DE69416629T2

DE69416629T2 - 2-Piperazinon-Verbindungen und deren Verwendung

Info

Publication number: DE69416629T2
Application number: DE69416629T
Authority: DE
Inventors: Hideto Higashiosaka Osaka 577 Fukushi; Hirosada Tsukuba Ibaraki 305 Sugihara; Zenichi Suita Osaka 565 Terashita
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1993-06-17
Filing date: 1994-06-13
Publication date: 1999-07-22
Anticipated expiration: 2014-06-14
Also published as: NO942274D0; US5550131A; DE69416629D1; KR950000683A; FI942881A; AU6477194A; EP0643072B1; HUT70045A; NO942274L; ATE176912T1; CA2126026A1; FI942881A0; CN1098409A; HU9401726D0; EP0643072A1

Description

Diese Erfindung bezieht sich auf neue 2-Piperazinon-1-essigsäureverbindungen und ihre Salze mit einer Hemmaktivität auf die Haftung tierischer Zellen und auf die Verbindungen als wirksame Bestandteile enthaltende Mittel.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist das Bereitstellen therapeutischer Mittel für verschiedene Krankheiten durch allgemein Bekämpfen oder Hemmen der Zellhaftung.
Als an der Haftung an extrazellulärem Substrat von Tierzellen beteiligte Faktoren sind Fibronectin, Vitronectin, Osteopontin, Kollagen, Thrombospondin, Fibrinogen und von Willebrand Faktor bekannt. Diese Proteine schließen -Arg-Gly-Asp- als Zellerkennungsort ein. Dieses Tripeptid wird durch wenigstens ein den Rezeptoren angehörendes Protein, Integrine, erkannt, die heterodimere Proteine sind, die aus mit zwei Membranen kombinierten Untereinheiten bestehen (E. Ruoslahti und M. D. Pierschbacher, Science, 238, 491 (1987)).
Von strukturell verwandten Integrinen, die die Aminosäuresequenz -Arg-Gly-Asp- erkennen, ist bekannt, daß sie an der extrazellulären Oberfläche von Blutplättchen, Endotheliumszellen, Leukozyten, Lymphozyten, Monozyten und Granulozyten exprimieren. Verbindungen mit der Aminosäuresequenz -Arg-Gly- Asp- sind kompetitiv an die Stelle gebunden, die durch ein interzelluläres Haftmolekül gebunden werden soll, um dadurch das Binden der interzellulären Haftmoleküle hemmen. Als derartige Substanzen zum Hemmen der interzellulären Haftung ist zum Beispiel H-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-OH bekannt.
Wenn Blutgefäße verletzt werden, werden Blutplättchen mit zum Beispiel Endotheliumskollagenen aktiviert, was das Binden von Fibrinogen an Blutplättchen, d. h. die Blutplättchenaggregation unter Bilden eines Thrombus bewirkt. Die Wechselwirkung zwischen Blutplättchen und Fibrinogen findet über GP IIb/IIIa statt, wobei dies ein wichtiges kennzeichnendes Merkmal der Blutplättchenaggregation ist. Die Zellhaftung hemmende Substanzen können die Blutplättchenaggregation hemmen, die auf Substanzen wie etwa Thrombin, Epinephrin, ADP und Kollagen zurückzuführen ist, die eine Blutplättchenaggregation verursachen.
Daneben wird von die Zellhaftung hemmenden Substanzen erwartet, daß sie Wirkstoffe zur Unterdrückung der Metastase von Tumorzellen sind (Hemmung der fixierten Haftung an der Stelle, wohin die Tumorzellen gewandert sind).
Lineare oder cyclische Peptide, die die Aminosäuresequenz -Arg-Gly-Asp- (RGD) enthalten, sind zum Beispiel aus Journal of Biological Chemistry (J. Biol. Chem.), 262, 17294 (1987), und JP-A-2 174 797 (1990) als die Zellhaftung hemmende Substanzen bekannt.
Diese vorgenannten bekannten Peptidderivate sind in ihrer Wirkungsstärke nicht befriedigend und ihre orale Absorbierbarkeit ist nicht zufriedenstellend. Da weiter diese Peptidderivate mit Enzymen einschließlich Aminopeptidase, Carboxypeptidase oder verschiedener Typen Endopeptidase, z. B. Serinprotease, hydrolysiert werden, ist ihre Stabilität in einer diese Enzyme enthaltenden Lösung oder in einem lebenden Körper nicht befriedigend. Zur klinischen Anwendung dieser Peptidderivate gibt es daher noch zu lösende Probleme.
Zum anderen werden in der europäischen Patentanmeldung (EPA) mit der Veröffentlichungsnr. 483667 [JP-A-4 264 068 (1992)] und der EPA mit der Veröffentlichungsnr. 505868 Verbindungen mit antithrombotischer Wirkung offenbart, die kein Peptid sind. Es werden Verbindungen mit einer 4- bis 7-gliedrigen cyclischen Alkyleniminogruppe wie etwa ein Pyrrolidinring beziehungsweise Verbindungen mit einem Piperidinring und dergleichen beschrieben. Verbindungen mit einem Piperazinonring und einer Hemmwirkung auf die Zellhaftung werden in der EPA mit der Veröffentlichungsnr. 529858 offenbart. Es wird nach Verbindungen gesucht, die verglichen mit den vorgenannten bekannten Verbindungen mit antithrombotischer Wirkung eine über einen längeren Zeitraum anhaltende höhere Wirkungsstärke aufweisen.
Gegenstand dieser Erfindung ist das Bereitstellen von Verbindungen mit einer die Zellhaftung hemmenden Wirkung, die verglichen mit bekannten Mitteln zum Hemmen der Zellhaftung in kleinerer Dosierung über einen längeren Zeitraum eine höhere Wirkungsstärke besitzen. Die vorliegende Erfindung bezieht sich mit anderen Worten auf neue 2-Piperazinon-1-essigsäureverbindungen, die frei von den vorstehenden Problemen sind, und auf Wirkstoffe, die diese die Zellhaftung hemmenden Wirkungen ausüben und diese Verbindungen als wirksame Bestandteile umfassen.
Genauer bezieht sich die vorliegende Erfindung auf die Verbindungen der Formel
wobei A eine Amidinogruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aminoethylgruppe darstellt, R¹&sup0; eine Spezies darstellt, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einer Nitrogruppe, Halogenatomen, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkenylgruppen, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkinylgruppen, C&sub1;&submin;&sub3;- Alkyloxycarbonylgruppen, einer Hydroxymethylgruppe, Formylgruppe sowie Gruppen der Formel OR¹¹, wobei R¹¹ ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;&submin;&sub5;-Alkyl-, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkenyl-, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkinyl-, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkanoyl-, Carbamoyl- oder Methansulfonylgruppe ist, von denen jede substituiert sein kann, besteht, R¹² und R¹³ jeweils für ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, eine C&sub1;&submin;&sub3;-Alkoxygruppe oder ein Halogenatom stehen, X für eine Hydroxygruppe, p-Hydroxyphenylgruppe oder eine gegebenenfalls veresterte oder amidierte Carboxygruppe steht, Y für eine gegebenenfalls veresterte oder amidierte Carboxygruppe steht und n 1 oder 2 bezeichnet, oder Salze davon [hierin nachstehend werden diese Verbindungen einschließlich der Salze in einigen Fällen einfach Verbindung (I) genannt] und auf die Zellhaftung hemmende Mittel, die diese Verbindungen enthalten.
Als repräsentative Verbindungen der Formel (I) werden Verbindungen der Formel
worin R¹¹ für ein Wasserstoffatom, eine gegebenenfalls substituierte Niederalkylgruppe, eine Niederalkanoylgruppe und eine gegebenenfalls substituierte Carbamoylgruppe oder Methansulfonylgruppe steht; R¹² beziehungsweise R¹³ für ein Wasserstoffatom, eine Hydroxylgruppe, eine Niederalkoxygruppe oder ein Halogenatom stehen; X für eine Hydroxylgruppe, p-Hydroxyphenylgruppe oder eine gegebenenfalls veresterte oder amidierte Carboxylgruppe steht; Y für eine gegebenenfalls veresterte oder amidierte Carboxylgruppe steht und n 1 oder 2 bezeichnet, oder ihre Salze angeführt.
In Formel (I) stellt A eine Amidinogruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aminoethylgruppe dar.
Als durch A dargestellte substituierte Aminoethylgruppen sind die Gruppen bevorzugt, die die entfernbare Gruppe darin entfernen und im Körper in eine physiologisch aktive freie Aminoethylgruppe überführen können, nachdem die Verbindungen (I) mit einer substituierten Aminoethylgruppe als Prodrugs verabreicht wurden. Beispiele des Substituenten der Aminogruppe in der substituierten Aminoethylgruppe schließen Pivaloyloxymethyl, n-Octyloxycarbonyl, n-Hexyloxycarbonyl, n-Octylaminocarbonyl, n-Hexylaminocarbonyl, Tetrahydrofuran-2-yl, Pyrrolidin- 1-ylmethyl, Morpholinomethyl und N,N-Dimethylaminocarbonyloxymethyl ein.
Als für die durch R¹&sup0; dargestellte Gruppe oder das Atom können zum Beispiel eine Nitrogruppe, Halogenatome, Niederalkenylgruppen, Niederalkinylgruppen, Niederalkyloxycarbonylgruppen und über ein Sauerstoffatom gebundene, durch OR¹¹ dargestellte Gruppen angeführt werden. Bevorzugte Beispiele von R¹¹ schließen ein Wasserstoffatom und gegebenenfalls substituierte Niederalkyl-, Niederalkenyl-, Niederalkinyl-, Niederalkanoyl-, Carbamoyl- und Methansulfonylgruppen ein.
Das heißt, R¹&sup0; ist vorzugsweise eine Spezies, die aus einer Gruppe ausgewählt ist, die aus einer Nitrogruppe, Halogenatomen, Niederalkenylgruppen, Niederalkinylgruppen, Niederalkyloxycarbonylgruppen, Hydroxymethylgruppe, Formylgruppe und durch die Formel OR¹¹ (worin R¹¹ ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkyl-, eine Niederalkenyl-, eine Niederalkinyl-, eine Niederalkanoyl-, eine Carbamoyl- und Methansulfonylgruppe ist, wovon jede substituiert sein kann) dargestellten Gruppen besteht.
Genauer ist die bevorzugte Gruppe oder das Atom R¹&sup0; eine Spezies, die aus einer Gruppe ausgewählt ist, die aus einer Hydroxygruppe, gegebenenfalls durch C&sub1;&submin;&sub3;-Alkoxygruppen substituierten C&sub1;&submin;&sub5;-Alkoxygruppen, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkenyloxygruppen, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkinyloxygruppen, Nitrogruppen, Halogenatomen, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkanoyloxygruppen, gegebenenfalls durch C&sub1;&submin;&sub3;-Alkylgruppen substituierten Carbamoyloxygruppen, Methansulfonyloxygruppe, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkenylgruppen, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkinylgruppen und C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyloxycarbonylgruppen besteht. Bevorzugte Beispiele durch R¹¹ dargestellter Niederalkylgruppen schließen geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub5;-Alkylgruppen wie etwa Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, sec- Butyl, tert-Butyl, n-Pentyl und Isopentyl ein, worunter C&sub1;&submin;&sub3;-Alkylgruppen bevorzugt sind.
Beispiele der Substituenten der "Niederalkyl-, Niederalkenyl-, Niederalkinyl-, Niederalkanoyl- und Methansulfonylgruppe, wovon jede substituiert sein kann", schließen eine Hydroxylgruppe, Nieder- (C&sub1;&submin;&sub3;)-alkoxygruppen, Aminogruppe, Mononieder-(C&sub1;&submin;&sub3;)- alkylaminogruppen, Dinieder-(C&sub1;&submin;&sub3;)-alkylaminogruppen, Nieder- (C&sub1;&submin;&sub3;)-alkanoylgruppen, Nieder- (C&sub1;&submin;&sub3;) -alkanoyloxygruppen, Nieder- (C&sub1;&submin;&sub3;)-alkanoylaminogruppen, Nieder-(C&sub1;&submin;&sub3;)-alkoxycarbonylgruppen und gegebenenfalls mit Nieder-(C&sub1;&submin;&sub3;)-alkylgruppen substituierte Carbamoylgruppen ein. Darunter sind Niederalkoxy-(C&sub1;&submin;&sub3;)-gruppen wie etwa Methoxy, Ethoxy und Propyloxy bevorzugt. Beispiele des Substituenten der durch R¹¹ dargestellten Carbamoylgruppe schließen Nieder-(C&sub1;&submin;&sub3;) -alkylgruppen ein.
Bevorzugte Beispiele durch R¹² und R¹³ dargestellter Niederalkoxygruppen und in den Substituenten einer durch das vorstehende RII dargestellten, entsprechenden gegebenenfalls substituierten "Niederalkylgruppe, Niederalkenyl, Niederalkinyl, Niederalkanoyl und Methansulfonyl" schließen C&sub1;&submin;&sub3;-Alkoxygruppen wie etwa Methoxy, Ethoxy und Propoxy ein.
Bevorzugte Beispiele durch R¹¹ dargestellter Niederalkanoylgruppen und in den Substituenten einer durch R¹¹ dargestellten entsprechenden gegebenenfalls substituierten "Niederalkyl-, Niederalkenyl-, Niederalkinyl-, Niederalkanoyl- und Methansulfonylgruppe" sind C&sub1;&submin;&sub3;-Alkanoylgruppen wie etwa Formyl, Acetyl und Propionyl.
Als durch R¹&sup0;, R¹² und R¹³ dargestellte Halogenatome werden Fluor, Chlor, Brom und Iod angeführt. Darunter sind Fluor und Chlor bevorzugt. Als bevorzugte Beispiele von Niederalkylgruppen als Substituenten einer durch R¹¹ dargestellten, gegebenenfalls substituierten Carbamoylgruppe, den von Niederalkylgruppen in durch R¹&sup0; dargestellten Niederalkyloxycarbonylgruppen und den von Niederalkylgruppen als Substituenten einer substituierten Aminogruppe und substituierten Carbamoylgruppe als Substituenten in der durch R¹¹ dargestellten, entsprechenden gegebenenfalls substituierten Niederalkyl-, Niederalkenyl-, Niederalkinyl-, Niederalkanoyl- und Methansulfonylgruppe werden C&sub1;&submin;&sub3;-Niederalkylgruppen wie etwa Methyl, Ethyl, n-Propyl und Isopropyl angeführt.
Bevorzugte Beispiele durch R¹&sup0; und R¹¹ dargestellter Niederalkenylgruppen sind C&sub2;&submin;&sub3;-Alkenylgruppen wie etwa Vinyl, Allyl und 1-Propenyl.
Bevorzugte Beispiele durch R¹&sup0; und R¹¹ dargestellter Niederalkinylgruppen sind C&sub2;&submin;&sub3;-Alkinylgruppen, die durch Ethinyl und Propargyl veranschaulicht werden.
Unter den vorstehend angeführten Verbindungen sind insbesondere die Verbindungen der Formel (I) bevorzugt, bei denen R¹&sup0; eine Hydroxylgruppe oder Methoxygruppe ist.
Ferner sind die Verbindungen der Formel (I) bevorzugt, worin R¹&sup0; eine Ethoxygruppe, Methoxyethoxygruppe, Propoxygruppe, Pro pargyloxygruppe, Allyloxygruppe, Fluoratom oder Chloratom ist. Darunter sind eine Ethoxygruppe, Propargyloxygruppe, Allyloxygruppe und Fluor als R¹&sup0; bevorzugt.
Bezüglich R¹² und R¹³ sind die Verbindungen der Formel (I) bevorzugt, worin sowohl R¹² und R¹³ ein Wasserstoffatom sind.
Bezüglich n sind die Verbindungen der Formel (I) bevorzugt, worin n 1 bezeichnet.
Darunter sind insbesondere die Verbindungen der Formel (I) bevorzugt, worin A eine Amidinogruppe ist, R¹&sup0; eine Hydroxylgruppe oder Methoxygruppe ist, sowohl R¹² als auch R¹³ ein Wasserstoffatom sind und n 1 bezeichnet.
Ferner sind die Verbindungen der Formel (I) bevorzugt, worin A eine Amidinogruppe ist, R¹&sup0; eine Ethoxygruppe, Propargyloxygruppe, Allyloxygruppe oder ein Fluoratom ist, sowohl R¹² als auch R¹³ ein Wasserstoff sind und n 1 bezeichnet.
Die anderen bevorzugten Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I), worin A eine Aminoethylgruppe ist, R¹&sup0; eine Hydroxylgruppe oder Methoxygruppe ist; sowohl R¹² als auch R'3 ein Wasserstoffatom sind und n 1 bezeichnet.
Die anderen bevorzugten Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I), worin A eine Aminoethylgruppe ist, R¹&sup0; eine Ethoxygruppe, Propargyloxygruppe, Allyloxygruppe oder ein Fluoratom ist, sowohl R'2 als auch R¹³ ein Wasserstoffatom sind und n 1 bezeichnet.
Als durch X und Y dargestellte, gegebenenfalls veresterte oder amidierte Carboxylgruppen sind die Gruppen bevorzugt, die im Körper überführbar sind, nachdem die Verbindung (I) als Prodrug verabreicht wurde, wodurch die Verbindung (I) in die ent sprechende in physiologisch aktiver Form überführt wird. Die durch X und Y dargestellten, gegebenenfalls veresterten oder amidierten Carboxylgruppen werden jeweils durch die folgenden Formeln
dargestellt. R¹ und R² stehen allgemein unabhängig für eine Hydroxylgruppe, C&sub1;&submin;&sub8;-Alkoxylgruppe (z. B. Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Butoxy), eine Niederalkenyloxygruppe, zum Beispiel C&sub3;&submin;&sub1;&sub2;- Alkenyloxygruppe wie etwa Allyloxy und Butenyloxy, Aralkyloxygruppe (eine Phenylniederalkyloxygruppe, deren Niederalkyl- Struktureinheit etwa 1 bis 4 Kohlenstoffatome aufweist, wie etwa Benzyloxy, Phenethyloxy und 3-Phenylpropyloxy) oder gegebenenfalls substituierte Aminogruppen, die jeweils durch -NR³R&sup4; und -NR&sup5;R&sup6; dargestellt werden. In NR³R&sup4; und NR&sup5;R&sup6; stehen R³ und R&sup4; und R&sup5; und R&sup6; unabhängig für ein Wasserstoffatom, eine Niederalkylgruppe (eine C&sub1;&submin;&sub6;-Niederalkylgruppe wie etwa Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl und Hexyl), C&sub3;&submin;&sub8;-Alkenylgruppe (z. B. Allyl, 2- Butenyl und 3-Pentenyl) oder C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkylgruppe (z. B. Benzyl, Phenethyl, Phenylpropyl und Pyridylmethyl) und die Arylgruppe in der Aralkylgruppe kann unsubstituiert oder mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sein. Beispiele der Substituenten schließen Nitro, Halogen (Chlor, Fluor, Brom), eine Niederalkylgruppe (Methyl, Ethyl, Propyl) und eine Niederalkoxylgruppe (Methoxy, Ethoxy, Propoxy) ein.
Die Verbindung (I) dieser Erfindung kann zu einer oral verabreichbaren Zubereitung vom Prodrugtyp formuliert werden und in diesem Falle ist es bevorzugt, als vorgenannte R¹ und R² eine Hydroxylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Amino- [z. B. Amino, N-Nieder-(C&sub1;&submin;&sub4;)-alkyl amino und N,N-Dinieder-(C&sub1;&submin;&sub4;)- alkylamino)] oder eine gegebenenfalls substituierte Alkoxylgruppe [z. B. eine Nieder-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkoxylgruppe, deren Alkylstruktureinheit gegebenenfalls mit Hydroxy oder einem gegebenenfalls substituierten Amino (z. B. Amino, Dimethylamino, Diethylamino, Piperidino oder Morpholino), Halogen, Nieder- (C&sub1;&submin;&sub6;)-alkylthio, Nieder-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkyloxycarbonyl (z. B. Isobutyloxycarbonyl), Propyliden, 3-Phthalidyliden, gegebenenfalls substituiertem Aminocarbonyl oder gegebenenfalls substituiertem Dioxolenyl (z. B. 5-Methyl-2-oxo-1,3-dioxolen-4-yl) substituiert ist] oder eine durch die Formel -OCH(R&sup7;)OCOR&sup8; dargestellte Gruppe [worin R&sup7; für ein Wasserstoffatom, eine geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;-Niederalkylgruppe (z. B. Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, t-Butyl, n-Pentyl, Isopentyl und Neopentyl) oder eine C&sub5;&submin;&sub7;-Cycloalkylgruppe (z. B. Cyclopentyl, Cyclohexyl oder Cycloheptyl) steht und Re für eine geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;-Niederalkylgruppe (z. B. Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, sec- Butyl, t-Butyl, n-Pentyl, Isopentyl und Neopentyl), eine C&sub2;&submin;&sub8;- Niederalkenylgruppe (z. B. Vinyl, Propenyl, Allyl und Isopropenyl), eine C&sub5;&submin;&sub7;-Cycloalkylgruppe (z. B. Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl), eine mit einer C&sub5;&submin;&sub7;-Cycloalkylgruppe (z. B. Cyclopentyl, Cyclohexyl oder Cycloheptyl) oder einer Arylgruppe wie etwa Phenylgruppe (z. B. Benzyl, p-Chlorbenzyl, Phenethyl, Cyclopentylmethyl und Cyclohexylmethyl) substituierte C&sub1;&submin;&sub3;-Niederalkylgruppe, eine mit einer C&sub5;&submin;&sub7;-Cycloalkylgruppe (z. B. Cyclopentyl, Cyclohexyl oder Cycloheptyl) oder einer Arylgruppe wie etwa Phenylgruppe (z. B. die mit einer Alkenylstruktureinheit wie etwa Vinyl, Propenyl, Allyl oder Isopropenyl, die durch Cinnamyl veranschaulicht wird) substituierte C&sub2;&submin;&sub3;-Niederalkenylgruppe, eine Arylgruppe wie etwa eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe (z. B. Phenyl, p-Tolyl und Naphthyl), eine geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;-Niederalkoxylgruppe (z. B. Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy, n-Butoxy, Isobutoxy, sec-Butoxy, t-Butoxy, n-Pentyloxy, Isopentyloxy und Neopentyloxy), eine geradkettige oder verzweigte C&sub2;&submin;&sub8;-Niederalkenyloxygruppe (z. B. Allyloxy und Isobuteloxy), eine C&sub5;&submin;&sub7;-Cycloalkyloxygruppe (z. B. Cyclopentyloxy, Cyclohexyloxy und Cycloheptyloxy), eine mit einer C&sub5;&submin;&sub7;-Cycloalkyloxygruppe (z. B. Cyclopentyl, Cyclohexyl oder Cyclohep tyl) oder einer Arylgruppe wie etwa gegebenenfalls substituiertem Phenyl (z. B. Gruppen mit einer Alkoxystruktureinheit wie etwa Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy oder Isopropoxy einschließlich Benzyloxy, Phenethyloxy, Cyclopentylmethyloxy und Cyclohexylmethyloxy) substituierte C&sub1;&submin;&sub3;-Niederalkoxylgruppe, eine mit einer C&sub5;&submin;&sub7;-Cycloalkylgruppe (z. B. Cyclopentyl, Cyclohexyl oder Cycloheptyl) oder mit einer Arylgruppe wie etwa gegebenenfalls substituiertem Phenyl (z. B. die mit einer Alkenyloxystruktureinheit wie etwa Vinyloxy, Allyloxy oder Isopropenyloxy, die durch Cinnamyloxy veranschaulicht werden) substituierte C&sub2;&submin;&sub3;-Niederalkenyloxylgruppe oder eine Aryloxygruppe wie etwa eine gegebenenfalls substituierte Phenoxygruppe (z. B. Phenoxy, p-Nitrophenoxy und Naphthoxy) steht] eingeführt.
Insbesondere schließen bevorzugte Beispiele veresterter Carboxylgruppen als durch Y dargestellte veresterte Carboxylgruppe im Falle des Verwendens der Verbindung (I) als Prodrug -COOMe, -COOEt, -COOtBu, -COOPr, Pivaloyloxymethoxycarbonyl, 1-(Cyclohexyloxycarbonyloxy)ethoxycarbonyl, 5-Methyl-2-oxo- 1,3-dioxolen-4-ylmethoxycarbonyl, Acetoxymethyloxycarbonyl, Propionyloxymethoxycarbonyl, n-Butyryloxymethoxycarbonyl, Isobutyryloxymethoxycarbonyl, 1-(Ethoxycarbonyloxy)ethoxycarbonyl, 1-(Acetyloxy)ethoxycarbonyl, 1-(Isobutyryloxy)ethoxycarbonyl, Cyclohexylcarbonyloxymethoxycarbonyl, Benzoyloxymethoxycarbonyl, Cinnamoylcarbonyl, Cyclopentylcarbonyloxymethoxycarbonyl, N,N-Dimethylcarbonylmethoxy, 2-(Isobutyloxycarbonyl)-2-propylidenethoxycarbonyl, (3-Phthalidyliden)ethoxycarbonyl ein.
In Formel (I) sind als X unter anderen -COOH, -COOCH&sub3; und -CONH&sub2; besonders bevorzugt. Als Y ist -COOH oder eine Gruppe, die im lebenden Körper in -COOH überführbar ist, bevorzugt und als n ist 1 bevorzugt.
Ausgezeichnet in der Aktivität sind Verbindungen der Formel (I), worin X -COOCH&sub3; ist, Y -COOH oder eine Gruppe ist, die im lebenden Körper in -COOH überführbar ist, und A, R¹&sup0;, R¹², R¹³ beziehungsweise n eine der vorgenannten bevorzugten Gruppen und Atome ist.
Die Verbindung (I) dieser Erfindung weist im Molekül einen oder mehr asymmetrische Kohlenstoffe auf und sowohl R-konfigurierte als auch S-konfigurierte sind in der vorliegenden Erfindung eingeschlossen.
Verbindung (I) kann übrigens hydratisiert sein und die Verbindung (I) und ihr Hydrat werden hierin nachstehend zusammen als Verbindung (I) bezeichnet.
Beispiele der Salze der Verbindung (I) schließen Salze einer anorganischen Säure wie etwa das Hydrochlorid, Hydrobromid, Sulfat, Nitrat und Phosphat, Salze einer organischen Säure wie etwa das Acetat, Tartrat, Citrat, Fumarat, Maleat, Toluolsulfonat und Methansulfonat, Metallsalze wie etwa das Natriumsalz, Kaliumsalz, Calciumsalz und Aluminiumsalz und Salze mit einer Base wie etwa das Triethylaminsalz, Guanidinsalz, Ammoniumsalz, Hydrazinsalz, Chininsalz und Cinchoninsalz ein, die pharmazeutisch annehmbar sind.
Spezielle Beispiele bevorzugter Verbindungen schließen (S)-4- (4-Amidinobenzoyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure, (S)-4-(4-Amidinobenzoyl-L-tyrosyl)-3- methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-hydrochlorid und (S)-4-(4-Amidinobenzoyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-methansulfonat, (S)-4-(4-Amidinobenzoyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure, (S)-4-(4-Amidinobenzoyl-O-ethyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure und (S)-4-{4-(2-Aminoethyl)benzoyl-O-methyl-L-tyrosyl}-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure ein.
Die Verbindung (I) dieser Erfindung kann zum Beispiel durch die nachstehend beschriebenen Verfahren hergestellt werden. Bei der folgenden Beschreibung der Herstellungsverfahren können R¹&sup0;, R¹² und R¹³ in den Ausgangsverbindungen und Zwischenverbindungen Schutzgruppen aufweisen, die herkömmlicherweise auf dem Peptidgebiet verwendet werden und in der folgenden Beschreibung sind diese Schutzgruppen ebenfalls eingeschlossen. Es ist unnötig anzumerken, daß die Einführung dieser funktionellen Gruppen und deren Eliminierung gemäß herkömmlichen Mitteln ausgeführt werden.
Die Verbindung (I) kann durch
a) Unterziehen einer Verbindung, die durch die Formel
dargestellt wird [wobei W ein Halogenatom darstellt], der Kondensation mit einer Verbindung, die durch die Formel
dargestellt wird [wobei jedes Symbol von derselben Bedeutung wie oben definiert ist]; oder
b) Unterziehen einer Verbindung, die durch die Formel
dargestellt wird [wobei jedes Symbol von derselben Bedeutung wie oben definiert ist], der Kondensation mit einer Verbindung, die durch die Formel
dargestellt wird [wobei jedes Symbol von derselben Bedeutung wie oben definiert ist], hergestellt werden.
Die Kondensationsreaktion bei den vorstehenden Verfahren a) und b) zum Herstellen der Verbindung (I) dieser Erfindung kann durch eine Bildungsreaktion für eine Amidbindung bei einer herkömmlichen Peptidsynthese, zum Beispiel das Verfahren unter Verwenden eines aktiven Esters, gemischten Säureanhydrids oder Säurechlorids, durchgeführt werden. Die Kondensationsreaktion zwischen der Verbindung (11) und der Verbindung (III) oder der Verbindung (IV) und der Verbindung (V) kann zum Beispiel durch Unterziehen der Verbindung (11) oder der Verbindung (IV) der Kondensation mit einem Phenol wie etwa 2,4,5-Trichlorphenol, Pentachlorphenol, 2-Nitrophenol oder 4-Nitrophenol oder einer N-Hydroxyverbindung wie etwa N-Succinimid, N-Hydroxy-5-norbornen-endo-2,3-dicarboxyimid (HONB), 1-Hydroxybenzotriazol (HOBT) oder N-Hydroxypiperidin in Gegenwart eines Katalysators wie etwa Dicyclohexylcarbodiimid unter Überführen in einen aktiven Ester davon, gefolgt von der Kondensation ausgeführt werden. Wahlweise läßt man die Verbindung (11) oder die Verbindung (IV) mit Chlorameisensäureisobutylester unter Ergeben eines gemischten Säureanhydrids reagieren, das anschließend der Kondensation unterzogen wird.
Die Kondensation zwischen der Verbindung (11) und der Verbindung (III) oder zwischen der Verbindung (IV) und der Verbindung (V) kann auch durch Verwenden nur eines Peptidbildungsreagenzes wie etwa Dicyclohexylcarbodiimid, N,N'-Carbonyldiimidazol, Diphenylphosphorylazid oder Diethylcyanophosphat ausgeführt werden.
Bei der Kondensationsreaktion liegt die in der Formel der Verbindung (II), (II') oder (IV) vorhandene Amidinogruppe vorzugsweise als Salz einer anorganischen Säure (z. B. Chlorwasserstoff, Schwefelsäure, Salpetersäure oder Bromwasserstoffsäure) oder geschützt mit einer tert-Butoxycarbonylgruppe oder Benzyloxycarbonylgruppe vor.
Jede vorgenannte Kondensationsreaktion kann durch die Zugabe vorzugsweise einer organischen Hase (z. B. Triethylamin, N-Methylpiperidin, 4-N,N-Dimethylaminopyridin) oder einer anorganischen Base (Natriumhydrogencarbonat, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat) gefördert werden. Die Reaktionstemperatur reicht üblicherweise von -20 bis +50ºC, vorzugsweise von 0ºC bis etwa Raumtemperatur. Beispiele üblicherweise eingesetzter Lösungsmittel schließen Wasser, Dioxan, Tetrahydrofuran, Acetonitril, Pyridin, N,N-Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, N-Methylpyrrolidon, Chloroform und Methylenchlorid ein und diese können allein oder als Gemisch verwendet werden.
Die Schutzgruppe der in dem Produkt aus den vorstehenden Verfahren (Benzylgruppe oder tert-Butylgruppe, welches die Schutzgruppe der Carboxylgruppe von X oder Y in der allgemeinen Formel (I) ist) und/oder die Schutzgruppe der phenolischen Hydroxylgruppe oder alkoholischen Hydroxylgruppe (Benzylgruppe oder tert-Butylgruppe, welches die Schutzgruppe der Hydroxylgruppe von R¹&sup0;, R¹², R¹³ und X in der allgemeinen, Formel (I) ist) kann durch ein an sich bekanntes Verfahren entfernt werden. Zum Beispiel kann eine Verbindung mit einer Benzylestergruppe oder einer Benzylethergruppe durch Unterziehen der Verbindung der Hydrierung in Gegenwart eines Edelmetallkatalysators wie etwa Palladium oder Platin in ein Carbonsäurederivat überführt werden und eine Verbindung mit einer tert-Butylestergruppe oder einer tert-Butylethergruppe kann durch Umsetzen der Verbindung mit einer Säure wie etwa Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in ein Carbonsäurederivat überführt werden.
Obschon Salze der Verbindung (I) durch die Reaktion zum Herstellen der Verbindung (I) selbst erhalten werden können, können sie auch nötigenfalls durch Zusetzen einer Säure, Alkalie oder Base hergestellt werden.
Die so erhaltene Zielverbindung (I) dieser Erfindung kann aus dem Reaktionsgemisch durch ein herkömmliches Trenn- und Reinigungsmittel wie etwa Extraktion, Einengen, Neutralisieren, Umkristallisation, Säulenchromatographie und Dünnschichtchromatographie aus dem Reaktionsgemisch isoliert werden.
In Verbindung (I) können wenigstens zwei Stereoisomere zugegen sein. Diese einzelnen Isomere oder ein Gemisch davon sind selbstverständlich im Umfang der vorliegenden Erfindung eingeschlossen und diese Isomere können gewünschtenfalls einzeln hergestellt werden.
Durch Ausführen der folgenden Reaktionen unter entsprechendem Verwenden eines einzelnen Isomers der vorgenannten Ausgangsverbindungen (III), (IV) oder (V) und eines einzelnen Isomers der nachstehend angeführten Ausgangsverbindungen (IX), (X), (XII), (XIII), (XIV) oder (XV) kann ein einzelnes optisches Isomer der Verbindung (I) erhalten werden. Wenn weiter das Produkt ein Gemisch aus zwei oder mehr Isomeren ist, kann es durch ein herkömmliches Trennverfahren, zum Beispiel ein Verfahren zum Bewirken der Bildung eines Salzes mit einer optisch aktiven Säure (z. B. Camphersulfonsäure, Weinsäure und Dibenzoylweinsäure), einer optisch aktiven Base (z. B. Cinchonin, Cinchonidin, Chinin, Chinidin, α-Methylbenzylamin und Dehydroabietylamin) oder verschiedene chromatographische Mittel oder fraktionierte Umkristallisation in entsprechende Isomere getrennt werden.
Die Ausgangsverbindungen (II) und (II') in der vorliegenden Erfindung sind an sich bekannte Verbindungen und die durch die Formeln (III), (IV) und (V) dargestellten Ausgangsverbindungen können in einer zu bekannten Verfahren analogen Weise hergestellt werden und sie können fallabhängig durch die durch die folgenden Reaktionsformeln dargestellten Verfahren hergestellt werden. In der folgenden Beschreibung wird die Verbindung der Formel (III) in einigen Fällen einfach als (III) bezeichnet und dasselbe wird in einigen Fällen auf andere Verbindungen angewandt.
In den vorstehenden Reaktionsformeln ist R eine Aminoschutzgruppe in der Aminosäure und steht zum Beispiel für eine Benzyloxycarbonylgruppe oder tert-Butoxycarbonylgruppe. R¹&sup0;, R¹², R¹³ und X können eine Schutzgruppe der phenolischen Hydroxylgruppe oder alkoholischen Hydroxylgruppe aufweisen. Beispiele der Schutzgruppe schließen eine tert-Butylgruppe und eine gegebenenfalls substituierte Benzylgruppe ein. Die Carboxylgruppe von X oder Y kann eine Schutzgruppe wie etwa Benzylgruppe oder tert-Butylgruppe aufweisen.
Das durch die vorstehenden Reaktionsformeln dargestellte Verfahren zum Herstellen der Verbindung (III) wird genauer erläutert. Die Reaktion zum Erhalten der Verbindung (VIII), indem man (VI) mit (VII) reagieren läßt, ist eine herkömmliche Alkylierung einer Aminogruppe. Genauer gesagt, läßt man die Verbindung (VI) mit der Verbindung (VII) üblicherweise bei von 0 bis +100ºC reichenden Temperaturen in Gegenwart einer Base (z. B. eine anorganische Base wie etwa Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Kaliumhydrogencarbonat oder Cesiumfluorid oder eine organische Base wie etwa Triethylamin, Pyridin oder 4-N,N- Dimethylaminopyridin) unter Ergeben der Verbindung (VIII) reagieren. Als Reaktionslösungsmittel wird ein organisches Lösungsmittel wie etwa Acetonitril, N,N-Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Toluol und Methylenchlorid angeführt.
Die nachfolgende Herstellung der Verbindung (X) durch Unterziehen der Verbindung (VIII) der Kondensation mit dem N-geschützten Derivat einer Aminosäure wird durch eine herkömmliche Reaktion zur Bildung einer Peptidbindung einer Aminosäure ausgeführt. Die Verbindung (X) kann unter im wesentlichen denselben Reaktionsbedingungen wie den bei der Kondensation der Verbindung (11) mit der Verbindung (III) hergestellt werden.
Die Cyclisierung der auf diese Weise erhaltenen Verbindung (X) zur cyclischen Verbindung (XI) ist die Cyclisierungsreaktion mit einem sauren Katalysator. Als Katalysator wird zum Beispiel von einer organischen Sulfonsäure wie etwa p-Toluolsulfonsäure, Camphersulfonsäure und Methansulfonsäure Gebrauch gemacht. Die Reaktion wird durch Unterziehen der Verbindung (X) der Reaktion üblicherweise in einem Lösungsmittel wie etwa Toluol, Benzol, Essigsäureethylester oder 1,2-Dichlorethan bei von 0 bis +100ºC, vorzugsweise von +30 bis +80ºC reichenden Temperaturen unter Ergeben der Verbindung (XI) ausgeführt.
Die nachfolgende Reaktion der Verbindung (XI) zur Verbindung (XII) ist eine Reaktion zum Reduzieren einer Doppelbindung und die Verbindung (XII) kann leicht durch zum Beispiel eine katalytische Reduktion unter Verwenden eines Metalls wie etwa Platin, Palladium oder Raney-Nickel oder ein Gemisch davon mit einem wahlfreien Träger als Katalysator oder eine Reduktion unter Verwenden eines Metallhydrids, zum Beispiel Natriumborhydrid oder Natriumcyanborhydrid, hergestellt werden. Die vorstehenden Reaktionen werden üblicherweise in Gegenwart eines organischen Lösungsmittels (z. B. Methanol, Ethanol, Dioxan, Essigsäureethylester) ausgeführt. Obschon die Reaktionstemperatur mit dem Reaktionsmittel schwankt, ist ein bevorzugter Bereich im allgemeinen von etwa -20 bis etwa +100ºC. Obschon diese Reaktion unter Normaldruck zufriedenstellend abläuft, kann sie fallabhängig unter erhöhtem Druck ausgeführt werden.
Wenn R eine Benzyloxycarbonylgruppe ist und die Reduktion katalytisch ausgeführt wird, verläuft die Reaktion des Entfernens der Schutzgruppe von R gleichzeitig und die Verbindung (V) kann auf einmal erhalten werden.
Reaktionen zum Entfernen von Schutzgruppen in (XII) zu (V) und (XIV) zu (III) sind herkömmliche Reaktionen zum Entfernen von Schutzgruppen von Aminogruppen in einem Peptid und in den Fällen, wo R für eine Benzyloxycarbonylgruppe steht, kann die Schutzgruppe durch katalytische Reduktion unter Verwenden eines Metalls wie etwa Platin, Palladium oder Rhodium als Katalysator entfernt werden. Wenn weiter R für eine tert-Butoxycarbonylgruppe steht, kann die Schutzgruppe leicht durch die Verwendung einer Säure wie etwa Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in einem organischen Lösungsmittel wie etwa Methanol, Ethanol, Essigsäureethylester oder Dioxan entfernt werden.
Die Kondensationsreaktion der Verbindung (V) mit einem Aminosäurederivat (XIII) und die der Verbindung (II') mit der Verbindung (XV) sind Reaktionen zum Bilden einer Amidbindung. Diese Reaktionen können in im wesentlichen derselben Weise wie bei der Kondensation der Verbindung (11) mit der Verbindung (III) ausgeführt werden.
Die durch die Formel (XIII) dargestellten Ausgangsverbindungen können durch zum Beispiel zu den in J. Am. Chem. Soc., 77 (1955), offenbarten analoge Verfahren hergestellt werden. Weiter kann die Verbindung (XIII), deren R¹&sup0; substituiertes Niederalkoxy, Niederalkenyloxy, Niederalkinyloxy, Niederalkanoyloxy, Carbamoyloxy beziehungsweise Alkylsulfonyloxy ist, im allgemeinen dadurch hergestellt werden, indem man Tyrosin oder 3,4-Dihydroxyphenylalanin (DOPA), deren Aminogruppe mit einer Benzyloxycarbonylgruppe oder tert-Butoxycarbonylgruppe geschützt ist, mit einem Dialkylsulfat wie etwa Dimethylsulfat oder Diethylsulfat oder Alkylhalogenid, Säureanhydrid, Alkylisocyanat, Alkylsulfonylhalogenid oder dergleichen reagieren läßt. Die Reaktion kann in Gegenwart einer Base (z. B. anorganische Base einschließlich Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Natriumhydrogencarbonat und Cesiumfluorid oder eine organische Base einschließlich Triethylamin, Pyridin, 4-N,N-Dimethylaminopyridin oder dergleichen) üblicherweise bei von etwa 30 bis etwa 100ºC reichenden Temperaturen ausgeführt werden. Als Reaktionslösungsmittel wird zum Beispiel von Acetonitril, N,N-Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Toluol, Methylenchlorid oder dergleichen Gebrauch gemacht.
Weiter kann die Verbindung (XIII), deren R¹&sup0; für eine Niederalkenylgruppe, eine Niederalkinylgruppe oder eine Niederalkyloxycarbonylgruppe steht, gemäß einem an sich bekannten Verfahren, und zwar dem in {J. Chem. Soc., Chem. Commun., 904 (1987), J. Am. Chem. Soc., 109, 547 (1987), oder J. Org. Chem., 48, 3252 (1983)} offenbarten Verfahren hergestellt werden.
Unter den durch die Formel (XIII) dargestellten Verbindungen kann bei denen, worin R¹&sup0; für eine Nitrogruppe oder ein Halogenatom steht und R¹² beziehungsweise R¹³ für ein Wasserstoffatom steht, von bekannten, im Handel erhältlichen Verbindungen Gebrauch gemacht werden.
Im allgemeinen kann die durch die Formel (XIII) dargestellte Verbindung durch im wesentlichen dasselbe, zur Synthese einer alpha-Aminosäure einsetzbare Verfahren, zum Beispiel J. Am. Chem. Soc., 70, 1451 (1948), Proc. Chem. Soc., 117 (1962), und J. Am. Chem. Soc., 65, 2211 (1943), hergestellt werden. Weiter können die jeweiligen optischen Isomeren der durch die Formel (XIII) dargestellten Verbindung durch im wesentlichen diesel ben, in bekannten Literaturstellen, zum Beispiel US-3 841 966 (1949), offenbarten Verfahren hergestellt werden.
Unter den durch die Formel (XIV) dargestellten Verbindungen kann die Verbindung, deren R¹&sup0; eine Formylgruppe ist, durch Unterziehen der Verbindung (XIV), deren R¹&sup0; eine Vinylgruppe ist, der Oxidation mit Rutheniumtetroxid hergestellt werden. Unter den durch die Formel (XIV) dargestellten Verbindungen kann eine Verbindung, deren R¹&sup0; eine Hydroxymethylgruppe ist, durch Unterziehen der Verbindung (XIV), worin R¹&sup0; eine Formylgruppe ist, der Reduktion mit Natriumborhydrid hergestellt werden.
Unter den durch die Formel (XIV) dargestellten Verbindungen kann eine Verbindung, worin Y für eine veresterte Carboxylgruppe steht und die als Prodrug einsetzbar ist, im wesentlichen gemäß dem aus Literaturzitaten, nämlich unter anderen Chem. Pharm. Bull., 31, 2698 (1983), Chem. Pharm. Bull., 32, 2241 (1984), J. Antibiotics, 40, 81 (1987), J. Antibiotics, 45, 1358 (19920), bekannten Verfahren hergestellt werden. Weiter können die Verbindungen im allgemeinen dadurch hergestellt werden, indem man die Verbindung (XVI), worin Y eine Carboxylgruppe ist, mit einer bekannten halogenierten organischen Verbindung, die zum Beispiel in {Chem. Pharm. Bull., 31, 2698 (1983), Chem. Pharm. Bull., 32, 2241 (1948), J. Antibiotics, 40, 81 (1987), und J. Antibiotics, 45, 1358 (1992)} offenbart ist, in Gegenwart einer Base (z. B. eine anorganische Base wie etwa Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Natriumhydrogencarbonat oder Cesiumfluorid oder eine organische Base wie etwa Triethylamin, Pyridin oder 4-N,N- Dimethylaminopyridin) üblicherweise bei von -20 bis 100ºC reichenden Temperaturen reagieren läßt Als Reaktionslösungsmittel werden N,N-Dimethylformamid, Acetonitril, Methylenchlorid, Essigsäureethylester, Tetrahydrofuran oder dergleichen angeführt.
Bei den vorgenannten Verfahren zum Herstellen der Verbindung (I) und ihrer Zwischenprodukte können die zu den Reaktionen einzusetzenden Verbindungen, solange keine unerwünschten Wirkungen erzeugt werden, in Form von Salzen, zum Beispiel ein Salz einer anorganischen Säure wie etwa das Hydrochlorid, Hydrobromid, Sulfat, Nitrat oder Phosphat, ein Salz einer organischen Säure wie etwa das Acetat, Tartrat, Citrat, Fumarat, Maleat, Toluolsulfonat oder Methansulfonat, ein Metallsalz wie etwa das Natriumsalz, Kaliumsalz, Calciumsalz oder Aluminiumsalz und ein Salz mit einer Base wie etwa das Triethylaminsalz, Guanidinsalz, Hydrazinsalz, Chininsalz oder Cinchoninsalz vorliegen.
Wenn die Verbindung (I) durch das vorgenannte Herstellungsverfahren in freier Form erhalten wird, kann sie durch ein herkömmliches Verfahren in ein Salz derselben überführt werden und wenn ein Salz der Verbindung (I) erhalten wird, kann es durch ein herkömmliches Verfahren in die Verbindung (I) überführt werden.
Die Verbindungen der Formel (I) (einschließlich ihrer Hydrate) sind von niedriger Toxizität und werden sicher verwendet und sie hemmen sowohl das Binden von Fibronectin und von Willebrand Faktor an den Fibrinogenrezeptor von Blutplättchen (Glycoprotein IIb/IIIa) als auch die verschiedenen Typen des Bindens der vorgenannten Haftproteine und anderer Haftproteine wie etwa Vitronectinkollagen und Laminin an die entsprechenden Rezeptoren der Zelloberfläche.
Die Verbindungen dieser Erfindung üben somit einen Einfluß auf die Zelle-Zelle- und Zelle-Matrix-Wechselwirkungen aus. Sie verhindern insbesondere die Entwicklung von Blutplättchenthrombin und können in der Therapie oder Prophylaxe von Krankheiten wie etwa peripherer Arterienverschluß, akuter Myokardinfarkt (AMI), tiefer Venenthrombose, Lungenembolie, Aneu rysma dissecans, transitorische ischämische Attacke (TIA), Schlaganfall und andere Verschlußkrankheiten, instabile Angina, Verbrauchskoagulopathie (DIC), Sepsis, operativer oder infektiöser Schock, postoperatives und postpartales Trauma, chirurgische kardiopulmonale Bypass-Operation, unverträgliche Bluttransfusion, Amotio placentae, thrombotische thrombozytopenische Purpura (TTP), akute oder chronische Nierenerkrankungen, die durch Hyperagglutination hervorgerufen wurden, wie etwa Schlangengift und immunologische Erkrankungen, Entzündungen, Arteriosklerose, hämolytisches urämisches Syndrom, symmetrische periphere Nekrose und Dekubitus in Säugern einschließlich Menschen verwendet werden.
Weiter kann die Verbindung (I) dieser Erfindung zum Verstärken der Wirkung eines thrombolytischen Mittels und zum Verhindern eines erneuten Verschlusses, Verhindern eines erneuten Verschlusses nach PTCA, Verhindern von Thrombozytopenie und Verhindern eines durch künstliche Blutgefäße und Organe verursachten Thrombus verwendet werden und sie hemmt daneben die Metastase und kann als Antitumormittel verwendet werden.
Medizinische Zusammensetzungen, die Verbindungen der Formel (I) (einschließlich ihrer Hydrate und Salze) enthalten, können zum Beispiel oral in Form von Tabletten, Lacktabletten, zukkerüberzogene Tabletten, Hart- und Weichgelatinekapseln, Lösungen, Emulsionen oder Suspensionen oder rektal zum Beispiel in Form von Suppositorien oder als Spray verabreicht werden. Die Zubereitungen in den vorstehend angeführten verschiedenen Formen können jeweils durch ein herkömmliches Verfahren, nötigenfalls unter Verwendung von Exzipienten und dergleichen hergestellt werden. Die Verabreichung kann jedoch auch nichtoral, zum Beispiel in Form injizierbarer Lösungen ausgeführt werden.
Zum Herstellen von Tabletten, Lacktabletten, zuckerüberzogenen Tabletten und Hartgelatinekapseln kann die aktive Verbindung mit pharmazeutisch annehmbaren anorganischen und organischen Arzneimittelhilfsstoffen gemischt werden. Typische Beispiele derartiger Arzneimittelhilfsstoffe, die für Tabletten, zuckerüberzogene Tabletten und Hartgelatinekapseln verwendet werden können, schließen Lactose, Maisstärke oder Derivate davon, Talkum und Stearinsäure oder Salze davon ein. Beispiele geeigneter Arzneimittelhilfsstoffe für Weichgelatinekapseln sind Pflanzenöl, Wachs, Fett und ein halbfestes oder flüssiges Polyol. Bei Weichgelatinekapseln sind jedoch keinerlei Arzneimittelhilfsstoffe notwendig, wenn die kennzeichnenden Merkmale der aktiven Verbindung geeignet sind.
Beispiele geeigneter Arzneimittelhilfsstoffe zur Herstellung von Lösungen und sirupartigen Zubereitungen sind Wasser, Polyol, Sucrose, Invertzucker und Glucose. Beispiele geeigneter Arzneimittelhilfsstoffe für injizierbare Lösungen sind Wasser, Alkohol, Polyol, Glycerin und Pflanzenöl.
Geeignete Beispiele für Suppositorien sind ein natürliches oder gehärtetes Öl, Wachs, Fett und halbfestes oder flüssiges Polyol. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können außerdem ein Konservierungsmittel, einen Lösungsvermittler, einen Stabilisator, ein Feuchtmittel, einen Emulgator, einen Süßstoff, ein Farbmittel, einen Aromastoff, ein Salz zum Verändern des osmotischen Druckes, einen Puffer, ein Überzugsmittel oder ein Antioxidant enthalten.
Die Dosierung der aktiven Verbindung zum Bekämpfen oder Verhindern der hierin vorstehend angeführten Krankheiten kann innerhalb eines breiten Bereiches schwanken und sollte selbstverständlich dazu eingestellt sein, sich an die individuellen Umstände in jedem besonderen Fall anzupassen. Im allgemeinen ist eine Dosis von etwa 0,01 bis 20 mg/kg, vorzugsweise etwa 0,1 bis 4 mg/kg je Tag bei der oralen Verabreichung an Erwach sene passend. Beim nicht-oralen Verabreichen sind 0,005 bis 1,0 mg/kg, vorzugsweise etwa 0,01 bis 0,3 mg, eine bevorzugte tägliche Dosis.
Die vorliegende Erfindung stellt die Verbindungen und medizinischen Produkte bereit, die zur Prophylaxe und Therapie verschiedener Erkrankungen durch Steuern oder Verhindern der Zellhaftung wirksam sind. Insbesondere übt eine Verbindung dieser Erfindung bei der oralen Verabreichung über einen langen Zeitraum ein Steuern der durch ADP verursachten Blutplättchenaggregation aus und kann deshalb als antithrombotisches Mittel verwendet werden, das verglichen mit bekannten Substanzen mit ähnlichen Aktivitäten wirksamer ist und länger anhält.
Die folgenden Testbeispiele, Bezugsbeispiele und Ausführungsbeispiele beschreiben die vorliegende Erfindung genauer, sie sind aber nicht dazu ausersehen, die vorliegende Erfindung auf irgendeine Weise zu beschränken.

Testbeispiel 1

Bindungsversuch in vitro

[Verfahren] Gewaschene Blutplättchen wurden aus mit Natriumcitrat ergänztem Blut von Meerschweinchen hergestellt, die unter Einstellen der Blutplättchenzahl auf 500 000/ul in Hepes- Tyrode-Lösung (pH 7,5) suspendiert wurden. Zu 70 ul dieser Suspension wurden 10 ul einer ADP-Lösung (Endkonzentration: 5 · 10&supmin;&sup5; M) zugesetzt und man ließ das Gemisch 15 Minuten bei Raumtemperatur stehen. Dem Gemisch wurde eine Lösung des Testwirkstoffes und 80 ul einer lzsl Fibrinogenlösung (Endkonzentration: 0,1 uM) zugesetzt, die man 2 Stunden bei Raumtemperatur stehen ließ. Eine 20%ige Sucrosepufferlösung wurde mit 100 ul Reaktionsgemisch überschichtet, das unter Abtrennen an Blutplättchen haftenden 1251-Fibrinogens von nicht-haftendem bei 3000 Upm zentrifugiert wurde. Die Radioaktivität des an Blut plättchen haftenden ¹²&sup5;I-Fibrinogens wurde bestimmt. Aus dem aus den Testgruppen erhaltenen Wert gegenüber dem spezifischen Binden der Kontrollgruppe (mit der Pufferlösung behandelt) wurde das Hafthemmungsverhältnis bestimmt.
Wirkung der Verbindung von Ausführungsbeispiel 1 gegen das spezifische Binden von ¹²&sup5;I-Fibrinogen an aktivierte Blutplättchen von Meerschweinchen IC&sub5;&sub0;-Wert: 2,7 · 10&supmin;&sup9; M (n = 3; n bedeutet die Zahl der Testtiere. In den folgenden Testbeispielen besitzt n dieselbe Bedeutung.)

Testbeispiel 2

Bestimmung der Blutplättchenaggregation in vitro

[Verfahren] Im Falle von Menschen wurde Blut aus der Armvene gesunder, männlicher Freiwilliger abgenommen, denen wenigstens zwei Wochen lang kein Wirkstoff verabreicht worden war und im Falle von Meerschweinchen wurde Blut aus der Bauchaorta unter Anästhesie mit Pentobarbital (20 mg/kg, i. p.) unter Verwenden von Natriumcitrat als Antikoagulationsmittel (Endkonzentration: 0,38% im Falle von Menschen; 0,315% im Falle von Meerschweinchen) abgenommen.
Das mit Natriumcitrat ergänzte Blut wurde 10 Minuten bei 950 Upm beziehungsweise 10 Minuten bei 2000 Upm und Raumtemperatur unter Erhalten blutplättchenreichen Plasmas (PRP) und blutplättchenarmen Plasmas (PPP) zentrifugiert. PRP wurde mit PPP zum Einstellen der Blutplättchenzahl auf 500000/ul verdünnt. Die Blutplättchenaggregation wurde gemäß Borns Verfahren (Nature 194: 927, 1962) mittels eines Aggregometers (HEMA TRACER VI Toa Iyo Denshi) spektroskopisch gemessen. Das PRP (250 ul) wurde 2 Minuten bei 37ºC inkubiert und anschließend wurden ihm 25 ul einer Testwirkstofflösung zugesetzt. Zwei Minuten später wurden 25 ul eines Mittels zum Bewirken der Gerinnung zugesetzt. Die Wirkung des Testwirkstoffes wurde durch die Hemmrate der maximalen Aggregationsrate der Testgruppe gegen die der Kontrollgruppe gezeigt. ADP wurde in der Mindestkonzentration (0,6-1 uM) verwendet, mit der die höchste Aggregation erhalten werden kann. Hemmwirkung auf die Blutplättchenaggregation durch ADP der Verbindungen der Ausführungsbeispiele
(- noch nicht gemessen)

Testbeispiel 3

Ex vivo Blutplättchenaggregationsversuch

[Verfahren]

Nach Fasten über Nacht wurde Meerschweinchen eine Testwirkstofflösung (2 ml/kg) oral verabreicht. Nach 1, 4 beziehungsweise 24 Stunden wurde den Tieren unter Anästhesie mit Pentobarbital Blut abgenommen. Durch das vorstehend beschriebene Verfahren wurde PRP hergestellt und die durch ADP bewirkte Blutplättchenaggregation wurde gemessen. Die Aggregationshemm rate wurde durch die bei den Testgruppen erhaltene Aggregationsrate gegen die bei der Kontrolle erhaltene bestimmt. Der Testwirkstoff wurde oral als Lösung in destilliertem Wasser verabreicht.
ADP-Aggregationshemmwirkung durch die Verbindung von Ausführungsbeispiel 1 bei Meerschweinchen
3 mg/kg p. o. nach 1 Stunde Hemmrate: 100% (n = 4)
3 mg/kg p. o. nach 4 Stunden Hemmrate: 100% (n = 4)
3 mg/kg p. o. nach 24 Stunden Hemmrate: 100% (n = 3)
ADP-Aggregationshemmwirkung durch die Verbindung von Ausführungsbeispiel 3 bei Meerschweinchen
1 mg/kg p. o. nach 1 Stunde Hemmrate: 95% (n = 6)
1 mg/kg p. o. nach 4 Stunden Hemmrate: 100% (n = 6)

Bezugsbeispiel 1

N-(2,2-Dimethoxyethyl)glycin-tert-butylester

Einem Gemisch von 150 g 2,2-Dimethoxyethylamin, 200 g wasserfreiem Kaliumcarbonat und 1,4 Liter N,N-Dimethylformamid wurden 100 ml Chloressigsäure-tert-butylester zugesetzt, während bei von 20 bis 25ºC reichenden Temperaturen gerührt wurde. Nach 2 Stunden Rühren wurden dem Gemisch 100 ml Chloressigsäure-tert-butylester zugesetzt und es wurde 7 Stunden bei von 20 bis 25ºC reichenden Temperaturen gerührt. Dem Reaktionsgemisch wurden 1,4 Liter Eiswasser zugesetzt und es wurde der Extraktion mit Essigsäureethylester unterzogen. Die organische Schicht wurde mit einer gesättigten wäßrigen Kochsalzlösung gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, gefolgt vom Abdestillieren des Lösungsmittels unter vermindertem Druck. Der Rückstand wurde der Destillation unter vermindertem Druck unter Ergeben einer Fraktion als Titelprodukt unterzogen, deren Siedepunkt 80-85ºC (0,4 mmHg) war. Die Ausbeute war 163 g.
NMR-Spektrum (CDCl&sub3;) δ: 1.49(s, 99 H), 2.75(d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.33(s, 2H), 3.39(s, 6H), 4.'47(t, J = 5.4 Hz, 1H)

Bezugsbeispiel 2

(S) -3-Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tertbutylester-oxalat

Einer Lösung von 44 g N-(2,2-dimethoxyethyl)glycin-tert-butylester und 49,5 g N-Benzyloxycarbonyl-L-asparaginsäure-betamethylester in 400 ml Methylenchlorid wurden unter Rühren und Eiskühlen 44 g 1-Ethyl-3-(3-diethylaminopropyl)carbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wurde 10 Minuten unter Eiskühlen, anschließend 50 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dem Reaktionsgemisch wurden 300 ml Wasser und 100 ml 5%ige wäßrige KHSOQ- Lösung zugesetzt und es wurde geschüttelt. Die organische Schicht wurde abgetrennt und die wäßrige Schicht wurde der Extraktion mit 200 ml Methylenchlorid unterzogen. Die organischen Schichten wurden vereinigt, mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, gefolgt vom Abdestillieren des Lösungsmittels unter vermindertem Druck. Der Rückstand (88 g) wurde in einem Liter Toluol gelöst und es wurden 4,0 g p-Toluolsulfonsäure zugesetzt, gefolgt von 4 Stunden Rühren bei 70-75ºC. Das Reaktionsgemisch wurde gekühlt und mit wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und anschließend wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde einer Kieselgel-Säulenchromatographie (600 ml) unterzogen. Mit einem Liter Elutionsmittel (Essigsäureethylester - Hexan = 1 : 1) eluierte Fraktionen wurden vereinigt und unter vermindertem Druck eingeengt. Einer Lösung des Rückstands (68 g) in 1,5 Liter Essigsäureethylester wurden 16 g 10% Palladium-Kohle zugesetzt. Das Gemisch wurde im Wasserstoffstrom 3 Stunden heftig gerührt. Der Katalysator wurde abfiltriert. Dem Filtrat wurde eine Lösung von 20,2 g Oxalsäuredihydrat in 200 ml Methanol zugesetzt und man ließ das Gemisch stehen. Der sich daraus ergebende kristalline Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt, mit Essigsäureethylester gewaschen und unter Liefern von 46,8 g Titelverbindung getrocknet; Schmp. 146-147ºC.
Spezifische Drehung [α] -26,0º (c = 0,603, Methanol).
Elementaranalyse für C&sub1;&sub3;H&sub2;&sub2;N&sub2;O&sub5;·C&sub2;H&sub2;O&sub4;:
Ber.: C 47,87; H 6,43; N 7,44
Gef.: C 47,79; H 6,20; N 7,42

Bezugsbeispiel 3

(S) -4-L-Tyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1- essigsäure-tert-butylester-acetat

In 15 ml Dichlormethan wurden 1,65 g (S)-3-Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester und 1,9 g N- Benzyloxycarbonyl-L-tyrosin gelöst. Während eine Stunde gerührt wurde, wurden der Lösung 1,44 g 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-hydrochlorid zugesetzt und das Gemisch wurde eine Stunde gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck unter Hinterlassen einer öligen Substanz eingeengt, die in Essigsäureethylester gelöst wurde. Die organische Schicht wurde mit 5%iger wäßriger Kaliumhydrogencarbonatlösung gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, gefolgt vom Abdestillieren des Lösungsmittels unter vermindertem Druck. Der Rückstand wurde der Kieselgel- Säulenchromatographie (Elutionsmittel: Essigsäureethylester Hexan = 7 : 3) unter Liefern von 2,0 g (S)-4-(N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester als farbloses öliges Produkt unterzogen.
IR γmax cm&supmin;¹: 3332, 2952, 1740, 1646, 1613, 1514, 1444, 1367, 1227, 1153.
NMR(CDCl&sub3;) δ: 1.46(9H, s), 2.30-2.53(1H, m), 2.72- 3.13(5H, m), 3.50-3.72(2H, m), 3.63; (3H, s), 3.85(1H, d, J = 12 Hz), 4.07(1H, d, J = 12 Hz), 4.70-4.90(1H, m), 4.90-5.05(1H, m), 5.11(2H, s), 5.50-5.67(2H, m), 6.76(2H, d, J = 8.2 Hz), 7.03(2H, d, J = 8.2 Hz), 7.36(5H, s).
Ein Gemisch von 1,3 g auf diese Weise erhaltenem (S)-4-(N- Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester, 300 mg 10% Palladium- Kohle, 180 mg Essigsäure und 20 ml Methanol wurde 30 Minuten im Wasserstoffstrom gerührt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Filtrat wurde unter Liefern von 1,0 g (S)-4-L-Tyrosyl- 3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester-acetat als farbloses, öliges Produkt unter vermindertem Druck eingeengt. Dieses Produkt kann in der nachfolgenden Reaktion ohne Reinigung verwendet werden.

Ausführungsbeispiel 1

(S)-4-(4-Amidinobenzoyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure-hydrochlorid

In einem Lösungsgemisch aus 20 ml Wasser und 10 ml Dioxan wurden 1,0 g (S)-4-L-Tyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester und 380 mg Natriumhydrogencarbonat gelöst. Der Lösung wurden unter heftigem Rühren 505 mg 4-Amidinobenzoylchlorid-hydrochlorid über einen Zeitraum von 10 Minuten zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt, anschließend wurde das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck eingeengt. Dem Konzentrat wurden 10 ml Trifluoressigsäure zugesetzt und das Gemisch wurde eine Stunde gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck zur Trockene eingeengt und es wurde in 5 ml 1 N HCl gelöst. Die Lösung wurde einer Wakogel LP-C18-Säule (Elutionsmittel: eine 7,5%ige wäßrige Acetonitrillösung) ausgesetzt. Die Zielfraktionen wurden gesammelt und unter Liefern von 550 mg Titelverbindung als farbloses, pulveriges Produkt lyophilisiert.
Spezifische Drehung: [α] +91ºC (c = 0,2, H&sub2;O)
Elementaranalyse für C&sub2;&sub6;H&sub2;&sub9;N&sub5;O&sub8;·HCl (576,0):
Ber.: C 54,22; H 5,25; N 12,16
Gef.: C 53,94; H 5,31; N 11,93

Bezugsbeispiel 4

(S) -4-O-tButyl-L-tyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester-acetat

Auf im wesentlichen dieselbe Weise wie in Bezugsbeispiel 3 wurden 1,87 g (3)-Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester und 2,43 g N-Benzyloxycarbonyl-O-tbutyl-L-tyrosin unter Ergeben von 3,2 g (S)-4-(N-Benzyloxycarbonyl-O-tbutyl-L-tyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin- 1-essigsäure-tert-butylester als farbloses, öliges Produkt umgesetzt.
IR γmaxcm&supmin;¹: 3300. 2980. 1740, 1655> , 1505, 1440, 1365, 1237, 1160.
NMR(CDCl&sub3;) δ: 1.31(9H, s), 1.46(9H, s), 2.35- 2.51(1H, mu), 2.70-3.18(SH,m), 3.57-3.70(2H, m), 3.63(3H, s), 3.81(1H, d, J = 17 Hz), 4..02(1H, d, J = 17 Hz), 4.75- 4.88(1H, mu), 5.00(2H, t, J = 5.2 Hz), 5.10(2H, s), 5.65(1H, d, J = 8.8 Hz), 6.91(2H, d, J = 83.4 Hz), 7.10(2H, d, J = 8.4 Hz), 7.35(5H, s).
Ein Gemisch von 3,2 g auf diese Weise erhaltenem (S)-4-(N- Benzyloxycarbonyl-O-tbutyl-L-tyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester, 1,0 g 10% Palladium-Kohle, 300 mg Essigsäure und 50 ml Methanol wurde 30 Minuten im Wasserstoffstrom gerührt. Der Katalysator wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde unter vermindertem Druck unter Hinterlassen von 2,80 g Titelverbindung als farbloses, öliges Produkt eingeengt.
Dieses Produkt kann so wie es ist zur nachfolgenden Reaktion verwendet werden.

Ausführungsbeispiel 2

(S) -4-(4-Amidinobenzoyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure

In einem Lösungsgemisch aus 40 ml Wasser und 20 ml Dioxan wurden 2,80 g in Bezugsbeispiel 4 erhaltenes (S)-4-O-tButyl-Ltyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäuretert-butylester-acetat und 840 mg Natriumhydrogencarbonat gelöst. Der Lösung wurden unter heftigem Rühren über 20 Minuten 1,1 g 4-Amidinobenzoylchlorid-hydrochlorid zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck unter Ergeben eines rohen Produktes eingeengt, das in 30 ml Trifluoressigsäure gelöst wurde. Man ließ die Lösung eine Stunde stehen, gefolgt vom Einengen unter vermindertem Druck. Das Konzentrat wurde mittels einer MCI GEL CHP 20P-Säule (10%ige wäßrige Acetonitrillösung) gereinigt. Die die Titelverbindung enthaltende Fraktion wurde eingeengt und es wurde unter Liefern von 1,9 g Titelverbindung als farbloses, kristallines Produkt aus Wasser-Methanol umkristallisiert; Schmp. 229-235ºC.
Spezifische Drehung: [α] +82º (c = 1,0, H&sub2;O)
Elementaranalyse für C&sub2;&sub6;H&sub2;&sub9;N&sub5;O8 · 3/2 H&sub2;O:
Ber.: C 55,12; H 5,69; N 12,36
Gef.: C 55,38; H 5,66; N 12,40

Bezugsbeispiel 5

(S) -4-O-Methyl-L-tyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester-acetat

Auf im wesentlichen dieselbe Weise wie in Bezugsbeispiel 3 wurden in Bezugsbeispiel 2 erhaltener (S)-3-Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester und N-Benzyloxycarbonyl-O-methyl-L-tyrosin der Kondensation unterzogen. Das Kondensat wurde der katalytischen Reduktion unter Liefern von (S)- 4-O-Methyl-L-tyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester-acetat als farbloses, öliges Produkt unterzogen. Die Ausbeute war 85%.
Auf im wesentlichen dieselbe Weise wie vorstehend wurden die folgenden Verbindungen von Bezugsbeispiel 6 bis 9 als farblose, ölige Produkte erhalten. Tabelle 1

Bezugsbeispiel 10

(S) -4-L-3,4-Dimethoxyphenylalanyl-3-methoxycarbonylmethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure-trifluoracetat

(S)-3-Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tertbutylester und N-tert-Butoxycarbonyl-L-3,4-dimethoxyphenylalanin wurden kondensiert und man ließ in Methylenchlorid mit Trifluoressigsäure reagieren. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck unter Hinterlassen der Titelverbindung als farbloses, öliges Produkt abdestilliert. Dieses Produkt kann ohne Reinigung zur nachfolgenden Reaktion verwendet werden.

Bezugsbeispiel 11

(S) -4-L-3,4-Diethoxyphenylalanyl-3-methoxycarbonylmethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure-trifluoracetat

Auf im wesentlichen dieselbe Weise wie in Bezugsbeispiel 10 kann die Titelverbindung aus (S)-3-Methoxycarbonylmethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester und N-tert-Butoxycarbonyl-L-3,4-diethoxyphenylalanin hergestellt werden.

Bezugsbeispiel 12

(S) -3-tert-Butoxymethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tertbutylester-oxalat

Auf im wesentlichen dieselbe Weise wie in Bezugsbeispiel 2 wurde die Titelverbindung aus N-(2,2-Dimethoxyethyl)glycintert-butylester und N-Benzyloxycarbonyl-O-tert-butyl-L-serin synthetisiert; Schmp. 178-180ºC.
Spezifische Drehung [α] -30,4º (c = 1,0, DMSO)
Elementaranalyse für C&sub1;&sub5;H&sub2;&sub8;N&sub2;O&sub4; · C&sub2;H&sub2;O&sub4; · 0,5 H&sub2;O:
Ber.: C 51,12; H 7,82; N 7,01
Gef.: C 51,40; H 7,71; N 6,94

Bezugsbeispiel 13

(S) -3-(4-tert-Butoxybenzyl)-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tertbutylester

Auf im wesentlichen dieselbe Weise wie in Bezugsbeispiel 2 wurde die Titelverbindung aus N-(2,2-Dimethoxyethyl)glycin und N-Benzyloxycarbonyl-O-tert-butyl-L-tyrosin synthetisiert;
Schmp. 124-126ºC.
Spezifische Drehung [α] -81, 7º (c = 0, 97, CHCl&sub3;)
Elementaranalyse für C&sub2;&sub1;H&sub3;&sub2;N&sub2;O&sub4;:
Ber.: C 66,99; H 8,57; N 7,44
Gef.: C 66,92; H 8,54; N 7,38
Die in Bezugsbeispiel 12 beziehungsweise Bezugsbeispiel 13 erhaltenen Verbindungen wurden mit N-Benzyloxycarbonyl-O-tertbutyl-L-tyrosin auf im wesentlichen dieselbe Weise wie in Bezugsbeispiel 3 kondensiert, gefolgt von der katalytischen Reduktion unter Liefern der Verbindungen von Bezugsbeispiel 14 beziehungsweise Bezugsbeispiel 15.

Bezugsbeispiel 14

(S) -4-O-tert-Butyl-1-tyrosyl-3-tert-butoxymethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester-acetat

Bezugsbeispiel 15

(S) -4-O-tert-Butyl-L-tyrosyl-3-(4-tert-butoxybenzyl)-2- oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester-acetat

Ausführungsbeispiel 3

(S) -4-(4-Amidinobenzoyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3- methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

Auf im wesentlichen dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 2 wurde in Bezugsbeispiel 5 erhaltener (S)-4-O-Methyl-L-tyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-tert-butylesteracetat mit 4-Amidinobenzoylchlorid kondensiert, gefolgt vom Entschützen mittels Trifluoressigsäure. Die sich daraus ergebende Verbindung wurde mittels einer MCI GEL CHP20-Säule (Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.) (Elutionsmittel: H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN -> 10% CH&sub3;CN) gereinigt, gefolgt von der Umkristallisation aus Wasser-Ethanol unter Liefern der Titelverbindung als farbloses kristallines Produkt. Die Ausbeute war 66%;
Schmp. 208-212ºC.
Spezifische Drehung [α] -76,7º (c = 1,035, DMSO)
Elementaranalyse für C&sub2;&sub7;H&sub3;&sub1;N&sub5;O8 · 3H&sub2;O:
Ber.: C 53,37; H 6,14; N 11,53
Gef.: C 53,15; H 6,14; N 11,36
Auf im wesentlichen dieselbe Weise wie vorstehend wurden die folgenden Beispiele von Ausführungsbeispiel 4 bis 11 aus den in Bezugsbeispiel 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 14, 15 beziehungsweise 4-Amidinobenzoylchlorid auf im wesentlichen dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 3 erhalten. Tabelle 2
Die folgenden Verbindungen von Bezugsbeispiel 15-20 wurden in derselben Weise wie Bezugsbeispiel 5 als farblose ölige Substanz erhalten. [Tabelle 4]
Die folgenden Verbindungen von Bezugsbeispiel 21-26 wurden in derselben Weise wie Bezugsbeispiel 10 als farblose ölige Substanz erhalten. Tabelle 5
Die folgenden Verbindungen von Beispiel 12-17 wurden erhalten, indem man demselben Verfahren wie dem von Beispiel 2 unter Verwendung von 4-Amidinobenzoylchlorid beziehungsweise der Verbindungen von Bezugsbeispiel 15-20 folgte. Tabelle 6
Die folgenden Verbindungen von Beispiel 18-23 wurden erhalten, indem man demselben Verfahren wie dem von Beispiel 2 unter Verwendung von 4-Amidinobenzoylchlorid beziehungsweise der Verbindungen von Bezugsbeispiel 21-26 folgte. Tabelle 7

Beispiel 24

(S) -4-{4-Amidinobenzoyl-(3,4-dihydroxy)-DL-phenylalanyl~-3- methoxycarbonyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

Unter Verwenden von in Bezugsbeispiel 2 erhaltenem (S)-3-Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazinessigsäure-tert-butylesteroxalsäuresalz, N-Benzyloxycarbonyl-3,4-di(methoxymethyloxy)- DL-phenylalanin und 4-Amidinobenzoylchlorid wurden im wesentlichen dieselben Verfahren wie in Bezugsbeispiel 5 und Beispiel 3 benützt, um die Titelverbindung als farbloses amorphes pulveriges Produkt zu ergeben.
Spezifische Drehung [α] 64,2º (c = 0,5, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub2;&sub6;H&sub2;&sub9;N&sub5;O&sub9; · 2 H&sub2;O
Ber.: C 52,79; H 5,62; N 11,84
Gef.: C 52,'83; H 5,75; N 11,66

Beispiel 25

(5) -4-{4-Amidinobenzoyl-(4-chlor)-DL-phenylalanyl}-3- methoxycarbonyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

Unter Verwenden von in Bezugsbeispiel 2 erhaltenem (S)-3- Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tert-butylester-oxalsäuresalz, N-Benzyloxycarbonyl-4-chlor-DL-phenylalanin und 4-Amidinobenzoylchlorid wurden im wesentlichen dieselben Verfahren wie in Bezugsbeispiel 10 und Beispiel 2 benützt, um die Titelverbindung als farbloses amorphes pulveriges Produkt zu ergeben.
Spezifische Drehung [α] 56, 8º (c = 0, 45, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub2;&sub6;H&sub2;&sub9;ClN&sub5;O&sub7; ·H&sub2;O
Ber.: C 54,22; H 5,25; N 12,16
Gef.: C 53,98; H 5,31; N 12,33

Bezugsbeispiel 27

N-'Butoxycarbonyl-L-tyrosinethylester

In einem Gemisch von 125,0 ml Wasser und 125,0 ml 1,4-Dioxan wurden 25,0 g L-Tyrosinethylester-hydrochlorid und 9,41 g Natriumhydrogencarbonat gelöst. Der Lösung wurden unter Rühren bei Raumtemperatur 25,7 ml Di-tbutyldicarbonat zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt und zur Extraktion mit Methylenchlorid geschüttelt. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in einem kleinen Volumen Essigsäureethylester gelöst und Petrolether wurde zum Bewirken der Kristallisation zugesetzt.
Schmp.: 83-86ºC
Spezifische Drehung [α] 41, 7º (c = 1, 0, CHCl&sub3;)
Elementaranalyse: C&sub1;&sub6;H&sub2;&sub2;NO&sub5; · 0,1 H&sub2;O
Ber.: C 61,96; H 7,21; N 4,52
Gef.: C 61,81; H 7,41; N 4,51

Bezugsbeispiel 28

N-'Butoxycarbonyl-4-trifluormethansulfonyloxy-L-phenylalaninethylester

in 97,3 ml Methylenchlorid wurden 6,0 g N-tButoxycarbonyl-Ltyrosin-ethylester, 3,40 ml 2,6-Lutidin und 0,48 g 4-Dimethylaminopyridin gelöst. Der Lösung wurden allmählich tropfenweise unter Rühren bei -30ºC 4,91 ml Trifluormethansulfonsäureanhydrid zugesetzt, gefolgt von einer Stunde Rühren bei Raumtemperatur. Der Reaktionslösung wurde Wasser zugesetzt und sie wurde zur Extraktion mit Methylenchlorid geschüttelt. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Hexan/Essigsäureethylester = 4/1) grob gereinigt und aus (Essigsäureethylester/Pentan) unter Ergeben von 4,9 g (57,2%) Titelverbindung als blaßrötliche Kristalle umkristallisiert.
Schmp.: 49-50ºC
Spezifische Drehung [α] +32, 3ºC (c = 1, 0, CHCl&sub3;)
Elementaranalyse: C&sub1;&sub7;H&sub2;&sub1;F&sub3;NO&sub7;S
Ber.: C 46,36; H 4,81; N 3,18
Gef.: C 46,52; H 5,07; N 3,13

Bezugsbeispiel 29

N-tButoxycarbonyl-4-vinyl-L-phenylalanin-ethylester
in 49,1 ml N,N-Dimethylformamid wurden 2,89 g N-'Butoxycarbonyl-4-trifluormethansulfonyloxy-L-phenylalanin-ethylester, 834 mg Lithiumchlorid, 92,1 mg Bis(triphenylphosphin)palladium(11)-chlorid, 145 mg 2,6-Di-'butyl-4-methylphenol und 1,99 ml Vinyltributylzinn gelöst. Die Lösung wurde unter einer Stickstoffatmosphäre 2 Stunden bei 90ºC gerührt. Der Reaktionslösung wurden 3,31 ml Pyridin und 6,61 ml Pyridiniumfluorid (eine 1,4M Tetrahydrofuranlösung) zugesetzt. Das Gemisch wurde 18 Stunden bei Raumtemperatur weitergerührt. Der Reaktionslösung wurde Wasser zugesetzt, anschließend wurde Unlösliches abfiltriert. Das Filtrat wurde zur Extraktion mit Essigsäureethylester geschüttelt. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Hexan/Essigsäureethylester - 4/l) unter Ergeben von 1,65 g (78,5%) Titelverbindung als blaßgelbes öliges Produkt gereinigt.
IRνmax cm&supmin;¹: 2978, 2932, 1738, 1713, 2510, 2444, 1390, 1366, 1346, 1249, 1168, 1095, 105i6, 989, 906, 850, 828, 777
NMR(CDCl&sub3;)δ: 1.24(t, J = 7.2 Hz, 3H), 71.42(s, 9H), 2.90- 3.21(m, 2H), 4.17(q, J = 7.2 Hz, 2H), 4E.47-4.63(m,1H), 4.90- 5.08(m, 1H), 5.23(d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.72(d, J = 17.6 Hz, 1H), 6.69(dd,J = 17.6 Hz,J = 11.OHz,lH), 7..10(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.34(d, J = 8.2 Hz, 2H)

Bezugsbeispiel 30

N-tButoxycarbonyl-4-vinyl-L-phenylalanin

In 5,17 ml eines Lösungsmittelgemisches aus Methanol : Wasser - 10 : 1 wurden 1,65 g N-tButoxycarbonyl-4-vinyl-L-phenylalaninethylester und 0,24 g Lithiumhydroxid-monohydrat gelöst. Die Lösung wurde 20 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde mit 1 N HCl auf pH 2-3 eingestellt und zur Extraktion mit Essigsäureethylester geschüttelt. Die organi sche Schicht wurde unter vermindertem Druck unter Ergeben von 1,40 g (92,7%) Titelverbindung als farblose, ölige Produktverbindung eingeengt.
IRνmax cm&supmin;¹: 3428, 2978, 1714, 1511, 1442, 1393, 1366, 1249, 1164, 1055
NMR(CDCl&sub3;)δ: 1.42(s, 9H), 2.99-3.28(m, 2H), 4.53- 4.70{m, 1H), 4.83-5.04(m, 1H), 5.23(d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.73(d, J = 17.6 Hz, 1H), 6.69(dd, J = 11..0 Hz, J = 17.6 Hz, 1H), 6.40-7.00(br, 1H), 7.14(d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.35(d, J = 8.2 Hz, 2H)

Bezugsbeispiel 31

(S) -4-(N-tButoxycarbonyl-4-vinyl-L-phenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester

In 21,7 ml Methylenchlorid wurden 2,17 g (S)-3-Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester-oxalsäuresalz und 1,40 g N-'butoxycarbonyl-4-vinyl-L-phenylalanin gelöst. Der Lösung wurden allmählich unter Kühlen mit Wasser während 5 Minuten 1,38 g 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-hydrochlorid zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt, anschließend wurde unter verringertem Druck Methylenchlorid abdestilliert. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst und mit 5%iger wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung und gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Die organische Schicht wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Der Rückstand wurde mit (Essigsäureethylester/Petrolether) unter Ergeben von 2,04 g (75,8%) Titelverbindung als weißes kristallines Produkt kristallisiert.
Schmp.. 148-152ºC
Spezifische Drehung [α] +94,3ºC (c = 0,5%, CHCl&sub3;)
Elementaranalyse: C&sub2;&sub9;H&sub4;&sub1;N&sub3;O&sub8;
Ber.: C 62,24; H 7,38; N 7,51
Gef.: C 62,01; H 7,51; N 7,47

Beispiel 26

(S) -4-(4-Amidinobenzoyl-L-4-vinylphenylalanyl)-3-methoxcarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

In einem Gemisch von 3,0 ml Methylenchlorid und 3,0 ml Trifluoressigsäure wurden 0,60 g (S)-4-(N-tßutoxycarbonyl-4-vinyl-Lphenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester gelöst. Die Lösung wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unterzogen. Dieses Produkt wurde in einem Gemisch von 11,1 ml H&sub2;O und 5,6 ml 1,4-Dioxan gelöst. Der Lösung wurden bei Raumtemperatur 0,45 g Natriumhydrogencarbonat zugesetzt, gefolgt von der Zugabe von 0,35 g 4- Amidinobenzoylchlorid über 5 Minuten bei Raumtemperatur. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt und mit 1 N HCl auf pH 2-3 eingestellt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels einer CHP-20- Säule (H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 15% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 20% CH&sub3;CN/H&sub2;O) gereinigt und mit 1 N HCl in das entsprechende Hydrochlorid überführt, gefolgt von der Lyophilisierung unter Ergeben von 0,39 g (58,4%) Titelverbindung als farbloses amorphes pulveriges Produkt.
Spezifische Drehung [α] +84,9ºC (c = 1,0%, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub2;&sub8;H&sub3;&sub2;N&sub5;O&sub7;Cl · 2,0 H&sub2;O
Ber.: C 54,06; H 5,83; N 11,26
Gef.: C 53,82; H 5,52; N 11, 11

Beispiel 27

(S) -4-(4-Amidinobenzoyl-L-4-ethinylphenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

In 50, 5 ml Dimethylformamid wurden 2, 97 g N-'Butoxycarbonyl-4- trifluormethansulfonyloxy-L-phenylalanin-ethylester, 857 mg Lithiumchlorid, 94,6 mg Bis(triphenylphosphin)palladium(11)- chlorid, 149 mg 2,6-Di-tbutyl-4-methylphenol und 2,03 ml Ethinyltributylzinn gelöst. Die Lösung wurde unter einer Stick stoffatmosphäre 2 Stunden bei 90ºC gerührt. Dem Reaktionssystem wurden 4,8 ml Pyridin und 9,6 ml Pyridiniumfluorid (eine 1,4M Tetrahydrofuranlösung) zugesetzt. Das Gemisch wurde 18 Stunden bei Raumtemperatur weitergerührt. Der Reaktionslösung wurde Wasser zugesetzt und Unlösliches wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde zur Extraktion mit Essigsäureethylester geschüttelt und die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Hexan/Essigsäureethylester = 4/l) gereinigt. Dieses Produkt und 34,3 mg Lithiumhydroxid-monohydrat wurden in 0,74 ml eines Lösungsmittelgemisches aus Methanol : Wasser - 10 : 1 gelöst, gefolgt von 45 Minuten Rühren bei Raumtemperatur. Das Reaktionssystem wurde mit 1 N HCl-Wasser auf pH 2-3 eingestellt und zur Extraktion mit Essigsäureethylester geschüttelt. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck unter Ergeben von N-'Butoxycarbonyl-4-ethinyl-L-phenylalanin als farbloses, öliges Produkt eingeengt. Dieses Produkt und 0,42 g (S)-3-Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester-oxalsäuresalz wurden in 4,2 ml Methylenchlorid gelöst. Der Lösung wurden allmählich unter Kühlen mit Wasser über 5 Minuten 0,24 g 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)- carbodiimid-hydrochlorid zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Methylenchlorid wurde unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst und die Lösung wurde mit 5%iger wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung und gesättigtem Natriumhydrogencarbonat gewaschen. Die organische Schicht wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und anschließend unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Hexan/Essigsäureethylester = 2/3) unter Ergeben von 370 mg (S)-4-(N-tButoxycarbonyl-4-ethinyl-L-phenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1- essigsäure-tbutylester als farbloses, öliges Produkt gereinigt. Dieses Produkt wurde in einem Gemisch aus 1,9 ml Methylenchlorid und 1,9 ml Trifluoressigsäure gelöst. Die Lösung wurde ei ne Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde unter vermindertem Druck eingeengt und mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unterzogen. Der Rückstand wurde in einem Gemisch von 6,8 ml H&sub2;O und 3,4 ml 1,4-Dioxan gelöst. Der Lösung wurden 0,28 g Natriumhydrogencarbonat zugesetzt und anschließend wurden 0,22 g 4-Amidinobenzoylchlorid über 5 Minuten bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt und mit 1 N HCl auf pH 2-3 eingestellt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels einer CHP-20-Säule (H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 15% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 20% CH&sub3;CN/H&sub2;O) gereinigt und mit 1 N HCl-Wasser in das entsprechende Hydrochlorid überführt, gefolgt von der Lyophilisierung unter Ergeben von 0,13 g (3,0%) Titelverbindung als farbloses amorphes pulveriges Produkt.
Speziffische Drehung [α] +57,2ºC (c = 1,0%, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub2;&sub8;H&sub3;&sub0;N&sub5;O&sub7;Cl · 3,0 H&sub2;O
Ber.: C 52,71; H 5,69; N 10,98
Gef.: C 52,61; H 5,51; N 11,06

Bezugsbeispiel 32

N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosin-tbutylester

In einem Gemisch aus 25,0 ml H&sub2;O und 25,0 ml 1,4-Dioxan wurden 5,0 g L-Tyrosin-tbutylester und 2,65 g Natriumhydrogencarbonat gelöst. Der Lösung wurden 4,51 ml Benzyloxycarbonylchlorid unter Rühren bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Gemisch wurde 15 Minuten gerührt, gefolgt vom Schütteln mit Essigsäureethylester zur Extraktion. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Hexan/Essigsäureethylester = 2/1) unter Ergeben von 7,79 g Titelverbindung als blaßgelbes, öliges Produkt gereinigt.
IRνmax cm&supmin;¹: 3346, 2978, 1700, 16113, 1594, 1514, 1452, 1366, 1227, 1153, 1103, 1057, 842, 751, 696
NMR(CDCl&sub3;)δ: 1.41(s, 9H), 2.83-3.10(m, 2H), 4.48(dd, J = 6.2 Hz, J = 14.4 Hz, 1H), 5.0J8(s, 2H), 5.31(d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.22(s, 1H), 6.69(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.97(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.32(s, 5H)

Bezugsbeispiel 33

N-Benzyloxycarbonyl-4-trifluormethansulfonyloxy-L-phenylalanin-tbutylester

In 210 ml Methylenchlorid wurden 15,6 g N-Benzyloxycarbonyl-Ltyrosin-tbutylester, 7,36 ml 2,6-Lutidin und 1,03 g 4-Dimethylaminopyridin gelöst. Der Lösung wurden allmählich tropfenweise unter Rühren bei -30ºC 10,6 ml Trifluormethansulfonsäureanhydrid zugesetzt, gefolgt von einer Stunde Rühren des Gemisches bei Raumtemperatur. Dem Reaktionsgemisch wurde Wasser zugesetzt und das Gemisch wurde zur Extraktion mit Methylenchlorid geschüttelt. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde mittels Kieselgel- Säulenchromatographie (Hexan/Essigsäureethylester = 4/1) unter Ergeben von 11,39 g (53,7%) Titelverbindung gereinigt.
IRνmax cm&supmin;¹: 3380, 1741, 1697, 1530, 1501, 1419, 1369, 1348, 1249, 1226, 1143, 1058, 1016, 892, 712, 696, 608, 498
NMR(CDCl&sub3;)δ: 1.37(s, 9H), 3.10(d, J = 6.2 Hz, 2H), 4.52(dd, J = 6.4 Hz, J = 14.0 Hz, 1H), 5.09(dd, J = 12.2 Hz, J = 14.0 Hz, 2H), 5..31(d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.10-7.28(m, 4H), 7.35(s, 5H)

Bezugsbeispiel 34

N-Benzyloxycarbonyl-4-methoxycarbonyl-L-phenylalanintbutylester

In einem Gemisch von 15,0 ml Methanol und 20,0 ml Dimethylsulfoxid wurden 2,0 g N-Benzyloxycarbonyl-4-trifluormethansulfonyloxy-L-phenylalanin-tbutylester, 164 mg 1,3-Bis(diphenylphosphino)propan, 89,1 mg Palladium(11)-acetat und 1,11 ml Triethylamin gelöst. In das Gemisch wurde 5 Minuten Kohlenmonoxid eingeblasen. Das Gemisch wurde unter einer Kohlenmonoxidatmosphäre 2 Stunden bei 80ºC weitergerührt. Dem Reaktionsgemisch wurde Wasser zugesetzt und es wurde zur Extraktion mit Essigsäureethylester geschüttelt. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Hexan/Essigsäureethylester = 3/1) unter Ergeben von 1,52 g (92,7%) Titelverbindung als farbloses, öliges Produkt gereinigt.
IRνmax cm&supmin;¹: 3346, 2978, 2950, 17120, 1610, 1515, 1452 1434, 1367, 1351, 1279, 1220, 1178, 1154, 1107, 1456, 1020, 844, 751, 697
NMR(CDCl&sub3;)δ: 1.39(s, 9H), 3.00-3.25(m, 2H), 3.90(s, 3H), 4.56(dd, J = 7.0 Hz, J = 13.0 Hz, 1H), 5.09(dd, J = 15.2 Hz, J = 17.0 Hz, 2H), 5..32(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.34(s, 5H), 7.94(d, J = 8.0 Hz, 2H)

Bezugsbeispiel 35

N-Benzyloxycarbonyl-4-methoxycarbonyl-L-phenylalanin

In einem Gemisch von jeweils 2,75 ml Trifluoressigsäure und Methylenchlorid wurden 0,55 g N-Benzyloxycarbonyl-4-methoxycarbonyl-L-phenylalanin-tbutylester gelöst. Die Lösung wurde 1,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt und das Konzentrat wurde mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unterzogen. Der Rückstand wurde in einem kleinen Volumen Essigsäureethylester gelöst und aus Petrolether unter Ergeben von 469 mg (98,7%) Titelverbindung als weißes kristallines Produkt kristallisiert.
Spezifische Drehung [α] +58,6ºC (c = 0,1, CHCl&sub3;)
Schmp.: 102-106ºC
Elementaranalyse: C&sub1;&sub9;H&sub1;&sub9;NO&sub6;
Ber.: C 63,89; H 5,36; N 3,92
Gef.: C 63,70; H 5,47; N 3,95

Bezugsbeispiel 36

(S) -4-(N-Benzyloxycarbonyl-4-methoxycarbonyl-L-phenylalanyl)- 3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester

In 7,6 ml Methylenchlorid wurden 0,76 g (S)-3-Methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester-oxalsäuresalz und 0,47 g N-Benzyloxycarbonyl-4-methoxycarbonyl-L-phenylalanin gelöst. Der Lösung wurden allmählich unter Kühlen mit Wasser während 5 Minuten 0,44 g 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt, anschließend wurde unter vermindertem Druck Methylenchlorid abdestilliert. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst. Die Lösung wurde mit 5%iger wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung und gesättigter wäßriger Hydrogencarbonatlösung gewaschen. Die organische Schicht wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, gefolgt vom Einengen unter vermindertem Druck. Der Rückstand wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Hexan/Essigsäureethylester = 1/2) unter Ergeben von 0,46 g (51,1%) Titelverbindung als farbloses, öliges Produkt gereinigt.
IRνmax cm&supmin;¹: 3322, 2980, 2952, 1719, 1649, 1525, 1489, 1435, 1367, 1281, 1152, 1104, 1020, 978, 846, 748, 699
NMR(CDCl&sub3;)δ: 1.45(s, 9H), 2.61-2.72(m, 1H), 2.72- 3.25(m, 5H), 3.63(s, 3H), 3.40-4.05(m, 4H), 3.90(s, 3H), 4.78-5.20(m, 4H), 5.61(d, J = 8.0 Hz, 11H), 7.16-7.46(m, 7H), 7.95(d, J = 8.0 Hz, 2H)

Beispiel 28

(S) -4-(4-Amidinobenzoyl-L-4-methoxycarbonylphenylalanyl)-3- methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

In 4,6 ml Essigsäureethylester wurden 0,46 g (S)-4-(N-Benzyloxycarbonyl-4-methoxycarbonyl-L-phenylalanyl)-3-methoxycarbo-, nylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester gelöst. Der Lösung wurden 0,19 g 10% Palladium-Kohle zugesetzt und 3 Stunden unter einer Wasserstoffatmosphäre gerührt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Filtrat wurde unter Ergeben eines farblosen öligen Produkts eingeengt. Dieses Produkt wurde in 3,0 ml Methylenchlorid und 3,0 ml Trifluoressigsäure gelöst. Das Gemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unterzogen. Dieses Produkt wurde in einem Gemisch von 8,1 ml H&sub2;O und 4,0 ml 1,4-Dioxan gelöst. Der Lösung wurden bei Raumtemperatur 0,31 g Natriumhydrogencarbonat zugesetzt, gefolgt von der Zugabe von 0,24 g 4-Amidinobenzoylchlorid über 5 Minuten bei Raumtemperatur. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt und mit 1 N HCl auf pH 2-3 eingestellt. Das Reaktionsgemisch wurde anschließend unter vermindertem Druck eingeengt.
Das Konzentrat wurde mittels einer CHP-20-Säule (H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 15% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 20% CH&sub3;CN/H&sub2;O) gereinigt. Weiter wurde das Produkt mit 1 N HCl-Wasser in sein Hydrochlorid überführt, gefolgt von der Lyophilisierung unter Ergeben von 0,26 g (53,0%) Titelverbindung als farbloses amorphes pulveriges Produkt.
Spezifische Drehung [α] +57,1ºC (c = 1,0%, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub2;&sub8;H&sub3;&sub2;N&sub5;O&sub9; · 2,5 H&sub2;O
Ber.: C 50,72; H 5,62; N 10,56
Gef.: C 50,68; H 5,50; N 10,48

Bezugsbeispiel 37

(S) -4-(N-tButoxycarbonyl-4-formyl-L-phenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-butylester

In einem Gemisch von 22,1 ml Tetrachlorkohlenstoff, 22,1 ml Acetonitril und 33, 2 ml Wasser wurden 2, 21 g (S) -4- (N-tButoxycarbonyl-4-vinyl-L-phenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2- oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester und 3,46 g Natriummetaperiodat gelöst. Der Lösung wurden 16,4 mg Ruthenium(III)- chlorid-n-hydrat bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde zur Extraktion mit Essigsäureethylester geschüttelt. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rück stand wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Hexan/Essigsäureethylester = 1/2) unter Ergeben von 1,14 g (51,4%) Titelverbindung als farbloses, öliges Produkt gereinigt.
IRνmax cm&supmin;¹: 2978, 2934, 1740, 1702, 1654, 1605, 1489, 1436, 1366, 1247, 1228, 1157, 1047, 1016, 979, 848
NMR(GDCl&sub3;)δ: 1.40(s, 9H), 1.45(s, 9H), 2.66-3.27(m, 6H), 3.42-3.93(m, 6H), 4.05-4.36(m, 1H), 4.72-4.90(m, 1H), 4.98(t, J = 5.0 Hz, 1H), 5.35(d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.34- 7.60(m, 2H), 7.83(d, J = 8.0 Hz, 2H), 9.98(s, 1H)

Beispiel 29

(S) -4-(4-Amidinobenzoyl-L-4-formylphenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

In einem Gemisch aus 1,1 ml Methylenchlorid und 1,1 ml Trifluoressigsäure wurden 0,22 g (S)-4-(N-tButoxycarbonyl-4-formyl-L-phenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1- essigsäure-tbutylester gelöst. Die Lösung wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde unter verringertem Druck eingeengt und der Rückstand wurde mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unterzogen. Das Produkt wurde in einem Gemisch von 4,1 ml Wasser und 2,0 ml 1,4-Dioxan gelöst. Der Lösung wurden bei Raumtemperatur 0,16 g Natriumhydrogencarbonat zugesetzt. Dem Gemisch wurden anschließend 0,13 g 4-Amidinobenzoylchlorid über 5 Minuten bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt und dessen pH wurde mit 1 N HCl auf 2-3 eingestellt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels einer CHF-20-Säule (H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 15% CH&sub3;CN/H&sub2;O) unter Ergeben von 0,15 g (64,9%) Titelverbindung als weißes, lyophilisiertes Produkt gereinigt.
Spezifische Drehung [α] +28,6ºC (c = 1,0, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub9;N&sub5;O&sub8; · 3,0 H&sub2;O
Ber.: C 53,55; H 5,83; N 11,56
Gef.: C 53,61; H 5,74; N 11,68

Bezugsbeispiel 38

(S) -4-(N-tButoxycarbonyl-4-hydroxymethyl-L-phenylalanyl)-3- methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester

In 13,0 ml Methanol wurden 0,65 g (S)-4-(N-'Butoxycarbonyl-4- formyl-L-phenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin- 1-essigsäure-tbutylester gelöst. Der Lösung wurden 21,9 mg Natriumborhydrid unter Rühren bei 0ºC zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Dem Reaktionsgemisch wurde Wasser zugesetzt, das zur Extraktion mit Methylenchlorid geschüttelt wurde. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Methylenchlorid/Essigsäureethylester = 2/3) unter Ergeben von 0,56 g (85,6%) Titelverbindung als farbloses, öliges Produkt gereinigt.
IRνmax cm&supmin;¹: 3428, 2978, 2932, 17140, 1708, 1647, 1489, 1437, 1366, 1248, 1156, 1048, 1015
NMR(CDCl&sub3;)δ: 1.44(s, 9H), 1.45(s, 9H), 2.18-2.40(m, 1H), 2.52-3.25(m, 6H), 3.63(s, 3H), 3.40-4.02(m, 3H), 4.30(d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.63(s,2H), 4.68-4.94(m,2H), 5.23- 5.50(m, 1H), 7.10-7.40(m, 4H)

Beispiel 30

(S) -4-(4-Amidinobenzoyl-L-4-hydroxymethylphenylalanyl)-3- methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

In einem Gemisch von 2,0 ml Methylenchlorid und 2,0 ml Trifluoressigsäure wurden 0,26 g (S)-4-(N-'Butoxycarbonyl-4- hydroxymethyl-L-phenylalanyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester gelöst. Die Lösung wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt und mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unterzogen. Dieses Produkt wurde in einem Lösungsmittelgemisch aus 4,8 ml Wasser und 2,4 ml Dioxan gelöst. Der Lösung wurden bei Raumtemperatur 0,19 g Natriumhydrogencarbonat zugesetzt, gefolgt von der Zugabe von 0,15 g 4- Amidinobenzoylchlorid über 5 Minuten bei Raumtemperatur. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt und dessen pH wurde mit 1 N HCl-Wasser auf 2-3 eingestellt, gefolgt vom Einengen unter vermindertem Druck. Das Konzentrat wurde mittels einer CHP-20- Säule (H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O) unter Ergeben von 0,17 g (60,7%) Titelverbindung als farbloses lyophilisiertes Produkt gereinigt.
Spezifische Drehung [α] +62,5º (c = 1,0, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub2;&sub7;H&sub3;&sub1;N&sub5;O&sub8; · 3,0 H&sub2;O
Ber.: C 53,37; H 6,14; N 11,53
Gef.. C 53,50; H 5,94; N 11,46

Beispiel 31

(S) -4-{4-(2-Aminoethyl)benzoyl-O-methyl-L-tyrosyl}-3-methoxycarbonyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

In 5 ml Dichlormethan wurden 400 mg 4-(2-tert-Butoxycarbonylaminoethyl)benzoesäure und 203 mg 1-Hydroxybenztriazol-monohydrat gelöst. Der Lösung wurden bei Raumtemperatur 400 mg 1- Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt. Dieser Lösung wurden 300 mg Triethylamin zugesetzt. Dem Gemisch wurden 2 ml einer Dichlormethanlösung von 785 mg in Bezugsbeispiel 5 erhaltenem (S)-4- O-Methyl-L-tyrosyl-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1- essigsäure-tert-butylester-essigsäuresalz zugesetzt. Das Gemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Dichlormethan verdünnt, das mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung und 5%iger Kaliumhydrogensulfatlösung gewaschen wurde, gefolgt vom Trocknen über Magnesiumsulfat, gefolgt vom Einengen unter vermindertem Druck unter Ergeben eines Rohprodukts. Das Rohprodukt wurde in einem Gemisch aus 3 ml Dichlormethan und 3 ml Trifluoressigsäure gelöst. Man ließ die Lösung eine Stunde bei Raumtemperatur stehen, gefolgt vom Einengen unter vermindertem Druck. Der Rückstand wurde mittels MCI GEL CHP20P (Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.) (Elutionsmittel H&sub2;O -> 15% CH&sub3;CN) gereinigt, gefolgt von der Lyophilisierung unter Liefern von 490 mg Titelverbindung als farbloses, pulveriges Produkt.
Spezifische Drehung [α] +68,4º (c = 0,45, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub2;&sub8;H&sub3;&sub4;N&sub4;O&sub8; · 2 H&sub2;O
Ber.: C 56,95; H 6,48; N 9,49
Gef.: C 56,80; H 6,61; N 9,20

Bezugsbeispiel 39

(S) -4-(N-Benzyloxycarbonyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

Einem Gemisch von 28,8 g (S)-3-Methoxycarbonyl-2-oxopiperazin- 1-essigsäure-tbutylester, 23,0 g N-Benzyloxycarbonyl-O-methyl- L-tyrosin und 202 ml Methylenchlorid wurden 15,3 g 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wurde 2 Stunden gerührt und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst. Die Lösung wurde mit 5%iger wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung und gesättigtem Natriumhydrogencarbonat gewaschen. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck unter Ergeben von 37,0 g rohem (S)-4-(N-Benzyloxycarbonyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3- methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-tbutylester eingeengt. Dieses Produkt wurde in 74,0 ml Methylenchlorid gelöst und es wurden 74,0 ml Trifluoressigsäure zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unter Liefern von 39,12 g Titelverbindung als farbloses, öliges Produkt unterzogen.
IRνmax cm&supmin;¹: 3422, 1720, 1643, 1512, 1438, 1299, 1246, 1177, 1027, 980,823, 740, 696
NMR(CDCl&sub3;)δ: 2.30-2.30(m, 6H), 2.907-3.83-(m, 7H), 3.71(s, 3H), 3.90-4.15(m, 1H), 4.50-4.75(m, 1H), 4.80- 4.95(m, 1H), 4.96(s, 2H), 6.81(d, J = = 8.6 Hz, 2H), 7.14- 7.40(m, 7H)

Bezugsbeispiel 40

(S) -4-(N-Benzyloxycarbonyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-dimethylaminocarbonylmethylester

In 7,39 ml N,N-Dimethylformamid wurden 2,0 g (S)-4-(N-Benzyloxycarbonyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure, 83,0 mg Natriumiodid und 563 ul N,N- Dimethylaminocarbonylmethylchlorid gelöst. Der Lösung wurden 772 ul Triethylamin unter Rühren bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Gemisch wurde 6 Stunden gerührt und anschließend wurde Wasser hinzugesetzt. Das Gemisch wurde zur Extraktion mit Essigsäureethylester geschüttelt. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Methylenchlorid/Methanol = 13/1) unter Ergeben von 1,57 g (68,0%) Titelverbindung als farbloses, öliges Produkt gereinigt.
IRνmax cm&supmin;¹: 2944, 1738, 1651, 1511, 1437, 1343, 1246, 1202, 1028, 821, 748, 697
NMR(CDCl&sub3;)δ: 2.47-2.68(m, 1H), 2.76-3.23(m, 5H), 2.95(s, 3H), 2.96(s, 3H), 3.58-3.84(m, 2H), 3.63(s, 3H), 3.77(s, 3H), 4.04(d, J = 17.0 Hz, 1H), 4.34(d, J = 17.0 Hz, 1H), 4.72-4.89(m, 3H), 4.92-5.06(m, 1H), 5.09(s, 2H), 5.54(d, J = 10 Hz, 1H), 6.80(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.08(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.36(s, 5H)
Durch im wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Bezugsbeispiel 40 wurden die folgenden Verbindungen von Bezugsbeispiel Nr. 41-43 als farblose, ölige Produkte erhalten. Tabelle 8

Beispiel 32

(S) -4-(4-Amidinobenzoyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-dimethylaminocarbonylmethylester-hydrochlorid

In 15,0 ml Methanol wurden 1,50 g (S)-4-(N-Benzyloxycarbonyl- O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1- essigsäure-dimethylaminocarbonylmethylester gelöst. Der Lösung wurden 6,0 g 10% Palladium-Kohle zugesetzt. Das Gemisch wurde 1,5 Stunden bei Raumtemperatur unter einer Wasserstoffatmosphäre gerührt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Dieses Produkt wurde in einem Lösungsmittelgemisch aus 11,4 ml Wasser und 5,7 ml 1,4-Dioxan gelöst. Der Lösung wurden 0,29 g Natriumhydrogencarbonat und 0,38 g 4-Amidinobenzoylchlorid-hydrochlorid über 5 Minuten bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt und wurde anschließend auf einen pH- Bereich von 2 bis 3 eingestellt, gefolgt vom Einengen unter vermindertem Druck. Der Rückstand wurde mittels einer CHP-20- Säule (H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 15%) und einer LH- 20-Säule (H&sub2;O) unter Liefern von 0,43 g (50,8%) Titelverbindung als weißes lyophilisiertes Produkt gereinigt.
Spezifische Drehung [α] +73,10º (c = 0,71, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub3;&sub1;H&sub3;&sub9;N&sub6;O&sub9;Cl ·3,0 H&sub2;O (729,183)
Ber.: C 51,06; H 6,22; N 11,53
Gef.: C 51,15; H 5,94; N 11,54
Verbindungen von Bezugsbeispiel Nr. 41, 42 und 43 wurden im wesentlichen demselben Verfahren wie Beispiel 32 unter Liefern der Verbindungen von Beispiel Nr. 33 bis 35 unterzogen. Tabelle 9
Beispiel 36

(S) -4-{4-(2-Aminoethyl)benzoyl-O-methyl-L-tyrosyl}-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-dimethylaminocarbonylmethylester-hydrochlorid

In 15,0 ml Methanol wurden 1,50 g in Bezugsbeispiel 40 erhaltener (S)-4-(N-Benzyloxycarbonyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-dimethylaminocarbonylmethylester gelöst. Der Lösung wurden 6,0 g 10% Palladium-Kohle zugesetzt. Das Gemisch wurde 1,5 Stunden bei Raumtemperatur unter einer Wasserstoffatmosphäre gerührt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Filtrat wurde unter verringertem Druck eingeengt. In 5,7 ml Methylenchlorid wurden 570 mg des Rückstandes und 0,42 mg 4-(2-Benzyloxycarbonylaminoethyl)benzoesäure gelöst. Der Lösung wurden während 5 Minuten unter Kühlen mit Wasser 0,29 g 1-(3-Dimethylaminopropyl)- 3-ethylcarbodiimid-hydrochlorid zugesetzt. Das Gemisch wurde 2 Stunden gerührt und wurde anschließend unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst, gefolgt vom Waschen mit 5%iger wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung und gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde mittels Kieselgelchromatographie (Methylenchlorid/Methanol = 13/1) grob gereinigt. Dieses Rohprodukt wurde in einem Gemisch aus 6,0 ml Methanol und 853 ul 1 N HCl gelöst. Der Lösung wurden 180 mg 10ºs Palladium-Kohle zugesetzt und das Gemisch wurde 40 Minuten unter einer Wasserstoffatmosphäre bei Raumtemperatur gerührt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels einer CHP-20-Säule (H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 15% CH&sub3;CN/H&sub2;O) unter Liefern von 0,39 g (69,6%) Titelverbindung als weißes lyophilisiertes Produkt gereinigt.
Spezifische Drehung [α] +73,8º (c = 0,74, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub3;&sub2;H&sub4;&sub2;N&sub5;O&sub9;Cl · 2,5 H&sub2;O (729,2029)
Ber.: C 53,29; H 6,57; N 9,71
Gef.: C 53,27; H 6,35; N 9,81
Die Verbindungen von Bezugsbeispiel Nr. 41, 42 und 43 wurden im wesentlichen demselben Verfahren wie in Beispiel 36 unter Ergeben der Verbindungen von Beispiel Nr. 37 bis 39 unterzogen. Tabelle 10

Bezugsbeispiel 44

(S) -4-(N-tert-Butoxycarbonyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

In 300 ml Methanol wurden 19 g (S)-4-(N-Benzyloxycarbonyl-Omethyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1- essigsäure gelöst. Der Lösung wurden 2,5 g 10% Palladium-Kohle zugesetzt und das Gemisch wurde 1,5 Stunden unter einer Wasserstoffatmosphäre gerührt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in einem Gemisch von 200 ml Wasser und 50 ml 1,4-Dioxan gelöst, welchem 7,36 ml Triethylamin zugesetzt wurden. Dem Gemisch wurden unter Eiskühlen 8,4 g Di-t-butyldicarbonat zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 5%igem Kaliumhydrogensulfat auf pH 2 eingestellt, gefolgt von der Extraktion mit Essigsäureethylester und Trocknen über wasserfreiem Natriumsulfat. Die Extraktlösung wurde unter vermindertem Druck unter Ergeben von 16,5 g Titelverbindung im Rohzustand als farbloses pulveriges Produkt eingeengt.
IRνmax cm&supmin;¹: 3400, 2975, 1735, 1710, 1665, 1510, 1440, 1365, 1300, 1245, 1210, 1170, 1030
NMR(CDCl&sub3;)δ: 1.42(s, 9H), 2.30-4.20(m,10 H), 3.64(s, 3H), 3.76(s, 3H), 4.76(m, 1H), 4.99(t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.12(d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.82(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.09(d, J = 8.4 Hz, 2H)

Bezugsbeispiel 45

(S) -4-(N-tButoxycarbonyl-D-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-(3-phthalidyliden)ethylester

In 8,66 ml N-Dimethylformamid wurden 2,2 g (S)-4-(N-tButoxycarbonyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure und 1,52 g Kaliumhydrogencarbonat gelöst. Der Lösung wurden 1,55 g (Z)-3-(2-Bromethyliden)phthalid unter Rühren bei 0ºC zugesetzt. Das Gemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und es wurde Wasser zugesetzt, gefolgt vom Schütteln mit Essigsäureethylester zur Extraktion. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Kieselgelchromatographie (Methylenchlorid/Essigsäureethylester = 6/3,5) unter Ergeben von 1,82 g Titelverbindung (63,2%) als farbloses öliges Produkt gereinigt.
IRνmax cm&supmin;¹: 2976, 2948, 1786, 1740, 1705, 1650, 1512. 1438, 1363, 1246, 1177, 978, 819, 764, 690, 635
NMR(CDCl&sub3;)δ: 1.43(s, 9H), 2.37-2.58(m, 1H), 2.76- 3.30(m, 5H), 3.50-3.90(m, 2H), 3.65(s, 3H), 3.78(s, 3H), 4.09(dd, J = 17.0 Hz, J = 24.6 Hz, 2H), 4.64-4.82(m, 1H), 4.92- 5.11(m, 3H), 5.36(d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.75(t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.83(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.03-7.26(m, 2H), 7.53-7.83(m, 3H), 7.92(d, J = 8.2 Hz, 1H)
Durch im wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Bezugsbeispiel 45 wurden die Verbindungen von Bezugsbeispiel Nr. 46 und 47 als farbloses, öliges Produkt erhalten. Tabelle 11

Beispiel 40

(S) -4-(4-Amidinobenzoyl-O-methl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-(3-phthalidyliden)ethylester-hydrochlorid

In einem Gemisch aus 5,1 ml Methylenchlorid und 5,1 ml Trifluoressigsäure wurden 1,71 g (S)-4-(N-tButoxycarbonyl-O- methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1- essigsäure-(3-phthalidyliden)ethylester gelöst. Die Lösung wurde 1,0 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unterzogen. In einem Lösungsmittelgemisch aus 17,0 ml H&sub2;O und 8,5 ml 1,4-Dioxan wurden 850 mg Produkt gelöst. Der Lösung wurden bei Raumtemperatur 0,53 g Natriumhydrogencarbonat zugesetzt und während 5 Minuten wurden 0,41 g 4-Amidinobenzoylchloridhydrochlorid bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt und dessen pH wurde mit 1 N HCl auf pH 2 bis 3 eingestellt; anschließend wurde das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde mittels einer CHP-20-Säule (H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 15% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 20% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 25% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 30% CH&sub3;CN/H&sub2;O), einer LH-20-Säule (MeOH) und der Kieselgelchromatographie (CH&sub3;CN/H&sub2;O = 5/1) unter Ergeben von 0,27 g (26,0%) Titelverbindung als weißes, lyophilisiertes Produkt gereinigt.
Spezifische Drehung [α] +51,5º (c = 0,77, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub3;&sub7;H&sub3;&sub7;N&sub5;O&sub1;&sub0; · 0,7 HCl · 0,3 CF&sub3;CO&sub2;H · 3,5 H&sub2;O (834,510)
Ber.: C 54,12; H 5,43; N 8,39
Gef.: C 54,11; H 5,21; N 8,64
Die Verbindungen von Bezugsbeispiel Nr. 46 und 47 wurden im wesentlichen demselben Verfahren wie in Beispiel 40 unter Ergeben der Verbindungen von Beispiel Nr. 41 und 42 unterzogen. Tabelle 12
Beispiel 43

(S) -4-{4-(2-Aminoethyl)benzoyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-(3-phthalidyliden)- ethylester-hydrochlorid

In einem Gemisch aus 5,1 ml Methylenchlorid und 5,1 ml Trifluoressigsäure wurden 1,71 g (S)-4-(N-'Butoxycarbonyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure-(3-phthalidyliden)ethylester gelöst. Die Lösung wurde 1,0 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde unter vermindertem Druck eingeengt und mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unterzogen. Dieses Produkt (860 mg) wurde in einem Gemisch aus 4,3 ml Methylenchlorid und 531 ul Triethylamin gelöst, das einer Lösung von 0,2 g 1- Hydroxybenzotriazol, 0,37 g 4-(2-tButoxycarbonylaminoethyl)benzoesäure und 0,28 g 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimid zugesetzt wurde. Das Gemisch wurde eine Stunde gerührt und die Reaktionslösung wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst und mit 5%igem Kaliumhydrogensulfat und gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Die organische Schicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde mittels Kieselgelchromatographie (Methylenchlorid/Essigsäureethylester = 1/4) grob gereinigt. Dieses Produkt wurde in einem Gemisch von 2,46 ml Methylenchlorid und 2,64 ml Trifluoressigsäure gelöst. Die Reaktionslösung wurde unter vermindertem Druck eingeengt, mehrmals der azeotropen Destillation mit Toluol unterzogen und anschließend mit 1 N HCl in das Hydrochlorid überführt. Der Rückstand wurde mittels einer CHP-20- Säule (H&sub2;O -> 5% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 15% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 20% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 25% CH&sub3;CN/H&sub2;O -> 30% CH&sub3;CN/H&sub2;O) und einer LH-20- Säule (MeOH) unter Liefern von 0,22 g (24,7%) Titelverbindung als weißes, lyophilisiertes Produkt gereinigt.
Spezifische Drehung [α] + 49,3º (c = 0,31, H&sub2;O)
Elementaranalyse: C&sub3;&sub5;H&sub4;&sub0;N&sub4;O&sub1;&sub0; · 0,7 HCl · 0,3 CF&sub3;CO&sub2;H · 2,0 H&sub2;O (808,515)
Ber.: C 57,34; H 5,61; N 6,93
Gef.: C 57,02; H 5,35; N 6,81
Die Verbindungen von Bezugsbeispiel Nr. 46 und 47 wurden im wesentlichen demselben Verfahren wie in Beispiel 43 unter Ergeben der Verbindungen von Beispiel Nr. 44 und 45 unterzogen. Tabelle 13

[Formulierungsbeispiele]

Im Falle des Verwendens der Verbindung (I) dieser Erfindung als therapeutisches Mittel für zum Beispiel Thrombose wird zum Beispiel von den folgenden Rezepten Gebrauch gemacht.

1. Tabletten

(1) (S)-4-(4-Amidinobenzoyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure

(2) Lactose 90 g
(3) Maisstärke 29 g
(4) Magnesiumstearat 1 g
130 g
Die gesamten Mengen (1) und (2) werden mit 17 g (3) gemischt und das Gemisch wird mit einer aus 7 g (3) hergestellten Paste granuliert. Mit dem Granulat werden 5 g (3) und die gesamte Menge (4) gemischt. Das gesamte Gemisch wird dem Formpressen auf einer Tablettenpreßmaschine unter Ergeben von 1000 Tablet ten mit 7 mm Durchmesser, die jeweils 10 mg (1) enthalten, unterzogen.

2. Injektionen

(1) (S)-4-(4-Amidinobenzoyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure 10 g
(2) Natriumchlorid 9 g
Die gesamten Mengen (1) und (2) werden in 1000 ml destilliertem Wasser gelöst. Jeweils ein ml Lösung wird in 1000 braune Ampullen gefüllt. Die Luft in den Ampullen wird durch Stickstoffgas ersetzt und die Ampullen werden verschlossen. Das gesamte Verfahren wird unter sterilen Bedingungen ausgeführt.

3. Tabletten

(1) (S)-4-(4-Amidinobenzoyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure 10 g
(2) Lactose 90 g
(3) Maisstärke 29 g
(4) Magnesiumstearat 1 a
130 g
Die gesamten Mengen (1) und (2) werden mit 17 g (3) gemischt und das Gemisch wird mit einer aus 7 g (3) hergestellten Paste granuliert. Mit dem Granulat werden 5 g (3) und die gesamte Menge (4) gemischt. Das gesamte Gemisch wird dem Formpressen auf einer Tablettenpreßmaschine unter Ergeben von 1000 Tabletten mit 7 mm Durchmesser, die jeweils 10 mg (1) enthalten, unterzogen.

4. Injektionen

(1) (S)-4-(4-Amidinobenzoyl-O-methyl-L-tyrosyl)-3-methoxycarbonylmethyl-2-oxopiperazin-1-essigsäure 10 g
(2) Natriumchlorid 9 g
Die gesamten Mengen (1) und (2) werden in 1000 ml destilliertem Wasser gelöst. Jeweils ein ml Lösung wird in 1000 braune Ampullen gefüllt. Die Luft in den Ampullen wird durch Stickstoffgas ersetzt und die Ampullen werden verschlossen. Das gesamte Verfahren wird unter sterilen Bedingungen ausgeführt.

Claims

1. Verbindung der Formel

wobei A eine Amidinogruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aminoethylgruppe darstellt, R¹&sup0; eine Spezies darstellt, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einer Nitrogruppe, Halogenatomen, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkenylgruppen, C2-3-Alkinylgruppen, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyloxycarbonylgruppen, einer Hydroxymethylgruppe, Formylgruppe sowie Gruppen der Formel OR¹¹, wobei R¹¹ ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;&submin;&sub5;- Alkyl-, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkenyl-, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkinyl-, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkanoyl-, Carbamoyl- oder Methansulfonylgruppe ist, von denen jede substituiert sein kann, besteht, R¹² und R¹³ jeweils ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, eine C&sub1;&submin;&sub3;-Alkoxygruppe oder ein Halogenatom darstellen, X eine Hydroxygruppe, p- Hydroxyphenylgruppe oder eine gegebenenfalls veresterte oder amidierte Carboxygruppe darstellt, Y eine gegebenenfalls veresterte oder amidierte Carboxygruppe darstellt und n 1 oder 2 bedeutet, oder ein Salz davon.

2. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei R¹&sup0; eine Spezies ist, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einer Hydroxygruppe, C&sub1;&submin;&sub5;-Alkoxygruppen, die gegebenenfalls mit C&sub1;&submin;&sub3;- Alkoxygruppen substituiert sind, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkenyloxygruppen, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkinyloxygruppen, einer Nitrogruppe, Halogenatomen, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkanoyloxygruppen, Carbamoyloxygruppen, die gegebenenfalls mit C&sub1;&submin;&sub3;-Alkylgruppen substituiert sind, einer Methansulfonyloxygruppe, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkenylgruppen, C&sub2;&submin;&sub3;-Alkinylgruppen, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyloxycarbonylgruppen, einer Hydroxymethylgruppe und einer Formylgruppe besteht.

3. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei R¹&sup0; eine Hydroxygruppe oder Methoxygruppe ist.

4. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei R¹&sup0; eine Ethoxygruppe, Methoxyethoxygruppe, Propoxygruppe, Propargyloxygruppe, Allyloxygruppe, ein Fluoratom oder ein Chloratom ist.

5. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei sowohl R¹² als auch R¹³ ein Wasserstoffatom sind.

6. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei n 1 bedeutet.

7. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei A eine Amidinogruppe ist, R¹&sup0; eine Hydroxygruppe oder Methoxygruppe ist, sowohl R¹² als auch R¹³ ein Wasserstoffatom sind und n 1 bedeutet.

8. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei A eine Amidinogruppe ist, R¹&sup0; eine Ethoxygruppe, Propargyloxygruppe, Allyloxygruppe oder ein Fluoratom ist, sowohl R¹² als auch R¹³ ein Wasserstoffatom sind und n 1 bedeutet.

9. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei A eine Aminoethylgruppe ist, R¹&sup0; eine Hydroxygruppe oder Methoxygruppe ist, so wohl R¹² als auch R¹³ ein Wasserstoffatom sind und n 1 bedeutet.

10. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei A eine Aminoethylgruppe ist, R¹&sup0; eine Ethoxygruppe, Propargyloxygruppe, Allyloxygruppe oder ein Fluoratom ist, sowohl R¹² als auch R¹³ ein Wasserstoffatom sind und n 1 bedeutet.

11. Verbindung gemäß Anspruch 7, wobei X -COOCH&sub3; ist und Y -COOH oder eine Gruppe, die im lebenden Körper in eine Carboxylgruppe umgewandelt werden kann, ist.

12. Mittel zur Hemmung der Adhäsion von Zellen, das die Verbindung gemäß Anspruch 1 umfaßt.

13. Verbindung der Formel

wobei R¹¹ ein Wasserstoffatom, eine gegebenenfalls substituierte C&sub1;&submin;&sub5;-Alkylgruppe, eine C&sub1;&submin;&sub3;-Alkanoylgruppe, eine gegebenenfalls substituierte Carbamoylgruppe oder Methansulfonylgruppe ist, R¹² und R¹³ jeweils ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, eine C&sub1;&submin;&sub3;-Alkoxygruppe oder ein Halogenatom darstellen, X eine Hydroxygruppe, p-Hydroxyphenylgruppe oder eine gegebenenfalls veresterte oder amidierte Carboxygruppe darstellt, Y eine gegebenenfalls veresterte oder amidierte Carboxygruppe darstellt und n 1 oder 2 deutet, oder ein Salz davon.

14. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung gemäß Anspruch 1, umfassend:

a) Kondensieren einer Verbindung, die durch die Formel

dargestellt wird [wobei W ein Halogenatom darstellt], mit einer Verbindung, die durch die Formel

dargestellt wird [wobei jedes Symbol wie oben definiert ist]; oder

b) Kondensieren einer Verbindung, die durch die Formel

dargestellt wird [wobei jedes Symbol wie oben definiert ist], mit einer Verbindung, die durch die Formel

dargestellt wird [wobei jedes Symbol wie oben definiert ist].

15. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Hemmung der Adhäsion von Zellen.

16. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung für Antithrombose.