JPS5959622A - ア−モンド、アンズ又はニワウメの種子から得られる生物活性蛋白質 - Google Patents
ア−モンド、アンズ又はニワウメの種子から得られる生物活性蛋白質Info
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- JPS5959622A JPS5959622A JP57170439A JP17043982A JPS5959622A JP S5959622 A JPS5959622 A JP S5959622A JP 57170439 A JP57170439 A JP 57170439A JP 17043982 A JP17043982 A JP 17043982A JP S5959622 A JPS5959622 A JP S5959622A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、アーモンド、アンス又はニワウメの種子から
得られる生物活性蛋白質に関する。
得られる生物活性蛋白質に関する。
本発明者等は、桃の種子が漢方医学において餅血の積滞
による経閉、４′Ｊ撲傷による役向の瘍痛。
による経閉、４′Ｊ撲傷による役向の瘍痛。
産後の餅血が停滞してしこシのある痛み、その他血行不
順による関節痛などに応用されていることに着目し、そ
の有効成分について研究を行った結果、その水抽出部分
から抗炎症、鎮痛及びウロキナーゼ活性化作用を有する
蛋白質を見出し特許出願を行った（特願昭５７−５５７
６５ ）。
順による関節痛などに応用されていることに着目し、そ
の有効成分について研究を行った結果、その水抽出部分
から抗炎症、鎮痛及びウロキナーゼ活性化作用を有する
蛋白質を見出し特許出願を行った（特願昭５７−５５７
６５ ）。
今回、本発明者等は、桃に近縁の種であるアーモンド、
アンス及びニワウメの種子にも類似の生物活性を有する
蛋白質が存在することを想定し、鋭意研究を行い、これ
らの種子から該当する蛋白質を見出しだ。従来これらの
種子に生物活性を有する蛋白質が含まれていることは何
ら知られていない。本発明者等は、更に研究を行い発明
を完成した。
アンス及びニワウメの種子にも類似の生物活性を有する
蛋白質が存在することを想定し、鋭意研究を行い、これ
らの種子から該当する蛋白質を見出しだ。従来これらの
種子に生物活性を有する蛋白質が含まれていることは何
ら知られていない。本発明者等は、更に研究を行い発明
を完成した。
本発明の蛋白質はすべて、無定形白色粉末の状態及び水
溶液の状態で安定であって、下記第１表に示した理化学
的性質を有する。尚、以下において、アーモンドから得
られる蛋白質のうち１ｖ５分子量のものをＰＲ−ＡＡ、
低分子量のものをＰＲ−ＢＡ、同様にアンスから得られ
る蛋白質をＰＲ−ＡＢ 、 ＰＲ−ＢＢニワウメから得
られる蛋白質をＰＲ−ＡＣ、ＰＲ−ＢＣと呼ぶ。
溶液の状態で安定であって、下記第１表に示した理化学
的性質を有する。尚、以下において、アーモンドから得
られる蛋白質のうち１ｖ５分子量のものをＰＲ−ＡＡ、
低分子量のものをＰＲ−ＢＡ、同様にアンスから得られ
る蛋白質をＰＲ−ＡＢ 、 ＰＲ−ＢＢニワウメから得
られる蛋白質をＰＲ−ＡＣ、ＰＲ−ＢＣと呼ぶ。
３Ｑ、’、 ！・ 刺 白）
第 １ 表
＊１ ゲルｐ過法により測定
＊ＺＫＢｒ法
第１表（続き）
＊３ 水溶液中で測定
本発明の蛋白質は強い抗炎症作用及び鎮痛作用を有して
いるので、抗炎症剤として有用であり、また脳血４〜・
心筋梗塞症の治療剤としても期待される。
いるので、抗炎症剤として有用であり、また脳血４〜・
心筋梗塞症の治療剤としても期待される。
次に本発明の蛋白質の生物活性試験結果を示す。
（１）抗炎症作用
Ｗｉｎｔｅｒらの方法（Ｐｒｏｃ、 Ｓｏｃ、 ＩＥｘ
ｐ、 Ｂｉｏｌ、 Ｍｅｄ。
ｐ、 Ｂｉｏｌ、 Ｍｅｄ。
１１１５４４（１９６２））に準じて行った。ウィスタ
ー系雄性ラット（体重１００〜１４０ｙ）に被検物質溶
液を静脈内泊射し、その１時間後に１％カラゲーニン溶
液０． ＋−ｍｅをラットの足跋；：皮下に注入した。
ー系雄性ラット（体重１００〜１４０ｙ）に被検物質溶
液を静脈内泊射し、その１時間後に１％カラゲーニン溶
液０． ＋−ｍｅをラットの足跋；：皮下に注入した。
カラゲーエン注射２時間後及び３時間後に発生した浮腫
の容積を測定し、次式により浮腫抑制率を求めた。
の容積を測定し、次式により浮腫抑制率を求めた。
尚、コントロールには１群８〜１６四のラノ］・を用い
た。結果を第２表に示す。
た。結果を第２表に示す。
第 ２ 表
＊５％、＊＊１％の危険率でコントロール群に比べて有
意の差が認められた。
意の差が認められた。
（２）鎮痛作用
Ｓ ｉ ｅｇｍｕｎｄらの方法（Ｐｒｏｃ、 Ｓｏｃ、
’ＥＸＩ）、 Ｂｉｏｌ。
’ＥＸＩ）、 Ｂｉｏｌ。
Ｍｅｄ、 ９５． ７２９ （１，９５７））に準じて
行った。
行った。
ｄｄ −Ｎ系雌性マウスに被検物質を静脈内注射し、そ
の３０分後に０．０３％フェニルキノン溶液（０５％エ
タノール溶液）体重１０ｙあたり０．１ｍｅを腹腔内に
注射した。フェニルキノン注射５分後から１５分間にわ
たシライジングの数を開側し、コントロール群に対する
抑制率を求めた。
の３０分後に０．０３％フェニルキノン溶液（０５％エ
タノール溶液）体重１０ｙあたり０．１ｍｅを腹腔内に
注射した。フェニルキノン注射５分後から１５分間にわ
たシライジングの数を開側し、コントロール群に対する
抑制率を求めた。
尚、コントロールには１群１７〜１９匹のマウスを用い
た。結果を第３表に示す。
た。結果を第３表に示す。
第 ３ 表
第３表（続き）
＊５％、＊＊１％の危険率でコントロール群に比べて有
意の差が認められた。
意の差が認められた。
（３）急性毒性
ｄｄＮ系雌性マウス（体重２４〜２５ｙ）を一群５匹と
して使用した。被検物質を生理食塩水に溶解し、静脈内
に投与した。青性症状を投与後１週間にわたシ観察しだ
ところ、すべての物質についてＬＤｓｏ値は１６００
（■／Ｋｙ’）以上であった。
して使用した。被検物質を生理食塩水に溶解し、静脈内
に投与した。青性症状を投与後１週間にわたシ観察しだ
ところ、すべての物質についてＬＤｓｏ値は１６００
（■／Ｋｙ’）以上であった。
このように、本発明の蛋白質は極めて安全性が高い。
本発明の蛋白質を製造する方法は、アーモンド、アンズ
又はニワウメの種子のいずれかを水で抽出し、■抽出液
を透析又は限外濾過し、その内液からクロマトグラフィ
ーによって２種の蛋白質を分離、精製するか、■抽出液
に親水性有機溶媒を加えて生じた沈殿から高分子量の蛋
白質を、上澄液から低分子量の蛋白質を得ることからな
る。
又はニワウメの種子のいずれかを水で抽出し、■抽出液
を透析又は限外濾過し、その内液からクロマトグラフィ
ーによって２種の蛋白質を分離、精製するか、■抽出液
に親水性有機溶媒を加えて生じた沈殿から高分子量の蛋
白質を、上澄液から低分子量の蛋白質を得ることからな
る。
アーモンド、アンズ又はニワウメの種子としては、世界
中いずれで栽培されたものをも用いることができる。新
鮮なもの又は２，３年保存したものが望捷しい。
中いずれで栽培されたものをも用いることができる。新
鮮なもの又は２，３年保存したものが望捷しい。
種子を直径２〜５票屑程度に刻み、直接水で抽出しても
よいが、種子をミキサーで粗砕し、親油性有機溶媒（例
えば、アセトン、エーテル、ｎ−へキサン、石油エーテ
ル等）で予め脱脂し、粉砕して細末状となし、水で抽出
する方が収率が高く、好ましい。
よいが、種子をミキサーで粗砕し、親油性有機溶媒（例
えば、アセトン、エーテル、ｎ−へキサン、石油エーテ
ル等）で予め脱脂し、粉砕して細末状となし、水で抽出
する方が収率が高く、好ましい。
抽出は温度１０〜６０℃、好ましくは室温で、１攪拌し
ながら又はせずに１〜５時間行う。抽出温度が高すぎる
と、種子中に共存する不要物質の抽出量が増えるととも
に、２種の蛋白質が失活する場合がある。特に夏期に室
温で、抽出に時間をかけ過ぎると、抽出混合物が発酵す
ることもある。
ながら又はせずに１〜５時間行う。抽出温度が高すぎる
と、種子中に共存する不要物質の抽出量が増えるととも
に、２種の蛋白質が失活する場合がある。特に夏期に室
温で、抽出に時間をかけ過ぎると、抽出混合物が発酵す
ることもある。
抽出の際、水と種子粉末とのＭ滑、Ｉ’Ｌ； ｌ’ｊ、
’特に限定はないが、後の処理を考慮すると、４〜６：
１が好ましい。
’特に限定はないが、後の処理を考慮すると、４〜６：
１が好ましい。
抽出液を透析又は限外デ過し、次いでクロマトグラフィ
ーを用いる方法■は、以下の通りである。
ーを用いる方法■は、以下の通りである。
透析は通常行われる方法でよく、例えば、ダイスキング
０セルロースチユーブ２０／３２型（アメリカ、ダイス
キング社製）等の透析チューブを用い得る。
０セルロースチユーブ２０／３２型（アメリカ、ダイス
キング社製）等の透析チューブを用い得る。
限外ｆ″過も通常行われる方法でよく、例えば、ダイア
フィルター””Ｇ −０５Ｔ（バイオエンジニアリング
社販売）等の限外ｒ過膜を用いる。
フィルター””Ｇ −０５Ｔ（バイオエンジニアリング
社販売）等の限外ｒ過膜を用いる。
得られた内液から２種の蛋白質をＱｉ 肉１１、精製す
るには、内液を凍結乾燥した後、ゲルｆ」過膜を担体と
するカラムクロマトグラフィー等の常法を用いればよい
。ゲル濾過剤としては、例えば、セファテツクノＧ−１
５〜Ｇ−２００（スウェーデン、ファルマシア社製）、
セファロース０２Ｂ〜６Ｂ（Ｆ１社＆）、七フアクリル
Ｓ−２００又はＳ−３００（同社製）、バイオゲル
Ｉ’−３０〜Ｐ−３００（アメリカ、バイオラド、ラボ
ラトリーズ社製）、バイオゲ／ｌ１０Ａ （同社製）、
ザガバツク０（イキリス、セラバック・ラボラトリーズ
社製）等があけられる。溶出液は水でもよいが、適当な
緩衝液（例えば、ＮａＨ２ＰＯ４−Ｎａ ２ＨＰＯ４％
ＩＩ衝液）を用いる方が、分離精製度が高い。
るには、内液を凍結乾燥した後、ゲルｆ」過膜を担体と
するカラムクロマトグラフィー等の常法を用いればよい
。ゲル濾過剤としては、例えば、セファテツクノＧ−１
５〜Ｇ−２００（スウェーデン、ファルマシア社製）、
セファロース０２Ｂ〜６Ｂ（Ｆ１社＆）、七フアクリル
Ｓ−２００又はＳ−３００（同社製）、バイオゲル
Ｉ’−３０〜Ｐ−３００（アメリカ、バイオラド、ラボ
ラトリーズ社製）、バイオゲ／ｌ１０Ａ （同社製）、
ザガバツク０（イキリス、セラバック・ラボラトリーズ
社製）等があけられる。溶出液は水でもよいが、適当な
緩衝液（例えば、ＮａＨ２ＰＯ４−Ｎａ ２ＨＰＯ４％
ＩＩ衝液）を用いる方が、分離精製度が高い。
このようにして分離、精製された２種の蛋白質は夫々更
に透析し遠心分離し上澄液を凍結乾燥することによって
、緩衝液に含まれる無機物を除き、より精製することが
できる。
に透析し遠心分離し上澄液を凍結乾燥することによって
、緩衝液に含まれる無機物を除き、より精製することが
できる。
ぉＩ上）良りが、ＪＣｊＣ育生落体、を拓えて分離、ｕ
勅す各方送■ｒＪ、味丁のお７に抽出液に親水性有機溶
媒、例えばアセトン、エタノール、メタノール、フロパ
ノール等を３０〜５５ｖ／ｖ％になるように加える。生
じた沈殿には高分子量の蛋白質のみが含まれており、前
述したクロマトグラフィーを同様に用いて精製し、これ
を得ることができる。
勅す各方送■ｒＪ、味丁のお７に抽出液に親水性有機溶
媒、例えばアセトン、エタノール、メタノール、フロパ
ノール等を３０〜５５ｖ／ｖ％になるように加える。生
じた沈殿には高分子量の蛋白質のみが含まれており、前
述したクロマトグラフィーを同様に用いて精製し、これ
を得ることができる。
一方、上澄液には低分子量の蛋白質が含まれておシ、こ
の液にさらに前記と同じ親水性有機溶媒を６０〜８５ｖ
／ｖ％になるように加え、生成した沈殿を同様にクロマ
トグラフィーを用いて精製することによシこれを得るこ
とができる。
の液にさらに前記と同じ親水性有機溶媒を６０〜８５ｖ
／ｖ％になるように加え、生成した沈殿を同様にクロマ
トグラフィーを用いて精製することによシこれを得るこ
とができる。
不法■は、前述の透析又は限外′ＩＩ過を行う方法■に
比し、収率は若干低いが、大；１：に処理できるので、
工業的にはより優れている。
比し、収率は若干低いが、大；１：に処理できるので、
工業的にはより優れている。
本発明を更に詳細に説明するため、以ドに実施例を示す
。
。
実施例１
アーモンドの種子（カリフォルニア産、５００ｙ）をミ
ギザーで粗砕し、アセトン（２，５ｔ）中常温で、時々
攪拌しながら５時間放置後、減圧ｆＩ過により、混合物
から残渣をとり出す。この操作を更に５回くり返し、残
渣を１０時間温風乾燥し、乾燥残渣を粉砕機（ゾルベラ
イザーモデルＡＰ−５．細川鉄工にＫ）で細末（６０〜
２００メツシユ）とした後、アセトンで３回（各２．５
ｔ、 ３時間ずつ）抽出し、残渣をメタノールで２回（
各２．５１．３時間ずつ）抽出し、減圧１遇した。
ギザーで粗砕し、アセトン（２，５ｔ）中常温で、時々
攪拌しながら５時間放置後、減圧ｆＩ過により、混合物
から残渣をとり出す。この操作を更に５回くり返し、残
渣を１０時間温風乾燥し、乾燥残渣を粉砕機（ゾルベラ
イザーモデルＡＰ−５．細川鉄工にＫ）で細末（６０〜
２００メツシユ）とした後、アセトンで３回（各２．５
ｔ、 ３時間ずつ）抽出し、残渣をメタノールで２回（
各２．５１．３時間ずつ）抽出し、減圧１遇した。
こうして得られた脱脂白色残渣に水（１２）を加え、常
温で時々攪拌しながら５時間放置することによう抽出し
、これを遠心分離（５０００ｒ、ｐ、ｍ。
温で時々攪拌しながら５時間放置することによう抽出し
、これを遠心分離（５０００ｒ、ｐ、ｍ。
２０分間）して抽出液と残渣に分け、残１１４ｉ′を水
（３００ｍｆりで洗浄し、洗液を抽出液に合した。
（３００ｍｆりで洗浄し、洗液を抽出液に合した。
この抽出液をヴイスキングセルロースチューブ（２０／
３２型）に入れ、流水下に１昼夜透析した後、透析チュ
ーブ内の液を集め、これを遠心分離して、上澄液と沈殿
に分け、沈殿を水に懸濁させ、これを凍結乾燥して粗Ｐ
Ｒ−ＡＡの白色粉末（４１，２ｙ”ｌを得、上澄液を凍
結乾燥して白色粉末（１１，４ｙ）を得た。上澄液凍結
、：ｉ３燥粉末（３，５ｙ）を０．０２Ｍ−リン酸−す
トリウム−リン酸ニナ、トリウム緩衝液（ｐＨ７，２５
，３５＋＋＋ｆ’）に溶かし、その溶液をセファロース
６１３を充填したカラム（φ６ Ｘ ５Ｑｃｍ）に添加
し、同一緩衝液（１６００＋＋＋ｅ）で溶出し、１０
ｍｅずつ分画し、１３１番から１５０番までの区分を凍
結乾燥し、相ＰＲ−ＢＡの白色粉末（１，４２ｙ’）を
得た。
３２型）に入れ、流水下に１昼夜透析した後、透析チュ
ーブ内の液を集め、これを遠心分離して、上澄液と沈殿
に分け、沈殿を水に懸濁させ、これを凍結乾燥して粗Ｐ
Ｒ−ＡＡの白色粉末（４１，２ｙ”ｌを得、上澄液を凍
結乾燥して白色粉末（１１，４ｙ）を得た。上澄液凍結
、：ｉ３燥粉末（３，５ｙ）を０．０２Ｍ−リン酸−す
トリウム−リン酸ニナ、トリウム緩衝液（ｐＨ７，２５
，３５＋＋＋ｆ’）に溶かし、その溶液をセファロース
６１３を充填したカラム（φ６ Ｘ ５Ｑｃｍ）に添加
し、同一緩衝液（１６００＋＋＋ｅ）で溶出し、１０
ｍｅずつ分画し、１３１番から１５０番までの区分を凍
結乾燥し、相ＰＲ−ＢＡの白色粉末（１，４２ｙ’）を
得た。
これらをさらに精製するだめに、まず粗ＰＲ−ＢＡの粉
末（１，４ｙ）を０．０２Ｍリン酸−ナトリウム−リン
酸二ナトリウム緩衝液（１５ｍｅ、 ｐＨ７，２５）に
溶かし、セファデックスＧ−１００を充填したカラム（
φ３．８ Ｘ ２９ｃｍ）に添加し、同・−緩衝液（３
５０ｍｅ ）で溶出し、７ ｍｅずつ分画し、３１番か
ら４１番までの区分を合せて、透析チューブ（ヴイスキ
ングセルロースチューブ２０／３２ｍ）を得た。このも
のの理化学的及び生物学的特性は前記の通りである。
末（１，４ｙ）を０．０２Ｍリン酸−ナトリウム−リン
酸二ナトリウム緩衝液（１５ｍｅ、 ｐＨ７，２５）に
溶かし、セファデックスＧ−１００を充填したカラム（
φ３．８ Ｘ ２９ｃｍ）に添加し、同・−緩衝液（３
５０ｍｅ ）で溶出し、７ ｍｅずつ分画し、３１番か
ら４１番までの区分を合せて、透析チューブ（ヴイスキ
ングセルロースチューブ２０／３２ｍ）を得た。このも
のの理化学的及び生物学的特性は前記の通りである。
次に粗ＰＲ−ＡＡの粉末（３，０Ｐ）を００２Ｍリン酸
−ナトリウム−リン酸二ナトリウム緩衝液（３０ｍｅＳ
ｐＨ７，２５）に溶解し、セファデックスＧ−１００を
充填し／こカラム（φ５ Ｘ ３ ｉ （Ｊｌｌ ）に
添加し、同一・緩衝液（３００ｍ、ｅ ）で溶出し、Ｓ
ｍｅずつ分画し、３１番から４０番までの区分を合ぜ
て、これを透析チューブ（ダイスキングセルロースチュ
ーブ２０／３２型）に入れ、これを流水下で１昼夜透析
した後、内液を凍結乾燥し、精製１）Ｒ−ＡＡの白色粉
末（１，７４ｙ）を得た。このものの理化学および生物
学的特性は前記の通りである。
−ナトリウム−リン酸二ナトリウム緩衝液（３０ｍｅＳ
ｐＨ７，２５）に溶解し、セファデックスＧ−１００を
充填し／こカラム（φ５ Ｘ ３ ｉ （Ｊｌｌ ）に
添加し、同一・緩衝液（３００ｍ、ｅ ）で溶出し、Ｓ
ｍｅずつ分画し、３１番から４０番までの区分を合ぜ
て、これを透析チューブ（ダイスキングセルロースチュ
ーブ２０／３２型）に入れ、これを流水下で１昼夜透析
した後、内液を凍結乾燥し、精製１）Ｒ−ＡＡの白色粉
末（１，７４ｙ）を得た。このものの理化学および生物
学的特性は前記の通りである。
実施例２
アンプの種子（中国産、５ｏｏｙ）をミキサーで粗砕し
、アセトン（２，５７）中に常温で、時々攪拌しながら
５時間放置後、減圧δｊ過により、混合物から残渣をと
シ出す。この操作を更に５回くり返し、残渣を１０時間
温風乾燥し、乾燥残渣を粉砕機（ゾルベライザーモデル
Ａ Ｐ −Ｓ、細用鉄工ＫＫ ）で細末（６０−ｗ２０
０メッンユ）としだ後、アセトンで３回（各２．５７．
３時間ずつ）抽出し、残渣をメタノールで２回（各２．
５ｔ、３時間ずつ）抽出し、減圧１過しだ。こうして得
られた脱脂白色残渣に水（］ｌ）を加え、常温で時々攪
拌しながら５時間放置することにより抽出し、これを遠
心分離（５０００ｒ、ｐ、ｍ、 ２０分間）して抽出液
と残渣に分け、残〆ｆ「を水（３００ｍｅ ）で洗浄し
、洗液を抽出液に合し／ζ。
、アセトン（２，５７）中に常温で、時々攪拌しながら
５時間放置後、減圧δｊ過により、混合物から残渣をと
シ出す。この操作を更に５回くり返し、残渣を１０時間
温風乾燥し、乾燥残渣を粉砕機（ゾルベライザーモデル
Ａ Ｐ −Ｓ、細用鉄工ＫＫ ）で細末（６０−ｗ２０
０メッンユ）としだ後、アセトンで３回（各２．５７．
３時間ずつ）抽出し、残渣をメタノールで２回（各２．
５ｔ、３時間ずつ）抽出し、減圧１過しだ。こうして得
られた脱脂白色残渣に水（］ｌ）を加え、常温で時々攪
拌しながら５時間放置することにより抽出し、これを遠
心分離（５０００ｒ、ｐ、ｍ、 ２０分間）して抽出液
と残渣に分け、残〆ｆ「を水（３００ｍｅ ）で洗浄し
、洗液を抽出液に合し／ζ。
この抽出液をグイスキングセルロースチューブ（２０／
３２型）に入れ、流水下に１昼夜透析した後、透析チュ
ーブ内の液を集め、これを遠心分前して、上澄液と沈殿
に分け、上澄液を凍結乾燥して白色粉末（５９，０Ｐ
）を得た。この粉末（１０ｙ）を０．．０２ Ｉ＋４リ
ン酸−ナトリウム−リン酸二ナトリウム緩衝液（ｐＨ７
，２５，１００ｎ＋Ｆ）に溶かし、その溶液をセファロ
ース６１３を充填したカラム（φ６ Ｘ ５０ｃ＋ｎ’
）に添加し、同一緩衝液（１５００ｍｌりで溶出し、１
０ ｍｅずつ分画し、８０番から１１０番までの区分及
びｌ ］、 １番から１３５番までの区分をそれぞれ合
せて、別々に凍結乾燥し、前者の区分から粗ＰＲ−ＡＢ
の白色粉末（５，６２ｙ）、後者の区分から白色粉末（
４，１４ｙ）を得た。この後者の白色粉末（４ｙ）を再
度セファロース６Ｂを充填しだカラム（φ６ｘ５０ｃｍ
）に添加し、同一緩衝液（１６００ｍ（’）で溶出し、
１Ｏｒｎｅずつ分画し、１１５番から１４４番までの区
分を合わせて凍結乾燥し、粗ｐ Ｒ−１３ｘ３の白色粉
末（２，２６Ｐ ’）を得た。
３２型）に入れ、流水下に１昼夜透析した後、透析チュ
ーブ内の液を集め、これを遠心分前して、上澄液と沈殿
に分け、上澄液を凍結乾燥して白色粉末（５９，０Ｐ
）を得た。この粉末（１０ｙ）を０．．０２ Ｉ＋４リ
ン酸−ナトリウム−リン酸二ナトリウム緩衝液（ｐＨ７
，２５，１００ｎ＋Ｆ）に溶かし、その溶液をセファロ
ース６１３を充填したカラム（φ６ Ｘ ５０ｃ＋ｎ’
）に添加し、同一緩衝液（１５００ｍｌりで溶出し、１
０ ｍｅずつ分画し、８０番から１１０番までの区分及
びｌ ］、 １番から１３５番までの区分をそれぞれ合
せて、別々に凍結乾燥し、前者の区分から粗ＰＲ−ＡＢ
の白色粉末（５，６２ｙ）、後者の区分から白色粉末（
４，１４ｙ）を得た。この後者の白色粉末（４ｙ）を再
度セファロース６Ｂを充填しだカラム（φ６ｘ５０ｃｍ
）に添加し、同一緩衝液（１６００ｍ（’）で溶出し、
１Ｏｒｎｅずつ分画し、１１５番から１４４番までの区
分を合わせて凍結乾燥し、粗ｐ Ｒ−１３ｘ３の白色粉
末（２，２６Ｐ ’）を得た。
これらをさらに精製するだめに、まず粗１） Ｒ−ＡＢ
の粉末（２ｙ）を０．０２Ｍリン酸−ナトリウム−リン
酸二ナトリウム緩衝液（２０ｍｅ、 ｐＨ７，２５）に
溶かし、セファデックスＧ−１００を充填したカラム（
φ５Ｘ３２Ｃｍ）に添加し、同一緩衝液（３００ｍｅ
）で溶出し、Ｓ ｍｅずつ分画し、３０番から４０番ま
での区分を合せて、透析チューブ（ヴイスキングセルロ
ースチューブ２０／：３２ 型’） Ｋ入れ、これを流
水下で１昼夜透析した後、内液を凍結乾燥し、精製ＰＲ
−ＡＢの白色粉末（Ｊ、３４ｙ）を得た。このものの理
化学的及び生物学的特性は前記の通シである。
の粉末（２ｙ）を０．０２Ｍリン酸−ナトリウム−リン
酸二ナトリウム緩衝液（２０ｍｅ、 ｐＨ７，２５）に
溶かし、セファデックスＧ−１００を充填したカラム（
φ５Ｘ３２Ｃｍ）に添加し、同一緩衝液（３００ｍｅ
）で溶出し、Ｓ ｍｅずつ分画し、３０番から４０番ま
での区分を合せて、透析チューブ（ヴイスキングセルロ
ースチューブ２０／：３２ 型’） Ｋ入れ、これを流
水下で１昼夜透析した後、内液を凍結乾燥し、精製ＰＲ
−ＡＢの白色粉末（Ｊ、３４ｙ）を得た。このものの理
化学的及び生物学的特性は前記の通シである。
次に粗ＰＲ−ＢＨの粉末（２，２ｙ）を０．０２Ｍリン
酸−す）・リウムーリン酸ニナトリウム緩衝液（２２ｍ
ｅ、 ｐＨ７，２５）に溶解し、セファデックスＧ−１
００を充填したカラム（φ５Ｘ３００１１１）に添加し
、同一・緩衝液（６０（ｈ＋＋ｅ）で溶出し２．５ｔす
つ分画し、７５′番から１．０５番捷での区分を合せて
、こレヲ透析チューブ（ダイスキングセルロースチュー
ブ２０／３２型）に入れ、これを流水下で１昼夜透析し
た後、内液を凍結乾燥し、精製ＰＲ−ＢＢの白色粉末（
３４１ｎｗ）をイ；Ｉた。このものの理化学および生物
学的特性は前１．ヒの通りである。
酸−す）・リウムーリン酸ニナトリウム緩衝液（２２ｍ
ｅ、 ｐＨ７，２５）に溶解し、セファデックスＧ−１
００を充填したカラム（φ５Ｘ３００１１１）に添加し
、同一・緩衝液（６０（ｈ＋＋ｅ）で溶出し２．５ｔす
つ分画し、７５′番から１．０５番捷での区分を合せて
、こレヲ透析チューブ（ダイスキングセルロースチュー
ブ２０／３２型）に入れ、これを流水下で１昼夜透析し
た後、内液を凍結乾燥し、精製ＰＲ−ＢＢの白色粉末（
３４１ｎｗ）をイ；Ｉた。このものの理化学および生物
学的特性は前１．ヒの通りである。
実施例３
ニワウメの種子（中国産、５００ｐ）をミキサーで粗砕
し、アセトン（２，５Ａ’）中に常温で、時々攪拌しな
がら５時間放置後、減圧濾過により、混合物から残漬を
とり出す。この操作を更に５回くり返し、残漬を１０時
間温風乾燥し、乾燥残漬を粉砕機（プルベライザーモデ
ルＡＩ）−５゜細円鉄工ＫＫ ）で細末（６０〜２００
メツシユ）とした後、アセトンで３回（各２．５ｔ、３
時間ずつ）抽出し、残渣をメタノールで２回（各２．５
Ａ１３時間ずつ）抽出し、減圧濾過しだ。こうして得ら
れた脱脂白色残渣に水（１１）を加え、常温で時々攪拌
しながら５時間放置することによシ抽出し、これを遠心
労Ｎ（１（５０００ｒ、ｐ、ｍ、 ２０分間）して抽出
液と残渣に分け、残渣を水（３００ｍｅ ）で洗浄し・
。
し、アセトン（２，５Ａ’）中に常温で、時々攪拌しな
がら５時間放置後、減圧濾過により、混合物から残漬を
とり出す。この操作を更に５回くり返し、残漬を１０時
間温風乾燥し、乾燥残漬を粉砕機（プルベライザーモデ
ルＡＩ）−５゜細円鉄工ＫＫ ）で細末（６０〜２００
メツシユ）とした後、アセトンで３回（各２．５ｔ、３
時間ずつ）抽出し、残渣をメタノールで２回（各２．５
Ａ１３時間ずつ）抽出し、減圧濾過しだ。こうして得ら
れた脱脂白色残渣に水（１１）を加え、常温で時々攪拌
しながら５時間放置することによシ抽出し、これを遠心
労Ｎ（１（５０００ｒ、ｐ、ｍ、 ２０分間）して抽出
液と残渣に分け、残渣を水（３００ｍｅ ）で洗浄し・
。
洗液を抽出液に合した。
この抽出液をダイスキングセルロースチューブ（２０／
３２型）に入れ、流水下に１昼夜透析した後、透析チュ
ーブ内の液を集め、これを遠心分離して、上澄液と沈殿
に分け、上澄液を凍結乾燥して白色粉末（３ｓ、４ｙ）
をイＨだ。この粉末（５ｙ）全０．０２Ｍリン酸−ナト
リウムーリン酸二フ−１−リウム緩ｍｊ液（ｐＨ７，２
５，５０ｍｅ ）に溶かし、その溶液をセファロース６
Ｂを充填したカラム（φ６ Ｘ ５０ Ｃ１ｉ ）に添
加し、同一緩衝液（１６００ｍｅ ） テ溶出し、１０
？ＩＬｅずつ分画し、８０番から１１０番までの区分及
び１２１番から１３０番までの区分をそれぞれ合せて、
別々に凍結乾燥し、前者の区分から粗ＰＲ−ＡＣの白色
粉末（３，５９ｙ）、後者の区分から粗ＰＲ−ＢＣの白
色粉末（１，１６ｇ）を得た。
３２型）に入れ、流水下に１昼夜透析した後、透析チュ
ーブ内の液を集め、これを遠心分離して、上澄液と沈殿
に分け、上澄液を凍結乾燥して白色粉末（３ｓ、４ｙ）
をイＨだ。この粉末（５ｙ）全０．０２Ｍリン酸−ナト
リウムーリン酸二フ−１−リウム緩ｍｊ液（ｐＨ７，２
５，５０ｍｅ ）に溶かし、その溶液をセファロース６
Ｂを充填したカラム（φ６ Ｘ ５０ Ｃ１ｉ ）に添
加し、同一緩衝液（１６００ｍｅ ） テ溶出し、１０
？ＩＬｅずつ分画し、８０番から１１０番までの区分及
び１２１番から１３０番までの区分をそれぞれ合せて、
別々に凍結乾燥し、前者の区分から粗ＰＲ−ＡＣの白色
粉末（３，５９ｙ）、後者の区分から粗ＰＲ−ＢＣの白
色粉末（１，１６ｇ）を得た。
これらをさらに精製するために、寸ず粗ＰＲ−ＡＣの粉
末（１，２ｙ）を０．０２Ｍリン酸−ナトリウム−リン
酸二ナトリウム緩衝液（１２ｍｅ、 ｐｉ−１７，２５
’）ノ に溶かし、セファデックスＧ−１００を
充填したカラム（φ３．８ Ｘ２９ ｃｍ ）に添加し
、同一緩衝液（２００２１１ｅ ）で溶出し、７．３
ｔｎｅずつ分画し、１５番から１８番までの区分を合せ
て、透析チューブ（ダイスキングセルロースチューブ２
０／３．２型）に入れ、これを流水下で１昼夜透析した
後、内液を凍結乾燥し、精製ＰＲ−ＡＣの白色粉末（６
６０ｆｎｆ／’）を得た。このものの理化学的及び生物
学的特性は前記の通りである。
末（１，２ｙ）を０．０２Ｍリン酸−ナトリウム−リン
酸二ナトリウム緩衝液（１２ｍｅ、 ｐｉ−１７，２５
’）ノ に溶かし、セファデックスＧ−１００を
充填したカラム（φ３．８ Ｘ２９ ｃｍ ）に添加し
、同一緩衝液（２００２１１ｅ ）で溶出し、７．３
ｔｎｅずつ分画し、１５番から１８番までの区分を合せ
て、透析チューブ（ダイスキングセルロースチューブ２
０／３．２型）に入れ、これを流水下で１昼夜透析した
後、内液を凍結乾燥し、精製ＰＲ−ＡＣの白色粉末（６
６０ｆｎｆ／’）を得た。このものの理化学的及び生物
学的特性は前記の通りである。
次に相ＰＲ−ＢＣの粉末（１，１ｙ ）を００２Ｍリン
酸−ナトリウム−リン酸二ナトリウム緩衝液（１１、ｍ
ｅ、 ｐＨ７，２５）に溶解し、セフ ７ チック７、
Ｇ −１００を充填したカラム（φ３．８Ｘ２３ｃｍ
）に添加し、同一緩衝液（３００ｍｅ ）で溶出し、６
．５７ｎｅずつ分画し、２７番から４２番までの区分を
合せて、これを透析チューブ（ダイスキングセルロース
チューブ２０／３２型）に入れ、これを流水下で１昼夜
透析した後、内液を凍結乾燥し、精製ＰＲ−ＢＣの白色
粉末（２１０ｆｆ１ｇ）を得た。このものの理化学およ
び生物学的特性は前記の通りである。
酸−ナトリウム−リン酸二ナトリウム緩衝液（１１、ｍ
ｅ、 ｐＨ７，２５）に溶解し、セフ ７ チック７、
Ｇ −１００を充填したカラム（φ３．８Ｘ２３ｃｍ
）に添加し、同一緩衝液（３００ｍｅ ）で溶出し、６
．５７ｎｅずつ分画し、２７番から４２番までの区分を
合せて、これを透析チューブ（ダイスキングセルロース
チューブ２０／３２型）に入れ、これを流水下で１昼夜
透析した後、内液を凍結乾燥し、精製ＰＲ−ＢＣの白色
粉末（２１０ｆｆ１ｇ）を得た。このものの理化学およ
び生物学的特性は前記の通りである。
第１図はＰＲ−ＡＡの、第２図はＰＲ−ＢＡの、第３図
はＰＲ−ＡＢの、第ＡＰＲ−ＢＢの、第５図はＰＲ−Ａ
Ｃの、第６図はＰ Ｒ＝ Ｂ Ｃの赤外線吸収スペクト
ルを表わす。 第７図はＰＲ−ＡＡの、第８図はＰＲ−ＢＡの、第９図
はＰＲ−ＡＢの、第１０図はＰ Ｒ−Ｂ １３の、第１
１図はＰＲ−ＡＣの、第１２図はＰＲ７ＢＣの紫外線吸
収スペクトルを表わす。 特許出願人 大日本製薬株式会社 代理人 小 島 −晃 第８図 第９図 波長 第１０図 −；Ｉｊ、長 第１１図 手 続 補 １ト 書（方式）（自発）１、事
件の表示 昭和５７年特許願第 １７０４３９ 号２発明の名称 アーモンド、アンプ又はニヮウメの種子からイＨられる
生物活性蛋白質 ３補正をする者 事件との関係 特許出願人 ５、補正の対象 明細書丸び゛し１昂ノ ロ、補正の内容 別紙のとおり明細書のタイプ浄書’Ｂ−’ｊ ’ＩＬｈ
）のｊ子名（内容に変更なし） （以 −に ） 手 続 −山 （Ｆ 針（自発）１事件の表示 昭和５７年特許願第 １７０４３９号 ２発明の名称 生物活性蛋白質 ３補ＩＥをする者 事件との関係 特許出願人 住ｔｙｒ 大阪市東区道修町３丁月２５番地名称 ２
９１ 大日本製薬株式会社 代Ｗ″１″没藤原冨男 社 長 ４代理人 ５、補旧の対象 明細１書の「発明の名称−］の欄 ６、補正の内容 明細書第１頁の発明の名称の欄に１−アーモンド、アン
ズ又はニフウメから得られる生物活性蛋白り４」とある
のを、願１に記１１アのとおり「アーモンド、ア／ズ又
はニワウメの種子から得られる生物活性蛋白質」と補正
する。 以上
はＰＲ−ＡＢの、第ＡＰＲ−ＢＢの、第５図はＰＲ−Ａ
Ｃの、第６図はＰ Ｒ＝ Ｂ Ｃの赤外線吸収スペクト
ルを表わす。 第７図はＰＲ−ＡＡの、第８図はＰＲ−ＢＡの、第９図
はＰＲ−ＡＢの、第１０図はＰ Ｒ−Ｂ １３の、第１
１図はＰＲ−ＡＣの、第１２図はＰＲ７ＢＣの紫外線吸
収スペクトルを表わす。 特許出願人 大日本製薬株式会社 代理人 小 島 −晃 第８図 第９図 波長 第１０図 −；Ｉｊ、長 第１１図 手 続 補 １ト 書（方式）（自発）１、事
件の表示 昭和５７年特許願第 １７０４３９ 号２発明の名称 アーモンド、アンプ又はニヮウメの種子からイＨられる
生物活性蛋白質 ３補正をする者 事件との関係 特許出願人 ５、補正の対象 明細書丸び゛し１昂ノ ロ、補正の内容 別紙のとおり明細書のタイプ浄書’Ｂ−’ｊ ’ＩＬｈ
）のｊ子名（内容に変更なし） （以 −に ） 手 続 −山 （Ｆ 針（自発）１事件の表示 昭和５７年特許願第 １７０４３９号 ２発明の名称 生物活性蛋白質 ３補ＩＥをする者 事件との関係 特許出願人 住ｔｙｒ 大阪市東区道修町３丁月２５番地名称 ２
９１ 大日本製薬株式会社 代Ｗ″１″没藤原冨男 社 長 ４代理人 ５、補旧の対象 明細１書の「発明の名称−］の欄 ６、補正の内容 明細書第１頁の発明の名称の欄に１−アーモンド、アン
ズ又はニフウメから得られる生物活性蛋白り４」とある
のを、願１に記１１アのとおり「アーモンド、ア／ズ又
はニワウメの種子から得られる生物活性蛋白質」と補正
する。 以上
Claims (3)
- （１） アーモンドの種子を水で抽出して得られる分
子量３０万〜３５万を有する生物部４４１“蛋白質ＰＲ
−ＡＡ及び分子量１万〜Ｌ５″１５を有する生物活性蛋
白質ＰＲ−ＢＡ０ - （２） アンスの種子を水で抽出して得られる分子量
２５万〜３５万を有する生物活性蛋白質Ｐ Ｒ−Ａ Ｂ
及び分子量１万〜３万を有する生物活性蛋白質Ｒ−ＢＢ
０ - （３） ニワウメの種子を水で抽出して得られる分子
量２５万〜３５万を有する生物活性蛋白質ＰＲ−ＡＣ及
び分子量１万〜１．５万を有する生物活性蛋白質ＰＲ−
ＢＣ８
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57170439A JPS5959622A (ja) | 1982-09-28 | 1982-09-28 | ア−モンド、アンズ又はニワウメの種子から得られる生物活性蛋白質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57170439A JPS5959622A (ja) | 1982-09-28 | 1982-09-28 | ア−モンド、アンズ又はニワウメの種子から得られる生物活性蛋白質 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5959622A true JPS5959622A (ja) | 1984-04-05 |
Family
ID=15904934
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57170439A Pending JPS5959622A (ja) | 1982-09-28 | 1982-09-28 | ア−モンド、アンズ又はニワウメの種子から得られる生物活性蛋白質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5959622A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1036279A (ja) * | 1996-07-18 | 1998-02-10 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | 植物抽出物含有線維芽細胞増殖促進剤 |
-
1982
- 1982-09-28 JP JP57170439A patent/JPS5959622A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1036279A (ja) * | 1996-07-18 | 1998-02-10 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | 植物抽出物含有線維芽細胞増殖促進剤 |
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