FR2568125A1 - Agent anti-tumeur contenant la proteine du sucre - Google Patents
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Abstract
L'INVENTION CONCERNE UN AGENT ANTI-TUMEUR. SELON L'INVENTION, IL SE COMPOSE D'UNE PROTEINE DU SUCRE D'UN POIDS MOLECULAIRE DE 30000 A 100000, AYANT UN POINT ISOELECTRIQUE DE 3,5 A 5,5 ET DES FACULTES PARTICULIERES DE FUSION DES CELLULES TUMORALES, SE COMPOSANT EFFICACEMENT DE RECTINE EN COMBINAISON AVEC DE LA N-ACETYL -D-GALACTOSAMINE. LE DESSIN JOINT MONTRE LA CONCENTRATION EN PROTEINE EN FONCTION DE L'INHIBITION DE LA CROISSANCE DES CELLULES. L'INVENTION S'APPLIQUE NOTAMMENT AU DOMAINE MEDICAL.
Description
La présente invention se rapporte à un agent anti-tumeur, contenant la protéine du sucre comme ingrédient principal qui provoque en particulier, la fusion des cellules tumorales. Les cellules provenant du poumon foetal du rat provoquent la fusion de l'extérieur et la fusion de l'intérieur par le virus de la leucémie murine. On considère que la protéine de fusion qui provoque la fusion de la cellule est la protéine du sucre qui existe dans la cellule du poumon foetal du rat infectée par le virus de la leucémie.
L'activité pharmacologique de la protéine du sucre a été examinée avec zele dans la présente invention, on a pu confirmer que la protéine du sucre provoquait particulièrement la fusion de la cellule dans
les cellules tumorales, et provoquaitde plus une incapacité de croissance de cellules tumorales, ce qui a permis d'atteindre la présente invention.
les cellules tumorales, et provoquaitde plus une incapacité de croissance de cellules tumorales, ce qui a permis d'atteindre la présente invention.
La présente invention a pour objet un agent anti-tumeur ayant des facultés particulières de fusion de la cellule par rapport aux cellules tumorales en tant qu'ingrédient principal qui agisse de manière excellente en empêchant la croissance des cellules tumorales.
La présente invention a pour autre objet un agent anti-tumeur qui ne soit pas nocif à administrer.
La présente invention a pour objet la protéine du sucre ayant un poids moléculaire de 30 000 à 100 000 et un poids isoélectrique de 3,5 à 5,5, cette protéine du sucre étant combinée à de la N-acétyl-D-
Galactosamine, et que l'on obtient avec une matière consistant principalement en rectine qui provoque la fusion de la cellule.
Galactosamine, et que l'on obtient avec une matière consistant principalement en rectine qui provoque la fusion de la cellule.
L'invention sera mieux comprise, et d'autres buts, caractéristiques, détails et avantages de celle-ci apparaitront plus clairement au cours de la description explicative qui va suivre faite en référence aux dessins schématiques annexés donnés uniquement à titre d'exemple illustrant plusieurs modes de réalisation de l'invention, et dans lesquels
la figure 1 montre un graphique, représentant la relation entre l'inhibition de la croissance sur l'axe des ordonnées et la concentration de la protéine de l'agent anti-tumeur selon l'invention, sur l'axe desabscisses
la figure 2 montre un graphique de la relation entre l'inhibition de la croissance sur l'axe des ordonnées et la température de l'agent anti-tumeur sur l'axe des abscisses
la figure 3 montre un graphique de la relation entre l'inhibition de la croissance sur l'axe des ordonnées et le pH de l'agent anti-tumeur sur l'axe desbscisses
la figure 4 montre un graphique des résultats de l'essai des facultés de perturbation des cellules qui est indiqué à l'expérience 7, l'inhibition de la croissance étant indiquée sur l'axe des ordonnées ; et
la figure 5 est un graphique des résultats des facultés de perturbation des cellules de l'exemple 15.
la figure 1 montre un graphique, représentant la relation entre l'inhibition de la croissance sur l'axe des ordonnées et la concentration de la protéine de l'agent anti-tumeur selon l'invention, sur l'axe desabscisses
la figure 2 montre un graphique de la relation entre l'inhibition de la croissance sur l'axe des ordonnées et la température de l'agent anti-tumeur sur l'axe des abscisses
la figure 3 montre un graphique de la relation entre l'inhibition de la croissance sur l'axe des ordonnées et le pH de l'agent anti-tumeur sur l'axe desbscisses
la figure 4 montre un graphique des résultats de l'essai des facultés de perturbation des cellules qui est indiqué à l'expérience 7, l'inhibition de la croissance étant indiquée sur l'axe des ordonnées ; et
la figure 5 est un graphique des résultats des facultés de perturbation des cellules de l'exemple 15.
Il est possible d'obtenir la protéine du sucre qui est un composant efficace de l'agent anti-tumeur selon l'invention.
En effet, l'une des méthodes de production consiste à acquérir du Lymphome humain sur la cellule en culture.
Une autre consiste à acquérir le virus de la leucémie murine de la cellule du poumon foetal du rat (RFL). Dans chaque cas, le principe de ces méthodes de production concerne la faculté de fusion de la cellule du poumon foetal du rat (RFL). Et il faut déterminer une partie ayant de fortes facultés de fusion et de faibles facultés de production du virus de la leucémie. Les cellules ainsi obtenues sont mises en culture, et ensuite ces cellules cultivées sont congelées, fondues et rompues. Les cellules rompues sont dessalées au sulfate d'ammonium, la protéine précipite est centrifugée et formée en agent de solution, et ensuite le sulfate d'ammonium est retiré par dialyse et d'autres composants comme la pellicule des cellules rompues et autres sont retirés par centrifugation.
Ensuite, on obtient le liquide surnageant. Ce liquide surnageant obtenu est purifié en utilisant CBH cephalos,
ConCanavaline A Cephalos, DEAE Cephalos, et une électro phore%ssur gel,et le liquide surnageant purifié est séparé et ensuite on obtient la protéine du sucre. Dans la présente invention, la protéine du sucre qui est un composant efficace de l'agent anti-tumeur a un poids moléculaire de 30 000 à 100 000 par analyse par électrophorèsesur gel. Chaque caractéristique de la protéine du sucre qui est l'ingrédient principal de gagent anti-tumeur selon l'invention est montréeci-après.
ConCanavaline A Cephalos, DEAE Cephalos, et une électro phore%ssur gel,et le liquide surnageant purifié est séparé et ensuite on obtient la protéine du sucre. Dans la présente invention, la protéine du sucre qui est un composant efficace de l'agent anti-tumeur a un poids moléculaire de 30 000 à 100 000 par analyse par électrophorèsesur gel. Chaque caractéristique de la protéine du sucre qui est l'ingrédient principal de gagent anti-tumeur selon l'invention est montréeci-après.
Propriétés de conservation
la figure 1 montre les changements du taux d'inhibition de la croissance dans le cas ou l'on change la concentration de la protéine et où la température de conservation est changée à 40C et 370C. On a utilisé
P388 pour la protéine dans ce cas. Comme le démontre la figure 1, il n'y a presque pas eu de perte d'activité à une forte concentration montrant 95-100 g de lainhibition de la croissance (0,001 mg/ml, 0,0004 mg/ml) en un jour, meme dans le cas de 40C ou 370C. Cependant, l'activité perdue augmente à basse concentration (0,001 mg/ml, 0,00004 mg/ml) .Et également meme à la condition de de forte concentration , environ 80-90%ont perdu leur activité dans le cas d'une condition de conservation de un mois en dessous de 40C.
la figure 1 montre les changements du taux d'inhibition de la croissance dans le cas ou l'on change la concentration de la protéine et où la température de conservation est changée à 40C et 370C. On a utilisé
P388 pour la protéine dans ce cas. Comme le démontre la figure 1, il n'y a presque pas eu de perte d'activité à une forte concentration montrant 95-100 g de lainhibition de la croissance (0,001 mg/ml, 0,0004 mg/ml) en un jour, meme dans le cas de 40C ou 370C. Cependant, l'activité perdue augmente à basse concentration (0,001 mg/ml, 0,00004 mg/ml) .Et également meme à la condition de de forte concentration , environ 80-90%ont perdu leur activité dans le cas d'une condition de conservation de un mois en dessous de 40C.
Stabilité thermique
On a examiné 0,00004 mg/ml marquant 50 % de lginhibit ion de la croissance de la protéine dans la présente invention, et les changements de l'inhibition de la croissance dans le cas o chaque protéine a été chauffée à chaque température pendant 10 minutes, et cela est montré sur la figure 2. Comme le montre la figure 2, il y a une perte d'environ 30 à 40 % de l'activité à un chauffage de 40 à 600C et environ 70 % de l'activité est perdue à un chauffage à 700C.
On a examiné 0,00004 mg/ml marquant 50 % de lginhibit ion de la croissance de la protéine dans la présente invention, et les changements de l'inhibition de la croissance dans le cas o chaque protéine a été chauffée à chaque température pendant 10 minutes, et cela est montré sur la figure 2. Comme le montre la figure 2, il y a une perte d'environ 30 à 40 % de l'activité à un chauffage de 40 à 600C et environ 70 % de l'activité est perdue à un chauffage à 700C.
Stabilité au pH
On a examiné 0,00004 mg/ml marquant 50 % d'abaissement de l'hyperplasie de la protéine et les changements de l'inhibition de la croissance dans le cas d'un changement du pH de la protéine à 37 C, et la protéine a été mise en culture pendant une heure, -comme le montre la figure 3. La figure 3 montre que la proteine examinée était la plus stable à pH 7, perdant 30 à 40 % de son activite des côtés acide et alcalin.Cependant, dans le cas d'une culture de 24 heures à 40C, on observe une perte d'environ 60 z de l'activité du côté acide (pH 2, pH 5) et environ 85 % de l'activité est conservée du côté alcalin < pH 9), par conséquent l'activité perdue du côté acide est remarquable.
On a examiné 0,00004 mg/ml marquant 50 % d'abaissement de l'hyperplasie de la protéine et les changements de l'inhibition de la croissance dans le cas d'un changement du pH de la protéine à 37 C, et la protéine a été mise en culture pendant une heure, -comme le montre la figure 3. La figure 3 montre que la proteine examinée était la plus stable à pH 7, perdant 30 à 40 % de son activite des côtés acide et alcalin.Cependant, dans le cas d'une culture de 24 heures à 40C, on observe une perte d'environ 60 z de l'activité du côté acide (pH 2, pH 5) et environ 85 % de l'activité est conservée du côté alcalin < pH 9), par conséquent l'activité perdue du côté acide est remarquable.
Point isoélectrique
Des mesures du point isoélectrique ont été effectuées par procédé de fraction du point isoélectrique par électrophorèse. On a utilisé une colonne de 110 ml de capacité pour cette mesure. Un choc électrique est appliqué en dessous d'environ 100C, 300 volts pendant 24 heures en utilisant de l'Ampholyte (pH 3,5 à 10) et on fractionne à raison de 1 ml. Après mesure du pH et de la protéine, on a examiné l'hyperplasie à un taux isoélectrique (pI) d'environ 3,5 à 5,5. Selon l'electro- phorèse ci-dessus mentionnée,le poids moléculaire était compris entre 20 000 et 150 000. Dans la cellule du poumon foetal murin utilisé comme cellule d'indication, la fusion de la cellule est examinée comme guide pour des cellules à plusieurs noyaux, et on a pu confirmer les facultés de fusion de la-cellule.On a également observé que la protéine du sucre provoque particulièrement la fusion de la cellule des cellules tumorales in vitro et également une perturbation de la croissance de la cellule à l'étude de l'examen des facultés de fusion de la cellule. On a également tenté de provoquer le cancer du muscle murin de la cuisse par du 3-méthyl cholanthrène, et l'injection intraveineuse de l'agent anti-tumeur ayant la proteine du sucre dans la présente invention a été appliquéeà ce muscle. Les dates auxquelles la tumeur a triplé de volume était de 4,5 jours en moyenne, dans le groupe sans injection du témoin. Par ailleurs, aucune virulence aigue ou chronique n'a été observée dans l'injection de l'agent anti-tumeur de la présente invention. L'agent anti-tumeur de la présente invention peut etre administré par voie orale ou non orale.
Des mesures du point isoélectrique ont été effectuées par procédé de fraction du point isoélectrique par électrophorèse. On a utilisé une colonne de 110 ml de capacité pour cette mesure. Un choc électrique est appliqué en dessous d'environ 100C, 300 volts pendant 24 heures en utilisant de l'Ampholyte (pH 3,5 à 10) et on fractionne à raison de 1 ml. Après mesure du pH et de la protéine, on a examiné l'hyperplasie à un taux isoélectrique (pI) d'environ 3,5 à 5,5. Selon l'electro- phorèse ci-dessus mentionnée,le poids moléculaire était compris entre 20 000 et 150 000. Dans la cellule du poumon foetal murin utilisé comme cellule d'indication, la fusion de la cellule est examinée comme guide pour des cellules à plusieurs noyaux, et on a pu confirmer les facultés de fusion de la-cellule.On a également observé que la protéine du sucre provoque particulièrement la fusion de la cellule des cellules tumorales in vitro et également une perturbation de la croissance de la cellule à l'étude de l'examen des facultés de fusion de la cellule. On a également tenté de provoquer le cancer du muscle murin de la cuisse par du 3-méthyl cholanthrène, et l'injection intraveineuse de l'agent anti-tumeur ayant la proteine du sucre dans la présente invention a été appliquéeà ce muscle. Les dates auxquelles la tumeur a triplé de volume était de 4,5 jours en moyenne, dans le groupe sans injection du témoin. Par ailleurs, aucune virulence aigue ou chronique n'a été observée dans l'injection de l'agent anti-tumeur de la présente invention. L'agent anti-tumeur de la présente invention peut etre administré par voie orale ou non orale.
Dans le cas d'une administration orale, une capsule molle, une capsule dure, des comprimés pour voie orale, des granulés, des granulés minuscules, une poudre et du liquide ont été utilisés et pour l'injection, l'infusion goutte à goutte et diverses sortes dladministratio ont été utilisées pour une administration non orale. L'agent anti-tumeur de la présente invention peut être préparé en utilisant une activité interiaciale. De même, l'agent anti-tumeur de la présente invention dépend du traitement souhaité et de la durée du traitement, cependant on considère que la dose quotidienne de l'agent anti-tumeur pour une personne adulte est usuellement de 0,01 à 1 000 mg.
La présente invention sera décrite ci-après dans les expériences qui suivent.
Expérience 1
Dans cette expérience, le virus dela leucémiehumaine a été acquis du lymphocyte du sang périphérique humain par le procédé habituel. Ce lymphocyte a été divisé, les cellules ayant la fonction de fusion ont été préparées comme principe de guidage du facteur de fusion des cellules cancéreuses, elles ont été choisies par la culture de mélange. Les cellules choisies seront appelées ci-après HR-1. Les cellules HR-1 ont été maintenues sur un milieu contenant du diméthyl sulfoxyde, à - 8O0C. Les cellules HR-1, à raison de 2 x 108 ont été mises en suspension sur 100 ml d'un milieu contenant 5 % de sérum foetal de vache ajouté à 1640 t/mn,qui a été transforme en liquide où flottait les cellules.On a inoculé 2 ml du liquide obtenu ci-dessus à 100 ml d'un milieu contenant 5 % de sérum foetal de vache ajouté à 1640 t/mn et on les a mises en culture pendant 4 jours à 370C à une condition d'air humide mélangé à 5 % de gaz carbonique dans un ballon de culture élastique de 175 cm . Après mise en culture, les cellules ont été rassemblées, rincées et mises en suspension dans une solution tampon d'acide phosphorique (pH 7,0), en mélangeant une solution de-sel physiologique. Ensuite, la suspension a été rapidement congelée puis on l'a fait fondre, et les cellules ont été mises en morceau. On a ensuite ajouté du sulfate d'ammonium jusqu'à une saturation dans la suspension des cellules détruites à une basse température en dessous de 40C et la protéine a précipité.Cette protéine précipitée a été centrifugée à 20 000 G pendant 30 minutes, et les précipités obtenus ont été mis en suspension dans PBS. Ensuite, une faible quantité de la solution de sulfate d'ammonium a été retirée par dialyse, et on a de nouveau centrifugé à 20 000 G pendant 30 minutes, les pellicules de cellule ont été retirées et l'on a obtenu le liquide surnageant. On a vérifié la fusion descellulesdans ce liquide surnageant obtenu, et on a pu confirmer qe ce liquide surnageant contenait les matières actives. En conséquence, on a utilisé les cellules RFL pour les cellules indiquées, que l'on a obtenues par un microscope à contraste des phases, et l'apparition des cellules à plusieurs noyaux a pu être confirmée.
Dans cette expérience, le virus dela leucémiehumaine a été acquis du lymphocyte du sang périphérique humain par le procédé habituel. Ce lymphocyte a été divisé, les cellules ayant la fonction de fusion ont été préparées comme principe de guidage du facteur de fusion des cellules cancéreuses, elles ont été choisies par la culture de mélange. Les cellules choisies seront appelées ci-après HR-1. Les cellules HR-1 ont été maintenues sur un milieu contenant du diméthyl sulfoxyde, à - 8O0C. Les cellules HR-1, à raison de 2 x 108 ont été mises en suspension sur 100 ml d'un milieu contenant 5 % de sérum foetal de vache ajouté à 1640 t/mn,qui a été transforme en liquide où flottait les cellules.On a inoculé 2 ml du liquide obtenu ci-dessus à 100 ml d'un milieu contenant 5 % de sérum foetal de vache ajouté à 1640 t/mn et on les a mises en culture pendant 4 jours à 370C à une condition d'air humide mélangé à 5 % de gaz carbonique dans un ballon de culture élastique de 175 cm . Après mise en culture, les cellules ont été rassemblées, rincées et mises en suspension dans une solution tampon d'acide phosphorique (pH 7,0), en mélangeant une solution de-sel physiologique. Ensuite, la suspension a été rapidement congelée puis on l'a fait fondre, et les cellules ont été mises en morceau. On a ensuite ajouté du sulfate d'ammonium jusqu'à une saturation dans la suspension des cellules détruites à une basse température en dessous de 40C et la protéine a précipité.Cette protéine précipitée a été centrifugée à 20 000 G pendant 30 minutes, et les précipités obtenus ont été mis en suspension dans PBS. Ensuite, une faible quantité de la solution de sulfate d'ammonium a été retirée par dialyse, et on a de nouveau centrifugé à 20 000 G pendant 30 minutes, les pellicules de cellule ont été retirées et l'on a obtenu le liquide surnageant. On a vérifié la fusion descellulesdans ce liquide surnageant obtenu, et on a pu confirmer qe ce liquide surnageant contenait les matières actives. En conséquence, on a utilisé les cellules RFL pour les cellules indiquées, que l'on a obtenues par un microscope à contraste des phases, et l'apparition des cellules à plusieurs noyaux a pu être confirmée.
Expérience 2
Dans cette expérience, le liquide surnageant obtenu à l'expérience la traversé une colonne RCA
Cephalos 4B préparée par RCA,purifié par Riunus Communis et Cephalos 4B, la fraction non adsorbe a été éluée par PBS et ensuite la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Galactose PBS. Cet éluat a été dialysé avec
PBS, le Galactose a été retiré et l'éluat est passe à travers une colonne de Con-A Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS. Ensuite, la fraction adsorbée a été fluée par 0,2 M de MannosePBS liquide
L'éluat a été dialysé avec PBS, et le Mannose a été retiré de l'éluat. Ensuite on a obtenu la fraction de protéine du sucre.La fusion des cellules de la Fraction de proteine du suce a été obtenue comme à l'expérience 1 et on a pu confirmer que cette fraction contenait des fractions de fusion des cellules
Expérience 3
Dans cette expérience 1 on a fait passer le liquide surnageant obtenu à 1' expérience 2 à travers une colonne de Con-A Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS et ensuite la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Mannose PBS liquide.Cet éluat a été dialyse avec PBS, le Mannose a été retiré et ensuite on a fait passer l'éluat à travers une colonne
RCA Cephalos 4B, et la fraction non adsorbée a été éluée par PBS, Ensuite, la fraction adsorber a été éluée par 0,2 M de Galactose PBs. L'éluat a été dialysé avec PBS, et on a retiré le galactose de l'éluat. Ensuite, les fractions de protéine du sucre ont été obtenues, on a observé une fusion des cellules sur les fractions des protéines du sucre comme à l'exemple 1 et on a pu confirmer que la protéine du sucre avait la faculté de fusion des cellules.
Dans cette expérience, le liquide surnageant obtenu à l'expérience la traversé une colonne RCA
Cephalos 4B préparée par RCA,purifié par Riunus Communis et Cephalos 4B, la fraction non adsorbe a été éluée par PBS et ensuite la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Galactose PBS. Cet éluat a été dialysé avec
PBS, le Galactose a été retiré et l'éluat est passe à travers une colonne de Con-A Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS. Ensuite, la fraction adsorbée a été fluée par 0,2 M de MannosePBS liquide
L'éluat a été dialysé avec PBS, et le Mannose a été retiré de l'éluat. Ensuite on a obtenu la fraction de protéine du sucre.La fusion des cellules de la Fraction de proteine du suce a été obtenue comme à l'expérience 1 et on a pu confirmer que cette fraction contenait des fractions de fusion des cellules
Expérience 3
Dans cette expérience 1 on a fait passer le liquide surnageant obtenu à 1' expérience 2 à travers une colonne de Con-A Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS et ensuite la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Mannose PBS liquide.Cet éluat a été dialyse avec PBS, le Mannose a été retiré et ensuite on a fait passer l'éluat à travers une colonne
RCA Cephalos 4B, et la fraction non adsorbée a été éluée par PBS, Ensuite, la fraction adsorber a été éluée par 0,2 M de Galactose PBs. L'éluat a été dialysé avec PBS, et on a retiré le galactose de l'éluat. Ensuite, les fractions de protéine du sucre ont été obtenues, on a observé une fusion des cellules sur les fractions des protéines du sucre comme à l'exemple 1 et on a pu confirmer que la protéine du sucre avait la faculté de fusion des cellules.
Expérience 4
Dans cette expérience, on a fait passer la fraction de protéine du sucre obtenue l'exemple 3 à travers une colonne de cellulose DEAE et la fraction absorbée a été éluée par 2 N NaCl. L'éluat a été dialysé avec PBS et on a obtenu une fraction de pro téine du sucre. La fusion des cellules de la fraction de protéine du sucre a été observé comme à l'exemple 1 et on a pu confirmer que la fraction de protéine du sucre avait une faculté de fusion des cellules.
Dans cette expérience, on a fait passer la fraction de protéine du sucre obtenue l'exemple 3 à travers une colonne de cellulose DEAE et la fraction absorbée a été éluée par 2 N NaCl. L'éluat a été dialysé avec PBS et on a obtenu une fraction de pro téine du sucre. La fusion des cellules de la fraction de protéine du sucre a été observé comme à l'exemple 1 et on a pu confirmer que la fraction de protéine du sucre avait une faculté de fusion des cellules.
Expérience 5
Dans cette expérience, on a fait passer la fraction de sucre obtenueà l'expérience 4 à travers une colbnne de N-Acétyl-D Galactosamine, et la fraction adsorbée a été élue par de la N-Acétyl-D Galactosamine.
Dans cette expérience, on a fait passer la fraction de sucre obtenueà l'expérience 4 à travers une colbnne de N-Acétyl-D Galactosamine, et la fraction adsorbée a été élue par de la N-Acétyl-D Galactosamine.
L'éluat a été dialysé par PBS, et on a obtenu la fraction de protéine du sucre La fusion des cellules sur la fraction de protéine du sucre a été observée comme a l'expérience 1 et on a pu confirmer que cette fraction avait des facultés de fusion des cellules.
Expérience 6
Dans cette expérience, le sucre a été détecté par l'essai de Shiff dans la fraction de sucre obtenue aux expériences 2, 3, 4 et 5 et la protéine a également été détectée par le bleu brillant de Coomassie. On a également effectué une électrophorèse sur un gel d'Amide acrylique a 12 % (contenant SDS) pendant 5 heures a 30mA. Par suite, le poids moléculaire était compris entre 30 000 et 100 000.
Dans cette expérience, le sucre a été détecté par l'essai de Shiff dans la fraction de sucre obtenue aux expériences 2, 3, 4 et 5 et la protéine a également été détectée par le bleu brillant de Coomassie. On a également effectué une électrophorèse sur un gel d'Amide acrylique a 12 % (contenant SDS) pendant 5 heures a 30mA. Par suite, le poids moléculaire était compris entre 30 000 et 100 000.
Expérience 7
Dans cette expérience, on a examiné des valeurs constantes de cellules, ces cellules ont été mises en culture pendant 48 jours à diverses sortes de-concentra tiors de facteurs de fusion des cellules et ensuite des quantités des cellules actives ont été mesurées. Les cellules ont été mises en culture dans 1 ml/réservoir du liquide de culture, deux réservoirs pour chaque dose ont été utilisés dans cette expérience. Le taux d'inhibition de la croissance des cellules est montré comme suit.Pourcentage d'inhibition de la croissance =
Dans cette expérience, on a examiné des valeurs constantes de cellules, ces cellules ont été mises en culture pendant 48 jours à diverses sortes de-concentra tiors de facteurs de fusion des cellules et ensuite des quantités des cellules actives ont été mesurées. Les cellules ont été mises en culture dans 1 ml/réservoir du liquide de culture, deux réservoirs pour chaque dose ont été utilisés dans cette expérience. Le taux d'inhibition de la croissance des cellules est montré comme suit.Pourcentage d'inhibition de la croissance =
<tb> (nombre <SEP> de <SEP> cellule <SEP> dans <SEP> chaque <SEP> groupe <SEP> d'essai
<tb> <SEP> 1 <SEP> - <SEP> nombre <SEP> des <SEP> cellules <SEP> dans <SEP> les <SEP> groupes <SEP> témoins) <SEP> x <SEP> 100
<tb>
Cellules pour l'expérience (1) Lymphocyte de sang humain périphérique normal (2) Leucémie humaine JM (3) Daudi (4) Balm 3 (5) CEM
La figure 4 montre les résultats des essais de cette expérience. Quatre sortes de cellules tumorales ont montre une sensibilité plus importante qu'un lymphocyte normal.
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Cellules pour l'expérience (1) Lymphocyte de sang humain périphérique normal (2) Leucémie humaine JM (3) Daudi (4) Balm 3 (5) CEM
La figure 4 montre les résultats des essais de cette expérience. Quatre sortes de cellules tumorales ont montre une sensibilité plus importante qu'un lymphocyte normal.
Expérience 8
Dans cette expérience, une cellule RFL provenant du poumon foetal du rat WKA (référence GANN, 64 321 à 322 (1973)) a reçu le virus de la leucémie murine Moloney par le processus habituel. La concentration du virus était de 1 000 à 10 000 MOI pour une cellule RFL. Par cette expérience, un lot de cellules RFL a reçu la possibilité de production des facteurs de fusion.
Dans cette expérience, une cellule RFL provenant du poumon foetal du rat WKA (référence GANN, 64 321 à 322 (1973)) a reçu le virus de la leucémie murine Moloney par le processus habituel. La concentration du virus était de 1 000 à 10 000 MOI pour une cellule RFL. Par cette expérience, un lot de cellules RFL a reçu la possibilité de production des facteurs de fusion.
Ces cellules ayant des facultés de fusion des cellules ont été préparées en tant que principe de guidage du facteur de fusion pour les cellules cancéreuses et ont été choisies par le procédé d'entassement des cellules. Les cellules cancéreuses utilisées étaient XC, KB, FL, KC,
RSb, HeLa, et autres. On appelera ci-après RM-4 les cellules choisies. Les cellules RM-4 ont été maintenues sur un milieu contenant du diméthyl sulfoxyde à - 80 C.
RSb, HeLa, et autres. On appelera ci-après RM-4 les cellules choisies. Les cellules RM-4 ont été maintenues sur un milieu contenant du diméthyl sulfoxyde à - 80 C.
Les cellules RM-4, à raison de 2 x 107 ont été mises en suspension dans 10 ml d'un milieu contenant 10 % de sérum foetal de vache additionne de milieu Eagle centrifugé
Dulbecco et on a formé un liquide de flottaison des cellules. Cytodex a été ajouté à 10 % du sérum foetal de vache additionné du milieu Eagle centrifugé Dulbecco, dans 8 à 10 ml du liquide de flottaison des cellules ci-dessus mentionné . On a inoculé 5 x 105 a 1 x 106 cellules/ml et ensuite les cellules RM-4 ont été mises en culture pendant 4 jours à 370C sous de l'air humidifié mélangé à du gaz carbonique à 5 %, dans une plaque ayant 10 cm de circonférence. Après mise en culture, les cellules ont été rassemblées, rincées et mises en suspension dans une solution de tampon d'acide phosphorique (pH 7,0) en mélange avec une solution de sel physiologique (appelée ici PBS).Ensuite, la solution a été rapidement congelée puis on l'a fait fondre, et les cellules se sont mises en morceau.
Dulbecco et on a formé un liquide de flottaison des cellules. Cytodex a été ajouté à 10 % du sérum foetal de vache additionné du milieu Eagle centrifugé Dulbecco, dans 8 à 10 ml du liquide de flottaison des cellules ci-dessus mentionné . On a inoculé 5 x 105 a 1 x 106 cellules/ml et ensuite les cellules RM-4 ont été mises en culture pendant 4 jours à 370C sous de l'air humidifié mélangé à du gaz carbonique à 5 %, dans une plaque ayant 10 cm de circonférence. Après mise en culture, les cellules ont été rassemblées, rincées et mises en suspension dans une solution de tampon d'acide phosphorique (pH 7,0) en mélange avec une solution de sel physiologique (appelée ici PBS).Ensuite, la solution a été rapidement congelée puis on l'a fait fondre, et les cellules se sont mises en morceau.
Deuxièmement, du sulfate d'ammonium a été ajouté jusqu'à la saturation dans la suspension des cellules détruites à une basse température inférieure à 40C, et la protéine a précipité. Cette protéine précipitée a été centrifugée à 12 000 G pendant 30 minutes, et les précipités obtenus ont été mis en suspension dans PBS. Ensuite, une faible quantité de la solution existante de sulfate d'ammonium a été retirée par le dialysat, et on a de nouveau centrifugé à 12 000 G pendant 30 minutes, les pellicules de cellule et autres ont été retirées et on a obtenu le liquide surnageant. La fusion des cellules a été vérifiée dans ce liquide surnageant obtenu et l'on a pu confirmer que ce liquide surnageant contenait les matières actives.
En conséquence, les cellules RFL ont été utilisées pour les cellules indiquées, on les a observé par un microscope à contraste de phase et l'apparition des cellules à plusieurs noyaux a pu être confirmé.
Expérience 9
Dans cette expérience, on a fait passer le liquide surnageant obtenu à l'expérience 8 à travers une colonne Cephalos 4B préparée par RCA purifié par
Ricious Communis et Cephalos B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS et ensuite la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Galactose PBS , Cet éluat a été dialysé à travers PBS, le Galactosewa été retiré et ensuite on a fait passer l'éluat à travers une colonne
Con-A Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été 'luée par PBS. Ensuite, la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Mannose PBS liquide. L'éluat a été dialysé avec PBS et le Mannes a été retiré de l'éluat. Alors, on a obtenu la fraction de protéine du sucre (appelée ci-après F-RM2).On a observé une fusion des cellules par
F-RM2 comme pour l'expérience 8 et on a pu confirmer que
F-RM2 avait une faculté de fusion de cellules.
Dans cette expérience, on a fait passer le liquide surnageant obtenu à l'expérience 8 à travers une colonne Cephalos 4B préparée par RCA purifié par
Ricious Communis et Cephalos B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS et ensuite la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Galactose PBS , Cet éluat a été dialysé à travers PBS, le Galactosewa été retiré et ensuite on a fait passer l'éluat à travers une colonne
Con-A Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été 'luée par PBS. Ensuite, la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Mannose PBS liquide. L'éluat a été dialysé avec PBS et le Mannes a été retiré de l'éluat. Alors, on a obtenu la fraction de protéine du sucre (appelée ci-après F-RM2).On a observé une fusion des cellules par
F-RM2 comme pour l'expérience 8 et on a pu confirmer que
F-RM2 avait une faculté de fusion de cellules.
Expérience 10
Daus cette expérience le liquide surnageant obtenu 9 l'expérience 8 est passé a travers une colonne de Con-A Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS et ensuite la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Mannose PBS liquide. Cet éluat a été dialysé avec PBS, le Mannosea été retiré et ensuite on a fait passer l'éluat à travers une colonne RCA de Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS et ensuite, la fraction adsorbée a été fluée par 0,2 M de Galactose
PBS. Léluat a été dialysé avec PBS et le Galactose a été retiré de l'éluat.Ensuite, on a obtenu la fraction de protéine du sucre (appelée ci-après F-RM3). On a observé une fusion descellules par F-RM3 comme dans l'expérience 1, et l'on a pu confirmer que F-RM3 avait une faculté de fusion des cellules.
Daus cette expérience le liquide surnageant obtenu 9 l'expérience 8 est passé a travers une colonne de Con-A Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS et ensuite la fraction adsorbée a été éluée par 0,2 M de Mannose PBS liquide. Cet éluat a été dialysé avec PBS, le Mannosea été retiré et ensuite on a fait passer l'éluat à travers une colonne RCA de Cephalos 4B, la fraction non adsorbée a été éluée par PBS et ensuite, la fraction adsorbée a été fluée par 0,2 M de Galactose
PBS. Léluat a été dialysé avec PBS et le Galactose a été retiré de l'éluat.Ensuite, on a obtenu la fraction de protéine du sucre (appelée ci-après F-RM3). On a observé une fusion descellules par F-RM3 comme dans l'expérience 1, et l'on a pu confirmer que F-RM3 avait une faculté de fusion des cellules.
Expérience 11
Dans cette expérience, on a fait passer une fraction de F-RM2 à travers une colonne de DEAE et la fraction adsorbée a été éluée par 2M NaCl. L'éluat a été dialyse avec PBS, et on a obtenu une fraction de protéine du sucre (appelée ci-après F-RM4). On a pu observer une fusion des cellules par F-Rt44 comme à l'expérience 8 et l'on a pu confirmer la faculté de fusion des cellules de F-RM4.
Dans cette expérience, on a fait passer une fraction de F-RM2 à travers une colonne de DEAE et la fraction adsorbée a été éluée par 2M NaCl. L'éluat a été dialyse avec PBS, et on a obtenu une fraction de protéine du sucre (appelée ci-après F-RM4). On a pu observer une fusion des cellules par F-Rt44 comme à l'expérience 8 et l'on a pu confirmer la faculté de fusion des cellules de F-RM4.
Expérience 12
Dans cette expérience, le sucre a été détecté par l'essai de Shiff dans F-RM2, F-RM3 ét F-RM4 obtenus aux expériences 9, 10 et Il et la protéine a également été détectée par le bleu brillant de Coomassie. On a effectué une électrophorèsesur gel à 10 % d'Amide acrylique pendant 2 heures à 3Ri. Par suite, le poids moléculaire a été compris entre 20 GOO et 150 000.
Dans cette expérience, le sucre a été détecté par l'essai de Shiff dans F-RM2, F-RM3 ét F-RM4 obtenus aux expériences 9, 10 et Il et la protéine a également été détectée par le bleu brillant de Coomassie. On a effectué une électrophorèsesur gel à 10 % d'Amide acrylique pendant 2 heures à 3Ri. Par suite, le poids moléculaire a été compris entre 20 GOO et 150 000.
Expérience 13
Dans cette expérience, on a mis 5m1 de F-RM2,
F-RM3 et F-RM4 obtenus aux expériences 9, 10 et 11 en suspension dans 20 mi de la solution de sel physiologique, on a contrôlé à OD230 = 0,4 et ensuite on a obtenu des solutions injectables. Ces solutions injectables ont été nommées solution injectable 9, 10 et 11.
Dans cette expérience, on a mis 5m1 de F-RM2,
F-RM3 et F-RM4 obtenus aux expériences 9, 10 et 11 en suspension dans 20 mi de la solution de sel physiologique, on a contrôlé à OD230 = 0,4 et ensuite on a obtenu des solutions injectables. Ces solutions injectables ont été nommées solution injectable 9, 10 et 11.
Expérience 14
Dans cette expérience, l'injection intra-musculaire de 0,2 mg de 3-methyl coranthrène a été appliquée au muscle de la cuisse d'une souris de souche BALB/c de quatre semaines, les tumeurs cancéreuses ont été provo quées chimiquement, et se sont produites dès le début.
Dans cette expérience, l'injection intra-musculaire de 0,2 mg de 3-methyl coranthrène a été appliquée au muscle de la cuisse d'une souris de souche BALB/c de quatre semaines, les tumeurs cancéreuses ont été provo quées chimiquement, et se sont produites dès le début.
Apres l'injection intra-musculaire, les tumeurs ont grandi et sont devenues possible à toucher. Par conséquent, quatre groupes ont été répartis à raison de vingt souris par groupe. Le premier groupe n'a pas reçu d'injection, en tant que témoin. Dans les second à quatrième groupes, les queues ont reçu 0,1 ml des injections 9, 10 et 11 obtenues à l'expérience 13, respectivement sous forme d'injections intra-veineuses. Les effets d'inhibition des tumeurs ont été calibrés à raison de 3 fois à partir du premier jour des tumeurs. Le tableau 1 montre les résultats et également les valeurs de survie à 10 jours après début des tumeurs.En conséquence, on a pu confirmer, par l'inspectionssque les exemples de survie et de mort étaient dûs aux tumeurs malignes de l'histiocytome
Tableau 1
GROUPE EFFET D'INHIBITION DES VALEURS DE SURVIE
TUMEURS (JOUR) (60eme JOUR)
PREMIER 4,5 0/20
DEUXIEME 38 3/20
TROISIEME 41 3/20
QUATRE ME 28 2/20
Expérience 15
Dans cette expérience, on a examiné des valeurs constantes des cellules, ces cellules ont été mises en culture pendant 48 jours à diverses sortes de concentrations et les quantités de cellules actives ont été mesurées. Les cellules ont été mises en culture dans 1 ml/réservoir du liquide de culture, deux réservoirs par dose ont été utilisés dans cette expérience.
Tableau 1
GROUPE EFFET D'INHIBITION DES VALEURS DE SURVIE
TUMEURS (JOUR) (60eme JOUR)
PREMIER 4,5 0/20
DEUXIEME 38 3/20
TROISIEME 41 3/20
QUATRE ME 28 2/20
Expérience 15
Dans cette expérience, on a examiné des valeurs constantes des cellules, ces cellules ont été mises en culture pendant 48 jours à diverses sortes de concentrations et les quantités de cellules actives ont été mesurées. Les cellules ont été mises en culture dans 1 ml/réservoir du liquide de culture, deux réservoirs par dose ont été utilisés dans cette expérience.
Le taux d'inhibition de la croissance des cellules est montré comme suit.
Pourcentage d'inhibition de la croissance =
<tb> <SEP> 1 <SEP> - <SEP> (Nombre <SEP> de <SEP> cellules <SEP> dans <SEP> chaque <SEP> groupe <SEP> d'essai
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> cellules <SEP> dans <SEP> les <SEP> groupe <SEP> témoins) <SEP> x <SEP> 100
<tb>
Cellules pour l'expérience (1) P328 Lymphome DBA/2 groupes tumeurs transplantées
meme groupe murin (2) L1210 Lymphome DBA/2 groupes tumeurs transplantées
même groupe murin (3) L5178Y Lymphome DBA/2 groupes tumeurs transplantées
même groupe murin (4) P815 Mastocyte DBA/2 groupes tumeurs transplantées
même groupe murin (5) B-16 Mélanome C57 BL/6 groupes tumeurs transplantées
même groupe murin (6) Cellule foetal du hamster doré (7) Lymphocyte de sang périphérique humain normal (8) Balm 3,lyphome-globules rouges humains (9) Daudi.Lymphome.globules rouges humains
La figure 5 montre les résultats des essais de cette expérience.Sept sortes de cellules tumorales utilisées ont montré une plus forte sensibilité que le lymphocyte normal et les cellules foetales normales du hamster.
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> cellules <SEP> dans <SEP> les <SEP> groupe <SEP> témoins) <SEP> x <SEP> 100
<tb>
Cellules pour l'expérience (1) P328 Lymphome DBA/2 groupes tumeurs transplantées
meme groupe murin (2) L1210 Lymphome DBA/2 groupes tumeurs transplantées
même groupe murin (3) L5178Y Lymphome DBA/2 groupes tumeurs transplantées
même groupe murin (4) P815 Mastocyte DBA/2 groupes tumeurs transplantées
même groupe murin (5) B-16 Mélanome C57 BL/6 groupes tumeurs transplantées
même groupe murin (6) Cellule foetal du hamster doré (7) Lymphocyte de sang périphérique humain normal (8) Balm 3,lyphome-globules rouges humains (9) Daudi.Lymphome.globules rouges humains
La figure 5 montre les résultats des essais de cette expérience.Sept sortes de cellules tumorales utilisées ont montré une plus forte sensibilité que le lymphocyte normal et les cellules foetales normales du hamster.
Expérience 16
On a observé,dans cette expérience, l'effet de
F-RM4 exercé sur les membranes de cellules purifiées et le Lysosome. Diverses sortes de cellules ont été détruites, les membranes des cellules et le Lysosome ont été purifiés, on a ajouté F-RM4 et ensuite on a observé continuellement la libération, dans le liquide de culture, de nucléotidase phosphatase acide. Les facteurs de fusion selon l'invention ont provoqué une fusion de la cellule purifiée et du
Lysosome. Ces réactions se sont produites très rapidement pendant 30 minutes en faisant agir les facteurs de fusion.
On a observé,dans cette expérience, l'effet de
F-RM4 exercé sur les membranes de cellules purifiées et le Lysosome. Diverses sortes de cellules ont été détruites, les membranes des cellules et le Lysosome ont été purifiés, on a ajouté F-RM4 et ensuite on a observé continuellement la libération, dans le liquide de culture, de nucléotidase phosphatase acide. Les facteurs de fusion selon l'invention ont provoqué une fusion de la cellule purifiée et du
Lysosome. Ces réactions se sont produites très rapidement pendant 30 minutes en faisant agir les facteurs de fusion.
Dans ces réactions également, les membranes des cellules et le Lysosome des cellules tumorales ont montré une plus forte sensibilité que les cellules normales.
Expérience 17
Elle a été mise en pratique sur la base du processus de détermination ou de discrimination de NCI. On a utilisé de souris BDF femelles,murines (poids : 12 + 1 g) pour cette expérience. Six unités murines par groupe et des tumeurs du type ascite ont été utilisées pour cette expérience.
Elle a été mise en pratique sur la base du processus de détermination ou de discrimination de NCI. On a utilisé de souris BDF femelles,murines (poids : 12 + 1 g) pour cette expérience. Six unités murines par groupe et des tumeurs du type ascite ont été utilisées pour cette expérience.
P 388 : 1 x 106 cellules/souris, L121O : 1 x 105 cellules/ souris. Le traitement a débuté au Jour 1 en mesurant par les tumeurs établies au Jour 0. La voie d'administration était par la cavité abdominale. La quantité d'administation était de 0,1 ml/souris (0,04ri et 0,004 pu). Deux sortes de traitements,en une fois et quotidien ont été administrées dans cette expérience.
T/C (durée de survie en moyenne du groupe traité/ durée de survie en moyenne du groupe témoin) # 125 %
L'efficacité a été évaluée avec les résultats obtenus ci-dessus. Comme le montre le tableau 2, on utilise fréquemment F RM4 pour NCI in vitro et in vivo et/ou il permet de diminuer le cancer au Japon. F RM4 a également présente un effet remarquable dans le cas de P388 et/ou L1210.
L'efficacité a été évaluée avec les résultats obtenus ci-dessus. Comme le montre le tableau 2, on utilise fréquemment F RM4 pour NCI in vitro et in vivo et/ou il permet de diminuer le cancer au Japon. F RM4 a également présente un effet remarquable dans le cas de P388 et/ou L1210.
Tableau 2
TSDE F-RM4 SUR LA SURVIE D'UNE SOURIS FORIEUSE D'UNE TUMEUR
TSDE F-RM4 SUR LA SURVIE D'UNE SOURIS FORIEUSE D'UNE TUMEUR
<tb> <SEP> Tumeur <SEP> Echantillon <SEP> Dose <SEP> OD280 <SEP> m/ <SEP> Nombre <SEP> Survie <SEP> moyen- <SEP> T/C
<tb> (voie) <SEP> (voie) <SEP> corps <SEP> x <SEP> jour <SEP> de <SEP> souris <SEP> ne <SEP> jours
<tb> <SEP> Témoin <SEP> - <SEP> 6 <SEP> 7,67 <SEP> 1,00
<tb> <SEP> P388 <SEP> F-RM4 <SEP> 0,04 <SEP> x <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 12,50 <SEP> 1,63
<tb> intra- <SEP> intra-péri
<tb> périto- <SEP> tonéale <SEP> 0,004 <SEP> x <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 10,17 <SEP> 1,33
<tb> <SEP> néale
<tb> <SEP> 0.04 <SEP> x <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 15,17 <SEP> 1,98
<tb> <SEP> 0.004 <SEP> x <SEP> 7 <SEP> 6 <SEP> 10,67 <SEP> 1,39
<tb> <SEP> Témoin <SEP> - <SEP> 6 <SEP> 8,00 <SEP> 1,00
<tb> L1210 <SEP> F-RM4 <SEP> 0,04 <SEP> x <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 10,50 <SEP> 1,31
<tb> intra- <SEP> intra-péri
<tb> périto- <SEP> tonéale
<tb> <SEP> néale <SEP> 0,004 <SEP> x <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 10,00 <SEP> 1,25
<tb> <SEP> 0,04 <SEP> x <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 9,00 <SEP> 1,13
<tb> <SEP> 1,004 <SEP> x <SEP> 7 <SEP> 6 <SEP> 8,83 <SEP> 1,10
<tb>
<tb> (voie) <SEP> (voie) <SEP> corps <SEP> x <SEP> jour <SEP> de <SEP> souris <SEP> ne <SEP> jours
<tb> <SEP> Témoin <SEP> - <SEP> 6 <SEP> 7,67 <SEP> 1,00
<tb> <SEP> P388 <SEP> F-RM4 <SEP> 0,04 <SEP> x <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 12,50 <SEP> 1,63
<tb> intra- <SEP> intra-péri
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<tb> <SEP> 0.04 <SEP> x <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 15,17 <SEP> 1,98
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<tb> <SEP> 1,004 <SEP> x <SEP> 7 <SEP> 6 <SEP> 8,83 <SEP> 1,10
<tb>
Claims (4)
- 7.- Agent anti-tumeur, caractérisé en ce qu'il comprend une protéine du sucre d'un poids moléculaire de 30 000 à 100 000 par analyse par électrophorèse sur gel, ayant un point isoélectrique de 3,5 à 5,5 et des facultés particulières de fusion des cellules dans les cellules tumorales, se composant efficacement de rectine en combinaison avec de la N-acétyl -D-Galactosamine.REVENDICATIONS
- 2.- Agent selon la revendication 1, caractérisé en ce que la protéine du sucre est obtenue des films de cellules animales.
- 3.- Agent selon la revendication 2, caractérisé en ce que les cellules animales sont des cellules humaines ayant acquis le virus de la leucémie du type T.
- 4.- Agent selon la revendication 2, caractérisé en ce que les cellules animales sont les cellules du rat ayant acquis le virus de la leucémie murine.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8411819A FR2568125B1 (fr) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | Agent anti-tumeur contenant la proteine du sucre |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8411819A FR2568125B1 (fr) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | Agent anti-tumeur contenant la proteine du sucre |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2568125A1 true FR2568125A1 (fr) | 1986-01-31 |
| FR2568125B1 FR2568125B1 (fr) | 1988-04-15 |
Family
ID=9306488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR8411819A Expired FR2568125B1 (fr) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | Agent anti-tumeur contenant la proteine du sucre |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2568125B1 (fr) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2073293A1 (fr) * | 1969-12-31 | 1971-10-01 | Pasteur Institut | |
| GB2106935A (en) * | 1981-10-01 | 1983-04-20 | Otsuka Pharma Co Ltd | Cancer cell-combatting lymphocytes process, for the production thereof, and anticancer agents containing said lymphocytes |
| FR2522267A1 (fr) * | 1982-02-26 | 1983-09-02 | Mochida Pharm Co Ltd | Glycoproteines a activite antitumorale, leur procede de preparation et leur application therapeutique |
-
1984
- 1984-07-25 FR FR8411819A patent/FR2568125B1/fr not_active Expired
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2073293A1 (fr) * | 1969-12-31 | 1971-10-01 | Pasteur Institut | |
| GB2106935A (en) * | 1981-10-01 | 1983-04-20 | Otsuka Pharma Co Ltd | Cancer cell-combatting lymphocytes process, for the production thereof, and anticancer agents containing said lymphocytes |
| FR2522267A1 (fr) * | 1982-02-26 | 1983-09-02 | Mochida Pharm Co Ltd | Glycoproteines a activite antitumorale, leur procede de preparation et leur application therapeutique |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2568125B1 (fr) | 1988-04-15 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse |