FR3143366A1 - Cosmetic active ingredient containing an extract of Aureobasidium pullulans - Google Patents

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Abstract

La présente concerne un principe actif cosmétique obtenu à partir d’une levure de l’espèce Aureobasidium pullulans et ses utilisations cosmétiques, en particulier pour une application anti-âge.The present relates to a cosmetic active ingredient obtained from a yeast of the Aureobasidium pullulans species and its cosmetic uses, in particular for an anti-aging application.

Description

Principe actif cosmétique contenant un extrait deAureobasidium pullulansCosmetic active ingredient containing an extract of Aureobasidium pullulans

L’invention concerne un principe actif cosmétique obtenu à partir d’une levure de l’espèceAureobasidium pullulanset ses utilisations cosmétiques, en particulier pour une application anti-âge.The invention relates to a cosmetic active ingredient obtained from a yeast of the Aureobasidium pullulans species and its cosmetic uses, in particular for an anti-aging application.

Etat de l’artState of the art

L’industrie cosmétique est toujours à la recherche de nouveaux ingrédients cosmétiques pour satisfaire les besoins des consommateurs.The cosmetics industry is always looking for new cosmetic ingredients to meet consumer needs.

Il existe donc un besoin pour de nouveaux produits cosmétiques anti-âge permettant surtout d’améliorer l’éclat du teint et la fonction barrière, voire de diminuer les rougeurs ou encore d’atténuer les rides.There is therefore a need for new anti-aging cosmetic products that can, above all, improve the radiance of the complexion and the barrier function, or even reduce redness or even reduce wrinkles.

Pour répondre à ce besoin, l’inventeur s’est intéressé à des matières premières naturelles et originales pour développer de tels ingrédients. Les levures, en particulier les levures dites adaptogènes et polyextrêmotolérantes, ont la particularité de survivre dans des environnements très hostiles (températures extrêmes, milieux pauvres en nutriments ou en matières organiques, milieux secs, ou encore milieux très exposés aux UVs). Pour survivre, elles ont su développer des mécanismes d’adaptation remarquables et représentent ainsi un intérêt certain pour l’industrie cosmétique.To meet this need, the inventor was interested in natural and original raw materials to develop such ingredients. Yeasts, in particular so-called adaptogenic and polyextremotolerant yeasts, have the particularity of surviving in very hostile environments (extreme temperatures, environments poor in nutrients or organic matter, dry environments, or even environments very exposed to UV rays). To survive, they have been able to develop remarkable adaptation mechanisms and thus represent a certain interest for the cosmetic industry.

Contrairement à l’art antérieur qui utilise essentiellement la levureAureobasidium pullulanspour fermenter des matières organiques animales ou végétales ou produire un polysaccharide particulier, le pullulan, l’inventeur utilise la biomasse des levures pour développer de nouveaux ingrédients d’intérêt.Unlike the prior art which essentially uses the yeast Aureobasidium pullulans to ferment animal or plant organic matter or produce a particular polysaccharide, pullulan, the inventor uses yeast biomass to develop new ingredients of interest.

Dans ce contexte, l’inventeur a, de façon très surprenante, identifié une levure appartenant à l’espèceAureobasidium pullulansdans le microbiote de rosiers cultivés sur le plateau de Valensol en France.In this context, the inventor has, very surprisingly, identified a yeast belonging to the species Aureobasidium pullulans in the microbiota of rose bushes grown on the Valensol plateau in France.

Ainsi, l’invention propose un nouveau principe actif cosmétique obtenu à partir d’une levure de l’espèceAureobasidium pullulans.Thus, the invention proposes a new cosmetic active ingredient obtained from a yeast of the Aureobasidium pullulans species.

La levureAureobasidium pullulans, également dénommée levure noire ou « Black yeast » est ubiquiste, polyextrêmotolérante et se présente soit sous forme de champignon filamenteux, soit sous forme unicellulaire.Aureobasidium pullulansest bien connue comme épiphyte naturel de nombreuses espèces végétales, telles que la pomme ou le raisin. Depuis plusieurs années, elle est utilisée en biotechnologie pour la production de plusieurs enzymes ou dans la lutte contre certaines maladies du règne végétal, telles que la maladie du pommier.The yeast Aureobasidium pullulans , also called black yeast, is ubiquitous, polyextremotolerant and occurs either in the form of a filamentous fungus or in unicellular form. Aureobasidium pullulans is well known as a natural epiphyte of many plant species, such as apples and grapes. For several years, it has been used in biotechnology for the production of several enzymes or in the fight against certain plant diseases, such as apple tree disease.

Enfin, il est également connu, des compositions cosmétiques comprenant un surnageant de culture d’Aureobasidium pullulansou des extraits de plantes fermentés parAureobasidium pullulan s, mais aucun enseignement ne décrit l’utilisation d’un extrait d’Aureobasidium pullulanscontenant au moins 25% de sucres selon la présente invention pour un effet anti-âge.Finally, cosmetic compositions comprising a culture supernatant of Aureobasidium pullulans or plant extracts fermented by Aureobasidium pullulans are also known, but no teaching describes the use of an extract of Aureobasidium pullulans containing at least 25 % of sugars according to the present invention for an anti-aging effect.

Aussi, l’invention vise un principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait issu de la biomasse de la levure de l’espèceAureobasidium pullulans, en particulier un principe actif cosmétique comprenant au moins 25% de sucres, en poids de matière sèche de l’extrait.Also, the invention aims at a cosmetic active principle comprising at least one extract derived from the biomass of yeast of the species Aureobasidium pullulans , in particular a cosmetic active principle comprising at least 25% sugars, by weight of dry matter of the 'extract.

Dans le contexte de l’invention, la levureAureobasidium pullulansa été prélevée sur des rosiers, avantageusement cultivés sur le plateau de Valensol (France), préférentiellement la levure est prélevée sur les fleurs, et/ou les épines et/ou les racines deRosa sp.In the context of the invention, the yeast Aureobasidium pullulans was taken from rose bushes, advantageously cultivated on the Valensol plateau (France), preferably the yeast is taken from the flowers, and/or the thorns and/or the roots of Rosa sp .

L’invention se rapporte également à un procédé de préparation du principe actif selon l’invention, comprenant notamment une culture de la biomasse d’Aureobasidium pullulansdans un milieu de culture, suivie d’une solubilisation de la levureAureobasidium pullulansdans l’eau, une extraction des sucres, une séparation de la phase soluble et insoluble, puis une récupération de la phase soluble, une inactivation enzymatique, une purification et éventuellement une concentration de l’extrait suivie d’une filtration stérilisante.The invention also relates to a process for preparing the active principle according to the invention, comprising in particular a cultivation of the biomass of Aureobasidium pullulans in a culture medium, followed by a solubilization of the yeast Aureobasidium pullulans in water , extraction of the sugars, separation of the soluble and insoluble phase, then recovery of the soluble phase, enzymatic inactivation, purification and possibly concentration of the extract followed by sterilizing filtration.

Le principe actif selon l’invention est d’origine naturelle. Il présente avantageusement un effet anti-âge, permettant ainsi de répondre aux problématiques de l’art antérieur. Aussi, il peut être utilisé pour des applications cosmétiques et être ainsi intégré dans une composition cosmétique, avantageusement une composition sous une forme adaptée à une application topique. L’invention se rapporte donc également à une utilisation cosmétique d’une composition comprenant au moins 0,1% en poids du principe actif selon l’invention, en particulier pour ses effets anti-âges.The active ingredient according to the invention is of natural origin. It advantageously presents an anti-aging effect, thus making it possible to respond to the problems of the prior art. Also, it can be used for cosmetic applications and thus be integrated into a cosmetic composition, advantageously a composition in a form suitable for topical application. The invention therefore also relates to a cosmetic use of a composition comprising at least 0.1% by weight of the active principle according to the invention, in particular for its anti-aging effects.

D’autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée de l’invention et des exemples qui vont suivre.Other characteristics and advantages will emerge from the detailed description of the invention and the examples which follow.

Description détaillée de l’inventionDetailed description of the invention

DéfinitionDefinition

Par «Aureobasidium pullulans» au sens de l’invention, on entend toute levure de la famille desDothioraceae, du genreAureobasidiumet de l’espèceAureobasidium pullulans. Préférentiellement, une souche de la levureAureobasidium pullulansenregistrée dans une collection de levures (CIRM), sous le numéro CLIB 2138. Préférentiellement,Aureobasidium pullulansa été isolée à partir de rosiers (Rosa sp.).By “ Aureobasidium pullulans ” within the meaning of the invention is meant any yeast of the Dothioraceae family, of the Aureobasidium genus and of the Aureobasidium pullulans species. Preferably, a strain of the yeast Aureobasidium pullulans registered in a yeast collection (CIRM), under the number CLIB 2138. Preferably, Aureobasidium pullulans was isolated from rose bushes ( Rosa sp .).

Par « principe actif cosmétique » au sens de l’invention, on entend un extrait comprenant au moins un ensemble de molécules présentant un effet cosmétique sur la peau. Préférentiellement l’effet cosmétique sur la peau est un effet anti-âge.By “cosmetic active ingredient” within the meaning of the invention is meant an extract comprising at least one set of molecules having a cosmetic effect on the skin. Preferably the cosmetic effect on the skin is an anti-aging effect.

Par « extrait deAureobasidium pullulans» au sens de l’invention, on entend un extrait comprenant au moins un ensemble de molécules, préférentiellement un extrait de la biomasse de la levureAureobasidium pullulanscomprenant au moins des sucres représentant au moins 25% en poids du poids total de l’extrait, obtenu à partir de tout procédé d’extraction bien connu de l’Homme du métier, par exemple par autolyse induite, sonication, homogénéisation, hydrolyse chimique, ou hydrolyse enzymatique. De tels procédés d’extraction sont décrits dans les publications Varelas V.et al., Drug Test Anal. 2016 Jan et Du L.et al.Molecules. 2020 Jan 23. L’extrait selon l’invention n’est pas un extrait du surnageant de culture d’Aureobasidium pullulans. By “extract of Aureobasidium pullulans ” within the meaning of the invention, is meant an extract comprising at least one set of molecules, preferably an extract of the biomass of the yeast Aureobasidium pullulans comprising at least sugars representing at least 25% by weight of the total weight of the extract, obtained from any extraction process well known to those skilled in the art, for example by induced autolysis, sonication, homogenization, chemical hydrolysis, or enzymatic hydrolysis. Such extraction processes are described in the publications Varelas V. et al. , Anal Drug Test. 2016 Jan and Du L. et al. Molecules. 2020 Jan 23. The extract according to the invention is not an extract from the culture supernatant of Aureobasidium pullulans.

Par « extrait du surnageant de culture de levure », on entend un extrait n’étant pas un extrait de la biomasse de culture d’Aureobasidium pullulans. By “extract from the yeast culture supernatant” is meant an extract which is not an extract from the culture biomass of Aureobasidium pullulans.

Principe actif selon l’inventionActive principle according to the invention

La présente invention a donc pour objet un principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait de la biomasse de la levure de l’espèceAureobasidium pullulans, dans lequel l’extrait est riche en sucres.The subject of the present invention is therefore a cosmetic active ingredient comprising at least one extract of the biomass of yeast of the species Aureobasidium pullulans , in which the extract is rich in sugars.

Selon un mode de réalisation, la levureAureobasidium pullulansest préférentiellement la levureAureobasidium pullulansest obtenue à partir de rosiers, plus préférentiellement à partir des fleurs, et/ou des épines et/ou des racines deRosa sp . According to one embodiment, the yeast Aureobasidium pullulans is preferably the yeast Aureobasidium pullulans is obtained from rose bushes, more preferably from the flowers, and/or thorns and/or roots of Rosa sp .

La biomasse d’Aureobasidium pullulansest notamment produite à partir de la levure. Cette étape est réalisée selon le mode de culture des levures, dans un milieu adapté à leur développement, par exemple un milieu de culture adapté classique pour l’homme de métier. Une fois la biomasse obtenue, on réalise une étape d’extraction en vue d’obtenir les molécules actives, préférentiellement une extraction des sucres. Aureobasidium pullulans biomass is notably produced from yeast. This step is carried out according to the yeast cultivation method, in a medium suitable for their development, for example a conventional culture medium suitable for those skilled in the art. Once the biomass has been obtained, an extraction step is carried out in order to obtain the active molecules, preferably an extraction of the sugars.

L’extrait selon l’invention comprend au moins 25% de sucres en poids de matière sèche de l’extrait. L’extrait selon l’invention peut également comprendre des peptides et des cendres minérales.The extract according to the invention comprises at least 25% sugars by weight of dry matter of the extract. The extract according to the invention may also comprise peptides and mineral ashes.

Ainsi, l’extrait selon l’invention comprend des sucres, ceux-ci représentent au moins 25% de l’extrait, en poids de matière sèche de l’extrait. Préférentiellement, l’extrait selon l’invention comprend au moins 30% de sucres, en poids de matière sèche de l’extrait.Thus, the extract according to the invention comprises sugars, these represent at least 25% of the extract, by weight of dry matter of the extract. Preferably, the extract according to the invention comprises at least 30% sugars, by weight of dry matter of the extract.

La teneur en sucres totaux dans ledit principe actif peut être déterminée par la méthode de DUBOIS (Dubois M. et al., Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956). La teneur en sucres totaux dans le principe actif selon l’invention est exprimée en pourcentage par rapport à la matière sèche.The total sugar content in said active ingredient can be determined by the DUBOIS method (Dubois M. et al., Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956). The total sugar content in the active ingredient according to the invention is expressed as a percentage relative to the dry matter.

La taille des sucres présents dans l’extrait peut être caractérisée par chromatographie HPLC/RI. Ils peuvent être sous forme de monosaccharides ou sous forme d’oligosaccharides, préférentiellement les oligosaccharides ont une masse molaire inférieure à 1800Da.The size of the sugars present in the extract can be characterized by HPLC/RI chromatography. They can be in the form of monosaccharides or in the form of oligosaccharides, preferably the oligosaccharides have a molar mass of less than 1800Da.

De façon particulièrement préféré, les oligosaccharides sont majoritaires au sein de l’extrait selon la présente invention. Enfin, selon un mode de réalisation particulièrement préféré, les sucres de l’extrait sont composés d’au moins 80% d’oligosaccharides.Particularly preferably, the oligosaccharides are the majority in the extract according to the present invention. Finally, according to a particularly preferred embodiment, the sugars of the extract are composed of at least 80% oligosaccharides.

Préférentiellement, les oligosaccharides de l’extrait sont des oligosaccharides de glucose liés par des liaisons alpha et/ou des oligosaccharides de glucose liés par des liaisons bêta.Preferably, the oligosaccharides of the extract are glucose oligosaccharides linked by alpha bonds and/or glucose oligosaccharides linked by beta bonds.

Les oligosaccharides de glucose liés en alpha sont des oligomères constitués de D-glucose liés par des liaisons alpha. Ces oligosaccharides présents dans le principe actif selon l’invention présentent un degré de polymérisation (DP) compris entre 2 et 10 unités, et présentent une masse molaire inférieure à 1800 Daltons. Préférentiellement, ils représentent entre 1,5 et 4 g/L.Alpha-linked glucose oligosaccharides are oligomers consisting of D-glucose linked by alpha bonds. These oligosaccharides present in the active ingredient according to the invention have a degree of polymerization (DP) of between 2 and 10 units, and have a molar mass of less than 1800 Daltons. Preferably, they represent between 1.5 and 4 g/L.

Les oligosaccharides de glucose liés en bêta sont des oligosaccharides, constitués de D-glucose liés par des liaisons bêta. Ces oligosaccharides présents dans le principe actif selon l’invention présentent un degré de polymérisation compris entre 2 et 10 unités, et présentent une masse molaire inférieure à 1800 Daltons. Préférentiellement, ils représentent entre 1,5 et 4 g/L.Beta-linked glucose oligosaccharides are oligosaccharides, consisting of D-glucose linked by beta bonds. These oligosaccharides present in the active principle according to the invention have a degree of polymerization of between 2 and 10 units, and have a molar mass of less than 1800 Daltons. Preferably, they represent between 1.5 and 4 g/L.

Aussi, le principe actif cosmétique selon l’invention comprend des sucres de structures oligosaccharidiques ayant un degré de polymérisation (DP) inférieur à 10, soit d’une masse molaire inférieure à 1800 Daltons.Also, the cosmetic active ingredient according to the invention comprises sugars with oligosaccharide structures having a degree of polymerization (DP) less than 10, i.e. a molar mass less than 1800 Daltons.

L’extrait selon l’invention comprend également des peptides. Préférentiellement, ceux-ci représentent au moins 30% en poids de matière sèche de l’extrait. La teneur en peptides peut être déterminée en mesurant la teneur en azote total selon la méthode de KJELDHAL (référence : Official method of analysis of the A.O.C., 12th ed. W Horwitz, E.D., New-York, 15-60, 1975). Les peptides ont une masse molaire inférieure à 2000Da. La répartition et la masse molaire des peptides peut être déterminée par chromatographie F.P.L.C. d’exclusion stérique (Fast Protein Liquid Chromatography), la quantité de chaque fraction peptidique est déterminée par dosage spectrophotométrique selon la méthode de Lowry (Lowry et al., Protein measurement with the Folin reagent, J. Biol. Chem., 193, 265-275, 1951).The extract according to the invention also comprises peptides. Preferably, these represent at least 30% by weight of dry matter of the extract. The peptide content can be determined by measuring the total nitrogen content according to the KJELDHAL method (reference: Official method of analysis of the A.O.C., 12th ed. W Horwitz, E.D., New York, 15-60, 1975). Peptides have a molar mass of less than 2000Da. The distribution and molar mass of the peptides can be determined by F.P.L.C. chromatography. steric exclusion (Fast Protein Liquid Chromatography), the quantity of each peptide fraction is determined by spectrophotometric assay according to the Lowry method (Lowry et al., Protein measurement with the Folin reagent, J. Biol. Chem., 193, 265 -275, 1951).

Lorsque l’extrait selon l’invention comprend des cendres minérales, le taux de cendres est préférentiellement compris entre 8 et 18% en poids par rapport à la matière sèche de l’extrait, encore plus préférentiellement compris entre 10 et 15%. La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons à 550°C dans un four à moufle. La nature des minéraux contenus dans les cendres peut être déterminée par spectrométrie d’émission optique (ICP / OES). Le dosage des ions chlorure contenus dans les cendres est réalisé par titration avec du nitrate d’argent. Préférentiellement, les cendres minérales contenues dans l’extrait selon l’invention comprennent du calcium, du phosphore, des ions chlorure, du magnésium, du soufre et du sodium.When the extract according to the invention comprises mineral ashes, the ash content is preferably between 8 and 18% by weight relative to the dry matter of the extract, even more preferably between 10 and 15%. The raw ash content can be determined by weighing the residue from the incineration of the samples at 550°C in a muffle furnace. The nature of the minerals contained in the ashes can be determined by optical emission spectrometry (ICP/OES). The dosage of chloride ions contained in the ashes is carried out by titration with silver nitrate. Preferably, the mineral ashes contained in the extract according to the invention comprise calcium, phosphorus, chloride ions, magnesium, sulfur and sodium.

La teneur en matières sèches de l’extrait peut être déterminée par la pesée des résidus issus du séchage de l’extrait selon l’invention à 105°C dans une étuve jusqu’à l’obtention d’un poids constant. Préférentiellement, l’extrait selon l’invention sous forme liquide a une teneur en matières sèches de : 10 g/L à 40 g/L, encore plus préférentiellement de 17 g/L à 26 g/L.The dry matter content of the extract can be determined by weighing the residues resulting from drying the extract according to the invention at 105°C in an oven until a constant weight is obtained. Preferably, the extract according to the invention in liquid form has a dry matter content of: 10 g/L to 40 g/L, even more preferably 17 g/L to 26 g/L.

Le principe actif cosmétique selon l’invention peut se présenter sous forme liquide ou sous forme solide.The cosmetic active ingredient according to the invention can be in liquid form or in solid form.

Lorsqu’il se présente sous forme liquide, le principe actif selon l’invention est préférentiellement l’extrait tel que décrit précédemment en tant que tel. Il se présente sous forme d’un liquide limpide, de couleur jaune très clair et présentant une faible odeur. Il peut toutefois être plus coloré et/ou être décoloré par tout procédé connu de l’homme du métier. Le principe actif peut également être combiné à des agents de stabilisation ou des agents de conservation.When it is in liquid form, the active ingredient according to the invention is preferably the extract as described previously as such. It comes in the form of a clear liquid, very light yellow in color and with a faint odor. It may, however, be more colored and/or be discolored by any process known to those skilled in the art. The active ingredient can also be combined with stabilizing agents or preservatives.

Lorsqu’il se présente sous forme solide le principe actif selon l’invention est préférentiellement constitué par l’extrait d’Aureobasidium pullulanstel que précédemment décrit et par un support choisi parmi la maltodextrine, la gomme arabique, la lécithine de soja ou l’isomalt. Selon un mode de réalisation, particulièrement adapté, l’extrait représente au moins 10% en poids du principe actif et le support au plus 90% en poids du principe actif.When it is in solid form, the active principle according to the invention is preferably constituted by the extract of Aureobasidium pullulans as previously described and by a support chosen from maltodextrin, gum arabic, soy lecithin or isomalt. According to a particularly suitable embodiment, the extract represents at least 10% by weight of the active principle and the support at most 90% by weight of the active principle.

Dans le cas d’une forme solide dans laquelle le principe actif est associé à un support, les teneurs en peptides, en sucres et en cendres minérales dans le principe actif sont modifiées, le support étant généralement constitué majoritairement de sucres.In the case of a solid form in which the active principle is associated with a support, the contents of peptides, sugars and mineral ash in the active principle are modified, the support generally consisting mainly of sugars.

Le principe actif selon l’invention peut éventuellement être intégré dans une composition cosmétique, notamment une composition comprenant au moins 0,1% en poids dudit principe actif. En particulier, la composition est sous une forme adaptée à une application topique tel qu’une crème ou une lotion.The active ingredient according to the invention can optionally be integrated into a cosmetic composition, in particular a composition comprising at least 0.1% by weight of said active ingredient. In particular, the composition is in a form suitable for topical application such as a cream or lotion.

Procédé d’extractionExtraction process

L’extrait constituant ou contenu dans le principe actif selon l’invention peut être obtenu par tout procédé comprenant au moins une étape d’extraction de la biomasse de la levure d’Aureobasidium pullulans. Selon la présente invention, l’extraction de la biomasse de la levure ne consiste pas en la récupération du surnageant de la culture de la levure.The extract constituting or contained in the active principle according to the invention can be obtained by any process comprising at least one step of extracting the biomass of the yeast of Aureobasidium pullulans . According to the present invention, the extraction of the yeast biomass does not consist of the recovery of the supernatant of the yeast culture.

Préalablement au procédé d’obtention de l’extrait en tant que tel, il convient de produire la biomasse d’Aureobasidium pullulans. Cette étape est réalisée selon le mode de culture des levures dans un milieu adapté à leur développement, par exemple un milieu de culture adapté classique pour l’homme de métier. Une fois la biomasse obtenue, on réalise une étape d’extraction en vue d’obtenir les molécules actives, préférentiellement des sucres. L’étape d’extraction est réalisée par tout moyen connu de l’homme du métier, par exemple par autolyse induite, sonication, homogénéisation, lyse enzymatique, hydrolyse chimique, hydrolyse enzymatique.Prior to the process of obtaining the extract as such, it is appropriate to produce the biomass of Aureobasidium pullulans . This step is carried out according to the method of cultivating the yeasts in a medium suitable for their development, for example a conventional culture medium suitable for those skilled in the art. Once the biomass has been obtained, an extraction step is carried out in order to obtain the active molecules, preferably sugars. The extraction step is carried out by any means known to those skilled in the art, for example by induced autolysis, sonication, homogenization, enzymatic lysis, chemical hydrolysis, enzymatic hydrolysis.

Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif selon l’invention est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes :

  1. culture de la biomasse d’Aureobasidium pullulansdans un milieu de culture, préférentiellement un milieu de culture adapté,
  2. solubilisation à raison d’au moins 50 g/L de la biomasse d’Aureobasidium pullulansdans l’eau,
  3. extraction, préférentiellement extraction des sucres,
  4. traitement thermique,
  5. séparation de la phase soluble et insoluble, et récupération de la phase soluble,
  6. purification par tri moléculaire, et éventuellement décoloration et désodorisation,
  7. éventuellement concentration et filtration stérilisante.
According to a particularly suitable embodiment, the active principle according to the invention is obtained by implementing the following steps:
  1. cultivation of the biomass of Aureobasidium pullulans in a culture medium, preferably a suitable culture medium,
  2. solubilization at a rate of at least 50 g/L of the biomass of Aureobasidium pullulans in water,
  3. extraction, preferably extraction of sugars,
  4. thermal treatment,
  5. separation of the soluble and insoluble phase, and recovery of the soluble phase,
  6. purification by molecular sorting, and possibly decolorization and deodorization,
  7. possibly concentration and sterilizing filtration.

La séparation de la phase soluble et insoluble est réalisée par tout moyen connu de l’homme du métier, par exemple par centrifugation, filtration ou décantation. Préférentiellement, la séparation des phases soluble et insoluble est réalisée pour récupérer la phase soluble contenant entre autres les sucres solubles, tels que les oligosaccharides.The separation of the soluble and insoluble phase is carried out by any means known to those skilled in the art, for example by centrifugation, filtration or decantation. Preferably, the separation of the soluble and insoluble phases is carried out to recover the soluble phase containing, among other things, soluble sugars, such as oligosaccharides.

Eventuellement, le procédé comprend une étape de filtration après la récupération de la phase soluble pour éliminer les particules encore en suspension. Ainsi, cette étape de filtration permet la purification de la phase soluble récupérée et est réalisée afin d’éliminer les molécules de haut poids moléculaire.Optionally, the process includes a filtration step after recovery of the soluble phase to eliminate particles still in suspension. Thus, this filtration step allows the purification of the recovered soluble phase and is carried out in order to eliminate high molecular weight molecules.

Le produit obtenu à ce stade peut éventuellement être encore concentré et/ou purifié, préférentiellement par des étapes d’ultrafiltrations successives à travers des filtres de porosité différentes, en conservant les filtrats à chaque étape et/ou par une méthode de type chromatographique.The product obtained at this stage can optionally be further concentrated and/or purified, preferably by successive ultrafiltration stages through filters of different porosity, preserving the filtrates at each stage and/or by a chromatographic type method.

Le produit obtenu après filtration, avant ou après concentration et filtration stérilisante, est un extrait d’Aureobasidium pullulans, et constitue une première forme du principe actif selon l’invention, se présentant alors sous forme liquide.The product obtained after filtration, before or after concentration and sterilizing filtration, is an extract of Aureobasidium pullulans , and constitutes a first form of the active principle according to the invention, then present in liquid form.

L’extrait obtenu peut ensuite être séché et associé ou non à un support, pour se présenter sous forme solide. Cette phase peut être réalisée par la mise en œuvre des étapes suivantes :

  • un support d’atomisation, de préférence la maltodextrine, est ajouté dans l’extrait d’Aureobasidium pullulans, d’au plus 90% (en masse/volume) ;
  • cette solution est ensuite concentrée sous vide ;
  • une élimination des bactéries éventuellement présentes est réalisée par traitement thermique ;
  • l’atomisation permet d’obtenir une poudre.
The extract obtained can then be dried and associated or not with a support, to be presented in solid form. This phase can be achieved by implementing the following steps:
  • an atomization support, preferably maltodextrin, is added to the extract of Aureobasidium pullulans , at most 90% (by mass/volume);
  • this solution is then concentrated under vacuum;
  • any bacteria present is eliminated by heat treatment;
  • atomization produces a powder.

Les étapes des procédés décrits ci-avant, prises individuellement sont usuelles dans le domaine des extractions d’actifs à partir de levures et l’homme du métier est à même d’en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales.The steps of the processes described above, taken individually, are usual in the field of extractions of active ingredients from yeast and those skilled in the art are able to adjust the reaction parameters on the basis of their general knowledge.

Utilisation cosmétiqueCosmetic use

Le principe actif selon l’invention est particulièrement d’intérêt pour ses effets anti-âge.The active ingredient according to the invention is of particular interest for its anti-aging effects.

L’invention vise ainsi une utilisation cosmétique, non thérapeutique, du principe actif selon l’invention pour ses effets cosmétiques, seul pour au moins un effet cosmétique anti-âge.The invention thus aims at a cosmetic, non-therapeutic use of the active principle according to the invention for its cosmetic effects, alone for at least one anti-aging cosmetic effect.

Par utilisation non thérapeutique, on entend au sens de l’invention une utilisation cosmétique du principe actif selon l’invention ou d’une composition cosmétique le comprenant, destinée à des personnes saines non malades, en particulier à des personnes présentant une peau saine.For the purposes of the invention, non-therapeutic use means a cosmetic use of the active ingredient according to the invention or of a cosmetic composition comprising it, intended for healthy, non-sick people, in particular for people with healthy skin.

Préférentiellement, le principe actif selon l’invention, seul ou dans une composition, vise à être utilisé en application topique sur la peau.Preferably, the active ingredient according to the invention, alone or in a composition, is intended to be used in topical application on the skin.

Le principe actif selon l’invention peut être introduit dans des compositions d’au moins 0,1% en poids du principe actif selon l’invention. Ces compositions comprennent, outre l’actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d’inconfort inacceptables pour l’utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements.The active principle according to the invention can be introduced into compositions of at least 0.1% by weight of the active principle according to the invention. These compositions comprise, in addition to the active ingredient, a physiologically acceptable and preferably cosmetically acceptable medium, that is to say which does not cause unacceptable sensations of discomfort for the user such as redness, tightness or tingling.

L’invention est à présent illustrée par des exemples non limitatifs de compositions selon l’invention et par des résultats.The invention is now illustrated by non-limiting examples of compositions according to the invention and by results.

ExemplesExamples

Exemple 1 – Principe actif selon l’inventionExample 1 – Active principle according to the invention

Le principe actif de l’exemple 1 est obtenu à partir d’une levure d’Aureobasidium pullulansisolée de rosiers. Le principe actif de l’exemple 1 est obtenu par le procédé suivant :

  1. Culture deAureobasidium pullulansdans un milieu de culture adapté
  2. Solubilisation de la biomasse de la levureAureobasidium pullulansdans l’eau, à raison de 50g/l,
  3. Extraction des sucres,
  4. Traitement thermique,
  5. Séparation des phases solubles et insolubles,
  1. Purification par tri moléculaire,
  2. Concentration, et
  3. Filtration stérilisante.
The active ingredient of Example 1 is obtained from an Aureobasidium pullulans yeast isolated from rose bushes. The active principle of Example 1 is obtained by the following process:
  1. Cultivation of Aureobasidium pullulans in a suitable culture medium
  2. Solubilization of the biomass of the yeast Aureobasidium pullulans in water, at a rate of 50g/l,
  3. Extraction of sugars,
  4. Thermal treatment,
  5. Separation of soluble and insoluble phases,
  1. Purification by molecular sorting,
  2. Concentration, and
  3. Sterilizing filtration.

Le principe actif obtenu possède les caractéristiques suivantes :

  • Teneur en Matières Sèches = 20,1 g/L dont :
  • Teneur en Sucres Totaux (selon la méthode de Dubois) = 6,9 g/L (34%, en poids par rapport à la matière sèche)
    1. Dont la teneur en oligosaccharides de glucose liés en alpha = 2,5g/L
    2. Dont la teneur en oligosaccharides de glucose liés en bêta = 2,5g/L
  • Teneur en peptides (selon la méthode KJELDHAL) = 6,6 g/L (33%, en poids par rapport à la matière sèche)
  • Teneur en cendres minérales = 2,5 g/L (12%, en poids par rapport à la matière sèche)
  • pH = 3,5
  • Liquide limpide, jaune très clair, faible odeur
The active ingredient obtained has the following characteristics:
  • Dry Matter Content = 20.1 g/L including:
  • Total Sugar Content (according to the Dubois method) = 6.9 g/L (34%, by weight relative to dry matter)
    1. Of which the content of alpha-linked glucose oligosaccharides = 2.5g/L
    2. Of which the content of beta-linked glucose oligosaccharides = 2.5g/L
  • Peptide content (according to the KJELDHAL method) = 6.6 g/L (33%, by weight relative to dry matter)
  • Mineral ash content = 2.5 g/L (12%, by weight relative to dry matter)
  • pH = 3.5
  • Clear liquid, very light yellow, faint odor

Exemple 2 – Principe actifExample 2 – Active ingredient horsout inventioninvention

Le principe actif de l’exemple 2 est également obtenu à partir d’une levure d’Aureobasidium pullulansisolée de rosiers. Le principe actif de l’exemple 2 est obtenu par le procédé suivant :

  1. Culture deAureobasi di um pullulansdans un milieu de culture adapté
  2. Solubilisation de la biomasse de la levureAureobasidium pullulansdans l’eau, à raison de 50g/l,
  3. Extraction des protéines,
  4. Traitement thermique,
  5. Séparation des phases solubles et insolubles,
  6. Purification par tri moléculaire,
  7. Concentration, et
  8. Filtration stérilisante.
The active principle of Example 2 is also obtained from an Aureobasidium pullulans yeast isolated from rose bushes. The active principle of Example 2 is obtained by the following process:
  1. Cultivation of Aureobasi di um pullulans in a suitable culture medium
  2. Solubilization of the biomass of the yeast Aureobasidium pullulans in water, at a rate of 50g/l,
  3. Protein extraction,
  4. Thermal treatment,
  5. Separation of soluble and insoluble phases,
  6. Purification by molecular sorting,
  7. Concentration, and
  8. Sterilizing filtration.

Le principe actif obtenu possède les caractéristiques suivantes :

  • Teneur en Matières Sèches = 26,8 g/L dont :
  • Teneur en Sucres Totaux (selon la méthode Dubois) = 2,5 g/L (9%, en poids par rapport à la matière sèche)
  • Teneur en Peptides (selon la méthode de KJELDHAL) = 12,4 g/L (46%, en poids par rapport à la matière sèche)
  • Teneur en Cendres minérales = 5 g/L (19%, en poids par rapport à la matière sèche)
  • pH = 3,6
  • Liquide limpide, jaune très clair, odeur faible.
The active ingredient obtained has the following characteristics:
  • Dry Matter Content = 26.8 g/L including:
  • Total Sugar Content (according to the Dubois method) = 2.5 g/L (9%, by weight relative to dry matter)
  • Peptide content (according to the KJELDHAL method) = 12.4 g/L (46%, by weight relative to dry matter)
  • Mineral ash content = 5 g/L (19%, by weight relative to dry matter)
  • pH = 3.6
  • Clear liquid, very light yellow, faint odor.

Exemple 3 – Principe actif hors inventionExample 3 – Active ingredient outside the invention

Le principe actif de l’exemple 3 est obtenu à partir du surnageant de culture de la biomasse deAureobasidium pullulans.

  1. Culture deAureobasidium pullulansdans un milieu de culture adapté
  2. Séparation physique afin de récupérer le surnageant de culture de la biomasse
  3. Filtration stérilisante
The active principle of Example 3 is obtained from the culture supernatant of the biomass of Aureobasidium pullulans .
  1. Cultivation of Aureobasidium pullulans in a suitable culture medium
  2. Physical separation to recover the culture supernatant from the biomass
  3. Sterilizing filtration

Le principe actif obtenu possède les caractéristiques suivantes :

  • Teneur en Matières Sèches = 9,6 g/L dont :
  • Teneur en Sucres Totaux (selon la méthode de Dubois) = 1,6 g/L (17%, en poids par rapport à la matière sèche)
  • Teneur en Protéines (selon la méthode de Lowry) = 0,11 g/L (1%, en poids par rapport à la matière sèche)
  • Teneur en Cendres minérales = 6,2 g/L (65%, en poids par rapport à la matière sèche)
  • pH = 6,9
  • Liquide limpide, jaune clair, odeur faible.
The active ingredient obtained has the following characteristics:
  • Dry Matter Content = 9.6 g/L including:
  • Total Sugar Content (according to the Dubois method) = 1.6 g/L (17%, by weight relative to dry matter)
  • Protein content (according to the Lowry method) = 0.11 g/L (1%, by weight relative to dry matter)
  • Mineral ash content = 6.2 g/L (65%, by weight relative to dry matter)
  • pH = 6.9
  • Clear, light yellow liquid, faint odor.

Evaluation de l’effet cosmétique du principe actif selon l’inventionEvaluation of the cosmetic effect of the active ingredient according to the invention

Essai 1 - Effet du principe actif selonTest 1 - Effect of the active ingredient according to l’inventionthe invention sur leon the vieillissement des cellules du compartiment épidermiqueaging of epidermal compartment cells

La présente étude vise à étudier l’expression de certains gènes et à déterminer le taux de certaines protéines dans des kératinocytes et traités avec les différents extraits. Les kératinocytes sont vieillis au moyen d’un stress radicalaire UVB, ou sont issus de donneurs âgés.The present study aims to study the expression of certain genes and to determine the level of certain proteins in keratinocytes treated with the different extracts. Keratinocytes are aged using UVB radical stress, or are derived from aged donors.

Le tableau 1 liste les gènes du compartiment épidermique modulés lors d’un vieillissement par stress radicalaire.Table 1 lists the epidermal compartment genes modulated during aging by free radical stress.

SymboleSymbol NomName HSP90AA1HSP90AA1 heat shock protein 90 alpha family class A member 1heat shock protein 90 alpha family class A member 1 SIRT1SIRT1 sirtuin 1sirtuin 1

Le tableau 2 liste les protéines du compartiment épidermique modulées lors d’un vieillissement par stress radicalaire.Table 2 lists the epidermal compartment proteins modulated during aging by free radical stress.

NomName SymboleSymbol Parkinson disease protein 7Parkinson disease protein 7 DJ-1DJ-1 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 TNR6TNR6

Les résultats de l’étude sont présentés dans les tableaux 3 à 5 ci-après. Le tableau 3 représente l’expression des gènes HSP90AA1 et SIRT1 dans des kératinocytes soumis à un stress radicalaire UVB et traités avec les différents extraits.The results of the study are presented in Tables 3 to 5 below. Table 3 represents the expression of the HSP90AA1 and SIRT1 genes in keratinocytes subjected to UVB radical stress and treated with the different extracts.

HSP90AA1 (%)HSP90AA1 (%) Efficacité (%)Efficiency (%) SIRT1 (%)SIRT1 (%) Efficacité (%)Efficiency (%) Kératinocytes non vieillis, non stressésUnaged, unstressed keratinocytes TémoinWitness 100100 100100 Kératinocytes vieillis par stress UVBKeratinocytes aged by UVB stress TémoinWitness 3939 1616 EXEMPLE 1 0,5%EXAMPLE 1 0.5% 5858 + 48+ 48 3333 + 106+ 106 EXEMPLE 2 0,5%EXAMPLE 2 0.5% 4646 + 18+ 18 2020 + 25+ 25 EXEMPLE 3 0,5%EXAMPLE 3 0.5% 4444 + 13+ 13 33 00

Le principe actif selon l’invention, riche en sucres, (exemple 1) présente un meilleur effet sur l’expression des gènes HSP90AA1 et SIRT1 dans des kératinocytes vieillis par stress UVB que les extraits hors invention (exemple 2 et exemple 3).The active principle according to the invention, rich in sugars, (example 1) has a better effect on the expression of the HSP90AA1 and SIRT1 genes in keratinocytes aged by UVB stress than the extracts outside the invention (example 2 and example 3).

Le tableau 4 ci-après représente les taux d’expression des protéines DJ-1 et TNR6 dans des kératinocytes vieillis par stress UVB et traités avec les différents extraits.Table 4 below represents the expression levels of DJ-1 and TNR6 proteins in keratinocytes aged by UVB stress and treated with the different extracts.

DJ-1 (%)DJ-1 (%) Efficacité (%)Efficiency (%) TNR6 (%)TNR6 (%) Efficacité (%)Efficiency (%) Kératinocytes non vieillis, non stressésUnaged, unstressed keratinocytes TémoinWitness 100100 100100 Kératinocytes vieillis par stress UVBKeratinocytes aged by UVB stress TémoinWitness 24962496 507507 EXEMPLE 1 0,5%EXAMPLE 1 0.5% 22272227 - 11- 11 310310 - 39- 39 EXEMPLE 2 0,5%EXAMPLE 2 0.5% 22902290 - 8- 8 417417 - 18- 18 EXEMPLE 3 0,5%EXAMPLE 3 0.5% 24532453 - 2- 2 507507 00

Le principe actif selon l’invention, riche en sucres, (exemple 1) présente un meilleur effet sur le taux de protéines DJ-1 et TNR6 dans des kératinocytes vieillis par stress UVB que les extraits hors invention (exemple 2 et exemple 3).The active principle according to the invention, rich in sugars, (example 1) has a better effect on the level of DJ-1 and TNR6 proteins in keratinocytes aged by UVB stress than the extracts outside the invention (example 2 and example 3).

Le tableau 5 ci-après représente les taux d’expression de la protéine DJ-1 dans des kératinocytes issus de donneurs âgés et traités avec le principe actif selon l’invention (exemple 1).Table 5 below represents the expression levels of the DJ-1 protein in keratinocytes from elderly donors and treated with the active ingredient according to the invention (example 1).

DJ-1 (%)DJ-1 (%) Efficacité (%)Efficiency (%) Kératinocytes jeunesYoung keratinocytes TémoinWitness 100100 Kératinocytes âgésAged keratinocytes TémoinWitness 118118 EXEMPLE 1 0,5%EXAMPLE 1 0.5% 5454 - 54- 54

Le principe actif (exemple 1) selon l’invention, riche en sucres, présente un effet significatif sur le taux d’expression de la protéine DJ-1 dans des kératinocytes issus de donneurs âgés. Ce résultat confirme les résultats obtenus sur des kératinocytes vieillis par stress radicalaire.The active ingredient (example 1) according to the invention, rich in sugars, has a significant effect on the level of expression of the DJ-1 protein in keratinocytes from elderly donors. This result confirms the results obtained on keratinocytes aged by radical stress.

Ainsi, l’extrait riche en sucres selon l’exemple 1 présente un effet sur les voies du métabolisme du vieillissement (HSP90AA1 +48%, SIRT1 +106%, DJ 1 -54%, TNR6 -39%).Thus, the sugar-rich extract according to example 1 has an effect on the aging metabolism pathways (HSP90AA1 +48%, SIRT1 +106%, DJ 1 -54%, TNR6 -39%).

L’extrait selon l’exemple 2, riche en protéines, a un effet beaucoup plus faible sur les voies du métabolisme du vieillissement. Aussi, il est moins efficace que l’extrait selon l’exemple 1.The extract according to example 2, rich in proteins, has a much weaker effect on the metabolic pathways of aging. Also, it is less effective than the extract according to example 1.

L’extrait selon l’exemple 3, extrait du surnageant, ne présente pas d’effet sur les voies du métabolisme de vieillissement dans le compartiment épidermique.The extract according to example 3, extracted from the supernatant, does not have any effect on the aging metabolism pathways in the epidermal compartment.

Aussi, un extrait riche en sucres permet d’obtenir un effet amélioré sur les voies du métabolisme de vieillissement.Also, an extract rich in sugars provides an improved effect on aging metabolism pathways.

Essai 2Test 2 Effet du principe actif selon l’invention sur la migration des kératinocytesEffect of the active ingredient according to the invention on the migration of keratinocytes âgésaged

La présente étude vise à étudier la capacité des différents extraits à augmenter la migration cellulaire de kératinocytes humains normaux. La migration cellulaire est la capacité de certaines cellules à se mouvoir, cette capacité migratoire est réduite avec l’âge.The present study aims to investigate the ability of different extracts to increase cell migration of normal human keratinocytes. Cell migration is the ability of certain cells to move; this migratory capacity is reduced with age.

La présente étude est réalisée sur des kératinocytes issus de donneurs âgés (> 60 ans).The present study is carried out on keratinocytes from elderly donors (> 60 years).

Le tableau 6 ci-après représente la quantification de la migration des kératinocytes dans la blessure réalisée dans des cultures de kératinocytes âgés, traités avec les différents extraits.Table 6 below represents the quantification of the migration of keratinocytes in the wound carried out in cultures of aged keratinocytes, treated with the different extracts.

Migration / Témoin (%)Migration / Control (%) Efficacité / Témoin (%)Efficacy / Control (%) TémoinWitness 100100 EXEMPLE 1 0,5%EXAMPLE 1 0.5% 123123 +23+23 EXEMPLE 3 0,5%EXAMPLE 3 0.5% 100100 00

L’extrait selon l’exemple 3 ne présente pas d’effet sur la migration des kératinocytes âgés. A l’inverse, l’extrait selon l’exemple 1 stimule la migration des kératinocytes âgés, de 23%. Là encore, l’extrait riche en sucres selon l’invention de l’exemple 1 permet un effet amélioré dans la stimulation de la migration des kératinocytes âgés et donc une efficacité anti-âge.The extract according to Example 3 has no effect on the migration of aged keratinocytes. Conversely, the extract according to example 1 stimulates the migration of aged keratinocytes by 23%. Here again, the extract rich in sugars according to the invention of Example 1 allows an improved effect in stimulating the migration of aged keratinocytes and therefore anti-aging effectiveness.

Claims (10)

Principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait de la biomasse de levure de l’espèceAureobasidium pullulans ,caractérisé en ce que l’extrait comprend au moins 25% de sucres, en poids de matière sèche de l’extrait.Cosmetic active ingredient comprising at least one extract of yeast biomass of the species Aureobasidium pullulans , characterized in that the extract comprises at least 25% sugars, by weight of dry matter of the extract. Principe actif cosmétique selon la revendication précédente caractérisé en ce que la levureAureobasidium pullulansest isolée à partir de rosiers.Cosmetic active ingredient according to the preceding claim, characterized in that the yeast Aureobasidium pullulans is isolated from rose bushes. Principe actif cosmétique selon l’une des revendications précédentes caractérisé en ce que la levure est isolée à partir des fleurs, et/ou des épines et/ou des racines deRosa sp.Cosmetic active ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that the yeast is isolated from the flowers, and/or thorns and/or roots of Rosa sp . Principe actif cosmétique selon l’une des revendications précédentes caractérisé en ce que l’extrait comprend au moins 30% de sucres, en poids de matière sèche de l’extrait.Cosmetic active ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that the extract comprises at least 30% sugars, by weight of dry matter of the extract. Principe actif cosmétique selon la revendication précédente, caractérisé en ce que les sucres de l’extrait sont composées d’au moins 80% d’oligosaccharides, en poids de matière sèche des sucres.Cosmetic active ingredient according to the preceding claim, characterized in that the sugars of the extract are composed of at least 80% of oligosaccharides, by weight of dry matter of the sugars. Principe actif cosmétique selon la revendication précédente, caractérisé en ce que les oligosaccharides sont des oligosaccharides de glucose liés en alpha et/ou des oligosaccharides de glucose liés en bêta.Cosmetic active ingredient according to the preceding claim, characterized in that the oligosaccharides are alpha-linked glucose oligosaccharides and/or beta-linked glucose oligosaccharides. Principe actif cosmétique selon l’une des revendications 5 ou 6, caractérisé en ce que les oligosaccharides ont une masse molaire inférieure à 1800 Da.Cosmetic active ingredient according to one of claims 5 or 6, characterized in that the oligosaccharides have a molar mass of less than 1800 Da. Principe actif cosmétique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu’il se présente sous forme liquide ou sous forme solide.Cosmetic active ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that it is in liquid form or in solid form. Principe actif cosmétique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu’il est susceptible d’être obtenu par un procédé comprenant les étapes suivantes :
  1. culture de la biomasse deAureobasidium pullulansdans un milieu de culture
  2. solubilisation d’au moins 50g/L deAureobasidium pullulansdans l’eau,
  3. extraction des sucres,
  4. traitement thermique,
  5. séparation de la phase soluble et insoluble, et récupération de la phase soluble,
  6. purification par tri moléculaire, et éventuellement décoloration et désodorisation, et
  7. éventuellement concentration et filtration stérilisante.
Cosmetic active ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that it can be obtained by a process comprising the following steps:
  1. cultivation of Aureobasidium pullulans biomass in a culture medium
  2. solubilization of at least 50g/L of Aureobasidium pullulans in water,
  3. extraction of sugars,
  4. thermal treatment,
  5. separation of the soluble and insoluble phase, and recovery of the soluble phase,
  6. purification by molecular sorting, and possibly decolorization and deodorization, and
  7. possibly concentration and sterilizing filtration.
Procédé de préparation d’un principe actif selon l’une des revendications 1 à 9 comprenant les étapes suivantes :
  1. culture de la biomasse deAureobasidium pullulansdans un milieu de culture
  2. solubilisation d’au moins 50g/L deAureobasidium pullulansdans l’eau,
  3. extraction des sucres,
  4. traitement thermique,
  5. séparation de la phase soluble et insoluble, et récupération de la phase soluble,
  6. purification par tri moléculaire, et éventuellement décoloration et désodorisation, et
  7. éventuellement concentration et filtration stérilisante.
Process for preparing an active ingredient according to one of claims 1 to 9 comprising the following steps:
  1. cultivation of Aureobasidium pullulans biomass in a culture medium
  2. solubilization of at least 50g/L of Aureobasidium pullulans in water,
  3. extraction of sugars,
  4. thermal treatment,
  5. separation of the soluble and insoluble phase, and recovery of the soluble phase,
  6. purification by molecular sorting, and possibly decolorization and deodorization, and
  7. possibly concentration and sterilizing filtration.
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