3為1至10之整數。
在本文中所提供之任何式中，在D為卡奇黴素或其類似物時，應理解D(卡奇黴素或類似物)包括如本領域已知的卡奇黴素類的任何成員，其中末端-S-S-S-CH3部分係經-S-S-置換，其中符號表示與P之連接點。卡奇黴素為一類源自於細菌棘袍小單孢菌之烯二炔 抗腫瘤抗生素，包括但不限於卡奇黴素γI、卡奇黴素β1 Br、卡奇黴素γ1 Br、卡奇黴素α2 I、卡奇黴素α3 I、卡奇黴素β1 i及卡奇黴素δ1 i。
在諸多實施例中，靶向劑為抗體。
在諸多實施例中，D具有式(Ia)：
R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基，或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C。
R1A、R1B、R1C、R1D及R1E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代 之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基，或者經取代或未經取代之雜芳基。
在諸多實施例中，鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基。符號n1獨立地為0至4之整數。符號v1獨立地為1或2。
在另一態樣中，提供一種式(II)之化合物(例如抗體藥物結合物)：
Ab為靶向劑，諸如抗體。在諸多實施例中，該抗體為嵌合抗體、CDR接枝抗體、人類化抗體或人類抗體或其免疫活性片段。在諸多實施例中，該抗體為抗SEZ6抗體。
L3為鍵、-O-、-S-、-NR3B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2、-C(O)NR3B-、-NR3BC(O)-、-NR3BC(O)NH-、-NHC(O)NR3B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。
L4為鍵、-O-、-S-、-NR4B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR4B-、-NR4BC(O)-、-NR4BC(O)NH-、-NHC(O)NR4B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。
R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基，或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C。
P為-O-、-S-、-NR2B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR2B-、-NR2BC(O)-、-NR2BC(O)NH-、-NHC(O)NR2B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
M為-O-、-S-、-NR5B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5B-、-NR5BC(O)-、-NR5BC(O)NH-、-NHC(O)NR5B-、-[NR5BC(R5E)(R5F)C(O)]n2-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或M1A-M1B-M1C。
W為-O-、-S-、-NR6B-、-C(O)-、-C(O)O-、 -S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6B-、-NR6BC(O)-、-NR6BC(O)NH-、-NHC(O)NR6B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或W1A-W1B-W1C。
M1A係鍵結於L3。M1C係鍵結於L4。
M1A為鍵、-O-、-S-、-NR5AB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5AB-、-NR5ABC(O)-、-NR5ABC(O)NH-、-NHC(O)NR5AB-、-[NR5ABCR5AER5AFC(O)]n3-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
M1B為鍵、-O-、-S-、-NR5BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5BB-、-NR5BBC(O)-、-NR5BBC(O)NH-、-NHC(O)NR5BB-、-[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
M1C為鍵、-O-、-S-、-NR5CB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5CB-、-NR5CBC(O)-、-NR5CBC(O)NH-、-NHC(O)NR5CB-、-[NR5CBCR5CER5CFC(O)]n5-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未 經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
W1A係鍵結於Ab。W1C係鍵結於L3。
W1A為鍵、-O-、-S-、-NR6BA-、-C(O)-、C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6BA-、-NR6BAC(O)-、-NR6BAC(O)NH-、-NHC(O)NR6BA-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
W1B為鍵、-O-、-S-、-NR6BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6BB-、-NR6BBC(O)-、-NR6BBC(O)NH-、-NHC(O)NR6BB-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
W1C為鍵、-O-、-S-、-NR6BC-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6BC-、-NR6BCC(O)-、-NR6BCC(O)NH-、-NHC(O)NR6BC-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
R1A、R1B、R1C、R1D、R1E、R2B、R3B、R4B、R5B、R5E、R5F、R5AB、R5AE、R5AF、R5BB、R5BE、R5BF、R5CB、 R5CE、R5CF、R6B、R6BA、R6BB及R6BC獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基，或者經取代或未經取代之雜芳基。
在諸多實施例中，鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基。
符號n1為0至4之整數。在諸多實施例中，n1為0。在諸多實施例中，n1為1。在諸多實施例中，n1為2。在諸多實施例中，n1為3。在諸多實施例中，n1為4。符號n7為0至4之整數。在諸多實施例中，n7為0。在諸多實施例中，n7為1。在諸多實施例中，n7為2。在諸多實施例中，n7為3。在諸多實施例中，n1為4。符號v1為1或2。符號n2、n3、n4、n5及z3獨立地為1至10之整數。符號z1及z2獨立地為0至10之整數。在諸多實施例中，n2為1。在諸多實施例中，n2為2。在諸多實施例中，n2為3。在諸多實施例中，n2為4。在諸多實施例中，n2為5。在諸多實施例中，n2為6。在諸多實施例中，n2為7。在諸多實施例中，n2為8。在諸多實施例中，n2 為9。在諸多實施例中，n2為10。在諸多實施例中，n3為1。在諸多實施例中，n3為2。在諸多實施例中，n3為3。在諸多實施例中，n3為4。在諸多實施例中，n3為5。在諸多實施例中，n3為6。在諸多實施例中，n3為7。在諸多實施例中，n3為8。在諸多實施例中，n3為9。在諸多實施例中，n3為10。在諸多實施例中，n4為1。在諸多實施例中，n4為2。在諸多實施例中，n4為3。在諸多實施例中，n4為4。在諸多實施例中，n4為5。在諸多實施例中，n4為6。在諸多實施例中，n4為7。在諸多實施例中，n4為8。在諸多實施例中，n4為9。在諸多實施例中，n4為10。在諸多實施例中，n5為1。在諸多實施例中，n5為2。在諸多實施例中，n5為3。在諸多實施例中，n5為4。在諸多實施例中，n5為5。在諸多實施例中，n5為6。在諸多實施例中，n5為7。在諸多實施例中，n5為8。在諸多實施例中，n5為9。在諸多實施例中，n5為10。在諸多實施例中，z2為1。在諸多實施例中，z2為2。在諸多實施例中，z2為3。在諸多實施例中，z2為4。在諸多實施例中，z2為5。在諸多實施例中，z2為6。在諸多實施例中，z2為7。在諸多實施例中，z2為8。在諸多實施例中，z2為9。在諸多實施例中，z2為10。在諸多實施例中，z1為1。在諸多實施例中，z1為2。在諸多實施例中，z1為3。在諸多實施例中，z1為4。在諸多實施例中，z1為5。在諸多實施例中，z1為6。在諸多實施例中，z1為7。在諸多實施例中，z1為8。在諸多實施例中，z1為9。在諸 多實施例中，z1為10。在諸多實施例中，z3為1。在諸多實施例中，z3為2。在諸多實施例中，z3為3。在諸多實施例中，z3為4。在諸多實施例中，z3為5。在諸多實施例中，z3為6。在諸多實施例中，z3為7。在諸多實施例中，z3為8。在諸多實施例中，z3為9。在諸多實施例中，z3為10。
在諸多實施例中，W共價連接於抗體內之半胱胺酸殘基。在諸多實施例中，該半胱胺酸殘基處於Kabat位置C214上。在諸多實施例中，W共價連接於抗體內之離胺酸殘基。
在諸多實施例中，M為M1A-M1B-M1C，其中M1A係鍵結於L3且M1C係鍵結於L4。
在諸多實施例中，M1A為鍵、經取代或未經取代之伸雜烷基或者-[NR5ABC(R5AE)(R5AF)C(O)]n3。在諸多實施例中，M1B為鍵、經取代或未經取代之伸雜烷基或者-[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-。在諸多實施例中，M1C為鍵或者經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。在諸多實施例中，M1A為胺基酸。在諸多實施例中，M1B為胺基酸。在諸多實施例中，M1A或M1B中至少一者為纈胺酸(val)。在諸多實施例中，M1A或M1B中至少一者為丙胺酸(ala)。在諸多實施例中，M1A或M1B中至少一者為瓜胺酸(cit)。在諸多實施例中，M1A、M1B或M1C之一為經取代之伸芳基。
在諸多實施例中，M1A、M1B或M1C中至少一 者具有式(III)： 其中Y為-NH-、-O-、-C(O)NH-或-C(O)O-；且n6為0至3之整數。
在諸多實施例中，W為W1A-W1B-W1C，其中W1A係鍵結於Ab且W1C係鍵結於L3。
在諸多實施例中，P為經取代或未經取代之烷基。
在諸多實施例中，z3為1或2。
在諸多實施例中，L3為經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。
在諸多實施例中，L4為經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。
在諸多實施例中，W為經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
在諸多實施例中，W為5員或6員經取代或未經取代之伸雜環烷基。
在諸多實施例中，W具有下式：
在諸多實施例中，M包含胜肽。
在諸多實施例中，-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]為：
在諸多實施例中，-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]具有下式：
在另一態樣中，提供一種式(IV)化合物：
n1、z1、z2、L3、L4、R1、P及M如本文中所描述。
W1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基，或者經取代或未經取代之雜芳基、-N3、-CF3、-CCl3、 -CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R7E、-OR7A、-NR7BR7C、-C(O)OR7A、-C(O)NR7BR7C、-NO2、-SR7D、-SOn7R7B、-SOv7NR7BR7C、-NHNR7BR7C、-ONR7BR7C、-NHC(O)NHNR7BR7C。
符號n7為0至4之整數。符號v7為1或2。
在諸多實施例中，該式(IV)化合物具有下式：
在諸多實施例中，R1為氫、經取代或未經取代之烷基或者-C(O)R1E。在諸多實施例中，R1為氫或-C(O)R1E。在諸多實施例中，R1為-C(O)R1E。在諸多實施例中，R1為-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3、-C(O)CH2CH2CH3或-C(O)CH2CH2CH2CH3。在諸多實施例中，R1為-C(O)CH3。
在諸多實施例中，L3獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R3G-經取代或未經取代之伸烷基或者R3G-經取代或未經取代之伸雜烷基。在諸多實施例中，L3獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R3G-經取代或未經取代之C1-C6伸烷基或者R3G-經取代或未經取代之2員至6員伸雜烷基。
R3G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、 -CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R3H-經取代或未經取代之烷基、R3H-經取代或未經取代之雜烷基、R3H-經取代或未經取代之環烷基、R3H-經取代或未經取代之雜環烷基、R3H-經取代或未經取代之芳基或者R3H-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R3G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R3H-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R3H-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R3H-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R3H-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R3H-經取代或未經取代之苯基或者R3H-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，L4獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R4G-經取代或未經取代之伸烷基或者R4G-經取代或未經取代之伸雜烷基。在諸多實施例中，L4獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R4G-經取代或未經取 代之C1-C6伸烷基或者R4G-經取代或未經取代之2員至6員伸雜烷基。
R4G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R4H-經取代或未經取代之烷基、R4H-經取代或未經取代之雜烷基、R4H-經取代或未經取代之環烷基、R4H-經取代或未經取代之雜環烷基、R4H-經取代或未經取代之芳基或者R4H-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R4G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R4H-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R4H-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R4H-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R4H-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R4H-經取代或未經取代之苯基或者R4H-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R1獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)H、-OH、-NH2、-C(O)OH、-C(O)NH2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、R1G-經取代或未 經取代之烷基、R1G-經取代或未經取代之雜烷基、R1G-經取代或未經取代之環烷基、R1G-經取代或未經取代之雜環烷基、R1G-經取代或未經取代之芳基或者R1G-經取代或未經取代之雜芳基。諸多實施例中，R1獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)H、-OH、-NH2、-C(O)OH、-C(O)NH2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、R1G-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R1G-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R1G-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R1G-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R1G-經取代或未經取代之苯基或者R1G-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R1G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1H-經取代或未經取代之烷基、R1H-經取代或未經取代之雜烷基、R1H-經取代或未經取代之環烷基、R1H-經取代或未經取代之雜環烷基、R1H-經取代或未經取代之芳基或者R1H-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R1G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、 -NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1H-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R1H-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R1H-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R1H-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R1H-經取代或未經取代之苯基或者R1H-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，P獨立地為-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R2G-經取代或未經取代之烷基、R2G-經取代或未經取代之雜烷基、R2G-經取代或未經取代之環烷基、R2G-經取代或未經取代之雜環烷基、R2G-經取代或未經取代之芳基或者R2G-經取代或未經取代之雜芳基。諸多實施例中，P獨立地為-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R2G-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R2G-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R2G-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R2G-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R2G-經取代或未經取代之苯基或者R2G-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R2G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、 -OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R2H-經取代或未經取代之烷基、R2H-經取代或未經取代之雜烷基、R2H-經取代或未經取代之環烷基、R2H-經取代或未經取代之雜環烷基、R2H-經取代或未經取代之芳基或者R2H-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R2G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R2H-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R2H-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R2H-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R2H-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R2H-經取代或未經取代之苯基或者R2H-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，M獨立地為-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-[NHCH2C(O)]-、-[NHCH2C(O)]2-、-[NHCH2C(O)]3-、-[NHCH2C(O)]4-、-[NHCH2C(O)]5-、-[NHCH2C(O)]6-、-[NHCH2C(O)]7-、-[NHCH2C(O)]8-、-[NHCH2C(O)]9-、-[NHCH2C(O)]10-、R5G-經取代或未經取代之烷基、R5G-經取代或未經取代之雜烷基、R5G-經取代或未經取代之環烷基、R5G-經取代或未經取代之雜環烷基、R5G-經取代或未經取代之芳基、R5G-經取代或未經取代之雜芳基或者M1A-M1B-M1C。在諸多實施例中，M獨立地為-O-、-S-、-NH-、 -C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-[NHCH2C(O)]-、-[NHCH2C(O)]2-、-[NHCH2C(O)]3-、-[NHCH2C(O)]4-、-[NHCH2C(O)]5-、-[NHCH2C(O)]6-、-[NHCH2C(O)]7-、-[NHCH2C(O)]8-、-[NHCH2C(O)]9-、-[NHCH2C(O)]10-、R5G-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5G-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5G-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5G-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5G-經取代或未經取代之苯基、R5G-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基或者M1A-M1B-M1C。
R5G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5H-經取代或未經取代之烷基、R5H-經取代或未經取代之雜烷基、R5H-經取代或未經取代之環烷基、R5H-經取代或未經取代之雜環烷基、R5H-經取代或未經取代之芳基或者R5H-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5H-經取代或未經取 代之C1-C6烷基、R5H-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5H-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5H-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5H-經取代或未經取代之苯基或者R5H-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，W獨立地為-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R6G-經取代或未經取代之烷基、R6G-經取代或未經取代之雜烷基、R6G-經取代或未經取代之環烷基、R6G-經取代或未經取代之雜環烷基、R6G-經取代或未經取代之芳基、R6G-經取代或未經取代之雜芳基或者W1A-W1B-W1C。在諸多實施例中，W獨立地為-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH、R6G-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R6G-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6G-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6G-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6G-經取代或未經取代之苯基或者R6G-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基或者W1A-W1B-W1C。在諸多實施例中，W為-[(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]或-[(L3')z1'-M'-(L4')z2'-P'-D']，其中-[(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]與-[(L3')z1'-M'-(L4')z2'-P'-D']相同或視情況不同。z1、z2、L3、L4、P、M及D獨立地與z1'、z2'、L3'、L4'、P'、M'及D'相同或獨立地視需要不同。z1、z2、L3、L4、P、M及D如本文中所描述。z1'、z2'、L3'、L4'、P'、M'及D'獨立地對應於z1、z2、L3、L4、P、M及D且因而如本文中所定義。
R6G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6H-經取代或未經取代之烷基、R6H-經取代或未經取代之雜烷基、R6H-經取代或未經取代之環烷基、R6H-經取代或未經取代之雜環烷基、R6H-經取代或未經取代之芳基或者R6H-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R6G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6H-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R6H-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6H-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6H-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6H-經取代或未經取代之苯基或者R6H-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，W1為氫、鹵素、-N3、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)H、-OH、-NH2、-C(O)OH、-C(O)NH2、-NO2、-SH、SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、R7G-經取代或未經取代之烷基、R7G-經取代或未經取代之雜烷基、R7G-經取代或未經取代之 環烷基、R7G-經取代或未經取代之雜環烷基、R7G-經取代或未經取代之芳基或者R7G-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，W獨立地為-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH、R7G-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R7G-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R7G-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R7G-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R7G-經取代或未經取代之苯基或者R7G-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R7G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R7H-經取代或未經取代之烷基、R7H-經取代或未經取代之雜烷基、R7H-經取代或未經取代之環烷基、R7H-經取代或未經取代之雜環烷基、R7H-經取代或未經取代之芳基或者R7H-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R7G獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R7H-經取代或未經取 代之C1-C6烷基、R7H-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R7H-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R7H-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R7H-經取代或未經取代之苯基或者R7H-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，M1A獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-[NHCH2C(O)]-、-[NHCH2C(O)]2-、-[NHCH2C(O)]3-、-[NHCH2C(O)]4-、-[NHCH2C(O)]5-、-[NHCH2C(O)]6-、-[NHCH2C(O)]7-、-[NHCH2C(O)]8-、-[NHCH2C(O)]9-、-[NHCH2C(O)]10-、R5AG-經取代或未經取代之烷基、R5AG-經取代或未經取代之雜烷基、R5AG-經取代或未經取代之環烷基、R5AG-經取代或未經取代之雜環烷基、R5AG-經取代或未經取代之芳基、R5AG-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，M1A獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-[NHCH2C(O)]-、-[NHCH2C(O)]2-、-[NHCH2C(O)]3-、-[NHCH2C(O)]4-、-[NHCH2C(O)]5-、-[NHCH2C(O)]6-、-[NHCH2C(O)]7-、-[NHCH2C(O)]8-、-[NHCH2C(O)]9-、-[NHCH2C(O)]10-、R5AG-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5AG-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5AG-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5AG-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5AG-經取代或未經取代之苯基或者R5AG-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R5AG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、 -CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5AH-經取代或未經取代之烷基、R5AH-經取代或未經取代之雜烷基、R5AH-經取代或未經取代之環烷基、R5AH經取代或未經取代之雜環烷基、R5AH-經取代或未經取代之芳基或者R5AH-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5AG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5AH-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5AH-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5AH-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5AH-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5AH-經取代或未經取代之苯基或者R5AH-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，M1B獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-[NHCH2C(O)]-、-[NHCH2C(O)]2-、-[NHCH2C(O)]3-、-[NHCH2C(O)]4-、-[NHCH2C(O)]5-、-[NHCH2C(O)]6-、-[NHCH2C(O)]7-、-[NHCH2C(O)]8-、 -[NHCH2C(O)]9-、-[NHCH2C(O)]10-、R5BG-經取代或未經取代之烷基、R5BG-經取代或未經取代之雜烷基、R5BG-經取代或未經取代之環烷基、R5BG-經取代或未經取代之雜環烷基、R5BG-經取代或未經取代之芳基、R5BG-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，M1B獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-[NHCH2C(O)]-、-[NHCH2C(O)]2-、-[NHCH2C(O)]3-、-[NHCH2C(O)]4-、-[NHCH2C(O)]5-、-[NHCH2C(O)]6-、-[NHCH2C(O)]7-、-[NHCH2C(O)]8-、-[NHCH2C(O)]9-、-[NHCH2C(O)]10-、R5BG-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5BG-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5BG-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5BG-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5BG-經取代或未經取代之苯基或者R5BG-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R5BG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5BH-經取代或未經取代之烷基、R5BH-經取代或未經取代之雜烷基、R5BH-經取代或未經取代之環烷基、R5BH-經取代或未經取代之雜環烷基、R5BH-經取代或未經取代之芳基或者R5BH-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5BG獨立地為側氧基、 鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5BH-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5BH-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5BH-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5BH-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5BH-經取代或未經取代之苯基或者R5BH-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，M1C獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-[NHCH2C(O)]-、-[NHCH2C(O)]2-、-[NHCH2C(O)]3-、-[NHCH2C(O)]4-、-[NHCH2C(O)]5-、-[NHCH2C(O)]6-、-[NHCH2C(O)]7-、-[NHCH2C(O)]8-、-[NHCH2C(O)]9-、-[NHCH2C(O)]10-、R5CG-經取代或未經取代之伸烷基、R5CG-經取代或未經取代之伸雜烷基、R5CG-經取代或未經取代之伸環烷基、R5CG-經取代或未經取代之伸雜環烷基、R5CG-經取代或未經取代之芳基、R5CG-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，M1C獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-[NHCH2C(O)]-、-[NHCH2C(O)]2-、-[NHCH2C(O)]3-、-[NHCH2C(O)]4-、-[NHCH2C(O)]5-、-[NHCH2C(O)]6-、-[NHCH2C(O)]7-、-[NHCH2C(O)]8-、 -[NHCH2C(O)]9-、-[NHCH2C(O)]10-、R5CG-經取代或未經取代之C1-C6伸烷基、R5CG-經取代或未經取代之2員至6員伸雜烷基、R5CG-經取代或未經取代之C3-C6伸環烷基、R5CG-經取代或未經取代之3員至6員伸雜環烷基、R5CG-經取代或未經取代之苯基或者R5CG-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R5CG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5CH-經取代或未經取代之烷基、R5CH-經取代或未經取代之雜烷基、R5CH-經取代或未經取代之環烷基、R5CH-經取代或未經取代之雜環烷基、R5CH-經取代或未經取代之芳基或者R5CH-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5CG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5CH-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5CH-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5CH-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5CH-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5CH-經取 代或未經取代之苯基或者R5CH-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，W1A獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R6AG-經取代或未經取代之伸烷基、R6AG-經取代或未經取代之伸雜烷基，R6AG-經取代或未經取代之伸環烷基、R6AG-經取代或未經取代之伸雜環烷基、R6AG-經取代或未經取代之芳基、R6AG-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，W1A獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH、R6AG-經取代或未經取代之C1-C6伸烷基、R6AG-經取代或未經取代之2員至6員伸雜烷基、R6AG-經取代或未經取代之C3-C6伸環烷基、R6AG-經取代或未經取代之3員至6員伸雜環烷基、R6AG-經取代或未經取代之苯基，或者R6AG-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R6AG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6AH-經取代或未經取代之烷基、R6AH-經取代或未經取代之雜烷基、R6AH-經取代或未經取代之環烷基、R6AH-經取代或未經取代之雜環烷基、R6AH-經取代或未經取代之芳基或者R6AH-經取代或未經 取代之雜芳基。在諸多實施例中，R6AG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6AH-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R6AH-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6AH-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6AH-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6AH-經取代或未經取代之苯基或者R6AH-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，W1B獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R6BG-經取代或未經取代之伸烷基、R6BG-經取代或未經取代之伸雜烷基、R6BG-經取代或未經取代之伸環烷基、R6BG-經取代或未經取代之伸雜環烷基、R6BG-經取代或未經取代之芳基、R6BG-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，W1B獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH、R6BG-經取代或未經取代之C1-C6伸烷基、R6BG-經取代或未經取代之2員至6員伸雜烷基、R6BG-經取代或未經取代之C3-C6伸環烷基、R6BG-經取代或未經取代之3員至6員伸雜環烷基、R6BG-經取代或未經取代之苯基或者R6BG-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R6BG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6BH-經取代或未經取代之烷基、R6BH-經取代或未經取代之雜烷基、R6BH-經取代或未經取代之環烷基、R6BH-經取代或未經取代之雜環烷基、R6BH-經取代或未經取代之芳基或者R6BH-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R6BG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6BH-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R6BH-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6BH-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6BH-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6BH-經取代或未經取代之苯基或者R6BH-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，W1C獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、R6CG-經取代或未經取代之伸烷基、R6CG-經取代或未經取代之伸雜烷基、R6CG-經取代或未經取代之伸環 烷基、R6CG-經取代或未經取代之伸雜環烷基、R6CG-經取代或未經取代之芳基、R6CG-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，W1C獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH、R6CG-經取代或未經取代之C1-C6伸烷基、R6CG-經取代或未經取代之2員至6員伸雜烷基、R6CG-經取代或未經取代之C3-C6伸環烷基、R6CG-經取代或未經取代之3員至6員伸雜環烷基、R6CG-經取代或未經取代之苯基，或者R6CG-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R6CG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6CH-經取代或未經取代之烷基、R6CH-經取代或未經取代之雜烷基、R6CH-經取代或未經取代之環烷基、R6CH-經取代或未經取代之雜環烷基、R6CH-經取代或未經取代之芳基或者R6CH-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R6CG獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6CH-經取代或未經 取代之C1-C6烷基、R6CH-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6CH-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6CH-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6CH-經取代或未經取代之苯基或者R6CH-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R1A獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.1-經取代或未經取代之烷基、R1.1-經取代或未經取代之雜烷基、R1.1-經取代或未經取代之環烷基、R1.1-經取代或未經取代之雜環烷基、R1.1-經取代或未經取代之芳基，或者R1.1-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R1A獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.1-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R1.1-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R1.1-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R1.1-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R1.1-經取代或未經取代之苯基或者R1.1-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R1B獨立地為氫、鹵素、 -CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.2-經取代或未經取代之烷基、R1.2-經取代或未經取代之雜烷基、R1.2-經取代或未經取代之環烷基、R1.2-經取代或未經取代之雜環烷基、R1.2-經取代或未經取代之芳基或者R1.2-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R1B獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.2-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R1.2-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R1.2-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R1.2-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R1.2-經取代或未經取代之苯基或者R1.2-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R1C獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.3-經取代或未經 取代之烷基、R1.3-經取代或未經取代之雜烷基、R1.3-經取代或未經取代之環烷基、R1.3-經取代或未經取代之雜環烷基、R1.3-經取代或未經取代之芳基或者R1.3-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R1C獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.3-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R1.3-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R1.3-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R1.3-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R1.3-經取代或未經取代之苯基或者R1.3-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。鍵結於同一氮原子之R1B及R1C可視需要接合以形成R1.3-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基或者R1.3-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R1D獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.4-經取代或未經取代之烷基、R1.4-經取代或未經取代之雜烷基、R1.4-經取代或未經取代之環烷基、R1.4-經取代或未經取代之雜環烷 基、R1.4-經取代或未經取代之芳基或者R1.4-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R1D獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.4-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R1.4-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R1.4-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R1.4-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R1.4-經取代或未經取代之苯基或者R1.4-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R1E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.5-經取代或未經取代之烷基、R1.5-經取代或未經取代之雜烷基、R1.5-經取代或未經取代之環烷基、R1.5-經取代或未經取代之雜環烷基、R1.5-經取代或未經取代之芳基或者R1.5-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R1E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、 -NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R1.5-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R1.5-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R1.5-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R1.5-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R1.5-經取代或未經取代之苯基或者R1.5-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。在諸多實施例中，R1E為未經取代之烷基。在諸多實施例中，R1E為未經取代之C1-C6烷基。在諸多實施例中，R1E為甲基、乙基、丙基或丁基。在諸多實施例中，R1E為甲基。
在諸多實施例中，R2B獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R2.2-經取代或未經取代之烷基、R2.2-經取代或未經取代之雜烷基、R2.2-經取代或未經取代之環烷基、R2.2-經取代或未經取代之雜環烷基、R2.2-經取代或未經取代之芳基或者R2.2-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R2B獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R2.2-經取代或未經 取代之C1-C6烷基、R2.2-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R2.2-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R2.2-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R2.2-經取代或未經取代之苯基或者R2.2-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R3B獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R3.2-經取代或未經取代之烷基、R3.2-經取代或未經取代之雜烷基、R3.2-經取代或未經取代之環烷基、R3.2-經取代或未經取代之雜環烷基、R3.2-經取代或未經取代之芳基或者R3.2-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R3B獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R3.2-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R3.2-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R3.2-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R3.2-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R3.2-經取代或未經取代之苯基或者R3.2-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R4B獨立地為氫、鹵素、 -CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R4.2-經取代或未經取代之烷基、R4.2-經取代或未經取代之雜烷基、R4.2-經取代或未經取代之環烷基、R4.2-經取代或未經取代之雜環烷基、R4.2-經取代或未經取代之芳基或者R4.2-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R4B獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R4.2-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R4.2-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R4.2-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R4.2-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R4.2-經取代或未經取代之苯基或者R4.2-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5B獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.2-經取代或未經 取代之烷基、R5.2-經取代或未經取代之雜烷基、R5.2-經取代或未經取代之環烷基、R5.2-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.2-經取代或未經取代之芳基或者R5.2-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5B獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.2-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.2-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.2-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.2-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.2-經取代或未經取代之苯基，或者R5.2-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.5-經取代或未經取代之烷基、R5.5-經取代或未經取代之雜烷基、R5.5-經取代或未經取代之環烷基、R5.5-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.5-經取代或未經取代之芳基，或者R5.5-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5E獨立地為氫、鹵素、 -CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.5-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.5-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.5-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.5-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.5-經取代或未經取代之苯基，或者R5.5-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5F獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.6-經取代或未經取代之烷基、R5.6-經取代或未經取代之雜烷基、R5.6-經取代或未經取代之環烷基、R5.6-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.6-經取代或未經取代之芳基，或者R5.6-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5F獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、 -OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.6-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.6-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.6-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.6-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.6-經取代或未經取代之苯基，或者R5.6-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5AB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.7-經取代或未經取代之烷基、R5.7-經取代或未經取代之雜烷基、R5.7-經取代或未經取代之環烷基、R5.7-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.7-經取代或未經取代之芳基，或者R5.7-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5AB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.7-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.7-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.7-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.7-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.7-經取代或 未經取代之苯基，或者R5.7-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5AE獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.8-經取代或未經取代之烷基、R5.8-經取代或未經取代之雜烷基、R5.8-經取代或未經取代之環烷基、R5.8-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.8-經取代或未經取代之芳基，或者R5.8-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5AE獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.8-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.8-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.8-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.8-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.8-經取代或未經取代之苯基，或者R5.8-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5AF獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、 -NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.9-經取代或未經取代之烷基、R5.9-經取代或未經取代之雜烷基、R5.9-經取代或未經取代之環烷基、R5.9-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.9-經取代或未經取代之芳基，或者R5.9-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5AF獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.9-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.9-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.9-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.9-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.9-經取代或未經取代之苯基，或者R5.9-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5BB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.10-經取代或未經 取代之烷基、R5.10-經取代或未經取代之雜烷基、R5.10-經取代或未經取代之環烷基、R5.10-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.10-經取代或未經取代之芳基，或者R5.10-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5BB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.10-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.10-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.10-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.10-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.10-經取代或未經取代之苯基，或者R5.10-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5BE獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.11-經取代或未經取代之烷基、R5.11-經取代或未經取代之雜烷基、R5.11-經取代或未經取代之環烷基、R5.11-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.11-經取代或未經取代之芳基，或者R5.11-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5BE獨立地為氫、鹵 素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.11-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.11-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.11-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.11-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.11-經取代或未經取代之苯基，或者R5.11-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5BF獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.12-經取代或未經取代之烷基、R5.12-經取代或未經取代之雜烷基、R5.12-經取代或未經取代之環烷基、R5.12-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.12-經取代或未經取代之芳基，或者R5.12-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5BF獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、 -OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.12-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.12-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.12-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.12-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.12-經取代或未經取代之苯基，或者R5.12-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5CB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.13-經取代或未經取代之烷基、R5.13-經取代或未經取代之雜烷基、R5.13-經取代或未經取代之環烷基、R5.13-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.13-經取代或未經取代之芳基，或者R5.13-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5CB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.13-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.13-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.13-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.13-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.13-經取 代或未經取代之苯基，或者R5.13-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5CE獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.14-經取代或未經取代之烷基、R5.14-經取代或未經取代之雜烷基、R5.14-經取代或未經取代之環烷基、R5.14-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.14-經取代或未經取代之芳基，或者R5.14-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5CE獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.14-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.14-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.14-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.14-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.14-經取代或未經取代之苯基，或者R5.14-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R5CF獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、 -NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.15-經取代或未經取代之烷基、R5.15-經取代或未經取代之雜烷基、R5.15-經取代或未經取代之環烷基、R5.15-經取代或未經取代之雜環烷基、R5.15-經取代或未經取代之芳基，或者R5.15-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R5CF獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R5.15-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R5.15-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R5.15-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R5.15-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R5.15-經取代或未經取代之苯基，或者R5.15-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R6A獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.1-經取代或未經 取代之烷基、R6.1-經取代或未經取代之雜烷基、R6.1-經取代或未經取代之環烷基、R6.1-經取代或未經取代之雜環烷基、R6.1-經取代或未經取代之芳基，或者R6.1-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R6A獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.1-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R6.1-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6.1-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6.1-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6.1-經取代或未經取代之苯基，或者R6.1-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R6B獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.2-經取代或未經取代之烷基、R6.2-經取代或未經取代之雜烷基、R6.2-經取代或未經取代之環烷基、R6.2-經取代或未經取代之雜環烷基、R6.2-經取代或未經取代之芳基，或者R6.2-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R6B獨立地為氫、鹵素、 -CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.2-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R6.2-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6.2-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6.2-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6.2-經取代或未經取代之苯基，或者R6.2-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R6AB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.7-經取代或未經取代之烷基、R6.7-經取代或未經取代之雜烷基、R6.7-經取代或未經取代之環烷基、R6.7-經取代或未經取代之雜環烷基、R6.7-經取代或未經取代之芳基，或者R6.7-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R6AB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、 -OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.7-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R6.7-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6.7-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6.7-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6.7-經取代或未經取代之苯基，或者R6.7-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R6BB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.10-經取代或未經取代之烷基、R6.10-經取代或未經取代之雜烷基、R6.10-經取代或未經取代之環烷基、R6.10-經取代或未經取代之雜環烷基、R6.10-經取代或未經取代之芳基，或者R6.10-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R6BB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.10-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R6.10-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6.10-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6.10-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6.10-經取 代或未經取代之苯基，或者R6.10-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
在諸多實施例中，R6BC獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.13-經取代或未經取代之烷基、R6.13-經取代或未經取代之雜烷基、R6.13-經取代或未經取代之環烷基、R6.13-經取代或未經取代之雜環烷基、R6.13-經取代或未經取代之芳基，或者R6.13-經取代或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R6BC獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHSO2H、-NHC(O)H、-NHC(O)OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、R6.13-經取代或未經取代之C1-C6烷基、R6.13-經取代或未經取代之2員至6員雜烷基、R6.13-經取代或未經取代之C3-C6環烷基、R6.13-經取代或未經取代之3員至6員雜環烷基、R6.13-經取代或未經取代之苯基，或者R6.13-經取代或未經取代之5員至6員雜芳基。
R1H、R2H、R3H、R4H、R5H、R6H、R7H、R5AH、R5BH、R5CH、R6AH、R6BH、R6CH、R1.1、R1.2、R1.3、R1.4、R1.5、 R2.2、R3.2、R4.2、R5.2、R5.5、R5.6、R5.7、R5.8、R5.9、R5.10、R5.11、R5.12、R5.13、R5.14、R5.15、R6.1、R6.2、R6.7、R6.10及R6.13獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC=(O)NHNH2、-NHC=(O)NH2、-NHSO2H、-NHC=(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCHF2、未經取代之烷基、未經取代之雜烷基、未經取代之環烷基、未經取代之雜環烷基、未經取代之芳基，或未經取代之雜芳基。在諸多實施例中，R1H、R2H、R3H、R4H、R5H、R6H、R7H、R5AH、R5BH、R5CH、R6AH、R6BH、R6CH、R1.1、R1.2、R1.3、R1.4、R1.5、R2.2、R3.2、R4.2、R5.2、R5.5、R5.6、R5.7、R5.8、R5.9、R5.10、R5.11、R5.12、R5.13、R5.14、R5.15、R6.1、R6.2、R6.7、R6.10及R6.13獨立地為側氧基、鹵素、-CF3、-CN、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-NO2、-SH、-SO3H、-SO4H、-SO2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC=(O)NHNH2、-NHC=(O)NH2、-NHSO2H、-NHC=(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCHF2、未經取代之C1-C6烷基、未經取代之2員至6員雜烷基、未經取代之C3-C6環烷基、未經取代之3員至6員雜環烷基、未經取代之苯基，或未經取代之5員至6員雜芳基。
III. 醫藥組合物
本文中亦提供醫藥調配物。在一個態樣中為一種包括本文中所描述之化合物或抗體藥物結合物及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組合物。
IV. 方法
本文中提供諸多方法。在一個態樣中，提供一種製備抗體藥物結合物之方法。該方法包括使卡奇黴素構建體與抗體之半胱胺酸或離胺酸接觸，該卡奇黴素構建體具有式W1-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D，其中W1為與離胺酸側鏈或半胱胺酸側鏈具有反應性之官能基，M為可裂解部分，L3及L4獨立地為連接子，P為二硫鍵保護基且D為卡奇黴素或其類似物。
在諸多實施例中，該卡奇黴素構建體與該抗體之特定半胱胺酸接觸。在諸多實施例中，該特定半胱胺酸係源自於天然二硫橋。在諸多實施例中，該抗體為經工程改造之抗體且該特定半胱胺酸並非源自於天然二硫橋。在諸多實施例中，在該接觸之前選擇性地還原該特定半胱胺酸。在諸多實施例中，該選擇性還原該抗體之步驟包括使該抗體與穩定劑接觸之步驟。
在其他較佳實施例中，所揭示之卡奇黴素-連接子構建體用於製造下式之抗體藥物結合物：Ab-[W-(X1)a-CM-(X2)b-P-D]n，或其醫藥學上可接受之鹽，其中：a)Ab包含靶向劑；b)W包含連接基或連接子基團；c)CM包含可裂解部分；d)P包含二硫鍵保護基；e)X1及X2包含視需要的間隔基部分；f)D包含卡奇黴素； a及b獨立地為0或1；且n為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在所選實施例中，靶向劑將包含具有一或多個游離半胱胺酸之位點特異性抗體。在所選實施例中，可裂解部分可包含胜肽鍵、腙部分、肟部分、酯鍵聯及二硫鍵聯。在其他較佳實施例中，連接基將與靶向劑上之半胱胺酸部分反應以共價連接卡奇黴素-連接子構建體與靶向劑。
除上述抗體藥物結合物以外，本發明進一步提供一般包含所揭示之ADC的醫藥組合物及使用此種ADC來在患者中診斷或治療病症(包括癌症)的方法。在尤佳實施例中，所揭示之結合物將與SEZ6決定子締合。
在另一實施例中，該靶向劑將包含有包含至少一個未配對半胱胺酸殘基之位點特異性工程改造IgG1同型抗體。在一些實施例中，該未配對半胱胺酸殘基將包含與重/重鏈鏈間殘基相對之重/輕鏈鏈間殘基。在其他實施例中，該未配對半胱胺酸殘基將由鏈內二硫橋產生。
在另一實施例中，靶向劑將包含經工程改造之抗體，其中構成該位點特異性工程改造抗體之輕鏈的C214殘基(根據Kabat之EU指數加以編號)經另一殘基取代或缺失。在另一實施例中，靶向劑將包含經工程改造之抗體，其中構成該工程改造抗體之重鏈的C220殘基(根據Kabat之EU指數加以編號)經另一殘基取代或缺失。
在一相關實施例中，本發明係關於一種殺 死、減少腫瘤細胞或致癌細胞之發生率或抑制其增殖之方法，其包括用本發明之卡奇黴素ADC處理該等腫瘤細胞或致癌細胞。在一相關實施例中，本發明提供一種治療癌症之方法，其包括向個體投與包含本發明之卡奇黴素結合物的醫藥組合物。
在另一實施例中，本發明包括一種製備本發明之抗體藥物結合物的方法，其包括以下步驟：a)提供包含可裂解連接子之卡奇黴素構建體；b)還原靶向劑以提供經活化之殘基；及c)使經選擇性還原之靶向劑與卡奇黴素構建體結合。
在所選實施例中，靶向劑將包含具有一或多個游離半胱胺酸之位點特異性抗體。在其他實施例中，將選擇性地還位置特異性抗體。在一相關較佳實施例中，選擇性地還原抗體之步驟包括使抗體與穩定劑接觸之步驟。在另一實施例中，該方法可進一步包括使抗體與弱還原劑接觸之步驟。
在另一態樣中，提供一種在有需要之個體中治療癌症的方法。該方法包括向該個體投與如申請專利範圍之治療有效量之醫藥組合物或本文中所揭示之抗體藥物結合物。在諸多實施例中，該癌症係選自胰臟癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌及胃癌。在諸多實施例中，該方法進一步包括向該個體投與額外化學治療劑。
在一個態樣中，提供一種向細胞遞送卡奇黴素細胞毒素之方法。該方法包括使細胞與如本文中所揭 示之抗體藥物結合物接觸。
如所指示，所揭示之結合物可用於治療、處置、改善或預防增殖性病症或其再發或進展。本發明之所選實施例提供此種卡奇黴素結合物用於對惡性腫瘤進行免疫治療性處理的用途，其較佳包括減少腫瘤起始細胞發生率。所揭示之ADC可單獨或與諸如化學治療劑或免疫治療劑(例如，治療性抗體)或生物反應調節劑之多種抗癌化合物聯合使用。在其他所選實施例中，可組合使用兩種或更多種離散的卡奇黴素結合物來提供增強之抗贅生效應。
本發明亦提供使用本文中所揭示之卡奇黴素結合物及如本文中所揭示之卡奇黴素結合物之醫藥組合物的套組或裝置及相關方法，其適用於治療增殖性病症，諸如癌症。為此，本發明較佳提供一種適用於治療此種病症之製品，其包括容納本發明之抗體藥物結合物的容器及使用該等結合物來治療、減緩或預防增殖性病症或其進展或再發之說明材料。在所選實施例中，該等裝置及相關方法將包括接觸至少一種癌症幹細胞之步驟。
以上為概述且因而必然對細節進行簡單化、通用化及省略；因此，本領域技術人員應瞭解，概述僅為說明性的且不意欲以任何方式具有限制性。本文中所描述之方法、組合物及/或裝置及/或其他標的物之其他態樣、特徵及優勢將在本文中所闡述之教示中顯而易知。提供概述以引入以下在詳細描述中進一步描述之呈簡化形式之原理的選擇。此概述不意欲確定所主張之標的物的關鍵 特徵或基本特徵，亦不意欲用作確定所主張之標的物的範疇的輔助。
I 卡奇黴素
卡奇黴素為一類源自於細菌棘袍小單孢菌之烯二炔抗腫瘤抗生素，包括分離並表徵之卡奇黴素γ1 I、卡奇黴素β1 Br、卡奇黴素γ1 Br、卡奇黴素α2 I、卡奇黴素α3 I、卡奇黴素β1 i及卡奇黴素δ1 i。各上述卡奇黴素類似物之結構在本領域為熟知的(例如，參見Lee等人，Journal of Antibiotics,1989年7月，其係以全文引用之方式併入本文中)且與本文中所揭示之卡奇黴素構建體及抗體藥物結合物相容。一般而言，卡奇黴素γI含有兩個不同的結構區，各自在化合物之生物活性中扮演特定的角色。兩者中之較大者由延伸之糖殘基組成，包含四個單醣單位及一個經六取代之苯環；其等由一系列非常罕見之糖苷、硫酯及羥胺鍵聯接合在一起。第二結構區，糖苷配基(aglycon)(稱為卡奇黴素酮)，含有緊密、高度功能化雙環核心，將應變烯二炔單位圍閉在橋接10員環中。此糖苷配基亞單元進一步包含如以下所描述充當用於產生分子之細胞毒性形式之活化因子的烯丙基三硫化物。
舉例而言，即將在下文顯示三硫化物卡奇黴素γ1 I之結構：
如本文中所使用，術語「卡奇黴素」應被視為意謂卡奇黴素γ1 I、卡奇黴素β1 Br、卡奇黴素γ1 Br、卡奇黴素α2 I、卡奇黴素α3 I、卡奇黴素β1 i及卡奇黴素δ1以及N-乙醯基衍生物、硫化物類似物及其類似物中的任一種。如本文中所使用，術語「卡奇黴素」應理解為涵蓋自然界中發現之卡奇黴素以及具有二硫化物終端且具有與另一分子(例如抗體藥物結合物)之連接點的卡奇黴素部分及其類似物。舉例而言，如本文中所使用，卡奇黴素γI應理解為且被詮釋為：
應瞭解，任何上述化合物均與本文中之教示相容且可用於製造所揭示之卡奇黴素構建體及抗體藥物結合物。在某些實施例中，所揭示之抗體藥物結合物的卡奇黴素組分將包含N-乙醯基卡奇黴素γ1 I。
卡奇黴素靶核酸且導致股斷裂，從而殺死靶細胞。更特定言之，已發現卡奇黴素會與DNA之小溝結合，其中其隨後進行類似於白格曼環化之反應以產生雙自由基物質。就此而言，如Crothers等人(1999)所說明，芳基四醣亞單元用於將藥物遞送至其標靶，從而與雙螺旋DNA之小溝緊密結合。當親核試劑(例如穀胱甘肽)攻擊三硫化物基團之中心硫原子時，其導致結構幾何形狀顯著變化且對10員烯二炔環施加大量應變。藉由烯二炔進行環芳化反應，從而產生高度反應性1,4-類苯雙自由基，且最終藉由自去氧核糖DNA主鏈吸引氫原子而導致DNA裂解，並由此引起股斷裂而完全解除此應變。注意，本發明之卡奇黴素二硫化物類似物構建體親核試劑使經保護之二硫鍵裂解以產生所欲雙自由基(參見第1圖)。
2000年，開發出包含N-乙醯基二甲基醯肼卡奇黴素之CD33抗原標靶免疫結合物(Mylotarg®)，作為針 對急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)之標靶療法並市場化。該藥物隨後由於功效及毒性問題而退出。相反，本發明之抗體卡奇黴素結合物展現良好治療方案，表明其可有效地用於治療許多增殖性病症。
II 抗體結合物
在較佳實施例中，與本發明相容之靶向劑與新穎卡奇黴素構建體結合以形成「抗體藥物結合物(ADC)」或「抗體結合物」。術語「結合物」廣泛使用且意謂在不考慮確切締合方法下，與本發明一致之靶向劑(例如抗體)的共價或非共價鍵結之任何可裂解卡奇黴素部分。在某些較佳實施例中，締合係藉由靶向劑之半胱胺酸殘基來實現。在尤佳實施例中，卡奇黴素可藉由可裂解連接子經由一或多個位置特異性之游離半胱胺酸與抗體結合。所揭示之ADC可用於治療性目的，包括治療癌症。
本發明之ADC可用於將細胞毒素或其他有效負載遞送至標靶位置(例如，表現SEZ6之腫瘤生成細胞)。如本文中所使用，術語「藥物」或「彈頭(warhead)」可互換使用且將意謂如以上所描述之任何卡奇黴素或卡奇黴素類似物。在較佳實施例中，所揭示之ADC將包含卡奇黴素彈頭之結合有效負載以相對非反應性、無毒的狀態下引導至標靶位置，隨後釋放並活化彈頭。彈頭於標靶位置的釋放較佳是藉由有效負載(例如，經由抗體上之一或多個半胱胺酸)，以及可將過度結合之毒性物質減至最少的ADC製劑之相對均質組合物之穩定結合來輔助。與經設計以便 在遞送至腫瘤位置後大量釋放包含卡奇黴素之有效負載的可裂解藥物連接子偶合，本發明之抗體藥物結合物實質上可減少非所欲之非特異性毒性。由此有利地在腫瘤位置上提供相對較高水平之活性卡奇黴素，同時將非靶細胞及組織之暴露減至最低，從而提供增強之治療指數。
在任何情況下，包含卡奇黴素之所選有效負載均可與抗體共價或非共價連接且展現不同的化學計算莫耳比，至少部分視用於實現結合之方法而定。在較佳實施例中，本發明之結合物可由下式表示：Ab-[W-(X1)a-CM-(X2)b-P-D]n (式2)或其醫藥學上可接受之鹽，其中a)Ab包含靶向劑；b)W包含連接基；c)CM包含可裂解部分；d)P包含二硫鍵保護基；e)X1及X2包含視需要的間隔基部分；且f)D包含卡奇黴素；其中a及b獨立地為0或1，且n為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
出於本發明之目的，組分W-(X1)a-CM-(X2)b-P一般可稱為「連接子」或「連接子單元」，且應理解為連接(例如，藉由一系列共價鍵)卡奇黴素彈頭與靶向劑。卡奇黴素及連接子一起構成與如本文中所描述之靶向劑結合的 有效負載。
在某些實施例中，連接子可包含分枝連接子。在其他較佳實施例中，靶向劑將包含抗體。在尤佳實施例中，D將包含如即將在下文式3中所闡述之N-乙醯基卡奇黴素： 其中*符號表示二硫鍵保護基，其共價結合於連接子之其餘部分且最終結合於靶向劑(Ab)。以下將更詳細論述其他較佳實施例及連接子組分及連接子構形。
關於式3，應瞭解，所說明之化合物包含與二硫鍵保護基(由*表示)結合之二硫鍵N-乙醯基卡奇黴素類似物，該二硫鍵保護基與連接子之其餘部分共價結合。如以下實例中所示，二硫鍵保護基改良二硫鍵在血流中之穩定性且允許有效合成所揭示之卡奇黴素-連接子構建體。在到達標靶(例如癌細胞)後，可裂解部分(CM)將斷裂以釋放經由二硫鍵保護基而連接於連接子之一部分(例如X2，參見第2圖)的卡奇黴素。連接子在CM處初步裂解後，與卡奇黴素連接之連接子之其餘部分將在生理學條件下降 解，至此二硫鍵得以斷裂(較佳在細胞內)，隨後發生活性雙自由基卡奇黴素物質之重排及形成。此種形式之卡奇黴素彈頭結合細胞DNA之小溝且誘導所欲的細胞毒性功效(參見Walker等人，Biochemistry 89：4608-4612,5/92，該文獻係以全文引用之方式併入本文中)。第1圖提供經註釋之化學結構，其描繪本發明之二肽卡奇黴素-連接子構建體，其中出於說明之目的描繪個別組分。
在任何情況下，可使用許多不同的可裂解連接子來製造根據上述式2之結合物，且結合方法將視組分之選擇而變化。因而，與卡奇黴素及所揭示之靶向劑之反應性殘基(例如半胱胺酸)締合的具有式2之任何可裂解連接子化合物均與本文中之教示相容。類似地，允許所選的卡奇黴素-連接子與抗體結合(包括位點特異性結合)之任何反應條件均在本發明之範疇內。儘管有上述內容，但本發明之尤佳實施例包括如本文中所描述使用穩定劑與弱還原劑之組合來使卡奇黴素-連接子與游離半胱胺酸選擇性結合。此種反應條件傾向於提供具有較少非特異性結合及污染物且相應地具有較低毒性的更均質製劑。
III 決定子
首先，重要的是，應指出本發明之卡奇黴素構建體及相應抗體藥物結合物不受任何特定標靶或抗原限制。相反，因為包括任何現有抗體或任何可如本文中所描述而產生之抗體的任何靶向劑，均可與新穎卡奇黴素-連接子構建體結合，故本發明所賦予之優勢廣泛適用且可 用於與任何標靶抗原(或決定子)連接。更特定言之，藉由使用新穎卡奇黴素-連接子構建體而賦予之有益性質(例如，可能之位點特異性結合、結合物穩定性之增強及非特異性毒性之降低)可廣泛適用於治療性抗體，與特定標靶無關。因而，儘管已出於說明及顯示本發明效益之目的而使用針對所選決定子之某些非限制性靶向劑，但其不以任何方式限制本發明之範疇。
因此，本領域技術人員應瞭解，本發明之抗體藥物結合物可包含任何可與所選決定子特異性識別或締合之任何靶向劑(例如，抗體)。如本文中所使用，「決定子」意謂與特定細胞、細胞群體或組織可鑑別地締合或特異性見於特定細胞、細胞群體或組織中或上之任何可偵測特性、性質、標記物或因子。決定子可具有形態學、功能或生物化學性質且一般具有表型。在某些較佳實施例中，決定子為在其物理結構及/或化學組成方面經差異性修飾之蛋白質，或由特定細胞類型或在某些條件下由細胞(例如，在細胞週期之特定點期間或特定區位中之細胞)差異性表現(向上或向下調控)之蛋白質。出於本發明之目的，決定子較佳包含細胞表面抗原或由異常細胞差異性表現之蛋白質，如藉由化學修飾、呈現形式(例如剪接變異體)、時程或量所證明。在某些實施例中，決定子可包含SEZ6蛋白質或其變異體、同功異形體或家族成員中之任一者及其特定結構域、區域或抗原決定基。「免疫決定子」或「抗原決定子」或「免疫原」或「抗原」意謂多肽中當引入免疫 活性的動物中時可刺激免疫反應且被免疫反應所產生之抗體識別的任何片段、區域或結構域。本文中所涵蓋之決定子可藉由其存在(陽性決定子)或不存在(陰性決定子)來鑑別細胞、細胞亞族群或組織(例如腫瘤)。
在尤佳實施例中，所揭示之抗體藥物結合物將包含針對SEZ6之抗體。SEZ6(亦稱為癲癇發作相關6同系物)為最初自經驚厥劑戊四唑處理之小鼠大腦皮層衍生細胞選殖之I型跨膜蛋白(Shimizu-Nishikawa,1995,PMID：7723619)。SEZ6具有兩種同功異形體，一種具有約4210個鹼基(NM_178860)且編碼994個胺基酸之蛋白質(NP_849191)，而一種具有約4194個鹼基(NM_001098635)且編碼993個胺基酸之蛋白質(NP_001092105)。此等之不同之處僅在於其ECD中之最後十個胺基酸殘基。SEZ6具有兩個其他家族成員：SEZ6L及SEZ6L2。術語「SEZ6家族」係指SEZ6、SEZ6L、SEZ6L2及其各種同功異形體。成熟SEZ6蛋白由一系列結構域構成：胞質區、跨膜域及包含獨特N末端結構域之細胞外域，隨後為兩個交替的Sushi及類CUB結構域，及三個額外串聯的Sushi結構域重複序列。已將人類SEZ6基因之突變與熱性癲癇發作、與體溫升高有關之痙攣及兒童期之大部分常見的癲癇類型相關聯(Yu等人，2007,PMID：17086543)。對藉由同源性及序列分析鑑別之SEZ6蛋白質之結構模組的回顧表明在信號轉導、細胞-細胞通信及神經發育方面之可能作用。如WO2015/031541中所描述由自經SEZ6抗原免疫之小鼠分 離之抗體產生與本發明相容之抗SEZ6人類化抗體，該案係全文併入本文中。
IV 靶向劑 A. 藥劑結構
如以上所提及，本發明之尤佳實施例包括含優先與所選決定子上之一或多個抗原決定基締合的靶向劑(較佳呈抗體或其免疫活性片段形式)的所揭示之結合物。抗體及其變異體及衍生物，包括已接受之命名及編號系統，已廣泛描述於例如以下文獻中：Abbas等人，(2010),Cellular and Molecular Immunology(第6版),W.B.Saunders Company；或Murphey等人，(2011),Janeway’s Immunobiology(第8版),Garland Science。
如本文中所使用，「抗體」或「完整抗體」典型地係包含由共價二硫鍵及非共價相互作用維持在一起之兩個重(H)及兩個輕(L)多肽鏈的Y形四聚蛋白。各輕鏈由一個可變域(VL)及一個恆定域(CL)構成。各重鏈包含一個可變域(VH)及恆定區，其在IgG、IgA及IgD抗體之情況下包含稱為CH1、CH2及CH3之三個結構域(IgM及IgE具有第四結構域CH4)。在IgG、IgA及IgD類別中，CH1及CH2結構域由可撓性鉸鏈區隔開，該可撓性鉸鏈區為長度可變之富含脯胺酸及半胱胺酸之節段(在不同的IgG子類中，約含有10至約60個胺基酸)。輕鏈及重鏈中之可變域藉由約12個或更多個胺基酸之「J」區與恆定域接合且重鏈亦具有約10個額外胺基酸之「D」區。各抗體類別進一 步包含由配對半胱胺酸殘基形成之鏈間及鏈內二硫鍵。
如本文中所使用，術語「抗體」包括多株抗體(polyclonal antibodies)、多株抗體(multiclonal antibodies)、單株抗體、嵌合抗體、人類化及靈長類化抗體、CDR接枝抗體、人類抗體、重組產生抗體、內抗體、多特異性抗體、雙特異性抗體、單價抗體、多價抗體、抗特應抗體(anti-idiotypic antibodies)、合成抗體，包括其突變蛋白及變異體，免疫特異性抗體片段，諸如Fd、Fab、F(ab')2、F(ab')片段、單鏈片段(例如ScFv及ScFvFc)；及其衍生物，包括Fc融合及其他修飾，及任何其他免疫活性分子，只要其展現與決定子優先締合或結合即可。此外，除非上下文約束另外指出，否則該術語進一步包括所有抗體類別(亦即，IgA、IgD、IgE、IgG及IgM)及所有子類(亦即，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。對應於不同類別抗體之重鏈恆定域典型地分別由相應小寫字母希臘字母α、δ、ε、γ及μ表示。類似地，來自任何脊椎動物物種之抗體輕鏈均可基於其恆定域之胺基酸序列而分配至稱為κ及λ的兩種明顯不同的類型之一。兩種輕鏈均與本文中之教示相容且可用於製造所揭示之抗體藥物結合物。
抗體之可變域自一種抗體至另一抗體在胺基酸組成方面顯示相當大之偏差且主要負責抗原識別及結合。各輕鏈/重鏈配對之可變區形成抗體結合位點，使得完整IgG抗體具有兩個結合位點(亦即，其為二價的)。VH及VL結構域包含三個具有極大可變性之區域，稱為高度變異 區或更通常為互補性決定區(CDR)，其由四個稱為架構區(FR)之不太可變之區域架構並隔開。VH區與VL區之間的非共價締合形成Fv片段(對於「片段可變」)，其含有抗體之兩個抗原結合位點之一。可藉由基因工程改造而獲得之ScFv片段(對於單鏈片段可變)在抗體之VH及VL區由胜肽連接子隔開之單一多肽鏈中締合。
除非另外指出，否則如本文中所使用，胺基酸分配至各結構域、架構區及CDR可根據由以下各項所提供之編號方案之一來進行：Kabat等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest(第5版),US Dept.of Health and Human Services,PHS,NIH,NIH出版編號91-3242；Chothia等人，1987,PMID：3681981；Chothia等人，1989,PMID：2687698；MacCallum等人，1996,PMID：8876650；或Dubel編，(2007)Handbook of Therapeutic Antibodies，第3版，Wily-VCH Verlag GmbH and Co；或AbM(Oxford Molecular/MSI Pharmacopia)。以下闡述如獲自Abysis網站資料庫(如下)之構成如Kabat、Chothia、MacCallum(亦稱Contact)及AbM所定義之CDR的胺基酸殘基。
抗體序列中之可變區及CDR可根據本領域已開發之一般規則(如以上所闡述，諸如，例如Kabat編號系統)或藉由比對該序列與已知可變區之資料庫加以鑑別。用於鑑別此等區域之方法描述於以下文獻中：Kontermann及Dubel編，Antibody Engineering,Springer,New York,NY,2001；及Dinarello等人，Current Protocols in Immunology,John Wiley and Sons Inc.,Hoboken,NJ,2000。抗體序列之例示性資料庫描述於且可藉由以下各項獲取：「Abysis」網站www.bioinf.org.uk/abs(由英國倫敦之倫敦大學學院生物化學暨分子生物學系之A.C.Martin維護)及VBASE2網站www.vbase2.org，如Retter等人，Nucl.Acids Res.,33(Database issue)：D671-D674(2005)中所描述。較佳使用Abysis資料庫分析序列，該資料庫整合來自於Kabat、IMGT及Protein Data Bank(PDB)之序列資料與來自於PDB之結構資料。參見Dr.Andrew C.R.Martin之著作 章節Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains.見於：Antibody Engineering Lab Manual (Duebel,S.及Kontermann編，R.,Springer-Verlag,Heidelberg,ISBN-13：978-3540413547，亦可自網站bioinforg.uk/abs取得)。Abysis資料庫網站進一步包括可根據本文中之教示加以使用之為鑑別CDR而開發之一般規則。除非另外指示，否則本文中所闡述之任何CDR均根據Abysis資料庫網站根據Kabat等人獲得。
對於本發明中所論述之重鏈恆定區胺基酸位置，編號係根據Edelman等人，1969,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 63(1)：78-85中首先描述之Eu指數來進行，該文獻描述據報導為第一個得以定序之人類IgG1骨髓瘤蛋白Eu之胺基酸序列。Edelman之EU指數亦闡述於Kabat等人，1991(同上)中。因而，術語「如Kabat中所闡述之EU指數」或「Kabat之EU指數」或「EU指數」在重鏈之上下文中係指如Kabat等人，1991(同上)中所闡述之基於Edelman等人之人類IgG1 Eu抗體之殘基編號系統。用於輕鏈恆定區胺基酸序列之編號系統類似地闡述於Kabat等人，(同上)中。即將在下文闡述與本發明相容之例示性κ輕鏈恆定區胺基酸序列(如以下所論述在可能包含游離半胱胺酸之C214位置下劃底線)。
(SEQ ID NO：1)。
類似地，即將在下文闡述與本發明相容之例示性IgG1重鏈恆定區胺基酸序列(如以下所論述在可能包含游離半胱胺酸之C220位置下劃底線)。
(SEQ ID NO：2)。
可使用標準分子生物學技術使所揭示之恆定區序列或其變異形式或衍生物與所揭示之重鏈及輕鏈可變區可操作地締合，以提供可併入本發明之ADC的全長抗體。
本領域技術人員應瞭解，免疫球蛋白分子中存在兩種二硫橋或鍵的類型：鏈間及鏈內二硫鍵。如眾所周知，鏈間二硫鍵之位置及編號係根據免疫球蛋白類別及物種而變化。儘管本發明不限於任何特定類別或子類之抗體，但本發明中為了說明目的，一般將使用IgG1免疫球蛋白。在野生型IgG1分子中，存在十二個鏈內二硫鍵(每一重鏈上四個且每一輕鏈上兩個)及四個鏈間二硫鍵。鏈內二硫鍵一般在一定程度上受保護，且與鏈間鍵相比，鏈內 二硫鍵對還原較不敏感。相反，鏈間二硫鍵位於免疫球蛋白表面上，對溶劑而言可及且通常相對易於還原。重鏈之間存在兩個鏈間二硫鍵且自各重鏈至其個別輕鏈存在一個鏈間二硫鍵。已顯示鏈間二硫鍵對於重鏈與輕鏈締合而言並非必要的。IgG1鉸鏈區在重鏈中包含形成鏈間二硫鍵之半胱胺酸，由此提供結構支持以及有助於Fab移動之撓性。重鏈/重鏈IgG1鏈間二硫鍵位於殘基C226及C229處(Eu編號)，而介於IgG1之輕鏈與重鏈之間的(重鏈/輕鏈)IgG1鏈間二硫鍵形成在κ或λ輕鏈之C214與重鏈上鉸鏈區中之C220之間。
B. 抗體產生及產生
本發明之抗體可使用本領域已知的多種方法來產生。
1. 在宿主動物中產生多株抗體
在不同的宿主動物中產生多株抗體在本領域為熟知的(參見例如Harlow及Lane(編)(1988)Antibodies：A Laboratory Manual,CSH Press；及Harlow等人，(1989)Antibodies,NY,Cold Spring Harbor Press)。為了產生多株抗體，用抗原蛋白質或包含抗原蛋白質之細胞或製劑使免疫活性的動物(例如小鼠、大鼠、兔、山羊、非人類靈長類等)免疫。在一段時間之後，藉由採血或處死動物來獲得含多株抗體之血清。血清可以獲自動物之形式使用，或可對抗體進行部分或完全純化以提供免疫球蛋白分離部分或經分離之抗體製劑。
任何形式之抗原或含有抗原之細胞或製劑均可用於產生決定子特異性抗體。術語「抗原」以廣義使用且可包含所選標靶之任何免疫原性片段或決定子，包括單個抗原決定基、多個抗原決定基、單個或多個結構域或整個細胞外域(entire extracellular domain,ECD)。抗原可為經分離之全長蛋白質、細胞表面蛋白質(例如用在其表面上表現抗原之至少一部分的細胞免疫)或可溶性蛋白質(例如僅用蛋白質之ECD部分免疫)。可在經基因修飾之細胞中產生抗原。上述抗原中之任一者均可單獨或與本領域已知的一或多種免疫原性增強佐劑組合使用。編碼該抗原之DNA可為基因組或非基因組DNA(例如cDNA)，且可編碼ECD之至少一部分，從而足以引發免疫原性反應。任何載體均可用於對表現抗原之細胞進行轉型，包括但不限於腺病毒載體、慢病毒載體、質體及非病毒載體，諸如陽離子脂質。
2. 單株抗體
在所選實施例中，本發明預期使用單株抗體。術語「單株抗體」或「mAb」係指獲自實質上均質之抗體群體的抗體，亦即，構成該群體之個別抗體除了可能以微量存在之可能突變(例如天然存在之突變)以外皆為相同的。
可使用多種技術製備單株抗體，包括雜交瘤技術、重組技術、噬菌體呈現技術、轉殖基因動物(例如XenoMouse®)或其一些組合。舉例而言，在較佳實施例中， 可使用雜交瘤及生物化學及基因工程技術來產生單株抗體，諸如以下文獻中更詳細描述：An,Zhigiang(編)Therapeutic Monoclonal Antibodies：From Bench to Clinic,John Wiley and Sons，第1版.2009；Shire等人(編)Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing,Springer Science+Business Media LLC，第1版.2010；Harlow等人，Antibodies：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版.1988；Hammerling等人，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981)。在產生許多特異性結合決定子之單株抗體後，可藉由多種篩選法基於例如對決定子之親和力或內化速率來選擇特別適合之抗體。在尤佳實施例中，如本文中所描述而產生之單株抗體可用作「來源」抗體且經進一步修飾以例如改良對標靶之親和力、改良其在細胞培養物中之產量、降低活體內免疫原性、產生多特異性構建體等。
3. 人類抗體
抗體可包含完全人類抗體。術語「人類抗體」係指具有對應於由人類產生之抗體之胺基酸序列的胺基酸序列及/或使用以下所描述之用於製造人類抗體之技術中之任一種製造的抗體(較佳為單株抗體)。
在一個實施例中，可藉由篩選使用噬菌體呈現製備之重組組合抗體庫來分離重組人類抗體。在一個實施例中，該庫為使用由自B細胞分離之mRNA製備的人 類VL及VH cDNA產生的scFv噬菌體或酵母呈現庫。
亦可藉由將人類免疫球蛋白基因座引入轉殖基因動物，例如已部分或完全去活性之內生性免疫球蛋白基因且已引入人類免疫球蛋白基因之小鼠中來製造人類抗體。在刺激後，觀察到在所有方面均非常類似人體所見之抗體產生，包括基因重排、組裝及完全人類抗體譜系。此方法描述於例如以下文獻中：美國專利第5,545,807號、第5,545,806號、第5,569,825號、第5,625,126號、第5,633,425號、第5,661,016號以及關於XenoMouse®技術之美國專利第6,075,181號及第6,150,584號；以及Lonberg及Huszar,1995,PMID：7494109。或者，可經由產生針對標靶抗原之抗體的人類B淋巴細胞(此種B淋巴細胞可自受贅生性病症困擾之個體中回收或可在活體外免疫)的永生化來製備人類抗體。參見例如Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss，第77頁(1985)；Boerner等人，1991,PMID：2051030；及美國專利第5,750,373號。如同其他單株抗體，此種人類抗體可作為來源抗體。
4. 衍生抗體：
一旦如以上所描述之來源抗體經生成、篩選並分離後，即可對其進行進一步改變以提供與本發明相容且具有改良之醫藥特徵的抗體。較佳使用已知的分子工程改造技術來修飾或改變源抗體以提供具有所欲治療性質之衍生抗體。
4.1 嵌合抗體及人類化抗體
本發明之所選實施例包含免疫特異性結合所選決定子(例如SEZ6)，且出於本發明之目的可被視為「來源」抗體之鼠類單株抗體。在所選實施例中，與本發明相容之抗體可藉由來源抗體之恆定區及/或抗原結合胺基酸序列之視需要的修飾而源自於此種來源抗體。在某些實施例中，若藉由缺失、突變、取代、插入或組合來改變源抗體中之所選胺基酸，則抗體源自於來源抗體。在另一實施例中，「衍生」抗體為其中來源抗體之片段(例如一或多個CDR或整個重鏈及輕鏈可變區)與受體抗體序列組合或併入其中以提供衍生抗體(例如嵌合或人類化抗體)之抗體。此等衍生抗體可使用如以下所描述之標準分子生物學技術產生，諸如，例如以改良對決定子之親和力；以改良抗體穩定性；以改良細胞培養物中之產量及產率；以降低活體內免疫原性；以降低毒性；以促進活性部分之結合；或以產生多特異性抗體。此種抗體亦可藉由用化學手段或後轉譯修飾來修飾成熟分子(例如糖基化模式或聚乙二醇化)而源自於來源抗體。
在一個實施例中，本發明之嵌合抗體包含源自於至少兩個不同的物種或類別之抗體且已共價接合之蛋白質節段的嵌合抗體。術語「嵌合」抗體係針對與來自於特定物種或屬於特定抗體類別或子類之抗體相同或同源之重鏈及/或輕鏈之一部分，而該鏈之其餘部分與來自另一物種或屬於另一抗體類別或子類之抗體中的相應序列相同 或同源的構建體以及此種抗體之片段(美國專利第4,816,567號；Morrison等人，1984,PMID：6436822)。在一些較佳實施例中，本發明之嵌合抗體可包含可操作地連接於人類輕鏈及重鏈恆定區之所選鼠類重鏈及輕鏈可變區的全部或大部分。在其他尤佳實施例中，與本發明相容之抗體可「衍生於」本文中所揭示之小鼠抗體。
在其他實施例中，本發明之嵌合抗體為「CDR接枝」抗體，其中CDR(如使用Kabat、Chothia、McCallum等所定義)源自於特定物種或屬於特定抗體類別或子類，而抗體之其餘部分源自於另一物種或屬於另一抗體類別或子類。為了在人類中使用，可將一或多個所選齧齒動物CDR(例如小鼠CDR)接枝至人類受體抗體中，從而置換人類抗體之一或多個天然存在之CDR。此等構建體一般具有提供人類抗體完整功能之優勢，例如，補體依賴性細胞毒性(complement dependent cytotoxicity,CDC)及抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)，同時減少個體對抗體之不需要之免疫反應。在尤佳實施例中，CDR接枝抗體將包含併入人類架構序列中之獲自小鼠之一或多個CDR。
與CDR接枝抗體類似者為「人類化」抗體。如本文中所使用，「人類化」抗體為包含源自於一或多個非人類抗體(供體或來源抗體)之一或多個胺基酸序列(例如CDR序列)的人類抗體(受體抗體)。在某些實施例中，可向人類化抗體中引入「回復突變」，其中受體人類抗體之可變 區之一或多個FR中之殘基由來自非人類物種供體抗體之相應殘基置換。此種回復突變可協助維持接枝CDR之適當三維構形且從而改良親和力及抗體穩定性。可使用來自不同的供體物種之抗體，包括但不限於小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類。此外，人類化抗體可包含受體抗體或供體抗體中未見之新殘基以例如進一步改良抗體效能。為此可使用如本文中所闡述之先前技術中之技術在不過度實驗之情況下容易地提供與本發明相容且包含以下實例中所闡述之源鼠類抗體的CDR接枝抗體及人類化抗體。
可進一步使用多種本領域公認之技術來確定何種人類序列用作受體抗體以提供根據本發明之人類化構建體。相容性人類生殖系序列及測定其作為受體序列之適合性的方法的編集揭示於例如以下文獻中：Tomlinson,I.A.等人，(1992)J.Mol.Biol.227：776-798；Cook,G.P.等人，(1995)Immunol.Today 16：237-242；Chothia,D.等人，(1992)J.Mol.Biol.227：799-817；及Tomlinson等人，(1995)EMBO J 14：4628-4638，各文獻全文併入本文中。亦可使用提供人類免疫球蛋白可變區序列之詳盡目錄的V-BASE目錄(VBASE2-Retter等人，Nucleic Acid Res.33；671-674,2005)(由英國劍橋MRC蛋白質工程中心之Tomlinson,I.A.等人編譯)來鑑別相容性受體序列。另外，例如美國專利第6,300,064號中所描述之一致人類架構序列經證明亦可為可根據本發明教示使用之相容性受體序列。一般而言，基於與鼠類來源架構序列之同源性以及對來源及受體抗體之 CDR典型結構之分析來選擇人類架構受體序列。隨後可使用本領域公認之技術來合成來源抗體之重鏈及輕鏈可變區之衍生序列。
舉例而言，CDR接枝抗體及人類化抗體及相關方法描述於美國專利第6,180,370號及第5,693,762號中。關於進一步細節，參見例如Jones等人，1986,PMID：3713831；以及美國專利第6,982,321號及第7,087,409號。
CDR接枝或人類化抗體可變區與人類受體可變區之序列一致性或同源性可如本文中所論述來確定，且當如此量測時較佳將具有至少60%或65%序列一致性，更佳至少70%、75%、80%、85%或90%序列一致性，甚至更佳至少93%、95%、98%或99%序列一致性。不一致之殘基位置較佳僅因保守胺基酸取代而不同。「保守胺基酸取代」為胺基酸殘基由具有化學性質(例如電荷或疏水性)類似之側鏈(R基團)的另一胺基酸殘基取代的胺基酸取代。一般而言，保守胺基酸取代實質上不改變蛋白質之功能性質。在兩個或更多個胺基酸序列在因保守取代而彼此不同的情況下，可上調序列一致性或相似度百分比以修正取代之保守性質。
4.2 位點特異性抗體
本發明之抗體可經工程改造以促進與卡奇黴素-連接子構建體之結合。就細胞毒素在抗體上之位置及藥物對抗體之比例(drug to antibody ratio,DAR)而言，抗體藥物結合物製劑宜包含ADC分子之同源群體。基於本發 明，本領域技術人員可容易地製造位點特異性工程改造構建體且使其選擇性地與如本文中所描述之卡奇黴素-連接子構建體結合。如本申請案中所使用，「位點特異性抗體」或「位點特異性構建體」意謂抗體或其免疫活性片段，其中重鏈或輕鏈中之至少一個胺基酸缺失、改變或經取代(較佳經另一胺基酸)以提供至少一個游離半胱胺酸。類似地，「位點特異性結合物」應被視為意謂包含位點特異性抗體及至少一種與未配對之半胱胺酸結合之卡奇黴素化合物的ADC。在某些實施例中，未配對半胱胺酸殘基將包含未配對之鏈內殘基。在其他較佳實施例中，游離半胱胺酸殘基將包含未配對之鏈間半胱胺酸殘基。在其他較佳實施例中，且如以下將更詳細論述，未配對或游離半胱胺酸可經工程改造至所選抗體或其免疫活性片段中所存在之任何殘基位點中(亦即，此種位點不需要破壞天然存在之天然二硫鍵)。經工程改造之抗體可具有不同的同型，例如IgG、IgE、IgA或IgD；且在彼等類別內，抗體可具有不同的子類，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。對於IgG構建體，抗體之輕鏈可包含κ或λ同型，各自併入C214，在較佳實施例中其可能由於IgG1重鏈中缺乏C220殘基而未配對。
無論在預選位點上引入游離半胱胺酸或是破壞天然二硫鍵，如本文中所描述之抗體之工程改造均調節卡奇黴素之化學計算結合，由此允許藥物對抗體之比例(「DAR」)在很大程度上精確固定，從而產生實質上DAR均質之製劑。此外，所揭示之位點特異性構建體進一步提 供就有效負載於抗體上之位置而言實質上均質之製劑。使用如本文中所描述之穩定劑選擇性結合經工程改造之構建體增加所欲之DAR物質百分比，且連同所製造之未配對或游離半胱胺酸位點一起賦予結合物穩定性及均質性，從而降低由卡奇黴素之無意溶出造成的非特異性毒性。由游離半胱胺酸之選擇性結合及製劑之相對均質性(在結合位置及DAR方面)提供之此毒性降低亦提供增強之治療指數，由此允許增加腫瘤位點上之卡奇黴素有效負載水平。另外，所產生之位點特異性結合物可視情況使用多種層析方法進行純化以提供大於75%、80%、85%、90%或甚至95%之高度均質之包含所欲DAR物質(例如DAR=2)之位點特異性結合物製劑。此種結合物均質性可藉由限制可能增加毒性之不需要之較高的DAR結合物雜質(其可能相對不穩定)而進一步增加所揭示之製劑的治療指數。
應瞭解，所揭示之工程改造結合物製劑所展現之良好性質至少部分基於特異性指導結合且在卡奇黴素位置及絕對DAR方面大大限制所製造之結合物的能力。不同於大部分習知ADC製劑，本發明之較佳實施例不完全依賴於部分或完全還原抗體以提供隨機結合部位及DAR物質之相對不受控制之產生。相反，所選本發明實施例藉由工程改造靶向抗體以破壞一或多個天然存在之(亦即，「天然」)鏈間或鏈內二硫橋或在任何位置引入半胱胺酸殘基而提供一或多個預定未配對(或游離)半胱胺酸位點。在後一種情況下，應瞭解，在所選實施例中，可使用 標準分子工程技術將半胱胺酸殘基沿抗體(或其免疫活性片段)重鏈或輕鏈在任一處併入或隨附於其中。在其他較佳實施例中，天然二硫鍵之破壞可與非天然半胱胺酸之引入組合而實現，以提供多個隨後可用作結合位點之游離半胱胺酸。
就引入或添加半胱胺酸殘基以提供游離半胱胺酸(與破壞天然二硫鍵相反)而言，本領域技術人員可容易地辨別抗體或抗體片段上之相容性位置。因此，在所選實施例中，視所欲DAR、抗體構建體、所選卡奇黴素-連接子及抗體標靶而定，半胱胺酸可引入CH1結構域、CH2結構域或CH3結構域或其任何組合中。在其他較佳實施例，半胱胺酸可引入κ或λ CL結構域中，且在尤佳實施例中引入CL結構域之c端區域中。在各情況下，可改變、移除或取代半胱胺酸插入位點近端之其他胺基酸殘基以促進分子穩定性、結合效率或在連接後對卡奇黴素有效負載提供保護性環境。在特定實施例中，經取代之殘基存在於抗體之任何可及位點上。藉由用半胱胺酸取代此種表面殘基，反應性硫醇基從而位於抗體上之易及位點上且可如本文中進一步描述之選擇性地還原。
除非上下文另外指出，否則如本文中所使用，術語「游離半胱胺酸」或「未配對半胱胺酸」可互換使用且應意謂抗體之任何半胱胺酸組分，無論是天然存在或是使用分子工程技術特異性地併入在所選殘基位置上，其均不會與同一抗體上之另一半胱胺酸形成天然二硫橋。 因而，在某些較佳實施例中，游離半胱胺酸可包含天然存在之半胱胺酸，其天然鏈間或鏈內二硫橋搭配物已經取代、消除或以其他方式改變以便在生理條件下破壞天然存在之二硫橋，從而致使未配對半胱胺酸適合於位點特異性結合。在其他較佳實施例中，游離或未配對半胱胺酸將包含選擇性地置放在抗體重鏈或輕鏈胺基酸序列內之預定位點上的半胱胺酸殘基。應瞭解，視系統之氧化狀態而定，在結合之前，游離或未配對半胱胺酸可作為硫醇(經還原之半胱胺酸)、作為封端半胱胺酸(經氧化)或作為與同一抗體上之另一游離半胱胺酸之非天然分子內二硫鍵(經氧化)存在。如以下更詳細論述，此抗體構建體之弱還原將提供可用於位點特異性結合之硫醇。在尤佳實施例中，游離或未配對半胱胺酸(無論是天然存在或是併入)將進行選擇性還原及後續卡奇黴素結合以提供所揭示之均質DAR組合物。
在一些實施例中，鏈間半胱胺酸殘基缺失。在其他實施例中，鏈間半胱胺酸經另一胺基酸(例如天然存在之胺基酸)取代。舉例而言，胺基酸取代可導致鏈間半胱胺酸經中性(例如絲胺酸、蘇胺酸或甘胺酸)或親水性(例如甲硫胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸或異白胺酸)殘基置換。在一個尤佳實施例中，鏈間半胱胺酸經絲胺酸置換。
在本發明所預期之一些實施例中，缺失或經取代之半胱胺酸殘基處於輕鏈(κ或λ)上，從而將游離半胱胺酸留在重鏈上。在其他實施例中，缺失或經取代之 半胱胺酸殘基處於重鏈上，從而將游離半胱胺酸留在輕鏈恆定區上。在組裝後，應瞭解，完整抗體之輕鏈或重鏈中之單一半胱胺酸缺失或取代產生具有兩個未配對半胱胺酸殘基之位點特異性抗體。
在一個尤佳實施例中，IgG輕鏈(κ或λ)之214位置上的半胱胺酸(C214)缺失或經取代。在另一較佳實施例中，IgG重鏈上之220位置上的半胱胺酸(C220)缺失或經取代。在其他實施例中，重鏈上之226位置或229位置上的半胱胺酸缺失或經取代。在一個實施例中，重鏈上之C220經絲胺酸取代(C220S)以在輕鏈中提供所欲游離半胱胺酸。將此種工程改造構建體用於以下實例中以提供與本文中之教示相容的新穎抗體藥物結合物。在另一實施例中，輕鏈中之C214經絲胺酸取代(C214S)以在重鏈中提供所欲游離半胱胺酸。此等較佳構建體之彙總即將示於下文表2中，其中所有編號均根據如Kabat中所闡述之EU指數，且WT表示「野生型」或無變化之天然恆定區序列，且△指定胺基酸殘基之缺失(例如，C214△指示214位置上之半胱胺酸已缺失)。
就引入或添加半胱胺酸殘基以提供游離半胱胺酸(與破壞天然二硫鍵相反)而言，本領域技術人員可容易地辨別抗體或抗體片段上之相容性位置。因此，在所選實施例中，視所欲DAR、抗體構建體、所選有效負載及抗體標靶而定，半胱胺酸可引入CH1結構域、CH2結構域或CH3結構域或其任何組合中。在其他較佳實施例，半胱胺酸可引入κ或λ CL結構域中，且在尤佳實施例中引入CL結構域之c端區域中。在各情況下，可改變、移除或取代半胱胺酸插入位點近端之其他胺基酸殘基以促進分子穩定性、結合效率或在連接後對有效負載提供保護性環境。在特定實施例中，經取代之殘基存在於抗體之任何可及位點上。藉由用半胱胺酸取代此種表面殘基，反應性硫醇基從而位於抗體上之易及位點上，且可如本文中進一步描述 之選擇性地還原。在特定實施例中，經取代之殘基存在於抗體之任何可及位點上。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基從而得以位於抗體之可及位點上且可用於選擇性地結合抗體。在某些實施例中，以下殘基中之任何一或多個均可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號)；重鏈之A118(Eu編號)；及重鏈Fc區之S400(Eu編號)。其他取代位置及製造相容性位點特異性抗體之方法闡述於美國專利第7,521,541號中，其全文併入本文中。
提供位點特異性構建體後，便可使用本文中所揭示之新穎技術，在實質上不破壞完整天然二硫橋之情況下，選擇性地還原所產生之游離半胱胺酸，從而主要在所選半胱胺酸位點上提供反應性硫醇。此等所製造之硫醇隨後與所揭示之卡奇黴素-連接子構建體進行定向結合且無實質性非特異性結合。亦即，本文中所揭示之經工程改造之構建體及視情況選擇性還原技術可主要地用於消除卡奇黴素有效負載之非特異性隨機結合。顯然，此舉提供在DAR物質分佈及靶向抗體上之卡奇黴素位置兩方面均實質上均質之製劑。如以下所論述，消除相對較高DAR污染物本身就可降低非特異性毒性並擴大製劑之治療指數。此外，此種選擇性允許卡奇黴素有效負載在很大程度上處於特別有利之預定位置(諸如輕鏈恆定區之末端區域)，其中卡奇黴素-連接子構建體在到達腫瘤前，受到一定程度之保護，但在遞送後經適當呈現及處理。因而，設計經工程改造之抗體以促進特異性卡奇黴素有效負載定位亦可用於 降低所揭示之製劑的非特異性毒性。最後，選擇性地且可再現地直接結合抗體之能力大幅簡化對所得組合物之表徵，從而促進藥物開發。
應瞭解，此等預定游離半胱胺酸位點之產生可使用本領域公認之分子工程技術在抗體上之預選位點上引入半胱胺酸或者移除、改變或置換二硫鍵之組成半胱胺酸殘基之一來達成。使用此等技術，本領域技術人員應瞭解任何抗體類別或同型均可經工程改造以展現能夠根據本發明選擇性地結合之一或多個游離半胱胺酸。此外，視所欲DAR而定，所選抗體可經工程改造以特異性展現1、2、3、4、5、6、7或甚至8個游離半胱胺酸。更佳地，所選抗體將經工程改造以含有2個或4個游離半胱胺酸且甚至更佳含有2個游離半胱胺酸。亦應瞭解，游離半胱胺酸可位於經工程改造之抗體中，以促進結合之卡奇黴素遞送至標靶，同時降低非特異性毒性。就此而言，包含IgG1抗體之所選本發明實施例，將卡奇黴素有效負載定位於CH1結構域上且更佳於該結構域之C端上。在其他較佳實施例中，抗體構建體將經工程改造以便將卡奇黴素定位於輕鏈恆定區上，且更佳於該恆定區之C端上。
顯然，亦可藉由使用以下所闡述之新穎穩定劑及卡奇黴素-連接子構建體進行構建體之選擇性還原而有助於限制有效負載與經工程改造之游離半胱胺酸之結合。如本文中所使用之「選擇性還原」將意謂經工程改造之構建體暴露於可還原游離半胱胺酸(從而提供反應性硫 醇)而實質上不破壞完整天然二硫鍵之還原條件。一般而言，可使用可提供所欲硫醇而不破壞完整二硫鍵之任何還原劑或其組合來實現選擇性還原。在某些較佳實施例中，且如以下實例中所闡述，可使用穩定劑及弱還原條件來實現選擇性還原，以製備用於結合之經工程改造之構建體。如本文中更詳細論述，相容性穩定劑一般將有助於還原游離半胱胺酸且允許所欲結合在不太嚴格之還原條件下進行。由此允許大多數天然二硫鍵保持完整且顯著減少非特異性結合之量，從而限制不需要之污染物及潛在毒性。可藉由使用許多系統實現相對較弱還原條件，但較佳包括使用含硫醇之化合物。應瞭解，鑒於本發明，本領域技術人員可容易地獲得相容性還原系統。
4.3 恆定區修飾及改變之糖基化
所選本發明實施例亦可包含恆定區(亦即，Fc區)之取代或修飾，包括但不限於胺基酸殘基取代、突變及/或修飾，由此產生具有較佳特徵之化合物，該特徵包括但不限於：藥物動力學改變、血清半衰期增加、結合親和力增加、免疫原性降低、產量增加、Fc配位體與Fc受體(Fc receptor,FcR)結合改變、ADCC或CDC增高或降低、糖基化改變或經修飾之恆定區結合特異性。
可產生具有改良之Fc效應功能的化合物，例如，藉由改變Fc結構域與Fc受體(例如，Fc γ RI、Fc γ RIIA及Fc γ RIIB、Fc γ RIII及FcRn)之間的相互作用所涉及的胺基酸殘基，由此可導致細胞毒性增加及/或藥物 動力學改變，諸如血清半衰期增加(參見例如Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)；Capel等人，Immunomethods 4：25-34(1994)；及de Haas等人，J.Lab.Clin.Med.126：330-41(1995)。
在所選實施例中，可藉由修飾(例如取代、缺失或添加)被鑑別為涉及Fc結構域與FcRn受體之間的相互作用的胺基酸殘基來產生具有增加之活體內半衰期的抗體(參見例如國際公開案第WO 97/34631號、第WO 04/029207號；美國專利第6,737,056號及美國公開案第2003/0190311號)。就此種實施例而言，Fc變異體可在哺乳動物、較佳人類中提供大於5天、大於10天、大於15天、較佳大於20天、大於25天、大於30天、大於35天、大於40天、大於45天、大於2個月、大於3個月、大於4個月或大於5個月之半衰期。增加半衰期導致較高血清效價，由此因而降低抗體藥物結合物之投與頻率或降低所投與之抗體濃度。例如在轉殖基因小鼠或表現人類FcRn之經轉染人類細胞株中，或在投與具有變異Fc區之多胜肽的靈長類中，分析活體內與人類FcRn之結合及人類FcRn高親和力結合多胜肽之血清半衰期。WO 2000/42072描述與FcRn具有改良或削弱之結合的抗體變異體。亦參見例如Shields等人，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。
在其他實施例中，Fc變化可導致ADCC或CDC活性增高或降低。如本領域已知，CDC係指在補體存在下溶解靶細胞，而ADCC係指分泌的Ig與某些細胞毒性 細胞(例如天然殺手細胞、嗜中性白血球及巨噬細胞)上所呈現之FcR結合，使得此等細胞毒性效應細胞能夠特異性結合攜帶抗原之靶細胞且隨後用細胞毒素殺死該靶細胞的細胞毒性形式。在本發明之上下文中，抗體變異體具有「經改變之」FcR結合親和力，與親本或未經修飾之抗體或與包含天然序列FcR之抗體相比有所增強或有所削弱之結合。此種呈現減少之結合的變異體可具有極少或不明顯之結合，例如與天然序列相比0至20%與FcR結合，例如，如藉由本領域所熟知的技術所測定。在其他實施例中，變異體與天然免疫球蛋白Fc結構域相比將展現增強之結合。應瞭解，此等類型之Fc變異體可有利地用於增強所揭示之抗體的有效抗贅生性質。在其他實施例中，此種變化導致結合親和力增加、免疫原性降低、產量增加、糖基化及/或二硫鍵(例如對於結合位點)改變、經修飾之結合特異性、增加吞噬及/或細胞表面受體(例如B細胞受體；B cell receptor,BCR)向下調控等。
其他實施例包含一或多種經工程改造之糖型，例如，包含共價連接於蛋白質(例如在Fc結構域中)之經改變之醣基化模式或經改變之碳水化合物組成的位點特異性抗體。參見例如Shields,R.L.等人，(2002)J.Biol.Chem.277：26733-26740。經工程改造之糖型可能適用於多種目的，包括但不限於增強或減弱效應功能、增加抗體對標靶之親和力或促進抗體產生。在需要減弱之效應功能的某些實施例中，分子可經工程改造以表現非醣基化形式。可消 除一或多個可變區架構醣基化位點從而消除該位點上之醣基化的取代為熟知的(參見例如美國專利第5,714,350號及第6,350,861號)。相反，可藉由在一或多個額外醣基化位點中進行工程改造來賦予含Fc之分子以增強之效應功能或改良之結合。
其他實施例包括具有經改變之醣基化組成的Fc變異體，諸如具有減少量之岩藻糖基殘基的岩藻糖基化不足抗體或具有增加之對分GlcNAc結構的抗體。此種經改變之醣基化模式已顯示可增加抗體之ADCC能力。可藉由本領域技術人員已知的任何方法來產生經工程改造之糖型，例如藉由使用經工程改造或變異表現株系、藉由與一或多種酶(例如N-乙醯基葡糖胺基轉移酶III(GnTIII))共同表現、藉由在不同的生物體或來自不同生物體的細胞株中表現包含Fc區之分子，或藉由在已表現包含Fc區之分子之後修飾碳水化合物(參見例如WO 2012/117002)。
4.4 片段
不考慮選擇何種抗體形式(例如嵌合、人類化等)來實施本發明，應瞭解，可根據本文中之教示使用其免疫活性片段作為抗體藥物結合物之靶向劑。「抗體片段」包含完整抗體之至少一部分。如本文中所使用，術語抗體分子之「片段」包括抗體之抗原結合片段，且術語「抗原結合片段」或「免疫活性片段」係指免疫球蛋白或抗體中免疫特異性結合所選抗原或其免疫原性決定子或與其反應或與得到該等片段之完整抗體競爭特異性抗原結合的多肽 片段。
例示性位點特異性片段包括：可變輕鏈片段(VL)、可變重鏈片段(VH)、scFv、F(ab')2片段、Fab片段、Fd片段、Fv片段、單域抗體片段、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子及由抗體片段形成之多特異性抗體。另外，活性位點特異性片段包含抗體中保留其與抗原/受質或受體相互作用且以類似於完整抗體之方式(但可能在一定程度上以較低頻率)對其進行修飾之能力的部分。此種抗體片段可經進一步工程改造以包含一或多個游離半胱胺酸。
在其他實施例中，抗體片段為包含Fc區的片段，且其保留當存在於完整抗體中時，正常情況下與Fc區相關之生物功能(諸如FcRn結合、抗體半衰期調節、ADCC功能及補體結合)中的至少一種。在一個實施例中，抗體片段為具有實質上類似於完整抗體之活體內半衰期的單價抗體。舉例而言，此種抗體片段可包含能夠賦予該片段活體內穩定性之與包含至少一個游離半胱胺酸之Fc序列連接之抗原結合臂。
如本領域技術人員應充分認識到，可藉由分子工程或經由對完整或完全抗體或抗體鏈之化學或酶促處理(諸如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶)或藉由重組手段來獲得片段。關於抗體片段之更詳細描述，參見例如Fundamental Immunology,W.E.Paul編，Raven Press,N.Y.(1999)。
4.5 多價構建體
在其他實施例中，本發明之抗體藥物結合 物可為單價或多價的(例如二價、三價等)。如本文中所使用，術語「原子價」係指與抗體締合之潛在標靶結合位點數目。各標靶結合位點特異性結合一個標靶分子或標靶分子上之特定位置或基因座。當抗體為單價時，該分子之各結合位點將特異性地結合於單一抗原位置或抗原決定基。當抗體包含多於一個標靶結合位點(多價)時，各標靶結合位點可特異性結合相同或不同的分子(例如，可結合不同的配位體或不同的抗原，或同一抗原上的不同的抗原決定基或位置)。參見例如美國公開案第2009/0130105號。
在一個實施例中，抗體為雙特異性抗體，其中兩個鏈具有不同的特異性，如Millstein等人，1983,Nature,305：537-539中所描述。其他實施例包括具有額外特異性之抗體，諸如三特異性抗體。其他更複雜之相容性多特異性構建體及其製造方法闡述於以下文獻中：美國公開案第2009/0155255號；以及WO 94/04690；Suresh等人，1986,Methods in Enzymology,121：210；及WO96/27011。
多價抗體可免疫特異性結合所欲標靶分子之不同的抗原決定基，或可免疫特異性結合標靶分子以及異源抗原決定基，諸如異源多肽或固體載體材料。儘管較佳實施例僅結合兩個抗原(亦即，雙特異性抗體)，但本發明亦涵蓋具有額外特異性之抗體，諸如三特異性抗體。雙特異性抗體亦包括交聯或「異源結合物」抗體。舉例而言，異源結合物中之抗體中一者可與卵白素(avidin)偶合，而另一者與生物素偶合。此種抗體已被提議用於，例如使免疫 系統細胞靶向不需要之細胞(美國專利第4,676,980號)，且用於治療HIV感染(WO 91/00360、WO 92/200373及EP 03089)。可使用任何適宜之交聯方法來製造異源結合物抗體。適合之交聯劑在本領域為熟知的，且連同許多交聯技術一起揭示於美國專利第4,676,980號中。
5. 抗體之重組產生
可使用獲自抗體產生細胞之遺傳物質及重組技術來產生或修飾抗體及其片段(參見例如Berger及Kimmel,Guide to Molecular Cloning Techniques,Methods in Enzymology，第152卷，Academic Press,Inc.,San Diego,CA；Sambrook及Russell(編)(2000)Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第3版),NY,Cold Spring Harbor Laboratory Press；Ausubel等人，(2002)Short Protocols in Molecular Biology：A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Wiley,John & Sons,Inc.；及美國專利第7,709,611號)。核酸可存在於完整細胞中、細胞溶解產物中或呈部分純化或實質上純形式。當藉由標準技術，包括鹼/SDS處理、CsCl分帶、管柱層析、瓊脂糖凝膠電泳及本領域熟知的其他技術與其他細胞組分或其他污染物，例如其他細胞核酸或蛋白質分離時，核酸為「經分離的」或變得實質上為純的。本發明之核酸可為例如DNA(例如基因組DNA、cDNA)、RNA及其人工變異體(例如胜肽核酸)，無論是單股或是雙股DNA或RNA，且可能含有或可能不含內含子。在一較佳實施例中，核酸為cDNA分 子。
可使用標準分子生物學技術獲得核酸。對於由雜交瘤表現之抗體而言，可藉由標準PCR擴增或cDNA選殖技術來獲得編碼抗體輕鏈及重鏈之cDNA。對於獲自免疫球蛋白基因庫(例如，諸如當使用噬菌體呈現技術時)之抗體，可使用標準本領域公認技術自該庫回收編碼抗體之免疫活性片段的核酸。
可藉由標準重組DNA技術進一步處理編碼VH及VL節段之DNA片段以便，例如，將可變區基因轉化至全長抗體鏈基因、Fab片段基因或scFv基因。在此等處理中，使編碼VL或VH之DNA片段可操作地連接於編碼另一蛋白質之另一DNA片段，諸如抗體恆定區或撓性連接子。如本文中所使用之術語「可操作地連接」意謂兩個DNA片段接合，使得由該兩個DNA片段編碼之胺基酸序列保持在架構內。
可藉由可操作地連接編碼VH之DNA與編碼重鏈恆定區(CH1、CH2及CH3)之另一DNA分子而將編碼VH區之經分離DNA轉化至全長重鏈基因。人類重鏈恆定區基因之序列在本領域為已知的(參見例如Kabat等人(1991)(同上))且涵蓋此等區域之DNA片段可藉由標準PCR擴增而獲得。重鏈恆定區可為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恆定區，但最佳為IgG1或IgG4恆定區。例示性IgG1恆定區闡述於SEQ ID NO：2中。對於Fab片段重鏈基因，編碼VH之DNA可操作地連接於僅編 碼重鏈CH1恆定區之另一DNA分子。
可藉由可操作地連接編碼VL之DNA與編碼輕鏈恆定區CL之另一DNA分子而將編碼VL區之經分離DNA轉化至全長輕鏈基因(以及Fab輕鏈基因)。人類輕鏈恆定區基因之序列在本領域為已知的(參見例如Kabat等人(1991)(同上))且涵蓋此等區域之DNA片段可藉由標準PCR擴增而獲得。輕鏈恆定區可為κ或λ恆定區，但最佳為κ恆定區。就此而言，例示性相容性κ輕鏈恆定區闡述於SEQ ID NO：1中。
與本發明相容之抗體可使用包含以下各物之載體來產生：如以上所描述之此種核酸，其可操作地連接於啟動子(參見例如WO 86/05807；WO 89/01036；及美國專利第5,122,464號)；以及真核生物分泌途徑之其他轉錄調節及處理控制元件。隨後使用本領域公認之技術培養攜帶此種載體之宿主細胞及宿主表現系統以提供所欲抗體。
如本文中所使用，術語「宿主表現系統」包括可經工程改造以產生核酸或與本發明相容之多肽及抗體的任何種類的細胞系統。此種宿主表現系統包括但不限於經重組噬菌體DNA或質體DNA轉型或轉染之微生物(例如大腸桿菌或枯草芽孢桿菌)；經重組酵母表現載體轉染之酵母(例如酵母菌屬)；或攜帶含有源自於哺乳動物細胞或病毒基因組之啟動子(例如腺病毒晚期啟動子)之重組表現構建體的哺乳動物細胞(例如COS、CHO-S、HEK-293T、3T3細胞)。可用兩種表現載體共轉染宿主細胞，例如第一載體 編碼重鏈衍生之多肽，而第二載體編碼輕鏈衍生之多肽。
對哺乳動物細胞進行轉型之方法在本領域為熟知的。例如參見美國專利第4,399,216號、第4,912,040號、第4,740,461號及第4,959,455號。宿主細胞亦可經工程改造以允許產生具有不同的特徵的抗原結合分子(例如經修飾之糖型或具有GnTIII活性之蛋白質)。
對於長期而言，較佳為重組蛋白質穩定表現之高產率產生。因此，穩定表現所選抗體之細胞株可使用標準本領域公認技術加以工程改造且形成本發明之一部分。與使用含有病毒複製起點之表現載體相反，可用由適當表現控制元件(例如，啟動子或增強子序列、轉錄終止子、聚腺苷酸化位點等)控制之DNA及可選標記物對宿主細胞進行轉型。本領域所熟知的任何選擇系統均可使用，包括在某些條件下提供增強表現之有效方法的麩胺酸合成酶基因表現系統(glutamine synthetase gene expression system,GS系統)。完全或部分結合EP 0 216 846、EP 0 256 055、EP 0 323 997及EP 0 338 841以及美國專利第5,591,639號及第5,879,936號來論述GS系統。用於開發穩定細胞株之另一較佳表現系統為FreedomTM CHO-S套組(Life Technologies)。
在已藉由重組表現或任何其他所揭示之技術產生與本發明相容之抗體後，可藉由本領域已知的方法對其進行純化，意謂對其自天然環境及自會干擾包括抗體之ADC的治療用途的污染物進行鑑別、表徵、分離及/或 回收。經分離之抗體包括重組細胞內之原位抗體。
可使用不同的本領域公認技術來純化此等經分離之製劑，諸如，例如離子交換及尺寸篩除層析法、透析、濾洗及親和力層析，尤其是蛋白A或蛋白G親和力層析。
6. 產生後選擇
無論如何獲得，可選擇產生抗體之細胞(例如，雜交瘤、酵母菌落等)、選殖且進一步篩選理想特徵，包括例如穩定生長、高抗體產量及理想抗體特徵，諸如對相關抗原之高親和力。雜交瘤可在活體外之細胞培養物中或在活體內之同基因的免疫受損動物中擴增。選擇、選殖及擴增雜交瘤及/或集落之方法對於本領域技術人員為熟知的。在鑑別所欲抗體後，可分離相關遺傳物質，加以處理且使用常用本領域公認分子生物學及生物化學技術進行表現。
由天然庫產生之抗體(天然或合成)可具有中等親和力(約106至107M-1之KA)。為了提高親和力，可藉由構建抗體庫(例如，藉由使用易出錯聚合酶在活體外引入隨機突變)且再選擇相對於彼等二級庫對抗原具有高親和力之抗體(例如藉由使用噬菌體或酵母呈現)而在活體外模擬親和力成熟。WO 9607754描述在免疫球蛋白輕鏈之CDR中誘導突變誘發以建立輕鏈基因庫的方法。
可使用不同的技術來選擇抗體，包括但不限於噬菌體或酵母呈現，其中在噬菌體或酵母上合成人類 組合抗體或scFv片段庫，用相關抗原或其抗體結合部分篩選該庫，且分離結合該抗原之噬菌體或酵母，由此可獲得抗體或免疫活性片段(Vaughan等人，1996,PMID：9630891；Sheets等人，1998,PMID：9600934；Boder等人，1997,PMID：9181578；Pepper等人，2008,PMID：18336206)。用於產生噬菌體或酵母呈現庫之套組可購自市面。亦存在可用於產生及篩選抗體呈現庫之其他方法及試劑(參見美國專利第5,223,409號；WO 92/18619、WO 91/17271、WO 92/20791、WO 92/15679、WO 93/01288、WO 92/01047、WO 92/09690；及Barbas等人，1991,PMID：1896445)。此種技術有利地允許篩選許多候選抗體且提供對序列之相對容易之處理(例如，藉由重組改組)。
V 抗體之特徵
在所選實施例中，可選擇產生抗體之細胞(例如，雜交瘤或酵母菌落)、選殖且進一步篩選適宜性質，包括例如穩定生長、高抗體產量及如以下更詳細論述之理想抗體藥物結合物特徵。在其他情況下，可藉由選擇特定抗原(例如特定蛋白質結構域)或標靶抗原之免疫活性片段以用於對動物進行接種來賦予抗體之特徵。在其他實施例中，所選抗體可如以上所描述經工程改造以增強或精化免疫化學特徵，諸如親和力或藥物動力學。
A. 中和抗體
在所選實施例中，與本發明相容之抗體可為「拮抗劑」或「中和」抗體，意謂抗體可與決定子締合， 且直接或藉由防止該決定子與結合搭配物(諸如配位體或受體)締合，阻斷或抑制該決定子之活性，從而中斷分子相互作用將引起之生物反應。當過量抗體使決定子所結合之結合搭配物的量減少至少約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、97%、99%或更多時，中和或拮抗劑抗體實質上將抑制決定子與其配位體或受質結合，如例如藉由標靶分子活性或在活體外競爭性結合分析中所量測。應瞭解，可使用本領域公認之技術直接量測經修飾之活性，或可藉由經改變之活性在下游所具有之影響(例如腫瘤發生或細胞存活率)來量測。
B. 內在化抗體
在許多情況下，所選決定子保持與腫瘤生成細胞表面締合，從而允許所揭示之ADC的定位及內在化。在較佳實施例中，此種抗體將與一或多個內在化後可殺死細胞之卡奇黴素有效負載締合或結合。在尤佳實施例中，本發明之ADC將包含具有卡奇黴素有效負載之內在化位點特異性ADC。
如本文中所使用，「內在化」之抗體為在與相關抗原或受體結合後由細胞吸收(連同任何細胞毒素一起)之抗體。對於治療性應用，內在化較佳將在活體內有需要之個體中發生。內在化之ADC的數目可能足以殺死表現抗原之細胞，尤其是表現抗原之癌症幹細胞。視卡奇黴素或ADC整體之效力(例如，基於DAR)而定，單一抗體分子吸收至細胞中可能足以殺死與該抗體結合之靶細胞。舉例 而言，在較高DAR及已連接之卡奇黴素之有效遞送下，一些ADC可能高度有效，以致於數個分子之內在化便足以殺死腫瘤細胞。抗體在與哺乳動物細胞結合後是否內在化可藉由不同的本領域公認分析法(例如皂草素分析，諸如Mab-Zap及Fab-Zap；Advanced Targeting Systems)來確定。偵測抗體是否內在化至細胞中之方法亦描述於美國專利第7,619,068號中。
C. 消耗抗體
在其他實施例中，本發明之抗體為消耗抗體。術語「消耗」抗體係指較佳結合細胞表面上或附近之抗原且誘導、促進或導致細胞死亡(例如藉由CDC、ADCC或引入細胞毒性劑)的抗體。在較佳實施例中，所選消耗抗體將與細胞毒素結合。消耗抗體較佳將能夠殺死所限定之細胞群體中的至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、97%或99%表現SEZ6之細胞。在一些實施例中，該細胞群體可包含經富集、切片、純化或分離之腫瘤生成細胞，包括癌症幹細胞。在其他實施例中，該細胞群體可包括包含癌症幹細胞之完整腫瘤樣品或非均質腫瘤萃取物。根據本文中之教示，可使用標準生物化學技術來監測及定量腫瘤生成細胞之消耗。
D. 結合親和力
與本發明相容之抗體較佳對所選決定子(例如SEZ6)具有高結合親和力。術語「KD」係指特定抗體-抗原相互作用之平衡解離常數或表觀親和力。當解離常數KD (koff/kon)10-6M時，與本發明相容之抗體可免疫特異性結合其標靶抗原。該抗體當KD 5×10-9M時以高親和力，且當KD 5×10-10M時以極高親和力特異性結合抗原。在本發明之一個實施例中，該抗體具有10-9M之KD及約1×10-4/秒(sec)之解離速率。在本發明之一個實施例中，解離速率<1×10-5/sec。在本發明之其他實施例中，抗體將以介於約10-7M與10-10M之間的KD結合決定子，且在另一實施例中，其將以KD 2×10-10M結合。本發明之其他所選實施例包括具有小於10-6M、小於5×10-6M、小於10-7M、小於5×10-7M、小於10-8M、小於5×10-8M、小於10-9M、小於5×10-9M、小於10-10M、小於5×10-10M、小於10-11M、小於5×10-11M、小於10-12M、小於5×10-12M、小於10-13M、小於5×10-13M、小於10-14M、小於5×10-14M、小於10-15M或小於5×10-15M之KD(koff/kon)的抗體。
在某些實施例中，與本發明相容之抗體以至少105M-1s-1、至少2×105M-1s-1、至少5×105M-1s-1、至少106M-1s-1、至少5×106M-1s1、至少107M-1s-1、至少5×107M-1s-1或至少108M-1s-1之締合速率常數或kon(或ka)速率(抗體+抗原(Ag)k on←抗體-Ag)免疫特異性結合決定子。
在另一實施例中，與本發明相容之抗體以小於10-1s-1、小於5×10-1s-1、小於10-2s-1、小於5×10-2s-1、小於10-3s-1、小於5×10-3s-1、小於10-4s-1、小於5×104s-1、小於10-5s-1、小於5×10-5s-1、小於10-6s-1、小於5×10-6s-1、小於10-7s-1、小於5×10-7s-1、小於10-8s-1、小於5×10-8s-1、小 於10-9s-1、小於5×10-9s-1或小於10-10s-1之解離速率常數或koff(或kd)速率(抗體+抗原(Ag)k off←抗體-Ag)免疫特異性結合決定子。
結合親和力可使用本領域已知的多種技術來測定，例如表面電漿子共振、生命膜層干涉、雙極化干涉法、靜態光散射、動態光散射、等溫滴定微量熱儀、ELISA、分析型超高速離心機及流式細胞儀技術。
E. 分箱及抗原決定基圖譜
如本文中所使用，術語「分箱(binning)」係指用於將抗體基於其抗原結合特徵及其是否彼此競爭而分組至「箱倉(bin)」中之方法。箱倉之初步確定可進一步精化且藉由抗原決定基圖譜及如本文中所描述之其他技術來證實。然而，應瞭解，憑經驗將抗體分配至個別箱倉提供可指示所揭示之抗體藥物結合物之治療潛力的資訊。
更特定言之，可藉由使用本領域已知的方法來確定所選參考抗體(或其片段)是否與第二測試抗體(亦即，處於同一箱中)競爭結合。在一個實施例中，參考抗體在飽和條件下與所選抗原締合，且隨後使用標準免疫化學技術測定第二或測試抗體結合同一抗原之能力。若測試抗體能夠實質上與參考抗體同時結合抗原，則第二或測試抗體結合與一級抗體或參考抗體不同的抗原決定基。然而，若測試抗體不能夠實質上在同時結合抗原，則測試抗體結合相同抗原決定基，即重疊抗原決定基或緊密鄰近(至少在空間上)參考抗體所結合之抗原決定基的抗原決定 基。亦即，測試抗體競爭抗原結合且與參考抗體處於同一箱倉中。
術語「競爭」或「競爭抗體」當在所揭示之抗體之情形下使用時意謂抗體之間的競爭，如藉由測試抗體或所測試之免疫功能片段抑制參考抗體與共同抗原之特異性結合的分析法所測定。典型地，此種分析涉及使用與固體表面或表現細胞、未標記之測試抗體及經標記之參考抗體結合的經純化之抗原(或其結構域或片段)。藉由測定在測試抗體存在下與固體表面或細胞結合之標記的量來量測競爭性抑制。通常，測試抗體係以過量存在及/或允許先結合。關於用於測定競爭性結合之方法的其他細節提供於本文中之實例中。通常，當競爭抗體以過量存在時，其將抑制參考抗體與共同抗原之特異性結合達至少30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或75%。在一些情況下，結合受抑制達至少80%、85%、90%、95%或97%或更多。
相反，當參考抗體得以結合時，其較佳將抑制隨後添加之測試抗體之結合達至少30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或75%。在一些情況下，測試抗體之結合受抑制達至少80%、85%、90%、95%或97%或更多。
一般而言，分箱或競爭性結合可使用多種本領域公認之技術來測定，諸如，例如免疫分析法，諸如西方墨點法、放射免疫分析法、酵素免疫吸附分析法 (ELISA)、「夾層」免疫分析法、免疫沈澱分析法、沈澱素反應、凝膠擴散沈澱素反應、免疫擴散分析法、凝集分析法、補體固定分析法、免疫放射量測定法、螢光免疫分析法及蛋白A免疫分析法。此種免疫分析法在本領域為常規且熟知的(參見Ausubel等人編，(1994)Current Protocols in Molecular Biology，第1卷，John Wiley & Sons,Inc.,New York)。另外，可使用交叉阻斷分析法(參見例如WO 2003/48731；及Harlow等人(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Harlow及David Lane編)。
用於確定競爭性抑制(及此後之「箱倉」)之其他技術包括：使用例如BIAcoreTM 2000系統(GE Healthcare)之表面電漿子共振；使用例如ForteBio® Octet RED(ForteBio)之生物膜層干涉法；或使用例如FACSCanto II(BD Biosciences)或多路LUMINEXTM偵測分析(Luminex)之流式細胞術珠粒陣列。
Luminex為使得能夠進行大規模多路抗體配對之基於珠粒之免疫分析平臺。該分析法比較抗體配對與標靶抗原之同時結合模式。該配對中之一個抗體(捕獲mAb)與Luminex珠粒結合，其中各捕獲mAb與不同顏色之珠粒結合。另一抗體(偵測mAb)與螢光信號(例如藻紅蛋白(PE))結合。該分析法分析抗體與抗原之同時結合(配對)且將具有類似配對概況之抗體分組在一起。偵測mAb及捕獲mAb之類似概況指示該兩種抗體結合相同或密切相關之抗 原決定基。在一個實施例中，可使用皮爾森(Pearson)相關係數測定配對概況，以鑑別與測試抗體小組中之任何特定抗體最密切相關之抗體。在較佳實施例中，若抗體配對之皮爾森相關係數為至少0.9，則將在與參考/捕獲mAb相同之箱倉中測定測試/偵測mAb。在其他實施例中，皮爾森相關係數為至少0.8、0.85、0.87或0.89。在其他實施例中，皮爾森相關係數為至少0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99或1。分析獲自Luminex分析法之資料的其他方法描述於美國專利第8,568,992號中。Luminex同時分析100種不同類型珠粒(或更多種)之能力提供幾乎不受限之抗原及/或抗體表面，從而與生物感測器分析法相比改良抗體抗原決定基分析之產出量及解析度(Miller等人，2011,PMID：21223970)。
「表面電漿子共振」係指允許藉由偵測生物感測器基質內之蛋白質濃度變化來分析即時特異性相互作用的光學現象。
在其他實施例中，可用於確定測試抗體是否與參考抗體「競爭」結合之技術為「生物膜層干涉法」，此為一種分析自兩個表面反射之白光的干涉圖案的光學分析技術：生物感測器尖端上之經固定蛋白質層及內部參考層。與生物感測器尖端結合之分子數之任何變化均導致可即時量測之干涉圖案位移。此種生物膜層干涉分析法可使用ForteBio® Octet RED機器如下進行。將參考抗體(Ab1)捕獲至抗小鼠捕獲晶片上，隨後使用高濃度非結合抗體阻 斷晶片且收集基線。隨後藉由特異性抗體(Ab1)俘獲單體重組標靶蛋白質並且將尖端浸入含與對照相同的抗體(Ab1)的孔中或含不同的測試抗體(Ab2)的孔中。若不發生進一步結合，如藉由比較結合水平與對照Ab1所確定，則確定Ab1及Ab2為「競爭」抗體。若觀測到另外與Ab2結合，則確定Ab1及Ab2不與彼此競爭。可擴大此過程以便在代表獨特箱倉之96孔板中使用一整排抗體篩選獨特抗體之大文庫。在較佳實施例中，若參考抗體抑制測試抗體與共同抗原之特異性結合達至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或75%，則測試抗體將與參考抗體競爭。在其他實施例中，結合受抑制達至少80%、85%、90%、95%或97%或更多。
在已定義涵蓋一組競爭抗體之箱倉後，可進行進一步表徵以確定與箱倉中之抗體結合之抗原上的特定結構域或抗原決定基。可使用由Cochran等人，2004,PMID：15099763所描述之方案之修改方案來進行結構域層級之抗原決定基圖譜。精細抗原決定基圖譜為測定抗原上包含抗體所結合之決定子之抗原決定基的特定胺基酸的方法。術語「抗原決定基」以其常用之生物化學意義使用，且係指標靶抗原中能夠由特定抗體識別且特異性結合之部分。在某些實施例中，抗原決定基或免疫原性決定子包括分子之化學活性表面基團，諸如胺基酸、糖側鏈、磷氧基或磺醯基，且在某些實施例中可具有特定三維結構特徵及/或特定電荷特徵。在某些實施例中，當其在蛋白質及/或大 分子之複雜混合物中優先識別其標靶抗原時，稱抗體特異性結合抗原。
當抗原為諸如SEZ6之多肽時，抗原決定基一般可由毗鄰蛋白質之三級摺疊的連續胺基酸及非連續胺基酸形成(「構形抗原決定基」)。在此種構形抗原決定基中，相互作用點越過蛋白質上彼此線性隔開之胺基酸殘基而存在。由連續胺基酸形成之抗原決定基(有時稱為「線性」或「連續」抗原決定基)典型地在蛋白質變性後得以保留，而藉由三級摺疊形成之抗原決定基典型地在蛋白質變性後喪失。在獨特的空間構形下，抗體抗原決定基典型地包括至少3個且更通常至少5或8至10個胺基酸。抗原決定基測定或「抗原決定基圖譜」方法在本領域為熟知的且可與本發明聯合用於鑑別SEZ6上由所揭示之抗體藥物結合物結合的抗原決定基。
相容性抗原決定基圖譜技術包括丙胺酸掃描突變體、胜肽墨點(Reineke(2004)Methods Mol Biol 248：443-63)或胜肽裂解分析。另外，可使用諸如抗原決定基切除、抗原決定基提取及抗原化學修飾之方法(Tomer(2000)Protein Science 9：487-496)。在其他實施例中，修飾輔助分析(modification-assisted profiling,MAP)，亦稱為基於抗原結構之抗體分析(antigen structure-based antibody profiling,ASAP)，提供根據各抗體與經化學或酶促修飾之抗原表面(美國公開案第2004/0101920號)之結合特徵的相似性對許多針對相同抗原之單株抗體進行分類的方法。此技術允許 快速過濾基因一致之抗體，使得表徵可聚焦於基因不同的抗體。應瞭解，MAP可用於將與本發明相容之抗體分選至結合不同的抗原決定基的抗體群組中。
確定抗原上之所欲抗原決定基後，有可能產生針對該抗原決定基之抗體，例如藉由使用本發明中所描述之技術用包含該抗原決定基之胜肽進行免疫。或者，在發現過程期間，抗體之產生及表徵可解釋關於位於特定結構域或模組(motif)中之理想抗原決定基的資訊。由此資訊，隨後有可能針對與同一抗原決定基之結合競爭性地篩選抗體。用於達成此舉之一種方法為進行競爭研究以發現競爭結合抗原之抗體。基於交叉競爭對抗體進行分箱之高產出量方法描述於WO 03/48731中。分箱或結構域水平或抗原決定基圖譜之其他方法，包括抗體競爭或在酵母上進行抗原片段表現，其在本領域為熟知的。
VI 連接子組分
通式[-W-(X1)a-CM-(X2)b-P-]之許多連接子化合物可用於使本發明之靶向劑與所選卡奇黴素彈頭結合。連接子僅需要與靶向劑上之反應性殘基(較佳半胱胺酸或離胺酸)及所選卡奇黴素或卡奇黴素類似物共價結合。因此，與靶向劑之所選殘基反應的任何所揭示之卡奇黴素-連接子構建體均可用於提供本發明之相對穩定之結合物(位點特異性或其他)且與本文中之教示相容。
在較佳實施例中，相容性連接子將在細胞外環境中賦予ADC穩定性，防止ADC分子聚集且保持ADC 在水性培養基中及在單體狀態下自由溶解。在轉運或遞送至細胞中之前，ADC較佳穩定且保持完整，亦即，靶向劑保持與卡奇黴素連接。儘管連接子在靶細胞外穩定，但其經特定設計以便以在標靶處或更佳在細胞內以某一有效速率裂解及/或降解。因此，有效連接子將：(i)維持靶向劑之特異性結合性質；(ii)有助於有效負載或卡奇黴素彈頭之細胞內遞送；(iii)保持穩定及完整，亦即，不裂解或降解，直至彈頭已遞送或轉運至其標靶位點；及(iv)維持所選卡奇黴素之細胞毒性、細胞殺死效應或細胞抑制效應(在一些情況下，包括任何旁觀者效應)。如所附實例中所示，ADC之製造及穩定性可藉由標準分析技術，諸如HPLC/UPLC、質譜、HPLC及分離/分析技術LC/MS及LC/MS/MS來量測。
A. 可裂解部分一(CM)
與本發明相容之連接子可廣泛分類為可裂解連接子且包含至少一個如本文中所定義之可裂解部分。可裂解連接子可包括酸不穩定連接子、蛋白酶可裂解連接子及二硫鍵連接子，其較佳內在化至靶細胞中且在細胞內之胞內體-溶酶體途徑中裂解。在此種情況下，卡奇黴素彈頭之釋放及活化可依賴於促進諸如腙或肟之酸不穩定化學鍵聯裂解的胞內體/溶酶體酸性隔室。溶酶體特異性蛋白酶裂解位點亦可經工程改造至連接子中，以較佳在其細胞內標靶附近釋放所揭示之卡奇黴素彈頭。或者，含有可裂解二硫鍵部分之連接子(以及卡奇黴素彈頭近端之連接子)提供在細胞內釋放卡奇黴素之方法，因為二硫鍵在細胞之還 原環境中選擇性裂解，但在血流中之富氧環境中則不然。
因此，本發明之某些較佳實施例包含可由細胞內環境中(例如溶酶體或胞內體或胞膜窖(caveolae)內)所存在之裂解劑裂解之連接子。連接子可為例如由細胞內肽酶或蛋白酶(包括但不限於溶酶體或胞內體蛋白酶)裂解之肽基連接子。在一些實施例中，肽基連接子為至少兩個胺基酸長或至少三個胺基酸長。裂解劑可包括組織蛋白酶B及D以及血纖維蛋白溶酶，已知其各自使二肽藥物衍生物水解，從而在靶細胞內釋放活性卡奇黴素。可由硫醇依賴性蛋白酶組織蛋白酶B裂解之例示性肽基連接子為包含Phe-Leu之胜肽，因為已發現組織蛋白酶B高度表現於癌組織中。此種連接子之其他實例描述於例如美國專利第6,214,345號中。在特定較佳實施例中，可由細胞內蛋白酶裂解之肽基連接子為Val-Cit連接子、Val-Ala連接子或Phe-Lys連接子，諸如美國專利第6,214,345號中所描述。使用治療劑之細胞內蛋白水解釋放的一個優勢為該藥劑典型地在結合時得以減毒且結合物之血清典型地具有較高的穩定性。
因而，在尤佳實施例中，可裂解部分所包含之胜肽鍵優先在預定作用位點上由蛋白酶裂解，其與在血清中由蛋白酶裂解相反。典型地，可裂解部分之胜肽組分包含1至20個胺基酸，較佳1至6個胺基酸，更佳1至3個胺基酸。胺基酸可為天然及/或非天然α-胺基酸。天然胺基酸為由基因密碼編碼之彼等胺基酸以及由其衍生之 胺基酸，例如羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸、瓜胺酸及O-磷絲胺酸。術語胺基酸亦包括胺基酸類似物及模擬物。類似物為與天然胺基酸具有相同一般H2N(R)CHCO2H結構，但R基團並非天然胺基酸中所發現者的化合物。類似物之實例包括高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸及甲硫胺酸甲基鋶。胺基酸模擬物為具有與α-胺基酸之一般化學結構不同的結構但以類似方式起作用的化合物。術語「非天然胺基酸」意欲表示「D」立體化學形式，天然胺基酸為「L」形式。
在尤佳實施例中，相容肽基連接子將包含：
其中星號指示與視需要的間隔基(或連接子)X2或二硫鍵保護基之連接點，TA為諸如本文中所揭示之靶向劑，L1包含肽基可裂解部分，W為連接L1與靶向劑上之反應性殘基的連接基(視需要包含間隔基(或連接子)X1)，L2為共價鍵或與-OC(=O)-一起形成自我犧牲連接子(immolative linker)。L1-L2-OC(O)-對應於式2中之-(X1)a-CM-及式(I/Ia)中之-(L3)Z1-M-。
作為肽基可裂解連接子，L1較佳為引發連接子降解從而導致二硫鍵裂解且在標靶位點上產生活性雙自由基卡奇黴素物質之觸發子。
應瞭解，L1及L2之性質可廣泛變化。此等 基團係基於其裂解特徵而加以選擇，該等裂解特徵可由遞送結合物之位點上的條件決定。儘管在一些情況下較佳為藉由酶之作用而裂解之彼等部分，但必須強調可藉由pH值變化(例如酸或鹼不穩定性)、溫度變化或在照射後(例如光不穩定性)裂解之部分與本發明相容且可用作CM。可在還原或氧化條件下裂解之部分亦為相容的且可用作可裂解部分。
在尤佳實施例中，L1可包含連續胺基酸序列。胺基酸序列或可裂解肽可為酶裂解之標靶受質，從而允許釋放藥物。術語「可裂解肽」係指含有蛋白酶之裂解識別序列的胜肽。蛋白酶之裂解識別序列為在蛋白水解裂解期間由蛋白酶識別之胺基酸序列。許多蛋白酶裂解位點在本領域為已知的，且此等及其他裂解位點可包括連接子、間隔基或連接子部分。參見例如Matayoshi等人，Science 247：954(1990)；Dunn等人，Meth.Enzymol.241：254(1994)；Seidah等人，Meth.Enzymol.244：175(1994)；Thornberry,Meth.Enzymol.244：615(1994)；Weber等人，Meth.Enzymol.244：595(1994)；Smith等人，Meth.Enzymol.244：412(1994)；Bouvier等人，Meth.Enzymol.248：614(1995)；Hardy等人，AMYLOID PROTEIN PRECURSOR IN DEVELOPMENT,AGING,AND ALZHEIMER’S DISEASE,Masters等人編，第190-198頁(1994)。
因而，在所選實施例中，L1可藉由酶之作用而裂解。在其他所選實施例中，酶可包含酯酶或肽酶。 在其他實施例中，肽序列係基於其由腫瘤相關蛋白酶(例如，癌細胞表面上或在腫瘤細胞附近在細胞外發現之蛋白酶)裂解之能力而加以選擇。此種蛋白酶之實例包括甲拌磷寡肽酶(thimet oligo peptidase,TOP)、CDIO(腦啡肽酶)、基質金屬蛋白酶(諸如MMP2或MMP9)、II型跨膜絲胺酸蛋白酶(諸如Hepsin、testisin、TMPRSS4或基質蛋白酶(matriptase)/MT-SP1)及豆莢蛋白(legumain)。可使用本領域已知的活體外蛋白酶裂解分析法來測試肽由腫瘤相關蛋白酶裂解之能力。
對於經設計以便由細胞內在化之結合物，可裂解部分較佳包含為了藉由胞內體或溶酶體蛋白酶裂解而選擇之胺基酸序列。此種蛋白酶之非限制性實例包括組織蛋白酶B、C、D、H、L及S，尤其是組織蛋白酶B。組織蛋白酶B優先在序列-AA2-AA1-處裂解胜肽，其中AA1為鹼性或強氫鍵結胺基酸(諸如離胺酸、精胺酸或瓜胺酸)，且AA2為疏水性胺基酸(諸如苯基丙胺酸、纈胺酸、丙胺酸、白胺酸或異白胺酸)，例如Val-Cit(其中Cit表示瓜胺酸)或Val-Lys。(在本文中，除非上下文另外清楚指示，否則胺基酸序列係從N至C方向書寫，如在H2N-AA2-AA1-CO2H中)。關於組織蛋白酶可裂解基團之其他資訊，參見Dubowchik等人，Biorg.Med.Chem.Lett.8,3341-3346(1998)；Dubowchik等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,8 3347-3352(1998)；及Dubowchik等人，Bioconjugate Chem.13,855-869(2002)，各文獻之揭示內容係以引用之方 式併入。可用於裂解肽基連接子之另一酶為豆莢蛋白，其為一種優先在Ala-Ala-Asn處裂解之溶酶體半胱胺酸蛋白酶。
因此，在較佳實施例中，L1包含胜肽。在某些所選實施例中可為二肽，其表示為-NH-AA2-AA1-CO-，其中-NH-及-CO-分別表示胺基酸基團之N及C端。在其他實施例中，可裂解肽可為三肽、四肽或五肽，其中各胺基酸獨立地為L或D異構體。
在某些實施例中，胜肽係選自由以下各項所組成之群組：Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Lle-Cit、Trp-Cit、Phe-Ala、Phe-N9-甲苯磺醯基-Arg、Phe-N9-硝基-Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO：3)、β-Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO：4)、Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO：5)、Val-Arg、Arg-Val、Arg-Arg、Val-D-Cit、Val-D-Lys、Val-D-Arg、D-Val-Cit、D-Val-Lys、D-Val-Arg、D-Val-D-Cit、D-Val-D-Lys、D-Val-D-Arg、D-Arg-D-Arg、Ala-Ala、Ala-D-Ala、D-Ala-Ala及D-Ala-D-Ala、Gly-Gly-Gly、Ala-Ala-Ala、D-Ala-Ala-Ala、Ala-D-Ala-Ala、Ala-Ala-D-Ala、Ala-Val-Cit及Ala-Val-Ala。在另一替代方案中，胜肽係選自由以下各項所組成之群組：Gly-Gly-Gly、Ala-Ala-Ala、D-Ala-Ala-Ala、Ala-D-Ala-Ala及Ala-Val-Ala。或者，胜肽為Gly-Gly-Ala、Val-Ala、Glu-Ala或Glu(OMe)-Ala。在一 相關實施例中，上文中之任何胜肽序列均可在任一方向上，如以上所定義。
另外，對於具有羧基或胺基側鏈官能基之彼等胺基酸基團，分別例如Glu及Lys，CO及NH可表示該側鏈官能基。
在一個實施例中，二肽-NH-AA2-AA1-CO-中之基團-AA2-AA1-係選自：-Phe-Lys-、-Val-Ala-、-Val-Lys-、-Ala-Lys-、-Val-Cit-、-Phe-Cit-、-Leu-Cit-、-Ile-Cit-、-Phe-Arg-及-Trp-Cit-，其中Cit為瓜胺酸。
較佳地，二肽-NH-AA2-AA1-CO-中之基團-AA2-AA1-係選自：-Phe-Lys-、-Val-Ala-、-Val-Lys-、-Ala-Lys-及-Val-Cit-。
最佳地，二肽-NH-AA2-AA1-CO-中之基團-AA2-AA1-為-Val-Cit-、-Phe-Lys-或-Val-Ala-。
在某些較佳實施例中，L2存在且與-C(=O)O-一起形成自我犧牲連接子。在其他實施例中，L2為酶活性受質，從而進一步調節藥物之釋放。
在一個實施例中，當L1可藉由酶之作用而裂解且L2存在時，該酶裂解位於L1與L2之間的鍵。
在某些實施例中，當L1及L2存在時，可由選自以下之鍵連接：-C(=O)NH-、-C(=O)O-、-NHC(=O)-、-NH(Ar)、-OC(=O)-、-OC(=O)O-、-NHC(=O)O-、-OC(=O)NH-及-NHC(=O)NH-。
L1中與L2連接之胺基可為胺基酸之N端或 可源自於胺基酸側鏈，例如離胺酸胺基酸側鏈之胺基。
包含肽基可裂解部分之相容卡奇黴素-連接子構建體的尤佳實施例在即將在下文闡述為式4至式12。應瞭解，實質上可如實例3(式4，Val-Cit)及實例4(式5，Val-Ala)中所闡述藉由僅在所欲二肽部分中進行取代來製造式6至式12之構建體。此外，鑒於本發明，本領域技術人員可使用類似之合成流程容易地製造其他肽基連接子卡奇黴素構建體。
L1中與L2連接之羧基可為胺基酸之C端或可源自於胺基酸側鏈，例如麩胺酸胺基酸側鏈之羧基。
L1中與L2連接之羥基可源自於胺基酸側鏈，例如絲胺酸胺基酸側鏈之羥基。
術語「胺基酸側鏈」包括以下各物中發現之彼等基團：(i)天然存在之胺基酸，諸如丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩胺醯胺、麩胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸；(ii)次要胺基酸，諸如鳥胺酸及瓜胺酸；(iii)非天然胺基酸、β-胺基酸、天然存在之胺基酸的合成類似物及衍生物；及(iv)其所有對映異構體、非對映異構體、經異構體增濃、經同位素標記(例如2H、3H、14C、15N)、經保護 之形式及外消旋混合物。
在一個實施例中，-C(=O)O-與L2一起形成以下基團：
其中星號指示視需要的間隔基X2或二硫鍵保護基之連接點，波狀線指示可裂解部分之連接點，Y為-N(H)-、-O-、-C(=O)N(H)-或-C(=O)O-，且n為0至3。伸苯基環視需要由一個、兩個或三個如本文中所描述之取代基取代。在一個實施例中，伸苯基視需要經鹵基、NO2、R或OR(其中R如以上所定義)取代。
在一個實施例中，Y為NH。
在一個實施例中，n為0或1。較佳地，n為0。
在Y為NH且n為0時，自我犧牲連接子可稱為對胺基苯甲基羰基連接子(p-aminobenylcarbonyl,PABC)。
在尤佳實施例中，連接子可包括自我犧牲連接子及二肽一起形成以下所說明之基團-NH-Val-Ala-CO-NH-PABC-(參見式5)： 其中星號指示卡奇黴素彈頭近端之視需要的間隔基或二硫鍵保護基之連接點，且波狀線指示與連接子之其餘部分(例如，視需要之間隔基-連接基節段)的連接點，其可與抗體結合。在二肽之酶裂解後，自我犧牲連接子將允許當遠端位點活化時完全釋放經保護之化合物(亦即，卡奇黴素二硫化物類似物)，其沿以下所示之路線進行：
其中L*為包含現已裂解之肽基單元及標靶抗原之連接子其餘部分之形式。卡奇黴素類似物隨二硫鍵保護基一起完全釋放有助於其餘連接子片段之降解及所欲雙自由基物質之產生。在其他尤佳實施例中，所選連接子將包含-NH-Val-Cit-CO-NH-PABC-(參見式4)。
關於自我犧牲部分之其他揭示內容，參見Carl等人，J.Med.Chem.,24(3),479-480(1981)；Carl等人，WO 81/01145(1981)；Dubowchik等人，Pharmacology & Therapeutics,83,67-123(1999)；Firestone等人，美國專利第6,214,345 B1號(2001)；Toki等人，J.Org.Chem.67,1866-1872(2002)；Doronina等人，Nature Biotechnology 21(7),778-784(2003)(勘誤，第941頁)；Boyd等人，美國專利第7,691,962 B2號；Boyd等人，US 2008/0279868 A1；Sufi等人，WO 2008/083312 A2；Feng，美國專利第7,375,078 B2 號；及Senter等人，US 2003/0096743 A1；該等文獻之揭示內容係以引用之方式併入。
在其他實施例中，可裂解連接子具有pH值敏感性(例如，參見式13及式14)。典型地，pH值敏感性連接子將可在酸性條件下水解。舉例而言，可使用可在溶酶體(例如，腙、肟、半卡腙、硫代半卡腙、順烏頭醯胺、原酸酯、縮醛、縮酮或其類似物)中水解之酸不穩定性連接子(參見例如美國專利第5,122,368號；第5,824,805號；第5,622,929號)。此種連接子在中性pH值條件(諸如血液中之彼等條件)下相對穩定，但在低於溶酶體之近似pH值pH 5.5或5.0時不穩定。因而，酸催化裂解之可裂解部分在溶酶體內將以比血液血漿速率快若干個數量級之速率裂解。適合之酸敏感性基團的實例包括順烏頭醯胺及腙，如以下文獻中所描述：Shen等人，美國專利第4,631,190號(1986)；Shen等人，美國專利第5,144,011號(1992)；Shen等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.102,1048-1054(1981)；及Yang等人，Proc.Natl Acad.Sci(USA),85,1189-1193(1988)；該等文獻之揭示內容係以引用之方式併入本文中。
在其他實施例中，連接子可在還原條件下裂解(例如二硫鍵連接子)。二硫鍵可藉由硫醇-二硫鍵交換機制裂解，其速率視周圍硫醇濃度而定。由於谷胱甘肽及其他硫醇之細胞內濃度高於其血清濃度，故二硫鍵之裂解速率將在細胞內較高。此外，硫醇-二硫鍵交換速率可藉由 調節二硫鍵之空間及電子特徵(例如，烷基-芳基二硫化物相對於烷基-烷基二硫化物；芳基環上之取代等)加以調節，從而使得二硫鍵聯設計具有增強之血清穩定性或特定裂解速率。多種二硫鍵連接子在本領域為已知的，包括例如可使用SATA(N-琥珀醯亞胺基-S-乙醯基硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丁酸酯)及SMPT(N-琥珀醯亞胺基-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫)甲苯)形成之彼等連接子。關於結合物中之二硫鍵可裂解基團之其他揭示內容，參見例如Thorpe等人，Cancer Res.48,6396-6403(1988)；Santi等人，美國專利第7,541,530 B2號(2009)；Ng等人，美國專利第6,989,452 B2號(2006)；Ng等人，WO 2002/096910 A1；Boyd等人，美國專利第7,691,962 B2號；及Sufi等人，US 2010/0145036 A1；該等文獻之揭示內容係以引用之方式併入本文中。
B. 視需要的間隔基-(X1及X2)
如先前所提及，所揭示之可裂解部分可側接一或多個視需要的間隔基(X1及X2)或可直接與靶向劑或二硫鍵保護基締合；亦即，間隔基X1及X2可能不存在或獨立地存在。舉例而言，若可裂解部分包含二硫鍵，則兩個硫之一可為半胱胺酸殘基或其替代物靶向劑。在其他實施例中，可裂解部分可為與抗體之碳水化合物側鏈上之醛鍵結的腙。在其他較佳實施例中，可裂解部分(可能與視需要的自我犧牲基團一起)可結合所選構形之兩個間隔基。
如本文中所使用之術語「間隔基」包括介於任何兩個化學基團之間的化學部分。舉例而言，在一些實施例中，間隔基(例如X1)之一端直接連接於靶向劑，或在其他實施例中連接於可與細胞結合劑形成共價鍵之反應性官能基(亦即，連接基)。在其他實施例，間隔基(例如X2)之一端連接於二硫鍵保護基或可與二硫鍵保護基形成共價鍵之反應性官能基。在一些實施例中，間隔基之一端連接於分枝支架。在一些實施例中，間隔基介於(1)靶向劑或可與靶向劑形成共價鍵之反應性官能基與(2)分枝支架之間。在一些實施例中，間隔基介於(1)二硫鍵保護基或可與二硫鍵保護基形成共價鍵之反應性官能基與(2)分枝支架之間。在某些較佳實施例中，間隔基可在一端連接於反應性官能基以形成連接子部分，該連接子部分可進一步與靶向劑或經保護之二硫基反應。
如本文中所使用之術語「分枝支架」包括與兩個或更多個間隔基連接之化學部分(亦即，「分枝單元」)。分枝支架允許兩個或更多個卡奇黴素部分與靶向劑連接(式15)。例示性分枝支架可源自於具有包含胺基(諸如Lys)或羧基(諸如Glu或Asp)之側鏈的胺基酸，或包含兩個或更多個此種胺基酸之肽(例如Lys-Lys二聚體等)。在其他實施例中，分枝單元可源自於或包含諸如三級胺之反應性部分。
在某些實施例中，間隔基在兩個化學基團之間產生所欲距離，以便例如避免空間障礙或促進分子撓 性。在某些實施例中，間隔基之存在不阻礙、抑制或以其他方式負面影響側接化學基團之功能(例如，細胞結合劑結合細胞上之標靶分子的能力，或細胞毒性藥物之細胞毒性)。在某些實施例中，間隔基賦予包含該間隔基之免疫結合物或連接子化合物其他有益特徵，諸如增強效力、溶解度、血清穩定性及/或功效。在某些實施例中，間隔基可包含一或多個胺基酸殘基(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個殘基)，其可能對蛋白酶或肽酶(諸如細胞內/溶酶體肽酶)裂解具有或不具有抗性。在某些實施例中，間隔基可包含聚乙二醇(PEG)單元-(CH2-CH2-O)-之一或多個重複序列，諸如1至1000個PEG單元、1至500個PEG單元、1至24個PEG單元或2至8個PEG單元(2、4、6或8個PEG單元)。在其他實施例中，較佳間隔基將包含直鏈或分支鏈經取代或未經取代之烷基或芳基部分。在其他實施例中，視需要之間隔基X1或X2均可包含自我犧牲部分。
C. 二硫鍵保護基-(P)
如先前所指示，卡奇黴素二硫基較佳由可提供穩定性(例如，血漿穩定性)直至ADC到達靶細胞之短鏈經取代或未經取代之雙官能脂族或芳基(「二硫鍵保護基」)加以保護。就此而言，二硫鍵保護基共價連接卡奇黴素二硫基與視需要的間隔基X2，或在不存在間隔基之情形下，直接連接可裂解部分或視需要的自我犧牲基團。在此種情況下，二硫鍵保護基對二硫鍵提供一定程度之空間阻 礙，從而降低其對經由硫醇-二硫鍵交換反應進行之裂解的敏感度。鑒於本發明，本領域技術人員可容易地選擇能提供所欲穩定性且優化卡奇黴素ADC之治療指數的相容性二硫鍵保護基(參見Kellogg等人，Bioconj.Chem,2011,22,717-727)。提供穩定二硫鍵之其他方法可見於USPN 20010036926中，其係以引用之方式併入本文中。
在尤佳實施例中，二硫鍵保護基將包含環狀或非環狀直鏈或分支鏈C1-C12飽和或不飽和脂族部分。在某些較佳實施例中，脂族部分可能經取代。在其他較佳實施例中，脂族部分可能未經取代。其他二硫鍵保護基實施例包含具有一個或兩個與二硫鍵部分近端之碳結合的甲基的脂族部分。在其他實施例中，脂族部分將包含與二硫鍵部分近端之碳結合的單一甲基。其他較佳實施例將包含具有一或多個甲基之脂族部分，其中一個、兩個或三個碳遠離近端碳。由各此種構建體所賦予之穩定性可使用本領域公認之技術容易地量測。在各情況下，所選二硫鍵保護基將用於在活體內增加二硫鍵之穩定性且延長卡奇黴素ADC之半衰期。
D. 連接基-(W)
連接基用於締合所揭示之卡奇黴素構建體與靶向劑，以提供本發明之抗體藥物結合物。在較佳實施例中，此種連接劑可包含已知參與對蛋白質靶向劑表面上之所選天然胺基酸(半胱胺酸、離胺酸、酪胺酸、色胺酸)之化學選擇性修飾的部分；已知參與糖基接合之反應性官 能基；適合於與非天然胺基酸進行化學選擇性反應之反應性部分；適合於藉由酶促反應與特定胜肽標籤進行生物結合之反應性基團(關於此等方法之一般描述，參考Bioconj.Chemistry 2015,26,176-192)。如本文中詳細論述，適合於產生位點特異性抗體藥物結合物之基於硫醇之連接基尤佳。
許多相容性連接子可有利結合具有親核性之經還原之半胱胺酸及離胺酸。涉及經還原之半胱胺酸及離胺酸的結合反應包括但不限於硫醇-馬來醯亞胺、硫醇-二溴馬來醯亞胺、硫醇-鹵基(醯基鹵化物)、硫醇-烯、硫醇-炔、硫醇-乙烯碸、硫醇-雙碸、硫醇-硫代磺酸酯、硫醇-吡啶基二硫化物及硫醇-對氟反應。如本文中進一步論述，硫醇-馬來醯亞胺生物結合由於其快速反應速率及溫和結合條件而成為最廣泛使用之方法之一。此方法之一個問題為逆麥可反應之可能性及馬來醯亞胺基連接之有效負載自抗體損失或轉移至血漿中之其他蛋白質，舉例而言，諸如人類血清白蛋白。然而，在較佳實施例中，使用如本文中在實例8及實例9中所闡述之選擇性還原及位點特異性抗體可用於穩定結合物且減少此種不合需要之轉移。硫醇-醯基鹵化物反應提供不能進行逆麥可反應且因此更穩定之生物結合物。令人遺憾的是，硫醇-鹵化物反應與基於馬來醯亞胺之結合相比一般具有較慢反應速率，因而在提供非所欲之藥物對抗體之比方面無效。硫醇-吡啶基二硫化物反應為另一盛行生物結合途徑。吡啶基二硫化物與游離硫醇 進行快速交換，從而產生混合二硫化物且釋放吡啶-2-硫酮。混合二硫化物可在還原性細胞環境中裂解，從而釋放有效負載。在生物結合方面獲得更多注意力之其他方法為硫醇-乙烯碸及硫醇-雙碸反應，各自與本文中之教示相容且明確包括在本發明之範疇內。本領域技術人員應瞭解，上述結合技術及試劑各自與本發明相容且可用於提供所揭示之抗體藥物結合物。
儘管有上述程序，但本發明之卡奇黴素-連接子較佳將連接於半胱胺酸上之反應性硫醇親核試劑，包括由游離半胱胺酸所提供之彼等反應性硫醇親核試劑。為此，可藉由用諸如DTT或TCEP或如本文中所闡述之弱還原劑之多種還原劑進行處理來使靶向劑之半胱胺酸具有反應性以便與連接子試劑結合。
就此而言，較佳連接基含有親電子官能基以便與蛋白質靶向劑上之親核性官能基反應。蛋白質上之親核性基團包括但不限於：(i)N端胺基；(ii)側鏈胺基，例如離胺酸；(iii)側鏈硫醇基，例如半胱胺酸；及(iv)糖羥基或胺基，其中該抗體係經糖基化。胺、硫醇及羥基具有親核性且能夠反應以便與連接子部分及連接子試劑上之親電子性基團形成共價鍵，該等基團包括：(i)馬來醯亞胺基；(ii)活化二硫化物；(iii)活性酯，諸如NHS(N-羥基琥珀醯亞胺)酯、HOBt(N-羥基苯并三唑)酯、鹵基甲酸酯及醯鹵；(iv)烷基及苯甲基鹵化物，諸如鹵基乙醯胺；及(v)醛、酮及羧基。
較佳連接基包含以下：
在所選實施例中，靶向劑與卡奇黴素-連接子部分之間的連接係藉由靶向劑上之半胱胺酸(例如，游離半胱胺酸)之硫醇殘基及連接子上存在之末端馬來醯亞胺基(亦即，連接基)。在此種實施例中，蛋白質靶向劑與卡奇黴素-連接子之間的連接為：
其中星號代表與卡奇黴素-連接子之其餘部分的連接點，且波狀線指示與靶向劑之其餘部分的連接點。在所選實施例中，硫原子較佳可源自於位點特異性游離半胱胺酸。關於其他相容性連接子，連接基包含可與經活化之殘基反應以提供所欲結合物之末端碘乙醯胺。鑒於本發明，在任何情況下，本領域技術人員均可容易地使所揭示之卡奇黴素-連接子構建體中之每一者與相容性靶向劑(例如，位點特異性抗體)結合。
除經活化之硫醇基以外，可藉由多種經活化之酯來實現離胺酸結合，包括但不限於，N-羥基琥珀醯 亞胺(N-hydroxy succinaimide,NHS)酯、五氟苯酚酯、四氟苯酚酯、對硝基苯酚酯、羥基苯并三唑(hydroxyl-benzotriazol,HOBt)酯及其他。在具有干擾pKa之離胺酸的某些情況下，可藉由與氮雜環丁酮部分及β-二酮反應來產生位點特異性離胺酸結合物。
在其他實施例中，可使用重氮鹽、二唑3,5-二酮衍生物、環狀亞胺及其他官能基來結合酪胺酸及色胺酸抗體組分。
其他實施例包括使所揭示之卡奇黴素構建體與某些靶向劑(例如抗體)上所存在之N-聚醣結合。一種常用方法包括藉由用過碘酸鹽處理來氧化具有鄰近二醇之聚醣，以產生醛。連接子上之連接基則選自醛反應性官能基，諸如肼、胺氧基化合物或適合於還原胺化之胺。在其他較佳實施例中，連接子上之連接基係選自多種應變環辛炔。其他相容性方法包括代謝表現靶向劑表面上之硫醇官能化聚醣。隨後將有可能藉由以上所闡述之半胱胺酸活性連接基來進行硫醇之結合。
在其他相容性實施例中，在靶向劑中併入非天然胺基酸允許雙正交化學官能基與預選位點之有效結合。隨後自互補雙正交反應性官能基選擇連接基。舉例而言，可使用酮反應性連接基，諸如肼、胺氧基化合物及適合於還原胺化之胺來結合所併入之對乙醯基苯基丙胺酸殘基。或者，可使用諸如應變環辛炔之無銅點擊化學試劑來併入並結合經疊氮官能化之非天然胺基酸。
其他相容性實施例包括卡奇黴素構建體與所揭示之靶向劑之酶介導型結合。為此，可使用生物素連接酶、麩胺醯胺轉移酶及硫辛酸連接酶將小分子特異性連接至蛋白質位點。舉例而言，麩胺醯胺轉移酶催化麩胺醯胺側鏈與含有一級胺連接基之小分子之間的醯胺鍵形成。一個尤佳實施例包括藉由麩胺醯胺轉移酶茂原輪鏈絲菌(Streptovertticillium mobaranese)修飾特定胜肽標籤(LLQGA)且隨後結合。此胜肽標籤已顯示當抗體之重鏈中及輕鏈中併入單一標籤時最有效結合。此種構形在與MMAD-胺反應時，可再現地提供大約1.8至1.9之藥物抗體比水平。作為一種替代策略，已使用產生甲醯基甘胺酸之酶。該酶將胜肽標籤CXPXR內之半胱胺酸殘基轉化成甲醯基甘胺酸。甲醯基甘胺酸雖然與利用適當連接基之肟及肼形成相容，但較佳藉由利用經胺氧基或肼官能化之色胺連接基之皮克特-施彭格勒(Pictet-Spengler)結紮而結合。此種反應之產物已顯示在生理學條件下非常穩定且可容易地提供根據本發明之卡奇黴素ADC。
與通用抗體連接之卡奇黴素-連接子構建體的實例即將在下文闡述為式4'至式12'及式14'至式17'。符號表示與式I中之Ab的連接點。
鑒於本發明，本領域技術人員可使用類似之合成方案容易地製造其他肽基連接子卡奇黴素構建體
VII 結合製備 A. 結合程序
如以上所提及，許多眾所周知的不同的反應均可用於連接所揭示之卡奇黴素-連接子構建體與所選靶向劑。舉例而言，利用半胱胺酸之硫氫基的多種反應可用於結合所欲有效負載。尤佳實施例將包括如以下詳細論述之包含一或多個游離半胱胺酸之抗體的結合。在其他實施例中，可藉由卡奇黴素與所選抗體中所存在之離胺酸殘基中之溶劑暴露胺基結合來產生本發明之ADC。其他實施例包括活化N端蘇胺酸及絲胺酸殘基，該等殘基隨後可用於連接連接所揭示之有效負載與抗體。所選結合方法較佳將經改適以優化與抗體連接之藥物數目且提供相對較高之治療指數。
用於結合治療化合物與半胱胺酸殘基之多種方法在本領域為已知的且對於本領域技術人員應顯而易見。在鹼性條件下，半胱胺酸殘基將進行去質子化以產生可與諸如馬來醯亞胺及碘乙醯胺之軟親電子試劑反應的硫醇根親核試劑。一般而言，用於此種結合之試劑可直接與半胱胺酸之半胱胺酸硫醇反應以形成結合蛋白質或與連接子-藥物反應以形成連接子-藥物中間物。在連接子之情況下，使用有機化學反應、條件及試劑之若干途徑對本領域技術人員為已知的，包括：(1)本發明蛋白質之半胱胺酸基團與連接子試劑反應，經由共價鍵形成蛋白質-連接子中間物，隨後與經活化之化合物反應；及(2)化合物之親核基團與連接子試劑反應，經由共價鍵形成藥物-連接子中間物，隨後與本發明蛋白質之半胱胺酸基團反應。在較佳實施例中，所揭示之雙官能連接子可包含用於與半胱胺酸殘基共價鍵聯之硫醇修飾基團及用於與卡奇黴素共價或非共價鍵聯之至少一個連接部分(例如第二硫醇修飾部分)。
在結合之前，可藉由用諸如二硫蘇糖醇(DTT)或(叁(2-羧乙基)膦(tris(2-carboxyethyl)phosphine,TCEP)之還原劑處理而使抗體具有反應性以便與連接子試劑結合。在其他實施例中，可藉由離胺酸與諸多試劑，包括但不限於2-亞胺基硫雜環戊烷(Traut氏試劑)、SATA、SATP或SAT(PEG)4進行反應從而將胺轉化成硫醇而將其他親核基團引入抗體中。
就此種結合而言，半胱胺酸硫醇或離胺酸 胺基為親核性的且能夠與連接子試劑或化合物-連接子中間物或藥物上之親電子基團反應以形成共價鍵，包括：(i)活性酯，諸如NHS酯、HOBt酯、鹵基甲酸酯及醯鹵；(ii)烷基及苯甲基鹵化物，諸如鹵基乙醯胺；(iii)醛、酮、羧基及馬來醯亞胺基；及(iv)二硫化物，包括吡啶基二硫化物，經由硫化物交換。化合物或連接子上之親核性基團包括，但不限於，能夠與連接子部分及連接子試劑上之親電子基團反應以形成共價鍵的胺、硫醇、羥基、醯肼、肟、肼、硫半卡腙、肼羧酸酯及芳基醯肼基團。
較佳標記試劑包括馬來醯亞胺、鹵乙醯基、碘乙醯胺琥珀醯亞胺基酯、異硫氰酸酯、磺醯氯、2,6-二氯三基、五氟苯基酯及亞磷醯胺，但亦可使用其他官能基。在某些實施例中，方法包括例如使用馬來醯亞胺、碘乙醯胺或鹵乙醯基/烷基鹵化物、氮雜環丙烯、丙烯醯衍生物與半胱胺酸之硫醇反應以產生與化合物具有反應性之硫醚。游離硫醇與經活化之吡啶二硫基之二硫鍵交換亦適用於產生結合物(例如使用5-硫-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitorbenzoic,TNB)酸)。較佳使用馬來醯亞胺。
如以上所指示，亦可使用離胺酸作為反應性殘基以實現如本文中所闡述之結合。通常藉由胺反應性琥珀醯亞胺基酯靶向親核性離胺酸殘基。為了獲得最佳數目之去質子化離胺酸殘基，水溶液之pH值必須低於離胺酸銨基之pKa(約10.5)，故該反應之典型pH值為約8及9。偶合反應之常用試劑為NHS-酯，其藉由離胺酸醯化機制與 親核性離胺酸反應。進行類似反應之其他相容性試劑包括異氰酸酯及異硫氰酸酯，其亦可連同本文中之教示一起使用以提供ADC。在離胺酸已活化後，上述連接基團中有許多個可用於使彈頭與抗體共價結合。
用於使化合物與蘇胺酸或絲胺酸殘基(較佳N末端殘基)結合之方法在本領域亦為已知的。舉例而言，已描述其中羰基前驅體源自於絲胺酸或蘇胺酸中，可藉由高碘酸鹽氧化而選擇性地且快速地轉化至醛形式之1,2-胺基醇的方法。該醛與欲連接於本發明蛋白質之化合物中之半胱胺酸的1,2-胺基硫醇反應形成穩定噻唑啶產物。此方法尤其適用於在N末端絲胺酸或蘇胺酸殘基上標記蛋白質。
在尤佳實施例中，反應性硫醇基可藉由引入一、二、三、四或更多個游離半胱胺酸殘基而引入所選抗體(或其片段)中(例如，製備包含一或多個游離非天然半胱胺酸胺基酸殘基之抗體)。如以上所闡述，此種位點特異性或工程改造抗體允許至少部分由於提供經工程改造之游離半胱胺酸位點及/或本文中所闡述之新穎結合程序而展現增強之穩定性及實質性均質性的結合物製劑。不同於完全或部分還原各鏈內或鏈間抗體二硫鍵以提供結合位點(且與本發明完全相容)之習知結合方法，本發明另外提供對某些所製備之游離半胱胺酸位點進行選擇性還原且使卡奇黴素-連接子針對其。由經工程改造之位點及選擇性還原所促進之結合特異性允許高百分比之位點在所欲位置定向結合。顯然，此等結合位點中有一些，諸如輕鏈恆定區之 末端區域中所存在之彼等，典型地難以有效結合，此係因為其傾向於與其他游離半胱胺酸交叉反應。然而，藉由對所產生之游離半胱胺酸進行分子工程及選擇性還原，可獲得有效結合速率，由此顯著減少不需要之高DAR污染物及非特異性毒性。更一般而言，經工程改造之構建體及所揭示之包括選擇性還原之新穎結合方法提供具有改良之藥物動力學及/或藥效學及可能改良之治療指數的ADC製劑。
如以上所論述，位點特異性構建體呈現游離半胱胺酸，其當得以還原時包含親核性且能夠與諸如以上所揭示之彼等連接子部分上之親電子基團反應以形成共價鍵的硫醇基。本發明之較佳抗體將具有可還原之未配對鏈間或鏈內半胱胺酸，亦即，提供此種親核性基團之半胱胺酸。因而，在某些實施例中，經還原之未配對半胱胺酸之游離硫氫基與所揭示之藥物-連接子之末端馬來醯亞胺基或鹵乙醯胺基反應將提供所欲結合。在此種情況下，可藉由用諸如二硫蘇糖醇(DTT)或(叁(2-羧乙基)膦(TCEP)之還原劑處理而使抗體之游離半胱胺酸具有反應性以便與連接子試劑結合。各游離半胱胺酸將因而在理論上呈現反應性硫醇親核試劑。儘管此種試劑為相容的，但應瞭解，位點特異性抗體之結合可使用本領域技術人員已知的不同的反應、條件及試劑來實現。
另外，已發現經工程改造之抗體的游離半胱胺酸可選擇性地還原以增強定點結合及減少不需要之可能有毒的污染物。更特定言之，已發現諸如精胺酸之「穩 定劑」調節蛋白質中之分子內及分子間相互作用，且可如本文中所闡述連同所選還原劑(較佳相對較弱)一起用於選擇性地還原游離半胱胺酸及促進位點特異性結合。
如本文中所使用，術語「選擇性還原」或「選擇性地還原」可互換使用，且應意謂在實質上不破壞經工程改造之抗體中所存在的天然二硫鍵的情況下還原游離半胱胺酸。在所選實施例中，此可藉由某些還原劑來實現。在其他較佳實施例中，對經工程改造之構建體的選擇性還原將包括使用穩定劑與還原劑(包括弱還原劑)之組合。應瞭解，術語「選擇性結合」應意謂已如本文中所描述選擇性地經卡奇黴素還原之經工程改造之抗體的結合。就此而言，使用此種穩定劑與所選還原劑之組合可顯著改良位點特異性結合之效率，如由抗體重鏈及輕鏈上之結合程度以及製劑之DAR分佈所決定。
儘管不希望受任何特定理論束縛，但此種穩定劑可用於在所欲結合位點上調節靜電微環境及/或調節構形變化，從而允許相對弱還原劑(本質上不還原完整天然二硫鍵)促進所欲游離半胱胺酸位點上之結合。已知此種試劑(例如，某些胺基酸)形成鹽橋(經由氫鍵結及靜電相互作用)且可以賦予穩定化效應之方式調節蛋白-蛋白質相互作用，由此可引起適宜構形變化及/或可減少不適宜之蛋白質-蛋白質相互作用。此外，此種試劑可用於在還原後抑制非所欲分子內(及分子間)半胱胺酸-半胱胺酸鍵之形成，因而促進所欲結合反應，其中經工程改造之位點特異性半胱 胺酸與藥物結合(較佳經由連接子)。因為選擇性還原條件不提供完整天然二硫鍵之顯著還原，故後續結合反應係自然驅動至游離半胱胺酸上之相對較少之反應性硫醇(例如，較佳2個游離硫醇/抗體)。如先前所提及，此顯著減少如本文中所闡述製造之結合物製劑中之非特異性結合及相應雜質的水平。
在所選實施例中，與本發明相容之穩定劑一般將包含至少一個部分具有鹼性pKa之化合物。在某些實施例中，該部分將包含一級胺，而在其他較佳實施例中，該胺部分將包含二級胺。在其他較佳實施例中，該胺部分將包含三級胺或胍基(guanidinium group)。在其他所選實施例中，該胺部分將包含胺基酸，而在其他相容性實施例中，該胺部分將包含胺基酸側鏈。在其他實施例中，該胺部分將包含形成蛋白質之胺基酸。在其他實施例中，該胺部分包含非形成蛋白質之胺基酸。在尤佳實施例中，相容性穩定劑可包含精胺酸、離胺酸、脯胺酸及半胱胺酸。另外，相容性穩定劑可包括胍及具有鹼性pKa之含氮雜環。
在某些實施例中，相容性穩定劑包含至少一個胺部分具有大於約7.5之pKa的化合物，在其他實施例中，主體胺部分將具有大於約8.0之pKa，在其他實施例中，該胺部分將具有大於約8.5之pKa，且在其他實施例中，該穩定劑將包含具有大於約9.0之pKa的胺部分。其他較佳實施例將包含穩定劑，其中胺部分將具有大於約9.5之pKa，而某些其他實施例將包含展現至少一個胺部分 具有大於約10.0之pKa的穩定劑。在其他較佳實施例，該穩定劑將包含具有pKa大於約10.5之胺部分的化合物，在其他實施例中，該穩定劑將包含具有pKa大於約11.0之胺部分的化合物，而在其他實施例中，該穩定劑將包含pKa大於約11.5之胺部分。在其他實施例中，該穩定劑將包含具有pKa大於約12.0之胺部分的化合物，而在其他實施例中，該穩定劑將包含pKa大於約12.5之胺部分。本領域技術人員應理解，可使用標準技術容易地計算或確定相關pKa且用於確定使用所選化合物作為穩定劑之適用性。
所揭示之穩定劑顯示當與某些還原劑組合時，在與游離位點特異性半胱胺酸之標靶結合方面尤其有效。出於本發明之目的，相容性還原劑可包括能產生經還原之游離位點特異性半胱胺酸以便在不顯著破壞經工程改造之抗體天然二硫鍵的情況下結合的任何化合物。在由所選穩定劑與還原劑之組合提供的此種條件下，經活化之卡奇黴素-連接子在很大程度上僅限於與所欲游離位點特異性半胱胺酸位點結合。相對較弱還原劑或以相對較低濃度使用以提供溫和條件之還原劑尤佳。如本文中所使用，術語「弱還原劑」或「弱還原條件」應被視為意謂由可在游離半胱胺酸位點上提供硫醇而實質上不破壞經工程改造之抗體中所存在之天然二硫鍵的還原劑(視需要在穩定劑存在下)導致的任何劑或狀態。亦即，弱還原劑或條件能夠有效地還原游離半胱胺酸(提供硫醇)而不顯著破壞蛋白質之天然二硫鍵。可藉由許多可建立適當環境以進行選擇性結 合之基於巰基之化合物來提供所欲還原條件。在較佳實施例中，弱還原劑可包含具有一或多個游離硫醇之化合物，而在尤佳實施例中，弱還原劑將包含具有單一游離硫醇之化合物。與本發明相容之還原劑的非限制性實例包括谷胱甘肽、n-乙醯基半胱胺酸、半胱胺酸、2-胺基乙烷-1-硫醇及2-羥基乙烷-1-硫醇。
應瞭解，以上所闡述之選擇性還原過程在與游離半胱胺酸之標靶結合方面尤其有效。就此而言，可藉由多種本領域公認技術來測定與位點特異性抗體中之所欲標靶位點之結合程度(在此定義為「結合效率」)。藥物與抗體之位點特異性結合的效率可藉由評估標靶結合位點(在本發明中，輕鏈c端上之游離半胱胺酸)上之結合相對於所有其他結合位點的百分比來確定。在某些實施例中，本文中之方法提供藥物與包含游離半胱胺酸之抗體的有效結合。在一些實施例中，如藉由標靶結合相對於所有其他結合位點之百分比所量測，結合效率為至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或更多。
應進一步瞭解，能夠結合之經工程改造之抗體可含有包含硫氫基之游離半胱胺酸殘基，該等硫氫基在抗體產生或儲存時經阻斷或封端。此種封端物包括小分子、蛋白質、胜肽、離子及與硫氫基相互作用且防止或抑 制結合物形成之其他物質。在一些情況下，未結合之經工程改造之抗體可包含與相同或不同的抗體上的其他游離半胱胺酸結合的游離半胱胺酸。如本文中所論述，此種交叉反應性可在製造程序期間導致不同的污染物。在一些實施例中，經工程改造之抗體在結合反應之前可能需要開封(uncapping)。在特定實施例中，本文中之抗體係經開封且顯示能夠結合之游離硫氫基。在特定實施例中，本文中之抗體進行不干擾或重排天然存在之二硫鍵的開封反應。應瞭解，在大部分情況下，開封反應將在正常還原反應(還原或選擇性還原)期間發生。
B. DAR分佈及純化
與本發明之位點特異性抗體結合的優勢之一為能夠產生包含較窄DAR分佈之相對同源之ADC製劑。就此而言，所揭示之構建體及/或選擇性結合，就藥物與經工程改造抗體之間的化學計算比而言，在樣品內提供ADC物質之均質性。如以上簡單論述，術語「藥物對抗體之比(drug to antibody ratio)」或「DAR」係指藥物與抗體之莫耳比。在一些實施例中，結合物製劑就其DAR分佈而言可為實質上均質的，意謂在該製劑內為具有特定DAR(例如，2或4之DAR)之位點特異性ADC的主要物質，其就負載位點(亦即，在游離半胱胺酸上)而言亦為均一的。在本發明之某些實施例中，有可能藉由使用位點特異性抗體及/或選擇性還原及結合來達成所欲均質性。在其他較佳實施例中，可藉由使用位點特異性構建體與選擇性還原之組 合來達成所欲均質性。在其他尤佳實施例中，可使用分析型或製備型層析技術來進一步純化該製劑。在此等實施例中之每一者中，可使用本領域已知的多種技術來分析ADC樣品之均質性，包括但不限於質譜、HPLC(例如尺寸篩除HPLC、RP-HPLC、HIC-HPLC等)或毛細管電泳。
就ADC製劑之純化而言，應瞭解，可採用標準醫藥製備方法來獲得所欲純度。如本文中所論述，諸如逆相(reverse phase,RP)及疏水性相互作用層析法(hydrophobic interaction chromatography,HIC)之液相層析法可藉由藥物負載值來分離混合物中之化合物。在一些情況下，離子交換(IEC)或混合模式層析(MMC)亦可用於分離具有特定藥物負載之物質。
視抗體之構形且至少部分視用於實現結合之方法而定，所揭示之ADC及其製劑可以不同的化學計算莫耳比包含卡奇黴素及抗體部分。在某些實施例中，每個ADC之卡奇黴素負載可包含1至20個彈頭(亦即，n為1至20)。其他所選實施例可包含具有1至15個彈頭之藥物負載的ADC。在其他實施例中，ADC可包含1至12個彈頭或更佳1至10個彈頭。在某些較佳實施例中，ADC將包含1至8個彈頭。
儘管理論藥物負載可能相對較高，但諸如游離半胱胺酸交叉反應性及彈頭疏水性之實際限制傾向於由於聚集物及其他污染物而限制包含此種DAR之均質製劑的產生。亦即，較高藥物負載(例如>10)可導致某些抗體 -藥物結合物聚集、不溶解、毒性或細胞滲透性損失。鑒於此種關係，本發明所提供之實際藥物負載較佳在1至10個藥物/結合物之範圍內，亦即，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個藥物共價連接於各抗體(例如，對於IgG1，其他抗體可具有不同的負載能力，視二硫鍵之數目而定)。本發明組合物之DAR較佳將為約2、4或6，且在尤佳實施例中，該DAR將包含約2或4。
儘管本發明提供相對較高水平之均質性，但所揭示之組合物實際上包含具有一定範圍之卡奇黴素化合物(1至10，在IgG1之情況下)之結合物的混合物。因而，所揭示之ADC組合物包括結合物混合物，其中大部分組成抗體共價連接於一或多個卡奇黴素部分且(儘管存在選擇性還原之結合物特異性)其中卡奇黴素可藉由不同的硫醇基連接於抗體。亦即，結合後，本發明之ADC組合物將包含以不同的濃度具有不同的卡奇黴素負載(例如1至10個藥物/IgG1抗體)之結合物(連同主要由游離半胱胺酸交叉反應性所致之某些反應污染物)的混合物。使用選擇性還原及製造後純化，結合物組合物可驅動至其在很大程度上含有單一主要所欲ADC物質(例如，具有2或4之藥物負載)與相對較低水平之其他ADC物質(例如具有1、3、5等藥物負載)的點。平均DAR值表示組合物總體(亦即，所有ADC物質合在一起)之卡奇黴素負載的加權平均值。由於所採用之定量方法中的固有不確定性及在工業情形下完全移除非主要ADC物質之困難性，可接受之DAR值或規格通常呈 現為平均值、範圍或分佈(亦即，2+/-0.5之平均DAR)。包含在該範圍(亦即，1.5至2.5)內之量測平均DAR的組合物較佳將用於醫藥情形下。
因而，在某些較佳實施例中，本發明將包括具有1、2、3、4、5、6、7或8各自+/- 0.5之平均DAR的組合物。在其他較佳實施例中，本發明將包括2、4、6或8 +/- 0.5之平均DAR。最後，在所選較佳實施例中，本發明將包括2 +/- 0.5之平均DAR。應瞭解，在某些較佳實施例中該範圍或偏差可小於0.4。因而，在其他實施例中，該組合物將包括1、2、3、4、5、6、7或8各自+/- 0.3之平均DAR，2、4、6或8 +/- 0.3之平均DAR，甚至更佳2或4 +/- 0.3之平均DAR，或甚至2 +/- 0.3之平均DAR。在其他實施例中，IgG1結合物組合物較佳將包括具有1、2、3、4、5、6、7或8各自+/- 0.4之平均DAR及相對較低水平(亦即，小於30%)之非主要ADC物質的組合物。在其他較佳實施例中，ADC組合物將包括2、4、6或8各自+/- 0.4之平均DAR與相對較低水平(<30%)之非主要ADC物質。在尤佳實施例中，ADC組合物將包括2 +/- 0.4之平均DAR與相對較低水平(<30%)之非主要ADC物質。在其他實施例中，主要ADC物質(例如，2或4之DAR)當相對於其他DAR物質加以量測時，將以大於65%之濃度、以大於70%之濃度、以大於75%之濃度、以大於80%之濃度、以大於85%之濃度、以大於90%之濃度、以大於93%之濃度、以大於95%之濃度或甚至以大於97%之濃度存在。
如以下實例中詳細描述，得自於結合反應之ADC製劑中卡奇黴素/抗體之分佈可藉由習知手段來表徵，諸如UV-Vis分光光度測定法、逆相HPLC、HIC、質譜、ELISA及電泳。亦可測定就藥物/抗體而言之ADC定量分佈。藉由ELISA，可測定特定ADC製劑中藥物/抗體之平均值。然而，藥物/抗體分佈值因抗體-抗原結合及ELISA之偵測限制而無法辨別。此外，用於偵測抗體-藥物結合物之ELISA分析法不測定藥物部分在何處連接於抗體，諸如重鏈或輕鏈片段，或特定胺基酸殘基。
VIII 藥物製劑及治療用途 A. 調配物及投與途徑
本發明之卡奇黴素ADC可使用本領域公認之技術以多種方式調配。在一些實施例中，本發明之治療ADC組合物可淨或與最少額外組分一起投與，而其他可視情況經調配以含有適合之醫藥學上可接受之載劑。如本文中所使用，「醫藥學上可接受之載劑」包含本領域所熟知的賦形劑、媒劑、佐劑及稀釋劑，且可得自商業來源以用於醫藥製備(參見例如Gennaro(2003)Remington：The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons：Drugfacts Plus，第20版，Mack Publishing；Ansel等人，(2004)Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，Lippencott Williams and Wilkins；Kibbe等人，(2000)Handbook of Pharmaceutical Excipients，第3版，Pharmaceutical Press)。
適合之醫藥學上可接受之載劑包括相對惰性之物質，且可有助於ADC之投與或可輔助將活性化合物處理成在醫藥學上經優化以遞送至作用位點之製劑。
此種醫藥學上可接受之載劑包括可改變調配物之形式、稠度、黏度、pH、張力、穩定性、滲透性、藥物動力學、蛋白質聚集或溶解度的試劑，且包括緩衝劑、潤濕劑、乳化劑、稀釋劑、封裝劑及皮膚滲透增強劑。載劑之某些非限制性實例包括生理食鹽水、經緩衝之生理食鹽水、葡萄糖、精胺酸、蔗糖、水、甘油、乙醇、山梨醇、葡聚糖、羧甲基纖維素鈉及其組合。用於系統性投與之ADC可經調配以用於經腸、不經腸或經局部投與。實際上，所有三種類型調配物可同時使用以達成活性成分之系統性投與。賦形劑以及用於不經腸及非不經腸藥物遞送之調配物闡述於Remington：The Science and Practice of Pharmacy(2000)第20版.Mack Publishing中。
適用於經腸投與之調配物包括硬或軟明膠膠囊、丸劑、錠劑(包括包衣錠劑)、酏劑、懸浮液、糖漿或其吸入及控制釋放形式。
適合於不經腸投與(例如藉由注射)之調配物包括水性或非水性等張無熱原無菌液體(例如溶液、懸浮液)，其中活性成分得以溶解、懸浮或以其他方式提供(例如，於脂質體或其他微粒中)。此種液體可另外含有其他醫藥學上可接受之載劑，諸如抗氧化劑、緩衝劑、防腐劑、穩定劑、抑菌劑、懸浮劑、增稠劑及致使調配物與預定接 受者之血液(或其他相關體液)等張之溶質。賦形劑之實例包括例如水、醇、多元醇、甘油、植物油及其類似物。用於此種調配物中之適合等張醫藥學上可接受之載劑的實例包括氯化鈉注射液、林格氏溶液或乳酸林格氏注射液。
在尤佳實施例中，本發明之調配組合物可經凍乾以提供抗體或ADC之粉末狀形式，隨後可在投與前復原。可藉由凍乾包含所揭示之抗體或ADC的溶液以產生包含活性成分連同任何視需要之共溶解生物相容性成分的粉末來產生用於製備可注射溶液之無菌粉末。一般而言，藉由將活性化合物併入含有鹼性分散介質或溶劑(例如稀釋劑)及視需要的其他生物相容性成分之無菌媒劑中來製備分散液或溶液。相容性稀釋劑為在醫藥學上可接受(對於投與人類而言安全且無毒)且適用於製備液體調配物(諸如在凍乾後復原之調配物)的稀釋劑。例示性稀釋劑包括無菌水、注射用抑菌水(bacteriostatic water for injuction,BWFI)、pH值緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝生理食鹽水)、無菌生理食鹽水溶液、林格氏溶液或葡萄糖溶液。在一替代實施例中，稀釋劑可包括鹽及/或緩衝劑之水溶液。
在某些較佳實施例中，抗體或ADC將與醫藥學上可接受之糖組合凍乾。「醫藥學上可接受之糖」為當與相關蛋白質組合時顯著防止或降低蛋白質在儲存時之化學及/或物理不穩定性的分子。當調配物意欲凍乾且隨後復原時。如本文中所使用，醫藥學上可接受之糖亦可稱為「凍乾保護劑」。例示性糖及其相應糖醇包括：胺基酸，諸如麩 胺酸單鈉或組胺酸；甲胺，諸如甜菜鹼；易溶鹽，諸如硫酸鎂；多元醇，諸如三元或較高分子量糖醇，例如丙三醇、葡聚糖、赤蘚醇、甘油、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨醇及甘露醇；丙二醇；聚乙二醇；PLURONICS®；及其組合。其他例示性凍乾保護劑包括丙三醇及明膠，及糖蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖及水蘇糖。還原糖之實例包括葡萄糖、麥芽糖、乳糖、麥芽酮糖、異麥芽酮糖及乳酮糖。非還原糖之實例包括選自糖醇及其他直鏈多元醇之多羥基化合物的非還原糖苷。較佳糖醇為單糖苷，尤其是藉由還原諸如乳糖、麥芽糖、乳果糖及麥芽酮糖之二糖而獲得之彼等化合物。糖苷側基可為糖苷或半乳糖苷。糖醇之其他實例為葡糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇及異麥芽酮糖。較佳醫藥學上可接受之糖為非還原糖海藻糖或蔗糖。醫藥學上可接受之糖係以「保護量」添加至調配物中(例如凍乾前)，此意謂蛋白質在儲存期間(例如，在復原及儲存後)基本上保留其物理及化學穩定性及完整性。
本領域技術人員應瞭解，相容性凍乾保護劑可以介於約1mM至約1000mM、約25mM至約750mM、約50mM至約500mM、約100mM至約300mM、約125mM至約250mM、約150mM至約200mM或約165mM至約185mM範圍內之濃度添加至液體或凍乾調配物中。在某些實施例中，可添加凍乾保護劑以提供約10mM、約25mM、約50mM、約75mM、約100mM、約125mM、約130mM、約140mM、約150mM、約160mM、約165mM、約170mM、 約175mM、約180mM、約185mM、約190mM、約200mM、約225mM、約250mM、約300mM、約400mM、約500mM、約600mM、約700mM、約800mM、約900mM或約1000mM之濃度。在某些較佳實施例中，凍乾保護劑可包含醫藥學上可接受之糖。在尤佳態樣中，醫藥學上可接受之糖將包含海藻糖或蔗糖。
在其他所選實施例中，本發明之液體及凍乾調配物可包含某些化合物，包括胺基酸或其醫藥學上可接受之鹽，以充當穩定或緩衝劑。此種化合物可以介於約1mM至約100mM、約5mM至約75mM、約5mM至約50mM、約10mM至約30mM或約15mM至約25mM範圍內之濃度添加。在某些實施例中，可添加緩衝劑以提供約1mM、約5mM、約10mM、約15mM、約20mM、約25mM、約30mM、約35mM、約40mM、約50mM、約60mM、約70mM、約80mM、約90mM或約100mM之濃度。在其他所選實施例中，可添加緩衝劑以提供約5mM、約10mM、約15mM、約20mM、約25mM、約30mM、約35mM、約40mM、約50mM、約60mM、約70mM、約80mM、約90mM或約100mM之濃度。在某些較佳實施例中，緩衝劑將包含鹽酸組胺酸。
在其他所選實施例中，本發明之液體及凍乾調配物可包含非離子界面活性劑，諸如聚山梨醇酯20、聚山梨酸酯40、聚山梨酸酯60或聚山梨醇酯80作為穩定劑。此種化合物可以介於約0.1mg/ml至約2.0mg/ml、約 0.1mg/ml至約1.0mg/ml、約0.2mg/ml至約0.8mg/ml、約0.2mg/ml至約0.6mg/ml或約0.3mg/ml至約0.5mg/ml範圍內之濃度添加。在某些實施例中，可添加界面活性劑以提供約0.1mg/ml、約0.2mg/ml、約0.3mg/ml、約0.4mg/ml、約0.5mg/ml、約0.6mg/ml、約0.7mg/ml、約0.8mg/ml、約0.9mg/ml或約1.0mg/ml之濃度。在其他所選實施例中，可添加界面活性劑以提供約1.1mg/ml、約1.2mg/ml、約1.3mg/ml、約1.4mg/ml、約1.5mg/ml、約1.6mg/ml、約1.7mg/ml、約1.8mg/ml、約1.9mg/ml或約2.0mg/ml之濃度。在某些較佳實施例中，界面活性劑將包含聚山梨醇酯20或聚山梨酸酯40。
無論是由凍乾粉末復原或是原溶液，所揭示之抗體或ADC之不經腸投與(例如靜脈內注射)用相容性調配物可包含約10μg/mL至約100mg/mL之ADC或抗體濃度。在某些所選實施例中，抗體或ADC濃度將包含20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL、600μg/mL、700μg/mL、800μg/mL、900μg/mL或1mg/mL。在其他實施例中，ADC濃度將包含2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、8mg/mL、10mg/mL、12mg/mL、14mg/mL、16mg/mL、18mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL或100mg/mL。
在任何情況下，應瞭解，本發明之化合物 及組合物可藉由多種途徑活體內投與有需要之個體，包括但不限於經口、靜脈內、動脈內、皮下、不經腸、鼻內、肌肉內、心內、心室內、氣管內、口腔、直腸、腹膜內、皮內、局部、透皮及脊髓內，或另外藉由植入或吸入。標的組合物可調配成呈固體、半固體、液體或氣體形式之製劑；包括但不限於錠劑、膠囊、粉劑、顆粒劑、軟膏、溶液、栓劑、灌腸劑、注射劑、吸入劑及氣霧劑。可根據預定應用及治療方案來選擇適當調配物及投與途徑。
B. 劑量
特定給藥方案，亦即，劑量、時程及重複，將視特定個體以及經驗考慮而定，諸如藥物動力學(例如半衰期、清除率等)。投與頻率之確定可由本領域技術人員，諸如主治醫師，基於考慮所治療之病狀及病狀嚴重程度、所治療之個體之年齡及一般健康狀態及其類似因素來進行。在療法過程中可基於對所選組合物及給藥方案之功效的評估來調整投與頻率。此種評估可基於特定疾病、病症或病狀之標記物來進行。在個體患有癌症之實施例中，此等包括經由觸診或目測直接量測腫瘤尺寸；藉由x射線或其他成像技術間接量測腫瘤尺寸；如藉由直接腫瘤活組織切片檢查及腫瘤樣品之顯微鏡檢查加以評估之改良；量測間接腫瘤標記物(例如前列腺癌之PSA)或根據本文中所描述之方法鑑別之抗原；增殖性或腫瘤生成細胞數目減少、此種贅生性細胞之持續減少；贅生性細胞增殖減少；或轉移發展之延遲。
本發明之卡奇黴素ADC可以不同的範圍投與。此等範圍包括約5μg/kg體重至約100mg/kg體重/劑量；約50μg/kg體重至約5mg/kg體重/劑量；約100μg/kg體重至約10mg/kg體重/劑量。其他範圍包括約100μg/kg體重至約20mg/kg體重/劑量及約0.5mg/kg體重至約20mg/kg體重/劑量。在某些實施例中，劑量為至少約100μg/kg體重、至少約250μg/kg體重、至少約750μg/kg體重、至少約3mg/kg體重、至少約5mg/kg體重、至少約10mg/kg體重。
在所選實施例中，ADC將以約10、20、30、40、50、60、70、80、90或100μg/kg體重/劑量投與(較佳經靜脈內)。其他實施例可包括以約200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000μg/kg體重/劑量投與ADC。在其他較佳實施例中，所揭示之結合物將以2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、9或10mg/kg投與。在其他實施例中，結合物可以12、14、16、18或20mg/kg體重/劑量投與。在其他實施例中，結合物可以25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90或100mg/kg體重/劑量投與。利用本文中之教示，本領域技術人員可基於特定標靶、臨床前動物研究、臨床觀察以及標準醫學及生物化學技術及量測而容易地確定ADC之適當劑量。
其他給藥方案可基於如美國專利第7,744,877號中所揭示之體表面積(body surface area,BSA) 計算。如眾所周知，BSA係使用患者之身高及體重來計算且提供個體之體型的量測，如由其體表面積所表示。在某些實施例中，結合物可以1mg/m2至800mg/m2、50mg/m2至500mg/m2之劑量及以100mg/m2、150mg/m2、200mg/m2、250mg/m2、300mg/m2、350mg/m2、400mg/m2或450mg/m2之劑量投與。亦應瞭解，可使用本領域公認及經驗技術來確定適當劑量。
所揭示之ADC可按特定時程投與。一般而言，一或多次向個體投與卡奇黴素結合物之有效劑量。更特定言之，每週一次、每兩週一次、每三週一次、每月一次或少於每月一次投與所揭示之ADC的有效劑量。在某些實施例中，所選ADC之有效劑量可多次投與，包括持續至少一個月、至少六個月、至少一年、至少兩年之時段或若干年之時段。在其他實施例中，投與所揭示之抗體或ADC之間可能經過若干天(2、3、4、5、6或7)、若干週(1、2、3、4、5、6、7或8)或若干個月(1、2、3、4、5、6、7或8)或甚至一年或若干年。
在某些較佳實施例中，包括結合抗體之治療過程將包括在數週或數個月之時段內的多個劑量之所選藥物產物。更特定言之，可每天、每兩天、每四天、每週、每十天、每兩週、每三週、每個月、每六週、每兩個月、每十週或每三個月一次投與本發明之抗體或ADC。就此而言，應瞭解，基於患者反應及臨床實務，可改變劑量或可調節間隔。
亦可在已給與一或多次投與之個體中憑經驗確定所揭示之治療組合物的劑量及方案。舉例而言，可給與個體增加劑量之如本文中所描述產生之治療組合物。在所選實施例中，劑量可分別基於憑經驗確定或觀測之副作用或毒性而逐漸增加或減少或減毒。為了評估所選組合物之功效，可如先前所描述來追蹤特定疾病、病症或病狀之標記物。對於癌症，此等包括經由觸診或目測直接量測腫瘤尺寸；藉由x射線或其他成像技術間接量測腫瘤尺寸；如藉由直接腫瘤活組織切片檢查及腫瘤樣品之顯微鏡檢查加以評估之改良；量測間接腫瘤標記物(例如前列腺癌之PSA)或根據本文中所描述之方法鑑別之腫瘤生成抗原；疼痛或癱瘓減輕；與腫瘤相關之語言、視力、呼吸或其他殘障之改善；食慾增加；或生活品質提高，如藉由已接受之測試或存活時間延長所量測。本領域技術人員應顯而易知，劑量將視個體、贅生性病狀之類型、贅生性病狀之階段、贅生性病狀是否開始轉移至個體中之其他位置及所使用之既往及並行治療而變化。
C. 組合療法
組合療法可能尤其適用於減少或抑制不需要之贅生性細胞增殖、減少癌症發生、減少或預防癌症再發、或者減少或預防癌症擴散或轉移。在此種情況下，本發明之抗體或ADC可藉由移除否則將會支持腫瘤塊且使其不朽化之CSC而充當致敏或化學致敏劑，且從而允許更有效使用減積(debulking)或抗癌劑之當前照護標準。亦 即，在某些實施例中，所揭示之抗體或ADC可提供可強化所投與之另一治療劑之作用模式的增強效應(例如，本質上加和或協同)。在本發明之上下文中，「組合療法」應以廣義解釋且僅係指投與卡奇黴素抗體或ADC及一或多種抗癌劑，包括但不限於細胞毒性劑、細胞抑制劑、抗血管生成劑、減積劑、化學治療劑、放射療法及放射治療劑、標靶抗癌劑(包括單株抗體及小分子實體)、BRM、治療性抗體、癌症疫苗、細胞因子、激素療法、放射療法及抗轉移劑及免疫治療劑，包括特異性及非特異性方法。
不要求組合之結果為當單獨進行各治療(例如卡奇黴素ADC及抗癌劑)時所觀測之效應的加和。儘管一般至少需要加和效應，但超出單一療法之一的任何增加之抗腫瘤效應均為有益的。此外，本發明不要求組合治療展現協同效應。然而，本領域技術人員應瞭解，利用包含較佳實施例之某些所選組合，可觀測到協同作用。
因而，在某些態樣中，組合療法相對於以下各項在治療癌症方面具有治療協同性或改良可量測治療效應：(i)單獨使用ADC；或(ii)單獨使用治療部分；或(iii)治療部分與未添加ADC之另一治療部分組合使用。如本文中所使用，術語「治療協同」意謂ADC與一或多個治療部分之組合具有大於ADC與一或多個治療部分之組合的加成效應的治療效應。
藉由與對照或基線量測值相比較來定量所揭示之組合的所欲結果。如本文中所使用，諸如「改良」、 「增加」或「減少」之相對術語指示值相對於對照，諸如在同一個體中在開始本文中所描述之治療之前的量測值或在不存在本文中所描述之所揭示ADC但存在其他治療部分(諸如照護治療標準)之對照個體(或多個對照個體)中的量測值。代表性對照個體為罹患與所治療個體相同形式之癌症的個體，其年齡與所治療之個體大約相同(以確保所治療個體及對照個體中之疾病階段相當)。
響應於療法之變化或改良一般為統計上顯著的。如本文中所使用，術語「顯著性」或「顯著」係關於對兩個或更多個實體之間存在非隨機相關之概率的統計分析。為了確定關係是否「顯著」或具有「顯著性」，可計算「p值」。在使用者所定義之截止點以下的p值被視為顯著的。小於或等於0.1、小於0.05、小於0.01、小於0.005或小於0.001之p值可被視為顯著的。
協同治療效應可為由單一治療部分或卡奇黴素ADC所引發之治療效應或由指定組合之ADC或單一治療部分所引發之治療效應之和的至少約兩倍，或至少約五倍，或至少約十倍，或至少約二十倍，或至少約五十倍，或至少約一百倍的效應。協同治療效應亦可觀測為與由單一治療部分或ADC所引發之治療效應或由指定組合之ADC或單一治療部分所引發之治療效應之和相比在治療效應方面增加至少10%，或至少20%，或至少30%，或至少40%，或至少50%，或至少60%，或至少70%，或至少80%，或至少90%，或至少100%，或更多。協同效應亦為當治療 劑組合使用時允許減少其給藥之效應。
在實施組合療法時，卡奇黴素ADC及治療部分可於單一組合物中或作為兩種或更多種不同的組合物使用相同或不同的投與途徑同時投與個體。或者，用ADC治療可在治療部分治療前後以例如數分鐘至數週之間隔進行。在一個實施例中，在彼此相距約5分鐘至約兩週內投與治療部分及ADC。在其他實施例中，投與ADC與治療部分之間可能經過若干天(2、3、4、5、6或7)、若干週(1、2、3、4、5、6、7或8)或若干個月(1、2、3、4、5、6、7或8)。
可按不同的時程投與組合療法直至病狀得以治療、減輕或治癒，諸如每天一次、兩次或三次、每兩天一次、每三天一次、每週一次、每兩週一次、每個月一次、每兩個月一次、每三個月一次、每六個月一次，或可連續投與。所選之ADC及一或多個治療部分可交替數日或數週投與；或可給與ADC治療，隨後用額外治療部分進行一或多次治療之順序。在一個實施例中，ADC與一或多個治療部分組合投與持續較短治療循環。在其他實施例中，投與組合治療持續較久治療循環。組合療法可經由任何途徑投與。
在一些實施例中，卡奇黴素ADC可與不同的第一線癌症治療組合使用。在一個實施例中，組合療法包括使用ADC及細胞毒性劑(諸如依弗醯胺(ifosfamide)、絲裂黴素C、長春地辛(vindesine)、長春花鹼(vinblastine)、 滅必治(etoposide)、伊立替康(ironitecan)、吉西他濱、紫杉烷、長春瑞濱(vinorelbine)、胺甲蝶呤及培美曲塞(pemetrexed))及視需要之一或多個其他治療部分。
在另一實施例中，組合療法包括使用ADC及基於鉑之藥物(例如卡鉑或順鉑)及視需要之一或多個其他治療部分(例如長春瑞濱；吉西他濱；紫杉烷，諸如，例如多烯紫杉醇或太平洋紫杉醇；伊立替康；或培美曲塞)。
在所選實施例中，本發明之化合物及組合物可與諸如PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑之檢查點抑制劑聯合使用。PD-1連同其配位體PD-L1一起為抗腫瘤T淋巴細胞反應之陰性調節因子。在一個實施例中，組合療法可包含投與卡奇黴素ADC連同抗PD-1抗體(例如噴羅珠單抗(perbrolizumab)、尼魯單抗(nivolumab)、皮地珠單抗(pidilizumab))及視需要之一或多個其他治療部分。在另一實施例中，組合療法可包括投與卡奇黴素ADC連同抗PD-L1抗體(例如阿維魯單抗(avelumab)、阿替珠單抗(atezolizumab)、德瓦魯單抗(durvalumab))及視需要之另一個或多個其他治療部分。在另一實施例中，組合療法可包括向用檢查點抑制劑及/或靶向BRAF組合療法(例如維羅非尼(vemurafenib)或達拉非尼(dabrafinib))治療後繼續進展之患者投與卡奇黴素ADC連同抗PD-1抗體或抗PD-L1。
在一個實施例中，舉例而言，在治療BR-ERPR、BR-ER或BR-PR癌症時，組合療法包括使用ADC及一或多個描述為「激素療法」之治療部分。如本文中所 使用之「激素療法」係指例如他莫昔芬；促性腺激素或促黃體素釋放激素(GnRH或LHRH)；依維莫司(everolimus)及依西美坦(exemestane)；托瑞米芬(toremifene)；或芳香酶抑制劑(例如阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(letrozole)、依西美坦或氟維司群(fulvestrant))。
在另一實施例中，舉例而言，在BR-HER2治療中，組合療法包括使用ADC及曲妥珠單抗(trastuzumab)或ado-曲妥珠單抗安坦辛及視需要之一或多個其他治療部分(例如帕妥珠單抗及/或多烯紫杉醇)。
在一些實施例中，舉例而言，在轉移性乳腺癌之治療中，組合療法包括使用所揭示之ADC及紫杉烷(例如多烯紫杉醇或太平洋紫杉醇)及視需要之額外治療部分，例如蒽環類藥物(例如多柔比星或表柔比星)及/或賀樂維。
在另一實施例中，舉例而言，在轉移性或復發性乳癌或BRCA突變乳癌之治療中，組合療法包括使用所揭示之ADC及甲地孕酮(megestrol)及視需要之額外治療部分。
在其他實施例中，舉例而言，在BR-TNBC之治療中，組合療法包括使用卡奇黴素ADC及聚ADP核糖聚合酶(poly ADP ribose polymerase,PARP)抑制劑(例如BMN-673、奧拉帕尼(olaparib)、魯卡帕尼(rucaparib)及維利帕尼)及視需要之額外治療部分。
在另一實施例中，舉例而言，在乳癌之治 療中，組合療法包括使用所揭示之ADC及環磷醯胺及視需要之額外治療部分(例如多柔比星、紫杉烷、表柔比星、5-FU及/或胺甲蝶呤)。
在另一實施例中，用於治療EGFR陽性NSCLC之組合療法包括使用所揭示之ADC及阿法替尼及視需要之一或多個其他治療部分(例如埃羅替尼(erlotinib)及/或貝伐單抗)。
在另一實施例中，用於治療EGFR陽性NSCLC之組合療法包括使用ADC及埃羅替尼及視需要之一或多個其他治療部分(例如貝伐單抗)。
在另一實施例中，用於治療ALK陽性NSCLC之組合療法包括使用ADC及色瑞替尼(ceritinib)及視需要之一或多個其他治療部分。
在另一實施例中，用於治療ALK陽性NSCLC之組合療法包括使用ADC及克唑替尼(crizotinib)及視需要之一或多個其他治療部分。
在另一實施例中，該組合療法包括使用ADC及貝伐單抗及視需要之一或多個其他治療部分(例如紫杉烷，諸如，例如多烯紫杉醇或太平洋紫杉醇；及/或鉑類似物)。
在另一實施例中，該組合療法包括使用ADC及貝伐單抗及視需要之一或多個其他治療部分(例如吉西他濱及/或鉑類似物)。
在一特定實施例中，用於治療鉑抗性腫瘤 之組合療法包括使用ADC及多柔比星及/或依託泊苷及/或吉西他濱及/或長春瑞濱及/或異環磷醯胺及/或甲醯四氫葉酸調節之5-氟尿嘧啶及/或貝伐單抗及/或他莫西芬；及視需要之一或多個其他治療部分。
在另一實施例中，該組合療法包括使用ADC及PARP抑制劑及視需要之一或多個其他治療部分。
在另一實施例中，該組合療法包括使用ADC及貝伐單抗及視需要之環磷醯胺。
該組合療法可包括ADC及對包含突變或異常表現之基因或蛋白質(例如BRCA1)之腫瘤有效的化學治療部分。
T淋巴細胞(例如細胞毒性淋巴細胞(cytotoxic lymphocytes,CTL))在針對惡性腫瘤之宿主防衛中起重要作用。藉由在抗原呈現細胞上呈現腫瘤相關抗原來活化CTL。活性特異性免疫療法為可用於藉由對患者接種源自於已知癌症相關抗原之肽而擴增對癌症之T淋巴細胞反應的方法。在一個實施例中，該組合療法可包括ADC及針對癌症相關抗原之疫苗(例如黑素細胞系特異性抗原酪胺酸酶、gp100、Melan-A/MART-1或gp75)。在其他實施例中，該組合療法可包括投與ADC連同自體CTL或天然殺手細胞之活體外擴增、活化及繼承性再引入。亦可藉由以抗原呈現細胞增強腫瘤抗原呈現之策略來促進CTL活化。顆粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)促進樹突狀細胞之募集及樹突狀細胞交叉啟動之活化。在一個實施例中，該 組合療法可包括分離抗原呈現細胞、用刺激性細胞因子(例如GM-CSF)活化此種細胞、用腫瘤相關抗原啟動及隨後使用所揭示之ADC及視需要之一或多個不同的治療部分之結合，將抗原呈現細胞授受性再引入患者中。
在其他實施例中，本發明之ADC可與以下所描述之一或多種抗癌劑組合使用。
如本文中所使用之術語「抗癌劑」或「化學治療劑」為「治療部分」之一個子集，其又描述為「醫藥學活性劑」之藥劑的子集。更特定言之，「抗癌劑」意謂可用於治療諸如癌症之細胞增殖性病症的任何藥劑，且包括但不限於細胞毒性劑、細胞抑制劑、抗血管生成劑、減積劑、化學治療劑、放射療法及放射治療劑、標靶抗癌劑、生物反應調節劑、治療抗體、癌症疫苗、細胞因子、激素療法、抗轉移劑及免疫治療劑。應瞭解，在如以上所論述之所選實施例中，此種抗癌劑可包含抗體藥物結合物且可在投與前與抗體締合。在某些實施例中，所產生之抗癌劑ADC可與如本文中所揭示之本發明ADC組合使用。
術語「細胞毒性劑」可為抗癌劑，意謂對細胞具有毒性且可減少或抑制細胞之功能及/或破壞細胞的物質。典型地，該物質為源自於活生物體之天然存在之分子(或合成製備之天然產物)。細胞毒性劑之實例包括但不限於細菌之小分子毒素或酶活性毒素(例如白喉毒素、假單胞菌內毒素及外毒素、葡萄球菌腸毒素A)、真菌(例如α-帚麴菌素(α-sarcin)、局限麴菌素(restrictocin))、植物(例 如相思子素、篦麻毒素、蒴蓮根毒素(modeccin)、檞寄生素(viscumin)、商陸抗病毒蛋白、皂草素、白樹毒素(gelomin)、地膚子皂苷(momoridin)、栝蔞素(trichosanthin)、大麥毒素、油桐蛋白、香石竹毒蛋白(dianthin protein)、美洲商陸蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜抑制劑、麻瘋樹毒素(curcin)、巴豆毒素、肥皂草抑制劑、絲林黴素(mitegellin)、局限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、新黴素及單端孢黴烯族毒素(tricothecene))或動物(例如，細胞毒性RNA酶，諸如細胞外胰臟RNA酶；DNA酶I，包括其片段及/或變異體)。
抗癌劑可包括抑制或經設計以抑制癌細胞或可能變成癌細胞或產生腫瘤生成子代(例如腫瘤生成細胞)之細胞的任何化學劑。此種化學劑通常針對細胞生長或分裂所必需之細胞內過程，且因而對一般快速生長並分裂之癌細胞尤其有效。舉例而言，長春新鹼使微管去聚合，且因而抑制細胞進入有絲分裂。此種藥劑通常組合投與且通常在組合時最有效，例如，在調配物CHOP中。此外，在所選實施例中，此種抗癌劑可與所揭示之抗體結合。
可與本發明之卡奇黴素ADC組合使用之抗癌劑的實例包括但不限於烷基化劑、烷基磺酸酯、阿那曲唑、鵝膏菌素、氮雜環丙烯、乙烯亞胺及甲基蜜胺、聚乙醯、喜樹鹼、BEZ-235、硼替佐米、苔蘚抑素、海綿抑素、CC-1065、色瑞替尼、克唑替尼、念珠藻素、多拉司他汀、倍癌黴素、艾榴塞洛素、埃羅替尼、水鬼蕉鹼、匍枝珊瑚 醇、海綿抑素、氮芥類、抗生素、烯二炔達內黴素、雙膦酸鹽、埃斯培拉黴素、色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素、放線菌素、胺茴黴素、重氮絲胺酸、博萊黴素、放線菌素C、莰佛胺、卡柔比星、洋紅黴素、嗜癌黴素、色黴素、環磷醯胺、放線菌素D、道諾紅菌素、地托比星、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、多柔比星、表柔比星、衣索比星、依西美坦、氟尿嘧啶、氟維司群、吉非替尼、伊達比星、拉帕替尼、來曲唑、洛那法尼、麻西羅黴素、醋酸甲地孕酮、絲裂黴素、黴酚酸、諾加黴素、橄欖黴素、帕唑帕尼、培洛黴素、紫菜黴素、嘌呤黴素、三鐵阿黴素、雷帕黴素、羅多比星、索拉非尼、鏈黑菌素、鏈脲黴素、他莫西芬、枸櫞酸他莫西芬、替莫唑胺、噻替哌、替吡法尼、殺結核菌素、烏苯美司、凡德他尼、伏氯唑、XL-147、淨司他丁、佐柔比星；抗代謝物、葉酸類似物、嘌呤類似物、雄激素、抗腎上腺素、葉酸補充劑(諸如亞葉酸)、醋葡內酯、醛磷醯胺糖苷、胺基乙醯丙酸、恩尿嘧啶、安吖啶、貝斯尿嘧啶、比生群、依達曲沙、地磷醯胺、秋水仙胺、地吖醌、依氟鳥胺酸、依利醋銨、埃博黴素、依託格魯、硝酸鎵、羥基脲、蘑菇多糖、洛尼達寧、類美登素、丙脒腙、米托蒽醌、莫哌達醇、二胺硝吖啶、噴司他丁、蛋胺氮芥、吡柔比星、洛索蒽醌、足葉草酸、2-乙基肼、丙卡巴肼、聚糖複合物、雷佐生；根黴素；SF-1126、西佐喃；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢黴素(T-2毒素、疣孢黴素A、桿孢菌素A及 蛇形菌素)；烏拉坦；長春地辛；達卡巴；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；雙溴丙基哌；加西托辛；阿拉伯糖苷；環磷醯胺；噻替派；類紫杉醇、苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；胺甲蝶呤；鉑類似物、長春花鹼；鉑；依託泊苷；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼；長春瑞濱；能滅瘤；替尼泊苷；依達曲沙；道諾黴素；胺基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；伊立替康、拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸；類視黃醇；卡培他濱；考布他汀；甲醯四氫葉酸；奧沙利鉑；XL518、可減少細胞增殖之PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR及VEGF-A之抑制劑，及以上任一者之醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物、酸或衍生物。此定義中亦包括用於調節或抑制激素作用於腫瘤之抗激素劑，諸如抗雌激素及選擇性雌激素受體抗體；抑制芳香酶之芳香酶抑制劑，其調節腎上腺中之雌激素產生；及抗雄激素；以及曲沙他濱(1,3-二烷核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸、核糖酶，諸如VEGF表現抑制劑及HER2表現抑制劑；疫苗，PROLEUKIN® rIL-2；LURTOTECAN®拓撲異構酶1抑制劑；ABARELIX® rmRH；長春瑞濱及埃斯培拉黴素及以上任一者之醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物、酸或衍生物。
尤佳抗癌劑包括市面上或臨床上可利用之化合物，諸如埃羅替尼(TARCEVA®，Genentech/OSI Pharm.)、多烯紫杉醇(TAXOTERE®，Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶，CAS編號51-21-8)、吉西他濱 (GEMZAR®，Lilly)、PD-0325901(CAS編號391210-10-9，Pfizer)、順鉑(順二胺二氯鉑(II)，CAS編號15663-27-1)、卡鉑(CAS編號41575-94-4)、太平洋紫杉醇(TAXOL®，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、曲妥珠單抗(HERCEPTIN®，Genentech)、替莫唑胺(4-甲基-5-側氧基-2,3,4,6,8-五氮雜雙環[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲醯胺，CAS編號85622-93-1，TEMODAR®，TEMODAL®，Schering Plough)、他莫西芬((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺，NOLVADEX®，ISTUBAL®，VALODEX®)及多柔比星(ADRIAMYCIN®)。其他市面上或臨床上可利用之抗癌劑包括奧沙利鉑(ELOXATIN®，Sanofi)、硼替佐米(VELCADE®，Millennium Pharm.)、索坦(SUNITINIB®，SU11248，Pfizer)、來曲唑(FEMARA®，Novartis)、甲磺酸伊馬替尼(GLEEVEC®，Novartis)、XL-518(Mek抑制劑，Exelixis，WO 2007/044515)、ARRY-886(Mek抑制劑，AZD6244，Array BioPharma，Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制劑，Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制劑，Novartis)、XL-147(PI3K抑制劑，Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟維司群(FASLODEX®，AstraZeneca)、甲醯四氫葉酸(亞葉酸)、雷帕黴素(西羅莫斯，RAPAMUNE®，Wyeth)、拉帕替尼(TYKERB®，GSK572016，Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(SARASARTM，SCH 66336，Schering Plough)、索拉非尼(NEXAVAR®，BAY43-9006，Bayer Labs)、吉非替尼(IRESSA®，AstraZeneca)、 伊立替康(CAMPTOSAR®，CPT-11，Pfizer)、替吡法尼(ZARNESTRATM，Johnson & Johnson)、ABRAXANETM(無Cremophor)、太平洋紫杉醇之白蛋白工程改造奈米粒子調配物(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，Il)、凡德他尼(rINN，ZD6474，ZACTIMA®，AstraZeneca)、苯丁酸氮芥、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、西羅莫司酯化物(TORISEL®，Wyeth)、帕唑帕尼(GlaxoSmithKline)、莰佛胺(TELCYTA®，Telik)、噻替派及環磷醯胺(CYTOXAN®，NEOSAR®)；長春瑞濱(NAVELBINE®)；卡培他濱(XELODA®，Roche)、他莫西芬(包括NOLVADEX®；枸據酸他莫西芬、FARESTON®(枸據酸托瑞米芬)、MEGASE®(醋酸甲地孕酮)、AROMASIN®(依西美坦；Pfizer)、福美坦、法倔唑、RIVISOR®(伏氯唑)、FEMARA®(來曲唑；Novartis)及ARIMIDEX®(阿那曲唑；AstraZeneca)。
在其他實施例中，本發明之ADC可與目前在臨床試驗中或市面可得之許多抗體(或免疫治療劑)中之任一者組合使用。所揭示之抗體可與選自由以下各項組成之群的抗體組合使用：阿巴伏單抗(abagovomab)、阿德木單抗(adecatumumab)、阿夫珠單抗(afutuzumab)、阿侖單抗(alemtuzumab)、阿妥莫單抗(altumomab)、阿馬昔單抗(amatuximab)、阿那莫單抗(anatumomab)、阿西莫單抗(arcitumomab)、巴維昔單抗(bavituximab)、貝妥莫單抗(bectumomab)、貝伐單抗(bevacizumab)、比伐珠單抗(bivatuzumab)、布利莫單抗(blinatumomab)、貝倫妥單抗 (brentuximab)、坎妥珠單體(cantuzumab)、卡妥索單抗(catumaxomab)、西妥昔單抗(cetuximab)、西妥珠單抗(citatuzumab)、西妥木單抗(cixutumumab)、克裡伏單抗(clivatuzumab)、可納木單抗(conatumumab)、達雷木單抗(daratumumab)、德羅圖單抗(drozitumab)、杜力妥單抗(duligotumab)、杜斯妥單抗(dusigitumab)、地莫單抗(detumomab)、達西珠單抗(dacetuzumab)、達洛珠單抗(dalotuzumab)、依美昔單抗(ecromeximab)、依洛珠單抗(elotuzumab)、恩司昔單抗(ensituximab)、厄妥索單抗(ertumaxomab)、埃達珠單抗(etaracizumab)、法勒珠單抗(farletuzumab)、非妥珠單抗(ficlatuzumab)、芬妥木單抗(figitumumab)、夫蘭妥單抗(flanvotumab)、夫土昔單抗(futuximab)、甘尼妥單抗(ganitumab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、吉倫昔單抗(girentuximab)、格雷木單抗(glembatumumab)、替伊莫單抗(ibritumomab)、伊戈伏單抗(igovomab)、英戈珠單抗(imgatuzumab)、英達西單抗(indatuximab)、伊諾珠單抗(inotuzumab)、伊妥木單抗(intetumumab)、伊匹單抗(ipilimumab)、伊妥木單抗(iratumumab)、拉貝珠單抗(labetuzumab)、蘭利珠單抗(lambrolizumab)、來沙木單抗(lexatumumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、洛沃珠單抗(lorvotuzumab)、魯卡木單抗(lucatumumab)、馬帕木單抗(mapatumumab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、米拉珠單抗(milatuzumab)、明瑞莫單抗(minretumomab)、米妥莫單抗(mitumomab)、莫昔莫單抗 (moxetumomab)、那那妥單抗(narnatumab)、那妥莫單抗(naptumomab)、奈昔木單抗(necitumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、尼魯單抗(nivolumab)、諾莫單抗(nofetumomabn)、奧妥珠單抗(obinutuzumab)、奧卡珠單抗(ocaratuzumab)、奧法木單抗(ofatumumab)、奧拉木單抗(olaratumab)、奧拉帕尼(olaparib)、奧那妥珠單抗(onartuzumab)、奧普珠單抗(oportuzumab)、奧戈伏單抗(oregovomab)、帕尼單抗(panitumumab)、帕薩妥珠單抗(Parsatuzumab)、帕曲妥單抗(Patritumab)、培妥莫單抗(Pemtumomab)、培妥珠單抗(Pertuzumab)、皮地珠單抗(Pidilizumab)、平妥莫單抗(Pintumomab)、普立妥木單抗(Pritumumab)、雷妥莫單抗(Racotumomab)、雷得妥單抗(Radretumab)、雷莫蘆單抗(Ramucirumab)、利妥木單抗(Rilotumumab)、利妥昔單抗(rituximab)、羅妥木單抗(Robatumumab)、沙妥莫單抗(satumomab)、司美替尼(selumetinib)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、絲妥昔單抗(siltuximab)、絲妥珠單抗(simtuzumab)、索利妥單抗(solitomab)、他珠單抗(tacatuzumab)、他普莫單抗(taplitumomab)、替妥莫單抗(tenatumomab)、替妥木單抗(teprotumumab)、替加珠單抗(tigatuzumab)、托西莫單抗(tositumomab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、土可珠單抗(tucotuzumab)、烏妥昔單抗(ublituximab)、維妥珠單抗(veltuzumab)、伏司妥珠單抗(vorsetuzumab)、伏妥昔單抗(votumumab)、紮蘆木單抗(zalutumumab)、CC49、3F8、 MDX-1105及MEDI4736及其組合。
其他尤佳實施例包括使用批准用於癌症療法之抗體，包括但不限於利妥昔單抗、吉妥珠單抗、阿侖單抗、替伊莫單抗、托西莫單抗、貝伐單抗、西妥昔單抗、帕替木單抗(patitumumab)、奧法木單抗、伊匹單抗及貝倫妥單抗維多汀(brentuximab vedotin)。本領域技術人員將能夠容易地鑑別與本文中之教示相容的其他抗癌劑。
D. 放射療法
本發明亦提供ADC與放射療法(亦即，用於在腫瘤細胞內局部誘導DNA損傷之任何機制，諸如γ照射、X射線、UV照射、微波、電子發射及其類似機制)之組合。亦涵蓋使用直接遞送放射性同位素至腫瘤細胞之組合療法，且所揭示之ADC可聯合標靶抗癌劑或其他標靶手段一起使用。典型地，經約1至約2週之時間段脈衝式投與放射療法。放射療法可投與患有頭頸癌之個體持續約6至7週。視需要，放射療法可作為單次劑量或作為多個順序劑量投與。
IX 適應症
本發明提供本發明之ADC用於診斷、診治、治療及/或預防多種病症之用途，包括贅生性、炎性、血管生成性及免疫學病症及由病原體引起之病症。特定言之，治療之關鍵標靶為包含實體腫瘤之贅生性病狀，但血液學惡性腫瘤在本發明之範疇內。在某些實施例中，本發明之ADC將用於治療腫瘤或表現特定決定子(例如SEZ6) 之腫瘤生成細胞。所治療之「個體」或「患者」較佳將為人類，但如本文中所使用，該等術語明確被視為包括任何哺乳動物物種。
應瞭解，本發明之化合物及組合物可用於治療處於不同的疾病階段及處於其治療週期中之不同的點的個體。因此，在某些實施例中，本發明之抗體及ADC將用作前線療法且投與先前已治療癌性病狀之個體。在其他實施例中，本發明之抗體及ADC將用於治療第二線及第三線患者(亦即，先前分別已治療相同病狀一次或兩次之彼等個體)。其他實施例將包括治療已用所揭示之ADC或用不同的治療劑治療相同或相關病狀三次或更多次的第四線以上之患者(例如SCLC患者)。在其他實施例中，本發明之化合物及組合物將用於治療先前已治療(用本發明之抗體或ADC或用其他抗癌劑)且已復發或據確定對先前治療為難治性之個體。在所選實施例中，本發明之化合物及組合物可用於治療具有復發腫瘤之個體。
在某些態樣中，增殖性病症將包括實體腫瘤，包括但不限於腎上腺、肝臟、腎臟、膀胱、乳房、胃、卵巢、子宮頸、子宮、食道、結腸直腸、前列腺、胰臟、肺(小細胞及非小細胞)、甲狀腺、癌瘤、肉瘤、膠質母細胞瘤及不同的頭頸部腫瘤。在其他較佳實施例中，且如以下實例中所示，所揭示之ADC在治療小細胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)及非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)(例如，鱗狀細胞非小細胞肺癌或鱗狀細胞 小細胞肺癌)方面尤其有效。在某些實施例中，肺癌為難治性、復發性或基於鉑之藥劑(例如卡鉑、順鉑、奧沙利鉑、拓撲替康(topotecan))及/或紫杉烷(例如多烯紫杉醇、太平洋紫杉醇、拉洛他塞(larotaxel)或去癌達(cabazitaxel))。在另一實施例中，所治療之個體受大細胞神經內分泌癌瘤(LCNEC)困擾。在本發明之其他態樣中，所揭示之抗體及ADC可用於治療骨髓性甲狀腺癌、膠質母細胞瘤、神經內分泌性前列腺癌(neuroendocrine postate cancer,NEPC)、高等級胃腸胰臟癌(gastroenteropancreatic cancer,GEP)及惡性黑素瘤。
根據本發明進行治療之更一般例示性贅生性病狀可為良性或惡性的；實體腫瘤或其他血液瘤形成；且可選自包括但不限於以下各項之群組：腎上腺腫瘤、AIDS相關癌症、肺泡軟部肉瘤、星形細胞腫瘤、自主神經節腫瘤、膀胱癌(鱗狀細胞癌及移行細胞癌)、囊胚腔病症、骨癌(釉質瘤、動脈瘤骨囊腫、骨軟骨瘤、骨肉瘤)、腦及脊髓癌、轉移性腦腫瘤、乳癌、頸動脈體瘤、子宮頸癌、軟骨肉瘤、脊索瘤、難染性腎細胞癌瘤、透明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性纖維組織細胞瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、室管膜瘤、上皮病症、尤因氏瘤、骨外黏液樣軟骨肉瘤、骨纖維生成不良、骨纖維發育不良、膽囊及膽管癌、胃癌、胃腸、妊娠期滋養層疾病、生殖細胞腫瘤、腺病症、頭頸癌、下丘腦、腸癌、胰島細胞腫瘤、卡波西氏肉瘤、腎臟癌(腎母細胞瘤、乳頭狀腎細胞癌)、 白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤性腫瘤、脂肪肉瘤/惡性脂肪瘤性腫瘤、肝癌(肝母細胞瘤、肝細胞癌)、淋巴瘤、肺癌(小細胞癌、腺癌、鱗狀細胞癌、大細胞癌等)、巨噬細胞病症、髓母細胞瘤、黑素瘤、腦膜瘤、多發性內分泌瘤、多發性骨髓瘤、脊髓發育不良症候群、神經母細胞瘤、神經內分泌腫瘤、卵巢癌、胰臟癌、乳頭狀甲狀腺癌、副甲狀腺腫瘤、兒科癌症、周圍神經鞘腫瘤、嗜鉻細胞瘤、垂體腫瘤、前列腺癌、眼色素層後黑素瘤、罕見血液學病症、腎轉移性癌症、桿狀腫瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮膚癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、胃癌、基質病症、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌瘤、胸腺瘤、甲狀腺轉移性癌症及子宮癌(子宮頸癌瘤、子宮內膜癌瘤及平滑肌瘤)。
在尤佳實施例中，個體將受胰臟癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌及胃癌困擾。在較佳實施例中，個體就胰臟癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌及胃癌而言將為難治的。
在其他較佳實施例中，該等ADC在治療肺癌方面尤其有效，包括以下亞型：小細胞肺癌及非小細胞肺癌(例如，鱗狀細胞非小細胞肺癌或鱗狀細胞小細胞肺癌)。在所選實施例中，抗體及ADC可投與展現有限階段疾病或廣泛階段疾病之患者。在其他較佳實施例中，所揭示之結合抗體將投與難治性患者(亦即，疾病在完成初步治療過程期間或之後不久復發之患者)；敏感性患者(亦即，其復發發生在初次治療後2至3月以後之患者)；或對基於 鉑之藥劑(例如卡鉑、順鉑、奧沙利鉑)及/或紫杉烷(例如多烯紫杉醇、太平洋紫杉醇、拉洛他塞或去癌達)展現抗性之患者。
在另一尤佳實施例中，所揭示之ADC在治療卵巢癌(包括卵巢漿液性癌瘤及卵巢乳頭狀漿液性癌瘤)方面有效。
本發明亦提供呈現良性或癌前腫瘤之個體的防治性或預防性治療。使用本發明抗體之治療不排除特定類型之腫瘤或增殖性病症。
X 製品
本發明包括包含一或多個容器之醫藥包裝及套組，其中容器可包含一或多個劑量之本發明ADC。在某些實施例中，該包裝或套組含有單位劑量，意謂預定量之包含例如本發明ADC之組合物、有或無一或多種其他藥劑且視需要一或多種抗癌劑。
本發明之套組一般將在適合之容器中含有本發明ADC之醫藥學上可接受之調配物及處於相同或不同的容器中的視需要的一或多種抗癌劑。該等套組亦可含有其他醫藥學上可接受之調配物或裝置，以用於診斷或組合療法。裝置或儀器之實例包括可用於偵測、監測、定量或分析與增殖性病症相關之細胞或標記物者。本發明所涵蓋之套組亦可含有適當試劑以組合本發明之ADC與抗癌劑或診斷劑(例如，參見美國專利第7,422,739號)。
當套組之組分於一或多種液體溶液中提供 時，液體溶液可為非水性的，然而，水性溶液較佳，無菌水性溶液尤佳。套組中之調配物亦可作為乾燥粉末或呈凍乾形式提供，由此可在添加適當液體後得以復原。用於復原之液體可容納在單獨容器中。此種液體可包含無菌醫藥學上可接受之緩衝液或其他稀釋劑，諸如抑細菌性注射用水、磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏溶液或葡萄糖溶液。在套組包含本發明ADC與其他治療劑或試劑之組合時，溶液可以莫耳等效組合或以一個組分超過另一個之方式預先混合。或者，本發明ADC及任何視需要之抗癌劑或其他藥劑在投與患者之前可單獨維持在不同的容器內。
套組可包括一個或多個容器及處於容器中、上或與隨其附帶之標籤或包裝插頁，以便指示封裝之組合物用於診斷或治療所選疾病病狀。適合之容器包括例如瓶、小瓶、注射器等。該等容器可由多種材料形成，諸如玻璃或塑膠。容器可包括無菌接取口，例如，容器可為靜脈內溶液袋或具有可藉由皮下注射針刺穿之瓶塞的小瓶。
在一些實施例中，套組可含有用於將ADC及任何視需要之組分投與患者之構件，例如，一或多個針或注射器(預填充或空)、眼用滴管、移液管或可將調配物注射或引入個體或應用於身體之患病區域的其他類似裝置。本發明之套組典型地亦將包括用於容納小瓶或其類似物及其他密封隔離以用於商業銷售之構件，諸如，例如置放並保持所欲小瓶及其他裝置之吹模成型塑膠容器。
XI 雜項
除非本文中另外定義，否則結合本文中所使用之科學及技術術語將具有本領域技術人員通常所理解之含義。此外，除非上下文另有要求，否則單數術語將包括複數且複數術語將包括單數。另外，本說明書及所附申請專利範圍中所提供之範圍包括兩個端點及介於端點之間的所有點。因此，2.0至3.0之範圍包括2.0、3.0及介於2.0與3.0之間的所有點。
一般而言，本文中所描述之細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及化學技術為本領域熟知且常用者。本文中聯合此種技術所使用之命名法亦常用於本領域中。除非另外指示，否則本發明之方法及技術一般根據本領域所熟知且如本說明書中所引用之多個參考文獻中所描述之習知方法來進行。
XII 參考文獻
本文中所引用之所有專利、專利申請案及公開案及可呈電子形式獲得之材料(舉例而言，包括例如GenBank及RefSeq中之核苷酸序列提交，及例如SwissProt、PIR、PRF、PDB中之胺基酸序列提交，及得自GenBank及RefSeq中之註釋編碼區之轉譯)的完整揭示內容係以引用之方式併入，不考慮片語「以引用之方式併入」是否關於特定參考文獻使用。僅出於清楚理解之目的提供以上詳細描述及繼其之後的實例。應理解其並無不必要之限制。本發明不限於所顯示及描述之確切細節。本領域技 術人員顯而易知之變化形式包括在由申請專利範圍界定之本發明中。本文中所使用之任何章節標題僅出於組織之目的，而不應被視為限制所描述之標的物。
XIII 序列表概述
本申請案隨附包括許多核酸及胺基酸序列之圖。以下表3提供所包括之序列的概述。
實施例
本文中所揭示之實施例包括以下實施例P1至實施例P27。
實施例P1. 一種式Ab-[W-(X1)a-CM-(X2)b-P-D]n之抗體藥物結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中a)Ab包含靶向劑；b)W包含連接基；CM包含可裂解部分；d)P包含二硫鍵保護基；e)X1及X2包含視需要的間隔基部分；且f)D包含卡奇黴素；其中a及b獨立地為0或1且n為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
實施例P2. 根據實施例P1之抗體藥物結合 物，其中該靶向劑包含抗體。
實施例P3. 根據實施例P2之抗體藥物結合物，其中該抗體包含嵌合、CDR接枝、人類化或人類抗體或其免疫活性片段。
實施例P4. 根據實施例P2或P3之抗體藥物結合物，其中該抗體包含抗SEZ6抗體。
實施例P5. 根據實施例P2至P4中任一者之抗體藥物結合物，其中該抗體包含位點特異性抗體。
實施例P6. 根據實施例P2至P5中任一者之抗體藥物結合物，其中該抗體包含兩個未配對之半胱胺酸。
實施例P7. 根據實施例P6之抗體藥物結合物，其中各抗體輕鏈包含未配對之半胱胺酸殘基。
實施例P8. 根據實施例P7之抗體藥物結合物，其中各未配對之半胱胺酸殘基處於位置C214上。
實施例P9. 根據實施例P1至P8中任一者之抗體藥物結合物，其中n包含整數2至8。
實施例P10. 根據實施例P1至P9中任一者之抗體藥物結合物，其中n包含整數2。
實施例P11. 根據實施例P1至P10中任一者之抗體藥物結合物，其中D包含卡奇黴素γ1 I之類似物。
實施例P12. 根據實施例P1至P11中任一者之抗體/藥物結合物，其中該卡奇黴素為卡奇黴素之N-乙醯基衍生物或二硫化物類似物。
實施例P13. 根據實施例P1至P12中任一者 之抗體/藥物結合物，其中該卡奇黴素為N-乙醯基-γ-卡奇黴素。
實施例P14. 根據實施例P1至P13中任一者之抗體藥物結合物，其中該可裂解部分包含胜肽鍵、腙部分、肟部分、酯鍵聯或二硫鍵聯。
實施例P15. 根據實施例P1至P14中任一者之抗體藥物結合物，其中該可裂解部分包含胜肽鍵。
實施例P16. 一種醫藥組合物，其包含根據實施例P1至P15中任一者之抗體藥物結合物。
實施例P17. 一種治療癌症之方法，其包括向有需要之個體投與根據實施例16之醫藥組合物。
實施例P18. 根據實施例P17之方法，其中該癌症係選自胰臟癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌及胃癌。
實施例P19. 根據實施例P17或P18之方法，其進一步包括向該個體投與至少一種額外治療部分。
實施例P20. 一種向細胞遞送卡奇黴素細胞毒素之方法，其包括使該細胞與根據實施例P1至P15中任一者之抗體藥物結合物接觸。
實施例P21. 一種製備抗體藥物結合物之方法，其包括以下步驟：a)提供包含可裂解連接子之卡奇黴素構建體；b)還原該靶向劑以提供經活化之殘基；及c)使該經還原之靶向劑與該卡奇黴素構建體結合。
實施例P22. 根據實施例P21之方法，其中 該靶向劑包含位點特異性抗體。
實施例P23. 根據實施例P22之方法，其中該位點特異性抗體包含源自於天然二硫橋之游離半胱胺酸。
實施例P24. 根據實施例P22之方法，其中該經工程改造之抗體包含並非源自於天然二硫橋之游離半胱胺酸。
實施例P25. 根據實施例P22之方法，其中該游離半胱胺酸包含引入之半胱胺酸殘基或經取代之半胱胺酸殘基。
實施例P26. 根據實施例P21至P25中任一者之方法，其中該還原該靶向劑之步驟包括選擇性地還原該靶向劑。
實施例27. 根據實施例P26之方法，其中該選擇性地還原該抗體之步驟包括使該抗體與穩定劑接觸之步驟。
其他實施例包括以下實施例1至實施例44。
實施例1一種化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(I)：Ab-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]z3(I)，其中：Ab為靶向劑；W為連接基；M為可裂解部分；L3及L4獨立地為連接子；P為二硫鍵保護基；D為卡奇黴素或其類似物；z1及z2獨立地為0至10之整數；且z3為1至10之整數。
實施例2. 根據實施例1之化合物，其中D 包含式(Ia)：，其中：R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOnv1NR1BR1C；R1A、R1B、R1C、R1D及R1E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基；且鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基；n1為0至4之整數；且v1為1或2。
實施例3. 根據實施例2之化合物，其中R1 為氫、經取代或未經取代之烷基或-C(O)R1E。
實施例4. 根據實施例2之化合物，其中該靶向劑為抗體。
實施例5. 根據實施例4之化合物，其中該抗體為嵌合抗體、CDR接枝抗體、人類化抗體或人類抗體或其免疫活性片段。
實施例6. 根據實施例4之化合物，其中該抗體為抗SEZ6抗體。
實施例7. 根據實施例4之化合物，其中W共價連接於該抗體內之半胱胺酸殘基。
實施例8. 根據實施例7之化合物，其中該半胱胺酸殘基處於Kabat位置C214上。
實施例9. 根據實施例4之化合物，其中W共價連接於該抗體內之離胺酸殘基。
實施例10. 根據實施例1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(II)： 其中：Ab為抗體；L3為鍵、-O-、-S-、-NR3B-、-C(O)-、-C(O)O-、 -S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR3B-、-NR3BC(O)-、-NR3BC(O)NH-、-NHC(O)NR3B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基；L4為鍵、-O-、-S-、-NR4B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR4B-、-NR4BC(O)-、-NR4BC(O)NH-、-NHC(O)NR4B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基；R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C；P為-O-、-S-、-NR2B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR2B-、-NR2BC(O)-、-NR2BC(O)NH-、-NHC(O)NR2B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M為-O-、-S-、-NR5B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5B-、-NR5BC(O)-、-NR5BC(O)NH-、-NHC(O)NR5B-、-[NR5BC(R5E)(R5F)C(O)]n2-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或M1A-M1B-M1C；W為-O-、-S-、-NR6B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6B-、-NR6BC(O)-、 -NR6BC(O)NH-、-NHC(O)NR6B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或W1A-W1B-W1C；M1A係鍵結於L3且M1C係鍵結於L4；M1A為鍵、-O-、-S-、-NR5AB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5AB-、-NR5ABC(O)-、-NR5ABC(O)NH-、-NHC(O)NR5AB-、-[NR5ABCR5AER5AFC(O)]n3-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M1B為鍵、-O-、-S-、-NR5BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5BB-、-NR5BBC(O)-、-NR5BBC(O)NH-、-NHC(O)NR5BB-、-[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M1C為鍵、-O-、-S-、-NR5CB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5CB-、-NR5CBC(O)-、-NR5CBC(O)NH-、-NHC(O)NR5CB-、-[NR5CBCR5CER5CFC(O)]n5-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；W1A係鍵結於Ab且W1C係鍵結於L3；W1A為鍵、-O-、-S-、-NR6AB-、 -C(O)-、C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6AB-、-NR6ABC(O)-、-NR6ABC(O)NH-、-NHC(O)NR6AB-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；W1B為鍵、-O-、-S-、-NR6BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6BB-、-NR6BBC(O)-、-NR6BBC(O)NH-、-NHC(O)NR6BB-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；W1C為鍵、-O-、-S-、-NR6CB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6CB-、-NR6CBC(O)-、-NR6CBC(O)NH-、-NHC(O)NR6CB-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；R1A、R1B、R1C、R1D、R1E、R2B、R3B、R4B、R5B、R5E、R5F、R5AB、R5AE、R5AF、R5BB、R5BE、R5BF、R5CB、R5CE、R5CF、R6B、R6AB、R6BB及R6CB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、 經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基；且鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基；n1為0至4之整數；v1為1或2；n2、n3、n4及n5獨立地為1至10之整數；z1及z2獨立地為0至10之整數；且z3為1至10之整數。
實施例11. 根據實施例10之化合物，其中M為M1A-M1B-M1C，其中：M1A係鍵結於L3且M1C係鍵結於L4。
實施例12. 根據實施例10之化合物，其中W為W1A-W1B-W1C，其中W1A係鍵結於Ab且W1C係鍵結於L3。
實施例13. 根據實施例10之化合物，其中P為經取代或未經取代之烷基。
實施例14. 根據實施例10之化合物，其中z3為1或2。
實施例15. 根據實施例10之化合物，其中L3為經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。
實施例16. 根據實施例10之化合物，其中L4為經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。
實施例17. 根據實施例10之化合物，其中R1為氫或-C(O)R1E。
實施例18. 根據實施例10之化合物，其中 W為經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
實施例19. 根據實施例18之化合物，其中W為5員或6員經取代或未經取代之伸雜環烷基。
實施例20. 根據實施例19之化合物，其中W具有下式：
實施例21. 根據實施例10之化合物，其中M包含肽。
實施例22. 根據實施例10之化合物，其中：M1A為鍵、經取代或未經取代之伸雜烷基或者-[NR5ABC(R5AE)(R5AF)C(O)]n3；M1B為鍵、經取代或未經取代之伸雜烷基或者-[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-；且M1C為鍵或者經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
實施例23. 根據實施例10之化合物，其中M1A及M1B獨立地為胺基酸。
實施例24. 根據實施例10之化合物，其中M1A或M1B中至少一者為纈胺酸(val)。
實施例25. 根據實施例10之化合物，其中M1A或M1B中至少一者為丙胺酸(ala)。
實施例26. 根據實施例10之化合物，其中 M1A或M1B中至少一者為瓜胺酸(cit)。
實施例27. 根據實施例10之化合物，其中M1A、M1B或M1C中至少一者為經取代之伸芳基。
實施例28. 根據實施例10之化合物，其中M1A、M1B或M1C中至少一者具有式(III)：，其中：Y為-NH-、-O-、-C(O)NH-或-C(O)O-；且n6為0至3之整數。
實施例29. 根據實施例10之化合物，其中-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]為：
實施例30. 根據實施例10之化合物，其中-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]具有下式：
實施例31. 一種醫藥組合物，其包含根據實 施例1至30中任一者之化合物。
實施例32. 一種在有需要之個體中治療癌症的方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據實施例31之醫藥組合物或根據實施例1至30中任一者之化合物。
實施例33. 根據實施例32之方法，其中該癌症係選自胰臟癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌及胃癌。
實施例34. 根據實施例32之方法，其進一步包括向該個體投與額外化學治療劑。
實施例35. 一種向細胞遞送卡奇黴素細胞毒素之方法，其包括使該細胞與根據實施例1至30中任一者之化合物接觸。
實施例36. 一種製備抗體藥物結合物之方法，其包括使卡奇黴素構建體與抗體之半胱胺酸或離胺酸接觸，該卡奇黴素構建體具有式W1-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D，其中W1為與離胺酸側鏈或半胱胺酸側鏈具有反應性之官能基，M為可裂解部分，L3及L4獨立地為連接子，P為二硫鍵保護基且D為卡奇黴素或其類似物。
實施例37. 根據實施例36之方法，其中該卡奇黴素構建體係與該抗體之特定半胱胺酸接觸。
實施例38. 根據實施例37之方法，其中該特定半胱胺酸源自於天然二硫橋。
實施例39. 根據實施例37之方法，其中該抗體為經工程改造之抗體且該特定半胱胺酸並非源自於天 然二硫橋。
實施例40. 根據實施例36至39中任一者之方法，其中在該接觸之前選擇性地還原該特定半胱胺酸。
實施例41. 根據實施例40之方法，其中該選擇性地還原該抗體之步驟包括使該抗體與穩定劑接觸之步驟。
實施例42. 一種化合物，其具有式(IV)：，其中L3為鍵、-O-、-S-、-NR3B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR3B-、-NR3BC(O)-、-NR3BC(O)NH-、-NHC(O)NR3B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基；L4為鍵、-O-、-S-、-NR4B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR4B-、-NR4BC(O)-、-NR4BC(O)NH-、-NHC(O)NR4B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基；R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C；P為-O-、-S-、-NR2B-、-C(O)-、 -C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR2B-、-NR2BC(O)-、-NR2BC(O)NH-、-NHC(O)NR2B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M為-O-、-S-、-NR5B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5B-、-NR5BC(O)-、-NR5BC(O)NH-、-NHC(O)NR5B-、-[NR5BC(R5E)(R5F)C(O)]n2-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或M1A-M1B-M1C；W1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-N3、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R7E、-OR7A、-NR7BR7C、-C(O)OR7A、-C(O)NR7BR7C、-NO2、-SR7D、-SOn7R7B、-SOv7NR7BR7C、-NHNR7BR7C、-ONR7BR7C、-NHC(O)NHNR7BR7C；M1A係鍵結於L3且M1C係鍵結於L4；M1A為鍵、-O-、-S-、-NR5AB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5AB-、-NR5ABC(O)-、-NR5ABC(O)NH-、-NHC(O)NR5AB-、-[NR5ABCR5AER5AFC(O)]n3-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M1B為鍵、-O-、-S-、-NR5BB-、-C(O)-、 -C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5BB-、-NR5BBC(O)-、-NR5BBC(O)NH-、-NHC(O)NR5BB-、-[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M1C為鍵、-O-、-S-、-NR5CB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5CB-、-NR5CBC(O)-、-NR5CBC(O)NH-、-NHC(O)NR5CB-、-[NR5CBCR5CER5CFC(O)]n5-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；R1A、R1B、R1C、R1D、R1E、R2B、R3B、R4B、R5B、R5E、R5F、R5AB、R5AE、R5AF、R5BB、R5BE、R5BF、R5CB、R5CE、R5CF、R6B、R7A、R7B、R7C、R7D、R7E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基；且鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基；n1 及n7獨立地為0至4之整數；v1及v7獨立地為1或2；且n2、n3、n4及n5獨立地為1至10之整數。
實施例43. 根據實施例42之化合物，其中該化合物為：
XIV 實例
藉由參考以下實例，將更容易理解以上如此大體上描述之本發明，該等實例係以說明之方式提供且不意欲限制本發明。該等實例不意欲表示以下實驗為所進行之所有或僅有實驗。除非另外指示，否則份數為重量份數，分子量為重量平均分子量，溫度為攝氏度，且壓力為或接近大氣壓。
PDX腫瘤細胞類型由縮寫後繼之以指示特定腫瘤細胞株之數字來表示。測試樣品之繼代次數由隨附於樣品名稱之p0-p#指示，其中p0指示直接獲自患者腫瘤之未繼代樣品且p#指示測試前腫瘤在小鼠中之繼代次數。如本文中所使用，腫瘤類型及亞型之縮寫示於表4中如下： 關於分析型及製備型HPLC方法之一般資訊。
分析方法A：
MS：Acuity Ultra SQ Detector ESI，掃描範圍120-2040Da。
管柱：Waters Acuity UPLC BEH C18，1.7μm，2.1×50mm
管柱溫度：50℃
流速：0.6ml/min
移動相A：0.1%甲酸/水。
移動相B：0.1%甲酸/乙腈。
梯度：
分析方法B：
MS：Acuity Ultra SQ Detector ESI，掃描範圍120-2040Da，管柱：Waters Acuity UPLC BEH C18，1.7μm，2.1×50mm
管柱溫度：60℃
流速：0.4ml/min
移動相A：0.1%甲酸/水。
移動相B：0.1%甲酸/乙腈。
梯度：
分析方法C：
HRMS：ABSciex 5600 Plus Triple Time-of-Flight(TOF)，掃描範圍250-2500Da
管柱：Waters Acuity UPLC BEH C18，1.7μm，2.1×50mm
管柱溫度：60℃
流速：0.4ml/min
移動相A：0.1%甲酸/水。
移動相B：0.1%甲酸/乙腈。
梯度：
製備型HPLC方法A：
管柱：Waters XBridge prep C18 5μm OBD，19×100mm
管柱溫度：環境
流速：15ml/min
移動相A：0.1%甲酸/水。
移動相B：0.1%甲酸/乙腈。
梯度：
製備型HPLC方法B：
管柱：Waters XBridge prep C18 5μm OBD，19×100mm
管柱溫度：環境
流速：15ml/min
移動相A：水。
移動相B：乙腈。
梯度：
實例1 包含腙連接子之卡奇黴素構建體之合成
根據式13之藥物連接子化合物 係使用如即將在下文所闡述之三種不同的方法合成。
合成途徑1：
(i)4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基硫代苯甲酸S-((2R,3S,4S,6S)-6-((((2R,3S,4R,5R,6R)-5-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-6-(((2S,5Z,9R,13E)-13-(2-((4-肼基-2-甲基-4-側氧基丁-2-基)二硫基)亞乙基)-9-羥基-12-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-1(12),5-二烯-3,7-二炔-2-基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)胺基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)酯(3)。
將N-乙醯基卡奇黴素(2，20mg，14μmol)溶解於2ml乙腈中且驟冷至-15℃。將3-巰基-3-甲基丁醯肼(21mg，0.14mmol，10當量)溶解於0.5ml乙腈中且緩慢添加至經驟冷之卡奇黴素溶液中，隨後添加三乙胺(18.8μL，014mmol，10當量)。允許反應物升溫直至完畢。3小時之後，濃縮反應物且藉由管柱層析法(MeOH/DCM 1%至20%)在矽膠管柱上進行純化，得到呈白色固體狀之3(18.7 mg，89%)。LCMS(分析方法A)：Rt=1.80min,[M+H]+=1478.57。
(ii)4-(4-((E)-1-(2-(3-(((E)-2-((1R,8S,Z)-8-(((2R,3R,4R,5S,6R)-5-((((2S,4S,5S,6R)-5-((4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基苯甲醯基)硫代)-4-羥基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)胺基)-3-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-1-羥基-10-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-4,9-二烯-2,6-二炔-13-亞基)乙基)二硫基)-3-甲基丁醯基)亞肼基)乙基)苯氧基)丁酸(4)。
在分子篩存在下將4-(4-乙醯基苯氧基)丁酸(3.8mg，17μmol，5當量)添加至含化合物3(5mg，3.4μmol)之乙醇(100μL)中。添加乙酸(15μL，80當量)且在37℃下將反應物攪拌3天。該時間之後，觀測到80%轉化且濃縮反應物並且藉由管柱層析法(MeOH/DCM 1%至20%)在矽膠管柱上進行純化，得到4(1.1mg，20%)。LCMS(分析方法A)：Rt=1.96min,[M+H]+=1682.53。
(iii)4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基硫代苯甲酸S-((2R,3S,4S,6S)-6-((((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(((2S,5Z,9R,13E)-13-(2-((4-(2-((E)-1-(4-(4-((2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁氧基)苯基)亞乙基)肼基)-2-甲基 -4-側氧基丁-2-基)二硫基)亞乙基)-9-羥基-12-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-1(12),5-二烯-3,7-二炔-2-基)氧基)-5-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)胺基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)酯(1)。
將5μL DIPEA(10當量)添加至N-(2-胺基乙基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺(7mg/mL，14μmol，5當量)於DMF中之500μL溶液中。將此溶液與5μL DIPEA(10當量)一起添加至4之溶液(480μL，10mg/mL DCM溶液)中。最後，添加11mg EDCI(11mg，28μmol，10當量)且在室溫下將混合物攪拌15小時。起始物質耗盡且藉由LCMS觀測所欲產物。LCMS(分析方法A)：Rt=1.98min,[M+H]+=1918.29。
合成途徑2：
(i)N-(2-(4-(4-乙醯基苯氧基)丁醯胺基)乙基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺(6)。
將N-(2-胺基乙基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺(137mg，0.54mmol，1.2當量)添 加至5(100mg，0.45mmol)於THF(2mL)中之溶液中，隨後添加HATU(205.3mg，0.54mmol，1.2當量)及HOBt水合物(82.6mg，0.54mmol，1.2當量)。隨後添加DIPEA(1.57mL，9.00mmol，20當量)且在室溫下將反應物攪拌15小時。蒸發溶劑且藉由管柱層析法純化粗產物，得到呈白色固體狀之所欲產物6(200mg，97%)。LCMS(分析方法A)：Rt=1.60min,[M+H]+=458.37。
(ii)4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基硫代苯甲酸S-((2R,3S,4S,6S)-6-((((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(((2S,5Z,9R,13E)-13-(2-((4-(2-((E)-1-(4-(4-((2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁氧基)苯基)亞乙基)肼基)-2-甲基-4-側氧基丁-2-基)二硫基)亞乙基)-9-羥基-12-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-1(12),5-二烯-3,7-二炔-2-基)氧基)-5-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)胺基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)酯(1)。
將N-(2-(4-(4-乙醯基苯氧基)丁醯胺基)乙基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺6(0.3mg，0.6μmol，5當量)於20μL乙醇中之溶液添加至含化合物3(0.2mg，0.14μmol)之DMF(20μL)中。添加乙酸(1μL，100當量)且在37℃下將反應物攪拌24小時。該時間之後，觀察到所欲產物。LCMS(分析方法A)：Rt=1.98min, [M+H]+=1918.69。
合成途徑3：
(i)(E)-4-(4-(1-(2-(3-巰基-3-甲基丁醯基)亞肼基)乙基)苯氧基)丁酸(8)。
將4-(4-乙醯基苯氧基)丁酸(5，750mg，3.37mmol，5當量)添加至含3-巰基-3-甲基丁醯肼(7，100mg，0.67mmol)之DMF(5mL)中。添加乙酸(3.0mL，80當量)且在37℃下將反應物攪拌3天。該時間之後，觀測到80%轉化且濃縮反應物並且藉由管柱層析法(MeOH/DCM 1%至20%)在矽膠管柱上進行純化，得到8(7.0mg，3%)。LCMS(分析方法A)：Rt=1.74min,[M+H]+=353.28。
(ii)4-(4-((E)-1-(2-(3-(((E)-2-((1R,8S,Z)-8-(((2R,3R,4R,5S,6R)-5- ((((2S,4S,5S,6R)-5-((4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基苯甲醯基)硫代)-4-羥基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)胺基)-3-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-1-羥基-10-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-4,9-二烯-2,6-二炔-13-亞基)乙基)二硫基)-3-甲基丁醯基)亞肼基)乙基)苯氧基)丁酸(4)。
將N-乙醯基卡奇黴素(2，5mg，3.5μmol)溶解於50μL乙腈中且驟冷至-15℃。將化合物8(6.2mg，17.7μmol，5當量)溶解於50μL乙腈中，且緩慢添加至經驟冷之卡奇黴素溶液中，隨後添加三乙胺(2.3μL，17.7μmol，5當量)。允許反應物升溫直至完畢。3小時之後，濃縮反應物且藉由管柱層析法(MeOH/DCM 1%至20%)在矽膠管柱上進行純化，得到4。LCMS(分析方法A)Rt=1.96min,[M+H]+=1682.80。
(iii)4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基硫代苯甲酸S-((2R,3S,4S,6S)-6-((((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(((2S,5Z,9R,13E)-13-(2-((4-(2-((E)-1-(4-(4-((2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁氧基)苯基)亞乙基)肼基)-2-甲基-4-側氧基丁-2-基)二硫基)亞乙基)-9-羥基-12-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-1(12),5-二烯-3,7-二 炔-2-基)氧基)-5-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)胺基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)酯(1)。
參見合成途徑1。
實例2 包含肟連接子之卡奇黴素構建體之合成
根據式14之藥物-連接子化合物 係如即將在下文所闡述來合成。
合成部分1：連接子形成
(i)N-(2-(4-(4-乙醯基苯氧基)丁醯胺基)乙基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺(6)。
與實例1/合成途徑2相同之程序
(ii)(Z)-(2-(((1-(4-(4-((2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁氧基)苯基)亞乙基)胺基)氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(10)。
將(2-(胺氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(46.2mg，0.26mmol，1.2當量)添加至N-(2-(4-(4-乙醯基苯氧基)丁醯胺基)乙基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺6(100mg，0.22mmol)於二甲基甲醯胺(200μL)中之溶液中。在40℃下將反應物攪拌15小時。濃縮反應物且藉由管柱層析法進行純化，得到呈白色固體狀之所欲產物10(65.5mg，50%)。LCMS(分析方法A)：Rt=1.92min,[M+H]+=616.44。
(iii)(Z)-N-(2-(4-(4-(1-((2-胺基乙氧基)亞胺 基)乙基)苯氧基)丁醯胺基)乙基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺(11)。
將(Z)-(2-(((1-(4-(4-((2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁氧基)苯基)亞乙基)胺基)氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯10溶解於10% TFA於二氯甲烷中之溶液中。在室溫下將反應混合物攪拌1小時，隨後蒸發溶劑。將所得粗混合物用於下一步驟。
合成部分2：連接子-藥物製造
(i)4-(((E)-2-((1R,8S,Z)-8-(((2R,3R,4R,5S,6R)-5-((((2S,4S,5S,6R)-5-((4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基苯甲醯基)硫代)-4-羥基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)胺基)-3-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-6-甲基四氫-2H-哌喃 -2-基)氧基)-1-羥基-10-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-4,9-二烯-2,6-二炔-13-亞基)乙基)二硫基)-4-甲基戊酸(12)。
將N-乙醯基卡奇黴素γ 1(0.2g，0.142mmol，1當量)溶解於30ml乙腈中並且將溶液驟冷至-15℃。將4-巰基-4-甲基戊酸(0.420ml，2.837mmol，20當量)溶解於10ml乙腈中且緩慢添加至經冷卻之N-乙醯基卡奇黴素溶液中。將三乙胺(0.377ml，2.837mmol，20當量)添加至反應混合物中且允許反應物經3至18h升溫至室溫。在反應完畢後，濃縮混合物且將乾物質裝載至矽膠上以用於急驟層析純化。急驟層析純化(2%至20% MeOH/DCM)分離呈玻璃樣固體狀之所欲產物(0.19g，90.5%產率)，其可呈白色粉末狀自冷乙醚中沈澱析出。LCMS(分析方法A)：Rt=1.92min,[M+H]+=1478.64。
(ii)4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基硫代苯甲酸S-((2R,3S,4S,6S)-6-((((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(((2S,5Z,9R,13E)-13-((Z)-2-(4-(4-((2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁氧基)苯基)-11,11-二甲基-8-側氧基-4-氧雜-12,13-二硫雜-3,7-二氮雜十五碳-2-烯-15-亞基)-9-羥基-12-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-1(12),5-二烯-3,7-二炔-2-基)氧基)-5-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3- 基)胺基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)酯(9)。
將(Z)-N-(2-(4-(4-(1-((2-胺基乙氧基)亞胺基)乙基)苯氧基)丁醯胺基)乙基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺11(2.1mg，4μmol，1.5當量)溶解於100μL二甲基甲醯胺中且添加5μL DIPEA(10當量)。隨後將此溶液與5μL DIPEA(10當量)一起添加至12(4.0mg，2.7μmol)於100μL二甲基甲醯胺中之溶液中。添加EDCI(2.6mg，13.5μmol，5當量)及HOBt水合物(4.1mg，27μL，10當量)，且在室溫下將反應物攪拌20小時。觀察到完全轉化且濃縮反應物，隨後在製備型HPLC上純化(製備型HPLC方法B)，得到所欲產物9(0.4mg，7.5%)。LC/HRMS(分析方法C)：Rt=9.06min,M/Z觀測值[M+2H]+=988.3195。1H NMR(500MHz，三氯甲烷-d)δ 7.56(d,J=8.8Hz,2H),6.90(d,J=8.8Hz,1H),6.68(s,2H),6.46(s,2H),6.23(d,J=65.9Hz,3H),5.73(s,1H),4.68(d,J=11.6Hz,1H),4.48(s,1H),4.32(s,1H),4.24(s,3H),4.04(q,J=6.3Hz,4H),3.89(s,3H),3.84(s,4H),3.82-3.54(m,13H),3.49(t,J=7.1Hz,3H),3.42-3.25(m,10H),2.61(d,J=17.7Hz,1H),2.39(d,J=21.7Hz,8H),2.29(d,J=7.6Hz,2H),2.21(s,5H),2.11(d,J=8.0Hz,7H),2.02(s,2H),1.93(s,2H),1.67-1.49(m,42H),1.41(d,J=6.3Hz,4H),1.31(d,J=6.2Hz,5H),1.28-1.15(m,12H)。
實例3 包含Val-Cit二肽連接子之卡奇黴素構建體之合成
根據式4(第1圖)之藥物-連接子化合物 係如即將在下文所闡述來合成。
合成部分1：連接子形成
碳酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲酯(4-硝基苯基)酯14。
先前已描述14之合成(US 6,214,345 B1)。
乙烷-1,2-二基二胺基甲酸第三丁酯(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)酯15。
將碳酸4-硝基苯酯14(100mg，0.136mmol， 1當量)溶解於5ml無水DMF中，冷卻至0℃且用(2-胺基乙基)胺基甲酸第三丁酯(21.4μL，0.136mmol，1當量)處理。將反應混合物攪拌2h，濃縮並藉由管柱層析法(梯度2%至50% MeOH/DCM)加以純化，產生灰白色固體(55mg，53%)。LCMS(分析方法A)：Rt=1.73min,[M+H]+=759.38。
(2-胺基乙基)胺基甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲酯16。
將Boc-胺連接子15(50mg，0.066mmol，1當量)溶解於10% TFA/DCM溶液(5ml)中且在室溫下攪拌30min。藉由LCMS證實反應完畢且在真空中移除溶劑。將所產生之游離胺之TFA鹽立即用於下一步驟。LCMS(分析方法A)：Rt=1.36min,[M+H]+=659.52。
合成部分2：藥物-連接子製造
4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基硫代苯甲酸S-((2R,3S,4S,6S)-6-((((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(((2S,5Z,9R,13E)-13-(1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基 -2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯基)-11,11-二甲基-3,8-二側氧基-2-氧雜-12,13-二硫雜-4,7-二氮雜十五碳-15-亞基)-9-羥基-12-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-1(12),5-二烯-3,7-二炔-2-基)氧基)-5-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)胺基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)酯13。
將卡奇黴素-酸衍生物10(108mg，0.073mmol，1當量)溶解於20ml無水DMF中，隨後添加EDCI(140.1mg，0.731mmol，10當量)、HOBt(111.8mg，0.731mmol，10當量)及無水DIPEA(0.253ml，1.46mmol，20當量)。在室溫下將反應物攪拌10min。將連接子胺16(144.2mg，0.219mmol，3當量)溶解於3ml無水DMF中並且將無水DIPEA(0.253ml，1.46mmol，20當量)添加至該連接子溶液中。隨後將連接子-胺溶液添加至經活化之酸溶液中。在37℃下將反應物攪拌隔夜且藉由LCMS加以監測。反應完畢後，在真空中移除DMF且將所獲得之殘餘物溶解於1：1乙腈：水中以用於製備型HPLC純化(方法A)。藉由製備型HPLC方法A分離呈白色粉末狀之所欲產物(20mg，12.9%)。LCMS：Rt(分析方法A或C)=8.52min,M/Z觀測值[M+H]+=2118.7134。1H NMR(500MHz，三氯甲烷-d)δ 7.52(d,J=8.1Hz,2H),7.26(d,J=8.1Hz,2H),6.95-6.86(m,2H),6.68(s,2H),6.44-6.36(m,1H),6.23(s,1H),5.91 (d,J=9.4Hz,1H),5.82-5.73(m,2H),5.67(d,J=1.7Hz,2H),5.03(dd,J=16.4,7.7Hz,4H),4.73-4.49(m,5H),4.46(d,J=2.9Hz,1H),4.27(s,2H),4.24-4.14(m,3H),3.88(s,4H),3.83(d,J=2.5Hz,4H),3.81(d,J=3.2Hz,1H),3.77-3.59(m,9H),3.57(s,4H),3.49(q,J=8.2,7.4Hz,3H),3.42-3.20(m,13H),3.18-3.04(m,3H),2.44-2.33(m,6H),2.29(t,J=9.8Hz,2H),2.23(t,J=7.2Hz,3H),2.20-1.96(m,31H),1.87(d,J=7.2Hz,4H),1.80-1.47(m,11H),1.46-1.35(m,5H),1.35-1.14(m,18H),0.92(dd,J=6.7,3.2Hz,6H)。
實例4 包含Val-Ala二肽連接子之卡奇黴素構建體之合成
根據式5之藥物-連接子化合物 係如即將在下文所闡述來合成。
合成部分1：連接子形成
碳酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(4-硝基苯基)酯18。
先前已描述碳酸4-硝基苯酯18之合成(US 6,214,345 B1)。
乙烷-1,2-二基二胺基甲酸第三丁酯(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲基)酯19。
使用與用於製備連接子15相同的合成程序來進行合成。分離產率68mg(63%)，LCMS(分析方法A)：Rt=1.85min,[M+H]+=673.39。
(2-胺基乙基)胺基甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯20。
與用於製備連接子16相同的合成程序。LCMS(分析方法A)：Rt=1.38min,[M+H]+=573.44。
合成部分2. 藥物-連接子製造
4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基硫代苯甲酸S-((2R,3S,4S,6S)-6-((((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(((2S,5Z,9R,13E)-13-(1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯基)-11,11-二甲基-3,8-二側氧基-2-氧雜-12,13-二硫雜-4,7-二氮雜十五碳-15-亞基)-9-羥基-12-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-1(12),5-二烯-3,7-二炔-2-基)氧基)-5-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)胺基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)酯17。
與用於製備13相同的合成程序。分離為白色固體。LCMS(分析方法B或C)Rt=8.93min,LC/HRMS M/Z觀測值[M+2H]+=1016.8810。1H NMR(500MHz，三氯甲烷-d)δ 7.50(d,J=8.2Hz,3H),7.26(s,4H),6.68(s,2H),6.25(s,3H),5.83-5.75(m,2H),5.73(s,2H),5.64(d,J=14.1Hz,2H),5.06(t,J=12.7Hz,4H),4.75-4.52(m,6H),4.48(s,2H),4.32(s,3H),4.20(dd,J=9.4,6.1Hz,2H),4.05 (s,4H),3.89(s,4H),3.84(d,J=1.6Hz,5H),3.77(dd,J=15.6,9.1Hz,4H),3.73-3.60(m,7H),3.58(s,4H),3.49(t,J=7.2Hz,4H),3.43-3.22(m,13H),3.18(d,J=17.2Hz,2H),2.98(s,3H),2.37(s,7H),2.33-2.13(m,8H),2.10(s,7H),1.90(s,3H),1.59(s,19H),1.50-1.37(m,10H),1.35-1.13(m,22H),0.93(d,J=6.8Hz,7H)。
實例5 包含雙Val-Cit二肽連接子之卡奇黴素構建體之合成
根據式15之藥物-連接子化合物 係如即將在下文所闡述來合成。
合成部分1：連接子形成。
雙(碳酸)((((2S,5S,15S,18S)-10-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基)-5,15-二異丙基-4,7,13,16-四側氧基-2,18-雙(3-脲基丙基)-3,6,10,14,17-五氮雜十九烷二醯基)雙(氮烷二基))雙(4,1-伸苯基))雙(亞甲基)酯雙(4-硝基苯基)酯22。
以類似於碳酸酯18之方式實現碳酸4-硝基苯酯22之合成。
雙((2-胺基乙基)胺基甲酸)((((2S,5S,15S,18S)-10-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基)-5,15-二異丙基-4,7,13,16-四側氧基-2,18-雙(3-脲基丙基)-3,6,10,14,17-五氮雜十九烷二醯基)雙(氮烷二基))雙(4,1-伸苯基))雙(亞甲基)酯之雙甲酸第三丁酯23。
使用與用於製備連接子15及19相同的合成程序來進行合成。分離產率13mg(51%)，LCMS(分析方法 A)：Rt=1.68min,[M+H]+=1379.85。
雙((2-胺基乙基)胺基甲酸)((((2S,5S,15S,18S)-10-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基)-5,15-二異丙基-4,7,13,16-四側氧基-2,18-雙(3-脲基丙基)-3,6,10,14,17-五氮雜十九烷二醯基)雙(氮烷二基))雙(4,1-伸苯基))雙(亞甲基)酯24。
與用於製備連接子16及20相同的合成程序。LCMS(分析方法A)：Rt=1.52min,[M+H]+=1179.67。
合成部分2. 連接子-藥物製造
馬來醯亞胺基雙Val-Cit-PABA-卡奇黴素γ 1衍生物21。
與用於製備13及17相同的合成程序。分離為白色固體。LCMS(分析方法B或C)Rt=7.80min,LC/HRMS M/Z觀測值[M+3H]+=1366.7897。
實例6 包含Val-Cit二肽連接子與可變PEG間隔基之卡奇黴素連接子-藥物之合成
其係如即將在下文所闡述來合成
合成部分1：連接子形成。
(2,2-二甲基-4-側氧基-3,9,12,15-四氧雜-5-氮雜十八碳-18-基)胺基甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲酯(26)。
使用與用於製備連接子15相同的合成程序來進行合成。LCMS(分析方法A)：Rt=1.81min,[M+H]+=919.36。
(3-(2-(2-(3-胺基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)胺基甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲酯(27)
與用於製備連接子16相同的合成程序。 LCMS(分析方法A)：Rt=1.46min,M/Z觀測值[M+H]+=819.36。
合成部分2. 藥物-連接子製造
4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基硫代苯甲酸S-((2R,3S,4S,6S)-6-((((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(((2S,5Z,9R,13Z)-13-(1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯基)-22,22-二甲基-3,19-二側氧基-2,8,11,14-四氧雜-23,24-二硫雜-4,18-二氮雜二十六碳-26-亞基)-9-羥基-12-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-1(12),5-二烯-3,7-二炔-2-基)氧基)-5-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)胺基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)酯(25)
與用於製備13及17相同的合成程序。分離為白色固體。LCMS(分析方法B或C)Rt=8.62min,LC/HRMS M/Z觀測值[M+2H]+=1139.9088。
其係如即將在下文所闡述來合成。
合成部分1：連接子形成。
(3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-十一氧雜三十五烷-1,35-二基)二胺基甲酸第三丁酯(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)酯(29)。
使用與用於製備連接子15相同的合成程序來進行合成。LCMS(分析方法A)：Rt=1.80min,M/Z觀測值[M+H]+=1243.69。
(35-胺基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-十一氧雜三十五烷基)胺基甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲酯(30)。
與用於製備連接子16相同的合成程序。LCMS(分析方法A)：Rt=1.50min,M/Z觀測值[M+H]+=1143.50。
合成部分2. 藥物-連接子製造
4-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-二羥基-4-甲氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-3-碘基-5,6-二甲氧基-2-甲基硫代苯甲酸S-((2R,3S,4S,6S)-6-((((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(((2S,5Z,9R,13Z)-13-(1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯基)-44,44-二甲基-3,41-二側氧基-2,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37-十二氧雜-45,46-二硫雜-4,40-二氮雜四十八碳-48-亞基)-9-羥基-12-((甲氧基羰基)胺基)-11-側氧基雙環[7.3.1]十三碳-1(12),5-二烯-3,7-二炔-2-基)氧基)-5-(((2S,4S,5S)-5-(N-乙基乙醯胺基)-4-甲氧基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)胺基)氧基)-4-羥基-2-甲基四氫-2H-哌喃-3-基)酯(28)。
與用於製備13及17相同的合成程序。分離為白色固體。LCMS(分析方法B或C)Rt=8.61min,LC/HRMS M/Z觀測值[M+2H]+=1302.0007。
實例7 二肽連接子-卡奇黴素構建體在活體外有效裂解
進行組織蛋白酶B分析以便說明先前實例中所製造之二肽連接子-藥物構建體對酶促裂解敏感。最初用1M N-乙醯基半胱胺酸溶液處理得自實例3及實例4之連接子藥物構建體以淬滅馬來醯亞胺官能基，隨後進行組織蛋白酶B處理。過量N-乙醯基半胱胺酸用於活化組織蛋白酶B。
更特定言之，將經淬滅之連接子-藥物之1：1乙腈：水溶液(20μL)用20mM HisCl pH 6.0稀釋至10% v/v之最終乙腈含量(80μL)。添加組織蛋白酶B酶以相對於連接子-藥物產生2.5莫耳%、5莫耳%或10莫耳%酶。對反應物進行輕緩渦旋且保持在室溫下。在15、30、60及90min之時間點，將3μL反應混合物置放至含有5μL Tris pH 9、2μL 100mM二羥基抗壞血酸(DHAA)、15μL水之總回收小瓶中。使用以上所闡述之分析方法B分析樣品。基於起始物質峰面積之減少來計算轉化率。結果示於第2A至2C圖中。
與Val-Ala二肽基構建體相比，Val-Cit卡奇黴素構建體一般更快裂解，但兩種構建體均由組織蛋白酶B有效裂解。藉由質譜表徵來證實預期有效負載胺之釋放，顯示1520.53之[MH]+離子。在接近細胞中所發現之彼等條件的離子化條件下，亦觀測到二硫鍵裂解及重排(第1 圖)，作為1334.39之[MH]+離子。
上述結果清楚地顯示，連接子裂解過程提供卡奇黴素有效負載之完全釋放。此資料指示例示性二肽基藥物連接子具有理想治療特徵且可有效併入所揭示之抗體藥物結合物中。
實例8 卡奇黴素-連接子構建體在活體外展現治療上有效之細胞毒性
進行其他分析以顯示諸如以上所描述之彼等卡奇黴素-連接子構建體保留細胞殺死能力且可充當抗體藥物結合物之一部分。使用293T細胞以及MES SA及MES SA/Dx細胞，其包含購自ATCC之子宮肉瘤細胞株。由與增加量之多柔比星一起培養之MES SA細胞產生MES SA/Dx細胞株，從而導致100倍多柔比星抗性及MDR1向上調控。除多柔比星以外，MES-SA/Dx細胞亦展現對多種其他化學治療劑(包括道諾黴素、放線菌素、長春新鹼、紫杉醇、秋水仙鹼)之顯著交叉抗性以及對絲裂黴素C及美法侖之中度交叉抗性。
在T75瓶中將細胞培養至約50%至80%匯合且用胰蛋白酶收集至單一細胞懸浮液中。將五百(500)個細胞/孔以50μL/孔培養基中接種於組織培養板中，且在37℃下培育18至24小時。在DMSO中將化合物稀釋為400×最終所欲濃度。隨後在培養基中對DMSO中之連續稀釋進行稀釋以達成0.25%之最終DMSO濃度，且將50μL/孔最 終稀釋液添加至細胞(Vf=100μL)。在接種及處理後，將細胞送回培育器中再持續72小時。按照製造商之說明製備CellTiter-Glo試劑且以100μL/孔添加至培養物中。CellTiter-Glo允許藉由定量細胞內ATP濃度對代謝活性細胞進行相對計數。在環境室溫下與CellTiter-Glo一起培育5分鐘之後，將125μL/孔CellTiter Glo/細胞溶解溶液轉移至黑色分析盤中，隨後在光度計中在30分鐘內讀取。將獲自除0.25% DMSO外未接受任何處理之培養物的發光讀數設為100%對照，且所有其他發光值均針對此等對照進行標準化(例如，標準化RLU，相對發光單位)。
分析之結果示於第3A圖至第3D圖中且源自於同一資料之所選IC50值呈現於以下表5中。更特定言之，第3A圖至第3D圖描繪卡奇黴素(第3A圖)、得自以上實例3之Val-Cit卡奇黴素(式3)(第3B圖)、得自以上實例4之Val-Ala卡奇黴素(式4)(第3C圖)及得自以上實例1之包含肟連接子之卡奇黴素(式1)的濃度依賴性活體外細胞殺死曲線。測定個別化合物中之每一者對MES細胞、MES SA/DX細胞及293T對照細胞之細胞殺死能力。
如第3A圖至第3D圖中所闡述之曲線所示，卡奇黴素及各連接子藥物化合物顯示醫藥學上可接受之活性且在相對較低之濃度下殺死MES SA細胞及293T對照細胞。就此而言，裸卡奇黴素在諸多濃度下顯示比連接子-藥物構建體所提供者低大約一個數量級之活性。此外，正如預期，MES SA/DX細胞更具抗性且需要更高毒素濃度 之裸毒素及藥物-連接子構建體來誘導細胞死亡。
就表5而言，所獲得之IC50值指示裸卡奇黴素及細胞毒素對照在皮莫耳範圍內具有活性，而卡奇黴素-連接子構建體在奈莫耳範圍內具有活性。應瞭解，藉由添加連接子部分來提供細胞毒性降低為理想的，因為其在藥物連接子在某種程度上自靶向部分解離之情況下降低非局部化毒性。因而，第3A圖至第3D圖中所闡述之資料指示所揭示之卡奇黴素-連接子對於包括在抗體藥物結合物中而言為適宜候選物。
實例9 卡奇黴素-連接子構建體與細胞結合劑之結合
為了進一步表徵本發明之卡奇黴素-連接子構建體，使用包括穩定劑(例如L-精胺酸)及弱還原劑(例如谷胱甘肽)之選擇性還原法使如以上實例3及實例4中所闡述製造之二肽基藥物-連接子化合物與位點特異性抗SEZ6抗體結合。如以上所論述，選擇性結合優先使卡奇黴素-連接子構建體與抗體上經工程改造之游離半胱胺酸結合，存在極少非特異性結合。
就此而言，hSC17ss1構建體之標靶結合位點為各輕鏈上214位置上之未配對半胱胺酸(C214)。為了實現此等經工程改造之位點之結合，在室溫下在含有1M L-精胺酸/8mM還原谷胱甘肽(GSH)/5mM EDTA之pH 8.0緩衝液中將hSC17ss1製劑部分還原至少兩小時。隨後使用30kDa膜(Millipore Amicon Ultra)將製劑緩衝液交換成20mM Tris/3.2mM EDTA pH 7.0緩衝液。所產生之經部分還原之製劑具有介於1.9與2.3之間的游離硫醇濃度，且隨後在4℃下使所有製劑與Val-Ala卡奇黴素(hSC17ss1-va)及Val-Cit卡奇黴素(hSC17ss1-vc)經由馬來醯亞胺部分結合隔夜。隨後使用在水中製備之10mM儲備溶液添加1.2莫耳過量之NAC來淬滅反應。在20分鐘之最少淬滅時間之後，隨後使用30kDa膜(Millipore Amicon Ultra)藉由濾洗將抗體-卡奇黴素製劑濾洗至20mM組胺酸氯化物pH 6.0中。
實例10 卡奇黴素ADC之表徵
藉由AB Sciex 5600 Triple飛行時間質譜儀(HR Triple TOF MS)及藉由Bruker maXis II超高解析度飛行時間質譜儀(UHR-TOF MS)測定卡奇黴素抗體-藥物結合物之非還原質量。兩者均配備有直接與超高效液相層析(ultra-high performance liquid chromatography,UHPLC)系統耦聯之電噴灑游離(ESI)源。首先將樣品稀釋至1mg/mL，隨後在其非還原形式下進行分析。在逆相管柱(Poroshell 300 SB-C3，5um，1.0×75mm，Agilent P/N 661750-909；Acquity BEH300 C4，1.7um，2.1×50mm，Waters P/N 186004495)上利用變性移動相系統分離蛋白質。移動相A為含0.1%(v/v)甲酸之水。移動相B為含0.1%(v/v)甲酸之80%(v/v)2-丙醇、10%(v/v)乙腈、10%(v/v)水(移動相B)。對各蛋白質之MS譜圖(例如第4A圖及第4B圖)取平均值，且隨後解摺積以獲得平均質量及單同位素質量。以下表5中彙總SC17ss1 LC與相應結合卡奇黴素連接子-藥物之理論及觀測平均質量以及單同位素質量。
此資料指示卡奇黴素-連接子構建體成功地與經工程改造之抗SEZ6抗體之游離半胱胺酸結合。
藉由逆相(RP-HPLC)分析進一步表徵得自先前實例之抗體-藥物製劑(以及另一製劑hSC1ss1-vc，其免疫特異性結合CD46且用實質上與其他製劑相同之方式結合)以定量重鏈相對於輕鏈結合位點。更特定言之，如第5圖中所示，使用RP-HPLC來確定hSC17ss1-vc(式4')、hSC17ss1-va(式5)'及hSC1ss1-vc(式4')之中靶輕鏈結合百 分比(第5圖)。使用Aeris WIDEPORE 3.6μm C4管柱(Phenomenex)，以含0.1%(v/v)三氟乙酸(TFA)之水作為移動相A及含0.1%(v/v)TFA之90%(v/v)乙腈作為移動相B進行分析。在分析之前將樣品用DTT充分還原，且隨後注入至管柱上，在15分鐘內施加30%至70%移動相B之梯度。收集214nm處之UV信號且隨後用於計算重鏈及輕鏈結合程度。
藉由對先前確定之峰(輕鏈，輕鏈+1個藥物、重鏈、重鏈+1個藥物、重鏈+2個藥物等)的RP-HPLC曲線下面積進行積分且分別計算各鏈之結合%來確定重鏈及輕鏈之結合百分比。如第5圖中所示，對於與Val-Cit及Val-Ala卡奇黴素構建體兩者之結合而言，hSC17輕鏈上之位點特異性結合百分比>80%。hSC1ss1與Val-Cit卡奇黴素之位點特異性結合亦產生輕鏈結合>80%。以上所描述之樣品之重鏈上的結合百分比對於hSC17位點特異性結合物而言<15%且對於hSC1ss1位點特異性結合而言<30%，預期此係由於與hSC17位點特異性Val-Cit及Val-Ala結合物分別獲得1.9及1.8之DAR相比，此樣品所獲得2.3之較高DAR。在所有情況下，可進一步優化結合參數以增加輕鏈上之結合百分比，同時降低重鏈上之結合百分比。
亦使用基於疏水性相互作用層析(HIC)HPLC之方法分析相同的hSC17ss1-vc、hSC17ss1-va及hSC1ss1-vc製劑，以確定ADC中DAR=2物質相對於不需要之DAR>2物質的量。就此而言，使用PolyPropyl A管柱 (PolyLC)，以含1.5M硫酸銨及25mM磷酸鉀之水作為移動相A且以含0.25% w/v CHAPS及25mM磷酸鉀之水作為移動相B來進行HIC。將樣品直接注入管柱上，其中在15分鐘內施加0至100%移動相B之梯度。收集280nm處之UV信號，且分析未結合抗體及較高DAR物質之層析譜。藉由對先前確定之峰(DAR=0、DAR=1、DAR=2、DAR=4等)的HIC曲線下面積進行積分且計算各峰之%來進行DAR計算。hSC17ss1-vc及hSC1ss1-vc之所得DAR分佈示於第6圖中。如藉由hSC17位點特異性結合物製劑之HIC所確定之DAR分佈(hSC17ss1-va之資料未顯示)指示所有三種結合物均產生>65% DAR=2。結合物製劑亦產生低於25% DAR<2及低於15% DAR>2。
使用相同的程序來分析N149、SC27及SC57之後續結合(IgG1位點特異性抗體與不同的決定子)，得到表7中所彙總之以下結果。使用以上所描述之HIC方法或以下所描述之尺寸篩除層析法進行DAR計算。
使用尺寸篩除層析(size-exclusion chromatography,SEC)來表徵卡奇黴素抗體-藥物結合物之尺寸異質性。分析使用Acquity 1.7-μm，4.6×300mm UPLC BEH200 SEC管柱，以含25mM磷酸鈉pH 6.5、500mM L-精胺酸及10%異丙醇(IPA)之水作為移動相。注入淨樣品且以0.2mL/min等度施加移動相持續22min。收集280nM處之UV信號且使用峰面積計算ADC之聚集及片段化程度。
相對緊湊之平均DAR及較低聚集或片段化速率強烈表明所得製劑將展現良好治療指數及相對較低非特異性毒性。
實例11 卡奇黴素ADC在活體外殺死抗原表現細胞
為了確定本發明之抗SEZ6 ADC是否能夠內在化並介導細胞毒性劑遞送至活腫瘤細胞，使用諸如實例 9中所提供之彼等所選抗SEZ6 ADC進行活體外細胞殺死分析。
大體上如以上實例8中所描述來培養及接種細胞。一天後，以介於0pM至1000pM範圍內的不同的濃度將腫瘤細胞暴露於人類化抗SEZ6 ADC(包含式1之肟藥物-連接子之hSC17ss1-va、hSC17ss1-vc及hSC17ss1-ox)。培育96小時之後，如以上實例7中所描述使用CellTiter-Glo®(Promega)對活細胞進行計數。將使用含未處理細胞之培養物的原始發光計數設為100%參考值，且所有其他計數均計算為佔參考值之百分比。
活體外分析之結果示於附第7A圖至附第7C圖中。更特定言之，第7A圖顯示hSC17ss1-vc消除抗原表現細胞之能力，而第7B圖顯示hSC17ss1-va消除抗原表現細胞之能力且第7C圖顯示hSC17ss1-ox消除抗原表現細胞之能力。在各情況下，與親本細胞株(293T)相比，在實質上較低之ADC濃度下殺死更多經轉導以過度表現SEZ6之293T-SEZ6細胞，從而表明ADC對SEZ6之特異性。第7A圖至第7C圖中所提供之資料顯示抗SEZ6 ADC內在化且遞送細胞毒性卡奇黴素有效負載之能力，從而支持使用所揭示之卡奇黴素-連接子構建體作為ADC組分。
將使用適當標靶表現細胞株之相同程序用於測定N149、SC27及SC57之後續卡奇黴素結合物的細胞殺死能力，得到表8中所彙總之以下結果。
總體而言，標靶特異性ADC以高效率殺死標靶表現細胞，從而顯示相對較低之IC50值。此種值與缺乏殺死非標靶表現細胞組合指示治療上適用之化合物。
實例12 卡奇黴素ADC在活體內殺死抗原表現細胞
進行活體內實驗以證實以上實例11中所顯示之卡奇黴素ADC hSC17ss1-vc及hSC17ss1-va之細胞殺死性質。為此，在攜帶得自具有內源性SEZ6細胞表面蛋白 表現之皮下患者之異種移植(patient-derived xenograft,PDX)小細胞肺癌(SCLC)腫瘤之免疫受損NODSCID小鼠中測試如先前實例中所闡述而製備之位點特異性SC17靶向ADC的活體內治療效應。更特定言之，在三個不同的SCLC模型中測試各抗SEZ6 ADC。
將SCLC-PDX細胞株、LU64、LU95及LU149各自作為解離細胞接種物注射在乳房脂墊區附近之皮膚下，且每週用測徑規量測(橢球體體積=a×b 2/2，其中a為橢圓之長直徑且b為短直徑)。在腫瘤生長至200mm3(範圍，100至300mm3)之平均尺寸之後，將小鼠隨機分至具有相等腫瘤體積平均值之處理組(n=5隻小鼠/組)。對於總劑量，每4天一次(Q4D×4)經由腹膜內注射(300μL體積)用媒劑(含5%葡萄糖之無菌水)或hSC17ss1-vc及hSC17ss1-va卡奇黴素製劑(0.1至1mg/kg)處理小鼠(5隻/組)，且藉由每週腫瘤體積(如以上利用測徑規)及體重量測值評估治療效應。個別小鼠或處理組之終點準則包括健康評估(任何患病徵象)、體重損失(自研究開始體重損失超過20%)及腫瘤負擔(腫瘤體積>1000mm3)。藉由每週腫瘤體積量測(mm3)監測功效，直至各組達到約800至1000mm3之平均值。腫瘤體積計算為處理組中所有小鼠之平均值與標準誤差平均值，且相對於自初始處理起之時間(天)繪圖。處理結果描繪於第8A圖至第8C圖中，其中顯示5隻小鼠/處理組之平均腫瘤體積與標準誤差平均值(standard error mean,SEM)。
特定言之，在攜帶SCLC PDX-LU149(第8A 圖)、PDX-LU95(第8B圖)或PDX-LU64(第8C圖)之小鼠中以所選劑量評估hSC17ss1-vc、hSC17ss1-va及hSC17ss1-肟(式14')ADC，以確定其延遲腫瘤生長之能力。附圖中所提供之資料顯示hSC17ss1-vc及hSC17ss1-va ADC在中等劑量水平(0.3至0.6mg/kg；單次劑量或Q4D×4給藥方案)下具有類似(hSC17ss1-vc與hSC17ss1-va相比)或不同(hSC17ss1-肟與hSC17ss1-vc相比)治療效應。此外，亦顯示適當劑量水平，諸如本實例中所使用者(例如1mg/kg；Q4D×4)，可在攜帶SCLC PDX之小鼠中達成50天或更久之耐久反應。
當在3隻小鼠SCLC PDX模型中測試時，在此等模型中且在指定劑量下，hSC17ss1-vc及hSC17ss1-va ADC製劑具有相當活體內功效。當在2個SCLC PDX模型中在相同劑量下評估時，hSC17ss1-肟ADC製劑具有一定程度的治療效應，但小於hSC17ss1-vc。SC17結合ADC在攜帶SCLC-PDX腫瘤之小鼠中的活體內功效具有劑量水平依賴性且在較高劑量水平下有效。總而言之，此資料指示SC17卡奇黴素ADC提供相當且有效之活體內療效。
實例13 小鼠耐受性研究
在免疫受損NODSCID小鼠中測試如先前實例中所闡述製備之hSC17ss1-vc卡奇黴素ADC之活體內耐受性。將天然5至7週齡小鼠稱重(21至28g)且隨機分至具有相等平均動物體重之處理組(n=3至4隻小鼠/組)。用單次劑量hSC17ss1-vc卡奇黴素製劑(2至16mg/kg)經由靜 脈內注射(100μL體積)處理小鼠，且每週監測小鼠體重量測值2至3次，持續2至3週。個別小鼠之終點準則包括體重損失(自研究開始超過10%)及身體健康評估(體態、活動量、體溫、呼吸率或任何其他患病徵象)。結果示於第9圖中，其中隨時間監測自研究開始之體重變化百分比(%)。第9圖所提供之資料顯示在免疫受損NODSCID小鼠中，hSC17ss1-vc在8mg/kg或更低之單次劑量下得以良好耐受。在8mg/kg劑量水平下發生處理後第5天自初始體重損失恢復；然而，經16mg/kg劑量水平處理之動物未恢復且由於不良健康狀況(終點準則)而移出。
實例14 hSC17ss1-vc及hSC27ss1-vc卡奇黴素在食蟹獼猴藥物動力學(PK)中之藥物動力學
在食蟹獼猴中評估如先前實例中所闡述製備之ADC。用1.5mg/kg hSC17ss1-vc、2.5mg/kg hSC17ss1-vc或1.5mg/kg hSC27ss1-vc處理食蟹獼猴(n=3隻雄性/組)，每3週一次經由20分鐘靜脈內輸注，總計2次劑量(Q3W×2)。評估藥物動力學以證實暴露與毒性相關(參見實例15)。各劑量之後在不同的時間點收集血漿樣品，且藉由夾心ELISA分析型方法評估總抗體(total antibody,TAb)及ADC分析物濃度。TAb及ADC濃度相對於時間資料示於第10圖中。
第10圖(式4')中所提供之資料顯示卡奇黴素ADC之PK呈劑量線性。預期MAb暴露大於ADC暴露。 觀測到極少至無ADC積聚。總而言之，卡奇黴素ADC在食蟹獼猴中之PK與抗體及/或ADC之預期PK一致。
實例15 猴毒理學研究 研究設計：
以1.5及2.5mg/kg劑量水平向食蟹獼猴(3隻/劑量水平)投與SC17ss1LD19.4，相隔3週，總計2次劑量。最後一次劑量後3週對動物進行屍檢。終點包括臨床觀察、體重、血液學、臨床化學、凝血、尿分析、器官重量、宏觀病理學及組織病理學。
結果：
SC17ss1LD19.4，1.5mg/kg/劑量
以1.5mg/kg/劑量以每3週2次劑量形式藉由靜脈內連續輸注投與之SC17ss1LD19.4得以耐受。臨床化學及組織病理學中呈現測試製品相關之變化。宏觀病理學、器官重量、血液學、凝血及尿分析中未呈現測試製品相關之變化。
臨床化學變化大體上具有劑量相關性且其特徵在於AST升高。組織病理學變化與腎臟、皮膚、食道、舌、膀胱及胸腺中之變化具有微弱且不一致之劑量相關性。
SC17ss1LD19.4，2.5mg/kg/劑量
以2.5mg/kg/劑量以每3週2次劑量形式藉由靜脈內連續輸注投與之SC17ss1LD19.4得以耐受。器官重量、血液學、臨床化學及組織病理學中呈現測試製品相 關之變化。宏觀病理學、凝血及尿分析中未呈現測試製品相關之變化。
器官重量變化之特徵在於胸腺重量減少及睪丸重量增加。血液學變化之特徵在於血小板及網狀細胞計數減少。臨床化學變化具有微弱劑量相關性且其特徵在於AST、ALT、總蛋白、球蛋白增多及白蛋白減少。組織病理學變化與腎臟、上皮(皮膚、食道、舌、膀胱)、胸腺及睾丸中之變化具有微弱且不一致之劑量相關性。
總體而言，測試化合物之毒性特徵指示其在哺乳動物中可良好耐受且在治療上適用。
本領域技術人員應進一步瞭解，本發明可在不背離其精神或關鍵屬性之情況下以其他特定形式實施。由於本發明之以上描述僅揭示其例示性實施例，故應理解，預期其他變化形式處於本發明之範疇內。因此，本發明不限於本文中已詳細描述之特定實施例。相反，應參考指示本發明之範疇及內容的所附申請專利範圍。
<110> 史坦森特瑞斯公司(Stemcentrx,Inc.) 葛瑞悠克 朱利亞(Gavrilyuk,Julia) 西索迪雅 夫拉(Sisodiya,Vikram N.)
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<212> PRT
<213> 智人
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<212> PRT
<213> 智人
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多胜肽
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<223> 合成的多胜肽
<400> 5

Claims (43)

  1. 一種化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，具有式(I)：Ab-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]z3(I)，其中：Ab為靶向劑；W為連接基；M為可裂解部分；L3及L4獨立地為連接子；P為二硫鍵保護基；D為卡奇黴素(calicheamicin)或其類似物；z1及z2獨立地為0至10之整數；以及z3為1至10之整數。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中D包含式(Ia)： 其中：R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、 經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C；R1A、R1B、R1C、R1D及R1E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基；以及鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基；n1為0至4之整數；以及v1為1或2。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之化合物，其中R1為氫、經取代或未經取代之烷基或-C(O)R1E。
  4. 如申請專利範圍第2項所述之化合物，其中該靶向劑為抗體。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之化合物，其中該抗體為嵌合抗體、CDR接枝抗體、人類化抗體或人類抗體或其 免疫活性片段。
  6. 如申請專利範圍第4項之化合物，其中該抗體為抗SEZ6抗體。
  7. 如申請專利範圍第4項之化合物，其中W係共價連接於該抗體內之半胱胺酸殘基。
  8. 如申請專利範圍第7項之化合物，其中該半胱胺酸殘基係處於Kabat位置C214上。
  9. 如申請專利範圍第4項之化合物，其中W係共價連接於該抗體內之離胺酸殘基。
  10. 如申請專利範圍第1項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，具有式(II)： 其中：Ab為抗體；L3為鍵、-O-、-S-、-NR3B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR3B-、-NR3BC(O)-、-NR3BC(O)NH-、-NHC(O)NR3B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基； L4為鍵、-O-、-S-、-NR4B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR4B-、-NR4BC(O)-、-NR4BC(O)NH-、-NHC(O)NR4B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基；R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C；P為-O-、-S-、-NR2B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR2B-、-NR2BC(O)-、-NR2BC(O)NH-、-NHC(O)NR2B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M為-O-、-S-、-NR5B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5B-、-NR5BC(O)-、-NR5BC(O)NH-、-NHC(O)NR5B-、-[NR5BC(R5E)(R5F)C(O)]n2-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或M1A-M1B-M1C；W為-O-、-S-、-NR6B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、 -S(O)2-、-C(O)NR6B-、-NR6BC(O)-、-NR6BC(O)NH-、-NHC(O)NR6B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或W1A-W1B-W1C；M1A係鍵結於L3以及M1C係鍵結於L4；M1A為鍵、-O-、-S-、-NR5AB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5AB-、-NR5ABC(O)-、-NR5ABC(O)NH-、-NHC(O)NR5AB-、-[NR5ABCR5AER5AFC(O)]n3-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M1B為鍵、-O-、-S-、-NR5BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5BB-、-NR5BBC(O)-、-NR5BBC(O)NH-、-NHC(O)NR5BB-、-[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M1C為鍵、-O-、-S-、-NR5CB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5CB-、-NR5CBC(O)-、-NR5CBC(O)NH-、-NHC(O)NR5CB-、-[NR5CBCR5CER5CFC(O)]n5-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或 未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；W1A係鍵結於Ab以及W1C係鍵結於L3；W1A為鍵、-O-、-S-、-NR6AB-、-C(O)-、C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6AB-、-NR6ABC(O)-、-NR6ABC(O)NH-、-NHC(O)NR6AB-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；W1B為鍵、-O-、-S-、-NR6BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6BB-、-NR6BBC(O)-、-NR6BBC(O)NH-、-NHC(O)NR6BB-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；W1C為鍵、-O-、-S-、-NR6CB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR6CB-、-NR6CBC(O)-、-NR6CBC(O)NH-、-NHC(O)NR6CB-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；R1A、R1B、R1C、R1D、R1E、R2B、R3B、R4B、R5B、R5E、R5F、R5AB、R5AE、R5AF、R5BB、R5BE、R5BF、R5CB、R5CE、 R5CF、R6B、R6AB、R6BB及R6CB獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基；以及鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基；n1為0至4之整數；v1為1或2；n2、n3、n4及n5獨立地為1至10之整數；z1及z2獨立地為0至10之整數；以及z3為1至10之整數。
  11. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中M為M1A-M1B-M1C，其中：M1A係鍵結於L3以及M1C係鍵結於L4。
  12. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中W為W1A-W1B-W1C，其中W1A係鍵結於Ab以及W1C係鍵結於L3。
  13. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中P為經取 代或未經取代之烷基。
  14. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中z3為1或2。
  15. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中L3為經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。
  16. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中L4為經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基。
  17. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中R1為氫或-C(O)R1E。
  18. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中W為經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
  19. 如申請專利範圍第18項所述之化合物，其中W為5員或6員經取代或未經取代之伸雜環烷基。
  20. 如申請專利範圍第19項所述之化合物，其中W具有下式：
  21. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中M包含胜肽。
  22. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中：M1A為鍵、經取代或未經取代之伸雜烷基或-[NR5ABC(R5AE)(R5AF)C(O)]n3；M1B為鍵、經取代或未經取代之伸雜烷基或-[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-；以及M1C為鍵或者經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基。
  23. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中M1A及M1B獨立地為胺基酸。
  24. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中M1A或M1B中至少一者為纈胺酸(val)。
  25. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中M1A或M1B中至少一者為丙胺酸(ala)。
  26. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中M1A或M1B中至少一者為瓜胺酸(cit)。
  27. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中M1A、M1B或M1C中至少一者為經取代之伸芳基。
  28. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中M1A、M1B或M1C中至少一者具有式(III)： 其中：Y為-NH-、-O-、-C(O)NH-或-C(O)O-；以及 n6為0至3之整數。
  29. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]為：
  30. 如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中-[W-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D]具有下式：
  31. 一種醫藥組合物，包含如申請專利範圍第1項至第30項中任一項所述之化合物。
  32. 一種在有需要之個體中治療癌症之方法，包括向該個體投與治療有效量之如申請專利範圍第31項所述之醫藥組合物或如申請專利範圍第1項至第30項中任一項所述之化合物。
  33. 如申請專利範圍第32項所述之方法，其中該癌症係選自胰臟癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌及胃癌。
  34. 如申請專利範圍第32項所述之方法，進一步包括向該個體投與額外化學治療劑。
  35. 一種向細胞遞送卡奇黴素細胞毒素之方法，包括使該細 胞與如申請專利範圍第1項至第30項中任一項所述之化合物接觸。
  36. 一種製備抗體藥物結合物之方法，包括使卡奇黴素構建體與抗體之半胱胺酸或離胺酸接觸，該卡奇黴素構建體具有式W1-(L3)z1-M-(L4)z2-P-D，其中W1為與離胺酸側鏈或半胱胺酸側鏈具有反應性之官能基，M為可裂解部分，L3及L4獨立地為連接子，P為二硫鍵保護基以及D為卡奇黴素或其類似物。
  37. 如申請專利範圍第36項所述之方法，其中使該卡奇黴素構建體與該抗體之特定半胱胺酸接觸。
  38. 如申請專利範圍第37項所述之方法，其中該特定半胱胺酸源自於天然二硫橋。
  39. 如申請專利範圍第37項所述之方法，其中該抗體為經工程改造之抗體以及該特定半胱胺酸並非源自於天然二硫橋。
  40. 如申請專利範圍第36項至第39項中任一項所述之方法，其中在該接觸之前選擇性地還原該特定半胱胺酸。
  41. 如申請專利範圍第40項所述之方法，其中該選擇性地還原該抗體之步驟包括使該抗體與穩定劑接觸之步驟。
  42. 一種化合物，具有式(IV)： L3為鍵、-O-、-S-、-NR3B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR3B-、-NR3BC(O)-、-NR3BC(O)NH-、-NHC(O)NR3B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基；L4為鍵、-O-、-S-、-NR4B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR4B-、-NR4BC(O)-、-NR4BC(O)NH-、-NHC(O)NR4B-、經取代或未經取代之伸烷基或者經取代或未經取代之伸雜烷基；R1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R1E、-OR1A、-NR1BR1C、-C(O)OR1A、-C(O)NR1BR1C、-SR1D、-SOn1R1B或-SOv1NR1BR1C；P為-O-、-S-、-NR2B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR2B-、-NR2BC(O)-、-NR2BC(O)NH-、-NHC(O)NR2B-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、 經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M為-O-、-S-、-NR5B-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5B-、-NR5BC(O)-、-NR5BC(O)NH-、-NHC(O)NR5B-、-[NR5BC(R5E)(R5F)C(O)]n2-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基、經取代或未經取代之伸雜芳基或M1A-M1B-M1C；W1為氫、鹵素、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基、-N3、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-CN、-C(O)R7E、-OR7A、-NR7BR7C、-C(O)OR7A、-C(O)NR7BR7C、-NO2、-SR7D、-SOn7R7B、-SOv7NR7BR7C、-NHNR7BR7C、-ONR7BR7C、-NHC(O)NHNR7BR7C；M1A係鍵結於L3以及M1C係鍵結於L4；M1A為鍵、-O-、-S-、-NR5AB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5AB-、-NR5ABC(O)-、-NR5ABC(O)NH-、-NHC(O)NR5AB-、-[NR5ABCR5AER5AFC(O)]n3-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基； M1B為鍵、-O-、-S-、-NR5BB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5BB-、-NR5BBC(O)-、-NR5BBC(O)NH-、-NHC(O)NR5BB-、-[NR5BBC(R5BE)(R5BF)C(O)]n4-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；M1C為鍵、-O-、-S-、-NR5CB-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)NR5CB-、-NR5CBC(O)-、-NR5CBC(O)NH-、-NHC(O)NR5CB-、-[NR5CBCR5CER5CFC(O)]n5-、經取代或未經取代之伸烷基、經取代或未經取代之伸雜烷基、經取代或未經取代之伸環烷基、經取代或未經取代之伸雜環烷基、經取代或未經取代之伸芳基或者經取代或未經取代之伸雜芳基；R1A、R1B、R1C、R1D、R1E、R2B、R3B、R4B、R5B、R5E、R5F、R5AB、R5AE、R5AF、R5BB、R5BE、R5BF、R5CB、R5CE、R5CF、R6B、R7A、R7B、R7C、R7D、R7E獨立地為氫、鹵素、-CF3、-CCl3、-CBr3、-CI3、-OH、-NH2、-COOH、-CONH2、-N(O)2、-SH、-S(O)3H、-S(O)4H、-S(O)2NH2、-NHNH2、-ONH2、-NHC(O)NHNH2、-NHC(O)NH2、-NHS(O)2H、-NHC(O)H、-NHC(O)-OH、-NHOH、-OCF3、-OCCl3、-OCBr3、-OCI3、-OCHF2、-OCHCl2、-OCHBr2、-OCHI2、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之雜烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之 雜環烷基、經取代或未經取代之芳基或者經取代或未經取代之雜芳基；以及鍵結於同一氮原子之R1B及R1C取代基可視需要接合以形成經取代或未經取代之雜環烷基或者經取代或未經取代之雜芳基；n1及n7獨立地為0至4之整數；v1及v7獨立地為1或2；以及n2、n3、n4及n5獨立地為1至10之整數。
  43. 如申請專利範圍第42項所述之化合物，其中該化合物為：
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