MX2007009196A - Compuestos macrocilicos de 18 miembros y analogos de los mismos. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere en general a agentes antimicrobianos macrocíclicos de 18 miembros llamados Tiacumicinas, específicamente, el OPT-80 (que está compuesto casi enteramente de R-Tiacumicina B), a composiciones farmacéuticas que comprenden OPT-80, y a métodos que usan OPT-80. En particular, este compuesto es un fármaco potente para el tratamiento de infecciones bacterianas, específicamente infecciones de C. difficile.

Description

COMPUESTOS MACROCÍCLICOS DE 18 MIEMBROS Y ANÁLOGOS DE LOS MISMOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona en general con agentes antimicrobianos macrocíclicos de 18 miembros llamados Tiacumicinas , específicamente, la R-Tiacumicina B o Tiacumicina B y sus compuestos relacionados. Particularmente, R-Tiacumicina B substancialmente puro, como un agente antibiótico potente para el tratamiento de infecciones bacterianas, específicamente infecciones GI causadas por la toxina que producen las cepas de Clostridium difficile (C. difficile) , Staphylococcus aureus (S. aureus) incluyendo el Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA) y Clostridium perfringens (C. perfringens) . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los macrocíclos son una clase terapéutica importante de antibióticos. Estos compuestos son frecuentemente producidos como una familia de congéneres biogenéticos cercanamente relacionados. Las Tiacumicinas son unas series de antibióticos macrocíclicos de 18 miembros en los cuales el anillo macrocíclico esta unido de manera glicosídica a uno o dos azucares. Un azúcar de siete carbonos se esterifica en varias posiciones con ácidos grasos pequeños. El otro azúcar, cuando esta presente, se esterifica con un isómero del ácido benzoico, ácido evernínico completamente substituido. (Journal of Liquid Chromatography, 1988, 11: 191-201). Las Tiacumicinas son una familia de compuestos relacionados que contienen el anillo de 18 miembros mostrado en la Fórmula I abajo.

Fórmula I En la actualidad, se han identificado varias Tiacumicinas distintas y seis de éstas (Tiacumicina A-F) se definen por su patrón particular de sustituyentes R1, R2 , y R3 (Patente Norteamericana de No. 4,918,174; J. Antibiotics, 1987, 40: 575-588), como se muestra en la Tabla 1. Tabla 1. Sustituyentes presentes en las Tiacumicinas A-F Las Tiacumicinas A-F se han caracterizado de manera espectroscópica y por otros métodos físicos. Las estructuras químicas de las Tiacumicinas se basan en la espectroscopia: UV-vis, IR y RMN de XH y 13C, ver por ejemplo J. Antibióticos, 1987, 40:575 - 588. La inspección de la Tabla 1 revela que ciertos miembros de la familia son isómeros estructuralmente relacionados y/o difieren por la presencia o la ausencia de ciertos radicales. Otros difieren en la naturaleza de sus grupos éster. Las Tiacumicinas se producen por bacterias, incluyendo la Dactylosporangium Aurantiacum subespecie Hamdenensis, la cual se puede obtener de la Colección de la Patente ARS del Centro de Investigación Regional del Norte, Departamento de Agricultura de los Estados Unidos, 1815 North University Street, Peoría, IL 61604, número de accesión NRRL 18085. Las características de la cepa AB 718C-41 se dan en J. Antibiotics, 1987, 40:567-574 y en la Patente Norteamericana de No. 4, 918, 174. La diarrea asociada a la C. difficile (CDAD) es una enfermedad caracterizada por diarrea severa y dolorosa. La C. difficile es responsable de aproximadamente 20% de los casos de diarrea asociada al antibiótico (AAD) y a la mayoría de los casos de colitis asociada al antibiótico (AAC) . Estas enfermedades son causadas típicamente por la toxina que producen las cepas de C. difficile, S. aureus incluyendo S. aureus resistente a la meticilina ( RSA) y Clostridium perfringens (C. perfringens) . La AAD representa una carga económica importante al sistema de salud que está estimada de manera conservativa en $3-6 mil millones por año en costos de exceso en los hospitales solo en Estados Unidos . Los enterococos resistentes a la Vancomicina, para la cual la colonización intestinal proporciona un depósito constante para la infección, también ha emergido como un patógeno de nosocomio mayor asociado a costos y a mortalidad crecientes en el cuidado de la salud. La VRE puede aparecer como coinfección en pacientes infectados con la C. difficile, o causar más comúnmente infección en ciertos pacientes de riesgo' elevado tales como pacientes de hematología y de oncología, pacientes en unidades de cuidado intensivo y pacientes que reciben trasplantes de órganos sólidos. Los estafilococos resistentes a la Meticilina, tales como la MRSA, están aumentando en predominio en ambos, hospitales y ambientes de la comunidad. Los estafilococos se encuentran en la piel y dentro de los tractos digestivos y respiratorios pero pueden infectar heridas abiertas y quemaduras y pueden progresar a una infección sistémica seria. La aparición de los estafilococos resistentes a múltiples fármacos, especialmente, en el hospital donde es frecuente el uso del antibiótico y la presión selectiva por los organismos resistentes a los fármacos es alta, ha evidenciado un desafío para tratar a estos pacientes. La presencia de la MRSA en la piel de pacientes y de trabajadores del cuidado de la salud promueve la transmisión de los organismos resistentes a múltiples fármacos . Enfermedades similares, incluyendo pero sin limitarse a la enterocolitis clostridial, diarrea neonatal, enterocolitis asociada al antibiótico, enterocolitis esporádica, y enterocolitis de nosocomio son también problemas significativos en algunas especies animales.

La AAD es un problema significativo en hospitales e instalaciones de cuidado de largo plazo y en la comunidad. La C. difficile es la causa principal de la AAD en el ambiente del hospital, considerando aproximadamente el 20% de los casos de AAD y la mayoría de casos de colitis asociada al antibiótico (AAC) . La incidencia creciente de la diarrea asociada a la Clostridium Difficile (CDAD) se ha atribuido a la prescripción frecuente de antibióticos de espectro amplio a pacientes hospitalizados. La forma más seria de la enfermedad es la colitis pseudomembranosa (PMC) , la cual se manifiesta de manera histológica por colitis con placas de mucosa, y de manera clínica por diarrea severa, calambres abdominales, y toxicidad sistémica. La razón de mortalidad total de CDAD es baja, pero es mucho mayor en pacientes quienes desarrollan colitis severa o toxicidad sistémica. Un estudio reciente ha mostrado que aun cuando la muerte no es directamente atribuible a la C. difficile, la razón de mortalidad en pacientes con CDAD con respecto a controles de casos correspondientes es mucho mayor. La diarrea y la colitis son causadas por la elaboración de una o más toxinas de la C.difficile . El organismo prolifera en el colon en pacientes a quienes se les ha dado antibióticos de espectro amplio o menos comúnmente, quimioterapia contra el cáncer. La CDAD se diagnostica en aproximadamente el 20% de los pacientes hospitalizados quienes desarrollan diarrea después del tratamiento con tales agentes. Actualmente hay dos terapias dominantes para la CDAD : vancomicina y metronidazol . La Vancomicina no se recomienda para tratamiento de primera línea de la CDAD principalmente porque es el único antibiótico activo contra algunas bacterias resistentes a múltiples fármacos que ponene en peligro la vida. Por lo tanto, en un esfuerzo por minimizar la aparición de la Enterococcus resistente a la vancomicina (VRE) o la S.aureus resistente a la vancomicina (VRSA) , la comunidad médica desalienta el uso de este fármaco excepto cuando es absolutamente necesario. El metronidazol se recomienda como terapia inicial sin preocupación para la promoción y la selección de la flora intestinal resistente a la vancomicina, especialmente la enterococci . A pesar de reportes de que la frecuencia de la resistencia de la C. difficile puede ser >6% en algunos países, el metronidazol sigue siendo casi tan eficaz como la vancomicina, es considerablemente menos costoso, y se puede utilizar de manera oral o de manera intravenosa. El metronidazol se asocia con efectos adversos significativos que incluyen náuseas, neuropatía, leucopenia, convulsiones, y una reacción tóxica al alcohol. Además, no es seguro para utilizarse en niños o mujeres embarazadas. La recurrencia clínica ocurre en hasta el 20% de los casos después del tratamiento con la vancomicina o el metronidazol . La terapia con metronidazol se ha reportado como un factor de riesgo importante para la colonización y la infección de la VRE . El régimen de tratamiento actual contra las infecciones gastrointestinales, por ejemplo, la diarrea asociada a la Clostridium difficile (CDAD) es bastante incómodo, requiriendo hasta 500 mg cuatro veces por día por 10 a 14 días. Así, existe la necesidad de un mejor tratamiento para los casos de la CDAD así como para los casos de otras diarreas asociadas al Antibiótico (AAD) y colitis asociadas al Antibiótico (AAC) . Las Tiacumicinas , específicamente la Tiacumicina B, muestran actividad contra una variedad de patógenos bacterianos y particularmente contra la C. difficile, una bacteria Gram-positiva (Antimicrob. Agents Chemother. 1991, 1108-1111) . La C. difficile es una bacteria que forma esporas, anaeróbica, que causa un infección de los intestinos. La diarrea es el síntoma más común pero también pueden ocurrir dolor abdominal y fiebre. La C. difficile es un agente causativo mayor de la colitis (inflamación del colon) y de diarrea que puede ocurrir después de la admisión del antibiótico. Esta bacteria se adquiere principalmente en hospitales e instalaciones de cuidado crónico. Debido a que la Tiacumicin B muestra actividad prometedora contra la C. difficile, se espera que sea útil en el tratamiento de infecciones bacterianas, especialmente aquellas del aparato gastrointestinal, en mamíferos. Ejemplos de tales tratamientos incluyen pero no se limitan al tratamiento de colitis y al tratamiento del síndrome del intestino irritable. Las Tiacumicinas pueden también encontrar uso para el tratamiento de cánceres gastrointestinales. Los antibióticos de Tiacumicina se describen en la Patente Norteamericana de No. 4,918,174 (expedida el 17 Abril de 1990), J. Antibiotics 1987, 40:575-588, J. Antibiotics 1987, 40: 567-574, J. Liquid Chromatography 1988, 11: 191-201, Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1991, 35: 1108-1111, Patente Norteamericana de No. 5,583,115 (expedida el 10 Diciembre de 1996), y la Patente Norteamericana de No. 5,767,096 (expedida el 16 de Junio de 1998), las cuales se incorporan aquí como referencia. Compuestos relacionados son los antibióticos de Lipiarmicina (c.f., J. Chem. Soc . Perkin Trans. I, 1987, 1353-1359 and J. Antibiotics 1988, 41: 308-315) y los antibióticos de Clostomicina (J. Antibiotics 1986, 39: 1407-1412), las cuales se incorporan aquí como referencia. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con nuevas composiciones farmacéuticas que contienen R-Tiacumicinas , específicamente la R-Tiacumicina B ópticamente pura, y al uso de estas nuevas composiciones conjuntamente con fármacos existentes para tratar infecciones provocadas por organismos anaerobios gram-positivos . Una modalidad de la presente invención esta dirigida hacia el descubrimiento de que el centro quiral en el C-19 de la Tiacumicina B tiene gran efecto en la actividad biológica. Ahora se ha descubierto que una preparación substancialmente pura de R-Tiacumicina B de actividad más alta, la cual tiene un grupo R-hidroxi en el C-19 tiene valores MIC asombrosamente muy bajos que el S- isómero ópticamente puro de la Tiacumicina B y de otros compuestos relacionados a la Tiacumicina B. En otra modalidad de la presente invención la R-Tiacumicina B substancialmente pura tiene una actividad post-antibiótica inusualmente larga (PAE) . Esta invención incluye la composición de nuevos agentes antibióticos, que contienen R-Tiacumicinas substancialmente puras, mediante fermentación aerobia sumergida del microorganismo Oactylosporangium aurantiacum subespecie hamdenensis . El método de producción esta cubierto por la WO 2004/014295 A2 , la cual se incorpora por este medio como referencia . BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra la estructura química de la R-Tiacumicina B por el Programa de Graficacion Elipsoide Térmico Oak Ridge (ORTEP) . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones El término "condición asociada al antibiótico" se refiere a una condición que resulta cuando la terapia con antibiótico altera el equilibrio de la flora microbiana del intestino, permitiendo que organismos patógenos tales como la enterotoxina que producen las cepas de C. difficile, S. aureus y C. perfringens florezcan. Estos organismos pueden causar diarrea, colitis pseudomembranosa , y colitis y se manifiestan por diarrea, urgencia, calambres abdominales, tenesmos, y fiebre entre otros síntomas. La diarrea, cuando es severa, causa deshidratación y las complicaciones médicas asociadas con la deshidratación. El término "asimétricamente substituido" se refiere a una estructura molecular en la cual un átomo que tiene cuatro valencias tetraédricas se une a cuatro átomos o grupos diferentes. Los casos más comunes involucran al átomo de carbono. En tales casos, resultan dos isómeros ópticos (enantiomeros D- y L- o enantiomeros R- y S-) por átomo de carbono, los cuales son imágenes en el espejo no superponibles uno del otro. Muchos compuestos tienen más de un carbono asimétrico. Esto da lugar a la posibilidad de muchos isómeros ópticos, siendo el número determinado por la fórmula 2n, donde n es el número de carbonos asimétricos. El término "caldo" como se utiliza aquí se refiere al medio de cultivo fluido como se obtiene durante o después de la fermentación. El caldo comprende una mezcla de agua, los antibióticos deseados, nutrientes sin usar, organismos vivos o muertos, productos metabólicos, y el adsorbente con o sin el producto fijado por adsorción. El término "Cetona de C-19" se refiere a un compuesto relacionado a la Tiacumicina B mostrado abajo en la fórmula II : Fórmula II El término "diastereomeros" se refiere a los estereoisómeros que no son imágenes en el espejo uno del otro. El término "enantiómero" se refiere a una imagen en el espejo no superponible de sí mismo. Un enantiómero de un isómero ópticamente activo rota la luz polarizada del plano en una dirección igual pero opuesta a la del isómero original. Una solución de partes iguales de un isómero ópticamente activo y de su enantiómero se conoce como una solución racémica y tiene una rotación neta de luz polarizada del plano de cero. Los enantiómeros tendrán los prefijos opuestos uno de otro: D- será L- o R- será S-. A menudo solamente un enantiómero es activo en un sistema biológico, debido a que la mayoría de las reacciones biológicas son enzimáticas y las enzimas pueden unir solamente a uno de los enantiómeros. El término "excipiente" se refiere a una sustancia inerte agregada a una composición farmacológica para facilitar más la administración de un compuesto. Ejemplos de excipientes incluyen pero no se limitan a, carbonato de calcio, fosfato de calcio, varios azúcares y tipos de almidón, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales y polietilenglicoles . El término "halógeno" incluye F, Cl , Br y I . El término "mezcla isomérica" significa una mezcla de dos o más especies químicas distintas de manera configuracional que tienen la misma fórmula química. Una mezcla isomérica es un género que comprende especies isoméricas individuales. Ejemplos de mezclas isoméricas incluyen estereoisómeros (enantiómeros y diastereómeros) , regioisómeros , que pueden resultar por ejemplo de una reacción pericíclica. Los compuestos de la presente invención comprenden átomos de carbono asimétricamente substituidos. Tales átomos de carbono asimétricamente substituidos pueden dar lugar a mezclas de estereoisómeros en un átomo de carbono asimétricamente substituido o un solo estereoisómero . Consecuentemente, las mezclas racémicas, mezclas de diastereómeros , además de los diastereómeros solos de los compuestos de la invención están incluidos en la presente invención. El término "Lipiarmicina A4" se refiere a un compuesto relacionado a la Tiacumicina B mostrado abajo en la fórmula III : Fórmula III El término "alquilo inferior" , solo o en combinación, se refiere a una cadena recta opcionalmente sustituida o a una cadena ramificada opcionalmente sustituida que tiene de 1 a aproximadamente 8 carbonos (por ejemplo, Ci, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8,) , más preferiblemente de 1 a 4 carbones (por ejemplo, Ci, C2, C3, C /) . Ejemplos de radicales de alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo. Un "alquilo inferior" es generalmente un alquilo más corto, por ejemplo, uno que contiene de 1 a aproximadamente 4 átomos de carbón (por ejemplo, Ci, C2, C3, C4, ) . El término "macrociclos" se refiere a moléculas orgánicas con estructuras de anillo largas que contienen generalmente más de 10 átomos. El término "macrociclos de 18 miembros" se refiere a moléculas orgánicas con estructuras de anillo que contienen 18 átomos . El término "con miembros en forma de anillos" puede comprender cualquier estructura cíclica, incluyendo carbociclos y heterociclos como los descritos anteriormente. El término "en forma de miembros" se refiere para denotar el número de átomos del esqueleto que constituyen el anillo. Así, por ejemplo, la piridina, pirano y tiopirano son anillos de 6 miembros y el pirrol, furano, y tiofeno son anillos de 5 miembros . El término "MIC" o "concentración inhibitoria mínima" se refiere a la concentración más baja de un antibiótico que es necesaria para inhibir el crecimiento de un aislado bacteriano in vitro. Un método común para determinar la MIC de un antibiótico es preparar varios tubos que contienen varias diluciones del antibiótico, que se inoculan entonces con el aislado bacteriano de interés. La MIC de un antibiótico se puede determinar a partir del tubo con la concentración más baja que no muestra ninguna turbidez (ningún crecimiento). El término "MIC50" se refiere a la concentración más baja del antibiótico requerida para inhibir el crecimiento del 50% de las cepas bacterianas probadas dentro de una especie bacteriana dada. El término "MIC90" se refiere a la concentración más baja del antibiótico requerida para inhibir el crecimiento del 90% de las cepas bacterianas probadas dentro de una especie bacteriana dada. El término "OPT-80" se refiere a una preparación que contiene aproximadamente 70-100%, preferiblemente, el 90% (con respecto a la sustancia antibiótica total, mediante ensayo por HPLC) de R-Tiacumicina B ópticamente pura (la cual tiene un grupo R-hidroxi en C-19, ver la fórmula IV) . Las porciones restantes consisten esencialmente de cantidades pequeñas de compuestos relacionados a la Tiacumicina B (que incluyen, pero no se limitan a la Lipiarmicina A4 y Cetona C-19) . Preparaciones de este tipo se describen en detalle en la solicitud de PCT PCT/US03/21977 , que tiene un número internacional de publicación WO 2004/014295 A2 y preparaciones las cuales se incorporan aquí como referencia. Sin embargo, para uso exclusivo riguroso en no humanos, puede usarse el "OPT-80" que contiene menos de 70% de R-Tiacumicina B ópticamente pura (con respecto a la sustancia antibiótica total, mediante ensayo por HPLC) . El término "ORTEP" se refiere al programa de computadora de Graficación Elipsoide Térmica Oak Ridge, escrito en Fortran, para dibujar ilustraciones de la estructura cristalina. Ilustraciones tipo esferas y varillas de una calidad conveniente para la publicación se producen ya sea con esferas o elipsoides de probabilidad de movimiento térmico, derivados de parámetros del factor de temperatura anisotrópico , en los sitios atómicos. El programa también produce pares estereoscópicos de ilustraciones que ayudan en la visualización de arreglos complejos de átomos y de sus patrones de movimiento térmico correlacionados. El término "PAE" o "efecto post -antibiótico" se refiere a un parámetro farmacodinámico bien establecido que refleja la supresión persistente del crecimiento bacteriano después de la exposición al antibiótico. El término "paciente" se refiere a un ser humano o a un animal con necesidad de tratamiento médico. Para los propósitos de esta invención, los pacientes humanos típicamente se institucionalizan en una instalación de cuidado médico primaria tal como un hospital u hospicio para ancianos. Sin embargo, el tratamiento de una enfermedad asociada con el uso de antibióticos o de quimioterapias para el cáncer o de terapias antivirales puede ocurrir en una base sin pasientes, luego de la liberación de una instalación de cuidado primaria, o se puede prescribir por un médico para el cuidado en el hogar, sin asociación con una instalación de cuidado medico primaria. Los animales en necesidad de tratamiento médico típicamente se encuentran en el cuidado de un veterinario. El término "portador aceptable farmacéuticamente" se refiere a un portador o a un diluyente que es aceptable farmacéuticamente . El término "sales aceptables farmacéuticamente" se refiere a aquellas derivadas de bases orgánicas e inorgánicas aceptables farmacéuticamente. Sales derivadas de bases apropiadas incluyen metales alcalinos (por ejemplo, sodio o potasio) , metales alcalino térreos (por ejemplo, magnesio) , amonio y sales de N (alquilo de Ci-C ) +, y similares. Ejemplos ilustrativos de algunas de éstas incluyen hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de colina, carbonato de sodio, y similares. El término "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de una o más de las Tiacumicinas descritas aquí, o a sales aceptables fisiológicamente de las mismas, con otros componentes químicos, tales como portadores y/o excipiente aceptables fisiológicamente. El propósito de una composición farmacéutica es facilitar la administración de un compuesto a un organismo. El término "portador aceptable fisiológicamente" se refiere a un portador o diluyente que no causa irritación significativa a un organismo y no anula la actividad y las propiedades biológicas del compuesto administrado. El término "colitis pseudomembranosa" o "enteritis" se refiere a la formación de material pseudomembranoso (es decir, material compuesto de fibrina, mucosa, células epiteliales necróticas y leucocitos) debido a la inflamación de la membrana mucosa de ambos intestinos delgado y grueso. Los términos de configuración "R" y "S" , como se utilizan aquí, son como se definen por las Recomendaciones de la IUPAC 1974 por la Sección E, Fundamental Stereochemistry, Puré Appl . Chern . (1976) 45, 13-30. Las moléculas quirales se pueden nombrar en base a los números atómicos de los átomos o a los grupos de átomos, los ligandos que se encuentran unidos al centro quiral . A los ligandos se les da una prioridad (cuanto más alto es el número atómico más alta es la prioridad) y sí las prioridades aumentan en una dirección en el sentido de las manecillas del reloj, se dice que son R. De otro modo, si se les da prioridad en una dirección contraria a las manecillas del reloj se dice que son S- . El término "R-Tiacumicina B" se refiere al isómero- (R) ópticamente puro de la Tiacumicina B con un grupo (R) -hidroxi en el C-19, como se muestra abajo en la Fórmula IV: OH Fórmula IV El término "S-Tiacumicina B" se refiere al isómero- (S) ópticamente puro de la Tiacumicina B con un grupo (S) -hidroxi en el C-19, como se muestra abajo en la Fórmula V: OH Fórmula V El término "estereoisómeros" se refiere a compuestos cuyas moléculas tienen el mismo número y tipo de átomos y el mismo arreglo atómico, pero difieren en su arreglo espacial. El término "azúcar" generalmente se refiere a mono-, di-u oligosacáridos . Un sacárido puede ser sustituido, por ejemplo, glucosamina, galactosamina, acetilglucosa, acetilgalactosa , N-acetilglucosamina , N-acetil -galactosamina , galactosil-N-acetilglucosamina, ácido N-acetilneuraminico (ácido siálico), etc., además de azucares sulfatadas y fosforiladas . Para los propósitos de esta definición, los sacáridos se encuentran en su forma de piranosa o furanosa. El término "Tiacumicina" como se utiliza aquí se refiere a una familia de compuestos los cuales comprenden el macrociclo de 18 miembros mostrado en la Fórmula I : Fórmula I El término "Tiacumicina B" como se utiliza aquí se refiere al macrocíclo de 18 miembros mostrado abajo en la Fórmula VI : Fórmula VI El término "rendimiento" como se utiliza aquí se refiere a una cantidad de Tiacumicina cruda reconstituida en metanol al mismo volumen que en caldo de fermentación original. El rendimiento se determina usando técnicas de HPLC estándar. El rendimiento se reporta en unidades de mg/L. Esta invención incluye la composición de nuevos agentes antibióticos, Tiacumicinas , mediante fermentación aeróbica sumergida del microorganismo Dactylosporangium aurantiacum subspecie hamdenensi . La producción del método esta cubierto por la WO 2004/014295 A2. La presente invención se relaciona con nuevas composiciones antibacterianas que contienen R-Tiacumicinas , específicamente la R-Tiacumicina B (la cual tiene un R-hidroxi en el C-19) y al uso de estas nuevas composiciones en combinación con fármacos existentes para tratar infecciones causadas por organismos anaerobios gram-positivos . La presente invención se relaciona además con la nueva preparación OPT-80 la cual contiene 70-100%, preferiblemente 90% (con respecto a la sustancia antibiotica total, por ensayo HPLC) de la R-Tiacumicina B. Las porciones restantes consisten esencialmente de cantidades pequeñas de compuestos relacionados a la Tiacumicina B (incluyendo, pero sin limitarse a lipiarmicina A4 y la Cetona C-19) . Preparaciones de este tipo se describen en detalle en la Solicitud PCT PCT/US03/21977 , que tiene un número de publicación internacional de WO 2004/014295 A2. Sin embargo, para uso exclusivo en no humanos, puede usarse el OPT-80 crudo que contiene menos de 70% de la R-Tiacumicina B (con respecto a la sustancia antibiotica total, por ensayo HPLC) . De acuerdo con la presente invención se proporcionan compuestos con la estructura de la Fórmula VII: Fórmula VII en donde : X se selecciona de alquilo inferior, y en donde el término "alquilo inferior" como se utiliza aquí se refiere a grupos alquilo de cadena ramificada o recta que comprenden uno a dos átomos de carbono, incluyendo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, y los similares; y Y se selecciona de OH o una cetona (=0) , y Z se selecciona de H o alquilo inferior y en donde el término "alquilo inferior" como se utiliza aquí se refiere a grupos alquilo de cadena ramificada o recta que comprenden de uno a cinco átomos de carbono, incluyendo metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, y los similares. Los compuestos preferidos de la invención son compuestos de la Fórmula VII en donde X es metilo o etilo, Y es cetona (=0) u OH y Z es isopropilo. Los compuestos más preferidos de la invención son los compuestos de la Fórmula VII en donde X es etilo, Y es cetona (=0) u OH, y Z es isopropilo. Los compuestos más preferidos de la invención son los compuestos de la Fórmula VII en donde X es etilo, Y es OH R y Z es isopropilo. Una modalidad de la presente invención esta dirigida hacia el descubrimiento de que el centro quiral en el C-19 de Tiacumicina B tiene gran efecto en la actividad biológica.

Ahora se ha descubierto que la R-Tiacumicina B, la cual tiene un grupo R-hidroxi en el C-19 tiene actividad significativamente más alta que la S-Tiacumicina B y que otros compuestos relacionados a la Tiacumicina B (Lipiarmicina A4 y Cetona C-19) . La actividad más alta se muestra por valores MIC mucho más bajos, los cuales pueden observarse abajo en el Ejemplo 3, Tablas 3 y 4 para varias cepas de C. difficile, S. aureus . E. Faecalis y E. Faecium. Este efecto del centro quiral C-19 en la actividad biológica es un descubrimiento nuevo e inesperado. En otra modalidad de la presente invención el OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de la R-Tiacumicina B) tiene un efecto post -antibiótico (PAE) inusualmente largo. Esto se discute en el Ejemplo 4, donde éste muestra que el OPT-80 tiene un PAE de más de 24 horas. Este PAE es inesperadamente más largo que el PAE del antibiótico usual de 1-5 horas. La presente invención también se relaciona a la divulgación de composiciones farmacéuticas, que comprenden un compuesto de la presente invención en combinación con un portador aceptable farmacéuticamente. Aún otro aspecto de la invención divulga un método de inhibición o tratamiento de infecciones bacterianas en humanos, que comprende administrar al paciente una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto de la invención solo o en combinación con otro agente antibacterial o antifúngico. Producción Los macrociclos de 18 miembros y análogos de los mismos se producen por fermentación. La cultivación de Dactylosporangium aurantiacum subspecie hamdenensis AB 718C-41 NRRL 18085 para la producción de las Tiacumicinas se lleva a cabo en un medio que contiene fuentes de carbono, sales inorgánicas y otros ingredientes orgánicos con uno o más absorbentes bajo condiciones de aireación apropiada y mezclado en un ambiente estéril. El microorganismo para producir los agentes antibacterianos activos se identificaron como pertenecientes a la familia Actinoplanaceae , género Dactylosporangium (Journal of Antibiotics, 1987, 40; 567-574 y la Patente Norteamericana 4,918,174) . Éste ha sido designado Dactylasporangium aurantiacum subespecies hamdenensis 718C-41. El subcultivo se obtuvo de ARS Patent Collection of the Northern Regional Research Center, United States Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoría, IL. 61604, USA., donde se le asignó número de acceso NRRL 18085. Las características de la cepa AB 718C-41 se dan en el Journal of Antibiotics, 1987, 40, 567-574 y la Patente Norteamericana 4,918,174.

Esta invención incluye la composición de nuevos agentes antibióticos, Tiacumicinas , mediante fermentación aeróbica sumergida del microorganismo Dactylosporangium aurantiacum subspecie ha denensis . El método de producción esta cubierto por la WO 2004/014295 A2 , la cual se incorpora por medio de esta como referencia. Formulación Farmacéutica y Administración Las composiciones farmacéuticas de los compuestos de Tiacumicina de la presente invención, específicamente el OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de la R-Tiacumicina) de acuerdo a la invención puede formularse sustancialmente de manera inmediata luego de la administración o en cualquier momento predeterminado o periodo de tiempo después de la administración. Los últimos tipos de composiciones generalmente se conocen como formulaciones de liberación modificadas, las cuales incluyen formulaciones que crean una concentración sustancialmente constante del fármaco dentro del tracto intestinal durante un periodo de tiempo extendido y formulaciones que tienen características de liberación modificadas con base en el criterio temporal o ambiental de acuerdo a lo descrito en Modified-Release Drug Delivery Technology, ed. M. J. Rathbone, J. Hodgraft and M.S. Roberts. Marcel Dekker, Inc. New York.

En los métodos de la invención puede emplearse cualquier forma de dosificación oral biológicamente aceptable. Ejemplos de tales formas de dosificación incluyen, sin limitación, tabletas masticables, tabletas de disolución rápida, tabletas efervescentes, polvos reconstituibles , elixires, líquidos, supositorios, cremas, soluciones, suspensiones, emulsiones, tabletas, tabletas multicapas, tabletas bi-capa, capsulas, capsulas de gelatina suave, capsulas de gelatina dura, tabletas osmóticas, capsulas osmóticas, capsuletas, pastillas, gotas, polvos, gránulos, partículas, microparticulas , gránulos dispersables , ingeribles, infusiones, barras saludables, preparaciones, alimentos para animales, cereales, recubrimientos de cereales, alimentos, alimentos nutritivos, alimentos funcionales y combinaciones de los mismos. La preparación de cualquiera de las formas de dosificación anteriores es bien conocida por personas de habilidad ordinaria en el arte. Adicionalmente , las formulaciones farmacéuticas pueden diseñarse para proporcionar ya sea, liberación inmediata o controlada del antibiótico luego de alcanzar el sitio objetivo. La selección de composiciones de liberación inmediata o controlada depende de una variedad de factores que incluyen la susceptibilidad de las especies y el antibiótico de la bacteria Gram-positiva que se trate y de las características bacteriostáticas/bactericidas de los terapéuticos. Métodos bien conocidos en el arte para fabricar las formulaciones se encuentran, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed) , ed. A.R. Gennaro, 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, o en Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds , J. Swarbrick and J.C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York.

Las formulaciones de liberación inmediata para uso oral incluyen tabletas o capsulas que contienen el ingrediente (s) activo en una mezcla con excipientes aceptables farmacéuticamente, no tóxicos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes o rellenadotes (por ejemplo, sucrosa, sorbitol, azúcar, manitol, celulosa microcristalina, almidones incluyendo almidón de papa, carbonato de calcio, cloruro de sodio, lactosa, fosfato de calcio, sulfato de calcio, o fosfato de sodio) ; agentes de granulación o desintegración (por ejemplo, derivados de celulosa que incluyen celulosa microcristalina, almidones que incluyen almidón de papa, croscarmelosa de sodio, alginatos, o ácido alginico) ; agentes de aglutinación (por ejemplo, sucrosa, glucosa, manitol, sorbitol, acacia, ácido alginico, alginato de sodio, gelatina, almidón, almidón pregelatini zado , celulosa microcristalina, silicato de aluminio magnesio, sodio de carboximetilcelulosa, metilcelulosa , metilcelulosa de hidroxipropilo, etilelulosa, polivinilpirrolidona o polietilenglicol) ; y agentes de lubricación, deslizantes y antiadhesivos (por ejemplo, estearato de magnesio, estearato de zinc, ácido esteárico, sílice, aceites vegetales hidrogenados o talco) . Otros agentes aceptables farmacéuticamente pueden ser colorantes, agentes saborizantes , plastificantes , humectantes, agentes de amortiguación y los similares se encuentran, por ejemplo, en The Handbook of Pharmaceuticals Excipients, tercera edición, editado por Arthur H. Kibbe, American Pharmaceutical Association Washington DC . La liberación por disolución o difusión controlada puede lograrse por recubrimiento apropiado de una formulación de tableta, capsula, pildora, o granulado de los compuestos o incorporando el compuesto en una matriz apropiada. Un recubrimiento de liberación controlada puede incluir una o más de las sustancias de recubrimiento mencionadas anteriormente y/o por ejemplo, shellac, cera de abeja, cera de glicol, cera de ricino, cera de carnauba, alcohol de estearilo, monoestearato de glicerilo, diestearato de glicerilo, palmitoestearato de glicerilo, etilcelulosa, resinas acrílicas, ácido dipoliláctico, butirato de acetato de celulosa, cloruro de polivinilo, acetato de polivinilo, vinil pirrolidona, polietileno, polimetacrilato , metilmetacrilato, 2 -hidroximetacrilato, hidrogeles de metacrilato, 1,3- butilenglicol , etilenglicol metacrilato y/o polietilenglicoles . En una formulación de matriz de liberación controlada, el material de la matriz también puede incluir, por ejemplo, metilcelulosa hidratada, cera de carnauba y alcohol de estearilo, carbopol 934, silicona, triestearato de glicerilo, metil acrilato-metil metacrilato, cloruro de polivinilo, polietileno y/o fluorocarbono halogenado. Una composición de liberación controlada puede también estar en la forma de una tableta o capsula boyante (es decir, una tableta o capsula que, luego de la administración oral, flota en la parte superior del contenido gástrico por un cierto periodo de tiempo) . Una formulación de tableta flotante del compuesto (s) puede prepararse granulando una mezcla de antibiótico con excipientes y 20-75% peso/peso de hidrocoloides , tales como la hidroxietilcelulosa , hidroxipropilcelulosa o la hidroxipropilmetilcelulosa . Los gránulos obtenidos pueden entonces comprimirse en tabletas. En contacto con el jugo gástrico, la tableta forma una barrera de gel impermeable al agua alrededor de su superficie. Esta barrera de gel toma parte en el mantenimiento de una densidad de menos de uno, permitiendo por medio de esto que la tableta permanezca flotante en el jugo gástrico. En el arte se conocen otras composiciones de liberación controlada útiles (vea por ejemplo, las Patentes Norteamericanas de Nos. 4,946,685 y 6, 261, 601) . Una composición de liberación modificada puede estar comprendida de un núcleo revestido por compresión cuya configuración geométrica controla el perfil de liberación del antibiótico encapsulado. Variando la geometría del núcleo, puede ajustarse el perfil de liberación del antibiótico para seguir una orden de cero, primer orden o una combinación de estas ordenes. El sistema también puede diseñarse para liberar más agentes benéficos al mismo tiempo, teniendo cada uno un perfil de liberación diferente (vea, por ejemplo las Patentes Norteamericanas de Nos. 4,111,202 y 3,279,995). También pueden prepararse formulaciones que tienen como objetivo los compuestos de Tiacumicina de la presente invención, específicamente el OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de la R-Tiacumicina) , que libera a regiones particulares del tracto intestinal . Los compuestos de Tiacumicina de la presente invención, específicamente el OPT-80, pueden encapsularse en un recubrimiento entérico que previene la degradación de la liberación y que la liberación ocurra en el estomago, pero que se disuelva fácilmente en medio medianamente ácido o de pH neutral del intestino pequeño. También puede utilizarse una formulación dirigida para la liberación del antibiótico al colon, utilizando tecnologías tales como las dependientes del tiempo, dependientes del pH, o por erosión enzimática de la matriz de polímero o de recubrimiento. Las propiedades de liberación dirigida de los compuestos de Tiacumicina de la presente invención, específicamente el OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de R-Tiacumicina B) que contiene la formulación pueden modificarse por otros medios. Por ejemplo, el antibiótico puede ser formado como complejo por inclusión, asociación iónica, enlace por hidrógeno, enlace hidrofobico, o por enlace covalente. Además, también pueden utilizarse polímeros o complejos susceptibles a lisis enzimática o microbiana como medios para liberar el fármaco. La encapsulación en microesferas de los compuestos de Tiacumicina de la presente invención, específicamente el OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de R-Tiacumicina B) es otra formulación farmacéutica útil para la liberación del antibiótico dirigido al objetivo. Las microesferas que contienen el antibiótico pueden usarse solas para la liberación del antibiótico, o como un componente de una formulación de liberación de dos etapas. Las formulaciones de liberación por etapas convenientes pueden consistir de microesferas estables al ácido, que encapsulan los compuestos de la presente invención, específicamente el OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de R-Tiacumicina B) a liberarse después en el tracto intestinal inferior mezclados con una formulación de liberación inmediata para liberar el antibiótico al estomago y al duodeno superior. Las microesferas pueden fabricarse por cualquier método apropiado, o a partir de cualquier material aceptable farmacéuticamente. Particularmente útiles son las microesferas proteinoides (vea por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 5,601,846 y 5,792,451) y las microesferas que contienen PLGA (vea por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 6,235,224 o 5,672,659) . Otros polímeros comúnmente usados en la formación de microesferas incluyen, por ejemplo, ????-e-caprolactona , poli (e-caprolactona-Co-DL-ácido láctico) , poli (DL-ácido láctico), poli (DL-ácido láctico-Co-ácido glicolico) y poli (s-caprolactona-Co-ácido glicolico) (vea, por ejemplo, Pitt et al., J. Pharm. Sci . , 68:1534, 1979). Las microesferas pueden fabricarse por procedimientos bien conocidos en el arte incluyendo secado por aspersión, coacervación, y emulsificación (vea por ejemplo, Davis et al., Microsphere and Drug Therapy, 1984, Elsevier, Benoit et al., Biodegradable icrospheres : Advances in Production Technologies, Capitulo 3, ed. Benita, S, 1996, Decaer, Nueva Cork; Microencapsulation and Related Drug Processes, Ed.

Deasy, 1984, Decker, New York; Patente Norteamericana No. 6, 365, 187) . Los polvos, polvos dispersables o gránulos convenientes para la preparación de soluciones acuosas o suspensiones de los compuestos de Tiacumicina de la presente invención, específicamente del OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de R-Tiacumicina B) mediante la adición de agua son formas de dosificación convenientes para la administración oral . La formulación como una suspensión proporciona al ingrediente activo en una mezcla con un agente de dispersión o humectante, agente de suspensión, y uno o más preservativos. Agentes de dispersión o humectantes convenientes son, por ejemplo, fosfatidas que ocurren de manera natural (por ejemplo, leeitina o productos de condensación de óxido de etileno con un ácido graso, un alcohol alifático de cadena larga o un éster parcial derivado de ácidos grasos) y un hexitol o un anhídrido de hexitol (por ejemplo, estearato de polioxietileno, monooleato de sorbitol de polioxietileno, monooleato de sorbitan de polioxietileno y los similares) . agentes de suspensión convenientes son, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa , alginato de sodio, y los similares. EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se proporcionan a manera de descripción de modalidades específicas de la presente invención sin pretender limitar en ningún modo el alcance de la invención.

Ejemplo 1- Estructura Exacta de R-Tiacumicina B La estructura exacta de la R-Tiacumicina B (el componente mayor más activo del OPT-80) se muestra abajo en la Fórmula IV. La estructura de cristal de rayos X de la R-Tiacumicina B se obtuvo a partir de un cristal en forma de paralelepípedo, incoloro (0.08 x 0.14 x 0.22 mm) desarrollado en metanol y se muestra como un diagrama ORTEP en la Figura 1. Esta estructura de rayos x confirma la estructura mostrada en la Fórmula IV.

El nombre químico oficial es 3- [ [ [6-Desoxi-4-0- (3 , 5-dicloro-2- etil-4 , 6 -dihidroxibenzoil ) -2 -O-metil - ß-D-mannopiranosil] oxi] - metil] -12 (R) - [ [6-desoxi-5-C-metil-4-0- (2-metil-l-oxopropil) -ß- D-lixo-hexopiranosil] oxi] - 11 ( S) -et il - 8 ( S) -hidroxi-18 (S) - (1 (R) - hidroxietil ) - 9 , 13 , 15- trimetiloxaciclooctadeca-3 ,5,9,13,15- pentaeno-2 -ona .

OH Fórmula IV Ejemplo 2 - Datos Analíticos del OPT-80 y Sustancias Relacionadas Los datos analíticos del OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de R-Tiacumicina , el cual es el componente más activo del OPT-80) y tres compuestos relacionados (S- Tiacumicina B, Lipiarmicina A4 , y Cetona C-19) se resumen abajo. Las estructuras de estos compuestos se muestran en la fórmula VIII y en la Tabla 2 abajo.

Fórmula VIII Tabla 2 : Estructura de la R-Tiacumicina B (el mayor componente más activo del OPT-80) y sustancias relacionadas Compuesto X Y Z R-Tiacumicina B Etilo (R) -OH Isopropilo S-Tiacumicina B Etilo (S) -OH Isopropilo Lipiarmicina A4 Metilo (S) -OH Isopropilo Cetona C-19 Etilo =0 Isopropilo Datos analíticos de la R-Tiacumicina B Punto de fusión 166-169 °C (aguja blanca de isopropanol) ; [a]D20 -6.9 (c 2.0, MeOH) ; MS m/z (ESI) 1079.7 (M+Na) +; RMN RMN XH XH (400 MHz, CD3OD) d 7.21 (d, IH) , 6.59 (dd, IH) , 5.95 (ddd, IH) , 5.83 (br s, IH) , 5.57 (t, IH) , 5.13 (br d, IH) , 5.09 (t, IH) , 5.02 (d, IH) , 4.71 (m, IH) , 4.71 (br s, IH) , 4.64 (br s, IH) , 4.61 (d, IH) , 4.42 (d, IH) , 4.23 (m, IH) , 4.02 (penteto, IH) , 3.92 (dd, IH) , 3.73 (m, 2H) , 3.70 (d, IH) , 3.56 (s, 3H) , 3.52-3.56 (m, 2H) , 2.92 (m, 2H) , 2.64-2.76 (m, 3H) , 2.59 (hepteto, IH) , 2.49 (ddd, IH) , 2.42 (ddd, IH) , 2.01 (dq, IH) , 1.81 (s, 3H) , 1.76 (s, 3H) , 1.65 (s, 3H) , 1.35 (d, 3H) , 1.29 (m, IH) , 1.20 (t, 3H) , 1.19 (d, 3 H) , 1.17 (d, 3H) , 1.16 (d, 3 H) , 1.14 (s, 3H) , 1.12 (s, 3H) , 0.87 (t, 3H) ; RMN 13C (100 MHz, CD3OD) d 178.4, 169.7, 169.1, 154.6, 153.9, 146.2, 143.7, 141.9, 137.1, 137.0, 136.4, 134.6, 128.5, 126.9, 125.6, 124.6, 114.8, 112.8, 108.8, 102.3,97.2, 94.3, 82.5, 78.6, 76.9, 75.9, 74.5, 73.5, 73.2, 72.8, 71.6, 70.5, 68.3, 63.9, 62.2, 42.5, 37.3, 35.4, 28.7, 28.3, 26.9, 26.4, 20.3, 19.6, 19.2, 18.7, 18.2, 17.6, 15.5, 14.6, 14.0, 11.4.

Datos analíticos de la S-Tiacumicina B .

Fórmula II (Cetona de C-19) Fórmula V (S-Tiacumicina B) Se agregó NaBH4 (9 eq, 48 mg) en tres porciones a una solución de Cetona C-19 (150 mg) en 3 mL de MeOH. Después de 1 hora, se agregó solución de NH4C1 saturada. La mezcla se extrajo con CHC13, y entonces se concentró. La S-Tiacumicina B se purificó por YMC-pack ODS-A 75x30mm I.D. column (H20 : eOH : AcOH 28:72:1) produciendo 35 mg puros de S-Tiacumicina B pura. MS m/z 1074.5 (M + NH4)+; RMN de XH (400 MHz , CDC13) d 7.15 (d, J= 11.4 Hz, IH) , 6.58 (dd, J= 14.1, 11.4 Hz, IH) , 5.82 (ddd, J= 14.1, 10.6, 3.5 Hz, IH) , 5.78 (s, IH) , 5.40 (dd, J= 7.8, 7.8 Hz, IH) , 5.15 (dd, J = 9.5, 9.5 Hz, IH) , 5.01 (d, J = 9.9 Hz, IH) , 5.01 (d, J = 9.9 Hz, IH) , 4.77 (ddd, J = 5.8, 5.3, 5.3 Hz, IH) , 4.68 (d, J= 11.6 Hz, IH) , 4.65 (br s, IH) , 4.62 (br s, IH) , 4.42 (d, J = 11.6 Hz, IH) , 4.28 (br s, IH) , 4.07-3.97 (m, 2H) , 3.74-3.58 (m, 4H) , 3.61 (s, 3H) , 3.52 (dq, J = 9.5, 5.8 Hz, IH) , 3.08 (dq, J= 12.6, 6.1 Hz, IH) , 3.01 (dq, J= 12.6, 6.1 Hz, IH) , 2.77-2.65 (m, 2H) , 2.60 (heptet, J = 6.9 Hz, IH) , 2.55-2.44 (m, 3H) , 1.95-1.84 (ra, IH) , 1.80 (s, 3H) , 1.76 (s, 3H) , 1.66 (s, 3H) , 1.34 (d, J = 5.8 Hz, 3H) , 1.29-1.24 (m, IH) , 1.27 (d, J = 6.6 Hz, 3H) , 1.21 (t, J= 6.1 Hz, 3H) , 1.19 (d, J= 6.9 Hz, 3H) , 1.18 (d, J= 6.9 Hz, 3H) , 1.15 (s, 3H) , 1.10 (s, 3H) , 0.84 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; RMN de 13C (100 MHz, CDCl3) d 177.4, 170.1, 168.8, 157.6, 152.8, 144.4, 143.1, 141.1, 136.7, 136.2, 134.9, 133.8, 128.7, 125.7, 125.2, 123.0, 113.9, 107.5, 107.2, 101.7, 94.9, 92.6, 80.8, 79.2, 76.6, 74.8, 73.5, 72.7, 71.9, 71.7, 70.2, 70.1, 69.5, 63.5, 62.3, 41.5, 36.6, 34.3, 29.5, 28.2, 26.2, 26.0, 19.4, 19.3, 18.9, 18.5, 17.8, 17.3, 15.3, 14.1, 13.7, 11.1; Datos analíticos de la Lipiarmicina A4 MS m/z 1060.5 (M + NH4)+; RMN de XH (400 Hz, CDC13) d 7.12 (d, J = 11.6 Hz, IH) , 6.59 (dd, J = 14.1, 11.6 Hz, IH) , 5.85 (br s, IH) , 5.83 (ddd, J= 14.1, 10.6, 4.8 Hz, IH) , 5.47 (dd, J= 8.3, 8.3 Hz, IH) , 5.12 (dd, J= 9.6, 9.6 Hz, IH) , 5.00 (d, J= 10.1 Hz, IH) , 4.98 (br d, J= 10.6 Hz, IH) , 4.75-4.69 (m, IH) , 4.68 (d, J= 11.4 Hz, IH) , 4.66 (br s, IH) , 4.62 (br s, IH) , 4.40 (d, J= 11.4 Hz, IH) , 4.26 (br s, IH) , 4.07-4.00 (m, IH) , 4.02 (br d, J= 3.3 Hz, IH) , 3.75-3.61 (m, 4H) , 3.62 (s, 3H) , 3.55 (dq, J = 9.6, 6.1 Hz, IH) , 2.82-2.45 (m, 6H) , 2.60 (s, 3H) , 2.07-1.97 (m, IH) , 1.92 (s, 3H) , 1.81 (s, 3H) , 1.67 (s, 3H) , 1.32 (d, J= 6.1 Hz, 3H) , 1.30-1.22 (m, IH) , 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 3H) , 1.19 (d, J= 7.1 Hz, 3H) , 1.18 (d, J= 7.1 Hz, 3H) , 1.15 (s, 3H) , I.10 (s, 3H) , 0.83 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; RMN de 13C (100 MHZ, CDC13) d 177.4, 170.5, 168.9, 157.8, 153.0, 144.3, 140.9, 137.7, 137.0, 136.3, 134.6, 134.4, 129.1, 127.9, 125.3, 123.2, 114.5, 107.4, 107.0, 101.8, 94.7, 92.5, 80.3, 79.6, 76.7, 74.9, 73.5, 72.7, 71.9, 71.6, 70.2, 70.1, 69.1, 63.6, 62.3, 41.9, 36.9, 34.4, 28.8, 28.2, 25.9, 20.0, 19.3, 19.0, 18.6, 18.5, 17.8, 17.2, 15.5, 13.8. 11.2; Datos analíticos de la Cetona C-19 S m/z 1072.5 (M + NH4) + ; RMN de XH (400 MHz, CDC13) 5 7.27 (d, J= 11.4 Hz, IH) , 6.61 (dd, J= 14.7, 11.4 Hz, IH) , 5.91 (ddd, J= 14.7, 9.1, 5.8 Hz, IH) , 5.83 (s, IH) , 5.31 (dd, J= 7.9, 7.9 Hz , IH) , 5.14 (dd, J= 9.7, 9.7 Hz, IH) , 5.06 (d, J= 10.6 Hz, IH) , 5.00 (d, J= 10.1 Hz, IH) , 4.98 (dd, J = 7.1, 4.8 Hz, IH) , 4.67 (d, J= II.9 Hz, IH) , 4.66 (br s, IH) , 4.61 (br s, IH) , 4.42 (d, J= 11.9 Hz, IH) , 4.30 (br s, IH) , 4.02 (br d, J= 3.3 Hz, IH) , 3.63-3.60 (m, 4H) , 3.62 (s, 3H) , 3.51 (dq, J = 9.7, 6.1 Hz, IH) , 3.09 (dq, J = 14.4, 7.3 Hz, IH) , 3.03 (dq, J = 14.4, 7.3 Hz, IH) , 2.76-2.50 (m, 6H) , 2.21 (s, 3H) , 1.93-1.87 (m, IH) , 1.87 (s, 3H) , 1.75 (s, 3H) , 1.63 (s, 3H) , 1.32 (d, J= 6.1 Hz, 3H) , 1.27-1.22 (m, IH) , 1.21 (t, J= 7.3 Hz , 3H) , 1.19 (d, J= 7.1 Hz, 3H) , 1.18 (d, J= 7.1 Hz, 3H) , 1.14 (s, 3H) , 1.10 (s, 3H) , 0.84 (t , J= 7.3 Hz, 3H) ; RMN de 13C (100 MHz , CDCl3) d 205.5, 177.4, 170.1, 166.9, 157.6, 152.8, 145.7, 143.1, 142.0, 137.1, 136.8, 135.5, 133.7, 128.3, 124.8, 124.0, 122.8, 113.9, 107.3, 107.2, 101.3, 94.8, 92.4, 80.4, 77.7, 76.6, 74.7, 73.5, 72.6, 71.8, 71.7, 70.2, 70.0, 63.0, 62.3, 41.5, 36.5, 34.3, 29.6, 28.1, 26.2, 26.1, 26.0, 19.2, 18.9, 18.5, 17.8, 17.3, 15.2, 14.0, 13.3, 11.0 Ejemplo 3: Actividad Biológica Valores de MIC determinados para varias cepas de C. díffícile El OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de R- Tiacumicina B) y sus compuestos relacionados se probaron contra el C. difficile. Los valores MIC se reportaron abajo en la Tabla 3. Como podemos observar, el OPT-80 fue específicamente activo cuando se comparó a la S-Tiacumicina B y a la Lipiarmicina A4.

Tabla 3: MIC versus cepas de C. difficile Cepas de C. OPT-80 S- Lipiarmicina Cetona C- difficile (compuesto Tiacumicina A4 19 casi enteramente de R- Tiacumicina B) ATCC 9689 0.03 0.125 0.06 0.06 ATCC 43255 0.125 1 0.5 0.5 ATCC 17857 0.03 0.25 0.06 nd LC #1 0.125 1 0.5 0.5 (aislado clínico) Valores MIC determinados para varios microorganismos El OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de R- Tiacumicina B) y sus compuestos relacionados se probaron contra otros varios patógenos. Los valores MIC se reportan abajo en la Tabla 4. Como podemos observar, el OPT-80 fue especialmente activo cuando se comparó a la S-Tiacumicina B y a la Lipiarmicina A4. Tabla 4: MIC ( g/ml) contra otros microorganismos # de ID Organismo OPT-80 (compuesto S-Tiacumicina Lipiarmicina de Cepa casi enteramente B A4 de R-Tiacumicina B) 1 S . aureus 4 64 8 (ATCC 29213) 2 S . aureus 4 64 16 (MRSA) 3 S . aureus 4 64 8 (MRSA) 4 E. faecalis 2 8 2 (ATCC) 5 E. faecalis 4 32 16 Resistente a la Vane. 6 E. faecalis 1 16 4 Resistente a la Vane . 7 E. faecalis 1 8 4 Resistente a la Vane . 8 E. faecalis 1 32 32 Resistente a la Vane .

Ejemplo 4 : Efecto Post-Antibiotico del OPT-80 en C. difflcile El efecto post-antibiótico (PAE) del OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de la R-Tiacumicina B) se midió contra dos cepas de C. difficile, ATCC 43255 y un aislado clínico, LC3. Adicionalmente se probaron la vancomicina y la rifampina versus el LC3. El PAE a 4x de MIC se observó extremadamente largo: mayor de 24 horas para ambas cepas. Debido a larga duración de este efecto, no se calculó un PAE exacto. La vancomicina por otro lado tuvo un PAE más normal de menos de una hora cuando se uso a 4x la MIC versus la cepa LC3. Ejemplo 5: Actividad In Vi ro del OPT-80 La eficacia in vitro del OPT-80 (el cual esta compuesto casi enteramente de la R-Tiacumicina B) , el metronidazol y la vancomicina se ensayaron versus 110 aislados clínicos genéticamente distintos de la C. difficile vía dilución de agar. Los datos de la MIC se presentan en las Tablas 5 y 6. Tabla 5. Media geométrica, rangos de MIC, valores de MIC50 y MICgo para el OPT-80 contra 110 aislados clínicos de C. difficile, vancomicina y metronidazol, en g/mL. Rango Media geométrica MIC50 MIC90 OPT-80 0.015-0.25 0.08 0.125 0.125 Metronidazol 0.025-0.5 0.15 0.25 0.25 Vancomicina 0.06-4 0.8 1 1 Tabla 6. Datos de MIC sin procesar para el OPT-80, vancomicina (VAN) y metronidazol (MTZ) versus 110 aislados clínicos de C. difficile, en g/mL.

ORG ID OPT-80 MTZ VAN ORG ID OPT-80 MTZ VAN Al 1535 0.125 0.25 1 COI 4652 0.25 0.125 1 AB1 832 0.06 0.125 1 CP1 5491 0.125 0.25 1 DI 1360 0.03 0.25 1 61 5930 0.03 0.25 1 El 816 0.06 0.125 1 63 6029 0.25 0.25 0.06 Fl 1015 0.125 0.125 1 64 5940 0.125 0.25 1 Gl 1077 0.125 0.125 1 65 5967 0.06 0.25 0.5 11 1389 0.125 0.125 1 66 6366 0.015 0.125 0.5 Jl 5971 0.06 0.25 1 67 6367 0.125 0.25 1 J7 4224 0.03 0.125 1 68 6368 0.03 0.125 0.06 J9 4478 0.06 0.125 1 69 6370 0.25 0.25 0.5 Kl 4305 0.125 0.25 0.5 70 6376 0.125 0.25 2 K14 5780 0.125 0.125 1 71 6379 0.125 0.25 1 Ll 1423 0.125 0.125 0.5 72 6380 0.125 0.25 2 NI 471 0.125 0.125 0.5 73 6382 0.25 0.25 1 01 1861 0.06 0.125 1 75 6388 0.125 0.125 0.5 Rl 397 0.125 0.125 1 76 6389 0.125 0.25 0.5 R6 6015 0.015 0.25 2 77 6390 0.06 0.125 1 VI 1521 0.125 0.125 0.5 78 6392 0.015 0.03 0.5 Wl 3931 0.125 0.5 1 80 6327 0.125 0.125 0.5 XI 1890 0.125 0.125 1 81 6328 0.125 0.125 0.5 Yl 5639 0.06 0.125 0.5 82 6329 0.06 0.03 0.5 Y2 1459 0.06 0.125 1 83 6330 0.06 0.125 0.5 Zl 3036 0.03 0.125 1 84 6331 0.125 0.25 0.5 AA2 4380 0.015 0.125 1 85 6332 0.06 0.125 1 AB2 1725 0.06 0.125 1 86 6333 0.03 0.125 0.5 AC1 1546 0.06 0.125 1 87 6334 0.125 0.125 0.5 AF1 1808 0.125 0.125 0.5 88 6335 0.125 0.25 0.5 AGI 3044 0.125 0.125 1 89 6336 0.25 0.5 1 AHI 3430 0.125 0.25 0.5 90 6338 0.125 0.125 1 AJI 1557 0.06 0.125 1 91 6339 0.125 0.125 1 AL1 1753 0.06 0.125 0.5 93 6341 0.125 0.125 1 AN1 464 0.125 0.125 0.5 94 6343 0.015 0.06 0.5 AOl 287 0.125 0.125 1 95 6347 0.125 0.125 1 ORG ID OPT-80 MTZ VAN ORG ID OPT-80 MTZ VAN ASI 4099 0.125 0.125 1 96 6348 0.06 0.125 0.5 ATI 1216 0.125 0.125 1 97 6349 0.25 0.125 1 AVI 941 0.25 0.125 0.5 98 6350 0.125 0.5 1 CJ1 893 0.125 0.025 1 101 6354 0.015 0.06 1 AW1 4501 0.125 0.125 1 102 6355 0.016 0.125 1 BE1 4307 0.125 0.25 1 103 6068 0.06 0.125 1 BH1 4506 0.06 0.06 0.5 104 6060 0.03 0.25 1 BU 1675 0.125 0.125 1 105 6071 0.03 0.125 0.5 BK1 4291 0.125 0.125 0.5 106 6078 0.03 0.25 0.5 BL1 716 0.125 0.125 1 107 6079 0.06 0.125 0.5 BM1 1453 0.06 0.125 1 109 6274 0.015 0.125 1 BN1 1322 0.125 0.25 1 111 6279 0.03 0.125 1 BR1 1321 0.06 0.125 1 112 6280 0.06 0.125 0.5 BT1 706 0.06 0.125 1 113 6304 0.06 0.125 1 BV1 1183 0.125 0.25 1 114 386 0.06 0.125 4 BW1 3130 0.125 0.125 1 115 5985 0.015 0.25 2 BX1 4271 0.125 0.25 1 116 5702 0.06 0.125 1 CN1 667 0.25 0.25 1 117 6026 0.06 0.125 2 CB1 1584 0.25 0.125 1 120 6057 0.03 0.25 1 CF1 5922 0.125 0.125 1 121 6072 0.06 0.25 0.5 CG1 1566 0.125 0.125 1 122 6111 0.25 0.25 0.5 CL1 3851 0.25 0.125 1 100 6353 0.125 0.25 1 Ejemplo 6: Actividad del OPT-80 Comparada Contra Especies Anaeróbicas Seleccionadas Se determinó la actividad in Vitro del OPT-80 contra 350 organismos anaerobios. El procedimiento experimental para el cual se esbozó en Antimicrobial Agents and Chemoterapy, 2004, 48: 4430-4434, el cual se incorpora por este medio como referencia en su totalidad.

Todos los organismos, incluyendo las cepas de C. difficile fueron aislados separados y no se relacionaron de manera clonal. Todas las cepas gram-negativas y gram-positivas de control de calidad recomendadas por NCCLS se incluyeron con cada corrida: en cada caso, los resultados (donde estuvieron disponibles) estuvieron en el rango.

Los resultados de la prueba de MIC se presentan en la Tabla 7. Tabla 7 MICs ( g/mL) del OPT-80 Organismo Rango de MIC50 MIC90 MIC Bacteroides fragilis (19) 64->128 >128 >128 Especies del grupo B. fragilis , no 64->128 >128 >128 fragilis (38) Especies Prevotella/porphyromonas 16->128 >128 >128 (42) Fusobacterium nucleatum (14) 64->128 >128 >128 Fusobacterium mortiferum (10) 64->128 >128 >128 Especies fusobacterium, 16->128 >128 >128 miscellaneous (14) Peptostreptococus tetradius (16) 0.25-1.0 1.0 1.0 Peptostreptococus asaccharolyticus 0.25-1.0 0.5 1.0 (15) Peptostreptococus anaerobius (15) <0.016-0.03 <0.016 <0.016 Finegoldia magna (15) 0.25-2.0 1.0 1.0 Micromonas micros (14) <0.016-0.06 0.03 0.06 Peptostreptococus prevotii (3) 0.25-1.0 NA NA Propionibacterium acnés (20) 0.5-1.0 4.0 4.0 Eggerthella lenta (10) <0.016-0.06 <0.016 <0.03 Misceláneos gram-positives , <0.016-16 <0.125 16 bastoncillos que no forman esporas Clostridium perfingrens (35) <0.016-0.06 <0.016 0.03 Clostridium difficile (21) <0.016-0.25 <0.016 0.125 Clostridium tertium (10) <0.016-0.06 <0.016 0.03 Especies Clostridium (19) <0.016-0.06 <0.016 0.03 Ejemplo 7; Actividades In Vitro del OPT-80 Contra Bacterias Intestinales Se evaluó la actividad in Vitro del OPT-80 contra bacterias intestinales. El procedimiento experimental para el cual se esbozó en Antimicrobial Agents and Chemoterapy, 2004, 48: 4898-4902, el cual se incorpora por este medio como referencia en su totalidad. Los rangos de concentración antimicrobianos se seleccionaron para abarcar y superar los niveles que se lograrían en el intestino (al grado que esta información es disponible), sujetas a las limitaciones de solubilidad de los fármacos en el medio de prueba. El rango de concentración del OpT-80 usado durante la prueba fue de 0.03 µ9/?t?1 a 1024 g/ml . Para el análisis, la bacteria probada se colocó de manera general en género, especies u otros grupos con al menos 10 aislados. Los rangos y las MICs a las cuales 50 y 90% de aislados se inhibieron, se determinaron excepto para organismos con menos de 10 cepas probadas, para los cuales únicamente se reportaron los rangos (Tabla 8) . El OPT-80 tuvo buena actividad contra la mayoría de los organismos en forma de varillas o bastoncillos que no forman esporas, gram-positivas , anaeróbicos y cocos gram-positivos anaeróbicos. El OPT-80 también mostró buena actividad contra los enterococos y estafilococos.

Tabla 8. Actividad in Vitro del OPT-80 contra 453 aislados bacterianos OTRAS MODALIDADES Todas las referencias discutidas anteriormente se incorporan aquí como referencia en su totalidad para todos los propósitos. Mientras que esta invención se ha mostrado y descrito de manera particular con referencias a modalidades preferidas de la misma, se entenderá por aquellos de experiencia en el arte que pueden realizarse varios cambios en forma y detalles en la misma sin apartarse del espíritu y alcance de la invención como se define por las reivindicaciones adjuntas.

Claims (36)

1. REIVINDICACIONES 1. Una composición caracterizada porque comprende 70% - 100% de un compuesto de la Fórmula VII
2. Fórmula VII en donde X es un alquilo inferior seleccionado del grupo que consiste de metilo, etilo, n-propilo, e isopropilo; y Y es OH o cetona (= O) ; y Z es H o un alquilo inferior seleccionados del grupo que consiste de metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, y pentilo. 2. La composición de la reivindicación 1, caracterizada porque dicha composición comprende además de 0% - 30% de compuestos relacionados a la Tiacumicina B.
3. 3. La composición de la reivindicación 1, caracterizada porque dicha composición comprende el 75% de la Fórmula VII.
4. 4. La composición de la reivindicación 1, caracterizada porque dicha composición comprende el 80% de la Fórmula VII.
5. 5. La composición de la reivindicación 1, caracterizada porque dicha composición comprende el 85% de la Fórmula VII.
6. 6. La composición de la reivindicación 1, caracterizada porque dicha composición comprende el 90% de la Fórmula VII.
7. 7. La composición de la reivindicación 1, caracterizada porque dicha composición comprende el 95% de la Fórmula VII .
8. 8. La composición de la reivindicación 1, caracterizada porque dicho X es metilo o etilo; y Y es OH o cetona (= O) ; y Z es el isopropilo.
9. 9. La composición de la reivindicación 8, caracterizada porque dicho X es etilo; y Y es OH o cetona (=0) ; y Z es isopropilo.
10. 10. La composición de la reivindicación 9, caracterizada porque dicho X es etilo; y Y es OH; y Z es isopropilo.
11. 11. Una composición caracterizada porque está comprendida de 70-100% de un compuesto de la Fórmula IV
12. Fórmula IV. 12. La composición de la reivindicación 11, caracterizada porque dicha composición comprende además de 0 -30% de compuestos relacionados a la Tiacumicina B. 13. La composición de la reivindicación 12, caracterizada porque dichos compuestos relacionados a la
13. Tiacumicina B se seleccionan del grupo que consiste de Lipiarmicina A4 y Cetona C-19.
14. 14. La composición de la reivindicación 12, caracterizada porque dicha composición comprende (a) = 90% de dicho compuesto de la Fórmula IV; y (b) =10% de dichos compuestos relacionados a la Tiacumicina B.
15. 15. La composición de la reivindicación 14, caracterizada porque dichos compuestos relacionados a la Tiacumicina B se seleccionan del grupo que consiste de Lipiarmicina A4 y Cetona C-19.
16. 16. Una composición farmacéutica caracterizada porque está comprendida de : (a) 70% - 100% de un compuesto de la Fórmula VII en donde X es un alquilo inferior seleccionado del grupo que consiste de metilo, etilo, n-propilo, e isopropilo; y Y es OH o cetona (=0) ; y Z es H o un alquilo inferior seleccionados del grupo que consiste de metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, y pentilo; y (b) 0% - 30% de los compuestos relacionados a la Tiacumicina B; y (c) un portador aceptable farmacéuticamente.
17. 17. La composición farmacéutica de la reivindicación 16, caracterizada porque comprende además un agente adicional seleccionado del grupo que consiste de un agente antimicrobiano y de un agente antifúngico.
18. 18. La composición farmacéutica de la reivindicación 16, caracterizada porque dicho X es metilo o etilo; y Y es OH o cetona (=0) ; y Z es isopropilo.
19. 19. La composición farmacéutica de la reivindicación 18, caracterizada porque dicho X es etilo; y Y es OH o cetona (=0) ; y Z es isopropilo.
20. 20. La composición farmacéutica de la reivindicación 19, caracterizada porque dicho X es etilo; y Y es OH; y Z es isopropilo.
21. 21. La composición farmacéutica de la reivindicación 20, caracterizada porque dichos compuestos relacionados a la Tiacumicina B se seleccionan del grupo que consiste de Lipiarmicina A4 y Cetona C-19.
22. 22. Una composición farmacéutica caracterizada porque está comprendida de : (a) 70% - 100% de un compuesto de la Fórmula IV (b) 0% - 30% de los compuestos relacionados a la Tiacumicina B; y (c) un portador aceptable farmacéuticamente.
23. 23. La composición farmacéutica de la reivindicación 22, caracterizada porque dicha composición farmacéutica está compuesta de (a) = 90% de dicho compuesto dicho de la Fórmula IV; y (b) =10% de dichos compuestos relacionados a la Tiacumicina B; y (c) dicho portador aceptable farmacéuticamente.
24. 24. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, caracterizada porque dichos compuestos relacionados a la Tiacumicina B se seleccionan del grupo que consiste de Lipiarmicina A4 y Cetona C-19.
25. 25. Un método para tratar las infecciones bacterianas en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar a dicho mamífero una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva terapéuticamente de dicha composición farmacéutica de la reivindicación 16.
26. 26. El método de la reivindicación 25, caracterizado porque dicho X es metilo o etilo; y Y es OH o cetona (=0) ; y Z es isopropilo.
27. 27. El método de la reivindicación 26, caracterizado porque dicho X es etilo; y Y es OH o cetona (= O) ; y Z es isopropilo.
28. 28. El método de la reivindicación 27, caracterizado porque dicho X es etilo; y Y es OH; y Z es isopropilo.
29. 29. El método de la reivindicación 28, caracterizado porque dichos compuestos relacionados a la Tiacumicina B se seleccionan del grupo que consiste de Lipiarmicina A4 y Cetona C-19.
30. 30. El método de la reivindicación 28, caracterizado porque la composición farmacéutica está compuesta de dicha composición farmacéutica de la reivindicación 23.
31. 31. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque dichos compuestos relacionados a la Tiacumicina B se seleccionan del grupo que consiste de Lipiarmicina A4 y Cetona C-19.
32. 32. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque dicha composición farmacéutica tiene un valor de MIC que es significativamente más bajo que los valores de MIC de los compuestos relacionados a la Tiacumicina B.
33. 33. El método de la reivindicación 32, caracterizado porque dichos compuestos relacionados a la Tiacumicina B se seleccionan del grupo que consiste de Lipiarmicina A4 , y Cetona C-19.
34. 34. El método de la reivindicación 32, caracterizado porque dicho valor de MIC se determina usando bacterias seleccionadas del grupo que consiste de C. difficile, S. aureus, E.faecalis, y E. faeciu .
35. 35. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque dicha composición farmacéutica tiene un efecto post-antibiótico (PAE) de más de 24 horas.
36. 36. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque dicha composición farmacéutica comprende además un agente adicional seleccionado del grupo que consiste de un agente antimicrobiano y un agente antifúngico.