JP2012530721A - 小モジュール免疫薬のための凍結乾燥製剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、とりわけ、小モジュール免疫薬（ＳＭＩＰ（商標））タンパク質のための安定な製剤を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質の凍結乾燥混合物を含有する製剤であって、凍結乾燥された小モジュール免疫薬タンパク質の７％未満が凝集形態で存在する製剤を提供する。本発明に従う製剤は、緩衝剤、安定剤、充填剤、界面活性剤、および／または他の賦形剤を含有し得る。本発明はまた、凍結乾燥、再構成のための製剤、およびその使用方法を提供する。

Description

関連出願に対する相互参照
この出願は、共に２００９年６月１８日に出願された米国仮特許出願第６１／２１８，３８８号および米国仮特許出願第６１／２１８，３８６号に対する優先権を主張するものであり、これらのそれぞれの全体は、参照することにより本明細書に組み込まれる。

過去１０年間で、バイオテクノロジーの進歩によって、薬学的用途のための様々なタンパク質を生産することが可能になった。タンパク質は、従来の有機薬剤および無機薬剤よりも大きくより複雑である（すなわち、複雑な三次元構造に加え、複数の官能基を有する）ため、このようなタンパク質の製剤、包装、および保存は、特別な問題を有する。液体製剤は、臨床上の利便性、患者の利便性、および製造の容易性のため、一般的に望ましい。しかし、多くのタンパク質では、液体製剤は実現不可能である。タンパク質の複雑性により、製造、包装、および運搬の間に受けるストレスから、タンパク質の分解が生じる。特定の小モジュール免疫薬は、このカテゴリーに属する。

結果として、液体製剤が選択肢でない場合は、凍結乾燥によって、許容可能な運搬条件および保存条件下で安定な投薬形態を生産することを合理的に保証する。凍結乾燥は通常、凍結、一次乾燥、および二次乾燥という、３つの主要な段階を含む。凍結は、水を氷に、または、一部の非晶質の製剤成分を結晶形態に変換する。一次乾燥は、低圧および低温での直接的な昇華によって凍結生成物から氷を除去する処理ステップである。二次乾燥は、蒸発表面への残留水の拡散を利用して生成物マトリクスから結合水を除去する処理ステップである。したがって、タンパク質の凍結ストレスおよび脱水ストレスを防ぐため、フリーズドライの間のタンパク質安定性を増強するため、および／または保管の間の凍結乾燥生成物の安定性を向上させるために、賦形剤および他の製剤成分の適切な選択が必要である。

本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質について、安定な凍結乾燥製剤が、緩衝剤、安定剤、充填剤、および／または界面活性剤の組み合わせを用いて調製され得るという発見を包含する。したがって、本発明は、とりわけ、凍結乾燥された小モジュール免疫薬タンパク質を含有する安定な製剤を提供する。

１つの態様において、本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質の凍結乾燥混合物を含有する製剤を提供する。いくつかの実施形態において、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、または０．５％未満の凍結乾燥された小モジュール免疫薬タンパク質が、凝集形態で存在する。特定の実施形態において、２〜８℃で少なくとも１ヶ月間、３ヶ月間、６ヶ月間、１年間、または２年間にわたる保管の際に、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、または０．５％未満の凍結乾燥された小モジュール免疫薬タンパク質が、凝集形態で存在する。特定の実施形態において、２５℃または室温で少なくとも１ヶ月間、３ヶ月間、６ヶ月間、１年間、または２年間にわたる保管の際に、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、または０．５％未満の凍結乾燥された小モジュール免疫薬タンパク質が、凝集形態で存在する。特定の実施形態において、４０℃で少なくとも２週間、１ヶ月間、３ヶ月間、または６ヶ月間にわたる保管の際に、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、または０．５％未満の凍結乾燥された小モジュール免疫薬タンパク質が、凝集形態で存在する。

いくつかの実施形態において、本発明に従う製剤は、充填剤、安定剤、および／または緩衝剤を含有する。いくつかの実施形態において、本発明に適した充填剤は、ショ糖、マンニトール、グリシン、塩化ナトリウム、デキストラン、トレハロース、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、本発明に適した緩衝剤は、ヒスチジン、酢酸ナトリウム、クエン酸、リン酸、コハク酸、トリス、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、本発明に適した安定剤は、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、グリシン、トレハロース、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、本発明の製剤はさらに等張剤を含む。いくつかの実施形態において、本発明に適した等張剤は、グリシン、ソルビトール、ショ糖、マンニトール、塩化ナトリウム、デキストロース、アルギニン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、本発明の製剤は、非還元糖を含む。いくつかの実施形態において、非還元糖は、ショ糖またはトレハロースである。いくつかの実施形態において、小モジュール免疫薬タンパク質に対する非還元糖の質量比は、約０．１：１、０．２：１、０．２５：１、０．４：１、０．５：１、１：１、２：１、２．６：１、３：１、４：１、または５：１である。

いくつかの実施形態において、本発明の製剤はさらに界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、本発明に適した界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー、トリトン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。

特定の実施形態において、本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質、ショ糖、ヒスチジン、およびポリソルベート８０の凍結乾燥混合物を含む製剤を提供する。特定の実施形態において、本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質、ショ糖、マンニトール、ならびにヒスチジンおよび／または酢酸ナトリウムから選択される緩衝剤の凍結乾燥混合物を含む製剤を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明の製剤における、ショ糖に対するマンニトールの質量比は、約０．１：１、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、または１０：１である。

いくつかの実施形態において、本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質、ショ糖、グリシン、および酢酸ナトリウムの凍結乾燥混合物を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明の独創的な製剤は、ＣＤ２０を特異的に標的化する結合ドメインを含む小モジュール免疫薬タンパク質を含有する。いくつかの実施形態において、小モジュール免疫薬タンパク質は、配列番号１〜５９および６７〜７６のいずれか１つに対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。

様々な実施形態において、本発明に従う、凍結乾燥された小モジュール免疫薬タンパク質は、保管の間に、例えば２〜８℃（例えば５℃）または室温（例えば２５℃）での保管の間に安定である。

小モジュール免疫薬タンパク質、ショ糖、ヒスチジン、およびポリソルベート８０の凍結乾燥混合物を包含する製剤。

別の態様において、本発明は、本明細書において記載される凍結乾燥製剤の再構成された製剤を提供する。いくつかの実施形態において、再構成された製剤は、希釈剤と、約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌ（例えば、約２５ｍｇ／ｍｌから約２００ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌから約２００ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌから約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌから約２５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌから約３００ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌ、約３００ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌ）の範囲の濃度の小モジュール免疫薬タンパク質とを含む。いくつかの実施形態において、再構成された製剤は、希釈剤と、およそ２５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１２５ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、１７５ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、３００ｍｇ／ｍｌ、３５０ｍｇ／ｍｌ、または４００ｍｇ／ｍｌの濃度の小モジュール免疫薬タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態において、再構成された製剤は、静脈内投与、皮下投与、または筋肉内投与のためのものである。

本発明はまた、本発明の再構成された製剤を投与することによって患者を治療するための方法、および、本発明の凍結乾燥製剤を保持する容器を含むキットまたは他の製品を提供する。

さらに別の態様において、本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質、非還元糖、および緩衝剤を包含する、凍結乾燥のための製剤を提供する。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、酢酸ナトリウムまたはヒスチジンから選択される。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、およそ５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、または３０ｍＭの濃度である。いくつかの実施形態において、ヒスチジンは、およそ５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、または３０ｍＭの濃度である。

いくつかの実施形態において、製剤はさらにマンニトール含む。いくつかの実施形態において、製剤はさらにメチオニンを含む。いくつかの実施形態において、メチオニンはおよそ１０ｍＭの濃度である。いくつかの実施形態において、非還元糖はショ糖である。いくつかの実施形態において、ショ糖は、およそ０．５％から１５％の間の範囲の濃度（例えば、およそ１％から１０％の間、５％から１５％の間、５％から１０％の間）である。いくつかの実施形態において、ショ糖はおよそ５％の濃度である。いくつかの実施形態において、適切な製剤は、およそ１０％の濃度のショ糖およびおよそ２０ｍＭの濃度のヒスチジンを含有する。いくつかの実施形態において、小モジュール免疫薬タンパク質に対する非還元糖の質量比は、約０．１：１、０．２：１、０．２５：１、０．４：１、０．５：１、１：１、２：１、２．６：１、３：１、４：１、または５：１である。

いくつかの実施形態において、凍結乾燥のための適切な製剤はさらに等張剤を含む。いくつかの実施形態において、等張剤は、グリシン、ソルビトール、ショ糖、マンニトール、塩化ナトリウム、デキストロース、および／またはアルギニンである。いくつかの実施形態において、凍結乾燥のための適切な製剤はさらに界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、適切な界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー、および／またはトリトンである。

様々な実施形態において、本発明に従う凍結乾燥のための製剤は、約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌ（例えば、約２５ｍｇ／ｍｌから約２００ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌから約２００ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌから約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌから約２５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌから約３００ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌ、約３００ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌ）の範囲の濃度の小モジュール免疫薬タンパク質を含有する。いくつかの実施形態において、本発明に従う凍結乾燥のための製剤は、およそ２５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１２５ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、１７５ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、３００ｍｇ／ｍｌ、３５０ｍｇ／ｍｌ、または４００ｍｇ／ｍｌの濃度の小モジュール免疫薬タンパク質を含有する。

いくつかの実施形態において、本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質、およそ５％から１０％の間の範囲の濃度のショ糖、およそ１０ｍＭから２０ｍＭの間の範囲の濃度のヒスチジン、およびおよそ０．００１％から０．１％の間の範囲の濃度のポリソルベート８０を含有する、凍結乾燥のための製剤を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、およそ２５ｍｇ／ｍｌの濃度の小モジュール免疫薬タンパク質、およそ６．５％の濃度のショ糖、およそ５０ｍＭの濃度のグリシン、およびおよそ２０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムを含有する、凍結乾燥のための製剤を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、およそ５０ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの間の範囲の濃度の小モジュール免疫薬タンパク質、およそ２０ｍＭの濃度のヒスチジン、およそ４％の濃度のマンニトール、およびおよそ１％の濃度のショ糖を含有する、凍結乾燥のための製剤を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、およそ１００ｍｇ／ｍｌの濃度の小モジュール免疫薬タンパク質、およそ１０％の濃度のショ糖、およそ２０ｍＭの濃度のヒスチジン、およそ０．０１％の濃度のポリソルベート８０を含有する、凍結乾燥のための製剤を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、およそ１００ｍｇ／ｍｌの濃度の小モジュール免疫薬タンパク質、およそ５％の濃度のショ糖、およそ１％の濃度のグリシン、およそ２０ｍＭの濃度のヒスチジン、およそ０．０１％の濃度のポリソルベート８０を含有する、凍結乾燥のための製剤を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、およそ１００ｍｇ／ｍｌの濃度の小モジュール免疫薬タンパク質、およそ５％の濃度のショ糖、およそ２．４％の濃度のソルビトール、およそ２０ｍＭの濃度のヒスチジン、およそ０．０１％の濃度のポリソルベート８０を含有する、凍結乾燥のための製剤を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、およそ２００ｍｇ／ｍｌの濃度の小モジュール免疫薬タンパク質、５％から１０％の間の範囲の濃度のショ糖、およそ２０ｍＭの濃度のヒスチジン、およそ０．０１％の濃度のポリソルベート８０を含有する、凍結乾燥のための製剤を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質、およそ５％の濃度のショ糖、およそ１０ｍＭの濃度のヒスチジン、およそ１０ｍＭの濃度のメチオニン、およびおよそ０．０１％の濃度のポリソルベート８０を含有する、凍結乾燥のための製剤を提供する。

いくつかの実施形態において、製剤は、およそ５．０からおよそ７．０の範囲のｐＨを有する。

いくつかの実施形態において、製剤は６．０のｐＨを有する。

様々な実施形態において、本発明に従う凍結乾燥のための製剤は、ＣＤ２０を特異的に標的化する結合ドメインを含有する小モジュール免疫薬タンパク質を含む。特定の実施形態において、小モジュール免疫薬タンパク質は、配列番号１〜５９および６７〜７６のいずれか１つに対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。

さらに別の態様において、本発明は、小モジュール免疫薬タンパク質を含有する製剤を凍結乾燥する工程、および凍結乾燥された製剤を室温以下の温度で保管する工程を含む、小モジュール免疫薬タンパク質を保管する方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明の独創的な方法は、ＣＤ２０を特異的に標的化する結合ドメインを含有する小モジュール免疫薬タンパク質を保管するために利用される。特定の実施形態において、小モジュール免疫薬タンパク質は、配列番号１〜５９および６７〜７６のいずれか１つに対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、本発明の方法は、凍結乾燥製剤を約２〜８℃（例えば５℃）の温度で保管する工程を含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、凍結乾燥された製剤をほぼ室温で保管する工程を含む。

本発明はまた、本明細書において記載される方法および／または製剤を用いて凍結乾燥および／または保管された小モジュール免疫薬タンパク質を提供する。

この出願において用いられる場合、「約」および「およそ」という用語は、同等のものとして用いられる。約／およそを伴う、または伴わない、この出願において用いられる任意の数字には、当業者によって認められる任意の通常の変動幅が含まれることが意味される。例えば、目的の値の通常の変動幅は、別段の記載がない限り、または文脈から別途明らかでない限り、記載された参照値のいずれかの方向に（超または未満）２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以内、またはそれ未満以内にある値の範囲を含み得る（このような数字が、考えられる値の１００％を超える場合を除く）。

本発明の他の特徴、目的、および利点は、以下の詳細な説明において明らかとなる。しかし、詳細な説明は、本発明の実施形態を示すものであるが、例示の目的のみで設けられるものであり、限定の目的ではないことを理解されたい。本発明の範囲内の様々な変更および修正は、詳細な説明から当業者に明らかとなろう。

図面は、例示を目的としたものであり、限定を目的としたものではない。

例示的な小モジュール免疫薬タンパク質（ＳＭＩＰ（商標））の構造を示す図である。 Ｈｕｌｌ（Ｈｕｌｌ Ｃｏ．／ＳＰ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｗａｒｍｉｎｓｔｅｒ、ＰＡ）臨床用凍結乾燥機において行われた、酢酸塩−グリシン−ショ糖（「ＡＧＳ」）製剤中の２５ｍｇ／ｍｌのタンパク質についての例示的な凍結乾燥サイクルを示す図である。充填容積は、１０ｍｌのチュービングバイアル内に４ｍｌである。 酢酸塩−マンニトール−ショ糖（「ＡＭＳ」）緩衝液およびヒスチジン−マンニトール−ショ糖（「ＨＭＳ」）緩衝液中の２５ｍｇ／ｍｌのタンパク質についての例示的な凍結乾燥サイクルを示す図である。サイクルは、Ｇｅｎｅｓｉｓ（ＶｉｒＴｉｓ／ＳＰ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｇａｒｄｉｎｅｒ、ＮＹ）実験室用凍結乾燥機で行った。充填容積は、１０ｍｌのバイアル内に４ｍｌである。 ＨＭＳ緩衝液中の５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質についての例示的な凍結乾燥サイクルを示す図である。サイクルは、実験室用のＧｅｎｅｓｉｓ（ＶｉｒＴｉｓ／ＳＰ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｇａｒｄｉｎｅｒ、ＮＹ）凍結乾燥機で行った。充填容積は、１０ｍｌのバイアル内に４ｍｌである。 ＨＭＳ製剤中のマンニトールの結晶化に対するタンパク質濃度の効果を示す例示的なデータを示す図である。マンニトールの結晶化のピークは、最大８９ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度で−６０℃から−１０℃までの傾きの間に見ることができる。９６から１１５ｍｇ／ｍｌの間のタンパク質濃度では、マンニトールの結晶化は、−１０℃での定温保持の間でのみ生じる。 ＨＭＳ緩衝液中の１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質についての例示的なフリーズドライサイクルを示す図である。 １０％ショ糖製剤、５％ショ糖＋１％グリシン製剤、５％ショ糖＋２．４％ソルビトール製剤中の１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質についての、例示的な凍結乾燥サイクルを示す図である。全ての製剤は、２０ｍＭのヒスチジンを含有する。 １０％ショ糖＋２０ｍＭヒスチジン緩衝液中の１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質の例示的な再構成を示す図である。水注入の時間は、およそ３０秒間であった。３分間持続的に回転させて、固体を溶解させた。３０秒未満で、溶液から発泡を取り除いた。 ５％ショ糖＋１％グリシン＋２０ｍＭヒスチジン緩衝液中の１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質の例示的な再構成を示す図である。水注入の時間は、およそ３０秒間であった。注入の後、水は、錠剤内部に可視的に浸透することなく、塊の上部に留まった。少なくとも９分間持続的に回転させて、固体を溶解させた。溶解の間に発泡は検出されなかった。 ５％ショ糖＋２．４％ソルビトール＋２０ｍＭヒスチジン緩衝液中の１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質の例示的な再構成を示す図である。水注入の時間は、およそ３０秒間であった。注入の後、水は、錠剤内部に可視的に浸透することなく、塊の上部に留まった。少なくとも９分間持続的に回転させて、固体を溶解させた。溶解の間に発泡は検出されなかった。 ５％ショ糖、１０ｍＭのヒスチジン、０．０１％ポリソルベート８０内に低濃度のショ糖および２００ｍｇ／ｍｌのタンパク質を有する製剤についての、例示的な凍結乾燥サイクルのトレースを示す図である。 １０％ショ糖、１０ｍＭのヒスチジン、０．０１％ポリソルベート８０内に２００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する製剤についての、例示的な凍結乾燥サイクルのトレースを示す図である。 ２００ｍｇ／ｍｌのタンパク質を含有する製剤中の低（５％）および高（１０％）ショ糖の例示的な塊の外観を示す図である。 タンパク質についての例示的な凍結乾燥サイクル（基準サイクル）を示す図である。 凍結乾燥タンパク質の例示的な塊の外観を示す図である。 凍結乾燥タンパク質の示差走査熱量計（ＤＳＣ）スキャンを示す図である。傾きの速度は２℃／分であり、１００秒ごとに±０．５℃調節した。 加速温度でのタンパク質液の安定性に対するｐＨおよび賦形剤の効果を示す図である。 タンパク質についての例示的なロバスト性試験：高水分でのサイクルを示す図である。 タンパク質についての例示的なロバスト性試験：「活発なサイクル」番号４を示す図である。 凍結乾燥タンパク質材料：無傷の塊（基準サイクル、左のバイアル）に対して塊の半分が崩壊したもの（活発なサイクル番号４、右のバイアル）についての、塊の外観の例示的な比較を示す図である。 「活発な」サイクル番号１（表１５）を用いて凍結乾燥されたタンパク質乾燥粉末のＤＳＣスキャンを示す図である。傾きの速度は、２℃／分であり、１００秒ごとに±０．５℃調節した。可逆的シグナル（緑）における基準のずれはガラス転移に相当し、一方、非可逆的シグナル（青）での発熱現象は、製剤成分の一部の明らかな結晶化に相当する。

本発明は、とりわけ、緩衝剤、安定剤、充填剤、界面活性剤、および／または他の賦形剤の組み合わせに基づく、小モジュール免疫薬（ＳＭＩＰ（商標））タンパク質のための凍結乾燥製剤を提供する。本発明に従う凍結乾燥製剤は、タンパク質の凍結ストレスおよび脱水ストレスを防ぎ、フリーズドライの間のタンパク質の安定性を保存もしくは増強し、ならびに／または保管の間の凍結乾燥生成物の安定性を保存し、もしくは向上させる。本発明はまた、安定な凍結乾燥製剤を調製する方法および前記凍結乾燥製剤の使用を提供する。

本発明の様々な態様は、以下の節において詳細に記載される。節の使用は、本発明を限定することを意図したものではない。各節は、本発明の任意の態様に適用され得る。この出願において、「または」の使用は、別段の記載がない限り、「および／または」を意味する。

小モジュール免疫薬
本明細書において用いられる場合、小モジュール免疫薬（ＳＭＩＰ（商標））タンパク質は、結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジ領域またはそれに由来するドメイン、免疫グロブリン重鎖Ｃ_Ｈ２定常領域またはそれに由来するドメイン、および免疫グロブリン重鎖Ｃ_Ｈ３定常領域またはそれに由来するドメインという融合ドメインの１つまたは複数を含有するタンパク質を言う。ＳＭＩＰ（商標）タンパク質治療薬は、好ましくは単一特異的である（すなわち、それらは、単一の抗原標的を認識しそれに付着して、生物学的活性を開始する）。本発明はまた、ＳＭＩＰ（商標）タンパク質を組み込み、分子のＣ末端からＳＭＩＰ（商標）タンパク質部分までに位置するさらなる結合ドメインも有する、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（商標）治療薬などの、多特異性分子および／または多価分子にも関する。好ましくは、ＳＣＯＲＰＩＯＮ治療薬の結合ドメインはそれぞれ、異なる標的に結合する。本発明に適した小モジュール免疫薬のドメインは、ヒト遺伝子配列の生成物であるポリペプチド、遺伝子操作されたポリペプチドおよび／もしくは突然変異したポリペプチドを含む任意の他の天然のもしくは人工の由来源の生成物であるポリペプチドであるか、または前記ポリペプチドに由来する。小モジュール免疫薬はまた、結合ドメイン−免疫グロブリン融合タンパク質としても知られている。

いくつかの実施形態において、ＳＭＩＰ（商標）に適したヒンジ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥなどの免疫グロブリンに由来する。例えば、ヒンジ領域は、０個、１個、または２個のシステイン残基を有する突然変異ＩｇＧ１ヒンジ領域ポリペプチドであり得る。

ＳＭＩＰ（商標）に適した結合ドメインは、抗原、受容体（例えば、ＣＤ２０）、または２つ以上の分子の複合体もしくは集合体もしくは凝集体などの同族生物学的分子を特異的に認識しそれに結合する能力を有する、任意のポリペプチドであり得る。

結合ドメインは、それが目的の抗原または他の所望の標的構造に特異的に結合することができるという条件で、重鎖または軽鎖のＶ領域の全てまたは一部または断片などの少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域ポリペプチドを含み得る。他の実施形態において、結合ドメインは、一本鎖免疫グロブリンに由来するＦｖ生成物を含んでもよく、これは、少なくとも１つの免疫グロブリン軽鎖Ｖ領域の全てまたは一部および少なくとも１つの免疫グロブリン重鎖Ｖ領域の全てまたは一部を含んでもよく、Ｖ領域に融合しているリンカーをさらに包含する。

本発明は、様々な小モジュール免疫薬に適用することができる。典型的な小モジュール免疫薬は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、およびＣＤ３４などの受容体または他のタンパク質；ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２受容体、ＨＥＲ３受容体、もしくはＨＥＲ４受容体などのＨＥＲ受容体ファミリーの構成員；ＬＦＡ−１、Ｍｏ１、ｐ１５０、ｐ９５、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ、成長因子、例えばＶＥＧＦなどの細胞接着分子；ＩｇＥ；血液型抗原；ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；タンパク質Ｃ；ＥＧＦＲ、ＲＡＧＥ、Ｐ４０、Ｄｋｋ１、ＮＯＴＣＨ１、ＩＬ−１３、ＩＬ−２１、ＩＬ−４、およびＩＬ−２２などを標的化し得る。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＣＤ２０を特異的に認識する小モジュール免疫薬を凍結乾燥または保管するために利用される。ＣＤ２０を特異的に結合する典型的な小モジュール免疫薬タンパク質を、図１に示す。図１に示されるように、抗ＣＤ２０ ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、典型的には、（１）１５個のアミノ酸からなるリンカーによって連結されている重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変断片を含むキメラ（マウス／ヒト）ＣＤ２０結合ドメイン、（２）修飾ヒトＩｇＧ１ヒンジドメイン、ならびに（３）ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインからなるＩｇＧエフェクタードメインという３つの異なるドメインからなる組換えホモ二量体融合タンパク質である（図１を参照されたい）。

典型的には、ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、予想される鎖間ジスルフィド結合で連結された共有結合型のホモ二量体（ＣＤ）である主要な形態、および鎖間ジスルフィド結合を有さないホモ二量体形態（解離性二量体、ＤＤ）という、異なる様式で会合している２つのホモ二量体形態で存在し得る。解離性二量体は、通常、完全に活性である。典型的には、二量体は、およそ１０６０００ダルトンの理論上の分子量を有する。ＳＭＩＰ（商標）タンパク質はまた、多価複合体も形成し得る。

典型的には、ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、糖タンパク質として存在する。例えば、図１に示されるように、抗ＣＤ２０ ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、各タンパク質鎖のＣＨ２ドメインの、Ｎに連結したグリコシル化コンセンサス配列（例えば、^３２７ＮＳＴ）で、オリゴ糖によって修飾されていてもよい（図１を参照されたい）。ＳＭＩＰ（商標）タンパク質はまた、各鎖上に、核フコシル化型アシアロアガラクト二分岐Ｎ連結型オリゴ糖（Ｇ０Ｆ）；ＣＯＯＨ末端のＧｌｙ^４７６、およびＮＨ２末端のピログルタメートを含有し得る。２つの少数の糖形態であるＧ１Ｆ／Ｇ０ＦおよびＧ１Ｆ／Ｇ１Ｆ、ならびに他の期待される微量レベルのＮ連結型糖形態もまた存在し得る。さらに、低レベルのコア１型Ｏ−グリカン修飾もまた、ＳＭＩＰ（商標）タンパク質のヒンジ領域において観察される。

いくつかの実施形態において、ＳＭＩＰ（商標）タンパク質の等電点（ｐＩまたはＩＥＰ）は、およそ７．０から９．０の範囲である（例えば、７．２、７．４、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８）。

本発明は、本明細書において論じられる様々な形態（例えば、単量体ポリペプチド、ホモ二量体、解離性二量体、または多価複合体）でＳＭＩＰ（商標）タンパク質を製剤化するために用いられ得る。本発明は、ヒト化ＳＭＩＰ（商標）タンパク質またはキメラＳＭＩＰ（商標）タンパク質などの、様々な修飾ＳＭＩＰ（商標）タンパク質を製剤化するために用いられ得る。本明細書において用いられる場合、「ヒト化ＳＭＩＰ（商標）タンパク質」という用語は、少なくとも１つのヒト化免疫グロブリン領域（例えば、ヒト化免疫グロブリン可変領域または定常領域）を含むＳＭＩＰ（商標）タンパク質を言う。いくつかの実施形態において、ヒト化ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、ヒト免疫グロブリン（例えば、完全にヒトのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）に実質的に由来するが標的特異的な１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、少なくとも１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲ、または３つのＣＤＲ）を維持している可変フレームワーク領域を含む、ヒト化可変領域を包含する。いくつかの実施形態において、ヒト化ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、１つまたは複数のヒト定常領域またはヒト化定常領域（例えば、ヒト免疫グロブリンＣ_Ｈ２ドメインおよび／またはＣ_Ｈ３ドメイン）を包含する。「実質的にヒト免疫グロブリンまたはヒト抗体由来の」または「実質的にヒトの」という用語は、比較の目的でヒト免疫グロブリンまたはヒト抗体のアミノ酸配列にアラインすると、その領域が、ヒトフレームワーク領域または定常領域の配列と少なくとも８０〜９０％、好ましくは９０〜９５％、より好ましくは９５〜９９％の同一性（すなわち、局所的な配列同一性）を有し、例えば保存的置換、コンセンサス配列の置換、生殖細胞系の置換、復帰突然変異などを可能にすることを意味する。本明細書において用いられる場合、「キメラＳＭＩＰ（商標）タンパク質」という用語は、可変領域が第１の種に由来し定常領域が第２の種に由来するＳＭＩＰ（商標）タンパク質を言う。キメラＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから、例えば遺伝子操作によって、構築することができる。ヒト化ＳＭＩＰ（商標）タンパク質およびキメラＳＭＩＰ（商標）タンパク質はさらに、参照によって本明細書に組み込まれる国際出願公開ＷＯ２００８／１５６７１３において記載されている。

本発明はまた、エフェクター機能を改変する、修飾されたグリコシル化パターンならびに／またはヒンジドメイン、Ｃ_Ｈ２ドメイン、および／もしくはＣ_Ｈ３ドメインに対する突然変異を有するＳＭＩＰ（商標）タンパク質を製剤化するために用いられ得る。いくつかの実施形態において、ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、受容体の結合に対する親和性に影響する、ヒンジ連結領域における隣接部位または近接部位に対する突然変異を含有し得る。さらに、本発明は、小モジュール免疫薬ポリペプチドまたはその一部を含む融合タンパク質の製剤に用いられ得る。

いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列（典型的なＳＭＩＰ（商標）配列の節を参照されたい）またはその変異体を含むＳＭＩＰ（商標）タンパク質を製剤化するために用いられ得る。いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜５９のいずれか１つのアミノ酸配列またはその変異体を有する可変ドメインを含有するＳＭＩＰ（商標）タンパク質を製剤化するために用いられ得る。いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜５９のいずれか１つのアミノ酸配列もしくはその変異体を有する可変ドメイン、配列番号６０〜６４のいずれか１つのアミノ酸配列もしくはその変異体を有するヒンジ領域、および／または配列番号６５もしくは６６のアミノ酸配列もしくはその変異体を有する免疫グロブリン定常領域を含有するＳＭＩＰ（商標）タンパク質を製剤化するために用いられ得る。いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列またはその変異体を有するＳＭＩＰ（商標）タンパク質を製剤化するために用いられ得る。

本明細書において用いられる場合、親配列の変異体には、限定はしないが、親配列に少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一なアミノ酸配列が含まれる。２つのアミノ酸配列の同一性パーセントは、視覚的検査および数学的計算によって決定され得るか、またはより好ましくは、比較は、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ；Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．），Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎパッケージバージョン１０．０プログラム、「ＧＡＰ」（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、１９８４、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：３８７）などのコンピュータプログラムもしくは他の同等のコンピュータプログラムを用いて配列情報を比較することによって行われる。「ＧＡＰ」プログラムのための好ましいデフォルトのパラメータには、（１）ＳｃｈｗａｒｔｚおよびＤａｙｈｏｆｆ編、Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、３５３〜３５８頁（１９７９）によって記載されている、ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＢｕｒｇｅｓｓ（（１９８６）、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：６７４５）の重み付けされたアミノ酸比較マトリクス、または他の同等の比較マトリクス、（２）アミノ酸配列では、各ギャップにつき３０のペナルティーおよび各ギャップ内の各記号につき１の追加ペナルティー、（３）末端ギャップについてはペナルティーなし、ならびに（４）長いギャップについては最大ペナルティーなし、が含まれる。当業者によって用いられる他の配列比較のプログラムもまた用いられ得る。

さらなる小モジュール免疫薬はさらに、例えば米国特許公開第２００３０１３３９３９号、米国特許公開第２００３０１１８５９２号、米国特許公開第２００４００５８４４５号、米国特許公開第２００５０１３６０４９号、米国特許公開第２００５０１７５６１４号、米国特許公開第２００５０１８０９７０号、米国特許公開第２００５０１８６２１６号、米国特許公開第２００５０２０２０１２号、米国特許公開第２００５０２０２０２３号、米国特許公開第２００５０２０２０２８号、米国特許公開第２００５０２０２５３４号、米国特許公開第２００５０２３８６４６号、および米国特許公開第２００８０２１３２７３号、国際特許公開ＷＯ０２／０５６９１０、国際特許公開ＷＯ２００５／０３７９８９、および国際特許公開ＷＯ２００５／０１７１４８において記載されており、これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる。

小モジュール免疫薬のための凍結乾燥製剤
凍結乾燥またはフリーズドライは、目的のタンパク質調製物から水を除去するために役立つ、タンパク質を保存するために一般に採用される技術である。凍結乾燥は、乾燥したい材料をまず凍結し、次に、氷または凍結した溶媒を真空環境において昇華させることによって取り除くプロセスである。

凍結乾燥は通常、凍結、一次乾燥、および二次乾燥という３つの主要な段階を含む。凍結は、水を氷に、または、一部の非晶質の製剤成分を結晶形態に変換するために必要である。一次乾燥は、低圧および低温での直接的な昇華によって凍結生成物から氷を除去する処理ステップである。二次乾燥は、蒸発表面への残留水の拡散を利用して生成物マトリクスから結合水を除去する処理ステップである。二次乾燥の間の生成物の温度は、通常、一次乾燥の間よりも高い。Ｔａｎｇ Ｘ．ら、（２００４）「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｆｏｒ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｄｖｉｃｅ」Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．、２１：１９１〜２００；Ｎａｉｌ Ｓ．Ｌ．ら（２００２）「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ」ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．Ｎａｉｌ ＳＬ編、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ／Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、２８１〜３５３頁；Ｗａｎｇら（２０００）「Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ」Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、２０３：１〜６０、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＮＡら（１９８４）「Ｔｈｅ ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ａ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗ．」Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．、３８：４８〜５９を参照されたい。

凍結乾燥プロセスを通して温度および圧力が変化するため、賦形剤または他の成分、例えば安定剤、緩衝剤、充填剤、および界面活性剤の適切な選択が、フリーズドライおよび保管の間のＳＭＩＰ（商標）の分解（例えば、タンパク質の凝集、アミド分解、および／または酸化）を防ぐために必要である。

したがって、本発明は、安定剤、緩衝剤、充填剤、および／または他の賦形剤の組み合わせに基づく、ＳＭＩＰ（商標）を含有する安定な凍結乾燥製剤を提供する。本明細書において用いられる場合、「安定な」製剤は、その中のタンパク質が凍結乾燥の間および保管の際にその物理的および化学的な安定性および完全性を本質的に保持している製剤である。タンパク質の安定性を測定するための様々な分析技術が、当技術分野で利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７〜３０１、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）、およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９〜９０（１９９３）において概説されている。安定性は、選択された温度（例えば、０℃、５℃、２５℃（室温）、３０℃、４０℃）で選択された期間（例えば、２週間、１ヶ月間、１．５ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、１２ヶ月間、１８ヶ月間、２４ヶ月間など）にわたる保管の後に測定することができる。迅速なスクリーニングでは、製剤は、４０℃で２週間から１ヶ月間にわたり保持され、この時点で安定性が測定される。製剤が２〜８℃で保管される場合、通常、製剤は２５℃（すなわち、室温）もしくは４０℃で少なくとも１ヶ月間にわたり安定であるべきであり、および／または２〜８℃で少なくとも３ヶ月間、６ヶ月間、１年間、もしくは２年間にわたり安定であるべきである。製剤が３０℃で保管される場合、通常、製剤は３０℃で少なくとも３ヶ月間、６ヶ月間、１年間、もしくは２年間にわたり安定であるべきであり、および／または４０℃で少なくとも２週間、１ヶ月間、３ヶ月間、もしくは６ヶ月間にわたり安定であるべきである。いくつかの実施形態において、凍結乾燥および保管の後の凝集の程度を、タンパク質の安定性の指標として用いることができる（例えば、本明細書における実施例を参照されたい）。本明細書において用いられる場合、「高分子量（「ＨＭＷ」）凝集体」という用語は、少なくとも２つのタンパク質単量体の会合体を言う。本発明の目的では、単量体は、目的のタンパク質の任意の生物学的に活性な形態の、単一の単位を言う。例えば、小モジュール免疫薬タンパク質の単量体は、単量体ポリペプチド、またはホモ二量体、または解離性二量体、またはＳＭＩＰ（商標）タンパク質の１単位の多価複合体であってもよい。会合は、共有結合、非共有結合、ジスルフィド結合、非還元性架橋、または他のメカニズムによるものであってもよい。

例えば、「安定な」製剤は、タンパク質の約１０％未満（例えば、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％未満）、好ましくは約５％未満（例えば、４％、３％、２％、１％、０．５％未満）が製剤中で凝集体として存在している製剤（高分子量種（「ＨＭＷ」）とも呼ばれる）であり得る。いくつかの実施形態において、安定性は、凍結乾燥製剤の凍結乾燥および保管の後の凝集体形成の増大によって測定することができる。例えば、「安定な」凍結乾燥製剤は、凍結乾燥製剤を２５℃（すなわち、室温）もしくは４０℃で少なくとも２週間、１ヶ月間、３ヶ月間、もしくは６ヶ月間にわたり保管した場合、または２〜８℃で少なくとも３ヶ月間、６ヶ月間、１年間、もしくは２年間にわたり保管した場合に、凍結乾燥製剤における凝集体の増大が約５％未満（例えば、４％、３％、２％、１％、０．５％未満）であり、好ましくは約３％未満（例えば、２％、１％、０．５％、０．２％、０．１％未満）である製剤であり得る。凝集体またはＨＭＷ種は、限定はしないがサイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、陽イオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、多角度光散乱（ＭＡＬＳ）、蛍光、紫外線吸収、比濁法、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、およびそれらの組み合わせを含む、当技術分野において知られている方法を用いて分析することができる。

いくつかの実施形態において、タンパク質製剤の安定性は、生物学的活性アッセイを用いて測定することができる。例えば、「安定な」製剤は、選択された温度（例えば、０℃、５℃、２５℃（室温）、３０℃、４０℃）で選択された期間（例えば、２週間、１ヶ月間、１．５ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、１２ヶ月間、１８ヶ月間、２４ヶ月間など）にわたる凍結乾燥または保管の後に元のタンパク質の活性を８０％（例えば、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、または９９％）保持する製剤であり得る。ＳＭＩＰ（商標）の生物学的活性アッセイは、当技術分野において知られている。典型的な方法は、米国特許公開第２００３０１３３９３９号、米国特許公開第２００３０１１８５９２号、米国特許公開第２００５０１３６０４９号、および米国特許公開第２００８０２１３２７３号、国際特許公開ＷＯ０２／０５６９１０、国際特許公開ＷＯ２００５／０３７９８９、および国際特許公開ＷＯ２００５／０１７１４８において記載されており、これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる。

製剤の調製
製剤化されるＳＭＩＰ（商標）は、限定はしないが組換え技術およびペプチド合成またはこれらの技術の組み合わせを含む、当技術分野において良く確立されている技術を用いて調製することができる。ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、限定はしないが、生成物を生産する組換え細胞、細菌、真菌細胞、昆虫細胞、トランスジェニック植物もしくはトランスジェニック植物細胞、トランスジェニック動物もしくはトランスジェニック動物細胞、または動物の血清、腹水、ハイブリドーマもしくは骨髄腫の上清を含む、任意のインビボまたはインビトロのタンパク質発現系から得ることができる。適切な細菌細胞には、限定はしないが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）細胞が含まれる。適切な大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株の例には、ＨＢ１０１、ＤＨ５α、ＧＭ２９２９、ＪＭ１０９、ＫＷ２５１、ＮＭ５３８、ＮＭ５３９、および外来ＤＮＡを切断することができない任意の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株が含まれる。用いられ得る適切な真菌宿主細胞には、限定はしないが、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、およびアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）の細胞が含まれる。適切な昆虫細胞には、限定はしないが、Ｓ２ Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ細胞、Ｄ．Ｍｅｌ−２細胞、ＳＦ９細胞、ＳＦ２１細胞、Ｈｉｇｈ−５（商標）細胞、Ｍｉｍｉｃ−ＳＦ９細胞、ＭＧ１細胞、およびＫＣ１細胞が含まれる。適切な典型的な組換え細胞系には、限定はしないが、ＢＡＬＢ／ｃマウス黒色腫系、ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６）、サル腎細胞、ヒト胎児腎臓系（２９３）、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、マウスセルトリ細胞、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ）、イヌ腎細胞、バッファローラット肝細胞、ヒト肺細胞、ヒト肝細胞、マウス乳腺腫瘍細胞、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、およびヒト肝細胞癌系（ＨｅｐＧ２）が含まれる。

ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、当技術分野において知られている様々なベクター（例えば、ウイルスベクター）を用いて発現させることができ、細胞は、当技術分野において知られている様々な条件（例えば、流加回分）下で培養することができる。タンパク質を生産するために細胞を遺伝子操作する様々な方法は、当技術分野において周知である。例えば、Ａｕｓａｂｅｌら編（１９９０）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照されたい。典型的な方法は、米国特許公開第２００３０１３３９３９号、米国特許公開第２００３０１１８５９２号、米国特許公開第２００５０１３６０４９号、および米国特許公開第２００８０２１３２７３号、国際特許公開ＷＯ０２／０５６９１０、国際特許公開ＷＯ２００５／０３７９８９、および国際特許公開ＷＯ２００５／０１７１４８において記載されており、これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる。

目的のＳＭＩＰ（商標）を調製した後、「凍結乾燥前製剤」（「凍結乾燥のための製剤」とも呼ばれる）を生産することができる。凍結乾燥前製剤中のＳＭＩＰ（商標）の量は、所望の用量容積、（１つまたは複数の）投与様式を考慮して決定される。

凍結乾燥のための適切な製剤は、様々な濃度の目的のＳＭＩＰ（商標）を含有し得る。いくつかの実施形態において、凍結乾燥に適した製剤は、約１ｍｇ／ｍｌから４００ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌから７０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌから８０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌから９０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌから１５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌから２００ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌから３５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌから４００ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌから３５０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌから４００ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌから２００ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌから２００ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌから１５０ｍｇ／ｍｌ）の範囲の濃度の目的のタンパク質を含有し得る。いくつかの実施形態において、凍結乾燥に適した製剤は、およそ２５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１２５ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、１７５ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、３００ｍｇ／ｍｌ、３５０ｍｇ／ｍｌ、または４００ｍｇ／ｍｌの濃度の目的のタンパク質を含有し得る。

タンパク質は、通常、溶液内に存在する。例えば、ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、ｐＨが約４〜８（例えば、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、および８．０）の、またいくつかの実施形態においては約５〜７の、ｐＨ緩衝された溶液中に存在し得る。典型的な緩衝液には、ヒスチジン、リン酸、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（「トリス」）、クエン酸、酢酸、酢酸ナトリウム、リン酸、コハク酸、および他の有機酸が含まれる。緩衝液の濃度は、例えば緩衝液、および製剤の（例えば、再構成された製剤の）所望の等張性に応じて、約１ｍＭから約３０ｍＭ、または約３ｍＭから約２０ｍＭであり得る。いくつかの実施形態において、適切な緩衝剤は、およそ１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、または５０ｍＭの濃度で存在する。

いくつかの実施形態において、凍結乾燥に適した製剤は、タンパク質を保護するための安定剤を含有し得る。安定剤はまた、凍結乾燥保護剤とも呼ばれる。典型的には、適切な安定剤は、ショ糖、ラフィノース、トレハロースなどの非還元糖、またはグリシン、アルギニン、およびメチオニンなどのアミノ酸である。凍結乾燥前製剤中の安定剤または凍結乾燥保護剤の量は、通常、再構成して得られる製剤が等張となるようなものである。しかし、高張の再構成された製剤もまた適している場合がある。さらに、凍結乾燥保護剤の量は、凍結乾燥の際にＳＭＩＰ（商標）の許容不可能な量の分解／凝集が生じるような、少なすぎるものであってはならない。凍結乾燥保護剤が糖（ショ糖またはトレハロースなど）であり、タンパク質がＳＭＩＰ（商標）である場合、凍結乾燥前製剤中の典型的な凍結乾燥保護剤濃度は、約１０ｍＭから約４００ｍＭ（例えば、約３０ｍＭから約３００ｍＭ、および約５０ｍＭから約１００ｍＭ）、または代替えとして、０．５重量％から１５重量％（例えば、１重量％から１０重量％、５重量％から１５重量％、５重量％から１０重量％）の範囲であり得る。いくつかの実施形態において、安定剤およびＳＭＩＰ（商標）の質量比は、約１：１である。他の実施形態において、安定剤およびＳＭＩＰ（商標）の質量比は、約０．１：１、０．２：１、０．２５：１、０．４：１、０．５：１、１：１、２：１、２．６：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、または２０：１であり得る。

いくつかの実施形態において、凍結乾燥のための適切な製剤はさらに、１つまたは複数の充填剤を含み得る。「充填剤」は、凍結乾燥混合物に質量を加え、凍結乾燥塊の物理的構造に寄与する化合物である。例えば、充填剤は、凍結乾燥塊の外観を向上させ得る（例えば、本質的に均一な凍結乾燥塊）。適切な充填剤には、限定はしないが、塩化ナトリウム、ラクトース、マンニトール、グリシン、ショ糖、トレハロース、ヒドロキシエチルデンプンが含まれる。充填剤の典型的な濃度は、約１％から約１０％（例えば、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％、５．５％、６．０％、６．５％、７．０％、７．５％、８．０％、８．５％、９．０％、９．５％、および１０．０％）である。

いくつかの実施形態において、凍結乾燥のための製剤は、凍結乾燥前製剤および再構成された製剤を等張に維持するための等張剤を含有する。典型的には、「等張」は、目的の製剤がヒトの血液と本質的に同一の浸透圧を有することを意味する。等張な製剤は、通常、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇから約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する。等張は、例えば蒸気圧型または凝固点型の浸透圧計を用いて、測定することができる。典型的な等張剤には、限定はしないが、グリシン、ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウム、およびアルギニンが含まれる。いくつかの実施形態において、適切な等張剤は、約０．０１〜５重量％（例えば、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．３、０．４、０．５、０．７５、１．０、１．２５、１．５、２．０、２．５、３．０、４．０、または５．０重量％）の濃度で凍結乾燥前製剤中に存在し得る。

いくつかの実施形態において、凍結乾燥のための製剤に界面活性剤を添加することが望ましい。典型的な界面活性剤には、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）などの非イオン性界面活性剤；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；トリトン；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム；ナトリウムオクチルグリコシド；ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、またはステアリルスルホベタイン；ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシン、またはステアリルサルコシン；リノネイルベタイン、ミリスチルベタイン、またはセチルベタイン；ラウロアミドプロピルベタイン、コカミドプロピルベタイン、リノールアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルミドプロピルベタイン、またはイソステアラミドプロピルベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタルニドプロピルジメチルアミン、パルミドプロピルジメチルアミン、またはイソステアラミドプロピルジメチルアミン；ココイルメチルタウリンナトリウムまたはメチルオフェイルタウリンジナトリウム；ならびにＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、およびエチレングリコールとプロピレングリコールとの共重合体（例えば、プルロニック、ＰＦ６８など）が含まれる。典型的には、添加される界面活性の量は、再構成されたタンパク質の凝集を低減させ、再構成後の粒子または発泡の形成を最少にするようなものである。例えば、界面活性剤は、約０．００１〜０．５％（例えば、約０．００５〜０．０５％または０．００５〜０．０１％）の濃度で、凍結乾燥前製剤中に存在し得る。特に、界面活性剤は、およそ０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、または０．５％などの濃度で、凍結乾燥前製剤中に存在し得る。代替として、またはさらに、界面活性剤は、凍結乾燥製剤および／または再構成された製剤に添加することができる。

特定の実施形態において、安定剤（ショ糖またはトレハロース）および充填剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）の混合物が、凍結乾燥前製剤の調製において用いられる。本発明の特定の実施形態において、安定剤（ショ糖またはトレハロースなど）、充填剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）、および界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）の混合物が、凍結乾燥前製剤の調製において用いられる。

Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．ら編（１９８０）において記載されているような、他の薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤を、これらが製剤の所望の特徴に悪影響を及ぼさない限り、凍結乾燥前製剤（および／または凍結乾燥製剤および／または再構成された製剤）に含めることができる。許容可能な担体、賦形剤、または安定剤は、採用される投薬量および濃度でレシピエントに対して無毒であり、限定はしないが、さらなる緩衝剤、保存料、共溶媒、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）、ポリエステルなどの生分解性ポリマー、ならびに／またはナトリウムなどの塩形成対イオンを含む。

本明細書において記載される製剤は、治療される特定の適応に適切なように２つ以上のタンパク質、好ましくは、他のタンパク質に悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するタンパク質を含有してもよい。

インビボでの投与に用いられる製剤は、無菌でなくてはならない。これは、凍結乾燥および再構成の前または後の、滅菌濾過膜を介する濾過によって、容易に達成される。

タンパク質、安定剤、および他の任意の成分を共に混合した後に、製剤を凍結乾燥する。この目的には、Ｈｕｌｌパイロットスケールドライヤー（ＳＰ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、ＵＳＡ）、Ｇｅｎｅｓｉｓ（ＳＰ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）実験室用フリーズドライヤー、または所与の凍結乾燥プロセスパラメータを制御し得る任意のフリーズドライヤーなどの、多くの異なるフリーズドライヤーが利用可能である。フリーズドライは、製剤を凍結し、その後、一次乾燥に適した温度で、凍結した内容物から氷を昇華させることによって達成される。最初の凍結によって、製剤は、典型的には約４時間以下（例えば、約３時間以下、約２．５時間以下、約２時間以下）で、約−２０℃未満（例えば、−５０℃、−４５℃、−４０℃、−３５℃、−３０℃、−２５℃など）の温度になる。この条件下で、生成物の温度は、典型的には、製剤の共晶点または崩壊温度より低い。典型的には、一次乾燥のための棚温度は、典型的には約２０から２５０ｍＴｏｒｒの範囲の適切な圧力で、約−３０から２５℃の範囲である（生成物が、一次乾燥の間に融点未満を維持する限り）。製剤、試料を保持する容器のサイズおよびタイプ（例えば、ガラスバイアル）、ならびに液体の容積は、数時間から数日間にわたり得る、乾燥に必要な時間を主に決定付ける。二次乾燥段階は約０〜６０℃で実施され、これは、採用される容器のタイプおよびサイズならびにＳＭＩＰ（商標）のタイプに主に依存する。ここでも、溶液の容積は、数時間から数日間にわたり得る、乾燥に必要な時間を主に決定付ける。

場合によって、アニーリングステップが、生成物の最初の凍結の間に導入されてもよい。アニーリングステップは、全体的なサイクル時間を低減させ得る。いかなる理論にも束縛されるものではないが、アニーリングステップは、賦形剤の、特にマンニトールの結晶化の促進を促すのに役立つことができ、これにより、製剤の残りの非晶質成分についてのガラス転移温度が上昇し、最高の棚温度が可能となると考えられる。アニーリングステップは、凍結の間の温度間隔または温度振動を含む。例えば、凍結温度は−４０℃未満であり得るが、アニーリングステップは、温度を例えば−１０℃まで上昇させ、この温度を一定期間にわたり維持する。アニーリングステップの時間は、０．５時間から８時間にわたり得る（例えば、０．５時間、１．０時間、１．５時間、２．０時間、２．５時間、３時間、４時間、６時間、および８時間）。アニーリング温度は、凍結温度から０℃の間であり得る。

本発明に従う凍結乾燥生成物は、生成物の品質分析、再構成時間、再構成の質、高い分子量、湿度、およびガラス転移温度に基づいて評価することができる。典型的には、タンパク質の質および乾燥生成物の分析は、限定はしないがサイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、陽イオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）、Ｘ線回折（ＸＲＤ）、変調示差走査熱量計（ｍＤＳＣ）、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、多角度光散乱（ＭＡＬＳ）、蛍光、紫外線吸収、比濁法、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、およびそれらの組み合わせを含む方法を用いる、生成物分解率の分析を含む。いくつかの実施形態において、本発明に従う凍結乾燥生成物の評価は、塊の外観を評価するステップを含む。しかし、いくつかの実施形態において、本発明に従う凍結乾燥生成物の評価は、塊の外観を評価するステップを含まない。

凍結乾燥は、試験管、袋、ボトル、トレー、バイアル（例えば、ガラスバイアル）、シリンジ、または任意の他の適切な容器などの容器内で行うことができる。容器は、使い捨てであってもよい。凍結乾燥または、大規模または小規模で行うことができる。いくつかの場合において、容器内でタンパク質製剤を凍結乾燥し、その中でタンパク質の再構成を実施して移しかえステップを避けることが望ましい場合がある。この場合の容器は、例えば、３、４、５、１０、２０、５０、または１００ｃｃのバイアルであり得る。

一般的な提案として、凍結乾燥は、水分含有量が約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、および約０．５％未満である凍結乾燥製剤をもたらす。

本発明に従うＳＭＩＰ（商標）製剤の例には、
１． ６．５％ショ糖、５０ｍＭのグリシン、２０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０中の、２５ｍｇ／ｍｌのＳＭＩＰ（商標）（例えば、ＴＲＵ−０１５）、
２． ２０ｍＭのヒスチジン、４％マンニトール、１％ショ糖、ｐＨ６．０中の、５０ｍｇ／ｍｌのＳＭＩＰ（商標）（例えば、ＴＲＵ−０１５）、
３． ２０ｍＭのヒスチジン、４％マンニトール、１％ショ糖、ｐＨ６．０中の、１００ｍｇ／ｍｌのＳＭＩＰ（商標）（例えば、ＴＲＵ−０１５）、
４． １０％ショ糖、２０ｍＭのヒスチジン、０．０１％ポリソルベート８０中の、１００ｍｇ／ｍｌのＳＭＩＰ（商標）、
５． ５％ショ糖、１％グリシン、２０ｍＭのヒスチジン、０．０１％ポリソルベート８０中の、１００ｍｇ／ｍｌのＳＭＩＰ（商標）、
６． ５％ショ糖、２．４％ソルビトール、２０ｍＭのヒスチジン、０．０１％ポリソルベート８０中の、１００ｍｇ／ｍｌのＳＭＩＰ（商標）、
７． ５％または１０％ショ糖、２０ｍＭのヒスチジン、０．０１％ポリソルベート８０中の、２００ｍｇ／ｍｌのＳＭＩＰ（商標）
が含まれる。

さらなる典型的な製剤は、実施例の節において記載される。

凍結乾燥製剤の保管
一般的に、凍結乾燥生成物は、室温で長期間にわたり保管することができる。保管温度は、典型的には、０℃から４５℃にわたり得る（例えば、４℃、２０℃、２５℃、４５℃など）。凍結乾燥生成物は、数ヶ月間から数年間にわたり、保管することができる。保管時間は通常、２４ヶ月間、１２ヶ月間、６ヶ月間、４．５ヶ月間、３ヶ月間、２ヶ月間、または１ヶ月間である。凍結乾燥生成物は、凍結乾燥容器内で直接的に保管することができ、この容器は再構成器としても機能し、移しかえステップをなくすことができる。代替として、凍結乾燥生成物製剤は、保管のために、より少ない増分に計量することができる。保管は通常、限定はしないが日光、ＵＶ照射、他の形態の電磁放射、過剰な熱または冷気、急速な熱ショック、および機械的ショックへの曝露を含む、タンパク質の分解をもたらす状況を避けるべきである。

凍結乾燥製剤の再構成
所望の段階で、典型的には、患者にタンパク質を投与する時点で、再構成された製剤中のタンパク質濃度が望ましいものとなるように、凍結乾燥製剤を希釈剤で再構成することができる。例えば、ＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ（例えば、約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌ）の濃度で、再構成された製剤中に存在し得る。様々な実施形態において、再構成された製剤のタンパク質濃度は、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３００ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも４００ｍｇ／ｍｌである。再構成された製剤中の高いタンパク質濃度は、再構成された製剤の皮下送達または筋肉内送達が意図されている場合に特に有用であると考えられる。しかし、静脈内投与などの他の投与経路では、再構成された製剤中の低い濃度のタンパク質が望ましい場合がある（例えば、再構成された製剤中に約５〜５０ｍｇ／ｍｌ、または約１０〜４０ｍｇ／ｍｌのタンパク質）。

再構成は通常、完全な水和を確実にするために、約２５℃の温度で行われるが、他の温度も所望により採用してよい。再構成に必要な時間は、例えば、希釈剤のタイプ、（１つまたは複数の）賦形剤およびタンパク質の量に依存する。典型的な希釈剤には、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝された溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、またはデキストロース溶液が含まれる。適切な希釈剤は、保存料を含有していてもよい。典型的な保存料には、ベンジルアルコールまたはフェノールアルコールなどの芳香族アルコールが含まれる。採用される保存料の量は、異なる保存料濃度を、タンパク質および保存料の有効性試験との適合性について評価することによって決定される。例えば、保存料が芳香族アルコール（ベンジルアルコールなど）である場合、保存料は、約０．１〜２．０％、約０．５〜１．５％、または約１．０〜１．２％の量で存在し得る。

再構成された製剤の投与
再構成された製剤は、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、関節内経路、滑液嚢内経路、髄腔内経路、経口経路、局所経路、または吸入経路による、ボーラス投与としてのまたは一定期間にわたる連続注入による静脈内投与などの、既知の方法に従って、タンパク質（例えば、小モジュール免疫薬タンパク質）での治療を必要とする対象、例えばヒトに投与される。

いくつかの実施形態において、再構成された製剤は、皮下（すなわち、皮膚の下）投与によって対象に投与される。このような目的では、製剤は、シリンジを用いて注入することができる。しかし、注入装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（商標）装置およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）、注入用ペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）、無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））、および皮下パッチ送達系などの、製剤を投与するための他の装置が利用可能である。

小モジュール免疫薬の適切な投薬量（「治療上効果的な量」）は、例えば、治療される状態、状態の重症度および経過、タンパク質が予防の目的で投与されるか治療の目的で投与されるか、これまでの治療、患者の臨床歴およびタンパク質に対する応答、用いるタンパク質のタイプ、ならびに担当医の裁量に応じて決定する。小モジュール免疫薬は、１度で、または一連の治療にわたって患者に適切に投与され、診断以降の任意の時点で患者に投与され得る。タンパク質は、単独の治療として、または問題となっている状態の治療において有用な他の薬剤または治療法と組み合わせて投与することができる。

キット
本発明は、本発明の凍結乾燥製剤を含有し、その再構成および／または使用のための指示を提供する、キットまたは他の製品を提供する。キットまたは他の製品は、容器を含み得る。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、およびシリンジが含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は凍結乾燥製剤を保持し、容器上の、または容器に付随するラベルは、再構成および／または使用のための指示を示し得る。例えば、ラベルは、凍結乾燥製剤が上記のようなタンパク質濃度まで再構成されることを示し得る。ラベルはさらに、製剤が、例えば皮下投与のために有用であるまたはその投与を意図したものであることを示してもよい。製剤を保持している容器は、複数回使用のためのバイアルであってもよく、これは、再構成された製剤の反復投与（例えば、２〜６回の投与）を可能にする。キットまたは他の製品はさらに、適切な希釈剤（例えば、ＢＷＦＩ）を包含する第２の容器を含み得る。希釈剤と凍結乾燥製剤とを混合すると、再構成された製剤中のタンパク質の最終濃度は通常、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３００ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも４００ｍｇ／ｍｌ）である。キットまたは他の製品はさらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用のための指示を有する添付文書を含む、商業上の立場および利用者の立場から望ましい他の材料を含み得る。

いくつかの実施形態において、本発明に従うキットには、凍結乾燥ＳＭＩＰ（商標）タンパク質を含有するバイアルまたは他の適切な容器、および充填前希釈剤用のシリンジが含まれる。充填前希釈剤は、再構成に適した任意の溶液（例えば、ＢＷＦＩ、または０．９％塩化ナトリウム溶液など）であり得る。適切なシリンジは、プラスチックまたはガラスであってもよく、使い捨てまたは再利用可能であってもよい。適切なシリンジはまた、様々なサイズ（例えば、１ｍｌ、２ｍｌ、４ｍｌ、６ｍｌ、８ｍｌ、１０ｍｌ）のものであってもよい。いくつかの実施形態において、シリンジは、シリンジ管に取り付けられたプランジャーロッドを有し得る。いくつかの実施形態において、シリンジは、利用者によって組み立てられる必要がある、分離型のプランジャーロッドを有し得る。典型的には、適切なシリンジは、投与する前に取り外せるかまたは折り取ることができる、不正開封不可能なプラスチック製の先端キャップを有してもよい。再構成されたＳＭＩＰ（商標）タンパク質をすぐに用いない場合には、考えられる汚染を予防するために、キャップを交換することもできる。凍結乾燥ＳＭＩＰ（商標）生成物を含有する適切なバイアルまたは他の容器は、プラスチックまたはガラスであってもよく、使い捨てまたは再利用可能であってもよい。適切なバイアルまたはアンプルなどの他の容器は、例えばゴム製のストッパー、ガラスキャップ、および／またはプラスチックキャップで密封されていてもよい。いくつかの実施形態において、キットは、バイアルのストッパーを貫通させるために用いられ得るアダプターを含み得る。いくつかの実施形態において、アダプターは、バイアルのストッパーを貫通させるために用いられ得る、凍結乾燥生成物の再構成および注入のためにシリンジに取り付けられるようになっている針を含む。いくつかの実施形態において、キットは、複数の充填前のバイアル、複数の充填前のシリンジ、および／または複数のバイアルの内容物を投与するためのさらに大きなシリンジを含み得る。典型的には、キットの構成要素は、個別に包装および滅菌され得る。いくつかの実施形態において、キットは、具体的な再構成手順および／または投与手順を含む使用のための指示を含み得る。

本発明は、以下の実施例を参照することによって、さらに完全に理解されよう。しかし、これらは、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。全ての引用文献は、参照により組み込まれる。

（実施例１）２５ｍｇ／ｍｌのＴＲＵ−０１５を含有する酢酸塩−グリシン−ショ糖（「ＡＧＳ」）凍結乾燥製剤
この実施例において、およそ２５ｍｇ／ｍｌの濃度のＴＲＵ−０１５を凍結乾燥するために、ＡＧＳ製剤を設計した。具体的には、この実施例において用いられるＡＧＳ製剤は、ｐＨ６．０で、６．５％ショ糖、５０ｍＭのグリシン、２０ｍＭの酢酸ナトリウムを含んでいた。タンパク質濃度は２５ｍｇ／ｍｌであり、バイアル当たり１００ｍｇのタンパク質であった。ショ糖は、安定剤および充填剤として作用し、グリシンは、安定剤および等張剤として添加した。酢酸ナトリウムは緩衝液である。ＡＧＳ製剤は、変調示差走査熱量計（「ＤＳＣ」）によって測定された−３４．２℃のガラス転移を有していた。フリーズドライ顕微鏡（「ＦＤＭ」）によって測定されたＡＧＳ製剤の崩壊温度は、−３１．４℃であることが明らかになった。実験室規模の凍結乾燥機における全凍結乾燥プロセスは、約１２０時間続いた。−１０℃での任意のアニーリングステップによって、実験室規模でサイクル時間が９０時間減少した。凍結乾燥サイクルを、ＧＭＰ臨床施設で実行するためにスケールアップさせた。臨床規模の凍結乾燥の全サイクル時間は、およそ１１７時間であった。典型的な凍結乾燥プログラムおよびサイクルの典型的なトレースを、表１および図２に示す。

図２に示されるように、一次乾燥の間の生成物の温度は、崩壊温度未満であった（図２）。熱電対センサーおよびＰｉｒａｎｉセンサーは、二次乾燥の傾きの前に、一次乾燥の完了を示した。これにより、塊の外観が良くなり、残留水分が少なくなった（１．２％）。乾燥粉末凍結乾燥物のガラス転移温度は６５℃であり、高温度での保管が可能となった。凍結乾燥生成物の再構成時間は、１分間未満であった。典型的な安定性データを、表２にまとめる。

この実施例は、ＡＧＳ製剤が、ＴＲＵ−０１５分子の安定性を保つために適していることを示唆する。本明細書において記載される典型的な凍結乾燥サイクルは、ＡＧＳ緩衝液中のＴＲＵ−０１５の凍結乾燥に適している。

（実施例２）酢酸塩−マンニトール−ショ糖（「ＡＭＳ」）製剤またはヒスチジン−マンニトール−ショ糖（「ＨＭＳ」）製剤
この実施例において、ＡＭＳ製剤およびＨＭＳ製剤という２つの製剤を開発した。酢酸塩−マンニトール−ショ糖（ＡＭＳ）に基づいた製剤は、緩衝液として２０ｍＭの酢酸ナトリウムを、充填剤として４％マンニトールを、安定剤として１％ショ糖を含有する。ヒスチジン−マンニトール−ショ糖（ＨＭＳ）製剤では、２０ｍＭのヒスチジンを酢酸ナトリウム緩衝液の代わりに用いた。残りの成分は同一であった（例えば、４％マンニトール、１％ショ糖）。溶液のｐＨは、両製剤で６．０であった。両製剤の等張性は、２７０ｍＯｓｍ／ｋｇであった。充填容積は、両製剤で、１０ｍｌのバイアル内に４ｍｌであり、バイアル当たり１００ｍｇのタンパク質であった。−１５℃でのアニーリングステップを、凍結乾燥プロセスにおいて用いた。いかなる理論にも束縛されるものではないが、このアニーリングステップはマンニトールの結晶化を促進すると考えられる。マンニトールが結晶化すると、ＡＭＳ製剤とＨＭＳ製剤との両方で、残りの非晶質相のガラス転移温度が−３５℃からおよそ−２３℃に上昇し得る。凍結乾燥の間の構造の崩壊は、最大−１６℃まで検出されなかった（ＡＭＳ製剤について測定した）。実施例１におけるものより高いガラス転移温度および崩壊温度によって、さらに高い棚温度での凍結乾燥サイクルの実施が可能になり、サイクルの長さが著しく減少する。例示的な凍結乾燥プログラムおよびサイクルの例示的なトレースを、表３および図３に示す。

データは、一次乾燥が崩壊温度よりも低い生成物温度（例えば、≦−１６℃）で行われたことを示す。一次乾燥は、ＰｉｒａｎｉのＤｅｗポイントセンサーおよび生成物の熱電対によって示されるように、二次乾燥の傾きの前に完了した。塊の外観は、両製剤で許容可能であった。周辺以下のＤＳＣは、ＡＭＳ緩衝液と比較して、ＨＭＳ緩衝液においてマンニトールの結晶度が低いことを示した。凍結乾燥によるタンパク質の分解は、両製剤で類似していた（ＡＭＳに基づいた製剤では０．３％ＨＭＷであるのに対し、ＨＭＳに基づいた製剤では０．５％ＨＭＷ）。

（実施例３）ＨＭＳ製剤中の５０ｍｇ／ｍｌのＴＲＵ−０１５
この実施例において、ＴＲＵ−０１５の濃度を、製剤中で２５ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌまで増大させた。したがって、１０ｍｌのバイアル中の４．３ｍｌの充填容積では、バイアル中のタンパク質含有量は、バイアル当たり２１５ｍｇの計算値まで増大した。ＨＭＳ製剤を、５０ｍｇ／ｍｌの投薬形態に採用した。この実施例において用いられたＨＭＳ製剤は、緩衝液として２０ｍＭのヒスチジンを、充填剤として４％マンニトールを、そして安定剤として１％ショ糖を含有していた。製剤はｐＨ６．０であった。ＤＳＣにより測定されたマンニトールの結晶化の開始は、約−２３℃であった。アニーリング温度は、この製剤ではおよそ−１０℃であった。アニーリング時間は、およそ４時間であった。ＨＭＳ中の５０ｍｇ／ｍｌのＴＲＵ−０１５のガラス転移温度は、−９℃であった。一次乾燥は、約０℃の棚温度にあった。典型的なサイクルプログラムおよびサイクルの例示的なトレースを、表４および図４に示す。

一次乾燥の間の生成物温度は、ガラス転移温度未満であった。一次乾燥は、ＰｉｒａｎｉのＤｅｗポイントセンサーおよび熱電対によって示されるように、二次乾燥の前に完了した。塊の外観は許容可能であり、残留水分は０．５％という低いものであった。乾燥粉末のガラス転移温度は、１００℃を超えていた。マンニトールの不完全な結晶化が観察された。およそ４５℃の開始温度で、少量の非晶質マンニトールが結晶化しているのが確認された。これはさらに、最大４０℃までの温度での促進された保管を可能にする。再構成時間は、およそ２分間であった。ポリソルベート８０を、凍結乾燥溶液または再構成のための希釈剤に添加することができる。４ｍｌから４．３ｍｌに充填容積を増大することによって、４８ｍｇ／ｍｌを超えるタンパク質濃度で、単一のバイアルから少なくとも２００ｍｇのＴＲＵ−０１５を送達することが可能になった。保管の際のＨＭＷ種の例示的なパーセンテージを表５にまとめた。

安定性の傾向の分析は、ＨＭＳ緩衝液中の５０ｍｇ／ｍｌのＴＲＵ−０１５が、４℃で２年間にわたり安定であると予測されることを示す。

（実施例４）ＨＭＳ製剤中の１００ｍｇ／ｍｌのＴＲＵ−０１５
この実施例において、皮下投薬形態（「ＳＱ」）に適した製剤を開発したが、前記製剤は典型的に、新薬の商業化における有益な選択肢である。注入容積の制限（例えば、≦１．０ｍｌ）によって、タンパク質の濃度は、典型的には少なくとも１００ｍｇ／ｍｌであるべきである。別の制限は、緩衝液の等張性であり、これは典型的には、２６０から３２０ｍＯｓｍ／ｋｇの間であるべきである。したがって、この実験において、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度のための製剤を開発した。具体的には、２７０ｍＯｓｍ／ｋｇの等張性の計算値を有するＨＭＳ緩衝液（２０ｍＭのヒスチジン、４％マンニトール、１％ショ糖、ｐＨ＝６．０）を、この製剤において用いた。ＤＳＣは、１ｍｌ当たり最大１１５ｍｇのタンパク質の、ＨＭＳ製剤における考えられるマンニトール結晶化を示した（図５）。

いかなる理論にも束縛されるものではないが、結晶性マンニトールは、良好な充填剤／塊形成剤であるだけではなく、高濃度タンパク質の再構成も促すと考えられる。典型的には、結晶性マンニトールを含有する製剤は、非晶質のタンパク質−ショ糖−マンニトール混合物とは対照的に、非常に速く溶解した。したがって、≧１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度でのマンニトールの結晶化の証拠は、高濃度（例えば、５０ｍｇ／ｍｌから１５０ｍｇ／ｍｌ）のＴＲＵ−０１５を凍結乾燥するためにはＨＭＳに基づいた製剤が特に適していることを示す。ＤＳＣはまた、−１０℃でマンニトールを結晶化させた後、ガラス転移温度が−９℃まで上昇し、５℃の棚温度での活発な一次乾燥が可能になったことを示す。

−１０℃でのアニーリングステップを行った。アニーリングステップの時間は、３から７時間であり得る。塊の外観は許容可能であり、残留水分は０．５％であった。凍結乾燥の前に０．０１％の界面活性剤ポリソルベート８０を溶液に添加すると、７０秒以内での再構成が可能となった。再構成が終了した時点から１分以内に、溶液は澄明化した。バイアルの保持容積を占めるように、バイアル中の充填容積を１．２ｍｌに増大させた。ＸＲＤは、ある程度の非晶質マンニトールが、凍結乾燥後に、ＨＭＳ中の１００ｍｇ／ｍｌのＴＲＵ−０１５内に残ったことを示す。

したがって、この実験に基づく、特に有用な製剤は、ｐＨ６．０の、４％マンニトール、１％ショ糖、２０ｍＭのヒスチジン、０．０１％ポリソルベート８０、１００ｍｇ／ｍｌのＴＲＵ−０１５（「ＨＭＳＴ」製剤）を含む。保管の間のこの製剤の例示的な安定性データを、表７に示す。

（実施例５）１００ｍｇ／ｍｌのＴＲＵ−０１５を含有する皮下用製剤
凍結乾燥ＴＲＵ−０１５の安定性をさらに向上させるために、緩衝液の等張性を維持しながら、非晶質安定剤の量を増大させることができる。およそ１：１の、タンパク質に対する安定剤の質量比が、室温での保管の安定性を向上させ得ると考えられた。したがって、この実験において用いられる、ヒスチジンに基づく製剤は、１００ｍｇ／ｍｌの濃度のタンパク質、１００ｍｇ／ｍｌ（１０％）の濃度のショ糖、および２０ｍＭの濃度のヒスチジンを含むものであった。この製剤の等張性を、約３１２ｍＯｓｍ／ｋｇと計算した。この製剤のガラス転移温度は、およそ−２５℃であった。この１０％ショ糖に基づく製剤は、粘度が２．３ｃＰｓであると決定されたＨＭＳ製剤（２０ｍＭのヒスチジン、４％マンニトール、１％ショ糖、ｐＨ６．０）と比較して（３．９ｃＰｓ）の粘度を有していた。安定剤および等張剤として一方はグリシンを含有し、他方はソルビトールを含有する、２つの別の製剤を開発した。粘度を減少させるため、ショ糖の濃度を１０％から５％まで減少させた。緩衝液の等張性を維持するため、グリシンの濃度は約１％であり、最終製剤において２９９ｍＯｓｍ／ｋｇの計算上の等張性であった。代替として、ソルビトールの濃度は約２．４％であり、最終製剤において２９８ｍＯｓｍ／ｋｇの計算上の等張性となった。グリシン含有製剤の粘度は約２．７ｃＰｓであり、ソルビトール含有製剤の粘度は約３．４ｃＰｓであった。グリシン含有製剤のガラス転移はおよそ−２１℃であり、ソルビトール含有製剤のガラス転移は約−２２．５℃であった。この実施例において、３つ全ての製剤について１つの凍結乾燥サイクルを設計して、ガラス転移温度未満での十分な乾燥プロセスをもたらした。製剤についての例示的な凍結乾燥プログラムおよびサイクルの例示的なトレースを、それぞれ表８および図７に示す。

このサイクルは、３つ全ての製剤で、塊の許容可能な外観をもたらした。残留水分は低く、ガラス転移温度は高く、安定性の加速試験の間の高温での保管を可能にした。例示的な凍結乾燥ＴＲＵ−０１５製剤の特徴を、表９にまとめる。

１０％ショ糖−２０ｍＭのヒスチジン製剤中の１００ｍｇ／ｍｌのＴＲＵ−０１５の再構成を、図８に示す。水の注入の開始から、溶液から発泡が取り除かれた時点までの、全再構成時間は、５分以下であった。

ＳＱ溶液の再構成に対するポリソルベート８０（「Ｔｗｅｅｎ」）の効果もまた研究した。３つのＳＱ（例えば、１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度）製剤を、０．０１％Ｔｗｅｅｎと共に、およびＴｗｅｅｎなしで、共凍結乾燥した。

ポリソルベート８０は、再構成の後に、溶液から発泡が取り除かれるのを助けた。１０％ショ糖に基づく製剤は、グリシンおよびソルビトールを含有する製剤と比較して、合理的な再構成時間を示した。図８〜１０は、１００ｇｍ／ｍｌの濃度のタンパク質を有する凍結乾燥生成物の再構成に対する異なるショ糖濃度が有し得る効果を例示する、例示的なデータを示す。ＳＱ製剤の例示的な安定性データを、表１０に示す。

（実施例６）２００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度で皮下投与するためのＴＲＵ−０１５製剤
この実験において、皮下投与を介してバイアル当たり約２００ｍｇのタンパク質投薬量の送達を容易にするために、製剤を開発した。したがって、この実験において用いられる全ての製剤は、およそ２００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を含有していた。典型的な製剤は、凍結乾燥保護剤（安定剤）としての低（５％）および高（１０％）ショ糖濃度を用いて開発した。両製剤は、１０ｍＭのヒスチジンおよび０．０１％ポリソルベート８０を含有する。低ショ糖の製剤は、低い粘度を有すると予測された。しかし、高ショ糖の製剤は、室温で、より安定であり得る。５％ショ糖に基づく製剤のガラス転移は、−２１℃であった。１０％ショ糖を有する製剤は、−２６℃のガラス転移を有する。異なる凍結乾燥プログラムを２つの製剤のために開発し、典型的なプロセスステップを表１１および１２に示す。各プロセスについての典型的な凍結乾燥サイクルを、図１１および１２に示す。塊の外観は、両製剤で許容可能であり、図１３に示す。

この実験のデータは、ＴＲＵ−０１５が、２００ｍｇ／ｍｌという高いタンパク質濃度の、本明細書において記載される製剤を用いても、凍結乾燥ストレスに耐え得ることを示す。

（実施例７）ＳＢＩ−０８７製剤についての凍結乾燥プロセス
この実施例において、５０ｍｇ／ｍｌの濃度のＳＢＩ−０８７を凍結乾燥するために、製剤を設計した。製剤は、ｐＨ６．０の、５％ショ糖、１０ｍＭのメチオニン、１０ｍＭのヒスチジン、および０．０１％ポリソルベート８０を含有する。例示的な凍結乾燥プログラムを表１４に示す。

例示的なプロセスパラメータおよび実験データもまた、図１４に示す。

図１４において見ることができるように、このケースにおける凍結乾燥の間の生成物の温度は、ＳＢＩ−０８７製剤の崩壊温度である−１５℃を超えなかった。凍結乾燥後に、塊のある程度の縮小が観察された（図１５）。しかし、凍結乾燥材料の塊の外観は許容可能であった。

凍結乾燥材料の残留水分は、０．３７±０．０１％であった。例示的な示差走査熱量計（「ＤＳＣ」）スキャンを図１６に示す。

発熱事象の開始は、およそ４４℃で生じた。ガラス転移温度はおよそ８９℃であった。凍結乾燥生成物の特性に基づいて、保管の間の材料へのある程度の水分転移をさらに考慮すると、凍結乾燥生成物は、相転移を伴うことなく、室温で保管され得ることが予想される。

（実施例８）ＳＢＩ−０８７の再構成に対するポリソルベート８０の影響
この実施例において、界面活性剤であるポリソルベート８０を製剤に添加して、再構成に対するその効果を評価した。再構成されたＳＢＩ−０８７溶液は、ポリソルベート８０を含有する溶液内に固体が溶解した１分以内に澄明化した。界面活性剤を有さないバイアル中の溶液は、少なくとも１時間にわたり濁ったままであった。ポリソルベート８０を有する材料と有さない材料との間のタンパク質の質に、差は検出されなかった。したがって、いかなる理論にも束縛されるものではないが、「オパレセンス」は、ポリソルベートの存在下で素早く消滅した気泡に起因すると考えられた。

（実施例９）ＳＢＩ−０８７の安定性に対するメチオニンの効果
液体安定性の研究を行って、高温での適切なｐＨおよび賦形剤を確認した。ベース製剤は、１０ｍＭのヒスチジン、５％ショ糖である。高分子量種（「ＨＭＷ」）の形成に対する、ｐＨ（５．５から６．５にわたる）ならびに０．０１％ポリソルベート８０および１０ｍＭのメチオニンの添加の効果を試験した。図１７に示されるように、ＳＢＩ−０８７に最適なｐＨは、ｐＨ５．５〜６．０の範囲であり得る。さらに、メチオニンは、ＨＭＷの形成の低減に有利であり得る。

（実施例１０）ＳＢＩ−０８７についてのロバスト性の研究
サイクルの逸脱に対する製剤のロバスト性を評価するために、実施例７において記載された製剤（すなわち、ｐＨ６．０の、５％ショ糖、１０ｍＭのヒスチジン、１０ｍＭのメチオニン、および０．０１％ポリソルベート８０、および５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度）中のＳＢＩ−０８７で、さらなる研究を行った。予測されないプロセスの逸脱のために、凍結乾燥材料中の残留水分は、正常な平均水分レベルよりも高いレベルに上昇する可能性があった。したがって、適切な製剤は、水分の上昇に起因する変動性の増大に対する十分な「耐性」をもたらすべきである。この製剤が十分な安定性をもたらすことを示すために、一次乾燥の最後に、凍結乾燥試料を正常な水分含有量より高い状態のままにするためにバイアルに栓をすることを除いて、表１４の凍結乾燥サイクルを実施した。例示的な凍結乾燥サイクルを図１８に示す。凍結乾燥材料の塊の外観は、図１５におけるものに類似していた。

商業用の凍結乾燥の間に圧力および棚温度の逸脱が生じることは珍しいことではない。これらの逸脱は、常に予測不可能なものであるが、生成物の温度の崩壊温度までまたはさらにはそれを超える温度までの増加をもたらし得る。プロセスのこれらの逸脱を試験するために、一次乾燥の間に、高い棚温度および圧力で、いくつかの「活発な」サイクルを行った。これらのサイクルの設計は、一次乾燥の間に崩壊温度に達し、それを超え、生じた生成物の質を評価するためのものであった。例示的な凍結乾燥サイクルパラメータを表１５に示す。活発なサイクルの例（サイクル番号４）もまた、図１９に示す。ＳＢＩ−０８７乾燥粉末についてのＤＳＣの例を、図２１に示す。

図１９に示されるように、生成物の温度は、崩壊温度を超えておよそ−６℃まで素早く上昇し、その後、−１１℃の最低値まで低下した。計算上の生成物温度プロフィールは、生成物の温度が氷の融点を超える可能性があったことを示す。塊構造の崩壊によって、材料とバイアルの底との間の接触がなくなった。したがって、バイアルの底から生成物への熱流束が低減すると考えられ、これは、一次乾燥の間の温度の一時的低下として示される。この実施例から得られる崩壊の証拠は、図２０で見ることができる。

ロバスト性サイクルのＳＢＩ−０８７乾燥粉末試料の例示的な残留水分値および例示的な熱特徴を、表１６に示す。

高水分サイクルの間の水分含有量の増大によって、ガラス転移温度が１８℃低下した。発熱事象の開始もまた低下した。しかし、試験した材料の全てのガラス転移は、保管温度よりも依然として高く、このことは、非晶質相における変動性が低いことを示す。「活性な」サイクル２〜４の材料のガラス転移温度は、水分データに基づいて、７１℃から８８℃の範囲内であると予想される。さらに、水分およびＤＳＣのデータに基づいて、試験したプロセスの逸脱は、４℃での保管の間の分解速度に顕著には影響しないことが予測される。この予測を支持する例示的な安定性データを、表１７に示す。

（実施例１１）充填前希釈剤用シリンジを有するキット
この実施例において、凍結乾燥ＳＭＩＰ（商標）タンパク質生成物および充填前希釈剤用シリンジを含有するキットが、再構成および投与の利便性のために開発される。充填前希釈剤用シリンジを有するキットは、典型的には、凍結乾燥タンパク質を有するバイアル、注入のための再構成緩衝液滅菌水を含有する充填前希釈剤用シリンジ、バイアルアダプター、およびシリンジのプランジャーロッドを含む。キットは、使用のための指示マニュアルを含み得る。充填前希釈剤用シリンジキットは、以下のステップに従って用いることができる。

まず、凍結乾燥ＳＭＩＰ（商標）タンパク質のバイアルおよび充填前希釈剤用シリンジを、室温に達するようにする。次に、凍結乾燥タンパク質を含有するバイアルからプラスチック製の引き上げ式頂部キャップを取り外し、ゴムストッパーの中心部分を露出させる。バイアルの頂部を、消毒スワブまたは消毒布で拭く。洗浄した後、ゴムストッパーは、汚染の機会を最少にするために、あらゆる表面または人と接触すべきではない。汚染のリスクを最小にするために、手順の間を通して注意すべきである。

次に、プラスチック製のバイアルアダプターの包装からカバーをはぎ取ることによって取り外す。次に、バイアルアダプターをバイアル上に載せ、アダプター内のアダプタースパイクがバイアルのストッパーを貫通するまで、バイアルアダプターを押す。次に、プランジャーロッドを希釈物用シリンジのプランジャーまで通すが、患者または医師は、汚染のリスクを最小にするために、プランジャーロッドをプランジャーに通す間、プランジャーロッドのシャフトとの接触を避けるべきである。次に、希釈剤用シリンジのプラスチック製の不正開封不可能な先端キャップを、キャップのミシン目を折ることによって折り取る。シリンジ先端とキャップ内部との接触は避けるべきである。次に、キャップを、その頂部を下にして、それが汚染されないと考えられる位置の清潔な表面上に置く。再構成された溶液をすぐに投与しない場合には、キャップは交換することができる。

次に、アダプターの包装を、アダプターから持ち上げて外し、廃棄する。バイアルは、平らな表面に置く。次に、希釈剤用シリンジを、確実となるまで先端をアダプターの開口部に通すことによって、バイアルアダプターに接続する。次に、希釈剤の全てをタンパク質バイアルに注入するために、プランジャーロッドを押す。シリンジを取り外さずに、粉末が溶解するまで、バイアルの内容物を穏やかに回転させるかまたは混合する。次に、溶液を、溶解しなかった粉末について検査する。その際、溶液は、澄明化しており無色であるべきである。２つ以上のバイアルを１回の注入で投与する場合には、凍結乾燥ＳＭＩＰ（商標）タンパク質を含有するさらなるバイアルを、同じように再構成することができる。

次に、バイアルを反転し、溶液をゆっくりとシリンジ内に引き入れる。ＳＭＩＰ（商標）タンパク質の２つ以上のバイアルを投与する場合、再構成された溶液をシリンジ内に引き入れずに、バイアルアダプターがバイアルに取り付けられたままにして、シリンジをバイアルから取り外すべきである。個別の大きなルアーロックシリンジを取り付けて、再構成された内容物をその中に引き入れることができる。この手順は、各バイアルについて繰り返すことができる。

シリンジを穏やかに引きながら反時計回りに回すことによって、バイアルアダプターからシリンジを分離することができる。次に、アダプターを取り付けたまま、バイアルを廃棄する。典型的には、室温で保管する場合には、再構成されたＳＭＩＰ（商標）タンパク質は、およそ３時間以内に投与すべきである。

同等物
以下に、本発明の特定の非限定的な実施形態を記載した。当業者であれば、常法にすぎない実験を用いて、本明細書において記載される本発明の具体的な実施形態の多くの同等物を認識し、または確認することが可能であろう。当業者には、以下の特許請求の範囲に規定されるように、本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、この記載に対する様々な変更および修正が成され得ることが理解されよう。

特許請求の範囲において、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」という冠詞は、逆のことが示されていない限り、または文脈から別途明らかでない限り、１つまたは２つ以上を意味し得る。１つの群の１つまたは複数の構成員の間に「または」を含む請求項または記載は、逆のことが示されていない限り、または文脈から別途明らかでない限り、その群の構成員の１つ、２つ以上、または全てが、所与の生成物もしくはプロセスにおいて存在するか、採用されるか、または他の形で関連すれば、満足なものであると考えられる。本発明は、群の厳密に１つの構成員が、所与の生成物もしくはプロセスにおいて存在するか、採用されるか、または他の形で関連する実施形態を含む。本発明はまた、群の構成員の２つ以上または全てが、所与の生成物もしくはプロセスにおいて存在するか、採用されるか、または他の形で関連する実施形態を含む。さらに、本発明が、１つもしくは複数の請求項の、または記載における関連する部分の、１つまたは複数の限定、要素、条項、記述用語などが別の請求項に導入される、全ての変形、組み合わせ、および並べ替えを包含することが理解される。例えば、別の請求項に従属する任意の請求項は、従属する請求項が同一な任意の他の請求項において見られる１つまたは複数の限定を含むように修正され得る。さらに、請求項が組成物を列挙する場合、別段の指示がない限り、または矛盾もしくは不一致が生じることが当業者に明らかでない限り、本明細書において開示される目的のいずれかのために組成物を用いる方法が含まれること、および本明細書において開示される作製方法のいずれかまたは当技術分野において知られている他の方法に従って組成物を作製する方法が含まれることが理解される。さらに、本発明は、本明細書において開示される組成物を調製するための方法のいずれかに従って作製された組成物を包含する。

要素がリストとして表される場合、例えば、マーカッシュグループ形式で表される場合、要素の各下位群もまた開示され、（１つまたは複数の）任意の要素がその群から除去され得ることが理解される。「包含している（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語が、開放的なものであり、さらなる要素またはステップを含むことを許容することに注意されたい。通常、本発明または本発明の態様が、特定の要素、特徴、ステップなどを包含するように記載されている場合、本発明または本発明の態様の特定の実施形態が、このような要素、特徴、ステップなどからなるか、またはこれらから基本的になることを理解されたい。簡潔性を目的として、これらの実施形態は、本明細書においてこの通りの文言で具体的に説明されていない。したがって、１つまたは複数の要素、特徴、ステップなどを包含する、本発明の各実施形態では、本発明はまた、これらの要素、特徴、ステップなどからなるかまたはこれらから基本的になる実施形態も提供する。

範囲が示されている場合、端点が含まれる。さらに、別段の指示がない限り、または文脈および／もしくは当業者の理解から別途明らかでない限り、範囲として表される値は、文脈から別途明らかに示されない限り、範囲の下限の単位の１０分の１まで、本発明の異なる実施形態において記載された範囲内の任意の具体的な値を取り得ることが理解される。また、別段の指示がない限り、または文脈および／もしくは当業者の理解から別途明らかでない限り、範囲として表される値は、所与の範囲内の任意の部分範囲を取り得、部分範囲の終点は、範囲の下限の単位の１０分の１と同程度の精度まで表されることが理解される。

さらに、本発明の任意の特定の実施形態が請求項の任意の１つまたは複数から明確に排除され得ることが理解される。本発明の組成物および／または方法の任意の実施形態、要素、特徴、適用、または態様が、任意の１つまたは複数の請求項から排除され得る。簡潔さを目的として、１つまたは複数の要素、特徴、目的、または態様が排除される実施形態の全てが、本明細書において明確に説明されているわけではない。

参照による組み込み
この出願において引用される全ての刊行物および特許文献は、全ての目的で、それぞれの刊行物または特許文献の内容が本明細書に組み込まれたかのように同程度まで、参照によりそれらの全体が組み込まれる。

Claims (62)

1. 小モジュール免疫薬タンパク質の凍結乾燥混合物を包含する製剤であって、凍結乾燥された小モジュール免疫薬タンパク質の７％未満が凝集形態で存在する製剤。
2. 充填剤および／または緩衝剤をさらに包含する、請求項１に記載の製剤。
3. 非還元糖をさらに包含する、請求項１に記載の製剤。
4. 非還元糖がショ糖である、請求項３に記載の製剤。
5. 非還元糖がトレハロースである、請求項３に記載の製剤
6. 小モジュール免疫薬タンパク質に対する非還元糖の質量比が、約０．１：１、０．２：１、０．２５：１、０．４：１、０．５：１、１：１、２：１、２．６：１、３：１、４：１、または５：１である、請求項３に記載の製剤。
7. 充填剤が、ショ糖、マンニトール、グリシン、塩化ナトリウム、デキストラン、トレハロース、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２に記載の製剤。
8. 緩衝剤が、ヒスチジン、酢酸ナトリウム、クエン酸、リン酸、コハク酸、トリス、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２に記載の製剤。
9. 緩衝剤がヒスチジンである、請求項８に記載の製剤。
10. 緩衝剤が酢酸ナトリウムである、請求項８に記載の製剤。
11. 製剤が安定剤をさらに包含する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製剤。
12. 安定剤が、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、グリシン、トレハロース、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１１に記載の製剤。
13. 安定剤がショ糖である、請求項１２に記載の製剤。
14. 製剤が等張剤をさらに包含する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の製剤。
15. 等張剤が、グリシン、ソルビトール、ショ糖、マンニトール、塩化ナトリウム、デキストロース、アルギニン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１４に記載の製剤。
16. 製剤が界面活性剤をさらに包含する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の製剤。
17. 界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー、トリトン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１６に記載の製剤。
18. 小モジュール免疫薬タンパク質、ショ糖、ヒスチジン、およびポリソルベート８０の凍結乾燥混合物を包含する製剤。
19. 小モジュール免疫薬タンパク質、ショ糖、マンニトール、およびヒスチジンまたは酢酸ナトリウムから選択される緩衝剤の凍結乾燥混合物を包含する製剤。
20. ショ糖に対するマンニトールの質量比が、約２：１、３：１、４：１、または５：１である、請求項１９に記載の製剤。
21. 小モジュール免疫薬タンパク質、ショ糖、グリシン、および酢酸ナトリウムの凍結乾燥混合物を包含する製剤。
22. 小モジュール免疫薬タンパク質が、ＣＤ２０を特異的に標的化する結合ドメインを包含する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の製剤。
23. 小モジュール免疫薬タンパク質が、配列番号１〜５９および６７〜７６のいずれか１つに対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を包含する、請求項２２に記載の製剤。
24. 凍結乾燥された小モジュール免疫薬タンパク質が室温で安定である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の製剤。
25. 請求項１〜２４のいずれか一項に記載の製剤を保持する容器を包含するキット。
26. 希釈剤で再構成された請求項１〜２４のいずれか一項に記載の製剤を包含する、再構成された製剤であって、小モジュール免疫薬タンパク質が、２５ｍｇ／ｍｌから４００ｍｇ／ｍｌの範囲内の濃度で、再構成された製剤中に存在する、再構成された製剤。
27. 静脈内投与、皮下投与、または筋肉内投与のための、請求項２６に記載の再構成された製剤。
28. 請求項２６または２７に記載の再構成された製剤を投与するステップを包含する、患者を治療するための方法。
29. 小モジュール免疫薬タンパク質、非還元糖、および緩衝剤を包含する、凍結乾燥のための製剤。
30. 緩衝剤が酢酸ナトリウムまたはヒスチジンから選択される、請求項２９に記載の製剤。
31. 緩衝剤がおよそ１０ｍＭの濃度である、請求項２９または３０に記載の製剤。
32. 緩衝剤がおよそ２０ｍＭの濃度である、請求項２９または３０に記載の製剤。
33. マンニトールをさらに包含する、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の製剤。
34. メチオニンをさらに包含する、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の製剤。
35. メチオニンがおよそ１０ｍＭの濃度である、請求項３４に記載の製剤。
36. 非還元糖がショ糖である、請求項２９〜３５のいずれか一項に記載の製剤。
37. ショ糖が１％から１０％の間の範囲の濃度である、請求項２６に記載の製剤。
38. ショ糖がおよそ５％の濃度である、請求項３７に記載の製剤。
39. 非還元糖がトレハロースである、請求項２９〜３５のいずれか一項に記載の製剤。
40. 小モジュール免疫薬タンパク質に対する非還元糖の質量比が、約０．１：１、０．２：１、０．２５：１、０．４：１、０．５：１、１：１、２：１、２．６：１、３：１、４：１、または５：１である、請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の製剤。
41. ショ糖がおよそ１０％の濃度であり、ヒスチジンがおよそ２０ｍＭの濃度である、請求項３６に記載の製剤。
42. 等張剤をさらに包含する、請求項２９〜４１のいずれか一項に記載の製剤。
43. 等張剤がグリシンまたはソルビトールである、請求項４２に記載の製剤。
44. 界面活性剤をさらに包含する、請求項２９〜４３のいずれか一項に記載の製剤。
45. 界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー、トリトン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４４に記載の製剤。
46. ショ糖がおよそ５％から１０％の間の範囲の濃度であり、ヒスチジンがおよそ１０ｍＭから２０ｍＭの間の範囲の濃度であり、ポリソルベート８０がおよそ０．００１％から０．１％の間の範囲の濃度である、請求項４５に記載の製剤。
47. 小モジュール免疫薬タンパク質がおよそ２５ｍｇ／ｍｌから４００ｍｇ／ｍｌの間の範囲の濃度である、請求項２９〜４６のいずれか一項に記載の製剤。
48. 小モジュール免疫薬タンパク質がおよそ２５ｍｇ／ｍｌの濃度であり、ショ糖がおよそ６．５％の濃度であり、グリシンがおよそ５０ｍＭの濃度であり、酢酸ナトリウムがおよそ２０ｍＭの濃度である、請求項４７に記載の製剤。
49. 小モジュール免疫薬タンパク質がおよそ５０ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの間の範囲の濃度であり、ヒスチジンがおよそ２０ｍＭの濃度であり、マンニトールがおよそ４％の濃度であり、ショ糖がおよそ１％の濃度である、請求項４７に記載の製剤。
50. 小モジュール免疫薬タンパク質がおよそ１００ｍｇ／ｍｌの濃度であり、ショ糖がおよそ１０％の濃度であり、ヒスチジンがおよそ２０ｍＭの濃度であり、ポリソルベート８０がおよそ０．０１％の濃度である、請求項４７に記載の製剤。
51. 小モジュール免疫薬タンパク質がおよそ１００ｍｇ／ｍｌの濃度であり、ショ糖がおよそ５％の濃度であり、グリシンがおよそ１％の濃度であり、ヒスチジンがおよそ２０ｍＭの濃度であり、ポリソルベート８０がおよそ０．０１％の濃度である、請求項４７に記載の製剤。
52. 小モジュール免疫薬タンパク質がおよそ１００ｍｇ／ｍｌの濃度であり、ショ糖がおよそ５％の濃度であり、ソルビトールがおよそ２．４％の濃度であり、ヒスチジンがおよそ２０ｍＭの濃度であり、ポリソルベート８０がおよそ０．０１％の濃度である、請求項４７に記載の製剤。
53. 小モジュール免疫薬タンパク質がおよそ２００ｍｇ／ｍｌの濃度であり、ショ糖が５％から１０％の間の範囲の濃度であり、ヒスチジンがおよそ２０ｍＭの濃度であり、ポリソルベート８０がおよそ０．０１％の濃度である、請求項４７に記載の製剤。
54. ショ糖がおよそ５％の濃度であり、ヒスチジンがおよそ１０ｍＭの濃度であり、メチオニンがおよそ１０ｍＭの濃度であり、ポリソルベート８０がおよそ０．０１％の濃度である、請求項４７に記載の製剤。
55. 製剤が、およそ５．０からおよそ７．０の範囲のｐＨを有する、請求項２９〜５４のいずれかに記載の製剤。
56. ６．０のｐＨを有する、請求項５５に記載の製剤。
57. 小モジュール免疫薬タンパク質が、ＣＤ２０を特異的に標的化する結合ドメインを包含する、請求項２９〜５６のいずれか一項に記載の製剤。
58. 小モジュール免疫薬タンパク質が、配列番号１〜５９および６７〜７６のいずれか１つに対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を包含する、請求項５７に記載の製剤。
59. 請求項２９〜５８のいずれか一項に記載の小モジュール免疫薬タンパク質を包含する製剤を凍結乾燥する工程、および
    凍結乾燥された製剤を室温以下の温度で保管する工程
    を包含する、小モジュール免疫薬タンパク質を保管する方法。
60. 保管温度が２〜８℃である、請求項５９に記載の方法。
61. 保管温度が室温である、請求項５９に記載の方法。
62. 請求項５９〜６１のいずれか一項に記載の方法に従って保管された、小モジュール免疫薬タンパク質。

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