JPH04502760A - エイズの診断，予防および治療に有効な新規ｈｉｖ蛋白質およびペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

エイズの診断、予防および治療に有効な新規ＨＴＶ蛋白質およびペプチド ゛　にｔ　る　＃昭 これは、我々が同時に申請中で１９８９年６月１日に提出された出１ｊｉＳｅｒ ｉａｌ　Ｎｏ、３５９，５４３の部分継続であり、我々が同時に申請中で１９８ ８年１０月３日に提出された出ｉ！１ｓｅｒｉａｌ　Ｎｏ、２５２，９４９の部 分継続であり、我々が同時に申請中で１９８７年８月２７日に提出された５ｅｒ ｉａｌＮｏ、０９０，０８０の部分継続である。 発明の背景 ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、ヒト細胞破壊ウィルス（Ｈ”ｒＬＶ−１１ｔ ）、Ｉｙｍｐｈａｄｅｎｏｐａｔｈｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｖｉｒｕｓ、リ ンパ腺関連ウィルス（ＬＡＶ）　、或いはエイズ関連レトロウィルス（ＡＲＶ） は後天性免疫不全症候群（、ＩＤ５）の原因として同定された（ポボビノ九Ｍ。 （Ｐｏｐｏｖｉｃ、Ｍ、）、Ｍ、Ｇ、サルンガッドハラン（Ｍ、Ｇ、Ｓａｒｎｇ ａｄｈａｒａｎ）、Ｅ、リード（Ｅ、Ｒｅａｄ）そしてＲ，Ｃ，ギヤｏ　（Ｒ， Ｃ。 Ｇａ１ｌｏ）（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２４：４９７−５００）、そのウ ィルスは０ＫＴ４”リンパ球の一部に対して、向性を示す（フラノラマン、Ｄ。 （Ｋｌａｔｚｍａｎｎ、Ｄ、）、Ｆ、バール−ジノウシ（Ｆ、Ｂａｒｒｓ−３ｊ ｎｏｕｓｓ　ｉ）、Ｍ、Ｔ、　ヌゲイル（Ｍ、　Ｔ、Ｎｕ’ｇ　ｙ　ｒ　ｅ）　 、Ｃ，ドーゲノト（Ｃ，Ｄａｕｇｅｔ）、Ｅ、ビル？−（Ｅ、Ｖｉ　１ｍｅｒ） 、Ｃ，グリスセリ　（Ｃ，Ｇｒｉｓｃｅｌｌｉ）、Ｆ、ブランーベジａｙト（Ｆ 、Ｂｒｕｎ−Ｖ６ｚｉｎｅｔ）、Ｃ，ルジュ（Ｃ，Ｒｏｕｚ　１ｏｕｘ）、Ｊ、 Ｄ、グルクマン（Ｊ−Ｄ、Ｇｌｕｋｍａｎ）、Ｊ、Ｃ，ンエルマン（Ｊ、Ｃ，Ｃ ｈｅｒｍａｎｎ＞、そしてり、モンタニュエ（Ｌ、Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ）［１ ９８４］５ｃｉｅｎｃｅ２２５．５９−６３）、大部分のエイズとエイズ関連複 合疾患（ＡＲＣ）の、患者と、そのウィルスに怒染した無症候性の人々の血清中 のＨＩＶ蛋白質に対する抗体（Ｍ、　Ｇ、サルンガソドハラン５ポポビッ久Ｍ、 Ｌ、ブルーチ（Ｌ、Ｂｒｕｃｈ）、Ｊ、スクブバッチ（Ｊ、５ｃｈｕｐｂａｃｈ ）、Ｒ，Ｃ，ギヤ口〔１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２４：５０６−５０８）は 、これらの抗原に対する抗体を検出するという免疫学的に基づいたテストの開発 を、可能にした。これらのテストは、ウィルスに怒染した人々の血液サンプルを 同定することによって、輸血を通じてのＨＩＶの蔓延を、防ぐために使われる。 現在、商業的に利用可能な診断テストは、不活化されたウィルスと抗原の蛋白質 を用いている。 診断のための新しいアプローチを与えることに加えて、組み換えＤＮＡは、バク テリアとウィルスに対するワクチンの開発に、非常に大きな将来性をもっている （ウィルソン、Ｔ、（Ｗｉ　１ｓｏｎ、Ｔ、）、（１９８４）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈ ｎｏｌｏｇｙ　２：２９−３９Ｌ組み換えワクチンを発現させるために最も幅広 く使われている生物は、大腸菌（Ｅ、　Ｃｏ　Ｉ　ｉ）、Ｓ、セルビシエ（Ｓ、 ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、培養哺乳類細胞である０例えば口諦疫（ｆｏｏｔ　ａ ｎｄｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａｓｅ）　（フレイド、Ｄ、Ｇ、（Ｋｌｅ　ｉｄ、Ｄ 、Ｇ、）。 Ｄ、ヤンスラ（Ｄ、Ｙａｎｓｕｒａ）、Ｂ、スモール（Ｂ、Ｓｍａ　］　１）、 Ｄ。 ドウベンｍｌ　（Ｄ、Ｄｏｗｂｅｎｋｏ）、Ｄ、Ｍ、ムール（Ｄ、Ｍ、Ｍｏｏｒ ｅ）。 Ｍ、Ｊ、ブルブマン（Ｍ、Ｊ、Ｂｒｕｂｍａｎ）、Ｐ、Ｄ、７７カーチ＋−（Ｐ Ｄ、Ｍｃｋｅｒｃｈｅｒ）、Ｄ、Ｏ，Ｍｏｒｇａｎ　（Ｄ、Ｏ，モーガン）、Ｂ 。 Ｈ，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ　（Ｂ、Ｈ，Ｏバートワン）、Ｈ，Ｌ、Ｂａｃｈｒａｃ ｈ（Ｈ，Ｌ、バーチラック）、［１９８１）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２１４：１１２５ −１１２９）とマラリア（ヤング、Ｊ、Ｆ、（Ｙｏｕｎｇ、Ｊ、Ｆ、　）、　ｗ 、”ｒ。 ホンクメイヤー　Ｈｏｃｋｍｅｙｅｒ、Ｍ、グロス（Ｇｒｏｓｓ）、Ｗ、リプレ イーバロウ（Ｒｉｐｌｅｙ−Ｂａｌｌｏｕ）、Ｒ，Ａ、ワーフ（Ｗｉ　ｒｔｚ） 、Ｊ。 Ｈ，トロスパー（Ｔｒｏｓｐｅｒ）、Ｒ，Ｌ、ブトイン（Ｂｅａｕｄｏ　ｉｎ） 、Ｍ。 Ｒ，ホリングデイル（Ｈｏｌｌｉｎｇｄａｌｅ）、Ｌ、Ｍ、ミラー（Ｍｉｌｌｅ ｒ）。 Ｃ０Ｌ、ディゲス（Ｄｉｇｇｓ）、Ｍ、ルセンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）。 （１９８５）Ｓｃｊｅｎｃｅ　２２８：９５Ｂ−９６２）に対するサブユニット ワクチンは、大腸菌で合成された。他の例は、酵母で造られたＢ型肝炎ウィルス 表面抗原（マクアレー、　Ｗ、Ｊ、（ＭｃＡｌ　ｅｅｒ、　Ｗ、Ｊ、　）、　Ｅ 、　Ｂ、ビエイナック（Ｂｕｙｎａｋ）、Ｒ，Ｚ、メイゲノター（Ｍａ　ｉｇｇ ｅｔｔｅｒ）。 Ｄ、Ｅ、ワンブラー（Ｗａｍｐ　ｌ　ｅ　ｒ）、Ｗ、Ｊ、ミラー（Ｍｉ　ｌ１ｅ ｒ）、Ｍ。 Ｒ，ヒルマン（Ｈｉｌｌｅｍａｎ）［１９８４）Ｎａｔｕｒｅ　３０７：１７Ｂ −１８０）と哺乳類細胞で造られたヘルペスワクチン（バーマン、Ｐ、　Ｗ。 （Ｂ　ｅ　ｒｍａ　ｎ、　Ｐ、　Ｗ）　、　Ｔ、グレゴリ−（Ｇｒｅｇｏｒｙ） 、Ｄ、チェイス（Ｃｈａ　ｓ　ｅ）　、Ｌ、　Ａ、ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、（ １９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２７：１４９０−１４９２）である。 それ故、ＨＩＶ全外被或いは外被の一部は動物を免疫するために使われてきた。 「蛋白質」　「ペプチド」　「ポリペプチド」という用語は、この出願では互換 性をもって使われていて、１個以上のアミノ酸をもつ化学化合物を意味する。こ こで使われている「化合物」という言葉は一般的な化学的化合物を指す、つまり 、「化合物」とは蛋白質、ペプチド、ポリペプチドを含む、さらに「化合物」の 範晴に含まれるのは、ポリペプチドが非ポリペプチドの部分と合体した融合化合 物である。この出願で使われているように、「天然で生じるＨＩＶ外被蛋白質」 という言葉は、蛋白質ｇｐ１６０．ｇｐ１２０．ｇｐ４１のみを指す、この出願 で使われているＨＩＶはＨＩＶ−１及びＨＩ　Ｖ−２を含むいかなるＨＩＶをも 意味する。 天然のｇｐ１２０　（ロビー（Ｒｏｂｅｙ）ら、（１９８６）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ 　Ｉ。 Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、８３ニア０２３−７０２７：マチｓ−（Ｍａｔｔｈｅｗｓ） ら、　［１９８６］Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、８３　：９７０ ９−９７１３）も、組み換え蛋白質（ラスキー（Ｌａｓｋｅｙ）ら（１９８６） Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２３：２０９−２１２；パトウニ−（ＰｕｔｎｅＶ）ら（１ ９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３４：１３９２−１３９５）も培養細胞においてＨ ＩＶを中和できる抗体を誘導する。しかしながら、これらの免疫原の全ては、そ のサブユニットに由来するウィルス変異体のみを中和する抗体しか誘導しない。 従って、多種類のウィルス変異体を防ぐことのできる新しいワクチンは、都合が 良く、ユニークなものとなろう。 ＨＩＶは、特にその外被遺伝子において、アミノ酸配列の変異を起こすことが知 られている（スターシンチ、　Ｂ、Ｒ６（ＳＬａｒｃｉｃｈ、Ｂ、Ｒ，）（１９ ８６）Ｃｅｌｌ　４５：６３７−６４８；バーン（Ｈａ　ｈｎ、　Ｂ、　Ｈ）ら 〔１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３２：１５４８−１５５３）。１００以上の変 異が分子クローニングと制限酵素認識分析によって、解析されてきた。またこれ らのいくつかは塩基配列決定法によって解析された。これらのうちいくつかはＲ Ｆ（ボポビノ久Ｍら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２４：４９７−５００）、 ＷＭＪ−１（バーン、　Ｂ、　Ｈら（１９８６：１ｓｃｉｅｎｃｅ　２３２：１ ５４Ｂ−１５５３）、ＬＡＶ（ウエインーホブワン、Ｓ　（Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓ ｏｎ、Ｓ）ら［１９８５）Ｃｅｌｌ　４０：９−１７）、ＡＲＶ−２（サンチュ ーベスカドール、Ｒ，（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｅｓｃａｄｏｒ、Ｒ）ら（１９８５ ）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２７：４８４−４９２）として知られるＨＩＶ単離株である 。この発明の１つの特長は、基本的な中和領域を含むＨＩＶの部分を決定するこ とである。基本的な中和領域は、ＨＩＶ外被のアミノＭ２９６と３３１のシステ ィン残基の間に位置する。アミノ酸の教え方は、ＨＩＶ−ｎｌＢの報告されてい る配列（ラッター。 Ｌ（Ｒａｔｎｅｒ、Ｌ）ら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ　３１３：２７７−２８４ ）に従っている。この領域は超可変であるが、ウィルスの中和に関連した型特異 的な抗原及び免疫原としての性質を保持していることが、知られている。 出願の対象となっている発明のさらなる特長は、主要な中和領域内の高度に保存 されたアミノ酸の発見である。 この領域の、ある配列は発表されているけれども（例えば、Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、ｐ ｕｂｌｉｓｈｅｄ　ＰＣＴ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ、Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ、ＷＯ３７１０２７７５：Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　Ｃｏｒｐｏｒ ａｔｉｏｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｋｉｎｇｄｏｍ　Ａｐｐｌｉ ｃａｔｊｏｎ　Ｎｏ、ＣＢ　２１９６６３４　Ａ；Ｓｔｉｃｈｔｉｎｇ　Ｃｅｎ ｔｒａａｌ　Ｄｉｅｒｇｅｎｅｅｓｋｕｎｄｉｇ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｕｔ、Ｐｕｂ ｌｉｓｈｅｄ　ＥＰＯＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｎｏ、０３１１２１９を参照） ここで述べられる保存された領域の存在は、以前には全く報告されていなかった 。 ウィルス感染した細胞から単離されたウィルス蛋白質、或いは組み換え蛋白質を 使用した診断キット、或いは治療薬は、これらの蛋白質を単離したウィルス変異 株に対して、特異的な抗原決定基をもつであろう。多種類の変異株からの蛋白質 を含む薬は、より幅広い抗原決定基を含むためより幅広（反応できる有利性をも つだろう。これは、患者からの血清のスクリーニング、或いは患者の治療におけ る処置の上で有利であろう。 合成ペプチドは、製造が容易である点、構造と提示の状態を変えることが可能で ある点から、ワクチン、治療薬、診断薬の活性成分として、有用性が高いと言え よう。 合成ペプチドは、幸運にも口蹄疫（ｆｏｏｔ　ａｎｄ　ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａ ｓｅ）ウィルス（ビトル（Ｂｉｔｔｌｅ）ら［１９８３）Ｎａｔｕｒｅ　２９８ ：３Ｏ−３３）ｉポリオウィルス（エミ＝（Ｅｍｉｎｉ）ら（１９８３）Ｎａｔ ｕｒｅ　３０５：６９９）；Ｂ型肝炎（ゲリン、Ｇｅｒｉｎら（１９８３）Ｐｒ ｏｃ。 Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、８０：２３６５−２３６９）；インフルエンザ（ シャビラ（Ｓｈａｐｊｒａ）ら［１９８４）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｙ、Ａｃａｄ。 Ｓｃｉ、８に２４６１〜２４６５）に対するワクチンに使われてきた。 今５．ＩＤｓのワクチンを開発すべき切迫した必要性がある。そのようなワクチ ンは、様々なＡＩＤＳウィルス変異株に対して、宿主を免疫するのに効果的であ れば、都合が良い。 主型Φ簡里星概！ 本発明は、ＨＩＶの主要な中和領域を決定し、診断薬、治療薬、予防薬の開発の ために）ＩＩＶ外被蛋白質のこの部分を利用する方法を開示する。より具体的に は、ＨＩＶの主要中和領域は、ＨＩＶ外被蛋白質のシスティン残基２９６と３３ １の間に存在する。この位置は表１に示されている。主要な中和領域の特定のア ミノ酸配列は、変異株の間で非常に多様であることが知られているけれども、我 々はこの領域のペプチドが、必ず中和抗体を生じさせ及び／又は中和抗体と結合 できることを発見した。この予期せぬ発見は、ＡＩＤＳの防止、診断、処置のた めの戦略と構図を描くための基礎を与える。 主要な中和領域（「ループ」としても知られている）の発見は、多くのＨＩ　Ｖ 変異株からの、多種類の外被蛋白質とペプチドに関する広範な研究の結果であっ た。中和抗体を生ぜしめ、及び／又は中和抗体と結合することも可能な蛋白質、 及びペプチドが、ここで開示される。これらの新しいＨ１ｌ蛋白質、ペプチド、 或いはそれらの均等物は、ＡＩＤＳの診断、予防、及び又は治療にも使えるだろ う。さらにそのペプチドは、ＨＩＶ感染の予防、診断、治療に役立つポリクロー ナル、及びモノクローナル抗体の産生、或いは同定のための、免疫原、或いはス クリーニング試薬として、使用可能である。 この発明のさらなる特長は、主要な中和領域内の高度に保存された領域の発見で ある。この発見は、ＨＩＶ外被蛋白質のこの部分内のアミノ酸配列の既知の多様 性のため、全く予期せぬものであった。 本発明の蛋白質とペプチドは、アミノ酸配列とそれをコードしているＤＮＡによ って、ここに正体を明らかにされる。つまり、それらは、既知の化学合成法、或 いは組み換えＤＮＡ技術によって、調製することができる。 これらのペプチド、或いは、これらのペプチドの抗原、或いは免疫原の性質をも っているペプチドは、宿主における幅広い中和抗体を誘導するためのワクチン（ 例えばペプチドのカクテル）に、効果的に使われよう。さらにこれらのペプチド は連続的に使用することもできよう０例えば、まず、１つのＨＩＶ変異株の主要 な中和領域と同等なペプチドで免疫し、引き続いて上記ペプチドの１つ、或いは それ以上で免疫できる。これらのペプチドに結合するポリクローナル、或いはモ ノクローナル抗体は、ＨＩＶ、及びＡＩＤＳの原因因子の予防、治療に有効であ ろう。 図厘Φ旦垂秦説朋 図１は、主要な中和領域の共通に生じる配列を示している。 図２は、多抗原決定基の遺伝子構築の概略である。 図３は、特定の多抗原決定基遺伝子の構築の段階を描いている。 図４は、多抗原決定基遺伝子の構築に対応する、４つの合成された１木鎖オリゴ マーの配列を示している。 発明Ω庇梃な説朋 ここで記載されるのは、中和抗体を生ぜしめ、及び／又は中和抗体と結合もする ＨＩＶ外被外被蛍白一部である。このユニークで全く予期しなかった性質は、調 べられた個々の）ＩＩＶ変巽体において、観察された。興味の対象となる領域は 、「主要中和領域」と名付けられた。主要中和領域は位置２９６と３３１にある システィン残基によって、はさまれている。これらの同しンステイン含有残基が ２９６よりもむしろ３０２に始まるように迷ぺられている（ルノソエ、Ｊ、　Ｒ ｏ（Ｒｕｓｃｈｅ、Ｊ、Ｒ）ら［９８８）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、５ｃ ｉｔＪｓＡ　８５　（１５）：３１９８−３２０２）のは、注目すべきである。 システィン残基はジスルフィド結合によって、結合するので、その残基の間の部 分は、ループを形成する傾向にある。それ故、主要中和領域は「ループ」とも言 ねる。 主要中和領域としてここで同定されている外被蛋白質の領域は、ＨＩＶ変異株の 間で非常に多様であることが知られている。そして、驚くべきことは、この領域 が個々の変異株で、中和抗体を誘発し、及び／又は中和抗体と結合できるという ことである。 ここで同定された主要中和領域は、）（ＩＶ外被蛋白質の小さな断片である。こ の小断片は、望むならば、特定の目的のために、付加的なアミノ酸と結合させる ことができる。そのような全ての蛋白質は、そのような蛋白質が天然に生しるＨ Ｉｖ外被蛋白質以外に、ここで特許請求されている。ここで使われたように「天 然に生しる外被蛋白質」とはｇｐ１６０．ｇｐ１２０．ｇｐ４１のみを言う。 表１に掲げられているのは、調べられた変異株のいくつかの主要中和領域の配列 である０表９は、主要中和領域の完全なリストを含んでいる。 アミノ酸は、３文字、或いは１文字の略語形式を使って、記されている。以下は 共通のアミノ酸とそれらの略語のリストである。 アスパラギン酸　ＡＳｐ　Ｄ Ａｓｎおよび／またはＡｓｐ　Ａｓｘ　ＢＧｌｎおよび／またはＧｌｕ　Ｇｌｘ 　Ｚグリシン　ｃｒｙ　Ｇ ９スチジン　Ｈ４ｓ　Ｈ ｌ。 以下は主要中和領域を含む蛋白質とペプチド、或いは、主要中和領域の断片の１ 、ＨＩＶ　１０Ｋｄ融合蛋白質は、Ｓｕｂ　１で表す、Ｓｕｂ　１（７）ＨＩＶ 部分のアミノ酸配列は、表２に示されている。５ｕｂｌのＨＩＶ部分のＤＮＡ配 列は表２Ａに示されている。５ｕｂｌのアミノ酸配列は表２Ｂに、ＤＮＡ配列は 表２Ｃに示されている。 ２、ＨＩＶ　１８Ｋｄ融合蛋白質はＳｕｂ　２で表す、５ｕｂ２のＨＩＶ部分の アミノ酸配列は表３に、Ｓｕｂ　２のＨＩＶ部分のＤＮＡ配列は表３Ａに示され ている。Ｓｕｂ　２の全アミノ酸配列は表３Ｂに、全ＤＮＡ配列は表３０に、示 されている。 ３、ＨＩＶ　２７Ｋｄ融合蛋白質は、ＰＢｌｌＦで表す、ＰＢｌｌｒのＨＩＶ部 分のアミノ酸配列は表４に、ＦＢＩ□のＨＩＶ部分のＤＮＡ配列は表４Ａに、掲 げられている。ＰＢｌｌＦの全アミノ酸配列とＤＮＡ配列はそれぞれ表４Ｂアミ ノ酸配列は表５に、ＰＢＩＭＨのＨＩＶ部分のＤＮＡ配列は表５Ａ　Ｌこ、示さ れている。ＰＢ１ｓ＋＋の全アミノ酸配列とＤＮＡ配列は、、それぞれ表５Ｂと ５０！こ示されている。 ５、）（ＩＶ　２６Ｋｄ融合蛋白質はＰＢｌｓｃＴ：表す、ＰＢｌｓｔ（７）Ｈ ＩＶ部分のアミノ酸配列は表６に、Ｐ　Ｂ　１　ｓｔのＨＩＶ部分のＤＮＡ配列 は表６Ａ’こ、示されている。ＰＢｌｓｔの全アミノ酸配列とＤＮＡ配列は、そ れぞれ表６Ｂと６０に示されている。 ６、ＨＩＶ　２６Ｋｄ融合蛋白質はＰ　Ｂ　１　ｗａｘで表す。Ｐ　Ｂ　１−５ ｉｘの）（Ｉ　Ｖ部７Ｂと７０に示されている。 利用できる。括弧内の他のアミノ酸は、免疫学的には活性のないスペーサーであ Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｈａ　Ｐｈｅ　ＶａｌＴ ｈｒ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　ＬｙｓＧｌ ｙ　Ａｓｎ　Ｍｅｔ Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　ｌｉｅ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　ＴｈｒＧ ａｙ　Ｉ　ｌｅ　Ｉ　ｌｅ　Ｇｌｙ　（Ｃｙｓ）ゴ１フ」二ＬＬよ（単履株ＨＩ Ｖ−ＷＭＪ２由来）：Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｌｅ ｕ　Ｓｅｒ　ＩｃｅＣ，Ｉｙ　Ｐｒｏ　ＧＩｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ａｒ ｇ　Ｔｈｒ　ＡｒｇＧｌｕ　Ｊ　Ｉｅ　Ｉ　ｌｅ　Ｇｌｙ　（ＣｙＳ）エズ至上 土工Ｉ（単離株ＨＴＶ−ＭＮ由来）：Ｔｙｒ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ 　Ａｒｇ　ｌｉｅ　Ｈ４ｓ　ｌ１ｅＧｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　 Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　ＴｈｒＬｙｓ　Ａｓｎ　１）ｅ　ｌｉｅ　Ｇｌｙ　（ Ｃｙｓ）ペプチド１４３（単離法ＨＩ　Ｖ−Ｓ　Ｃ由来）：Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔ ｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｉｒｅ　Ｈ４ｓ　１１ｅＧｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇａ ｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　ＴｈｒＧｌｙ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ 　Ｊｌｅ　Ｇｌｙ　（Ｃｙｓ）ぴブチド１３１　（単離株Ｈｒｖ−ｍＢ由来〕　 ：（Ｔｙｒ）Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈ ｒＡｒｇ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｔｌｅ　Ａｒｇ　ｌｉｅ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ ペプチド１３２（単離法ＨＩ　Ｖ−ｍＢ由来）：Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌ ａ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　ＧｌｙＬｙｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ 　Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ａｈａ　ＨｉｓＧｌｕ　Ａｒｇ　Ｖａｔ　Ａｌａ　 Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｇｌｎ　５ｅｒＶａｌ　Ｇｌｕ　ｌｉｅ　Ａｓｎ　Ｃ ｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　ＡｓｎＡｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｌｙ ｓ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅさ１土上１（単離法ＨＩ　Ｖ−ＲＦ由来）　：ｌｉｅ　Ｔｈ ｒ　Ｌ）Ｉｓ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｔ　ＩｃｅＴｙｒ　（Ｃ ｙｓ） 且旦盈土工（単離株ＨＩＶ−ＷＭＪ２由来）：Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｉｃｅ　Ｇｌｙ 　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　ＰｈｅＡｒｇ（Ｃｙｓ） 且旦主王立鳴離株ＨＩＶ−３Ｃ由来）；１１ｅ　Ｈｆｓ　Ｔｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒ ｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅｌｌｅ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ 　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　ＡｓｎＴｈｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　ＩｃｅＲ Ｐ３３７　（単離株ＨＩＶ−Ｉ［ＩＢ由来）：Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ 　Ｉｌｅ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｐｒ。 Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　（Ｃｙｓ）ＲＰ７７　（単離株１（ＩＶ−１ ［ＩＢ由来）：Ｇａｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｈａ　ＰｈｅＲＰ８３　（ 単離株ＨＩＶ−ＷＭＪＩ由来）：Ｈｆｓ　Ｉｌｅ　Ｈｉｓ　Ｉｌｅ　Ｇａｙ　Ｐ ｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ＡｌａＰｈｅ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｇａｙ　（Ｃｙｓ）凡 旦ユ旦ユ単離株ＨＩＶ−ｎｌＢ由来）：Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌ ｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ（Ｃｙｓ）尺且旦ユニ ｌｉｅ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｈｆｓ　ＣｙｓＡ ｓｎ　Ｔｉｅ　Ｓｅｒ 旦ヱＪ」−： Ａｌａ　Ｈｉｓ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｊｌｅ　５ｅｒＲＰ７５Ａ： （Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｈａ　Ａｌａ）Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ Ａｒｇ　（Ａｈａ　Ａｈａ　Ａｌａ　Ａｈａ　Ａｌａ　Ｃｙｓ）ＲＰ５６　： １１ｅ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｐｒ。 １旦ｎ上 １１ｅ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　ｌｉｅ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｈｆｓ　ＣｙｓＡ ｓｎ　Ｉｌｅ　５ｅｒ ＲＰ３４２（ＩＩ離株ＨＩＶ−ＭＮ由来）：１１ｅ　Ｈｉｓ　ｌｉｅ　Ｇｌｙ　 Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　ＰｈｅＴｙｒ　Ｔｈｒ　（Ｃｙｓ） ＲＦｅ５　（ＨＩＶ−ＭＮ関連）： （Ｃｙｓ）Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｈｉｓ　ｌｉｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　（Ｃｙｓ）ＲＰ９７　（Ｉ（ＴＶ−ＭＮ関連 ）： （Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ）Ｉｌｅ　）Ｉｔｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌ ｙＡｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　（Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ）ＲＰ ９８　（）ｆｌＶ−ＭＮ関連）： （Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇａｙ　Ｇｌｙ）Ｉｌｅ　Ｈｆｓ　ｌｉｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒ。 Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ（Ｃ；Ｉｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ ）ＲＦｅ５　（ＨＴＶ−ＭＮ関連）： （Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ）ｌｉｅ　Ｈｆｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒ。 Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　（Ｇｌｙ　Ｇｌ）’　５ｅｒ）（Ｓ ｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ）Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　ｌｉｅ　Ｈｉｓｌｌ ｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ（ＧｌｙＧｌｙ 　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ） ＲＰ１０２： （Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ）Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　５ｅｒ １］ｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　ＧＩｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ（（１，ｌｙ　Ｇｌ ｙＡｒｇ　ｌｉｅ　Ｈｉｓ　ｌｉｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｃｙｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌ ａＰｈｅ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ ｌｌｅ　Ｌｅｕ　Ｔｂｒ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　、Ａｓｐ （Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ）Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ（Ｇｌｙ　Ｃ；Ｉｙ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ ）ＲＰ１０６： （Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ）Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｈｉｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒ。 Ｇａｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ（Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ）ＲＰ１０ ８： （Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ）Ｈｆｓ　Ｉｃｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ（Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　５ｅｒｌ ｉｅ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　ＡｓｎＬｙ ｓ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｔｉｅ　Ｈｆｓ　ｌｉｅ　Ｇａｙ　Ｐｒ。 Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ１ １ｅ　ｌｉｅ　Ｃｌ３Ｆ　Ｔｈｒ　Ｔｉｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　ＨｉｓＣ ｙｓ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　５ｅｒ ＲＰ８４　（単離株ＨＩ　Ｖ−ＭＮ由来）　：１１ｅ　Ｈｆｓ　Ｉｌｅ　Ｇａｙ 　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　ＰｈｅＴｙｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　（Ｃｙｓ ） ＲＰ１４４（単離株７８８７−３由来）：Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａ ｒｇ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　ＴｉｅＧｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｈ ａ　ｌｉｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　ＴｈｒＣｌｕ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｔｌｅ　Ｇｌｙ （Ｃｙｓ）ＲＰ１４５　（単離株６５８７−７由来）：Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ 　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｔｉｅ　Ｈｉｓ　ｒｌｅＧｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　 Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　ＴｈｒＧｌｙ　Ａｓｐ　Ｉ　Ｉｅ　 Ｉ　Ｉｅ　Ｇａｙ　（Ｃｙｓ）ＲＬＬ！Ｌｉ（単離株ＣＣ由来）： Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　ｌ１ｅＣ １ｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　ＡｌａＡｒ ｇ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　ｌｉｅ　Ｇｌｙ（Ｃｙｓ）Ｒヱユ」ｊ−（単離株ＫＫ２６ １由来）：Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ 　ＶａｌＣｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　 ＡｒｇＨｉｓ　Ｌｙｓ　Ｉ　ｌｅ　Ｉ　ｌｅ　Ｇａｙ　（Ｃｙｓ）ＲＰ１５０　 （単離株ＡＲＶ−２由来）：Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ 　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　ｌ１ｅＣｒｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　 Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　ＴｈｒＣｌｙ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ（Ｃｙｓ）Ｒ Ｐ１５１（単離株ＮＹ５由来）： Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　ｌｉｅ　Ａｌａ　ｌ１ｅＧ ｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　ＡｒｇＧｌ ｕ　Ｌｙｓ　ｌｉｅ　Ｈｅ　Ｇｌｙ（Ｃｙｓ）０．１つ以上の変異株からの配列 を含む混成ペプチドＲＰ７３　（単離株ＨＩＶ−Ｉ［ＩＢ、ＨＴＶ−ＲＦ由来） ：Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　ＩＩｅ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　ＧＩｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒ。 Ｃ１ｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ（Ｃｙｓ）Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｈｆｓ　 Ｉｌｅ　Ｇａｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ＡｌａＰｈｅ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　Ｌ ｙｓ　Ｓｅｒ　Ｔｉｅ　Ａｒｇ　ｌｉｅ　ＧｉｎＡｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌ ｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　ｌｉｅ　Ｔｙｒ（Ｃｙｓ）ＲＰ８０　（華離株）１１Ｖ− Ｉ［ＩＢ、ＨＩＶ−ＲＦ由来）：Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐ ｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌｌ　１ｅ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　（Ｃｙｓ） ＲＪｊＬＬ（単離株ＨＮＩ−１［ＩＢ、ＨＩＶ−ＲＦ、ＨＩＶ−ＷＭＪｌ、ＨＩ Ｖ−ＭＮ由来）： Ａｒｇ　ｌｉｅ　Ｈ４ｓ　ｌｉｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ＡｌａＰ ｈｅ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｉｃｅ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｃ１ｙＰｒ ｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｔ　ｌｉｅ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ（Ｃｙｓ）且旦 旦Ｉ（隼離株ＨＩ　Ｖ−ＭＮ、　ＨＩ　Ｖ−ＮＭＪ　１由来）：Ａｒｇ　ｌｉｅ 　Ｈ４ｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ＡｌａＰｈｅ　Ｔｙｒ　 Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　（Ｃｙｓ）ＲＰ８Ｂ　（単Ｍ株ＨＩ　Ｖ−ＭＮ、　ＨＩ　Ｖ− ５Ｃ由来）Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｈ４ｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ 　ＡｌａＰｈｅ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　（７１７（Ｃ７Ｓ）ＲＰ１３７　（ 単離株ＨＩＶ−１［ＩＢ、ＨＩＶ−ＲＦ由来）Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ 　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　ｌ１ｅＴｈｒ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　 Ｇａｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　ＶａｌＴｈｒ　ｌｉｅ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｉ ｃｅ　Ｇｌｙ（Ｃｙｓ）ＲＰ１４０　（単離株ＨＩＶ−１［ＩＢ、ＨＩＶ−ＲＦ 由来）：Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　ｌｉｅ　Ｔｈｒ　 ＬｙｓＧｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　Ａｒｇ　Ａｈａ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　１ ｉｅＧｌｙ　Ｌｙｓ　Ｉ　Ｉｅ　Ｇｌｙ　（Ｃｙｓ）Ｐｅ　ｔｉｄｅ６４　（単 離株ＨＩＶ−１１１Ｂ、ＨｒＶ−ＲＦ、ＨＩＶ−ＭＮ、ＨＩＶ−ＳＣ由来）： Ａｒｇ　ＩＩｅ　Ｈｒｓ　Ｉｃｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　Ａｒｇ　Ａｌａｌ ｌｅ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｃ１ｙ　Ｐｒ。 Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａ　ｌ　Ｉ　ｌｅ　Ｔｙｒ　（Ｃｙｓ）Ｐｅ　ｔｉｄｅｌ　 Ｂ（単離株ＨＴＶ−Ｉ［ＩＢ、ＨＩＶ−ＲＦ由来）：Ａｒｇ　Ｉｃｅ　Ｇｉｎ　 Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ＶａｌＩｃｅ　Ｔｙｒ（Ｃｙｓ） Ｐｅ　ｔｉｄｅ１３Ｂ　（単離株ＨＩＶ−１［ＩＢ、ＨＩｖ−ＲＦ由来）：Ａｓ ｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　ｌｉｅ　Ａｒｇ　ｌ１ｅＧｌｎ 　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　ｌｉｅ　ＴｙｒＡｌａ　 Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｉｃｅ　Ｇａｙ（Ｃｙｓ）ＲＰ６３　（Ｉ［ｌｌ−Ｒ Ｆ混成）： Ａｒｇ　ｌｉｅ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｇａｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌｌ ｌｅ　Ｔｙｒ　（Ｃｙｓ） Ｄ１種々のペプチド配列 １旦Ａユニ Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｃ１ｙ　Ａｒｇ ＲヱＪ」２； Ｇａｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ（Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｈａ（ Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ）Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　ＧａｙＡ ｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ（Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｃｙｓ）ＲＰＩＩＩ： １１ｅ　ＧＩｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　ｌｉｅ　Ｇｌｎ　ＡｒｇＧ ｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　（Ｃｙｓ） ＲＰ１１３： Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　ＧｌｙＰ ｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　ＡｒｇＡｒ ｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇａｙ　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　ＡｒｇＧｌｙ 　Ｐｒｏ　Ｃ；Ｉｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ（Ｃｙｓ）Ｇｌ ｙ　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　Ａｒｇ　Ａｈａ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　ＧａｙＡｒｇ 　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｃｒｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　ＰｈｅＳｅｒ　 Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｉｃｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ＡｌａＰｈｅ　Ｔ ｙｒ　Ｔｈｒ　（Ｃｙｓ） ＲＰ１２１ｃ　： （Ｃｙｓ）Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　（Ｃｙｓ）ＲＰ１２２ｃ　： （Ｃｙｓ）ｌｉｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ（Ｃｙｓ）ＲＰ１ ２３Ｃ： （Ｃｙｓ）Ｈ４ｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｃ１ｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ （Ｃｙｓ） 本発明でとり上げられている蛋白質とペプチドは、よく知られている合成方法で 作られる。それとは別に、これらの物質は、組み換えＤＮＡ法を利用して作られ る。そのような組み換えＤＮＡの過程は、実際に、この発明の新しい蛋白質とペ プチドを得るために、まず利用されたので、ここにおいて明らかにされている。 しかしながら、一旦これらの物質が調製され、配列が決定されれば、技術に熟練 した人にとっては、それらの物質を作るのにより通した方法は、化学合成法によ るものであろう０例えば、ここで明らかにされた分子サイズの蛋白質やペプチド を即座に作ることのできる利用可能な自動装置がある。 この発明の蛋白質とペプチドの幾かを作る組み換えＤＮＡ法には、ｐ　ＲＥＶ２ ．２と呼ばれる発現ベクターが使われた。このプラスミドは、ｐＢＧｌと呼ばれ るプラスミドから作られた。 プラスミドＰＢＧＩは、宿主大腸菌ＭＳ３７１に入った状態で、Ｎｏｒｔｈｅｒ ｎＲｅｇｉｏｎａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＮＲＲＬ、ｔ Ｊ。 Ｓ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ、Ｐｅｏｒｉａ。 Ｔｌ１ｉｎｏｉｓ、ＵＳＡ）に寄託された。それは、この貯蔵機関の永久保存物 である。大腸菌ＭＳ３７１　（ｐＢＧｌ）、ＮＲＲＬ　Ｂ−１５９０４，は、１ ９８４年１１月１日に寄託された。今では、大腸菌ＭＳ３７１、ＮＲＲＬ　Ｂ− １５１２９は、公げに入手可能である。 プラスミドｐＲＥＶ２．２は、宿主大腸菌ＪＭ１０３に入った状態で、ＮＲＲＬ に１９８６年７月３０日に寄託された。大腸菌ＪＭＩ　０３　（ｐＲＥＶ２．２ ）は、寄託番号ＮＲＲＬ　Ｂ−１８０９１を受けた。ＮＲＲＬ　Ｂ−１５９０４ とＮＲＲＬ　Ｂ−１８０９１は、それらを開示している特許の許可に基いて、制 限なしに誰もが利用可能であろう。 ここで記載されている他の大腸菌株は、以下のように寄託された。 大腸菌５Ｇ２０２ｓ１、ＮＲＲＬ　Ｂ−１５９１８は、１９８４年１２月１２日 に寄託された。 大腸菌ＧＡＧ６２９　（ｐＫＨｌ）＝　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８０９５は、１９８６ 年７月３０日に供託された。 この後者の寄託は、宿主細胞からプラスミドを分離する標準的な方法を、適用し て、ここで書かれている宿主大腸菌ＣＡＧ６２９を使うことができる。出願中の 培養細胞は培養細胞が、３７ＣＦＲ１，１４と３５ＬＩＳＣ１２２の条件下で米 国特許庁長官によって権限を与えられた者に対しては、培養細胞を開示している 特許出願の出願中でも、入手可能なことを保証する条件下で、寄託された。その 寄託物は本出願に対応する米国以外の出願またはそれから派生した出願について も各国の特許法によって要求されるように、入手可能である。但し、寄託物の入 手性は、政府によって許可された特許櫓を減損させて出願中の発明を利用するラ イセンスの設定をすることではないことは理解されるべきである。 さらに、出願中の培養寄託物は、ブダペスト条約の規定に従って、公共的に保管 さ損料用されるだろう６例えば、それらは、生存能力を維持するために必要な全 ての注意を払い、保管されるだろうし、寄託されたサンプルの最も最近要求され た供給後、少なくとも５年間、また、どんな場合でも、寄託臼から少なくとも３ ０年間或いは培養物の開示を含んで発行された全ての特許をを効期間、培養細胞 が汚染にさらされないように保たれるだろう、寄託の条件のために、要求された 時にサンプルの供給が不可能な場合には、寄託者は寄託物を取り替えるａ務を承 認する。対象となる培養寄託物の公共利用に関する全ての制約は、それらを開示 した特許が認められれば、不可逆的に取り除かれるであろう。 出願された発明の新しいＨＩＶ蛋白質とペプチドは、サノカロマざシス・セルビ シエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）の誘導可能なガラ クトース・プロモーターをもつプラスミド（ブローチ、Ｊ、Ｒ（Ｂｒｏａｃｈ。 Ｊ、Ｒ，、）　、　Ｙ、リー（Ｙ、Ｌｉ）、Ｌ、Ｃ，−ＩＬ−（Ｌ、Ｃ，Ｗｕ） 、　Ｍ、ジャラム（Ｍ、Ｊａｙａｒａｍ）［１９８３：ｌ　ｉｎ　Ｅｘｐｅｒｉ ｍｅｎｔａｌＭａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｒ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ ｎ、ｐ、８３゜Ｍ、イノウニ（Ｍ、Ｉｎｏｕｙｅ）！、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒ ｅｓｓ）を用いて、発現させることができる。これらのプラスミドは、ＹＥｐ５ １とＹＥｐ　５２（ブローチ、Ｊ、　Ｒら（１９８３））と呼ばｆｔ、大腸菌複 製開始点、β−ラクタメース遺伝子、酵母ＬＥＵ２遺伝子、２μｍ複製開始点、 そして２μｍ円ＲＥＰ３座をもつ０組み換え遺伝子発現は、酵母ＧＡＬ１０遺伝 子プロモータームこよって、引き起こされる。 ガラクトースとアルコールデヒドロゲナーゼ（ペンネソツェン、Ｊ、Ｌ。 （Ｂｅｎｎｅｔｚｅｎ、Ｊ、Ｌ、）とＢ、　Ｄ、ホール（Ｂ、　Ｄ、　Ｈａ　Ｉ 　１）（１９８２）Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２５７：３０１８；アンメラー、 Ｇ。 （Ａｍｍｅｒｅｒ、Ｇ、）［１９８３）ｉｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙ ｍｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ、１０１．　ｐ、１９２）、ホスホグリセレートキナーゼ 〔デリヌノ久Ｒ，（Ｄｅｒｙｎｃｋ、Ｒ，）、Ｒ，Ａ、　ハイツ７：／　（Ｒ， Ａ。 Ｈｉｔｚｅｍａｎ）、Ｐ、Ｗ、グレイ（Ｐ、　Ｗ、Ｇｒａｙ）、Ｄ、Ｖ、ゴエデ ル（Ｄ、Ｖ、Ｇｏｅｄｄｅｌ）［１９８３）ｉｎ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　 Ｍａｎｊｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ｐ、２４ ７゜Ｍ、イノウニ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）、）リオス　フォスフェ ートイソメラーゼ（ｔｒｉｏｓｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｉｓｏｍｅｒａｓｅ） （アルバー、　Ｔ、（Ａｌｂｅｒ、　Ｔ、　）、Ｇ、カワサキＣＧ、Ｋａｗａｓ ａｋｉ）［１９８２）Ｊ、Ｍｏ１ｅｃ、ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔ、 １：４１９）、或いはエノラーゼ（イネス、Ｍ、Ａ、（Ｉｎｎｅｓ、Ｍ、Ａ、） ら〔１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２６：２１）のような酵母プロモーターも使 用できる。 ここで開示された遺伝子は、サルの細胞で発現できる。これらの蛋白質をコード している遺伝子を、オカヤマ（Ｏｋａｙａｍａ）とバーブ（Ｂｅｒｇ）によって 発表されているプラスミドの１つ（オカヤマ、Ｈ１とＰ、バーブ（１９８３）Ｍ ｏｌｅｃ、ａｎｄ　Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ、３：２８０）にクローン化し、そこに 参照されているように、これらのプラスミドで、コス（ＣＯ３）細胞を形質転換 すると、ＨＩＶ蛋白質の合成を免疫学的に検出できる。 他の哺乳類細胞の遺伝子発現／蛋白質産生糸も利用できる。他のそのような系の 例は、ワクシニア、ウィルス発現系（モス、Ｂ、（Ｍｏｓｓ、Ｂ、）（１９８５ ）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｔｏｄａｙ　６：２４３；チャクラパティ、Ｓ、（Ｃ ｈａ、ｋｒａｂａｒｔｉ、Ｓ、）、に、　プレデリック（Ｋ、Ｂｒｅｃｈｌｉｎ ｇ）。 Ｂ、モス（１９８５）Ｍｏｌｅｃ、ａｎｄ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、５：３４０３ ）とマウス・レトロウィルス由来のベクター（ムリガン、Ｒ，Ｃ，（Ｍｕｌｌｉ ｇａｎ、Ｒ，Ｃ，）（１９８３）ｉｎ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｍａｎｉｐ ｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｆｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ｐ、１５５．Ｍ、　 イノウニ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）である。 出願中の発明のＨＩＶ蛋白質とペプチドは、ＢＯＣとＦＭＯＣのような固相ペプ チド合成法（メリーフィールド、Ｒ，Ｂ、（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｒ，Ｂ。 ［１９６３）Ｊ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、８５：２１４９；チェノ、Ｃ０ （Ｃｈａｎｇ、Ｃ，）とＪ、メイエンホッフ７−（Ｊ、Ｍ６ｊｅｎｈｏｆｅｒ） （１９７Ｂ）Ｔｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、１１：２ ４６）によって、化学的に合成できる。 その技術においてよく知られているように、蛋白質のアミノ酸配列はＤＮＡのヌ クレオド配列によって、決定できる。遺伝子コードの重複のため、すなわち、３ つぞろいのヌクレチド（コドン）をコードしている１つ以上の遺伝コードが、蛋 白質を作るために使われるアミノ酸の大部分に用いられるため、違ったヌクレオ チド配列が、特定の１つのアミノ酸をコードできる。そして、以下に遺伝コード を記す。 フェニルアラニン（Ｐｈｅ）ＴＴＫ　ヒスチジン（Ｈ４ｓ）　ＣＡＫロイシン（ Ｌｅｕ）　ＸＴＹ　グルタミン（Ｇｉｎ）　ＣＡＪイソロイシン；（ｌｉｅ）　 ＡＴＭ　アスパラギン（Ａｓｎ）　ＡＡＫメチオニン（Ｍｅｔ）　ＡＴＣリジン （ＬｙＳ）　ＡＡＪバリン（Ｖａｌ）　ＧＴＬ　アスパラギン酸（Ａｓｐ）　（ 、ＡＫセリン（Ｓｅｒ）　ＱＲ３グルタミン１１１（ＧＪｕ）　ＧＡＪプロリン （Ｐｒｏ）　ＣＣＬ　システィン（Ｃｙｓ）　ＴＧＫスレオニン（Ｔｈｒ）　Ａ ＣＬ　）リプトファン（Ｔｒｐ）　ＴＧＧアラニン（Ａｌａ）　ＧＣＬ　アルギ ニン（Ａｒｇ）　ＷＧＺチロシン（Ｔｙｒ）　ＴＡＫ　グリシン（Ｇｌｙ）　ｃ ｃｒ−終止シグナル　ＴＡＪ 終止シグナル　ＴＧＡ 注：各３文字デオキシヌクレオチドトリプレットは、ｍＲＮＡのトリヌクレオチ ドに対応しており、５′末端が左側で３′末端が右側となっている。ここで示す すべてのＤＮＡ配列は、チミンをウラシルと置き換えるとｍＲＮＡ配列に対応す る配列を持つ鎖で表している８文字は、デオキシヌクレオチド配列を形成するプ リントまたはピリミジン塩基を表す。 Ａタアデニン Ｇ−グアニン Ｃ歇シトシン Ｔミチミン Ｘ−もしＹがＡまたばＧならばＴまたはＣＸ−もしＹがＣまたはＴならばＣ Ｙ＝もしＸがＣならばＡ、　Ｇ、　ＣまたはＴｙ＝もしＸがＴならばＡまたはＧ Ｗ＝もしＺがＡまたはＧならばＣまたはＡＷ＝もしＺがＣまたはＴならばＣ Ｚ＝もしＷがＣならばＡ、Ｇ、ＣまたはＴＺ−もしＷがＡならばＡまたはＧ ＱＲ＝もしＳがＡ、　Ｇ、　ＣまたはＴならばＴＣ；あるいはＱＲ＝もしＳがＴ またはＣならばＡＣ Ｊ＝ＡまたはＧ Ｋ＝ＴまたはＣ Ｌ＝Ａ、Ｔ、ＣまたはＧ Ｍ＝Ａ、ＣまたはＴ 上で示したのは、本発明のＨＩＶタンパク質およびペプチドの新しいアミノ酸配 列をここで開示したち以外のヌクレオチド配列によって調製され得ることを示し ている。これらのＨＪＶタンパク質およびペプチド、あるいはＨ■ｖの抗原性、 免疫原性、あるいは治療活性を有するそれらの断片の新しいアミノ酸配列をコー ドする、機能的に同等なヌクレオチド配列を、既知の合成法によって調製するこ とが可能である。したがって、本発明は、このような機能的に同等なヌクレオチ ド配列を含む。 以上のように、本発明の範囲はここに示した特異的なヌクレオチド配列のみを含 むだけではなく、実質的に同一の）ｆｌＶ抗原性、免疫原性、または治療活性を 持つ分子をコードするすべての同等なヌクレオチドをも含むものである。 さらに、本発明の範囲は開示した特異的なアミノ酸配列を含むのみでなく、ウィ ルス中和化の特性を持つ特異的なＨＩＶ抗体の産生の誘導および同抗体への結合 を行うかなりの能力を持つタンパク質またはタンパク質断片をコードする同よう な配列も含むことを意図している。 “同等な”という語は、本質的に同一種の宿主内で実質的に同一のＨＩＶ抗原性 、免疫原性、または治療活性を持つ分子を産生ずる、ここで同定されたヌクレオ チド配列として実質的に働くヌクレオチド配列を表すものとして、ここで元来の 特許用法において用いられる。この定義内で、サブフラグメントとはＨＩＶ抗原 性、免疫原性、または治療活性を存するものである。 上述のように、微生物による方法でＨＴＶタンパク質を産生ずるために、本発明 のＨＩＶ抗原性、免疫原性、または治療活性をコードするヌクレオチド配列を用 いることは、遺伝子工学分野の技術者には既知のことである。配列を発現ベクタ ーと連結し、真核生物細胞（酵母または哺乳動物細胞）または原核生物（細菌細 胞）のいずれかの宿主に形質転換または形質導入することは、例えばインシュリ ン、インターフェロン、ヒト成長ホルモン、ＩＬ−１，ＩＬ−２などの他の既知 のタンパク質の産生に用いられている標準的な手法である。同様な方法、あるい は明らかなその修飾法を、本発明において、微生物を用いること、または組体培 養技術によってＨＴＶタンパク質またはペプチドの調製に用いることが可能であ る。 ここで開示するヌクレオチド配列は、本分野で既知の方法により、“遺伝子機械 ”によって調製することができる。これはヌクレオチド配列の開示により可能と なるものである。 ここで示した制限酵母は、ベセスダ・リサーチ・ラボラトリーズ社（米国ミズリ ー州ガイタースバーグ）または二ニー・イングランド・バイオラブズ社（英国マ サチューセッツ州ベバリー）から購入可能である。酵素は販売元の指示にしたが って使用する。 プラスミドの調製および宿主生物の形質転換を行うための多様な方法は本分野で はよく知られてきる。これらの方法はすべてＴ、マニアナイス（Ｍａｎｉａｔｉ ｓ）、Ｅ、Ｆ、　フリンチｓ　（Ｆｒｉ　ｔｓｃｈ）、およびＪ、サムブルンク （Ｓａｍｂｒｏｏｋ）（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ、 Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａ＋（＝＋−ルドスブリングハーバー研究所、 ニューヨーク）に記載されている。したがって、ＤＮＡを微生物細胞から抽出す ること、制限酵素消化、ＤＮＡ断片の電気泳動、プラスミドとインサートＤＮＡ のティリングおよびアニーリング、ＤＮＡ連結、例えば大腸菌などの細胞の形質 転換、プラスミドＤＮＡの調製、タンパク質の電気泳動、およびＤＮＡ塩基配列 決定は、遺伝子工学分野の技術者には既知のものである。 本発明のＨＩＶタンパク質またはペプチドを用いる免疫化学的アッセイは、多様 な形態で行われ得る。望ましい態様の一つば液相アッセイであって、これは検査 する試料と）ＩＩＶ抗原を混合し、溶液中で免疫複合体を形成させ、それを多様 な方法によって検出するものである。望ましい別の態様は、固相免疫測定アッセ イである。固相アッセイにおいては、ＨＴＶタンパク質またはペプチドは固相上 に固定化さ娠抗原−免疫吸着体を形成させる。免疫吸着体を検査する試料とイン キュベートする。適当なインキュベート時間後、免疫吸着体を試料から分離し、 標識した抗（ヒ）ＩｇＧ）抗体を用いて免疫吸着体に結合したヒト抗−）１１Ｖ 抗体を検出する。免疫吸着体に結合した標識の蓋は、抗−ＨＴＶ抗体の存在下ま たは非存在下の評価をするための陽性または陰性コントロールと比較する巳とが できる。 免疫吸着体は、精製したＨＩＶタンパク質またはペプチドを固相に吸着または結 合させることによって調製される。ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、デ キストランなどの物質からできたビーズなどの、多様な固相を用いることができ る。他の適当な固相としては、これらの物質で作成された、またはコートされた チューブあるいはプレートが含まれる。 ＨＩＶタンパク質またはペプチドは、アミドまたはエステル結合による共有結合 または吸着などの技術によって固相に対して吸着結合で、あるいは非共を結合で 結合させることが可能である。ＨＩＶタンパク質またはペプチドが固相に固定さ れた後、例えば３％サカナゼラチンなどの動物性タンパク質でさらにコートす、 　ることが可能である。これよにり、免疫吸着体表面へのタンパク質の非特異的 吸着を減らすブロッキングタンパク質が供給される。 次に、免疫吸着体を、抗−ＨＩＶ抗体に関して検査する試料とインキュベートす る。血液スクリーニングの場合には、血漿または血清を用いる。血漿または血清 は正常動物血漿または血清で希釈する。希釈する血漿または血清は、抗−（ヒト １　ｇＧ）抗体を得たものと同一の動物種由来のものである。望ましい抗−（ヒ ト１ｇＧ）抗体はヤギ抗＝（ヒトＩｇＧ）抗体である。したがって、望ましい態 様では希釈はヤギ血清または血漿で行う。 ｐＨや温度などのインキュベーション条件、およびインキュベーション時間は重 要ではない。これらのパラメータは通常の実験によって最適化され得る。一般に 、インキュベーションは約４５℃で１〜２時間、ｐＨ７〜８の緩衝液中で行われ る。 インキュベーション後、免疫吸着体と試料を分離する０分離は、沈降または遠心 などの通常の分離技術によって行われる。つづいて、あらゆる阻害物質を除くた めに試料を洗うこともできる。 免疫吸着体を標識した抗−（ヒトＩ　ｇＧ）抗体（トレーサー）とインキュベー トして、それに結合したヒト抗体を検出する。一般に、免疫吸着体を、抗−（ヒ ）　７　ｇＧ）抗体を得た動物種の血清または血漿を少量（約］％）含む、標識 した抗−〔ヒトＩｇ（１）抗体？８液とともにインキュベートする。抗−（ヒト ＩｇＧ）抗体はいかなる動物からも得られる。しかしながら、ヤギ抗−（ヒ）　 ｌ　ｇＧ）抗体が望ましい。抗−（ヒトＩｇＧ）抗体は、例えば、ヤギ抗−（ヒ ）ＩｇＧ）ＦＣ抗体などの、ヒトＩｇＧのＦｃ断片に対する抗体で有り得る。 抗−（ヒトＩｇＧ）抗体または抗−（ヒトＩｇＧ）ＦｃはＩｔｓ　ｌなどの放射 性物質；蛍光物質などの光学標識；またはホースラディシュベルオキシダーゼな どの酵素で１ｍ可能である。抗−ヒト抗体をビオチン化し、標識したアビジンを 用いて免疫吸着体への結合を検出することもできる。 標識した抗体とのインキュベーション後、免疫吸着体を溶液から分離し、免疫吸 着体に結合した標識を算出する。標識の選択により、算出は多様な方法で行われ る。標識が放射性ガンマ線放出物質である場合には、標識はガンマカウンターで 検出可能であり、標識か蛍光物質であれば、蛍光針で検出することができる。 酵素の場合には酵素基質を用いて呈色反応を測定することによって標識を検出す ることができる。 免疫吸着体に結合した標識量は、抗−ＨＩＶ抗体の存在を決定するために、陽性 および陰性コントロールと比較する。コントロールは一般に検査試料と共に行う 、陽性コントロールはＨＩＶに対する抗体を含む血清である；陰性コントロール はＨＩＶに対する抗体を含まない健康由来の血清である。 簡便化と標準化のために、免疫測定アッセイを行うための試薬をアッセイキット としてまとめることが可能である。血液をスクリーニングするためのキットは、 以下のものを含む： （ａ）ＨＩＶタンパク質またはペプチドでコートしたポリスチレンビーズなどの 、免疫吸着体； （ｂ）正常ヤギ血清または血漿などの、血清または血漿試料の希釈液；（ｃ）約 １％のヤギ血清または血漿を含む、緩衝化した水溶液中のヤギ抗−（ヒ）　１　 ｇＧ）抗体などの、抗−（ヒトＩｇＧ）抗体：（ｄ）少なくとも一つの新しいＨ ＩＶタンパク質またはペプチドに対する抗体を含む血清などの、陽性コントロー ル；および（ｅ）少なくとも一つの新しいＨＩＶタンパク質またはペプチドに対 する抗体を含まない健康人由来の保存血清などの、陰性コントロール。 標識が酵素である場合には、酵素の基質もさらにキットに含まれる可能性がある 。 抗−ＨＩＶ抗体の別の態様のアッセイは、抗原サンドイッチアッセイである。 このアッセイでは、！！議したＨＩＶタンパク質またはペプチドを、抗−（ヒト ＩｇＧ）抗体の代わりとして、免疫吸着体に結合した抗−ＨＩＶ抗体の検出に用 いる。このアッセイは原理的には、抗体分子の２価性に基づくものである。抗体 の一方の結合部位が固相に固定された抗原に結合する；第２の結合部位は標識し た抗原に結合することができる。アッセイ法は、実質的に上述の免疫測定アッセ イと同一であるが、試料とのインキュベーション後、免疫吸着体を！！議したＨ ＩＶタンパク質またはペプチド溶液とインキュベーションする点が異なる。ＨＩ Ｖタンパク質またはペプチドはこの型のアッセイのために、放射性物質、酵素な どで標識することが可能である。 第３の型では、抗原抗体反応を阻害することなくＩｇＧ分子のＦｃ断片に結合で きる、細菌性タンパク質であるプロティンＡを免疫吸着体に吸着した抗−Ｈ１■ 抗体の検出のための標識トレーサーとして使用することができる。プロティンＡ は放射性物質、酵素、あるいは他の検出可能物質で容易にｍｓすることができる 。 ＨＩＶタンパク質またはペプチドを用いる免疫化学的アッセイは、全ウィルス（ または破砕したウィルス）を用いるものと比較して幾つかの利点を持つ、Ｈ１■ タンパク質またはペプチドに基づくアッセイは、感染能力のあるウィルスを大量 に培養することに対する配慮、および細胞培養とウィルス産生ずることに内在す る多様性を軽減する。さらに、このアッセイは、検査を行う病院、診療所、血液 銀行の技術者がＡＩＤＳにかかる現実の、または内在的な恐怖を軽減させること を助ける。 複数のウィルス多様体由来の組み換え外皮タンパク質を用いた免疫化学的アッセ イは、単一のＨ■■多様体由来のタンパク質を用いる場合と比較して、さらなる 利点を持つ。複数の多様体由来のタンパク質配列を用いたアッセイは、発散した ＨＩＶ多樟体に感染した患者集団中で抗体をより正確に検索する。また、異なる ［Ｖ多様体タンパク質を用いる固相酵素結合性免疫吸着体アンセイ（ＥＬＩＳＡ ）により、異なる地理的位置における流行の血清型の決定を可能にする。これま でどの抗体検出キットも１種類以上のＨＩＶ多様体を用いていなかったので、こ の決定はここで初めて可能となるのである。 ）（ＩＶ多多様由来の組み換えタンパク質の別の使用法は、試験動物中の多様体 特異的な抗血清を得るためである。この抗血清は、ある個人に感染したウィルス 多様体を同定するための試薬を塔えるものである。現在のところ、”ウィルス型 置！ｌ″′はウィルス遺伝子クローニングおよび塩基配列決定によってのみなさ れている。多様体特異的血清が患者のウィルス単離物に結合することにより、現 在不可能な迅速な検出法が供給される０例えば、ＰＢ１ｕ４．ＰＢＩＩＦ、ＰＢ ＩＮＮ。 Ｐ　Ｂ　１　＄Ｃ＋　およびＰＢＩ工、８と呼ばれるタンパク質に対して作られ た抗体は、臨床単離物がどのＨＩＶ多樺体と最も密接に僚でいるかを決定するた めに、愚者由来のウィルス単離物のスクリーニングに用いられる。この“スクリ ーニングは、既知の多様な抗体抗原結合法によって行われる。 ここで開示する１種以上のＨＩＶタンパク質またはペプチドを含むワクチン、お よび抗原性をもつその多様体は、本分野で既知の方法によって調製される０例え ば、このようなワクチンは、溶液または懸濁液などの注射可能な形態で調製する ことが可能である。注射に先立って液体に溶解または懸濁するような固体状態で 調製することも可能である。任意に、調製物は乳化させることもできる。活性の ある高原性内容物は、活性内容物と薬学的に受容可能で併用可能な基剤と混合す ることができる。適当な基剤の例としては、水、生理食塩水、デキストロース、 グリセロール、エタノールなど、およびその組み合わせが含まれるつさらに、望 むならば、ワクチンに、湿潤剤や懸濁剤、ｐＨ１ｉ衝剤、または水酸化アルミナ ムやムラミルジペプチドまたはその誘導体などのアジュバントなどを少量含ませ ることも可能である。ペプチドの場合には、ＫＬＨなどの巨大分子とカップルさ せることにより免疫原性が向上するばあいがある。ワクチンは通常、例えばｎｒ ｓ注射または筋肉注射などで、元来注射によって投与される。座薬および、幾つ かの場合には経口用処方を含む別の投与法に通したさらなる処方もある。座薬と して、伝統的な結合剤と担体としては、例えばポリアルカレンゲリコールまたは トリグリセリドが含まれる。座薬は約０２．５％から約１０％の範囲の、望まし くは約１から２％の活性内容物を含む混合物から作成される。経口処方は、通常 例えば、薬剤グレードのマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネ シウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの通常用い られる基剤を含む。これらの組成は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル、連 続的放出処方、または粉末の形態を取ることができ、約ｌＯ％から約９５％、望 ましくは約２５％から約７０％の活性内容物を含む。 化合物は中性または塩形態としてワクチンに処方することができる。薬学的に受 け入れられる塩としては、酸添加塩（ペプチドの遊離アミノ基と形成）が含まれ 、これは例えば塩酸やリン酸などの無ｌ！酸、あるいは酢酸、ンユウ酸、酒石酸 、マンゾリン酸などの有機酸と形成されるものである。有機カルボキシル基と形 成される塩も、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、ある いは水酸化第２鉄などの無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミ ン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロ力インなどの有機塩基から 形成される。ワクチン組成物は、主要な中和領域を含むタンパク質断片と組み合 わせてヘルパーＴ細胞エピトープを含むペプチドを含むことができる。これらの エピトープのいくつかはＨＩＶエピトープ中にマツプされ、これらの領域は増殖 およびリンパ球からのリンホカイン放出を刺激することが示されている。ワクチ ン中のこれらのエピトープの双方を与えることにより、体液性免疫および細胞性 免疫反応の双方が刺激されることになる。 あるいは、ワクチン組成物は一般的な免疫反応を増加させるように働く化合物を 含むこともできる。そのような化合物の一つとしてインターロイキン−２（ｒＬ −２）があり、これは一般的な免疫刺激により免疫原性を増幅させることが報告 されている（ナンハーグ（Ｎｕｗｂｅｒｇ）他、（１９８８）ＮｅｗＣｈｅｍｉ ｃａｌ　ａｎｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ　ｔ、。 Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ、コールドスプリングハーハー研究所、ニューヨーク州 コールドスプリングハーバ−）、ＩＬ−２はワクチン化の効率を増幅させるため に、ＰＮＤを含む）（ＩＶペプチドまたはタンパク質と結合させる場合もある。 ワクチンは投与量組成と適合する方法で、治療上効果的で免疫原性となる量を投 与する。投与量は、治療される患者、患者の抗体を合成する免疫系の容量、およ び必要とされる保護の程度シこ依存する。投与に必要とされる活性内容物の正確 な量は実施者の判断で決定され、個人によって異なるものである。し力もながら 、適当な投与量は１色者あたり約数１００マイクログラムの活性内容物である。 最初の投与と追加免疫の治療法も多様性のあるものであるが、典型的には最初の 投与の後１から２週間後に次の注射または別の投与を行う。 ）（ＩＶば、特に外皮タンパク質遺伝子において、アミノ酸配列の変化を示すこ とが知られている（Ｂ、Ｒ，スターチッヒ（Ｓｔａｒｃｉｃｈ）（１９８６）Ｃ ｅｌ１４５：６３７−６４８；Ｂ、Ｈ、バーン（Ｔ（ａｈｎ）他、（１９８６） Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３２：１５４Ｂ−１５５３）。１００以上の多様体が、分子 クローニングと制限酵素認識部位解析によって解析され、そのうちの幾つかがヌ クレオチド塩基配列決定によって解析された。それらのうち幾つかはＲＦ（ボポ ビノク（Ｐｏｐｏｖｉｃ）、Ｍ、他（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２４：４９ ７−５００）、ＷＭＪ−１（Ａ−ン、Ｂ、　Ｈ，他（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：１５４８−１５５３）、ＬＡＶ　（ウエインーホブワン（Ｗａｉｎ−Ｈ ｏｂｓｏｎ）。 Ｓ、他（１９８５）Ｃｅｌｌ　４０：９−１７）、およびＡＲＶ−２（サンチェ スーペスカドール（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｅｓｃａｄｏｒ）、Ｒ，他（１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２７：４８４−４９２）として知られているＨＩＶ単離物で ある。異なるウィルス単離物由来のＨＩＶペプチドは、異なるＨＩＶ単離物によ る感染に対する保護のためのワクチン調製に用いることができる。さらに、ワク チン調製物を、免疫性を与えるために】種類以上のＨＪ　Ｖ単離物の主要な中和 領域に対応する１［！頭板上の外皮タンパク質断片を用いて調製し、それにより ＡＩＤＳ４二対するよりよい保護を与え得ることが可能である。あるいは、１種 類以上のＨＭＶ単離物由来の主要中和エピトープのタンデムな配列から後世され る単一のタンパク質断片を用いてワクチン調製物を作成することもできる。ＨＩ Ｖの主要中和領域を同定することにより、このポリペプチド領域を有用なワクチ ン、治療薬、診断役の処方に応用することが可能である。 ここで開示する組み換えペプチドに対する抗体は、治療薬および予防薬として有 用である。多様なＨＩＶ多様体を中和することのできるポリクローナルまたはモ ノクローナル抗体の生成は、偶発的な感染の事象を減少させるため、および免疫 に危険のあるＨＴＶ惑染感染の治療に有用であり得る。さらムこ、免疫治療法は 躾つかの［Ｖ多様体εこわたって広く中和することのできるポリクローナル抗体 ＠誘導する可能性がある。多様なＪ（ＩＶ多楢体を中和する能力は、広範囲中和 抗体と呼ばれる。広範囲中和抗体は２種類以上のＨＩＶ多様体またはすべてのＨ １■多様体を中和する可能性がある。したがって、ＨＩＶ多様体の異なる群を中 和する広範囲中和抗体の混合物は、ＡＩＤＳの診断、予防、および治療に有用と なるであろう。 ５種のＨＩＶ多様体由来のペプチドで免疫することにより、２種で免疫した場合 には起こらなかったような、これら５種のＨＩＶ多様体以外も中和できる血清が 得られることは驚くべきことであり、有利な点である。実施例２２は、５種のペ プチドで免疫することにより広範囲中和血清が得られることが示されている。 異なるＨＩＶ多様体の超可変領域由来の幾つかの配列が単一の合成ペプチドとし て作成された場合にも、広範囲中和血清が生成される。さらにこの超可変領域中 の保存されたアミノ酸のみを含むペプチドを持つＲＰ１３６またはそれと同等の タンパク質で１度免疫した動物を再免疫することにより、広範囲中和血清が得ら れる可能性がある。この免疫法は、ワクチン作成のため、および治療薬として有 用な抗体を得るため有用であろう。 受動免疫ムこおける使用のための多価免疫グロブリンは、ウマを免疫すること、 あるいはヒト血清を保存し、血漿または血清からＴｇＧ成分を分画することによ って調製される。ヒトまたはマウスモノクローナル抗体を産生ずる細胞系は、標 準的なトランスフォーメーションおよびハイブリドーマ技術（Ｍｅｔｈｏｄｓｉ ｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ｖｏｗ、１２１，５ｅｃｔｉｏｎｓ　Ｉ　ａｎｄｌ 　１　（１９８６）　Ｊ、Ｊ、ランボーン（Ｌａｎｇｏｎｅ）とＨ，Ｖ、ブナキ ス（Ｖｕｎａｋｉｓ）ｍ集、アカデミツクブレス）。ＨＴＶモノクローナル抗体 はマツシフらによって報告されている方法によって調製可能である（マツシタ他 （１９８８）Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　６２　（６）：２１０ ７−２１１４）。多くの場合モノクローナル抗体はヒト以外の種で産生されるの で、それらはしばしばヒトに対して免疫原性をを持つ。これらのモノクローナル 抗体をヒトの治療でうまく使うためには、キメラ抗体分子を作成する必要があり 、それにおいてリガンド結合に関与するポリペプチド領域（可変領域）はある種 からのもので、構造的な安定性およびその他の生物機能を与える部分（非可変領 域）はヒト抗体由来のものである。可変領域がある宿三由来で非可変領域が第２ の宿主由来であるキメラ抗体の産生法は、本分野の技術者には既知のものである 。例えば、ライバーガー（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ）他、ＷＯ出版第８６１０１５３ ３、優先９／３／８４　；−Ｔ：リワン（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ）他、ＥＰ出版第０ 　１７３４９４号、優先８／２７／８６参照。可変領域の相補性決定領域（ＣＤ Ｒｓ）のみを望みの抗原特異性の免疫グロブリン由来のＣＤＲ５と交換すること によって抗体を作成する、別の方法がウィンター（Ｗｉｎｔｅｒ）によって報告 されている（ＧＢ出版第２　１８８　６３８号、優先３／２７／８６）。マウス モノクローナル抗体は、ヒｌ−Ｆ　ｃ領域を含む抗体を産生ずることによってヒ トの治療用に適合したものとなる（モリワン、Ｓ、Ｌ、（１９８５）Ｓｃｉｅｎ ｃｅ　２２９：１２０２−１２０７）、！立された方法により、このようなハイ ブリッドモノクローナル抗体の構築、発現、および生成をおこなうことができる 。免疫グロブリンを治療目的で投与する方法は、多数の感染病についてこれまで 用いられて来た。 ここでもちいる“抗体”という語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体 、完全に元の形の抗体あるいは完全抗体の免疫活性を持つ抗体断片を含むことを 意図する。”″抗体”という語には、異なる宿主種由来の可変領域と非可変領域 を持つキメラ抗体、あるいはＣＤＲのみが置き換えられたキメラ抗体も含まれる 。 ＨＩＶ怒染の治療のために、抗体を含む組成物を治療を必要とする患者または動 物に投与することができる。あるいは、こ二で述べたＨＩＶ抗原を、受容者自身 の免疫反応を刺激するために投与することも可能である。ＨＩｖ抗原で処置する 場合には、単一の抗原を投与するか、望ましくは広範囲中和抗原または抗原の混 合物を投与する。このような組成物は以下の実施例で詳細に述べる。 固定化効率を上昇させること、タンパク質の安定性を上昇させること、免疫原性 を上昇させること、免疫原性を変化させること、毒性を減らすこと、または複数 の変化を同時に行うことによって、有機合成によって作成されたペプチドを修飾 できることは、診断、治療、予防に用いる際に有用となり得る。例えば、アミノ 基またはカルボキン基の修飾によって全体の電化を増加または減少させるように 修飾することができる（アミノ基のカルバミル化、トリフルオロアセチル化、ま たはサクシニル化；カルボキシル基のアセチル化）、例えばＤ−アミノ酸やペプ チドの環状化によって、ペプチドをより安定にすることができる。免疫原性や溶 解性を増すために、脂質や炭水化物などの非タンパク質性物質と共に共有結合ま たは非共有結合でペプチドを修飾することができる。ポリエチレングリコールは 溶解度を増すために使用可能である０本発明は、修飾されたタンパク質および／ またはペプチドが実質的に元の化合物の抗原的／免疫原的性質をすべて保ってい る限りは、ここで示すタンパク質およびペプチドのすべてのこのような化学修飾 も含めるものである。 ペプチドは１種類以上のウィルス多様体の抗原性を含むように修飾することも可 能である。これは例えば口蹄疫ウィルスに関して行われた。 口諦疫ウィルスは、多数の多様体が存在し、一種の多様体での免疫が他の多様体 に対する保護になり得ない点で、ＨＩＶと類似している。免疫原としてのペプチ ドの真の有用性は、双方の天然多様体の特性をもつペプチドの修飾によって１種 以上の多様体に対する免疫がなされたことによって示された。このような修飾多 様体を実験動物の免疫に用いると、それらは口蹄疫ウィルスのＡ１０株とＡ１２ 株の双方に対して保護された（ブラウン（Ｂｒｏｗｎ）、Ｆ、ＶｉｒｕｓＶａｃ ｃｉｎｅｓＳＧ、ドレスマン（Ｄｒｅｓｓｍａｎ）、Ｊ、グロブリン（Ｂｒｏｎ ｓｏｎ）、Ｒ，ケネディ−（Ｋｅｎｎｅｄｙ）、ｐＰ、４９−５４　（１９８５ ））ＰＮＤエピトープを含むＨＩＶペプチドまたはタンパク質を、免疫原性を増 すために、無関係なウィルス粒子、複製中のウィルス、またそのほかの微生物と 結合させるまたは取り込ませることもできる。ＨＩＶエピトープを遺伝的あるい は化学的にウィルス粒子または微生物または免疫原性部分あるいはその化合物に 結合させることができる。抗原性エピトープを免疫反応を増幅させるためにウィ ルス性タンパク質または粒子に結合させた。例えば、ロタウィルスのＶＰ６キヤ ブンドタンパク質を、粒子の形でＶＦ６のモノマーまたはオリゴマーで、目的の エピトープの免疫原キャリアタンパク質として用いた（ＥＰ出版第０２５９１４ ９）、同様に、エバンス（Ｅｖａｎｓ）他（１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３３９＋ ３８５）は、Ｈｌエピトープの免疫原性を増加させるために、ポリオウィルスの キャプシドクンバク質とＨＩＶのｇｐ４］のエピトープのキメラを構築した。 外来抗原決定基が細菌細胞によって発現され、提出された。クローニングさメ１ ．たサルモ２う（Ｓａ　Ｉｍｏｎｅ　Ｉ　ｌａ）フラジェリン遺伝子を発現する サルモネラ株に、コ１／う毒素またはＢ型肝炎の表面抗原のエピトープか挿入さ れたものが、挿入されたエピトープに対する細胞性免疫反応および体液性免疫反 応の双方を引き起こすことが報告されたにュートン（Ｎｅｗｔｏｎ）他（１９８ ９）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４４ニア０−７２；およびウー（Ｗｕ）他（１９８９） Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８６：４７２６−４７３０） 。 実施例Ｉ８は、２種のＨＩＶ多欅多様来のアミノ酸配列を含むペプチドが２種の ウィルス特異的中和抗血清のウィルス中和活性をブロックできることを示してい る。このことにより、２種以上の）（ＩＶ多樺体の配列を含むペプチドまたはタ ンパク質は、２種以上のＨＩＶ多捧体に対して効果的な免疫反応を起こしうろこ とを示唆している。 実施例１９は、２種のＨＩＶ単離物由来の外皮タンパク質で共免疫することによ り、２種のＨＩＶ単離物の中和が可能な免疫反応を引き起こすことを示している 。これは、２種以上のＨＩＶ多様体由来のタンパク質で共免疫することにより２ 種以上のＨＩＶ多欅多様対して効果的な免疫反応を引き起こし得ることを示唆し ている。 以下は、本発明の過程を例示する実施例であり、最良の態様を含んでいる。これ らの実施例は制限を与えるものではない。すべての溶媒混合液の比率は、特に指 示のない限り体積比で示しである。 −六　１−ブースミド　ＲＥＶ２．２のｐＲＥＶ２．２　プラスミド発現ベクタ ーはプラスミドｐＢＧ１から作成された。プラスミドｐＢＧ１は、例えばクリア ーライセード等密度密度勾配法やそれと同様なものを用いる周知の方法によりそ の大腸菌宿主から単離できる。ｐＢＧｌと同様、ｐＲＥＶ２．２は大腸菌プロモ ーター下流に挿入された遺伝子を発現する。ｐＢＧｌとｐＲＥＶ２．２の相違点 は以下のことである：１、ｐＲＥＶ２．２は機能を有するプラスミド復製（ｒ旦 」−）タンパク質を欠如している。 ２、ｐＲＥｖ２．２はΔ土工■サイトに挿入された工Ａ転写ターミＺ−クーを有 する。この塩基配列は過剰発現遺伝子の転写終結を確実にする。 ３、ｐＲＥＶ２．２はアンピシリン及びクロラムフェニコールに耐性を示ス遺伝 子を含み、一方ｐＢＧ１はアンピシリン耐性のみを有する。 ４、ｐＲＥＶ２．２はいくつかの制限エンドヌクレアーゼのサイトをコードする 塩基配列を含む。 上に示した４つの相違を作り出すため、以下の方法が用いられた。 １ａ、５μｇのプラスミドｐＢＧ１を約２１６０及び３４４０塩基対の断片を生 ずるＮす互１で切断した。 １ｂ、Ｎｄｅｌのインキュベーション後、制限酵素反応液からの０．　１μｇの ＤＮＡを分子内結合が起き易い条件下でＴ４ＤＮＡリガーゼで処理を行った（標 準的なＴ４リガーゼ反応条件を用いた２００μ！の反応体積（Ｎｅｕ　Ｅｎｇｌ ａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ））ｅ３４４０塩基対断片の分 子内結合はアンピシリン耐性プラスミドとなる。 ライゲーション反応液で感受性大１１ｊｌｉ菌株ＪＭ１０３　（Ｎｅｕ　Ｅｎｇ ｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓから入手できる）を形質転換し、常法Ｇこ従し）アン ピシリン耐性クローンを選択した。 ｌｃ、生じたプラスミド、ｐＢＧｌから２１６０塩基対のＮｄｅｌ断片刃（除去 されたｐＢＧ１ΔＮは、アンピシリン耐性クローンからプラスミドを調製し、Ｎ ｄｅｌとΣ主↓１を用いて制限断片のパターンを決定することにより選択した（ 生ずる断片は約１７９０及び１６５０）、この欠失しまプラスミドの複製を調節 するＬ立ｚ遺伝子を不活性化する。 ２ａ、次に５μｇのｐＢＧ１ΔＮを旦工ｏＲＩ及び旦匹ＩＩで切断し、約２４５ ５塩基対の長い断片を単離した。 ２ｂ、以下に示す構造を有する合成二本鎖断片をイタクラら（Ｉｔａｋｕｒａｅ ｔａｌ、）の方法（イタクラ、　Ｋ、Ｊ、Ｊ、ｌｉｌンシ（Ｊ、Ｊ、Ｒ。 ５ｓｉ）Ｒ，Ｂ、　ウオレス（Ｂ、Ｂ、Ｗａ　ｌ　１ａｃｅ）（１９８４）Ａｎ ｎ、Ｒｅｖ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、５３：３２３−３５６及びその参照文献）により 調製した： ５’　ＧＡＴＣＡＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＧＴＣＧＡＣＧＣＡＴ３’　ＴＴＣＧＡ ＡＧＡＣＧＴＣＡＧＣＴＧＣＧＴＡＣＧＣＣＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＴＡＣＣＣＧ ＧＧＡＧＣＴＣＧ　３’ＴＡＧＧＣＣＡＴＧＧＧＣＣＣＴＣＧＡＧＣＴＴＡＡ　 ５’この断片は旦旦土Ｉ及び１立ｏＲＩの突出末端を持ち、いくつかの制限エン ドヌクレアーゼの認識配列を含む。 ２ｃ、０．１ｄｇの２４５５塩基対旦ｃｏＲＩ一旦旦↓Ｉ断片と０．０１ｄｇの 合成断片をＴ４ＤＮＡリガーゼで結合し、ＪＭ１０３株コンピテント細胞の形質 転換を行った０合成断片がｐＢＧ１ΔＮの足車上■と旦旦旦Ｒ１の間に挿入され た組換え体プラスミドを有する細胞を、プラスミドを旦り且■および旦立ｏＲＩ で切断することにより選択した。特徴的な断片の長さは約２３５５と２００塩基 対である。このプラスミドをｐＲＥＶＩと称する。 ２ｄ、５ｄｇのｐＲＥＶＴを一箇所のみ切断するΔｌ工■で切断した。 ２ｅ、以下に示す二本鎖断片を合成した：５’　ＣＧＧＴＡＣＣＡＧＣＣＣＧＣ ＣＴＡＡＴＧ３’　ＴＧＣＡＧＣＣＡＴＧＧＴＣＧＧＧＣＧＧＡＡＧＣＧＧＧＣ ＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＣＧＴ　３’ＴＴＡＣＴＣＧＣＣＣＧＡＡＡＡＡＡＡＡＣ ５’この断片はΔｌ工ｎ突出末端を持ち、１工ｚＡ転写絆結配列を含む。 ２ｆ、２０μｌの反応体積中でＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて、０．　１ｄｇのΔ 旦工■切断ＰＲＥＶＩと０．０１ｄｇの合成断片を結合した。 ２ｇ、コンピテントとしたＪＭＩ０３株の細胞を形質転換し、アンピシリン耐性 クローンを選択した。 ２ｈ、選択されたコロニーから分離したプラスミドのＫｌ旦１．ＥｃｏＲ１二重 切断を用いて正しいコンストラクションを含む細胞を単離した。 ｈ旦Ｉ、旦立ｏＲＩによって生ずる断片の長さは約２４７５及び８゜塩基対であ る。このプラスミドをＰＲＥＶＩＴＴと称し、それはｍＡ転写ターミネータ−を 有する。 ３ａ、上述のように（標準的な方法により）調製された５μｇ６）ｐＲＥＶＩＴ ＴをＮｄｅｌ及び〜にｍｎｌで切断し、約８５０塩基対の断片を単離した。 ３ｂ、アンピシリン及びテトラサイクリン並びにクロラムフェニコール耐性を付 与するプラスミドｐＢＲ３２５（ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ。 ＭＤ）５ｄｇをＢｃｌＩで切断し、クレノーポリメラーゼとデオキシヌクレオチ ドを用いて末端を平滑化した。酵素を不活化した後、反応液壱Ｎｄ旦Ｉで処理し 、約３１８５塩基対の断片を単層した９この断片はクロラムフェニコール及びア ンピシリン耐性の遺伝子並びに複製起点を含む。 ３ｃ、０．１ｄｇのｐＲＥＶＩＴＴ由来Ｎｄ　ｅ　Ｉ−Ｘｍｎ　Ｉ断片とｐＢＲ ３２５由来Ｎｄｅｌ一旦旦土Ｉ断片を２０μ！中でＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて 結合し、反応液をＪＭ１０３株のコンピテント細胞の形質転換に用いた。アンピ シリン及びクロラムフェニコールの双方に耐性な細胞を選択した。 ３ｄ、選択されたクローンから得たプラスミドの旦ｃｏＲＩ及びＮｄｅｌ二重切 断を用いて約２４８０．１１４５　及び４１０塩基対の大きさの断片を与えるプ ラスミドを選択した。これをプラスミドｐＲＥＶＩＴＴ／ｃｈｉと称し、これは アンピシリン並びにクロラムフェニコールに対する耐性遺伝子を有する。 ４ａ、以下の二本鎖断片を合成した。 Ｍｌｕｌ　ＥｃｏＲＶ　Ｃ１ａｌ　ＢａｍＨＩ　５ａｉｌ　Ｈ４ｎｄｌｌｌ　Ｓ ｍａ１５’　ＣＧＡＡＣＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＴＡＴＣＡＴＣＧＡＴＧＧ−ＡＴ ＣＣＧ丁ＣＧＡＣＡＡＧＣ丁丁ＣＣＣＧＧＧＡＧＣＴ　３’３’　ＧＣＴＴＧＣ ＧＣＡＣＣＧＧＣＴＡＴＡＧＴＡＧＣＴＡＣ−ＣＴＡＧＧＣＡＧＣＴＧＴＴＣＧ ＡＡＧＧＧＣＣＣ５’平滑末端及びＳｓ工Ｉ突出末端を持つこの断片は、いくつ かの制限酵素の認識配列を含む。 ４ｂ、５ｔｔｇのｐＲＥＶＩＴＴ／Ｃｈｌを％１ｕｌ（旦エユＩザイトがら約２ ０ヌクレオチドの所を切断する）及び５ｓｔｌ（マルチクローニングサイトを切 断する）で切断した。約３９９０塩基対の大きい方の断片をアガロースゲルから 単離した。 ４ｃ、０．１ｄｇのｐＲＥＶＩＴＴ／ｃｈ　Ｉ由来の凡工ｕｌ−Σｌ工■断片と ０．０１ｄｇの合成断片を２０μｌの体積中でＴ４ＤＮＡリガーゼで処理を行っ た。 ４ｄ、この反応液でＪＭ１０３株を形質転換し、アンピシリン耐性クローンを選 択した。 ４ｅ、いくつかのクローンからプラスミドを単離し、Ｍ１旦１又はｐ±ａｌを用 いた切断によりスクリーニングを行った。これらの酵素のいずれによる切断に於 いても、それぞれはプラスミドを１箇所しか切断しないため、新たなマルチクロ ーニングサイトを持つ組換え体クローンは１本の断片を生ずる。 ４ｆ、マルチクローニングサイトの塩基配列を実証した。これは、プラスミドを ＨｐａＩ及び旦ヱ且■で切断後１３９５塩基対の断片を単離し、ｍｐ１８の旦二 旦１サイトにクローニングして標準的方法を用いたジデオキシヌクレオチドシー クエンスにより塩基配列を決定した。 ４ｇ、このプラスミドをｐＲＥＶ２．２と称する。 只　２−バク−１ア　バク　−　ＲＥＶ２　１のプラスミドｐＲＥＶ２．１はプ ラスミドｐＲＥＶ２．２及び合成オリゴヌクレオチドを用いて作成された。生し たプラスミドはｐＰＢＩ−３ｕｂｌ及びｐＰＢｌ−５ｕｂ２の作成に用いられた 。 ｐＲＥＶ２．１の作成方法の例は以下のようなものである。 １、プラスミドｐＲＥＶ２．２を制限酵素Ｎｒ旦Ｉ及び旦ａｍＨＩで切断し、４ Ｋｂの断片をアガロースゲルから単離する。 ２、以下に示す二本鎖オリゴヌクレオチドを合成する：５’　ＣＧＡＡＣＧＣＧ ＴＧＧＴＣＣＧＡＴＡＴＣＡＴＣＧＡＴＧ　３’３’ＧＣＴＴＧＣＧＣＡＣＣＡ ＧＧＣＴＡＴＡＧＴＡＧＣＴＡＣＣＴＡＧ　５’３．１及び２の断片を２０μ！ 中でＤＮＡリガーゼを用いて結合し、コンピテント大腸菌細胞を形質転換し、ク ロムフェニコール耐性コロニーを選択する。 ４、Ｎ二重１サイトから旦且凪ＨＴサイトが挟む領域に２由来のオリゴヌクレオ チドを含み、再びこれらの制限酵素サイトを生ずるプラスミドクロー〉′が同定 される。このプラスミドｐＲＥＶ２．１と呼ぶ。 ／′Ｘ　３−ブースミド　ＦＢＩ−３ｕｂｌの　びそこが”の旦二重■サイトか ら旦工互■サイトに本質的にＨＩＶの立ｌヱ遺伝子をコードする約１６５塩基対 （ｂｐ）のＤＮＡを含み、そこからａｐ１２０エンベロープタンパク質のこの部 分を含む約１２Ｋｄの融合タンパク質が合成される。プラスミドｐＰＢＴ−３ｕ ｔ＋ｒは次のようにして作成され得る：１．１ラスミドｐ　Ｐ　Ｂ　１　＋＋　 ｒｍ’ｆｅＭ上旦ｌ及び旦工且■で切断し、約１６５ｂｐの断片を単離する。 ２、プラスミドｐＲＥＶ２゜１をＭｌｕｌ及びＳｍａ　Ｉで切断し、約４Ｋｄの 大きい断片をアガロースゲルから単離する。 ３．１７’ｌｌ製した断片とｐＲＥＶ２．１断片を２０ｕｆ（７）体１中でＴ４ ＤＮＡリガーゼをｍいて結合させ、その反応液でＣＡ０６２９株のコンピテント 細胞を形質転換し、アンピシリン耐性の形質転換体を選択する。 ４、適当な制限酵素パターンにより、ｇｐ１２０断片が正しい方向にクローニン グされ、融合タンパク質を生ずるような形質転換体を選別する。この組換え体プ ラスミドを持つ株を、５０ｄｇ／ｍＥのアンピシリンを含む２％培地中で生育さ せ、細胞タンパク質の全量を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで電気泳動を行う と、クマジーブルー染色又はプローブとしてＨ１■感染者から選択した血清を用 いるウェスタンプロット解析のいずれでも約１２Ｋｄのタンパク質が見られる。 ス　４−ブースミド　ＰＢＩ−３ｕｂｌ　、ＨＩＶエンベロープ　Ｉ　Ａ・え　 ンパク　の　制 御、細胞の培養：細胞はクマノブ（Ｃｈｅｍａｐ）（Ｃｈｅｍａ’ｐａｃ、Ｗ。 ｏｄｂｕｒｙ、ＮＹ）発酵槽中で１０リツトルの２％培地（２％酵母抽出エキス 、ハクトートリブトン、カザミノ酸（Ｄｉｒｃｏ、ＤｅＬｒｏｉｔ。 ＭＩＤ、０．２％−塩基カリウム、０．２％二塩基カリウム、及び０．２％二塩 基ナトリウム）で培養した。発酵温度３０’Ｃ，ｐＨ６，８、及び空気をｌｖｖ ｍで供給した。プラスミドの選択には２０μｇ　／　ｍ　１２のクロムフェニコ ールを供給した。典型的な細胞の収率（温重量）は３０ｇ／ｌであった。 ２、溶菌：組換え体Ｈ■■エンベロープ融合タンパク質を含む湿重量５０ｇの大 腸菌を最終体積１００ｍ１の５０ｍＭＴｒｉｓ−Ｃ１ｐＨ８，０，５ｍＭエチレ ンジアミンテトラ酢酸カリウム（ＫＥＤＴＡ）、５ｍＭジチオスレイトール（Ｄ ＴＴ）、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、０．　５％ＴＲＩＴＯＮ丁”− Ｘ−１００（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａ　ｙ、ＮＪ）　及び５ｍ Ｍ　フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）に再懸濁した。懸濁液を 室温で３０分間インキュベートした。 この材料を等容の０．１−０．１５ｍｍグラスビーズを含むＢＥＡＤ−ＢＥＡＴ ＥＲ”″（Ｂｉｏｓｐｅｃ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｂａｒｔｌｅｓｖｉ　ｌ　ｌｅ 、　ＯＫ）を用いて溶菌した。溶菌は室温で１分間隔で６分間行った。液体をビ ーズから分け、２０．０００Ｘｇで２．５時間遠心分離した。 上澄を除き、沈殿を１００ｍＡの８Ｍ尿素　２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃｊ２ｐＨ８ ，０，５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、５ｍＭＰＭＳＦ 、及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡに再懸濁した。ペレットをポリトロンホモジナイザー で可溶化し、２０．０００ｇで２時間遠心分離した。 ３、ＣＭりｏｖトゲラフイー：８Ｍ尿素、１０ｍＭ　４−（２−ヒドロキシエチ ル−１−ピペラジンエタン−スルホン酸（ＨＥＰＥＳ）ｐＨ６，５゜１５ｍＭ　 β−メルカプトエタノール、及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡで平衡化したＣＭ　ＦＡＳ Ｔ　ＦＬＯＷ　５ＥＰＨＡＲＯ５Ｅ”（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を詰めた１００ｍ ４２カラム（２，５ｃｍｘ２０ｃｍ）に室温で透析物を載せた。カラムを２００ ｍ尼の平衡化バッフイーで洗浄し、タンパク質を１．０リツトルのＯ−０，４Ｍ 　ＮａＣｆｆ１直線勾配で溶出した。 Ｈ１１タンパク質（］２Ｋｄ）は５ＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動によるア ッセイで約０．２Ｍ　ＮａＣｆｆで溶出された。 Ｓｕｂ　Ｉを含むフラクションをプールし、前述のカラムと同しバッファーで平 衡化しｔ’５−２００　（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）ゲル濾過カラムに添加すること により一層の精製が行われた。 ；′Ｘ　５−ブースミド　ＰＢＩ−３ｕｂ２の　−　びそこからのＰｖ旦■サイ トから足車且■サイトに本質的にＨＩＶ旦且ヱ遺伝子をコードする３２０ｂｐの ＤＮＡを含み、そこからｇｐ１２０エンベロープタンパク質のこの部分を含む約 １８Ｋｄの融合タンパク質が合成される。プラスミドｐＰＢ１−３ｕｂ２は次の ようにして作成され得る。 １、プラスミドｐＰＢ１＋＋ｕ＋をＭ↓旦Ｉ及び足車旦Ｉで切断し、約３２０ｂ ｐの断片を単離する。 ２、プラスミドＰＲＥＶ２．１をＭ１旦ＩおよびΣ二重Ｉで切断し、約４Ｋｄの 大きい断片をアガロースゲルから単離する。 ３．１で調製した断片とｐＲＥＶ２．１断片を２０μｌの体積中でＴ４ＤＮＡリ ガーゼを用いて結合させ、その反応液で５Ｇ２０２５１株のコンピテント細胞を 形質転換し、アンピシリン耐性の形質転換体を選択する。 ４、適当な制限酵素のパターンにより、ｇｐ１２０の断片が正しい方向にクロー ニングさり、融合タンパク質を生ずるような形質転換体を選別する。この組換え 体プラスミドを持つ株を、５０μｇ／ｍ１．のアンピシリンを含む２％培地中で 生育させ、細胞タンパク質の全量を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで電気泳動 を行うと、クマジーブルー染色又はプローブとしてＨＩＶ患者から選択した血清 を用いるウェスタンプロット解析のいずれでも約１８Ｋｄのタンパク質が見られ る。 六　６−ブースミド　ＰＢＩ−３ｕｂ２　ＨＩＶ工７べｏ−プ　１　人・え　ン バク　の１１＋ １、細胞の培養：細胞はケマソブ発酵槽中で１０リツトルの２％培地で培養した 。発酵温度３７°Ｃ，ｐＨ６，８、及び空気を１ｖｖｒｒｌで供給した。プラス ミドの選択には２０μｇ／ｍｌのクロラムフェニコールを供給した。典型的な細 胞の収率（温重ｌ）は３０　ｇ／ｌであった。 ２、溶菌：組換え体ＨＩＶエンベロープ融合タンパク質を含む湿重１５０ｇの大 腸菌を最終体積１００ｒｒ＋ｉ！の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃ１ｐＨ８，０゜５ｍ Ｍ　ＫＥＤＴＡ、５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、０． ５％　ＴＲＩＴＯＮ”−Ｘ−１００及び５　ｍ　Ｍ　Ｐ　Ｍ　Ｓ　Ｆに再懸濁し た。懸濁液を室温で３０分間インキュベートした。 この材料を等容の０．１−０．１５ｍｍグラスビーズを含ｔＢＥＡＤ−ＢＥＡＴ ＥＲ”を用いて溶菌した。溶菌は室温で１分間隔で６分間行った。 液体をビーズから分け、２０，０００Ｘｇで２．５時間遠心分離した。上澄を除 き、沈殿を１００ｒｒ＋ｊ！の６Ｍ塩酸グアニジン、２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃｐ 、　ｐＨ８，０，５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、５ｍ Ｍ　ＰＭＳＦ、及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡに再懸濁した。ペレットをポリトロンホ モジナイザーで可溶化し、２０．ＯＯＯＸｇで２時間遠心分離した。 上澄（９０ｍｊ２）を４リツトルの８Ｍ尿素、２０ｍＭ　ギ酸ナトリウム、ｐＨ ４，０，ＩｍＭ　ＥＤＴＡ、及び　１５ｍＭ　β−メルカプトエタノールに対し て透析した。透析は各回８時間又はそれ以上、バッファーを３回換えて行った。 スペクトラホール（Ｓｐｅｃｔｒａｐｈｏｒ）ｉｆＮチューブ（Ｓ／Ｐ、ＭｃＧ ｒａｗ　Ｐａｒｋ　ＩＬ）３．５Ｋｄ分子量限界のものを用いた。 ３、ＣＭクロマトグラフィー二８Ｍ尿素、２０ｍＭ　ギ酸ナトリウム　ｐＨ４， ０，１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール及び１ｍＭ　ＮａＥＤＴＡで平衡化し たＣＭ　ＦＡＳＴ　ＦＬＯＷ　ＳＥＰＨＡＲＯ３ＥＴＭ（Ｐｈａｒｍａ　ｃ　ｉ 　ｄ）を詰めたＩ　Ｏ０ｒｒｌカラム（２，５ｃｍｘ２０ｃｍ）に室温で透析物 を載せた。カラムを２００ｍｆｆの平衡化バッファーで洗浄し、タンパク質を１ ．０リツトルの０−０．４Ｍ　ＮａＣ１直線勾配で溶出した。ＨＴＶタンパク質 ｏａｋｄ）はＳ’ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によるアッセイで約０ ．２Ｍ　ＮａＣ１で溶出した。 ５ｕｂ−２を含むフラクションをプールし、前述のカラムと同しバッファーで平 衡化したＳ−２００（Ｐｈａｍａｃｉａ）ゲル濾過力うムムこ添加することによ り一層の精製が行われた。 六　７−人　ペプチド ペプチドの合成は、例えば自動ペプチド合成のような多様な確立された方法によ り行われ得る。ペプチドはクロスリンクされたポリスチレンビーズ上でカルボキ シル末端を始点として段階的にアミノ酸を付加してゆく固相合成（メリフィール ド、Ｒ，Ｂ、（Ｍｅｒｒｉｆ　ｉｅ　ｌｄ、Ｒ，Ｂ、）　（１９６３）Ｓ、Ａｍ 。 Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、８５：２１４９）により集成される。各合成は標準的なｔ− Ｂｏｃケミストリーを用いて自動ペプチド合成８！（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓ ｙｓｔｅｍｓ　４３０−Ａ）により行われた。アミノ酸は使用直前に反応性の高 い対象型無水物に共役させた。共役の難点を最小限とするため、共役バッファー としてジメチルホルムアミドを用いた。ニンヒドリンの定量分析を用いて各アミ ノ酸付加後の共役効率を測定した（セーリン、Ｖ、Ｋ、（Ｓａｒ　ｉｎ、Ｖ、　 Ｋ、　）。 Ｓ、　Ｂ、　Ｈ，ケント（Ｓ、　Ｂ、　Ｋｅｎｔ）、Ｊ、　Ｐ、タム（Ｊ、Ｐ、 Ｔａｍ）　。 Ｒ，Ｂ、メリフィールド（Ｒ，Ｂ、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）（１９８１）Ａｎａ ｌ。 Ｂｉｏｃｈｅｍ、１１７：１４７　１９８］）。 すべてのペプチドは脱保護され、ＨＦ切断にかわる方法を用いてポリスチレン支 持体から切り離した。ペプチドを含む樹脂をトリフルオロ酢酸、トリフルオロメ タンスルホン酸及び存機チオールスカベンジャーの混合液（タム、Ｊ、　Ｐ、　 。 Ｗ、Ｆ、　ヘス（Ｗ、Ｆ、Ｈｅａ　ｔｈ）　、ＲｏＢ、　メリフィールド［１９ ８６）Ｊ。 Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、１０８：５２４２）に再懸濁した。可溶性ペプチドを エチルエーテルで沈殿させ、エーテルを除去後、２００ｍＭ炭酸ナトリウム、３ Ｍ塩酸グアニジンに再懸濁した。未精製ペプチドを１．０ｃｍｘ２５ｃｍのＶｉ ｄａｃ準調製用Ｃ１ｌカラムの逆相クロマトグラフィーにより精製した。用いた バッファーは：　（Ａ）０．１％トリフルオロ酢酸水溶液及び（Ｂ）０．１％ト リフルオロ酢酸８０％アセトニトリル／２０％水溶液。 旦ヱ旦■サイトから旦且１１１サイトに本質的にＨＩＶ＋＋Ｆｅｎｖ遺伝子をコ ードする約５６５ｂｐのＤＮＡを含み、そこからｇｐ１２０エンベロープタンパ ク質のこの部分を含む約２７Ｋｄの融合タンパク質が合成される、プラスミドｐ 　Ｐ　Ｂ　１　＊ｒは次のように作成され得る： １、表４ＡのＤＮＡ断片を合成する。 ２、プラスミドｐＲＥＶ２．２を足車且ＲＶ及び旦ａｍＨ１で切断し、アガロー スゲルから約４Ｋｄの大きい断片を単離する。 ３．１で調製した断片とｐＲＥＶ２．２断片を２０μｌの体積中でＴ４ＤＮＡリ ガーゼを用いて結合させ、その反応液でＣＡＧ６２９株のコンピテント細胞を形 質転換し、アンピシリン耐性の形質転換体を選択する。 ４、適当な制限酵素のパターンによりｇｐ１２０断片が正しい方向にクローニン グされ、融合タンパク質を生ずるような質転換体を選別する。この組換え体プラ スミドを持つ株を５０μｇ／ｍ１．のアンピシリンを含む２％培地中３２℃で生 育させ、細胞タンパク質の全員をＳＤＳポリアクリルアミドゲルで電気泳動を行 うと、クマージーブルー染色またはプローブとしてＨＩＶ患者から選択した血清 を用いるウェスタンプロット解析のいずれによっても約２７Ｋｄのタンパク質が 見られる。 ス　９−ブースミド　ＰＢＩ　ＨＩＶエンベロープ凸　Ｉ　Ａ・　えＺどｌ質虫 禮製 １、細胞の培養：細胞はケマノブ発酵槽中で１０リンドルの２％培地で培養した 。発酵温度３０°Ｃ，ｐＨ６，８及び空気をｌｖｖｍで供給した。プラスミドの 選択には２０μｇ／ｍｌのクロラムフェニコールを供給した。典型的な細胞の収 率（質重量）は３０ｇ／！であった。 ２、溶菌：紐換え体ＨＩＶエンベロープ融合タンパク質を含む湿重量５０ｇの大 腸菌を最終体積１００ｍｊ！の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃ１ｐＨ８，０゜０．５ｍ Ｍ　ＫＥＤＴＡ、５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、０． ５％　ＴＲＩＴＯＮＴＭＸ−］　００及び５ｍＭ　ＰＭＳＦに再懸濁した。３０ ０ｍｇのリゾチームを加え、懸濁液を室温で３０分間インキュベートした。 この材料を等容積の０．１−０．１５ｍｍグラスビーズを含むＢＥＡＤ−ＢＥＡ ＴＥＲ”を用いて溶菌した。溶菌は室温で１分間隔で６分間行った。液体をビー ズから分け、２０．ＯＯＯＸｇで２．５時間遠心分離した。 上澄を除き、沈殿をＩ　ＯＯｍｆの８Ｍ尿素、２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃｊ！ｐＨ ８，０，０，５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール。 ５ｍＭ　ＰＭＳＦ、及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡに再懸濁した。”＜　Ｌ／　ノドを ポリトロンホモジェナイザーで可溶化し、２０．０００Ｘｇで２時間遠心分離し た。 上澄（９０ｍｆ）を４リツトルの８Ｍ尿素、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、ｐＨ６，５ ，１ｍＭ　ＥＤＴＡ、、及び１５ｍＭ　β−メルカプトエタノールに対して透析 した。透析は各回８時間またはそれ以上、バッファーを３回換えて行った。スペ クトラホール透析チューブの３．５Ｋｄ分子量限界のものを用いた。 ３、ＣＭクロマトグラフィ　：８Ｍ尿素、１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ　ｐＨ６，５゜ １５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、及び１ｍＭ　Ｎａ　ＥＤＴＡで平衡化し たＣＭ　ＦＡＳＴ　ＦＬＯＷ　５ＥＰＨＡＲＯ３ＥＴ＋を詰めた１００ｍ１カラ ム（２，５ｃｍｘ２０ｃｍ）に室温で透析物を載せた、カラムを２００ｍ１の平 衡化バッファーで洗浄し、タンパク質を１，０リツトルの０−０．４Ｍ　ＮａＣ ｆ直線勾配で溶出した。ＨＩＶタンパク質（２７Ｋａ）はＳＤＳポリアクリルア ミドゲル電気泳動によるアッセイで約０．２ＭＮａＣ１′Ｔ：溶出された。 ｐ　Ｂ　Ｉ　ＩＦを含むフラクションをプールし、前述のカラムと同じバッファ ーで平衡化したＳ−３００ゲル１１ｉ通カラムに添加することにより一層の精製 が行われた。 ・ス　１０−プラスミド　ＰＢｌｈの　そこか゛の旦工１■サイトから旦盈１■ サイトに本質的にＨｒ　Ｖ工見几ヱ遺伝子をコードする約６００ｂｐのＤＮＡを 含み、そこからｇｐ１２０エンベロープタンパク質のこの部分を含む約２８Ｋｄ の融合タンパク質が合成される、プラスミドｐＰＢＩＭＮはつぎのようにして作 成され得る。 １、表５六のＤＮＡ断片を合成する。 ２、プラスミドｐＲＥＶ２．２を旦ａ’ｍＨＩで切断する。 ３．１で調製した断片とｐＲＥＶ２．２断片を２０μ！の体積中でＴ４Ｄｂ；Ａ リガーゼを用いて結合させ、その反応液でＣＡＧ６２９株のコンピテント細胞を 形質転換し、アンビンリン耐性の形質転換体を選択する。 ４、適当な制限酵素のパターンによりｇＰ１２０断片が正しい方向にクローニン グされ、融合タンパク質を生ずるような質転換体を選別する。二〇組換体プラス ミドを持つ株を５０ｕｇ／ｍＡのアンピシリンを含む２％培地中３２°Ｃで生育 させ、細胞タンパク質の全量をＳＤＳポリアクリルアミドゲルで電気泳動を行う と、クマジーブルー染色またはプローブとしてＨＩＭ色者から選択した血清を用 いるウェスタンプロット解析のいずれによっても約２８Ｋｄのタンパク質が見ら れる。 ス　１１−ブースミド　ＰＢＩ　Ｎ’　ＨＴＶエンベロープ配置をムむ　ええｄ 以ｌ製 】、細胞の培養：細胞はケマップ発酵槽中で１０リツトルの２％培地で培養した 。発酵温度３０’Ｃ，ｐＨ６，８及び空気をｌｖｖｍで供給した。プラスミドの 選択には２０μｇ／ｒｒ＋ｆ！のクロムフェニコールを供給した。典型的な細胞 の収率（質重ｔ）は３０ｇ／Ｉｌであった。 ２、／８菌、＆ｌｌ換え体Ｈ■■エンベロープ融合タンパク質を含む湿重量５０ ｇの大腸菌を最終体積１００ｍｊ！の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃｆ！　ｐＨ８，０ ，０、５ｍＭ　ＫＥＤＴＡ、５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノ ール、０．５％　ＴＲＩＴＯＮＴＭＸ−１００及び５ｍＭＰＭＳＦに再懸濁した 。３００ｍｇのりゾチームを加え、懸濁液を室温で３０分間インキュベートした 。 この材料を等容積の０．１−０．１５ｍｍグラスビーズを含むＢＥＡＤ−ＢＥＡ ＴＥＲＴＭを用いて溶菌した。溶菌は室温で１分間隔で６分間行った。液体をビ ーズから分け、２０，０００Ｘｇで２．５時間遠心分離した。 上澄を除き、沈殿を１００ｍｊ！の８Ｍ尿素、２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃ１ｐＨ８ ，０，５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、５ｍＭ　ＰＭＳ Ｆ、及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡに再ｉ！！濁した。ペレットをポリトロンホモジェ ナイザーで可溶化し、２０，０００Ｘｇで２時間遠心分離した。 上澄（９０ｍｆｆｉ）を４リツトルの８Ｍ尿素、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、ｐＨ６ ，５，１ｍＭ　ＥＤＴＡ、及び１５ｍＭ　β−メルカプトエタノールに対して透 析した。透析は各回８時間またはそれ以上、バッファーを３回換えて行なった。 スペクトラホール透析チューブの３．５Ｋｄ分子量限界のものを用いた。 ３、ＣＭり０７トグラフイー：８Ｍ尿素、１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ　ｐＨ６，５゜ １５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡで平衡化したＣ Ｍ　ＦＡＳＴ　ＦＬＯＷ　５ＥＰＨＡＲＯＳＥ”を詰めた１００ｍｊｇカラム（ ２，５ｃｍｘ２０ｃｍ）に室温で分析物を載せた。カラムを２００ｍ１の平衡化 バッファーで洗浄し、タンパク質を１．０リツトルの０−０．４Ｍ　ＮａＣｊ！ 直線勾配で溶出した。ＨＩＶタンパク質（２８Ｋｄ）はＳＤＳポリアクリルアミ ドゲル電気泳動によるアッセイで約０．２ＭＮａＣ乏で溶出された。 ＦＢＩ工を含むフラクションをプールし、前述のカラムと同しバッファーで平衡 化したＳ−３００ゲル濾過カラムに添加することにより一層の精製が行われた。 ス　１２〜プラスミド　ＦＢＩ　の　とそこか′の旦ヱ旦■サイトから旦互ユ■ サイトに本質的にＨ■■、ｌＮ互ユヱ遺伝子をコードする約５７０　ｂ　ｐのＤ ＮＡを含み、そこからｇＰ１２０エンベロープタンパク質のこの部分を含む約２ ６Ｋｄの融合タンパク質が合成される、プラスミドｐＰＢ１ｓｃは次のようにし て作成され得る。 １、表６ＡのＤＮＡ断片を合成する。 ２、プラスミドｐＲＥＶ２．２をＥｃｏＲ及び旦ａｍＨ］で切断し、アガロース ゲルから約４Ｋｄの大きい断片を単層する。 ３、　１で調製した断片とｐＲＥＶ２．２断片を２０μ！の体積中で７４　ＤＮ Ａリガーゼを用いて結合させ、その反応液でＣＡＧ６２９株のコンピテント細胞 を形質転換し、アンピンリン耐性の形質転換体を選択する。 ４、適当な制限酵素のパターンによりｇｐ１２０断片が正しい方向にクローニン グされ、融合タンパク質を生ずるような質転換体を選別する。この組換え体プラ スミドを持つ株を５０μｇ　／　ｍ　ｉ！のアンピシリンを含む２％培地中３２ °Ｃで生育させ、細胞タンパク質の全量をＳＤＳポリアクリルアミドゲルで電気 泳動を行うと、クマノーブルー染色またはプローブとしてＨＪＶ色者から選択し た血清を用いるウェスタンプロット解析のいずれによっても約２６Ｋｄのタンパ ク質が見られる。 １示１］３−７”−スミド　Ｂ１　か゛の、ＨＩＶエンヘロース」見立ヱｌ上！ 上り−１Ａ・　え　ンパク　の　１ １、細胞の増殖＝２％培地で、チェマツプ（Ｃｈｅｍａｐ）発酵槽で１０リツト ル容量で細胞を増殖させた。発酵層は３０°Ｃ，ｐＨは６．８、空気をＩＶＶｍ で供給した。プラスミド′選択は２０ｔｔｇ／ｍＩタコラムフェニコールにより なされた。典型的な細胞収率は（生重量で）３０ｇ／尼であった。 ２、細胞溶解二組み換えＨＩＶエンベロープ融合タンパク譬を含む、生重量で５ ０ｇの大腸凹（旦、ｃｏｌｉ）を、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＣＱ　ｐＨ８，０，５ ｍＭＫＥＤＴＡ、５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール（β− ｍｅｒｃａｐｔｏａｔａｎｏｌＬ　Ｏ，５％　ＴＲＩＴＯＮ”ｘ−ｔｏｏ、５ｒ ｒ＋Ｍ　ＰＭＳＦ中に、最終容量１００ｍｆｆで再懸濁した。３００ｍｇのりゾ チーム（Ｉｉｓｏｚｙｍｅ）を加え、懸濁液を室温で３０分間保温した。 この物質を、等量の０．１−０．１５ｍｍグラスビーズを含むＢＥＡＤ−ＢＥＡ ＴＥＲＴ′を用いて溶解した。溶解は１分のインターバルをおきながら室温で６ 分間行われた。液体を、ビーズから分離し、２０．０００Ｘｇで２．５時間遠心 した。上澄を取り除き、ペレット（ｐｅｌｌｅｔ、）を８Ｍ尿素、２０ｍＭＴｒ ｉｓ−Ｃ１ｐｌ（８，０，５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノー ル、５ｍＭ　ＰＭＳＦ、１ｍＭ　ＫＥＤＴＡ　１００ｍｆに再懸濁した。ベレッ トをポリトロン　ホモジナイザー（ｐｏｌｙｔｒｏｎ　ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ ）を用いて可溶化し、２０．ＯＯＯＸｇで２時間遠心した。 上澄（９０ｒｒ＋ｊりを４　’Ｊ　ｙ　）ルの８Ｍ尿素、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ 、ｐＨ６，５，１ｍＭ　ＥＤＡＴＡ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、１ ｍＭＫＥＤＴＡに対して室温で透析した。透析したものを、８Ｍ尿素、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ　ｐＨ６，５，１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、］ｍＭ　ＫＥ ＤＴＡで平衡にしたＣＭ　ＦＡＳＴ　ＦＬＯＷ　５ＥＰＨＲＯ３Ｅ”をつめた１ ００ｍ４２カラム（２，５ｃｍｘ２０　ｃｍ）に室温でかけた。カラムを２００ ｍｆの平衡緩衝液で洗い、タンパク質を１，０リツトルのＯ−０，４Ｍ　＼ａＣ ！線型勾配でノ容量させた。５ＤＳ−ポリアク−リルアミド電気泳動によりアッ セイしたところ、、ＨＴＶタンパク質（２６Ｋｄ）はおよそ０．２Ｍ　Ｎａ（Ｊ のところで）容量されていた。 Ｐ　Ｂ　１　ｓｃを含むフラクションをプールし、前のカラムと同じ緩衝液で平 衡にしたＳ−３００ゲル濾過カラムにかけることで、更に精製を行なった。 実只　１４−ブースミド　Ｂｌ、Ｉ　の　ｌ　び実質的にＨＩ　Ｖｌｌ、ｌＪｚ 　ｅユヱ遺伝子を、コードしているおよそ５６０ｂｐのＤＮＡを含み、ｇ　ｐ　 １．２　Ｑエンベロープタンパク質のこの部分を含むおよそ２６Ｋｄの融合タン パク質を作り出すプラスミドｐ　Ｂ　ｉ　ＷＭＪ！は以下のように作製できる。 １、表７ＡのＤＮＡ断片の合成 ２、プラスミドｐＲＥＶ２．２の足車旦ＲＶと旦！凪ＨＩでの制限酸素処理及び 、およそ４Ｋｂの大きな断片のアガロースゲルからの単離３．１．で調製した断 片の、Ｔ４　ＤＮＡリガーゼを用いた２　０ｒｒｌの容量でのｐＲＥＶ２．２断 片とのライゲーション、ライゲーションミクスチャーのコンピテントセル株ＣＡ Ｇ６２９へのトランスフオーム、及びアンピシリン耐性トランスフォーマントの 選択。 ４、適当な制限パターンによる、融合タンパク質を作り出す適切な方向にクロー ンされたｇｐ　１２０断片を持つようなトランスフォーマントの選択。このリコ ンとナンドプラスミドを有す株を５０Ｍｇ／ｍｊ！アンピンリンを含む２％培地 で３２“Ｃで成長させ、細胞性タンパク質を総補体を５ＤＳ−ポリアクリルアミ ドに電気泳動し、およそ２６Ｋｄのタンパク質を、クマシーブルー（ｃｏｏｍａ ｓｉｅ　ｂＩｕｅ）染色あるいはプローブとしてＨＩＶ感染個体からの選択血清 を用いたウェスタンプロットアナリンスにより視覚化できる。 ス　１５−ＨＩＶエンベロープ　１必ｔ゛　み　え　ンバク　のブースミドＬ旦 上ヒ辻か夜の精製 １、細胞の増殖：２％培地中で、チェブマン発酵槽で１０リツトル容量で細胞を 増殖させた。発酵温度は３０°ｃ−ｐＨｔよ６．８で空気をｌｖｖｍで供給した 。プラスミド選択は２０Ｍｇ／ｍＲクロラムフェニコールで行なった。 典型的な細胞収率は（生重量で）３０ｇ／４であった。 ２、細胞溶解二組みかえＨＴＶエンヘローブ融合タンパク質を含む旦、ｃｏｌｉ を生重量で５０ｇだけ、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃ／４　ｐＨ８，０，５ｍＭＫＥ ＤＴＡ、５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール。 ０．５％　ＴＲＩＴＯＮ”Ｘ−１００，５ｍＭ　ＰＭＳＦに、最終容積１００ｍ ｊ２に再懸濁した。３００ｍｇのリゾチームを加え、懸濁液を室温で３０分間保 温した。 この物質を等量の０．１−０．１５ｍｍグラスビーズを含むＢＥＡＤ−ＢＥＡＴ ＥＲ”を用いて溶解した。溶解は、１分のインターバルをおきながら室温で６分 間行なわれた。液体をビーズから分離し、２０．ＯＯＯｘｇで２，５時間遠心し た。上澄を取り除き、ベレットを、８Ｍ尿素、２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ　−（ｌ　ｐ Ｈ８，０，５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール、５ｍＭ　Ｐ ＭＳＦ、１ｍＭ　ＫＥＤＴＡ　１００ｍ尼に再懸濁した。ペレットをポリトロン ホモジナイザーを用いて可溶化し、２０、ＯＯＯＸｇで２時間遠心した。 上ａ（９０ｍｊりを８Ｐ、４尿素、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、ｐＨ６，５，１ｍＭ 　ＥＤＴＡ、１５ｍＭ　β−メルカプトエタノ−）Ｌｉ４Ｉ！に対して透析した 。透析は、緩衝液を３回とりかえたか、各回８時間かそれ以上行なわれた。３． ５Ｋｄの分子量で区切るスペクトラファー透析チュービング（ｓｐｅｃｔｒａｐ ｈｏｒ　ｄｉａｌｙｓｉｓ　ｔｕｂｉｎｇ）が用いられた。 ３、ＣＭクロマトグラフィー・透析したものを、８Ｍ尿素、１０ｍＭ　ＨＥＰＥ Ｓ　ｐＨ６，５，１５ｍＭ　β−メルカプとエタノール、１ｍＭ　ＮａＥＤＴＡ で平衡にしたＣＭ　ＦＡＳＴ　ＦＬＯＷ　５ＥＰＨＡＲＯ３ＥＴ＋′＋をつめた １００ｍ４２カラム（２，５ｃｍＸ２０ｃｍ）に室温でかけた。 ２００ｍｊ：の千′＃緩衝液でカラムを洗い、０．０４Ｍ　ＮａＣＥの線型勾配 置リットルでタンパク質を溶出させた。５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳 動により分析したところ、およそ０．２Ｍ　ＮａＣＲ＋二てＨＩＶタンパク質（ ２６Ｋｄ＞がｌ容量巳た７ｐＢＩい、□を含むフラクションをプールし、前のカ ラムと同じ緩衝液で平衡にしたＳ−３００ゲル濾過カラムに通用することで、更 に精製を行なった。 二　］６−１人 Ｔ４ポジティブなＴ細胞に関して、Ｈ１怒染細胞の１旦　ｖｉｔｒｏでの融合が 、免疫血清の有無において測られている。これはよく知られたアッセイである（ パトニ−（ｐａｔｎｅｙ）ら、Ｃ１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３４：１３９２ −１３９５）。 慢性的に感染した細胞と未感染細胞（１：１５）を混ぜ、２４時間インキュベー トする。それから、融合した細胞（巨大細胞（ｇｉａｎｔ　ｕｌｌ）のフォーカ ス（Ｆｃｕｓ）を数える（通常約６０）。細胞を混ぜる時、免疫血清の、例えば 完全なＨＩＶエンベロープ（ｇｐ１６０）あるいは本発明のタンパク質またはペ プチドに対する血清の希釈液を加える。２４時間後の巨大細胞の９０％の減少は 、免疫血清が融合をブロックすることができることを示している。このアッセイ は、例えばＨＩＶＢかＨＩ　Ｖ　ＲＦといった様々なウィルス株に感染した細胞 についてなされることができる。 ス１７−ｒ人、６ム 実示例１６に記述されたアッセイを用いると、タンパク質のペプチドが、細胞融 合阻害を起こす抗体により認識されるエピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅ）を含んでい るかが、決定できる。例えば、元の出師のｐＢｌｌｌ［ｅに対する抗血清による ＨＩＶＩＩＩＩ怒染細胞の融合阻害は、ｐＢｌ　Ｌタンパク質を５μｇ／ｍｌで 加えることにより、戚する。ｐＢｌ　ｍｗに対する抗血清を用い、タンパク質や ペプチドのどれでも１つ、例えば５ｕｂ２，５ｕｂ１．ＣＮＢｒ１．ペプチド１ ３５あるいはペプチド１３６を５μｇ、／ｍ（２で加えると、ｐＢ１抗血清の活 性は全体的に抑えられる。更に、ＨＩＶ−ＲＦを中和できる、ｐＢｌ−ＲＦに対 する抗血清は、この活性においてペプチド１３９により抑えられる。ペプチド１ ３９の中央部分、例えばペプチド３３９し力・含まないペプチドも、ＦＢＩ−Ｒ Ｆに対する抗血清の融合阻害活性を抑えることができる。これにより、中和を引 き出し１こり融合を阻害する抗体を抑えるのＬこ必要な決定的なアミノ酸は１０ アミノ酸配列Ｃ例：ペプチド３３９）にまで初めて限定される。 ス　１８−　Ｂｌ−Ｉ［１と　Ｂ１　の此疫几　Ｃｏ−ｉｍｍｕｎｉｚａＬ上且 ユＬ ＨＩＶ＋＋＋ｍ単離体とＨＩＶ＋＋ｒ単離体からの２つのｐＢ１タンパク質で免 疫処理した動物からの抗血清は、ＨＩＶｕｎ及びＨＩＶＩＦ両惑染細胞感染胞融 合を抑えることができた。このことは、２つのＨ１ｊｌ離体のエンベロープ配列 を含む別々のタンパク質での共免疫処理が、両車体を中和することのできる免疫 反応を引き起こすことを実証している。免疫血清をブロックするという小さなタ ンパク質もしくはペプチドのこの新しい性質は、以前には記述されていないこと である。 本発明のタンパク質とペプチドの中には、）（ＩＶ感染を中和し、ＨＩＶに感染 した細胞の融合を抑える体液性免疫反応をひき起こすための完全なユビトーブを 含んでいるものがある。このことは完全なＨＩｖユビト−プで免疫処理した動物 からの血清に由来するこうした活性と以上のタンパク質とペプチドが競合するこ とにより示される。殊に、抗ｇｉ１６０または抗ｐＢ１血清からの活性と競合す ることのできるタンパク質及びペプチドは、５ｕｂ２，５ｕｂｌ、ＣＮＢｒ１゜ ペプチド１３５及びペプチド１３６である。 個体においてＨＩＶに反応する免疫システムを刺激することになるのではないだ プラスミドｐＢ＋は、本質的に、ＨＩＶ　ｅ立上遺伝子をコードしているＰｖ５ ′端に平滑末端を、３′端に旦ａｍＨＩオーバ〜ハング（ｏ　ｖ　ｅ　ｒｈａｎ ｇ）とライゲートできる末端を持っている。 ２．５μｇのプラスミドＰＢＥＶ２．２の旦且旦ＲＶ及び旦ａｍＨＩでの制限処 理と、アガロースゲルからのおよそ４Ｋｄの大きな断片の単離。 ３、表８の断片が１Ｍｇの、Ｔ４　ＤＮＡリガーゼを用いた２０ｒｒｌ容量での ＰＲＥＶ２．２断片０．　１Ｍｇとのライゲーション、ライゲーション　ミクス チャーのコンピテントセル株５Ｇ２０２５１へのトランスフォーメーション、及 びアンピシリン耐性トランスフォーマントの選択。 ４、精製したプラスミドのＡｈａｍ制限パターンを用いての、断片の平滑末端が 、ＲＥＶ２．２　足車旦ＲＶ末端にライゲートし、旦立ｍＨＩオーバーハング末 端同志が、ライゲートした方向で、合成断片を持っている組みかえプラスミドを 有した細胞の選択。適切なプラスミドのＡｈ且■消化は、およそ１２１０．１０ ２０．７５０．６９０，５００．３４０及び２０塩ＡＲＣまたはＨＩＶに感染し た個体からの選択血清を用いたウェスタンプロット分析により視覚化することが できる。 只　２０−ブースミド　Ｂｌ１　か”のＨＩＶエンベロープ　１　・　かμｇ／ ｍｌのクロラムフェニコールで行なわれた。典型的な細胞収率は（生重量で）３ ０ｇ／ｊ！であった。 ０．５％　ＴＲＩ　ＴＯＮ”Ｘ−１００及び５ｍＭ　ＰＭＳＦ中に最終容量１０ ０ｍｊ！にて再懸濁した。３００ｍｇのリゾチームを加え、懸濁液を室温で３０ 分間保温した。 この物質を、等量の０．　１−０．１５ｍｍグラスビーズを含むＢＥＡＤ−ＢＥ ＡＴＥＲ”（Ｂｉｏｓｐｅｃ、Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｂａｒｔｌｅｓｖ　ｉＩ　］ 　ｅ、　ＯＫ）を用いて溶解させた。溶解は１分のインターバルをおきながら室 温で６分間行なわれた。液体をビーズから分離し、２０，０００×ｇで２．５時 間遠心したヮ上澄を取り除き、ベレットを１００ｍｆの６Ｍグアニジン−塩酸、 ２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−（Ｊ　ｐＨ８，０，５ｍＭＤＴ７．１５ｍＭ　β−メルカ プトエタノール、５ｍＭ　ＰＭＳＦ、及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡ中に再懸濁した。 ポリトロンホモジナイザーを用いてベレットを可溶化し、２０．０００Ｘｇで２ 時間遠心した。 上澄（９０ｍｊ２）を４リツトルの８Ｍ尿素、２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＣＥ、ｐＨ ８，０，１ｍＭ　ＥＤＴＡ及び１５ｍＭ　β−メルカプトエタノールに対して透 析した。透析はバッファーを３回変えて各回８時間かそれ以上行なわれた。３． ５Ｋｄの分子量で区切るスペクトラファー透析チューブで（ＳＩＰ、ＭｃＧｒａ ｗ　Ｐａｒｋ、ＩＬ）が用いられた。 ３、ＣＭ　クロマトクラフィー：８Ｍ尿素、ｌ０ｍＭリン酸カリウム　ｐＨ７， ０，１５ｍＭ　β−メルカプトエタノール及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡ中に平衡にし たＣＭ　ＦＡＳＴ　ＦＬＯＷ　５ＥＰ）！ＡＲＯ３ＥＴＭをつめた５５０ｍ１！ カラム（５ｃｍＸ２８ｃｍ）に、透析したものを室温でかけた。 カラムを２リツトルの平衡パンファーで洗い、０．０４Ｍ　ＮａＣ１の５リツト ルの線型勾配でタンパク質を溶出させた。ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動に より分析したところ、）（ＩＶタンパク質（２６Ｋｄ）は、およそ０．２Ｍ　Ｎ ａＣ１のところで７容出した。 ス　２１−口く　る　゛を′るための　２つ、　るいはそれｐ上のベブ天且二Ω 免役処理 ５つのペプチド、即ち、ペプチド１３５．ペプチド１３９．ペプチド１４１゜ペ プチド１４２．ペプチド１４３を個々に、キャリアータンパク質（Ｃａｒｉｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）に交差結合させ、羊を免疫処理するのに用いた。各ペプチド は免疫原として個々ムこ用いると、タイプ特異的な中和を引きおこすことができ る。 サクシニミジル−４−（ｎ−マレイミドメチル）ンクロヘキサン　１−カルボン 酸（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いることにより、スルフィドリル（ｓｕｌｆｈｙｄｒｙ ｌ）結合を通じてキーホール　リンベット　ヘモシアニン（Ｋｅｙｈｏｌ　Ｉｉ ｍｐｅｔ　ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）（ＫＬＨ）に交差結合させた。ペプチドのＫ ＬＨに対する比は重量で１：２であった。交差結合させたペプチドの各々２００ μｇを、免疫処理カクテル（計１ｍｇの５ペプチド、２ｍｇのｋＬＨ）を用いた 。 交差結合や免疫処理法のこの手法は１例であって限定されたことを意図している のではない。４回の免疫処理後、免疫血清を、明らかに異なる単体と同様、これ らの５つのＨＩＶ担体の中和に対して試験した。免疫血清は、ペプチド配列が由 来しているところの５つの単体のどれでも感染した細胞の融合を抑えることがで きた。加えて、その血清は、免疫処理に眉いられなかった他の変体を中和した。 同等の広域性中和血清も、この免疫原の多様性によって得られるだろう。例えば 、５つ以上の変体からの主要な中和ドメインに由来したアミノ酸配列を持つ５つ 以上のペプチドを用いるこれまた、様々なＨＩＶ変体に相同なセグメント（ｓ　 ｅｇｍｅｎ　ｔ）を含んだシングルペプチド（例、ペプチド６４またはペプチド ７４）も、広域性の中和抗体を引きおこすのに用いられるかもしれない。 広域性中和抗体を引きおこすことのできる免疫処理のプロトコールは、主要な中 和ドメインあるいはそのセグメントに抗原的に同等のペプチドまたはタンパク質 で最初に免疫処理するという形をとることもあるだろう。最初の免疫処理に続い て２回目の免疫処理が行なわれる。最初の免疫処理は、例えば、ペプチド１３５ 、ペプチド１３９．ペプチド１４１、ペプチド１４２またはペプチド１４３で行 なわれ、続く免疫処理は例えば、以下のペプチドの１つあるいはそれ以上で行な われた： ＲＰ５７　ｌｉｅ　Ａｓｎ　Ｃ）’ｓ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　）（ ｉｓＣｙｓ　Ａｓｎ　ｌｉｅ　Ｓｅｒ ＲＰ５５　Ａｌａ　Ｈｉｓ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　５ｅｒＲＰ７５（Ａｌａ 　Ａｈａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｈａ　Ａｌａ）Ｇｌｙ　Ｐｒ。 Ｇｌｙ　Ａｒｇ（Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　ＡｌａＣｙｓ） ＲＰ５６　１１ｅ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｐｒ。 ＲＰ５９　１］、ｅ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｈ４ ５Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｔｉｅ　Ｓｅｒ 本手法はあるタンバグ質またはペプチド′で免疫処理してから、元の免疫原の明 確なセントに対する免疫反応を押し上げるようになっている。この免疫処理の手 法は、ワクチンの方法論において、また、治療応用のための広域性中和ポリクロ ーナルまたはモノクローナル抗体の産生にも有用と思われる。 只　２３−゛　な　ドメインの　なセグメントのｉ主要な中和ドメインのあるセ グメントは、全体としての主要な中和下ｊインと関係して抗原性及び免疫原性反 応を引き起こす能力があることがわかっている。 たとえば、“ループの先端（ｔｉｐ　ｏｆ　ｔｈｅ　１ｏｏｐ）”として知られ ている主要な中和ドメインのある領域は、中和抗体を生じたりそして／または中 和抗体と結合したりする能力があることが示されている。この能力は、様々なＨ ＩＶ変体の“ループの先端”に対して観察される。 ループの先端はＨＴＶ変体の間で高く保存されている３アミノ酸セグメントを含 み、３つの保存されたアミノ酸の一方の側には、様々なアミノ酸がついている。 Ｇａｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙという３つの保存されたアミノ酸は通常、ＨＩＶエンベ ロープタンパク質の３１１．３１２そして３１３の位置に、またはその近辺にあ る。 いづれのＨＩＶ変体でもこのセグメントの片側もしくは両側についている２から ８アミノ酸とともに、Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｃ；Ｉｙ上セグメント“ループの先端” を構成している。保存されたセグメントについているアミノ酸は、２０の天然ア ミノ酸のどれでもよく、どんな順番でも構わないと思われる。主要な中和ドメイ ンのアミノ酸は、異なるＨＩＶ−］単体の間で変わっているが、特定の場所での 保存（例えばループの先端）は、こうした場所でのアミノ酸はウィルスの機能に 必要なのである。 只　２４−怪　：、に゛　れたＴ（ＴＶ−１か”の゛　な　の配万ｆランダムフ ィールド（ｒａｎｄａｍ　ｆｉｅｌｄ）単体からの主要な中和ドメイン（ｐｒｉ ｎｃｉｐａｌ　ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ　ｄｏｍｏｉｎｓ；ＰＮＤｓ）の配列 を、エンベロープタンパク質のこの領域の不均一性の度合いを決定するために得 た。無作為に選択されたＨＩＶ−１怒染ドナー（ｄｏｎｏｒ）からの末梢血液リ ンパ球（ＰＢＬｓ）を未感染ＰＢＬｓと共に接着するが、もしくはウィルス単位 をＣＤ４セルライン（ｃｅｌｌ　Ｊｅｉｎ）に応用するが、どちらかを行なった 。こうした感染細胞から、ＤＮＡを抽出し、ＰＮＤをコードする２４０塩基対の 領域を、隣接する保存領域をハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー を用いてポリメラーゼチェインリアクション（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎ 　ｒｅａｃｔｉｏｎ）により増幅した。この産物をｐｕｃ１９にクローニングし 、各オリジナルな単体からの１つもしくはそれ以上のクローンのＰＮＤの塩基配 列を決定した。ある怒染個体内でのウィルス集団の不均一性により、ＰＣＲ反応 から２つもしくはそれ以上の塩基配列を得ると、これらの塩基配列は時折、異な っていた。 １００近くの個体（その内幾つかは不均一なウィルス集団に感染した）から得ら れたデータを、以前に得られていたＩ（ＩＶ塩基配列の情報と見比べた０表９は ＨＩＶ単体からの１３８のＰＮＤ塩基配列を掲げている。これらの塩基配列から 、ＨＩＶエンベロープタンパク質のアミノ酸配列における、よく知られ、しばし ば引用された多様性にも拘らず、免疫学的に重大なＰＮＤの領域、特にＰＮＤの 中央の領域において本当に高度な保存があることが、示される。とりわけ、“ル ープの先端“でのＧｌｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ配列は９０％以上の変体に存在する。 更に、Ｇ−Ｐ−Ｇの各側のある位置にある他のアミノ酸もまた、高く保存されて いることがわかった。表１０は、ＰＮＤにおける各位置での様々なアミノ酸の出 現頻度を表している。中央のプロリンに隣接するグリシンの非常に強い保存性に 加えて、他の幾つかの場所で（例、ＸＨでのＲ，Ｘ、、でのＰ、　Ｙ、、でのＧ 、　Ｙ、、でのＲ，ＹＩｂでのＡ）、強い保存性がある。 Ｇ−Ｐ−Ｇ配列付近に中心をもつ、１７アミノ酸のセグメントの多様性の相対頻 麿の比較が表１１Ｌこ示しである。この表では、各位置で最も共通じて出現して いるアミノ酸を反映した配列がまず挙げられている。ダノノユは共通配列との同 一性を示している。のこりの配列は、２から１３８まで共通配列への相同性に従 って並べられている。以上のことから、表の一番上の配列は、共通配列に最も大 きな相同性を示している。表の下の方の配列は、より低い相同性を示している。 例えば、単体ｍＢとＬＡＶ−ＢＲＵからのアミノ酸配列は、それぞれこの表の９ ２と９３の位Ｉにある。このことは、これらの単体が、共通配列と限られた相同 性しか持たないことを示している。現在の研究により、Ｃｒｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ の左にＧｌｙ−Ａｒｇ−（Ｑ−Ｒ）を持つＩ［ｌＢがＬＡＵ−ＢＲＵのようなＨ ＩＶウィルスは比較的普遍的でないことが示されている。対照的に、この領域で のＭＮ様配列（、、、ＩＨＩＧＰＧ、、、）は最も普遍的である。現在の研究に より、他の一般的に研究されている変体の主要な中和ドメインは、比較的普遍的 でない配列を含んでいることが示されている。 本発明は、主要な中和ドメインでのある高く保存された領域の発見に関連してい るが、様々な単体の間で、この領域における多様性が、いくらか残っている。 この多様性は、配列中のある点での“欠損（ｍｉｓｓｉｎｇ）”もしくは゛付加 （ａｄｄｅｄ＞”アミノ酸を含んでいる。勿論、゛′欠損”もしくは°“付加” アミノ酸は配列を示す、美学的に喜ばしい表を工夫するのに困難を与えうるだろ う。 しかしながら、本発明に重大な高く保存された領域を位置づけるという観点から すると、同業者にとってはこれらの欠損もしくは付加アミノ酸は何の困難も提出 しない。表９は１３８のＰＮＤ配列についての１つの表現である。表１１は、同 しＰＮＤ配列を示すのにわずかに異なる表現を用いている６配列の保存性という 主な考案は、多分、表１１Ｌこ示される表現を参照することにより、最もよく視 覚化できるだろう。しかしながら、注意すべきは、これらの配列を表現するため の手段が、１つ以上存在することが、配列もしくは保存領域を正確に位置づける という！ｈ練者の能力を危険にさらさないですむということである。 ９遍的に出現するアミノ酸配列の発見で、予め広範囲のＨＴＶ変体に対する中和 抗体を誘起そして／あるいはそれと結合できる予防用そして治療用の構成物を開 発することが、初めて可能となる。そのような構成物に対し、一般化された化学 式Ｄ　ｏ　ｒｍｕ　］　ａ）が、以下のものであろう：ａｘＧｚＧｙｂ ここでχはＯ〜１３の長さのアミノ酸；ｙは０から１７の長さのアミノ酸；そし て２はＰ、Ａ、Ｓ、　ＱまたはＬ；そしてａまたはｂのどちらか（両方共ではな い）は、省略されうる；ａまたはｂは個々に、以下のいづれか１つを含むニジス ティン、免疫原性を高められるタンバグ質か他の部分、ＨＩＶの主要な中和ドメ インのペプチド、Ｔ−細胞を刺激できるペプチド、もしくは、一般的な免疫刺激 物。 Ｖ遍配列パターンの更なる分析により、ＨＪＶの単体の間で非常ムこ普遍的なあ る特異的なパターンが明らかにされる。こうした普遍配列の例は表１２と図１に 示されている。こうした普遍的なパターンは、ここで既述された研究と発見の結 果としてのみ知られるものであるが、それは、広範囲のＨＩＶ単体について利用 できる製薬学的、診断的構成物を作るのに用いられうる。このことは、勿論、今 、存在するとわかっている多くのＨｒＶ変体かえられている中で、非常に重要で ある。 表１２は、ループの先端での領域に出現する普遍配列パターンの′ｄＡ集物であ る。 例えば、ＨＩＶ単体のおよそ６０％が、コア配列］　ａ　ＴＧＰＧＲＩ　ａは幾 つかの異なる残基を表す〕を含み、およそ５０％が、配列ＴＧＰＧＲＡを含み、 そしておよそ４０％が、ＧＰＧＲＡＦを含む。Ｈｉｓ残基が、Ｔａ１ＧＰＧＲの ａの位置に存在する時、この配列はＪ（ＩＶ単体のおよそ３０％に出現する。ａ に対し、全ての可能な置換に存在するようなＩａＩＧＰＧＲ配列を持つペプチド の混合物から成るワクチン構成物は、大多数のＨＩＶ変体を中和する抗体を誘起 する能力がある。免疫原として用いる際には、実示例２１で記述したように、キ ャリアータンパク質や、補助側ペプチドを結合させるのが望ましい。 図１に示すように、普遍配列パターンは、アミノ酸セグメント内でも明らかであ る。４回もしくはそれ以上単離された配列は、強調しである。こうした普遍的に 出現する配列は、広い中和反応を誘起するワクチンカクテルを処方するのに用い ることができる。例えば、有望なカクテルは、表された８つのグループの各々か らのペプチドを含んでいるかもしれない、また、ペプチド配列は、こうしたグル ープの２つもしくはそれ以上のものからの主要な中和ドメインを含んだハイブリ ッドポリペプチドとして与えられることもあるだろう。そのようなカクテルは、 ＨＩｖ変体の少なくとも７０％を中和する抗体を生ずることができるようなペプ チドを含んでいるのが好ましいが、それが、少なくとも９０％を中和する抗体を 生ずることができるペプチドを含んでいると最も好ましい。 本発明の抗原は、あるアミノ酸配列に結合する抗体を生しさせる能力により同定 することができる。例えば、特に都合のよい抗原性化合物は、Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ− Ａ−Ｆ、Ｉ　−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆ、−１−Ｇ”Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ、Ｉ　−ａ −１−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ，Ｉ　−ａ−１−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ、そしてＩ−ａ−１ −Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆ　（ここでａは２０アミノ酸のいづれか）のような共 通のアミノ酸配列に結合する抗体を生じさせるものだろう。 表１０から、全ての変体でのアミノ酸の出現を表すポリペプチドは以下のように 表されることができることが理解されるだろう：Ｘ＋３Ｘ＋ｚＸＢＸ＋ｏＸｇ　 Ｘ婁　Ｘｑ　Ｘ６　Ｘｓ　Ｘａ　Ｘｓ　ＸＩ　ＸＩ　ＧＺＧｙｘ　ｙ２　ｙ４Ｖ ｓ　ｙａ　）’？　Ｙ＊　Ｙ＊　７＋ｏ）’＋＋３’＋ｚ）’＋３３’＋４）’ ＋ｓ）’＋ｉ）’＋ｔここで、 Ｘ、はＩＲ，Ｍ、　ＬＱＲ，Ｖ、　Ｌ、　Ｋ、　Ｆ、　Ｓ、　Ｇ、　Ｙ、　ＳＲ ＧまたはＹＱＲＸＩ２はＨ，Ｒ，Ｙ、　Ｔ、Ｓ、Ｐ、　Ｆ、　Ｎ、　Ａ、　Ｋ、 　ＧマタはＶ；Ｘ、はＩ、Ｌ、　Ｍ、　Ｔ、Ｖ、　Ｅ、　Ｇ、ＦまたはＹ；Ｘ、 はＲ，Ｓ、Ｇ、　Ｈ，Ａ、Ｋまたはなし；Ｘ、はに、Ｒ，Ｉ、　Ｎ、　Ｑ、　Ａ 、ＩＲ，ＲＱまたはなし；χ、はＲ，Ｋ、Ｓ、Ｉ、Ｐ、　Ｑ、　Ｅ、　Ｇまたは Ｔ；Ｘ、はＴ、　Ｋ、　Ｖ、Ｉ、　Ａ、　Ｒ，Ｐ、またはＥ；ＸＩはＮ、　ＮＶ 、　Ｙ、　ＫＴ、Ｉ、　Ｔ、　ＤＫ、　Ｈ，またはに；Ｘ、はＮ、Ｓ、　Ｋ、　 Ｅ、　Ｙ、　Ｄ、］またはＱ；χ、。はＮ、　Ｙ、Ｓ、　Ｄ、　ＣまたはＨ；Ｘ ｌｌはＰ； ＸｌｌはＲ，Ｉまたはに； ＸＩ３はＴ、Ｉ、ＭまたはＡ； ２はＰ、　Ａ、　Ｑ、　ＳまたはＬ； ｙ、はＲ，Ｋ、　Ｑ、　Ｇ、ＳまたはＴ；ｙ、はＡ、Ｖ、　Ｎ、　Ｒ，Ｋ、　Ｔ 、　Ｓ、Ｆ、ＰまたはＷ；ｙ、はＦ、ｌ、Ｖ、　Ｌ、　Ｗ、　Ｙ、　Ｇ、Ｓまた はＴ；ｙａ　ＬＡＹ、Ｖ、　Ｈ，Ｌ、Ｆ、　Ｓ、Ｉ　、　Ｔ、　Ｍ、　Ｒ，ＶＭ 、またはＦＴ；ｙｓ　Ｌ；！Ｔ、　Ａ、Ｖ、　Ｑ、Ｈ，Ｉ、　Ｓ、　Ｙまたはな し；ｙ、はＴ、Ｒ，Ｉ、　Ｑ、　Ａ、　Ｍ、またはなし；ｙ、はＧ、　Ｅ、　Ｋ 、　Ｒ，Ｔ、　Ｄ、　Ｑ、　Ａ、　Ｈ，Ｎ、　Ｐ’　またはなし；ｙｌはＲ，Ｑ 、Ｅ、　Ｋ、　Ｄ、　Ｎ、　Ａ、　Ｇ、Ｓ、１．またはなし；ｙ、はｌ、　Ｖ、 Ｒ，Ｎ、　Ｇ、またはなし；ｙ＋ｏ＋；！］、　Ｔ、Ｖ、　Ｋ、　Ｍ、　Ｒ，Ｌ 、Ｓ、　Ｅ、　Ｑ、　Ａマタハナシ；ｙ５．はＧ、Ｒ，Ｅ、　Ｋ、　Ｈまたはな し；ｙ１！はり、　Ｎ、Ｉ、　Ｒ，Ｔ、　Ｓまたはなし；ＸＩ３はｌ、　Ｍ、　 ＭＥ、Ｌ、またはなし；ｙ工はＲ，Ｇ、Ｋ、Ｓ、Ｅまたはなし；ｙ３．はＱ、　 Ｋ、またはＲ； ｙＩ＆はＡ；そして ｙｌ、はＨ，Ｙ、　ＲまたはＱ。 広域性中和活性を持つモノクローナルそして／またはポリクローナル抗体は、予 防用あるいは治療用の構成物における利用のための普遍的に出現するペプチド配 列を用いて作ることができる。ここで記述した普遍的に出現する配列は、この出 現において記述された他のペプチドと全く同様にして用いることができる０例え ば、Ｔリンパ球の刺激、一般的な免疫刺激を供給するために、免疫原性の溶解性 を高めるために、もしくは毒性を減らすために、これらのペプチドを修飾するこ とができる。ペプチドはまた、末端のシスティン残基を付加したり、あるいはキ ャリアータンパク質、補助剤、スペーサーそして／またはリンカ−とつなげるこ とにより修飾することもあるだろう。ずっと多くのＨＩＶ変体についても有用で あるような、マルチエピトープなポリペプチドを生産するために、他のＨＴＶエ ピトープと、ペプチドを融合させることもあるだろう。また、ペプチドをンステ イン残基間で結合させることにより、環状化することもできるだろう、そのよう な環状ペプチドを作るのに用いられるシスティン残基は、主要な中和抗体ドメイ ンの両端に自然に生じたシスティンかもしれないし、あるいは、システィン残基 はペプチドの両末端に付加されるかもしれない。 加えて、ワクチン構成物は、主要な中和ドメインを含むタンパク質断片と組み合 わせて、Ｔヘルパー細胞のエピトープを含んでいるペプチドを含むかもしれない 。こうした幾つかのエピトープはＨＴＶエンベロープの中にマツプされているし 、こうした領域は増殖とリンパ球からのリンフ才力インの放出を刺激することが 示されている。ワクチン構成物にて、これらのエピトープの両方を提供すること で、体液性と細胞性の両方の免疫反応を刺激することになるだろう。 只　２５−マルチエピトーブ云　の　１とクローニング１つ以上の）（ＩＶ単体 からの中和エピトープから成るタンパク質をコードする合成遺伝子が作製できる 。ここで例示している合成遺伝子は、ＨＩＶ単体Ｉ［ＩＢ。 ＲＦ、ＳＣ，ＭＮ、そしてＷＭＪＩからの中和エピトープをコードしているＤＮ Ａ配列のタンデムアレンジメントを含んでいる。遺伝子のエピトープをコードし ている各々のドメインは、各単位のループの先端でのＧｌ　ｙ−Ｐｒｏ−ＧＩ　 Ｙの共通配列を中心とした１１アミノ酸をコードするよう設計された。以上のよ うに、マルチエピトープ遺伝子は５つの異なるコーディングリージョンを含み、 その各々が、異なる単体からの中和エピトープをコードしていた。この特別な作 製物のために５つの単体の各々のために選ばれたエピトープは、５つのエピトー プの各々からのＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ配列の両側に４アミノ酸のついたＧａｙ −Ｐｒｏ−Ｇｌｙ配列より構成されている。これらの単体からの他の中和エピト ープをコードじているドメインが、マルチエピトープ遺伝子にとりこまれている かもしれない。また、他の単体からの中和エピトープをコードしている遺伝子を 用いることもできる。 遺伝子は、４つのグリシン残基をコードするＤＮＡ配列によりドメインがつなが るように、作製された。リンキング配列の組成及び長さは変わりうるが、それ自 身が非免疫原な配列であることが好ましい。ここで記述した合成遺伝子のＤＮＡ 配列は、ベクターにクローニングし易いように、また別に、２つもしくはそれ以 上のより短い遺伝子をつけることでより長いマルチエピトープで遺伝子を作製で きるように、制限酵素サイトを、断片の両端にコードされるように、設計した（ 図２）。加えて、融合タンパク質の一部として生産させた時に、切断し易いよう に、遺伝子の５′端にメチオニン残基をコードさせた。 図３はここで記述されたマルチエピトープ遺伝子の作製ステップを表している。 この遺伝子によってコードされているアミノ酸配列は、表１３に示しである。こ のアミノ酸配列の５つの単体の各々に相当する部分は表１３にて同定されている 。 遺伝子の全長の２末鎖サブ断片が、タンデムな中和エピトープと、リンキングア ミノ酸配列をコードするよう設計された一本鎖合成オリゴマーから始めて、最初 に作製された。どんなサブ断片も使われうる。この実験では、遺伝子を２つに分 けたが、３，４．それ以上の部分でも用いることができる。６７と７８ヌクレオ チドの間の長さを持つ４つのｌ＊鎖オリゴマーを合成した（ＨＥＯ−１，ＨＥＯ −２，ＨＥＯ−３，そしてＨＥＯ−４）（図３）、オリゴマーは、１０（ＨＥＤ −１＋２）または１１（ＨＥＯ−３＋４）塩基の相補的なオーバーランプを持つ 、２末鎖サブ断片の反対向きで隣りあった鎖として組で（ＨＥＯ−１と２；ＨＥ Ｏ−３と４）設計された。各組のオリゴマーを混ぜ６５℃で５分間熱し、それか ら３７゛Ｃで１時間インキュベートしてアニールさせた。 アニーリング後、シークエナーゼ（Ｓｅｑｕｅｎａｓｅ）（Ｕ、Ｓ、Ｂｉｏｃ゛ ｈｅｍ）と４つのデオキシヌクレオチド３リン酸を用いて各組の相補鎖を完全な ものとしたじフィル−インＢ１１１ｅｄ−ｉｎ）″）。この反応は、室温で１時 間インキュベートされ、６５℃で３分間加熱してから、更に１時間新しいシーク エナーゼで３７°Ｃでインキュベートされた。１４１　（ＨＥＯ−１＋２）と１ ２６　（ＨＥＯ−３＋４）塩基対の２本鎖断片が作られ、マルチエピトープで遺 伝子の隣り合ったサブ断片を表していた。ＨＥＯ−１＋Ｈ２は、３エピトープと 隣り合ったリンカ−アミノ酸をコードしている配列を含み、ＨＥＯ−３＋４は、 ４番目のエピトープから遺伝子の最後までわたっていた。 フィルイン反応に続いて、サンプル標準操作によりフェノール／クロ巳ホルムで 抽出し、エターノルで沈殿させた。その結果できた２本鎖ＤＮＡをＨｉｎｄｌｌ ［（ＨＥＯ−１＋２）またはＳｕｃ　Ｉ　（ＨＥＯ−３＋４）で消化し、３％　 ＮｕＳｉｅｖｅアガロースゲルで精製した。精製断片を、ＨｉｎｄＩ［ｉ＋旦見 ｃｌ消化ｐｕｃｌ９　（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ）と、３要素 ライゲーションでライゲートし、旦，ｃｏｌｉ　ＪＭ１０５細胞にトランスフォ ームした．全長のマルチェピトーブ遺伝子をコードしている、ｐｕｃｌＱ中の２ ５６塩基対の存在は、制限酵素分析とＤＮＡシークエンシングにより確かめられ た．その結果得られたブラスミドを、ｐｕｃ／ＭＥＰ−１と名付けた．ＭＥＰ− １インサートをｐｕｃ／ＭＥＰ−１から取り除き、マルチェビトーブタンパク質 に融合された旦．ｃｏｌｉＢＧ遺伝子からのリーダ一部分から成る融合タンパク 質を高レベルで発現させるＨｉｎｄＩ［［＋ＳａｃＩで消化したｐＲｅｖ２．１ に再びクローニングした．その結果得られたブラスミド、ｐＭＥＰ−１−８３４ ２と名付けられたが、旦．Ｃｏｌｉ株ＳＧ２０２５１にトランスフォームし、ク マシーブルー染色あるいは５ＨＩＶ単体の各々からのループ先端ペプチド辷対す る抗血清から選択されたプーブを用いてのウェスタンプロット分析において１２ Ｋｄマルチェビトーブ融合タンパク質を同定した。融合タンパク譬はそのまま用 いることもできるが、別に、メチオニン残基のＣ端（カルポキシル端）側で切断 する臭化シアンによってリーダ一部分を切断することができる．融合タンパク質 のアミノ酸配列は表１３Ａに示される。 マルチェピトーブペプチドは、上述の手法により組みかえ細胞から精製できる。 上述の操作を用いて、異なるＨＩＶ単体のいづれからのタンデム中和エピトーブ もコードしている別の合成遺伝子を作製することができる。加えて、上の操作の 変法を作ることができ、それは本発明に含められることを意味している。例えば 、遺伝子によりコードされる中和ユピトーブの長さは変えることができ、１つの 遺伝子内で個々のエピトープの長さに変化がありうる．更に、マルチェピトーブ 遺伝子内の中和エビトープの数を変えることができ、エピトープのアミノ酸配列 によりまたはリンキング配列の組成や長さをここで記述された例とは変えること ができる． ここで記述された例や具体化は、説明の明白のためだけであり、その見方での欅 々な修飾や変化が同業者に示唆されるだろうし、この出願の意図と視野と書き添 えられた請求の範囲内に含まれることになるということは、理解されるべきであ る。 本研究はアレルギー及び感染病の国立研究所（Ｎａｔｉｏｎａｉ　Ｉｎｓｔｉｔ ｕｔｅ　ｏｆ　Ａｌｌｅｒｇｙ　ａｎｄ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　Ｄｉｓｅａｓ ｅ；ＮＩＡＩＤ）によりＲｅｐｌｉｇｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに与えられ た契約番号Ｎｏｌ−ＡＩ−６２５５８の下で部分的に支援された．ＬｅｕＡｓｎ Ｇ　］ｎＳｅｒＶａ　Ｉ　Ｇ　］　ｕ　Ｉ　ｌ　ｅＡ　ｓｎＣｙｓＴｈｒＡ　ｒ ｇＰｒｏＡｓｎＡｓ　ｎＡ　ｓｎＴｈｒＡ　ｒ■kｙｓ ＳｅｒＩｌｅＡｒｇｌ］ｅＧ］ｎＡｒｇＧＩｙＰｒｏＧ］ｙＡｒｇＡ］ａＰｈｅ Ｖａｌ丁ｈｒｌ］ｅＧＩｙＬｙｓｌｌｅＧ　ｌ　ｙＡ　ｓｎＭｅ　ｔＡ　ｒｇＧ 　ＩｎＡ　１　ａＨ　ｉｓＣｙｓＡｓｎ　１１　ｅＳｅｒＡ　ｒｇＡ　］ａＬｙ ｓＴｒｐＡ　ｓｎＡ唐獅sｈｒ 表２Ａ ＣＴＧＡＡＣＣＡＡＴＣＴＧＴＡＧＡＡＡＴＴＡＡＴＴＧＴＡＣＡＡＧＡＣＣＣ ＡＡＣＡＡＣＡＡＴＡＣＡＡＧＡＡＡＡＡＧＴＡＴＣＣＧＴＡＴＣＣＡＧＡＧＡ ＧＧＡＣＣＡＧＧＧＡＧＡＧＣＡＴＴＴＧＴＴＡＣＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＡＴＡ ＧＧＡＡＡＴＡＴＧＡＧＡＣＡＡＧＣＡＣＡＴ丁ＧＴＡＡＣＡＴＴＡＧＴＡＧＡ ＧＣＡＡＡＡＴＧＧＡＡＴＡＡＣＡＣＴＴＴ表２Ｂ Ｍｅ　ｔＬｅｕＡ　ｒｇＰｒｏＶａ　ＩＧ　］ｕＴｈｒＰｒｏＴｈｒＡｒｇＧ　 １　ｕ　Ｉ　Ｉ　ｅＬｙｓＬｙｓＬｅｕＡ　ｓｐＧ　ＩｙＬ■■ ＴｒｐＡ　ＩａＰｈｅＳｅｒＬｅｕＡ　ｓｐＡ　ｒｇＧ　Ｊ　ｕＡ　ｒｇＶａ　 Ｉ　Ａ　１　ａＡ　ｓｐＬｅｕＡ　ｓｎＧ　Ｉｎ５ｅｒＶａ@ＩＧ　ｌ　ｕ １　１　ｅＡ　ｓｎＣｙｓＴｈｒＡ　ｒｇＰｒｏＡ　ｓｎＡｓｎＡｓｎＴｈｒＡ ｒｇＬｙｓＳｅｒｌ　ＩｅＡｒｇ　ｌ　Ｉ　ｅＧ　］ｎＡ　窒■ Ｇ　１　ｙＰｒｏＧ１ｙＡｒｇＡ　ｌａＰｈｅＶａ　ｌＴｈｒｌ　ｌｅＧ　１ｙ Ｌｙｓ　Ｉ　ＩｅＧ　ＩｙＡｓｎＭｅｔＡｒｇＧＩｎＡ　Ｉ■ ＨｉｓＣｙｓＡｓｎｌｌｅＳｅｒＡｒｇ酎ａＬｙｓ’ｒｒｐＡｓｎＡｓｎＴｈｒ 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ＭｅｔＬｅｕＡｒｇＰｒｏＶａ　ｌＧｌｕＴｈｒＰｒｏＴｈｒＡｒｇＧｌｕｌ　 ｌｅＬｙｓＬｙｓＬｅｕＡｓｐＣｌｙＬｅｕＴｒｐ−ＡｌａＰｈｅＳｅｒＬｅｕ ＡｓｐＡｒｇＧｌｕＡｒｇＶａ　ＩＶａ　ＩＡｒｇＴｙｒ）１ｉｓＡｒｇＴｒｐ ＨｅＡｒｇＣ１ｎＡ］ａＳｅｒ−１［［Ｂ ＭｅｔＴｈｅＡｒｇｌｌｅＧｌｎＡｒｇＧＩｙＰｒｏＧｌｙＡｒｇＡＩａＰｈｅ Ｖａｌ　ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙ− Ｆ ＳｅｒｌｌｅＴｈｒＡｒｇＧ］ｙＰｒｏＧｌｙＡｒｇＶａ　ＩＩ　ＩｅＴｙｒＧ ｌｙＣＩｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙ− Ｎ Ａｒｇｌ　］ｅＨｉｓｌ　ｌｅＣｙｌｙＰｒｏＧｌｙＡｒｇＡｌａＰｈｅＴｙｒ ＧＩｙＣ；］ｙＧｌｙＧ１ｙＧ１ｙ− Ｃ ５ｅｒｌ　ＩｅＨｉｓｌｌｅＧＩｙＰｒｏＧＩｙＡｒｇＡｌａＰｈｅＴｙｒＧｌ 　ｙＧ　Ｉ　ｙＧ　Ｉ　ｙＧ　Ｉ　ｙＧ］　ｙ−ＭＪＩ ＨｉｓｌｌｅＨｉｓｌｌｅＣｒｌｙＰｒｏＧＩｙＡｒｇＡＩａＰｈｅＴｙｒＧｌ ｙＧｌｙＧＩｙＧｌｙＧｌｙ− ＬｅｕＳｅｒｌｌｅＣｙｓ

【書類名】　図面

【図１１ 浄１（内容に変更なし） 共通酉乙列バ７−ン ＃度　ＫＲＫＲＩ　ＨＩ　ＧＰＧＲＡＦＹＴＴＫ６　Ｖ＋Ｎ＋＋＋＋＋＋＋＋＋ ＋Ｈ＋＋＋７　ＴＳＲＧ−Ｒ〜−−−−−ＩＬＡ−Ｅ６　−−ＱＲ−一−−−− ，−Ｖ−ＩＧ【図２】

【図３】 オＩＩコ゛スクｌ、ｆチドＯアニーリングクレノー断片（用オシ−７エナーゼで カフ１ルーインＨＥＯ−３＋２　）ＨＩＮＤ　ＩＩ＋　で消Ｊｊ　）ＩＥＯ−３ ＋４）ＳＡＣＩ　でシメ１４Ｆ：

【図４】 マル斗エピ）−１１伝チイ％Ｉ）ｋｌ）のオリコ゛又りし才子ドと旧Ω：１ ｆｉ 手続補正書（方式） ％式％ およびペプチド 名　称　レプリゲン・コーポレーション５、補正命令の日付　平成　４年　１月 ２１日　（発送日）国際調査報告 ｗ、−Ａｅｅ’＋ｄｔｘｌｌ＆　ＰＣＴ１０５８９１０４３０２、１．１ａ１工 １ｍ、　ＰＣＴ／ｕｓ８９１０４３０２１．．１．１−ｍ　Ａｅｅｌ’ｔｓｌ− −−ＰＣＴ／ＵＳ８９１０４３０２国際調査報告 ＰＣＴ／Ｕ’ｉ　８９１０４３０２ ＳＡ　３１６９８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．中和抗体を誘導または結合する能力を有し、該能力が、（ａ）ＨＩＶの一変 種の主要な中和ドメインであるか、（ｂ）ＨＩＶの一変種の主要な中和ドメイン の一部であるか、あるいは（ｃ）主要中和ドメインあるいはその一部と等価であ るアミノ酸配列に起因する化合物。 ２．中和抗体を誘導および／または結合する能力を有し、ＨＩＶの一変種の主要 中和ドメインあるいはその一部分からなる、天然に存在するＨＩＶ夾膜タンパク 質ではない化合物。 ３．該化合物が、以下の部分、すなわち、システインまたは免疫原性を増強する ことのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ドメイン由来 のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一般的な免疫 賦活物質のひとつまたは複数を付加することによって修飾されている、請求の範 囲第２項に記載の化合物。 ４．中和抗体を誘導または結合する能力を有し、ＨＩＶの一変種の夾膜タンパク 質の第２９６番と第３３１番目またはその付近のシステイン残基の間にあるアミ ノ酵から実質的に構成されている化合物。 ５．ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、 ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在であって良く、そしてａとｂはそれぞれ独立して、システインまたは免疫原 性を増強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和 ドメイン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、 一般的な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、変種ＨＩＶ中和抗体を誘 導および／または結合する能力をもつ化合物。 ６．該化合物が環状にされている、請求の範囲第５項に記載の化合物。 ７．該化合物が１種以上のＨＩＶ変種の主要中和ドメイン由来の抗原決定基を含 んでいる、請求の範囲第５項に記載の化合物。 ８．以下のグループから選択されたポリペプチド、（１）Ｓｕｂ１と表わされる ＨＩＶ１０Ｋｄ融合タンパク質（２）Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク質部分（３）Ｓ ｕｂ２と表わされるＨＩＶ１８Ｋｄ融合タンパク質（４）Ｓｕｂ２のＨＩＶタン パク質部分（５）ＰＢ１ＲＦと表わされるＨＩＶ２７Ｋｄ融合タンパク質（６） ＰＢ１ＲＦのＨＩＶタンパク質部分（７）ＰＢ１ＭＮと表わされるＨＩＶ２８Ｋ ｄ融合タンパク質（８）ＰＢ１ＭＮのＨＩＶタンパク質部分（９）ＰＢ１ＳＣと 表わされるＨＩＶ２６Ｋｄ融合タンパク質（１０）ＰＢ１ＳＣのＨＩＶタンパク 質部分（１１）ＰＢ１ＷＭＪＺと表わされるＨＩＶ２６Ｋｄ融合タンパク質（１ ２）ＰＢ１ＷＭＪＺのＨＩＶタンパク質部分（１３）ペプチドＩＩＩＲ（ＢＨ１ ０）−ＰＮＤ；（１４）ペプチドＲＦ−ＰＮＤ； （１５）ペプチドＭＮ−ＰＮＤ； （１６）ペプチドＳＣ−ＰＮＤ； （１７）ペプチドＷＭＪ−２−ＰＮＤ；（１８）ペプチドＬＡＶ−ＭＡＬ−ＰＮ Ｄ；（１９）ペプチドＳＦ−２−ＰＮＤ； （２０）ペプチドＮＹ５−ＰＮＤ； （２１）ペプチドＺ３−ＰＮＤ； （２２）ペプチドＷＭＪ１−ＰＮＤ； （２３）ペプチドＷＭＪ３−ＰＮＤ； （２４）ペプチドＺ６−ＰＮＤ； （２５）ペプチドＬＡＶＥＬ１−ＰＮＤ；（２６）ペプチドＣＤＣ４５１−ＰＮ Ｄ；（２７）ペプチドＣＤＣ４２−ＰＮＤ；（２８）ペプチドＢＡＬ−ＰＮＤ； （２９）ペプチドＨＩＶ−２−ＰＮＤ；（３０）ペプチド−１３５； （３１）ペプチド−１３６； （３２）ペプチド−１３９； （３３）ペプチド４１； （３４）ペプチド１４２； （３５）ペプチド１４３； （３６）ペプチド１３１； （３７）ペプチド１３２； （３８）ペプチド１３４； （３９）ペプチド３３９； （４０）ＲＰ３４２（ＷＭＪ２）； （４１）ＲＰ３４３（ＳＣ）； （４２）ＲＰ６０（ＩＩＩ■）； （４３）ＲＰ３３５（ＩＩＩ■）； （４４）ＲＰ３３７（ＩＩＩ■）； （４５）ＲＰ７７（ＩＩＩ■）； （４６）ＲＰ８３（ＷＭＪ１）； （４７）ＲＰ７９（ＩＩＩ５）； （４８）ＲＰ５７； （４９）ＲＰ５５； （５０）ＲＰ７５； （５１）ＲＰ５６； （５２）ＲＰ５９； （５３）ＲＰ７３（ＩＩＩ■，ＲＦ）；（５４）ＲＰ７４（ＩＩＩ■，ＲＦ，Ｍ Ｎ，ＳＣ）；（５５）ＲＰ８０（ＩＩＩ■，ＲＦ）；（５６）ＲＰ８１（ＩＩＩ ■，ＲＦ，ＷＭＪ１，ＭＮ）；（５７）ＲＰ８２（ＷＭＪ１，ＭＮ）；（５８） ＲＰ１３７（ＩＩＩ■，ＲＦ）；（５９）ＲＰ１４０（ＩＩＩ■，ＲＦ）；（６ ０）ペプチド６４（ＨＩＶ−ＩＩＩＢ／ＨＩＶ−ＲＦ／ＨＩＶ−ＭＮ／ＨＩＶ− ＳＣ）； （６１）ペプチド３３８（ＨＩＶ−ＩＩＩ■／ＨＩＶ−ＲＦ）；（６２）ペプチ ド１３８； （６３）ＲＰ３４２； （６４）ＲＰ９６； （６５）ＲＰ９７； （６６）ＲＰ９８； （６７）ＲＰ９９： （６８）ＲＰ１００； （６９）ＲＰ１０２； （７０）ＲＰ８８； （７１）ＲＰ９１； （７２）ＲＰ１０４； （７３）ＲＰ１０６； （７４）ＲＰ１０８； （７５）ＲＰ７０； （７６）ＲＰ８４； （７７）ＲＰ１４４； （７８）ＲＰ１４５； （７９）ＲＰ１４６； （８０）ＲＰ１４７； （８１）ＲＰ１５０； （８２）ＲＰ１５１； （８３）ＲＰ６３； （８４）ＲＰ４１； （８５）ＲＰ６１； （８６）ＲＰ７５； （８７）ＲＰ１１１； （８８）ＲＰ１１３； （８９）ＲＰ１１４； （９０）ＲＰ１１６； （９１）ＲＰ１２０； （９２）ＲＰ１２１ｃ； （９３）ＲＰ１２２ｃ； （９４）ＲＰ１２３ｃ； およびその化学的修飾物。 ９．天然に存在するＨＩＶ夾膜タンパク質以外のポリペプチドをコードし、該ポ リペプチドが中和抗体を誘導または結合する能力を有し、ＨＩＶの一変種の主要 中和ドメインあるいはその一部分からなるＤＮＡ配列。 １０．該ポリペプチドが ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、 ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在であっても良く、そしてａとｂはそれぞれ独立して、システインまたは免疫 原性を増強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中 和ドメイン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは 、一般的な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、請求の範囲第９項に記 載のＤＮＡ配列。 １１．以下の ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有するひとつ以上の化合物からなり、ここでｘは０から１３アミ ノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在であっても良く、そしてａとｂはそれぞれ、システインまたは免疫原性を増 強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ドメイ ン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一般的 な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、広範な変種ＨＩＶに対する中和 抗体を誘導および／または結合することのできる組成物。 １２．ｘが以下の、 ｘ（０）≡ｘは存在しない ｘ（１）≡Ｘ１ ｘ（２）≡ｘ２ｘ１ ｘ（３）≡ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（４）≡ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（５）≡ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（６）≡ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（７）≡ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（８）≡ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ ｘ２ｘ１ｘ（９）≡ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１０）≡ｘ１０ ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１１）≡ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１２）≡ｘ１２ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１３）≡ｘ１３ｘ１２ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｚはＰ，Ｌ，Ａ，Ｓ，又はＱ；およびｙは以下より選択され る；ｙ（０）≡ｙは存在しない ｙ（１）≡ｙ１ ｙ（２）≡ｙ１ｙ２ ｙ（３）≡ｙ１ｙ２ｙ３ ｙ（４）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ ｙ（５）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ ｙ（６）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ（７）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ（８）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ（９）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ（１０）≡ｙ１ｙ ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ（１１）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ（１２）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ（１３）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ（１４）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ（１５）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ（１６）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ１６ｙ（１７）≡ｙ１ｙ ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ１６ ｙ１７ また上で ｘ１はＩ，Ｒ，Ｍ，ＩＱＲ，Ｖ，Ｌ，Ｋ，Ｆ，Ｓ，Ｇ，Ｙ，ＳＲＧ，またはＹＱ Ｒ； ｘ２はＨ，Ｒ，Ｙ，Ｔ，Ｓ，Ｐ，Ｆ，Ｎ，Ａ，Ｋ，Ｇ，又はＶ；ｘ３はＩ，Ｌ， Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｅ，Ｇ，Ｆ，またはＹ；ｘ４はＲ，Ｓ，Ｇ，Ｈ，Ａ，Ｋ，あるいは 存在しないｘ５はＫ，Ｒ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ａ，ＩＲ，ＲＱ，あるいは存在しないｘ ６はＲ，Ｋ，Ｓ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｅ，Ｇ，またはＴ；ｘ７はＴ，Ｋ，Ｖ，Ｉ，Ａ， Ｒ，Ｐ，またはＥ；ｘ８はＮ，ＮＶ，Ｙ，ＫＩ，Ｉ，Ｔ，ＤＫ，ＨまたはＫ；ｘ ９はＮ，Ｓ，Ｋ，Ｅ，Ｙ，Ｄ，Ｉ，またはＱ；Ｘ１０はＮ，Ｙ，Ｓ，Ｄ，Ｇ，ま たはＨ；ｘ１１はＰ； ｘ１２はＲ，Ｉ，またはＫ； ｘ１３はＴ，Ｉ，ＭまたはＡ； ｙ１はＲ，Ｋ，Ｑ，Ｇ，Ｓ，またはＴ；ｙ２はＡ，Ｖ，Ｎ，Ｒ，Ｋ，Ｔ，Ｓ，Ｆ ，Ｐ，またはＷ；ｙ３はＦ．Ｉ．Ｖ，Ｌ，Ｗ，Ｙ，Ｇ，Ｓ，またはＴ；ｙ４はＹ ，Ｖ，Ｈ，Ｌ，Ｆ，Ｓ，Ｉ，Ｔ，Ｍ，Ｒ，ＶＨ，またはＴ；ｙ５はＴ，Ａ，Ｖ， Ｑ，Ｈ，Ｉ，Ｓ，Ｙ，あるいは存在しないｙ６はＴ，Ｒ，Ｉ，Ｑ，Ａ，Ｍ，また は存在しないｙ７はＧ，Ｅ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｄ，Ｑ，Ａ，Ｈ，Ｎ，Ｐ，または存在 しないｙ８はＲ，Ｑ，Ｅ，Ｋ，Ｄ，Ｎ，Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｉ，または存在しないｙ９ はＩ，Ｖ，Ｒ，Ｎ，Ｇ，または存在しないｙ１０はＩ，Ｔ，Ｖ，Ｋ，Ｍ，Ｒ，Ｌ ，Ｓ，Ｅ，Ｑ，Ａ，ｙ１１はＧ，Ｒ，Ｅ，Ｋ，Ｈ，または存在しないｙ１２はＤ ，Ｎ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｓ，または存在しないｙ１３はＩ，Ｍ，ＭＥ，Ｌ，または存 在しないｙ１４はＲ，Ｇ，Ｋ，Ｓ，Ｅ，または存在しないｙ１５はＱ，Ｋ，又は Ｒ； ｙ１６はＡ；および ｙ１７はＨ，Ｙ，Ｒ，またはＱ。 から選択される、請求の範囲第１１項に記載の組成物。 １３．ｘ１がにで、 ｚがＰであり、 ｙ１がＲであり、かつ ｙ２がＡである 請求の範囲第１２項に記載の組成物。 １４．ｘ１がＩで、 Ｘ３がＩであり、 ｚがＰであり、かつ ｙ１がＲである 請求の範囲第１２項に記載の組成物。 １５．ｚがＰで、 ｙ１がＲであり、 ｙ２がＡであり、かつ ｙ３がＦである 請求の範囲第１２項に記載の組成物。 １６．ｘ１でＩ、 ｘ２がＨ、 さ３がＩ、 ｘ４がＲ、 ｘ５がＫ、 ｘ６がＲ、 Ｘ７がＴ、 ｚがＰ、 ｙ１がＲ、 ｙ２がＡ、 ｙ３がＦ、 ｙ４がＹ、 ｙ５がＴ、 ｙ６がＴ、 ｙ７がＧである、請求の範囲第１２項に記載の組成物。 １７．該化合物が環状にされている、請求の範囲第１１項に記載の組成物。 １８．ａおよび／またはｂがＨＩＶ主要中和ドメイン由来である、請求の範囲第 １１項に記載の組成物。 １９．免疫原性を増強することが可能な該部分が、ウイルス粒子、微生物または それらの免疫原性を示す部分である、請求の範囲第１１項に記載の組成物。 ２０．ポリペプチドが天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であり、該ポリペ プチドが中和抗体を誘導および／または結合する能力を有し、また該ポリペプチ ドがＨＩＶ変種の主要中和ドメインあるいはその一部分から構成される化合物を 含む複合化合物を用いて、マウス、ラット、ウマ、ヤギ、ヒトあるいはチンパン ジーなどの適当な動物を免疫する事によって生ずる免疫グロブリン、モノクロー ナル抗体および／またはポリクローナル抗体からなる、予防用あるいは治療用組 成物。 ２１．ＨＩＶ変種の主要中和ドメインを含む少なくともひとつの化合物で動物ま たはヒトを免疫し、続いて該動物もしくはヒトを（ａ）天然に存在しないＨＩＶ 央膜タンパク質である化合物であって、中和抗体を誘導および／または結合する ことのできる化合物であり、またＨＩＶ変種の主要な中和ドメインあるいはその 一部からなる複数の化合物からなる混合物あるいは、 （ｂ）天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であるポリペプチドであって、中 和抗体を誘導および／または結合することのできるものであり、またＨＩＶ変種 の主要な中和メドインあるいはその一部からなる複数のポリペプチドからなる複 合化合物、により免疫することで生ずる抗体からなる予防用もしくは治療用組成 物。 ２２．天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であるが、各々がＨＩＶ変種の主 要中和ドメインあるいはその一部からなり、および中和抗体を誘導および／また は結合することができる複数の化合物からなる混合物によって作製した抗体を含 む予防用あるいは治療用組成物。 ２３．以下の ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在であっても良く、そしてａとｂはそれぞれ独立して、システインまたは免疫 原性を増強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中 和ドメイン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは 、一般的な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、ＨＩＶ中和抗体を誘導 および／または結合することのできる、少なくともひとつの化合物に対して得ら れた抗体を含む予防用あるいは治療用組成物。 ２４．ａおよび／またはｂがＨＩＶ主要中和ドメイン由来のペプチドからなる、 請求の範囲第２３項に記載の組成物。 ２５．以下の、 ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在であってもよく、そしてａとｂはそれぞれ独立して、システインまたは免疫 原性を増強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中 和ドメイン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは 、一般的な免疫賦活物質のいずれかから構成されている化合物に対して作製され た抗体。 ２６．ｘが以下のグループ ｘ（０）≡ｘは存在しない ｘ（１）≡ｘ１ ｘ（２）≡ｘ２ｘ１ ｘ（３）≡ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（４）≡ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（５）≡ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（６）≡ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（７）≡ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（８）≡ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ ｘ２ｘ１ｘ（９）≡ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１０）≡ｘ１０ ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１１）≡ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１２）≡ｘ１２ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１３）≡ｘ１３ｘ１２ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｚはＰ，Ｌ，Ａ，Ｓ，またはＱ；そしてｙは以下より選択さ れるｙ（０）≡ｙは存在しない ｙ（１）≡ｙ１ ｙ（２）≡ｙ１ｙ２ ｙ（３）≡ｙ１ｙ２ｙ３ ｙ（４）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ ｙ（５）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ ｙ（６）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ（７）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ（８）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ（９）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ（１０）≡ｙ１ｙ ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ（１１）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ（１２）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ（１３）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ（１４）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ（１５）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ（１６）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ１６ｙ（１７）≡ｙ１ｙ ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ１６ ｙ１７ また、上において ｘ１はＩ，Ｒ，Ｍ，ＩＱＲ，Ｖ，Ｌ，Ｋ，Ｆ，Ｓ，Ｇ，Ｙ，ＳＲＧ，またはＹＱ Ｒ； ｘ２はＨ，Ｒ，Ｙ，Ｔ，Ｓ，Ｐ，Ｆ，Ｎ，Ａ，Ｋ，Ｇ，またはＶ；ｘ３はＩ，Ｌ ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｅ，Ｇ，Ｆ，またはＹ；ｘ４はＲ，Ｓ，Ｇ，Ｈ，Ａ，Ｋ，または 存在しないｘ５はＫ，Ｒ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ａ，ＩＲ，ＲＱ，または存在しないｘ６ はＲ，Ｋ，Ｓ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｅ，Ｇ，またはＴ；ｘ７はＴ，Ｋ，Ｖ，Ｉ，Ａ，Ｒ ，Ｐ，またはＥ；ｘ８はＮ，ＮＶ，Ｙ，ＫＩ，Ｉ，Ｔ，ＤＫ，Ｈ，またはＫ；ｘ ９はＮ，Ｓ，Ｋ，Ｅ，Ｙ，Ｄ，Ｉ，またはＱ；ｘ１０はＮ，Ｙ，Ｓ，Ｄ，Ｇ，ま たはＨ；ｘ１１はＰ； Ｘ１２はＲ，Ｉ，またはＫ； ｘ１３はＴ，Ｉ，ＭまたはＡ； ｙ１はＲ，Ｋ，Ｑ，Ｇ，Ｓ，またはＴ；ｙ２はＡ，Ｖ，Ｎ，Ｒ，Ｋ，Ｔ，Ｓ，Ｆ ，Ｐ，またはＷ；ｙ３はＦ，Ｉ，Ｖ，Ｌ，Ｗ，Ｙ，Ｇ，Ｓ，またはＴ；ｙ４はＹ ，Ｖ，Ｈ，Ｌ，Ｆ，Ｓ，Ｉ，Ｔ，Ｍ，Ｒ，ＶＨ，またはＦＴ；ｙ５はＴ，Ａ，Ｖ ，Ｑ，Ｈ，Ｉ，Ｓ，Ｙ，または存在しないｙ６はＴ，Ｒ，Ｉ，Ｑ，Ａ，Ｍ，また は存在しないｙ７はＧ，Ｅ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｄ，Ｑ，Ａ，Ｈ，Ｎ，Ｐ，または存在 しないｙ８はＲ，Ｑ，Ｅ，Ｋ，Ｄ，Ｎ，Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｉ，または存在しないｙ９ はＩ，Ｖ，Ｒ，Ｎ，Ｇ，または存在しないｙ１０はＩ，Ｔ，Ｖ，Ｋ，Ｍ，Ｒ，Ｌ ，Ｓ，Ｅ，Ｑ，Ａ，または存在しないｙ１１はＧ，Ｒ，Ｅ，Ｋ，Ｈ，または存在 しないｙ１２はＤ，Ｎ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｓ，または存在しないｙ１３はＩ，Ｍ，Ｍ Ｅ，Ｌ，または存在しないｙ１４はＲ，Ｇ，Ｋ，Ｓ，Ｅ，または存在しないｙ１ ５はＱ，Ｋ，またはＲ； ｙ１６はＡ；および ｙ１７はＨ，Ｙ，Ｒ，またはＱ。 から選択される、請求の範囲第２５項に記載の組成物。 ２７．該化合物が、以下のグループ、 （ａ）ａ−Ｙ−Ｓ−Ｎ−Ｖ−Ｒ−Ｎ−Ｒ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆ −Ｈ−Ｔ−Ｔ−Ｋ−Ｒ−Ｉ−Ｔ−ｂ；（ｂ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｓ−Ｒ−Ｇ− Ｉ−Ｒ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｉ−Ｌ−Ａ−Ｔ−Ｅ−Ｒ−Ｉ−Ｉ−ｂ；（ｃ ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｇ−Ｉ−Ｆ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ｎ−Ｉ−Ｙ −Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｎ−Ｉ−Ｉ−ｂ；（ｄ）ａ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｓ−Ｉ−Ｒ−Ｉ− Ｑ−Ｒ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｉ−Ｇ−Ｋ−Ｉ−Ｇ−ｂ；（ｅ）ａ −Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｒ−（ＩｏｒＶ）−Ｔ−Ｍ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ｖ（ ＹｏｒＷ）−Ｙ−（ＸｏｒＴ）−（ＡｏｒＴ）−Ｇ−Ｑ−Ｉ−Ｉ−ｂ； （ｆ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−（ＩｏｒＴ）−Ｒ−Ｋ−（ＲｏｒＳ）−Ｉ−Ｔ−（Ｒｏ ｒＫ）−Ｇ−Ｐ−Ｇ−（ＲｏｒＫ）−Ｖ−Ｉ−Ｙ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｑ−Ｉ−Ｉ−ｂ ；（ｇ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｇ−Ｉ−Ｙ−Ｖ−Ｇ−Ｓ−Ｇ−Ｒ−（Ａ ｏｒＫ）−Ｖ−Ｔ−Ｔ−Ｒ−（ＤｏｒＨｏｒＱ）−Ｋ−Ｉ−（ＩｏｒＭ）−ｂ； および （ｈ）ａ−Ｔ−Ｒ−Ｑ−（ＲｏｒＳ）−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｇ−Ｌ−Ｇ−Ｑ−（Ａｏｒ Ｓ）−Ｌ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｒ−ｂ；から選択される、請求の範囲第２６項に記載の 抗体。 ２８．天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であり、ＨＩＶ変種の主要中和ド メインもしくはその一部からなり、中和抗体を誘導および／または結合する能力 を有する複数の化合物からなる混合物から構成される、広範な中和性免疫応答を 生起させるためのワクチン組成物。 ２９．天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であり、ＨＩＶ変種の主要中和ド メインもしくはその一部からなり、中和抗体を誘導および／または結合する能力 を有する複数のポリペプチドからなる複合化合物から構成される、広範な中和性 免疫応答を生起させるためのワクチン組成物。 ３０．以下の ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在でもよく、そして、ａとｂはそれぞれ独立して、システインまたは免疫原性 を増強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ド メイン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一 般的な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、ＨＩＶ中和抗体を誘導もし くは結合することのできる、少なくともひとつの化合物によって構成されるワク チン組成物。 ３１．該組成物が免疫アジュバントと一緒に形成されている、請求の範囲第３０ 項に記載のワクチン組成物。 ３２．ｘが以下のグループ ｘ（０）≡ｘは存在しない ｘ（１）≡ｘ１ ｘ（２）≡ｘ２ｘ１ ｘ（３）≡ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（４）≡ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（５）≡ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（６）≡ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（７）≡ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（８）≡ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ ｘ２ｘ１ｘ（９）≡ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１０）≡ｘ１０ ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１１）≡ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１２）≡ｘ１２ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１２）≡ｘ１３ｘ１２ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｚはＰ，Ｌ，Ａ，Ｓ，またはＱ；そしてｙは以下から選択さ れるｙ（０）≡ｙは存在しない ｙ（１）≡ｙ１ ｙ（２）≡ｙ１ｙ２ ｙ（３）≡ｙ１ｙ２ｙ３ ｙ（４）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ ｙ（５）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ ｙ（６）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ（７）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ（８）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ（９）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ（１０）≡ｙ１ｙ ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ（１１）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ（１２）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ（１３）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ（１４）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ（１５）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ（１６）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ１６ｙ（１７）≡ｙ１ｙ ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ１６ ｙ１７ そして上において ｘ１はＩ，Ｒ，Ｍ，ＩＱＲ，Ｖ，Ｌ，Ｋ，Ｆ，Ｓ，Ｇ，Ｙ，ＳＲＧ，またはＹＱ Ｒ； ｘ２はＨ，Ｒ，Ｙ，Ｔ，Ｓ，Ｐ，Ｆ，Ｎ，Ａ，Ｋ，Ｇ，またはＶ；ｘ３はＩ，Ｌ ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｅ，Ｇ，Ｆ，またはＹ；ｘ４はＲ，Ｓ，Ｃ，Ｈ，Ａ，Ｋ，または 存在しないｘ５はＫ，Ｒ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ａ，ＩＲ，ＲＱ，または存在しないｘ６ はＲ，Ｋ，Ｓ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｅ，Ｇ，またはＴ；ｘ７はＴ，Ｋ，Ｖ，Ｉ，Ａ，Ｒ ，Ｐ，またはＥ；ｘ８はＮ，ＮＶ，Ｙ，ＫＩ，Ｉ，Ｔ，ＤＫ，Ｈ，またはＫ；ｘ ９はＮ，Ｓ，Ｋ，Ｅ，Ｙ，Ｄ，Ｉ，またはＱ；ｘ１０はＮ，Ｙ，Ｓ，Ｄ，Ｇ，ま たはＨ；ｘ１１はＰ； ｘ１２はＲ，Ｉ，またはＫ； ｘ１３はＴ，Ｉ，ＭまたはＡ； ｙ１はＲ，Ｋ，Ｑ，Ｇ，Ｓ，またはＴ；ｙ２はＡ，Ｖ，Ｎ，Ｒ，Ｋ，Ｔ，Ｓ，Ｆ ，Ｐ，またはＷ；ｙ３はＦ，Ｉ，Ｖ，Ｌ，Ｗ，Ｙ，Ｇ，Ｓ，またはＴ；ｙ４はＹ ，Ｖ，Ｈ，Ｌ，Ｆ，Ｓ，Ｉ，Ｔ，Ｍ，Ｒ，ＶＨ，またはＦＴ；ｙ５はＴ，Ａ，Ｖ ，Ｑ，Ｈ，Ｉ，Ｓ，Ｙ，または存在しないｙ６はＴ，Ｒ，Ｉ，Ｑ，Ａ，Ｍ，また は存在しないｙ７はＧ，Ｅ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｄ，Ｑ，Ａ，Ｈ，Ｎ，Ｐ，または存在 しないｙ８はＲ，Ｑ，Ｅ，Ｋ，Ｄ，Ｎ，Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｉ，または存在しないｙ９ はＩ，Ｖ，Ｒ，Ｎ，Ｇ，または存在しないｙ１０はＩ，Ｔ，Ｖ，Ｋ，Ｍ，Ｒ，Ｌ ，Ｓ，Ｅ，Ｑ，Ａ，または存在しないｙ１１はＧ，Ｒ，Ｅ，Ｋ，Ｈ，または存在 しないｙ１２はＤ，Ｎ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｓ，または存在しないｙ１３はＩ，Ｍ，Ｍ Ｅ，Ｌ，または存在しないｙ１４はＲ，Ｇ，Ｋ，Ｓ，Ｅ，または存在しないｙ１ ５Ｑ，Ｋ，またはＲ； ｙ１６はＡ；そして ｙ１７はＨ，Ｙ，Ｒ，またはＱ。 から選択される、請求の範囲第３０項に記載のワクチン。 ３３．ｘ１はＩ； ｘ２はＨ； ｘ３はＩ； ｘ４はＲ； ｘ５はＫ； ｘ６はＲ； ｘ７はＴ； ｚはＰ； ｙ１はＲ； ｙ２はＡ； ｙ３はＦ； ｙ４はＹ； ｙ５はＴ； ｙ６はＴ；および ｙ７はＧ。 である、請求の範囲第３２項に記載のワクチン。 ３４．該化合物が、以下のグループ （ａ）ａ−Ｙ−Ｓ−Ｎ−Ｖ−Ｒ−Ｎ−Ｒ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆ −Ｈ−Ｔ−Ｔ−Ｋ−Ｒ−Ｉ−Ｔ−ｂ；（ｂ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｓ−Ｒ−Ｇ− Ｉ−Ｒ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｉ−Ｌ−Ａ−Ｔ−Ｅ−Ｒ−Ｉ−Ｉ−ｂ；（ｃ ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｇ−Ｉ−Ｆ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ｎ−Ｉ−Ｙ −Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｎ−Ｉ−Ｉ−ｂ；（ｄ）ａ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｓ−Ｉ−Ｒ−Ｉ− Ｑ−Ｒ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｉ−Ｇ−Ｋ−Ｉ−Ｇ−ｂ；（ｅ）ａ −Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｒ−（ＩｏｒＶ）−Ｔ−Ｍ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ｖ− （ＹｏｒＷ）−Ｙ−（ＸｏｒＴ）−（ＡｏｒＴ）−Ｇ−Ｑ−Ｉ−Ｉ−ｂ； （ｆ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−（ＩｏｒＴ）−Ｒ−Ｋ−（ＲｏｒＳ）−Ｉ−Ｔ−（Ｒｏ ｒＫ）−Ｇ−Ｐ−Ｇ−（ＲｏｒＫ）−Ｖ−Ｉ−Ｙ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｑ−Ｉ−１−ｂ ；（ｇ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｇ−Ｉ−Ｙ−Ｖ−Ｇ−Ｓ−Ｇ−Ｒ−（Ａ ｏｒＫ）−Ｖ−Ｔ−Ｔ−Ｒ−（ＤｏｒＨｏｒＱ）−Ｋ−Ｉ−（ＩｏｒＭ）ｂ；お よび （ｈ）ａ−Ｔ−Ｒ−Ｑ−（ＲｏｒＳ）−Ｉ−Ｒ−Ｉ−Ｇ−Ｌ−Ｇ−Ｑ−（Ａｏｒ Ｓ）−Ｌ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｒ−ｂ。 から選択される、請求の範囲第３２項に記載のワクチン。 ３５．該化合物が、配列Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆに結合する抗体を誘導すること ができる、請求の範囲第３２項に記載のワクチン組成物。 ３６．該化合物が、配列Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆに結合する抗体を誘導する ことができる、請求第３２項に記載のワクチン組成物。 ３７．該化合物が、配列Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａに結合する抗体を誘導すること ができる、請求の範囲第３２項に記載のワクチン組成物。 ３８．該化合物が、配列Ｉ−ａ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒに結合する抗体を誘導する ことができ、ａが２０種のアミノ酸のいずれかを表わす、請求の範囲第３２に記 載のワクチン組成物。 ３９．ａがＨである、請求の範囲第３８項に記載のワクチン。 ４０．該化合物が、配列Ｉ−ａ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａに結合する抗体を誘導 することができ、ａが２０種のアミノ酸のいずれかを表わす、請求の範囲第３２ 項に記載のワクチン組成物。 ４１．ａがＨである、請求の範囲第４０項に記載のワクチン。 ４２．該化合物が、配列Ｉ−ａ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆに結合する抗体を 誘導することができ、ａが２０種のアミノ酸のいずれかを表わす、請求の範囲第 ３２項に記載のワクチン組成物。 ４３．ａがＨである、請求の範囲第４２項に記載のワクチン。 ４４．該化合物が環状化されている、請求の範囲第３０項に記載のワクチン組成 物。 ４５．該化合物が一種以上のＨＩＶ変種由来の抗原決定基を含んでいる、請求の 範囲第３０項に記載のワクチン組成物。 ４６．ｘ１がＩ、 ｚがＰ、 ｙ１がＲであり、 ｙ２がＡである、 請求の範囲第３２項に記載のワクチン。 ４７．ｘ１がＩ、 ｘ３がＩ、 ｚがＰであり、 ｙ１がＲである、 請求の範囲第３２項に記載のワクチン。 ４８．ｘがＰ、 ｙ１がＲ、 ｙ２がＡであり、 ｙ３がＦである 請求の範囲第３２項に記載の組成物。 ４９．ｘが、ｘ（５），ｘ（６），ｘ（７），ｘ（８），ｘ（９），ｘ（１０） およびｘ（１１）からなるグループから選択され、ｙが、ｙ（５），ｙ（６）， ｙ（７），ｙ（８），ｙ（９），ｙ（１０）およびｙ（１１）から選択される、 請求の範囲第３２項に記載のワクチン。 ５０．該化合物が、以下のアミノ酸配列、ａ−Ｘ１３−Ｒ−Ｐ−Ｘ１０−Ｘ９− Ｘ８−Ｘ７−Ｘ６−Ｘ５−Ｘ４−Ｘ３−Ｘ２−Ｘ１−Ｇ−ｚ−Ｇ−ｙ１−ｙ２− ｙ３−ｙ４−ｙ５−ｙ６−ｙ７−ｙ８−ｙ９−ｙ１０−Ｇ−ｙ１２−ｙ１３−Ｒ −ｙ１５−Ａ−ｙ１７−ｂを有する、訴求の範囲第３２項に記載の組成物。 ５１．（ａ）天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であり、中和抗体を誘導お よび／または結合することのできる化合物であり、またＨＩＶ変種の主要な中和 ドメインあるいはその一部からなる化合物および、（ｂ）該抗体および該化合物 の間で形成される複合体を検出する手段を含む、生物学的液体中のＨＩＶに対す る抗体の検出に用いるためのキット。 ５２．該化合物が ｘＧｚＧｙ という分子式を有し、ここで、 ｘは、０から１３アミノ酸長であり、 ｙは、０から１７アミノ酸長を表わし、２は、Ｐ，Ａ，Ｓ，ＱまたはＬを表わし ている、請求の範囲第５１項に記載のキット。 ５３．ｘが以下のグループ ｘ（０）≡ｘは存在しない ｘ（１）≡ｘ１ ｘ（２）≡ｘ２ｘ１ ｘ（３）≡ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（４）≡ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（５）≡ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（６）≡ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ ｘ（７）≡ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（８）≡ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ ｘ２ｘ１ｘ（９）≡ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１０）≡ｘ１０ ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１１）≡ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ ｘ６ｘ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１２）≡ｘ１２ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｘ（１３）≡ｘ１３ｘ１２ｘ１１ｘ１０ｘ９ｘ８ｘ７ｘ６ｘ ５ｘ４ｘ３ｘ２ｘ１ｚはＰ，Ｌ，Ａ，Ｓ，またはＱ；およびｙは以下から選ばれ るｙ（０）≡ｙは存在しない ｙ（１）≡ｙ１ ｙ（２）≡ｙ１ｙ２ ｙ（３）≡ｙ１ｙ２ｙ３ ｙ（４）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ ｙ（５）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ ｙ（６）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ（７）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ（８）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ（９）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ（１０）≡ｙ１ｙ ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ（１１）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ（１２）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ（１３）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ（１４）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ（１５）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ（１６）≡ｙ１ｙ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ１６ｙ（１７）≡ｙ１ｙ ２ｙ３ｙ４ｙ５ｙ６ｙ７ｙ８ｙ９ｙ１０ｙ１１ｙ１２ｙ１３ｙ１４ｙ１５ｙ１６ ｙ１７ そして上において ｘ１はＩ，Ｒ，Ｍ，ＩＱＲ，Ｖ，Ｌ，Ｋ，Ｆ，Ｓ，Ｇ，Ｙ，ＳＲＧ，またはＹＱ Ｒ； ｘ２はＨ，Ｒ，Ｙ，Ｔ，Ｓ，Ｐ，Ｆ，Ｎ，Ａ，Ｋ，Ｇ，またはＶ；ｘ３はＩ，Ｌ ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｅ，Ｇ，Ｆ，またはＹ；ｘ４はＲ，Ｓ，Ｇ，Ｈ，Ａ，Ｋ，または なしｘ５はＫ，Ｒ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ａ，ＩＲ，ＲＱ，またはなしｘ６はＲ，Ｋ，Ｓ ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｅ，Ｇ，またはＴ；ｘ７はＴ，Ｋ，Ｖ，Ｉ，Ａ，Ｒ，Ｐ，または Ｅ；ｘ８はＮ，ＮＶ，Ｙ，ＫＩ，Ｉ，Ｔ，ＤＫ，Ｈ，またはＫ：ｘ９はＮ，Ｓ， Ｋ，Ｅ，Ｙ，Ｄ，Ｉ，またはＱ；ｘ１０はＮ，Ｙ，Ｓ，Ｄ，Ｇ，またはＨ；Ｘ１ １はＰ； ｘ１２はＲ，Ｉ，またはＫ； ｘ１３はＴ，Ｉ，ＭまたはＡ； ｙ１はＲ，Ｋ，Ｑ，Ｇ，Ｓ，またはＴ；ｙ２はＡ，Ｖ，Ｎ，Ｒ，Ｋ，Ｔ，Ｓ，Ｆ ，Ｐ，またはＷ；ｙ２はＦ，Ｉ，Ｖ，Ｌ，Ｗ，Ｙ，Ｇ，Ｓ，またはＴ；ｙ４はＹ ，Ｖ，Ｈ，Ｌ，Ｆ，Ｓ，Ｉ，Ｔ，Ｍ，Ｒ，ＶＨ，またはＦＴ；ｙ５はＴ，Ａ，Ｖ ，Ｑ，Ｈ，Ｉ，Ｓ，Ｙ，またはなしｙ６はＴ，Ｒ，Ｉ，Ｑ，Ａ，Ｍ，またはなし ｙ７はＧ，Ｅ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｄ，Ｑ，Ａ，Ｈ，Ｎ，Ｐ，またはなしｙ８はＲ，Ｑ ，Ｅ，Ｋ，Ｄ，Ｎ，Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｉ，またはなしｙ９はＩ，Ｖ，Ｒ，Ｎ，Ｇ，ま たはなしｙ１０はＩ，Ｔ，Ｖ，Ｋ，Ｍ，Ｒ，Ｌ，Ｓ，Ｅ，Ｑ，Ａ，またはなしｙ １１Ｇ，Ｒ，Ｅ，Ｋ，Ｈ，またはなしｙ１２はＤ，Ｎ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｓ，または なしｙ１３はＩ，Ｍ，ＭＥ，Ｌ，またはなしｙ１４はＲ，Ｇ，Ｋ，Ｓ，Ｅ，また はなしｙ１５はＱ，Ｋ，またはＲ； ｙ１６はＡ；および ｙ１７はＨ，Ｙ，Ｒ，またはＱ。 から選択される、請求の範囲第５２項に記載のキット。 ５４．該化合物が、以下のグループ （ａ）ａ−Ｙ−Ｓ−Ｎ−Ｖ−Ｒ−Ｎ−Ｒ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆ −Ｈ−Ｔ−Ｔ−Ｋ−Ｒ−Ｉ−Ｔ−ｂ；（ｂ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｓ−Ｒ−Ｇ− Ｉ−Ｒ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｉ−Ｌ−Ａ−Ｔ−Ｅ−Ｒ−Ｉ−Ｉ−ｂ；（ｃ ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−−Ｒ−Ｋ−Ｇ−Ｉ−Ｆ−Ｉ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ｎ−Ｉ− Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｎ−Ｉ−Ｉ−ｂ；（ｄ）ａ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｓ−Ｉ−Ｒ−Ｉ −Ｑ−Ｒ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｉ−Ｇ−Ｋ−Ｉ−Ｇ−ｂ；（ｅ） ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｒ−（ＩｏｒＶ）−Ｔ−Ｍ−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ｖ −（ＹｏｒＷ）−Ｙ−（ＸｏｒＴ）−（ＡｏｒＴ）−Ｇ−Ｑ−Ｉ−Ｉ−ｂ； （ｆ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−（ＩｏｒＴ）−Ｒ−Ｋ−（ＲｏｒＳ）−Ｉ−Ｔ−（Ｒｏ ｒＫ）−Ｇ−Ｐ−Ｇ−（ＲｏｒＫ）−Ｖ−Ｉ−Ｙ−Ａ−Ｔ−Ｇ−Ｑ−Ｉ−Ｉ−ｂ ；（ｇ）ａ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｔ−Ｒ−Ｋ−Ｇ−Ｉ−Ｙ−Ｖ−Ｇ−Ｓ−Ｇ−Ｒ−（Ａ ｏｒＫ）−Ｖ−Ｔ−Ｔ−Ｒ−（ＤｏｒＨｏｒＱ）−Ｋ−Ｉ−（ＩｏｒＭ）−ｂ； および （ｈ）ａ−Ｔ−Ｒ−Ｑ−（ＲｏｒＳ）−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｇ−Ｌ−Ｇ−Ｑ−（Ａｏｒ Ｓ）−Ｌ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｒ−ｂ；から選択される、請求の範囲第５１項に記載の キット。 ５５．天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク賃であり、中和抗体を誘導および／ または結合することのできる化合物であり、またＨＩＶ変種の主要な中和ドメイ ンあるいはその一部から構成されている少なくともひとつの化合物を用いた、液 体中のＨＩＶ抗体を検出もしくは定量するための免疫学的アッセイ法。 ５６．該化合物が ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在でも良く、そしてａとｂはそれそれ独立に、システインまたは免疫原性を増 強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ドメイ ン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一般的 な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、請求の範囲第５５項に記載の免 疫学的アッセイ法。 ５７．天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であり、中和抗体の誘導および／ または結合能を有し、それぞれが、ＨＩＶ変種の主要中和ドメインもしくはその 一部から構成される複数の化合物からなる混合物を用いて免疫することからなる 、広範な中和性ポリクローナル抗体あるいはモノクローナル抗体を生成する方法 。 ５８．中和抗体の誘導および／または結合能を有し、それぞれがＨＩＶ変種の主 要中和ドメインもしくはその一部から構成される複数のポリペプチドからなる複 合化合物を用いて免疫することからなる、広範な中和性ポリクローナル抗体ある いはモノクローナル抗体を生成する方法。 ５９．ＨＩＶ変種の主要中和ドメインあるいはその一部を含む、少なくともひと つの化合物で動物またはヒトを免疫し、続いて該動物もしくはヒトを（ａ）天然 に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であり、中和抗体を誘導および／または結合 することのできる化合物であり、またＨＩＶ変種の主要な中和ドメインあるいは その一部からなる複数の化合物からなる混合物あるいは、 （ｂ）天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であり、中和抗体を誘導および／ または結合することのできる化合物であり、またＨＩＶ変種の主要な中和ドメイ ンあるいはその一部からなる複数のポリペプチドからなる複合混合物、 により免疫することよりなる、広範な中和抗体を生成するための方法。 ６０．該化合物が ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在であって良く、そしてａとｂはそれぞれ独立に、システインまたは免疫原性 を増強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ド メイン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一 般的な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、中和抗体を誘導もしくは結 合することのできる、少なくともひとつの化合物による免疫することよりなる、 請求の範囲第５９項に記載の方法。 ６１．（ａ）天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であり、中和抗体を誘導お よび／または結合することができ、ＨＩＶ変種の主要な中和ドメインあるいはそ の一部からなる該化合物をインキュベーションするステップおよび、 （ｂ）該抗体および該化合物の間で形成される複合体の検出をすることを含む、 生物学的液体中のＨＩＶに対する抗体の検出に用いるための方法。 ６２．該化合物か ｘＧｚＧｙ という分子式を有し、ここで ｘは、０から１３アミノ酸長であり、 ｙは、０から１７アミノ酸長を表わし、ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌを表わ している請求の範囲第６１項に記載の方法。 ６３．予防もしくは治療を必要とする動物またはヒトに、天然に存在しないＨＩ Ｖ夾膜タンパク質であって、中和抗体を誘導および／または結合することができ 、またそれぞれが、ＨＩＶ変種の主要な中和ドメインあるいはその一部から構成 されている複数の化合物からなる混合物に対して得られた抗体から構成される組 成物を投与することを含む、ＨＩＶ感染の予防あるいは治療法。 ６４．該化合物が ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在でも良く、そしてａとｂはそれぞれ独立に、システインまたは免疫原性を増 強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ドメイ ン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一般的 な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、請求の範囲第６３項に記載の方 法。 ６５．リンパ球の分裂応答の刺激が必要なヒトを、天然に存在しないＨＩＶ夾膜 タンパク質であって、中和抗体を誘導および／または結合することができ、また ＨＩＶ変種の主要な中和ドメインあるいはその一部から構成されている、少なく とも１種の化合物によって処置することからなる、ヒトにおけるリンパ球分裂応 答を刺激する方法。 ６６．該化合物が ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在でも良く、そしてａとｂはそれぞれ独立に、システインまたは免疫原性を増 強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ドメイ ン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一般的 な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、請求の範囲第６５項に記載の方 法。 ６７．治療を必要とする動物またはヒトに、天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパ ク質であって、中和抗体を誘導および／または結合することができ、またそれぞ れが、ＨＩＶ変種の主要な中和ドメインあるいはその一部から構成されている、 ひとつ以上の化合物からなる組成物を投与することを含む、ＨＩＶ感染の治療法 。 ６８．該化合物が ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在でも良く、ａとｂはそれぞれ独立に、システインまたは免疫原性を増強する ことのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ドメイン由来 のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一般的な免疫 賦活物質のいずれかから構成されている、請求の範囲第６７項に記載の方法。 ６９．生物学的液体について、 （ａ）天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク質であって、中和抗体を誘導および ／または結合することができ、ＨＩＶ変種の主要な中和ドメインあるいはその一 部からなる化合物に特異的な抗体と、該液体を接触させ、 （ｂ）該液体中で、該変種の指標として免疫複合体を検出することからなる、変 種の一変種に特異的なタンパク質の存在を調べるための方法。 ７０．パート（ｃ）の該化合物が ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在でも良く、そしてａとｂはそれぞれ独立に、システインまたは免疫原性を増 強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ドメイ ン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一般的 な免疫賦活物質のいずれかから構成されている、請求の範囲第６９項に記載の方 法。 ７１．免疫した動物由来のリンパ細胞を、天然に存在しないＨＩＶ夾膜タンパク 質であって、中和抗体を誘導および／または結合することができ、またＨＩＶ変 種の主要な中和ドメインあるいはその一部から構成されている、少なくともひと つの化合物で処理することを含む、１ｎｖｉｔｒｏでリンパ球を刺激する方法。 ７２．該化合物が ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ２は、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在でも良く、そしてａとｂはそれぞれ以下の、システインまたは免疫原性を増 強することのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ドメイ ン由来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一般的 な免疫賦活物質のいずれかから構成されているかもしれない、請求の範囲第７１ 項に記載の方法。 ７３．天然に存在しないＨＩＶ夾腹タンパク質であって、中和抗体を誘導あるい は結合することができ、またＨＩＶ変種の主要な中和ドメインあるいはその一部 から構成されている少なくともひとつの化合物、に結合する能力について抗体産 生細胞を検索することを含む、予防あるいは治療に有用なポリクローナル抗体も しくはモノクローナル抗体を同定する方法。 ７４．該化合物が ａｘＧｚＧｙｂ という分子式を有し、ここで ｘは０から１３アミノ酸長であり、 ｙは０から１７アミノ酸長を表わし、 ｚは、Ｐ，Ａ，Ｓ，Ｑまたは、Ｌであり、ａ、ｂ両者ではなくいずれか一方は不 存在でも良く、ａとｂはそれぞれ独立して、システインまたは免疫原性を増強す ることのできるタンパク質あるいはそのほかの部分、ＨＩＶ主要中和ドメイン由 来のペプチド、Ｔ−細胞を刺激することのできるペプチドもしくは、一般的な免 疫賦活物質のいずれかから構成されている、請求の範囲第７３項に記載の方法。 ７５．１種以上のＨＩＶ中和エピトープを含むポリペプチドをコードする合成遺 伝子。 ７６．１種以上のＨＩＶ単離物由来の中和エピトープを含むポリペプチドをコー ドする合成遺伝子。 ７７．２から２０種のＨＩＶ単離物由来の中和エピトープを含む該ポリペプチド をコードしている請求の範囲第７６項に記載の合成遺伝子。 ７８，該中和エプトープの一つが、ＨＩＶ−ＭＮと呼ばれるＨＩＶ単離物由来で ある、請求の範囲第７６項に記載の合成遺伝子。 ７９．該ポリペプチドが、ＨＩＶ−ＭＮ，ＨＩＶ−ＩＩＩＢ，ＨＩＶ−ＲＦねＨ ＩＶ−ＳＣおよびＨＩＶ−ＷＭＪ１と呼ばれているＨＩＶ単離物由来の中和エピ トープを含んでいる、請求の範囲第７６項に記載の合成遺伝子。 ８０．異なるＨＩＶ単離物由来の中和エピトープをコードする領域かアミノ酸ス ペーサーにより分割されている、請求の範囲第７６項に記載の合成遺伝子。 ８１．該アミノ酸スペーサーがグリシンである、請求の範囲第８０項に記載の合 成遺伝子。 ８２．該遺伝子が、第１３表に示されるアミノ酸配列もしくはそれと均等なアミ ノ酸配列を持つポリペプチドをコードしている、請求の範囲第７６項に記載の合 成遺伝子。 ８３．該遺伝子が、融合ポリペプチドである、請求の範囲第７６項に記載の合成 遺伝子。 ８４．該遺伝子が、第１３Ａ表に示されるアミノ酸配列もしくはそれと均等なア ミノ酸配列を持つポリペプチドをコードしている、請求の範囲第８３項に記載の 合成遺伝子。 ８５．ひとつ以上のＨＩＶ単離物由来の中和エピトープを含む化合物。 ８６．該化合物が、２から２０種のＨＩＶ単離物由来の中和エピトープを含む、 請求の範囲第８５項に記載の化合物。 ８７．該中和エピトープのひとつが、ＨＩＶ−ＭＮと呼ばれるＨＩＶ単離物由来 である、請求の範囲第８５項に記載の化合物。 ８８．該化合物が、ＨＩＶ−ＭＮ，ＨＩＶ−ＩＩＩＢ，ＨＩＶ−ＲＦ，ＨＩＶ− ＳＣおよびＨＩＶ−ＷＭＪ１と呼ばれているＨＩＶ単離物由来の中和エピトープ を含んでいる、請求の範囲第８５項に記載の化合物。 ８９．該中和エピトープがアミノ酸スペーサーによって分割されている、請求の 範囲第８５項に記載の化合物。 ９０．該アミノ酸スペーサーがグリシンである、請求の範囲第８９項に記載の化 合物。 ９１．該化合物が、第１３表に示されるアミノ酸配列もしくはそれと均等なアミ ノ酸配列を持つ、請求の範囲第８５項に記載の化合物。 ９２．該化合物が融合ペプチドである、請求の範囲第８５項に記載の化合物。 ９３．該化合物が、第１３Ａ表に示されるアミノ酸配列もしくはそれと均等なア ミノ酸配列を持っている、請求の範囲第９２項に記載の化合物。 ９４．ひとつがＨＩＶ−ＭＮである、２から２０種のＨＩＶ単離物の中和エピト ープを含んでいる、多−エピトープ化合物からなる組成物て適当な動物を免疫す ることにより得られる、免疫グロブリン、モノクローナル抗体および／またはポ リクローナル抗体を含む予防用または治療用組成物。 ９５．該多−エピトープ化合物が、ＨＩＶ−ＭＮ，ＨＩＶ−ＩＩＩＢ，ＨＩＶ− ＲＦ，ＨＩＶ−ＳＣおよびＨＩＶ−ＷＭＪ１と呼ばれているＨＩＶ単離物由来の 中和エピトープを含んでいる、請求の範囲第９４項に記載の化合物。 ９６．ひとつがＨＩＶ−ＭＮである、２から２０種のＨＩＶ単離物の中和エピト ープを含んでいる、多−エピトープ化合物からなる組成物で適当な動物を免疫す る、広範な中和性ポリクローナルもしくはモノクローナル抗体を生成する方法。 ９７．該多−エピトープ化合物が、ＨＩＶ−ＭＮ，ＨＩＶ−ＩＩＩＢ，ＨＩＶ− ＲＦ、ＨＩＶ−ＳＣおよびＨＩＶ−ＷＭＪ１と呼ばれているＨＩＶ単離物由来の 中和エピトープを含んでいる、請求の範囲第９６項に記載の方法。 ９８．ひとつがＨＩＶ−ＭＮである、２から２０種のＨＩＶ単催物の中和エピト ープを含んでいる、多−エピトープ化合物からなる組成物で適当な動物を免疫す ることにより得られる、免疫グロブリン、モノクローナル抗体および／またはポ リクローナル抗体を含む薬理学的組成物を、予防または治療を必要とする動物や ヒトに投与する、ＨＩＶ感染の予防法または治療法。 ９９．該多−エピトープ化合物が、ＨＩＶ−ＭＮ，ＨＩＶ−ＩＩＩＢ，ＨＩＶ− ＲＦ，ＨＩＶ−ＳＣおよびＨＩＶ−ＷＭＪ１と呼ばれているＨＩＶ単離物由来の 中和エピトープを含んでいる、請求の範囲第９８項に記載の方法。 １００．ひとつがＨＩＶ−ＭＮである、２から２０種のＨＩＶ単離物の中和エピ トープを含んでいる、多−エピトープ化合物からなる組成物によって、リンパ球 の分裂応答を刺激する必要のあるヒトを処理することを含む、ヒトにおけるリン パ球の分裂応答を刺激する方法。 １０１．該多−エピトープ化合物が、ＨＩＶ−ＭＮ．ＨＩＶ−ＩＩＩＢ，ＨＩＶ −ＲＦ，ＨＩＶ−ＳＣおよびＨＩＶ−ＷＭＪ１と呼ばれているＨＩＶ単離物由来 の中和エピトープを含んでいる、請求の範囲第１００項に記載の方法。