RU2465317C1

RU2465317C1 - Yersinia pseudotuberculosis test strain for differentiation of yersinia pseudotuberculosis bacteria genetic group ii

Info

Publication number: RU2465317C1
Application number: RU2011138215/10A
Authority: RU
Inventors: Галина Ивановна Кокорина (RU); Галина Ивановна Кокорина; Екатерина Александровна Воскресенская (RU); Екатерина Александровна Воскресенская; Маргарита Валентиновна Чеснокова (RU); Маргарита Валентиновна Чеснокова
Priority date: 2011-09-16
Filing date: 2011-09-16
Publication date: 2012-10-27

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: Yersinia pseudotuberculosis 1068 bacterial strain is recovered from a patient suffering pseudotuberculosis, deposited in the collection of the Russian Science and Research Antiplague Institute Microbe, No. KM 213 and is applicable as a test strain for differentiation of Yersinia pseudotuberculosis bacteria genetic group II. The characteristic of the strain is the content of chromosomal gene of the Y.pseudotuberculosis YPMa/YPMc (urtA/C) superantigen and the pVM 82 (dotO) plasmid of molecular weight 82MDa determined by PCR method.

EFFECT: invention shall enable epidemiologic study of sporadic and group cases of pseudotuberculosis: specifying an infection source in a hotbed of the disease and identifying transmission factors, as well as monitoring strain circulation at various territories.

2 dwg, 1 tbl

Description

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой оригинальный штамм возбудителя псевдотуберкулеза, содержащий хромосомный ген суперантигена Y.pseudotuberculosis YPMa/YPMc (ypmA/C), плазмиды с мол. массой 82МДа (pVM 82) и используемый как тест-штамм для дифференциации бактерий Y.pseudotuberculosis генетической группы II.The invention relates to medical microbiology and is an original strain of the causative agent of pseudotuberculosis containing the chromosomal gene of the superantigen Y. pseudotuberculosis YPMa / YPMc (ypmA / C), plasmids with mol. mass 82MDa (pVM 82) and used as a test strain for the differentiation of bacteria Y. pseudotuberculosis genetic group II.

Псевдотуберкулез регистрируется в России практически повсеместно, при этом наиболее высокие показатели заболеваемости характерны для территорий с умеренным и холодным климатом (Сибирский, Дальневосточный, Северо-Западный ФО).Pseudotuberculosis is registered almost everywhere in Russia, while the highest incidence rates are characteristic of temperate and cold climates (Siberian, Far Eastern, North-Western Federal Districts).

Известно, что псевдотуберкулез в различных географических регионах характеризуется определенными клиническими симптомами (Fukushima Н., Matsuda Y., Seki R., et al. Geographical Heterogeneity between Far Eastern and Western Countries in Prevalence of the Virulence Plasmid, the Superantigen Yersinia pseudotuberculosis-Derirved Mitogen, and the High-Pathogenicity Island among Yersinia pseudotuberculosis Strains. J Clin Microbiol. 2001; 39 (10): 3541-3547): в Европе для этой инфекции характерны, главным образом, наличие лихорадки, гастроинтестинальных симптомов и мезентериального лимфаденита, тогда как в России - это системные проявления, такие как сыпь, узловатая эритема, артриты.Pseudotuberculosis in different geographical regions is known to have certain clinical symptoms (Fukushima N., Matsuda Y., Seki R., et al. Geographical Heterogeneity between Far Eastern and Western Countries in Prevalence of the Virulence Plasmid, the Superantigen Yersinia pseudotuberculosis-Derirved Mitogen , and the High-Pathogenicity Island among Yersinia pseudotuberculosis Strains. J Clin Microbiol. 2001; 39 (10): 3541-3547): in Europe, this infection is mainly characterized by fever, gastrointestinal symptoms and mesenteric lymphadenitis, whereas in In Russia, these are systemic manifestations such as rash, erythema nodosum, arthritis.

Такой полиморфизм клинических проявлений заболевания обусловлен наличием у возбудителя большого набора факторов патогенности хромосомной и плазмидной природы. Так, гены «острова» высокой патогенности HPI, расположенного на хромосоме, ответственны за биосинтез и регуляцию системы утилизации железа, необходимого для экспрессии высоковирулентного фенотипа энтеробактерий (Camiel E. The Yersinia high-pathogenicity island: an iron-uptake island. Microbes and Infection, 3, 2001, 561-569). Суперантигены YPMs в организме хозяина стимулируют поликлональную активацию Т-лимфоцитов (СД4+, СД8+). При этом во взаимодействие вовлекаются от 10 до 40% всех лимфоцитов. Это ведет к гиперпродукции цитокинов, таких как IL-2, TNF-α, IFN-γ, что может вызвать синдром токсического шока (Шурыгина И.А., 2003). Известно три группы суперантигенов - YPMa, YPMb, YPMc, кодируемых соответствующими генами ypmA, ypmB и ypmC (Carnoy С., Floquet S., Marceau M., et al. The superantigen gene ypm is located in an unstable chromosomal locus of Yersinia pseudotuberculosis. J Bacteriol. 2002, 184(16):4489-99). YAPI - адгезивный «остров» патогенности иерсиний, несет гены, кодирующие пили IV типа (филаментозные структуры, отходящие от поверхности бактериальной клетки, короче и многочисленнее жгутиков). Пили IV типа вовлечены в различные бактериальные функции, включая адгезию на клетках пейеровых бляшек, бактериофагальную адсорбцию, плазмидный перенос и флагеллин-независимую подвижность (Collyn F., Léty M.A., Nair S., et al. Yersinia pseudotuberculosis harbors a type IV pilus gene cluster that contributes to pathogenicity. Infect Immun., 2002, 70(11):6196-205). Плазмида с мол. массой 82 МДа (pVM82), присутствующая у некоторых штаммов Y.pseudotuberculosis, оказывает иммуносупрессорное и антифагоцитарное действие на иммунные структуры макроорганизма (Дубровина В.И., Голубинский Е.П., Борсук Г.И. и авт. Особенности фагоцитоза Yersinia pseudotuberculosis с разным набором плазмид. Мед. паразитол., 1999, 4:50-53). М.В.Чеснокова и соавт. (Чеснокова М.В., Климов В.Т., Марамович А.С. Генотипирование Yersinia pseudotuberculosis, выделенных в Сибири и на Дальнем Востоке. Журн. микробиол., 2006, 6, 20-25) показали, что штаммы Y.pseudotuberculosis, обладающие плазмидой pVM82, вызывают более тяжелое течение псевдотуберкулеза.This polymorphism of the clinical manifestations of the disease is due to the presence of a large set of pathogenicity factors of chromosomal and plasmid nature in the pathogen. Thus, the genes of the “island” of high pathogenicity of the HPI located on the chromosome are responsible for the biosynthesis and regulation of the iron utilization system necessary for the expression of the highly virulent enterobacteria phenotype (Camiel E. The Yersinia high-pathogenicity island: an iron-uptake island. Microbes and Infection, 3, 2001, 561-569). Superantigens of YPMs in the host organism stimulate the polyclonal activation of T-lymphocytes (CD4 +, CD8 +). In this case, from 10 to 40% of all lymphocytes are involved in the interaction. This leads to overproduction of cytokines, such as IL-2, TNF-α, IFN-γ, which can cause toxic shock syndrome (Shurygina I.A., 2003). Three groups of superantigens are known - YPMa, YPMb, YPMc encoded by the corresponding ypmA, ypmB and ypmC genes (Carnoy C., Floquet S., Marceau M., et al. The superantigen gene ypm is located in an unstable chromosomal locus of Yersinia pseudotuberculosis. J Bacteriol. 2002, 184 (16): 4489-99). YAPI is an adhesive “island” of Yersinia pathogenicity; it carries genes encoding type IV drank (filamentous structures extending from the surface of a bacterial cell, shorter and more numerous than flagella). Type IV dranks are involved in a variety of bacterial functions, including adhesion to Peyer's plaque cells, bacteriophage adsorption, plasmid transfer and flagellin independent motility (Collyn F., Léty MA, Nair S., et al. Yersinia pseudotuberculosis harbors a type IV pilus gene cluster that contributes to pathogenicity. Infect Immun., 2002, 70 (11): 6196-205). Plasmid with a pier. weighing 82 MDa (pVM82), present in some strains of Y. pseudotuberculosis, has an immunosuppressive and antiphagocytic effect on the immune structures of a macroorganism (Dubrovina V.I., Golubinsky E.P., Borsuk G.I. and author Features of phagocytosis of Yersinia pseudotuberculosis with a different set of plasmids. Medical parasitol., 1999, 4: 50-53). M.V. Chesnokova et al. (Chesnokova M.V., Klimov V.T., Maramovich A.S. Genotyping of Yersinia pseudotuberculosis isolated in Siberia and the Far East. J. Microbiol., 2006, 6, 20-25) showed that Y.pseudotuberculosis strains possessing the plasmid pVM82 cause a more severe course of pseudotuberculosis.

Ранее методом ПЦР штаммы Y.pseudotuberculosis были исследованы на наличие таких генов вирулентности, как гены суперантигенов (ypmA, ypmB и ypmC), гены «острова» высокой патогенности HPI, и по результатам работы разделены на генетические группы (Fukushima H., Matsuda Y., Seki R., et al. Geographical Heterogeneity between Far Eastern and Western Countries in Prevalence of the Virulence Plasmid, the Superantigen Yersinia pseudotuberculosis-Derived Mitogen, and the High-Pathogenicity Island among Yersinia pseudotuberculosis Strains. J Clin Microbiol. 2001; 39(10):3541-3547). Недостатком этого исследования является то, что не были учтены другие факторы патогенности - адгезивный «остров» патогенности иерсиний и плазмида pVM82.Previously, Y. pseudotuberculosis strains were tested by PCR for the presence of virulence genes such as superantigen genes (ypmA, ypmB and ypmC), genes of the “island” of high pathogenicity HPI, and were divided into genetic groups (Fukushima H., Matsuda Y. , Seki R., et al. Geographical Heterogeneity between Far Eastern and Western Countries in Prevalence of the Virulence Plasmid, the Superantigen Yersinia pseudotuberculosis-Derived Mitogen, and the High-Pathogenicity Island among Yersinia pseudotuberculosis Strains. J Clin Microbiol. 2001; 39 ( 10): 3541-3547). The disadvantage of this study is that it did not take into account other pathogenicity factors - the adhesive “island” of pathogenicity of yersinia and plasmid pVM82.

В настоящее время для эпидемиологического расследования случаев спорадических и групповых заболеваний псевдотуберкулезом и проведения мониторинга за возбудителями на различных территориях исследуют содержание плазмид Y.pseudotuberculosis, которые выделяют по методу Т.Kieser в несколько этапов, а также методом ПЦР определяют наличие генов «острова» высокой патогенности HPI и суперантигена (Чеснокова М.В., Климов В.Т., Марамович А.С. Генотипирование Yersinia pseudotuberculosis, выделенных в Сибири и на Дальнем Востоке. Журн. микробиол., 2006, 6, 20-25). Штамм-аналог получить не удалось.Currently, for the epidemiological investigation of cases of sporadic and group diseases of pseudotuberculosis and for monitoring pathogens in various territories, the content of Y. pseudotuberculosis plasmids is studied, which are isolated by T. Kieser in several stages, and the presence of genes of the “island” of high pathogenicity is determined by PCR HPI and superantigen (Chesnokova M.V., Klimov V.T., Maramovich A.S. Genotyping of Yersinia pseudotuberculosis isolated in Siberia and the Far East. Zh. Microbiol., 2006, 6, 20-25). The analogue strain could not be obtained.

За прототип выбран штамм Y. pseudotuberculosis КМ-9 /2160 (Мессорош В.Г. Биологические свойства Yersinia pseudotuberculosis и совершенствование лабораторной диагностики псевдотуберкулеза. Автореф. дисс.… канд. мед. наук, СПб, 1993, 18 с.), используемый в качестве эталона для определения вирулентности, депонированный в коллекции патогенных микроорганизмов РосНИПЧИ «Микроб». Степень вирулентности определяли при конъюнктивальном заражении морских свинок, энтеральном заражении белых мышей и морских свинок и инфицировании культур тканей линий НЕр-2, HeLa. Изучение наличия генов вирулентности не проводилось. Поэтому применение штамма для выполнения задач мониторинга за циркуляцией возбудителя псевдотуберкулеза и поиска источника инфекции нецелесообразно.For the prototype, a strain of Y. pseudotuberculosis KM-9/2160 (Messorosh V.G. Biological properties of Yersinia pseudotuberculosis and improvement of laboratory diagnosis of pseudotuberculosis. Abstract of thesis ... candidate of medical sciences, St. Petersburg, 1993, 18 pp.) Used in as a standard for determining virulence, deposited in the collection of pathogenic microorganisms RosNIPCHI "Microbe". The degree of virulence was determined by conjunctival infection of guinea pigs, enteric infection of white mice and guinea pigs, and infection of tissue cultures of the HEP-2, HeLa lines. A study of the presence of virulence genes has not been conducted. Therefore, the use of the strain to perform monitoring tasks for the circulation of the causative agent of pseudotuberculosis and the search for the source of infection is impractical.

Изобретение направлено на получение тест-штамма Y.pseudotuberculosis генетической группы II.The invention is directed to obtaining a test strain of Y. pseudotuberculosis of genetic group II.

Технический результат - дифференциация бактерий Yersinia pseudotuberculosis генетической группы II по содержанию генов вирулентности, что позволит устанавливать источник инфекции в очаге заболевания и идентифицировать факторы передачи, а также проводить мониторинг за циркуляцией штаммов на различных территориях.The technical result is the differentiation of bacteria Yersinia pseudotuberculosis of genetic group II by the content of virulence genes, which will allow to establish the source of infection in the outbreak and identify transmission factors, as well as monitor the circulation of strains in different territories.

Полученный штамм Y.pseudotuberculosis 1068 депонирован в коллекции патогенных микроорганизмов РосНИПЧИ «Микроб» КМ 213. Особенностью штамма является содержание хромосомного гена суперантигена Y.pseudotuberculosis YPMa/YPMc (ypmA/С), плазмиды с мол. массой 82МДа (pVM 82).The obtained strain of Y. pseudotuberculosis 1068 was deposited in the collection of pathogenic microorganisms of RosNIPCHI "Microbe" KM 213. The strain is characterized by the content of the chromosomal gene of the superantigen Y.pseudotuberculosis YPMa / YPMc (ypmA / C), plasmids with mol. mass 82MDa (pVM 82).

Штамм семейства Enterobacteriaceae род Yersinia вид Y.pseudotuberculosis выделен от больного псевдотуберкулезом генерализованной формы средней степени тяжести, г.Иркутск, 2002 г.A strain of the Enterobacteriaceae family, genus Yersinia, species Y. pseudotuberculosis, was isolated from a patient with pseudotuberculosis of a generalized moderate form, Irkutsk, 2002.

Морфологические и физиологические характеристики. Грамотрицательные аспорогенные бескапсульные палочковидные клетки 1-3 мкм, слабоподвижны при температуре ниже 30°С, при 37°С неподвижны. На жидких питательных средах в аэробных условиях при 28°С или при 37°С образуют равномерное помутнение. На агаре Хоттингера при 28°С через 48 ч образуют выпуклые прозрачные серовато-желтые блестящие колонии с относительно ровным краем и приподнятым центром размером до 1,2-1,8 мм. На среде с бромтимоловым синим при 28°С через 48 ч на сине-голубом фоне среды образуют мелкие (1-2 мм), голубовато-зеленые, с приподнятым центром, выпуклые, сухие, с матовым налетом колонии с фестончатым краем.Morphological and physiological characteristics. Gram-negative asporogenous capsuleless rod-shaped cells 1-3 microns, weakly mobile at temperatures below 30 ° C, at 37 ° C they are motionless. On liquid nutrient media under aerobic conditions at 28 ° C or at 37 ° C form a uniform turbidity. On Hottinger agar at 28 ° C, after 48 h, convex transparent grayish-yellow shiny colonies with a relatively even edge and a raised center up to 1.2-1.8 mm in size are formed. On a medium with bromothymol blue at 28 ° С, after 48 h, on a blue-blue background, the medium forms small (1-2 mm), bluish-green, with a raised center, convex, dry, with a matte bloom of a colony with a scalloped edge.

Биохимическая активность. Ферментирует с образованием кислоты: глюкозу, маннит, ксилозу, не ферментирует лактозу, сахарозу, сорбит. Пробы на индол и сероводород отрицательны. Продуцирует каталазу, не продуцирует оксидазу. Гидролизует мочевину, не ферментирует салицин. Не продуцирует орнитиндекарбоксилазу.Biochemical activity. It ferments with the formation of acid: glucose, mannitol, xylose, does not ferment lactose, sucrose, sorbitol. Samples for indole and hydrogen sulfide are negative. It produces catalase, does not produce oxidase. Hydrolyzes urea, does not ferment salicin. Does not produce ornithine decarboxylase.

Антигенные свойства. Вступает в реакцию агглютинации с диагностической сывороткой к Y.pseudotuberculosis 0:1.Antigenic properties. Enters into agglutination reaction with diagnostic serum to Y. pseudotuberculosis 0: 1.

Генетические особенности. Содержит хромосомный ген суперантигена YPMa/YPMc (ypmA/C) и плазмиду pVM82 (dotO); отсуствуют ген адгезивного «острова» патогенности иерсиний YAPI (pilPQ), хромосомный ген «острова» высокой патогенности HPI (fyuA) и ген суперантигена иерсиний YPMb (ypmB).Genetic features. Contains the chromosomal superantigen gene YPMa / YPMc (ypmA / C) and plasmid pVM82 (dotO); there is no gene for the adhesive “island” of pathogenicity Yersinia YAPI (pilPQ), a chromosome gene for the “island” of high pathogenicity HPI (fyuA) and the gene for superantigen Yersinia YPMb (ypmB).

По сравнению со штаммом аналогом в настоящем изобретении изучают также наличие хромосомного фактора патогенности - YAPI. Преимуществом данного исследования является использование только метода ПЦР для поиска всех генов вирулентности.Compared to the analogue strain, the presence of a chromosomal pathogenicity factor, YAPI, is also studied. The advantage of this study is to use only the PCR method to search for all virulence genes.

Сущность изобретения поясняется чертежами.The invention is illustrated by drawings.

На ФИГ.1 представлены результаты ПЦР со штаммом Yersinia pseudotuberculosis №1068 (группа II), где М - маркер молекулярного веса ДНК (10000 b.p.; Eurogentec); 1 - ypm А/ С (422 b.p.); 2 - ypmB (268 b.p.); 3 - fyuA (149 b.p.); 4 - pilPQ (569 b.p.); 5 - dotO (2811 b.p.).Figure 1 presents the results of PCR with a strain of Yersinia pseudotuberculosis No. 1068 (group II), where M is a molecular weight marker for DNA (10000 b.p .; Eurogentec); 1 - ypm A / C (422 b.p.); 2 - ypmB (268 b.p.); 3 - fyuA (149 b.p.); 4 - pilPQ (569 b.p.); 5 - dotO (2811 b.p.).

На ФИГ.2 - результаты ПЦР со штаммами Yersinia pseudotuberculosis №1068 дорожки (1-5), №1067 дорожки (6-10) и №620 дорожки (11-15), где М - маркер молекулярного веса ДНК (VI.; Eurogentec); 1, 6, 11 - ypm А/ С (422 b.p.); 2, 7, 12 - ypmB (268 b.p.); 3, 8, 13 - fyuA (149 b.p.); 4, 9, 14 - pilPQ (569 b.p.); 5, 10, 15 - dotO (2811 b.p.).Figure 2 - PCR results with strains of Yersinia pseudotuberculosis No. 1068 lanes (1-5), No. 1067 lanes (6-10) and No. 620 lanes (11-15), where M is the molecular weight marker of DNA (VI .; Eurogentec ); 1, 6, 11 - ypm A / C (422 b.p.); 2, 7, 12 - ypmB (268 b.p.); 3, 8, 13 - fyuA (149 b.p.); 4, 9, 14 - pilPQ (569 b.p.); 5, 10, 15 - dotO (2811 b.p.).

Изобретение реализуется следующим образом.The invention is implemented as follows.

Пример 1. Способ получения штаммаExample 1. A method of obtaining a strain

Чистую культуру штамма выращивают на агаре Хоттингера при 28°С в течение 24 ч.A pure strain culture is grown on Hottinger agar at 28 ° C. for 24 hours.

Готовят взвесь бактерий с концентрацией 10⁸ м.к./мл в стерильной дистиллированной воде, 100 мкл взвеси кипятят 5 мин, центрифугируют при 10 тыс. об/мин 1 мин, используют надосадок. Бактерии исследуют методом полимеразной цепной реакции с праймерами к участкам генов, кодирующим факторы патогенности Y.pseudotuberculosis производства ООО «Синтол» (Москва) (таблица 1).A suspension of bacteria is prepared with a concentration of 10 ⁸ mk / ml in sterile distilled water, 100 μl of the suspension is boiled for 5 minutes, centrifuged at 10 thousand rpm for 1 minute, and a supernatant is used. Bacteria are examined by polymerase chain reaction with primers for gene regions encoding pathogenicity factors Y. pseudotuberculosis produced by Syntol LLC (Moscow) (table 1).

Реакционную смесь для проведения ПЦР готовят с использованием стандартных реагентов производства «Fermentas» согласно прилагаемой инструкции: 2,5 мкл 10х Taq буфера с (NH₄)₂SO₄, 2 мМ/мкл MgCl₂, 0,2 мМ/мкл каждого дНТФ, 0,4 мкМ/мкл прямого и обратного праймеров, 0,625 U Taq-ДНК-полимеразы, с добавлением 4 мкл исследуемого образца до конечного объема 25 мкл. ПЦР проводят по программе: 1 цикл 95°С - 5 мин; 25 циклов 94°С - 1 мин, 55°С - 1 мин, 72°С - 1 мин; 1 цикл 72°С - 7 мин. Для учета результатов ПЦР проводят электрофорез в 1,5% агарозном геле при постоянном напряжении 75 B в ТВЕ буфере (0,9 М Tris, 0,9 М борная кислота, 20 мМ EDTA·Na₂) с окрашиванием этидий бромидом.The PCR reaction mixture is prepared using standard Fermentas reagents according to the attached instructions: 2.5 μl of 10x Taq buffer with (NH ₄ ) ₂ SO ₄ , 2 mM / μl MgCl ₂ , 0.2 mM / μl of each dNTP, 0.4 μM / μl of forward and reverse primers, 0.625 U Taq-DNA polymerase, with the addition of 4 μl of the test sample to a final volume of 25 μl. PCR is carried out according to the program: 1 cycle of 95 ° C - 5 min; 25 cycles 94 ° С - 1 min, 55 ° С - 1 min, 72 ° С - 1 min; 1 cycle 72 ° C - 7 min. To take into account the results of PCR, electrophoresis was performed on a 1.5% agarose gel at a constant voltage of 75 V in TBE buffer (0.9 M Tris, 0.9 M boric acid, 20 mM EDTA · Na ₂ ) with ethidium bromide staining.

На ФИГ.1 представлен результат электрофоретического разделения фрагментов ДНК, полученных после проведения ПЦР.Figure 1 presents the result of electrophoretic separation of DNA fragments obtained after PCR.

Видно, что у штамма 1068 присуствуют два фрагмента ДНК, длиной 422 п.н. и 2811 п.н. (дорожки 1 и 5), что соответствует участкам генов ypmA/С и dotO. На дорожках 2, 3, 4 ампликонов нет.It can be seen that strain 1068 contains two DNA fragments with a length of 422 bp and 2811 bp (lanes 1 and 5), which corresponds to the regions of the ypmA / C and dotO genes. There are no amplicons on tracks 2, 3, 4.

Пример 2. Исследование ДНК штаммов Yersinia pseudotuberculosisExample 2. The study of DNA strains of Yersinia pseudotuberculosis

Методом ПЦР с использованием праймеров к хромосомным генам Yersinia (fyuA, pilPQ, ypmA/С, ypmB) и к плазмидному гену (dotO) были исследованы ДНК штаммов №1067 и №620, которые были выделены в стационаре при лечении спорадических больных псевдотуберкулезом. В качестве контроля использован штамм Y.pseudotuberculosis KM 213.By PCR using primers for the Yersinia chromosomal genes (fyuA, pilPQ, ypmA / C, ypmB) and the plasmid gene (dotO), DNA strains No. 1067 and No. 620 were studied, which were isolated in a hospital for the treatment of sporadic patients with pseudotuberculosis. As a control, the strain Y. pseudotuberculosis KM 213 was used.

Результаты исследования представлены на ФИГ.2.The research results are presented in FIG. 2.

Видно, что у всех исследованных штаммов Y.pseudotuberculosis присуствуют два фрагмента ДНК длиной 422 п.н. (дорожки 1, 6, и 11) и 2811 п.н. (дорожки 5, 10, 15), как и у полученного тест-штамма и, соответственно, они могут быть отнесены к генетической группе II. Таким образом, установлен факт генетического сходства исследованных штаммов, что позволяет судить о циркуляции Y.pseudotuberculosis данной генетической группы на исследуемой территории.It is seen that in all the studied strains of Y. pseudotuberculosis, two DNA fragments 422 bp in length are present. (lanes 1, 6, and 11) and 2811 bp (lanes 5, 10, 15), like the obtained test strain and, accordingly, they can be assigned to genetic group II. Thus, the fact of genetic similarity of the studied strains was established, which allows us to judge the circulation of Y. pseudotuberculosis of this genetic group in the study area.

Таким образом, заявленный штамм пригоден для дифференциации бактерий Yersinia pseudotuberculosis генетической группы II по содержанию генов вирулентности, что позволит устанавливать источник инфекции в очаге заболевания и идентифицировать факторы передачи, а также проводить мониторинг за циркуляцией штаммов на различных территориях.Thus, the claimed strain is suitable for differentiation of bacteria Yersinia pseudotuberculosis of genetic group II by the content of virulence genes, which will allow to establish the source of infection in the focal point of the disease and identify transmission factors, as well as monitor the circulation of the strains in different territories.

Claims

Test strain Yersinia pseudotuberculosis, RosNIPCHI "Microbe" KM 213, for differentiation of bacteria Yersinia pseudotuberculosis genetic group II.