JPH0725786A - アルツハイマー病を伴うアミロイドーシスの治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 細胞間神経原繊維タングル及び細胞外アミロ
イド プラ−ク中に存在するタンパク質のリン酸化を制
御する方法において、有効量のキナ−ゼモジュレ−タ、
又はホスファタ−ゼモジュレ−タを導入することを含
み、モジュレ−タがタンパク質のタンパク質分解プロセ
ッシングの速度を増加、又は減少させることができるこ
とを特徴とする方法。 【効果】 アルツハイマー病の治療に有効な方法が提供
される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の分野】本発明はアルツハイマ−病を伴うアミロ
イド−シスを、哺乳類のタンパク質のリン酸化を制御す
る又はそれに影響する少なくとも１種類の薬剤を患者に
有効量投薬することにより治療する方法に関する。

【０００２】

【発明の背景】アルツハイマ−病（ＡＤ）はタンパク質
のリン酸化の異常、及びタンパク質の異化の変化を特徴
とする脳の異常である。いくつかの研究所の研究による
とタンパク質のリン酸化の変化はアルツハイマ−病に見
られる細胞間神経原繊維のタングルの形成に関連する。
しかしβ／Ａ４タンパク質前駆体（βＡＰＰ）の異化に
おけるタンパク質リン酸化に関する役割は示されていな
い。

【０００３】アルツハイマ−病は老人痴呆の最も普通な
ひとつの原因である。アルツハイマ−病にかかった固体
の特徴は進行性記憶障害、言語及び視界技能の消失、及
び行動欠損である。アルツハイマ−病にかかった固体の
認識障害は、大脳皮質、アンモン角、第１前脳、及び脳
の他の領域の神経細胞の退化の結果である。解剖によっ
て得たアルツハイマ−病脳の組織学的分析によると、退
化したニュ−ロンの核周囲部及び軸索突起に神経原繊維
タングル、感染脳領域のいくらかの血管の内部及び回り
に細胞外神経性（老人性）プラ−ク及びアミロイド プ
ラ−クが存在する。神経性プラ−クは退化神経の末端
（軸索及び樹状）に位置し、アミロイドタンパク質繊維
のコア化合物を含む。脳管アミロイドタンパク質物質は
脳脊髄膜及び大脳皮質の血管に存在する（Ｇｌｅｎｎｅ
ｒ 及びＷｏｎｇ，１９８４，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１２０：８８５−
８９０；Ｇｌｅｎｎｅｒ 及びＷｏｎｇ，１９８４，Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，１２２：１１３１−１１３５；Ｗｏｎｇ等，１９
８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．
Ｓ．Ａ．，８２：８７２９−８７３２）。

【０００４】アルツハイマ−病の病理学の中心的特徴は
プラ−ク内へのアミロイドタンパク質の沈着である。４
ｋＤａアミロイドタンパク質（Ａ４（ＡＰＣ，β−アミ
ロイド又はＢＡＰ）とも言われる）は染色体２１上にあ
る遺伝子によりコ−ドされる、より大きいアミロイド前
駆体（ＡＰＰ）の先端を切断した形態である（Ｇｏｌｄ
ｇａｂｅｒ等，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：８
７７−８８０；Ｋａｎｇ等，１９８７，Ｎａｔｕｒｅ，
３２５：７３３−７３６；Ｊｅｎｋｉｎｓ等，１９８
８，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ
ｍｕｎ．，１５１：１−８；Ｔａｎｚｉ等，１９８７，
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：８８０−８８５）。

【０００５】要約するとアルツハイマ−病は、主に細胞
骨格タンパク質から成る細胞間神経原繊維タングル、及
び細胞外実質性ならびに脳管アミロイドを含むある種の
神経病理学的特徴により特性づけられる（Ｋａｔｚｍａ
ｎ，Ｒ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔ ｏｆ
Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
生化学的にアルツハイマ−病はタンパク質のリン酸化に
おける変化により特徴づけられる。神経原繊維タングル
の二成分、すなわち神経原繊維に存在する微小管結合タ
ンパク質タウ及び神経繊維タンパク質が異常にリン酸化
される（おそらくカルシウム／カルモジュリン依存タン
パク質キナ−ゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）により）（Ｓｔｅ
ｒｎｂｅｒｇｅｒ，Ｎ．Ｈ．，Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅ
ｒ，Ｌ．Ａ．及びＵｌｒｉｃｈ，Ｊ．，（１９８５），
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．
Ａ．，８２：４２７４及びＦｌａｍｅｎｔ，Ｓ．及びＤ
ｅｌａｃｏｕｒｔｅ，Ａ．，（１９８９），ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ．，２４７：２１３）。タンパク質キナ−ゼＣ
（ＰＫＣ）の活性は、アルツハイマ−病、家族性アルツ
ハイマ−病、及びダウン症候群患者からの繊維芽球にお
けると同様にアルツハイマ−病脳においても減少するこ
とが報告されている（Ｃｏｌｅ，Ｇ．，Ｄｏｂｋｉｎ
ｓ，Ｋ．Ｒ．，Ｈａｕｓｅｎ，Ｌ．Ａ．，Ｔｅｒｒｙ，
Ｒ．Ｄ．及びＳａｉｔｏｈ，Ｔ．，（１９８８），Ｂｒ
ａｉｎ Ｒｅｓ．，４５２：１６５−１７４及びＨｕｙ
ｈｎ，Ｔ．Ｖ．，Ｃｏｌｅ，Ｇ．，Ｋａｔｚｍａｎ，
Ｒ．，Ｈａｕｎｇ，Ｒ．−Ｐ．及びＳａｉｔｏｈ，Ｔ．
（１９８９），Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．，４６：１１
９５−１１９９）。細胞質ゾル６０ｋＤａリンタンパク
質は、アルツハイマ−病脳において標準の二倍の濃度で
存在すると報告されている（Ｓａｉｔｏｈ，Ｔ．及びＤ
ｏｂｋｉｎｓ，Ｋ．Ｒ．（１９８６），Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８３：９７６４−９７６
７）。

【０００６】脳のプラ−ク及び脳管アミロイドの主要成
分であるβ／Ａ４タンパク質は、巨大膜貫通型タンパク
質、β／Ａ４アミロイド前駆体タンパク質、又はβＡＰ
Ｐから誘導される。βＡＰＰは３種類の主要イソフォ−
ム、βＡＰＰ₆₉₅、βＡＰＰ₇₅₁及びβＡＰＰ₇₇₀から成
り、これらは異なるスプライシングから生じ、その一次
配列の長さによ表されている。このタンパク質はリンタ
ンパク質であり、すでにアルツハイマ−病を伴うリン酸
化の変化はタングルタンパク質に影響するばかりでな
く、βＡＰＰの代謝をも変え、おそらくβＡ４の堆積を
生ずるのであろうということが提唱されている（Ｇａｎ
ｄｙ等，（１９８８），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：６２１８）。

【０００７】βＡＰＰ膜貫通型及び細胞質ドメインの有
力なリン酸化部位に対応する合成ペプチドを用いて、こ
のペプチドがＰＫＣ又はＣａＭ Ｋ ＩＩに非常に有効
な基質であることがすでに示された。βＡＰＰの推定上
のＰＫＣリン酸化部位はタンパク質の膜貫通型／細胞質
の境界と予想される位置から７残基上にあり、上皮成長
因子受容体及びインタ−リュ−キン−２の両方に存在す
るＰＫＣ−リン酸化部位と類似している。これらの部位
におけるＰＫＣによるこれら二受容体のリン酸化ではこ
れらをインタ−ナリゼ−ションの的としている。同様
に、βＡＰＰのリン酸化もそのインタ−ナリゼ−ション
及び異化を制御する。

【０００８】

【発明の要約】本出願人は、モデル系としてＰＣ１２ラ
ットの褐色細胞腫細胞を用いてタンパク質のリン酸化を
制御する薬剤のβＡＰＰの代謝に対する影響を研究する
ことにより、上記観察を拡張した。ＰＣ１２におけるβ
ＡＰＰの代謝は十分特性づけられており（Ｗｉｅｄｅｍ
ａｎｎ，Ａ．，Ｋｏｎｉｇ，Ｇ．，Ｂｕｋｅ，Ｄ．，Ｆ
ｉｓｃｈｅｒ，Ｐ．，Ｓａｌｂａｕｍ，Ｊ．Ｍ．，Ｍａ
ｓｔｅｒｓ，Ｃ．Ｌ．及びＢｅｙｒｅｕｔｈｅｒ，Ｋ．
（１９８９），Ｃｅｌｌ，５７：１１５）、この細胞系
を有用なものとしている。本出願人はβＡＰＰ代謝がタ
ンパク質のリン酸化を調節する薬剤により制御されるこ
とを観察し、タンパク質のリン酸化における変化がアル
ツハイマ−病に特徴的な細胞外でのβ／Ａ４の堆積を変
えるのであろうと思われる。

【０００９】本発明は細胞間神経原繊維タングル及び細
胞外アミロイドプラ−クに存在するタンパク質のタンパ
ク質リン酸化を制御する方法において、例えば患者又は
患者の細胞に有効量のキナ−ゼモジュレ−タ又はホスフ
ァタ−ゼモジュレ−タを導入し、モジュレ−タがそのよ
うなタンパク質のタンパク質分解プロセッシングの速度
を増加させる、又は減少させることができることを特徴
とする方法に関する。

【００１０】本発明は又、哺乳類におけるアルツハイマ
−型アミロイド−シスの形成を阻害する方法において、
哺乳類に少なくとも１種類のタンパク質ホスフアタ−ゼ
の阻害剤を有効量投薬することからなり、阻害剤は細胞
間神経原繊維タングル及び細胞外アミロイドプラ−クに
存在するタンパク質のタンパク質分解プロセッシングを
減少させることができることを特徴とする方法を目的と
している。

【００１１】本発明は又、哺乳類患者のアルツハイマ−
病を伴うアミロイド−シスの治療において、患者に哺乳
類細胞におけるタンパク質のリン酸化を制御することの
できる少なくとも１種類の薬剤を有効量投薬することを
含むことを特徴とする治療に関する。

【００１２】本発明は又、アミロイド形成を制御する薬
剤のスクリ−ニング法において、タンパク質のリン酸化
を制御することができると思われる薬剤を哺乳類細胞と
接触させ、アミロイド前駆体タンパク質分解における変
化を検出することから成ることを特徴とする方法に関す
る。

【００１３】本発明は又、正常な、又はトランスジェニ
ック動物全体のアミロイド形成を制御する薬剤のスクリ
−ニング法において、該動物にタンパク質のリン酸化を
制御できると思われる薬剤を投薬し、動物の脳における
神経の退化の変化を検出することから成ることを特徴と
する方法に関する。

【００１４】

【図の詳細な説明】

図１．ＰＤＢｕ及びオカダ酸によるβＡＰＰプロセッシ
ングの調節 （Ａ）抗−βＡＰＰ^645-694抗体を用いた免疫沈降によ
るＰＣ１２細胞におけるβＡＰＰ及びβＡＰＰ誘導ペプ
チドの同定。［³⁵Ｓ］メチオニン標識ＰＣ１２細胞の免
疫沈降物からのＰＡＧＥゲルのオ−トラジオグラフを示
す。上図において、６−１８％勾配ゲルの高分子量領域
のオ−トラジオグラフを示す。下図において、１５ｋＤ
ａ及び１９ｋＤａペプチドを含む低分子量のゲルの長時
間暴露のオ−トラジオグラフを示す。

【００１５】（Ｂ）レ−ン：１，０時間における制御条
件下の標識ＰＣ１２細胞の免疫沈降物；２−６．０時間
にて添加後４５分追跡時の標識ＰＣ１２細胞の免疫沈降
物；２，参照細胞；３，１μＭのＰＤＢｕで処理した細
胞；４，１μＭのオカダ酸で処理した細胞；５，１μＭ
のＰＤＢｕ及び１μＭのオカダ酸で処理した細胞；６，
１μＭのＰＤＢｕ及び１μＭのオカダ酸で処理し、１０
０μＭのβＡＰＰ^645-694ペプチドの存在下で免疫沈降
した細胞。ＰＣ１２細胞中のβＡＰＰの形態は限定加水
分解により決定される通り、ヒトのβＡＰＰ₆₉₅と関連
していると思われる。１１３／１１５ｋＤａ二重線（レ
−ン１）及び１４３／１４９ｋＤａ二重線（レ−ン２）
をＡに示すゲルから取り出し、Ｖ８プロテア−ゼを用い
た限定加水分解消化を行い、試験管内で同様に処理し、
転写し、翻訳したヒトβＡＰＰ₆₉₅ｃＤＮＡと比較した
（レ−ン３）。

【００１６】図２．時間の関数としての、ＰＤＢｕ及び
Ｈ−７によるβＡＰＰプロセッシングの制御 ＰＣ１２細胞を［³⁵Ｓ］メチオニンを用いて２０分間代
謝により標識し、完全培地を用いて指定の時間追跡し
た。ＰＫＣ活性を制御する薬剤を追跡期間の最初に加え
た（０時間）。細胞の溶解に続き、抽出物の免疫沈降、
ＮａＤｏｄＳＯ₄−ＰＡＧＥ及びオ−トラジオグラフィ
−を行った。オ−トラジオグラムを走査することにより
種々の形態のβＡＰＰを定量した。示した結果は四実験
の平均±ＳＥＭである。０時間にて回収した全βＡＰＰ
_751/770（すなわち未熟及び成熟）を１００単位とする
ようにデ−タを標準化した。ＣＯＯＨ−末端βＡＰＰフ
ラグメントの量は０時間において重要でない。Ａ及びＢ
において、回収量を０時間における合計のパ−セントで
表す。Ｃにおいて、回収量は任意の単位で示す。

【００１７】（Ａ）未成熟βＡＰＰ_751/770 （Ｂ）成
熟βＡＰＰ_751/770 （Ｃ）１５ｋＤａＣＯＯＨ−末端
フラグメント。参照細胞（・），ＰＤＢｕ−処理細胞
（ ），Ｈ−７−処理細胞（ ）。

【００１８】図３．時間の関数としての、ＰＤＢｕによ
る成熟βＡＰＰのプロセッシングの制御 追跡時間３５分にてＰＤＢｕを加え、成熟βＡＰＰを最
大量に近付ける。実験に関する他の詳細はすべて図２の
例の記載と同様である。示した実験は３回の別々の実験
の代表的な例である。実験点は二重の決定の平均であ
る。

【００１９】（Ａ）未成熟βＡＰＰ_751/770 （Ｂ）成
熟βＡＰＰ_751/770 （Ｃ）１５ｋＤａＣＯＯＨ−末端
フラグメント。参照細胞（・），ＰＤＢｕ−処理細胞
（ ）。

【００２０】図４．時間の関数としての、オカダ酸を用
いたβＡＰＰプロセッシングの制御 追跡の最初（０時間）にオカダ酸（１μＭ）を直接加え
た。実験に関する他の詳細はすべて図２の例の記載と同
様である。示した結果は４実験の平均±ＳＥＭである。

【００２１】（Ａ）未成熟βＡＰＰ_751/770 （Ｂ）成
熟βＡＰＰ_751/770 （Ｃ）１５ｋＤａＣＯＯＨ−末端
フラグメント。参照細胞（・），オカダ酸処理細胞
（ ）。

【００２２】図５．時間の関数としての、オカダ酸を用
いた成熟βＡＰＰのプロセッシングの制御 追跡時間３５分にてオカダ酸を加え、成熟βＡＰＰを最
大量に近付ける。実験に関する他の詳細はすべて図２の
例の記載と同様である。示した実験は２回の別々の実験
の代表的な例である。実験点は二重の決定の平均であ
る。

【００２３】（Ａ）未成熟βＡＰＰ_751/770 （Ｂ）成
熟βＡＰＰ_751/770 （Ｃ）１５ｋＤａＣＯＯＨ−末端
フラグメント。参照細胞（・），オカダ酸処理細胞
（ ）。 〔発明の詳細な説明〕

【００２４】報告されている通り（Ｗｉｅｄｅｍａｎｎ
等，上記参照）、ＰＣ１２細胞中のβＡＰＰは４５分で
成熟し、おそらくリソソ−ム経路によりプロセッシング
される。ホルボ−ルエステルはこのプロセッシングの速
度を明らかに賦活する。これは、上皮成長因子及びイン
タ−リュ−キン−２の受容体の授受の制御におけるその
影響と類似して、プロテア−ゼ キナ−ゼ Ｃ（ＰＫ
Ｃ）がインタ−ナリゼ−ション及び分解のためにβＡＰ
Ｐを的としていることを示している。ＰＫＣの阻害剤で
あるＨ７がβＡＰＰのプロセッシングの基底速度を明ら
かに減少させるという事実は、非賦活細胞において基本
的にβＡＰＰは活性なＰＫＣによってリン酸化された後
に切断されることを示している。

【００２５】１５ｋＤａ及び１９ｋＤａ βＡＰＰフラ
グメントの量に対するＰＫＣの活性剤の影響が、βＡＰ
Ｐの周知の正常なプロセッシングの観点から調べられて
いる。βＡＰＰがＢ／Ａ４ドメイン中で切断された後、
βＡＰＰの細胞外の部分は通常分泌されることが報告さ
れている。これは、正常のβＡＰＰプロセッシングがア
ミロイド発生及び、おそらく脳プラ−クの形成を排除し
て行われることを意味する。１５ｋＤａ及び１９ｋＤａ
Ｃ−末端βＡＰＰフラグメントの分子量はβ／Ａ４全
配列を含むことができ、従ってアミロイド発生的であり
うる量と一致している。

【００２６】ＢａｙＫがβＡＰＰに影響を持たなかった
という事実は、本出願人の分析系においてＣａＭＫＩＩ
がβＡＰＰ異化に含まれないことを示唆している。イノ
ノマイシンの影響は、ゴルジ膜を横切るカルシウム勾配
へのこのイノノフォアの影響によると思われる。

【００２７】ホスファタ−ゼ１及び２Ａの有力な阻害剤
であるオカダ酸は、多くのタンパク質キナ−ゼの多数の
基質に関して正味のリン酸化を増加させる。従ってβＡ
ＰＰプロセッシングへのオカダ酸の効果は、どのひとつ
のキナ−ゼに起因させることもできず、すでに特性化さ
れたものとは異なるキナ−ゼによるβＡＰＰのリン酸
化、あるいはβＡＰＰ成熟及びプロセッシングの制御に
含まれる他のタンパク質のリン酸化を含むと思われる。

【００２８】１５及び１９ｋＤａフラグメントへのＰＤ
Ｂｕ及びオカダ酸の影響は、リン酸化に起因し、成熟β
ＡＰＰのより急速な分解、又は１５及び１９ｋＤａフラ
グメントの異化の減速を引き起こすと思われる。１９ｋ
Ｄａフラグメントが１５ｋＤａフラグメントのリン酸化
された形態である可能性がある。

【００２９】以下は、哺乳類細胞のタンパク質のリン酸
化状態に影響する、又は制御する化合物（“活性化合
物”）のリストである。リン酸化状態は、タンパク質に
リン酸塩部分を添加するキナ−ゼの活性を阻害する、あ
るいは賦活することにより、又はタンパク質からリン酸
塩部分を除去するホスファタ−ゼを阻害する、あるいは
賦活することにより制御することができる。

【００３０】以下は、完全な又は徹底的なリストのつも
りではないが良く知られた例のリストである：キナ−ゼ賦活剤 ：ホルボ−ルエステル−例えば、４−ア
ルファ−ホルボ−ル １２，１３−ジブチレ−ト、ホル
ボ−ル １２−ミリステ−ト １３−アセテ−ト（ＰＭ
Ａ）、又は（ホルボ−ル−１２，１３−ジブチレ−ト
（ＰＤＢＵ又はＰＤＢｕ） インドラクタム−例えば、（−）−７−オクチルインド
ラクタム Ｖ メツェリン ジアシルグリセロ−ル ホルスコリン ３−（Ｎ−アセチルアミノ）−５−（Ｎ−デシル−Ｎ−
メチルアミノ）−ベンジルアルコ−ル（ＡＤＭＢ）、及
び６−（Ｎ−デシルアミノ）−４−ヒドロキシメチルイ
ンド−ル（ＤＨＩ）キナ−ゼ阻害剤 ： スタウロスポリン アウラノフィン Ｗ５，Ｗ１２，Ｗ１３，Ｗ７，Ｈ７，Ｈ８，Ｈ９又はＨ
Ａ１００４（Ｗ７はＮ−（６−アミノヘキシル）−５−
クロロ−１−ナフタンスルファミド ヒドロクロリド；
Ｈ７は１−（５−イソキノリンスルホニル）−２−メチ
ルピペラジン ジヒドロクロリド；Ｈ８はＮ−［２−
（メチルアミノ）エチル］−３−イソキノリンスルホン
アミド ジヒドロクロリド；Ｈ９はＮ−（２−アミノエ
チル）−５−イソキノリンスルホンアミド；ＨＡ１００
４はＮ（２−グアニジノエチル）−５−イソキノリン−
スルホンアミド ヒドロクロリド；Ｗ５はＮ−（６−ア
ミノヘキシル）−１−ナフタレンスルホンアミド ヒド
ロクロリド；Ｗ１２はＮ−（４−アミノブチル）−２−
ナフタレンスルホンアミド ヒドロクロリド、及びＷ１
３はＮ−（−４−アミノブチル）−５−クロロ−２−ナ
フタレンスルホンアミドヒドロクロリド） スフィンゴシン チルホスチンホスファタ−ゼ阻害剤 ：オカダ酸及びその誘導体 カリクリン−Ａ バナデ−トホスファタ−ゼ賦活剤 ：ソマトスタチン類似体。

【００３１】上記賦活剤及び阻害剤の誘導体も本発明に
含まれると理解するべきである。

【００３２】本発明において使用する活性化合物は薬
剤、すなわち製薬配合物として投薬することができる。

【００３３】本発明の方法において動物及び人に投薬す
るために使用する製薬配合物は、製薬キャリヤ−又は賦
形剤と混合して活性化合物を含む。

【００３４】薬剤は本発明の化合物を含む錠剤（甘味入
り、及び顆粒を含む）、ドロップ、カプセル、丸薬、ア
ンプル、又は座薬であることができる。

【００３５】本文で使用する“薬剤”は、医学的投薬に
適した、物理的に分離した凝集性の部分を意味する。本
文で使用する“投薬単位の形態の薬剤”は、それぞれ１
日の投薬量、又は倍量（４倍量まで）あるいは約分量
（１４分の１まで）の本発明の活性化合物をキャリヤ−
と共に含む、及び／又は外皮に封入した、医学的投薬に
適した、物理的に分離した凝集性の部分を意味する。薬
剤が１日の投薬量を含むか、又は例えば１日の投薬量の
半分、３分の１、あるいは４分の１を含むかは、それぞ
れ薬剤を１日に１度投薬するのか、あるいは例えば２
回、３回、又は４回投薬するのかにより決まる。

【００３６】配合物は、各単位が決まった投薬量の活性
成分を供給するように合わせた投薬単位として調製する
のが有利である。錠剤、被覆錠剤、カプセル、アンプル
及び座薬が、本発明の好ましい投薬形態の例である。活
性成分が有効量に達している、すなわち適した有効投薬
量が１単位、あるいは倍単位投薬に使用される投薬形態
と一致していることだけが必要である。もちろん正確な
個人的投薬量は、１日の投薬量と同様に医師又は獣医師
の指示下で標準の医学的原則に従って決定される。

【００３７】活性化合物は水性、又は非水性希釈剤中の
活性化合物の懸濁液、溶液、及び乳液、シロップ、顆
粒、あるいは粉末として投薬することもできる。

【００３８】錠剤、ドロップ、カプセル、及び丸薬に成
型するのに適する、活性化合物を含む製薬配合物（例え
ば顆粒）に使用することができる希釈剤には以下が含ま
れる：（ａ）充填剤及び伸展剤、例えば澱粉、糖、マン
ニト−ル、及びケイ酸；（ｂ）結合剤、例えばカルボキ
シメチルセルロ−ス及び他のセルロ−ス誘導体、アルギ
ニン酸塩、ゼラチン及びポリビニルピロリドン；（ｃ）
湿潤剤、例えばグリセロ−ル；（ｄ）分解剤、例えば寒
天、炭酸カルシウム、及び重炭酸ナトリウム；（ｅ）溶
解を遅延させるための試薬、例えばパラフィン；（ｆ）
再吸収促進剤、例えば第４アンモニウム化合物；（ｇ）
界面活性剤、例えばセチルアルコ−ル、グリセロ−ルモ
ノステアレ−ト；（ｈ）吸着性キャリヤ−、例えばカオ
リン及びベントナイト；（ｉ）潤滑剤、例えばタルク、
ステアリン酸カルシウム及びマグネシウム、ならびに固
体ポリエチルグリコ−ル。

【００３９】活性化合物を含む錠剤、ドロップ、カプセ
ル、及び丸薬は不透明化剤を含む通常の皮膜、外皮及び
保護マトリックスを有することができる。これらは腸管
のみで、又は好ましくはその特定の部分で、できる限り
ある時間をかけて活性成分を放出するように構成するこ
とができる。皮膜、外皮及び保護マトリックスは例えば
ポリマ−物質又はワックスから製造することができる。

【００４０】活性成分は１又は数種類の上記希釈剤と共
に微細カプセルの形態とすることもできる。

【００４１】座薬とするのに適する製薬配合物に使用す
る希釈剤は、例えばポリエチレングリコ−ル、及び脂肪
（例えばココア油及び高級エステル、［例えばＣ₁₄−ア
ルコ−ルとＣ₁₆脂肪酸］）などの通常の水溶性希釈剤、
又はこれらの希釈剤の混合物であることができる。

【００４２】溶液又は乳液である製薬配合物は、例えば
溶媒などの通常の希釈剤（もちろん上記の通り界面活性
剤の存在する場合以外は分子量が２００以下である溶媒
を除いて）、溶解剤及び乳化剤を含むことができる。そ
のような希釈剤の特別な例は水、エチルアルコ−ル、イ
ソプロピルアルコ−ル、炭酸エチル、酢酸エチル、ベン
ジルアルコ−ル、安息香酸ベンジル、プロピレングリコ
−ル、１，３−ブチレングリコ−ル、ジメチルホルムア
ミド、油類（例えば落花生油）、グリセロ−ル、テトラ
ヒドロフルフリルアルコ−ル、ポリエチレングリコ−
ル、及びソルビト−ルの脂肪酸エステル、あるいはこれ
らの混合物であるが、これらに限らるわけではない。

【００４３】非経口的投薬のための溶液及び乳液は、ア
ンプル中に含まれた無菌の、例えば水又はアラキス油で
なければならず、場合によっては血液−等張でなければ
ならない。

【００４４】懸濁液の製薬配合物は通常の希釈剤、例え
ば水、エチルアルコ−ル、プロピレングリコ−ルなどの
液体希釈剤、界面活性剤（例えばエトキシル化イソステ
アリルアルコ−ル、ポリオキシエチレンソルビット及び
ソルビタンエステル）、微結晶セルロ−ス、アルミニウ
ムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、及びトラガ
ント、あるいはこれらの混合物を含むことができる。

【００４５】製薬配合物は着色剤及び防腐剤、ならびに
香料、及び調味料（例えばペパ−ミント油及びユ−カリ
油）、及び甘味料（例えばサッカリン及びアスパルテ−
ム）も含むことができる。

【００４６】製薬配合物は一般に全配合物の０．５−９
０重量％の活性成分を含む。

【００４７】活性化合物の他に、製薬配合物及び薬剤は
製薬上活性な他の化合物を含むことができる。

【００４８】本発明の薬剤中の希釈剤も製薬配合物に関
して上記で述べたいずれであることもできる。本発明の
薬剤は分子量が２００以下の溶媒を単一の希釈剤として
含むことができる。

【００４９】活性化合物は経口的に、非経口的に（例え
ば筋肉内、腹膜内、皮下、経皮膚、又は静脈内）、直腸
により、あるいは局部的に投薬するものであり、経口的
又は非経口的な投薬が好ましく、経舌あるいは静脈内投
薬が特に好ましい。

【００５０】体重１ｋｇ当たり０．０５−２０ｍｇの投
薬率は治療する人、又は動物患者の性質及び体重、治療
する患者の個人的反応、活性化合物を含んで投薬される
配合物の種類、投薬のしかた、病気の進行の程度、ある
いは投薬間隔の関数であろう。従って最低投薬率以下で
十分な場合もあり、所望の結果を得るために上限を越え
る必要がある場合もある。多量を投薬する場合、１日に
数回の投薬にわけるのが良いであろう。

【００５１】

【実施例】ホルボ−ル １２，１３−ジブチレ−ト（Ｐ
ＤＢｕ）、４−アルファ−ホルボ−ル １２，１３−ジ
ブチレ−ト（４αＰＤＢｕ）及びホルボ−ル １２−ミ
リステ−ト １３−アセテ−ト（ＰＭＡ）はＬＣ Ｓｅ
ｒｖｉｃｅ Ｃｏｒｐ．，Ｗｏｂｕｒｎ，Ｍａより購入
した。オカダ酸はＭｏａｎａ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｎｏｌｕｌｕ，ＨＩより購入した。
Ｈ７はＳｅｉｋａｇａｄａ Ｋｏｇｙｏ，Ｃｏ．，Ｊａ
ｐａｎより購入した。

【００５２】実施例１ βＡＰＰ（βＡＰＰ^645-694，アミノ酸のナンバリング
はヒトβＡＰＰ₆₉₅のナンバリングに対応する）の細胞
質ドメインに対応する合成ペプチドをＹｅｌｅＳｅｑｕ
ｅｎｃｉｎｇ Ｆａｃｉｌｉｔｙにより製造した。この
βＡＰＰ６４５−６９５に対応する合成ペプチドを用い
てうさぎに免疫を与えることにより抗体を製造した。ヒ
トβＡＰＰ₆₉₅のアミノ酸１６−６９５を含む融合タン
パク質を発現するＥ．ｃｏｌｉの溶解物のイムノブロッ
ト分析により血清のスクリ−ニングを行った。組み替え
融合タンパク質βＡＰＰ₆₉₅に対して免疫活性である血
清をさらに免疫沈降活性に関して２つの系にスクリ−ニ
ングした：１系では、うさぎの網状赤血球溶解物及び［
³⁵Ｓ］メチオニンを用いたβＡＰＰ₆₉₅ｃＤＮＡの試験
管内転写、その後βＡＰＰ₆₉₅ｍＲＮＡの試験管内翻訳
により製造した³⁵Ｓ−標識βＡＰＰ₆₉₅を使用し；他の
系ではβＡＰＰ₆₉₅ｃＤＮＡを用いてトランスフェクシ
ョンし、［³⁵Ｓ］メチオニンを用いて標識した細胞によ
り製造した³⁵Ｓ−標識βＡＰＰ₆₉₅を使用した。免疫沈
降は、Ｐａｎｇ，Ｄ．Ｔ．，Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｋ．Ｔ．，
Ｖａｌｔｏｒｔａ，Ｆ．，Ｂｅｎｆｅｎａｔｉ，Ｆ．及
びＧｒｅｅｎｇａｒｄ，Ｐ．，（１９８８），Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８
５：７６２−７６６に記載の通りに行った。組み替えβ
ＡＰＰに対して効率の高い（＞９０％）免疫沈降活性を
有する血清をＨａｒｌｏｗ，Ｅ．及びＬａｎｅ，Ｄ．，
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａ
ｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，
Ｎ．Ｙ．１９８８）に記載のＳｅｐｈａｒｏｓｅ−βＡ
ＰＰ６４５−６９５のカラム上でアフイニテイ−精製を
行った。ここで使用した抗血清によりラットの皮質ホモ
ジネ−トのウエスタン法において、Ｍ_r１１５−１４０
ｋＤａの３種類のタンパク質、及びＭ_r９３ｋＤａの帯
が認められた。

【００５３】ＰＣ細胞を、１０％（ｖ／ｖ）の子牛胎児
の血清、及び熱により不活性化した馬の血清を５％含む
Ｄｕｌｂｅｃｃｏの修正Ｅａｇｌｅ’ｓ培地（ＤＭＥ
Ｍ，Ｆｌｏｗ Ｌａｂｓ）中で培養した。

【００５４】ＰＣ１２細胞の代謝による標識のため、細
胞を２度洗浄し、粉砕により皿から除去し、細胞をｐＨ
７．４にて、１ｍＣｉ／ｍｌの［³⁵Ｓ］メチオニン（１
２００Ｃｉ／ミリモル，ＮＥＮ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂ
ｏｓｔｏｎ ＭＡ）及び２０ｍＭのヘペスを補った［³⁵
Ｓ］メチオニンを含まないＤＭＥＭに、６ｘ１０⁶細胞
／ｍｌで２０分間懸濁した。その後細胞を、過剰のメチ
オニン及び２０ｍＭのヘペスを含むｐＨが７．４の、空
気を満たした５−６倍容量の完全培地（ＤＭＥＭ）で希
釈し、記載の添加をして０−１３５分追跡した。試験物
質を追跡期間の最初に（０時間）、又は３５分後に添加
した。トリパンブル−排除により決定した細胞の生存度
は実験の最初９０％以上であり、追跡１３５分後に５％
以下に減少した。

【００５５】溶解のため、細胞（０．２ｍｌ）を０．４
ｍｌの溶解緩衝液（２ｍＭ ＮａＮ₃，１５０ｍＭ Ｎ
ａＣｌ，１００ｍＭ トリスＨＣｌ，ｐＨ７．４，１％
ｖ／ｖ ＮＰ４０，０．５％ｗ／ｖ ナトリウムデオキ
シコレ−ト，０．１％ｗ／ｖＮａＤｏｄＳＯ₄及び４０
単位／ｍｌ トラシロ−ルを含む）で希釈し、氷上にお
く。２０分後、試料を１０，０００ｘｇにて５分間遠心
にかけ、上澄みを免疫沈降に使用した。いくつかの実験
では細胞を１％のＮａＤｏｄＳＯ₄で溶解し、音波処理
し、煮沸して免疫沈降に使用した（Ｐａｎｇ，Ｄ．
Ｔ．，上記参照）。この方法で得た結果は実際に標準の
方法で得た結果と同一であった。

【００５６】免疫沈降のために、１０，０００ｘｇの上
澄みを、３μｌの非希釈、あるいはアフィニティ−精製
したうさぎの抗−βＡＰＰ６４５−６９５と共に全容量
を６００μｌとして４℃にて１時間インキュベ−トし
た。インキュベ−ションに続き、溶解緩衝液中の７５μ
ｌのＰｒｏｔｅｉｎ Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ ＬＫＢ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａ
ｙ，Ｎ．Ｙ．）の１：１懸濁液を加え、４℃にてさらに
３０分間インキュベ−ションを続けた。不溶の複合体を
１５０ｍＭ ＮａＣｌ及び２ｍＭ ＮａＮ₃を含む１０
０ｍＭのトリスＨＣｌ，ｐＨ７．４で３回洗浄し、再度
溶解緩衝液（６２．５ｍＭ トリスＨＣｌ，ｐＨ６．
８，２％ ＳＤＳ，５％ ２−メルカプトエタノ−ル，
１０％ ショ糖）に懸濁し、煮沸した。タンパク質をＮ
ａＤｏｄＳＯ₄−ＰＡＧＥを用いて分離し、１Ｍのサリ
チル酸ナトリウムを用いた定量フルオログラフィ−によ
り検出した。タンパク質帯をオ−トラジオグラムのデン
シトメトリ−により、あるいは放射活性帯を取り出し、
液体シンチレ−ションスペクトル分析を行うことにより
定量した。βＡＰＰ₇₅₁及びβＡＰＰ₇₅₀がＰＣ１２細胞
の主要なβＡＰＰイソフォ−ムであった。これらのイソ
フォ−ムはＰＡＧＥ上で互いに非常に近くに移動するの
で一緒に定量し、βＡＰＰ_751/770と示す。βＡＰＰ₆₉₅
の定量のためにコンピュ−タ−法を使用した（Ｃｒａｎ
ｄｅｌｌ，Ｒ．，ＭｃＣｌｅｌｌａｎ，Ｍ．，Ａｒｃ
ｈ，Ｓ．，Ｄｏｅｎｉａｓ，Ｊ．及びＰｉｐｅｒ，
Ｒ．，（１９８７），Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１
６７：１５）。βＡＰＰ₆₉₅について観察された効果
は、βＡＰＰ_751/770について観察されたものと類似し
ていた。１９ｋＤａペプチドは１５ｋＤａペプチドと定
量的に類似の挙動を示すようであった。

【００５７】免疫沈降βＡＰＰ又は試験管内転写βＡＰ
Ｐのペプチドマッピングを、ｓ．ａｕｒｅｕｓ Ｖ８
プロテア−ゼ（Ｍｉｌｅｓ Ｃｏ．，Ｅｌｋｈａｒｔ，
ＩＮ）を用いてＨｕｔｔｎｅｒ等の方法に従って行っ
た。

【００５８】結果 ＰＣ１２細胞を［³⁵Ｓ］メチオニンを含むＤＭＥＭ中で
２０分間インキュベ−トし、完全培地中で種々の期間追
跡した。そのような³⁵Ｓ−標識細胞の溶解物からの、β
ＡＰＰ６４５−６９５に対して製造した抗体を用いた免
疫沈降により、１４９，１４３，１２５，１１５，１１
３及び１０６ｋＤａの６タンパク質帯が得られた（図１
ａ，レ−ン１及び２）。

【００５９】これらの６タンパク質帯は、免疫沈降を１
００μＭのβＡＰＰ^645-694ペプチドの存在下で行うと
観察されない（図１Ａ，レ−ン６）。さらにこれらの６
タンパク質はＶ８プロテア−ゼを用いて消化すると類似
のペプチドマップを示し、そのマップは試験管内転写及
び翻訳をしたヒトのβＡＰＰ₆₉₅ｃＤＮＡを用いて観察
されるマップと類似しており、免疫沈降タンパク質帯が
βＡＰＰイソフォ−ムであることを強く証明している。

【００６０】異なる追跡期間の後、標識帯の相対的量の
変化が観察された。Ｍ_r１１３／１１５と１４３／１４
９ｋＤａの二重線間に、及びＭ_r１０６と１２５ｋＤａ
の間に前駆体−生成物関連性が可能であることがわかる
（図１及び２）。上記のＷｉｅｄｅｍａｎｎ等の観察に
基づき、Ｍ_r１４３／１４９及び１２５ｋＤａのタンパ
ク質を仮に以下のように同定した：Ｍ_r１０６，１１３
及び１１５ｋＤａ帯はそれぞれβＡＰＰ₆₉₅，βＡＰＰ
₇₅₁及びβＡＰＰ₇₇₀の未成熟（Ｎ−グリコシル化）型で
あり；Ｍ_r１２５，１４３及び１４９ｋＤａはそれぞれ
βＡＰＰ₆₉₅，βＡＰＰ₇₅₁及びβＡＰＰ₇₇₀の成熟（Ｎ
−及びＯ−グリコシル化）型である。すでに成熟βＡＰ
Ｐ分子の集団はリソソ−ム機構により急速に分裂し、
（Ｃｏｌｅ，Ｇ．，Ｈｕｙｈｎ，Ｔ．Ｖ．及びＳａｉｔ
ｏｈ，Ｔ．，（１９８９）Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｒｅ
ｓ．，１４：９３３）Ｎ−末端部分を分泌することが示
されている。追跡期間の最初に１００μＭのクロロキン
をＰＣ１２細胞に加えると、標識１２５／１４３及び１
４９ｋＤａタンパク質が相対的に増加し、リソソ−ム酸
化及び成熟型βＡＰＰの分裂の疎外剤としてのクロロキ
ンの作用と一致した。

【００６１】実施例２：プロテインキナ−ゼＣを用いた
βＡＰＰプロセッシングの制御 ＰＣ１２細胞を追跡期間の間１μＭのＰＤＢｕと共にイ
ンキュベ−トした場合、標識未成熟βＡＰＰの消失の速
度への影響は観察されなかった（図２Ａ）。

【００６２】しかし、標識βＡＰＰの成熟型の量が減少
し、１５ｋＤａ及び１９ｋＤａの標識ペプチドの量が増
加した（図２Ｂ，Ｃ）。１００μＭのβＡＰＰ^645-694
ペプチドの存在下で免疫沈降を行った場合は１５ｋＤａ
及び１９ｋＤａペプチドは観察されず（図１Ａ，レ−ン
６）、これらのペプチドが成熟βＡＰＰのＣＯＯＨ−末
端フラグメントであることと一致している。別のホルボ
−ルエステル、ＰＭＡはＰＤＢｕと類似の影響を与える
が、不活性ＰＤＢｕ類似体、４αＰＤＢｕは影響を与え
ない（図なし）。標識成熟βＡＰＰの減少、及び標識１
５ｋＤａ及び１９ｋＤａペプチドの付随的増加はこれら
のタンパク質の間の前駆体−生成物関連性を証明してい
る。おそらく１５ｋＤａ及び１９ｋＤａペプチドは、分
裂及びＮ−末端ドメインの分泌後も細胞と会合したまま
のβＡＰＰのタンパク質分解フラグメントであろう。デ
−タはＰＫＣ活性化が成熟βＡＰＰのプロセッシングの
速度を増し、成熟βＡＰＰの回収量を減少させ、タンパ
ク質分解フラグメントの回収量を増加させることを証明
している。

【００６３】タンパク質キナ−ゼＣを含む数種のタンパ
ク質キナ−ゼの阻害剤であるＨ７（１００μＭ）は成熟
βＡＰＰの量を相対的に増加させる（図２Ｂ）。この観
察はＰＫＣが成熟βＡＰＰのプロセッシングを賦活する
という考えと一致する。さらにＨ７（１００μＭ）は、
標識成熟βＡＰＰの量の減少及び標識１５ｋＤａ及び１
９ｋＤａペプチドの量の増加においてＰＤＢｕ（１μ
Ｍ）の効果と拮抗する（図なし）。

【００６４】標識成熟βＡＰＰの量へのＰＤＢｕの最大
効果の２分の１は約１７ｎＭにて観察され、ＰＫＣによ
り媒介されるとされている他のＰＤＢｕの効果と一致す
る。成熟βＡＰＰの量が最大量の近辺の場合のβＡＰＰ
プロセッシングへのＰＫＣの活性化の効果を調べるため
に、追跡３５分後にＰＤＢｕ（１μＭ）を加えた。標識
１５ｋＤａ及び１９ｋＤａペプチドの量の急激な増加が
観察され（図２Ｃ）、ＰＤＢｕが成熟βＡＰＰのプロセ
ッシングの速度を増すことを証明している。

【００６５】実施例３：オカダ酸感応性タンパク質ホス
ファタ−ゼによるβＡＰＰプロセッシングの制御 追跡の最初にオカダ酸（１μＭ）を添加すると標識未成
熟βＡＰＰの半減期が長くなり、標識成熟βＡＰＰの量
が減少した（図４Ａ，Ｂ）。同時に標識１５ｋＤａ及び
１９ｋＤａβＡＰＰペプチドが増加した（図４Ｃ）。こ
れは、オカダ酸がＰＤＢｕと同様に成熟βＡＰＰのプロ
セッシングの速度を増すが、ＰＤＢｕとは異なり初期に
おけるβＡＰＰプロセッシングにも影響を与えることを
証明している。オカダ酸（１μＭ）をＰＤＢｕ（１μ
Ｍ）と共に追跡の最初に加えた場合、標識１５ｋＤａ及
び１９ｋＤａペプチドの量が非常に増加した（図１Ａ，
レ−ン５）。オカダ酸を追跡３５分後、成熟βＡＰＰが
最大量近辺の時に加えると、標識１５ｋＤａ及び１９ｋ
Ｄａペプチドの量を急速に増加させた（図５Ｃ）。これ
らの結果はオカダ酸が成熟βＡＰＰのプロセッシングの
速度を増す作用を行うことを証明している。未成熟及び
成熟βＡＰＰの量へのオカダ酸の最大値の２分の１の効
果は約３００ｎＭにて観察された（図なし）。

【００６６】本出願人は、ＰＣ１２細胞中のβＡＰＰが
４５分かけて成熟する、及びそれがおそらくリソソ−ム
経路によりプロセッシングされるという先行技術の仮定
を確認した。ホルボ−ルエステルは成熟βＡＰＰのプロ
セッシング速度、及び１５ｋＤａ及び１９ｋＤａペプチ
ドの形成速度を明らかに賦活する。ホルボ−ルエステル
はこれらのペプチドの異化の速度に影響を与えると思わ
れる。本出願人の得た結果は、上皮成長因子受容体及び
インタ−リュ−キン−２受容体の授受の制御におけるそ
の影響（Ｏｌｔｅｒｓｄｏｒｆ，Ｔ．等，（１９８
９），ＪＢＣ，２６５：４４９２−４４９７）と類似し
て、ＰＫＣがβＡＰＰをインタ−ナリゼ−ション及び分
解の的としていることを示唆している。ＰＫＣの阻害剤
であるＨ７がβＡＰＰのプロセッシングの基底速度を明
らかに減少させるという事実はこの反応の生理学的重要
性を支持する。

【００６７】βＡＰＰの細胞外部分は通常βＡＰＰがβ
／Ａ４ドメインに分裂した後分泌されると報告されてい
る（Ｓｉｓｏｄｉａ，Ｓ．Ｓ．，Ｋｏｕ，Ｅ．Ｈ．，Ｂ
ｅｙｒｅｕｔｈｅｒ，Ｋ．，Ｕｎｔｅｒｂｅｃｋ，Ａ．
及びＰｒｉｃｅ，Ｄ．Ｌ．，（１９８０），Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ，２４８：４９２−４９５）。これは、正常なβＡ
ＰＰのプロセッシングはアミロイド発生、及びおそらく
脳プラ−クの形成を排除して行われることを意味する。
１５ｋＤａ及び１９ｋＤａペプチドの分子量は明らかに
それがβ／Ａ４配列を全部含み、従って有力なアミロイ
ド発現性である場合と矛盾しないものである。ホスファ
タ−ゼ１及び２Ａの有力な阻害剤であるオカダ酸は、種
々の実験系で多くの基質の正味のリン酸化を増加させる
ことが示された。従ってβＡＰＰプロセッシングのオカ
ダ酸の影響はいずれのキナ−ゼひとつにも起因させるこ
とはできず、すでに特性化されたものと異なるキナ−ゼ
によるβＡＰＰのリン酸化を含むか、あるいはβＡＰＰ
成熟及びプロセッシングの制御に含まれる他のタンパク
質のリン酸化を含むものと思われる。

【００６８】ＰＫＣ及びもしかすると他のタンパク質キ
ナ−ゼが正常な及びおそらく変化したβＡＰＰのプロセ
ッシングの制御に含まれるという観察結果は、アルツハ
イマ−病のアミロイド−シスにおける異常なリン酸化の
役割を支持している。

【００６９】本明細書及び実施例は説明のために示した
もので、制限を加えるものではなく、種々の修正及び変
更が本発明の精神及び範囲から逸脱することなく可能で
あることを理解するべきである。

【００７０】本発明の主たる特徴及び態様は以下のとお
りである。

【００７１】１．細胞間神経原繊維タングル及び細胞外
アミロイド プラ−ク中に存在するタンパク質のリン酸
化を制御する方法において、有効量のキナ−ゼモジュレ
−タ、又はホスファタ−ゼモジュレ−タを導入すること
を含み、該モジュレ−タが該タンパク質のタンパク質分
解プロセッシングの速度を増加、又は減少させることが
できることを特徴とする方法。

【００７２】２．第１項に記載の方法において、該タン
パク質をβＡ４アミロイド前駆体タンパン質、タウ及び
神経繊維タンパク質から選ぶことを特徴とする方法。

【００７３】３．第１項に記載の方法において、該モジ
ュレ−タがホルボ−ルエステル、インドラクタム、メツ
ェリン、ジアシルグリセロ−ル、又はホルスコリンから
成る群より選んだキナ−ゼ賦活剤であることを特徴とす
る方法。

【００７４】４．第３項に記載の方法において、該モジ
ュレ−タが４−アルファ−ホルボ−ル １２，１３−ジ
ブチレ−ト、ホルボ−ル １２，１３−ジブチレ−ト、
及びホルボ−ル １２ミリステ−ト １３−アセテ−ト
から成る群より選んだホルボ−ルエステルであることを
特徴とする方法。

【００７５】５．第１項に記載の方法において、モジュ
レ−タが（−）−７−オクチルインドラクタムＶである
ことを特徴とする方法。

【００７６】６．第１項に記載の方法において、該モジ
ュレ−タがスタウロスポリン、アウラノフィン、Ｗ５，
Ｗ１２，Ｗ１３，Ｗ７，Ｈ７，Ｈ８，Ｈ９，ＨＡ１００
４，スフィンゴシン、及びチルホスチンから成る群より
選んだキナ−ゼ阻害剤であることを特徴とする方法。

【００７７】７．第１項に記載の方法において、該モジ
ュレ−タがオカダ酸、オカダ酸の誘導体、カリクリン−
Ａ及びバナデ−トから成る群より選んだホスファタ−ゼ
阻害剤であることを特徴とする方法。

【００７８】８．第１項に記載の方法において、該モジ
ュレ−タがソマトスタチン類似体であることを特徴とす
る方法。

【００７９】９．哺乳類におけるアルツハイマ−型アミ
ロイド−シスの形成を阻害する方法において、該哺乳類
に少なくとも１種類のタンパク質ホスフアタ−ゼの阻害
剤を有効量投薬することから成り、該阻害剤が細胞間神
経原繊維タングル及び細胞外アミロイドプラ−クに存在
するタンパク質のタンパク質分解プロセッシングを減少
させることができることを特徴とする方法。

【００８０】１０．第９項に記載の方法において、タン
パク質ホスファタ−ゼの該阻害剤がオカダ酸、オカダ酸
の誘導体、カリクリン−Ａ及びバナデ−トであることを
特徴とする方法。

【００８１】１１．哺乳類患者におけるアルツハイマ−
病を伴うアミロイド−シスの治療法において、該患者に
哺乳類細胞のタンパク質のリン酸化を調節することので
きる少なくとも１種類の薬剤を有効量投薬することを含
むことを特徴とする方法。

【００８２】１２．アミロイド形成を調節する薬剤のス
クリ−ニング法において、タンパク質のリン酸化を調節
することができると思われる薬剤を哺乳類細胞と接触さ
せ、アミロイド前駆体タンパク質の分解における変化を
検出することから成ることを特徴とする方法。

【００８３】１３．アミロイド形成を調節する薬剤のス
クリ−ニング法において、全体としての正常な、又はト
ランスジェニック動物にタンパク質のリン酸化を調節で
きると思われる薬剤を投薬し、動物の脳における神経の
退化の変化を検出することから成ることを特徴とする方
法。

【図面の簡単な説明】

図１は［³⁵Ｓ］メチオニン標識ＰＣ１２細胞の免疫沈降
物からのＰＡＧＥのオ−トラジオグラフである。図２は
ＰＫＣ活性を制御する薬剤の、ＰＣ１２細胞のβＡＰＰ
タンパク質への影響を示す３つのグラフである。図３は
ＰＤＢｕの発動βＡＰＰタンパク質への影響を示す３つ
のグラフである。図４はオカダ酸によるβＡＰＰプロセ
ッシングの制御を時間の関数として示す３つのグラフで
ある。図５はオカダ酸による成熟βＡＰＰのプロセッシ
ングの制御を時間の関数として示す３つのグラフであ
る。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成６年６月２９日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図面の簡単な説明

【補正方法】変更

【補正内容】

【図面の簡単な説明】

【図１】［^３５Ｓ］メチオニン標識ＰＣ１２細胞の免疫
沈降物からのポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧ
Ｅ）のオートラジオグラフの結果を示す図に代わる写真
である。

【図２】ＰＫＣ活性を制御する薬剤の、ＰＣ１２細胞の
βＡＰＰタンパク質への影響を示す３つのグラフであ
る。

【図３】ＰＤＢｕの発動βＡＰＰタンパク質への影響を
示す３つのグラフである。

【図４】オカダ酸によるβＡＰＰプロセッシングの制御
を時間の関数として示す３つのグラフである。

【図５】オカダ酸による成熟βＡＰＰのプロセッシング
の制御を時間の関数として示す３つのグラフである。

【手続補正２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 サミユエル・イー・ガンデイ アメリカ合衆国ニユーヨーク州10128ニユ ーヨーク・ナンバー15・イーストエイテイ ナインスストリート525 (72)発明者 ポール・グリーンガード アメリカ合衆国ニユーヨーク州10021ニユ ーヨーク・イーストシツクステイナインス ストリート362

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 細胞間神経原繊維タングル及び細胞外ア
   ミロイドプラ−ク中に存在するタンパク質のリン酸化を
   制御する方法において、有効量のキナ−ゼモジュレ−
   タ、又はホスファタ−ゼモジュレ−タを導入することを
   含み、該モジュレ−タが該タンパク質のタンパク質分解
   プロセッシングの速度を増加、又は減少させることがで
   きることを特徴とする方法。
2. 【請求項２】 哺乳類におけるアルツハイマ−型アミロ
   イド−シスの製造を阻害する方法において、該哺乳類に
   少なくとも１種類のタンパク質ホスファタ−ゼの阻害剤
   を有効量投薬することから成り、該阻害剤が細胞間神経
   原繊維タングル及び細胞外アミロイドプラ−クに存在す
   るタンパク質のタンパク質分解プロセッシングを減少さ
   せることができることを特徴とする方法。
3. 【請求項３】 哺乳類患者におけるアルツハイマ−病を
   伴うアミロイド−シスの治療法において、該患者に哺乳
   類細胞のタンパク質のリン酸化を調節することのできる
   少なくとも１種類の薬剤を有効量投薬することを含むこ
   とを特徴とする方法。
4. 【請求項４】 アミロイド形成を調節する薬剤のスクリ
   −ニング法において、タンパク質のリン酸化を調節する
   ことができると思われる薬剤を哺乳類細胞と接触させ、
   アミロイド前駆体タンパク質の分解における変化を検出
   することから成ることを特徴とする方法。
5. 【請求項５】 アミロイド形成を調節する薬剤のスクリ
   −ニング法において、全体としての正常な、又はトラン
   スジェニック動物にタンパク質のリン酸化を調節できる
   と思われる薬剤を投薬し、動物の脳における神経の退化
   の変化を検出することから成ることを特徴とする方法。