KR20110036559A - 대장암 진단용 조성물 및 그 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381 유전자의 신규한 용도를 제공한다. 본 발명에 따른 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 또는 LOC143381 유전자는 대장암과 높은 관련성을 가지므로, 상기 유전자의 발현량을 확인함으로써 대장암의 진단, 약물스크리닝 등이 가능하고, 본 발명에 따른 유전자를 대장암 치료타겟으로 할 수 있다는 장점을 갖는다.
Description
본 발명은 대장암 진단용 조성물 및 그를 이용한 진단키트, 대장암 치료용 조성물, 및 대장암 치료제 스크리닝용 조성물 및 스크리닝 방법에 관한 것이다.
대장암은 일반적으로 소득수준이 높은 집단에서 발생률이 높아 일반적으로 '선진국형 암'으로 인식되어지고 있으며 서양의 경우 암 사망에 있어서 제2위를 차지하는 암으로 전체 암의 약 15% 정도를 차지하고 있다. 미국의 경우 연간 약 56,000명이 대장암으로 사망하고 130,000명의 새로운 대장암 환자가 발생한다고 보고되고 있으며 우리나라에서 대장암은 사망률에서 전체 암에서 차지하는 비율이 위암, 간암, 폐암에 이어 제4위를 차지하는 암이다. 1980년에 전체암의 5.8%를 차지하던 것이 1985년에는 6.1%, 1995년에는 8.2%, 가장 최근 자료인 2002년에는 11.2%로 지속적인 증가 추세를 보이고 있으며, 1991년도 자료와 비교해 볼 때 위암, 간암, 자궁경부암의 사망률이 감소한 데 비해 대장암에 의한 사망률은 인구 10만 명당 4.7명에서 11.4명으로 2배 이상 증가하였다. 이와 같은 추세가 계속된다면 2010년경에는 우리나라에서의 대장암 발생빈도가 서양의 수준에 도달할 것으로 예측되며 2006년 대장암 발병률은 2위에 해당한다.
대장암 환자의 생존률을 높이기 위한 많은 노력이 진행되고 있으나 기존 치료법을 통하여 생존률을 향상시키기는 어려운 상태이다. 대장암 환자의 생존률을 높이기 위해서는 무엇보다도 조기진단과 새로운 대장암 맞춤타겟의 발굴이 시급하다. 대부분의 대장암은 선종에서 발생하며, 암으로의 변화에 약 10년이 소요되므로 조기진단을 통하여 전암성 병변인선종이나 조기암을 제거할 기회가 많다. 현재 사용되는 선별 검사로는 1) 대변 잠혈 검사, 2) 에스결장경 검사, 3) 대장 내시경 검사, 4) 대장 조영술이 사용되고 있는데 잠혈 검사는 조기진단용으로는 유용성이 떨어지며, 대장 조영술은 진단의 정확도가 떨어져 1cm 이하의 경우 20-50%, 1cm 이상일 때는 10-30%, 조기 대장암의 경우 15-45% 정도의 정확도를 보인다. 따라서 좀 더 정확하고 조기진단이 될 수 있는 진단시스템이 필요하며, 이는 대장암 관련 마커유전자의 발굴이 필요로 되어지는 부분이다. 또한 대장암이 발병했을 경우 예후를 예측하고 적절한 치료방침을 정하는데 대장암 마커가 적절히 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
대장암의 발생과정에는 여러종류의 암 유전자, 종양 억제유전자등 다양한 유전자 변화가 관여하는 것으로 알려져 있다. 실제 대장암은 발암과정에서 일어나는 유전적 변화가 가장 많이 밝혀진 암이다. 대장암은 한 개의 암 유전자 또는 종양억제 유전자의 변화가 단독으로 암을 유발시킬 수 있는 것이 아니고 정상 대장 점막세포가 선종의 단계를 거쳐 대장암으로 진행되기 위해서는 수년에 걸친 긴 세월을 통해 여러 개의 암 관련 유전자의 변화가 축적되어야 하는데 이를 대장암 발생에 있어서 유전자의 다단계적 변화라고 한다. 여기서 중요한 것은 각 단계에서의 유전자 변화 순서가 아니라 궁극적으로 누적되는 유전자들의 변화의 총합이다. 대장암 발생과정에 관여하는 유전적 변화로는 K-ras, APC, MCC 유전자, 18번 염색체의 DCC유전자, 17번 염색체의 p53 유전자, 그리고 DNA methylation의 이상 등이 있으며, hMSH2, hMSH1, hPMS1, hPMS2 등의 돌연변이도 관계된다.
이와 같이,암의 형성은 다양한 유전자들과 이들 유전자들의 발현및 조절 기작이 복합적으로 연관되어 진행되므로 최근 들어 다량의 유전자를 사용하는 올리고 칩을 이용한 암 관련 유전자들의 발현률을 비교하여 암의 새로운 진단이나 치료의 마커를 발굴하기 위한 연구들이 이루어지고 있다. 암세포에서 발현이 증가하거나 감소하는 유전자들은 세포분열, 세포신호전달, 세포 골격, 세포 운동, 세포 방어, 유전자및 단백질의 발현 그리고 세포내 물질대사등 여러부분에 관여하는 것으로 환자 조직들에 따라 동일한 발현변화를 보이는 유전자가 있는 반면 다른 발현 변화를 보이는 유전자들이 많다. 이것은 각각 환자들이 특이성 때문일 가능성이 크므로 연구하는 대상의 환자 조직들의 정확한 병리학적 소견과 분류에 따라야 하며 정확한 유전자를 이용한 진단에는 보다 많은 새로운 유전자들의 검색과 확인이 필요하다.
특정 세포내에서 특정 유전자의 발현 빈도를 조사함으로서 대장암 관련된 유전자의 발굴이 가능하며, 이를 통하여 대장암 진행의 분자적 메카니즘을 이해하게 되고, 나아가 대장암 진단 및 치료 타겟으로의 사용이 가능하게 될 것이다.
현재 LMTK3는 기능적으로는 Tyrosine kinase 도메인을 가지고 있다는 것이 알려져 있을 뿐, 다른 기능에 대해서 전혀 보고된 바가 없으며, LOC644774는 Phosphoglycerate kinase 1 의 유사 단백질을 코딩하고 있으나 기능 연구는 되어 있지 않다. HS.389988는 염기서열만 알려져 있고 WDR72는 WD repeat 도메인을 가진 미지의 단백질이다. LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424 또한 전혀 기능이 알려져 있지 않다. FLJ21511는 기능이 알려져 있지 않고 C9ORF19 는 Glioma pathogenesis와 관련되어 보고되었으나 암관련 보고는 없으며, MGC15476 는 DACT3 로도 알려져 있고 DACT3 단백질은 마우스의 뇌 분화시 발현되는 단백질로 알려져 있으며, HS.388347 는 유전자 서열만이 알려져 있다.
본 발명자들은 상기 유전자들이 대장암관련성이 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381 유전자의 신규한 용도를 제공하는 것을 목적으로 한다.
보다 구체적으로, 본 발명은 상기 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 대장암 진단용 또는 대장암치료제 스크리닝용 조성물, 상기 유전자의 억제제 또는 상기 유전자로부터 발현된 단백질의 억제제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 대장암 치료용 조성물, 및 대장암 진단용 키트를 제공하고자 한다.
본 발명은 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자를 포함하는 대장암 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 'LMTK3', 'LOC644774', 'HS.389988', 'WDR72', 'LOC440157‘, ’LOC643911', 'C13ORF23', 'LOC644424', 'FLJ21511', 'C9ORF19', 'MGC15476', 또는 'LOC143381'의 '유전자'라 함은 이들 유전자의 DNA 또는 mRNA를 말하며, DNA 또는 mRNA의 전부 또는 일부를 모두 포함하는 개념이다.
본 발명의 대장암 진단용 조성물은 상기 유전자 외에도 핵산의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.
상기 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23 및 LOC644424 유전자는 대장암세포에서 특이적으로 발현이 증가하며, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381 유전자는 대장암세포에서 특이적으로 발현이 감소한다. 따라서 상기 유전자의 발현정도를 조사하면 대장암을 진단할 수 있다.
상기 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381유전자의 서열정보는 표 1에 나타낸 바와 같다.
본 발명은 또한 상기 유전자들의 대장암 진단 용도 및 상기 조성물과 대상체로부터 얻은 시료 간의 반응을 확인하여 대장암을 진단하는 방법을 제공한다.
본 발명의 진단 방법에서 상기 유전자를 포함하는 조성물과 시료 간의 반응의 확인은 DNA-DNA, DNA-RNA, DNA-단백질 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들, 예컨대 DNA 칩, 단백질 칩, 중합효소 연쇄반응 (PCR), 노던 블롯팅, 서던 블롯팅, ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent assay), 효모 이중 혼성법(yeast two-hybrid), 2-D 겔 분석 및 시험관 내 결합 에세이 (in vitro binding assay) 등을 이용할 수 있다. 예컨대 상기 유전자의 전부 또는 일부를 프로브로 사용하여 대상자의 체액으로부터 분리한 핵산과 하이브리드화한 후 당분야에 공지된 다양한 방법, 예컨대 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerases chain reaction), 써던블로팅(southern blotting), 노던 블롯팅(Northern blooting) 등으로 이를 검출함으로써 대상자에서 상기 유전자가 고발현된 상태인지 또는 저발현된 상태인지 조사하면 대장암의 발생 여부를 판단할 수 있다. 상기 프로브를 방사선 동위원소 또는 효소 등으로 표지하면 용이하게 유전자의 존재를 확인할 수 있다. 상기 프로브의 염기서열은 상기 유전자의 염기서열과 70% 이상의 유사성이 있으면 족하다. 상기 프로브는 본 발명의 센스 및 안티센스 프라이머를 이용한 유전자 증폭법에 의해 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍을 포함하는 대장암 진단용 조성물을 제공한다.
상기 센스 및 안티센스 프라이머쌍은 상기 유전자에 대한 상보적인 염기서열을 갖는 서열번호 15~38의 프라이머쌍일 수 있다. 상기 프라이머쌍은 다음의 표 2에 정리하였다. 본 발명에서 '상보적'이란 프라이머의 염기서열에서 완전히 상보적인 것과 80% 이상의 상동성이 있는 것을 포함하는 개념이다.
상기 센스 프라이머 및 안티센스 프라이머를 이용한 공지의 방법으로 상기 12종의 유전자의 발현양을 측정할 수 있다. 예를 들면, RT-PCR방법 등으로 측정할 수 있다.
본 발명은 또한 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 대장암 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물은 상기 단백질 외에도 단백질의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.
앞서 언급한 바와 같이, 상기 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23 또는 LOC644424 유전자는 대장암세포에서 특이적으로 발현이 증가하며, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 또는 LOC143381 유전자는 대장암세포에서 특이적으로 발현이 감소하므로 상기 유전자들로부터 발현된 단백질을 이용하여 상기 유전자 또는 단백질의 과발현 또는 저발현 여부를 조사하면 대장암을 진단할 수 있다.
본 발명은 또한 상기 단백질의 대장암 진단 용도 및 상기 조성물과 대상체로부터 얻은 시료 간의 반응을 확인하여 대장암을 진단하는 방법을 제공한다.
본 발명의 진단 방법에서 상기 단백질을 포함하는 조성물과 시료 간의 반응의 확인은 DNA-단백질, RNA-단백질, 단백질-단백질 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들, 예컨대 DNA 칩, 단백질 칩, 중합효소 연쇄반응 (PCR), 노던 블롯팅, 서던 블롯팅, 웨스턴 블롯팅, ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent assay), 특이적 면역염색(histoimmunostaining), 효모 이중 혼성법(yeast two-hybrid), 2-D 겔 분석 및 시험관 내 결합 에세이 (in vitro binding assay) 등을 이용할 수 있다. 예컨대 상기 유전자들로부터 발현된 단백질의 전부 또는 일부를 프로브로 사용하여 대상자의 체액으로부터 분리한 핵산 또는 단백질과 하이브리드화한 후 당분야에 공지된 다양한 방법, 예컨대 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerases chain reaction), 웨스턴 블로팅(western blotting) 등으로 이를 검출함으로써 대상자에서 상기 유전자가 고발현된 상태인지 조사하면 대장암의 발생 여부를 판단할 수 있다. 상기 프로브를 방사선 동위원소 또는 효소 등으로 표지하면 용이하게 유전자의 존재를 확인할 수 있다.
또한 본 발명의 조성물은 상기 단백질 대신 상기 단백질에 대한 특이적 항체를 포함할 수 있다. LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23 또는 LOC644424 유전자는 대장암세포에서 특이적으로 발현이 증가하여 상기 유전자로부터 발현된 단백질의 양 또한 증가하게 되며, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476, 또는 LOC143381 유전자는 대장암세포에서 특이적으로 발현이 감소하여 상기 유전자로부터 발현된 단백질의 양 또한 감소하게 된다. 따라서 상기 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체를 이용하는 경우, 항원-항체 반응을 통해 상기 단백질을 검출해 내어 대장암을 진단할 수 있다.
상기 단백질에 대한 모노클로날 항체는 당업계에 통상적인 모노클로날 항체 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있고, 시판되는 것을 사용할 수 있다. 상기 단백질에 대한 모노클로날 항체는 일반적으로 알칼라인 포스파타아제(alkaline phosphatase, AP) 또는 호올스래디쉬 퍼록시다제(horseradish peroxidase, HRP) 등의 효소가 컨쥬게이션된 2차 항체 및 이들의 기질을 사용하여 발색반응시킴으로써 정량분석할 수도 있고, 아니면 직접 상기 단백질에 대한 모노클로날 항체에 AP 또는 HRP 효소 등이 컨쥬게이션된 것을 사용하여 정량분석할 수도 있다. 또한, 모노클로날 항체 대신에 상기 단백질을 인식하는 폴리클로날 항체를 사용할 수도 있고 이는 당업계에 통상적인 항혈청 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있으며, 항원결합성을 갖는 것이면 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항체의 일부도 본 발명의 항체에 포함되고, 모든 면역 글로불린 항체가 포함된다. 나아가, 본 발명의 항체에는 인간화 항체 등의 특수항체도 포함된다.
상기 항체는 본 발명의 12종의 각 유전자를 통상적인 방법에 따라 발현벡터에 클로닝하여 상기 유전자에 의해 코딩된 단백질을 얻고, 얻어진 단백질로부터 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다. 여기에는 12종의 단백질의 부분 펩타이드도 포함하며, 본 발명의 부분펩타이드로는 최소한 7개 이상, 바람직하게는 12개 이상의 아미노산을 포함한다.
또한 본 발명은 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자, 상기 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍, 상기 유전자로부터 발현된 단백질, 또는 상기 단백질에 대한 항체를 포함하는 대장암 진단용 키트를 제공한다.
상기 대장암 진단용 키트는 지지체, 적당한 완충용액, 발색 효소 또는 형광물질로 표지된 2차 항체, 발색 기질액, 또는 1,6-N-아세틸글루코사민 당쇄가지 변화를 측정하기 위한 L4-PHA, 폴리(A) RNA 분리시약 등을 더 포함할 수 있다.
상기 지지체는 니트로셀룰로오즈막, 폴리비닐수지로 합성된 96웰플레이트(96 well plate), 폴리스티렌수지로 합성된 96웰플레이트, 또는 유리로 된 슬라이드글라스 등일 수 있고, 상기 발색효소는 퍼옥시다아제(peroxidase), 또는 알칼라인 포스파타아제(alkaline phosphatase) 등일 수 있으며, 상기 형광물질은 FITC, 또는 RITC 등일 수 있고, 상기 발색 기질액은 ABTS(2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzenzothiazoline-6-sulfonic acid)), OPD(o-Phenylenediamine), 또는 TMB(Tetramethyl Benzidine) 등일 수 있다.
본 발명은 또한 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자를 포함하는 대장암 치료제 스크리닝용 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 상기 조성물의 대장암치료제 스크리닝용 용도 및 상기 조성물을 표적물질로 이용하여 시험대상물질을 접촉시키고, 표적물질과 시험대상물질 간의 반응을 확인하여, 시험대상물질이 상기 유전자의 발현을 증진시키는 활성 또는 억제하는 활성을 나타내는지를 결정하는 단계를 포함하는 대장암치료제 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명의 스크리닝 방법에서 상기 유전자를 포함하는 조성물과 시험대상물질 간의 반응 확인은, DNA-DNA, DNA-RNA, DNA-단백질, DNA-화합물 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들을 사용할 수 있다. 예를 들면, 생체 외부에서(in vitro) 상기 유전자와 시험대상물질 사이의 결합 여부를 확인하기 위한 혼성화 시험, 포유류세포와 시험대상물질을 반응시킨 후 노던 분석, 정량적 PCR, 정량적 실시간 PCR 등을 통한 상기 유전자의 발현율 측정 방법, 또는 상기 유전자에 리포터 유전자를 연결시켜 세포 내로 도입한 후 시험대상물질과 반응시키고 리포터 단백질의 발현율을 측정하는 방법 등을 사용할 수 있다. 이러한 경우 본 발명의 조성물은 상기 유전자 외에도, 핵산의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 대장암치료제 스크리닝용 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 상기 조성물의 대장암치료제 스크리닝용 용도 및 상기 조성물을 표적물질로 이용하여 시험대상물질을 접촉시키고, 표적물질과 시험대상물질 간의 반응을 확인하여, 시험대상물질이 상기 단백질의 기능을 증진시키는 활성 또는 억제하는 활성을 나타내는지를 결정하는 단계를 포함하는 대장암치료제 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명의 스크리닝 방법에서 상기 단백질을 포함하는 조성물과 시험대상물질 간의 반응 확인은, 단백질-단백질, 단백질-화합물 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들을 사용할 수 있다. 예를 들면, 상기 단백질과 시험대상물질을 반응시킨 후 활성을 측정하는 방법, 효모 이중 혼성법(yeast two-hybrid), 상기 단백질에 결합하는 파지 디스플레이 펩티드 클론(phage-displayed peptide clone)의 검색, 천연물 및 화학물질 라이브러리(chemical library) 등을 이용한 HTS(high throughput screening), 드럭 히트 HTS(drug hit HTS), 세포 기반 스크리닝(cell-based screening), 또는 DNA 어레이(DNA array)를 이용하는 스크리닝법 등을 사용할 수 있다. 이러한 경우 본 발명의 조성물은 상기 단백질 외에도, 단백질의 구조 또는 생리 활성을 안정하게 유지시키는 완충액 또는 반응액을 포함할 수 있다. 또한 본 발명의 조성물은 생체 내(in vivo) 실험을 위해, 상기 단백질을 발현하는 세포, 또는 전사율을 조절할 수 있는 프로모터 하에 상기 단백질을 발현하는 플라스미드를 함유하는 세포 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 스크리닝 방법에서, 시험대상물질은 통상적인 선정방식에 따라 대장암전이 억제제로서의 가능성을 지닌 것으로 추정되거나 또는 무작위적으로 선정된 개별적인 핵산, 단백질, 기타 추출물 또는 천연물, 화합물 등이 될 수 있다.
본 발명의 스크리닝 방법을 통해 얻은, 대장암 고발현 유전자의 발현을 증진시키거나 단백질의 기능을 증진시키는 활성을 나타내는 시험대상물질 및 반대로 대장암 고발현 유전자의 발현을 억제시키거나 단백질의 기능을 억제시키는 활성을 나타내는 시험대상물질은, 전자의 경우, 시험대상물질에 대한 억제제를 개발함으로써 대장암치료제 후보물질이 될 수 있고, 후자의 경우는 대장암치료제 후보물질이 될 수 있다. 또한, 대장암 저발현 유전자의 발현을 증진시키거나 단백질의 기능을 증진시키는 활성을 나타내는 시험대상물질 및 반대로 대장암 저발현 유전자의 발현을 억제시키거나 단백질의 기능을 억제시키는 활성을 나타내는 시험대상 물질은, 전자의 경우, 대장암치료제 후보물질이 될 수 있고, 후자의 경우, 시험대상물질에 대한 억제제를 개발함으로써 대장암치료제 후보물질이 될 수 있다. 이와 같은 대장암치료제 후보물질은 이후의 대장암치료제 개발과정에서 선도물질(leading compound)로서 작용하게 되며, 선도물질이 상기 유전자 또는 그로부터 발현되는 단백질의 기능 억제효과를 나타낼 수 있도록 그 구조를 변형시키고 최적화함으로써, 새로운 대장암치료제를 개발할 수 있다.
본 발명은 또한 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자의 siRNA를 제공한다.
상기 siRNA의 염기서열은 상기 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자(mRNA)의 염기서열 중 각각의 서열에서 연속된 19~23개의 염기서열일 수 있다.
상기 siRNA의 서열은 편의상 정방향 서열(sense strand)을 나타낸 것으로, 실제 유전자 억제효과를 나타내는 역방향 서열(antisense strand)과 함께 이중리보핵산쇄를 구성하게 된다.
본 발명의 siRNA는 짧은 19-23개의 이중 리보핵산쇄로 세포내에 도입하면 비특이적 저해(non-specific inhibition)없이 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자 발현만을 억제하는 효과를 나타내므로, 대장암 관련 유전자 기능연구에 이용할 수 있다. 또한, 상기 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자 발현을 억제하여 대장암세포를 죽이는 효과도 나타낼 수 있다.
본 발명은 또한 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자에 대한 억제제를 포함하는 대장암 치료용 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자는 대장암 세포에서 다량 발현되므로, 상기 유전자의 억제제를 투여하여 상기 유전자의 발현을 저해시키면 대장암을 억제할 수 있다.
따라서 본 발명은 또한 상기 유전자의 억제제의 대장암 치료 용도 및 유효량의 상기 유전자의 억제제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 대장암 치료방법을 제공한다. 본 발명에 있어서 대장암 치료는 대장암의 예방 및 억제를 포함한다.
본 발명에 있어서, LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자에 대한 억제제는 상기 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드일 수 있다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드는 생체 내 뿐만 아니라 생체 외에서도 유전자-특이적 억제를 달성하기 위해 성공적으로 사용되어 왔다. 안티센스 뉴클레오타이드는 특정 DNA 또는 RNA 타겟에 대해 안티센스(또는 상보)인 짧은 길이의 DNA 합성 가닥(또는 DNA 아날로그)이다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타겟에 결합하고 전사, 번역 또는 스플라이싱의 단계에서 발현을 멈추게 함으로써 DNA 또는 RNA 타겟에 의해 인코드된 단백질의 발현을 막기 위해 제안되었다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 세포 배양 및 질병의 동물 모델에서도 성공적으로 이용되어 왔다(Hogrefe, 1999). 올리고뉴클레오타이드가 분해되지 않도록 더욱 안정하고 저항적이 되게 하기 위한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 또 다른 변형이 당업자에게 알려져 있고 이해된다. 여기서 사용된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 이중나선 또는 단일나선 DNA, 이중나선 또는 단일나선 RNA, DNA/RNA 하이브리드, DNA 및 RNA 아날로그 및 염기, 당 또는 백본 변형을 지닌 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 올리고뉴클레오타이드는 안정성을 증가시키고, 뉴클레아제 분해에 대한 저항성을 증가시키기 위해 당분야에 알려진 방법에 의해 변형된다. 이들 변형은 당분야에 알려져 있는 올리고뉴클레오타이드 백본의 변형, 당 모이어티의 변형 또는 염기의 변형을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.
또한, LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자에 대한 억제제는 상기 유전자의 siRNA(Small Interfering RNA)일 수 있다.
즉, 상기 siRNA의 염기서열은 상기 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자(mRNA)의 염기서열 중 각각의 서열에서 연속된 19~23개의 연속된 염기서열일 수 있다.
상기 siRNA의 서열은 편의상 정방향 서열(sense strand)을 나타낸 것으로, 실제 유전자 억제효과를 나타내는 역방향 서열(antisense strand)과 함께 이중리보핵산쇄를 구성하게 된다.
siRNA는 세포 배양 및 생체 내에서 오래 지속되는 효과, 생체 내에서 세포를 트랜스펙션시키는 능력 및 혈청 내 분해에 대한 저항력의 측면에서 생체 내에서 특정한 유전자의 발현의 저해에 대해 매우 강한 약물이 되는 잠재력을 지닌다(Bertrand et al., 2002). siRNA의 전달 및 siRNA를 포함한 발현 컨스트럭트/벡터는 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 미국 출원 제2004/106567 및 2004/0086884는 바이러스성 벡터, 비바이러스성 벡터, 리포솜 전달 운반체, 플라스미드 주입 시스템, 인공 바이러스 엔벨로프 및 폴리라이신 컨쥬게이트를 포함한 전달 메커니즘뿐만 아니라 많은 발현 컨스트럭트/벡터를 제공하고 있다.
siRNA는 상대적으로 낮은 농도로도 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의해 얻을 수 있는 효과와 동등하거나 높은 효과를 얻을 수 있기 때문에 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 대안으로 제시되고 있다(Thompson, 2002). siRNA의 이용은 질병의 동물 모델에 있어서 유전자 발현을 저해하는 데 대중성을 나타내고 있다. 당업자는 당해 기술 분야에 공지된 방법을 이용하여 원하는 방식대로 상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 siRNA를 합성하고 변형시킬 수 있다(예를 들어, Andreas Henschel, Frank Buchholz1 and Bianca Habermann (2004) DEQOR: a web-based tool for the design and quality control of siRNAs. Nucleic Acids Research 32(Web Server Issue):W113-W120. 참조). 또한 당업자는 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 siRNA를 지닌 발현 컨스트럭트/벡터에 유용한 조절 서열(예컨대, 구성적 프로모터, 유도성 프로모터, 조직-특이적 프로모터 또는 그의 결합)을 잘 이해하고 있다.
대장암 치료를 위해 사용되는 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 siRNA는 약제학적으로 허용되는 담체를 추가적으로 포함한 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 적당한 약제학적으로 허용되는 담체는 예를 들어 하나 이상의 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 덱스트린, 글리세롤, 에탄올뿐만 아니라 이들의 조합을 포함한다. 이러한 조성물은 투여 후 활성 성분의 빠른 방출, 또는 지속적이거나 지연된 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다.
상기 유전자의 저해제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 siRNA 외에도 상기 유전자의 발현을 억제하는 물질이면 어떤 것이든 가능하다. 따라서 종래 당해 기술 분야에서 상기 유전자의 저해제로 알려진 화합물 또한 이용가능하다.
본 발명은 또한 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 억제제를 포함하는 대장암 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명의 유전자를 억제하면 그에 따른 단백질의 발현이 억제되어 대장암이 억제되는 것이므로, 상기 유전자의 단백질을 저해하면 대장암을 억제할 수 있다.
따라서 본 발명은 상기 단백질에 대한 억제제의 대장암 치료 용도 및 유효량의 상기 단백질의 억제제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 대장암 치료방법을 제공한다. 본 발명에 있어서 대장암 치료는 대장암의 예방 및 억제를 포함한다.
상기 단백질에 대한 억제제는 본 발명의 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체일 수 있다. 상기 단백질에 대한 모노클로날 항체는 당업계에 통상적인 모노클로날 항체 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있고, 시판되는 것을 사용할 수 있다. 또한, 모노클로날 항체 대신에 상기 단백질을 인식하는 폴리클로날 항체를 사용할 수도 있고 이는 당업계에 통상적인 항혈청 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있다.
본 발명의 대장암 치료용 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다. 본 발명의 단백질에 대한 억제제가 항체일 경우 약제학적으로 허용되는 담체는 결합 단백질의 저장 수명 또는 유효성을 증가시키는 습윤제, 유화제, 방부제 또는 완충액과 같은 최소량의 보조 물질로 구성될 수 있다.
또한 본 발명의 대장암 치료용 조성물은 하나 또는 그 이상의 대장암치료제와 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 대장암 치료용 조성물은 예를 들어 당업자에게 잘 알려진 화학요법약제(chemotherapeutic agent), 예컨대, 사이클로포스파마이드, 아지리딘, 알킬알콘설포네이트, 나이트로소우레아, 다카르바진, 카르보플라틴, 시스플라틴 등과 같은 알킬화제(alkylating agent), 마이토마이신 C, 안트라사이클린, 독소루비신(아드리아마이신) 등과 같은 항생제, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라신, 시타라빈 등과 같은 항대사제(antimetabolitic agent), 빈카 알칼로이드와 같은 식물유래 약제 및 호르몬 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 대장암 치료용 조성물은 상기 유효 성분 외에도 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 포함할 수 있으며, 이러한 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제, 또는 가용화제 등이 있다.
또한 본 발명의 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 대장암 치료용 조성물의 약제 제제 형태는 과립제, 산제, 피복정, 정제, 캡슐제, 좌제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 및 활성 화합물의 서방출형 제제 등이 될 수 있다.
본 발명의 대장암 치료용 조성물은 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 복강내, 흉골내, 경피, 비측내, 흡입, 국소, 직장, 경구, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.
본 발명의 치료 방법에 있어서, "유효량"은 대장암을 억제하는 효과를 이루는데 요구되는 양을 의미한다. 따라서, 본 발명의 유효 성분의 "유효량"은 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 성인의 경우, 상기 유전자 또는 단백질의 억제제를 1일 1회 내지 수회 투여시, siRNA일 경우 0.01ng/kg~10㎎/kg, 상기 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드인 경우 0.01ng/kg~10㎎/kg, 화합물일 경우 0.1ng/kg~10㎎/kg, 상기 단백질에 대한 모노클로날 항체일 경우 0.1ng/kg~10㎎/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명에 있어서, 상기 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381 유전자는 표 1의 염기서열 또는 상기 염기서열 중 하나 이상의 염기가 결실, 치환 또는 삽입된 염기서열일 수 있다.
상기 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381 유전자, 상기 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍, 및 상기 유전자의 siRNA 서열은 예시일 뿐 이에 한정되는 것이 아님은 당업자에게 자명하다. 상기 서열들에 대해 실질적인 서열 동일성 또는 실질적인 서열 상동성을 지닌 서열 또한 본 발명의 범주에 포함된다. 여기서 사용된 "실질적인 서열 동일성" 또는 "실질적인 서열 상동성"이라는 용어는 서열이 또 다른 서열과의 실질적인 구조적 또는 기능적 동일성을 나타냄을 표현하기 위해 사용된다. 이러한 차이는 예를 들어 다른 종 간의 코돈 용법의 고유의 변이에 기인한다. 2 이상의 다른 서열 사이의 유의적인 양의 서열 중복 또는 유사성이 있는 경우 이들 서열의 길이 또는 구조가 다르더라도 유사한 물리적 특성을 지니는 경우 구조적 차이는 무시할만한 정도가 된다.
본 발명에서 유전공학적 기술과 관련된 사항은 샘브룩 등의 문헌(Sambrook, et al. Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (2001)) 및 프레드릭 등의 문헌 (Frederick M. Ausubel et al., Current protocols in molecular biology volume 1, 2, 3, John Wiley & Sons, Inc. (1994))에 개시되어 있는 내용에 의해 보다 명확하게 된다.
LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 또는 LOC143381 유전자는 대장암과 높은 관련성을 가지므로, 상기 유전자의 발현량을 확인함으로써 대장암의 진단, 약물스크리닝 등이 가능하고, 본 발명의 유전자를 대장암 치료타겟으로 할 수 있다.
도 1은 대장암 유전자의 마이크로어레이 결과를 나타낸 사진이다.
도 2는 임상조직에서 대장암 고발현 유전자의 발현량을 나타낸 RT-PCR결과 사진(A)과 LOC440157 유전자와 LOC643911 유전자의 발현비를 나타낸 그래프(B)이다.
도 3은 임상조직에서 대장암 저발현 유전자의 발현량을 나타낸 RT-PCR결과 사진(A)과 MGC15476유전자의 발현비를 나타낸 그래프(B)이다.
도 4는 대장암세포주에서 대장암 고발현 유전자의 발현비(대장암세포주/정상조직)를 나타낸 그래프이다.
도 5는 대장암세포주에서 대장암 저발현 유전자의 발현비(대장암세포주/정상조직)를 나타낸 그래프이다.
도 2는 임상조직에서 대장암 고발현 유전자의 발현량을 나타낸 RT-PCR결과 사진(A)과 LOC440157 유전자와 LOC643911 유전자의 발현비를 나타낸 그래프(B)이다.
도 3은 임상조직에서 대장암 저발현 유전자의 발현량을 나타낸 RT-PCR결과 사진(A)과 MGC15476유전자의 발현비를 나타낸 그래프(B)이다.
도 4는 대장암세포주에서 대장암 고발현 유전자의 발현비(대장암세포주/정상조직)를 나타낸 그래프이다.
도 5는 대장암세포주에서 대장암 저발현 유전자의 발현비(대장암세포주/정상조직)를 나타낸 그래프이다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
<실시예 1> 대장암진단용 유전자 확인
1-1. 대장암 임상조직과 정상조직, 6개의 대장암 세포주에서 총 RNA 분리
(1) 대장암 임상조직의 준비
66쌍의 환자의 대장암 조직과 정상 조직은 삼성의료원으로부터 공급 받았다. 임상조직은 환자로부터 외과적으로 제거된 후, 분석때 까지 이를 액체질소에 보관하였다.
(2) 대장암 세포주의 준비
10% 소혈청(Fetal Bovine Serum, GIBCO사), 페니실린 (10000U/ml)과 스트렙토마이신(10mg/ml) 을 첨가한 RPMI1640 (GIBCO) 배양액을 10mm 디쉬에 10ml씩 분주한 후 대장암 세포주인 HT29, SW480, DLD1, HCT116, SW620, Colo205(각각의 입수처 기재바랍니다.) 를 디쉬당 세포수가 1X106 이 되도록 접종하고 이를 37℃, 5% CO2 가 존재하는 배양기에서 배양하였다.
(3) 총 RNA 분리
총 RNA는 QIAGEN 킷트 (RNeasy Maxi kit: cat #75162)를 사용하여 분리하였고, Experion RNA StdSens(Bio-Rad사) 칩을 이용하여 정량하였다. 우선 상기 대장암 임상조직과 정상조직을 적절한 크기로 자른 후 150ul 의 베타 멀캅토 에탄올을 첨가한 15ml의 키트 내 분해 완충액에 용해시켰다. 여기에 15ml의 70% 에탄올을 넣어 잘 섞은 후, 3000g에서 5분간 원심분리하여 총 RNA를 막에 부착시켰다. 두 차례의 세척을 항 후 1.2ml의 RNase가 없는 물을 첨가하여 총 RNA를 분리하였다. 부착된 세포주의 경우는 트립신, EDTA를 이용하여 회수한 후 키트 내 분해 완충액 RLN (50mM TrisCl, pH 8.0, 140mM NaCl, 1.5mM MgCl2, 0.5% NP-40) 1ml에 베타 멀캅토 에탄올 10ul 를 첨가하여 용해시켰다. 여기에 1ml의 70% 에탄올을 넣어 잘 섞은 후, 3000g에서 5분간 원심분리하여 총 RNA를 막에 부착시켰다. 두 차례의 세척을 한 후 100ul의 RNase가 없는 물을 첨가하여 총 RNA를 분리하였다.
1-2. 총 RNA를 이용한 마이크로어레이 실시 및 대장암 진단용 유전자 확인
(1) 마이크로어레이 실시
하이브리드화를 위해 실시예 1-1에서 추출된 총 RNA를 Illumina TotalPrep RNA Amplification Kit (Ambion사)을 이용하였다. T7 Oligo(dT) primer를 이용하여 cDNA를 합성하고, biotin-UTP를 이용하여 in vitro transcription을 실시하여 biotin-labeled cRNA를 제조하였다. 제조된 cRNA는 NanoDrop(Nanodrop사, ND-1000)을 이용하여 정량하였다. 정상 대장 상피세포 및 대장암 세포에서 제조된 cRNA를 Human-6 V2 (Illumina사) 칩에 하이브리드화 하였다. 하이브리드화 후 비특이적 하이브리드화를 제거하기 위하여 Illumina Gene Expression System 세척액 (Illumina사)을 이용하여 Illumina Human-6 V2칩을 세척하였고, 세척된 Illumina Human-6 V2칩은 streptavidin-Cy3(Amersham사) 형광 염색약으로 표지하였다. 형광 표지된 DNA 칩은 공촛점(confocal) 레이저 스캐너 (Illumina사)를 이용하여 스캐닝하여 각 스팟에 존재하는 형광의 데이터를 얻어서 TIFF 형태의 이미지 파일로 저장하였다. TIFF 이미지 파일을 BeadStudio version 3(Illumina사)으로 정량하여 각 스팟의 형광값을 정량하였다. 정량된 결과는 Avadis Prophetic version 3.3(Strand Genomics사) 프로그램으로 ‘quantile’ 기능을 이용하여 보정하였다.
(2) 대장암 진단용 유전자 확인
상기의 과정으로 얻어진 1,601개의 유전자 발현 정도 분석을 통하여 정상 대장 상피세포와 대장암 세포의 유전자 발현 양상을 비교 분석하여, 대장암 진단용 유전자를 확인하였다. 군집화 분석(hierarchical clustering analysis)를 이용하여 유전자 발현양상을 분석하였으며, 그 결과, 정상 대장 상피세포와 대장암 세포는 크게 두 개의 군집으로 나누어지는 것을 알 수 있었다 (정상과 대장암조직). 또한, 정상 대장 상피세포와 대장암 세포를 비교하여 60% 이상의 환자에서 2배 이상의 발현차이를 나타내는 유전자들을 발견할 수 있었으며, 이중 고발현과 저발현이 각각 281개 및 605개였고, 현재 대장암에서 유전자 발현량의 변화가 보고되지 않은 대장암 마커 유전자 후보를 선발할 수 있었다.
정상조직을 대조군으로 한 대장암 조직에서의 각 유전자의 발현량을 고발현되는 유전자의 경우 붉은색으로, 저발현되는 유전자의 경우 초록색으로 나타내었다 (도 1). 도 1에 나타난 바와 같이, 고발현 유전자로 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424을 확인하였고, 저발현 유전자로 FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381을 확인하였다.
또한, 상기 각각의 유전자에 대해 마이크로어레이 상의 구체적인 변화율과 유의성(P값), 2배이상 변화한 시료의 수, 그리고 유전자의 정의 및 알려진 기능을 표 3에 나타내었다. 표 3에 나타난 바와 같이 고발현 유전자와 저발현 유전자는 정상 대장 상피세포와 비교하여 발현차이를 크게 나타내므로, 대장암 진단, 약물 스크리닝, 또는 치료타겟 등으로 사용할 수 있음을 알 수 있다.
<실시예 2> 임상시료에서 대장암진단용 유전자 발현 확인
17쌍의 임상환자 샘플(실시예 1의 66쌍의 대장암 환자로부터 채취한 대장암조직(T1~T66)과 정상조직(N1~N66) 중 임상2기에 해당하는 환자조직 17쌍(T1~T17, N1~N17))을 이용하였으며, 실시예 1에서 확인된 8종의 대장암 고발현 유전자와 5종의 대방암 저발현 유전자의 발현량을 RT-PCR 방법을 통하여 분석하였다.
2-1. 역전사 효소 반응에 의한 cDNA 합성
17쌍의 임상환자 샘플(실시예 1의 66쌍의 대장암 환자로부터 채취한 대장암조직(T1~T66)과 정상조직(N1~N66) 중 임상2기에 해당하는 환자조직 17쌍(T1~T17, N1~N17))의 RNA 를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 시료 각각의 총 RNA 5ug, 프라이머인 50uM Olgo(dT)20 1ul와 10mM dNTP 2.5ul,를 넣고 RNase 저해제인 DEPC 가 들어 있는 멸균수로 전체가 25ul 가 되도록 하여 RNA/primer 혼합용액을 만들었다. 65℃에서 5분간 반응시킨 후 55℃로 옮겨 보관하였다. 다음 10X RT buffer 5ul, 25mM MgCl2 10ul, 0.1M DTT 5ul, RNase inhibitor 1ul, SuperScriptIII RT 효소를 1ul 넣고 전체가 25ul 가 되도록 한 후 55℃에서 보관 중인 RNA/primer 혼합용액과 섞어준 후, 55℃에서 50분간 반응시켰다. 그 후 85℃에서 5분간 반응시켜 RT 효소를 불활성화 한후 얼음에 넣어 반응을 종결시켰다. PCR 을 하기 전에 cDNA sample에 RNase 1ul 를 처리하여 37℃에서 20분간 반응 시켜 RNA 를 제거한 후 PCR 반응을 하였다.
2-2. PCR 을 통한 cDNA 증폭과 발현량 확인
(1) 주형의 농도 보정
마커유전자를 정량하기 위한 표준 유전자로서 GAPDH를 사용하였다. 표준 유전자의 프라이머를 이용하여 PCR 반응을 수행하고 표준 유전자 GAPDH의 발현량이 동일해지도록 cDNA의 농도를 보정하였다.
우선 각각의 cDNA를 20배 희석한 후 희석된 샘플 2ul를 이용하여 PCR 반응을 수행하였다. PCR은 2X PCR premix (바이오니아사) 15ul, 2ul의 GAPDH 5' 프라이머(20pmole), 2ul 의 3' 프라이머(20pmole), 11ul 의 증류수를 넣어 사용하였고 20 cycle, 23cycle, 25cycle을 수행하였다. 이 때 PCR 반응 조건은 94℃ 30초, 50℃ 30초, 72℃ 1분으로 수행하였으며, 산물의 크기는 457bp 이다.
PCR 산물을 2% 아가로스 젤에 로딩하여 전기영동한 후 젤 사진을 찍고, 이미지를 TotalLab v1.0 프로그램[Nonlinear Dynamix사] 으로 정량 한 후, 다시 보정하여 PCR을 수행하여 정량하는 방식으로 각 시료의 농도를 동일하게 보정하였다.
(2) PCR 에 의한 대장암 마커 유전자 증폭
상기 (1)에서 보정된 시료를 20배 희석한 cDNA 를 각 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머를 이용하여 PCR 하였다. PCR반응은 94도 1분, 54도 30초, 72도 1분으로 하였으며 cycle 수는 각 유전자의 샘플내의 농도에 따라 보정하면서 실시하였다. 적게는 25cycle을 수행하였으며 많게는 38cycle을 수행하였다. PCR 반응용액 조성은 표 4와 같고, 사용된 프라이머는 표 5와 같다.
대장암 관련 8종의 고발현 유전자인 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 및 LOC644424 와 저발현 유전자인 FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 및 LOC143381의 프라이머는 단백질 코딩 내부에서 디자인 하였으며 각 프라이머의 길이는 19~24mer 이고 Tm 값은 55도 근처이다.
(3) 발현량 확인
PCR 산물을 확인하기 위하여 2% 아가로스 젤을 이용하여 전기영동하고 이미지 장비를 이용하여 분석하였다.
그 결과를 도 2(A, B) 및 도 3(A, B)에 나타내었으며, 도 2는 임상조직에서 대장암 고발현 유전자의 발현량을 나타낸 RT-PCR 결과사진(A)과 LOC440157과 LOC643911의 발현비를 나타낸 그래프(B)이다. 도 3은 임상조직에서 대장암 저발현 유전자의 발현량을 나타낸 RT-PCR 결과사진(A)과 MGC15476의 발현비를 나타낸 그래프(B)이다. 사진에서 N은 정상조직(nontumer 조직)을 의미하며, T는 그에 해당하는 대장암 조직을 의미한다. 확연한 차를 보이는 유전자에 대해서는 아가로스젤 이미지 사진으로 나타내었고, 발현량의 차이가 적은 LOC440157과 LOC643911, 저발현유전자 MGC15476의 경우는 이미지 사진을 TotalLab v1.0 프로그램[Nonlinear Dynamix사]으로 정량 한 후 GAPDH로 보정하고 그래프로 다시 나타내었다. 상기 그래프의 X축은 임상시료를 나타낸 것이며 Y축은 발현비(대장암조직/정상조직)를 나타낸다. 상기 발현비는 대장암 조직에서 발현되는 양(각각의 마커유전자의 발현량을 표준유전자인 GAPDH의 발현량으로 보정하여 준 값)을 각각의 셋트의 정상 대장 조직에서 발현되는 발현량으로 나누어 준 값이다.
그 결과 13종의 유전자들은 확연히 대장암 시료에서 고발현되거나 저발현됨을 확인하였고, 고발현되는 대장암 마커 유전자 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 또는 LOC644424는 대장암의 진단, 또는 약물스크리닝 등을 위한 대장암마커, 또는 치료타겟 등으로 사용할 수 있고, 저발현되는 유전자 FLJ21511, C9ORF19, MGC15476, 또는 LOC143381는 대장암의 진단, 또는 약물스크리닝 등을 위한 대장암억제 마커로 사용가능할 것으로 보인다.
<실시예 3> 대장암세포주에서의 대장암 진단용 유전자의 발현량 확인
실시예 2에서 발현량의 변화가 확인된 유전자에 대해서 대장암 세포주를 이용하여 그 발현량을 조사하였다. 실시예2와 동일하게 추출한 RNA를 이용하여 cDNA를 만들고 RT-PCR로 발현량을 조사하였다.
3-1. cDNA 합성
실시예 1의 6개의 대장암 세포주( HT29, SW480, DLD1, HCT116, SW620, Colo205) 각각의 총 RNA를 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 수행하였다.
3-2. PCR 을 통한 cDNA 증폭과 발현량 확인
실시예 2와 동일하게 주형의 농도 보정, PCR 에 의한 유전자 증폭, 및 발현량 확인을 하였다.
그 결과를 도 4와 도 5에 나타냈으며, 도 4는 대장암세포주에서 대장암 고발현 유전자의 발현량을 나타낸 그래프이고, 도 5는 대장암세포주에서 대장암 저발현 유전자의 발현량을 나타낸 그래프이다. 도 4 및 도 5의 y축에는 표준 유전자인 GAPDH로 보정한 PCR 산물의 량을 실시예 2의 정상 대장조직에서의 발현량의 평균값으로 나누어 준 값을 나타낸 것이며, x축은 대장암세포주를 나타낸 것이다.
그 결과 8종의 대장암 고발현 유전자 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, 또는 LOC644424의 발현량은 대장암 세포주에서 대체적으로 높게 나타났으며, 저발현유전자 FLJ21511, C9ORF19, MGC15476 또는 LOC143381의 발현량은 대장암 세포주에서 대체적으로 낮게 나타났다.
이와 같은 결과는 LMTK3, LOC644774, HS.389988, WDR72, LOC440157, LOC643911, C13ORF23, LOC644424, FLJ21511, C9ORF19, MGC15476, 또는 LOC143381 유전자와 대장암의 관련성을 재확인해 주는 것으로써, 상기 유전자의 발현량을 확인함으로써 대장암의 진단, 약물스크리닝 등이 가능하고, 상기 유전자를 대장암 치료타겟으로 할 수 있음을 나타내는 것이다.
<110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology
<120> Composition for diagnosing colorectal cancer and use thereof
<130> P07-075-KRI-DA1
<160> 38
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 4972
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(4470)
<223> PREDICTED: lemur tyrosine kinase 3(LMTK3), mRNA.
<400> 1
atgaggcaag tgctgtggtt gtgtaatgtc tgcgtaaccg cacgggaaac ccgccaccac 60
ctccacctcc ctgccatcct cgacaagatg cctgcccccg gcgccctcat cctccttgcg 120
gccgtctccg cctccggctg cctggcgtcc ccggcccacc ccgatggatt cgccctgggc 180
cgggctcctc tggctcctcc ctacgctgtg gtcctcattt cctgctccgg cctgctggcc 240
ttcatcttcc tcctcctcac ctgtctgtgc tgcaaacggg gcgatgtcgg cttcaaggaa 300
tttgagaacc ctgaagggga ggactgctcc ggggagtaca ctccccctgc ggaggagacc 360
tcctcctcac agtcgctgcc tgatgtctac attctcccgc tggctgaggt ctccctgcca 420
atgcctgccc cgcagccttc acactcagac atgaccaccc ccctgggcct tagccggcag 480
cacctgagct acctgcagga gattgggagt ggctggtttg ggaaggtgat cctgggagag 540
attttctccg actacacccc cgcccaggtg gtggtgaagg agctccgagc cagcgcgggg 600
cccctggagc aacgcaagtt catctcggaa gcacagccgt acaggagcct gcagcacccc 660
aatgtcctcc agtgcctggg tctgtgcgtg gagacgctgc cgtttctgct gattatggag 720
ttctgtcaac tgggggacct gaagcgttac ctccgagccc agcggccccc cgagggcctg 780
tcccctgagc taccccctcg agacctgcgg acgctgcaga ggatgggcct ggagatcgcc 840
cgcgggctgg cgcacctgca ttcccacaac tacgtgcaca gcgacctggc cctgcgcaac 900
tgcctgctga cctctgacct gaccgtgcgc atcggagact acgggctggc ccacagcaac 960
tacaaggagg actactacct gaccccagag cgcctgtgga tcccactgcg ctgggcggcg 1020
cccgagctcc tcggggagct ccacgggacc ttcatggtgg tggaccagag ccgcgagagc 1080
aacatctggt ccctgggggt gaccctgtgg gagctgtttg agtttggggc ccagccctac 1140
cgccacctgt cagacgagga ggtcctcgcc ttcgtggtcc gccagcagca tgtgaagctg 1200
gcccggccga ggctcaagct gccttacgcg gactactggt atgacattct tcagtcctgc 1260
tggcggccac ctgcccagcg cccttcagcc tctgatctcc aattgcagct cacctacttg 1320
ctctccgagc ggcctccccg gcccccaccg ccgccacccc caccccgaga cggtcccttc 1380
ccctggccct ggccccctgc acacagtgcg ccccgcccgg ggaccctctc ctcaccgttc 1440
cccctactgg atggcttccc tggagccgac cccgacgatg tgctcacggt caccgagagt 1500
agccgcggcc tcaacctcga gtgcctgtgg gagaaggccc ggcgtggggc cggccggggt 1560
gggggggcac ctgcctggca gccggcgtcg gcccccccgg ccccccacgc caacccctcc 1620
aaccctttct acgaggcgct gtccacgccc agcgtgctgc ctgtcatcag cgcccgcagc 1680
ccctccgtga gcagcgagta ctacatccgc ttggaggagc acggctcccc tcctgagccc 1740
ctcttcccca acgactggga ccccctggac ccaggagtgc ccgcccctca ggccccccag 1800
gccccctccg aggtccccca gctggtgtcc gagacctggg cctcccccct cttccctgcg 1860
ccccggccct tcccagccca gtcctcagcg tcaggcagct tcctgctgag cggctgggac 1920
cccgagggcc ggggcgccgg ggagaccctg gcgggagacc ctgccgaggt cttgggggag 1980
cgggggaccg ccccgtgggt ggaagaagaa gaggaggagg aggagggcag ctccccaggg 2040
gaagacagca gcagccttgg aggtggccca agccgccggg gtcccctacc ctgtcccctg 2100
tgcagccgcg agggggcctg ctcctgcctg ccactggagc ggggggacgc cgtagcaggc 2160
tggggaggcc accctgctct tggctgcccc cacccccccg aggacgactc ctcgctgcgg 2220
gcagagcggg gctccctggc cgacttgccc atggcccccc ccgcctcggc cccccccgag 2280
tttctggacc ccctcatggg ggcggcggcg ccccagtacc ccgggcgggg gccacctccc 2340
gctccccccc ccccgccgcc acctcctcgg gcccccgcgg acccggccgc gtcccccgac 2400
cccccttcgg ccgtggccag tcccggttca ggcctctcgt cgccgggccc caagccgggg 2460
gacagcggct acgagaccga gacccctttt tccccagagg gagccttccc aggtgggggg 2520
gcggccgagg aggaaggggt ccctcggccg cgggctcccc ccgagccacc cgacccagga 2580
gcgccccggc cacctccaga cccgggtccg ctcccactcc cggggccccg ggagaagccg 2640
accttcgtgg ttcaagtgag cacggaacag ctgctgatgt ccctgcggga ggatgtgaca 2700
aggaacctcc tgggggagaa gggggcgaca gcccgggaga caggacccag gaaggcgggg 2760
agaggccccg ggaacagaga gaaagtcccg ggcctgaaca gggacccgac agtcctgggc 2820
aacgggaaac aagccccaag cctgagcctc ccagtgaacg gggtgacagt gctggagaac 2880
ggggaccaga gagccccagg catcgaggag aaggcggcgg agaatggggc cctggggtcc 2940
cccgagagag aagagaaagt gctggagaat ggggagctga cacccccaag gagggaggag 3000
aaagcgctgg agaatgggga gctgaggtcc ccagaggccg gggagaaggt gctggtgaat 3060
gggggcctga cacccccaaa gagcgaggac aaggtgtcag agaatggggg cctgagattc 3120
cccaggaaca cggagaggcc accagagact gggccttgga gagccccagg gccctgggag 3180
aagacgcccg agagttgggg tccagccccc acgatcgggg agccagcccc agagacctct 3240
ctggagagag cccctgcacc cagcgcagtg gtctcctccc ggaacggcgg ggagacagcc 3300
cctggccccc ttggcccagc ccccaagaac gggacgctgg aacccgggac cgagaggaga 3360
gcccccgaga ctgggggggc gccgagagcc ccaggggctg ggaggctgga cctcgggagt 3420
gggggccgag ccccagtggg cacggggacg gcccccggcg gcggccccgg aagcggcgtg 3480
gacgcaaagg ccggatgggt agacaacacg aggccgcagc caccgccgcc accgctgcca 3540
ccgccaccgg aggcacagcc gaggaggctg gagccagcgc ccccgagagc caggccggag 3600
gtggcccccg agggagagcc cggggcccca gacagcaggg ccggcggaga cacggcactc 3660
agcggagacg gggacccccc caagcccgag aggaagggcc ccgagatgcc acgactattc 3720
ttggacttgg gaccccctca ggggaacagc gagcagatca aagccaggct ctcccggctc 3780
tcgctggcgc tgccgccgct cacgctcacg ccattcccgg ggccgggccc gcggcggccc 3840
ccgtgggagg gcgcggacgc cggggcggct ggcggggagg ccggcggggc gggagcgccg 3900
gggccggcgg aggaggacgg ggaggacgag gacgaggacg aggaggagga cgaggaggcg 3960
gcggcgccgg gcgcggcggc ggggccgcgg ggccccggga gggcgcgagc agccccggtg 4020
cccgtcgtgg tgagcagcgc cgacgcggac gcggcccgcc cgctgcgggg gctgctcaag 4080
tctccgcgcg gggccgacga gccagaggac agcgagctgg agaggaagcg caagatggtc 4140
tccttccacg gggacgtgac cgtctacctc ttcgaccagg agacgccaac caacgagctg 4200
agcgtccagg ccccccccga gggggacacg gacccgtcaa cgcctccagc gcccccgaca 4260
cctccccacc ccgccacccc cggagatggg tttcccagca acgacagcgg ctttggaggc 4320
agtttcgagt gggcggagga tttccccctc ctcccccctc caggcccccc gctgtgcttc 4380
tcccgcttct ccgtctcgcc tgcgctggag accccggggc cacccgcccg ggcccccgac 4440
gcccggcccg caggccccgt ggagaattga ttccccgaag acccgacccc gctgcaccct 4500
cagaagaggg gttgagaatg gaatcctctg tggatgacgg cgccactgcc accaccgcag 4560
acgccgcctc tggggaggcc cccgaggctg ggccctcccc ctcccactcc cctaccatgt 4620
gccaaacggg aggccccggg cccccgcccc ccagcccccc agatggctcc cctgaccccc 4680
ctgaccccct cggagccaaa tgaggcagga atccccccgc ccctccatag agagccgcct 4740
ttctcggaac tgaactgaac tcttttgggc ctggagcccc tcgacacagc ggaggtccct 4800
cctcacccac tcctggccca agacaggggc cgcaggcttc ggggacccgg accccccatt 4860
tcgcgtctcc cctttccctc cccagcccgg cccctggagg ggcctctggt tcaaaccttc 4920
gcgtggcatt ttcacattat ttaaaaaaga caaaaacaac tttttggagg aa 4972
<210> 2
<211> 282
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(282)
<223> PREDICTED: similar to Phosphoglycerate kinase 1(LOC644774), mRNA.
<400> 2
atgatgcttt gggcactggt tcacagagcc cacagctcca tggtaggagt caatctgcca 60
cagaaggctg gtgggttttt gatgaagaag gagctgaact actttgcaaa ggccttggag 120
agcccagagc gacccttcct ggccatcctg ggcggagcta aagttgcaga caagatccag 180
ctcatcaata atatgctgga caaagtcaat gagatgatta ttggtggtgg aatggctttt 240
aagttcctta aggtgctcaa caacatggag gtaggaactt aa 282
<210> 3
<211> 488
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(488)
<223> K-EST0184252 L9SNU354 cDNA clone L9SNU354-11G075, mRNA sequence
<400> 3
cttattttct ctgaacgatc ctgattccag tcatcttgtt gaatacccta gttctaataa 60
ttgactcttg cttttctaga gaaatatttc caaatgatgc tagttttgtc tcttcctttc 120
aaagttgtat accacttctt tttcttgtca ttttgcattg cctgggacct ccagaataat 180
gtttcatgaa gtagcatgta tccatatctg gttcttgact ttttcatcat tataattgtt 240
ttctatgggt tacttatcag tttaagaatg cttaattcct agatgaacta agagtgttta 300
ttacatgttg agatttatgg tatgcttttt cttcctcaag ataatgcatt ttttgtatta 360
tctgttaatg tgataggtta tccatttgtg tattttcaat cattgaacaa cccttgattt 420
ttttggataa actctatttg gtcattatgc atcattctat aaaccctgct gaatttttca 480
tttgccaa 488
<210> 4
<211> 7326
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(7326)
<223> WD repeat domain 72(WDR72), mRNA.
<400> 4
cctctgccgc tcctccgccc cacggctcag gattcgccca aaatgaggac ttccctgcag 60
gcagtggcac tctggggaca gaaggcccct ccccacagca tcactgccat catgatcact 120
gatgaccagc gaacgattgt gactggaagt caagagggtc agctctgtct ctggaatctc 180
tcacatgaac taaagatttc agcgaaagaa ctcctatttg gtcattcagc ttcggtaaca 240
tgtttggcaa gagcaaggga cttctctaaa cagccctaca ttgttagtgc tgctgaaaat 300
ggggagatgt gtgtttggaa tgtcaccaat ggacagtgcg tggagaaggc tacacttcct 360
tacaggcaca ctgcaatctg ttattaccac tgctcattcc ggatgacagg agaaggctgg 420
cttctttgtt gtggagaata tcaagatgtc cttataattg atgccaaaac tttggctgtt 480
gttcacagtt ttagatcatc tcagtttcct gactggatca actgcatgtg cattgttcac 540
tccatgagaa ttcaagaaga ttctctcttg gtggtatcag tagctggtga gctcaaagta 600
tgggatcttt cctcatctat caacagcatt caggaaaagc aagatgtcta tgaaaaagaa 660
tccaagtttc ttgagtcctt gaactgccag acaattcgat tttgcacata tactgagaga 720
cttctattgg tggtattttc taaatgttgg aaggtttatg attattgtga tttttccctt 780
ctgctgactg aagttagtag aaatgggcag ttctttgctg gtggagaagt gattgctgct 840
cacagaatcc tcatctggac agaagatggt cacagttaca tctatcagct gctgaacagt 900
gggctttcaa aaagcatata ccctgctgat ggaagagtgc ttaaagagac catttatcct 960
catttactgt gctctacttc tgtgcaggaa aataaggaac agagccgtcc ctttgttatg 1020
ggctacatga atgaaaggaa agagcctttt tacaaggtac ttttctctgg agaagtctca 1080
ggaagaatta ctttgtggca catccctgat gttcctgtat ccaagtttga tggttctcct 1140
agagagatac cagtaactgc cacctggact cttcaagata attttgataa gcatgatact 1200
atgtcacaaa gtattattga ctatttctct gggcttaaag atggggcagg aactgctgta 1260
gtcacttcat cagagtatat tccaagtctt gataaactaa tatgtggctg tgaagatggg 1320
acaattatca ttacccaggc tttgaatgct gccaaagcaa gacttctgga aggtggttct 1380
ttagtaaaag attctccccc tcataaagtt cttaaaggcc accaccaaag tgtcacttca 1440
ttactctatc cacatggtct ctcttcgaaa ttagaccaaa gttggatgtt gtctggggac 1500
ctggactcat gtgtgatctt gtgggatatc tttactgaag aaattttgca taaattcttt 1560
ttggaagctg gtccagtaac aagtcttttg atgtcaccag agaagtttaa actaaggggt 1620
gagcagataa tttgctgtgt gtgcggtgac cattccgtgg ctctccttca ccttgaggga 1680
aagagttgcc tcctgcatgc ccggaagcac ctttttcctg tgaggatgat aaaatggcac 1740
ccggttgaga attttttaat tgttggatgt gcagatgact cagtttatat ctgggaaatt 1800
gaaacaggca ctttggaaag acatgagaca ggagaaagag cacgaattat tcttaattgt 1860
tgtgatgatt cacagcttgt gaagtctgta cttcccattg cctcagagac acttaagcac 1920
aaaagtatag aacagagatc ctccagcccc taccagcttg ggccattacc ttgccctggt 1980
ctgcaggtgg agtcttcatg taaggttact gatgccaaat tttgcccaag accttttaat 2040
gtcttgcctg tgaagacaaa atggagtaac gttggctttc atattcttct atttgatctg 2100
gaaaaccttg ttgaactttt gctaccaact ccactcagtg atgttgactc ttccagttca 2160
ttctatggtg gtgaggtcct gagaagagcc aagagcacag tggagaagaa gacactgaca 2220
ctgagaaaaa gtaaaactgc ctgtggtcct ctttcagcag aggcactagc caagcctatt 2280
actgaaagcc tggcccaagg agataatacc atcaaattct cagaagaaaa tgatggcatt 2340
aaaaggcaga agaaaatgaa gatctccaaa aaaatgcagc ctaagccatc aagaaaagta 2400
gatgccagtc tcacaataga cacagcaaaa ttgtttctgt cttgcctttt gccatgggga 2460
gtggataaag atttagatta tctttgcatt aagcacctca atattttaaa gcttcagggt 2520
cctatttctt tgggaatttc tttgaatgaa gataatttct cactgatgtt gccaggttgg 2580
gatttatgca atagtggaat gataaaagac tattcaggag taaatttatt ttccaggaaa 2640
gttttggact tgtcagataa atacacagcc actcttccaa atcaggttgg aattccaaga 2700
ggattggaaa ataattgtga ttctttgcga gagtcagata ctatagttta tttgttgagc 2760
agactatttt tagttaataa attagttaac atgcctttag aattggcatg tagagttggc 2820
agttctttca gaatggaaag tatacataat aagatgagag gtgctgggaa tgacatttta 2880
aatatgtcaa gcttctacag ttgcttacga aatggtaaga atgaatccca tgtacctgag 2940
gctgaccttt cacttttgaa gctaatttcc tgttggagag accagtctgt gcaggtaact 3000
gaagcaatac aagctgttct cttggcggaa gttcaacaac acatgaagag tttgggaaag 3060
atacccgtca atagtcaacc agtgtccatg gcagagaatg gtaactgtga gatgaagcag 3120
atgctgccaa agctggaatg gacagaagaa ctagagttac agtgtgttag aaacactttg 3180
cctctgcaaa ctccagtcag cccggtcaag catgacagca actcaaactc ggcaaacttc 3240
caagacgtgg aggacatgcc tgacagatgt gccttggaag agtctgagag tccaggtgag 3300
ccaaggcatc attcatggat agcaaaggtc tgcccctgca aggtgtctta aatggaatct 3360
catcagtagg agctgaattt ggacaaatta agaaatccaa aagatgccat ttgtttatta 3420
ctgtataaaa gcattgttgt tattggtcaa gttattaggc tgtagtggat ttgctaatac 3480
tttagccaac atgtattaaa gtgattttaa tacatgctga ttacaatgca atacatactg 3540
attgaaaata ttcatattca tctaatttta gaaaaatatt gcctagatca ttctctattc 3600
ctgtttctta ctttttctgt taatatttcc aacagggaat gccagtccac agacacaaat 3660
ttaatactgc tttaaatttt ctcctatcct tttagtccct gaattatata ataaacaatg 3720
ttaaaaccaa tgtagtacac aatacttact tacaaattta atactgcttc aaggtattta 3780
atctaaaatt ttaccaactt tgatttgtct ggttaggata ttttgtttta gtggatatgc 3840
tttaattcgg atcaattact gcagtaaatc tcatccctaa gcatgaaatg ttgtcaacaa 3900
atacccagtt ccatttagtt atcaattagc ccaaataaga gatacaaagt ataacagtga 3960
ccaaccttgt actgttgagt taatttgaac ttctaatgac attgaggcta atgtctttag 4020
ctcaaggttg atcttgttgg ccatatagat gtgaactagg gaaggggaat caacttacag 4080
catatcacaa ttgatcctta ttaagtataa actcttgtag gtcttttccc agaaagaagc 4140
ttgactagca ggaattctaa aactgaaata tatcaaacag cataaatagg aatagacata 4200
aagtgctctt ctattaaagc ctttggtgat ctatttacta tgatttatat tgtacagttc 4260
ctcgatttac agaaaatcat caaaattatt aatctacata tcttatgtat ataaatattg 4320
cctaatccat agaaaaaagg atataaagta ttaaatatgt gatatatagc tatatctatc 4380
tatctatgta tctaataggg aagtccaagt cacttcaatt gaagaaacat atctctgagc 4440
ataggagcag cctcaggtcc tatggtggga tgcagtggac aggagagggg gaaattagaa 4500
aagagaacta tataattgaa aaagggatat aaagcattaa atatatgata tatagctata 4560
tctatgtatg tatctaacag agaagttcaa gtcacttcaa ttaaagaaac atttttgagc 4620
atgggaccag cctcaggtct tatgctggga tgcagtagac aggagatggg gaaattagaa 4680
aagagaactg tgtaattgaa atgacgtggg ctgcaccctt aaggaactta taattaatga 4740
tgatctgaat aaacatacca ggataaagat gtcaaatgag tgtgactccc ttaaagtaga 4800
ttaaagtgtg cattctttgt ttcctaaaat atgattttac tgcttgaaat tacatttgag 4860
ttgaagttta gaaactaaca tagcattaat atgaataatc atggaaaatt attatccttt 4920
gaaaactgat tgataaatat attccccctc ctttagaaac agtcaaaagc cacttcaaac 4980
aagtttcaaa ataaaggaag gtagcaagtt aggcgatgga ttatattttc ttgcttgttg 5040
tataccagtt gtcaaggaca ttataaggac tcccaaaagc attttgaagg atggcaatat 5100
caaataagtg tatgtcctct caaatgaggc atttttaatt gttaaaatct atttggacgc 5160
tcaggttatg atatgtttat gaaaaataag cttcattatt tttatagcta catcctatta 5220
ttccctttta gaaacaagaa taacaatagg ttttaatagt tgccatactt agcatttatc 5280
agttctaatg aaaccaatat tgaatctctg ataaatattt tctgatgtta ctagctatgg 5340
gaaattagaa ctggcacaac cctgacatta ctaagtggaa atgttaggat ttttcggcat 5400
cgcatgttag aatctctaaa atttaaacat tcctgttaaa tgactaaggt ttgcttttat 5460
caatatgaat tctgaaggcc aatatcatac cattaactat gaaagctttt aattcctaaa 5520
aatagtttta gagatattca agcaatgctc tcctaatatc catacgcaag tgtgtttatg 5580
acacaaattc actagtctgt ttaaaaatga attctttata ttgactggtg ttccacatat 5640
ttcagtaatt tctgttatga gaggacttga aatagcaaat tgccacacag ttaactggat 5700
agaccacgta cgtggtgatc ataaccactt ggtactacac ccagaaactc aaaattgtct 5760
ttctcctgat gagatatggg tgtccttttg tacgtctagg cctaggtaac cagtggagtg 5820
attatattag caaatgtgtt tgtatccgga gtcttcctgt cattgtaata aaaaatttat 5880
ttaaaaattt tgtcttgtgt ttcttttttg gtaatcatct tggtgatatt tatgaatgta 5940
tttgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtatacata catatatatg tgtgtatata tatacacaca 6000
tatatataca catatatatg tgtgtatata tatatatata tggcatatcc cccaaaggaa 6060
tatcatattt tcatttgcaa gccttgattc tttgacttgc tgttgagttt cacattggct 6120
ccattgtata ttgcaggaaa aagtacctgg aaagcctgga gggttaaaag cagaggctcc 6180
tcggcagcgt gtccaggccg tgtgtgcttg ctgtgcttgt cagagcctca ttccctcccc 6240
tgtgttggag agctttctca cagggctcat ccagaggtgc tagaaagcaa tgtgagcact 6300
attaaacact tcaaatataa ggaaaaatgt ataatgttag aaacacacag ttaaaaagta 6360
gccccaggta tcaaacattc tgttactatt ttagaaacta aattaaggct gctttgaaca 6420
tgatggtatt agaaaaatgg tagaatacag tttgttaaat attaatattc tatctttaga 6480
tgatagcatt tggtgacttt tatttctttt ctcatacatt ttttccagtg ttctgtattt 6540
ttaaaatcct ttcataatta ttataatgaa cactttagaa aagatactat ttctcttcca 6600
tccttagagg gcacattata ataattgagt attttaaaat taaattttat gccatgtatt 6660
taaaatgaaa gttcaggtta cattaattcc aactgatttt aaagccttat tttcacagag 6720
tggactcatt caatttttta aattttatat tcatacattt tgattgctca gttatataaa 6780
agcggtgtta tagactcctt tattctccac aaaatgttgt cttatatgta aagtgccaaa 6840
agttgtgttt aatttcctaa gaaagtcatt gctttgtaaa catttgcata atacttagtg 6900
ttttttgtaa ttttaaaaaa ttagcttaac caaaagagtt gcaaaattaa aacttacttg 6960
agtaggtatc tttcagacaa agctgcatgg cttcatgtac aatagtcccc agatcacctc 7020
gcactgtagt ttgctcaaga aggagcctac agatggcagg taggagaagg taaactggaa 7080
attaacaggt ctgtctgtaa gagcatgcca ctggaaacac ccatccaatt tgggacccct 7140
ggaagacagc atgtgtctaa tgggaggcct gtcctagtac aactccttta ctcttttcac 7200
cttcatcttg accttctcag ataccatctt tatgtaaaat gttgatgttg tggagttttt 7260
gcagtaattt aatttttata aatattgtat taaaatatat ttatcttgaa aaaaaaaaaa 7320
aaaaaa 7326
<210> 5
<211> 2779
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(2779)
<223> hypothetical gene supported by AK096951; BC066547(LOC440157),
mRNA.
<400> 5
cagcgatcag cttggctgcc cttgcttcgt agtgccacag tagaggctag gggagcaact 60
ggctttcctc cccaaaaggc gggcagggtt atccacactt tgcccaggtc cctgaagcct 120
gcggctgagc tcggggataa caggggccaa gtcaccggtc ccagacacct aggaactatt 180
agagacagga accagcatat gacacagggg ctgttaagta ggaggttgga gaacacacgt 240
ttttggtcta aaccgggggc ccctctcttt gcccactgag cccgcggcct gcgtggtgct 300
gagactgcct ctggccgcgt ccgcttggga caaggcctga gcggtggctg atcccacctg 360
gatgtcccgg gccggctccc acccgaagcc cgccatcccg ggacgcggtg gggagaagct 420
ggcactgctc cttgccatgc ttggcggccg ctgctgcccg gctgggggtc ccgagtcgca 480
cacgccctgc aagccctggc caccgatccg gagggaacgc cctgggctgc ggtccccgaa 540
gccaagagaa gaagcaggtc ccagggccga ctccaaagcc gcatctccag ctttgttcat 600
gggtccggga agcagaggcc gccgccggcc accgtcgtgg gcgagaagaa gggcacgagg 660
cggccggggc tcctgcccgg aaccacatgt gcgcgccggg ccccgcttct tcatcgcact 720
tgcggccccg gctgcccggg gcctgcgagt ttccagccag ggcccgggac tctggcgcgg 780
tccggccgcg aggaaggaag gcgtggcccg ggtgggggta gcggcaggcc tgcggctcag 840
gccatggggc aggggcagaa aaacgacccc ggcgctgtcc gggcatccag ctcggttccc 900
gctgcagcca ggagactccc gggagcgctc taggaaccac agagccctgg aactcacctg 960
gcagcctcgc ggcgctaaag ccggcggagc ctgagacagc gcgcggcgag gcggtcacgc 1020
tccacccccg cgtggcggca ggactcggat ttcgcccctg gttttaaaat tgtgccggtg 1080
gagcccggga cgctgggaag agcgttctgc gcccctccag tcgcggtctc cgccctaaac 1140
cgacttccag agccgcctct gctccctgga ggggcgcagt ggcggacacc ggcgtcccac 1200
gaagtcgcag gtcctcagtc tgagggctgc cccgcacgct cggaatgcag gagggtctcc 1260
gcctcgctgc gctgcccctg ggggcggagg cgtgcgctgc aggcgagaga ggcggcccgg 1320
tatcgatgga gaagcacaga gggctttgag gtcgcaacgt cccggttgct gagcggagtc 1380
aggagtcagg ttccaaaggg acagcgctca gggttgtaat caccacccgg cccaccgctt 1440
ccgcagctgc gagtctaggg cggagctgtt gggtggaccg agcaggcgag gcgcaggcag 1500
gcagcggctc cgcctcggaa tccgcctcga ccggggcaca ggtgcccgcc ccacctgtcc 1560
ctcggtcacc ccaaccctgt ttcctcgacc cccagcactc ctccaggcct agttcgcttc 1620
agaggcgcaa gacccggaaa acaaggaaga agcgagctca gcctcaatcc ccgtccccac 1680
cccactttcg ggaccgctaa gctggagaat tgaagggggc ggaccccgga ttaaagccgc 1740
tcccttccca gcctcgcccc gctttcctaa tgtccgtgat gatttcgtta ttggcaggga 1800
agagccagac tccctgcgct cccaagacgg ggcgattggg agggggttct ggagctcatg 1860
cctggggtcg gcccggcggg ggtgaccccg cgccctcgcc ggtgcaagga gaacagctgg 1920
ttcccgccgg ggcagggaag cgtggacggt gtgggctcag gcgcctggca ggcacacggg 1980
gcctctaaag cttggtcact gtcacagatc gtgtggttgt ttcttccgtc cccgccacgc 2040
cttcctcctg ggatggggat tcattcccta gcaggtgtcg gagaactggc gcccttgcag 2100
ggtaggcgcc ccggagcctg aggcgggaac tttaaaatca gacgcttggg ggccgggctg 2160
ggaaaaactg gcggaaaata ttataactga actctcaatg ccagctgttg tagaagctcc 2220
tgggacaagc ggtggaagtc ccctcaggag gcttccgcga tgtcctaggt ggctgctccg 2280
cccgccacgg tcatttccat tgactcacac gcgccgcctg gaggaggagg ctgcgctgga 2340
cacgccggtg gcgcctttgc ctgggggagc gcagcctgga gctctggcgg tagcgctggg 2400
agcggggcct cggaggctgg gcctggggac ccaaggttgg gcggggcgca ggaggtgggc 2460
tcagggttct ccagagaatc cccatgagct gacccgcagg gcggccgtgc cagtaggcac 2520
cgggcccccg cggtgacctg cggccccgaa gctggagcag ccactgcaaa tgctgcgctg 2580
accccaaatg ctgtgtcctt taaatgtttt aattaagaat aattaatagg tccgggtgtg 2640
gaggctcaag ccttaatccc cagcacctgg cgaggccgag gagggaggat cccttgagcc 2700
cagaggttcg agactagcct gggcaacaca gtcagactcc atccttccaa aacaaacaaa 2760
caaaaaaaaa aaaaaaaaa 2779
<210> 6
<211> 558
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(558)
<223> PREDICTED: hypothetical protein LOC643911(LOC643911), mRNA.
<400> 6
aggtgttaag tgtgatgctt ccataataca tttggatgct gtcagctaag ttcacttctg 60
aactaagggg ttcctccaaa tgttggctga aattcatccc aaggctggtc tgcaaagtct 120
gcaattcata atggagctac tgtactggct attggaagga ggagattctg aagataagga 180
ggatgccact ggaaatgttg aaatgaaaaa tattcagccg ttggtctttg aaatttcctg 240
tgatgtgttt caatctagat gcaaagaaca tggaaaaatc aaagtgctcg agtggtttaa 300
atatgttttg ggtattcctg tttatagact ataatacttt tccaattaaa atcctcagtt 360
gtcacgcaga agaaggttaa gctgtatttg attgccagtt ttactgaaaa tgcttagtat 420
tttacagtat caccaaatat attttgttta gccaaggtat aggaaaaata aaataaattg 480
tataggttga cttttttcta aaatgtcttt attggattga atgaatgttt atacctgaaa 540
aaaaaaggtt caaaaaaa 558
<210> 7
<211> 5228
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(5228)
<223> chromosome 13 open reading frame 23(C13orf23), transcript variant
1, mRNA.
<400> 7
acaccaggac cccacctctg gctttcagga aagaggggcc caagctggcg gcgcagtgtt 60
gagtttactt gggcgcgact ggctttattg taggtcccca tgagctggtg ggggctgtag 120
gggtaaccag gcagggcgtc tggcgctgtt ggggctgcgt ttttccggag tccccctatg 180
cgaggccgtg cccctcttcg cccggctcct ggtgctcccc agccgccggc ccgctcccgg 240
aagctgcagc agctggtaac aaagagcctg ccgggccgcc tgctgccggg gccgaggtat 300
ccaggagtcg ggcggagcgg ctggggatga gcgcgagccg gaccatgcgt ccgggttcgc 360
ggcggtgagg gtcgcggccg gcggccgagg cgcaggtgcg ggtcgagaga ccggcgcctc 420
cctccccgcc gcccgtggac tctgagcgca ggtgtttcta ctctgccggc cgctccacct 480
gggaaagcgc cttcaagagc tacctctggc ggcacctggc cctcagctgc agggaaaccg 540
cactcaaacc tgccgccgag cccgggtttt tctgcaaaac tcagaggacc tggctcttgc 600
ccgaggtgcc ctgaaccatt gtgtgaataa gctggggaag cctgactgga gtgttttttc 660
tttttaataa aaagagtttt tctgaatctc aatttttaga aatttttttt gcgaagtttg 720
caatactctc tacctcttcg catcctctct tgctcgtgga gtctttttcc tcctcagcta 780
taaatatttt ttactatcgg cggagcagac cagggatgaa cgtcttttaa ttgcaagtat 840
aactgttaaa accacgtcgg gatagtagtc aagatggata aaaagtcctt tgaaatggtg 900
ctggatgaaa ttagaaaggc tgttttgaca gaatacaaat taaaagcaat tgaatatgtg 960
catggatact tttctagtga acaggtggtt gatttgctga gatatttttc ctgggccgag 1020
ccccagttga aggcaatgaa agcattacag cataaaatgg tggctgtcca gccaacagaa 1080
gtggtcaata tactcaactg tttcactttc agtaaagaca aactagttgc tcttgaactg 1140
ttagcctcga acattattga tgcacagaat tctcgtccta ttgaagattt attcagggta 1200
aatatgtctg agaagaaacg gtgcaagaga atacttgaac aggctttcaa ggggggctgc 1260
aaagctcctc atgctatgat atcttcttgt ggaacaatcc caggaaatcc atatcccaaa 1320
ggaagaccta gccgcataaa tggaattttc ccaggaactc ctttgaaaaa agatggtgaa 1380
gaatgtacta acgaaggcaa aggaatagct gcacgaattc ttgggccatc caaaccacct 1440
ccttcaacat ataatccaca taaacctgtt ccttatccga tacctccatg ccgaccacat 1500
gcaactattg caccaagtgc ttataacaat gcaggtctgg taccattagc gaatgtcata 1560
gctccacctc cacctccata tactcctaat cctgtaggaa cagagaatga agacctttcg 1620
aatccgtcaa aacctataca gaatcaaaca ttttccaccc cagcaagtca actcttttct 1680
cctcatggtt ctaatccttc aacacctgct gcaactcctg ttcctactgc atccccagtc 1740
aaggcaatta atcatccatc agcatcagca gctgccaccg tttctggaat gaacctgctg 1800
aatactgtcc ttcctgtgtt cccagggcag gtctcctcag ccgttcacac acctcagcca 1860
tcaataccaa acccaacagt tatcagaacc ccttcattgc ccactgcacc tgttacatcc 1920
atccacagta caaccaccac tcctgttcct tccatttttt ctggcctagt gtcactgcca 1980
ggtccttctg ccactcctac cgcagccact cctaccccag gacctacacc acggtccact 2040
cttggttcca gtgaagcatt tgcttctact tctgcacctt tcactagcct ccccttttcc 2100
accagctctt ctgctgcttc taccagcaac ccaaattctg cttcattgtc atcagttttt 2160
gcagggctcc ctttgccctt accaccaaca tcccaaggcc tatccaaccc gactcctgta 2220
attgctggtg gctctactcc cagcgttgcc ggtccacttg gtgtgaacag tcctcttttg 2280
tctgcgttaa aaggttttct gacatccaat gacaccaatt taatcaactc ctctgcttta 2340
tcctctgctg tcacaagtgg gctggcttca ctatcttctc ttactcttca gaactctgac 2400
tcttctgctt cagcccctaa caagtgctat gccccatcag ccatccctac cccacagagg 2460
acttccactc cagggttggc cctgttccca ggcctgccgt ctcccgtggc taactcaact 2520
tccactcccc tgacattgcc tgtacagtct cctttagcca ctgctgcatc agcttccacg 2580
tcagtgccag ttagctgtgg ctcctcagcc tcccttttgc gtggccccca cccaggtacc 2640
tcagatctgc atatttcatc tacccctgct gcaacaactc ttcctgttat gatcaaaact 2700
gagcccacaa gtcctactcc ctcggccttc aaaggtccat ctcattctgg gaatccctct 2760
catggcactt taggtttgtc agggacattg ggccgtgcat atacttcaac atccgtgccc 2820
atcagtttat ctgcttgcct taatcctgca ttgtcaggtc tctccagctt gagtactcct 2880
ttaaatggtt caaatcctct ttcctctatt tcccttccac cacatggttc ctccactccc 2940
attgcaccag tattcactgc tcttccttct tttacttctt tgaccaacaa ttttccttta 3000
actggcaacc catctcttaa tccgtcagta tctctcccag ggtcattaat agccacctca 3060
tctaccgctg ccacctccac atctctccct catcctagct caacggcagc tgttctctca 3120
gggctttctg cttcagcacc agtctcagca gcacctttcc ccctcaacct gtccactgct 3180
gttccctcac ttttctctgt tactcaagga cctctgtcat cttcaaatcc ctcctatcca 3240
ggcttttctg tctctaatac cccaagcgtt acccctgctc ttccctcatt cccggggctg 3300
caggcgccct ctacagtcgc agctgtcaca ccactacctg tggctgccac agccccatcc 3360
ccagctccag tcctcccagg attcgcctca gcattcagtt ccaatttcaa ctccgctctt 3420
gttgcacaag ccggtttatc atctggactt caagctgcag gcagttctgt ttttccaggc 3480
cttttgtccc tcccgggtat ccctgggttt cctcagaatc cttcacaatc atccttgcaa 3540
gaattacagc ataatgcggc tgcgcagtca gcattgttac agcaggtcca ttcagcttcg 3600
gctctggaaa gctatccagc tcagcctgat gggtttccta gttatccttc agcgccagga 3660
acaccatttt ctttgcaacc aagcctgtcc cagagtgggt ggcagtgaat acttttaact 3720
tttattctcc ttcagagcaa catcagaatt gcctgagaac tgcaatgaac aatctgacaa 3780
atgtgaagct ggccaaaagt cggaaaatga gaatgagggt aatcctggag aaattgtgac 3840
aacaatttga aaattgtggt tgcattttaa agtgtgaaca ctcccctatg taaatatgct 3900
gacaataaat tgtatggaga atggtattta aaaagtgttt ggagactttt cacctgtcct 3960
ataaaatttt gaattgtgta tgtgatctac atagaaagaa tattaaagag taggttgaac 4020
tctttatagc cgaatacagc cttaaatatg cttgtatagc atccactggc agaagtaata 4080
gttgtgcctc agacttgggg gttgcatgtg gccctggggg agttactacc cttggtatgc 4140
atgagcggtt cctattagca tcagtgggaa ctcagtactc tgtatgtatc cacaaaaggg 4200
aacttgagac ccacagttat tcttaatttc tgatattaac aaccgtacat actgctgaat 4260
ttaactcaaa atatttcagg taagtgaaag tggtgcttaa tgtagactat agaatgactt 4320
tcaggtgttt tcaactgaaa gtatatatcc agaactgcat ccttatagaa atacaagtaa 4380
gacttaggat aatttgcctt caaaacagtt ttcctaatct cagcagtatc cagtgagtga 4440
agaacacttg actgactctt gggccacctc tgttacttac tgtactatgg aagctcctgg 4500
tgaatgttta caattatggg atgtagtatt tctatttgta ctttaagtca aatgcttata 4560
tgaaatatgt gacaacaaat agagaagact ggctctgtta gtaattatgc agtatgtact 4620
ctatttaagg atctgtggta gtataacatg agtgaatgtc attaattttg aagtaataac 4680
tgccacatgt gggaagtagg ggagtaagga gaatgaattc caatctgtga ttaaaagtgt 4740
aaactataga ctctactgta gtacatttca ggatctagaa gttttacttt tataaagatg 4800
gtgtccggaa gatgttgcta atgtatttta cttcaacata gggaacaaac tttttaagta 4860
tattaataaa cctgtatggt tagtttttaa cagtttttta aaataaacta tggatatgac 4920
aaatattctg tgttttacta agtgcttgga taggctttct aattttgtat acgtgctaga 4980
gttaattatt gaacattttt atccaaattt agttgtaact ctgtttatac tactgattgc 5040
tcattcgttt aaatgatatt ttaatgtaaa agtcataacc aacatatgaa cagacagatt 5100
tatgtcttta aacacagaat gtaagctata gtttaatctg ataccagttg ctggaagttg 5160
ccatttgttt ttcttaaatc tatacccata aaacttcttt taagattaaa aaaaaaaaaa 5220
aaaaaaaa 5228
<210> 8
<211> 1610
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(1610)
<223> PREDICTED: hypothetical protein LOC644424(LOC64424), mRNA.
<400> 8
caaaaggcca aagtaaaaaa aaaaaaaaaa ggaaaaaatg aaaaagaagc cattgaatac 60
cctattgacc ataagaaaaa ggcagggaaa gttgttcaac ggcaacccag gcactgaagg 120
aaaaagaaca tggagaatga caaaagccca gagggaggag taaaaggaca caaacaccat 180
tctcagggac caggactggg cgctgttctc agggaccagg actgggcact aatcacagaa 240
ctgtaacagg cgccccatgg gaatgaccaa ctgttagatg gggcctgcag ggcagcacct 300
ccctcctgcc tcccaccaac agcttctaaa gggaaatgcc gactcttttc acaccagtcc 360
cctcactgcg gctgagtgtg tgggcgcaga tgataggtca caacaacctg attcagtcct 420
cactgcggct gagtgtgtcg ggtgcagatg acaggccacc acaacctgat tcagtcccca 480
ctgtggctgt gtgtgggggt gcagatgaca ggccaccaca acctgattca ggattcagtt 540
ggctaccagc cagtgccata aggaaaacca ttctggggct cttgagaggg gcaaagcata 600
atttgcatgt gggagaaatg ttaatagttt gtgaccagag gacaagctgt ggtttattaa 660
agactgctgc aggttcctac tatgcttctc atcaagaggc ggaatctaat caccttcccc 720
ccttgaatca tggctggtct cagtgatgag tacgactgga cagtgtggca ggagagatgc 780
tctgggactt ctgaggggcg atcatgagag gccttacagc ttctgcctgg gcctcttgga 840
cacacaccct gggagaagcc agacaaacct gactacctga cactgccaga ctgggaggaa 900
gtccatgctg gccacaaaga gagggctggg tgcctgctcc atgtccccag ccactagagt 960
ccttctgggt gcctgcttca cgtccccagc cactagagtc cttccagatg agaccaggga 1020
catcatgaag caaccaaccc acacagccct gtcctgtgtc ttgacccaga aaattgtgac 1080
atgtaaaaag aataaattcc tggtttaagc cagtaaggtt actggtacat tgttacatct 1140
cagataatta aaaccttgaa aaactcatga gagatcacaa gtagaacctt gatctgaaac 1200
atggcatgtg gcgatttata ttgagtatta ggttaaaaat gcaagaaggg agcatagtta 1260
atattttacg ttaaagctaa aactataatt gcctacttaa aattttcagt taattaggtt 1320
gtcacttttt gttcttaacg aagaaatcaa ctagttttat tccataaaca gttagaactg 1380
atgcacacat ccgtttctcc ttactcattt taaacagcta tctgaaatag gaagtgtaat 1440
ataattttta aagaatctga aaacatgaca gaaatgttta aactataaac atatattgta 1500
tatgttagca tattgtatac attgcatatt aacataagct agaatcattg acataaattt 1560
atataaacaa aaggtataaa ataaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1610
<210> 9
<211> 2486
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(2486)
<223> hypothetical protein FLJ21511(FLJ21511), mRNA.
<400> 9
acactgcctc ggttcggcaa gtgggtcagt tggctggggc tcacttggca acgggacgcg 60
ggaacgaggg gcgcggacgc aggcccggga ggacgcggcg gcgggaacct gggggcgcag 120
ggctagggca gcgggcccga cccgcacggc tttcctggaa agcgctgccc ctcgccgcgg 180
cgatgccctc gctgtggaga gaaatcctct tggagtcgct gctgggatgt gtttcttggt 240
ctctctacca tgacctggga ccgatgatct attactttcc tttgcaaaca ctagaactca 300
ctgggcttga aggttttagt atagcatttc tttctccaat attcctaaca attactcctt 360
tctggaaatt ggttaacaag aagtggatgc taaccctgct gaggataatc actattggca 420
gcatagcctc cttccaggct ccaaatgcca aacttcgact gatggttctt gcgcttgggg 480
tgtcttcctc actgatagtg caagctgtga cttggtggtc aggaagtcat ttgcaaaggt 540
acctcagaat ttggggattc attttaggac agattgttct tgttgttcta cgcatatggt 600
atacttcact aaacccaatc tggagttatc agatgtccaa caaagtgata ctgacattaa 660
gtgccatagc cacacttgat cgtattggca cagatggtga ctgcagtaaa cctgaagaaa 720
agaagactgg tgaggtagcc acggggatgg cctctagacc caactggctg ctggcagggg 780
ctgcttttgg tagccttgtg ttcctcaccc actgggtttt tggagaagtc tctcttgttt 840
ccagatgggc agtgagtggg catccacatc cagggccaga tcctaaccca tttggaggtg 900
cagtactgct gtgcttggca agtggattga tgcttccatc ttgtttgtgg tttcgtggta 960
ctggtttgat ctggtgggtt acaggaacag cttcagctgc ggggctcctt tacctgcaca 1020
catgggcagc tgctgtgtct ggctgtgtct tcgccatctt tactgcatcc atgtggcccc 1080
aaacacttgg acaccttatt aactcaggga caaaccctgg gaaaaccatg accattgcca 1140
tgatatttta tcttctagaa atatttttct gtgcctggtg cacagctttt aagtttgtcc 1200
caggaggtgt ctacgctaga gaaagatcag atgtgctttt ggggacaatg atgttaatta 1260
tcgggctgaa tatgctattt ggtcctaaga aaaaccttga cttgcttctt caaacaaaaa 1320
acagttctaa agtgcttttc agaaagagtg aaaaatacat gaaacttttt ctgtggctgc 1380
ttgttggtgt gggattgttg ggattaggac tacggcataa agcctatgag agaaaactgg 1440
gcaaagtggc accaaccaaa gaggtctctg ctgccatctg gcctttcagg tttggatatg 1500
acaatgaagg gtggtctagt ctagaaagat cagctcacct gctcaatgaa acaggtgcag 1560
atttcataac aattttggag agtgatgctt ctaagcccta tatggggaac aatgacttaa 1620
ccatgtggct aggggaaaag ttgggtttct atacagactt tggtccaagc acaaggtatc 1680
acacttgggg gattatggct ttgtcaagat acccaattgt gaaatctgag catcaccttc 1740
ttccgtcacc agagggcgag atcgcaccag ccatcacatt gaccgttaac atttcgggca 1800
agctggtgga ttttgtcgtg acacactttg ggaaccacga agatgacctc gacaggaaac 1860
tgcaggctat tgctgtttca aaactactga aaagtagctc taatcaagtg atatttctgg 1920
gatatatcac ttcagcacct ggctccagag attatctaca gctcactgaa catggcaatg 1980
tgaaggatat cgacagcact gatcatgaca gatggtgtga atacattatg tatcgagggc 2040
tgatcaggtt gggttatgca agaatctccc atgctgaact gagtgattca gaaattcaga 2100
tggcaaaatt taggatccct gatgacccca ctaattatag agacaaccag aaagtggtca 2160
tagaccacag agaagtttct gagaaaattc attttaatcc cagatttgga tcctacaaag 2220
aaggacacaa ttatgaaaac aaccatcatt ttcatatgaa tactcccaaa tactttttat 2280
gaaacattta aaacaagaag ttattggctg ggaaaatcta agaaaaaaag tatgtaagat 2340
aaaaagaaga gattaatgaa agtgggaaaa tacacatgaa gaacctcaac ttaaaaaaca 2400
catggtatct atgcagtggg aaattacctc catttgtaaa ctatgttgct taataaaaac 2460
atttctctaa aaaaaaaaaa aaaaaa 2486
<210> 10
<211> 1900
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(1900)
<223> chromosome 9 open reading frame 19(C9orf19), mRNA.
<400> 10
agccgcgggg agcgaggagc gcgcggagcc ggccatgggc aagtcagctt ccaaacagtt 60
tcataatgag gtcctgaagg cccacaatga gtaccggcag aagcacggcg tccccccact 120
gaagctctgc aagaacctca accgggaggc tcaacagtat tctgaggccc tggccagcac 180
gaggatcctc aagcacagcc cggagtccag ccgtggccag tgtggggaga accttgcatg 240
ggcatcctat gatcagacag gaaaggaggt ggctgataga tggtacagtg aaatcaagaa 300
ctataacttc cagcagcctg gcttcacctc ggggactgga cacttcacgg ccatggtatg 360
gaagaacacc aagaagatgg gcgtggggaa ggcgtccgca agtgacgggt cctcctttgt 420
ggtggccaga tacttcccag cggggaatgt tgtcaatgag ggcttcttcg aagaaaacgt 480
cctgccgccg aagaagtaac ttgttaaatg taatgggaag gtggcagact taagaacgtg 540
gatatgaagt gcctagaacc accacaacct ggctgtgcgt ctgtccctgt gggtgtatgt 600
gcttgtgtgt gtgatgcatg tgagcgtctc tggcacacac acttggacat acagttctgt 660
gtgcgctcat tcttattaca ggagtgagca aaggaagcat ttaccccgat ggttacctag 720
accacgatta tttggattgg ggggaggggg gatccgtttt ttttttttaa ttttttgtta 780
tttctaagca aacctctttt gtacttttct tacttctaat atccatccct ggactttttg 840
tattccaaat gtttgtgatg ctgagaagtg aagttcattt tatgtgatct tcatgcgtcg 900
taatctactt ttggtagata attaagatta ttaaaccctc atttaaatgt gacataaaat 960
acagctttaa gcacataaat ataaagcagc ttccatcagg aacatggagc aggcagggac 1020
tccattttac agaattactg agatttctca gttgtaaaac atgatgtcat cctgcatgcc 1080
tcctggaatt ctccaatggg gtcgccaaac aacaaatgga gaaaaaaagt tttacttcct 1140
tgcattcttc tacctttaaa tagcaaagta ccactaccac caccacctct tgcccccttc 1200
cctcttttct taaacttctg gcatttcaga gctcagcagg ctacccctgg tttctggaga 1260
gttgggctag gcctgaagct ccccctcccc cacctctgct aggcagccca ggcctggtct 1320
gggagacagc ccctcaccct gcctgggctc ttggccaagc ggccttggat ggatgaagtc 1380
agagaggtgg ggtgagggtg agcttactca gggcccccag aggaagccct cagcctctgc 1440
cctcccccca cacagggcgg gagcccaggc ctgttcctgg cagctgtggc tgcagctgtg 1500
ctcctgctcc ctcctggaat gtgcgacaag cccaaatgtt ccagggaggc ggccggggca 1560
gggggcttag aagtgctaat atggttctgt gttttgcctg aaacgatacc aggttcccct 1620
gaatagcaac tttacaaggt ccatgtggga gggaccaacc cagatgccct gctgagtgtc 1680
cctgaaacca tggcagctcc atctgtcaag atggcagggg ccggagtgag ggggctgctg 1740
gcttaacagc aggcatctgg gcaggccagt cctcaaagca gctcctgaag gtctgtgttg 1800
cactgtcacc agtctcaagc tatgcctcta atttcaccag ggatattgac taagaagaca 1860
ataaaatctt tttctttgtg taaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1900
<210> 11
<211> 2544
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(2544)
<223> thymus expressed gene 3-like(MGC15476), mRNA.
<400> 11
ctcactcaga cccatgaggc cctgcctggt ctcgtctggg acctgggaca gcagctggga 60
gacctgagcc tggagtctgg gggcctggaa caggagagcg ggcgtagctc gggcttctat 120
gaagatccca gctctacagg aggtccagat tcaccaccct caaccttctg tggggacagt 180
ggcttctctg gatccagctc ctatggtcgc ctgggtccct ctgagccccg gggcatctat 240
gccagtgaga ggcccaagtc cctaggagac gccagtccca gcgctccgga ggtggtgggc 300
gcgcgggcag cggtgccgcg gtccttctca gcgccctacc cgacggcagg tgggtcgccg 360
gcccggaggc ctgctcctcg gcggagcggc gggcccgcgc cgggcccttt ctgacgccca 420
gccccctgca cgccgtggcg atgcgcagcc cgcggccctg cggccgccct cccaccgact 480
cgcccgacgc ggggggcgca gggcggcccc tggacggcta catctcggcg ctcctgcgca 540
ggcgccgccg ccggggggcg ggccagcccc ggaccagtcc tgggggcgcg gacggcggcc 600
cgcggcgcca gaacagcgtg cgccagcggc cgcccgacgc gtctccgtcc cccggcagcg 660
cgcgacccgc gcgggagccc tcgttggagc gcgtcggggg ccaccccacc agccctgccg 720
ccttgagccg cgcctgggcg tcgtcgtggg agtcggaggc ggcacccgag cccgctgcgc 780
cgcccgccgc cccctcaccc cccgacagcc cggctgaggg ccgcttggtg aaggcgcagt 840
acatcccggg cgcgcaggcg gccacccgag gcctccctgg ccgcgccgcc cgccgcaaac 900
cgccgccact gacccgcggc cgcagcgtgg agcagtcacc accccgggag cgtccccggg 960
ccgccggccg ccgtggacgc atggccgagg cttcgggccg ccgcggctcg cccagggccc 1020
gcaaggcctc gcgctcccag tctgagacca gcctgctggg ccgcgcctcc gcggtccctt 1080
cggggccccc taagtacccc acggcggagc gggaagagcc tcggcctcca cggccacgcc 1140
gcggcccagc gcccacgctg gcggcccagg ccgcagggtc ctgccgtcgc tggcgctcca 1200
ctgcggagat cgacgctgcc gatgggcgcc gcgtgcggcc ccgagcccct gcggcgcgtg 1260
ttcccggccc cggcccgtcc ccgtcagctc cccagcgtcg tctgctttac ggctgcgcgg 1320
gcagcgactc cgagtgctcg gctgggcgcc tggggcccct gggacgccgg gggcctgcgg 1380
gaggcgtcgg cgggggttac ggggagagcg aatcgagcgc cagcgaggga gaatcgcctg 1440
ccttcagctc tgcctccagc gactcagacg gcagcggtgg cctcgtgtgg ccgcagcagc 1500
tggtggcggc caccgcggcc tctgggggtg gagcaggtgc aggggcgccc gcaggccccg 1560
ccaaagtctt cgtgaaaatc aaagcttccc acgcgctcaa gaaaaagata ctgcgtttcc 1620
gttcgggttc tctcaaggtc atgactacag tgtgagtttg gggatttgct tgggctcccc 1680
cttcatggcc tctgcacctc cacactccca accactgacc cttccacatc taccttccaa 1740
agaccatcgt tttctctgct tccaaagacc cccctcactc tccccactcc taacagtctt 1800
ggttgaaaag gctcccccac caccaccgag aggaatgggg aggagccctg tttgacccag 1860
ttcagcttct agcttggaag cccttgggca agacagttcc ccttctctgg gcgtcacttt 1920
cctcatctgt acagtaagtg tccatgtatg caaaaggggt aattcggttt gaatttcccc 1980
gttttagttt agaagcctag tctgtttgtt ccccttcacc gctctccctc tcattcctga 2040
tgagccctct cattcctcct ttccttgccc agctatggcc ccctctcatt cacaaagtgc 2100
cccctccatg tccctggacc cttaagatat ccccttggca ccctggtcag agactctgtg 2160
tctgactcag gtggtccctg cagagtgccc tgggaaggga aggagcactg atttgggggt 2220
tttgagggtc aagtaggggt tggtaacacc tggaaagaag gactctttca cttcgatccc 2280
tggacaatta tggaggattc ggaggtagaa gaggggaagg aagatggttt ctatctcatg 2340
acccccactc cctgtgagag ggaatggggg aagcctgatg accctcagct gttccaatct 2400
agtatttttt ttctttttta aaattactgt atttattatg acgatggtga ctccccagtg 2460
caaagggggg ccagattctg tgtgtttctc taacctcttt gtaaataaat gcacagtgta 2520
acataaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 2544
<210> 12
<211> 4471
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> mRNA
<222> (1)..(4471)
<223> mRNA; cDNA DKFZp686J0156(from clone DKFZp686J0156)
<400> 12
caattacata tttatttttc catacctgat ttttttcaag tctgtaataa aaaaagtata 60
agttgagatt aacataggtt atttttcatg aagtatagca aacgatctag aatgtgatag 120
gagtgtggtt tccatttctt tttttttttt tttaacagac ttttgtgctg tagtaagaat 180
gtcttagaag ttgtgtcttc gagttcctca aacaccggac agggctcccc cagagctgcc 240
tcagcctttg atttggtcca tattcagaca cttcctgtct tgcatacact ctgaggatgg 300
gccgcttcta gctgccgccc gtctccctct tgccttcttg tctctaaatc agacactccc 360
aagcactcca tctgctatac taggagagtg ggagagccaa agcattttgg agtccatgta 420
aagtgcctgg gaaaagagat gtaagagcag tgggagttta tataattagc gaattctttt 480
ctcagaattc agcggaaatg tatttctgtt gttattattt acaaaattgt ggcctcagag 540
gagctgtctt ttggaaaata agttttcatt catgcagtta gttagacatg cacgatgtac 600
ttgaatcaat aaactgtgga ccagaaaagg gctgcttaaa tgaattcacg tgttctaatt 660
ctctttcgag gctgttgatg acctcctgga ttcatacccc catgatctgt cttgctcttg 720
cctctgttct ttgataaagc acatcagact atgtgacacc catcttttca agaacgacct 780
aaaagcaatg acaacaggca ggagagaatt accactggcc tgggcacagt gacagcagaa 840
ggcccacctg agcttggaga gttggcgaga taaggcaaaa tcaaggtgca acagtgggcc 900
atgttccaag ggtgaatgga tctgagagtc cgctgatgtt ccttactgat cagaacaggg 960
accttctaac gaaacagcca gagttccttg aatcaggcag aagttcttta gagacaggaa 1020
gccagagcta ttgataatat ccgaacgaca gaggaaggaa tttcttatta gaaattctaa 1080
aataaaacaa gtggggattt ggttggatac ccttagaagc tacatttttc tctcatccct 1140
aagatagata tctcaagtgt atatctgaca cctcttggct ttgacacggc tctgcttctc 1200
aagtgaccat ttgttttaag tctgttgtct agaattcttt gtgggggctg gacctctgaa 1260
aaagattctc actgcagagg ctttaaatct gtgttttttt ccactccctc cgtcctggga 1320
tgtattcggt aggacatttc atttatatca ggatattggc tgattcagct ctctttcatc 1380
gttattattc aggcctccct ccaccacctt gttctttatt gcctaagtat tgccctcccc 1440
aattcttcat cgtaatagct ctaaatttag tttgacccaa attaattttt gttccaacag 1500
atatatttta agacagagaa gcctctctca ggagccagat gatctgaaga tgatgctaat 1560
ccccaaatac gaagttcctc cagctaactc tcctctgagc tccctcttct tagctttggg 1620
attggggatg gtctcatcct tgccaggaat ccctttgttg ctcccagtgt ctctgatgag 1680
cttctcctcc ctcccagaga caatgcaggg gtggttttca gcagaatgtg ccacctgcac 1740
ttctgattgt tctgagaccc agcccagagg ggtggagaag gcgcacaaac cctattccaa 1800
taaactgcct gcagagaacc acagcctgct aatagtcgtt gaggtctcag ccccctaagg 1860
tctccaagct catttgacca gcgcagctgc gacttcggct gtctgcctct ggcaggtgcc 1920
aatatcagca tcttgtccca ctgccatggg gagttaattt ttgctccagg gcagctgcca 1980
agcccagcac cggcatcaat agaaggtttt ctctgatttt cttctcttcc tctcaggcta 2040
ggctttctta ccaatcccca atttccttct gtagggcgcc aggagactgg ccagagatct 2100
ttagactctt acttagtttg aacatctctt gctgctcaca cccaggcttc ttcagcagaa 2160
agcatgaccc atagtaggta ctcagaaact ggttgaatga aaagccttga catttaaggg 2220
ctttattctg tcatacggtg gcaagaactg gcctattggc atcgtattcc tggcattgag 2280
ctgtattgac cctgaatgtg tcctcctgag gtttttgagg gtgacctagg agaaagggtc 2340
tgaaaaagca ctgggatcca agtgacttta aatctgcccg tggcatttcc tgctgagagg 2400
cgagaaacta gcatctctcc caacaggctc acatccgcca ggaaggacag agtccaaaac 2460
gggggtagac tttgtgggaa attcgccagt tagtccgctg agattttaat ctgcctcaag 2520
cacaggatgc tgacaagaaa ggtagaccac tcccccgatc ccagacaaac cccaggggtg 2580
acaacttctc catcagtatc ctgagaagca acatcaaatg cttaccaagt cagcacgttt 2640
actgagtgag tactctgacg gaataaacca gcatttggag ctgaacttga gaacacaggg 2700
ccctctgaca gcagcttagg gaaacaccca tcccttccag attggcagaa tccttccatt 2760
tcatgtcctt cggagacgct gtattctctt tacaaatcat tcatgaaact gagactcagt 2820
ctcccagggg taagtcctgg gccacgtgca aacaatggca aatccagctc ttccatgata 2880
gagaaggcaa acacacccac cttcatcctg agcctaaaag gccacctctg agcacttggg 2940
cagccactcc tctgggcctc agagggccat gagcttggcc aggtaggcac agcggcgggg 3000
aagtcacagc tgtcaggtac cggccatggt gcaggtggga ataggagatg ccagagctgc 3060
tttagctgag gaaagcaaac agtcagcagt gctcaaagga gcaaaacttc gaatgtgcac 3120
attgacccct gacacctgca agcataacac agatcctaag actagagtga agtaggaaga 3180
agaattagaa aatccagtgg atgtcctgag tatagggaac cagggccgtt gaaaatcagt 3240
aaaggttgat tacctggggc gagaccgggt gactgtggca gtgcaggtga aggtaccctg 3300
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acacacacac acacacacac acacacacac acaatgattg gagggctata tgatccagca 3420
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accgggaggc tcaacagtat 20
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<220>
<223> Nucleic acid used as reverse primer for amplifying LOC143381
<400> 38
tccaagggtg ttggcaataa 20
Claims (6)
- LOC644424(hypothetical protein LOC644424, GeneBank accession No.U79301 NT_113794) 유전자, 상기 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍, 상기 유전자로부터 발현된 단백질, 또는 상기 단백질에 대한 항체를 포함하는 대장암 진단용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 센스 및 안티센스 프라이머쌍은 서열번호 29 및 30 인 대장암 진단용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 LOC644774(similar to phosphoglycerate kinase 1, GeneBank accession No.XM_927868.1), WDR72(WD repeat domain 72, GeneBank accession No.NM_182758.2), LOC440157(hypothetical gene supported by AK096951; BC066547, GeneBank accession No.NM_001013701.1) 및 LOC643911(hypothetical protein LOC643911, GeneBank accession No.XM_931911.2)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자, 상기 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍, 상기 유전자로부터 발현된 단백질, 또는 상기 단백질에 대한 항체를 추가로 포함하는 대장암 진단용 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍중 LOC644774 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍은 서열번호 17 및 18인 센스 및 안티센스 프라어머쌍, WDR72 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍은 서열번호 21 및 22인 센스 및 안티센스 프라어머쌍, LOC440157 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍은 서열번호 23 및 24인 센스 및 안티센스 프라이머쌍, LOC643911 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍은 서열번호 25 및 26인 센스 및 안티센스 프라이머쌍인 대장암 진단용 조성물.
- LOC644424(hypothetical protein LOC644424, GeneBank accession No.U79301 NT_113794) 유전자, 상기 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍, 상기 유전자로부터 발현된 단백질, 또는 상기 단백질에 대한 항체를 포함하는 대장암 진단용 키트.
- 제5항에 있어서, 상기 키트는 LOC644774(similar to phosphoglycerate kinase 1, GeneBank accession No.XM_927868.1), WDR72(WD repeat domain 72, GeneBank accession No.NM_182758.2), LOC440157(hypothetical gene supported by AK096951; BC066547, GeneBank accession No.NM_001013701.1) 및 LOC643911(hypothetical protein LOC643911, GeneBank accession No.XM_931911.2)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자, 상기 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머쌍, 상기 유전자로부터 발현된 단백질, 또는 상기 단백질에 대한 항체를 추가로 포함하는 대장암 진단용 키트.
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EP3056576A3 (en) * | 2007-10-23 | 2016-09-28 | Clinical Genomics Pty Ltd | A method of diagnosing neoplasms |
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- 2011-03-17 KR KR1020110023976A patent/KR101115449B1/ko not_active IP Right Cessation
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EP3056576A3 (en) * | 2007-10-23 | 2016-09-28 | Clinical Genomics Pty Ltd | A method of diagnosing neoplasms |
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