ES2244991T3 - Analogosmcbi de cc-1065 y las duocarmicinas. - Google Patents
Analogosmcbi de cc-1065 y las duocarmicinas.Info
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Abstract
LA INVENCION SE REFIERE AL MCBI (7 - METOXI - 1, 2, 9, 9A TETRA - HIDROCICLOPROPA [C] BENC [E] INDOL - 4 - ONA), EL CUAL SE PUEDE EMPLEAR COMO AGENTE ALQUILANTE DE ADN Y SE PUEDE INCORPORAR EN ANALOGOS DE CC-1065 Y DUOCARMICINAS, PARA CONSTRUIR AGENTES ALQUILANTES DE ADN SELECTIVOS PARA DETERMINADAS ZONAS.
Description
Análogos MCBI de CC-1065 y las
duocarmicinas.
La invención se refiere a antibióticos
antitumorales. Más particularmente, la invención se refiere a
análogos de CC-1065 y las duocarmicinas que tienen
actividad como antibiótico antitumoral.
(+)-CC-1065 (1) y
la duocarmicina representan los miembros iniciales de una clase de
antibióticos antitumorales excepcionalmente potentes que derivan sus
efectos biológicos a través de la alquilación de DNA selectiva para
la secuencia controlada estereoelectrónicamente reversible (Boger y
otros, J. Org. Chem. 1990, 55,4499; Boger y otros,
J. Am. Chem. Soc. 1990, 112, 8961; Boger y
otros, J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 6645; Boger
y otros, J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 9872;
Boger y otros, Bioorg. Med. Chem. Lett. 1992,
2, 759). Después de su descripción inicial, se han dedicado
esfuerzos intensivos a establecer su selectividad de alquilación de
DNA y su origen estructural. También se han dedicado esfuerzos a
establecer la conexión entre la alquilación de DNA y las propiedades
biológicas consiguientes, es decir, para definir los principios
fundamentales subyacentes a las relaciones entre estructura,
reactividad química y propiedades biológicas (Figura 1;
1-3).
La CBI
(1,2,9,9a-tetrahidrociclopropa[c]benz[e]indol-4-ona)
se ha identificado como una subunidad de alquilación que corresponde
a la subunidad de alquilación de CC-1065 y las
duocarmicinas (Boger y otros, J. Am. Chem. Soc. 1989,
111, 6461; Boger D. L.; Ishizaki y otros, J. Org.
Chem. 1990, 55, 5823). Agentes que incluyen los
análogos basados en CBI han resultado especialmente útiles como
agentes alquilantes de DNA. Esto era significativo ya que los
estudios precedentes habían atribuido tales características únicas
de las subunidades de alquilación presentes en la naturaleza a que
dejan la percepción de que incluso pequeñas perturbaciones
estructurales, cambios estructurales profundamente arraigados
aislados, tendrían efectos perjudiciales sobre las propiedades.
Hurley y otros, Science 1984, 226, 843;
Reynolds y otros, Biochemistry 1985, 24, 6228;
Hurley y otros, Biochemistry 1988, 27, 3886;
Hurley y otros, J. Am. Chem. Soc. 1990, 112,
4633; Warpehoski y otros, Biochemistry 1992,
31, 2502). No solo esto ha resultado inexacto, sino que los
enantiómeros naturales de los análogos basados en CBI de
(+)-CC-1065 han resultado
químicamente más estables (4 veces), biológicamente más potentes y
considerablemente más accesibles sintéticamente que los
correspondientes agentes que incorporan la subunidad de alquilación
de CPI natural de CC-1065. Boger y otros, J Org.
Chem. 1990, 55, 5823; Boger y otros, J. Org.
Chem. 1992, 57, 2873; Boger y otros, J. Org.
Chem. 1995, 60, 1271). Por otra parte, agentes
seleccionados dentro de la serie de análogos de CBI no solo exhibían
potente actividad citotóxica sino también una actividad antitumoral
in vivo potente y eficaz. (Boger y otros, Bioorg. Med.
Chem. Lett. 1991, 1, 115).
Se ha observado que los enantiómeros naturales de
los análogos basados en CBI alquilan el DNA con una selectividad
inalterada para la secuencia a una velocidad potenciada con una
eficacia mayor que el correspondiente análogo de CPI (Boger y otros,
Bioorg. Med. Chem. Lett. 1991, 1, 115; Boger y
otros, J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 2779; Boger
y otros, J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 5487).
Esto indica que la subunidad de alquilación de CBI simplificada
ofrece importante ventajas sobre la subunidad de alquilación natural
de CC-1065. En estudios recientes, se han
desarrollado modelos de las reacciones de alquilación de DNA de
CC-1065 y las duocarmicinas. (Boger y otros, J.
Org. Chem. 1990, 55, 4499; Boger y otros, J.
Am. Chem. Soc. 1990, 112, 8961; Boger y otros,
J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 6645; Boger y
otros, J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 9872; Boger
y otros, Bioorg. Med. Chem. Lett. 1992, 2, 759;
Boger y otros, J. Am. Chem. Soc. 1994, 116,
1635). Estos modelos se ajustan a la selectividad de alquilación de
DNA en N_{3} de adenina, rica en AT, invertida y desviada, de los
agentes enantiómeros y sus análogos estructurales. Se ha encontrado
que los aductos diaestereoisómeros derivados de los enantiómeros no
naturales sufren una interacción estérica desestabilizante
significativa entre el centro C7 de CPI (CH_{3}) o el centro C8 de
CBI con la base adyacente a la adenina alquilada que no está
presente con los aductos de enantiómeros naturales. De acuerdo con
esta observación, los rasgos distintivos entre los enantiómeros
naturales y no naturales disminuyen o desaparecen a medida que el
volumen estérico inherente que rodea este centro se reduce o
elimina. (Boger y otros, J. Am. Chem. Soc. 1994,
116, 7996). Debido a la selectividad de los enantiómeros no
naturales para desestabilizar interacciones estéricas que rodean el
centro C7 de CPI o C8 de CBI, los enantiómeros no naturales de los
análogos basados en CBI son más eficaces que el análogo de CPI
correspondiente que presenta una velocidad y una eficacia relativa
de alquilación de DNA aún más potenciadas.
Existe una relación directa entre la estabilidad
funcional y la potencia citotóxica (Boger y otros, J. Am. Chem.
Soc. 1994, 116, 6461; Boger y otros, J. Am.
Chem. Soc. 1994, 116, 11335; Mohamadi y otros,
J. Med. Chem. 1994, 37, 232; Boger y otros,
J. Org. Chem. 1994, 59, 4943; Boger y otros,
J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 6461; Boger y
otros, J. Org. Chem. 1990, 55, 5823). En una
serie en curso de estudios efectuados con agentes que contienen
modificaciones profundamente arraigadas en la subunidad de
alquilación que hasta la fecha incluyen 4-9 (Figura
2), se ha encontrado que los agentes que poseen la mayor estabilidad
frente a la solvolisis exhiben la actividad citotóxica más potente.
Por otra parte, esta relación directa entre estabilidad funcional y
potencia biológica se ha observado con análogos tanto simples como
avanzados de los productos naturales. Se observó una convalidación
subsiguiente de esta relación con una serie de derivados de CBI
substituidos en N^{2} simples. (Boger y otros, J. Am. Chem.
Soc. 1994, 116, 5523). Se observaron relaciones
lineales predecibles entre la estabilidad frente a la solvolisis
(-log k), la potencia citotóxica (log 1/IC_{50},
L1210) y las propiedades de retirada de electrones del substituyente en N^{2} (constante \sigma_{p} de Hammett) (Figura 2; 4-9).
L1210) y las propiedades de retirada de electrones del substituyente en N^{2} (constante \sigma_{p} de Hammett) (Figura 2; 4-9).
Lo que se necesita es un agente alquilante
alternativo que tenga una reactividad alterada en comparación con
CBI, que pueda incorporarse en análogos de CC-10665
y las duocarmicinas.
Un aspecto de la invención se dirige a agentes
alquilantes representados por cualquiera de las siguientes
estructuras:
En las estructuras anteriores, X se selecciona
del grupo que consiste en cloro, bromo, yodo y OTOS y R_{1} se
elecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
terc-butoxicarbonilo y un radical representado por
la siguiente estructura:
En el radical anterior, R_{2} se selecciona del
grupo que consiste en hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6); R_{3} se
selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, hidroxilo,
O-alquilo(C1-C6) y un radical
representado por la siguiente estructura:
R_{4} se selecciona del grupo que consiste en
hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6); y R_{5}
se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6). V_{1}
representa un grupo vinileno entre R_{2} y R_{3}. Sin embargo,
vienen al caso las siguientes condiciones:
- 1.
- Si R_{2} y R_{3} participan en un anillo de pirrolidina substituido en N (véase posteriormente), entonces R_{4} y R_{5} son hidrógeno; y
- 2.
- Si R_{2} es hidrógeno, entonces R_{4} y R_{5} son hidrógeno y R_{3} es un radical representado por la siguiente estructura:
Alternativamente, R_{2} y R_{3} y el grupo
vinileno intermedio forman juntos un anillo de pirrolidina
substituido en N representado por la siguiente estructura:
en la que V_{1} representa el
grupo vinileno entre R_{2} y R_{3}. En el radical anterior,
R_{6} se selecciona del grupo que consiste en -NH_{2} y un
radical representado por la siguiente
estructura:
R_{7} se selecciona del grupo que consiste en
hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6); R_{8} se
selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6); y V_{2}
representa un grupo vinileno entre R_{7} y R_{8}.
Alternativamente, R_{7} y R_{8} y el grupo
vinileno intermedio pueden formar juntos un anillo de pirrolidona
substituido en N representado por la siguiente estructura:
en la que V_{2} representa el
grupo vinileno entre R_{7} y
R_{8}.
Modalidades preferidas de la invención incluyen
los siguientes compuestos:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Un segundo aspecto de la invención se dirige al
uso de los compuestos indicados anteriormente para la alquilación de
DNA.
La MCBI
(7-metoxi-1,2,9,9a-tetrahidrociclopropa[c]benz[e]indol-4-ona)
es un derivado de CBI substituido que tiene un grupo metoxi en C7
para con respecto al carbonilo en C4. La estructura central
de la subunidad de alquilación de MCBI se preparó mediante una
condensación de Stobbe-acilación de
Friedel-Crafts modificada para la generación de los
precursores de naftaleno apropiadamente funcionalizados (210 y 200)
seguido por ciclación de 5-exo-trig-radical
arilo-alqueno (228 a 230, 246 a 248) para la
terminación de la síntesis del esqueleto de
1,2-dihidro-3H-benz[e]indol
y la alquilación en Ar-3' final de 236 para la
introducción del ciclopropano activado. Dos sistemas para la
realización de la ciclación del radical libre
5-exo-trig clave se detallan con el primer
procedimiento con el cierre de 228 para proporcionar 230, en el que
la funcionalización del producto requerida se introducía antes de la
ciclación y el último con atrapamiento con Tempo del producto de
ciclación del substrato de alqueno no funcionalizado 246 para
proporcionar 248. El último sistema conciso proporcionaba la
subunidad de MCBI y su precursor inmediato en 12-13
etapas con conversiones globales excelentes
(27-30%). Se detallan la resolución de un precursor
de MCBI intermedio y su incorporación en ambos enantiómeros de
257-266, análogos de CC-1065 y las
duocarmicinas. Se describe un estudio de la reactividad y
regioselectividad de solvolisis de N-BOC-MCBI
(238) y se encontró que la introducción del grupo metoxi en C7
aceleraba la velocidad de solvolisis en solo 1,6 veces. Este efecto
sorprendentemente moderado sugiere que la protonación del carbonilo
en C4 no es la etapa determinante de la velocidad de la solvolisis o
la adición nucleófila catalizada por ácido, que produce poca
acumulación de carga diferencial en el estado de transición y apoya
además la sugerencia de que la reacción de apertura del anillo de
ciclopropano requiere la presencia y la ayuda de un nucleófilo
(mecanismo SN2). Sin duda esto contribuye a la selectividad de
alquilación de DNA de esta clase de agentes e implica que la
colocación de un nucleófilo accesible (N_{3} de adenina) y no la
protonación del carbonilo en C_{4} puede ser el caso determinante
de la velocidad. Este efecto electrónico notablemente pequeño sobre
la velocidad de solvolisis no tenía impacto sobre la
regioselectividad de solvolisis y se observaba exclusivamente la
adición nucleófila controlada estereoelectrónicamente al carbono
menos substituido del ciclopropano activado.
La Figura 1 ilustra las estructuras de
(+)CC-1065 (1) y las duocarmicinas
2-3.
La Figura 2 ilustra las estructuras de agentes
4-9 que contienen modificaciones profundamente
arraigadas en la subunidad de alquilación. El esquema inferior
muestra una comparación directa de MCBI con CBI.
La Figura 3 ilustra la síntesis de compuestos
intermedios iniciales 204, 206, 208 y 210.
La Figura 4 ilustra la síntesis de compuestos de
MCBI intermedios avanzados 238 y 240.
La Figura 5 ilustra la síntesis del compuesto de
MCBI intermedio avanzado 230.
La Figura 6 ilustra la síntesis de agentes
acoplados a MCBI 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264 y 266.
La Figura 7 ilustra la solvolisis del compuesto
de MCBI intermedio avanzado 29 hasta un compuesto simple obtenido
como producto 47.
La Figura 8 ilustra una tabla de agentes
examinados en la que k representa la constante de velocidad
de solvolisis medida a pH 3; t_{1/2} representa la
semi-vida del agente medida a pH 3 con los valores
de IC_{50} y los datos espectrales ultravioletas e infrarrojos
indicados. Los superíndices apuntados se definen como sigue: (a) pH
= 3: CH_{3}OH al 50%-tampón, el tampón es ácido cítrico 0,1 M,
Na_{2}HPO_{4} 0,2 M y H_{2}O 4:1:20 (v:v:v), respectivamente;
(b) CH_{3}OH; (c) KBr; (d) THF; (e) Película; (f) Nujol; (g) a pH
2, k = 1,53 x 10^{-5} s^{-1}, t_{1/2} = 12,5
horas; (h) a pH 2, k = 1,62 x 10^{-5} s^{-1},
t_{1/2} = 11,5 horas.
La Figura 9 ilustra un estudio de solvolisis
(espectro UV) de N-BOC-MCBI (238, parte
superior) y MCBI (240, parte inferior) en CH_{3}OH al 50%-tampón
acuoso (pH 3,0, ácido cítrico 0,1 M, NaH_{2}PO_{4} 0,2 M y
H_{2}O 4:1:20 (v/v/v), respectivamente). Los espectros se
registraron a intervalos regulares y solo se muestran unos pocos por
claridad. Parte superior: 1, 0 horas; 2, 4 horas; 3, 27 horas; 4, 70
horas; 5, 105 horas; 6,177 horas. Parte inferior: 1, 0 horas; 2, 4
horas; 3,27 horas; 4, 70 horas; 5, 177 horas; 6, 752 horas.
La Figura 10 ilustra la actividad citotóxica
in vitro de agentes de MCBI examinados y se muestran en
comparación con agentes de CBI.
La Figura 11 ilustra que se encuentra que los
agentes examinados siguen una relación directa entre estabilidad
funcional (-log k) y potencia citotóxica (-log (IC_{50})).
La Figura 12 ilustra distinciones de enantiómeros
que revelan que se encontraba que los enantiómeros de
MCBI-TMI exhibían distinciones análogas pero algo
menores que las observadas con CBI-TMI.
La Figura 13 ilustra la segmentación de hebras
inducida térmicamente de DNA de doble hebra (fragmento de DNA de
SV40, 144 pb, nucleótido Nº 5238-138, clon w794)
después de 72 horas de incubación de agente-DNA a
37ºC seguido por retirada de agente no unido y 30 minutos de
incubación a 100ºC; 8% de PAGE desnaturalizante y autorradiografía.
Marca 1 DNA de control; marcas 2-4,
(-)-MCBI-TMI (254, 1 x 10^{-5} a 1
x 10^{-7} M); marcas 5-7,
(-)-duocarmicina SA (2, 1 x 10^{-5} a 1 x
10^{-7} M); marcas 8-11, reacciones de G, C, A y T
de Sanger; marcas 12-14,
(-)-CC-1065 (1,1 x 10^{-5} a 1 x
10^{-7} M); marcas 15-17,
(-)-MCBI-CDPI_{2} (266, 1 x
10^{-5} a 1 x 10^{-7} M); marcas 18-20,
(-)-MCBI-CDPI_{1} (262, 1 x
10^{-5} a 1 x 10^{-7} M); marcas 21-23
(-)-MCBI-indol_{2} (258, 1 x
10^{-5} a 1 x 10^{-7} M).
La Figura 14 ilustra la relación lineal entre
ln[(A_{f}-A_{i})/(A_{f}-A)];
estudio de solvolisis (espectro UV) de
N-BOC-MCIB (238, parte superior) y MCBI (240,
parte inferior) en CH_{3}OH al 50%-tampón acuoso (pH 3,0, ácido
cítrico 0,1 M, Na_{2}HPO_{4} 0,2 M y H_{2}O 4:1:20 (v/v/v),
respectivamente). Los espectros se registraron a intervalos
regulares y solo se muestran unos pocos por claridad. Parte
superior: 1, 0 horas, 2, 4 horas, 3, 27 horas, 4, 70 horas, 5, 105
horas, 6, 177 horas. Parte inferior: 1, 0 horas, 2, 4 horas, 3, 27
horas, 4, 70 horas, 5, 177 horas, 6, 752 horas.
La Figura 15 ilustra una gráfica de porcentaje de
densidad óptica integrada (% de IOD) frente al tiempo, establecida a
través de la autorradiografía de 5'-^{32}P y DNA
marcado y usada para verificar la velocidad relativa de alquilación
de v794 en el sitio de alta afinidad 5'-AATTA
para 1, 254, 258, (+)-CBI-TMI y
(+)-DSA-indol_{2}.
La Figura 16 ilustra la segmentación de cadenas
inducida térmicamente de DNA marcado en el extremo 5' (fragmento de
DNA de SV40, 144 pb, nucleótido Nº 5238-138, clon
w794). Según se indica, la incubación del DNA-agente
se efectuó a 37ºC durante 24 ó 48 horas, seguido por retirada de
agente no unido y 30 minutos de incubación a 100ºC; 8% de PAGE
desnaturalizante y autorradiografía.
La Figura 17 ilustra la segmentación de cadenas
inducida térmicamente de DNA de doble hebra (fragmento de DNA de
SV40, 144 pb, nucleótidos Nº 5238-138, clon w794)
después de 24 horas de incubación de agente-DNA a
25ºC seguido por retirada de agente no unido y 30 minutos de
incubación a 100ºC; 8% de PAGE desnaturalizante y autorradiografía.
Marca 1, DNA de control; marcas 2-4,
(+)-duocarmicina SA (2,1 x 10^{-5} x 1 x 10^{-7}
M); marcas 5-7,
(+)-MCBI-TMI (254, 1 x 10^{-5} a 1
x 10^{-7} M); marcas 8-11, reacciones de G, C, A y
T de Sanger; marcas 12-14,
(+)-CC-1065 (1,1 x 10^{-5} a 1 x
10^{-7} M); marcas 15-17,
(+)-MCBI-indol_{2} (258, 1 x
10^{-5} a 1 x 10^{-7} M); marcas 18-20,
(+)-MCBI-CDPI_{2} (266, 1 x
10^{-5} a 1 x 10^{-7} M).
La Figura 18 ilustra que las velocidades
relativas de alquilación de DNA, para los diversos agentes, no
siguen las velocidades relativas de solvolisis catalizada por ácido
(k = constante de velocidad respectiva).
La invención representa la primera síntesis de
derivados de MCBI substituidos,
7-metoxi-1,2,9,9a-tetrahidrociclopropa[c]benz[e]-indol-4-ona
(MCBI), que tienen un substituyente metoxi en C7 para con
respecto al carbonilo en C4. Se anticipaba que la comparación
directa de MCBI con CBI permitía una determinación de la magnitud de
los efectos electrónicos del substituyente en C7 sobre la
reactividad química y, finalmente, la relación de esta reactividad
funcional con las propiedades biológicas (Figura 2; estructura de
MCBI).
La condensación de Stobbe (Stobbe, H. Chem.
Ber. 1893, 26, 2312; Johnson y otros, Org.
React. 1951, 6, 1) de
3-metoxibenzaldehído (200; Figura 3) con succinato
de dietilo (3-6 equivalentes) efectuada mediante
tratamiento con t-BuOK (Johnson y otros, Org. React.
1951, 6, 1; Baghos y otros, Helv. Chim. Acta
1979, 62, 90) (2-4 equiv,
t-BuOH, reflujo, 1-2 horas, 74%)
proporcionaba una mezcla 2:1 de semiésteres 202 que se sometían a
acilación de Friedel-Crafts (1,0 equivalentes de
NaOAc, Ac_{2}O, 5 horas de reflujo) para proporcionar una mezcla
de 210, su O-acetato correspondiente 208 y cantidades
significativas de los productos de Friedel-Crafts
isómeros 204-206 (Figura 3). La etanolisis
subsiguiente (K_{2}CO_{3}, EtOH) de la mezcla resultante servía
para hidrolizar los O-acetatos 204 y 208 proporcionando una
mezcla de 210 y su isómero 206 que se separaban fácilmente mediante
cromatografía. El uso de este sistema proporcionaba 210 con un
rendimiento global de 40-45% satisfactorio a partir
de 200 sin la purificación deliberada de los productos intermedios
202 ó 208, pero sufría conversiones erráticas y la separación
preparativa de los productos isómeros finales. Las mejores
conversiones se observaban cuando la acilación de
Friedel-Crafts se efectuaba bajo condiciones de
reacción moderadamente diluidas (0,1 frente a 0,5 M). En parte, la
mezcla de E:Z 2:1 de semiésteres iniciales 202 dictaba una
fijación rigurosa de las condiciones de acilación de
Friedel-Crafts capaces de isomerización y ciclación
del isómero Z no productivo. Los intentos de mejorar la
relación de productos isómeros usando condiciones de reacción más
suaves generalmente producían conversiones globales inferiores en
210 debido a la ciclación menos eficaz del isómero Z bajo las
condiciones examinadas (Figura 1; parte superior).
Esto se mejoraba significativamente efectuando la
condensación de Stobbe de una manera más controlada. La condensación
de 200 con el reactivo de
Wadsworth-Horner-Emmons 212 (Owten y
otros, Synth. Commun. 1993, 23, 2119; Gallagher
y otros, Tetrahedron Lett. 1994, 35, 289;
Hughes y otros, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1 1989,
449; Comber y otros, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1
1991, 2783) (1 equiv, 1.05 equiv de NaH, THF, 0 a 25ºC., 10
horas, 81%) proporcionaba 214 en el que predominaba el isómero
E deseado \geq 20:1 (Figura 3). La desprotección catalizada
por ácido selectiva del éster t-butílico (98%)
seguida por acilación de Friedel-Crafts efectuada
mediante tratamiento con Ac_{2}O-NaOAc (reflujo, 1
hora) proporcionaba una mezcla de 202-210. La
hidrólisis subsiguiente de los O-acetatos (K_{2}CO_{3},
EtOH) proporcionaba 210 (68% global) y 206. Notablemente, el tiempo
de reacción requerido para la terminación de la acilación de
Friedel-Crafts se reducía significativamente con el
uso del isómero E puro de 202 y el rendimiento de 210 se
mejoraba también. Por otra parte, esto permitía el uso de
condiciones de reacción de Friedel-Crafts más suaves
(Ac_{2}O, 1,1 equivalentes de NaOAc, 70ºC, 10 horas) y esta
modificación mejoraba adicionalmente las conversiones y la relación
de 210:206 (8:1). Después de este procedimiento, 210 se aislaba con
un rendimiento global de 76% a partir de 202. De forma similar, el
tratamiento de 202 con TFAA-NaOAc
(Bonnett-Delpon y otros, J. Org. Chem.
1988, 53, 754) (reflujo, 30 horas, 57%) proporcionaba
210 con conversiones ligeramente inferiores como una mezcla 9:1 de
210:206. Esfuerzos alternativos para convertir en primer lugar 202
en el cloruro de ácido correspondiente (2 equivalentes de
(COCl)_{2}) seguido por ciclación catalizada con ácidos de
Lewis (AlCl_{3}, 38%; FeCl_{3}, 46%; SnCl_{4}, 54%) no
mejoraban estas conversiones. No solo la conversión global de 200 en
210 mejoraba usando esta modificación de la condensación de Stobbe,
sino que la capacidad para aislar y caracterizar productos
intermedios puros
en la ruta hasta 210 permitía una determinación y una optimización exactas de cada etapa de reacción (Figura 3).
en la ruta hasta 210 permitía una determinación y una optimización exactas de cada etapa de reacción (Figura 3).
La protección del fenol 210 como su éter
bencílico 216 (98%) seguida por hidrólisis del éster etílico (98%) y
transposición de Curtius del ácido carboxílico resultante 218
empleando el reactivo de Shioiri-Yamada (DPPA;
Shioiri y otros, J. Am. Chem. Soc. 1972, 94,
6203; Ninomiya y otros, Tetrahedron 1974, 30,
2151) en t-BuOH proporcionaba el carbamato 220 directamente
con conversiones excelentes (69%), Figura 4. La bromación en
C-4 catalizada por ácido a baja temperatura de 220
(1,2 equivalentes de NBS, catalizador H_{2}SO_{4}, THF, -78ºC, 5
horas, 98%) proporcionaba limpiamente 222 cuya estructura se
confirmaba con la observación de un pico cruzado NOE de
C_{3}-H/OCH_{2}Ph de diagnóstico en el espectro
de ^{1}H-^{1}H-NMR de 2D. La
alquilación de la sal sódica de 222 (1,3 equivalentes de NaH, DMF,
25ºC, 30 minutos) con
1-bromo-3-metil-2-buteno
(3 equivalentes, DMF, 25ºC, 8 horas, 95%) seguida por una ozonolisis
a baja temperatura cuidadosamente controlada de 224 y el tratamiento
reductivo subsiguiente (Me_{2}S) del ozónido en bruto
proporcionaba 226 (81%). En la optimización de la reacción de
ozonolisis, se encontró que el uso de tiempos de reacción más
prolongados sin una extinción a baja tempera de O_{3} en exceso
intermedia conducía a la generación rápida de un producto de
oxidación adicional. Por consiguiente, la observancia de las
condiciones de reacción y particularmente el tiempo de reacción
detallados era crítica para el éxito de la conversión de 224 en 226.
La introducción de Wittig del éter vinílico 228 resultaba mas eficaz
con la generación a baja temperatura de Ph_{3}P=CHOTHP (Schlude,
H. Tetrahedron 1975, 31, 89) en THF seguido por
la reacción con 226 en THF-HMPA durante un período
de reacción sostenido y proporcionaba una mezcla de isómeros
olefínicos E:Z con excelente rendimiento (88%). El
tratamiento de 228 con Bu_{3}SnH (2 equivalentes, C_{6}H_{6},
catalizador AIBN, 80ºC, 2 horas, 95-98%)
proporcionaba 230, el producto de la ciclación de
5-exo-trig-radical arilo-alqueno, con
un rendimiento excelente. La desprotección de THP subsiguiente
(Bongini y otros, Synthesis, 1979, 618) de 230
proporcionaba el alcohol libre 232 (99%) y se efectuó sin evidencia
de desprotección de N-BOC. La conversión de 232 en el cloruro
primario 234 (2 equivalentes de Ph_{3}P, 6 equivalentes de
CCl_{4}, CH_{2}Cl_{2}, 25ºC, 20 horas,
99-100%; Hooz y otros, Can. J. Chem.
1968, 46, 86) seguida por hidrogenolisis de
transferencia (Beig y otros, Synthesis 1985, 76) del
éter bencílico (99-110%) y la espirociclación
subsiguiente efectuada mediante tratamiento de 236 con NaH (3
equivalentes, THF, 0ºC, 30 minutos, 89%) proporcionaba
N-BOC-MCBI (238). De forma similar, la
desprotección catalizada con ácido de 232 (HCl-EtOAc
3N, 25ºC, 20 minutos) seguida por espirociclación de la sal de
hidrocloruro en bruto durante la exposición a NaHCO_{3} acuoso al
5%-THF (1:1, 25ºC, 1,5 horas, 93%) proporcionaba limpiamente MCBI
(240); (Figura 4).
Después de la terminación de esta síntesis de 238
y 240, se investigaron métodos alternativos para efectuar la
ciclación de 5-exo-trig-radical
arilo-alqueno (Boger y otros, J. Org. Chem.
1995, 60, 1271). En el sistema inicial de la presente
invención, la ciclación del éter enólico 228 avanzaba con una
conversión excelente en parte debido al uso de un alqueno aceptor
activado que acelera la velocidad de cierre del anillo y refuerza la
preferencia inherente para la ciclación de
5-exo-trig. Además, el éter vinílico
incorpora en el substrato de ciclación toda la funcionalización
requerida en el producto de ciclación deseado. Sin embargo, la
limitación natural de este sistema es el requisito de incorporar la
funcionalidad del producto en el alqueno aceptor del substrato de
ciclación de radical libre y esto implica una reacción de ozonolisis
cuidadosamente definida y una reacción de Wittig subsiguiente con un
metilentrifenilfosforano funcionalizado. Se efectuó una preparación
más eficaz y más corta de 232 basándose en el atrapamiento con Tempo
satisfactorio (Boger y otros, J. Org. Chem. 1995,
60, 1271) de una ciclación de radical
arilo-alqueno-5-exo-trig
de un alqueno inactivado que evita la necesidad de la
funcionalización del alqueno antes de la ciclación. La yodación en
C4 catalizada por ácido selectiva de 220 efectuada mediante
tratamiento a baja temperatura con NIS (1,1 equivalentes,
catalizador TsOH, THF-CH_{3}OH, -78ºC, 3 horas,
89%) seguida por la alquilación de la sal sódica de 242 (1,25
equivalentes de NaH, DMF, 0ºC, 50 minutos) con bromuro de alilo (3
equivalentes, DMF, 25ºC, 3h, 93%) proporcionaba 246 (Figura 5). El
tratamiento de una mezcla de 246 y Tempo (6 equivalentes) en benceno
con Bu_{3}SnH (5 x 1,0 equivalentes, 70ºC, 1 hora) proporcionaba
248 (82%) claramente. De forma similar, el tratamiento de 246 y
Tempo (6 equivalentes) en tolueno con (Me_{3}Si)_{3}SiH
(5 x 1 equivalente, 80ºC, 10 horas) proporcionaba 248 (84%) en una
reacción que requería tiempos de reacción ligeramente más
prolongados para la terminación. La abstracción del átomo de
hidrógeno de Tempo desde Bu_{3}SnH o (Me_{3}Si)_{3}SiH
(Bu_{3}SnH > (Me_{3}Si)_{3}SiH) sirve
presumiblemente para iniciar la cascada de reacción de la
abstracción con radicales tributilestaño de yoduro procedente de
246, la ciclación de 5-exo-trig-radical
arilo-alqueno que avanza a una velocidad
excepcionalmente rápida y no sufre reducción competitiva o
atrapamiento con Tempo intermolecular, y el atrapamiento con Tempo
final del radical primario del producto de ciclación sin abstracción
competitiva del átomo de hidrógeno desde Bu_{3}SnH. La reacción
competitiva del radical tributilestaño con Tempo frente a 246
presumiblemente justifica los requisitos de Bu_{3}SnH
(3-5 equivalentes) y Tempo (6 equivalentes) en
exceso. La segmentación reductiva de 248 para proporcionar 230 se
efectuó mediante tratamiento con Zn (12 equivalentes,
HOAc-THF-H_{2}O 3:1:1, 70ºC, 2
horas, 86%) (Figura 5).
Resolución. El producto intermedio
sintético avanzado 236, el penúltimo producto intermedio para los
análogos basados en MCBI, se resolvió directamente y eficazmente en
una columna Daicel Chiralcel OD analítica o preparativa (\alpha =
1,17) (Boger y otros, J. Am. Chem. Soc. 1994,
116, 7996). Se encontró que este procedimiento cómodo que
evita la derivación, la separación y la desderivación
diastereoisómeras se efectuaba mejor con 236, aunque 234 (\alpha =
1,12) y N-BOC-MCBI (238, \alpha = 1,16)
también eran capaces de resolución directa en las columnas Chiralcel
OD. Para los propósitos de la presente invención, 236 podía
separarse en una columna de HPLC OD de 2 x 25 cm de 10 \mum
(i-PrOH-hexano al 2%, 5 ml/minuto) con una
recuperación de 90-100% de la muestra total. La
conversión de (1S)- y ent-(1R)-236 naturales
en (+)- y ent-(-)-N-BOC-CIB (238) y
(+)- y ent-(-)-CBI (240) seguía los
procedimientos experimentales detallados en la Figura 4.
La determinación de la configuración absoluta se
basaba inicialmente en las potencias citotóxicas relativas de (+)- y
ent-(+)-N-BOC-MCBI naturales y
análogos relacionados, exhibiendo la primera una actividad más
potente de acuerdo con observaciones realizadas con
4-9. Finalmente, esto se confirmó en un examen
preliminar de la selectividad para la alquilación de DNA de los
enantiómeros de los análogos avanzados 257-266.
Notablemente, se encontró que el signo de rotación para los
enantiómeros naturales y no naturales de
N-BOC-MCBI y MCBI así como los de los
análogos avanzados era el mismo que los observados con
4-7 y 9 y sus análogos avanzados.
La subunidad de alquilación de MCBI se incorporó
en el CC-1065 y los análogos de duocarmicina según
se detalla en la Figura 6. La desprotección catalizada por ácido de
236 (HCl 4M-EtOAc, 25ºC, 30 minutos) seguida por el
acoplamiento inmediato de la sal de hidrocloruro de amina inestable
250 con ácido
5,6,7-trimetoxiindol-2-carboxílico
(300, 3 equivalentes de EDCI, DMF, 25ºC, 10 horas, 85%; Boger y
otros, J. Org. Chem. 1990, 55, 4499), 58 (3
equivalentes de EDCI, DMF, 25ºC, 10 horas, 78%; Boger y otros, J.
Org. Chem. 1984, 49, 2240), CDPI_{1} (320, 3
equivalentes de EDCI, DMF, 25ºC, 12 horas, 71%; Boger J. Org.
Chem. 1987, 52, 1521) y CDPI_{2} (340, 3
equivalentes de EDCI, DMF, 25ºC., 6 horas, 68%; Boger y otros, J.
Org. Chem. 1987, 52, 1521; Boger y otros, J.
Org. Chem. 1984, 49, 2240) efectuada
deliberadamente en ausencia de base añadida que promueve el cierre
competitivo de 250 en 240 proporcionaba los precursores inmediatos
257, 256, 260 y 264, respectivamente. Notablemente, la facilidad de
los acoplamientos de 250 con los ácidos carboxílicos
300-340 disminuía a medida que decrecía su
solubilidad (300, 58 > 320 > 340), lo que necesariamente frena
la velocidad de reacción. El tratamiento subsiguiente de los agentes
acoplados con NaH (3,0 equivalentes, THF-DMF 3:1,
0ºC, 30 minutos) proporcionaba MCBI-TMI (254, 90%),
MCBI-indol_{2} (258, 86%),
MCBI-CDPI_{1} (262, 90%) y
MCBI-CDPI_{2} (266, 94%), respectivamente, con
excelentes conversiones. Las conversiones óptimas se observaban
cuando el tratamiento de la reacción de espirociclación se efectuaba
con un tampón acuoso de fosfato (0,2 M, pH 7) a baja temperatura
(0ºC). Bajo estas condiciones, se minimizaba la hidrólisis
adventicia en MCBI (240) (Figura 6).
Dos características fundamentales de las
subunidades de alquilación han resultado importantes en los estudios
de 4-9 hasta la fecha. La primera es la apertura de
anillo catalizada por ácido controlada estereoelectrónicamente del
ciclopropano activado que evita la adición preferencial de un
nucleófilo al carbono del ciclopropano menos substituido. La segunda
es la velocidad relativa de solvolisis catalizada por ácido que se
ha encontrado que refleja directamente la reactividad funcional de
los agentes y sigue una relación directa fundamental entre la
estabilidad frente a la solvolisis y la potencia citotóxica in
vitro (Boger y otros, J. Am. Chem. Soc. 1994,
116, 6461; Boger y otros, J. Am. Chem. Soc.
1994, 116, 11335).
Con tal de que la substitución en C7 del núcleo
de CBI no perturbe los efectos estereoelectrónicos sobre la apertura
de anillo catalizada por ácido, se anticipaba que este sutil cambio
estructural de introducir un substituyente metoxi en C7 para
incrementar la reactividad solvolítica de los agentes a través de la
activación electrónica de la protonación del carbonilo en C4
requería solvolisis. Por otra parte, se anticipaba que la solvolisis
se produciría sin embargo con una segmentación exclusiva del enlace
C8b-C9 con adición de un nucleófilo al carbono de
ciclopropano C9 menos substituido en vez de mediante segmentación
del enlace C8b-C9a con expansión de anillo y adición
de un nucleófilo a C9a. Notablemente, la última segmentación
colocaría la carga positiva en desarrollo sobre el centro secundario
preferido frente al primario y, en los agentes precedentes, esta
preferencia era anulada por el control esteroelectrónico
inherente.
De acuerdo con las expectativas,
N-BOC-MCBI (238, t_{1/2} = 80 horas,
k = 2,41 x 10^{-6} s^{-1}) resultaba ser más reactivo
hacia la solvolisis química a pH 3 que
N-BOC-CBI (4, t_{1/2} = 133 horas),
pero la diferencia era mucho menos pronunciada que lo anticipado y
238 era todavía substancialmente más estable que
N-BOC-CPI (6, t_{1/2} = 36,7 horas),
Figura 8. Así, N-BOC-MCBI exhibe una
semi-vida solo 0,6 veces más corta que la del agente
originario N-BOC-CBI (4) a pH 3. A pH 7
(H_{2}O-CH_{3}OH 1:1), donde 4-7
no mostraban evidencia de solvolisis cuando se controlaban durante
1-2 semanas, N-BOC-MCBI (238)
no mostraba de forma similar evidencia de solvolisis. La solvolisis
se seguía espectrofotométricamente mediante UV con la desaparición
de la banda de absorción de longitud de onda larga del cromóforo
MCBI (324 nM) y con la aparición de una banda de absorción de
longitud de onda corta (266 nm) atribuible a
seco-N-BOC-MCBI (Figura 9). Como CPI y CBI,
MCBI (240, t_{1/2} = 334 horas, k = 5,76 x 10^{-7}
s^{-1}) resultaba substancialmente más estable a la solvolisis que
N-BOC-MCBI (238) y esto es presumiblemente el
resultado de la protonación de N^{3} preferencial frente a
la protonación de O que se requiere para la catálisis de la
solvolisis. Casi de forma idéntica a las tendencias exhibidas por
4-9, MCBI (240, t_{1/2} = 334 horas,
k = 5,76 x 10^{-7} s^{-1}) resultaba ser solo ligeramente
más reactiva que CBI (t_{1/2} = 930 horas, k = 2,07
x 10^{-7} s^{-1})^{25} y 6-7 veces más
reactiva que DSA
(t_{1/2} = 2150 horas, k = 8,9 x 10^{-8} s^{-1})^{16} pero menos reactiva que CPI (Figura 8-9).
(t_{1/2} = 2150 horas, k = 8,9 x 10^{-8} s^{-1})^{16} pero menos reactiva que CPI (Figura 8-9).
Así, la velocidad de solvolisis catalizada por
ácido de N-BOC-MCBI (238) era predeciblemente
más rápida que la de N-BOC-CBI (4) debido a
la activación electrónica por el substituyente metoxi en C7, pero la
magnitud de este efecto es notablemente modesta (1,6 veces) y
reveladora. En primer lugar, sugiere que la protonación del
carbonilo en C4 no es la etapa determinante de la velocidad de
solvolisis o adición nucleófila catalizada por ácido. Usando el
valor \alpha_{p+} de -0,78 para el substituyente metoxi, esto
proporciona un valor de \rho notablemente pequeño de -0,28 para la
reacción de solvolisis catalizada por ácido. Aunque este pequeño
valor para \rho se basa en una comparación simple y está sujeto a
error, es análogo a un valor de \rho similarmente bajo derivado de
un grupo mayor de comparaciones (-0,30). Aunque se conocen muchas
interpretaciones mecánicas de \rho, la más general indica que es
una medida de la carga percibida por el substituyente en la reacción
pero abarca otros factores incluyendo la demanda electrónica, la
deslocalización de carga, la posición del estado de transición y la
transmisión de efectos del substituyente para la reacción bajo
estudio (Bradamante, S.; Pagani, G. A. J. Org. Chem.
1980, 45, 10). Puesto que estos factores no son
independientes, a menudo no es posible distinguir los efectos. Sin
embargo, un valor de \rho negativo inusualmente pequeño de -0,3
puede indicar poca acumulación de carga positiva diferencial en el
centro de reacción y sugiere un mecanismo SN2 estricto para la
apertura del anillo. Cualitativamente, esto se aprecia fácilmente
reconociendo que el substituto metoxi en C7 de 238 y 240 tiene solo
un efecto muy moderado de 1,6 veces sobre la velocidad de solvolisis
catalizada por ácido. La observación de productos de reacción de
solvolisis SN2 limpios para la adición por expansión del anillo
anormal al ciclopropano activado del 8 estrechamente relacionado
acoplado con el valor de \rho sorprendentemente pequeño exhibido
por la reacción sugiere que se produce poca acumulación de carga
diferencial en el estado de transición y que la observación de la
reacción requiere la presencia y la ayuda del nucleófilo. Sin duda,
esto contribuye a la selectividad de alquilación de DNA de esta
clase de agentes e implica que la posición de un nucleófilo
accesible (N3 de adenina) y no la protonación de carbonilo en C4
puede ser el suceso determinante de la velocidad.
El tratamiento de
N-BOC-MCBI (238) con 0,1 equivalentes de
CF_{3}SO_{3}H en CH_{3}OH (0ºC, 3 horas) daba como resultado
la solvolisis limpia para proporcionar un solo producto 268 (95%),
Figura 7. No se observó desprotección de N-BOC o una olefina
y la metanolisis avanzaba sin alteración de la regioselectividad
controlada estereoelectrónicamente. Se observó que la segmentación
limpia del enlace C8b-C9 con adición de CH_{3}OH
al carbono del ciclopropano C9 menos substituido proporcionaba 268 y
no se detectó segmentación del enlace C8b-C9 con
expansión del anillo y adición de CH_{3}OH a C9a para proporcionar
270 (> 20:1). Notablemente, esto está en fuerte contrate con
estudios de solvolisis de las subunidades de alquilación más
reactivas de CC-1065, duocarmicina A y CBQ donde se
han detectado cantidades significativas de los productos de
solvolisis de expansión del anillo anormal. Sin embargo, las
observaciones están de acuerdo con los estudios previos de los
presentes inventores de N-BOC-CBI (4) donde
no se detectaba (> 20:1) producto de solvolisis de expansión de
anillo (Boger y otros, J. Org. Chem. 1990, 55,
5823). Hasta la fecha, solo se han detectado productos de solvolisis
con expansión de anillo anormal con los agentes químicamente más
reactivos, es decir, 6-8, y solo son especialmente
relevantes en un sistema tal en el que la alineación
estereoelectrónica de ambos enlaces de ciclopropano es equivalente,
es decir 8 (Boger y otros, J. Am. Chem. Soc. 1994,
116, 6461; Boger y otros, J. Am. Chem. Soc.
1994, 116, 11335). De forma importante, esta adición
nucleófila catalizada por ácido controlada estereoelectrónicamente a
los agentes basados en CBI, incluyendo los agentes basados en MCBI,
que avanza con regioselectividad > 20:1 proporciona una ventaja
adicional de los agentes sobre los análogos basados en CPI de
CC-1065 que se ha encontrado que exhiben una
selectividad 4:1 más moderada (Warpehoski y otros, J. Am. Chem.
Soc. 1994, 116, 7573).
Se ha encontrado que los enantiómeros naturales
de los agentes basados en MCBI exhiben una potencia citotóxica que
es ligeramente menos potente o no distinguible de la del
correspondiente agente basado en CBI (Figura 10). Aunque la magnitud
de las diferencias de reactividad es demasiado pequeña y las
variabilidades en los ensayos citotóxicos demasiado grandes para
permitir una comparación crítica de los agentes de CBI y MCBI, las
tendencias cualitativas son generalmente las esperadas. De forma
importante y de acuerdo con su reactividad relativa, se encontró que
los agentes seguían la relación directa bien establecida entre
estabilidad funcional y potencia citotóxica observada en estudios
previos con el grupo completo de agentes que se ha examinado hasta
la fecha (Figura 11). De forma análoga a las observaciones previas,
los precursores seco correspondientes 236, 252, 256, 260 y 264
exhibían una actividad citotóxica indistinguible de los agentes que
contienen ciclopropano.
Las propiedades de alquilación de DNA de los
agentes se examinaron dentro de cuatro segmentos de 150 pares de
bases de DNA dúplex para los que están disponibles resultados
comparativos para agentes relacionados. Cuatro clones del fago
M13mp10 se seleccionaron para el estudio y contienen los insertos de
DNA nucleosomático de SV40 w794 (nucleótidos Nº
5238-138) y su complemento w836 (nucleótidos Nº
5189-91) y c988 (nucleótidos Nº
4359-4210) y su complemento c820 (nucleótidos Nº
4201-4356). La identificación del sitio de
alquilación y la determinación de la selectividad relativa entre los
sitios disponible se obtuvieron mediante segmentación de hebras
inducida térmicamente del DNA dúplex solamente marcado en el extremo
5' después de la exposición a los agentes. Después del tratamiento
del DNA dúplex marcado en el extremo con una gama de concentraciones
de agente, el agente no unido se retiró mediante precipitación con
EtOH del DNA. La redisolución del DNA en tampón acuoso, la
termolisis (100ºC, 30 minutos) para inducir la segmentación de
hebras en los sitios de alquilación de DNA, la electroforesis en gel
de poliacrilamida (PAGE) de alta resolución desnaturalizante
adyacente a patrones de secuenciación de didesoxinucleótidos de
Sanger y la autorradiografía conducían a la identificación de los
sitios de segmentación y alquilación de DNA. Los detalles completos
de este procedimiento se han descrito y analizado en otras partes
(10). Las selectividades de la reacción de alquilación de DNA
observadas bajo las condiciones de incubación de 25ºC (24 horas)
para los agentes detallados aquí han resultado idénticas a las
selectividades de alquilación observadas con períodos de reacción
más cortos o prolongados o cuando las reacciones se efectuaban a
diferentes temperaturas (37 ó 4ºC, 0,5-7 días).
Según se analiza posteriormente, las velocidades y las eficacias,
pero no las eficacias relativas finales, de alquilación de DNA se
alteraban cambiando las temperaturas de reacción.
Una comparación de la alquilación de DNA mediante
los enantiómeros naturales de 254, 258, 262 y 266 junto con los
productos naturales (+)-duocarmicina SA (2) y
(+)-CC-1065 (1) dentro de DNA de
w794 se ilustra en la Figura 17 y es representativa del grupo
completo de comparaciones que se ha realizado con los agentes. En
las comparaciones, (+)-duocarmicina SA (2) y
(+)-MCBI-TMI (254) eran
indistinguibles y los dos agentes exhibían la misma selectividad y
eficacia de alquilación de DNA. Esto se ilustra perfectamente dentro
de DNA de w794 en la Figura 17 donde los dos agentes alquilan
detectablemente el mismo sitio de alta afinidad de
5'-AATTA a de 10^{-6} a 10^{-7} M, ambos
alquilan los tres sitios secundarios adicionales hasta una extensión
comparable solo a concentraciones superiores y ambos exhiben la
misma extensión de alquilación a lo largo del intervalo de
concentraciones examinado. Esto es exactamente análogo a las
observaciones realizadas en las comparaciones previas de los
presentes inventores de duocarmicina SA (2) y
CBI-TMI (Boger y otros, J. Am. Chem. Soc.
1994, 116, 7996).
De forma similar,
(+)-MCBI-CDPI_{2} (266) y
(+)-CC-1065 (1) resultaban
esencialmente indistinguibles en las presentes comparaciones. Esto
se ilustra perfectamente en la Figura 17 con DNA de w794 donde los
dos agentes alquilan detectablemente el sitio de alta afinidad de
5'-AATTA a 10^{-7} M, ambos alquilan los
sitios secundarios adicionales hasta extensiones comparables a
concentraciones de agente superiores y ambos exhiben la misma
extensión de alquilación a lo largo del intervalo de concentraciones
examinado. Esto es lo más evidente en la comparación de la cantidad
de DNA sin reaccionar presente a cada una de las concentraciones de
reacción. De forma similar,
(+)-MCBI-indol_{2} (258) alquila
DNA detectablemente a 10^{-7} molar.
Aunque esto no es tan pronunciado dentro de w794
donde solo se observan distinciones sutiles en la selectividad de
alquilación con las eficacias relativas de alquilación de sitios
secundarios, las distinciones entre duocarmicina
SA/MCBI-TMI frente a
CC-1065/MCBI-CDPI_{2} son más
evidentes en los segmentos adicionales de DNA examinados. En estas
comparaciones, los agentes menores, incluyendo duocarmicina SA,
MCBI-TMI y MCBI-CDPI_{1}, exhiben
una clara selectividad de alquilación rica en AT de 3,5 pares de
bases mientras que los agentes mayores, incluyendo
CC-1065 y MCBI-CDPI_{2}, prefieren
más intensamente los sitios de alquilación ricos en AT de 5 pares de
bases más grandes. Estas observaciones son análogas a las realizadas
en las comparaciones directas de los agentes basados en CBI con
CC-1065 o las duocarmicinas (Boger y otros, J.
Am. Chem. Soc. 1994, 116, 7996) y no se detectaron
rasgos que distingan el comportamiento de los enantiómeros naturales
de los agentes basados en MCBI y CBI. Estas selectividades de
alquilación se han documentado y descrito con detalle en otras
partes (Boger y otros, J. Am. Chem. Soc. 1994,
116, 7996) y cada sitio de alquilación detectado era adenina
seguido por dos bases A o T 5' en el sitio de tres pares de bases
que sigue la siguiente preferencia: 5'-AAA
> 5'-TTA >
5'-TAA > 5'-ATA.
Para los agentes más cortos MCBI-TMI y
MCBI-CDPI_{1}, también había una fuerte
preferencia pero no un requerimiento absoluto de que la cuarta base
5' fuera A o T frente a G o C y esta preferencia distinguía a muchos
de los sitios de alta afinidad frente a baja (por ejemplo,
5'-AAAA). Para el agente más largo
MCBI-CDPI_{2}, no solo existía una preferencia más
fuerte para que la cuarta base fuera A o T sino que esa preferencia
se extendía a incluir una quinta base A o T 5' (por ejemplo,
5'-AAAAA). Así, como los agentes precedentes,
los agentes basados en MCBI exhibían selectividades de alquilación
en N3 de adenina rica en AT que comienzan en el sitio de alquilación
N3 de adenina 3' con agente que se une en la hendidura menor en la
dirección 3'-5' que cubre 3,5 ó 5 pares de
bases.
Análogamente a las velocidades relativas de
alquilación de DNA establecidas para
(+)-duocarmicina SA (1) y
(+)-CBI-TMI en el sitio de afinidad
alta de w794, 5'-AATTA, se midieron las
velocidades relativas de alquilación de DNA para
(+)-duocarmicina SA (1),
(+)-CBI-TMI y
(+)-MCBI-TMI (254) (4ºC,
0-48 horas, concentración de agente 10^{-6} M) y
los tres agentes resultaban casi indistinguibles. Se encontró que
(+)-MCBI-TMI alquilaba el sitio de
alta afinidad 5'-AATTA de forma cinéticamente
más rápida a 4ºC que la duocarmicina SA o CBI-TMI,
aunque las distinciones son bastante pequeñas:
k(254):k(CBI-TMI):k(2) =
1,8:1,0:0,9 (Figura 15). Se observaron velocidades relativas
similares en las comparaciones anteriores de duocarmicina SA y
CBI-TMI y los tres agentes están así tan cercanos
que no pueden alcanzarse fácilmente distinciones exactas entre
CBI-TMI y MCBI-TMI. A 25ºC, las
distinciones son aun más difíciles de observar y los tres agentes
son esencialmente indistinguibles de acuerdo con las actividades
relativas de los agentes establecidas en los estudios de solvolisis
química.
Representativa de esta dificultad para detectar
velocidades relativas distinguibles para las tres clases de agentes,
una comparación de velocidades similar de
(+)-DSA-indol_{2} y
(+)-MCBI-indol_{2} (258) efectuada
a 25ºC (0-24 horas) y a una concentración de agente
de 10^{-6} M revelaba una velocidad esencialmente indistinguible:
k(DSA-indol_{2})/k(MCBI-indol)_{2}
= 1,05 (Figura 15). De forma importante, estas dos comparaciones
sugieren que se observan pocas o ninguna diferencias
experimentalmente distinguibles en las velocidades relativas de
alquilación de DNA con los enantiómeros naturales de dos agentes
basados en DSA, CBI o MCBI. En brusco contraste, los tres alquilan
cinéticamente el DNA mucho más rápidamente que el correspondiente
agente basado en CPI (10-50 veces) donde las
distinciones son mucho más pronunciadas y se distinguen
experimentalmente fácilmente.
Una comparación representativa de la alquilación
de DNA por los enantiómeros no naturales de los agentes basados en
MCBI junto con los enantiómeros no naturales de duocarmicina SA (2)
y CC-1065 (1) con el mismo segmento w794 de DNA se
ilustra en la Figura 13. Varias observaciones importantes análogas a
las realizadas en los estudios previos de los presentes inventores
con los agentes basados en CBI también se observan con los agentes
basados en MCBI. En primer lugar, la alquilación de DNA con
enantiómeros no naturales es considerablemente más lenta y los
resultados mostrados en la Figura 13 para los enantiómeros no
naturales se obtuvieron con incubación a 37ºC (72 horas) frente a
incubación a 25ºC (24 horas, Figura 17) para los enantiómeros
naturales. Incluso con las condiciones de reacción más vigorosas, la
extensión de alquilación por los enantiómeros no naturales es
inferior requiriendo concentraciones de agente superiores para
detectar. Incluso se requerían tiempos de reacción más prolongados a
37ºC para alcanzar la misma eficacia de alquilación que la observada
con los enantiómeros naturales a 25ºC (24 horas). Esta diferencia
distintiva en la velocidad de alquilación de DNA era la más
destacada con los agentes menores MCBI-TMI (254) y
duocarmicina SA (2), fácilmente perceptible pero menos destacada con
los agentes de tamaño intermedio MCBI-CDPI_{1}
(262) y MCBI-indol_{2} (258) y perceptible pero
aun menos destacada con los agentes mayores
MCBI-CDPI_{2} (266) y CC-1065 (1).
Esta tendencia es similar a la observada en la potencia citotóxica
relativa de pares de enantiómeros.
(+)-MCBI-TMI es 50 veces más potente
que el correspondiente enantiómero no natural mientras que los
enantiómeros naturales de los agentes mayores (258, 262, 266) son
solo 1-3 veces más potentes con los enantiómeros 262
y 266 siendo esencialmente indistinguibles. Esto se ilustra
perfectamente en la alquilación de DNA de w794 en la Figura 13 donde
MCBI-TMI y duocarmicina SA exhiben alquilación
detectable a 10^{-5} M, mientras que la de
MCBI-CDPI_{1}, MCBI-indol_{2} y
MCBI-CDPI_{2} son detectables a de 10^{-6} a
10^{-7} M. Bajo las condiciones de 25ºC (24 horas), los
enantiómeros naturales alquilan todos w794 detectablemente a de
10^{-6} a 10^{-7} M (Figura 17).
La selectividad y eficacia de alquilación de DNA
de (-)-MCBI-TMI (254) y
ent-(-)-duocarmicina SA (2) eran casi
indistinguibles, siendo la última ligeramente más eficaz. Esta
observación es análoga a la realizada en las comparaciones previas
de los presentes inventores de
(-)-CBI-TMI y
ent-(-)-duocarmicina SA (2), excepto que la
distinción era mayor (10 veces). De forma similar,
(-)-MCBI-CDPI_{2} (266) y
ent-(-)-CC-1065 eran casi
indistinguibles, como también
(-)-MCBI-indol_{2} y
(-)-MCBI-CDPI_{1}. Esto es quizá
lo más evidente al comparar la extensión relativa de DNA marcado
consumido a 10^{-5} M en la Figura 13. De nuevo, no eran
perceptibles distinciones en la selectividad de alquilación de DNA
de los enantiómeros no naturales de agentes basados en MCBI y los
agentes descritos previamente. Cada uno de los sitios de alquilación
resultaba ser adenina que estaba flanqueada en ambos lados casi
siempre por una base de A o T y la preferencia para este sitio rico
en AT de tres bases era 5'-AAA >
5'-TAA > 5'-AAT
> 5'-TAT. Para los agentes más cortos,
había una fuerte preferencia para que la segunda base 3' fuera A o T
(por ejemplo, 5'-AAAA) que para los agentes
mayores se extendía también a la tercera base 3' (por ejemplo,
5'-AAAAA). Así, cada sitio de alquilación
para los enantiómeros no naturales resultaba estar de acuerdo con la
alquilación en N_{3} de adenina con agente que se une en la
hendidura menor en la dirección 5'-3' inversa a
través de un sitio rico en AT de 3,5 ó 5 pares de bases que rodea el
sitio de alquilación. Esto es análogo a la selectividad de
alquilación de enantiómeros naturales, excepto que se extiende en la
dirección 5'-3' inversa en la hendidura menor y,
debido a la naturaleza diastereoisómera de los aductos, se desvía en
un par de bases con relación a los enantiómeros naturales.
Una comparación representativa de las propiedades
de alquilación de DNA de ambos enantiómeros de
N-BOC-MCBI (238) dentro del mismo segmento de
DNA de w794 se ilustra en la Figura 16. No se detectaron
distinciones substanciales entre N-BOC-CBI
(4) y N-BOC-MCBI (238), excepto que la
eficacia relativa de la alquilación de DNA por el enantiómero no
natural de 238 era esencialmente indistinguible de la de su
enantiómero natural bajo las condiciones de ensayo y
significativamente mejor que el enantiómero no natural de
N-BOC-CBI:
(+)-N-BOC-CBI/ent-(-)-N-BOC-CBI
(5-10 veces)^{34} frente a
(+)-N-BOC-MCBI/ent-(-)-N-BOC-MCBI
(1-2 veces). Los dos enantiómeros de 238 alquilaban
DNA mucho menos eficazmente que 257-266 (10^{4}
veces; Figura 6) proporcionando alquilación detectable a de
10^{-2} a 10^{-3} M (37ºC, 24-48 horas), mucho
menos que 257-266 que exhiben una selectividad de
alquilación rica en AT de dos pares de bases
(5'-AA > 5'-TA) y
hacían lo mismo con la alquilación de los mismos sitios. Este
comportamiento inusual de los dos enantiómeros que alquilan los
mismos sitios es análogo a observaciones anteriores realizadas con
4-9. Esto es una consecuencia natural de las
orientaciones de unión invertidas de los dos enantiómeros y la
relación diastereoisómera de los dos aductos que dan como resultado
que los dos enantiómeros cubran el mismo sitio de unión exacto que
rodea la adenina alquilada. N-BOC-MCBI (238)
se adapta perfectamente a estas observaciones y modelos
anteriores.
Estudios previos han sugerido una explicación
atractiva para el comportamiento confuso de pares enantiómeros de
agentes que se ha propuesto que puede atribuirse a una sola
característica estructural - el grado de volumen estérico que rodea
el centro C7 de CPI/DSA o C8 de CBI/MCBI en la subunidad de
alquilación para la que los enantiómeros no naturales son
especialmente sensibles. Las diferencias de enantiómeros han
resultado distinguibles con derivados simples de las propias
subunidades de alquilación (es decir,
N-BOC-MCBI), son más destacas con los agentes
basados en dímeros (es decir, MCBI-TMI) y son menos
destacadas o no fácilmente distinguibles con los agentes mayores
basados en trímeros o tetrámeros (es decir,
MCBI-CDPI_{2}). En general, se observó menos
distinción en la potencia biológica y la eficacia de alquilación de
DNA relativa con los pares enantiómeros de CI y duocarmicina SA,
ambos de los cuales carecen de substituyentes o volumen estérico en
esta posición.
Por otra parte, las distinciones entre los
agentes enantiómeros basados en CI que carecen totalmente del anillo
de pirrol son pequeñas y menos pronunciadas que las observadas con
los agentes basados en DSA (DSA > CI). En contraste, los agentes
basados en CPI, CBI y DA exhiben distinciones más pronunciadas (CPI
> DA > CBI) siguiendo un orden que refleja las diferencias
estéricas relativas. De acuerdo con estas observaciones, se encontró
que los enantiómeros de MCBI-TMI exhibían
distinciones análogas pero menores que las observadas con
CBI-TMI (Figura 12). Este comportamiento distintivo
de los enantiómeros no naturales se deriva de una interacción
estérica pronunciada del centro C7 de CPI/DSA o C8 de CBI/MCBI con
la base 5' adyacente al sitio de alquilación de N3 de adenina
presente en el modelo de unión 5'-3' enantiómero no
natural.
De forma importante, la única distinción
principal entre los agentes basados en CBI y MCBI se observó con los
enantiómeros no naturales donde se encontró que los derivados de
MCBI eran 4-40 veces más potentes en ensayos
citotóxicos y más eficaces para alquilar DNA que el correspondiente
derivado de CBI. Además, los enantiómeros no naturales de
MCBI-CDPI_{1}, MCBI-indol_{2} y
MCBI-CDPI_{2} eran casi equipotentes con los
enantiómeros naturales correspondientes en los ensayos citotóxicos.
Aunque tal comportamiento se ha observado con
(+)-CC-1065/ent-(-)-CC-1065
y algunos de los análogos más avanzados (por ejemplo,
CPI-CDPI_{2}), los enantiómeros naturales de los
derivados de indol_{2} y CDPI_{1} de diversas subunidades de
alquilación han sido menos potentes que los enantiómeros naturales.
Las comparaciones de las propiedades citotóxicas de los enantiómeros
no naturales de los derivados de CBI detallados en la Figura 10
frente a las de MCBI-indol_{2},
MCBI-CDPI_{1} y MCBI-CDPI_{2}
son representativas de tales observaciones pasadas y presentes. En
contraste con los agentes basados en CBI donde los enantiómeros no
naturales eran 8-400 veces menos potentes que los
enantiómeros naturales con solo los dos enantiómeros de
CBI-CDPI_{2} exhibiendo potencias comparables,
ambos enantiómeros de MCBI-indol_{2},
MCBI-CDPI_{1} y MCBI-CDPI_{2}
eran comparables en potencia citotóxica (1-3 veces)
y las distinciones esencialmente no existían con los derivados de
CDPI_{1} y CDPI_{2} que se unen más estrechamente.
Estas observaciones pueden ser importantes para
distinguir el origen de las potencias biológicas de esta clase de
agentes alquilantes de DNA reversibles. Se han avanzado dos
propuestas en las que se ha sugerido que las potencias biológicas
están relacionadas con la velocidad de alquilación de DNA o con la
estabilidad termodinámica de los aductos y la eficacia relativa
resultante de alquilación de DNA. Claramente, no solo las
velocidades de alquilación de DNA entre los diversos enantiómeros
naturales de los derivados de MCBI varían ampliamente, sino que las
velocidades de alquilación de DNA entre los pares enantiómeros
varían hasta una extensión incluso mayor. Las potencias citotóxicas
casi equivalentes entre el grupo completo de enantiómeros naturales
de MCBI y la potencia citotóxica comparable de la mayoría de los
enantiómeros de MCBI no naturales no están de acuerdo con la
propuesta de que las velocidades de alquilación de DNA pueden
relacionarse con la potencia citotóxica pero está totalmente de
acuerdo con la propuesta de que la estabilidad termodinámica y la
eficacia resultante de alquilación de DNA pueden estar directamente
relacionadas. Los enantiómeros no naturales forman aductos
inherentemente menos estables y se invierten más fácilmente que los
enantiómeros naturales correspondientes. Para los enantiómeros
naturales, una sola subunidad de alquilación de DNA es suficiente
para proporcionar aductos funcionalmente estables (es decir, TMI,
CDPI_{1}) y proporciona agentes totalmente potentes capaces de una
alquilación de DNA eficaz. Para los enantiómeros no naturales, la
potencia biológica completa y la alquilación de DNA eficaz se han
alcanzado generalmente solo con los agentes que contienen dos
subunidades de unión a DNA grandes (es decir, CDPI_{2}).
Se observan potencias intermedias con los agentes
menores que disminuyen a medida que decrece su tamaño y su afinidad
de unión no covalente. Representativo de tal tendencia es el
comportamiento de los enantiómeros no naturales de los agentes
basados en CBI (Figura 10). Los enantiómeros no naturales de MCBI
siguen esta misma tendencia, excepto que se comportan de forma más
similar a los enantiómeros naturales ya que son más potentes y
alcanzan un nivel constante de potencia citotóxica con algunos de
los derivados más simples de subunidad de unión a DNA sencilla. Para
los presentes inventores, esto ha sugerido que el substituyente
metoxi en C7 sobre la subunidad de alquilación de los enantiómeros
no naturales de MCBI proporciona suficiente estabilización de la
unión no covalente adicional para potenciar la eficacia o
estabilidad aparente de la alquilación de DNA con enantiómeros no
naturales. De acuerdo con esta propuesta, se encontró que incluso la
N-BOC-MCBI y los enantiómeros de
MCBI-TMI exhibían menos distinción que los de
CBI-TMI. Aunque este impacto de un solo grupo metoxi
puede parecer especulativo, se han observado efectos potenciadores
similares de un solo grupo metoxi dentro de la subunidad TMI de
(+)-duocarmicina SA. De forma similar, el grupo
metoxicarbonilo en C6 de la duocarmicina SA puede contribuir a la
potenciación de los enantiómeros no naturales de DSA.
Esta interpretación y la relación de la potencia
citotóxica con la eficacia de la alquilación de DNA y la estabilidad
de los aductos es especialmente atractiva ya que está de acuerdo con
la relación directa entre la potencia citotóxica y la estabilidad
funcional observadas con derivados de 4-9. De
acuerdo con la interpretación de que no es la velocidad de
alquilación de DNA y la reactividad funcional lo que mejora la
potencia citotóxica sino en cambio la eficacia neta y la estabilidad
relativa del proceso de alquilación de DNA, son los agentes
químicamente más estables que pueden alcanzar lo más eficazmente su
diana biológica intracelular los que exhiben la actividad citotóxica
más potente con tal de que sean suficientemente reactivos para
alquilar DNA con la formación de aductos funcionalmente
estables.
Se detalla una síntesis en 12-13
etapas corta y eficaz (27-30% global) de MCBI y sus
precursores inmediatos y constituye el primer derivado de CBI
substituido descrito. Su evaluación permitía la primera
determinación del efecto electrónico de los substituyentes sobre la
reactividad química y funcional de los agentes y el impacto que esto
puede tener sobre sus propiedades biológicas. Un estudio de la
reactividad de solvolisis de N-BOC-MCBI
indicaba que la introducción del grupo metoxi en C7 donante de
electrones fuerte acelera la velocidad de solvolisis en solo
1,2-1,06 veces. Este efecto notablemente pequeño
indica que la protonación del carbonilo en C4 no es la etapa
determinante de la velocidad de solvolisis o adición nucleófila
catalizada por ácidos y apoya adicionalmente la propuesta de que la
reacción de apertura del anillo de ciclopropano requiere la
presencia y la ayuda de un nucleófilo (mecanismo S_{N}2). Sin
duda, esto contribuye a la selectividad de alquilación de DNA y
sugiere que la colocación de un nucleófilo accesible (N3 de adenina)
y no la protonación del carbonilo en C4 o la complejación con ácidos
de Lewis es la etapa determinante de la velocidad que controla la
selectividad para la secuencia de la alquilación de DNA. Este efecto
electrónico excepcionalmente pequeño sobre la velocidad de
solvolisis no tenía impacto sobre la regioselectividad de solvolisis
y se observaba exclusivamente la adición nucleófila controlada
estereoelectrónicamente al carbono menos substituido del
ciclopropano activado. Para los enantiómeros naturales, este efecto
electrónico muy pequeño sobre la reactividad funcional tiene poco o
ningún efecto perceptible sobre su selectividad, eficacia y
velocidades relativas de alquilación de DNA o sobre sus propiedades
biológicas cuando se compara con el agente basado en CBI
correspondiente. Se detectaron efectos perceptibles del grupo metoxi
en C7 sobre los enantiómeros no naturales y resultaban ser
4-40 veces más eficaces que los enantiómeros no
naturales basados en CBI correspondientes y comparables en potencia
citotóxica con el enantiómero natural de MCBI correspondiente. Este
efecto sobre los enantiómeros no naturales se racionaliza lo más
consecuentemente no por un efecto del substituyente metoxi en C7
sobre la reactividad funcional sino en cambio a través de la
introducción de interacciones no covalentes estabilizantes
adicionales que incrementan la eficacia de alquilación de DNA y
estabilizan adicionalmente una reacción de alquilación de DNA
inherentemente reversible.
Método
A
Una solución de t-butóxido
potásico (21,0 g, 0,29 moles, 2 equivalentes) en
t-butanol (81 ml) se añadió a una solución de
m-anisaldehído 200 (10,8 ml, 11,8 g, 0,087 moles) de la
compañía Aldrich y succinato de dietilo (40,2 ml, 0,242 moles, 3
equivalentes) y la mezcla se calentó a reflujo durante 45 minutos.
Se añadieron succinato de dietilo (40,2 ml, 0,242 moles, 3
equivalentes) y t-butóxido potásico (21,0 g, 0,19
moles, 2 equivalentes) adicionales en t-butanol (81
ml) y la mezcla se calentó a reflujo durante 45 minutos adicionales.
La mezcla se enfrió, se acidificó con la adición de HCl acuoso al
25% y se extrajo con éter dietílico (3 x 15 ml). La capa orgánica se
extrajo con Na_{2}CO_{3} acuoso al 5% (6 x 40 ml). La fase
acuosa resultante se acidificó con la adición de HCl acuoso al 25% y
se reextrajo con éter dietílico (3 x 30 ml). La capa orgánica
combinada se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró bajo presión
reducida proporcionando un producto oleoso que resultaba ser una
mezcla 2:1 de los semiésteres isómeros 202 (15,0 g, 23,2 g teóricos,
74%).
La mezcla de 202 (15,0 g, 64 milimoles) se trató
con Ac_{2}O (320 ml) y NaOAc (5,25 g, 64 milimoles, 1,0
equivalentes) y se calentó a reflujo durante 5 horas. El disolvente
se retiró bajo presión reducida y el residuo se trató con
Na_{2}CO_{3} acuoso al 15% (100 ml) y se extrajo con acetato de
etilo (3 x 30 ml). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se
concentró a vacío. Sin purificación adicional, el aceite marrón
oscuro se disolvió en etanol (100 ml) y se trató con K_{2}CO_{3}
(10 g, 72,4 milimoles). La mezcla se calentó a reflujo durante 18
horas antes de enfriarse, concentrarse, diluirse con H_{2}O (40
ml), acidificarse hasta pH 6 con la adición de HCl acuoso al 10% y
extraerse con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa orgánica se secó
(Na_{2}SO_{4}) y se concentró bajo presión reducida. La
cromatografía de desarrollo rápido (5 x 20 cm, SiO_{2}, elución en
gradiente de acetato de etilo al 10-30%-hexano)
proporcionaba 210 (8,90 g, 21,4 g teóricos, 42% para 3 etapas) como
un sólido blanco: pf 168ºC (hexano, placas incoloras); ^{1}H NMR
(CDCl_{3}, 400 MHz) \delta (d, J=8,8 Hz, 1H,
C8-H), 8,10 (s, 1H, C4-H), 7,38 (s,
1H, C2-H), 7,23 (dd, J=3,2, 8,8 Hz, 1H,
C7-H), 7,20 (d, J=3,2 Hz, 1H, C5-H),
4,40 (q, J=8,0 Hz, 2H), 3,90 (s, 3H, OCH_{3}), 1,40 (t, J=8,0 Hz,
3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 100 MHz) \delta 166,1, 157,5,
152,9, 134,4, 127,9, 123,3, 121,7, 119,8, 118,6, 106,0, 104,8, 60,0,
54,5, 13,7; IR (KBr)\mu_{max} 385, 1683, 1608, 1397,
1283, 1225, 1028, 878, 833, 768 cm^{-1}; FABHRMS (NBA) m/e
246,0885 (M^{+}, C_{14}H_{14}O_{4} requiere 246,0892).
Análisis Calculado para C_{14}H_{14}O_{4}: C, 68,28; H, 5,73.
Encontrado: C, 68,22; H, 5,77.
También se aislaron cantidades variables de 206.
Para 206: pf 88-89ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400
MHz) \delta 9,32 (s, 1H, OH), 8,03 (d, J=1,5 Hz, 1H,
C4-H), 7,50 (d, J=8,2 Hz, 1H, C5-H),
7,43 (d, J=1,5 Hz, 1H, C2-H), 7,37 (t, J=8,2 Hz, 1H,
C6-H), 6,86 (d, J=7,6 Hz, 1H, C7-H),
4,39 (q, J=7,8 Hz, 2H), 4,09 (s, 3H, OCH_{3}), 1,39 (t, J=7,8 Hz,
3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 100 MHz) \mu 166,5, 155,9, 154,6,
135,8, 129,5, 126,4, 123,1, 121,5, 117,1, 109,6, 106,0, 61,1, 56,2,
14,3; IR (película) \mu_{max} 3404, 3056, 2980, 1718, 1711,
1611, 1583, 1468, 1450, 1380, 1290, 1220, 1126, 1087 cm^{-1};
FABHRMS (NBA-NaI) m/e 269,0786 (M^{+} + Na,
C_{14}H_{14}O_{4} requiere 269,0790). Análisis Calculado para
C_{14}H_{14}O_{4}: C, 68,28; H, 5,73. Encontrado: C, 68,23; H,
5,64.
Método B, A partir de
214
Una mezcla 9:1 de
CF_{3}CO_{2}H-H_{2}O (50 ml) a 0ºC se añadió a
214 (3,10 g, 9,68 milimoles) y la mezcla de reacción se calentó
hasta 25ºC y se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción se
concentró a vacío y dos volúmenes separados de 50 ml de tolueno se
añadieron secuencialmente y se retiraron bajo presión reducida para
proporcionar 202 (2,50 g, 2,56 g teóricos, 98%) como un aceite
incoloro.
Una mezcla de 202 (2,50 g, 9,46 milimoles) y
NaOAc (0,750 g, 9,50 milimoles) en 50 ml de Ac_{2}O se calentó a
70ºC durante 10 horas. Las materias volátiles se retiraron a vacío y
una solución del producto en bruto y K_{2}CO_{3} (1,38 g, 10,0
milimoles) en 35 ml de etanol se calentó a reflujo durante 4 horas.
La mezcla de reacción se enfrió hasta 0ºC, se acidificó con la
adición de HCl 1M (pH 6) y se extrajo con éter dietílico (4 x 30
ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con NaCl acuoso
saturado (1 x 10 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se
concentraron bajo presión reducida. La cromatografía en capa fina
centrífuga (SiO_{2}, placa Chromatotron de 4 mm, elución en
gradiente de acetato de etilo al 5-20%-hexano)
proporcionaba 210 (1,79 g, 2,33 g teóricos, 76%) y 206 (0,22 g, 9%)
como sólidos cristalinos blancos.
La siguiente tabla resume los resultados de
intentos relacionados para convertir 202 derivado de 214 en 210:
| condiciones | tiempo de reacción (h) | relación 210:206 | % de 210 aislado |
| Ac_{2}O-NaOAc, 160ºC^{a} | 1 | 5:1 | 61 |
| Ac_{2}O-NaOAc, 70ºC^{a} | 10 | 8:1 | 76 |
| TFAA-NaOAc, 40ºC^{a} | 30 | 9:1 | 57 |
| (COCl)_{2}; AlCl_{3} 0ºC | 1 | 11:1 | 38 |
| (COCl)_{2}; FeCl_{3} 0ºC | 2 | 10:1 | 46 |
| (COCl)_{2}; SnCl_{4} 0ºC | 2 | 11:1 | 54 |
| ^{a} Tratamiento subsiguiente con K_{2}CO_{3}-etanol |
Compuesto 214 según se ilustra en
la Figura
3
Una suspensión de NaH (0,64 g, 16 milimoles, 60%
en aceite) en 25 ml de tetrahidrofurano se añadió a una solución de
212 (5,00 g, 14,8 milimoles), véase Owten y otros, Synth,
Commun. 1993, 23, 2119, en 40 ml de
tetrahidrofurano a 0ºC y la mezcla de reacción se calentó hasta 25ºC
y se agitó durante 10 horas. La solución se enfrió hasta 0ºC, se
añadió 200 (2,00 g, 14,8 milimoles) de la compañía química Aldrich
en 25 ml de tetrahidrofurano y la mezcla se calentó hasta 25ºC y se
agitó durante 10 horas. Una mayoría del tetrahidrofurano se retiró
bajo presión reducida y se añadió NaHCO_{3} acuoso saturado (20
ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (4 x 30 ml) y
las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con NaCl acuoso
saturado, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío.
La cromatografía (SiO_{2}, 6 x 15 cm, elución en gradiente de
acetato de etilo al 5-10%-hexano) proporcionaba 214
(3,65 g, 4,74 g teóricos, 77%) como un aceite incoloro como un
isómero simple mediante ^{1}H NMR (> 20:1); ^{1}H NMR
(CDCl_{3}, 400 MHz) \mu 7,80 (s, 1H, C2'-H),
7,28 (t, J=7,8 Hz, 1H, C5'-H),
6,92-6,86 (m, 3H, C4-H,
C4'-H, C6'-H), 4,26 (q, J=7,1 Hz,
2H), 3,79 (s, 3H, OCH_{3}), 3,44 (s, 2H,
C2-H_{2}), 1,44 (s, 9H,
C(CH_{3})_{3}), 1,31 (t, J=7,1 Hz, 3H); ^{13}C
NMR (CDCl_{3}, 100 MHz) \mu 170,3, 167,5, 159,6, 141,1, 136,5,
129,5, 127,0, 121,4, 114,7, 114,0, 81,0, 61,0, 55,2, 35,0, 28,0,
14,2; IR (película) 2978, 2933, 1726, 1708, 1578, 1368, 1278, 1194,
1155, 1096 cm^{-1}; FABHRMS (NBA) m/e 321,1716 (M^{+} +
H, C_{18}H_{24}O_{5} requiere 321,1702).
Compuesto
216
Una solución de 210 (900 mg, 3,65 milimoles) en
dimetilformamida anhidra (12,5 ml) bajo N_{2} se trató con
K_{2}CO_{3} anhidro (700 mg, 5,1 milimoles, 1,4 equivalentes),
bromuro de bencilo (0,51 ml, 4,3 milimoles, 1,2 equivalentes) y
Bu_{4}NI (0,7 mg). La mezcla se agitó a 25ºC durante 5 horas antes
de que se concentrara bajo presión reducida. La cromatografía
(SiO_{2}, elución en gradiente de acetato de etilo al
2-5%-hexano) proporcionaba 216 (1,20 g, 1,23 g
teóricos, 98%) como un semisólido incoloro: ^{1}H NMR (CDCl_{3},
400 MHz) \mu 8,20 (d, J=9,6 Hz, 1H, C8-H), 8,10
(s, 1H, C4-H), 7,53 (d, J=8,0 Hz, 2H), 7,40 (t,
J=8,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J=2,4 Hz, 1H, C5-H), 7,34
(m, 2H), 7,19 (dd, J=2,4, 9,6 Hz, 1H, C7-H), 7,18
(s, 1H, C2-H), 5,20 (s, 2H, CH_{2}C_{6}H_{5}),
4,40 (q, J=8,0 Hz, 2H), 3,90 (s, 3H, OCH_{3}), 1,40 (t, J=8,0 Hz,
3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 100 MHz) \mu 166,9, 158,6, 154,7,
136,8, 134,9, 128,6, 128,56, 128,3, 128,2, 127,6, 123,9, 122,6,
106,9, 102,4, 119,9, 106,9, 102,4, 71,1, 61,1, 55,2, 14,3; IR
(película) \mu_{max} 2978, 1715, 1603, 1455, 1406, 1366, 1345,
1286, 1237, 1149, 1097, 1029 cm^{-1}; FABHRMS
(NBA-CsI) m/e 469,0422 (M^{+} + Cs,
C_{21}H_{20}O_{4} requiere 469,0416). Análisis Calculado para
C_{21}H_{20}O_{4}: C, 74,98; H, 5,99. Encontrado: C, 75,21; H,
5,91.
Compuesto
218
Una solución de 216 (2,49 g, 7,40 milimoles) en
tetrahidrofurano-CH_{3}OH-H_{2}O
(4:1:1, 50 ml) se trató con LiOH-H_{2}O (930 mg,
22,2 milimoles, 3 equivalentes). La suspensión se agitó a 23ºC
durante 18 horas antes de que se añadiera H_{2}O (20 ml). La
solución se acidificó con la adición de HCl acuoso al 10% y el
precipitado blanco se recogió. La cristalización en etanol
proporcionaba 218 (2,17 g, 2,28 g teóricos, 95%, típicamente
95-98%) como agujas incoloras: pf 185ºC (etanol,
agujas blancas); ^{1}H NMR
(dimetilsulfóxido-d_{6}, 400 MHz) \mu 8,15 (d,
J=9,6 Hz, 1H, C8-H), 8,10 (s, 1H,
C4-H), 7,57 (d, J=9,6 Hz, 2H), 7,50 (d, J=2,0 Hz,
1H, C5-H), 7,43 (t, J=9,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J=9,6
Hz, 2H), 7,34 (s, 1H, C2-H), 7,27 (dd, J=2,0, 9,6
Hz, 1H, C7-H), 5,30 (s, 2H, CH_{2}C_{6}H_{5}),
3,90 (s, 3H, OCH_{3}); ^{13}C NMR
(dimetilsulfóxido-d_{6}, 100 MHz) \mu 167,6,
158,2, 154,1, 136,9, 134,8, 129,0, 128,5, 127,9, 127,5, 123,3,
122,2, 122,1, 120,0, 107,6, 102,6, 69,5, 55,4; IR (KBr)
\delta_{max} 2932, 2647, 2543, 1685, 1629, 1420, 1296, 1201,
1030, 891, 768, 638 cm^{-1}; FABHRMS (NBA) m/e 308,1040
(M^{+}, C_{19}H_{16}O_{4} requiere 308,1049). Análisis
Calculado para C_{19}H_{16}O_{4}: C, 74,01; H, 5,23.
Encontrado: C, 73,86; H, 5,33.
Compuesto
220
Una solución de 218 (1,20 g, 3,91 milimoles) en
t-butanol (75 ml) se trató secuencialmente con
bifenilfosforilazida (DPPA, 1,29 g, 4,69 milimoles, 1,2
equivalentes, véase Shioiri y otros, J. Am. Chem Soc.
1972, 94, 6203) y trietilamina (0,67 ml, 4,69
milimoles, 1,2 equivalentes) y la mezcla se agitó a reflujo durante
10 horas. La mezcla se enfrió y se concentró a vacío. La
cromatografía en capa fina centrífuga (SiO_{2}, placa Chromatotron
de 4 mm, elución en gradiente de acetato de etilo al
5-10%-hexano) proporcionaba 220 (1,01 g, 1,48 g
teóricos, 68%, típicamente 60-69%) como un sólido
blanco: pf 138ºC (hexano, agujas blancas); ^{1}H NMR (CDCl_{3},
400 MHz) \mu 8,10 (d, J=9,6 Hz, 1H, C8-H), 7,50
(d, J=8,8 Hz, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,35 (m, 2H), 6,98 (d, J=1,9 Hz,
1H, C4-H), 6,95 (dd, J=2,5, 9,6 Hz, 1H,
C7-H), 6,86 (d, J=1,9 Hz, 1H, C2-H),
6,65 (s, 1H, NH), 5,20 (s, 2H, CH_{2}C_{6}H_{5}), 3,80 (s, 3H,
OCH_{3}), 1,50 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}); ^{13}C
NMR (CDCl_{3}, 100 MHz) \mu 158,7, 155,3, 152,7, 136,9, 136,3,
129,8, 128,6, 127,9, 127,4, 123,7, 117,6, 116,0, 106,7, 105,3, 97,2,
80,6, 70,1, 55,2, 28,4; IR (KBr) \mu_{max} 3323, 2978, 1698,
1591, 1549, 1422, 1346, 1228, 1148, 1024, 945, 869, 820, 756, 701
cm^{-1}; FABHRMS (NBA-CsI) m/e 512,0846
(M^{+} + Cs, C_{23}H_{25}NO_{4} requiere 512,0838). Análisis
Calculado para C_{23}H_{25}NO_{4}: C, 72,80; H, 6,64; N, 3,69.
Encontrado: C, 72,42; H, 6,77; N, 3,92.
Compuesto
222
Una solución de 220 (620 mg, 1,63 milimoles) en
tetrahidrofurano (35 ml) bajo N_{2} se enfrió hasta -78ºC y se
trató con una solución de tetrahidrofurano (2 ml) que contenía 10
\mul de H_{2}SO_{4} concentrado. Después de 5 minutos, se
añadió una solución de NBS (320 mg, 1,80 milimoles, 1,1
equivalentes) en tetrahidrofurano (10 ml) y la mezcla se agitó a
-78ºC durante 2 horas. La mezcla se diluyó con éter dietílico (50
ml) y se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 x 10 ml) y NaCl
acuoso saturado (20 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a
vacío. La cromatografía en capa fina centrífuga (SiO_{2}, placa
Chromatotron de 4 mm, acetato de etilo al
5-10%-hexano) proporcionaba 222 (720 mg, 747 mg
teóricos, 96%, típicamente 90-98%) como un sólido
blanco: pf: 125-127ºC (hexano, sólido blanco);
^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400 MHz) \mu 8,10 (d, J=9,2 Hz, 1H,
C5-H), 7,98 (s, 1H, C3-H), 7,55 (d,
J=7,2 Hz, 2H), 7,40 (m, 5H), 7,02 (dd, J=2,4, 9,2 Hz, 1H,
C6-H), 5,20 (s, 2H, CH_{2}C_{6}H_{5}), 3,90
(s, 3H, OCH_{3}), 1,50 (s, 9H, C(CH_{3})_{3});
la NMR ^{1}H-^{1}H NOESY 2D (CDCl_{3}, 400
MHz) presentaba un pico cruzado NOE diagnóstico para
C3-H/CH_{2}C_{6}H_{5}; ^{13}C NMR
(CDCl_{3}, 100 MHz) \mu 159,8, 154,7, 152,5, 136,6, 135,6,
133,9, 128,6, 128,1, 128,0, 127,8, 124,5, 118,3, 116,3, 105,1, 97,6,
81,2, 70,3, 55,3, 28,6; IR (KBr) \mu_{max} 3409, 2977, 1733,
1623, 1506, 1367, 1222, 1153, 1030, 989, 882, 829, 753 cm^{-1};
FABHRMS (NBA) m/e 457,0880 (M^{+},
C_{23}H_{24}BrNO_{4} requiere 457,0889).
Compuesto
224
Una suspensión de NaH (44 mg, 0,92 milimoles, 50%
en aceite, 1,3 equivalentes) en dimetilformamida (4 ml) a 24ºC bajo
Ar se trató con 222 (315 mg, 0,71 milimoles) y la mezcla de reacción
se agitó durante 30 minutos. La mezcla se enfrió a 0ºC y se añadió
lentamente
4-bromo-2-metil-2-buteno
(0,25 ml, 2,1 milimoles, 3 equivalentes). La mezcla se dejó calentar
hasta 24ºC y se agitó durante 8 horas antes de verterse en H_{2}O
(15 ml). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml) y los
extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (10 ml), NaCl
acuoso saturado (5 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se
concentraron a vacío. La cromatografía (SiO_{2}, elución en
gradiente de acetato de etilo al 5-7%-hexano)
proporcionaba 224 (357 mg, 374 mg teóricos, 95%) como un sólido
blanquecino: pf 108-109ºC (hexano, sólido blanco);
^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400 MHz) mezcla de rotámeros de amida, para
el rotámero principal \mu 8,10 (d, J=9,2 Hz, 1H,
C5-H), 7,56 (d, J=2,4 Hz, 1H, C8-H),
7,47 (d, J=7,2 Hz, 2H), 7,38 (m, 3H), 7,13 (dd, J=2,4, 9,2 Hz, 1H,
C6-H), 6,55 (s, 1H, C3-H), 5,30 (t,
J=6,8 Hz, 1H, CH=C), 5,20 (d, J=11,7 Hz, 1H,
CHHC_{6}H_{5}), 5,14 (d, J=11,7 Hz, 1H,
CHHC_{6}H_{5}), 4,42 (dd, J=6,1, 15,0 Hz, 1H,
NCHH), 4,05-3,90 (m, 1H, NCHH), 3,96
(s, 3H, OCH_{3}), 1,53 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}),
1,30 (s, 6H, dos CH_{3}); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 100 MHz) \mu
159,4, 154,2, 153,9, 139,6, 136,5, 135,7, 134,3, 128,6, 128,1,
127,5, 127,2, 124,2, 119,8, 118,2, 113,6, 106,3, 106,2, 80,0, 70,3,
55,4, 46,4, 28,2, 25,7, 17,6; IR (KBr) \mu_{max} 2929, 1680,
1623, 1452, 1414, 1381, 1223, 1151, 1035, 972, 916, 841, 700
cm^{-1}; FABHRMS (NBA) m/e 526,1569 (M^{+} + H,
C_{28}H_{32}BrNO_{4} requiere 526,1593), Análisis Calculado
para C_{28}H_{32}BrNO_{4}: C, 63,88; H, 6,13; N, 2,66.
Encontrado: C, 63,66; H, 6,15; N, 2,68.
Compuesto
226
Una solución de 224 (755 mg, 1,43 milimoles) en
CH_{3}OH al 20%-CH_{2}Cl_{2} (45 ml) se enfrió hasta -78ºC y
se trató con una corriente de O_{3} al 3%/O_{2} (100 l/h)
durante 2,9 minutos. La mezcla de reacción se extinguió
inmediatamente con la adición de 4,5 ml (61 milimoles, 43
equivalentes) de Me_{2}S. La mezcla de reacción se agitó a -78ºC
durante 5 minutos y a 24ºC durante 6 horas antes de que el
disolvente se retirara a vacío. La cromatografía en capa fina
centrífuga (SiO_{2}, placa Chromatotron de 2 mm, elución en
gradiente de acetato de etilo al 10-20%-hexano)
proporcionaba 226 (580 mg, 718 mg teóricos, 81%) como un sólido
blanco: pf 170ºC (desc, acetato de etilo-hexano,
sólido blanco); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400 MHz) dos rotámeros de
amida, 9,70 y 9,75 (dos s, 1H, CHO), 8,20 y 8,10 (dos d, J=9,2 Hz,
1H, C5-H), 7,50 (d, J=2,4 Hz, 1H,
C8-H), 7,45 (d, J=7,6 Hz, 2H), 7,30 (m, 3H), 7,10
(dd, J=2,4, 9,2 Hz, 1H, C6-H), 6,80 y 6,75 (dos s,
1H, C3-H), 5,21-5,06 (m, 2H,
OCH_{2}C_{6}H_{5}), 4,58 y 4,46 (dos d, J=18,8 Hz, 1H,
CHHCHO), 3,90 (m, 1H, CHHCHO), 3,91 y 3,89 (dos s, 3H,
OCH_{3}), 1,50 y 1,30 (dos s, 9H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 100
MHz) \mu rotámero principal 198,1, 159,7, 154,4, 139,5, 136,3,
134,3, 128,7, 128,2, 127,8, 127,4, 124,4, 118,6, 112,7, 106,3,
105,5, 105,2, 81,3, 70,4, 59,2, 55,4, 28,2; IR (KBr) \mu_{max}
2977, 2911, 2850, 2835, 1735, 1695, 1624, 1599, 1458, 1417, 1365,
1225, 1155, 1107, 1026, 839, 741 cm^{-1}; FABHRMS (NBA) m/e
499,0969 (M^{+}, C_{25}H_{26}BrNO_{5} requiere 499,0994).
Análisis Calculado para C_{25}H_{26}BrNO_{5}: C, 60,01; H,
5,24; N, 2,80. Encontrado: C, 59,81; H, 5,19; N, 3,07.
Compuesto
228
Una suspensión de cloruro
trifenil[(2-tetrahidropiraniloxi)metil]-fosfonio
(371 mg, 0,90 milimoles, 3,0 equivalentes, véase Schlude, H.
Tetrahedron 1975, 31, 89) en 2 ml de
tetrahidrofurano a -78ºC se trató gota a gota con
n-BuLi (0,727 ml, 1,18 M en hexano, 0,86 milimoles,
2,86 equivalentes). La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 5
minutos y se dejó calentar hasta 24ºC durante 10 minutos. La mezcla
se enfrió de nuevo hasta -78ºC y se añadió gota a gota 23 (154 mg,
0,30 milimoles) en tetrahidrofurano (1 ml) seguido por HMPA (1,2 ml,
24 equivalentes). La mezcla de reacción se agitó 20 minutos a -78ºC
y 5 horas a 24ºC antes de extinguirse con la adición de tampón de
fosfato (51 ml, pH 7,4). La mezcla se extrajo con acetato de etilo
(3 x 20 ml) y la fase orgánica combinada se secó (Na_{2}SO_{4})
y se concentró a vacío. La cromatografía (SiO_{2}, elución en
gradiente de acetato de etilo al 5-30%-hexano, que
contiene 2% de trietilamina) proporcionaba 228 (154 mg, 175 mg
teóricos, 88%) como un aceite y como una mezcla de isómeros de
olefina E y Z: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400 MHz)
isómeros E y Z y rotámeros de amida \mu 8,10 (m, 1H,
C5-H), 7,5-7,3 (m, 7H), 7,00 (m, 1H,
C6-H), 6,7-6,5 (m, 1H, CH=CH),
6,3-6,0 (m, 1H, CH=CH), 5,2-5,0 (m,
2H, CH_{2}C_{6}H_{5}), 4,8-4,2 (m, 3H),
3,98-2,70 (m, 5H, OCH_{3} y
OCH_{2}CH_{2}), 1,6-1,3 (m, 15H); IR
(película) \mu_{max} 2947, 2871, 1704, 1622, 1597, 1453, 1415,
1367, 1227, 1161, 1035, 960, 901, 841, 742, 697, 651 cm^{-1};
FABHRMS (NBA-CsI) m/e 730,0800 (M^{+} + Cs,
C_{31}H_{36}BrNO_{6} requiere 730,0780). Análisis Calculado
para C_{31}H_{36}BrNO_{6}: C, 62,21; H, 6,06; N, 2,34.
Encontrado: C, 62,42; H, 6,27; N, 2,45.
Compuesto
230
Una solución de 228 (950 mg, 1,59 milimoles) y
AIBN (4,4 mg, 0,32 milimoles, 0,2 equivalentes) en C_{6}H_{6}
(60 ml) a 24ºC bajo Ar se trató con Bu_{3}SnH (925 mg, 3,18
milimoles, 2 equivalentes) y la mezcla de reacción se calentó a
reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió y el
disolvente se retiró a vacío. La cromatografía en capa fina
centrífuga (SiO_{2}, placa Chromatotron de 4 mm, elución en
gradiente de acetato de etilo al 5-10%-hexano, que
contenía 2% de trietilamina) proporcionaba 230 (785 mg, 826 mg
teóricos, 95%, típicamente 95-98%) como un aceite
amarillo claro: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400 MHz) \mu 8,10 (d,
J=9,2 Hz, 1H, C6-H), 7,65 (s ancho, 1H,
C4-H), 7,45-7,25 (m, 5H), 6,95 (d,
J=2,4 Hz, 1H, C9-H), 6,88 (dd, J=2,4, 9,2 Hz, 1H,
C7-H), 5,20 (s ancho, 2H,
CH_{2}C_{6}H_{5}), 4,60 y 4,50 (dos s anchos y m, 1H,
OCHCH_{2}), 4,20-3,20 (m, 10H),
1,90-1,50 (m, 15H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 100
MHz) \mu 158,7, 155,6, 153,0, 137,0, 132,0, 128,51, 128,45, 127,9,
127,5, 125,0, 117,4, 115,0, 101,4, 100,1, 98,3, 94,6, 70,1, 68,9,
62,7, 60,4, 55,3, 52,9, 30,6, 28,5, 25,9, 19,7, 14,2; IR (Película)
\mu_{max} 2942, 1700, 1623, 1451, 1405, 1368, 1228, 1141, 1029,
986, 907, 834, 737 cm^{-1}; FABHRMS (NBA) m/e 519,2597
(M^{+} + Cs, C_{31}H_{37}NO_{6} requiere 519,2621).
Compuesto
232
Una solución de 230 (207 mg, 0,40 milimoles) en
CH_{3}OH (6,5 ml) se trató con Amberlyst 15 (12,5 mg) y la mezcla
de reacción se calentó a 45ºC durante 6 horas. La resina se retiró
mediante filtración y el disolvente se concentró a vacío. La
cromatografía (SiO_{2}, elución de gradiente de acetato de etilo
al 20-40%-hexano) proporcionaba 232 (171 mg, 172,5
mg teóricos, 99%) como un sólido incoloro: pf
158-160ºC (hexano, sólido incoloro); ^{1}H NMR
(CDCl_{3}, 400 MHz) \mu 8,10 (d, J=9,6 Hz, 1H,
C6-H), 7,80 (s ancho, 1H, C4-H),
7,51 (d, J=7,2 Hz, 2H), 7,40 (t, J=7,1 Hz, 2H),
7,36-7,32 (m, 1H), 6,96 (s ancho, 1H,
C9-H), 6,95 (dd, J=11,0, 8,4 Hz, 1H,
C7-H), 5,20 (s ancho, 2H,
CH_{2}C_{6}H_{5}), 4,17 (d, J=11,0 Hz, 1H,
C2-H),4,10 (dd, J=11,0, 8,4 Hz, 1H,
C2-H), 3,93-3,90 (m, 1H,
C1-H), 3,89 (s, 3H, OCH_{3}), 3,70 (m, 2H,
CH_{2}OH), 1,50 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}); ^{13}C
NMR (CDCl_{3}, 100 MHz) \mu 158,9, 155,0, 151,0, 128,5, 127,9,
127,6, 125,2, 114,9, 101,2, 94,6, 70,2, 64,6, 55,3, 52,4, 41,2,
28,5; IR (KBr) \mu_{max} 3405, 1691, 1625, 1588, 1478, 1449,
1407, 1366, 1227, 1140, 1028 cm^{-1}; FABHRMS
(NBA-CsI) m/e 568,1101 (M^{+} + Cs,
C_{26}H_{29}NO_{5} requiere 568,1100).
Compuesto
234
Una solución de 232 (112 mg, 0,25 milimoles) y
Ph_{3}P (135 mg, 0,50 milimoles, 2 equivalentes) en
CH_{2}Cl_{2} (0,9 ml) a 24ºC bajo Ar se trató con CCl_{4}
(0,15 ml, 1,5 milimoles, 6 equivalentes) y la mezcla de reacción se
agitó durante 20 horas a 24ºC. La cromatografía (SiO_{2}, acetato
de etilo al 10%-hexano) proporcionaba 234 (113 mg, 113 mg teóricos,
100%) como un sólido blanco: pf 148-150ºC (hexano,
sólido blanco); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400 MHz) \mu 8,10 (d,
J=9,2 Hz, 1H, C6-H), 7,70 (s ancho, 1H,
C4-H), 7,50 (d, J=6,4 Hz, 2H),
7,40-7,35 (m, 3H), 6,97 (dd, J=2,4, 9,2 Hz, 1H,
C7-H), 6,86 (d, J=2,4 Hz, 1H, C9-H),
5,20 (s, 2H, CH_{2}C_{6}H_{5}), 4,22 (m, 1H,
C2-H), 4,10 (t, J=9,8 Hz, 1H, C2-H),
3,92-3,86 (m, 2H, CHHCl,
C1-H), 3,91 (s, 3H, OCH_{3}), 3,40 (t, J=11,4 Hz,
1H, CHHCl), 1,58 (s, 9H, C(CH_{3})_{3});
^{13}C NMR (CDCl_{3}, 100 MHz) \mu 159,2, 156,3, 153,0, 137,0,
131,0, 128,5, 128,0, 127,6, 125,4, 118,0, 114,9, 100,8 94,5, 70,2,
55,4, 53,0, 46,2, 28,5; IR (KBr) \mu_{max} 2971, 1699, 1626,
1456, 1405, 1367, 1334, 1144, 1029, 958, 907 cm^{-1}; FABHRMS
(NBA) m/e 453,1710 (M^{+}, C_{26}H_{28}ClNO_{4}
requiere 453,1706). Análisis Calculado para
C_{26}H_{28}ClNO_{4}: C, 68,79; H, 6,22; N, 3,09. Encontrado:
C, 68,70; H, 6,51; N, 2,78.
Compuesto
236
Una mezcla de 234 (80 mg, 0,17 milimoles),
HCO_{2}NH_{4} (70 mg, 1,11 milimoles, 6 equivalentes), Pd al
10%-C (80 mg) en acetona (6 ml) se calentó a reflujo durante 30
minutos. El catalizador se retiró mediante filtración y el
disolvente se evaporó bajo presión reducida. La cromatografía en
capa fina centrífuga (SiO_{2}, acetato de etilo al 40%-hexano)
proporcionaba 236 (61 mg, 64 mg teóricos, 95%, típicamente
95-100%) como un sólido blanco; ^{1}H NMR
(CDCl_{3}, 400 MHz) \mu 8,10 (d, J=9,2 Hz, 1H,
C6-H), 7,50 (s ancho, 1H, C4-H),
6,95 (dd, J=2,4, 9,2 Hz, 1H, C7-H), 6,84 (d, J=2,4
Hz, 1H, C9-H), 6,05 (s ancho, 1H, OH), 4,22 (m, 1H,
C2-H), 4,10 (t, J=11,6 Hz, 1H,
C2-H), 3,98-3,80 (m, 2H,
CHHCl, C1-H), 3,91 (s, 3H, OCH_{3}), 3,40
(t, J=11,4 Hz, 1H, CHHCl), 1,60 (s, 9H,
C(CH_{3})_{3}); IR
(KBr) \mu_{max} 3336, 2929, 1674, 1629, 1595, 1477, 1421, 1374, 1223, 1141, 1029, 822, 713 cm^{-1}; FABHRMS (NBA-CsI) m/e 496,0287 (M^{+} + Cs, C_{19}H_{22}ClNO_{4} requiere 496,0292).
(KBr) \mu_{max} 3336, 2929, 1674, 1629, 1595, 1477, 1421, 1374, 1223, 1141, 1029, 822, 713 cm^{-1}; FABHRMS (NBA-CsI) m/e 496,0287 (M^{+} + Cs, C_{19}H_{22}ClNO_{4} requiere 496,0292).
Resolución de 236. Los enantiómeros de 236
se resolvieron en una columna de HPLC Diacel Chiralcel OD
semipreparativa (10 \mum, 2 x 25 cm) usando eluyente de
i-PrOH al 2%-hexano (5 ml/minuto). Los enatiómeros
se eluían con tiempos de retención de 48,03 (enantiómero no natural)
y 41,05 minutos (enantiómero natural, \mu = 1,17). Natural
(1S)-236; [\mu]^{3} -42 (c 0,25,
CH_{2}Cl_{2}), ent-(1R)-236:
[\mu]^{3} +41 (c 0,25, CH_{2}Cl_{2}).
Compuesto
238
Una solución de 236 (1,5 mg, 4,1 \mumoles) en
tetrahidrofurano-dimetilformamida (3:1, 200 \mul)
a 0ºC bajo N_{2} se trató con suspensión de NaH (0,5 mg, 60% en
una dispersión oleosa, 12 \mumoles, 3 equivalentes). La mezcla de
reacción se dejó agitar a 0ºC y durante 30 minutos antes de la
adición de tampón de fosfato de pH 7 (0,2 M, 250 \mul) y 2 ml de
tetrahidrofurano. La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se
concentró a vacío. La cromatografía (SiO_{2}, elución en gradiente
de acetato de etilo al 20-30%-hexano) proporcionaba
238 (1,2 mg, 1,3 mg teóricos, 89%) como una espuma blanca: pf
90-92ºC (hexano-acetato de etilo,
prismas incoloros); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400 MHz) \mu 8,10 (d,
J=8,7 Hz, 1H, C5-H), 6,90 (dd, J=2,4, 8,7 Hz, 1H,
C6-H), 6,70 (s ancho, 1H, C3-H),
6,25 (d, J=2,4 Hz, 1H, C8-H), 4,10 (m, 2H,
C1-H_{2}), 3,80 (s, 3H, OCH_{3}), 2,60 (dt,
J=4,1, 7,6 Hz, 1H, C9a-H), 1,56 (s, 9H), 1,43 (t,
J=5 Hz, 1H, C9-H), 1,23 (t, J=7,1 Hz, 1H,
C9-H); ^{13}C NMR (C_{6}D_{6}, 100 MHz) \mu
184,5, 162,6, 157,9, 151,8, 142,6, 129,6, 127,4, 111,9, 109,4,
106,7, 82,4, 54,9, 52,4, 33,2, 28,6, 27,9, 23,1; IR (película)
\mu_{max} 2974, 1724, 162, 1599, 1477, 1398, 1370, 1297, 1239,
1162, 1122, 1021 cm^{-1}; UV (CH_{3}OH) \mu_{max} 312 (\mu
= 18000), 275 nm (\mu = 16000); UV (tetrahidrofurano)
\mu_{max} 301
(\mu = 25000), 270 nm (\mu = 20000); FABHRMS (NBA) m/e 328,1561 (M^{+} + H, C_{19}H_{21}NO_{4} requiere 328,1549). Natural (+)-238: [\mu]^{3} +144 (c 0,043, tetrahidrofurano) ent-(-)-238: [\mu]^{3} -142 (c 0,031, tetrahidrofurano).
(\mu = 25000), 270 nm (\mu = 20000); FABHRMS (NBA) m/e 328,1561 (M^{+} + H, C_{19}H_{21}NO_{4} requiere 328,1549). Natural (+)-238: [\mu]^{3} +144 (c 0,043, tetrahidrofurano) ent-(-)-238: [\mu]^{3} -142 (c 0,031, tetrahidrofurano).
Compuesto
240
El fenol 236 (5 mg, 1,37 \mumoles) se trató con
HCl 3N anhidro-acetato de etilo (0,4 ml) a 24ºC
durante 20 minutos. El disolvente se retiró a vacío para
proporcionar el hidrocloruro de amina inestable en bruto. Este
residuo se trató con NaHCO_{3} acuoso al 5% (0,4 ml) y
tetrahidrofurano (0,4 ml) a 24ºC bajo N_{2} y la mezcla bifásica
se agitó durante 1,5 horas (24ºC). La mezcla de reacción se extrajo
con acetato de etilo (3 x 2 ml) y los extractos combinados se
lavaron con H_{2}O (2 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se
concentraron a vacío. La cromatografía (SiO_{2}, CH_{3}OH al
10%-CH_{2}Cl_{2}) proporcionaba 240 (2,9 mg, 3,1 mg teóricos,
93%) como un aceite de color canela: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400
MHz) \mu 8,10 (d, J=8,7 Hz, 1H, C5-H), 6,87 (dd,
J=2,4, 8,7 Hz, 1H, C6-H), 6,27 (d, J=2,4 Hz, 1H,
C8-H), 5,65 (s, 1H, C3-H), 4,80 (s
ancho, 1H, NH), 3,80 (s, 3H, OCH_{3}), 3,79 (dd, J=5,2, 10,2 Hz,
1H, C1-H), 3,63 (d, J=10,2 Hz, 1H,
C1-H), 2,78 (dt, J=7,8, 4,6 Hz, 1H,
C9a-H), 1,40 (dd, J=4,0, 7,8 Hz, 1H,
C9-H), 1,23 (t, J=4,4 Hz, 1H, C9-H);
IR (película) \mu_{max} 3384, 2917, 2848 1738, 1611, 1525, 1462,
1361, 1236, 1028 cm^{-1}; FABHRMS (NBA) m/e 228,1023
(M^{+} + H, C_{14}H_{13}NO_{2} requiere 228,1025). Natural
(+)-240: [\mu]^{3} +200 (c 0,04,
tetrahidrofurano)ent-(-)-240:
[\mu]^{3} -194 (c 0,05 tetrahidrofurano).
Compuesto
242
Una solución de 220 (985 mg, 2,60 milimoles) en
40 ml de una mezcla 1:1 de
tetrahidrofurano-CH_{3}OH se enfrió hasta -78ºC y
se añadieron 30 mg de ácido
p-toluenosulfónico-H_{2}O en 1 ml
de tetrahidrofurano. Se introdujo N-yodosuccinimida (652 mg,
2,90 milimoles) en 10 ml de tetrahidrofurano mediante una cánula
durante 5 minutos. Al terminar la reacción (alrededor de 3 horas a
-78ºC), se añadieron 10 ml de NaHCO_{3} acuoso saturado y 50 ml de
éter dietílico. La reacción se calentó hasta 25ºC y se añadió NaCl
sólido para saturar la capa acuosa. La capa orgánica se separó y la
capa acuosa se extrajo con éter dietílico (3 x 10 ml). Las capas
orgánicas se combinaron, se lavaron con NaHCO_{3} acuoso saturado
(1 x 10 ml) y NaCl acuoso saturado (2 x 10 ml), se secaron
(Na_{2}SO_{4}) y se concentraron. La cromatografía (SiO_{2}, 2
x 4 cm, acetato de etilo al 20%-hexano) proporcionaba 242 (1,17 g,
1,31 g teóricos, 89%, típicamente 85-95%) como un
sólido blanco cristalino: pf 139-141ºC (acetato de
etilo-hexano, agujas); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400
MHz) \mu 8,12 (d, J=9,1 Hz, 1H, C5-H), 7,90 (s,
1H, C3-H), 7,52 (d, J=7,1 Hz, 2H), 7,41 (t, J=7,6
Hz, 2H), 7,36 (d, J=2,4 Hz, 1H, C8-H), 7,34 (t,
J=7,4 Hz, 1H), 7,28 (s ancho, 1H, NH), 6,99 (dd, J=9,1, 2,4 Hz, 1H,
C6-H), 5,24 (s, 2H, OCH_{2}Ph), 3,95 (s, 3H,
OCH_{3}), 1,56 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}); ^{13}C
NMR (CDCl_{3}, 100 MHz) \mu 160,1, 155,8, 152,7, 138,9, 136,6,
136,4, 128,5, 128,0, 127,8, 124,6, 118,5, 116,3, 110,8, 98,1, 81,1,
79,4, 70,3, 55,3, 28,3; IR (película) \mu_{max} 3387, 2978,
2923, 1730, 1621, 1602, 1572, 1503, 1366, 1230, 1152 cm^{-1};
FABHRMS (NBA-CsI) m/e 637,9836 (M^{+} + Cs,
C_{23}H_{24}INO_{4} requiere 637,9804). Análisis Calculado
para C_{23}H_{24}INO_{4}:C, 54,67; H, 4,79; N, 2,77.
Encontrado: C, 54,61; H, 4,85, N, 2,92.
Compuesto
246
Una solución de 242 (820 mg, 1,62 milimoles) en
25 ml de dimetilformamida enfriada hasta 0ºC se trató con NaH (80
mg, 60% en aceite, 2,0 milimoles) en varias porciones durante 10
minutos. Después de 45 minutos, se añadió bromuro de alilo (605 mg,
5 milimoles) y la mezcla de reacción se dejó calentar hasta 25ºC y
se agitó durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó mediante
la adición de NaHCO_{3} acuoso saturado (15 ml) y la capa acuosa
se extrajo con acetato de etilo (4 x 15 ml). Las capas orgánicas se
combinaron, se lavaron con H_{2}O (2 x 10 ml) y NaCl acuoso
saturado (2 x 10 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y
se concentraron bajo presión reducida. La cromatografía en capa fina
centrífuga (SiO_{2}, placa Chromatotron de 4 mm, elución en
gradiente de acetato de etilo al 5-15%-hexano)
proporcionaba 246 (822 mg, 884 mg teóricos, 93%, típicamente
90-95%) como un sólido blanco cristalino (mezcla de
rotámeros de amida CDCl_{3}): pf 112-113ºC
(acetato de etilo-hexano) rotámero principal \mu
8,21 (d, J=9,1 Hz, 1H, C5-H), 7,53 (s, 1H,
C8-H), 7,46 (d, J=7,2 Hz, 2H), 7,39 (t, J=7,0 Hz,
2H), 7,33 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,13 (dd, J=9,1, 1,8 Hz, 1H,
C6-H), 6,60 (s, 1H, C3-H),
5,97-5,87 (m, 1H, CH=CH_{2}),
5,28-4,98 (m, 4H, CH_{2}Ph, C=CH_{2}), 4,51 (dd,
J=15,0, 5,9 Hz, 1H, NCHH), 3,97 (s, 3H, OCH_{3}), 3,81 (dd,
J=15,0, 7,2 Hz, 1H, NCHH), 1,30 (s, 9H,
C(CH_{3})_{3}); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 100 MHz)
\mu 159,9, 155,1, 153,9, 143,6, 137,0, 136,5, 133,6, 128,6, 128,1,
127,2, 124,4, 120,2, 118,3, 117,9, 111,9, 106,3, 93,9, 80,3, 70,2,
55,4, 52,2, 28,3; IR (película) 3077, 2976, 2923, 1703, 1621, 1594,
1450, 1410, 1367, 1324, 1263, 1226, 1149, 1030 cm^{-1}; FABHRMS
(NBA-CsI) m/e 678,0089 (M^{+} + Cs,
C_{26}H_{28}INO_{4} requiere 678,0017). Análisis Calculado
para C_{26}H_{28}INO_{4}: C, 57,26; H, 5,17; N, 2,57.
Encontrado: 57,16; H, 5,25; N, 2,54.
Compuesto
248
Una solución de 246 (720 mg, 1,32 milimoles) y
Tempo (619 mg, 3,96 milimoles) en 45 ml de benceno recientemente
destilado (Na/benzofenona) bajo N_{2} se trató con Bu_{3}SnH
(384 mg, 1,32 milimoles). La solución se calentó a 70ºC y tres
equivalentes adicionales del Tempo (3 x 206 mg) y Bu_{3}SnH (4 x
284 mg) se añadieron secuencialmente en cuatro porciones durante los
siguientes 45 minutos. Después de 1 hora, la solución se enfrió
hasta 25ºC y las materias volátiles se retiraron bajo presión
reducida. La cromatografía en capa fina centrífuga (SiO_{2}, placa
Chromatotron de 4 mm, elución en gradiente de acetato de etilo al
0-10%-hexano) proporcionaba 248 (622 mg, 758 mg
teóricos, 82%, típicamente 75-90%) como un sólido
blanco: pf 128-130ºC (hexano, agujas blancas);
^{1}H NMR (dimetilsulfóxido-d_{6}, 400 MHz)
\mu 8,01 (d, J=9,2 Hz, 1H, C6-H), 7,62 (s ancho,
1H, C4-H), 7,52 (s ancho, 2H), 7,42 (t, J=7,2 Hz,
2H), 7,35 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J=2,4 Hz, 1H,
C9-H), 6,95 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H,
C7-H), 5,23 (s, 2H, OCH_{2}Ph), 4,16 (d, J=11,0
Hz, 1H, C2-H), 4,01 (t, J=11,0 Hz, 1H,
C2-H), 3,92 (dd, J=8,1, 4,6 Hz, 1H, CHHOR),
3,82 (s, 3H, OCH_{3}), 3,79-3,70 (m, 2H,
CHHOR y C1-H), 1,51 (s, 9H,
C(CH_{3})_{3}), 1,46-1,19 (m, 6H,
piperidina-(CH_{2})_{3}-), 1,14 (s, 3H, CH_{3}), 1,02
(s, 3H, CH_{3}), 0,91 (s, 3H, CH_{3}), 0,82 (s, 3H, CH_{3});
^{13}C NMR (dimetilsulfóxido-d_{6}, 100 MHz)
\mu 158,7, 155,5, 152,7, 141,5, 137,0, 131,9, 128,5, 127,9, 127,5,
125,0, 117,4, 115,3, 112,8, 100,9, 94,6, 80,4, 70,1, 59,8, 59,7,
55,0, 52,8, 39,6, 39,5, 38,4, 33,2, 32,9, 31,2, 28,5, 20,14, 20,52,
17,0; IR (película) \mu_{max} 2974, 2923, 1697, 1620, 1584,
1471, 1446, 1400, 1359, 1323, 1220, 1169, 1133, 1031 cm^{-1};
FABHRMS (NBA-NaI) m/e 597,3288 (M^{+} + Na,
C_{35}N_{46}N_{2}O_{5} requiere 597,3304). Análisis
Calculado para C_{35}H_{46}N_{2}O_{5}: C, 73,13; H, 8,07; N,
4,88. Encontrado: C, 73,30; H, 7,94; N, 4,85.
Método B, a partir de
248
Compuesto
230
Una solución de 248 (750 mg, 1,30 milimoles) en
30 ml de una mezcla 3:1:1 de
HOAc-tetrahidrofurano-H_{2}O se
trató con polvo de zinc (1,05 g, 16 milimoles) y la suspensión
resultante se calentó a 70ºC con agitación vigorosa. Después de 2
horas, la mezcla de reacción se enfrió hasta 25ºC y el zinc se
retiró mediante filtración. Los materiales volátiles se retiraron
bajo presión reducida y el residuo resultante se disolvió en 30 ml
de acetato de etilo y se filtró. La solución se concentró y se
sometió a cromatografía en capa fina centrífuga (SiO_{2}, placa
Chromatotron de 4 mm, elución en gradiente de acetato de etilo al
15-35%-hexano) para proporcionar 230 (487 mg, 566 mg
teóricos, 86%, típicamente 80-90%) como un sólido
blanco idéntico en todos los aspectos al material auténtico.
Compuesto
252
Una solución de 236 (3,5 mg, 9,6 \mumoles) en
HCl 4 M-acetato de etilo (300 \mul) a 0ºC se agitó
durante 30 minutos antes de que las materias volátiles se retiraran
mediante una corriente de N_{2} y el residuo se secara bajo vacío
(0,02 mm) durante 15 minutos. El 250 en bruto resultante se disolvió
en dimetilformamida (200 \mul) y se trató secuencialmente con 300
(2,7 mg, 10,6 \mumoles, para la preparación, véase Boger y otros,
J. Org. Chem. 1990, 55, 4499) e hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(EDCI) (5,5 mg, 29 \mumoles, 3 equivalentes) y la mezcla de
reacción se agitó durante 10 horas a 25ºC. Se añadió agua (0,5 ml) a
la mezcla de reacción y la fase acuosa se extrajo con acetato de
etilo (4 x 1 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron
(Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La cromatografía en
capa fina preparativa (SiO_{2}, 20 cm x 20 cm x 0,25 mm,
dimetilformamida al 5%-tolueno, R_{f} = 0,60) proporcionaba 252
(4,1 mg, 4,8 mg teóricos, 85%) como un sólido blanco; ^{1}H NMR
(dimetilsulfóxido-d_{6}, 400 MHz) \mu 11,48 (d,
J=2,0 Hz, 1H, NH), 10,35 (s, 1H, OH), 8,02 (d, J=9,2 Hz, 1H,
C6-H), 7,74 (s ancho, 1H, C4-H),
7,12 (d, J=2,4 Hz, 1H, C9-H), 7,08 (d, J=2,0 Hz, 1H,
C3'-H), 7,00 (d, J=9,2, 2,4 Hz, 1H,
C7-H), 6,98 (s, 1H, C4'-H), 4,72 (t,
J=10,5 Hz, 1H, C2-H), 4,47 (dd, J=11,1, 1,3 Hz, 1H,
C2-H), 4,19-4,15 (m, 1H,
C1-H), 4,05 (dd, J=11,3, 3,3 Hz, 1H, CHHCl),
3,95 (s, 3H, OCH_{3}), 3,93 (s, 3H, OCH_{3}), 3,84 (s, 3H,
OCH_{3}), 3,82 (s, 3H, OCH_{3}), 3,80 (dd, J=10,4, 5,5 Hz, 1H,
CHHCl), IR (película) \mu_{max} 3238, 2946, 1631, 1585,
1522, 1493, 1463, 1388, 1313, 1220 cm^{-1}; FABHRMS (NBA)
m/e 497,1500 (M^{+} + H, C_{26}H_{25}ClN_{2}O_{6}
requiere 497,1479). Natural (1S)-252:
[\mu]^{3} -23 (c 0,07,
dimetilformamida)ent-(1R)-252:
[\mu]^{3} +23 (c 0,10, dimetilformamida).
Compuesto
254
Una solución de 252 (3,5 mg, 7,04 \mumoles) en
tetrahidrofurano-dimetilformamida (3:1, 250 \mul)
a 0ºC se trató con NaH (0,85 mg, 60% en aceite, 21 \mumoles, 3
equivalentes). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a
0ºC antes de la adición de tampón de fosfato de pH 7 (0,2 M, 400
\mul) y 3 ml de tetrahidrofurano. La solución orgánica se secó
(Na_{2}SO_{4}), se concentró a vacío y el producto en bruto se
purificó mediante cromatografía en capa fina preparativa (SiO_{2},
20 cm x 20 cm x 0,25 mm, dimetilformamida al 5%-tolueno, R_{f} =
0,55) para proporcionar 254 (2,9 mg, 3,2 mg teóricos, 90%) como un
sólido blanco: ^{1}H NMR
(dimetilsulfóxido-d_{6}, 400 MHz) \mu 11,60 (s,
1H, NH), 7,91 (d, J=8,8 Hz, 1H, C5-H), 7,08 (d,
J=2,0 Hz, 1H, C3'-H), 6,97 (dd, J=8,7, 2,4 Hz, 1H,
C6-H), 6,92 (s, 1H, C4'-H), 6,70 (d,
J=2,4 Hz, 1H, C8-H), 6,60 (s, 1H,
C3-H), 4,50 (dd, J=10,5, 5,0 Hz, 1H,
C1-H), 4,32 (d, J=10,5 Hz, 1H,
C1-H), 3,90 (s, 3H, OCH3), 3,84 (s, 3H, OCH_{3}),
3,80 (s, 3H, OCH_{3}), 3,79 (s, 3H, OCH_{3}),
3,32-3,28 (m, 1H, C9a-H,
parcialmente oscurecido por H_{2}O), 1,78 (dd, J=7,7, 4,0 Hz, 1H,
C9-H), 1,69 (t, J=4,3 Hz, 1H, C9-H);
IR (película) \mu_{max} 2937, 1646, 1626, 1595, 1533, 1518,
1467, 1446, 1394, 1302, 1270, 1232, 1108 cm^{-1}; FABHRMS (NBA)
m/e 461,1732 (M^{+} + H, C_{26}H_{24}N_{2}O_{6}
requiere 461,1713). Natural (+)-254:
[\mu]^{3} +204 (c 0,05,
tetrahidrofurano)ent-(-)-254:
[\mu]^{3} -206 (c 0,05, tetrahidrofurano).
Compuesto
256
Una solución de 236 (4,3 mg, 11,8 \mumoles) en
HCl 4 M-acetato de etilo (350 \mul) a 0ºC se agitó
durante 30 minutos antes de que las materias volátiles se retiraran
mediante una corriente de N_{2} y el residuo se secara bajo vacío
(0,02 mm) durante 15 minutos. El 250 en bruto resultante se disolvió
en dimetilformamida (250 \mul) y se trató secuencialmente con 58
(4,2 mg, 13,0 \mumoles, según se preparaba aquí) e hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(EDCI) (6,8 mg, 35 \mumoles, 3 equivalentes) y la mezcla se agitó
durante 10 horas a 25ºC. Se añadió agua (0,5 ml) a la mezcla de
reacción y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (4 x 1
ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron
(Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La cromatografía en
capa fina preparativa (20 cm x 20 cm x 0,25 mm, dimetilformamida al
15%-tolueno, R_{f} = 0,45) proporcionaba 256 (5,2 mg, 6,7 mg
teóricos, 78%) como un sólido de color canela; ^{1}H NMR
(dimetilsulfóxido-d_{6}, 400 MHz) \mu 11,72 (s,
2H, NH), 10,32 (s, 1H, OH), 10,16 (s, 1H, NH), 8,22 (s, 1H,
C4'-H), 8,02 (d, J=9,2 Hz, 1H,
C6-H), 7,82 (s ancho, 1H, C4-H),
7,67 (d, J=8,2 Hz, 1H, C4''-H), 7,58 (dd, J=8,9, 1,8
Hz, 1H, C6'-H), 7,49 (d, J=8,4 Hz, 1H,
C7''-H), 7,47 (d, J=7,8 Hz, 1H,
C7'-H), 7,42 (s, 1H, C3' o
C3''-H),
7,23 (s, 1H, C3' o C3''-H), 7,21 (t, J=8,1 Hz, 1H, C6''-H), 7,12 (d, J=2,2 Hz, 1H, C9-H), 7,06 (t, J=7,2 Hz, 1H, C5''-H),
6,98 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H, C7-H), 4,79 (t, J=10,4 Hz, 1H, C2-H), 4,57 (d, J=10,1 Hz, 1H, C2-H), 4,25-4,21 (m, 1H, C1-H), 4,04 (dd, J=11,0, 3,0 Hz, 1H, CHHCl), 3,86 (dd, J=11,0, 6,3 Hz, 1H, CHHCl), 3,91 (s, 3H, OCH_{3}); IR (película) \mu_{max} 3280, 2920, 1693, 1647, 1630, 1589, 1518, 1455, 1417, 1308, 1220 cm^{-1}; FABHRMS (NBA-CsI) m/e 565,1655 (M^{+} + H, C_{32}H_{25}ClN_{4}O_{4} requiere 565,1643). Natural (1S)-256: [\mu]^{3} +54 (c 0,08, dimetilformamida), ent-(1R)-256:
[\mu]^{3} -55 (c 0,07, dimetilformamida).
7,23 (s, 1H, C3' o C3''-H), 7,21 (t, J=8,1 Hz, 1H, C6''-H), 7,12 (d, J=2,2 Hz, 1H, C9-H), 7,06 (t, J=7,2 Hz, 1H, C5''-H),
6,98 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H, C7-H), 4,79 (t, J=10,4 Hz, 1H, C2-H), 4,57 (d, J=10,1 Hz, 1H, C2-H), 4,25-4,21 (m, 1H, C1-H), 4,04 (dd, J=11,0, 3,0 Hz, 1H, CHHCl), 3,86 (dd, J=11,0, 6,3 Hz, 1H, CHHCl), 3,91 (s, 3H, OCH_{3}); IR (película) \mu_{max} 3280, 2920, 1693, 1647, 1630, 1589, 1518, 1455, 1417, 1308, 1220 cm^{-1}; FABHRMS (NBA-CsI) m/e 565,1655 (M^{+} + H, C_{32}H_{25}ClN_{4}O_{4} requiere 565,1643). Natural (1S)-256: [\mu]^{3} +54 (c 0,08, dimetilformamida), ent-(1R)-256:
[\mu]^{3} -55 (c 0,07, dimetilformamida).
Compuesto
258
Una solución de 256 (2,8 mg, 4,95 \mumoles) en
tetrahidrofurano-dimetilformamida (3:1, 250 \mul)
a 0ºC se trató con NaH (0,59 mg, 60% en aceite, 15 \mumoles, 3
equivalentes) y la mezcla se agitó durante 30 minutos a 0ºC. La
mezcla de reacción se extinguió con la adición de tampón de fosfato
de pH 7 (0,2 M, 250 \mul) y 3 ml de tetrahidrofurano. La solución
orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se concentró a vacío y se
purificó mediante cromatografía en capa fina preparativa (20 cm x 20
cm x 0,25 mm, dimetilformamida al 15%-tolueno, R_{f} = 0,40) para
proporcionar 258 (2,25 mg, 2,62 mg teóricos, 86%) como un sólido de
color canela: ^{1}H NMR (dimetilsulfóxido-d_{6},
400 MHz) \mu 11,82 (s, 1H, NH), 11,70 (s, 1H, NH), 10,17 (s, 1H,
NH), 8,21 (s, 1H, C4'-H), 7,94 (d, J=8,7 Hz, 1H,
C5-H), 7,66 (d, J=8,0 Hz, 1H,
C4''-H), 7,59 (dd, J=8,8, 1,7 Hz, 1H,
C6'-H), 7,47 (d aparente, J=9,2 Hz, 2H,
C7'-H y C7''-H), 7,41 (s, 1H,
C3'-H o C3''-H), 7,27 (d, J=1,6 Hz,
1H, C3' o C3''-H), 7,21 (t, J=7,2 Hz, 1H,
C6''-H), 7,06 ((t, J=7,2 Hz, 1H,
C5''-H), 6,98 (dd, J=8,7, 2,3 Hz, 1H,
C6-H), 6,89 (s, 1H, C3-H), 6,72 (d,
J=2,3 Hz, 1H, C8-H), 4,62 (dd, J=10,3, 5,0 Hz, 1H,
C1-H), 4,49 (d, J=10,3 Hz, 1H,
C1-H), 3,92-3,87 (m, 1H,
C9a-H), 3,85 (s, 3H, OCH_{3}), 1,77 (dd, J=7,7,
4,0 Hz, 1H,
C9-H), 1,67 (d, J=4,0 Hz, 1H, C9-H); IR (película) \mu_{max} 2944, 1647, 1586, 1550, 1517, 1391, 1234, 1137, 1067, 1025 cm^{-1}; FABHRMS (NBA) m/e 529,1889 (M^{+} + H, C_{32}H_{24}N_{4}O_{4} requiere 529,1876). Natural (+)-258: [\mu]^{3} +122 (c 0,04, dimetilformamida) ent-(-)-258: [\mu]^{3} -120 (c 0,07, dimetilformamida).
C9-H), 1,67 (d, J=4,0 Hz, 1H, C9-H); IR (película) \mu_{max} 2944, 1647, 1586, 1550, 1517, 1391, 1234, 1137, 1067, 1025 cm^{-1}; FABHRMS (NBA) m/e 529,1889 (M^{+} + H, C_{32}H_{24}N_{4}O_{4} requiere 529,1876). Natural (+)-258: [\mu]^{3} +122 (c 0,04, dimetilformamida) ent-(-)-258: [\mu]^{3} -120 (c 0,07, dimetilformamida).
Compuesto
260
Una solución de 236 (3,9 mg, 10,7 \mumoles) en
HCl 4 M-acetato de etilo (300 \mul) a 0ºC se agitó
durante 30 minutos antes de que las materias volátiles se retiraran
mediante una corriente de N_{2} y el residuo se secara bajo vacío
(0,02 mm) durante 15 minutos. El 250 en bruto resultante se disolvió
en dimetilformamida (200 \mul) y se trató secuencialmente con 320
(2,9 mg, 11,8 \mumoles, según se preparaba en Boger y otros, J.
Org. Chem. 1987, 52, 1521) e hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(EDCI) (6,1 mg, 32 \mumoles, 3 equivalentes) y la mezcla se agitó
a 25ºC durante 12 horas. Se añadió agua (0,5 ml) a la mezcla de
reacción y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (4 x 1
ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron
(Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La cromatografía en
capa fina preparativa (20 cm x 20 cm x 0,25 mm, dimetilformamida al
30%-tolueno, R_{f} = 0,65) daba 260 (3,7 mg, 5,2 mg teóricos, 71%)
como un sólido amarillo claro; ^{1}H NMR
(dimetilsulfóxido-d_{6}, 400 MHz) \mu 11,60 (d,
J=2,0 Hz, 1H, NH), 10,31 (s, 1H, OH), 8,01 (d, J=9,2 Hz, 1H,
C6-H), 7,99 (d, J=8,9 Hz, 1H,
C4'-H), 7,80 (s ancho, 1H, C4-H,
7,23 (d, J=8,9 Hz, 1H, C5'-H), 7,10 (d, J=2,4 Hz,
1H, C9-H), 7,00 (d, J=1,5 Hz, 1H,
C8'-H), 6,98 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H,
C7-H), 6,10 (s ancho, 2H, NH_{2}), 4,77 (t, J=10,8
Hz, 1H, C2-H), 4,54 (dd, J=11,0, 1,4 Hz, 1H,
C2-H), 4,22-4,17 (m, 1H,
C1-H), 4,04 (dd, J=11,1, 3,1 Hz, 1H, CHHCl),
3,98 (t, J=8,8 Hz, 2H, C2'-H_{2}), 3,92 (s, 3H,
OCH_{3}), 3,86 (dd, J=11,1, 7,2 Hz, 1H, CHHCl), 3,25 (t,
J=8,8 Hz, 2H, C1'-H_{2} parcialmente oscurecido
por H_{2}O); IR (película) \mu_{max} 3292, 2923, 1659, 1630,
1595, 1504, 1446, 1415, 1384, 1224 cm^{-1}; FABHRMS (NBA)
m/e 490,1411 (M^{+}, C_{26}H_{23}ClN_{4}O_{4}
requiere 490,1408). Natural (1S)-260:
[\mu]^{3} +74 (c 0,09, dimetilformamida)
ent-(1R)-260: [\mu]^{3} -76
(c 0,11, dimetilfor-
mamida).
mamida).
Compuesto
262
Una solución de 260 (1,8 mg, 3,67 \mumoles) en
tetrahidrofurano-dimetilformamida (3:1, 200 \mul)
a 0ºC se trató con NaH (0,44 mg, 60% en aceite, 11 \mumoles, 3
equivalentes). La mezcla se agitó a 0ºC durante 30 minutos antes de
que la reacción se apagara con la adición de tampón de fosfato de pH
7 (0,2 M, 200 \mul) y 3 ml de tetrahidrofurano. La solución
orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se concentró a vacío y se
purificó mediante cromatografía en capa fina preparativa (20 cm x 20
cm x 0,25 mm, dimetilformamida al 30%-tolueno, R_{f} = 0,65) para
proporcionar 262 (1,50 mg, 1,67 mg teóricos, 90%) como un sólido
amarillo claro: ^{1}H NMR
(dimetilsulfóxido-d_{6}, 400 MHz) \mu 11,70 (s,
1H, NH), 8,01 (d, J=9,2 Hz, 1H, C4'-H), 7,93 (d,
J=8,4 Hz, 1H, C5-H), 7,21 (d, J=8,8 Hz, 1H,
C5'-H), 7,06 (s, 1H, C8'-H), 6,98
(dd, J=8,6, 2,2 Hz, 1H, C6-H), 6,86 (s, 1H,
C3-H), 6,71 (d, J=2,2 Hz, 1H, C8-H),
6,11 (s ancho, 2H, NH_{2}), 4,58 (dd, J=10,3, 4,9 Hz, 1H,
C1-H), 4,46 (d, J=10,3 Hz, 1H,
C1-H), 3,97 (t, J=8,5 Hz, 2H,
C2'-H_{2}), 3,85 (s, 3H, OCH_{3}),
3,38-3,30 (m, 3H, C9a, C1'-H_{2}
parcialmente oscurecido por H_{2}O), 1,77 (dd, J=7,8, 4,1 Hz, 1H,
C9-H), 1,66 (t, J=4,1 Hz, 1H, C9-H);
IR (película) \mu_{max} 3375, 2937, 1652, 1597, 1572, 1501,
1455, 1426, 1388, 1359, 1334, 1300, 1267, 1229, cm^{-1}; FABHRMS
(NBA) m/e 455,1730 (M^{+} + H,
C_{26}H_{22}N_{4}O_{4} requiere 455,1719). Natural
(+)-262: [\mu]^{3} +183 (c 0,07,
dimetilformamida) ent-(-)-262:
[\mu]^{3} -187 (c 0,08, dimetilformamida).
Compuesto
264
Una solución de 236 (3,6 mg, 9,8 \mumoles) en
HCl 4 M-acetato de etilo (300 \mul) a 0ºC se agitó
durante 30 minutos antes de que las materias volátiles se retiraran
mediante una corriente de N_{2} y el residuo se secara bajo vacío
(0,02 mm) durante 15 minutos. El 250 en bruto resultante se disolvió
en dimetilformamida (200 \mul) y se trató secuencialmente con 340
(4,6 mg, 10,7 \mumoles según se preparaba en Boger y otros, J.
Org. Chem. 1984, 49, 2240) e hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(EDCI) (5,6 mg, 29 \mumoles, 3 equivalentes) y la mezcla se agitó
durante 6 horas a 25ºC. El disolvente se retiró bajo vacío, se
añadió agua (0,5 ml) a la mezcla y el producto en bruto insoluble se
recogió mediante centrifugación. La cromatografía en capa fina
preparativa (20 cm x 20 cm x 0,25 mm, dimetilformamida al
33%-tolueno, R_{f} = 0,50) daba 264 (4,5 mg, 6,6 mg teóricos, 68%)
como un sólido amarillo claro; ^{1}H NMR
(dimetilsulfóxido-d_{6}, 400 MHz) \mu 11,80 (d,
J=1,6 Hz, 1H, NH), 11,55 (d, J=1,2 Hz, 1H, NH), 10,31 (s, 1H, OH),
8,28 (d, J=7,0 Hz, 1H, C4'-H), 8,01 (d, J=9,2 Hz,
1H, C6-H), 7,97 (d, J=8,9 Hz, 1H,
C4''-H), 7,82 (s ancho, 1H, C4-H),
7,38 (d, J=9,0 Hz, 1H, C5''-H), 7,22 (d, J=8,8 Hz,
1H, C5'-H), 7,16 (d, J=1,3 Hz, 1H,
C8''-H), 7,12 (d, J=2,3 Hz, 1H,
C9-H), 6,98 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H,
C7-H), 6,97 (s, 1H, C8'-H), 6,10 (s
ancho, 2H, NH_{2}), 4,80 (t, J=10,8 Hz, 1H, C2-H),
4,66 (t, J=8,3 Hz, 2H, C2'-H_{2}), 4,57 (d, J=11,0
Hz, 1H, C2-H), 4,23-4,21 (m, 1H,
C1-H), 4,05 (dd, J=11,0, 3,0 Hz, 1H, CHHCl),
3,96 (t, J=8,8 Hz, 2H, C2''-H_{2}), 3,91 (s, 3H,
OCH_{3}), 3,87 (dd, J=11,0, 4,2 Hz, 1H, CHHCl),
3,52-3,35 (m, 4H, C1'-H_{2},
C1''-H_{2} parcialmente oscurecido por H_{2}O);
IR (película) \mu_{max} 3374, 2913, 2851, 1662, 1651, 1605,
1446, 1425, 1359, 1282, 1241, 1164 cm^{-1}; FABHRMS (NBA)
m/e 675,2143 (M^{+} + H, C_{37}H_{31}ClN_{6}O_{5}
requiere 675,2123).Natural (1S)-264:
[\mu]^{3} +50 (c 0,05, dimetilformamida)
ent-(1R)-264: [\mu]^{3} -52
(c 0,04, dimetilfor-
mamida).
mamida).
Compuesto
266
Una solución de 264 (0,57 mg, 0,84 \mumoles) en
tetrahidrofurano-dimetilformamida (3:1, 50 \mul) a
0ºC se trató con NaH (0,10 mg, 2,5 \mumoles, 3 equivalentes) y la
mezcla se agitó a 0ºC durante 30 minutos. La mezcla de reacción se
extinguió con la adición de tampón de fosfato de pH 7 (0,2 M, 50
\mul) y 2 ml de tetrahidrofurano. La solución orgánica se secó
(Na_{2}SO_{4}), se concentró a vacío y se purificó mediante
cromatografía en capa fina preparativa (5 cm x 20 cm x 0,25 mm,
dimetilformamida al 33%-tolueno, R_{f} = 0,45) para proporcionar
266 (0,51 mg, 0,54 mg teóricos, 94%) como un sólido amarillo claro:
^{1}H NMR (dimetilsulfóxido-d_{6}, 400 MHz)
\mu 11,90 (d, J=2,0 Hz, 1H, NH), 11,55 (d, J=2,0 Hz, 1H, NH), 8,29
(d, J=8,1 Hz, 1H, C4'-H), 7,97 (d, J=8,9 Hz, 1H,
C4''-H), 7,93 (d, J=8,8 Hz, 1H,
C5-H), 7,36 (d, J=8,9 Hz, 1H,
C5''-H), 7,22 (d, J=1,7 Hz, 1H,
C8''-H), 7,21 (d, J=8,7 Hz, 1H,
C5''-H), 6,98 (dd, J=8,8, 2,4 Hz, 1H,
C7-H), 6,96 (d, J=1,3 Hz, 1H,
C8'-H), 6,88 (s, 1H, C3-H), 6,73 (d,
J=2,4 Hz, 1H, C8-H), 6,10 (s ancho, 2H, NH_{2}),
4,65 (t, J=8,2 Hz, 2H, C2'-H_{2}), 4,61 (dd,
J=10,5, 4,8 Hz, 1H, C1-H), 4,50 (d, J=10,5 Hz, 1H,
C1-H), 3,98 (t, J=8,7 Hz, 2H,
C2''-H_{2}), 3,86 (s, 3H, OCH_{3}),
3,50-3,35 (m, 5H, C1'-H_{2},
C1''-H_{2}, C9a-H parcialmente
oscurecido por H_{2}O), 1,78 (dd, J=7,8, 4,0 Hz, 1H,
C9-H), 1,68 (t, J=4,3 Hz, 1H, C9-H);
IR (película) \mu_{max} 3372, 2920, 1656, 1602, 1581, 1501,
1430, 1392, 1363, 1338, 1267, 1229, 1141, 1019 cm^{-1}; FABHRMS
(NBA-CsI) m/e 771,1244 (M^{+} + Cs,
C_{37}H_{30}N_{6}O_{5} requiere
771,1332). Natural (+)-266: [\mu]^{3} +145 (c 0,01, dimetilformamida) ent-(-)-266: [\mu]^{3} -149 (c 0,01, dimetilformamida).
771,1332). Natural (+)-266: [\mu]^{3} +145 (c 0,01, dimetilformamida) ent-(-)-266: [\mu]^{3} -149 (c 0,01, dimetilformamida).
Se disolvió N-BOC-MCBI
(238, 0,1 mg) en CH_{3}OH (1,5 ml) y se mezcló con tampón acuoso
de pH 3 (1,5 ml). El tampón contenía ácido cítrico 0,1 M,
Na_{2}HPO_{4} 0,2 M y H_{2}O 4:1:20 (v:v:v), respectivamente.
La solución de solvolisis se cerró herméticamente y se mantuvo a
25ºC protegida de la luz. El espectro UV se midió a intervalos
regulares cada 2 horas durante el primer día, cada 12 horas durante
otra semana y cada 24 horas durante una semana adicional. Se
controlaron la disminución en la absorción de longitud de onda larga
a 324 nm y el incremento en la absorción de longitud de onda corta a
266 nm, Figura 1. La constante de velocidad de solvolisis (k
= 2,41 x 10^{-6} s^{-1}) y la semivida (t_{1/2} = 80
horas) se calcularon a partir de datos registrados a la longitud de
onda corta a partir del tratamiento por mínimos cuadrados (r =
0,995) de la pendiente de la gráfica de tiempo frente a
1-[(A-A_{i})/A_{f}-A_{j})].
De forma similar, se disolvió MCBI (240, 0,1 mg)
en CH_{3}OH (1,5 ml) y se mezcló con tampón acuoso de pH 3 (1,5
ml). La solución de solvolisis se cerró herméticamente y se agitó a
25ºC en la oscuridad. El espectro UV se registró cada 24 horas
durante 2 meses. Se controlaron la disminución en la absorción de
longitud de onda larga a 340 nm y el incremento en la absorción a
268 nm, Figura 1. La constante de velocidad (k = 5,76 x
10^{-7} s^{-1}) y la semivida (t_{1/2} = 334 horas) de
solvolisis se determinaron según se detalla anteriormente (r =
0,98).
Compuesto
268
Una solución de 238 (10,1 mg, 30,8 \mumoles) en
2,5 ml de CH_{3}OH se enfrió hasta 0ºC y se añadió
CF_{3}SO_{3}H-CH_{3}OH (185 \mul, 0,02 M,
0,12 equivalentes). Después de 3 horas, la reacción se extinguió
mediante la adición de NaHCO_{3} (10 mg) y la mezcla se calentó
hasta 25ºC, se filtró y la solución se concentró. La cromatografía
en capa fina centrífuga (SiO_{2}, placa Chromatotron de 0,3 mm,
acetato de etilo al 30%-hexano) proporcionaba 268 (10,5 mg, 11,1 mg
teóricos, 95%) como un sólido blanco: pf 157-159ºC
(hexano, prismas blancos); ^{1}H NMR (C_{6}D_{6}, 400 MHz)
\mu 8,46 (d, J=8,3 Hz, 1H, C6-H), 8,15 (s ancho,
1H, C4-H), 7,06 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H,
C7-H), 6,99 (d, J=2,4 Hz, 1H, C9H), 6,95 (s ancho,
1H, OH), 4,22 (d, J=10,6 Hz, 1H, C2-H),
3,85-3,80 (m, 1H, C2-H),
3,66-3,63 (m, 1H, CHHOCH_{3}), 3,55 (dd,
J=9,2, 3,7 Hz, 1H, CHHOCH_{3}), 3,41 (s, 3H, OCH_{3}
3,01-2,95 (m, 1H, C1-H), 2,97 (s,
3H, OCH_{3}), 1,44 (s, 9H, C(CH_{3})_{3});
^{13}C NMR (C_{6}D_{6}, 100 MHz) \mu 159,4, 154,5, 153,4,
142,4, 132,9, 125,9, 117,5 115,1, 114,4, 102,0, 98,0, 80,8, 74,7,
58,5, 54,7, 53,3, 37,8, 28,4; IR (película) \mu_{max} 3329,
2974, 2932, 1697, 1674, 1629, 1590, 1476, 1418, 1368, 1331, 1224,
1141, 1028 cm^{-1}; FABHRMS (NBA-NaI) m/e
359,1720 (M^{+}, C_{20}H_{25}NO_{5} requiere 359,1733).
Se ha observado que las velocidades relativas de
alquilación de DNA no siguen las velocidades relativas de solvolisis
catalizada por ácido (Figura 18). Aunque esto se describió en primer
lugar con una serie de agentes (16-18) que poseían
estructuras suficientemente diferentes para que el origen de los
efectos no estuviera claro, las últimas series (20 y 254) están tan
estrechamente relacionadas que es improbable que las sutiles
diferencias estructurales contribuyan a una alteración del orden de
reactividad esperado. En cambio, el orden de velocidades de
alquilación de DNA inesperado observado con los últimos agentes
puede estar influido por un efecto previamente no reconocido
íntimamente ligado a la catálisis. En esta última serie, el impacto
del substituyente C7 (20 y 254, R = OCH_{3} > H) está
relacionado con su simple presencia en vez de su naturaleza
electrónica (R = OCH_{3} > H). Se sugiere ahora que este
impacto es debido a la longitud extendida de la subunidad de
alquilación y el incremento correspondiente en la torsión inherente
de la amida N2 de conexión que podría acompañar a la unión a la
hendidura secundaria de DNA proporcionando así un papel no obvio
para el grupo metoxi.
Claims (13)
1. Un compuesto representado por la siguiente
estructura:
en la
que:
R_{1} se selecciona del grupo que consiste en
hidrógeno, terc-butoxicarbonilo y un radical
representado por la siguiente estructura:
R_{2} se selecciona del grupo que consiste en
hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6);
R_{3} se selecciona del grupo que consiste en
hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6);
y un radical representado por la siguiente
estructura:
R_{4} se selecciona del grupo que consiste en
hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6); y
R_{5} se selecciona del grupo que consiste en
hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6); y
V_{1} representa un grupo vinileno entre
R_{2} y R_{3}; o
R_{2} y R_{3} y el grupo vinileno intermedio
V_{1} juntos forman un anillo de pirrolidina substituido en N
representado por la siguiente estructura:
en la
que
V_{1} representa el grupo vinileno entre
R_{2} y R_{3}; y
R_{6} se selecciona del grupo que consiste en
-NH_{2} y un radical representado por la siguiente estructura:
en la
que:
R_{7} se selecciona del grupo que consiste en
hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6);
R_{8} se selecciona del grupo que consiste en
hidrógeno, hidroxilo y
O-alquilo(C1-C6); y
V_{2} representa un grupo vinileno entre
R_{7} y R_{8}; o
R_{7} y R_{8} y el grupo vinileno intermedio
V_{2} juntos forman un anillo de pirrolidina substituido en N
representado por la siguiente estructura:
en la
que:
V_{2} representa el grupo vinileno entre
R_{7} y R_{8},
con las siguientes condiciones:
- si R_{2} y R_{3} participan en el primer anillo de pirrolidina substituido en N, entonces R_{4} y R_{5} son hidrógeno;
- si R_{2} es hidrógeno, entonces R_{4} y R_{5} son hidrógeno y R_{3} es un radical representado por la siguiente estructura:
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, representado por la siguiente estructura:
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, representado por la siguiente estructura:
4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, representado por la siguiente estructura:
5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, representado por la siguiente estructura:
6. Un compuesto representado por la siguiente
estructura:
en la
que
X se selecciona del grupo que consiste en cloro,
bromo, yodo y OTOS; y
R_{1} es como se define en la reivindicación
1.
7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
6, representado por la siguiente estructura:
8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
6, representado por la siguiente estructura:
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
6, representado por la siguiente estructura:
10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
6, representado por la siguiente estructura:
11. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 10, mezclado con su enantiómero.
12. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 11, para usar en terapia.
13. Uso de los compuestos de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en la fabricación de un
medicamento para tratar tumores.
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