RU2551316C1 - STRAIN OF BACTERIA Serratia plymuthica HAVING ANTIVIRAL ACTIVITY AGAINST INFLUENZA VIRUS OF TYPE A (VERSIONS) - Google Patents
STRAIN OF BACTERIA Serratia plymuthica HAVING ANTIVIRAL ACTIVITY AGAINST INFLUENZA VIRUS OF TYPE A (VERSIONS) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2551316C1 RU2551316C1 RU2013159202/10A RU2013159202A RU2551316C1 RU 2551316 C1 RU2551316 C1 RU 2551316C1 RU 2013159202/10 A RU2013159202/10 A RU 2013159202/10A RU 2013159202 A RU2013159202 A RU 2013159202A RU 2551316 C1 RU2551316 C1 RU 2551316C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- serratia
- bacteria
- antiviral activity
- strains
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к новым штаммам бактерий рода Serratia, выделенных из различных источников и отобранных по признаку наибольшей нуклеазной активности для производства препаратов, обладающих противовирусной активностью, и может быть использовано в медицине, микробиологии и биотехнологии.The invention relates to new strains of bacteria of the genus Serratia, isolated from various sources and selected according to the highest nuclease activity for the production of preparations with antiviral activity, and can be used in medicine, microbiology and biotechnology.
Известны данные об антивирусной активности панкреатической рибонуклеазы в отношении ряда РНК- и ДНК-содержащих вирусов, а также об их применении в клинике для лечения вирусных заболеваний. Рядом исследователей изучаются антивирусные свойства нуклеаз, выделенных из микроорганизмов, которые обладают более выраженными антивирусными свойствами, чем панкреатическая рибонуклеаза [Шапот В.С. Нуклеазы, М., 1968; Нуклеазы микроорганизмов, под ред. A.M. Безбородова, М., 1974 Nucleuses, ed. by S.M. Linn, R.J. Roberts, Cold Spring Harbour, 1982].Data are known on the antiviral activity of pancreatic ribonuclease in relation to a number of RNA and DNA viruses, as well as on their use in the clinic for the treatment of viral diseases. A number of researchers are studying the antiviral properties of nucleases isolated from microorganisms that have more pronounced antiviral properties than pancreatic ribonuclease [Shapot V.S. Nucleases, M., 1968; Nuclease microorganisms, ed. A.M. Bezborodova, M., 1974 Nucleuses, ed. by S.M. Linn, R.J. Roberts, Cold Spring Harbor, 1982].
Известны сообщения об антивирусной, в частности, антигриппозной активности веществ, имеющих природное происхождение. Так, авторы И.Д. Макаренкова и др. (2010) сообщают о способности сульфатированного полисахарида - фукоидана из морской бурой водоросли Laminaria japonica подавлять продукцию высокопатогенного вируса гриппа птиц A/H5N1 в течение 24 ч инфекции при профилактической и лечебно-профилактической схемах применения [Противовирусная активность сульфатированного полисахарида из бурой водоросли LAMINARIA JAPONICA в отношении инфекции культур клеток, вызванной вирусом гриппа А птиц (H5N1) Макаренкова И.Д., Дерябин П.Г., Львов Д.К., Звягинцева Т.Н., Беседнова Н.Н. Вопросы вирусологии. 2010. Т.55. №1. С.41-45].There are reports of antiviral, in particular, anti-influenza activity of substances of natural origin. So, the authors I.D. Makarenkova et al. (2010) report the ability of a sulfated polysaccharide, fucoidan from Laminaria japonica seaweed, to suppress the production of highly pathogenic avian influenza virus A / H5N1 for 24 hours of infection with prophylactic and therapeutic prophylactic regimens [Antiviral activity of sulfated polysaccharide from brown algae LAMINARIA JAPONICA in relation to cell culture infection caused by avian influenza A virus (H5N1) Makarenkova I.D., Deryabin P.G., Lvov D.K., Zvyagintseva T.N., Besednova N.N. Questions of virology. 2010.V. 55. No. 1. S.41-45].
Показана противовирусная активность препаратов грибного происхождения [Разумов И.А., Косогова Т.А., Казачинская Е.В., Пучкова Л.И., Щербакова Н.С., Горбунова И.А., Михайловская И.Н., Локтев В.Б., Теплякова Т.В. Противовирусная активность водных экстрактов и полисахаридных фракций, полученных из мицелия и плодовых тел высших грибов. // Антибиотики и Химиотерапия, т.55, №9-10, 2010].The antiviral activity of preparations of fungal origin was shown [Razumov I.A., Kosogova T.A., Kazachinskaya E.V., Puchkova L.I., Scherbakova N.S., Gorbunova I.A., Mikhailovskaya I.N., Loktev V.B., Teplyakova T.V. Antiviral activity of aqueous extracts and polysaccharide fractions obtained from mycelium and fruit bodies of higher fungi. // Antibiotics and Chemotherapy, t.55, No. 9-10, 2010].
Рибонуклеазы обладают выраженной противовирусной активностью в отношении таких РНК-содержащих вирусов, как вирусы гриппа, полиомиелита, клещевого энцефалита, бешенства [Грибенча С.В. Противовирусная активность РНКазы Bacillus intermedius у морских свинок и кроликов, зараженных вирусом бешенства // Вопросы вирусологии, 2006, №5, с.41-43]. Дезоксирибонуклеазы тормозят синтез и размножение ДНК-содержащих вирусов, осповакцины, аденовируса, герпеса.Ribonucleases have a pronounced antiviral activity against such RNA-containing viruses as influenza, polio, tick-borne encephalitis, rabies [Gribencha S.V. Antiviral activity of Bacillus intermedius RNase in guinea pigs and rabbits infected with rabies virus // Questions of Virology, 2006, No. 5, pp.41-43]. Deoxyribonucleases inhibit the synthesis and reproduction of DNA-containing viruses, smallpox vaccines, adenovirus, herpes.
Одним из наиболее изученных энзимов этого класса является секретируемая эндонуклеаза Serratia marcescens. Грамотрицательные бактерии рода Serratia, в культуральной жидкости отдельных штаммов которых обнаружены высокие РНК-азная и ДНК-азная активности широко известны как продуценты различного рода препаратов [Габдуллина Г.К. Действие нуклеазы Serratia marcescens на клетки и рост асцитной опухоли Эрлиха: Афтореф. дис… канд. биол. наук. - Казань, 1980. - 20 с.; Патент РФ №2148645, МПК C12N 9/20, опубл. 10.05.2000 г. «Штамм бактерий Serratia marcescens-продуцент липазы»]. Фермент тормозит размножение вирусов везикулярного стоматита и осповакцины в культуре клеток куриных фибробластов.One of the most studied enzymes of this class is the secreted endonuclease Serratia marcescens. Gram-negative bacteria of the genus Serratia, in the culture fluid of individual strains of which high RNAase and DNAse activity are found, are widely known as producers of various kinds of drugs [Gabdullina G.K. The action of nuclease Serratia marcescens on cells and the growth of Ehrlich ascites tumor: Aftoref. dis ... cand. biol. sciences. - Kazan, 1980. - 20 p .; RF patent №2148645, IPC C12N 9/20, publ. 05/10/2000, "The strain of bacteria Serratia marcescens-producing lipase"]. The enzyme inhibits the propagation of viruses of vesicular stomatitis and smallpox vaccine in chicken fibroblast cell culture.
Известен штамм Serratia marcescens В-10 М-1 продуцент дезоксирибонуклеазы наиболее часто используемой в лабораторных условиях. [Нуклеазы микроорганизмов и их практическое использование. Рига, 1989, с.3. 2. Биосинтез микроорганизмами нуклеаз и протеаз М.: Наука, 1979, с.7].A known strain of Serratia marcescens B-10 M-1 producer of deoxyribonuclease most often used in laboratory conditions. [Nucleases of microorganisms and their practical use. Riga, 1989, p. 3. 2. Biosynthesis by microorganisms of nucleases and proteases M .: Nauka, 1979, p.7].
Первый созданный на основе эндонуклеазы Serratia marcescens противовирусный препарат получил название эндонуклеаза бактериальная. В настоящее время нуклеазы из бактерий Sarratia marcescens используют для лечения вирусных заболеваний пчел [Патент РФ №2038776, МПК A01K 51/00, опубл. 09.07.1995 г. «Средство “Эндоглюкин” для профилактики и лечения вирусных заболеваний пчел и стимуляции развития пчелиных семей»].The first antiviral drug based on the endonuclease Serratia marcescens was called bacterial endonuclease. Currently, nucleases from bacteria Sarratia marcescens are used to treat viral diseases of bees [RF Patent No. 2038776, IPC A01K 51/00, publ. 07/09/1995, the "Tool" Endoglukin "for the prevention and treatment of viral diseases of bees and stimulate the development of bee families"].
Наиболее близким аналогом (прототипом) является штамм Serratia marcescens, опубликованный в патенте на средство на основе культуральной жидкости, полученной с использованием указанного штамма [патент РФ №2420309, МПК A61K 39/00, опубл. 10.06.2011 г.].The closest analogue (prototype) is a strain of Serratia marcescens, published in the patent for a product based on culture fluid obtained using the specified strain [RF patent No. 2420309, IPC A61K 39/00, publ. 06/10/2011].
Однако не известны опубликованные данные о том, что выше приведенные аналоги, в том числе и прототип, обладают ингибирующим действием против высокопатогенного вируса гриппа птиц A/H5N1 и человека A/H3N2.However, the published data is not known that the above analogues, including the prototype, have an inhibitory effect against the highly pathogenic avian influenza virus A / H5N1 and human A / H3N2.
Техническим результатом заявляемого решения является выявление бактериальных штаммов, обладающих противовирусными свойствами, в отношении вируса гриппа птиц A/H5N1 и гриппа человека (H3N2).The technical result of the proposed solution is the identification of bacterial strains with antiviral properties in relation to avian influenza virus A / H5N1 and human flu (H3N2).
Указанный технический результат достигается тем, что получен штамм бактерий Serratia plumuthica Dg-91, обладающий противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа типа A и депонированный в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»» под регистрационным номером B-1288.The specified technical result is achieved by the fact that the obtained bacterial strain Serratia plumuthica Dg-91, with antiviral activity against type A influenza viruses and deposited in the collection of bacteria, bacteriophages and fungi of the Federal State Institution of Science "State Scientific Center for Virology and Biotechnology" Vector "under registration number B-1288.
Указанный технический результат достигается также получением штамма бактерий Serratia plumuthica Dg-98, обладающий противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа типа A и депонированный в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»» под регистрационным номером B-1297.The specified technical result is also achieved by obtaining a bacterial strain Serratia plumuthica Dg-98, which has antiviral activity against type A influenza viruses and deposited in the collection of bacteria, bacteriophages and fungi of the Federal State Institution of Science "State Scientific Center for Virology and Biotechnology" Vector "under registration number B-1297.
Указанный технический результат достигается также получением штамма бактерий Serratia plumuthica Bp-868, обладающий противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа типа A и депонированный в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»» под регистрационным номером B-1296.The specified technical result is also achieved by obtaining a bacterial strain Serratia plumuthica Bp-868, which has antiviral activity against type A influenza viruses and deposited in the collection of bacteria, bacteriophages and fungi of the Federal State Institution of Science "State Scientific Center for Virology and Biotechnology" Vector "under registration number B-1296.
Указанный технический результат достигается также получением штамма бактерий Serratia plumuthica Az-372, обладающий противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа типа A и депонированный в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»» под регистрационным номером B-1285.The indicated technical result is also achieved by obtaining a bacterial strain Serratia plumuthica Az-372, which has antiviral activity against type A influenza viruses and deposited in the collection of bacteria, bacteriophages and fungi of the Federal State Institution of Science "State Scientific Center for Virology and Biotechnology" Vector "under registration number B-1285.
Заявляемые штаммы изолированы при высеве исследуемых образцов на среду РПА (pH 7,0-7,2, температура инкубирования 30-37°C). Характеристика заявляемых штаммов, связанная с источниками их выделения, представлена в таблице 1.The inventive strains were isolated by plating the test samples on RPA medium (pH 7.0-7.2, incubation temperature 30-37 ° C). The characteristics of the claimed strains associated with the sources of their selection are presented in table 1.
Определение таксономической принадлежности бактериальных изолятов.Determination of the taxonomic affiliation of bacterial isolates.
Для определения таксономической принадлежности бактерий Вр-868, Dg-91, Dg-98 и Az-372, выделенных из природных источников, стандартными методами исследовали их фенотипические признаки и определяли нуклеотидные последовательности продуктов ПНР, соответствующие гену 16S рРНК штаммов. Определение исследуемых бактерий до вида проводили по Бердже [“Bergey′s Manual of Systematic Bacteriology”. 8 th ed. / Ed. John G. Holt. - Baltimore-London, Williams and Wilkins, 1986. - V.1-2. - 1105 p.].To determine the taxonomic affiliation of the Bp-868, Dg-91, Dg-98, and Az-372 bacteria isolated from natural sources, their phenotypic traits were studied by standard methods and the nucleotide sequences of the products of the NDP corresponding to the 16S rRNA gene of strains were determined. Determination of the studied bacteria to the species was carried out according to Berge [“Bergey's Manual of Systematic Bacteriology”. 8 th ed. / Ed. John G. Holt. - Baltimore-London, Williams and Wilkins, 1986. - V.1-2. - 1105 p.].
Для получения геномных характеристик выделяли суммарные ДНК из чистых культур и проводили ПНР с универсальными праймерами, соответствующими гену 16S рРНК эубактерий: 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′ и 5′-CGGCTACCTTGTTACGACTT-3′. Нуклеотидные последовательности продуктов ПЦР определяли с использованием BigDye 3,1 Terminator Cycle Sequencing Kit и автоматического анализатора ДНК модели ABI 3130xl (Applied Biosystems, США), в Межинститутском Центре секвенирования ДНК СО РАН (г. Новосибирск). Филогенетический анализ выполняли с использованием программы MEGA версии 4 для нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК, определенных в данной работе, и близкородственных видов из базы данных GenBank (https://www.ncbi.nlm.nih.gov).To obtain genomic characteristics, total DNAs were isolated from pure cultures and PNRs were performed with universal primers corresponding to the eubacteria 16S rRNA gene: 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ′ and 5′-CGGCTACCTTGTTACGACTT-3 ′. The nucleotide sequences of PCR products were determined using the BigDye 3.1 Terminator Cycle Sequencing Kit and an automatic DNA analyzer model ABI 3130xl (Applied Biosystems, USA), at the Inter-Institute Center for DNA Sequencing SB RAS (Novosibirsk). Phylogenetic analysis was performed using the MEGA version 4 program for the nucleotide sequences of the 16S rRNA gene defined in this work and closely related species from the GenBank database (https://www.ncbi.nlm.nih.gov).
При культивировании применяли питательную среду “S” (Пептон, NaCI, MgCl2×6H2O, Трис-аминометан, pH 8.0) или “LB” (“Difco”, США) состава: дрожжевой экстракт, пептон, NaCI, pH 7,2.During cultivation, we used the nutrient medium “S” (Peptone, NaCI, MgCl 2 × 6H 2 O, Tris-aminomethane, pH 8.0) or “LB” (“Difco”, USA) composition: yeast extract, peptone, NaCI, pH 7, 2.
Хранение штаммов: Штаммы хранили в лиофильно-высушенном состоянии, в 30%-ном растворе глицерина при температуре минус 65°C и при периодических пересевах на агаризованную среду LB.Storage of strains: The strains were stored in a freeze-dried state, in a 30% glycerol solution at a temperature of minus 65 ° C and during periodic passages on LB agar medium.
Морфологические и биохимические признаки штаммовMorphological and biochemical characteristics of strains
Грамотрицательные, неспороносные, подвижные или неподвижные клетки штаммов Вр-868, Dg-91, Dg-98 и Az-372 представлены палочками, в основном укороченными, размером 0,5-0,8×1,0-2,5 мкм (табл.2).Gram-negative, non-spore, motile or motionless cells of strains BP-868, Dg-91, Dg-98 and Az-372 are represented by sticks, mainly shortened, 0.5-0.8 × 1.0-2.5 μm in size (table .2).
Штаммы являются факультативными анаэробами, хорошо растут при температуре 30-37°C. Согласно результатам определения нуклеотидной последовательности 16S рРНК бактерии данной группы отнесены к роду Serratia.Strains are facultative anaerobes, grow well at a temperature of 30-37 ° C. According to the results of determining the nucleotide sequence of 16S rRNA, bacteria of this group are assigned to the genus Serratia.
Показано, что штаммы Вр-868, Dg-91, Dg-98 Az-372 в соответствии с признаками представителей рода Serratia, отрицательны в тестах по уреазе, на индол, сероводород, амилазу; образуют ДНКазу, гидролизуют желатин, утилизируют цитрат, восстанавливают нитрат, с образованием кислоты гидролизуют сахарозу, лактозу, манит, мальтозу, глюкозу. Все культуры, за исключением штамма Az-372, были отрицательны в тесте с метиловым красным. В реакции Фогес-Проскауэра штаммы имеют отличия допустимые в рамках признаков бактерий рода Serratia (табл.3).It was shown that strains BP-868, Dg-91, Dg-98 Az-372 in accordance with the characteristics of representatives of the genus Serratia, are negative in tests for urease, indole, hydrogen sulfide, amylase; form a DNase, hydrolyze gelatin, utilize citrate, reduce nitrate, and sucrose, lactose, lure, maltose, glucose are hydrolyzed to form acid. All cultures, with the exception of strain Az-372, were negative in the methyl red test. In the Voges-Proskauer reaction, the strains have differences that are acceptable within the framework of the traits of bacteria of the genus Serratia (Table 3).
Совокупные данные по фенотипическим и геномным признакам позволяют идентифицировать штаммы Dg-91, Dg-98, Bp-868, Az-372, как принадлежащие к виду Serratia plumuthica.Combined data on phenotypic and genomic traits make it possible to identify strains Dg-91, Dg-98, Bp-868, Az-372 as belonging to the species Serratia plumuthica.
Посевной материал получали при выращивании штаммов на среде LB, на агаризованной среде LB (0,25% LB, 1,7% агара) и среде А (0,7% пептона, 0,4% рыбного гидролизата, 0,5% NaCl, 1,7% агара). Значение pH всех сред составляло 7,0-7,2.Inoculum was obtained by growing strains on LB medium, on LB agar medium (0.25% LB, 1.7% agar) and medium A (0.7% peptone, 0.4% fish hydrolyzate, 0.5% NaCl, 1.7% agar). The pH of all media was 7.0-7.2.
Для получения образцов культуральной жидкости (КЖ) штаммы культивировали в среде “S” или “LB” в течение 18 ч при температуре 37°C с последующим центрифугированием в течение 20 мин при 8000 об/мин на центрифуге JA-21 (Beckman, США). Полученные образцы КЖ и биомассы хранили до использования в замороженном состоянии при температуре минус 20°C.To obtain samples of the culture fluid (QL), the strains were cultured in S or LB medium for 18 h at 37 ° C, followed by centrifugation for 20 min at 8000 rpm in a JA-21 centrifuge (Beckman, USA) . The obtained samples of QOL and biomass were stored until use in a frozen state at a temperature of minus 20 ° C.
Для получения клеточных экстрактов (КЭ) бактериальные клетки разрушали ультразвуком в стерильной дистиллированной воде на дезинтеграторе MSE (Великобритания). Степень разрушения контролировали на спектрофотометре при длине волны 560 нм.To obtain cell extracts (CE), bacterial cells were destroyed by ultrasound in sterile distilled water on an MSE disintegrator (UK). The degree of destruction was monitored on a spectrophotometer at a wavelength of 560 nm.
Ниже приведены данные по исследованию нуклеазной активности штаммов.Below are data on the study of the nuclease activity of the strains.
Количественное определение РНКазной и ДНКазной активности проводили по превращению субстратных нуклеиновых кислот: суммарной дрожжевой РНК (НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ «Вектор») и ДНК из молок лосося (Медиген, Новосибирск) во фрагменты, которые растворимы в 4%-ной HClO4, с появлением кислоторастворимого материала с адсорбцией при 260 нм.Quantitative determination of RNase and DNase activity was carried out by converting substrate nucleic acids: total yeast RNA (NIKTI BAS SSC WB “Vector”) and DNA from salmon milk (Medigen, Novosibirsk) into fragments that are soluble in 4% HClO 4 , with the appearance of acid-soluble material with adsorption at 260 nm.
В процессе работы нами показано, что все эти штаммы бактерий обладают не только РНКазной, но и ДНКазной активностью и гидролизуют не только ДНК из молок лосося, но и ДНК фага λ и ДНК фага Т7.In the process, we showed that all these bacterial strains possess not only RNase, but also DNase activity and hydrolyze not only DNA from salmon milk, but also DNA of phage λ and DNA of phage T7.
Подготовка к тестированию штаммов вируса гриппа и культуры клеток.Preparation for testing influenza virus strains and cell culture.
Для оценки противовирусной эффективности полученных препаратов использовали высокопатогенный вирус гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (A/H5N1) из коллекции ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор, наработанный на 10-суточных развивающихся куриных эмбрионах (РКЭ). Концентрация вируса составила: 103,5-6,5 lg ТЦД50/мл. Вирус гриппа человека A/Aichi/2/68(A/H3N2) (из коллекции ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»), титр 102,5-6,5 lg ТЦД50/мл вирусаллантоисной жидкости (ВАЖ)). Для тестирования токсичности и противовирусной активности препаратов использовали перевиваемую культуру клеток MDCK.To assess the antiviral efficacy of the preparations, a highly pathogenic avian influenza virus A / chicken / Kurgan / 05/2005 (A / H5N1) from the collection of the Federal State Budget Scientific Center of the World Bank "Vector developed on 10-day developing chicken embryos (RCE)" was used. The virus concentration was: 10 3.5-6.5 lg TCD 50 / ml. Human influenza virus A / Aichi / 2/68 (A / H3N2) (from the collection of the Federal State Institution of Science and Science of the World Bank “Vector”), titer 10 2.5-6.5 lg TCD 50 / ml of virus-allantoic fluid (IMPORTANT). To test the toxicity and antiviral activity of the preparations, a transplantable MDCK cell culture was used.
Определение токсичности препаратов. Для определения токсических доз препараты разводили в 2, 5, 10, раз средой Axcevir-MDCK, вносили по 150 мкл в соответствующие лунки планшета с клетками MDCK и ставили в термостат при температуре 37°C, 5% CO2 и 100% влажности на 2 суток.Determination of toxicity of drugs. To determine toxic doses, the preparations were diluted 2, 5, 10, times with Axcevir-MDCK medium, 150 μl were added to the corresponding wells of the plate with MDCK cells and placed in a thermostat at 37 ° C, 5% CO2 and 100% humidity for 2 days .
Через 2 суток с помощью инвертированного микроскопа оценивали наличие токсического действия в монослоях клеток MDCK, инкубированных с разными концентрациями препаратов.After 2 days using an inverted microscope, the presence of toxic effects in monolayers of MDCK cells incubated with different concentrations of the preparations was evaluated.
Для определения противовирусной активности препаратов использовали максимально переносимые концентрации (МПК).To determine the antiviral activity of the drugs used the maximum tolerated concentration (IPC).
Определение противовирусной активности препаратов. Для определения противовирусной активности препаратов готовили десятикратные разведения ВАЖ от 1 до 8 с использованием среды Axcevir-MDCK, содержащей 2 мкг/мл трипсина. В монослой культуры клеток MDCK вносили по 50 мкл выбранного разведения препарата и 100 мкл от 1 до 8 разведения ВАЖ. Клетки инкубировали 2 суток при температуре 37°C в атмосфере 5% CO2 в термостате ТС-1/80 СПУ (Россия). Через 2 суток в каждой лунке с помощью инвертированного микроскопа регистрировали ЦПД в монослое клеток и определяли наличие вируса в среде культивирования по реакции гемагглютинации (РГА) с 1% эритроцитами петуха. Ниже приведены примеры конкретного применения заявляемых штаммов.Determination of antiviral activity of drugs. To determine the antiviral activity of the preparations, ten-fold dilutions of IMPORTANT from 1 to 8 were prepared using Axcevir-MDCK medium containing 2 μg / ml trypsin. 50 μl of the selected dilution of the preparation and 100 μl of 1 to 8 dilutions of IMPORTANT were added to the monolayer of the MDCK cell culture. Cells were incubated for 2 days at a temperature of 37 ° C in an atmosphere of 5% CO2 in a TS-1/80 SPU thermostat (Russia). After 2 days in each well, an inverted microscope was used to record the CPD in the cell monolayer and the presence of the virus in the culture medium was determined by the hemagglutination reaction (RGA) with 1% rooster red blood cells. The following are examples of specific applications of the claimed strains.
Определение наличия нуклеолитической и противовирусной активности штаммов Serratia plumuthica Bp-868, Serratia plumuthica Dg-91, Serratia plumuthica Dg-98, Serratia plumuthica Az-372 относительно вирусов гриппа человека A/Aichi/2/68, а штаммов Serratia plumuthica Dg-91, Serratia plumuthica Az-372 (H3N2) относительно птичьего гриппа A/chicken/Kurgan/05/2005 (A/H5N1), проводится впервые, в связи с чем можно сделать вывод о соответствии предлагаемых штаммов критериям изобретения «новизны» и «изобретательский уровень».Determination of the nucleolytic and antiviral activity of strains of Serratia plumuthica Bp-868, Serratia plumuthica Dg-91, Serratia plumuthica Dg-98, Serratia plumuthica Az-372 relative to human influenza viruses A / Aichi / 2/68, and strains Serratia plumuthica Dg-91, Serratia plumuthica Az-372 (H3N2) with respect to bird flu A / chicken / Kurgan / 05/2005 (A / H5N1), is carried out for the first time, in connection with which we can conclude that the proposed strains meet the criteria of the invention of "novelty" and "inventive step" .
Изобретение подтверждено следующими примерами практического применения.The invention is confirmed by the following examples of practical application.
Получение образцов (препаратов).Obtaining samples (preparations).
Пример 1. Получение препарата (образец 11-13), на основе экстракта клеток (КЭ) штамма Serratia plumuthica. Bp-868.Example 1. Obtaining the drug (sample 11-13), based on the extract of cells (CE) of a strain of Serratia plumuthica. Bp-868.
Биомассу клеток штамма (0,4 г), полученную после культивирования в «LB» и последующего центрифугирования и освобождения от надосадочной жидкости, ресуспендировали в 4 мл дистиллированной воды и обрабатывали 4 раза по 30′′ с интервалом 30′′, на ультразвуковом (УЗ)-дезинтеграторе (с амплитудой 18), добиваясь максимально возможного разрушения клеток. После УЗ-обработки разрушенные клетки осаждали центрифугированием 10 мин при 12000 об/мин на микроцентрифуге “Eppendorf”, КЭ отбирали и стерилизовали ультрафильтрацией через Whatman фильтр с размерами пор 0,2 мкм. Полученный препарат хранили до использования при температуре минус 20°C. Концентрация белка в образце составила 3,6 мг/мл, активность РНКазы 332,2 ед/мл или 3322 ед/г влажной биомассы.The biomass of the cells of the strain (0.4 g) obtained after cultivation in “LB” and subsequent centrifugation and liberation from the supernatant was resuspended in 4 ml of distilled water and treated 4 times with 30 ″ with an interval of 30 ″, ultrasound ) -disintegrator (with an amplitude of 18), achieving the maximum possible destruction of cells. After ultrasound treatment, the destroyed cells were besieged by centrifugation for 10 min at 12000 rpm on an Eppendorf microcentrifuge, CEs were selected and sterilized by ultrafiltration through a Whatman filter with a pore size of 0.2 μm. The resulting preparation was stored until use at a temperature of minus 20 ° C. The concentration of protein in the sample was 3.6 mg / ml, the activity of RNase 332.2 u / ml or 3322 u / g of wet biomass.
Пример 2. Испытание противовирусного действия препарата №11-13, приготовленного на основе КЭ штамма Serratia plumuthica Bp-868 (в профилактической схеме) на вирусе гриппа человека (A/H3N2).Example 2. The antiviral test of the drug No. 11-13, prepared on the basis of CE of the strain of Serratia plumuthica Bp-868 (as a preventive measure) on the human influenza virus (A / H3N2).
Для испытания препарат №11-13 развели в 5 раз и внесли на клетки MDCK в объеме 50 мкл на лунку 96-луночного планшета. Инкубация 2 часа. Удалили препарат, затем в лунки внесли среду RPMI-1640 без сыворотки и без трипсина. Добавили вирус A/Aichi/2/68 (H3N2) с -1 по -7 по 50 мкл на лунку. Инкубация 2 сут. Учет с 1% эритроцитами петуха.For testing, preparation No. 11-13 was diluted 5 times and added to the MDCK cells in a volume of 50 μl per well of a 96-well plate. Incubation 2 hours. The preparation was removed, then RPMI-1640 medium without serum and trypsin was added to the wells. A / Aichi / 2/68 virus (H3N2) was added from -1 to -7, 50 μl per well. Incubation 2 days. Accounting with 1% rooster red blood cells.
Планшеты с обработанными клетками и вирусом помещали в термостат при температуре 37°C, 5% CO2 и 100% влажности на 2-3 суток до образования монослоя. Индекс нейтрализации составил 2,5 lg при исходной концентрации вируса 102,5 lg ТЦД50/мл (табл.4).Plates with treated cells and virus were placed in a thermostat at a temperature of 37 ° C, 5% CO 2 and 100% humidity for 2-3 days before the formation of a monolayer. The neutralization index was 2.5 lg at the initial virus concentration of 10 2.5 lg TCD 50 / ml (table 4).
Пример 3. Получение препарата (образца) 12-16, на основе экстракта клеток (КЭ) штамма Serratia plumuthica Dg-91.Example 3. Obtaining a preparation (sample) 12-16, based on the extract of cells (CE) of a strain of Serratia plumuthica Dg-91.
Биомассу клеток штамма Serratia plumuthica Dg-91. (0,4 г), полученную после культивирования в «LB» и последующего центрифугирования и освобождения от надосадочной жидкости, ресуспендировали в 4 мл стерильной дистиллированной воды и обрабатывали 4 раза по 30′′ с интервалом 30′′, на ультразвуковом (УЗ)-дезинтеграторе. После УЗ-обработки разрушенные клетки осаждали центрифугированием 10 мин при 12000 об/мин на микроцентрифуге “Eppendorf”, КЭ отбирали и стерилизовали ультрафильтрацией через Whatman фильтр с размерами пор 0,2 мкм. Полученный препарат хранили до использования при температуре минус 20°C. Концентрация белка в образце составила 7,4 мг/мл, активность РНКазы 574,75 ед/мл., а ДНКазы - 463,1 ед/мл.The biomass of cells of the strain of Serratia plumuthica Dg-91. (0.4 g) obtained after culturing in LB and subsequent centrifugation and liberation from the supernatant was resuspended in 4 ml of sterile distilled water and treated 4 times with 30 ″ at an interval of 30 ″, on ultrasound (US) - disintegrator. After ultrasound treatment, the destroyed cells were besieged by centrifugation for 10 min at 12000 rpm on an Eppendorf microcentrifuge, CEs were selected and sterilized by ultrafiltration through a Whatman filter with a pore size of 0.2 μm. The resulting preparation was stored until use at a temperature of minus 20 ° C. The protein concentration in the sample was 7.4 mg / ml, the activity of RNase was 574.75 units / ml, and DNase - 463.1 units / ml.
Пример 4. Испытание противовирусного действия КЭ штамма Serratia plumuthica Dg-91 на вирусе гриппа человека A/Aichi/2/68(A/H3N2). Анализ противовирусной активности штамма как в примере 2.Example 4. Testing the antiviral effect of TBE of the strain of Serratia plumuthica Dg-91 on human influenza virus A / Aichi / 2/68 (A / H3N2). Analysis of the antiviral activity of the strain as in example 2.
Клеточный экстракт (КЭ) штамма Serratia plumuthica Dg-91 (препарат №12-16) проверили в профилактической схеме на противовирусную активность. Индекс нейтрализации составил 6,5 lg при исходной концентрации вируса 106,5 lg ТЦД50/мл (табл.4).The cell extract (CE) of the strain of Serratia plumuthica Dg-91 (preparation No. 12-16) was checked in the preventive scheme for antiviral activity. The neutralization index was 6.5 lg at the initial virus concentration of 10 6.5 lg TCD 50 / ml (table 4).
Пример 5. Получение препарата (образца) 12-01 на основе культуральной жидкости (КЖ) штамма Serratia plumuthica Dg-91.Example 5. Obtaining a preparation (sample) 12-01 based on the culture fluid (QOL) of a strain of Serratia plumuthica Dg-91.
Суспензию клеток готовили с использованием культуры штамма Serratia plumuthica Dg-91, наработанного на агаризованной среде «LB» в течение 18 часов при температуре 28-30°C. Суспензию вносили в количестве 2% в колбы с 50 мл среды LB и культивировали в течение 24 часов на термостатированной качалке (КТ 104, Россия). Для приготовления препарата на основе культуральной жидкости полученную КЖ штамма Serratia plumuthica Dg-91 центрифугировали при 10000 об/мин в течение 30 мин на центрифуге JA-21. Осветленную надосадочную жидкость стерилизовали ультрафильтрацией через Whatman фильтр с размерами пор 0,2 мкм и использовали для испытания в качестве противовирусного препарата в профилактической схеме. РНКазная активность в КЖ составила 220,5 ед/мл. Хранили препарат до использования при температуре минус 20°C.A cell suspension was prepared using a culture of a strain of Serratia plumuthica Dg-91, produced on an agar medium “LB” for 18 hours at a temperature of 28-30 ° C. The suspension was introduced in an amount of 2% into flasks with 50 ml of LB medium and cultured for 24 hours on a thermostatically controlled shaker (CT 104, Russia). To prepare a preparation based on the culture fluid, the obtained QOL of the Serratia plumuthica Dg-91 strain was centrifuged at 10,000 rpm for 30 min in a JA-21 centrifuge. The clarified supernatant was sterilized by ultrafiltration through a Whatman filter with a pore size of 0.2 μm and used for testing as an antiviral drug in a prophylactic regimen. RNase activity in QOL was 220.5 units / ml. The drug was stored until use at a temperature of minus 20 ° C.
Пример 6. Испытание противовирусного действия КЖ штамма Serratia plumuthica Dg-91 на вирусе гриппа человека A/Aichi/2/68(A/H3N2). Анализ противовирусной активности штамма как в примере 2.Example 6. Testing the antiviral effect of QOL of the strain Serratia plumuthica Dg-91 on human influenza virus A / Aichi / 2/68 (A / H3N2). Analysis of the antiviral activity of the strain as in example 2.
Культуральную жидкость штамма Serratia plumuthica Dg-91 (препарат №12-01) проверили в профилактической схеме на противовирусную активность. Индекс нейтрализации составил 6,5 lg при исходной концентрации вируса 106,5 lg ТЦД50/мл (табл.4).The culture fluid of the strain Serratia plumuthica Dg-91 (drug No. 12-01) was checked in the preventive scheme for antiviral activity. The neutralization index was 6.5 lg at the initial virus concentration of 10 6.5 lg TCD 50 / ml (table 4).
Пример 7. Испытание противовирусного действия КЖ штамма Serratia plumuthica Dg-91 на вирусе гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (A/H5N1). Для испытания препарат №12-01 развели в 5 раз и внесли на клетки MDCK в объеме 50 мкл на лунку 96-луночного планшета. Инкубация 2 часа. Удалили препарат, затем в лунки внесли среду RPMI-1640 без сыворотки и без трипсина. Добавили вирус A/Aichi/2/68 (H3N2) с -1 по -7 по 50 мкл на лунку. Инкубация 2 сут. Учет с 1% эритроцитами петуха.Example 7. Testing the antiviral effect of QOL of the strain Serratia plumuthica Dg-91 on avian influenza virus A / chicken / Kurgan / 05/2005 (A / H5N1). For testing, preparation No. 12-01 was diluted 5-fold and added to the MDCK cells in a volume of 50 μl per well of a 96-well plate. Incubation 2 hours. The preparation was removed, then RPMI-1640 medium without serum and trypsin was added to the wells. A / Aichi / 2/68 virus (H3N2) was added from -1 to -7, 50 μl per well. Incubation 2 days. Accounting with 1% rooster red blood cells.
Планшеты с обработанными клетками и вирусом помещали в термостат при температуре 37°C, 5% CO2 и 100% влажности на 2-3 суток до образования монослоя. Индекс нейтрализации составил 6,5 lg (табл.4) при исходной концентрации вируса 106,5 lg ТЦД50/мл.Plates with treated cells and virus were placed in a thermostat at a temperature of 37 ° C, 5% CO 2 and 100% humidity for 2-3 days before the formation of a monolayer. The neutralization index was 6.5 lg (Table 4) at an initial virus concentration of 10 6.5 lg TCD 50 / ml.
Пример 8. Получение препарата (образца) 12-25 на основе культуральной жидкости (КЖ) штамма. Serratia plumuthica. Az-372.Example 8. Obtaining a drug (sample) 12-25 based on the culture fluid (QOL) of the strain. Serratia plumuthica. Az-372
Образец 12-25 получен как в примере 5.Sample 12-25 obtained as in example 5.
Испытание противовирусного действия препарата 12-25 на вирусе гриппа человека (A/H3N2) (профилактическая схема) как в примере 8. Индекс нейтрализации составил 3,0 lg при исходной концентрации вируса гриппа человека (A/H3N2) 106,5 lg ТЦД50/мл Концентрация белка составила 10,2 мг/мл., РНКазная активность - 108,9 ед/мл кж. (табл.4).Testing the antiviral effect of drug 12-25 on a human influenza virus (A / H3N2) (prophylactic regimen) as in Example 8. The neutralization index was 3.0 lg at the initial concentration of human influenza virus (A / H3N2) 10 6.5 lg TCD 50 / ml Protein concentration was 10.2 mg / ml., RNase activity - 108.9 units / ml KZh. (table 4).
Пример 9. Испытание КЖ Serratia plumuthica. Az-372 на вирусе гриппа птиц (A/H5N1). Препарат (образец) штамма под №11-41 получен как в примере 5 на среде «S». Концентрация белка составила 8,8 мг/мл, а РНКазная активность - 185,3 ед/мл. Индекс нейтрализации вируса гриппа (A/H5N1) составил 3,5 lg при исходной концентрации вируса 103,5 lg ТЦД50/мл (табл.4)Example 9. Test QL Serratia plumuthica. Az-372 on avian influenza virus (A / H5N1). The drug (sample) strain No. 11-41 obtained as in example 5 on the medium "S". The protein concentration was 8.8 mg / ml, and the RNase activity was 185.3 u / ml. The neutralization index of influenza virus (A / H5N1) was 3.5 lg at an initial virus concentration of 10 3.5 lg TCD 50 / ml (table 4)
Пример 10. Получение препарата (образца) 12-54 на основе культуральной жидкости (КЖ) штамма Serratia plumuthica Dg-91.Example 10. Obtaining a drug (sample) 12-54 based on the culture fluid (QOL) of a strain of Serratia plumuthica Dg-91.
Образец получали, как в примере 5, за исключением того, что клетки культивировали на среде «S».A sample was obtained as in Example 5, except that the cells were cultured on S medium.
Для приготовления препарата полученную КЖ штамма Serratia plumuthica Dg-91 центрифугировали при 10000 об/мин в течение 30 мин на центрифуге JA-21. Осветленную надосадочную жидкость стерилизовали ультрафильтрацией через Whatman фильтр с размерами пор 0,2 мкм и использовали для испытания в качестве противовирусного препарата. Хранили препарат до использования при температуре минус 20°C. РНКазная активность в КЖ составила 129,8 ед/мл.To prepare the preparation, the obtained QOL of the strain of Serratia plumuthica Dg-91 was centrifuged at 10,000 rpm for 30 min in a JA-21 centrifuge. The clarified supernatant was sterilized by ultrafiltration through a Whatman filter with a pore size of 0.2 μm and used for testing as an antiviral drug. The drug was stored until use at a temperature of minus 20 ° C. RNase activity in QOL was 129.8 units / ml.
Испытание противовирусного действия образца 12-54 проводили на вирусе гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (A/H5N1) как в примере 7. Индекс нейтрализации составил 6,5 lg при исходной концентрации вируса 106,5 lg ТЦД50/мл (табл.4).The antiviral test of sample 12-54 was performed on avian influenza virus A / chicken / Kurgan / 05/2005 (A / H5N1) as in Example 7. The neutralization index was 6.5 lg at an initial virus concentration of 10 6.5 lg TCD 50 / ml (table 4).
Пример 11. Образец (12-20) получали как описано в примере 1. За исключением того, что использовали штамм Serratia plumuthica Dg-98. Осадок клеток штамма, полученный после центрифугирования и освобождения от надосадочной жидкости, как в примере 1, ресуспендировали в 4 мл дистиллированной воды и обрабатывали 4 раза по 30′′ с интервалом 30′′, на ультразвуковом (УЗ)-дезинтеграторе. Процент разрушения 90%. После УЗ-обработки разрушенные клетки осаждали центрифугированием при 10000 об/мин на микроцентрифуге “Eppendorf”, КЭ отбирали и стерилизовали ультрафильтрацией через Whatman фильтр с размерами пор 0,2 мкм. Полученный препарат хранили до использования при температуре минус 20°C.Example 11. Sample (12-20) was obtained as described in example 1. Except that the strain of Serratia plumuthica Dg-98 was used. The strain of cells of the strain obtained after centrifugation and liberation from the supernatant, as in example 1, was resuspended in 4 ml of distilled water and treated 4 times with 30 ″ at intervals of 30 ″ on an ultrasonic (ultrasound) disintegrator. The percentage of destruction of 90%. After ultrasonic treatment, the destroyed cells were besieged by centrifugation at 10,000 rpm on an Eppendorf microcentrifuge, CEs were selected and sterilized by ultrafiltration through a Whatman filter with a pore size of 0.2 μm. The resulting preparation was stored until use at a temperature of minus 20 ° C.
Полученный КЭ после размораживания разводили в 2 раза дистиллированной водой и использовали для испытания на противовирусное действие на вирусе гриппа человека A/Aichi/2/68(A/H3N2): Индекс нейтрализации составил 3,5 lg при исходной концентрации вируса 103,5 lg ТЦД50/мл (табл.4).The obtained CE after thawing was diluted 2 times with distilled water and used to test for antiviral effect on the human influenza virus A / Aichi / 2/68 (A / H3N2): The neutralization index was 3.5 lg at the initial virus concentration of 10 3.5 lg TCD 50 / ml (table 4).
Пример 12. Для испытания использовали чистые стерильные среды «LB» и «S» в качестве противовирусного агента. Испытание проводили для исключения влияния компонентов среды на вирусы гриппа. Обработку клеток проводили как в примере 2. Данные среды не оказывали противовирусного эффекта и не влияли на культуру клеток MDCK. Титр вирусов не изменился по сравнению с контролем и составил: A/chikenKurgan/05/2005 (H5N1) 103,5-6,5 lg ТЦД50/мл, а вируса гриппа человека A/Aichi/2/68(A/H3N2): 102,5-6,5 lg ТЦД50/мл в зависимости от эксперимента.Example 12. For the test used pure sterile medium "LB" and "S" as an antiviral agent. The test was performed to exclude the influence of environmental components on influenza viruses. The processing of cells was carried out as in example 2. These media did not have an antiviral effect and did not affect the cell culture of MDCK. The virus titer did not change compared to the control and amounted to: A / chikenKurgan / 05/2005 (H5N1) 10 3.5-6.5 lg TCD 50 / ml, and the human influenza virus A / Aichi / 2/68 (A / H3N2 ): 10 2.5-6.5 lg TCD 50 / ml depending on the experiment.
Пример 13. КЖ штамма Serratia plumuthica Dg-91 (образец 12-01) и КЭ (образец 12-16), а также КЭ штамма Serratia plumuthica Dg-91 хранились в течение 4-5 месяцев (время наблюдения) при температуре -20°C. Определение противовирусной активности проводили, как в примерах 7-8. Титр вируса (A/H3N2) в lg ТЦД50/мл через 48 ч обработки препаратом (профилактичекая схема) равен 0 при концентрации вируса в контроле 103,5 lg ТЦД50/мл (Табл.5).Example 13. The QOL of the strain of Serratia plumuthica Dg-91 (sample 12-01) and CE (sample 12-16), as well as the CE of strain Serratia plumuthica Dg-91 were stored for 4-5 months (observation time) at a temperature of -20 ° C. The determination of antiviral activity was carried out as in examples 7-8. The virus titer (A / H3N2) in log TCD 50 / ml after 48 hours of drug treatment (prophylactic regimen) is 0 at a virus concentration in the control of 10 3.5 lg TCD 50 / ml (Table 5).
Таким образом, из приведенных таблиц 4 и 5 видно, что заявляемые штаммы обеспечивают достижение технического результата, а именно обладают противовирусными свойствами, в отношении вируса гриппа птиц A/H5N1 и гриппа человека (H3N2).Thus, it can be seen from the tables 4 and 5 that the claimed strains ensure the achievement of a technical result, namely, they have antiviral properties in relation to the bird flu virus A / H5N1 and human flu (H3N2).
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013159202/10A RU2551316C1 (en) | 2013-12-30 | 2013-12-30 | STRAIN OF BACTERIA Serratia plymuthica HAVING ANTIVIRAL ACTIVITY AGAINST INFLUENZA VIRUS OF TYPE A (VERSIONS) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013159202/10A RU2551316C1 (en) | 2013-12-30 | 2013-12-30 | STRAIN OF BACTERIA Serratia plymuthica HAVING ANTIVIRAL ACTIVITY AGAINST INFLUENZA VIRUS OF TYPE A (VERSIONS) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2551316C1 true RU2551316C1 (en) | 2015-05-20 |
Family
ID=53294373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013159202/10A RU2551316C1 (en) | 2013-12-30 | 2013-12-30 | STRAIN OF BACTERIA Serratia plymuthica HAVING ANTIVIRAL ACTIVITY AGAINST INFLUENZA VIRUS OF TYPE A (VERSIONS) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2551316C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2650762C1 (en) * | 2017-03-28 | 2018-04-17 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Strain of serratia species bacteria having antiviral activity |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1661214A1 (en) * | 1989-07-19 | 1991-07-07 | Казанский государственный университет им.В.И.Ульянова-Ленина | Strain of bacteria serratia marcescens- a producer of endonuclease |
| RU2007185C1 (en) * | 1989-07-26 | 1994-02-15 | Научная фирма "Биосиб" | Method of prophylaxis of virus respiratory diseases at animals |
| RU2038776C1 (en) * | 1993-01-22 | 1995-07-09 | Людмила Дмитриевна Детиненко | Agent for prophylaxis and treatment of virus diseases of bee and for stimulating growth of bee colony |
| RO127469A2 (en) * | 2010-12-21 | 2012-06-29 | Institutul De Cercetare-Dezvoltare Pentru Protecţia Plantelor | Strain of serratia plymuthica with multiple effects on crops |
-
2013
- 2013-12-30 RU RU2013159202/10A patent/RU2551316C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1661214A1 (en) * | 1989-07-19 | 1991-07-07 | Казанский государственный университет им.В.И.Ульянова-Ленина | Strain of bacteria serratia marcescens- a producer of endonuclease |
| RU2007185C1 (en) * | 1989-07-26 | 1994-02-15 | Научная фирма "Биосиб" | Method of prophylaxis of virus respiratory diseases at animals |
| RU2038776C1 (en) * | 1993-01-22 | 1995-07-09 | Людмила Дмитриевна Детиненко | Agent for prophylaxis and treatment of virus diseases of bee and for stimulating growth of bee colony |
| RO127469A2 (en) * | 2010-12-21 | 2012-06-29 | Institutul De Cercetare-Dezvoltare Pentru Protecţia Plantelor | Strain of serratia plymuthica with multiple effects on crops |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2650762C1 (en) * | 2017-03-28 | 2018-04-17 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Strain of serratia species bacteria having antiviral activity |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Abo-Elyousr et al. | Native endophytic Pseudomonas putida as a biocontrol agent against common bean rust caused by Uromyces appendiculatus | |
| Kawuri et al. | Destructive leaf rot disease caused by Fusarium oxysporum on Aloe barbadensis Miller in Bali | |
| Pujade-Renaud et al. | Endophytes from wild rubber trees as antagonists of the pathogen Corynespora cassiicola | |
| Kozubíková-Balcarová et al. | The diversity of oomycetes on crayfish: Morphological vs. molecular identification of cultures obtained while isolating the crayfish plague pathogen | |
| Liu et al. | An endophytic strain of genus Paenibacillus isolated from the fruits of Noni (Morinda citrifolia L.) has antagonistic activity against a Noni's pathogenic strain of genus Aspergillus | |
| Fan et al. | The strain HEB01 of Fusarium sp., a new pathogen that infects brown soft scale | |
| CN105838642B (en) | A kind of actinomyces of cure plant disease of peanut and its application | |
| JP6605637B2 (en) | A composition for inhibiting and / or controlling the growth of said system comprising nucleic acids of parasitic, pathogenic or ectopic biological systems | |
| AU689851B2 (en) | Ancient organisms | |
| Zarei et al. | Chitinase isolated from water and soil bacteria in shrimp farming ponds | |
| CN105255746B (en) | One plant of Paecilonyces variotii strain and its application for having High pathogenicity to diaphorina citri | |
| RU2551316C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Serratia plymuthica HAVING ANTIVIRAL ACTIVITY AGAINST INFLUENZA VIRUS OF TYPE A (VERSIONS) | |
| CN109355219A (en) | One pseudomonas and its application | |
| CN110804566B (en) | Bacillus for preventing and treating root rot of paris polyphylla and preparation method and application thereof | |
| RU2528064C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Serratia species WHICH IS PRODUCER OF EXTRACELLULAR RIBONUCLEASE AND DEOXYRIBONUCLEASE HAVING ANTIVIRAL ACTIVITY | |
| CN102409012A (en) | Klebsiella pneumoniae separated from termite intestinal tract | |
| CN113046249B (en) | Verticillium lecanii LL-01 and biocontrol application thereof | |
| CN111100194B (en) | Application of antibacterial peptide PD-L4 in inhibition of avian influenza virus | |
| RU2650762C1 (en) | Strain of serratia species bacteria having antiviral activity | |
| RU2580242C2 (en) | Antiviral agent based on serratia-family bacteria nuclease | |
| Mustieles et al. | Microbial deterioration of a mesoamerican and Hispanic mummies | |
| CN117050919B (en) | Application of rhodococcus strain ND011 and tobacco planting method | |
| RU2412238C2 (en) | Antiviral medication (versions) | |
| RU2520086C1 (en) | Aeromonas bestiarum BACTERIA STRAIN - PRODUCER OF ALKALINE RIBONUCLEASE HAVING ANTIVIRAL ACTIVITY | |
| Brovarska et al. | Characteristics of Stenotrophomonas rhizophila Lipopolysaccharide, a Representative of Antarctica |