JP2023169138A - キメラ抗原受容体及びｔ細胞受容体並びに使用方法 - Google Patents

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スチュアート エー． シーヴァース
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Abstract

【課題】癌の治療に有用である、抗原結合モチーフの１つ以上を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。【解決手段】本開示の態様は、１つ以上の抗原結合モチーフを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチドに関する。ＣＤ２０に結合する結合モチーフと、任意にＣＤ１９に結合する結合モチーフとを含む抗体及び抗原結合系、並びにそれらを生産する方法及び使用する方法が提供される。本開示の抗体及び抗原結合系は、抗ＣＤ２０結合モチーフと抗ＣＤ１９結合モチーフとを含むＣＡＲを含む。本開示の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９抗原結合系である又はそれらを含む抗体及びＣＡＲ等の組成物が提供され、該組成物を含む細胞療法薬は、例えば癌の治療に有用である。【選択図】なし

Description

［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１８年１２月１２日付で出願された米国仮出願第６２／７７８，８９３号の優先権の利益を主張し、その出願全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
ヒト癌は、本質的に正常細胞で構成され、この正常細胞が遺伝的又はエピジェネティックな変換を受けて異常な癌細胞となる。そうすることで、癌細胞は、正常細胞によって発現されるものとは明確に異なるタンパク質及び他の抗原を発現し始める。これらの異常な腫瘍抗原は、身体の自然免疫系によって、癌細胞を特異的に標的とし死滅させるのに使用され得る。しかしながら、癌細胞は、Ｔリンパ球及びＢリンパ球等の免疫細胞が癌細胞を標的とすることに成功しないように様々な機構を利用する。
現行の療法のＴ細胞療法は、患者において癌細胞を標的とし、死滅させるために富化又は改変されたヒトＴ細胞に頼っている。Ｔ細胞が特定の癌細胞を標的とし死滅させる能力を増加するため、特定の標的癌細胞へとＴ細胞を方向づけるコンストラクトを発現するようＴ細胞を操作する方法が開発された。特定の腫瘍抗原と相互作用することができる結合ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔ細胞が特定の腫瘍抗原を発現する癌細胞を標的とし、死滅させることを可能とする。癌細胞を標的とし、死滅させるためのＣＡＲ及びＴＣＲが必要とされている。
少なくとも第１の態様では、本開示は、抗ＣＤ２０結合モチーフを含む抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントであって、上記抗ＣＤ２０結合モチーフは、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、及び配列番号１９９からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のうちのいずれか１つの３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）の配列と、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、及び配列番号２１０からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のうちのいずれか１つの３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）の配列とを含む、抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントを含む。幾つかの実施の形態では、上記抗ＣＤ２０結合モチーフは、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）を含む第１のドメインと、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を含む第２のドメインとを含み、ここで、（ｉ）上記ＨＣＤＲ１は、配列番号３～配列番号５、配列番号２５～配列番号２７、配列番号４７～配列番号４９、配列番号６９～配列番号７１、配列番号９１～配列番号９３、配列番号１１３～配列番号１１５、配列番号１３５～配列番号１３７、配列番号１５７～配列番号１５９、配列番号１７９～配列番号１８１、及び配列番号２０１～配列番号２０３のいずれか１つによる配列を有し、（ｉｉ）上記ＨＣＤＲ２は、配列番号６～配列番号８、配列番号２８～配列番号３０、配列番号５０～配列番号５２、配列番号７２～配列番号７４、配列番号９４～配列番号９６、配列番号１１６～配列番号１１８、配列番号１３８～配列番号１４０、配列番号１６０～配列番号１６２、配列番号１８２～配列番号１８４、及び配列番号２０４～配列番号２０６のいずれか１つによる配列を有し、（ｉｉｉ）上記ＨＣＤＲ３は、配列番号９～配列番号１１、配列番号３１～配列番号３３、配列番号５３～配列番号５５、配列番号７５～配列番号７７、配列番号９７～配列番号９９、配列番号１１９～配列番号１２１、配列番号１４１～配列番号１４３、配列番号１６３～配列番号１６５、配列番号１８５～配列番号１８７、及び配列
番号２０７～配列番号２０９のいずれか１つによる配列を有し、（ｉｖ）上記ＬＣＤＲ１は、配列番号１４～配列番号１６、配列番号３６～配列番号３８、配列番号５８～配列番号６０、配列番号８０～配列番号８２、配列番号１０２～配列番号１０４、配列番号１２４～配列番号１２６、配列番号１４６～配列番号１４８、配列番号１６８～配列番号１７０、配列番号１９０～配列番号１９２、及び配列番号２１２～配列番号２１４のいずれか１つによる配列を有し、（ｖ）上記ＬＣＤＲ２は、配列番号１７～配列番号１９、配列番号３９～配列番号４１、配列番号６１～配列番号６３、配列番号８３～配列番号８５、配列番号１０５～配列番号１０７、配列番号１２７～配列番号１２９、配列番号１４９～配列番号１５１、配列番号１７１～配列番号１７３、配列番号１９３～配列番号１９５、及び配列番号２１５～配列番号２１７のいずれか１つによる配列を有し、かつ、（ｖｉ）上記ＬＣＤＲ３は、配列番号２０～配列番号２２、配列番号４２～配列番号４４、配列番号６４～配列番号６６、配列番号８６～配列番号８８、配列番号１０８～配列番号１１０、配列番号１３０～配列番号１３２、配列番号１５２～配列番号１５４、配列番号１７４～配列番号１７６、配列番号１９６～配列番号１９８、及び配列番号２１８～配列番号２２０のいずれか１つによる配列を有する。幾つかの実施の形態では、上記ＨＣＤＲは、（ｉ）配列番号３～配列番号５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号６～配列番号８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９～配列番号１１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号２５～配列番号２７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２８～配列番号３０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号３１～配列番号３３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号４７～配列番号４９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号５０～配列番号５２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号５３～配列番号５５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号６９～配列番号７１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号７２～配列番号７４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号７５～配列番号７７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｖ）配列番号９１～配列番号９３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号９４～配列番号９６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９７～配列番号９９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１１３～配列番号１１５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１１６～配列番号１１８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１１９～配列番号１２１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１３５～配列番号１３７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１３８～配列番号１４０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１４１～配列番号１４３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１５７～配列番号１５９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１６０～配列番号１６２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１６３～配列番号１６５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号１７９～配列番号１８１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１８２～配列番号１８４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１８５～配列番号１８７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、又は（ｘ）配列番号２０１～配列番号２０３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２０４～配列番号２０６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号２０７～配列番号２０９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３を含み、かつ、上記ＬＣＤＲは、（ｉ）配列番号１４～配列番号１６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７～配列番号１９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２０～配列番号２２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号３６～配列番号３８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号３９～配列番号４１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号４２～配列番号４４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号５８～配列番号６０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号６１～配列番号６３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号６４～配列番号６６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号８０～配列番号８２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号８３～配列番号８５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号８６～配列番号８８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖ）配列番号１０２～配列番号１０４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１０５～配列番号１０７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１０８～配列番号１１０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１２４～配列番号１２６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１２７～配列番号１２９のい
ずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１３０～配列番号１３２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１４６～配列番号１４８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１４９～配列番号１５１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１５２～配列番号１５４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１６８～配列番号１７０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７１～配列番号１７３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１７４～配列番号１７６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号１９０～配列番号１９２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１９３～配列番号１９５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１９６～配列番号１９８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、又は（ｘ）配列番号２１２～配列番号２１４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号２１５～配列番号２１７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２１８～配列番号２２０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３を含む。
様々な実施の形態では、本開示の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含む第１のドメインと、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む第２のドメインとを含み、ここで、上記ＨＣＤＲ及び上記ＬＣＤＲは、（ｉ）配列番号３～配列番号５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号６～配列番号８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９～配列番号１１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１４～配列番号１６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７～配列番号１９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２０～配列番号２２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号２５～配列番号２７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２８～配列番号３０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号３１～配列番号３３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号３６～配列番号３８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号３９～配列番号４１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号４２～配列番号４４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号４７～配列番号４９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号５０～配列番号５２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号５３～配列番号５５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号５８～配列番号６０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号６１～配列番号６３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号６４～配列番号６６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号６９～配列番号７１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号７２～配列番号７４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号７５～配列番号７７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号８０～配列番号８２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号８３～配列番号８５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号８６～配列番号８８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖ）配列番号９１～配列番号９３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号９４～配列番号９６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９７～配列番号９９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１０２～配列番号１０４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１０５～配列番号１０７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１０８～配列番号１１０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１１３～配列番号１１５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１１６～配列番号１１８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１１９～配列番号１２１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１２４～配列番号１２６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１２７～配列番号１２９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１３０～配列番号１３２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１３５～配列番号１３７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１３８～配列番号１４０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１４１～配列番号１４３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１４６～配列番号１４８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１４９～配列番号１５１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１５２～配列番号１５４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１５７～配列番号１５９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１６０～配列番号１６２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１６３～配列番号１６５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１６８～配列番号１７０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７１～配列番号１７３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１７４～配列番号１７６のいずれか１つによるＬＣＤ
Ｒ３、（ｉｘ）配列番号１７９～配列番号１８１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１８２～配列番号１８４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１８５～配列番号１８７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１９０～配列番号１９２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１９３～配列番号１９５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１９６～配列番号１９８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、又は（ｘ）配列番号２０１～配列番号２０３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２０４～配列番号２０６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号２０７～配列番号２０９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号２１２～配列番号２１４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号２１５～配列番号２１７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２１８～配列番号２２０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３を含む。幾つかの実施の形態では、上記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、上記３つのＨＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、上記３つのＬＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、（ｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、又は配列番号１９９と少なくとも８０％同一であり、かつ、（ｉｉ）上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、又は配列番号２１０と少なくとも８０％同一である。幾つかの実施の形態では、上記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、上記３つのＨＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、上記３つのＬＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、（ｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１２と少なくとも８０％同一であり、（ｉｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号２３と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号３４と少なくとも８０％同一であり、（ｉｉｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号４５と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号５６と少なくとも８０％同一であり、（ｉｖ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号６７と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号７８と少なくとも８０％同一であり、（ｖ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号８９と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１００と少なくとも８０％同一であり、（ｖｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１１１と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１２２と少なくとも８０％同一であり、（ｖｉｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１３３と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１４４と少なくとも８０％同一であり、（ｖｉｉｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１５５と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１６６と少なくとも８０％同一であり、（ｉｘ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１７７と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１８８と少なくとも８０％同一であり、又は（ｘ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１９９と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号２１０と少なくとも８０％同一である。
３つのＨＣＤＲ及び３つのＬＣＤＲを含む本開示の幾つかの実施の形態では、３つのＨＣＤＲ及び３つのＬＣＤＲは単一のポリペプチドによって構成される。３つのＨＣＤＲ及び３つのＬＣＤＲを含む本開示の幾つかの実施の形態では、３つのＨＣＤＲは第１のポリペプチドに含まれ、３つのＬＣＤＲは第２のポリペプチドに含まれる。幾つかの実施の形態では、上記第１のポリペプチドは、抗体重鎖であり、かつ上記第２のポリペプチドは、抗体軽鎖である。
幾つかの実施の形態では、上記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、（ｉ）５Ｔ４、αフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ細胞受容体、ＣＡ－１２５、癌胎児性抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ７９、ＣＤ７８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、
ＣＳＰＧ４、ＩｇＭ、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮性腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ－１１Ｒα、κ鎖、λ鎖、メラノーマ関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ－１、突然変異ｐ５３、突然変異ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＥｐｈＡ３（ＥＰＨ受容体Ａ３）、ＢＡＦＦＲ（Ｂ細胞活性化因子受容体）、及びそれらの組合せからなる群から選択される抗原に結合する結合モチーフ、及び／又は（ｉｉ）Ｂ細胞に特徴的な抗原に結合する結合モチーフを更に含み、任意に上記Ｂ細胞に特徴的な抗原はＣＤ１９又はＣＤ２０ではない。幾つかの実施の形態では、上記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、抗ＣＤ１９結合モチーフを更に含む。幾つかの実施の形態では、上記抗ＣＤ１９結合モチーフは、３つのＨＣＤＲを含む第１のドメインと、３つのＬＣＤＲを含む第２のドメインとを含み、ここで、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、かつ、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記ＨＣＤＲ及び上記ＬＣＤＲは、配列番号２２３～配列番号２２５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２２６～配列番号２２８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号２２９～配列番号２３１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号２３４～配列番号２３６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号２３７～配列番号２３９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２４０～配列番号２４２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３を含む。幾つかの実施の形態では、上記抗ＣＤ１９結合モチーフは、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記重鎖可変ドメインは、配列番号２２１と少なくとも８０％同一であり、かつ上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記軽鎖可変ドメインは、配列番号２３２と少なくとも８０％同一である。幾つかの実施の形態では、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲ及び上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲは、単一のポリペプチドに含まれる。幾つかの実施の形態では、上記抗ＣＤ２０結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲ、上記抗ＣＤ２０結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲ、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲ、及び上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲは、一緒になって単一のポリペプチドに含まれる。
様々な実施の形態では、抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、キメラ抗原受容体であるか、又はキメラ抗原受容体に含まれる。幾つかの実施の形態では、抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、キメラ抗原受容体であるか、又はキメラ抗原受容体に含まれる単一のポリペプチドであり、そのキメラ抗原受容体は、二重特異性キメラ抗原受容体である。幾つかの実施の形態では、上記キメラ抗原受容体は、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｔ細胞受容体のα鎖、Ｔ細胞受容体のβ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４若しくはＴ細胞受容体のζ鎖の膜貫通ドメインである膜貫通ドメイン、又はそれらの任意の組合せを含む。幾つかの実施の形態では、（ｉ）上記抗ＣＤ２０結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲ及び上記抗ＣＤ２０結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲは、第１のポリペプチド内に存在し、かつ（ｉｉ）上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲ及び上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲは、一緒になって第２の異なるポリペプチドに含まれる。幾つかの実施の形態では、上記第１のポリペプチドは、第１のキメラ抗原受容体である、又は第１のキメラ抗原受容体に含まれる。幾つかの実施の形態では、上記第２のポリペプチドは、第２のキメラ抗原受容体である、又は第２のキメラ抗原受容体に含まれる。
様々な実施の形態では、本開示は、本開示の少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸及び／又はそのような核酸を含むベクターを含む。さらに、本開示は、操作された細胞を作製する方法であって、本開示の少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸で細胞をトランスフェクション又は形質導入することを含む、方法を含む。さらに、本明細書では、本明細書に示される抗原結合系、抗体、又は抗原結合フラグメントをコード又は発現する細胞であって、任意に該細胞は免疫細胞であり、任意に該細胞はＴ細胞である、細胞が提供される。
本開示は、治療を必要とする被験体における癌を治療する方法であって、本開示の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントをコードする又はこれらを含む１つ以上の細胞を含む細胞療法組成物を上記被験体に投与することを含む、方法を更に含む。また、本明細書では、被験体における免疫応答を誘発する又は被験体を癌に対して免疫化する方法であって、本開示の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントをコードする又はこれらを含む１つ以上の細胞を含む細胞療法組成物を上記被験体に投与することを含む、方法が提供される。幾つかの実施の形態では、上記細胞は、ＣＡＲ－Ｔ細胞である。様々な実施の形態では、前記癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性の白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、有毛細胞性白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性障害（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、形質細胞腫（形質細胞異常増殖症；孤立性骨髄腫；孤立性形質細胞腫；髄外性形質細胞腫；及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換後濾胞性リンパ腫、若しくはワルデンストレームマクログロブリン血症、又はそれらの組合せである。幾つかの実施の形態では、細胞療法は、同種異系細胞療法又は自家細胞療法である。
本開示の少なくとも１つの態様は、抗ＣＤ２０結合モチーフを含むキメラ抗原受容体であって、上記抗ＣＤ２０結合モチーフは、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、及び配列番号１９９からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の配列のうちのいずれか１つに含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）と、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、及び配列番号２１０からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の配列のうちのいずれか１つに含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）とを含む、キメラ抗原受容体を含む。幾つかの実施の形態では、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含む第１のドメイン及び３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む第２のドメインにおいて、（ｉ）上記ＨＣＤＲ１は、配列番号３～配列番号５、配列番号２５～配列番号２７、配列番号４７～配列番号４９、配列番号６９～配列番号７１、配列番号９１～配列番号９３、配列番号１１３～配列番号１１５、配列番号１３５～配列番号１３７、配列番号１５７～配列番号１５９、配列番号１７９～配列番号１８１、及び配列番号２０１～配列番号２０３のいずれか１つによる配列を有し、（ｉｉ）上記ＨＣＤＲ２は、配列番号６～配列番号８、配列番号２８～配列番号３０、配列番号５０～配列番号５２、配列番号７２～配列番号７４、配列番号９４～配列番号９６、配
列番号１１６～配列番号１１８、配列番号１３８～配列番号１４０、配列番号１６０～配列番号１６２、配列番号１８２～配列番号１８４、及び配列番号２０４～配列番号２０６のいずれか１つによる配列を有し、（ｉｉｉ）上記ＨＣＤＲ３は、配列番号９～配列番号１１、配列番号３１～配列番号３３、配列番号５３～配列番号５５、配列番号７５～配列番号７７、配列番号９７～配列番号９９、配列番号１１９～配列番号１２１、配列番号１４１～配列番号１４３、配列番号１６３～配列番号１６５、配列番号１８５～配列番号１８７、及び配列番号２０７～配列番号２０９のいずれか１つによる配列を有し、（ｉｖ）上記ＬＣＤＲ１は、配列番号１４～配列番号１６、配列番号３６～配列番号３８、配列番号５８～配列番号６０、配列番号８０～配列番号８２、配列番号１０２～配列番号１０４、配列番号１２４～配列番号１２６、配列番号１４６～配列番号１４８、配列番号１６８～配列番号１７０、配列番号１９０～配列番号１９２、及び配列番号２１２～配列番号２１４のいずれか１つによる配列を有し、（ｖ）上記ＬＣＤＲ２は、配列番号１７～配列番号１９、配列番号３９～配列番号４１、配列番号６１～配列番号６３、配列番号８３～配列番号８５、配列番号１０５～配列番号１０７、配列番号１２７～配列番号１２９、配列番号１４９～配列番号１５１、配列番号１７１～配列番号１７３、配列番号１９３～配列番号１９５、及び配列番号２１５～配列番号２１７のいずれか１つによる配列を有し、かつ、（ｖｉ）上記ＬＣＤＲ３は、配列番号２０～配列番号２２、配列番号４２～配列番号４４、配列番号６４～配列番号６６、配列番号８６～配列番号８８、配列番号１０８～配列番号１１０、配列番号１３０～配列番号１３２、配列番号１５２～配列番号１５４、配列番号１７４～配列番号１７６、配列番号１９６～配列番号１９８、及び配列番号２１８～配列番号２２０のいずれか１つによる配列を有する。幾つかの実施の形態では、上記ＨＣＤＲは、（ｉ）配列番号３～配列番号５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号６～配列番号８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９～配列番号１１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号２５～配列番号２７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２８～配列番号３０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号３１～配列番号３３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号４７～配列番号４９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号５０～配列番号５２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号５３～配列番号５５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号６９～配列番号７１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号７２～配列番号７４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号７５～配列番号７７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｖ）配列番号９１～配列番号９３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号９４～配列番号９６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９７～配列番号９９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１１３～配列番号１１５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１１６～配列番号１１８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１１９～配列番号１２１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１３５～配列番号１３７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１３８～配列番号１４０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１４１～配列番号１４３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１５７～配列番号１５９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１６０～配列番号１６２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１６３～配列番号１６５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号１７９～配列番号１８１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１８２～配列番号１８４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１８５～配列番号１８７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、又は（ｘ）配列番号２０１～配列番号２０３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２０４～配列番号２０６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号２０７～配列番号２０９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３を含み、かつ、上記ＬＣＤＲは、（ｉ）配列番号１４～配列番号１６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７～配列番号１９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２０～配列番号２２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号３６～配列番号３８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号３９～配列番号４１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号４２～配列番号４４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号５８～配列番号６０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号６１～配列番号６３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号６４～配列番号
６６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号８０～配列番号８２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号８３～配列番号８５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号８６～配列番号８８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖ）配列番号１０２～配列番号１０４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１０５～配列番号１０７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１０８～配列番号１１０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１２４～配列番号１２６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１２７～配列番号１２９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１３０～配列番号１３２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１４６～配列番号１４８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１４９～配列番号１５１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１５２～配列番号１５４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１６８～配列番号１７０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７１～配列番号１７３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１７４～配列番号１７６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号１９０～配列番号１９２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１９３～配列番号１９５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１９６～配列番号１９８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、又は（ｘ）配列番号２１２～配列番号２１４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号２１５～配列番号２１７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２１８～配列番号２２０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施の形態では、上記キメラ抗原受容体は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含む第１のドメインと、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む第２のドメインとを含み、ここで、３つのＨＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、３つのＬＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、上記ＨＣＤＲ及び上記ＬＣＤＲは、（ｉ）配列番号３～配列番号５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号６～配列番号８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９～配列番号１１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１４～配列番号１６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７～配列番号１９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２０～配列番号２２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号２５～配列番号２７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２８～配列番号３０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号３１～配列番号３３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号３６～配列番号３８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号３９～配列番号４１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号４２～配列番号４４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号４７～配列番号４９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号５０～配列番号５２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号５３～配列番号５５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号５８～配列番号６０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号６１～配列番号６３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号６４～配列番号６６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号６９～配列番号７１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号７２～配列番号７４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号７５～配列番号７７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号８０～配列番号８２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号８３～配列番号８５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号８６～配列番号８８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖ）配列番号９１～配列番号９３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号９４～配列番号９６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９７～配列番号９９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１０２～配列番号１０４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１０５～配列番号１０７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１０８～配列番号１１０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１１３～配列番号１１５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１１６～配列番号１１８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１１９～配列番号１２１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１２４～配列番号１２６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１２７～配列番号１２９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１３０～配列番号１３２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１３５～配列番号１３７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１３８～配列番号１４０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１４１～配列番号１４３
のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１４６～配列番号１４８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１４９～配列番号１５１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１５２～配列番号１５４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１５７～配列番号１５９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１６０～配列番号１６２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１６３～配列番号１６５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１６８～配列番号１７０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７１～配列番号１７３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１７４～配列番号１７６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号１７９～配列番号１８１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１８２～配列番号１８４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１８５～配列番号１８７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１９０～配列番号１９２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１９３～配列番号１９５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１９６～配列番号１９８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、又は（ｘ）配列番号２０１～配列番号２０３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２０４～配列番号２０６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号２０７～配列番号２０９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号２１２～配列番号２１４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号２１５～配列番号２１７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２１８～配列番号２２０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３を含む。様々な実施の形態では、上記キメラ抗原受容体は、上記３つのＨＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、上記３つのＬＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、（ｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、又は配列番号１９９と少なくとも８０％同一であり、かつ、（ｉｉ）上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、又は配列番号２１０と少なくとも８０％同一である。幾つかの実施の形態では、上記キメラ抗原受容体は、上記３つのＨＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、上記３つのＬＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、（ｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１２と少なくとも８０％同一であり、（ｉｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号２３と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号３４と少なくとも８０％同一であり、（ｉｉｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号４５と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号５６と少なくとも８０％同一であり、（ｉｖ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号６７と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号７８と少なくとも８０％同一であり、（ｖ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号８９と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１００と少なくとも８０％同一であり、（ｖｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１１１と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１２２と少なくとも８０％同一であり、（ｖｉｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１３３と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１４４と少なくとも８０％同一であり、（ｖｉｉｉ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１５５と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１６６と少なくとも８０％同一であり、（ｉｘ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１７７と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号１８８と少なくとも８０％同一であり、又は（ｘ）上記重鎖可変ドメインは、配列番号１９９と少なくとも８０％同一であり、かつ上記軽鎖可変ドメインは、配列番号２１０と少なくとも８０％同一である。
３つのＨＣＤＲ及び３つのＬＣＤＲを含む幾つかの実施の形態では、３つのＨＣＤＲ及び３つのＬＣＤＲは単一のポリペプチドに含まれる。３つのＨＣＤＲ及び３つのＬＣＤＲを含む幾つかの実施の形態では、３つのＨＣＤＲは第１のポリペプチドに含まれ、３つのＬＣＤＲは第２のポリペプチドに含まれる。幾つかの実施の形態では、上記第１のポリペ
プチドは、抗体重鎖であり、かつ上記第２のポリペプチドは、抗体軽鎖である。幾つかの実施の形態では、上記キメラ抗原受容体は、（ｉ）５Ｔ４、αフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ細胞受容体、ＣＡ－１２５、癌胎児性抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ７９、ＣＤ７８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＩｇＭ、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮性腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ－１１Ｒα、κ鎖、λ鎖、メラノーマ関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ－１、突然変異ｐ５３、突然変異ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＥｐｈＡ３（ＥＰＨ受容体Ａ３）、ＢＡＦＦＲ（Ｂ細胞活性化因子受容体）、及びそれらの組合せからなる群から選択される抗原に特異的に結合する結合モチーフ、及び／又は（ｉｉ）Ｂ細胞に特徴的な抗原に特異的に結合する結合モチーフを更に含み、任意に上記Ｂ細胞に特徴的な抗原はＣＤ１９又はＣＤ２０ではない。幾つかの実施の形態では、上記キメラ抗原受容体は、抗ＣＤ１９結合モチーフを更に含む。
幾つかの実施の形態では、請求項４０のキメラ抗原受容体において、上記抗ＣＤ１９結合モチーフは、３つのＨＣＤＲを含む第１のドメインと、３つのＬＣＤＲを含む第２のドメインとを含み、ここで、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、かつ、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記ＨＣＤＲ及び上記ＬＣＤＲは、配列番号２２３～配列番号２２５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２２６～配列番号２２８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号２２９～配列番号２３１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号２３４～配列番号２３６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号２３７～配列番号２３９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２４０～配列番号２４２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３を含む。幾つかの実施の形態では、上記抗ＣＤ１９結合モチーフは、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記重鎖可変ドメインは、配列番号２２１と少なくとも８０％同一であり、かつ上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記軽鎖可変ドメインは、配列番号２３２と少なくとも８０％同一である。幾つかの実施の形態では、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲ及び上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲは、単一のポリペプチドに含まれる。
幾つかの実施の形態では、上記抗ＣＤ２０結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲ、上記抗ＣＤ２０結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲ、上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＨＣＤＲ、及び上記抗ＣＤ１９結合モチーフの上記３つのＬＣＤＲは、一緒になって単一のポリペプチドに含まれる。幾つかの実施の形態では、上記キメラ抗原受容体は、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｔ細胞受容体のα鎖、Ｔ細胞受容体のβ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４若しくはＴ細胞受容体のζ鎖の膜貫通ドメインである膜貫通ドメイン、又はそれらの任意の組合せを含む。
様々な実施の形態では、本開示は、本開示の第１のキメラ抗原受容体と、５Ｔ４、αフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ細胞受容体、ＣＡ－１２５、癌胎児性抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ７９、ＣＤ７８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＩｇＭ
、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮性腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ－１１Ｒα、κ鎖、λ鎖、メラノーマ関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ－１、突然変異ｐ５３、突然変異ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＥｐｈＡ３（ＥＰＨ受容体Ａ３）、ＢＡＦＦＲ（Ｂ細胞活性化因子受容体）、及びそれらの組合せからなる群から選択される抗原に特異的に結合する結合モチーフ、及び／又はＢ細胞に特徴的な抗原に特異的に結合する結合モチーフを含み、任意にＢ細胞に特徴的な抗原はＣＤ１９又はＣＤ２０ではない、第２のキメラ抗原受容体とを含むバイシストロン性キメラ抗原受容体を含む。幾つかの実施の形態では、第２のキメラ抗原受容体は抗ＣＤ１９結合モチーフを含む。
さらに、本開示は、本開示の少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸及び／又はそのような核酸を含むベクターを提供する。本開示はまた、操作された細胞を作製する方法であって、本開示の核酸で細胞をトランスフェクション又は形質導入することを含む、方法を含む。様々な実施の形態では、本開示は、本明細書に示されるキメラ抗原受容体をコード又は発現する細胞であって、任意に該細胞が免疫細胞であり、任意に該細胞がＴ細胞である、細胞を含む。
本開示は、治療を必要とする被験体における癌を治療する方法であって、本開示のキメラ抗原受容体をコードする又は含む１つ以上の細胞を含む細胞療法組成物を上記被験体に投与することを含む、方法を更に提供する。本開示は、被験体における免疫応答を誘発する又は被験体を癌に対して免疫化する方法であって、本開示のキメラ抗原受容体をコードする又は含む１つ以上の細胞を含む細胞療法組成物を上記被験体に投与することを含む、方法を更に提供する。幾つかの実施の形態では、上記細胞は、ＣＡＲ－Ｔ細胞である。様々な実施の形態では、前記癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性の白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、有毛細胞性白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性障害（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、形質細胞腫（形質細胞異常増殖症；孤立性骨髄腫；孤立性形質細胞腫；髄外性形質細胞腫；及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換後濾胞性リンパ腫、若しくはワルデンストレームマクログロブリン血症、又はそれらの組合せである。幾つかの実施の形態では、上記細胞療法は、同種異系細胞療法又は自家細胞療法である。
少なくとも１つの態様では、本開示は、抗ＣＤ２０結合モチーフと、ＣＤ１９結合モチーフとを含むキメラ抗原受容体であって、抗ＣＤ２０結合モチーフが、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、配列番号１９９、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、及び配列番号２１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、キメラ抗原受容体を含む。幾つかの実施の形態では、ＣＤ１９結合モチーフは
、配列番号２２１及び配列番号２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施の形態では、抗ＣＤ２０結合モチーフは、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、配列番号１９９、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、及び配列番号２１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、ＣＤ１９結合モチーフは、配列番号２２１及び配列番号２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施の形態では、抗ＣＤ２０結合モチーフ及びＣＤ１９結合モチーフは１つのポリペプチドに含まれる。幾つかの実施の形態では、抗ＣＤ２０結合モチーフ及びＣＤ１９結合モチーフは異なるポリペプチドに含まれる。
少なくとも１つの態様では、本開示は、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、配列番号１９９、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、及び配列番号２１０からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む。少なくとも１つの態様では、本開示は、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、配列番号１９９、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、及び配列番号２１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する抗ＣＤ２０結合モチーフを含むキメラ抗原受容体を含む医薬組成物を含む。幾つかの実施の形態では、該組成物はＣＤ１９結合モチーフを更に含む。
本開示は、新規の抗原結合分子を含む新規のポリペプチド、及び該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。本開示の幾つかの態様は、本明細書に開示される重鎖及び軽鎖（又はそれらのＣＤＲ）のうちの少なくとも１つを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドに関する。また、本開示は、かかるポリヌクレオチドを含むベクター（例えばウイルスベクター）、及びかかるベクターを含む組成物を提供する。本開示は、かかるＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチド、及びかかるポリヌクレオチドを含む組成物を更に提供する。さらに、本開示は、かかるポリヌクレオチドを含む及び／又はかかるウイルスベクターによって形質導入された操作された細胞（例えばＴ細胞）、並びにかかる操作された細胞を含む組成物を提供する。本開示は、複数の操作されたＴ細胞を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。本開示は、かかる操作されたＴ細胞及び組成物を製造する方法、並びにかかる操作されたＴ細胞及び組成物の（例えば黒色腫の治療における）使用を提供する。また、本開示は、本開示のポリヌクレオチド、ベクター、又はポリペプチドを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む、腫瘍に対する免疫を誘導する方法を提供する。本開示の他の態様は、上記ＣＡＲを含む細胞、及び癌を患っている患者の治療のためのＴ細胞療法における該細胞の使用に関する。
本明細書に記載される任意の態様又は実施形態は、本明細書に開示される任意の他の態様又は実施形態と組み合わせられ得る。本開示はその詳細な説明と併せて記載されているが、上述の記載は解説を意図するものであって、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲を限定するものではない。他の態様、利点、及び変更形態は、添付の特許請求の範囲に含まれる。本明細書で言及される特許及び科学文献は、当業者に利用可能な知識を確立する。本明細書で引用される米国特許、及び公開又は未公開の米国特許出願はいずれも、引用することにより本明細書の一部をなす。本明細書で引用される公開された外国の特許及び特許出願はいずれも引用することにより本明細書の一部をなす。本明細書で引用される他の公開された参照文献、辞書、文書、原稿及び科学文献はいずれも、引用
することにより本明細書の一部をなす。本開示の他の特徴及び利点は、実施例を含む以下の詳細な説明、及び特許請求の範囲から明らかとなる。
定義
本開示がより容易に理解されるように、まず或る特定の用語を以下に定義する。以下の用語及び他の用語に対する更なる定義は、本明細書を通して記載される。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される、数量を特定していないもの（the singular forms "a," "an" and "the"）は、文脈より別段の明確な指示がない限り複数の指示対象を含む。
具体的に述べられない又は文脈より明らかでない限り、本明細書で使用される「又は」の用語は「又は」と「及び」の両方を含み、それらを包含すると理解される。
本明細書において使用される場合、「及び／又は」の用語は、２つの指定される特徴又は成分の各々ともう一方とを含む、又はもう一方を含まない具体的な開示として理解される。したがって、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」等の句で使用される「及び／又は」の用語は、Ａ及びＢ；Ａ又はＢ；Ａ（単独）；並びにＢ（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」等の句において使用される「及び／又は」の用語は、Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）の態様の各々を包含することが意図される。
本明細書で使用される「例えば」及び「すなわち」の用語は、限定を意図せずに例として使用されるにすぎず、本明細書において明らかに列挙されるそれらの項目のみを指すものと解釈されるべきではない。
「以上」、「少なくとも」、「それよりも多く」等の用語、例えば「少なくとも１つ」は、限定されるものではないが、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９又は１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、又は示される値よりも多い値を含むと理解される。また、任意のより大きな数、又はその間の分数も含まれる。
逆に、「以下」の用語は示される値よりも小さい各値を含む。例えば、「１００ヌクレオチド以下」は、１００個、９９個、９８個、９７個、９６個、９５個、９４個、９３個、９２個、９１個、９０個、８９個、８８個、８７個、８６個、８５個、８４個、８３個、８２個、８１個、８０個、７９個、７８個、７７個、７６個、７５個、７４個、７３個、７２個、７１個、７０個、６９個、６８個、６７個、６６個、６５個、６４個、６３個
、６２個、６１個、６０個、５９個、５８個、５７個、５６個、５５個、５４個、５３個、５２個、５１個、５０個、４９個、４８個、４７個、４６個、４５個、４４個、４３個、４２個、４１個、４０個、３９個、３８個、３７個、３６個、３５個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個及び０個のヌクレオチドを含む。また、任意のより小さな数、又はその間の分数も含まれる。
「複数」、「少なくとも２つ」、「２以上」、「少なくとも第２の」等の用語は、限定されるものではないが、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９又は１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００以上を含むと理解される。また、任意のより大きな数、又はその間の分数も含まれる。
本明細書を通して、「含んでいる、含む（comprising）」の文言、又は「含む（comprises）」若しくは「含んでいる（comprising）」等の変化形は、示される要素、整数若し
くは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を含むことを含意するが、任意の他の要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を排除しないと理解される。本明細書において「含んでいる、含む」の言葉と共に態様が記載される場合はいつでも、「からなる」及び／又は「から本質的になる」の用語で記載される他の類似の態様も提供されると理解される。
具体的に述べられておらず又は文脈より明らかでない限り、本明細書で使用される「約」の用語は、当業者によって決定される特定の値又は組成に対する許容可能な誤差範囲に含まれる値又は組成を指し、その値又は組成がどのように測定され又は決定されるのか、すなわち測定システムの制限に部分的に依存する。例えば、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる（comprising essentially of）」は、当該技術分野における１
回の実施当たりの１以上の標準偏差の範囲内を意味し得る。「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」は、最大１０％（すなわち±１０％）の範囲を意味し得る。したがって、「約」は、示される値よりも１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、０．０１％、又は０．００１％大きい又は小さい範囲に含まれると理解され得る。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇ～５．５ｍｇの間の任意の量を含み得る。さらに、特に生物学的なシステム又はプロセスに関して、上記用語は、或る値の最大１０倍又は最大５倍を意味する場合がある。特定の値又は組成が本開示で提供される場合、別段の指示がない限り、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」の意味は、その特定の値又は組成に対する許容可能な誤差の範囲に含まれるとされる。
本明細書に記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージの範囲、比率範囲、又は整数の範囲は、別段の指示がない限り、述べられる範囲に含まれる任意の整数、また適切な場合には、その分数（或る整数の１０分の１、及び１００分の１等）の値を含むものと理解される。
本明細書で使用される単位、接頭辞及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ：Systeme International de Unites）の容認される形態を用いて提示される。数値範囲は、その範
囲を規定する数値を含む。
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、この開示が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (2001), CRC Press、"The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013),
Academic Press、及び"The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Pressは、この開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。
「投与すること、投与する（Administering）」は、当業者に知られている様々な方法
及び送達システムのいずれかを使用する、被験体に対する薬剤の物理的な導入を指す。本明細書に開示される製剤のための例示的な投与経路には、例えば注射又は点滴による、静脈内投与経路、筋肉内投与経路、皮下投与経路、腹腔内投与経路、脊髄投与経路、又は他の非経口（parenteral：腸管外）投与経路が含まれる。「非経口投与」の句は、経腸及び局所の投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ管内、病巣内、関節腔内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、関節腔下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び点滴、また同様にｉｎ ｖｉｖｏ電気穿孔を含む。幾つかの実施形態では、上記製剤は、非経口的ではない経路、例えば経口で投与される。他の非経口的ではない経路として、局所、表皮、又は粘膜の投与経路、例えば、鼻腔内、経膣的、直腸、舌下又は局所的なものが挙げられる。また、投与は、例えば１回、複数回、及び／又は１以上の延長された期間に亘って行われ得る。
「抗体」（Ａｂ）の用語は、限定されず、抗原に特異的に結合する糖タンパク質免疫グロブリンを含む。一般に、抗体は、ジスルフィド結合によって相互に連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖、又はそれらの抗原結合分子を含み得る。各Ｈ鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略記する）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つの定常ドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略記する）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つの定常ドメイン、すなわちＣＬを含む。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存される領域が介在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に細分され得る。ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシ末端にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順で並ぶ、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。Ａｂの定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主の組織又は因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。概して、ヒト抗体は、２つの同一の重（Ｈ）鎖ポリペプチド（それぞれ約５０ｋＤ）及び２つの同一の軽（Ｌ）鎖ポリペプチド（それぞれ約２５ｋＤ）から構成され、これらが互いに結び付いて、一般に「Ｙ字型」構造と呼ばれるものになる、およそ１５０ｋＤの四量体作用物質である。重鎖と軽鎖とは単一のジスルフィド結合によって互いに連結又は接続されており、２つの他のジスルフィド結合は重鎖ヒン
ジ領域を互いに接続し、こうして二量体が互いに接続され、四量体が形成される。天然に産生される抗体はまた、例えばＣＨ２ドメイン上でグリコシル化されている。
「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列又はそれと区別することができない配列から作製、集成、又は誘導された可変ドメイン配列及び定常ドメイン配列を有する抗体を含むことが意図される。幾つかの実施形態では、抗体（又は抗体構成要素）は、それらのアミノ酸配列が、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていない残基又は要素（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダム突然変異誘発若しくは部位特異的突然変異誘発によって導入された変異、又はｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入された変異）を含むとしても、「ヒト」であるとみなされ得る。「ヒト化」という用語は、非ヒト種（例えば、マウス）の可変ドメインから誘導され、ヒト生殖系列にコードされた配列により類似するように改変された配列を有する可変ドメインを有する抗体を含むことが意図される。幾つかの実施形態では、「ヒト化」抗体は、ヒトフレームワークドメインのアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上のフレームワークドメインと、非ヒト抗体のアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上の相補性決定領域とを含む。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、一般にヒト免疫グロブリン定常ドメインの少なくとも一部を含む。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト重鎖定常ドメインのＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、及び任意にＣＨ４領域を含み得る。
抗体として、例えば、モノクローナル抗体、組換えにより生成された抗体、単一特異的抗体、多重特異的抗体（二重特異的抗体を含む）、ヒト抗体、操作された抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２本の重鎖分子及び２本の軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖対、イントラボディ（intrabodies）、抗体融合体（本明細書では「抗体
コンジュゲート」と称されることがある）、ヘテロコンジュゲート抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ（affybodies）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば抗－抗－Ｉｄ抗体を含む）、ミニボディ（minibodies）、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣物」と称されることがある）、及び上記のいずれかの抗原結合フラグメントが挙げられ得る。或る特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体はまた、例えば、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、単離されたＣＤＲ、単鎖Ｆｖ、ポリペプチド－Ｆｃ融合物、単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲ等のサメ単一ドメイン抗体又はそのフラグメント）、ラクダ化抗体、単鎖ダイアボディ又はタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（商標））、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（商標）、ミニボディ、ＢｉＴＥ（商標）、アンキリンリピートタンパク質又はＤＡＲＰＩＮ（商標）、Ａｖｉｍｅｒ（商標）、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（商標）、Ａｆｆｉｌｉｎ（商標）、Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｙ（商標）、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）、ＴｒｉｍｅｒＸ（商標）、ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ（商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ（商標）、及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（商標）を含み得る。
免疫グロブリンは、限定されるものではないが、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ及びＩｇＭを含む、一般的に知られているアイソタイプのいずれかに由来し得る。ＩｇＧサブクラスもまた、当業者に良く知られており、限定されるものではないが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む。「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされるＡｂクラス又はサブクラス（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を指す。「抗体」の用語は、例として、天然起源と非天然起源の両方のＡｂ、モノクローナル及びポリクローナルのＡｂ；キメラＡｂ及びヒト化Ａｂ；ヒトＡｂ又は非ヒトＡｂ；全合
成Ａｂ；並びに単鎖Ａｂを含む。非ヒトＡｂは、ヒトにおけるその免疫原性を減少させるため、組換え法によってヒト化され得る。明確に述べられない場合、また別段の指示がない限り、「抗体」の用語は、前述の免疫グロブリンのいずれかの抗原結合フラグメント又は抗原結合部分も含み、一価及び二価のフラグメント又は部分、並びに単鎖Ａｂを含む。
「抗原結合分子」、「抗原結合部分」又は「抗体フラグメント」は、抗体の抗原結合部（例えばＣＤＲ）を含む任意の分子を指し、この分子は該抗体に由来する。抗原結合分子は、抗原相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。抗体フラグメントの例として、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、ｄＡｂ、直鎖抗体、ｓｃＦｖ抗体、並びに抗原結合分子から形成される多重特異性抗体が挙げられる。ペプチボディ（Peptibodies）（すなわち、ペプチド結合ドメインを含むＦｃ融合
分子）は、好適な抗原結合分子の別の例である。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は腫瘍細胞上の抗原に結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、過剰増殖性疾患（hyperproliferative disease）に関与する細胞上の抗原、又はウイルス若しくは細菌の抗原に結合する。或る特定の実施形態では、抗原結合分子はＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１又はＦＬＴ３に結合する。或る特定の実施形態では、抗原結合分子はＣＤ１９、ＣＤ２０、又はそれらの両方に結合する。更なる実施形態では、抗原結合分子は、その１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗原に特異的に結合する抗体フラグメントである。更なる実施形態では、抗原結合分子は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、アビマー（avimers）を含む、又はそれからなる。
幾つかの場合には、ＣＤＲは、参照抗体（例えば、本開示の抗体）中に見られるＣＤＲ、及び／又は本開示で提供されるＣＤＲの配列と実質的に同一である。幾つかの実施形態では、ＣＤＲは、参照ＣＤＲと比較して配列が同一であるか、又は１個、２個、３個、４個、若しくは５個（例えば、１個～５個）の間のアミノ酸置換を含むかのいずれかの点で、参照ＣＤＲ（例えば、本開示で提供されるＣＤＲ）と実質的に同一である。幾つかの実施形態では、ＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）の配列同一性を示すという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。幾つかの実施形態では、ＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも９６％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を示すという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。幾つかの実施形態では、ＣＤＲは、ＣＤＲ内の１つのアミノ酸が参照ＣＤＲと比較して欠失、付加、又は置換されているという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であるが、ＣＤＲは、参照ＣＤＲのアミノ酸配列とその他の点では同一であるアミノ酸配列を有する。幾つかの実施形態では、ＣＤＲは、ＣＤＲ内の２個、３個、４個、又は５個（例えば、２個～５個）のアミノ酸が参照ＣＤＲと比較して欠失、付加、又は置換されているという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であるが、ＣＤＲは、参照ＣＤＲとその他の点では同一であるアミノ酸配列を有する。様々な実施形態では、抗原結合フラグメントは参照抗体と同じ抗原に結合する。
抗原結合フラグメントは、任意の手段によって生産され得る。例えば、幾つかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、インタクトな抗体の断片化によって酵素的又は化学的に生産され得る。幾つかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、組換え的に（すなわち、操作された核酸配列の発現によって）生産され得る。幾つかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、全体的に又は部分的に合成により生産され得る。幾つかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、少なくとも約５０アミノ酸、６０アミノ酸、７０アミノ酸、８０アミノ酸、９０アミノ酸、１００アミノ酸、１１０アミノ酸、１２０アミノ酸、１３０アミノ酸、１４０アミノ酸、１５０アミノ酸、１６０アミノ酸、１７０アミノ酸、１８０アミノ酸、１９０アミノ酸又はそれより長い長さ、幾つかの実施形態では、少なくと
も約２００アミノ酸（例えば、５０アミノ酸～１００アミノ酸、５０アミノ酸～１５０アミノ酸、５０アミノ酸～２００アミノ酸、又は１００アミノ酸～２００アミノ酸）の長さを有し得る。
「可変領域」又は「可変ドメイン」の用語は、交換可能に使用され、当該技術分野において一般的である。可変領域は、典型的には抗体の一部、一般的には、軽鎖又は重鎖の一部、典型的には成熟重鎖中のアミノ末端の約１１０個～１２０個のアミノ酸、及び成熟軽鎖中の約９０個～１１５個のアミノ酸を指し、それらは、抗体間で配列が広範囲に異なり、その特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性において使用される。配列における可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される領域に濃縮されるのに対し、可変ドメイン中のより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と称される。いかなる特定の機構又は理論にも縛られることを望むものではないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互作用及び特異性を主として担うものと考えられる。或る特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。或る特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲ、及びヒトのフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は霊長類（例えば非ヒト霊長類）の可変領域である。或る特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲ、及び霊長類（例えば非ヒト霊長類）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」の用語は、抗体の軽鎖可変領域又はその抗原結合分子を指すため区別なく使用される。
「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」の用語は、抗体の重鎖可変領域又はその抗原結合分子を指すため区別なく使用される。
ＣＤＲの多くの定義、すなわち、Ｋａｂａｔナンバリング、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング、ＡｂＭナンバリング、又は接触（contact）ナンバリングが一般に使用されている。
ＡｂＭ定義は、Oxford Molecular社のＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される２つの折衷案である。接触定義は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく。
Figure 2023169138000001
「Ｋａｂａｔナンバリング」の用語及び類似の用語は、当該技術分野において認められ、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域、又はその抗原結合分子中のアミノ酸残基をナンバリングするシステムを指す。或る特定の態様では、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って、抗体のＣＤＲを特定することができる（例えば、Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391、及びKabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunol
ogical Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242を参照されたい）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用
すると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、３５（Ｋａｂａｔナンバリングスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）に続いて任意に１つ又は２つの追加のアミノ酸を含み得るアミノ酸３１位～３５位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位～６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸９５位～１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸２４位～３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位～５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸８９位～９７位（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って決定された。
或る特定の態様では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリンの構造ループの位置を指す、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定され得る（例えば、Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917、Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273:
927-948、Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817、Tramontano A et al.,
(1990) J Mol Biol 215(1): 175-82、及び米国特許第７，７０９，２２６号を参照され
たい）。典型的には、Ｋａｂａｔナンバリング規定を使用する場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ－Ｈ１ループは重鎖のアミノ酸２６～３２、３３又は３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ－Ｈ２ループは重鎖のアミノ酸５２～５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ－Ｈ３ループは重鎖のアミノ酸９５～１０２に存在するのに対し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ－Ｌ１ループは軽鎖のアミノ酸２４～３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ－Ｌ２ループは軽鎖のアミノ酸５０～５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ－Ｌ３ループは軽鎖のアミノ酸８９～９７に存在する。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ－ＨＩループの末端は、Ｋａｂａｔナンバリング規定を使用して番号を付与した場合には、ループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４の間で変動する（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くため、すなわち３５Ａも３５Ｂも存在しない場合には３２でループが終了し、３５Ａのみが存在する場合には３３でループが終了し、３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合には３４でループが終了するからである）。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定された。
「定常領域」及び「定常ドメイン」の用語は区別なく用いられ、当該技術分野で共通の意味を有する。定常領域は抗体部分、例えば、抗原に対する抗体の結合に直接関係しないが、Ｆｃ受容体との相互作用等の様々なエフェクター機能を呈し得る、軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。
「重鎖」の用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、ＩｇＧのサブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭのクラスの抗体をそれぞれ生じさせる、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指す場合がある。
「軽鎖」の用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、例えばカッパー（κ）又はラムダ（λ）を指す場合がある。軽鎖アミノ酸配列は当該技術分野においてよく知られている。具体的な実施形態では、軽鎖はヒト軽鎖である。
「結合親和性」は、一般的には、分子（例えば抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合的な相互作用の合計の強さを指す。別段の指示がない限り、本明細書で使用される「結合親和性」は、結合ペアのメンバー（例えば抗
体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的には、解離定数（ＫＤ）によって表され得る。親和性は、限定されるものではないが、平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡会合定数（ＫＡ）を含む、当該技術分野で知られている多くの方法で測定され得る及び／又は表され得る。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算されるが、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば抗原に対する抗体の会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば抗原に対する抗体の解離を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）又はＫｉｎＥｘＡ等の当業者に知られている技術によって決定され得る。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。或る特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合分子のＣＤＲ（複数の場合もある）内又はフレームワーク領域（複数の場合もある）内の１以上のアミノ酸残基を、類似する側鎖を有するアミノ酸残基で置換することができる。概して、２つの配列は、これらが保存的アミノ酸置換を対応する位置に含む場合に、一般に「実質的に類似している」とみなされる。例えば、或る特定のアミノ酸は、一般に「疎水性」アミノ酸若しくは「親水性」アミノ酸として、及び／又は「極性」側鎖若しくは「非極性」側鎖を有するものとして分類される。或るアミノ酸を同じタイプの別のアミノ酸に置換することが保存的置換とみなされ得る。例示的なアミノ酸のカテゴリー分類を以下の表２及び表３にまとめる。
Figure 2023169138000002
Figure 2023169138000003
「異種性（の）（heterologous）」の用語は、天然起源の配列以外の任意の供給源によることを意味する。例えば、配列番号２３２のアミノ酸配列を有する共刺激タンパク質、例えば対応するヒト共刺激タンパク質の一部として含まれる異種性配列は、野生型ヒト共刺激タンパク質として天然に生じない、すなわちそれと整列（align）されないアミノ酸
配列である。例えば、異種性ヌクレオチド配列は、野生型ヒト共刺激タンパク質コーディング配列以外のヌクレオチド配列を指す。
「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えばポリペプチドの隣接するアミノ酸（直鎖の又は隣接するエピトープ）であってもよく、又はエピトープは、例えば、ポリペプチド（複数の場合もある）の２以上の隣接しない領域に共に由来するもの（配座、非直鎖、不連続、又は隣接しないエピトープ）であってもよい。或る特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と結合された水素／重水素交換（例えば液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイに基づくオリゴペプチド走査アッセイ、及び／又は突然変異誘発マッピング（例えば部位特異的変異誘発マッピング）によって特定され得る。Ｘ線結晶学研究のため、結晶化は、当該技術分野の既知の方法（例えば、Giege R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350、McPherson A (1990)
Eur J Biochem 189: 1-23、Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274、McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303）のいずれかを使用して遂行され得る。抗体：抗原の結晶は、良く知られているＸ線回折技術を使用して研究され得て、Ｘ－ＰＬＯＲ（Yale University, 1992、Molecular Simulations, Inc.によって配布；例えば、Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,を参照されたい；米国特許出願公開
第２００４／００１４１９４号）、及びＢＵＳＴＥＲ（Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60、Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW、Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323）等のコンピューターソフトウェアを使用してリファインされ得る。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して遂行され得る。例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む、突然変異誘発技術の説明について、Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394、及びCunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085を参照されたい。
抗原と、第１の結合分子、抗体又はその抗原結合分子との相互作用が、参照結合分子、参照抗体又はその抗原結合分子の抗原と相互作用する能力を遮断する、制限する、阻害する、或いは減少させる場合、抗原結合分子、抗体又はその抗原結合分子は、参照抗体又はその抗原結合分子と「交差競合する」。交差競合は、完全なものであってもよく、例えば、抗原に対する結合分子の結合が、参照結合分子の抗原に結合する能力を完全に遮断するか、又は交差競合は、部分的であってもよく、例えば、抗原に対する結合分子の結合が、参照結合分子の抗原に結合する能力を減少させる。或る特定の実施形態では、参照抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子は、参照抗原結合分子と同じ、又はそれと重複するエピトープを結合する。他の実施形態では、参照抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子は、参照抗原結合分子とは異なるエピトープを結合する。多くの種類の競合結合アッセイ
、例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）；固相直接又は間接酵素免疫定量法（ＥＩＡ）；サンドイッチ競合アッセイ（Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press）；Ｉ１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552）；及び直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82）を使用して、或る一つの抗原結合分子が他方と競合するかどうかを判断することができる。
「結合」という用語は、一般に２つ以上の実体間の非共有結合的な結び付きを指す。直接的な結合には、実体又は部分間の物理的接触が含まれる。「間接的な」結合には、１つ以上の介在する実体との物理的接触による物理的相互作用が含まれる。２つ以上の実体間の結合は、例えば、相互作用する実体若しくは部分が単離されて研究される様々な状況のいずれかで、又はより複雑な系の状況で（例えば、担体の実体と共有結合的に又は別の方法で結び付けられる間に及び／又は細胞等の生物学的系において）評価され得る。
「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」の用語は、抗体に関して類似の用語であって、抗原（例えばエピトープ又は免疫複合体）に結合する分子を指し、かかる結合は当業者によって理解される通りである。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、一般的には、例えばイムノアッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、ＫｉｎＥｘＡ ３０００測定器（アイダホ州ボイシのSapidyne Instruments）又は当該技術分野で知られている他のアッセイによって特定されるように、より低い親和性で他のペプチド又はポリペプチドに結合し得る。具体的な実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、分子が別の抗原に結合する場合のＫＡと比べて少なくとも２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、４ｌｏｇ以上のＫＡで抗原に結合する。結合は、結合モチーフ、抗体、又は抗原結合系と標的ではない実体（すなわち、非標的）との結び付きと比較した、結合モチーフ、抗体、又は抗原結合系と結合モチーフ、抗体、又は抗原結合系の標的との優先的な結び付きを含み得る。幾つかの実施形態では、結合モチーフ、抗体、又は抗原結合系と標的との間の結合が結合モチーフ、抗体、又は抗原結合系と非標的との結合と比較して２倍超、５倍超、１０倍超、２０倍超、３０倍超、４０倍超、５０倍超、６０倍超、７０倍超、８０倍超、９０倍超、又は１００倍超である場合に、結合モチーフ、抗体、又は抗原結合系は、標的に選択的に結合する。幾つかの実施形態では、結合親和性が約１０－５Ｍ未満、約１０－６Ｍ未満、約１０－７Ｍ未満、約１０－８Ｍ未満、又は約１０－９Ｍ未満である場合に、結合モチーフ、抗体、又は抗原結合系は、標的に選択的に結合する。
別の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、約１×１０－７Ｍの解離定数（Ｋｄ）で結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、Ｋｄが約１×１０－９Ｍ～約５×１０－９Ｍである場合、「高い親和性」で抗原を特異的に結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、Ｋｄが約１×１０－１０Ｍ～約５×１０－１０Ｍである場合、「非常に高い親和性」で抗原を特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合分子は１０－９ＭのＫｄを有する。一実施形態では、解離速度（off-rate）は約１×１０－５未満である。他の実施形態では、抗原結合分子は、約１×１０－７Ｍ～約１×１０－１３ＭのＫｄでヒトＢＣＭＡを結合する。更に別の実施形態では、抗原結合分子は、約１×１０－１０Ｍ～約５×１０－１０ＭのＫｄでヒトＢＣＭＡを結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、ヒトＣＤ１９、ＣＤ２０、又はその両方に、約１×１０－７Ｍ～約１×１０－１３ＭのＫｄで結合する。更に別の実施形態では、抗原結合分子は、ヒトＣＤ１９、ＣＤ２０、又はその両方に、約１×１０－１０Ｍ～約５×１０－１０ＭのＫｄで結合する
。
具体的な実施形態では、別の種の標的抗原、例えば非ヒトＢＣＭＡ又は非ヒトＣＬＬ－１に対するよりも高い親和性にて標的ヒト抗原、例えばヒトＢＣＭＡ又はヒトＣＬＬ－１に結合する抗体又はその抗原結合分子が本明細書に示される。幾つかの実施形態では、ヒトＣＤ１９、ヒトＣＤ２０、又はその両方に、一方の標的抗原又は両方の標的抗原の別の種、例えば非ヒトＣＤ１９、非ヒトＣＤ２０、又はその両方に対するよりも高い親和性で結合する抗体又はその抗原結合分子が本明細書に示される。或る特定の実施形態では、例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴又は動力学的排除アッセイ（kinetic exclusion assay）によって測定される、別の種の標的抗原に対するよりも５％、１０％、
１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％高い親和性にて標的ヒト抗原、例えばヒトＢＣＭＡ又はヒトＣＬＬ－１に結合する抗体又はその抗原結合分子が本明細書に示される。或る特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９、ヒトＣＤ２０、又はその両方に、例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、又は動力学的排除アッセイによって測定される、一方の標的抗原又は両方の標的抗原の別の種に対するよりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％高い親和性で結合する抗体又はその抗原結合分子が本明細書に示される。具体的な実施形態では、標的ヒト抗原に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合分子は、例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴又は動力学的排除アッセイによって測定される、ヒト抗原に対する抗体又はその抗原結合分子の結合の１０％、１５％、又は２０％未満で別の種の標的抗原に結合する。
「キメラ抗原受容体」、すなわち「ＣＡＲ」は、結合モチーフと、抗原結合時に免疫細胞（例えば、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞等のＴ細胞、又はそれらの組合せ）を活性化する手段とを含むように操作された分子を指す。ＣＡＲは、人工Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、又はキメラ免疫受容体としても知られている。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、結合モチーフ、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、１つ以上の共刺激ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞と呼称され得る。「細胞外ドメイン」（すなわち「ＥＣＤ」）は、ポリペプチドが細胞膜に存在する場合に、細胞膜の外側、すなわち細胞外空間に存在すると理解されるポリペプチドの一部を指す。
「抗原」は、免疫応答を誘発する、又は抗体若しくは抗原結合分子によって結合されることが可能な任意の分子を指す。免疫応答は、抗体産生若しくは特定の免疫適格細胞（immunologically-competent cells）の活性化のいずれか、又はそれらの両方を含み得る。
当業者は、実質的に全てのタンパク質又はペプチドを含む任意の高分子が抗原としての役割を果たし得ることを容易に理解する。抗原は内因性に発現され得て、すなわちゲノムＤＮＡによって発現され得るか、又は組換えによって発現され得る。抗原は、癌細胞等の或る特定の組織に特異的となり得るか、又は広く発現され得る。さらに、より大きな分子の断片が抗原として作用し得る。一実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。特定の一実施形態では、抗原はＣＤ１９又はＣＤ２０の全て又は断片である。「標的」は、結合モチーフ、抗原結合系、又は結合作用物質、例えば抗体によって結合されるあらゆる分子である。幾つかの実施形態では、標的は本開示の抗原又はエピトープである。
「中和する、中和すること」の用語は、リガンドに結合し、そのリガンドの生物学的効果を妨げる又は減少させる抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントを指す。幾つかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントは、リガンド上の結合部位を直接遮断する、或いは間接的な手段（リガンドの構造の又はエネル
ギーの変更等）によってリガンドの結合能を変更する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントは、結合されるタンパク質が生体機能を実施するのを妨げる。
「自己」の用語は、後に再導入されることになっているのと同じ個体に由来する任意の材料を指す。例えば、本明細書に記載される操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））は、患者からのリンパ球の収集を含み、該リンパ球は、その後、例えばＣＡＲコンストラクトを発現するように操作した後、同じ患者に戻される（administered back）。
「同種異系」の用語は、一個体に由来する任意の材料を指し、該材料はその後、同種の別の個体に導入される（例えば同種異系Ｔ細胞移植）。
「形質導入」及び「形質導入された」の用語は、外来ＤＮＡがウイルスベクターによって細胞へと導入されるプロセスを指す（Jones et al., "Genetics: principles and analysis," Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)を参照されたい）。幾つかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタイン－バールウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター、又はそれらの任意の組合せである。
「形質転換」は、外因性ＤＮＡが宿主細胞に導入されるあらゆるプロセスを指す。形質転換は、天然条件又は人工的条件下で様々な方法を使用して行われ得る。形質転換は、原核性宿主細胞又は真核性宿主細胞に外来核酸配列を挿入するあらゆる既知の方法を使用して達成され得る。幾つかの実施形態では、幾つかの形質転換の方法論は、形質転換される宿主細胞及び／又は挿入される核酸に基づいて選択される。形質転換の方法は、限定されるものではないが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、及びリポフェクションを含み得る。幾つかの実施形態では、「形質転換された」細胞は、挿入されたＤＮＡが自律的に複製するプラスミドとして又は宿主染色体の一部としてのいずれかで複製することができるという点で安定して形質転換されている。幾つかの実施形態では、形質転換された細胞は、導入された核酸を発現し得る。
「ベクター」という用語は、示される核酸配列を含む又は包含するように改変されたレシピエント核酸分子を指す。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは追加のＤＮＡがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡ分子を指す。別の種類のベクターはウイルスベクターであり、ここで、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得る。或る特定のベクターは、これらが導入される宿主細胞中で自律複製することができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及び哺乳類エピソーマルベクター）。他のベクター（例えば、哺乳類非エピソーマルベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得ることにより、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、或る特定のベクターは、これらが作動可能に連結される挿入された遺伝子の発現を指示する配列を含む。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼称され得る。例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed.,
Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))（これは、あらゆる目的について、引用することにより本明細書の一部をなす）に見られるような標準的な技術がベクターの操作に使用され得る。
「癌」は、身体における異常な細胞の制御されていない成長を特徴とする、幅広い各種疾患のグループを指す。制御されていない細胞の分裂及び成長は、隣接する組織に侵入して、またリンパ系又は血流によって身体の離れた部分へと転移し得る、悪性腫瘍の形成を
もたらす。「癌」又は「癌組織」は、腫瘍を含む場合がある。本開示の方法によって治療され得る癌の例として、限定されるものではないが、リンパ腫、白血病、骨髄腫、及び他の白血球の悪性腫瘍（leukocyte malignancies）を含む免疫系の癌が挙げられる。幾つかの実施形態では、本開示の方法は、例えば、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頚部癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頚癌、膣癌、外陰癌、多発性骨髄腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ：primary mediastinal large B cell lymphoma）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ：diffuse large
B cell lymphoma）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、形質転換後濾胞性リンパ腫（transformed follicular lymphoma）、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ：splenic marginal zone lymphoma）、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の
肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性又は急性の白血病、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病（chronic myeloid leukemia）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、幼少期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍（spinal axis tumor）、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉
腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、石綿によって誘導されるものを含む、環境によって誘導される癌、他のＢ細胞悪性腫瘍、及び上記癌の組合せに由来する腫瘍のサイズを減少するため使用され得る。特定の一実施形態では、癌は多発性骨髄腫である。特定の癌は、化学療法又は放射線療法に反応性となり得るが、そうでなければその癌は難治性となり得る。難治性癌は、外科的処置に適用できない癌を指し、その癌は最初に化学療法若しくは放射線療法に無反応であるか、又はその癌は経時的に無反応となるかのいずれかである。さらに、癌には、特定不能のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、２ライン以上の全身療法後の縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫に起因するＤＬＢＣＬを含む、２ライン以上の全身療法後の再燃性若しくは難治性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫が含まれる。
本明細書に使用される「抗腫瘍効果」は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少、転移の数の減少、全体生存期間又は無増悪生存期間の増加、平均余命の増加、又は腫瘍と関係する様々な生理学的症状の改善として提示され得る、生物学的効果を指す。また、抗腫瘍効果は、腫瘍の発生の予防、例えばワクチンを指す場合がある。
本明細書で使用される「サイトカイン」は、特異抗原との接触に反応して１つの細胞によって放出される非抗体タンパク質を指し、ここで、サイトカインは第２の細胞と相互作用して、第２の細胞における反応を媒介する。サイトカインは、細胞によって内因性に発現され得るか、又は被験体に投与され得る。サイトカインは、マクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及び肥満細胞を含む免疫細胞によって放出されて、免疫応答を伝播し得る。サイトカインは、レシピエント細胞において様々な反応を誘導し得る。サイトカインは、ホメオスタシスサイトカイン（homeostatic cytokines）、ケモカイン、炎症誘発性サイトカ
イン、エフェクター及び急性期タンパク質を含み得る。例えば、インターロイキン（ＩＬ）７及びＩＬ－１５を含むホメオスタシスサイトカインは、免疫細胞の生存及び増殖を促進し、炎症誘発性サイトカインは炎症反応を促進し得る。ホメオスタシスサイトカインの例として、限定されるものではないが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１５及びインターフェロン（ＩＦＮ）γが挙げられる。炎症誘発性サイトカインの例として、限定されるものではないが、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７ａ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、ＴＮＦ－β、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、可溶性細胞間接着分子１（ｓＩＣＡＭ－１）、可溶性血管接着分子１（ｓＶＣＡＭ－１）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ及び胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）が挙げられる。エフェクターの例として、限定される
ものではないが、グランザイムＡ、グランザイムＢ、可溶性Ｆａｓリガンド（ｓＦａｓＬ）及びパーフォリンが挙げられる。急性期タンパク質の例として、限定されるものではないが、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及び血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）が挙げられる。
「ケモカイン」は細胞走化性又は指向性運動を媒介するサイトカインの一種である。ケモカインの例として、限定されるものではないが、ＩＬ－８、ＩＬ－１６、エオタキシン、エオタキシン－３、マクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ又はＣＣＬ２２）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ－１又はＣＣＬ２）、ＭＣＰ－４、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１ａ）、ＭＩＰ－１β（ＭＩＰ－１ｂ）、ガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ－１０）、並びに胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ又はＣＣＬ１７）が挙げられる。
「治療的有効量」、「有効用量」、「有効量」又は「治療的に有効な投薬量」の治療剤、例えば操作されたＣＡＲ Ｔ細胞は、単独で又は別の治療剤と組み合わせて使用された場合に、疾患の発症から被験体を保護する、又は疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度及び持続期間の増加、若しくは疾患の罹患に起因する機能障害若しくは身体障害の予防によって明示される疾患の退縮を促進する、任意の量である。治療剤の疾患の退縮を促進する能力は、熟練した医師に知られている様々な方法を使用して、例えば、臨床試験中のヒト被験体において、ヒトにおける効能を予測する動物モデル系において、又はｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによって評価され得る。
「リンパ球」の用語は、ナチュラルキラー（ＮＫ：natural killer）細胞、Ｔ細胞、又はＢ細胞を含む。ＮＫ細胞は、生得免疫系の主な成分を占める細胞傷害性（細胞毒性）リンパ球の一種である。ＮＫ細胞は腫瘍及びウイルスによって感染された細胞を拒絶する。ＮＫ細胞は、アポトーシス又はプログラム細胞死のプロセスによって作用する。ＮＫ細胞は、細胞を死滅させるために活性化を必要としないことから、「ナチュラルキラー」と名付けられた。Ｔ細胞は、細胞媒介免疫（抗体が関与しない）において主な役割を果たす。そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、他の種類のリンパ球からそれら自体を分化させる。免疫系の特殊化された器官である胸腺は、主としてＴ細胞の成熟を担う。６種類のＴ細胞、すなわち、ヘルパーＴ細胞（例えばＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ、細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔ－キラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はキラーＴ細胞としても知られる）、メモリーＴ細胞（（ｉ）ナイーブ細胞のようなステムメモリーＴＳＣＭ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ－セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋及びＩＬ－７Ｒα＋であるが、それらは、大量のＣＤ９５、ＩＬ－２Ｒβ、ＣＸＣＲ３及びＬＦＡ－１を発現し、メモリー細胞に特有の多数の機能的な属性を示す；（ｉｉ）セントラルメモリーＴＣＭ細胞は、Ｌ－セレクチン及びＣＣＲ７を発現し、ＩＦＮγ又はＩＬ－４ではなくＩＬ－２を分泌する；並びに（ｉｉｉ）エフェクターメモリーＴＥＭ細胞はＬセレクチンもＣＣＲ７も発現しないものの、ＩＦＮγ及びＩＬ－４のようなエフェクターサイトカインを産生する）、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ、サプレッサーＴ細胞又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節性Ｔ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）及びγδＴ細胞が存在する。一方、Ｂ細胞は、液性免疫（抗体が関与する）で最も重要な役割を果たす。Ｂ細胞は抗体及び抗原を作製し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の役割を行い、抗原の相互作用による活性化の後、メモリーＢ細胞となる。哺乳動物では、未成熟Ｂ細胞は、その名前が由来する骨髄で形成される。
「リンカー」（Ｌ）又は「リンカードメイン」又は「リンカー領域」は、本発明のＣＡＲのドメイン／領域のいずれかを一緒に連結する、約１アミノ酸～１００アミノ酸の長さのオリゴペプチド領域又はポリペプチド領域を指す。リンカーは、グリシン及びセリン等の柔軟な残基から構成され得るため、隣接するタンパク質ドメインは相互に関連して自由
に動くことができる。２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないようにすることが望ましい場合には、より長いリンカーが使用され得る。リンカーは切断可能又は切断不可能であり得る。切断可能なリンカーの例としては、２Ａリンカー（例えば、Ｔ２Ａ）、２Ａ様リンカー、又はそれらの機能的同等物、及びそれらの組合せが挙げられる。幾つかの実施形態では、リンカーには、ピコルナウイルス２Ａ様リンカー、ブタテッショウウイルス（Ｐ２Ａ）、ウイルス（Ｔ２Ａ）のＣＨＹＳＥＬ配列、又はそれらの組合せ、変異体、及び機能的同等物が含まれる。他の実施形態では、リンカー配列は、Ａｓｐ－Ｖａｌ／Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ｘ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ（２Ａ）－Ｐｒｏ（２Ｂ）モチーフ（配列番号３１４）を含み得て、その結果、２Ａのグリシンと２Ｂのプロリンとの間に切断がもたらされる。他のリンカーは当業者に明らかであり、本発明の代替の実施形態に関連して使用され得る。例としては、幾つかの例で、リンカーを使用してバイシストロン性ＣＡＲの２つのＣＡＲ等の異なる抗原結合系を接続又は連結することができる。リンカーは、異なる要素を互いに接続する多重要素媒介物（multi-element agent）の一部であり得る
。例えば、ポリペプチドは、２つ以上の機能的ドメイン又は構造的ドメインを含み、これらを互いに連結するそのようなドメイン間のアミノ酸のストレッチを含み得る。幾つかの実施形態では、リンカーエレメントを含むポリペプチドは、一般形Ｓ１－Ｌ－Ｓ２の全体構造を有し、ここで、Ｓ１及びＳ２は、同一又は相違し得て、リンカーによって互いに結び付けられる２つのドメインを表す。リンカーは、本開示のＣＡＲのドメイン／領域のいずれかを共に接続又は連結することができる。幾つかの実施形態では、ポリペプチドリンカーは、少なくとも２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、２０アミノ酸、２１アミノ酸、２２アミノ酸、２３アミノ酸、２４アミノ酸、２５アミノ酸、２６アミノ酸、２７アミノ酸、２８アミノ酸、２９アミノ酸、３０アミノ酸、３５アミノ酸、４０アミノ酸、４５アミノ酸、５０アミノ酸、５５アミノ酸、６０アミノ酸、６５アミノ酸、７０アミノ酸、７５アミノ酸、８０アミノ酸、８５アミノ酸、９０アミノ酸、９５アミノ酸、１００アミノ酸以上の長さ（例えば、１アミノ酸～１０アミノ酸、１アミノ酸～２０アミノ酸、１アミノ酸～３０アミノ酸、１アミノ酸～４０アミノ酸、１アミノ酸～５０アミノ酸、１アミノ酸～６０アミノ酸、１アミノ酸～７０アミノ酸、１アミノ酸～８０アミノ酸、１アミノ酸～９０アミノ酸、１アミノ酸～１００アミノ酸、１０アミノ酸～２０アミノ酸、１０アミノ酸～３０アミノ酸、１０アミノ酸～４０アミノ酸、１０アミノ酸～５０アミノ酸、１０アミノ酸～６０アミノ酸、１０アミノ酸～７０アミノ酸、１０アミノ酸～８０アミノ酸、１０アミノ酸～９０アミノ酸、又は１０アミノ酸～１００アミノ酸の長さ）である。幾つかの実施形態では、リンカーは、これが剛直な三次元構造物を採用せず、代わりにポリペプチドに柔軟性を与える傾向にあることを特徴とする。
「単鎖可変フラグメント」、「単鎖抗体可変フラグメント」又は「ｓｃＦｖ」抗体は、リンカーペプチドによって接続された重鎖及び軽鎖のみの可変領域を含む抗体の形態を指す。
「遺伝子操作された」又は「操作された」の用語は、限定されるものではないが、コーディング領域若しくは非コーディング領域、又はそれらの一部分の欠失、又はコーディング領域若しくはその一部分の挿入を含む、細胞のゲノムを改変する方法を指す。幾つかの実施形態では、改変される細胞はリンパ球、例えば、患者又はドナーのいずれかから得ることができるＴ細胞である。Ｔ細胞は、例えば、細胞のゲノムに組み込まれる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）等の外来コンストラクトを発現するように改変され得る。操作は、一般に人の手により扱うことを含む。例えば、ポリヌクレオチドは、天然ではその順序で一緒に連結又は接続されない２つ以上の配列が、操作されたポリヌクレオチド中で互いに直接的に連結又は接続されるように人の手によって扱われる場
合に「操作された」とみなされる。分子生物学の技術により細胞を扱うという文脈では、細胞又は生物は、その遺伝情報が変更されるように扱われた場合（例えば、以前に存在しなかった新しい遺伝物質が、例えば、形質転換、体細胞ハイブリダイゼーション、トランスフェクション、形質導入、若しくは他の機序によって導入された場合、又は以前に存在した遺伝物質が、例えば、置換突然変異若しくは欠失突然変異によって、若しくは他のプロトコルによって変更若しくは除去される場合）に「操作された」とみなされる。幾つかの実施形態では、結合作用物質は、改変されたリンパ球、例えば、Ｔ細胞であり、患者又はドナーから得ることができる。操作された細胞は、例えば、細胞のゲノムに組み込まれるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）等の外来コンストラクトを発現するように改変され得る。操作されたポリヌクレオチド又は結合作用物質の結果物は、実際の扱いが以前の実体に対して行われたとしても、一般に「操作された」と言及される。幾つかの実施形態では、「操作された」とは、実体が設計及び産生されたことを指す。「設計された」という用語は、（ｉ）その構造が人の手によって選択される若しくは選択された作用物質、（ｉｉ）人の手を必要とするプロセスによって産生される作用物質、及び／又は（ｉｉｉ）天然物質及び他の既知の作用物質とは異なる作用物質について言及される。「Ｔ細胞受容体」、すなわち「ＴＣＲ」は、Ｔ細胞の表面上に存在する抗原認識分子を指す。通常のＴ細胞の発達の間に、４つのＴＣＲ遺伝子α、β、γ、及びδのそれぞれは再配列して、非常に多様なＴＣＲタンパク質をもたらし得る。
「免疫応答」は、侵入病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、癌性若しくは他の異常な細胞、又は自己免疫若しくは病理学的炎症の場合、正常なヒトの細胞若しくは組織の選択的な標的化、それらへの結合、それらに対する損傷、それらの破壊、及び／又は脊椎動物の身体からのそれらの排除をもたらす、免疫系の細胞（例えばＴリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、及び好中球）及びこれらの細胞のいずれか又は肝臓によって産生される可溶性高分子（Ａｂ、サイトカイン、及び補体を含む）の作用を指す。
「免疫療法」の用語は、免疫応答を誘導する、増強する、抑制する、或いは改変することを含む方法による、疾患に冒された、又は疾患にかかる若しくは疾患の再発を患うリスクがある被験体の治療を指す。免疫療法の例として、限定されるものではないが、Ｔ細胞療法が挙げられる。Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞療法（adoptive T cell therapy）、腫瘍
浸潤リンパ球（ＴＩＬ）免疫療法、自己細胞治療、操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））、及び同種異系Ｔ細胞移植を含み得る。しかしながら、当業者は、本明細書に開示されるコンディショニング法（conditioning methods）が任意の移植Ｔ細胞療法の有効性を増強し得ることを認識するであろう。Ｔ細胞療法の例は、米国特許出願公開第２０１４／０１５４２２８号及び同第２００２／０００６４０９号、米国特許第５，７２８，３８８号及び国際公開第２００８／０８１０３５号に記載される。
免疫療法のＴ細胞は、当該技術分野において知られている任意の供給源に由来し得る。例えば、Ｔ細胞は、造血幹細胞集団からｉｎ ｖｉｔｒｏで分化されてもよく、又はＴ細胞は被験体から得られてもよい。Ｔ細胞を、例えば末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍から得ることができる。さらに、Ｔ細胞は、当該技術分野において利用可能な１以上のＴ細胞株に由来してもよい。また、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシス（apheresis）等の当業者に知られている任意の多くの技術を使用して被験
体から収集された血液単位から得ることもできる。Ｔ細胞療法用のＴ細胞を単離する更なる方法は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号に開示され、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
「ｅＡＣＴ（商標）」と略記することができ、養子細胞移植としても知られる「操作さ
れた自己細胞療法」の用語は、患者自身のＴ細胞を収集し、その後、１以上の特定の腫瘍細胞又は悪性腫瘍の細胞表面上に発現される１以上の抗原を認識し、標的とするように遺伝的に変更するプロセスである。Ｔ細胞は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように操作され得る。ＣＡＲ陽性（＋）Ｔ細胞は、少なくとも１つの共刺激ドメイン及び少なくとも１つの活性化ドメインを含む細胞内シグナル伝達部に連結された特定の腫瘍抗原に対する特異性を有する細胞外単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を発現するように操作される。共刺激ドメインは、例えば配列番号２３２のアミノ酸配列を有する天然起源の共刺激ドメイン、又はその変異体、例えば短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を有する変異体に由来し得て、活性化ドメインは、例えばＣＤ３－ゼータに由来し得る。或る特定の実施形態では、ＣＡＲは２個、３個、４個又はそれ以上の共刺激ドメインを有するように設計される。ＣＡＲ ｓｃＦｖは、例えば、全ての正常なＢ細胞、並びに限定されるものではないがＮＨＬ、ＣＬＬ、及び非Ｔ細胞ＡＬＬを含むＢ細胞悪性腫瘍を含む、Ｂ細胞系統の細胞によって発現される膜貫通タンパク質であるＣＤ１９を標的とするように設計され得る。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、共刺激ドメインが別々のポリペプチド鎖として発現されるように操作される。ＣＡＲ Ｔ細胞療法及びコンストラクトの例は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号、同第２０１４／０２２７２３７号、同第２０１４／００９９３０９号、及び同第２０１４／００５０７０８号に記載され、これらの引用文献はそれらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。「養子細胞療法」、すなわち「ＡＣＴ」は、抗腫瘍活性を有する免疫細胞を被験体、例えば癌患者に移入することを含む。幾つかの実施形態では、ＡＣＴは、抗腫瘍活性を有するリンパ球（例えば、操作されたリンパ球）の使用を含む治療アプローチである。
「患者」は、癌（例えばリンパ腫又は白血病）に冒された任意のヒトを含む。「被験体」及び「患者」の用語は、本明細書では区別なく使用される。
「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」という用語は、多細胞生物内ではなく、人工的環境内、例えば、試験管、反応容器、細胞培養等において行われる事象を指す。「ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞」という用語は、ｅｘ ｖｉｖｏで培養されるあらゆる細胞を指す。特に、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞はＴ細胞を含み得る。「ｉｎ ｖｉｖｏ」という用語は、ヒト又は非ヒト動物等の多細胞生物内で行われる事象を指す。
「抗原特異的標的領域」（ＡＳＴＲ）は、特定の抗原を標的とするＣＡＲの領域を指す。本発明のＣＡＲは、少なくとも２つの異なる抗原を標的とする少なくとも２つの標的化領域を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも３つ以上の異なる抗原を標的とする３つ以上の標的化領域を含む。ＣＡＲ上の標的化領域は細胞外にある。幾つかの実施形態では、抗原特異的標的化領域は、抗体又はその機能的同等物又はそのフラグメント又はその誘導体を含み、標的化領域のそれぞれは異なる抗原を標的とする。標的化領域は、全長重鎖、Ｆａｂフラグメント、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、二価単鎖抗体又はダイアボディを含み得て、これらはそれぞれ標的抗原に対して特異的である。しかしながら、連結されたサイトカイン（サイトカイン受容体を有する細胞の認識につながる）、アフィボディ、天然に存在する受容体由来のリガンド結合ドメイン、（例えば、腫瘍細胞上の）受容体に対する可溶性タンパク質／ペプチドリガンド、ペプチド、及び免疫応答を促すワクチン等の多くの選択肢があり、これらはそれぞれ本発明の様々な実施形態で使用され得る。実際、当業者によって理解されるように、所与の抗原に高い親和性で結合するほとんどあらゆる分子を、抗原特異的標的化領域として使用することができる。
「抗原提示細胞」、すなわち「ＡＰＣ」は、抗原をプロセシングしてＴ細胞に提示する細胞を指す。例示的なＡＰＣには、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、或る特定の活性化上皮細胞、並びにＴＣＲ刺激及び適切なＴ細胞共刺激が可能な他の細胞型が含まれる。
「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」の用語は区別なく使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結されたアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２個のアミノ酸を含み、タンパク質又はペプチドの配列を含み得るアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いにつながれた２個以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるように、上記用語はまた、当該技術分野において、例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーと一般的に称される短い鎖と、当該技術分野において一般的にはタンパク質と称され、多くの種類が存在する、より長い鎖の両方を指す。「ポリペプチド」として、例えば、特に、生物学的に活性な断片、実質的に相同性のポリペプチド、オリゴペプチド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、改変ポリペプチド、誘導体、類縁体、融合タンパク質が挙げられる。ポリペプチドは、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、又はそれらの組合せを含む。
本明細書で使用される「刺激」は、その同族のリガンドと刺激分子を結合することによって誘導される一次応答を指し、ここで、その結合はシグナル伝達事象を媒介する。「刺激分子」は、Ｔ細胞上の分子、例えば、抗原提示細胞上に存在する同族の刺激リガンドと特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体を指す。「刺激リガンド」は、抗原提示細胞（例えば、ＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞等）上に存在する場合、Ｔ細胞上の刺激分子と特異的に結合することができ、それによって、限定されるものではないがＴ細胞の活性化、免疫応答の開始、増殖等を含むＴ細胞による一次応答を媒介するリガンドである。刺激リガンドとして、限定されるものではないが、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３等）、ペプチドで充填されたＭＨＣクラスＩ分子、スーパーアゴニスト抗ＣＤ２抗体、及びスーパーアゴニスト抗ＣＤ２８抗体が挙げられる。
本明細書で使用される「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーション等の一次シグナルと組み合わせて、限定されるものではないがＴ細胞の増殖及び／又は主要な分子の上方制御若しくは下方制御等のＴ細胞の応答をもたらすシグナルを指す。
本明細書で使用される「共刺激リガンド」は、Ｔ細胞上の同族の共同刺激分子を特異的に結合する抗原提示細胞上の分子を含む。共刺激リガンドの結合は、限定されるものではないが、Ｔ細胞の増殖、活性化、分化等を含むＴ細胞応答を媒介するシグナルを提供する。共刺激リガンドは、一次シグナルに加えて、刺激分子によって、例えば、ペプチドがロードされた主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子とのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体の結合によって提供されるシグナルを誘導する。共刺激リガンドとして、限定されるものではないが、３／ＴＲ６、４－１ＢＢリガンド、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニスト又は抗体、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ：herpes virus entry mediator）、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、ＩＬＴ
４、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ：immunoglobulin-like transcript）３、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、Ｂ７－Ｈ３と特異的に結合するリガンド、リンフォトキシンβ受容体、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ａ（ＭＩＣＡ）、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ｂ（ＭＩＣＢ）、ＯＸ４０リガンド、ＰＤ－Ｌ２、又はプログラム細胞死（ＰＤ）Ｌ１が挙げられ得る。共刺激リガンドとして、限定されず、４－１ＢＢ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＩＣＯＳ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ナチュラルキラー細胞受容体Ｃ（ＮＫＧ２Ｃ）、ＯＸ４０、ＰＤ－１、又は腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４又はＬＩＧＨＴ）等のＴ細胞上に存在する共刺激分子と特異的に結合する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合することにより、限定されるものではないが増殖等のＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族の結合パートナーである。共刺激分子として、限定されるものではないが、「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合することにより、限定されるものではないが増殖等のＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族の結合パートナーである。共刺激分子として、限定されるものではないが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３（α；β；δ；ε；γ；ゼータ）、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８０、ＣＤ８３リガンド、ＣＤ８４、ＣＤ８６、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ９、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃγ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８））、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ－１、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ－３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ、ＴＮＦｒ、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ－６、又はそれらの断片、短縮物（truncations）、若しくは組合せが挙げられる。
「減少する、減少させる（reducing）」及び「減じる（decreasing）」の用語は、本明細書において区別なく使用され、本来よりも少ない、あらゆる変化を示す。「減少する、減少させる」及び「減じる」は測定前と測定後の比較を必要とする、相対的な用語である。「減少する、減少させる」及び「減じる」は完全な欠乏を含む。
「改善する」、「増加させる」、「抑制する」、及び「減少させる」という用語は、ベースライン又は他の参照測定値に対する値を示す。幾つかの実施形態では、適切な参照測定値は、作用物質若しくは治療の存在を欠く（例えば、これらの前及び／又は後である）が他の点では同等の条件下での、又は適切な同等の参照作用物質の存在下での或る特定の系（例えば、単一の個体）における測定値を含み得る。幾つかの実施形態では、適切な参照測定値は、関連する作用物質又は治療の存在下で同等に応答することが知られている又はそれが予想される同等の系における測定値を含み得る。
被験体の「治療（Treatment）」又は被験体を「治療する、治療すること（treating）
」は、症状、合併症若しくは状態の発症、進行、発現、重症度若しくは再発、又は疾患と関連する生化学的指標の転換、緩和、改善、阻害、遅延又は予防の目的で、被験体に対して行われる任意の種類の処置若しくはプロセス、又は被験体に対する有効成分の投与を指す。一実施形態では、「治療」又は「治療する、治療すること」は部分寛解を含む。別の実施形態では、「治療」又は「治療する、治療すること」は完全寛解を含む。幾つかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害及び／又は状態の兆候を示さない被験体、及び
／又は疾患、障害、及び／又は状態の初期の兆候のみを示す被験体の治療であり得る。幾つかの実施形態では、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の確立された兆候を示す被験体の治療であり得る。幾つかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態を患っていると診断された被験体の治療であり得る。幾つかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態の発症のリスク増加と統計的に相関する１つ以上の感受性因子を有することが知られる被験体の治療であり得る。
「作用物質」という用語は、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、脂質、小分子、金属、細胞、若しくは生物（例えば、その画分又は抽出物）若しくはその成分を含むあらゆる部類の分子若しくは実体、又はいずれかが、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、脂質、小分子、金属、細胞、若しくは生物（例えば、その画分又は抽出物）若しくはそれらの成分である複数の分子若しくは実体を指すことができる。幾つかの実施形態では、作用物質は、単離形又は純粋形で利用され得る。幾つかの実施形態では、作用物質は、粗製形又は不純形で利用され得る。幾つかの実施形態では、作用物質は、例えば、スクリーニングして、中に存在する成員を特定する又は特徴付けることができる集団、コレクション、又はライブラリーとして提供され得る。
２つの事象又は実体は、一方の存在、レベル及び／又は形態が他方の存在、レベル及び／又は形態と相関している場合に、互いに「関連」している。例えば、実体（例えば、ポリペプチド、遺伝子シグネチャー、代謝産物、微生物等）は、その存在、レベル及び／又は形態が疾患、障害若しくは状態の発生率、及び／又は疾患、障害若しくは状態に対する感受性と（例えば、関連する集団全体にわたって）相関している場合に、疾患、障害又は状態と関連しているとみなされる。例えば、２つ以上の実体は、これらが直接的に又は間接的に相互作用すると、互いに物理的に「結び付けられる」ため、これらは、互いに物理的に近接する及び／又は互いに物理的に近接して留まる（例えば、結合する）。追加の例では、互いに物理的に結び付けられている２つ以上の実体は、例えば、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁力、及びそれらの組合せによって、互いに共有結合的に連結若しくは接続されるか、又は非共有結合的に結び付けられる。
「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／又はＲＮＡ分子）間、及び／又はポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。示される２つのポリペプチド配列間のパーセント同一性を計算する方法は知られている。２つの核酸配列又はポリペプチド配列のパーセント同一性の計算は、例えば、最適な比較を目的として２つの配列をアライメントすることによって実施され得る（例えば、最適なアライメントを目的として第１の配列及び第２の配列の一方又は両方にギャップを導入することができ、比較を目的として非同一配列を無視することができる）。次に、対応する位置のヌクレオチド又はアミノ酸を比較する。第１の配列中の位置を第２の配列中の対応する位置と同じ残基（例えば、ヌクレオチド又はアミノ酸）が占めている場合に、これらの分子はその位置で同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、配列が共有する同一の位置の数の関数であり、任意にギャップの数及び各ギャップの長さが考慮され、これらは２つの配列の最適なアライメントのために導入することが必要とされる場合がある。配列の比較又はアライメント、及び２つの配列間のパーセント同一性の決定は、ＢＬＡＳＴ（基本的なローカルアライメント検索ツール）等の数学的アルゴリズムを使用して行われ得る。幾つかの実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）同一である場合に、互いに「相同」であるとみなされる。
パーセント同一性を計算するため、典型的には、配列間の最も大きな一致を与える方法で比較される配列を整列させる。パーセント同一性を特定するために使用され得るコンピュータープログラムの一例は、ＧＡＰ（Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387、ウィスコンシン州マディソンのウィスコンシン大学、Genetics Computer Group）を含むＧＣＧプログラムパッケージである。コンピューターアルゴリズムであるＧＡＰを使用して、パーセント配列同一性が特定される２つのポリペプチド又はポリヌクレオチドを整列させる。配列を、それらの各アミノ酸又はヌクレオチドの最適なマッチング（アルゴリズムによって特定される、「一致スパン（matched span）」）について整列させる。また或る特定の実施形態では、上記アルゴリズムによって、標準的な比較マトリクス（Dayhoff et al., 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352 for the PAM 250 comparison matrix、Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919 for the BLOSUM 62 comparison matrixを参照されたい）が使用される。アミノ酸配列又は核酸配列の比較のために、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、並びにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ギャップＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ等の市販のコンピュータープログラムで利用可能なアルゴリズムを含む他のアルゴリズムも利用可能である。例示的なそのようなプログラムは、Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990、Altschul, et al., Methods in Enzymology、Altschul, et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs," Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997、Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998、及びMisener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols
(Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999に記載されている。
類似の配列を特定することに加えて、上述のプログラムは一般に類似性の程度の指標を与える。幾つかの実施形態では、２つの配列は、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％以上（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）のそれらの対応する残基が、残基の関連するストレッチにわたって類似及び／又は同一である場合に、実質的に類似しているとみなされる。幾つかの実施形態では、関連するストレッチは完全な配列である。幾つかの実施形態では、関連するストレッチは、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、少なくとも４０個、少なくとも４５個、少なくとも５０個、少なくとも５５個、少なくとも６０個、少なくとも６５個、少なくとも７０個、少なくとも７５個、少なくとも８０個、少なくとも８５個、少なくとも９０個、少なくとも９５個、少なくとも１００個、少なくとも１２５個、少なくとも１５０個、少なくとも１７５個、少なくとも２００個、少なくとも２２５個、少なくとも２５０個、少なくとも２７５個、少なくとも３００個、少なくとも３２５個、少なくとも３５０個、少なくとも３７５個、少なくとも４００個、少なくとも４２５個、少なくとも４５０個、少なくとも４７５個、少なくとも５００個以上の残基である。かなりの配列類似性を有する配列は互いに相同であり得る。
「併用療法」は、被験体が２つ以上の治療レジメン（例えば、２つ以上の治療部分）を同時に受ける状況を指す。幾つかの実施形態では、２つ以上のレジメンが同時に施され得る。幾つかの実施形態では、そのようなレジメンは、逐次に施され得る（例えば、第１のレジメンの全ての「用量」は、第２のレジメンのあらゆる用量の投与の前に施される）。幾つかの実施形態では、そのような作用物質は、重複する投与レジメンで投与される。幾つかの実施形態では、併用療法薬の「投与」は、１つ以上の作用物質又はモダリティを、他の作用物質（複数の場合もある）又はモダリティ（複数の場合もある）が与えられる被
験体に組み合わせて投与することを含み得る。明確にするために、併用療法は、個々の作用物質が単一の組成物で一緒に（又は更に必然的に同時に）投与されることを必要としないが、幾つかの実施形態では、２つ以上の作用物質又はその活性部分は、併用組成物で又は更に併用化合物で（例えば、単一の化学的複合体又は共有結合実体の部分として）一緒に投与され得る。
「～に対応する」は、適切な参照分子又は参照組成物との比較により分子又は組成物中の構造要素の位置／同一性を指定するのに使用され得る。例えば、幾つかの実施形態では、ポリマー中のモノマー残基（例えば、ポリペプチド中のアミノ酸残基又はポリヌクレオチド中の核酸残基）は、適切な参照ポリマー中の残基に「対応する」として特定され得る。例えば、単純にするために、ポリペプチド中の残基は、参照関連ポリペプチドに基づく規範的なナンバリングシステムを使用して指定され得るため、例えば、位置１００の残基に「対応する」アミノ酸は、参照ポリペプチド中の位置１００にある残基に対応する限り、実際にアミノ酸鎖中の１００番目のアミノ酸である必要はない。例えば、本開示によりポリペプチド及び／又は核酸中の「対応する」残基を特定するために利用され得る、例えばＢＬＡＳＴ、ＣＳ－ＢＬＡＳＴ、ＣＵＤＡＳＷ＋＋、ＤＩＡＭＯＮＤ、ＦＡＳＴＡ、ＧＧＳＥＡＲＣＨ／ＧＬＳＥＡＲＣＨ、Ｇｅｎｏｏｇｌｅ、ＨＭＭＥＲ、ＨＨｐｒｅｄ／ＨＨｓｅａｒｃｈ、ＩＤＦ、Ｉｎｆｅｒｎａｌ、ＫＬＡＳＴ、ＵＳＥＡＲＣＨ、ｐａｒａｓａｉｌ、ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ、ＰＳＩ－Ｓｅａｒｃｈ、ＳｃａｌａＢＬＡＳＴ、Ｓｅｑｕｉｌａｂ、ＳＡＭ、ＳＳＥＡＲＣＨ、ＳＷＡＰＨＩ、ＳＷＡＰＨＩ－ＬＳ、ＳＷＩＭＭ、又はＳＷＩＰＥ等のソフトウェアプログラムを含む様々な配列アライメント方略を利用することができる。
「ドメイン」という用語は、実体の一部を指す。幾つかの実施形態では、「ドメイン」は、実体の構造的特徴及び／又は機能的特徴に関連しているため、例えば、ドメインがその親実体の残りの部分から物理的に分離される場合に、これが実質的に又は完全に構造的特徴及び／又は機能的特徴を保持する。幾つかの実施形態では、ドメインは、その（親）実体から分離されて異なる（受容）実体に連結又は接続される場合に、１つ以上の構造的特徴及び／又は機能的特徴を受容実体で実質的に保持する及び／又は受容実体に付与する、例えばこれを親実体において特徴付ける実体の一部を含み得る。幾つかの実施形態では、ドメインは、分子（例えば、小分子、炭水化物、脂質、核酸、又はポリペプチド）の一部である。幾つかの実施形態では、ドメインはポリペプチドの一区画である。幾つかのそのような実施形態では、ドメインは、構造要素（例えば、アミノ酸配列又は配列モチーフ、α－ヘリックス特性、β－シート特性、コイルドコイル特性、ランダムコイル特性等）及び／又は機能的特徴（例えば、結合活性、酵素活性、フォールディング活性、シグナル伝達活性等）によって特徴付けられる。
「剤形」という用語は、被験体に投与するための活性作用物質（例えば、抗原結合系又は抗体）の物理的に個別の単位を指すのに使用され得る。一般に、そのような単位はそれぞれ予め決められた量の活性作用物質を含有する。幾つかの実施形態では、そのような量は、関連する集団に投与されたときに所望の転帰又は有益な転帰と相関することが認められた投与レジメンに従う投与に適切な単位投与量（又はその全部分）である。被験体に投与される治療組成物又は治療作用物質の総量は１人以上の医師によって決定され、２つ以上の剤形の投与を伴い得る。
「投与レジメン」という用語は、被験体に個別に投与される一連の１つ以上の単位用量を指すのに使用され得る。幾つかの実施形態では、所与の治療作用物質は、１つ以上の投与を含み得る推奨される投与レジメンを有する。幾つかの実施形態では、投与レジメンは他の投与から時間的に分離される複数の投与を含む。幾つかの実施形態では、投与レジメンは複数の投与を含み、連続する投与は等しい長さの期間によって互いに分離される。幾
つかの実施形態では、投与レジメンは複数の投与を含み、連続する投与は少なくとも２つの異なる長さの期間によって互いに分離される。幾つかの実施形態では、投与レジメン内の全ての投与は同じ単位投与量の投与である。幾つかの実施形態では、投与レジメン内の異なる投与は異なる量の投与である。幾つかの実施形態では、投与レジメンは、第１の投与量での第１の投与に続いて、第１の投与量とは異なる第２の投与量での１つ以上の追加の投与を含む。幾つかの実施形態では、投与レジメンは、所望の転帰又は有益な転帰を達成するために定期的に調整される。
「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用の生物学的結果を指す。エフェクター機能には、限定されるものではないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及び補体媒介性細胞傷害（ＣＭＣ）が含まれる。エフェクター機能は、抗原結合依存性、抗原結合非依存性、又はその両方であり得る。ＡＤＣＣは、免疫エフェクター細胞による抗体が結合した標的細胞の溶解を指す。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、ＡＤＣＣは一般に、抗体で覆われた標的細胞（例えば、抗体が結合される抗原を表面に発現する細胞）を認識した後にこれを殺傷するＦｃ受容体（ＦｃＲ）保有エフェクター細胞を含むと理解される。ＡＤＣＣを媒介するエフェクター細胞は、限定されるものではないが、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、好酸球のうちの１つ以上を含む免疫細胞を含み得る。
「エフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃ受容体を発現し、かつ１つ以上のエフェクター機能を媒介する免疫系の細胞を指す。幾つかの実施形態では、エフェクター細胞は、限定されるものではないが、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、大顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔリンパ球、及びＢリンパ球のうちの１つ以上を含み得る。エフェクター細胞は、限定されるものではないが、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むあらゆる生物のエフェクター細胞であり得る。
「賦形剤」という用語は、例えば、所望の粘稠度又は安定化効果を与える又はそれらに寄与するために組成物に含まれ得る作用物質を指す。幾つかの実施形態では、適切な賦形剤は、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等を含み得る。
本明細書に記載される材料又は実体の「断片」又は「部分」は、例えば物理的実体又は抽象的実体の全体の個別の部分を含む構造を有する。幾つかの実施形態では、断片は、全体に見られる１つ以上の部分を欠いている。幾つかの実施形態では、断片は、全体に見られる特徴的な構造要素、ドメイン又は部分からなる又はそれらを含む。幾つかの実施形態では、ポリマー断片は、全体のポリマー中に見られるモノマー単位（例えば、残基）の少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、２００個、２１０個、２２０個、２３０個、２４０個、２５０個、２７５個、３００個、３２５個、３５０個、３７５個、４００個、４２５個、４５０個、４７５個、５００個以上を含む又はそれらからなる。幾つかの実施形態では、ポリマー断片は、全体のポリマー中に見られるモノマー単位（例えば、残基）の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、２５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％以上（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）を含む又はそれらからなる。幾つかの実施形態では、材料全体又は実体全体は、断片の「親」と呼称され得る。
「融合ポリペプチド」又は「融合タンパク質」という用語は一般に、少なくとも２つのセグメントを含むポリペプチドを指す。一般に、少なくとも２つのそのようなセグメントを含むポリペプチドは、２つのセグメントが（１）同じペプチド中に天然には含まれておらず、及び／又は（２）以前に単一のポリペプチドにおいて互いに連結若しくは接続されておらず、及び／又は（３）人の手の動作によって互いに連結若しくは接続されている部分である場合に、融合ポリペプチドであるとみなされる。
「遺伝子産物」又は「発現産物」という用語は一般に、遺伝子から転写されたＲＮＡ（プロセシング前及び／又はプロセシング後）、又は遺伝子から転写されたＲＮＡによってコードされるポリペプチド（修飾前及び／又は修飾後）を指す。
「単離された」という用語は、或る物質が（１）以前は共に結び付けられていた若しくはそうでなければ共に結び付けられることとなる少なくとも幾つかの成分から分離されたこと、及び／又は或る物質が（２）限られた若しくは規定された量若しくは濃度の１つ以上の既知又は未知の夾雑物を含む組成物中に存在することを指す。幾つかの実施形態では、単離された物質は、以前は該物質が共に結び付けられていた該物質とは異なる（non-substance）他の成分、例えば以前は該物質が共に結び付けられていた又はそうでなければ
該物質が共に結び付けられることとなる他の成分又は夾雑物の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）から分離され得る。或る特定の場合には、物質は、これが限られた又は低減された量又は濃度の同じ種類又は類似の種類の分子を含む組成物中に存在する場合に単離されている。例えば、或る特定の場合には、核酸、ＤＮＡ、又はＲＮＡの物質は、これが限られた又は低減された量又は濃度の該物質とは異なる核酸、ＤＮＡ、又はＲＮＡ分子を含む組成物中に存在する場合に単離されている。例えば、或る特定の場合には、ポリペプチドの物質は、これが限られた又は低減された量又は濃度の該物質とは異なるポリペプチド分子を含む組成物中に存在する場合に単離されている。或る特定の実施形態では、量は、例えば、組成物中に存在する所望の物質の量に対して測定された量であり得る。或る特定の実施形態では、限られた量は、組成物中の物質量の１００％以下、例えば、組成物中の物質量の１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％以下（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）である量であり得る。或る特定の場合には、組成物は、選択された物質に関して純粋又は実質的に純粋である。幾つかの実施形態では、単離された物質は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）の純度である。物質が他の成分又は夾雑物を実質的に含まない場合に、物質は「純粋」である。幾つかの実施形態では、物質は、例えば１つ以上の担体又は賦形剤（例えば、緩衝剤、溶媒、水等）等の或る特定の他の成分と組み合わされた後でも「単離されている」又は更には「純粋である」とみなされ得る。そのような実施形態では、物質のパーセント単離又は純度は、そのような担体又は賦形剤を含めずに計算される。
「核酸」は、ヌクレオチドのあらゆるポリマー鎖を指す。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又
はそれらの組合せであり得る。幾つかの実施形態では、核酸は１つ以上の天然の核酸残基を含む。幾つかの実施形態では、核酸は１つ以上の核酸類似体から構成される。幾つかの実施形態では、核酸は、天然源からの単離、相補的鋳型に基づく重合による酵素的合成（ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏ）、組換え細胞又は組換え系における再生、及び化学合成のうちの１つ以上によって調製される。幾つかの実施形態では、核酸は、少なくとも３残基長、４残基長、５残基長、６残基長、７残基長、８残基長、９残基長、１０残基長、１５残基長、２０残基長、２５残基長、３０残基長、３５残基長、４０残基長、４５残基長、５０残基長、５５残基長、６０残基長、６５残基長、７０残基長、７５残基長、８０残基長、８５残基長、９０残基長、９５残基長、１００残基長、１１０残基長、１２０残基長、１３０残基長、１４０残基長、１５０残基長、１６０残基長、１７０残基長、１８０残基長、１９０残基長、２０残基長、２２５残基長、２５０残基長、２７５残基長、３００残基長、３２５残基長、３５０残基長、３７５残基長、４００残基長、４２５残基長、４５０残基長、４７５残基長、５００残基長、６００残基長、７００残基長、８００残基長、９００残基長、１０００残基長、１５００残基長、２０００残基長、２５００残基長、３０００残基長、３５００残基長、４０００残基長、４５００残基長、５０００残基長以上（例えば、２０残基長～１００残基長、２０残基長～５００残基長、２０残基長～１０００残基長、２０残基長～２０００残基長、又は２０残基長～５０００残基長以上）である。幾つかの実施形態では、核酸は部分的又は全体的に一本鎖である。幾つかの実施形態では、核酸は部分的又は全体的に二本鎖である。幾つかの実施形態では、核酸は、ポリペプチドをコードする少なくとも１つの要素、又はポリペプチドをコードする配列の相補鎖である少なくとも１つの要素を含むヌクレオチド配列を有する。
「作動可能に連結された」とは、記載された構成要素がそれらの意図された様式で機能することが可能な関係で存在する並置を指す。例えば、機能的エレメントに「作動可能に連結された」制御エレメントは、機能的エレメントの発現及び／又は活性が、制御エレメントと適合可能な条件下で達成されるように結び付けられている。
「薬学的に許容可能な」という用語は、或る分子又は組成物が、レシピエントに投与された場合にそのレシピエントに対して有害ではないこと、又はそのレシピエントに対する利益があらゆる有害な作用を上回ることを指す。本明細書に開示される組成物を製剤化するのに使用される担体、希釈剤、又は賦形剤に関して、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤は、組成物の他の成分と相容性でなければならず、そのレシピエントに対して有害であってはならず、又はそのレシピエントに対する利益があらゆる有害な作用を上回っていなければならない。「薬学的に許容可能な担体」という用語は、作用物質を身体の一部から別の部分に（例えば或る器官から別の器官に）運ぶ又は輸送することに関与する、薬学的に許容可能な材料、組成物、又はビヒクル、例えば、液体若しくは固体の増量剤、希釈剤、賦形剤、又は溶媒封入材料を意味する。医薬組成物中に存在するそれぞれの担体は、製剤の他の成分と相容性であり、患者に対して有害でないという意味で「許容可能」でなければならず、又はそのレシピエントに対する利益はあらゆる有害な作用を上回っていなければならない。薬学的に許容可能な担体として作用し得る材料の幾つかの例としては、糖類、例えば、ラクトース、グルコース及びスクロース、デンプン、例えば、トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプン、セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース、粉末状トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、賦形剤、例えば、カカオバター及び坐剤ワックス、油類、例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及び大豆油、グリコール、例えば、プロピレングリコール、ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール、エステル、例えば、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル、寒天、緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張食塩水、リンガー溶液、エチルアルコール、ｐＨ緩衝液、ポリエステル、ポリカーボネート及び／又はポリ無水物、並
びに医薬製剤に使用される他の非毒性の相容性物質が挙げられる。
「医薬組成物」という用語は、活性作用物質が１つ以上の薬学的に許容可能な担体と一緒に製剤化されている組成物を指す。幾つかの実施形態では、活性作用物質は、関連する被験体又は集団に投与された場合に予め決められた治療効果を達成する統計的に有意な確率を示す治療レジメンでの投与に適切な単位投与量で存在する。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、限定されるものではないが、以下の、経口投与、例えば、飲薬（水性又は非水性の溶液又は懸濁液）、錠剤、例えば、頬側吸収、舌下吸収、及び全身吸収を目的とする錠剤、ボーラス剤、粉剤、顆粒剤、舌に適用するペースト剤、非経口投与、例えば、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、又は硬膜外注射による、例えば、無菌溶液若しくは無菌懸濁液、又は持続放出製剤としての非経口投与、局所適用、例えば、皮膚、肺、又は口腔に適用されるクリーム剤、軟膏剤、又は制御放出性パッチ剤若しくはスプレー剤としての局所適用、膣内投与又は直腸内投与、例えば、ペッサリー剤、クリーム剤、又はフォーム剤としての投与、舌下投与、眼内投与、経皮投与、又は経鼻投与、肺内投与、及び他の粘膜表面への投与のために適合された形を含む固体形又は液体形での投与用に製剤化され得る。
「参照」という用語は、比較が行われる基準又はコントロールを説明している。例えば、幾つかの実施形態では、対象となる作用物質、動物、個体、集団、試料、配列、又は値が、作用物質、動物、個体、集団、試料、配列、又は値である参照又はコントロールと比較される。幾つかの実施形態では、参照又はコントロールは、対象となる試験、測定、又は決定と実質的に同時に試験、測定、及び／又は決定される。幾つかの実施形態では、参照又はコントロールは、任意に有形媒体内に包埋された組織学的な参照又はコントロールである。一般に、参照又はコントロールは、評価されるものと同等の条件又は状況下で決定される又は特徴付けられる。選択される参照又はコントロールへの信頼及び／又はそれとの比較を正当化するのに十分な類似性が存在する場合。
「制御性Ｔ細胞」（「Ｔｒｅｇ」、「Ｔｒｅｇ細胞」、又は「Ｔｒｅｇｓ」）は、或る特定の免疫活性、例えば、自己免疫、アレルギー、及び感染への応答の制御に関与するＣＤ４＋Ｔリンパ球の系譜を指す。制御性Ｔ細胞は、Ｔ細胞集団の活性を調節することができ、或る特定の自然免疫系細胞型に影響を及ぼすこともできる。Ｔｒｅｇｓは、バイオマーカーＣＤ４、ＣＤ２５、及びＦｏｘｐ３の発現、並びにＣＤ１２７の低発現によって特定され得る。天然に存在するＴｒｅｇ細胞は通常、末梢ＣＤ４＋Ｔリンパ球の約５％～１０％を構成する。しかしながら、腫瘍微小環境内のＴｒｅｇ細胞（すなわち、腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞）は、ＣＤ４＋Ｔリンパ球集団全体の２０％～３０％と同程度の割合を占める場合がある。
「試料」という用語は一般に、対象となる起源から得られた又はそこから誘導される材料のアリコートを指す。幾つかの実施形態では、対象となる起源は、生物学的起源又は環境的起源である。幾つかの実施形態では、対象となる起源は、細胞又は生物、例えば、細胞集団、組織、又は動物（例えば、ヒト）を含み得る。幾つかの実施形態では、対象となる起源は、生体組織又は生体液を含む。幾つかの実施形態では、生体組織又は生体液は、羊水、房水、腹水、胆汁、骨髄、血液、乳汁、脳脊髄液、耳垢、乳び、び汁、射精液、内リンパ、滲出液、糞便、胃酸、胃液、リンパ、粘液、心膜液、外リンパ、腹腔液、胸膜液、膿汁、カタル性分泌物、唾液、皮脂、精液、血清、恥垢、痰、滑液、汗、涙液、尿、膣分泌物、硝子体液、嘔吐物、及び／又はそれらの組合せ若しくは成分（複数の場合もある）を含み得る。幾つかの実施形態では、生体液は、細胞内液、細胞外液、血管内液（血漿）、間質液、リンパ液、及び／又は細胞透過液を含み得る。幾つかの実施形態では、生体液は、植物滲出液を含み得る。幾つかの実施形態では、生体組織又は生体試料を、例えば、吸引、生検（例えば、細針生検又は組織生検）、スワブ（例えば、口腔スワブ、鼻腔内
スワブ、皮膚スワブ、又は膣スワブ）、擦過、手術、洗出、又は洗浄（例えば、気管支肺胞洗浄、乳管洗浄、鼻洗浄、眼洗浄、口腔洗浄、子宮洗浄、膣洗浄、又は他の洗出若しくは洗浄）によって得ることができる。幾つかの実施形態では、生体試料は個体から得られた細胞を含む。幾つかの実施形態では、試料は、任意の適切な手段によって対象となる起源から直接得られた「一次試料」である。幾つかの実施形態では、文脈から明らかなように「試料」という用語は、一次試料を処理することによって（例えば、一次試料の１つ以上の成分を除去することによって、及び／又は一次試料に１つ以上の作用物質を添加することによって）得られる調製物を指す。そのような「処理された試料」は、例えば、試料から抽出された又は一次試料を核酸の増幅若しくは逆転写、或る特定の成分の単離及び／又は精製等のような１つ以上の技法に供することによって得られた核酸又はタンパク質を含み得る。
「癌の病期」という用語は、癌の進行のレベルの定性的評価又は定量的評価を指す。幾つかの実施形態では、癌の病期を決定するのに使用される基準は、限定されるものではないが、癌が体内のどこに位置するか、腫瘍サイズ、癌がリンパ節に広がっているかどうか、癌が身体の１つ以上の異なる部分に広がっているかどうか等のうちの１つ以上を含み得る。幾つかの実施形態では、癌は、いわゆるＴＮＭシステムを使用して病期分類され得る。それによれば、Ｔは通常、原発腫瘍と呼ばれる主腫瘍のサイズ及び範囲を指し、Ｎは癌を有する近くのリンパ節の数を指し、Ｍは癌が転移しているかどうかを指す。幾つかの実施形態では、癌は、病期０（上皮内癌又はＣＩＳとも呼ばれる、近くの組織に広がりを有さずに存在する異常な細胞；ＣＩＳは癌ではないが、癌になる可能性がある）、病期Ｉ～病期ＩＩＩ（癌が存在する；数が大きいほど、腫瘍は大きくなり、近くの組織により一層広がっている）、又は病期ＩＶ（癌が身体の離れた部分に広がっている）として言及され得る。幾つかの実施形態では、癌は、正常位置；限局型（癌はそれが始まった場所に限定され、広がったという兆候を有しない）；局所（癌が近くのリンパ節、組織、又は臓器に広がっている）；遠隔（癌が身体の離れた部分に広がっている）；及び不明（病期を決定するのに十分な情報がない）からなる群から選択される病期に割り当てられ得る。
「治療作用物質」という語句は、生物に投与されたときに所望の薬理学的効果を誘発するあらゆる作用物質を指し得る。幾つかの実施形態では、作用物質は、それが適切な集団にわたって統計的に有意な効果を示す場合に、治療作用物質であるとみなされる。幾つかの実施形態では、適切な集団は、モデル生物又はヒト被験体の集団であり得る。幾つかの実施形態では、適切な集団は、或る特定の年齢群、性別、遺伝的背景、既存の臨床状態等の様々な基準によって、バイオマーカーの存在又は不存在等に従って規定され得る。幾つかの実施形態では、治療作用物質は、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴の軽減、改善、緩和、抑止、予防、発症の遅延、重症度の軽減、及び／又は発生率の低下に使用され得る物質である。幾つかの実施形態では、治療作用物質は、それをヒトへの投与のために販売し得る前に、政府機関によって承認された又は承認される必要がある作用物質である。幾つかの実施形態では、治療作用物質は、ヒトへの投与のために処方箋が必要とされる作用物質である。
本開示の様々な態様を、以下の小区分で更に詳細に説明する。本開示は、少なくとも抗ＣＤ２０結合モチーフを含む抗原結合系及び結合作用物質を提供する。とりわけ、本開示は、癌の治療及び／又は免疫応答の開始若しくは調節に有用な方法及び組成物を提供する。或る特定の実施形態では、本開示は、抗ＣＤ２０結合モチーフと、第２の抗原又はエピトープに対する第２の結合モチーフとを含むことで二重標的化されている抗原結合系及び結合作用物質を含む。幾つかの例では、第２の結合モチーフは、ＣＤ１９に選択的に結合する。様々な実施形態では、１つ以上の結合モチーフはｓｃＦｖである。例示的な結合モチーフのアミノ酸配列、及び該アミノ酸配列をコードする核酸配列は、本明細書に示されている。幾つかの実施形態では、本開示の抗原結合系はキメラ抗原受容体である。幾つか
の実施形態では、本開示の抗原結合系は、二重特異性キメラ抗原受容体又はバイシストロン性キメラ抗原受容体である。幾つかの実施形態では、本開示の結合作用物質は操作されたＴ細胞受容体である。
本開示の様々な実施形態は、本明細書に示される結合モチーフ又は抗原結合系をコードするベクター、例えば、二重特異性又はバイシストロン性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体等の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９抗原結合系をコードするベクターを提供する。本開示の様々な実施形態は、本明細書に示される抗原結合系又は結合モチーフをコード又は発現する細胞、例えば、二重特異性又はバイシストロン性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体等の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体をコード又は発現するように操作されたＴ細胞である結合作用物質を提供する。本開示は、例えば、組み込まれた遺伝子、例えば、対象となるヌクレオチド配列（例えば、そのようなヌクレオチド配列を含む構成的発現コンストラクト及び／又は誘導性発現コンストラクト）で遺伝子改変された免疫細胞である結合作用物質を含む結合作用物質を提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、腫瘍を有する被験体を治療する方法であって、本明細書に記載される結合作用物質治療薬及び／又は本明細書に記載されるタンパク質治療薬を被験体に投与することを含む、方法を提供する。幾つかの実施形態では、方法は、１つ以上の追加の治療薬（例えば、第２の結合作用物質（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、ＴＣＲ－Ｔ細胞、ＴＩＬ細胞、同種異系ＮＫ細胞、及び自家ＮＫ細胞）、抗体－薬物コンジュゲート、抗体、二重特異性抗体、Ｔ細胞に結合する二重特異性抗体、操作された抗体、及び／又は本明細書に記載されるポリペプチド）の投与を更に含む。
本開示の他の特徴、課題及び利点は、以下の詳細な説明において明白である。しかしながら、詳細な説明は、本開示の実施形態を示す一方で、限定するものではなく、例示的に示されているにすぎないことを理解されたい。
本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に記載される抗体に見られる抗原結合配列を含み得る。幾つかの場合には、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に記載される抗原結合フラグメントを含む。別段の指示がない限り、本開示におけるＣＤ２０についての言及はヒトＣＤ２０に関連することが理解されるべきである。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも１つのＨＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される２つのＨＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも２つのＨＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される３つのＨＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される３つのＨＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも１つのＬＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される２つのＬＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも２つのＬＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される３つのＬＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される３つのＬＣＤＲを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される少なくとも１つのＨＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも１つのＨＣＤＲと、本明細書に示される少なくとも１つのＬＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも１つのＬＣＤＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される１つのＨＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも１つのＨＣＤＲと、本明細書に示される、
例えば、表４～表１３のＨＣＤＲ（複数の場合もある）と同じ表から導き出される１つのＬＣＤＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される２つのＨＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも２つのＨＣＤＲと、本明細書に示される２つのＬＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも２つのＬＣＤＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される２つのＨＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される少なくとも２つのＨＣＤＲと、本明細書に示される、例えば、表４～表１３のＨＣＤＲ（複数の場合もある）と同じ表から導き出される２つのＬＣＤＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される３つのＨＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される３つのＨＣＤＲと、本明細書に示される３つのＬＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される３つのＬＣＤＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に示される３つのＨＣＤＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される３つのＨＣＤＲと、表４～表１３のＨＣＤＲ（複数の場合もある）と同じ表から導き出される３つのＬＣＤＲとを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域（重鎖ＦＲ）、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの２つの重鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインの少なくとも２つの重鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの２つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも２つの軽鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの１つの重鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される、例えば、表４～表１３の重鎖ＦＲ（複数の場合もある）と同じ表から導き出される軽鎖可変ドメインの１つの軽鎖ＦＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの２つの重鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインの少なくとも２つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの２つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも２つの軽鎖ＦＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの２つの重鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインの少なくとも２つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示さ
れる、例えば、表４～表１３の重鎖ＦＲ（複数の場合もある）と同じ表から導き出される軽鎖可変ドメインの２つの軽鎖ＦＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲ、例えば、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲと、表４～表１３の重鎖ＦＲ（複数の場合もある）と同じ表から導き出される３つの軽鎖ＦＲとを含む。
表４～表１３に示される例示的な抗体配列は、例えば、四量体抗体、単一特異性抗体、二重特異性抗体、抗原結合フラグメント、又は結合モチーフを含む、あらゆる抗体形式で使用するのに適している。表４～表１３に示される重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン並びにそれらの部分は、結合モチーフに含まれ得る。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、一緒に又はそれぞれ個別に、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインの対応するＦＲ（複数の場合もある）に対して少なくとも７５％（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）の同一性を有する１つ、２つ、又は３つのＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、一緒に又はそれぞれ個別に、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインの対応するＦＲ（複数の場合もある）に対して少なくとも７５％（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％）の同一性を有する１つ、２つ、又は３つのＦＲを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する少なくとも１つの重鎖可変ドメインを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、表４～表１３に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）をそれぞれ有する２つの重鎖可変ドメインを含み、これらの重鎖可変ドメインは同一又は相違し得る。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する少なくとも１つの軽鎖可変ドメインを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）をそれぞれ有する２つの軽鎖可変ドメインを含み、これらの軽鎖可変ドメインは同一又は相違し得る。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する少なくとも１つの重鎖可変ドメインと、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する少なくとも１つの軽鎖可変ドメインとを含む。或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、表４～表１３のいずれか１つに開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する１つの重鎖可変ドメインと、表４～表１３のいずれか１つに開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する１つの軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、任意に、表４～表１３の同じ表から導き出される。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、表４～表１３に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）をそれぞれ有する２つの重鎖可変ドメインと、表４～表１３に開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）をそれぞれ有する２つの軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、様々な実施形態では、（ｉ）重鎖可変ドメインのそれぞれは同一若しくは相違し得るか、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインのそれぞれは同一若しくは相違し得るか、（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖可変ドメイン及び少なくとも１つの軽鎖可変ドメインは、表４～表１３の同じ表から導き出され得るか、又は（ｉｖ）２つの重鎖可変ドメイン及び２つの軽鎖可変ドメインは全て表４～表１３の同じ表から導き出され得る。表４～表１３のそれぞれは、（ｉ）例示的な抗体の重鎖可変ドメイン、（ｉｉ）重鎖可変ドメインをコードするＤＮＡ配列、（ｉｉｉ）ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、及びＣｈｏｔｈｉａのナンバリングによる重鎖可変ドメインの３つの重鎖可変ドメインＣＤＲ、（ｉｖ）例示的な抗体の軽鎖可変ドメイン、（ｖ）軽鎖可変ドメインをコードするＤＮＡ配列、並びに（ｖｉ）ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、及びＣｈｏｔｈｉａのナンバリングによる軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む、例示的な抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインの配列を表す。各表に示される情報は、フレームワークアミノ酸配列、並びに各ＣＤＲアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び対応するＦＲアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を提供する。
様々な実施形態では、結合モチーフは、本開示の重鎖可変ドメイン（例えば、表４～表１３のいずれか１つの重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性、例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％
、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性を有する）と、本開示の軽鎖可変ドメイン（例えば、表４～表１３のいずれか１つの軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性、例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性を有する）と、リンカー（例えば、配列番号２４７によるリンカー及び／又は配列番号３０７～配列番号３１３のいずれか１つによるリンカー；例えば、Whitlow et
al. Protein Eng. 1993 Nov;6(8):989-95を参照）とを含み得る。様々な実施形態では、結合モチーフは、リーダー配列と、本開示の重鎖可変ドメイン（例えば、表４～表１３のいずれか１つの重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性、例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性を有する）と、本開示の軽鎖可変ドメイン（例えば、表４～表１３のいずれか１つの軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性、例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性を有する）と、リンカーとを含み得る。本開示の重鎖可変ドメイン及び本開示の軽鎖可変ドメインを含む結合モチーフのアミノ酸配列又はヌクレオチド配列が提供される場合に、本開示を考慮すれば、該配列から２つの可変ドメインをつなぐリンカーは明らかであろう。本開示の重鎖可変ドメイン及び本開示の軽鎖可変ドメインを含む結合モチーフのアミノ酸配列又はヌクレオチド配列が提供される場合に、本開示を考慮すれば、リーダー配列は明らかであろう。誤解を避けるために、本開示の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、任意の方向、例えば、重鎖可変ドメインが軽鎖可変ドメインのＣ末端にある方向、又は重鎖可変ドメインが軽鎖可変ドメインのＮ末端にある方向で存在し得る。様々な実施形態では、結合モチーフは、１つ以上の追加のリンカーに隣接する、配列番号２４７によるリンカー及び／又は配列番号３０７～配列番号３１３のいずれか１つによるリンカーを含み得る。
或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本開示の重鎖可変ドメインと、本開示の軽鎖可変ドメインと、配列番号２４７に対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有するリンカーとを含む結合モチーフを含む。或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、配列番号２４７によるリンカー及び／又は配列番号３０７～配列番号３１３のいずれか１つによるリンカーを含む結合モチーフを含む。或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本開示の重鎖可変ドメインと、本開示の軽鎖可変ドメインと、配列番号２４５に対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有するリーダー配列とを含む結合モチーフを含む。或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、配列番号２４５によるＣＳＦ２ＲＡリーダー配列を含む結合モチーフを含む。或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフは、本開示の重鎖可変ドメインと、本開示の軽鎖可変ドメインと、本開示のリンカーと、本開示のリーダー配列とを含む結合モチーフを含む。抗ＣＤ１９結合モチーフ及びその構成要素をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号２４６及び配列番号２４８に見られる。様々な実施形態では、本開示の結合モチーフは、表５３の配列（配列番号２５１～配列番号２６０）のいずれか１つによる配列を有する。
例えばＡｂ１等の本明細書に示される例示的な抗体に基づく本開示の結合作用物質は、
示される例示的な抗体による重鎖可変ドメインと、示される例示的な抗体による軽鎖可変ドメインとを含む、あらゆるフラグメント又は形式で提供され得る。
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本開示は、抗ＣＤ２０結合モチーフと、第２の標的抗原又はエピトープ、例えばＣＤ２０ではない抗原（例えば、ＣＤ１９）に結合する第２の結合モチーフとを含む抗体及び抗原結合系を含む。二重標的化抗原結合系は、二重特異性ＣＡＲ及びバイシストロン性ＣＡＲを含む。多くの抗原結合モチーフが知られている。様々な実施形態では、第２の標的抗原はＣＤ１９である。本明細書は、限定されるものではないが、５Ｔ４、αフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＣＡ－１２５、癌胎児性抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮性腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ－１１Ｒα、κ鎖、λ鎖、メラノーマ関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ－１、突然変異ｐ５３、突然変異ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１、ＶＥＧＦＲ２、又はそれらの組合せである第２の抗原を含む、様々な第２の標的抗原を含む。したがって、様々な実施形態では、本開示の抗原結合系又は抗体は、抗ＣＤ２０結合モチーフである第１の結合モチーフと、５Ｔ４、αフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＣＡ－１２５、癌胎児性抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮性腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、Ｈ
ＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ－１１Ｒα、κ鎖、λ鎖、メラノーマ関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ－１、突然変異ｐ５３、突然変異ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＥｐｈＡ３（ＥＰＨ受容体Ａ３）、ＢＡＦＦＲ（Ｂ細胞活性化因子受容体）、又はそれらの組合せである第２の抗原に結合する第２の結合モチーフとを含み得る。幾つかの実施形態では、第２の抗原は、Ｂ細胞又はそのサブセットに特徴的な抗原であり、任意に第２の抗原は、ＣＤ１９又はＣＤ２０ではない。これらの第２の抗原を標的とする結合モチーフの例は知られている及び／又は本明細書に示されている。
幾つかの場合には、抗ＣＤ２０結合モチーフ（例えば、本開示の重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメインを含む）と、抗ＣＤ１９結合モチーフ（例えば、本開示の重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメインを含む）とを含む二重特異性ＣＡＲ等の抗原結合系において、抗ＣＤ２０結合モチーフ（又はその重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメイン）は、抗ＣＤ１９結合モチーフ（又はその重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメイン）よりもキメラ抗原受容体のＣ末端に近い。幾つかの場合には、抗ＣＤ２０結合モチーフ（例えば、本開示の重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメインを含む）と、抗ＣＤ１９結合モチーフ（例えば、本開示の重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメインを含む）とを含む二重特異性ＣＡＲ等の抗原結合系において、抗ＣＤ２０結合モチーフ（又はその重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメイン）は、抗ＣＤ１９結合モチーフ（又はその重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメイン）よりも作用物質のＮ末端に近い。
ＣＤ１９（分化クラスター１９、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｂ４、ＣＶＩＤ３、分化抗原ＣＤ１９としても知られる）は、ヒトにおいてＣＤ１９遺伝子によってコードされるタンパク質である。別段の指示がない限り、本開示におけるＣＤ１９についての言及はヒトＣＤ１９に関連することが理解されるべきである。ＣＤ１９はＢ細胞の表面上に見られる。ＣＤ１９の発現はＢ細胞の証であるため、ＣＤ１９は、抗原として、例えば、Ｂ細胞及びＢ細胞から生ずる癌細胞、例えば、Ｂ細胞リンパ腫の認識において有用であり得る。抗ＣＤ１９抗体は、例えば、幾つかの非限定的な例を示すと、末梢血及び脾臓におけるＢリンパ球、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）細胞、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）細胞、有毛細胞性白血病（ＨＣＬ）細胞、共通急性リンパ芽球性白血病（ＣＡＬＬ）細胞、プレＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（ｐｒｅ－Ｂ－ＡＬＬ）細胞、及びヌル細胞型急性リンパ芽球性白血病（ＮＵＬＬ－ＡＬＬ）細胞上に発現されるＣＤ１９に結合し得る。抗ＣＤ１９結合モチーフを含む抗原結合系を含む例示的な医薬製品は、医薬製品ＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標）である。ＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標）は、特定不能のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫に起因するＤＬＢＣＬを含む、２ライン以上の全身療法後の再燃性又は難治性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を伴う成人患者の治療に適応されるＣＤ１９指向性遺伝子改変自家Ｔ細胞免疫療法薬である（免疫療法に関連する方法及び組成物に関して、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標）のＦＤＡ承認の添付文書を参照のこと）。抗ＣＤ１９結合モチーフを含む抗原結合系を含む別の例示的な医薬製品は、医薬製品ＫＹＭＲＩＡＨ（商標）である。ＫＹＭＲＩＡＨ（商標）は、（１）難治性又は２回目以降の再燃にある前駆Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を伴う２５歳までの患者、並びに（２）特定不能のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫に起因するＤＬＢＣＬを含む、２ライン以上の全身療法後の再燃性又は難治性（ｒ／ｒ）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を伴う成人患者の治療に適応されるＣＤ１９指向性遺伝子改変自家Ｔ細胞免疫療法薬である（免疫療法に関連する方法及び組成物に関して、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすＫＹＭＲＩＡＨ（商標）のＦＤＡ承認の添付文書を参照のこと）。
ＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標）及びＫＹＭＲＩＡＨ（商標）の両者とも、抗ヒトＣＤ１９抗体から誘導される抗体結合ドメインを含む。多くの抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９遺伝子のエクソン４にコードされているＣＤ１９のエピトープに結合すると考えられている。他の抗ＣＤ１９結合モチーフは、ＣＤ１９の異なるエピトープ、又は異なる親和性を有する同じエピトープを認識し得る。抗原結合系は、例えば、ＳＪ２５Ｃ１に由来する抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ１９抗体であるクローンＳＪ２５Ｃ１は、Ｓｐ２／０マウス骨髄腫細胞とＮＡＬＭ１細胞及びＮＡＬＭ１６細胞で免疫化されたＢＡＬＢ／ｃマウスから分離された脾臓細胞とのハイブリダイゼーションから得られる。ＳＪ２５Ｃ１抗原結合ドメインは、他の治験中のＣＤ１９標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法で使用された。
本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に記載される抗体に見られる抗原結合配列を含み得る。幾つかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される抗原結合フラグメントを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される少なくとも１つのＨＣＤＲ、例えば、表１４に開示される少なくとも１つのＨＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される２つのＨＣＤＲ、例えば、表１４に開示される少なくとも２つのＨＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される３つのＨＣＤＲ、例えば、表１４に開示される３つのＨＣＤＲを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される少なくとも１つのＬＣＤＲ、例えば、表１４に開示される少なくとも１つのＬＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される２つのＬＣＤＲ、例えば、表１４に開示される少なくとも２つのＬＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される３つのＬＣＤＲ、例えば、表１４に開示される３つのＬＣＤＲを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される少なくとも１つのＨＣＤＲ、例えば、表１４に開示される少なくとも１つのＨＣＤＲと、本明細書に示される少なくとも１つのＬＣＤＲ、例えば、表１４に開示される少なくとも１つのＬＣＤＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される２つのＨＣＤＲ、例えば、表１４に開示される少なくとも２つのＨＣＤＲと、本明細書に示される２つのＬＣＤＲ、例えば、表１４に開示される少なくとも２つのＬＣＤＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に示される３つのＨＣＤＲ、例えば、表１４に開示される３つのＨＣＤＲと、本明細書に示される３つのＬＣＤＲ、例えば、表１４に開示される３つのＬＣＤＲとを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域（重鎖ＦＲ）、例えば、表１４に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの２つの重鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも２つの重鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に開示される軽鎖
可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの２つの軽鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも２つの軽鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの２つの重鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも２つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの２つの軽鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも２つの軽鎖ＦＲとを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲ、例えば、表１４に開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲとを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、一緒に又はそれぞれ個別に、表１４に開示される重鎖可変ドメインの対応するＦＲ（複数の場合もある）に対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する１つ、２つ、又は３つのＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、一緒に又はそれぞれ個別に、表１４に開示される軽鎖可変ドメインの対応するＦＲ（複数の場合もある）に対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する１つ、２つ、又は３つのＦＲを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、表１４に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する少なくとも１つの重鎖可変ドメインを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、表１４に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）をそれぞれ有する２つの重鎖可変ドメインを含み、これらの重鎖可変ドメインは同一又は相違し得る。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、表１４に開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する少なくとも１つの軽鎖可変ドメインを含む。様々な実
施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、表１４に開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）をそれぞれ有する２つの軽鎖可変ドメインを含み、これらの軽鎖可変ドメインは同一又は相違し得る。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、表１４に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する少なくとも１つの重鎖可変ドメインと、表１４に開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有する少なくとも１つの軽鎖可変ドメインとを含む。
様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、表１４に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）をそれぞれ有する２つの重鎖可変ドメインと、表１４に開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）をそれぞれ有する２つの軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、様々な実施形態では、（ｉ）重鎖可変ドメインのそれぞれは同一若しくは相違し得るか、又は（ｉｉ）軽鎖可変ドメインのそれぞれは同一若しくは相違し得る。
或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本開示の重鎖可変ドメインと、本開示の軽鎖可変ドメインと、配列番号２４７に対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有するリンカーとを含む結合モチーフを含む。或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、配列番号２４７によるリンカー及び／又は配列番号３０７～配列番号３１３のいずれか１つによるリンカーを含む結合モチーフを含む。或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本開示の重鎖可変ドメインと、本開示の軽鎖可変ドメインと、配列番号２４５に対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の同一性）を有するリーダー配列とを含む結合モチーフを含む。或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、配列番号２４５によるＣＳＦ２ＲＡリーダー配列を含む結合モチーフを含む。或る特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフは、本開示の重鎖可変ドメインと、本開示の軽鎖可変ドメインと、本開示のリンカーと、本開示のリーダー配列とを含む結合モチーフを含む。或る特定の実施形態では、結合モチーフは、配列番号２４３に示される配列を有する。抗ＣＤ１９結合モチーフ及びその構成要素をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号２４４、配列番号２４６及び配列番号２４８に見られる。様々な実施形態では、結合モチーフは、
１つ以上の追加のリンカーに隣接する、配列番号２４７によるリンカー及び／又は配列番号３０７～配列番号３１３のいずれか１つによるリンカーを含み得る。
Figure 2023169138000024
Figure 2023169138000025
Figure 2023169138000026
抗原結合系は、例として、二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びバイシストロン性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。本開示は、とりわけ、ＣＤ２０及び第２の標的抗原、例えばＣＤ１９の両方を標的とする抗原結合系を提供する。幾つかの実施形態では、本開示の抗原結合系は、二重特異性抗原結合系を含む。幾つかの実施形態では、本開示の抗原結合系は、バイシストロン性抗原結合系（例えば、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを含み、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲが同じ細胞で発現される系）を含む。バイシストロン性ＣＡＲは、単一のベクターによってコードされる異なる標的に結合する２つのＣＡＲを含み得る。バイシストロン性ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合モチーフを含む第１のＣＡＲと、抗ＣＤ２０結合モチーフを含む第２のＣＡＲとを含み得る。様々なＣＡＲフレームワークと結び付けられた結合モチーフは交換可能であり、本実施例に示される特徴の組合せは例示的なものであって、限定するものではない。幾つかの実施形態では、バイシストロン性ＣＡＲの第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲ（例えば、抗ＣＤ２０ ＣＡＲ及び抗ＣＤ１９
ＣＡＲ）は、別個の遺伝子によってコードされ、及び／又は別個のｍＲＮＡ分子として発現される。幾つかの実施形態では、バイシストロン性ＣＡＲの第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲ（例えば、抗ＣＤ２０ ＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ＣＡＲ）は、単一の遺伝子によっ
てコードされ、及び／又は単一のｍＲＮＡ分子において一緒に発現され、ここで、発現されるタンパク質は、第１のＣＡＲ、切断可能なリンカードメイン、及び第２のＣＡＲを含む。バイシストロン性ＣＡＲの第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲは一般に、免疫細胞、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において一緒に発現されるため、個々のＣＡＲ－Ｔ細胞は、標的抗原のそれぞれ（例えば、ＣＤ２０及びＣＤ１９のそれぞれ）を標的とするＣＡＲを発現した。
様々な実施形態では、バイシストロン性ＣＡＲベクターは、リボソームスキップ配列又は内部リボソーム進入部位を利用する。リボソームスキップ配列によって隔離された２つの独立したＣＡＲ分子をコードする単一のベクターは、バイシストロン性ＣＡＲを発現し得る。様々な実施形態では、バイシストロン性ＣＡＲは、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを含み、ここで、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの配列は、結合モチーフに関してのみ相違する。様々な実施形態では、バイシストロン性ＣＡＲは、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを含み、ここで、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの配列は、重鎖可変ドメイン配列及び／又は軽鎖可変ドメイン配列に関してのみ相違する。したがって、幾つかの実施形態では、バイシストロン性ＣＡＲの第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲは、その１つ以上の構成要素、例えば、同じ又は異なる共刺激ドメインのいずれか又は全てについて同じ又は異なる配列を有し得る。例えば、バイシストロン性ＣＡＲの第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲの一方又は両方は、ＣＤ２８共刺激ドメイン、４１ＢＢ共刺激ドメイン、ＯＸ４０共刺激ドメイン、又はＩＣＯＳ共刺激ドメイン等の本明細書に示される共刺激ドメインを含み得る。
バイシストロン性ＣＡＲのＣＡＲは、結合モチーフと、ヒンジと、膜貫通ドメインと、共刺激ドメイン及び活性化ドメインを含む細胞内ドメインとを含み得る。結合モチーフは、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフ又は抗ＣＤ２０結合モチーフであり得る。ヒンジ及び膜貫通ドメインは、ヒンジドメイン及び膜貫通ドメインを含む２８Ｔ（ＣＤ２８）ドメイン又はＣＤ８Ｋドメインであり得る。共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン又は４１ＢＢ共刺激ドメインであり得る。活性化ドメインはＣＤ３ｚ活性化ドメインであり得る。
幾つかの実施形態では、第１の結合モチーフ及び第２の結合モチーフ（例えば、別個の抗ＣＤ２０結合モチーフ及び抗ＣＤ１９結合モチーフ）は両者とも、単一の二重特異性ＣＡＲに含まれる。そのような二重特異性ＣＡＲにおいて、ＣＡＲ分子自体は、２つ以上の抗原を認識するように操作され得る。タンデム二重特異性ＣＡＲでは、第１の結合モチーフ及び第２の結合モチーフは細胞外にあり、膜近位結合モチーフ及び膜遠位結合モチーフとして特徴付けられ得る。幾つかの実施形態では、抗ＣＤ２０結合モチーフは膜近位であり、抗ＣＤ１９結合モチーフは膜遠位である。他の実施形態では、抗ＣＤ１９結合モチーフは膜遠位であり、抗ＣＤ２０結合モチーフは膜近位である。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、選択された抗原を標的とするようにＴ細胞（例えば、患者Ｔ細胞又はドナーＴ細胞）を誘導又はリダイレクトすることができる操作された受容体である。ＣＡＲは、抗原を認識し、その抗原に結合したときに免疫細胞を活性化して、その抗原を有する細胞を攻撃及び破壊するように操作され得る。これらの抗原が腫瘍細胞上に存在する場合に、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、該腫瘍細胞を標的として殺傷することができる。ＣＡＲは一般に、抗原結合を媒介する細胞外結合モチーフ（例えば、抗ＣＤ２０結合モチーフ及び／又は抗ＣＤ１９結合モチーフ）と、抗原結合系が細胞表面又は細胞膜に存在する場合に細胞膜にまたがる又は細胞膜にまたがると理解される膜貫通ドメインと、細胞内（又は細胞質）シグナル伝達ドメインとを含む。
少なくとも１つの非限定的な見地によれば、ＣＡＲ組成物の少なくとも３つの「世代」が存在している。第１世代のＣＡＲにおいて、結合モチーフ（例えば、単鎖フラグメント
可変結合モチーフ）は、任意にヒンジドメイン及び１つ以上のスペーサーを含む膜貫通ドメインを介してシグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）に連結又は接続される。第２世代のＣＡＲでは、シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）とともに共刺激ドメイン（ＣＭ１、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、又はＯＸ－４０）が導入される。第３世代のＣＡＲでは、第２の共刺激ドメイン（ＣＭ２）が含まれる。
ＴＣＲは、α鎖及びβ鎖から構成されるヘテロ二量体である。ＴＣＲシグナル伝達は、免疫シナプスを生成するシグナル伝達タンパク質の動員を必要とする。さらに、原形質膜でのＴＣＲの局在は、Ｔ細胞で発現されるＣＤ３複合体に依存する。操作された単鎖ＴＣＲは、例えば、ＣＡＲコンストラクトの膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを使用して作製され得る。そのための方法及びコンストラクトは知られている（例えば、ｓＴＣＲ及びＴＣＲ－ＣＡＲ分子、例えば、ＴＣＲβ鎖とＣＤ２８ＴＭ及びＣＤ２８及びＣＤ３ζシグナル伝達モジュールとの融合）。本開示の抗ＣＤ２０抗原結合系及び／又は抗ＣＤ１９抗原結合系は、ＣＤ２０及び／又はＣＤ１９に結合する１つ以上の抗原結合モチーフを含み得る。幾つかの実施形態では、抗原結合系は、共刺激ドメイン、及び／又は細胞外ドメイン（例えば、「ヒンジ」又は「スペーサー」領域）、及び／又は膜貫通ドメイン、及び／又は細胞内（シグナル伝達）ドメイン、及び／又はＣＤ３ζ若しくはＣＤ３ε活性化ドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ２０抗原結合系及び／又は抗ＣＤ１９抗原結合系は、少なくとも、ヒトＣＤ２０に結合する結合モチーフと、共刺激ドメインと、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、ＣＤ３ζ又はＣＤ３ε活性化ドメインとを含む。
幾つかの実施形態では、本開示の抗原結合系は、リーダーペプチド（Ｐ）、結合モチーフ（Ｂ）、共刺激タンパク質の細胞外ドメイン（Ｅ）、膜貫通ドメイン（Ｔ）、共刺激ドメイン（Ｃ）、第２の共刺激ドメイン（Ｃ’）、及び活性化ドメイン（Ａ）の１つ以上又は全てを含む抗原結合系を含み得る。幾つかの場合には、抗原結合系は、以下：Ｂ Ｅ Ｔ Ａに従って構成される。幾つかの場合には、抗原結合系は、以下：Ｐ Ｂ Ｅ Ｔ Ａに従って構成される。幾つかの場合には、抗原結合系は、以下：Ｂ Ｅ Ｔ Ｃ Ａに従って構成される。幾つかの場合には、抗原結合系は、以下：Ｐ Ｂ Ｅ Ｔ Ｃ Ａに従って構成される。幾つかの場合には、抗原結合系は、以下：Ｂ Ｅ Ｔ Ｃ Ｃ’ Ａに従って構成される。幾つかの場合には、抗原結合系は、以下：Ｐ Ｂ Ｅ Ｔ Ｃ Ｃ’ Ａに従って構成される。幾つかの実施形態では、抗原結合系はＶＨ及びＶＬを含み、任意にＣＡＲは、以下：Ｐ－ＶＨ－ＶＬ－Ｅ－Ｔ－Ｃ－Ａ、又はＰ－ＶＬ－ＶＨ－Ｅ－Ｔ－Ｃ－Ａに従って構成される。幾つかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬはリンカー（Ｌ）によって接続されており、任意にＣＡＲは、以下：（Ｎ末端からＣ末端に向かって）Ｐ－ＶＨ－Ｌ－ＶＬ－Ｅ－Ｔ－Ｃ－Ａ、又はＰ－ＶＨ－Ｌ－ＶＬ－Ｅ－Ｔ－Ｃ－Ａに従って構成される。
１つ以上の抗原結合モチーフが、抗原結合系の標的（複数の場合もある）を決定する。抗原結合系の結合モチーフは、あらゆる結合モチーフ、例えば、本開示によって提供される抗体、例えば、本開示の結合モチーフを含み得る。幾つかの実施形態では、結合モチーフは、抗ＣＤ２０結合モチーフ及び／又は抗ＣＤ１９結合モチーフを含み得る。幾つかの実施形態では、結合モチーフは、抗ＣＤ２０結合モチーフ及び／又は抗ＣＤ１９結合モチーフを含み得る。
結合モチーフは、これらが他のＣＡＲ構成要素と一緒に単鎖の部分として発現されるように操作され得るため、キメラ抗原受容体において少なくとも部分的に使用される。例えば、米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号、並びにEshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy （1997) 45: 131-136、Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 （619-626)、Finney et al., Journal of Immunology, 19
98, 161: 2791-2797（これらはそれぞれ、ＣＡＲ中の結合モチーフドメインに関して、引用することにより本明細書の一部をなす）を参照されたい。結合モチーフ又はｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとが一緒に連結又は接続されている単鎖抗原結合フラグメントである。例えば、米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号、並びにEshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy （1997) 45: 131-136（これらはそれぞれ、結合モチーフドメイ
ンに関して、引用することにより本明細書の一部をなす）を参照されたい。親抗体から誘導される場合に、結合モチーフは、標的抗原の親抗体の結合の一部を保持し得るか、全てを保持し得るか、又はその結合を本質的に保持し得る。
ヒンジは、結合モチーフと膜貫通ドメインとの間に位置する抗原結合系の細胞外ドメインであり得る。ヒンジは、細胞外ドメイン又は「スペーサー」とも呼称され得る。ヒンジは、受容体の発現、活性、及び／又は安定性に寄与し得る。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインは、結合モチーフと膜貫通ドメインとの間に位置している。ヒンジはまた、標的抗原に到達するための柔軟性を与え得る。ヒンジは、免疫グロブリン様ヒンジドメインを含む。
幾つかの実施形態では、本開示の抗原結合系は、免疫グロブリン様ヒンジドメインであるか、それに由来するか、又はそれから誘導される（例えば、その全て又は断片を含む）ヒンジを含み得る。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインは、免疫グロブリンに由来するか、又は免疫グロブリンから誘導される。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、若しくはＩｇＭのヒンジ、又はそれらの断片から選択される。
ヒンジは、天然源又は合成源から誘導され得る。幾つかの実施形態では、本開示の抗原結合系は、ＣＤ２、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連α鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連β鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３ζ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ－ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ－ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ－ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ－１０、ＩＣＡＭ－１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－７Ｒα、ＬＦＡ－１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ－７６（Ｌ
ＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、若しくはＴｏｌｌリガンド受容体であるか、それらに由来するか、若しくはそれらから誘導される（例えば、それらの全て又は断片を含む）又はそれらの断片若しくは組合せであるヒンジを含み得る。或る特定の実施形態では、ＣＡＲはＣＤ２８ヒンジを含まない。
幾つかの実施形態では、本開示の抗原結合系は、ＣＤ８αのヒンジであるか、それに由来するか、又はそれから誘導される（例えば、その全て又は断片を含む）ヒンジを含み得る。幾つかの実施形態では、ヒンジは、ＣＤ２８のヒンジであるか、それに由来するか、又はそれから誘導される。幾つかの実施形態では、ヒンジは、ＣＤ８αのヒンジの断片又はＣＤ２８のヒンジの断片であるか、それらに由来するか、又はそれらから誘導され、ここで、断片は全体よりも小さいものである。幾つかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジの断片又はＣＤ２８ヒンジの断片は、ＣＤ８αヒンジ又はＣＤ２８ヒンジのＮ末端又はＣ末端又はその両方の少なくとも１アミノ酸、少なくとも２アミノ酸、少なくとも３アミノ酸、少なくとも４アミノ酸、少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸、少なくとも７アミノ酸、少なくとも８アミノ酸、少なくとも９アミノ酸、少なくとも１０アミノ酸、少なくとも１１アミノ酸、少なくとも１２アミノ酸、少なくとも１３アミノ酸、少なくとも１４アミノ酸、少なくとも１５アミノ酸、少なくとも１６アミノ酸、少なくとも１７アミノ酸、少なくとも１８アミノ酸、少なくとも１９アミノ酸、又は少なくとも２０アミノ酸を除くアミノ酸配列を含む。例示的なヒンジ配列は、表５４に示されるヒンジ配列（配列番号２６１～配列番号２６９）を含む。
これらのヒンジドメインのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は知られている。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインをコードするポリヌクレオチドは、既知のヌクレオチド配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）同一のヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインのポリペプチド配列は、既知のポリペプチド配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）同一のポリペプチド配列を含む。
概して、（例えば、抗原結合系の）「膜貫通ドメイン」は、細胞表面の分子又は細胞膜に存在する（例えば、細胞膜の一部又は全部にまたがる）場合に、膜内に存在するという特質を有するドメインを指す。本開示の抗原結合系についての共刺激ドメインは、膜貫通ドメイン及び／又は細胞内シグナル伝達ドメインを更に含み得る。膜貫通ドメインにおける全てのアミノ酸が膜内に存在することは必要ない。例えば、幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、タンパク質の指定されたストレッチ又は部分が実質的に膜内に位置することを特徴とする。タンパク質の細胞内局在（例えば、膜貫通局在）を予測する様々なアルゴリズムを使用して、アミノ酸配列又は核酸配列を分析することができる。プログラムｐｓｏｒｔ（PSORT.org）及びＰｒｏｓｉｔｅ（prosite.expasy.org）が、そのようなプ
ログラムの例である。
本明細書に記載される抗原結合系に含まれる膜貫通ドメインの種類は、いかなる種類に
も限定されない。幾つかの実施形態では、結合モチーフ及び／又は細胞内ドメインに天然に結び付けられている膜貫通ドメインが選択される。幾つかの場合には、膜貫通ドメインは、例えば、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのそのようなドメインの結合を避けて、受容体複合体の他の構成員との相互作用を最小限に抑えるために、１つ以上のアミノ酸の修飾（例えば、欠失、挿入、及び／又は置換）を含む。
膜貫通ドメインは、天然源又は合成源のいずれかから誘導され得る。起源が天然であれば、ドメインは、あらゆる膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質から誘導され得る。例示的な膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα鎖、β鎖、若しくはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＴＮＦＳＦＲ２５、ＣＤ１５４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃγ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－７Ｒα、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３と結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１；ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ－３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、若しくはＶＬＡ－６、又はそれらの断片、短縮物若しくは組合せから誘導され得る（例えば、少なくともそれらの膜貫通ドメインを含み得る）。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、合成物であり得る（そして、例えば、ロイシン及びバリン等の主に疎水性の残基を含み得る）。幾つかの実施形態では、合成による膜貫通ドメインの各末端にフェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンのトリプレットが含まれる。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞質ドメインに直接的に連結又は接続されている。幾つかの実施形態では、短いオリゴペプチドリンカー又はポリペプチドリンカー（例えば、２アミノ酸から１０アミノ酸の間の長さ）が、膜貫通ドメインと細胞内ドメインとの間の連結を形成し得る。幾つかの実施形態では、リンカーはグリシン－セリンダブレットである。
本明細書に示される膜貫通ドメインのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は知られている。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドは、既知のヌクレオチド配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）同一のヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインのポリペプチド
配列は、既知のポリペプチド配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）同一のポリペプチド配列を含む。任意に、短いスペーサーが、ＣＡＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインの全て又は一部の間の連結を形成し得る。
細胞内ドメイン（又は細胞質ドメイン）は、標的抗原が結合モチーフに結合した際に、例えば、１つ以上の免疫細胞エフェクター機能（例えば、ネイティブな免疫細胞エフェクター機能）を活性化する細胞内シグナルを惹起及び／又は媒介する１つ以上のシグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインのシグナル伝達ドメインは、免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化を媒介する。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。幾つかの実施形態では、細胞内ドメインのシグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞の活性化、増殖、生存、及び／又は他のＴ細胞機能を媒介する。細胞内ドメインは、活性化ドメインであるシグナル伝達ドメインを含み得る。細胞内ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインであるシグナル伝達ドメインを含み得る。
抗原が免疫細胞に結合した際にシグナルを伝達し得る細胞内シグナル伝達ドメインは知られており、そのいずれも本開示の抗原結合系に含まれ得る。例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列は、ＴＣＲが抗原に結合した後にシグナル伝達を開始することが知られている（例えば、Brownlie et al., Nature Rev. Immunol. 13:257-269 （2013)を参照されたい）。
幾つかの実施形態では、シグナル伝達ドメイン及び／又は活性化ドメインは、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。細胞質シグナル伝達配列を含むＩＴＡＭの例は、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄから誘導されるものを含む（例えば、Love et al., Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2:a002485 （2010)、Smith-Garvin et al., Annu. Rev. Immunol. 27:591-619 （2009)を参照されたい）。
或る特定の実施形態では、好適なシグナル伝達ドメインとしては、限定されるものではないが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃγ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－７Ｒα、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３と結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、Ｌｙ１０８）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１；ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、Ｓ
ＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ－３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ－６、又はそれらの断片、短縮物若しくは組合せが挙げられる。
ＣＡＲに共刺激シグナル伝達ドメインを含めることで、例えば、シグナル伝達能を高めることができる。米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号と並んで、Krause et al.及びFinney et al.（上記参照）、Song et al., Blood 119:696-706 (2012)、Kalos et al., Sci Transl. Med. 3:95 (2011)、Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011)、並びにGross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59-83 (2016)を参照されたい。ＴＣＲのみにより生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分である場合があり、二次シグナル又は共刺激シグナルが活性化を高めることができる。したがって、幾つかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、１つ以上の免疫細胞エフェクター機能（例えば、本明細書に記載されるネイティブな免疫細胞エフェクター機能）を活性化する１つ以上の追加のシグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激シグナル伝達ドメイン）を更に含む。幾つかの実施形態では、そのような共刺激シグナル伝達ドメインの一部は、その部分がエフェクター機能シグナルを伝達する限り使用され得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される細胞質ドメインは、Ｔ細胞補助受容体（又はその断片）の１つ以上の細胞質配列を含む。このようなＴ細胞補助受容体の非限定的な例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＭＹＤ８８、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３と結合するリガンドが挙げられる。例示的な共刺激タンパク質は、Ｔ細胞上に天然に見られる共刺激タンパク質のアミノ酸配列を有し、その共刺激タンパク質の完全なネイティブなアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６１３０．１に記載されている。或る特定の場合には、ＣＡＲは、以下に示される配列番号２７０による配列によってコードされる４１ＢＢ共刺激ドメインを含む。
配列番号２７０
AGATTCAGCGTTGTGAAGAGAGGCCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGAGACCTGTGCAGACCACACAGGAGGAAGACGGCTGCAGCTGTAGATTCCCCGAGGAAGAGGAGGGCGGCTGTGAGCTGAGAGTTAAGTTCAGCAGGAGCGCCGACGCCCCTGCCTACCAGCAAGGACAGAATCAACTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAGGAATACGATGTGCTGGACAAGAGGAGAGGCAGAGACCCCGAGATGGGCGGCAAACCTAGAAGAAAGAACCCCCAGGAGGGCCTGTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAAAGAAGAAGAGGCAAGGGCCACGACGGCCTCTACCAGGGCTTAAGCACAGCTACAAAGGACACCTACGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCTAGATGATTAATTAAatcgat
本明細書に示されるシグナル伝達ドメインのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は知られている。幾つかの実施形態では、シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドは、既知のヌクレオチド配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）同一のヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、シグナル伝達ドメインのポリペプチド配列は、既知のポリペプチド配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少な
くとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）同一のポリペプチド配列を含む。
様々な実施形態では、例えば、抗原結合系の活性に起因する有害事象を最小限に抑える又は減らすには、抗原結合系の活性を調節する（例えば、減少させる）機構が望ましい。免疫細胞に誘導性の「オン」スイッチ又は「促進（accelerator）」スイッチを含めるこ
とも望ましい場合がある。適切な技術は、細胞が本開示のＣＡＲコンストラクトで形質導入される前に、その後に、又はそれと同時に、誘導性カスパーゼ－９（米国特許出願公開第２０１１／０２８６９８０号）又はチミジンキナーゼを使用することを含む。自殺遺伝子及び／又は「オン」スイッチを導入する追加の方法は、ＴＡＬＥＮＳ、ジンクフィンガー、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス技術、及び他の技術を含む。
本開示によれば、オン－オフ制御スイッチ技術又は他の種類の制御スイッチ技術は本明細書の一部をなし得る。これらの技術は、例えば、或る特定の細胞におけるＦＫＢＰ／Ｒａｐａｌｏｇ二量体化システムを利用するWu et al., Science 2014 350 （6258)（その
内容は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす）によって開示される二量体化ドメイン及びそのようなドメインの二量体化の任意の活性化因子の使用を含み得る。追加の二量体化技術は、例えば、Fegan et al. Chem. Rev. 2010, 110, 3315-3336並びに米国特許第５，８３０，４６２号、同第５，８３４，２６６号、同第５，８６９，３３７号、及び同第６，１６５，７８７号（これらのそれぞれの内容も、二量体化技術に関して、引用することにより本明細書の一部をなす）に記載されている。追加の二量体化ペアは、シクロスポリン－Ａ／シクロフィリン受容体、エストロゲン／エストロゲン受容体（任意に、タモキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、又はエンドキシフェンを使用する）、グルココルチコイド／グルココルチコイド受容体、テトラサイクリン／テトラサイクリン受容体、及び／又はビタミンＤ／ビタミンＤ受容体を含み得る。二量体化技術の更なる例は、例えば、国際公開第２０１４／１２７２６１号、国際公開第２０１５／０９０２２９号、米国特許出願公開第２０１４／０２８６９８７号、米国特許出願公開第２０１５／０２６６９７３号、米国特許出願公開第２０１６／００４６７００号、米国特許第８，４８６，６９３号、米国特許出願公開第２０１４／０１７１６４９号、及び米国特許出願公開第２０１２／０１３００７６号（これらの内容は更に、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす）に見出すことができる。
幾つかの実施形態では、本開示の抗原結合系は、リーダーペプチド（本明細書では、「シグナルペプチド」又は「リーダー配列」とも呼称される）を含む。或る特定の実施形態では、リーダーペプチドは、アミノ酸配列ＭＥＷＴＷＶＦＬＦＬＬＳＶＴＡＧＶＨＳ（配列番号２４９）、ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号２５０）、又はＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰ（配列番号２９５）に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％（例えば、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％）同一のアミノ酸配列を含む。
ＣＡＲの構成要素を、バイオテクノロジーの定型的な技術を使用して同等の構成要素と交換する又は「入れ替える」ことができる。少数の非限定的かつ部分的な例を提供するために、本開示のＣＡＲは、本明細書に示されるヒンジ及び本明細書に示される共刺激ドメインと組み合わせて、本明細書に示される結合モチーフを含み得る。或る特定の例では、本開示のＣＡＲは、本明細書に示されるヒンジ及び本明細書に示される共刺激ドメインと組み合わせて、本明細書に示されるリーダー配列と一緒に本明細書に示される結合モチー
フを含み得る。様々な実施形態では、本開示は、配列番号２５１～配列番号２６０のいずれか１つによる結合モチーフを、配列番号２６１～配列番号２６９のいずれか１つによるヒンジと組み合わせて（例えば、隣接して融合させて）、任意に配列番号２７０による４１ＢＢ共刺激ドメインと更に組み合わせて（例えば、隣接して融合させて）提供する。それらの少数の非限定的な例は、配列番号２７１～配列番号２９０に示されている。
バイシストロン性ＣＡＲは、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとの間に切断可能なリンカーを含む単一のポリペプチドとして発現される第１のＣＡＲ配列及び第２のＣＡＲ配列を含み得る。例示的な切断可能なリンカーは、フーリン－ＧＳＧ－Ｔ２Ａである（例えば、切断可能なリンカーに関して、引用することにより本明細書の一部をなすChng et al. MAbs. 2015 Mar-Apr; 7(2): 403-412を参照されたい、またバイシストロン性ＣＡＲ設計に関
して、引用することにより本明細書の一部をなすGuedan et al. Mol Ther Methods Clin Dev. 2019 Mar 15; 12: 145-156を参照されたい）。バイシストロン性ＣＡＲ構造物の唯
一の非限定的な例を提供するために、バイシストロン性ＣＡＲは、（ａ）（ｉ）シグナルペプチド（例えば、ＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド）、（ｉｉ）抗ＣＤ１９軽鎖可変ドメイン、（ｉｉｉ）リンカー（例えば、１つのＧ４Ｓリンカー又は複数のＧ４Ｓリンカー）、（ｉｖ）抗ＣＤ１９重鎖可変ドメイン、（ｖ）スペーサー又はヒンジ（例えば、ＣＤ２８Ｔスペーサー）、（ｖｉ）膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８膜貫通ドメイン）、（ｖｉｉ）共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８共刺激ドメイン）、（ｖｉｉｉ）刺激ドメイン（例えば、ＣＤ３ｚ刺激ドメイン）を含む第１のＣＡＲと、（ｂ）切断可能なリンカー（例えば、フーリンＧＳＧ－Ｔ２Ａリンカー）と、（ｃ）（ｉ）シグナルペプチド（例えば、ＣＤ８ａシグナルペプチド）、（ｉｉ）本開示の抗ＣＤ２０重鎖可変ドメイン、（ｉｉｉ）リンカー（例えば、配列番号２４７によるリンカー及び／又は配列番号３０７～配列番号３１３のいずれか１つによるリンカー）、（ｉｖ）本開示の抗ＣＤ２０軽鎖可変ドメイン、（ｖ）スペーサー又はヒンジ（例えば、ＣＤ８ａスペーサー）、（ｖｉ）膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８膜貫通ドメイン）、（ｖｉｉ）共刺激ドメイン（例えば、４１ｂｂ共刺激ドメイン）、及び（ｖｉｉｉ）刺激ドメイン（例えば、ＣＤ３ｚ刺激ドメイン）を含む第２のＣＡＲとを含み得る。したがって、限定されるものではないが、例示的な抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９バイシストロン性ＣＡＲは、配列番号２９１及び配列番号２９２に示されるヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を有し得る又はそれらを含み得る。
二重特異性ＣＡＲは、本開示の第１の結合モチーフと、抗ＣＤ１９結合モチーフである第２の結合モチーフとを含む単一のポリペプチドであり得る。非限定的な例示的な実施形態では、二重特異性ＣＡＲは、（ｉ）リーダー（例えば、ＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド）と、（ｉｉ）本開示の抗ＣＤ２０軽鎖可変ドメインと、（ｉｉｉ）リンカーと、（ｉｖ）抗ＣＤ２０重鎖可変ドメインと、（ｖ）リンカー（例えば、短縮されたリンカー）と、（ｖｉ）抗ＣＤ１９軽鎖可変ドメインと、（ｖｉｉ）リンカーと、（ｖｉｉｉ）抗ＣＤ１９重鎖可変ドメインと、（ｉｘ）細胞外ドメイン（例えば、ＣＤ２８Ｔヒンジ又はＩｇＧ４ヒンジ）と、（ｘ）膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８膜貫通ドメイン）と、（ｘｉ）細胞内領域（例えば、ＣＤ２８細胞内共刺激ドメイン及び／又は４１ｂｂ共刺激ドメイン）と、刺激ドメイン（例えば、ＣＤ３ｚ刺激ドメイン）とを含み得る。したがって、限定されるものではないが、例示的な抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９二重特異性ＣＡＲは、配列番号２９３～配列番号３０６に示されるヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を有し得る又はそれらを含み得る。
限定されるものではないが、ヒンジ、スペーサー、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、刺激ドメイン、結合モチーフ、及びそれぞれの変異体の配列を含む様々なＣＡＲ配列、構成要素、及び／又はフレームワークは知られており、所望の結合及び構成要素又は構造を有するＣＡＲは、例えば重鎖可変ドメイン配列又はＣＤＲ配列及び軽鎖可変ドメイン配列又はＣＤＲ配列が示されれば、容易に構築され得る。
本開示は、とりわけ、ＣＤ２０及び第２の標的抗原、例えばＣＤ１９に結合する二重特異性抗体を提供する。二重特異性抗体は、第１の標的抗原に結合する第１の結合モチーフと、第２の標的抗原に結合する第２の結合モチーフとを有する抗体を含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体は、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフと、本開示の抗ＣＤ１９結合モチーフとを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体は、本開示の抗ＣＤ２０重鎖可変ドメイン及び本開示の抗ＣＤ２０軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＤ２０結合モチーフと、抗ＣＤ１９重鎖可変ドメイン及び抗ＣＤ１９軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＤ１９結合モチーフとを含む。
本開示は、本開示の抗体が治療作用物質又は検出可能な部分と結び付けられているコンジュゲートを含む。様々な実施形態では、治療作用物質は、本明細書に示される抗癌剤である。或る特定の実施形態では、示されるコンジュゲートは、１つ以上の検出可能な部分を含む、すなわち、１つ以上のそのような部分で「標識」される。幾つかのそのような実施形態では、本開示のコンジュゲートは、診断又はイメージングの用途で、例えば、癌の診断又はイメージングにおいて有用である。本明細書に記載される標識抗体コンジュゲートにおいて、あらゆる多種多様な検出可能な部分を使用することができる。適切な検出可能な部分は、限定されるものではないが、様々なリガンド、放射性核種、蛍光色素、化学発光剤（例えば、アクリジニウムエステル、安定化ジオキセタン等）、生物発光剤、スペクトル分解可能な無機蛍光半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、マイクロ粒子、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金等）、ナノクラスター、常磁性金属イオン、酵素、比色標識（例えば、色素、金コロイド等）、ビオチン、ジゴキシゲニン、ハプテン、及び抗血清又はモノクローナル抗体が利用可能なタンパク質を含む。
本開示は、本明細書に示される抗ＣＤ２０結合モチーフ及び／又は抗ＣＤ１９結合モチーフをコードする核酸を含む。本開示は、限定されるものではないが、結合モチーフ（例えば、抗ＣＤ２０結合モチーフ及び抗ＣＤ１９結合モチーフ）をコードする核酸を含む、本明細書に示される抗体をコードする核酸を含む。本開示は、限定されるものではないが、バイシストロン性キメラ抗原受容体及び二重特異性キメラ抗原受容体（例えば、ＣＤ２０及びＣＤ１９に結合するバイシストロン性キメラ抗原受容体及び二重特異性キメラ抗原受容体）をコードする核酸を含む、本明細書に示される抗原結合系をコードする核酸を含む。配列番号２の核酸配列は、配列番号１及び配列番号３～配列番号１１のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１３の核酸配列は、配列番号１２及び配列番号１４～配列番号２２のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号２４の核酸配列は、配列番号２３及び配列番号２５～配列番号３３のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号３５の核酸配列は、配列番号３４及び配列番号３６～配列番号４４のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号４６の核酸配列は、配列番号４５及び配列番号４７～配列番号５５のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号５７の核酸配列は、配列番号５６及び配列番号５８～配列番号６６のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号６８の核酸配列は、配列番号６７及び配列番号６９～配列番号７７のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号７９の核酸配列は、配列番号７８及び配列番号８０～配列番号８８のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号９０の核酸配列は、配列番号８９及び配列番号９１～配列番号９９のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１０１の核酸配列は、配列番号１００及び配列番号１０２～配列番号１１０のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１１２の核酸配列は、配列番号１１１及び配列番号
１１３～配列番号１２１のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１２３の核酸配列は、配列番号１２２及び配列番号１２４～配列番号１３２のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１３４の核酸配列は、配列番号１３３及び配列番号１３５～配列番号１４３のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１４５の核酸配列は、配列番号１４４及び配列番号１４６～配列番号１５４のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１５６の核酸配列は、配列番号１５５及び配列番号１５７～配列番号１６５のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１６７の核酸配列は、配列番号１６６及び配列番号１６８～配列番号１７６のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１７８の核酸配列は、配列番号１７７及び配列番号１７９～配列番号１８７のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号１８９の核酸配列は、配列番号１８８及び配列番号１９０～配列番号１９８のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号２００の核酸配列は、配列番号１９９及び配列番号２０１～配列番号２０９のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号２１１の核酸配列は、配列番号２１０及び配列番号２１２～配列番号２２０のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。本開示は、本明細書に示される抗ＣＤ１９結合モチーフをコードする核酸を含む。配列番号２２２の核酸配列は、配列番号２２１及び配列番号２２３～配列番号２３１のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。配列番号２３３の核酸配列は、配列番号２３２及び配列番号２３４～配列番号２４２のそれぞれに対応し、それらをコードする例示的な核酸配列を含み、そして提供する。
本開示は、本開示の核酸を含む及び／又は本開示のポリペプチドをコードするベクターを含む。様々な実施形態では、本開示は、本明細書に示される抗ＣＤ２０結合モチーフ及び／又は抗ＣＤ１９結合モチーフをコードする核酸を含むベクターを含む。様々な実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、結合モチーフ分子（例えば、抗ＣＤ２０結合モチーフ又は抗ＣＤ１９結合モチーフ）をコードする核酸を含む、本明細書に示される抗体をコードする核酸を含むベクターを含む。様々な実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、バイシストロン性キメラ抗原受容体又は二重特異性キメラ抗原受容体（例えば、ＣＤ２０及びＣＤ１９に結合するバイシストロン性キメラ抗原受容体及び二重特異性キメラ抗原受容体）をコードする核酸を含む、本明細書に示される１つ以上の抗原結合系をコードする核酸を含むベクターを含む。
あらゆるベクターが本開示に適切であり得る。幾つかの実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。幾つかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、マウス白血病ウイルスベクター、ＳＦＧベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバールウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レンチウイルスベクター、又はそれらの任意の組合せである。好適な例示的なベクターとして、例えばｐＧＡＲ、ｐＢＡＢＥ－ｐｕｒｏ、ｐＢＡＢＥ－ｎｅｏ ｌａｒｇｅＴｃＤＮＡ、ｐＢＡＢＥ－ｈｙｇｒｏ－ｈＴＥＲＴ、ｐＭＫＯ．１ ＧＦＰ、ＭＳＣＶ－ＩＲＥＳ－ＧＦＰ、ｐＭＳＣＶ ＰＩＧ（Ｐｕｒｏ ＩＲＥＳ ＧＦＰ空プラスミド）、ｐＭＳＣＶ－ｌｏｘｐ－ｄｓＲｅｄ－ｌｏｘｐ－ｅＧＦＰ－Ｐｕｒｏ－ＷＰＲＥ、ＭＳＣＶ ＩＲＥＳ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ、ｐＭＩＧ、ＭＤＨ１－ＰＧＫ－ＧＦＰ＿２．０、ＴｔＲＭＰＶＩＲ、ｐＭＳＣＶ－ＩＲＥＳ－ｍＣｈｅｒｒｙ ＦＰ、ｐＲｅｔｒｏＸ ＧＦＰ Ｔ２Ａ Ｃｒｅ、ｐＲＸＴＮ、ｐＬｎｃＥＸＰ、及びｐＬＸＩＮ－Ｌｕｃが挙げられる。
組換え発現ベクターは、あらゆる適切な組換え発現ベクターであり得る。適切なベクターは、プラスミド及びウイルス等の繁殖及び増殖若しくは発現又はその両方に向けて設計されたベクターを含む。例えば、ベクターは、ｐＵＣシリーズ（Fermentas Life Sciences、メリーランド州グレンバーニー）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Stratagene、
カリフォルニア州ラホーヤ）、ｐＥＴシリーズ（Novagen、ウィスコンシン州マディソン
）、ｐＧＥＸシリーズ（Pharmacia Biotech、スウェーデン、ウプサラ）、及びｐＥＸシ
リーズ（Clontech、カリフォルニア州パロアルト）から選択され得る。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＺａｐＩＩ（Stratagene）、λＥＭＢＬ４、及びλＮＭ１１４９等のバクテリオファージベクターを使用することもできる。本開示の文脈において有用な植物発現ベクターの例としては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１、及びｐＢＩＮ１９（Clontech）が挙げられる。本開示の文脈において有用な動物発現ベクターの例としては、ｐｃＤＮＡ、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ、及びｐＭＡＭｎｅｏ（Clontech）が挙げられる。幾つかの実施形態では、抗原結合系をコードする核酸及び本明細書に記載される誘導性発現コンストラクトの両方を含めるために、（例えば、Clontechからの）バイシストロン性ＩＲＥＳベクターが使用される。
幾つかの実施形態では、組換え発現ベクターはウイルスベクターである。適切なウイルスベクターとしては、限定されるものではないが、レトロウイルスベクター、アルファウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、及び鶏痘ウイルスベクターが挙げられ、好ましくは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を形質転換する天然の能力又は操作された能力を有する。
組換え発現ベクターは、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory
Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001、及びAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994に記載される標準的な組換えＤＮＡ技術を使用し
て調製され得る。環状又は線状である発現ベクターのコンストラクトは、原核性宿主細胞又は真核性宿主細胞において機能する複製系を含むように調製され得る。複製系は、例えば、ＣｏｌＥ１、２μプラスミド、λ、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス等から誘導され得る。
組換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクションされた宿主の選択を可能にする１つ以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性、例えば、抗生物質、重金属等に対する耐性、栄養要求性宿主において原栄養性を与える相補等を含む。組換え発現ベクターに適したマーカー遺伝子は、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、及びアンピシリン耐性遺伝子を含む。
本開示の文脈において有用なベクターは、「裸の」核酸ベクター（すなわち、これらを封入するタンパク質、糖類、及び／又は脂質をほとんど又は全く有しないベクター）、又は他の分子と複合体を形成したベクターであり得る。ベクターと適切に組み合わせることができる他の分子としては、限定されるものではないが、ウイルスコート、カチオン性脂質、リポソーム、ポリアミン、金粒子、及び細胞分子を標的とするリガンド、受容体、又は抗体等の標的化部分が挙げられる。
慣用の形質転換技術、トランスフェクション技術、又は形質導入技術を介して、ベクターＤＮＡを細胞、例えば免疫細胞に導入することができる。「形質転換」及び「トランスフェクション」という用語は、リン酸カルシウム共沈又は塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥ
－デキストラン媒介性トランスフェクション、リポフェクション、遺伝子銃、ナノ粒子媒介送達、又はエレクトロポレーション等の、外来核酸（例えば、ＤＮＡ）を細胞に導入する様々な当該技術分野で認められた技術を包含する。形質導入は、例えば、限定されるものではないが、レトロウイルス、レンチウイルス、及びＡＡＶを含む、本明細書に開示されるベクターによる細胞へのベクターのウイルス性送達を含む。
本開示は、本開示の少なくとも１つのベクター又は核酸を含むか、発現するか、又はそれらを含む若しくは発現するように操作される（例えば、形質転換又は形質導入される）細胞を含む。幾つかの実施形態では、方法は、少なくとも１つの抗原結合系をコードするポリヌクレオチドを含むベクターで細胞を形質導入することを含む。本開示は、本開示の１つ以上のポリペプチドをコードする少なくとも１つのベクターを含む又は該ベクターを含むように形質転換される細胞を含む。本開示は、本明細書に示される抗ＣＤ２０結合モチーフ及び／又は抗ＣＤ１９結合モチーフをコードする少なくとも１つのベクターを含む又は該ベクターを含むように形質転換される細胞を含む。本開示は、限定されるものではないが、結合モチーフ分子（例えば、抗ＣＤ２０結合モチーフ又は抗ＣＤ１９結合モチーフ）を含む、本明細書に示される抗体をコードする少なくとも１つのベクターを含む又は該ベクターを含むように形質転換される細胞を含む。本開示は、限定されるものではないが、バイシストロン性キメラ抗原受容体又は二重特異性キメラ抗原受容体（例えば、ＣＤ２０及びＣＤ１９に結合するバイシストロン性キメラ抗原受容体又は二重特異性キメラ抗原受容体）を含む、本明細書に示される１つ以上の抗原結合系をコードする少なくとも１つのベクターを含む又は該ベクターを含むように形質転換される細胞を含む。幾つかの実施形態では、細胞は、それぞれのベクターが異なるＣＡＲをコードする２つのベクターで同時トランスフェクション又は同時形質導入され、それら２つの異なるＣＡＲが一緒になってバイシストロン性ＣＡＲとなる。一緒になってバイシストロン性ＣＡＲとなる２つの異なるＣＡＲをコードする２つの異なるベクターによる細胞のトランスフェクション又は形質導入は、単一の細胞集団に対して同時に行われ得るか、２つの異なる細胞集団に対して同時に、それぞれの集団が２つのベクターのうちの１つだけで形質導入されるように行われ得るか、又は２つの異なる細胞集団に対して独立して、それぞれが２つのベクターのうちの１つだけで形質導入されるように行われ得る。
本開示は、本開示の１つ以上のポリペプチドを含む細胞を含む。本開示は、本明細書に示される抗ＣＤ２０結合モチーフ及び／又は抗ＣＤ１９結合モチーフを含む（例えば、発現する）細胞を含む。本開示は、限定されるものではないが、結合モチーフ（例えば、抗ＣＤ２０結合モチーフ又は抗ＣＤ１９結合モチーフ）を含む、本明細書に示される抗体を含む（例えば、発現する）細胞を含む。本開示は、限定されるものではないが、バイシストロン性キメラ抗原受容体又は二重特異性キメラ抗原受容体（例えば、ＣＤ２０及びＣＤ１９に結合するバイシストロン性キメラ抗原受容体及び二重特異性キメラ抗原受容体）を含む、本明細書に示される１つ以上の抗原結合系を含む（例えば、発現する）細胞を含む。
他の態様では、本開示のポリヌクレオチド又はベクターを含む細胞が本明細書に示されている。幾つかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示される１つ又は２つのｓｃｆｖを含むＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞を対象とする。他の実施形態では、本開示は、本明細書に開示される１つ又は２つのｓｃｆｖを含むＣＡＲ又はＴＣＲによってコードされるポリペプチドを含む細胞、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞を対象とする。幾つかの実施形態では、ポリペプチドは、以下に示されるアミノ酸配列、又はそれらの任意の組合せを含む。
配列番号２３２（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ軽鎖）：
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT
配列番号２２１（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ重鎖）：
EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
配列番号５６（抗ＣＤ２０軽鎖）：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLADPFTFGGGTKVEIK
配列番号４５（抗ＣＤ２０重鎖）：
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARETDYSSGMGYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号５６（抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ２軽鎖）：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLADPFTFGGGTKVEIK
配列番号１５５（抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ２重鎖）：
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSRYVWSWIRQPPGKGLEWIGEIDSSGKTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYDSSDSYYYSYDYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号１４４（抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ３軽鎖）：
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASSRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSFPWTFGGGTKVEIK
配列番号１７７（抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ３重鎖）：
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYAWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHRGFTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYDSSDSYYYSYDYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号７８（抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ４軽鎖）：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYRFPPTFGQGTKVEIK
配列番号６７（抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ４重鎖）：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFKEYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYSGHTYYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGPHYDDWSGFIIWFDPWGQGTLVTVSS
いずれの細胞も本開示のポリヌクレオチド、ベクター又はポリペプチドに対する宿主細胞として使用され得る。幾つかの実施形態では、細胞は、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞
、又は哺乳動物細胞等のより高等な真核細胞であってもよい。好適な原核細胞としては、限定されずに、グラム陰性又はグラム陽性の生物等の真正細菌、例えばエンテロバクテハシエ（Enterobactehaceae：腸内細菌科）、例えばエシェリヒア（Escherichia）、例えばＥ．コリ；エンテロバクター（Enterobacter）；エルウィニア（Erwinia）；クレブシエ
ラ（Klebsiella）；プロテウス（Proteus）；サルモネラ（Salmonella）、例えばサルモ
ネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimurium）；セラチア（Serratia）、例えばセラチア・マルセッセンス（Serratia marcescans）及びシゲラ（Shigella）；Ｂ．サチリス
（subtilis）及びＢ．リケニフォルミス（licheniformis）等の桿菌；Ｐ．アエルギノー
ザ（aeruginosa）等のシュードモナス；及びストレプトマイセス（Streptomyces）等が挙げられる。幾つかの実施形態では、細胞はヒト細胞である。幾つかの実施形態では、細胞は免疫細胞である。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＴＣＲ発現細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、顆粒球、生得のリンパ系細胞、巨核球、単球、マクロファージ、血小板、胸腺細胞、及び骨髄性細胞からなる群から選択される。一実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。別の実施形態では、免疫細胞はＮＫ細胞である。或る特定の実施形態では、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自己Ｔ細胞、操作された自己Ｔ細胞（ｅＡＣＴ（商標））、同種異系Ｔ細胞、異種性Ｔ細胞、又はそれらの任意の組合せである。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ又はＣＡＲ－Ｔ）及び操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は免疫細胞、例えばＴ細胞に容易に挿入され、該免疫細胞、例えばＴ細胞によって発現されて、結合作用物質が生産され得る。或る特定の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞等の免疫細胞）は、ドナー被験体から得られる。幾つかの実施形態では、ドナー被験体は、癌又は腫瘍に罹患しているヒト患者である。他の実施形態では、ドナー被験体は、癌又は腫瘍に罹患していないヒト患者である。幾つかの実施形態では、操作された細胞は被験体に対して自家である。幾つかの実施形態では、操作された細胞は被験体に対して同種異系である。
本開示の細胞を、当該技術分野で知られている任意の供給源によって得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで造血幹細胞集団から分化されてもよく、又はＴ細胞は被験体から得られてもよい。Ｔ細胞は、例えば末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍から得られてもよい。さらに、Ｔ細胞は、当該技術分野において利用可能な１以上のＴ細胞株に由来し得る。また、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシス等の当業者に知られている数多くの技術を使用して被験体から収集された血液単位から得られてもよい。或る特定の実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、後の処理に適切なバッファー又は培地に入れる。幾つかの実施形態では、細胞をＰＢＳで洗浄する。理解されるように、洗浄工程は、例えばＣｏｂｅ（商標）２９９１細胞処理装置、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ（商標）等の半自動フロースルー遠心分離機等を使用することによって使用され得る。幾つかの実施形態では、洗浄された細胞を１以上の生体適合性のバッファー、又はバッファーを含む若しくは含まない他の生理食塩水溶液に再懸濁する。或る特定の実施形態では、アフェレーシス試料の望ましくない成分が除去される。Ｔ細胞療法用にＴ細胞を単離する追加の方法は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号に開示され、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
或る特定の実施形態では、Ｔ細胞は、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離を使用することによる赤血球の溶解及び単球の枯渇によってＰＢＭＳから単離される。幾つかの実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋のＴ細胞等のＴ細胞の特定の亜集団は、当該技術分野において知られている正又は負の選択技術によって更に単離される。例えば、負の選択によるＴ細胞集団の富化は、負
に選択される細胞に特有の表面マーカーに対する抗体の組合せによって遂行され得る。幾つかの実施形態では、負に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する負の磁気免疫付着（negative magnetic immunoadherence）又はフローサイトメトリーによる細胞の選別及び／又は選択を使用することができる
。例えば、負の選択によってＣＤ４＋細胞を富化するため、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ２０及びＨＬＡ－ＤＲに対する抗体を含む。或る特定の実施形態では、フローサイトメトリー及び細胞選別は、本開示における使用に対する目的の細胞集団を単離するために使用される。
幾つかの実施形態では、ＰＢＭＣは、本明細書に記載される方法を使用して、免疫細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲ等）により遺伝子修飾に直接使用される。或る特定の実施形態では、ＰＢＭＣを単離した後、Ｔリンパ球を更に単離し、遺伝子修飾及び／又は拡大の前又は後のいずれかに、細胞傷害性Ｔリンパ球とヘルパーＴリンパ球の両方を、ナイーブ、メモリー、及びエフェクターのＴ細胞亜集団へと選別する。
幾つかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、これら各種のＣＤ８＋細胞と関連する細胞表面抗原を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、及びエフェクター細胞へと更に選別される。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発現は、ＣＣＲ７、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、及びＣＤ１２７を含み、グランザイムＢに対して陰性である。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋及びＣＤ６２Ｌ＋のＴ細胞である。幾つかの実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ１２７に対して陰性であり、グランザイムＢ及びパーフォリンに対して陽性である。或る特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞は亜集団へと更に選別される。例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞及びエフェクター細胞へと選別され得る。
幾つかの実施形態では、免疫細胞、例えばＴ細胞は、単離に続いて、既知の方法を使用して遺伝子修飾されるか、又は遺伝子修飾に先だってｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫細胞が活性化され、拡大される（すなわち、前駆細胞の場合、分化される）。別の実施形態では、免疫細胞、例えばＴ細胞は、本明細書に記載されるキメラ抗原受容体によって遺伝子修飾され（例えば、ＣＡＲをコードする１以上のヌクレオチド配列を含むウイルスベクターによって形質導入される）、次いでｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化及び／又は拡大される。Ｔ細胞を活性化及び拡大する方法は当該技術分野において知られており、例えば米国特許第６，９０５，８７４号、同第６，８６７，０４１号、及び同第６，７９７，５１４号、並びにＰＣＴ公報国際公開第２０１２／０７９０００号に記載され、それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。一般的には、かかる方法は、ＰＢＭＣ又は単離されたＴ細胞と、一般的にはビーズ又は他の表面に付着された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等の刺激物質及び共刺激物質とを、ＩＬ－２等の適切なサイトカインを含む培養培地中で接触させることを含む。同じビーズに付着された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体は、「代理」抗原提示細胞（ＡＰＣ）としての役割を果たす。一例は、ヒトＴ細胞の生理学的な活性化に対するＣＤ３／ＣＤ２８活性化因子／刺激因子システムである、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）システムである。他の実施形態では、米国特許第６，０４０，１７７号及び同第５，８２７，６４２号、並びにＰＣＴ公報国際公開第２０１２／１２９５１４号（それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に記載されるような方法を使用して、フィーダー細胞、並びに適切な抗体及びサイトカインによって、Ｔ細胞は活性化され、刺激されて増殖する。
本開示の様々な態様では、本開示のベクター又はポリペプチド（例えば、本開示の抗ＣＤ２０結合モチーフ及び／又は抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９抗原結合系）を含む、これらを発
現する、これらをコードする、又はこれらをコードするように形質転換される細胞が結合作用物質である。結合作用物質、又は結合作用物質の集団は、結合作用物質（例えば、癌用の治療薬として有用な細胞を含む組成物）として（例えば、その活性作用物質として）使用され得る。
本開示は、例えば、本開示のベクター又は核酸による細胞の形質転換（例えば、形質導入）によって、本明細書に開示される抗体作用物質を生産する方法及びプロセスを更に含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される抗体作用物質を生産する方法又はプロセスは、本明細書に示される少なくとも１つの抗原結合系をコードする核酸（例えば、ベクター中に存在する核酸）で細胞を形質転換（例えば、形質導入）することを含む。概して、本明細書に記載される抗体作用物質は、免疫細胞、例えば、養子細胞療法において有用である又は使用することができる細胞から生産され得る。幾つかの実施形態では、結合作用物質は、ＴＩＬ、Ｔ細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、ＮＫ細胞、γδＴ細胞、制御性Ｔ細胞、又は末梢血単核細胞からなる群から選択される細胞型から生産される。「腫瘍浸潤リンパ球」、すなわちＴＩＬは、血流から出て腫瘍に遊走した白血球を指す。リンパ球は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びナチュラルキラー細胞の３つの群に分けることができる。「Ｔ細胞」は、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、及びγδＴ細胞を含むＣＤ３＋細胞を指す。
或る特定の実施形態では、結合作用物質は、細胞、例えば免疫細胞を、本明細書に記載される抗原結合系をコードする核酸及び／又は発現コンストラクト（例えば、（ｉ）抗原結合系をコードする核酸を含む第１の組換え発現ベクター及び誘導性発現コンストラクトを含む第２の組換え発現ベクター、（ｉｉ）抗原結合系をコードする核酸及び誘導性発現コンストラクトの両方を含む単一の組換え発現ベクター、又は（ｉｉｉ）構成的発現コンストラクトを含む組換え発現ベクター）で遺伝子改変（例えば、形質転換）することによって生産される。組換え発現ベクターは、限定されるものではないが、一本鎖又は二本鎖であり、合成された又は部分的に天然源から得ることができる、天然ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、又は改変ヌクレオチドを含み得るＤＮＡ及びＲＮＡを含む、あらゆる種類のヌクレオチドを含み得る。組換え発現ベクターは、天然に存在する若しくは天然に存在しないヌクレオチド間の連結、又は両方の種類の連結を含み得る。
幾つかの実施形態では、或る方法は、本明細書に開示される抗原結合系をコードするポリヌクレオチドで細胞を形質導入することを含む。幾つかの実施形態では、方法は、抗原結合系をコードするポリヌクレオチドを含むベクターで細胞を形質導入することを含む。
幾つかの実施形態では、Ｔ細胞療法で使用されるドナーＴ細胞は（例えば、自家Ｔ細胞療法用に）患者から得られる。他の実施形態では、Ｔ細胞療法で使用されるドナーＴ細胞は患者ではない被験体から得られる。例示的な態様では、被験体は白血球アフェレーシスを受けることができ、その際、白血球をｅｘ ｖｉｖｏで収集、濃縮、又は枯渇させて、対象となる細胞、例えばＴ細胞が選択及び／又は分離される。これらのＴ細胞分離物を方法により増殖させ、本開示の１つ以上のＣＡＲコンストラクトが導入され得るように処理することができ、それにより本開示のＣＡＲ Ｔ細胞が作製される。
幾つかの実施形態では、免疫細胞を被験体から得て、本明細書に記載される誘導性発現コンストラクト又は構成的発現コンストラクト、例えば、本明細書に記載される誘導性発現コンストラクト又は構成的発現コンストラクトを含む発現ベクターで形質転換、例えば形質導入することで、結合作用物質が得られる。したがって、幾つかの実施形態では、結合作用物質は、免疫細胞を得たのと同じ被験体に投与される自家細胞を含む。幾つかの実施形態では、免疫細胞を被験体から得て、本明細書に記載される誘導性発現コンストラクト又は構成的発現コンストラクト、例えば、本明細書に記載される誘導性発現コンストラ
クト又は構成的発現コンストラクトを含む発現ベクターで形質転換、例えば形質導入することで、別の被験体に同種異系移植される結合作用物質が得られる。
或る特定の実施形態では、Ｔ細胞はドナー被験体から得られる。幾つかの実施形態では、ドナー被験体は、癌又は腫瘍に冒されたヒト患者である。他の実施形態では、ドナー被験体は癌又は腫瘍に冒されていないヒト患者である。
本開示の様々な組成物は、任意の手段によって生産され得る操作された細胞の集団を含む。幾つかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載される抗原結合系を発現するように操作されたヒト細胞の集団を提供する。幾つかの実施形態では、そのような集団は結合作用物質を含む。幾つかの実施形態では、そのような集団は培養された集団を含む。幾つかの実施形態では、そのような集団は、幾つかの実施形態では、培養された集団の投与を受け得る単一のヒト供給源からの細胞の培養された集団である。本明細書に開示されるように、結合作用物質は、任意の単一の細胞又は細胞の集団、例えば、本明細書に示される操作された細胞の集団を含み得る。
本開示の他の態様は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含む組成物、本明細書に記載されるベクター、本明細書に記載されるポリペプチド、又は本明細書に記載されるｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞に関する。幾つかの実施形態では、上記組成物は、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、可溶化剤、乳化剤、保存剤、及び／又はアジュバントを含む。幾つかの実施形態では、上記組成物は賦形剤を含む。一実施形態では、上記組成物は、本明細書に記載される抗原結合分子を含むＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む。別の実施形態では、上記組成物は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされるＴＣＤを含むＣＡＲ又はＴＣＲを含む。別の実施形態では、上記組成物は、本明細書に開示されるｓｃｆｖの１つ又は２つを含むＣＡＲ又はＴＣＲを含むＴ細胞を含む。
他の実施形態では、上記組成物は、非経口的な送達に対し、吸入に対し、又は経口等の消化管による送達に対して選択される。かかる薬学的に許容可能な組成物の作製は、当業者の能力の範囲に含まれる。或る特定の実施形態では、バッファーを使用して上記組成物を生理学的ｐＨ又はわずかに低いｐＨ、典型的には約５～約８の範囲のｐＨに維持する。或る特定の実施形態では、非経口投与が検討される場合、上記組成物は、薬学的に許容可能なビヒクル中、追加の治療剤と共に又はそれを伴わずに、本明細書に記載される組成物を含む、パイロジェンフリー（pyrogen-free）の非経口的に許容可能な水溶液の形態である。或る特定の実施形態では、非経口注射用のビヒクルは滅菌蒸留水であり、該蒸留水中において、少なくとも１つの追加の治療剤と共に又はそれを伴わずに、本明細書に記載される組成物が適切に保存される無菌の等張液として製剤化される。或る特定の実施形態では、上記作製は、所望の分子と、製品の制御放出又は持続放出を提供する、高分子化合物（ポリ乳酸又はポリグリコール酸等）、ビーズ、又はリポソームとの製剤化を含み、その後、デポー注射によって送達される。或る特定の実施形態では、所望の分子を導入するために、埋め込み可能な薬物送達デバイスが使用される。
幾つかの実施形態では、本開示は、本開示の１つ以上、例えば、本開示の抗原結合系、該抗原結合系をコードする核酸、及び／又は該核酸を含む及び／又は発現する細胞（複数の場合もある）若しくは細胞の集団を含む及び／又は送達する医薬組成物を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、本明細書に示される１つ以上の細胞、例えば、本明細書に示されるポリペプチドをコード又は発現する結合作用物質、例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９ ＣＡＲを含む及び／又は送達する医薬組成物（すなわち「結合作用物質医薬組成物」）を提供する。結合作用物質医薬組成物は、本明細書に記載される１つ又は複数の細胞を１つ以上の薬学的又は生理学的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤と組み合
わせて含み得る。そのような組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水等のような緩衝液、グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトール等の炭水化物、タンパク質、ポリペプチド又はグリシン等のアミノ酸、酸化防止剤、ＥＤＴＡ又はグルタチオン等のキレート剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、及び保存剤を含み得る。
本開示の結合作用物質医薬組成物を、本明細書に示される任意の実施形態による投与用に製剤化することができ、その少なくとも１つの非限定的な例は静脈内投与である。組成物は、静脈内投与経路、腫瘍内投与経路、動脈内投与経路、筋肉内投与経路、腹腔内投与経路、髄腔内投与経路、硬膜外投与経路、及び／又は皮下投与経路用に製剤化され得る。好ましくは、組成物は非経口投与経路用に製剤化される。非経口投与に適した組成物は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌薬及び、例えば該組成物を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含み得る、水性又は非水性の等張性の滅菌注射溶液であり得る。水性又は非水性の滅菌懸濁液は、１つ以上の懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び保存剤を含有し得る。本開示の結合作用物質医薬組成物は、治療される（又は予防される）疾患に適切な様式で投与され得る。
注射用の滅菌組成物は、従来の製薬慣行に従って注射用の蒸留水をビヒクルとして使用して製剤化され得る。例えば、生理食塩水又はグルコース並びにＤ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール及び塩化ナトリウム等の他の補助剤を含む等張性溶液を、任意に適切な可溶化剤、例えば、エタノール等のアルコール及びプロピレングリコール又はポリエチレングリコール等のポリアルコール、並びにポリソルベート８０（商標）、ＨＣＯ－５０等の非イオン性界面活性剤と組み合わせて、注射用水溶液として使用することができる。
油状液体の非限定的な例としてはゴマ油及び大豆油が挙げられ、該油状液体を可溶化剤としての安息香酸ベンジル又はベンジルアルコールと組み合わせることができる。含まれ得る他のものは、リン酸緩衝剤又は酢酸ナトリウム緩衝剤等の緩衝剤、塩酸プロカイン等の鎮静剤、ベンジルアルコール又はフェノール等の安定剤、及び酸化防止剤である。製剤化された注射剤は、適切なアンプル内に包装され得る。
一実施形態では、結合作用物質医薬組成物は、検出可能なレベルの夾雑物、例えば、エンドトキシン、マイコプラズマ、複製コンピテントレンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ－Ｇ核酸、ＨＩＶ ｇａｇ、残留抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、プールヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培養培地成分、ベクターパッケージング細胞又はプラスミド構成要素、細菌及び真菌を実質的に含まない。一実施形態では、細菌は、アルカリゲネス・ファエカリス（Alcaligenes faecalis）、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）、エシェリキア・コリ（Escherichia coli）、ヘモフィルス・インフルエンザエ（Haemophilus influenzae）、ナイセリア・メニンギティディス（Neisseria meningitides）、シュードモナス・アエルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）、ストレプトコッカス・ニュ
ーモニア（Streptococcus pneumonia）、及び／又はストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus pyogenes）Ａ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
様々な実施形態では、本明細書に示される細胞（例えば、結合作用物質、例えば、操作されたＴ細胞又は操作されたＮＫ細胞）は、結合作用物質医薬組成物から活性化及び／又は増殖され得る、及び／又は結合作用物質医薬組成物を産生すべきであり得る。幾つかの実施形態では、被験体への投与の前に追加の工程を実施することができる。例えば、結合作用物質は、被験体に投与する前に、免疫細胞を本明細書に記載される誘導性発現コンストラクト又は構成的発現コンストラクト（例えば、誘導性発現コンストラクト又は構成的
発現コンストラクトを含む発現ベクター）と接触させてから（例えば、形質導入又はトランスフェクトさせてから）ｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖され得る。ｉｎ ｖｉｔｒｏでの増殖は、被験体に投与する前に、１日以上、例えば、２日以上、３日以上、４日以上、６日以上、又は８日以上続行し得る。幾つかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの増殖は、被験体に投与する前に、２１日以内、例えば、１８日以内、１６日以内、１４日以内、１０日以内、７日以内、又は５日以内続行し得る。例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの増殖は、被験体に投与する前に、１日間～７日間、２日間～１０日間、３日間～５日間、又は８日間～１４日間続行し得る。例えば、結合作用物質（例えば、操作されたＴ細胞又は操作されたＮＫ細胞）を含む結合作用物質医薬組成物は、所望の投与量、例えば１０４個～１０９個の細胞／ｋｇ（体重）（例えば、１０５個～１０６個の細胞／ｋｇ（体重））の投与量での投与用に製剤化され得る。本開示の或る特定の実施形態は、被験体に本明細書に記載される医薬組成物、例えば本明細書に記載される結合作用物質（例えば、本開示の操作された細胞の集団）、本明細書に記載されるタンパク質治療薬、結合作用物質を含む組成物、及び／又はタンパク質治療薬を含む組成物等を、例えば、適切な投与レジメンで投与される場合に、被験体を治療するのに有効な量で投与する方法を含む。
幾つかの実施形態では、結合作用物質は、被験体に対して自家であり、被験体は、被験体から免疫細胞を分離する前に、免疫学的にナイーブな状態、免疫化された状態、罹患した状態、又は別の状態であり得る。幾つかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの増殖の間に、結合作用物質は、抗原（例えば、ＴＣＲ抗原）で刺激され得る。抗原刺激された増殖を、任意に、例えば、抗ＣＤ３抗体、抗Ｔａｃ抗体、抗ＣＤ２８抗体、又はフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）等のリンパ球増殖を非特異的に刺激する条件下での増殖で補うことができる。増殖された結合作用物質は、被験体に直接的に投与され得る、又は今後の使用のために、すなわち被験体への後の投与のために凍結され得る。
幾つかの実施形態では、結合作用物質はｅｘ ｖｉｖｏでインターロイキン－２（ＩＬ－２）により処理した後に癌患者へと注入され、注入後に、癌患者はＩＬ－２で治療される。さらに、幾つかの実施形態では、癌患者は、結合作用物質の投与前に、準備的なリンパ球枯渇（免疫系の一時的なアブレーション）を受けることができる。ＩＬ－２治療及び準備的なリンパ球枯渇の組合せは、結合作用物質の持続性を高め得る。幾つかの実施形態では、結合作用物質は、サイトカインをコードする核酸で形質導入又はトランスフェクションされ、その核酸は、サイトカインの構成的な、調節可能な、又は時間的に制御される発現をもたらすように操作され得る。適切なサイトカインとしては、例えば、収縮期の間のＴリンパ球の生存を高めるように作用するサイトカインが挙げられ、これによりメモリーＴリンパ球の形成及び生存が促進され得る。
或る特定の実施形態では、結合作用物質は、癌治療剤等の別の治療剤の投与の前に、実質的にそれと同時に、又はその後に投与される。癌治療剤は、例えば、化学療法剤、生物学的作用物質、又は放射線治療であり得る。幾つかの実施形態では、結合作用物質が与えられる被験体には、リンパ球枯渇化学療法又は放射線療法等の免疫細胞の枯渇を引き起こすのに十分な治療は施されない。
幾つかの実施形態において被験体に投与される投与量は、実施形態、使用される組成物、投与方法、並びに治療される部位及び被験体によって変動し得る。しかしながら、用量は治療応答を与えるのに十分であるべきである。臨床医は、病状を治療又は予防するために、ヒト又は他の被験体に投与される組成物の治療的有効量を決定することができる。治療的に有効であるのに必要とされる組成物の正確な量は、例えば、結合作用物質の活性、及び投与経路等の多くの要因に依存し得る。
適切な数の結合作用物質細胞が被験体に投与され得る。本明細書に記載される単一の結
合作用物質細胞は、増殖して治療上の利益を与えることができるが、幾つかの実施形態では、１０２個以上、例えば、１０３個以上、１０４個以上、１０５個以上、又は１０８個以上の結合作用物質細胞が投与される。幾つかの実施形態では、１０１２個以下、例えば１０１１個以下、１０９個以下、１０７個以下、又は１０５個以下の本明細書に記載される結合作用物質細胞が被験体に投与される。幾つかの実施形態では、１０２個～１０５個、１０４個～１０７個、１０３個～１０９個、又は１０５個～１０１０個の本明細書に記載される結合作用物質細胞が投与される。結合作用物質医薬組成物は、例えば１０４個～１０９個の細胞／ｋｇ（体重）（例えば、１０５個～１０６個の細胞／ｋｇ（体重））の投与量で投与され得る。結合作用物質医薬組成物は、例えば、約２×１０６個の細胞／ｋｇ、約３×１０６個の細胞／ｋｇ、約４×１０６個の細胞／ｋｇ、約５×１０６個の細胞／ｋｇ、約６×１０６個の細胞／ｋｇ、約７×１０６個の細胞／ｋｇ、約８×１０６個の細胞／ｋｇ、約９×１０６個の細胞／ｋｇ、約１×１０７個の細胞／ｋｇ、約２×１０７個の細胞／ｋｇ、約３×１０７個の細胞／ｋｇ、約４×１０７個の細胞／ｋｇ、約５×１０７個の細胞／ｋｇ、約６×１０７個の細胞／ｋｇ、約７×１０７個の細胞／ｋｇ、約８×１０７個の細胞／ｋｇ、又は約９×１０７個の細胞／ｋｇの投与量で投与され得る。
本明細書に記載される結合作用物質の用量は、一度に、又は一連の分割用量（subdoses）を適切な期間にわたって投与して、例えば必要に応じて、毎日、半週ごとに、毎週、隔週で、半月ごとに、隔月で、半年ごと、又は一年ごとに哺乳動物に投与され得る。有効量の結合作用物質を含む投与単位を１日１回投与で投与することも、又は総一日投与量を、必要に応じて一日に投与される用量の２分割用量、３分割用量、４分割用量、若しくはそれ以上の分割用量で投与することもできる。
適切な投与手段は、医師によって選択され得る。投与経路は、非経口投与、例えば、注射による投与、経鼻投与、経肺投与、又は経皮投与であり得る。投与は、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射による全身投与又は局所投与であり得る。幾つかの実施形態では、組成物は、非経口送達用、吸入用、又は経口等の消化管を介した送達用に選択される。投与用量及び投与方法は、被験体の体重、年齢、状態等に応じて変動し、適切に選択され得る。
様々な実施形態では、本明細書に記載される結合作用物質は、医薬組成物に添合され得る。本開示の結合作用物質を含む医薬組成物は、既知の方法によって製剤化され得る（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th edition, ed. Alfonso R. Gennaro,
Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1985)に記載されている）。様々な例では、本開示の結合作用物質を含む医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含むように製剤化され得る。薬学的に許容可能な担体の例としては、限定されるものではないが、生理学的に適合可能なあらゆる全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等が挙げられる。本開示の結合作用物質を含む組成物は、薬学的に許容可能な塩、例えば、酸付加塩又は塩基付加塩を含み得る。
様々な実施形態では、本明細書に記載される結合作用物質を含む組成物、例えば注射用滅菌製剤は、従来の製薬慣行に従って注射用蒸留水をビヒクルとして使用して製剤化され得る。例えば、生理食塩水又はグルコース並びにＤ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール及び塩化ナトリウム等の他の補助剤を含む等張性溶液を、任意に適切な可溶化剤、例えば、エタノール等のアルコール及びプロピレングリコール又はポリエチレングリコール等のポリアルコール、並びにポリソルベート８０（商標）、ＨＣＯ－５０等の非イオン性界面活性剤と組み合わせて、注射用水溶液として使用することができる。本明細書に開示されるように、結合作用物質を含む医薬組成物は、任意の形態で存在し得る。そのような形態としては、例えば、液剤（例えば、注射可能及び注入可能な液剤）、分散液剤又は懸濁液剤、錠剤、丸剤、粉末剤、リポソーム剤及び坐剤等の液体剤形、半固体剤
形、及び固体剤形が挙げられる。
任意の形態の選択又は使用は、部分的には、意図された投与様式及び治療用途に依存し得る。例えば、全身送達又は局所送達を目的とした本開示の結合作用物質を含む組成物は、注射可能溶液又は注入可能溶液の形態で存在し得る。したがって、本開示の結合作用物質を含む組成物は、非経口様式（例えば、静脈内注射、皮下注射、腹腔内注射、又は筋肉内注射）による投与用に製剤化され得る。非経口投与は、経腸投与及び局所投与以外の、通常は注射による投与様式を指し、限定されるものではないが、静脈内、鼻腔内、眼内、肺、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内及び胸骨内の注射及び注入を含む。
投与経路は、非経口投与、例えば、注射による投与、経鼻投与、経肺投与、又は経皮投与であり得る。投与は、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射による全身投与又は局所投与であり得る。
様々な実施形態では、本開示の結合作用物質を含む医薬組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、又は高濃度での安定した貯蔵に適した他の秩序構造物として製剤化され得る。滅菌注射可能溶液は、本開示の結合作用物質を含む組成物を必要な量で適切な溶媒中に、必要に応じて上記で列挙した成分の１つ又は組合せとともに導入した後に、濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散液は、本開示の結合作用物質を含む組成物を、基礎となる分散媒及び上に列挙したものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に導入することによって調製される。滅菌注射可能溶液の調製用の滅菌粉末の場合に、調製方法は、本開示の結合作用物質と任意の追加の所望の成分（以下を参照）とを含む組成物の粉末を事前に滅菌濾過されたその溶液から得る真空乾燥及び凍結乾燥を含む。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散液の場合に所望の粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持され得る。本開示の結合作用物質を含む注射可能な組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを本開示の結合作用物質を含む組成物中に含めることによってもたらされ得る。
本開示の結合作用物質を含む医薬組成物は、水又は別の薬学的に許容可能な液体中の滅菌溶液又は懸濁液を含む注射可能な製剤の形態で非経口投与され得る。例えば、本開示の結合作用物質を含む医薬組成物は、治療用分子と、滅菌水及び生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、フレーバリング添加剤（flavoring excipient）、希
釈剤、ビヒクル、保存剤、結合剤等の薬学的に許容可能なビヒクル又は媒体とを適切に混ぜ合わせた後に、一般的に許容される製薬慣行に必要とされる単位剤形で混合することによって製剤化され得る。医薬調剤に含まれる有効成分の量は、指定された範囲内の適切な用量が提供されるような量である。油状液体の非限定的な例としてはゴマ油及び大豆油が挙げられ、その油状液体を可溶化剤としての安息香酸ベンジル又はベンジルアルコールと組み合わせることができる。含めることができる他のものは、リン酸緩衝剤又は酢酸ナトリウム緩衝剤等の緩衝剤、塩酸プロカイン等の鎮静剤、ベンジルアルコール又はフェノール等の安定剤、及び酸化防止剤である。製剤化された注射剤は、適切なアンプル内に包装され得る。
幾つかの実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、０℃未満の温度（例えば、－２０℃又は－８０℃）での貯蔵用に製剤化され得る。幾つかの実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、２℃～８℃（例えば、４℃）で最大２年間（例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、１年半、又は２年）の貯蔵用に製剤化され得る。したがって、幾つか
の実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、２℃～８℃（例えば、４℃）で少なくとも１年間の貯蔵で安定である。
幾つかの場合には、本開示の結合作用物質を含む医薬組成物は、溶液として製剤化され得る。幾つかの実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、例えば、２℃～８℃（例えば、４℃）での貯蔵用に適した、適切な濃度で緩衝された溶液として製剤化され得る。本明細書に記載される結合作用物質を含む医薬組成物は、イムノリポソーム組成物に製剤化され得る。循環時間が高められたリポソームは、例えば、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
或る特定の実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、インプラント及びマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤のように、組成物が即時放出するのを防ぐ担体とともに製剤化され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸等の生分解性で生体適合性のポリマーを使用することができる。そのような製剤を作製する多くの方法が知られている。例えば、J.
R. Robinson (1978) "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems," Marcel Dekker, Inc., New Yorkを参照されたい。
幾つかの実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、ヒト等の哺乳動物への肺内投与（例えば、吸入器又はネブライザーを介した投与）に適した組成物に製剤化され得る。そのような組成物の製剤化方法は知られている。乾燥粉末吸入用製剤及び該製剤の投与に適したシステムも知られている。肺への投与は、経口及び／又は経鼻であり得る。肺送達用の医薬用デバイスの例としては、定量吸入器、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、及びネブライザーが挙げられる。例えば、本開示の結合作用物質を含む組成物は、乾燥粉末吸入器を介して被験体の肺に投与され得る。これらの吸入器は、分散性で安定した乾燥粉末製剤を肺に送達する噴射剤を用いないデバイスである。乾燥粉末吸入器は知られており、限定されるものではないが、ＴＵＲＢＯＨＡＬＥＲ（商標）（AstraZeneca；英国、ロン
ドン）、ＡＩＲ（商標）吸入器（ALKERMES（商標）；マサチューセッツ州ケンブリッジ）、ＲＯＴＡＨＡＬＥＲ（商標）（GlaxoSmithKline；英国、ロンドン）、及びＥＣＬＩＰ
ＳＥ（商標）（Sanofi-Aventis；フランス、パリ）を含む。例えば、国際公開第０４／０２６３８０号、国際公開第０４／０２４１５６号、及び国際公開第０１／７８６９３号を参照されたい。ＤＰＩデバイスは、インスリン及び成長ホルモン等のポリペプチドの肺投与に使用されてきた。幾つかの実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、定量吸入器によって肺内投与され得る。これらの吸入器は、個別の用量の分子を肺に送達するのに噴射剤に頼っている。追加のデバイス及び肺内投与法は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０２７１６６０号及び同第２００９／０１１０６７９号（これらのそれぞれの開示は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす）に示されている。
幾つかの実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、例えば、薬学的に許容可能な溶液、懸濁液又は軟膏の形態で、眼への送達用に製剤化され得る。眼の治療に使用される調剤は、例えば、限定されるものではないが、保存剤、緩衝剤、張性剤、酸化防止剤、及び安定剤、非イオン性湿潤剤又は清澄剤、及び増粘剤等の追加の成分を含有する滅菌水溶液の形態で存在し得る。本明細書に記載される調剤は、治療を必要とする被験体（例えば、ＡＭＤに罹患している被験体）の眼に慣用の方法によって、例えば、点眼の形態で、又は１つ以上の組成物を含有する治療溶液中に眼を浸けることによって局所投与され得る。
或る特定の実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物の投与には、眼の硝子体腔に薬物を導入するための様々なデバイスが適切であり得る。例えば、米国特許出願公開第２００２／００２６１７６号は、強膜を通じて硝子体腔へと突き出るように挿入するこ
とで、硝子体腔内に医薬作用物質を送達することができる医薬含有プラグを記載している。別の例では、米国特許第５，４４３，５０５号は、眼の内部への薬物の持続放出のために上脈絡膜腔又は無血管領域へと導入するための埋め込み型デバイスを記載している。米国特許第５，７７３，０１９号及び同第６，００１，３８６号はそれぞれ、眼の強膜表面に取り付け可能な埋め込み型薬物送達デバイスを開示している。治療作用物質を眼に送達する追加の方法及びデバイス（例えば、経強膜パッチ及びコンタクトレンズを介した送達）は、例えば、Ambati and Adamis (2002) Prog Retin Eye Res 21(2):145-151、Ranta and Urtti (2006) Adv Drug Delivery Rev 58(11):1164-1181、Barocas and Balachandran
(2008) Expert Opin Drug Delivery 5(1):1-10(10)、Gulsen and Chauhan (2004) Invest Opthalmol Vis Sci 45:2342-2347、Kim et al. (2007) Ophthalmic Res 39:244-254、
及び国際公開第０４／０７３５５１号（これらの開示は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす）に記載されている。
様々な実施形態では、皮下投与は、シリンジ、プレフィルドシリンジ、自己注射器（例えば、使い捨て又は再利用可能のもの）、ペン型注射器、パッチ注射器、ウェアラブル注射器、皮下注入セットを備えた携行式シリンジ注入ポンプ、又は結合作用物質薬と組み合わせるための皮下注射用の他のデバイス等のデバイスによって達成され得る。
本開示の注射システムは、米国特許第５，３０８，３４１号に記載される送達ペンを使用することができる。ペン型デバイスは、糖尿病を伴う患者へのインスリンの自己送達に一般的に使用される。そのようなデバイスは、少なくとも１つの注射針（例えば、約５ｍｍ～８ｍｍの長さの３１ゲージの針）を備え得て、一般に１つ以上の治療単位用量の治療溶液が事前に充填されており、できる限り少ない痛みで溶液を被験体に迅速に送達するのに有用である。１つの薬剤送達ペンは、治療薬又は他の薬剤のバイアルを内部に収容することができるバイアルホルダーを備える。ペンは、完全に機械的なデバイスであり得る、又は電子回路と組み合わせて、利用者に注射される薬剤の投与量を正確に設定及び／又は指示することができる。例えば、米国特許第６，１９２，８９１号を参照されたい。幾つかの実施形態では、ペン型デバイスの針は使い捨てであり、キットは１つ以上の使い捨ての交換用針を含む。本開示の結合作用物質を含む本発明で特徴付けられる組成物のいずれか１つの送達に適したペン型デバイスは、例えば米国特許第６，２７７，０９９号、同第６，２００，２９６号、及び同第６，１４６，３６１号（これらのそれぞれの開示は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす）にも記載されている。マイクロニードルに基づくペン型デバイスは、例えば、米国特許第７，５５６，６１５号（この開示は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす）に記載されている。高精度ペン型注射器（Precision Pen Injector）（ＰＰＩ）デバイスであるScandinavian Health Ltdにより製造されるＭＯＬＬＹ（商標）も参照されたい。
幾つかの実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、血管系を介した結合作用物質の輸送が意図される標的組織又は標的部位への該輸送に頼らない局所投与によって被験体に送達され得る。例えば、本開示の結合作用物質を含む組成物は、本開示の結合作用物質を含む組成物の注射若しくは埋め込みによって、又は本開示の結合作用物質を含む組成物を収容するデバイスの注射若しくは埋め込みによって送達され得る。或る特定の実施形態では、標的組織又は標的部位の近くに局所投与した後に、本開示の結合作用物質を含む組成物、又はその１つ以上の成分は、投与部位ではない意図される標的組織又は標的部位に拡散し得る。
幾つかの実施形態では、本開示の結合作用物質を含む組成物は、関節に、例えば、関節に直接的に（例えば、関節空間内に）又は関節の近くで局所投与され得る。本開示の結合作用物質を含む組成物を局所投与することができる関節内関節（intraarticular joints
）の例としては、例えば、股関節、膝関節、肘関節、手首関節、胸鎖関節、顎関節、手根
関節、足根関節、足首関節、及び関節炎状態の対象となるあらゆる他の関節が挙げられる。本開示の結合作用物質を含む組成物はまた、例えば、肩峰滑液包、二頭筋橈骨滑液包、肘撓骨（cubitoradial）滑液包、三角筋滑液包、膝蓋下滑液包、坐骨滑液包、及び任意の他の滑液包等の滑液包に投与され得る。
幾つかの実施形態では、本明細書に示される本開示の結合作用物質を含む組成物は、自己投与に適切であり得る単位剤形で存在する。そのような単位剤形は、容器、一般に、例えば、バイアル、カートリッジ、プレフィルドシリンジ又は使い捨てペン内で提供され得る。米国特許第６，３０２，８５５号に記載されるドーザーデバイス等のドーザーを、例えば、本明細書に記載される注射システムとともに使用することもできる。
医薬溶液は、治療的有効量の本開示の結合作用物質を含む組成物を含み得る。そのような有効量は、部分的に、本開示の結合作用物質を含む投与される組成物の効果、又は２つ以上の作用物質が使用される場合に、本開示の結合作用物質及び１つ以上の追加の活性作用物質を含む組成物の組合せ効果に基づいて容易に決定され得る。本開示の結合作用物質を含む組成物の治療的有効量はまた、個体の病状、年齢、性別、及び体重、並びに組成物（及び１つ以上の追加の活性作用物質）が個体において所望の奏効、例えば、少なくとも１つの状態パラメーターの改善、例えば、補体媒介性障害の少なくとも１つの症状の改善を引き起こす能力等の要因に従って変動し得る。例えば、治療的有効量の本開示の結合作用物質を含む組成物は、障害及び／又は障害の症状のいずれか１つを抑止（それらの重症度を軽減又はそれらの発生を排除）及び／又は予防し得る。治療的有効量はまた、治療的に有益な効果が本開示の結合作用物質を含む組成物の任意の有毒作用又は有害作用を上回る量である。
本開示の結合作用物質を含む組成物は、固定用量として、又はミリグラム毎キログラム（ｍｇ／ｋｇ）の用量で投与され得る。幾つかの実施形態では、用量はまた、本開示の結合作用物質を含む組成物中の１つ以上の抗原結合分子に対する抗体又は他の宿主免疫応答の生成を低減又は回避するように選択され得る。決して限定することを意図するものではないが、本開示の結合作用物質を含む組成物等の結合作用物質の例示的な投与量としては、例えば、１ｍｇ／ｋｇ～１０００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。本開示の結合作用物質を含む組成物の例示的な投与量としては、限定されるものではないが、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、又は２０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。
本開示の結合作用物質を含む組成物のいずれかの適切なヒト用量は、例えば、第Ｉ相用量漸増研究において更に評価され得る。例えば、van Gurp et al. (2008) Am J Transplantation 8(8):1711-1718、Hanouska et al. (2007) Clin Cancer Res 13(2, part 1):523-531、及びHetherington et al. (2006) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10): 3499-3500を参照されたい。
様々な実施形態では、医薬組成物は、本開示の核酸、例えば、ベクターを含み得る。本開示の核酸を含む医薬組成物を製剤化する方法は、例えば、Drugs and the Pharmaceutical Sciences: a Series of Textbooks and Monographs (Dekker, N.Y.)のシリーズの書籍において知られている。例えば、非経口適用、皮内適用、又は皮下適用に使用される溶液又は懸濁液は、以下の成分：注射用水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶剤等の滅菌希釈剤、ベンジルアルコール又はメチルパラベン等の抗細菌剤、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム等の酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸等のキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩等の
緩衝剤、及び塩化ナトリウム又はデキストロース等の張性を調整する作用物質を含み得る。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウム等の酸又は塩基を用いて調整され得る。非経口調剤は、例えば、アンプル、使い捨てシリンジ、又はガラス製若しくはプラスチック製の２つ以上の投与バイアル内に封入され得る。
注射用に適した本開示の核酸を含む医薬組成物は、滅菌注射可能溶液又は滅菌注射可能分散液の即時調合のための滅菌水溶液又は滅菌分散液及び滅菌粉末を含み得る。静脈内投与の場合に、適切な担体は、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（BASF、ニュージャージー州パーシッパニー）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含み得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、及びそれらの適切な混合物を含む溶媒又は分散媒であり得る。
効果的な治療的使用に関連する滅菌性、安定性、粘度及び他の要因が考慮され得る。流動性を維持する１つの方法は、例えば、レシチン等のコーティングの使用、所望の粒子サイズの維持、又は界面活性剤の使用を含む。幾つかの場合には、等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトール等の多価アルコール、塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましいであろう。幾つかの場合には、本開示の核酸を含む注射可能な組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含めることによってもたらされ得る。
滅菌注射可能溶液は、抗細菌剤及び抗真菌剤（例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等）等の成分の１つ又は組合せを添合することによって、及び／又は濾過滅菌によって調製され得る。幾つかの場合には、分散液は、活性分子を基礎となる分散媒及び抗細菌剤又は抗真菌剤を含有する滅菌ビヒクルに添合することによって調製される。滅菌注射可能溶液の調製用の滅菌粉末の場合に、調製方法は、事前に滅菌濾過されたその溶液からの真空乾燥及び凍結乾燥を含む。
本開示の核酸を含む経口組成物は、不活性希釈剤又は可食性担体を含み得る。経口治療的投与のためには、本開示の核酸は賦形剤とともに添合され、例えば、錠剤、トローチ剤、又はカプセル剤、例えば、ゼラチンカプセル剤の形態で使用され得る。本開示の核酸を含む経口組成物を、マウスウォッシュとして使用するために液体担体を使用して調製することもできる。医薬的に適合可能な結合剤、及び／又はアジュバント材料が、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤等は、以下の成分：微結晶性セルロース、トラガカントガム若しくはゼラチン等の結合剤、デンプン若しくはラクトース等の賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ（商標）若しくはトウモロコシデンプン等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム若しくはＳｔｅｒｏｔｅｓ（商標）等の滑沢剤、コロイド状二酸化ケイ素等の滑剤、スクロース若しくはサッカリン等の甘味料、又はペパーミント、サリチル酸メチル、若しくはオレンジフレーバリング等のフレーバリング剤のいずれか、又は同様の性質の分子を含有し得る。
幾つかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡワクチン等の核酸作用物質の投与に適したあらゆる方法によって投与され得る。これらの方法としては、例えば、遺伝子銃、バイオインジェクター、及び皮膚パッチ、並びに無針法、例えば米国特許第６，１９４，３８９号に開示されているマイクロ粒子ＤＮＡワクチン技術、及び米国特許第６，１６８，５８７号に開示される粉末型ワクチンによる哺乳動物の経皮無針ワクチン接種が挙げられる。さらに、例えば、Hamajima et al., (1998) Clin. Immunol. Immunopathol. 88(2), 205-10に記載されるように鼻腔内送達が可能である。リポソーム（例えば、米国特許第６，４７２，３７５号に記載される）。或る特定の場合には、マイクロカプセル化が使用され得る。さらに、（例えば、米国特許第６，４７１，９９６号に記載されるように）生分解性の標
的化可能なマイクロ粒子送達系を使用することができる。
本開示の核酸を含む組成物は、アジュバント、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、保存剤、それらの混合物、又は核酸を含む治療組成物に含める任意の成分等の成分を含み得る。核酸組成物は、例えば、生理食塩水、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等、リン酸緩衝生理食塩溶液、水、及び水中油型エマルジョン又は油中水型エマルジョン等のエマルジョン、並びに医薬品投与と適合可能な様々な種類の湿潤剤を含み得る。本開示の核酸を含む組成物に、補足的な活性分子を添合することもできる。本開示の核酸を含む組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏでの使用に許容可能であることを更なる任意の条件として、安定剤及び保存剤、並びに本明細書に記載される担体のいずれかを含み得る。追加の担体、安定剤、及びアジュバントの例については、Martin REMINGTON'S PHARM. SCI., 15th Ed. (Mack Publ. Co.), Easton (1975) and
Williams & Williams, (1995)、及び"PHYSICIAN'S DESK REFERENCE", 52nd ed., Medical Economics, Montvale, N.J. (1998)を参照されたい。
本明細書に記載される方法は、本開示の核酸を含む医薬組成物の製造及び使用を含む。本開示の核酸を含む医薬組成物は一般に、それらの意図された投与経路と適合可能であるように製剤化される。投与経路の例としては、非経口投与、例えば、静脈内投与、頭蓋内投与、皮内投与、皮下投与、経口（例えば、吸入）投与、経皮（局所）投与、経粘膜投与、及び直腸投与が挙げられる。
核酸組成物は、緩衝剤又はｐＨ調整剤を含み得る。緩衝剤は、有機酸又は有機塩基から調製された塩であり得る。本開示の緩衝剤は、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、又はフタル酸の塩等の有機酸塩、Ｔｒｉｓ、塩酸トロメタミン、及びリン酸緩衝剤を含む。追加の担体は、ポリビニルピロリドン、フィコール（高分子糖）、デキストレート（例えば、２－ヒドロキシプロピル－．クアドラチュア．－シクロデキストリン（2-hydroxypropyl-.quadrature.-cyclodextrin）等のシクロデキス
トリン）、ポリエチレングリコール、フレーバリング剤、抗微生物剤、甘味料、酸化防止剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標） ２０及びＴＷＥＥＮ（登録商標） ８０等のポリソルベート）、脂質（例えば、リン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、及びキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）等の高分子賦形剤又は添加剤を含む。
本開示の核酸がベクターである或る特定の実施形態では、本開示は、遺伝子導入及び／又は遺伝子療法用の組成物、例えば、ウイルス粒子、例えば、ＡＡＶ粒子及び／又はレトロウイルス粒子、例えばレンチウイルス粒子を含む組成物を含む。ウイルス力価に関して使用される「ゲノム粒子（ｇｐ）」又は「ゲノム当量」という用語は、感染性又は機能性にかかわらず、組換えウイルスゲノム、例えば、組換えＡＡＶ ＤＮＡゲノムを含むビリオンの数を指す。ベクター調製物中のゲノム粒子の数が測定され得る。ウイルス力価に関して使用される「感染ユニット（ＩＵ）」、「感染性粒子」、又は「複製ユニット」という用語は、例えば、複製中心アッセイとしても知られる感染中心アッセイによって測定され得る組換えＡＡＶベクター粒子の感染性の又は複製能を有する組換えウイルスの数を指す。ウイルス力価に関して使用される「形質導入ユニット（ＴＵ）」という用語は、機能的な導入遺伝子産物の産生をもたらす、感染性組換えベクター粒子、例えば、組換えＡＡＶベクター粒子の数を指す。
幾つかの実施形態では、組成物は、例えば、用量当たり２×１０６個～２×１０１２個、２×１０７個～２×１０１１個、又は２×１０８個～２×１０１１個のＤＮＡ含有ウイルス粒子を含む。或る特定の実施形態では、単位剤形におけるベクターの濃度又は力価は、例えば、少なくとも（ａ）１ｍＬ当たり１×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり２×１０
１２個の粒子、１ｍＬ当たり３×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり４×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり５×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり６×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり７×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり８×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり９×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり１０×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり１５×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり２０×１０１２個の粒子、１ｍＬ当たり２５×１０１２個の粒子、若しくは１ｍＬ当たり５０×１０１２個の粒子、（ｂ）１×１０９ＴＵ／ｍＬ、２×１０９ＴＵ／ｍＬ、３×１０９ＴＵ／ｍＬ、４×１０９ＴＵ／ｍＬ、５×１０９ＴＵ／ｍＬ、６×１０９ＴＵ／ｍＬ、７×１０９ＴＵ／ｍＬ、８×１０９ＴＵ／ｍＬ、９×１０９ＴＵ／ｍＬ、１０×１０９ＴＵ／ｍＬ、１５×１０９ＴＵ／ｍＬ、２０×１０９ＴＵ／ｍＬ、２５×１０９ＴＵ／ｍＬ、若しくは５０×１０９ＴＵ／ｍＬ、又は（ｃ）１×１０１０ＩＵ／ｍＬ、２×１０１０ＩＵ／ｍＬ、３×１０１０ＩＵ／ｍＬ、４×１０１０ＩＵ／ｍＬ、５×１０１０ＩＵ／ｍＬ、６×１０１０ＩＵ／ｍＬ、７×１０１０ＩＵ／ｍＬ、８×１０１０ＩＵ／ｍＬ、９×１０１０ＩＵ／ｍＬ、１０×１０１０ＩＵ／ｍＬ、１５×１０１０ＩＵ／ｍＬ、２０×１０１０ＩＵ／ｍＬ、２５×１０１０ＩＵ／ｍＬ、若しくは５０×１０１０ＩＵ／ｍＬである。そのような実施形態は、本開示により包含される単位投与量を限定せず、本開示の核酸を含む様々な組成物と一緒に使用され得る投与量の様々な尺度を限定しない。例えば、粒子の投与量、濃度、又は量は、被験体１キログラム当たりのベクターゲノム（Ｖｇ／Ｋｇ）又はＶｇ／用量に関して測定され得る及び／又は表現され得る。粒子の投与量、濃度、又は量を測定及び／又は表現する好ましい手段は、様々な要因、例えば、投与経路に応じて変化し得る。
本開示は、ＣＤ２０及び別の抗原、例えばＣＤ１９を同時に標的とする技術を提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、免疫応答を開始及び／又は調節する技術を提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、癌（例えば、表面に発現されたＣＤ２０を有する細胞（複数の場合もある）によって特徴付けられる癌）を治療する技術を提供する。
本明細書は、癌を治療又は予防するための、本明細書に示される結合作用物質医薬組成物の使用を含む。本開示の別の態様は、悪性腫瘍を治療又は予防する方法であって、それを必要とする被験体に有効量の結合作用物質医薬組成物を投与することを含み、例えば、細胞が本明細書に示される少なくとも１つの抗原結合系を含む、方法を対象とする。薬学的有効量の本開示の結合作用物質医薬組成物の投与を含む本開示の方法を使用して、被験体の癌を治療し、腫瘍のサイズを減少させ、腫瘍細胞を殺傷し、腫瘍細胞増殖を防ぎ、腫瘍成長を防ぎ、患者から腫瘍を排除し、腫瘍の再燃を防ぎ、腫瘍転移を防ぎ、患者の寛解を誘導し、又はそれらの任意の組合せを行うことができる。或る特定の実施形態では、本明細書に示される方法は完全奏効を誘発する。幾つかの特定の実施形態では、本明細書に示される方法は部分奏効を誘発する。或る特定の実施形態では、結合作用物質医薬組成物は、本明細書に示される細胞、例えば本開示の少なくとも１つのＣＡＲを含む又は発現する細胞であるか、該細胞を含むか、該細胞を活性作用物質として含むか、又は該細胞を唯一の活性作用物質として含む。幾つかの実施形態では、結合作用物質医薬組成物は、抗ＣＤ２０ ＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ＣＡＲを含むバイシストロン性ＣＡＲ系を含む、又は結合作用物質医薬組成物は、本開示の二重特異性抗Ｃ２０／抗ＣＤ１９ ＣＡＲを含む。
様々な実施形態では、本開示は、被験体において癌に対する免疫を誘発する又は被験体に癌に対する免疫を与えるための、本明細書に示される結合作用物質医薬組成物の使用を含む。本開示は、本明細書に示される結合作用物質医薬組成物を被験体に投与することにより、被験体における癌を予防する方法を更に含む。本開示は、本明細書に示される結合作用物質医薬組成物を被験体に投与することにより、被験体における免疫応答を誘発する方法を更に含む。或る特定の実施形態では、結合作用物質医薬組成物は、本明細書に示される細胞、例えば本開示の少なくとも１つのＣＡＲを含む又は発現する細胞であるか、該細胞を含むか、該細胞を活性作用物質として含むか、又は該細胞を唯一の活性作用物質と
して含む。幾つかの実施形態では、結合作用物質医薬組成物は、抗ＣＤ２０ ＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ＣＡＲを含むバイシストロン性ＣＡＲ系を含む、又は結合作用物質医薬組成物は、本開示の二重特異性抗Ｃ２０／抗ＣＤ１９ ＣＡＲを含む。
或る特定の実施形態では、治療を必要とする被験体における癌を治療する方法は、被験体に本明細書に開示されるポリヌクレオチド、ベクター、抗体、又は抗原結合系を投与することを含む。一実施形態では、該方法は、抗原結合系又は抗体（例えば、抗原結合系）をコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。別の実施形態では、該方法は、抗原結合系又は抗体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを投与することを含む。別の実施形態では、該方法は、抗原結合系又は抗体を被験体に投与することを含む。
本開示の別の態様は、好適な条件下で、本明細書に開示されるポリヌクレオチドで細胞を形質導入することを含む、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現する細胞を作製する方法に関する。幾つかの実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるように、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドで細胞を形質導入することを含む。幾つかの実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターで細胞を形質導入することを含む。或る特定の実施形態では、本開示は、結合作用物質医薬組成物が、本開示の抗原結合作用物質（例えば、抗原結合系）をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターでトランスフェクション又は形質導入されたＴ細胞を含むＴ細胞療法を提供する。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞療法で使用されるドナーＴ細胞は、（例えば、自家Ｔ細胞療法用に）患者から得られる。他の実施形態では、Ｔ細胞療法で使用されるドナーＴ細胞は、患者ではない被験体から得られる。一実施形態では、本開示のＴ細胞療法は、自家細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））である。この実施形態によれば、該方法は、患者から血液細胞を収集することを含み得る。次いで、分離された血液細胞（例えば、Ｔ細胞）は、本開示の抗原結合系を発現するように操作され得る。或る特定の実施形態では、結合作用物質は患者に投与される。幾つかの実施形態では、結合作用物質は、患者における癌を治療する又は治療することが意図される。例えば、一実施形態では、結合作用物質は腫瘍のサイズを縮小する。様々な実施形態では、本開示の細胞は、ヒト被験体から分離されたばかりの細胞、細胞培養物から分離されたばかりの細胞、又は貯蔵された、例えば凍結された細胞であり得る。
本開示の別の態様は、本明細書に記載されるポリヌクレオチド、本明細書に記載されるベクター、又は本明細書に記載されるＣＡＲ若しくはＴＣＲを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む、腫瘍に対する免疫を誘導する方法に関する。一実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ又はＴＣＲを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む。
本開示の別の態様は、有効量の本出願の操作された免疫細胞を投与することを含む、被験体において免疫応答を誘導する方法に関する。幾つかの実施形態では、免疫応答はＴ細胞媒介免疫応答である。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞媒介免疫応答は、１以上の標的細胞に対するものである。幾つかの実施形態では、操作された免疫細胞はＣＡＲ又はＴＣＲを含み、ここで、ＣＡＲ又はＴＣＲは、本開示に記載されるＴＨＤを含む。幾つかの実施形態では、標的細胞は腫瘍細胞である。
本開示の別の態様は、悪性腫瘍を治療する又は予防する方法に関し、該方法は、有効量の少なくとも１つの免疫細胞を、それを必要とする被験体に投与することを含み、ここで
、該免疫細胞は少なくとも１つのＣＡＲ又はＴＣＲを含み、該ＣＡＲ又はＴＣＲが本明細書に開示されるｓｃｆｖの１つ又は２つを含む。
本開示の別の態様は、本明細書に開示されるポリヌクレオチド、ベクター、ＣＡＲ若しくはＴＣＲ、細胞、又は組成物を被験体に投与することを含む、癌の治療を、それを必要とする被験体において行う方法に関する。一実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ又はＴＣＲを投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードする、ポリヌクレオチドを含む細胞、又は該ポリヌクレオチドを含むベクターを投与することを含む。
幾つかの実施形態では、癌の治療を、それを必要とする被験体において行う方法は、Ｔ細胞療法を含む。一実施形態では、本開示のＴ細胞療法は操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））である。この実施形態によれば、上記方法は、患者から血液細胞を収集することを含み得る。単離された血液細胞（例えばＴ細胞）は、その後、本開示のＣＡＲ又はＴＣＲを発現するように操作され得る。特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＴＣＲ Ｔ細胞は患者に投与される。幾つかの実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＴＣＲ Ｔ細胞は、患者において腫瘍又は癌を治療する。一実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＴＣＲ Ｔ細胞は、腫瘍又は癌のサイズを減少する。
幾つかの実施形態では、Ｔ細胞療法における使用に対するドナーＴ細胞は、（例えば自己Ｔ細胞療法に対しては）患者から得られる。他の実施形態では、Ｔ細胞療法における使用に対するドナーＴ細胞は、患者でない被験体から得られる。
Ｔ細胞は治療的有効量で投与され得る。例えば、Ｔ細胞の治療的有効量は、少なくとも約１０４個の細胞、少なくとも約１０５個の細胞、少なくとも約１０６個の細胞、少なくとも約１０７個の細胞、少なくとも約１０８個の細胞、少なくとも約１０９個の細胞、又は少なくとも約１０１０個の細胞となり得る。別の実施形態では、Ｔ細胞の治療的有効量は、約１０４個の細胞、約１０５個の細胞、約１０６個の細胞、約１０７個の細胞、又は約１０８個の細胞である。特定の一実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＴＣＲ Ｔ細胞の治療的有効量は、約２×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ、約６×１０６細胞／ｋｇ、約７×１０６細胞／ｋｇ、約８×１０６細胞／ｋｇ、約９×１０６細胞／ｋｇ、約１×１０７細胞／ｋｇ、約２×１０７細胞／ｋｇ、約３×１０７細胞／ｋｇ、約４×１０７細胞／ｋｇ、約５×１０７細胞／ｋｇ、約６×１０７細胞／ｋｇ、約７×１０７細胞／ｋｇ、約８×１０７細胞／ｋｇ、又は約９×１０７細胞／ｋｇである。
本開示の方法は、被験体において癌を治療するため、腫瘍のサイズを減少させるため、腫瘍細胞を死滅させるため、腫瘍細胞増殖を予防するため、腫瘍の成長を予防するため、患者から腫瘍を排除するため、腫瘍の再燃を予防するため、腫瘍転移を予防するため、患者において寛解を誘導するため、又はそれらの任意の組合せに使用され得る。或る特定の実施形態では、上記方法は完全奏功を誘導する。他の実施形態では、上記方法は部分奏功を誘導する。
或る特定の実施形態では、癌は、例えば細胞表面上にＣＤ１９を発現する細胞を含む。或る特定の実施形態では、癌は、例えば細胞表面上にＣＤ２０を発現する細胞を含む。或る特定の実施形態では、癌は、例えば細胞表面上にＣＤ１９及びＣＤ２０の両方をそれぞれ個別に発現する細胞を含む。
治療され得る癌は、血管新生化されていない、まだ実質的に血管新生化されていない、又は血管新生化された腫瘍を含む。また、癌は固形腫瘍又は非固形腫瘍を含み得る。幾つかの実施形態では、癌は血液の癌である。幾つかの実施形態では、癌は白血球の癌である。他の実施形態では、癌は形質細胞の癌である。幾つかの実施形態では、癌は白血病、リンパ腫又は骨髄腫である。或る特定の実施形態では、上記癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び血球貪食リンパ組織球増多症（ＨＬＨ））、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病（ＣＭＬ）、慢性若しくは急性の肉芽腫性疾患、慢性若しくは急性の白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、有毛細胞性白血病、血球貪食症候群（マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ））、ホジキン病、大細胞肉芽腫（large cell granuloma）、白血球接着不全症、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、限定されるものではないが急性骨髄白血病（ＡＭＬ）を含む骨髄疾患、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性障害（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫））、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症；孤立性骨髄腫；孤立性形質細胞腫；髄外性形質細胞腫；及び多発性形質細胞腫）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換後濾胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、又はそれらの組合せである。一実施形態では、癌は骨髄腫である。特定の一実施形態では、癌は多発性骨髄腫である。別の実施形態では、癌は白血病である。一実施形態では、癌は急性骨髄白血病である。
様々な場合には、癌を治療するために、本明細書に示される結合作用物質医薬組成物を使用する方法は自家細胞療法である。様々な場合には、癌を治療するために、本明細書に示される結合作用物質医薬組成物を使用する方法は同種異系細胞療法である。
本明細書に示される結合作用物質医薬組成物を使用する或る特定の方法は、被験体から血液細胞を収集することを含む。次いで、分離された被験体の血液細胞（例えば、Ｔ細胞）は、例えば、本開示の抗原結合系を発現するように操作され得る。幾つかの実施形態では、結合作用物質は被験体に投与される。幾つかの実施形態では、結合作用物質は被験体における癌を治療する。一実施形態では、結合作用物質は腫瘍のサイズを縮小する。
様々な実施形態では、本開示で使用される本明細書に示される細胞治療薬は、本明細書に示される細胞治療薬ではない１つ以上の追加の治療作用物質又は治療薬の投与を更に含む治療過程において被験体に投与され得る。或る特定の実施形態では、本開示は、治療が、本明細書に示される結合作用物質が与えられる及び／又は該結合作用物質を必要とする被験体に抗癌剤を投与することを含む、癌の治療用の併用療法を提供する。
或る特定の実施形態では、本明細書に示される結合作用物質の投与は、追加の抗癌療法を事前に受けた被験体、追加の抗癌療法を受ける予定の被験体、又は追加の抗癌療法を含む治療レジメンの過程にある被験体に対するものであり得る。様々な実施形態では、本明細書に記載されるように本明細書に示される結合作用物質と組み合わせて投与される追加の作用物質又は治療薬は、本明細書に示される結合作用物質と同時に、本明細書に示され
る結合作用物質と同じ日に、又は本明細書に示される結合作用物質と同じ週に投与され得る。様々な実施形態では、本明細書に記載されるように本明細書に示される結合作用物質と組み合わせて投与される追加の作用物質又は治療薬は、本明細書に示される結合作用物質及び追加の作用物質又は治療薬の投与が本明細書に示される結合作用物質の投与の前後で１時間以上、その前後で１日以上、その前後で１週間以上、又はその前後で１ヶ月以上離れるように投与され得る。様々な実施形態では、１つ以上の追加の作用物質の投与頻度は、本明細書に示される結合作用物質の投与頻度と同じであっても、類似していても、又は異なっていてもよい。
本明細書に示される結合作用物質と組み合わせて使用される作用物質又は治療薬は、本明細書に示される結合作用物質と一緒に単一の治療組成物若しくは用量で、別個の組成物の形の本明細書に示される結合作用物質と同時に、又は本明細書に示される結合作用物質の投与とは時間的に異なるように投与され得る。本明細書に示される結合作用物質が追加の作用物質と組み合わせて使用される場合に、本明細書に示される結合作用物質は、追加の作用物質とともに同時製剤化され得るか、又は本明細書に示される結合作用物質は、追加の作用物質製剤とは別個に製剤化され得る。
幾つかの実施形態では、上記方法は化学療法剤を投与することを更に含む。或る特定の実施形態では、選択される化学療法剤は、リンパ枯渇（lymphodepleting）（プレコンデ
ィショニング）化学療法剤である。有益なプレコンディショニング治療のレジメンは、相関的な有益なバイオマーカーと共に、米国仮特許出願第６２／２６２，１４３号及び同第６２／１６７，７５０号に記載され、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。これらは、例えば、指定される有益な用量のシクロホスファミド（２００ｍｇ／ｍ２／日～２０００ｍｇ／ｍ２／日）及び指定される用量のフルダラビン（２０ｍｇ／ｍ２／日～９００ｍｇ／ｍ２／日）を患者に投与することを含むＴ細胞療法を必要とする患者をコンディショニングする方法を記載する。或る一つのかかる投薬レジメンは、治療的有効量の操作されたＴ細胞の患者への投与の３日前に、約５００ｍｇ／ｍ２／日のシクロホスファミド及び約６０ｍｇ／ｍ２／日のフルダラビンを毎日患者に投与することを含む、患者を治療することを含む。他の実施形態では、抗原結合分子、形質導入された（或いは操作された）細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲ等）、及び化学療法剤は、各々、被験体における疾患又は状態を治療するのに有効な量で投与される。
或る特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＴＣＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法剤と併せて投与され得る。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホン酸塩；ベンゾドーパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドーパ（meturedopa）、及びウレ
ドーパ（uredopa）等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチ
レンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（triethylenethiophosphaoramide）
、及びトリメチロロメラミン（trimethylolomelamine）のレジメ（resume）を含む、エチレンイミン及びメチラメラミン（methylamelamines）；クロラムブチル、クロルナファジン、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビチン（novembichin
）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン（prednimustine）、トロホス
ファミド（trofosfamide）、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン（ranimustine）等のニトロソウレア；アクラシノマイシン（aclacinomysins）、アクチノマ
イシン、アントラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマ
イシン、カリチアマイシン、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジオリ
ピン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubici
n）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エ
ソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、マルセロマイシン（marcellomycin）、マイ
トマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、ケラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン
、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン（zorubicin）等の抗生物質；メトトレキセ
ート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）等の代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート等の葉酸類縁体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン（thiamiprine）、チオグアニン等のプリン類縁体；アンシ
タビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵ等のピリミジン類縁体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、マイトテイン、トリロスタン等の抗副腎剤；フロリン酸（frolinic acid）等の葉酸補液；アセグラトン；アルド
ホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（bestrabucil）；ビスアントレン；エダトラキサート（edatraxate）；デフォファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォルミチン（elformithine）；酢酸エリプチニ
ウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキウレア；レンティナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン（nitracrine）；ペントスタチン；フェナメット（phenamet）；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２、２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシッド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）；クロラムブチル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチン等の白金類縁体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオミチン（ＤＭＦＯ）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）等のレチノイン酸誘導体；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンジフチトクス）；エスペラミシン；カペシタビン；並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体が挙げられる。幾つかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ及び／又はＴＣＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、腫瘍に対するホルモンの作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）－イミダゾール、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（keoxifene）、ＬＹ１１７０１８、オナプ
リストン、及びトレミフェン（フェアストン）を含む抗エストロゲン薬；並びにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド及びゴセレリン等の抗アンドロゲン薬；並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体と併せて投与され得る。また適切な場合には、限定されるものではないが、ＣＨＯＰ、すなわち、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、ドキソルビシン（ヒドロキシドキソルビシン）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標））及びプレドニゾンを含む化学療法剤の組合せが投与される。
幾つかの実施形態では、化学療法剤は、操作された細胞又は核酸の投与と同時に又は投与の１週以内に投与される。他の実施形態では、化学療法剤は、操作された細胞又は核酸
の投与の後、１週間～４週間、すなわち１週間～１ヶ月、１週間～２ヶ月、１週間～３ヶ月、１週間～６ヶ月、１週間～９ヶ月、又は１週間～１２ヶ月投与される。幾つかの実施形態では、化学療法剤は、細胞又は核酸を投与する少なくとも１ヶ月前に投与される。幾つかの実施形態では、上記方法は、２以上の化学療法剤を投与することを更に含む。
様々な追加の治療剤が、本明細書に記載される組成物と併せて使用され得る。例えば、有用な可能性がある追加の治療剤としては、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（商標））、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ（CureTech）、及びアテゾリズマブ（Roche）等のＰＤ－１阻害剤が挙げられる。本開示との併
用に適している追加の治療剤としては、限定されないが、イブルチニブ（ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標））、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（商標））、イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標））、カツマキソマブ、イブリツモマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アキシチニブ、マシチニブ、パゾパニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、トセラニブ、レスタウルチニブ、アキシチニブ、セジラニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、セマクサニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、チボザニブ、トセラニブ、バンデタニブ、エントレクチニブ、カボザンチニブ、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、ラドチニブ（radotinib）、ボスチニブ、レスタウルチニブ、ルキソリチニブ、パク
リチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、トラメチニブ、ビニメチニブ、アレクチニブ、セリチニブ、クリゾチニブ、アフリベルセプト、アジポチド、デニロイキンジフチトクス、エベロリムス及びテムシロリムス等のｍＴＯＲ阻害剤、ソニデギブ及びビスモデギブ等のヘッジホッグ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤（パルボシクリブ）等のＣＤＫ阻害剤が挙げられる。
追加の実施形態では、ＣＡＲ及び／又はＴＣＲを含む免疫を備える組成物は、抗炎症剤と共に投与される。抗炎症剤又は抗炎症薬としては、限定されるものではないが、ステロイド及びグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキセート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミド、及びミコフェノール酸（mycophenolate）を含む非ステロイド系抗炎症薬（Ｎ
ＳＡＩＤ）が挙げられ得る。例示的なＮＳＡＩＤとしては、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ－２阻害剤、及びシアリレート（sialylates）が挙げられる。例示的な鎮痛剤としては、アセトアミノフェン、オキシコドン、塩酸プロポキシフェンのトラマドールが挙げられる。例示的なグルココルチコイドとしては、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、又はプレドニゾンが挙げられる。例示的な生物学的応答修飾物質としては、細胞表面マーカー（例えばＣＤ４、ＣＤ５等）に対する分子、サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標））及びインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）））、ケモカイン阻害剤、及び接着分子阻害剤が挙げられる。生物学的応答修飾物質は、分子の組換え形態と並んで、モノクローナル抗体も含む。例示的なＤＭＡＲＤとしては、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキセート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）及び筋肉内）、及びミノサイクリンが挙げられる。
或る特定の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、サイトカインと併せて投与される。本明細書で使用される「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとして別の細胞に対して作用する、１つの細胞集団によって放出されるタンパク質を指すことを意味する。サイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン及び従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインの中でも、ヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン等の成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）等の糖タンパク質ホルモン；肝臓増殖因子（ＨＧＦ）；線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ミューラー阻害物質；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子；インテグリン；トロンボポイエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ－β等の神経成長因子（ＮＧＦ）；血小板増殖因子；ＴＧＦ－α及びＴＧＦ－β等のトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン－α、β及びγ等のインターフェロン；マクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ－ＣＳＦ（ＧＭ－ＣＳＦ）；及び顆粒球－ＣＳＦ（Ｇ－ＣＳＦ）等のコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２；ＩＬ－１５等のインターロイキン（ＩＬ）、ＴＮＦ－α又はＴＮＦ－β等の腫瘍壊死因子；並びにＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が挙げられる。本明細書で使用されるサイトカインの用語は、天然起源の又は組換え細胞培養物由来のタンパク質、及び本来の配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。様々な実施形態では、本開示で使用される本明細書に示される結合作用物質は、抗炎症剤の投与を更に含む治療過程において被験体に投与され得る。抗炎症剤としては、限定されるものではないが、ステロイド及びグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキセート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミド、及びミコフェノール酸（mycophenolate）を含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられ得る。例示的
なＮＳＡＩＤとしては、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ－２阻害剤、及びシアリレート（sialylates）が挙げられる。例示的な鎮痛剤としては、アセトアミノフェン、オキシコドン、塩酸プロポキシフェンのトラマドールが挙げられる。例示的なグルココルチコイドとしては、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、又はプレドニゾンが挙げられる。例示的な生物学的応答修飾物質としては、細胞表面マーカー（例えばＣＤ４、ＣＤ５等）に対する分子、サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標））及びインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）））、ケモカイン阻害剤、及び接着分子阻害剤が挙げられる。生物学的応答修飾物質は、分子の組換え形態と並んで、モノクローナル抗体も含む。例示的なＤＭＡＲＤとしては、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキセート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）及び筋肉内）、及びミノサイクリンが挙げられる。
様々な実施形態では、本開示で使用される本明細書に示される結合作用物質は、ＣＨＯＰの投与を更に含む治療過程において被験体に投与され得る。ＣＨＯＰは、ＤＮＡに結合して架橋の形成を引き起こすことによりＤＮＡに損傷を与えるアルキル化剤であるシクロホスファミド（(C)yclophosphamide）、ＤＮＡ塩基の間に自身が挿入することによりＤＮＡに損傷を与えるインターカレート剤であるヒドロキシダウノルビシン（(H)ydroxydaunorubicin）（ドキソルビシン又はアドリアマイシンとも呼ばれる）、タンパク質チューブ
リンに結合することにより細胞の複製を抑えるオンコビン（(O)ncovin）（ビンクリスチ
ン）、及びコルチコステロイドであるプレドニゾン（(P)redonisone）又はプレドニゾロ
ン（(P)rednisolone）からなる。
追加の例示的な実施形態。本開示は、限定されるものではないが、以下の例示的な実施形態を含む：
実施形態１．（ｉ）抗原結合分子と、（ｉｉ）共刺激ドメインと、（ｉｉｉ）活性化ドメインとを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離されたポリヌクレオチドであって、該共刺激ドメインは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含み、該細胞外ドメインは、（ｉ）配列番号２３２、配列番号２２１、配列番号５６、配列番号４５、配列番号１５５、配列番号１４４、配列番号１７７、配列番号７８、及び配列番号６７に記載されるコンストラクトのいずれかのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列から実質的になる又は該アミノ酸配列からなる抗原結合分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
実施形態２．膜貫通ドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｔ細胞受容体のα鎖、Ｔ細胞受容体のβ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４若しくはＴ細胞受容体のζ鎖の膜貫通ドメイン又はそれらの任意の組合せである、実施形態１のポリヌクレオチド。
実施形態３．細胞内ドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７のシグナル伝達領域、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２９、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃγ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、免疫グロブリン様タンパク質、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢｌ、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８））、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ－３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ－６、又はそれらの組合せを含む、実施形態１又は２のポリヌクレオチド。
実施形態４．抗原結合分子の少なくとも１つは、５Ｔ４、αフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＣＡ－１２５、癌胎児性抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、Ｃ
Ｄ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮性腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ－１１Ｒα、κ鎖、λ鎖、メラノーマ関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ－１、突然変異ｐ５３、突然変異ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１、若しくはＶＥＧＦＲ２、又はそれらの組合せからなる群から選択される抗原に特異的に結合する、実施形態１～３のポリヌクレオチド。
実施形態５．ポリヌクレオチドは、配列番号２３２、配列番号２２１、配列番号５６、配列番号４５、配列番号１５５、配列番号１４４、配列番号１７７、配列番号７８、及び配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、実施形態１～４のいずれかのポリヌクレオチド。
実施形態６．実施形態１～５のいずれか１つのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
実施形態７．配列番号２３２、配列番号２２１、配列番号５６、配列番号４５、配列番号１５５、配列番号１４４、配列番号１７７、配列番号７８、及び配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
実施形態８．実施形態１～５のいずれか１つのポリヌクレオチドを含むベクター。
実施形態９．ベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ＤＮＡベクター、レンチウイルスベクター、プラスミド、レトロウイルスベクター、若しくはＲＮＡベクター、又はそれらの任意の組合せである、実施形態７のベクター。
実施形態１０．実施形態１～５のいずれか１つのポリヌクレオチド、請求項６若しくは７のポリペプチド、請求項８若しくは９のベクター、又はそれらの任意の組合せを含む細胞。
実施形態１１．実施形態１～５のいずれか１つのポリヌクレオチド、請求項６若しくは７のポリペプチド、請求項８若しくは９のベクター、請求項１０の細胞、又はそれらの任意の組合せを含む組成物。
実施形態１２．請求項１～５のいずれか１つのポリヌクレオチド、実施形態６若しくは７のポリペプチド、請求項８若しくは９のベクター、又はそれらの任意の組合せを含む細胞の作製方法。
実施形態１３．腫瘍に対する免疫を誘発する方法であって、被験体に有効量の請求項１～５のいずれか１つのポリヌクレオチド、実施形態６若しくは７のポリペプチド、実施形態８若しくは９のベクター、実施形態１０の細胞、実施形態１１の組成物、又はそれらの任意の組合せを投与することを含む、方法。
実施形態１４．治療を必要とする被験体における癌の治療用の医薬の製造のための、実施形態１～５のいずれか１つのポリヌクレオチド、実施形態６若しくは７のポリペプチド、実施形態８若しくは９のベクター、実施形態１１の細胞、又は実施形態１２の組成物の使用。
実施形態１５．上記癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄腫性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性白血病若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、有毛細胞性白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性障害（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、形質細胞腫（形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換後濾胞性リンパ腫若しくはワルデンストレームマクログロブリン血症、又はそれらの組合せである、実施形態１５の使用。
本明細書で言及される全ての出版物、特許、及び特許出願は、個々の出版物、特許又は特許出願が各々、具体的かつ個別に引用することにより本明細書の一部をなすことが指示されるのと同じ程度に、引用することにより本明細書の一部をなす。しかしながら、本明細書における参照文献の引用は、かかる参照文献が本開示に対する先行技術の認識として解釈されるべきではない。引用することにより本明細書の一部をなす参照文献に提供される定義又は用語のいずれかが本明細書に提供される用語及び考察とは異なる場合は、本開示の用語及び定義を優先する。本出願全体を通して引用される全ての参照文献の内容は、引用することにより明らかに本明細書の一部をなす。
実施例１
本実施例は、例示的な生産された抗ＣＤ２０重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン、並びにそれらの組合せを提供する。例示的な抗ＣＤ２０重鎖可変ドメイン及び抗ＣＤ２０軽鎖可変ドメインのＣＤＲ配列、並びにそれによるＨＣＤＲ及びＬＣＤＲの例示的な組合せも、以下の表４～表１３に示されている。表４～表１３は、例示的な可変ドメインをコードする例示的な核酸配列を含む（したがって、例示的な可変ドメインの特定されたＣＤＲをコードする例示的な核酸配列も提供する）。
本開示の例示的な重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインによる細胞結合を決定するために、精製されたＩｇＧをフローサイトメトリーによって１０ｎＭの濃度での細胞結合について特性評価した。抗体を、ＣＤ２０を過剰発現するＣＨＯ－Ｓ細胞、Ｒａｊｉ、及びＮａｍａｌｗａのＣＤ２０＋細胞系統、並びにＥｏＬ－１及びＣＨＯ－ＳのＣＤ２０－細胞系統とともにインキュベートした。ＦＩＴＣ－ＬＣを使用してＩｇＧを検出した。ネガティブコントロールに対する結合の比率を各抗体について計算した。選択された抗ＣＤ２０抗体による例示的な細胞結合を表１５に示す。
Figure 2023169138000027
実施例２
本実施例は、バイシストロン性ＣＡＲ及び二重特異性ＣＡＲを提供する。バイシストロン性ＣＡＲ及び二重特異性ＣＡＲは、２つの結合モチーフを含む（それぞれ２つのＣＡＲ分子で、又は単一のＣＡＲ分子に）。第１の結合モチーフはＣＤ２０に結合し、第２の結合モチーフはＣＤ１９に結合する。ＣＤ１９に結合し、及び／又はＣＤ１９に結合する結合モチーフ、抗体、及び抗原結合系の構築に有用な抗体配列は知られている。本実施例は、本明細書で抗体Ａｂ１１と呼ばれる抗ＣＤ１９結合作用物質の抗体配列を使用し、これらは表１４に示されている。
本実施例の二重特異性ＣＡＲを、以下のドメイン：第１の結合モチーフと、第２の結合モチーフと、ヒンジと、膜貫通ドメインと、共刺激ドメイン及び活性化ドメインを含む細胞内ドメインとを含むように作製した。本実施例において、各二重特異性ＣＡＲは、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む第１の結合モチーフを含み、これらの重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、実施例１の例示的な抗体配列の単一の組からの重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインである（すなわち、両方は、Ａｂ１～Ａｂ１０に対応する表４～表１３の同じ表からのものである）。したがって、結合モチーフは、元となる抗体又は元となる表を参照することによって特定することができ、対応する表に示される元となる抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを有する結合モチーフを指す。本実施例において、各二重特異性ＣＡＲは、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む第２の結合モチーフを含み、これらの重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、抗体Ａｂ１１の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン（すなわち、配列番号２２１及び配列番号２３２）である。本実施例の二重特異性ＣＡＲは、ヒンジドメイン及び膜貫通ドメインを含む２８Ｔ（ＣＤ２８）ドメインを含んでいた。本実施例の二重特異性ＣＡＲは、ＣＤ２８共刺激ドメインを含んでいた。本実施例の二重特異性ＣＡＲは、ＣＤ３ｚ活性化ドメインを含んでいた。
本実施例は、Ｂｉｃ－２、Ｂｉｃ－８、Ｂｉｃ－９、及びＢｉｃ－１４として特定される４つのバイシストロン性ＣＡＲを含む。４つのバイシストロン性ＣＡＲのそれぞれは、以下の表１６に記載される実施例１の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのペアを含む抗ＣＤ２０結合モチーフを含む第１のＣＡＲコンストラクトと、抗ＣＤ１９結合モチーフを含む第２のＣＡＲコンストラクトとを含んでいた。
Figure 2023169138000028
実施例３
ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、健康なドナー由来のアフェレーシス材料からポジティブセレクションによって分離し、これらを使用して抗ＣＤ２０一価ＣＡＲ Ｔ細胞産物又は抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９バイシストロン性ＣＡＲ Ｔ細胞産物を作製した。Ｔ細胞を、結合された抗ＣＤ３抗体及び可溶性ＣＤ２８抗体で活性化し、ＣＡＲコンストラクトをコードするレンチウイルスベクターで形質導入した。コントロールとして、非形質導入（ＮＴＤ）Ｔ細胞を、同じドナーＴ細胞から並行して作製した。採取日（製造の８日目～１０日目）に、ＣＡＲ Ｔ細胞産物を染色し、フローサイトメトリーによって分析して形質導入効率を評価し、共培養アッセイで使用した。一価ＣＡＲをコードするベクター及びバイシストロン性ＣＡＲをコードするベクターによるＴ細胞の形質導入効率をモニタリングした。
一価ＣＡＲをコードするベクターのＴ細胞形質導入効率を決定するために、ＣＡＲ－Ｔ産物を、固定可能な生存率色素の存在下で一連の抗体（抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、及び抗リンカー抗体）で染色し、フローサイトメトリーによって分析して、生存しているＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージを評価した（抗リンカー抗体に関して、引用することにより本明細書の一部をなすＷＯ／ＵＳ２０１７／０４１５３４号を参照されたい）。抗リンカー抗体は、抗ＣＤ２０ ＣＡＲの結合モチーフの重鎖と軽鎖との間のリンカーに結合する抗体であり、形質導入効率を測定するのに使用される。コントロールは、非形質導入細胞（ＮＴＤ）、コントロール抗ＣＤ１９結合作用物質を含むレトロウイルスで形質導入された細胞、及びコントロール抗ＣＤ２０結合作用物質（Ａｂ１２結合モチーフ）で形質導入された細胞を含んでいた。
バイシストロン性ＣＡＲをコードするベクターのＴ細胞形質導入効率を決定するために、ＣＡＲ－Ｔ産物を、固定可能な生存率色素の存在下で一連の抗体（抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗イディオタイプ抗体、及び抗リンカー抗体を含む）で染色し、フローサイトメトリーによって分析して、生存しているＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージを評価した。抗イディオタイプ抗体は、抗ＣＤ１９結合モチーフであるＡｂ１１の結合モチーフに結合する。したがって、抗イディオタイプ抗体は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲに結合する。抗イディオタイプ抗体を使用して、抗ＣＤ１９ ＣＡＲの形質導入効率を測定する。抗リンカー抗体を使用して、抗ＣＤ２０ ＣＡＲの形質導入効率を測定する。コントロールは、非形質導入細胞（ＮＴＤ）、コントロール抗ＣＤ１９結合作用物質を含むレトロウイルスで形質導入された細胞、及びコントロール抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９二重特異性ＣＡＲ（Ａｂ１３／Ａｂ１４二重特異性、Ａｂ１１／Ａｂ１２二重特異性）で形質導入された細胞を含んでいた。
Figure 2023169138000029
Figure 2023169138000030
実施例４
本実施例は、とりわけ、ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＣＡＲ－Ｔ標的抗原を発現する細胞と共培養する例示的な方法を提供する。培養物中のＴ細胞の追跡を容易にするために、ＣＡＲ－Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）試薬で製造業者の指示に従って標識し、引き続きＲ－１０％培地で洗浄した。ＣＡＲ－Ｔ標的抗原を発現する細胞（「標的細胞」）の追跡を容易にするために、ルシフェラーゼを発現するように標的細胞を操作した。ルシフェラーゼを発現する標的細胞は、両者ともＣＤ１９及びＣＤ２０の両方の抗原を発現するＮａｌｍ６及びＲａｊｉを含んでいた。さらに、ＣＤ１９又はＣＤ２０を発現しないＮａｌｍ６細胞及びＲａｊｉ細胞（ノックアウト細胞、すなわちＫＯ）を作製した。これらのＣＤ１９ＫＯ及びＣＤ２０ＫＯ細胞を、Ｎａｌｍ６親細胞及びＲａｊｉ親細胞からクローン選択した。これらのＣＤ１９ＫＯ及びＣＤ２０ＫＯ細胞は、それぞれＣＤ２０を発現するがＣＤ１９を発現しないか、又はＣＤ１９を発現するがＣＤ２０を発現しない。ＣＤ１９ＫＯ及びＣＤ２０ＫＯ株を作製し、これらをコントロールとして使用して、バイシストロン性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現する細胞の各ＣＡＲの抗原結合を機能的に評価した。
ルシフェラーゼを発現する標的細胞を、ＣＴＶ標識されたＣＡＲ－Ｔ細胞と一緒にＲ－
１０％培地において様々な比率でプレーティングした（共培養の０日目）。この比率は、エフェクター（ＣＡＲ－Ｔ）細胞対標的細胞の比率（エフェクター：標的、すなわちＥ：Ｔ）と呼称され得る。細胞を所望の比率でプレーティングするために、１ウェル当たりの標的細胞の数を２５０００個の細胞で一定に保ちながら、ＣＡＲ－Ｔ細胞を２倍～３倍に段階希釈した。共培養物を３７℃で１６時間（ｈ）又は４日間インキュベートし、以下に記載されるように機能的評価を行った。
実施例５
この実施例では、実施例４に記載されるように、Ｔ細胞を標的細胞と共培養した。Ｔ細胞媒介細胞傷害性は、単独でプレーティングされた標的細胞によって発されたシグナルと比較した共培養ウェルにおける標的ルシフェラーゼシグナルの減少の関数として測定された。共培養開始後の４日目に、Ｄ－ルシフェリン基質を０．１４ｍｇ／ｍＬの最終濃度で共培養ウェルに添加し、プレートを３７℃で暗所にて１０分間インキュベートした。発光シグナルを、直後にＶａｒｉｏＳｋａｎ（商標）ＬＵＸ又はＶａｒｉｏＳｋａｎ（商標）Ｆｌａｓｈマルチモードマイクロプレートリーダーで読み取った。Ｔ細胞媒介細胞傷害性は、以下のように計算した：％細胞傷害性＝［１－（対象となる試料／標的単独のコントロール）のルシフェラーゼシグナル］×１００。
コントロールは、ネガティブコントロールとしての非形質導入（ＮＴＤ）Ｔ細胞（すなわち、ＣＡＲを発現しないＴ細胞）、コントロール抗ＣＤ１９結合作用物質を含むレトロウイルスで形質導入された細胞、コントロール抗ＣＤ２０結合作用物質で形質導入された細胞、コントロール抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９二重特異性ＣＡＲ（Ａｂ１３／Ａｂ１４二重特異性、Ａｂ１５／Ａｂ１６二重特異性）で形質導入された細胞を含んでいた。
Figure 2023169138000031
Figure 2023169138000032
Figure 2023169138000033
Figure 2023169138000034
Figure 2023169138000035
Figure 2023169138000036
Figure 2023169138000037
Figure 2023169138000038
Figure 2023169138000039
実施例６
この実施例では、実施例４に記載されるように、Ｔ細胞を標的細胞と共培養した。共培養で１６時間後に、上清を収集し、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｖ－ＰＬＥＸ炎症誘発性パネル１ヒトキット（Proinflammatory Panel 1 human kit）を製造業
者の指示に従って使用して、サイトカインレベルについて分析した。抗原を発現する標的細胞と一緒に１：１のＥ：Ｔ比率でプレーティングされたＴ細胞産物の共培養物からの上清を、抗原結合により媒介されるインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）、ＩＬ－２、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、及びＩＬ－１０の分泌のレベルについて分析した。全ての試料を検出範囲内となるように希釈した。各サイトカインのレベルをｐｇ／ｍＬとして報告し、各アッセイの定量下限及び定量上限を報告する。
コントロールは、ネガティブコントロールとしての非形質導入（ＮＴＤ）Ｔ細胞（すなわち、ＣＡＲを発現しないＴ細胞）、コントロール抗ＣＤ１９結合作用物質を含むレトロウイルスで形質導入された細胞、コントロール抗ＣＤ２０結合作用物質で形質導入された細胞、コントロール二重特異性抗原結合系（Ａｂ１３／Ａｂ１４二重特異性）で形質導入された細胞、及び二重特異性抗原結合系（Ａｂ１５／Ａｂ１６二重特異性）で形質導入された細胞を含んでいた。
Figure 2023169138000040
Figure 2023169138000041
Figure 2023169138000042
Figure 2023169138000043
Figure 2023169138000044
Figure 2023169138000045
Figure 2023169138000046
Figure 2023169138000047
Figure 2023169138000048
実施例７
実施例４に記載されるように、Ｔ細胞を標的細胞と共培養した。１６時間の共培養後に、抗原陽性の標的細胞と一緒に指定されたＥ：Ｔ比率でプレーティングされたＴ細胞産物を採取し、一連の抗体－蛍光体で染色して、Ｔ細胞（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）及び活性化マーカーの４－１ＢＢを特定し、フローサイトメトリーによって分析した。固定可能な生存率色素により、生細胞の分析が可能であった。事象を、生細胞（生存率色素陰性）、リンパ球（前方散乱［ＦＳＣ］面積対側方散乱［ＳＳＣ］面積プロットを使用する）、単一細胞（ＦＳＣ面積対ＦＳＣ高さプロットを使用する）、そして次にＴ細胞（ＣＤ３＋）に対して系統的にゲーティングした。次いで、Ｔ細胞を活性化のレベル（すなわち、４－１ＢＢ＋細胞のパーセンテージ）について分析した。ＮＴＤコントロールＴ細胞によって発現されるレベルに基づいて、４－１ＢＢゲーティング閾値を設定した。
コントロールは、ネガティブコントロールとしての非形質導入（ＮＴＤ）Ｔ細胞（すなわち、ＣＡＲを発現しないＴ細胞）、コントロール抗ＣＤ１９結合作用物質を含むレトロウイルスで形質導入された細胞、コントロール抗ＣＤ２０結合作用物質で形質導入された細胞、コントロール二重特異性抗原結合系（Ａｂ１３／Ａｂ１４二重特異性）で形質導入された細胞、及び二重特異性抗原結合系で形質導入された細胞を含んでいた。
Figure 2023169138000049
Figure 2023169138000050
実施例８
実施例４に記載されるように、Ｔ細胞を標的細胞と共培養した。Ｔ細胞産物の増殖能を、抗原を発現する標的細胞に対する応答における、ＮＴＤコントロールＴ細胞と比較したＣＴＶ色素の細胞分裂に主導される希釈のフローサイトメトリー分析によって決定した。共培養開始後の４日目に、抗原を発現する標的細胞と一緒に３：１のＥ：Ｔ比率でプレーティングされたＴ細胞産物を採取し、固定可能な生存率色素の存在下で一連の抗体－蛍光体（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）で染色して、生存しているＴ細胞を特定し、フローサイトメトリーによって分析した。増殖細胞のパーセンテージ及びＣＴＶシグナルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を報告する。ＣＴＶのＭＦＩの減少は、産物が経た細胞分裂のラウンド数に比例する（すなわち、ＣＴＶ ＭＦＩが低いほど、細胞はより多くの増殖を経ている）。
コントロールは、ネガティブコントロールとしての非形質導入（ＮＴＤ）Ｔ細胞（すなわち、ＣＡＲを発現しないＴ細胞）、コントロール抗ＣＤ１９結合作用物質を含むレトロウイルスで形質導入された細胞、コントロール抗ＣＤ２０結合作用物質で形質導入された細胞、コントロール二重特異性抗原結合系（Ａｂ１３／Ａｂ１４二重特異性）で形質導入された細胞、及びＡｂ１１／Ａｂ１２二重特異性抗原結合系で形質導入された細胞を含んでいた。
Figure 2023169138000051
Figure 2023169138000052
Figure 2023169138000053
Figure 2023169138000054
実施例９
本実施例は、抗ＣＤ２０抗原結合系で使用されるヒンジに関連するデータを提供する。本実施例のＣＡＲ Ｔ細胞は一価の抗ＣＤ２０ ＣＡＲを含む。本実施例は、ＮＳＧマウスにおいて播種性ルシフェラーゼ発現ＲａｊｉヒトＢ細胞リンパ腫モデルに対してＣＡＲ－Ｔコンストラクトを試験している。毎週の血液試料をＣＡＲ－Ｔの存続についてモニタリングした。生物発光イメージング（ＢＬＩ）及び生存エンドポイントに基づいて応答を評価した。７日目、１３日目、２０日目、２７日目、３４日目、及び４１日目に分析のために全血を採取した。５日目、１２日目、１９日目、２６日目、３３日目、及び４７日目にＢＬＩを実施した。５５日目に研究を終了した。
この研究のＣＡＲ－Ｔ細胞を以下の表３７に示す。表３７のＣＡＲ－Ｔ細胞型のそれぞれを６匹のマウスに投与した。表３７はこの実施例の後続の表で参照される実験条件又は群を示す。全てのＣＡＲ－Ｔ細胞を２×１０７個の細胞／ｍＬの用量で静脈内投与（ＱＤｘ１）した。さらに、全てのマウスに３６μｇの投与量のヒトＩＬ－２を与えた（（Ｑ１２Ｈｘ２）ＱＤｘ３）。ヒトＩＬ－２はＣＡＲ－Ｔの存続及び生存を促進する。表３７の群４、群５、及び群７～群１０として特定されるＣＡＲ Ｔ細胞のコンストラクトは４１ＢＢ共刺激ドメインを含んでいた。表３７の群６として特定されるＣＡＲ Ｔ細胞はＣＤ２８共刺激ドメインを含んでいた。
Figure 2023169138000055
全てのＣＡＲ－Ｔ細胞治療は、研究マウスによって十分に許容された。各群内で、治療関連体重変化、治療関連死、腫瘍増殖遅延の中央値、コントロールと比較した腫瘍負荷（％Ｔ／Ｃ）の中央値、部分的な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＰＲ）、完全な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＣＲ）、腫瘍のない生存者のパーセント（％ＴＦＳ）、及び寿命延長のパーセントを含む幾つかの指標をモニタリングした。結果を以下の表３８に示す。データは５５日目の実験終了までのモニタリングを表すことに留意されたい。
Figure 2023169138000056
実施例１０
本実施例は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ＣＡＲを含むバイシストロン性ＣＡＲを含み、抗ＣＤ２０ ＣＡＲが様々な抗ＣＤ２０結合モチーフ及び／又はヒンジを含むＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効力に関連するデータを提供する。
バイシストロン性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＮＳＧマウスにおいて播種性ルシフェラーゼ発現Ｒａｊｉ ＣＤ１９ＫＯ Ｂ細胞リンパ腫瘍に対して試験した。毎週の血液試料をＣＡＲ－Ｔの存続についてモニタリングした。生物発光イメージング（ＢＬＩ）及び生存エンドポイントに基づいて応答を評価した。７日目、１３日目、２０日目、２７日目、３４日目、及び４１日目に分析のために全血を採取した。５日目、１２日目、１９日目、２６日目、３３日目、４０日目、及び４８日目にＢＬＩを実施した。５５日目に研究を終了した。以下の表３９の５行目～１４行目に示されるこの研究のＣＡＲ－Ｔ細胞は、表３９に示される抗ＣＤ２０ ＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ＣＡＲ（２８Ｔ（ＣＤ２８）ヒンジ及びＣＤ２８共刺激ドメインを含むＡｂ１１ ＣＡＲ）を含むバイシストロン性ＣＡＲ－Ｔ細胞である。表３９はこの実施例の後続の表で参照される実験条件又は群を示す。ＣＡＲ－Ｔ細胞を６匹のマウスに投与した（但し、４匹のマウスには非形質導入Ｔ細胞（表３９の２行目）を与えた）。全てのＣＡＲ－Ｔ細胞を１×１０７個の細胞／ｍＬ（２行目～７行目、９行目、１１行目、及び１３行目）又は４×１０６個の細胞／ｍＬ（８行目、１０行目、１２行目、及び１４行目）の用量で静脈内投与（ＱＤｘ１）した。さらに、全てのマウスに３６μｇの投与量のヒトＩＬ－２を与えた（（Ｑ１２Ｈｘ２）ＱＤｘ３）。
Figure 2023169138000057
治療関連体重変化、治療関連死、腫瘍増殖遅延の中央値、コントロールと比較した腫瘍負荷（％Ｔ／Ｃ）の中央値、部分的な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＰＲ）、完全な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＣＲ）、腫瘍のない生存者のパーセント（％ＴＦＳ）、及び寿命延長のパーセント（ＩＬＳ％）を含む幾つかの指標をモニタリングした。結果を以下の表４０に示す。データは５５日目の実験終了までのモニタリングを表すことに留意されたい。
全てのＣＡＲ－Ｔ細胞治療は、研究マウスによって十分に許容された。試験された全てのＣＡＲ－Ｔ細胞治療は抗腫瘍応答を誘発した。全ての治療レジメンで、３０．２日を超える腫瘍増殖遅延の中央値、及び２２６．７％を超える寿命延長（ＩＬＳ）が得られた。非形質導入（ＮＴＤ）細胞での治療（２４％）を除き、全ての治療レジメンで０％の１９日目の％Ｔ／Ｃの中央値が得られた。
Figure 2023169138000058
実施例１１
本実施例は、抗ＣＤ１９結合モチーフ及び抗ＣＤ２０結合モチーフを含む二重特異性ＣＡＲを含むＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効力に関連するデータを提供する。二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＮＳＧマウスにおいて播種性ルシフェラーゼ発現Ｒａｊｉ Ｂ細胞リンパ腫瘍に対して試験した。毎週の血液試料をＣＡＲ－Ｔの存続についてモニタリングした。生物発光イメージング（ＢＬＩ）及び生存エンドポイントに基づいて応答を評価した。７日目、１３日目、２０日目、２７日目、３２日目、及び４１日目に分析のために全血を採取した。５日目、１２日目、１９日目、２６日目、３３日目、４０日目、及び４７日目にＢＬＩを実施した。５４日目に研究を終了した。
以下の表４１の４行目～８行目に示されるこの研究のＣＡＲ－Ｔ細胞は抗ＣＤ１９結合モチーフ及び抗ＣＤ２０結合モチーフを含み、抗ＣＤ１９結合モチーフがＡｂ１１である二重特異性ＣＡＲ－Ｔ細胞である。表４１はこの実施例の後続の表で参照される実験条件又は群を示す。ＣＡＲ－Ｔ細胞を、表４１に示される用量でそこに示される匹数のマウス
に投与した。全てのＣＡＲ－Ｔ細胞を静脈内投与（ＱＤｘ１）した。さらに、全てのマウスに３６μｇの投与量のヒトＩＬ－２を与えた（（Ｑ１２Ｈｘ２）ＱＤｘ３）。
Figure 2023169138000059
治療関連体重変化、治療関連死、腫瘍増殖遅延の中央値、コントロールと比較した腫瘍負荷（％Ｔ／Ｃ）の中央値、部分的な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＰＲ）、完全な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＣＲ）、腫瘍のない生存者のパーセント（％ＴＦＳ）、及び寿命延長のパーセント（ＩＬＳ％）を含む幾つかの指標をモニタリングした。結果を以下の表４２に示す。抗腫瘍効力を観察した。
Figure 2023169138000060
実施例１２
本実施例は、（ｉ）抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ＣＡＲを含むバイシストロン性ＣＡＲ、並びに（ｉｉ）抗ＣＤ１９結合モチーフ及び抗ＣＤ２０結合モチーフを含む二重特異性ＣＡＲを含むＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効力に関連するデータを提供する。バイシストロン性及び二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＮＳＧマウスに
おいて播種性ルシフェラーゼ発現Ｒａｊｉ Ｂ細胞リンパ腫瘍に対して試験した。毎週の血液試料をＣＡＲ－Ｔの存続についてモニタリングした。生物発光イメージング（ＢＬＩ）及び生存エンドポイントに基づいて応答を評価した。７日目、１３日目、２０日目、２７日目、３４日目、及び４０日目に分析のために全血を採取した。５日目、１２日目、１９日目、２６日目、３３日目、及び４０日目にＢＬＩを実施した。４８日目に研究を終了した。
以下の表４３に示されるこの研究のＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗ＣＤ２０結合モチーフ及び抗ＣＤ１９結合モチーフ（Ａｂ１１）を含むバイシストロン性又は二重特異性のＣＡＲ－Ｔ細胞である。表４３はこの実施例の後続の表で参照される実験条件又は群を示す。ＣＡＲ－Ｔ細胞を６．０×１０６個の用量で投与した。ＣＡＲ－Ｔ細胞型のそれぞれを６匹のマウスに投与した。全てのＣＡＲ－Ｔ細胞を静脈内投与（ＱＤｘ１）した。さらに、全てのマウスに３６μｇの投与量のヒトＩＬ－２を腹腔内で与えた（（Ｑ１２Ｈｘ２）ＱＤｘ３）。
Figure 2023169138000061
治療関連体重変化、治療関連死、腫瘍増殖遅延の中央値、コントロールと比較した腫瘍負荷（％Ｔ／Ｃ）の中央値、部分的な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＰＲ）、完全な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＣＲ）、腫瘍のない生存者のパーセント（％ＴＦＳ）、及び寿命延長のパーセント（ＩＬＳ％）を含む幾つかの指標をモニタリングした。結果を以下の表４４に示す。データは４８日目の実験終了までのモニタリングを表すことに留意されたい。
全ての治療は許容された。非形質導入細胞及びＬＧ細胞を除く全ての治療レジメンで、少なくとも２１日を超える腫瘍増殖遅延の中央値、２２３％を超える寿命延長（ＩＬＳ）、およそ０％の１２日目の％Ｔ／Ｃの中央値が得られ、多くで部分的な腫瘍退縮及び／又は完全な腫瘍退縮が得られた。
Figure 2023169138000062
実施例１３
本実施例は、一価の抗ＣＤ２０ ＣＡＲを含むＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効力に関連するデータを提供する。抗ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＮＳＧマウスにおいて播種性ルシフェラーゼ発現Ｒａｊｉ Ｂ細胞リンパ腫瘍（ＣＤ１９ ＷＴ）に対して試験した。毎週の血液試料をＣＡＲ－Ｔの存続についてモニタリングした。生物発光イメージング（ＢＬＩ）及び生存エンドポイントに基づいて応答を評価した。５日目、１２日目、２１日目、２８日目、３３日目、４０日目、及び４７日目にＢＬＩを実施した。５５日目に研究を終了した。以下の表４５に示されるこの研究のＣＡＲ－Ｔ細胞を、表４５に示される投与量でそこに示される匹数のマウスに投与した。表４５はこの実施例の後続の表で参照される実験条件又は群を示す。全てのＣＡＲ－Ｔ細胞を静脈内投与（ＱＤｘ１）した。全てのマウスに３６μｇの投与量のヒトＩＬ－２を与えた（（Ｑ１２Ｈｘ２）ＱＤｘ３）。
Figure 2023169138000063
治療関連体重変化、治療関連死、腫瘍増殖遅延の中央値、コントロールと比較した腫瘍負荷（％Ｔ／Ｃ）の中央値、部分的な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＰＲ）、完全な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＣＲ）、腫瘍のない生存者のパーセント（％ＴＦＳ）、及び寿命延長のパーセント（ＩＬＳ％）を含む幾つかの指標をモニタリングした。結果を以下の表４６に示す。
Figure 2023169138000064
実施例１４
本実施例は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ＣＡＲを含むバイシストロン性ＣＡＲを含むＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効力、並びに一価の抗ＣＤ２０ ＣＡＲを含むＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効力に関連するデータを提供する。ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＮＳＧマウスにおいて播種性ルシフェラーゼ発現Ｒａｊｉ Ｂ細胞リンパ腫瘍に対して試験した。毎週の血液試料をＣＡＲ－Ｔの存続についてモニタリングした。生物発光イメージング（ＢＬＩ）及び生存エンドポイントに基づいて応答を評価した。５日目、１２日目、１９日目、２６日目、３３日目、及び４０日目にＢＬＩを実施した。
この研究のＣＡＲ－Ｔ細胞を以下の表４７に示す。表４７はこの実施例の後続の表で参照される実験条件又は群を示す。群１～群１０はコントロール及び単一特異性ＣＡＲ－Ｔ細胞のみを含むのに対して、群１１～群１６はバイシストロン性ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む。バイシストロン性ＣＡＲ－Ｔ細胞は、表３９に示される抗ＣＤ２０ ＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ＣＡＲ（Ａｂ１１ ＣＡＲ）を含む。表４７に示される各条件は６匹のマウスを含んでいた。全てのＣＡＲ－Ｔ細胞を示される用量で静脈内投与（ＱＤｘ１）した。さらに、全てのマウスに３６μｇの投与量のヒトＩＬ－２を腹腔内で与えた（（Ｑ１２Ｈｘ２）ＱＤｘ３）。
Figure 2023169138000065
治療関連体重変化、治療関連死、腫瘍増殖遅延の中央値、コントロールと比較した腫瘍負荷（％Ｔ／Ｃ）の中央値、部分的な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＰＲ）、完全な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＣＲ）、腫瘍のない生存者のパーセント（％ＴＦＳ）、及び寿命延長のパーセント（ＩＬＳ％）を含む幾つかの指標をモニタリングした。結果を以下の表４８に示す。全てのＣＡＲ－Ｔ細胞治療は、研究マウスによって十分に許容された。
Figure 2023169138000066
実施例１５
本実施例は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ＣＡＲを含むバイシストロン性ＣＡＲを含むＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効力、並びに一価の抗ＣＤ２０ ＣＡＲを含むＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効力に関連するデータを提供する。ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＮＳＧマウスにおいてルシフェラーゼ発現ＮＡＬＭ６ヒト急性リンパ芽球性白血病モデルに対して試験した。血液試料をＣＡＲ－Ｔの存続についてモニタリングした。生物発光イメージング（ＢＬＩ）及び生存エンドポイントに基づいて応答を評価した。４日目、１１日目、２０日目、２５日目、３２日目、及び３９日目に分析のために全血を採取した。３日目、１０日目、１８日目、２４日目、３１日目、３８日目、及び４５日目にＢＬＩを実施した。４８日目に研究を終了した。
この研究のＣＡＲ－Ｔ細胞を以下の表４９に示す。表４９はこの実施例の後続の表で参
照される実験条件又は群を示す。群１～群８はコントロール及び単一特異性ＣＡＲ－Ｔ細胞のみを含むのに対して、群９～群１２はバイシストロン性ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む。バイシストロン性ＣＡＲ－Ｔ細胞は、表４９に示される抗ＣＤ２０ ＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ ＣＡＲ（Ａｂ１１ ＣＡＲ）を含む。表４９に示される各条件は６匹のマウスを含んでいた。全てのＣＡＲ－Ｔ細胞を示される用量で静脈内投与（ＱＤｘ１）した。
Figure 2023169138000067
治療関連体重変化、治療関連死、腫瘍増殖遅延の中央値、コントロールと比較した腫瘍負荷（％Ｔ／Ｃ）の中央値、部分的な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＰＲ）、完全な腫瘍退縮を示す動物のパーセント（％ＣＲ）、腫瘍のない生存者のパーセント（％ＴＦＳ）、及び寿命延長のパーセント（ＩＬＳ％）を含む幾つかの指標をモニタリングした。結果を以下の表５０に示す。全てのＣＡＲ－Ｔ細胞治療は、研究マウスによって許容された。
Figure 2023169138000068
実施例１６
本実施例は、ＣＡＲの構成要素として使用される配列に関連するデータを提供する。４つの抗ＣＤ２０結合モチーフを、４つのヒンジ（ＣＤ８ヒンジ（８ｋ）、短縮されたＣＤ２８ヒンジ（２８Ｔ）、Ｇ４Ｓリンカーを有する短縮されたＣＤ２８ヒンジ、及びＩｇＧ４ヒンジ（Ｉ４））と組み合わせて試験する。全ての二重特異性ＣＡＲ及びバイシストロン性ＣＡＲは、Ａｂ１１抗ＣＤ１９結合モチーフを含む。ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、健康なドナー由来のアフェレーシス材料からポジティブセレクションによって分離し、これらを使用して抗ＣＤ２０一価ＣＡＲ Ｔ細胞産物又は抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９バイシストロン性ＣＡＲ Ｔ細胞産物を作製した。Ｔ細胞を結合された抗ＣＤ３抗体及び可溶性ＣＤ２８抗体で活性化し、ＣＡＲコンストラクトをコードするレンチウイルスベクターで形質導入した。コントロールとして、非形質導入（ＮＴＤ）Ｔ細胞を同じドナーＴ細胞から並行して作製した。採取日（製造の８日目～１０日目）に、ＣＡＲ Ｔ細胞産物を染色し、フローサイトメトリーによって分析して形質導入効率を評価し、共培養アッセイで使用した。一価ＣＡＲをコードするベクター及びバイシストロン性ＣＡＲをコードするベクターによるＴ細胞の形質導入効率をモニタリングした。
一価のＣＡＲをコードするベクターのＴ細胞形質導入効率を決定するために、ＣＡＲ－Ｔ産物を、固定可能な生存率色素の存在下で一連の抗体（抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８
、及び抗リンカー）で染色し、フローサイトメトリーによって分析して、生存しているＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージを評価した。抗リンカー抗体は、抗ＣＤ２０ ＣＡＲの結合モチーフの重鎖と軽鎖との間のリンカーに結合する抗体であり、形質導入効率を測定するのに使用される。コントロールは、非形質導入細胞（ＮＴＤ）、コントロール抗ＣＤ１９結合作用物質を含むレトロウイルスで形質導入された細胞、及びコントロール抗ＣＤ２０結合作用物質（Ａｂ１２結合モチーフ）で形質導入された細胞を含んでいた。
バイシストロン性ＣＡＲをコードするベクターのＴ細胞形質導入効率を決定するために、ＣＡＲ－Ｔ産物を固定可能な生存率色素の存在下で一連の抗体（抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗イディオタイプ、及び抗リンカーを含む）で染色し、フローサイトメトリーによって分析して、生存しているＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージを評価した。抗イディオタイプ抗体は、抗ＣＤ１９結合モチーフであるＡｂ１１の結合モチーフに結合する。したがって、抗イディオタイプ抗体は抗ＣＤ１９ ＣＡＲに結合する。抗イディオタイプ抗体を使用して、抗ＣＤ１９ ＣＡＲの形質導入効率を測定する。抗リンカー抗体を使用して、抗ＣＤ２０ ＣＡＲの形質導入効率を測定する。コントロールは、非形質導入細胞（ＮＴＤ）、コントロール抗ＣＤ１９結合作用物質を含むレトロウイルスで形質導入された細胞、及びコントロール抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９二重特異性ＣＡＲ（Ａｂ１３／Ａｂ１４二重特異性、Ａｂ１１／Ａｂ１２二重特異性）で形質導入された細胞を含んでいた。
培養物中のＴ細胞の追跡を容易にするために、ＣＡＲ－Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）試薬で製造業者の指示に従って標識し、引き続きＲ－１０％培地で洗浄した。ＣＡＲ－Ｔ標的抗原を発現する細胞（「標的細胞」）の追跡を容易にするために、ルシフェラーゼを発現するように標的細胞を操作した。ルシフェラーゼを発現する標的細胞は、両者ともＣＤ１９及びＣＤ２０の両方の抗原を発現するＮａｌｍ６及びＲａｊｉを含んでいた。さらに、ＣＤ１９又はＣＤ２０を発現しないＮａｌｍ６細胞及びＲａｊｉ細胞（ノックアウト細胞、すなわちＫＯ）を作製した。これらのＣＤ１９ＫＯ及びＣＤ２０ＫＯ細胞をＮａｌｍ６親細胞及びＲａｊｉ親細胞からクローン選択した。これらのＣＤ１９ＫＯ及びＣＤ２０ＫＯ細胞は、それぞれＣＤ２０を発現するがＣＤ１９を発現しないか、又はＣＤ１９を発現するがＣＤ２０を発現しない。ＣＤ１９ＫＯ及びＣＤ２０ＫＯ株を作製し、これらをコントロールとして使用して、バイシストロン性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現する細胞の各ＣＡＲの抗原結合を機能的に評価した。
ルシフェラーゼを発現する標的細胞を、ＣＴＶ標識されたＣＡＲ－Ｔ細胞と一緒にＲ－１０％培地において様々な比率でプレーティングした（共培養の０日目）。この比率は、エフェクター（ＣＡＲ－Ｔ）細胞対標的細胞の比率（エフェクター：標的、すなわちＥ：Ｔ）と呼称され得る。細胞を所望の比率でプレーティングするために、１ウェル当たりの標的細胞の数を２５０００個の細胞で一定に保ちながら、ＣＡＲ－Ｔ細胞を２倍～３倍に段階希釈した。共培養物を３７℃で１６時間（ｈ）又は４日間インキュベートし、以下に記載されるように機能的評価を行った。
Ｔ細胞媒介細胞傷害性は、単独でプレーティングされた標的細胞によって発されたシグナルと比較した共培養ウェルにおける標的ルシフェラーゼシグナルの減少の関数として測定された。共培養開始後の４日目に、Ｄ－ルシフェリン基質を０．１４ｍｇ／ｍＬの最終濃度で共培養ウェルに添加し、プレートを３７℃で暗所にて１０分間インキュベートした。発光シグナルを、直後にＶａｒｉｏＳｋａｎ（商標）ＬＵＸ又はＶａｒｉｏＳｋａｎ（商標）Ｆｌａｓｈマルチモードマイクロプレートリーダーで読み取った。Ｔ細胞媒介細胞傷害性は、以下のように計算した：％細胞傷害性＝［１－（対象となる試料／標的単独のコントロール）のルシフェラーゼシグナル］×１００。
サイトカイン産生を共培養で１６時間後に測定した。その時点で上清を収集し、Ｍｅｓ
ｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｖ－ＰＬＥＸ炎症誘発性パネル１ヒトキットを製造業者の指示に従って使用して、サイトカインレベルについて分析した。抗原を発現する標的細胞と一緒に１：１のＥ：Ｔ比率でプレーティングされたＴ細胞産物の共培養物からの上清を、抗原結合により媒介されるインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）、ＩＬ－２、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、及びＩＬ－１０の分泌のレベルについて分析した。全ての試料を検出範囲内となるように希釈した。各サイトカインのレベルをｐｇ／ｍＬとして報告し、各アッセイの定量下限及び定量上限を報告する。
１６時間の共培養後にＴ細胞活性化を測定するために、抗原陽性の標的細胞と一緒に指定されたＥ：Ｔ比率でプレーティングされたＴ細胞産物を採取し、一連の抗体－蛍光体で染色して、Ｔ細胞（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）及び活性化マーカーの４－１ＢＢを特定し、フローサイトメトリーによって分析した。固定可能な生存率色素により、生細胞の分析が可能であった。事象を、生細胞（生存率色素陰性）、リンパ球（前方散乱［ＦＳＣ］面積対側方散乱［ＳＳＣ］面積プロットを使用する）、単一細胞（ＦＳＣ面積対ＦＳＣ高さプロットを使用する）、そして次にＴ細胞（ＣＤ３＋）に対して系統的にゲーティングした。次いで、Ｔ細胞を活性化のレベル（すなわち、４－１ＢＢ＋細胞のパーセンテージ）について分析した。ＮＴＤコントロールＴ細胞によって発現されるレベルに基づいて、４－１ＢＢゲーティング閾値を設定した。
Ｔ細胞産物の増殖能を、抗原を発現する標的細胞に対する応答における、ＮＴＤコントロールＴ細胞と比較したＣＴＶ色素の細胞分裂に主導される希釈のフローサイトメトリー分析によって決定した。共培養開始後の４日目に、抗原を発現する標的細胞と一緒に３：１のＥ：Ｔ比率でプレーティングされたＴ細胞産物を採取し、固定可能な生存率色素の存在下で一連の抗体－蛍光体（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）で染色して、生存しているＴ細胞を特定し、フローサイトメトリーによって分析した。増殖している細胞のパーセンテージ及びＣＴＶシグナルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を報告する。ＣＴＶのＭＦＩの減少は、産物が経た細胞分裂のラウンド数に比例する。
この実施例で使用されるＣＡＲ－Ｔ細胞は、以下の表５１で特定されるＣＡＲを含んでいた。表５１はこの実施例の後続の表で参照される実験条件又は群を示す。形質導入効率を表５２に示す。Ｎａｌｍ６（ＣＤ１９＋、ＣＤ２０ｌｏｗ）、Ｎａｌｍ６ ＣＤ１９ＫＯ（ＣＤ１９－、ＣＤ２０＋）、Ｒａｊｉ（ＣＤ１９＋、ＣＤ２０＋）、及びＲａｊｉ ＣＤ１９ＫＯ（ＣＤ１９－、ＣＤ２０＋）における４日目の細胞傷害性を、表５３Ａ～表５３Ｄに示す。Ｎａｌｍ６ ＣＤ１９ＫＯ標的細胞における１：３のＥ：Ｔ比率での共培養１４時間後のサイトカイン産生を、ｐｇ／ｍＬで測定して表５４Ａ～表５４Ｄに示す（条件ごとに２回反復）。共培養１６時間後の４１ＢＢの上方調節によって測定されるＴ細胞活性化（４１ＢＢ＋生Ｔ細胞のパーセント）を表５５Ａ～表５５Ｄに示す（条件ごとに２回反復）。共培養後４日目でのＴ細胞の増殖を表５６に示す（増殖しているＣＤ３＋のパーセント、条件ごとに２回反復）。
Figure 2023169138000069
Figure 2023169138000070
Figure 2023169138000071
Figure 2023169138000072
Figure 2023169138000073
Figure 2023169138000074
Figure 2023169138000075
Figure 2023169138000076
Figure 2023169138000077
Figure 2023169138000078
Figure 2023169138000079
Figure 2023169138000080
Figure 2023169138000081
Figure 2023169138000082
Figure 2023169138000083
Figure 2023169138000084
Figure 2023169138000085
Figure 2023169138000086
Figure 2023169138000087
実施例１７
抗ＣＤ２０一価ＣＡＲにおいてヒンジの比較を行った。この実施例に示されるデータは、上記の実施例に示される方法を使用して得られた。この実施例で使用されるＣＡＲ－Ｔ細胞は、以下の表５７で特定されるＣＡＲを含んでいた。表５７はこの実施例の後続の表で参照される実験条件又は群を示す。この実施例で結合モチーフＡ、結合モチーフＢ、結合モチーフＣ、及び結合モチーフＤとして特定される４つの抗ＣＤ２０結合モチーフを利用した。試験されたヒンジは、短縮されたＣＤ２８ヒンジ（２８Ｔ）、ＣＤ８ヒンジ（８ｋ）、及びＩｇＧ４ヒンジ（Ｉ４）を含む。
形質導入効率を表５８に示す。Ｒａｊｉ（ＣＤ１９＋、ＣＤ２０ｈｉｇｈ）、Ｒａｊｉ
ＣＤ２０ＫＯ（ＣＤ１９＋、ＣＤ２０－）、Ｎａｍａｌｗａ（ＣＤ１９＋、ＣＤ２０ｌｏｗ）、及びＮａｌｍ６（ＣＤ１９＋、ＣＤ２０ｌｏｗ）の４日目の細胞傷害性を表５９及び表６０に示す。１：１のＥ：Ｔ比率での共培養１４時間後のサイトカイン産生を表６１Ａ～表６１Ｄに示す。共培養１６時間後での４１ＢＢの上方調節によって測定されるＴ細胞活性化を、１：１又は１：４のＥ：Ｔで、それぞれ表６２及び表６３に示す。共培養後４日目でのＴ細胞の増殖を、１：１又は１：４のＥ：Ｔで、それぞれ表６４及び表６５に示す。
Figure 2023169138000088
Figure 2023169138000089
Figure 2023169138000090
Figure 2023169138000091
Figure 2023169138000092
Figure 2023169138000093
Figure 2023169138000094
Figure 2023169138000095
Figure 2023169138000096
Figure 2023169138000097
Figure 2023169138000098
Figure 2023169138000099
Figure 2023169138000100
Figure 2023169138000101
Figure 2023169138000102
Figure 2023169138000103
Figure 2023169138000104
実施例１８
Figure 2023169138000105
Figure 2023169138000106
Figure 2023169138000107
Figure 2023169138000108
Figure 2023169138000109
Figure 2023169138000110
実施例１９
Figure 2023169138000111
Figure 2023169138000112
実施例２０
Figure 2023169138000113
Figure 2023169138000114
Figure 2023169138000115
Figure 2023169138000116
Figure 2023169138000117
Figure 2023169138000118
Figure 2023169138000119
Figure 2023169138000120
Figure 2023169138000121
Figure 2023169138000122
Figure 2023169138000123
Figure 2023169138000124
Figure 2023169138000125
Figure 2023169138000126
Figure 2023169138000127
Figure 2023169138000128
Figure 2023169138000129
Figure 2023169138000130
Figure 2023169138000131
Figure 2023169138000132
Figure 2023169138000133
実施例２１
Figure 2023169138000134
Figure 2023169138000135
Figure 2023169138000136
実施例２２
Figure 2023169138000137
Figure 2023169138000138
Figure 2023169138000139
実施例２３
Figure 2023169138000140
多くの実施形態を記載したが、本開示及び実施例は、本明細書に記載される組成物及び方法を利用する又はそれらに包含される他の実施形態を提供し得ることは明らかである。したがって、その範囲は、例として表された実施形態ではなく、本開示及び添付の特許請求の範囲から理解され得るものによって規定されるべきであることが理解されるであろう。

Claims (29)

  1. 抗ＣＤ２０結合モチーフを含む抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗ＣＤ２０結合モチーフは、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、及び配列番号１９９からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のうちのいずれか１つの３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）の配列と、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、及び配列番号２１０からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）の配列とを含む、抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  2. 前記抗ＣＤ２０結合モチーフは、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）を含む第１のドメインと、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を含む第２のドメインとを含み、ここで、
    （ｉ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３～配列番号５、配列番号２５～配列番号２７、配列番号４７～配列番号４９、配列番号６９～配列番号７１、配列番号９１～配列番号９３、配列番号１１３～配列番号１１５、配列番号１３５～配列番号１３７、配列番号１５７～配列番号１５９、配列番号１７９～配列番号１８１、及び配列番号２０１～配列番号２０３のいずれか１つによる配列を有し、
    （ｉｉ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号６～配列番号８、配列番号２８～配列番号３０、配列番号５０～配列番号５２、配列番号７２～配列番号７４、配列番号９４～配列番号９６、配列番号１１６～配列番号１１８、配列番号１３８～配列番号１４０、配列番号１６０～配列番号１６２、配列番号１８２～配列番号１８４、及び配列番号２０４～配列番号２０６のいずれか１つによる配列を有し、
    （ｉｉｉ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号９～配列番号１１、配列番号３１～配列番号３３、配列番号５３～配列番号５５、配列番号７５～配列番号７７、配列番号９７～配列番号９９、配列番号１１９～配列番号１２１、配列番号１４１～配列番号１４３、配列番号１６３～配列番号１６５、配列番号１８５～配列番号１８７、及び配列番号２０７～配列番号２０９のいずれか１つによる配列を有し、
    （ｉｖ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１４～配列番号１６、配列番号３６～配列番号３８、配列番号５８～配列番号６０、配列番号８０～配列番号８２、配列番号１０２～配列番号１０４、配列番号１２４～配列番号１２６、配列番号１４６～配列番号１４８、配列番号１６８～配列番号１７０、配列番号１９０～配列番号１９２、及び配列番号２１２～配列番号２１４のいずれか１つによる配列を有し、
    （ｖ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１７～配列番号１９、配列番号３９～配列番号４１、配列番号６１～配列番号６３、配列番号８３～配列番号８５、配列番号１０５～配列番号１０７、配列番号１２７～配列番号１２９、配列番号１４９～配列番号１５１、配列番号１７１～配列番号１７３、配列番号１９３～配列番号１９５、及び配列番号２１５～配列番号２１７のいずれか１つによる配列を有し、かつ、
    （ｖｉ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号２０～配列番号２２、配列番号４２～配列番号４４、配列番号６４～配列番号６６、配列番号８６～配列番号８８、配列番号１０８～配列番号１１０、配列番号１３０～配列番号１３２、配列番号１５２～配列番号１５４、配列番号１７４～配列番号１７６、配列番号１９６～配列番号１９８、及び配列番号２１８～配列番号２２０のいずれか１つによる配列を有する、
    請求項１に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  3. 前記ＨＣＤＲは、
    （ｉ）配列番号３～配列番号５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号６～配列番号８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９～配列番号１１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３
    、
    （ｉｉ）配列番号２５～配列番号２７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２８～配列番号３０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号３１～配列番号３３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号４７～配列番号４９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号５０～配列番号５２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号５３～配列番号５５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号６９～配列番号７１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号７２～配列番号７４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号７５～配列番号７７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号９１～配列番号９３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号９４～配列番号９６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９７～配列番号９９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、
    （ｖｉ）配列番号１１３～配列番号１１５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１１６～配列番号１１８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１１９～配列番号１２１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、
    （ｖｉｉ）配列番号１３５～配列番号１３７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１３８～配列番号１４０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１４１～配列番号１４３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、
    （ｖｉｉｉ）配列番号１５７～配列番号１５９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１６０～配列番号１６２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１６３～配列番号１６５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、
    （ｉｘ）配列番号１７９～配列番号１８１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１８２～配列番号１８４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１８５～配列番号１８７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、又は、
    （ｘ）配列番号２０１～配列番号２０３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２０４～配列番号２０６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号２０７～配列番号２０９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、
    を含み、
    前記ＬＣＤＲは、
    （ｉ）配列番号１４～配列番号１６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７～配列番号１９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２０～配列番号２２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号３６～配列番号３８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号３９～配列番号４１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号４２～配列番号４４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号５８～配列番号６０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号６１～配列番号６３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号６４～配列番号６６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号８０～配列番号８２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号８３～配列番号８５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号８６～配列番号８８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号１０２～配列番号１０４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１０５～配列番号１０７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１０８～配列番号１１０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｖｉ）配列番号１２４～配列番号１２６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１２７～配列番号１２９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１３０～配列番号１３２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｖｉｉ）配列番号１４６～配列番号１４８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１４９～配列番号１５１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１５２～配列番号１５４のい
    ずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｖｉｉｉ）配列番号１６８～配列番号１７０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７１～配列番号１７３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１７４～配列番号１７６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｉｘ）配列番号１９０～配列番号１９２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１９３～配列番号１９５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１９６～配列番号１９８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、又は、
    （ｘ）配列番号２１２～配列番号２１４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号２１５～配列番号２１７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２１８～配列番号２２０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    を含む、
    請求項１又は２に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  4. 前記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含む第１のドメインと、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む第２のドメインとを含み、ここで、
    前記ＨＣＤＲ及び前記ＬＣＤＲは、
    （ｉ）配列番号３～配列番号５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号６～配列番号８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９～配列番号１１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１４～配列番号１６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７～配列番号１９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２０～配列番号２２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号２５～配列番号２７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２８～配列番号３０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号３１～配列番号３３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号３６～配列番号３８のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号３９～配列番号４１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号４２～配列番号４４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号４７～配列番号４９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号５０～配列番号５２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号５３～配列番号５５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号５８～配列番号６０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号６１～配列番号６３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号６４～配列番号６６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号６９～配列番号７１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号７２～配列番号７４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号７５～配列番号７７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号８０～配列番号８２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号８３～配列番号８５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号８６～配列番号８８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号９１～配列番号９３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号９４～配列番号９６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号９７～配列番号９９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１０２～配列番号１０４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１０５～配列番号１０７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１０８～配列番号１１０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｖｉ）配列番号１１３～配列番号１１５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１１６～配列番号１１８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１１９～配列番号１２１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１２４～配列番号１２６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１２７～配列番号１２９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１３０～配列番号１３２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｖｉｉ）配列番号１３５～配列番号１３７のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１３８～配列番号１４０のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１４１～配列番号１４３のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１４６～配列番号１４８のいずれかによるＬＣＤ
    Ｒ１、配列番号１４９～配列番号１５１のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１５２～配列番号１５４のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｖｉｉｉ）配列番号１５７～配列番号１５９のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１６０～配列番号１６２のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１６３～配列番号１６５のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１６８～配列番号１７０のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１７１～配列番号１７３のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１７４～配列番号１７６のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    （ｉｘ）配列番号１７９～配列番号１８１のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号１８２～配列番号１８４のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号１８５～配列番号１８７のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号１９０～配列番号１９２のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号１９３～配列番号１９５のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号１９６～配列番号１９８のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、又は、
    （ｘ）配列番号２０１～配列番号２０３のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２０４～配列番号２０６のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号２０７～配列番号２０９のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号２１２～配列番号２１４のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号２１５～配列番号２１７のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２１８～配列番号２２０のいずれか１つによるＬＣＤＲ３、
    を含む、
    請求項１～３のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  5. 前記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、前記３つのＨＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、前記３つのＬＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、
    （ｉ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号２３、配列番号４５、配列番号６７、配列番号８９、配列番号１１１、配列番号１３３、配列番号１５５、配列番号１７７、又は配列番号１９９と少なくとも８０％同一であり、かつ、
    （ｉｉ）前記軽鎖可変ドメインは、配列番号１２、配列番号３４、配列番号５６、配列番号７８、配列番号１００、配列番号１２２、配列番号１４４、配列番号１６６、配列番号１８８、又は配列番号２１０と少なくとも８０％同一である、
    請求項１～４のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  6. 前記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、前記３つのＨＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、前記３つのＬＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、
    （ｉ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号１と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号１２と少なくとも８０％同一であり、
    （ｉｉ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号２３と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号３４と少なくとも８０％同一であり、
    （ｉｉｉ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号４５と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号５６と少なくとも８０％同一であり、
    （ｉｖ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号６７と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号７８と少なくとも８０％同一であり、
    （ｖ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号８９と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号１００と少なくとも８０％同一であり、
    （ｖｉ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号１１１と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号１２２と少なくとも８０％同一であり、
    （ｖｉｉ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号１３３と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号１４４と少なくとも８０％同一であり、
    （ｖｉｉｉ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号１５５と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号１６６と少なくとも８０％同一であり、
    （ｉｘ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号１７７と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号１８８と少なくとも８０％同一であり、又は、
    （ｘ）前記重鎖可変ドメインは、配列番号１９９と少なくとも８０％同一であり、かつ前記軽鎖可変ドメインは、配列番号２１０と少なくとも８０％同一である、
    請求項５に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  7. 前記３つのＨＣＤＲ及び前記３つのＬＣＤＲは、単一のポリペプチドに含まれる、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  8. 前記３つのＨＣＤＲは、第１のポリペプチドに含まれ、前記３つのＬＣＤＲは、第２のポリペプチドに含まれる、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  9. 前記第１のポリペプチドは、抗体重鎖であり、前記第２のポリペプチドは、抗体軽鎖である、請求項８に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  10. 前記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、
    （ｉ）５Ｔ４、αフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ細胞受容体、ＣＡ－１２５、癌胎児性抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ７９、ＣＤ７８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＩｇＭ、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮性腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ－１１Ｒα、κ鎖、λ鎖、メラノーマ関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ－１、突然変異ｐ５３、突然変異ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＥｐｈＡ３（ＥＰＨ受容体Ａ３）、ＢＡＦＦＲ（Ｂ細胞活性化因子受容体）、及びそれらの組合せからなる群から選択される抗原に特異的に結合する結合モチーフ、及び／又は、
    （ｉｉ）Ｂ細胞に特徴的な抗原に特異的に結合する結合モチーフ（ここで、任意に、前記Ｂ細胞に特徴的な抗原はＣＤ１９又はＣＤ２０ではない）、
    を更に含む、
    請求項１～９のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  11. 前記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、抗ＣＤ１９結合モチーフを更に含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  12. 前記抗ＣＤ１９結合モチーフは、３つのＨＣＤＲを含む第１のドメインと、３つのＬＣＤＲを含む第２のドメインとを含み、ここで、
    前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＨＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
    前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＬＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
    前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記ＨＣＤＲ及び前記ＬＣＤＲは、配列番号２２３～配列番号２２５のいずれかによるＨＣＤＲ１、配列番号２２６～配列番号２２８のいずれかによるＨＣＤＲ２、配列番号２２９～配列番号２３１のいずれか１つによるＨＣＤＲ３、配列番号２３４～配列番号２３６のいずれかによるＬＣＤＲ１、配列番号２３７～配列番号
    ２３９のいずれかによるＬＣＤＲ２、配列番号２４０～配列番号２４２のいずれか１つによるＬＣＤＲ３を含む、
    請求項１１に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  13. 前記抗ＣＤ１９結合モチーフは、前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＨＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＬＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインとを含み、ここで、前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記重鎖可変ドメインは、配列番号２２１と少なくとも８０％同一であり、かつ前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記軽鎖可変ドメインは、配列番号２３２と少なくとも８０％同一である、請求項１２に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  14. 前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＨＣＤＲ及び前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＬＣＤＲは、単一のポリペプチドに含まれる、請求項１２又は１３に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  15. 前記抗ＣＤ２０結合モチーフの前記３つのＨＣＤＲ、前記抗ＣＤ２０結合モチーフの前記３つのＬＣＤＲ、前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＨＣＤＲ、及び前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＬＣＤＲは、共に単一のポリペプチドに含まれる、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  16. 前記抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、キメラ抗原受容体であか、又はキメラ抗原受容体に含まれる、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  17. 前記キメラ抗原受容体は、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｔ細胞受容体のα鎖、Ｔ細胞受容体のβ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４若しくはＴ細胞受容体のζ鎖の膜貫通ドメイン又はそれらの任意の組合せである膜貫通ドメインを含む、請求項１６に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  18. （ｉ）前記抗ＣＤ２０結合モチーフの前記３つのＨＣＤＲ及び前記抗ＣＤ２０結合モチーフの前記３つのＬＣＤＲは、第１のポリペプチド内に存在し、（ｉｉ）前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＨＣＤＲ及び前記抗ＣＤ１９結合モチーフの前記３つのＬＣＤＲは、共に第２の異なるポリペプチドに含まれる、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  19. 前記第１のポリペプチドは、第１のキメラ抗原受容体であるか、又は第１のキメラ抗原受容体に含まれる、請求項１８に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  20. 前記第２のポリペプチドは、第２のキメラ抗原受容体であるか、又は第２のキメラ抗原受容体に含まれる、請求項１８又は１９に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  21. 請求項１～２０のいずれか一項に記載の少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸。
  22. 請求項２１に記載の核酸を含むベクター。
  23. 請求項２１に記載の核酸又は請求項２２に記載のベクターで細胞をトランスフェクション又は形質導入することを含む、操作された細胞を作製する方法。
  24. 請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントをコード又は発現する細胞であって、任意に前記細胞は免疫細胞であり、任意に前記細胞はＴ細胞である、細胞。
  25. 治療を必要とする被験体における癌を治療する方法であって、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントをコードする又はこれらを含む１つ以上の細胞を含む細胞療法組成物を前記被験体に投与することを含む、方法。
  26. 被験体における免疫応答を誘発する又は被験体を癌に対して免疫化する方法であって、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗原結合系、抗体、又はその抗原結合フラグメントをコードする又はこれらを含む１つ以上の細胞を含む細胞療法組成物を前記被験体に投与することを含む、方法。
  27. 前記細胞は、ＣＡＲ－Ｔ細胞である、請求項２５又は２６に記載の方法。
  28. 前記癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄腫性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性白血病若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、有毛細胞性白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性障害（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、形質細胞腫（形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換後濾胞性リンパ腫若しくはワルデンストレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換後濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、有毛細胞性リンパ腫／白血病、又はそれらの組合せである、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記細胞療法は、同種異系細胞療法又は自家細胞療法である、請求項２５～２８のいずれか一項に記載の方法。
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