JP2012515931A - 全血球数及び白血球百分率を決定するシステム及び方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2008年4月25日に出願された米国特許仮出願第61/047,920号に対する、米国特許法第119条に基づく優先権を主張し、参照によってその全体を本明細書中に明示的に援用する。さらに、本願は、本願と同じ日に同じ発明者らによって出願された「体液を分析するシステム及び方法」と題する出願を、参照によって本明細書中に明示的に援用する。
プラットフォーム100を取り上げる実施形態では、アドバンサ110が、1つ又は複数のスライド装置700〜700”を受け取るように構成されている。アドバンサ110は、プラットフォームの上面101のような表面に取り付けることができる。アドバンサ110は、図1Aに示されるようなベルトの形態をとってもよく、このシステムは、スライド装置をプラットフォームの表面101に沿って移動させるために、メカニカルアーム、重力、磁力、水力、歯車、又は他の移行技術を使用してもよい。
受光装置200は、(明視野顕微鏡のような)顕微鏡、ビデオカメラ、静止カメラ、又は光を受光する他の光学装置であってもよい。標準的な明視野顕微鏡を使用する実施形態では、自動化ステージ(スライドムーバ201)及び焦点を有する顕微鏡を選択することができる。一実施形態では、顕微鏡は、電動式ステージ及び焦点モータ取り付け具に取り付けてもよい。顕微鏡は、コンピュータ300の制御下で異なる拡大レンズを選択することを可能にする電動式のノーズピースを有していてもよい。フィルタホイールによって、コンピュータ300が光路における狭帯域カラーフィルタを自動的に選択することが可能となる。フィルタの代わりにLED照明を用いてもよく、LEDの使用は、フィルタホイールの回転に必要な時間と比較して画像撮影時間を短縮することができる。1600×1200画素のファイヤーワイヤーカメラを使用して狭帯域画像を撮影してもよい。
コンピュータ300は、図1Aに示されるようなラップトップであってもよく、若しくはサーバ、ワークステーション、又は任意の他の種類のコンピュータ装置であってもよい。コンピュータは、プロセッサと、ディスプレイ320と、インタフェース310と、内部メモリ及び/又はディスクドライブとを備えている。コンピュータ300はまた、メモリ内に、又は光学ドライブのようなコンピュータ可読媒体に記憶されているソフトウェアを備えている。このソフトウェアは、コンピュータに対して、受光装置200、アプリケータ400、アプリケータコントローラ490、ファン500、プラットフォーム100、アドバンサ110、光源600、ディスペンサ450若しくは800、これらの構成要素のうちの1つに接続されている任意の構成要素のいずれかを動作させる命令を含んでいる。同様に、コンピュータは、これらの構成要素のいずれかから情報を受け取ることができる。例えば、このソフトウェアは、フィーダ102からのスライドの分散速度を制御することができ、またフィーダ102は、存在するスライドの数に関してコンピュータに知らせることができる。加えて、コンピュータ300は、受光装置がとらえた画像の分析を行うことにも関与することができる。コンピュータは、分析プロセスを通して、特定の血液容量中の特定の種類の細胞の数、例えば、赤血球数と、白血球数と、血小板数と、測定されると共に導き出されたCBCの他の成分とを計算することができ、例えば、ヘモグロビン含量、赤血球形態又はWBC百分率を計算することができる。画像分析ソフトウェアは、それぞれの個々の視野を分析して総赤血球数及び総白血球数を算出することができる。患者のバイアル中の1マイクロリットル当たりの総数を計算するためには、スライド上で計数された数に、希釈率及び部分試料の容量を乗算する。スライドからの計数、形態学的測定並びにRBC及びWBCの画像の結果をディスプレイ320に示すことができる。いくつかの実施形態では、コンピュータ300は、数値データ、細胞集団ヒストグラム、散布図、及びモニタに表示される血球の画像を使用する細胞形態の直接評価を表示することが可能である。細胞形態を表示することが可能であることによって、システム10のユーザが、経験のある技術者又は他の専門家が手動で調べ直すためのさらなるスライドを準備する正当な理由となる、細胞形態における異常の有無を迅速に確定することができる。このソフトウェアは、コンピュータ命令を提供し、受光装置から受け取った画像331を表示することができるか、又はディスプレイ330に、画像分析の結果332(おそらくは例えばチャート又はグラフ)を示すことができる。同様に、コンピュータ300は、特定の血液容量中の特定の種類の細胞数を数えるか、又は特定の血液容量中の損傷を受けた細胞、癌細胞若しくは溶解細胞の数を数えることができる。コンピュータのメモリは、コンピュータが分析プロセスを行うことを可能にするソフトウェアを含むことができる。コンピュータは、分析中に1つ又は複数の倍率を使用することができる。
特定の実施形態では、アプリケータ400は、シリンジ、手動若しくはモータ駆動式の分注器を備えるか、又は管を通してピペットチップに取り付けられたモータ制御式のポンプを使用することができる。多くの異なる種類のピペット又はシリンジを使用することができるが、2%よりも良好な精度を有するアプリケータ400を使用することによって改善された結果を示す試験結果を得ることができる。ポンプは、蠕動ポンプ、シリンジポンプ、又はオリフィスを通して少量の容量を吸引及び分注することのできる他の同様の装置であってもよい。通常、そのようなオリフィスは、外径が2ミリメートル〜5ミリメートルであり、内径が0.5ミリメートルであるチップ405に含まれる。チップ405は使い捨て可能であっても又は洗浄可能であってもよい。チップ405は、その挿入及び洗浄を容易にするために円形とすることができる。チップを通って流れる流体は、血液又は希釈血液の薄層をスライド上に堆積させることがでるように制御される。チップを通る流速及びスライドにわたるチップの相対速度及び高さを最適化することによって、適切な密度の細胞をスライド上に堆積させることができる。これらの要因はそれぞれ、他の要因に影響を与えるため、高さ、チップを通る流速及びスライドにわたる速度の適した組み合わせを決定しなければならない。一実施形態では、チップを通る流速は0.1マイクロリットル/秒であり、その間、チップは約70ミクロンの高さでスライド表面にわたって30ミリメートル/秒の速度で移動する。
ガス移動装置500は、(図1に示されるような)ファンを備えてもよく、又は例えばコンプレッサ若しくはベローのような他のガス移動装置を備えてもよい。ガス移動装置500は、コンピュータ300に直接接続してもよく、又は(図示されるような)プラットフォーム100若しくはアプリケータ400のような別の構成要素を通じて接続してもよい。ガス移動装置は、ガス(いくつかの場合では大気)を、スライドを横切って押し出し、スライドが乾燥する速さを制御する。スライドを横切ってあまりに多くの空気を速く移動させすぎる(すなわちファン速度が速すぎる)と、速すぎる乾燥に起因して検体中の細胞を破裂させる可能性があり、スライドを横切ってあまりに少ない空気をゆっくり移動させすぎる(すなわちファン速度が遅すぎる)と、細胞の乾燥が非常に遅くなり、収縮して見える可能性がある。コンピュータ300は、スライドからのガス移動装置の距離と、分析される流体の種類と、流れの幅と、流れの平均厚さ(これは各流れのZ方向への細胞の量である)とに基づいて、ある期間内にスライドを横切って移動する空気の量(すなわち空気の1秒当たりの立方フィート)を選択することができる。ガス移動装置500は、スライド装置700の近くに配置することができ、ガスが30度〜60度の角度(45度を用いることができる)で約15秒〜20秒の期間スライドに当たるようにガスを誘導するように位置付けられている。いくつかの実施形態では、コンピュータは、システム付近の湿度及び温度設定を制御して、ガス移動装置500を使用することなく乾燥プロセスが生じるようにしてもよい。
発光装置600の2つの異なる実施形態が示されている。図1Aでは、発光装置600は、ハウジング601と、マルチスペクトル光源610と、複数の光フィルタ620、620’、620”と、フィルタセレクタ621とを備えている。図1Aに示されるように、光源610をよりよく示すためにハウジングの一部を取り除いている。光源610は、白色光源を備えてもよく、又は、ハロゲン球、蛍光球、白熱電球のような他のマルチスペクトル光源を備えてもよい。フィルタ620〜620”を用いて、マルチスペクトル光をフィルタリングして単一の波長又は狭帯域の波長にすることができる。フィルタセレクタ621は、どのフィルタを光源610の正面に出現させるかを選択することができる。いくつかの実施形態では、特定の範囲の光がスライドを照明することを可能にするため、2つ以上のフィルタを用いてもよい。フィルタセレクタ621は、フィルタをスピンさせて光路へ出入りさせる回転モータ及びロッドを備えている。第2の実施形態では、光源は、狭帯域の光を照射する1つ又は複数のレーザ又はLED630を備えている(図1B参照)。このシステム10においてLEDを使用することの利点は、LEDはスイッチを迅速にオンオフすることができ、受光装置である単一の白黒カメラがマルチスペクトル画像を非常に短時間で撮影することが可能となることである。LEDはまた、通常は15nm〜30nmの半値全幅(最大強度のピーク輝度の半分の波長強度分布の幅)の狭帯域照明を生成する。また、LEDは、可視範囲において、熱発生赤外線エネルギーを光学系に放射することがなく、従来のランプと比べて比較的長寿命である。フィルタリングされていない白色光(すなわち広帯域照明)ではなく狭帯域照明を使用することの利点は、狭帯域照明を使用することによって受光装置200が生成する画像の鮮明さが増すことである。受光装置200がレンズを含む場合、このレンズの存在が、異なる色を使用する場合にわずかな焦点シフト又は画質の劣化を生じるいくらかの色収差を引き起こす可能性がある。白色光照明の場合、このことが画質の全体的な劣化を生じる可能性がある。受光装置200は、各狭帯域照明の白黒画像をとらえてもよい。コンピュータ300は、焦点距離又はスライドからのレンズの距離を調整することによって波長毎に焦点及び画質を補正することが可能である。いくつかの実施形態では、コンピュータ300は、複数の明色を順次照射しながらレンズの焦点位置をシフトさせて、画像の品質を改善することができる。
図1A、図2、図3は、スライド701と、検体ゾーン710と、スライドフレーム720と、スライドホルダ730とを備えたスライド装置700の実施形態を示している。しかし、本発明の他の実施形態は、スライドホルダ730又はスライドフレーム720の使用を必要としない場合がある。さらに、検体ゾーン710の境界マークも任意選択的であり、1つ又は複数の疎水性リング又は他の彩色マークを備えてもよい。これらのリングは、血液試料を収容するのを助けることができ、また、スライドを顕微鏡下で手動で観察するときに検体ゾーンを迅速に位置決めすることによってスライドの画像を調べ直すことを容易にする(分析プロセスの画像解釈の助けともなり得る)。リングはまた、染料をスライド上に移す際に助けにもなり得る。さらに、検体ゾーンは矩形として示されているが、円形又は三角形のような他の形状を使用してもよい。0.5平方センチメートル〜3平方センチメートルの総面積を有するゾーンを含む異なるサイズの検体ゾーンを使用してもよい。スライド701は、ガラス又はプラスチックから製造してもよく、高さ25.4mm(1インチ)×幅76.2mm(3インチ)×厚さ1mmであってもよい。また図2及び図3は、スライド上の流れ750中に分散した流体試料を示している。流体は、図3に示されるように流れで分散してもよく、又は図4に示されるように渦巻パターンで分散してもよい。
図1Bを参照すると、このシステムは、スライド701を前処理する放電装置900を備えている。この放電装置は、コロナ放電装置の形態をとってもよい。放電装置900は、高強度の熱を生成して小粒子を消散させることによってスライド701を洗浄し、親水性表面を作り出すことができる。エレクトロ・テクニック・プロダクツ社のサヴィキPAが、本発明と適合するコロナ放電装置を作製している。前処理を行うために、コンピュータ300は、放電装置900をオンにし、スライド装置コントローラ760に対して、約15秒間(1秒〜20秒の範囲を使用してもよい)スライドをスパイラル運動又はラスター運動させる。この放電装置は、スライドから角度を付けて設定してもよく、又はスライドの上方に直接位置付けてもよい。通常、放電装置900は、スライドの上方のおよそ10mm〜20mmに位置付けることができる。
システム10は、任意にスライドラベラ1000を備え、また任意にスライドラベル読取機1100を備えてもよい。スライドラベル読取機1000は、図1A及び図1Bに示されるように、プラットフォーム100上のフィーダ102の近くに位置してもよく、又は独立型であるか若しくは他の構成要素に取り付けてもよい。スライドラベラ1000は、ラベルをスライド上に配置することができる。ラベル770は、スライド上にステッカー、バーコード、RFIDタグ、EASタグ、又は他の種類のマーキングのようなアイテムを含んでもよい。図3は、その上にUPCバーコードラベルを有する例示的なスライドを示しているが、他の従来のマーキングを使用してもよい。さらに、マーキングは、塗料若しくはインクによってスライドへ直接塗布してもよく、又は(ステッカーのような)書き込み媒体及び接着剤を使用してスライドへ付着させてもよい。
上述したように、本発明は、末梢血又は全血を分析するために使用することができる。しかし、本発明を用いて種々の体液の細胞の研究をすることもできる。例えば、本明細書に記載される準備方法及び分析技術は、骨髄穿刺液試料にも適用することができる。骨髄試料は、細胞密度が高く、末梢血ではほとんど見られない多くの未成熟の赤血球及び白血球の種類を含む。細胞の薄層を準備する技術と、ロマノフスキー染料による染色と、画像分析による分析とを、骨髄穿刺液にも適用することができるが、さらなる種類の細胞を識別するには、より精緻な画像分析が必要である。
システム10は、血液試料中の網状赤血球の数を計数することもできる。RNAをマーキングするためにロマノフスキー染料を使用して、コンピュータ300は、検体中に存在する網状赤血球を計数することができる。ロマノフスキー染料を使用する場合、網状赤血球は、他の赤血球よりもわずかに青く見え、また通常わずかに大きい。コンピュータ300は、その分析プロセス(図7A及び図7Bの16A又は17B)を使用して、赤血球の青色成分を定量化することができる。分析プロセスは、600nm(470nm〜750nmの範囲)の非青色光によって撮影した画像から430nm(400nm〜470nmの範囲)の青色光によって撮影した1つの画像を差し引くことによって形成される細胞の異なる画像の積分光学濃度を測定することができる。この分析プロセスは、規定の範囲の積分青色成分を有する赤血球の数を、手動で、又は特別な染料を使用するフロー法によって計数した網状赤血球の数と相関させることができる。分析プロセスの精度は、細胞物体のサイズ、形状、色及び測定される特徴を測定するように、分析プロセス(16A又は17B)に要求することによってさらに高めることができる。例えば、分析プロセスは、真の網状赤血球ではなく、赤血球と、赤血球の下方にあるか又は上方にある青みがかった血小板との違いを検出することができる。
本発明の実施形態は、図1A又は図1Bに示される複数のスライド装置700をパイプラインシリーズで処理することが意図されるが、スライド装置700を並列に処理する実施形態も意図され得る。より多くの(例えば10個〜20個)のスライド装置を直列又は並列で処理することのできる実施形態を構成してもよく、又は容量がより小さいシステム10を構成してもよい(一度に4個〜8個のスライドを処理する)。以下の2つの段落は、図1A及び図1Bの例示的なプロセスフローを説明するが、代替的なプロセスフローが可能であり、実現可能である。これらのプロセスフローは、図10A及び図7Bにも示されている。加えて、他の構成のシステムが可能であり、異なるプロセスフローを有する可能性がある。さらに、一連の工程が提示されているが、工程の多くは、異なる順番で提示するか、又は同時に行うことができる。最後に、以下の工程の大部分は任意選択的であり、プロセスフローから除外してもよい。
この方法の精度を確認するために、デジタル画像からRBC及びWBCを計数するコンピュータアルゴリズムを開発した。
以下の工程シーケンスは任意の順番で行うことができ、いくつかの工程を省くか又は代わりに他の工程を行ってもよい。
工程1.患者の血液を充填した管から既知の容量の血液を採取する。
工程2.必要であれば血液を希釈する。例えば、希釈剤として5%のアルブミンを含む蒸留水を使用してもよい。
工程3.既知の容量の血液又は血液に希釈剤を足したものを、顕微鏡のスライドガラス上のある領域にわたって薄い層に広げる。スライドは、細胞をよりよく広げるために親水性表面をもたらすように処理してもよい。スライドは、血液成分がスライドに最適に付着するように処理してもよい。
工程4.スライドを空気乾燥させる、あるいは、少量の空気又は熱を使用して乾燥を助ける。
工程5.カバースリップのない状態で補正される「乾燥」対物レンズを使用して、カバースリップを使用することなく画像をとらえる。例えば、CCDカメラに接続されている10倍又は20倍の対物レンズを使用してもよい。赤血球(RBC)並びに可能性としては白血球(WBC)及び血小板を含む各画像フレーム内の数を決定する。例えば、カラーカメラを使用するか又は干渉フィルタ若しくはLEDが生成する狭帯域光照明を使用して1つ又は複数のカラーを用いてもよい。このとき、ヘモグロビン含量の測定も行うことができる。
工程6.細胞をスライド上に固定して染色する。固定は、別個の工程であってもよく、又は染色と組み合わせてもよい。
工程7.「乾燥」対物レンズを使用して、カバースリップを使用することなく染色したスライドの画像をとらえ、RBC、WBC及び血小板並びにヘモグロビンを計数する。この工程は、工程5の代わりに、又は工程5と併せて行うことができる。
工程8.「乾燥」対物レンズ、例えばカバースリップに関して補正されない40倍又は50倍の対物レンズを用いて、カバースリップを使用することなく取得した高解像度画像からWBC百分率を遂行する。カラーカメラ、又はカラーフィルタを使用するか若しくはLED照明を使用して撮影した複数の白黒画像を使用してもよい。この工程は、工程7の追加として、又は工程7と組み合わせて行うことができる。
工程9.所望のパラメータ及びCBCに必要な派生パラメータを計算する。
工程10.オペレータに対して、グラフィカルユーザインタフェース(GUI)に全てのCBCパラメータを表示する。
工程11.オペレータに対して、GUIにWBC百分率の結果を表示する。
工程12.RBC、WBC、血小板及び何らかの正常ではない/異常な血液成分の画像をオペレータに対して表示する。
工程13.オペレータが画像と相互作用することを可能にし、パラメータにCBC、WBC百分率を「サインオフ」させ、正常ではない、すなわち異常な物体を同定する。
工程14.必要であれば、工程13におけるオペレータの相互作用に応じてCBC及びWBCの計数の結果をアップデートする。
工程15.任意に、電動式のコンピュータ制御可能なステージを備える顕微鏡に対象の物体を再配置し、物体を自動的に再配置して調べることを可能にする。
工程16.任意に、顕微鏡オペレータの相互作用に応じてCBC及びWBCの計数の結果をアップデートする。
Claims (51)
- 血液又は骨髄由来の細胞を分析するシステムであって、
a.前記骨髄又は前記血液を含む流体を分注するアプリケータであって、アプリケータコントローラと前記流体及び前記細胞をスライド上へ分注するチップとを備えたアプリケータと、
b.前記スライド上の前記細胞の画像をとらえるレンズを備えた受光装置と、
c.マイクロプロセッサとコンピュータ可読媒体に記憶されているソフトウェアとを含むコンピュータと
を備え、
前記ソフトウェアは、前記コンピュータに対して、
i.前記チップを前記スライド上の特定の高さの位置に位置付けるように前記アプリケータコントローラに命令する工程であって、前記位置は、X方向成分と、Y方向成分と、Z方向成分とを有する工程と、
ii.前記アプリケータのチップを特定の速度で前記スライドを横切って移動させるように前記アプリケータコントローラに命令する工程であって、前記速度は、ある方向成分及びある速度成分を有する工程と、
iii.希釈流体を前記チップから特定の速度で流出させるように前記アプリケータに命令する工程と、
iv.前記チップの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに細胞の第1の流れを前記スライドにわたって塗布させる工程であって、前記第1の流れは、細胞の単層及びある流れ幅を有する工程と、
v.前記チップの位置を特定の距離だけ変えるように前記アプリケータコントローラに指示する工程と、
vi.前記チップの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに細胞の第2の流れを前記スライドにわたって塗布させる工程であって、前記第2の流れは前記第1の流れの近くの位置に定着する工程と
を行わせるシステム。 - 前記第1の流れ及び前記第2の流れは、前記スライド上に、間隙のない連続的な細胞の単層を形成する、請求項1に記載のシステム。
- 前記特定の距離は、前記流れ幅におおよそ等しい、請求項1に記載のシステム。
- 前記血液又は前記骨髄を貯蔵する第1のリザーバと、
希釈剤を貯蔵する第2のリザーバと、
前記血液又は前記骨髄と前記希釈剤とを混合して希釈流体を形成するミキサと
を備える、請求項1に記載のアプリケータ。 - 前記システムは前記流体を含み、該流体は、血液又は骨髄と、塩又はタンパク質を主成分とする希釈剤とを含有する、請求項1に記載のシステム。
- 前記システムは前記流体を含み、該流体は、血液又は骨髄と、ウシアルブミン、プラズマネート、フィコールデキストランのいずれかとを含有する、請求項1に記載のシステム。
- 前記システムは前記流体を含み、該流体は、血液又は骨髄と、プラズマネート1部毎にプラズマライト4部を含有する希釈剤とを含有する、請求項1に記載のシステム。
- 前記システムは前記流体を含み、該流体は、5容量%のアルブミンを含有する希釈剤1部毎に血液2部を含有する、請求項1に記載のシステム。
- 前記ソフトウェアは、前記コンピュータに対して、
a.前記第1の流れの画像をとらえるように受光装置に命令する工程と、
b.前記第1の流れの幅を決定するために前記画像を分析する工程と、
c.前記チップを前記第1の流れの幅と等しい距離だけ移動させるように前記コントローラに指示する工程と
を行わせる、請求項1に記載のシステム。 - 前記ソフトウェアは、前記コンピュータに対して、
a.細胞の第3の流れを前記スライドにわたって一定のY方向成分及びZ方向成分並びに増大するX方向成分を有する線に沿って塗布するように前記アプリケータコントローラに指示する工程と、
b.細胞の第4の流れを前記スライドにわたって一定のY方向成分及びZ方向成分並びに減少するX方向成分を有する線に沿って塗布するように前記アプリケータコントローラに指示する工程と
を行わせ、
c.前記第1の流れと、前記第2の流れと、前記第3の流れと、前記第4の流れとは、前記スライド上に、間隙のない連続的な細胞の単層の流れを形成する、請求項1に記載のシステム。 - 前記スライドを洗浄する放電ユニットと、
染料を前記スライド上へ分注するディスペンサと、
前記スライドを傾けて余分な染料を除去するスライドティルタと、
前記スライドの画像を撮影する受光装置と、
前記スライドを前記受光装置の下に位置付けるスライドムーバと、
前記スライド上へ又は該スライドを通して光を誘導する発光装置と
を備える、請求項1に記載のシステム。 - 前記ソフトウェアは、前記コンピュータに、
a.前記コントローラが前記チップを前記スライドの上方約70ミクロンに位置付け、
b.前記アプリケータが流体を約0.1マイクロリットル/秒の速度で前記チップから流出させ、
c.前記コントローラが前記チップを前記スライドに沿って約30mm/秒の速度で移動させる
ように命令させる、請求項1に記載のシステム。 - a.新たなスライドを保管するフィーダと、
b.細胞の単層を前記スライド上へ塗布する第1のステーションと、
c.前記スライドを染色、固定及び乾燥させる第2のステーションと、
d.前記スライドを照明すると共に画像化する第3のステーションと、
e.処理したスライドを受け取るコレクタと、
f.前記スライドを、前記フィーダから開始して、前記第1のステーション、前記第2のステーション、前記第3のステーション、次いで前記コレクタまで、前記システムを通して移動させるアドバンサと
を有するプラットフォームを備える、請求項1に記載のシステム。 - 前記ソフトウェアは、前記コンピュータに、
発光源が、
a.前記スライドを照明する白色光を照射し、
b.第1の光フィルタを前記白色光に適用して前記白色光の照射を第1の波長に制限し、
c.第2の光フィルタを前記白色光に適用して前記白色光の照射を第2の波長に制限する
ように命令させる、請求項1に記載のシステム。 - 前記ソフトウェアは、前記コンピュータに、前記発光源が第3の光フィルタを前記白色光に適用して前記白色光の照射を第3の波長に制限するように命令させる、請求項14に記載のシステム。
- 前記第1の波長は430nmであり、前記第2の波長は570nmである、請求項14に記載のシステム。
- 前記第1の波長は430nmであり、前記第2の波長は500nmであり、前記第3の波長は525nm又は600nmである、請求項15に記載のシステム。
- 前記ソフトウェアは、前記コンピュータに、
a.空間シフト又は他の歪みを補償することによって前記画像を洗練させ、
b.白色光の少なくとも2つの別個の波長が前記スライドに誘導されるときに前記受光装置がとらえる2つ以上の画像を組み合わせて、マルチカラー画像を表示するために生成する、請求項14に記載のシステム。 - 前記ソフトウェアは、前記コンピュータに、前記細胞の空間的特徴と、濃度的特徴と、比色的特徴と、構造的特徴とを決定させて、細胞の種類を分類する、請求項14に記載のシステム。
- 前記コンピュータの前記ソフトウェアは、
a.前記コンピュータに、前記受光装置が前記スライドの白黒画像をとらえるように命令させ、
b.前記コンピュータに、前記レンズの焦点距離を調整することによって焦点及び画質を補正させ、
c.前記コンピュータに、複数のフィルタを前記スライドと前記光源との間に介在させながら前記レンズの焦点位置をシフトさせる、請求項14に記載のシステム。 - 前記白色光を生成するハロゲン球と、
前記フィルタの位置を変える回転モータと
を備える、請求項14に記載の発光源。 - 前記ソフトウェアは、前記コンピュータに、
光源が、
a.第1のLEDに第1の波長で光を照射させ、
b.第2のLEDに第2の波長で光を照射させる
ように命令させる、請求項1に記載のシステム。 - 血液又は骨髄由来の細胞を分析する方法であって、
a.前記血液又は前記骨髄を含有する流体を、チップを使用してスライド上へ分注することと、
b.受光装置を用いて前記スライドの画像をとらえることと、
c.前記スライド上方のX方向成分とY方向成分とZ方向成分とを有する特定の高さの位置に前記チップを位置付けるように、アプリケータコントローラに命令することと、
d.アプリケータのチップを、ある方向成分及びある速度成分を有する特定の速度で前記スライドを横切って移動させるように、前記アプリケータコントローラに命令することと、
e.希釈流体を前記チップから特定の速度で流出させるように前記アプリケータに命令することと、
f.前記チップの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに、細胞の単層及びある流れ幅を有する細胞の第1の流れを前記スライドにわたって塗布させることと、
g.前記チップの位置を特定の距離だけ変えるように前記アプリケータコントローラに指示することと、
h.前記チップの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに、前記第1の流れの近くの位置に定着する細胞の第2の流れを前記スライドにわたって塗布させることと
を含む方法。 - 前記血液又は前記骨髄を第1のリザーバに貯蔵する工程と、
希釈剤を第2のリザーバに貯蔵する工程と、
ミキサにおいて前記血液又は前記骨髄と前記希釈剤とを混合して希釈流体を形成する工程と、
チップを使用して前記流体及び前記細胞をスライド上へ分注する工程と
を含む、請求項23に記載の方法。 - 前記第1の流れ及び前記第2の流れは、前記スライド上に、間隙のない連続的な細胞の単層を形成する、請求項23に記載の方法。
- 前記特定の距離は前記流れ幅に等しい、請求項23に記載の方法。
- 前記流体は、塩又はタンパク質を主成分とする希釈剤を含む、請求項23に記載の方法。
- 前記流体は、ウシアルブミン、プラズマネート、フィコール、デキストランのいずれかを含む、請求項23に記載の方法。
- 前記流体は、プラズマネート1部毎にプラズマライト4部を含有する希釈剤を含む、請求項23に記載の方法。
- 前記流体は、5容量%のアルブミンを含有する希釈剤1部毎に血液2部を含有する、請求項23に記載の方法。
- a.前記第1の流れの画像をとらえるように受光装置に命令する工程と、
b.前記第1の流れの幅を決定するために前記画像を分析する工程と、
c.前記チップを前記第1の流れの幅と等しい距離だけ移動させる工程と
を含む、請求項23に記載の方法。 - a.細胞の第3の流れを前記スライドにわたって、一定のY方向成分及びZ方向成分並びに増大するX方向成分を有する線に沿って塗布する工程と、
b.細胞の第4の流れを前記スライドにわたって、一定のY方向成分及びZ方向成分並びに減少するX方向成分を有する線に沿って塗布する工程と
を含み、
c.前記第1の流れと、前記第2の流れと、前記第3の流れと、前記第4の流れとは、前記スライド上に、間隙のない連続的な細胞の単層の流れを形成する、請求項23に記載の方法。 - 前記スライドを洗浄する放電ユニットを準備する工程と、
染料を前記スライド上へ分注するディスペンサを準備する工程と、
前記スライドを傾けて余分な染料を除去するスライドティルタを準備する工程と、
前記スライドの画像を撮影する受光装置を準備する工程と、
前記スライドを前記受光装置の下に位置付けるスライドムーバを準備する工程と、
前記スライド上へ又は該スライドを通して光を誘導する発光装置を準備する工程と
を含む、請求項23に記載の方法。 - a.前記チップを前記スライドの上方約70ミクロンに位置付ける工程と、
b.流体を約0.1マイクロリットル/秒の速度で前記チップから流出させる工程と、
c.前記チップを前記スライドに沿って約30mm/秒の速度で移動させる工程と
を含む、請求項23に記載の方法。 - a.新たなスライドを保管するためのフィーダを備えたプラットフォームを準備する工程と、
b.細胞の単層を前記スライド上へ塗布する第1のステーションを準備する工程と、
c.前記スライドを染色、固定及び乾燥させる第2のステーションを準備する工程と、
d.前記スライドを照明すると共に画像化する第3のステーションを準備する工程と、
e.処理したスライドを受け取るコレクタを準備する工程と、
f.前記スライドを、前記フィーダから開始して、前記第1のステーション、前記第2のステーション、前記第3のステーション、次いで前記コレクタまで、前記システムを通して移動させる工程と
を含む、請求項23に記載の方法。 - a.前記スライドを照明する白色光を照射する工程と、
b.前記白色光の照射を第1の波長に制限するために第1の光フィルタを前記白色光に適用する工程と、
c.前記白色光の照射を第2の波長に制限するために第2の光フィルタを前記白色光に適用する工程と
を含む、請求項23に記載の方法。 - 前記白色光の照射を第3の波長に制限するために第3の光フィルタを前記白色光に適用する工程を含む、請求項23に記載のプロセス。
- 前記第1の波長は430nmであり、前記第2の波長は570nmである、請求項36に記載の方法。
- 前記第1の波長は430nmであり、前記第2の波長は500nmであり、前記第3の波長は525nm又は600nmである、請求項37に記載の方法。
- a.空間シフトを補償することによって前記画像を洗練させる工程と、
b.白色光の少なくとも2つの別個の波長が前記スライドに誘導されるときに、マルチカラー画像を表示するために生成するように、前記受光装置がとらえる2つ以上の画像を組み合わせる工程と
を含む、請求項36に記載の方法。 - 細胞の種類を分類するために、前記細胞の空間的特徴、濃度的特徴、比色的特徴、構造的特徴を決定する工程を含む、請求項36に記載の方法。
- a.前記受光装置に前記スライドの白黒画像をとらえるように命令する工程と、
b.前記レンズの焦点距離を調整することによって焦点及び画質を補正する工程
と、
c.複数のフィルタを前記スライドと前記光源との間に介在させながら前記レンズの焦点位置をシフトさせる工程と
を含む、請求項36に記載の方法。 - 前記白色光を生成するハロゲン球と、前記フィルタの位置を変える回転モータとを準備する工程を含む、請求項36に記載の方法。
- a.第1のLEDに第1の波長で光を照射させる工程と、
b.第2のLEDに第2の波長で光を照射させる工程と
を含む、請求項23に記載の方法。 - カバースリップ又は油対物レンズを前記スライドに取り付けることを含まない、請求項23に記載の方法。
- 血液又は骨髄由来の細胞を分析するシステムであって、
a.前記骨髄又は前記血液を含む流体を分注するアプリケータであって、アプリケータコントローラと、前記流体及び前記細胞とをスライド上へ分注するチップを備えたアプリケータと、
b.マイクロプロセッサと、コンピュータ可読媒体に記憶されているソフトウェアとを含むコンピュータと
を備え、
前記ソフトウェアは、前記コンピュータに対して、
i.前記チップを前記スライド上方の特定の高さの位置に位置付けるように前記アプリケータコントローラに命令する工程であって、前記位置は、X方向成分とY方向成分とZ方向成分とを有する工程と、
ii.前記アプリケータのチップを特定の速度で前記スライドを横切って移動させるように前記アプリケータコントローラに命令する工程であって、前記速度は、ある方向成分及びある速度成分を有する工程と、
iii.希釈流体を前記チップから特定の速度で流出させるように前記アプリケータに命令する工程と、
iv.前記チップの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに細胞の第1の流れを前記スライドにわたって塗布させる工程であって、前記第1の流れは、細胞の単層及びある流れ幅を有する工程と、
v.前記チップの位置を特定の距離だけ変えるように前記アプリケータコントローラに指示する工程と、
vi.前記チップの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに細胞の第2の流れを前記スライドにわたって塗布させる工程であって、前記第2の流れは、前記第1の流れの近くの位置に定着する工程と
を行わせるシステム。 - 前記システムは2つの受光装置を備え、
前記コンピュータは、第1の受光装置に、染色及び固定されていないスライドの画像をとらえさせ、前記コンピュータは、第2の受光装置に、前記スライドを染色及び固定した後で、該スライドの画像をとらえさせる、請求項46に記載のシステム。 - 血液又は骨髄由来の細胞を分析する方法であって、
a.前記血液又は前記骨髄を含有する流体を、チップを使用してスライド上へ分注することと、
b.前記スライド上のX方向成分とY方向成分とZ方向成分とを有する特定の高さの位置に前記チップを位置付けるように、アプリケータコントローラに命令することと、
c.前記アプリケータのチップを、ある方向成分及びある速度成分を有する特定の速度で前記スライドを横切って移動させるように、前記アプリケータコントローラに命令することと、
d.前記流体を前記チップから特定の速度で流出させるように前記アプリケータに命令することと、
e.前記チップの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに、細胞の単層及びある流れ幅を有する細胞の第1の流れを前記スライドにわたって塗布させることと、
f.前記チップの位置を前記流れ幅に等しい距離だけ変えるように、前記アプリケータコントローラに指示することと、
g.前記チップの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに、前記第1の流れの近くの位置に定着する細胞の第2の流れを前記スライドにわたって塗布させることと
を含む方法。 - 染色及び固定されていないスライドの画像をとらえるように第1の受光装置に命令する工程と、
前記スライドを染色及び固定した後で、該スライドの画像をとらえるように第2の受光装置に命令する工程と
を含む、請求項48に記載の方法。 - 血液又は骨髄由来の細胞を分析するシステムであって、
a.前記骨髄又は前記血液を含む流体を分注するアプリケータであって、前記流体及び前記細胞をスライド上へ分注するチップを備えたアプリケータと、
b.前記スライドを移動させるスライドコントローラと、
c.マイクロプロセッサと、コンピュータ可読媒体に記憶されているソフトウェアとを含むコンピュータと
を備え、
前記ソフトウェアは、前記コンピュータに対して、
i.前記スライドを前記チップの下方の特定の高さの位置に位置付けるように前記スライドコントローラに命令する工程であって、前記位置は、X方向成分とY方向成分とZ方向成分とを有する工程と、
ii.前記スライドを特定の速度で前記チップを横切って移動させるように前記スライドコントローラに命令する工程であって、前記速度は、ある方向成分及びある速度成分を有する工程と、
iii.希釈流体を前記チップから特定の速度で流出させるように前記アプリケータに命令する工程と、
iv.前記スライドの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに細胞の第1の流れを前記スライドにわたって塗布させる工程であって、前記第1の流れは、細胞の単層及びある流れ幅を有する工程と、
v.前記チップの位置を特定の距離だけ変えるように前記スライドコントローラに指示する工程と、
vi.前記スライドの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに細胞の第2の流れを前記スライドにわたって塗布させる工程であって、前記第2の流れは、前記第1の流れの近くの位置に定着する工程と
を行わせるシステム。 - 血液又は骨髄由来の細胞を分析する方法であって、
a.血液又は骨髄を含有する流体を、チップを使用してスライド上へ分注することと、
b.前記チップの下方のX方向成分とY方向成分とZ方向成分とを有する特定の高さの位置に前記スライドを位置付けるように、スライドコントローラに命令することと、
c.前記スライドを、ある方向成分及びある速度成分を有する特定の速度で前記スライドを横切って移動させるように、前記スライドコントローラに命令することと、
d.前記流体を前記チップから特定の速度で流出させることと、
e.前記チップの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに、細胞の単層及びある流れ幅を有する細胞の第1の流れを前記スライドにわたって塗布させることと、
f.前記スライドの位置を特定の距離だけ変えるように前記スライドコントローラに指示することと、
g.前記スライドの位置が一定のZ方向成分を有するように、前記チップに、前記第1の流れの近くの位置に定着する細胞の第2の流れを前記スライドにわたって塗布させることと
を含む方法。
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