KR100869933B1 - Supplementation of kinetin for mammalian preimplantation embryo development - Google Patents
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Abstract
본 발명은 키네틴을 이용한 포유동물의 임신초기 배아의 배양에 관한 것으로, 완전한정배양액 (NCSU-PVA) 내에서 포유동물의 단위발생란 및 핵이식란중 어느 하나를 발달시키는데 있어, 상기 완전한정배양액에는 키네틴이 특정 함량 포함되는 것을 특징으로 한다. The present invention relates to the cultivation of early mammary embryos of mammals using kinetin, and to developing any one of mammalian unit embryos and nuclear transfer eggs in NCSU-PVA, kinetin This particular content is characterized by being included.
본 발명에 의하면, 식물세포의 세포분열을 촉진시키는 시토키닌으로 알려진 식물 호르몬인 키네틴이 포유동물의 임신초기 배아의 배양시 첨가되면 확장 및 부화된 배반포 비율, 배반포의 성장속도 및 생존성을 증가시키는 등 배양에 효과적인 것을 확인할 수 있다. According to the present invention, when the plant hormone kinetin, known as cytokinin, promotes cell division of plant cells, is added during the culture of early embryos in mammals, the ratio of expanded and hatched blastocysts, growth rate and viability of blastocysts, etc. are increased. It can be confirmed that it is effective for cultivation.
완전한정배양액, 포유동물, 배아, 배반포, 키네틴 Intravenous cultures, mammals, embryos, blastocysts, kinetin
Description
도 1은 키네틴의 농도에 따른 돼지 단위발생란의 발달단계 분포를 5일, 6일, 7일째 측정한 그래프이고, Figure 1 is a graph measuring the developmental stage distribution of pig unit embryos according to the concentration of kinetin on the 5th, 6th, 7th day,
도 2는 돼지 핵이식란에서 완전한정 배양액 (NCSU-PVA) 및 체외배양액(NCSU-BSA)에 키네틴을 첨가시 세포분열 및 배반포의 발달율과 배반포 중 확장 및 부화 배반포 그리고 부화 배반포의 비율을 측정한 그래프이다. Figure 2 is a graph measuring the rate of development of cell division and blastocyst and expansion and hatching blastocyst and hatching blastocyst in blastocyst upon addition of kinetin to complete tablet culture (NCSU-PVA) and in vitro culture (NCSU-BSA) in porcine nuclear transfer embryos. to be.
본 발명은 키네틴을 이용한 포유동물의 임신초기 배아의 배양에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 완전한정배양액내에서 포유동물의 단위발생란 및 핵이식란 중 어느 하나를 발달시키는데 있어, 상기 완전한정배양액에는 키네틴이 포함되는 것을 특징으로 하는 포유동물의 임신초기 배아의 배양에 관한 것이다. The present invention relates to the culture of early mammary embryos of mammals using kinetin. More specifically, the present invention relates to the cultivation of early embryo embryos of mammals, characterized in that in the development of any one of the mammalian unit embryos and nuclear transfer embryos in the complete fermentation broth, the complete fermentation broth comprises kinetin will be.
본 발명에서 사용하려는 키네틴 (Kinetin)은 식물세포의 세포분열을 촉진시키는 시토키닌 (cytokinin)으로 알려진 식물 호르몬이다. 이같은 키네틴이 DNA에 존재할 경우 repair 효소의 합성을 증가시키고 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 (superoxide dismutase)를 촉진시키는 것으로도 알려져 있다. Kineticin (Kinetin) to be used in the present invention is a plant hormone known as cytokinin (cytokinin) that promotes cell division of plant cells. The presence of such kinetin in the DNA is known to increase the synthesis of repair enzymes and to promote superoxide dismutase.
또한, 노화 혹은 주름 방지제로도 사용되어 왔으며, 다수의 식물 배양에 사용되어온 예를 찾아볼 수 있었다. It has also been used as an anti-aging or anti-wrinkle agent and has been found in many plant cultures.
그러나, 이같은 키네틴을 포유동물의 임신초기 배아에 적용하여 배양시킨 예는 지금까지 찾아볼 수 없었다. However, there have been no examples of such kinetin applied to mammalian early pregnancy embryos.
이에 본 발명의 목적은 키네틴을 이용한 포유동물의 임신초기 배아의 배양을 제공하고자 하는 것이다. 더 구체적으로 본 발명은 완전한정배양액내에서 포유동물의 단위발생란 및 핵이식란중 어느 하나를 발달시키는데 있어, 상기 완전한정배양액에는 키네틴이 포함되는 것을 특징으로 하는 포유동물의 임신초기 배아의 배양법을 제공하고자 한다. Accordingly, an object of the present invention is to provide a culture of early pregnancy embryo of mammal using kinetin. More specifically, the present invention provides a method for culturing early embryo embryos of mammals, characterized in that the complete embryo culture contains kinetin in the development of any one of the mammalian unit embryos and the nuclear transfer embryos in the complete embryo culture. I would like to.
본 발명의 제1견지에 의하면, According to the first aspect of the present invention,
완전한정배양액을 이용하여 포유동물의 임신초기 배아를 배양시키는 방법에 있어서, In the method of culturing the early pregnancy embryo of mammal using a complete constant culture solution,
상기 완전한정배양액에 키네틴을 100～800μM/L 범위내로 첨가함으로써 단위발생란의 발달시 확장 및 부화된 배반포 비율을 증가시키는 것을 특징으로 하는 포 유동물의 임신초기 배아의 배양방법이 제공된다. Provided is a method for culturing early-stage embryos, which is characterized by increasing the rate of expansion and hatched blastocyst during development of unit embryos by adding kinetin to the complete fermentation broth in the range of 100-800 μM / L.
본 발명의 제2견지에 의하면, According to the second aspect of the present invention,
완전한정배양액을 이용하여 포유동물의 임신초기 배아를 배양시키는 방법에 있어서, In the method of culturing the early pregnancy embryo of mammal using a complete constant culture solution,
상기 완전한정배양액에 키네틴을 100～800μM/L 범위내로 첨가함으로써 핵이식란의 발달시 확장 및 부화된 배반포 비율을 증가시키는 것을 특징으로 하는 포유동물의 임신초기 배아의 배양방법이 제공된다. Provided is a method for culturing early embryo embryos in mammals, characterized by increasing the rate of expansion and hatching of blastocysts during the development of nuclear transfer embryos by adding kinetin within the range of 100 to 800 μM / L in the complete fermentation broth.
본 발명의 제3견지에 의하면, According to the third aspect of the present invention,
완전한정배양액을 이용하여 포유동물의 임신초기 배아를 배양시키는 방법에 있어서, In the method of culturing the early pregnancy embryo of mammal using a complete constant culture solution,
상기 완전한정배양액에 키네틴을 100～800μM/L 범위내로 첨가함으로써 단위발생란 발달시 배반포의 성장속도 및 생존성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 포유동물의 임신초기 배아의 배양방법이 제공된다. By adding kinetin in the range of 100-800 μM / L in the complete culture medium, there is provided a method for culturing early embryos in mammals, characterized in that the growth rate and viability of blastocysts during unit development are increased.
본 발명의 제4견지에 의하면, According to the fourth aspect of the present invention,
완전한정배양액을 이용하여 포유동물의 임신초기 배아를 배양시키는 방법에 있어서, In the method of culturing the early pregnancy embryo of mammal using a complete constant culture solution,
상기 완전한정배양액에 키네틴을 100～800μM/L 범위내로 첨가함으로써 핵이 식란 발달시 배반포의 성장속도 및 생존성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 포유동물의 임신초기 배아의 배양방법이 제공된다. By adding kinetin in the range of 100-800 μM / L in the complete fermentation broth, there is provided a method for culturing early embryos in mammals, wherein the growth rate and viability of blastocysts during nucleus development is increased.
이하, 본 발명에 대하여 상세하게 설명한다. EMBODIMENT OF THE INVENTION Hereinafter, this invention is demonstrated in detail.
우선, 본 발명에서는 포유동물의 임신초기 배아의 배양에 있어 키네틴이 첨가된 완전한정배양액(NCSU-PVA) 내에서 단위발생란 및 핵이식란중 어느 하나를 발달시킨다.First of all, in the present invention, mammalian embryos develop either unit embryos or nuclear transfer embryos in complete sperm culture medium (NCSU-PVA) to which kinetin is added.
상기 완전한정배양액이란 미량원소 등의 확인이 완벽하게 어려운 혈청이나 혈청단백질 등이 첨가되지 않은, 배양액의 성분조성을 완전히 파악하고 있는 배양액을 의미한다. 영문 용어중 NCSU는 North Carolina State University-23 medium의 약어로서 돼지 수정란 배양에 특이적으로 사용되는 배양액을 의미하고, 용어중 PVA (폴리비닐 알코올)은 혈청단백질인 BSA 대신 배양액에 첨가하는 고분자로서 수정란이 플라스틱 접시에 달라붙거나 수정란끼리 서로 달라붙는 것을 방지하는 역할을 주로 하는 첨가물이다.The complete normal culture solution refers to a culture solution that completely grasps the composition of the culture medium without addition of serum or serum protein, which is difficult to identify trace elements. NCSU is an abbreviation of North Carolina State University-23 medium, which means a culture medium specifically used for culturing pig fertilized eggs.In the term, PVA (polyvinyl alcohol) is a polymer that is added to culture medium instead of serum protein BSA. It is an additive which mainly plays a role of preventing sticking to this plastic plate or sticking of fertilized eggs together.
구체적으로, NCSU의 조성은 이에 한정하는 것은 아니나, 통상적으로 입수가능한 조성으로서 NaCl 108.73 mM, KCl 4.78 mM, CaCl2H2O 1.70, KH2PO4 1.19 mM, MgSO47H2O 1.19 mM, NaHCO3 25.07 mM, 글루코오스 5.55 mM, L-글루타민 1.0 mM, 타우린 7.0 mM, Hypotaurine 5.0 mM 이면 충분하다. 여기에 0.1% (v/v) 필수 및 비필수아미노산과 0.1% (w/v) PVA를 첨가하면 충분하다. Specifically, the composition of NCSU is not limited thereto, but as a commercially available composition, NaCl 108.73 mM, KCl 4.78 mM, CaCl 2 H 2 O 1.70, KH 2 PO 4 1.19 mM, MgSO 4 7H 2 O 1.19 mM, NaHCO 3 25.07 mM, glucose 5.55 mM, L-glutamine 1.0 mM, taurine 7.0 mM, Hypotaurine 5.0 mM are sufficient. It is sufficient to add 0.1% (v / v) essential and non-essential amino acids and 0.1% (w / v) PVA.
이때 포유동물로는 개, 고양이, 돼지, 소, 쥐 등을 포함한다. Mammals include dogs, cats, pigs, cattle, mice, and the like.
또한, 사용가능한 키네틴의 함량은 100～800μM 범위내인 것이 바람직한데, 100μM 미만에서는 배양에 영향을 미치는 키네틴의 함량이 충분하지 않고, 800μM 를 초과하면 첨가되는 키네틴의 함량 대비 배아된 배아의 확장 및 부화된 배반포 비율 증가가 충분치 않기 때문이다. 보다 바람직한 키네틴의 함량은 200 μM 내외인 것이 좋다. In addition, the content of usable kinetin is preferably in the range of 100 ~ 800μM, if less than 100μM is not enough content of the kinetin affecting the culture, if it exceeds 800μM expansion of the embryo and compared to the content of added kinetin and This is because the increase in hatching blastocyst ratio is not enough. More preferably, the content of kinetin is about 200 μM.
특히 본 발명에서 사용하는 키네틴은 식물 호르몬인 관계로 배아의 배양에 적용하더라도 부작용 및 독성의 우려가 없다는 잇점을 갖는다. In particular, the kinetin used in the present invention has the advantage that there is no concern of side effects and toxicity even if applied to the culture of the embryo because it is a plant hormone.
한편, 상기 발달 조건은 37-39℃ 하에 5-7일간 배양시키면 충분하다. 특히, 5% 탄산가스 배양기 내에서 배양시키는 것이 바람직하다. On the other hand, the development conditions are sufficient to culture for 5-7 days at 37-39 ℃. In particular, it is preferable to incubate in a 5% carbon dioxide gas incubator.
그 결과, 완전한정 배양액 내에서 배양된 배아의 확장 및 부화된 배반포 비 율을 증가시킬 수 있었다. 나아가 포유동물의 임신초기 배아에 있어 배반포의 성장속도 및 생존성을 증가시키게 되는 것이다. As a result, it was possible to increase the rate of expansion and hatched blastocysts of embryos cultured in complete well culture. In addition, the growth rate and viability of blastocysts in early pregnancy of mammals will be increased.
이뿐 아니라, 본 발명에서는 포유동물의 임신초기 배아의 배양에 있어 키네틴이 첨가된 혈청원 첨가 체외배양체계 (NCSU-BSA)내에서도 단위발생란 및 핵이식란중 어느 하나를 발달시킬 수 있다.In addition, in the present invention, mammalian embryos can be developed either in embryonic embryos or in nuclear embryos (NCSU-BSA).
상기 혈청원 첨가 체외배양체계는 상술한 NCSU 조성에 통상적으로 수정란배양액에 대하여 사용되는 지방산이 제거된 소혈청단백질 지방산이 제거된 소 혈청 알부민 (BSA)을 4 mg/ml 정도 첨가하여 사용하면 충분하다. The serum source-added in vitro culture system is sufficient to add about 4 mg / ml bovine serum albumin (BSA) from which fatty acid has been removed from bovine serum protein fatty acid, which is usually used for fertilized egg culture, to the NCSU composition described above. .
이때 포유동물로는 개, 고양이, 돼지, 소, 쥐 등을 포함한다. Mammals include dogs, cats, pigs, cattle, mice, and the like.
또한, 사용가능한 키네틴의 함량은 100-400μM 범위내인 것이 바람직한데, 100μM 미만에서는 배양에 영향을 미치는 키네틴의 함량이 충분하지 않고, 400μM 를 초과하면 첨가되는 키네틴의 함량 대비 배아된 배아의 확장 및 부화된 배반포 비율 증가가 충분치 않기 때문이다. 보다 바람직한 키네틴의 함량은 100-200μM 정도인 것이 좋다.In addition, the amount of available kinetin is preferably in the range of 100-400 μM, but below 100 μM, the amount of kinetin that affects the culture is not sufficient, and when it exceeds 400 μM, the expansion of embryos and the amount of kinetin added This is because the increase in hatching blastocyst ratio is not enough. More preferably, the content of kinetin is about 100-200 μM.
한편, 상기 발달 조건은 37-39℃ 하에 5-7일간 배양시키면 충분하다. 특히, 5% 탄산가스 배양기 내에서 배양시키는 것이 바람직하다. On the other hand, the development conditions are sufficient to culture for 5-7 days at 37-39 ℃. In particular, it is preferable to incubate in a 5% carbon dioxide gas incubator.
그 결과, 혈청원 첨가 체외배양체계 내에서도 배양된 배아의 확장 및 부화된 배반포 비율을 증가시킬 수 있었다. 나아가 포유동물의 임신초기 배아에 있어 배반포의 성장속도 및 생존성을 증가시키게 되는 것이다. As a result, it was possible to increase the expansion and hatched blastocyst ratio of cultured embryos even in serum-added in vitro culture system. In addition, the growth rate and viability of blastocysts in early pregnancy of mammals will be increased.
나아가, 본 발명에 있어 상기 기재한 유효성분으로서 키네틴 이외에 추가로 배양에서 허용 가능한 보조성분을 1종 이상 포함함으로써, 포유동물의 배아 배양용 조성물로서도 제공될 수 있다. Furthermore, in the present invention, by including at least one auxiliary ingredient acceptable in the culture in addition to kinetin as the active ingredient described above, it can be provided as a composition for the culture of embryos in mammals.
본 발명의 조성물 제조시 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수 등을 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제, 희석제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. Acceptable carriers in the preparation of the composition of the present invention may be saline, sterile water and the like, and other conventional additives such as antioxidants, buffers, bacteriostatic agents, diluents, etc. may be added as necessary.
이하 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 보다 상세히 설명한다. Hereinafter, a preferred embodiment of the present invention will be described in more detail.
실시예Example 1: 완전한정 1: perfect 배양체계하Under culture 키네틴의Kinetine 적정 첨가농도 결정 Determination of proper concentration
본 실시예는 완전한정 배양체계 하에서의 키네틴 첨가 농도를 적정화하기 위한 것이다. This example is for optimizing the concentration of kinetin added under a complete tablet culture system.
도축장에서 회수한 돼지의 난소로부터 미성숙난자를 채취하고 이를 체외에서 성숙배양하여 얻은 체외성숙난자를 전기융합기를 이용, 1.6 kV/cm DC의 자극으로 활성화시켜 획득한 단위발생란을 키네틴이 각각 100, 200, 및 800μM/L씩 첨가된 완전한정 배양액 하에 발달시켰다.
이때 완전한정 배양액으로는 NaCl 108.73 mM, KCl 4.78 mM, CaCl2H2O 1.70, KH2PO4 1.19 mM, MgSO47H2O 1.19 mM, NaHCO3 25.07 mM, 글루코오스 5.55 mM, L-글루타민 1.0 mM, 타우린 7.0 mM, Hypotaurine 5.0 mM, 0.1% (v/v) 필수 및 비필수아미노산, 과 0.1% (w/v) PVA로 된 조성을 사용하였으며, 발달 조건은 38.5℃, 5% 탄산가스 배양기 내에서 7일간 배양시켰다.At this time, the complete tablet culture solution was NaCl 108.73 mM, KCl 4.78 mM, CaCl 2 H 2 O 1.70, KH 2 PO 4 1.19 mM, MgSO 4 7H 2 O 1.19 mM, NaHCO 3 25.07 mM, Glucose 5.55 mM, L-glutamine 1.0 mM , Taurine 7.0 mM, Hypotaurine 5.0 mM, 0.1% (v / v) essential and non-essential amino acids, and 0.1% (w / v) PVA. Development conditions were 38.5 ° C. in a 5% carbon dioxide incubator. Incubated for 7 days.
한편, 대조군으로는, 필수 및 비필수아미노산 (AAs)이 첨가된 완전한정배양액을 사용하였으며, 구체적인 조성은 0.1% (v/v) 필수 및 비필수아미노산을 포함하였다.On the other hand, as a control, a complete fixed culture with essential and non-essential amino acids (AAs) was used, and the specific composition included 0.1% (v / v) essential and non-essential amino acids.
그런 다음 7일째 세포 분화율, 배반포 발달율, 그리고 총 배반포 중 확장 및 부화된 배반포율을 조사하고 그 결과를 하기표 1에 정리하였다.Then, on the 7th day, cell differentiation rate, blastocyst development rate, and expansion and hatched blastocyst rate in total blastocyst were examined and the results are summarized in Table 1 below.
상기 표 1에서 보듯이, 완전한정배양체계 하에서 키네틴 첨가시, 돼지 단위발생란에서 배반포 발육률은 별다른 차이를 보이지 않았지만, 배반포중 확장 및 부화된 배반포의 비율은 실험군 2(200μM의 키네틴 첨가)의 경우 49.37%로서 대조군 1(PVA+AAs)의 39.22%에 비하여 높게 나타났다. As shown in Table 1, when the kinetin was added under the complete normal culture system, the blastocyst development rate did not show any difference in the pig unit embryo, but the ratio of the expanded and hatched blastocysts in the blastocysts was experimental group 2 (200 μM kinetin addition). 49.37% was higher than 39.22% of control group 1 (PVA + AAs).
이는 키네틴이 돼지의 초기 배아의 발달 속도를 증가시키며, 초기 배아 발달에 있어 키네틴이 세포 독성 혹은 유해한 영향을 미치지 않는다는 것을 보여주는 결과인 것으로 추론된다. It is inferred that kinetin increases the rate of development of early embryos in pigs and shows that kinetin does not have cytotoxic or detrimental effects on early embryo development.
실시예Example 2: 2: 혈청원Serum 첨가 adding 체외배양체계하In vitro culture system 키네틴의Kinetine 돼지 단위 Pig unit 발생란의Outbreak 발달에 미치는 영향 Development impact
본 실시예는 혈청원 첨가 체외배양체계 하에서 키네틴이 돼지 단위발생란의 발달에 미치는 영향을 조사하기 위한 것이다. This example is to investigate the effect of kinetin on the development of swine embryos under serum-added in vitro culture system.
상기 실시예 1에서 완전한정배양체계에서 가장 효과적인 첨가량인 것으로 확인된 키네틴 200μM를 혈청원 첨가 배양액 중 PVA 대신 BSA를 4 mg/ml 첨가한 것을 제외하고는 상기 실시예 1에서와 동일한 실험을 반복하였다. The same experiment as in Example 1 was repeated except that 200 μM of kinetin, which was found to be the most effective addition amount in the complete normal culture system, was added 4 mg / ml of BSA instead of PVA in the serum-added culture medium in Example 1 .
역시 7일째 세포 분화율, 배반포 발달율, 그리고 총 배반포 중 확장 및 부화된 배반포율을 조사하고 그 결과를 하기 표 2에 정리하였다. Cell differentiation rate, blastocyst development rate, and expansion and hatched blastocyst rate in total blastocyst on
상기 표 2에서 보듯이, 대조군 2(BSA+AAs)에 비해 실험군(200μM의 키네틴 첨가시)의 경우 배반포의 발달율은 58.82%에서 40.82%로 감소하였지만, 배반포중 확장 및 부화된 배반포의 비율은 55.71%에서 70.00%로 증가하였다. As shown in Table 2, the development rate of the blastocyst was reduced from 58.82% to 40.82% in the experimental group compared to the control group 2 (BSA + AAs), but the ratio of expanded and hatched blastocysts was 55.71. Increased from 70.00%.
이로부터, 키네틴이 배반포의 발육속도 또는 생존성에는 부분적으로 긍정적인 효과가 있으나 BSA와 함께 첨가되었을 때 배반포 형성자체에는 부정적인 영향을 미친다는 것을 확인할 수 있었다. From this, it was confirmed that kinetin has a partially positive effect on the growth rate or viability of blastocysts but negatively affects blastocyst formation when added with BSA.
실시예Example 3: 3: 키네틴이Kinectin 돼지 pig 초기배아Early embryo 발달중 Under development 배반포Blastocyst 발달에 미치는 영향 Development impact
본 실시예는 키네틴이 돼지 초기배아 발달단계중 배반포의 발달에 미치는 영향을 조사하기 위한 것이다. This example is to investigate the effect of kinetin on the development of blastocysts during the early stage of embryo development.
상기 실시예 1 및 2의 결과들을 토대로 하여 키네틴 첨가시 돼지 초기 배아 발달단계의 compaction 이후 단계부터 5일, 6일 및 7일째에 배반포의 발달단계를 조사및 분석하고 그 결과를 도 1에 그래프로서 정리하였다. Based on the results of Examples 1 and 2, the development and development of blastocysts were examined and analyzed 5 days, 6 days, and 7 days after the compaction of the early stage of embryo development when kinetin was added. In summary.
도 1에 있어서, BK 200은 BSA+AAs+200μM 키네틴을 의미하며, PK200은 PVA+AAs+200μM 키네틴을 의미한다. In FIG. 1, BK 200 means BSA + AAs + 200 μM kinetin, and PK200 means PVA + AAs + 200 μM kinetin.
결과적으로, 완전한정 배양체계 (PVA 첨가시)와 혈청원 첨가 배양체계 (BSA 첨가시)에 각각 200μM의 키네틴을 첨가할 경우, 배반포 성장속도 측면에서 볼 때 확장 또는 부화 배반포 비율이 상대적으로 높은 것을 확인할 수 있었다. As a result, when 200 μM of kinetin was added to the complete well culture system (with PVA) and serum source culture system (with BSA), the expansion or hatching blastocyst ratio was relatively high in terms of blastocyst growth rate. I could confirm it.
또한, BSA 첨가 배양체계에서는 상술한 표 2에서도 확인할 수 있듯이, 키네틴 첨가시 배반포 형성비율은 저하된 반면 총 배반포 가운데 부화된 배반포의 비율은 200μM의 키네틴 첨가시 0.95%에서 10.00%로 증가하여 키네틴이 배반포의 품을 향상시키는 인자임을 확인할 수 있었다. In addition, in the BSA-added culture system, as shown in Table 2 above, the blastocyst formation rate decreased when the kinetin was added, while the ratio of hatched blastocysts among the total blastocysts increased from 0.95% to 10.00% when 200 μM of kinetin was added. It was confirmed that the factor improves the quality of the blastocyst.
실시예Example 4: 4: 키네틴이Kinectin 돼지 pig 핵이식란에In a nuclear transfer column 미치는 영향 Impact
본 실시예는 키네틴이 돼지 핵이식란에 미치는 영향을 조사하기 위한 것이다. This example is to investigate the effect of kinetin on swine nuclear transfer eggs.
상술한 실시예 1 내지 3의 단위발생란에서 얻은 결과들을 토대로 하여 돼지 핵이식란에서 완전한정 배양액 및 체외배양액에 키네틴을 첨가시, 세포 분열 및 배반포의 발달율과 배반포중 확장 및 부화배반포 비율 및 부화 배반포의 비율을 조사하고 그 결과를 도 2에 그래프로서 정리하였다. On the basis of the results obtained in the unit embryos of Examples 1 to 3 described above, when kinetin is added to the complete tablet culture and in vitro culture in porcine nuclear transfer embryos, the rate of development of cell division and blastocyst, expansion and hatching blastocyst ratio, and hatching blastocyst of blastocyst The ratio was investigated and the results are summarized in graph in FIG. 2.
참고로, 상기 도면 중 B의 배반포 생성율은 생존성과 연관있으며, C의 확장 및 부화 배반포 비율은 성장속도와 연관된다. For reference, the blastocyst production rate of B in the figure is associated with viability, and the expansion and hatching blastocyst ratio of C is related to the growth rate.
도 2에서 보듯이, 핵이식란에 있어서 완전한정배양체계에 200μM 의 키네틴을 첨가할 경우, 배반포 발육률이 7.50%에서 15.38%로 증가하였으며, 이는 BSA 첨가 배양체계하에 배양한 핵이식란의 배반포 발달율 12.80%와 비교될만한 것이었다. As shown in FIG. 2, when 200 μM of kinetin was added to the complete well culture system in the nuclear transfer embryo, the blastocyst development rate increased from 7.50% to 15.38%, which was 12.80 in blastocyst development rate of the nuclear transplanted embryo cultured in the BSA-added culture system. It was comparable to%.
또한, BSA 첨가 배양체계와 PVA 첨가 배양체계에 키네틴을 첨가하였을 때 생산된 배반포의 확장 및 부화 배반포로의 발달율은 각각 37.50% 및 33.33%에서 50.00% 및 43.75%로 증가하여 핵이식란의 발육에 있어 키네틴을 BSA의 존재 유무에 관계없이 배반포의 발육 및 생존성에 있어 효과가 있는 것으로 판명되었다. In addition, the growth rate of blastocysts and hatching blastocysts produced by the addition of kinetin to the BSA and PVA cultures increased from 37.50% and 33.33% to 50.00% and 43.75%, respectively. Kinetine has been shown to be effective in the development and viability of blastocysts with or without BSA.
본 발명은 특정한 실시예에 관련하여 도시하고 설명하였지만, 이하의 특허청 구범위에 의해 마련되는 본 발명의 정신이나 분야를 벗어나지 않는 한도 내에서 본 발명이 다양하게 개조 및 변화될 수 있다는 것을 당업계에서 통상의 지식을 가진 자는 용이하게 알 수 있음을 밝혀두고자 한다. While the invention has been shown and described with respect to particular embodiments, it will be appreciated that the invention can be varied and modified without departing from the spirit or scope of the invention as set forth in the claims below. It will be appreciated that those skilled in the art can easily know.
본 발명에 의하면, 식물세포의 세포분열을 촉진시키는 시토키닌으로 알려진 식물 호르몬인 키네틴이 포유동물의 임신초기 배아에 있어 확장 및 부화된 배반포 비율, 배반포의 성장속도 및 생존성을 증가시키는 등 배양에 효과적인 것을 확인할 수 있다. According to the present invention, kinine, a plant hormone known as cytokinin, which promotes cell division of plant cells, is effective in culturing such as increasing the rate of expansion and hatching of blastocysts, growth rate and viability of blastocysts in early pregnancy of mammals. You can see that.
Claims (8)
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2007
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Patent Citations (3)
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 논문-2007* |
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