JPH0353895A

JPH0353895A - グリシンの定量用試薬及び定量法

Info

Publication number: JPH0353895A
Application number: JP18880089A
Authority: JP
Inventors: Yoji Marui; 丸井　洋二; Chozo Hayashi; 林　長蔵; Takao Shirokane; 白兼　孝雄; Motoo Nakajima; 中島　基雄; Kiyoshi Mizusawa; 水沢　清
Original assignee: Kikkoman Corp
Current assignee: Kikkoman Corp
Priority date: 1989-07-24
Filing date: 1989-07-24
Publication date: 1991-03-07

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、食品、尿又は血液等のグリシン含有試料中の
グリシンの定量用試薬及び定量法に関するものである。

グリシンは多くの動物杜蛋白質とくに紺フィブロイン、
ゼラチン、エラスチンなどに多量に含まれ、種々の加工
食品中に広く存在する。また、生体内では種々の代謝経
路での前駆体及び最終産物としてそれら代謝系の岐路に
重要な位置を占める。

その大要は、（１）蛋白質への導入及び胆汁酸、芳香族
カルボン酸などとの結合（解１１７′作用）、（２）セ
リンへの変ｍ、（３）アミジン大（転移反応によるグア
ニジノ酢酸、クレアチンへの変化、（４）グリシンーコ
ハク酸回路からのポルフィリンへの導入、（５）テトラ
ヒドロ葉酸に結合する活性Ｃ１単位の有力な前駆体で、
プリン、ヒスチジンの炭素骨格に入る他、メチオニンや
チミンのメチル基となる等である。臨床的には、腎不全
患者の血中グリシン濃度は低下し尿中Ｄ１泄徂は増加す
る傾向が見られ腎臓の尿細管の再吸収能との関連が示唆
されており、また肝疾患では胆汁酸のグリシン抱合体が
減少するため、胆汁中のグリシン抱合体に対するタウリ
ン抱合体の比は各種疾患によって変化すること等多数の
報告がある。

従って、食品、尿又は血液等のグリシンの定量を行なう
ことは、産業上及び臨床医学上非常に重要な意義を有す
る。

従来、試料中のグリシンを定量する方法としては、例え
ば■グリシンをニンヒドリンで酸化し生ずるホルムアル
デヒドをクロモトロープ酸で比色定量する方法、グリシ
ンをＯ−フタルアルデヒドでクロロホルムに抽出可能な
緑色の物質をつくらせて比色定量する方法、グリシンに
アロキサンを作用させて赤紫色に発色させて比色定量す
る方法（タンパク質化学１、第３５０頁、共立出版株式
会社出版、１９６９年発行）、■グリシンをベ３ンゾイルクロライドと反応させて生じた馬尿酸を酢酸エ
チルで抽出後、無水酢酸、ρ−ジメチルアミノベンズア
ルデヒド及びピリジンと反応させて比色定損する方法〔
エス・オーモリ等（Ｓ　．　Ｏｈｍｏｒｉｅｔ　ａｌ．
）　：アナル・バイオケム（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．）、第９０巻、第６６２頁、１９７８年）■グリシン
を含有する試料から該グリシンをイオン交換クロマトグ
ラフィーを用いて分画し、これを定量する方法（生化学
実験講座１１　Ｓ第５３頁、東京化学同人出版、１９６
７年発行）、■グリシンに１）一アミノ酸オキシダーゼ
、グリオキシル酸還元酵素及び還元型ニコチンアミドア
デニンジヌクレオタイド（ＮＡＤＨ）を作用させて、Ｎ
ＡＤＨの３４０　ｎｍの吸光度の減少を測定する方法（
エス・ジェイ・バガー等（Ｓ．Ｊ．Ｂｅｒｇｅｒ　ｅｔ
　ａｌ．）　：アナル・バイオヶム（Ａｎａｌ　．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．）、第６５巻、第２３２頁、１９７５年）
等が知られている。しかじの及び■の方法は操作が非常
に煩剥１で、定量に時間を要し、■の方法は大掛かりな
装置を必要とし、更に定量費用が嵩む大きな欠点を有す
る。また■の方４法は酵素法であるが、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼはグリ
シンに対する基質特異性が非常に低く、しかも酵素反応
時間が非常に長いという欠点を有する。

そこで、本発明者らは、迅速かつ正確なグリシンの定量
方法を開発すべく鋭意検討を重ねてきた結果、本発明を
完成した。

即ち、本発明は、　（ア）グルタチオン合戊酵素、（イ
）γ−グルタミル誘導体、アミノ酪酸誘導体及びシステ
イン誘導体からなる群より選ばれる少なくとも１種、（
ウ）アデノシン−５′一三リン酸及びその塩からなる７
！Ｔより選ばれる少なくとも１種、（１）金属イオン及
び（オ）アデノシン−５′一二リン酸、オルトリン酸及
びグルタチオンからなる群より選ばれる１種を検出する
ための試薬を含有してなるグリシンの定量用試薬であり
、また本発明はグリシン含有試料に、（ア）グルタチオ
ン合成酵素、（イ）γ−グルタミル誘導体、アミノ酪酸
誘導体及びシスティン誘導体からなる群より選ばれる少
なくとも工種、（ウ）アデノシン−５′一三リン酸及び
その塩からなる群より選ばれる少なくとも１種及び（１
）金属イオンを反応せしめ、生或するアデノシン−５′
一二リン酸、オルトリン酸もしくはグルタチオンを測定
することにより該試料中のグリシンを定量することを特
徴とするグリシンの定量法である。

そして本発明によれば、極めて簡易な操作で迅速に、し
かも精度良く試料中のグリシンを定量することができる
。

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明のグリシン含有試料としては、グリシンを含有す
るものであれば、如何なるものでも良く、例えば食品一
般、尿、血液、血清、糞便等が挙げられる。

そして、これらの試料のｐＨは無調整でも良いが、これ
を適宜なｐＨ調整剤、例えば塩酸、硫酸、硝酸、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム等によりｐＨ　４〜１２、
好ましくはｐＨ　６〜９に調整することが望ましい。

また、試料は、そのままあるいは水、緩衝液等で適宜な
濃度（０．０１〜０５μｍ０１）となる如く希釈して用
いられる。

本発明において用いられるグルタチオン合成酵素として
は、微生物、動物、植物等、如何なる起源のものを用い
ても良く、例えばハトの肝臓、小麦の胚、ラットの腎臓
、赤血球、酵母、大腸菌等が挙げられる。尚、グルタチ
オン合或酵素は、■エイチ・グシマ等（Ｈ．Ｇｕｓｈｉ
ｍａ　ｅｔ　ａｌ．）　：ジャーナル・オブ・アプライ
ド・バイオケミストリ−（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐ
ｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第５巻、第
２１０頁、ｌ９８３年、■エル・オツペンハイマ一等（
Ｌ．Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒ　ｅｔ　ａｌ．）　：ジエ
イ・バイオル・ケム（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｒｎ．）、
第２５４巻、第５１８４頁、１９７９年、■イー・ディ
・ムーズ等（Ｅ．Ｄ．Ｍｏｏｚ　ｅｔ　ａｌ．）　：バ
イオケミストリ−（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第６
巻、第１７２２頁、１９６７年、■エム・ワイ−０一等
（Ｍ．Ｙ．Ｌａｗ　ｅｔ　ａｌ．）、プラント・サイエ
ンス　（Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　：第４３巻、
第１８５頁、１９８６年等に記載された方法により容易
に調製することができる。

７ γ−グルタミル誘導体としては、Ｌ体あるいはＤ体いず
れを用いても良いが、例えばＬ一γ−グルタミルーＬ−
システイン、Ｄ一γ−グルタミルＬ−システイン、Ｌ一
γ−グルタミルーＤ−システイン、Ｌ一γ−グルタミル
ーＬ−α−アミノ酪酸、Ｄ一γ−グルタミルーＬ一α−
アミノ酪酸、Ｌ−γ−グルタミルーＤ一α−アミノ酪酸
、Ｌγ−グルタミル＝Ｌ−　（Ｓ−メチル）システイン
、Ｄ−γ−グルタミル−Ｌ−　（Ｓ−メチル）システイ
ン、Ｌ一γ−グルタミルーＬ−β−アミノ酪酸、Ｌ−γ
−グルタミルーＬ−セリン、Ｄ−γ−グルタミルーＬ−
セリン、Ｌ−γ−グルタミルーＤセリン、Ｌ一γ−グル
タミルーグリシン、Ｄ−γグルタミルーグリシン、Ｌ−
γ−グルタミルＬ−アラニン、Ｄ一γ−グルタミルーＬ
−アラニン、Ｌ−γ−グルタミルーＤ−アラニン、Ｌ一
γグルタミルーＬ−ノルバリン、Ｌ−γ−グルタミルー
Ｌ−ノルロイシン、Ｌ一γ一（α−メチル）グルタミル
ーＬ−α−アミノ酪酸、Ｄ−γ−（αーメチル）グルタ
ミルーＬ一α−アミノ酪酸、Ｌ８ γ−（Ｎ−メチル）グルタミルーＬ一α−アミノ酪酸、
Ｄ−γ−（Ｎ−メチル）グルタミルーＬα−アミノ酪酸
、Ｌ−γ一（β−メチル）グルタミルーＬ一α−アミノ
酩酸、Ｄ一γ一（β−メチル）グルタミルーＬ一α−ア
ミノ酪酸、Ｌ一γ−（γ−メチル）グルタミルーＬ−α
−アミノ酪酸、Ｄ一γ一（γ−メチル）グルタミルーＬ
−α−アミノ酪酸等が挙げられる。そして、その使用濃
度は１〜１００　ｍＭが好ましい。

アミノ酪酸誘導体としては、Ｌ体あるいはＤ体いずれを
用いても良いが、例えばβ−アミノグルタリルーＬ−α
−アミノ酪酸、グルタリル−Ｌ−α−アミノ酪酸、Ｎ−
アセチルーＬ一α−アミノ酪酸等が挙げられる。そして
、その使用濃度は１　−　１００　ｍＭが好ましい。

システイン誘導体としては、Ｌ体あるいはＤ体いずれを
用いても良いが、例えばＮ−アセチルーＬ−システイン
、β−アミノグルタリルーＬ−システイン、グルタリル
ーＬ−システイン等が挙げられる。そして、その使用濃
度は１〜１００　ｍＭが好ましい。

アデノシン−５′一三リン酸（以下ＡＴＰと略記する）
及びその塩としては、ＡＴＰ，　　ＡＴＰニカリウム塩
、ＡＴＰニナトリウム塩、ＡＴＰトリス塩、ＡＴＰマグ
ネシウム塩、ＡＴＰカルシウム塩、ＡＴＰニモノエタノ
ールアンモニウム塩等が挙げられる。

そして、その使用濃度は１〜５０　ｍＭが好ましい。

また、金属イオンとしては、マグネシウムイオン、マン
ガンイオン、コバルトイオン、鉄イオン、銅イオン、カ
ルシウムイオン、カリウムイオン、ルビジウムイオン、
リチウムイオン等が挙げられ、これらの群より選ばれた
少なくとも１種のものを添加する。そして、その使用濃
度は１　−　１００　ｍＭが好ましい。

次に、本発明において、グリシン含有試料に、グルタチ
オン合或酵素を作用させる際、該酔素の添加量は、試料
に含まれるグリシン量、酵素反応条件等により適宜調整
される。例えば０．０１〜０．５μｍｏｌのグリシン含
有試料に対し、０．５単位以上、好ましくは１〜５０　
Ｕ７’ｍｈ添加する。

そして、該酵素を試料に作用させる際の温度は８０℃以
下、好ましくは２０〜６０℃であり、時間はグリシンを
分解するに十分な時間、好ましくは１〜６０分酵素反応
させるのが好ましい。

次いで、上記酵素反応により生成するアデノシン−５′
−ニリン酸（以下ＡＤＰと略記する）、オルトリン酸も
しくはグルタチオンの含有量をそれぞれ検出試薬を用い
る公知の方法で測定することにより試料中のグリシンを
定量することができる。

上記ＡＤＰの測定法としては、如何なる測定法を用いて
も良いが、例えば■ＡＤＰにホスホエノールピルビン酸
の共存下、ピルビン酸キナーゼ及び乳酸デヒドロゲナー
ゼを作用させて、この際の共役反応、還元型ニコチンア
ミドアデニンジヌクレオタイド（ＮＡＤＨ）→酸化型ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオタイド（ＮＡＤ＋）で
生成したＮＡＤ＋の生成量を３４０　ｎｍで測定する方
法（メソッヅ・オブ・エンザイマチック・アナリシス（
Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ）、第３版、第１１７巻、第３６５頁、１９８５年発行）、■ＡＤＰにホス
ホエノールピルビン酸の共存下、ビルビン酸キナーゼ及
びピルビン酸オキシターゼを作用させて、生戊した過酸
化水素を酵素的に比色定量する方法（特開昭５５−　１
３０６８号）、■ＡＤＰにホスホエノールビルビン酸の
共存下、ピルビン酸キナーゼを作用させて、生成したＡ
ＴＰをルシフェリンの存在下、ルシフェラーゼを作用さ
せ発光法で測定する方法（メソッヅ・オブ・エンザイマ
チック・アナリシス　（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｎｚ
ｙｍａｔｉｃＡｎａｌｙｓｉｓ）、第３版、第７巻、第
３７０頁、１９８５年発行）等が挙げられる。

オルトリン酸の測定法としては、如何なる測定法を用い
ても良いが、例えば■オルトリン酸にモリブデン酸アン
モニウムを加えてリンモリブデン酸塩とし、これを１．
２．４−アミノナフ１・ールスルホン酸で還元し、この
還元物を比色定量する方法くフィスケ・サバｏ　−　（
Ｆｉｓｋｅ−Ｓｕｂｂａｒｏｗ）法〉、上記フィスケ・
サバロー法において、１，２．４−アミノナフトールス
ルホン酸で還元する１２代りに、Ｎ，Ｎ−ジエチルーρ−フエニレンジアミンで
還元する以外は全く同様に処理するフィスケ・サバ口一
変法、オルトリン酸にモリブデン酸アンモニウムを加え
てリンモリブデン酸塩とし、これを硫酸第一鉄で還元し
、この還元物を比色定量する方法〈トゥスキ−（Ｔａｕ
ｓｓｋｙ）法〉（分析ライブラリー３、臨床化学分析■
、第１１６頁、１９６７年、東京化学同人出版）、■オ
ルトリン酸にイノシンの共存下、プリンヌクレオシドホ
スホリラーゼ及びキサンチンオキシダーゼを作用させて
生成した過酸化水素を酵素的に比色定量する方法（越智
正昭ら：最新検査、第２巻、第７頁、１９８４年）、■
オルトリン酸にシュークロースとグルコースー１，６−
ニリン酸の共存下、シュークロースホスホリラーゼ、ホ
スホグルコムターゼ及びグルコース−６−リン酸デヒド
ロゲナーゼを作用させて、この際の共役反応、酸化型ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオタイドホスフーコ一一
ト　（ＮＡＤＰ”）一還元型ニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオタイドホスフェート　（ＮＡＤＰＨ）で１３生成したＮＡＤＰＨの生戊量を３４０　ｎｍで測定する
方法（特開昭６３−４９１００号）等が挙げられる。

また、グルタチオンの測定法としては、如何なる測定法
を用いても良いが、例えば■グルタチオンを５，５′−
ジチオビス−２一二トロ安息香酸と反応させて、生成し
た酸化型グルタチオンについてはＮＡＤＰＨの存在下グ
ルタチオン還元酵素でグルタチオンに再生させ、最終的
に生成した２ニトロ−５−チオ安息香酸を比色定量する
方法（メソッヅ・オブ・エンザイマチック・アナリシス
（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ａｎａ
ｌｙｓｉｓ）、第３版、第８巻、第５２１頁、ｌ９８５
年発行）、■グルタチオンを０−フタルアルデヒドと反
応させてＡ’ｔ光法で測定する方法〔ブイ・エイチ・コ
ーン（Ｖ．Ｉ｛Ｃｏｈｎ）　：アナル・バイオケム（Ａ
ｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、第１４巻、第４３４頁、
１９６６年〕、■グルタチオンをモノブロムバイメイン
と反応させて、その誘導体を逆用クロマトグラフィーを
用いて分画し、これを定量する方法〔ジー・エル・ニュ
ー１・ン（Ｇ．Ｌ．Ｎｅｗｔｏｎ）　：アナル・バイオ
ケム（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｌ４ｅｍ．）、第１１４巻、第３８３頁、１９８１年〕、■
グルタチオンにメチルグリオキサルの共７７下、Ｓラク
トイルグルタチオンメチルグリオキサルリアーゼを作用
させ、生成したＳ−ラクトイルグルタチオンを測定する
方法〔メソッヅ・オブ・エンザイマチック・アナリシス
（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ａｎａ
ｌｙｓｉｓ）、第２版、第４巻、第１６４３頁、１９７
４年発行）等が挙げられる。

本発明は、従来法に比較して操作が極めて簡便であり、
１試料当りの測定時間も従来法に比し著しく短縮され、
また感度も極めて優れ、さらに多量の試料を同時に測定
できるので、産業上極めて有意義である。

以下、実施例により本発明を具体的に示す。

実施例１〈グリシンの定量用試薬の調製〉（反応試薬）トリスー堝酸緩衝液（ｐＨ　７．５）　　　　１００　
　ｍＭＡＴＰ　　　　　　　　　　　　　　　　１０　
　ｍＭ１５ＭｇＣ１２１０　　　ｍＭグルタチオン合成酔素　　　　　　　　５　　Ｕ／ｍｊ
（生戊するＡＤＰの検出試桑）トリスー塩酸緩衝液（ｐＨ　７．５）　　　　１００　
　ｍＭホスホエノールピルビン酸　　　　　　１　　ｍ
Ｍ塩化カリウム　　　　　　　　　　　　１０　　ｍＭ
ＭｇＣ１２２．７　ｍＭＮＡＤＨ　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ．２　
ｍＭピルビン酸キナーゼ　　　　　　　　１０　　Ｕ／
ｌｄ乳酸デヒドロゲナーゼ　　　　　　　１０　　Ｕ／
ｍｌ！以上のような組威を含有する反応試薬及びＡＤＰ
の検出試薬からなるグリシン定量用試薬を調製した。

実施例２〈グリシンの定量〉グリシンを１０μｍｏｌ／ｍＪ！になるように溶解ｌ６した水溶液を希釈して様々な濃度に調製したグリシン含
有試料（　０　、２．５　、５．０　、７．５及び１０
μｍｏｌ／ａｔ！）　　１０μｋそれぞれに上記実施例
１で調製した反応試薬を０．３　ｍＦ添加し、３０℃に
保温して３分間反応させた。次いで、それぞれの反応液
（　ＡＤＰが生成含有される）に同実施例１で調製した
ＡＤＰの検出試薬を２６則添加し、３０℃に保温して３
分間反応させた後、分光光度計により　３４０　ｎｍの
吸光度の減少量から試料中のグリシンを測定した。グリ
シン量と吸光度との相関図を第１図に示す。これによっ
て明らかなように、グリシン量と吸光度との間には直線
的な相関があり、充分標準検量線として使用でき、しか
も試料中のグリシンを迅速かつ正確に定量できることが
判明した。

実施例３〈生成するオルトリン酸を測定するグリシンの定量法〉（反応試薬の調製）トリスー塩酸緩衝液（ｐＨ　７．５）　　　　１００　
　ｍＭＡＴＰ１０ｍＭＬ一γ−グルタミルーＬ−システイン５　　　　ｍＭＭｇＣ１２グルタチオン合成酵素１０　　　　ｍＭ１０　　　Ｕ／ｍｌ以」二のような糾成を含有する反応試薬を調製した。

次に、グリシンを１００μｍｏｌ／ｍｌ！になるように
溶解した水溶液を希釈して様々な濃度に調製したグリシ
ン含有試料（０、ｌＯ、２０、３０及び４０μｍｏｌ／
ｍｆ！）　　１０μ文それそれに上記反応試薬を０．３
　ｍｆ！添加し、３０℃に保温して４分間反応させた。

次いで、それぞれの反応液（オルトリン酸が生成含有さ
れる）に、フィスケ・サバ口一変法による無機リン測定
用試薬セット（商品名：無機リン測定セット「第一」、
販売：第一化学薬品抹式会社）の反応試液（Ｎ，Ｎ−ジ
エチルーρフェニレンジアミン硫酸塩溶液）２．０ｍＪ
！及び呈色試液Ａ　（２０．２　ｍＭモリブデン酸アン
モニウム溶液）０．５ｍｌ！を添加して２５°Ｃで２０
分間放置し、更に呈色試液Ｂ（炭酸ナトリウム溶液）１
０ｍｌを添加し２５℃で５分間放置した後、分光光度計
により　６６０　ｎｍの吸光度の増加量から試料中のグ
リシンを測定した。グリシン量と吸光度との相関図を第
２図に示す。これによって明らかなように、グリシン量
と吸光度との間には直線的な相関があり、充分標準検量
線として他用でき、しかも試料中のグリシンを迅速かつ
正確に定量できることが判明した。

実施例４〈グリシンの定量用試薬の調製〉（反応試薬）トリスー塩酸Ｍ衝液（ｐＨ　７．５）　　　　１００　
　ｍＭＡＴＰ　　　　　　　　　　　　　　　　１０　
　ｍＭＬ−γ−グルタミルーＬ−システイン５　　　　ｍＭＭｇＣ１２１０　　ｍＭグルタチオン合威酵素　　　　　　　　５　Ｕ／ｍｌ１
９（生或するグルタチオンの検出試薬）リン酸緩衝液（ｐＨ　７．１）　　　　　　　５０　　
ｍＭ５，５′−ジチオビス−２一二１・口安息香酸０．
４　ｍＭ炭酸水素ナトリウム０．７ｍＭＮＡＤＰＨＯ１ｍＭエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム０．５ｍＭグルタチオン還元酵素０．Ｉ　　Ｕ／ＩＴＬｆ！以上のような組成を含有する反応試薬及びグルタチオン
の検出試薬からなるグリシンの定量用試薬を調製した。

実施例５くグリシンの定量〉グリシンを１００μｍｏｌ／ｍｊになるように溶解した
水溶液を希釈して様々な濃度に調製したグリシン含有試
料（０、５、１０、１５、２０及び２５μｍｏｌ／ｍｆ
！）　　１０μ代それぞれに」一記実施例４で調製した
反応試薬を１０ｍｌ添加し、３０℃に保温して４分間反
応させた。次いで、それぞれの２０反応液（グルタチオンが生成含有される）から１０μ２
ずつを分取して、同実施例４で調製したグルタチオンの
検出試薬を２．７ｍｌ添加し、２５℃に保温しながら分
光光度計により反応を開始して１分間から２分間の単位
ｌ分間当りの４１２ｎｍの吸光度の増加量から試料中の
グリシンを測定した。グリシン量と吸光度との相関図を
第３図に示す。これによって明らかなように、グリシン
量と吸光度との間には直線的な相関があり、充分標準検
量線として使用でき、しかも試料中のグリシンを迅速か
つ正確に定量できることが判明した。

実施例６〈グリシンの定量〉上記実施例２の、生戒するＡＤＰを測定するグリシンの
定量方法において、反応試薬として５ｍＭＩ、一γ−グ
ルタミルーＬ−システインを用いる代わりに５０　ｍＭ
グルタリルーＬ−α−アミノ酪酸を用いる以外は全く同
様にグリシンを測定したところ、グリシン量と吸光度と
の間に直線的な相関があり、試料中のグリシンを迅速か
つ正確に定量できることが判明した。

実施例７〈グリシンの定量〉上記実施例２の、生成するＡＤＰを測定するグリシンの
定量方法において、反応試薬として５ｍＭＬ−γ−グル
タミルーＬ−システィンを用いる代わりに５０　ｍＭ　
Ｎ−アセチルーＬ−システィンを用いる以外は全く同様
にグリシンを７Ｉｌｌ１足したところ、グリシン量と吸
光度との問に直線的な相関があり、試料中のグリシンを
迅速かつ正確に定量できることが判明した。

【図面の簡単な説明】

第ｌ図は生成するＡＤＰを測定した際のグリシン量と吸
光度との相関を示す標準検量線図、第２図は生成するオ
ルトリン酸を測定した際のグリシン量と吸光度との相関
を示す標準検量線図、第３図は生成するグルタチオンを
測定した際のグリシン量と吸光度との相関を示す標準検
量線図である。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）（ア）グルタチオン合成酵素、（イ）γ−グルタ
ミル誘導体、アミノ酪酸誘導体及びシステイン誘導体か
らなる群より選ばれる少なくとも１種、（ウ）アデノシ
ン−５′−三リン酸及びその塩からなる群より選ばれる
少なくとも１種、（エ）金属イオン及び（オ）アデノシ
ン−５′−二リン酸、オルトリン酸及びグルタチオンか
らなる群より選ばれる１種を検出するための試薬を含有
してなるグリシンの定量用試薬。
（２）グリシン含有試料に、（ア）グルタチオン合成酵
素、（イ）γ−グルタミル誘導体、アミノ酪酸誘導体及
びシステイン誘導体からなる群より選ばれる少なくとも
１種、（ウ）アデノシン−５′−三リン酸及びその塩か
らなる群より選ばれる少なくとも１種及び（１）金属イ
オンを反応せしめ、生成するアデノシン−５′−二リン
酸、オルトリン酸もしくはグルタチオンを測定すること
により該試料中のグリシンを定量することを特徴とする
グリシンの定量法。