JPWO2019230856A1 - Ｎａｖ１．７モノクローナル抗体 - Google Patents

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Abstract

本発明の目的は新規のＮａｖ１．７モノクローナル抗体を提供することにある。特定の６つのＣＤＲ（重鎖のＣＤＲ１〜ＣＤＲ３及び軽鎖のＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）又は特定の重鎖可変領域／軽鎖可変領域を有するＮａｖ１．７モノクローナル抗体又はその抗体断片を開示する。該モノクローナル抗体等は、疼痛、掻痒等の治療又は予防に用いることができる。

Description

本発明は、新規のＮａｖ１．７モノクローナル抗体又はその抗体断片に関する。より詳細には、Ｎａｖ１．７に特異的に結合する抗体若しくはその抗体断片に関する。さらに詳しくは、Ｎａｖ１．７を選択的に阻害するモノクローナル抗体若しくはその抗体断片又はこれを含有する医薬組成物若しくはＮａｖ１．７検出用キットに関する。
Ｎａｖ１．７は遺伝子ＳＣＮ９Ａにコードされている電位依存性ナトリウムイオンチャネルであり、主に末梢神経に発現する（非特許文献１）。Ｎａｖ１．７は、４つのドメインＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤを含み、それぞれが６つの膜貫通タンパク質ヘリックス（Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｓ４、Ｓ５及びＳ６）並びに３つの細胞外親水性ループＥ１、Ｅ２及びＥ３を含む。
Ｎａｖ１．７ノックアウトマウスにおいて炎症性疼痛が小さくなること（非特許文献２）が知られており、低分子化合物であるＮａｖ１．７阻害剤が先端紅痛症（非特許文献３）、三叉神経痛（非特許文献４）等に効果を示すことが確認されている。
また、痛み（疼痛）や痒み（掻痒）に効果があるＮａｖ１．７モノクローナル抗体が特許文献１〜７等で報告されている。特許文献１〜３にはドメインＣのＥ３細胞外領域に結合する抗体が記載されている。
ＷＯ２０１１／０５１３５０ ＵＳ８７３４７９８ ＵＳ８９８６９５４ ＵＳ９２６６９５３ ＷＯ２０１４／１５９５９５ ＷＯ２０１５／０３２９１６ ＷＯ２０１５／０３５１７３
ＰＮＡＳ（１９９７）９４：１５２７−１５３２ ＰＮＡＳ（２００４）１０１：１２７０６−１２７１１ Ｐａｉｎ（２０１２）１５３（１）：８０−８５ ＴＨＥ ＬＡＮＣＥＴ ＮＥＵＲＯＬＯＧＹ（２０１７）１６（４）：２９１−３００
本発明の目的は、疼痛、掻痒等の治療薬として利用可能な新規のＮａｖ１．７モノクローナル抗体又はその抗体断片を提供することである。
本発明者らは、鋭意研究の結果、Ｎａｖ１．７のドメインＣのＥ３細胞外領域に特異的に結合し、Ｎａｖ１．７を選択的に阻害するモノクローナル抗体を見出した。さらに、本発明のモノクローナル抗体が、鎮痛作用又は掻痒抑制作用を有することを見出した。
すなわち、本発明は、以下に関する。
（１−１）ａ１）配列番号２７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号５０のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の１２Ｈ４、ｈ１２Ｈ４、ｈ１２Ｈ４−２及びｈ１２Ｈ４−３のＣＤＲ又はその変異体を含む重鎖可変領域並びに軽鎖可変領域）

ｂ１−１）配列番号３のアミノ酸配列において１若しくは２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号４のアミノ酸配列において１若しくは２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号５のアミノ酸配列において１若しくは２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、
ｂ１−２）配列番号１５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号１６のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、
ｂ１−３）配列番号１５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、若しくは
ｂ１−４）配列番号２１のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号３６のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の３Ｂ２、３Ｂ２／１５Ｃ８、１５Ｃ８、２９Ｇ３若しくは２８Ｂ５／１５Ｃ８のＣＤＲ又はその変異体を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｃ１）配列番号７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４０のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の５Ｅ１２のＣＤＲ又はその変異体を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｄ１）配列番号１１のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号１２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１３のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号４２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４０のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の７Ｂ９のＣＤＲ又はその変異体を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｅ１）配列番号１５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号１９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号４５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号３６のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の１５Ｈ６のＣＤＲ又はその変異体を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｆ１−１）配列番号２１のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、若しくは
ｆ１−２）配列番号３のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の２８Ｂ５若しくは３Ｂ２／２８Ｂ５のＣＤＲ又はその変異体を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｇ１）配列番号３１のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号５０のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；若しくは（つまり、実施例の２２Ｄ３のＣＤＲ又はその変異体を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｈ１）配列番号５６：Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｘａａ４−Ｈ（ここで、Ｘａａ４は、Ｍ又はＩである）のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５７：Ｌ−Ｉ−Ｉ−Ｐ−Ｙ−Ｘａａ５−Ｇ−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｆ−Ｙ−Ｎ−Ｘａａ８−Ｋ−Ｆ−Ｘａａ９−Ｇの（ここで、Ｘａａ５は、Ｓ又はＮであり、Ｘａａ６は、Ｄ又はＥであり、Ｘａａ７は、Ｔ又はＩであり、Ｘａａ８は、Ｑ又はＰであり、Ｘａａ９は、Ｋ又はＲである）のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号５８：Ａ−Ｘａａ１０−Ｖ−Ｓ−Ｙ−Ａ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（ここで、Ｘａａ１０は、Ｅ又はＤである）のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５４：Ｋ−Ｖ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｘａａ１−Ｓ（ここで、Ｘａａ１は、Ｆ又はＩである）のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号５５：Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｘａａ２−Ｈ−Ｖ−Ｐ−Ｘａａ３−Ｔ（ここで、Ｘａａ２は、Ｔ又はＩであり、Ｘａａ３は、Ｆ又はＷである）のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例３に記載の複数抗体の共通配列を有するＣＤＲ又はその変異体を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）
を含むＮａｖ１．７に結合するモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（１−２）配列番号２７のアミノ酸配列において１０位以外の箇所において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２９のアミノ酸配列において２及び６位以外の箇所において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号５０のアミノ酸配列において５位以外の箇所において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例６に記載のｈ１２Ｈ４における重要配列を必須とするＣＤＲ又はその変異体を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）
を含む（１−１）記載の抗体又はその抗体断片。
（２）ａ１）配列番号２７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の１２Ｈ４、ｈ１２Ｈ４、ｈ１２Ｈ４−２及びｈ１２Ｈ４−３のＣＤＲを含む重鎖可変領域並びに軽鎖可変領域）

ｂ１−１）配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、
ｂ１−２）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、若しくは
ｂ１−３）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、若しくは
ｂ１−４）配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号３６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の３Ｂ２、３Ｂ２／１５Ｃ８、１５Ｃ８、２９Ｇ３又は２８Ｂ５／１５Ｃ８のＣＤＲを含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｃ１）配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の５Ｅ１２のＣＤＲを含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｄ１）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の７Ｂ９のＣＤＲを含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｅ１）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号３６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の１５Ｈ６のＣＤＲを含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｆ１−１）配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、若しくは
ｆ１−２）配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例の２８Ｂ５又は３Ｂ２／２８Ｂ５のＣＤＲを含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｇ１）配列番号３１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；若しくは
（つまり、実施例の２２Ｄ３のＣＤＲを含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）

ｈ１）配列番号５６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号５７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（つまり、実施例３に記載の複数抗体の共通配列を有するＣＤＲを含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）
を含む（１−１）若しくは（１−２）記載の抗体又はその抗体断片。
（３）ａ２）配列番号５２、５９若しくは６０のアミノ酸配列若しくは配列番号５２、５９若しくは６０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号５３若しくは６１のアミノ酸配列若しくは配列番号５３若しくは６１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｂ２）配列番号２６のアミノ酸配列若しくは配列番号２６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号４９のアミノ酸配列若しくは配列番号４９のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｃ２）配列番号２３のアミノ酸配列若しくは配列番号２３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号４８のアミノ酸配列若しくは配列番号４８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｄ２）配列番号２のアミノ酸配列若しくは配列番号２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号３３のアミノ酸配列若しくは配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｅ２）配列番号６のアミノ酸配列若しくは配列番号６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号３７のアミノ酸配列若しくは配列番号３７のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｆ２）配列番号１０のアミノ酸配列若しくは配列番号１０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号４１のアミノ酸配列若しくは配列番号４１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｇ２）配列番号１４のアミノ酸配列若しくは配列番号１４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号４３のアミノ酸配列若しくは配列番号４３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｈ２）配列番号１８のアミノ酸配列若しくは配列番号１８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号４４のアミノ酸配列若しくは配列番号４４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｉ２）配列番号２０のアミノ酸配列若しくは配列番号２０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号４６のアミノ酸配列若しくは配列番号４６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｊ２）配列番号３０のアミノ酸配列若しくは配列番号３０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号５１のアミノ酸配列若しくは配列番号５１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｋ２）配列番号２のアミノ酸配列若しくは配列番号２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号４６のアミノ酸配列若しくは配列番号４６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ｌ２）配列番号２のアミノ酸配列若しくは配列番号２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号４３のアミノ酸配列若しくは配列番号４３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；若しくは
ｍ２）配列番号２０のアミノ酸配列若しくは配列番号２０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号４３のアミノ酸配列若しくは配列番号４３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
を含む（１−１）若しくは（１−２）記載の抗体又はその抗体断片。
具体例としては、実施例の表１に記載の抗体が挙げられる。
（４）ａ２−１）配列番号５２のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号５３のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
ａ２−２）配列番号５９のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号５３のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；若しくは
ａ２−３）配列番号６０のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
配列番号６１のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
を含む（３）記載の抗体又はその抗体断片。
（５）さらに、
配列番号６２若しくは６３のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域及び
配列番号６４のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域
を含む（１）〜（４）のいずれかに記載の抗体又はその抗体断片。
（４）及び（５）の具体例としては、実施例の表２に記載の抗体が挙げられる。
（６）（１−１）、（１−２）、（２）〜（５）いずれかに記載の抗体又はその抗体断片を含有する医薬組成物。
（７）疼痛及び／又は掻痒の治療剤及び／又は予防剤である、（６）記載の医薬組成物。
（８）（３）又は（４）記載の抗体の重鎖可変領域をコードし、
さらに（５）記載の抗体の重鎖定常領域をコードしていてもよいポリヌクレオチド。
（９）（３）又は（４）記載の抗体の軽鎖可変領域をコードし、
さらに（５）記載の抗体の軽鎖定常領域をコードしていてもよいポリヌクレオチド。
（１０）（８）又は（９）記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（１１）（１−１）、（１−２）、（２）〜（５）いずれかに記載の抗体又は抗体断片をコードするポリヌクレオチド。
（１２）抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ')２、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ又はＤｉａｂｏｄｙである（１−１）、（１−２）、（２）〜（５）いずれかに記載の抗体又は抗体断片。
（１３）（１−１）、（１−２）、（２）〜（５）いずれかに記載のモノクローナル抗体若しくはその抗体断片を投与することを含む、Ｎａｖ１．７関連疾患の予防又は治療方法。
（１４）Ｎａｖ１．７関連疾患の治療若しくは予防剤を製造するための、（１−１）、（１−２）、（２）〜（５）いずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（１５）Ｎａｖ１．７関連疾患の治療若しくは予防のための、（１−１）、（１−２）、（２）〜（５）いずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（１６）Ｎａｖ１．７関連疾患が疼痛及び／又は掻痒である、（１３）記載の方法又は（１４）若しくは（１５）記載の抗体又はその抗体断片。
（１７）（１−１）、（１−２）、（２）〜（５）いずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含有するＮａｖ１．７検出用キット。
本発明のモノクローナル抗体又は抗体断片は、Ｎａｖ１．７に特異的に結合するので、生体試料においてＮａｖ１．７を検出するために使用することができる。さらに、本発明のモノクローナル抗体又は抗体断片は、Ｎａｖ１．７を選択的に阻害する活性を有するので、本発明のモノクローナル抗体又は抗体断片を含む医薬組成物は、医薬品、特に、Ｎａｖ１．７関連疾患の治療又は予防のための医薬として非常に有用である。
１５Ｃ８の重鎖（配列番号１４）、１５Ｈ６の重鎖（配列番号１８）、２８Ｂ５の重鎖（配列番号２０）及び２９Ｇ３の重鎖（配列番号２３）のＫａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びアライメント結果 １５Ｃ８の軽鎖（配列番号４３）、１５Ｈ６の軽鎖（配列番号４４）、２８Ｂ５の軽鎖（配列番号４６）及び２９Ｇ３の軽鎖（配列番号４８）のＫａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びアライメント結果 ｈ１２Ｈ４の重鎖（配列番号５２、図３Ａ）及び軽鎖（配列番号５３、図３Ｂ）のＫａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ 坐骨神経部分結紮モデルに対して足裏局所投与による薬効評価 坐骨神経部分結紮モデルに対して静脈内投与による薬効評価
本明細書において使用される用語は、特に言及する場合を除いて、当該分野で通常用いられる意味で用いられる。
本発明においては、当該分野で公知の抗体作製手法が利用可能である。例えば、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｉｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅ （Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉａｔｉｏｎｓ）に記載された方法等が挙げられる。
また、当該分野で公知の遺伝子操作的手法が利用可能である。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｆｏｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （２０１２）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ （２０１２）に記載された方法等が挙げられる。
ヒトＮａｖ１．７は遺伝子ＳＣＮ９Ａにコードされているアミノ酸からなるタンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：Ｑ１５８５８）である。
本発明の本発明のモノクローナル抗体又は抗体断片は、本明細書に記載のＣＤＲ又は重鎖可変領域／軽鎖可変領域を有するモノクローナル抗体又は該抗体の断片である。該抗体又は抗体断片は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ若しくはＩｇＡ）又はサブクラス由来であり得、例えば、マウス、ラット、サメ、ウサギ、ブタ、ハムスター、ラクダ、ラマ、ヤギ又はヒトを含む任意の種から取得されてもよい。該抗体又は抗体断片として、好ましくは、ヒト化モノクローナル抗体又はヒト化モノクローナル抗体の抗体断片である。
本発明において「モノクローナル抗体の抗体断片」とは、本発明のモノクローナル抗体の一部であって、当該モノクローナル抗体と同様にＮａｖ１．７に特異的に結合し、Ｎａｖ１．７を選択的に阻害する断片を意味する。
具体的には、ヒトＮａｖ１．７に対して特異的に結合するＦａｂ（ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ ｂｉｎｄｉｎｇ）、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ Ｆｖ；以下、ｓｃＦｖと表記する）、ジスルフィド安定化抗体（ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｆｖ； 以下、ｄｓＦｖと表記する）、２量化体Ｖ領域断片（以下、Ｄｉａｂｏｄｙと表記する）、ＣＤＲを含むペプチド等を挙げることができる（エキスパート・オピニオン・オン・テラピューティック・パテンツ、第６巻、第５号、第４４１〜４５６頁、１９９６年）。
Ｆａｂは、ＩｇＧのヒンジ領域で２本のＨ鎖を架橋している２つのジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ結合）の上部のペプチド部分を酵素パパインで分解して得られる、Ｈ鎖のＮ末端側約半分とＬ鎖全体で構成される、分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるＦａｂは、本発明のモノクローナル抗体をパパイン処理して得ることができる。また、本発明のモノクローナル抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを細胞へ導入することにより発現させることによってもＦａｂを製造することができる。
Ｆａｂ’は、Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ間のＳ−Ｓ結合を切断した分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるＦａｂ’は、本発明のモノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）２を還元剤ジチオスレイトール処理して得ることができる。また、本発明のモノクローナル抗体のＦａｂ’をコードするＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることによってもＦａｂ’を製造することができる。
Ｆ（ａｂ’）２は、ＩｇＧのヒンジ領域の２個のＳ−Ｓ結合の下部を酵素ペプシンで分解して得られる、２つのＦａｂ’領域がヒンジ部分で結合して構成される、分子量約１０万の抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるＦ（ａｂ’）２は、本発明のモノクローナル抗体をペプシン処理して得ることができる。また、本発明のモノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）２をコードするＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることによってもＦ（ａｂ’）２を製造することができる。
ｓｃＦｖは、一本のＶＨと一本のＶＬとを適当なペプチドリンカー（以下、Ｐと表記する）を用いて連結した、ＶＨ−Ｐ−ＶＬ又はＶＬ−Ｐ−ＶＨポリペプチドであり、抗原活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるｓｃＦｖに含まれるＶＨ及びＶＬは、本発明のモノクローナル抗体のものであればよい。本発明で使用されるｓｃＦｖは、本発明のモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、ｓｃＦｖ発現ベクターを構築し、大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させ製造することができる。
ｄｓＦｖは、ＶＨ及びＶＬ中のそれぞれ１アミノ酸残基をシステイン残基に置換したポリペプチドをＳ−Ｓ結合を介して結合させたものをいう。システイン残基に置換するアミノ酸残基はＲｅｉｔｅｒらにより示された方法（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７、６９７（１９９４））に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。本発明で使用されるｄｓＦｖに含まれるＶＨ又はＶＬは、本発明のモノクローナル抗体のものであればよい。本発明で使用されるｄｓＦｖは、本発明のモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、適当な発現ベクターに挿入してｄｓＦｖ発現ベクターを構築し、該発現ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入し、発現させることにより製造することができる。
Ｄｉａｂｏｄｙは、抗原結合特異性が同じ又は異なるｓｃＦｖが２量体を形成した抗体断片であり、同じ抗原に対する２価の抗原結合活性又は異なる抗原に対する２種類の特異的な抗原結合活性を有する抗体断片である。例えば、本発明のモノクローナル抗体に特異的に反応する２価のＤｉａｂｏｄｙは、本発明のモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、３〜１０残基のペプチドリンカーを有するｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することによりＤｉａｂｏｄｙを発現させ、製造することができる。
ＣＤＲを含むペプチドは、ＶＨ又はＶＬのＣＤＲの少なくとも１領域以上を含んで構成される。複数のＣＤＲは、直接又は適当なペプチドリンカーを介して結合させることができる。本発明で使用されるＣＤＲを含むペプチドは、本発明のモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、ＣＤＲをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを動物細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることにより、製造することができる。また、ＣＤＲを含むペプチドは、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ−ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法によって製造することもできる。
本発明のモノクローナル抗体又は抗体断片は、Ｎａｖ１．７に特異的に結合することが特徴である。以下、Ｎａｖ１．７特異的結合能の測定手順の一例を記す。
特異的結合は、少なくとも約１×１０−６Ｍ又はそれ未満の平衡解離定数（例えば、ＫＤが小さいほど、より緊密な結合を表す）を特徴とすることができる。２つの分子が特異的に結合するかどうかを測定する方法は、当該技術分野で周知であり、実施例５に記載の競合ＥＬＩＳＡ法の他、表面プラズモン共鳴及び同様のものが挙げられる。しかし、Ｎａｖ１．７を特異的に結合する単離抗体は、他の種由来のＮａｖ１．７分子のような他の抗原に対する交差反応性を示すことがある。それにもかかわらず、更に、ｈＮａｖ１．７及び１以上の更なる抗原と結合する多重特異的抗体、又はｈＮａｖ１．７の２種の異なる領域（例えば、ＥＣループ３−１及びＥＣループ３−３）と結合する二重特異的抗体は、ｈＮａｖ１．７と「特異的に結合する」抗体とみなされる。
本発明のモノクローナル抗体又は抗体断片は、Ｎａｖ１．７を阻害することが特徴である。以下、Ｎａｖ１．７阻害能の測定手順の一例を記す。
Ｎａｖ１．７をコードするＤＮＡをクローニングしたｐｃＤＮＡ３．１（インビトロジェン社製）をＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）にトランスフェクションすることによりＮａｖ１．７安定発現細胞を構築する。この細胞を用いて下記に示す方法によりマニュアルパッチクランプを実施することにより、抗体のＮａｖ１．７特異的な阻害を評価することができる。ポリＬ-リジンコートしたガラス片を、３５ｍｍディッシュに並べ、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（ＳＩＧＭＡ社製）に懸濁したＮａｖ１．７安定発現細胞を播種する（４×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈ）。播種翌日、ガラス片を測定チャンバーに移してホールセル形成し、―７０ｍＶ固定、１０ｍｓｅｃ矩形波を０．１Ｈｚで与えながら抗体を処置し、抗体処置前と処置後（＞２ｍｉｎ処置）で測定を行う。
本発明のモノクローナル抗体は、本明細書に記載のＣＤＲ又は重鎖可変領域／軽鎖可変領域を用いて当該分野の定法によって作製することができる。
本発明のモノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体も含む。ヒト化抗体はヒト体内における抗原性が低下しているため、治療目的等でヒトに投与する場合に有用である。ヒト化モノクローナル抗体は、ヒト以外の哺乳動物、例えばマウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ; ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ) をヒト抗体のフレームワーク領域（ＦＲ ; ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｇｉｏｎ)へ移植したものである。従って、ヒト化モノクローナル抗体のＦＲは、ヒト由来のものである。適当なＦＲは、Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．らの文献を参照すれば選択できる。この場合のＦＲとしては、ＣＤＲが良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成したヒト化抗体のＣＤＲが適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域のＦＲのアミノ酸を置換してもよい（Ｓａｔｏ、Ｋ．ら, Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １９９３年、第５３巻、８５１ページ)。置換されるＦＲのアミノ酸の割合は、全ＦＲ領域の０〜１５％、好ましくは０〜５％である。
なお、本発明のヒト化モノクローナル抗体には、ヒト抗体の定常領域が使用される。好ましいヒト抗体の定常領域としては、重鎖としてはＣγが挙げられ、例えば、Ｃγ１，Ｃγ２，Ｃγ３，Ｃγ４を、軽鎖としてはＣκ、Ｃλを使用することができる。また、抗体又はその産生の安定性を改善するために、ヒト抗体のＣ領域を修飾してもよい。ヒト化の際に用いられるヒト抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ等いかなるアイソタイプのヒト抗体でもよいが、本発明においてはＩｇＧを用いることが好ましく、さらにIgＧ１又はＩｇＧ４が好ましい。
本発明のヒト化モノクローナル抗体は、重鎖定常領域のＣ末端にリジンが付加していてもしていなくてもよい。好ましくは、配列番号６４のアミノ酸配列の軽鎖定常領域及び配列番号６２又は６３のアミノ酸配列の重鎖定常領域を有し、配列番号６２又は６３のＣ末端にリジンが付加していてもしていなくてもよい。
ヒト化モノクローナル抗体は一般的な製造方法により作製することができる（例えば、下記実施例４、ＷＯ９５／１４０４１号公報、ＷＯ９６／０２５７６号公報等参照）。具体的には、まずマウス抗体のＣＤＲとヒト抗体のＦＲを連結するように設計した可変領域をコードするＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する（ＷＯ９８／１３３８８号公報参照）。得られたＤＮＡを、ヒト抗体の定常領域をコードするＤＮＡと連結し、次いで発現ベクターに組み込む。または、抗体の可変領域をコードするＤＮＡを、抗体の定常領域のＤＮＡを含む発現ベクターへ組み込んでもよい。本発明で使用される抗体を製造するには、抗体遺伝子を発現制御領域、例えば、エンハンサー／プロモーターの制御のもとで発現するよう発現ベクターに組み込む。次に、この発現ベクターにより宿主細胞を形質転換し、抗体を発現させることができる。
上記の形質転換体の宿主細胞としては、例えば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞等の脊椎動物細胞、原核細胞、酵母等が挙げられる。形質転換体は、当業者に周知の方法に従って培養することができ、該培養により、形質転換体細胞内又は細胞外に本発明のモノクローナル抗体が産生される。該培養に用いられる培地としては、採用した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択でき、例えば、ＣＯＳ細胞の場合、ＲＰＭＩ−１６４０培地やダルベッコ修正イーグル最小必須培地（ＤＭＥＭ）等の培地に、必要に応じウシ胎児血清（ＦＢＳ）等の血清成分を添加したものを使用できる。該形質転換体の培養の際の培養温度は、細胞内のタンパク質合成能を著しく低下せしめない温度であればいずれでもよいが、好適には３２〜４２℃、最も好適には３７℃で培養することが好ましい。また必要に応じて、１〜１０％（ｖ／ｖ）の炭酸ガスを含む空気中で培養することができる。
上記により形質転換体の細胞内又は細胞外に生産される本発明のモノクローナル抗体を含む画分は、該タンパク質の物理的性質や化学的性質等を利用した各種公知の分離操作法により、分離・精製することができる。かかる方法としては、具体的には例えば通常のタンパク質沈澱剤による処理、限外濾過、分子ふるいクロマトグラフィー（ゲル濾過）、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の各種クロマトグラフィー、透析法、及びこれらの組み合わせ等を採用できる。該方法により、容易に高収率、高純度で本発明のモノクローナル抗体を製造できる。
本発明のモノクローナル抗体又はその活性断片は、さらに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、放射性物質、トキシン等の各種分子により修飾されていてもよい。抗体の修飾方法はこの分野で公知の方法を利用することができる。
また本発明のモノクローナル抗体は、そのＮ末端あるいはＣ末端に他のタンパク質を融合してもよい（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２００４， １０， １２７４−１２８１）。融合するタンパク質は当業者が適宜選択することができる。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含有する医薬組成物（本発明の医薬組成物）は、経口的又は非経口的に全身あるいは局所的に投与することができる。非経口的投与としては、例えば、点滴等の静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、鼻腔内投与、吸入等を選択することができる。
本発明の医薬組成物は、Ｎａｖ１．７関連疾患の治療及び／又は予防のための医薬として非常に有用である。
Ｎａｖ１．７関連疾患とは、疼痛、掻痒、神経原性炎症、咳等が挙げられる。
「疼痛」としては、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、炎症性疼痛、関節炎、骨関節炎、偏頭痛、群発頭痛症候群、三叉神経痛、疱疹性神経痛、全身性神経痛、神経変性疾患、運動障害、神経内分泌障害、失調症、敗血症、内臓痛、急性痛風、ヘルペス後神経痛、糖尿病性神経障害、座骨神経痛、背痛、頭部若しくは頸部の疼痛、激痛若しくは難治性疼痛、突発痛、手術後の痛み、遺伝性紅痛症、歯痛、鼻炎、がん疼痛、膀胱障害等が挙げられる。
「掻痒」としては、急性掻痒、慢性掻痒、ヒスタミン依存掻痒、ヒスタミン非依存掻痒等が挙げられる。
「神経原性炎症」は、喘息、関節炎、湿疹、頭痛、片頭痛、若しくは乾癬、又は前記の組合せに随伴し得る。
「咳」とは、病理性又は慢性の咳が挙げられる。
本発明の医薬組成物の有効投与量は、一回につき体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇから１００ｍｇの範囲から選ばれる。あるいは、患者あたり５〜５０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇの投与量を選ぶことができる。しかしながら、本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含む医薬組成物はこれらの投与量に制限されるものではない。また、投与期間は、患者の年齢、症状により適宜選択することができる。本発明の医薬組成物は、投与経路次第で医薬的に許容される担体や添加物を共に含むものであってもよい。このような担体及び添加物の例として、水、医薬的に許容される有機溶媒、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、カゼイン、ジグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、医薬添加物として許容される界面活性剤等が挙げられる。使用される添加物は、剤型に応じて上記の中から適宜あるいは組合せて選択されるが、これらに限定されるものではない。
本発明は、本発明のモノクローナル抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを包含する。本発明のモノクローナル抗体の重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、さらに、重鎖定常領域をコードしていてもよい。本発明のモノクローナル抗体の軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、さらに、軽鎖定常領域をコードしていてもよい。また、本発明は、これらのポリヌクレオチドを少なくとも１つ含む発現ベクターを包含する。
該ポリヌクレオチドは、本発明のモノクローナル抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域をコードする限り、特に限定されず、複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）等のヌクレオチドからなる重合体である。天然以外の塩基を含んでいてよい。本発明のポリヌクレオチドは、抗体を遺伝子工学的な手法により製造するために使用することができる。また本発明のモノクローナル抗体と同等な機能を有する抗体をスクリーニングするために、プローブとして用いることもできる。即ち本発明のモノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチド、又はその一部をプローブとして用い、ハイブリダイゼーション、遺伝子増幅技術（例えばＰＣＲ）等の技術により、該ポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ本発明のモノクローナル抗体と同等の活性を有する抗体をコードするＤＮＡを得ることができる。このようなＤＮＡも本発明のポリヌクレオチドに含まれる。
ハイブリダイゼーション技術（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ２ｎｄ ｅｄ．， ９．４７−９．５８， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ． ｐｒｅｓｓ， １９８９）は当業者によく知られた技術である。ハイブリダイゼーションの条件としては、例えば、低ストリンジェントな条件が挙げられる。低ストリンジェントな条件とは、ハイブリダイゼーション後の洗浄において、例えば４２℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳの条件であり、好ましくは５０℃、０．１×ＳＳＣ 、０．１％ＳＤＳの条件である。より好ましいハイブリダイゼーションの条件としては、高ストリンジェントな条件が挙げられる。高ストリンジェントな条件とは、例えば６５℃、５×ＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳの条件である。これらの条件において、温度を上げる程に高い相同性を有するポリヌクレオチドが効率的に得られることが期待できる。但し、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響する要素としては温度や塩濃度等複数の要素が考えられ、当業者であればこれら要素を適宜選択することで同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
これらハイブリダイゼーション技術や遺伝子増幅技術により得られるポリヌクレオチドがコードする、本発明のモノクローナル抗体と機能的に同等な抗体は、通常、これら抗体とアミノ酸配列において高い相同性を有する。本発明のモノクローナル抗体には、本発明のモノクローナル抗体と機能的に同等であり、かつ該抗体のアミノ酸配列と高い相同性を有する抗体も含まれる。高い相同性とは、アミノ酸レベルにおいて、通常、少なくとも７５％以上の同一性、好ましくは８５％以上の同一性、さらに好ましくは９５％以上の同一性を指す。ポリペプチドの相同性を決定するには、文献（Ｗｉｌｂｕｒ， Ｗ． Ｊ． ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ， Ｄ． Ｊ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ（１９８３）８０，７２６−７３０）に記載のアルゴリズムに従えばよい。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、Ｎａｖ１．７に特異的に結合するため、生体試料においてＮａｖ１．７を検出するために使用することができる。生体試料としては、血液、血漿、血清、尿、臓器、組織、骨髄、リンパ節等が挙げられる。そのため、本発明のモノクローナル抗体を含有するキットはＮａｖ１．７検出用キットとして利用可能である。該キットは、本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含み、さらに、標識二次抗体、標識の検出に必要な基質、担体、洗浄バッファー、試料希釈液、酵素基質、反応停止液、精製された標準物質としてのＮａｖ１．７タンパク質、使用説明書等を含んでいてもよい。
以下に本発明の実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
実施例１：Ｎａｖ１．７抗体の調製
ヒトＮａｖ１．７（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：Ｑ１５８５８）のドメインＣ、Ｅ３細胞外ループＣ末領域に相当するペプチド（１４１８−ＳＶＮＶＤＫＱＰＫＹＥＹＳＬ（配列番号１）−１４３１；ｈＣＥ３Ｃペプチド）を抗原として選定した。
ｈＣＥ３ＣペプチドのＮ末にＣｙｓ残基を付与したペプチド（Ｃｙｓ−ＳＶＮＶＤＫＱＰＫＹＥＹＳＬ（配列番号１）；Ｃｙｓ−ｈＣＥ３Ｃ）を合成し（東レ株式会社製）、マレイミド化ｇｉａｎｔ ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔｓヘモシアニン（マレイミド化ＫＬＨ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）に結合させ、免疫原を調製した。このペプチド−ＫＬＨ複合体をフロイント完全アジュバントと共にＡ／Ｊ Ｊｍｓ Ｓｌｃ雌性マウスに免疫した。その後、追加でフロイント不完全アジュバントと共に４回免疫した。
最終免疫の３日後に脾臓を摘出し、脾臓細胞とマウスミエローマ細胞（ｐ３×６３６３−Ａｇ８．、東京腫瘤研究所）をＰＥＧ法を用いて融合させ、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む培地で選択した。培養上清を用いて免疫原ペプチドを使用したＥＬＩＳＡ法により、結合抗体を産生するハイブリドーマを樹立した。
実施例２：抗体配列の決定
樹立したクローンのハイブリドーマ細胞より、常法に従って抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を決定した（表１）。









































Figure 2019230856
実施例３：抗体配列のアライメント
１５Ｃ８、１５Ｈ６、２８Ｂ５及び２９Ｇ３の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列について抗体配列解析ソフトウェアａｂＹｓｉｓを用いたＫａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇと、遺伝子解析ソフトウェアＧＥＮＥＴＩＸを用いたアライメントを実施した（図１、２）。その結果、１５Ｃ８、１５Ｈ６、２８Ｂ５及び２９Ｇ３のアミノ酸配列は以下に述べるとおり類似したものであった。
軽鎖のＣＤＲ１は、配列番号３４の１６アミノ酸から構成されていた。
軽鎖のＣＤＲ２は、Ｋ−Ｖ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｘａａ１−Ｓ（ここで、Ｘａａ１は、Ｆ又はＩである：配列番号５４）の７アミノ酸から構成されていた。
軽鎖のＣＤＲ３は、Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｘａａ２−Ｈ−Ｖ−Ｐ−Ｘａａ３−Ｔ（ここで、Ｘａａ２は、Ｔ又はＩであり、Ｘａａ３は、Ｆ又はＷである：配列番号５５）の９アミノ酸から構成されていた。
重鎖のＣＤＲ１は、Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｘａａ４−Ｈ（ここで、Ｘａａ４は、Ｍ又はＩである：配列番号５６）の５アミノ酸から構成されていた。
重鎖のＣＤＲ２は、Ｌ−Ｉ−Ｉ−Ｐ−Ｙ−Ｘａａ５−Ｇ−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｆ−Ｙ−Ｎ−Ｘａａ８−Ｋ−Ｆ−Ｘａａ９−Ｇの（ここで、Ｘａａ５は、Ｓ又はＮであり、Ｘａａ６は、Ｄ又はＥであり、Ｘａａ７は、Ｔ又はＩであり、Ｘａａ８は、Ｑ又はＰであり、Ｘａａ９は、Ｋ又はＲである：配列番号５７）１７アミノ酸から構成されていた。
重鎖のＣＤＲ３は、Ａ−Ｘａａ１０−Ｖ−Ｓ−Ｙ−Ａ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（ここで、Ｘａａ１０は、Ｅ又はＤである：配列番号５８）の９アミノ酸から構成されていた。
実施例４：抗体のヒト化
１２Ｈ４について、下記の方法でヒト化を実施した。マウス抗体アミノ酸配列の重鎖及び軽鎖のＶ遺伝子領域配列に類似したヒト生殖系アクセプター配列を配列解析ソフトＡｂｓｉｓで検索し、選択した。またＪ鎖領域については、マウス抗体ＤＮＡ配列と相同性の高い配列をＩＭＧＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）で検索しヒトフレームワーク配列とした。このヒトフレームワーク配列に対し、Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ（Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ａｕｇ１；１３２（２）：２１１−５０．（１９７０））によって定義されたマウス抗体重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３及びマウス抗体軽鎖ＣＤＲ１，ＣＤＲ２，ＣＤＲ３を移植することで表２のヒト化抗体配列を設計した。なお、ｈ１２Ｈ４，ｈ１２Ｈ４−２，ｈ１２Ｈ４−３の定常領域には、重鎖にはｈＩｇＧ４Ｐｒｏ（配列番号６２）又はｈＩｇＧ１（配列番号６３）を、軽鎖にはｈＩｇＫ（配列番号６４）を用いた。
ヒト化１２Ｈ４(ｈ１２Ｈ４)、他のヒト生殖系アクセプター配列にＣＤＲを移植したヒト化配列ｈ１２Ｈ４−２及びｈ１２Ｈ４−３は、免疫原ペプチド（Ｃｙｓ−ＣＥ３Ｃ）に対し、実施例５に記載する方法でマウス抗体と同等の親和性を示した。
Figure 2019230856
実施例５：親和性評価
免疫原ペプチド（Ｃｙｓ−ｈＣＥ３Ｃ）に対する親和性を以下に示す競合ＥＬＩＳＡ法により測定した。
抗マウスＩｇＧ抗体固相化プレートに、取得したマウス抗体の希釈液を加え、室温で３時間結合させた。ＥＬＩＳＡ用洗浄バッファーで３回洗浄したのちに、ビオチン標識した免疫原ペプチドとＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＨＲＰ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を添加した。これと同時に未標識の免疫原ペプチドの希釈系列を添加し、４℃で一晩反応させた。ＥＬＩＳＡ洗浄液で３回洗浄後、ＴＭＢ−Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を添加して発色させた後に、等量の０．０５Ｎの硫酸で反応を停止し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。ビオチン標識ペプチドのシグナルを２分の１に減弱する未標識ペプチドの濃度を親和性（ＩＣ５０）とした。その結果、表３に示すように免疫原ペプチドに対し強い親和性を示した。
Figure 2019230856
実施例６：ヒト化１２Ｈ４の結合に重要なアミノ酸の特定
ヒト化１２Ｈ４（ｈ１２Ｈ４）について抗体配列解析ソフトaｂＹｓｉｓを用いてＫａｂａｔのｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びＣＤＲの定義を実施した。この結果を図３Ａ、３Ｂに示す。また、ＣＤＲに相当するアミノ酸に点変異を導入した変異体を作製し、その親和性を実施例５に記載した方法論で算出した。この際、未標識ペプチドとしては免疫原ペプチドのＮ末Ｃｙｓを除いたペプチド（ＳＶＮＶＤＫＱＰＫＹＥＹＳＬ；配列番号１）を用い、このペプチドに対する親和性として算出した。軽鎖の結果を表４に、重鎖の結果を表５に示す。その結果、軽鎖のＱ９０、Ｖ９４はそのアミノ酸を他のアミノ酸に置換すると、このペプチドに対する親和性がなくなった。表４中、ｎ．ｄ．はｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅを意味する。このことから、軽鎖のＱ９０、Ｖ９４は結合に特に重要なアミノ酸であると考えられる。また、軽鎖のＮ２８、重鎖のＭ９９はそのアミノ酸を他のアミノ酸に置換すると１０倍以上親和性が落ちた。このことから、軽鎖のＮ２８、重鎖のＭ９９は、結合に重要なアミノ酸であると考えられる。
Figure 2019230856
Figure 2019230856
実施例７：薬効評価
（７−１）ラット坐骨神経部分結紮モデル（Ｐａｒｔｉａｌ Ｓｃｉａｔｉｃ Ｎｅｒｖｅ Ｌｉｇａｔｉｏｎモデル）の作製
ラットをイソフルランにより麻酔し、左足の毛を剃った。大腿上部の皮膚を切開し、筋を割いて坐骨神経を露出させた。坐骨神経の約半分をナイロン糸で強く結紮し、筋及び皮膚を縫合した。これを手術側とした。右足については坐骨神経結紮以外の同様の処置を行い、偽手術側とした。
（７−２）足裏局所投与による薬効評価
（７―１）で作成したラットを用いて、手術の２週間後、ａｎａｌｇｅｓｉｏｍｅｔｅｒ（ランダルセリット法）により機械痛覚過敏に対する鎮痛作用を評価した。手術２週間後、ａｎａｌｇｅｓｉｏｍｅｔｅｒにより１秒当り１６ｇずつ刺激圧が増加するようにラット後肢を圧迫し、ラットが逃避行動を示した際の圧を疼痛閾値とした。左右の後肢について疼痛閾値を評価し、処置前疼痛閾値とした。手術側の疼痛閾値が６０〜９０ｇ、かつ偽手術側の疼痛閾値が１００〜１７５ｇの動物を採用した。なお、動物の訓練のため、処置前疼痛閾値測定前に同様の操作を実施した。本発明の抗体はＰＢＳを用いて３００μｇ／４０μＬになるように調製し、動物足裏に４０μＬ投与した。投与５分後、左右後肢の疼痛閾値を評価し、処置後疼痛閾値とした。下記の方法により％ｒｅｖｅｒｓａｌ値を計算し、抗体の鎮痛作用を評価した。
％ｒｅｖｅｒｓａｌ値＝（手術側処置後疼痛閾値―手術側処置前疼痛閾値）／（偽手術側処置前疼痛閾値−手術側処置前疼痛閾値）×１００
３Ｂ２、１５Ｃ８、２８Ｂ５、２９Ｇ３及び１２Ｈ４の結果を図４に示す。本発明の抗体は、足裏投与により、Ｎａｖ１．７を阻害し、疼痛に対して有意な薬効を示した。
（７−３）静脈内投与による薬効評価
（７―１）で作成したラットを用いて、手術の２週間後、フォンフライフィラメントにより機械性のアロディニアに対する作用を評価した。金網上に載せたプラスチック製ケージにラットを入れ、馴化させた。抗体を投与後金網側からラットの足裏にフォンフライフィラメント（０．４〜２６ｇ）を押し当て、ラットが逃避行動を示し始めるフィラメントの圧値を疼痛閾値とした。左右の後足について疼痛閾値を評価し、処置前の閾値とした。手術後の疼痛閾値が０．６〜２ｇ、かつ偽手術側の疼痛閾値が８〜１５ｇの動物を薬効評価に採用した。なお動物の訓練のために、処置前の疼痛閾値測定前に同様の操作を実施した。本発明の抗体をｓａｌｉｎｅにて５０ｍｇ／ｋｇになるよう調製し静脈内投与した。投与０．５〜７２時間後、左右後足の疼痛閾値を評価し、処置後の疼痛閾値とした。下記の方法により％ｒｅｖｅｒｓａｌ値を算出し、化合物の鎮痛効果として比較した。
％ｒｅｖｅｒｓａｌ値＝（手術側処置後の疼痛閾値の対数−手術側処置前の疼痛閾値の対数）／（偽手術側処置前の疼痛閾値の対数−手術側処置前の疼痛閾値の対数）
ヒト化１２Ｈ４（ｈ１２Ｈ４）の結果を図５に示す。本発明の抗体は、静脈内投与により、投与後４８時間まで疼痛に対して有意な薬効を示した。
本発明のモノクローナル抗体又は抗体断片は、生体試料においてＮａｖ１．７を検出するために使用することができる。さらに、本発明のモノクローナル抗体又は抗体断片を含む医薬組成物は、Ｎａｖ１．７関連疾患の治療又は予防のための医薬として非常に有用である。

Claims (10)

  1. ａ１）配列番号２７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号２８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号２９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号３５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号５０のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｂ１−１）配列番号３のアミノ酸配列において１若しくは２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号４のアミノ酸配列において１若しくは２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号５のアミノ酸配列において１若しくは２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、
    ｂ１−２）配列番号１５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号１６のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号１７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、
    ｂ１−３）配列番号１５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号２４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号２５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、若しくは
    ｂ１−４）配列番号２１のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号２２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号１７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
    を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号３５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号３６のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｃ１）配列番号７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号３９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号４０のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｄ１）配列番号１１のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号１２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号１３のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号４２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号４０のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｅ１）配列番号１５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号１９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号１７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号４５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号３６のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｆ１−１）配列番号２１のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号２２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号１７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、若しくは
    ｆ１−２）配列番号３のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
    を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号３５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号４７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｇ１）配列番号３１のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号３２のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号２９のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号３５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号５０のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；若しくは

    ｈ１）配列番号５６のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号５７のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号５８のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号５４のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号５５のアミノ酸配列において１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
    を含むＮａｖ１．７に結合するモノクローナル抗体又はその抗体断片。
  2. ａ１）配列番号２７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｂ１−１）配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、
    ｂ１−２）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、
    ｂ１−３）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、若しくは
    ｂ１−４）配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
    を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号３６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｃ１）配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｄ１）配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｅ１）配列番号１５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号３６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｆ１−１）配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３、若しくは
    ｆ１−２）配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
    を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；

    ｇ１）配列番号３１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；若しくは

    ｈ１）配列番号５６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号５７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号５５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
    を含む請求項１記載の抗体又はその抗体断片。
  3. 配列番号５２、５９若しくは６０のアミノ酸配列若しくは
    配列番号５２、５９若しくは６０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
    配列番号５３若しくは６１のアミノ酸配列若しくは配列番号５３若しくは６１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域
    を含む請求項１若しくは２記載の抗体又はその抗体断片。
  4. ａ１−１）配列番号５２のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
    配列番号５３のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
    ａ１−２）配列番号５９のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
    配列番号５３のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；若しくは
    ａ１−３）配列番号６０のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び
    配列番号６１のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
    を含む請求項３記載の抗体又はその抗体断片。
  5. さらに、
    配列番号６２若しくは６３のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域及び
    配列番号６４のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域
    を含む請求項１〜４のいずれかに記載の抗体又はその抗体断片。
  6. 請求項１〜５いずれかに記載の抗体又はその抗体断片を含有する医薬組成物。
  7. 疼痛及び／又は掻痒の治療剤及び／又は予防剤である、請求項６記載の医薬組成物。
  8. 請求項３又は４記載の抗体の重鎖可変領域をコードし、
    さらに請求項５記載の抗体の重鎖定常領域をコードしていてもよいポリヌクレオチド。
  9. 請求項３又は４記載の抗体の軽鎖可変領域をコードし、
    さらに請求項５記載の抗体の軽鎖定常領域をコードしていてもよいポリヌクレオチド。
  10. 請求項８又は９記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
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