JP2638253B2 - ビタミンｄ類定量用試薬およびその製法 - Google Patents
ビタミンｄ類定量用試薬およびその製法Info
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Landscapes
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は螢光性発色団あるいは化学発光能を有する官
能基を持つ求ジエン試薬とその製法に関する。更にはそ
の試薬を用いてのcis−ジエンを持つ化合物、特にビタ
ミンＤ、ビタミンＡおよびそれらの代謝物の検出、定量
分析法に関する。
能基を持つ求ジエン試薬とその製法に関する。更にはそ
の試薬を用いてのcis−ジエンを持つ化合物、特にビタ
ミンＤ、ビタミンＡおよびそれらの代謝物の検出、定量
分析法に関する。
従来の技術・発明が解決しようとする課題 活性ビタミンD3代謝物の１α、25−ジヒドロキシビタ
ミンD3かカルシウム代謝のみならず標的細胞の様々なも
のの増殖や分化を調節する多くの機能を持ったステロイ
ドホルモンであることは現在よく知られている。ビタミ
ンＤの生物学的役割を十分理解するために様々な臨床の
場におけるヒト血漿中の主要代謝物の濃度を正確に知る
ことは重要なことである。
ミンD3かカルシウム代謝のみならず標的細胞の様々なも
のの増殖や分化を調節する多くの機能を持ったステロイ
ドホルモンであることは現在よく知られている。ビタミ
ンＤの生物学的役割を十分理解するために様々な臨床の
場におけるヒト血漿中の主要代謝物の濃度を正確に知る
ことは重要なことである。
一般に使用されている競合的結合分析は特異性を欠く
ので、重要な代謝物は、分析に先立って分けられていな
ければならない。また、この分析法は正確さに欠ける。
ガスクロマトグラフィー−質量分析法は測定の操作が煩
雑であるなどの問題がある。
ので、重要な代謝物は、分析に先立って分けられていな
ければならない。また、この分析法は正確さに欠ける。
ガスクロマトグラフィー−質量分析法は測定の操作が煩
雑であるなどの問題がある。
従ってビタミンＤ代謝物を分析するための正確で特異
的かつ高感度の方法が必要とされていた。
的かつ高感度の方法が必要とされていた。
課題を解決するための手段 本発明者らは、ビタミンＤ、ビタミンＡまたはそれら
の代謝物の共役したトリエンの部分と速く特異的かつ定
量的に反応する新規な、螢光もしくは化学発光試薬
（Ｉ）および（II）を合成した。
の代謝物の共役したトリエンの部分と速く特異的かつ定
量的に反応する新規な、螢光もしくは化学発光試薬
（Ｉ）および（II）を合成した。
本発明の化合物は下記一般式（Ｉ）および（II）で示
される。
される。
各式中、Ｘは以下で示される螢光発色団またはポテン
シャル化学発光基の群から選ばれた一員であり、Ｙは以
下で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一
員である。
シャル化学発光基の群から選ばれた一員であり、Ｙは以
下で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一
員である。
すなわち、Ｘは下記式 （式中Ｚは酸の共役塩基を示し； ＲおよびＲ′は同一でも異なっていてもよく、水素原
子またはアルキル基を示す） で示される基よりなる螢光発色団またはポテンシャル化
学発光基の群から選ばれた一員である。
子またはアルキル基を示す） で示される基よりなる螢光発色団またはポテンシャル化
学発光基の群から選ばれた一員である。
Ｘの好ましい例としては下記式 （式中Ｚは前記と同じ意味を示す） で示されるものが挙げられる。式 である場合が特に好ましい。
一方、Ｙは下記式 −（CH2）ｌ− −（CH2）ｌ−Ｂ−（CH2）ｌ− （式中、−Ａ−は−Ｏ−または−NH−を示し、−Ｂ−は
−NH−、−COO−、−SO2NH−、 よりなる群より選ばれた一員を示し、ｌは１から５まで
の整数を示し、ｍは０から５までの整数を示し、ｎは０
または１のいずれかを示す） で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一員
である（但し、Ｙのそれぞれの式の左端は一般式（Ｉ）
または（II）の環の窒素原子と、右端はＸと結合す
る）。
−NH−、−COO−、−SO2NH−、 よりなる群より選ばれた一員を示し、ｌは１から５まで
の整数を示し、ｍは０から５までの整数を示し、ｎは０
または１のいずれかを示す） で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一員
である（但し、Ｙのそれぞれの式の左端は一般式（Ｉ）
または（II）の環の窒素原子と、右端はＸと結合す
る）。
Ｙの好ましい例としては下記式 −（CH2）ｎ− （但しｎは前記と同じ意味を示す）で示されるものが挙
げられる。式 である場合が特に好ましい。
げられる。式 である場合が特に好ましい。
本発明の化合物の好ましい例としては、式 で表されるものが挙げられる。
本発明の一般式（Ｉ）および（II）で示される化合物
は、以下の様にして合成される。
は、以下の様にして合成される。
Ａ）トリアゾリジンシントンと発色団シントンとのカッ
プリングによる方法。
プリングによる方法。
Ｂ）セミカルバジド体を最後に閉環する方法。
（式中、ＸおよびＹは前記と同じ意味を示し、Ｑはヒド
ロキシメチル基またはアミノ基を示し、ＷはC1−C3アル
キル基を示す） Ａ）法として一般式（Ｖ）と（VII）から（Ｉ）を得
る反応または一般式（VI）と（VII）から（II）を得る
反応は、酸クロリド体（VII）を無水ベンゼン等の溶媒
に溶解し、（Ｖ）または（VI）の無水DMF溶液を加え、
還流することによって行う。
ロキシメチル基またはアミノ基を示し、ＷはC1−C3アル
キル基を示す） Ａ）法として一般式（Ｖ）と（VII）から（Ｉ）を得
る反応または一般式（VI）と（VII）から（II）を得る
反応は、酸クロリド体（VII）を無水ベンゼン等の溶媒
に溶解し、（Ｖ）または（VI）の無水DMF溶液を加え、
還流することによって行う。
Ｂ）法として一般式（VIII）から（II）を得る反応
は、無水炭酸カリウム等の共存下（VIII）を無水エタノ
ール等の溶媒に懸濁し、還流することによって行う。
は、無水炭酸カリウム等の共存下（VIII）を無水エタノ
ール等の溶媒に懸濁し、還流することによって行う。
また、試薬（Ｉ）が不安定な場合、下記反応式のよう
に（II）より用時調製する。
に（II）より用時調製する。
一般式（II）から（Ｉ）を得る反応は、Pb（O
Ac）４、PhI（OAc）２等の緩和な酸化剤で酸化すること
により行う。
Ac）４、PhI（OAc）２等の緩和な酸化剤で酸化すること
により行う。
作用 本発明の一般式（Ｉ）および（II）で示される化合物
は、ビタミンＤ、ビタミンＡおよびそれらの代謝物のci
s−ジエンの部分を特異的に検知する螢光の強い求ジエ
ン試薬である。
は、ビタミンＤ、ビタミンＡおよびそれらの代謝物のci
s−ジエンの部分を特異的に検知する螢光の強い求ジエ
ン試薬である。
求ジエングループとして選ばれた４−置換−1,2,4−
トリアゾリン−3,5−ジオンは反応性が高く、緩和な条
件下で少量の基質と定量的に反応する。また対称である
ので１種の幾何異性体しかできないという利点を持つ。
トリアゾリン−3,5−ジオンは反応性が高く、緩和な条
件下で少量の基質と定量的に反応する。また対称である
ので１種の幾何異性体しかできないという利点を持つ。
螢光発色団またはポテンシャル化学発光基として選ば
れたＸで示される基は、高い螢光効率を持っており、ま
たこれらはトリアゾリジン環の酸化条件下でも安定であ
る。
れたＸで示される基は、高い螢光効率を持っており、ま
たこれらはトリアゾリジン環の酸化条件下でも安定であ
る。
以下に本発明を製造例及び実施例によって更に詳しく
説明するが、本発明はこれらの製造例及び実施例によっ
て何ら限定されない。
説明するが、本発明はこれらの製造例及び実施例によっ
て何ら限定されない。
製造例及び実施例 融点は、微量融点測定器（柳本製作所製）にて測定
し、未補正、IRスペクトルは、日本分光FT/IR−7000型
にて測定。MSスペクトルは、日本電子JMS−D300型にて
電子衝撃法（EI）あるいは、日立Ｍ−2000型にてSIMS法
にて測定。′Ｈ−NMRスペクトルは、日本電子GX−270型
にて測定し、tetramethylsilaneを内部標準として、化
学シフトをδ値で示した。測定溶媒は、各化合物ごとに
記した。なおD2O中での測定には、３−（trimethylsily
l）−propionic acid−d4 sodium saltを内部標準に用
いた。NMRの記載は、次の略号によった。ｓ＝singlet;d
＝doublet;t＝triplet;q＝quartet;m＝multiplet;arom
＝aromatic;br＝broad;sig＝signal。TLC（薄層クロマ
トグラフィー）は、Kiesel gel GF254（Merck社製）を
使用。カラムクロマトグラフィーは、特記しない限り、
シリカゲルは、Merck社製Kiesel gel60（35−70mesh）
を使用。反応は、ルーティンにアルゴン気流下で行なっ
た。
し、未補正、IRスペクトルは、日本分光FT/IR−7000型
にて測定。MSスペクトルは、日本電子JMS−D300型にて
電子衝撃法（EI）あるいは、日立Ｍ−2000型にてSIMS法
にて測定。′Ｈ−NMRスペクトルは、日本電子GX−270型
にて測定し、tetramethylsilaneを内部標準として、化
学シフトをδ値で示した。測定溶媒は、各化合物ごとに
記した。なおD2O中での測定には、３−（trimethylsily
l）−propionic acid−d4 sodium saltを内部標準に用
いた。NMRの記載は、次の略号によった。ｓ＝singlet;d
＝doublet;t＝triplet;q＝quartet;m＝multiplet;arom
＝aromatic;br＝broad;sig＝signal。TLC（薄層クロマ
トグラフィー）は、Kiesel gel GF254（Merck社製）を
使用。カラムクロマトグラフィーは、特記しない限り、
シリカゲルは、Merck社製Kiesel gel60（35−70mesh）
を使用。反応は、ルーティンにアルゴン気流下で行なっ
た。
（製造例１） エチル４−イソシアナトベンゾエイト（5.0g、0.026m
ol）の無水ベンゼン溶液（260ml）中に、室温攪拌下カ
ルバジン酸エチル（3.4g、0.033mol）を加えた後、反応
混合物を２時間加熱還流した。室温に戻した後、析出結
晶を吸引取し、粗セミカルバジト１（7.25g、収率93.
9％）を得た。本品をEtOHより再結晶し、無色鱗片状晶
（6.80g）を得た。
ol）の無水ベンゼン溶液（260ml）中に、室温攪拌下カ
ルバジン酸エチル（3.4g、0.033mol）を加えた後、反応
混合物を２時間加熱還流した。室温に戻した後、析出結
晶を吸引取し、粗セミカルバジト１（7.25g、収率93.
9％）を得た。本品をEtOHより再結晶し、無色鱗片状晶
（6.80g）を得た。
化合物1: mp 194−195℃ MS M/z（％）:295（M+、６）、250（７）、204
（５）、146（65）、104（100）。
（５）、146（65）、104（100）。
′Ｈ−NMR（CDCl3＋DMSO−d6）δ： 1.28（3H、ｔ、Ｊ＝7.3Hz、CH2CＨ ３） 1.38（3H、ｔ、Ｊ＝7.3Hz、CH2CＨ ３） 4.19（2H、ｑ、Ｊ＝7.3Hz、ＣＨ 2CH3） 4.33（2H、ｑ、Ｊ＝7.3Hz、ＣＨ 2CH3） 7.52及び7.92（4H、AA′BB′、Ｊ＝8.6Hz、aromH） 7.70（1H、br.sig.NH） 7.80（1H、br.sig.NH） 8.57（1H、br.sig.NH） 元素分析：計算値 （C13H17N3O5）:C、52.87;H、5.80;N、14.23 測定値 :C、52.71;H、5.72;N、14.14 （製造例２） セミカルバジド１（1.181g、4mmol）を無水EtOH（50m
l）に溶解し、粉砕した無水炭酸カリウム（553mg、4mmo
l）を加えた後、反応液を５時間加熱還流した。減圧下E
tOHを留去し、残渣に氷冷水を加え、さらに希塩酸を用
いて水層を酸性とした。水層は、AcOEt（３×60ml）に
て抽出し、AcOEt層は、飽和食塩水にて洗浄、無水硫酸
マグネシウムにて乾燥し、溶媒留去した。結晶性残渣
（901mg）は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（4
5g）にて精製し、10％MeOH含有AcOEt溶出部よりトライ
アゾリジン２（808mg、収率81.1％）を結晶状に得、AcO
Etより再結晶し無色針状晶を得た。
l）に溶解し、粉砕した無水炭酸カリウム（553mg、4mmo
l）を加えた後、反応液を５時間加熱還流した。減圧下E
tOHを留去し、残渣に氷冷水を加え、さらに希塩酸を用
いて水層を酸性とした。水層は、AcOEt（３×60ml）に
て抽出し、AcOEt層は、飽和食塩水にて洗浄、無水硫酸
マグネシウムにて乾燥し、溶媒留去した。結晶性残渣
（901mg）は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（4
5g）にて精製し、10％MeOH含有AcOEt溶出部よりトライ
アゾリジン２（808mg、収率81.1％）を結晶状に得、AcO
Etより再結晶し無色針状晶を得た。
化合物２ mp 206〜207℃ MS m/z（％）:249（M+、35）、221（31）、204（10
0）、191（13）、163（21）、146（72）。
0）、191（13）、163（21）、146（72）。
′Ｈ−NMR（CDCl3＋DMSO−d6）δ： 1.40（3H、ｔ、Ｊ＝7.3Hz、CH2CＨ ３） 4.37（2H、ｑ、Ｊ＝7.3Hz、ＣＨ 2CH3） 7.71及び8.10（4H、AA′BB′、Ｊ＝8.9Hz、aromH） 10.29（2H、br.s、２×NH） 元素分析：計算値 （C11H11N3O4）:C、53.03;H、4.45;N、16.86 測定値 :C、53.00;H、4.51;N、16.95 （製造例３） ＜方法Ｉ＞ エステル体２（355mg、1.43mmol）の無水THF（8.5m
l）溶液をドライアイス及び四塩化炭素浴を用いて−20
℃に冷却し、本冷却・攪拌溶液に水素化ジイソブチルア
ルミニウム（6.42ml;1mol/トルエン溶液）を約20分間
にわたって滴加した。反応混合液は、更に−20℃にて４
時間攪拌した後、希塩酸（2ml、19.6mmolの塩化水素を
含む）を加えて酸性にした。減圧下溶媒を留去し得られ
た残渣を2gのシリカゲルに吸着し、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（40g）に付し精製した。カラムは、1
0％MeOH含有CHCl3にて溶出し、３を含む分画を固体状
（337mg）に得、MeOHにより結晶化させ、純粋なベンジ
ルアルコール体３（240mg、収率81.4％）を無色針状晶
として得た。
l）溶液をドライアイス及び四塩化炭素浴を用いて−20
℃に冷却し、本冷却・攪拌溶液に水素化ジイソブチルア
ルミニウム（6.42ml;1mol/トルエン溶液）を約20分間
にわたって滴加した。反応混合液は、更に−20℃にて４
時間攪拌した後、希塩酸（2ml、19.6mmolの塩化水素を
含む）を加えて酸性にした。減圧下溶媒を留去し得られ
た残渣を2gのシリカゲルに吸着し、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（40g）に付し精製した。カラムは、1
0％MeOH含有CHCl3にて溶出し、３を含む分画を固体状
（337mg）に得、MeOHにより結晶化させ、純粋なベンジ
ルアルコール体３（240mg、収率81.4％）を無色針状晶
として得た。
＜方法II＞−スケールの大きい反応に適する− エステル体２（1.576g、6.32mmol）を用いて、方法Ｉ
と同様に反応・後処理を行なった。塩酸処理後の生成物
を水（60ml）に懸濁させ、不溶物を綿栓過した。液
は、水にて充填したAmberlite XAD−２カラム（700ml）
に通しベンジルアルコール体３を樹脂に吸着させた後、
水（1500ml）にてカラムを洗浄した。MeOHを用いて吸着
している３を溶出すると、固体状残渣（1.170g）が得ら
れ、本品をMeOHより再結晶し、ベンジルアルコール体３
（794mg、収率60.6％）を得た。
と同様に反応・後処理を行なった。塩酸処理後の生成物
を水（60ml）に懸濁させ、不溶物を綿栓過した。液
は、水にて充填したAmberlite XAD−２カラム（700ml）
に通しベンジルアルコール体３を樹脂に吸着させた後、
水（1500ml）にてカラムを洗浄した。MeOHを用いて吸着
している３を溶出すると、固体状残渣（1.170g）が得ら
れ、本品をMeOHより再結晶し、ベンジルアルコール体３
（794mg、収率60.6％）を得た。
化合物3: mp ＞300℃ MS m/z（％）:207（M+、82）、178（100）、148（2
2）、132（14）、120（29）、107（47）、58（55）。
2）、132（14）、120（29）、107（47）、58（55）。
′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 4.54（2H、ｓ、ＣＨ 2Ph） 7.40（4H、ｓ、aromH） 10.38（2H、ｓ、２×NH） 元素分析：計算値 （C9H9N3O3）:C、52.17;H、4.38;N、20.28 測定値 :C、51.99;H、4.44;N、20.25 （製造例４） イソシアン酸ｐ−ニトロフェニル（5.0g、30.5mmo
l）、カルバジン酸エチル（3.97g、30.5mmol）及び無水
ベンゼン（130ml）の混合液を1.5時間、加熱還流した。
析出した淡黄色粗結晶を吸引取し、ベンゼンにてよく
洗浄し、セミカルバジド４（7.85g、収率97.6％）を得
た。本品をMeOHより再結晶し、無色鱗片状晶を得た。
l）、カルバジン酸エチル（3.97g、30.5mmol）及び無水
ベンゼン（130ml）の混合液を1.5時間、加熱還流した。
析出した淡黄色粗結晶を吸引取し、ベンゼンにてよく
洗浄し、セミカルバジド４（7.85g、収率97.6％）を得
た。本品をMeOHより再結晶し、無色鱗片状晶を得た。
化合物4: mp 216〜217℃（Lit.mp218.0〜218.5℃） MS m/z（％）:268（M+、0.3）、222（３）、164（10
0）。
0）。
′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 1.21（3H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、CH2CＨ ３） 4.08（2H、ｑ、Ｊ＝6.9Hz、ＣＨ 2CH3） 7.73（2H、br.sig、aromH） 8.15（2H、aromH） 8.36、9.02及び9.48（各々1H、br.s、３×NH） （文献）F.Arndt、L.Loewe.and A.Tarlan−Akｎ、Re
v.Fac.Sci.Forest Univ.Istanbul.13A127（1948）； Chem.Abstr.、42、8190（1948） （製造例５） セミカルバジド４（4.08g、15.2mmol）、粉砕した無
水炭酸カリウム（2.50g、15.2mmol）及び無水EtOH（200
ml）の懸濁液を３時間加熱還流した。反応混合液は、黄
色から暗赤色へと変化した。減圧下EtOHを留去した後、
残渣に氷冷水（300ml）を加え、2N HClにて酸性とし
た。本水層は、AcOEt（３×150ml）にて抽出、芒硝にて
乾燥し、AcOEtを留去すると、粗結晶性生成物（3.70g）
を得、このものをアセトンより再結晶すると、無色針状
晶の５（2.73g、収率80.7％）が得られた。
v.Fac.Sci.Forest Univ.Istanbul.13A127（1948）； Chem.Abstr.、42、8190（1948） （製造例５） セミカルバジド４（4.08g、15.2mmol）、粉砕した無
水炭酸カリウム（2.50g、15.2mmol）及び無水EtOH（200
ml）の懸濁液を３時間加熱還流した。反応混合液は、黄
色から暗赤色へと変化した。減圧下EtOHを留去した後、
残渣に氷冷水（300ml）を加え、2N HClにて酸性とし
た。本水層は、AcOEt（３×150ml）にて抽出、芒硝にて
乾燥し、AcOEtを留去すると、粗結晶性生成物（3.70g）
を得、このものをアセトンより再結晶すると、無色針状
晶の５（2.73g、収率80.7％）が得られた。
化合物5: mp 267〜269℃（Lit.mp270.0〜271.5℃） MS m/z（％）:222（M+、100）、192（５）、165（2
7）。
7）。
′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 7.90及び8.34（4H、AA′BB′、Ｊ＝9.2Hz、aromH） 10.78（2H、br.S、２×NH） （文献）G.Zinner and W.Deucker、Arch.Pharm.、294、
370（1961） （製造例６） ニトロ体５（787mg、3.54mmol）のEtOH溶液（60ml）
を、PtO2（80mg）存在下、常圧・常温にて水素気流中接
触還元を行なった。水添開始約40〜50分後、反応容器内
に結晶が析出し始めた。２時間後に理論水素消費量（24
0ml）に達したので反応を終了した。析出結晶は、AcOEt
及びEtOHを用いて溶解させた後、セライトを通して吸引
過した。液を減圧下溶媒留去すると粗アミノ体６
（720mg、収率定量的）を結晶状に得た。本品は、EtOH
−AcOEt（1:1;v/v）にて再結晶すると無色針状晶を与え
た。
370（1961） （製造例６） ニトロ体５（787mg、3.54mmol）のEtOH溶液（60ml）
を、PtO2（80mg）存在下、常圧・常温にて水素気流中接
触還元を行なった。水添開始約40〜50分後、反応容器内
に結晶が析出し始めた。２時間後に理論水素消費量（24
0ml）に達したので反応を終了した。析出結晶は、AcOEt
及びEtOHを用いて溶解させた後、セライトを通して吸引
過した。液を減圧下溶媒留去すると粗アミノ体６
（720mg、収率定量的）を結晶状に得た。本品は、EtOH
−AcOEt（1:1;v/v）にて再結晶すると無色針状晶を与え
た。
化合物6: mp ＞300℃ MS m/z（％）:192（M+、99）、134（100）、105（5
4）、79（24） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 5.21（2H、br.s、NH2） 6.60及び6.97（4H、AA′BB′、Ｊ＝8.6Hz、aromH） 10.14（2H、br.S、２×NH） （製造例７） ３−クロロプロピルイソサイアネイト（5.0g、41.8mm
ol）の無水ベンゼン溶液（120ml）にカルバジン酸エチ
ル（5.2g、50.2mmol）を加え、加熱還流１時間行なっ
た。減圧下溶媒を留去すると粗生成物（9.25g）が結晶
状に得られ、本品をAcOEt−Et2Oより再結晶し、純品の
セミカルバジド７（6.59g）を得た。結晶母液（2.24g）
をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Wacogel C−2
00、100g）にて精製し、２〜５％MeOH含有CHCl3溶出部
よりさらに７（517mg）げ得られた。合計収率は、76.0
％であった。
4）、79（24） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 5.21（2H、br.s、NH2） 6.60及び6.97（4H、AA′BB′、Ｊ＝8.6Hz、aromH） 10.14（2H、br.S、２×NH） （製造例７） ３−クロロプロピルイソサイアネイト（5.0g、41.8mm
ol）の無水ベンゼン溶液（120ml）にカルバジン酸エチ
ル（5.2g、50.2mmol）を加え、加熱還流１時間行なっ
た。減圧下溶媒を留去すると粗生成物（9.25g）が結晶
状に得られ、本品をAcOEt−Et2Oより再結晶し、純品の
セミカルバジド７（6.59g）を得た。結晶母液（2.24g）
をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Wacogel C−2
00、100g）にて精製し、２〜５％MeOH含有CHCl3溶出部
よりさらに７（517mg）げ得られた。合計収率は、76.0
％であった。
化合物7: mp 107.0〜108.5℃ MS m/z（％）:225（M+＋２、0.08）、223（M+、0.
2）、178（２）、180（0.7）、141（16）、104（10
0）。
2）、178（２）、180（0.7）、141（16）、104（10
0）。
′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 1.29（3H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、CH2CＨ ３） 2.00（2H、ｍ、CH2CＨ 2CH2） 3.39（2H、ｍ、−ＣＨ 2NH−） 3.59（2H、ｔ、Ｊ＝5.8Hz、ClCＨ ２−） 4.21（2H、ｑ、Ｊ＝6.9Hz、ＣＨ 2CH3） 5.68（1H、ｍ、NH） 6.73及び6.81（各々1H、br.s、２×NH） （製造例８） セミカルバジド７（5.256g、23.5mmol）の無水DMF溶
液（55ml）にNaN3（1.830g、28.2mmol）を加え、100℃
にて3.5時間、加熱攪拌した。減圧下DMFを留去し、残渣
に水（50ml）を加えて、AcOEt（５×70ml）にて抽出し
た。合一したAcOEt層は、氷洗、芒硝乾燥し、溶媒留去
すれば、粗アジド体８（5.13g、収率94.8％）が結晶状
に得られた。本品をエーテルより再結晶し、無色結晶
（3.60g）を得た。
液（55ml）にNaN3（1.830g、28.2mmol）を加え、100℃
にて3.5時間、加熱攪拌した。減圧下DMFを留去し、残渣
に水（50ml）を加えて、AcOEt（５×70ml）にて抽出し
た。合一したAcOEt層は、氷洗、芒硝乾燥し、溶媒留去
すれば、粗アジド体８（5.13g、収率94.8％）が結晶状
に得られた。本品をエーテルより再結晶し、無色結晶
（3.60g）を得た。
化合物8: mp 81〜82℃ MS m/z（％）:noM+、185（２）、141（３）、116
（２）、104（100） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 1.29（3H、ｔ、Ｊ＝7.3Hz、CH2CＨ ３） 1.80（2H、ｍ、CH2CＨ 2CH2） 3.33（2H、ｍ、−ＣＨ 2NH−） 3.37（2H、ｔ、Ｊ＝6.6Hz、N3CＨ ２−） 4.21（2H、ｑ、Ｊ＝7.3Hz、ＣＨ 2CH3） 5.64（1H、ｍ、NH） 6.66及び6.73（各々1H、br.s、２×NH） （製造例９） アジド体８（3.60g、15.6mmol）、粉砕した無水炭酸
カリウム（2.60g、18.7mmol）及び無水EtOH（140ml）の
懸濁液を加熱還流３時間行なった。減圧下EtOHを留去
し、残渣に水（50ml）を加え、2NHClにて弱酸性とし
た。この酸性の水層は、あらかじめ水にて調整しておい
たAmberlite XAD−２カラム（450ml）を通した。カラム
は水（750ml）にて水洗した後、MeOHにて、生成物を樹
脂より脱着・溶出させた。合一したMeOH溶出部を溶媒留
去し、粗結晶生成物を得、このものをAcOEtより再結晶
し、純品の９（2.58g、収率89.8％）を無色鱗片状晶と
して得た。
（２）、104（100） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 1.29（3H、ｔ、Ｊ＝7.3Hz、CH2CＨ ３） 1.80（2H、ｍ、CH2CＨ 2CH2） 3.33（2H、ｍ、−ＣＨ 2NH−） 3.37（2H、ｔ、Ｊ＝6.6Hz、N3CＨ ２−） 4.21（2H、ｑ、Ｊ＝7.3Hz、ＣＨ 2CH3） 5.64（1H、ｍ、NH） 6.66及び6.73（各々1H、br.s、２×NH） （製造例９） アジド体８（3.60g、15.6mmol）、粉砕した無水炭酸
カリウム（2.60g、18.7mmol）及び無水EtOH（140ml）の
懸濁液を加熱還流３時間行なった。減圧下EtOHを留去
し、残渣に水（50ml）を加え、2NHClにて弱酸性とし
た。この酸性の水層は、あらかじめ水にて調整しておい
たAmberlite XAD−２カラム（450ml）を通した。カラム
は水（750ml）にて水洗した後、MeOHにて、生成物を樹
脂より脱着・溶出させた。合一したMeOH溶出部を溶媒留
去し、粗結晶生成物を得、このものをAcOEtより再結晶
し、純品の９（2.58g、収率89.8％）を無色鱗片状晶と
して得た。
化合物９ mp 140〜141℃ MS m/z（％）:noM+、141（20）、129（39）、101（10
0） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 1.78（2H、quintet、Ｊ＝6.6Hz、−CH2CＨ 2CH2−） 3.38（2H、ｔ、Ｊ＝6.6Hz） 3.43（2H、ｔ、Ｊ＝6.6Hz） 10.06（2H、br.s、２×NH） （製造例10） アジド体９（1.70g、9.23mmol）をEtOH（19ml）及びH
2O（7.5ml）に溶解し、10％pd−Ｃ（177mg）存在下常圧
水素接触還元に付した。室温下96時間反応を行なった
後、反応液は、セライトを通して触媒を除去した。液
は、減圧下溶液留去すると結晶性残渣（1.629g）が得ら
れ、H2O−MeOHより再結晶すると遊離アミノ体10（1.007
g、収率69.0％）が無色針状晶として得られた。
0） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 1.78（2H、quintet、Ｊ＝6.6Hz、−CH2CＨ 2CH2−） 3.38（2H、ｔ、Ｊ＝6.6Hz） 3.43（2H、ｔ、Ｊ＝6.6Hz） 10.06（2H、br.s、２×NH） （製造例10） アジド体９（1.70g、9.23mmol）をEtOH（19ml）及びH
2O（7.5ml）に溶解し、10％pd−Ｃ（177mg）存在下常圧
水素接触還元に付した。室温下96時間反応を行なった
後、反応液は、セライトを通して触媒を除去した。液
は、減圧下溶液留去すると結晶性残渣（1.629g）が得ら
れ、H2O−MeOHより再結晶すると遊離アミノ体10（1.007
g、収率69.0％）が無色針状晶として得られた。
化合物10 mp 227〜229℃ MS m/z（％）:158（M+、100）、141（50）、129（4
7）、101（95）、56（94）． ′Ｈ−NMR（D2O）δ： 2.00（2H、ｍ、−CH2CＨ 2CH2−） 3.03（2H、ｔ、Ｊ＝7.4Hz、ＣＨ 2NH2） 3.60（2H、ｔ、Ｊ＝6.6Hz、−ＣＨ ２−Ｎ） 化合物10の塩酸塩 アジド体９（140mg、0.76mmol）をEtOH（20ml）及び
濃塩酸（0.4ml）に溶解し、10％pd−Ｃ（30mg）存在
下、3.0Kg/cm2水素圧にて中圧接触還元を行なった。室
温にて４時間後、反応を終了し、上記と同様に処理する
と、10のHCl塩が結晶状に得られ、MeOH−Et2Oより再結
晶し、純品の10HCl塩（93.0mg）、収率63.0％）が無色
針状晶として得られた。
7）、101（95）、56（94）． ′Ｈ−NMR（D2O）δ： 2.00（2H、ｍ、−CH2CＨ 2CH2−） 3.03（2H、ｔ、Ｊ＝7.4Hz、ＣＨ 2NH2） 3.60（2H、ｔ、Ｊ＝6.6Hz、−ＣＨ ２−Ｎ） 化合物10の塩酸塩 アジド体９（140mg、0.76mmol）をEtOH（20ml）及び
濃塩酸（0.4ml）に溶解し、10％pd−Ｃ（30mg）存在
下、3.0Kg/cm2水素圧にて中圧接触還元を行なった。室
温にて４時間後、反応を終了し、上記と同様に処理する
と、10のHCl塩が結晶状に得られ、MeOH−Et2Oより再結
晶し、純品の10HCl塩（93.0mg）、収率63.0％）が無色
針状晶として得られた。
（製造例11） ジニトロベラトロール11（2.28g、10mmol）を加温下E
tOH（100ml）に溶解させた。PtO2（0.23g）存在下、室
温、常圧水素気流中接触還元を行なった。攪拌23.5時間
後、水素の消費が完全に停止（理論水素消費量1.3）
したので反応を終了した。還元生成物は、すばやく窒素
気流下、セライトを通し触媒を除き、液は、ジュチル
ケトマロネート（1.74g、10mmol）をあらかじめ入れて
おいた反応容器内へ直接導入した。反応混合溶液は、直
ちに加熱還流１時間行なった後、室温にて一晩放置し
た。析出した結晶を吸引取し、粗結晶生成物12（2.11
g、収率75.8％）を得、EtOH−CH2Cl2より再結晶を行な
い、黄緑色針状晶（1.98g）を得た。一方、結晶液
（0.80g）は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（4
5g）にて精製し、１％MeOH含有CHCl3溶出部より、さら
に12（0.33g）を得、合計収率は、83.0％であった。
tOH（100ml）に溶解させた。PtO2（0.23g）存在下、室
温、常圧水素気流中接触還元を行なった。攪拌23.5時間
後、水素の消費が完全に停止（理論水素消費量1.3）
したので反応を終了した。還元生成物は、すばやく窒素
気流下、セライトを通し触媒を除き、液は、ジュチル
ケトマロネート（1.74g、10mmol）をあらかじめ入れて
おいた反応容器内へ直接導入した。反応混合溶液は、直
ちに加熱還流１時間行なった後、室温にて一晩放置し
た。析出した結晶を吸引取し、粗結晶生成物12（2.11
g、収率75.8％）を得、EtOH−CH2Cl2より再結晶を行な
い、黄緑色針状晶（1.98g）を得た。一方、結晶液
（0.80g）は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（4
5g）にて精製し、１％MeOH含有CHCl3溶出部より、さら
に12（0.33g）を得、合計収率は、83.0％であった。
化合物12 mp 250〜251℃（Lit.255℃） MS m/z（％）:278（M+、100）、233（７）、204（8
3）、189（31） ′Ｈ−NMR（CDCl3＋CD3OD）δ： 1.48（3H、ｔ、Ｊ＝7.0Hz、CH2CＨ ３） 3.99及び4.06（each3H、ｓ、２×OCH3） 4.56（2H、ｑ、Ｊ＝7.0Hz、ＣＨ 2CH3） 6.94及び7.38（各々1H、ｓ、aromH） （文献） Collection Czechoslov.Chem.Commun.、36、2527（197
1） （製造例12） NaH（0.26g、10.97mmol）を無水DMF（5ml）に懸濁
し、本冷却（０℃）、攪拌懸濁液に、12（2.03g、7.31m
mol）の無水DMF（60ml）溶液を約20分間かけて滴加し
た。水素ガスの発生が終わり、溶液の色が黄色から黄褐
色に変化したのを確認後（約20−30分）、ヨウ化メチル
（0.68ml、10.97mmol）を約５分間かけて滴加した。反
応混合溶液は、更に氷冷下1.5時間攪拌後、氷冷水（150
ml）中に注ぎ、CHCl3（３×150ml）にて抽出した。CHCl
3抽出層は、飽和食塩にて洗浄し、芒硝乾燥、溶媒留去
して、黄色残渣（2.74g）を得た。本生成物は、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（130g）により精製し、
CHCl3:Benzene（1:1;v/v）溶出部より、Ｏ−メチル体14
（0.10g、収率4.7％）を淡黄色結晶として、またCHCl3
溶出部からＮ−メチル体13（1.72g、収率80.4％）を黄
色結晶として得た。Ｎ−メチル体13は、EtOH−Et2Oより
再結晶し、黄色針状晶を得、14は、Et2O−ｎ−Hexaneよ
り再結晶し、淡黄色針状晶を得た。
3）、189（31） ′Ｈ−NMR（CDCl3＋CD3OD）δ： 1.48（3H、ｔ、Ｊ＝7.0Hz、CH2CＨ ３） 3.99及び4.06（each3H、ｓ、２×OCH3） 4.56（2H、ｑ、Ｊ＝7.0Hz、ＣＨ 2CH3） 6.94及び7.38（各々1H、ｓ、aromH） （文献） Collection Czechoslov.Chem.Commun.、36、2527（197
1） （製造例12） NaH（0.26g、10.97mmol）を無水DMF（5ml）に懸濁
し、本冷却（０℃）、攪拌懸濁液に、12（2.03g、7.31m
mol）の無水DMF（60ml）溶液を約20分間かけて滴加し
た。水素ガスの発生が終わり、溶液の色が黄色から黄褐
色に変化したのを確認後（約20−30分）、ヨウ化メチル
（0.68ml、10.97mmol）を約５分間かけて滴加した。反
応混合溶液は、更に氷冷下1.5時間攪拌後、氷冷水（150
ml）中に注ぎ、CHCl3（３×150ml）にて抽出した。CHCl
3抽出層は、飽和食塩にて洗浄し、芒硝乾燥、溶媒留去
して、黄色残渣（2.74g）を得た。本生成物は、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（130g）により精製し、
CHCl3:Benzene（1:1;v/v）溶出部より、Ｏ−メチル体14
（0.10g、収率4.7％）を淡黄色結晶として、またCHCl3
溶出部からＮ−メチル体13（1.72g、収率80.4％）を黄
色結晶として得た。Ｎ−メチル体13は、EtOH−Et2Oより
再結晶し、黄色針状晶を得、14は、Et2O−ｎ−Hexaneよ
り再結晶し、淡黄色針状晶を得た。
化合物13 mp 166〜167℃ MS m/z（％）:292（M+、100）、278（11）、277（1
2）、247（16）、220（45）、205（６）、192（22）、1
77（15）、147（12） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 1.44（3H、ｔ、Ｊ＝7.0Hz、ＣＨ 2CＨ ３） 3.73（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.94及び4.05（each3H、ｓ、２×OCH3） 4.51（2H、ｑ、Ｊ＝7.0Hz、ＣＨ 2CH3） 6.71及び7.36（each1H、ｓ、aromH） 化合物14 mp 123〜125℃ MS m/z（％）:292（M+、100）、247（16）、220（4
5）、205（18）、190（69）、177（15）、161（12）。
2）、247（16）、220（45）、205（６）、192（22）、1
77（15）、147（12） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 1.44（3H、ｔ、Ｊ＝7.0Hz、ＣＨ 2CＨ ３） 3.73（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.94及び4.05（each3H、ｓ、２×OCH3） 4.51（2H、ｑ、Ｊ＝7.0Hz、ＣＨ 2CH3） 6.71及び7.36（each1H、ｓ、aromH） 化合物14 mp 123〜125℃ MS m/z（％）:292（M+、100）、247（16）、220（4
5）、205（18）、190（69）、177（15）、161（12）。
′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 1.46（3H、ｔ、Ｊ＝8.0Hz、CH2CＨ ３） 4.00、4.06及び4.16（each3H、Ｓ、３×OCH3） 4.52（2H、ｑ、Ｊ＝8.0Hz、ＣＨ 2CH3） 7.10及び7.41（each1H、S.aromH） 元素分析：計算値 測定値： （製造例13） Ｎ−メチル体13（0.48g、1.63mmol）の1,4−ジオキサ
ン（5ml）溶液に1N NaOH水溶液（5ml）を加え、室温下1
0分間攪拌した。反応液は1N HClを用いて弱酸性とした
後、CHCl3にて、水層の螢光が消失するまで繰り返し抽
出した。合一したCHCl3層は、水洗、芒硝乾燥後、溶媒
を留去し、黄色粗結晶カルボン酸15（0.39g、収率90.7
％）を得た。本品は、CHCl3より再結晶を行ない、黄色
針状晶を得た。
ン（5ml）溶液に1N NaOH水溶液（5ml）を加え、室温下1
0分間攪拌した。反応液は1N HClを用いて弱酸性とした
後、CHCl3にて、水層の螢光が消失するまで繰り返し抽
出した。合一したCHCl3層は、水洗、芒硝乾燥後、溶媒
を留去し、黄色粗結晶カルボン酸15（0.39g、収率90.7
％）を得た。本品は、CHCl3より再結晶を行ない、黄色
針状晶を得た。
化合物15 mp 241〜243℃（Lit.mp222℃） MS m/z（％）:264（M+、27）、220（100）、205（2
7）、177（16） （文献）T.Iwata、M.Yamaguchi、S.Hara、M.Nakamura、
and Y.Ohkura、J.Chromatogr.、362、209（1986） （製造例14） カルボン酸15（470mg、1.78mmol）及びSOCl2（10ml）
の混合溶液を１時間加熱還流した。減圧下、過剰のSOCl
2を留去し、得られた赤褐色結晶を無水ベンゼン−ｎ−
ヘキサンより再結晶し、黄赤色針状晶の酸クロリド16
（435mg、収率86.3％）を得た。
7）、177（16） （文献）T.Iwata、M.Yamaguchi、S.Hara、M.Nakamura、
and Y.Ohkura、J.Chromatogr.、362、209（1986） （製造例14） カルボン酸15（470mg、1.78mmol）及びSOCl2（10ml）
の混合溶液を１時間加熱還流した。減圧下、過剰のSOCl
2を留去し、得られた赤褐色結晶を無水ベンゼン−ｎ−
ヘキサンより再結晶し、黄赤色針状晶の酸クロリド16
（435mg、収率86.3％）を得た。
化合物16 mp 272−273℃（分解）〔Lit.mp261℃〕 MS m/z（％）:284（M+＋2.21）、282（M+、62）、247
（100）、219（51）、191（42） （文献）T.Iwata、M.Yamaguchi、S.Hara and M.Nakamur
a、J.Chromatogr.、362、209（1986） （実施例１） 酸クロリド16（113mg、0.4mmol）を無水ベンゼン（8m
l）に溶解し、本攪拌還流溶液に、ベンジルアルコール
体３（124mg、0.6mmol）の無水DMF（0.5ml）溶液を一気
に加え、0.5時間還流を継続した。３の添加と同時に黄
色沈殿物が生成し始めた。反応液を０℃に冷却し、析出
結晶を吸引取し、ベンゼンにて洗浄した。黄色粗結晶
（184mg）は、クロロホルムにて膨潤したセファデック
スLH−20カラムクロマトグラフィー（200ml）にて精製
し、５％MeOH含有CHCl3溶出部よりII A（103mg、収率5
6.8％）を得た。本品は、MeOH−CHCl3より再結晶し、黄
色結晶を得た。
（100）、219（51）、191（42） （文献）T.Iwata、M.Yamaguchi、S.Hara and M.Nakamur
a、J.Chromatogr.、362、209（1986） （実施例１） 酸クロリド16（113mg、0.4mmol）を無水ベンゼン（8m
l）に溶解し、本攪拌還流溶液に、ベンジルアルコール
体３（124mg、0.6mmol）の無水DMF（0.5ml）溶液を一気
に加え、0.5時間還流を継続した。３の添加と同時に黄
色沈殿物が生成し始めた。反応液を０℃に冷却し、析出
結晶を吸引取し、ベンゼンにて洗浄した。黄色粗結晶
（184mg）は、クロロホルムにて膨潤したセファデック
スLH−20カラムクロマトグラフィー（200ml）にて精製
し、５％MeOH含有CHCl3溶出部よりII A（103mg、収率5
6.8％）を得た。本品は、MeOH−CHCl3より再結晶し、黄
色結晶を得た。
化合物II A mp 279〜280℃（分解） MS（＋SIMS）m/z:454（M+＋１） ′Ｈ−NMR（CDCl3＋DMSO−d6）δ： 3.75（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.92及び4.05（各々3H、ｓ、２×OCH3） 5.43（2H、ｓ、ＣＨ 2ph） 6.91及び7.36（各々1H、ｓ、aromH） 7.54及び7.58（4H、AA′BB′、Ｊ＝8.6Hz、aromH、 10.36（2H、br.s、２×NH） 元素分析：計算値 （C21H19N5O7）CH3OH:C、54.43;H、4.78;N、14.43 測定値 :C、54.42;H、4.35;N、14.83 （実施例２） 酸クロリド16（20mg、0.07mmol）の無水ベンゼン（2.
5ml）還流溶液に、６（9mg、0.047mmol）の無水DMF（0.
1ml）溶液を一気に加え、反応混合液は、１時間、加熱
還流した。反応液を室温に戻してから、析出している結
晶を吸引取すると、黄色粗結晶生成物II B（11.3mg、
収率55.1％）が得られた。本品は、極めて難溶性のた
め、以下の反応には、精製することなく使用する。
5ml）還流溶液に、６（9mg、0.047mmol）の無水DMF（0.
1ml）溶液を一気に加え、反応混合液は、１時間、加熱
還流した。反応液を室温に戻してから、析出している結
晶を吸引取すると、黄色粗結晶生成物II B（11.3mg、
収率55.1％）が得られた。本品は、極めて難溶性のた
め、以下の反応には、精製することなく使用する。
化合物II B ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 3.78（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.89及び4.03（各々3H、ｓ、２×OCH3） 7.10及び7.47（各々1H、ｓ、aromH） 7.45及び7.83（4H、AA′BB′、Ｊ＝9.0Hz、aromH） 10.42（2H、ｓ、２×NH） （製造例15） ジニトロベラトロール11（0.91g、4mmol）をEtOH（80
ml）に溶解し、PtO2（89mg）存在下室温にて常圧水素気
流中接触還元を行なった。水素の消費（理論消費量540m
l）が完全に停止するまで約17時間反応を継続した。生
じた淡黄緑色溶液は、窒素気流中セライトを通し触媒を
除去し、液は、２−ケトグルタル酸（0.58g、4mmol）
を含む反応容器中に直接集め、直ちに加熱還流した。1.
5時間後、反応を終了し、反応液を冷却すると、橙黄色
結晶が析出して来た。析出結晶を吸引取し、キノキサ
リノン体17（0.80g、収率71.9％）を得、EtOHより再結
晶し黄色針状晶（0.62g）を得た。
ml）に溶解し、PtO2（89mg）存在下室温にて常圧水素気
流中接触還元を行なった。水素の消費（理論消費量540m
l）が完全に停止するまで約17時間反応を継続した。生
じた淡黄緑色溶液は、窒素気流中セライトを通し触媒を
除去し、液は、２−ケトグルタル酸（0.58g、4mmol）
を含む反応容器中に直接集め、直ちに加熱還流した。1.
5時間後、反応を終了し、反応液を冷却すると、橙黄色
結晶が析出して来た。析出結晶を吸引取し、キノキサ
リノン体17（0.80g、収率71.9％）を得、EtOHより再結
晶し黄色針状晶（0.62g）を得た。
化合物17 mp 250〜252゜ MS m/z（％）:278（M+、36）、260（100）、232（8
8）、217（32）、189（31）、161（21） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 2.80（2H、ｔ、Ｊ＝7.3Hz、−ＣＨ 2CO−） 3.92及び3.93（各々3H、ｓ、２×OCH3） 6.78及び7.18（各々1H、ｓ、aromH） 11.92（1H、br.sig.−COOＨ） （製造例16） ＜方法Ｉ＞ 氷冷したNaH（176mg、7.3mmol）の無水DMF（3ml）懸
濁液に、攪拌下化合物17（606mg、2.2mmol）の無水DMF
（20ml）溶液を約20分間かけて滴加し、更に0.5時間０
℃にて攪拌を続けた。次に反応容器にヨウ化メチル（45
5μ、7.3mmol）を約10分間かけて滴加し、全反応液
は、引き続き０℃にて1.5時間攪拌し、氷冷水（50ml）
中に注いだ。混合溶液は、CHCl3（３×50ml）にて抽出
し、有機層は、飽和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留
去すると、粗生成物（570mg）が得られた。本成積体
は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Wacogel C
−200、24g）にて精製し、ｎ−Hexane:AcOEt（4:1〜2:
1;v/v）の溶出部よりＮ−メチル体18（492mg、収率73.8
％）を得MeOH−CHCl3より再結晶し、淡黄色針状晶を得
た。Ｏ−メチル体19は、極微量得られたにすぎなかった
（方法II参照）。
8）、217（32）、189（31）、161（21） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 2.80（2H、ｔ、Ｊ＝7.3Hz、−ＣＨ 2CO−） 3.92及び3.93（各々3H、ｓ、２×OCH3） 6.78及び7.18（各々1H、ｓ、aromH） 11.92（1H、br.sig.−COOＨ） （製造例16） ＜方法Ｉ＞ 氷冷したNaH（176mg、7.3mmol）の無水DMF（3ml）懸
濁液に、攪拌下化合物17（606mg、2.2mmol）の無水DMF
（20ml）溶液を約20分間かけて滴加し、更に0.5時間０
℃にて攪拌を続けた。次に反応容器にヨウ化メチル（45
5μ、7.3mmol）を約10分間かけて滴加し、全反応液
は、引き続き０℃にて1.5時間攪拌し、氷冷水（50ml）
中に注いだ。混合溶液は、CHCl3（３×50ml）にて抽出
し、有機層は、飽和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留
去すると、粗生成物（570mg）が得られた。本成積体
は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Wacogel C
−200、24g）にて精製し、ｎ−Hexane:AcOEt（4:1〜2:
1;v/v）の溶出部よりＮ−メチル体18（492mg、収率73.8
％）を得MeOH−CHCl3より再結晶し、淡黄色針状晶を得
た。Ｏ−メチル体19は、極微量得られたにすぎなかった
（方法II参照）。
一方、CHCl3抽出後の水層は、0.5N HClにて酸性とし
た後、５％MeOH含有CHCl3にて再抽出し、有機層は、飽
和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去するとカルボン
酸20（86mg、13.5％）が結晶状に得られた。本品をMeOH
−CHCl3より再結晶すると黄色針状晶が得られた。
た後、５％MeOH含有CHCl3にて再抽出し、有機層は、飽
和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去するとカルボン
酸20（86mg、13.5％）が結晶状に得られた。本品をMeOH
−CHCl3より再結晶すると黄色針状晶が得られた。
＜方法II＞ カルボン酸17（1.00g、3.60mmol）をCH2Cl2−MeOH
（1:1;v/v、100ml）に懸濁し、室温攪拌下ジアゾメタン
のエーテル溶液を原料の17が消失するまで滴加した。過
剰のジアゾメタンは、窒素気流にて留去した後、減圧下
溶媒を留去すると、結晶性残渣（1.14g）が得られた。
本生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Wa
cogel C−200、50g）にて精製し、ｎ−Hexane:AcOEt
（6:1;v/v）溶出部よりＯ−メチル体19（480mg、収率4
3.6％）及びｎ−Hexane:AcOEt（1:1;v/v）溶出部よりＮ
−メチル体18（528mg、収率48.0％）をそれぞれ得た。
Ｏ−メチル体19は、MeOH−CHCl3より再結晶し、無色プ
リズム晶を得た。
（1:1;v/v、100ml）に懸濁し、室温攪拌下ジアゾメタン
のエーテル溶液を原料の17が消失するまで滴加した。過
剰のジアゾメタンは、窒素気流にて留去した後、減圧下
溶媒を留去すると、結晶性残渣（1.14g）が得られた。
本生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Wa
cogel C−200、50g）にて精製し、ｎ−Hexane:AcOEt
（6:1;v/v）溶出部よりＯ−メチル体19（480mg、収率4
3.6％）及びｎ−Hexane:AcOEt（1:1;v/v）溶出部よりＮ
−メチル体18（528mg、収率48.0％）をそれぞれ得た。
Ｏ−メチル体19は、MeOH−CHCl3より再結晶し、無色プ
リズム晶を得た。
化合物18 mp 174−175℃ MS m/z（％）:306（M+、100）、274（35）、258（1
4）、247（88）、231（24）、203（20） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 2.86（2H、ｔ、Ｊ＝7.1Hz、−ＣＨ 2CO） 3.69及び3.70（各々3H、ｓ、Ｎ−CH3、COOCＨ ３） 3.96及び4.01（各々3H、ｓ、２×OCH3） 6.68及び7.25（各々1H、ｓ、aromH） 化合物19 mp 137〜139℃ MS m/z（％）:306（M+、51）、275（10）、247（10
0）、203（10） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 2.89（2H、ｍ） 3.24（2H、ｍ） 3.71（3H、ｓ、COOCＨ ３） 4.00及び4.02及び4.07（各々3H、ｓ、３×OCH3） 7.17及び7.27（each1H、ｓ、aromH） 化合物20 mp 239〜241℃ MS m/z（％）:292（M+、53）、274（99）、246（10
0）、231（53）、203（41）、175（27） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 2.70（2H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、ＣＨ 2CO） 3.00（2H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、ＣＨ 2CH2CO） 3.65（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.84及び3.94（各々3H、ｓ、２×OCH3） 6.98及び7.22（各々1H、ｓ、aromH） （製造例17） Ｎ−メチル体18（1.15g、3.75mmol）を1,4−ジオキサ
ン（18ml）及び1N NaOH水溶液（10ml）に溶解し、室温
下10分間攪拌反応させた。反応混合液は、希塩酸酸性と
した後、10％MeOH含有CHCl3にて水層の螢光か消失する
まで抽出を繰り返した。合一した有機層は、飽和食塩水
にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去し、粗結晶カルボン酸20
（1.05g、収率95.9％）を得た。本品は、MeOH−CHCl3よ
り再結晶し、純品20（852mg）得、このものは、先に得
ている化合物20と一致した。
4）、247（88）、231（24）、203（20） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 2.86（2H、ｔ、Ｊ＝7.1Hz、−ＣＨ 2CO） 3.69及び3.70（各々3H、ｓ、Ｎ−CH3、COOCＨ ３） 3.96及び4.01（各々3H、ｓ、２×OCH3） 6.68及び7.25（各々1H、ｓ、aromH） 化合物19 mp 137〜139℃ MS m/z（％）:306（M+、51）、275（10）、247（10
0）、203（10） ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ： 2.89（2H、ｍ） 3.24（2H、ｍ） 3.71（3H、ｓ、COOCＨ ３） 4.00及び4.02及び4.07（各々3H、ｓ、３×OCH3） 7.17及び7.27（each1H、ｓ、aromH） 化合物20 mp 239〜241℃ MS m/z（％）:292（M+、53）、274（99）、246（10
0）、231（53）、203（41）、175（27） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 2.70（2H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、ＣＨ 2CO） 3.00（2H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、ＣＨ 2CH2CO） 3.65（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.84及び3.94（各々3H、ｓ、２×OCH3） 6.98及び7.22（各々1H、ｓ、aromH） （製造例17） Ｎ−メチル体18（1.15g、3.75mmol）を1,4−ジオキサ
ン（18ml）及び1N NaOH水溶液（10ml）に溶解し、室温
下10分間攪拌反応させた。反応混合液は、希塩酸酸性と
した後、10％MeOH含有CHCl3にて水層の螢光か消失する
まで抽出を繰り返した。合一した有機層は、飽和食塩水
にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去し、粗結晶カルボン酸20
（1.05g、収率95.9％）を得た。本品は、MeOH−CHCl3よ
り再結晶し、純品20（852mg）得、このものは、先に得
ている化合物20と一致した。
（製造例18） カルボン酸20（500mg、1.71mmol）を無水DMF（12ml）
に溶解し、本攪拌溶液にトリエチルアミン（0.36ml、2.
57mmol）、ジフェニルリン酸アジド（0.55ml、2.57mmo
l）を順次滴加した。反応１時間後にジフェニルリン酸
アジド（0.34mmol）を追加し、更に1.5時間室温下攪拌
を行ない、淡黄緑色溶液を得た。減圧下速やかに溶媒留
去し、残渣を高真空下乾燥した。乾燥生成物に無水ベン
ゼン（20ml）を加え、混合溶液を１時間加熱還流した。
一度反応液を室温に戻した後、カルバジン酸エチル（17
8mg、1.71mmol）を加えた。反応液は、再び0.5時間還流
後、更に室温下0.5時間攪拌し、溶媒を留去した。得ら
れた淡黄色残渣（1.976g）は、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（90g）にて精製し、４〜５％MeOH含有CHC
l3溶出部よりセミカルバジド21（230mg）を得た。未分
離分画は、再シリカゲルカラムクロマトグラフィー（15
g）に対し、更に21（164mg）を得、合計収率は58.6％で
あった。
に溶解し、本攪拌溶液にトリエチルアミン（0.36ml、2.
57mmol）、ジフェニルリン酸アジド（0.55ml、2.57mmo
l）を順次滴加した。反応１時間後にジフェニルリン酸
アジド（0.34mmol）を追加し、更に1.5時間室温下攪拌
を行ない、淡黄緑色溶液を得た。減圧下速やかに溶媒留
去し、残渣を高真空下乾燥した。乾燥生成物に無水ベン
ゼン（20ml）を加え、混合溶液を１時間加熱還流した。
一度反応液を室温に戻した後、カルバジン酸エチル（17
8mg、1.71mmol）を加えた。反応液は、再び0.5時間還流
後、更に室温下0.5時間攪拌し、溶媒を留去した。得ら
れた淡黄色残渣（1.976g）は、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（90g）にて精製し、４〜５％MeOH含有CHC
l3溶出部よりセミカルバジド21（230mg）を得た。未分
離分画は、再シリカゲルカラムクロマトグラフィー（15
g）に対し、更に21（164mg）を得、合計収率は58.6％で
あった。
化合物21 MS m/z（％）:393（M+、５）、347（0.8）、330
（１）、289（92）、246（47）、234（100）、219（2
2）、205（24） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 1.18（3H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、CH2CＨ ３） 2.95（2H、ｔ、Ｊ＝5.9Hz、ＣＨ 2CH2NH−） 3.52（2H、ｍ、ＣＨ 2NH） 3.67（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.89及び3.97（各々3H、ｓ、２×OCH3） 4.02（2H、ｑ、Ｊ＝6.9Hz、ＣＨ 2CH3） 6.40（1H、br、sig、NH） 6.91及び7.31（各々1H、ｓ、aromH） 7.70（1H、br.s、NH） 8.65（1H、br.sig、NH） （実施例３） セミカルバジド21（272mg、0.69mmol）、粉砕した無
水炭酸カリウム（191mg、1.38mmol）及びabs EtOH（20m
l）の懸濁液を６時間、加熱還流した。減圧下溶媒留去
し、残渣に水（30ml）を加え、2N HClにて酸性とした。
水層は、10％MeOH含有CHCl3（３×50ml）にて抽出し、
有機層は、飽和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去す
ると、淡黄色結晶（222mg）が得られ、MeOH−CHCl3より
再結晶し、黄色プリズム晶として、II C（130mg）を得
た。結晶母液（70mg）は、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（10g）にて精製し、５％MeOH含有CHCl3溶出部
より更にII C（64mg）を得、合計収率は80.8％であっ
た。
（１）、289（92）、246（47）、234（100）、219（2
2）、205（24） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 1.18（3H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、CH2CＨ ３） 2.95（2H、ｔ、Ｊ＝5.9Hz、ＣＨ 2CH2NH−） 3.52（2H、ｍ、ＣＨ 2NH） 3.67（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.89及び3.97（各々3H、ｓ、２×OCH3） 4.02（2H、ｑ、Ｊ＝6.9Hz、ＣＨ 2CH3） 6.40（1H、br、sig、NH） 6.91及び7.31（各々1H、ｓ、aromH） 7.70（1H、br.s、NH） 8.65（1H、br.sig、NH） （実施例３） セミカルバジド21（272mg、0.69mmol）、粉砕した無
水炭酸カリウム（191mg、1.38mmol）及びabs EtOH（20m
l）の懸濁液を６時間、加熱還流した。減圧下溶媒留去
し、残渣に水（30ml）を加え、2N HClにて酸性とした。
水層は、10％MeOH含有CHCl3（３×50ml）にて抽出し、
有機層は、飽和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去す
ると、淡黄色結晶（222mg）が得られ、MeOH−CHCl3より
再結晶し、黄色プリズム晶として、II C（130mg）を得
た。結晶母液（70mg）は、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（10g）にて精製し、５％MeOH含有CHCl3溶出部
より更にII C（64mg）を得、合計収率は80.8％であっ
た。
化合物II C mp 250〜253℃ MS m/z（％）:347（M+、５）、289（２）、246（10
0）、231（35）、203（20）、175（20）、101（12） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 3.02（2H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、 3.65（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.80（2H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、 3.84及び3.95（各々3H、ｓ、２×OCH3） 6.96及び7.26（各々1H、ｓ、aromH） 9.95（2H、ｓ、２×NH） （実施例４） トリアゾリジンII C（10.0mg、0.029mmol）の無水DMF
（1ml）溶液にPhI（OAc）２（11.2mg、0.035mmol）を加
え、室温にて１時間攪拌した。減圧下DMFを留去すると
赤色固体状残渣が得られた。本品をCH2Cl2−benzeneよ
り結晶化すると、極微量であるが、目的のI Cの赤色プ
リズム晶が得られて来た。現在、大量に純品のI Cを得
るための方法（昇華法等）を検討中である。
0）、231（35）、203（20）、175（20）、101（12） ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 3.02（2H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、 3.65（3H、ｓ、Ｎ−CH3） 3.80（2H、ｔ、Ｊ＝6.9Hz、 3.84及び3.95（各々3H、ｓ、２×OCH3） 6.96及び7.26（各々1H、ｓ、aromH） 9.95（2H、ｓ、２×NH） （実施例４） トリアゾリジンII C（10.0mg、0.029mmol）の無水DMF
（1ml）溶液にPhI（OAc）２（11.2mg、0.035mmol）を加
え、室温にて１時間攪拌した。減圧下DMFを留去すると
赤色固体状残渣が得られた。本品をCH2Cl2−benzeneよ
り結晶化すると、極微量であるが、目的のI Cの赤色プ
リズム晶が得られて来た。現在、大量に純品のI Cを得
るための方法（昇華法等）を検討中である。
化合物I C （実施例５） アミノ体10（9.8mg、0.05mmol）及び炭酸カリウム（1
5.2mg、0.11mmol）の水溶液（0.25ml）に７−クロロ−
４−ニトロベンゾフラザン（8.3mg、0.041mmol）のEtOH
（1ml）溶液を約５分間かけて滴加した。生じた暗紫色
溶液は、室温で10分攪拌した後、60−70℃にて５分間加
熱攪拌した。暗紫色反応懸濁液は、2N HClにて酸性にす
ると暗赤色溶液となった。減圧下溶媒留去し、得られた
残渣（44.5mg）は、ODSカラムクロマトグラフィー（Wat
ers社、分取用ODS充填剤5g）にて精製した。カラムは、
20％MeOH含有水にて溶出し、トライアゾリジンII D（9.
5mg、収率70.9％）を黄赤色粘着性物質として得た。
5.2mg、0.11mmol）の水溶液（0.25ml）に７−クロロ−
４−ニトロベンゾフラザン（8.3mg、0.041mmol）のEtOH
（1ml）溶液を約５分間かけて滴加した。生じた暗紫色
溶液は、室温で10分攪拌した後、60−70℃にて５分間加
熱攪拌した。暗紫色反応懸濁液は、2N HClにて酸性にす
ると暗赤色溶液となった。減圧下溶媒留去し、得られた
残渣（44.5mg）は、ODSカラムクロマトグラフィー（Wat
ers社、分取用ODS充填剤5g）にて精製した。カラムは、
20％MeOH含有水にて溶出し、トライアゾリジンII D（9.
5mg、収率70.9％）を黄赤色粘着性物質として得た。
化合物II D MS m/z（％）:no M+ ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 1.99（2H、ｍ） 3.4〜3.5（4H、ｍ） 6.42（1H、ｄ、Ｊ＝9.2Hz、aromH） 8.51（1H、ｄ、Ｊ＝9.2Hz、aromH） 9.42（1H、ｍ、NH） 10.10（2H、ｓ、２×NH） （実施例６） Ｎ−メチルアクリジニウム（22mg、0.038mmol）の無
水DMF（0.5ml）溶液にアミノ体10（7.6mg、0.048mmol）
を加え、生じた反応懸濁液を外浴50−60℃にて６時間加
熱攪拌した。減圧下DMFを留去し、暗黄色残渣（43.5m
g）に塩酸水溶液（0.057mmolの塩化水素に相当する量）
及びMeOHを加え残渣を溶解した。再び溶媒を留去し、残
渣をセファデックスLH−20カラムクロマトグラフィー
（55ml）にて精製した。EtOHにてカラムを充填し、EtOH
にて溶出せしめた。溶出容量37〜46mlの黄色分画を集め
化合物II E（22.4mg、収率94.8％）を得た。
水DMF（0.5ml）溶液にアミノ体10（7.6mg、0.048mmol）
を加え、生じた反応懸濁液を外浴50−60℃にて６時間加
熱攪拌した。減圧下DMFを留去し、暗黄色残渣（43.5m
g）に塩酸水溶液（0.057mmolの塩化水素に相当する量）
及びMeOHを加え残渣を溶解した。再び溶媒を留去し、残
渣をセファデックスLH−20カラムクロマトグラフィー
（55ml）にて精製した。EtOHにてカラムを充填し、EtOH
にて溶出せしめた。溶出容量37〜46mlの黄色分画を集め
化合物II E（22.4mg、収率94.8％）を得た。
化合物II E ′Ｈ−NMR（DMSO−d6）δ： 1.67（2H、ｍ、−HNCH2CＨ 2CH2−） 2.94（2H、ｔ、Ｊ＝7.6Hz、PhCＨ ２−） 3.06（2H、ｍ −HNCＨ ２−） 3.36（2H、ｔ、Ｊ＝6.6Hz、−ＣＨ 2N） 4.97（3H、ｓ、＋Ｎ−ＣＨ ３） 7.46及び7.65（4H、AA′BB′、Ｊ＝8.6Hz、aromH） 7.92（1H、ｍ、NH） 8.19（2H、ｍ、aromH） 8.57（2H、ｍ、aromH） 8.62（2H、ｄ、Ｊ＝8.6Hz、aromH） 8.96（2H、ｄ、Ｊ＝9.2Hz、aromH） 10.10（2H、br、ｓ、２×NH） 以下に本発明化合物とビタミンＤ類との反応例につい
て説明する。
て説明する。
螢光性求ジエン試薬とビタミンＤ誘導体との反応 （実施例７） ａ＝R1＝R2＝R3＝Ｈ ｂ＝R1＝R3H R2＝OH ｃ＝R1＝OH R2、R3＝Ｈ ｄ＝R1＝R2＝OH R3＝Ｈ ｅ＝R1＝R3＝OH R2＝Ｈ Diels−Alder Adducts（ディールス−アルダー付加体）
III a、ｂ、ｃ、ｄ、ｅの合成 ＜方法１＞ Pb（OAc）４によるII Aの酸化、引き続く
D.A.反応 Vitamin D322a（9.1mg、0.024mmol）、II A（12.9m
g、0.028mmol）、無水DMF（0.2ml）、無水THF（0.3ml）
及びgl.AcOH（５μ）の懸濁液を−75℃に冷却し、本
攪拌液にPb（OAc）４（18.9ml、0.043mmol）を加えた。
反応懸濁液は、Pb（OAc）４添加５分後より赤色を帯び
て来た。反応液は１時間−75℃にて攪拌した後、室温に
戻し更に１時間反応を行なった。反応混合物を氷冷水に
注ぎ、CHCl3（３×15ml）にて抽出した。CHCl3層は、飽
和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去した。得られた
黄色粘着性物質（22.0mg）はPreparative TLC（Merck社
製、silica gel 60 F254、20cm（Ｗ）×10cm（Ｈ）×0.
5mm（Ｔ）×４枚、展開溶媒２％MeOH含有CHCl3）にて精
製し、主成積体III a（C6−αH;9.0mg）及びその異性体
III a′（C6−βH;1.6mg）を得た。合計収率は、53.5％
であった。III a（C6−αＨ）は、黄色結晶として得ら
れ、MeOH−CH2Cl2より再結晶し、黄色針状晶を得た。
III a、ｂ、ｃ、ｄ、ｅの合成 ＜方法１＞ Pb（OAc）４によるII Aの酸化、引き続く
D.A.反応 Vitamin D322a（9.1mg、0.024mmol）、II A（12.9m
g、0.028mmol）、無水DMF（0.2ml）、無水THF（0.3ml）
及びgl.AcOH（５μ）の懸濁液を−75℃に冷却し、本
攪拌液にPb（OAc）４（18.9ml、0.043mmol）を加えた。
反応懸濁液は、Pb（OAc）４添加５分後より赤色を帯び
て来た。反応液は１時間−75℃にて攪拌した後、室温に
戻し更に１時間反応を行なった。反応混合物を氷冷水に
注ぎ、CHCl3（３×15ml）にて抽出した。CHCl3層は、飽
和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去した。得られた
黄色粘着性物質（22.0mg）はPreparative TLC（Merck社
製、silica gel 60 F254、20cm（Ｗ）×10cm（Ｈ）×0.
5mm（Ｔ）×４枚、展開溶媒２％MeOH含有CHCl3）にて精
製し、主成積体III a（C6−αH;9.0mg）及びその異性体
III a′（C6−βH;1.6mg）を得た。合計収率は、53.5％
であった。III a（C6−αＨ）は、黄色結晶として得ら
れ、MeOH−CH2Cl2より再結晶し、黄色針状晶を得た。
化合物III a（C6−αＨ） mp 143〜145℃ 元素分析：計算値 （C48C61N5O8・H2O）:C、67.50;H、7.43;N、8.20、 測定値 :C、67.08;H、7.18;N、8.12、 ＜方法２＞ PhI（OAc）２によるII Aの酸化、引き続く
ビタミンＤとの反応 II A（10.0mg、0.022mmol）の無水DMF（1ml）溶液
に、PhI（OAc）２（7.5mg、0.023mmol）を加え、室温攪
拌下、反応液が十分な赤色を呈するまで約0.5〜１時間
攪拌を継続した。本赤色溶液に、24.25（OH）2D322e
（5.0mg、0.012mmol）を加え、溶液の赤色が消失するま
で更に1.5時間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、黄褐色
粘着性物質（24.1mg）を得、preparative TLC（Merck社
製Silica gel60 F254、20cm（Ｗ）×10cm（Ｈ）×0.5mm
（Ｔ）×４枚、展開溶媒５％MeOH含有CH2Cl2）にて精製
し、付加体III e（C6−αH ＆ βＨの混合物、10.4m
g、収率定量的）を非結晶性黄色粘着性物質として得
た。
ビタミンＤとの反応 II A（10.0mg、0.022mmol）の無水DMF（1ml）溶液
に、PhI（OAc）２（7.5mg、0.023mmol）を加え、室温攪
拌下、反応液が十分な赤色を呈するまで約0.5〜１時間
攪拌を継続した。本赤色溶液に、24.25（OH）2D322e
（5.0mg、0.012mmol）を加え、溶液の赤色が消失するま
で更に1.5時間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、黄褐色
粘着性物質（24.1mg）を得、preparative TLC（Merck社
製Silica gel60 F254、20cm（Ｗ）×10cm（Ｈ）×0.5mm
（Ｔ）×４枚、展開溶媒５％MeOH含有CH2Cl2）にて精製
し、付加体III e（C6−αH ＆ βＨの混合物、10.4m
g、収率定量的）を非結晶性黄色粘着性物質として得
た。
このようにして得たビタミンＤ類と本発明試薬との付
加体の異性体生成比及び収率を第１表に示す。
加体の異性体生成比及び収率を第１表に示す。
III a及びIII bの化合物については、C6−αＨ及びβ
Ｈ体をそれぞれ分離し、′Ｈ−NMRを測定した。結果を
第２表に示す。
Ｈ体をそれぞれ分離し、′Ｈ−NMRを測定した。結果を
第２表に示す。
III c、III d及びIII eの化合物については立体異性
体を分離することなく′Ｈ−NMRを測定した。結果を第
３表に示す。
体を分離することなく′Ｈ−NMRを測定した。結果を第
３表に示す。
ビタミンD3誘導体と本発明試薬（化合物I A）との付
加物である化合物III c、III d及びIII eの混合液につ
いて、HPLC（高速液体クロマトグラフィー）による分離
を次の条件により行なった。
加物である化合物III c、III d及びIII eの混合液につ
いて、HPLC（高速液体クロマトグラフィー）による分離
を次の条件により行なった。
HPLC分離条件 カラム:Li Chrospher100RP−18（ｅ）（５μｍ）4mm×2
50mm 溶離剤：水：メタノール＝27:73（V/V） 流速:1ml/分 検出:Ex395nm、Em500nm サンプルサイズ：〔III c（〜6ng）＋III d（〜6ng）＋
III e（〜6ng）〕/10μエタノール 結果を第１図に示す。図中、III c、III d、III eは
主生成物を、III c′、III d′、III e′は副生物をそ
れぞれ表わす。
50mm 溶離剤：水：メタノール＝27:73（V/V） 流速:1ml/分 検出:Ex395nm、Em500nm サンプルサイズ：〔III c（〜6ng）＋III d（〜6ng）＋
III e（〜6ng）〕/10μエタノール 結果を第１図に示す。図中、III c、III d、III eは
主生成物を、III c′、III d′、III e′は副生物をそ
れぞれ表わす。
化合物IV aの２つ異性体（C6−αＨ及びβＨ）はprep
arative TLCによりそれぞれ分離してから、′Ｈ−NMRを
測定した。結果を第４表に示す。
arative TLCによりそれぞれ分離してから、′Ｈ−NMRを
測定した。結果を第４表に示す。
IV b、IV c及びIV dの化合物については、異性体を分
離することなく′Ｈ−NMRを測定した。結果を第５表に
示す。
離することなく′Ｈ−NMRを測定した。結果を第５表に
示す。
ビタミンD3誘導体と本発明試薬（化合物I C）との付
加物である化合物IV b、IV c及びIV dの混合液につい
て、HPLCによる分離を次の条件で行なった。
加物である化合物IV b、IV c及びIV dの混合液につい
て、HPLCによる分離を次の条件で行なった。
HPLC分離条件 カラム:Li Chrospher100RP−18（ｅ）（５μｍ）4mm×2
50mm 溶離剤：（直線的勾配溶離による） ０分 水：メタノール＝40:60 30分後 水：メタノール＝20:80 40分後 水：メタノール＝20:80 流速:1ml/分 検出:Ex.370nm、Em.440nm、 サンプルサイズ：〔IV b（〜15ng）＋IV c（〜12ng）＋
IV d（〜15ng）〕/10μエタノール 結果を第２図に示す。図中、IV b、IV c、IV dは主生
成物を、IV b′、IV c′、IV d′は副生成物をそれぞれ
表わす。
50mm 溶離剤：（直線的勾配溶離による） ０分 水：メタノール＝40:60 30分後 水：メタノール＝20:80 40分後 水：メタノール＝20:80 流速:1ml/分 検出:Ex.370nm、Em.440nm、 サンプルサイズ：〔IV b（〜15ng）＋IV c（〜12ng）＋
IV d（〜15ng）〕/10μエタノール 結果を第２図に示す。図中、IV b、IV c、IV dは主生
成物を、IV b′、IV c′、IV d′は副生成物をそれぞれ
表わす。
以下に本発明化合物とビタミンＡ類との反応例につい
て説明する。
て説明する。
螢光性求ジエン試薬とビタミンＡ誘導体との反応（実施
例８〜10） （実施例８） ビタミンＡ酸（Retinoic acid）（23）と螢光試薬I Aと
の反応 II A（22mg、50μmol）のDMF溶液（2ml）にPhI（OA
c）２（16mg、50μmol）を加え室温で30分攪拌し、I A
を調製する。この溶液をretinoic acid（10mg、33μmo
l）のCH2Cl2（20ml）溶液に０℃Ar気流下滴下する、０
℃30分後溶媒を留去し、シリカゲルのTLCで10％MeOH/CH
Cl3を用いて精製する。V aの収量11mg（44％）。V a :UV（95％EtOH）400、307、247、218nm.IR（KBr）17
70、1719、1655cm-1 ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ1.05及び1.14（各々3H、ｓ、Me−
１）、1.75（3H、ｓ、Me−５）、1.81（3H、ｓ、Me−
９）、2.21（3H、ｓ、Me−13）、3.73（3H、ｓ、NM
e）、3.94及び4.04（各々3H、ｓ、OMe）、4.83（1H、
ｓ、Ｈ−７）、4.85（1H、ｄ、Ｊ＝8.6、Ｈ−10）、5.4
7（1H、ｓ、Ｈ−８）、5.83（1H、ｓ、Ｈ−14）、5.45
（2H、ｓ、Ｏ−CH2）、6.02（1H、dd、Ｊ＝15及び8.6、
Ｈ−11）、6.47（1H、ｄ、Ｊ＝15、Ｈ−12）、6.67及び
7.37（each1H、ｓ、キノキサリン）、7.55及び7.58（ea
ch2H、AA′BB′、Ｊ＝９、Ar） （実施例９） ビタミンＡ酸（Retinoic acid）（23）とI Cとの反応 II c（7mg、20μmol）のDMF（500μ）の溶液にPhI
（OAc）２（7.8mg、24μmol）を加え室温で30分攪拌
し、I cの淡赤色溶液を調製する。Retinoic acid（3.5m
g、12μmol）のCH2Cl2（10ml）溶液に上記I cの溶液を
０℃にて加えAr気流下30分間攪拌する、溶媒を留去し残
渣をシリカゲルのTLCで10％MeOH/CH2Cl2にて精製し、付
加体V b（5mg、66％）を得る。V b UV（95％EtOH）368、244、213nm IR（KBr）1771、1715、1649cm-1 MS m/e646（M+−１）、601、399、355 ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ0.88及び0.95（各々3H、ｓ、Me−
１）、1.59（3H、ｓ、Me−５）、1.77（3H、ｓ、Me−
９）、2.19（3H、ｓ、Me−13）、3.67（3H、ｓ、NM
e）、3.93及び4.01（各々3H、ｓ、OMe）、4.61（1H、
ｓ、Ｈ−７）、4.74（1H、ｄ、Ｊ＝8.6、Ｈ−10）、5.3
7（1H、ｓ、Ｈ−８）、5.86（1H、ｓ、Ｈ−14）、5.96
（1H、dd、Ｊ＝15及び8.6、Ｈ−11）、6.35（1H、ｄ、
Ｊ＝15、Ｈ−12）、3.2及び4.0（各々2H、ｍ、−CH2CH2
−） （実施例10） ビタミンＡ（Retinol）（24）とI Aの反応 II A（15mg、35μmol）より調製したI AのDMF溶液をr
etinol（24）（10mg、35μmol）のCH2Cl2（20ml）溶液
に−78℃で加え、30分攪拌する。溶媒留去後残渣をシリ
カゲルのカラムでAcOEt/CHCl3/EtOH50:50:1を溶媒に用
いて精製し、付加体VI（14mg、55％）を得る。
例８〜10） （実施例８） ビタミンＡ酸（Retinoic acid）（23）と螢光試薬I Aと
の反応 II A（22mg、50μmol）のDMF溶液（2ml）にPhI（OA
c）２（16mg、50μmol）を加え室温で30分攪拌し、I A
を調製する。この溶液をretinoic acid（10mg、33μmo
l）のCH2Cl2（20ml）溶液に０℃Ar気流下滴下する、０
℃30分後溶媒を留去し、シリカゲルのTLCで10％MeOH/CH
Cl3を用いて精製する。V aの収量11mg（44％）。V a :UV（95％EtOH）400、307、247、218nm.IR（KBr）17
70、1719、1655cm-1 ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ1.05及び1.14（各々3H、ｓ、Me−
１）、1.75（3H、ｓ、Me−５）、1.81（3H、ｓ、Me−
９）、2.21（3H、ｓ、Me−13）、3.73（3H、ｓ、NM
e）、3.94及び4.04（各々3H、ｓ、OMe）、4.83（1H、
ｓ、Ｈ−７）、4.85（1H、ｄ、Ｊ＝8.6、Ｈ−10）、5.4
7（1H、ｓ、Ｈ−８）、5.83（1H、ｓ、Ｈ−14）、5.45
（2H、ｓ、Ｏ−CH2）、6.02（1H、dd、Ｊ＝15及び8.6、
Ｈ−11）、6.47（1H、ｄ、Ｊ＝15、Ｈ−12）、6.67及び
7.37（each1H、ｓ、キノキサリン）、7.55及び7.58（ea
ch2H、AA′BB′、Ｊ＝９、Ar） （実施例９） ビタミンＡ酸（Retinoic acid）（23）とI Cとの反応 II c（7mg、20μmol）のDMF（500μ）の溶液にPhI
（OAc）２（7.8mg、24μmol）を加え室温で30分攪拌
し、I cの淡赤色溶液を調製する。Retinoic acid（3.5m
g、12μmol）のCH2Cl2（10ml）溶液に上記I cの溶液を
０℃にて加えAr気流下30分間攪拌する、溶媒を留去し残
渣をシリカゲルのTLCで10％MeOH/CH2Cl2にて精製し、付
加体V b（5mg、66％）を得る。V b UV（95％EtOH）368、244、213nm IR（KBr）1771、1715、1649cm-1 MS m/e646（M+−１）、601、399、355 ′Ｈ−NMR（CDCl3）δ0.88及び0.95（各々3H、ｓ、Me−
１）、1.59（3H、ｓ、Me−５）、1.77（3H、ｓ、Me−
９）、2.19（3H、ｓ、Me−13）、3.67（3H、ｓ、NM
e）、3.93及び4.01（各々3H、ｓ、OMe）、4.61（1H、
ｓ、Ｈ−７）、4.74（1H、ｄ、Ｊ＝8.6、Ｈ−10）、5.3
7（1H、ｓ、Ｈ−８）、5.86（1H、ｓ、Ｈ−14）、5.96
（1H、dd、Ｊ＝15及び8.6、Ｈ−11）、6.35（1H、ｄ、
Ｊ＝15、Ｈ−12）、3.2及び4.0（各々2H、ｍ、−CH2CH2
−） （実施例10） ビタミンＡ（Retinol）（24）とI Aの反応 II A（15mg、35μmol）より調製したI AのDMF溶液をr
etinol（24）（10mg、35μmol）のCH2Cl2（20ml）溶液
に−78℃で加え、30分攪拌する。溶媒留去後残渣をシリ
カゲルのカラムでAcOEt/CHCl3/EtOH50:50:1を溶媒に用
いて精製し、付加体VI（14mg、55％）を得る。
化合物VI： IR（KBr）3440、1771、1711、1655cm-1 ′Ｈ−NMR（CDCl3）0.992及び0.987（各々3H、ｓ、Me−
１）、1.66（3H、ｓ、Me−５）、1.99（3H、ｓ、Me−
９）、1.91（3H、ｓ、Me−13）、3.74（3H、ｓ、NM
e）、3.95及び4.05（各々3H、ｓ、OMe）、3.56（1H、d
d、Ｊ＝８及び４、OH、D2O添加消失）、4.24及び3.87
（各々1H、ｍ、Ｈ−15）、4.44（1H、ｄ、Ｊ＝６、Ｈ−
14）、5.22（1H、ｄ、Ｊ＝９、Ｈ−10）、5.31（1H、
ｍ、Ｈ−11）、5.70（1H、ｍ、Ｈ−12）、5.99（1H、
ｄ、Ｊ＝16.5、Ｈ−８）、6.17（1H、ｄ、Ｊ＝16.5、Ｈ
−７） 発明の効果 以上説明したように本発明により合成した螢光もしく
は化学発光試薬はcis−ジエンを持つ化合物と速く特異
的かつ定量的に反応する。従ってこれらの試薬はcis−
ジエンを持つ化合物、特にビタミンＤ、Ａおよびそれら
の代謝物の検出・定量分析に適している優れた試薬であ
るということができる。
１）、1.66（3H、ｓ、Me−５）、1.99（3H、ｓ、Me−
９）、1.91（3H、ｓ、Me−13）、3.74（3H、ｓ、NM
e）、3.95及び4.05（各々3H、ｓ、OMe）、3.56（1H、d
d、Ｊ＝８及び４、OH、D2O添加消失）、4.24及び3.87
（各々1H、ｍ、Ｈ−15）、4.44（1H、ｄ、Ｊ＝６、Ｈ−
14）、5.22（1H、ｄ、Ｊ＝９、Ｈ−10）、5.31（1H、
ｍ、Ｈ−11）、5.70（1H、ｍ、Ｈ−12）、5.99（1H、
ｄ、Ｊ＝16.5、Ｈ−８）、6.17（1H、ｄ、Ｊ＝16.5、Ｈ
−７） 発明の効果 以上説明したように本発明により合成した螢光もしく
は化学発光試薬はcis−ジエンを持つ化合物と速く特異
的かつ定量的に反応する。従ってこれらの試薬はcis−
ジエンを持つ化合物、特にビタミンＤ、Ａおよびそれら
の代謝物の検出・定量分析に適している優れた試薬であ
るということができる。
第１図は、ビタミンD3各誘導体と本発明試薬I Aとの付
加体をHPLCによって分離した後に検出した各々の付加体
のピークを表わすクロマトグラムである。 第２図は、ビタミンD3各誘導体と本発明試薬I Cとの付
加体をHPLCによって分離した後に検出した各々の付加体
のピークを表わすクロマトグラムである。
加体をHPLCによって分離した後に検出した各々の付加体
のピークを表わすクロマトグラムである。 第２図は、ビタミンD3各誘導体と本発明試薬I Cとの付
加体をHPLCによって分離した後に検出した各々の付加体
のピークを表わすクロマトグラムである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 405/12 Ｃ０７Ｄ 405/12 413/06 413/06 413/12 ２４９ 413/12 ２４９ 471/04 １１２ 471/04 １１２Ｔ 491/056 491/056 Ｇ０１Ｎ 31/22 １２２ Ｇ０１Ｎ 31/22 １２２
Claims (9)
- 【請求項１】一般式（Ｉ） （式中、Ｘは下記式 （式中、Ｚは酸の共役塩基を示し、ＲおよびＲ′は同一
でも異なっていてもよく、水素原子またはアルキル基を
示す） で示される基よりなる螢光発色団またはポテンシャル化
学発光基の群から選ばれた一員であり、 Ｙは下記式 −（CH2）ｌ− −（CH2）ｌ−Ｂ−（CH2）ｌ− （式中、−Ａ−は−Ｏ−または−NH−を示し； −Ｂ−は−NH−、−COO−、−SO2NH−、 よりなる群から選ばれた一員を示し、 ｌは１から５までの整数を示し、 ｍは０から５までの整数を示し、 ｎは０または１のいずれかを示す） で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一員
である（但し、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子
と右端はＸと結合する）） で表される化合物。 - 【請求項２】一般式（II） （式中、Ｘは下記式 （式中、Ｚは酸の共役塩基を示し、ＲおよびＲ′は同一
でも異なっていてもよく、水素原子またはアルキル基を
示す） で示される基よりなる螢光発色団またはポテンシャル化
学発光基の群から選ばれた一員であり、 Ｙは下記式 −（CH2）ｌ− −（CH2）ｌ−Ｂ−（CH2）ｌ− （式中、−Ａ−は−Ｏ−または−NH−を示し； −Ｂ−は−NH−、−COO−、−SO2NH−、 よりなる群から選ばれた一員を示し、 ｌは１から５までの整数を示し、 ｍは０から５までの整数を示し、 ｎは０または１のいずれかを示す） で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一員
である（但し、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子
と右端はＸと結合する）） で表される化合物。 - 【請求項３】Ｘが下記式 （式中、Ｚは酸の共役塩基を示す） で示される酸よりなる群から選ばれた一員であり、 Ｙが下記式 −（CH2）ｎ− （式中、ｎは０または１のいずれかを示す） で示される基よりなる群から選ばれた一員である（但
し、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子と右端はＸ
と結合する）） 請求項１または２に記載の化合物。 - 【請求項４】Ｘが下記式（III） およびＹが下記式（IV） で示される基である、請求項１または２に記載の化合
物。 - 【請求項５】一般式（Ｖ） （式中、Ｙは下記式 −（CH2）ｌ− −（CH2）ｌ−Ｂ−（CH2）ｌ− （式中、−Ａ−は−Ｏ−または−NH−を示し； −Ｂ−は−NH−、−COO−、−SO2NH−、 よりなる群から選ばれた一員を示し、 ｌは１から５までの整数を示し、 ｍは０から５までの整数を示し、 ｎは０または１のいずれかを示す） で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一員
であり（但し、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子
と右端はＸと結合する）、 Ｑはヒドロキシメチル基またはアミノ基を示す）） で表される化合物を一般式（VII） Ｘ−COCl （VII） （式中、Ｘは下記式 （式中、Ｚは酸の共役塩基を示し、ＲおよびＲ′は同一
でも異なっていてもよく、水素原子またはアルキル基を
示す） で示される基よりなる螢光発色団またはポテンシャル化
学発光基の群から選ばれた一員である） で表される化合物とカップリングすることを特徴とする
一般式（Ｉ） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する） で表される化合物の製造方法。 - 【請求項６】一般式（VI） （式中、Ｙは下記式 −（CH2）ｌ− −（CH2）ｌ−Ｂ−（CH2）ｌ− （式中、−Ａ−は−Ｏ−または−NH−を示し； −Ｂ−は−NH−、−COO−、−SO2NH−、 よりなる群から選ばれた一員を示し、 ｌは１から５までの整数を示し、 ｍは０から５までの整数を示し、 ｎは０または１のいずれかを示す） で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一員
であり（但し、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子
と右端はＸと結合する）、 Ｑはヒドロキシメチル基またはアミノ基を示す）） で表される化合物を一般式（VII） Ｘ−COCl （VII） （式中、Ｘは下記式 （式中、Ｚは酸の共役塩基を示し、ＲおよびＲ′は同一
でも異なっていてもよく、水素原子またはアルキル基を
示す） で示される基よりなる螢光発色団またはポテンシャル化
学発光基の群から選ばれた一員である） で表される化合物とカップリングすることを特徴とする
一般式（II） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する） で表される化合物の製造方法。 - 【請求項７】一般式（VIII） （式中、Ｘは下記式 （式中、Ｚは酸の共役塩基を示し、ＲおよびＲ′は同一
でも異なっていてもよく、水素原子またはアルキル基を
示す） で示される基よりなる螢光発色団またはポテンシャル化
学発光基の群から選ばれた一員であり、 Ｙは下記式 −（CH2）ｌ− −（CH2）ｌ−Ｂ−（CH2）ｌ− （式中、−Ａ−は−Ｏ−または−NH−を示し； −Ｂ−は−NH−、−COO−、−SO2NH−、 よりなる群から選ばれた一員を示し、 ｌは１から５までの整数を示し、 ｍは０から５までの整数を示し、 ｎは０または１のいずれかを示す） で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一員
であり（但し、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子
と右端はＸと結合する）、ＷはC1−C3アルキル基を示
す）） で表されるセミカルバジド体を閉環することを特徴とす
る、一般式（II） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する） で表される化合物の製造方法。 - 【請求項８】一般式（Ｉ） （式中、Ｘは下記式 （式中、Ｚは酸の共役塩基を示し、ＲおよびＲ′は同一
でも異なっていてもよく、水素原子またはアルキル基を
示す） で示される基よりなる螢光発色団またはポテンシャル化
学発光基の群から選ばれた一員であり、 Ｙは下記式 −（CH2）ｌ− −（CH2）ｌ−Ｂ−（CH2）ｌ− （式中、−Ａ−は−Ｏ−または−NH−を示し； −Ｂ−は−NH−、−COO−、−SO2NH−、 よりなる群から選ばれた一員を示し、 ｌは１から５までの整数を示し、 ｍは０から５までの整数を示し、 ｎは０または１のいずれかを示す） で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一員
である（但し、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子
と右端はＸと結合する）） または一般式（II） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する） で表される化合物を螢光もしくは化学発光試薬として用
いることを特徴とする、化学構造中にcis−ジエン構造
を持つ化合物の検出および定量分析法。 - 【請求項９】一般式（Ｉ） （式中、Ｘは下記式 （式中、Ｚは酸の共役塩基を示し、ＲおよびＲ′は同一
でも異なっていてもよく、水素原子またはアルキル基を
示す） で示される基よりなる螢光発色団またはポテンシャル化
学発光基の群から選ばれた一員であり、 Ｙは下記式 −（CH2）ｌ− −（CH2）ｌ−Ｂ−（CH2）ｌ− （式中、−Ａ−は−Ｏ−または−NH−を示し； −Ｂ−は−NH−、−COO−、−SO2NH−、 よりなる群から選ばれた一員を示し、 ｌは１から５までの整数を示し、 ｍは０から５までの整数を示し、 ｎは０または１のいずれかを示す） で示されるスペーサーの基よりなる群から選ばれた一員
である（但し、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子
と右端はＸと結合する）） または一般式（II） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する） で表される化合物を螢光もしくは化学発光試薬として用
いることを特徴とする、ビタミンＤ、ビタミンＡまたは
これらの代謝物の検出および定量分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2105046A JP2638253B2 (ja) | 1990-04-20 | 1990-04-20 | ビタミンｄ類定量用試薬およびその製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2105046A JP2638253B2 (ja) | 1990-04-20 | 1990-04-20 | ビタミンｄ類定量用試薬およびその製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH045287A JPH045287A (ja) | 1992-01-09 |
| JP2638253B2 true JP2638253B2 (ja) | 1997-08-06 |
Family
ID=14397059
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2105046A Expired - Lifetime JP2638253B2 (ja) | 1990-04-20 | 1990-04-20 | ビタミンｄ類定量用試薬およびその製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2638253B2 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7019146B1 (en) | 2002-06-27 | 2006-03-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisya | Ferrocene compound and use thereof |
| NZ582426A (en) * | 2007-08-01 | 2011-04-29 | Kumiai Chemical Industry Co | Oxopyrazine derivative and herbicide |
| US8765920B2 (en) | 2009-12-23 | 2014-07-01 | The Scripps Research Institute | Tyrosine bioconjugation through aqueous Ene-like reactions |
| JP6602884B2 (ja) * | 2014-12-08 | 2019-11-06 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | ビタミンｄの測定法 |
| JP7096078B2 (ja) * | 2018-06-12 | 2022-07-05 | 株式会社トクヤマ | セミカルバジド化合物の製造方法、およびトリアゾリジンジオン化合物の製造方法 |
| EP3886854A4 (en) | 2018-11-30 | 2022-07-06 | Nuvation Bio Inc. | PYRROLE AND PYRAZOLE COMPOUNDS AND METHODS OF USE THERE |
| CN117417405B (zh) * | 2023-12-15 | 2024-03-19 | 上海快序生物科技有限公司 | 一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法及其在蛋白质检测中的应用 |
-
1990
- 1990-04-20 JP JP2105046A patent/JP2638253B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２５（３），（１９８２），Ｐ．２７６−３１５ |
| Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３１（４），（１９８７），Ｐ．４５７−７６ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH045287A (ja) | 1992-01-09 |
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