JP4602577B2

JP4602577B2 - 前糖尿病状態のスクリーニング方法及びスクリーニング用試薬

Info

Publication number: JP4602577B2
Application number: JP2001073332A
Authority: JP
Inventors: 宏幸海老沼; 和典齋藤; 博仁曽根; 信博山田
Original assignee: Sekisui Medical Co Ltd
Current assignee: Sekisui Medical Co Ltd
Priority date: 2001-03-15
Filing date: 2001-03-15
Publication date: 2010-12-22
Anticipated expiration: 2021-03-15
Also published as: EP1376133B1; ATE410695T1; CN1211660C; DE60229223D1; WO2002075315A1; EP1376133A4; JP2002277473A; NO20034059L; KR20030086305A; NO20034059D0; US20040110246A1; NO333874B1; EP1376133A1; TWI334929B; CN1502043A; KR100811726B1; US7198905B2

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、耐糖能障害による前糖尿病状態を簡便に検出するスクリーニング方法及びスクリーニング用試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
現在、わが国では、糖尿病患者が約６９０万人いると推定されており、更に、前糖尿病状態とも言える耐糖能障害の人を加えると１３７０万人になると推定されている。また、特に４０歳以上の国民ではその１０人に１人が糖尿病であるといわれている。
【０００３】
糖尿病は、従来境界型といわれていた耐糖能障害を経て発症することが知られており、この状態をできるだけ早く検出して、治療を行なうことにより糖尿病への進行を抑制することができる。
【０００４】
従来、臨床的に行なわれている耐糖能障害及び糖尿病の診断は、空腹時の血糖値測定と７５ｇ経口糖負荷試験における糖負荷後１時間及び／又は２時間の血糖値測定によって行なわれている。空腹時の血糖値（以下、ＦＢＳという）は、負担が少ないことからスクリーニングに用いられており、日本糖尿病学会判定基準によれば、１１０ｍｇ／ｄｌ未満で正常型、１１０〜１２５ｍｇ／ｄｌで境界型、１２６ｍｇ／ｄｌ以上で糖尿病型と判定される。そして、上記の診断により、糖尿病が疑われる場合には更に７５ｇ経口糖負荷試験を行ない、最終的な判定（糖負荷２時間後の血糖値が１４０ｍｇ／ｄｌ未満で正常型、１４０〜１９９ｍｇ／ｄｌで境界型、２００ｍｇ／ｄｌ以上で糖尿病型）が行なわれている。
【０００５】
しかしながら、上述したＦＢＳによる判定法は、不安定型の糖尿病や検査前夜の食事内容などにより、必ずしも正確な判定法とは言えず、また、７５ｇ経口糖負荷試験は、実施に最低２時間と頻回の採血を要し、患者に身体的な負担がかかるため、あまり好ましい方法とは言えない。
【０００６】
これまでに、前糖尿病状態、又は糖尿病状態を検出する方法として、例えば以下のような方法が提案されている。
【０００７】
▲１▼糖投与後一定時間経過後の哺乳動物患者の尿中のＤ−キロイノシトールの量又は増加率と、同様にして定量された健常人の尿中のＤ−キロイノシトールの量又は増加率との比較により前糖尿病状態を検出する方法（特開２０００−２９８１３１号公報）。
【０００８】
▲２▼哺乳動物患者の糖尿状態の可能性の存在に対して該患者からの尿試料をスクリーニングする方法であって、１）細菌のいない環境に該試料を保持し、２）該試料をＤ−キロイノシトールの存在について分析し、ここでＤ−キロイノシトールが不在か、又はインビボでの効果がないことを示す程度に著しい低レベルをその患者の糖尿病状態の徴候とする過程を有し、該低レベルが非糖尿病患者のレベルの少なくとも３オーダー低いレベルであることを特徴とするスクリーニング方法（特許第２８３４３２１号公報）。
【０００９】
▲３▼糖尿病の症状と関連したインシュリン抵抗性の指標であるchiro−イノシトールの、哺乳動物患者からの尿サンプルあるいは血清サンプル中の濃度を測定することを特徴とする糖尿病の症状と関連したインシュリン抵抗性を検出する方法（特許第３１１８４５８号公報）。
【００１０】
▲４▼インスリン耐性についてヒトをスクリーニングする方法であって、体液中のＤ−キロイノシトールの濃度を測定する工程と、体液中のミオイノシトールの濃度を測定する工程、ミオイノシトール対Ｄ−キロイノシトールの比を算出する工程、及び該算出された比をインスリン耐性に特徴的な比と比較する工程、を包含し、該算出された比がインスリン耐性に特徴的な比を超える場合、該ヒトがインスリン耐性であるようだと決定される方法（特表平１０−５０７８２６号公報）。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
上記▲１▼〜▲４▼のスクリーニング方法は、尿を利用できるので採血等の必要のない検査方法であるものの、糖負荷後一定時間内の尿採取が必要であり、被験者は一定時間拘束されるため、一般検査に適した方法とは言えなかった。更に、測定法が複雑で、多数検体処理が不可能であるという問題があった。
【００１２】
したがって、本発明の目的は、被験者に身体的、時間的及び費用的な負担をあまりかけずに、より正確に耐糖能障害による前糖尿病状態の判定を行なうことができ、かつ多数検体処理が可能なスクリーニング方法及びスクリーニング用試薬を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するため、本発明の前糖尿病状態のスクリーニング方法の一つは、被験者から採取した体液中のＤ−マンノース濃度及びグルコース濃度を測定し、前記Ｄ−マンノース濃度を予め設定したＤ−マンノース濃度の基準値と比較すると共に、前記グルコース濃度を予め設定したＤ−グルコース濃度の基準値と比較することを特徴とする。
【００１４】
本発明のスクリーニング方法においては、前記Ｄ−マンノース濃度が所定の基準値より高く、前記Ｄ−グルコース濃度が所定の基準値より低い被験者を検出するものであることが好ましい。
【００１５】
本発明のスクリーニング方法においては、前記体液が、被験者の空腹時における血液、血漿又は血清であることが好ましい。また、前記Ｄ−マンノース濃度の基準値が、健常者の空腹時における血液、血漿又は血清を採取して測定したＤ−マンノース濃度を統計学的に処理して得た上限値であることが好ましい。
【００１６】
本発明のスクリーニング方法によれば、従来のＦＢＳによる判定方法では見過ごされやすかった不安定型の糖尿病患者や、ＦＢＳが正常値を示す潜在的な耐糖能障害などの前糖尿病状態の患者をより正確に判定できる。
【００１７】
一方、本発明の前糖尿病状態のスクリーニング用試薬は、前記スクリーニング方法に用いられ、電子受容体の存在下でマンノースに対して脱水素による酸化能を有する酵素と、該酵素が利用できる前記電子受容体とを含むことを特徴とする。
【００１８】
本発明のスクリーニング用試薬においては、更にグルコース消去剤を含むことが好ましい。また、前記酵素が、酵素番号ＥＣ１．１．１．１１９に分類されるグルコースデヒドロゲナーゼであることが好ましく、グルコノバクター属に属する微生物由来のアルドヘキソースデヒドロゲナーゼであることがより好ましい。また、前記グルコース消去剤が、グルコース６位リン酸化酵素とアデノシン三リン酸とを含有するものであることが好ましい。更に、前記電子受容体が、補酵素ＮＡＤＰであることが好ましい。
【００１９】
本発明のスクリーニング用試薬によれば、複雑な酵素共役系を介することなく、Ｄ−マンノースに直接作用して脱水素による酸化能を有する酵素を用いるため、簡便にＤ−マンノースを定量でき、多数の検体処理が可能となる。また、グルコース消去剤を用いた場合には、試料中のグルコースの影響を受けにくいため、より正確にＤ−マンノースを定量することができる。
【００２０】
【発明の実施の形態】
本発明のスクリーニング方法で検出される前糖尿病状態とは、食事などによって血中に糖が流入した際に、血中の糖を骨格筋、肝臓、脂肪組織などの末梢組織に充分取り込むことができずに、血糖値が上昇する状態、すなわち耐糖能障害をいう。なお、本発明の適用対象は、主として人間であるが、家畜、ペットなどの哺乳動物にも適用することができる。本発明において「被験者」とは、そのような哺乳動物も含む意味である。
【００２１】
本発明の前糖尿病状態のスクリーニング方法は、被験者から採取した体液中のＤ−マンノース濃度を測定し、その濃度を所定の基準値と比較することにより行なわれる。また、より正確にスクリーニングを行なう際には、Ｄ−マンノース濃度の測定とグルコース濃度の測定を行ない、それぞれの濃度を各基準値と比較することにより行なわれる。
【００２２】
上記体液としては、被験者から採取された尿、血液などが挙げられ、特に、血糖値の測定も行えることから、血液、血漿又は血清が好ましく、特に空腹時に採取したものが好ましい。
【００２３】
被験者の体液から測定されたＤ−マンノース濃度に基づいて、前糖尿病状態を判定するためのＤ−マンノース濃度の基準値は、予め糖尿病診断基準によって前糖尿病又は糖尿病でないと診断された複数（数十人〜数百人が好ましい）の健常者の体液（好ましくは血液、血漿又は血清）中のＤ−マンノース濃度を測定し、その結果から統計学的処理により正常範囲を求め、この正常範囲の上限値等に基づいて設定することができる。
【００２４】
この基準値は、数多くの被験者に対して予備試験を行うことより、より正確に決定することができるため、本発明において特に限定されるものではないが、後述する実施例によれば、血中のＤ−マンノース濃度の基準値は９μｇ／ｍｌ前後であると判断される。このため、後述する実施例においては、血中のＤ−マンノース濃度が９μｇ／ｍｌ未満は正常、９μｇ／ｍｌ以上で前糖尿病状態の疑いがあると判定することにした。
【００２５】
Ｄ−マンノース濃度の測定方法は、公知の方法を採用できるが、中でも多数検体処理が可能な方法で行なうことが好ましく、後述するスクリーニング用試薬を用いて行なうことが特に好ましい。
【００２６】
また、グルコース濃度の基準値は、従来のＦＢＳの基準である、日本糖尿病学会判定基準（１１０ｍｇ／ｄｌ未満で正常型、１１０〜１２５ｍｇ／ｄｌで境界型、１２６ｍｇ／ｄｌ以上で糖尿病型）が好ましく採用される。グルコース濃度は、市販の自動分析装置用試薬等を用いて測定することができる。
【００２７】
以下、本発明の前糖尿病状態のスクリーニング方法について好ましい態様を挙げて説明する。
【００２８】
まず、被験者の好ましくは空腹時における血液を常法にしたがって採取し、好ましくは血漿又は血清（以下、単にサンプルという）に分離する。ここで被験者とは、健常者、糖尿病が疑われる人、糖尿病患者など、前糖尿病状態を検査しようとする全ての人を意味する。
【００２９】
次いで、このサンプルに、補酵素ＮＡＤＰ等の電子受容体の存在下、アルドヘキソースデヒドロゲナーゼ等のマンノースに対して脱水素による酸化能を有する酵素を作用させ、生成された電子受容体の還元体を定量してＤ−マンノース濃度を測定する。また、市販の分析試薬を用いて、同じサンプル中のグルコース濃度も測定する。
【００３０】
こうして測定された血中のＤ−マンノース濃度及びグルコース濃度の測定結果を、それぞれの基準値と比較して、前糖尿病状態かどうかを判定する。具体的な結果の判定については、例えばＤ−マンノース濃度が基準値を超え、グルコース濃度が診断基準値の正常範囲内である被験者は、耐糖能障害の疑いがあることから、７５ｇ経口糖負荷試験による再検査を薦める。
【００３１】
また、グルコース濃度が診断基準値を超えた被験者は、耐糖能障害である可能性が高いが、Ｄ−マンノース濃度が基準値を超えない場合は、一過性の血糖上昇の疑いもあることから、被験者に食事等の摂取の確認を取り、耐糖能障害によるものかどうかを判断する。
【００３２】
このように、空腹時における血中のＤ−マンノース濃度を測定することによって、ＦＢＳによる判定のみでは検出することが難しい潜在的な耐糖能障害を簡便に検出することができる。また、血中のＤ−マンノース濃度は、食事由来などによる血糖値の変動に比べてその変動が小さいことから、一過性の血糖上昇が疑われる被験者に対しても、Ｄ−マンノース濃度から一過性の血糖上昇であるかの判別が可能となる。
【００３３】
更に、空腹時における血中のＤ−マンノース濃度とグルコース濃度とを測定して、それぞれの基準値と比較することによって、７５ｇ経口糖負荷試験により初めて耐糖能障害及び糖尿病として検出される被験者（糖負荷後２時間の血糖値が１４０ｍｇ/ｄｌ以上）も検出することができる。
【００３４】
次に、上記の前糖尿病状態のスクリーニング方法で用いられる試薬について説明する。
【００３５】
本発明で用いられる酵素としては、電子受容体の存在下、マンノースに対して脱水素による酸化能を有する酵素であればよく、特に制限はないが、好ましくは、酵素番号ＥＣ１．１．１．１１９に分類される酵素が挙げられる。具体的には、例えば、OKAMOTOの文献（J.Biochem. 53(5) 1963 pp348−353）に記載されたAcetobacter suboxydansから得られるＮＡＤＰ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ、AVIGAD等の文献（J. Biol. Chem. 243(8) 1968 pp1936−1941）に記載されたGluconobacter cerinusから得られるＮＡＤＰ依存性アルドヘキソースデヒドロゲナーゼ、DAHMS等の文献（J.Biol.Chem. 247(7) 1972 pp2222−2227）に記載されたＮＡＤ依存性アルドヘキソースデヒドロゲナーゼ等が挙げられる。
【００３６】
本発明において、上記酵素はグルコノバクター属に属する微生物由来のアルドヘキソースデヒドロゲナーゼであることが特に好ましい。グルコノバクター属に属する微生物としては、例えば、グルコノバクター・アサイ（G.asaii）IFO 3276、グルコノバクター・セリヌス（G.cerinus）IFO 3267、グルコノバクター・フラテオリ（G.frateurii）IFO 3264、グルコノバクター・オキシダンス（G.oxydans）IFO 14819等が挙げられ、これらの微生物を培養して菌体を回収し、この菌体を超音波処理等により破砕して得られる破砕液を、必要に応じて、硫安分画、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトゲル、ゲル濾過等のカラムクロマトグラフィを組み合わせて精製することにより酵素を得ることができる。
【００３７】
なお、マンノース脱水素酵素の使用濃度は、特に限定されないが、０．１〜１００単位（ｕ）／ｍｌ、特に１〜１０単位（ｕ）／ｍｌの範囲とすることが好ましい。ここで、上記酵素１単位（ｕ）とは、下記の方法により測定された、１分間に１μｍｏｌのNADPHを生成する酵素量とした。
【００３８】
すなわち、200ｍＭ Tris-HCl（ｐＨ9.0）1.5ｍｌに、10ｍＭ NADP 0.3ml、精製水 0.85ml、500ｍＭ D-マンノース 0.3ｍｌを混和し、37℃で5分間プレインキュベーションした後、該プレインキュベーションにサンプル0.05ｍｌを混合し、37℃において反応を開始し、１分間当りの340nmにおける吸光度の増加を測定した。なお、ブランクはD-マンノースの代わりに精製水を用いた。力価は、前記の測定法で求めたサンプル吸光度、ブランクの各値から下式によって求めた。
【００３９】
【数１】
ｕ/ml＝（（ΔODサンプル/min-ΔODブランク/min）×3/（6.3*0.05））×希釈倍率
【００４０】
本発明において、電子受容体としては、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ等の補酵素、酸素、フェナジンメトサルフェート、ジクロルフェノールインドフェノール、フェリシアン化合物などを、１種又は２種以上適宜選択して使用することができ、特に補酵素ＮＡＤＰが好ましい。電子受容体の使用濃度は、０．１〜１０ｍｍｏｌ／ｌ、特に０．５〜２ｍｍｏｌ／ｌの範囲が好ましい。
【００４１】
また、電子受容体の還元体を定量するために、電子受容体が還元されることによって発色する発色剤を併用してもよい。かかる発色剤は、使用する電子受容体に応じて適宜選択すればよいが、例えば補酵素ＮＡＤＰの還元体であるＮＡＤＰＨを定量するために、電子キャリアーとして、フェナジンメトサルフェートやジアホラーゼとテトラゾリウム塩を共存させ、生成されるホルマザン色素を比色定量する方法が挙げられる。
【００４２】
更に、本発明で用いるマンノース脱水素酵素は、マンノース以外にグルコースにも作用を示すため、特に血清や血漿等の生体試料中のマンノースを測定する場合には、グルコースの影響を少なからず受けることになる。したがって、生体試料に対する測定精度をより高めるためには、グルコース消去剤を併用することが好ましい。このグルコース消去剤としては、グルコース６位リン酸化酵素とＡＴＰとを含有するものが好ましく用いられる。
【００４３】
上記グルコース６位リン酸化酵素としては、グルコキナーゼ、ヘキソキナーゼ等が挙げられ、ＥＣ２．７．１．２、ＥＣ２．７．１．１に分類されるものであれば特に制限はなく、市販のものを使用できるが、好ましくはグルコースに特異性の高いグルコキナーゼが用いられる。それらの使用量は、試料中のグルコース量により異なるが、概ね０．１〜５０ｕ／ｍｌである。また、グルコースのリン酸化に必要なＡＴＰ量は、試料中のグルコース量により異なるが、概ね１〜２０ｍＭである。更に、グルコースリン酸化反応を促進するものとして通常、無機、有機塩類としてマグネシウムイオンを５〜５０ｍＭ程度含有させる。グルコース消去のためのグルコースリン酸化反応は、ｐＨ６〜１０の緩衝液中、２０〜５０℃、望ましくは２５〜３７℃で、添加直後から１０分間程度行なわれる。
【００４４】
また、グルコースを除去する方法として、グルコースオキシダーゼとカタラーゼを用いる方法等の公知の方法を利用してもよい。
【００４５】
本発明において使用できる緩衝液としては、ｐＨ６〜１０のリン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス塩酸緩衝液、グッド緩衝液、ホウ酸緩衝液等、通常使用されるものであればいずれも使用可能である。
【００４６】
本発明の前糖尿病状態のスクリーニングに用いられる試薬は、グルコース消去剤と、定量用酵素とを別々に組合せてもよい。より具体的には、電子受容体とグルコース消去剤とを含む第１試薬と、マンノース脱水素酵素を含む第２試薬との２試薬で構成するのが好ましい。
【００４７】
試料に上記マンノース定量用試薬を添加して反応を行わせた後、反応液中で還元された電子受容体の測定は、例えば、電子受容体の還元体に特有な吸収波長における吸光度を測定したり、電子受容体の還元体によって発色する発色剤の発色強度を測定することなどによって行うことができる。
【００４８】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００４９】
酵素製造例（グルコノバクター・アサイ由来アルドヘキソースデヒドロゲナーゼの製造）
グルコノバクター・アサイ（ＩＦＯ３２７６）を酵母エキス０．５％、フルクトース１％からなる培地に植菌し、２８℃で２４時間振とう培養し、遠心分離して菌体を得た。この菌体を２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）に懸濁し、氷冷下で超音波破砕装置により処理し、破砕液を遠心分離して菌体残渣を除去し、粗酵素液を得た。
【００５０】
この粗酵素液に硫酸アンモニウム粉末を３０％飽和となるように加えて溶解させ、析出したタンパク質を遠心分離により取り除いた。得られた上清をＢｕｔｙｌトヨパールカラムに通して酵素を吸着させ、硫酸アンモニウムを３０〜０％飽和量含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）で酵素を溶出した。
【００５１】
各溶出画分の酵素活性を測定して活性画分を回収し、その活性画分を２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）にて透析して脱塩した後、これをＤＥＡＥトヨパールカラムに通して酵素を吸着させ、０〜０．２５ＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）で酵素を溶出した。
【００５２】
各溶出画分の酵素活性を測定して活性画分を回収し、その活性画分を２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）にて透析して脱塩した後、これを更にハイドロキシアパタイトカラムに通して酵素を吸着させ、２０〜１５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）で酵素を溶出させ、各溶出画分の酵素活性を測定して活性画分を回収し、これを精製酵素液とした。
【００５３】
実施例
糖尿病の疑いのある被験者５９名に、７５ｇグルコース経口糖負荷試験を実施し、糖負荷直前（空腹時）、糖負荷後３０分、６０分、１２０分に、それぞれ血糖測定用採血管を用いて採血して血漿を分離し、各血漿中のグルコース濃度を、市販の自動分析装置用試薬「ピュアオートＳ−Ｇｌｕ」（商品名、第一化学薬品株式会社製）を用いて測定した。
【００５４】
一方、Ｄ−マンノース濃度の測定を、下記の第１試薬及び第２試薬からなる定量用試薬を用いて行なった。すなわち、各血漿サンプル８μｌに対し、第１試薬２５６μｌを添加して３７℃で５分間反応させ、次いで、第２試薬５６μｌを添加して同様に３７℃で５分間反応させた後、主波長４５０ｎｍ、副波長７００ｎｍの２波長とし、２ポイントアッセイにて吸光度を測定した。これらの操作は、日立７１５０形自動分析装置にて行った。なお、標準物質としては、市販のＤ−マンノースを水溶液として用いた。また、溶血等の本測定系に誤差を与える虞れのあるサンプルについては、第２試薬からアルドヘキソースデヒドロゲナーゼを除いたブランク試薬を別に調製し、各サンプルを同時に測定後、得られた非特異的な発色分を差し引くことによって、誤差を補正した。
【００５５】
第１試薬：
１２５ｍＭトリス塩酸緩衝液
１．２５ｍＭＮＡＤＰ
０．７５ｍＭＷＳＴ−１
１．２５％Ｔｗｅｅｎ２０
６．２５ｕ／ｍｌジアホラーゼ
１２.５ｕ／ｍｌグルコキナーゼ
１０ｍＭＡＴＰ
２ｍＭ酢酸マグネシウム
（ｐＨ８．５）
第２試薬：
２０ｍＭリン酸緩衝液
２３ｕ／ｍｌアルドヘキソースデヒドロゲナーゼ（前記製造例で得た酵素）
（ｐＨ７．０）
これらの試験結果を図１に示す。
【００５６】
すなわち、７５ｇ経口糖負荷試験の結果から、日本糖尿病学会診断基準に基いて、被験者を正常型、境界型、糖尿病型の３群に分類した。その結果、正常型２４名、境界型１５名、糖尿病型２０名に分類された。図１において、正常型と判定された人は◆、境界型と判定された人は○、糖尿病型と判定された人は×で表示した。
【００５７】
一方、図１の縦軸にはＤ−マンノース濃度をとり、横軸には糖負荷直前の血漿中のグルコース濃度（空腹時血糖値：ＦＢＳ）をとって、上記各被験者をプロットした。
【００５８】
ＦＢＳは、１１０ｍｇ／ｄｌ未満を正常型、１１０〜１２５ｍｇ／ｄｌを境界型、１２６ｍｇ／ｄｌ以上を糖尿病型に分類した。このＦＢＳのみの判定では、正常型４６名、境界型７名、糖尿病型６名に分類された。
【００５９】
また、この実施例におけるD-マンノース濃度の基準値は、上記日本糖尿病学会診断基準に基づいて正常型と判定された２４名のD-マンノース濃度を統計学的手法に基づいて算出した。具体的には、正常型と判定された２４名のD-マンノース濃度が正規分布を示すと仮定して、健常者の正常値範囲を平均値±２×標準偏差で推定すると、6.6±2.4μg/mlとなり、上限値は9μg/mlと算出される。更に、この上限値の９５％信頼区間は7.3〜10.7μg/mlと算出されるが、この実施例では、基準値を上限値の9μg/mlと設定した。
【００６０】
この結果、ＦＢＳの基準値である１１０ｍｇ／ｄｌを超えており、糖負荷試験の結果から境界型及び糖尿病型と判定された被験者１３名のうち１０名は、血漿中のＤ−マンノース濃度が基準値を越えていることが分かる。すなわち、ＦＢＳで検出される境界型及び糖尿病型の被験者の７０〜８０％は、Ｄ−マンノース濃度の測定においても検出できることが分かる。
【００６１】
また、ＦＢＳの結果では正常型と判定された４６名のうち、糖負荷試験の結果から耐糖能障害が疑われる境界型及び糖尿病型と診断された被験者は２２名含まれている。これらの被験者は、境界型、糖尿病型であるにも係らず、一次診断でＦＢＳしか行わない従来の診断体制では正常型として見逃されていた人達であるが、血漿中のＤ−マンノース濃度によれば、そのうち８名が基準値を越えていることが分かる。
【００６２】
一方、ＦＢＳ及び糖負荷試験の両方とも正常型（図１の◆）と判定された２４名については、血漿中のＤ−マンノース濃度が基準値を越えているケースは認められなかった。
【００６３】
これらの結果から、血漿中のＤ−マンノース濃度を測定することによって、従来、ＦＢＳが正常値を示して見逃されていた軽度な耐糖能障害である境界型の被験者、すなわち前糖尿病状態にある被験者をより高い確率で検出することが可能であることが分かった。
【００６４】
【発明の効果】
以上説明したように本発明によれば、従来の空腹時血糖値による判定方法では見過ごされやすかった不安定型の糖尿病患者や軽度な耐糖能障害である前糖尿病状態の患者をより正確に判定できる前糖尿病状態のスクリーニング方法を提供できる。その結果、耐糖能障害による前糖尿病状態の被験者などの早期発見が可能となり、糖尿病への進行の予防のために薬剤等による適切な早期治療が行なうことができ、更には治療経過をモニターすることもできる。
【００６５】
更に、本発明のスクリーニング方法を、現在用いられている糖尿病検査に組み入れることによって、検査項目のパネル化、そのためのソフトウェア開発等、総合的な糖尿病診断システムの構築にも応用が可能である。
【００６６】
また、本発明の前糖尿病状態のスクリーニング用試薬は、反応系が簡単であるため、各種自動分析装置への適用も容易であり、多数の検体処理にも適している。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の前糖尿病状態のスクリーニング方法により、糖負荷前の血漿中のＤ−マンノース濃度とグルコース濃度とを比較した結果を示す図表である。

Claims

被験者から採取した体液中のＤ−マンノース濃度及びグルコース濃度を測定し、前記Ｄ−マンノース濃度を予め設定したＤ−マンノース濃度の基準値と比較すると共に、前記グルコース濃度を予め設定したＤ−グルコース濃度の基準値と比較することを特徴とする前糖尿病状態のスクリーニング方法。
前記Ｄ−マンノース濃度が所定の基準値より高く、前記Ｄ−グルコース濃度が所定の基準値より低い被験者を検出するものである請求項１記載の前糖尿病状態のスクリーニング方法。
前記体液が、被験者の空腹時における血液、血漿又は血清である請求項１又は２に記載の前糖尿病状態のスクリーニング方法。
前記Ｄ−マンノース濃度の基準値が、健常者の空腹時における血液、血漿又は血清を採取して測定したＤ−マンノース濃度を統計学的に処理して得た上限値である請求項１〜３のいずれか１つに記載の前糖尿病状態のスクリーニング方法。
請求項１〜４のスクリーニング方法に用いられる、電子受容体の存在下でマンノースに対して脱水素による酸化能を有する酵素と、該酵素が利用できる前記電子受容体とを含むことを特徴とする、前糖尿病状態のスクリーニング用試薬。
更にグルコース消去剤を含む、請求項５記載の前糖尿病状態のスクリーニング用試薬。
前記グルコース消去剤が、グルコース６位リン酸化酵素とアデノシン三リン酸とを含有するものである、請求項６記載の前糖尿病状態のスクリーニング用試薬。
前記酵素が、酵素番号ＥＣ１．１．１．１１９に分類されるグルコースデヒドロゲナーゼである、請求項５〜７のいずれか１つに記載の前糖尿病状態のスクリーニング用試薬。
前記酵素が、グルコノバクター属に属する微生物由来のアルドヘキソースデヒドロゲナーゼである、請求項５〜８のいずれか１つに記載の前糖尿病状態のスクリーニング用試薬。
前記電子受容体が、補酵素酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸である、請求項５〜９のいずれか一つに記載の前糖尿病状態のスクリーニング用試薬。