KR20210124260A - 폐암을 치료하기 위한 항-ceacam5 면역접합체의 용도 - Google Patents

폐암을 치료하기 위한 항-ceacam5 면역접합체의 용도 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 인간 CEACAM5에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 면역접합체를 사용하여, 폐암, 예컨대, NSQ NSCLC를 포함하는 고 CEACAM5 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

폐암을 치료하기 위한 항-CEACAM5 면역접합체의 용도
본 개시내용은 CEACAM5를 발현하는 암, 예컨대, 비-편평 비-소세포 폐암(non-squamous non-small cell lung cancer: NSQ NSCLC)의 치료적 치료 분야에 관한 것이다. 본 발명의 특정 양태는 폐암을 치료하기 위한 CEACAM5 길항제, 예컨대, 항-CEACAM5 항체 및 면역접합체의 용도에 관한 것이다.
항체 약물 접합체(antibody drug conjugate: ADC)의 작용 기전은, 약물의 선택적이고 효율적인 내재화를 달성하기 위해서 종양 세포 상에서 충분하게 발현되는, 특정 항원에 대한 결합에서 시작된다. ADC를 사용하여 종양 세포에 대해서 선택적으로 표적화하는 강력한 세포독성제는, 호지킨 림프종의 치료를 위한 브렌툭시맙 베도틴 및 재발된 전이성 HER2+ 유방암의 치료를 위한 트라스투주맙 엠탄신(T-DM1)의 최근 승인에 의해서 입증된 바와 같이, 암의 치료를 위한 효과적인 전략인 것으로 밝혀져 있다. 충족되지 않는 의학적 요구를 갖는 다수의 다른 악성 질환, 예컨대, 고형 종양 암은 이러한 치료적 선택으로부터 이익을 얻을 수 있다.
예를 들어,　폐암은 미국에서 수 십 만 명이 사망하는 공격적인 형태의 암이다. 불행하게도, 이것은 초기 치료 후에 재발하고, 후속 치료에 대해서 더 내성이 되는 경향이 있다. 다수의 치료법이 폐암을 갖는 개체의 치료에 사용되어 왔지만, 보다 효과적인 치료법이 필요하다.
본 개시내용은 특히 폐암(예를 들어, NSQ NSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 폐암(예를 들어, NSQ NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 유효량의 CEACAM5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 면역접합체(항체를 포함함)를 투여하는 단계를 포함한다.
본 개시내용은 특히 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체(ADC 또는 항체-약물 접합체라고도 불림) 및 유효량의 CEACAM5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함하는 CEACAM5를 발현하는 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 CEACAM5를 발현하는 암을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 암은 인간 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 5(human carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5: hCEACAM5)를 발현한다. 다양한 구현예에서, 암은 hCEACAM5를 많은 양으로 발현한다. 예를 들어, 암은 서열번호 10 및 11을 포함하는 hCEACAM5의 A3-B3 도메인을 발현하여, 이러한 항체 또는 면역접합체는 이러한 도메인에 결합한다.
본 개시내용은 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 5 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 5 암을 치료하는 데 사용하기 위한, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 제공한다. 다양한 구현예에서, 항체는 인간 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 5(hCEACAM5)에 특이적으로 결합하고, 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 VH는 3개의 상보성 결정 영역인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, VL은 3개의 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열(GFVFSSYD)을 포함하고; HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열(ISSGGGIT)을 포함하며; HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열(AAHYFGSSGPFAY)을 포함하고; LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열(ENIFSY)을 포함하며; LCDR2는 NTR의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR3은 서열번호 7의 아미노산 서열(QHHYGTPFT)을 포함한다.
본 개시내용은 비편평 비-소세포 폐암(NSQNSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 NSQ NSCLC를 치료하는 데 사용하기 위한, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 제공하며, 여기서 항체는 hCEACAM5에 특이적으로 결합하고, 항체는 VH 및 VL을 포함하며, VH는 3개의 상보성 결정 영역인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, VL은 3개의 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며; HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하며; LCDR2는 NTR의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR3은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 암 치료제로 사전 치료된 대상체를 치료하는 데 사용하기 위한, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 제공하며, 여기서 항체는 hCEACAM5에 특이적으로 결합하고, 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, VH는 3개의 상보성 결정 영역인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, VL은 3개의 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며; HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하며; LCDR2는 NTR의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR3은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 발현자이다. 다른 구현예에서, 대상체는 비-소세포 폐암의 치료를 위한 작용제 또는 약물로 사전 치료되었다. 다른 구현예에서, 작용제 또는 약물은 화학치료제, 혈관신생 저해제, 표피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor: EGFR) 저해제, 역형성 림프종 키나제(anaplastic lymphoma kinase: ALK) 저해제, 수용체 티로신 키나제(ROS1) 저해제 및 면역 관문 저해제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이들 구현예의 특정 양태에서, 면역 관문 저해제는 PD-1 저해제 및/또는 PD-L1 저해제이다.
다양한 구현예에서, 암은 NSQ NSCLC이다.
다양한 구현예에서, VH는 서열번호 1을 포함한다:
Figure pct00001
다양한 구현예에서, 중쇄는 서열번호 8을 포함한다:
Figure pct00002
다양한 구현예에서, VL은 서열번호 2를 포함한다:
Figure pct00003
다양한 구현예에서, 경쇄는 서열번호 9를 포함한다:
Figure pct00004
다양한 구현예에서, 항체는 적어도 1종의 성장 저해성 작용제(growth inhibitory agent)에 접합되거나 연결된다. 구현예에서, 성장 저해성 작용제는 세포독성제이다. 항체의 다양한 구현예에서, 성장 저해성 작용제는 화학치료제, 효소, 항생제 및 독소, 예컨대, 소분자 독소 또는 효소적으로 활성인 독소, 탁소이드, 일일초(vincas), 탁산, 메이탄시노이드 또는 메이탄시노이드 유사체, 토메이마이신(tomaymycin) 또는 피롤로벤조디아제핀 유도체, 크립토피신 유도체, 렙토마이신 유도체, 아우리스타틴 또는 돌라스타틴 유사체, 전구약물, 토포이성질화효소(topoisomerase) II 저해제, DNA 알킬화제, 항튜불린제 및 CC-1065 또는 CC-1065 유사체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 항체의 다양한 구현예에서, 성장 저해성 작용제는 N2'-데아세틸-N2'-(3-머캅토-1-옥소프로필)-메이탄신(DM1) 또는 N2'-데아세틸-N-2'(4-메틸-4-머캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신(DM4)이다. 예를 들어, 성장 저해성 작용제는 DM4이다.
다양한 구현예에서, 항체는 절단성 또는 비-절단성 링커를 통해서 적어도 하나의 성장 저해성 작용제에 공유 부착된다. 항체의 다양한 구현예에서, 링커는 N-석신이미딜 피리딜디티오부티레이트(SPDB), 4-(피리딘-2-일디설파닐)-2-설포-부티르산(설포-SPDB) 및 석신이미딜 (N-말레이미도메틸) 시클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들어, 링커는 SPDB이다.
다양한 구현예에서 항체는 huMAb2-3이다.
본 발명의 다양한 구현예에서, 대상체는 종양 세포 집단에서 50(2+ 및 3+ 강도로 이루어짐) 이상의 백분율 점수의 hCEACAM5 발현, 예를 들어, 적어도 약 50, 적어도 약 50 내지 약 80, 적어도 약 80 또는 약 100(2+ 및 3+ 강도로 이루어짐) 이상의 백분율 점수의 hCEACAM5 발현을 갖는다. 다양한 구현예에서, hCEACAM5 발현의 백분율은 종양 세포 집단의 적어도 약 50% 내지 약 80%, 종양 세포 집단의 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 약 100%이다. 다양한 구현예에서, 암은 종양 세포 집단의 적어도 약 50%, 적어도 약 50% 내지 약 80%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 약 100%에서 hCEACAM5를 고도로 발현하는 비-편평 비-소세포 폐 암종이다.
다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 예를 들어, 정맥내 주입에 의해서 정맥내 투여된다.
다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 초기 30분 동안 2.5 ㎎/분의 속도로 투여된다. 다양한 구현예에서, 약 30분 후, 항체의 투여 속도는 5 ㎎/분까지 증가된다.
다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 대상체의 신체 표면적 기준으로 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 또는 210 ㎎/㎡의 용량 수준으로 투여된다. 구현예에 따라서, 항체를 포함하는 면역접합체는 대상체의 신체 표면적 기준으로 100 ㎎/㎡의 용량 수준으로 투여되고, 이것은 증량 단계 동안 결정된 최대 내약 용량(maximum tolerated dose: MTD)에 상응한다.
다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 약 2.5 ㎎/㎡ 내지 약 5 ㎎/㎡의 용량으로 투여된다. 예를 들어, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 약 2.5 ㎎/㎡ 내지 약 5 ㎎/㎡의 용량으로 1시간 동안 투여된다. 용량은 항체 2.5 ㎎/㎡, 항체 5 ㎎/㎡이고, 2.5 ㎎/㎡와 5 ㎎/㎡ 사이의 모든 용량, 예를 들어, 2.75, 3, 3.25, 3.5, 3.75, 4, 4.25, 4.5 및 4.75 ㎎/㎡를 포함한다. 다양한 구현예에서, 신체 표면적은 대상체의 신장 및 실제 신체를 사용하여 계산된다.
다양한 구현예에서 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 14일마다 투여된다. 다양한 구현예에서 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 3주마다 투여된다.
구현예에서 본 개시내용은 비편평 비-소세포 폐암(NSQNSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 비편평 비-소세포 폐암(NSQNSCLC)을 치료하는 데 사용하기 위한 면역접합체 huMAb2-3-SPDB-DM4를 제공하며, 여기서 면역접합체 huMAb2-3-SPDB-DM4는 100 ㎎/㎡의 용량 수준으로 2주마다 투여된다.
구현예에서 본 개시내용은 비편평 비-소세포 폐암(NSQNSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 비편평 비-소세포 폐암(NSQNSCLC)을 치료하는 데 사용하기 위한 면역접합체 huMAb2-3-SPDB-DM4를 제공하며, 여기서 면역접합체 huMAb2-3-SPDB-DM4는 100 ㎎/㎡의 용량 수준으로 3주마다 투여된다.
또 다른 구현예에서 본 개시내용은 비편평 비-소세포 폐암(NSQNSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 비편평 비-소세포 폐암(NSQNSCLC)을 치료하는 데 사용하기 위한 면역접합체 huMAb2-3-SPDB-DM4를 제공하며, 여기서 면역접합체 huMAb2-3-SPDB-DM4는 150 ㎎/㎡ 또는 170 ㎎/㎡의 제1 용량 수준으로 투여되고, 그 다음 100 ㎎/㎡의 용량 수준으로 2주마다 투여된다.
다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 투여하기 전에, 대상체는 사전 의약이 투여된다. 예를 들어, 사전 의약은 히스타민 H1 길항제이다.
다양한 구현예에서, 히스타민 H1 길항제는 디페닐히드라민 또는 덱스클로르페니라민이다.
본 발명의 다양한 구현예에서, 대상체는 비-소세포 폐암의 치료를 위한 작용제 또는 약물로 미리 치료되었다. 예를 들어, 대상체는 작용제 또는 약물로 강하게 사전 치료되었고/되었거나 효과적이지 않게 치료되었다. 본 발명의 다양한 구현예에서, 작용제 또는 약물은 화학치료제, 혈관신생 저해제, 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 저해제, 역형성 림프종 키나제(ALK) 저해제, 수용체 티로신 키나제(ROS1) 저해제 및 면역 관문 저해제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명의 다양한 구현예에서, 면역 관문 저해제는 PD-1 저해제 및/또는 PD-L1 저해제이다.
상기에 기재된 용도를 위한 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 일부 구현예에서, 암의 적어도 하나의 증상의 진행은 감소되거나, 둔화되거나, 중단되거나, 달리 개선된다. 이들 구현예의 특정 양태에서, 종양 성장 속도 또는 종양 크기는 항체로의 치료 후에 감소된다. 이들 구현예의 다른 양태에서, 세포 발현의 발현 패턴, 강도 및 비율은 암의 감소, 둔화 또는 중단을 나타낸다.
본 개시내용은 본 명세서에 기재된 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 암을 치료하는 데 사용하기 위한 면역접합체를 제공하며, 여기서 면역접합체는 hCEACAM5에 특이적으로 결합하고, 상기에 기재된 바와 같은 항체를 포함하는 항체 약물 접합체(ADC)를 포함하고, 암의 적어도 하나의 증상은 감소되거나, 둔화되거나, 중단되거나, 달리 개선된다.
본 개시내용은 NSQ NSCLC의 치료를 필요로 하는 대상체에서 NSQ NSCLC를 치료하는 데 사용하기 위한 면역접합체를 제공하며, 여기서 면역접합체는 hCEACAM5에 특이적으로 결합하고, 상기에 기재된 바와 같은 항체를 포함하는 ADC를 포함하고, 암의 적어도 하나의 증상의 진행은 감소되거나, 둔화되거나, 중단되거나, 달리 개선된다.
본 개시내용은 강하게 사전 치료된 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 발현자인 대상체를 치료하는 데 사용하기 위한 면역접합체를 제공하며, 여기서 면역접합체는 hCEACAM5에 특이적으로 결합하고, 상기에 기재된 바와 같은 항체를 포함하는 ADC를 포함하고, 암의 적어도 하나의 증상은 감소되거나, 둔화되거나, 중단되거나, 달리 개선된다.
다양한 구현예에서 면역접합체는 항체 huMAb2-3을 포함한다.
성장 저해성 작용제는 DM4를 포함하고; 링커는 SPDB를 포함한다. 다양한 구현예에서, ADC는 huMAb2-3-SPDB-DM4를 포함한다.
다양한 구현예에서, 종양 성장 속도 또는 종양 크기는 면역접합체로의 치료 후 감소된다.
다양한 구현예에서, 세포 발현의 발현 패턴, 강도 및 비율은 암의 감소, 둔화 또는 중단을 나타낸다.
본 개시내용은 본 명세서에 기재된 항체 또는 기재된 면역접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 5 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 5 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 hCEACAM5에 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 항체는 VH 및 VL을 포함하고, VH는 3개의 상보성 결정 영역인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, VL은 3개의 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며; HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하며; LCDR2는 NTR의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR3은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 NSQ NSCLC의 치료를 필요로 하는 대상체에서 NSQ NSCLC를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 hCEACAM5에 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 항체는 VH 및 VL을 포함하고, VH는 3개의 상보성 결정 영역인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, VL은 3개의 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며; HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하며; LCDR2는 NTR의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR3은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 암 치료제로 사전 치료된 적이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 항체는 hCEACAM5에 특이적으로 결합하고, 항체는 VH 및 VL을 포함하고, VH는 3개의 상보성 결정 영역인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, VL은 3개의 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며; HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하며; LCDR2는 NTR의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR3은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 발현자이다. 다른 구현예에서, 대상체는 비-소세포 폐암의 치료를 위한 작용제 또는 약물로 사전 치료되었다. 다른 구현예에서, 작용제 또는 약물은 화학치료제, 혈관신생 저해제, 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 저해제, 역형성 림프종 키나제(ALK) 저해제, 수용체 티로신 키나제(ROS1) 저해제 및 면역 관문 저해제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이들 구현예의 특정 양태에서, 면역 관문 저해제는 PD-1 저해제 및/또는 PD-L1 저해제이다.
상기에 기재된 방법의 다양한 실시형태에서, 암은 NSQ NSCLC이다.
방법의 다양한 구현예에서, VH는 서열번호 1을 포함한다. 방법의 다양한 구현예에서, 중쇄는 서열번호 8을 포함한다.
방법의 다양한 구현예에서, VL은 서열번호 2를 포함한다. 방법의 다양한 구현예에서, 경쇄는 서열번호 9를 포함한다.
방법의 다양한 실시형태에서, 항체는 적어도 1종의 성장 저해성 작용제에 접합되거나 연결된다. 예를 들어, 성장 저해성 작용제는 세포독성제이다.
방법의 다양한 실시형태에서, 성장 저해성 작용제는 화학치료제, 효소, 항생제 및 독소, 예컨대, 소분자 독소 또는 효소적으로 활성인 독소, 탁소이드, 일일초, 탁산, 메이탄시노이드 또는 메이탄시노이드 유사체, 토메이마이신 또는 피롤로벤조디아제핀 유도체, 크립토피신 유도체, 렙토마이신 유도체, 아우리스타틴 또는 돌라스타틴 유사체, 전구약물, 토포이성질화효소 II 저해제, DNA 알킬화제, 항튜불린제 및 CC-1065 또는 CC-1065 유사체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 방법의 다양한 구현예에서, 성장 저해성 작용제는 DM1 또는 DM4이다. 예를 들어, 성장 저해성 작용제는 DM4이다.
방법의 다양한 구현예에서, 항체는 절단성 또는 비-절단성 링커를 통해서 적어도 하나의 성장 저해성 작용제에 공유 부착된다. 방법의 다양한 구현예에서, 링커는 SPDB, 설포-SPDB 및 SMCC로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 구현예, 링커는 SPDB이다.
방법의 다양한 구현예에서, 항체는 huMAb2-3이다. 방법의 다양한 구현예에서, 대상체 환자는 상기 종양 세포 집단에서 50(2+ 및 3+ 강도로 이루어짐) 이상의 백분율 점수의 hCEACAM5 발현을 갖는다. 예를 들어, 적어도 약 50, 적어도 약 50 내지 약 80, 적어도 약 80 또는 약 100(2+ 및 3+ 강도로 이루어짐) 이상의 백분율 점수의 hCEACAM5 발현. 다양한 구현예에서, hCEACAM5 발현의 백분율은 종양 세포 집단의 적어도 약 50% 내지 약 80%, 종양 세포 집단의 적어도 약 80%, 또는 약 100%이다. 방법의 다양한 구현예에서, 암은 종양 세포 집단의 적어도 약 50%, 적어도 약 50% 내지 약 80%, 적어도 약 80%, 또는 약 100%에서 hCEACAM5를 고도로 발현하는 비-편평 비-소세포 폐 암종이다.
방법의 다양한 구현예에서, 항체는 예를 들어, 정맥내 주입에 의해서 정맥내로 투여된다.
방법의 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 초기 30분 동안 2.5 ㎎/분의 속도로 투여된다. 방법의 다양한 구현예에서, 30분 후, 항체의 투여 속도는 5 ㎎/분까지 증가된다.
방법의 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 대상체의 신체 표면적 기준으로 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 또는 210 ㎎/㎡의 용량 수준으로 투여된다. 방법의 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 약 2.5 ㎎/㎡ 내지 약 5 ㎎/㎡의 용량으로 투여된다. 예를 들어, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 약 2.5 ㎎/㎡ 내지 약 5 ㎎/㎡의 용량으로 1시간 동안 투여된다. 용량은 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체 2.5 ㎎/㎡, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체 5 ㎎/㎡, 그리고 2.5 ㎎/㎡ 내지 5 ㎎/㎡ 사이의 모든 용량, 예를 들어, 2.75, 3, 3.25, 3.5, 3.75, 4, 4.25, 4.5 및 4.75 ㎎/㎡를 포함한다. 다양한 구현예에서, 신체 표면적은 대상체의 신장 및 실제 신체를 사용하여 계산된다.
방법의 다양한 구현예에서 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 14일마다 투여된다. 다양한 구현예에서 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는, 3주마다 투여된다.
방법의 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 투여하기 전에, 대상체는 사전 의약이 투여되고, 예를 들어, 대상체 사전 의약은 히스타민 H1 길항제이다. 방법의 다양한 구현예에서, 히스타민 H1 길항제는 디페닐히드라민 또는 덱스클로르페니라민이다.
방법의 다양한 구현예에서, 대상체는 비-소세포 폐암의 치료를 위한 작용제 또는 약물로 미리 치료되었다. 예를 들어, 작용제 또는 약물은 화학치료제, 혈관신생 저해제, EGFR 저해제, 역형성 림프종 키나제(ALK) 저해제, 수용체 티로신 키나제(ROS1) 저해제 및 면역 관문 저해제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들어, 면역 관문 저해제는 PD-1 저해제 및/또는 PD-L1 저해제이다.
상기에 기재된 방법의 일부 실시형태에서, 암의 적어도 하나의 증상의 진행은 감소되거나, 둔화되거나, 중단되거나, 달리 개선된다. 이들 구현예의 특정 양태에서, 종양 성장 속도 또는 종양 크기는 항체로의 치료 후에 감소된다. 이들 구현예의 특정 양태에서, 세포 발현의 발현 패턴, 강도 및 비율은 암의 감소, 둔화 또는 중단을 나타낸다.
본 개시내용은 본 명세서에 기재된 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
방법의 다양한 구현예에서, 항체는 hCEACAM5에 특이적으로 결합하고, 본 명세서에 기재된 임의의 항체를 포함하는 ADC로서 투여되고, 여기서 ADC로의 투여/치료 후에 암의 적어도 하나의 증상의 진행은 감소되거나, 둔화되거나, 중단되거나, 달리 개선된다.
방법의 다양한 구현예에서, ADC는 항체 huMAb2-3를 포함하고; 성장 저해성 작용제는 DM4를 포함하고; 링커는 SPDB를 포함한다. 다양한 구현예에서, ADC는 huMAb2-3-SPDB-DM4를 포함한다.
방법의 다양한 구현예에서, 종양 성장 속도 및/또는 종양 크기는 항체 및/또는 면역접합체로의 치료 후에 감소된다.
방법의 다양한 구현예에서, 세포 발현의 발현 패턴, 강도 및 비율은 항체 및/또는 면역접합체로의 치료 후에 암의 감소, 둔화 또는 중단을 나타낸다.
방법의 다양한 구현예에서, 항체 및/또는 면역접합체는 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서 투여된다.
도 1a, 도 1b 및 도 1c는 각각 1+, 2+, 3+ 염색 강도의 예를 도시한다.
도 2는 보관소 샘플에서 중앙 집중화된 CEACAM5 발현의 카테고리에 따른 huMAb2-3-SPDB-DM4로 치료된 환자에서 최상의 상대적 종양 수축률의 막대 그래프이다. 환자의 CEACAM5 발현(2+/3+)은 50% 미만, 50% 내지 80% 또는 이상이다. PR은 부분 반응을 의미한다. SD는 안정적인 질환을 의미한다. PD는 진행성 질환을 의미한다.
도 3은 고 CEACAM5-발현(폐) 코호트에서 치료된 32명의 환자 및 중간 발현자 코호트의 환자에서 관찰된 최상의 상대적 종양 수축률을 예시한다. 환자의 CEACAM5 발현(2+/3+)은 50% 미만 또는 50% 이상이다. PR은 부분 반응을 의미한다. SD는 안정적인 질환을 의미한다. PD는 진행성 질환을 의미한다.
도 4는 고 CEACAM5-발현(폐) 코호트에서 치료된 32명의 환자에서 진행까지의 시간(TTP)을 예시한다.
본 개시내용은 NSQ NSCLC의 치료를 위한 약제학적 조성물 및 이러한 조성물들을 사용하는 방법 및 이러한 질환의 적어도 하나의 증상의 개선을 제공한다. 이들 조성물은 (CEACAM5)에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 포함하고, 예를 들어, 항체는 항체 huMAb2-3이다. ADC huMAb2-3-SPDB-DM4는 huMAb2-3(항-CEACAM5) 항체와 미세소관 어셈블리를 저해하는 항유사분열제인 메이탄시노이드 유도체 4(DM4)를 조합한 면역접합체이다. DM4는 혈장에서 안정적이고, 세포 내에서 절단성인 최적화된 링커인 SPDB[N-석신이미딜 4-(2-피리딜디티오)-부티레이트]를 통해서 huMAb2-3에 공유 결합된다. 표적화된 암 세포에서의 결합 및 내재화 후, huMAb2-3-SPDB-DM4는 분해되어, 세포독성 DM4 대사산물을 방출한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 고 CEACAM5 암은 폐암을 포함하는, 몇몇 유형을 지칭한다. 일부 구현예에서, 폐암은 비-편평 비-소세포 폐암이다. 특정 구현예에서, 고 CEACAM5 발현자는 종양 세포 집단을 발현하는 것 중 적어도 50%에서 2+ 초과의 강도를 갖는다. 고 CEACAM5 발현자는 폐암 중 약 20%를 나타낸다. DM4 세포독성제, SPDB 링커 및 인간화된 항체 huMAb2-3을 포함하는 본 명세서에 기재된 ADC는 개념 증명 연구에서 투여되었다. 데이터는 ADC가 폐암의 하위세트에서 개념 증명을 달성하였다.
ADC를 강하게 사전 치료된 고 CEACAM5 발현자에서의 1/2상 연구에서 분석하였다. ADC는, 3L 설정에서 경쟁적인 전체 반응률(Overall Response Rate: ORR) 및 반응 기간(DoR)을 나타내었다. 가장 흔한 약물 이상 반응(Adverse Drug Reaction: ADR)은 안구 독성(치료 중단 없이 가역적임) 및 최소 혈액/신경 독성이었다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "강하게 사전 치료된"은 1개월 초과 동안 대상체의 사전 치료를 지칭한다. 다른 구현예에서, 강하게 사전 치료된 대상체는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24개월 초과 동안 치료를 겪었다. 특정 구현예에서, 사전 치료는 1종 이상의 암 치료제의 투여이다.
비-소세포 폐암(NSCLC)
비-소세포 폐암은 폐 조직에 악성(암) 세포가 형성되는 질환이다. 흡연이 이 질환의 주요 원인이다. 이것은 소세포 폐 암종 이외의 상피성 폐암의 일종이다. 몇몇 유형의 비-소세포 폐암이 존재한다. 비-소세포 폐암의 각각의 유형은 상이한 종류의 암세포를 갖는다. 각각의 유형의 암세포는 상이한 방식으로 성장하고 확산된다. 비-소세포 폐암의 유형은 암에서 발견되는 세포의 종류 및 세포가 현미경으로 어떻게 보이는 지에 따라 명명된다: (1) 편평 세포 암종: 물고기 비늘처럼 보이는 얇고 편평한 세포인 편평 세포에서 시작하는 암. 이것은 표피모양(epidermoid) 암종이라고도 불린다. (2) 대세포 암종: 여러 유형의 대세포에서 시작될 수 있는 암. 그리고 (3) 선암종: 폐포를 라이닝하고, 점액과 같은 물질을 만드는 세포에서 시작되는 암.
호지킨 림프종 치료를 위한 브렌툭시맙 베도틴 및 재발된 전이성 HER2+ 유방암의 치료를 위한 트라스투주맙 엠탄신(T-DM1)의 최근 승인에서 입증된 바와 같이, ADC를 사용하여 종양 세포에 대한 강력한 세포독성을 선택적으로 표적화하는 것이 현재 암 치료를 위한 효과적인 전략임이 입증되었다. 충족되지 않은 의학적 요구가 있는 다른 많은 악성 질환은 이러한 치료 선택의 혜택을 받을 수 있다. ADC의 작용 기전은 약물의 선택적이고 효율적인 내재화를 달성하기 위해 종양 세포에서 충분히 발현되는 특정 항원에 대한 결합으로 시작된다.
근치적 수술은 적합한 1기 NSCLC 환자의 치료 표준이다(예를 들어, 폐절제술, 폐엽절제술, 분절절제술 또는 쐐기 절제술, 소매 절제술). 보조 치료는 조사 시험의 일부로만 제공되어야 한다. II기 및 IIIA기 보조제 시스플라틴-기반 화학요법은 완전히 절제된 NSCLC 종양에 대한 표준으로 남아 있다. 시스플라틴과 조합하여 또는 서로 함께 사용되는 다른 화학치료제는 카르보플라틴, 파클리탁셀(탁솔), 알부민-결합 파클리탁셀(냅(nab)-파클리탁셀, Abraxane), 도세탁셀(Taxotere), 젬시타빈(Gemzar), 비노렐빈(Navelbine), 이리노테칸(Camptosar), 에토포사이드(VP-16), 빈블라스틴 및 페메트렉세드(Alimta)를 포함할 수 있다. 추가로, N2 림프절 환자에게 방사선 요법을 사용할 수 있다. 진행 병기 IIIB/IV기 또는 수술 불가능한 NSCLC 환자에서, 치료는 시스플라틴-기반 화학요법과 3세대 세포독성제 또는 세포성장정지 약물(cytostatic drug)(항-EGFR, 항-VEGFR)의 수 회 주기를 포함할 수 있다.
폐암을 포함한 암 치료는 혈관신생 저해제, 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 저해제, 역형성 림프종 키나제(ALK) 저해제, 수용체 티로신 키나제 ROS1 저해제 및 면역 관문 저해제를 포함할 수 있다.
혈관신생 저해제는 악시티닙(Inlyta), 베바시주맙(Avastin), 카르보잔티닙(Cometriq), 에버롤리무스(Afinitor, Zortress), 레날리도마이드(Revlimid), 파조파닙(Votrient), 라무시루맙(Cyramza), 레고라페닙(Stivarga), 소라페닙(Nexavar), 수니티닙(Sutent), 탈리도마이드(Synovir, Thalomid), 반데타닙(Caprelsa), 아플리버셉트 및 지브-아플리버셉트(Zaltrap)를 포함할 수 있지만 이들로 제한되지 않는다.
표피 성장 인자 수용체(EGFR) 저해제는 제피티닙(Iressa), 에를로티닙(Tarceva), 라파티닙(Tykerb), 세툭시맙(Erbitux), 네라티닙(Nerlynx), 오시머티닙(Tagrisso), 파니투무맙(Vectibix), 반데타닙(Caprelsa), 네시투무맙(Protrazza) 및 다코미티닙(Vizimpro)을 포함할 수 있지만 이들로 제한되지 않는다.
면역 관문 저해제는 예정사 1(Programmed Death-1: PD-1) 수용체(PD-1) 결합제(예를 들어, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 시미플리맙), 예정사-리간드 1(PD-L1) 결합제(예를 들어, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙), CTLA-4 결합제(예를 들어, 이필리무맙), OX40 또는 OX40L 결합제, 아데노신 A2A 수용체 결합제, B7-H3 결합제, B7-H4 결합제, BTLA 결합제, 인돌레아민 2,3-디옥시게나제 결합제, 킬러-세포 면역글로불린-유사 수용체(KIR) 결합제, 림프구 활성화 유전자-3(LAG-3) 결합제, 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트 NADPH 옥시다제 이소폼(NOX2) 결합제, T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 3(TIM-3) 결합제, T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제자(V-domain Ig suppressor of T cell activation: VISTA) 결합제, 글루코코티코이드-유도 TNFR 패밀리 관련 유전자(Glucocorticoid-Induced TNFR family Related gene: GITR) 결합제 및 시알산-결합 면역글로불린-유형 렉틴 7(SIGLEC7) 결합제를 포함할 수 있지만 이들로 제한되지 않는다.
CEA 및 CEACAM
암배아항원(CEA)은 세포 접착과 관련된 당단백질이다. 1965년, CEA는 임신 첫 6개월 동안 태아의 소아관에 의해 정상적으로 발현된 단백질로서 처음 확인되었고(문헌[Gold and Freedman, J Exp Med, 121, 439, 1965]), 췌장암, 간암 및 대장암에서 발견되었다. CEA 패밀리는 면역 글로불린 슈퍼패밀리에 속한다. 18개의 유전자로 이루어진 CEA 패밀리는 단백질의 2개의 군, 즉, 암배아 항원-관련 세포 접착 분자(carcinoem-bryonic antigen-related cell adhesion molecule: CEACAM) 하위군 및 임신-특이적 당단백질 하위군으로 나뉘어 진다.
인간에서, CEACAM 하위군은 7개의 구성원, 즉, CEACAM1, CEACAM3, CEACAM4, CEACAM5, CEACAM6, CEACAM7 및 CEACAM8로 이루어진다. 다수의 연구 결과는 본래 확인된 CEA와 동일한 CEACAM5가 결장직장 종양세포, 위 종양세포, 폐 종양세포, 유방 종양세포, 전립선 종양세포, 난소 종양세포, 자궁경부 종양세포 및 방광 종양세포의 표면에서 고도로 발현되며, 대장의 원주 상피 세포 및 술잔 세포, 위의 목점액 세포 및 식도와 자궁경부의 편평 상피세포와 같은 소수의 정상적인 상피 조직에서 약하게 발현됨을 보여주었다. 따라서, CEA-CAM5는 면역접합체와 같은, 종양 특이적인 표적화 접근법에 적합한 치료적 표적을 구성할 수 있다. 본 발명은 CEACAM5에 대해 지향되는 항체를 제공하며, 이것이 생체내에서 링커를 사용하여 세포독성제에 접합되고, NSQ NSCLC를 갖는 대상체에게 안전하게 투여될 수 있다는 것을 나타낸다. 데이터는, 다양한 폐암 세포에서의 hCEACAM5 발현이 약 50 이상, 약 50 내지 약 80 또는 약 100(2+ 및 3+ 강도로 이루어짐)의 백분율 점수였다는 것을 나타낸다. CEACAM 패밀리 구성원들의 세포외 도메인은 서열 상동성에 따라 A, B 및 N의 3가지 유형으로 분류된, 반복된 면역 글로불린 유사(Ig 유사) 도메인으로 이루어진다. CEACAM5는 7개의 이러한 도메인, 즉, N, A1, B1, A2, B2, A3 및 B3을 함유한다.
한 편으로 CEACAM5 A1, A2 및 A3 도메인 및 다른 한 편으로 B1, B2 및 B3 도메인은 높은 서열 상동성을 나타내는데, 인간 CEACAM5의 A 도메인은 84 내지 87%의 쌍별 서열 유사성을 나타내고, B 도메인은 69 내지 80%의 쌍별 서열 유사성을 나타낸다. 나아가, 그 구조에 A 및/또는 B 도메인을 나타내는 다른 인간 CEACAM 구성원들, 즉 CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7 및 CEACAM8은 인간 CEACAM5와 상동성을 나타낸다. 특히, 인간 CEACAM6 단백질의 A 도메인 및 B 도메인은 각각 인간 CEACAM5의 A1 도메인과 A3 도메인, 및 B1 도메인 내지 B3 도메인 중 임의의 도메인과 서열 상동성을 나타내는데, 이는 인간 CEACAM5의 A 도메인 및 B 도메인 중에서 관찰된 것보다 훨씬 높다.
CEA를 표적으로 한 진단용 또는 치료용 목적을 고려하여 다수의 항-CEA 항체가 생성되었다. Sharkey 등(1990, Cancer Research 50, 2823)에 의한 예에서와 같이, 관련 항원에 대한 특이성은 이 분야에서의 관심사로서 항상 언급되고 있다. 위에 언급된 상동성 때문에, 이전에 기술된 항체들 중 일부는 상이한 면역 글로불린 도메인에 존재하는 CEACAM5의 반복적인 에피토프에 대한 결합을 나타낼 수 있어, CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7, 또는 CEA-CAM8과 같은 다른 CEACAM 구성원에 대해서는 교차 반응성을 나타내지만, CEACAM5에 대한 특이성은 부족할 수 있다. 항-CEACAM5 항체의 특이성은 인간 CEACAM5를 발현하는 종양 세포와는 결합하지만 나머지 CEACAM 구성원들을 발현하는 일부 정상적인 조직과는 결합하지 않는 CEA를 표적으로 한 치료법의 관점에서 요구된다. CEACAM1, CEACAM6 및 CEACAM8은 인간 및 비 인간 영장류의 호중구에 의해 발현된다고 기술되어 있는데, 여기서 이들이 과립구 형성을 조절하고 면역 반응에서 역할을 한다고 밝혀졌다는 점은 주목할 만하다.
Genentech가 개발한 메이탄시노이드 항-CEACAM6 항체와 같은, 항-CEACAM6 항체 약물 접합체가 기술되어 있는데(문헌[Strickland et al, 2009 J Pathol, 218, 380]), 이것은 비 인간 영장류에서 CEACAM6 의존성 조혈 독성을 유도하는 것으로 나타났다. 저자들은 골수에서의 이러한 항체 약물 접합체의 축적 및 과립성 백혈구 및 그것들의 세포 전구체의 고갈 때문인 것으로 여겨지는 이러한 독성을 중요한 안전성 문제로 간주하였다. 따라서, 더욱 정확하게는, 치료적인 목적면에서, 항-CEACAM5 항체의 CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7 또는 CEACAM8과의 교차 반응성은 정상적인 조직에 대한 증가된 독성에 의해 이러한 화합물의 치료 지수를 감소시킬 수 있다. 따라서, 특히 항체 약물 접합체(ADC)로 사용하기 위해서 또는 표적 세포의 사멸을 야기하는 임의의 다른 작용 모드에서 CEACAM 패밀리의 다른 분자와 교차 반응하지 않을 CEACAM5에 특이적으로 지향되는 항체를 얻는 데 있어 강력한 이점이 있다.
더욱이, CEACAM5는 비록 낮은 수준이지만 일부 정상 세포 조직에서 발현되는 것으로 기술되어 있기 때문에, 인간 CEACAM5뿐만 아니라 시노몰거스 원숭이(마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis)) CEACAM5에 결합할 수 있는 항-CEACAM5 항체를 개발하는 것이 중요한데, 그 이유는 이러한 항체가 안전성 프로파일을 평가하기 위해 시노몰거스 원숭이에 대한 전임상 독성학 연구에서 쉽게 시험될 수 있기 때문이다. 치료용 항체의 효능은 기능성 항체의 경우(문헌[Doern et al. 2009, J. Biol. Chem 284 10254]) 및 효과기 기능이 관여되는 경우(문헌[Beers et al. Semin Hematol 47:107-114]) 둘 모두에서 표적 내의 에피토프의 국지화에 좌우될 수 있다고 밝혀져 있기 때문에, 인간/원숭이 교차 반응성 항체는 인간 및 시노몰거스 원숭이 단백질의 동일한 반복된 Ig 유사 상동성 도메인의 에피토프에 결합하는 것으로 나타나야 한다.
이러한 항체의 종 교차 반응성에 대한 필요성을 인간 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5에 대해 특이성, 즉, 다른 마카카 파시쿨라리스 및 인간 CEACAM 구성원에 대해서는 교차 반응성을 나타내지 않는 성질과 결합시키는 것은 인간 CEACAM 단백질과 마카카 파시쿨라리스 CEACAM 단백질 사이에서의 전반적인 서열 상동성을 고려할 때 추가적인 정도의 복합성을 부가한다.
실제로, 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5 서열의 인간 CEACAM5 서열과의 전체적인 쌍별 정렬(AAA51967.1/GI:180223, 702개 아미노산)은 단지 78.5%의 동일성을 나타내었다. 마카카 파시쿨라리스 CEACAM1, CEACAM5, 및 CEACAM6 유전자들을 클로닝하고, 인간 및 마카카 파시쿨라리스 A, B 및 N 도메인들의 전체적인 정렬을 수행하였다. 이러한 정렬 결과는 인간 및 마카크 CEACAM5에 공통적이고, 임의의 다른 패밀리 구성원과는 공유되지 않는 이상적인 에피토프를 국지화할 부위가, 만일 존재한다면, 매우 소수일 것이라고 예측하였다. 이러한 이유로 다른 인간 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM 구성원과는 교차 반응성을 나타내지 않으면서 인간 CEACAM5와 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5 사이에 교차 반응성을 나타내는 항체를 개발하는 것은 매우 낮은 성공 가능성을 나타낼 것이라고 예상되었다. 주목할 만한, 이전에 기술된 항-CEACAM5 항체들은 매우 소수의 예외와 함께(MT111), 마카카 파시쿨라리스 교차 반응성에 대해서는 거의 기록되지 않고 있다.
Immunomedics 라베투주맙(hMN14로도 알려져 있음, 문헌[Sharkey et al, 1995, Cancer Research 55, 5935])과 같은 항-인간 CEACAM5 항체들은 이미 임상 시험에 이용되고 있다. 이러한 항체는 관련된 항원과 결합하지 않는 것으로 나타났지만, 마카카 파시쿨라리스의 CEACAM5와 교차 반응하지 않는다. 주목할 만하게도, 마이크로멧(Micromet)의 MT111 항체(MedImmune의 MEDI-565 항체로도 알려져 있음)는 인간 CEA-CAM5 및 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체이다(문헌[Peng et al., PLoS ONE 7(5): e3641]; WO 2007/071426). MT111은 인간 및 시노몰구스 원숭이 CEACAM5를 인식하는 항체로부터의 단일쇄 가변 단편(scFv)과 인간 CD3를 인식하는 항체로부터의 scFv의 융합에 의해 생성되었다고 한다. 또한, MT111은 다른 CEACAM 패밀리 구성원과 결합하지 않는다고 보고된 바 있다(문헌[Peng et al., PLoS ONE 7(5): e3641]). MT111은 인간 CEA-CAM5의 A2 도메인의 입체형태적 에피토프에 결합한다. 이러한 입체형태적 에피토프는, 종양에서 전체 길이의 CEACAM5에 부수적으로 발현되는 인간 CEACAM5의 스플라이스 변이체에서 누락된다(문헌[Peng et al., PLoS ONE 7(5): e3641]). 나아가, MT111이 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5의 동일한 에피토프와 결합한다는 증거가 없다.
치료적 목적을 위해 최적의 특성을 나타내는, CEACAM5 표면 단백질에 대한 새로운 항체를 생산하고자 하는 시도로, 재조합 단백질로, 그리고 종양 세포로, 마우스를 면역화하였다. 본 발명자들은 유리한 프로파일을 나타내는 면역 글로불린(IgG)만을 선택하기 위하여 CEACAM 패밀리의 몇몇 재조합 단백질에 대한 ELISA 및 관련 세포주를 이용한 유동 세포계수법을 이용하여 수 백 개의 하이브리도마를 스크리닝하였다. 예기치 않게도, 본 발명자들은 하이브리도마 클론들을 선택하여 원하는 특징 전부를 포함하는, 상응하는 성숙한 IgG를 생산할 수 있었다. 그것들은 높은 친화도로 인간 CEACAM5의 A3-B3 도메인과 특이적으로 결합하며, 인간 CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7 및 CEACAM8 단백질들을 인식하지 않는다. 세포적 맥락에서, 이들 항체들은 종양 세포에 대해 (나노몰 범위로) 높은 친화도를 나타낸다. 더구나, 이러한 항체는 10 이하의 원숭이/인간 친화도 비율로 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5 단백질과도 결합한다.
CEACAM5의 A3-B3 도메인을 표적화함으로써, 이들 항체는 종양-표적화 가능성이 증가되었는데, 그 이유는 전장 인간 CEACAM5 및 Peng 등이 확인한 이의 스플라이스 변이체 둘 다에 결합하는 능력을 가지고 있기 때문이다.
마지막으로, CEACAM5는 문헌에서 거의 내재화하지 않는 표면 단백질로 기술되어 있어(문헌[Schmidt et al, 2008, Cancer Immunol.Immunother.57, 1879]에서 검토됨), 항체 약물 접합체를 위한 유망한 표적이 아닐 수 있다. 선행 기술에서 보고된 바에도 불구하고, 본 발명자들은 본 발명자들이 생산한 항체가 결합 후 CEACAM5-항체 복합체를 내재화할 수 있고, 세포독성제와 결합시킬 때 시험관 내에서 종양 세포에 대해 세포독성 활성을 유도할 수 있음을 보여주었다. 또한, 세포독성제에 결합된 동일한 항체들은 인간 원발성 대장 및 위장 종양을 가지고 있는 마우스에서 종양 성장을 현저하게 저해할 수 있다. 예컨대, 본 명세서에서 전문이 참조에 의해 포함된 WO2014079886을 참조한다.
정의
본 명세서에 사용된 바와 같이, 정량적 용어에서 용어 "약"은 그것이 수식하는 값의 플러스 또는 마이너스 10%를 지칭한다(값이 분자 또는 뉴클레오티드의 수와 같이 세분할 수 없는 경우 가장 가까운 정수로 반올림됨). 예를 들어, "약 100 ㎎"이라는 구는 90 ㎎ 내지 110 ㎎을 포함할 것이며; "약 2500 ㎎"이라는 구는 2250 ㎎ 내지 2750 ㎎을 포함할 것이다. 백분율에 적용될 때 용어 "약"은 해당 백분율에 대해 플러스 또는 마이너스 10%를 지칭한다. 예를 들어, "약 20%"라는 구는 18 내지 22%를 포함할 것이고, "약 80%"는 72 내지 88%를 포함할 것이다. 더욱이, "약"이 정량적 용어와 함께 본 명세서에서 사용되는 경우, 플러스 또는 마이너스 10% 값에 추가하여, 정량적 용어의 정확한 값도 고려되고 설명되는 것으로 이해된다. 예를 들어, "약 23%"라는 용어는 정확히 23%를 명시적으로 고려, 설명 및 포함한다.
단수 엔티티는 하나 이상의 이러한 엔티티를 지칭하며, 예를 들어 "증상은 하나 이상의 증상을 나타내는 것으로 이해됨을 주목해야 한다. 그러므로, 용어 "하나", "하나 이상" 및 "적어도 하나"는 본 명세서에서 상호 교환 능하게 사용될 수 있다.
더 나아가, 본 명세서에서 사용된 "및/또는"은 두 가지의 명시된 특징 또는 구성요소의 각각을 다른 한 가지와 함께 또는 다른 한 가지 없이 구체적으로 개시하는 것으로서 간주되어야 한다. 따라서, 본 명세서에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 "A와 B", "A 또는 B", "A"(단독), "B"(단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 다음의 양태 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B와 C; A, B 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A와 C; A와 B; B와 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
본 명세서에서 양상이 "포함하는(comprising)"이라는 말로 기재되는 경우에, 다르게는 "이루어진(consisting of)" 및/또는 "본질적으로 이루어진(consisting essentially of)"이라는 용어로 기재된 유사한 양상도 제공되는 것으로 이해된다.
본 출원에 사용된 "CEACAM5"는 "CD66e"(분화 클러스터 66e) 또는 CEA로도 알려져 있는 "암배아 항원-관련 세포 접착 단백질 5"를 지정한다. CEACAM5는 세포 접착과 관련된 당단백질이다. CEACAM5는 특히 결장, 위, 폐 및 자궁 종양 세포의 표면 상에서 고도로 발현된다.
신호 펩티드(위치 1~34) 및 프로펩티드(위치 686~702)를 포함하는 전체 길이의 인간 CEACAM5의 참조 서열은 등록번호 AAA51967.1 하에 유전자 은행(GenBank) 데이터베이스로부터 이용 가능하다(서열번호 52). 다섯 개의 비동의(non-synonymous) SNP가 백인 집단에서 2%를 초과하는 빈도로 확인된 바 있는데, 이들 중 네 개는 인간의 CECAM5(서열번호 58)의 N 도메인에 위치하고 있고(위치 80, 83, 112, 113 위치), 마지막 것은 A2 도메인(위치 398)에 위치하고 있다. 유전자 은행 AAA51967.1은 주요한 단상형(I80, V83, I112, I113 및 E398)을 함유한다.
본 발명자들이 클로닝한 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5의 세포외 도메인의 서열은 서열번호 12에 개시되어 있다. WO2014079886을 참조하는데, 이는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 포함된다.
서열번호 12
Figure pct00005
"도메인"은 일반적으로 서열 상동성에 기초하여 정의되며, 특정 구조적 또는 기능적 엔티티와 종종 관련된 단백질의 임의의 영역일 수 있다. CEACAM 패밀리 구성원은 Ig 유사 도메인으로 구성된다고 공지되어 있다. 용어 도메인은 본 문헌에서 "N 도메인"과 같은 개별적인 Ig 유사 도메인들 또는 "A3-B3 도메인"과 같은 연속적인 도메인들의 집합을 가리키는 데에 이용된다.
인간 CEACAM5의 도메인 구성은 다음과 같다(유전자 은행 AAA51967.1; 서열번호 13에 기초함):
서열번호 13
Figure pct00006
[표 1A]
Figure pct00007
따라서, 인간 CEACAM5의 A3-B3 도메인은 서열번호 13의 위치 499~685의 아미노산들로 이루어진다.
마카카 파시쿨라리스 CEACAM5의 도메인 구성은 다음과 같다(클로닝된 세포외 도메인 서열; 서열번호 12에 기초함):
[표 1B]
Figure pct00008
따라서, 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5의 A3-B3 도메인은 서열번호 53의 위치 465~654의 아미노산으로 이루어진다.
"암호 서열" 또는 RNA, 폴리펩티드, 단백질 또는 효소와 같은 발현 생성물을 "암호화하는" 서열은 발현 시, 그 RNA, 폴리펩티드, 단백질 또는 효소의 생산을 가져오는 뉴클레오티드 서열로, 즉, 이러한 뉴클레오티드 서열은 그 폴리펩티드, 단백질 또는 효소를 위해 아미노산 서열을 암호화한다. 단백질의 암호 서열은 개시 코돈(보통 ATG) 및 종결 코돈을 포함할 수 있다.
본 출원에 사용된 바와 같이, 특이적인 단백질(예컨대, 항체)에 대한 참조는 자연적인 아미노산 서열이 있는 폴리펩티드뿐만 아니라, 변이체 및 그의 기원 또는 제조 방식과는 무관한 변형된 형태를 포함할 수 있다. 자연적인 아미노산 서열이 있는 단백질은 자연으로부터 얻어진 것과 동일한 아미노산 서열이 있는 단백질이다. 그러한 자연적인 서열의 단백질은 자연으로부터 분리될 수 있거나, 일반적인 재조합 및/또는 합성 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 자연적인 서열의 단백질은 구체적으로 자연 발생적인 절단된 형태 또는 가용성 형태, 자연 발생적인 변이체 형태(예컨대, 대안적으로 스플라이스된 형태), 자연 발생적인 대립 형질의 변이체 및 번역 후 변형을 포함하는 형태를 아우른다. 자연적인 서열의 단백질은 글리코실화, 또는 인산화, 또는 일부 아미노산 잔기의 기타 변형과 같은 번역 후 변형을 수반하는 단백질을 포함한다.
용어 "유전자"는 하나 이상의 단백질 또는 효소 전부 또는 일부를 포함하는 아미노산의 특정 서열을 암호화하거나 이에 상응하는 DNA 서열을 의미하며, 예를 들어, 유전자가 발현되는 조건을 결정하는, 프로모터 서열과 같은 조절 DNA 서열을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있다. 구조적 유전자가 아닌 일부 유전자들은 DNA로부터 RNA로 전사될 수 있지만, 아미노산 서열로 번역되지는 않는다. 다른 유전자들은 구조적 유전자의 조절자로서, 또는 DNA 번역의 조절자로서 기능할 수 있다. 특히, 용어 유전자는 단백질을 암호화하는 게놈 서열, 즉, 조절자, 프로모터, 인트론 및 엑손 서열을 위해 의도될 것일 수 있다.
"서열 동일성"의 백분율은 비교창 위에 최적으로 정렬된, 두 개의 서열들을 비교함으로써 결정될 수 있는데, 여기서, 비교창의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열의 일부분은 두 서열들의 최적 정렬에 대해 (부가 또는 결실을 포함하지 않는) 참조 서열과 비교하여 부가 또는 결실(즉, 틈)을 포함할 수 있다. 이러한 백분율은 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 양쪽 서열 모두에서 발생하는 위치의 수를 결정하여 합치된 위치의 수를 얻고, 합치된 위치의 수를 비교창에서의 전체 위치 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 얻음으로써 계산된다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은 전체적인 쌍별 정렬, 예컨대, Needleman과 Wunsch(문헌[J.Mol.Biol.48:443 (1970)])의 알고리즘을 이용하여 수행한다. 서열 동일성의 백분율은 예를 들어, BLOSUM62 매트릭스와 함께, 프로그램 Needle 및 다음 매개변수 갭-오픈(gap-open)=10, 갭-익스텐드(gap-extend)=0.5를 이용하여 용이하게 결정할 수 있다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 비슷한 화학적 성질(예컨대, 전하, 크기 및 소수성)을 나타내는 측쇄 R이 있는 다른 아미노산 잔기로 치환되는 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 성질을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 비슷한 화학적 성질을 나타내는 측쇄가 있는 아미노산의 군의 예는 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; 2) 지방족-히드록시 측쇄: 세린 및 트레오닌; 3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파르트산 및 글루타민; 및 7) 황-함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌. 보존적 아미노산 치환 집합은 아미노산 크기를 기초로 하여 정의될 수도 있다.
본 발명은 CEACAM5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 본 명세서에 사용된 용어 "hCEACAM5"는 인간 CEACAM5에 특이적으로 결합하는 인간 사이토카인 수용체를 의미한다. 특정 구현예에서, 환자에게 투여되는 항체는 hCEACAM5의 적어도 하나의 도메인에 특이적으로 결합한다.
본 발명자들은 인간 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5 단백질 모두에 대해 높은 친화도를 나타내며, 인간 CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7 및 CEACAM8 단백질 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM1, CEACAM6 및 CEACAM8 단백질과 유의미하게 교차 반응하지 않는 특이적인 마우스 항-CEACAM5 항체들을 생성하고, 스크리닝하고 선택하는 데에 성공하였다.
소위 "항체 MAb1"은,
- 서열
EVMLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGSYIYYLDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARPAYYGNPAMDYWGQGTSVTVSS(서열번호 14, CDR은 굵은 글씨로 나타냄)로 이루어진 중쇄의 가변 도메인으로서, FR1-H는 아미노산 위치 1 내지 25에 걸쳐 있고, CDR1-H는 아미노산 위치 26 내지 33에 걸쳐 있고, FR2-H는 아미노산 위치 34 내지 50에 걸쳐 있고, CDR2-H는 아미노산 위치 51 내지 58에 걸쳐 있고, FR3-H는 아미노산 위치 59 내지 96에 걸쳐 있고, CDR3-H는 아미노산 위치 97 내지 109에 걸쳐 있고, FR4-H는 아미노산 위치 110 내지 120에 걸쳐 있는, 상기 중쇄의 가변 도메인, 및
- 서열
DILMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNsYPLYTFGGGTKLEIK(서열번호 15, CDR은 굵은 글자로 나타냄)로 이루어지는 경쇄의 가변 도메인으로, 여기서 FR1-L은 아미노산 위치 1번 내지 26에 걸쳐 있고, CDR1-L은 아미노산 위치 27 내지 32에 걸쳐 있고, FR2-L은 아미노산 위치 33 내지 49에 걸쳐있고, CDR2-L은 아미노산 위치 50 내지 52에 걸쳐 있고, FR3-L은 아미노산 위치 53 내지 88에 걸쳐 있고, CDR3-L은 아미노산 위치 89 내지 98에 걸쳐 있고, FR4-L은 아미노산 위치 99 내지 108에 걸쳐 있는, 상기 경쇄의 가변 도메인을 포함한다.
소위 "항체 MAb2"는,
- 서열
EVQLQESGGVLVKPGGSLKLSCAASGFvFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVAYIsSgGGiTYFPDTVQGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLKSEDTAIYYCaAHYFGsSGPFAYWGQGTLVTVSA(서열번호 16, CDR은 굵은 글씨로 나타냄)로 이루어진 중쇄의 가변 도메인으로서, FR1-H는 아미노산 위치 1 내지 25에 걸쳐 있고, CDR1-H는 아미노산 위치 26 내지 33에 걸쳐 있고, FR2-H는 아미노산 위치 34 내지 50에 걸쳐 있고, CDR2-H는 아미노산 위치 51 내지 58에 걸쳐 있고, FR3-H는 아미노산 위치 59 내지 96에 걸쳐 있고, CDR3-H는 아미노산 위치 97 내지 109에 걸쳐 있고, FR4-H는 아미노산 위치 110 내지 120에 걸쳐 있는, 상기 중쇄의 가변 도메인, 및
- 서열
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIFSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNTKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIK(서열번호 17, CDR은 굵은 글자로 나타냄)로 이루어지는 경쇄의 가변 도메인으로, FR1-L은 아미노산 위치 1 내지 26에 걸쳐 있고, CDR1-L은 아미노산 위치 27 내지 32에 걸쳐 있고, FR2-L은 아미노산 위치 33 내지 49에 걸쳐 있고, CDR2-L은 아미노산 위치 50 내지 52에 걸쳐 있고, FR3-L은 아미노산 위치 53 내지 88에 걸쳐 있고, CDR3-L은 아미노산 위치 89 내지 97에 걸쳐 있고, FR4-L은 아미노산 위치 98 내지 107에 걸쳐 있는, 상기 경쇄의 가변 도메인을 포함한다.
또한, CDR2-L에 K52R 치환을 도입함으로써 항체 MAb2의 변이체를 생성시켰다. 본 출원에서 "Mab2K52R"로 지칭되는 이러한 변이체는 인간 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5에 대해 MAb2와 기본적으로 동일한 친화도를 나타낸다.
소위 "항체 MAb3"은,
- 서열
EVKLVESGGGLVKPGGSLTLPCAASGFTFSrYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGdtYYPDSVKGRFTVSRDNARNILFLQMSSLRSEDTGMYYCARvnYYdssflDwWGQGTTLTVSS(서열번호 18, CDR은 굵은 글씨로 나타냄)로 이루어진 중쇄의 가변 도메인으로서, FR1-H는 아미노산 위치 1 내지 25에 걸쳐 있고, CDR1-H는 아미노산 위치 26 내지 33에 걸쳐 있고, FR2-H는 아미노산 위치 34 내지 50에 걸쳐 있고, CDR2-H는 아미노산 위치 51 내지 57에 걸쳐 있고, FR3-H는 아미노산 위치 58 내지 95에 걸쳐 있고, CDR3-H는 아미노산 위치 96 내지 108에 걸쳐 있고, FR4-H는 아미노산 위치 109 내지 119에 걸쳐 있는, 상기 중쇄의 가변 도메인, 및
- 서열
DIVMTQSQRFMSTLEGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNnYPLYTFGGGTKLEIK(서열번호 19, CDR은 굵은 글자로 나타냄)로 이루어지는 경쇄의 가변 도메인으로서, FR1-L은 아미노산 위치 1 내지 26에 걸쳐 있고, CDR1-L은 아미노산 위치 27 내지 32에 걸쳐 있고, FR2-L은 아미노산 위치 33 내지 49에 걸쳐 있고, CDR2-L은 아미노산 위치 50 내지 52에 걸쳐 있고, FR3-L은 아미노산 위치 53 내지 88에 걸쳐 있고, CDR3-L은 아미노산 위치 89 내지 98에 걸쳐 있고, FR4-L은 아미노산 위치 99 내지 108에 걸쳐 있는, 상기 경쇄의 가변 도메인을 포함한다.
소위 "항체 MAb4"는,
- 서열
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFtFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVAFIsSyGGrTYYADTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMFYCaAHYFGtSGPFAYWGQGTLVTVSA(서열번호 20, CDR은 굵은 글씨로 나타냄)로 이루어진 중쇄의 가변 도메인으로서, FR1-H는 아미노산 위치 1 내지 25에 걸쳐 있고, CDR1-H는 아미노산 위치 26 내지 33에 걸쳐 있고, FR2-H는 아미노산 위치 34 내지 50에 걸쳐 있고, CDR2-H는 아미노산 위치 51 내지 58에 걸쳐 있고, FR3-H는 아미노산 위치 59 내지 96에 걸쳐 있고, CDR3-H는 아미노산 위치 97 내지 109에 걸쳐 있고, FR4-H는 아미노산 위치 110 내지 120에 걸쳐 있는, 상기 중쇄의 가변 도메인, 및
- 서열
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYFAWYQQKQGKSPQLLVYNaKILAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGTYYCQHHYGiPFTFGSGTKLELK(서열번호 21, CDR은 굵은 글자로 나타냄)로 이루어지는 경쇄의 가변 도메인으로, FR1-L은 아미노산 위치 1 내지 26에 걸쳐 있고, CDR1-L은 아미노산 위치 27 내지 32에 걸쳐 있고, FR2-L은 아미노산 위치 33 내지 49에 걸쳐 있고, CDR2-L은 아미노산 위치 50 내지 52에 걸쳐 있고, FR3-L은 아미노산 위치 53 내지 88에 걸쳐 있고, CDR3-L은 아미노산 위치 89 내지 97에 걸쳐 있고, FR4-L은 아미노산 위치 98 내지 107에 걸쳐 있는, 상기 경쇄의 가변 도메인을 포함한다.
소위 "항체 MAb5"는,
- 서열
ELQLVESGGVLVKPGGSLKLSCAASGFaFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVTYInSgGGiTYYPDTVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLKSEDTAIYYCtAHYFGsSGPFAYWGQGTLVTVSA(서열번호 22, CDR은 굵은 글씨로 나타냄)로 이루어진 중쇄의 가변 도메인으로서, FR1-H는 아미노산 위치 1 내지 25에 걸쳐 있고, CDR1-H는 아미노산 위치 26 내지 33에 걸쳐 있고, FR2-H는 아미노산 위치 34 내지 50에 걸쳐 있고, CDR2-H는 아미노산 위치 51 내지 58에 걸쳐 있고, FR3-H는 아미노산 위치 59 내지 96에 걸쳐 있고, CDR3-H는 아미노산 위치 97 내지 109에 걸쳐 있고, FR4-H는 아미노산 위치 110 내지 120에 걸쳐 있는, 상기 경쇄의 가변 도메인, 및
- 서열
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNaKTLTEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGtPFTFGSGTKLEIK(서열번호 23, CDR은 굵은 글자로 나타냄)로 이루어지는 경쇄의 가변 도메인으로, FR1-L은 아미노산 위치 1 내지 26에 걸쳐 있고, CDR1-L은 아미노산 위치 27 내지 32에 걸쳐 있고, FR2-L은 아미노산 위치 33 내지 49에 걸쳐 있고, CDR2-L은 아미노산 위치 50 내지 52에 걸쳐 있고, FR3-L은 아미노산 위치 53 내지 88에 걸쳐 있고, CDR3-L은 아미노산 위치 89 내지 97에 걸쳐 있고, FR4-L은 아미노산 위치 98 내지 107에 걸쳐 있는, 상기 경쇄의 가변 도메인을 포함한다.
이들 항체의 다수의 변경 및 변이체는 국제 특허 제WO2014079886호에 기재되어 있고, 이는 전문이 참조에 의해 포함된다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 항체 huMAb2-3 또는 이의 변이체, 즉, 인간 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5 단백질의 A3-B3 도메인과 결합하는 분리된 항체로서, 이는,
a) 서열 서열번호 8 또는 이에 대해 적어도 85% 동일한 서열로 이루어지는 중쇄; 또는
b) 서열 서열번호 9 또는 이에 대해 적어도 85% 동일한 서열로 이루어지는 경쇄 또는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
다양한 구현예에서, 본 발명은 인간 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5와 결합하는 항체에 관한 것이다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5의 A3-B3 도메인과 결합한다. 더욱 구체적으로는, 이러한 항체는 분리된 형태로 발현되든 또는 가용성의 세포외 도메인 또는 막 결합 전체 길이의 CEACAM5 단백질로 존재하든 간에 개의치 않고 인간 및 마카카 파시쿨라리스 A3-B3 도메인에 결합할 수 있다.
백인 집단에서 2%를 초과하는 빈도로 어떠한 SNP도 인간 CEACAM5의 A3-B3 도메인에서 보고되지 않았으며, 이는 CEACAM5 상에서 이러한 항체들의 에피토프(들)이 집단의 일부분에서 변경될 위험을 최소화하므로, 이러한 도메인에 대한 이러한 항체들의 특이성은 유리하다.
일 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 항체는 표면의 인간 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5 단백질에 대해 특이적이다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 CEACAM1, 인간 CEACAM6, 인간 CEACAM7, 인간 CEACAM8, 마카카 파시쿨라리스 CEACAM1, 마카카 파시쿨라리스 CEACAM6 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM8 단백질과 결합하지 않거나, 이들과 유의미하게 교차 반응하지 않는다.
다양한 구현예에서, 이러한 항체는 전술된 인간 및 마카카 파시쿨라리스 CEACAM 단백질들의 세포외 도메인과 결합하지 않거나, 이들과 유의미하게 교차 반응하지 않는다.
인간 CEACAM1 전체 길이의 단백질은 등록번호 NP_001703.2로 유전자 은행 데이터베이스에서 이용 가능하다. 인간 CEACAM1의 세포외 도메인은 이 단백질의 위치 35~428의 아미노산으로 이루어진다. 인간 CEACAM6 전장 단백질은 등록번호 NP_002474.3로 유전자 은행 데이터베이스에서 이용 가능하다. 인간 CEACAM6의 세포외 도메인은 이 단백질의 위치 35~327의 아미노산으로 이루어진다.
인간 CEACAM7 전장 단백질은 등록번호 NP_008821.1로 유전자 은행 데이터베이스에서 이용 가능하다. 인간 CEACAM7의 세포외 도메인은 이 단백질의 위치 36~248의 아미노산으로 이루어진다.
인간 CEACAM8 전장 단백질은 등록번호 NP_001807.2로 유전자 은행 데이터베이스에서 이용 가능하다. 인간 CEACAM8의 세포외 도메인은 이 단백질의 위치 35~332의 아미노산으로 이루어진다.
엠. 파시쿨라리스 CEACAM1 세포외 도메인은 전체 길이 단백질의 위치 35~428의 아미노산, 즉, 단백질의 1~394번 아미노산으로 이루어진다.
엠. 파시쿨라리스 CEACAM6 세포외 도메인은 전체 길이 단백질의 위치 35~327의 아미노산, 즉, 단백질의 1~293번 아미노산으로 이루어진다.
엠. 파시쿨라리스 CEACAM8 세포외 도메인은 전체 길이 단백질의 위치 35~332의 아미노산, 즉, 단백질의 1~298번 아미노산으로 이루어진다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체"는 4개의 폴리펩티드 쇄, 이황화 결합에 의해 상호 연결되는 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄를 포함하는 면역글로불린 분자, 및 이의 다량체(예를 들어, IgM)를 지칭한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 HCVR 또는 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 명세서에서 LCVR 또는 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인(CL1)을 포함한다. VH 및 VL 영역은, 프레임워크 영역(FR)으로 명명된 보다 보존된 영역이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 명명된, 초가변성의 영역으로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노 말단에서부터 카르복시 말단까지 다음과 같은 순서로 배열된 3개의 CDR과 네 개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 일부 구현예에서, 항체(또는 이의 항원 결합 부분)의 FR은 인간 생식세포 계열 서열과 동일할 수 있거나, 천연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 컨센서스 서열은 둘 이상의 CDR의 병행 분석을 기준으로 정의될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 용어 "항체"는 또한 전체 항체 분자의 항원 결합 단편을 포함한다. 본 명세서에 사용된 용어, 항체의 "항원 결합 부분", 항체의 "항원 결합 단편" 등은 항원과 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는, 임의의 천연 발생적인, 효소적으로 획득할 수 있는, 합성의, 또는 유전자 공학에 의해 생성된 폴리펩티드 또는 당단백질이다. 항체의 항원 결합 단편은, 예를 들어 항체 가변 도메인 및 선택적으로, 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 수반하는 단백질 분해 또는 재조합 유전자 조작 기술과 같은 임의의 적절한 표준 기술을 사용하여 완전한 항체 분자로부터 유래될 수 있다. 이러한 DNA는, 예를 들어 상업적 공급처, DNA 라이브러리(예를 들어, 파지-항체 라이브러리를 포함)로부터 알려져 있고/있거나 용이하게 이용 가능하거나, 또는 합성될 수 있다. DNA는 화학적으로 또는 분자 생물학 기술을 사용하여, 예를 들어 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적절한 구성으로 배열하는 것, 또는 코돈을 도입하거나, 시스테인 잔기를 생성하거나, 아미노산을 변형, 부가 또는 결실시키는 것 등에 의해 서열결정 및 조작될 수 있다.
항원-결합 단편의 비-제한적인 예는 (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역을 모방하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소 인식 단위(예를 들어, 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 예를 들어, CDR3 펩티드) 또는 구속된 FR3-CDR3-FR4 펩티드를 포함한다. 다른 조작된 분자, 예컨대, 도메인 특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실 항체, 키메라 항체, CDR-그래프팅된 항체, 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 테트라바디(tetrabody), 미니바디(minibody), 나노바디(nanobody)(예를 들어, 1가 나노바디, 및 2가 나노바디), 소형 모듈형 면역약제(SMIP: small modular immunopharmaceutical) 및 샤크(shark) 가변 IgNAR 도메인이 본 명세서에 사용된 표현 "항원-결합 단편" 내에 또한 포함된다.
항체의 항원 결합 단편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성을 가질 수 있고, 하나 이상의 프레임워크 서열에 인접하거나, 이와 인 프레임(in frame)으로 존재하는 적어도 하나의 CDR을 일반적으로 포함할 것이다. VL 도메인과 회합되는 VH 도메인을 가지는 항원-결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 임의의 적합한 배열로 서로에 대해 위치할 수 있다. 예를 들어, 가변 영역은 이량체일 수 있고, VH-VH, VH-VL 또는 VL-VL 이량체를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체의 항원 결합 단편은 단량체의 VH 또는 VL 도메인을 함유할 수 있다.
일부 구현예에서, 항체의 항원 결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유적으로 연결된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 항체의 항원 결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적인 예시적인 구성은(i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL을 포함한다. 위에 열거된 예시적인 구성들 중 임의의 것을 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 구성에서, 가변 및 불변 도메인은 서로 직접적으로 연결될 수 있거나 또는 전체 또는 부분 힌지 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 다양한 구현예에서, 힌지 영역은 단일 폴리펩티드 분자에서 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이의 가요성 또는 반가요성 결합을 초래하는 적어도 2개의(예를 들어, 5, 10, 15, 20, 40, 60개의 또는 이보다 더 많은) 아미노산으로 이루어질 수 있다. 게다가, 다양한 구현예에서, 항체의 항원-결합 단편은(예를 들어, 디설파이드 결합(들)에 의해) 서로 및/또는 하나 이상의 단량체형 VH 또는 VL 도메인과 비-공유 회합된 상기 열거된 임의의 가변 및 불변 도메인 배열의 호모-이량체 또는 헤테로-이량체(또는 기타 다량체)를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 방법에 이용하기 위한 항체 또는 항체 단편은 다중특이적인 항체일 수 있으며, 이러한 다중특이적인 항체는 하나의 표적 폴리펩티드의 상이한 에피토프들에 특이적일 수 있거나, 둘 이상의 표적 폴리펩티드의 에피토프들에 대해 특이적인 항원 결합 도메인들을 함유할 수 있다. 본 발명의 맥락에서 이용될 수 있는 예시적인 2특이성 항체 포맷은 제1 면역글로불린(Ig) CH3 도메인과 제2 Ig CH3 도메인의 이용을 수반하며, 여기서, 제1 및 제2 Ig CH3 도메인은 서로 적어도 하나의 아미노산이 다르고, 적어도 하나의 아미노산 차이는 아미노산 차이가 결여된 2특이성 항체에 비해, 단백질 A에 대한 2특이성 항체의 결합성을 감소시킨다. 일 구현예에서, 제1 Ig CH3 도메인은 단백질 A에 결합하고, 제2 Ig CH3 도메인은 H95R 변형 (IMGT 엑손 넘버링에 의함; EU 넘버링에 의하면 H435R)과 같은, 단백질 A 결합을 감소시키거나 없애는 돌연변이를 함유한다. 제2 CH3은 Y96F 변형 (IMGT에 의함; EU에 의하면 Y436F)을 더 포함할 수 있다. 제2 CH3 내에서 발견될 수 있는 추가의 변형은 다음을 포함한다: IgG1 항체의 경우 D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, 및 V82I(IMGT에 의한; EU에 의하면 D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, 및 V422I); IgG2 항체의 경우 N44S, K52N, 및 V82I(IMGT; EU에 의하면 N384S, K392N, 및 V422I); 그리고 IgG4 항체의 경우 Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, 및 V82I(IMGT에 의한; EU에 의하면 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, 및 V422I). 상기에 기재된 이중특이적 항체 포맷의 변화가 본 발명의 범위 내에서 고려된다. 다양한 구현예에서, 본 명세서에 개시된 예시적인 2특이성 항체 포맷을 포함하는 임의의 다중특이성 항체 포맷은 본 기술 분야에서 이용 가능한 일상적인 기술을 사용하여 항-CEACAM5 항체의 항원-결합 단편의 맥락에서의 사용용으로 맞추어질 수 있다.
본 명세서에 개시된 항-CEACAM5 항체는 상응하는 생식 계열 서열들에 비해, 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 및/또는 CDR 부위에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는 본 명세서에 개시된 아미노산 서열을 예를 들어, 공개된 항체 서열 데이터베이스로부터 이용할 수 있는 생식계열 서열과 비교함으로써 용이하게 확인할 수 있다. 본 발명은 본 명세서에 개시된 임의의 아미노산 서열로부터 유래된 것으로서, 여기서, 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 부위 내의 하나 이상의 아미노산들이 상응하는 생식 계열 잔기(들)로, 또는 상응하는 생식 계열 잔기(들)의 보존적인 아미노산 치환(자연 발생적인 또는 자연 발생적이지 않은)으로 복귀 돌연변이되는 (그러한 서열 변화들을 본 명세서에서는 "생식 계열 복귀 돌연변이"라 한다) 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 당해 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자라면, 본 명세서에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 부위 서열로 시작하여, 하나 이상의 개별적인 생식 계열 복귀 돌연변이 또는 이의 조합을 포함하는 수많은 항체 및 항원 결합 단편들을 용이하게 생산할 수 있다. 일부 구현예에서, VH 및/또는 VL 도메인들 내의 모든 프레임워크 잔기 및/또는 CDR 잔기들은 생식 계열 서열로 복귀 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 소정 잔기들만이, 예를 들어, FR1의 처음 8개 아미노산 내에서 또는 FR4의 마지막 8개 아미노산 내에서 발견되는 돌연변이된 잔기만, 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견되는 돌연변이된 잔기만 생식세포 계열 서열로 복귀 돌연변이된다. 더욱이, 본 발명의 항체는 프레임워크 및/또는 CDR 영역들 내에 둘 이상의 생식세포 계열 복귀 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있으며, 즉, 소정의 개별적인 잔기들은 생식세포 계열 서열로 복귀 돌연변이되는 반면, 생식세포 계열 서열과 상이한 소정의 다른 잔기들은 유지된다. 하나 이상의 생식세포 계열 복귀 돌연변이들을 함유하는 항체 및 항원 결합 단편은, 일단 얻어지면, 개선된 결합 특이성, 증가된 결합 친화도, (경우에 따라) 개선된 또는 향상된 길항작용적 또는 효능작용적 생물학적 특성, 감소된 면역원성 등과 같은 하나 이상의 원하는 특성에 대해 용이하게 시험될 수 있다. 이러한 일반적인 방식으로 얻어진 항체 및 항원-결합 단편은 본 발명 내에 포함된다.
항체의 불변 영역은 보체를 고정하고 세포 의존성 세포독성을 매개하는 항체의 능력에서 중요하다. 따라서, 항체가 세포독성을 매개하는 것이 바람직한지 여부를 기초로 하여, 항체의 이소형이 선택될 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "인간 항체"는 인간 생식세포 면역 글로불린 서열로부터 유래된 가변 부위 및 불변 부위를 가지고 있는 항체를 포함하고자 한 것이다. 그럼에도 불구하고, 다양한 구현예에서, 본 개시내용에서의 특징적인 인간 항체는, 예를 들어 CDR 및 일부 구현예에서 CDR3에서 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관 내에서의 무작위 또는 위치-특이적 돌연변이 유발에 의해 또는 생체 내에서의 체세포 돌연변이에 의해 도입되는 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나 본 명세서에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유동물 종의 생식계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 이식된 항체를 포함하고자 한 것이 아니다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해서 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 모든 인간 항체, 예컨대, 숙주 세포에 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체(아래에서 추가로 설명됨), 재조합체로부터 단리된 항체, 조합 인간 항체 라이브러리(아래에서 추가로 설명됨), 인간 면역글로불린 유전자에 대한 유전자 이식 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체(예를 들어, 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함된 문헌[Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295]) 또는 다른 DNA 서열에 대한 인간 면역글로불린 유전자 서열의 스플라이싱을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해서, 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 항체를 포함하도록 의도된다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나 특정 구현예에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이유발(또는, 인간 Ig 서열에 대해 이식 유전자를 가진 동물이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발)을 겪고, 이에 따라 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식계 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 그와 관련되는 한편, 생체내 인간 항체 생식계 레퍼토리 내에서 천연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
인간 항체는 힌지 이질성(hinge heterogeneity)과 관련이 있는 두 가지 형태로 존재할 수 있다. 일 구현예에서, 면역글로불린 분자는 이량체가 쇄간 중쇄 디설파이드 결합에 의해 함께 유지되는 약 150 내지 160 kDa의 안정한 4개 쇄 작제물을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 이량체는 쇄간 디설파이드 결합을 통해 연결되지 않고, 공유 결합된 경쇄 및 중쇄(하프-항체)로 구성된 약 75 내지 80 kDa의 분자가 형성된다. 이러한 구현예/형태는 심지어 친화성 정제 후에도 분리가 극도로 어려웠다.
용어 "인간화 항체" 또는 "인간화된 항체"는 전체적으로 또는 부분적으로 비 인간 기원이고, 인간에서 면역 반응을 회피하거나 최소화하기 위하여 예를 들어, VH 및 VL 도메인의 프레임워크 부위의, 특정 아미노산을 교체하도록 변형된 항체를 지칭한다. 인간화 항체의 불변 도메인은 대부분의 경우 인간 CH 및 CL 도메인이다.
항체 서열의 인간화(humanisation/humanization) 를 위한 다수의 방법이 해당 분야에 알려져 있으며; 예를 들어, 문헌[Almagro & Fransson (2008) Front Biosci. 13: 1619-1633]에 의한 검토를 참조한다. 한 가지 흔히 사용되는 방법은 CDR 그래프팅, 또는 항체 재성형으로, 이는 공여체 항체, 일반적으로 마우스 항체의 CDR 서열들을 상이한 특이성의 인간 항체의 프레임워크 스캐폴드로 그래프팅하는 것을 수반한다. CDR 그래프팅은 CDR이 그래프팅된 비 인간 항체의 결합 특이성 및 친화도를 감소시킬 수 있고, 따라서 생물학적 활성을 감소시킬 수 있으므로, 모항체의 결합 특이성 및 친화도를 유지하기 위하여 CDR 그래프팅된 항체의 선택된 위치에 역돌연변이를 도입할 수 있다. 가능성 있는 역돌연변이를 위한 위치들의 확인은 문헌에서 및 항체 데이터베이스에서 이용 가능한 정보를 이용하여 수행할 수 있다. 역 돌연변이를 위한 후보인 아미노산 잔기는 전형적으로 항체 분자의 표면에 위치된 것들이지만, 매장되거나 낮은 정도의 표면 노출을 갖는 잔기는 일반적으로 변경되지 않을 것이다 CDR 그래프팅 및 역돌연변이에 대한 대안적인 인간화 기법은 재표면화(resurfacing)로, 여기서 비 인간 기원의 표면에 노출되지 않은 잔기들은 유지되지만, 표면 잔기들은 인간 잔기들로 변경된다. 또 다른 대안적인 기법은 "유도 선택(guided selection)"으로 알려져 있으며(Jespers et al. (1994) Biotechnology 12, 899), 쥐 항체로부터 에피토프 및 모항체의 결합 특성을 보존하는 완전 인간 항체를 도출하는 데 이용될 수 있다.
여러 가지 온전한 IgG 이소형에 있어서, 두 번째 형태의 출현 빈도는 항체의 힌지 영역 이소형과 관련된 구조적 차이 때문이나, 이에 한정되지 않는다. 인간 IgG4 경첩의 경첩 부위에서의 단일 아미노산 치환은, 두 번째 형태의 출현을 인간 IgG1 경첩을 이용할 때 전형적으로 관찰된 수준까지 상당히 줄일 수 있다(전문이 참조에 의해 포함된 문헌[Angal et al., (1993) Molecular Immunology 30:105]). 다양한 구현예에서 본 개시내용은 예를 들어 생성에 있어서 원하는 항체 형태의 수율을 개선시키기에 바람직할 수 있는 힌지, CH2 또는 CH3 영역에서의 하나 이상의 돌연변이를 갖는 항체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 "단리된 항체"는 확인되고, 그의 천연 환경의 적어도 하나의 구성성분으로부터 분리되고/거나 회수된 항체를 의미한다. 예를 들어, 항체가 천연적으로 존재하거나, 천연적으로 생성된 유기체의 적어도 하나의 구성성분으로부터, 조직 또는 세포로부터 분리 또는 제거된 항체는 "단리된 항체"이다. 다양한 구현예에서, 단리된 항체는 재조합 세포 내의 원위치의 항체를 또한 포함한다. 다른 구현예에서, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 또는 단리 단계가 가해진 항체이다. 다양한 구현예에서, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
용어 "특이적으로 결합하는" 등은 생리 조건 하에서 상대적으로 안정적인 복합체를 항원과 함께 형성하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 의미한다. 항체가 항원에 특이적으로 결합하는지를 결정하는 방법은 당해 분야에 잘 알려져 있고, 예를 들어 평형 투석, 표면 플라즈몬 공명 등을 포함한다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, CEACAM5에 "특이적으로 결합하는" 항체는 표면 플라스몬 공명 분석에서 측정될 경우 약 1000 nM 미만, 약 500 nM 미만, 약 300 nM 미만, 약 200 nM 미만, 약 100 nM 미만, 약 90 nM 미만, 약 80 nM 미만, 약 70 nM 미만, 약 60 nM 미만, 약 50 nM 미만, 약 40 nM 미만, 약 30 nM 미만, 약 20 nM 미만, 약 10 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 4 nM 미만, 약 3 nM 미만, 약 2 nM 미만, 약 1 nM 미만 또는 약 0.5 nM 미만의 KD로 CEACAM5 또는 이의 부분에 결합하는 항체를 포함한다. 특이적인 결합은 또한 적어도 약 1×10-6 M의 또는 이보다 더 작은 해리 상수를 특징으로 할 수 있다. 다른 구현예에서, 해리 상수는 적어도 약 1×10-7 M, 1×10-8 M 또는 1×10-9 M이다. 그러나 인간 CEACAM5에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른(비-인간) 종 유래의 CEACAM5 분자와 같은 다른 항원과의 교차-반응성을 가질 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "표면 플라즈몬 공명"은, 예를 들어 비아코어(BIAcore)™ 시스템(Biacore Life Sciences division of GE Healthcare, 미국 뉴저지주 피스케이타웨이 소재)을 사용하여 바이오센서 매트릭스 내 단백질 농도의 변화의 검출에 의해 실시간 상호 작용의 분석을 가능하게 하는 광학 현상을 말한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "KD"는 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 나타내고자 한다.
"친화성"은 이론적으로, 전체 항체와 항원 간의 평형 회합에 의해 정의된다. 친화도는 표면 플라스몬 공명으로 결합 및 해리 속도를 측정하는 방법 또는 면역화학 검정법(ELISA, FACS)에서 EC50(또는 겉보기 KD)을 측정하는 방법과 같은 다양한 알려진 방법들에 의해 평가될 수 있다. 이러한 분석법에서, EC50은 ELISA(효소 결합 면역 흡착 측정법)에 의한 정의된 농도의 항원 또는 FACS(형광 활성 세포 분류법)에 의한 항원을 발현하는 정의된 농도의 세포에 대한 어느 정도의 소정의 노출 시간 후의 기준선 및 최대 사이의 절반 정도의 반응을 유도하는 항체 농도이다.
항원 1(Ag1)에 결합하는 단클론성 항체는, EC50이 두 항원 모두에 대해 유사한 범위로 존재하는 경우, 항원 2(Ag2)에 대해 "교차-반응성"이다. 본 출원에서, Ag1에 대한 단클론성 항체 결합은 Ag2에 대해, Ag1에 대한 친화도에 대한 Ag2에 대한 친화도의 비율이 10 이하(예를 들어, 5, 2, 1 또는 0.5)일 때, 교차 반응적이며, 친화도는 두 항원 모두에 대해 동일한 방법으로 측정된 것이다.
인간 CEACAM5에 대한 친화도 또는 마카카 파시쿨라리스 CEACAM5에 대한 친화도는 포획 항원으로서 가용성 재조합 CEACAM5를 이용하여 ELISA에서 EC50 값으로서 결정될 수 있다.
또한, 본 발명의 항체는 25 nM 이하, 예를 들어 20 nM 이하, 10 nM 이하, 5 nM 이하, 3 nM 이하 또는 1 nM 이하인, 종양 세포주 MKN45(DSMZ, ACC 409)에 대한, 또는 환자로부터 유래되는 이종 이식 종양 세포(Oncodesign Biotechnology로부터 이용 가능한 CR-IGR-034P, 종양 컬렉션 CReMEC)에 대한 FACS 분석법으로 결정될 수 있는, 겉보기 해리 상수(겉보기 KD)를 나타낼 수 있다. 겉보기 KD는 0.01~20 nM의 범위 내일 수 있거나, 0.1~20 nM, 0.1~10 nM, 또는 0.1~5 nM의 범위 내일 수 있다.
추가적으로, 본 발명에 따른 항체는, 동결되고 포르말린으로 고정되고 파라핀으로 포매된(FFPE) 조직 박편에서 면역조직화학법에 의해 CEACAM5 발현을 검출할 수 있는 것으로 나타났다.
용어 "에피토프"는 파라토프로 알려진 항체 분자의 가변 영역 내의 특정 항원 결합 위치와 상호작용하는 항원 결정기(determinant)를 말한다. 단일 항원은 둘 이상의 에피토프를 보유할 수 있다. 따라서, 상이한 항체는 항원 상의 상이한 영역에 결합할 수 있고, 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. 에피토프는 입체형태적 또는 선형일 수 있다. 입체형태적인 에피토프는 선형의 폴리펩티드 쇄의 상이한 부분들로부터 공간적으로 나란히 놓인 아미노산에 의해 생성된다. 선형의 에피토프는 폴리펩티드 쇄 내의 인접한 아미노산 잔기들에 의해 생성된 것이다. 특정 상황에서, 에피토프는 항원 상의 당류, 포스포릴기, 또는 술포닐기의 모이어티를 포함할 수 있다.
다양한 구현예에서 본 명세서에 기재된 방법에 유용한 항-CEACAM5 항체는 항체가 유래된 상응하는 생식세포 계열 서열과 비교하여 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 및/또는 CDR 영역에서의 하나 이상의 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는 본 명세서에 개시된 아미노산 서열을 예를 들어, 공개된 항체 서열 데이터베이스로부터 이용할 수 있는 생식계열 서열과 비교함으로써 용이하게 확인할 수 있다. 다양한 구현예에서 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 아미노산 서열 중 임의의 것으로부터 유래된 항체 및 이의 항원-결합 단편의 이용을 수반하는 방법을 포함하며, 여기서, 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산은 항체가 유래된 생식세포 계열 서열의 상응하는 잔기(들) 또는 또 다른 인간 생식세포 계열 서열의 상응하는 잔기(들) 또는 상응하는 생식세포 계열 잔기(들)의 보존적 아미노산 치환(그러한 서열 변화는 본 명세서에서 "생식세포 계열 돌연변이"로 총칭됨)으로 돌연변이된다. 다수의 항체 및 항원-결합 단편이 작제될 수 있는데, 이는 하나 이상의 개별 생식세포 계열 돌연변이 또는 이의 조합을 포함한다. 특정 구현예에서, VH 및/또는 VL 도메인 내의 프레임워크 및/또는 CDR 잔기 모두는 항체가 유래되는 원래의 생식계 서열에서 관찰되는 잔기로 다시 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 오직 특정 잔기만, 예를 들어, FR1의 처음 8개 아미노산 또는 FR4의 마지막 8개 아미노산 내에서 발견되는 돌연변이된 잔기만이 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견되는 돌연변이된 잔기만 원래의 생식계열 서열로 다시 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 프레임워크 및/또는 CDR 잔기(들) 중 하나 이상은 상이한 생식계열 서열(즉, 항체가 원래 유래된 생식계열 서열과 상이한 생식계열 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이된다. 더욱이, 항체는 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내의 둘 이상의 생식세포 계열 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있으며, 예를 들어, 특정한 개별 잔기가 특정한 생식세포 계열 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이되는 한편, 원래의 생식세포 계열 서열과는 상이한 특정한 다른 잔기는 유지되거나, 상이한 생식세포 계열 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이된다. 하나 이상의 생식세포 계열 돌연변이들을 함유하는 항체 및 항원 결합 단편들은, 일단 얻어지면, 개선된 결합 특이성, 증가된 결합 친화도, (경우에 따라) 개선된 또는 향상된 길항적 또는 작용적 생물학적 특성, 감소된 면역원성 등과 같은 하나 이상의 원하는 특성에 대해 용이하게 시험될 수 있다. 이러한 일반적인 방식으로 얻은 항체 및 항원-결합 단편의 사용은 본 개시내용에 포함된다.
또한, 본 개시내용은 하나 이상의 보존적 치환을 갖는 본 명세서에 개시된 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열 중 임의의 것의 변이체를 포함하는 항-CEACAM5 항체의 이용을 수반하는 방법을 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용은 본 명세서에서 개시되는 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열 중 임의의 것에 대해, 예를 들어 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환이 있는 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열을 갖는 항-CEACAM5 항체의 용도를 포함한다.
본 개시내용에 따르면, 다양한 구현예에서, 항-CEACAM5 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역(HCVR), 경쇄 가변 영역(LCVR), 및/또는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하며, 이는 국제 특허 공개 제WO 2014/079886 A1호(본 명세서에 전문이 참조에 의해 포함됨)에 기재된 항-CEACAM5 항체의 아미노산 서열 중 임의의 것을 포함한다.
본 출원에 기술된 항체들의 아미노산 서열 변경(들)이 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 성질들을 향상시키는 것이 바람직할 수 있다. 인간 항체의 VH 및 VL의 FR에 비 인간 동물로부터 유래된 항체의 VH 및 VL의 CDR만을 단순히 그래프팅함으로써 인간화 항체가 생산될 때, 항원 결합 활성은 비 인간 동물로부터 유래된 본래의 항체의 항원 결합 활성과 비교할 때 감소될 수 있다고 알려져 있다. 비 인간 항체의 VH 및 VL의 몇몇 아미노산 잔기들은, CDR에서뿐만 아니라 FR에서도, 직접적으로 또는 간접적으로 항원 결합 활성과 관련이 있을 수 있다고 여겨진다. 따라서, 인간 항체의 VH 및 VL의 FR로부터 유래된 상이한 아미노산 잔기들로 이러한 아미노산 잔기들을 치환하면 결합 활성을 감소시킬 것이다. 이러한 문제를 해결하기 위하여, 비 인간 CDR로 그래프팅된 인간 항체에서, 인간 항체의 VH 및 VL의 FR의 아미노산 서열들 중에서 항체의 결합과 직접적으로 관련이 있는 아미노산 잔기, 또는 CDR의 아미노산 잔기와 상호 작용하는 아미노산 잔기, 또는 항체의 3차원적 구조를 유지하는 아미노산 잔기 및 항원과의 결합과 직접적으로 관련이 있는 아미노산 잔기를 확인하려는 시도가 이루어져야 한다. 감소된 항원 결합 활성은 확인된 아미노산을 비 인간 동물로부터 유래된 본래의 항체의 아미노산 잔기들로 교체함으로써 증가될 수 있다.
본 발명의 항체들의 구조 및 그것들을 암호화하는 DNA 서열들에 변화 및 변경이 이루어질 수 있으며, 또한 바람직한 특성을 나타내는 기능적인 항체 또는 폴리펩티드가 얻어질 수 있다.
본 발명의 추가적인 대상은 또한 본 발명의 폴리펩티드들의 기능-보존적 변이체들을 포괄한다. 예를 들어, 특정 아미노산은 주목할 만한 활성의 손실 없이 단백질 구조에 있어서 다른 아미노산으로 치환될 수 있다. 단백질의 상호적 능력 및 속성은 그것의 생물학적 기능적 활성을 정의하므로, 특정 아미노산 치환이 단백질 서열 내에서, 그리고 물론 그것의 서열을 암호화하는 DNA에서 이루어질 수 있지만, 그럼에도 유사한 성질을 나타내는 단백질을 획득할 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체 서열들, 또는 상기 폴리펩티드를 암호화하는 상응하는 DNA 서열들에서, 그것들의 생물학적 활성의 주목할 만한 손실 없이 다양한 변화들이 이루어질 수 있다고 예상된다. 특정 아미노산이 비슷한 소수친수 지수 또는 점수를 나타내는 다른 아미노산들로 치환될 수 있으며, 또한 비슷한 생물학적 활성을 나타내는 단백질을 초래할 수 있다는, 즉, 생물학적 기능적으로 동등한 단백질을 획득할 수 있다는 점은 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 또한, 본 발명의 항체 또는 폴리펩티드에서, 항원에 대한 결합의 유의미한 손실 없이 치환될 수 있는 모든 아미노산을 확인하기 위하여, 알라닌 스캐닝 접근법과 같은 잘 확립된 기술을 이용하는 것도 가능하다. 그러한 잔기는 중성인 것으로 간주될 수 있는데, 그것들은 항원 결합 또는 항체의 구조 유지에 관여하지 않기 때문이다. 이러한 중성 위치들 중 하나 이상은 본 발명의 항체 또는 폴리펩티드의 주요 특징들을 변경시키지 않고 알라닌 또는 다른 아미노산에 의해 치환될 수 있다.
중성 위치들은 임의의 아미노산 치환이 항체에 도입될 수 있는 위치들로서 볼 수 있다. 실제로, 알라닌 스캐닝 원칙에서, 알라닌이 선택되는데, 이 잔기는 특정한 구조적 또는 화학적 특징을 보유하지 않기 때문이다. 일반적으로, 알라닌이 단백질의 성질들을 바꾸지 않고 특정 아미노산에 대해 치환될 수 있다면, 전부는 아닐지라도 여러 다른 아미노산 치환들도 중성일 가능성이 높다고 인정되고 있다. 알라닌이 야생형 아미노산인 반대의 경우에, 특정한 치환이 중성으로 보여질 수 있다면, 다른 치환들도 중성일 가능성이 높다. 따라서, 위에서 개략적으로 설명한 바와 같이, 아미노산 치환은 아미노산 측쇄 치환기의 상대적인 유사성, 예를 들어, 그것들의 소수성, 친수성, 전하, 크기 등을 기초로 한다. 전술한 특징들 중 임의의 것을 고려하는 예시적인 치환은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 아르기닌과 리신; 글루탐산과 아스파르트산; 세린과 트레오닌; 글루타민과 아스파라긴; 및 발린, 류신과 이소류신을 포함한다.
예컨대, 항체의 항원 의존적 세포 매개 세포 독성(ADCC) 및/또는 보체 의존적 세포 독성(CDC)을 증진시키기 위하여, 본 발명의 항체를 효과기 기능에 대하여 변경하는 것 또한 바람직할 수 있다. 이것은 항체의 Fc 부위에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 시스테인 잔기(들)이 Fc 부위에 도입될 수 있는데, 이에 의해 이 부위에 쇄 내 이황화 결합이 형성될 수 있다. 이렇게 하여 생성된 동종이량체 항체는 향상된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체 매개 세포 살해 및/또는 항체 의존적 세포성 세포 독성(ADCC)을 나타낼 수 있다(문헌[Caron PC. et al. 1992; and Shopes B. 1992]).
본 발명의 항체의 다른 유형의 아미노산 변경은, 즉, 항체에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 모이어티를 제거 및/또는 항체에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 자리를 추가함으로써, 항체의 본래의 글리코실화 패턴을 바꾸는 데에 유용할 수 있다. 트리펩티드 서열인 아스파라긴-X-세린과 아스파라긴-X-트레오닌(여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다) 중 어느 하나의 존재는 가능성 있는 글리코실화 부위를 생성한다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 추가 또는 제거는 아미노산 서열이 상기에 기재된 트리펩티드 서열 중 하나 이상을 함유하도록(N 결합 글리코실화 부위) 아미노산 서열을 바꿈으로써 편리하게 달성된다.
또 다른 유형의 변경은 잠재적으로 분해 생성물 또는 항체 제제의 이질성을 초래하므로 인실리코(in silico) 또는 실험적으로, 확인된 서열들의 제거를 수반한다. 예로써, pH 및 표면 노출과 같은 인자들에 따라 아스파라긴 및 글루타민 잔기들의 탈아미드화가 일어날 수 있다. 아스파라긴 잔기는 주로 Asn-Gly 서열에 존재할 때 특히 탈아미드화에 취약하며, Asn-Ala과 같은 다른 디펩티드 서열에서는 정도가 덜하다. 따라서, 그러한 탈아미드화 자리, 특히 Asn-Gly이 본 발명의 항체 또는 폴리펩티드에 존재할 때, 전형적으로 보존적 치환에 의해 이러한 자리를 제거하여 관련된 잔기들 중 하나를 제거하는 것이 바람직할 수 있다. 관련된 잔기들 중 하나 이상을 제거하기 위한 서열에서의 그러한 치환 또한 본 발명에 의해 포괄되도록 의도된다.
또 다른 유형의 공유적 변경은 항체에 대해 화학적으로 또는 효소적으로 글리코시드를 결합시키는 것을 수반한다. 이러한 절차는 N- 또는 O-결합 글리코실화를 위하여 글리코실화 능력이 있는 숙주 세포에서 항체를 생산할 것을 요구하지 않는다는 점에서 유리하다. 이용되는 결합 모드에 따라, 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카르복실기, (c) 시스테인의 것과 같은 유리 설프하이드릴기, (d) 세린, 트레오닌 또는 하이드록시프롤린의 그것들과 같은 유리 하이드록실기, (e) 페닐알라닌, 티로신 또는 트립토판의 그것들과 같은 방향족 잔기, 또는 (f) 글루타민의 아미드기에 접착될 수 있다. 예를 들어, 이러한 방법은 국제 특허 제WO87/05330호에 기술되어 있다.
항체에 존재하는 임의의 탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소적으로 달성될 수 있다. 화학적 탈글리코실화는 항체를 트리플루오로메탄설폰산 화합물 또는 균등한 화합물에 노출시킬 것을 요구한다. 이러한 처리는 항체는 온전하게 두면서, 연결하는 당(N-아세틸글루코사민 또는 N-아세틸갈락토사민)을 제외하고는 대부분의 또는 모든 당들의 절단을 가져온다. 화학적 탈글리코실화는 문헌[Sojahr H. et al. (1987)] 및 문헌[Edge, AS. et al. (1981)]에 의해 기재되어 있다. 항체의 탄수화물 모이어티의 효소적 절단은 Thotakura, NR. 등(1987)이 기술한 바와 같이, 다양한 엔도- 및 엑소글리코시다제를 이용하여 달성될 수 있다.
또 다른 유형의 항체의 공유적 변경은 항체를 다양한 비 단백질성 고분자, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌 중 하나에 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호 또는 제4,179,337호에 기재된 방식으로 연결하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명의 항체는 항체 huMAb2-3 또는 이의 변이체이다. huMAb2-3 항체에 대한 상이한 아미노산 서열이 하기 서열번호 1 내지 9에 제시되어 있다.
서열번호 1의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열은 다음과 같다:
Figure pct00009
서열번호 2의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열은 다음과 같다:
Figure pct00010
서열번호 1 및 2의 CDR 서열은 하기에 열거되어 있고, 서열번호 3 내지 7을 포함한다.
서열번호 3의 아미노산 서열은 GFVFSSYD이다.
서열번호 4의 아미노산 서열은 ISSGGGIT이다.
서열번호 5의 아미노산 서열은 AAHYFGSSGPFAY이다.
서열번호 6의 아미노산 서열은 ENIFSY이다.
경쇄 CDR2의 아미노산 서열은 NTR이다.
서열번호 7의 아미노산 서열은 QHHYGTPFT이다.
서열번호 8의 중쇄 아미노산 서열은 다음과 같다:
Figure pct00011
서열번호 9의 경쇄 아미노산 서열은 다음과 같다:
Figure pct00012
본 개시내용에 따르면, 본 명세서에 개시된 항체는 인간 CEACAM5 단백질의 A3-B3 도메인의 에피토프에 결합한다. 본 개시내용의 항체에 의해서 결합되는 A3-B3 도메인 에피토프의 아미노산 서열은 SGANLNL(서열번호 10) 및 INGIPQQHTQVLF(서열번호 11)를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생물학적 등가물"은 효능 및 안전성 둘 다에 관련하여, 효과가 비교 분자와 본질적으로 동일한 것으로 예상될 수 있도록, 동일한 몰 용량에서, 그리고 유사한 조건(예를 들어, 동일한 투여 경로) 하에서 투여 후에 유사한 생체이용가능성(이용률 및 이용 가능 정도)을 갖는 분자를 나타낸다. 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 포함하는 2가지의 약제학적 조성물은 그들이 약제학적으로 동등하면, 생물학적 등가성이며, 이는 그들이 동일한 투여 경로에 있어서 동일한 투여 형태에 동일한 양의 활성 성분을 함유하는 것을 의미하며, 동일하거나 대등한 표준을 충족시킨다.
특정 구현예에서, 본 개시내용은 서열번호 1의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 2의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 이러한 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 이러한 약제학적 조성물의 사용 방법을 제공한다.
다양한 구현예에서 항체는 서열번호 1의 중쇄 가변 영역/도메인 내의 CDR 및 서열번호 2의 경쇄 가변 영역/도메인 내의 CDR을 포함한다. 다양한 구현예에서 항체는 서열번호 1의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호 2의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역은 CEACAM5에 특이적으로 결합하는 항체이다. 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 국제 공개 제WO 2014/079886 A1호를 참조한다. 일 구현예에서, 항체는 서열번호 8의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 9의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
면역접합체
본 발명은 또한 세포 독성 접합체, 또는 면역접합체, 또는 항체 약물 접합체, 또는 접합체를 포함한다. 본 출원에 사용된 모든 이러한 용어들은 동일한 의미를 나타내며 서로 교체 가능하다.
따라서, 본 발명은 세포독성제 또는 방사성 동위원소와 같은 적어도 하나의 성장 저해제에 연결된 또는 접합된, 본 발명의 항체를 포함하는 "면역접합체"에 관한 것이다.
차별 없이 사용할 수 있는 "성장 저해성 작용제" 또는 "항-증식제"는 세포, 특히, 종양 세포의 성장을 시험관 내 또는 생체 내에서 저해하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다.
본 출원에서 사용된 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 저해하거나 방지하고/하거나 세포의 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. "세포독성제"라는 용어는 화학치료제, 효소, 항생제, 및 소분자 독소 또는 박테리아, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소와 같은 독소(이의 단편 및/또는 변이체를 포함함) 및 아래에 기술된 다양한 항종양 또는 항암제를 포함하는 것으로 의도된다. 일부 구현예에서, 세포독성제는 탁소이드, 일일초(vincas), DM1 또는 DM4와 같은 메이탄시노이드 또는 메이탄시노이드 유사체, 작은 약물, 토메이마이신(tomaymycin) 또는 피롤로벤조디아제핀 유도체, 크립토피신 유도체, 렙토마이신 유도체, 아우리스타틴 또는 돌라스타틴 유사체, 전구약물, 토포이성질화효소 II 저해제, DNA 알킬화제, 항튜불린제, CC-1065 또는 CC-1065 유사체이다.
본 출원에 사용된 "메이탄시노이드"는 메이탄시노이드 및 메이탄시노이드 유사체를 가리킨다. 메이탄시노이드는 미세소관 형성을 저해하는 약물로서, 포유동물 세포에 독성이 매우 강하다.
적절한 메이탄시노이드의 예로는 메이탄시놀 및 메이탄시놀 유사체를 포함한다.
적절한 메이탄시놀 유사체의 예는 변경된 방향족 고리를 가지고 있는 것 및 다른 위치가 변경된 것을 포함한다. 이러한 적절한 메이탄시노이드는 미국 특허 제4,424,219호; 제4,256,746호; 제4,294,757호; 제4,307,016호; 제4,313,946호; 제4,315,929호; 제4,331,598호; 제4,361,650호; 제4,362,663호; 제4,364,866호; 제4,450,254호; 제4,322,348호; 제4,371,533호; 제6,333,410호; 제5,475,092호; 제5,585,499호 및 제5,846,545호에 개시되어 있다.
변경된 방향족 고리가 있는 메이탄시놀의 적절한 유사체들의 구체적인 예로는,
(1) C-19-데클로로(미국 특허 제4,256,746호)(안사미토신 P2의 LAH 환원에 의해 제조됨);
(2) C-20-하이드록시(또는 C-20-데메틸) +/-C-19-데클로로(미국 특허 제4,361,650호 및 제4,307,016호)(스트렙토마이세스 또는 액티노마이세스를 이용한 탈메틸화 또는 LAH를 이용한 탈염소화에 의해 제조됨); 및
(3) C-20-데메톡시, C-20-아실옥시(-OCOR), +/-데클로로(미국 특허 제4,294,757호)(염화아실을 이용한 아실화에 의해 제조됨)을 포함한다.
다른 위치에 변경이 있는 메이탄시놀의 적절한 유사체의 구체적인 예는,
(1) C-9-SH(미국 특허 제4,424,219호)(메이탄시놀과 H2S 또는 P2S5의반응에 의해 제조됨);
(2) C-14-알콕시메틸(데메톡시/CH2OR)(미국 특허 제4,331,598호);
(3) C-14-하이드록시메틸 또는 아실옥시메틸(CH2OH 또는 CH2OAc)(미국 특허 제4,450,254호)(노카디아(Nocardia)로부터 제조됨);
(4) C-15-하이드록시/아실옥시(미국 특허 제4,364,866호)(스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 전환에 의해 제조됨);
(5) C-15-메톡시(미국 특허 제4,313,946호 및 제4,315,929호)(트레위아 누디플로라(Trewia nudiflora)로부터 분리됨);
(6) C-18-N-데메틸(미국 특허 제4,362,663호 및 제4,322,348호)(스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 탈메틸화에 의해 제조됨); 및
(7) 4,5-데옥시(미국 특허 제4,371,533호)(메이탄시놀의 삼염화티타늄/LAH 환원에 의해 제조됨)를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 세포독성 접합체는 세포독성제로서, 공식적으로 N 2'-데아세틸-N 2'-(3-머캅토-1-옥소프로필)-메이탄신이라 지칭되는, 티올을 함유하는 메이탄시노이드(DM1)를 이용한다. DM1은 하기 화학식 I로 표현된다:
[화학식 I]
Figure pct00013
.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 세포독성 접합체는 세포독성제로서, 공식적으로 N 2'-데아세틸-N-2'(4-메틸-4-머캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신이라 지칭되는, 티올을 함유하는 메이탄시노이드 DM4를 이용한다. DM4는 하기 화학식 II로 표현된다:
[화학식 II]
Figure pct00014
.
본 발명의 추가적인 구현예에서, 황 원자를 보유하는, 탄소 원자 상에 모노- 또는 디-알킬 치환을 가지고 있는, 티올 및 디설파이드-함유 메이탄시노이드를 포함하는 기타 메이탄신이 이용될 수 있다. 이들은 장애형(hindered) 설프하이드릴 기를 가지고 있는 아실기가 있는 아실화된 아미노산 측쇄를 C-3, C-14 하이드록시메틸, C-15 하이드록시, 또는 C-20 데스메틸에 가지고 있는 메이탄시노이드를 포함하는데, 여기서, 티올 작용기를 보유하는 아실기의 탄소 원자는 하나 또는 두 개의 치환기를 가지고 있고, 상기 치환기는 CH3, C2H5, 용액에 존재할 수 있는 1 내지 10개의 시약 및 임의의 응집체를 가지고 있는 선형 또는 분지형 알킬 또는 알케닐이다.
이러한 세포독성제 및 접합 방법의 예는 참조로써 포함된 출원 WO2008/010101에 추가적으로 제공된다.
용어 "방사성 동위원소"는 At211, Bi212, Er169, I131, I125, Y90, In111, P32, Re186, Re188, Sm153, Sr89 및 Lu의 방사성 동위원소와 같은, 암을 치료하기에 적절한 방사성 동위원소를 포함하도록 의도된다. 이러한 방사성 동위원소는 일반적으로 주로 베타 방사선을 방출한다. 일 구현예에서, 이러한 방사성 동위원소는 알파 방출체 동위원소, 더욱 정확하게는 알파 방사선을 방출하는 토륨 227이다. 본 발명에 따른 면역접합체는 출원 WO2004/091668에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체들은 직접적으로 또는 절단 가능하거나 절단 가능하지 않은 링커를 통해 적어도 하나의 성장 저해성 작용제에 공유적으로 접착된다.
본 명세서에 사용된 "링커"는 공유 결합을 포함하는 화학적 모이어티 또는 폴리펩티드를 약물 모이어티에 공유적으로 접착하는 원자의 쇄를 의미한다.
이러한 접합체들은 시험관 내 방법에 의해 제조될 수 있다. 약물 또는 전구약물을 항체에 연결하기 위하여, 연결기(linking group)가 이용된다. 적절한 연결기는 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 다이설파이드기, 티오에테르기, 산에 불안정한 기, 빛에 불안정한 기, 펩티다제에 불안정한 기 및 에스테라제에 불안정한 기를 포함한다. 본 발명의 항체의 세포독성제 또는 성장 저해제와의 접합은 N-석신이미딜 피리딜디티오부티레이트(SPDB), 부탄산 4-[(5-니트로-2-피리디닐)디티오]-2,5-디옥소-1-피롤리디닐 에스테르(니트로-SPDB), 4-(피리딘-2-일디설파닐)-2-설포-부티르산(설포-SPDB), N-석신이미딜(2-피리딜디티오) 프로피오네이트(SPDP), 석신이미딜 (N-말레이미도메틸) 시클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC), 이미노티올란(IT), (디메틸 아디피미데이트 HCL과 같은) 이미도에스테르의 이중 기능성 유도체, (디석신이미딜 수버레이트와 같은) 활성 에스테르, (글루타르알데히드와 같은) 알데히드, (비스 (p-아지도벤조일)-헥산디아민과 같은) 비스-아지도 화합물, (비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민과 같은) 비스-디아조늄 유도체, (톨루엔 2,6-디이소시아네이트와 같은) 디이소시아네이트 및 (1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠과 같은) 비스-활성 불소 화합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다양한 이중 기능성 단백질 결합제를 이용하여 이루어질 수 있다. 예를 들어, Vitetta 등(1987)에 기술된 바와 같이 리신 면역독소를 제조할 수 있다. 탄소 표지된 1-이소티오시아네이토벤질 메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 방사성 핵종을 항체에 접합시키기 위한 예시적인 킬레이트제이다(국제 특허 공개 제WO 94/11026호).
링커는 세포 내에서 세포독성제 또는 성장 저해제의 방출을 용이하게 하기 위한 "절단 가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산에 불안정한 링커, 펩티다제에 민감한 링커, 에스테라제에 불안정한 링커, 빛에 불안정한 링커 또는 다이설파이드-함유 링커(예컨대, 미국 특허 제5,208,020호 참조)가 이용될 수 있다. 링커는 또한 몇몇 사례에서 더 나은 허용성을 야기할 수 있는 "절단 가능하지 않은 링커"(예를 들어, SMCC 링커)일 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 항체 및 세포독성 또는 성장 저해성 폴리펩티드를 포함하는 융합 단백질이 재조합 기법 또는 펩티드 합성법에 의해 만들어질 수 있다. DNA의 길이는 서로 인접하거나, 접합체의 원하는 성질들을 파괴하지 않는 링커 펩티드를 암호화하는 부위에 의해 분리된, 접합체의 두 부분을 암호화하는 각각의 부위들을 포함할 수 있다.
전구약물(예컨대, 펩티딜 화학치료제, 국제 특허 공개 제WO81/01145호 참조)을 활성이 있는 항암제로 전환하는 전구약물 활성화 효소에 폴리펩티드를 접합시킴으로써(예를 들어, 국제 특허 공개 제WO 88/07378호 및 미국 특허 제4,975,278호 참조), 본 발명의 항체들은 의존성 효소 매개 전구약물 치료법(Dependent Enzyme Mediated Prodrug Therapy)에도 이용될 수 있다. ADEPT에 유용한 면역접합체의 효소 성분으로는 전구약물을 그것의 활성이 더 높은, 세포독성 형태로 전환시키는 방식으로 전구약물에 작용할 수 있는 임의의 효소를 포함한다. 본 발명의 방법에 유용한 효소들로는 인산염 함유 전구약물을 유리 약물로 전환하는 데 유용한 알칼리 포스파타제; 황산염 함유 전구약물을 유리 약물로 전환하는 데 유용한 아릴설파타제; 무독성 플루오로시토신을 항암제인 5-플루오로우라실로 전환하는 데 유용한 시토신 탈아미노효소; 펩티드 함유 전구약물을 유리 약물로 전환하는 데 유용한, 세라티아 단백질 분해효소, 서몰리신, 서브틸리신, 카르복시펩티다제 및 (카텝신 B 및 L과 같은) 카텝신과 같은 단백질 분해효소; D-아미노산 치환기를 함유하는 전구약물을 전환하는 데 유용한 D-알라닐카르복시펩티다제; 당글리코실화된 전구약물을 유리 약물로 전환하는 데 유용한, O-갈락토시다제 및 뉴라미니다제와 같은 탄수화물 절단 효소; P-락탐으로 유도된 약물을 유리 약물로 전환하는 데 유용한 P-락타마제; 및 아민 질소에서 각각 페녹시아세틸 또는 페닐아세틸 기로 유도된 약물을 유리 약물로 전환하는 데 유용한 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제와 같은, 페니실린 아미다제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 효소들은 위에서 논의된 헤테로이중기능성 가교 시약을 이용하는 것과 같은, 당해 기술 분야에 잘 알려져 있는 기법들에 의해 본 발명의 폴리펩티드에 공유적으로 결합될 수 있다.
일 구현예에 따르면, 본 발명의 접합체에서, 성장 저해제는 메이탄시노이드이고, 일 구현예에서 DM1 또는 DM4이다.
상기 접합체에서, 이러한 항체는 연결기에 의해 상기 적어도 하나의 성장 저해제에 접합된다. 일 구현예에서, 상기 연결기는 SPDB, 설포-SPDB, 또는 SMCC와 같은 절단 가능한 또는 절단 불가능한 링커이다.
이러한 접합체는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다:
하기 화학식 III의 항체-SPDB-DM4 접합체
[화학식 III]
Figure pct00015
하기 화학식 IV의 항체-설포-SPDB-DM4 접합체
[화학식 IV]
Figure pct00016
및
하기 화학식 V의 항체-SMCC-DM1 접합체
[화학식 V]
Figure pct00017
.
일 구현예에서, 이러한 접합체는 상기에 정의된 바와 같은 화학식 III, IV 또는 V의 접합체이며, 여기서 항체는 본 명세서에 기재된 항체이다.
일반적으로, 이러한 접합체는,
(i) 세포 결합제(예컨대, 본 발명에 따른 항체)의 선택적 완충 수용액을 링커 및 세포독성 화합물의 용액과 접촉시키는 단계;
(ii) 그런 다음, (i) 단계에서 형성된 접합체를 반응하지 않은 세포결합제로부터 분리시키는 단계를 포함하는 공정에 의해 수득될 수 있다.
세포 결합제의 수용액은, 예를 들어, 인산 칼륨, 아세트산염, 시트르산염 또는 N-2-하이드록시에틸피페라진-N'-2-에탄설폰산(허피스 완충액)과 같은 완충액으로 완충될 수 있다. 이러한 완충액은 세포결합제의 속성에 따라 달라진다. 세포독성 화합물은 유기 극성 용매, 예를 들어, 디메틸 설폭사이드(DMSO) 또는 디메틸아세트아미드(DMA) 중 용액에 존재한다.
반응 온도는 일반적으로 20 내지 40℃ 사이에 포함된다. 반응 시간은 1시간부터 24시간까지 다를 수 있다. 세포결합제와 세포독성제 사이의 반응은 굴절측정 및/또는 UV 검출기를 이용한 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 모니터링될 수 있다. 접합체 수율이 너무 낮은 경우, 반응 시간이 연장될 수 있다.
(ii) 단계의 분리를 수행하기 위하여 다수의 상이한 크로마토그래피법이 당업자에 의해 이용될 수 있다. 접합체는, 예를 들어, SEC, 흡착 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 크로마토그래피, IEC), 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC), 친화성 크로마토그래피, 혼합-지지체 크로마토그래피, 예를 들어, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 또는 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)로 정제될 수 있다. 투석 또는 정용여과에 의한 정제도 이용될 수 있다.
본 출원에 사용된 용어 "응집체"는 둘 이상의 세포결합제 사이에 형성될 수 있는 회합을 의미하며, 상기 세포결합제들은 접합에 의해 변경되거나 변경되지 않는다. 응집체는 다수의 매개변수, 예를 들어, 용액 내 세포-결합제의 높은 농도, 용액의 pH, 높은 전단력, 결합된 이량체의 숫자 및 이들의 소수성 특성, 온도의 영향 하에 형성될 수 있고(문헌[Wang & Gosh, 2008, J. Membrane Sci., 318: 311-316] 및 이 문헌에 인용된 문헌); 이들 매개변수 중 일부의 상대적인 영향은 명확하게 확립되지 않았다는 것을 주목하기 바란다. 단백질 및 항체의 경우에, 당업자는 문헌[Cromwell et al. (2006, AAPS Jounal, 8(3): E572-E579)]을 참조할 것이다. 응집체의 함유량은 SEC와 같이, 당업자에게 널리 공지되어 있는 기법으로 결정될 수 있다(문헌[Walter et al., 1993, Anal. Biochem., 212(2): 469-480] 참조).
(i) 또는 (ii) 단계 후, 접합체를 함유하는 용액을 크로마토그래피, 한외여과 및/또는 정용여과의 추가적인 (iii) 단계를 거치도록 할 수 있다.
이러한 접합체는 수용액에서 이러한 단계의 종료 시에 회수된다.
일 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 접합체는 1 내지 10 범위, 예를 들어, 2 내지 5, 특히 3 내지 4의 "약물 대 항체 비율"(또는 "DAR")을 특징으로 한다. 이는 일반적으로 메이탄시노이드 분자들을 포함하는 접합체들의 사례이다.
DAR 숫자는 접합을 위해 사용되는 실험 조건(성장 저해제/항체 비율, 반응 시간, 용매 및 (만일 존재한다면) 공동용매의 성질과 같음)에 따라 사용되는 약물(즉, 성장 저해제) 및 항체의 성질에 의해 달라질 수 있다. 따라서, 항체와 성장 저해제 사이의 접촉은 상이한 약물 대 항체 비율; 선택적으로 네이키드(naked) 항체; 선택적으로 응집체에 의해 서로 상이한 여러 접합체를 포함하는 혼합물을 초래한다. 따라서, 결정되는 DAR은 평균값이다.
DAR을 결정하는 데에 이용될 수 있는 방법은 실질적으로 정제된 접합체 용액의 λD 및 280 ㎚에서의 흡광도 비율을 분광학적으로 측정하는 것으로 이루어진다. 280 ㎚는 항체 농도와 같은 단백질 농도를 측정하는 데 일반적으로 이용되는 파장이다. 파장 λD는 항체로부터 약물을 구별하는 것을 허용하도록 선택되며, 즉, 당업자에게 쉽게 공지된 바와 같이, λD는 약물이 높은 흡광도를 갖는 파장이고, λD는 약물의 흡광도 피크와 항체의 흡광도 피크에서 실질적인 중첩을 피하기 위해 280 ㎚로부터 충분히 떨어져 있다. λD는 메이탄시노이드 분자의 경우 252 ㎚인 것으로 선택될 수 있다. DAR 계산법은 문헌[Antony S.Dimitrov (ed), LLC, 2009, Therapeutic Antibodies and Protocols, vol 525, 445, Springer Science]으로부터 도출될 수 있다.
λD(AλD) 및 280 ㎚(A280)에서의 접합체에 대한 흡광도를 ("DAR(SEC)" 매개변수를 계산할 수 있게 하는) 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 분석의 단량체 피크 상에서 또는 ("DAR(UV)" 매개변수를 계산할 수 있게 하는) 전형적인 분광분석 기기를 이용하여 측정한다. 흡광도는 다음과 같이 표현될 수 있다:
Figure pct00018
식 중,
cD 및 cA는 각각 약물 및 항체의 용액에서의 농도이다.
εDλD 및 εD280은 각각 λD 및 280 ㎚에서의 약물의 몰 흡광 계수이고,
εAλD 및 εA280은 각각 λD 및 280 ㎚에서 항체의 몰 흡광 계수이다.
두 개의 미지의 물질들을 이들 두 식으로 분해할 경우, 다음의 식으로 이어진다:
Figure pct00019
그런 다음, 평균 DAR을 항체의 농도에 대한 약물의 농도의 비율로부터 계산한다: DAR = cD/cA.
약제학적 조성물
본 발명의 항체 또는 면역접합체는 약제학적으로 허용 가능한 부형제 및 선택적으로, 생분해 가능한 고분자와 같은 지효성 매트릭스와 조합되어 치료적 조성물을 형성할 수 있다.
따라서, 본 발명의 또 다른 대상은 본 발명의 항체 또는 면역접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 의약용의, 본 발명에 따른 폴리펩티드 또는 면역접합체에 관한 것이다.
"약제학적으로" 또는 "약제학적으로 허용 가능한"은 포유동물, 상세하게는 인간에게 적합하게 투여됐을 때 부작용, 알러지 또는 다른 부반응을 생산하지 않는 분자 성분 및 조성물을 의미한다. 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제는 무독성 고체, 반고체 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 물질 또는 임의의 유형의 제형 보조물을 지칭한다.
여기에서 사용된, "약제학적으로 허용 가능한 염"은 생리학적으로 적합한, 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제 등을 포함한다. 적절한 담체, 희석제 및/또는 부형제의 예로는 물, 아미노산, 식염수, 인산염 완충 식염수, 완충액 인산염, 아세트산염, 시트르산염, 숙신산염; 히스티딘, 아르기닌, 글리신, 프롤린, 글리실글리신과 같은 아미노산 및 유도체; 무기염 NaCl, 염화칼슘; 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올, 수크로스, 트레할로스, 만니톨과 같은 당 또는 폴리알코올; 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20, 폴록사머 188과 같은 계면활성제 등뿐만 아니라, 이의 조합물 중 하나 이상을 포함한다. 많은 경우에서, 조성물에 당, 폴리알코올 또는 염화나트륨과 같은 등장성 물질을 포함하는 것이 바람직할 것이며, 제형은 트립타민과 같은 항산화제 및 트윈 20과 같은 안정화제도 함유할 수 있다.
약제학적 조성물의 형태, 투여 경로, 투여량 및 투여계획은 당연히, 치료되는 병태, 병의 중증도, 환자의 연령, 체중 및 성별 등에 달려 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 국소용, 경구, 비경구, 비강 내, 정맥 내, 근육 내, 피하 또는 안구 내 투여 등을 위해 제형화될 수 있다.
일 구현예에서, 이러한 약제학적 조성물은 주사될 수 있는 제형에 약제학적으로 허용 가능한 용제를 함유한다. 이들은 등장성, 멸균, 식염수 용액(모노나트륨 또는 디나트륨 인산염, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 또는 염화마그네슘 등 또는 그러한 염들의 혼합물) 또는 경우에 따라 멸균수 또는 생리 식염수의 첨가 시 주사 가능한 용액의 조성을 허용하는 건조, 특히 동결 건조된 조성물일 수 있다.
이러한 약제학적 조성물은 약물 조합 장치를 통해 투여될 수 있다.
투여에 이용되는 용량은 다양한 매개변수들의 함수로, 그리고 예를 들어, 이용되는 투여 방식의 함수, 관련된 병리학의 함수, 또는 대안적으로 원하는 치료 지속기간의 함수로 조정될 수 있다.
약제학적 조성물을 제조하기 위하여, 본 발명의 유효량의 항체 또는 면역접합체가 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 수성 매질에 용해되거나 분산될 수 있다.
주사용으로 적합한 약제학적 형태로는 멸균 수성 용액 또는 분산액; 호마유, 땅콩유 또는 수성 프로필렌 글리콜을 포함하는 제형; 및 멸균 주사 가능한 용액 또는 분산액의 임기 제제를 위한 멸균 분말을 포함한다. 모든 경우에서, 이러한 형태는 멸균되어야 하고, 분해되지 않고 전달을 위한 적절한 장치 또는 시스템으로 주사 가능해야 한다. 그것은 제조 및 보관 조건 하에서 안정적이어야 하고, 세균 및 곰팡이와 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다.
유리 염기 또는 약제학적으로 허용 가능한 염으로서의 활성 화합물의 용액은 계면활성제와 적절히 혼합된 물에 제조될 수 있다. 분산액은 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 이들의 혼합물에서 및 오일에서 제조될 수 있다. 통상의 저장 및 사용 환경들 하에서, 이들 제제는 미생물의 성장을 방지하는 보존제를 함유한다.
본 발명의 항체 또는 면역접합체는 중성 또는 염 형태의 조성물로 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 염으로는 (단백질의 유리 아미노 기로 형성된) 산 부가염을 포함하고, 이는 예를 들어, 염산 또는 인산과 같은 무기 산 또는 아세트산, 옥살산, 주석산, 만델산 등과 같은 유기 산으로 형성된다. 또한, 유리 카르복실기로 형성된 염은 예를 들어, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 수산화칼슘 또는 수산화철과 같은 무기 염기 및 이소프로필아민, 트리메틸아민, 글리신, 히스티딘, 프로카인 등과 같은 유기 염기로부터 유래될 수 있다.
또한, 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이의 적절한 혼합물 및 식물성 오일을 함유하는, 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 예를 들어, 분산액의 경우에 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 레시틴과 같은 코팅제의 이용에 의해, 그리고 계면활성제의 이용에 의해, 적절한 유동성이 유지될 수 있다. 미생물의 작용 방지는 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등의 다양한 항박테리아제 및 항진균제에 의해 초래될 수 있다. 여러 경우에 등장성 물질, 예를 들어, 당 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사 가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연하는 물질들, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 조성물에 이용함으로써 초래될 수 있다.
멸균성의 주사 가능한 용액은 필요에 따라, 위에 열거된 임의의 기타 성분들과 함께, 적절한 용매에 필요한 양으로 활성 성분을 도입한 후, 여과 멸균에 의해 제조된다. 일반적으로, 분산액은 다양한 멸균된 활성 성분들을 염기성 분산 매질 및 위에서 언급된 것들로부터 필요한 기타 성분들을 함유하는 멸균 용제에 도입하여 제조된다. 멸균성의 주사 가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조 기법으로, 이는 활성 성분의 분말에 더하여, 이전에 멸균 여과된 용액으로부터의 임의의 추가적인 원하는 성분을 생산한다.
직접적인 주사를 위한 더욱 농축된, 또는 고도로 농축된 용액의 제조 또한 고려되는데, 여기서 용매로서 DMSO를 사용하는 것이 구상되어, 극도로 빠른 침투를 가져와 작은 종양 영역에 고농도의 활성 물질들을 전달한다.
제형화할 때, 용액들은 투여 제형에 적합한 방식으로, 그리고 치료적으로 효과적인 양으로 투여될 것이다. 이러한 제형들은 상기에 기재된 주사 가능한 용액 유형과 같이 다양한 투여 형태로 용이하게 투여되나, 약물 방출 캡슐 등도 이용될 수 있다.
수용액으로 비경구 투여 시, 예를 들어, 이러한 용액은 필요에 따라 적절하게 완충되어야 하고, 액체 희석제는 먼저 충분한 식염수 또는 글루코스로 등장성이 되도록 하여야 한다. 이러한 수용액은 특히 정맥 내, 근육 내, 피하 및 복강 내 투여에 적합하다. 이와 관련하여, 이용될 수 있는 멸균성의 수성 매질은 본 개시의 관점에서 당업자에게 공지될 것이다. 예를 들어, 하나의 투여량은 등장성의 NaCl 용액 1 ml에 용해되거나, 피하 주입액 1000 ml에 부가되거나, 예정된 주입 부위에 주사될 수 있다(예를 들어, 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th Edition, pages 1035-1038 and 1570-1580] 참조). 치료되는 대상체의 상태에 따라 투여량의 약간의 변화가 필수적으로 일어날 것이다. 투여를 책임지는 사람은 어떠한 경우에도 개별적인 대상자를 위한 적절한 용량을 결정할 것이다.
본 발명의 항체 또는 면역접합체는 용량당 약 0.01 내지 100 밀리그램 정도를 포함하도록 치료적 혼합물 내에 제형화될 수 있다.
정맥 내 또는 근육 내 주사와 같은, 비경구 투여를 위해 제형화된 항체 또는 면역접합체 외에도, 기타 약제학적으로 허용 가능한 형태는 예컨대, 경구 투여용 정제 또는 기타 고체; 경시적 방출 캡슐; 및 현재 이용되는 임의의 기타 형태를 포함한다.
특정 구현예에서, 리포좀 및/또는 나노 입자의 이용이 폴리펩티드의 숙주 세포로의 도입을 위해 고려된다. 리포좀 및/또는 나노 입자의 형성 및 이용은 당업자에게 공지되어 있다.
나노캡슐은 일반적으로 안정적이고 재현 가능한 방식으로 화합물을 포착할 수 있다. 세포간 고분자 과부하로 인한 부작용을 피하기 위하여, 이러한 (약 0.1 ㎛ 크기의) 초미세입자는 생체 내에서 분해될 수 있는 고분자를 이용하여 일반적으로 설계된다. 이러한 요건을 충족하는 생분해성 폴리알킬-시아노아크릴레이트 나노 입자, 또는 생분해성 폴리락티드 또는 폴리락티드-글리콜라이드 공중합체 나노 입자들이 본 발명에 이용하기 위하여 고려되며, 그러한 입자들은 용이하게 제조될 수 있다.
리포좀은 수성 매질에 분산된 인지질로부터 형성되며, 자발적으로 다중층의 동심상의 이중층 소포체(다중층 소포체(MLV)라고도 지칭됨)를 형성한다. MLV는 일반적으로 25 ㎚ 내지 4 ㎛ 범위의 직경을 나타낸다. MLV의 초음파 처리는 핵에 수용액을 함유하는, 200 내지 500 Å 범위의 지름을 나타내는 작은 단일층 소포체(SUV)의 형성을 초래한다. 리포좀의 물리적 특성은 pH, 이온 강도 및 2가 양이온의 존재에 달려 있다.
투여 방법 및 제형
본 명세서에 개시된 방법은 대상체에게 치료적 유효량의 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 투여하는 것을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 폐암(예를 들어, NSQ NSCLC)의 치료를 야기하는 치료제의 용량을 의미한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "치료"는 폐암과 연관된 하나 이상의 증상에서 검출 가능한 개선을 야기하거나, 또는 그 병태 또는 증상(들)을 야기하는 근본적인 병리학적 기전(들)과 상관되는 생물학적 효과(예를 들어, 특정 바이오마커 수준의 감소)를 야기하는 것을 나타낸다. 예를 들어, 폐암과 연관된 다음과 같은 증상 또는 병태 중 임의의 것의 개선을 유발하는 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 용량은 "치료적으로 유효한 양"으로 간주된다.
또 다른 예에서, 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 용량이 암(예를 들어, 폐암)과 연관된 하나 이상의 매개변수 또는 증상의 검출 가능한 개선을 가져오지 않거나, 암의 병태 또는 증상(들)을 발생시키는 근본적인 병리학적 기전(들)과 관련이 있는 생물학적 효과를 초래하지 않을 때, 치료는 효과적이지 않았다.
이러한 구현예 중 일부에 따르면, 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 정맥내로 투여된다.
본 발명의 방법에 따르면, 대상체에게 투여되는 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량은 대상체의 연령 및 크기(예를 들어, 체중 또는 체표면적)와, 투여 경로 및 당업자에게 잘 알려진 다른 요인에 따라 달라질 것이다.
특정 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 용량은 대상체의 신체 표면적에 따라서 달라진다. 특정 구현예에서, 대상체에게 투여되는 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 용량은 약 1 ㎎/㎡ 내지 약 500 ㎎/㎡이다. 일부 구현예에서, 대상체에게 투여되는 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 용량은 약 5 ㎎ 내지 약 300 ㎎/㎡이다. 다양한 구현예에서, 대상체에게 투여되는 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 용량은 약 5 내지 약 250 ㎎/㎡이다. 다양한 구현예에서, 용량은 대상체의 신체 표면적 기준으로 약 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 또는 210 ㎎/㎡ 이다. 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 약 2.5 ㎎/㎡ 내지 약 5 ㎎/㎡의 용량으로 투여된다. 예를 들어, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 일정 시간 기간(예를 들어, 30분 및 1시간) 동안 약 2.5 ㎎/㎡ 내지 약 5 ㎎/㎡의 용량으로 투여된다. 용량은 항체 2.5 ㎎/㎡, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체 5 ㎎/㎡ 및 2.5 ㎎/㎡ 내지 5 ㎎/㎡ 사이의 모든 용량, 예를 들어 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 및 4.9 ㎎/㎡를 포함한다.
예를 들어, 본 발명은 항- CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체 약 1 ㎎/㎡, 약 5 ㎎/㎡, 10 ㎎/㎡, 약 15 ㎎/㎡, 약 20 ㎎/㎡, 약 25 ㎎/㎡, 약 30 ㎎/㎡, 약 35 ㎎/㎡, 약 40 ㎎/㎡, 약 45 ㎎/㎡, 약 50 ㎎/㎡, 약 55 ㎎/㎡, 약 60 ㎎/㎡, 약 65 ㎎/㎡, 약 70 ㎎/㎡, 약 75 ㎎/㎡, 약 80 ㎎/㎡, 약 85 ㎎/㎡, 약 90 ㎎/㎡, 약 95 ㎎/㎡, 약 100 ㎎/㎡, 약 105 ㎎/㎡, 약 110 ㎎/㎡, 약 115 ㎎/㎡, 약 120 ㎎/㎡, 약 125 ㎎/㎡, 약 130 ㎎/㎡, 약 135 ㎎/㎡, 약 140 ㎎/㎡, 약 145 ㎎/㎡, 약 150 ㎎/㎡, 약 155 ㎎/㎡, 약 160 ㎎/㎡, 약 165 ㎎/㎡, 약 170 ㎎/㎡, 약 175 ㎎/㎡, 약 180 ㎎/㎡, 약 185 ㎎/㎡, 약 190 ㎎/㎡, 약 195 ㎎/㎡, 약 200 ㎎/㎡, 약 205 ㎎/㎡, 약 210 ㎎/㎡, 약 215 ㎎/㎡, 약 220 ㎎/㎡, 약 225 ㎎/㎡, 약 230 ㎎/㎡, 약 235 ㎎/㎡, 약 240 ㎎/㎡, 약 245 ㎎/㎡, 약 250 ㎎/㎡, 약 255 ㎎/㎡, 약 260 ㎎/㎡, 약 265 ㎎/㎡, 약 270 ㎎/㎡, 약 275 ㎎/㎡, 약 280 ㎎/㎡, 약 285 ㎎/㎡, 약 290 ㎎/㎡, 약 295 ㎎/㎡, 약 300 ㎎/㎡, 약 325 ㎎/㎡, 약 350 ㎎/㎡, 약 375 ㎎/㎡, 약 400 ㎎/㎡, 약 425 ㎎/㎡, 약 450 ㎎/㎡, 약 475 ㎎/㎡ 또는 약 500 ㎎/㎡가 1주당 또는 2주마다 1회 투여되는 방법을 포함한다(이들로 제한되지는 않는다). 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 대상체의 신체 표면적 기준으로 2주마다 약 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 또는 210 ㎎/㎡로 투여된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "약 1 내지 약 500 ㎎/㎏으로 투여되는"은 언급된 물질이 진술된 범위(그 범위의 종점을 포함함) 내의 임의의 값으로 투여됨을 의미한다. 예를 들어, "환자에게 투여되는 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 용량이 1 ㎎/㎡ 내지 500 ㎎/㎡이다"라는 것은 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체, 1 ㎎/㎡, 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체 500 ㎎/㎡, 및 이들 사이의 모든 용량의 투여를 포함한다. 구현예에서, CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 일정 시간 기간에 걸쳐서, 예를 들어, 14일(즉, 2주마다) 또는 3주마다 1회 약 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180, 또는 210 ㎎/㎡의 용량으로 투여된다. 방법의 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 실시예 1에 열거된 용량으로 사용된다.
다양한 구현예에서, 용량은 일정한 속도로 투여된다. 대안적으로, 용량은 가변 속도로 투여된다. 다양한 구현예에서, 용량은 약 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 2.5 또는 5 ㎎/분의 일정한 속도로 투여된다. 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 처음 30분 또는 처음 1시간 동안 일정 속도로 투여된다. 다양한 구현예에서, 약 30분 또는 1시간 후, 항체의 투여 속도는 변경된다. 예를 들어, 속도는 감소된다. 다양한 구현예에서, 속도는 증가된다. 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 처음 30분 또는 1시간 동안 2.5 ㎎/분의 속도로 투여된다. 다양한 구현예에서, 약 30분 또는 1시간 후, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 투여 속도는 5 ㎎/분으로 증가된다.
본 발명의 방법은 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체의 다중 용량을 환자에게 명시된 시간 경과에 걸쳐서 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 1일당 약 1 내지 5회, 1주당 약 1 내지 5회, 2주마다 약 1 내지 5회, 1개월당 약 1 내지 5회 또는 1년당 약 1 내지 5회 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 제1 시점에서 제1 용량의 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 환자에 투여하는 단계, 이어서 제2 시점에서 제2 용량의 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 환자에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 용량과 제2 용량은 동일한 양의 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 함유할 수 있다. 제1 용량과 제2 용량 사이의 시간은 약 수 시간에서 수 주일 수 있다. 예를 들어, 제2 시점(즉, 제2 용량이 투여되는 시간)은 제1 시점(즉, 제1 용량이 투여되는 시간) 후 약 1시간 내지 약 7주 후일 수 있다. 본 발명의 일부 전형적인 구현예에 따르면, 제2 시점은 제1 시점 후 약 1시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 8시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 24시간, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 6주, 약 8주, 약 10주, 약 12주, 약 14주 이상일 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 시점은 약 1주 또는 약 2주이다. 제3 또는 이후의 용량은 환자의 치료 과정 전반에 걸쳐 비슷하게 투여될 수 있다. 본 발명은 항-CEACAM5 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항체를 포함하는 면역접합체 및 선택적으로 1종 이상의 추가 치료제를 포함하는 치료 조성물의 사용 방법을 제공한다. 본 발명의 치료적 조성물은 적절한 담체, 부형제 및 기타 개선된 수송, 전달, 내성 등을 제공하기 위하여 제형 내에 포함되는 작용제와 함께 투여될 것이다. 다수의 적절한 제형은 모든 약제사에게 공지된 처방서인 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA]에서 찾아볼 수 있다. 이들 제형은, 예를 들어 산제, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 지질(양이온성 또는 음이온성) 함유 소낭(예컨대, 리포펙틴(LIPOFECTIN)), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀젼, 에멀젼형 카보왁스(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고형 겔, 및 카보왁스를 포함하는 반-고형 혼합물을 포함한다. 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311]을 또한 참조하기 바란다.
다양한 전달 시스템, 예를 들어 수용체 매개 엔도사이토시스, 미세캡슐, 미세입자, 리포좀에서의 봉지화가 알려져 있고, 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는 데 이용될 수 있다(예를 들어, 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Wu et al. (1987) J. Biol. Chem. 262:4429-4432] 참조). 도입 방법은 피부 내, 근육 내, 복강 내, 정맥 내, 피하, 비강 내, 경막 외 및 경구 경로를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들어, 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막피부의 내벽(예컨대, 구강 점막, 직장 점막 및 내장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있으며, 다른 생물학적으로 활성이 있는 작용제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신적 또는 국소적일 수 있다. CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 피하로 투여될 수 있다.
또한, 약제학적 조성물은 소포, 예컨대, 리포좀으로 전달될 수 있다(전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Langer (1990) Science 249:1527-1533] 참조). 일부 상황에서는, 약제학적 조성물은 예를 들어, 펌프 또는 고분자 물질을 이용하여, 제어 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 제어 방출 시스템은 조성물의 표적에 가까이 위치하게 될 수 있어서, 전신성 용량의 일부만을 필요로 할 수 있다.
주사 가능한 제제는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 국소 주사, 점적 주입 등을 위한 투여 형태를 포함할 수 있다. 이러한 주사 가능한 제제는 널리 공지된 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 주사 가능한 제제는 예를 들어, 위에 기재된 항체 또는 그의 염을 주사를 위해 통상적으로 사용되는 멸균 수성 매질 또는 유성 매질에 용해, 현탁화, 또는 에멀젼화하는 것에 의해 제조될 수 있다. 주사용 수성 매질로는, 예를 들어, 생리식염수, 글루코스 및 기타 보조제를 함유하는 등장 용액 등이 있으며, 이들은 알코올(예를 들어, 에탄올), 폴리알코올(예를 들어, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제 [예를 들어, 폴리소르베이트 80, HCO-50(수소화 피마자유의 폴리옥시에틸렌 (50 mol) 부가물)] 등과 같은 적절한 가용화제와 조합되어 이용될 수 있다. 유성 매질로는, 예를 들어, 참기름, 대두유 등이 이용되며, 이는 벤질 벤조에이트, 벤질 알코올 등과 같은 가용화제와 조합되어 이용될 수 있다. 그렇게 제조된 주사제는 적절한 앰플에 채워질 수 있다.
유리하게는, 상기에 기재된 경구 또는 비경구용 약제학적 조성물은 활성 성분의 용량을 맞추기에 적합한 단위 용량의 투여형으로 제조된다. 단위 용량의 이러한 투여형은, 예를 들어 정제, 환제, 캡슐제, 주사제(앰플), 좌제 등을 포함한다.
본 명세서에 개시된 방법에 따르면, 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체(또는 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 포함하는 약제학적 제형)은 임의의 허용 가능한 장치 또는 메커니즘을 이용하여 환자에 투여될 수 있다. 예를 들어, 투여는 시린지 및 바늘을 사용하여, 또는 재사용 가능한 펜 및/또는 자동주사기 전달 장치로 달성될 수 있다. 본 발명의 방법은 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체(또는 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 포함하는 약제학적 제형)를 투여하기 위하여 다수의 재사용 가능한 펜 및/또는 자동주사기형 전달 장치를 이용하는 것을 포함한다. 이러한 장치의 예는 AUTOPEN(Owen Mumford, Inc., 영국 우드스탁 소재), DISETRONIC 펜(Disetronic Medical Systems, 스위스 베르그도르프 소재), HUMALOG MIX 75/25 펜, HUMALOG 펜, HUMALIN 70/30 펜(Eli Lilly and Co., 미국 인디애나 주 인디애나폴리스 소재), NOVOPEN I, II 및 III(Novo Nordisk, 덴마크 코펜하겐 소재), NOVOPEN JUNIOR(Novo Nordisk, 덴마크 코펜하겐 소재), BD 펜(Becton Dickinson, 미국 뉴저지 주 프랭클린 레이크 소재), OPTIPEN, OPTIPEN PRO, OPTIPEN STARLET™ 및 OPTICLIK(sanofi-aventis, 독일 프랑크푸르트 소재)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 몇 가지만을 언급하자면, 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 응용되는 일회용 펜형 및/또는 자동주사기형 전달 장치의 예는, SOLOSTAR 펜(Sanofi-Aventis), FLEXPEN(Novo Nordisk) 및 KWIKPEN(Eli Lilly), SURECLICK Autoinjector(Amgen, 미국 캘리포니아주 싸우전드 오크스 소재), PENLET(Haselmeier, 독일 슈투트가르트 소재), EPIPEN(Dey, L.P.)및 HUMIRA Pen(AbbVie Inc., 미국 일리노이주 노스 시카고 소재)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
일 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 사전 충전 시린지를 이용하여 투여된다. 또 다른 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 안전 시스템을 함유하는 사전 충전 시린지를 이용하여 투여된다. 예를 들어, 안전 시스템은 우발적인 바늘 찔림 부상을 방지한다. 다양한 구현예에서, 항체는
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안전 시스템(West Pharmaceutical Services Inc.)을 포함하는 사전 충전 시린지를 이용하여 투여된다. 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 제5,215,534호 및 미국 특허 제9,248,242호를 또한 참조하기 바란다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 자동주사기를 이용하여 투여된다. 다양한 구현예에서, 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체는 PUSHCLICK 기술(SHL Group)을 특징으로 하는 자동주사기를 이용하여 투여된다. 다양한 구현예에서, 자동주사기는 소정 용량의 조성물 및/또는 항체가 대상체에게 투여되게 하는 시린지를 포함하는 장치이다. 전문이 참조에 의해 본 명세에 포함된 미국 특허 제9,427,531호 및 미국 특허 제9,566,395호를 또한 참조하기 바란다.
또한, 항-CEACAM5 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체(또는 항체 또는 항체를 포함하는 면역접합체를 포함하는 약제학적 제형)을 전달하기 위하여 마이크로주입기를 이용하는 것도 본 명세서에서 고려된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "마이크로주입기"는 장시간(예를 들어, 약 10, 15, 20, 25, 30분 이상)에 걸쳐 큰 부피(예를 들어, 최대 약 2.5 ㎖ 또는 이보다 더 큰 부피)의 약제학적 제형을 서서히 투여하도록 설계된 피하 전달 장치를 의미한다. 예를 들어, 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 제6,629,949호; 미국 특허 제6,659,982호; 및 문헌[Meehan et al., J. Controlled Release 46:107-116 (1996)]을 참조하기 바란다. 마이크로주입기는 고농도 및/또는 점성의 용액 내에 함유된 큰 용량의 치료용 단백질의 전달에 특히 유용하다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물은 모든 목적을 위해 그들 전체가 본 명세서에 참조에 의해 포함된다.
실시예
실시예 1: TED13751 - 진행성 고형 종양 환자에서 huMAb2-3-SPDB-DM4의 항종양 활성 및 안전성 약동학의 평가를 위한 인간에서의 최초 연구(first-in-human study) - 연구 설계
IV 경로를 통해서 2주마다(q2w; 14일) 단일 작용제로서 투여된 huMAb2-3-SPDB-DM4로서 식별된 ADC의 안전성 및 약동학의 평가를 위한 인간에서의 최초(FIH: first-in-human) 임상 연구를 진행성, 비절제성 또는 전이성 고형 종양을 갖는 성인에서 수행하였다.
연구를 2개의 부분으로 나눴다: 증량 단계(Escalation Phase) 및 확장 단계(Expansion Phase).
증량 단계 동안, CEACAM5를 발현하는 것으로 알려진 종양 유형을 갖는 환자에 대해 치료될 집단은 풍부했지만 이에 제한되지는 않았고; CEACAM5 발현의 확인은 가장 최근의 보관소 조직 샘플 및 중앙 실험실에서의 IHC를 사용하여 후향적으로 실시하였다. 농축을 위해 순환 CEACAM5의 발현을 또한 사용하였다. 대상체의 신체 표면적 기준으로 100 ㎎/㎡의 최대 내약 용량(MTD)을 증량 단계 동안 결정하였다.
확장 단계 동안, 치료할 집단은 종양 세포 집단의 50%를 포함하는 강도가 2+ 이상인 CEACAM5 발현을 갖는 NSQ NSCLC 환자로 제한되었고, 위 선암종 코호트에서 연구 치료에 잠재적으로 적격한 환자에 대한 로컬 IHC 평가를 사용하여 가장 최근의 보관소 조직 샘플에 대한 사전 스크리닝 동안 문서화하였다.
2개의 독립적인 NSQ NSCLC 확장 단계 코호트가 존재하였다: 제1 코호트(폐 코호트)는 종양 세포 집단의 적어도 50%를 포함하는 강도가 2+ 이상인 CEACAM5 발현을 갖는 환자를 포함하였다. 제2 코호트(폐 비스(Lung bis) 코호트)는 종양 세포 집단의 21% 내지 50% 미만 사이의 2+ 이상인 강도에서 양성으로 사전 스크리닝된 환자를 포함하였다. huMAb2-3-SPDB-DM4 단클론성 항체 기반 CEACAM5 검정을 갖지 않는 연구 센터의 경우 - 로컬 IHC 플랫폼에서 구현된 종양 CEACAM5 발현의 사전 스크리닝 평가를 중앙에서 수행하였다. 상기 정의를 충족하는 보관소 사례에 대해 전체 스크리닝을 수행하였다.
CEACAM5 발현 수준은 보관소 및 새로운(기준 샘플) 종양 조직 모두에서 본질적으로 후향적으로 그리고 중앙에서 문서화하였다.
CEACAM5 종양 발현의 확인은 기준선에서 수집된 새로운 종양 조직에 대해서 중앙 실험실에서 후향적으로 수행하였다(NSQ NSCLC의 경우 확장 단계에서만 필수 생검). 충분한 보관된 종양 물질이 입수 가능하면, 중앙 평가를 또한 후향적으로 수행하여 발현의 평가에서 변동성에 대한 지식을 얻었다. 후향적 분석의 결과는 환자의 치료에 영향을 미치지 않았다. 이는 전체 반응의 더 양호한 해석 및 진행 시 CEACAM5 발현과의 비교를 위한 기준선(획득 내성의 기전으로서의 CEACAM5 손실에 대한 탐색)을 위한 것이다.
최대 60명의 환자를 NSQ NSCLC(폐) 코호트에 포함시켰고, 최대 28명의 환자를 NSQ NSCLC(폐 비스) 코호트에 포함시켰다. 측정 가능한 악성 질환을 갖는 환자만 자격이 있었다. 사전 스크리닝 절차 동안 엄격한 CEACAM5 발현 기준을 충족하는 악성 질환을 갖는 NSQ NSCLC 환자를 로딩 용량 없이 최대 내약 용량(MTD)으로 치료될 자격에 대해 추가 스크리닝하였다.
확장 단계에 등록된 처음 6명의 환자의 안전성은, 다음 환자를 등록하기 전에 6번째 환자가 2주기 동안 치료되었을 때 연구 위원회에서 검토하였다. MTD(로딩 용량 없음)는 huMAb2-3-SPDB-DM4의 계획된 용량에서 주기 2의 마지막에서 치료된 환자의 1/3 이하(3개 코호트에 등록됨)가 용량 제한 독성(DLT: dose limiting toxicity)을 경험한 경우 확인되었다. 같은 시점에서, 각막 독성을 예방하는 데 있어서 1차 각막독성 예방으로부터의 이익의 유무에 대해서 예비 평가를 수행하였다. 또한, 존재하는 경우, 누적 독성의 발생을 평가하였다. 약물의 항종양 활성을 RECIST 1.1에 따라 평가하였다.
개별 환자에 대한 연구 기간은 최대 4주의 포함 기간(기준 기간), 적어도 1주기(2주)의 치료 기간, 마지막 연구용 의약품(investigational medical product: IMP) 투여 후 대략 30일의 치료 종료(end-of-treatment: EOT) 방문 및 면역원성 평가를 위한 적어도 1회의 추적 방문(EOT 방문 후 대략 30일)을 포함하였다.
포함 기준
I 1. 연구자의 판단에 따라 표준 대체 요법이 이용 가능하지 않고, 하기 포함 기준을 충족하는 국소 진행성 또는 전이성 고형 악성 종양 질환.
I 2. 적어도 6×5 ㎛ 슬라이드와 FFPE 보관소 조직으로부터, 3×10 ㎛(최상) 또는 6×5 ㎛이거나 또는 필요한 물질의 동일한 총량을 유지하기 위해서 동등할 수 있는 슬라이드의 추가 수가 그 사이트에서의 로컬 시험 및/또는 스폰서 또는 스폰서가 지정한 실험실로의 배송, 종양 CEACAM5 발현의 평가(증량 단계에서 후향적으로 그리고 확장 단계에서 전향적으로) 및 반응의 다른 예측 바이오마커의 탐색을 위해서 입수 가능해야 한다. 더 적은 물질이 입수 가능한 경우, 주요 평가를 위한 관련 물질이 충분하다고 평가하고 확인한 스폰서와 논의한 후 환자는 여전히 자격이 있을 수 있다.
I 3. 증량 단계 코호트(메인(Main) 및 비스) 참가자의 경우: CEACAM5 발현, 즉, NSQ NSCLC의 유병률이 높은 악성 질환을 포함한 CEACAM5를 발현하거나 발현할 가능성이 있는 종양에 대해서 포함을 강화하였다(이에 제한되지는 않음). 확장 단계 코호트 참가자의 경우, NSQ NSCLC 하위유형 또는 기타 폐암 하위유형을 갖는 환자로 포함을 제한하였다. 보관소 종양 조직에 대한 로컬 또는 중앙 CEACAM5 발현 평가에 기초하여, NSQ NSCLC 확장 단계에 2개의 독립적인 코호트가 존재하였다. 수정 #4 전에 시작한 제1 코호트(폐)는 종양 세포 집단의 적어도 50%를 포함하는 강도가 2+ 이상인 CEACAM5 발현을 갖는 환자를 포함하였다. 제2 독립적인 코호트(폐 비스)는 종양 세포 집단의 21% 내지 50% 미만에서 2+ 이상인 강도에서 양성으로 사전 스크리닝된 환자를 포함하였다.
I 4. 확장 단계에서만 RECIST v1.1에 의한 적어도 하나의 측정 가능한 병변.
I 5. 생검이 가능한 적어도 하나의 병변(확장 코호트만). 환자는 치료 시작 전에 종양 CEACAM5 발현의 후향적 확인을 위한 기준선 생검에 동의해야 한다(NSCLC 또는 생검이 가능한 병변이 없는 SCLC 제외).
연구용 제품
약제학적 형태
huMAb2-3-SPDB-DM4 ADC는 30 ㎖ 타입 I 유리 바이알에 함유되는 125 ㎎(5 ㎎/㎖)의 주입용 용액을 위한 25 ㎖ 추출 가능한 부피의 농축액으로서 공급되었다.
투여당 약물의 용량
약물을 증량 단계 동안 결정된 바와 같은 MTD(100 ㎎/m²)로 2주마다 투여한다.
환자의 신장 및 실제 체중을 사용하여 환자의 신체 표면적(BSA)을 계산하였다. 2.2 ㎡ 초과의 BSA를 갖는 환자의 경우, 용량은 2.2 ㎡ BSA를 기준으로 계산할 것이다.
히스타민 H1 길항제(huMAb2-3-SPDB-DM4 투여 약 1시간 전에 제공된 디페닐히드라민 50 ㎎ PO 또는 등가물[예를 들어, 덱스클로르페니라민])를 사용한 사전 의약이 모든 환자에 대해서 필요하다.
주입 제어 펌프를 사용하여, huMAb2-3-SPDB-DM4를 처음 30분 동안 2.5 ㎎/분의 속도로 IV 주입으로 투여하고, 이어서 과민 반응이 없는 경우 5 ㎎/분으로 증량한다.
투여된 IMP의 정확한 용량 및 시간(일/월/년, h:min)을 eCRF에 문서화할 것이다.
치료 기간:
huMAb2-3-SPDB-DM4를 제1일에 투여하였고, 14일마다 반복하였고; 이러한 14일의 기간은 1회 치료 주기(1 주기)를 구성하였다. 환자는 질환 진행, 허용 불가능한 독성 또는 자발적 중단까지 치료를 계속할 수 있다.
희석 및 주입 방법
제품에는 정균제가 존재하지 않았기 때문에, 무균 기술의 준수가 요구되었다. 투여 전에, 각각의 환자의 용량은 사전 충전된 희석제(0.9% 염화나트륨) 백에서 시작하여 연구 약사가 개별적으로 준비할 필요가 있다.
용액이 준비되면, 백 준비에서부터 용량 주입 종료까지 7.5시간 이내에 환자에게 투여하였다.
두 가지 유형의 투여가 사용되었다.
· 저용량(최대 30 ㎎/㎡)용 주사기 드라이버에 의한 주입.
· 다른 용량의 경우 펌프에 의한 주입.
0.2 마이크론 필터 장치가 접착된 IV 튜빙 투여 세트를 주입에 사용하였다. 연구 약물은 어떠한 다른 IV 수액과도 함께 투여되지 않았다. 그러나, 주입 튜빙을 선택적으로 생리 식염수 또는 huMAb2-3-SPDB-DM4로 프라이밍하였다. 25 ㎖ 이하의 주입 부피의 경우, 용량의 주입 전에 25 ㎖의 huMAb2-3-SPDB-DM4의 플러시(flush) 및 파괴가 보장될 필요가 있었다. 펌프에 의한 주입 마지막에, 전체 용량의 전달을 보장하기 위해 필요에 따라 생리 식염수로 IV 라인을 플러싱하였다. 시린지 드라이버에 의한 주입 마지막에, 시린지 내의 huMAb2-3-SPDB-DM4의 잔여량을 파괴하였다.
종양 반응 평가
객관적인 반응 또는 향후 진행을 평가하기 위해서, 기준선에서 전체 종양 부담을 추정하고, 이를 후속 측정을 위한 비교인자로 사용할 필요가 있었다. 기준선에서 측정 가능한 질환을 갖는 환자만 객관적인 종양 반응이 1차 평가변수인 프로토콜에 포함시켰다. 측정 가능한 질환은 적어도 하나의 측정 가능한 병변의 존재로 정의하였다. 1차 평가변수가 종양 진행(진행까지의 시간 또는 고정된 날짜에 진행에 따른 비율)인 연구에서, 프로토콜은 참가자가 측정 가능한 질환을 갖는 환자로 제한되는지 또는 측정 가능하지 않은 질환만 갖는 환자가 또한 자격이 있는지를 특정하였다. 하기 표 2 및 표 3을 참조하기 바란다.
반응 기준
Figure pct00021
Figure pct00022
최상 전체 반응의 평가
하기 표는 기준선에서 측정 가능한 질환을 갖는 환자에 대한 각각의 시점에서의 전반적인 반응 상태 계산의 요약을 제공한다.
Figure pct00023
Figure pct00024
환자에 대한 모든 데이터가 알려지면, 최상의 전체 반응을 결정하였다.
완전 또는 부분 반응의 확인이 필요하지 않은 시험에서 최상 반응 결정: 이러한 시험에서 최상 반응은 모든 시점에 걸쳐 최상 반응으로 정의된다(예를 들어, 제1 평가에서 SD, 제2 평가에서 PR, 그리고 마지막 평가에 대한 PD는 PR의 최상의 전체 반응을 갖는다). SD가 최상 반응이라고 여겨지는 경우, 기준선으로부터 지정된 최소 시간까지 프로토콜을 충족해야 한다. 달리는 SD가 최상 시점 반응인 경우 최소 시간이 충족되지 않으면, 환자의 최상 반응은 후속 평가에 좌우된다. 예를 들어, 제1 평가에서 SD를 갖고, 제2 평가에서 PD를 갖고, SD에 대한 최소 기간을 충족하지 않는 환자는 PD의 최상 반응을 가질 것이다. 제1 SD 평가 후 추적 관찰에 실패한 동일한 환자는 평가할 수 없는 것으로 간주될 것이다.
완전 또는 부분 반응의 확인이 필요하지 않은 시험에서 최상 반응 결정:
완전 또는 부분 반응은 각각에 대한 기준이 프로토콜에서 지정된 바와 같은 후속 시점(일반적으로 4주 후)에 충족되는 경우에만 청구될 수 있다. 이러한 상황에서, 최상의 전체 반응은 표 5와 같이 해석되었다.
CEACAM5 - 면역조직화학(IHC) 스코어링 방법
CEACAM5 염색 면역조직화학 슬라이드를 광학 현미경으로 병리학자에 의해 평가하였다.
CEACAM5 양성 막 염색을 발현하는 생존 종양 세포의 백분율에 의해 CEACAM5 양성을 결정하였다.
종양 세포가 2+ 및 3+ 강도에서 부분 또는 완전한 원주 원형질막 염색을 나타내는 경우 종양 세포는 CEACAM5 양성이다. 이들은 1+ 강도(약한 염색) 또는 염색 없음(강도 0)에서 염색을 나타내는 경우 음성으로 간주된다.
섹션에서 관찰된 모든 종양 세포를 CEACAM5에 대해 평가한다.
CEACAM5 양성 세포의 백분율을 결정하기 위해서는 최소 100개의 살아 있는 종양 세포가 섹션에 존재해야 한다.
스코어링은 하기에 제시된 바와 같이 측정된 각각의 강도에서 염색된 종양 세포의 백분율을 캡처한다:
% CEACAM5 양성 = 100 × 2+ 이상의 강도에서 CEACAM5 막 염색을 발현하는 종양 세포의 수/섹션에 존재하는 살아 있는 종양 세포의 총 수
도 1a, 도 1b 및 1c는 각각 1+, 2+, 3+ 염색 강도의 예를 도시한다. 2+ 및 3+ 막 염색 강도를 CEACAM5 양성으로 간주한다. 스코어링을 포함한 IHC 과정에 대한 일반적인 설명은 문헌[So-Woon Kim et al (Journal of Pathology and Translational Medicine 2016; 50: 411-418)]에 제공되어 있다.
실시예 2 : TED13751 - 확장 단계 - NSQ NSCLC 코호트 - 1차 단계 중간 분석
실시예 1에 논의된 바와 같이, 보관소 종양 조직에 대한 로컬 또는 중앙 CEACAM5 발현 평가에 기초하여, 비-sqNSCLC 확장 단계에 2개의 독립적인 코호트가 존재하였다: 제1 코호트는 종양 세포 집단의 적어도 50%를 포함하는 강도가 2+ 이상의 CEACAM5 발현을 갖는 환자를 포함하였다 제2 독립적인 코호트(폐 비스)는 종양 세포 집단의 21% 내지 50% 미만에서 2+ 이상인 강도에서 양성으로 사전 스크리닝된 환자를 포함하였다. 두 코호트 모두 100 ㎎/㎡의 huMAb2-3-SPDB-DM4를 사용한 치료를 위해 선택되었다.
2+ 이상의 강도에서 종양 세포 집단의 50% 이상의 CEACAM5 발현을 갖는 NSQ NSCLC(폐) 코호트의 경우, 항-PDL1로 사전 치료된 환자에서 huMAb2-3-SPDB-DM4의 항종양 활성을 평가하고, 이러한 하위집단에서 하위군 분석에 대한 최소 검정력을 보장하기 위해서 항-PD1/항-PDL1로 사전 치료된 최소 30명의 환자가 포함되었다. 2+ 이상의 강도에서 1% 이상 내지 50% 미만 사이의 CEACAM5 발현을 갖는 NSQ NSCLC(폐 비스) 코호트의 경우, 약한 CEACAM5 막 염색을 갖는 28명의 치료된 환자의 코호트를 추가함으로써 CEACAM5 발현 수준과 효능 결과 사이의 관계를 평가할 것이다(2+ 초과의 강도에서 적어도 1%의 양성 종양 세포 및 50% 미만의 종양 세포).
표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 고 CEACAM5-발현(폐) 코호트에서 25.9%의 객관적인 반응이 관찰된 반면, 저 발현(폐-비스) 코호트에서는 객관적인 반응이 관찰되지 않았다. 표 1 및 표 2는 huMAb2-3-SPDB-DM4로 치료된 비-소세포 폐암 환자의 객관적인 반응 결과를 요약한다. 표는 50(2+ 및 3+ 강도로 구성) 이상의 백분율 점수의 hCEACAM5 발현을 갖는 NSCLC 환자와 1 내지 49의 백분율 점수의 hCEACAM5 발현을 갖는 환자 사이의 객관적인 반응을 비교한다.
Figure pct00025
[표 2]
Figure pct00026
추가로, 도 2에 도시된 바와 같이, 50 내지 80% 또는 80% 초과의 CEACAM5 발현을 갖는 환자에서 최상의 상대적 종양 수축이 관찰되었다.
표 3 및 표 4에 나타낸 바와 같이, 반응 기간(DoR) 및 진행까지의 시간(TTP)이 또한 고 발현(폐) 코호트에서 개선되었다.
[표 3]
Figure pct00027
[표 4]
Figure pct00028
더욱이, 이러한 고 발현 환자(50 이상의 백분율 점수의 hCEACAM5 발현) 중에서, 항-PD1/PDL1로 사전 치료된 환자 및 항-PD1/PDL1로 사전 치료되지 않은 환자에서 유사한 객관적인 반응이 얻어졌다(표 5 및 표 6).
[표 5]
Figure pct00029
Figure pct00030
실시예 3 : TED13751 - 확장 단계 - NSQ NSCLC 고 발현자 코호트 - 치료된 32명의 환자에 대한 1차 단계 완전 코호트 분석
32명의 환자의 코호트의 완전 분석은 실시예 2의 중간 분석을 확인해 준다.
그것은 강하게 사전 치료된 50% 이상의 CEACAM5의 NSQ NSCLC 환자에서 항종양 활성을 촉진시키는 것을 나타낸다. 이러한 항종양 활성은 RECIST1.1에 따라 25%의 반응률과 관련이 있었다(90% CI 14.70~39.20%).
표 7에 나타낸 바와 같이, 고 CEACAM5-발현(폐) 코호트에서 치료된 32명의 환자에서 25%의 객관적인 반응이 관찰되었다.
Figure pct00031
추가로, 도 3에 도시된 바와 같이, 일반적으로 50 내지 80% 또는 80% 초과의 CEACAM5 발현을 갖는 환자에서 최상의 상대적 종양 수축이 관찰되었다. 도 4에 도시된 바와 같이, 진행까지의 시간(TTP)이 또한 고 발현(폐) 코호트에서 개선되었다. 더욱이, 하기 표 8에 나타낸 바와 같이, 이러한 고 발현 환자 중에서, 항-PD1/PDL1로 사전 치료된 환자 및 항-PD1/PDL1로 사전 치료되지 않은 환자에서 유사한 객관적인 반응이 얻어졌다.
Figure pct00032
실시예 4 : TED13751 - 확장 단계 - NSQ NSCLC 중간 발현자 코호트
표 9에 나타낸 바와 같이, (20명의 환자에 대해서) 단지 하나의 객관적인 반응이 저 발현(폐-비스) 코호트에서 관찰되었다.
Figure pct00033
결론적으로, 이러한 데이터는, huMAb2-3-SPDB-DM4로 치료된 NSCLC 폐암의 하위세트에서 개념 증명이 달성되었다는 것을 입증한다. 특히, 이러한 데이터는, huMAb2-3-SPDB-DM4가 폐암 중 대략 60%를 나타내는 하위유형인 NSQ NSCLC를 치료하는 데 효과적이라는 결론을 뒷받침한다. 더욱이, 이러한 데이터는, huMAb2-3-SPDB-DM4가 NSQ NSCLC 암 중 대략 20%를 나타내는 종양 유형인 고 CEACAM5 발현 NSQ NSCLC의 치료에 특히 효과적이라는 결론을 뒷받침한다.
SEQUENCE LISTING <110> SANOFI <120> USE OF ANTI-CEACAM5 IMMUNOCONJUGATES FOR TREATING LUNG CANCER <130> FR2019/003 EP <160> 23 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH1a of humanized MAb2 antibody <400> 1 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> VL1c of humanized MAb2 antibody <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Thr Arg Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HCDR1 <400> 3 Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr Asp 1 5 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HCDR2 <400> 4 Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr 1 5 <210> 5 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 5 Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 6 Glu Asn Ile Phe Ser Tyr 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 7 Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 8 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain <400> 8 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 9 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain <400> 9 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A3-B3 domain of human CEACAM5 protein <400> 10 Ser Gly Ala Asn Leu Asn Leu 1 5 <210> 11 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A3-B3 domain epitopes <400> 11 Ile Asn Gly Ile Pro Gln Gln His Thr Gln Val Leu Phe 1 5 10 <210> 12 <211> 654 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> extracellular domain of Macaca fascicularis CEACAM5 <400> 12 Gln Leu Thr Ile Glu Ser Arg Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly Lys Glu 1 5 10 15 Val Leu Leu Leu Ala His Asn Val Ser Gln Asn Leu Phe Gly Tyr Ile 20 25 30 Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Ala Ser Arg Arg Ile Gly Ser Cys 35 40 45 Val Ile Arg Thr Gln Gln Ile Thr Pro Gly Pro Ala His Ser Gly Arg 50 55 60 Glu Thr Ile Asp Phe Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Val Thr Gln 65 70 75 80 Ser Asp Thr Gly Ser Tyr Thr Ile Gln Val Ile Lys Glu Asp Leu Val 85 90 95 Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe Arg Val Tyr Pro Glu Leu Pro Lys 100 105 110 Pro Tyr Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Ile Glu Asp Lys Asp Ala 115 120 125 Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Thr Thr Tyr Leu Trp 130 135 140 Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Glu Leu Ser 145 150 155 160 Ser Asp Asn Arg Thr Leu Thr Val Phe Asn Ile Pro Arg Asn Asp Thr 165 170 175 Thr Ser Tyr Lys Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Val Arg Arg Ser 180 185 190 Asp Pro Val Thr Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Ala Pro Thr Ile 195 200 205 Ser Pro Leu Asn Thr Pro Tyr Arg Ala Gly Glu Tyr Leu Asn Leu Thr 210 215 220 Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Thr Ala Gln Tyr Phe Trp Phe Val Asn 225 230 235 240 Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn Ile Thr 245 250 255 Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Met Cys 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Arg Trp Cys Ile Pro Trp Gln 1 5 10 15 Arg Leu Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr 20 25 30 Thr Ala Lys Leu Thr Ile Glu Ser Thr Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly 35 40 45 Lys Glu Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln His Leu Phe Gly 50 55 60 Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gln Ile Ile 65 70 75 80 Gly Tyr Val Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Tyr Ser 85 90 95 Gly Arg Glu Ile Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Ile 100 105 110 Ile Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu His Val Ile Lys Ser Asp 115 120 125 Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe Arg Val Tyr Pro Glu Leu 130 135 140 Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro Val Glu Asp Lys 145 150 155 160 Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Ala Thr Tyr 165 170 175 Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln 180 185 190 Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn Val Thr Arg Asn 195 200 205 Asp Thr Ala Ser Tyr Lys Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Ala Arg 210 215 220 Arg Ser Asp Ser Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Ala Pro 225 230 235 240 Thr Ile Ser Pro Leu Asn Thr Ser Tyr Arg Ser Gly Glu Asn Leu Asn 245 250 255 Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser Trp Phe 260 265 270 Val Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn 275 280 285 Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Thr Cys Gln Ala His Asn Ser 290 295 300 Asp Thr Gly Leu Asn Arg Thr Thr Val Thr Thr Ile Thr Val Tyr Ala 305 310 315 320 Glu Pro Pro Lys Pro Phe Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu 325 330 335 Asp Glu Asp Ala Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Ile Gln Asn Thr 340 345 350 Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg 355 360 365 Leu Gln Leu Ser Asn Asp Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr 370 375 380 Arg Asn Asp Val Gly Pro Tyr Glu Cys Gly Ile Gln Asn Glu Leu Ser 385 390 395 400 Val Asp His Ser Asp Pro Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp 405 410 415 Asp Pro Thr Ile Ser Pro Ser Tyr Thr Tyr Tyr Arg Pro Gly Val Asn 420 425 430 Leu Ser Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser 435 440 445 Trp Leu Ile Asp Gly Asn Ile Gln Gln His Thr Gln Glu Leu Phe Ile 450 455 460 Ser Asn Ile Thr Glu Lys Asn Ser Gly Leu Tyr Thr Cys Gln Ala Asn 465 470 475 480 Asn Ser Ala Ser Gly His Ser Arg Thr Thr Val Lys Thr Ile Thr Val 485 490 495 Ser Ala Glu Leu Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro 500 505 510 Val Glu Asp Lys Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Ala Gln 515 520 525 Asn Thr Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Gly Gln Ser Leu Pro Val Ser 530 535 540 Pro Arg Leu Gln Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn 545 550 555 560 Val Thr Arg Asn Asp Ala Arg Ala Tyr Val Cys Gly Ile Gln Asn Ser 565 570 575 Val Ser Ala Asn Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asp Val Leu Tyr Gly 580 585 590 Pro Asp Thr Pro Ile Ile Ser Pro Pro Asp Ser Ser Tyr Leu Ser Gly 595 600 605 Ala Asn Leu Asn Leu Ser Cys His Ser Ala Ser Asn Pro Ser Pro Gln 610 615 620 Tyr Ser Trp Arg Ile Asn Gly Ile Pro Gln Gln His Thr Gln Val Leu 625 630 635 640 Phe Ile Ala Lys Ile Thr Pro Asn Asn Asn Gly Thr Tyr Ala Cys Phe 645 650 655 Val Ser Asn Leu Ala Thr Gly Arg Asn Asn Ser Ile Val Lys Ser Ile 660 665 670 Thr Val Ser Ala Ser Gly Thr Ser Pro Gly Leu Ser Ala Gly Ala Thr 675 680 685 Val Gly Ile Met Ile Gly Val Leu Val Gly Val Ala Leu Ile 690 695 700 <210> 14 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MAb1 variable domain of heavy chain <400> 14 Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Leu Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 15 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MAb1 variable domain of light chain <400> 15 Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 16 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MAb2 variable domain of heavy chain <400> 16 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Phe Pro Asp Thr Val 50 55 60 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Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Pro Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Phe Leu 65 70 75 80 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Asn Tyr Tyr Asp Ser Ser Phe Leu Asp Trp Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MAb3 variable domain of light chain <400> 19 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Arg Phe Met Ser Thr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Leu 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 20 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MAb4 variable domain of heavy chain <400> 20 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Phe Ile Ser Ser Tyr Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Phe Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala His Tyr Phe Gly Thr Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 21 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MAb4 variable domain of light chain <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 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Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 23 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MAb5 variable domain of light chain <400> 23 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Thr Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105

Claims (30)

  1. 비편평 비-소세포 폐암(non squamous non-small cell lung cancer: NSQ NSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 NSQ NSCLC를 치료하는 데 사용하기 위한, 항체 또는 상기 항체를 포함하는 면역접합체(immunoconjugate)로서, 상기 항체는 hCEACAM5에 특이적으로 결합하고, 상기 항체는 VH 및 VL을 포함하며, 상기 VH는 3개의 상보성 결정 영역인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 VL은 3개의 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 상기 HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열(GFVFSSYD)을 포함하고; 상기 HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열(ISSGGGIT)을 포함하며; 상기 HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열(AAHYFGSSGPFAY)을 포함하고; 상기 LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열(ENIFSY)을 포함하며; 상기 LCDR2는 NTR의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR3은 서열번호 7의 아미노산 서열(QHHYGTPFT)을 포함하는, 면역접합체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 대상체는 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 발현자(high carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule expresser)인, 항체, 또는 상기 항체를 포함하는, 면역접합체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대상체는 비-소세포 폐암의 치료를 위한 작용제 또는 약물로 사전 치료된, 항체, 또는 상기 항체를 포함하는, 면역접합체.
  4. 제3항에 있어서, 상기 작용제 또는 약물은 화학치료제, 혈관신생 저해제, 표피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor: EGFR) 저해제, 역형성 림프종 키나제(anaplastic lymphoma kinase: ALK) 저해제, 수용체 티로신 키나제(ROS1) 저해제 및 면역 관문 저해제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체, 또는 상기 항체를 포함하는, 면역접합체.
  5. 제4항에 있어서, 상기 면역 관문 저해제는 PD-1 저해제 및/또는 PD-L1 저해제인, 항체, 또는 상기 항체를 포함하는, 면역접합체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 1
    Figure pct00034

    을 포함하는, 항체, 또는 상기 항체를 포함하는, 면역접합체.
  7. 제6항에 있어서, 상기 중쇄는 서열번호 8
    Figure pct00035

    을 포함하는, 항체, 또는 상기 항체를 포함하는, 면역접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL은 서열번호 2
    Figure pct00036

    를 포함하는, 항체, 또는 상기 항체를 포함하는, 면역접합체.
  9. 제8항에 있어서, 상기 경쇄는 서열번호 9
    Figure pct00037

    를 포함하는, 항체, 또는 상기 항체를 포함하는, 면역접합체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 하나의 성장 저해성 작용제(growth inhibitory agent)에 접합되거나 연결된, 항체를 포함하는, 면역접합체.
  11. 제10항에 있어서, 상기 성장 저해성 작용제는 세포독성제인, 면역접합체.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 성장 저해성 작용제는 화학치료제, 효소, 항생제 및 독소, 예컨대, 소분자 독소 또는 효소적으로 활성인 독소, 탁소이드, 일일초(vincas), 탁산, 메이탄시노이드 또는 메이탄시노이드 유사체, 토메이마이신(tomaymycin) 또는 피롤로벤조디아제핀 유도체, 크립토피신 유도체, 렙토마이신 유도체, 아우리스타틴 또는 돌라스타틴 유사체, 전구약물, 토포이성질화효소(topoisomerase) II 저해제, DNA 알킬화제, 항튜불린제 및 CC-1065 또는 CC-1065 유사체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  13. 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 성장 저해성 작용제는 (N2'-데아세틸-N2'-(3-머캅토-1-옥소프로필)-메이탄신) DM1 또는 N2'-데아세틸-N-2'(4-메틸-4-머캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신(DM4)인, 면역접합체.
  14. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 절단성 또는 비-절단성 링커를 통해서 상기 적어도 하나의 성장 저해성 작용제에 공유 부착된, 면역접합체.
  15. 제14항에 있어서, 상기 링커는 N-석신이미딜 피리딜디티오부티레이트(SPDB), 4-(피리딘-2-일디설파닐)-2-설포-부티르산(설포-SPDB), 및 석신이미딜 (N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 상기 종양 세포 집단에서 50(2+ 및 3+ 강도로 이루어짐) 이상의 백분율 점수의 hCEACAM5 발현을 갖는, 면역접합체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역접합체는 상기 대상체의 신체 표면적 기준으로 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 또는 210 ㎎/㎡의 용량 수준으로 투여되는, 면역 접합체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역접합체는 14일마다 또는 3주마다 투여되는, 면역접합체.
  19. 비편평 비-소세포 폐암(NSQ NSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 NSQ NSCLC를 치료하는 방법으로서, hCEACAM5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 상기 항체를 포함하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체는 VH 및 VL을 포함하며, 상기 VH는 3개의 상보성 결정 영역인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 VL은 3개의 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 상기 HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열(GFVFSSYD)을 포함하고; 상기 HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열(ISSGGGIT)을 포함하며; 상기 HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열(AAHYFGSSGPFAY)을 포함하고; 상기 LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열(ENIFSY)을 포함하며; 상기 LCDR2는 NTR의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR3은 서열번호 7의 아미노산 서열(QHHYGTPFT)을 포함하는, 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 대상체는 고 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 발현자인, 방법.
  21. 제19항에 있어서, 상기 대상체는 비-소세포 폐암의 치료를 위한 작용제 또는 약물로 이전에 치료된, 방법.
  22. 제19항에 있어서, 상기 작용제 또는 약물은 화학치료제, 혈관신생 저해제, 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 저해제, 역형성 림프종 키나제(ALK) 저해제, 수용체 티로신 키나제(ROS1) 저해제 및 면역 관문 저해제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 면역 관문 저해제는 PD-1 저해제 및/또는 PD-L1 저해제인, 방법.
  24. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 1종의 성장 저해성 작용제에 접합되거나 연결된, 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 성장 저해성 작용제는 (N2'-데아세틸-N2'-(3-머캅토-1-옥소프로필)-메이탄신) DM1 또는 N2'-데아세틸-N-2'(4-메틸-4-머캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신(DM4)인, 방법.
  26. 제19항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 절단성 또는 비-절단성 링커를 통해서 상기 적어도 하나의 성장 저해성 작용제에 공유 부착된, 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 링커는 N-석신이미딜 피리딜디티오부티레이트(SPDB), 4-(피리딘-2-일디설파닐)-2-설포-부티르산(설포-SPDB) 및 석신이미딜(N-말레이미도메틸) 시클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  28. 제19항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 상기 종양 세포 집단에서 50(2+ 및 3+ 강도로 이루어짐) 이상의 백분율 점수의 hCEACAM5 발현을 갖는, 방법.
  29. 제19항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 상기 대상체의 신체 표면적 기준으로 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 또는 210 ㎎/㎡의 용량 수준으로 투여되는, 방법.
  30. 제19항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 14일마다 또는 3주마다 투여되는, 방법.
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