DK166715B1 - Farmaceutiske produkt og anvendelse af dette til fremstilling af et kombinationspraeparat til behandling af virusinfektioner - Google Patents

Description

Den foreliggende opfindelse angår farmaceutiske produkter med anti viral aktivitet.

DK 166715 B1

I EP 141927 beskrives en forbindelse med formlen A

<Λ \ν^\ν/^Νη2 a (CH ,)-

HO-CH2-CH-CH2-OH

5 og salte, phosphatestere og acylderivater deraf som antivirale midler.

Prodrugs af forbindelsen med formlen A har formlen B

<;xi, (CH J, 2 HO-CH -CH-CH-OH 2 2 10 og salte og derivater deraf som angivet under formel A, hvor X er C^.g-alkoxy, NH2 eller hydrogen. De forbindelser med formlen B, hvor X er C^.g-alkoxy eller ΝΗ2» er beskrevet i EP 141927, og den forbindelse med formlen B, hvor X er hydrogen, er beskrevet i EP 182024. Et 15 særlig foretrukket eksempel på en forbindelse med formlen B er den, hvor X er hydrogen, og hvor de to OH-grupper er i form af acetylderivater, hvilket er beskrevet i eksempel 2 i EP 182024.

Interferoner er proteiner, der produceres af forskellige typer pattedyrceller eller ved genetiske manipulationsmetoder. Deres egenska-20 ber, kemiske natur og fremgangsmåder til fremstilling og isolering deraf er i de senere år blevet grundigt undersøgt og dokumenteret på grund af deres potentielt værdifulde terapeutiske egenskaber (jfr. E.

Knight Jr., "Purification and characterisation of Interferons" i DK 166715 B1 2

Interferon 2, 1980, red. I. Gressor, Academic Press, London; og Antiviral Research, 6 (1986) 1-17).

Det har nu vist sig, at en kombination af et interferon og en forbindelse med formlen A eller et prodrug eller et farmaceutisk 5 acceptabelt salt og/eller derivat som defineret ovenfor, af hver af disse har god antiviral virkning. Virkningen af kombinationen er større end det, der kunne forventes på grundlag af de antivirale virkninger af bestanddelene hver for sig, og der frembringes tilsyneladende en synergistisk virkning.

10 Den foreliggende opfindelse angår således et farmaceutisk produkt, der omfatter et interferon og en forbindelse med formlen A

O

«au HO-CH -CH-CH -OH 2 2 eller et prodrug eller et farmaceutisk acceptabelt salt, phosphates-15 ter og/eller acylderivat af hver af disse som et kombinationspræparat til samtidig, separat eller successiv anvendelse ved antiviral terapi. Saltet er fortrinsvis natriumsaltet.

I et foretrukket aspekt administreres de aktive bestanddele i produktet samtidig.

20 Den foreliggende opfindelse angår endvidere et farmaceutisk præparat, der omfatter et Interferon og en forbindelse med formlen A eller et prodrug, salt og/eller derivat deraf sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer.

Opfindelsen angår yderligere anvendelse af et interferon og en for-25 bindelse med formlen A eller et prodrug eller et salt og/eller derivat deraf som angivet ovenfor til fremstilling af et kombinationspræ- DK 166715 B1 3 parat til samtidig, separat eller successiv anvendelse ved antiviral terapi.

Udtrykket "acylderivat" omfatter i nærværende beskrivelse og krav et hvilket som helst derivat af forbindelserne med formlen A, hvor én 5 eller flere acylgrupper er til stede. Sådanne derivater er omfattet af definitionen som prodrugs af forbindelserne med formlen A ud over de derivater, som i sig selv er biologisk aktive.

Eksempler på prodrugs, farmaceutisk acceptable salte og derivater er som beskrevet i ovennævnte EP-patentskrifter, hvortil der henvises.

10 Forbindelsen med formlen A kan også være i én af de former, der er beskrevet i EP 216459.

Det er kendt, at interferon findes i flere typer (α, β og 7). En hvilken som helst type interferon kan benyttes i produktet og præparatet ifølge opfindelsen. Interferonkoncentrationer udtrykkes almin-15 deligvis som standard-"enheder", som er internationalt anerkendt og dokumenteret og angiver styrken af en given mængde interferon med hensyn til inhibering af virusreplikation under standardbetingelser.

Interferonet fremstilles fortrinsvis syntetisk, fx ved genetiske manipulationsmetoder, og er i farmaceutisk acceptabel form. "Far-20 maceutisk acceptabel form" betyder bl.a. med en farmaceutisk acceptabel renhedsgrad uden normale farmaceutiske additiver såsom diluen-ter og bærere og ikke omfattende materiale, der anses for toxisk i normale dosismængder. En farmaceutisk acceptabel renhedsgrad er generelt mindst 50% uden normale farmaceutiske additiver, fortrinsvis 25 75%, især 90% og navnlig 95%.

De ovenfor beskrevne produkter og præparater har antiviral virkning og er potentielt anvendelige ved behandling af infektioner, der er forårsaget af herpes-vira såsom herpes simplex type 1-virus, herpes simplex type 2-virus, varicella zoster-virus, Epstein-Barrvirus og 30 cytomegalovirus.

Forbindelserne med formlen A, prodrugs, salte og derivater kan fremstilles som beskrevet i ovennævnte EP-patentskrifter.

DK 166715 B1 4

Produktet ifølge opfindelsen kan administreres ad oral vej til mennesker og kan formuleres som sirup, tabletter eller kapsler til enten separat, successiv eller samtidig administration. Når produktet eller den ene af de aktive bestanddele deraf er i form af én tablet, kan 5 der anvendes en hvilken som helst farmaceutisk bærer, der er egnet til formulering af sådanne faste præparater, fx magnesiumstearat, stivelse, lactose, glucose, rismel og kridt. Produktet eller den ene af de aktive bestanddele deraf kan også være i form af en slugbar kapsel, fx af gelatine, der indeholder forbindelsen eller forbindel-10 serne, eller i form af en sirup, en opløsning eller en suspension. Hensigtsmæssige flydende farmaceutiske bærere omfatter ethylalkohol, glycerol, saltopløsning og vand, hvortil der kan være sat smags-eller farvestoffer til dannelse af sirupper.

Til parenteral administration fremstilles flydende enhedsdosisformer, 15 der indeholder et produkt ifølge opfindelsen eller en aktiv bestanddel deraf og en steril bærer. Produktet eller bestanddelen kan afhængig af bæreren og koncentrationen enten være suspenderet eller opløst. Parenterale opløsninger fremstilles normalt ved at opløse produktet eller bestanddelen deraf i en bærer og filtersterilisere før 20 påfyldning i et hensigtsmæssigt hætteglas eller ampul og forsegling.

Med fordel er der også adjuvanser såsom et lokalbedøvende middel, konserveringsmidler og puf ringsmidler opløst i bæreren. For at forøge stabiliteten kan præparatet (enkelte bestanddele eller blandet) ned-fryses efter påfyldning i hætteglasset, og vandet kan fjernes i vaku-25 ‘ um.

Parenterale suspensioner fremstilles på i det væsentlige samme måde bortset fra, at produktet eller bestanddelen deraf suspenderes i bæreren i stedet for at blive opløst og steriliseres ved udsættelse . for ethylenoxid før suspension i den sterile bærer. Med fordel er der 30 i præparatet inkorporeret et overfladeaktivt middel eller et befugt-ningsmiddel for at lette ensartet fordeling af forbindelsen ifølge opfindelsen.

Foretrukne parenterale formuleringer omfatter vandige formuleringer DK 166715 B1 5 under anvendelse af sterilt vand eller normalt saltvand ved en pH på omkring 7,4.

Som det er almindelig praksis, ledsages præparaterne sædvanligvis af skrevne eller trykte brugsanvisninger til den pågældende medicinske 5 behandling.

Præparatet kan også formuleres til topisk påføring på huden eller øjnene. Til topisk påføring på huden kan præparatet være i form af en creme, lotion eller salve. Disse formuleringer kan være konventionelle formuleringer, der er velkendte inden for området, fx som 10 beskrevet i standardværker om farmaceutika og kosmetika såsom Harry's Cosmeticology udgivet af Leonard Hill Books samt British Pharmacopoeia. En særlig fordelagtig formulering til topisk påføring på huden omfatter et detergent, natriumlaurylsulfat, som en yderligere bestanddel. Præparatet til påføring på øjnene kan være et konven-15 tionelt øjendråbepræparat, som er velkendt inden for området, eller et yderligere salvepræparat.

Mængden af interferon udtrykkes som nævnt ovenfor almindeligvis i standardenheder. Generelt er præparater, der indeholder ca. 50-500.000 enheder interferon pr. mg af forbindelsen med formlen A eller 20 et prodrug eller et salt, en phosphatester, et acylderivat eller et prodrug deraf, virksomme. Foretrukne præparater er sådanne, der indeholder ca. 1.000-200.000 enheder interferon pr. mg af forbindelsen med formlen A eller et prodrug eller et salt, en phosphatester eller et acylderivat deraf.

25 Produktet ifølge opfindelsen er fortrinsvis i enhedsdosisform eller i en anden form, der kan administreres i en enkelt dosis. En hensigtsmæssig dosisenhed kan indeholde fra 50 mg til 1 g af de samlede aktive bestanddele, fx 100^-500 mg. Sådanne doser kan administreres 1-4 gange daglig eller sædvanligvis 2 eller 3 gange daglig. Den virksomme 30 dosis af forbindelsen ligger generelt i området fra 0,2 til 40 mg af de samlede lægemidler pr. kg legemsvægt pr. dag eller sædvanligvis 10-20 mg/kg daglig.

DK 166715 B1 6

Det foretrækkes at behandle infektionen med relativt store doser af kombinationsproduktet i begyndelsen for at begrænse risikoen for udvikling af modstandsdygtige virusstammer i infektionen.

Til topisk administration kan salver eller cremer formuleres på kendt 5 måde i konventionelle inerte baser (fx vaseline, etc.). En mængde på ca. 0,10-10 vægtprocent samlede lægemidler, fortrinsvis ca. 0,5-5 vægtprocent samlede lægemidler, giver en hensigtsmæssig koncentration i en salve eller creme til topisk administration 1-4 gange daglig.

Sådanne topisk påførte formuleringer holder på effektiv måde et re-10 servoir af de aktive lægemidler mod det inficerede sted, således at koncentrationerne af lægemidler i formuleringerne ikke er kritiske, naturligvis under forudsætning af, at der ikke anvendes et dosis-niveau, der er skadeligt for omliggende hudområder.

Det er endvidere klart, at hver bestanddel i produktet ifølge opfin-15 delsen kan administreres ad en anden vej. Fx kan forbindelsen med formlen A eller et prodrug administreres oralt og interferon intra-muskulært.

Virkningen af kombinationen ifølge opfindelsen belyses ved nedenstående biologiske testdata.

20 Biologiske testdata

Test for synergi mellem forbindelsen med formlen A og humant interferon mod herpes s implex-virus, type 1 og 2, ved plaquereduktionsas-says i MRC-5-celler MRG-5-celler blev dyrket til konfluens i multiskåle med 24 brønde 25 (brønddiameter 1,5 cm) . De drænede cellemonolag blev hver inficeret med ca. 50-100 infektiøse partikler af herpes simplex-virus 1 eller 2 (HSV-1, stamme SC16; HSV-2, stamme MS) i 100 μΐ phosphatpufret saltopløsning. Viruset blev adsorberet i 1 time ved stuetemperatur. Efter adsorption blev resterende inokulum fjernet fra hver brønd og erstat-30 tet med 0,5 ml Eagles MEM indeholdende 5% nyfødt kalveserum og 0,9% agarose (A37). Når agarosen var hærdet, tilsattes fortyndinger af testforbindelserne, som var fremstillet i Eagles MEM (indeholdende DK 166715 Bl 7 5% nyfødt kalveserum), idet hver brønd modtog 0,25 ml af hver bestanddel, dvs. i alt 0,5 ml. Forbindelsen med formlen A blev fortyndet til følgende række af koncentrationer: 12, 4, 1,2, 0,4, 0,12 og 0,04 /zg/ml; slutkoncentrationerne i assayet lå derfor mellem 3 /ig/ml 5 og 0,01 /ig/ml. Humant interferon blev fortyndet til følgende række af koncentrationer: 4000, 1200, 400, 120 og 40 IU/ml; slutkoncentrationerne i assayet lå derfor mellem 1000 og 10 IU/ml. De inficerede kulturer blev inkuberet ved 37°C i en fugtig atmosfære af 5% CO2 i luft, indtil plaques var klart synlige (2-3 dage for HSV-1; sædvan-10 ligvis 1 dag for HSV-2). Kulturerne blev fikseret i formalsaltopløsning, agaroseoverlejringerne blev forsigtigt vasket af, og derefter blev cellemonolagene farvet med carbolfushsin. Et stereomikroskop blev anvendt til at tælle plaques. Under henvisning til antallet af plaques i viruskontrolmonolag (ubehandlede kulturer) blev den pro-15 centvise reduktion i plaquetallet for hver kombination beregnet.

Synergi mellem forbindelse A og humant interferon mod HSV-1 og HSV-2 i MRC-5-celler a) Aktivitet mod HSV-1 IC50* (/tg/ml) af A i nærværelse af 20 0 10 30 100 IU/ml humant interferon (IFN) 0,34 0,04 0,02 0,01 (for IFNa; Wellferon**) 0,45 0,34 0,19 0,14 (for IFN/J; Fiblaferon 5***) 0,40 0,22 0,19 0,19 (for IFN-γ,· Amgen Biologicals***) 25 _ b) Aktivitet mod HSV-2 IC50* (/tg/ml) af A i nærværelse af 0 10 30 100 IU/ml humant interferon (IFN) 30 0,62 0,29 0,21 0,09 (for IFNe; Wellferon***) 0,64 0,62 0,39 0,41 (for IFNjS; Fiblaferon 5***) 0,44 0,34 0,29 0,27 (for IFN7; Amgen Biologicals***)

Claims (10)

1. Farmaceutisk produkt, kendetegnet ved, at det omfatter en synergistisk 10 kombination af et interferon og en forbindelse med formlen A /yS I 2 <ch > HO-CH2~CH-CH2-OH eller et prodrug eller et farmaceutisk acceptabelt salt, phosphates-15 ter og/eller acylderivat af hver af disse som et kombinationspræparat til samtidig, separat eller successiv anvendelse ved antiviral terapi.

2. Produkt ifølge krav 1, kendetegnet ved, at produktet omfatter et interferon og 20 en forbindelse med formlen A som angivet i krav 1 eller et natriumsalt deraf.

3. Produkt ifølge krav 1, kendetegnet ved, at produktet omfatter et interferon og et prodrug af forbindelsen med formlen A, hvilket prodrug har formlen B DK 166715 B1 <Xa, · <cH2>2 2 HO-CH2-CH-CH2-OH hvor X er hydrogen, eller et farmaceutisk acceptabelt salt, phosphates ter eller acylderivat deraf.

4. Produkt ifølge krav 3, 5 kendetegnet ved, at forbindelsen med formlen B er den, hvor X er hydrogen, og hvor de to OH-grupper er i form af acetylderivater .

5. Produkt ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4, kendetegnet ved, at interferonet er fremstillet syntetisk.

6. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det omfatter et interferon og en forbindelse med formlen A som angivet i krav 1 eller et prodrug, et farmaceutisk acceptabelt salt og/eller derivat deraf som angivet i et hvilket som helst af kravene 1-4 sammen med en farmaceutisk accep-15 tabel bærer.

7. Præparat ifølge krav 6, kendetegnet ved, at præparatet er formuleret til topisk påføring på huden og omfatter natriumlaurylsulfat som yderligere bestanddel .

8. Præparat ifølge krav 6 eller 7, kendetegnet ved, at præparatet indeholder 1.000-200.000 enheder interferon pr. mg af forbindelsen med formlen A eller et prodrug eller et farmaceutisk acceptabelt salt og/eller derivat deraf som angivet i et hvilket som helst af kravene 1-4.

9. Anvendelse af et produkt eller et farmaceutisk præparat ifølge et hvilket som helst af kravene 1-8 til fremstilling af et kombinations- DK 166715 B1 præparat til samtidig, separat eller successiv anvendelse ved antiviral terapi.

10. Produkt eller farmaceutisk præparat ifølge et hvilket som helst af kravene 1-8 til anvendelse ved behandling af virusinfektioner.