JP2023520727A - Ｕｓｐ３０阻害剤として活性を有するｎ－シアノピロリジン - Google Patents

Abstract

本発明は、脱ユビキチン化酵素ＵＳＰ３０の阻害剤として活性を有するＮ－シアノピロリジンのクラスに関するものであり、ミトコンドリア機能不全、がん及び線維症を含む状態を含む種々の治療分野において有用である。JPEG2023520727000031.jpg94107

Description

本発明は、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３０（ＵＳＰ３０）としても知られる、脱ユビキチン化酵素ユビキチンＣ末端ヒドロラーゼ３０の阻害剤としての活性を有するＮ－シアノピロリジンのクラス、その使用、その調製方法、及び該阻害剤を含有する組成物に関する。これらの阻害剤は、ミトコンドリア機能不全、がん及び線維症を伴う疾患を含む種々の治療分野において有用である。

以下に引用又は依拠される全ての文献は、参照により本明細書に明示的に援用される。

ユビキチンは７６個のアミノ酸からなる小さなタンパク質で、細胞内のタンパク質機能の調節に重要である。ユビキチン化と脱ユビキチン化は、ユビキチンが脱ユビキチン化酵素（ＤＵＢ）によって標的タンパク質に共有結合又は切断される酵素的過程であり、そのうち約１００のＤＵＢがヒト細胞中に存在し、配列相同性に基づいてサブファミリーに分けられる。ＵＳＰファミリーの特徴は、ＤＵＢ活性に重要なＣｙｓとＨｉｓ残基を含む共通のＣｙｓとＨｉｓボックスである。ユビキチン化及び脱ユビキチン化プロセスは、細胞周期進行、アポトーシス、細胞表面受容体の修飾、ＤＮＡ転写及びＤＮＡ修復を含む多くの細胞機能の調節に関与している。このように、ユビキチン系は、炎症、ウイルス感染、代謝機能障害、中枢神経系障害、及び発がんを含む多くの疾患状態の病因に関係している。

ユビキチンはミトコンドリア動態のマスターレギュレーターである。ミトコンドリアはダイナミックオルガネラであり、その生合成、融合及び分裂事象は、ミトフシンのような多くの主要因子のユビキチン化を介した翻訳後調節によって調節される。ヒトにおいて、ＵＳＰ３０は、ミトコンドリア外膜に見出される５１７アミノ酸タンパク質である（Ｎａｋａｍｕｒａら、２００８、Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９：１９０３－１１）。これはミトコンドリアアドレスシグナルをもつ唯一の脱ユビキチン化酵素であり、多くのミトコンドリアタンパク質を脱ユビキチン化することが示されている。ＵＳＰ３０がパーキン媒介マイトファジーに拮抗し、ＵＳＰ３０活性の低下がパーキン媒介マイトファジーにおけるパーキン媒介欠損を救うことができることが実証されている（Ｂｉｎｇｏｌ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｎａｔｕｒｅ ５１０：３７０－５；Ｇｅｒｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４（１１）：９２０－９３０；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １７（２）：１６０－１６９）。ＵＳＰ３０の不活性化はまた、潜在的にＴＯＭタンパク質のユビキチン化を介して、ミトコンドリアタンパク質の取込みを増加させることができる（Ｊａｃｏｕｐｙ ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｓｃｉ Ｒｅｐ ９（１）：１１８２９）。ＵＳＰ３０のごく一部はペルオキシソームに局在しており、ミトコンドリア小胞とＥＲ小胞の融合により生成され、ＵＳＰ３０はＰｅｘ２／ペクスファジー経路に拮抗する可能性がある（Ｒｉｃｃｉｏら、２０１９、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２１８（３）：７９８－８０７）。Ｅ３ ＵｂリガーゼＭａｒｃｈ５及びデユビキチナーゼＵＳＰ３０は、トランスロカーゼと会合し、ミトコンドリアの取込みを調節し、Ｍａｒｃｈ５は、ミトコンドリアの取込みに反対し、基質の分解を指令するが、ＵＳＰ３０は、基質の取込みを促進するために基質を脱ユビキチン化する（Ｐｈｕ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ ７７，１１０７－１１２３）。

ミトコンドリアの機能障害は、ミトコンドリア内容の減少（ミトファジー又はミトコンドリア生合成）、ミトコンドリア活性の低下及び酸化的リン酸化、ならびに活性酸素種（ＲＯＳ）生成の調節と定義される。従って、非常に多数の老化過程及び病理におけるミトコンドリア機能不全の役割。

例えば、パーキンソン病は世界中で約１，０００万人が罹患し（パーキンソン病財団）、黒質のドーパミン作動性ニューロンの消失を特徴とする。ＰＤの根底にある正確な機序は不明であるが、ミトコンドリア機能不全はＰＤにおけるドーパミン作動性ニューロン感受性の重要な決定因子として次第に認識されており、家族性及び散発性疾患のほか、毒素誘発性パーキンソン症候群の特徴である。パーキンは、早期発症ＰＤに関与する多くのタンパク質の１つである。ほとんどのＰＤ症例はα－シヌクレインの欠損と関連しているが、パーキンソン病症例の１０％は特異的な遺伝的欠損と関連しており、そのうちの１つはユビキチンＥ３リガーゼパーキンにある。パーキンとプロテインキナーゼＰＴＥＮ誘導推定キナーゼ１（ＰＩＮＫ１）は協働してミトコンドリアのミトコンドリア膜タンパク質をユビキチン化し、ミトファジーをもたらす。マイトファジーの調節障害は、ＰＤの特徴として報告されている酸化ストレスの増加をもたらす。従って、ＵＳＰ３０の阻害はＰＤの治療のための潜在的戦略である可能性がある。例えば、活性を低下させるパーキン突然変異を有するＰＤ患者は、ＵＳＰ３０の阻害によって治療的に代償され得る。

ＵＳＰ３０の欠乏はミトコンドリアのミトファジークリアランスを増強し、パーキン誘発細胞死を増強することが報告されている。ＵＳＰ３０はまた、パーキンの過剰発現とは無関係にＢＡＸ／ＢＡＫ依存性アポトーシスを調節することが示されている。ＵＳＰ３０の欠乏は、パーキンの過剰発現を必要とせずに、ＡＢＴ－７３７のようなＢＨ３模倣体に対してがん細胞を感作する。従って、抗アポトーシスの役割がＵＳＰ３０及びＵＳＰ３０について実証されており、従って、ＵＳＰ３０は抗がん治療の潜在的標的である。

ユビキチン－プロテアソーム系は、プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））が多発性骨髄腫の治療薬として承認されて以来、がん治療の標的として注目を集めている。ボルテゾミブによる長期治療は、関連する毒性及び薬剤耐性により制限される。しかしながら、ＤＵＢのようなプロテアソームの上流のユビキチン－プロテアソーム経路の特定の側面を標的とする治療戦略は、より良好な忍容性が予測される（Ｂｅｄｆｏｒｄら、２０１１、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ １０：２９４６）。

腎線維症、肝線維症、肺線維症などの線維性疾患は、罹病率及び死亡率の主要原因であり、すべての組織及び臓器系に影響を及ぼしうる。線維化は、細胞外マトリックス沈着、血管／尿細管／管／気道の開存性の低下、及び最終的に臓器不全をもたらす機能の障害を特徴とする組織又は臓器に対する急性又は慢性のストレスの結果であると考えられる。多くの線維性疾患は、生活様式又は環境因子によって促進されるが、線維性疾患の一部は遺伝的引き金を介して開始されるか、又は実際に特発性（すなわち、既知の原因がない）と考えられる。特発性肺線維症（ＩＰＦ）のようなある種の線維症は、非特異的キナーゼ阻害薬（ニンテダニブ）や、作用機序がよくわかっていない薬物（ピルフェニドン）で治療できる。腎線維症や肝線維症などの臓器線維症に対する他の治療法は、臓器自体への圧力を軽減する（例えば、肝硬変に対するβ遮断薬、慢性腎疾患に対するアンジオテンシン受容体遮断薬）。グルコースや食事のコントロールなどの生活習慣因子に注意を払うことも、病気の経過や重症度に影響を及ぼす。

ミトコンドリアの機能障害は、ＡＴＰ産生の減少と共に、主要な病原性メディエーターである酸化ストレスの下流にある、多くの線維性疾患に関係している。前臨床モデルでは、マイトファジー経路の破壊（パーキン又はＰＩＮＫ１の突然変異又はノックアウトを介する）が肺線維症及び腎線維症を悪化させ、酸化ストレスの増加を示す証拠が認められる。

Ｋｕｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １８：１１４は、線維化促進性筋線維芽細胞の蓄積がＩＰＦにおける線維化リモデリングの重要なプロセスであることを開示している。最近の知見は、ＩＰＦの病因におけるリソソーム分解機構の一部であるオートファジー／マイトファジーの関与を示し、ミトファジーがミトコンドリア活性酸素種（ＲＯＳ）媒介血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）活性化の調節を介して筋線維芽細胞分化に関与していることを示していると言われている。クリタの結果は、ピルフェニドンがＰＡＲＫ２媒介有糸分裂を誘導し、また、不十分な有糸分裂の状況で肺線維症発生を阻害することを示唆し、これはＩＰＦ治療の抗線維症機序を少なくとも部分的に説明する可能性がある。

Ｗｉｌｌｉａｍｓら、２０１５、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ．１２月；１０２：２６４－２６９、ミトファジーを介して損傷したミトコンドリアを除去することによるアルコール及びアセトアミノフェン誘発性肝障害に対する保護におけるＰＩＮＫ１－パーキン媒介オートファジーの役割について考察する。ＵＳＰ８の薬理学的安定化又はＵＳＰ１５及びＵＳＰ３０の不活性化は、パーキン誘発性マイトファジーをアップレギュレートし、ひいては薬物誘発性肝障害を防ぐための潜在的な治療標的であることが示唆される。しかしながら、ＤＵＢは転写的にも翻訳後にも調節されており、これらの特異的酵素を標的とする薬物開発を困難にする可能性があり、さらに、リン酸化されたユビキチンはＤＵＢに耐性であることが示された。著者らは、ＰＩＮＫ１の安定化又はキナーゼ活性のアップレギュレーションは、ＤＵＢの阻害よりも有効な標的である可能性があると結論づけている。

Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ５，２６１９－２６４２，及びＷｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ ３０９：Ｇ３２４－Ｇ３４０，肝臓におけるミトコンドリア恒常性の調節に関与するメカニズム、及びこれらのメカニズムがアルコール誘発性肝疾患をどのように防御するかをレビューした。

Ｌｕｃｉａｎｉ ｅｔ ａｌ，２０２０，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．１１，９７０は、最終分化細胞におけるミトコンドリアネットワークの制御解除が、メチルマロン酸血症（ＭＭＡ）を含む広範な障害に寄与すると報告している。メタクリル酸メチルは、ミトコンドリアのメチルマロニル補酵素Ａムターゼ（ＭＭＵＴ）の欠損による最も一般的な遺伝性代謝障害の１つである。ＭＭＵＴ欠損は、ＰＩＮＫ１／パーキン媒介ミトファジーの異常により悪化する代謝及びミトコンドリアの変化を誘発し、上皮ストレスを引き起こし、最終的に細胞損傷を引き起こす機能不全ミトコンドリアの蓄積を引き起こす。原発性ＭＭＵＴ欠損症、ミトコンドリア疾患、ミトファジー機能不全及び上皮ストレスとの関連が示唆されており、メタクリル酸メチルの潜在的な治療的展望が示されている。

Ｋｌｕｇｅら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１８，２８ ２６５５－２６５９は、ＵＳＰ３０の選択的阻害剤がマイトファジーを促進することを報告している。

Ｎ－シアノ置換複素環の一連の誘導体は、各々が参照により本明細書に明示的に組み込まれるＰＣＴ出願ＷＯ２０１６／０４６５３０（ＵＳ１５／５１３１２５、ＵＳ１５／８９４０２５、ＵＳ１６／４４８０６６）、ＷＯ２０１６／１５６８１６（ＵＳ１５／５５８６３２、ＵＳ１６／２９７９３７、ＵＳ１６／４１９５５８、ＵＳ１６／４１９７４７、ＵＳ１６／７８８４４６）、ＷＯ２０１７／００９６５０（ＵＳ１５／７３８９００）、ＷＯ２０１７／０９３７１８（ＵＳ１５／７７６１４９）、ＷＯ２０１７／１０３６１４（ＵＳ１５／７８１６１５）、ＷＯ２０１７／１４９３１３（ＵＳ１６／０７８５１８）、ＷＯ２０１７／１０９４８８（ＵＳ１６／０６０２９９）、ＷＯ２０１７／１４１０３６（ＵＳ１６／０７０９３６）、ＷＯ２０１７／１６３０７８（ＵＳ１６／０８７５１５）、ＷＯ２０１７／１５８３８１（ＵＳ１６／０８０２２９）、ＷＯ２０１７／１５８３８８（ＵＳ１６／０８０５０６）、ＷＯ２０１８／０６５７６８（ＵＳ１６／３３６６８５）、ＷＯ２０１８／０６０７４２（ＵＳ１６／３３６２０２）、ＷＯ２０１８／０６０６８９（ＵＳ１６／３３４８３６）、ＷＯ２０１８／０６０６９１（ＵＳ１６／３３６３６３）、ＷＯ２０１８／２２０３５５（ＵＳ１６／６１５０４０）、ＷＯ２０１８／２３４７５５（ＵＳ１６／６１５７０９）、ＷＯ２０２０／２１２３５０、ＷＯ２０２０／２１２３５１及びＷＯ２０２１／０４３８７０において脱ユビキチン化酵素阻害剤として開示されている。参照により本明細書に明示的に組み込まれるＰＣＴ出願ＷＯ２０１９／１７１０４２（米国特許第１６／９７７０１９号）は、線維性疾患の治療のためのＵＳＰ３０の阻害剤としてのＮ－シアノピロリジンの使用を開示している。

Ｆａｌｇｕｅｙｒｅｔ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４４、９４－１０４、及びＰＣＴ出願ＷＯ０１／７７０７３は、カテプシンＫ及びＬの阻害剤としてのシアノピロリジンを指し、骨粗鬆症及び他の骨吸収関連疾患の治療に潜在的に有用である。ＰＣＴ出願ＷＯ２０１５／１７９１９０は、潰瘍性大腸炎及びクローン病の治療に潜在的有用性を有するナシレタノールアミン加水分解酸アミダーゼ阻害剤を指す。ＰＣＴ出願ＷＯ２０１３／０３０２１８は、ＵＳＰ７のようなユビキチン特異的プロテアーゼの阻害剤としてのキナゾリン－４－オン化合物を指し、がん、神経変性疾患、炎症性疾患、及びウイルス感染の治療に潜在的に有用である。ＰＣＴ出願ＷＯ２０１５／０１７５０２及びＷＯ２０１６／０１９２３７は、自己免疫疾患、炎症性疾患及びがんのような疾患の治療に潜在的に有用なブルトン型チロシンキナーゼの阻害剤を指す。ＰＣＴ出願ＷＯ２００９／０２６１９７、ＷＯ２００９／１２９３６５、ＷＯ２００９／１２９３７０、及びＷＯ２００９／１２９３７１は、ＣＯＰＤの治療に有用である可能性のあるカテプシンＣの阻害剤としてのシアノピロリジンを参照している。米国特許出願第２００８／０３００２６８号は、チロシンキナーゼ受容体ＰＤＧＦＲの阻害剤としてのポリ芳香族化合物を指す。ＰＣＴ出願ＷＯ２０１９／２２２４６８、ＷＯ２０１９／０７１０７３、ＷＯ２０２０／０３６９４０及びＷＯ２０２０／０７２９６４、Ｒｕｓｉｌｏｗｉｃｚ－Ｊｏｎｅｓら、２０２０、バイオＲｘｉｖ ２０２０．０４．１６．０４４４２０６（２０２０年４月２０日）、及びＴｓｅｆｏｕら、バイオＲｘｉｖ ２０２１．０２．４２９３４４（２０２１年２月２日）は、ＵＳＰ３０阻害剤としてのシアナミド含有化合物を指す。

ＰＣＴ出願ＷＯ２０１５／１８３９８７は、がん、線維症、自己免疫疾患又は状態、炎症性疾患又は状態、神経変性疾患又は状態、又は感染を治療する方法において、デユビキチナーゼ阻害剤及びヒト血清アルブミンを含む医薬組成物を指す。ＵＣＨＬ５／ＵＣＨ３７、ＵＳＰ４、ＵＳＰ９Ｘ、ＵＳＰ１１及びＵＳＰ１５を含むデユビキチナーゼは、ＴＧＦ－βシグナル伝達経路の調節に関与していると言われており、その破壊は神経変性及び線維性疾患、自己免疫機能障害及びがんを引き起こす。

ＰＣＴ出願ＷＯ２００６／０６７１６５は、インドリノンキナーゼ阻害剤を用いて線維性疾患を治療する方法を指す。ＰＣＴ出願ＷＯ ２００７／１１９２１４は、エンドセリン受容体アンタゴニストを用いて初期の肺線維症を治療する方法を指す。ＰＣＴ出願ＷＯ２０１２／１７０２９０は、ＴＨＣ酸を使用して線維性疾患を治療する方法を指す。ＰＣＴ出願ＷＯ２０１８／２１３１５０は、ミトコンドリア欠損を含む状態の処置において潜在的有用性を有するスルホンアミドＵＳＰ３０阻害剤を指す。Ｌａｒｓｏｎ－Ｃａｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４４，５８２－５９６は、マクロファージＡｋｔ１キナーゼ媒介有糸分裂、アポトーシス抵抗性及び肺線維症に関する。Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １，７１－７９は、腎病態生理学におけるマイトファジーの潜在的役割をレビューしている。

ミトコンドリア機能不全、がん及び線維症、ならびにそれらに関連する種々の症状及び状態を含む状態の治療又は予防のための安全、代替、及び／又は改良された方法及び組成物に対する必要性が存在する。いかなる特定の理論又はメカニズムにも拘束されることを望まないが、本発明の化合物は、酵素ＵＳＰ３０を阻害するように作用し、次いで、パーキン誘導マイトファジーをアップレギュレートすると考えられる。

急性腎障害（ＡＫＩ）は、腎疾患改善グローバルアウトカム（ＫＤＩＧＯ）ガイドラインに記載されているように、血清クレアチニン（ＳＣｒ）の増加と尿量の減少に基づいて分類された損傷の重症度を伴う７日以内に起こる腎機能の突然の低下と定義される。ＡＫＩは年間約１，３３０万人に発生し、その８５％は開発途上世界に住んでおり、毎年約１７０万人の死亡に寄与していると考えられている（Ｍｅｈｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｌａｎｃｅｔ ３８５（９９８７）：２６１６－２６４３）。ＡＫＩは永続的な腎障害（すなわち、慢性腎疾患；ＣＫＤ）を引き起こす可能性が高く、非腎臓器の損傷を引き起こす可能性もある。ＡＫＩは、特に発症ＣＫＤ、進行性ＣＫＤ、末期腎疾患及び心血管イベントを発症する患者の絶対数を考慮する場合、重要な公衆衛生上の懸念である。ＡＫＩはＣＯＶＩＤ－１９により入院した患者に多く、院内死亡率と強く関連しており、ミトコンドリア損傷及び機能障害は潜在的な病態生理学的機序及び治療標的として報告されている（Ｋｅｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ （２０２０）３５：１６５２－１６６２）。

ＡＫＩ及びＣＫＤは、同一の疾患スペクトル上の連続体とみなされる（Ｃｈａｗｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｐｈｒｏｌ １３（４）：２４１－２５７）。冠動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）を受ける患者は腎損傷のリスクが高い。ＡＫＩの治療及び／又は予防のための医薬品の開発には、明らかに満たされていない医学的ニーズがある。

腎臓は高い代謝要求部位であり、ｉｎ ｖｉｖｏで高い有糸分裂率が示された（ＭｃＷｉｌｌｉａｍｓら、２０１８、Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ ２７（２）：４３９－４４９ ｅ４３５）。腎近位尿細管上皮細胞（ＲＰＴＥＣ）は溶質／イオン交換に顕著なＡＴＰ要求性を有する細胞型であり、ミトコンドリアに富み、腎臓における急性腎障害（ＡＫＩ）の主要エフェクター細胞である。ミトコンドリア機能不全は、前臨床ＡＫＩ及びＣＫＤモデルからの複数の証拠系を通して、また患者生検において異常なミトコンドリア表現型を示すデータを通して（Ｅｍｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｐｈｒｏｌ １２（５）：２６７－２８０；Ｅｉｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｈａｎｄｂ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２４０：２２９－２５０）、ＡＫＩ／ＣＫＤ機序に関係している。さらに、原発性ミトコンドリア疾患は、しばしば、ＭＥＬＡＳ／ＭＩＤＤ患者における巣状分節性糸球体硬化症（Ｋａｗａｋａｍｉら、２０１５、Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ ２６（５）：１０４０－１０５２）、及びコエンザイムＱ欠損症患者における原発性尿細管病変などの腎症状で発現する。ｍｔＤＮＡの突然変異は母性遺伝性尿細管間質性疾患を引き起こす可能性がある（Ｃｏｎｎｏｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７，ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔ １３（３）：ｅ１００６６２０）。

腎損傷におけるミトコンドリア品質管理に関しては（Ｔａｎｇら、２０１８、Ａｕｔｏｐｈａｇｙ １４（５）：８８０～８９７）、ＰＩＮＫ１ ＫＯ及びＰＡＲＫ２ ＫＯマウスのいずれにおいても、虚血性ＡＫＩ後に腎損傷が悪化することを示し、ＰＩＮＫ１／ＰＡＲＫＩＮ媒介性マイトファジーが腎臓におけるＩＲＩ後に保護的役割を果たすことを示唆した。さらに、パーキン／ＰＩＮＫ１マイトファジーはシスプラチン誘発性腎障害を防ぐ（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ ９（１１）：１１１３）。ミトファジーの研究に利用できるＣＫＤのモデルは限られており、線維症におけるミトコンドリアの品質管理の裏付けとなる証拠は、ＣＯＰＤ及びＩＰＦなどの線維性肺疾患に関する研究から得られている。パーキンノックアウト動物は、ブレオマイシンに応答して肺線維症の増悪を示す（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、２０１６、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９７：５０４－５１６）。同様に、パーキンノックアウト（ＫＯ）動物由来の気道上皮細胞は、タバコ煙に対する線維化及び老化反応の増悪を示す（Ａｒａｙａ ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ａｕｔｏｐｈａｇｙ １５（３）：５１０－５２６）。

前臨床モデルは、ヒトの状態と一致する線維症病理（例えば、コラーゲン沈着）をモデル化する能力を通して、潜在的な新規治療法を研究するために利用可能である。前臨床モデルは、毒素媒介性（例えば、肺及び皮膚線維症に対するブレオマイシン）、外科的（例えば、虚血／再潅流障害モデル及び急性尿細管間質性線維症に対する一側性尿管閉塞モデル）、及び遺伝的（例えば、糖尿病性腎症に対する糖尿病性（ｄｂ／ｄｂ）マウスであり得る。例えば、適応のあるＩＰＦ治療（ニンテダニブ及びピルフェニドン）に対して以前に与えられた両例は、ブレオマイシン肺線維症モデルにおいて有効性を示す。

従って、ＵＳＰ３０の阻害が示される条件の治療又は予防のためにＵＳＰ３０の阻害剤である化合物が必要である。特に、標的疾患に対する効力を最大化するために、適切な及び／又は改良された特性を有するＵＳＰ３０阻害剤に対する必要性が存在する。

本発明は、式（Ｉ－Ａ）及び式（Ｉ－Ｂ）から選択される式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩に関する：

Ｒ^１は、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_４）フルオロアルキル、ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_２（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３から選択され；
Ｒ^２は水素とメチルから選択され；
Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は、それぞれ独立して水素、重水素及びフッ素から選択される。

本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の使用、特にミトコンドリア機能不全、がん及び線維症を伴う状態の治療、ならびにそれらの調製方法及び該化合物を含有する医薬組成物に関する。

本発明は、標的疾患に対する効力を最大化するために、適切な及び／又は改良された特性を有するＵＳＰ３０阻害剤に関する。そのような特性には、例えば、ＰＫ（薬物動態）プロファイルを含む効力、選択性、物理化学的特性、ＡＤＭＥ（吸収、分布、代謝及び排泄）特性、及び安全性プロファイルが含まれる。

一般に、患者に投与されるべき有効／有効用量を低下させるために、関連するアッセイにおいて標的酵素に対する薬物分子の効力を最大化することが望ましい。本発明の化合物は、本明細書に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ生化学的蛍光偏光（ＦＰ）アッセイを用いてＵＳＰ３０親和性について試験することができる。

ＵＳＰ３０は、細胞内に存在するエネルギー産生細胞小器官であるミトコンドリアの外膜に局在する膜貫通タンパク質である。従って、インビトロで細胞活性を実証することができることは有利である。なぜなら、これは、その生理学的設定において標的に係合するより大きな能力、すなわち、ＵＳＰ３０阻害剤化合物が細胞を透過することができる多くの成分の１つであるからである。本明細書に記載されるＵＳＰ３０細胞ウエスタンブロット（ＷＢ）アッセイは、ＵＳＰ３０活性をモニターするための不可逆活性プローブを用いて、細胞中のＵＳＰ３０に対する化合物の活性を試験することを目的とする。細胞ウエスタンブロットアッセイと同様に、標的結合評価（ｅｘ ｖｉｖｏ）は、本明細書に記載されるアッセイを用いて、化合物投与動物由来の脳又は腎臓組織試料のいずれかで実施することができる。

標的結合の知識を下流の薬力学に拡張するために、ＴＯＭ２０（ミトコンドリア外膜タンパク質）ユビキチン化の評価を行うことができる。

一般に、薬物はその望ましい標的酵素に対して可能な限り選択的であることが重要であり、さらなる活性が副作用の可能性を生じさせる。しかし、多くのＤＵＢの正確な生理学的役割はまだ完全には決定されていない。しかし、これらのＤＵＢがどのような役割を果たしているのか、果たしていないのかにかかわらず、未知の生理学的機能を有する関連するメカニズムの標的に対して、どのような薬物も選択性を有することを保証することは、医薬化学の正しい前提である。本発明の化合物をスクリーニングすることができるＤＵＢ酵素の代表例は、ＵＣＨＬ１、ＵＣＨＬ３、ＵＣＨＬ５、ＹＯＤ１、ＳＥＮＰ２、ＳＥＮＰ６、ＴＲＡＢＩＤ、ＢＡＰ１、Ｃｅｚａｎｎｅ、ＭＩＮＤＹ２／ＦＡＭ６３Ｂ、ＯＴＵ１、ＯＴＵＤ３、ＯＴＵＤ５、ＯＴＵＤ６Ａ、ＯＴＵＤ６Ｂ、ＯＴＵＢ１／ＵＢＣＨ５Ｂ、ＯＴＵＢ２、ＣＹＬＤ、ＶＣＰＩＰ、ＡＭＳＨ－ＬＰ、ＪＯＳＤ１、ＪＯＳＤ２、ＵＳＰ１／ＵＡＦ１、ＵＳＰ２、ＵＳＰ４、ＵＳＰ５、ＵＳＰ６、ＵＳＰ７、ＵＳＰ８、ＵＳＰ９ｘ、ＵＳＰ１０、ＵＳＰ１１、ＵＳＰ１２／ＵＡＦ１、ＵＳＰ１３、ＵＳＰ１４、ＵＳＰ１５、ＵＳＰ１６、ＵＳＰ１９、ＵＳＰ２０、ＵＳＰ２１、ＵＳＰ２２、ＵＳＰ２４、ＵＳＰ２５、ＵＳＰ２８、ＵＳＰ３２、ＵＳＰ３４、ＵＳＰ３５、ＵＳＰ３６、ＵＳＰ４５、ＵＳＰ４６／ＵＡＦ１、ＵＳＰ４７及びＵＳＰ４８である。好ましくは、本発明の化合物は、これらのＤＵＢ酵素のうちの１つ以上に対してＵＳＰ３０に対して良好な選択性を有する。

他のＤＵＢ酵素に対する選択性とは別に、薬物が他の標的に対して低い親和性を有することが重要であり、標的のパネルに対して薬理学的プロファイリングを実施して、潜在的なオフターゲット効果の可能性を評価し、最小限にすることができる。本発明の化合物をスクリーニングすることができる標的の例は、工業標準のＥｕｒｏｆｉｎｓ－Ｃｅｒｅｐ ＳａｆｅｔｙＳｃｒｅｅｎ４４パネルのものであり、これは、ＧＰＣＲ受容体、トランスポーター、イオンチャネル、核受容体、及びキナーゼ及び非キナーゼ酵素の代表的な選択として４４の標的を含む。好ましくは、本発明の化合物は、このスクリーニングパネルの標的に対して有意でない親和性を有する。本発明の化合物をスクリーニングすることができる標的のさらなる例は、キナーゼ酵素の代表的な選択として３９の標的を含むＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＳｅｌｅｃｔＳｃｒｅｅｎキナーゼプロファイリングパネルのキナーゼである。好ましくは、本発明の化合物は、このスクリーニングパネルの標的に対して有意でない親和性を有する。さらに、本発明の化合物をスクリーニングすることができる特定の酵素クラスの例は、カテプシン（例えば、カテプシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｌ２、Ｓ、Ｖ及びＺ）である。好ましくは、本発明の化合物は、１以上のこれらの酵素に対してＵＳＰ３０に対して良好な選択性を有する。

また、経口投与に適するような好ましい薬物動態学的特性を有する化合物も必要である。経口投与された薬物は、良好な生物学的利用能、すなわち、消化管を容易に通過し、消化管から全身循環に移行する際に広範な代謝を受けない能力を有するべきである。薬物がいったん全身循環に入ると、代謝速度は体内での薬物の滞留時間を決定するのにも重要である。

したがって、薬物分子が消化管を容易に通過し、体内でゆっくりとしか代謝されないという特性を有することは明らかに好ましい。Ｃａｃｏ－２アッセイは、所定の分子が消化管を通過する能力を予測するための広く受け入れられているモデルである。薬物分子の代謝の大部分は一般に肝臓で起こり、全細胞肝細胞（動物又はヒト）を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験は、肝臓における代謝に対する所定の分子の感受性を測定するための広く受け入れられている方法である。このようなアッセイは、肝細胞で計算されたクリアランス値からｉｎ ｖｉｖｏクリアランスを予測することを目的とする。

良好なＣａｃｏ－２フラックスを有し、肝細胞に対して安定である化合物は、良好な経口バイオアベイラビリティ（消化管からの良好な吸収及び肝臓を通過する際の化合物の最小限の抽出）及び薬物が有効であるのに十分な体内滞留時間を有すると予測される。

化合物の溶解度は、予想される薬理学的応答のための全身循環における薬物の所望の濃度を達成する上で重要な因子である。低水溶性は、新規化学物質の製剤開発で遭遇する問題であり、吸収部位に薬物が溶液の形で存在しなければならない。化合物の速度論的溶解度は、比濁溶解度アッセイを用いて測定することができ、そのデータは、用量依存性ヒト腸管吸収を予測するためにＣａｃｏ－２透過性データと組み合わせて用いることもできる。

化合物の曝露プロファイルを示す標準的なアッセイを用いて測定することができる他のパラメータとしては、例えば、血漿安定性（半減期測定）、血中ＡＵＣ、Ｃ_ｍａｘ、Ｃ_ｍｉｎ及びＴＯＣ値が挙げられる。

アルツハイマー病、パーキンソン病、及び本明細書に記載される他の疾患を含む中枢神経疾患の治療には、血液脳関門の十分な浸透を必要とする脳を標的とする薬物分子が必要である。従って、有効な血液脳浸透特性を有し、脳内に適切な滞留時間を提供するＵＳＰ３０阻害剤が有効である必要性がある。化合物が血液脳関門を通過できる確率は、ＭＤＲ１－ＭＤＣＫ細胞単層（ＭＤＲ－１でトランスフェクトされたＭａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎臓細胞は、ヒト排出トランスポーターＰ－糖タンパク質の過剰発現をもたらす）を利用するインビトロフラックスアッセイによって測定することができる。さらに、曝露は、ｉｎ ｖｉｖｏ動物モデルを用いて、脳及び血漿中で直接測定することもできる。

また、好ましい安全性プロファイルを有する化合物が必要であり、これは種々の標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ方法によって測定することができる。細胞毒性カウンタースクリーニングを用いて、特定の細胞系（例えば、細胞）における抗増殖／細胞毒性効果をアッセイすることができる。ミトコンドリア活性に応答したレゾフリン（アラマルブルー（商標））に対するレザスリン（ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標））の蛍光検出によるＨＣＴ１１６。

毒性及び安全性試験はまた、有害作用の潜在的標的臓器を同定し、臨床試験における初期開始用量を設定するための治療指数を定義するために実施されてもよい。規制要件は、一般に、少なくとも２種類の実験動物種、１種類のげっ歯類（ラット又はマウス）及び１種類の非げっ歯類（ウサギ、イヌ、ヒト以外の霊長類、又は他の適切な動物種）で試験を実施することを要求している。

細菌復帰突然変異試験（エームス試験）は、本発明の化合物の突然変異誘発特性を評価するために使用することができ、一般に、アミノ酸ヒスチジンの生合成の突然変異体であるネズミチフス菌株を用いることによって評価することができる。

小核試験は、小核の存在を評価することにより、化合物が遺伝毒性を有するかどうかを判定するために用いられる。小核には、ＤＮＡ切断（染色体異常誘発物質）によって生じた染色体断片や、有糸分裂装置の破壊によって生じた染色体全体（異数性誘発物質）が含まれる。

ｈＥＲＧ予測アッセイは、カリウムチャネルへの被験化合物の可能な結合及び心エコー図上の潜在的ＱＴ延長に関する貴重な情報を提供する。ｈＥＲＧ電流を阻害するとＱＴ間隔が延長し、致死的となる可能性のある心室頻拍性不整脈（Ｔｏｒｓａｄｅｓ ｄｅ Ｐｏｉｎｔｅｓ）が生じる。典型的には、アッセイデータは、自動パッチクランプアッセイプラットフォームから生成され得る。

したがって、本発明は、標的疾患に対する効力を最大化するために、適切な及び／又は改良された特性を有するＵＳＰ３０阻害剤に関する。そのような特性には、例えば、ＰＫ（薬物動態）プロファイルを含む効力、選択性、物理化学的特性、ＡＤＭＥ（吸収、分布、代謝及び排泄）特性、及び安全性プロファイルが含まれる。

本発明の化合物は、有意でありかつ予想外である上記の同定された特性の１つ以上を示すことが見出された。例えば、本発明の実施例１～３は、本明細書に記載の生化学的アッセイで測定した場合、ＵＳＰ３０に対して非常に強力である。本発明のこれらの実施例（１～３）の全ては、他のＤＵＢ及びカテプシンよりもＵＳＰ３０に対して有意に選択的である。

本発明の化合物の顕著かつ予想外の特性により、それらはＵＳＰ３０活性に関連する疾患の治療及び／又は予防における使用に特に適している。

第１の態様によれば、本発明は、式（Ｉ－Ａ）及び式（Ｉ－Ｂ）から選択される式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩を提供する：

Ｒ^１は、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_４）フルオロアルキル、ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_２（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３から選択され；
Ｒ^２は水素とメチルから選択され；
Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は、それぞれ独立して水素、重水素及びフッ素から選択される。

式（Ｉ）の化合物は、絶対立体化学を示す単一の立体異性体として存在する。

アルキル基は直鎖又は分枝鎖であり、１～４個の炭素原子を含む。アルキルの例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、及びｓｅｃ－ブチルが挙げられる。

フルオロアルキル基は、１つ以上のフッ素置換基を含み得る。例は、フルオロメチル、ジフルオロメチル及びトリフルオロメチルである。

別段の指示がない限り、「置換された」という用語は、１つ以上の定義された基によって置換されたことを意味する。複数の選択肢からグループを選択することができる場合、選択されたグループは同一であっても異なっていてもよい。用語「独立して」は、複数の置換基が１つ以上の可能な置換基から選択される場合、それらの置換基は同一であっても異なっていてもよいことを意味する。

本発明で使用するための式（Ｉ）の化合物の好ましい実施形態を以下に定義する。

好ましくは、Ｒ^１は、メチル、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｏ（ＣＨＣＨ_２Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３から選択される。
より好ましくは、Ｒ^１はメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される。
好ましい一実施形態では、Ｒ^１はＣＨ_２ＯＣＨ_３である。
別の好ましい実施形態では、Ｒ^１はメチルである。

好ましくは、Ｒ^２は水素である。
好ましくは、Ｒ^３は水素である。
好ましくは、Ｒ^４は水素である。

好ましくは、Ｒ^５は、水素及びフッ素から選択される。
最も好ましくは、Ｒ^５は水素である。

好ましくは、Ｒ^６は水素である。

本発明の１つの好ましい態様によれば、
Ｒ^１はメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される。
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６はそれぞれ水素である。
Ｒ^５は水素とフッ素から選択される。

本発明の別の好ましい態様によれば、
Ｒ^１はメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される；
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６はそれぞれ水素である。

本発明の第１の好ましい態様によれば、式（Ｉ－Ａ）を有する式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物又は互変異性体の薬学的に許容される塩である：

Ｒ^１は、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_４）フルオロアルキル、ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_２（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３から選択され；
Ｒ^２は水素とメチルから選択され、
Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は、それぞれ独立して水素、重水素及びフッ素から選択される。

式（Ｉ－Ａ）の化合物の好ましい実施形態を以下に定義する。

好ましくは、Ｒ^１は、メチル、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｏ（ＣＨＣＨ_２Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３から選択される。
より好ましくは、Ｒ^１はメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される。
好ましい一実施形態では、Ｒ^１はＣＨ_２ＯＣＨ_３である。
別の好ましい実施形態では、Ｒ^１はメチルである。

好ましくは、Ｒ^２は水素である。
好ましくは、Ｒ^３は水素である。
好ましくは、Ｒ^４は水素である。

好ましくは、Ｒ^５は、水素及びフッ素から選択される。
最も好ましくは、Ｒ^５は水素である。

好ましくは、Ｒ^６は水素である。

本発明の１つの好ましい態様によれば、
Ｒ^１はメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される。
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６はそれぞれ水素である。
Ｒ^５は水素とフッ素から選択される。

本発明の別の好ましい態様によれば、
Ｒ^１はメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される；
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６はそれぞれ水素である。

本発明で使用するための好ましい式（Ｉ－Ａ）の化合物は、以下のものから選択される。
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド；
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド；
その互変異性体、又は前記化合物又は互変異性体の薬学的に許容される塩。

本発明の第２の好ましい態様によれば、式（Ｉ－Ｂ）を有する式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物又は互変異性体の薬学的に許容される塩である：

Ｒ^１は、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_４）フルオロアルキル、ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_２（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３から選択され；
Ｒ^２は水素とメチルから選択され、
Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は、それぞれ独立して水素、重水素及びフッ素から選択される。

式（Ｉ－Ｂ）の化合物の好ましい実施形態を以下に定義する。

好ましくは、Ｒ^１は、メチル、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｏ（ＣＨＣＨ_２Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３から選択される。
より好ましくは、Ｒ^１はメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される。
好ましい一実施形態では、Ｒ^１はＣＨ_２ＯＣＨ_３である。
別の好ましい実施形態では、Ｒ^１はメチルである。

好ましくは、Ｒ^２は水素である。
好ましくは、Ｒ^３は水素である。
好ましくは、Ｒ^４は水素である。

好ましくは、Ｒ^５は、水素及びフッ素から選択される。
最も好ましくは、Ｒ^５は水素である。

好ましくは、Ｒ^６は水素である。

本発明の１つの好ましい態様によれば、
Ｒ^１はメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される。
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６はそれぞれ水素である。
Ｒ^５は水素とフッ素から選択される。

本発明の別の好ましい態様によれば、
Ｒ^１はメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される；
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６はそれぞれ水素である。

本発明で使用するための好ましい式（Ｉ－Ｂ）の化合物は、以下のものから選択される。
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド；
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－１－シアノ－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド；
その互変異性体、又は前記化合物又は互変異性体の薬学的に許容される塩。

式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩は、その酸付加及び塩基塩（ジ塩を含む）を含む。

適切な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。例としては、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプ酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヒベン酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、リン酸水素塩、イセチオン酸塩、Ｄ及びＬ－乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、２－ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、パルメート、リン酸塩、サッカリン酸塩、ステアリン酸塩、硫酸コハク酸塩、Ｄ－及びＬ－酒石酸塩、及びトシル酸塩が挙げられる。

適切な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基から形成される。例としては、アルミニウム、アンモニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオールアミン、グリシン、リジン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン及び亜鉛塩が挙げられる。

適切な塩に関する概説については、Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｗｅｒｍｕｔｈ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ（２００２）を参照されたい。

式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩は、式（Ｉ）の化合物の溶液と所望の酸又は塩基とを適宜混合することによって容易に調製することができる。塩は、溶液から沈殿し、濾過によって回収され得るか、又は溶媒の蒸発によって回収され得る。

本発明による医薬上許容される溶媒和物は、水和物及び溶媒和物を含み、ここで結晶化の溶媒は、例えば、同位体的に置換され得る。例えば、Ｄ_２Ｏ、アセトン－ｄ_６、ＤＭＳＯｄ_６である。

また、本発明の範囲内では、クラスレート、薬物－宿主包接複合体であって、上述の溶媒和物とは対照的に、薬物及び宿主は非化学量論量で存在する。このような複合体の概説については、Ｈａｌｅｂｌｉａｎ（１９７５年８月）のＪ．Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，６４（８），１２６９－１２８８を参照されたい。

以下、式（Ｉ）の化合物への全ての言及は、その塩、及び式（Ｉ）の化合物の溶媒和物及び包接化合物及びそれらの塩への言及を含む。

本発明は、本明細書で定義した式（Ｉ）の化合物の全ての多型を含む。

また、本発明の範囲内には、式（Ｉ）の化合物のいわゆる「プロドラッグ」がある。したがって、薬理活性をほとんど又は全く持たない式（Ｉ）の化合物のある種の誘導体は、体内又は体上に投与されたときに代謝されると、所望の活性を有する式（Ｉ）の化合物を生じることができる。このような誘導体は「プロドラッグ」と呼ばれる。

本発明によるプロドラッグは、例えば、Ｈ Ｂｕｎｄｇａａｒｄ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５）による「プロドラッグの設計」に記載されているように、式（Ｉ）の化合物中に存在する適切な官能基を当業者に公知の特定の部分で「プロ部分」と置き換えることによって製造することができる。

最後に、式（Ｉ）のある種の化合物は、それ自体、式（Ｉ）の他の化合物のプロドラッグとして作用し得る。

窒素原子を含む式（Ｉ）の化合物のある種の誘導体もまた対応するＮ－オキシドを形成することができ、そのような化合物もまた本発明の範囲内である。

本発明の範囲内には、式（Ｉ）の化合物の全ての互変異性体形態が含まれる。

個々のエナンチオマーの調製／単離のための従来の技術は、例えば、キラル高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用する、適切な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成、又はラセミ体（又は塩又は誘導体のラセミ体）の分解能を含む。あるいは、ラセミ体（又はラセミ体前駆体）を、適切な光学活性化合物、例えばアルコール、又は式（Ｉ）の化合物が酸性又は塩基性部分、１－フェニルエチルアミン又は酒石酸のような塩基又は酸と反応させてもよい。得られたジアステレオマー混合物は、クロマトグラフィー及び／又は分別結晶化によって分離することができ、一方又は両方のジアステレオ異性体は、当業者に周知の手段によって対応する純粋なエナンチオマーに変換することができる。本発明のキラル化合物（及びそのキラル前駆体）は、クロマトグラフィー、典型的にはＨＰＬＣを用いて、０～５０容量％のイソプロパノール、典型的には２～２０％、及び０～５容量％のアルキルアミン、典型的には０．１％のジエチルアミンを含有する炭化水素、典型的にはヘプタン又はヘキサンからなる移動相を有する不斉樹脂上で、エナンチオマー的に富化された形態で得ることができる。溶出液を濃縮すると濃縮された混合物が得られる。本発明は、ラセミ体及びそのラセミ混合物を含む式（Ｉ）の化合物のすべての結晶形態を含む。立体異性コングロマリットは、当業者に公知の従来の技術、例えば、Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ及びＳ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ（Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４）による「有機化合物の立体化学」を参照されたい。

式（Ｉ）の化合物は、Ｒ^１及びアミドによって置換されたピロリジン環の炭素原子に２つのキラル中心を含み、前記立体中心は、（Ｒ）又は（Ｓ）配置のいずれかで存在し得る。ＩＵＰＡＣ命名法による立体異性体の絶対配置（Ｒ）及び（Ｓ）の指定は、置換基の性質及びシークエンス・ルール法の適用に依存する。したがって、式（Ｉ）の化合物は４つの立体異性体の形で存在することができる。

本発明の式（Ｉ）の化合物は、単一の立体異性体として存在する。アミド置換基のピロリジン炭素原子は（Ｒ）－立体中心として存在するが、Ｒ^１基のピロリジン炭素原子の名称は置換基の性質に依存する。式（Ｉ）の化合物は、単一の立体異性体として単離され、立体異性体過剰率が少なくとも６０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、例えば９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％で存在し得る。

Ｒ^１置換基自体内に、式（Ｉ）の化合物中にさらなるキラル中心が存在し得る。本発明の範囲内には、式（Ｉ）の化合物のすべてのそのような立体異性体形態が含まれる。

本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の全ての薬学的に許容される同位体変種を含む。同位体変化とは、少なくとも１つの原子が同じ原子番号を有する原子で置換されるが、通常天然に見られる原子質量とは異なる原子質量と定義される。

本発明の化合物に含めるのに適した同位体の例には、^２Ｈ及び^３Ｈなどの水素、^１３Ｃ及び^１４Ｃなどの炭素、^１５Ｎなどの窒素、^１７Ｏ及び^１８Ｏなどの酸素、^３２Ｐなどのリン、^３５Ｓなどの硫黄、^１８Ｆなどのフッ素、及び^３６ＣＩなどの塩素の同位体が含まれる。

本発明の化合物を重水素のような同位体で置換することは、より大きな代謝安定性、例えば、インビボ半減期の増加又は投与量の必要性の減少から生じるある種の治療上の利点を与えることができ、したがって、ある状況において好ましいことがある。

式（Ｉ）の化合物の特定の同位体変異、例えば放射性同位体を取り込んだものは、薬物及び／又は基質組織分布研究において有用である。放射性同位体トリチウム及び^１４Ｃは、それらの取り込みの容易さ及び検出の容易さの観点から、このために特に有益である。

式（Ｉ）の化合物の同位体変形は、一般に、当業者に公知の慣用の技術によって、又は付随する実施例及び調製物に記載されたものと類似の方法によって、適切な試薬の適切な同位体変形を用いて調製することができる。式（Ｉ）の化合物は、脱ユビキチン化酵素ＵＳＰ３０の阻害剤である。

さらなる態様によれば、本発明は、本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は薬剤として使用するための前記化合物又は互変異性体の薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる態様によれば、本発明は、ＵＳＰ３０の阻害が公知であるか、又は有益な効果をもたらすことが示され得る障害又は状態の治療又は予防方法を提供し、それは、本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物、それらの互変異性体、又は該化合物又は互変異性体の薬学的に許容される塩の治療有効量を前記哺乳動物に投与することを含む。本発明の全ての態様の１つの好ましい態様において、障害又は状態は、中枢神経系の指標である。本発明の全ての態様のさらなる好ましい態様において、障害又は状態は、末梢性指標である。

さらなる態様によれば、本発明は、ＵＳＰ３０の阻害が知られている、又は示され得る障害又は状態の治療又は予防のための薬剤の製造における、本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物又は互変異性体の薬学的に許容される塩の使用を提供する。薬剤の製造には、特に、式（Ｉ）の化合物若しくはその塩の化学合成、又は化合物若しくは塩を含む組成物若しくは製剤の調製、又は化合物を含むいずれかの薬剤の包装が含まれ得る。本発明の全ての態様の１つの好ましい態様において、障害又は状態は、中枢神経系の指標である。本発明の全ての態様のさらなる好ましい態様において、障害又は状態は、末梢性指標である。

ＵＳＰ３０活性から有益な障害又は状態は、ミトコンドリア機能不全、がん及び線維症を伴う状態から選択される。

本発明の全ての態様の１つの好ましい態様において、ＵＳＰ３０活性から利益を受ける障害又は状態は、ミトコンドリア機能不全を含む状態である。ミトコンドリア機能障害を伴う状態は、中枢神経系の徴候又は末梢の徴候であることがある。

ミトコンドリアの機能不全は、赤血球を除く全身の細胞に存在する特殊化したコンパートメントであるミトコンドリアの欠損に起因する。ミトコンドリアが機能しなくなると、細胞内で生成されるエネルギーは少なくなり、細胞傷害や細胞死に至ることさえある。この過程が全身にわたって繰り返された場合、この過程が起こった被験者の生涯は著しく損なわれる。ミトコンドリアの病気は、脳、心臓、肝臓、骨格筋、腎臓、内分泌系や呼吸器系など、非常にエネルギーを必要とする器官に最もよくみられる。

ミトコンドリア機能不全を含む状態は、ミトファジー欠損を含む状態、ミトコンドリアＤＮＡの突然変異を含む状態、ミトコンドリア酸化ストレスを含む状態、ミトコンドリア膜電位の欠損を含む状態、ミトコンドリア生合成を含む状態、ミトコンドリアの形状又は形態の欠損を含む状態、及びリソソーム貯蔵欠損を含む状態から選択され得る。

特に、ミトコンドリア機能障害を伴う状態は、神経変性疾患、多発性硬化症（ＭＳ）；ミトコンドリア脳症、乳酸アシドーシス及び脳卒中様エピソード（ＭＥＬＡＳ）症候群；物質遺伝性糖尿病及び難聴（ＭＩＤＤ）；レーバー遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）；がん（例えば、乳房、卵巣、前立腺、肺、腎臓、胃、結腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳、メラノーマ、骨又は他の組織臓器のがん、血液細胞のがん、例えば、リンパ腫及び白血病、多発性骨髄腫、転移性がん腫、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、鼻咽頭がん、結腸直腸がん、及び非小細胞肺がん）；神経障害、運動失調症、網膜色素変性症、母性遺伝性Ｌｅｉｇｈ症候群（ＮＡＲＰ－ＭＩＬＳ）；ダノン病；糖尿病；糖尿病性腎症；代謝障害；心不全；心筋梗塞につながる虚血性心疾患；統合失調症などの精神疾患；多発性スルファターゼ欠損症（ＭＳＤ）；ムコリピドーシスＩＩ（ＭＬ ＩＩ）；ムコリピドーシスＩＩＩ（ＭＬ ＩＩＩ）；ムコリピドーシスＩＶ（ＭＬ ＩＶ）；ＧＭ１－ガングリオシドーシス（ＧＭ１）；神経セロイド－リポフスチン症（ＮＣＬ１）；アルパー病；バース症候群；ベータ酸化欠陥；カルニチン－アシル－カルニチン欠乏；カルニチン欠乏；クレアチン欠乏症候群；コエンザイムＱ１０欠乏；複雑なＩ欠乏；複雑なＩＩ欠損；複雑なＩＩＩ欠損；複雑なＩＶ欠乏；複雑なＶ欠乏；ＣＯＸ欠乏；慢性進行性外眼筋麻痺症候群（ＣＰＥＯ）；ＣＰＴ Ｉ欠乏症；ＣＰＴ ＩＩ欠乏症；グルタル酸尿症ＩＩ型；カーンズ・セイヤー症候群；乳酸アシドーシス；長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠乏症（ＬＣＨＡＤ）；Ｌｅｉｇｈ病又は症候群；Ｌｅｉｇｈ症候群フランス系カナダ人（ＬＳＦＣ）バリアント；致命的な乳児心筋症（ＬＩＣ）；ルフト病；中鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠乏症（ＭＣＡＤ）；ミオクローヌスてんかん及び赤色ぼろ線維（ＭＥＲＲＦ）症候群；ミトコンドリア細胞障害；ミトコンドリア劣性運動失調症候群；ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群；筋神経胃腸障害及び脳症；ピアソン症候群；ピルビン酸デヒドロゲナーゼ欠損症；ピルビン酸カルボキシラーゼ欠乏；ＰＯＬＧ変異；中鎖／短鎖３－ヒドロキシアシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（Ｍ／ＳＣＨＡＤ）欠損症；超長鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＶＬＣＡＤ）欠損症；ペルオキシソーム障害；メチルマロン酸血症；加齢に伴う認知機能や筋力の低下から選択され得る。

ミトコンドリア機能不全を含む状態は、中枢神経系疾患、例えば神経変性疾患であり得る。

神経変性疾患には、限定されないが、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、虚血、脳卒中、レビー小体型認知症、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核変性（ＣＢＤ）、及び前頭側頭型認知症が含まれる。

特に、本発明の化合物は、パーキンが突然変異しているα－シヌクレイン、パーキン、ＰＩＮＫ１、ＧＢＡ、及びＬＲＲＫ２、ならびに常染色体劣性若年性パーキンソン病（ＡＲ－ＪＰ）における突然変異に関連するＰＤを含むが、これらに限定されない、パーキンソン病の治療又は予防に有用であり得る。

本明細書に記載される本発明の化合物又はその医薬組成物は、ミトコンドリア機能不全を含む状態の治療又は予防のために使用される場合、１種以上の追加の薬剤と組み合わせることができる。化合物は、レボドパ、ドーパミン作動薬、モノアミノオキシゲナーゼ（ＭＡＯ）Ｂ阻害剤、カテコールＯ－メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤、抗コリン作動薬、リルゾール、アマンタジン、コリンエステラーゼ阻害剤、メマンチン、テトラベナジン、抗精神病薬、ジアゼパム、クロナゼパム、抗うつ薬、及び抗痙攣薬から選択される１つ又は複数の追加の薬剤と組み合わせることができる。これらの化合物は、神経変性疾患における病原性タンパク質凝集体を減少／除去する薬剤、例えば、アルファ－シヌクレイン・パーキンソン病、多系統萎縮症又はレビー小体を伴う痴呆を減少／除去する薬剤；アルツハイマー病又は進行性核上性麻痺におけるタウを減少／除去する薬剤；ＡＬＳ又は前頭側頭型痴呆におけるＴＤＰ－４３を減少／除去する薬剤と組み合わせることができる。

本発明の全ての態様の別の好ましい実施形態において、ＵＳＰ３０活性から利益を受ける障害又は状態は、がんである。このがんはミトコンドリアの機能障害と関連している可能性がある。好ましいがんには、例えば、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、精巣がん、頭頸部がん、膵臓がん、脳がん、黒色腫がん、骨がん、又は組織器官の他のがん、及びリンパ腫などの血球がん、白血病、多発性骨髄腫、転移性がん腫、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、鼻咽頭がん、結腸直腸がん、結腸直腸がん、及び非小細胞肺がんが含まれる。

特に、本発明の化合物は、アポトーシス経路が調節不能であり、より詳細には、ＢＣＬ－２ファミリーのタンパク質が突然変異した場合、又は過剰発現した場合、又は過少発現した場合に、がんの治療又は予防に有用であり得る。

線維化とは、外傷、炎症、組織修復、免疫学的反応、細胞過形成、及び新生物の後に起こる細胞外マトリックス成分の蓄積をいう。本発明の化合物及び組成物によって治療され得る線維性障害には、とりわけ、主要な臓器疾患、例えば、間質性肺疾患（ＩＬＤ）に関連する線維症／線維性障害、肝硬変、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）（肝線維症）、腎臓病（腎線維症）、急性腎障害（ＡＫＩ）、慢性腎臓病（ＣＫＤ）、腎移植機能の遅延、心臓又は血管の病気（心臓線維症）、及び眼の病気；線維増殖性疾患、例えば、全身性及び局所性強皮症、ケロイド及び肥厚性瘢痕、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、デュピュイトラン拘縮など。外傷に関連する瘢痕、例えば、外科的合併症、化学療法薬による線維症（例えば、ブレオマイシン誘発性線維症）、放射線誘発性線維症、偶発的な損傷及び火傷）；後腹膜線維症（オーモンド病）；及び腹膜透析を受けている患者における腹膜線維症／腹膜瘢痕化（通常、腎移植後）が含まれる。例えば、Wynn et al, 2004, Nat Rev Immunol. August; 4(8): 583-594を参照されたい。したがって、本発明は、例えば、肺、肝臓、腎臓、心臓、皮膚、眼、胃腸管、腹膜及び骨髄、ならびに本明細書に記載の他の疾患／障害を含む主要臓器の、及び／又はそれらに関連する線維症／線維性障害の治療又は予防の方法、ならびに前記方法で使用される化合物及び組成物に関する。

化合物は、抗糖尿病薬、心血管疾患薬、及び酸化ストレス（ｎｒｆ２／ｋｅａｐ－１経路を含むが、これらに限定されない）及び抗アポトーシス経路（抗ｐ５３剤を含むが、これらに限定されない）などの疾患関連経路を標的とする新規薬剤を含む、腎疾患の治療に使用される薬剤と組み合わせることができる。

間質性肺疾患（ＩＬＤ）には、肺の炎症及び線維症が病理学の最終的な共通経路である疾患、例えばサルコイドーシス、珪肺症、薬物反応、感染症、及び関節リウマチ及び全身性硬化症（強皮症）などの膠原血管疾患が含まれる。肺の線維性疾患には、例えば、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、通常の間質性肺炎（ＵＩＰ）、間質性肺疾患、潜在性線維化肺胞炎（ＣＦＡ）、閉塞性細気管支炎、及び気管支拡張症が含まれる。

特発性肺線維症（ＩＰＦ）はＩＬＤの最も一般的なタイプであり、原因は不明である。

これらの化合物は、ＩＰＦの治療薬であり、潜在的には、ニンテダニブ及びピルフェニドンを含むＩＬＤの治療薬と組み合わせることができる。

肝硬変はＩＬＤと同様の原因を有し、ウイルス性肝炎に伴う肝硬変、住血吸虫症、慢性アルコール中毒などがある。

腎疾患は糖尿病と関連していることがあり、糖尿病は腎臓を損傷し瘢痕化させ、進行性の機能喪失や高血圧性疾患につながることがある。腎線維症は、ＣＫＤや進行性ＣＫＤなどの慢性腎疾患（ＣＫＤ）から末期腎疾患（ＥＳＲＤ）に至るまで、腎疾患のどの段階でも起こりうる。腎線維症は、高血圧や糖尿病などの心血管疾患の結果として発症することがあり、その両方が線維化反応を促進する腎機能に大きな負荷を与える。しかし、腎線維症は特発性（原因不明）のこともあり、ある種の遺伝性ミトコンドリア疾患も腎線維症の症状及び関連症状を呈する。

心臓病では瘢痕組織が生じ、心臓のポンプ機能が損なわれることがある。

眼の疾患には、例えば、黄斑変性及び網膜及び硝子体網膜症があり、視力を損なうことがある。

好ましい態様において、本発明は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の治療又は予防に関する。

別の好ましい態様において、本発明は、腎線維症の治療又は予防に関する。

別の好ましい態様において、本発明は、特に高リスク患者における急性腎損傷（ＡＫＩ）の治療又は予防に関する。例としては、手術後のＡＫＩ、例えば虚血再潅流障害、遅発性移植片機能による臓器移植；化学療法によるＡＫＩのような腫瘍学；直接尿細管細胞毒性、血行動態虚血及び浸透圧作用のような造影剤誘発性腎症；薬物又は感染による急性間質性腎炎；及びＣＯＶＩＤ－１９誘発性ＡＫＩが挙げられる。特定の高リスク患者サブグループは、心臓手術、例えば、冠動脈バイパス移植及び／又は弁手術を受けるサブグループである。６５歳以上、インスリン依存性糖尿病、ＣＫＤ（推定糸球体濾過量［ｅＧＦＲ］が６０ｍｌ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２未満の成人は特にリスクがある）、心不全、肝疾患、ＡＫＩの既往など、ＡＫＩの静的危険因子が確立されている。

別の好ましい態様において、本発明は、例えば、尿細管間質性線維症及び糖尿病性腎症を含む、このようなＡＫＩに起因する慢性腎疾患（ＣＫＤ）の治療又は予防に関する。

Ｌｅｉｇｈ症候群はまれな遺伝性神経代謝障害で、中枢神経系を侵す。この進行性疾患は生後３カ月から２歳の乳児から始まる。まれに、１０代の若者や成人に発症する。Ｌｅｉｇｈ症候群は、ミトコンドリアタンパク質をコードする核ＤＮＡの突然変異、ミトコンドリアＤＮＡの突然変異（母性遺伝性レー症候群－ＭＩＬＳ）、又はＸ染色体の短腕に位置するピルビン酸デヒドロゲナーゼと呼ばれる酵素の欠損（Ｘ連鎖Ｌｅｉｇｈ症候群）によって引き起こされる。Ｌｅｉｇｈ症候群の症状は通常、急速に進行する。最も初期の徴候は、吸乳能力の低下、頭部の制御能力及び運動能力の喪失である。これらの症状には、食欲不振、嘔吐、いらだちやすさ、持続的な泣き、けいれんなどが伴う。病気が進行すると、全身の脱力感、筋緊張の低下、乳酸アシドーシスなどの症状が現れ、呼吸機能や腎機能が低下する。

母性遺伝性Ｌｅｉｇｈ症候群（ＭＩＬＳ）では、ミトコンドリアＤＮＡの遺伝的突然変異（９０％以上）が、運動に関与する脳の領域で細胞を走らせるエネルギー源を妨げる。ミトコンドリアＤＮＡの遺伝的突然変異は、これらの細胞に慢性的なエネルギー欠乏をもたらし、その結果、中枢神経系に影響を及ぼし、運動機能の進行性変性を引き起こす。ＭＩＬＳを引き起こすミトコンドリアＤＮＡの遺伝子突然変異が少ない場合（９０％未満）、この状態は神経障害性運動失調及び網膜色素変性（ＮＡＲＰ）として知られている。また、Ｌｅｉｇｈ秒（Ｘ連鎖Ｌｅｉｇｈ病と呼ばれる）は、細胞代謝に重要な別の物質群をつくる遺伝子の突然変異の結果であるリー脳症の別の変異型が存在し、これはＦｒｅｎｃｈ Ｃａｎａｄｉａｎ Ｖａｒｉａｎｔと呼ばれ、ＬＲＰＰＲＣと呼ばれる遺伝子の突然変異を特徴とする。同様の神経学的症状はＬｅｉｇｈ症候群の場合と同様に発現するが、肝脂肪症はフランスのカナダ変異型でもよくみられる。

好ましい実施形態では、本発明は、例えば、Ｘ連鎖Ｌｅｉｇｈ病、Ｌｅｉｇｈ症候群Ｆｒｅｎｃｈ Ｃａｎａｄｉａｎ Ｖａｒｉａｎｔ、及び／又はＬｅｉｇｈ病に関連する症状を含む、Ｌｅｉｇｈ症候群又は疾患の治療又は予防に関する。

化合物は、限定されるものではないが、ニコチンアミドリボシドを含む、ミトコンドリア疾患の治療として使用され得る新規薬剤と組み合わせることができる。

「治療」への言及には、症状を改善し、軽減し、一時的又は永続的に症状の原因を除去する手段が含まれる。本発明の化合物は、ヒト及び他の哺乳動物において本明細書に開示された疾患の治療に有用である。

別の実施形態では、本発明は、本明細書に開示される疾患の予防的治療を包含し、記名された障害又は状態の症状の出現を予防又は遅らせる手段を含む。本発明の化合物は、ヒト及び他の哺乳動物において本明細書に開示された疾患の予防に有用である。

治療又は予防を必要とする患者は、例えば、状態に苦しんでいる、又は状態に苦しむリスクのあるヒト又は他の哺乳動物であり得る。

さらなる態様によれば、本発明は、薬学的に許容される希釈剤又は担体と共に、本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物、又は該化合物又は互変異性体の薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。

本発明の医薬組成物は、任意の薬学的に許容される担体、アジュバント又はビヒクルと組み合わされた本発明の化合物のいずれかを含む。薬学的に許容される担体の例は、当業者に知られており、限定されないが、投与様式及び剤形の性質に応じて、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、抗菌剤、抗真菌剤、潤滑剤及び分散剤が含まれる。組成物は、例えば、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、エリキシル、ロゼンジ、座薬、シロップ及び懸濁液及び溶液を含む液体調製物の形態であってもよい。本発明の文脈における用語「医薬組成物」は、活性剤を含み、さらに１以上の医薬的に許容される担体を含む組成物を意味する。組成物は、投与様式及び剤形の性質に応じて、例えば、希釈剤、アジュバント、賦形剤、ビヒクル、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、抗菌剤、抗真菌剤、潤滑剤及び分散剤から選択される成分をさらに含み得る。

本明細書に記載される本発明の化合物又はその医薬組成物は、単独で、又は１以上のさらなる医薬剤と組み合わせて使用することができる。化合物は、追加の抗腫瘍治療剤、例えば、化学療法剤又は他の調節タンパク質の阻害剤と組み合わせることができる。１つの実施形態において、さらなる抗腫瘍治療剤は、ＢＨ－３模倣物である。さらなる態様において、ＢＨ－３模倣体は、限定されるものではないが、ＡＢＴ－７３７、ＡＢＴ－１９９、ＡＢＴ－２６３、及びＯｂａｔｏｃｌａｘの１以上から選択され得る。さらなる態様において、さらなる抗腫瘍剤は、化学療法剤である。化学療法剤は、限定されないが、オラパリブ、マイトマイシンＣ、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、電離放射線（ＩＲ）、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、テモゾロミド、タキサン、５フルオロピリミジン、ゲムシタビン、及びドキソルビシンから選択され得る。

線維性障害の治療又は予防のために、例えば、本明細書に記載の本発明の化合物又はその医薬組成物は、単独で、又は抗コリン作動薬、β－２模倣薬、ステロイド、ＰＤＥ－ＩＶ阻害剤、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＮＫ１拮抗剤、ＬＴＤ４拮抗剤、ＥＧＦＲ阻害剤、及びエンドセリン拮抗剤から選択される１つ以上の医薬剤と併用して使用され得る。

特に、本発明の化合物又は本明細書に記載されている医薬組成物は、単独で使用するか、又はコルチコステロイド、免疫抑制剤若しくは細胞毒性剤のような一般的な免疫抑制剤、又はピルフェニドン又は非特異的キナーゼ阻害剤（例えばニンテダニブ）のような抗線維化剤からなる群から選択される１種以上のさらなる薬学的剤と組み合わせて使用することができる。

本発明の医薬組成物は、経口、非経口、局所、吸入、鼻腔内、直腸、膣内、眼及び耳のような任意の適切に有効な方法で投与することができる。本発明の化合物の送達に適した医薬組成物及びそれらの調製方法は、当業者には容易に明らかであろう。そのような組成物及びそれらの調製方法は、例えば、「レミントンの医薬科学」、第１９版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）に見出され得る。

経口投与
本発明の化合物は経口投与することができる。経口投与は、化合物が消化管に入るように飲み込むことを含むか、又は化合物が口から直接血流に入る口腔又は舌下投与を用いることができる。

経口投与に適した製剤には、錠剤、微粒子、液体、又は粉末を含むカプセル、ロゼンジ（液体充填を含む）、チュー、マルチ粒子及びナノ粒子、ゲル、フィルム（粘膜接着剤を含む）、胚珠、スプレー及び液体製剤などの固体製剤が含まれる。

液体製剤には、懸濁液、溶液、シロップ及びエリキシルが含まれる。このような製剤は、軟カプセル又は硬カプセル中の充填剤として使用することができ、典型的には、担体、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、メチルセルロース、又は適切な油、及び１種以上の乳化剤及び／又は懸濁剤を含む。液体製剤はまた、例えば、小袋からの固体の再構成によって調製することもできる。

また、本発明の化合物は、Ｌｉａｎｇ及びＣｈｅｎ（２００１）によるＥｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐａｔｅｎｔｓ，１１（６），９８１－９８６に記載されているような速溶性で速崩壊性の投与形態で使用することもできる。

典型的な錠剤は、例えば、直接圧縮、造粒（乾燥、湿潤、又は溶融）、溶融凝固、又は押出によって、製剤化学者に公知の標準的プロセスを用いて調製することができる。錠剤配合物は、１つ以上の層を含んでもよく、コーティングされていても、コーティングされていなくてもよい。

経口投与に適した賦形剤の例には、担体、例えば、セルロース、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム、マンニトール及びクエン酸ナトリウム、造粒結合剤、例えばポリビニルピロリジン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びゼラチン、崩壊剤、例えばデンプングリコール酸ナトリウム及びケイ酸塩、潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸、湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、防腐剤、酸化防止剤、香料及び着色剤が挙げられる。

経口投与のための固体製剤は、即時放出及び／又は改変放出であるように製剤化することができる。改変放出製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御二重放出、標的放出及びプログラム放出が含まれる。高エネルギー分散、浸透圧及び被覆粒子などの適切な改変放出技術の詳細は、Ｖｅｒｍａら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｏｎ－ｌｉｎｅ，２５（２），１－１４（２００１）に記載されている。その他の放出調節製剤は、米国特許第６，１０６，８６４号に記載されている。

非経口投与
本発明の化合物はまた、血流中、筋肉中、又は内部臓器中に直接投与することもできる。非経口投与に適した手段としては、静脈内、動脈内、腹腔内、髄腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、及び皮下が挙げられる。非経口投与に適した器具としては、針（マイクロニードルを含む）注射器、ニードルフリー注射器、及び注入技術が挙げられる。

非経口製剤は、典型的には、塩、炭水化物及び緩衝剤のような賦形剤（好ましくは、ｐＨ３～９）を含有し得る水溶液であるが、いくつかの用途については、それらは、無菌の非水溶液として、又は無菌の無発熱性水のような適切なビヒクルと共に使用される乾燥形態として、より適切に製剤化され得る。

例えば凍結乾燥による滅菌条件下での非経口製剤の調製は、当業者に周知の標準的な医薬技術を用いて容易に達成することができる。

非経口溶液の調製に使用される式（Ｉ）の化合物の溶解度は、適切な処理、例えば、高エネルギースプレー乾燥分散体の使用、及び／又は溶解性増強剤の使用などの適切な配合技術の使用によって増加させることができる。

非経口投与のための処方は、即時放出及び／又は改変放出であるように処方することができる。改変放出製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御二重放出、標的放出、及びプログラム放出が含まれる。

本発明の医薬組成物はまた、血液脳関門をバイパスするための当技術分野で公知の組成物及び方法を含み、又は脳に直接注入することができる。注射に適した領域としては、大脳皮質、小脳、中脳、脳幹、視床下部、脊髄及び脳室組織、ならびに頸動脈小体及び副腎髄質を含む末梢神経系の領域が挙げられる。

投与量
化合物の有効用量の大きさは、もちろん、治療すべき状態の重症度及び投与経路の性質によって変化する。適切な投与量の選択は、医師の許可の範囲内である。１日用量範囲は、ヒト及び非ヒト動物の約１０μｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、一般に、約１０μｇ～３０ｍｇ／ｋｇ体重／用量であり得る。１日１～３回投与する。

例えば、経口投与は、５～５００ｍｇのような５ｍｇ～１０００ｍｇの総一日用量を必要とすることができ、一方、静脈内投与は、０．１～１０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１～１ｍｇ／ｋｇ体重のような０．０１～３０ｍｇ／ｋｇ体重のみを必要とすることができる。１日の総投与量は、単回又は分割で投与することができる。当業者であれば、特定の条件の治療又は予防において、本発明の化合物は、「必要に応じて」（すなわち、必要に応じて、又は所望に応じて）単回投与として取ることができることも理解されよう。

合成方法論
式（Ｉ）の化合物は、一般的な反応スキーム及び代表的な実施例において後述する方法を用いて調製することができる。必要に応じて、スキーム内の個々の変換は、異なる順序で完了することができる。本発明は、以下の略語及び定義が使用される以下の非限定的な実施例によって例示される。化合物は、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣＭＳ）又は^１Ｈ ＮＭＲ、又はその両方によって特徴付けられた。

さらなる態様によれば、本発明は、式（Ｉ－Ａ）の化合物を製造する方法を提供し、式（ＩＶ）の化合物（式中、ＸはＯＨである）を式（Ｖ－Ａ）のアミン（ＰＧは、保護基、例えば、ＢＯＣ又はＣＢＺである）と反応させて、式（ＩＩＩ－Ａ）のアミドを与えることを含む（スキーム１）。アミドカップリング反応は、例えばＤＣＣ、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＥＤＣなどのカップリング試薬を使用する反応によって、又は混合無水物を介して、標準的な方法論を使用して実施することができる。あるいは、酸（ＩＶ）（ＸがＯＨである）は、ＳＯＣｌ_２、ＰＣｌ_３、又はＰＣｌ_５を使用して、酸塩化物（ＩＶ）（ＸがＣｌである）に変換することができ、その後、好ましくは適切な溶媒中、適切な塩基の存在下でアミン（ＶＡ）と反応させることができる。あるいは、化合物（ＩＶ）（Ｘはエステルを形成する）は、好ましくは適切な溶媒中で、アミン（Ｖ－Ａ）と直接反応させることができる。式（ＩＩＩ－Ａ）の化合物は、標準的な方法を用いて脱保護されて、アミン（ＩＩ－Ａ）を与え、次に臭化シアンと反応させて、式（Ｉ－Ａ）の対応する化合物をアが得ることができる。

さらなる態様によれば、本発明は、式（Ｉ－Ａ）のためのものと類似の方法を用いて、式（Ｉ－Ｂ）の化合物の製造方法を提供する（スキーム２）。

さらなる態様において、本発明は、式（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）及び（ＩＩＩ－Ｂ）から選択される化合物、その互変異性体、又は当該化合物若しくは互変異性体の塩を提供する。

式中、ＰＧは保護基であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は、式（Ｉ）の化合物及びその好ましい実施形態について本明細書で定義されるとおりである。

保護基は、好ましくは、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｐ－メトキシベンジルカルボニル（ＭｅＯＺ）、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ベンジル（Ｂｎ）、カルバメート、ｐ－メトキシベンジル（ＰＭＢ）、３，４－ジメトキシベンジル（ＤＭＰＭ）、ｐ－メトキシフェニル（ＰＭＰ）、トシル（Ｔｓ）、トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）、４－ニトロベンゼンスルホニル（Ｎｏｓｙｌ）、及び２－ニトロフェニルスルフェニル（Ｎｐｓ）から選択される。最も好ましいものは、ＢＯＣ及びＣｂｚである。

中間体の合成
５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル

スキーム：（ｉ）Ｂｒ_２、ＤＣＭ、０℃から室温、１ｈ；（ｉｉ）ＮａＮ（ＣＨＯ）_２、ＭｅＣＮ、７５℃、２ｈ、次にｃ．ＨＣｌ、８０℃、１ｈ；（ｉｉｉ）クロロオキソ酢酸エチル、Ｋ_２ＣＯ_３、ＤＣＭ、０℃から室温、３ｈ；（ｉｖ）ＰＯＣｌ_３、１００℃、１６ｈ。

ステップ（ｉ）
２－ブロモ－１－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタン－１－オン
１－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタン－１－オン（ＣＡＳ ０１７１－６３－６、Ｍａｔｒｉｘ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１．０ｇ、４．９０ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中の撹拌溶液に、臭素（０．７８ｇ、４．９０ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ溶液を添加し、０℃で滴下し、室温までゆっくりと加温し、１時間撹拌し、次に飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下で濃縮して２ブロモ－１－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタン－１－オン（１．４５ｇ、定量収率）を得た。この物質は次の段階で直接使用された。LCMS: 方法C; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7.94 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.60 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.47 (s, 2H)。

ステップ（ｉｉ）
２－アミノ－１－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタン－１－オン塩酸塩
アセトニトリル（１０ｍＬ）中の２－ブロモ－１－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタン－１－オン（１．３０ｇ、４．５９ｍｍｏｌ、１当量）の撹拌溶液に、ナトリウムジホルミルアミド（０．５２ｇ、５．５１ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、混合物を７０℃で１時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮し、残渣をメタノール（４ｍＬ）及び濃ＨＣｌ（２ｍＬ）で希釈した。混合物をさらに８０℃で１時間加熱し、次いで室温まで冷却した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をイソプロピルアルコール（２ｍＬ）と共に撹拌して沈殿を形成し、そして固体を濾過して２－アミノ－１－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタン－１－オン塩酸塩（０．８１ｇ、３．９６ｍｍｏｌ、収率８０％、２段階以上）を得た。ＬＣＭＳ：方法Ｃ、１．３０分、ＭＳ：ＥＳ＋ ２２０．２。

ステップ（ｉｉｉ）
２－オキソ－２－（（２－オキソ－２－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）エチル）アミノ）酢酸エチル
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の２－アミノ－１－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタン－１－オンＨＣｌ塩（０．８０ｇ、３．６５ｍｍｏｌ、１当量）の撹拌溶液に、０℃でＫ_２ＣＯ_３（０．７５ｇ、５．４７ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、塩化エチルオキサリル（０．７４５ｇ、５．４８ｍｍｏｌ、１．５当量）を０℃で滴下し、混合物を室温まで滴下し、２時間撹拌し、水（３０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下で濃縮し、２－オキソ－２－（（２－オキソ－２－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）エチル）－アミノ）酢酸エチル（０．３８ｇ、１．１９ｍｍｏｌ、収率３３％）を得た。LCMS: 方法C, 1.62 min, MS: ES+ 320.3; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 9.21 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.07 - 8.09 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.73 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.74 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.29 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。

ステップ（ｉｖ）
５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル
２－オキソ－２－（（２－オキソ－２－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）フェニル）アミノ）酢酸エチル（０．３７ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ_３溶液（３．７ｍＬ、１０容量）を、１６時間、１００℃で加熱した。混合物を室温に冷却し、氷冷水（３０ｍＬ）に注ぎ、次いで固体のＮａＨＣＯ_３で塩基性化し、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣を－７０℃でメタノールでトリチュレートし、減圧乾燥して、５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル（０．２２ｇ、０．７３ｍｍｏｌ、収率６３％）を得た。LCMS: 方法C, 1.86 min, MS: ES+ 302.4; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 8.16 (s, 1H), 7.88 - 7.83 (m, 2H), 7.70 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (d, 1H), 4.41 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.36 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。

実施例１
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド

スキーム：（ｉ）ＴＢＤ、ＴＨＦ、０℃から室温、２ｈ；（ｉｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、０℃から室温、１ｈ；（ｖ）Ｋ_２ＣＯ_３、ＢｒＣＮ、ＴＨＦ、０℃から室温、１ｈ。

ステップ（ｉ）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－２－（メトキシメチル）－４－（５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド）－ピロリジン－１－カルボン酸塩
ＴＨＦ（８ｍＬ）中の５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル（０．３５ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－アミノ－２－（メトキシメチル）ピロリジン－１－カルボン酸塩（ＣＡＳ １２０７８５３－５３－９、０．２７ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＢＤ（０．２４ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）を０℃で部分的に添加し、室温に加温し、２時間撹拌し、次いで、水（６０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ－ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－２－（メトキシメチル）－４－（５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド）ピロリジン－１－カルボキシレート（０．２５ｇ、０．５１ｍｍｏｌ、収率４４％）を得た。LCMS: 方法C, 1.89 min, MS: ES+ 486.4。

ステップ（ｉｉ）
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩
ＤＣＭ（８ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－２－（５－（３－（メトキシメチル）－４－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）－オキサゾール－２－カルボキサミド）ピロリジン－１－カルボキシレート（０．２５ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（０．７５ｍＬ、３ｖｏｌ）を０℃で滴下し、室温に放置し、１時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮して、Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩（０．２５ｇ、０．５０ｍｍｏｌ、約９７％収率）を得た。LCMS: 方法C, 1.49 min, MS: ES+ 386.6。

ステップ（ｉｉｉ）
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミドトリフルオロアセテート（０．２５ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）中の撹拌溶液に、室温でＫ_２ＣＯ_３（０．２１ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を添加し、１０分間撹拌した。臭化シアン（０．０５ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を室温で０℃で添加し、混合物を室温で１時間撹拌し、水（６０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎヘキサン中６０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）－フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド（０．１３ｇ、０．３３ｍｍｏｌ、収率６６％）を得た。LCMS: 方法H, 3.10 min, MS: ES+ 411.0; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.34 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.69 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.45 - 4.54 (m, 1H), 3.99 - 4.05 (m, 1H), 3.67 - 3.71 (m, 1H), 3.39 - 3.49 (m, 3H), 3.32 (s, 3H), 2.09 - 2.15 (m, 1H), 1.94 - 2.00 (m, 1H), chiral SFC: Method Y2, 2.60 min。

実施例２
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド

ステップ（ｉ）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－（５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド）ピロリジン－１－カルボン酸塩
ＴＨＦ（３ｍＬ）中の５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル（０．２１ｇ、０．７０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）とｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－２－メチルピロリジン－１－カルボン酸塩（ＣＡＳ ３４８１６５－６３－９、０．２１ｇ、１．０４ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＴＢＤ（０．１９５ｇ、１．３９ｍｍｏｌ、２．０ ｑ）の溶液を０℃で滴下して添加した。混合物を室温に加温し、３時間撹拌し、次いで氷冷水（３０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）に付して、ｔｅｒｔ ブチル（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－（５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド）ピロリジン－１－カルボキシレート（０．１４ｇ、０．３１ｍｍｏｌ、収率４４％）を得た。LCMS: Ｍｅｔｈｏｄ 方法C, 1.90 min, MS: [M-56] 400.2。

ステップ（ｉｉ）
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－（５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド）ピロリジン－１－カルボキシレート（０．１３ｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（０．３９ｍＬ、３容量）を０℃で滴下し、室温までゆっくりと加温し、１時間撹拌し、次いで、減圧下で再度濃縮して、Ｎ－（（３Ｒ、５Ｒ）－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩（０．１９ｇ、定量収率）を得た。LCMS: 方法C, 1.40 min, MS: ES+ 356.2。

ステップ（ｉｉｉ）
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミドトリフルオロアセテート（０．１８ｇ、０．３８ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（５ｍＬ）中の撹拌溶液に、Ｋ_２ＣＯ_３（０．２６５ｇ、１．９ｍｍｏｌ、５．０当量）を加え、次いで臭化シアン（０．０４ｇ、０．３８ｍｍｏｌ、１．０当量）を０℃で加え、混合物を室温にゆっくり温め、３０分間撹拌し、次いで水（２０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）に付して、Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）－フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド（０．０５ｇ、０．１３ｍｍｏｌ、２段階にわたり４６％収率）を得た。LCMS: 方法H, 3.98 min, MS: ES+ 381; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 9.39 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.84 - 7.90 (m, 2H), 7.69 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.49 - 4.51 (m, 1H), 3.87 - 3.95 (m, 1H), 3.75 - 3.79 (m, 1H), 3.44 (dd, J = 10.0 Hz, 3.6 Hz, 1H), 2.13 - 2.19 (m, 1H), 1.81 - 1.74 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。

実施例３
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド

ステップ（ｉ）
５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボン酸リチウム
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボン酸エチル（０．２０ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水酸化リチウム一水和物（０．０６ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）の水（１ｍＬ）溶液を０℃で滴下し、混合物を室温に温め、２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮して、５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボン酸リチウム（０．２２ｇ、定量収率）を得た。LCMS: 方法H1, 2.11 min, MS: ES+ 274.0。

ステップ（ｉｉ）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ，４Ｒ）－２－（メトキシメチル）－４－（５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド）ピロリジン－１－カルボン酸塩
ＴＨＦ（７ｍＬ）中の５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボン酸リチウム（０．２０ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、０℃でＤＩＰＥＡ（０．２８ｇ、０．３６ｍＬ、２．１５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（０．３３ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１時間撹拌した。ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－２－（メトキシメチル）ピロリジン－１－カルボン酸塩（ＣＡＳ １１２３３０５－９８－５、０．１７ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を０℃で加え、混合物を室温に温め、１６時間撹拌し、次いで水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ－ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ，４Ｒ）－２－（メトキシメチル）－４－（５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド）ピロリジン－１－カルボキシレート（０．２０ｇ、０．４１ｍｍｏｌ、収率５７％）を得た。LCMS: 方法H1, 3.72 min, MS: ES+ 486.2。

ステップ（ｉｉｉ）
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ，４Ｒ）－２－（メトキシメチル）－４－（５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド）ピロリジン－１－カルボキシレート（０．２ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（２ｍＬ、１０ｖｏｌ）を０℃で滴下し、室温に放置し、１時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮して、Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミドＴＦＡ塩（０．２３ｇ、定量収率）を得た。LCMS: 方法H1, 2.74 min, MS: ES+ 386.2。

ステップ（ｉｖ）
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）－フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミドトリフルオロ酢酸（０．２３ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中の撹拌溶液に、Ｋ_２ＣＯ_３（０．１９ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、５分間撹拌した。臭化シアン（０．０５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を室温で１時間撹拌し、次いで水（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）－フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド（０．０９ｇ、０．２２ｍｍｏｌ、収率５３％）を２ステップで得た。LCMS: 方法H1, 3.15 min, MS: ES+ 411.2; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm: 9.17 (d, J = 7.6Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.68 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.50 - 4.55 (m, 1H), 3.88 - 3.92 (m, 1H), 3.63 - 3.67 (m, 1H), 3.46 - 3.55 (m, 2H), 3.37 - 3.41 (m, 4H), 2.29 - 2.36 (m, 1H), 1.81 - 1.87 (m, 1H); Chiral SFC: Method Y14, 3.68 min。

実施例４
Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－１－シアノ－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド

標題化合物は、ステップ（ｉ）において、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－アミノ－２－メチルピロリジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ ７０８２７４－４６－８）を用いる実施例２と類似の方法によって調製することができる。

発明の化合物の生物活性
ＴＡＭＲＡ カルボキシテトラメチルローダミン
ＰＣＲ ポリメラーゼ連鎖反応
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
Ｔｒｉｓ ２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－１，３－プロパンジオール
Ｎｐ－４０ ノニデットＰ－４０、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ＰＮＳ 末梢神経系
ＢＨ３ Ｂｃｌ－２ホモロジードメイン３
ＰＴＥＮ ホスファターゼとテンシンのホモログ
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＹＦＰ 黄色蛍光タンパク質
ＶＭＥ ビニルメチルエステル
ＨＡ 赤血球凝集素
Ａｈｘ アミノヘキサン酸

ＵＳＰ３０生化学的ＩＣ_５０アッセイ
希釈プレートを、９６ウェルポリプロピレンＶ底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ＃６５１２０１）中の５０％ ＤＭＳＯ中の最終濃度（１００μＭの最終濃度については２１００μＭ）の２１倍で調製した。典型的な８点希釈系列は、１００、３０、１０、３、１、０．３、０．１、０．０３μＭ最終である。反応は、ブラック３８４ウェルプレート（少量、Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８４０７６）において、２１μｌの最終反応体積で２回実施した。１μｌの５０％ＤＭＳＯ又は希釈化合物のいずれかをプレートに添加した。ＵＳＰ３０（Ｂｏｓｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ ＃Ｅ５８２）を反応緩衝液（４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ ７．５、０．００５％Ｔｗｅｅｎ ２０、０．５ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、５ｍＭβ－メルカプトエタノール）中で希釈して、４ｎＭの最終アッセイ濃度にし、１０μｌの希釈ＵＳＰ３０を化合物に添加した。酵素及び化合物を室温で３０分間インキュベートした。反応は、蛍光分極基質としてイソペプチド結合を介してユビキチンに結合した５０ｎＭのＴＡＭＲＡ標識ペプチドを添加することによって開始した。反応は、基質添加直後及び室温での２時間のインキュベーション後に読み取った。Ｐｈｅｒａｓｔａｒ Ｐｌｕｓ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）を用いて読影を行った。λ励起５４０ｎｍ、λ発光５９０ｎｍ。

参照実施例

オフターゲット薬理学

実施例１は、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ ＣＥＲＥＰ ＳａｆｅｔｙＳｃｒｅｅｎ４４パネルにおける薬理学的プロファイリングに供した。１０μＭの単一濃度において、結合又は酵素活性の２０％未満の阻害がパネルのすべての標的に対して観察された。

実施例２は、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ ＣＥＲＥＰ ＳａｆｅｔｙＳｃｒｅｅｎ４４パネルにおける薬理学的プロファイリングに供した。１０μＭの単一濃度では、１０μＭで３２％の阻害が観察された５－ＨＴ２ｂを除き、パネルのすべての標的に対して２０％未満の結合阻害又は酵素活性の阻害が観察された。

実施例１及び２は、これらのスクリーニングパネルにおける標的に対する親和性が低いため、標的外相互作用の可能性が低い。

安全性薬理試験
実施例１は、０．０１～３０μＭの濃度で安定に発現されたＣＨＯ細胞において。ｈＥＲＧカリウムチャネルに対する効果について評価された。実施例１は３０μＭでｈＥＲＧ電流振幅の４４．３％の抑制値を生じ、ＩＣ_５０値は３４．３μＭ（ＳＤ３．１、ｎ＝３）であり、予想される治療域内のＱＴ間隔に影響する傾向がほとんどないことを示した。

実施例２は、０．０１～３０μＭの濃度で安定に発現されたＣＨＯ細胞において、ｈＥＲＧカリウムチャネルに対する効果について評価された。実施例２は、３０μＭでｈＥＲＧ電流振幅の５４．３％の抑制値を生じ、ＩＣ_５０値は２４．７μＭ（ＳＤ５．１、ｎ＝３）であり、予想される治療域内のＱＴ間隔に影響する傾向が低いことを示した。

遺伝毒性
実施例１は、細菌復帰突然変異試験（Ａｍｅｓ）及びｉｎ ｖｉｔｒｏ小核試験で評価された。すべてのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験は、細胞毒性又は不溶性によって制限された濃度までの濃度を用いて、外因性代謝活性化の有無にかかわらず実施された。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ株ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１５３５及びＴＡ９７ａ及びＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ Ｃｏｌｉ株ＷＰ２ ｕｖｒＡ ｐＫＭ１０１を用いた復帰突然変異試験では、代謝活性化の有無にかかわらず、１０００μｇ／ウェル（５０００μｇ／プレートに相当）まで試験したところ、突然変異は誘発されなかった。

染色体損傷の誘導は、ＴＫ６細胞におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ小核アッセイを用いて評価した。実施例１は、外因性代謝活性化の存在下で３時間インキュベートし、その後２７時間回復させた場合、及び外因性代謝活性化の非存在下で２７時間インキュベートし、その後２７時間回復させた場合、小核の誘導について陰性であった。

実施例２は、細菌復帰突然変異試験（Ａｍｅｓ）で評価された。すべてのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験は、細胞毒性又は不溶性によって制限された濃度までの濃度を用いて、外因性代謝活性化の有無にかかわらず実施された。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ株ＴＡ９８及びＴＡ１００を用いた復帰突然変異試験では、代謝活性化の有無にかかわらず、１０００μｇ／ウェル（５０００μｇ／プレートに相当）まで試験したところ、突然変異は誘発されなかった。

ＵＳＰ３０内因性細胞標的結合アッセイ
ＹＦＰ－パーキンを安定的に過剰発現するＨｅｌａ細胞を６ウェル皿に播種した。一旦接着されると、細胞を、適切な濃度の被験化合物又はビヒクル対照で３７℃、５％ＣＯ_２で１時間処理した。全細胞溶解物を、細胞を冷ＰＢＳ中にスクレーピングし、遠心分離し、溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－塩基、ｐＨ７．５、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ＮＰ－４０／Ｉｇｅｐａｌ ＣＡ－６３０、ＭｇＣｌ_２、１０％グリセロール、５ｍＭβ－メルカプトエタノール、ｃＯｍｐｌｅｔｅ ｍｉｎｉ錠ＥＤＴＡフリー（Ｒｏｃｈｅ）、ＰｈｏｓＳｔｏｐ錠（Ｒｏｃｈｅ）））中で１０分間溶解した。除去された細胞溶解物からの等価な２０μｇのタンパク質を、２．５μＭ ＨＡ－Ａｈｘ－Ａｈｘ－Ｕｂ－ＶＭＥプローブの最終濃度と共に室温でインキュベートした。５ｘＳＤＳサンプルローディング緩衝液及びＳＤＳ ＰＡＧＥ及びウエスタンブロット法により分離したタンパク質を添加することにより反応を停止した。抗ＵＳＰ３０ヒツジＳ７４６Ｄ抗体（ＭＲＣ ＰＰＵ試薬及びサービス）及びウサギ抗ヒツジ二次ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体（Ｔｈｅｒｍｏ ＃３１４８０）を用いてＵＳＰ３０を検出し、ＧＥ ＬＡＳ４０００イメージャー上でＥＣＬ試薬（ＧＥ ＃ＲＰＮ２１０９）を用いて可視化した。標的結合は、Ｕｂ－ＶＭＥプローブに結合したＵＳＰ３０及びＵＳＰ３０に対応するバンドの定量化及びこの割合の発現によって、ビヒクル処理対照と比較して測定した。

ＵＳＰ３０脳組織標的結合アッセイ
５０～１００ｍｇの組織を、Ｒｅｔｃｈ Ｍｉｘｅｒ Ｍｉｌｌ（ＭＭ４００）を用いて、３×体積の溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－塩基、ｐＨ７．５、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ－４０／Ｉｇｅｐａｌ ＣＡ－６３０、１Ｍ ＭｇＣｌ_２、１０％グリセロール、５ｍＭ β－メルカプトエタノール、ｃＯｍｐｌｅｔｅ ｍｉｎｉ錠ＥＤＴＡフリー（ロシュ）、ＰｈｏｓＳｔｏｐ錠剤）中でホモジナイズした（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－塩基、ｐＨ７．５、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ＮＰ－４０／Ｉｇｅｐａｌ ＣＡ－６３０）。溶解物を除去し、Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてタンパク質を定量した。６０μｇのタンパク質を含有するライセートを、２４μＭのＨＡ－Ａｈｘ－Ａｈｘ－Ｕｂ－ＶＭＥプローブの最終濃縮物と共に室温で６０分間インキュベートした。５ｘＳＤＳサンプルローディング緩衝液及びＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウエスタンブロット法により分離したタンパク質を添加することにより反応を停止した。抗ＵＳＰ３０ヒツジＳ７４６Ｄ抗体（ＭＲＣ ＰＰＵ試薬及びサービス）及びウサギ抗ヒツジ二次ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体（Ｔｈｅｒｍｏ ＃３１４８０）を用いてＵＳＰ３０を検出し、ＧＥ ＬＡＳ４０００イメージャー上でＥＣＬ試薬（ＧＥ ＃ＲＰＮ２１０９）を用いて可視化した。標的結合は、Ｕｂ－ＶＭＥプローブに結合したＵＳＰ３０及びＵＳＰ３０に対応するバンドの定量化及びこの割合の発現によって、ビヒクル処理対照と比較して測定した。

ＴＯＭ２０ユビキチン化アッセイ
ヒト細胞株には、ミトコンドリア脱分極剤（例、イオノフォア）を投与することができる。ＣＣＣＰ、バリノマイシン、ミトコンドリア複合体阻害剤（オリゴマイシン、アンチマイシンＡ）は、ＴＯＭ２０のユビキチン化を誘導し、ＵＳＰ３０阻害剤の存在下でさらに促進される。ＴＯＭ２０ユビキチン化は、その後、細胞溶解物のウエスタンブロッティングを介して評価され、ユビキチンの各分子に対する８ｋＤａの分子量増加のために、ＴＯＭ２０ユビキチン化付加物検出が可能であり、その結果、ＴＯＭ２０免疫反応性バンドのラダリングがもたらされる。ＴＯＭ２０－ユビキチン化レベルは、ラダー免疫反応性バンドの化学ルミネセンスデンシトメトリーを用いて定量することができる。

ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性（細胞Ｔｏｘ）：アッセイエンドポイントとしてアラマルブルー（商標）を用いてＨＣＴ１１６ヒト結腸直腸がん細胞で測定した。化合物の細胞毒性は、９６時間の連続暴露期間にわたって測定された。

さらなる研究
ｌｏｇ Ｐ：分配係数；親油性測定。
ｌｏｇＤ：分布係数；親油性測定。
ＴＰＳＡ：トポロジー極性表面積。
比濁溶解度：ＤＭＳＯ中で調製した試験化合物溶液を水性緩衝液中に希釈したもの。濁度測定法は、６２０ｎｍにおける吸光度を測定することにより、エンドポイントとして用いられる。
ＦａｓＳＩＦ：ｐＨ６．５で測定した空腹時の模擬腸液。
Ｈｅｐ Ｃｌマウス：マウス細胞におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ肝細胞クリアランス。
Ｈｅｐ Ｃｌヒト：ヒト細胞におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ肝細胞クリアランス。
血漿ｆ_ｕ，ｐ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ平衡透析により測定した血漿製剤中の化合物の遊離画分。結合していない（遊離）化合物のみが標的と結合することができることが理解される。
脳ｆ_ｕ，ｂｒ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ平衡透析によって測定した脳ホモジネート製剤中の化合物の遊離画分。結合していない（遊離）化合物のみが標的と結合することができることが理解される。

Ｃｌ_ｕ：ｉｎ ｖｉｔｒｏクリアランス。ここで定義されるＣｌ_ｕは、スケールされたクリアランスであり、次に、真性クリアランスから計算される。内因性クリアランスは、肝細胞標本中の化合物のインキュベーションから決定される、肝代謝反応による予測クリアランスである。値（ｍＬ／分／ｋｇ）が低いほど、化合物はより安定である。
Ｃｌ ｉｎ ｖｉｖｏクリアランス：単位時間当たりに物質が完全に除去される血漿（又はマトリックス）の体積の薬物動態学的測定。値（ｍＬ／分／ｋｇ）が低いほど、化合物はより安定である。
経口Ｆ：経口バイオアベイラビリティ。
ＭＤＲ１－ＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎細胞単層）（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）フラックスアッセイ。
細胞ＴＥ ＷＢ：ＵＳＰ３０内因性細胞標的結合ウエスタンブロット（ＷＢ）アッセイ。ＵＳＰ３０活性をモニターするための不可逆活性プローブを用いて、細胞中のＵＳＰ３０に対する化合物の活性をアッセイする。
ＴＥ ｅｘ ｖｉｖｏ：ＵＳＰ３０腎臓組織標的結合アッセイ。
Ｋｐ ｕ，ｕは、血漿中の未結合薬物に対する脳内の未結合薬物の比率であり、末梢及び／又は中枢神経系の適応症を治療する可能性を示唆している可能性がある。

これらの例は、他の化合物に対する潜在的優位性を示す有益な特性を有する。例えば、実施例１では、マウスで測定したように、観察された静注血漿クリアランス２０ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇは低く、貴重な血漿安定性を示し、化合物は５９％の非常に良好な経口バイオアベイラビリティを有する。

比較データ
参考例Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、ＵＳＰ３０の阻害剤として活性であると同定され、シアナミド構造的特徴を有する本発明の化合物と構造的類似性を共有する既知のＤＵＢ阻害剤である。参考例Ｂ、Ｃ及びＤは、ＵＣＨＬ１阻害活性を有するものとしてＷＯ２０１６／０４６５３０に開示されている。

ＵＳＰ３０の効力
本発明の実施例１～３は、生化学的アッセイで測定した場合、参照例Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤよりもＵＳＰ３０に対して有意に強力である。例えば、実施例１及び２は、それぞれ、参照例Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤよりも１４、３４、６２及び８８０倍強力である。実施例３は、参照例Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤよりそれぞれ９、２２、３９及び５５０倍強力である。

ＵＳＰ３０のＵＳＰ２、ＵＳＰ１０、ＵＳＰ１６、ＵＳＰ２１、ＵＳＰ２２、ＵＳＰ２５、ＵＳＰ２８に対する選択性
実施例１～３は、参照例Ａ（ＵＳＰ２、ＵＳＰ１０、ＵＳＰ１６、ＵＳＰ２１、ＵＳＰ２２、ＵＳＰ２５及びＵＳＰ２８）と比較して、７つのＤＵＢを超えるＵＳＰ３０に対して有意に選択的である。実施例１～３は、少なくとも、７つのＤＵＢの各々に対してよりもＵＳＰ３０に対して８８０倍強力である。これは、７つのＤＵＢのうちの１つに対して２．７倍強力である参考例Ａよりも有意に優れている。

ＵＣＨＬ１に対するＵＳＰ３０の選択性
実施例１～３は、参照例Ｂ、Ｃ及びＤと比較して、ＵＳＰ３０に対してＵＣＨＬ１よりも有意に選択的であり、実施例１～３は、ＵＳＰ３０に対してＵＣＨＬ１よりも少なくとも２００００倍強力であり、一方、Ｂ、Ｃ及びＤは、それぞれ、４．５倍、０．８倍及び１．５倍強力である。

カテプシンＢ、Ｋ、Ｌ、Ｓ及びＶを超えるＵＳＰ３０の選択性
実施例１及び２は、参照例Ａと比較して、カテプシン（Ｂ、Ｋ、Ｌ、Ｓ及びＶ）よりもＵＳＰ３０に対して有意に選択的であり、実施例１及び２は、それぞれ、カテプシンの各々に対してよりも、ＵＳＰ３０に対してそれぞれ、少なくとも３３００倍及び１７００倍強力である。これは、１つのカテプシンに対して１１倍の効力を有する参考例Ａよりも有意に有利である。

先行技術の引例に対する本発明の化合物の上述の同定された利点は、有意であり、かつ予期せぬものである。本発明の化合物は、それ自体で、特に組み合わせて、ＵＳＰ３０活性に関連する疾患の治療又は予防に使用するのに特に適している。

前臨床ｉｎ ｖｉｖｏモデル
本発明の化合物は、例えば、以下を含む、公表された文献からの標準的な試験手順を用いて、代表的なインビボ疾患モデルにおいて有効性について試験することができる。
（ａ）ブレオマイシン誘発肺線維症モデルは、特発性肺線維症の主要な前臨床モデルである。［Kobayashi et al, 2016, J Immunol, 197(2):504-516］
（ｂ）ＮＡＦＬＤ及びグルコースホメオスタシスの食餌誘発モデル［Nishida et al, 2013, Lab Invest; Feb;93(2):230-41］
（ｃ）パーキンソン病のＭＰＴＰモデルは、化学的に誘発されるミトコンドリア機能不全によって引き起こされる脳のドーパミン作動系の神経変性を調べるのによく用いられるパラダイムである。［Karuppagouner et al, 2014, Sci Rep. 2014 May 2;4:4874］
（ｄ）Ｎｄｕｆｓ４ＫＯ Ｌｅｉｇｈ症候群モデル。［Kruse et al, 2008, Cell Metab. Apr;7(4):312-20］
（ｅ）老齢げっ歯類モデル：海馬、認知及び運動機能への影響。［Kobilo et al, 2014, Learn Mem. Jan 17;21(2):119-26; Creed et al, 2019, Neuroscience. Jun 15;409:169-179; Van Skike et al, 2020, Aging Cell. 19; e13057］。実施例１は、このモデルにおいて評価された。
（ｆ）ＵＵＯは尿細管細胞傷害、間質性炎症及び線維化を特徴とする腎障害を引き起こす。それは、非可逆性腎後急性腎障害（ＡＫＩ）のモデルとして役立つ。実験的ＵＵＯは、アポトーシス、炎症、及び線維化の分子メカニズムを示しており、これらはすべて、一次傷害にかかわらず、腎障害における重要なプロセスである。従って、ＵＵＯモデルは、閉塞を越えた研究者情報を提供する（Chevalier et al, 2009, Kidney Int 75(11): 1145-1152）。

実施例１は、ＵＵＯモデルにおいて、進行性尿細管間質性線維症及び慢性腎疾患（ＣＫＤ）を軽減する化合物の能力を決定するために評価された。試験１日目に、成体Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、溶媒、１５、５又は１．５ｍｇ／ｋｇ、実施例１、１日２回のいずれかの投与レジメンに従って、強制経口投与した。１日目の投与から２時間後、マウスは２点で左尿管を結紮する手術を受けた。その後、水腎症による腎盂拡張の観察により、ＵＯ手術の成功が確認された。動物には、腎臓を採取した１０日間、又は組織病理学的評価及びタンパク質／ＲＮＡ評価のために、所定の投与計画に従って投与した。コラーゲン沈着の程度を評価するためにピクロシリウスレッド染色を行い、ＩＨＣを用いて相対的α－平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ）発現を評価した。

結果は、１５、５及び１．５ｍｇ／ｋｇの実施例１（ｐ．ｏ．）を１日２回投与すると、連結した腎臓におけるピクロシリウスレッド染色の減少によって証明されるように、コラーゲン沈着が統計的に減少することを示した。α－ＳＭＡ染色の評価は、１５、５及び１．５ｍｇ／ｋｇの実施例１ ＢＩＤの経口投与が、溶媒処理対照と比較して、ＵＵＯ損傷腎臓におけるα－ＳＭＡレベルの統計的減少をもたらしたことを明らかにした。
（ｇ）ＡＫＩは、両側性の腎茎クランプにより誘発され、その結果、虚血再潅流障害（ＩＲＩ）が生じ、その結果、腎機能の尿細管損傷及び炎症が重度に喪失する［Lu et al. 2012. J Nephrol. 25 (5): 738-45］。

Claims (26)

1. 式（Ｉ－Ａ）及び式（Ｉ－Ｂ）：
   

   

   ［式中、
   Ｒ^１は、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_４）フルオロアルキル、ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_２（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３から選択され；
   Ｒ^２は、水素及びメチルから選択され；
   Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は、それぞれ独立して水素、重水素及びフッ素から選択される］
   から選択される式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩。
2. Ｒ^１が、メチル、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｏ（ＣＨＣＨ_２Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２及びＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３から選択される、請求項１に記載の化合物。
3. Ｒ^１がメチル及びＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される、請求項２に記載の化合物。
4. Ｒ^２が水素である、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物。
5. Ｒ^３、Ｒ^４及びＲ^６がそれぞれ水素である、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物。
6. Ｒ^５が水素及びフッ素から選択される、請求項１～５のいずれか１項に記載の化合物。
7. Ｒ^５が水素である、請求項６に記載の化合物。
8. 式（Ｉ～Ａ）：
   

   

   を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物。
9. Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド；及び
   Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド；
   から選択される、請求項８に記載の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩。
10. 式（Ｉ～Ｂ）：
    

    

    を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物。
11. Ｎ－（（３Ｒ，５Ｒ）－１－シアノ－５－（メトキシメチル）ピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド；及び
    Ｎ－（（３Ｒ，５Ｓ）－１－シアノ－５－メチルピロリジン－３－イル）－５－（３－（トリフルオロメトキシ）フェニル）オキサゾール－２－カルボキサミド
    から選択される、請求項１０に記載の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩。
12. 薬剤として使用するための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩。
13. ミトコンドリア機能不全、がん、又は線維症を伴う状態の治療又は予防に使用するための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩。
14. ミトコンドリア機能不全、がん、又は線維症を伴う状態の治療又は予防に使用する薬剤の製造における、請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩の使用。
15. 請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、ミトコンドリア機能不全、がん、又は線維症を伴う状態の治療又は予防方法。
16. ミトコンドリア機能不全を伴う状態が、ＣＮＳ障害：神経変性疾患；パーキンソン病；アルツハイマー病；筋萎縮性側索硬化症；ハンチントン病；虚血；脳卒中；レビー小体型認知症；前頭側頭型認知症；多発性硬化症；ミトコンドリア脳症、乳酸アシドーシス及び脳卒中様エピソード症候群；物質遺伝性糖尿病及び難聴；レーバー遺伝性視神経症；神経障害、運動失調症、網膜色素変性症－母性遺伝のＬｅｉｇｈ症候群；ダノン病；糖尿病；糖尿病性腎症；代謝障害；心不全；心筋梗塞につながる虚血性心疾患；精神疾患、統合失調症；複数のスルファターゼ欠乏；ムコリピドーシスＩＩ；ムコリピドーシスＩＩＩ；ムコリピドーシスＩＶ；ＧＭ１－ガングリオシドーシス；神経セロイド－リポフスチン症；アルパー病；バース症候群；ベータ酸化欠陥；カルニチン－アシル－カルニチン欠乏；カルニチン欠乏；クレアチン欠乏症候群；コエンザイムＱ１０欠乏；複雑なＩ欠乏；複雑なＩＩ欠損；複雑なＩＩＩ欠損；複雑なＩＶ欠乏；複雑なＶ欠乏；ＣＯＸ欠乏；慢性進行性外眼筋麻痺症候群；ＣＰＴ Ｉ欠乏；ＣＰＴ ＩＩ欠乏；グルタル酸尿症ＩＩ型；カーンズ・セイヤー症候群；乳酸アシドーシス；長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠乏；Ｌｅｉｇｈ病又は症候群；Ｌｅｉｇｈ症候群フランス系カナダ人のバリアント；致命的な乳児心筋症；ルフト病；中鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠乏；ミオクローヌスてんかん及び赤色ぼろ線維症候群；ミトコンドリア細胞障害；ミトコンドリア劣性運動失調症候群；ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群；筋神経胃腸障害及び脳症；ピアソン症候群；ピルビン酸デヒドロゲナーゼ欠損症；ピルビン酸カルボキシラーゼ欠乏；ＰＯＬＧ突然変異；中鎖／短鎖３－ヒドロキシアシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症；及び非常に長鎖のアシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症；ペルオキシソーム障害；メチルマロン酸血症；並びに加齢に伴う認知機能及び筋力の低下から選択される、請求項１３～１５に記載の化合物、使用、又は方法。
17. 神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、虚血、脳卒中、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症、前頭側頭型認知症；α－シヌクレイン、パーキン、ＰＩＮＫ１、ＧＢＡ、及びＬＲＲＫ２の突然変異に関連するパーキンソン病、及びパーキンが突然変異している常染色体劣性若年性パーキンソン病から選択される、請求項１６に記載の化合物、使用、又は方法。
18. 神経変性疾患が、Ｌｅｉｇｈ症候群又は疾患、Ｘ連鎖Ｌｅｉｇｈ病、Ｌｅｉｇｈ症候群フランス系カナダ人のバリアント、及び／又はＬｅｉｇｈ病に関連する症状である、請求項１６に記載の化合物、使用又は方法。
19. がんが、乳房、卵巣、前立腺、肺、腎臓、胃、結腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳、黒色腫、骨、肝臓、軟部組織、組織器官のがん、血液細胞のがん、ＣＭＬ、ＡＭＬ、マントル細胞リンパ腫、神経芽細胞腫、黒色腫、軟部肉腫、脂肪肉腫、線維芽細胞肉腫、平滑筋肉腫、肝細胞がん、骨肉腫、食道がん、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、転移性癌腫、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、鼻咽頭癌、結腸直腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、アポトーシス経路が調節不全になっている癌、及びＢＣＬ－２ファミリーのタンパク質が突然変異しているか、過剰発現又は過小発現している癌から選択される、請求項１３～１５に記載の化合物、使用又は方法。
20. 線維症が、外傷、炎症、組織修復、免疫学的反応、細胞過形成、及び新生物の後に起こる細胞外マトリックス成分の蓄積に関連する線維症又は線維性障害から選択される、請求項１３～１５に記載の化合物、使用、又は方法。
21. 線維症が、主要臓器疾患、線維増殖性障害、及び外傷に関連する瘢痕に関連する線維症又は線維性障害から選択される、請求項２０に記載の化合物、使用又は方法。
22. 線維症が、間質性肺疾患、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、及び非アルコール性脂肪性肝炎、腎臓病、急性腎障害、慢性腎臓病、遅延型腎移植機能、心臓又は血管疾患、眼の疾患、全身及び局所の強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、デュピュイトラン拘縮、外科的合併症、化学療法薬物誘発性線維症、放射線誘発性線維症、偶発的な損傷及び火傷、後腹膜線維症、ならびに腹膜線維症／腹膜瘢痕化に関連する線維症又は線維性障害から選択される、請求項２１に記載の化合物、使用又は方法。
23. 間質性肺疾患に関連する線維症が、サルコイドーシス、珪肺症、薬物反応、感染症、コラーゲン血管疾患、関節リウマチ、全身性硬化症、強皮症、肺線維症、特発性肺線維症、通常の間質性肺炎、間質性肺疾患、原因不明の線維性肺胞炎、閉塞性細気管支炎、及び気管支拡張症から選択される、請求項２２に記載の化合物、使用又は方法。
24. 前記腎疾患が急性腎障害又は慢性腎疾患である、請求項２２に記載の化合物、用途又は方法。
25. 請求項１～１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の薬学的に許容される塩を、１種以上の薬学的に許容される賦形剤と共に含む、医薬組成物。
26. 式（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）及び（ＩＩＩ－Ｂ）：
    

    

    ［式中、
    Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は、請求項１～１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物について定義した通りであり；ＰＧは保護基であり、好ましくはｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ－メトキシベンジルカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル、アセチル、ベンゾイル、ベンジル、カルバメート、ｐ－メトキシベンジル、３，４－ジメトキシベンジル、ｐ－メトキシフェニル、トシル、トリクロロエトキシカルボニル、４－ニトロベンゼンスルホニル及び２－ニトロフェニルスルフェニルから選択される］
    から選択される化合物、その互変異性体、又は前記化合物若しくは互変異性体の塩。