JPS63501922A - ４―アンドロステン―３，１７―ジオンまたは１，４―アンドロスタジエン―３，１７―ジオンの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ４−アンドロステン−６，１７−ジオンおよび１−４−アンドロスタジエン−３ ，１７−ジオンの製法本発明は詩求の範囲で特徴づけられた方法に関する。

多数の微生物（そこでたとえばアルスロバクタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　 ）、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉ−ｂａｃｔｅｒｊ、ｕｍ　）、ミクロバク テリウム（Ｍｊ　ｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）。

プロタミノバクタ−（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ　）、バシラス（Ｂａｃ ｉ１’ｌｕｓ　）、ノルカルシア（Ｎｏｒｃａｒｄｉａ　）、ストレプトマイセ ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）のようなものおよび殊にミコバクテリウム） が、天然に存在する３β−ヒドロキシ−Δ５−ステリン（コレステリンまたはシ トステリンのような）を二酸化炭素および水に分解する天然の能力含有しおよび この分解の際中間的に４−アンドロステン−６，１７−ジオンおよび１，４−ア ンドロスタジエン−３，１７−ジオンが形成されることは公知でおる。

禁止剤添加物または突然変異された微生物を用いて、ステリンの分解全１形成さ れた４−アンドロステン−６，１７−ジオンまたは１，４−アンドロスタジエン −３，１７−ジオンの分解が避けられるように導くことができることはさらに公 知でおる（西ドイツ国特許出願公開第１５４３２６９号および同第１５９３３２ ７号明細書ならびに米国特許第３６８４６５７号明細書参照）。

ステリンの側鎖分解が非常に複雑々発酵系で生じおよび全ての、天然のステロイ ドの側鎖分解で共作用する酵素が、この化合物の側鎖分解も生じる能力を有す知 条件下にα−シトステリンの側鎖も分解されることは当業者にとって驚異的であ る。さらにこの分解の際α−シトステリンのΔ７−二ｌ結合が水素化しおよび４ α−位に存在するメチル基が分離されることは期待されなかった。

他の出発物質の使用全除外して、本発明による方法は、ステリンの公知微生物学 的側鎖分解反応でも適用するのと同じ発酵条件下に実施される。

本発明によシ発酵は通常ステリンの側鎖分解のために使用する、微生物培養の使 用下に実施する。好適な培養はたとえばステリンの側鎖分所のために可能な、ア ルスロバクタ−、ブレビバクテリウム、ミクロバクテリウム、プロタミノバクタ −、ストレプトマイセスの類または殊にミコバクテリウムの類の微生物培養であ る。好適な微生物としてたとえば次のものが挙げられる：ミクロバクテリウム　 ラクトラム（Ｍｊｃｒｏｂａｃ−ｔｅｒｉｕｍ　ｌａｃｔｕｍ　）　ＩＡＭ　− １６４０、グロタミノバクター　ア／Ｉ／す７ラブス（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａ ｃｔｅｒ　ａｌｂｏｆｌａｖｕｓ）ＩＡＭ　−１０４０、バシラス　ロゼウス（ Ｂａｃｉｌ’ｌｕｇｒｏｓｅｕｇ　）　ＩＡＭ　−１２５７、バシラス　スフエ リカスＣＢａｃｉｌｌｕｓ　５ｐｈＫｒｉｃｕｓ　）　ＡＴＣＣ−７０５５、ノ ルカルブイア　ガルドネリ（Ｎｏｒｃａｒｄｊａ　ｇａｒｄｎｅｒｉ　）　ＩＡ Ｍ　−１０５、ノルカルブイア　ミニ？　（Ｎｏｒｃａｒｄｉａ　ｍｉｎｉｍａ ）ｘＡＭ−６７４、ノルカルブイア　コラリナ（Ｎｏｒｃａｒ−ｄｉａ　ｃｏｒ ａｌｌｉｎａ　）　ＩＦＯ−３３３３、ストレプトマイセス　ルベセンス（Ｓｔ ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｒｕｂｅｓｃａｎｓ　）　ＩＡＭ　−７４または殊に微 生物ミコバクテリウム　アビウム（Ｍｙｃｏ’ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｖｊｕｍ 　）　ＩＦＯ−３Ｑ　Ｆ３２、ミコバクテリウム　７レイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ ｒｊｕｍ　ｐｈｌｅｉ　）　ＩＦＯ−３１５８、ミコバクテリウム　フレイ（イ ンステイチュート　７ユア　グズント　ハイツベーゼン（Ｉｎ５ｔｉ−ｔｕｔ　 ｆｕｒ　Ｇｅｓｕｎｄｈｅｉｔｓｗｅｓｅｎ　）、ブタペストＮｒ、２９）、ミ コバクテリウム　フレイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｐｈｌｅｉ　）ＡＴＣ Ｃ−３５４、ミコバクテリウム　スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　 ｓｍｅｇｍａｔｉｓ　）　ＩＦＯ−３Ｑ　３４、ミコバクテリウム　スメグマチ ス　ＡＴＣＣ−２０、ミコ７マクテリウム　スメグマチス（インステイチュート 　７ユア　デズントハイツ　ベーゼン、ブタペス）Ｎｒ。

２７Ｌ　ミコバクテリウム　スメグマチス　ＡＴＣＣ−１９９７９およびミコバ クテリウム　フォルトウィトラム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｊｕｍ　ｆｏｒｔｕｉ ｔｕｍ　）　ＣＢＳ　−４９５，６６゜微生物としてミコバクテリウム　スペッ ク。

（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　５ｐｅｃ、　）　ＮＲＲＬ＋　Ｂ　−３８０５ 、ミコバクテリウム　スペック、　ＮＲＲＬ　Ｂ　−３６β、３、ミコバクテリ ウム　フレイ　ＮＲＲＬ　Ｂ　−８１５４およびミコバクテリウム　フォルトウ ィトラム　ＮＲＲＬ　Ｂ　−８１５６が特に有利でア夛、その使用でα−シトス テリンが付加的な９α−ヒドロキシ化を阻止する禁止剤の使用なしに実施される 。

この微生物のために通常使用される培養条件下に、好適な栄養培体中脱気下に液 中培養で培養される。その後培養に基質を（好適な溶剤中に溶解されるかまたは 特に乳化形で〕添加しおよび最高基質変換が達成されるまで、発酵する。

好適な基質溶剤はたとえばメタノール、エタノール、グリコールモノメチルエー テル、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである。基質の乳化は たとえば、この微細にされた形でまたは水と混合可能な溶剤（メタノール、エタ ノール、アセトン、グリコールモノメチルエーテル、ジメチルホルムアミドまた はジメチルスルホキシド）に溶解されて、通常の乳化助剤を含有する（特にカル クを除去された）水中強い攪流下にノズルで入れることによシ生じる。好適な乳 化助剤はたとえばエチレンオキシ付加物またはポリグリコールの脂肪酸エステル のような非イオン乳化剤である。好適な乳化剤として市販の湿潤剤ナイン（Ｔ＋ ４ｉｎ　）”、トウイー：／（Ｔｗｅｅｎ　）”および２　／ｆ　７（５ｐａｎ 　）（ＲＪがたとえば挙げられる。最適の基質濃度、基質添加時間および発酵時 間は使用される基質の構造および使用される微生物の種類に依存する。この大き さは、微生物学的ステロイド変換の際一般に必要であるように、個々の場合、当 莱者によく知られている予備試験により確かめられねばならない。

不発明による方法により製造できる一般式Ｉの４−アンドロステン−６，１７− ジオン−誘導体は公知のように、薬学作用性ステロイドの合成のために今日営業 聞に使用される、価値の高い中間生成物である。

次の実施例で本発明による方法を詳述する。

例　１ １係　酵母抽出物 ０．４５　％　リン酸水素二ナトリウム０−３４　％　リン酸二水素カリウムお よび−−６，７に調節− を含有する滅菌栄養媒体５００μに有する２を一エルレンマイヤーフラスコが、 ミコバクテリウム　スペック、Ｉ　ＮＲＲＬ　Ｂ　−３８０５−乾燥培養の懸濁 液を接種さｎおよび６０℃で６日間１公当９１９０回転で去とうされる−０ ２．５％　コーンスチープリカー ０．３％　リン酸水素二アンモニウム ０．２５％　大豆粉宋および ０．２５係　トウイーン１（゛卸８□０−−ＬＯ［調節− を含有する、そのつと１００＃ｌＡ滅菌栄養媒体を有する１０エルレンマイヤー フラスコ＜、ｓｏｏｍｔ）がｔのつどミコバクテリウム　スペック−培養＄　＄ 　５　ｒｎｔ、で接種されおよび６０°Ｃで２４時間にわたって１分当り２２０ 回転で振とうされる。その後各々の培養にジメチルホルムアミド６、Ｏｎに溶解 されたα−シトステリン１００ｍ９に添加しおよび３０°Ｃでざらに９６時間ｚ ｚｘｙ発酵させる。

一つにされた培養を塩化エチレンで抽出し、抽出物を真空中で濃縮し、残渣ヲシ リカグル力ラムを介してクロマトグラフィーにより精製しおよびジインプロピル エーテルからの再結晶後、４−アンドロステン−６，１７−ジオン１６０ダが得 られる。

同時に未反応のα−シトステリン６８５ｍＱか回収さ例１の条件下、しかしミコ バクテリウム　スペック。

ＮＲＲＬ　Ｂ　−３６８３の使用下に全部で１０００＋＋＋９のα−シトステリ ンが反応、後処理されおよび未反応のα−シトステリン６３０■と同時に１，４ −アンドロスタジエン−６，１７−ジオン１４０■が得られる。

閑際調査報告 ＡＮＮＥＸ　Ｔｏ　−’！４Ｅ　ｒＮＴＥＲＮＡτｌ０ＮＡＬ　５ＥＡＲＣＨＲ Ｅ：’ＯＲＴ　０ＮＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ　ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ　Ｎ ｏ、　ＰＣＴ／ＤＥ　８６１００５０８　（ＳＡ　１５５３３）ＵＳ−Ａ−３６ ８４６５７１５１０８／７２　（、Ｂ−Ａ−１３２７８８８２２１０８／７３Ｇ Ｂ−Ａ−１３２９３８７０５１０９／７３　１ＪＳ−Ａ−３７５９７９１１８１ ０９／７３

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. １．一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中■は単結合または二重結合を表わす〕の４−アンドロステン−３，１７− ジオンおよび１，４−アンドロスタジエン−３，１７−ジオンの製法において、 α−シトステリン： ▲数式、化学式、表等があります▼ をステリンの側鎖分解が可能な微生物種類の培養で発酵することを特徴とする、 ４−アンドロステン−３，１７−ジオンおよび１−４−アンドロスタジエン−３ ，１７−ジオンの製法。
2. ２．α−シトステリンをステリンの側鎖分解が可能な、ミコバクテリウムまたは ノルカルディアの種類の微生物種類の培養で発酵する、請求の範囲第１項記載の ４−アンドロステン−３，１７−ジオンおよび１，４−アンドロスタジエン−３ ，１７−ジオンの製法。
3. ３．α−シトステリンをミコバクテリウム　スペック、ＮＲＲＬＢ−３８０５、 ミコバクテリウム　スペック、ＮＲＲＬＢ−３６８３、ミコバクテリウム　フレ イ　ＮＲＲＬＢ−８１５４またはミコバクテリウムフオルトウイトウム　ＮＲＲ ＬＢ−８１５３で発酵する、請求の範囲第１項または第２項記載の４−アンドロ ステン−３，１７−ジオンおよび１，４−アンドロスタジエン−３，１７−ジオ ンの製法。