JP4689393B2 - 毛髪はり・こし改善剤および毛髪用化粧料 - Google Patents

Description

本発明は、毛髪のはり・こしを改善する薬剤および該薬剤を含有する毛髪用化粧料に関し、より詳しくは、毛髪・毛包の細胞を賦活化することにより、更に詳しくは、毛髪関連遺伝子の発現を上昇することにより、毛髪のはり・こしを改善する薬剤および該薬剤を含有する毛髪用化粧料に関する。

毛髪に関する悩みとしては、薄毛、抜け毛といった毛根、毛包の健康状態に関わるものと、硬い、柔らかい、はり・こしがない、枝毛、くせ毛、パサツクといった毛髪の物性に関わるものとがある。また、毛髪の物性に関わる悩みであっても、外的要素に起因するダメージ、例えばパーマ剤やブリーチ剤処理、紫外光暴露、大気汚染物質暴露、コーミング摩擦など、毛髪に対する直接的なダメージによるものと、毛幹形成における内的要素が関与する場合とが考えられる。後者の場合におけるヘアケアでは、毛髪の質の改善を図るだけでなく、毛根、毛包自体の健康状態を良好にする手当てが必要とされる。従って、一口に毛質の状態が良くないといっても、そのケア方法はその原因により様々である。

毛髪自体はその表面を覆うキューティクル（毛小皮）、その内部にあって毛髪の大部分を占める毛皮質及び中心部の毛髄質から構成される。毛髪の硬さやはり・こし感にはキューティルが大きく寄与していることが明らかにされている（曽我部敦他、Ｊ．Ｓｏｃ．Ｃｏｓｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．Ｊａｐａｎ，Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．３（２００２）ｐｐ．２０７−２１６「毛髪物性に関する研究１−毛髪の短径・長径測定と曲げ応力評価法」）。キューティクルは酸性ヘアケラチンＨａ１、Ｈａ２、塩基性ケラチンＨｂ１、Ｈｂ２などの繊維タンパク質や修飾酵素、例えばトランスグルタミナーゼ、ペプチジルアルギニンディミナーゼ、さらには顆粒成分トリコヒアリンＳ100など、様々な成分から構成されることまでは知られている。しかしながら、これら各成分と毛質、例えば毛髪のはりやこしとの関係については十分に解明されていない。毛質を左右するメカニズムが生化学・分子生物学レベルにおいて十分には解明されれば、既存の毛質改善剤に比べ一層顕著な効果を奏するものの提供が可能となり得る。

毛髪にはり・こしを付与するとされる従来の毛髪用化粧料としては、例えば、特開平１１−３０２１２９号（特許文献１）に記載されているような、反応性官能基が結合したシリル基を有する共重合体を配合した毛髪処理用組成物であって、毛髪上で加水分解によってシロキサン結合Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉを形成し、これにより共重合体分子間を架橋せしめることにより、毛髪にハリとコシを付与するものがある。しかしながら、これらの従来の毛髪用化粧料は、毛髪の表面にコーティングされるものであって、毛髪に浸透し又は毛包に吸収されて毛髪・毛包の細胞を賦活化することにより毛髪のはり・こしを改善するものではない。

他方、タウリンを有効成分とする細胞賦活剤が特開２００２−９７１１６号（特許文献２）に、Ｎ−メチルタウリンを有効成分とする細胞賦活剤および毛髪はり・こし改善剤が国際公開ＷＯ２００２／０３４２５３号公報（特許文献３）にそれぞれ記載されている。これらの薬剤の作用効果として、細胞増殖の活性化による、毛髪細胞コントロール、毛髪成長期延長、毛髪細胞増殖の活性化、毛髪はり・こし改善が記載されているが、ここでの毛髪はり・こし改善効果は、依然として、毛髪の物性試験（ねじりトルク）により評価されている。従って、生化学・分子生物学レベルでの活性評価に基づく新規な毛髪はり・こし改善剤が求められている。

特開平１１−３０２１２９号公報 特開２００２−９７１１６号公報 ＷＯ２００２／０３４２５３号公報

本発明は、生化学・分子生物学レベルでの活性評価に基づく新規な毛髪はり・こし改善剤を提供することを目的とする。

本発明者は、毛髪のはり・こし（その尺度となる硬さ、より詳しくはヤング率）と毛髪関連遺伝子の発現との相関関係を調べたところ、ヘアケラチン遺伝子、特にヘアケラチンＨａ２遺伝子、ヘアケラチンＨｂ２遺伝子及び／又はケラチン関連タンパク質ＫＡＰ５．１〜５の各遺伝子の発現が亢進するほど、より好ましくはヘアケラチンＨａ２遺伝子、ＫＡＰ５．１遺伝子、ＫＡＰ５．２遺伝子又はＫＡＰ５．４遺伝子の発現が亢進するほど、毛髪のヤング率が高くなる、即ち毛髪にはり、こし感がでることを見出して、「ヘアケラチン遺伝子を指標とした毛質評価方法」についての特許出願を行っている（特願２００４−１６４５９６号）。

本発明者は、今般、各種の薬剤が毛髪関連遺伝子の発現に及ぼす効果を評価するためのアッセイ系を新たに構築し、このアッセイ系を用いて、種々の化合物が毛髪関連遺伝子の発現に及ぼす効果について鋭意検討したところ、特定の２−アミノチアゾール誘導体に毛髪関連遺伝子の発現を上昇する効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は、下記一般式（１）で示される２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種以上の化合物を有効成分とする毛髪はり・こし改善剤に関する。

（一般式（１）中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃及びＲ₄は、それぞれ独立に水素原子、直鎖または分岐の炭素数１〜８のアルキル基、直鎖または分岐の炭素数２〜８のアルケニル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数７〜１０のアラルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、５〜１４員のヘテロアリール基を表し、ｎ及びｍは０または１を表す。但し、ｎが１の時、ｍは０、Ｒ₃は水素原子またはメチル基であり、ｍが１の時、ｎは０、Ｒ₃は水素原子またはメチル基である。）

本発明はまた、上記一般式（１）（但し、Ｒ₂は水素原子である）で示される２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種以上の化合物を有効成分とする毛髪用化粧料に関する。

本発明はまた、２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種以上の化合物を含んでなる毛髪用化粧料を毛髪または頭皮に適用することを含んでなる毛髪はり・こし改善方法に関する。

本発明はまた、２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種以上の化合物を水相又は油相に添加して毛髪用化粧料を製造することを特徴とする毛髪用化粧料の製造方法に関する。

本発明の毛髪はり・こし改善剤および毛髪用化粧料の有効成分である２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩は、毛髪または頭皮に使用されることにより、毛髪に浸透し又は毛包に吸収されて、細胞内でケラチン関連タンパク質ＫＡＰ５の発現を亢進し、毛髪のはり・こしを改善し得る。

本発明は、毛髪・毛包の細胞を賦活化することにより、より詳しくは毛髪関連遺伝子の発現を上昇させることにより、毛髪のはり・こしを改善する薬剤および毛髪用化粧料に関するものであり、生化学・分子生物学レベルでの活性評価に基づく、より詳しくはケラチン関連タンパク質ＫＡＰ５遺伝子の発現調節効果のアッセイに基づく新規な毛髪はり・こし改善剤および毛髪用化粧料を提供するものである。

本発明者は、既に出願した特願２００４−１６４５９６号「ヘアケラチン遺伝子を指標とした毛質評価方法」において、毛髪の硬さと毛髪から抽出される各種遺伝子との相関性を調べるため、毛髪の硬さの指標であるヤング率を測定し、その測定結果と各種遺伝子のＲＴ−ＰＣＲにより測定した発現量との関係をSpearmanの順位相関係数を用い、統計学的に分析した（Zar, J.H.J.Amer.Stat.Assoc.67:578〜580, 1970「Significance testing of the Spearman rank correlation cofficient」）。その結果、毛髪のヤング率は、ヘアケラチンＨａ２、ＫＡＰ５．１、ＫＡＰ５．２、ＫＡＰ５．４遺伝子の発現量が多いと統計学的に有意に高まることを見出した。また、ヘアケラチンＨｂ２遺伝子の発現量が多い場合も、統計学的に有意ではないが、毛髪のヤング率が高まることを見出した。一方で、毛皮質のその他の構成タンパク質、例えばヘアケラチンＨａ１については、毛髪の硬さとの間で相関性はなかった。従って、毛皮質と比較して、キューティクル構成タンパク質や関連遺伝子が毛髪の硬さに関与する割合が高いことが示唆された。

ヘアケラチンＨａ２遺伝子（NCBI GenBANK Source 「X90761」）はケラチン遺伝子ファミリーの一構成員である酸性タンパク質をコードする。ヘアケラチンＨａ２はＩ型ヘケラチンであり、II型ケラチンとヘテロ二量化して毛髪や爪などを構成する。Ｉ型ヘケラチンは染色体第17q12-q21領域に位置する。

ヘアケラチンＨｂ２遺伝子（NCBI GenBANK Source 「Y19207」）はケラチン遺伝子ファミリーの一構成員である塩基性タンパク質をコードする。ヘアケラチンＨｂ２はII型ヘケラチンであり、Ｉ型ケラチンとヘテロ二量化して毛髪や爪などを構成する。II型ヘケラチンは染色体第12q13領域に位置する。

ヒトケラチン関連タンパク質（ＫＡＰ）５ファミリーに属するＫＡＰ５．１〜５遺伝子（配列番号１〜５）（Homo sapiens genomic DNA, chromosome 11 clone:RP11-684B2, complete sequences. ACCESSION:AP000867）は塩基配列のみ既知のヒトＥＳＴであり、機能に関する報告はされていない。ＫＡＰ５．１〜５遺伝子の発現の亢進と毛髪の硬さとの関係は不明であった。特に何らかの理論に拘束されるわけではないが、例えばＫＡＰ５．２遺伝子によりコードされる推定タンパク質はシステインリッチであり（約35.5％）、また低分子アミノ酸であるグリシンとセリンを豊富に含む（それぞれ18.8％及び24.2％）アミノ酸１８６個からなるため、α−ヘリックスなどの二次構造を形成せず、ケラチン繊維の間に容易に入り込むことができ、また多数セリン残基のＯＨ基による多数の水素結合の形成も考えられるため、毛髪の機械的強度に大きく寄与している可能性がある。他のＫＡＰ５遺伝子も同様にシステイン、グリシン、セリンを豊富に含み、発現生成物はＫＡＰ５．２と同様の構造を有し、毛髪の機械的強度に大きく寄与すると考えられる。下記の表１にＫＡＰ５．１〜５遺伝子推定コードタンパク質の一部アミノ酸組成を示す。

ＫＡＰ５．１〜５．５遺伝子（配列番号１〜５）はヒトケラチン関連タンパク質ＫＡＰ５ファミリーに属する、互いに相同性の比較的高い遺伝子群である。各遺伝子によりコードされる推定タンパク質のアミノ酸配列同士の相同性の高さは、図４及び下記の表２から明らかである。

本発明者は、毛髪の硬さ（ヤング率）との相関性が認められたヘアケラチンＨａ２、Ｈｂ２遺伝子、ヒトケラチン関連タンパク質ＫＡＰ５．１、ＫＡＰ５．２、ＫＡＰ５．４遺伝子のうち、特にＫＡＰ５．１遺伝子について、この毛髪関連遺伝子の発現に各種薬剤が及ぼす効果を評価するためのレポーターアッセイ系を新たに構築した。このアッセイ系を用いて、種々の化合物がＫＡＰ５．１遺伝子の発現に及ぼす効果について鋭意検討した。その結果、２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩にＫＡＰ５．１遺伝子の発現を上昇する効果があることを見出した。

先に記載のとおり、ＫＡＰ５．１〜５．５遺伝子（配列番号１〜５）はヒトケラチン関連タンパク質ＫＡＰ５ファミリーに属する、互いに相同性の比較的高い遺伝子群である。また、図３から分かるように、ＫＡＰ５．１遺伝子のプロモーター領域の配列と他のＫＡＰ５．２−５．５遺伝子のプロモーター領域の配列とは互いに非常に近似しており、その制御機構は同等である可能性が高い。従って、ＫＡＰ５．１遺伝子の発現を亢進する薬剤は他のＫＡＰ５遺伝子の発現も亢進している可能性が非常に高いと考えられる。

さらに、先に記載のとおり、ＫＡＰ５．１遺伝子の発現量が多いほど毛髪のヤング率が統計学的に有意に高まることから、ＫＡＰ５．１遺伝子の発現を上昇する薬剤は毛髪の硬さを向上し、毛髪のはり・こしを改善する。

本発明の２−アミノチアゾール誘導体は公知の化合物で容易に入手することができる。また、容易に入手できる２−アミノチアゾール等から公知の方法により容易に合成することができる。

本発明の２−アミノチアゾール誘導体は、硝酸化成抑制剤（特公昭46-9208）、抗菌剤または殺菌剤（WO96/16650）、掻痒治療剤（特開2002-241308）及びサイクリン依存性タンパク質キナーゼ酵素ｃｄｋ５、ｃｄｋ２、グリコーゲンシンターゼキナーゼ酵素−３のインヒビター（特開2002-338556）の用途が知られているが、毛髪関連遺伝子の発現を上昇する効果を有すること、及び、毛髪のはり・こしを改善することは全く知られていない。また、脱毛、毛髪の薄化、及び禿頭の治療のためのチアゾール誘導体を含んで成る医薬組成物も開示されているが（特開2002−338556）、毛髪関連遺伝子の発現の亢進については何ら言及されておらず、また、当該アミノチアゾール誘導体の置換基Ｒ₁（本発明における置換基Ｒ₂に相当）は水素原子を含まない点で本発明の２−アミノチアゾール誘導体と異なる。

本発明の２−アミノチアゾール誘導体の具体的な物質名を例示すれば、２−アミノチアゾール、２−アミノ−４−メチルチアゾール、２−アミノ−５−メチルチアゾール、２−アミノ−４，５−ジメチルチアゾール、２−アセトアミドチアゾール、２−アセトアミド−４−メチルチアゾール、２―アセトアミド―５−メチルチアゾール、２−アセトアミド−４，５−ジメチルチアゾール、２−アセトアミド−４，５−ジフェニルチアゾール、２−プロピオニルアミノチアゾール、２−ブチリルアミノチアゾール、２−バレリルアミノチアゾール、２−プロピオニルアミノ−４−メチルチアゾール、２−ブチリルアミノ−４−メチルチアゾール、２−バレリルアミノ−４−メチルチアゾール、２−メチルアミノチアゾール、２−ジメチルアミノチアゾール、２−メチルスルホニルアミノ−４，５−ジフェニルチアゾール、２−ベンゼンスルホニルアミノ−４，５−ジフェニルチアゾール等が挙げられる。これらの中でも、２−アミノチアゾール、２−アセトアミドチアゾール及び２−アセトアミド−４−メチルチアゾールが好ましい。

「薬学的に許容される塩」とは、薬剤化合物とほぼ同等の生物活性を保持し、かつ毒性でない塩をいう。このような塩の例としては、特に限定されないが、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸等のような無機酸と共に形成される付加塩、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸等のような有機酸と共に形成される付加塩等が挙げられる。

本発明の２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩を含む毛髪はり・こし改善剤及び毛髪用化粧料の剤形は、特に限定されず、毛髪のはり・こしを改善するために通常使用される形態のいずれでもよい。例えば、液状、乳液状、乳化クリーム状、クリーム状、ジェル状、ワックス状、霧状、泡状、エアゾール等が挙げられる。本発明の毛髪はり・こし改善剤及び毛髪用化粧料は、例えば、ヘアリキッド、ヘアトニック、ヘアクリーム、ムース、トリートメント、育毛剤、シャンプー、リンス、クリーム、乳液、パック等の製品として応用できる。

本発明の２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩の配合量は、毛髪化粧料の剤形にもよるが、毛髪化粧料の全量中、一般には０．００１〜２０質量％、好ましくは０．０１〜５質量％である。

本発明の毛髪はり・こし改善剤および毛髪化粧料は、本発明の効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品、医薬品の一般配合成分を、必要に応じて配合して常法により調製することができる。一般配合成分は、例えば、粉末成分、液体油脂、固体油脂、ロウ、炭化水素油、高級脂肪酸、高級アルコール、エステル油、シリコーン油、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、保湿剤、水溶性高分子、増粘剤、皮膜剤、紫外線吸収剤、金属イオン封鎖剤、低級アルコール、多価アルコール、糖、アミノ酸、有機アミン、高分子エマルジョン、ｐＨ調製剤、皮膚栄養剤、ビタミン、酸化防止剤、酸化防止助剤、香料、水、等である。

具体的に配合可能な成分の例は次の通りである。毛髪はり・こし改善剤および毛髪化粧料は、必要に応じ、下記成分の一種または二種以上を配合して、目的とする剤形に応じて常法により製造される。
ポリエチレン粉末、ポリメタクリル酸メチル粉末、ナイロンパウダー等の粉末類。二酸化チタン、酸化亜鉛、合成マイカ、タルク、カオリン、セリサイト、窒化ホウ素等の無機顔料。赤色２２６号、赤色２２８号、青色４０４号等の有機顔料。ツバキ油、マカデミアナッツ油、オリーブ油、ヒマシ油等の油脂。ホホバ油、ミツロウ、カンデリラロウ、カルナウバロウ、ラノリン等のロウ。流動パラフィン、スクワラン、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素油。ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸等の高級脂肪酸。セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、オクチルドデカノール等の高級アルコール。ミリスチン酸イソプロピル、リンゴ酸ジイソステアリル等のエステル油。メチルポリシロキサン等のシリコーン油。高級脂肪酸セッケン、高級アルキル硫酸エステル塩、Ｎ−アシルサルコシネート、ＰＯＥ−アルキルエーテル硫酸塩等のアニオン界面活性剤。塩化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム等のカチオン界面活性剤。アルキルジメチルアミノ酢酸ベタイン、アルキルアミドプロピルジメチルアミノ酢酸ベタイン等の両性界面活性剤。ポリオキシエチレン型、多価アルコールエステル型、エチレンオキシド・プロピレンオキシドブロック共重合体等の非イオン界面活性剤。ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グルセリン、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、ヒアルロン酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等の保湿剤。クインスシードガム、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー等の水溶性高分子。ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ニトロセルロース、高分子シリコーン等の皮膜剤。ＰＡＢＡ系、桂皮酸系、サリチル酸系、ベンゾフェノン系、ベンゾトリアゾール系、ジベンゾイルメタン系等の紫外線吸収剤。エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のナトリウム塩等の金属イオン封鎖剤。４，５−ジモルホリノピリダジノン等の光安定化剤。エタノール、プロパノール、イソプロパノール、イソブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール等の低級アルコール。１，３−ブチレングリコール、キシリトール、ソルビトール、ジエチレングリコール、ポリグリセリン等の多価アルコール。三炭糖、四炭糖、五炭糖、六炭糖、デオキシ糖、アミノ糖、ウロン酸等の単糖。トレハロース等のオリゴ糖。セルロース、コンドロイチン硫酸等の多糖。グリシン、セリン、リシン、シスチン、システイン、メチオニン、グルタミン酸、プロリン等のアミノ酸及びその誘導体。モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の有機アミン。乳酸−乳酸ナトリウム、クエン酸−クエン酸ナトリウム等のｐＨ調製剤。ビタミンＡ、ビタミンＢ₁、ビタミンＢ₂、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビオチン、ニコチン酸アミド等のビタミン及びその誘導体。ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸エステル、ヒポタウリン、チオタウリン等の酸化防止剤。パラオキシ安息香酸エステル類、フェノキシエタノール等の防腐剤。各種の液化石油ガス（ＬＰＧ）、窒素ガス、炭酸ガス等の噴射剤。グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸誘導体、ヒノキチオール、酸化亜鉛等の消炎剤。トラネキサム酸等のプロテアーゼ阻害剤。アルブチン、アスコルビン酸グルコシド、４−メトキシサリチル酸塩、エラグ酸、ルシノール等の美白剤。レチノール、α−ヒドロキシ酸等の抗しわ剤。ローヤルゼリー、感光素、コレステロール誘導体等の賦活剤。センブリエキス、γ−オリザノール、セファランチン、ビタミンＥ及びその誘導体、ニコチン酸ベンジルエステル、アデノシン、ミノキシジル等の血行促進剤。カプサイシン、トウガラシチンキ、ショウキョウチンキ、カンタリスチンキ、ノワル酸ワニリルアミド等の局所刺激剤。エストラジオール、エチニルエストラジオール等の抗男性ホルモン作用剤。パントテン酸およびその誘導体。アラントイン、感光素３０１等の毛包賦活剤。サリチル酸、イオウ、レゾルシン、硫化セレン等の角質剥離・溶解剤。ビタミンＢ₆及びその誘導体等の抗脂漏剤。塩酸ジフェンヒドラミン、マレイン酸クロルフェニラミン、カンファー、メントール等の鎮痒剤。オウバク、オウレン、シコン、シャクヤク、バーチ、セージ、ビワ、ニンジン、アロエ、ゼニアオイ、アイリス、ブドウ、ヨクイニン、ヘチマ、ユリ、サフラン、センキュウ、ショウキュウ、オトギリソウ、オノニス、ニンニク、トウガラシ、チンピ、トウキ、海藻等の各種抽出物。

以下、具体例を挙げて、本発明を更に具体的に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。

例１
ＫＡＰ５．１レポータープラスミドの構築
毛髪の硬さ（ヤング率）と相関性が認められたＫＡＰ５．１について、ＰＣＲ法により転写調節領域を増幅した後、レポータープラスミドの構築を行った。

Ａ．ＤＮＡ断片のＰＣＲ増幅
ＫＡＰ５．１遺伝子とＫＡＰ５．２遺伝子を含む約１５ｋｂのＤＮＡ断片を、５’末端に制限酵素ＮｏｔＩおよびＭｌｕＩの認識サイトを付加したＮＭ−Ｆ１プライマー（配列番号６）とＲ２プライマー（配列番号７）を用いて、市販のヒトゲノムＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａより入手）を鋳型としてＰＣＲ法により増幅した（図１−Ａ）。

なお、ＰＣＲ反応の条件は下記の表に示す通りである。

ＮＭ−Ｆ１プライマー（配列番号６）とＲ２プライマー（配列番号７）は下記の表に示す通りである。なお、表に示す番号はHomo sapiens genomic DNA, chromosome 11 clone:RP11-684B2, complete sequences. ACCESSION:AP000867.5の配列番号の位置を表示する。

Ｂ．ＤＮＡ断片のベクターへのクローニング
増幅したＤＮＡ断片を制限酵素ＭｌｕＩとＮｈｅＩで二重消化して、アガロースゲル電気泳動により分離してから約４．９ｋｂのＤＮＡ断片を回収した。このＤＮＡ断片を、ホタルルシフェラーゼ（ｆｉｒｅｆｌｙ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）をコードする遺伝子を有するレポーターベクターｐＧＬ−３ｂａｓｉｃ（Ｐｒｏｍｅｇａより入手）のＭｌｕＩとＮｈｅＩサイトの間にクローニングした（図１−Ｂ）。サブクローニング［ステップ１：ＳａｃＩ／ＮｃｏＩ断片（１５４ｂｐ，図２）をｐＧＬ−３ｂａｓｉｃにサブクローニング。ステップ２：得られたプラスミドにＳａｃＩ断片（約４．０ｋｂｐ，図２）を挿入］により、ＫＡＰ５．１の５’上流領域（配列番号８）を含むレポータープラスミドｐＧＬ−３−ＫＡＰ５．１を構築した（図２）。

例２
ＫＡＰ５．１レポーターアッセイ
不死化外毛根鞘細胞（ＩＯＲＳ）（特開２０００−８９より入手）を７５ｃｍ² フラスコに８０万細胞播種し、３７℃・５％ＣＯ₂ の条件下で６日間培養する。培地はＫｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ−ＳＦＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）を用いる。
１日目：プラスミドＤＮＡ導入（一過性）。培養したＩＯＲＳ細胞を、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ）のマニュアルに従って、上記の構築したレポータープラスミドｐＧＬ３−ＫＡＰ５．１（ｆｉｒｅｆｌｙ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）と、市販の内部標準プラスミドｐＲＬ−ＴＫ（ｒｅｎｉｌｌａ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）で、Ｄｕａｌに形質転換した。
２日目：形質転換した細胞を２４ウェルのマルチウェルプレートに１ウェル当たり１０〜１６万細胞となるように播き直し、３７℃・５％ＣＯ₂ の条件下で一晩培養する。
３日目：各ウェルの培地を、各種薬剤を溶解させた基礎培地と交換し、３７℃・５％ＣＯ₂ の条件下で一晩培養する。
４日目：アッセイ。デュアル−ルシフェラーゼ・レポーター・アッセイ系（Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用い、該製造者のマニュアルに従って各ウェルごとのルシフェラーゼ活性を測定する。ルミノメーターはＡｕｔｏＬｕｍａｔ ＬＢ９５３（ＢＥＲＴＨＯＬＤ）を用いる。

ネガティブコントロールとして、薬剤を含有しないことを除いて同じ条件のアッセイを行った（Ｋ−ＳＦＭ(−)）。アッセイ結果を表５に示した。遺伝子発現を亢進する効果は亢進率（ネガティブコントロールを１００とした時の比）として表した。

表５に示したように本発明の２−アミノチアゾール誘導体はＫＡＰ５．１の遺伝子発現を亢進する効果が認められた。

本例ではＫＡＰ５．１についてのみアッセイ結果を示したが、先に述べたように、ＫＡＰ５．１遺伝子のプロモーター領域の配列と他のＫＡＰ５．２−５．５遺伝子のプロモーター領域の配列が互いに非常に近似しており（図３）、その制御機構は同等である可能性が高いことから、ＫＡＰ５．１の発現を亢進する薬剤は他のＫＡＰ５遺伝子の発現も亢進し、はり、こし感を改善している可能性が非常に高い。

例３
毛髪用化粧料の調製
本発明の毛髪用化粧料の処方例を以下に示す。なお、配合量は質量％である。ワックスの硬度は（株）アイテクノエンジニアリング製カードメーター・マックスＭＥ−４１５で測定した（径：５．６ｍｍ；速度：７ｓｅｃ／インチ；荷重：２００ｇ；温度：３７℃）。粘度は芝浦システム株式会社製単一円筒型回転粘度計１２８７温度３０℃で測定した。尚、ジェル、トリートメント等の高粘度のものはＶＳ−Ｈ１型（ローターＮｏ．６／１０ｒｐｍ）、ミスト、ヘアリキッド、ムース、ヘアトニック、育毛剤等の低粘度のものはＶＳ−Ａ１型（ローターＮｏ．１／６０ｒｐｍ）を使用した。

例３．１ ワックス
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有するワックスを調製した。乳化ワックス状、硬度２０。このワックスは使用感もよく、はり、こし感の向上がみられた。
２−アセトアミドチアゾール ０．１
流動パラフィン １０
マイクロクリスタリンワックス １０
ジメチルポリシロキサン ４
ステアリルアルコール ４
プロピレングリコール １０
カルナウバロウ ３
イソステアリン酸 ０．５
ステアリン酸 ４．５
テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット ２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ３
ポリオキシエチレンオレイルエーテルリン酸 ２
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン ３
トリエタノールアミン １
パラオキシ安息香酸エステル 適量
ポリアクリル酸ナトリウム 適量
精製水 残余
香料 適量。

例３．２ ミスト
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有するミストを調製した。霧状（エアゾール）、粘度５。このミストは使用感も良く、はり、こし感の向上がみられた。
２−アセトアミドチアゾール １
アクリル樹脂アルカノールアミン液 １２
ラウリン酸ジエタノールアミド ０．５
エタノール ５７
ポリオキシエチレンオレイルエーテル ０．５
精製水 残余

例３．３ ジェル
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有するジェルを調製した。透明固形状（ジェル）、粘度３００００。このジェルは使用感もよく、はり、こし感の向上が見られた。
２−アセトアミドチアゾール １
ベヘニルアルコール １
グリセリン ５
１，３−ブチレングリコール ５
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油コハク酸（５０Ｅ．Ｏ．） ４０
水酸化カリウム １
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル ０．１
精製水 残余
香料 適量。

例３．４ ヘアリキッド
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有するヘアリキッドを調製した。透明固形状、粘度８。このヘアリキッドは使用感もよく、はり、こし感の向上がみられた。
２−アセトアミドチアゾール ３
エタノール ５５
プロピレングリコール ５
ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン・ペンタエリスリトールエーテル（５ＥＯ） ２５
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル ０．５
色素 適量
精製水 残余
香料 適量。

例３．５ トリートメント
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有するトリートメントを調製した。乳化クリーム状、粘度２５０００。このトリートメントは使用感もよく、はり、こし感の向上がみられた。
２−アセトアミドチアゾール ０．５
流動パラフィン １０
ワセリン ３
ジメチルポリシロキサン ２
プロピレングリコール １０
ポリオキシプロピレン（４０）ブチルエーテル ２
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット ３
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ２
水酸化カリウム ０．１
カルボキシビニルポリマー ０．３
精製水 残余
香料 適量。

例３．６ ムース
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有するムースを調製した。原液／噴射剤９０／１０。泡状（エアゾール）、粘度５。このムースは使用感も良く、はり、こし感の向上がみられた。
原液：
２−アセトアミドチアゾール ０．５
揮発性イソパラフィン ０．５
エタノール １０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．５
ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンデシルエーテル ０．５
ビワ葉エキス ０．１
ユカフォーマーＳＭ １０
精製水 残余。
噴射剤：
ＬＰＧ

例３．７ ヘアトニック
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有するヘアトニックを調製した。透明液状、粘度７。このヘアトニックは使用感も良く、はり、こし感の向上がみられた。
２−アセトアミドチアゾール ３
エタノール ６０
ジプロピレングリコール ２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．５
乳酸 適量
乳酸ナトリウム液 適量
グリチルリチン酸モノアンモニウム ０．１
ニコチン酸アミド ０．１
酢酸ＤＬ−α−トコフェロール ０．１
Ｌ−メントール ０．２
色素 適量
精製水 残余
香料 適量。

例３．８ ヘアトニック
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有するヘアトニックを調製した。透明液状、粘度７。このヘアトニックは使用感も良く、はり、こし感の向上がみられた。
２−アセトアミド−４−メチルチアゾール ２
エタノール ６０
ジプロピレングリコール ２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．５
乳酸 適量
乳酸ナトリウム液 適量
グリチルリチン酸モノアンモニウム ０．１
ニコチン酸アミド ０．１
酢酸ＤＬ−α−トコフェロール ０．１
Ｌ−メントール ０．２
色素 適量
精製水 残余
香料 適量。

例３．９ 育毛剤
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有する育毛剤を調製した。透明液状、粘度７。この育毛剤は使用感も良く、はり、こし感の向上がみられた。
２−アセトアミドチアゾール ２
エタノール ８０
イソステアリルアルコール ２
１，３−ブチレングリコール ３
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 １
ラウリル硫酸ナトリウム ０．３
ＤＬ−リンゴ酸 適量
β−グリチルレチン酸 ０．２
パントテニルエチルエーテル ０．１
ニコチン酸ベンジル ０．１
ニコチン酸アミド ０．１
酢酸ＤＬ−α−トコフェロール ０．５
デシルテトラデシルジメチルアミンオキシド液（２０％） ５
Ｌ−メントール １

例３．１０ 育毛剤
以下の処方に従い、常法により本発明の薬剤を含有する育毛剤を調製した。透明液状、粘度７。この育毛剤は使用感も良く、はり、こし感の向上がみられた。
２−アセトアミド−４−メチルチアゾール ３
エタノール ８０
イソステアリルアルコール ２
１，３−ブチレングリコール ３
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 １
ラウリル硫酸ナトリウム ０．３
ＤＬ−リンゴ酸 適量
β−グリチルレチン酸 ０．２
パントテニルエチルエーテル ０．１
ニコチン酸ベンジル ０．１
ニコチン酸アミド ０．１
酢酸ＤＬ−α−トコフェロール ０．５
デシルテトラデシルジメチルアミンオキシド液（２０％） ５
Ｌ−メントール １

本発明の毛髪はり・こし改善剤および毛髪用化粧料は、毛髪または頭皮に使用されることにより、毛髪に浸透し又は毛包に吸収されて、毛髪のはり・こしを改善し得るものであり、美容方法として有用である。

ＫＡＰ５．１レポータープラスミドの構築および構成を示す概略図である。図１−ＡはＫＡＰ５．１遺伝子とＫＡＰ５．２遺伝子を含むＤＮＡ断片のＰＣＲ増幅を示す図であり、図１−Ｂは増幅したＤＮＡ断片のレポータープラスミドベクターｐＧＬ−３ｂａｓｉｃへのクローニングを示す図である。 図１に続くＫＡＰ５．１レポータープラスミドの構築図であり、サブクローニングによるＫＡＰ５．１遺伝子翻訳領域（開始コドン以降）の削除を示す図である。 ＫＡＰ５遺伝子群の発現調節を示す図である。 ヒトＫＡＰ５．１〜５．５遺伝子の推定コードタンパク質のアミノ酸配列比較を示す図である。

Claims (6)

1. 下記一般式（１）で示される２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種以上の化合物を有効成分とする毛髪はり・こし改善剤。
   

   

   （一般式（１）中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃及びＲ₄は、それぞれ独立に水素原子、直鎖または分岐の炭素数１〜８のアルキル基、直鎖または分岐の炭素数２〜８のアルケニル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数７〜１０のアラルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、５〜１４員のヘテロアリール基を表し、ｎ及びｍは０または１を表す。但し、ｎが１の時、ｍは０、Ｒ₃は水素原子またはメチル基であり、ｍが１の時、ｎは０、Ｒ₃は水素原子またはメチル基である。）
2. 一般式（１）中のＲ₂が水素原子である、請求項１記載の毛髪はり・こし改善剤。
3. ２−アミノチアゾール誘導体が、２−アミノチアゾール、２−アセトアミドチアゾール及び２−アセトアミド−４−メチルチアゾールからなる群から選択される、請求項１又は２記載の毛髪はり・こし改善剤。
4. ２−アセトアミドチアゾール及び２−アセトアミド−４−メチルチアゾールからなる群から選択される２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種以上の化合物を有効成分とする毛髪用化粧料。
5. 請求項１記載の２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種以上の化合物を毛髪または頭皮に適用することを含んでなる毛髪はり・こし改善方法。
6. 請求項４記載の２−アミノチアゾール誘導体およびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種以上の化合物を水相又は油相に添加して毛髪用化粧料を製造することを特徴とする毛髪用化粧料の製造方法。

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