RU2121000C1

RU2121000C1 - Nutrient medium for mycobacterium culturing

Info

Publication number: RU2121000C1
Application number: RU95111841A
Authority: RU
Inventors: Р.А. Нуратинов
Original assignee: Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт
Priority date: 1995-07-11
Filing date: 1995-07-11
Publication date: 1998-10-27

Abstract

FIELD: microbiology. SUBSTANCE: medium is made by modification of Finn-11 medium. Medium is enriched with easily assimilable nitrogen and carbon but very deficient components (sodium glutamate, L-asparagine) are excluded. Medium has liquid paraffin as an additional carbon source (n-alkanes) and as a film-forming substance. This change of composition ensures to increase both the growth rate and sowing out of mycobacteria from pathological material from animals and sputum of patient with tuberculosis. Medium is used for bacteriological tuberculosis diagnosis in animals and human. EFFECT: enhanced effectiveness of medium. 2 tbl

Description

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в медицине, в частности для высевания патологического материала и выращивания микобактерий при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота и человека. The invention relates to veterinary medicine and can be used in medicine, in particular for sowing pathological material and growing mycobacteria in the diagnosis of tuberculosis in cattle and humans.

В практике ветеринарных и медицинских лабораторий для бактериологической диагностики туберкулеза наиболее широко применяют плотные питательные среды Левенштейна-Йенсена, Финн II, картофельная, "Новая" (Г.Г.Мордовский), среды 6 и 9, предложенные В.А.Аникиным и соавт. и т.д. Все перечисленные среды мало отличаются по химическому составу, физическим свойствам одна от другой и состоят из солевой основы с добавлением желтков куриных яиц. Соответственно, высеваемость и скорость роста микобактерий на разных средах незначительно расходятся в ту или иную сторону. In the practice of veterinary and medical laboratories for bacteriological diagnosis of tuberculosis, the most widely used dense nutrient media are Levenshtein-Jensen, Finn II, potato, Novaya (G.G. Mordovsky), media 6 and 9, proposed by V.A. Anikin et al. etc. All of these media differ little in chemical composition, physical properties one from another and consist of a salt base with the addition of chicken yolks. Accordingly, the seeding rate and growth rate of mycobacteria on different media slightly differ in one direction or another.

Недостатками данных питательных сред являются низкая высеваемость патологического материала и малая скорость роста чистых культур. The disadvantages of these culture media are low sowing pathological material and low growth rate of pure crops.

Наиболее близкой по технической сущности к заявляемому изобретению является среда, предложенная Г.К.Самилло и Е.Н.Ромашевой (1988), содержащая в качестве источника азота дрожжевой аутолизат и аммоний щавелевокислый, а в качестве источника углерода - глицерин в следующем составе:
магний сернокислый - 0,15 г
натрий лимоннокислый - 0,3 г
железоаммиачные квасцы - 0,015 г
калий фосфорнокислый 1 зам. - 6,0 г
щавелевокислый аммоний - 1,5 г
дрожжевой аутолизат - 3,0 мл
глицерин - 6 мл
дистиллированная вода - 300 мл
яйца куриные - 12 шт.The closest in technical essence to the claimed invention is a medium proposed by G.K.Samillo and E.N. Romasheva (1988), containing yeast autolysate and ammonium oxalate as a nitrogen source, and glycerin in the following composition as a carbon source:
magnesium sulfate - 0.15 g
sodium citrate - 0.3 g
iron-ammonium alum - 0.015 g
potassium phosphate 1 deputy. - 6.0 g
ammonium oxalate - 1.5 g
yeast autolysate - 3.0 ml
glycerin - 6 ml
distilled water - 300 ml
chicken eggs - 12 pcs.

малахитовая зелень - 10 мл 2% р-ра
Недостатками данной среды являются низкий процент высеваемости из патологического материала и мокроты, малая скорость роста микобактерий. Кроме того, в процессе длительного термостатирования среда высыхает, в связи с чем прекращаются рост и размножение микобактерий. Это явление особенно проявляется при высеве гомогенатов биоматериалов на выделение микобактерий.malachite greens - 10 ml of 2% solution
The disadvantages of this environment are a low percentage of inoculation from pathological material and sputum, a low growth rate of mycobacteria. In addition, during prolonged temperature control, the medium dries, and therefore the growth and reproduction of mycobacteria ceases. This phenomenon is especially evident when seeding homogenates of biomaterials for the isolation of mycobacteria.

Целью изобретения является повышение эффективности использования питательной среды для выделения и выращивания микобактерий за счет изменения химического состава среды. The aim of the invention is to increase the efficiency of the use of a nutrient medium for the isolation and cultivation of mycobacteria due to changes in the chemical composition of the medium.

Поставленная цель достигается тем, что среда Финн II, содержащая в качестве источника азота глутаминовокислый натрий, аммония - цитрат однозамещенный, содержит в качестве источника азота дрожжевой аутолизат и аммоний щавелевокислый (Г.К.Самилло, Е.Н.Ромашева, 1988), дополнительно в качестве источника углерода - смесь Н-алканов в следующих количествах:
куриные яйца - 12 шт.This goal is achieved by the fact that Finn II medium, containing monosodium glutamic acid as a nitrogen source, monosubstituted citrate, contains a yeast autolysate and oxalic ammonium as a nitrogen source (G.K.Samillo, E.N. Romasheva, 1988), in addition as a carbon source, a mixture of H-alkanes in the following amounts:
chicken eggs - 12 pcs.

дрожжевой аутолизат - 30 мл
магний сернокислый - 0,15 г
натрий лимоннокислый - 0,3 г
железоаммиачные квасцы - 0,015 г
калий фосфорнокислый 1 зам. - 6,0 г
щавелевокислый аммоний - 1,5 г
глицерин - 6 мл
дистиллированная вода - до 300 мл
Н-алкилы (C₁₂-C₁₇) - 4-5 капель на поверхность среды в пробирке
Сопоставительный анализ с прототипом позволяет сделать вывод, что заявляемый состав среды отличается от известной введением нового компонента, а именно Н-алканов (C₁₂-C₁₇) и количественным составом компонентов. Таким образом, заявляемое техническое решение соответствует критерию "новизна". Анализ известных составов сред, используемых для выделения и выращивания микобактерий, показывает, что некоторые введенные в заявляемое решение вещества известны, например Н-алканы. Однако их применение в этих средах в сочетании с другими компонентами не обеспечивает средам такие свойства, которые они проявляют в заявляемом решении, а именно значительное обогащение легкоусвояемым азотом и углеродом плотной яичной среды с одновременным покрытием поверхности среды слоем жидкого парафина и, как следствие, длительное сохранение влажности среды в процессе термостатирования. Таким образом, данный состав компонентов придает среде новые свойства, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критерию "существенные отличия".yeast autolysate - 30 ml
magnesium sulfate - 0.15 g
sodium citrate - 0.3 g
iron-ammonium alum - 0.015 g
potassium phosphate 1 deputy. - 6.0 g
ammonium oxalate - 1.5 g
glycerin - 6 ml
distilled water - up to 300 ml
N-alkyls (C ₁₂ -C ₁₇ ) - 4-5 drops on the surface of the medium in vitro
Comparative analysis with the prototype allows us to conclude that the claimed composition of the medium differs from the known introduction of a new component, namely, N-alkanes (C ₁₂ -C ₁₇ ) and the quantitative composition of the components. Thus, the claimed technical solution meets the criterion of "novelty." An analysis of the known compositions of the media used for the isolation and growth of mycobacteria shows that some substances introduced into the claimed solution are known, for example, N-alkanes. However, their use in these environments in combination with other components does not provide the media with the properties that they exhibit in the claimed solution, namely, a significant enrichment of easily digestible nitrogen and carbon dense egg medium with simultaneous coating of the surface of the medium with a layer of liquid paraffin and, as a result, long-term preservation humidity in the process of temperature control. Thus, this composition of the components gives the environment new properties, which allows us to conclude that the proposed solution meets the criterion of "significant differences".

Для экспериментальной проверки заявляемого состава среды были подготовлены 8 серий в различных вариантах, отличающиеся количественным содержанием добавляемых компонентов. Для этого предварительно готовили солевой состав, растворяли в теплой дистиллированной воде и стерилизовали при 1 атм. в течение 20 мин. Стерильный дрожжевой аутолизат добавляли к солевому раствору перед смешиванием со сбитыми яйцами. В стерильную колбу с бусами выливали 12 куриных яиц, встряхивали после добавления каждого яйца до образования однородной массы, доливали 10 мл 2% водного раствора малахитового зеленого и 300 мл приготовленного солевого раствора. Затем фильтровали через марлю, разливали по пробиркам и выдерживали в аппарате свертывания в наклонном положении при температуре 85^oC в течение 45 мин. Готовые серии сред засевали микобактериями разных видов лабораторных штаммов (одномоментно, из одного разведения бакмассы), одна из которых показала оптимальные результаты (см. табл. 1). В таблице представлены полученные свойства образцов сред с внесением различных соотношений компонентов и известных составов.For experimental verification of the claimed composition of the medium, 8 series were prepared in various versions, differing in the quantitative content of the added components. For this, the salt composition was preliminarily prepared, dissolved in warm distilled water and sterilized at 1 atm. within 20 minutes A sterile yeast autolysate was added to the saline before mixing with beaten eggs. 12 chicken eggs were poured into a sterile flask with beads, shaken after adding each egg until a homogeneous mass was formed, 10 ml of a 2% aqueous solution of malachite green and 300 ml of the prepared saline solution were added. Then it was filtered through cheesecloth, poured into test tubes and kept in the coagulation apparatus in an inclined position at a temperature of 85 ^o C for 45 minutes The finished series of media were seeded with mycobacteria of different types of laboratory strains (simultaneously, from a single dilution of the backbone), one of which showed optimal results (see Table 1). The table shows the obtained properties of media samples with the introduction of various ratios of components and known compositions.

Из таблицы следует, что на предлагаемой среде (N 8) микобактерии лабораторных штаммов растут значительно быстрее, чем на всех остальных модификациях сред, в т.ч. чем на аналоге и прототипе (N 2, N 7). From the table it follows that on the proposed environment (N 8) mycobacteria of laboratory strains grow much faster than on all other modifications of the media, including than on the analogue and prototype (N 2, N 7).

Аналогичные результаты при посевах патматериала от животных и мокроты больных туберкулезом людей. Эти результаты отражены в таблице 2. Similar results when sowing material from animals and sputum of people with tuberculosis. These results are shown in table 2.

Таким образом, на предлагаемой среде сроки получения как первичной культуры, так и обильной бакмассы сокращаются на 15-20 суток. В то же время, на 16-19% повышается высеваемость микобактерий из патматериала от животных и почти в 2 раза из мокроты больных туберкулезом людей. Thus, in the proposed environment, the timing of obtaining both the primary culture and abundant Bakmass is reduced by 15-20 days. At the same time, the sowing rate of mycobacteria from animal material and by almost 2 times from the sputum of people with tuberculosis increases by 16-19%.

Использование заявляемой среды в бактериологии туберкулеза позволит ускорить постановку диагноза; за короткий срок получить обильную бакмассу; повысить высеваемость микобактерий из патматериала от животных и мокроты от больных туберкулезом людей; укоротить сроки термостатирования высеянных пробирок; исключить из состава среды остродефицитные ингредиенты. The use of the inventive medium in the bacteriology of tuberculosis will accelerate the diagnosis; for a short time to get a plentiful back mass; increase the seeding rate of mycobacteria from material from animals and sputum from people with tuberculosis; shorten the temperature control period of seeded tubes; exclude severely deficient ingredients from the medium.

Claims

The nutrient medium used in tuberculosis bacteriology, containing chicken eggs, yeast autolysate, magnesium sulfate, sodium citrate, ammonium iron alum, monosubstituted potassium phosphate, ammonium oxalate, glycerin, malachite greens and distilled water, which additionally contains a mixture of (C ₁₂ -C ₁₇ ) with the quantitative composition of the ingredients:
Chicken eggs - 12
Yeast autolysate, ml - 30
Magnesium sulfate, g - 0.15
Sodium citrate, g - 0.3
Iron-ammonium alum, g - 0.015
Potassium phosphate monosubstituted, g - 6.0
Ammonium oxalate, g - 1.5
Glycerin, ml - 6
Malachite greens, 2% solution, ml - 10
Distilled water, ml - Up to 300
H-alkanes, drops on the surface of the medium in a plug - 4 - 5ш