JP2017035079A - Microtube, cell housing recovery tool set, and cell recovery auxiliary tool - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、細胞等を収容するマイクロチューブ、細胞収容回収器具セット、及び細胞回収補助具に関する。より詳細には、先端が針状に形成された細胞採取器具を用いた場合に細胞を好適に回収できるマイクロチューブ、細胞収容回収器具セット、及び細胞回収補助具に関する。 The present invention relates to a microtube for storing cells and the like, a cell storage / recovery instrument set, and a cell recovery aid. More specifically, the present invention relates to a microtube, a cell storage / collection instrument set, and a cell collection aid that can suitably collect cells when a cell collection instrument having a needle-like tip is used.
従来、再生医療においては、体外で培養したヒトや動物の細胞を移植することで組織の再生を促進させるという研究が行われており、一部では実用化もされている。このような細胞は、少量(例えば、500μL〜1500μL)の液体を収容可能なマイクロチューブに収容された状態で保管及び搬送される(例えば、特許文献1参照)。 Conventionally, in regenerative medicine, research has been conducted to promote tissue regeneration by transplanting human or animal cells cultured outside the body, and some have been put into practical use. Such cells are stored and transported in a state of being accommodated in a microtube capable of accommodating a small amount (for example, 500 μL to 1500 μL) of liquid (for example, see Patent Document 1).
ここで、培養した細胞を移植する場合には、遠心分離によりマイクロチューブの下部に集めた細胞を、注射針のような先端が針状に形成された細胞採取器具を用いて回収した後、体内の所定の部位に細胞を注入する。このように、先端の細い針を用いた場合、従来のマイクロチューブでは、下部に集められた細胞を残さずに回収することが困難であった。
特に、脳外科の分野等においては、細胞を脳の深部に移植するために長針を用いて細胞の回収が用いられるが、マイクロチューブに収容された少量の細胞を、長針を用いて残さず回収することは極めて困難であった。
Here, when transplanting cultured cells, the cells collected at the bottom of the microtube by centrifugation are collected using a cell collection device with a needle-like tip such as an injection needle, Cells are injected into a predetermined site. As described above, when a needle with a thin tip is used, it is difficult to collect the cells collected in the lower part without leaving them in the conventional microtube.
In particular, in the field of neurosurgery and the like, cell recovery using a long needle is used to transplant cells into the deep part of the brain, but a small amount of cells contained in a microtube are recovered without using a long needle. It was extremely difficult.
従って、本発明は、先端が針状に形成された細胞採取器具を用いた場合に、少量の細胞であっても好適に回収できるマイクロチューブ、細胞収容回収器具セット、及び細胞回収補助具を提供することを目的とする。 Accordingly, the present invention provides a microtube, a cell storage / recovery instrument set, and a cell recovery aid that can suitably recover even a small amount of cells when a cell sampling instrument having a needle-like tip is used. The purpose is to do.
本発明は、一端側に開口部が形成されると共に他端側に閉鎖された底部が形成された筒状の容器本体と、該容器本体に取り付けられ前記開口部を密閉する蓋体と、を備えるマイクロチューブであって、前記容器本体の前記底部の内面は、半径0.8mm以下の凹曲面に形成されるマイクロチューブに関する。 The present invention includes a cylindrical container body having an opening formed at one end and a bottom closed at the other end, and a lid attached to the container body and sealing the opening. It is a microtube provided, Comprising: The inner surface of the said bottom part of the said container main body is related with the microtube formed in a concave curved surface with a radius of 0.8 mm or less.
また、前記容器本体の内面は、前記底部の内面に連続すると共に該容器本体の軸方向に対して所定角度傾斜したテーパ面部を含み、該テーパ面部の前記軸方向に対するテーパ角度は、10°以下であることが好ましい。 The inner surface of the container body includes a tapered surface portion that is continuous with the inner surface of the bottom portion and is inclined at a predetermined angle with respect to the axial direction of the container body, and the taper angle of the tapered surface portion with respect to the axial direction is 10 ° or less. It is preferable that
また、前記テーパ面部の前記軸方向に対するテーパ角度は、7.5°以下であることが好ましい。 Moreover, it is preferable that the taper angle with respect to the said axial direction of the said taper surface part is 7.5 degrees or less.
また、前記テーパ面部の前記軸方向に対するテーパ角度は、5°以上であることが好ましい。 Moreover, it is preferable that the taper angle with respect to the said axial direction of the said taper surface part is 5 degrees or more.
また、マイクロチューブは、前記容器本体の外面から該容器本体の軸方向における前記底部側に延出する脚部を更に備え、自立可能であることが好ましい。 Moreover, it is preferable that a microtube is further provided with the leg part extended from the outer surface of the said container main body to the said bottom part side in the axial direction of this container main body, and can be self-supporting.
また、前記容器本体の内面は、前記テーパ面部に連続すると共に該容器本体の軸方向に対して該テーパ面部のテーパ角度よりも大きな角度傾斜した第2テーパ面部を更に含むことが好ましい。 Moreover, it is preferable that the inner surface of the container main body further includes a second tapered surface portion that is continuous with the tapered surface portion and is inclined with respect to the axial direction of the container main body by an angle larger than the taper angle of the tapered surface portion.
また、前記容器本体の容量は、500μL〜1500μLであることが好ましい。 Moreover, it is preferable that the capacity | capacitance of the said container main body is 500 microliters-1500 microliters.
また、前記容器本体は、前記開口部側の外周面に形成された雄ねじ部を含み、前記蓋体は、内周面に前記雄ねじ部に螺合可能な雌ねじ部が形成されたキャップにより構成されることが好ましい。 Further, the container body includes a male screw portion formed on the outer peripheral surface on the opening side, and the lid body is configured by a cap having a female screw portion that can be screwed to the male screw portion on the inner peripheral surface. It is preferable.
また、本発明は、上述のいずれかに記載のマイクロチューブと、前記容器本体の上部に接続可能なチューブ接続部、及び該チューブ接続部が前記容器本体に接続された状態で該容器本体の軸方向に沿って延び前記開口部を介して前記容器本体の内部に連通する筒状部を有する細胞回収補助具と、を備える細胞収容回収器具セットに関する。 The present invention also provides a microtube according to any one of the above, a tube connecting portion connectable to an upper portion of the container main body, and a shaft of the container main body in a state where the tube connecting portion is connected to the container main body. The present invention relates to a cell collection / recovery instrument set including a cell collection auxiliary tool having a cylindrical portion that extends along a direction and communicates with the inside of the container body through the opening.
また、本発明は、一端側に開口部が形成されると共に他端側に閉鎖された底部が形成された筒状の容器本体と、該容器本体に取り付けられ前記開口部を密閉する蓋体と、を備えるマイクロチューブに取り付けられ前記容器本体に収容された細胞の回収を補助する細胞回収補助具であって、前記容器本体の上部に接続可能なチューブ接続部と、前記チューブ接続部が前記容器本体に接続された状態で該容器本体の軸方向に沿って延び前記開口部を介して前記容器本体の内部に連通する筒状部と、を備える細胞回収補助具に関する。 The present invention also provides a cylindrical container body having an opening formed at one end and a bottom closed at the other end, and a lid attached to the container body for sealing the opening. A cell collection aid that assists in the collection of cells contained in the container body, the tube connection part being connectable to the upper part of the container body, and the tube connection part being the container The present invention relates to a cell recovery aid comprising: a cylindrical portion that extends along the axial direction of the container main body and communicates with the inside of the container main body through the opening while being connected to the main body.
本発明によれば、先端が針状に形成された細胞採取器具を用いて少量の細胞を好適に回収できるマイクロチューブ、細胞収容回収器具セット、及び細胞回収補助具を提供できる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the microtube which can collect | recover a small amount of cells suitably using the cell collection instrument in which the front end was formed in the shape of a needle, a cell accommodation collection instrument set, and a cell collection auxiliary tool can be provided.
以下、本発明のマイクロチューブの好ましい各実施形態について、図面を参照しながら説明する。本発明のマイクロチューブは、再生医療において移植に用いられる細胞を含む液体を収容する場合に使用される。より具体的には、マイクロチューブは、最大容量が500μL〜1500μLに構成される。 Hereinafter, preferred embodiments of the microtube of the present invention will be described with reference to the drawings. The microtube of the present invention is used when containing a liquid containing cells used for transplantation in regenerative medicine. More specifically, the microtube has a maximum capacity of 500 μL to 1500 μL.
第1実施形態のマイクロチューブ1は、図1及び図2に示すように、容器本体10と、脚部20と、蓋体としてのキャップ30と、を備える。
容器本体10は、一端側(上端側)に開口部11が形成されると共に他端側に閉鎖された底部12が形成された筒状に構成される。この容器本体10の内面13は、図3及び図4に示すように、凹面部131と、テーパ面部132と、円筒面部133と、を含んで構成される。
The microtube 1 of 1st Embodiment is provided with the container
The
凹面部131は、容器本体10の底部12の内面を構成する。凹面部131は、図5に示すように、半径Rが0.8mm以下の凹曲面に形成される。本発明では、凹面部131を、半径Rが0.8mm以下の凹曲面に形成することで、マイクロチューブ1に収容された細胞を注射針のような先端が針状に形成された細胞採取器具を用いて効果的に回収(採取)できる。
凹面部131の半径Rは、先端が針状に形成された細胞採取器具による細胞の回収率を高める観点から、0.5mm以下であることが好ましく、0.25mm以下であることがより好ましい。また、凹面部131の半径Rは、細胞採取器具の先端が凹面部131に密着することで細胞の回収を阻害することを防ぐ観点から、0.1mm以上であることが好ましい。
第1実施形態では、凹面部131の半径Rは、0.25mmに設定されている。
The
The radius R of the
In the first embodiment, the radius R of the
テーパ面部132は、凹面部131(底部12の内面)に連続すると共に容器本体10の軸方向LDに対して所定角度傾斜している。言い換えれば、テーパ面部132は、凹面部131の上部に配置された円錐面状に形成される。テーパ面部132の軸方向LDに対するテーパ角度θは、マイクロチューブ1の底部12側に集められた場合における細胞層の高さ(厚さ)を好適に確保し、先端が針状に形成された細胞採取器具による細胞の回収を容易にする観点から、10°以下であることが好ましく、7.5°以下であることがより好ましい。また、テーパ面部132の軸方向LDに対するテーパ角度θは、細胞採取器具の先端がテーパ面部132に密着することで細胞の回収を阻害することを防ぐ観点から、5°以上であることが好ましい。
第1実施形態では、テーパ面部132の軸方向LDに対するテーパ角度θは、7°に設定されている。
The
In the first embodiment, the taper angle θ of the
円筒面部133は、容器本体10における一端側に配置される。円筒面部133は、容器本体10の内径がテーパ面部132の上端部(開口部11側の端部)における容器本体10の内径と同一の円周面に形成される。
The
容器本体10の外面には、雄ねじ部14及び容器リブ部15が形成される。
雄ねじ部14は、容器本体10の開口部11側の外面に形成される。容器リブ部15は、容器本体10における雄ねじ部14よりも底部12側に配置される。容器リブ部15は、容器本体10の外面の一部が容器本体10の全周に亘って突出して形成される。
A
The
脚部20は、容器本体10の外面から容器本体10の軸方向LDにおける底部12側に延出する。第1実施形態では、脚部20は、容器本体10の外周面から底部12側に向かって円筒状に延びて形成される。脚部20の先端部の位置は、図4に示すように、容器本体10の底部12よりも先端側に位置する。また、脚部20の先端面は、マイクロチューブ1の軸方向LDに直交する平面状に形成される。これにより、マイクロチューブ1は、底部12を下方に向けた状態で脚部20により自立可能に構成される。
The
第1実施形態では、容器本体10及び脚部20は、合成樹脂部材を一体成形して形成される。容器本体10及び脚部20は、収容された細胞を視認可能とする観点から透明性を有する材料から構成することが好ましく、また、比較的剛性の大きい材料から構成されることが好ましい。容器本体10を構成する材料としては、具体的には、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリメチルペンテン、メタクリル、ABS樹脂(アクリロニトリル・ブタジエン・スチレン共重合体)、PET樹脂(ポリエチレンテレフタレート)、ポリ塩化ビニル等の合成樹脂が挙げられる。
また、容器本体10の開口部11における直径(内径)は、好ましくは6mm〜10mmであり、容器本体10の高さは、好ましくは30mm〜70mmである。
In the first embodiment, the
Moreover, the diameter (inner diameter) in the
キャップ30は、容器本体10に取り付けられ開口部11を密閉する。本実施形態では、キャップ30は、容器本体10とは別体に構成される。キャップ30は、内周面に、容器本体10の雄ねじ部14に螺合可能な雌ねじ部31が形成された一端側が閉鎖された円筒状に構成される。
キャップ30は、容器本体10と同様の材料により構成できる。
The
The
以上説明した第1実施形態のマイクロチューブ1は、再生医療において、培養した細胞を生体に移植する場合に好適に用いられる。具体的には、培養した細胞を生体に移植する場合、移植に用いられる細胞は、他の液性成分(培養液等)と共にマイクロチューブ1に収容され、キャップ30を容器本体10に取り付けた状態で遠心分離器にかけられる。これにより、細胞は、マイクロチューブ1(容器本体10)の底部12(凹面部131近傍)に集められ、液性成分と分離される。
The microtube 1 of the first embodiment described above is suitably used when transplanting cultured cells into a living body in regenerative medicine. Specifically, when transplanting cultured cells into a living body, the cells used for transplantation are housed in the microtube 1 together with other liquid components (such as a culture solution), and the
次いで、キャップ30を容器本体10から取り外し、底部12に集められた細胞を、細胞採取器具を用いて回収する。細胞の移植を行う場合には、回収した細胞を生体内の所定の部位に注入するため、注射針のような先端が針状に形成された細胞採取器具が用いられる。
Next, the
ここで、従来のような底部の内面が平面状に形成されたマイクロチューブや底部の内面が凹曲面で形成されているものの凹曲面の半径Rが0.8mmを超えるような曲率の小さいマイクロチューブの場合には、マイクロピペットのような先端が針状に形成されていない細胞採取器具を用いた場合には、細胞をそれなりに好適に回収できる。しかしながら、先端が針状に形成された細胞採取器具を用いた場合には、このような従来のマイクロチューブでは、細胞を残さず回収することは困難であった。
そこで、第1実施形態では、容器本体10の底部12の内面である凹面部131を、半径0.8mm以下の凹曲面に形成した。これにより、マイクロチューブ1に収容された細胞を、注射針のような先端が針状に形成された細胞採取器具を用いて効果的に回収できる。
Here, a conventional microtube having a flat bottom inner surface and a microtube having a small curvature such that the radius R of the concave curved surface exceeds 0.8 mm although the inner surface of the bottom is formed by a concave curved surface. In this case, when a cell collection device such as a micropipette whose tip is not formed in a needle shape is used, the cells can be suitably recovered. However, when a cell collection device having a needle-like tip is used, it is difficult to collect all the cells with such a conventional microtube.
Therefore, in the first embodiment, the
また、容器本体10の内面13を、凹面部131に連続すると共に容器本体10の軸方向LDに対して所定角度傾斜したテーパ面部132を含んで構成し、このテーパ面部132の軸方向LDに対するテーパ角度を10°以下に構成した。これにより、マイクロチューブ1の底部12側に集められた場合における細胞の層の厚さを好適に確保できるので、先端が針状に形成された細胞採取器具による細胞の回収をより容易に行える。
Further, the
また、マイクロチューブ1を、脚部20を含んで構成し、自立可能とした。これにより、マイクロチューブ1の取扱い性を向上させられる。
Moreover, the microtube 1 was comprised including the
また、容量500μL〜1500μLのマイクロチューブ1に第1実施形態の凹面部131及び/又はテーパ面部132の構成を適用することで、先端が針状に形成された細胞採取器具による細胞の回収率を好適に高められる。
In addition, by applying the configuration of the
次に、本発明のマイクロチューブ1に収容した細胞の回収を補助する細胞回収補助具50及びマイクロチューブ1及び細胞回収補助具50を備える細胞収容回収器具セット100につき、図6〜図9を参照しながら説明する。
細胞回収補助具50は、図6に示すように、両端が開口した円筒状に形成される、チューブ接続部51と、筒状部52と、を備える。
Next, referring to FIGS. 6 to 9, the cell
As shown in FIG. 6, the
チューブ接続部51は、細胞回収補助具50の一端部に配置され、マイクロチューブ1の容器本体10の上端部に接続可能に構成される。本実施形態では、チューブ接続部51は、容器本体10の雄ねじ部14に螺合可能な雌ねじ部511が内周面に形成された筒状に構成される。
The
筒状部52は、チューブ接続部51と一体的に形成される。筒状部52は、チューブ接続部51が容器本体10に接続された状態で容器本体10の軸方向LDに沿って延びる。そして、この状態で、筒状部52は、開口部11を介して容器本体10の内部に連通する(図8参照)。
The
筒状部52の長さは、細胞の回収に用いられる細胞採取器具の針の長さに応じて適宜設定できるが、脳外科の分野等において細胞を脳の深部に移植するために用いられる長針により細胞を好適に採取する観点から、10cm〜30cmであることが好ましい。筒状部52の内径は、長針を好適にマイクロチューブ1の内部に挿入する観点から、容器本体10の開口部11の内径と同じ径に構成されることが好ましい。
以上の細胞回収補助具50は、容器本体10を構成する材料と同様の硬質の合成樹脂により構成される。
The length of the
The
次に、細胞回収補助具50の使用方法について説明する。
細胞回収補助具50は、遠心分離により容器本体10の底部12に集められた細胞を、回収(採取)する場合に用いられる。細胞を回収する場合には、まず、図7及び8に示すように、キャップ30を取り外した状態の容器本体10の雄ねじ部14にチューブ接続部51の雌ねじ部511を螺合させて細胞回収補助具50を容器本体10に接続する。
次いで、図9に示すように、長針210及びシリンジ220を有する細胞採取器具200の長針を、筒状部52に差し込む。これにより、長針は、筒状部52に案内されることで容器本体10の開口部11に容易に挿入される。
次いで、長針の先端部を容器本体10の底部12(凹面部131)に位置させ、細胞を回収する。
Next, a method for using the
The
Next, as shown in FIG. 9, the long needle of the
Next, the tip of the long needle is positioned on the bottom 12 (concave surface 131) of the
このように、細胞回収補助具50を用いることで、特に、長針を有する細胞採取器具を用いて細胞を回収する場合に、長針を容易にマイクロチューブ1に挿入できるので、マイクロチューブ1に収容した細胞の移植にかかる負担を軽減できる。
In this way, by using the
次に、第2実施形態のマイクロチューブ1Aにつき、図10及び図11を参照しながら説明する。
第2実施形態のマイクロチューブ1Aは、テーパ面部132A(内面13A)の構成において、第1実施形態と異なる。第2実施形態については、上述した第1実施形態と異なる点を主に説明し、同様の点は同一の符号を付して説明を省略する。特に説明しない点は、第1実施形態についての説明が適宜適用される。
Next, the
The
第2実施形態のマイクロチューブ1Aでは、テーパ面部132Aは、第1テーパ面部135と、第2テーパ面部136と、を含んで構成される。第1テーパ面部135は、第1実施形態におけるテーパ面部132に対応する。
第2テーパ面部136は、第1テーパ面部135の開口部11側に連続すると共に容器本体10Aの軸方向LDに対して第1テーパ面部135のテーパ角度θよりも大きな角度θ2傾斜している。
In the
The second
第2実施形態では、第1テーパ面部135の軸方向LDに対するテーパ角度θは、5°に設定され、第2テーパ面部136の軸方向LDに対するテーパ角度θ2は、10°に設定されている(図10及び図11参照)。
また、第2実施形態では、脚部20は、容器本体10の第2テーパ面部136が位置している部分の外周面から延出して形成されている。
In 2nd Embodiment, taper angle (theta) with respect to axial direction LD of the 1st
Moreover, in 2nd Embodiment, the
第2実施形態のマイクロチューブ1Aによれば、第1実施形態と同様の効果を奏する他、以下のような効果も奏する。
容器本体10Aを、第1テーパ面部135と、この第1テーパ面部135のテーパ角度θよりも大きな角度θ2傾斜した第2テーパ面部136と、を含んで構成した。これにより、第1テーパ面部135のテーパ角度θを小さくした場合であっても、第2テーパ面部136のテーパ角度θ2を調整することで、容器本体10に収容できる液体の量を増加させられる。
According to the
The
また、脚部20を、容器本体10の第2テーパ面部136が位置している部分の外周面から延出させた。これにより、脚部20の延出方向と第2テーパ面部136の延びる方向との角度が小さくなりすぎることを防げる。よって、容器本体10及び脚部20を合成樹脂部材により一体成形する場合に、テーパ面部132Aと脚部20との境界部分において成形不良を起こりにくくできる。テーパ面部132Aと脚部20との境界部分における成形不良を効果的に抑制する観点から、第2テーパ面部136の軸方向LDに対するテーパ角度θ2は、10°〜30°であることが好ましい。
Moreover, the
以上、本発明をその好ましい実施形態に基づき説明したが、本発明は上記実施形態には制限されず、本発明の趣旨を逸脱しない限り適宜変更が可能である。
例えば、第1実施形態及び第2実施形態では、容器本体10,10Aとキャップ30とを別体で構成したが、これに限らない。即ち、例えば、図12に示すように、マイクロチューブ1Bを、容器本体10Bとキャップ30Bとを帯状の連結部材40Bにより連結して一体的に構成してもよい。この場合、図13に示すように、細胞回収補助具50Bを、チューブ接続部51Bに形成され、連結部材40Bが進入可能なスリット53Bを含んで構成することが好ましい。これにより、連結部材40Bを有するマイクロチューブ1Bにも対応可能な細胞回収補助具50B、及び細胞収容回収器具セット100Bを実現できる。
尚、この場合、マイクロチューブ1Bと細胞回収補助具50Bとは、両者を液密に嵌合させることで接続される。
As mentioned above, although this invention was demonstrated based on the preferable embodiment, this invention is not restrict | limited to the said embodiment, As long as it does not deviate from the meaning of this invention, it can change suitably.
For example, in the first embodiment and the second embodiment, the container
In this case, the
また、上記実施形態では、細胞回収補助具50の筒状部52におけるチューブ接続部51とは反対側の端面(長針210が差し込まれる側の端面)を、筒状部52の軸方向に垂直な面により構成したが、これに限らない。即ち、図14に示すように、長針が差し込まれる側の端面の一部が軸方向に切り欠かれた切り欠き部54Cを含んで細胞回収補助具50Cを構成してもよい。また、図15に示すように、長針が差し込まれる側の端面を、筒状部52Dの軸方向に対して所定角度傾斜した傾斜面に形成して細胞回収補助具50Dを構成してもよい。これにより、長針を細胞回収補助具により差し込みやすくできる。
尚、細胞回収補助具50Cを、切り欠き部54Cを含んで構成する場合、切り欠き部54Cの幅は、図14に示す幅に限られない。例えば、切り欠き部54Cを、長針が通過できる程度の幅のいわゆるスリット状に形成してもよい。
In the above-described embodiment, the end surface (the end surface on the side into which the
When the
また、第1実施形態及び第2実施形態では、マイクロチューブ1,1Aを、脚部20を含んで自立可能に構成したが、これに限らない。即ち、マイクロチューブを、脚部を含まずに構成してもよい。
Moreover, in 1st Embodiment and 2nd Embodiment, although the
また、上記実施形態では、マイクロチューブと細胞回収補助具とを、螺合又は嵌合により接続したが、これに限らない。即ち、マイクロチューブと細胞回収補助具との接続部分から細胞が漏れないように液密に接続できれば、他の接続方法によって接続してもよい。また、接続部分を、Oリングを含んで構成してもよい。 Moreover, in the said embodiment, although the microtube and the cell collection | recovery assistance tool were connected by screwing or fitting, it is not restricted to this. In other words, other connection methods may be used as long as the cells can be connected in a liquid-tight manner so that cells do not leak from the connection portion between the microtube and the cell collection aid. Moreover, you may comprise a connection part including an O-ring.
次に、本発明を実施例に基づいて更に詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 Next, the present invention will be described in more detail based on examples, but the present invention is not limited thereto.
[細胞の回収率の測定]
以下の表1に示す実施例1〜3のマイクロチューブ及び比較例のマイクロチューブを作製し、それぞれのマイクロチューブにつき、細胞の回収の容易さを測定した。
[Measurement of cell recovery rate]
The microtubes of Examples 1 to 3 shown in Table 1 below and the microtubes of the comparative example were prepared, and the ease of cell recovery was measured for each microtube.
細胞の回収の容易さの測定は、以下の手法及び手順により行った。
1.牛血600mLを3000gで10分間遠心分離した。
2.「1.」にて得られた血漿50mLを、50mL遠沈管に移し残った血漿は廃棄した。
3.「1.」にて得られたバフィーコート(白血球、血小板)を15mL遠沈管に移した。
4.「3.」にて得られたバフィーコートを2330gで10分間遠心分離し、赤血球層をスポイトで廃棄した。
5.「4.」に「2.」の血漿を適量加え細胞懸濁液とし、血球カウンターを用いて細胞数(白血球数)をカウントした。(白血球数の目安として10±2万/uL)*細胞懸濁液量は8mL程度となった。(必要液量は6mL以上)
6.細胞懸濁液500uLを実施例1〜3、及び比較例のマイクロチューブ(計4本)に分注した。(n=3)
7.「6.」を200gで5分間遠心分離した。
8.23G針とシリンジを用いて、細胞懸濁液を全量回収し、サンプリングチューブに移した。
9.血球カウンターを用いて細胞数(白血球数)をカウントし、細胞回収率を算出した。
10.1〜9を2回実施した。(計n=6)結果を表2に示す。
The ease of cell recovery was measured by the following method and procedure.
1. 600 mL of bovine blood was centrifuged at 3000 g for 10 minutes.
2. 50 mL of the plasma obtained in “1.” was transferred to a 50 mL centrifuge tube, and the remaining plasma was discarded.
3. The buffy coat (white blood cells and platelets) obtained in “1.” was transferred to a 15 mL centrifuge tube.
4). The buffy coat obtained in “3.” was centrifuged at 2330 g for 10 minutes, and the red blood cell layer was discarded with a dropper.
5). An appropriate amount of the plasma of “2.” was added to “4.” to obtain a cell suspension, and the number of cells (white blood cell count) was counted using a blood cell counter. (As a guide to the white blood cell count, 10 ± 20,000 / uL) * The cell suspension amount was about 8 mL. (Required liquid volume is 6mL or more)
6). 500 uL of cell suspension was dispensed into microtubes (total 4) of Examples 1 to 3 and Comparative Example. (N = 3)
7). “6.” was centrifuged at 200 g for 5 minutes.
Using the 8.23G needle and syringe, the entire cell suspension was recovered and transferred to a sampling tube.
9. The cell count (white blood cell count) was counted using a blood cell counter, and the cell recovery rate was calculated.
10.1-9 was implemented twice. (Total n = 6) The results are shown in Table 2.
表2に示すように、凹面部の半径Rが0.8mm以下の各実施例のマイクロチューブによれば、いずれも95%以上の高い率で細胞が回収できたことが確認された。特に、凹面部の半径Rが0.1mmであり、テーパ面部の軸方向に対するテーパ角度が5°である実施例3のマイクロチューブでは、細胞の回収率が99%以上と特に好適に細胞を回収できることが確認された。 As shown in Table 2, it was confirmed that according to the microtubes of the examples in which the radius R of the concave surface portion was 0.8 mm or less, the cells could be recovered at a high rate of 95% or more. In particular, in the microtube of Example 3 in which the radius R of the concave surface portion is 0.1 mm and the taper angle with respect to the axial direction of the tapered surface portion is 5 °, the cell recovery rate is particularly preferably 99% or more. It was confirmed that it was possible.
1,1A,1B マイクロチューブ
10,10A,10B 容器本体
11 開口部
12 底部
13 内面
14 雄ねじ部
20 脚部
30 キャップ(蓋体)
31 雌ねじ部
50 細胞回収補助具
51 チューブ接続部
52 筒状部
100,100B 細胞収容回収器具セット
132 テーパ面部
135 第1テーパ面部(テーパ面部)
136 第2テーパ面部
LD 軸方向
1, 1A,
31
136 2nd taper surface part LD axial direction
Claims (10)
前記容器本体の前記底部の内面は、半径0.8mm以下の凹曲面に形成されるマイクロチューブ。 A microtube comprising: a cylindrical container body having an opening formed at one end and a bottom closed at the other end; and a lid attached to the container body and sealing the opening. There,
The inner surface of the said bottom part of the said container main body is a microtube formed in a concave curved surface with a radius of 0.8 mm or less.
前記蓋体は、内周面に前記雄ねじ部に螺合可能な雌ねじ部が形成されたキャップにより構成される請求項1〜7のいずれかに記載のマイクロチューブ。 The container body includes a male screw portion formed on the outer peripheral surface on the opening side,
The microtube according to any one of claims 1 to 7, wherein the lid is configured by a cap having a female screw portion that can be screwed to the male screw portion on an inner peripheral surface.
前記容器本体の上部に接続可能なチューブ接続部、及び該チューブ接続部が前記容器本体に接続された状態で該容器本体の軸方向に沿って延び前記開口部を介して前記容器本体の内部に連通する筒状部を有する細胞回収補助具と、を備える細胞収容回収器具セット。 The microtube according to any one of claims 1 to 8,
A tube connecting portion connectable to an upper portion of the container main body, and the tube connecting portion is connected to the container main body and extends along the axial direction of the container main body to enter the container main body through the opening. A cell containing and collecting instrument set comprising: a cell collecting auxiliary tool having a tubular portion that communicates with the cell collecting auxiliary tool set.
前記容器本体の上部に接続可能なチューブ接続部と、
前記チューブ接続部が前記容器本体に接続された状態で該容器本体の軸方向に沿って延び前記開口部を介して前記容器本体の内部に連通する筒状部と、を備える細胞回収補助具。 A microtube comprising: a cylindrical container body having an opening formed at one end and a bottom closed at the other end; and a lid attached to the container body and sealing the opening. A cell recovery aid that assists in the recovery of cells attached and contained in the container body,
A tube connecting portion connectable to an upper portion of the container body;
A cell collection aid comprising: a tubular portion that extends along the axial direction of the container body and communicates with the inside of the container body through the opening in a state where the tube connection portion is connected to the container body.
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